JP2003533996A - ヒトレセプタータンパク質、関連試薬および方法 - Google Patents

ヒトレセプタータンパク質、関連試薬および方法

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JP2003533996A JP2001586962A JP2001586962A JP2003533996A JP 2003533996 A JP2003533996 A JP 2003533996A JP 2001586962 A JP2001586962 A JP 2001586962A JP 2001586962 A JP2001586962 A JP 2001586962A JP 2003533996 A JP2003533996 A JP 2003533996A
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amino acids
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ジェラード ティー． ハーディマン，
フェルナンド エル． ロック，
ジェイ． フェルナンド バザン，
ロバート エイ． カステライン，
スティーブン ダブリュー． ケイ． ホ，
ヨン−ジュン リウ，
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Abstract

(57)【要約】 本発明は、９個の新規な関連する哺乳動物レセプター、例えば、ＤＴＬＲ２、ＤＴＬＲ３、ＤＴＬＲ４、ＤＴＬＲ５、ＤＴＬＲ７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ９、およびＤＴＬＲ１０と名付けられた、霊長類、ヒト、ＤＮＡＸ Ｔｏｌｌレセプター様分子構造、およびそれらの生物学的活性に関する。本発明により、この哺乳動物（例えば、ヒト）レセプターをコードする核酸、精製されたレセプターおよびこれらのフラグメントが提供される。抗体（ポリクローナルおよびモノクローナルの両方）もまた、提供される。また、診断的利用および治療的利用の両方のために組成物を使用する方法を記載する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （発明の分野） 本発明は、形態形成または免疫系機能を含む、哺乳動物の生理機能に影響を与
える組成物および方法に関する。詳細には、本発明は、発生および／または免疫
系を調節する核酸、タンパク質、および抗体を提供する。これらの物質の診断お
よび治療での使用もまた、開示される。
【０００２】 （発明の背景） 組換えＤＮＡ技術は一般に、宿主への導入などを通じて、ドナー供給源からそ
の後のための処理のベクターへと遺伝情報を組み込み、これによって移入された
遺伝情報は、新しい環境においてコピーされ、そして／または発現される技術を
いう。通常、遺伝情報は、所望のタンパク質産物をコードするメッセンジャーＲ
ＮＡ（ｍＲＮＡ）から誘導された相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）の形態で存在する。
キャリアは頻繁に、宿主での後の複製のためにｃＤＮＡを組込み、そしていくつ
かの場合には実際にｃＤＮＡの発現を制御し、それにより宿主においてコードさ
れる産物の合成を指向する能力を有するプラスミドである。
【０００３】 かねてから、哺乳動物免疫応答は、一連の複雑な細胞性の相互作用（「免疫ネ
ットワーク」と呼ばれる）に基づくことが知られている。近年の研究は、このネ
ットワーク内部の仕組みについて、新たな洞察を提供した。実際に、免疫応答の
多くが、リンパ球、マクロファージ、顆粒球、および他の細胞のネットワーク様
相互作用の辺りにあることは、依然として明らかであるが、免疫学者は、現在、
一般的に、リンホカイン、サイトカイン、またはモノカインとして知られる可溶
性タンパク質が、これらの細胞性の相互作用の制御において重要な役割を果たす
という見解を有している。従って、かなりの興味が、細胞調節性因子の単離、特
徴づけ、および作用機構について存在し、この理解は、多くの医学的な異常（例
えば、免疫系障害）の診断および治療において、顕著な利点をもたらす。
【０００４】 リンホカインは、明らかに種々の方法で、細胞の活性を媒介する。リンホカイ
ンは、非常に多くの前駆体（複雑な免疫系を構成する多様な細胞系統を含む）へ
の、多能性の造血幹細胞の増殖、発達、および／または分化を補助することが示
されている。細胞成分間の、適切で、そしてバランスのとれた相互作用は、健常
な免疫応答のために必要である。異なる細胞系統は、リンホカインが他の薬剤と
ともに投与される場合、しばしば異なる様式で応答する。
【０００５】 免疫応答にとって特に重要である細胞系統として、２つのクラスのリンパ球が
挙げられる：免疫グロブリン（外来物質を認識し、そして結合してその除去をも
たらす能力を有するタンパク質）を産生および分泌し得るＢ細胞、ならびにリン
ホカインを分泌し、そしてＢ細胞および免疫ネットワークを構成する種々の他の
細胞（他のＴ細胞を含む）を、誘導または抑制する、種々のサブセットのＴ細胞
。これらのリンパ球は、多くの他の細胞型と相互作用する。
【０００６】 別の重要な細胞系統は、肥満細胞（全ての哺乳動物種で明確に確認されている
わけではない）であり、この肥満細胞は、体全体の毛細管に隣接して位置する、
顆粒を含む結合組織細胞である。これらの細胞は、肺、皮膚、および胃腸管およ
び尿生殖路において特に高濃度で見い出される。肥満細胞は、アレルギーに関連
した障害、特に以下のようなアナフィラキシーにおいて中心的な役割を果たす：
選択された抗原が肥満細胞表面上のレセプターと結合したあるクラスの免疫グロ
ブリンと架橋する場合、この肥満細胞は、脱顆粒し、そしてメディエーター（例
えば、ヒスタミン、セロトニン、ヘパリン、およびプロスタグランジン）を放出
し、このメディエーターはアレルギー反応（例えば、アナフィラキシー）を引き
起こす。
【０００７】 一般にインビトロで免疫系の細胞を維持することはできないので、種々の免疫
障害のより良好な理解および処置のための探求は、妨げられてきた。免疫学者は
、これらの細胞の多くを培養することが、種々の増殖因子（多くのリンホカイン
を含む）を含む、Ｔ細胞上清および他の細胞上清の使用を通じて達成され得るこ
とを発見した。
【０００８】 インターロイキン−１ファミリーとしてのタンパク質は、ＩＬ−１α、ＩＬ−
１β、ＩＬ−１ＲＡ、そして最近はＩＬ−１γ（インターフェロンγ誘導因子（
ＩＧＩＦ）とも命名された）が挙げられる。関連したファミリーの遺伝子は、広
範囲の生物学的機能に関連している（Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ（１９９４）ＦＡＳＥ
Ｂ Ｊ．８：１３１４-１３２５；Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ（１９９１）Ｂｌｏｏｄ
７７：１６２７−１６５２；およびＯｋａｍｕｒａら（１９９５）Ｎａｔｕｒ
ｅ ３７８：８８−９１を参照のこと）。
【０００９】 さらに、形態形成発生を調節する、種々の増殖因子および調節因子が存在する
。これは、例えば、ＩＬ−１レセプターに特徴的な構造的および機構的特徴を共
有するレセプターへの結合を通じてシグナルを伝達するＴｏｌｌリガンドを含む
。例えば、Ｌｅｍａｉｔｒｅら（１９９６） Ｃｅｌｌ ８６：９７３−９８３
；ならびにＢｅｌｖｉｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ（１９９６）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．
Ｃｅｌｌ ＆ Ｄｅｖｅｌ．Ｂｉｏｌ．１２：３９３−４１６を参照のこと。
【００１０】 前述より、新規の可溶性タンパク質およびそのレセプター（リンホカインに類
似のものを含む）の発見および開発が、例えば、免疫系および／または造血細胞
の発生、分化または機能に直接的または間接的に関与する広範囲の変性状態また
は異常状態のための新規治療法に寄与するはずであることは、明らかである。詳
細には、他のリンホカインの有益な活性を亢進または増強するリンホカイン様分
子についての新規レセプターの発見および理解が、非常に有利である。本発明は
、インターロイキン−１様組成物と類似性を示すリガンドについての新規レセプ
ターおよび関連する化合物、ならびにこれらの使用のための方法を提供する。
【００１１】 （発明の要旨） 本発明は、９個の新規な関連する哺乳動物レセプター、例えば、ＤＴＬＲ２、
ＤＴＬＲ３、ＤＴＬＲ４、ＤＴＬＲ５、ＤＴＬＲ７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ９、
およびＤＴＬＲ１０と名付けられた、霊長類、ヒト、ＤＮＡＸ Ｔｏｌｌレセプ
ター様分子構造、およびそれらの生物学的活性に関する。本発明は、ポリペプチ
ド自体をコードする核酸、ならびにそれらの生成および使用の方法を含む。本発
明の核酸は、部分的に、本明細書に包含されるクローニングされた相補的ＤＮＡ
（ｃＤＮＡ）配列に対するその相同性によって特徴付けられる。
【００１２】 ある実施形態において、本発明は下記の群より選択される物質の組成物を提供
する：配列番号４に対して少なくとも約１２アミノ酸の長さにわたって同一性を
示す実質的に純粋なＤＴＬＲ２のタンパク質もしくはペプチドまたは組換えＤＴ
ＬＲ２のタンパク質もしくはペプチド；配列番号４の天然配列ＤＴＬＲ２；ＤＴ
ＬＲ２配列を含む融合タンパク質；配列番号６に対して少なくとも約１２アミノ
酸の長さにわたって同一性を示す実質的に純粋なＤＴＬＲ３のタンパク質もしく
はペプチドまたは組換えＤＴＬＲ３のタンパク質もしくはペプチド；配列番号６
の天然配列ＤＴＬＲ３；ＤＴＬＲ３配列を含む融合タンパク質；配列番号２６に
対して少なくとも約１２アミノ酸の長さにわたって同一性を示す実質的に純粋な
ＤＴＬＲ４のタンパク質もしくはペプチドまたは組換えＤＴＬＲ４のタンパク質
もしくはペプチド；配列番号２６の天然配列ＤＴＬＲ４；ＤＴＬＲ４配列を含む
融合タンパク質；配列番号１０に対して少なくとも約１２アミノ酸の長さにわた
って同一性を示す実質的に純粋なＤＴＬＲ５のタンパク質もしくはペプチドまた
は組換えＤＴＬＲ５のタンパク質もしくはペプチド；配列番号１０の天然配列Ｄ
ＴＬＲ５；ＤＴＬＲ５配列を含む融合タンパク質；配列番号１２、２８、または
３０に対して少なくとも約１２アミノ酸の長さにわたって同一性を示す実質的に
純粋なＤＴＬＲ６のタンパク質もしくはペプチドまたは組換えＤＴＬＲ６のタン
パク質もしくはペプチド；配列番号１２、２８、または３０の天然配列ＤＴＬＲ
６；ＤＴＬＲ６配列を含む融合タンパク質；配列番号１６、１８または３７に対
して少なくとも約１２アミノ酸の長さにわたって同一性を示す実質的に純粋なＤ
ＴＬＲ７のタンパク質もしくはペプチドまたは組換えＤＴＬＲ７のタンパク質も
しくはペプチド；配列番号１６、１８または３７の天然配列ＤＴＬＲ７；ＤＴＬ
Ｒ７配列を含む融合タンパク質；配列番号３２または３９に対して少なくとも約
１２アミノ酸の長さにわたって同一性を示す実質的に純粋なＤＴＬＲ８のタンパ
ク質もしくはペプチドまたは組換えＤＴＬＲ８のタンパク質もしくはペプチド；
配列番号３２または３９の天然配列ＤＴＬＲ８；ＤＴＬＲ８配列を含む融合タン
パク質；配列番号２２または４１に対して少なくとも約１２アミノ酸の長さにわ
たって同一性を示す実質的に純粋なＤＴＬＲ９のタンパク質もしくはペプチドま
たは組換えＤＴＬＲ９のタンパク質もしくはペプチド；配列番号２２または４１
の天然配列ＤＴＬＲ９；ＤＴＬＲ９配列を含む融合タンパク質；配列番号３４、
４３または４５に対して少なくとも約１２アミノ酸の長さにわたって同一性を示
す実質的に純粋なＤＴＬＲ１０のタンパク質もしくはペプチドまたは組換えＤＴ
ＬＲ１０のタンパク質もしくはペプチド；配列番号３４、４３または４５の天然
配列ＤＴＬＲ１０；ならびにＤＴＬＲ１０配列を含む融合タンパク質。好ましく
は、実質的に純粋か、または単離されたタンパク質は、ＤＴＬＲ２、ＤＴＬＲ３
、ＤＴＬＲ４、ＤＴＬＲ５、ＤＴＬＲ６、ＤＴＬＲ７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ９
、またはＤＴＬＲ１０の対応する一部分に対して配列同一性を示すセグメントを
含み、この中で、前述の同一性は、少なくとも約１５アミノ酸；好ましくは約１
９アミノ酸；またはより好ましくは約２５アミノ酸にわたる。特定の実施形態に
おいて、物質の組成物は以下である：表２の成熟配列を含むＤＴＬＲ２；または
翻訳後修飾を欠くＤＴＬＲ２；表３の成熟配列を含むＤＴＬＲ３；または翻訳後
修飾を欠くＤＴＬＲ３；表４の成熟配列を含むＤＴＬＲ４；または翻訳後修飾を
欠くＤＴＬＲ４；表５の完全配列を含むＤＴＬＲ５；または翻訳後修飾を欠くＤ
ＴＬＲ５；表６の成熟配列を含むＤＴＬＲ６；または翻訳後修飾を欠くＤＴＬＲ
６；表７の成熟配列を含むＤＴＬＲ７；または翻訳後修飾を欠くＤＴＬＲ７；表
８の成熟配列を含むＤＴＬＲ８；または翻訳後修飾を欠くＤＴＬＲ８；表９の完
全配列を含むＤＴＬＲ９；または翻訳後修飾を欠くＤＴＬＲ９；表１０の成熟配
列を含むＤＴＬＲ１０；または翻訳後修飾を欠くＤＴＬＲ１０；あるいは物質の
組成物は、以下のタンパク質またはペプチドであり得る：ヒトのような霊長類を
含む哺乳動物から選択された温血動物由来である；配列番号４、６、２６、１０
、１２、２８、３０、１６、１８、３２、２２、または３４の少なくとも１個の
ポリペプチドセグメントを含む；前述の同一性を示す複数の部分を示す；ＤＴＬ
Ｒ２、ＤＴＬＲ３、ＤＴＬＲ４、ＤＴＬＲ５、ＤＴＬＲ６、ＤＴＬＲ７、ＤＴＬ
Ｒ８、ＤＴＬＲ９、またはＤＴＬＲ１０の天然対立遺伝子改変体である；少なく
とも約３０アミノ酸長さを有す；霊長類のＤＴＬＲ２、ＤＴＬＲ３、ＤＴＬＲ４
、ＤＴＬＲ５、ＤＴＬＲ６、ＤＴＬＲ７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ９、またはＤＴ
ＬＲ１０にとって特異的である少なくとも２個の非重複エピトープを示す；霊長
類のＤＴＬＲ２、ＤＴＬＲ３、ＤＴＬＲ４、ＤＴＬＲ５、ＤＴＬＲ６、ＤＴＬＲ
７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ９、またはＤＴＬＲ１０に対して少なくとも約３５ア
ミノ酸の長さにわたる配列同一性を示す；さらに霊長類のＤＴＬＲ２、ＤＴＬＲ
３、ＤＴＬＲ４、ＤＴＬＲ５、ＤＴＬＲ６、ＤＴＬＲ７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ
９、またはＤＴＬＲ１０にとって特異的である少なくとも２個の非重複エピトー
プを示する；げっ歯動物のＤＴＬＲ６に対して少なくとも約２０アミノ酸の長さ
にわたって同一性を示す；グリコシル化されている；天然グルコシル化状態でな
くとも１００ｋＤの分子量を有する；合成ポリペプチドである；固体基材に結合
している；別の化学的部分に結合されている；天然配列からの５重以下の置換体
である；あるいは天然配列からの欠失改変体または挿入改変体である。
【００１３】 他の実施形態は、以下を含む組成物を含む：滅菌ＤＴＬＲ２のタンパク質もし
くはペプチド；またはＤＴＬＲ２のタンパク質もしくはペプチドおよびキャリア
、ここでこのキャリアは、水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む水性
化合物であり；そして／または経口投与、直腸投与、経鼻投与、局所投与、また
は非経口投与のために処方される；滅菌ＤＴＬＲ３のタンパク質もしくはペプチ
ド；またはＤＴＬＲ３のタンパク質もしくはペプチドおよびキャリア、個々でこ
のキャリアは、水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む水性化合物であ
り；そして／または経口投与、直腸投与、経鼻投与、局所投与、または非経口投
与のために処方される；滅菌ＤＴＬＲ４のタンパク質もしくはペプチド；または
ＤＴＬＲ４のタンパク質もしくはペプチドおよびキャリア、ここでこのキャリア
は、水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む水性化合物であり；そして
／または経口投与、直腸投与、経鼻投与、局所投与、または非経口投与のために
処方される；滅菌ＤＴＬＲ５のタンパク質もしくはペプチド；またはＤＴＬＲ５
のタンパク質もしくはペプチドおよびキャリア、ここでこのキャリアは、水、生
理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む水性化合物であり；そして／または経
口投与、直腸投与、経鼻投与、局所投与、または非経口投与のために処方される
；滅菌ＤＴＬＲ６のタンパク質もしくはペプチド；またはＤＴＬＲ６のタンパク
質もしくはペプチドおよびキャリア、ここでこのキャリアは、水、生理食塩水、
および／もしくは緩衝液を含む水性化合物であり；そして／または経口投与、直
腸投与、経鼻投与、局所投与、または非経口投与のために処方される；滅菌ＤＴ
ＬＲ７のタンパク質もしくはペプチド；またはＤＴＬＲ７のタンパク質もしくは
ペプチドおよびキャリア、ここでこのキャリアは、水、生理食塩水、および／も
しくは緩衝液を含む水性化合物であり；そして／または経口投与、直腸投与、経
鼻投与、局所投与、または非経口投与のために処方される；滅菌ＤＴＬＲ８のタ
ンパク質もしくはペプチド；またはＤＴＬＲ８のタンパク質もしくはペプチドお
よびキャリア、ここでこのキャリアは、水、生理食塩水、および／もしくは緩衝
液を含む水性化合物であり；そして／または経口投与、直腸投与、経鼻投与、局
所投与、または非経口投与のために処方される；滅菌ＤＴＬＲ９のタンパク質も
しくはペプチド；またはＤＴＬＲ９のタンパク質もしくはペプチドおよびキャリ
ア、ここでこのキャリアは、水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む水
性化合物であり；そして／または経口投与、直腸投与、経鼻投与、局所投与、ま
たは非経口投与のために処方される；滅菌ＤＴＬＲ１０のタンパク質もしくはペ
プチド；またはＤＴＬＲ１０のタンパク質もしくはペプチドおよびキャリア、こ
こでこのキャリアは、水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む水性化合
物であり；そして／または経口投与、直腸投与、経鼻投与、局所投与、または非
経口投与のために処方される。
【００１４】 特定の融合タンパク質の実施形態において、本発明は、以下を含む融合タンパ
ク質を提供する：表２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０の成熟タンパ
ク質配列；ＦＬＡＧ配列、Ｈｉｓ６配列、またはＩｇ配列を含む検出タグもしく
は精製タグ；あるいは、別のレセプタータンパク質の配列。
【００１５】 種々のキットの実施形態は、以下を含むキットを包含する：ＤＴＬＲタンパク
質またはポリペプチド、ならびに：このようなタンパク質またはポリペプチドを
含む区画；および／または、キット中の試薬の使用または廃棄のための取扱説明
書。
【００１６】 結合化合物の実施形態は、以下を含む：天然のＤＴＬＲ２タンパク質、ＤＴＬ
Ｒ３タンパク質、ＤＴＬＲ４タンパク質、ＤＴＬＲ５タンパク質、ＤＴＬＲ６タ
ンパク質、ＤＴＬＲ７タンパク質、ＤＴＬＲ８タンパク質、ＤＴＬＲ９タンパク
質、もしくはＤＴＬＲ１０タンパク質に特異的に結合する、抗体由来の抗原結合
部位を含む結合化合物：ここで、このタンパク質は、霊長類のタンパク質であり
；この結合化合物は、Ｆｖ、Ｆａｂ、もしくはＦａｂ２フラグメントであり；こ
の結合化合物は、別の化学的部分と結合するか；または、この抗体は：表２、３
、４、５、６、７、８、９もしくは１０の成熟ポリペプチドのペプチド配列に対
して惹起され；成熟ＤＴＬＲ２、ＤＴＬＲ３、ＤＴＬＲ４、ＤＴＬＲ５、ＤＴＬ
Ｒ６、ＤＴＬＲ７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ９、もしくはＤＴＬＲ１０に対して惹
起され；精製ヒトＤＴＬＲ２、ＤＴＬＲ３、ＤＴＬＲ４、ＤＴＬＲ５、ＤＴＬＲ
６、ＤＴＬＲ７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ９、もしくはＤＴＬＲ１０に対して惹起
され；免疫選択され；ポリクローナル抗体であり；変性ＤＴＬＲ２、ＤＴＬＲ３
、ＤＴＬＲ４、ＤＴＬＲ５、ＤＴＬＲ６、ＤＴＬＲ７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ９
、もしくはＤＴＬＲ１０に結合し；少なくとも３０μＭの、抗原に対するＫｄを
示し；ビーズもしくはプラスチック膜を含む固体基材に付着されるか；滅菌組成
物中に存在するか；または、検出可能に標識される（放射能標識または蛍光標識
を含む）。結合組成物のキットはしばしば、結合化合物、および：この結合化合
物を含む区画；および／または、キット中の試薬の使用または廃棄のための取扱
説明書を含む。しばしば、このキットは、定性的分析または定量的分析を行い得
る。
【００１７】 例えば、抗体を作製するための方法（この方法は、免疫系を免疫原性の量の霊
長類ＤＴＬＲ２、ＤＴＬＲ３、ＤＴＬＲ４、ＤＴＬＲ５、ＤＴＬＲ６、ＤＴＬＲ
７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ９、もしくはＤＴＬＲ１０で免疫し、それによって、
この抗体の産生を引き起こす工程を包含する）または抗原：抗体複合体を産生す
るための方法（この方法は、このような抗体と哺乳動物ＤＴＬＲ２、ＤＴＬＲ３
、ＤＴＬＲ４、ＤＴＬＲ５、ＤＴＬＲ６、ＤＴＬＲ７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ９
、もしくはＤＴＬＲ１０タンパク質またはペプチドと接触させ、これによって上
記複合体を形成させる工程を包含する）が提供される。
【００１８】 他の組成物としては、以下を含む組成物が挙げられる：滅菌結合化合物、結合
化合物およびキャリア（ここでこのキャリアは：水、生理食塩水、および／また
は緩衝液を含む水性化合物であり；そして／または経口投与、直腸投与、経鼻投
与、局所的投与、または非経口投与のために処方される）。
【００１９】 核酸の実施形態は、ＤＴＬＲ２〜１０のタンパク質もしくはペプチドもしくは
融合タンパク質をコードする単離された核酸または組換え核酸を含み、ここで：
ＤＴＬＲは、哺乳動物由来であるか；あるいはこの核酸は：表２、３、４、５、
６、７、８、９もしくは１０の抗原性ペプチド配列をコードし；表２、３、４、
５、６、７、８、９もしくは１０の複数の抗原性ペプチド配列をコードし；表２
、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０由来の少なくとも１７連続するヌク
レオチドを含み；このセグメントをコードする天然のｃＤＮＡに対して少なくと
も約８０％の同一性を示し；発現ベクターであり；さらに、複製起点を含み；天
然供給源由来であり；検出可能な標識を含み；合成ヌクレオチド配列を含み；６
ｋｂ未満、好ましくは３ｋｂ未満であり；霊長類を含む哺乳動物由来であり；天
然の全長コード配列を含み；このＤＴＬＲをコードする遺伝子のハイブリダイゼ
ーションプローブであるか；あるいは、ＰＣＲプライマー、ＰＣＲ産物、または
変異誘発プライマーである。このような組換え核酸を含む細胞、組織、または器
官がまた提供される。好ましくは、この細胞は：原核生物細胞；真核生物細胞；
細菌細胞；酵母細胞；昆虫細胞；哺乳動物細胞；マウス細胞；霊長類細胞；また
はヒト細胞である。このような核酸、および：この核酸を含む区画；霊長類ＤＴ
ＬＲ２、ＤＴＬＲ３、ＤＴＬＲ４、もしくはＤＴＬＲ５のタンパク質またはポリ
ペプチドをさらに含む区画；ならびに／またはキット中の試薬の使用または廃棄
のための取扱説明書を含むキットが提供される。しばしば、このキットは、定性
的分析または定量的分析を行い得る。
【００２０】 他の実施形態は、以下のような核酸を含む：配列番号３に、３０℃かつ２Ｍ未
満の塩の洗浄条件下でハイブリダイズし；配列番号５に、３０℃かつ２Ｍ未満の
塩の洗浄条件下でハイブリダイズし；配列番号７に、３０℃かつ２Ｍ未満の塩の
洗浄条件下でハイブリダイズし；配列番号９に、３０℃かつ２Ｍ未満の塩の洗浄
条件下でハイブリダイズし；配列番号１１、１３、２７、もしくは２９に、３０
℃かつ２Ｍ未満の塩の洗浄条件下でハイブリダイズし；配列番号１５、１７、も
しくは３６に、３０℃かつ２Ｍ未満の塩の洗浄条件下でハイブリダイズし；配列
番号１９、３１、もしくは３８に、３０℃かつ２Ｍ未満の塩の洗浄条件下でハイ
ブリダイズし；配列番号２１もしくは４０に、３０℃かつ２Ｍ未満の塩の洗浄条
件下でハイブリダイズし；配列番号２３、３３、４２、もしくは４４に、３０℃
かつ２Ｍ未満の塩の洗浄条件下でハイブリダイズし；霊長類ＤＴＬＲ２に対し、
少なくとも約３０ヌクレオチドのストレッチにわたり、少なくとも約８５％の同
一性を示し；霊長類ＤＴＬＲ３に対し、少なくとも約３０ヌクレオチドのストレ
ッチにわたり、少なくとも約８５％の同一性を示し；霊長類ＤＴＬＲ４に対し、
少なくとも約３０ヌクレオチドのストレッチにわたり、少なくとも約８５％の同
一性を示し；霊長類ＤＴＬＲ５に対し、少なくとも約３０ヌクレオチドのストレ
ッチにわたり、少なくとも約８５％の同一性を示す。好ましくは、このような核
酸は、このような性質を有する：ここで、ここで、洗浄条件は、４５℃および／
もしくは５００ｍＭの塩であるか；または同一性は、少なくとも９０％であり、
そして／もしくはこのストレッチは、少なくとも５５ヌクレオチドである。
【００２１】 より好ましくは、洗浄条件は、５５℃および／もしくは１５０ｍＭの塩である
か；または同一性は、少なくとも９５％であり、そして／もしくはこのストレッ
チは、少なくとも７５ヌクレオチドである。
【００２２】 リガンド：レセプター複合体を産生する方法もまた提供され、この方法は、実
質的に純粋な霊長類ＤＴＬＲ２、ＤＴＬＲ３、ＤＴＬＲ４、ＤＴＬＲ５、ＤＴＬ
Ｒ６、ＤＴＬＲ７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ９、またはＤＴＬＲ１０（組換えで産
生されたタンパク質、もしくは合成で産生されたタンパク質を含む）と候補Ｔｏ
ｌｌリガンドを接触させる工程；これにより上記複合体を形成させる工程を包含
する。
【００２３】 本発明はまた、細胞もしくは組織培養細胞の生理学または発達を調節する方法
を提供する。この方法は、この細胞を、哺乳動物ＤＴＬＲ２、ＤＴＬＲ３、ＤＴ
ＬＲ４、ＤＴＬＲ５、ＤＴＬＲ６、ＤＴＬＲ７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ９、もし
くはＤＴＬＲ１０のアゴニストまたはアンタゴニストと接触させる工程を包含す
る。好ましくは、この細胞は、ＤＴＬＲ１０のアゴニストまたはアンタゴニスト
を含むｐＤＣ２細胞である。
【００２４】 （好ましい実施形態の詳細な説明） （概要） Ｉ．一般 ＩＩ．活性 ＩＩＩ．核酸 Ａ．コードしているフラグメント、配列、プローブ Ｂ．変異、キメラ、融合 Ｃ．核酸の作製 Ｄ．細胞が含有するベクター ＩＶ．タンパク質、ペプチド Ａ．フラグメント、配列、免疫原、抗原 Ｂ．ムテイン Ｃ．アゴニスト／アンタゴニスト、機能的等価物 Ｄ．タンパク質の作製 Ｖ．核酸、タンパク質の作製 Ａ．合成 Ｂ．組換え Ｃ．天然供給源 ＶＩ．抗体 Ａ．ポリクローナル Ｂ．モノクローナル Ｃ．フラグメント；Ｋｄ Ｄ．抗イディオタイプ抗体 Ｅ．ハイブリドーマ細胞株 ＶＩＩ．ＤＴＬＲ２〜１０を定量するためのキットおよび方法 Ａ．ＥＬＩＳＡ Ｂ．コードしているｍＲＮＡのアッセイ Ｃ．定性的／定量的 Ｄ．キット ＶＩＩＩ．治療的組成物、方法 Ａ．組み合わせ組成物 Ｂ．単位用量 Ｃ．投与 ＩＸ．リガンド。
【００２５】 （Ｉ．一般） 本発明は、哺乳動物（本明細書中では特定の規定された性質（構造的性質およ
び生物学的の両方）を有する霊長類ＤＮＡＸ Ｔｏｌｌ様レセプター分子（ＤＴ
ＬＲ））のアミノ酸配列およびＤＮＡ配列を提供する。これらは、本明細書中に
おいて、それぞれＤＴＬＲ２、ＤＴＬＲ３、ＤＴＬＲ４、ＤＴＬＲ５、ＤＴＬＲ
６、ＤＴＬＲ７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ９、もしくはＤＴＬＲ１０と呼ばれ、ヒ
トＴｏｌｌ様レセプターファミリーのメンバーの数を１から１０に増加する。こ
れらの分子をコードする種々のｃＤＮＡは、霊長類（例えば、ヒト）のｃＤＮＡ
配列ライブラリーから得られた。他の霊長類または他の哺乳動物の対応物もまた
所望される。
【００２６】 適用可能ないくつかの標準的な方法は、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら（１９８
２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎ
ｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８
９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎ
ｕａｌ，（第二版），１−３巻、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌら
，Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅ
ｓ，Ｂｒｏｏｋｌｙｎ，ＮＹ；またはＡｕｓｕｂｅｌら（１９８７および定期的
な補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂ
ｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（これらの各々は
、本明細書中で参考として援用される）に記載されるかまたはこれらにおいて引
用される。
【００２７】 ヒトＤＴＬＲ１をコードするセグメントの完全ヌクレオチド（配列番号１）お
よび対応するアミノ酸配列（配列番号２）が表１に示される。Ｎｏｍｕｒａら（
１９９４）ＤＮＡ Ｒｅｓ．１：２７−３５もまた参照のこと。ヒトＤＴＬＲ２
をコードするセグメントの完全ヌクレオチド（配列番号３）および対応するアミ
ノ酸配列（配列番号４）が表２に示される。ヒトＤＴＬＲ３をコードするセグメ
ントの完全ヌクレオチド（配列番号５）および対応するアミノ酸配列（配列番号
６）が表３に示される。ヒトＤＴＬＲ４をコードするセグメントの完全ヌクレオ
チド（配列番号７）および対応するアミノ酸配列（配列番号８）が表４に示され
る；配列番号２５および２６も参照のこと。ヒトＤＴＬＲ５をコードするセグメ
ントの部分的なヌクレオチド（配列番号９）および対応するアミノ酸配列（配列
番号１０）が表５に示される。ヒトＤＴＬＲ６をコードするセグメントの完全ヌ
クレオチド（配列番号１１）および対応するアミノ酸配列（配列番号１２）が表
