JP2004043330A - 新規ピリジン誘導体およびその用途 - Google Patents
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Abstract
【課題】虚血性疾患、免疫疾患、アルツハイマー病、骨粗鬆症、脳虚血疾患、白内障、緑内障、網膜（脈絡膜）疾患、光凝固による眼球後眼部合併症（例えば黄斑部浮腫、網膜剥離など）などの予防または治療薬として、あるいは血管新生などの抑制または治療薬として有用なカルパイン阻害活性を有し、かつ、高い水溶性を有する化合物を提供することである。
【解決手段】下記一般式
【化１】
［式中、Ｒ１はピリジル基を、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ低級アルキル基を、ｎは０、１または２を示す。］で表される化合物またはその塩、および当該化合物を含有するカルパイン阻害剤。
【選択図】なし
【解決手段】下記一般式
【化１】
［式中、Ｒ１はピリジル基を、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ低級アルキル基を、ｎは０、１または２を示す。］で表される化合物またはその塩、および当該化合物を含有するカルパイン阻害剤。
【選択図】なし
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明はカルパイン阻害活性を有する新規ピリジン誘導体に関する。また、本発明は新規ピリジン誘導体を含有する医薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】
カルパインは生体内に広く分布する細胞質内のタンパク分解酵素の一つであり、カルシウムイオンで活性化される。現在では、このカルパインの異常な活性化が脳卒中、クモ膜下出血、アルツハイマー病、虚血性疾患、筋ジストロフィー、白内障、血小板凝集、関節炎などの種々の疾患に関与していることが明らかとなっている［Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｉｅｎｃｅｓ，１５巻，４１２頁（１９９４年）］。一方、カルパイン阻害剤は水晶体培養による実験的白内障モデルにおいて、水晶体の透明維持に効果があり［Ｃｕｒｒ． Ｅｙｅ Ｒｅｓ．，１０巻，６５７−６６６頁（１９９４年）］、白内障治療剤（ＷＯ９３／２３０３２）などとして有用であることがわかってきている。これまで報告されているカルパイン阻害剤としては、ペプチドハロメタン誘導体（特公平６−２９２２９）、ペプチドジアゾメタン誘導体［Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，２５３巻，７５１−７５８頁（１９８８年）、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３５巻，２１６−２２０頁（１９９２年）］、ペプチジルアルデヒド誘導体（特開平１０−１４７５６４など）などが挙げられるが、これらの阻害剤は、未だ実用化されていないのが現状である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
カルパイン阻害活性を有し、かつ、高い水溶性を有する化合物を提供することである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記の課題を解決すべく鋭意研究した結果、高い水溶性を有し、かつ、強いカルパイン阻害活性を有するピリジン誘導体を創製し、さらに研究を進め本発明を完成した。
【０００５】
すなわち、本発明は、
（１）下記一般式（Ｉ）
【化２】
［式中、Ｒ１はピリジル基を、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ低級アルキル基を、ｎは０、１または２を示す。］で表される化合物またはその塩、
（２）上記（１）記載の化合物またはその医薬上許容される塩を含有する医薬、
（３）カルパイン阻害剤である上記（２）記載の医薬、および
（４）カルパインが関与する疾患の予防または治療剤である上記（２）記載の医薬に関する。
【０００６】
上記一般式（Ｉ）中、Ｒ１で表されるピリジル基としては、２−ピリジル、３−ピリジルおよび４−ピリジルのいずれでもよい。Ｒ２およびＲ３で表される低級アルキル基としては、炭素数１〜６の直鎖状または分枝状アルキル基が好ましく、具体的にはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、１−メチルブチル、２−メチルブチル、１，２−ジメチルプロピル、ヘキシル、１−メチルペンチル、２−メチルペンチル、３−メチルペンチル、４−メチルペンチル、１，１−ジメチルブチル、１，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、２，３−ジメチルブチル、３，３−ジメチルブチル、１−エチルブチル、２−エチルブチル、１−エチル−２−メチルプロピル、１，１，２−トリメチルプロピルが挙げられる。とりわけ好ましくは炭素数３〜４の直鎖状または分枝状アルキル基である。Ｒ２で表される低級アルキル基としてはイソプロピルが、Ｒ３で表される低級アルキル基としてはイソブチルが特に好ましい。ｎは０、１または２の整数である。
【０００７】
さらに、本発明は、本発明化合物（Ｉ）およびその塩、また本発明化合物（Ｉ）およびその塩の各種の溶媒和や結晶多形の物質ならびにプロドラッグをも包含する。本発明における式（Ｉ）で表される化合物の塩としては生理学的に許容される塩が好ましく、例えば無機酸との塩、有機酸との塩または酸性アミノ酸との塩などが挙げられる。無機酸との塩の好適な例としては、例えば塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸などとの塩が挙げられる。有機酸との塩の好適な例としては、例えばギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フマール酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などとの塩が挙げられる。酸性アミノ酸との塩の好適な例としては、例えばアスパラギン酸、グルタミン酸などとの塩が挙げられる。
【０００８】
本発明の化合物は、例えば下記反応式
【化３】
［式中、各記号は前記と同意義であり、Ａはアミノ基の保護基を示す。］により製造することができる。
【０００９】
アミノ基がＡで表される保護基で保護されたα−アミノ酸のＮ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル（ＩＩ）［以下、化合物（ＩＩ）と記載することもある。］と一般式（ＩＩＩ）で表されるアミノアルコール［以下、化合物（ＩＩＩ）と記載することもある。］を反応させることにより、一般式（ＩＶ）で表される化合物［以下、化合物（ＩＶ）と記載することもある。］を得ることができる。Ａで表される保護基としてはベンジルオキシカルボニル基（以下、Ｚ基と記載することもある。）、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基（以下、Ｂｏｃ基と記載することもある。）などの通常ペプチド合成の分野で用いられるものを適宜使用できる。この反応は、化合物（ＩＩ）を通常使用される有機溶媒に溶解し、約１〜約５モル当量の化合物（ＩＩＩ）を加え、攪拌することにより行うことができる。通常使用される有機溶媒としては、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、メタノール、エタノール、ベンゼン、トルエン、酢酸エチルなどのような反応に悪影響をおよぼさない慣用の溶媒またはそれらの混合溶媒が挙げらるが、好ましくは酢酸エチルである。反応温度は、副反応が起こらない範囲であれば、特に限定されず、反応は通常、冷却下、室温または加温下で行われるが、好ましくは室温である。
【００１０】
次に、化合物（ＩＶ）を酸化反応に付することにより、一般式（Ｖ）で表される化合物［以下、化合物（Ｖ）と記載することもある。］を得ることができる。該酸化方法としては、例えばクロム酸酸化に分類される二クロム酸ピリジニウム（ＰＤＣ）酸化、クロロクロム酸ピリジニウム（ＰＣＣ）酸化、ジョーンズ（Ｊｏｎｅｓ）酸化、コリンズ（Ｃｏｌｌｉｎｓ）酸化、またはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）酸化に分類されるスワン（Ｓｗｅｒｎ）酸化、ＤＭＳＯ−三酸化硫黄ピリジン錯体による酸化、ＤＭＳＯ−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）による酸化、ＤＭＳＯ−塩化オキサリルによる酸化、または次亜ハロゲン酸による酸化、Ｎ−ハロゲノカルボン酸アミドによる酸化など、自体公知の方法を使用することができるが、とりわけＤＭＳＯ−三酸化硫黄ピリジン錯体による酸化が好ましい。ＤＭＳＯ−三酸化硫黄ピリジン錯体を用いて酸化する反応は、化合物（ＩＶ）をジメチルスルホキシドまたはジメチルスルホキシドと通常使用される有機溶媒（例えばテトラヒドロフラン、ジクロロメタン、酢酸エチルなど）の混合溶媒に溶解し、適当な塩基（例えばジイソプロピルエチルアミンやトリエチルアミンなど）の存在下、三酸化硫黄ピリジン錯体を加えることで行うことができる。反応温度は特に限定されないが、通常冷却下、室温または加温下であり、好ましくは氷冷下から室温の範囲である。
【００１１】
次に、化合物（Ｖ）のアルデヒドをエチレングリコールで環状アセタールを形成して保護する［一般式（ＶＩ）で表される化合物、以下、化合物（ＶＩ）と記載することもある。］。この反応は、化合物（Ｖ）を通常使用される有機溶媒に溶解し、エチレングリコールを加え、ピリジニウムｐ−トルエンスルホナートの存在下で攪拌して行うことができる。通常使用される有機溶媒としては、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、メタノール、エタノール、ベンゼン、トルエン、酢酸エチルなどのような反応に悪影響をおよぼさない慣用の溶媒またはそれらの混合溶媒が挙げらるが、好ましくはトルエンである。エチレングリコールの使用量は化合物（Ｖ）に対して約１〜約２０倍当量で、好ましくは約３〜約６倍当量である。ピリジニウムｐ−トルエンスルホナートの代わりに通常酸触媒として用いられるｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、酢酸、ギ酸などの有機酸や塩酸、臭化水素酸、硫酸などの無機酸を用いても同様の反応を行うことができる。反応温度は約２０〜約２００℃であるが、好ましくは約５０〜約１５０℃である。また、エチレングリコールの代わりにエタノールを用いて同様の反応を行い、ジエチルアセタールを形成することにより化合物（Ｖ）のアルデヒドを保護することもできる。
【００１２】
次に化合物（ＶＩ）の保護基であるＡを、アミノ保護基の脱離反応に用いられる慣用的方法から適宜選択して脱離することにより、一般式（ＶＩＩ）で表される化合物［以下、化合物（ＶＩＩ）と記載することもある。］を得ることができる。例えばＡがＺ基の場合は、化合物（ＶＩ）を通常使用される溶媒（例えばメタノール、エタノール、テトラヒドロフラン、酢酸などのような反応に悪影響をおよぼさない慣用の溶媒またはそれらの混合溶媒）に溶解し、慣用の金属触媒（例えばパラジウム炭素、ラネーニッケルなど）の存在下で接触還元によりＡを脱離することができる。水素圧は約１〜約５０気圧であるが、好ましくは約１〜約５気圧である。反応温度は、好ましくない副反応が起こらない範囲であれば特に限定されず、通常冷却下、室温または加温下で行われる。ＡがＢｏｃ基の場合は、化合物（ＶＩ）を通常使用される有機溶媒（例えばテトラヒドロフラン、ジクロロメタン、酢酸エチルなどのような反応に悪影響をおよぼさない慣用の溶媒またはそれらの混合溶媒）に溶解し、酸の存在下、攪拌することによりＡを脱離することができる。酸としては塩酸、トリフルオロ酢酸、ｐ−トルエンスルホン酸などが挙げられる。また、市販されている塩酸の酢酸エチル溶液もしくはジオキサン溶液などを用いて脱離することもできる。反応温度は特に限定されないが、通常冷却下、室温または加温下であり、好ましくは氷冷下から室温の範囲である。
【００１３】
次に、化合物（ＶＩＩ）と一般式（ＶＩＩＩ）で表される化合物［以下、化合物（ＶＩＩＩ）と記載することもある。］またはその塩あるいはそれらの反応性誘導体のアミド化反応を行うことにより、一般式（ＩＸ）で表される化合物［以下、化合物（ＩＸ）と記載することもある。］を得ることができる。このアミド化反応は脱水縮合剤を用いるような通常のペプチド合成の方法などによって行われる。化合物（ＶＩＩＩ）の好適な反応性誘導体としては、酸ハロゲン化物（例えば酸塩化物など）、酸無水物（例えばジアルキルリン酸、フェニルリン酸、ジフェニルリン酸、ジベンジルリン酸、ハロゲン化リン酸などの置換されたリン酸：ジアルキル亜リン酸：亜硫酸：チオ硫酸：硫酸：例えばメタンスルホン酸などのスルホン酸：例えば酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸、ピバリン酸、ペンタン酸、イソペンタン酸、トリクロロ酢酸などの脂肪族カルボン酸：例えば安息香酸などの芳香族カルボン酸のような酸との混合酸無水物；対称酸無水物など）、活性化アミド（例えばイミダゾール、４−置換イミダゾール、ジメチルピラゾール、トリアゾール、テトラゾールとの活性化アミドなど）、活性化エステル（例えばＮ，Ｎ−ジメチルヒドロキシルアミン、１−ヒドロキシ−２−（１Ｈ）−ピリドン、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールなどのＮ−ヒドロキシ化合物とのエステルなど）などが挙げられるが、好ましくは１−ヒドロキシベンゾトリアゾールとのエステル体または酸塩化物である。脱水縮合剤としては、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩またはジシクロヘキシルカルボジイミドなどが好適に使用される。反応に使用される有機溶媒としてはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、メタノール、エタノール、ベンゼン、トルエン、酢酸エチルまたはこれらの混合溶媒などが挙げらるが、好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドである。反応温度は、好ましくない副反応が起こらない範囲であれば特に限定されず、通常冷却下、室温または加温下であり、好ましくは氷冷下から室温の範囲である。
【００１４】
