JP2004510736A - アルコール中毒治療における神経ペプチドｙ拮抗物質の使用 - Google Patents
アルコール中毒治療における神経ペプチドｙ拮抗物質の使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2004510736A JP2004510736A JP2002532218A JP2002532218A JP2004510736A JP 2004510736 A JP2004510736 A JP 2004510736A JP 2002532218 A JP2002532218 A JP 2002532218A JP 2002532218 A JP2002532218 A JP 2002532218A JP 2004510736 A JP2004510736 A JP 2004510736A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- npy
- alcohol
- receptor antagonist
- ethanol
- selective
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
- A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline
- A61K31/353—3,4-Dihydrobenzopyrans, e.g. chroman, catechin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
- A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
- A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
- A61P25/32—Alcohol-abuse
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Abstract
本発明は、治療的に有効な量のＮＰＹレセプター拮抗物質を投与することを含む、哺乳類でアルコール中毒およびアルコール乱用を治療する方法を提供する。本発明はまた、前記ＮＰＹレセプター拮抗物質を含有する医薬組成物を目的とする。
Description
【０００１】
序論
発明の技術分野
本発明は、哺乳類におけるアルコール中毒およびアルコール乱用の治療を目的とする組成物および方法に関する。
背景
アルコール中毒は現代社会における最も重要な問題の１つである。米国予防衛生研究所によれば、アルコール乱用は、毎年の全自動車事故死亡者数（２００００人を超える）の４５％の原因となっており、短期入院総数のほぼ４４％が含まれる。その他に２５０００人がアルコール付随肝硬変で死亡している（ＮＩＨ報告Ｎｏ．９７−４０１７、（１９９７））。法務省（Ｊｕｓｔｉｃｅ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ）の報告によれば、アルコールは、１９９８年の全凶悪犯罪のほぼ４０％に深く関わっている。合衆国でアルコール乱用の結果生じる経済コストは、毎年ほぼ１５００億ドルと概算される。
【０００２】
ジスルフィラム［アンタビュース（Ａｎｔａｂｕｓｅ）（登録商標）］およびナルトレキソン［トレキサン（Ｔｒｅｘａｎ）（登録商標）］は、アルコール乱用治療で補助的に使用される現在入手できるＦＤＡが承認した唯一の製品である。ジスルフィラムは、体内でのアルコールの中間代謝を阻止し、アセトアルデヒドの蓄積をひき起こすことによって機能する。前記アセトアルデヒドは続いて顕著な行動上のおよび生理学的副作用をもたらす。前記薬剤を服用することに対する患者の協力は上記の副作用のために少ない（以下の文献を参照されたい：Ｔ．Ｗ． Ｒａｌｌ， ”Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ａ．Ｇ． Ｇｉｌｍａｎ ｅｔ ａ．， ８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｃｈａｐ． １７， ｐｐ．３７８−３７９）。ナルトレキソンは周知の麻薬拮抗物質であり、内因性オピエート褒賞系の活性化を阻止することによって機能すると考えられる（前記系はアルコール消費によって活性化される）。実際、ナルトレキソンは比較的作用時間が短いため穏やかな作用を有するのみであり、薬剤が何らかの効果を発揮するためには、通常患者は行動療法による同時治療を必要とする（Ｊ．Ｒ． Ｖｏｌｐｉｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．， Ａｒｃｈ． Ｇｅｎ． Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ， １９９２， ４９：８７６−８８０）。したがって、哺乳類のアルコール中毒およびアルコール乱用の治療に有用な新規な方法および組成物を開発することは重要である。
【０００３】
アルコールが脳に作用する神経生物学的メカニズムおよび中毒をひき起こす行動プロセスの性状は完全には明らかにされていない。他の過剰消費性行動（例えば肥満）の研究は、視床下部を主要な中枢神経系の調節系と特定した（例えば以下の文献を参照されたい：Ｊ．Ｅ． Ｂｌｕｎｄｅｌｌ， Ａｐｐｅｔｉｔｅ， １９８６， ７：３９−５６； Ｓ．Ｐ． Ｋａｌｒａ ｅｔ ａｌ．， Ｅｎｄｏｃｒ． Ｒｅｖ．， １９９９， ２０：６８−１００）。最近得られた証拠は、アルコールおよび食物の摂取は視床下部伝達系によって調節されることを示唆している。副脳室核（ＰＶＮ）へのセロトニン（５−ＨＴ）の注射はノルエピネフリン誘発炭水化物摂取を抑制する（Ｓ．Ｆ． Ｌｅｉｂｏｗｉｔｚ ａｎｄ Ｇ． Ｓｈｏｒ−Ｐｏｓｎｅｒ， Ａｐｐｅｔｉｔｅ， １９８６， ７：Ｓｕｐｐｌ．１−１４）。同様に、ＰＶＮへの部位特異的ノルエピネフリン輸液はまたアルコールの自己摂取の増加をもたらし、５−ＨＴの同時輸液によって完全に阻止される（Ｃ．Ｗ． Ｈｏｄｇｅ ｅｔ ａｌ．， Ａｌｃｏｈｏｌ Ｃｌｉｎ． Ｅｘｐ． Ｒｅｓ．， １９９６， ２０：１６６９−１６７４）。その結果によって、摂食行動およびアルコール希求行動は、共通の視床下部メカニズムによって調節されるかもしれないということが提唱される（Ｈ．Ｈ． Ｓａｍｓｏｎ ａｎｄ Ｃ．Ｗ． Ｈｏｄｇｅ， ”Ｎｅｕｒｏｂｅｈａｖｉｏｒａｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｔｈａｎｏｌ ｉｎｔａｋｅ”， ｉｎ ”Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｅｔｈａｎｏｌ ｏｎ ｔｈｅ Ｎｅｒｖｏｕｓ Ｓｙｓｔｅｍ，” Ｒ．Ａ． Ｄｅｉｔｒｉｃｈ ａｎｄ Ｖ．Ｇ． Ｅｒｗｉｎ， ｅｄｓ．， ｐｐ．２０３−２２６， ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ， １９９６）。
【０００４】
神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）（３６アミノ酸残基ペプチド）は、これまでに知られている摂食行動のもっとも強力な刺激因子である。脳室内または視床下部核内へのＮＰＹの輸液（Ｂ．Ｇ． Ｓｔａｎｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｐｅｐｔｉｄｅ， １９９５， ６：１２０５−１２１１； Ｂ．Ｇ． Ｓｔａｎｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．， １９９３， ６０４：３０４−３１７）は、食物摂取を亢進し（Ｂ．Ｇ． Ｓｔａｎｌｅｙ ａｎｄ Ｓ．Ｆ． Ｌｅｉｂｏｗｉｔｚ， Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．， １９９４， ３５：２６３５−２６４２）、さらに反復注射は過食症および肥満をもたらす（Ｂ．Ｇ． Ｓｔａｎｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｐｅｐｔｉｄｅ， １９９６，７：１１８９−１１９２）。ＮＰＹの多くの脳領域への注射は食物摂取を亢進するが、ＰＶＮがその主要作用部位である（Ｂ．Ｇ． Ｓｔａｎｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １９８５， ８２：３９４０−３９４３； Ｓｔａｎｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， １９９３）。ＮＰＹレセプターは種々のサブタイプとして存在することが判明している（前記サブタイプはサブタイプ選択的拮抗物質と反応する）（Ａ． Ｂａｌａｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ， Ｐｅｐｔｉｄｅ， １９９７， １８：４４５−４５７）。多大な注意が、ＮＰＹの食物希求作用および食欲促進作用を仲介するレセプターサブタイプに向けられた（Ｃ． Ｇｅｒａｌｄ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， １９９６， ３８２：１６８−１７１； Ｄ． Ｏ’Ｓｈｅａ ｅｔ ａｌ．， Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ， １９９７， １３８：１９６−２０２； Ｙ．Ｈ． Ｈｕ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， １９９６， ２７１：２６３１５−２６３１９）。Ｙ１レセプターは最初は、Ｙ１作動薬［Ｐｒｏ３４］−ＮＰＹが摂食を刺激するので、前記作用に必要なレセプターとして提唱された。しかしながら、強力な食欲促進作用はまた、Ｙ１レセプターで低い能力をもつＮ末端切断ＮＰＹフラグメント（ＮＰＹ２−３６）によっても惹起される。これは、新規な“Ｙ１様”レセプターが前記作用を仲介するかもしれないという考えをもたらした（Ｇ．Ｓｔａｎｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｐｅｐｔｉｄｅｓ， １９９２， １３：５８１−５８７）。さらに、［Ｐｒｏ３４］−ＮＰＹは、ＮＰＹの注射後に認められる食物摂取の約５０％を刺激し、Ｙ１レセプターは、ＮＰＹの食欲促進作用のある程度の部分について重要であるかもしれないことを示唆した（Ｏ’Ｓｈｅａ ｅｔ ａｌ．， １９９７）。
【０００５】
非ペプチド性ＮＰＹのＹ１レセプター選択的拮抗物質が知られている。Ｙ１選択的ＢＩＢＰ３２２６のデザイン、選択性および心脈管系特性が報告された（Ｈ．Ｎ． Ｄｏｏｄｓ ｅｔ ａｌ． Ｒｅｇｕｌ． Ｐｅｐｔ．， １９９６， ６５：７１−７７）。米国特許第５，６１６，６２０号明細書は、心脈管系疾患、肥満および糖尿病の治療で有用なものとしてＢＩＢＰ３２２６およびその類似体を開示している。ＢＩＢＯ３３０４は、Ｙ１レセプターサブタイプに対してナノモル以下で親和性を示す非ペプチド性拮抗物質である。これは、ＮＰＹの適用によって、または飢餓によって誘発されるラットの食物摂取を顕著に抑制する（Ｈ．Ａ． Ｗｉｅｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒ． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．， １９９８， １２５：５４９−５５）。米国特許第６，１１４，３９０号明細書は、多くの疾患および異常（高血圧、心脈管系疾患、肥満および糖尿病を含む）の治療で有用であるとしてＢＩＢＯ３３０４およびその類似体を開示している。非ペプチド性ＮＰＹＹ５レセプター選択的拮抗物質もまた摂食行動に影響を与えることが判明している（Ｋａｎａｔａｎｉ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ．， ２０００， ２７２：１６９−１７３）。
【０００６】
関連文献
いくつかの実験で、エタノールの生化学的、生理学的作用および行動における作用に対するＮＰＹの関与が示唆された。選別的に交配したアルコール嗜好性（Ｐ）ラットでは、海馬、扁桃、前頭皮質でＮＰＹ様免疫反応性レベルがアルコール非嗜好性（ＮＰ）ラットと比較して低い（Ｃ．Ｌ． Ｅｈｌｅｒｓ ｅｔ ａｌ．， Ａｌｃｏｈｏｌ Ｃｌｉｎ． Ｅｘｐ． Ｒｅｓ．， １９９８ａ， ２２：１７７８−１７８２）。しかしながら、Ｐラットは、ＮＰラットよりもＰＶＮおよび弓状核でより強いＮＰＹ免疫反応性を示す（Ｂ．Ｈ． Ｈｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ａｌｃｏｈｏｌ Ｃｌｉｎ． Ｅｘｐ． Ｒｅｓ．， １９９９， ２３（６）：１０２３−１０３０）。同様に、６％エタノール含有飼料を長期間供給することによって、ＰＶＮのＮＰＹ含有量が増加し、ロング＝エバンスラットの摂食パターンに変化が生じた（Ｊ．Ｔ． Ｃｌａｒｋ ｅｔ ａｌ．， １９９８， Ｒｅｇｕｌ． Ｐｅｐｔ．， ７５−７６：３３５−３４５）。ＰおよびＮＰラットの遺伝的連関分析によって、ＮＰＹ遺伝子を含む染色体領域に顕著な定量的形質遺伝子座が特定された（Ｌ．Ｇ． Ｃａｒｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｌｃｏｈｏｌ Ｃｌｉｎ． Ｅｘｐ． Ｒｅｓ．， １９９８， ２２：８８４−８８７）。ＮＰＹを欠く変異マウスとＮＰＹを過剰発現する遺伝子導入マウスとの比較によって、エタノール摂取および急性感受性は、脳内のＮＰＹ総レベルと反比例することが示された（Ｔ．Ｅ． Ｔｈｉｅｌｅ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， １９９８， ３９６：３６６−３６９）。
【０００７】
選別交配したアルコール高摂取（ＨＡＤ）ラットは、アルコール低摂取（ＬＡＤ）ラットよりもＰＶＮにおけるＮＰＹ免疫反応性が低い（Ｈｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．， １９９９）。さらに、ＮＰＹを欠くヌル変異体マウスは野生型のコントロールマウスよりも多量のエタノールを飲み、さらにＮＰＹを過剰発現する遺伝子導入マウスは野生型コントロールマウスよりもエタノールを少ししか飲まない（Ｔｈｉｅｌｅ ｅｔ ａｌ．， １９９８）。これらのデータを総合すれば、ＮＰＹレベルの低下はエタノールの自己摂取の増加と結びついている。しかしながら、ＨＡＤラットはまた、ＬＡＤラットと比較して中枢扁桃のＮＰＹレベルが低く（Ｈｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．， １９９９）、他の脳領域におけるＮＰＹレベルの変化が、前記特別なラットのエタノール自己摂取に影響を与える可能性を示唆している。さらに、ＮＰＹヌル変異体および遺伝子導入マウスの行動は、全体的なＮＰＹの変化だけでなく関連ペプチド作動系における潜在的な発育代償によっても影響を受ける可能性があり、このことは、エタノールの自己摂取における視床下部の役割に関して上記の研究から特定の結論を引き出すことを困難にしている。
【０００８】
発明の概要
本発明は、哺乳類のアルコール中毒およびアルコール乱用の治療方法を提供する。前記方法は治療的に有効な量のＮＰＹレセプター拮抗物質を投与することを含む。本発明はまた、前記物質を含有する医薬組成物を目的とする。
本発明の一観点において、ＰＶＮ内のＮＰＹレセプターとＮＰＹ（または他のリガンド）の結合によるＮＰＹレセプターの活性化が、ＮＰＹレセプター拮抗物質の投与によって防止または低下させられる。ある態様では、本発明は、アルコール中毒の患者によるアルコールの自己摂取を減少させる方法を提供する。別の態様では、本発明は、アルコール中毒患者のアルコール希求行動を減少させる方法を提供する。さらに別の態様では、本発明は、回復中のアルコール中毒患者の飲酒再発の発生を防止または減少させる方法を提供する。これらの観点は、治療的に有効な量のＮＰＹレセプター拮抗物質を投与することによって達成される。所望される目的に応じ、治療的に有効な量は、アルコール中毒患者のアルコールの自己摂取およびアルコール嗜好を減少させるために十分であり、アルコール中毒患者のアルコール希求行動を低下させるために十分であり、または回復中のアルコール中毒患者の飲酒再発の発生を減少させるために十分であり、それによってアルコール中毒およびアルコール乱用が治療される。本発明は、アルコール中毒、アルコール依存症またはアルコール乱用の治療において、アルコールの渇望を減少させ、アルコール希求衝動を抑制し、さらに個々人が遺伝的にアルコール中毒またはアルコール乱用の傾向があるか否かにかかわらず、前記個々人のアルコール消費を制限するために有用である。
本発明の他の目的は、以下の説明および請求の範囲を通読することによって当業者には明白となろう。
【０００９】
具体的な態様の説明
本発明は、治療的に有効な量のＮＰＹレセプター拮抗物質を投与することを含む哺乳類でアルコール中毒またはアルコール乱用を治療する方法を提供する。本発明のある態様では、ＰＶＮ内のＮＰＹレセプターが治療的に有効量のＮＰＹレセプター拮抗物質によって遮断される。治療的に有効な量は、罹患哺乳類のエタノール自己摂取および嗜好性を減少させるために十分で、それによって過剰なアルコール消費を医学的に管理してアルコール依存およびアルコール乱用を治療する。関連する観点において本発明は以下の方法を提供する：アルコール中毒患者に治療的に有効な量のＮＰＹレセプター拮抗物質を投与し、さらに前記投与の前後に前記患者のアルコール自己摂取レベルを測定することを含む、アルコール中毒患者でアルコールの自己摂取を減少させる方法、アルコール中毒患者に治療的に有効な量のＮＰＹレセプター拮抗物質を投与し、さらに前記投与の前後に前記患者のアルコール希求行動レベルを測定することを含むアルコール中毒患者のアルコール希求行動を減少させる方法、および回復中のアルコール中毒患者に治療的に有効な量のＮＰＹレセプター拮抗物質を前記患者に投与し、さらに前記投与の前後に前記患者の飲酒再発の発生頻度を測定することを含む飲酒の再発発生を防止または減少させる方法。前記観点は全てアルコール中毒およびアルコール乱用の一般的および最終的目標に関連する。
【００１０】
ヒトのアルコール依存およびアルコール乱用は下記の症状のいずれかを特徴とする：（１）顕著な耐性（これは、酩酊または所望の効果を得るために顕著に増加したアルコール量（少なくとも５０％増加）を必要とする）または同量のアルコールの持続的使用による効果の顕著な低下；（２）特徴的なアルコールの禁断症状；（３）禁断症状の緩和または回避のための頻繁なアルコール摂取；（４）断酒または飲酒のコントロールに対する持続的要求または１回もしくは２回以上の試みの失敗；（５）意図したものより大量または長時間のアルコール消費；（６）アルコール消費による重要な社会活動、職業活動または余暇活動の断念または低下；（７）アルコール入手のため、飲酒のため、またはアルコールの作用から回復するために必要な活動に費やされる時間が長い；（８）職場、学校または家庭で主要な役割または義務を果たすように期待されているときにしばしば酩酊しているか、禁断症状がある；（９）アルコールの使用によって惹起されるかまたは悪化する社会的、精神的または身体的問題の持続的存在または再発を認識しているにもかかわらず持続的に飲酒している。典型的には、前記症状は少なくとも１ヶ月持続するか、または長期間にわたって繰返し発生している。アルコール乱用は、１２ヶ月以内に下記の１つまたは２つ以上の出来事によって示される、特に臨床的に顕著な障害または窮迫を特徴とする：（１）職場、学校または家庭で主要な役割または義務を果たすことできない飲酒の繰返し；（２）身体的に危険な状態での飲酒の繰返し；（３）アルコール関連の法律上の問題の繰返し；または（４）アルコールの作用によって惹起される持続的または繰り返される社会的または対人的問題にもかかわらずアルコール使用が持続する。
