JP4823503B2 - Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｆｅｒｍｅｎｔｕｍの新規微生物株ＧＭ−０９０、およびＩＦＮ−γ分泌の刺激および／またはアレルギーの処置のためのその使用。 - Google Patents

Description

（１．発明の分野）
本発明は、新規微生物株である、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＧＭ−０９０、ならびに、ＩＦＮ−γ分泌の刺激および／またはアレルギーの処置のためのその使用に主に関する。

（２．関連技術の説明）
アレルギーとは、通常無害な物質に対して、免疫学的に媒介される有害反応を発症する後天性の素質（ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）をいう。アレルギー反応は、掻痒（ｉｔｃｈｉｎｇ）、咳（ｃｏｕｇｈｉｎｇ）、喘鳴（ｗｈｅｅｚｉｎｇ）、くしゃみ（ｓｎｅｅｚｉｎｇ）、なみだ眼（ｗａｔｅｒｙ ｅｙｅｓ）、炎症および疲労などの症状を引き起こす。アレルギー反応は、早期特異的免疫応答および後期炎症反応を含むと考えられている。アレルゲン（例えば、花粉およびダニ埃）が高い親和性の免疫グロブリン（ＩｇＥ）レセプターを刺激することによって、アレルギーの早期段階を媒介することが報告された。例えば、マスト細胞および好塩基球は、アレルゲンによって刺激を受けるとき、ヒスタミンおよびサイトカインを放出する。次いで、マスト細胞および好塩基球から放出されたサイトカインは、炎症性細胞を補充（ｒｅｃｒｕｉｔ）することによってアレルギーの後期段階を媒介した（非特許文献１（Ｓｅｒａｆｉｎ，ＷＥ，ＧｏｏｄｍａｎおよびＧｉｌｌｍａｎｓ，「Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」，Ｈａｒｄｍｅｎ，Ｊａ；Ｌｉｍｂｉｒｄ，Ｌ，Ｅ編，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎ．Ｙ．，６５９−６８２，１９９６）を参照のこと。）。好酸球、マクロファージ、リンパ球、好中球および血小板の流入が、悪性の炎症サイクルを開始することもまた報告された。アレルギーの後期段階は、初期の免疫応答を増幅し、これはついで、より多くの炎症細胞の放出を誘発した（非特許文献２（Ｔｏｗｎｌｅｙ，ＲＧおよびＯｋａｄａ，Ｃ，Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ，６８：１９０−１９６，１９９１））。

種々の治療が、アレルギー症状を処置するために研究されてきた。とりわけ、抗アレルギー剤およびヒスタミンＨレセプターアンタゴニスト（抗ヒスタミン剤）が使用されてきた。ヒスタミンアンタゴニストは、アレルゲンの存在に応答してマスト細胞から放出されるヒスタミンの作用を中和するために投与される。ヒスタミンアンタゴニストは、標的組織に対するヒスタミンの作用による発赤、掻痒および腫脹を減少させ、そしてマスト細胞の脱顆粒から生じる症状の多くを予防または軽減するように作用した。しかし、抗ヒスタミン剤はまた、有害反応（例えば、敏捷性の減少、反応時間の遅延および傾眠）に関連すると報告された（非特許文献３（ＧｏｏｄｍａｎおよびＧｉｌｌｍａｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｅｉｇｈｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，５７５−５８８頁，１９９０））。

サイトカインを調節することによるアレルギーの処置についてもいくつか報告がある。とりわけ、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）は、Ｔｈ２リンパ球においてサイトカイン（特に、ＩＬ−４の分泌）の過剰発現を阻害して、Ｂ細胞の増殖を低下させることが見出された。このほか、ＩＦＮ−γは、Ｔｈ１の免疫応答を刺激し得、ＩｇＥの合成を抑制し得る（非特許文献４（Ｓａｒｅｎｅｖａ Ｔら，Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ｖｉｒｕｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ ＩＦＮ−α／β ａｎｄ ＩＬ−１８ ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｅｎｈａｎｃｅ ＩＦＮ−γ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ Ｔ ｃｅｌｌｓ． Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６０：６０３２−６０３８，１９９８）；非特許文献５（Ｓｈｉｄａ Ｋら，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ａｎｔｉｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ＩｇＥ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｍｕｒｉｎｅ ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅ ｃｕｌｔｕｒｅ． Ｉｎｔ Ａｒｃｈ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ １１５：２７８−２８７，１９９８））。ＩＦＮ−γがＢ細胞の増殖を抑制し得、そしてＩｇＥ分泌を抑制し得ることから、ＩＦＮ−γは、アレルギーを処置することにおいて有効であると考えられている。

