JP2004091491A - アレルギーを処置する際のいくつかのLactobacillus株の新規使用 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 本発明は、被験体においてアレルギーを処置するための方法を提供し、この方法は、INF−γ分泌を刺激する乳酸細菌株を含む医薬を該被験体に投与する工程を包含する。1つの実施形態において、上記乳酸細菌株は、Lactobacillus plantarum CCRC 12944である。1つの実施形態において、上記乳酸細菌株は、Lactobacillus acidophilus CCRC 14079である。
【選択図】 なし
Description
(1.発明の分野)
本発明は、主に、アレルギーを処置する際のいくつかのLactobacillus株の新規使用に関する。
アレルギーとは、通常無害な物質に対する免疫学的に媒介された有害反応を発症する後天性の能力をいう。アレルギー反応は、痒み、咳、喘鳴、くしゃみ、涙眼、炎症および疲労のような症状を引き起こす。通常、アレルギー反応は、初期の特異的な免疫応答および後期の炎症反応を含むと考えられる。アレルゲン(例えば、花粉およびダニ塵芥)は、高親和性免疫グロブリン(IgE)レセプターを刺激することによって、アレルギーの初期相を媒介することが報告されている。例えば、肥満細胞および好塩基球は、アレルゲンによって刺激された場合、ヒスタミンおよびサイトカインを放出する。肥満細胞および好塩基球から放出されたサイトカインは、次いで、炎症細胞をリクルートすることによってアレルギーの後期相を媒介する。好酸球、マクロファージ、リンパ球、好中球および血小板の流入は、悪性の炎症サイクルを開始することもまた報告されている。このアレルギーの後期相は、最初の免疫応答を増幅させ、この増幅された免疫応答は、次いで、さらなる炎症細胞の放出を誘発する(非特許文献1)。
本発明は、アレルギーを処置することにおける、いくつかのLactobacillus株の新規な使用を提供する。
本発明に従って、INF−γの分泌を刺激するいくつかのLactobacillus株が、予想外にも見出され、そしてアレルギーの処置のために使用され得る。
(細菌培養)
表1に列挙される67の乳酸細菌株を、予め選択した。陽性コントロール(PC)および陰性コントロール(NC)としての株もまた示された。全ての株を、FIRDIから購入した。
これらのリンパ球サンプルを、所定量の上述の細菌株と同時培養した。Lactobacillus casei CCRC 10697を、陽性コントロールとして採用し、そしてLactobacillus delbrueckii亜種bulgaricus CCRC 14071を、陰性コントロールとして採用した。12時間、36時間および60時間の同時培養の後に、各サンプル中の細胞をそれぞれ収集した。収集した細胞を再懸濁させ、そして2000rpmで5分間、遠心分離した。各サンプルにおけるINF−γレベルの決定のために、上清を採取した。
ELISAによってINF−γレベルを決定するための方法は、Shidaら(Shida K.,Makino K.,Morishita A.,Takamizawa K.,Hachimura S.,Ametani A.,Takehito S.,Kumagai Y.,Habu S.,Kaminogawa S.Lactobacillus casei inhibits antigen induced IgE secretion through regulation of cytokine production in murine splenocyte cultures.Int Arch Allergy Immunol 1998;115:278−287)によりお記載されており、以下の工程を包含する:
・コーティング緩衝液(1リットルあたり、8.00gのNaCl、0.20gのKCl、1.44gのNa2HPO4、0.24gのKH2PO4、30.0gのウシ血清アルブミンおよび0.50gのNaN3(pH7.4))中2.5μg/mLの精製したマウス抗ヒトINF−γ抗体(150μL)を、ELISAプレートの各ウェルに添加する工程;
・このプレートを、室温、40rpmで振盪する工程;
・このプレートを、4℃で一晩インキュベートする工程;
・これらのウェル中のコーティング緩衝液を、捨てる工程;
・このプレートの各ウェルを洗浄緩衝液(1リットルあたり、8.00gのNaCl、0.20gのKCl、1.44gのNa2HPO4、0.24gのKH2PO4、0.5mLのTween 20および0.50gのNaN3(pH7.4))で、3分間、2回洗浄する工程;
・これらのウェルを蒸留水で洗浄する工程;
・このプレートの各ウェルに200μLのブロック緩衝液を添加する工程;
・このプレートを、室温で少なくとも2時間インキュベートする工程;
・これらのウェル中のブロック緩衝液を捨てる工程;
・このプレートの各ウェルを、洗浄緩衝液で、3分間、3回洗浄する工程;
・このプレートの各ウェルを蒸留水で洗浄する工程;
・リンパ球サンプルの上清をとり、これをこのプレートの各ウェルに添加する工程;
・このプレートを、40rpmで、4℃で一晩振盪する工程;
・これらのウェル中のサンプルを捨てる工程;
・このプレートの各ウェルを、洗浄緩衝液で、3分間、3回洗浄し、次いで、蒸留水で洗浄する工程;
・希釈緩衝液で希釈した150μLのビオチンマウス抗ヒトINF−γ抗体を、このプレートの各ウェルに添加する工程;
・このプレートを、室温で2時間インキュベートする工程;
・このプレートの各ウェルを、洗浄緩衝液で、3分間、3回洗浄し、次いで、蒸留水で洗浄する工程;
・希釈緩衝液で希釈した150μLのストレプトアビジン−アルカリホスファターゼ(ストレプトアビジン−AKP)を、このプレートの各ウェルに添加する工程;
・このプレートを、室温で1時間インキュベートする工程;
・このプレートの各ウェルを、洗浄緩衝液で、3分間、4回洗浄し、次いで、蒸留水で洗浄する工程;
・150μLの基質p−ニトロフェニルホスフェート(pNpp)を、このプレートの各ウェルに添加する工程;
・この基質反応が完了するまで、このプレートを室温でインキュベートする工程;
・このプレートの各ウェルの405nmにおける吸光度(すなわち、OD405)を測定する工程。
67の乳酸細菌株により刺激されるINF−γレベルの結果を、表2に列挙する:
(表2)
(末梢血単核細胞の単離)
