ES2247105T3

ES2247105T3 - Metodos para preparar isomeros de cla.

Info

Publication number: ES2247105T3
Application number: ES01931164T
Authority: ES
Inventors: Asgeir Saebo; Per Christian Saebo
Original assignee: Natural ASA
Current assignee: Aker Biomarine AS
Priority date: 2000-04-24
Filing date: 2001-04-24
Publication date: 2006-03-01
Anticipated expiration: 2021-04-24
Also published as: EP1276709B1; WO2001081290A3; NO20025084D0; CA2406228A1; ATE307108T1; AU2001257627B2; NO327744B1; DE60114176T2; NO20025084L; WO2001081290A2; CA2406228C; DE60114176D1; EP1276709A2; US6380409B1; AU5762701A; JP2004516232A

Abstract

Un método que comprende: a) proporcionar un primer isómero del ácido octadecadienoico parcialmente purificado que presenta un sistema de enlace conjugado; y b) calentar dicho primer isómero del ácido octadecadienoico parcialmente purificado entre 200 y 240ºC de modo que dicho sistema de enlace conjugado migre, formando de este modo una mezcla que comprende al menos dicho primer isómero del ácido octadecadienoico y un segundo isómero del ácido octadecadienoico, en el que el primer y segundo isómeros del ácido octadecadienoico se seleccionan de la siguiente lista de pares: primer isómero segundo isómero c9, t11 t8, c10 t10, c12 c11, t13 c7, t9 t6, c8 t11, c13 c12, t14 c6, t8 t5, c6 c5, t7 t4, c6 c4, t6 t3, c5 t12, c14 c13, t15 t13, c5 c14, t16 t8, c10 c9, t11 c11, t13 t10, c12 t6, c8 c7, t9 c12, t14 t11, c13 t5, c6 c6, t8 t4, c6 c5, t7 t3, c5 c4, t6 c13, t15 t12, c14 c14, t16 t13, c5 y en el que dicho segundo isómero está presente en un concentración mayor del 20% en peso de dicho primer isómero.

Description

Métodos para preparar isómeros de CLA.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a la bioquímica de los lípidos, y en particular a la preparación de varios isómeros de ácido linoleico conjugado.

Antecedentes de la invención

En 1978, los investigadores de la Universidad de Wisconsin descubrieron la identidad de una sustancia contenida en la carne de vacuno cocinada que parecía inhibir la mutagénesis. Se descubrió que la sustancia era una mezcla de isómeros de posición del ácido linoleico (C18:2) con dobles enlaces conjugados. Los isómeros c9,t11 y t10,c12 se presentan en mayor abundancia, pero no es cierto que los isómeros sean responsables de la actividad biológica observada. Se ha observado en los estudios de absorción marcada que el isómero 9,11 parece estar preferentemente algo relacionado e incorporado en la fracción de fosfolípidos de los tejidos animales y en menor medida en el isómero 10,12 (Ha, et al., Cancer Res., 50: 1097 [1990]).

La actividad biológica relacionada con los ácido linoleicos conjugados (denominados CLA) es diversa y compleja. Actualmente, se conoce muy poco acerca de los mecanismos de actuación, aunque es probable que varios estudios preclínicos y clínicos en evolución arrojen nueva luz en los modos de actuación fisiológicos y bioquímicos. Las propiedades anticarcinógenas de CLA han sido bien documentadas. La administración de CLA inhibe la carcinogenia de las mamas de rata, como demostró Birt, et al., Cancer Res., 52: 2035s [1992]). Ha, et al., supra, describió resultados similares en un modelo de neoplasia del estómago anterior del ratón. CLA también ha sido identificado como un potente agente citotóxico contra las células diana del melanoma, de los cánceres colorrectal y de mama humanos in vitro.

Aunque los mecanismos de actuación del CLA son todavía oscuros, existen pruebas de que puede(n) estar implicado(s), al menos in vivo, algún(os) componente(s) del sistema inmunitario. La patente U.S. nº 5.585.400 (Cook, et al., incorporada a esta memoria como referencia), da a conocer un método para la atenuación de reacciones alérgicas en animales mediada por la hipersensibilidad de tipo I o de IgE administrando una dieta que contiene CLA. Se demostró también que CLA en concentraciones de aproximadamente 0,1 a 1,0 por ciento era un adyuvante eficaz para la conservación de los glóbulos blancos. La patente U.S. nº 5.674.901 (Cook et al., incorporada a esta memoria como referencia), dio a conocer que la administración oral o parenteral de CLA en forma de ácido libre o de sal daba como resultado la elevación en las subpoblaciones de linfocitos CD-4 y CD-8 asociada a la inmunidad mediada por las células. Los efectos desfavorables que aparecen en el pretratamiento con el factor de necrosis tumoral exógeno podrían ser aliviados indirectamente mediante la elevación o el mantenimiento de los niveles de las células CD-4 y CD-8 en animales a los que se administró CLA. Por último, la patente U.S. nº 5.430.066 (Cook, et al., incorporada a esta memoria como referencia), describe el efecto de CLA en la prevención de la pérdida de peso y la anorexia por inmunoestimulación.

Aparte de las potenciales aplicaciones terapéuticas y farmacológicas de CLA indicadas anteriormente, se ha suscitado mucho entusiasmo con respecto a la utilización de CLA como complemento dietético. Se ha descubierto que CLA ejerce un profundo efecto generalizado en la composición corporal, en particular redirigiendo la distribución de la grasa y de la masa en el tejido magro. La patente U.S. nº 5.554.646 (Cook, et al., incorporada a esta memoria como referencia), da a conocer un método que utiliza CLA como complemento dietético mediante el cual se alimentaba a cerdos, ratones y seres humanos con dietas que contenían 0,5 por ciento de CLA. En cada especie, se observó una disminución significativa en el contenido de grasa con un aumento correspondiente en la masa de proteína. Es interesante que en estos animales, el aumento del contenido de ácidos grasos de la dieta por adición de CLA no producía ningún aumento del peso corporal, pero estaba relacionado con la redistribución de la grasa y del magro en el interior del cuerpo. Otro fenómeno dietético de interés es el efecto del enriquecimiento en CLA en la transformación del pienso. La patente U.S. nº 5.428.072 (Cook, et al., incorporada a esta memoria como referencia), proporcionó datos que demuestran que la incorporación de CLA en el pienso animal (aves y mamíferos) aumentaba la eficacia de la transformación del pienso conduciendo a una ganancia mayor de peso en las aves y mamíferos complementados con CLA. Los potenciales efectos beneficiosos del enriquecimiento con CLA para los piensos para el crecimiento de animales son evidentes.