６に、マウスＤＴＬＲ６（配列番号１３、１４、２７、２８、２９および３０）
の部分的な配列と共に示される。ヒトＤＴＬＲ７をコードするセグメントの部分
的なヌクレオチド（配列番号１５および１７）ならびに対応するアミノ酸配列（
配列番号１６および１８）が表７に示され；全長配列は、配列番号３６および３
７に提供される。ヒトＤＴＬＲ８をコードするセグメントの部分的なヌクレオチ
ド（配列番号１９）および対応するアミノ酸配列（配列番号２０）が、補助的な
配列（配列番号３１、３２、３８、および３９）と共に表８に示される。ヒトＤ
ＴＬＲ９をコードするセグメントの部分的なヌクレオチド（配列番号２１）およ
び対応するアミノ酸配列（配列番号２２）が表９に示される；配列番号４０およ
び４１も参照のこと。ヒトＤＴＬＲ１０をコードするセグメントの部分的なヌク
レオチド（配列番号２３）および対応するアミノ酸配列（配列番号２４）が、補
助的な配列（配列番号３３、３４、４２、および４３）ならびにげっ歯類（例え
ば、マウス）配列（配列番号３５、４４、および４５）と共に表１０に示される
。
【００２８】 表１：霊長類（例えば、ヒト）ＤＮＡＸ Ｔｏｌｌ様レセプター１（ＤＴＬＲ
１）のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列（配列番号１および配列番号２を参
照のこと）。
【００２９】
【表１】 表２：霊長類（例えば、ヒト）ＤＮＡＸ Ｔｏｌｌ様レセプター２（ＤＴＬＲ
２）のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列（配列番号３および配列番号４を参
照のこと）。
【００３０】
【表２】 表３：哺乳動物（例えば、ヒト）Ｔｏｌｌ様レセプター３（ＤＴＬＲ３）のヌ
クレオチド配列およびアミノ酸配列（配列番号５および配列番号６を参照のこと
）。
【００３１】
【表３】 表４：哺乳動物（例えば、霊長類、ヒト）ＤＮＡＸ Ｔｏｌｌ様レセプター４
（ＤＴＬＲ４）のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列（配列番号７および配列
番号８を参照のこと）。
【００３２】
【表４】 霊長類（例えば、ヒト）ＤＴＬＲ４配列（配列番号２５および配列番号２６）を
補足する；Ａと示されたヌクレオチド８１、３１４４、３２０５、および３５６
３は、それぞれＡ、Ｃ、Ｇ、またはＴであり得；Ｇと示されたヌクレオチド３１
３２、３５３２、３５３８、および３５５３は、それぞれＧまたはＴであり得；
Ａと示されたヌクレオチド３６３８は、ＡまたはＴであり得；そしてＣと示され
たヌクレオチド３６７７、３６８５、および３７３６は、それぞれＡまたはＣで
あり得ることに注意。
【００３３】
【表５】 表５：哺乳動物（例えば、霊長類、ヒト）ＤＮＡＸ Ｔｏｌｌ様レセプター５
（ＤＴＬＲ５）の部分的なヌクレオチド配列およびアミノ酸配列（配列番号９お
よび配列番号１０を参照のこと）。
【００３４】
【表６】 表６：哺乳動物（例えば、霊長類またはげっ歯類）ＤＮＡＸ Ｔｏｌｌ様レセ
プター６（ＤＴＬＲ６）のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列。配列番号１１
および配列番号１２は、霊長類（例えば、ヒト）由来であり；配列番号１３およ
び配列番号１４はげっ歯類（例えば、マウス）由来である。 霊長類：
【００３５】
【表７】 げっ歯類（配列番号１３および配列番号１４）：
【００３６】
【表８】 さらなるげっ歯類（例えば、マウス）の配列： 上流（配列番号２７および配列番号２８）；Ｃと示されたヌクレオチド１８６、
１９６、２１７、２７６、および３００は、それぞれＡ、Ｃ、Ｇ、またはＴであ
り得る：
【００３７】
【表９】 下流（配列番号２９および配列番号３０）；Ａと示されたヌクレオチド１６４３
は、ＡまたはＧであり得：Ｃと示されたヌクレオチド１６６４は、Ａ、Ｃ、Ｇ、
またはＴであり得：Ｇと示されたヌクレオチド１６８０および１７３５は、それ
ぞれＧまたはＴであり得：Ｃと示されたヌクレオチド１７１９は、ＣまたはＴで
あり得：そしてＡと示されたヌクレオチド１７２７は、Ａ、Ｇ、またはＴであり
得る：
【００３８】
【表１０】 表７：哺乳動物（例えば、霊長類、ヒト）ＤＮＡＸ Ｔｏｌｌ様レセプター７
（ＤＴＬＲ７）のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列。 上流（配列番号１５および配列番号１６）：
【００３９】
【表１１】 下流（配列番号１７および配列番号１８）：
【００４０】
【表１２】 さらなる霊長類（例えば、ヒト）ＤＴＬＲ７配列（配列番号３６および配列番号
３７）：
【００４１】
【表１３】 表８：哺乳動物（例えば、霊長類、ヒト）ＤＮＡＸ Ｔｏｌｌ様レセプター８
（ＤＴＬＲ８）の部分的なヌクレオチド配列およびアミノ酸配列（配列番号１９
および配列番号２０を参照のこと）。
【００４２】
【表１４】 さらなる霊長類（例えば、ヒト）配列（配列番号３１および配列番号３２）；Ｃ
と示されたヌクレオチド４および２３は、Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＴであり得；Ｃと
示されたヌクレオチド８４５は、ＣまたはＴであり得る：
【００４３】
【表１５】 さらなる霊長類（例えば、ヒト）ＤＴＬＲ８（配列番号３８および配列番号３９
）：
【００４４】
【表１６】 表９：哺乳動物（例えば、霊長類、ヒト）ＤＮＡＸ Ｔｏｌｌ様レセプター９
（ＤＴＬＲ９）の部分的なヌクレオチド配列およびアミノ酸配列（配列番号２１
および配列番号２２を参照のこと）。
【００４５】
【表１７】 さらなる霊長類（例えば、ヒト）ＤＴＬＲ９（配列番号４０および配列番号４１
）：
【００４６】
【表１８】 表１０：哺乳動物（例えば、霊長類、ヒト）ＤＮＡＸ Ｔｏｌｌ様レセプター
１０（ＤＴＬＲ１０）のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列（配列番号２３お
よび配列番号２４を参照のこと）。 Ａと示されたヌクレオチド５４、１０３、および３４５は、それぞれＡまたはＧ
であり得；Ｇと示されたヌクレオチド３１３は、ＧまたはＴであり得；そしてＣ
と示されたヌクレオチド３１６、３８０、４０７、および４０８は、それぞれＡ
、Ｃ、Ｇ、またはＴであり得る。
【００４７】
【表１９】 さらなる霊長類（例えば、ヒト）ＤＴＬＲ１０配列（配列番号３３および配列番
号３４）；Ａと示されたヌクレオチド８５４は、ＡまたはＴであり得；Ｃと示さ
れたヌクレオチド１１７１および１１７２は、それぞれＡ、Ｃ、Ｇ、またはＴで
あり得る：
【００４８】
【表２０】 さらなる霊長類（例えば、ヒト）ＤＴＬＲ１０（配列番号４２および配列番号４
３）：
【００４９】
【表２１】 部分的なげっ歯類（例えば、マウス）ＤＴＬＲ１０ヌクレオチド配列（配列番号
３５）：
【００５０】
【表２２】 さらなるげっ歯類（例えば、マウス）ＤＴＬＲ１０（配列番号４４および配列番
号４５）：
【００５１】
【表２３】 表１１：ヒトＤＴＬＲの細胞内ドメインの比較。ＤＴＬＲ１は配列番号２であ
り；ＤＴＬＲ２は配列番号４であり；ＤＴＬＲ３は配列番号６であり；ＤＴＬＲ
４は配列番号８であり；ＤＴＬＲ５は配列番号１０であり；そしてＤＴＬＲ６は
配列番号１２である。ＤＴＬＲにわたって特に重要であり、保存されている（例
えば、特徴的な）残基は、配列番号１８の残基ｔｙｒ１０−ｔｙｒ１３；ｔｒｐ
２６；ｃｙｓ４６；ｔｒｐ５２；ｐｒｏ５４−ｇｌｙ５５；ｓｅｒ６９；ｌｙｓ
７１；ｔｒｐ１３４−ｐｒｏ１３５；およびｐｈｅ１４４−ｔｒｐ１４５に対応
する。
【００５２】
【表２４】 膜貫通セグメントは、霊長類ＤＴＬＲ７のおおよそ８０２〜８１８（７９１〜
８２３）（配列番号３７）；ＤＴＬＲ８のおおよそ５５９〜５７５（５５０〜５
８６）（配列番号３９）；ＤＴＬＲ９のおおよそ５５３〜５６９（５４９〜５８
２）（配列番号４１）；ＤＴＬＲ１０のおおよそ７９６〜８１０（７９０〜８１
４）（配列番号４３）；およびＤＴＬＲ１０のおおよそ４８１〜４９７（４７５
〜５０３）（配列番号４５）に対応する。
【００５３】 本明細書中で使用される場合、用語ＤＮＡＸ Ｔｏｌｌ様レセプター２（ＤＴ
ＬＲ２）は、表２に示されるアミノ酸配列を有するか、あるいはこのようなアミ
ノ酸配列を共有するタンパク質またはペプチドセグメントを含むタンパク質もし
くはこれらの実質的なフラグメントを記載するために使用されるべきである。同
様に、ＤＴＬＲ３および表３；ＤＴＬＲ４および表４；ＤＴＬＲ５および表５；
ＤＴＬＲ６および表６；ＤＴＬＲ７および表７；ＤＴＬＲ８および表８；ＤＴＬ
Ｒ９および表９；ならびにＤＴＬＲ１０および表１０を用いる。げっ歯類（例え
ば、マウス）ＤＴＬＲ１１配列は、例えば、ＥＳＴ ＡＡ７３９０８３；ＤＴＬ
Ｒ１３は、ＥＳＴＡＩ０１９５６７；ＤＴＬＲ１４は、ＥＳＴ ＡＩ３９０３３
０およびＡＡ２４４６６３に提供される。
【００５４】 本発明はまた、それぞれのＤＴＬＲ対立遺伝子（この配列が提供される）のタ
ンパク質バリエーション（例えば、ムテインアゴニストまたはアンタゴニスト）
を含む。代表的には、このようなアゴニストまたはアンタゴニストは、約１０％
未満の配列の相違を示し、従って、しばしば１個と１１個との間（例えば、２、
３、５、７個など）の置換を有する。このようなアゴニストまたはアンタゴニス
トはまた、記載されるタンパク質の対立遺伝子および他の改変体（例えば、天然
多型）を含む。代表的には、このようなアゴニストまたはアンタゴニストは、高
親和性で（例えば、少なくとも１００ｎＭ、通常約３０ｎＭより良好に、好まし
くは、約１０ｎＭより良好に、そしてより好ましくは、約３ｎＭより良好で）そ
の対応する生物学的レセプターと結合する。この用語はまた、関連する天然に存
在する関連形態（例えば、乳動物タンパク質の対立遺伝子、多型改変体、および
哺代謝改変体）をいうために本明細書中で使用されるべきである。
【００５５】 本発明はまた、表２中のアミノ酸配列と実質的なアミノ酸配列同一性を有する
タンパク質またはペプチドを含む。このタンパク質またはペプチドとして、比較
的わずかな置換（例えば、好ましくは約３〜５未満）しか有さない配列改変体が
挙げられる。同様の性質が、表３、４、５、６、７、８、９、または１０に示さ
れる他のＤＴＬＲ配列に当てはまる。
【００５６】 実質的なポリペプチド「フラグメント」または「セグメント」は、少なくとも
約８アミノ酸、一般的には少なくとも１０アミノ酸、より一般的には少なくとも
１２アミノ酸、多くの場合少なくとも１４アミノ酸、より多くの場合少なくとも
１６アミノ酸、代表的には少なくとも１８アミノ酸、より代表的には少なくとも
２０アミノ酸、通常少なくとも２２アミノ酸、より通常少なくとも２４アミノ酸
、好ましくは少なくとも２６アミノ酸、より好ましくは少なくとも２８アミノ酸
、そして特に好ましい実施形態においては、少なくとも約３０以上のアミノ酸の
アミノ酸残基のストレッチである。異なるタンパク質のセグメントの配列は、適
切な長さのストレッチにわたり互いに比較され得る。
【００５７】 アミノ酸配列相同性または配列同一性は、残基の一致を至適化すること（必要
である場合には、必要とされるギャップを導入すること）により決定される。例
えば、Ｎｅｅｄｌｅｈａｍら（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３
−４５３；Ｓａｎｋｏｆｆら（１９８３）第１節、Ｔｉｍｅ Ｗａｒｐｓ，Ｓｔ
ｒｉｎｇ編、およびＭａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：Ｔｈｅ Ｔｈｅｏｒｙ ａ
ｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ，Ａ
ｄｄｉｓｏｎ−Ｗｅｓｌｅｙ，Ｒｅａｄｉｎｇ，ＭＡ；ならびにＩｎｔｅｌｌｉ
Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ；Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕ
ｐ（ＧＣＧ），Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ；およびＮＣＢＩ（ＮＩＨ）製のソフトウ
ェアパッケージ（これらの各々は、本明細書中で参考として援用される）を参照
のこと。保存的置換を一致と考える場合に、これは変化する。保存的置換は、代
表的には、以下の群内の置換を含む：グリシン、アラニン；バリン、イソロイシ
ン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸；アスパラギン、グルタミン；セ
リン、スレオニン；リジン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チロシン。
相同性アミノ酸配列は、サイトカン配列における天然の対立遺伝子および種間の
バリエーションを含むことを意図される。代表的な相同性タンパク質またはペプ
チドは、表２、３、４、５、６、７、８、９、または１０のアミノ酸配列セグメ
ントと、５０〜１００％相同性（ギャップが導入され得る場合）から６０〜１０
０％相同性（保存的置換が導入される場合）までを有する。相同性の評価は、少
なくとも約７０％、一般的には少なくとも７６％、より一般的には少なくとも８
１％、多くの場合少なくとも８５％、より多くの場合少なくとも８８％、代表的
には少なくとも９０％、より代表的には少なくとも９２％、通常少なくとも９４
％、より通常には少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９６％、そしてより
好ましくは少なくとも９７％、そして特に好ましい実施形態では、少なくとも９
８％以上である。相同性の程度は、比較されるセグメントの長さと共に変化する
。相同タンパク質またはペプチド（例えば、対立遺伝子改変体）は、表２、３、
４、６、７、８、９、または１０に記載される実施形態と、ほとんどの生物学的
活性を共有する。アミノ酸レベルまたはヌクレオチドレベルで、特に興味深い比
較領域は、各々のブロック１〜１０内の領域、またはブロック内領域（図２Ａ〜
２Ｂに示されたブロック内領域に対応する）に対応する。
【００５８】 本明細書中で使用される場合、用語「生物学的活性」は、それぞれのリガンド
による、炎症応答、生得免疫、および／または形態形成発達に対する効果を記載
するために使用されるが、これらに限定されない。例えば、これらのレセプター
は、ＩＬ−１レセプターと同様に、ホスファターゼまたはホスホリラーゼ活性を
媒介するはずであり、この活性は、標準的な手順により容易に測定される。例え
ば、Ｈａｒｄｉｅら（１９９５編）Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｋｉｎａｓｅ Ｆ
ａｃｔＢｏｏｋ 第Ｉ巻および第ＩＩ巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａ
ｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；Ｈａｎｋｓら（１９９１）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．
２００：３８−６２；Ｈｕｎｔｅｒら（１９９２）Ｃｅｌｌ ７０：３７５−３
８８；Ｌｅｗｉｎ（１９９０）Ｃｅｌｌ ６１：７４３−７５２；Ｐｉｎｅｓら
（１９９１）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．
Ｂｉｏｌ．５６：４４９−４６３；およびＰａｒｋｅｒら（１９９３）Ｎａｔｕ
ｒｅ ３６３：７３６−７３８を参照のこと。このレセプターは、リガンド結合
によって調節される調節可能な酵素と酷似した生物学的活性を示す。しかし、こ
の酵素のターンオーバー数は、レセプター複合体よりも酵素のターンオーバー数
により近似する。さらに、このような酵素活性を誘導するために必要な占有され
るレセプターの数は、ほとんどのレセプター系よりも少なく、細胞当たり数千の
数で誘導するほとんどのレセプターとは対照的に、細胞当たり数十に近い数であ
り得る。レセプターまたはその一部は、一般または特異的な基質を標識するため
にホスフェート標識酵素として有用であり得る。
【００５９】 用語リガンド、例えば、ＤＴＬＲのアゴニスト、アンタゴニストおよびアナロ
グは、Ｔｏｌｌリガンド様タンパク質に対する特徴的な細胞応答を調節する分子
、ならびにリガンド−レセプター相互作用（例えば、レセプターが天然のレセプ
ターまたは抗体である場合）のより標準的な構造的結合競合の特徴を保有する分
子を含む。細胞性応答は、関係はあるが、Ｉ型ＩＬ−１レセプターまたはＩＩ型
ＩＬ−１レセプターとは区別される細胞性レセプターに対する種々のＴｏｌｌリ
ガンドの結合を介しておそらく媒介される。例えば、ＢｅｌｖｉｎおよびＡｎｄ
ｅｒｓｏｎ（１９９６）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．１２：
３９３〜４１６；ＭｏｒｉｓａｔｏおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ（１９９５）Ａｎｎ
．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ２９：３７１〜３９９１、ならびにＨｕｌｔｍａ
ｒｋ（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ ３６７：１１６〜１１７を参照のこと。
【００６０】 また、リガンドは、上記レセプターまたはそのアナログが結合する天然のリガ
ンドか、または天然のリガンドの機能的アナログである分子のいずれかとして機
能する分子である。機能的アナログは、構造的改変を有するリガンドであり得る
か、または適切なリガンド結合決定因子と相互作用する分子形状を有する全体的
に無関係な分子であり得る。このリガンドは、アゴニストまたはアンタゴニスト
として機能し得る（例えば、Ｇｏｏｄｍａｎら（１９９０編）Ｇｏｏｄｍａｎ＆
Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏ
ｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋを参照のこと）。
【００６１】 合理的な薬物設計はまた、レセプターまたは抗体および他のエフェクターまた
はリガンドの分子形状の構造的研究に基づき得る。エフェクターは、リガンドの
結合に応答して他の機能を媒介する他のタンパク質であるかもしれないし、また
レセプターと正常に相互作用する他のタンパク質であるかもしれない。どの部位
が、特定の他のタンパク質と相互作用するかを決定するための手段の１つは、物
理的構造決定法（例えば、ｘ線結晶学または２次元ＮＭＲ技術）である。これら
は、どのアミノ酸残基が分子接触領域を形成するかに関するガイダンスを提供す
る。タンパク質構造決定法の詳細な説明については、例えば、Ｂｌｕｎｄｅｌｌ
およびＪｏｈｎｓｏｎ（１９７６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａ
ｐｈｙ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（これは、本明細書
中で、参考として本明細書により援用される）を参照のこと。
【００６２】 （ＩＩ．活性） Ｔｏｌｌ様レセプタータンパク質は、例えば、ホスフェート代謝において多く
の異なる生物学的活性を有し、特定の基質（代表的にはタンパク質）に添加され
るかまたはそこから除去される。このようなものは、一般に、炎症性の機能の調
節、他の先天的免疫応答、または形態学的効果を生じる。ＤＴＬＲ２、３、４、
５、６、７、８、９、または１０タンパク質は、他のＴｏｌｌ様レセプタータン
パク質に対して相同性であるが、それぞれは、異なる構造を有する。例えば、ヒ
トＤＴＬＲ２遺伝子コード配列は恐らく、マウスＤＴＬＲ２のヌクレオチドコー
ド配列と約７０％の同一性を有する。アミノ酸レベルにおいてもまた、相当の同
一性があるようである。
【００６３】 ＤＴＬＲの生物学的活性は、代表的には特異的な様式で、しかし時折非特異的
な様式で、基質に対するホスフェート部分の付加または除去に関連する。基質は
、同定され得るか、または酵素活性についての条件が標準的な方法によって（例
えば、Ｈａｒｄｉｅら（編、１９９５）Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｋｉｎａｓｅ
ＦａｃｔＢｏｏｋ ＩおよびＩＩ巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ
Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；Ｈａｎｋｓら（１９９１）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２
００：３８−６２；Ｈｕｎｔｅｒら（１９９２）Ｃｅｌｌ ７０：３７２−３８
８；Ｌｅｗｉｎ（１９９０）Ｃｅｌｌ ６１：７４３−７５２；Ｐｉｎｅｓら（
１９９１）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂ
ｉｏｌ．５６：４４９−４６３；ならびにＰａｒｋｅｒら（１９９３）Ｎａｔｕ
ｒｅ ３６３：７３６−７３８に記載されるように）アッセイされ得る。
【００６４】 （ＩＩＩ．核酸） 本発明は、例えば、これらのタンパク質もしくはそのフラグメントまたは密接
に関連するタンパク質もしくはそのフラグメントをコードする、単離された核酸
またはフラグメントの、例えば、対応するポリぺプチド（好ましくは生物学的に
活性であるポリぺプチド）をコードするための使用を意図する。さらに、本発明
は、それぞれのＤＴＬＲの特徴的配列を有するこのようなタンパク質またはポリ
ぺプチドを個々にまたは群としてコードする、単離されたまたは組換えのＤＮＡ
を包含する。代表的には、核酸は、適切な条件下で、表２〜１０に示される核酸
配列セグメントとハイブリダイズし得るが、好ましくは表１の対応するセグメン
トとはハイブリダイズし得ない。上記の生物学的に活性なタンパク質またはポリ
ぺプチドは、全長タンパク質またはフラグメントであり得、そして代表的には、
表２〜１０に示されるアミノ酸配列に高度に相同なアミノ酸配列のセグメントを
有する。さらに、本発明は、ＤＴＬＲ２〜１０タンパク質に等価なフラグメント
を有するタンパク質をコードする単離されたまたは組換えの、核酸またはそのフ
ラグメントの使用を包含する。単離された核酸は、５’側および３’側において
それぞれの調節配列（例えば、天然の遺伝子由来のプロモーター、エンハンサー
、ポリＡ付加シグナルなど）を有し得る。
【００６５】 「単離された」核酸は、例えば、元々の種からのリボソーム、ポリメラーゼ、
および隣接ゲノム配列のような天然の配列にもともと付随する他の成分から分離
された、実質的に純粋な核酸（例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡ、または混合ポリマー）
である。この用語は、その天然に存在する環境から除去されている核酸配列を包
含し、そして組換えまたはクローン化のＤＮＡ単離体を包含し、これらはこれに
よって、天然に存在する組成物、および化学的に合成されたアナログまたは異種
系によって生物学的に合成されたアナログから区別され得る。実質的に純粋な分
子には、完全に純粋または実質的に純粋のいずれかの分子の単離された形態が含
まれる。
【００６６】 単離された核酸は、一般に、分子の均一な組成物であるが、いくつかの実施態
様においては、不均一性（好ましくは少量）を含む。この不均一性は、代表的に
は、所望の生物学的な機能または活性に対して重要でないポリマー末端または部
分で見出される。
【００６７】 「組換え」核酸は、代表的には、その産生方法またはその構造のいずれかによ
って規定されている。その産生（例えば、プロセスによって生成される産物）の
方法に関して、プロセスは、組換え核酸技術（例えば、ヌクレオチド配列におけ
る人為的介入を含む）の使用である。代表的には、この介入には、インビトロ操
作を含むが、特定の状況下では、それはより古典的な動物繁殖技術を含み得る。
あるいは、組換え核酸は、天然には互いに連続しない２つのフラグメントの融合
を含む配列を生成することによって作製される核酸であり得るが、天然の産物（
例えば、その天然の状態に見出されるような天然に存在する変異体）は除外する
ことを意味する。従って、例えば、天然に存在しないベクターで細胞を形質転換
することによって作製される産物が、任意の合成的オリゴヌクレオチドプロセス
を使用して誘導される配列を含む核酸と同様に含まれる。このようなプロセスは
、しばしば、代表的には制限酵素配列認識部位を導入または除去しながら、同一
または保存されたアミノ酸をコードする縮重コドンでコドンを置換するためにな
される。あるいは、このプロセスは、所望の機能の核酸セグメントを一緒に結合
して、一般に入手できる天然の形態において見出されない所望の機能の組み合わ
せを含む単一の遺伝子実体（例えば、融合タンパク質をコードする）を生成する
ために行われる。制限酵素認識部位は、しばしば、このような人為的な操作の標
的であるが、他の部位特異的な標的（例えば、プロモーター、ＤＮＡ複製部位、
調節配列、制御配列、または他の有用な特徴）は、設計によって組込まれ得る。
類似の概念が、組換え（例えば、融合のポリぺプチド）について意図される。こ
れには、二量体反復が含まれる。詳細には、遺伝暗号の縮重によって、ＤＴＬＲ
２〜５のフラグメントおよび種々の異なる関連する分子（例えば、他のＩＬ−１
レセプターファミリーのメンバー）由来の配列の融合物に等価なポリぺプチドを
コードする合成核酸が含まれる。
【００６８】 核酸の状況における「フラグメント」は、少なくとも約１７ヌクレオチド、一
般には少なくとも２１ヌクレオチド、より一般的には少なくとも２５ヌクレオチ
ド、通常少なくとも３０ヌクレオチド、より通常には少なくとも３５ヌクレオチ
ド、しばしば少なくとも３９ヌクレオチド、よりしばしば少なくとも４５ヌクレ
オチド、代表的には少なくとも５０ヌクレオチド、より代表的には少なくとも５
５ヌクレオチド、通常少なくとも６０ヌクレオチド、より通常には少なくとも６
６ヌクレオチド、好ましくは少なくとも７２ヌクレオチド、より好ましくは少な
くとも７９ヌクレオチドの連続するセグメントであり、そして特に好ましい実施
態様において、少なくとも８５以上のヌクレオチドである。代表的には、異なる
遺伝子配列のフラグメントは、適切な長さのストレッチ、特に以下に記載するド
メインような規定されたセグメントにわたって互いに比較され得る。
【００６９】 ＤＴＬＲ２〜１０をコードする核酸は、それ自体または密接に関連するタンパ
ク質をコードする遺伝子、ｍＲＮＡ、およびｃＤＮＡ種、ならびに多型性の改変
体、対立遺伝子改変体または他の遺伝的改変体（例えば、異なる個体または関連
する種由来の）をコードするＤＮＡを同定するために特に有用である。このよう
なスクリーニングにとって好ましいプローブは、異なる多型性改変体間で保存さ
れるかまたは特異性を欠失するヌクレオチドを含有するインターロイキンの領域
であり、そして好ましくは全長またはそれに近い。他の状況では、多型性改変体
特異的配列はより有用である。
【００７０】 本発明は、本明細書中に示される単離されたＤＮＡに同一または高度に相同な
核酸配列を有する組換え核酸分子およびフラグメントをさらに包含する。特に、
この配列は、しばしば、転写、翻訳、およびＤＮＡ複製を制御するＤＮＡセグメ
ントに作動可能に連結している。これらのさらなるセグメントは、代表的には、
所望の核酸セグメントの発現を補助する。
【００７１】 相同な、すなわち高度に同一性の核酸配列は、互いにまたは表２〜１０の配列
について比較された場合、有意な類似性を示す。核酸における相同性の標準は、
配列比較によって当該分野で一般に使用される相同性の尺度であるか、またはハ
イブリダイゼーション条件に基づくかのいずれかである。比較ハイブリダイゼー
ション条件は、より詳細に以下に記載される。
【００７２】 核酸配列比較の状況における実質的な同一性とは、セグメントまたはその相補
鎖が、比較される場合、適切なヌクレオチド挿入または欠失を伴って最適に整列
された際に、ヌクレオチドの少なくとも約６０％、一般的には少なくとも６６％
、通常少なくとも７１％、しばしば少なくとも７６％、よりしばしば少なくとも
８０％、通常少なくとも８４％、より通常には少なくとも８８％、代表的には少
なくとも９１％、より代表的には少なくとも約９３％、好ましくは少なくとも約
９５％、より好ましくは少なくとも約９６％〜９８％以上において、そして特定
の実施態様では、ヌクレオチドの約９９％以上までの高さにおいて、同一である
ことのいずれかを意味し、例えば、以下に記載されるのセグメントような構造的
ドメインをコードするセグメントを包含する。あるいは、実質的な同一性は、セ
グメントが選択的ハイブリダイゼーション条件下で、鎖またはその相補鎖に、代
表的には表２〜１０に由来する配列を使用して、ハイブリダイズする場合に存在
する。代表的には、選択的ハイブリダイゼーションは、少なくとも約１４ヌクレ
オチドのストレッチにわたって少なくとも約５５％の相同性、より代表的には少
なくとも約６５％、好ましくは少なくとも約７５％、そしてより好ましくは少な
くとも約９０％の相同性が存在する場合に生じる。Ｋａｎｅｈｉｓａ（１９８４
）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１２：２０３−２１３（これは、本明細書中
で参考として援用される）を参照のこと。相同性比較の長さは、記載されるよう
に、より長いストレッチにわたり得、そして特定の実施態様においては、少なく
とも約１７ヌクレオチド、一般的には少なくとも約２０ヌクレオチド、通常（ｏ
ｒｄｉｎａｒｉｌｙ）少なくとも約２４ヌクレオチド、通常（ｕｓｕａｌｌｙ）
少なくとも約２８ヌクレオチド、代表的には少なくとも約３２ヌクレオチド、よ
り代表的には少なくとも約４０ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約５０ヌク
レオチドのストレッチにわたり、そしてより好ましくは少なくとも約７５〜１０
０以上のヌクレオチドにわたる。
【００７３】 ストリンジェントな条件は、ハイブリダイゼーションの状況において相同性を
いう場合、ハイブリダイゼーション反応において代表的に制御される塩、温度、
有機溶媒、および他のパラメーターを組み合わせたストリンジェントな条件であ
る。ストリンジェントな温度条件は、通常、約３０℃を超える温度、より通常に
は約３７℃を超える温度、代表的には約４５℃を超える温度、より代表的には約
５５℃を超える温度、好ましくは約６５℃を超える温度、そしてより好ましくは
約７０℃を超える温度を含む。ストリンジェントな塩条件は、通常、約５００ｍ
Ｍ未満、通常、約４００ｍＭ未満、より通常には、約３００ｍＭ未満、代表的に
は、約２００ｍＭ未満、好ましくは、約１００ｍＭ未満、そしてより好ましくは