さらに、化合物（ＩＸ）を脱アセタール化反応に付することにより、一般式（Ｉ）で表される化合物を得ることができる。この脱アセタール化反応は、化合物（ＩＸ）を水または通常使用される有機溶媒と水の混合溶媒に溶解し、酸を加え、攪拌することにより行うことができる。反応に使用される有機溶媒としてはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、メタノール、エタノール、ベンゼン、トルエン、酢酸エチルまたはこれらの混合溶媒などが挙げらるが、好ましくはテトラヒドロフランである。用いられる酸としてはｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、酢酸、ギ酸などの有機酸や塩酸、臭化水素酸、硫酸などの無機酸が挙げられるが、特に好ましくは塩酸である。好適な塩酸濃度は約１〜約６Ｍである。反応温度は特に限定されず、冷却下、室温または加温下で反応は行われる。反応時間は、約１〜約４８時間程度である。このようにして得られるピリジン誘導体は公知の分離精製手段、例えば濃縮、減圧濃縮、溶媒抽出、晶出、再結晶、転溶、クロマトグラフィーなどにより単離精製することができる。
【００１５】
本発明の式（Ｉ）で表される化合物およびその塩（以下、本発明化合物と記載する場合がある。）は文献未載の新規化合物であり、後記試験例に示すように優れたカルパイン阻害活性を有するため、それらを有効成分として、必要により後記の担体などを組み合わせることにより、医薬として有用である。
【００１６】
本発明化合物を含有する医薬は、哺乳動物（例えばヒト、ラット、マウス、ウサギ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコなど）のカルパインが関与する疾患、例えば虚血性疾患、免疫疾患、アルツハイマー病、骨粗鬆症、脳虚血疾患、白内障、緑内障、網膜（脈絡膜）疾患、光凝固による眼球後眼部合併症（例えば黄斑部浮腫、網膜剥離など）などの予防または治療薬として、あるいは血管新生などの抑制または治療薬として有用である。また、本発明化合物は高い水溶性を有しているので、従来困難であった水性液剤としての使用が可能である。さらに、本発明化合物は組織移行性に優れ、かつ毒性も非常に低く安全性にも優れている。
【００１７】
本発明化合物を含有する医薬は全身的または局所的に投与される。全身的には経口投与の他、静脈内注射、皮下注射、筋肉内注射など非経口的にも投与される。局所的には、皮膚、粘膜、鼻内、眼内などに投与される。
【００１８】
本発明化合物を含有する医薬の製剤形態としては、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、坐剤などの固形剤、およびシロップ剤、注射剤、点眼剤、点鼻剤などの液剤などが挙げられる。顆粒および錠剤として製造する場合には、例えば賦形剤（乳糖、白糖、ブドウ糖、デンプン、結晶セルロースなど）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウムなど）、崩壊剤（デンプン、カルメロースナトリウム、炭酸カルシウムなど）、結合剤（デンプン糊液、ヒドロキシプロピルセルロース液、カルメロース液、アラビアゴム液、ゼラチン液、アルギン酸ナトリウム液など）などを用いることにより任意の剤形を製造することができる。また、顆粒剤および錠剤には、適当なコーティング剤（ゼラチン、白糖、アラビアゴム、カルナバロウなど）、腸溶性コーティング剤（例えば酢酸フタル酸セルロース、メタアクリル酸コポリマー、ヒドロキシプロピルセルロースフタレート、カルボキシメチルエチルセルロースなど）などで剤皮を施してもよい。
【００１９】
カプセル剤として製造する場合には、適当な賦形剤、例えば流動性と滑沢性を向上させるためのステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、軽質無水ケイ酸など、また加圧流動性のための結晶セルロースや乳糖などの他、上記崩壊剤などを適宜添加したものを均等に混和または粒状もしくは粒状としたものに適当なコーティング剤で剤皮を施したものを充填するか、適当なカプセル基剤（ゼラチンなど）にグリセリンまたはソルビトールなど加えて塑性を増したカプセル基剤で被包成形することもできる。これらカプセル剤には必要に応じて、着色剤、保存剤［二酸化硫黄、パラベン類（パラオキシ安息香酸メチル、エチル、プロピルエステル）］などを加えることができる。カプセル剤は通常のカプセルの他、腸溶性コーティングカプセル、胃内抵抗性カプセル、放出制御カプセルとすることもできる。腸溶性カプセルとする場合、腸溶性コーティング剤でコーティングした化合物または化合物に上記の適当な賦形剤を添加したものを通常のカプセルに充填または、カプセル自身を腸溶性コーティング剤でコーティング、もしくは腸溶性高分子を基剤として成形することができる。
【００２０】
坐剤として製造する場合には坐剤基剤（例えばカカオ脂、マクロゴールなど）を適宜選択して使用することができる。
【００２１】
シロップ剤として製造する場合、例えば安定剤（エデト酸ナトリウムなど）、懸濁化剤（アラビアゴム、カルメロースなど）、矯味剤（単シロップ、ブドウ糖など）、芳香剤などを適宜選択して使用することができる。
【００２２】
注射剤、点眼剤または点鼻剤として製造する場合、医薬上許容される添加物、例えば等張化剤（塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、マンニトール、ソルビトール、ホウ酸、ホウ砂、ブドウ糖、プロピレングリコールなど）、緩衝剤（リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、炭酸緩衝液、クエン酸緩衝液、トリス緩衝液など）、保存剤（パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、塩化ベンザルコニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、ホウ酸、ホウ砂など）、増粘剤（ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコールなど）、安定化剤（亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、アスコルビン酸、ジブチルヒドロキシトルエンなど）、ｐＨ調整剤（塩酸、水酸化ナトリウム、リン酸、酢酸など）などを適宜添加した溶液に溶解または分散することによって製造することができる。
【００２３】
なお、本発明化合物は、医薬品として望まれる高い水溶性を有するので、水溶性液剤、特に上記したシロップ剤、注射剤、点眼剤および点鼻剤などの製剤として有利に使用できる。
【００２４】
上記シロップ剤、注射剤、点眼剤および点鼻剤における添加剤の添加量は、添加する添加剤の種類、用途などによって異なるが、添加剤の目的を達成し得る濃度を添加すればよく、等張化剤は、通常、浸透圧が約２２９〜約３４３ｍＯｓｍとなるよう、約０．５〜約５．０ｗ／ｖ％に添加する。また、緩衝剤は約０．０１〜約２．０ｗ／ｖ％程度、増粘剤は約０．０１〜約１．０ｗ／ｖ％程度、安定化剤は約０．００１〜約１．０ｗ／ｖ％程度添加する。ｐＨ調整剤は、適宜添加し、通常ｐＨ約３〜約９、好ましくは約４〜約８に調整される。
【００２５】
本発明化合物の投与量は対象となる疾患、症状、投与対象、投与方法などにより異なるが、例えば内服剤として成人に投与する場合は、１日数回、１回量約１〜約２００ｍｇ、好ましくは約１０〜約１００ｍｇである。また、注射剤として成人に投与する場合は、１日１回、約０．１〜約５０ｍｇ、好ましくは約１〜約３０ｍｇである。また、眼に局所的に使用する場合には、通常約０．００１〜約１．０ｗ／ｖ％、好ましくは約０．０１〜約０．５ｗ／ｖ％に調整した点眼液を、１回約２０〜約５０μＬ、１日数回点眼するのがよい。
【００２６】
【発明の実施の形態】
本発明を以下の参考例、実施例、試験例および製剤例に従いさらに詳細に説明するが、本発明はこれらにより何ら限定されるものではない。なお、実施例で述べる化合物の分析値において、融点はＹａｎａｃｏ製ＭＰ−５００Ｖ型（補正なし）を用いて測定した。核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）はＶａｒｉａｎ製Ｇｅｍｉｎｉ−２０００型を用いて測定した。比旋光度（［α］Ｄ）はＨｏｒｉｂａ製ＳＥＰＡ−２０００型を用いて測定した。元素分析はＥｌｅｍｅｎｔａｒ製Ｖａｒｉｏ ＥＬ型を用いて測定した。
【００２７】
【実施例】
参考例１ （２Ｓ）−２−（（ベンジルオキシ）カルボニルアミノ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−（ヒドロキシメチル）−３−メチルブチル）−３−メチルブタナミド（参考化合物１）
ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−バリンＮ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル（３０ｇ，８６ｍｍｏｌ）の酢酸エチル溶液（４００ｍＬ）にＬ−ロイシノール（１２ｇ，１００ｍｍｏｌ）を加えた。この反応液を室温で１８時間攪拌した（沈殿が観察された）。この沈殿を酢酸エチルの追加により溶解し、この溶液を１Ｍ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、減圧濃縮した。残渣をヘキサンで洗浄し、参考化合物１（１９ｇ，６３％） を無色結晶として得た。
ｍｐ ６５．１−６５．９ ℃． １Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ： ０．８０−０．８７ （ｍ， １２Ｈ）， １．２６−１．３７ （ｍ， ２Ｈ）， １．５９ （ｍ， １Ｈ）， １．９２ （ｍ， １Ｈ）， ３．１８ （ｍ， １Ｈ）， ３．３０ （ｍ， １Ｈ）， ３．７７−３．８３ （ｍ， ２Ｈ）， ４．６１ （ｍ， １Ｈ）， ４．９９−５．０８ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２１ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．７Ｈｚ）， ７．３１−７．３６ （ｍ， ５Ｈ）， ７．５１ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ）．
【００２８】
参考例２ （２Ｓ）−２−（（ベンジルオキシ）カルボニルアミノ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−ホルミル−３−メチルブチル）−３−メチルブタナミド（参考化合物２）
参考化合物１（１９ｇ，５４ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド（１５０ｍＬ）とジクロロメタン（７０ｍＬ）に溶解し、５℃に冷却した。そこへ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２８ｇ，２２０ｍｍｏｌ）と三酸化硫黄ピリジン錯体（３５ｇ，２２０ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド懸濁液（７０ｍＬ）を加えた。この反応液を氷冷下で３０分間攪拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し、この溶液を１Ｍ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、減圧濃縮した。得られた白色固体を酢酸エチル／ヘキサン混液から結晶化し、参考化合物２（１２ｇ，６３％）を無色結晶として得た。
ｍｐ １２３．１−１２４．６ ℃． １Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ： ０．８４−０．９１ （ｍ， １２Ｈ）， １．３７−１．６５ （ｍ， ３Ｈ）， ２．００ （ｍ， １Ｈ）， ３．９０ （ｍ， １Ｈ）， ４．１２ （ｍ， １Ｈ）， ５．０４ （ｓ， ２Ｈ）， ７．３１−７．３７ （ｍ， ６Ｈ）， ８．３４ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ）， ９．３９ （ｓ， １Ｈ）．
【００２９】
参考例３ （２Ｓ）−２−（（ベンジルオキシ）カルボニルアミノ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−（２，５−ジオキソラニル）−３−メチルブチル）−３−メチルブタナミド（参考化合物３）
参考化合物２（１１ｇ，３１ｍｍｏｌ）のトルエン溶液（３００ｍＬ）にエチレングリコール（９．８ｇ，１６０ｍｍｏｌ）とピリジニウムｐ−トルエンスルホナート（１．６ｇ，６．３ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を８０℃で４時間攪拌した。この反応液を１Ｍ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、減圧濃縮した。残渣をヘキサン混液から結晶化し、参考化合物３（１２ｇ，９７％）を無色結晶として得た。
ｍｐ １０５．９−１０６．６ ℃． １Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ： ０．７９−０．８７ （ｍ， １２Ｈ）， １．２１ （ｍ， １Ｈ）， １．３８ （ｍ， １Ｈ）， １．５７ （ｍ， １Ｈ）， １．９３ （ｍ， １Ｈ）， ３．７３−３．９ （ｍ， ５Ｈ），４．０１ （ｍ， １Ｈ）， ４．７１ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ）， ４．９８−５．０９ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１８ （ｄ， １Ｈ，Ｊ ＝ ９．０）， ７．３１−７．３５ （ｍ， ５Ｈ）， ７．５４ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ９．３ Ｈｚ）．
【００３０】
参考例４ （２Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（１Ｓ）−１−（２，５−ジオキソラニル）−３−メチルブチル）−３−メチルブタナミド（参考化合物４）
参考化合物３（１２ｇ，３１ｍｍｏｌ）をエタノール（２５０ｍＬ）に溶解し、常圧室温で１０％パラジウム炭素 （２．０ｇ）の存在化、水素化反応を行った。７２時間攪拌後、パラジウム炭素をろ去し、ろ液を減圧濃縮し、参考化合物４（７．５ｇ，９５％）を無色オイルとして得た。
１Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ： ０．７６ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ）， ０．８２ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．８７ （ｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， １．２３ （ｍ， １Ｈ）， １．３７ （ｍ， １Ｈ）， １．５５ （ｍ， １Ｈ）， １．６８ （ｓ， ２Ｈ）， １．９ （ｍ， １Ｈ）， ２．９６ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ５．１ Ｈｚ）， ３．７４−３．９１ （ｍ， ４Ｈ）， ４．０１ （ｍ， １Ｈ）， ４．７２ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ３．３ Ｈｚ）， ７．６２ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ９．６ Ｈｚ）．