グラム陽性細菌である乳酸菌（Ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａ）は、産業用食品醗酵においてよく使用されている。近年の研究において、乳酸菌は、細胞のＩＦＮ−γ分泌を刺激することが示された（非特許文献６ （Ｂｌｕｍ Ｓら，Ｉｎｔｅｎｓｉｎａｌ ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｉｍｍｕｎｏｃｏｍｐｅｔｅｎｔ ｃｅｌｌｓ．Ａｎｔｏｎｉｅ Ｖａｎ Ｌｅｅｕｗｅｎｈｏｅｋ ６７：１９９−２０５，１９９９）；非特許文献７（Ｃｏｎｔｒａｃｔｏｒ ＮＶら，Ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ，ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｎｄ ｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅｄ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｉｎ ｃｏｌｉｔｓ−ｆｒｅｅ ｇｎｏｔｏｂｉｏｔｉｃ ＩＬ−２−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｍｉｃｅ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６０：３８５−３９４，１９９８）；非特許文献８（Ｄｅｌｎｅｓｔｅ Ｙら，Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｆｏｏｄｓ：Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ ｏｎ ｉｍｍｕｎｃｏｍｐｅｔｅｎｔ ｃｅｌｌｓ．Ｎｕｔｒ Ｒｅｖ ５６：５９３−９８，１９９８）；非特許文献９（Ｈａｌｌｅｒ Ｄら，Ｎｏｎ−ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｅｌｉｃｉｔ ａ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｂｙ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ／ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ ｃｏ−ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｇｕｔ ４７：７９−８７，２０００））。いくつかの特定の乳酸菌（例えば、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ およびＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ ｓｕｂｓｐ．）は、マウスおよびヒト由来の血液中のリンパ球のＩＦＮ−γ分泌を刺激することが見出された（非特許文献１０（Ａｒｕｎａｃｈａｌａｍ Ｋら，Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｎａｔｕｒａｌ ｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｂｙ ｄｉｅｔａｒｙ ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ（ＨＮ ０１９）．Ｅｕｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ ５４：１−５，２０００）；非特許文献１１（Ｋｉｓｈｉ Ａら，Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ｏｒａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ ｓｕｂｓｐ．Ｃｏａｇｕｌａｎｓ ｏｎ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−α ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｃａｐａｃｉｔｙ ｉｎ ｈｕｍａｎｓ．Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｎｕｔｒ １５：４０８−４１２，１９９６））。乳酸菌は、ヒトまたはマウス由来のリンパ球を刺激してインターロイキン−１２（ＩＬ−１２）（これは、Ｔ細胞およびＮＫ細胞を活性化してＩＦＮ−γを分泌させるＴ細胞刺激サイトカインである）を分泌させ得ることもまた報告されている（非特許文献１２（Ｐｏｕｗｅｌｓ ＰＨら， Ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｓ ａ ｃａｒｒｉｅｒ ｆｏｒ ｏｒａｌ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ：ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｖｅｃｔｏｒ ｓｙｓｔｅｍｓ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ａｎｔｉｇｅｎｓ．Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ４４：１８３−９２，１９９６））。