【００１１】
本発明の別の態様では、アルコール中毒の哺乳類ホストでＮＰＹの作用を遮断し、さらにアルコールに対する渇望を減少させるために十分な量のＮＰＹレセプター拮抗物質が投与される。本発明は、回復中のアルコール中毒患者で飲酒再発の防止に有用である。脳内のＮＰＹレベルの上昇は、アルコール希求行動の急激な増加およびアルコールに対する強い渇望と相関する。ＮＰＹレセプターでＮＰＹの作用を遮断することによって、前記渇望が低下し、さらに飲酒再発の可能性が減少する。
【００１２】
本発明では、“ＮＰＹレセプター拮抗物質”または“ＮＰＹ拮抗物質”は、脳内または末梢のＮＰＹレセプター上で内因性または外因性神経ペプチド−Ｙ（ＮＰＹ）の作用を遮断し、アルコールの自己摂取が減少するように機能する化合物または組成物を指す。好ましくは、ＮＰＹ拮抗物質は、アルコール渇望およびアルコールの自己摂取を減少させ、さらに通常の食物または水の消費には悪影響を与えない。非選択的なＮＰＹ拮抗物質は、Ｙ１および／またはＹ５レセプターサブタイプを含む多数のＮＰＹレセプターサブタイプと結合する拮抗物質である。本発明で使用できる非選択的ＮＰＹ拮抗物質の例は、［Ｄ−Ｔｙｒ２７，３６，Ｄ−Ｔｈｒ３２］神経ペプチドＹ（２７−３６）（Ｄ−ＮＰＹと略す）である。Ｄ−ＮＰＹ（拮抗特性によりＮＰＹＹ１、Ｙ２、Ｙ４およびＹ５レセプターサブタイプと結合する）は、Ｍｅｙｅｒｓらの報告（Ｒ．Ｄ． Ｍｅｙｅｒｓ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ． Ｂｕｌｌ．， １９９５， ３７：２３７−２４５）（前記文献は本明細書に含まれるものとする）にしたがって得ることができる。本発明で使用できる別の選択的ＮＰＹ拮抗物質はＢＷ１２２９Ｕ９１である。これはＹ１およびＹ４レセプターに対してナノモルの高い親和性を示し、Ｙ５レセプターに対しては中等度の親和性を示すが、Ｙ２レセプターに対してははるかに低い親和性を有する。ＢＷ１２２０Ｕ９１は、Ｗｉｄｄｏｗｓｏｎらの報告（Ｐ．Ｓ． Ｗｉｄｄｏｗｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐｅｐｔｉｄｅｓ， １９９９， ２０：３６７−３７２）（前記文献は本明細書に含まれるものとする）にしたがって得ることができる。
【００１３】
好ましい態様では、ＮＰＹレセプター拮抗物質はＮＰＹＹ１レセプターサブタイプに対して選択的である。本発明で有用なＹ１選択的拮抗物質の例は、（Ｒ）−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−Ｄ−アルギニンアミド（ＢＩＢＰ３２２６としても知られている）である。ＢＩＢＰ３２２６は、米国特許第５，６１６，６２０号明細書およびＤｏｏｄｓらの文献（Ｈ．Ｎ． Ｄｏｏｄｓ ｅｔ ａｌ．， Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ， １９９６， ６５：７１−７７）（両文献は本明細書に含まれるものとする）の記載にしたがって得ることができる。他の有用なＹ１選択的拮抗物質には、例えば以下のＢＩＢＰ３２２６の類似体並びに医薬的に許容できるその塩および水和物が含まれる：
（Ｒ）−Ｎ２−［ビス（４−ブロモフェニル）アセチル］−Ｎ−［（４−ヒドロキシフェニル）−メチル］−アルギニンアミド
（Ｒ）−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［［４−（２−ヒドロキシエチル）フェニル］−メチル］−アルギニンアミド
（Ｒ）−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−アルギニンアミド
（Ｒ）−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［［４−（ヒドロキシメチル）フェニル］−メチル］−アルギニンアミド
Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［４−ヒドロキ−３−メチルフェニル］−メチル］アルギニンアミド
（Ｒ，Ｓ）−３−［３−（アミノイミノメチル）フェニル］−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−アラニンアミド
（Ｒ）−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−Ｎ−メチル−アルギニンアミド
（Ｒ，Ｓ）−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−Ｎ５−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−オルニチンアミド
Ｎ−［（３，５−ジメチル−４−ヒドロキシフェニル）メチル］−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−アルギニンアミド
Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［（４−メトキシフェニル）メチル］−アルギニンアミド、および
（Ｒ）−Ｎ−［［４−［（４，５−ジヒドロ−５，５−ジメチル−２，４（３Ｈ）−ジオキソ−１Ｈ−イミダゾール−３−イル）メチル］フェニル］メチル］−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−アルギニンアミド。
【００１４】
本発明で有用なＮＰＹＹ１レセプター拮抗物質のさらに別の例は、（Ｒ）−Ｎ−［［４−（アミノカルボニルアミノメチル）−フェニル］メチル］−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−アルギニンアミドトリフルオロアセテート（ＢＩＢＯ３３０４としても知られている）である。ＢＩＢＯ３３０４は、米国特許第６，１１４，３９０号明細書およびＷｉｅｌａｎｄらの報告（Ｈ．Ａ． Ｗｉｅｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒ． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．， １９９８， １２５：５４９−５５）（両文献は本明細書に含まれるものとする）に記載された方法にしたがって得ることができる。
【００１５】
他の有用なＹ１選択的拮抗物質には、例えば以下のＢＩＢＯ３３０４の類似体並びに医薬的に許容できるその塩および水和物が含まれる：
（Ｒ）−Ｎ−［［４−（アミノカルボニルアミノメチル）フェニル］メチル］−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−アルギニンアミド、
（Ｒ，Ｓ）−Ｎ５−（アミノイミノメチル）−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−Ｎ５−メチル−オルニチンアミド、
（Ｒ）−Ｎ−［［４−（アミノカルボニルメチル）フェニル］メチル］−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−アルギニンアミド、
（Ｒ）−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［［４−（メチルアミノカルボニルアミノメチル）フェニル］メチル］−アルギニンアミド、
（Ｒ）−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［［４−（エチルアミノカルボニルアミノメチル）フェニル］メチル］−アルギニンアミド、
（Ｒ）−Ｎ−［［４−（アミノカルボニルアミノメチル）フェニル］メチル］−Ｎ２−［ビス−（４−メトキシフェニル）アセチル］−アルギニンアミド、
（Ｒ）−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［［４−（エトキシカルボニルメチルアミノカルボニルアミノメチル）フェニル］メチル］−アルギニンアミド、
（Ｒ）−Ｎ−［［４−（アミノカルボニルアミノメチル）フェニル］メチル］−Ｎ２−［ビス−（４−フルオロフェニル）アセチル］−アルギニンアミド、
（Ｒ）−Ｎ−［［４−（アミノカルボニルアミノメチル）フェニル］メチル］−Ｎ２−［ビス−（４−クロロフェニル）アセチル］−アルギニンアミド、
（Ｒ）−Ｎ−［［４−（アミノカルボニルアミノメチル）フェニル］メチル］−Ｎ２−［ビス−（４−ヒドロキシフェニル）アセチル］−アルギニンアミド、
（Ｒ）−Ｎ−［［４−（アミノカルボニルアミノメチル）フェニル］メチル］−Ｎ２−［ビス−［４−（メトキシカルボニルメトキシ）フェニル］アセチル］−アルギニンアミド、および
（Ｒ）−Ｎ−［［４−（アミノカルボニルアミノメチル）フェニル］メチル］−Ｎ２−［ビス−［４−（ヒドロキシカルボニルメトキシ）フェニル］アセチル］−アルギニンアミド。
【００１６】
他の有用な選択的ＮＰＹＹ１レセプター拮抗物質の例は、米国特許第５，９６２，５３０号明細書および第６，０４０，２８９号明細書に開示されている（両文献は本明細書に含まれるものとする）。
本発明の別の態様では、ＮＰＹレセプター拮抗物質はＮＰＹＹ５レセプターサブタイプに対して選択的である。本発明で有用なＹ５選択的拮抗物質の例は、（２−（３，３−ジメチル−１−オキソ−４Ｈ−１Ｈ−キサンテン−９−イル）−５，５−ジメチル−シクロヘキサン−１，３ジオン）であり、これはＬ−１５２８０４としても知られている。Ｌ−１５２８０４は、Ｋａｎａｔａｎｉらの報告（Ｋａｎａｔａｎｉ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ．， ２０００， ２７２：１６９−１７３）（前記文献は本明細書に含まれるものとする）にしたがって得ることができる。
【００１７】
本明細書でＮＰＹレセプター拮抗物質またはＮＰＹ拮抗物質という用語が用いられるときは、ヒトおよび他の哺乳類でＮＰＹレセプター拮抗物質特性を有する医薬的に許容できる全ての塩がその中に含まれると解されるべきである。前記塩には例えば以下の無機酸または有機酸による塩が含まれる：酢酸、ギ酸、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酢酸、フマル酸、コハク酸、乳酸、マンデル酸、リンゴ酸、クエン酸、酒石酸、またはマレイン酸。さらに、ＮＰＹ拮抗物質がカルボキシ基を含む場合、無機および有機塩基を用いて医薬的に許容できる付加塩に変換することができる。適切な塩基の例には、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アンモニア、シクロヘキシルアミン、ジシクロヘキシルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミンおよびトリエタノールアミンが含まれる。
【００１８】
ＮＰＹ拮抗物質および医薬的に許容できる担体または賦形剤を含む医薬組成物は、アルコール中毒の治療で有効な薬剤であり、したがって本発明の別の特徴を提供する。本発明の別の態様は、ＮＰＹＹ１選択的またはＮＰＹＹ５選択的拮抗物質を含有する医薬組成物を含む。ＮＰＹＹ１選択的拮抗物質を含む医薬組成物が好ましい。好ましい全身投与用組成物は、投与されたとき血液脳関門を通過するか、または生理学的に活性な形態のＮＰＹＹ１またはＮＰＹＹ５拮抗物質を含む。
本発明を実施する場合、ＮＰＹ拮抗物質は、ＮＰＹがそのレセプターと作用する部位で前記拮抗物質が機能できることを条件に全身的または局所的に投与することができる。好ましくは、前記拮抗物質は、全身的に（例えば非経口的、経口的または腹腔内に）投与される。局所適用およびエアゾルの吸入もまた包含される。
【００１９】
１日当たり体重１ｋｇにつき約０．００１ｍｇから約１００ｍｇのオーダーのＮＰＹ拮抗物質の投与レベルがアルコール中毒の治療で有用である。単回投与製剤を製造するために担体物質と結合させることができる活性物質の量は、治療の対象者および個々の投与態様に応じて変動するであろう。ユニット製剤は一般に約１ｍｇから約５００ｍｇの有効成分を含むであろう。
個々の個体に固有の用量レベルは、ＮＰＹ拮抗物質の活性、年齢、体重、一般的な身体的および精神的健康状態、遺伝的素因、環境的な影響、性別、食事、投与期間、投与ルート、排出速度、および治療される個々の問題の重篤度を含む種々の要因によって左右されるであろう。例えば、アルコール中毒症状の治療に有用な用量レベルは、それぞれのアルコール乱用問題の重大度にしたがって個体間で変動するであろう。同様に、アルコール渇望を抑制するための用量レベルは、各個体のアルコール中毒症状の重篤度に応じて個体間で変動するであろう。当業者は、当技術分野で周知の方法を用い日常的な検査によって本明細書に記載したパラメータ内での適切な投与量を容易に決定できよう。
【００２０】
有効成分だけを投与することもできるが、前記有効成分を製剤として提供することが好ましい。経口投与に適した本発明の製剤は、別々に分離させたユニット形（例えばカプセル、カシェー（ｃａｃｈｅｔ）、錠剤またはロゼンジで、各々が予め定められた量の有効成分を含むもの）；粉末または顆粒形；水性液または非水性液中の溶液または懸濁液；または水中油乳濁液もしくは油中水乳濁液であろう。
有効成分はまたボラス、エレキシルまたはペースト形でもよい。
錠剤は、場合によって１つまたは２つ以上の補助成分とともに有効成分を圧縮または鋳型成形することによって製造できる。圧縮錠剤は、場合によって結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、表面活性剤または調剤物質と混合した自由流動形状（例えば粉末または顆粒）の有効成分を、適切な機械で圧縮することによって製造できる。湿製錠剤は、粉末の有効成分および不活性な希釈液で湿らせた適切な担体の混合物を適切な機械で鋳型成形することによって製造できる。
【００２１】
非経口投与に適した製剤は、便利には有効成分の滅菌水性調製物を含み、好ましくは服用者の血液と等張である。
鼻腔または口腔内投与に適した製剤（例えば以下に記載する自噴式粉末製剤）は、０．１から２０％ｗ／ｗ、例えば２％ｗ／ｗの活性製剤を含むことができる。
ヒトの治療で使用する本発明の製剤は、有効成分のための医薬的に許容できる担体および場合によって他の治療成分と一緒に有効成分を含む。前記担体は、製剤の他の成分と適合するという意味で“許容可能”でなければならず、さらにその服用者にとって有害であってはならない。
【００２２】
本発明の薬理学的に活性な化合物は、前記化合物の有効量を経口的または非経口的な適用に適した賦形剤または担体と結合または混合された状態で含む医薬組成物の製造に有用である。好ましいものは、以下の１つまたは２つ以上のものと一緒に前記有効成分を含む錠剤およびゼラチンカプセルである：（ａ）希釈剤、例えばラクトース、デキストロース、シュクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース、グリシンなど；（ｂ）潤滑剤、例えばシリカ、タルク、ステアリン酸、そのマグネシウム塩もしくはカルシウム塩、ポリエチレングリコールなど；錠剤の場合にはまた；（ｃ）結合剤、例えば珪酸マグネシウムアルミニウム、澱粉ペースト、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムまたはポリビニルピロリドンなど；さらに所望する場合は（ｄ）崩壊剤、例えば沸騰散混合物など；および（ｅ）吸収剤、着色剤、香料および甘味料など。注射可能な組成物は好ましくは水性等張溶液または懸濁液であり、座薬は有利には脂肪性乳液または懸濁液から製造される。前記医薬組成物は滅菌するか、および／または補助剤、例えば保存料、殺菌剤、湿潤剤または乳化剤、可溶化促進剤、浸透圧調節用の塩および／または緩衝剤を含むことができる。さらに、前記医薬組成物はまた、他の治療的に有益な物質を含むことができる。前記組成物は、それぞれ通常の混合方法、顆粒化方法または被覆方法にしたがって製造され、約０．１から７５％、好ましくは約１から５０％の有効成分を含む。
【００２３】
前記製剤は便利にはユニット製剤として提供され、製薬分野で周知の任意の方法によって製造できる。いずれの方法も、有効成分を１つまたは２つ以上の補助成分を構成する担体と結合させる工程を含む。一般に、前記製剤は、均一にかつ緊密に前記有効成分を液状担体または微細分割固形担体またはその両方と結合され、さらに必要な場合には所望の製剤に生成物を成形することによって製造される。
【００２４】
その目的の使用に対するＮＰＹ拮抗物質の有効性は多様な方法で決定できる。例えば、本発明の方法で有用な化合物は、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ ｖｉｖｏ動物モデルで得られたデータに基づいてさらに検査して選択することができる。例えば、化合物は、当業者に公知のｉｎ ｖｉｔｒｏバイオアッセイによりＮＰＹレセプターとの結合親和性について検定することができる。例えば、カナタニらの方法（Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ．， ２０００， ２７２：１６９−１７３）は、ＮＰＹレセプターサブタイプ（Ｙ１、Ｙ２、Ｙ４およびＹ５）を個々に発現することが知られている種々の哺乳類細胞を使用する。その結合親和性（Ｋｉ）が、放射能標識ＮＰＹとの競合的結合アッセイでナノモルの範囲内にあれば、テスト化合物は特定のレセプターサブタイプの選択的競合物質であると考えられる。
【００２５】
化合物がＮＰＹ拮抗物質であるか否かを決定する別の方法は、細胞内Ｃａ２＋濃度のＮＰＹ誘発増加を抑制するテスト化合物の能力を測定するものである。前記アッセイは、上記と同じ細胞を用い、テスト化合物の存在下または非存在下およびＮＰＹの存在下または非存在下で実施される。細胞内Ｃａ２＋を増加させるＮＰＹの能力をナノモルの範囲内のＩＣ５０で抑制するテスト化合物は拮抗物質であると考えられる。テスト化合物がただ１つのＮＰＹレセプターサブタイプの拮抗物質である場合は、前記化合物は選択的拮抗物質であると考えられる。非選択的ＮＰＹレセプター拮抗物質は、２つまたは３つ以上のレセプターサブタイプで適切な結合親和性を示す。
【００２６】
