JP2004083433A

JP2004083433A - エラスターゼ阻害剤

Info

Publication number: JP2004083433A
Application number: JP2002243647A
Authority: JP
Inventors: Tatsuya Ichitsubo; 市坪　達也; Akiko Takashima; 高島　明子
Original assignee: Rohto Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Rohto Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2002-08-23
Filing date: 2002-08-23
Publication date: 2004-03-18

Abstract

【課題】新規なエラスターゼ阻害剤を提供する。
【解決手段】アロエ抽出物に、エラスターゼ阻害作用を見出し、新規なエラスターゼ阻害剤として提供できる。本発明のエラスターゼ阻害剤は、皮膚の弾力性や柔軟性の低下を防ぎ、肌のハリを回復又は維持することができ若々しい肌を保つ効果を有する。
【選択図】　　なし

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、アロエ抽出物を含有するエラスターゼ阻害剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
エラスチンは、皮膚、血管壁、腱、軟骨などの伸展性に富む結合組織内に存在する弾性繊維状構造蛋白質であり、ペプチド鎖間に独特の架橋構造をもち皮膚に弾力性と柔軟性を与えている。エラスチンは、エラスターゼにより分解される。エラスターゼは、エラスチンを特異的な基質とするプロテアーゼの一種で、エラスチンの新陳代謝に重要な役割を果たす。通常の生体内ではエラスターゼとエラスターゼ活性調節因子とが協同しあうことによって、エラスターゼ活性が恒常的に保持されている。しかし、エラスターゼ活性が亢進するとエラスチンを過剰に分解してしまうため、組織老化、更には疾患を悪化させる原因となる。
【０００３】
これまでの研究により、ある種の疾患においてエラスターゼ活性の亢進が密接に関与していることがわかっている。そこで、亢進したエラスターゼ活性を抑制するエラスターゼ阻害剤の疾患治療剤としての有用性が、慢性関節リュウマチ、変形性関節症などの関節系疾患（日本薬理学会誌、９９、９３−１０７、１９９２）、全身性炎症反応症候群（医学のあゆみ４月別冊、１０４−１０７、１９９８）、動脈硬化等で報告されている。
【０００４】
皮膚の自然老化や光老化の機序にもエラスターゼ関与している。紫外線曝露された皮膚では多形核白血球を含む炎症性細胞の湿潤、エラスチン繊維の部分的凝集、過剰に亢進されたエラスターゼによりエラスチン繊維の凝集が生じる（Ｊ．　Ｓｏｃ．　Ｃｏｓｍｅｔ．Ｃｈｅｍ．Ｊａｐａｎ、３１（２）、ｐ１９０−２００、１９９７）等、老化とエラスターゼの関連が解明されつつある。そして、エラスターゼ阻害剤を用いた皮膚外用剤に、皮膚の弾力性や柔軟性を取り戻し、ハリを回復及び／又は維持し若々しい肌を保つ抗老化効果、抗シワ効果があることが報告されている。
【０００５】
植物由来のエラスターゼ阻害作用を有する物質に関する研究としては、ワレモコウ、イタドリ、ハチジョウイタドリ、オオイタドリ、メリッサ、マンネンロウ、ベニバナ、ショウガの各植物抽出物（特開２０００−３１９１８９号公報）、セージやクワ属植物（特開平１１−１４７８３４号公報）、セイヨウニワトコ（特開平１１−１４７８３２号公報）、褐藻類のヒバマタ属、アスコフィラム属、レッソニア属またはダービリア属に属する海藻からの抽出物（特開２０００−５３５７８号公報）、アセンヤクの溶媒抽出物（特開平１０−１８２４１４号公報）、ユキノシタの溶媒抽出物（特開平１１−２４６３８６号公報）などが知られている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、安全性が高い新規なエラスターゼ阻害剤を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、前記課題を解決するために鋭意検討の結果、アロエ抽出物にエラスターゼ阻害作用があることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、アロエ抽出物を含有するエラスターゼ阻害剤に関する。また、本発明は、アロエ抽出物を有効成分として含有してなるエラスターゼ阻害剤に関する。
【０００８】
【発明の実施の形態】
本発明において用いられるアロエ抽出物は、ユリ科アロエ族に属する植物（Ａｌｏｅ　ｆｅｒｏｘ、Ａｌｏｅ　ｓｐｉｃａｔａ、Ａｌｏｅ　ｂａｒｂａｄｅｎｓｉｓ、Ａｌｏｅ　ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ、Ａｌｏｅ　ａｆｒｉｃａｎａ等）の抽出物であり、古くから医薬品や化粧料に用いられている安全性の高い抽出物である。アロエはその種類や産地により含有する成分が異なるが、本発明に用いる抽出物においては、特に限定することなく用いることができる。
【０００９】