Otra importante fuente de interés en CLA, y una de las que acentúa su primer potencial comercial, es la que tiene lugar de forma natural en los alimentos y piensos consumidos por los seres humanos y los animales semejantes. En particular, el CLA es abundante en los productos procedentes de los rumiantes. Por ejemplo, se han realizado varios estudios en los que se ha examinado el CLA en varios productos lácteos. Aneja, et al., (J. Dairy Sci., 43: 231 [1990]) observó que el tratamiento de la leche en el yogur producía una concentración de CLA. (Shanta, et al., Food Chem. 47: 257 [1993]) demostró que un aumento combinado de la temperatura de tratamiento y de la adición de suero aumentaba la concentración de CLA durante la preparación del queso procesado. En un estudio independiente, Shanta, et al., J. Food Sci., (60, 695 [1995]) describió que mientras que las condiciones de tratamiento y de almacenamiento no reducían de forma apreciable las concentraciones de CLA, no se observaba ningún aumento. De hecho, varios estudios han indicado que la variación estacional o entre animales puede tenerse en cuenta en diferencias hasta de tres veces el contenido en CLA de la leche de vaca (véase p. ej., Parodi et al., J. Dairy Sci., 60: 1550 [1977]). Así mismo, factores dietéticos han estado implicados en la variación del contenido de CLA (Chin, et al., J. Food Comp. Anal. 5: 185 [1992]). Debido a esta variación en el contenido de CLA en las fuentes naturales, la ingestión de cantidades prescritas de varios alimentos no garantizará que el individuo o el animal reciba la dosis óptima que asegure la consecución del efecto nutritivo deseado.

En el desarrollo de una fuente comercial definida de CLA tanto para aplicaciones terapéuticas como nutritivas, se necesita un procedimiento para la generación de grandes cantidades del material definido. El problema con la mayoría de los productos de CLA preparados por los métodos convencionales es su heterogenicidad y la variación sustancial en la isoforma de lote a lote. Una publicación reciente documenta esta variación e indica la necesidad para los productores de CLA de valorar la naturaleza compleja de sus productos (véase Christie et al., JAOCS, 74(11): 1231 [1997]).

Se ha dispensado atención considerable al hecho de que la ingestión de grandes cantidades de aceites hidrogenados y de grasas sólidas, en lugar de sebo animal, da como resultado dietas altas en contenido de ácidos grasos trans. Por ejemplo, Holman, et al., (Proc. Natl. Acad. Sci., 88: 4830 [1991]) demostraron que los aceites hidrogenados del pienso de ratas daban lugar a una acumulación en el hígado de rata de isómeros inusuales de ácidos grasos poliinsaturados, que parecen interferir con el metabolismo de los ácidos grasos poliinsaturados naturales. Por consiguiente, existe una necesidad acusada del análisis químico y bioquímico de los diversos isómeros del CLA.

Compendio de la invención

La presente invención se refiere a la bioquímica de lípidos, y en particular a la preparación de varios isómeros del ácido linoleico (octadecadienoico) conjugado. La presente invención no está limitada a la producción de cualquier isómero particular de ácido octadecadienoico. De hecho, se puede preparar una variedad de isómeros que comprenden, pero no se limitan al, ácido c9,t11 octadecadienoico, ácido t8,c10 octadecadienoico, ácido t10,c12 octadecadienoico, ácido c11,t13 octadecadienoico, ácido c7,t9 octadecadienoico, ácido t6,c8 octadecadienoico, ácido t11,c13 octadecadienoico, ácido c12,t14 octadecadienoico, ácido c6,t8 octadecadienoico, ácido t5,c6 octadecadienoico, ácido c5,t7 octadecadienoico, ácido t4,c6 octadecadienoico, ácido t3,c5 octadecadienoico, ácido t12,c14 octadecadienoico, ácido octadecadienoico c13,t15 y ácido c14,t16 octadecadienoico. Los isómeros se pueden suministrar como ácidos grasos libres, ésteres de alquilo o glicéridos de acilo. Por consiguiente, en algunas realizaciones, la presente invención proporciona un método para la producción de una composición que comprende más del 25% de uno de los isómeros anteriores. Todavía en otras realizaciones, la presente invención proporciona un método para la producción de una composición que comprende más del 40% de uno de los isómeros anteriores. Todavía en otras realizaciones, la presente invención proporciona un método para la producción de una composición que comprende más del 50% de uno de los isómeros anteriores. De nuevo, los isómeros se pueden suministrar como ácidos grasos libres, ésteres de alquilo o glicéridos de acilo. En algunas otras realizaciones preferidas, la presente invención proporciona un método para la producción de una composición que comprende más del 60% de CLA c11,t13.

En realizaciones particularmente preferidas, la presente invención proporciona un método para la producción de una mezcla de gliceroles de acilo que comprende restos de isómeros de ácido linoleico conjugado, en la que el contenido de acilo graso de dichos gliceroles de acilo es al menos el 25% de un isómero de ácido linoleico conjugado seleccionado del grupo que consta de ácido t8,c10 octadecadienoico, ácido c11,t13 octadecadienoico, ácido c7,t9 octadecadienoico, ácido t6,c8 octadecadienoico, ácido t11,c13 octadecadienoico, ácido c12,t14 octadecadienoico, ácido c6,t8 octadecadienoico, ácido t5,c6 octadecadienoico, ácido c5,t7 octadecadienoico, ácido t4,c6 octadecadienoico, ácido t3,c5 octadecadienoico, ácido t12,c14 octadecadienoico, ácido c13,t15 octadecadienoico y ácido c14,t16 octadecadienoico. En otras realizaciones particularmente preferidas, la presente invención proporciona un método para la producción de una mezcla de gliceroles de acilo que comprende restos de isómeros de ácido linoleico conjugado, en la que el contenido de acilo graso de dichos gliceroles de acilo es al menos el 45% de un isómero de ácido linoleico conjugado seleccionado del grupo que consta de ácido t8,c10 octadecadienoico, ácido c11,t13 octadecadienoico, ácido c7,t9 octadecadienoico, ácido t6,c8 octadecadienoico, ácido t11,c13 octadecadienoico, ácido c12,t14 octadecadienoico, ácido c6,t8 octadecadienoico, ácido t5,c6 octadecadienoico, ácido c5,t7 octadecadienoico, ácido t4,c6 octadecadienoico, ácido t3,c5 octadecadienoico, ácido t12,c14 octadecadienoico, ácido c13,t15 octadecadienoico y ácido c14,t16 octadecadienoico. Todavía en realizaciones más particularmente preferidas, la presente invención proporciona un método para producir una mezcla de gliceroles de acilo que comprende restos de isómeros de ácido linoleico conjugado, en la que el contenido de acilo graso de dichos gliceroles de acilo es al menos el 50% de un isómero de ácido linoleico conjugado seleccionado del grupo que consta de ácido t8,c10 octadecadienoico, ácido c11,t13 octadecadienoico, ácido c7,t9 octadecadienoico, ácido t6,c8 octadecadienoico, ácido t11,c13 octadecadienoico, ácido c12,t14 octadecadienoico, ácido c6,t8 octadecadienoico, ácido t5,c6 octadecadienoico, ácido c5,t7 octadecadienoico, ácido t4,c6 octadecadienoico, ácido t3,c5 octadecadienoico, ácido t12,c14 octadecadienoico, ácido c13,t15 octadecadienoico y ácido c14,t16 octadecadienoico.