【００３１】
参考例５ （２Ｓ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−（２，５−ジオキソラニル）−３−メチルブチル）−３−メチル−２−（４−ピリジルカルボニルアミノ）ブタナミド（参考化合物５）
参考化合物４（１．６ｇ，６．２ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（３０ｍＬ）にイソニコチノイルクロリド塩酸塩（１．４ｇ，８．０ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（１．３ｇ，１２ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を室温で２時間攪拌した。減圧濃縮後、残渣を酢酸エチルに溶解し、この溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、減圧濃縮し、参考化合物５（２．３ｇ，９８％）を微黄色オイルとして得た。
１Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ： ０．７９ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．８６ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．９２ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ）， ０．９２ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， １．２４ （ｍ， １Ｈ）， １．３９ （ｍ， １Ｈ）， １．５９ （ｍ， １Ｈ）， ２．１０ （ｍ， １Ｈ）， ３．７３−３．８６ （ｍ， ４Ｈ）， ４．０２ （ｍ， １Ｈ）， ４．３２ （ｔ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ）， ４．７２ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ３．６ Ｈｚ）， ７．７２−７．７７ （ｍ， ３Ｈ）， ８．５３ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ）， ８．７１−８．７４ （ｍ， ２Ｈ）．
【００３２】
参考例６ （２Ｓ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−（２，５−ジオキソラニル）−３−メチルブチル）−３−メチル−２−（（２−ピリジルメチル）カルボニルアミノ）ブタナミド（参考化合物６）
参考化合物４（０．８０ｇ，３．１ｍｍｏｌ）、２−ピリジル酢酸塩酸塩（０．５９ｇ，３．４ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．４６ｇ，３．４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．３４ｇ，３．４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）に溶解した。そこへ、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．６５ｇ，３．４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（２０ｍＬ）を氷冷下で加えた。この溶液を室温で１８時間攪拌した後、減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルで希釈し、この溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、減圧濃縮した。残渣をヘキサンから結晶化を行い、参考化合物６（０．９０ｇ，７７％）を無色結晶として得た。
ｍｐ １０８．３−１０９．２ ℃． １Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ： ０．７８−０．８６ （ｍ， １２Ｈ）， １．２２ （ｍ， １Ｈ）， １．３７ （ｍ， １Ｈ）， １．５３ （ｍ， １Ｈ）， １．９６ （ｍ， １Ｈ）， ３．７１ （ｓ， ２Ｈ）， ３．７５−３．８５ （ｍ， ４Ｈ）， ４．０１ （ｍ， １Ｈ）， ４．２２ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．８， ６．５ Ｈｚ）， ４．７０ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ３．３ Ｈｚ）， ７．２５ （ｍ， １Ｈ）， ７．３２ （ｍ， １Ｈ）， ７．６６−７．７５ （ｍ， ２Ｈ）， ８．１１ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ）， ８．４８ （ｍ， １Ｈ）．
【００３３】
参考例７ （２Ｓ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−（２，５−ジオキソラニル）−３−メチルブチル）−３−メチル−２−（（３−ピリジルメチル）カルボニルアミノ）ブタナミド（参考化合物７）
参考化合物４（０．８０ｇ，３．１ｍｍｏｌ）、３−ピリジル酢酸塩酸塩（０．５９ｇ，３．４ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．４６ｇ，３．４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．３４ｇ，３．４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）に溶解した。そこへ、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．６５ｇ，３．４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（２０ｍＬ）を氷冷下で加えた。この溶液を室温で１８時間攪拌した後、減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルで希釈し、この溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、減圧濃縮した。残渣をヘキサンから結晶化を行い、参考化合物７（０．９２ｇ，７９％）を無色結晶として得た。
ｍｐ ８９．７−９０．３ ℃． １Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ： ０．７７−０．８４ （ｍ， １２Ｈ）， １．２１ （ｍ， １Ｈ）， １．３５ （ｍ， １Ｈ）， １．５１ （ｍ， １Ｈ）， １．９２ （ｍ， １Ｈ）， ３．５１ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １４．１ Ｈｚ）， ３．５８ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １４．１ Ｈｚ）， ３．７３−３．８７ （ｍ， ４Ｈ）， ３．９９ （ｍ， １Ｈ）， ４．１８（ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．９， ７．２ Ｈｚ）， ４．６９ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ３．６ Ｈｚ）， ７．３１ （ｍ， １Ｈ）， ７．６５−７．７１ （ｍ， ２Ｈ）， ８．１９ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．９ Ｈｚ）， ８．４１−８．４６ （ｍ， ２Ｈ）．
【００３４】
参考例８ （２Ｓ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−（２，５−ジオキソラニル）−３−メチルブチル）−３−メチル−２−（（４−ピリジルメチル）カルボニルアミノ）ブタナミド（参考化合物８）
参考化合物４（０．８０ｇ，３．１ｍｍｏｌ）、４−ピリジル酢酸塩酸塩（０．５９ｇ，３．４ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．４６ｇ，３．４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．３４ｇ，３．４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）に溶解した。そこへ、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．６５ｇ，３．４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（２０ｍＬ）を氷冷下で加えた。この溶液を室温で１８時間攪拌した後、減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルで希釈し、この溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、減圧濃縮した。残渣をヘキサンから結晶化を行い、参考化合物８（０．９０ｇ，７７％）を無色結晶として得た。
ｍｐ １５９．１−１５９．８ ℃． １Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ： ０．７７−０．８４ （ｍ， １２Ｈ）， １．２０ （ｍ， １Ｈ）， １．３５ （ｍ， １Ｈ）， １．５０ （ｍ， １Ｈ）， １．９０ （ｍ， １Ｈ）， ３．５３ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １３．８ Ｈｚ）， ３．５９ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １３．８ Ｈｚ）， ３．７３−３．８７ （ｍ， ４Ｈ）， ４．００ （ｍ， １Ｈ）， ４．１８ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ９．２， ７．２ Ｈｚ）， ４．６９ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ３．６ Ｈｚ）， ７．２６−７．２８ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７１ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ９．３ Ｈｚ）， ８．２１ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ９．２ Ｈｚ）， ８．４５−８．４７ （ｍ， ２Ｈ）．
【００３５】
参考例９ （２Ｓ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−（２，５−ジオキソラニル）−３−メチルブチル）−３−メチル−２−（（３−ピリジルエチル）カルボニルアミノ）ブタナミド（参考化合物９）
参考化合物４（０．８０ｇ，３．１ｍｍｏｌ）、３−ピリジルプロピオン酸塩酸塩（０．５９ｇ，３．４ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．４６ｇ，３．４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．３４ｇ，３．４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）に溶解した。そこへ、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．６５ｇ，３．４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（２０ｍＬ）を氷冷下で加えた。この溶液を室温で１８時間攪拌した後、減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルで希釈し、この溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、減圧濃縮した。残渣をヘキサンから結晶化を行い、参考化合物９（０．９４ｇ，７８％）を無色結晶として得た。
ｍｐ ８３．８−８４．２ ℃． １Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ： ０．７４ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ）， ０．７６ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．８０ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．８６ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， １．２２ （ｍ， １Ｈ）， １．３５ （ｍ， １Ｈ）， １．５４ （ｍ， １Ｈ）， １．８６ （ｍ， １Ｈ）， ２．４１−２．６０ （ｍ， ２Ｈ）， ２．８２ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ）， ３．７３−３．８４ （ｍ， ４Ｈ）， ３．９８ （ｍ， １Ｈ）， ４．１８ （ｍ， １Ｈ）， ４．６９ （ｍ， １Ｈ）， ７．２６ （ｍ， １Ｈ）， ７．６１−７．６５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．８２ （ｄ， １Ｈ，Ｊ ＝ ９．０ Ｈｚ）， ８．３８ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ）， ８．４３ （ｍ， １Ｈ）．
【００３６】
実施例１ （２Ｓ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−ホルミル−３−メチルブチル）−３−メチル−２−（４−ピリジルカルボニルアミノ）ブタナミド（化合物１）
【化４】
参考化合物５（１．２ｇ，３．３ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）に溶解し１Ｍ塩酸（２０ｍＬ）を加えた。この溶液を５０℃で８時間攪拌した。この反応液を濃縮後、残渣を酢酸エチルに溶解した。この溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、減圧濃縮した。残渣をヘキサンから結晶化を行い、化合物１（０．５１ｇ，４８％）を無色結晶として得た。