約８０ｍＭ未満、さらに約２０ｍＭ未満までである。しかし、パラメーターの組
み合わせは、任意の単一のパラメーターの尺度よりもさらに重要である。例えば
、ＷｅｔｍｕｒおよびＤａｖｉｄｓｏｎ（１９６８）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３
１：３４９−３７０（これは、本明細書中によって参考として本明細書中に援用
される）を参照のこと。
【００７４】 あるいは、配列比較については、代表的には、１つの配列が、参照配列として
作用しそれぞれに対して試験配列が比較される。配列比較アルゴリズムを使用す
る場合、試験配列および参照配列がコンピューターに入力され、必要ならば、サ
ブ配列の座標が指定され、そして配列アルゴリズムプログラムパラメーターが指
定される。次に、配列比較アルゴリズムによって、参照配列に対する試験配列の
配列同一性パーセントが、指定されたプログラムパラメーターに基づいて計算さ
れる。
【００７５】 比較のために配列の光学的な整列が、実施され得る。これは、例えば、Ｓｍｉ
ｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４
８２の局所相同性アルゴリズムによって、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃ
ｈ（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の相同性配列アルゴリズム
によって、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’
ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４の類似性検索方法によって、こ
れらのアルゴリズムのコンピューター化された手段（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅ
ｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍ
ｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、
ＷＩにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）によ
って、または可視検査（一般に、Ａｕｓｕｂｅｌら、前記を参照のこと）による
。
【００７６】 有用なアルゴリズムの１つの例は、ＰＩＬＥＵＰである。ＰＩＬＥＵＰは、進
行性の対形式の整列（ｐａｉｒｗａｓｅ ａｌｉｇｍｅｎｔ）を使用して、１群
の関連配列から多数の配列整列を作成して、関係および配列同一性パーセントを
示す。また、整列を作成するために使用されたクラスター関係を示す、ツリーま
たは樹状図をプロットする。ＰＩＬＥＵＰは、ＦｅｎｇおよびＤｏｏｌｉｔｔｌ
ｅ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．３５：３５１−３６０の進行性の整列方
法の簡素化されたものを使用する。使用される方法は、ＨｉｇｇｉｎｓおよびＳ
ｈａｒｐ（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ ５：１５１−１５３によって記載される方
法に類似する。プログラムは、３００配列、各々、最大長５，０００のヌクレオ
チドまたはアミノ酸まで整列し得る。この多数整列手順は、２つの最も類似の配
列の対形式の整列で開始し、２つの整列した配列のクラスターを生じる。次いで
、このクラスターを、整列した配列の次の最も関連した配列またはクラスターに
対して整列させる。配列の２つのクラスターを、２つの個々の配列の対形式の整
列の単純な延長によって整列させる。最後の整列を、一連の進行性の対形式の整
列によって達成する。このプログラムは、配列比較の領域について特異的配列お
よびそのアミノ酸またはヌクレオチド座標を指定することによって、およびプロ
グラムパラメータを指定することによって実行される。例えば、以下のパラメー
タを使用して、参照配列を他の試験配列と比較して配列同一性パーセント関係を
決定し得る：デフォルトギャップウエイト（３．００）、デフォルトギャップ長
ウエイト（０．１０）、および加重末端ギャップ。
【００７７】 配列同一性パーセントおよび配列類似性を決定するために適切であるアルゴリ
ズムの他の例は、ＢＬＡＳＴアルゴリズムであり、これは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら
（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０に記載される。Ｂ
ＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウエアは、ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎ
ｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ｈｔ
ｔｐ：ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）によって公的に利用可能
である。このアルゴリズムは、最初に問い合わせ配列における長さＷの短いワー
ド（ｗｏｒｄ）を同定することによって高スコアリング配列対（ＨＳＰ）を同定
することを含み、これは、データベース配列において同じ長さのワードと整列し
た場合、いくつかのポジティブな値の閾値スコアＴに適合するかまたはそれを満
たすかのいずれかである。Ｔは、近傍ワードスコア閾値と呼ばれる（Ａｌｔｓｃ
ｈｕｌら、前記）。これらの最初の近傍ワードヒットは、それらを含むより長い
ＨＳＰを見いだすために検索を開始するためのシードとして作用する。次いで、
ワードヒットは、累加した整列スコアが増加し得る限り、各配列に沿った両方向
に伸長させる。各方向へのワードヒットの伸長は、以下の場合停止される：累加
した整列スコアがその最大達成値から量Ｘだけ減少する場合；１つ以上のネガテ
ィブなスコアリング残基整列の蓄積に起因して、累加したスコアがゼロ以下にな
る場合；あるいは、いずれかの配列の末端に達した場合。ＢＬＡＳＴアルゴリズ
ムのパラメータＷ、Ｔ、およびＸは、整列の感度およびスピードを決定する。Ｂ
ＬＡＳＴプログラムは、デフォルトとして、１１のワード長（Ｗ）、５０のＢＬ
ＯＳＵＭ６２スコアリングマトリクス（ＨｅｎｉｋｏｆｆおよびＨｅｎｉｋｏｆ
ｆ（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８９：１
０９１５を参照のこと）整列（Ｂ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝４、お
よび両方の鎖の比較を使用する。
【００７８】 配列同一性パーセントを算出することに加えて、ＢＬＡＳＴアルゴリズムはま
た、２つの配列間の類似性の統計学的分析を行う（例えば、Ｋａｒｌｉｎおよび
Ａｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． Ｕ
ＳＡ ９０：５８７３−５７８７を参照のこと）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによ
って提供される類似性の１つの尺度は、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、これ
は、２つのヌクレオチドまたはアミノ酸配列間の適合が、偶然に生じる確率の指
標を提供する。例えば、参照核酸に対する試験核酸の比較における最小合計確率
が、約０．１未満、より好ましくは約０．０１未満、および最も好ましくは約０
．００１未満である場合、核酸は、参照配列に類似するとみなされる。
【００７９】 ポリペプチドの２つの核酸配列が、実質的に同一であることのさらなる指標は
、第１の核酸によってコードされるポリペプチドが、以下に記載のように、第２
の核酸によってコードされるポリペプチドと免疫学的に交差反応性であることで
ある。したがって、ポリペプチドは、代表的には、例えば、２つのペプチドが保
存的置換のみによって異なる場合、第２のポリペプチドと実質的に同一である。
２つの核酸配列が実質的に同一であることの他の指標は、以下に記載のように、
２つの分子が、ストリンジェント条件下で互いにハイブリダイズすることである
。
【００８０】 単離されたＤＮＡは、ヌクレオチド置換、ヌクレオチド欠失、ヌクレオチド挿
入、およびヌクレオチドストレッチの反転によって容易に改変され得る。これら
の改変は、本発明のタンパク質またはその誘導体をコードする新規なＤＮＡ配列
を生じる。これらの改変された配列は、変異体タンパク質（ムテイン）を生成す
るために、または改変種の発現を増強するために使用され得る。増強された発現
は、遺伝子増幅、増加された転写、増加された翻訳、および他の機構を含み得る
。このような変異体ＤＴＬＲ様誘導体は、タンパク質またはそのフラグメントの
、予め決定された変異または部位特異的変異を包含し、遺伝コード縮重を使用す
るサイレントな変異を含む。本明細書中で使用される場合「変異体ＤＴＬＲ」は
、さもなければ上述に記載されるようなＤＴＬＲの相同性の定義の中にあるポリ
ぺプチドであって、ただし欠失、置換、または挿入のいずれかの手段によって、
天然において見出されるような他のＤＴＬＲ様タンパク質のアミノ酸配列とは異
なるアミノ酸配列を有するものを含む。特に、「部位特異的変異体ＤＴＬＲ」は
、表２〜１０のタンパク質と実質的な配列相同性を有するタンパク質を含み、そ
して代表的に、本明細書中で開示される形態の生物学的活性または効果の大部分
を共有する。
【００８１】 部位特異的変異部位は予め定められているが、変異体は部位特異的である必要
はない。哺乳動物ＤＴＬＲ変異誘発は、発現と相まって、遺伝子におけるアミノ
酸挿入または欠失の作製によって達成され得る。置換、欠失、挿入、または多く
の組み合わせは、最終構築物で到達するために生成され得る。挿入は、アミノ末
端融合またはカルボキシ末端融合を包含する。ランダム変異誘発は、標的コドン
で行われ得、そして発現された哺乳動物ＤＴＬＲ変異体は、次いで所望の活性に
ついてスクリーニングされ得る。公知の配列を有するＤＮＡにおいて所定の部位
に置換変異を作成する方法は、例えば、当該分野で周知であるＭ１３プライマー
変異誘発による。Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）およびＡｕｓｕｂｅｌら（１
９８７年および定期補遺）もまた参照のこと。
【００８２】 ＤＮＡの変異は、正常には、リーディングフレームの外のコード配列に配置す
べきではなく、そして好ましくは、ループまたはヘアピンのような二次ｍＲＮＡ
構造を産生するためにハイブリダイズし得る相補領域を生成しない。
【００８３】 ＢｅａｕｃａｇｅおよびＣａｒｒｕｔｈｅｒｓ（１９８１）Ｔｅｔｒａ．Ｌｅ
ｔｔｓ．２２：１８５９−１８６２によって記載されるホスホロアミダイト法は
、適切な合成ＤＮＡフラグメントを産生する。二本鎖フラグメントは、相補鎖を
合成し、そして適切な条件下で互いの鎖をアニーリングすることによって、また
は適切なプライマー配列を有するＤＮＡポリメラーゼを使用して相補鎖を付加す
ることによってのいずれかでしばしば得られる。
【００８４】 ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術は、しばしば、変異誘発において適用さ
れ得る。あるいは、変異誘発プライマーは、予め決定された部位で規定された変
異を作製するために一般に使用される方法である。例えば、Ｉｎｎｉｓら（編、
１９９０）ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄ
ｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａ
ｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ；ならびにＤｉｅｆｆｅｎｂａｃｈおよびＤｖｅｋｓｌｅ
ｒ（１９９５；編）ＰＣＲ Ｐｒｉｍｅｒ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎ
ｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、ＣＳＨ、ＮＹを
参照のこと。
【００８５】 （ＩＶ．タンパク質、ペプチド） 上記されるように、本発明は、霊長類ＤＴＬＲ２〜１０を含み、例えば、その
配列は、表２〜１０において開示され、そして上記される。対立遺伝子および他
の改変体もまた意図され、例えば、他の配列（例えば、エピトープタグおよび機
能的ドメインを含む）と、このような配列の部分とを組合わせる融合タンパク質
を含む。
【００８６】 本発明はまた、組換えタンパク質（例えば、これらの霊長類または齧歯類タン
パク質からのセグメントを使用する異種融合タンパク質）を提供する。異種融合
タンパク質は、天然で同じ様式において通常融合されないタンパク質またはセグ
メントの融合である。従って、ＩＬ−１レセプターとＤＴＬＲとの融合産物は、
代表的なペプチド結合において融合される配列を有する連続的なタンパク質分子
であり、代表的に単一の翻訳産物として作製され、そして各供給源ペプチドに由
来する特性（例えば、配列または抗原性）を示す。同様の概念が、異種核酸配列
に適用される。
【００８７】 さらに、新しい構築物は、他の関連タンパク質（例えば、ＩＬ−１レセプター
または他のＤＴＬＲ（特定の改変体を含む））からの類似の機能的または構造的
ドメインを組み合わせることから作製され得る。例えば、リガンド結合セグメン
トまたは他のセグメントは、異なる新しい融合ポリペプチドまたはフラグメント
間で、「交換」され得る。例えば、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍら（１９８９）Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ ２４３：１３３０−１３３６；およびＯ’Ｄｏｗｄら（１９８８）Ｊ
．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：１５９８５−１５９９２（これらの各々は、本
明細書中で参考として援用される）を参照のこと。従って、新しい組み合わせの
特異性を示す新しいキメラポリペプチドは、レセプター結合特異性の機能的連結
から生じる。例えば、他の関連のレセプター分子からのリガンド結合ドメインが
、付加され得るか、あるいはこの他のドメインまたは関連のタンパク質の他のド
メインと置換され得る。得られるタンパク質は、しばしば、ハイブリッド機能お
よび特性を有する。例えば、融合タンパク質は、特定の細胞オルガネラへの、融
合タンパク質の隔離を提供するように作用し得る、標的化ドメインを含み得る。
【００８８】 候補融合パートナーおよび配列は、種々の配列データベース（例えば、Ｇｅｎ
Ｂａｎｋ、ｃ／ｏ ＩｎｔｅｌｌｉＧｅｎｅｔｉｃｓ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉ
ｅｗ、ＣＡ；およびＢＣＧ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ、Ｍａｄｉｓ
ｏｎ、ＷＩ（これらは、各々本明細書中に参考として援用される）から選択され
得る。
【００８９】 本発明は特に、Ｔｏｌｌリガンドに結合し、そして／またはシグナル伝達にお
いて影響されるムテインを提供する。ＩＬ−１ファミリーの他のメンバーと、ヒ
トＤＴＬＲ１〜１０との構造アラインメントは、保存された特徴／残基を示す。
表３Ａを参照のこと。ＩＬ−１ファミリーの他のメンバーとのヒトＤＴＬＲ配列
のアラインメントは、種々の構造的および機能的に共有された特徴を示す。Ｂａ
ｚａｎら、（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ ３７９：５９１；Ｌｏｄｉら、（１９９
４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６３：１７６２−１７６６；ＳａｙｌｅおよびＭｉｌｎ
ｅｒ−Ｗｈｉｔｅ（１９９５）ＴＩＢＳ ２０：３７４−３７６；ならびにＧｒ
ｏｎｅｎｂｅｒｇら（１９９１）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ４
：２６３−２６９もまた参照のこと。
【００９０】 ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βリガンドは、主なレセプターとしてＩＬ−１レセ
プターＩ型にに結合し、次いでこの複合体は、ＩＬ−１レセプターＩＩＩ型と高
親和性レセプター複合体を形成する。このレセプターサブユニットは、恐らく新
たなＩＬ−１ファミリーメンバーと共有される。
【００９１】 ＤＴＬＲ２〜１０配列の他の種の対応物（例えば、対応する領域）においての
同様の変異体は、リガンドおよび基質と、同様の相互作用を提供するはずである
。マウス配列またはヒト配列のいずれかでの置換が特に好ましい。逆に、リガン
ド結合相互作用領域から離れた保存的な置換は、おそらく、大部分のシグナル伝
達活性を保存する。
【００９２】 霊長類ＤＴＬＲ２〜１０の「誘導体」には、アミノ酸配列変異体、グリコシル
化改変体、代謝誘導体、および他の化学部分との共有結合体または凝集結合体が
含まれる。共有結合的誘導体は、例えば、当該技術分野で周知の手段によって、
ＤＴＬＲアミノ酸側鎖またはＮ末端もしくはＣ末端で見られる基への官能基の連
結によって調製され得る。これらの誘導体には、カルボキシル末端の、またはカ
ルボキシル側鎖を含む残基の脂肪族エステルまたはアミド、ヒドロキシル基含有
残基のＯ−アシル誘導体、およびアミノ末端アミノ酸またはアミノ基含有残基（
例えば、リジンまたはアルギニン）のＮ−アシル誘導体が非限定的に含まれ得る
。アシル基は、Ｃ３〜Ｃ１８の正常アルキルを含むアルキル部分の群から選択さ
れ、それによってアルカノイルアロイル種を形成する。
【００９３】 特に、グリコシル化変化が含まれ、例えば、その合成およびプロセシング中に
、または更なるプロセシング工程において、ポリペプチドのグリコシル化パター
ンを改変することによって作製される。これを達成するために特に好ましい手段
は、このようなプロセシングを通常は提供する細胞に由来するグリコシル化酵素
、例えば、哺乳動物グリコシル化酵素に、ポリペプチドを曝露することによる。
脱グリコシル化酵素もまた意図される。また、他のマイナーな改変を有する同じ
一次アミノ酸配列の型を含み、これには、リン酸化アミノ酸残基（例えば、ホス
ホチロシン、ホスホセリン、またはホスホトレオニン）が含まれる。
【００９４】 誘導体の主要な群は、ポリペプチドの他のタンパク質と、レセプターまたはそ
のフラグメントとの共有結合体である。これらの誘導体は、Ｎ−またはＣ−末端
融合体のような組換え培養物中で、あるいは反応性側基によってタンパク質を架
橋することにおけるそれらの有用性について当該技術分野で公知の薬剤の使用に
よって、合成され得る。架橋剤との好ましい誘導体化部位は、遊離アミノ基、炭
水化物部分、およびシステイン残基にある。
【００９５】 レセプターと他の相同タンパク質または異種タンパク質との間の融合ポリペプ
チドもまた提供される。相同ポリペプチドは、異なるレセプター間の融合物であ
り得、例えば、複数の異なるトール（Ｔｏｌｌ）リガンドの結合特異性を示すハ
イブリッドタンパク質、または基質効果の特異性を広げるかもしくは弱め得るレ
セプターを生じる。同様に、誘導体タンパク質の特性または活性の組み合わせを
示す異種融合物が、構築され得る。代表的な例は、レポーターポリペプチド（例
えば、ルシフェラーゼ）のレセプターのセグメントまたはドメイン（例えば、リ
ガンド結合セグメント）との融合物であり、その結果、所望のリガンドの存在ま
たは位置が容易に決定され得る。例えば、Ｄｕｌｌら、米国特許第４，８５９，
６０９号（これを本明細書中で参考として援用する）を参照のこと。他の遺伝子
融合パートナーとしては、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、
細菌性β−ガラクトシダーゼ、ｔｒｐＥ、プロテインＡ、β−ラクタマーゼ、α
アミラーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ、および酵母α接合因子が挙げられる
。例えば、Ｇｏｄｏｗｓｋｉら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：８１２−
８１６を参照のこと。
【００９６】 ＢｅａｕｃａｇｅおよびＣａｒｒｕｔｈｅｒｓ（１９８１）Ｔｅｔｒａ．Ｌｅ
ｔｔｓ．２２：１８５９−１８６２によって記載されたホスホラミダイト法は、
適切な合成ＤＮＡフラグメントを産生する。二本鎖フラグメントは、相補鎖を合
成し、そして適切な条件下で互いの鎖をアニーリングすることによって、または
適切なプライマー配列を有するＤＮＡポリメラーゼを使用して相補鎖を付加する
ことによってのいずれかでしばしば得られる。
【００９７】 このようなポリペプチドはまた、リン酸化、スルホン化、ビオチン化、または
他の部分の付加もしくは除去によって化学的に改変されているアミノ酸残基、特
にリン酸基に類似の分子形状を有する残基を有し得る。いくつかの実施形態では
、改変は、有用な標識因子であり、または精製標的、例えば、アフィニティーリ
ガンドとして役立つ。
【００９８】 融合タンパク質は、代表的に、組換え核酸法によってまたは合成ポリぺプチド
法によってのいずれかで作製される。核酸操作および発現についての技術は、例
えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：
Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版）第１〜３巻、Ｃｏｌｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、およびＡｕｓｕｂｅｌら（
編）（１９８７および定期的な補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉ
ｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ（これらはそれぞれ、本明細書中で参考として援用される）において
、一般に記載される。ポリぺプチドの合成についての技術は、例えば、Ｍｅｒｒ
ｉｆｉｅｌｄ（１９６３）Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−
２１５６；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３２：３４１
−３４７；およびＡｔｈｅｒｔｏｎら（１９８９）Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐ
ｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａ
ｃｈ、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ；（これらのそれぞれは、本明細書中
で参考として援用される）において記載される。より長いポリぺプチドを作製す
るための方法について、Ｄａｗｓｏｎら（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６６：
７７６−７７９もまた参照のこと。
【００９９】 本発明はまた、アミノ酸配列またはグリコシル化における改変以外のＤＴＬＲ
２−１０の誘導体の使用を意図する。このような誘導体は、化学部分との共有結
合的なまたは凝集的な会合を含み得る。これらの誘導体は、一般に、３つのクラ
スに分類される：（１）塩、（２）側鎖および末端残基の共有結合的な改変、な
らびに（３）例えば、細胞膜との吸着複合体。このような共有結合誘導体または
凝集誘導体は、免疫原として、イムノアッセイにおける試薬として、またはレセ
プターもしくは他の結合分子（例えば、抗体）のアフィニティー精製のためのよ
うな精製方法において、有用である。例えば、トールリガンドは、ＤＴＬＲレセ
プター、抗体、または他の類似の分子のアッセイまたは精製における使用のため
に、当該分野において周知である方法により、臭化シアン活性化セファロースの
ような固体支持体へ共有結合によって固定化され得るか、または、グルタルアル
デヒド架橋を用いるかまたは用いないで、ポリオレフィン表面上に吸着され得る
。リガンドはまた、検出可能な基で標識され得、例えばクロラミンＴ手順によっ
て放射性ヨウ素化（ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｅ）され得るか、希土類キレート
に共有結合され得るか、または診断アッセイにおける使用のために、別の蛍光部
分に結合され得る。
【０１００】 本発明のＤＴＬＲは、ＤＴＬＲまたはその種々のフラグメントに特異的な（例
えば、他のＩＬ−１レセプターファミリーメンバーの間を区別し得る）、抗血清
または抗体の生成のための免疫原として使用され得る。精製されたＤＴＬＲは、
タンパク質を含有する不純な調製物の種々の形態での免疫化によって調製された
モノクローナル抗体または抗原結合フラグメントをスクリーニングするために使
用され得る。特に、用語「抗体」はまた、天然の抗体の抗原結合フラグメント（
例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆｖなど）を包含する。精製されたＤＴＬＲはまた
、上昇したレベルの発現の存在に応答して産生された抗体、または内因性レセプ
ターに対する抗体産生を導く免疫障害を検出するための試薬として使用され得る
。さらに、ＤＴＬＲフラグメントはまた、すぐ下に記載されるように、本発明の
抗体を産生するための免疫原として役立ち得る。例えば、本発明は、表２〜表１
０に示されるアミノ酸配列、そのフラグメント、または種々の相同なペプチドに
対して結合親和性を有するか、またはそれに対して惹起される抗体を意図する。
特に、本発明は、ネイティブなＤＴＬＲの外部タンパク質表面で曝露されること
が予測されるか、または実際に曝露される、特異的なフラグメントに対し、結合
親和性を有するかまたはそれに対して惹起された抗体を意図する。
【０１０１】 レセプターリガンドに応答する生理学的応答のブロックは、おそらく競合的阻
害を介する、レセプターに対するリガンドの結合の阻害から生じ得る。従って、
本発明のインビトロアッセイにおいて、抗体、またはこれらの抗体の抗原結合セ
グメント、または固相基質に付着されるフラグメントを、しばしば使用する。こ
れらのアッセイはまた、リガンド結合領域の変異および改変、または他の変異お
よび改変（例えば、シグナル伝達または酵素機能に影響する）のいずれかの効果
の診断的な決定を可能にする。
【０１０２】 本発明はまた、競合的な薬物スクリーニングアッセイの使用を意図し、例えば
、レセプターまたはフラグメントに対する中和抗体は、リガンドまたは他の抗体
への結合について、試験化合物と競合する。この様式において、中和抗体または
フラグメントは、レセプターに対する１つ以上の結合部位を共有するポリぺプチ
ドの存在を検出するために使用され得、そしてそうでなければリガンドを結合し
得る、レセプターにおける結合部位を占有するためにもまた使用され得る。
【０１０３】 （Ｖ．核酸およびタンパク質の作製） タンパク質またはそのフラグメントをコードするＤＮＡは、化学合成、ｃＤＮ
Ａライブラリーのスクリーニングによって、または広範な種々の細胞株もしくは
組識サンプルから調製されたゲノムライブラリーのスクリーニングによって入手
され得る。天然の配列は、標準的な方法、および本明細書中（例えば、表２〜表
１０）に提供される配列を使用して、単離され得る。他の種対応物は、ハイブリ
ダイゼーション技術によって、または種々のＰＣＲ技術によって、配列データベ
ース（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ）における検索と組み合わせて、またはこの検索
によって、同定され得る。
【０１０４】 このＤＮＡは、完全長のレセプターまたはフラグメントの合成のために、広範
な種々の宿主細胞において発現され得、次いで完全長のレセプターまたはフラグ
メントは、例えば、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を生成するた
めに；結合研究のために；改変されたリガンド結合またはキナーゼ／ホスファタ
ーゼドメインの構築および発現のために；ならびに構造／機能研究のために、使
用され得る。改変体またはフラグメントは、適切な発現ベクターで形質転換また
はトランスフェクトされる宿主細胞において発現され得る。これらの分子は、組
換え宿主に由来する分子以外のタンパク質または細胞性の夾雑物を実質的に含有
しないことが可能であり、それゆえ、薬学的に受容可能なキャリアおよび／また
は希釈剤と組合わされる場合、薬学的組成物において特に有用である。タンパク
質、またはその部分は、他のタンパク質との融合物として発現され得る。
【０１０５】 発現ベクターは、代表的には、所望のレセプター遺伝子またはそのフラグメン
ト（通常、適切な宿主細胞において認識される適切な遺伝子制御エレメントに作
動可能に連結される）を含有する自己複製するＤＮＡまたはＲＮＡ構築物である
。これらの制御エレメントは、適切な宿主内での発現をもたらし得る。発現をも
たらすために必要な制御エレメントの特定の型は、使用される最終的な宿主細胞
に依存する。一般に、遺伝子制御エレメントは、原核生物プロモーター系または
真核生物プロモーター発現制御系を含み得、そして代表的に、転写プロモーター
、必要に応じて、転写の開始を制御するオペレーター、ｍＲＮＡの発現レベルを
上昇する転写エンハンサー、適切なリボソーム結合部位をコードする配列、なら
びに転写および翻訳を終結する配列を含み得る。発現ベクターはまた、通常、ベ
クターが宿主細胞から独立して複製することを可能する、複製起点を含む。
【０１０６】 本発明のベクターとしては、記載されるようなタンパク質をコードするＤＮＡ
を含むベクター、または生物学的に活性な等価なポリぺプチドをコードするその
フラグメントが挙げられる。ＤＮＡは、ウイルスプロモーターの制御下にあり得
、そして選択マーカーをコードし得る。本発明はさらに、原核生物宿主または真
核生物宿主において、このようなタンパク質をコードする真核生物ｃＤＮＡを発
現し得る、このような発現ベクターの使用を意図し、ここでベクターは、宿主と
適合性であり、そしてレセプターをコードする真核生物ｃＤＮＡはベクターに挿
入され、その結果、ベクターを含む宿主の増殖は、問題のｃＤＮＡを発現する。
通常、発現ベクターは、それらの宿主細胞における安定な複製のために、または
細胞あたりの所望の遺伝子の総コピー数を非常に増加する増幅のために、設計さ
れる。発現ベクターが、宿主細胞において複製することが、いつも必要であるわ