公知のＮＰＹレセプター拮抗物質およびＮＰＹＹ１選択的またはＹ５選択的レセプター拮抗物質のアルコール渇望減少およびアルコール自己摂取減少における有効性は、実験動物モデルで検査することができる。簡単に記せば、ロングエバンスラットを実験室の環境に対して条件付けし、Ｈｏｄｇｅら（Ａｌｃｏｈｏｌ， １９９３， １０：１９１−１９６）が記載したように、シュクロース減衰方法（ｓｕｃｒｏｓｅ−ｆａｄｉｎｇ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ； Ｈ．Ｈ． Ｓａｍｓｏｎ， Ａｌｃｏｈｏｌ Ｃｌｉｎ． Ｅｘｐ． Ｒｅｓ．， １９８６， １０：４３６−４４２）を用いて水と一緒に置かれているエタノール（１０％ｖ／ｖ）を自己摂取するように訓練した。定位手術を実施して、ＰＶＮに向けてインジェクターガイドカニューレを移植した。前記条件付けしたラットのＰＶＮに、ＮＰＹとともにまたはＮＰＹ無しでテスト化合物の微量注入を実施する。前記ラットに直ちに水またはエタノール（１０％ｖ／ｖ）のどちらかを自己摂取する機会を与える。消費したエタノールまたは水を測定する。エタノールの摂取は、消費したミリリットルからグラム／キログラム体重に変換する。相対的エタノール摂取（嗜好性）は、全摂取液体（エタノール＋水（ｍｇ））で割った消費エタノール（ｍｇ）として算出する。薬剤の投与効果は平方偏差の一方向繰返し測定値分析（ｏｎｅ−ｗａｙ ｒｅｐｅａｔｅｄ ｍｅａｓｕｒｅｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ）（ＡＮＯＶＡ）によって解析する。薬剤投与と賦形剤コントロールとの間のｐｏｓｔ−ｈｏｃ比較は、ペアード（ｐａｉｒｅｄ）ｔ検定または適切な場合にはダンネットの（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ）ｔ検定を用いて実施する（ＳｉｇｍａＳｔａｔ， Ｊａｎｄｅｌ， Ｓａｎ Ｒａｆａｅｌ， ＣＡ）。テスト化合物が、アルコール自己摂取のＮＰＹ誘発増加においてまたは基準自己摂取において統計的に有意な減少を生じたとき、前記テスト化合物は有効であると考えられる。
【００２７】
ＮＰＹ拮抗物質の有効性をテストする別の適切な動物モデルは、Ｏｌｉｖｅら（Ｅｕｒ．Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． ２０００， １２：４１３１−４１４０）の記載にしたがってアルコール強化レバー押し（ａｌｃｏｈｏｌ−ｒｅｉｎｆｏｒｃｅｄ ｌｅｖｅｒ ｐｒｅｓｓｉｎｇ）行動を用いる。前記モデルは、アルコール希求行動を防止もしくは遅らせるＮＰＹ拮抗物質、または回復中のアルコール中毒者の飲酒再発を防止もしくは減少させるＮＰＹ拮抗物質の特定に特に有用である。
一般的に認められている動物モデルでの一般的毒性プロフィルおよび所望の投与ルートによる生体利用性もまた、アルコール中毒治療での使用に適したＮＰＹ拮抗物質の選別で考慮される。
【００２８】
アルコール中毒治療における本発明の方法および組成物の効能はまた、場合によって、適切な基準および倫理的ガイドラインの下で実施されるヒトの臨床試験で標準的な方法を用いて評価することができる。例えば、二重盲検、プラセボ対照実験を文献の記載（Ｖｏｌｐｉｃｅｌｌｅ ｅｔ ａｌ．， Ａｒｃｈ． Ｇｅｎ． Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ， １９９２， ４９：８７６−８８０）にしたがって実施することができる。簡単に記せば、アルコール依存についてＤＳＭ−ＩＶ診断基準（アルコール禁断の生理的症状を含む）に適合する対象者を、標準的な解毒治療の後で４つの治療群に分ける：（１）テスト化合物を投与；（２）プラセボ化合物を投与；（３）テスト化合物および行動療法を実施；（４）プラセボ化合物および行動療法を実施。３ヶ月間、全対象者は検査技師によって週単位で検査を受ける。前記検査技師は、体内アルコール検出検査を実施し、さらにアルコール渇望、アルコール希求、アルコール消費および気分を調べる。得られたデータは標準的な統計技術によって解析される。テスト化合物は、アルコール自己摂取、アルコール希求行動または飲酒再発において統計的に有意な減少をもたらすとき有効であると考えられる。いずれの特別な患者についても、前記方法の有効性は類似の態様で決定することができる。
以下の実施例は制限としてではなく例示として提供する。
【００２９】
【実施例】
実施例
方法
動物：３６匹のロングエバンスラットの雄（Ｈａｒｌａｎ， Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ， ＩＮ）を１匹ずつプレキシグラスのケージに収容した。水へのアクセスは行動訓練の第一日目は制限したが、実験の残りについては常に利用可能な状態であった。飼料は常にホームケージで摂取できる状態であった。実験チャンバーでは、エタノール（１０％ｖ／ｖ）および水が日中（Ｍ−Ｆ）セッション中は同時に利用できる状態であった。動物のコロニールームは、６：３０に点燈し１２Ｌ：１２Ｄサイクルで維持した。実験セッションは前記サイクルの点燈部分で実行した。全ての実験手順は研究所ガイドラインおよびＮＩＨガイドラインにしたがって実施した。
【００３０】
装置：実験セッションは、防音小部屋（ＭＥＤ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ， モデルＥＮＶ０１６Ｍ， Ｌａｆａｙｅｔｔｅ， ＩＮ）に静置したプレキシガラスチャンバー（２７×３７×２１ｃｍ）で実施した。チャンバーには外部の騒音を遮断した排気送風機が装備されていた。各チャンバーの右側の壁には２つの５０ｍＬの飲料ボトルがあった。薬剤溶液はステンレススチールの注入装置（Ｐｌａｓｔｉｃｓ Ｏｎｅ， Ｒｏａｎｏｋｅ， ＶＡ）から双方に投与された。前記注入装置はプラスチックチューブで２つの１．０μＬの注射筒（Ｈａｍｉｌｔｏｎ， Ｒｅｎｏ， ＮＶ）に連結されていた。注射筒には微量輸液ポンプ（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ， モデル２２， Ｎａｔｉｃｋ， ＭＡ）が搭載され、０．５μＬ／分／注射筒を輸液できるように設定されていた。
【００３１】
自己摂取手順：実験室の飼育条件に２週間順応させた後、飲料へのアクセスを１日１時間（２日間のみ）制限し、さらに２群のラット（Ｎ＝１２／群）を、１回のオーバーナイトセッション中にシュクロース（１０％ｖ／ｖ）と水に一晩中アクセスできるようにして実験チャンバー内のボトルから飲むように訓練した。続いて、シュクロース（１０％ｖ／ｖ）と水がともに摂取できる日中の１時間セッションを実施した。シュクロースおよび水の溶液の位置（すなわちチャンバーの左または右側）は毎日交換した。シュクロースと水の摂取パターンが安定したら、シュクロース減衰法（Ｈ．Ｈ． Ｓａｍｓｏｎ， Ａｌｃｏｈｏｌ Ｃｌｉｎ． Ｅｘｐ． Ｒｅｓ．， １９８６， １０：４３６−４４２）を以前に報告（例えば、Ｈｏｄｇｅ ｅｔ ａｌ．， １９９３）されたように用いて一緒に置かれたエタノール（１０％ｖ／ｖ）と水を自己摂取するようにラットを訓練した。簡単に記せば、エタノールを前記シュクロース溶液に徐々に添加し、ラットが１０％エタノール対水を自己摂取するまで前記溶液からシュクロースを徐々に減少させた。２ヶ月間のシュクロース減衰法の実施中に、エタノール／シュクロース溶液および水の位置を毎日交換した。全動物が水よりもエタノール／シュクロース溶液を好んだ（データは示されていない）。シュクロースが消失した後、１週間につき５日間、４ヶ月の間ラットにエタノール（１０％ｖ／ｖ）対水を自己摂取させ、長期のエタノール自己摂取歴を確立させた。４ヶ月の基準手順の最後に、前記動物に定位手術を実施した。続いて、前記動物に微量注入法を実施する前にさらに３ヶ月間エタノールを自己摂取させた。
【００３２】
ＮＰＹは消費性（ｃｏｎｓｕｍｍａｔｏｒｙ）行動に対して強力な作用を有するので、ＰＶＮ内にＮＰＹを輸液することによって、エタノールの薬理作用に関する経験とは無関係のメカニズムを介してエタノールの摂取を変化させることができるかもしれない。したがって、消費に対するＮＰＹの非特異的作用のコントロールとして、エタノールの自己摂取の長期歴をもたない別のラット群（ｎ＝１２）でＮＰＹの作用を調べた。実験に使用されたことが無いラットを１週間実験室に順応させた。続いて、前記動物にＰＶＮに誘導される両側性ガイドカニューレを移植した。回復のために術後１週間してから実験セッションを開始した。日中の６０分セッションの間に、エタノール（１０％ｖ／ｖ）対水が同時に摂取できる状態にある自己摂取チャンバーにラットを入れた。１週間の間エタノールおよび水の基準摂取レベルを測定した。続いて微量注入法を実施した。
【００３３】
定位手術：エタノールと水の摂取が安定化したとき、ＰＶＮへ誘導される両側性ステンレススチールガイドカニューレ（２６ゲージ）を外科手術により移植した。ラットをアトロピン（０．４ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を併用しながらペントバルビタールで麻酔し（６０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）、定位装置（Ｄａｖｉｄ Ｋｏｐｆ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ， Ｔｕｊｕｎｇａ， ＣＡ）に置いた。注入カニューレ（Ｐｌａｓｔｉｃｓ Ｏｎｅ， Ｒｏａｎｏｋｅ， ＶＡ）をＰＶＮの背側１ｍｍで終わるように移植し、頭蓋用ネジおよび歯科用セメントで頭蓋骨に固定した。除去可能なワイア栓子をガイドカニューレの全長に挿入し、組織による閉塞および外部破片による夾雑を制限した。ＰＶＮのために用いた定位座標は、ブレグマより−１．８ｍｍ、中線から側方へ＋１．０ｍｍ、さらに垂直面に対して側方に５°で皮質表面から下方に−６．５ｍｍであった（Ｐａｘｉｎｏｓ ＆ Ｗａｔｓｏｎ， １９８２）。全ての測定値は平坦な頭蓋から得た。手術後、全ラットに術後痛管理のためにブプレノルフィン（０．２ｍｇ／ｋｇ、皮下）を投与した。日中セッションは術後１週間して開始した。
【００３４】
微量注入法：エタノールと水の摂取が再び安定したら、週に１回微量注入を実施した。麻酔していないラットをプラスチック容器（１５×３０×深さ１５ｃｍ）に入れ移動を少なくした。栓子を取り除き、無菌的な３３ゲージの注入装置をガイドカニューレの末端を越えて１ｍｍの深さに両側に挿入した。蒸留水を賦形剤として薬剤溶液を総容積１μＬ（片側０．５μＬ）で輸液した。注入装置をさらに３０秒そのまま維持し薬剤を拡散させた。前記溶液の正確な流れを各注入の前後に確認し、化合物の送達を担保した。自己摂取セッションは微量注入後直ちに開始した。無菌的栓子を行動試験セッションの終了時に再び挿入した。同時投与の場合は、Ｄ−ＮＰＹまたはＢＩＢＰ３２２６はＮＰＹの１５分前に輸液した。賦形剤注入もまた実施して、輸液によって生じる局所圧または浸透圧の変化のためのコントロールとした。薬剤試験の前の１ヶ月間、動物を手で扱い、プラスチックタブに入れて、その後の薬剤作用に対する操作上の変化の影響を最小限にした。これらのセッションのデータは分析に用いなかった。微量注入プロトコルの完了時に、ラットを殺し、注射部位の組織学的証明のためにその脳を取り出した。
【００３５】
薬剤および投与量：中枢投与に用いた本実験の薬剤は以下のＮＰＹであった：非選択的ＮＰＹ拮抗物質、［Ｄ−Ｔｙｒ２７，３６，Ｄ−Ｔｈｒ３２］神経ペプチドＹ（２７−３６）（Ｄ−ＮＰＹ）およびＹ１選択的拮抗物質、（Ｒ）−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−Ｄ−アルギニンアミド（ＢＩＢＰ３２２６）。全ての薬剤は、リサーチ・ケミカル・インターナショナル（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ， Ｎａｔｉｃｋ， ＭＡ）から入手した。いずれの薬剤も中枢投与のために滅菌蒸留水に溶解した。薬剤溶液は投与の直前に調製し、総容積１μＬ（０．５μＬ／片側／分）で両側に輸液した。薬剤は用量を知らされている実験者によって任意の順序で投与された。自己摂取用エタノール（９５％）は水道水で希釈した。
【００３６】
組織学：実験終了後、ラットに致死量のペントバルビタールナトリウム（２００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を投与し、０．９％のＮａＣｌ、続いて１０％のホルムアミドを心臓を介して灌流させた。脳を取り出し、１０％ホルマリン／３０％シュクロース溶液に最小限１０日間保存した。固定した脳を凍結し、切片（４０μｍ）を作製し、クレシルバイオレットで染色して光学顕微鏡下で調べて注入位置を決定した。ＰＶＮで両側性に終わる明瞭に範囲が限定された注入装置の跡が確認されたラットのデータだけを用いた。
【００３７】
データの解析および統計学：消費されたエタノールと水の容積は、各１時間セッションの終わりに０．５ミリリットルまで測定した。エタノール摂取は、消費されたｍＬからｇ／ｋｇ体重に換算した。相対的エタノール摂取（嗜好性）は、（消費エタノールのｍＬ）÷全液体摂取（エタノール＋水のｍＬ）として算出した。薬剤の投与効果は、平方偏差の一方向繰返し測定値分析（ＡＮＯＶＡ）によって解析した。薬剤投与と賦形剤コントロールとの間のｐｏｓｔ−ｈｏｃ比較は、ペアードｔ検定または適切な場合にはダンネットのｔ検定を用いて実施した（ＳｉｇｍａＳｔａｔ， Ｊａｎｄｅｌ， Ｓａｎ Ｒａｆａｅｌ， ＣＡ）。
【００３８】
結果
行動訓練の結果大半の動物で安定なエタノールの自己摂取を得た。微量注入手順の前の２５日の間の平均エタノール摂取は０．４４±０．０５ｇ／ｋｇであった。ＮＰＹおよびＢＩＢＰ３２２６を投与された群の３匹のラットから得られたデータは、基準自己摂取の実施不良のために除外した。
組織学：冠状脳切片の組織学的検査の分析によって、シュクロース減衰の後でＮＰＹおよびＤ−ＮＰＹを輸液された１２匹のうち１１匹の動物が、ＰＶＮに両側性の注入を受けたことが示された。シュクロース減衰の後でＮＰＹおよびＢＩＢＰ３２２６を輸液されたラットの脳切片の検査によって、９匹のうち９匹の動物が、ＰＶＮに注入を受けたことが示された。１２匹のコントロール動物のうち１０匹がＰＶＮに両側注入を受けていた。前記注入手順によって、ＰＶＮ内に極めてわずかのグリオーシスと組織の損傷が生じた。ＰＶＮで両側性の注入を受けた動物のデータのみを提示する。
【００３９】
エタノール摂取および嗜好性に対するＮＰＹの作用：ＰＶＮへのＮＰＹ輸液の結果は図１に示されている。反復測定ＡＮＯＶＡによって、ＮＰＹはエタノール摂取を有意に高めることが示された［Ｆ（３，３０）＝７．６、ｐ＜０．００１］。ｐｏｓｔ−ｈｏｃダンネットの比較は、ＮＰＹのいずれの投与量も、賦形剤コントロールと比較したときエタノール摂取を有意に高めることを示した（図１Ａ）。個々のラットのデータを精査したところ、テストした１１匹のラットは全て、ＮＰＹのいずれの投与量でもエタノール摂取（ｇ／ｋｇ）の増加を示した。基準エタノール嗜好性は高いが（＞７０％）、ＰＶＮ内へのＮＰＹの投与もまた、エタノール嗜好性を用量依存態様で優位に増加させた［Ｆ（３，３０）＝３．３，ｐ＜０．０５］（図１Ｂ）。テストした最も高い２つの用量では、日中セッション中の液体消費の９０％以上がエタノールで占められていた（ｐ＜０．０５；図１Ｂ）。エタノール摂取および嗜好性は、実験セッション中の水の摂取の顕著な全体的減少を伴っていた［Ｆ（３，３０）＝５．４、ｐ＜０．０１］（図１Ｃ）。ｐｏｓｔ−ｈｏｃ比較によって、ＮＰＹは用量依存態様で水の摂取を減少させることが示された（ｐ＜０．０５）。
【００４０】
非選択的ＮＰＹレセプター拮抗物質Ｄ−ＮＰＹは、部分的であるが有意なエタノール摂取の低下をもたらした（図１Ａ、右）。ＮＰＹ（１０ｆｍｏｌ）と同時投与したとき、Ｄ−ＮＰＹはエタノールおよび水の摂取に対するＮＰＹの作用を完全に遮断した（図１Ａおよび１Ｃ、右）。嗜好性のデータにはその傾向はあったが、Ｄ−ＮＰＹはＮＰＹ誘発エタノール嗜好性増加を有意には変化させなかった（Ｐ＜０．０９、図１Ｂ）。したがって、前記データは、ＰＶＮへの外因性ＮＰＹの輸液は、ラットで強力にエタノール摂取およびエタノール嗜好性を高めることを示している。非選択的ＮＰＹ拮抗物質Ｄ−ＮＰＹは部分的には基準エタノール摂取を減少させ、ＮＰＹによって生じるエタノール摂取の増加を完全に遮断した。
【００４１】
表１は、エタノールの長期自己摂取歴をもたない、シュクロース減衰法を受けたラットのＰＶＮへのＮＰＹ輸液の影響を示す。データの値は平均±ＳＥＭとして提示されている。これらの条件下では、テストしたいずれの用量のＮＰＹもエタノール摂取、エタノール嗜好性または水の摂取に変化をもたらさなかった。
【００４２】
炭水化物およびアルコール摂取の類似作用は少し前から知られていた（Ｃ．Ｐ． Ｒｉｃｈｔｅｒ， Ｑ． Ｊ． Ｓｔｕｄ． Ａｌｃｏｈｏｌ， １９５３， １４：５２５−５３９； Ｐ．Ｊ． Ｋｕｌｋｏｓｋｙ， Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． Ｂｉｏｂｅｈａｖ． Ｒｅｖ．， １９８５， ９：１７９−１９０）。アルコール摂取は、ラットのタンパク質または脂肪消費を変化させることなく、栄養物特異的態様で炭水化物摂取を減少させる（Ｏ．Ａ． Ｆｏｒｓａｎｄｅｒ， Ａｌｃｏｈｏｌ， １９８８， ２３：１４３−１４９）。したがって、ヒトの実験では甘味物質の摂取はアルコール消費に反比例することを示している（Ｇ．Ａ． Ｃｏｌｄｉｔｚ ｅｔ ａｌ．， Ａｍ． Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｎｕｔｒ．， １９９１， ５４：４９−５５）。他の実験では、低炭水化物食はアルコール摂取を高めるが、高炭水化物食は飲酒を低下させることが示された（Ｒ．Ｖ． Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．， Ｑ． Ｊ． Ｓｔｕｄ． Ａｌｃｏｈｏｌ， １９７３， ３４：７５８−７６３； Ｌ． Ｐｅｋｋａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒ． Ｊ． Ｎｕｔｒ．， １９７８， ４０：１０３−１１３； Ｏ．Ａ． Ｆｏｒｓａｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｌｃｏｈｏｌ， １９８８， ５：２３３−２３８）。単純炭水化物はアルコール中毒者の再発を遅らせることが報告された（Ｍ．Ｅ． Ｆａｒｃａｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｎｕｔｒ． Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ， １９８４， １６：１２３−１２４）。さらにまた、回復中のアルコール中毒の女性は、強いアルコール渇望期に甘い食品をより多く食べることが報告された（Ｓ． Ｒｏｓｅｎｆｉｅｌｄ， Ｒｅｓ． Ｎｕｒｓ． Ｈｅａｌｔｈ， １９８８， １１：１６５−１７４）。したがって、自己摂取行動の発達中に、エタノールと炭水化物（例えばシュクロース）とを対にすることによって、食物摂取を仲介する恒常性維持神経系（すなわち視床下部）との密接な連動が生じるかもしれない。また別には、シュクロースで訓練した動物によるより高レベルのエタノール摂取がＮＰＹの作用に影響を与えた可能性もある。
【００４３】
ホームケージでの飼料および水の消費に対するＮＰＹの影響：ＰＶＮへのＮＰＹ輸液は、ホームケージで測定したとき体重（図２Ａ）または食物消費（図２Ｂ）には全く影響を与えなかった。しかしながら、前記用量のＮＰＹは、ホームケージで測定したとき水の摂取を有意に［Ｆ（１，１０）＝９．６２５、ｐ＜０．０５］減少させた（図２Ｃ）。単独またはＮＰＹと併用して投与したＤ−ＮＰＹは、体重に対して全く影響をもたらさなかった（図２Ａ、右）。ＮＰＹはまたシュクロース処理を受けていない動物のホームケージでの体重、食物摂取または水の摂取にも影響を及ぼさなかった。
【００４４】