ｍｐ １０１．７−１０３．１ ℃． １Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ： ０．９３ （ｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ）， １．０４ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， １．０５ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， １．４５ （ｍ， １Ｈ）， １．６６−１．７６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．２３ （ｍ， １Ｈ）， ４．５３−４．６１ （ｍ， ２Ｈ）， ６．５３ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ）， ７．１４ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ）， ７．６５−７．６７ （ｍ， ２Ｈ）， ８．７５−８．７７ （ｍ， ２Ｈ）， ９．５９ （ｓ， １Ｈ）． ［α］Ｄ ２５ ＋１８．２°（Ｃ ＝ ０．２０４）．
【００３７】
実施例２ （２Ｓ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−ホルミル−３−メチルブチル）−３−メチル−２−（（２−ピリジルメチル）カルボニルアミノ）ブタナミド（化合物２）
【化５】
参考化合物６（０．８７ｇ，２．３ｍｍｏｌ）を１Ｍ塩酸（２０ｍＬ）に溶解した。この溶液を５０℃で４時間攪拌した後、ＨＰＬＣシステム（カラム；ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ−Ａ ２５０×２０ｍｍＩ．Ｄ．，移動相；アセトニトリル／水／トリフルオロ酢酸＝２０：８０：０．１）を用いて精製した。主分画を集め、炭酸水素ナトリウムを加え中和し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、減圧濃縮することにより化合物２（０．４６ｇ，６０％）を無色結晶として得た。
ｍｐ １３１．５−１３２．０ ℃． １Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ： ０．８４ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．８６ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ）， ０．８８ （ｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， １．４１ （ｍ， １Ｈ）， １．５０−１．６２ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０２ （ｍ， １Ｈ）， ３．７２ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１２ （ｍ， １Ｈ）， ４．２４ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．７， ６．８ Ｈｚ）， ７．２５ （ｍ， １Ｈ）， ７．３３ （ｍ， １Ｈ）， ７．７２ （ｍ， １Ｈ）， ８．２２ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ）， ８．４３ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ）， ８．４６ （ｍ， １Ｈ）， ９．３９ （ｓ， １Ｈ）． ［α］Ｄ ２５ −５３．７°（Ｃ ＝ ０．２０３）．
【００３８】
実施例３ （２Ｓ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−ホルミル−３−メチルブチル）−３−メチル−２−（（３−ピリジルメチル）カルボニルアミノ）ブタナミド（化合物３）
【化６】
参考化合物７（０．８９ｇ，２．４ｍｍｏｌ）を１Ｍ塩酸（２０ｍＬ）に溶解した。この溶液を５０℃で４時間攪拌した後、ＨＰＬＣシステム（カラム；ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ−Ａ ２５０×２０ｍｍＩ．Ｄ．，移動相；アセトニトリル／水／トリフルオロ酢酸＝２０：８０：０．１）を用いて精製した。主分画を集め、炭酸水素ナトリウムを加え中和し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、減圧濃縮することにより化合物３（０．５０ｇ，６４％）を無色結晶として得た。
ｍｐ １０８．９−１１０．７ ℃． １Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ： ０．８２−０．８８ （ｍ， １２Ｈ）， １．４０ （ｍ， １Ｈ）， １．４９−１．６１ （ｍ， ２Ｈ）， １．９９ （ｍ， １Ｈ）， ３．５１ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １４．１ Ｈｚ），３．６０ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １４．１ Ｈｚ）， ４．１２ （ｍ， １Ｈ）， ４．２１ （ｍ， １Ｈ）， ７．３２ （ｍ， １Ｈ）， ７．６７ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ）， ８．２８ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ９．０ Ｈｚ）， ８．４１−８．４７ （ｍ， ３Ｈ）， ９．３９ （ｓ， １Ｈ）． ［α］Ｄ ２５ −２４．１°（Ｃ ＝ ０．２０３）．
【００３９】
実施例４ （２Ｓ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−ホルミル−３−メチルブチル）−３−メチル−２−（（４−ピリジルメチル）カルボニルアミノ）ブタナミド（化合物４）
【化７】
参考化合物８（０．７７ｇ，２．３ｍｍｏｌ）を１Ｍ塩酸（２０ｍＬ）に溶解した。この溶液を５０℃で４時間攪拌した後、ＨＰＬＣシステム（カラム；ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ−Ａ ２５０×２０ｍｍＩ．Ｄ．，移動相；アセトニトリル／水／トリフルオロ酢酸＝２０：８０：０．１）を用いて精製した。主分画を集め、炭酸水素ナトリウムを加え中和し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、減圧濃縮することにより化合物４（０．３７ｇ，５４％）を無色結晶として得た。
ｍｐ ９９．１−１０１．４ ℃． １Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ： ０．９０ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ）， ０．９１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．９３ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ）， ０．９５ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， １．４６ （ｍ， １Ｈ）， １．５５−１．６８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．１０ （ｍ， １Ｈ）， ３．６１ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２７ （ｍ， １Ｈ）， ４．３６ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ９．０， ７．２ Ｈｚ）， ７．２８−７．２９ （ｍ， ２Ｈ）， ７．８８ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ９．３ Ｈｚ）， ７．９７ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ）， ８．４９−８．５０ （ｍ， ２Ｈ）， ９．４８ （ｓ， １Ｈ）． ［α］Ｄ ２５ −４０．７°（Ｃ ＝ ０．２０４）．
【００４０】
実施例５ （２Ｓ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−ホルミル−３−メチルブチル）−３−メチル−２−（（３−ピリジルエチル）カルボニルアミノ）ブタナミド（化合物５）
【化８】
参考化合物９（０．７７ｇ，２．３ｍｍｏｌ）を１Ｍ塩酸（２０ｍＬ）に溶解した。この溶液を５０℃で４時間攪拌した後、ＨＰＬＣシステム（カラム；ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ−Ａ ２５０×２０ｍｍＩ．Ｄ．，移動相；アセトニトリル／水／トリフルオロ酢酸＝２０：８０：０．１）を用いて精製した。主分画を集め、炭酸水素ナトリウムを加え中和し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、減圧濃縮することにより化合物５（０．４６ｇ，５８％）を無色結晶として得た。
ｍｐ １０５．０−１０６．１ ℃． １Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ： ０．７８ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ）， ０．８１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ）， ０．８５ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．８９ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ）， １．４１ （ｍ， １Ｈ）， １．５０−１．６８ （ｍ， ２Ｈ）， １．９２ （ｍ， １Ｈ）， ２．４２−２．６１ （ｍ， ２Ｈ）， ２．８３ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ）， ４．０８ （ｍ， １Ｈ）， ４．２０ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．７， ７．２ Ｈｚ）， ７．２７ （ｍ， １Ｈ）， ７．６２ （ｍ， １Ｈ）， ７．９３ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ９．０ Ｈｚ）， ８．３７−８．４３ （ｍ，
３Ｈ）， ９．３８ （ｓ， １Ｈ）．
【００４１】
実施例６ （２Ｓ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−ホルミル−３−メチルブチル）−３−メチル−２−（（３−ピリジルメチル）カルボニルアミノ）ブタナミド塩酸塩（化合物６）
【化９】
化合物３（０．４３ｇ，１．３ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（５０ｍＬ）に溶解し、氷冷下で４Ｍ塩酸／酢酸エチル溶液（０．４０ｍＬ）を加えた。生じた沈殿をろ取した後、酢酸エチルで洗浄し化合物６（０．４０ｇ，８６％）を無色結晶として得た。
ｍｐ ７９．８−８０．１ ℃． Ａｎａｌ． Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ１８Ｈ２７Ｎ３Ｏ３・ＨＣｌ・Ｈ２Ｏ ： Ｃ， ５５．７３ ； Ｈ， ７．８０ ； Ｎ， １０．８３． Ｆｏｕｎｄ ： Ｃ， ５５．５８ ； Ｈ， ７．６６ ； Ｎ， １０．６３．
【００４２】
実施例７ （２Ｓ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−ホルミル−３−メチルブチル）−３−メチル−２−（（３−ピリジルエチル）カルボニルアミノ）ブタナミド塩酸塩（化合物７）
【化１０】
化合物５（０．４３ｇ，１．３ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（５０ｍＬ）に溶解し、氷冷下で４Ｍ塩酸／酢酸エチル溶液（０．４０ｍＬ）を加えた。生じた沈殿をろ取した後、酢酸エチルで洗浄し化合物７（０．４０ｇ，８６％）を無色結晶として得た。
ｍｐ ７９．６−８０．２ ℃． Ａｎａｌ． Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ１９Ｈ２９Ｎ３Ｏ３・ＨＣｌ・Ｈ２Ｏ ： Ｃ， ５６．７８ ； Ｈ， ８．０２ ； Ｎ， １０．４５． Ｆｏｕｎｄ ： Ｃ， ５６．９９ ； Ｈ， ８．２４ ； Ｎ， １０．２４．
【００４３】
試験例１ 溶解性の確認
化合物６および化合物７の結晶（１０ｍｇ）に水（１００μＬ）をそれぞれ加えた。その結果、両方の結晶とも、水に全溶した。このように、化合物６および化合物７は高い水溶性を有していることがわかった。
【００４４】
試験例２ μ−カルパインおよびｍ−カルパイン阻害活性の測定
μ−およびｍ−カルパインの阻害活性は文献［Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ． ｖｏｌ．２０８，３８７−３９２（１９９３）］に記載された方法に準じて測定した。すなわち、種々の濃度の被験薬を含むジメチルスルホキシド溶液（２．５μＬ）に、０．５ｍｇ／ｍＬのカゼイン、５０ｍＭのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）、２０ｍＭのジチオスレイトールおよび１．０ｎｍｏｌのμ−カルパイン（コスモバイオ製）またはｍ−カルパイン（コスモバイオ製）を含む反応液（２００μＬ）を９６ウェルプレート上で加えた。そこへ、２０ｍＭの塩化カルシウム水溶液（５０μＬ）を加え、３０℃で６０分間反応させた。この反応液（１００μＬ）を別の９６ウェルプレートに移し、精製水（５０μＬ）と５０％のＰｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｄｙｅ Ｒｅａｇｅｎｔ（ＢＩＯ−ＲＡＤ Ｃａｔａｌｏｇ ５００−０００６）水溶液（１００μＬ）を加えて室温で１５分間放置した後、５９５ｎＭで吸光度を測定した。被験薬を含まず同様に処理したものをコントロール値、２０ｍＭ塩化カルシウム水溶液の代わりに１ｍＭ ＥＤＴＡ水溶液（５０μＬ）を加え同様に処理したものをブランク値とし、５０％阻害に必要な量（ＩＣ５０）を求めた。
阻害率＝｛１−（測定値−ブランク値）／（コントロール値−ブランク値）｝×１００
【００４５】
（試験結果）
その結果を表１に示した。本発明化合物には、優れたカルパイン阻害活性が認められた。
【００４６】
【表１】
【００４７】