アトピー性皮膚炎は、小児において最も一般的なアレルギー疾患の一つである。アトピー性皮膚炎を処置するための従来の方法は、局所ステロイド治療である。しかし、症状が続き、そしてステロイド投与を停止した後しばしば症状が再発する。プロバイオティクス治療は、アトピー性皮膚炎を処置するための、より安全かつより効果的な方法であると考えられている。いくつかの乳酸菌（例えば、Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ｓｔｒａｉｎ ＧＧ （非特許文献１３（Ｋａｌｌｉｏｍａｋｉ，Ｍ．，Ｓ．Ｓａｌｍｉｎｅｎら，Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ ａｎｄ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ａｔｏｐｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ：４−ｙｅａｒ ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ ｏｆ ａ ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌ． Ｌａｎｃｅｔ ３６１（９３７２）：１８６９−７１，２００３）；非特許文献１４（Ｋｉｒｊａｖａｉｎｅｎ，Ｐ．Ｖ．，Ｓ．Ｊ．Ｓａｌｍｉｎｅｎら，Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｔｏｐｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ：ｕｎｄｅｒｓｃｏｒｉｎｇ ｔｈｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｏｆ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ． Ｊ Ｐｅｄｉａｔｒ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｎｕｔｒ ３６（２）：２２３−７，２００３）；非特許文献１５（Ｄｒｅｂｏｒｇ，Ｓ．，Ｔｈｅ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ．Ａｎｎ Ａｌｌｅｒｇｙ Ａｓｔｈｍａ Ｉｍｍｕｎｏｌ ８９（６ Ｓｕｐｐｌ １）：８３−５，２００２）；非特許文献１６（Ｐｅｓｓｉ，Ｔ．，Ｙ．Ｓｕｔａｓら，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１０ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ａｔｏｐｉｃ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｏｒａｌ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＧＧ．Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ａｌｌｅｒｇｙ ３０（１２）：１８０４−８，２０００）；非特許文献１７（Ｉｓｏｌａｕｒｉ，Ｅ．，Ｔ．Ａｒｖｏｌａら，Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｔｏｐｉｃ ｅｃｚｅｍａ．Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ａｌｌｅｒｇｙ ３０（１１）：１６０４−１０，２０００））、Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ １９０７０−２とＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ ＤＳＭ １２２４６０との組み合わせ（非特許文献１８（Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄｔ，Ｖ．，Ｅ．Ｂｅｎｆｅｌｄｔら，Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｒａｉｎｓ ｉｎ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｗｉｔｈ ａｔｏｐｉｃ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ． Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ １１１（２）：３８９−９５，２００３））、およびＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｔｉｓ Ｂｂ−１２ （非特許文献１７（Ｉｓｏｌａｕｒｉ，Ｅ．，Ｔ．Ａｒｖｏｌａら，２０００））が、アトピー性皮膚炎の予防および／または処置において有効であると示唆された。
Ｓｅｒａｆｉｎ，ＷＥ，ＧｏｏｄｍａｎおよびＧｉｌｌｍａｎｓ，「Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」，Ｈａｒｄｍｅｎ，Ｊａ；Ｌｉｍｂｉｒｄ，Ｌ，Ｅ編，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎ．Ｙ．，６５９−６８２，１９９６ Ｔｏｗｎｌｅｙ，ＲＧおよびＯｋａｄａ，Ｃ，Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ，６８：１９０−１９６，１９９１ ＧｏｏｄｍａｎおよびＧｉｌｌｍａｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｅｉｇｈｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，５７５−５８８頁，１９９０ Ｓａｒｅｎｅｖａ Ｔら，Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ｖｉｒｕｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ ＩＦＮ−α／β ａｎｄ ＩＬ−１８ ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｅｎｈａｎｃｅ ＩＦＮ−γ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ Ｔ ｃｅｌｌｓ． Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６０：６０３２−６０３８，１９９８ Ｓｈｉｄａ Ｋら，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ａｎｔｉｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ＩｇＥ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｍｕｒｉｎｅ ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅ ｃｕｌｔｕｒｅ． Ｉｎｔ Ａｒｃｈ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ １１５：２７８−２８７，１９９８ Ｂｌｕｍ Ｓら，Ｉｎｔｅｎｓｉｎａｌ ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｉｍｍｕｎｏｃｏｍｐｅｔｅｎｔ ｃｅｌｌｓ．Ａｎｔｏｎｉｅ Ｖａｎ Ｌｅｅｕｗｅｎｈｏｅｋ ６７：１９９−２０５，１９９９ Ｃｏｎｔｒａｃｔｏｒ ＮＶら，Ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ，ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｎｄ ｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅｄ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｉｎ ｃｏｌｉｔｓ−ｆｒｅｅ ｇｎｏｔｏｂｉｏｔｉｃ ＩＬ−２−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｍｉｃｅ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６０：３８５−３９４，１９９８ Ｄｅｌｎｅｓｔｅ Ｙら，Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｆｏｏｄｓ：Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ ｏｎ ｉｍｍｕｎｃｏｍｐｅｔｅｎｔ ｃｅｌｌｓ．Ｎｕｔｒ Ｒｅｖ ５６：５９３−９８，１９９８ Ｈａｌｌｅｒ Ｄら，Ｎｏｎ−ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｅｌｉｃｉｔ ａ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｂｙ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ／ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ ｃｏ−ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｇｕｔ ４７：７９−８７，２０００ Ａｒｕｎａｃｈａｌａｍ Ｋら，Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｎａｔｕｒａｌ ｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｂｙ ｄｉｅｔａｒｙ ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ （ＨＮ ０１９）．Ｅｕｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ ５４：１−５，２０００ Ｋｉｓｈｉ Ａら，Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ｏｒａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ ｓｕｂｓｐ．Ｃｏａｇｕｌａｎｓ ｏｎ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−α ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｃａｐａｃｉｔｙ ｉｎ ｈｕｍａｎｓ．Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｎｕｔｒ １５：４０８−４１２，１９９６ Ｐｏｕｗｅｌｓ ＰＨら， Ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｓ ａ ｃａｒｒｉｅｒ ｆｏｒ ｏｒａｌ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ：ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｖｅｃｔｏｒ ｓｙｓｔｅｍｓ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ａｎｔｉｇｅｎｓ．Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ４４：１８３−９２，１９９６ Ｋａｌｌｉｏｍａｋｉ，Ｍ．，Ｓ．Ｓａｌｍｉｎｅｎら，Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ ａｎｄ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ａｔｏｐｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ：４−ｙｅａｒ ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ ｏｆ ａ ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌ． Ｌａｎｃｅｔ ３６１（９３７２）：１８６９−７１，２００３ Ｋｉｒｊａｖａｉｎｅｎ，Ｐ．Ｖ．，Ｓ．Ｊ．Ｓａｌｍｉｎｅｎら，Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｔｏｐｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ：ｕｎｄｅｒｓｃｏｒｉｎｇ ｔｈｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｏｆ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ． Ｊ Ｐｅｄｉａｔｒ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｎｕｔｒ ３６（２）：２２３−７，２００３ Ｄｒｅｂｏｒｇ，Ｓ．，Ｔｈｅ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ．Ａｎｎ Ａｌｌｅｒｇｙ Ａｓｔｈｍａ Ｉｍｍｕｎｏｌ ８９（６ Ｓｕｐｐｌ １）：８３−５，２００２ Ｐｅｓｓｉ，Ｔ．，Ｙ．Ｓｕｔａｓら，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１０ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ａｔｏｐｉｃ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｏｒａｌ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＧＧ．Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ａｌｌｅｒｇｙ ３０（１２）：１８０４−８，２０００ Ｉｓｏｌａｕｒｉ，Ｅ．，Ｔ．Ａｒｖｏｌａら，Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｔｏｐｉｃ ｅｃｚｅｍａ．Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ａｌｌｅｒｇｙ ３０（１１）：１６０４−１０，２０００ Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄｔ，Ｖ．，Ｅ．Ｂｅｎｆｅｌｄｔら，Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｒａｉｎｓ ｉｎ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｗｉｔｈ ａｔｏｐｉｃ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ． Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ １１１（２）：３８９−９５，２００３