En otras realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición que comprende isómeros del ácido linoleico conjugado, en el que la composición comprende o consta esencialmente de al menos el 25% de un primer isómero de ácido octadecadienoico y al menos el 25% de un isómero hermano de dicho primer isómero. La presente invención no se limita a cualquier par de isómeros hermanos. De hecho, se contempla una variedad de pares de isómeros hermanos que incluyen, pero no se limitan al ácido c9,t11 octadecadienoico y ácido t8,c10 octadecadienoico, ácido t10,c12 octadecadienoico y ácido c11,t13 octadecadienoico, ácido c7,t9 octadecadienoico y ácido t6,c8 octadecadienoico, ácido t11,c13 octadecadienoico y ácido c12,t14 octadecadienoico, ácido c6,t8 octadecadienoico y ácido t5,c6 octadecadienoico, ácido c5,t7 octadecadienoico y ácido t4,c6 octadecadienoico, ácido c4,t6 octadecadienoico y ácido t3,c5 octadecadienoico, ácido t12,c14 octadecadienoico y ácido c13,t15 octadecadienoico, y ácido t13,c15 octadecadienoico y ácido c14,t16 octadecadienoico. Los isómeros se pueden proporcionar como ácidos grasos libres, ésteres de alquilo o glicéridos de acilo.

Todavía en otras realizaciones, la presente invención proporciona métodos para la preparación de pares de isómeros de ácido octadecadienoico y/o isómeros individuales del ácido octadecadienoico que comprenden: a) proporcionar un primer isómero del ácido octadecadienoico parcialmente purificado; y b) tratar el primer isómero del ácido octadecadienoico en condiciones tales que migre el sistema de enlace conjugado, formando de este modo una mezcla que contiene al menos el primer y segundo isómeros del ácido octadecadienoico. Todavía en realizaciones adicionales, los métodos comprenden además la etapa c) separar al menos el primer y segundo isómeros del ácido octadecadienoico para proporcionar un segundo isómero del ácido octadecadienoico purificado. Las condiciones comprenden el calentamiento del isómero del ácido octadecadienoico parcialmente purificado. Todavía en otras realizaciones, la etapa de separación se lleva a cabo por cromatografía de gas-líquido. En algunas realizaciones, el primer isómero del ácido octadecadienoico parcialmente purificado es uno de los ácidos c9,t11 y t8,c10 octadecadienoicos y el segundo isómero del ácido octadecadienoico es el otro de los ácidos t8,c10 y c9,t11 octadecadienoicos. En algunas realizaciones, el primer isómero del ácido octadecadienoico parcialmente purificado es uno de los ácidos t10,c12 y c11,t13 octadecadienoicos y el segundo isómero del ácido octadecadienoico es el otro de los ácidos t10,c12 y c11,t13 octadecadienoicos. En algunas realizaciones, el primer isómero del ácido octadecadienoico parcialmente purificado es uno de los ácidos c7,t9 y t6,c8 octadecadienoicos y el segundo isómero del ácido octadecadienoico es el otro de los ácidos t10,c12 y c11,t13 octadecadienoicos. En algunas realizaciones, el primer isómero del ácido octadecadienoico parcialmente purificado es uno de los ácidos t11,c13 y c12,t14 octadecadienoicos y el segundo isómero del ácido octadecadienoico es otro de los ácidos t11,c13 y c12,t14 octadecadienoicos. En algunas realizaciones, el primer isómero del ácido octadecadienoico parcialmente purificado es uno de los ácidos c6,t8 y t5,c6 octadecadienoicos y el segundo isómero del ácido octadecadienoico es el otro de los ácidos c6,t8 y t5,c6 octadecadienoicos. En otras realizaciones, el primer isómero del ácido octadecadienoico parcialmente purificado es uno de los ácidos c5,t7 y t4,c6 octadecadienoicos y el segundo isómero del ácido octadecadienoico es el otro de los ácidos c5,t7 y t4,c6 octadecadienoicos. En algunas realizaciones, el primer isómero del ácido octadecadienoico parcialmente purificado es uno de los ácidos t3,c5 y c4,t6 octadecadienoicos y el segundo isómero del ácido octadecadienoico es el otro de los ácidos c4,t6 y t3,c5 octadecadienoicos. En algunas realizaciones, el primer isómero del ácido octadecadienoico parcialmente purificado es uno de los ácidos t12,c14 y c13,t15 octadecadienoicos y el segundo isómero del ácido octadecadienoico es otro de los ácidos t12,c14 y c13,t15 octadecadienoicos. En otras realizaciones, el primer isómero del ácido octadecadienoico parcialmente purificado es uno de los ácidos c14,t16 y t13,c15 octadecadienoicos y el segundo isómero del ácido octadecadienoico es el otro de dichos ácidos c14,t16 y t13,c15 octadecadienoicos.

En algunas realizaciones, el segundo isómero está presente en una concentración mayor del 30% del primer isómero. En otras realizaciones, el segundo isómero está presente en una concentración mayor del 40% del primer isómero. Todavía en otras realizaciones, el segundo isómero está presente en una concentración entre el 20% y el 80% del primer isómero.