製剤例１ 錠剤
化合物１ ５ｇ
デンプン １２ｇ
乳糖 ２７．２ｇ
ステアリン酸マグネシウム ０．４ｇ
化合物１、乳糖およびデンプンを加えてよく混和し、湿性錠剤調整法に準じて打錠用顆粒とする。ステアリン酸マグネシウムを加えて打錠し、錠剤４００錠とする。錠剤は、必要に応じて、腸溶性コーティング剤（メタアクリル酸コポリマー）でコーティングする。
【００４８】
製剤例２ 点眼剤
化合物６ １００ｍｇ
ホウ酸 ７００ｍｇ
ホウ砂 適量
塩化ナトリウム ５００ｍｇ
エデト酸ナトリウム ０．０５ｍｇ
塩化ベンザルコニウム ０．０００５ｍｇ
滅菌精製水 全量 １００ｍＬ
以上の成分を常法により無菌的に混和溶解して点眼剤とする。
【００４９】
製剤例３ 注射剤
化合物７ １００ｍｇ
塩化ナトリウム ９００ｍｇ
１Ｎ水酸化ナトリウム 適量
注射用蒸留水 全量 １００ｍＬ
以上の成分を常法により無菌的に混和溶解して注射剤とする。
【発明の効果】
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物は、優れたカルパイン阻害活性を有しているため、カルパインが関与する種々の疾患、例えば虚血性疾患、免疫疾患、アルツハイマー病、骨粗鬆症、脳組織障害による疾患、白内障、緑内障、網脈絡膜疾患、光凝固による眼球後眼部合併症、血管新生を伴う疾患などの予防および治療薬として有用である。また、本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物は、高い水溶性を有しているため、特に水性液剤に有利に使用される。
【発明の属する技術分野】
本発明はカルパイン阻害活性を有する新規ピリジン誘導体に関する。また、本発明は新規ピリジン誘導体を含有する医薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】
カルパインは生体内に広く分布する細胞質内のタンパク分解酵素の一つであり、カルシウムイオンで活性化される。現在では、このカルパインの異常な活性化が脳卒中、クモ膜下出血、アルツハイマー病、虚血性疾患、筋ジストロフィー、白内障、血小板凝集、関節炎などの種々の疾患に関与していることが明らかとなっている［Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｉｅｎｃｅｓ，１５巻，４１２頁（１９９４年）］。一方、カルパイン阻害剤は水晶体培養による実験的白内障モデルにおいて、水晶体の透明維持に効果があり［Ｃｕｒｒ． Ｅｙｅ Ｒｅｓ．，１０巻，６５７−６６６頁（１９９４年）］、白内障治療剤（ＷＯ９３／２３０３２）などとして有用であることがわかってきている。これまで報告されているカルパイン阻害剤としては、ペプチドハロメタン誘導体（特公平６−２９２２９）、ペプチドジアゾメタン誘導体［Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，２５３巻，７５１−７５８頁（１９８８年）、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３５巻，２１６−２２０頁（１９９２年）］、ペプチジルアルデヒド誘導体（特開平１０−１４７５６４など）などが挙げられるが、これらの阻害剤は、未だ実用化されていないのが現状である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
カルパイン阻害活性を有し、かつ、高い水溶性を有する化合物を提供することである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記の課題を解決すべく鋭意研究した結果、高い水溶性を有し、かつ、強いカルパイン阻害活性を有するピリジン誘導体を創製し、さらに研究を進め本発明を完成した。
【０００５】
すなわち、本発明は、
（１）下記一般式（Ｉ）
【化２】
（２）上記（１）記載の化合物またはその医薬上許容される塩を含有する医薬、
（３）カルパイン阻害剤である上記（２）記載の医薬、および
（４）カルパインが関与する疾患の予防または治療剤である上記（２）記載の医薬に関する。
【０００６】
上記一般式（Ｉ）中、Ｒ１で表されるピリジル基としては、２−ピリジル、３−ピリジルおよび４−ピリジルのいずれでもよい。Ｒ２およびＲ３で表される低級アルキル基としては、炭素数１〜６の直鎖状または分枝状アルキル基が好ましく、具体的にはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、１−メチルブチル、２−メチルブチル、１，２−ジメチルプロピル、ヘキシル、１−メチルペンチル、２−メチルペンチル、３−メチルペンチル、４−メチルペンチル、１，１−ジメチルブチル、１，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、２，３−ジメチルブチル、３，３−ジメチルブチル、１−エチルブチル、２−エチルブチル、１−エチル−２−メチルプロピル、１，１，２−トリメチルプロピルが挙げられる。とりわけ好ましくは炭素数３〜４の直鎖状または分枝状アルキル基である。Ｒ２で表される低級アルキル基としてはイソプロピルが、Ｒ３で表される低級アルキル基としてはイソブチルが特に好ましい。ｎは０、１または２の整数である。
【０００７】
さらに、本発明は、本発明化合物（Ｉ）およびその塩、また本発明化合物（Ｉ）およびその塩の各種の溶媒和や結晶多形の物質ならびにプロドラッグをも包含する。本発明における式（Ｉ）で表される化合物の塩としては生理学的に許容される塩が好ましく、例えば無機酸との塩、有機酸との塩または酸性アミノ酸との塩などが挙げられる。無機酸との塩の好適な例としては、例えば塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸などとの塩が挙げられる。有機酸との塩の好適な例としては、例えばギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フマール酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などとの塩が挙げられる。酸性アミノ酸との塩の好適な例としては、例えばアスパラギン酸、グルタミン酸などとの塩が挙げられる。
【０００８】
本発明の化合物は、例えば下記反応式
【化３】
【０００９】
アミノ基がＡで表される保護基で保護されたα−アミノ酸のＮ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル（ＩＩ）［以下、化合物（ＩＩ）と記載することもある。］と一般式（ＩＩＩ）で表されるアミノアルコール［以下、化合物（ＩＩＩ）と記載することもある。］を反応させることにより、一般式（ＩＶ）で表される化合物［以下、化合物（ＩＶ）と記載することもある。］を得ることができる。Ａで表される保護基としてはベンジルオキシカルボニル基（以下、Ｚ基と記載することもある。）、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基（以下、Ｂｏｃ基と記載することもある。）などの通常ペプチド合成の分野で用いられるものを適宜使用できる。この反応は、化合物（ＩＩ）を通常使用される有機溶媒に溶解し、約１〜約５モル当量の化合物（ＩＩＩ）を加え、攪拌することにより行うことができる。通常使用される有機溶媒としては、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、メタノール、エタノール、ベンゼン、トルエン、酢酸エチルなどのような反応に悪影響をおよぼさない慣用の溶媒またはそれらの混合溶媒が挙げらるが、好ましくは酢酸エチルである。反応温度は、副反応が起こらない範囲であれば、特に限定されず、反応は通常、冷却下、室温または加温下で行われるが、好ましくは室温である。
【００１０】
次に、化合物（ＩＶ）を酸化反応に付することにより、一般式（Ｖ）で表される化合物［以下、化合物（Ｖ）と記載することもある。］を得ることができる。該酸化方法としては、例えばクロム酸酸化に分類される二クロム酸ピリジニウム（ＰＤＣ）酸化、クロロクロム酸ピリジニウム（ＰＣＣ）酸化、ジョーンズ（Ｊｏｎｅｓ）酸化、コリンズ（Ｃｏｌｌｉｎｓ）酸化、またはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）酸化に分類されるスワン（Ｓｗｅｒｎ）酸化、ＤＭＳＯ−三酸化硫黄ピリジン錯体による酸化、ＤＭＳＯ−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）による酸化、ＤＭＳＯ−塩化オキサリルによる酸化、または次亜ハロゲン酸による酸化、Ｎ−ハロゲノカルボン酸アミドによる酸化など、自体公知の方法を使用することができるが、とりわけＤＭＳＯ−三酸化硫黄ピリジン錯体による酸化が好ましい。ＤＭＳＯ−三酸化硫黄ピリジン錯体を用いて酸化する反応は、化合物（ＩＶ）をジメチルスルホキシドまたはジメチルスルホキシドと通常使用される有機溶媒（例えばテトラヒドロフラン、ジクロロメタン、酢酸エチルなど）の混合溶媒に溶解し、適当な塩基（例えばジイソプロピルエチルアミンやトリエチルアミンなど）の存在下、三酸化硫黄ピリジン錯体を加えることで行うことができる。反応温度は特に限定されないが、通常冷却下、室温または加温下であり、好ましくは氷冷下から室温の範囲である。
【００１１】
次に、化合物（Ｖ）のアルデヒドをエチレングリコールで環状アセタールを形成して保護する［一般式（ＶＩ）で表される化合物、以下、化合物（ＶＩ）と記載することもある。］。この反応は、化合物（Ｖ）を通常使用される有機溶媒に溶解し、エチレングリコールを加え、ピリジニウムｐ−トルエンスルホナートの存在下で攪拌して行うことができる。通常使用される有機溶媒としては、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、メタノール、エタノール、ベンゼン、トルエン、酢酸エチルなどのような反応に悪影響をおよぼさない慣用の溶媒またはそれらの混合溶媒が挙げらるが、好ましくはトルエンである。エチレングリコールの使用量は化合物（Ｖ）に対して約１〜約２０倍当量で、好ましくは約３〜約６倍当量である。ピリジニウムｐ−トルエンスルホナートの代わりに通常酸触媒として用いられるｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、酢酸、ギ酸などの有機酸や塩酸、臭化水素酸、硫酸などの無機酸を用いても同様の反応を行うことができる。反応温度は約２０〜約２００℃であるが、好ましくは約５０〜約１５０℃である。また、エチレングリコールの代わりにエタノールを用いて同様の反応を行い、ジエチルアセタールを形成することにより化合物（Ｖ）のアルデヒドを保護することもできる。
【００１２】
次に化合物（ＶＩ）の保護基であるＡを、アミノ保護基の脱離反応に用いられる慣用的方法から適宜選択して脱離することにより、一般式（ＶＩＩ）で表される化合物［以下、化合物（ＶＩＩ）と記載することもある。］を得ることができる。例えばＡがＺ基の場合は、化合物（ＶＩ）を通常使用される溶媒（例えばメタノール、エタノール、テトラヒドロフラン、酢酸などのような反応に悪影響をおよぼさない慣用の溶媒またはそれらの混合溶媒）に溶解し、慣用の金属触媒（例えばパラジウム炭素、ラネーニッケルなど）の存在下で接触還元によりＡを脱離することができる。水素圧は約１〜約５０気圧であるが、好ましくは約１〜約５気圧である。反応温度は、好ましくない副反応が起こらない範囲であれば特に限定されず、通常冷却下、室温または加温下で行われる。ＡがＢｏｃ基の場合は、化合物（ＶＩ）を通常使用される有機溶媒（例えばテトラヒドロフラン、ジクロロメタン、酢酸エチルなどのような反応に悪影響をおよぼさない慣用の溶媒またはそれらの混合溶媒）に溶解し、酸の存在下、攪拌することによりＡを脱離することができる。酸としては塩酸、トリフルオロ酢酸、ｐ−トルエンスルホン酸などが挙げられる。また、市販されている塩酸の酢酸エチル溶液もしくはジオキサン溶液などを用いて脱離することもできる。反応温度は特に限定されないが、通常冷却下、室温または加温下であり、好ましくは氷冷下から室温の範囲である。
【００１３】
次に、化合物（ＶＩＩ）と一般式（ＶＩＩＩ）で表される化合物［以下、化合物（ＶＩＩＩ）と記載することもある。］またはその塩あるいはそれらの反応性誘導体のアミド化反応を行うことにより、一般式（ＩＸ）で表される化合物［以下、化合物（ＩＸ）と記載することもある。］を得ることができる。このアミド化反応は脱水縮合剤を用いるような通常のペプチド合成の方法などによって行われる。化合物（ＶＩＩＩ）の好適な反応性誘導体としては、酸ハロゲン化物（例えば酸塩化物など）、酸無水物（例えばジアルキルリン酸、フェニルリン酸、ジフェニルリン酸、ジベンジルリン酸、ハロゲン化リン酸などの置換されたリン酸：ジアルキル亜リン酸：亜硫酸：チオ硫酸：硫酸：例えばメタンスルホン酸などのスルホン酸：例えば酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸、ピバリン酸、ペンタン酸、イソペンタン酸、トリクロロ酢酸などの脂肪族カルボン酸：例えば安息香酸などの芳香族カルボン酸のような酸との混合酸無水物；対称酸無水物など）、活性化アミド（例えばイミダゾール、４−置換イミダゾール、ジメチルピラゾール、トリアゾール、テトラゾールとの活性化アミドなど）、活性化エステル（例えばＮ，Ｎ−ジメチルヒドロキシルアミン、１−ヒドロキシ−２−（１Ｈ）−ピリドン、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールなどのＮ−ヒドロキシ化合物とのエステルなど）などが挙げられるが、好ましくは１−ヒドロキシベンゾトリアゾールとのエステル体または酸塩化物である。脱水縮合剤としては、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩またはジシクロヘキシルカルボジイミドなどが好適に使用される。反応に使用される有機溶媒としてはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、メタノール、エタノール、ベンゼン、トルエン、酢酸エチルまたはこれらの混合溶媒などが挙げらるが、好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドである。反応温度は、好ましくない副反応が起こらない範囲であれば特に限定されず、通常冷却下、室温または加温下であり、好ましくは氷冷下から室温の範囲である。
【００１４】