本発明は、新規有用微生物を提供することを課題とする。

本発明は、新規微生物株Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＧＭ−０９０を提供する。

別の局面において、本発明は、ＩＦＮ−γ分泌を刺激するための医薬の製造における、単離された微生物株Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＧＭ−０９０の使用を提供する。

なお別の局面において、本発明は、アレルギーを処置するための医薬の製造における、単離された微生物株Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＧＭ−０９０の使用を提供する。
項１． 単離された微生物株であって、受託番号ＣＣＴＣＣ Ｍ２０４０５５のもとで中國典型培養物保藏中心(Ｃｈｉｎａ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ)に寄託された、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＧＭ−０９０という、微生物株。
項２． 項１に記載の微生物株を含む、組成物。
項３． 上記微生物株は、生きているかまたは不活化されている、項２に記載の組成物。
項４． 上記微生物株は、不活化されている、項３に記載の組成物。
項５． 上記微生物株は、凍結乾燥されている、項２に記載の組成物。
項６． 薬学的組成物、食品補助品、健康食品、医療用食品またはそれらの成分の形態である、項２に記載の組成物。
項７． インターフェロン（ＩＦＮ）−γ分泌を刺激するための医薬の製造における、項１に記載の単離された微生物株の使用。
項８． 上記微生物株は生きているかまたは不活化されている、項７に記載の使用。
項９． 上記微生物株は、不活化されている、項８に記載の使用。
項１０． 上記微生物株は、凍結乾燥されている、項７に記載の使用。
項１１． アレルギーを処置するための医薬の製造における、項１に記載の単離された微生物株の使用。
項１２． 上記アレルギーは皮膚炎である、項１１に記載の使用。
項１３． 上記皮膚炎は、アトピー性皮膚炎である、項１２に記載の使用。
項１４． 上記微生物株は、生きているかまたは不活化されている、項１１に記載の使用。
項１５． 上記微生物株は、不活化されている、項１４に記載の使用。
項１６． 上記微生物株は、凍結乾燥されている、項１１に記載の使用。

新規微生物株Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＧＭ−０９０が提供された。

（発明の詳細な説明）
本発明は、新規な微生物株Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＧＭ−０９０を提供する。この微生物株は、ＩＦＮ−γ分泌を刺激可能であり、かつ／またはアレルギーを処置可能である。この株ＧＭ−０９０は、２００４年７月１９日に、受託番号ＣＣＴＣＣ Ｍ ２０４０５５のもとで、中國典型培養物保藏中心（ｔｈｅ Ｃｈｉｎａ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ （ＣＣＴＣＣ） ）に寄託された。

このＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＧＭ−０９０は、ヒトの胃腸管から単離された。

このＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＧＭ−０９０の微生物学的特徴が、下記に示される。

（ａ）形態学的特徴：
（１）細胞の形状および大きさ：杆菌であり、これは、ＭＲＳ培地中で３７℃にて一晩培養した後、細胞を顕微鏡観察した場合に、縁が丸い、杆状の形状を有する
（２）運動性：非運動性
（３）鞭毛：なし
（４）芽胞形成：芽胞形成なし
（５）グラム染色：陽性。

（ｂ）培養特徴：
（１）培地：ＭＲＳ培地（ＤＩＦＣＯ（登録商標）０８８１）（表１に示される）、最終ｐＨ ６．５±０．２

（２）培養条件：３７^ｏＣ嫌気性。

（ｃ）生理学的特徴：
（１）ＡＰＩ ５０ ＣＨＬ試験：ＡＰＩ ５０ ＣＨＬシステムを、乳酸菌の同定のために使用する。 一連の酵素の応答をアッセイすることによって、乳酸菌の特徴を確立する。ＧＭ−０９０株の同定を、ＡＰＩ ５０ ＣＨストリップおよびＡＰＩ ５０ ＣＨＬ培地（ＡＰＩ（登録商標）Ｓｙｓｔｅｍｓ ＳＡ，Ｍｏｎｔａｌｉｅｕ Ｖｅｒｃｉｅｕ，Ｆｒａｎｃｅ）を使用して、炭水化物醗酵試験によって行った。ＧＭ−０９０のＡＰＩ ５０ ＣＨＬ試験の結果を、表２に列挙する：

（ｄ）遺伝的特徴：
このＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ種特異的プライマーを使用して、Ｙｅｕｎｇら（Ｙｅｕｎｇ，Ｐ．Ｓ．Ｍ．，Ｓａｎｄｅｒｓ，Ｍ．Ｅ．，Ｋｉｔｔｓ，Ｃ．Ｌ．，Ｃａｎｏ，Ｒ．，Ｔｏｎｇ，Ｐ．Ｓ．，Ｓｐｅｃｉｅｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ Ｓｔｒａｉｎｓ． Ｊ．Ｄｉａｒｙ．Ｓｃｉ．８５：１０３９−１０５１，２００２）に従って、ＧＭ−０９０株の種を同定した。その１６ｓ ｒＤＮＡ配列を、配列番号１に示す。また、無作為増幅多型ＤＮＡ（ＲＡＰＤ分析）を行った。ＧＭ−０９０は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍに属するが、特異的ＲＡＰＤパターンを有することが示される。上記を考えると、ＧＭ−０９０は、新規なＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ株である。