けではなく、例えば、宿主細胞によって認識される複製起点を含まないベクター
を使用して、種々の宿主において、タンパク質またはそのフラグメントの一過性
の発現をもたらすことが可能である。組換えによる、宿主ＤＮＡへの、タンパク
質をコードする部分またはそのフラグメントの組込みを引き起こすベクターの使
用もまた、可能である。
【０１０７】 本明細書中で使用される場合、ベクターは、プラスミド、ウイルス、バクテリ
オファージ、組込み可能なＤＮＡフラグメント、および宿主のゲノムへのＤＮＡ
フラグメントの組込みを可能にする他のビヒクルを含む。発現ベクターは、作動
可能に連結された遺伝子の発現をもたらす遺伝子制御エレメントを含む特殊化さ
れたベクターである。プラスミドは、ベクターの最も一般に使用される形態であ
るが、等価な機能を提供し、かつ当該分野において公知であるか、または公知に
なる、全ての他のベクターの形態は、本明細書における使用に適切である。例え
ば、Ｐｏｕｗｅｌｓら（１９８５および補遺）Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ
：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎ．Ｙ．、お
よびＲｏｄｒｉｑｕｅｚら（編）Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｓｕｒｖｅｙ ｏｆ Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｕ
ｓｅｓ、Ｂｕｔｔｅｒｓｗｏｒｔｈ、Ｂｏｓｔｏｎ，１９８８（これらは本明細
書中で参考として援用される）を参照のこと。
【０１０８】 形質転換された細胞は、組換えＤＮＡ技術を使用して構築されたレセプターベ
クターで形質転換されたまたはトランスフェクトされた細胞、好ましくは哺乳動
物細胞である。形質転換された宿主細胞は、通常、所望のタンパク質またはその
フラグメントを発現するが、そのＤＮＡのクローニング、増幅、および操作の目
的のために、目的のタンパク質を発現する必要はない。本発明はさらに、栄養培
地において、形質転換された細胞を培養することを意図し、従って、レセプター
が、細胞膜中に蓄積することを可能する。タンパク質は、培養物または特定の場
合において培養培地のいずれかから、回収され得る。
【０１０９】 本発明の目的のために、核酸配列は、それらが互いに機能的に関連する場合、
作動可能に連結されている。例えば、プレ配列または分泌リーダーについてのＤ
ＮＡは、それがプレタンパク質として発現されるか、またはポリペプチドを細胞
膜もしくはそのポリペプチドの分泌へと指向させるのに関与する場合、そのポリ
ペプチドに作動可能に連結されている。プロモーターは、それがポリペプチドの
転写を制御する場合、コード配列に作動可能に連結されている；リボソーム結合
部位は、それが翻訳を可能にする位置にある場合、コード配列に作動可能に連結
されている。通常、作動可能な連結とは、連続でかつリーディングフレームであ
ることを意味するが、しかし、リプレッサー遺伝子のような特定の遺伝子エレメ
ントは、オペレーター配列に連続して連結していないが、なお結合しており、こ
れは次いで発現を制御する。
【０１１０】 適切な宿主細胞は、例えば、原核生物、下等真核生物および高等真核生物を含
む。原核生物は、グラム陰性およびグラム陽性の両方の生物を含む（例えば、Ｅ
．ｃｏｌｉおよびＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）。下等真核生物は、酵母（例えば、Ｓ
．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅおよびＰｉｃｈｉａ）、およびＤｉｃｔｙｏｓｔｅｌｉ
ｕｍ属の種を含む。高等真核生物は、非哺乳動物起源（例えば、昆虫細胞および
鳥類）および哺乳動物起源（例えば、ヒト、霊長類および齧歯類）の両方の動物
細胞から樹立された組織培養細胞株を含む。
【０１１１】 原核生物宿主ベクター系は、多数の異なる種について広範な種々のベクターを
含む。本明細書において使用される場合、Ｅ．ｃｏｌｉおよびそのベクターは、
他の原核生物において使用される等価なベクターを包含するために遺伝的に使用
される。ＤＮＡを増幅するための代表的なベクターは、ｐＢＲ３２２またはその
多くの誘導体である。レセプターまたはそのフラグメントを発現するために使用
され得るベクターとしては、例えば、以下を含有するベクターが挙げられるが、
これらに限定されない：ｌａｃプロモーター（ｐＵＣシリーズ）；ｔｒｐプロモ
ーター（ｐＢＲ３２２−ｔｒｐ）；Ｉｐｐプロモーター（ｐＩＮシリーズ）；λ
−ｐＰまたはｐＲプロモーター（ｐＯＴＳ）；またはハイブリッドプロモーター
（例えば、ｐｔａｃ（ｐＤＲ５４０））。Ｂｒｏｓｉｕｓら、（１９８８）「Ｅ
ｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｅｍｐｌｏｙｉｎｇ Ｌａｍｂｄａ−、
ｔｒｐ−、ｌａｃ−、ａｎｄ Ｉｐｐ−ｄｅｒｉｖｅｄ Ｐｒｏｍｏｔｅｒｓ」
Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｓｕｒｖｅｙ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎ
ｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｕｓｅｓ（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚおよ
びＤｅｎｈａｒｄｔ編）、Ｂｕｔｔｅｒｓｗｏｒｔｈ、Ｂｏｓｔｏｎ、第１０章
、２０５−２３６頁（本明細書中で参考として援用される）を参照のこと。
【０１１２】 下等真核生物（例えば、酵母およびＤｉｃｔｙｏｓｔｅｌｉｕｍ）は、ＤＴＬ
Ｒ配列含有ベクターで形質転換され得る。本発明の目的のために、最も一般的な
下等真核生物宿主は、パン酵母Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉ
ａｅである。これは、一般的に下等真核生物を代表するように使用されるが、多
くの他の株および種もまた利用可能である。酵母ベクターは、代表的に、複製起
点（組み込み型でない場合）、選択遺伝子、プロモーター、レセプターまたはそ
のフラグメントをコードするＤＮＡ、ならびに翻訳終結、ポリアデニル化および
転写終結のための配列からなる。酵母のための適切な発現ベクターとしては、３
−ホスホグリセリン酸キナーゼおよび種々の他の解糖系酵素遺伝子プロモーター
のような構成的プロモーター、またはアルコールデヒドロゲナーゼ２プロモータ
ーもしくはメタロチオネインプロモーターのような誘導性プロモーターが挙げら
れる。適切なベクターとしては、以下の型の誘導体が挙げられる：自己複製性低
コピー数（例えば、ＹＲｐシリーズ）、自己複製性高コピー数（例えば、ＹＥｐ
シリーズ）；組み込み型（例えば、ＹＩｐシリーズ）またはミニ染色体（例えば
、ＹＣｐシリーズ）。
【０１１３】 高等真核生物組織培養細胞は、通常には、機能的に活性なインターロイキンタ
ンパク質の発現のための好ましい宿主細胞である。原理的に、任意の高等真核生
物組織培養細胞株（例えば、昆虫バキュロウイルス発現系）が、無脊椎動物供給
源または脊椎動物供給源にかかわらず、実用可能である。しかし、哺乳動物細胞
が好ましい。このような細胞の形質転換またはトランスフェクションおよび増殖
は、慣用的手段となっている。有用な細胞株の例としては、ＨｅＬａ細胞、チャ
イニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株、乳児ラット腎臓（ＢＲＫ）細胞株、
昆虫細胞株、鳥類細胞株、およびサル（ＣＯＳ）細胞株が挙げられる。このよう
な細胞株のための発現ベクターは、通常、複製起点、プロモーター、翻訳開始部
位、ＲＮＡスプライス部位（ゲノムＤＮＡを使用する場合）、ポリアデニル化部
位、および転写終結部位を含む。これらのベクターはまた、通常、選択遺伝子ま
たは増幅遺伝子を含む。適切な発現ベクターとしては、例えば、アデノウイルス
、ＳＶ４０、パルボウイルス、ワクシニアウイルスまたはサイトメガロウイルス
のような供給源由来のプロモーターを含有する、プラスミド、ウイルス、または
レトロウイルスであり得る。適切な発現ベクターの代表的な例は、ｐＣＤＮＡ１
；ｐＣＤ（Ｏｋａｙａｍａら、（１９８５）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．５：
１１３６−１１４２を参照のこと）；ｐＭＣ１ｎｅｏ ＰｏｌｙＡ（Ｔｈｏｍａ
ｓら、（１９８７）Ｃｅｌｌ ５１：５０３−５１２を参照のこと）；およびバ
キュロウイルスベクター（例えば、ｐＡＣ ３７３またはｐＡＣ ６１０）が挙
げられる。
【０１１４】 分泌タンパク質について、オープンリーディングフレームは、通常、そのＮ末
端でシグナルペプチドに共有結合的に連結されている成熟産物または分泌産物か
らなるポリペプチドをコードする。このシグナルペプチドは、成熟（または、活
性）ポリペプチドの分泌前に切断される。切断部位は、経験則（例えば、ｖｏｎ
−Ｈｅｉｊｎｅ（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
１４：４６８３−４６９０）から高度な正確性で予測され得、そしてシグナルペ
プチドの正確なアミノ酸組成は、その機能に重要ではないようである（例えば、
Ｒａｎｄａｌｌら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４３：１１５６−１１５９；
Ｋａｉｓｅｒら（１９８７）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３５：３１２−３１７）。
【０１１５】 特定のグリコシル化パターンまたは規定されたグリコシル化パターンを提供す
る系においてこれらのポリペプチドを発現することが、しばしば所望される。こ
の場合において、通常のパターンは、その発現系によって自然に提供されるパタ
ーンである。しかし、このパターンは、このポリペプチド（例えば、非グリコシ
ル化形態）を、異種発現系に導入された適切なグリコシル化タンパク質に曝露す
ることによって、改変可能である。例えば、レセプター遺伝子を、哺乳動物また
は他のグリコシル化酵素をコードする１以上の遺伝子と同時形質転換し得る。こ
のアプローチを使用して、特定の哺乳動物グリコシル化パターンが、原核生物ま
たは他の細胞において達成可能である。
【０１１６】 ＤＴＬＲの供給源は、上記のような組換えＤＴＬＲを発現する真核生物宿主ま
たは原核生物宿主であり得る。この供給源はまた、マウス Ｓｗｉｓｓ ３Ｔ３
繊維芽細胞のような細胞株であり得るが、他の哺乳動物細胞株もまた、本発明に
意図され、好ましい細胞株は、ヒト種由来である。
【０１１７】 現在配列が公知であるので、霊長類ＤＴＬＲ、そのフラグメントまたは誘導体
は、ペプチドを合成するための従来のプロセスによって調製され得る。これらは
、以下に記載されるようなプロセスを含む：ＳｔｅｗａｒｔおよびＹｏｕｎｇ（
１９８４）Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｐ
ｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ；Ｂｏｄａｎ
ｓｚｋｙおよびＢｏｄａｎｓｚｋｙ（１９８４）Ｔｈｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏ
ｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；およびＢｏｄａｎｓｚｋｙ（１９８４）Ｔｈｅ Ｐｒｉｎｃ
ｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−
Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（これらの各々は全て、本明細書中で参考とし
て援用される）。例えば、アジドプロセス、酸塩化物プロセス、酸無水物プロセ
ス、混合無水物プロセス、活性エステルプロセス（例えば、ｐ−ニトロフェニル
エステル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、またはシアノメチルエステ
ル）、カルボジイミダゾールプロセス、酸化還元プロセス、またはジシクロヘキ
シルカルボジイミド（ＤＣＣＤ）／付加プロセスが使用され得る。固相合成およ
び液相合成は共に、上記のプロセスに適用可能である。類似の技術が、部分的な
ＤＴＬＲ配列と共に使用され得る。
【０１１８】 ＤＴＬＲタンパク質、フラグメントまたは誘導体が、ペプチド合成において代
表的に使用されるような、上記のプロセスに従って適切に調製され、これは、一
般に、いわゆる段階プロセス（これは、アミノ酸を末端アミノ酸に１つずつ順番
に縮合させる工程を含む）によるか、または末端アミノ酸にペプチドフラグメン
トを結合させることによる。結合反応において使用されていないアミノ基は、不
正確な位置での結合を防止するために代表的に保護されなければならない。
【０１１９】 固相合成が適用される場合、Ｃ末端アミノ酸は、そのカルボキシル基を介して
不溶性キャリアまたは支持体に結合される。その不溶性キャリアは、それが反応
性カルボキシル基への結合能を有する限り、特に限定されない。このような不溶
性のキャリアの例としては、ハロメチル樹脂（例えば、クロロメチル樹脂または
ブロモメチル樹脂、ヒドロキシメチル樹脂、フェノール樹脂、ｔｅｒｔ−アルキ
ルオキシカルボニルヒドラジド化樹脂など）が挙げられる。
【０１２０】 アミノ基保護アミノ酸は、その活性化されたカルボキシル基と先に形成された
ペプチドまたは鎖の反応性アミノ基との縮合を介して順番に結合されて、ペプチ
ドを段階的に合成する。完全な配列を合成した後、ペプチドを、不溶性キャリア
から分離して、そのペプチドを産生する。この固相アプローチは、Ｍｅｒｒｉｆ
ｉｅｌｄら（１９６３）、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−２１
５６（本明細書中で参考として援用される）によって一般的に記載される。
【０１２１】 調製されたタンパク質およびそのフラグメントは、ペプチド分離（例えば、抽
出、沈澱、電気泳動および種々の形態のクロマトグラフィーなど）によって反応
混合物から単離および精製され得る。本発明のレセプターは、その所望される用
途に応じて、種々の程度の純度で入手され得る。精製は、本明細書に開示される
タンパク質精製技術の使用によって（以下を参照のこと）、または免疫吸着アフ
ィニティークロマトグラフィーの方法において記載される本明細書中の抗体の使
用によって、達成され得る。この免疫吸着アフィニティークロマトグラフィーは
、まずその抗体を固相支持体に結合し、次いでその結合された抗体を、適切な細
胞の可溶化溶解物、レセプターを発現する他の細胞の溶解物、あるいはＤＮＡ技
術の結果としてこのタンパク質を産生する細胞の溶解物または上清と接触させる
ことによって実行される。下記を参照のこと。
【０１２２】 一般に、精製されたタンパク質は、少なくとも約４０％純粋であり、通常少な
くとも約５０％純粋であり、通常少なくとも約６０％純粋であり、代表的に少な
くとも約７０％純粋であり、より代表的には少なくとも約８０％純粋であり、好
ましくは少なくとも約９０％純粋であり、より好ましくは少なくとも約９５％純
粋であり、そして特定の実施形態において、９７％〜９９％以上純粋である。純
度は、通常、重量基準であるが、またモル基準でもあり得る。異なるアッセイが
、適切な場合、適用される。
【０１２３】 （ＶＩ．抗体） 抗体は、種々の哺乳動物（例えば、霊長類）のＤＴＬＲタンパク質およびその
フラグメント（天然に存在するネイティブ形態およびそれらの組換え形態の両方
）に対して惹起され得、その差異は、活性なレセプターに対する抗体が、ネイテ
ィブな立体構造においてのみ存在するエピトープをより認識する可能性があると
いうことである。変性された抗原の検出はまた、例えば、ウエスタン分析におい
て、有用であり得る。天然のレセプターまたは抗体のアゴニストまたはアンタゴ
ニストとして有用な抗イディオタイプ抗体がまた意図される。
【０１２４】 好ましい抗体は、親和性および選択性の両方の特性を示す。高い親和性は一般
的に好ましく、選択性は、種々の実施形態のサブセット間の区別を可能にする。
特に、例えば、関連メンバーの種々の特異的な組み合わせに結合するがその他に
結合しないように特徴付けられる抗体調製物を保持することが望ましい。このよ
うな種々の組み合わせのサブセットは、例えば、これらの試薬が、免疫親和性、
選択などの標準的な方法を用いて作製または選択され得ることを特異的に可能に
する。
【０１２５】 タンパク質の予め決定されたフラグメントに対する抗体（結合フラグメントお
よび単鎖バージョンを含む）は、そのフラグメントと免疫原性タンパク質との結
合体を用いた動物の免疫によって惹起され得る。モノクローナル抗体は、所望の
抗体を分泌する細胞から調製される。これらの抗体は、正常なタンパク質もしく
は欠損性タンパク質への結合についてスクリーニングされ得るか、またはアゴニ
スト活性もしくはアンタゴニスト活性についてスクリーニングされ得る。これら
のモノクローナル抗体は通常、少なくとも約１ｍＭ、より通常には少なくとも約
３００μＭ、代表的には少なくとも約１００μＭ、より代表的には少なくとも約
３０μＭ、好ましくは少なくとも約１０μＭ、そしてより好ましくは少なくとも
約３μＭまたはそれよりも良好なＫＤで結合する。
【０１２６】 本発明の抗体（抗原結合フラグメントを含む）は、有意な診断的または治療的
な価値を有し得る。それらは、レセプターに結合しそしてリガンドへの結合を阻
害するか、またはレセプターが生物学的応答を誘発する（例えば、その基質に作
用する）能力を阻害する、潜在的なアンタゴニストであり得る。それらはまた、
非中和抗体として有用であり得、そして毒素または放射性核種に結合されて、産
生細胞（またはインターロイキンの供給源に局在化される細胞）に結合し得る。
さらに、これらの抗体は、薬物または他の治療薬剤に、直接的にか、またはリン
カーによって間接的にかのいずれかで結合され得る。
【０１２７】 本発明の抗体はまた、診断的適用において有用であり得る。捕捉抗体または非
中和抗体として、これらは、リガンド結合または基質結合を阻害することなくレ
セプターに結合し得る。中和抗体として、これらは、競合結合アッセイにおいて
有用であり得る。これらはまた、リガンドの検出または定量に有用である。これ
らは、それぞれのタンパク質のウエスタンブロット分析あるいは免疫沈降または
免疫精製のための試薬として使用され得る。
【０１２８】 タンパク質フラグメントは、融合ポリペプチドまたは共有結合されたポリペプ
チドのように、他の物質（特に、ポリペプチド）に結合され、免疫原として使用
され得る。哺乳動物ＤＴＬＲおよびそのフラグメントは、種々の免疫原（例えば
、キーホールリンペットヘモシアニン、ウシ血清アルブミン、破傷風トキソイド
など）に融合され得るか、または共有結合的に連結され得る。ポリクローナル抗
血清を調製する方法の記載については、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｏｅｂｅ
ｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ、ＨａｒｐｅｒおよびＲｏｗ、１９６９
；Ｌａｎｄｓｔｅｉｎｅｒ（１９６２）Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｓｅｒ
ｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ、Ｄｏｖｅｒ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ
ｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；およびＷｉｌｌｉａｍｓら（１９６７）Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第
１巻 Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；（これらは各々、本
明細書中に参考として援用される）を参照のこと。代表的な方法は、抗原での動
物の超免疫を含む。次いで、この動物の血液を、繰返し免疫のすぐ後に回収し、
そしてγグロブリンを単離する。
【０１２９】 いくつかの例において、種々の哺乳動物宿主（例えば、マウス、齧歯類、霊長
類、ヒトなど）からモノクローナル抗体を調製することが望ましい。このような
モノクローナル抗体を調製するための技術の記載は、例えば、Ｓｔｉｔｅｓら（
編）Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第４版）
、Ｌａｎｇｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｌｏｓ Ａｌｔｏ
ｓ、ＣＡおよびそこで引用される参考文献；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９
８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、ＣＳ
Ｈ Ｐｒｅｓｓ；Ｇｏｄｉｎｇ（１９８６）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂ
ｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（第２版）Ａｃ
ａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；ならびに、特に、Ｋｏｈｌｅｒ
およびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７（
ここでは、モノクローナル抗体を作製する１つの方法を議論される）において、
見出され得る。これらの参考文献のそれぞれは、本明細書中に参考として援用さ
れる。簡潔にまとめると、この方法は、免疫原を動物に注射する工程を包含する
。次いで、この動物を屠殺し、そして細胞をその脾臓から採取し、次いで、この
細胞を骨髄腫細胞と融合する。結果は、インビトロで再生することが可能なハイ
ブリッド細胞すなわち「ハイブリドーマ」である。次いで、このハイブリドーマ
の集団をスクリーニングして、個々のクローンを単離し、このクローンの各々は
、この免疫原に対する単一の抗体種を分泌する。この様式において、得られる個
々の抗体種は、免疫原性物質上の認識される特異的部位に応答して作製された、
免疫動物由来の不死化およびクローン化された単一のＢ細胞の産物である。
【０１３０】 他の適切な技術としては、抗原性ポリペプチドあるいはファージベクターまた
は類似のベクター中の抗体のライブラリーの選択への、インビトロでのリンパ球
の曝露を含む。Ｈｕｓｅら（１９８９）「Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｌ
ａｒｇｅ Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｍ
ｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ ｉｎ Ｐｈａｇｅ Ｌａｍ
ｂｄａ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１；およびＷａｒｄら（
１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６（これらの各々は、本明細書
中に参考として援用される）を参照のこと。本発明のポリペプチドおよび抗体は
（キメラ抗体またはヒト化抗体を含む）、改変を伴ってかまたは伴わないで使用
され得る。しばしば、ポリペプチドおよび抗体は、検出可能なシグナルを提供す
る物質に共有結合的にかまたは非共有結合的にのいずれかで結合することによっ
て標識される。広範な種々の標識および結合体化技術が公知であり、そして科学
文献および特許文献の両方において、広範に報告されている。適切な標識として
は、放射性核種、酵素、基質、補因子、インヒビター、蛍光部分、化学発光部分
、磁性粒子などが挙げられる。このような標識の使用を教示する特許としては、
米国特許第３，８１７，８３７号；同第３，８５０，７５２号；同第３，９３９
，３５０号；同第３，９９６，３４５号；同第４，２７７，４３７号；同第４，
２７５，１４９号；および同第４，３６６，２４１号が挙げられる。また、組換
え免疫グロブリンまたはキメラ免疫グロブリンは、生成され得るか（Ｃａｂｉｌ
ｌｙ、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）；またはトランスジェニ
ックマウスにおいて作製され得る（Ｍｅｎｄｅｚら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ
Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６−１５６を参照のこと）。これらの参考文献は
、本明細書中に参考として援用される。
【０１３１】 本発明の抗体はまた、ＤＴＬＲの単離における、アフィニティークロマトグラ
フィーのために使用され得る。抗体が固体支持体（例えば、アガロース、Ｓｅｐ
ｈａｄｅｘなどのような粒子）に連結されているカラムを調製し得、細胞溶解物
を、カラムに通過させ得、カラムを洗浄し、続いて、漸増濃度の穏やかな変性剤
で洗浄し、これにより、精製タンパク質を放出させる。このタンパク質を使用し
て、抗体を精製し得る。
【０１３２】 抗体はまた、特定の発現産物について、発現ライブラリーをスクリーニングす
るために使用され得る。通常、このような手順において使用される抗体は、抗体
結合によって抗原の存在の容易な検出を可能にする部分で標識される。
【０１３３】 ＤＴＬＲに対して惹起される抗体はまた、抗イディオタイプ抗体を惹起するた
めに使用される。これらは、タンパク質の発現、またはそのタンパク質を発現す
る細胞に関連する、種々の免疫学的状態を検出または診断するのに有用である。
これらはまた、リガンドのアゴニストまたはアンタゴニストとして有用であり、
天然に存在するリガンドについての、競合的なインヒビターまたは置換体であり
得る。
【０１３４】 規定された免疫原（例えば、配列番号４、６、８、１０、１２、１４、１６、
１８、２０、２２、または２４のアミノ酸配列からなる免疫原）に対して生成さ
れた抗体と特異的に結合するか、またはこのような抗体と特異的に免疫反応性で
あるＤＴＬＲタンパク質は、代表的に、イムノアッセイにおいて決定される。イ
ムノアッセイは、代表的には、例えば、配列番号４、６、８、１０、１２、１４
、１６、１８、２０、２２、または２４のタンパク質に対して惹起されたポリク
ローナル抗血清を使用する。この抗血清は、他のＩＬ−１Ｒファミリーメンバー
（例えば、ＤＴＬＲ１）（好ましくは同じ種由来）に対して、低い交差反応性を
有するように選択され、そしてこのような交差反応性はいずれも、イムノアッセ
イで使用する前に免疫吸着法により除去される。
【０１３５】 イムノアッセイで使用する抗血清を生成するために、配列番号４、６、８、１
０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、または２４のタンパク質もしくはそ
れらの組み合わせを、本明細書に記載されるようにして単離する。例えば、組換
えタンパク質を哺乳動物細胞株で生成し得る。適切な宿主、例えば、Ｂａｌｂ／
ｃのようなマウスの同系交配系統を、代表的には標準的アジュバント（例えば、
フロイントアジュバント）および標準的マウス免疫プロトコル（Ｈａｒｌｏｗお
よびＬａｎｅ、前出を参照のこと）を使用して、選択されたタンパク質を用いて
免疫する。あるいは、本明細書中に開示される配列に由来し、そしてキャリアタ
ンパク質に結合体化させた合成ペプチドを免疫原に使用し得る。ポリクローナル
血清を収集し、イムノアッセイ（例えば、固体支持体上に固定した免疫原を用い
る固相イムノアッセイ）において免疫原タンパク質に対して力価測定する。力価
が１０４以上のポリクローナル抗血清が選択され、他のＩＬ−１Ｒファミリーメ
ンバー（例えば、マウスＤＴＬＲまたはヒトＤＴＬＲ１）に対する交差反応性に
ついて、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、前述、５７０−５７３頁に記載されるよ
うな競合結合イムノアッセイを使用して試験される。好ましくは、少なくとも２
つのＤＴＬＲファミリーメンバーが、ヒトＤＴＬＲ２−１０のいずれかまたはい
くつかと組み合わせて、この決定において使用される。これらのＩＬ−１Ｒファ
ミリーメンバーは、組換えタンパク質として生成され得、そして本明細書に記載
される標準的分子生物学およびタンパク質化学技術を使用して単離され得る。
【０１３６】 競合結合形式のイムノアッセイが、交差反応性決定のために使用され得る。例
えば、配列番号４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、およ
び／または２４のタンパク質もしくはそれらの種々のフラグメントを、固体支持
体に固定し得る。このアッセイに添加されるタンパク質は、固定された抗原に対
する抗血清の結合と競合する。固定されたタンパク質に対する抗血清の結合と競
合する上記タンパク質の能力を、配列番号４、６、８、１０、１２、１４、１６
、１８、２０、２２、および／または２４のタンパク質の能力と比較する。上記
タンパク質に対するパーセント交差反応性を、標準的算出法を使用して算出する
。上記に列挙した各タンパク質との交差反応性が１０％未満の抗血清を選択およ
びプールする。次いで、上記に列挙したタンパク質との免疫吸着法により、交差
反応抗体をプールした抗血清から取り出す。
【０１３７】 次いで、免疫吸着およびプールした抗血清を、上記のように、競合結合イムノ
アッセイにおいて使用し、第２のタンパク質を免疫原タンパク質（例えば、配列
番号４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、および／または
２４のＩＬ−１Ｒ様タンパク質）と比較する。この比較を行うため、この２つの
タンパク質を広範囲の濃度でそれぞれアッセイし、そして固定されたタンパク質
への抗血清の結合を５０％阻害するのに必要な各タンパク量を決定する。必要と
される第２のタンパク量が、選択されたタンパク質または必要とされるタンパク
質の２倍未満のタンパク量である場合、第２のタンパク質は、免疫原に対して生
成した抗体と特異的に結合すると言われる。
【０１３８】 これらのＤＴＬＲタンパク質は、これまで同定された少なくとも１０個の遺伝
子を含む相同なタンパク質のファミリーのメンバーであることが理解される。Ｄ
ＴＬＲ２−１０のような特定の遺伝子生成物に対して、この用語は、本明細書に