アロエ抽出物の抽出方法は、特に限定されるものではないが、主として葉を原料とし、葉を乾燥、細切、圧搾等、適宜処理を施すか、または葉そのままに対して、低温もしくは加温下で溶媒により抽出する方法が例示できる。得られた抽出液は濾過またはイオン交換樹脂精製、吸着等を用いて精製し、ペースト状、ゲル状、粉末状、液状として利用することもできる。また、市販のアロエエキス等のアロエ抽出物を利用することもできる。
【００１０】
アロエの抽出に用いることのできる抽出溶媒としては、例えば水、低級アルコール（メチルアルコール、エチルアルコール、プロパノール、ブタノール、ブタノール等）、多価アルコール（グリセリン、１，３−ブチレングリコール等）等が挙げられる。
【００１１】
本発明のエラスターゼ阻害剤において、アロエ抽出物の含有量は、アロエ抽出物の乾燥固形分として、好ましくは０．００００１〜１０質量％（以下単に「％」で示す）であり、より好ましくは０．０００１〜５％、特に好ましくは０．０００１〜１％である。また、アロエエキスなどの抽出物を使用する場合は、アロエエキス等の抽出物として、好ましくは、０．００１〜２０質量％であり、より好ましくは０．００１〜１０重量％、特に好ましくは０．０１〜１０重量％である。
【００１２】
本発明のエラスターゼ阻害剤は、本発明の効果を損なわない量的及び質的範囲内で、アロエ抽出物の他に通常使用される溶媒や基剤、各種添加剤（例えば界面活性剤、乳化剤、油分、安定化剤、増粘剤、防腐剤、結合剤、滑沢剤、着色剤、分散剤、ｐＨ調整剤、保湿剤、紫外線吸収剤、ビタミン類、キレート剤、アミノ酸類、香料等）などを配合することによって、錠剤、顆粒剤、散剤、細粒剤、硬カプセル剤等の固形製剤の他、シロップ剤、軟カプセル剤等の液剤、軟膏剤、乳剤等の半固形剤などの製剤形態、化粧料であれば、例えばファンデーション、口紅、化粧水、美容液、乳液、クリーム、ローション、オイル、ジェル、パックなどの各種所望の形態に調製することができる。これらは通常用いられる添加物や溶媒等を用いて常法によって製造可能である。
【００１３】
本発明のエラスターゼ阻害剤は、医薬品、医薬部外品、食品、化粧品等の各種分野において利用することができる。具体的には、ヒトをはじめとする哺乳動物においてエラスターゼ亢進に起因する疾患の治療剤、予防剤、またはエラスターゼ亢進に起因する生理状態のための研究試薬等として有用である。具体的には、慢性関節リュウマチ・変形性関節症などの関節疾患治療及び／又は予防剤、紫外線曝露や加齢によるシワやタルミの改善及び／又は予防のための抗老化又は抗シワ用皮膚外用剤、皮膚の弾力性や柔軟性を向上しハリを回復し維持する美肌用化粧料等が挙げられる。
【００１４】
【発明の効果】
アロエ抽出物は、エラスターゼ活性の阻害作用を有する。そのため、皮膚老化現象である弾力性や柔軟性の低下を防止し、皮膚のハリを回復又は維持することができ肌の状態を若々しく保つことができる。また、シワやタルミの予防又は改善にも有用である。さらに、関節疾患等の各種疾患の治療などにも効果がある。
【００１５】
【実施例】
以下に本発明を実施例及び試験例に基づいてさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例等に限定されるものではない。なお、下記の各処方において％とは、特に言及しない限り、重量（Ｗ／Ｗ）％を意味するものとする。
【００１６】
実施例１〜４　アロエ抽出物（１，３−ブチレングリコールで抽出した抽出物、一丸ファルコス株式会社製　商品名「アロエベラリキッドＢＧ」）を滅菌精製水に濃度０．０８、０．２４、０．８および２．４（ｗ／ｖ）％となるように溶解し、得られた水溶液をそれぞれ実施例１〜４とした。
【００１７】
試験例１　ヒト白血球由来エラスターゼ活性阻害試験
実施例１〜４を用いて、ヒト白血球由来エラスターゼ活性阻害率を試験した。反応用緩衝液は、０．２Ｍ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ＝８．０）を用いた。エラスターゼ基質溶液は、合成基質であるＮ−サクシニル−アラニル−アラニル−アラニル−ｐ−ニトロアニリド（ＢＡＣＨＥＭ　ＡＧ社製）をＤＭＳＯで５０ｍＭとなるように調製し、使用時に反応緩衝液で５ｍＭに希釈して調製した。エラスターゼ酵素液は、ヒト白血球由来エラスターゼ（Ｅｌａｓｔｉｎ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　Ｃｏ．，Ｉｎｃ．）をリン酸緩衝液で１０．０μｇ／ｍｌとなるように調製した。
９６ウエルマイクロプレートの１ウエルに対して、エラスターゼ基質溶液５０μｌ（反応溶液中での最終濃度１．２５ｍＭ）、エラスターゼ酵素液１００μｌ（反応溶液中での最終濃度５．０μｇ／ｍｌ）及び実施例１〜４を５０μｌを添加して３７℃で１時間反応させた。対照としては、エラスターゼ基質溶液５０μｌ（反応溶液中での最終濃度１．２５ｍＭ）、エラスターゼ酵素液１００μｌ（反応溶液中での最終濃度５．０μｇ／ｍｌ）及び精製水１００μｌ（比較例１）を添加したものも、同様に３７℃で１時間反応させた。その後、実施例１〜４及び比較例１を添加した反応溶液の吸光度４０５ｎｍを測定した。
エラスターゼ阻害率は、分解生成物であるｐ−ニトロアニリドの吸光度４０５ｎｍをもちいて、以下のように求めた。即ち、実施例１〜４添加反応溶液の１時間後吸光度と比較例１添加反応溶液の１時間後吸光度の差を、比較例１添加反応溶液の１時間経過後吸光度で除してエラスターゼ阻害率（％）とした。結果は表１に示す。
【００１８】
【表１】