（ｅ）ＧＭ−０９０株の細胞壁タンパク質：
ＧＭ−０９０株の細胞壁タンパク質は、他の従来のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ株と比較した場合、特異的パターンを示す。ＧＭ−０９０株の細胞壁タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥパターンは、図４に示される。

本発明は、ＩＦＮ−γ分泌を刺激し、そして／または被験体におけるアレルギーを処置するための方法を提供し、この方法は、上記被験体に、ＧＭ−０９０株を含む組成物を投与する工程を包含する。

Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍは、通常、モルトウィスキー醗酵の間に見出される（ｖａｎ Ｂｅｅｋ，Ｓ．およびＰｒｉｅｓ，Ｆ．Ｇ． Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ｄｕｒｉｎｇ ｍａｌｔ ｗｈｉｓｋｙ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ：ａ ｐｏｌｙｐｈａｓｉｃ ｓｔｕｄｙ． Ａｐｐｌ Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ６８（１）：２９７−３０５，２００２；ならびにＳｉｍｐｓｏｎ，Ｋ．Ｌ．ら，Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ ｆｒｏｍ Ｓｃｏｔｃｈ ｍａｌｔ ｗｈｉｓｋｙ ｄｉｓｔｉｌｌｅｒｉｅｓ ａｎｄ ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｉｎｔｏｓｈｅｎｓｉｓ ｓｐ． ｎｏｖ．，ａ ｎｅｗ ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｍａｌｔ ｗｈｉｓｋｙ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｓ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ １４７：１００７−１０１６，２００１）。生理食塩水で洗浄したＬ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍの静脈内注射は、ウサギにおいて過敏性反応を誘発することが示された（Ｊａｃｋｓｏｎ，Ｄ．Ｅ．，Ｃ．Ｒ．Ｈｏｗｌｅｔｔ，ら， Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ ｔｏ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ａｎｄ ｌｉｐｏｔｅｉｃｈｏｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｒａｂｂｉｔｓ．Ｐａｒｔ ＩＩ． Ｉｎｔ Ａｒｃｈ Ａｌｌｅｒｇｙ Ａｐｐｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ６５（３）：３０４−１２，１９８１；Ｊａｃｋｓｏｎ，Ｄ．Ｅ．，Ｇ．Ｄ．Ｊａｃｋｓｏｎ，ら，Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＩｇＭ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｍｅｍｏｒｙ ｔｏ ｌｉｐｏｔｅｉｃｈｏｉｃ ａｃｉｄｓ ｉｎ ｒａｂｂｉｔｓ． Ｐａｒｔ Ｉ． Ｉｎｔ Ａｒｃｈ Ａｌｌｅｒｇｙ Ａｐｐｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ６５（２）：１９８−２０２，１９８１；Ｊａｃｋｓｏｎ，Ｄ．Ｅ．，Ａ．Ｊ．Ｗｉｃｋｅｎ，ら，Ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ ｌｉｐｏｔｅｉｃｈｏｉｃ ａｃｉｄ：ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ ｒａｂｂｉｔｓ ａｎｄ ｍｉｃｅ． Ｐａｒｔ ＩＩ． Ｉｎｔ Ａｒｃｈ Ａｌｌｅｒｇｙ Ａｐｐｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ６５（２）：２０３−１１，１９８１）。対照的に、１つの株Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＣＰ３４は、コントロール群と比較して、血清抗原特異的ＩｇＥレベルを減少するという有意な効果を有することが分かった（Ｉｓｈｉｄａ，Ｙ．ら，Ｄｅｃｒｅａｓｅ ｉｎ ｏｖａｌｂｕｍｉｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＩｇＥ ｏｆ ｍｉｃｅ ｓｅｒｕｍ ａｆｔｅｒ ｏｒａｌ ｕｐｔａｋｅ ｏｆ ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａ． Ｂｉｏｓｃｉ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ ６７（５）：９５１−９５７，２００３）。

驚くべきことに、ＧＭ−０９０株がＩＦＮ−γ分泌を刺激する能力を有することが、本発明において見出される。本発明の動物モデルにおいて、ＧＭ−０９０株とともに培養した脾細胞を、ＩＦＮ−γ分泌を増大するために刺激した。ＩＦＮ−γ分泌の刺激におけるＧＭ−０９０の効果は、陽性コントロールであるＰＨＡよりさらに良い。

本発明に従って、Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍは、被験体におけるアレルギーを処置するためのものである。好ましくは、そのアレルギーは、皮膚炎である。より好ましくは、その皮膚炎は、アトピー性皮膚炎である。用語「アレルギー」とは、本明細書中で使用される場合、ＩＦＮ−γ媒介性アレルギーをいう。そのアレルギー性障害としては、鼻炎、静脈洞炎、喘息、過敏性肺炎、外因性アレルギー性肺胞炎、結膜炎、じんま疹、湿疹、皮膚炎、アナフィラキシー、血管性水腫、アレルギー性頭痛および片頭痛、ならびに特定の胃腸障害が挙げられる。

本発明の例に従って、皮膚炎の状態は、ＧＭ−０９０で処置することによって劇的に改善された。さらに、その症状は、ほぼ消散される。

本発明に従って、その乳酸菌株は、生きていても良いし不活化されていてもよい。例えば、生の細菌株は、加熱工程、または不活化株を得るために乳酸菌株を殺傷するために当該分野で通常使用される他の処理によって処理され得る。好ましくは、この乳酸菌は、凍結乾燥される。