食物摂取および体重に対してＮＰＹ関連作用が認められないことは、いくつかの要因によって説明することができる。第一に、本実験で使用したＮＰＹの濃度はｆｍｏｌの範囲であり、これは、摂食に典型的に用いられる濃度（ｐｍｏｌからｎｍｏｌの範囲である）より極めて低かった（例えば以下の文献を参照されたい：Ｓｔａｎｌｅｙ ａｎｄ Ｌｅｉｂｏｗｉｔｚ， １９８５）。したがって、エタノール自己摂取行動は、ＮＰＹレベルの変化に対して摂食よりもはるかに鋭敏であるかもしれない。第二に、ＰＶＮにおけるＮＰＹレベルの上昇は、環境内のもっとも関連する物質の消費を直ちに増加させるかもしれない。ＮＰＹはシュクロース非依存的方法で訓練したラットではエタノール摂取に影響を与えなかったので、これは本実験の事例ではないように思われる。
【００４５】
ＮＰＹは、エタノール自己摂取セッションで水の摂取を有意に減少させ、エタノール嗜好性の増加の一因となった。我々はまた、ＰＶＮへのＮＰＹの輸液後に、比較的小さいが有意である、ホームケージでの２４時間水摂取の減少を観察した。非選択的ＮＰＹ拮抗物質、Ｄ−ＮＰＹは、エタノール自己摂取セッションでＮＰＹ誘発水摂取減少を有意に逆転させ、Ｙ１選択的拮抗物質は水摂取減少傾向を逆転させた。総合すれば、前記データは、ＮＰＹはエタノール経験をもつラットとエタノール未経験ラットで水摂取に対して異なる作用を有することを示唆している。
【００４６】
エタノール摂取および嗜好性のＮＰＹ誘発変化に対するＹ１拮抗物質の影響：図３は、ＮＰＹおよびＮＰＹＹ１選択的拮抗物質（ＢＩＢＰ３２２６）のＰＶＮ内輸液の結果を示している。ＰＶＮへのＢＩＢＰ３２２６の単独輸液（１０．６μＭ）は、エタノール摂取もしくは嗜好性または水の摂取に対して有意な影響をもたらさなかった（図３Ａ、ＢおよびＣ）。ＮＰＹ（１０ｆｍｏｌ）はコントロールの値よりもエタノール摂取を有意に増加させた（図３Ａ）。ＢＩＢＰ３２２６をＮＰＹとＰＶＮ内に一緒に投与することによって、エタノール摂取を増加させるこのＮＰＹ用量の能力は完全に遮断された（図３Ａ）。したがって、これらのデータは、ＮＰＹ（ＰＶＮ内のＹ１レセプターで作用する）はアルコールの自己摂取の強力な刺激薬であること、およびＹ１レセプター特異的拮抗物質はこの刺激を完全に遮断できることを示している。
【００４７】
扁桃内へのＮＰＹＹ１拮抗物質の微量注入：アルコール希求行動におけるＮＰＹレセプターの役割をさらに解明するために、文献（Ｋｅｌｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， ２００１， Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ２２：５１５−５２２）の記載にしたがって、エタノール対水を自己摂取するように訓練にしたラットの扁桃の中枢核（ＣｅＡ）内にＮＰＹＹ１ペプチド拮抗物質ＢＩＢＰ３２２６を注入した。前記ＣｅＡは、視床下部に加えてこの脳領域は顕著な数のＮＰＹレセプターを含んでいるので、さらに追加のテスト領域として選択した。前記拮抗物質は水の摂取に影響をあたえなかった。反復測定ＡＮＯＶＡによって、ＢＩＢＰ３２２６はしかしながら自己摂取エタノール量を有意に変化させることを示した［Ｆ（３，２３）＝５．９、ｐ＜０．０１］。追跡統計分析で、有意な主要作用は、最高用量のＢＩＢＰ３２２６の輸液後のエタノール自己摂取の低下によるものであることが示された（図４）。これらのデータは、ＣｅＡのＮＰＹＹ１レセプターの遮断はエタノールの強化能力を減少させることを示している。エタノール自己摂取の進行における前記減少は、Ｙ１は、アルコール乱用およびアルコール中毒に付随する問題（例えば制御のきかない飲酒）の医学的管理における有用な治療薬であることを示唆している。
【００４８】
非ペプチド性ＮＰＹＹ５拮抗物質、Ｌ１５２８０４の全身注射：我々の研究室で得られた証拠は、ＮＰＹの微量注入はアルコールの自己摂取を高めることを示した。前記作用は、非選択的ＮＰＹ拮抗物質（Ｄ−ＮＰＹ）またはＢＩＢＰ３２２６のどちらかを視床下部に輸液することによって遮断された。上記で示した証拠は、ＣｅＡ内に投与されたＹ１拮抗物質ＢＩＢＰ３２２６がアルコールの自己摂取を有意に減少させることを示すことによって前記発見を敷衍した。これらのデータは、アルコール乱用およびアルコール中毒の医学的管理における治療薬としてのＮＰＹ拮抗物質の潜在的効能を示している。しかしながら、これらの発見の普遍性は、前記化合物が特定の脳領域に直接投与されたという事実によっていくぶん限定される。これらの発見の妥当性を拡大するために、最近報告された（Ｋａｎａｔａｎｉ ｅｔ ａｌ．， ２０００）選択的非ペプチドＮＰＹＹ５拮抗物質Ｌ１５２８０４を合成し、アルコール希求行動についてテストした。化合物の効能に関する厳密なテストとして、アルコールを大量摂取する遺伝的素因を有するＣ５７ＢＬ／６ＪマウスでＹ５拮抗物質をテストした。
【００４９】
方法
雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを標準的なプレキシガラスケージ（ｎ＝４／ケージ）に収容し、飼料（Ｈａｒｌａｎ， Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ， ＩＮ）と水は常時供給した。マウスは２０週齢（体重２８−３５ｇ）で全ての検査の開始時に薬剤処置に対して未使用であった。自己摂取オペラント訓練中は、固形飼料（オーバーナイトセッションにつき１５ｇ）はオペラントチャンバーに置き、水は固定比１（ＦＲ−１）強化スケジュールの下で利用できた。
【００５０】
テストセッションは、寸法が１５．９×１４×１２．７ｃｍでステンレススチールの格子床を有する８つのプレキシガラスのオペラントチャンバー（Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ， Ｌａｆａｙｅｔｔｅ， ＩＮ）で実施した。換気を提供しさらに外部のノイズの遮断を助けるハウスファンが設置されている防音小部屋に各チャンバーを置いた。各オペラントチャンバーの左および右の壁に高感度ステンレススチールレスポンスレバーおよび液体分配システムを設置した。プログラム可能ポンプ（ＰＨＭ−１００， Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ）に据え付けた６０ｍＬの注射筒内に液体溶液（エタノールまたは水）を維持した。前記ポンプは、連結されたレスポンスレバーの左に配置されているステンレススチールのコップに活性化１回につき０．０１ｍＬを供給した。各チャンバーはまた、ハウスライト（１６：００−１８：００から０６：００−０８：００の間点燈される）とともに各レバーの上に配置された刺激ライト（レバーが押されるたびに活性化される）を有していた。チャンバーはＩＢＭ互換性ＰＣとのインターフェースを有し、全てのレベー押しおよび液体の供給を記録するようにプログラムされた。
【００５１】
マウスは漸近法の強化（１０％シュクロースｗ／ｖ）を用いてレバーを押すように訓練した。最初の行動形成セッションの後、１６時間のオーバーナイト（１６：００から０８：００）訓練セッションの間マウスを自由に歩きまわらせた。前記トレーニングセッションの間、両方の反応レバーは、強化因子として提供された１０％シュクロース対水による共存固定比１（ＣＯＮＣ ＦＲ１ＦＲ１）のスケジュールで有効であった。各溶液の位置（左または右）は各動物について固定されていたが、副次的な好みを制御するために動物間でバランスをとった。４日後、マウスで使用するために適応させたシュクロース置換法を用いてエタノール（１０％Ｖ／Ｖ）対水を経口的に自己摂取するように訓練した（Ｏｌｉｅｖｅ ｅｔ ａｌ．， ２０００， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． １２：４１３１−４１４０）。簡単に記せば、エタノール（２、４、８または１０％ｖ／ｖ）を毎日濃度を増加させながら４日間でシュクロース（１０％ｗ／ｖ）にだんだんと添加した。続いて、シュクロース（１０、５、２％ｗ／ｖ）を毎日濃度を減少させながら４日間でエタノール含有溶液からだんだんと消失させた。シュクロース置換訓練の後、全てのマウスは、強化因子として提供されたエタノール（１０％Ｖ／Ｖ）対水による強化のＣＯＮＣ ＦＲ１ ＦＲ１スケジュールで信頼できる態様で反応した。
【００５２】
アルコール希求行動に対するＬ１５２８０４の影響：Ｌ１５２８０４（１０、３０および６０ｍｇ／ｋｇ）の全身投与は、１６時間セッションの間水の摂取に全く影響を与えなかった。コントロールのアルコール自己摂取の仕方を分析することによって、行動はセッション全体を通して発生するが、アクセス後４から５時間でピークに達することが示された（図５、白丸）。２つの低用量のＬ１５２８０４の投与はエタノールの自己摂取を有意には変化させなかった。しかしながら、Ｌ１５２８０４（６０ｍｇ／ｋｇ）は、前記ピーク期間の間のアルコール希求行動（例えばアルコールのためのレバー押し）を有意に低下させた。自己摂取の代償性増加はアクセスから１３時間目に生じた。これは、Ｙ５拮抗物質の薬理動態と一致するかもしれない。これらのデータは、Ｌ１５２８０４は高刺激期間の間アルコール希求行動を減少させることを示唆している。
【００５３】
アルコール希求行動の開始に対するＬ１５２８０４の影響：各日中セッションは、動物からしばらくエタノールをとりあげ、エタノールを捜し求めるか否かの刺激誘発（多分に刺激誘発された自己摂取再発行為）（すなわち実験環）状況を具現している。本実験では、とりあげる時間は毎日８：００から１６：００であった。したがって、エタノールを自己摂取する（および自己摂取を再発させる）ための誘因に対するＬ１５２８０４の潜在的作用を示すために、我々は、各セッションの間に反応が開始する時間を分析した。Ｌ１５２８０４は最初の反応までの潜伏時間を有意に引き延ばした（図６）。これらのデータは、ＮＰＹＹ５拮抗物質がエタノール希求行動の開始を遅らせることを示している。動物モデルをヒトのアルコール中毒症状に敷衍することによって、これらのデータは、ＮＰＹＹ５拮抗物質は、アルコール中毒者の再発を遅らせてアルコール希求の回避に役立つ可能性を示唆している。
【００５４】
本明細書で述べた全ての刊行物および特許出願は本明細書に含まれるものとする。別に規定されないかぎり、本明細書で用いられる全ての技術用語および学術用語は、本発明が属する技術分野で一般的に理解されているものと同じ意味を有する。
本発明はこれで完全に説明し終えたが、添付の請求の範囲から離れることなく多くの変更および改変が可能であることは当業者には明白であろう。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は、１時間のテストセッションの直前にＰＶＮ内に輸液したＮＰＹまたはＮＰＹ＋Ｄ−ＮＰＹのエタノール摂取（Ａ）、エタノール嗜好性（Ｂ）および水の摂取に対する影響を示している。投薬は任意の順序で実施した。データは、１１匹のラットの平均±ＳＥＭとして表されている。（＊）は、賦形剤コントロールと有意差があることを示している（ダンネット（Ｄｕｎｎｅｔｔ）ｐ＜０．０５）。（†）は、ＮＰＹ単独とは有意差があることを示している（ペアードｔ検定ｐ＜０．０５）。
【図２】
図２は、ＰＶＮ内に輸液したＮＰＹまたはＮＰＹ＋Ｄ−ＮＰＹの体重（Ａ）、食物摂取（Ｂ）および水の摂取に対する影響を、輸液後２４時間してホームケージで測定したものを示している。投薬は任意の順序で実施した。測定は、図１に示したデータと同じ日に実施した。データは、１１匹のラットの平均±ＳＥＭとして表されている。（＊）は、賦形剤コントロールと有意差があることを示している（ダンネット（Ｄｕｎｎｅｔｔ）ｐ＜０．０５）。
【図３】
図３は、１時間のテストセッションの直前にＰＶＮ内に輸液したＮＰＹ、ＢＩＢＰ３２２６またはＮＰＹ＋ＢＩＢＰ３２２６のエタノール摂取（Ａ）、エタノール嗜好性（Ｂ）および水の摂取に対する影響を示している。投薬は任意の順序で実施した。データは、９匹のラットの平均±ＳＥＭとして表されている。（＊）は、賦形剤コントロールと有意差があることを示している（ペアードｔ検定ｐ＜０．０５）。
【図４】
図４は、扁桃の中枢核内のＮＰＹ−Ｙ１拮抗物質、ＢＩＢＰ３２２６の作用を示すドースレスポンス曲線を示す。ＢＩＢＰ３２２６は、１時間のセッション中に自己摂取されるアルコール量を顕著に減少させた。（＊）は、賦形剤（ｖｅｈ）と有意差があることを示している（ターキー検査（ｐ＜０．０５）、Ｎ＝９匹のラット）。
【図５】
図５は、訓練したＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを用いた行動試験セッションの時間の関数として表したエタノール強化レバー押しの総回数を示す。６０ｍｇ／ｋｇのＬ１５２８０４（白丸）または食塩水溶液（黒丸）の投与を比較した。アルコールの自己摂取は開始から４時間目および５時間目の間に最高に達した。Ｌ１５２８０４は、アルコール希求行動におけるこのピークを阻止した。（＊）は対応する時点で食塩水コントロールと有意差があることを示している。
【図６】
図６は、Ｌ１５２８０４の用量の関数として表した反応潜伏時間（すなわち最初のアルコールレバー押しまでの時間の遅れ）を示す。Ｌ１５２８０４の用量に依存して反応の開始が遅くなった。（＊）は、注射無し（ｎｉ）および食塩水（ｓａｌ）コントロールと有意差があることを示している（ターキーテスト、ｐ＜０．０５）。最高用量では２つのデータ−数値の変動性のために有意差が得られなかった（前記数値は平均値からほぼ２標準偏差多かった）。前記は、これら２匹のマウスで非常に強力な作用を示している。
序論
発明の技術分野
本発明は、哺乳類におけるアルコール中毒およびアルコール乱用の治療を目的とする組成物および方法に関する。
背景
アルコール中毒は現代社会における最も重要な問題の１つである。米国予防衛生研究所によれば、アルコール乱用は、毎年の全自動車事故死亡者数（２００００人を超える）の４５％の原因となっており、短期入院総数のほぼ４４％が含まれる。その他に２５０００人がアルコール付随肝硬変で死亡している（ＮＩＨ報告Ｎｏ．９７−４０１７、（１９９７））。法務省（Ｊｕｓｔｉｃｅ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ）の報告によれば、アルコールは、１９９８年の全凶悪犯罪のほぼ４０％に深く関わっている。合衆国でアルコール乱用の結果生じる経済コストは、毎年ほぼ１５００億ドルと概算される。
【０００２】
ジスルフィラム［アンタビュース（Ａｎｔａｂｕｓｅ）（登録商標）］およびナルトレキソン［トレキサン（Ｔｒｅｘａｎ）（登録商標）］は、アルコール乱用治療で補助的に使用される現在入手できるＦＤＡが承認した唯一の製品である。ジスルフィラムは、体内でのアルコールの中間代謝を阻止し、アセトアルデヒドの蓄積をひき起こすことによって機能する。前記アセトアルデヒドは続いて顕著な行動上のおよび生理学的副作用をもたらす。前記薬剤を服用することに対する患者の協力は上記の副作用のために少ない（以下の文献を参照されたい：Ｔ．Ｗ． Ｒａｌｌ， ”Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ａ．Ｇ． Ｇｉｌｍａｎ ｅｔ ａ．， ８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｃｈａｐ． １７， ｐｐ．３７８−３７９）。ナルトレキソンは周知の麻薬拮抗物質であり、内因性オピエート褒賞系の活性化を阻止することによって機能すると考えられる（前記系はアルコール消費によって活性化される）。実際、ナルトレキソンは比較的作用時間が短いため穏やかな作用を有するのみであり、薬剤が何らかの効果を発揮するためには、通常患者は行動療法による同時治療を必要とする（Ｊ．Ｒ． Ｖｏｌｐｉｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．， Ａｒｃｈ． Ｇｅｎ． Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ， １９９２， ４９：８７６−８８０）。したがって、哺乳類のアルコール中毒およびアルコール乱用の治療に有用な新規な方法および組成物を開発することは重要である。
【０００３】
アルコールが脳に作用する神経生物学的メカニズムおよび中毒をひき起こす行動プロセスの性状は完全には明らかにされていない。他の過剰消費性行動（例えば肥満）の研究は、視床下部を主要な中枢神経系の調節系と特定した（例えば以下の文献を参照されたい：Ｊ．Ｅ． Ｂｌｕｎｄｅｌｌ， Ａｐｐｅｔｉｔｅ， １９８６， ７：３９−５６； Ｓ．Ｐ． Ｋａｌｒａ ｅｔ ａｌ．， Ｅｎｄｏｃｒ． Ｒｅｖ．， １９９９， ２０：６８−１００）。最近得られた証拠は、アルコールおよび食物の摂取は視床下部伝達系によって調節されることを示唆している。副脳室核（ＰＶＮ）へのセロトニン（５−ＨＴ）の注射はノルエピネフリン誘発炭水化物摂取を抑制する（Ｓ．Ｆ． Ｌｅｉｂｏｗｉｔｚ ａｎｄ Ｇ． Ｓｈｏｒ−Ｐｏｓｎｅｒ， Ａｐｐｅｔｉｔｅ， １９８６， ７：Ｓｕｐｐｌ．１−１４）。同様に、ＰＶＮへの部位特異的ノルエピネフリン輸液はまたアルコールの自己摂取の増加をもたらし、５−ＨＴの同時輸液によって完全に阻止される（Ｃ．Ｗ． Ｈｏｄｇｅ ｅｔ ａｌ．， Ａｌｃｏｈｏｌ Ｃｌｉｎ． Ｅｘｐ． Ｒｅｓ．， １９９６， ２０：１６６９−１６７４）。その結果によって、摂食行動およびアルコール希求行動は、共通の視床下部メカニズムによって調節されるかもしれないということが提唱される（Ｈ．Ｈ． Ｓａｍｓｏｎ ａｎｄ Ｃ．Ｗ． Ｈｏｄｇｅ， ”Ｎｅｕｒｏｂｅｈａｖｉｏｒａｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｔｈａｎｏｌ ｉｎｔａｋｅ”， ｉｎ ”Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｅｔｈａｎｏｌ ｏｎ ｔｈｅ Ｎｅｒｖｏｕｓ Ｓｙｓｔｅｍ，” Ｒ．Ａ． Ｄｅｉｔｒｉｃｈ ａｎｄ Ｖ．Ｇ． Ｅｒｗｉｎ， ｅｄｓ．， ｐｐ．２０３−２２６， ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ， １９９６）。
【０００４】