Tal como se utiliza en esta memoria, "ácido linoleico conjugado" o "CLA" se refiere a cualquier ácido linoleico conjugado o al ácido graso octadecadienoico libre. Se pretende que esta expresión abarque e indique todos los isómeros de posición y geométricos del ácido linoleico con dos dobles enlaces carbono-carbono conjugados en cualquier lugar de la molécula. CLA se diferencia del ácido linoleico ordinario en que el ácido linoleico ordinario tiene dobles enlaces en los átomos de carbono 9 y 12. Ejemplos de CLA incluyen los isómeros cis y trans ("isómeros E/Z") de los siguientes isómeros de posición: ácido 2,4-octadecadienoico, ácido 4,6-octadecadienoico, ácido 6,8-octadecadienoico, ácido 7,9-octadecadienoico, ácido 8,10-octadecadienoico, ácido 9,11-octadecadienoico, ácido 10,12-octadecadienoico y ácido 11,13-octadecadienoico. Tal como se utiliza en esta memoria, "CLA" comprende un solo isómero, una mezcla seleccionada de dos o más isómeros y una mezcla no seleccionada de isómeros obtenidos de fuentes naturales, así como el CLA sintético y semisintético.

Tal como se utiliza en esta memoria, la expresión "ácido linoleico conjugado isomerizado" se refiere al CLA sintetizado por métodos químicos (p. ej., isomerización en álcali acuoso, isomerización en álcali no acuoso o isomerización en alcoholato alcalino).

Tal como se utiliza en esta memoria, la expresión "grupo ácido linoleico conjugado" se refiere a cualquier compuesto o pluralidad de compuestos que contienen ácidos o derivados linoleicos conjugados. Los ejemplos comprenden, pero no limitan a los ácidos grasos, ésteres de alquilo y triglicéridos del ácido linoleico conjugado.

Tal como se utiliza en esta memoria, se pretende que los "triglicéridos" de CLA contengan CLA en cualquiera o en las tres posiciones (p. ej., posiciones SN-1, SN-2 o SN-3) en el eje central del glicerol. Por consiguiente, un triglicérido que contiene CLA puede contener cualquiera de los isómeros de posición y geométricos de CLA. Tal como se utiliza en esta memoria, "acilglicerol" se refiere a una molécula de glicerol que tiene un (monoacilglicerol), dos (diacilglicerol) o tres (triacilglicerol o triglicérido) restos de acilo grasos en una cualquiera de las posiciones disponibles en la molécula de glicerol. Las mezclas de triglicéridos o acilgliceroles pueden contener cantidades variables de determinados isómeros de CLA dependiendo de la concentración de los determinados isómeros en el CLA utilizada para producir el triglicérido y, si se utilizan procedimientos enzimáticos para preparar el triglicérido o acilglicerol, la especificidad de la lipasa o lipasas utilizadas. Por consiguiente, es conveniente caracterizar la mezcla o composición de triglicérido o acilglicerol resultante en función de la cantidad, referida en porcentaje, de un isómero determinado de CLA contenido dentro de la mezcla o composición completa. A título de ejemplo no limitativo, unos restos de CLA que contienen la composición de triglicérido o acilglicerol en varias posiciones en el eje central del glicerol puede decirse que tienen un contenido en resto de acilo graso de al menos el 25% de un determinado isómero de ácido linoleico conjugado cuando este isómero de ácido linoleico conjugado ocupa al menos el 25% de cualquiera de las posiciones SN-1, SN-2 y SN-3 de los triglicéridos en la mezcla. Visto de otra manera, si los restos de acilo graso se eliminan por saponificación, la mezcla resultante de sales de ácidos grasos comprenderá al menos el 25% del isómero determinado.

Tal como se utiliza en esta memoria, se pretende que los "ésteres" de CLA incluyan alguno y todos los isómeros de posición y geométricos de CLA unidos mediante un enlace éster a un alcohol o a cualquier otro grupo químico, incluyendo, pero sin limitarse a los alcoholes naturales, fisiológicamente aceptables (p. ej., metanol, etanol o propanol). Por consiguiente, un éster de CLA o un CLA esterificado puede contener cualquiera de los isómeros de posición y geométricos de CLA.

Se pretende que los "isómeros no naturales" de CLA incluyan, pero no se limiten a los isómeros c11,t13; t11,c13; t11,t13; c11,c13; c8,t10; t8,c10; t8,t10; c8,c10; y trans-trans del ácido octadecadienoico. Sin embargo, esta definición no incluye los isómeros t10,c12 y c9,t11 del ácido octadecadienoico. Los "isómeros no naturales" pueden también denominarse "isómeros menores" de CLA, ya que estos isómeros se producen generalmente en cantidades pequeñas cuando se sintetiza CLA por isomerización con álcali.

Tal como se utiliza en esta memoria, CLA de "baja impureza" se refiere a las composiciones de CLA, que incluyen ácidos grasos libres, ésteres de alquilo y triglicéridos, que contienen menos del 1% total de ácidos 8,10 octadecadienoicos, ácidos 11,13 octadecadienoicos o ácidos trans-trans octadecadienoicos.

Tal como se utiliza en esta memoria, "c" comprende un enlace químico en la orientación cis, y "t" se refiere a un enlace químico en la posición trans. Si un isómero de posición de CLA se diseña sin un "c" o un "t", entonces esta denominación incluye los cuatro isómeros posibles. Por ejemplo, ácido 10,12 octadecadienoico comprende el ácido c10,t12; t10,c12; t10,t12 y c10,c12 octadecadienoico, mientras que el ácido t10,c12 octadecadienoico o CLA se refiere solamente a un solo isómero.

Tal como se utiliza en esta memoria, el término "aceite" se refiere a un líquido que fluye libremente que contiene ácidos grasos de cadena larga (p. ej., CLA), triglicéridos u otros grupos hidrocarbonados de cadena larga. Los ácidos grasos de cadena larga incluyen, pero no se limitan a los diversos isómeros de CLA.

Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresión "portador fisiológicamente aceptable" se refiere a cualquier portador o excipiente utilizado normalmente con productos farmacéuticos oleosos. Dichos portadores o excipientes incluyen, pero no se limitan a, aceites, almidones y azúcares (p. ej., sacarosa y lactosa).

Tal como se utiliza en esta memoria, la expresión "vehículo de administración oral" se refiere a cualquier medio para administrar un producto farmacéutico por vía oral, incluyendo pero sin limitarse a cápsulas, píldoras, comprimidos y jarabes.

Tal como se utiliza en esta memoria, la expresión ``producto alimenticio se refiere a cualquier alimento o pienso adecuado para el consumo por seres humanos, animales no rumiantes o animales rumiantes. El "producto alimenticio" puede ser un alimento preparado y envasado (p. ej., mahonesa, aderezo de ensalada, pan o queso) o un pienso animal (p. ej., pienso animal extruído y en gránulos o desde luego piensos mezclados). "Producto alimenticio preparado" significa cualquier alimento preenvasado aprobado para consumo humano o animal.