開示されるアミノ酸配列だけではなく、対立遺伝子、非対立遺伝子または種改変
体である他のタンパク質をもいう。この用語は、単一部位変異のような従来の組
換え技術を使用する計画的な変異によるか、またはそれぞれのタンパク質をコー
ドするＤＮＡの短い部分を切除することによるか、または新規アミノ酸の置換も
しくは新規アミノ酸の付加により導入された非天然の変異を含むことも理解され
る。このような小さな改変は、本来の分子の免疫的同一性および／またはその生
物学的活性を実質的に維持しなければならない。従って、これらの改変は、示さ
れた天然に存在するＩＬ−１Ｒ関連タンパク質（例えば、配列番号２、４、６、
８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、または２４に示されるＤＴＬ
Ｒタンパク質）と特異的に免疫反応性であるタンパク質を含む。タンパク質を適
切な細胞株で発現させ、そしてリンパ球に対する適切な効果を測定することによ
り、改変タンパク質の生物学的特性が決定され得る。重大でないと考えられる特
定のタンパク質の改変として、ＩＬ−１Ｒファミリーについて総括して上記のよ
うな類似の化学特性を有するアミノ酸の保存的置換が挙げられる。タンパク質を
ＤＴＬＲ２−１０のタンパク質と最適に整列させ、そして本明細書に記載される
従来のイムノアッセイを使用して免疫的同一性を決定することにより、本発明の
タンパク質組成を決定し得る。
【０１３９】 （ＶＩＩ．キットおよび定量） 本発明のＩＬ−１Ｒ様分子の天然に存在する形態および組換え形態は両方とも
、キットおよびアッセイ法において特に有用である。例えば、これらの方法はま
た、結合活性（例えば、これらのタンパク質に対するリガンド）についてのスク
リーニングに適用される。いくつかの自動化アッセイ法が近年開発されており、
１年当たり何万もの化合物のスクリーニングを可能にしている。例えば、ＢＩＯ
ＭＥＫ自動化ワークステーション、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，
Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、およびＦｏｄｏｒら、（１９９１
）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：７６７−７７３（これらは、参考として本明細書中
に援用される）を参照のこと。後者は、固体基質上に合成された複数の規定され
たポリマーによる結合を試験する手段を記載している。リガンドまたはアゴニス
ト／アンタゴニストに相同なタンパク質のスクリーニングに適したアッセイの開
発は、本発明により提供されるように、大量の精製された可溶性の活性状態のＤ
ＴＬＲの利用可能性により、大いに容易にされ得る。
【０１４０】 前述のリガンドスクリーニング技術における使用のために、精製ＤＴＬＲはプ
レート上に直接コートされ得る。しかし、これらのタンパク質に対する非中和抗
体は、例えば、診断的な使用において有用な固相上に各レセプターを固定化する
ための捕獲抗体として使用され得る。
【０１４１】 本発明はまた、タンパク質またはそのリガンドの存在を検出するための様々な
診断用キットおよび方法における、ＤＴＬＲ２−１０、そのフラグメント、ペプ
チド、およびそれらの融合産物の使用を意図する。あるいは、またはさらに、こ
の分子に対する抗体が、キットおよび方法に組み込まれ得る。代表的には、キッ
トは、規定されたＤＴＬＲペプチド、または遺伝子セグメント、あるいは一方も
しくは他方を認識する試薬のいずれかを含む区画を有する。代表的には認識試薬
は、ペプチドの場合、レセプターまたは抗体であり、あるいは遺伝子セグメント
の場合には、通常、ハイブリダイゼーションプローブである。
【０１４２】 サンプル（例えば、ＤＴＬＲ４）の濃度を決定するために好ましいキットは、
代表的には、ＤＴＬＲ４に対する既知の結合親和性を有する標識化合物（例えば
、リガンドまたは抗体）、ポジティブコントロールとしてＤＴＬＲ４の供給源（
天然に存在するかまたは組換え）、および遊離の標識化合物から結合した標識化
合物を分離する手段（例えば、試験サンプル中のＤＴＬＲ４を固定する固相）を
備える。試薬を含む区画および説明書が通常提供される。
【０１４３】 哺乳動物ＤＴＬＲまたはペプチドフラグメントに特異的な抗原結合フラグメン
トあるいはレセプターフラグメントを含む抗体は、上昇したレベルのリガンドお
よび／またはそのフラグメントの存在を検出するための診断的な適用において有
用である。診断アッセイは、均質的（遊離試薬と抗体−抗原複合体との間の分離
工程を含まない）または異質的（分離工程を含む）であり得る。種々の市販のア
ッセイ（例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合イムノソルベント
検定法（ＥＬＩＳＡ）、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、酵素増幅イムノアッセ
イ技術（ＥＭＩＴ）、基質−標識化蛍光イムノアッセイ（ＳＬＦＩＡ）など）が
存在する。例えば、標識され、そしてＤＴＬＲ４またはその特定のフラグメント
に対する抗体を認識する二次抗体を使用することにより、非標識化抗体を使用し
得る。これらのアッセイもまた、文献で広範囲に議論されている。例えば、Ｈａ
ｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ＣＳＨ．、ならびにＣｏｌｉｇａｎ（編、１９９１お
よび定期的な補遺）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｉｍｍｕｎ
ｏｌｏｇｙ Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。
【０１４４】 抗イディオタイプの抗体は、ＤＴＬＲ４のアゴニストまたはアンタゴニストと
して作用する類似の用途を有し得る。これらは、適切な状況下で治療用試薬とし
て有用であるようである。
【０１４５】 しばしば、診断アッセイのための試薬は、アッセイの感度を最適化するために
、キットに補充される。本発明について、アッセイの性質、プロトコル、および
標識に依存して、標識抗体または非標識抗体のいずれか、あるいは標識リガンド
が提供される。これは、通常、緩衝剤、安定化剤、酵素に対する基質などのよう
なシグナルの産生に必要な材料などの他の添加物と組み合わされる。好ましくは
、キットはまた、適切な使用および使用後の含有物の廃棄についての説明書を包
含する。代表的には、キットは、有用な各試薬の区画を有し、そして適切な使用
および試薬の廃棄についての説明書を含む。望ましくは、試薬は乾燥した凍結乾
燥粉末として提供され、この試薬は、アッセイを行うのに適した濃度を有する水
性媒体中で再構成され得る。
【０１４６】 診断アッセイの上記の構成成分は、改変を行うことなく使用され得るか、また
は種々の方法において改変され得る。例えば、標識は、検出可能なシグナルを直
接または間接的に提供する部分を共有結合または非共有結合することによって達
成され得る。これらのアッセイのいずれかにおいて、試験化合物、ＤＴＬＲ、ま
たはそれに対する抗体は、直接または間接のいずれかで標識され得る。直接標識
についての可能性として、標識基：放射性標識（例えば、１２５Ｉ）、酵素（米
国特許第３，６４５，０９０号）（例えば、ペルオキシダーゼおよびアルカリホ
スファターゼ）、ならびに蛍光標識（米国特許第３，９４０，４７５号）（これ
は、蛍光強度における変化、波長のシフト、または蛍光偏光をモニターし得る）
が挙げられる。これらの特許の両方が、本明細書中に参考として援用される。間
接標識についての可能性としては、１つの構成成分のビオチン化、続いて上記の
標識基の一つに結合したアビジンへの結合が挙げられる。
【０１４７】 遊離のリガンドから結合したリガンドを、あるいは遊離の試験化合物から結合
した試験化合物を分離する多くの方法もまた存在する。ＤＴＬＲは、種々のマト
リクスに固定され得、続いて洗浄され得る。適切なマトリクスは、ＥＬＩＳＡプ
レートのようなプラスチック、フィルター、およびビーズを含む。レセプターを
マトリクスに固定する方法としては、プラスチックへの直接接着、捕捉抗体の使
用、化学結合、およびビオチン−アビジンが挙げられるがこれらに限定されない
。このアプローチの最後の工程は、任意のいくつかの方法（これは、例えばポリ
エチレングリコールのような有機溶媒または硫酸アンモニウムのような塩を利用
する方法を含む）による抗体／抗原複合体の沈殿を含む。他の適切な分離技術は
、Ｒａｔｔｌｅら（１９８４）Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．３０（９）１４５７−１４
６１に記載されるフルオレセイン抗体磁化粒子方法、および米国特許第４，６５
９，６７８号に記載されるような二重抗体磁性粒子分離（これらの各々は、本明
細書において参考として援用される）を含むが、これに限定されない。
【０１４８】 タンパク質またはフラグメントを種々の標識へ連結するための方法は，文献に
おいて広範に報告されており、そしてここでは詳細な議論を必要としない。これ
らの技術の多くは，ペプチド結合を形成するためのカルボジイミドまたは活性エ
ステルのいずれかの使用を通じた活性化カルボキシル基の使用、連結のために、
活性化ハロゲン（例えば、クロロアセチル）または活性化オレフィン（例えば、
マレイミド）を用いたメルカプト基の反応によるチオエーテルの形成などを含む
。融合タンパク質もまた、これらの適用において用途が見出される。
【０１４９】 本発明の別の診断的局面は、ＤＴＬＲの配列から採取したオリゴヌクレオチド
またはポリヌクレオチド配列の使用を含む。これらの配列は、免疫学的障害を有
すると疑われる患者におけるそれぞれのＤＴＬＲのレベルを検出するためのプロ
ーブとして使用され得る。ＲＮＡおよびＤＮＡの両方のヌクレオチド配列の調製
、配列の標識、および好ましいサイズの配列は、文献において、充分な記載およ
び議論がなされている（ｒｅｃｅｉｖｅ）。通常、オリゴヌクレオチドプローブ
は、少なくとも約１４ヌクレオチド、通常少なくとも約１８ヌクレオチドを有す
るべきであり、そしてポリヌクレオチドプローブは数キロベースにまで及び得る
。種々の標識、最も一般的には放射性核種、特に３２Ｐが使用され得る。しかし
、他の技術もまた使用され得る（例えば、ポリヌクレオチドへの導入のためのビ
オチン改変ヌクレオチドの使用）。次いで、ビオチンは、アビジンまたは抗体へ
の結合のための部位として作用し、これは、広範な種々の標識（例えば、放射性
核種、蛍光剤、酵素など）で標識され得る。あるいは、特定の二重鎖（ＤＮＡ二
重鎖、ＲＮＡ二重鎖、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド二重鎖、またはＤＮＡ−タン
パク質二重鎖を含む）を認識し得る抗体が使用され得る。次いで抗体は、標識さ
れ得、そして二重鎖が表面に結合し、その結果、表面上の二重鎖の形成に際して
二重鎖に結合した抗体の存在が検出され得るアッセイが、行われる。新規のアン
チセンスＲＮＡに対するプローブの使用は、任意の従来の技術（例えば、核酸ハ
イブリダイゼーション、プラスおよびマイナススクリーニング、組換えプロービ
ング、ハイブリッド遊離翻訳（ｈｙｂｒｉｄ ｒｅｌｅａｓｅｄ ｔｒａｎｓｌ
ａｔｉｏｎ）（ＨＲＴ）、およびハイブリッド拘束翻訳（ｈｙｂｒｉｄ ａｒｒ
ｅｓｔｅｄ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ）（ＨＡＲＴ））において行われ得る。こ
れはまた、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）のような増幅技術を含む。
【０１５０】 他のマーカーの定性的存在または定量的存在についてもまた試験する診断キッ
トもまた意図される。診断または予後は、マーカーとして使用される複数の指標
の組合せに依存し得る。従って、キットはマーカーの組み合わせについて試験し
得る。例えば、Ｖｉａｌｌｅｔら、（１９８９）Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｇｒ
ｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｓ．１；８９−９７を参照のこと。
【０１５１】 （ＶＩＩＩ．治療的有用性） 本発明は、有意な治療的価値を有する試薬を提供する。ＤＴＬＲ（天然に存在
するかまたは組換え）、そのフラグメント、ムテインレセプター、および抗体、
ならびにこのレセプターまたは抗体に対する結合親和性を有するとして同定され
た化合物は、これらのリガンドのレセプターの異常な発現を示す状態の処置にお
いて有用であるはずである。このような異常性は、代表的には、免疫障害によっ
て明らかにされる。従って、本発明は、リガンドへの応答の異常な発現または異
常な誘発と関連する、種々の疾患または障害において治療的価値を提供するはず
である。Ｔｏｌｌリガンドは、形態発生（例えば、背腹極性決定および免疫応答
、特に初期の生得性応答）に関与することが示唆されている。例えば、Ｓｕｎら
（１９９１）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９６：２４７−２５４；Ｈｕｌｔ
ｍａｒｋ（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ ３６７：１１６−１１７を参照のこと。
【０１５２】 組換えＤＴＬＲ、ムテイン、アゴニスト、またはそれらに対するアンタゴニス
ト抗体、あるいは抗体は精製され、次いで患者に投与され得る。これらの試薬は
、さらなる活性成分とともに治療的使用のために、例えば、従来の薬学的に受容
可能なキャリアまたは希釈剤中で、生理的に無害な安定剤および賦形剤とともに
合わされ得る。これらの組み合わせは、例えば、濾過により滅菌され得、そして
投薬バイアル中における凍結乾燥によるような投薬形態または安定化した水性調
製物中における保存物へと配置される。本発明はまた、相補的結合ではない抗体
またはその結合フラグメントの使用を意図する。
【０１５３】 ＤＴＬＲまたはそのフラグメントを用いたリガンドスクリーニングを行って、
レセプターに対する結合親和性を有する分子を同定し得る。次いで、続く生物学
的アッセイを利用して推定リガンドが競合的な結合（これは、内因性の刺激活性
をブロックし得る）を提供し得るか否かを決定し得る。レセプターフラグメント
は、リガンドの活性をブロックするという点で、ブロッカーまたはアンタゴニス
トとして使用され得る。同様に、内因性刺激活性を有する化合物は、レセプター
を活性化し得、従って、この化合物は、リガンドの活性を刺激（例えば、シグナ
ル伝達の誘発）するという点で、アゴニストである。本発明はさらに、ＤＴＬＲ
に対する抗体のアンタゴニストとしての治療的用途を意図する。
【０１５４】 有効な治療に必要な試薬の量は、多くの異なる因子に依存し、これには、投与
手段、標的部位、患者の生理学的状態、および投与される他の医薬品が含まれる
。従って、処置投薬量を、力価測定して、安全性および効力を最適化するべきで
ある。代表的には、インビトロで使用される投薬量によって、これらの試薬のイ
ンサイチュでの投与のために有用な量における、有用なガイダンスを提供し得る
。特定の障害の処置についての有効用量の動物試験は、ヒトの投薬量の予測的な
指標をさらに提供する。種々の考慮事項が以下に記載されている。例えば、Ｇｉ
ｌｍａｎら（編）（１９９０）ＧｏｏｄｍａｎおよびＧｉｌｍａｎ：Ｔｈｅ Ｐ
ｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ
、第８版、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ；ならびにＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、最新版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂ
ｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎ．；これらは、各々が本明細
書において参考として援用される。投与方法は、そこに議論されており、そして
以下、例えば、経口、静脈内、腹腔内、または筋肉内投与、経皮拡散などである
。薬学的に受容可能なキャリアには、水、生理食塩水、緩衝液、および、例えば
、Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ，Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．，Ｒａｈｗａｙ，Ｎｅｗ
Ｊｅｒｓｅｙに記載された他の化合物が挙げられる。推定リガンドとそのレセプ
ターとの間の予想される高親和性結合、すなわちターンオーバー数に起因して、
まず、低用量のこれらの試薬が、有効であることが予想される。そして、シグナ
ル伝達経路により、極めて少量のリガンドが効果を有し得ることが示唆される。
従って、投薬量範囲は、通常、１ｍＭ濃度よりも低い量であり、代表的には、約
１０μＭ濃度より低く、通常、約１００ｎＭより低く、好ましくは約１０ｐＭ（
ピコモル濃度）より低く、そして最も好ましくは約１ｆＭ（フェムトモル濃度）
より低い量で、適切なキャリアと共に存在することが予想される。徐放性処方物
または徐放性装置が、しばしば、連続投与に利用される。
【０１５５】 ＤＴＬＲ、そのフラグメント、および抗体またはそのフラグメント、アンタゴ
ニストおよびアゴニストが、処置される宿主に直接投与され得るか、または化合
物のサイズに依存して、オボアルブミンまたは血清アルブミンなどのキャリアタ
ンパク質にそれらを結合させた後、投与されるのが望ましくあり得る。治療用処
方物を、任意の従来の投薬処方において投与し得る。活性成分を単独投与するこ
とは可能であるが、薬学的処方物として活性成分を存在させるのが好ましい。処
方物は、上記に規定したような少なくとも一種の活性成分を、一種以上のその受
容可能なキャリアと共に含む。各キャリアは、他の成分と適合性があり、患者に
とって有害ではないという意味で、薬学的および生理学的の両方で受容可能でな
ければならない。処方物は、経口、直腸内、鼻腔内または非経口的（皮下、筋肉
内、静脈内および皮内を含む）投与に適したものを含む。処方物は、都合良く、
単位投薬量形態で存在し得、そして薬学分野において周知の方法により調製され
得る。例えば、Ｇｉｌｍａｎら（編、１９９０年）ＧｏｏｄｍａｎおよびＧｉｌ
ｍａｎ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅ
ｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第８版，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ；ならびにＲｅｍ
ｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（最新版
），Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎ．；Ａ
ｖｉｓら（編、１９９３年）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆ
ｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎ
Ｙ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編、１９９０年）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；ならびにＬ
ｉｅｂｅｒｍａｎら（編、１９９０年）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓ
ａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ
を参照のこと。本発明の治療は、他の治療的薬剤（特に、他のＩＬ−１ファミリ
ーのメンバーのアゴニストまたはアンタゴニスト）と組み合わせられ得るか、ま
たはそれらに付随して使用され得る。
【０１５６】 （ＩＸ．リガンド） 本明細書におけるＴｏｌｌレセプターの説明は、上記のように、リガンドを同
定する手段を提供する。このようなリガンドは、適度に高い親和性を有するそれ
ぞれのレセプターと特異的に結合するはずである。種々の構築物が、利用可能と
なり、これによっていずれのレセプターの標識方法によってもそのリガンドを検
出し得る。例えば、ＤＴＬＲの直接標識、二次標識のためのマーカー（例えば、
ＦＬＡＧまたは他のエピトープタグ等）を融合させることにより、レセプターの
検出を可能にする。これは、生化学的精製のための親和性方法、または発現クロ
ーニングアプローチでの標識化もしくは選択のように、組織学的であり得る。ツ
ーハイブリッド選択系もまた、利用可能なＤＴＬＲ配列を有する適切な構築物の
作製に応用され得る。例えば、ＦｉｅｌｄｓおよびＳｏｎｇ（１９８９）Ｎａｔ
ｕｒｅ ３４０：２４５−２４６を参照のこと。
【０１５７】 一般的に、ＤＴＬＲの記載は、ＤＴＬＲ２、ＤＴＬＲ３、ＤＴＬＲ４、ＤＴＬ
Ｒ５、ＤＴＬＲ６、ＤＴＬＲ７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ９、および／またはＤＴ
ＬＲ１０試薬ならびにＤＴＬＲ２、ＤＴＬＲ３、ＤＴＬＲ４、ＤＴＬＲ５、ＤＴ
ＬＲ６、ＤＴＬＲ７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ９、および／またはＤＴＬＲ１０組
成物に対する個々の特異的な実施形態に類似的に適用可能である。
【０１５８】 本発明の広い範囲は、以下の実施例を参照することにより最も良く理解される
が、これらは発明を特定の実施形態に限定することを意図するものではない。
【０１５９】 （実施例） （Ｉ．一般的な方法） いくつかの標準的な方法を、記述または参照する（例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ
ら（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ；Ｓａｍｂｒｏｏｋ
ら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｍａｎｕａｌ、（第２版）、第１〜３巻、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ａｕ
ｓｕｂｅｌら、Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓ
ｏｃｉａｔｅｓ，Ｂｒｏｏｋｌｙｎ，ＮＹ；またはＡｕｓｕｂｅｌら、（１９８
７および補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。タンパ
ク質の精製のための方法としては、硫酸アンモニウム沈殿、カラムクロマトグラ
フィー、電気泳動、遠心分離、結晶化などのような方法が挙げられる。例えば、
Ａｕｓｕｂｅｌら（１９８７および周期的な補遺）；Ｃｏｌｉｇａｎら（編、１
９９６年）および定期的な補遺、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒ
ｋ；Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ（１９９０）「Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐ
ｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ」Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第１
８２巻およびこのシリーズの他の巻；ならびにタンパク質精製製品の使用の際の
製造業社の文献（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ
．、またはＢｉｏ−Ｒａｄ、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、ＣＡ．）を参照のこと。組換え
技術と組み合わせて、適切なセグメント（例えば、ＦＬＡＧ配列またはプロテア
ーゼ除去配列を介して融合され得る等価物）への融合を可能にする。例えば、Ｈ
ｏｃｈｕｌｉ（１９８９）Ｃｈｅｍｉｓｃｈｅ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅ １２：６
９−７０；Ｈｏｃｈｕｌｉ（１９９０）「Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒ
ｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｉｔｈ Ｍｅｔａｌ Ｃｈｅｌａ
ｔｅ Ａｂｓｏｒｂｅｎｔ」Ｓｅｔｌｏｗ（編）Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅ
ｅｒｉｎｇ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ １２：８７−９８
、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．；およびＣｒｏｗｅら（１９９２）ＱＩ
Ａｅｘｐｒｅｓｓ：Ｔｈｅ Ｈｉｇｈ Ｌｅｖｅｌ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａ
ｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ ＱＵＩＡＧ
ＥＮ，Ｉｎｃ．、Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡを参照のこと。
【０１６０】 標準的な免疫技術およびアッセイは、例えば、Ｈｅｒｔｚｅｎｂｅｒｇら（編
、１９９６）Ｗｅｉｒ’ｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａ
ｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ 第１〜４巻、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ
；Ｃｏｌｉｇａｎ（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉ
ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ、ＮＹ；ならびにＭｅｔｈｏｄ
ｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ 第７０、７３、７４、８４、９２、９３、１
０８、１１６、１２１、１３２、１５０、１６２、および１６３巻に記載される
。
【０１６１】 血管の生物学的活性についてのアッセイは、当該分野で周知である。これらは
、腫瘍、または他の組織における脈管形成活性および血管拡張活性（例えば、動
脈平滑筋増殖（例えば、Ｋｏｙｏｍａら（１９９６）Ｃｅｌｌ ８７：１０６９
−１０７８を参照のこと）、血管上皮への単球接着（例えば、ＭｃＥｖｏｙら（
１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８５：２０６９−２０７７）など）を包含す
る。また、Ｒｏｓｓ（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ ３６２：８０１−８０９；Ｒｅ
ｋｈｔｅｒおよびＧｏｒｄｏｎ（１９９５）Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１４７：
６６８−６７７；Ｔｈｙｂｅｒｇら（１９９０）Ａｒｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓ
ｉｓ １０：９６６−９９０；ならびにＧｕｍｂｉｎｅｒ（１９９６）Ｃｅｌｌ
８４：３４５−３５７を参照のこと。
【０１６２】 神経細胞の生物学的活性についてのアッセイは、例えば、Ｗｏｕｔｅｒｌｏｏ
ｄ（編、１９９５）Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｍｏｄｕ
ｌｅｓ １０，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅ
ｎｃｅｓ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；およびＮｅｕｒｏｍｅｔｈｏｄｓ
Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪに記載される。発生系の方法論
は、例えば、Ｍｅｉｓａｍｉ（編）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｇｒ
ｏｗｔｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ＣＲＣ Ｐ
ｒｅｓｓ；およびＣｈｒｉｓｐｅｅｌｓ（編）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎ
ｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｉｎ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａ
ｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅに記載される。
【０１６３】 コンピューター配列分析を、例えば、ＧＣＧ（Ｕ．Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）およ
びＧｅｎＢａｎｋ供給源からのプログラムを含む、入手可能なソフトウェアプロ
グラムを用いて実行する。公の配列データベースはまた、例えば、ＧｅｎＢａｎ
ｋ、ＮＣＢＩ、ＥＭＢＯなどからのデータベースを使用した。膜貫通モチーフお
よび他の重要なモチーフの決定は、このような生物情報科学ツールを使用して予
測され得る。
【０１６４】 ＩＬ−１０レセプターに対して適用可能な多くの技術は、例えば、ＵＳＳＮ０
８／１１０，６８３号（これは、本明細書中に全ての目的のために参考として援
用される）（ＩＬ−１０レセプター）に記述されるようにＤＴＬＲに対して適用
され得る。
【０１６５】 （ＩＩ．ヒトレセプターの新規なファミリー） 略語：ＤＴＬＲ、ＤＮＡＸ Ｔｏｌｌ様レセプター；ＩＬ−１Ｒ、インターロ
イキン−１レセプター；ＴＨ、Ｔｏｌｌ相同性；ＬＲＲ、ロイシン−リッチ反復
；ＥＳＴ、発現された配列タグ；ＳＴＳ、配列タグ化部位；ＦＩＳＨ、蛍光イン
サイチュハイブリダイゼーション。
【０１６６】 Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ Ｔｏｌｌの細胞質ドメインとヒトインターロイキン−