神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）（３６アミノ酸残基ペプチド）は、これまでに知られている摂食行動のもっとも強力な刺激因子である。脳室内または視床下部核内へのＮＰＹの輸液（Ｂ．Ｇ． Ｓｔａｎｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｐｅｐｔｉｄｅ， １９９５， ６：１２０５−１２１１； Ｂ．Ｇ． Ｓｔａｎｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．， １９９３， ６０４：３０４−３１７）は、食物摂取を亢進し（Ｂ．Ｇ． Ｓｔａｎｌｅｙ ａｎｄ Ｓ．Ｆ． Ｌｅｉｂｏｗｉｔｚ， Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．， １９９４， ３５：２６３５−２６４２）、さらに反復注射は過食症および肥満をもたらす（Ｂ．Ｇ． Ｓｔａｎｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｐｅｐｔｉｄｅ， １９９６，７：１１８９−１１９２）。ＮＰＹの多くの脳領域への注射は食物摂取を亢進するが、ＰＶＮがその主要作用部位である（Ｂ．Ｇ． Ｓｔａｎｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １９８５， ８２：３９４０−３９４３； Ｓｔａｎｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， １９９３）。ＮＰＹレセプターは種々のサブタイプとして存在することが判明している（前記サブタイプはサブタイプ選択的拮抗物質と反応する）（Ａ． Ｂａｌａｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ， Ｐｅｐｔｉｄｅ， １９９７， １８：４４５−４５７）。多大な注意が、ＮＰＹの食物希求作用および食欲促進作用を仲介するレセプターサブタイプに向けられた（Ｃ． Ｇｅｒａｌｄ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， １９９６， ３８２：１６８−１７１； Ｄ． Ｏ’Ｓｈｅａ ｅｔ ａｌ．， Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ， １９９７， １３８：１９６−２０２； Ｙ．Ｈ． Ｈｕ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， １９９６， ２７１：２６３１５−２６３１９）。Ｙ１レセプターは最初は、Ｙ１作動薬［Ｐｒｏ３４］−ＮＰＹが摂食を刺激するので、前記作用に必要なレセプターとして提唱された。しかしながら、強力な食欲促進作用はまた、Ｙ１レセプターで低い能力をもつＮ末端切断ＮＰＹフラグメント（ＮＰＹ２−３６）によっても惹起される。これは、新規な“Ｙ１様”レセプターが前記作用を仲介するかもしれないという考えをもたらした（Ｇ．Ｓｔａｎｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｐｅｐｔｉｄｅｓ， １９９２， １３：５８１−５８７）。さらに、［Ｐｒｏ３４］−ＮＰＹは、ＮＰＹの注射後に認められる食物摂取の約５０％を刺激し、Ｙ１レセプターは、ＮＰＹの食欲促進作用のある程度の部分について重要であるかもしれないことを示唆した（Ｏ’Ｓｈｅａ ｅｔ ａｌ．， １９９７）。
【０００５】
非ペプチド性ＮＰＹのＹ１レセプター選択的拮抗物質が知られている。Ｙ１選択的ＢＩＢＰ３２２６のデザイン、選択性および心脈管系特性が報告された（Ｈ．Ｎ． Ｄｏｏｄｓ ｅｔ ａｌ． Ｒｅｇｕｌ． Ｐｅｐｔ．， １９９６， ６５：７１−７７）。米国特許第５，６１６，６２０号明細書は、心脈管系疾患、肥満および糖尿病の治療で有用なものとしてＢＩＢＰ３２２６およびその類似体を開示している。ＢＩＢＯ３３０４は、Ｙ１レセプターサブタイプに対してナノモル以下で親和性を示す非ペプチド性拮抗物質である。これは、ＮＰＹの適用によって、または飢餓によって誘発されるラットの食物摂取を顕著に抑制する（Ｈ．Ａ． Ｗｉｅｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒ． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．， １９９８， １２５：５４９−５５）。米国特許第６，１１４，３９０号明細書は、多くの疾患および異常（高血圧、心脈管系疾患、肥満および糖尿病を含む）の治療で有用であるとしてＢＩＢＯ３３０４およびその類似体を開示している。非ペプチド性ＮＰＹＹ５レセプター選択的拮抗物質もまた摂食行動に影響を与えることが判明している（Ｋａｎａｔａｎｉ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ．， ２０００， ２７２：１６９−１７３）。
【０００６】
関連文献
いくつかの実験で、エタノールの生化学的、生理学的作用および行動における作用に対するＮＰＹの関与が示唆された。選別的に交配したアルコール嗜好性（Ｐ）ラットでは、海馬、扁桃、前頭皮質でＮＰＹ様免疫反応性レベルがアルコール非嗜好性（ＮＰ）ラットと比較して低い（Ｃ．Ｌ． Ｅｈｌｅｒｓ ｅｔ ａｌ．， Ａｌｃｏｈｏｌ Ｃｌｉｎ． Ｅｘｐ． Ｒｅｓ．， １９９８ａ， ２２：１７７８−１７８２）。しかしながら、Ｐラットは、ＮＰラットよりもＰＶＮおよび弓状核でより強いＮＰＹ免疫反応性を示す（Ｂ．Ｈ． Ｈｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ａｌｃｏｈｏｌ Ｃｌｉｎ． Ｅｘｐ． Ｒｅｓ．， １９９９， ２３（６）：１０２３−１０３０）。同様に、６％エタノール含有飼料を長期間供給することによって、ＰＶＮのＮＰＹ含有量が増加し、ロング＝エバンスラットの摂食パターンに変化が生じた（Ｊ．Ｔ． Ｃｌａｒｋ ｅｔ ａｌ．， １９９８， Ｒｅｇｕｌ． Ｐｅｐｔ．， ７５−７６：３３５−３４５）。ＰおよびＮＰラットの遺伝的連関分析によって、ＮＰＹ遺伝子を含む染色体領域に顕著な定量的形質遺伝子座が特定された（Ｌ．Ｇ． Ｃａｒｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｌｃｏｈｏｌ Ｃｌｉｎ． Ｅｘｐ． Ｒｅｓ．， １９９８， ２２：８８４−８８７）。ＮＰＹを欠く変異マウスとＮＰＹを過剰発現する遺伝子導入マウスとの比較によって、エタノール摂取および急性感受性は、脳内のＮＰＹ総レベルと反比例することが示された（Ｔ．Ｅ． Ｔｈｉｅｌｅ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， １９９８， ３９６：３６６−３６９）。
【０００７】
選別交配したアルコール高摂取（ＨＡＤ）ラットは、アルコール低摂取（ＬＡＤ）ラットよりもＰＶＮにおけるＮＰＹ免疫反応性が低い（Ｈｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．， １９９９）。さらに、ＮＰＹを欠くヌル変異体マウスは野生型のコントロールマウスよりも多量のエタノールを飲み、さらにＮＰＹを過剰発現する遺伝子導入マウスは野生型コントロールマウスよりもエタノールを少ししか飲まない（Ｔｈｉｅｌｅ ｅｔ ａｌ．， １９９８）。これらのデータを総合すれば、ＮＰＹレベルの低下はエタノールの自己摂取の増加と結びついている。しかしながら、ＨＡＤラットはまた、ＬＡＤラットと比較して中枢扁桃のＮＰＹレベルが低く（Ｈｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．， １９９９）、他の脳領域におけるＮＰＹレベルの変化が、前記特別なラットのエタノール自己摂取に影響を与える可能性を示唆している。さらに、ＮＰＹヌル変異体および遺伝子導入マウスの行動は、全体的なＮＰＹの変化だけでなく関連ペプチド作動系における潜在的な発育代償によっても影響を受ける可能性があり、このことは、エタノールの自己摂取における視床下部の役割に関して上記の研究から特定の結論を引き出すことを困難にしている。
【０００８】
発明の概要
本発明は、哺乳類のアルコール中毒およびアルコール乱用の治療方法を提供する。前記方法は治療的に有効な量のＮＰＹレセプター拮抗物質を投与することを含む。本発明はまた、前記物質を含有する医薬組成物を目的とする。
本発明の一観点において、ＰＶＮ内のＮＰＹレセプターとＮＰＹ（または他のリガンド）の結合によるＮＰＹレセプターの活性化が、ＮＰＹレセプター拮抗物質の投与によって防止または低下させられる。ある態様では、本発明は、アルコール中毒の患者によるアルコールの自己摂取を減少させる方法を提供する。別の態様では、本発明は、アルコール中毒患者のアルコール希求行動を減少させる方法を提供する。さらに別の態様では、本発明は、回復中のアルコール中毒患者の飲酒再発の発生を防止または減少させる方法を提供する。これらの観点は、治療的に有効な量のＮＰＹレセプター拮抗物質を投与することによって達成される。所望される目的に応じ、治療的に有効な量は、アルコール中毒患者のアルコールの自己摂取およびアルコール嗜好を減少させるために十分であり、アルコール中毒患者のアルコール希求行動を低下させるために十分であり、または回復中のアルコール中毒患者の飲酒再発の発生を減少させるために十分であり、それによってアルコール中毒およびアルコール乱用が治療される。本発明は、アルコール中毒、アルコール依存症またはアルコール乱用の治療において、アルコールの渇望を減少させ、アルコール希求衝動を抑制し、さらに個々人が遺伝的にアルコール中毒またはアルコール乱用の傾向があるか否かにかかわらず、前記個々人のアルコール消費を制限するために有用である。
本発明の他の目的は、以下の説明および請求の範囲を通読することによって当業者には明白となろう。
【０００９】
具体的な態様の説明
本発明は、治療的に有効な量のＮＰＹレセプター拮抗物質を投与することを含む哺乳類でアルコール中毒またはアルコール乱用を治療する方法を提供する。本発明のある態様では、ＰＶＮ内のＮＰＹレセプターが治療的に有効量のＮＰＹレセプター拮抗物質によって遮断される。治療的に有効な量は、罹患哺乳類のエタノール自己摂取および嗜好性を減少させるために十分で、それによって過剰なアルコール消費を医学的に管理してアルコール依存およびアルコール乱用を治療する。関連する観点において本発明は以下の方法を提供する：アルコール中毒患者に治療的に有効な量のＮＰＹレセプター拮抗物質を投与し、さらに前記投与の前後に前記患者のアルコール自己摂取レベルを測定することを含む、アルコール中毒患者でアルコールの自己摂取を減少させる方法、アルコール中毒患者に治療的に有効な量のＮＰＹレセプター拮抗物質を投与し、さらに前記投与の前後に前記患者のアルコール希求行動レベルを測定することを含むアルコール中毒患者のアルコール希求行動を減少させる方法、および回復中のアルコール中毒患者に治療的に有効な量のＮＰＹレセプター拮抗物質を前記患者に投与し、さらに前記投与の前後に前記患者の飲酒再発の発生頻度を測定することを含む飲酒の再発発生を防止または減少させる方法。前記観点は全てアルコール中毒およびアルコール乱用の一般的および最終的目標に関連する。
【００１０】
ヒトのアルコール依存およびアルコール乱用は下記の症状のいずれかを特徴とする：（１）顕著な耐性（これは、酩酊または所望の効果を得るために顕著に増加したアルコール量（少なくとも５０％増加）を必要とする）または同量のアルコールの持続的使用による効果の顕著な低下；（２）特徴的なアルコールの禁断症状；（３）禁断症状の緩和または回避のための頻繁なアルコール摂取；（４）断酒または飲酒のコントロールに対する持続的要求または１回もしくは２回以上の試みの失敗；（５）意図したものより大量または長時間のアルコール消費；（６）アルコール消費による重要な社会活動、職業活動または余暇活動の断念または低下；（７）アルコール入手のため、飲酒のため、またはアルコールの作用から回復するために必要な活動に費やされる時間が長い；（８）職場、学校または家庭で主要な役割または義務を果たすように期待されているときにしばしば酩酊しているか、禁断症状がある；（９）アルコールの使用によって惹起されるかまたは悪化する社会的、精神的または身体的問題の持続的存在または再発を認識しているにもかかわらず持続的に飲酒している。典型的には、前記症状は少なくとも１ヶ月持続するか、または長期間にわたって繰返し発生している。アルコール乱用は、１２ヶ月以内に下記の１つまたは２つ以上の出来事によって示される、特に臨床的に顕著な障害または窮迫を特徴とする：（１）職場、学校または家庭で主要な役割または義務を果たすことできない飲酒の繰返し；（２）身体的に危険な状態での飲酒の繰返し；（３）アルコール関連の法律上の問題の繰返し；または（４）アルコールの作用によって惹起される持続的または繰り返される社会的または対人的問題にもかかわらずアルコール使用が持続する。
【００１１】
本発明の別の態様では、アルコール中毒の哺乳類ホストでＮＰＹの作用を遮断し、さらにアルコールに対する渇望を減少させるために十分な量のＮＰＹレセプター拮抗物質が投与される。本発明は、回復中のアルコール中毒患者で飲酒再発の防止に有用である。脳内のＮＰＹレベルの上昇は、アルコール希求行動の急激な増加およびアルコールに対する強い渇望と相関する。ＮＰＹレセプターでＮＰＹの作用を遮断することによって、前記渇望が低下し、さらに飲酒再発の可能性が減少する。
【００１２】
本発明では、“ＮＰＹレセプター拮抗物質”または“ＮＰＹ拮抗物質”は、脳内または末梢のＮＰＹレセプター上で内因性または外因性神経ペプチド−Ｙ（ＮＰＹ）の作用を遮断し、アルコールの自己摂取が減少するように機能する化合物または組成物を指す。好ましくは、ＮＰＹ拮抗物質は、アルコール渇望およびアルコールの自己摂取を減少させ、さらに通常の食物または水の消費には悪影響を与えない。非選択的なＮＰＹ拮抗物質は、Ｙ１および／またはＹ５レセプターサブタイプを含む多数のＮＰＹレセプターサブタイプと結合する拮抗物質である。本発明で使用できる非選択的ＮＰＹ拮抗物質の例は、［Ｄ−Ｔｙｒ２７，３６，Ｄ−Ｔｈｒ３２］神経ペプチドＹ（２７−３６）（Ｄ−ＮＰＹと略す）である。Ｄ−ＮＰＹ（拮抗特性によりＮＰＹＹ１、Ｙ２、Ｙ４およびＹ５レセプターサブタイプと結合する）は、Ｍｅｙｅｒｓらの報告（Ｒ．Ｄ． Ｍｅｙｅｒｓ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ． Ｂｕｌｌ．， １９９５， ３７：２３７−２４５）（前記文献は本明細書に含まれるものとする）にしたがって得ることができる。本発明で使用できる別の選択的ＮＰＹ拮抗物質はＢＷ１２２９Ｕ９１である。これはＹ１およびＹ４レセプターに対してナノモルの高い親和性を示し、Ｙ５レセプターに対しては中等度の親和性を示すが、Ｙ２レセプターに対してははるかに低い親和性を有する。ＢＷ１２２０Ｕ９１は、Ｗｉｄｄｏｗｓｏｎらの報告（Ｐ．Ｓ． Ｗｉｄｄｏｗｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐｅｐｔｉｄｅｓ， １９９９， ２０：３６７−３７２）（前記文献は本明細書に含まれるものとする）にしたがって得ることができる。
【００１３】
好ましい態様では、ＮＰＹレセプター拮抗物質はＮＰＹＹ１レセプターサブタイプに対して選択的である。本発明で有用なＹ１選択的拮抗物質の例は、（Ｒ）−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−Ｄ−アルギニンアミド（ＢＩＢＰ３２２６としても知られている）である。ＢＩＢＰ３２２６は、米国特許第５，６１６，６２０号明細書およびＤｏｏｄｓらの文献（Ｈ．Ｎ． Ｄｏｏｄｓ ｅｔ ａｌ．， Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ， １９９６， ６５：７１−７７）（両文献は本明細書に含まれるものとする）の記載にしたがって得ることができる。他の有用なＹ１選択的拮抗物質には、例えば以下のＢＩＢＰ３２２６の類似体並びに医薬的に許容できるその塩および水和物が含まれる：
（Ｒ）−Ｎ２−［ビス（４−ブロモフェニル）アセチル］−Ｎ−［（４−ヒドロキシフェニル）−メチル］−アルギニンアミド
（Ｒ）−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［［４−（２−ヒドロキシエチル）フェニル］−メチル］−アルギニンアミド
（Ｒ）−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−アルギニンアミド
（Ｒ）−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［［４−（ヒドロキシメチル）フェニル］−メチル］−アルギニンアミド
Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［４−ヒドロキ−３−メチルフェニル］−メチル］アルギニンアミド
（Ｒ，Ｓ）−３−［３−（アミノイミノメチル）フェニル］−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−アラニンアミド
（Ｒ）−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−Ｎ−メチル−アルギニンアミド
（Ｒ，Ｓ）−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−Ｎ５−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−オルニチンアミド
Ｎ−［（３，５−ジメチル−４−ヒドロキシフェニル）メチル］−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−アルギニンアミド
Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［（４−メトキシフェニル）メチル］−アルギニンアミド、および
（Ｒ）−Ｎ−［［４−［（４，５−ジヒドロ−５，５−ジメチル−２，４（３Ｈ）−ジオキソ−１Ｈ−イミダゾール−３−イル）メチル］フェニル］メチル］−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−アルギニンアミド。
【００１４】
本発明で有用なＮＰＹＹ１レセプター拮抗物質のさらに別の例は、（Ｒ）−Ｎ−［［４−（アミノカルボニルアミノメチル）−フェニル］メチル］−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−アルギニンアミドトリフルオロアセテート（ＢＩＢＯ３３０４としても知られている）である。ＢＩＢＯ３３０４は、米国特許第６，１１４，３９０号明細書およびＷｉｅｌａｎｄらの報告（Ｈ．Ａ． Ｗｉｅｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒ． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．， １９９８， １２５：５４９−５５）（両文献は本明細書に含まれるものとする）に記載された方法にしたがって得ることができる。
【００１５】
他の有用なＹ１選択的拮抗物質には、例えば以下のＢＩＢＯ３３０４の類似体並びに医薬的に許容できるその塩および水和物が含まれる：
（Ｒ）−Ｎ−［［４−（アミノカルボニルアミノメチル）フェニル］メチル］−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−アルギニンアミド、
（Ｒ，Ｓ）−Ｎ５−（アミノイミノメチル）−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−Ｎ５−メチル−オルニチンアミド、
（Ｒ）−Ｎ−［［４−（アミノカルボニルメチル）フェニル］メチル］−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−アルギニンアミド、
（Ｒ）−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［［４−（メチルアミノカルボニルアミノメチル）フェニル］メチル］−アルギニンアミド、
（Ｒ）−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［［４−（エチルアミノカルボニルアミノメチル）フェニル］メチル］−アルギニンアミド、
（Ｒ）−Ｎ−［［４−（アミノカルボニルアミノメチル）フェニル］メチル］−Ｎ２−［ビス−（４−メトキシフェニル）アセチル］−アルギニンアミド、
（Ｒ）−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［［４−（エトキシカルボニルメチルアミノカルボニルアミノメチル）フェニル］メチル］−アルギニンアミド、