【００１９】
表１に示す結果より、アロエ抽出液を含有する実施例１〜４は、濃度依存的にエラスターゼ活性を阻害することが確認された。
【００２０】
試験例２　ヒト線維芽細胞由来エラスターゼ活性阻害試験
実施例１〜４を用いて、ヒト線維芽細胞由来のエラスターゼ活性阻害率を試験した。ヒト線維芽細胞（クラボウ）を牛胎児血清を１０％含有するダルベッコ最小培地（ＤＭＥＭ）中に播種して、３７℃・５％ＣＯ_２インキュベーター内で培養した。培養用シャーレ（１００ｍｍディッシュ、コーニング）で培養後コンフルエントになった細胞を集め、緩衝液リン酸バッファー６ｍｌに再懸濁し、超音波で破砕して粗酵素液を調製した。こうして得た粗酵素液１００μｌに、ＤＭＳＯで５０ｍＭとなるように調製し、使用時に反応緩衝液（０．２Ｍ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ＝８．０））で５ｍＭに希釈して調製したエラスターゼ合成基質Ｎ−サクシニル−アラニル−アラニル−アラニル−ｐ−ニトロアニリド（ＢＡＣＨＥＭ　ＡＧ社製）を５０μｌ添加し、さらに実施例３又は４を５０μｌ添加して、３７℃で１時間反応させた。対照として、粗酵素液１００μｌに、ＤＭＳＯで５０ｍＭとなるように調製し、使用時に反応緩衝液（０．２Ｍ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ＝８．０））で５ｍＭに希釈して調製したエラスターゼ合成基質Ｎ−サクシニル−アラニル−アラニル−アラニル−ｐ−ニトロアニリド（ＢＡＣＨＥＭ　ＡＧ社製）を５０μｌ及び精製水５０μｌ（比較例１）を添加したものも、同様に３７℃で１時間反応させた。その後、実施例３又は４及び比較例１を添加した反応溶液の吸光度４０５ｎｍを測定した。エラスターゼ阻害率は、分解生成物であるｐ−ニトロアニリドの吸光度４０５ｎｍをもちいて、以下のように求めた。即ち、実施例３又は４添加反応溶液の１時間後吸光度と比較例１添加反応溶液の１時間後吸光度の差を、比較例１添加反応溶液の１時間経過後吸光度で除してエラスターゼ阻害率（％）とした。結果は表２に示す。
【００２１】
【表２】

【００２２】
表２に示す結果より、アロエ抽出物を含有するエラスターゼ阻害剤は、濃度依存的に繊維芽細胞由来のエラスターゼ活性を阻害することが確認された。皮膚の繊維芽細胞由来エラスターゼの阻害活性を有することから、皮膚の老化現象の予防又は改善に有用であることが示唆される。
【００２３】
実施例１　美容用組成物
下記の成分を混合し、打錠して錠剤（１錠５００ｍｇ）を得た。

【００２４】

【００２５】

Claims

アロエ抽出物を含有するエラスターゼ阻害剤。