Tal como se utiliza en esta memoria, la expresión "producto comestible" se refiere a cualquier sustancia adecuada para el consumo humano o animal.

Tal como se utiliza en esta memoria, la expresión "compuesto orgánico volátil" se refiere a cualquier compuesto que contenga carbono que exista parcial o completamente en estado gaseoso a una temperatura dada. Los compuestos orgánicos volátiles se pueden formar en la oxidación de un compuesto orgánico (p. ej., CLA). Los compuestos orgánicos volátiles incluyen, pero no se limitan a pentano, hexano, heptano, 2-butenol, etanol, 3-metil butanal, 4-metil pentanona, hexanal, heptanal, 2-pentil furano y octanal.

Tal como se utiliza en esta memoria, la expresión "oxidante quelante metálico" se refiere a cualquier antioxidante que secuestra metales. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a lecitinas y ésteres del ácido cítrico.

Tal como se utiliza en esta memoria, la expresión "purificar parcialmente" significa cualquier proceso que elimine algo de un contaminante del componente de interés, tal como la eliminación no deseada de isómeros de una preparación de ácido linoleico conjugado. El porcentaje de un componente purificado aumenta de este modo en la muestra (es decir, se concentra el componente de interés).

Tal como se utiliza en esta memoria, la expresión "isómeros hermanos" se refiere a pares de isómeros conjugados del ácido linoleico que se pueden interconvertir mediante algún tratamiento (p. ej., calentamiento). En la Tabla 1, infra, se proporcionan ejemplos de isómeros hermanos.

Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresión "sistema de enlace conjugado" se refiere a la siguiente disposición de enlaces dobles no saturados en una cadena de carbohidrato: -C=C-C=C- (es decir, dos dobles enlaces separados por un enlace sencillo).

Tal como se utiliza en esta memoria, el término "migrar", cuando se utiliza en referencia a un sistema de enlace conjugado en cadenas de carbohidrato, se refiere a la disposición de dobles enlaces carbono-carbono no saturados dentro de la cadena de carbohidrato de modo que los dobles enlaces se desplazan arriba y abajo de la cadena.

Descripción detallada de la invención

La presente invención se refiere a la bioquímica de lípidos, y en particular a la preparación de varios isómeros de ácido linoleico conjugado. Se ha demostrado que la reconfiguración de los dobles enlaces del ácido linoleico a posiciones conjugadas tiene lugar durante el tratamiento con catalizadores tales como níquel o álcali a altas temperaturas, y durante la autooxidación. Teóricamente, ocho posibles isómeros geométricos del ácido 9,11 y 10,12 octadecadienoico (c9,c11; c9,t11; t9,c11; t9,t11; c10,c12; c10,t12; t10,c12 y t10,t12) se formarían a partir de la isomerización del ácido c9,c12-octadecadienoico. Un mecanismo general para la isomerización del ácido linoleico fue descrito por J.C. Cowan (JAOCS 72: 492-99 [1950]). Se cree que el doble enlace se polariza como resultado de una colisión con un catalizador de activación. El átomo de carbono polarizado y su carbón adyacente están libres entonces para rotar y las fuerzas son tales como para hacer al átomo de carbono deficiente esencialmente plano. Cuando el sistema se desplaza a continuación para liberar estas fuerzas creadas como resultado de la colisión, se forman ambos isómeros cis y trans. La formación de determinados isómeros de CLA se favorece termodinámicamente. Esto es debido a las características coplanares de los cinco átomos de carbono alrededor del doble enlace conjugado y a un conflicto espacial de la resonancia radical. La distribución relativamente mayor de los isómeros 9,11 y 10,12 procede al parecer de la estabilización adicional de los isómeros geométricos c9,t11 o t10,c12.

Los avances en cromatografía de gases han permitido a los investigadores determinar de manera precisa la composición del isómero de las muestras de CLA. Estos estudios demuestran que se forman realmente muchos más de 8 isómeros durante la conjugación. En Christie et al., (JAOCS 74 (11): 1231 [1997]), se describió que la distribución del isómero de una muestra comercial de CLA fue la siguiente: 8,10 (14%); 9,11 (30%); 10,12 (31%) y 11,13 (24%). En otro estudio de Christie et al. en (Lipids 33(2): 217-21 [1998]), se describió la composición del isómero de CLA siguiente de una preparación comercial de CLA: t11,t13 (0,74%); t10,t12 (1,23%); t9,t11 (1,18%); t8,t10 (0,46%); c11,t13 y t11,c13 (21,7%) c10,t12 y t10,c12 (29,0%); c9,t11 y t9,c11 (29,5%); c8,t10 y t8,c10 (12,3%); c11,c13 (0,96%); c10,c12 (0,88%); c9,c11 (0,88%); y c8,c10 (0,20%). Como se puede apreciar en estos estudios, aún cuando la formación de determinados isómeros está favorecida, otros isómeros de CLA pueden contribuir en gran medida a la composición de las preparaciones de CLA isomerizadas en álcali.

A. Migración de dobles enlaces conjugados

La presente invención proporciona métodos para producir composiciones enriquecidas para diferentes isómeros de CLA. En algunas realizaciones de la invención, un isómero de CLA parcialmente purificado o concentrado se trata en condiciones que produce la migración del sistema de doble enlace. En las realizaciones preferidas, las condiciones comprenden el calentamiento de al menos un isómero a aproximadamente 200-240ºC, preferentemente a aproximadamente 220ºC. En otras realizaciones, las condiciones comprenden además hacer reaccionar el isómero o los isómeros parcialmente purificados o concentrados en nitrógeno en un recipiente sellado. Con referencia a la Tabla 1, se pueden utilizar las preparaciones de los isómeros de la columna 1 para producir preparaciones que contienen una cantidad sustancial del correspondiente isómero de la columna 2. Tras la reacción de conversión inicial, la preparación contendrá tanto el isómero de partida como el isómero "hermano". Asimismo, las preparaciones de los isómeros de la columna 2 se pueden utilizar para producir cantidades sustanciales del correspondiente isómero de la columna 1. Las preparaciones que contienen ambos isómeros se pueden tratar además para purificar el isómero hermano (p. ej., por cromatografía de gases). Como comprenderán los expertos en la materia, es posible partir de más de un isómero parcialmente purificado, produciendo de este modo una preparación que contiene cuatro, seis, ocho o más isómeros. En otras realizaciones, se puede preparar una preparación purificada del isómero hermano por métodos conocidos en la técnica (es decir, cromatografía gas- líquido) de la preparación tratada que contiene el isómero inicial y su isómero hermano.