（Ｒ）−Ｎ−［［４−（アミノカルボニルアミノメチル）フェニル］メチル］−Ｎ２−［ビス−（４−フルオロフェニル）アセチル］−アルギニンアミド、
（Ｒ）−Ｎ−［［４−（アミノカルボニルアミノメチル）フェニル］メチル］−Ｎ２−［ビス−（４−クロロフェニル）アセチル］−アルギニンアミド、
（Ｒ）−Ｎ−［［４−（アミノカルボニルアミノメチル）フェニル］メチル］−Ｎ２−［ビス−（４−ヒドロキシフェニル）アセチル］−アルギニンアミド、
（Ｒ）−Ｎ−［［４−（アミノカルボニルアミノメチル）フェニル］メチル］−Ｎ２−［ビス−［４−（メトキシカルボニルメトキシ）フェニル］アセチル］−アルギニンアミド、および
（Ｒ）−Ｎ−［［４−（アミノカルボニルアミノメチル）フェニル］メチル］−Ｎ２−［ビス−［４−（ヒドロキシカルボニルメトキシ）フェニル］アセチル］−アルギニンアミド。
【００１６】
他の有用な選択的ＮＰＹＹ１レセプター拮抗物質の例は、米国特許第５，９６２，５３０号明細書および第６，０４０，２８９号明細書に開示されている（両文献は本明細書に含まれるものとする）。
本発明の別の態様では、ＮＰＹレセプター拮抗物質はＮＰＹＹ５レセプターサブタイプに対して選択的である。本発明で有用なＹ５選択的拮抗物質の例は、（２−（３，３−ジメチル−１−オキソ−４Ｈ−１Ｈ−キサンテン−９−イル）−５，５−ジメチル−シクロヘキサン−１，３ジオン）であり、これはＬ−１５２８０４としても知られている。Ｌ−１５２８０４は、Ｋａｎａｔａｎｉらの報告（Ｋａｎａｔａｎｉ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ．， ２０００， ２７２：１６９−１７３）（前記文献は本明細書に含まれるものとする）にしたがって得ることができる。
【００１７】
本明細書でＮＰＹレセプター拮抗物質またはＮＰＹ拮抗物質という用語が用いられるときは、ヒトおよび他の哺乳類でＮＰＹレセプター拮抗物質特性を有する医薬的に許容できる全ての塩がその中に含まれると解されるべきである。前記塩には例えば以下の無機酸または有機酸による塩が含まれる：酢酸、ギ酸、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酢酸、フマル酸、コハク酸、乳酸、マンデル酸、リンゴ酸、クエン酸、酒石酸、またはマレイン酸。さらに、ＮＰＹ拮抗物質がカルボキシ基を含む場合、無機および有機塩基を用いて医薬的に許容できる付加塩に変換することができる。適切な塩基の例には、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アンモニア、シクロヘキシルアミン、ジシクロヘキシルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミンおよびトリエタノールアミンが含まれる。
【００１８】
ＮＰＹ拮抗物質および医薬的に許容できる担体または賦形剤を含む医薬組成物は、アルコール中毒の治療で有効な薬剤であり、したがって本発明の別の特徴を提供する。本発明の別の態様は、ＮＰＹＹ１選択的またはＮＰＹＹ５選択的拮抗物質を含有する医薬組成物を含む。ＮＰＹＹ１選択的拮抗物質を含む医薬組成物が好ましい。好ましい全身投与用組成物は、投与されたとき血液脳関門を通過するか、または生理学的に活性な形態のＮＰＹＹ１またはＮＰＹＹ５拮抗物質を含む。
本発明を実施する場合、ＮＰＹ拮抗物質は、ＮＰＹがそのレセプターと作用する部位で前記拮抗物質が機能できることを条件に全身的または局所的に投与することができる。好ましくは、前記拮抗物質は、全身的に（例えば非経口的、経口的または腹腔内に）投与される。局所適用およびエアゾルの吸入もまた包含される。
【００１９】
１日当たり体重１ｋｇにつき約０．００１ｍｇから約１００ｍｇのオーダーのＮＰＹ拮抗物質の投与レベルがアルコール中毒の治療で有用である。単回投与製剤を製造するために担体物質と結合させることができる活性物質の量は、治療の対象者および個々の投与態様に応じて変動するであろう。ユニット製剤は一般に約１ｍｇから約５００ｍｇの有効成分を含むであろう。
個々の個体に固有の用量レベルは、ＮＰＹ拮抗物質の活性、年齢、体重、一般的な身体的および精神的健康状態、遺伝的素因、環境的な影響、性別、食事、投与期間、投与ルート、排出速度、および治療される個々の問題の重篤度を含む種々の要因によって左右されるであろう。例えば、アルコール中毒症状の治療に有用な用量レベルは、それぞれのアルコール乱用問題の重大度にしたがって個体間で変動するであろう。同様に、アルコール渇望を抑制するための用量レベルは、各個体のアルコール中毒症状の重篤度に応じて個体間で変動するであろう。当業者は、当技術分野で周知の方法を用い日常的な検査によって本明細書に記載したパラメータ内での適切な投与量を容易に決定できよう。
【００２０】
有効成分だけを投与することもできるが、前記有効成分を製剤として提供することが好ましい。経口投与に適した本発明の製剤は、別々に分離させたユニット形（例えばカプセル、カシェー（ｃａｃｈｅｔ）、錠剤またはロゼンジで、各々が予め定められた量の有効成分を含むもの）；粉末または顆粒形；水性液または非水性液中の溶液または懸濁液；または水中油乳濁液もしくは油中水乳濁液であろう。
有効成分はまたボラス、エレキシルまたはペースト形でもよい。
錠剤は、場合によって１つまたは２つ以上の補助成分とともに有効成分を圧縮または鋳型成形することによって製造できる。圧縮錠剤は、場合によって結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、表面活性剤または調剤物質と混合した自由流動形状（例えば粉末または顆粒）の有効成分を、適切な機械で圧縮することによって製造できる。湿製錠剤は、粉末の有効成分および不活性な希釈液で湿らせた適切な担体の混合物を適切な機械で鋳型成形することによって製造できる。
【００２１】
非経口投与に適した製剤は、便利には有効成分の滅菌水性調製物を含み、好ましくは服用者の血液と等張である。
鼻腔または口腔内投与に適した製剤（例えば以下に記載する自噴式粉末製剤）は、０．１から２０％ｗ／ｗ、例えば２％ｗ／ｗの活性製剤を含むことができる。
ヒトの治療で使用する本発明の製剤は、有効成分のための医薬的に許容できる担体および場合によって他の治療成分と一緒に有効成分を含む。前記担体は、製剤の他の成分と適合するという意味で“許容可能”でなければならず、さらにその服用者にとって有害であってはならない。
【００２２】
本発明の薬理学的に活性な化合物は、前記化合物の有効量を経口的または非経口的な適用に適した賦形剤または担体と結合または混合された状態で含む医薬組成物の製造に有用である。好ましいものは、以下の１つまたは２つ以上のものと一緒に前記有効成分を含む錠剤およびゼラチンカプセルである：（ａ）希釈剤、例えばラクトース、デキストロース、シュクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース、グリシンなど；（ｂ）潤滑剤、例えばシリカ、タルク、ステアリン酸、そのマグネシウム塩もしくはカルシウム塩、ポリエチレングリコールなど；錠剤の場合にはまた；（ｃ）結合剤、例えば珪酸マグネシウムアルミニウム、澱粉ペースト、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムまたはポリビニルピロリドンなど；さらに所望する場合は（ｄ）崩壊剤、例えば沸騰散混合物など；および（ｅ）吸収剤、着色剤、香料および甘味料など。注射可能な組成物は好ましくは水性等張溶液または懸濁液であり、座薬は有利には脂肪性乳液または懸濁液から製造される。前記医薬組成物は滅菌するか、および／または補助剤、例えば保存料、殺菌剤、湿潤剤または乳化剤、可溶化促進剤、浸透圧調節用の塩および／または緩衝剤を含むことができる。さらに、前記医薬組成物はまた、他の治療的に有益な物質を含むことができる。前記組成物は、それぞれ通常の混合方法、顆粒化方法または被覆方法にしたがって製造され、約０．１から７５％、好ましくは約１から５０％の有効成分を含む。
【００２３】
前記製剤は便利にはユニット製剤として提供され、製薬分野で周知の任意の方法によって製造できる。いずれの方法も、有効成分を１つまたは２つ以上の補助成分を構成する担体と結合させる工程を含む。一般に、前記製剤は、均一にかつ緊密に前記有効成分を液状担体または微細分割固形担体またはその両方と結合され、さらに必要な場合には所望の製剤に生成物を成形することによって製造される。
【００２４】
その目的の使用に対するＮＰＹ拮抗物質の有効性は多様な方法で決定できる。例えば、本発明の方法で有用な化合物は、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ ｖｉｖｏ動物モデルで得られたデータに基づいてさらに検査して選択することができる。例えば、化合物は、当業者に公知のｉｎ ｖｉｔｒｏバイオアッセイによりＮＰＹレセプターとの結合親和性について検定することができる。例えば、カナタニらの方法（Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ．， ２０００， ２７２：１６９−１７３）は、ＮＰＹレセプターサブタイプ（Ｙ１、Ｙ２、Ｙ４およびＹ５）を個々に発現することが知られている種々の哺乳類細胞を使用する。その結合親和性（Ｋｉ）が、放射能標識ＮＰＹとの競合的結合アッセイでナノモルの範囲内にあれば、テスト化合物は特定のレセプターサブタイプの選択的競合物質であると考えられる。
【００２５】
化合物がＮＰＹ拮抗物質であるか否かを決定する別の方法は、細胞内Ｃａ２＋濃度のＮＰＹ誘発増加を抑制するテスト化合物の能力を測定するものである。前記アッセイは、上記と同じ細胞を用い、テスト化合物の存在下または非存在下およびＮＰＹの存在下または非存在下で実施される。細胞内Ｃａ２＋を増加させるＮＰＹの能力をナノモルの範囲内のＩＣ５０で抑制するテスト化合物は拮抗物質であると考えられる。テスト化合物がただ１つのＮＰＹレセプターサブタイプの拮抗物質である場合は、前記化合物は選択的拮抗物質であると考えられる。非選択的ＮＰＹレセプター拮抗物質は、２つまたは３つ以上のレセプターサブタイプで適切な結合親和性を示す。
【００２６】
公知のＮＰＹレセプター拮抗物質およびＮＰＹＹ１選択的またはＹ５選択的レセプター拮抗物質のアルコール渇望減少およびアルコール自己摂取減少における有効性は、実験動物モデルで検査することができる。簡単に記せば、ロングエバンスラットを実験室の環境に対して条件付けし、Ｈｏｄｇｅら（Ａｌｃｏｈｏｌ， １９９３， １０：１９１−１９６）が記載したように、シュクロース減衰方法（ｓｕｃｒｏｓｅ−ｆａｄｉｎｇ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ； Ｈ．Ｈ． Ｓａｍｓｏｎ， Ａｌｃｏｈｏｌ Ｃｌｉｎ． Ｅｘｐ． Ｒｅｓ．， １９８６， １０：４３６−４４２）を用いて水と一緒に置かれているエタノール（１０％ｖ／ｖ）を自己摂取するように訓練した。定位手術を実施して、ＰＶＮに向けてインジェクターガイドカニューレを移植した。前記条件付けしたラットのＰＶＮに、ＮＰＹとともにまたはＮＰＹ無しでテスト化合物の微量注入を実施する。前記ラットに直ちに水またはエタノール（１０％ｖ／ｖ）のどちらかを自己摂取する機会を与える。消費したエタノールまたは水を測定する。エタノールの摂取は、消費したミリリットルからグラム／キログラム体重に変換する。相対的エタノール摂取（嗜好性）は、全摂取液体（エタノール＋水（ｍｇ））で割った消費エタノール（ｍｇ）として算出する。薬剤の投与効果は平方偏差の一方向繰返し測定値分析（ｏｎｅ−ｗａｙ ｒｅｐｅａｔｅｄ ｍｅａｓｕｒｅｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ）（ＡＮＯＶＡ）によって解析する。薬剤投与と賦形剤コントロールとの間のｐｏｓｔ−ｈｏｃ比較は、ペアード（ｐａｉｒｅｄ）ｔ検定または適切な場合にはダンネットの（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ）ｔ検定を用いて実施する（ＳｉｇｍａＳｔａｔ， Ｊａｎｄｅｌ， Ｓａｎ Ｒａｆａｅｌ， ＣＡ）。テスト化合物が、アルコール自己摂取のＮＰＹ誘発増加においてまたは基準自己摂取において統計的に有意な減少を生じたとき、前記テスト化合物は有効であると考えられる。
【００２７】
ＮＰＹ拮抗物質の有効性をテストする別の適切な動物モデルは、Ｏｌｉｖｅら（Ｅｕｒ．Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． ２０００， １２：４１３１−４１４０）の記載にしたがってアルコール強化レバー押し（ａｌｃｏｈｏｌ−ｒｅｉｎｆｏｒｃｅｄ ｌｅｖｅｒ ｐｒｅｓｓｉｎｇ）行動を用いる。前記モデルは、アルコール希求行動を防止もしくは遅らせるＮＰＹ拮抗物質、または回復中のアルコール中毒者の飲酒再発を防止もしくは減少させるＮＰＹ拮抗物質の特定に特に有用である。
一般的に認められている動物モデルでの一般的毒性プロフィルおよび所望の投与ルートによる生体利用性もまた、アルコール中毒治療での使用に適したＮＰＹ拮抗物質の選別で考慮される。
【００２８】
アルコール中毒治療における本発明の方法および組成物の効能はまた、場合によって、適切な基準および倫理的ガイドラインの下で実施されるヒトの臨床試験で標準的な方法を用いて評価することができる。例えば、二重盲検、プラセボ対照実験を文献の記載（Ｖｏｌｐｉｃｅｌｌｅ ｅｔ ａｌ．， Ａｒｃｈ． Ｇｅｎ． Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ， １９９２， ４９：８７６−８８０）にしたがって実施することができる。簡単に記せば、アルコール依存についてＤＳＭ−ＩＶ診断基準（アルコール禁断の生理的症状を含む）に適合する対象者を、標準的な解毒治療の後で４つの治療群に分ける：（１）テスト化合物を投与；（２）プラセボ化合物を投与；（３）テスト化合物および行動療法を実施；（４）プラセボ化合物および行動療法を実施。３ヶ月間、全対象者は検査技師によって週単位で検査を受ける。前記検査技師は、体内アルコール検出検査を実施し、さらにアルコール渇望、アルコール希求、アルコール消費および気分を調べる。得られたデータは標準的な統計技術によって解析される。テスト化合物は、アルコール自己摂取、アルコール希求行動または飲酒再発において統計的に有意な減少をもたらすとき有効であると考えられる。いずれの特別な患者についても、前記方法の有効性は類似の態様で決定することができる。
以下の実施例は制限としてではなく例示として提供する。
【００２９】
【実施例】
実施例
方法
動物：３６匹のロングエバンスラットの雄（Ｈａｒｌａｎ， Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ， ＩＮ）を１匹ずつプレキシグラスのケージに収容した。水へのアクセスは行動訓練の第一日目は制限したが、実験の残りについては常に利用可能な状態であった。飼料は常にホームケージで摂取できる状態であった。実験チャンバーでは、エタノール（１０％ｖ／ｖ）および水が日中（Ｍ−Ｆ）セッション中は同時に利用できる状態であった。動物のコロニールームは、６：３０に点燈し１２Ｌ：１２Ｄサイクルで維持した。実験セッションは前記サイクルの点燈部分で実行した。全ての実験手順は研究所ガイドラインおよびＮＩＨガイドラインにしたがって実施した。
【００３０】
装置：実験セッションは、防音小部屋（ＭＥＤ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ， モデルＥＮＶ０１６Ｍ， Ｌａｆａｙｅｔｔｅ， ＩＮ）に静置したプレキシガラスチャンバー（２７×３７×２１ｃｍ）で実施した。チャンバーには外部の騒音を遮断した排気送風機が装備されていた。各チャンバーの右側の壁には２つの５０ｍＬの飲料ボトルがあった。薬剤溶液はステンレススチールの注入装置（Ｐｌａｓｔｉｃｓ Ｏｎｅ， Ｒｏａｎｏｋｅ， ＶＡ）から双方に投与された。前記注入装置はプラスチックチューブで２つの１．０μＬの注射筒（Ｈａｍｉｌｔｏｎ， Ｒｅｎｏ， ＮＶ）に連結されていた。注射筒には微量輸液ポンプ（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ， モデル２２， Ｎａｔｉｃｋ， ＭＡ）が搭載され、０．５μＬ／分／注射筒を輸液できるように設定されていた。
【００３１】
自己摂取手順：実験室の飼育条件に２週間順応させた後、飲料へのアクセスを１日１時間（２日間のみ）制限し、さらに２群のラット（Ｎ＝１２／群）を、１回のオーバーナイトセッション中にシュクロース（１０％ｖ／ｖ）と水に一晩中アクセスできるようにして実験チャンバー内のボトルから飲むように訓練した。続いて、シュクロース（１０％ｖ／ｖ）と水がともに摂取できる日中の１時間セッションを実施した。シュクロースおよび水の溶液の位置（すなわちチャンバーの左または右側）は毎日交換した。シュクロースと水の摂取パターンが安定したら、シュクロース減衰法（Ｈ．Ｈ． Ｓａｍｓｏｎ， Ａｌｃｏｈｏｌ Ｃｌｉｎ． Ｅｘｐ． Ｒｅｓ．， １９８６， １０：４３６−４４２）を以前に報告（例えば、Ｈｏｄｇｅ ｅｔ ａｌ．， １９９３）されたように用いて一緒に置かれたエタノール（１０％ｖ／ｖ）と水を自己摂取するようにラットを訓練した。簡単に記せば、エタノールを前記シュクロース溶液に徐々に添加し、ラットが１０％エタノール対水を自己摂取するまで前記溶液からシュクロースを徐々に減少させた。２ヶ月間のシュクロース減衰法の実施中に、エタノール／シュクロース溶液および水の位置を毎日交換した。全動物が水よりもエタノール／シュクロース溶液を好んだ（データは示されていない）。シュクロースが消失した後、１週間につき５日間、４ヶ月の間ラットにエタノール（１０％ｖ／ｖ）対水を自己摂取させ、長期のエタノール自己摂取歴を確立させた。４ヶ月の基準手順の最後に、前記動物に定位手術を実施した。続いて、前記動物に微量注入法を実施する前にさらに３ヶ月間エタノールを自己摂取させた。
【００３２】
ＮＰＹは消費性（ｃｏｎｓｕｍｍａｔｏｒｙ）行動に対して強力な作用を有するので、ＰＶＮ内にＮＰＹを輸液することによって、エタノールの薬理作用に関する経験とは無関係のメカニズムを介してエタノールの摂取を変化させることができるかもしれない。したがって、消費に対するＮＰＹの非特異的作用のコントロールとして、エタノールの自己摂取の長期歴をもたない別のラット群（ｎ＝１２）でＮＰＹの作用を調べた。実験に使用されたことが無いラットを１週間実験室に順応させた。続いて、前記動物にＰＶＮに誘導される両側性ガイドカニューレを移植した。回復のために術後１週間してから実験セッションを開始した。日中の６０分セッションの間に、エタノール（１０％ｖ／ｖ）対水が同時に摂取できる状態にある自己摂取チャンバーにラットを入れた。１週間の間エタノールおよび水の基準摂取レベルを測定した。続いて微量注入法を実施した。
【００３３】