さらに、化合物（ＩＸ）を脱アセタール化反応に付することにより、一般式（Ｉ）で表される化合物を得ることができる。この脱アセタール化反応は、化合物（ＩＸ）を水または通常使用される有機溶媒と水の混合溶媒に溶解し、酸を加え、攪拌することにより行うことができる。反応に使用される有機溶媒としてはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、メタノール、エタノール、ベンゼン、トルエン、酢酸エチルまたはこれらの混合溶媒などが挙げらるが、好ましくはテトラヒドロフランである。用いられる酸としてはｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、酢酸、ギ酸などの有機酸や塩酸、臭化水素酸、硫酸などの無機酸が挙げられるが、特に好ましくは塩酸である。好適な塩酸濃度は約１〜約６Ｍである。反応温度は特に限定されず、冷却下、室温または加温下で反応は行われる。反応時間は、約１〜約４８時間程度である。このようにして得られるピリジン誘導体は公知の分離精製手段、例えば濃縮、減圧濃縮、溶媒抽出、晶出、再結晶、転溶、クロマトグラフィーなどにより単離精製することができる。
【００１５】
本発明の式（Ｉ）で表される化合物およびその塩（以下、本発明化合物と記載する場合がある。）は文献未載の新規化合物であり、後記試験例に示すように優れたカルパイン阻害活性を有するため、それらを有効成分として、必要により後記の担体などを組み合わせることにより、医薬として有用である。
【００１６】
本発明化合物を含有する医薬は、哺乳動物（例えばヒト、ラット、マウス、ウサギ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコなど）のカルパインが関与する疾患、例えば虚血性疾患、免疫疾患、アルツハイマー病、骨粗鬆症、脳虚血疾患、白内障、緑内障、網膜（脈絡膜）疾患、光凝固による眼球後眼部合併症（例えば黄斑部浮腫、網膜剥離など）などの予防または治療薬として、あるいは血管新生などの抑制または治療薬として有用である。また、本発明化合物は高い水溶性を有しているので、従来困難であった水性液剤としての使用が可能である。さらに、本発明化合物は組織移行性に優れ、かつ毒性も非常に低く安全性にも優れている。
【００１７】
本発明化合物を含有する医薬は全身的または局所的に投与される。全身的には経口投与の他、静脈内注射、皮下注射、筋肉内注射など非経口的にも投与される。局所的には、皮膚、粘膜、鼻内、眼内などに投与される。
【００１８】
本発明化合物を含有する医薬の製剤形態としては、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、坐剤などの固形剤、およびシロップ剤、注射剤、点眼剤、点鼻剤などの液剤などが挙げられる。顆粒および錠剤として製造する場合には、例えば賦形剤（乳糖、白糖、ブドウ糖、デンプン、結晶セルロースなど）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウムなど）、崩壊剤（デンプン、カルメロースナトリウム、炭酸カルシウムなど）、結合剤（デンプン糊液、ヒドロキシプロピルセルロース液、カルメロース液、アラビアゴム液、ゼラチン液、アルギン酸ナトリウム液など）などを用いることにより任意の剤形を製造することができる。また、顆粒剤および錠剤には、適当なコーティング剤（ゼラチン、白糖、アラビアゴム、カルナバロウなど）、腸溶性コーティング剤（例えば酢酸フタル酸セルロース、メタアクリル酸コポリマー、ヒドロキシプロピルセルロースフタレート、カルボキシメチルエチルセルロースなど）などで剤皮を施してもよい。
【００１９】
カプセル剤として製造する場合には、適当な賦形剤、例えば流動性と滑沢性を向上させるためのステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、軽質無水ケイ酸など、また加圧流動性のための結晶セルロースや乳糖などの他、上記崩壊剤などを適宜添加したものを均等に混和または粒状もしくは粒状としたものに適当なコーティング剤で剤皮を施したものを充填するか、適当なカプセル基剤（ゼラチンなど）にグリセリンまたはソルビトールなど加えて塑性を増したカプセル基剤で被包成形することもできる。これらカプセル剤には必要に応じて、着色剤、保存剤［二酸化硫黄、パラベン類（パラオキシ安息香酸メチル、エチル、プロピルエステル）］などを加えることができる。カプセル剤は通常のカプセルの他、腸溶性コーティングカプセル、胃内抵抗性カプセル、放出制御カプセルとすることもできる。腸溶性カプセルとする場合、腸溶性コーティング剤でコーティングした化合物または化合物に上記の適当な賦形剤を添加したものを通常のカプセルに充填または、カプセル自身を腸溶性コーティング剤でコーティング、もしくは腸溶性高分子を基剤として成形することができる。
【００２０】
坐剤として製造する場合には坐剤基剤（例えばカカオ脂、マクロゴールなど）を適宜選択して使用することができる。
【００２１】
シロップ剤として製造する場合、例えば安定剤（エデト酸ナトリウムなど）、懸濁化剤（アラビアゴム、カルメロースなど）、矯味剤（単シロップ、ブドウ糖など）、芳香剤などを適宜選択して使用することができる。
【００２２】
注射剤、点眼剤または点鼻剤として製造する場合、医薬上許容される添加物、例えば等張化剤（塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、マンニトール、ソルビトール、ホウ酸、ホウ砂、ブドウ糖、プロピレングリコールなど）、緩衝剤（リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、炭酸緩衝液、クエン酸緩衝液、トリス緩衝液など）、保存剤（パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、塩化ベンザルコニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、ホウ酸、ホウ砂など）、増粘剤（ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコールなど）、安定化剤（亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、アスコルビン酸、ジブチルヒドロキシトルエンなど）、ｐＨ調整剤（塩酸、水酸化ナトリウム、リン酸、酢酸など）などを適宜添加した溶液に溶解または分散することによって製造することができる。
【００２３】
なお、本発明化合物は、医薬品として望まれる高い水溶性を有するので、水溶性液剤、特に上記したシロップ剤、注射剤、点眼剤および点鼻剤などの製剤として有利に使用できる。
【００２４】
上記シロップ剤、注射剤、点眼剤および点鼻剤における添加剤の添加量は、添加する添加剤の種類、用途などによって異なるが、添加剤の目的を達成し得る濃度を添加すればよく、等張化剤は、通常、浸透圧が約２２９〜約３４３ｍＯｓｍとなるよう、約０．５〜約５．０ｗ／ｖ％に添加する。また、緩衝剤は約０．０１〜約２．０ｗ／ｖ％程度、増粘剤は約０．０１〜約１．０ｗ／ｖ％程度、安定化剤は約０．００１〜約１．０ｗ／ｖ％程度添加する。ｐＨ調整剤は、適宜添加し、通常ｐＨ約３〜約９、好ましくは約４〜約８に調整される。
【００２５】
本発明化合物の投与量は対象となる疾患、症状、投与対象、投与方法などにより異なるが、例えば内服剤として成人に投与する場合は、１日数回、１回量約１〜約２００ｍｇ、好ましくは約１０〜約１００ｍｇである。また、注射剤として成人に投与する場合は、１日１回、約０．１〜約５０ｍｇ、好ましくは約１〜約３０ｍｇである。また、眼に局所的に使用する場合には、通常約０．００１〜約１．０ｗ／ｖ％、好ましくは約０．０１〜約０．５ｗ／ｖ％に調整した点眼液を、１回約２０〜約５０μＬ、１日数回点眼するのがよい。
【００２６】
【発明の実施の形態】
本発明を以下の参考例、実施例、試験例および製剤例に従いさらに詳細に説明するが、本発明はこれらにより何ら限定されるものではない。なお、実施例で述べる化合物の分析値において、融点はＹａｎａｃｏ製ＭＰ−５００Ｖ型（補正なし）を用いて測定した。核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）はＶａｒｉａｎ製Ｇｅｍｉｎｉ−２０００型を用いて測定した。比旋光度（［α］Ｄ）はＨｏｒｉｂａ製ＳＥＰＡ−２０００型を用いて測定した。元素分析はＥｌｅｍｅｎｔａｒ製Ｖａｒｉｏ ＥＬ型を用いて測定した。
【００２７】
【実施例】
参考例１ （２Ｓ）−２−（（ベンジルオキシ）カルボニルアミノ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−（ヒドロキシメチル）−３−メチルブチル）−３−メチルブタナミド（参考化合物１）
ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−バリンＮ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル（３０ｇ，８６ｍｍｏｌ）の酢酸エチル溶液（４００ｍＬ）にＬ−ロイシノール（１２ｇ，１００ｍｍｏｌ）を加えた。この反応液を室温で１８時間攪拌した（沈殿が観察された）。この沈殿を酢酸エチルの追加により溶解し、この溶液を１Ｍ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、減圧濃縮した。残渣をヘキサンで洗浄し、参考化合物１（１９ｇ，６３％） を無色結晶として得た。
ｍｐ ６５．１−６５．９ ℃． １Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ： ０．８０−０．８７ （ｍ， １２Ｈ）， １．２６−１．３７ （ｍ， ２Ｈ）， １．５９ （ｍ， １Ｈ）， １．９２ （ｍ， １Ｈ）， ３．１８ （ｍ， １Ｈ）， ３．３０ （ｍ， １Ｈ）， ３．７７−３．８３ （ｍ， ２Ｈ）， ４．６１ （ｍ， １Ｈ）， ４．９９−５．０８ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２１ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．７Ｈｚ）， ７．３１−７．３６ （ｍ， ５Ｈ）， ７．５１ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ）．
【００２８】
参考例２ （２Ｓ）−２−（（ベンジルオキシ）カルボニルアミノ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−ホルミル−３−メチルブチル）−３−メチルブタナミド（参考化合物２）
参考化合物１（１９ｇ，５４ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド（１５０ｍＬ）とジクロロメタン（７０ｍＬ）に溶解し、５℃に冷却した。そこへ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２８ｇ，２２０ｍｍｏｌ）と三酸化硫黄ピリジン錯体（３５ｇ，２２０ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド懸濁液（７０ｍＬ）を加えた。この反応液を氷冷下で３０分間攪拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し、この溶液を１Ｍ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、減圧濃縮した。得られた白色固体を酢酸エチル／ヘキサン混液から結晶化し、参考化合物２（１２ｇ，６３％）を無色結晶として得た。
ｍｐ １２３．１−１２４．６ ℃． １Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ： ０．８４−０．９１ （ｍ， １２Ｈ）， １．３７−１．６５ （ｍ， ３Ｈ）， ２．００ （ｍ， １Ｈ）， ３．９０ （ｍ， １Ｈ）， ４．１２ （ｍ， １Ｈ）， ５．０４ （ｓ， ２Ｈ）， ７．３１−７．３７ （ｍ， ６Ｈ）， ８．３４ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ）， ９．３９ （ｓ， １Ｈ）．
【００２９】
参考例３ （２Ｓ）−２−（（ベンジルオキシ）カルボニルアミノ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−（２，５−ジオキソラニル）−３−メチルブチル）−３−メチルブタナミド（参考化合物３）
参考化合物２（１１ｇ，３１ｍｍｏｌ）のトルエン溶液（３００ｍＬ）にエチレングリコール（９．８ｇ，１６０ｍｍｏｌ）とピリジニウムｐ−トルエンスルホナート（１．６ｇ，６．３ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を８０℃で４時間攪拌した。この反応液を１Ｍ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、減圧濃縮した。残渣をヘキサン混液から結晶化し、参考化合物３（１２ｇ，９７％）を無色結晶として得た。
ｍｐ １０５．９−１０６．６ ℃． １Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ： ０．７９−０．８７ （ｍ， １２Ｈ）， １．２１ （ｍ， １Ｈ）， １．３８ （ｍ， １Ｈ）， １．５７ （ｍ， １Ｈ）， １．９３ （ｍ， １Ｈ）， ３．７３−３．９ （ｍ， ５Ｈ），４．０１ （ｍ， １Ｈ）， ４．７１ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ）， ４．９８−５．０９ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１８ （ｄ， １Ｈ，Ｊ ＝ ９．０）， ７．３１−７．３５ （ｍ， ５Ｈ）， ７．５４ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ９．３ Ｈｚ）．
【００３０】
参考例４ （２Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（１Ｓ）−１−（２，５−ジオキソラニル）−３−メチルブチル）−３−メチルブタナミド（参考化合物４）
参考化合物３（１２ｇ，３１ｍｍｏｌ）をエタノール（２５０ｍＬ）に溶解し、常圧室温で１０％パラジウム炭素 （２．０ｇ）の存在化、水素化反応を行った。７２時間攪拌後、パラジウム炭素をろ去し、ろ液を減圧濃縮し、参考化合物４（７．５ｇ，９５％）を無色オイルとして得た。
１Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ： ０．７６ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ）， ０．８２ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．８７ （ｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， １．２３ （ｍ， １Ｈ）， １．３７ （ｍ， １Ｈ）， １．５５ （ｍ， １Ｈ）， １．６８ （ｓ， ２Ｈ）， １．９ （ｍ， １Ｈ）， ２．９６ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ５．１ Ｈｚ）， ３．７４−３．９１ （ｍ， ４Ｈ）， ４．０１ （ｍ， １Ｈ）， ４．７２ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ３．３ Ｈｚ）， ７．６２ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ９．６ Ｈｚ）．