健康なボランティア由来の血液サンプル5mLを、5mLのFicoll−Hypaque(17−1400−02、Pharmacia)と共に添加し、次いで500gで30分間遠心分離した。末梢血単核細胞(PBMC)を、サンプルの界面から取得し、そしてPBSで2回洗浄した。このPBMC(105細胞/mL)を、各ウェルが2mLのRPMI 1640培地(pH7.7)を含む6ウェルプレートのウェルに移した。
実施例1に記載されるのと類似の方法を用いて、PBMCをLactobacillus plantarum CCRC 12944、Lactobacillus acidophilus CCRC 14079、Lactobacillus rhamnosus CCRC 10940、Lactobacillus paracasei亜種paracasei CCRC 14023、ならびにLactobacillus delbrueckii亜種bulgaricus CCRC 12297、14007および14069(107細胞/mL)と共に同時培養した。Lactobacillus casei CCRC 10697を、ポジティブコントロールとして取得し、そしてLactobacillus delbrueckii亜種bulgaricus CCRC 14071を、ネガティブコントロールとして取得した。この細胞を、24時間、48時間および72時間の同時培養後に収集し、そして再懸濁し、そして2000rpmで5分間遠心分離した。実施例1に記載されるのと同じ方法によってINF−γレベルを決定するために、上清を取得した。
7株によって刺激されるPBMCのINF−γ量の結果を、表3に列挙し、そして特に、Lactobacillus paracasei亜種paracasei CCRC 14023による結果を、図2に示す。
Claims (21)
- 被験体においてアレルギーを処置するための方法であって、該方法は、INF−γ分泌を刺激する乳酸細菌株を含む医薬を該被験体に投与する工程を包含し、該株は、Lactobacillus plantarum CCRC 12944、Lactobacillus acidophilus CCRC 14079、Lactobacillus rhamnosus CCRC 10940、Lactobacillus paracasei亜種paracasei CCRC 14023、Lactobacillus delbrueckii亜種bulgaricus CCRC 12297、Lactobacillus delbrueckii亜種bulgaricus CCRC 14007、およびLactobacillus delbrueckii亜種bulgaricus CCRC 14069からなる群より選択され、該株全ては、Food Industry Research and Development Institute(FIRDI)、Hsinchu,Taiwanに寄託されている、方法。
- 前記乳酸細菌株が、Lactobacillus plantarum CCRC 12944である、請求項1に記載の方法。
- 前記乳酸細菌株が、Lactobacillus acidophilus CCRC 14079である、請求項1に記載の方法。
- 前記乳酸細菌株が、Lactobacillus rhamnosus CCRC 10940である、請求項1に記載の方法。
- 前記乳酸細菌株が、Lactobacillus paracasei亜種paracasei CCRC 14023である、請求項1に記載の方法。
- 前記乳酸細菌株が、Lactobacillus delbrueckii亜種bulgaricus CCRC 12297である、請求項1に記載の方法。
- 前記乳酸細菌株が、Lactobacillus delbrueckii亜種bulgaricus CCRC 14007である、請求項1に記載の方法。
- 前記乳酸細菌株が、Lactobacillus delbrueckii亜種bulgaricus CCRC 14069である、請求項1に記載の方法。
- 前記乳酸細菌株が、生きているかまたは不活性化されている、請求項1に記載の方法。
- 前記乳酸細菌株が、不活性化されている、請求項9に記載の方法。
- IFN−γ分泌を刺激するために治療的に有効な量で、INF−γ分泌を刺激する乳酸細菌株を含む、アレルギーを処置するための組成物であって、該株は、Lactobacillus plantarum CCRC 12944、Lactobacillus acidophilus株CCRC 14079、Lactobacillus rhamnosus 株CCRC 10940、Lactobacillus paracasei亜種paracasei株CCRC 14023、Lactobacillus delbrueckii亜種bulgaricus株CCRC 12297、Lactobacillus delbrueckii亜種bulgaricus株CCRC 14007、およびLactobacillus delbrueckii亜種bulgaricus株CCRC 14069からなる群より選択され、該株全ては、Food Industry Research and Development Institute(FIRDI)、Hsinchu,Taiwanに寄託されている、組成物。
- 前記乳酸細菌株が、Lactobacillus plantarum CCRC 12944である、請求項11に記載の組成物。
- 前記乳酸細菌株が、Lactobacillus acidophilus CCRC 14079である、請求項11に記載の組成物。
- 前記乳酸細菌株が、Lactobacillus rhamnosus CCRC 10940である、請求項11に記載の組成物。
- 前記乳酸細菌株が、Lactobacillus paracasei亜種paracasei CCRC 14023である、請求項11に記載の組成物。
- 前記乳酸細菌株が、Lactobacillus delbrueckii亜種bulgaricus CCRC 12297である、請求項11に記載の組成物。
- 前記乳酸細菌株が、Lactobacillus delbrueckii亜種bulgaricus CCRC 14007である、請求項11に記載の組成物。
- 前記乳酸細菌株が、Lactobacillus delbrueckii亜種bulgaricus CCRC 14069である、請求項11に記載の組成物。
- 前記乳酸細菌株が、生きているかまたは不活性化されている、請求項11に記載の組成物。
- 前記乳酸細菌株が、不活性化されている、請求項19に記載の組成物。
- 薬学的組成物、栄養補助食品、食物、またはこれらの成分の形態である、請求項11に記載の組成物。
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