１（ＩＬ−１）レセプターとの間の配列相同性の発見は、両方の分子が、Ｒｅｌ
型転写因子の核転座に結びつく関連シグナル伝達経路を誘発するという確信を広
めている。この保存されたシグナル伝達スキームは、昆虫および脊椎動物の両方
において進化論的な古来の免疫応答を左右する。本発明者らは、細胞内セグメン
トおよび細胞外セグメントの両方においてＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ Ｔｏｌｌに密
接に類似するタンパク質構造を有する新規なクラスの推定ヒトレセプターの分子
クローニングを報告する。５つのヒトＴｏｌｌ様レセプター（ＤＴＬＲ１〜５と
呼ぶ）は、おそらくハエ分子の直接的なホモログであり、そしてそれ自体は、ヒ
トにおいて先天免疫の重要な、かつ認識されない成分を構築し得た；興味をそそ
ることに、脊椎動物におけるＤＴＬＲの進化学的被保持は、初期形態発生パター
ンのレギュレーターとしてＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ胚の背腹方向化におけるＴｏｌ
ｌに類似した他の役割を示し得る。複数の組織ｍＲＮＡブロットは、ヒトＤＴＬ
Ｒに対して著しく異なる発現のパターンを示す。蛍光インサイチュハイブリダイ
ゼーションおよび配列タグ化部位データベース分析を使用して、本発明者らは、
同族ＤＴＬＲ遺伝子が第４染色体（ＤＴＬＲ１、２、および３）、第９染色体（
ＤＴＬＲ４）、ならびに第１染色体（ＤＴＬＲ５）に存在することを示す。様々
な昆虫由来の整列されたＴｏｌｌ相同性（ＴＨ）ドメインならびにヒトＤＴＬＲ
、脊椎動物ＩＬ−１レセプター、およびＭｙＤ８８因子、ならびに植物疾患耐性
タンパク質の構造予測は、酸性活性部位を有する同方向のβ／α折り畳みを認識
し；類似の構造は、細菌において感覚情報を形質導入することに広く関与する応
答レギュレーターのクラスにおいて著しく回帰する。
【０１６７】 ヒトからハエをこのように劇的に分離する形態学的な大きな隔たりのシードを
、よく知られている胚形状および胚パターンに植えるが、非常に異なる細胞複雑
性を生じる。ＤｅＲｏｂｅｒｔｉｓおよびＳａｓａｉ（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ
３８０：３７−４０；ならびにＡｒｅｎｄｔおよびＮｕｂｌｅｒ−Ｊｕｎｇ（
１９９７）Ｍｅｃｈ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．６１：７−２１。昆虫と脊椎動物との間
の発生方式のこの相違を、著しく類似するシグナル伝達経路によって編成し、等
価でない遺伝子レパートリーからのタンパク質ネットワークおよび性化学的機構
のより大きな変換を強調する。ＭｉｋｌｏｓおよびＲｕｂｉｎ（１９９６）Ｃｅ
ｌｌ ８６：５２１−５２９；ならびにＣｈｏｔｈｉａ（１９９４）Ｄｅｖｅｌ
ｏｐ．１９９４ 補遺、２７−３３。これらの調節経路の進化学的な設計を計画
する有力な方法は、タンパク質配列および構造の種間の比較を介してそれらのあ
りそうな分子成分（および生物学的機能）を推論することによる。Ｍｉｋｌｏｓ
およびＲｕｂｉｎ（１９９６）Ｃｅｌｌ ８６：５２１−５２９；Ｃｈｏｔｈｉ
ａ（１９９４）Ｄｅｖｅｌｏｐ．１９９４ 補遺、２７−３３（３−５）；なら
びにＢａｎｆｉら（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．１３：１６７−１７
４。
【０１６８】 胚発生における普遍的な重大な工程は、先天的非対称から生じたか、または外
部の手がかりによって誘発されたかのいずれかの体軸の明確化である。ＤｅＲｏ
ｂｅｒｔｉｓおよびＳａｓａｉ（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ ３８０：３７−４０
；ならびにＡｒｅｎｄｔおよびＮｕｂｌｅｒ−Ｊｕｎｇ（１９９７）Ｍｅｃｈ．
Ｄｅｖｅｌｏｐ．６１：７−２１。モデル系として、特定の留意が、背腹方向の
分極の系統発生論拠および細胞性機構に集中している。ＤｅＲｏｂｅｒｔｉｓお
よびＳａｓａｉ（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ ３８０：３７−４０；ならびにＡｒ
ｅｎｄｔおよびＮｕｂｌｅｒ−Ｊｕｎｇ（１９９７）Ｍｅｃｈ．Ｄｅｖｅｌｏｐ
．６１：７−２１。この形質転換のためのプロトタイプ分子ストラテジーは、Ｄ
ｒｏｓｏｐｈｉｌａ胚から現れている。ここで、少数の遺伝子の連続した作用は
、転写因子Ｄｏｒｓａｌの背腹化勾配（ｖｅｎｔｒａｌｉｚｉｎｇ ｇｒａｄｉ
ｅｎｔ）を生じる。Ｓｔ．ＪｏｈｎｓｔｏｎおよびＮｕｓｓｌｅｉｎ−Ｖｏｌｈ
ａｒｄ（１９９２）Ｃｅｌｌ ６８：２０１−２１９；ならびにＭｏｒｉｓａｔ
ｏおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ（１９９５）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．２９：３
７１−３９９。
【０１６９】 このシグナル伝達経路は、Ｔｏｌｌ（母性の分泌腹側因子（ｍａｔｅｒｎａｌ
ｌｙ−ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｖｅｎｔｒａｌ ｆａｃｔｏｒ）（Ｓｐａｔｚｌｅ）
の結合をＴｕｂｅ（アクセサリー分子）の細胞質嵌合（ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ
ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ）、Ｐｅｌｌｅ（インヒビターＣａｃｔｕｓからのＤｏ
ｒｓａｌの解離を触媒し、腹側核へのＤｏｒｓａｌの移動を可能にするＳｅｒ／
Ｔｈｒキナーゼ）の活性化へ変換する膜貫通レセプター）上に集中する（Ｍｏｒ
ｉｓａｔｏおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ（１９９６）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．
２９：３７１−３９９；ならびにＢｅｌｖｉｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ（１９９
６）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｂｉｏｌ．１２：３９３−４
１６）。Ｔｏｌｌ経路はまた、成体ハエにおいて強力な抗細菌因子の誘発を制御
する（Ｌｅｍａｉｔｒｅら（１９９６）Ｃｅｌｌ ８６：９７３−９８３）；Ｄ
ｏｒｓｏｐｈｉｌａ免疫防御におけるこの役割は、脊椎動物における多数の免疫
および炎症応答を左右するＩＬ−１経路に対する機械的な類似を強力にする。Ｂ
ｅｌｖｉｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ（１９９６）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ Ｄ
ｅｖｅｌｏｐ．Ｂｉｏｌ．１２：３９３−４１６；ならびにＷａｓｓｅｒｍａｎ
（１９９３）Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ ４：７６７−７７１。ＩＬ−１
レセプターにおけるＴｏｌｌ関連細胞質ドメインは、Ｐｅｌｌｅ様キナーゼ、Ｉ
ＲＡＫ、の結合、および潜伏性ＮＦ−κＢ／Ｉ−κＢ複合体（Ｄｏｒｓａｌおよ
びＣａｃｔｕｓの抱き合わせ（ｅｍｂｒａｃｅ）を反映する）の活性化を指向す
る。ＢｅｌｖｉｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ（１９９６）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌ
ｌ Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｂｉｏｌ．１２：３９３−４１６；ならびにＷａｓｓｅｒ
ｍａｎ（１９９３）Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ ４：７６７−７７１。
【０１７０】 本発明者らは、ヒトにおける４つの新しいＴｏｌｌ様分子（ＤＴＬＲ２〜５と
表わされる）のクローニングおよび分子特徴付けを記載する（Ｃｈｉａｎｇおよ
びＢｅａｃｈｙ（１９９４）Ｍｅｃｈ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．４７：２２５−２３９
に従う）。この分子は、脊椎動物のＩＬ−１レセプターよりも密接にＤｒｏｓｏ
ｐｈｉｌａ Ｔｏｌｌホモログに結合されるレセプターファミリーを示す。ＤＴ
ＬＲ配列を、ヒトＥＳＴから誘導し；これらの一部のｃＤＮＡを、５つのＤＴＬ
Ｒに対してヒト組織における完全な発現プロフィールを得、同族遺伝子の染色体
位置をマッピングし、そして全長ｃＤＮＡ回収のためにｃＤＮＡライブラリーの
選択を制限するために使用した。他の努力（Ｂａｎｆｉら（１９９６）Ｎａｔｕ
ｒｅ Ｇｅｎｅｔ．１３：１６７−１７４；およびＷａｎｇら（１９９６）Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：４４６８−４４７６）に拍車をかけられ、本発明
者らは、構造的保存および分子節減（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐａｒｓｉｍｏｎｙ
）によってヒトにおける生物学的系を組み立てている。この系は、Ｄｒｏｓｏｐ
ｈｉｌａにおける強制調節スキームの相対物である。さらに、Ｔｏｌｌシグナル
伝達を駆動する生化学的機構は、Ｔｏｌｌ相同性（ＴＨ）ドメイン、ＤＴＬＲに
よって共有されるコアモジュール、ＩＬ−１レセプターの広範なファミリー、哺
乳動物ＭｙＤ８８因子および植物疾患耐性タンパク質の提案された３次折り畳み
によって示唆される。Ｍｉｔｃｈａｍら（１９９６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．
２７１：５７７７−５７８３；およびＨａｒｄｉｍａｎら（１９９６）Ｏｎｃｏ
ｇｅｎｅ １３：２４６７−２４７５。本発明者らは、昆虫、植物、および動物
における形態発生および初期免疫をつなぐシグナル伝達経路（Ｂｅｌｖｉｎおよ
びＡｎｄｅｒｓｏｎ（１９９６）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ Ｄｅｖｅｌｏｐ．
Ｂｉｏｌ．１２：３９３−４１６；ならびにＷｉｌｓｏｎら（１９９７）Ｃｕｒ
ｒ．Ｂｉｏｌ．７：１７５−１７８）が細菌性の２成分経路に根源を有し得るこ
とを提案する。
【０１７１】 （コンピューター分析） 昆虫ＤＴＬＲに関するヒト配列を、ＢＬＡＳＴサーバー（Ａｌｔｓｃｈｕｌら
、（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．６：１１９−１２９）を用いてＮａ
ｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏ
ｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）でＥＳＴデータベース（ｄｂＥＳＴ）から同定した
。より感度の高いパターンおよびプロフィールベースの方法（ＢｏｒｋおよびＧ
ｉｂｓｏｎ（１９９６）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：１６２−１８４）
を、非冗長データベースに存在する脊椎動物タンパク質および植物タンパク質と
共有されるＤＴＬＲファミリーのシグナル伝達ドメインを単離するために使用し
た。ＤＴＬＲ細胞内ドメイン配列または細胞外ドメイン配列の直進性アラインメ
ントを、ＣｌｕｓｔａｌＷ（Ｔｈｏｍｐｓｏｎら（１９９４）Ｎｕｃｌｅｉｃ
Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２２：４６７３−４６８０）によって実行した；このプロ
グラムはまた、Ｎｅｉｇｈｂｏｒ−Ｊｏｉｎｉｎｇアルゴリズムによって整列さ
れた配列の分枝オーダーを計算した（５０００ブートストラップの複製はツリー
グループ分けに対する信頼値を提供した）。
【０１７２】 ある程度のストリンジェンシーで認識される保存されたアラインメントパター
ンを、Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓプログラム（インターネットＵＲＬ ｈｔｔｐ：／／
ｗｗｗ．ｂｏｒｋ．ｅｍｂｌ−ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ．ｄｅ／Ａｌｉｇｎｍｅｎ
ｔ／ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ．ｈｔｍｌ）によって得た。タンパク質フィンガープリ
ントのＰＲＩＮＴＳライブラリー（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｃｈｅｍ．ｕ
ｃｌ．ａｃ．ｕｋ／ｂｓｍ／ｄｂｂｒｏｗｓｅｒ／ＰＲＩＮＴＳ／ＰＲＩＮＴＳ
．ｈｔｍｌ）（Ａｔｔｗｏｏｄら（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒ
ｅｓ．２５：２１２−２１７）は、分枝ＬＲＲのＮ末端特性およびＣ末端特性と
柔軟にマッチする化合物モチーフ（ＰＲＩＮＴＳコードＬｅｕｒｉｃｈｒｐｔ）
を用いてＤＴＬＲの細胞外セグメントに存在する無数のロイシン−リッチ反復（
ＬＲＲ）を確かに同定した。３状態精度（ｔｈｒｅｅ−ｓｔａｔｅ ａｃｃｕｒ
ａｃｙ）が７２％より上の２つの予測アルゴリズムを、細胞内ドメインアライン
メントに対するコンセンサス２次構造を認識作用力を保持するブリッジとして誘
導するために使用した（Ｆｉｓｃｈｅｒら（１９９６）ＦＡＳＥＢ Ｊ．１０：
１２６−１３６）。ニューラルネットワークプログラムＰＨＤ（Ｒｏｓｔおよび
Ｓａｎｄｅｒ（１９９４）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ １９：５５−７２）ならびに統計
的予測方法ＤＳＣ（ＫｉｎｇおよびＳｔｅｒｎｂｅｒｇ（１９９６）Ｐｒｏｔｅ
ｉｎ Ｓｃｉ．５：２２９８−２３１０）は共に、インターネットサーバーを有
する（ＵＲＬ それぞれｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｍｂｌ−ｈｅｉｄｅｌｂｅｒ
ｇ．ｄｅ／ｐｒｅｄｉｃｔｐｒｏｔｅｉｎ／ｐｈｄ＿ｐｒｅｄ．ｈｔｍｌおよび
ｈｔｔｐ：／／ｂｏｎｓａｉ．ｌｉｆ．ｉｃｎｅｔ．ｕｋ／ｂｍｍ／ｄｓｃ／ｄ
ｓｃ＿ｒｅａｄ＿ａｌｉｇｎ．ｈｔｍｌ）。細胞内領域は、例えば、Ｈａｒｄｉ
ｍａｎら（１９９６）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １３：２４６７−２４７５；およびＲ
ｏｃｋら（１９９８）Ｐｒｏｃ Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５
：５８８−５９３（それぞれ参考として本明細書中で援用される）で考察される
ＴＨＤ領域をコードする。このドメインは、レセプターによってシグナル伝達す
る機構（リン酸基を基質へ移動する）において非常に重要である。
【０１７３】 （全長ヒトＤＴＬＲ ｃＤＮＡのクローニング） Ｔｏｌｌ様Ｈｕｍｒｓｃ７８６配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録コード Ｄ１３６３
７）（Ｎｏｍｕｒａら（１９９４）ＤＮＡ Ｒｅｓ．１：２７−３５）由来のＰ
ＣＲプライマーを使用して、ヒト赤白血球株、ＴＦ−１細胞株由来ｃＤＮＡライ
ブラリー（Ｋｉｔａｍｕｒａら（１９８９）Ｂｌｏｏｄ ７３：３７５−３８０
）をプローブし、ＤＴＬＲ１ ｃＤＮＡ配列を得た。残りのＤＴＬＲ配列は、ｄ
ｂＥＳＴからフラグ化され（ｆｌａｇｇｅｄ）、そしてＩ．Ｍ．Ａ．Ｇ．Ｅ．コ
ンソーシアム（Ｌｅｎｎｏｎら（１９９６）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ３３：１５１−
１５２）から、Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，
ＡＬ）を介して得られる適切なＥＳＴクローンであった、：クローンＩＤ番号８
０６３３およびクローンＩＤ番号 １１７２６２（ＤＴＬＲ２）、クローンＩＤ
番号 １４４６７５（ＤＴＬＲ３）、クローンＩＤ番号 ２０２０５７（ＤＴＬ
Ｒ４）ならびにクローンＩＤ番号 ２７７２２９（ＤＴＬＲ５）。ヒトＤＴＬＲ
２〜４に対する全長ｃＤＮＡを、それぞれ、λｇｔｌ０ファージ、ヒト成人肺
、胎盤、および胎児の肝臓の５’−Ｓｔｒｅｔｃｈ Ｐｌｕｓ ｃＤＮＡ ライ
ブラリー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）のＤＮＡハイブリダイゼーションスクリーニング
によってクローン化した；このＤＴＬＲ５配列は、ヒト多発性硬化症プラークの
ＥＳＴ由来である。すべてのポジティブクローンを配列決定し、そして整列し個
々のＤＴＬＲ ＯＲＦを同定した：ＤＴＬＲ１（２３６６ ｂｐクローン、７８
６ａａ ＯＲＦ）、ＤＴＬＲ２（２６００ｂｐ、７８４ａａ）、ＤＴＬＲ３（３
０２９ｂｐ、９０４ａａ）、ＤＴＬＲ４（３８１１ｂｐ、８７９ａａ）およびＤ
ＴＬＲ５（１２７５ｂｐ、３７０ａａ）。同様の方法をＤＴＬＲ ６〜１０につ
いて使用する。ＤＴＬＲ３ハイブリダイゼーションおよびＤＴＬＲ４ ハイブリ
ダイゼーションのためのプローブを、ヒト胎盤（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）ｃＤＮ
Ａライブラリーおよびヒト肝臓（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）ｃＤＮＡ ライブラリーを
、それぞれテンプレートとして使用するＰＣＲによって作製した；プライマー対
を、それぞれのＥＳＴ配列から誘導した。ＰＣＲ反応をＴ．ａｑｕａｔｉｃｕｓ
Ｔａｑｐｌｕｓ ＤＮＡポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を、以下の条
件下で使用して実施した：１×（９４℃、２分間）３０×（５５℃、２０秒間；
７２℃、３０秒間；９４℃、２０秒間）、１×（７２℃、８分間）。ＤＴＬＲ２
の全長ｃＤＮＡスクリーニングのために、第１のＥＳＴクローン（ＩＤ番号８０
６３３）のＥｃｏＲＩ／ＸｂａＩ消化によって作製した９００ｂｐフラグメント
をプローブとして使用した。
【０１７４】 （ｍＲＮＡブロットティングおよび染色体上の位置決定） １レーン当たり約２μｇのポリ（Ａ）＋ＲＮＡを含む、ヒトの複数の組織（カ
タログ番号１、２）および癌細胞株ブロット（カタログ番号７７５７−１）を、
Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）から購入した。ＤＴＬＲ １〜
４については、単離された全長ｃＤＮＡがプローブとしての役割を果たし、ＤＴ
ＬＲ５については、ＥＳＴクローン（ＩＤ番号２７７２２９）プラスミド挿入物
を使用した。簡潔には、このプローブを、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｒｅｄｉｐｒｉｍ
ｅ ｒａｎｄｏｍ ｐｒｉｍｅｒ ｌａｂｅｌｉｎｇキット（ＲＰＮ１６３３）
を使用して［α−３２Ｐ］ｄＡＴＰで放射性標識した。プレハイブリダゼーショ
ンおよびハイブリダイゼーションを、０．５Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４、７％ ＳＤＳ
、０．５Ｍ ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）中で、６５℃にて実施した。全てのストリ
ンジェンシー洗浄を、６５℃で、最初の２回を２×ＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳで
４０分間、その後に続く洗浄を、０．１×ＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳで２０分間
実施した。次いで膜を、増感紙（ｉｎｔｅｎｓｉｆｙｉｎｇ ｓｃｒｅｅｎｓ）
の存在下で、−７０℃にてＸ線フィルム（Ｋｏｄａｋ）に対して露光した。ｃＤ
ＮＡライブラリーＳｏｕｔｈｅｒｎｓ（１４）によるより詳細な研究を、造血細
胞サブセット中でのこれらの発現を調べるために選択されたヒトＤＴＬＲクロー
ンによって実施した。
【０１７５】 ヒト染色体マッピングを、様々な全長（ＤＴＬＲ２〜４）ｃＤＮＡクローンま
たは部分（ＤＴＬＲ５）ｃＤＮＡクローンをプローブとして使用し、Ｈｅｎｇお
よびＴｓｕｉ（１９９４）Ｍｅｔｈ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．３３：１０９−１
２２に記載の蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）法によって
実施した。これらの分析を、ＳｅｅＤＮＡ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．（Ｏｎｔ
ａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）によるサービスで実施した。このマップされたＤＴＬ
Ｒ遺伝子に関連するヒトの症候群（またはシンテニック遺伝子群の座位にあるマ
ウスの欠損）の調査を、インターネットサーバによるＤｙｓｍｏｒｐｈｉｃ Ｈ
ｕｍａｎ−Ｍｏｕｓｅ Ｈｏｍｏｌｏｇｙ Ｄａｔａｂａｓｅ（ｈｔｔｐ：／／
ｗｗｗ．ｈｇｍｐ．ｍｒｃ．ａｃ．ｕｋ／ＤＨＭＨＤ／ ｈｕｍ＿ｃｈｒｏｍｅ
ｌ．ｈｔｍｌ）において実施した。同様の方法が、ＤＴＬＲ ６〜１０に対して
も適用可能である。
【０１７６】 （昆虫およびヒトのＤＴＬＲエクトドメイン（ｅｃｔｏｄｏｍａｉｎ）の保存
された構造） ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａにおけるＴｏｌｌファミリーは、少なくとも以下に挙げ
る別個の４つの遺伝子産物を含む：Ｔｏｌｌ、すなわちハエ胚の背腹方向パター
ン化に関連するプロトタイプレセプター（ＭｏｒｉｓａｔｏおよびＡｎｄｅｒｓ
ｏｎ（１９９５）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．２９：３７１−３９９）および
２番目としては著名な「１８ホイーラー（１８Ｗｈｅｅｌｅｒ）（１８ｗ）」（
これはまた、初期胚発生に関連する（ＣｈｉａｎｇおよびＢｅａｃｈｙ（１９９
４）Ｍｅｃｈ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．４７：２２５−２３９；Ｅｌｄｏｎら（１９９
４）Ｄｅｖｅｌｏｐ．１２０：８８５−８９９））；２つのさらなるレセプター
が、雄性特異的転写産物（Ｍｓｔ）遺伝子座の下流の不完全な、Ｔｏｌｌ様ＯＲ
Ｆ（ＧｅｎＢａｎｋコード Ｘ６７７０３）によって予測されているか、または
「配列タグ部位（ＳＴＳ）」Ｄｍ２２４５（ＧｅｎＢａｎｋコード Ｇ０１３７
８）（Ｍｉｔｃｈａｍら（１９９６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：５７７
７−５７８３）によってコードされている。Ｔｏｌｌおよび１８ｗの細胞外セグ
メントは、不完全な、約２４アミノ酸ＬＲＲモチーフを別々に構成する（Ｃｈｉ
ａｎｇおよびＢｅａｃｈｙ（１９９４）Ｍｅｃｈ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．４７：２２
５−２３９ならびにＥｌｄｏｎら（１９９４）Ｄｅｖｅｌｏｐ．１２０：８８５
−８９９）。ＬＲＲの類似のタンデムアレイは、一般に改変された細胞表面分子
の粘着性触覚を形成し、そしてその独特の３次元構造は、リボヌクレアーゼイン
ヒビターフォールドの馬蹄形状（ｈｏｒｓｅｓｈｏｅ−ｓｈａｐｅｄ）クレード
ルを模倣していると推定される。ここで、１７個のＬＲＲが、２８残基のβ／α
ヘアピンの繰り返しモチーフを示す（ＢｕｃｈａｎａｎおよびＧａｙ（１９９６
）Ｐｒｏｇ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．６５：１−４４）。Ｔｏ
ｌｌによるＳｐａｔｚｌｅの特異的な認識は、湾曲したβ−シートの凹面を使用
する蛇行性（ｓｅｒｐｅｎｔｉｎｅ）レセプターのマルチプルＬＲＲエクトドメ
インによるシスチン−ノットフォールド（ｃｙｓｔｉｎｅ−ｋｎｏｔ ｆｏｌｄ
）の糖タンパク質ホルモンの結合について提案されたモデルに従い得る（Ｋａｊ
ａｖａら（１９９５）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ３：８６７−８７７）；興味深いこ
とに、Ｓｐａｔｚｌｅにおけるシステインのパターンおよびオーファン（ｏｒｐ
ｈａｎ）ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａリガンドであるＴｒｕｎｋは、類似のシスチン−
ノット３次元構造であると予測される（ＢｅｌｖｉｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ（
１９９６）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｂｉｏｌ．１２：３９
３−４１６；ならびにＣａｓａｎｏｖａら（１９９５）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖｅｌ
ｏｐ．９：２５３９−２５４４）。
【０１７７】 Ｔｏｌｌおよび１８ｗそれぞれの、２２個のＬＲＲのエクトドメインおよび３
１個のＬＬＲのエクトドメイン（ＭｓｔのＯＲＦフラグメントは１６個のＬＲＲ
を示す）は、配列解析およびパターン解析（Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９４）Ｎ
ａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．６：１１９−１２９；ならびにＢｏｒｋおよびＧｉｂ
ｓｏｎ（１９９６）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：１６２−１８４）によ
って、ＤＴＬＲ１〜４（不完全なＤＴＬＲ５鎖は、現在、４つの膜近位ＬＲＲを
含む）の匹敵する１８、１９、２４、および２２のＬＲＲのアレイと最も密に関
連付けられる（図１）。しかし、ヒトＤＴＬＲ鎖における顕著な差異は、Ｔｏｌ
ｌ、１８ｗおよびＭｓｔのＯＲＦのエクトドメイン中に変動的（膜境界からそれ
ぞれ４、６、２個のＬＲＲ分離れている）に埋め込まれている約９０残基のシス
テインリッチ領域の共通する欠失である。これらのシステインクラスターは、（
ＬＲＲを終らせる）「上端（ｔｏｐ）」部位と（上にスタックされる）「下端（
ｂｏｔｔｏｍ）」部位（ＣｈｉａｎｇおよびＢｅａｃｈｙ（１９９４）Ｍｅｃｈ
．Ｄｅｖｅｌｏｐ．４７：２２５−２３９；Ｅｌｄｏｎら（１９９４）Ｄｅｖｅ
ｌｏｐ．１２０：８８５−８９９；ならびにＢｕｃｈａｎａｎおよびＧａｙ（１
９９６）Ｐｒｏｇ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．６５：１−４４）
とに明確に二分されており；この「上端」モジュールは、保存された膜近位（ｊ
ｕｘｔａｍｅｍｂｒａｎｅ）スペーサー（図１）として、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ
ＤＴＬＲおよびヒトＤＴＬＲの両方において再度現れる。発明者らは、Ｄｒｏ
ｓｏｐｈｉｌａレセプター（および他のＬＲＲタンパク質）において柔軟に位置
付けられたシステインクラスターは、「上端」が「下端」に対して対合された場
合、ＤＴＬＲエクトドメインの全体的なフォールドを変更することなしに、ＬＲ
Ｒのいずれかの対の間に挿入され得る対になった末端を有するコンパクトなモジ
ュールを形成することを提案する；類似の「押出（ｅｘｔｒｕｄｅｄ）」ドメイ
ンは、他のタンパク質の構造を修飾する（Ｒｕｓｓｅｌｌ（１９９４）Ｐｒｏｔ
ｅｉｎ Ｅｎｇｉｎ．７：１４０７−１４１０）。
【０１７８】 （ＴＨシグナル伝達ドメインの分子設計） ＴｏｌｌとＩＬ−１ Ｉ型（ＩＬ−１Ｒ１）レセプターとの間の配列比較によ
って、類似のＲｅｌ型転写因子によって、シグナル伝達を媒介すると推定される
約２００アミノ酸の細胞質ドメインの遠い類似性を開示する（Ｂｅｌｖｉｎおよ
びＡｎｄｅｒｓｏｎ（１９９６）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ Ｄｅｖｅｌｏｐ．
Ｂｉｏｌ．１２：３９３−４１６；ならびに（ＢｅｌｖｉｎおよびＡｎｄｅｒｓ
ｏｎ（１９９６）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｂｉｏｌ．１２
：３９３−４１６；ならびにＷａｓｓｅｒｍａｎ（１９９３）Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｅｌｌ ４：７６７−７７１））。この機能のパラダイムに対するより
新しい追加としては、Ｎ末端ＴＨモジュール、その後のヌクレオチド結合セグメ
ント（ＮＴＰａｓｅ）およびＬＲＲセグメントを特徴とする、タバコおよび麻由
来の１組の植物疾患耐性タンパク質が挙げられる（Ｗｉｌｓｏｎら（１９９７）
Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．７：１７５−１７８）；対照的に、「致死（ｄｅａｔｈ）
ドメイン」が、細胞内骨髄分化マーカーであるＭｙＤ８８のＴＨ鎖に先行する（
Ｍｉｔｃｈａｍら（１９９６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：５７７７−５
７８３；およびＨａｒｄｉｍａｎら（１９９６）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １３：２４
６７−２４７５）（図１）。新規のＩＬ−１型レセプターとしては、ＩＬ−１Ｒ
３、アクセサリーシグナル伝達分子、およびオーファンレセプターＩＬ−１Ｒ４
（これはまた、ＳＴ２／Ｆｉｔ−１／Ｔ１と呼ばれる）、ＩＬ−１Ｒ５（ＩＬ１
Ｒ−関連タンパク質）、およびＩＬ−１Ｒ６（ＩＬ−ｌＲ−関連タンパク質−２
）が挙げられる（Ｍｉｔｃｈａｍら（１９９６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７
１：５７７７−５７８３；Ｈａｒｄｉｍａｎら（１９９６）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ
１３：２４６７−２４７５）。新規のヒトＤＴＬＲ配列を用いて、発明者らは、
共通するＴＨモジュールのコンフォメーションを解析することによってこの進化