【００３１】
参考例５ （２Ｓ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−（２，５−ジオキソラニル）−３−メチルブチル）−３−メチル−２−（４−ピリジルカルボニルアミノ）ブタナミド（参考化合物５）
参考化合物４（１．６ｇ，６．２ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（３０ｍＬ）にイソニコチノイルクロリド塩酸塩（１．４ｇ，８．０ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（１．３ｇ，１２ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を室温で２時間攪拌した。減圧濃縮後、残渣を酢酸エチルに溶解し、この溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、減圧濃縮し、参考化合物５（２．３ｇ，９８％）を微黄色オイルとして得た。
１Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ： ０．７９ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．８６ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．９２ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ）， ０．９２ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， １．２４ （ｍ， １Ｈ）， １．３９ （ｍ， １Ｈ）， １．５９ （ｍ， １Ｈ）， ２．１０ （ｍ， １Ｈ）， ３．７３−３．８６ （ｍ， ４Ｈ）， ４．０２ （ｍ， １Ｈ）， ４．３２ （ｔ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ）， ４．７２ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ３．６ Ｈｚ）， ７．７２−７．７７ （ｍ， ３Ｈ）， ８．５３ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ）， ８．７１−８．７４ （ｍ， ２Ｈ）．
【００３２】
参考例６ （２Ｓ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−（２，５−ジオキソラニル）−３−メチルブチル）−３−メチル−２−（（２−ピリジルメチル）カルボニルアミノ）ブタナミド（参考化合物６）
参考化合物４（０．８０ｇ，３．１ｍｍｏｌ）、２−ピリジル酢酸塩酸塩（０．５９ｇ，３．４ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．４６ｇ，３．４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．３４ｇ，３．４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）に溶解した。そこへ、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．６５ｇ，３．４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（２０ｍＬ）を氷冷下で加えた。この溶液を室温で１８時間攪拌した後、減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルで希釈し、この溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、減圧濃縮した。残渣をヘキサンから結晶化を行い、参考化合物６（０．９０ｇ，７７％）を無色結晶として得た。
ｍｐ １０８．３−１０９．２ ℃． １Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ： ０．７８−０．８６ （ｍ， １２Ｈ）， １．２２ （ｍ， １Ｈ）， １．３７ （ｍ， １Ｈ）， １．５３ （ｍ， １Ｈ）， １．９６ （ｍ， １Ｈ）， ３．７１ （ｓ， ２Ｈ）， ３．７５−３．８５ （ｍ， ４Ｈ）， ４．０１ （ｍ， １Ｈ）， ４．２２ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．８， ６．５ Ｈｚ）， ４．７０ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ３．３ Ｈｚ）， ７．２５ （ｍ， １Ｈ）， ７．３２ （ｍ， １Ｈ）， ７．６６−７．７５ （ｍ， ２Ｈ）， ８．１１ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ）， ８．４８ （ｍ， １Ｈ）．
【００３３】
参考例７ （２Ｓ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−（２，５−ジオキソラニル）−３−メチルブチル）−３−メチル−２−（（３−ピリジルメチル）カルボニルアミノ）ブタナミド（参考化合物７）
参考化合物４（０．８０ｇ，３．１ｍｍｏｌ）、３−ピリジル酢酸塩酸塩（０．５９ｇ，３．４ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．４６ｇ，３．４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．３４ｇ，３．４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）に溶解した。そこへ、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．６５ｇ，３．４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（２０ｍＬ）を氷冷下で加えた。この溶液を室温で１８時間攪拌した後、減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルで希釈し、この溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、減圧濃縮した。残渣をヘキサンから結晶化を行い、参考化合物７（０．９２ｇ，７９％）を無色結晶として得た。
ｍｐ ８９．７−９０．３ ℃． １Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ： ０．７７−０．８４ （ｍ， １２Ｈ）， １．２１ （ｍ， １Ｈ）， １．３５ （ｍ， １Ｈ）， １．５１ （ｍ， １Ｈ）， １．９２ （ｍ， １Ｈ）， ３．５１ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １４．１ Ｈｚ）， ３．５８ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １４．１ Ｈｚ）， ３．７３−３．８７ （ｍ， ４Ｈ）， ３．９９ （ｍ， １Ｈ）， ４．１８（ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．９， ７．２ Ｈｚ）， ４．６９ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ３．６ Ｈｚ）， ７．３１ （ｍ， １Ｈ）， ７．６５−７．７１ （ｍ， ２Ｈ）， ８．１９ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．９ Ｈｚ）， ８．４１−８．４６ （ｍ， ２Ｈ）．
【００３４】
参考例８ （２Ｓ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−（２，５−ジオキソラニル）−３−メチルブチル）−３−メチル−２−（（４−ピリジルメチル）カルボニルアミノ）ブタナミド（参考化合物８）
参考化合物４（０．８０ｇ，３．１ｍｍｏｌ）、４−ピリジル酢酸塩酸塩（０．５９ｇ，３．４ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．４６ｇ，３．４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．３４ｇ，３．４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）に溶解した。そこへ、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．６５ｇ，３．４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（２０ｍＬ）を氷冷下で加えた。この溶液を室温で１８時間攪拌した後、減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルで希釈し、この溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、減圧濃縮した。残渣をヘキサンから結晶化を行い、参考化合物８（０．９０ｇ，７７％）を無色結晶として得た。
ｍｐ １５９．１−１５９．８ ℃． １Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ： ０．７７−０．８４ （ｍ， １２Ｈ）， １．２０ （ｍ， １Ｈ）， １．３５ （ｍ， １Ｈ）， １．５０ （ｍ， １Ｈ）， １．９０ （ｍ， １Ｈ）， ３．５３ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １３．８ Ｈｚ）， ３．５９ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １３．８ Ｈｚ）， ３．７３−３．８７ （ｍ， ４Ｈ）， ４．００ （ｍ， １Ｈ）， ４．１８ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ９．２， ７．２ Ｈｚ）， ４．６９ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ３．６ Ｈｚ）， ７．２６−７．２８ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７１ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ９．３ Ｈｚ）， ８．２１ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ９．２ Ｈｚ）， ８．４５−８．４７ （ｍ， ２Ｈ）．
【００３５】
参考例９ （２Ｓ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−（２，５−ジオキソラニル）−３−メチルブチル）−３−メチル−２−（（３−ピリジルエチル）カルボニルアミノ）ブタナミド（参考化合物９）
参考化合物４（０．８０ｇ，３．１ｍｍｏｌ）、３−ピリジルプロピオン酸塩酸塩（０．５９ｇ，３．４ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．４６ｇ，３．４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．３４ｇ，３．４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）に溶解した。そこへ、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．６５ｇ，３．４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（２０ｍＬ）を氷冷下で加えた。この溶液を室温で１８時間攪拌した後、減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルで希釈し、この溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水後、減圧濃縮した。残渣をヘキサンから結晶化を行い、参考化合物９（０．９４ｇ，７８％）を無色結晶として得た。
ｍｐ ８３．８−８４．２ ℃． １Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ： ０．７４ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ）， ０．７６ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．８０ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．８６ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， １．２２ （ｍ， １Ｈ）， １．３５ （ｍ， １Ｈ）， １．５４ （ｍ， １Ｈ）， １．８６ （ｍ， １Ｈ）， ２．４１−２．６０ （ｍ， ２Ｈ）， ２．８２ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ）， ３．７３−３．８４ （ｍ， ４Ｈ）， ３．９８ （ｍ， １Ｈ）， ４．１８ （ｍ， １Ｈ）， ４．６９ （ｍ， １Ｈ）， ７．２６ （ｍ， １Ｈ）， ７．６１−７．６５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．８２ （ｄ， １Ｈ，Ｊ ＝ ９．０ Ｈｚ）， ８．３８ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ）， ８．４３ （ｍ， １Ｈ）．
【００３６】
実施例１ （２Ｓ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−ホルミル−３−メチルブチル）−３−メチル−２−（４−ピリジルカルボニルアミノ）ブタナミド（化合物１）
【化４】