TABLA 1

Columna 1	Columna 2
c9,t11	t8,c10
t10,c12	c11,t13
c7,t9	t6,c8
t11,c13	c12,t14

TABLA 1 (continuación)

Columna 1	Columna 2
c6,t8	t5,c6
c5,t7	t4,c6
c4,t6	t3,c5
t12,c14	c13,t15
t13,c15	c14,t16

Como se demostró en los Ejemplos, el tratamiento del ácido t10,c12 octadecadienoico dio como resultado la producción de ácido c11,t13 octadecadienoico. Asimismo, se puede utilizar ácido c11,t13 octadecadienoico concentrado o parcialmente purificado para producir el ácido t10,c12 octadecadienoico. Después de tratar el isómero parcialmente purificado para producir un isómero hermano, la preparación resultante comprende con preferencia aproximadamente más del 20% del isómero hermano en comparación con el isómero inicial parcialmente purificado. En otras realizaciones, la preparación resultante comprende preferentemente aproximadamente más del 40% del isómero hermano en comparación con el isómero inicial parcialmente purificado. Todavía en otras realizaciones, la preparación resultante comprende aproximadamente entre aproximadamente el 20% y el 80% del isómero hermano en comparación con el isómero inicial parcialmente purificado. Todavía en otras realizaciones, la preparación resultante comprende o consta esencialmente de más de aproximadamente el 20% del isómero hermano en peso/peso (p. ej., la preparación contiene aproximadamente 20 gramos del isómero hermano y aproximadamente 80 gramos del isómero inicial parcialmente purificado). En otras realizaciones, la preparación resultante comprende aproximadamente más del 40% del isómero hermano en peso/peso. Todavía en otras realizaciones, la preparación comprende entre aproximadamente el 20% y el 80% del isómero hermano en peso/peso.

Parte experimental

Los ejemplos siguientes se proporcionan a fin de demostrar e ilustrar más determinadas realizaciones preferidas y aspectos de la presente invención y no deben considerarse limitativos de su alcance.

En la exposición experimental que sigue, se aplican las abreviaturas siguientes: M (molar); mM (milimolar); \muM (micromolar); kg (kilogramos); g (gramos); mg (miligramos); \mug (microgramos); ng (nanogramos); l (litros); ml (mililitros); \mul (microlitros); cm (centímetros); mm (milímetros); nm (nanómetros); ºC (grados centígrados); KOH (hidróxido de potasio); HCl (ácido clorhídrico); y Hg (mercurio).

Ejemplo 1 Preparación de isómeros de CLA

Este Ejemplo describe la producción del ácido c11,t13 octadecadienoico a partir del ácido t10,c12 octadecadienoico. Se disolvieron cincuenta gramos de KOH en propilenglicol con calentamiento moderado. Se añadieron a continuación a la mezcla cien gramos de ácido linoleico al 98%, se calentó la mezcla a 150ºC y se agitó durante 3 horas. Se enfrió a continuación la mezcla y se lavó varias veces con agua caliente y a continuación se secó al vacío con calor moderado. La mezcla de CLA resultante constaba de ácido c9,t11 y t10,c12 octadecadienoico así como de vestigios de isómeros de CLA. La mezcla se transformó en éster metílico por ebullición a reflujo en metanol ácido. Se disolvieron cincuenta gramos de los ácidos grasos libres conjugados en metanol que contenía 4,5% de ácido sulfúrico y se hirvió en condiciones de reflujo durante 1 hora en un baño de agua. Se enfrió la mezcla y se descartó la capa del fondo. Se añadió metanol reciente con ácido sulfúrico al 4,5% en la mezcla hervida durante otra hora en las condiciones de reflujo. Tras el enfriamiento, esta mezcla de éster metílico se lavó varias veces con agua y a continuación se secó al vacío con calor moderado. Se disolvieron diez gramos del éster metílico en acetona y se enfriaron durante toda la noche a -60ºC en un congelador. Se recuperó un precipitado sólido por filtración y se volvió a disolver en acetona y de nuevo se enfrió a -30ºC durante toda la noche. Se secó el precipitado al vacío y se demostró por análisis GLC que contiene 97% de t10,c12 CLA. El equipo analítico constaba de un GLC Perkin Elmer con muestreador automático. La columna era del tipo de sílice fundida muy polar. Se utilizó el siguiente equipo para el programa:

Inyección:: Sin separación a 250ºC

Detección:: Detector de ionización de llama a 280ºC

Portador:: Helio a psig.

Programa de la estufa:: 80ºC-130ºC (45ºC/min), a continuación 1ºC/min a 220ºC y ºC hasta el final durante 10 min.

Columna:: SILICE FUNDIDA WCOT 0,25 mm \times 100 m, CP-SIL 88 para FAME, df = 0,2.

Se cubrió con nitrógeno un gramo de isómero t10,c12 purificado a continuación en un tubo sellado y se calentó durante dos horas a 220ºC. Tras el enfriamiento, se analizaron los ésteres metílicos resultantes por GC como anteriormente. El contenido relativo de t10,c12 en la mezcla se redujo al 52,32% y el isómero c11,t13 estaba presente en una concentración de 41,96% (véase Tabla 2).

TABLA 2

Conversión del isómero t10,c12 en el isómero c1,t13
Isómero	Antes del calentamiento, %	Tras el calentamiento, %
c11,t13	0	41,57
t10,c12	97,34	51,72
c11,c13	0	1,44
c10,c12	0	2,70
t11,t13	0	0,54
t10,t12	0,7	1,05

Ejemplo 2 Preparación de los isómeros de CLA

Este Ejemplo describe la producción de ácido t8,c10 octadecadienoico a partir del ácido c9,t11 octadecadienoico. El ácido c9,t11 octadecadienoico purificado se puede adquirir en los proveedores comerciales (Matreya, State Collage, PA) o mediante fermentación de microorganismos de rumiantes (véase, p. ej., la patente U.S. nº 5.674.901, incorporada a esta memoria como referencia). El ácido c9,t11 octadecadienoico purificado se transforma en un gran porcentaje (p. ej., 25% a 50%) en ácido t8,c10 octadecadienoico colocando el ácido c9,t11 octadecadienoico en un tubo sellado bajo nitrógeno y calentando a 220ºC durante aproximadamente 2 horas.