別の局面において、本発明は、Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＧＭ−０９０株を含む組成物を提供する。

本発明に従って、その乳酸菌株は、薬学的組成物、栄養補助食品、食品、健康食品、医療用食品、またはそれらの成分中に含まれ得る。これらの乳酸菌株は、通常、人の手によって施される。本発明の好ましい実施形態において、この乳酸菌株は、食品形態において（例えば、乳汁中で乳酸菌の醗酵を介して調製された凝固乳製品において）送達され得る。そのように調製された食品製品は、乳児または小児に便利に投与され得る。

なお別の局面において、本発明は、ＩＦＮ−γ分泌を刺激するための医薬品の製造における、単離された微生物株Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＧＭ−０９０の使用を提供する。

なお別の局面において、本発明は、アレルギーを処置するための医薬品の製造における、単離された微生物株Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＧＭ−０９０の使用を提供する。

以下の実施例は、単に例示目的で提供されるのであって、本発明の範囲を限定するとは意図されない。

（実施例１：Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＧＭ−０９０の単離）
内視鏡によって採取した一片のヒト胃組織を、２ｍＬのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ＭＲＳブロス（ＤＩＦＣＯ（登録商標）０８８１）中で培養した。この組織を含む培地を、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ選択寒天上にプレートし、３７^ｏＣで１日インキュベートした。このプレート上で増殖している単一のコロニーを選択し、グラム染色に供した。次いで、グラム陽性細菌を、選択した。１つの株（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＧＭ−０９０とよばれる）を、クローニングした。

（実施例２：グラム染色）
グラム染色を、グラム染色用のグラム色素染色セット（ＭＥＲＣＫ（登録商標），Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）の説明書に従って行った。まず、細菌をクリスタルバイオレットで１分間染色し、次いで、ルゴール溶液で１分間処理した。サンプルを、蒸留水で注意深く約５秒間すすいだ。スライドガラスを、脱色溶液のための溶液３または４の中で約１０〜１５秒間、旋回した。色素がもはや放出されなくなり、スメアー（ｓｍｅａｒ）が青鼠色に見えたときに、旋回を停止した。サンプルを、再び蒸留水で約５秒間注意深くすすいだ。そのスライドガラスを、溶液５（サフラニン溶液）で約１分間完全に覆った。そのサンプルを、蒸留水で約５秒間注意深くすすいだ。サンプルを乾燥させた後、これを顕微鏡検査に供した。

顕微鏡検査の結果を、図１に示した。

（実施例３：１６ｓ ｒＤＮＡ配列決定）
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ種特異的プライマーを使用して、Ｙｅｕｎｇら（２００２）に従って、ＧＭ−０９０株の種を同定した。簡潔には、プライマーＰＡＦ（５’−ＡＧＡ ＧＴＴ ＴＧＡ ＴＣＣ ＴＧＧ ＣＴＣ ＡＧ−３’、配列番号２）および５３６Ｒ（５’−ＧＴＡ ＴＴＡ ＣＣＧ ＣＧＧ ＣＴＧ ＣＴＧ−３’、配列番号３）を使用して、その１６Ｓ ｒＤＮＡ遺伝子の５’領域を増幅した。ｉＣｙｃｌｅｒ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ（登録商標）Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．）においてＰＣＲを行った。増幅を以下のようにプログラムした：９４℃で２分間のプレインキュベーション、続いて、９４℃で４５秒間、５５℃で４５秒間、および７２℃で６０秒間を４０サイクル。これらのサイクルの後、７２℃で７分間反応を維持し、次いで、４℃に冷却した。そのＰＣＲ産物を、１．５％アガロースゲル上で分離し、溶出し、自動配列決定を行った。そのオリゴヌクレオチド配列を使用して、相同な配列について、ＧｅｎＢａｎｋ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）を検索した。

ＧＭ−０９０の１６ｓ ｒＤＮＡの配列は、Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＰＬ ９００６株の１６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子の配列と同一であった。

（実施例４：無作為増幅多型ＤＮＡ（ＲＡＰＤ分析））
無作為増幅多型ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析を使用して、Ａｎｇｅｌｉｓら（Ａｎｇｅｌｉｓ，Ｍ．Ｄ．，Ｃｏｒｓｅｔｔｉ，Ａ．，Ｔｏｓｔｉ，Ｎ．，Ｒｏｓｓｉ，Ｊ．，Ｃｏｒｂｏ，Ｍ．Ｒ．，およびＧｏｂｂｅｔｔｉ，Ｍ．，Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｎ−Ｓｔａｒｔｅｒ Ｌａｃｔｉｃ Ａｃｉｄ Ｂａｃｔｅｒｉａ ｆｒｏｍ Ｉｔａｌｉａｎ Ｅｗｅ Ｃｈｅｅｓｅｓ Ｂａｓｅｄ ｏｎ Ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ，Ｇｅｎｏｔｙｐｉｃ，ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｗａｌｌ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｎａｌｙｓｅｓ． Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６７：２０１１−２０２０，２００１）に従って、ＧＭ−０９０株と他のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ株とを区別した。２つのプライマー、Ｐ２（５’−ＡＴＧ ＴＡＡ ＣＧＣ Ｃ−３’、配列番号４）およびＰ３（５’−ＣＴＧ ＣＧＧ ＣＡＴ−３’、配列番号５）を使用した。ｉＣｙｃｌｅｒ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ（登録商標）Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．）においてＰＣＲを行った。そのＰＣＲプログラムは、９４℃での１分間の変性、３５℃で１分間のアニーリング、および７２℃で２分間の伸長を４５サイクルからなった；そのサイクルの前に、９４℃で約４分間の変性を行い、そのサイクルの後に、７２℃で５分間の伸長を行った。ＰＣＲ産物を１．５％（ｗｔ／ｖｏｌ）アガロースゲル上での電気泳動によって分離し、そのＤＮＡを、臭化エチジウム（０．５ｍｇ／ｍｌ）での染色の後、ＵＶ照射によって検出した。