的な糸の構造的な定義付けを追求した：１２８のアミノ酸を含む１０個の保存配
列は、最も小さいＴＨドメインフォールドを形成する；アライメントにおけるギ
ャップは、配列および長さが可変であるループの適当な位置を特徴付ける（図２
Ａ〜２Ｂ）。
【０１７９】 マルチプルアライメントがなされた配列における保存および変化のパターンを
利用する２つの予測アルゴリズムである、ＰＨＤ（ＲｏｓｔおよびＳａｎｄｅｒ
（１９９４）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ １９：５５−７２）およびＤＳＣ（Ｋｉｎｇお
よびＳｔｅｒｎｂｅｒｇ（１９９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．５：２２９８−
２３１０）によって、ＴＨシグナル伝達モジュールについて強く、一致した結果
を生じた（図２Ａ−２Ｂ）。各ブロックは、別個の２次構造得エレメント含む：
交互に現れる（Ａ〜Ｅで標識した）β−ストランドおよび（１〜５の番号をつけ
た）α−ヘリックスの様子によって、平行βシートの両表面上にα−ヘリックス
を有するβ／αクラスのフォールドが予測される。疎水性のβ−ストランドであ
るＡ、ＣおよびＤは、β−シートで「内側の」たる板を形成すると予測され、そ
の一方でより短い両親媒性βストランドであるＢおよびＥは、代表的な「エッジ
」ユニットと共通点がある（図２Ａ、２Ｂ）。この割り当ては、コアのβシート
におけるＢ−Ａ−Ｃ−Ｄ−Ｅというストランドの順番と適合する（図２Ｃ）；フ
ォールド比較プログラム（「マッピング」）およびレコグニション（「スレッテ
ィング」）プログラム（Ｆｉｓｃｈｅｒら（１９９６）ＦＡＳＥＢ Ｊ．１０：
１２６−１３６）は、この２重に巻くβ／αトポロジーを強く回答する。このＴ
Ｈドメインについての大まかな構造の驚くべき機能的予測は、マルチプルアライ
メントにおいて多く保存され荷電した残基は、以下のβシートのＣ末端側にマッ
プされることである：βＡの末端のＡｓｐ１６残基（ブロック番号付けスキーム
−図２Ａ〜２Ｂ）、βＢに続くＡｒｇ３９およびＡｓｐ４０、α３の最初のター
ンにあるＧｌｕ７５、およびβＤ〜α４ループまたはβＥの後にある、より緩や
かに保存されたＧｌｕ／Ａｓｐ残基（図２Ａ〜２Ｂ）。４つの他に保存された残
基の位置（Ａｓｐ７、Ｇｌｕ２８、およびＡｒｇ５７−Ａｒｇ／Ｌｙｓ５８の対
）は、反対側の、βシートのＮ末端にある塩橋ネットワークに適合する（図２Ａ
〜２Ｂ）。他のＤＴＬＲ実施形態のアライメントは類似した特徴を提示し、そし
てこれらの特徴を含むペプチドセグメント（例えば、これらを含む２０アミノ酸
セグメント）は、特に重要である。
【０１８０】 シグナル伝達機能は、ＴＨドメインの構造的な完全性に依存する。モジュール
境界内の不活性化変異または不活性化欠失は（図２Ａ〜２Ｂ）は、ＩＬ−１Ｒ１
およびＴｏｌｌについて一覧される。Ｈｅｇｕｙら（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．
Ｃｈｅｍ．２６７：２６０５−２６０９；Ｃｒｏｓｔｏｎら（１９９５）Ｊ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１６５１４−１６５１７；Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒら（
１９９１）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖｅｌｏｐ．５：７９７−８０７；Ｎｏｒｒｉｓお
よびＭａｎｌｅｙ（１９９２）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖｅｌｏｐ．６：１６５４−１
６６７；ＮｏｒｒｉｓおよびＭａｎｌｅｙ（１９９５）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖｅｌ
ｏｐ．９：３５８−３６９；ならびにＮｏｒｒｉｓおよびＭａｎｌｅｙ（１９９
６）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖｅｌｏｐ．１０：８６２−８７２。最小のＴＨドメイン
を超えて延長したヒトのＤＴＬＲ１〜５鎖（それぞれの残基長は、８、０、６、
２２および１８である）は、ＭｓｔのＯＲＦの切り株状の（ｓｔｕｂｂｙ）４ア
ミノ酸残基の「尾部」に対して最も密に類似している。Ｔｏｌｌおよび１８ｗは
、融合ＴＨドメインのシグナル伝達をネガティブ制御し得る関係のない１０２残
基の尾部および２０７残基の尾部（図２Ａ〜２Ｂ）を示す。Ｎｏｒｒｉｓおよび
Ｍａｎｌｅｙ（１９９５）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖｅｌｏｐ．９：３５８−３６９；
ならびにＮｏｒｒｉｓおよびＭａｎｌｅｙ（１９９６）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖｅｌ
ｏｐ．１０：８６２−８７２。
【０１８１】 ＴＨドメインを保持する異なるタンパク質間の進化的関係は、マルチプルアラ
イメントから誘導された系統樹によって最もよく識別される（図３）。４つの主
要な枝が、植物タンパク質、ＭｙＤ８８因子、ＩＬ−１レセプター、およびＴｏ
ｌｌ様分子を分離する；後者の枝は、ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａおよびヒトのＤＴＬ
Ｒをクラスター化する。
【０１８２】 （ヒトＤＴＬＲ遺伝子の染色体上での分散）． 初期のヒトＤＴＬＲ遺伝子ファミリーの遺伝的連鎖を調べるために、発明者ら
は、ＦＩＳＨによって５つの遺伝子のうち４つを染色体上の遺伝子座をマップし
た（図４）。このＤＴＬＲ１遺伝子は、これまでにヒトゲノム計画によって図示
されてきた：ＳＴＳデータベースの遺伝子座（ＳＴＳ ＷＩ−７８０４またはＳ
ＨＧＣ−１２８２７に対応する、ｄｂＳＴＳ登録番号Ｇ０６７０９）がＨｕｍｒ
ｓｃ７８６ ｃＤＮＡ（Ｎｏｍｕｒａら（１９９４）ＤＮＡ Ｒｅｓ．１：２７
−３５）について存在し、そしてこの遺伝子を第４染色体マーカー間隔Ｄ４Ｓ１
５８７−Ｄ４２４０５（５０〜５６ｃＭ）の約４ｐｌ４に確定する。この割り当
ては最近ＦＩＳＨ分析によって確証を得た。Ｔａｇｕｃｈｉら（１９９６）Ｇｅ
ｎｏｍｉｃｓ ３２：４８６−４８８。本研究において、本発明者らは、残りの
ＤＴＬＲ遺伝子を、染色体４ｑ３２（ＤＴＬＲ２）、染色体４ｑ３５（ＤＴＬＲ
３）、染色体９ｑ３２−３３（ＤＴＬＲ４）および染色体ｌｑ３３．３（ＤＴＬ
Ｒ５）上の遺伝子座に確実に割り当てた。本研究の過程において、親ＤＴＬＲ２
ＥＳＴ（クローンＩＤ番号８０６３３）についてのＳＴＳを生成し（ＳＴＳ
ＳＨＧＣ−３３１４７に対するｄｂＳＴＳ 登録番号Ｔ５７７９１）、発明者ら
の発見事項に従って第４染色体のマーカー間隔Ｄ４Ｓ４２４−Ｄ４Ｓ１５４８（
１４３−１５３ｃＭ）の４ｑ３２に位置付けた。第４染色体の長腕上に、ＤＴＬ
Ｒ２遺伝子とＤＴＬＲ３遺伝子との間の約５０ｃＭギャップが存在する。
【０１８３】 （ＤＴＬＲ遺伝子は示差的に発現される） Ｔｏｌｌおよび１８ｗの両方は、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａにおいて、胚のパター
ン化を超える機能を提示し得る複雑な空間的の発現パターンおよび一過性発現パ
ターンを有する。Ｓｔ．ＪｏｈｎｓｔｏｎおよびＮｕｓｓｌｅｉｎ−Ｖｏｌｈａ
ｒｄ（１９９２）Ｃｅｌｌ ６８：２０１−２１９；ＭｏｒｉｓａｔｏおよびＡ
ｎｄｅｒｓｏｎ（１９９５）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．２９：３７１−３９
９；ＢｅｌｖｉｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ（１９９６）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌ
ｌ Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｂｉｏｌ．１２：３９３−４１６；Ｌｅｍａｉｔｒｅら（
１９９６）Ｃｅｌｌ ８６：９７３−９８３ ＣｈｉａｎｇおよびＢｅａｃｈｙ
（１９９４）Ｍｅｃｈ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．４７：２２５−２３９；ならびにＥｌ
ｄｏｎら（１９９４）Ｄｅｖｅｌｏｐ．１２０：８８５−８９９。本発明者らは
、放射性標識したＤＴＬＲ ｃＤＮＡを使用して、様々なヒト組織および癌細胞
株でｍＲＮＡブロッティング分析によってＤＴＬＲ転写産物の空間的な分布を調
べた（図５）。ＤＴＬＲ１が、普遍的に発現されたことが見出されかつ他のレセ
プターより高いレベルで発現されたことが見出された。おそらくは、選択的スプ
ライシングを反映して、「短い」３．０ｋＢのＤＴＬＲ１転写産物形態および「
長い」８．０ｋＢのＤＴＬＲ１転写産物形態が、卵巣および脾臓にそれぞれ存在
する（図５、パネルＡおよびパネルＢ）。癌細胞ｍＲＮＡパネルはまた、バーキ
ットリンパ腫細胞株におけるＤＴＬＲ１の顕著な過剰発現を示す（図５、パネル
Ｃ）。ＤＴＬＲ２ ｍＲＮＡは、肺で検出された４．０ｋＢの種および心臓、脳
、および筋肉で顕著な４．４ｋＢ転写産物伴い、ＤＴＬＲ１に比べそれほど広範
に発現しない。ＤＴＬＲ３の組織分布パターンは、ＤＴＬＲ２の発現に同調する
（図５、パネルＥ）。ＤＴＬＲ３はまた、約４．０ｋＢおよび約６．０ｋＢのサ
イズで２つの主要な転写産物として存在し、そして最も高い発現レベルが、胎盤
および膵臓で観察された。対照的に、ＤＴＬＲ４メッセージおよびＤＴＬＲ５メ
ッセージは、極めて組織特異的であるようである。ＤＴＬＲ４を、サイズが約７
．０ｋＢの単一の転写産物として胎盤でのみ検出した。微弱な４．０ｋＢのシグ
ナルが、卵巣および末梢血単球においてＤＴＬＲ５について観察された。
【０１８４】 （進化的な祖先制御系の構成要素） シグナル伝達経路のもともとの分子的な設計図および分岐する運命は、比較ゲ
ノムアプローチによって再構築され得る。ＭｉｋｌｏｓおよびＲｕｂｉｎ（１９
９６）Ｃｅｌｌ ８６：５２１−５２９；Ｃｈｏｔｈｉａ（１９９４）Ｄｅｖｅ
ｌｏｐ．１９９４ Ｓｕｐｐｌ．２７−３３；Ｂａｎｆｉら（１９９６）Ｎａｔ
ｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．１３：１６７−１７４；ならびにＷａｎｇら（１９９６）
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：４４６８−４４７６。本発明者らは、この論
理を使用して、Ｔｏｌｌに代表されるＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ遺伝子ファミリーの
直接的な進化的対応物である、５つのレセプターパラログ、目下のＤＴＬＲ１〜
５をコードするヒトにおける創発性の遺伝子ファミリーを同定した（図１〜図３
）。ヒトＤＴＬＲおよびハエＤＴＬＲの保存された構造、保存されたＬＲＲエク
トドメインおよび細胞内ＴＨモジュール（図１）は、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ（６
，７）におけるＴｏｌｌに結合する頑強な経路が脊椎動物においての生き続けて
いることを暗示する。最も良い証拠は、反復経路（ｒｅｉｔｅｒａｔｅｄ ｐａ
ｔｈｗａｙ）から取り入れられる：レセプター融合ＴＨドメインの多種多様なＩ
Ｌ−１系およびそのレパートリー、ＩＲＡＫホモログ、ＮＦ−κＢホモログおよ
びＩ−κＢホモログ（ＢｅｌｖｉｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ（１９９６）Ａｎｎ
．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｂｉｏｌ．１２：３９３−４１６ ；Ｗ
ａｓｓｅｒｍａｎ（１９９３）Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ ４：７６７−
７７１； Ｈａｒｄｉｍａｎら（１９９６）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １３：２４６７
−２４７５；およびＣａｏら（１９９６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７１：１１２８−
１１３１）；Ｔｕｂｅ様因子はまた、特徴付けられてきた。ＤＴＬＲが生産的に
ＩＬ−１Ｒシグナル伝達機構にカップルし得るか、またはそのかわりに、タンパ
ク質の平行的なセット（ｐａｒａｌｌｅｌ ｓｅｔ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ）
を使用するかは、知られていない。ＩＬ−１レセプターとは異なって、ヒトＤＴ
ＬＲのＬＲＲクレードルは、Ｓｐａｔｚｌｅ／Ｔｒｕｎｋ−関連シスチン−ノッ
ト因子に対する親和性を保持すると予測される；この型に適合するＤＴＬＲリガ
ンド候補（ＰＥＮと呼ばれる）が単離された。
【０１８５】 シグナル伝達の生化学的機構は、経路において相互作用するタンパク質のフォ
ールドの保存によって測定され得る。ＭｉｋｌｏｓおよびＲｕｂｉｎ（１９９６
）Ｃｅｌｌ ８６：５２１−５２９；Ｃｈｏｔｈｉａ（１９９４）Ｄｅｖｅｌｏ
ｐ．１９９４ Ｓｕｐｐｌ．，２７−３３。現在のところ、Ｔｏｌｌシグナル伝
達のパラダイムは、分子の構造、分子の作用、また分子の運命によって役割が狭
義に定義されるいくつかの分子を含む：Ｐｅｌｌｅは、Ｓｅｒ／Ｔｈｒキナーゼ
（リン酸化）、ＤｏｒｓａｌはＮＦ−κＢ様転写因子（ＤＮＡ結合）であり、そ
してＣａｃｔｕｓは、アンキリンリピートインヒビター（Ｄｏｒｓａｌ結合、分
解）である。ＢｅｌｖｉｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ（１９９６）Ａｎｎ．Ｒｅｖ
．Ｃｅｌｌ Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｂｉｏｌ．１２：３９３−４１６。対照的に、Ｔ
ｏｌｌ、ＴＨドメインおよびＴｕｂｅの機能は依然として謎のままである。他の
サイトカインレセプター（Ｈｅｌｄｉｎ（１９９５）Ｃｅｌｌ ８０：２１３−
２２３）のように、Ｔｏｌｌのリガンド介在二量体化が、誘因であるようである
：Ｔｏｌｌの膜近位領域にある遊離システインが、構成性の活性レセプター対を
生成（Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒら（１９９１）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖｅｌｏｐ．５：７
９７−８０７）し、そしてダイマーとしてキメラＴｏｒｓｏ−Ｔｏｌｌレセプタ
ーシグナル（Ｇａｌｉｎｄｏら（１９９５）Ｄｅｖｅｌｏｐ．１２１：２２０９
−２２１８）を生成し；さらに、Ｔｏｌｌエクトドメインの深刻な切り取りまた
は大規模な欠失が、無差別な細胞内シグナル伝達（ＮｏｒｒｉｓおよびＭａｎｌ
ｅｙ（１９９５）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖｅｌｏｐ．９：３５８−３６９；ならびに
ＷｉｎａｎｓおよびＨａｓｈｉｍｏｔｏ（１９９５）Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｅｌｌ ６：５８７−５９６）を生じ、これは、触媒ドメイン（Ｈｅｌｄｉｎ（
１９９５）Ｃｅｌｌ ８０：２１３−２２３）を有する腫瘍形成性レセプターを
彷彿させる。Ｔｕｂｅは、膜に局在しており、ＰｅｌｌｅのＮ末端（致死）ドメ
インに係合しそしてリン酸化されるが、Ｔｏｌｌ−Ｔｕｂｅ相互作用およびＴｏ
ｌｌ−Ｐｅｌｌｅ相互作用のいずれもが、ツーハイブリット分析によって記録さ
れない（Ｇａｌｉｎｄｏら（１９９５）Ｄｅｖｅｌｏｐ．１２１：２２０９−２
２１８；ならびにＧｒｏβｈａｎｓら（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ ３７２：５６
３−５６６）；この後者の結果は、Ｔｏｌｌ ＴＨ ドメインのコンフォメーシ
ョン「状態」が幾分、因子の漸増を与えることを示唆する。Ｎｏｒｒｉｓおよび
Ｍａｎｌｅｙ（１９９６）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖｅｌｏｐ．１０：８６２−８７２
；ならびにＧａｌｉｎｄｏら（１９９５）Ｄｅｖｅｌｏｐ．１２１：２２０９−
２２１８。
【０１８６】 これらの当惑させる問題の中心であるのは、Ｔｏｌｌ ＴＨモジュールの構造
的性質である。この問題に取り組むために、発明者らは、ヒトＤＴＬＲ鎖を組み
込んだ、昆虫、植物および脊椎動物由来のＴＨ配列の進化的な多様性を利用し、
そして構造予測およびフォールドレコグニションのために最小の、保存タンパク
質コアを抽出した（図２）。酸性残基の非対称的なクラスターを伴う強く予測さ
れた（β／α）５ＴＨドメインフォールドは、細菌のツーコンポーナント（ｔｗ
ｏ−ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）シグナル伝達経路におけるレスポンスレギュレーター
（ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ）の構造とトポロジー的には同一で
ある（Ｖｏｌｚ（１９９３）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３２：１１７４１−１
１７５３；およびＰａｒｋｉｎｓｏｎ（１９９３）Ｃｅｌｌ ７３：８５７−８
７１）（図２Ａ〜図２Ｃ）。プロトタイプ化学走性レギュレーターＣｈｅＹは、
コアのβ−シートのＣ端にある「アスパラギン酸ポケット」中で一過的に２価の
カチオンに結合する；このカチオンは、静電的な安定性を提供し、そして不変Ａ
ｓｐのリン酸化の活性化を促進する。Ｖｏｌｚ（１９９３）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ ３２：１１７４１〜１１７５３。同様に、ＴＨドメインは、酸性である
一群の中でカチオンを捕捉し得るが、活性化および下流シグナル伝達（ｄｏｗｎ
ｓｔｒｅａｍ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）は、負に荷電した部分の特異的結合に依存
し得る：アニオン性リガンドは、緻密な水素結合ネットワーク中に閉じ込められ
ることにより強力なネガティブ結合部位ポテンシャルに打ち勝ち得る。Ｌｅｄｖ
ｉｎａら（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３：
６７８６−６７９１．興味深いことに、ＴＨドメインは、ＴｏｌｌのためのＴｕ
ｂｅ／Ｐｅｌｌｅ複合体のアセンブリ、または植物および脊椎動物における相同
的なシステムのための受動的な足場として単純に作用し得ないが、そのかわり、
シグナル伝達機構における真のコンフォメーション的な誘因として積極的にかか
わる。おそらくは、Ｔｕｂｅ／Ｐｅｌｌｅ複合体の条件付の結合を説明する場合
、Ｔｏｌｌの二量体化は、制御レセプター尾部（ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｒｅｃ
ｅｐｔｏｒ ｔａｉｌｓ）（ＮｏｒｒｉｓおよびＭａｎｌｅｙ（１９９５）Ｇｅ
ｎｅｓ Ｄｅｖｅｌｏｐ．９：３５８−３６９；ＮｏｒｒｉｓおよびＭａｎｌｅ
ｙ（１９９６）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖｅｌｏｐ．１０：８６２−８７２）による脱
マスキング、またはＴＨポケットの低分子アクチベーターによる結合を促進し得
る。しかし、細胞内の「遊離」ＴＨモジュール（ＮｏｒｒｉｓおよびＭａｎｌｅ
ｙ（１９９５）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖｅｌｏｐ．９：３５８−３６９；Ｗｉｎａｎ
ｓおよびＨａｓｈｉｍｏｔｏ（１９９５）Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ ６
：５８７−５９６）は、逸脱したＴｕｂｅ／Ｐｅｌｌｅ複合体を活性化しそして
これにドッキングすることによって、触媒、ＣｈｅＹ様の誘因として作用し得る
。
【０１８７】 （形態発生レセプターおよび免疫防御） 昆虫免疫系と脊椎動物免疫系との間の進化的な関連は、ＤＮＡ中に刻まれてい
る：昆虫において抗微生物因子をコードする遺伝子は、哺乳動物においてＮＦ−
κＢ転写因子に結合することが公知である急性期応答エレメントに類似した上流
のモチーフを示す。Ｈｕｌｔｍａｒｋ（１９９３）Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ．
９：１７８〜１８３。背面および２つの背面関連因子（ＤｉｆおよびＲｅｌｉｓ
ｈ）は、細菌チャレンジの後にこれらの防御タンパク質の誘導を補助する（Ｒｅ
ｉｃｈｈａｒｔら（１９９３）Ｃ．Ｒ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｐａｒｉｓ ３１６
：１２１８〜１２２４；Ｉｐら（１９９３）Ｃｅｌｌ ７５：７５３〜７６３；
およびＤｕｓｈａｙら（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ ９３：１０３４３〜１０３４７）；Ｔｏｌｌ、または他のＤＴＬＲは、成
体ショウジョウバエにおけるこれらの急激な免疫応答を調節するようである（Ｌ
ｅｍａｉｔｒｅら（１９９６）Ｃｅｌｌ ８６：９７３〜９８３；およびＲｏｓ
ｅｔｔｏら（１９９５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕ
ｎ．２０９：１１１〜１１６）。脊椎動物におけるＩＬ−１炎症応答に対するこ
れらの機構的類似（ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ ｐａｒａｌｌｅｌ）は、Ｔｏｌｌ
シグナル伝達経路の機能的な多能の証拠であり、胚性パターニングと先天性免疫
との間の古来の相乗作用を示唆する（ＢｅｌｖｉｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ（１
９９６）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｂｉｏｌ．１２：３９３
〜４１６；Ｌｅｍａｉｔｒｅら（１９９６） Ｃｅｌｌ ８６：９７３〜９８３
；Ｗａｓｓｅｒｍａｎ（１９９３） Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ ４：７
６７〜７７１；Ｗｉｌｓｏｎら（１９９７）Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．７：１７５〜
１７８；Ｈｕｌｔｍａｒｋ（１９９３）Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ．９：１７８
〜１８３；Ｒｅｉｃｈｈａｒｔら（１９９３）Ｃ．Ｒ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｐａ
ｒｉｓ ３１６：１２１８〜１２２４；Ｉｐら（１９９３）Ｃｅｌｌ ７５：７
５３〜７６３；Ｄｕｓｈａｙら（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．ＵＳＡ ９３：１０３４３〜１０３４７；Ｒｏｓｅｔｔｏら（１９９５）
Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０９：１１１〜１
１６；ＭｅｄｚｈｉｔｏｖおよびＪａｎｅｗａｙ（１９９７）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉ
ｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４〜９；ならびにＭｅｄｚｈｉｔｏｖおよびＪａｎｅ
ｗａｙ（１９９７）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４〜９）。昆虫
ＤＴＬＲタンパク質とヒトＤＴＬＲタンパク質とのより近い相同性は、ＩＬ−１
系に対する純粋に免疫平行に置き換わる生物学的機能のさらにより強い重なりを
誘導し、背面−腹面および脊椎動物胚の他の形質転換の、潜在的分子制御因子に
役立つ。ＤｅＲｏｂｅｒｔｉｓおよびＳａｓａｉ（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ ３
８０：３７〜４９；ならびにＡｒｅｎｄｔおよびＮｕｂｌｅｒ−Ｊｕｎｇ（１９
９７）Ｍｅｃｈ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．６１：７〜２１。
【０１８８】 ヒトにおいて出現した強いレセプターファミリーの本説明は、Ｗｎｔパターニ
ング因子についての脊椎動物Ｆｒｉｚｚｌｅｄレセプターの最近の発見を反映す
る。Ｗａｎｇら（１９９６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：４４６８〜４４
７６。多くの他のサイトカインレセプター系が、初期発生において役割を有する
ように（ＬｅｍａｉｒｅおよびＫｏｄｊａｂａｃｈｉａｎ（１９９６）Ｔｒｅｎ
ｄｓ Ｇｅｎｅｔ．１２：５２５〜５３１）、おそらく、小さな（ｃｏｍｐａｃ
ｔ）胚および細長い成体の異なる細胞の状況は、異なる時間で異なる生物学的結
果（例えば、形態形成 対 ＤＴＬＲについての免疫防御）を有する既知のシグ
ナル伝達経路およびその拡散性のトリガーを、単に生じる。昆虫、植物、および
ヒトＴｏｌｌ−関連系（Ｈａｒｄｉｍａｎら（１９９６）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １
３：２４６７〜２４７５；Ｗｉｌｓｏｎら（１９９７）Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．７
：１７５〜１７８）について、これらのシグナルは、興味あることに細菌形質導
入エンジンに似ている、調節ＴＨドメインを通って巡る（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ（
１９９３）Ｃｅｌｌ ７３：８５７〜８７１）。
【０１８９】 特に、ＤＴＬＲ６は、ファミリーにおいてその一員を樹立する構造的特徴を示
す。さらに、このファミリーのメンバーは、多くの重大な発達疾患状態および先
天的免疫系の機能に関係する。特に、ＤＴＬＲ６は、主要な発達異常についての
ホットスポットである位置に対するＸ染色体にマッピングされる。例えば、Ｓａ
ｎｇｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ：ヒトＸ染色体ウェブサイト ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．
ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／ＨＧＰ／ＣｈｒＸ／ｉｎｄｅｘ．ｓｈｔｍｌ；およ
びＢａｙｌｏｒ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｈｕｍａｎ Ｇｅ
ｎｏｍｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇウェブサイト ｈｔｔｐ：／／ｇｃ．ｂｃｍ．
ｔｍｃ．ｅｄｕ：８０８８／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ｓｅｑ／ｈｏｍｅを参照のこと。
【０１９０】 寄託されたＰＡＣについての登録番号は、ＡＣ００３０４６である。この登録
番号は、２つのＰＡＣ：ＲＰＣ−１６４Ｋ３およびＲＰＣ−２６３Ｐ４由来の配
列を含む。これらの２つのＰＡＣ配列は、Ｂａｙｌｏｒウェブサイトで、ヒト染
色体Ｘｐ２２上のＳＴＳマーカーＤＸＳ７０４とＤＸＳ７１６６との間にマッピ
ングされた。この領域は、いくつかの発達異常について「ホットスポット」であ
る。
【０１９１】 （ＩＩＩ．ＰＣＲによるＤＴＬＲフラグメントの増幅） ２つの適切なプライマー配列が選択される（表１〜１０を参照のこと）。ＲＴ
−ＰＣＲは、部分的ｃＤＮＡまたは全長ｃＤＮＡを産生するためのメッセージの
存在について選択される適切なｍＲＮＡサンプル（例えば、この遺伝子を発現す
るサンプル）に対して使用される。例えば、Ｉｎｎｉｓら（編、１９９０）ＰＣ
Ｒ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａ
ｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ
、ＣＡ；ならびにＤｉｅｆｆｅｎｂａｃｈおよびＤｖｅｋｓｌｅｒ（編、１９９
５）ＰＣＲ Ｐｒｉｍｅｒ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌ
ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、ＣＳＨ、ＮＹを参照のこと。こ
のようなことは、ｃＤＮＡライブラリーにおける全長遺伝子のためのプローブに
対する有用な配列の決定を可能にする。ＤＴＬＲ６は、ゲノムにおける連続配列
であり、このことは、他のＤＴＬＲもまた連続配列であることを示唆し得る。従
って、ゲノムＤＮＡに対するＰＣＲは、全長連続配列を生成し得、次いで、染色
体ウォーキング方法が適用可能である。あるいは、配列データベースは、記載さ
れる実施形態の一部に対応する配列か、または密接に関連する形態（例えば、選
択的スプライシングなど）を含む。発現クローニング技術はまた、ｃＤＮＡライ
ブラリーに適用され得る。
【０１９２】 （ＩＶ．ＤＴＬＲの組織分布） これらのＤＴＬＲをコードするそれぞれの遺伝子についてのメッセージが検出
された。図５Ａ〜５Ｆを参照のこと。他の細胞および組織は、適切な技術（例え
ば、ＰＣＲ、免疫アッセイ、ハイブリダイゼーションまたは他のもの）によって
アッセイされる。組織および器官のｃＤＮＡ調製物は、例えば、Ｃｌｏｎｔｅｃ
ｈ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡから利用可能である。天然の発現の供給
源の同定は、記載されるように、有用である。
【０１９３】 サザン分析：初期増幅ｃＤＮＡライブラリー由来のＤＮＡ（５μｇ）を、適切
な制限酵素で消化して挿入物を放出させ、１％アガロースゲルで電気泳動し、そ
してナイロン膜に移した（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ａｎｄ Ｓｃｈｕｅｌｌ、Ｋ
ｅｅｎｅ、ＮＨ）。
【０１９４】 ヒトｍＲＮＡの単離のためのサンプルとしては、代表的には例えば以下が挙げ
られる：末梢血単核細胞（単球、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、顆粒球、Ｂ細胞）、休止（
