JP2004239906A5 - - Google Patents

Description

試験片は好ましくは、ポリエーテルスルフォン及び変成ポリエーテルスルフォンから成るグループの中から選択された材料で作られている多孔質膜を含んで成る。多孔質膜に塗布される単数又は複数の重合体は好ましくはアクリル系ラテックス重合体及びポリスチレン硫酸ナトリウムから成るグループの中から選択されている。

この研究作業中に、電極ベースのＮＡＤ依存性ＧＤＨ系の中で有用であるものとして〔特許文献４〕中で報告されたメディエータは、すぐ上で記述されているような光学ベースのＮＡＤ依存性ＧＤＨ系ならびに光学ベースのＰＱＱ−ＧＤＨ還元性系の中では使用可能であることが発見された。この結果は、少なくとも２つの理由から驚くべきことである。すなわち第１に、メディエータは異なる酵素に特異的でありうる。ＮＡＤ−ＧＤＨ系で役に立つ全てのメディエータが必ずしもＰＱＱ−ＧＤＨ系内でも役に立つとはかぎらない。第２に、〔特許文献４〕で開示されたメディエータは有色である。これは、〔特許文献４〕で開示されているような電極ベースの系内では問題あることではないが、本書で開示されているような光学ベースの系ではこれらのメディエータは使用できないと予想されるはずであった。しかしながら、出願人は、これらのメディエータが反応進行中に有色の状態から無色の状態にまで変化することから、最終点では測定値と干渉しないことを発見した。当業者であれば、色発生を測定することが一般に好ましいが、色の消失も同じく測定でき、それでも標準的には前者の方が優れた試験精度を与える、ということを想像できるであろう。かくして〔特許文献４〕に開示されているようなメディエータと共に、及び本書に開示されているような不透明度を制御するための付加的な単数又は複数の重合体と共にＰＱＱ−ＧＤＨ還元系を使用することは、本発明の範囲内に入る。かかる系のための適切な指示薬としては、Dojindo Laboratoriesから入手可能なＷＳＴ−４は、上述の〔特許文献５〕及び〔特許文献６〕内で開示されているもののようなテトラゾリウム塩指示薬が含まれる。

高気流オーブン内で少なくとも５分間４０〜５０℃で膜を乾燥させた。膜をディスク状にカットし、図１Ｂの実施形態と関連して上述したとおり、条片にはめ込んだ。Adhesives Researchから入手可能なArcare７８４３感圧接着剤を用いて、コーティングされた反応面に透明のポリエステルフィルムウインドウを貼付した。試験片は、反応面を下にして方向づけした。グルコースでスパイクした全血又はグルコース水溶液のいずれか５００ナノリットルの標本を次に、試験片内の各ディスクの粗い標本面に適用した。０．１５ＭのＮａ ＨＥＰＥＳを用いてｐＨ７．５までグルコース溶液を緩衝させた。水性及び全血標本中のグルコース濃度は、０mg/dL、５０mg/dL、１００mg/dL、２５０mg/dL、及び６００mg/dLであった。全血標本を、指示されたレベルまでスパイクし、Yellow Springs Co.,Inc.２３００型ＳＴＡＴ Ｐｌｕｓグルコース検出器を用いて血漿グルコースとしてこれを測定した。各々の標本試験片上で各標本溶液について２つの複製を試験させた。２００２年４月１９日付けの同時係属特許出願〔特許文献７〕の中に記述されている器具を用いて、透明ポリエステルフィルムウインドウにおいて、６８０nmで各試験片の反射率を測定した。この計器は、直径約０．０３０インチの小読取り部域反射率読取りヘッドを用いている。測定された反射率値ＲをＫ／Ｓ＝（１−Ｒ）2／２Ｒという式により線形化関数Ｋ／Ｓに変換した。図２に示されているように、各々のグルコースレベルについての測定された反射率は、水溶液及び全血の両方について、又、テストデイスクの異なる孔径について実質的に同じであり、本発明に従って作られた試験片について、用量応答が実質的に膜孔径そして全血がその標本中に存在しているか否かと無関係であったことを示している。

例３
Pall CorporationによりPresenseの商品名で販売されている孔径０．８ミクロンのポリエーテルスルフォン多孔質膜材料を用いて、試験片を調製した。使用された試薬組成物は、表１で記述されたものであった。浸漬ではなくむしろ多孔質膜の反応面上へのストライピングにより、試薬組成物を塗布した。次に試験片に、Arcare７８４３感圧接着剤により固定された透明ポリエステルウインドウを備え、これを、全て以上の例１に記述された通りに試薬リボンと共に積層させた。試験片は、反応面を下にして方向づけした。その後、５００ナノリットルのグルコースでスパイクされた全血の試験標本を、各試験片の粗い標本面に塗布した。グルコース全血標本は、Yellow Springs Instrument検出器を用いて血漿グルコースとして測定された場合、０mg/dL、５０mg/dL、１００mg/dL、２００mg/dL、４００mg/dL及び６００mg/dLであった。各標本試験片上で各標本溶液について２つの複製を試験させた。

０.８ミクロンのポリエーテルスルフォンPresence膜及び０．２及び５．０ミクロンポリエーテルスルフォンSupor膜の予めカットされた条片上に、試薬混合物の約１マイクロリットルのアリコートを設置した。室温での空気乾燥の後、０、５０、２００mg/dLの水性グルコース標本の５００nLのアリコートを添加した。色変化、色の均質性、そして色変化の速度を観察した。グルコース標本について、視覚的用量応答を観察した。０．１％のSilwetL-7600表面活性剤を伴い最終処方ｐＨが約７．０である類似の処方のアリコートを同様に、マイクロキュベット（例えば小容積、５０ミクロンの経路長）内に設置し、０〜５００mg/dLの全血グルコースを添加した用量応答を観察した。約２５〜５パーセントの反射率範囲が観察された。これらの結果は、水性及び全血標本の両方において、３―(３．５−シカルボキシフェニルイミノ)−３Ｈ−フェノチアジンがグルコースのＰＱＱ−ＧＤＨ決定の有効なメディエータであり得ることを表わしている。