ｍｐ １０１．７−１０３．１ ℃． １Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ： ０．９３ （ｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ）， １．０４ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， １．０５ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， １．４５ （ｍ， １Ｈ）， １．６６−１．７６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．２３ （ｍ， １Ｈ）， ４．５３−４．６１ （ｍ， ２Ｈ）， ６．５３ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ）， ７．１４ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ）， ７．６５−７．６７ （ｍ， ２Ｈ）， ８．７５−８．７７ （ｍ， ２Ｈ）， ９．５９ （ｓ， １Ｈ）． ［α］Ｄ ２５ ＋１８．２°（Ｃ ＝ ０．２０４）．
【００３７】
実施例２ （２Ｓ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−ホルミル−３−メチルブチル）−３−メチル−２−（（２−ピリジルメチル）カルボニルアミノ）ブタナミド（化合物２）
【化５】
ｍｐ １３１．５−１３２．０ ℃． １Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ： ０．８４ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．８６ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ）， ０．８８ （ｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， １．４１ （ｍ， １Ｈ）， １．５０−１．６２ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０２ （ｍ， １Ｈ）， ３．７２ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１２ （ｍ， １Ｈ）， ４．２４ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．７， ６．８ Ｈｚ）， ７．２５ （ｍ， １Ｈ）， ７．３３ （ｍ， １Ｈ）， ７．７２ （ｍ， １Ｈ）， ８．２２ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ）， ８．４３ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ）， ８．４６ （ｍ， １Ｈ）， ９．３９ （ｓ， １Ｈ）． ［α］Ｄ ２５ −５３．７°（Ｃ ＝ ０．２０３）．
【００３８】
実施例３ （２Ｓ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−ホルミル−３−メチルブチル）−３−メチル−２−（（３−ピリジルメチル）カルボニルアミノ）ブタナミド（化合物３）
【化６】
ｍｐ １０８．９−１１０．７ ℃． １Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ： ０．８２−０．８８ （ｍ， １２Ｈ）， １．４０ （ｍ， １Ｈ）， １．４９−１．６１ （ｍ， ２Ｈ）， １．９９ （ｍ， １Ｈ）， ３．５１ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １４．１ Ｈｚ），３．６０ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １４．１ Ｈｚ）， ４．１２ （ｍ， １Ｈ）， ４．２１ （ｍ， １Ｈ）， ７．３２ （ｍ， １Ｈ）， ７．６７ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ）， ８．２８ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ９．０ Ｈｚ）， ８．４１−８．４７ （ｍ， ３Ｈ）， ９．３９ （ｓ， １Ｈ）． ［α］Ｄ ２５ −２４．１°（Ｃ ＝ ０．２０３）．
【００３９】
実施例４ （２Ｓ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−ホルミル−３−メチルブチル）−３−メチル−２−（（４−ピリジルメチル）カルボニルアミノ）ブタナミド（化合物４）
【化７】
ｍｐ ９９．１−１０１．４ ℃． １Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ： ０．９０ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ）， ０．９１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．９３ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ）， ０．９５ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， １．４６ （ｍ， １Ｈ）， １．５５−１．６８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．１０ （ｍ， １Ｈ）， ３．６１ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２７ （ｍ， １Ｈ）， ４．３６ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ９．０， ７．２ Ｈｚ）， ７．２８−７．２９ （ｍ， ２Ｈ）， ７．８８ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ９．３ Ｈｚ）， ７．９７ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ）， ８．４９−８．５０ （ｍ， ２Ｈ）， ９．４８ （ｓ， １Ｈ）． ［α］Ｄ ２５ −４０．７°（Ｃ ＝ ０．２０４）．
【００４０】
実施例５ （２Ｓ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−ホルミル−３−メチルブチル）−３−メチル−２−（（３−ピリジルエチル）カルボニルアミノ）ブタナミド（化合物５）
【化８】
ｍｐ １０５．０−１０６．１ ℃． １Ｈ−ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ： ０．７８ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ）， ０．８１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ）， ０．８５ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．８９ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ）， １．４１ （ｍ， １Ｈ）， １．５０−１．６８ （ｍ， ２Ｈ）， １．９２ （ｍ， １Ｈ）， ２．４２−２．６１ （ｍ， ２Ｈ）， ２．８３ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ）， ４．０８ （ｍ， １Ｈ）， ４．２０ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．７， ７．２ Ｈｚ）， ７．２７ （ｍ， １Ｈ）， ７．６２ （ｍ， １Ｈ）， ７．９３ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ９．０ Ｈｚ）， ８．３７−８．４３ （ｍ，
３Ｈ）， ９．３８ （ｓ， １Ｈ）．
【００４１】
実施例６ （２Ｓ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−ホルミル−３−メチルブチル）−３−メチル−２−（（３−ピリジルメチル）カルボニルアミノ）ブタナミド塩酸塩（化合物６）
【化９】
ｍｐ ７９．８−８０．１ ℃． Ａｎａｌ． Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ１８Ｈ２７Ｎ３Ｏ３・ＨＣｌ・Ｈ２Ｏ ： Ｃ， ５５．７３ ； Ｈ， ７．８０ ； Ｎ， １０．８３． Ｆｏｕｎｄ ： Ｃ， ５５．５８ ； Ｈ， ７．６６ ； Ｎ， １０．６３．
【００４２】
実施例７ （２Ｓ）−Ｎ−（（１Ｓ）−１−ホルミル−３−メチルブチル）−３−メチル−２−（（３−ピリジルエチル）カルボニルアミノ）ブタナミド塩酸塩（化合物７）
【化１０】
ｍｐ ７９．６−８０．２ ℃． Ａｎａｌ． Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ１９Ｈ２９Ｎ３Ｏ３・ＨＣｌ・Ｈ２Ｏ ： Ｃ， ５６．７８ ； Ｈ， ８．０２ ； Ｎ， １０．４５． Ｆｏｕｎｄ ： Ｃ， ５６．９９ ； Ｈ， ８．２４ ； Ｎ， １０．２４．
【００４３】
試験例１ 溶解性の確認
化合物６および化合物７の結晶（１０ｍｇ）に水（１００μＬ）をそれぞれ加えた。その結果、両方の結晶とも、水に全溶した。このように、化合物６および化合物７は高い水溶性を有していることがわかった。
【００４４】
試験例２ μ−カルパインおよびｍ−カルパイン阻害活性の測定
μ−およびｍ−カルパインの阻害活性は文献［Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ． ｖｏｌ．２０８，３８７−３９２（１９９３）］に記載された方法に準じて測定した。すなわち、種々の濃度の被験薬を含むジメチルスルホキシド溶液（２．５μＬ）に、０．５ｍｇ／ｍＬのカゼイン、５０ｍＭのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）、２０ｍＭのジチオスレイトールおよび１．０ｎｍｏｌのμ−カルパイン（コスモバイオ製）またはｍ−カルパイン（コスモバイオ製）を含む反応液（２００μＬ）を９６ウェルプレート上で加えた。そこへ、２０ｍＭの塩化カルシウム水溶液（５０μＬ）を加え、３０℃で６０分間反応させた。この反応液（１００μＬ）を別の９６ウェルプレートに移し、精製水（５０μＬ）と５０％のＰｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｄｙｅ Ｒｅａｇｅｎｔ（ＢＩＯ−ＲＡＤ Ｃａｔａｌｏｇ ５００−０００６）水溶液（１００μＬ）を加えて室温で１５分間放置した後、５９５ｎＭで吸光度を測定した。被験薬を含まず同様に処理したものをコントロール値、２０ｍＭ塩化カルシウム水溶液の代わりに１ｍＭ ＥＤＴＡ水溶液（５０μＬ）を加え同様に処理したものをブランク値とし、５０％阻害に必要な量（ＩＣ５０）を求めた。
阻害率＝｛１−（測定値−ブランク値）／（コントロール値−ブランク値）｝×１００
【００４５】
（試験結果）
その結果を表１に示した。本発明化合物には、優れたカルパイン阻害活性が認められた。
【００４６】
【表１】
製剤例１ 錠剤
化合物１ ５ｇ
デンプン １２ｇ
乳糖 ２７．２ｇ
ステアリン酸マグネシウム ０．４ｇ
化合物１、乳糖およびデンプンを加えてよく混和し、湿性錠剤調整法に準じて打錠用顆粒とする。ステアリン酸マグネシウムを加えて打錠し、錠剤４００錠とする。錠剤は、必要に応じて、腸溶性コーティング剤（メタアクリル酸コポリマー）でコーティングする。
【００４８】
製剤例２ 点眼剤
化合物６ １００ｍｇ
ホウ酸 ７００ｍｇ
ホウ砂 適量
塩化ナトリウム ５００ｍｇ
エデト酸ナトリウム ０．０５ｍｇ
塩化ベンザルコニウム ０．０００５ｍｇ
滅菌精製水 全量 １００ｍＬ
以上の成分を常法により無菌的に混和溶解して点眼剤とする。
【００４９】
製剤例３ 注射剤
化合物７ １００ｍｇ
塩化ナトリウム ９００ｍｇ
１Ｎ水酸化ナトリウム 適量
注射用蒸留水 全量 １００ｍＬ
以上の成分を常法により無菌的に混和溶解して注射剤とする。
【発明の効果】
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物は、優れたカルパイン阻害活性を有しているため、カルパインが関与する種々の疾患、例えば虚血性疾患、免疫疾患、アルツハイマー病、骨粗鬆症、脳組織障害による疾患、白内障、緑内障、網脈絡膜疾患、光凝固による眼球後眼部合併症、血管新生を伴う疾患などの予防および治療薬として有用である。また、本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物は、高い水溶性を有しているため、特に水性液剤に有利に使用される。
Claims (4)
- 下記一般式
- 請求項１記載の化合物またはその医薬上許容される塩を含有する医薬。
- カルパイン阻害剤である請求項２記載の医薬。
- カルパインが関与する疾患の予防または治療剤である請求項２記載の医薬。
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|---|---|---|---|
| JP2002200403A JP2004043330A (ja) | 2002-07-09 | 2002-07-09 | 新規ピリジン誘導体およびその用途 |
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| JP2002200403A JP2004043330A (ja) | 2002-07-09 | 2002-07-09 | 新規ピリジン誘導体およびその用途 |
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ID=31707287
Family Applications (1)
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Cited By (1)
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|---|---|---|---|---|
| WO2009147221A1 (en) * | 2008-06-04 | 2009-12-10 | Biovitrum Ab (Publ) | Small molecule leptin receptor modulators |
-
2002
- 2002-07-09 JP JP2002200403A patent/JP2004043330A/ja not_active Withdrawn
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| WO2009147221A1 (en) * | 2008-06-04 | 2009-12-10 | Biovitrum Ab (Publ) | Small molecule leptin receptor modulators |
| CN102159545A (zh) * | 2008-06-04 | 2011-08-17 | 阿斯利康(瑞典)有限公司 | 小分子瘦蛋白受体调节剂 |
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