プライマーＰ２によって得られたＲＡＰＤパターンの結果を図２に示し、プライマーＰ３によって得られたＲＡＰＤパターンの結果を図３に示した。ＧＭ−０９０のＲＡＰＤパターンは、従来のＬ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ株のＲＡＰＤパターンとは異なっていることが明らかになった。上記を考えると、ＧＭ−０９０は、新規なＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ株であった。

（実施例５：ＧＭ−０９０の細胞壁タンパク質抽出および分析）
細胞壁タンパク質を、Ａｎｇｅｌｉｓら（２００１）に従って抽出した。簡潔には、ＭＲＳ培地中で培養された中温性乳酸桿菌の２４時間齢細胞を回収し、０．１Ｍ ＣａＣｌ_２を含む０．０５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）中で２回洗浄し、１０．０のＡ_６００において１ｍｌの同じ緩衝液中で再懸濁した。８，０００×ｇで５分間遠心分離した後、細胞壁タンパク質を、０．０１Ｍ ＥＤＴＡ、０．０１Ｍ ＮａＣｌ、および２％（ｗｔ／ｖｏｌ）ＳＤＳを含む抽出緩衝液（ｐＨ ８．０）１ｍｌで、ペレットから抽出した。懸濁液を室温にて６０分間保存し、１００℃で５分間加熱し、１１，６００×ｇで１０分間、４℃で遠心分離した。その上清を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析し、クーマシーブルーで染色した。

結果を図４に示した。ＧＭ−０９０は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍの１つの株であることが証明された。

（実施例６：ＩＦＮ−γを刺激するためのＧＭ−０９０）
マウス脾細胞によるサイトカイン生成を測定するために、そのマウス脾細胞を、ＢＡＬＢ／ｃマウスから採取し、１０％ウシ胎仔血清を補充したＲＰＭＩ １６４０培地（ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬ（登録商標），Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ，ＵＳＡ）中で培養した。１００μｌの細胞懸濁液（４×１０^５細胞／ｍｌ）を、９６ウェルプレートに添加し、乳酸桿菌なし（未処理）または種々の乳酸桿菌ありでインキュベートした。１０μｇ／ｍｌ ＰＨＡ（Ｓｉｇｍａ（登録商標），Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）をポジティブコントロールとして使用した。マイクロプレートを、５％ ＣＯ_２の加湿雰囲気中で３７℃で４８時間インキュベートした。脾細胞培養懸濁液中のＩＦＮ−γのレベルを、市販のキット（ＯｐｔＥＩＡ Ｍｏｕｓｅ ＩＦＮ−γ Ｓｅｔ，ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ（登録商標），Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ．，ＵＳＡ）を用いるＥＬＩＳＡによって決定した。

結果を図５に示した。ＧＭ−０９０は、ＩＦＮ−γ分泌を、ポジティブコントロールのＰＨＡより強く刺激することが実証された。

（実施例７：アレルギーを処置するためのＧＭ−０９０（１））
６歳の少女は、彼女が３ヶ月齢のときにアトピー性皮膚炎であると最初に診断された。その当時、湿疹が顔面全体に現れていた。その症状は、二次感染によりその後悪化した。最初の培養物として、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓを与えた。７日間の抗生物質治療の後、彼女に、加水分解した幼児処方の食事を与えた。しかし、いくつかの感染攻撃はなお、この５年間起こった。さらに、苔癬化および湿疹様の変化は、顔面全体および四肢の湾曲領域の両方で認められた。彼女は、医療施設の著明な皮膚科医を何度か訪問したが、症状は続き、頻繁に再発した。局所的ステロイド治療は、この症例において有効であった。しかし、一旦彼女が、ステロイド治療を中止すると、症状は再発した。その臨床医は、彼女のＩｇＥレベル（免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｅ：総ＩｇＥ １１２０ＩＵ／ｍｌ、ダニ特異的ＩｇＥ＞１００ＫＵ／ｍｌ）を測定した。

凍結乾燥したＧＭ−０９０を、２×１０^９ＣＦＵ／日で投与した。

三週間後、その症状は、既に消散していた。その患者の写真を、図６および７に示した。

（実施例８：アレルギーを処置するためのＧＭ−０９０（２））
その患者が、小学校にいるときに、彼女は、頻繁に、鼻づまりを、そして起床時には常に、目のかゆみの症状を経験した。おそらく、これは５歳時で始まり、いくらかのエリテマトーデス性発疹（ｅｒｙｔｈｍａｔｏｕｓ ｒａｓｈ）が、顔面、頸部、四肢に認められた。いくらかの皮膚は、苔癬化をなお示す。彼女は、あらゆる皮膚科医を訪れ、ステロイドで治療したものの、状態は、ほんのわずかに改善されただけであり、医薬品（ステロイド）の服用を中止して直後に、悪化した。彼女に、過去一年間、ｐｒｏｔｏｐｉｃ治療を行った。症状は、この治療によって制御され得るが、彼女は、代わりの治療を求めた。彼女の両親は、ともに、家族歴で、過敏性鼻炎（ａｎａｐｈｙｌａｘｉｓ ｒｈｉｎｉｔｉｓ）の病歴を持っていた。