Ejemplo 3 Preparación de los isómeros de CLA

Este Ejemplo describe la producción de ácido t6,c8 octadecadienoico a partir del ácido c7,t9 octadecadienoico. El ácido c7,t9 octadecadienoico purificado se puede obtener por cromatografía de gases a escala de preparación. El ácido c7,t9 octadecadienoico purificado se transforma en un gran porcentaje (p. ej., 25% a 50%) en ácido t6,c8 octadecadienoico colocando el ácido c9,t11 octadecadienoico en un tubo sellado bajo nitrógeno y calentando a 220ºC durante aproximadamente 2 horas.

Ejemplo 4 Preparación de los isómeros de CLA

Este Ejemplo describe la producción de ácido c12,t14 octadecadienoico a partir del ácido t11,c13 octadecadienoico. El ácido t11,c13 octadecadienoico purificado se puede obtener por cromatografía de gases a escala de preparación (p. ej., siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo 1). El ácido t11,c13 octadecadienoico purificado se transforma en un gran porcentaje (p. ej., 25% a 50%) en ácido c12,t14 octadecadienoico colocando el ácido c9,t11 octadecadienoico en un tubo sellado bajo nitrógeno y calentando a 220ºC durante aproximadamente 2 horas.

Ejemplo 5 Preparación de los isómeros de CLA

Este Ejemplo describe la producción de ácido t5,c6 octadecadienoico a partir del ácido c6,t8 octadecadienoico. El ácido c6,t8 octadecadienoico purificado se puede obtener por cromatografía de gases a escala de preparación. El ácido c6,t8 octadecadienoico purificado se transforma en un gran porcentaje (p. ej., 25% a 50%) en ácido t5,c6 octadecadienoico colocando el ácido c9,t11 octadecadienoico en un tubo sellado bajo nitrógeno y calentando a 220ºC durante aproximadamente 2 horas.

Ejemplo 6 Preparación de los isómeros de CLA

Este Ejemplo describe la producción de ácido t4,c6 octadecadienoico a partir del ácido c5,t7 octadecadienoico. El ácido c5,t5 octadecadienoico purificado se puede obtener por cromatografía de gases a escala de preparación. El ácido c5,t7 octadecadienoico purificado se transforma en un gran porcentaje (p. ej., 25% a 50%) en ácido t4,c6 octadecadienoico colocando el ácido c9,t11 octadecadienoico en un tubo sellado bajo nitrógeno y calentando a 220ºC durante aproximadamente 2 horas.

Ejemplo 7 Preparación de los isómeros de CLA

Este Ejemplo describe la producción de ácido t3,c5 octadecadienoico a partir del ácido c4,t6 octadecadienoico. El ácido c4,t6 octadecadienoico purificado se puede obtener por cromatografía de gases a escala de preparación. El ácido c4,t6 octadecadienoico purificado se transforma en un gran porcentaje (p. ej., 25% a 50%) en ácido t3,c5 octadecadienoico colocando el ácido c9,t11 octadecadienoico en un tubo sellado bajo nitrógeno y calentando a 220ºC durante aproximadamente 2 horas.

Ejemplo 8 Preparación de los isómeros de CLA

Este Ejemplo describe la producción de ácido c13,t15 octadecadienoico a partir del ácido t12,c14 octadecadienoico. El ácido t12,c14 octadecadienoico purificado se puede obtener por cromatografía de gases a escala de preparación. El ácido t12,c14 octadecadienoico purificado se transforma en un gran porcentaje (p. ej., 25% a 50%) en ácido c13,t15 octadecadienoico colocando el ácido c9,t11 octadecadienoico en un tubo sellado bajo nitrógeno y calentando a 220ºC durante aproximadamente 2 horas.

Ejemplo 9 Preparación de los isómeros de CLA

Este Ejemplo describe la producción de ácido c14,t16 octadecadienoico a partir del ácido t13,c15 octadecadienoico. El ácido t13,c15 octadecadienoico purificado se puede obtener por cromatografía de gases a escala de preparación. El ácido t13,c15 octadecadienoico purificado se transforma en un gran porcentaje (p. ej., 25% a 50%) en ácido c14,t16 octadecadienoico colocando el ácido c9,t11 octadecadienoico en un tubo sellado bajo nitrógeno y calentando a 220ºC durante aproximadamente 2 horas.

Ejemplo 10 Preparación de triacilgliceroles de CLA por esterificación directa

Se añade lipasa de Candida antarctica inmovilizada (1,25 g) a una mezcla de glicerol (1,22 g, 13,3 mmoles) e isómero de CLA deseado. Se agita la mezcla suavemente sobre una placa calefactora con agitador magnético a 65ºC en vacío continuo de 0,01 a 0,5 Torr. El agua volátil producida durante la evolución de la reacción se condensa continuamente en trampas enfriadas con nitrógeno líquido. Tras 48 h se interrumpe la reacción, se añade n-hexano y se separa la enzima por filtración. Se trata la fase orgánica con una solución acuosa alcalina de carbonato de sodio para eliminar el exceso de ácidos grasos libres (cuando sea necesario). Se elimina la capa orgánica al vacío (tras el secado sobre sulfato de magnesio anhidro cuando proceda) en un evaporador rotativo seguido de tratamiento a alto vacío para producir el producto prácticamente puro. Cuando se utilizan cantidades estequiométricas de ácidos grasos libres, se aplica la valoración mediante hidróxido de sodio estandarizado para determinar el contenido en ácido graso libre del producto de reacción en bruto.

Ejemplo 12 Producción de triacilglicéridos

Se preparan isómeros de CLA tal como se describió anteriormente y se destilan en una planta de destilación molecular a 150ºC y a una presión de 10^{-2} mbar. A continuación, se mezclan 1.000 kg del producto destilado con 97 kg de glicerol puro y 80 kg de lipasa. Se deja continuar la reacción durante 12 horas a 55ºC al vacío y en agitación. El producto triacilglicérido se destila en un aparato de destilación molecular para eliminar los ácidos grasos sin reaccionar.

Ejemplo 13 Síntesis de c11,t13 CLA

Este Ejemplo describe la producción de una muestra de CLA que contiene aproximadamente 60% del isómero c11,t13 de CLA. En resumen, se transfirieron dos porciones de una mezcla de éster etílico del ácido graso t10,c12 al 95%, 30 g de cada uno, a tubos de ensayo de 70 ml. Se purgaron con nitrógeno los tubos de ensayo y se sellaron. Se precalentaron los tubos de ensayo durante un minuto en un baño de agua a 100ºC y a continuación se colocaron directamente en un baño de aceite a 220ºC. Tras dos horas, se extrajo uno de los tubos de ensayo del baño de aceite y se dejó enfriar. Se extrajo el otro tubo de ensayo después de una hora más y a continuación se dejó enfriar. Se determinaron por GC los perfiles del isómero de la muestra inicial y de dos muestras calientes (Tabla 13).