定位手術：エタノールと水の摂取が安定化したとき、ＰＶＮへ誘導される両側性ステンレススチールガイドカニューレ（２６ゲージ）を外科手術により移植した。ラットをアトロピン（０．４ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を併用しながらペントバルビタールで麻酔し（６０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）、定位装置（Ｄａｖｉｄ Ｋｏｐｆ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ， Ｔｕｊｕｎｇａ， ＣＡ）に置いた。注入カニューレ（Ｐｌａｓｔｉｃｓ Ｏｎｅ， Ｒｏａｎｏｋｅ， ＶＡ）をＰＶＮの背側１ｍｍで終わるように移植し、頭蓋用ネジおよび歯科用セメントで頭蓋骨に固定した。除去可能なワイア栓子をガイドカニューレの全長に挿入し、組織による閉塞および外部破片による夾雑を制限した。ＰＶＮのために用いた定位座標は、ブレグマより−１．８ｍｍ、中線から側方へ＋１．０ｍｍ、さらに垂直面に対して側方に５°で皮質表面から下方に−６．５ｍｍであった（Ｐａｘｉｎｏｓ ＆ Ｗａｔｓｏｎ， １９８２）。全ての測定値は平坦な頭蓋から得た。手術後、全ラットに術後痛管理のためにブプレノルフィン（０．２ｍｇ／ｋｇ、皮下）を投与した。日中セッションは術後１週間して開始した。
【００３４】
微量注入法：エタノールと水の摂取が再び安定したら、週に１回微量注入を実施した。麻酔していないラットをプラスチック容器（１５×３０×深さ１５ｃｍ）に入れ移動を少なくした。栓子を取り除き、無菌的な３３ゲージの注入装置をガイドカニューレの末端を越えて１ｍｍの深さに両側に挿入した。蒸留水を賦形剤として薬剤溶液を総容積１μＬ（片側０．５μＬ）で輸液した。注入装置をさらに３０秒そのまま維持し薬剤を拡散させた。前記溶液の正確な流れを各注入の前後に確認し、化合物の送達を担保した。自己摂取セッションは微量注入後直ちに開始した。無菌的栓子を行動試験セッションの終了時に再び挿入した。同時投与の場合は、Ｄ−ＮＰＹまたはＢＩＢＰ３２２６はＮＰＹの１５分前に輸液した。賦形剤注入もまた実施して、輸液によって生じる局所圧または浸透圧の変化のためのコントロールとした。薬剤試験の前の１ヶ月間、動物を手で扱い、プラスチックタブに入れて、その後の薬剤作用に対する操作上の変化の影響を最小限にした。これらのセッションのデータは分析に用いなかった。微量注入プロトコルの完了時に、ラットを殺し、注射部位の組織学的証明のためにその脳を取り出した。
【００３５】
薬剤および投与量：中枢投与に用いた本実験の薬剤は以下のＮＰＹであった：非選択的ＮＰＹ拮抗物質、［Ｄ−Ｔｙｒ２７，３６，Ｄ−Ｔｈｒ３２］神経ペプチドＹ（２７−３６）（Ｄ−ＮＰＹ）およびＹ１選択的拮抗物質、（Ｒ）−Ｎ２−（ジフェニルアセチル）−Ｎ−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−Ｄ−アルギニンアミド（ＢＩＢＰ３２２６）。全ての薬剤は、リサーチ・ケミカル・インターナショナル（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ， Ｎａｔｉｃｋ， ＭＡ）から入手した。いずれの薬剤も中枢投与のために滅菌蒸留水に溶解した。薬剤溶液は投与の直前に調製し、総容積１μＬ（０．５μＬ／片側／分）で両側に輸液した。薬剤は用量を知らされている実験者によって任意の順序で投与された。自己摂取用エタノール（９５％）は水道水で希釈した。
【００３６】
組織学：実験終了後、ラットに致死量のペントバルビタールナトリウム（２００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を投与し、０．９％のＮａＣｌ、続いて１０％のホルムアミドを心臓を介して灌流させた。脳を取り出し、１０％ホルマリン／３０％シュクロース溶液に最小限１０日間保存した。固定した脳を凍結し、切片（４０μｍ）を作製し、クレシルバイオレットで染色して光学顕微鏡下で調べて注入位置を決定した。ＰＶＮで両側性に終わる明瞭に範囲が限定された注入装置の跡が確認されたラットのデータだけを用いた。
【００３７】
データの解析および統計学：消費されたエタノールと水の容積は、各１時間セッションの終わりに０．５ミリリットルまで測定した。エタノール摂取は、消費されたｍＬからｇ／ｋｇ体重に換算した。相対的エタノール摂取（嗜好性）は、（消費エタノールのｍＬ）÷全液体摂取（エタノール＋水のｍＬ）として算出した。薬剤の投与効果は、平方偏差の一方向繰返し測定値分析（ＡＮＯＶＡ）によって解析した。薬剤投与と賦形剤コントロールとの間のｐｏｓｔ−ｈｏｃ比較は、ペアードｔ検定または適切な場合にはダンネットのｔ検定を用いて実施した（ＳｉｇｍａＳｔａｔ， Ｊａｎｄｅｌ， Ｓａｎ Ｒａｆａｅｌ， ＣＡ）。
【００３８】
結果
行動訓練の結果大半の動物で安定なエタノールの自己摂取を得た。微量注入手順の前の２５日の間の平均エタノール摂取は０．４４±０．０５ｇ／ｋｇであった。ＮＰＹおよびＢＩＢＰ３２２６を投与された群の３匹のラットから得られたデータは、基準自己摂取の実施不良のために除外した。
組織学：冠状脳切片の組織学的検査の分析によって、シュクロース減衰の後でＮＰＹおよびＤ−ＮＰＹを輸液された１２匹のうち１１匹の動物が、ＰＶＮに両側性の注入を受けたことが示された。シュクロース減衰の後でＮＰＹおよびＢＩＢＰ３２２６を輸液されたラットの脳切片の検査によって、９匹のうち９匹の動物が、ＰＶＮに注入を受けたことが示された。１２匹のコントロール動物のうち１０匹がＰＶＮに両側注入を受けていた。前記注入手順によって、ＰＶＮ内に極めてわずかのグリオーシスと組織の損傷が生じた。ＰＶＮで両側性の注入を受けた動物のデータのみを提示する。
【００３９】
エタノール摂取および嗜好性に対するＮＰＹの作用：ＰＶＮへのＮＰＹ輸液の結果は図１に示されている。反復測定ＡＮＯＶＡによって、ＮＰＹはエタノール摂取を有意に高めることが示された［Ｆ（３，３０）＝７．６、ｐ＜０．００１］。ｐｏｓｔ−ｈｏｃダンネットの比較は、ＮＰＹのいずれの投与量も、賦形剤コントロールと比較したときエタノール摂取を有意に高めることを示した（図１Ａ）。個々のラットのデータを精査したところ、テストした１１匹のラットは全て、ＮＰＹのいずれの投与量でもエタノール摂取（ｇ／ｋｇ）の増加を示した。基準エタノール嗜好性は高いが（＞７０％）、ＰＶＮ内へのＮＰＹの投与もまた、エタノール嗜好性を用量依存態様で優位に増加させた［Ｆ（３，３０）＝３．３，ｐ＜０．０５］（図１Ｂ）。テストした最も高い２つの用量では、日中セッション中の液体消費の９０％以上がエタノールで占められていた（ｐ＜０．０５；図１Ｂ）。エタノール摂取および嗜好性は、実験セッション中の水の摂取の顕著な全体的減少を伴っていた［Ｆ（３，３０）＝５．４、ｐ＜０．０１］（図１Ｃ）。ｐｏｓｔ−ｈｏｃ比較によって、ＮＰＹは用量依存態様で水の摂取を減少させることが示された（ｐ＜０．０５）。
【００４０】
非選択的ＮＰＹレセプター拮抗物質Ｄ−ＮＰＹは、部分的であるが有意なエタノール摂取の低下をもたらした（図１Ａ、右）。ＮＰＹ（１０ｆｍｏｌ）と同時投与したとき、Ｄ−ＮＰＹはエタノールおよび水の摂取に対するＮＰＹの作用を完全に遮断した（図１Ａおよび１Ｃ、右）。嗜好性のデータにはその傾向はあったが、Ｄ−ＮＰＹはＮＰＹ誘発エタノール嗜好性増加を有意には変化させなかった（Ｐ＜０．０９、図１Ｂ）。したがって、前記データは、ＰＶＮへの外因性ＮＰＹの輸液は、ラットで強力にエタノール摂取およびエタノール嗜好性を高めることを示している。非選択的ＮＰＹ拮抗物質Ｄ−ＮＰＹは部分的には基準エタノール摂取を減少させ、ＮＰＹによって生じるエタノール摂取の増加を完全に遮断した。
【００４１】
表１は、エタノールの長期自己摂取歴をもたない、シュクロース減衰法を受けたラットのＰＶＮへのＮＰＹ輸液の影響を示す。データの値は平均±ＳＥＭとして提示されている。これらの条件下では、テストしたいずれの用量のＮＰＹもエタノール摂取、エタノール嗜好性または水の摂取に変化をもたらさなかった。
炭水化物およびアルコール摂取の類似作用は少し前から知られていた（Ｃ．Ｐ． Ｒｉｃｈｔｅｒ， Ｑ． Ｊ． Ｓｔｕｄ． Ａｌｃｏｈｏｌ， １９５３， １４：５２５−５３９； Ｐ．Ｊ． Ｋｕｌｋｏｓｋｙ， Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． Ｂｉｏｂｅｈａｖ． Ｒｅｖ．， １９８５， ９：１７９−１９０）。アルコール摂取は、ラットのタンパク質または脂肪消費を変化させることなく、栄養物特異的態様で炭水化物摂取を減少させる（Ｏ．Ａ． Ｆｏｒｓａｎｄｅｒ， Ａｌｃｏｈｏｌ， １９８８， ２３：１４３−１４９）。したがって、ヒトの実験では甘味物質の摂取はアルコール消費に反比例することを示している（Ｇ．Ａ． Ｃｏｌｄｉｔｚ ｅｔ ａｌ．， Ａｍ． Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｎｕｔｒ．， １９９１， ５４：４９−５５）。他の実験では、低炭水化物食はアルコール摂取を高めるが、高炭水化物食は飲酒を低下させることが示された（Ｒ．Ｖ． Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．， Ｑ． Ｊ． Ｓｔｕｄ． Ａｌｃｏｈｏｌ， １９７３， ３４：７５８−７６３； Ｌ． Ｐｅｋｋａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒ． Ｊ． Ｎｕｔｒ．， １９７８， ４０：１０３−１１３； Ｏ．Ａ． Ｆｏｒｓａｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｌｃｏｈｏｌ， １９８８， ５：２３３−２３８）。単純炭水化物はアルコール中毒者の再発を遅らせることが報告された（Ｍ．Ｅ． Ｆａｒｃａｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｎｕｔｒ． Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ， １９８４， １６：１２３−１２４）。さらにまた、回復中のアルコール中毒の女性は、強いアルコール渇望期に甘い食品をより多く食べることが報告された（Ｓ． Ｒｏｓｅｎｆｉｅｌｄ， Ｒｅｓ． Ｎｕｒｓ． Ｈｅａｌｔｈ， １９８８， １１：１６５−１７４）。したがって、自己摂取行動の発達中に、エタノールと炭水化物（例えばシュクロース）とを対にすることによって、食物摂取を仲介する恒常性維持神経系（すなわち視床下部）との密接な連動が生じるかもしれない。また別には、シュクロースで訓練した動物によるより高レベルのエタノール摂取がＮＰＹの作用に影響を与えた可能性もある。
【００４３】
ホームケージでの飼料および水の消費に対するＮＰＹの影響：ＰＶＮへのＮＰＹ輸液は、ホームケージで測定したとき体重（図２Ａ）または食物消費（図２Ｂ）には全く影響を与えなかった。しかしながら、前記用量のＮＰＹは、ホームケージで測定したとき水の摂取を有意に［Ｆ（１，１０）＝９．６２５、ｐ＜０．０５］減少させた（図２Ｃ）。単独またはＮＰＹと併用して投与したＤ−ＮＰＹは、体重に対して全く影響をもたらさなかった（図２Ａ、右）。ＮＰＹはまたシュクロース処理を受けていない動物のホームケージでの体重、食物摂取または水の摂取にも影響を及ぼさなかった。
【００４４】
食物摂取および体重に対してＮＰＹ関連作用が認められないことは、いくつかの要因によって説明することができる。第一に、本実験で使用したＮＰＹの濃度はｆｍｏｌの範囲であり、これは、摂食に典型的に用いられる濃度（ｐｍｏｌからｎｍｏｌの範囲である）より極めて低かった（例えば以下の文献を参照されたい：Ｓｔａｎｌｅｙ ａｎｄ Ｌｅｉｂｏｗｉｔｚ， １９８５）。したがって、エタノール自己摂取行動は、ＮＰＹレベルの変化に対して摂食よりもはるかに鋭敏であるかもしれない。第二に、ＰＶＮにおけるＮＰＹレベルの上昇は、環境内のもっとも関連する物質の消費を直ちに増加させるかもしれない。ＮＰＹはシュクロース非依存的方法で訓練したラットではエタノール摂取に影響を与えなかったので、これは本実験の事例ではないように思われる。
【００４５】
ＮＰＹは、エタノール自己摂取セッションで水の摂取を有意に減少させ、エタノール嗜好性の増加の一因となった。我々はまた、ＰＶＮへのＮＰＹの輸液後に、比較的小さいが有意である、ホームケージでの２４時間水摂取の減少を観察した。非選択的ＮＰＹ拮抗物質、Ｄ−ＮＰＹは、エタノール自己摂取セッションでＮＰＹ誘発水摂取減少を有意に逆転させ、Ｙ１選択的拮抗物質は水摂取減少傾向を逆転させた。総合すれば、前記データは、ＮＰＹはエタノール経験をもつラットとエタノール未経験ラットで水摂取に対して異なる作用を有することを示唆している。
【００４６】
エタノール摂取および嗜好性のＮＰＹ誘発変化に対するＹ１拮抗物質の影響：図３は、ＮＰＹおよびＮＰＹＹ１選択的拮抗物質（ＢＩＢＰ３２２６）のＰＶＮ内輸液の結果を示している。ＰＶＮへのＢＩＢＰ３２２６の単独輸液（１０．６μＭ）は、エタノール摂取もしくは嗜好性または水の摂取に対して有意な影響をもたらさなかった（図３Ａ、ＢおよびＣ）。ＮＰＹ（１０ｆｍｏｌ）はコントロールの値よりもエタノール摂取を有意に増加させた（図３Ａ）。ＢＩＢＰ３２２６をＮＰＹとＰＶＮ内に一緒に投与することによって、エタノール摂取を増加させるこのＮＰＹ用量の能力は完全に遮断された（図３Ａ）。したがって、これらのデータは、ＮＰＹ（ＰＶＮ内のＹ１レセプターで作用する）はアルコールの自己摂取の強力な刺激薬であること、およびＹ１レセプター特異的拮抗物質はこの刺激を完全に遮断できることを示している。
【００４７】
扁桃内へのＮＰＹＹ１拮抗物質の微量注入：アルコール希求行動におけるＮＰＹレセプターの役割をさらに解明するために、文献（Ｋｅｌｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， ２００１， Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ２２：５１５−５２２）の記載にしたがって、エタノール対水を自己摂取するように訓練にしたラットの扁桃の中枢核（ＣｅＡ）内にＮＰＹＹ１ペプチド拮抗物質ＢＩＢＰ３２２６を注入した。前記ＣｅＡは、視床下部に加えてこの脳領域は顕著な数のＮＰＹレセプターを含んでいるので、さらに追加のテスト領域として選択した。前記拮抗物質は水の摂取に影響をあたえなかった。反復測定ＡＮＯＶＡによって、ＢＩＢＰ３２２６はしかしながら自己摂取エタノール量を有意に変化させることを示した［Ｆ（３，２３）＝５．９、ｐ＜０．０１］。追跡統計分析で、有意な主要作用は、最高用量のＢＩＢＰ３２２６の輸液後のエタノール自己摂取の低下によるものであることが示された（図４）。これらのデータは、ＣｅＡのＮＰＹＹ１レセプターの遮断はエタノールの強化能力を減少させることを示している。エタノール自己摂取の進行における前記減少は、Ｙ１は、アルコール乱用およびアルコール中毒に付随する問題（例えば制御のきかない飲酒）の医学的管理における有用な治療薬であることを示唆している。
【００４８】
非ペプチド性ＮＰＹＹ５拮抗物質、Ｌ１５２８０４の全身注射：我々の研究室で得られた証拠は、ＮＰＹの微量注入はアルコールの自己摂取を高めることを示した。前記作用は、非選択的ＮＰＹ拮抗物質（Ｄ−ＮＰＹ）またはＢＩＢＰ３２２６のどちらかを視床下部に輸液することによって遮断された。上記で示した証拠は、ＣｅＡ内に投与されたＹ１拮抗物質ＢＩＢＰ３２２６がアルコールの自己摂取を有意に減少させることを示すことによって前記発見を敷衍した。これらのデータは、アルコール乱用およびアルコール中毒の医学的管理における治療薬としてのＮＰＹ拮抗物質の潜在的効能を示している。しかしながら、これらの発見の普遍性は、前記化合物が特定の脳領域に直接投与されたという事実によっていくぶん限定される。これらの発見の妥当性を拡大するために、最近報告された（Ｋａｎａｔａｎｉ ｅｔ ａｌ．， ２０００）選択的非ペプチドＮＰＹＹ５拮抗物質Ｌ１５２８０４を合成し、アルコール希求行動についてテストした。化合物の効能に関する厳密なテストとして、アルコールを大量摂取する遺伝的素因を有するＣ５７ＢＬ／６ＪマウスでＹ５拮抗物質をテストした。
【００４９】
方法
雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを標準的なプレキシガラスケージ（ｎ＝４／ケージ）に収容し、飼料（Ｈａｒｌａｎ， Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ， ＩＮ）と水は常時供給した。マウスは２０週齢（体重２８−３５ｇ）で全ての検査の開始時に薬剤処置に対して未使用であった。自己摂取オペラント訓練中は、固形飼料（オーバーナイトセッションにつき１５ｇ）はオペラントチャンバーに置き、水は固定比１（ＦＲ−１）強化スケジュールの下で利用できた。
【００５０】
テストセッションは、寸法が１５．９×１４×１２．７ｃｍでステンレススチールの格子床を有する８つのプレキシガラスのオペラントチャンバー（Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ， Ｌａｆａｙｅｔｔｅ， ＩＮ）で実施した。換気を提供しさらに外部のノイズの遮断を助けるハウスファンが設置されている防音小部屋に各チャンバーを置いた。各オペラントチャンバーの左および右の壁に高感度ステンレススチールレスポンスレバーおよび液体分配システムを設置した。プログラム可能ポンプ（ＰＨＭ−１００， Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ）に据え付けた６０ｍＬの注射筒内に液体溶液（エタノールまたは水）を維持した。前記ポンプは、連結されたレスポンスレバーの左に配置されているステンレススチールのコップに活性化１回につき０．０１ｍＬを供給した。各チャンバーはまた、ハウスライト（１６：００−１８：００から０６：００−０８：００の間点燈される）とともに各レバーの上に配置された刺激ライト（レバーが押されるたびに活性化される）を有していた。チャンバーはＩＢＭ互換性ＰＣとのインターフェースを有し、全てのレベー押しおよび液体の供給を記録するようにプログラムされた。
【００５１】
マウスは漸近法の強化（１０％シュクロースｗ／ｖ）を用いてレバーを押すように訓練した。最初の行動形成セッションの後、１６時間のオーバーナイト（１６：００から０８：００）訓練セッションの間マウスを自由に歩きまわらせた。前記トレーニングセッションの間、両方の反応レバーは、強化因子として提供された１０％シュクロース対水による共存固定比１（ＣＯＮＣ ＦＲ１ＦＲ１）のスケジュールで有効であった。各溶液の位置（左または右）は各動物について固定されていたが、副次的な好みを制御するために動物間でバランスをとった。４日後、マウスで使用するために適応させたシュクロース置換法を用いてエタノール（１０％Ｖ／Ｖ）対水を経口的に自己摂取するように訓練した（Ｏｌｉｅｖｅ ｅｔ ａｌ．， ２０００， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． １２：４１３１−４１４０）。簡単に記せば、エタノール（２、４、８または１０％ｖ／ｖ）を毎日濃度を増加させながら４日間でシュクロース（１０％ｗ／ｖ）にだんだんと添加した。続いて、シュクロース（１０、５、２％ｗ／ｖ）を毎日濃度を減少させながら４日間でエタノール含有溶液からだんだんと消失させた。シュクロース置換訓練の後、全てのマウスは、強化因子として提供されたエタノール（１０％Ｖ／Ｖ）対水による強化のＣＯＮＣ ＦＲ１ ＦＲ１スケジュールで信頼できる態様で反応した。
【００５２】
アルコール希求行動に対するＬ１５２８０４の影響：Ｌ１５２８０４（１０、３０および６０ｍｇ／ｋｇ）の全身投与は、１６時間セッションの間水の摂取に全く影響を与えなかった。コントロールのアルコール自己摂取の仕方を分析することによって、行動はセッション全体を通して発生するが、アクセス後４から５時間でピークに達することが示された（図５、白丸）。２つの低用量のＬ１５２８０４の投与はエタノールの自己摂取を有意には変化させなかった。しかしながら、Ｌ１５２８０４（６０ｍｇ／ｋｇ）は、前記ピーク期間の間のアルコール希求行動（例えばアルコールのためのレバー押し）を有意に低下させた。自己摂取の代償性増加はアクセスから１３時間目に生じた。これは、Ｙ５拮抗物質の薬理動態と一致するかもしれない。これらのデータは、Ｌ１５２８０４は高刺激期間の間アルコール希求行動を減少させることを示唆している。