凍結乾燥したＧＭ−０９０を、朝晩食事前に服用させた。

１４日間の治療後、状態は、非常に改善され、その症状は、ほぼ消散した。（免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｅを臨床データとして測定する：総ＩｇＥ ５８０ＩＵ／ｍｌ、ダニ特異的ＩｇＥ＞５０ＫＵ／ｍｌ）。写真を、図８に示した。

本発明の実施形態が例示され、記載されてきたが、種々の改変および改善が当業者によって行われ得る。本発明は、示されるような特定の形態に限定されず、全ての改変は、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、添付の特許請求の範囲に規定される範囲内であることが意図される。

（摘要）
本発明は、単離された微生物株Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＧＭ−０９０を提供し、この微生物株は、ＩＦＮ−γ分泌を刺激し、そして／またはアレルギーを処置するにおいて有効であることが見出されている。ＩＦＮ−γ分泌の刺激、および／またはアレルギーの処置におけるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＧＭ−０９０の使用もまた、提供される。

図１は、ＧＭ−０９０の１０００倍の顕微鏡写真を示す。 図２は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ．Ｍの種々の株のプライマーＰ２と１００ｂｐｓ ＤＮＡマーカーとを用いて得られたＲＡＰＤパターンを示す（レーン１，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＧＭ−０９０；レーン２，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＡＴＣＣ ９３３８；レーン３，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＡＴＣＣ １１７３９ およびレーン４，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＡＴＣＣ １４９３１）。 図３は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ．Ｍの種々の株のプライマーＰ３と１００ｂｐｓ ＤＮＡマーカーとを用いて得られたＲＡＰＤパターンを示す（レーン１，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＧＭ−０９０；レーン２，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＡＴＣＣ ９３３８；レーン３，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＡＴＣＣ １１７３９ およびレーン４，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＡＴＣＣ １４９３１）。 図４は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ．Ｍの種々の株から得られた細胞壁タンパク質とタンパク質マーカーとのＳＤＳ−ＰＡＧＥパターンを示す（レーン１，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＧＭ−０９０；レーン２，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＡＴＣＣ ９３３８；レーン３，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＡＴＣＣ １１７３９ およびレーン４，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＡＴＣＣ １４９３１）。 図５は、マウス脾臓細胞によるＩＦＮ−γ産生の刺激に対するＰＨＡ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉおよびＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍの効果を示す（レーン１：ナイーブ；レーン２、ＰＨＡ；レーン３、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ；レーン４、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＧＭ−０９０）。 図６は、実施例７に記載される患者の写真を示す（ａ：処置前；ｂ：処置後）。 図７は、実施例７に記載される患者の写真を示す（ａ：処置前；ｂ：処置後）。 図８は、実施例８に記載される患者の写真を示す（ａ：処置前；ｂ：処置後）。

配列番号１は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＧＭ−０９０株の１６ｓ ｒＤＮＡ配列である。

配列番号２は、プライマーＰＡＦの配列である。

配列番号３は、プライマー５３６Ｒの配列である。

配列番号４は、プライマーＰ２の配列である。

配列番号５は、プライマーＰ３の配列である。

Claims (16)

1. 単離された微生物株であって、受託番号ＣＣＴＣＣ Ｍ２０４０５５のもとで中國典型培養物保藏中心(Ｃｈｉｎａ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ)に寄託された、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＧＭ−０９０という、微生物株。
2. 請求項１に記載の微生物株を含む、組成物。
3. 前記微生物株は、生きているかまたは不活化されている、請求項２に記載の組成物。
4. 前記微生物株は、不活化されている、請求項３に記載の組成物。
5. 前記微生物株は、凍結乾燥されている、請求項２に記載の組成物。
6. 薬学的組成物、食品補助品、健康食品、医療用食品またはそれらの成分の形態である、請求項２に記載の組成物。
7. インターフェロン（ＩＦＮ）−γ分泌を刺激するための医薬の製造における、請求項１に記載の単離された微生物株の使用。
8. 前記微生物株は生きているかまたは不活化されている、請求項７に記載の使用。
9. 前記微生物株は、不活化されている、請求項８に記載の使用。
10. 前記微生物株は、凍結乾燥されている、請求項７に記載の使用。
11. アレルギーを処置するための医薬の製造における、請求項１に記載の単離された微生物株の使用。
12. 前記アレルギーは皮膚炎である、請求項１１に記載の使用。
13. 前記皮膚炎は、アトピー性皮膚炎である、請求項１２に記載の使用。
14. 前記微生物株は、生きているかまたは不活化されている、請求項１１に記載の使用。
15. 前記微生物株は、不活化されている、請求項１４に記載の使用。
16. 前記微生物株は、凍結乾燥されている、請求項１１に記載の使用。