Se extrajeron tres muestras de cada una de las dos muestras calientes y se diluyeron en 3,5, 4,5 ó 5,5 ml de acetona por gramo de grasa en tubos de ensayo de 70 ml (Tabla 14). Se enfriaron a continuación a -60ºC en un congelador los tubos de ensayo con solución de acetona. Después de 3 días, se extrajeron muestras de las fracciones de sobrenadante. Se determinó por GC el perfil de isómero de las fracciones sobrenadantes (Tabla 15).

El calentamiento de la muestra inicial (aproximadamente 99% de CLA total, 0,9% de ácido oleico) a 220ºC durante 2 y 3 horas produjo una conversión parcial del isómero t10,c12 en el isómero c11,t13. Las muestras calientes contenían de 35 a 45% de isómero c11,t13 (Tabla 13). El contenido exacto del isómero no se pudo determinar debido a la separación incompleta en las condiciones de GC seleccionadas.

La cristalización de la muestra calentada durante dos horas difería de la cristalización de la muestra calentada durante tres horas al proporcionar mejores cristales (más sólidos). La muestra calentada durante 3 horas proporcionó cristales medio derretidos. El análisis de las fracciones sobrenadantes puso de manifiesto que la cristalización de la muestra calentada durante dos horas dio una mejor separación con un contenido mayor de c11,13 en la fracción sobrenadante. El contenido de CLA c11,t13 y t10,c12 en las fracciones sobrenadantes fue de 56 al 60% y del 27 al 30% respectivamente. El contenido de c11,t13 fue ligeramente mayor en las fracciones sobrenadantes de las muestras con la proporción grasa/acetona menor (Tabla 15).

TABLA 13

Composición de ácido graso de las muestras iniciales y calientes*
Muestra	sin GC	c9,t11	c11,t13	t10,c12	c10,c12	c11,c13	t11,t13	otros t,t
Inicial	5723	2,8	nd	94,8	0,8	0,2	nd	0,7
220ºC	5724	2,8	38	55	0,7	1,4	0,3	0,8
2 h
220ºC	5725	2,6	46	46	1,1	1,9	0,4	1,0
3 h
* \begin{minipage}[t]{155mm} En las muestras calientes, los valores dados en la columna c9,t11 representan a c9,t11 y t8,c10 debido a una conversión similar a partir de c9,t11. Los valores dados para las cantidades de c10,c12 y c11,c13 son los valores integrados por la GC. Estos valores se pueden desviar del contenido real debido a la separación incompleta en los cromatogramas.\end{minipage}

TABLA 14

Dilución de la muestra inicial en acetona antes del enfriamiento*
Dilución nº	Cantidad de grasa (g)	Cantidad de acetona (ml)
1 (1:3,5)	7,0	24,5
2 (1:4,5)	5,5	24,8
3 (1:5,5)	4,5	24,8
* Las dos muestras calientes se diluyeron en cantidades iguales.

TABLA 15

Perfil de ácidos grasos de las fracciones sobrenadantes*
Muestra	sin GC	c9,t11	c11,t13	t10,c12	c10,c12	c11,c13	t11,t13	otros t,t
2 h	5726	4,3	56	31	1,0	2,4	0,7	1,1
dil. 1
2 h	5727	4,8	60	28	1,2	2,4	0,6	1,1
dil. 2
2 h,	5728	5,6	59	27	1,2	3,0	0,6	1,1
dil. 3
3 h,	5729	2,8	41	50	1,2	2,0	0,5	1,1
dil. 1
3 h,	5733	3,2	48	42	1,2	2,3	0,7	1,3
dil. 2
3 h,	5734	3,7	56	33	1,3	2,6	0,6	1,1
dil. 3
* \begin{minipage}[t]{155mm} En las muestras calientes, los valores dados en la columna c9,t11 representan a c9,t11 y t8,c10 debido a una conversión similar a partir de c9,t11. Los valores dados para las cantidades de c10,c12 y c11,c13 son los valores integrados por la GC. Estos valores se pueden desviar del contenido real debido a la separación incompleta en los cromatogramas.\end{minipage}

A partir de lo anterior es evidente que la presente invención proporciona métodos para la preparación de composiciones de isómeros de CLA.

Claims

1. Un método que comprende:

a): proporcionar un primer isómero del ácido octadecadienoico parcialmente purificado que presenta un sistema de enlace conjugado; y

b): calentar dicho primer isómero del ácido octadecadienoico parcialmente purificado entre 200 y 240ºC de modo que dicho sistema de enlace conjugado migre, formando de este modo una mezcla que comprende al menos dicho primer isómero del ácido octadecadienoico y un segundo isómero del ácido octadecadienoico, en el que el primer y segundo isómeros del ácido octadecadienoico se seleccionan de la siguiente lista de pares:

primer isómero segundo isómero c9, t11 t8,c10 t10,c12 c11, t13 c7, t9 t6,c8 t11,c13 c12, t14 c6, t8 t5,c6 c5, t7 t4,c6 c4, t6 t3,c5 t12,c14 c13, t15 t13,c5 c14, t16 t8,c10 c9, t11 c11, t13 t10,c12 t6,c8 c7, t9 c12, t14 t11,c13 t5,c6 c6, t8 t4,c6 c5, t7 t3,c5 c4, t6 c13, t15 t12,c14 c14, t16 t13,c5

: y en el que dicho segundo isómero está presente en un concentración mayor del 20% en peso de dicho primer isómero.

2. El método según la reivindicación 1, que comprende además la etapa de

c): separación de dicho primer isómero del ácido octadecadienoico parcialmente purificado y dicho segundo isómero del ácido octadecadienoico para proporcionar un segundo isómero del ácido octadecadienoico parcialmente purificado.

3. El método según la reivindicación 2, en el que dicha etapa de purificación se lleva a cabo mediante cromatografía de gases o líquidos.

4. El método según la reivindicación 1, en el que dicho isómero del ácido octadecadienoico comprende un éster de alquilo.

5. El método según la reivindicación 1, que comprende además la síntesis de un acilglicerol con dicha mezcla que comprende al menos dicho primer isómero del ácido octadecadienoico y un segundo isómero del ácido octadecadienoico.

6. El método según la reivindicación 5, en el que dicho acilglicerol es un triglicérido.