【００５３】
アルコール希求行動の開始に対するＬ１５２８０４の影響：各日中セッションは、動物からしばらくエタノールをとりあげ、エタノールを捜し求めるか否かの刺激誘発（多分に刺激誘発された自己摂取再発行為）（すなわち実験環）状況を具現している。本実験では、とりあげる時間は毎日８：００から１６：００であった。したがって、エタノールを自己摂取する（および自己摂取を再発させる）ための誘因に対するＬ１５２８０４の潜在的作用を示すために、我々は、各セッションの間に反応が開始する時間を分析した。Ｌ１５２８０４は最初の反応までの潜伏時間を有意に引き延ばした（図６）。これらのデータは、ＮＰＹＹ５拮抗物質がエタノール希求行動の開始を遅らせることを示している。動物モデルをヒトのアルコール中毒症状に敷衍することによって、これらのデータは、ＮＰＹＹ５拮抗物質は、アルコール中毒者の再発を遅らせてアルコール希求の回避に役立つ可能性を示唆している。
【００５４】
本明細書で述べた全ての刊行物および特許出願は本明細書に含まれるものとする。別に規定されないかぎり、本明細書で用いられる全ての技術用語および学術用語は、本発明が属する技術分野で一般的に理解されているものと同じ意味を有する。
本発明はこれで完全に説明し終えたが、添付の請求の範囲から離れることなく多くの変更および改変が可能であることは当業者には明白であろう。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は、１時間のテストセッションの直前にＰＶＮ内に輸液したＮＰＹまたはＮＰＹ＋Ｄ−ＮＰＹのエタノール摂取（Ａ）、エタノール嗜好性（Ｂ）および水の摂取に対する影響を示している。投薬は任意の順序で実施した。データは、１１匹のラットの平均±ＳＥＭとして表されている。（＊）は、賦形剤コントロールと有意差があることを示している（ダンネット（Ｄｕｎｎｅｔｔ）ｐ＜０．０５）。（†）は、ＮＰＹ単独とは有意差があることを示している（ペアードｔ検定ｐ＜０．０５）。
【図２】
図２は、ＰＶＮ内に輸液したＮＰＹまたはＮＰＹ＋Ｄ−ＮＰＹの体重（Ａ）、食物摂取（Ｂ）および水の摂取に対する影響を、輸液後２４時間してホームケージで測定したものを示している。投薬は任意の順序で実施した。測定は、図１に示したデータと同じ日に実施した。データは、１１匹のラットの平均±ＳＥＭとして表されている。（＊）は、賦形剤コントロールと有意差があることを示している（ダンネット（Ｄｕｎｎｅｔｔ）ｐ＜０．０５）。
【図３】
図３は、１時間のテストセッションの直前にＰＶＮ内に輸液したＮＰＹ、ＢＩＢＰ３２２６またはＮＰＹ＋ＢＩＢＰ３２２６のエタノール摂取（Ａ）、エタノール嗜好性（Ｂ）および水の摂取に対する影響を示している。投薬は任意の順序で実施した。データは、９匹のラットの平均±ＳＥＭとして表されている。（＊）は、賦形剤コントロールと有意差があることを示している（ペアードｔ検定ｐ＜０．０５）。
【図４】
図４は、扁桃の中枢核内のＮＰＹ−Ｙ１拮抗物質、ＢＩＢＰ３２２６の作用を示すドースレスポンス曲線を示す。ＢＩＢＰ３２２６は、１時間のセッション中に自己摂取されるアルコール量を顕著に減少させた。（＊）は、賦形剤（ｖｅｈ）と有意差があることを示している（ターキー検査（ｐ＜０．０５）、Ｎ＝９匹のラット）。
【図５】
図５は、訓練したＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを用いた行動試験セッションの時間の関数として表したエタノール強化レバー押しの総回数を示す。６０ｍｇ／ｋｇのＬ１５２８０４（白丸）または食塩水溶液（黒丸）の投与を比較した。アルコールの自己摂取は開始から４時間目および５時間目の間に最高に達した。Ｌ１５２８０４は、アルコール希求行動におけるこのピークを阻止した。（＊）は対応する時点で食塩水コントロールと有意差があることを示している。
【図６】
図６は、Ｌ１５２８０４の用量の関数として表した反応潜伏時間（すなわち最初のアルコールレバー押しまでの時間の遅れ）を示す。Ｌ１５２８０４の用量に依存して反応の開始が遅くなった。（＊）は、注射無し（ｎｉ）および食塩水（ｓａｌ）コントロールと有意差があることを示している（ターキーテスト、ｐ＜０．０５）。最高用量では２つのデータ−数値の変動性のために有意差が得られなかった（前記数値は平均値からほぼ２標準偏差多かった）。前記は、これら２匹のマウスで非常に強力な作用を示している。
Claims (16)
- アルコール中毒患者のアルコールの自己摂取を減少させる方法であって、治療的に有効な量のＮＰＹレセプター拮抗物質を前記患者に投与し、前記投与の前後に前記患者のアルコール自己摂取レベルを測定することを含む前記アルコール自己摂取を減少させる方法。
- 前記ＮＰＹレセプター拮抗物質が選択的ＮＰＹＹ１レセプター拮抗物質である請求項１に記載の方法。
- 前記選択的ＮＰＹＹ１レセプター拮抗物質がＢＩＢＰ３２２６である請求項２に記載の方法。
- 前記ＮＰＹレセプター拮抗物質が選択的ＮＰＹＹ５レセプター拮抗物質である請求項１の方法。
- 前記ＮＰＹレセプター拮抗物質が２−（３，３−ジメチル−１−オキソ−４Ｈ−１Ｈ−キサンテン−９−イル）−５，５−ジメチル−シクロヘキサン−１，３−ジオンまたは医薬的に許容できるその塩もしくは水和物である請求項４に記載の方法。
- アルコール中毒患者のアルコール希求行動を減少させる方法であって、治療的に有効な量のＮＰＹレセプター拮抗物質を前記患者に投与し、前記投与の前後に前記患者のアルコール希求行動レベルを測定することを含む前記アルコール希求行動を減少させる方法。
- 前記ＮＰＹレセプター拮抗物質が選択的ＮＰＹＹ１レセプター拮抗物質である請求項６に記載の方法。
- 前記選択的ＮＰＹＹ１レセプター拮抗物質がＢＩＢＰ３２２６である請求項７に記載の方法。
- 前記ＮＰＹレセプター拮抗物質が選択的ＮＰＹＹ５レセプター拮抗物質である請求項６の方法。
- 前記ＮＰＹレセプター拮抗物質が２−（３，３−ジメチル−１−オキソ−４Ｈ−１Ｈ−キサンテン−９−イル）−５，５−ジメチル−シクロヘキサン−１，３−ジオンまたは医薬的に許容できるその塩もしくは水和物である請求項９に記載の方法。
- 回復中のアルコール中毒患者の飲酒の再発発生を減少させる方法であって、治療的に有効な量のＮＰＹレセプター拮抗物質を前記患者に投与し、前記投与の前後に前記患者の飲酒再発の発生頻度を測定することを含む前記飲酒再発発生を減少させる方法。
- 前記ＮＰＹレセプター拮抗物質が選択的ＮＰＹＹ１レセプター拮抗物質である請求項１１に記載の方法。
- 前記選択的ＮＰＹＹ１レセプター拮抗物質がＢＩＢＰ３２２６である請求項１２に記載の方法。
- 前記ＮＰＹレセプター拮抗物質が選択的ＮＰＹＹ５レセプター拮抗物質である請求項１１の方法。
- 前記ＮＰＹレセプター拮抗物質が２−（３，３−ジメチル−１−オキソ−４Ｈ−１Ｈ−キサンテン−９−イル）−５，５−ジメチル−シクロヘキサン−１，３−ジオンまたは医薬的に許容できるその塩もしくは水和物である請求項１４に記載の方法。
- 治療的に有効な量のＮＰＹレセプター拮抗物質を含む、アルコール中毒に冒されている哺乳類のアルコール中毒治療用医薬組成物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US23796400P | 2000-10-03 | 2000-10-03 | |
| PCT/US2001/030830 WO2002028393A1 (en) | 2000-10-03 | 2001-10-02 | Use of neuropeptide-y antagonists in treatment of alcoholism |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2004510736A true JP2004510736A (ja) | 2004-04-08 |
Family
ID=22895950
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002532218A Pending JP2004510736A (ja) | 2000-10-03 | 2001-10-02 | アルコール中毒治療における神経ペプチドｙ拮抗物質の使用 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20040029953A1 (ja) |
| EP (1) | EP1337257A4 (ja) |
| JP (1) | JP2004510736A (ja) |
| AU (2) | AU2001296493B2 (ja) |
| CA (1) | CA2424622A1 (ja) |
| WO (1) | WO2002028393A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004110368A2 (en) * | 2003-06-06 | 2004-12-23 | Merck & Co., Inc. | Combination therapy for the treatment of hypertension |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4326465A1 (de) * | 1993-01-20 | 1995-02-09 | Thomae Gmbh Dr K | Aminosäurederivate, diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel und Verfahren zu ihrer Herstellung |
| US6114390A (en) * | 1995-11-30 | 2000-09-05 | Karl Thomae Gmbh | Amino acid derivatives, pharmaceutical compositions containing these compounds and processes for preparing them |
| FR2754709B1 (fr) * | 1996-10-23 | 1999-03-05 | Sanofi Sa | Composition cosmetique contenant un antagoniste des recepteurs du neuropeptide gamma et alpha 2 antagonistes susceptibles d'etre incorpores dans une telle composition |
| US6187777B1 (en) * | 1998-02-06 | 2001-02-13 | Amgen Inc. | Compounds and methods which modulate feeding behavior and related diseases |
| US6399631B1 (en) * | 1999-07-23 | 2002-06-04 | Pfizer Inc. | Carbazole neuropeptide Y5 antagonists |
| US6803372B2 (en) * | 1999-08-20 | 2004-10-12 | Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. | Spiro compounds |
| TWI279402B (en) * | 1999-08-20 | 2007-04-21 | Banyu Pharma Co Ltd | Spiro compounds having NPY antagonistic activities and agents containing the same |
| US6511984B2 (en) * | 2000-03-30 | 2003-01-28 | Pfizer Inc. | Neuropeptide Y antagonists |
| US20020061897A1 (en) * | 2000-03-30 | 2002-05-23 | Elliott Richard L. | Neuropeptide Y antagonists |
| WO2002003988A2 (en) * | 2000-07-06 | 2002-01-17 | Wyeth | Use of substituted indole compounds for treating neuropeptide y-related conditions |
-
2001
- 2001-10-02 JP JP2002532218A patent/JP2004510736A/ja active Pending
- 2001-10-02 EP EP01977367A patent/EP1337257A4/en not_active Withdrawn
- 2001-10-02 US US10/398,091 patent/US20040029953A1/en not_active Abandoned
- 2001-10-02 WO PCT/US2001/030830 patent/WO2002028393A1/en not_active Application Discontinuation
- 2001-10-02 CA CA002424622A patent/CA2424622A1/en not_active Abandoned
- 2001-10-02 AU AU2001296493A patent/AU2001296493B2/en not_active Ceased
- 2001-10-02 AU AU9649301A patent/AU9649301A/xx active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1337257A4 (en) | 2004-04-07 |
| US20040029953A1 (en) | 2004-02-12 |
| AU2001296493B2 (en) | 2006-04-13 |
| AU9649301A (en) | 2002-04-15 |
| EP1337257A1 (en) | 2003-08-27 |
| CA2424622A1 (en) | 2002-04-11 |
| WO2002028393A1 (en) | 2002-04-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5411504B2 (ja) | 薬物嗜癖および行動嗜癖を治療するためのイブジラストの使用 | |
| JP5114381B2 (ja) | 精神疾患および障害治療用アミリンおよびアミリンアゴニスト | |
| Kelley et al. | Neuropeptide-Y in the paraventricular nucleus increases ethanol self-administration | |
| JP4926069B2 (ja) | 肥満ならびに肥満関連疾患および障害の治療方法 | |
| EP2135603B1 (en) | Compositions and methods for increasing insulin sensitivity | |
| EP2506717B1 (en) | Method of using dopamine reuptake inhibitors and their analogs for treating diabetes symptoms and delaying or preventing diabetes-associated pathologic conditions | |
| JP2001523245A (ja) | 肥満を治療するためのｎｋ−１受容体拮抗薬およびｓｓｒｉの使用 | |
| CN101001619A (zh) | 影响体重减轻的安非他酮和第二化合物的组合物 | |
| JP2009517393A (ja) | 不安症の治療方法 | |
| US20240066003A1 (en) | Neurodevelopmental disorder therapy | |
| MX2008012666A (es) | Amilina y agonistas de amilina para tratar enfermedades y trastornos psiquiatricos. | |
| JP5166437B2 (ja) | カヘキシーの治療 | |
| KR102266696B1 (ko) | 주의력 및 인지 장애, 및 신경 퇴행성 장애와 관련된 치매 치료용 신규 치료제 | |
| US7989479B2 (en) | Use of a p38 kinase inhibitor for treating psychiatric disorders | |
| JP2010534628A (ja) | 神経変性障害を治療するためのネラメキサンの新規組合せ | |
| JP2003528927A (ja) | 腎機能障害の処置 | |
| Rylkova et al. | Effects of NPY and the specific Y1 receptor agonist [D-His26]-NPY on the deficit in brain reward function and somatic signs associated with nicotine withdrawal in rats | |
| JP2003511410A (ja) | 肥満症の治療のためのモルホリノール誘導体 | |
| JP5175015B2 (ja) | ジスキネジーの治療 | |
| JP2004510736A (ja) | アルコール中毒治療における神経ペプチドｙ拮抗物質の使用 | |
| Broderick | Intracavernous pharmacotherapy: treatment for the aging erectile response | |
| EP1099446B1 (en) | Combination for treating depression and anxiety containing a CNS-penetrant NK-1 receptor antagonist and an antidepressant or anxiolytic agent | |
| AU2001296493A1 (en) | Use of neuropeptide-Y antagonists in treatment of alcoholism | |
| JP2002536337A (ja) | 麻酔の調節 | |
| JP6416213B2 (ja) | 気分障害患者の治療のためのナルメフェン |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20041004 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20071119 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20080421 |