Ｔ１００）；末梢血単核細胞（抗ＣＤ３で２、６、１２時間活性化し、プールし
た）（Ｔ１０１）；Ｔ細胞、ＴＨ０クローンＭｏｔ７２（休止）（Ｔ１０２）；
Ｔ細胞、ＴＨ０クローンＭｏｔ７２（抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３で３、６、１２
時間活性化し、プールした）（Ｔ１０３）；Ｔ細胞、ＴＨ０クローンＭｏｔ７２
（特異的ペプチドで２、７、１２時間アネルギー処理し、プールした）（Ｔ１０
４）；Ｔ細胞ＴＨ１クローンＨＹ０６（休止）（Ｔ１０７）；Ｔ細胞、ＴＨ１ク
ローンＨＹ０６（抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３で３、６、１２時間活性化し、プー
ルした）（Ｔ１０８）；Ｔ細胞、ＴＨ１クローンＨＹ０６（特異的ペプチドで２
、６、１２時間アネルギー処理し、プールした）（Ｔ１０９）；Ｔ細胞、ＴＨ２
クローンＨＹ９３５（休止）（Ｔ１１０）；Ｔ細胞、ＴＨ２クローンＨＹ９３５
（抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３で２、７、１２時間活性化し、プールした）（Ｔ１
１１）；Ｔ細胞ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ− Ｔ細胞（抗ＣＤ２８、ＩＬ−４、およ
び抗ＩＦＮ−γにおいて２７日間極性化し、ＴＨ２極性化し、抗ＣＤ３および抗
ＣＤ２８で４時間活性化した）（Ｔ１１６）；Ｔ細胞腫瘍株ジャーカットおよび
Ｈｕｔ７８（休止）（Ｔ１１７）；Ｔ細胞クローン、プールしたＡＤ１３０．２
、Ｔｃ７８３．１２、Ｔｃ７８３．１３、Ｔｃ７８３．５８、Ｔｃ７８２．６９
（休止）（Ｔ１１８）；Ｔ細胞ランダムγδＴ細胞クローン（休止）（Ｔ１１９
）；脾細胞（休止）（Ｂ１００）；脾細胞（抗ＣＤ４０およびＩＬ−４で活性化
した）（Ｂ１０１）；Ｂ細胞ＥＢＶ株、プールしたＷＴ４９、ＲＳＢ、ＪＹ、Ｃ
ＶＩＲ、７２１．２２１、ＲＭ３、ＨＳＹ（休止）（Ｂ１０２）；Ｂ細胞株ＪＹ
（ＰＭＡおよびイオノマイシンで１、６時間活性化し、プールした）（Ｂ１０３
）；プールしたＮＫ２０クローン（休止）（Ｋ１００）；プールしたＮＫ２０ク
ローン（ＰＭＡおよびイオノマイシンで６時間活性化した）（Ｋ１０１）；ＮＫ
Ｌクローン（ＬＧＬ白血病患者の末梢血由来、ＩＬ−２処理した）（Ｋ１０６）
；ＮＫ細胞傷害性クローン６４０−Ａ３０−１（休止）（Ｋ１０７）；造血前駆
株ＴＦ１（ＰＭＡおよびイオノマイシンで１、６時間活性化し、プールした）（
Ｃ１００）；Ｕ９３７前単球株（休止）（Ｍ１００）；Ｕ９３７前単球株（ＰＭ
Ａおよびイオノマイシンで１、６時間活性化し、プールした）（Ｍ１０１）；溶
離した単球（ｅｌｕｔｒｉａｔｅｄ ｍｏｎｏｃｙｔｅ）（ＬＰＳ、ＩＦＮγ、
抗ＩＬ−１０で１、２、６、１２、２４時間活性化し、プールした）（Ｍ１０２
）；溶離した単球（ＬＰＳ、ＩＦＮγ、ＩＬ−１０で１、２、６、１２、２４時
間活性化し、プールした）（Ｍ１０３）；溶離した単球（ＬＰＳ、ＩＦＮγ、抗
ＩＬ−１０で４、１６時間活性化し、プールした）（Ｍ１０６）；溶離した単球
（ＬＰＳ、ＩＦＮγ、ＩＬ−１０で４、１６時間活性化し、プールした）（Ｍ１
０７）；溶離した単球（ＬＰＳで１時間活性化した（Ｍ１０８）；溶離した単球
（ＬＰＳで６時間活性化した）（Ｍ１０９）；ＤＣ ７０％ ＣＤ１ａ＋（ＣＤ
３４＋ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα１２日間由来、休止）（Ｄ１０１）；ＤＣ ７０
％ ＣＤ１ａ＋（ＣＤ３４＋ ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα１２日間由来、ＰＭＡお
よびイオノマイシンで１時間活性化した）（Ｄ１０２）；ＤＣ ７０％ ＣＤ１
ａ＋（ＣＤ３４＋ ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα１２日間由来、ＰＭＡおよびイオノ
マイシンで６時間活性化した）（Ｄ１０３）；ＤＣ ９５％ ＣＤ１ａ＋（ＣＤ
３４＋ ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα１２日間ＦＡＣＳ選別由来、ＰＭＡおよびイオ
ノマイシンで１、６時間活性化し、プールした）（Ｄ１０４）；ＤＣ ９５％
ＣＤ１４＋（ｅｘＣＤ３４＋ ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα１２日間ＦＡＣＳ選別由
来、ＰＭＡおよびイオノマイシンで１、６時間活性化し、プールした）（Ｄ１０
５）；ＤＣ ＣＤ１ａ＋ ＣＤ８６＋（ＣＤ３４＋ ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα１
２日間ＦＡＣＳ選別由来、ＰＭＡおよびイオノマイシンで１、６時間活性化し、
プールした）（Ｄ１０６）；ＤＣ（単球ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４ ５日間由来、
休止）（Ｄ１０７）；ＤＣ（単球ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４ ５日間由来、休止）
（Ｄ１０８）；ＤＣ（単球ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４ ５日間由来、ＬＰＳで４、
１６時間活性化し、プールした）（Ｄ１０９）；ＤＣ（単球ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ
−４ ５日間由来、ＴＮＦα、単球上清（ｓｕｐｅ）で４、１６時間活性化し、
プールした）（Ｄ１１０）；平滑筋腫Ｌ１１良性腫瘍（Ｘ１０１）；正常子宮筋
層Ｍ５（Ｏ１１５）；悪性平滑筋肉腫ＧＳ１（Ｘ１０３）；肺線維芽細胞肉腫株
ＭＲＣ５（ＰＭＡおよびイオノマイシンで１、６時間活性化し、プールした）（
Ｃ１０１）；腎臓上皮癌細胞株ＣＨＡ（ＰＭＡおよびイオノマイシンで１、６時
間活性化し、プールした）（Ｃ１０２）；２８週齢雄性胎児腎（Ｏ１００）；２
８週齢雄性胎児肺（Ｏ１０１）；２８週齢雄性胎児肝臓（Ｏ１０２）；２８週齢
雄性胎児心臓（Ｏ１０３）；２８週齢雄性胎児脳（Ｏ１０４）；２８週齢雄性胎
児胆嚢（Ｏ１０６）；２８週齢雄性胎児小腸（Ｏ１０７）；２８週齢雄性胎児脂
肪組織（Ｏ１０８）；２５週齢雌性胎児卵巣（Ｏ１０９）；２５週齢雌性胎児子
宮（Ｏ１１０）；２８週齢雄性胎児精巣（Ｏ１１１）；２８週齢雄性胎児脾臓（
Ｏ１１２）；成人の２８週齢胎盤（Ｏ１１３）；および１２歳由来の炎症扁桃（
Ｘ１００）。
【０１９５】 マウスｍＲＮＡの単離のためのサンプルとしては、例えば、以下が挙げられ得
る：休止マウス線維芽細胞性Ｌ細胞株（Ｃ２００）；Ｂｒａｆ：ＥＲ（エストロ
ゲンレセプターに対するＢｒａｆ融合物）トランスフェクト細胞（コントロール
）（Ｃ２０１）；Ｔ細胞（ＴＨ１極性化した）（Ｍｅｌ１４明，脾臓由来の、Ｉ
ＦＮγおよび抗ＩＬ−４で７日間極性化したＣＤ４＋細胞；Ｔ２００）；Ｔ細胞
（ＴＨ２極性化した）（Ｍｅｌ１４明，脾臓由来の、ＩＬ−４および抗ＩＦＮγ
で７日間極性化したＣＤ４＋細胞；Ｔ２０１）；Ｔ細胞（高度にＴＨ１極性化し
た）（Ｏｐｅｎｓｈａｗら（１９９５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：１３５７
−１３６７を参照のこと；抗ＣＤ３で２、６、１６時間活性化し、プールした；
Ｔ２０２）；Ｔ細胞（高度にＴＨ２極性化した）（Ｏｐｅｎｓｈａｗら（１９９
５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：１３５７−１３６７を参照のこと；抗ＣＤ３
で２、６、１６時間活性化し、プールした；Ｔ２０３）；ＣＤ４４−ＣＤ２５＋
プレＴ細胞（胸腺から分類した）（Ｔ２０４）；ＴＨ１ Ｔ細胞クローン Ｄ１
．１（抗原での最後の刺激後３週間休止する）（Ｔ２０５）；ＴＨ１ Ｔ細胞ク
ローンＤ１．１（１０μｇ／ｍｌ ＣｏｎＡを１５時間刺激した）（Ｔ２０６）
；ＴＨ２ Ｔ細胞クローンＣＤＣ３５（抗原での最後の刺激後３週間休止する）
（Ｔ２０７）；ＴＨ２ Ｔ細胞クローンＣＤＣ３５（１０ μｇ／ｍｌ Ｃｏｎ
Ａを１５時間刺激した）（Ｔ２０８）；Ｍｅｌ１４＋脾臓由来ナイーブＴ細胞（
休止）（Ｔ２０９）；Ｍｅｌ１４＋ Ｔ細胞（ＩＦＮ−γ／ＩＬ−１２／抗ＩＬ
−４でＴｈ１を６、１２、２４時間極性化し、プールした）（Ｔ２１０）；Ｍｅ
ｌ１４＋ Ｔ細胞（ＩＬ−４／抗ＩＦＮ−γでＴｈ２を６、１３、２４時間極性
化し、プールした）（Ｔ２１１）；未刺激成熟Ｂ細胞白血病細胞株Ａ２０（Ｂ２
００）；未刺激Ｂ細胞株ＣＨ１２（Ｂ２０１）；未刺激脾臓由来大Ｂ細胞（Ｂ２
０２）；全脾臓由来Ｂ細胞（ＬＰＳ活性化した）（Ｂ２０３）；脾臓由来のメト
リザマイド富化樹状細胞（休止）（Ｄ２００）；骨髄由来の樹状細胞（休止）（
Ｄ２０１）；ＬＰＳで４時間活性化した単球細胞株ＲＡＷ２６４．７（Ｍ２００
）；ＧＭおよびＭ−ＣＳＦ由来骨髄マクロファージ（Ｍ２０１）；マクロファー
ジ細胞株Ｊ７７４（休止）（Ｍ２０２）；０．５、１、３、６、１２時間プール
したマクロファージ細胞株Ｊ７７４＋ＬＰＳ＋抗ＩＬ１０（Ｍ２０３）；０．５
、１、３、５、１２時間プールしたマクロファージ細胞株Ｊ７７４＋ＬＰＳ＋Ｉ
Ｌ１０（Ｍ２０４）；エアロゾルでチャレンジしたマウス肺組織（Ｔｈ２プライ
マー、７、１４、２３時間プールしたエアロゾルＯＶＡチャレンジ）（Ｇａｒｌ
ｉｓｉら、（１９９５）Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉ
ｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ７５：７５−８３を参照のこと；Ｘ２０６）；
Ｎｉｐｐｏｓｔｒｏｎｇｕｌｕｓ−感染肺組織（Ｃｏｆｆｍａｎら、（１９８９
）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４５：３０８−３１０を参照のこと；Ｘ２００）；全成人
肺（正常）（Ｏ２００）；全肺ｒａｇ−１（Ｓｃｈｗａｒｚら（１９９３）Ｉｍ
ｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ４：２４９−２５２を参照のこと；Ｏ２０５）
；ＩＬ−１０ Ｋ．Ｏ．脾臓（Ｋｕｈｎ ら、（１９９１）Ｃｅｌｌ ７５：２
６３−２７４を参照のこと；Ｘ２０１）；全成人脾臓（正常）（Ｏ２０１）；全
脾臓ｒａｇ−１（Ｏ２０７）；ＩＬ−１０ Ｋ．Ｏ．パイアー斑（Ｏ２０２）；
全パイアー斑（正常）（Ｏ２１０）；ＩＬ−１０ Ｋ．Ｏ．腸間膜リンパ節（Ｘ
２０３）；全腸間膜リンパ節（正常）（Ｏ２１１）；ＩＬ−１０ Ｋ．Ｏ．結腸
（Ｘ２０３）；全結腸（正常）（Ｏ２１２）；ＮＯＤ マウス膵臓（Ｍａｋｉｎ
ｏら、（１９８０）Ｊｉｋｋｅｎ Ｄｏｂｕｔｓｕ ２９：１−１３を参照のこ
と；Ｘ２０５）；全胸腺ｒａｇ−１（Ｏ２０８）；全腎臓ｒａｇ−１（Ｏ２０９
）；全心臓ｒａｇ−１（Ｏ２０２）；全脳ｒａｇ−１（Ｏ２０３）；全精巣ｒａ
ｇ−１（Ｏ２０４）；全肝臓ｒａｇ−１（Ｏ２０６）；ラット正常関節組織（Ｏ
３００）；ならびにラット関節炎関節組織（Ｘ３００）。
【０１９６】 ＤＴＬＲ１０は、前駆体樹状細胞２型（ｐＤＣ２）において高度に発現するこ
とが見出されている。例えば、Ｒｉｓｓｏａｎら（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃｅ
２８３：１１８３〜１１８６；およびＳｉｅｇａｌら（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ ２８４：１８３５〜１８３７を参照のこと。しかし、ＤＴＬＲ１０は、単球
では発現しない。ＤＴＬＲ１０の制限された発現は、宿主の免疫防御におけるレ
セプターについての役割の示唆を強化する。ｐＤＣ２細胞は、天然のインターフ
ェロン産生細胞（ＮＩＰＣ）であり、これは単純疱疹ウイルス感染に対する応答
において大量のＩＮＦαを産生する。
【０１９７】 （Ｖ．ＤＴＬＲの種相対物のクローニング） 種々のストラテジーを用いて、これらのＤＴＬＲの種相対物を、好ましくは他
の霊長類から得る。１つの方法は、密接に関連した種のＤＮＡプローブを使用す
る交差ハイブリダイゼーションによる方法である。中間段階として、進化的に類
似の種を調査するのは有用であり得る。別の方法は、特定の種間（例えば、ヒト
）、遺伝子間（例えば、高度に保存されたかもしくは保存されていないポリペプ
チド配列またはヌクレオチド配列の領域）のブロックの類似性または差異の同定
に基づく特異的なＰＣＲプライマーを用いることによる方法である。あるいは、
抗体は、発現クローニングのために使用され得る。
【０１９８】 （ＶＩ．哺乳動物ＤＴＬＲタンパク質の産生） 適切な（例えば、ＧＳＴ）融合構築物を、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉで発現させる
ために操作する。例えば、マウスＩＧＩＦ ｐＧｅｘプラスミドを構築し、そし
てＥ．ｃｏｌｉに形質転換する。新たに形質転換した細胞を、５０μｇ／ｍｌア
ンピシリン含有ＬＢ培地で増殖させ、そしてＩＰＴＧ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏ
ｕｉｓ，ＭＯ）で誘導する。一晩の誘導後、この細菌を収集し、そしてＤＴＬＲ
タンパク質を含むペレットを単離する。このペレットを、ＴＥ緩衝液（５０ｍＭ
Ｔｒｉｓ−塩基 ｐＨ８．０、１０ｍＭ ＥＤＴＡおよび２ｍＭペファブロッ
ク（ｐｅｆａｂｌｏｃ））２リットル中でホモジナイズする。この物質を、微量
流動化装置（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ，
Ｎｅｗｔｏｎ，ＭＡ）を三回通過させる。流動化した上清を、Ｓｏｒｖａｌｌ
ＧＳ−３ローターにより１３，０００ｒｐｍで１時間スピンダウンさせる。得ら
れたこのＤＴＬＲタンパク質含有上清を濾過し、そして５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−塩
基 ｐＨ８．０で平衡化したグルタチオン−ＳＥＰＨＡＲＯＳＥカラムに通す。
ＤＴＬＲ−ＧＳＴ融合タンパク質を含む画分をプールし、そして例えば、トロン
ビン（Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．
，Ｓｏｕｔｈ Ｂｅｎｄ，ＩＮ）で切断する。次いで、切断したプールを、５０
ｍＭ Ｔｒｉｓ−塩基で平衡化したＱ−ＳＥＰＨＡＲＯＳＥカラムに通す。ＤＴ
ＬＲを含む画分をプールし、そして冷却した蒸留Ｈ２Ｏで希釈して伝導率を低下
させ、そして新鮮なＱ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラム単独に、または続いて免疫ア
フィニティー抗体カラムを通す。ＤＴＬＲタンパク質を含む画分をプールし、ア
リコートにし、そして−７０℃の冷凍庫で保存する。
【０１９９】 ＣＤスペクトルのＤＴＬＲ１タンパク質との比較により、このタンパク質が正
確に折り畳まれていることが示唆され得る。Ｈａｚｕｄａら、（１９６９）Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１６８９−１６９３を参照のこと。
【０２００】 （ＶＩＩ．ＤＴＬＲを用いる生物学的アッセイ） 生物学的アッセイは、一般に、タンパク質のリガンド結合特徴またはレセプタ
ーのキナーゼ／ホスファタ−ゼ活性に関する。この活性は、多くの他の酵素活性
がそうであるように、代表的には可逆的であり、そしてホスファターゼまたはホ
スホリラーゼ活性を媒介し、この活性は標準的手順によって容易に測定される。
例えば、Ｈａｒｄｉｅら（編、１９９５）Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｋｉｎａｓ
ｅ ＦａｃｔＢｏｏｋ 第Ｉ巻および第ＩＩ巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ
、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ；Ｈａｎｋｓら（１９９１）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ
ｏｌ．２００：３８〜６２；Ｈｕｎｔｅｒら（１９９２）Ｃｅｌｌ ７０：３７
５〜３８８；Ｌｅｗｉｎ（１９９０）Ｃｅｌｌ ６１：７４３〜７５２；Ｐｉｎ
ｅｓら（１９９１）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｓｙｍｐ．Ｑｕａ
ｎｔ．Ｂｉｏｌ．５６：４４９〜４６３；およびＰａｒｋｅｒら（１９９３）Ｎ
ａｔｕｒｅ ３６３：７３６〜７３８を参照のこと。
【０２０１】 インターロイキン−１（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ １ｓ）のファミリーは、そ
れぞれの分子が炎症性疾患の重要な媒介物である分子を含む。包括的な総説につ
いては、Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ（１９９６）「Ｂｉｏｌｏｇｉｃ ｂａｓｉｓ ｆ
ｏｒ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１ ｉｎ ｄｅｓｅａｓｅ」Ｂｌｏｏｄ ８７
：２０９５〜２１４７を参照のこと。種々のＴｏｌｌリガンドが、疾患（特に炎
症応答）の開始において重要な役割を果たし得るという示唆がある。ＩＬ−１フ
ァミリーに関連する新規なタンパク質の発見は、疾患の開始について分子的基礎
を提供し、そして増加する範囲および効力の治療的ストラテジーの開発を可能に
する分子の同定を促進する。
【０２０２】 （ＶＩＩＩ．例えばＤＴＬＲ４に特異的な抗体の調製） 近交系Ｂａｌｂ／ｃマウスを、組換え形態のタンパク質（例えば、精製したＤ
ＴＬＲ４）または安定にトランスフェクトしたＮＩＨ−３Ｔ３細胞で腹腔内免疫
する。動物を、適切な時点で、タンパク質（さらなるアジュバントを含むか、ま
たは含まない）でブーストし、抗体の産生をさらに刺激する。血清を収集するか
、またはハイブリドーマを収集した脾臓で産生する。
【０２０３】 あるいは、Ｂａｌｂ／ｃマウスを、遺伝子もしくはそのフラグメントで形質転
換した細胞（内因性細胞または外因性細胞のいずれか）で免疫するか、または抗
原の発現を富化した単離された膜で免疫する。血清を適切な時点で、代表的には
多くのさらなる投与後に収集する。種々の遺伝子治療技術は、例えば、免疫応答
を生成するためのインサイチュでのタンパク質産生において有用であり得る。
【０２０４】 モノクローナル抗体を作製し得る。例えば、脾細胞を、適切な融合パートナー
と融合し、そしてハイブリドーマを標準手順により増殖培地で選択する。ハイブ
リドーマの上清を、所望のＤＴＬＲに結合する抗体の存在について、例えば、Ｅ
ＬＩＳＡまたは他のアッセイによりスクリーニングする。特定のＤＴＬＲの実施
形態を特異的に認識する抗体もまた、選択または調製され得る。
【０２０５】 別の方法において、合成ペプチドまたは精製タンパク質を免疫系に提示し、モ
ノクローナル抗体またはポリクローナル抗体を生成する。例えば、Ｃｏｌｉｇａ
ｎ（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ，Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ；ならびにＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９
８９）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照のこと。適切な状況にお
いて、結合試薬を上記のように（例えば、蛍光または他の方法で）標識するか、
またはパンニング法のための基体に固定化するかのいずれかをする。核酸はまた
、動物の細胞に導入されて抗原（これは、免疫応答を誘発するのに役立つ）を産
生し得る。例えば、Ｗａｎｇら、（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ
．Ｓｃｉ．９０：４１５６−４１６０；Ｂａｒｒｙら、（１９９４）ＢｉｏＴｅ
ｃｈｎｉｑｕｅｓ １６：６１６−６１９；およびＸｉａｎｇら、（１９９５）
Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２：１２９−１３５を参照のこと。
【０２０６】 （ＩＸ．例えばＤＴＬＲ５を有する融合タンパク質の産生） 種々の融合構築物を、ＤＴＬＲ５を用いて作製する。この遺伝子の部分を、エ
ピトープタグ（例えば、ＦＬＡＧタグ）、またはツーハイブリッドシステム構築
物に融合する。例えば、ＦｉｅｌｄｓおよびＳｏｎｇ（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ
３４０：２４５−２４６を参照のこと。
【０２０７】 このエピトープタグを、結合パートナー（例えば、それぞれのＤＴＬＲ５のた
めのリガンド）を検出する抗ＦＬＡＧ抗体での検出を用いる発現クローニング手
順に使用し得る。ツーハイブリッドシステムはまた、ＤＴＬＲ５に特異的に結合
するタンパク質を単離するために使用され得る。
【０２０８】 （Ｘ．ＤＴＬＲの染色体マッピング） 染色体スプレッドを調製する。インサイチュハイブリダイゼーションを、７２
時間培養したフィトヘマグルチニン刺激リンパ球から得られた染色体調製物にお
いて実施する。良質のハイブリダイゼーション後染色体バンド形成を確実にする
ために、培養（６０μｇ／ｍｌの培地）の最後の７時間、５−ブロモデオキシウ
リジンを添加する。
【０２０９】 Ｂ細胞総ｃＤＮＡテンプレートのプライマーの補助で増幅された、適切なフラ
グメント（例えば、ＰＣＲフラグメント）を、適切なベクターにクローン化する
。このベクターを３Ｈでのニックトランスレーションによって標識する。放射性
標識プローブを、Ｍａｔｔｅｉら（１９８５）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．６９：３２
７−３３１に記載のように、中期スプレッドにハイブリダイズさせる。
【０２１０】 核トラックエマルジョン（ＫＯＤＡＫ ＮＴＢ２）でコーティングした後、ス
ライドを露出（例えば、４℃で１８日間）させる。バンド形成手順の間の銀粒の
スリッピングを避けるために、染色体スプレッドを緩衝化ギムザ溶液でまず染色
し、そして中期を写真撮影する。次いで、蛍光色素−光分解−ギムザ（ＦＰＧ）
法によってＲバンド形成を行い、そして分析前に中期を再度写真撮影する。
【０２１１】 あるいは、上記のようにＦＩＳＨを実行し得る。ＤＴＬＲ遺伝子は、異なる染
色体上に局在化する。ＤＴＬＲ２およびＤＴＬＲ３は、第４ヒト染色体に局在化
し；ＤＴＬＲ４は、第９ヒト染色体に局在化し、そしてＤＴＬＲ５は、第１ヒト
染色体に局在化する。図４Ａ〜４Ｄを参照のこと。
【０２１２】 （ＸＩ．構造活性関連） 特定の残基の重要性に関する情報を、標準的手順および分析を使用して決定す
る。標準的変異誘発分析を、例えば、所定の位置（例えば、上記で同定した位置
）で多くの異なる改変体を作製し、そしてこの改変体の生物学的活性を評価する
ことにより行う。これを、活性を改変する位置を決定するまで、または生物学的
活性を保持、ブロック、もしくは調節のいずれかをさせるために置換され得る残
基を決定するために特定の位置に焦点をあてるまで実施し得る。
【０２１３】 あるいは、天然の改変体の分析は、どの位置が天然の変異に寛容かを示し得る
。これは、個体間、または株間もしくは種間のバリエーションの集団分析から生
じ得る。選択した個体由来のサンプルを、例えば、ＰＣＲ分析および配列決定に
より分析する。これにより、集団多型の評価が可能になる。
【０２１４】 （ＸＩ．ＤＴＬＲに関するリガンドの単離） ＤＴＬＲを、特異的結合試薬として使用し、抗体が使用されるのと同様に、そ
の結合特異性を利用することにより、その結合パートナーを同定し得る。結合試
薬は、上記のように（例えば、蛍光または他の方法で）標識するか、またはパン
ニング法の基板に固定するかのいずれかである。
【０２１５】 結合組成物を、使用して、結合パートナー（すなわち、好ましくは膜と会合し
た、リガンド）を発現する細胞株から作製された発現ライブラリーをスクリーニ
ングする。標準染色技術を、使用して、表面に発現したリガンドを検出または識
別するか、あるいは、表面発現が形質転換された細胞を、パンニングによってス
クリーニングする。細胞内の発現のスクリーニングは、種々の染色または免疫染
色手順によって実施する。ＭｃＭａｈａｎら（１９９１）ＥＭＢＯ Ｊ．１０：
２８２１−２８３２もまた、参照のこと。
【０２１６】 例えば、０日目に、２チャンバーパーマノックス（ｐｅｒｍａｎｏｘ）スライ
ドを、チャンバーあたり１ｍｌのフィブロネクチン（ＰＢＳ中１０ｎｇ／ｍｌ）
で、室温にて３０分間、予め被覆する。ＰＢＳで１回リンスする。次に、ＣＯＳ
細胞を、１．５ｍｌの増殖培地中、２〜３×１０５細胞／チャンバーでプレーテ
ィングする。３７℃で一晩インキュベートする。
【０２１７】 各サンプルについて、１日目に、無血清ＤＭＥ中の６６μｇ／ｍｌ ＤＥＡＥ
−デキストラン、６６μＭクロロキン、および４μｇ ＤＮＡの溶液０．５ｍｌ
を調製する。各セットについて、例えば、１および１／２００希釈のＤＴＬＲ−
ＦＬＡＧ ｃＤＮＡの陽性コントロール、ならびに陰性モックを調製する。細胞
を無血清ＤＭＥでリンスする。ＤＮＡ溶液を添加し、そして３７℃で５時間イン
キュベートする。培地を除去し、そしてＤＭＥ中の１０％ＤＭＳＯの０．５ｍｌ
を２．５分間添加する。これを除去し、ＤＭＥで一度洗浄する。１．５ｍｌの増
殖培地を添加し、そして一晩インキュベートする。
【０２１８】 ２日目、培地を交換する。３または４日目、細胞を固定し、そして染色する。
細胞をハンクス緩衝化生理食塩水溶液（ＨＢＳＳ）で二回リンスし、そして４％
パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）／グルコースで５分間固定する。ＨＢＳＳで３
回洗浄する。すべての液体を除去した後、スライドを−８０℃で保存し得る。各
チャンバーについて、０．５ｍｌインキュベーションを以下のように行う。３２
μｌ／ｍｌの１Ｍ ＮａＮ３を含むＨＢＳＳ／サポニン（０．１％）を、２０分
間添加する。次に、細胞をＨＢＳＳ／サポニンで１回洗浄する。適切なＤＴＬＲ
またはＤＴＬＲ／抗体複合体を細胞に添加し、そして３０分間インキュベートす
る。細胞をＨＢＳＳ／サポニンで二回洗浄する。適切な場合、１次抗体を３０分
間添加する。２次抗体、例えば、ベクター抗マウス抗体を１／２００希釈で添加
し、そして３０分間インキュベートする。ＥＬＩＳＡ溶液（例えば、Ｖｅｃｔｏ
ｒ Ｅｌｉｔｅ ＡＢＣ西洋ワサビペルオキシダーゼ溶液）を調製し、そして３
０分間プレインキュベートする。例えば、ＨＢＳＳ／サポニン２．５ｍｌ当たり
、溶液Ａ（アビジン）１滴および溶液Ｂ（ビオチン）１滴を使用する。細胞をＨ
ＢＳＳ／サポニンで二回洗浄する。ＡＢＣ ＨＲＰ溶液を添加し、そして３０分
間インキュベートする。細胞をＨＢＳＳで二回洗浄し、二回目の洗浄を２分間行
い、これは細胞を閉鎖する。次いで、Ｖｅｃｔｏｒジアミノ安息香酸（ＤＡＢ）
を５〜１０分間添加する。ガラス蒸留水５ｍｌ当たり、緩衝液２滴に加えてＤＡ
Ｂ ４滴およびＨ２Ｏ２ ２滴を使用する。チャンバーを注意深く除去し、そし
てスライドを水中でリンスする。数分間、風乾し、次いでＣｒｙｓｔａｌ Ｍｏ
ｕｎｔ１滴を添加し、そしてカバーガラスをかける。８５〜９０℃で５分間乾燥
する。
【０２１９】 プールの陽性染色を評価し、そして結合の原因となる単一遺伝子を単離するま
で進行的にサブクローニングする。
【０２２０】 あるいは、ＤＴＬＲ試薬を使用し、推定リガンドを発現する細胞をアフィニテ
ィー精製するか、または選別する。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、またはＡｕｓ
ｕｂｅｌらを参照のこと。
【０２２１】 別のストラテジーは、パンニングによって膜結合レセプターをスクリーニング
することである。レセプターｃＤＮＡを、以下に記載されるように構築する。リ
ガンドを、固定化し得、そして発現細胞を固定化するために使用し得る。固定化
は、例えば、ＤＴＬＲ融合構築物のＦＬＡＧ配列を認識する適切な抗体の使用に
よってか、または第１の抗体に対して惹起される抗体の使用によって達成され得
る。選択および増幅の反復サイクルにより、適切なクローンが富化され、その結
果、レセプターを発現するクローンが単離される。
【０２２２】 ファージ発現ライブラリーを、哺乳動物ＤＴＬＲによってスクリーニングし得
る。適切な標識技術（例えば、抗ＦＬＡＧ−抗体）は、適切なクローンの特異的
な標識化を可能にする。
【０２２３】 本明細書中におけるすべての引用物は、各個々の刊行物または特許出願が、参
考として援用されることが具体的にかつ個々に示されるのと同程度に、本明細書
中に参考として援用される。
【０２２４】 当業者にとって明白なように、本発明の多くの改変および変更は、本発明の精
神および範囲から逸脱することなく行なわれ得る。本明細書中に記載される特定
の実施形態は、例示として提供するだけであり、そして本発明は、このような特
許請求の範囲が権利を付与される等価物の全範囲とともに、添付の特許請求の範
囲の用語により制限される；そして本発明は本明細書に実施例として提示した特
定の実施形態により制限されない。
【０２２５】 ヒトは、２つの異なる型の樹状細胞（ＤＣ）前駆体を有する。末梢血単球（ｐ
ＤＣ１）は、ＧＭＣＳＦおよびＩＬ−４と共に培養後、未成熟骨髄ＤＣを生じる
。ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）での刺激後、これらの未成熟細胞は、成熟骨
髄ＤＣ（ＤＣ１）になる。血液または扁桃由来のＣＤ４＋ＣＤ３−ＣＤ１１ｃ−
形質細胞様細胞（ｐＤＣ２）は、ＩＬ−３と共に培養後、異なる型の未成熟ＤＣ
を生じ、そしてＣＤ４０Ｌ刺激後、成熟ＤＣ（ＤＣ２）に分化する。Ｒｉｓｓｏ
ａｎら，（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８３：１１８３−１１８６。
【０２２６】 Ｓｉｇｅａｌら，（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８４：１８３５−１８３７
は、ｐＤＣ２が、「天然のインターフェロン産生細胞」（ＩＰＣ）であることを
示す。インターフェロン（ＩＦＮ）は、抗ウイルス免疫応答において最も重要な
サイトカインである。ヒト血液における「天然のＩＦＮ−サイトカイン産生細胞
」（ＮＩＰＣ）は、ＣＤ４および主要な組織適合性複合体クラスＩＩタンパク質
を発現するが、それらの希薄性、迅速なアポトーシスおよび結合のマーカーの欠
如によって、単離そして特徴付けされていない。ここで、精製されたＮＩＰＣは
、ＣＤ４（＋）ＣＤ１１ｃ−２型樹状細胞前駆体（ｐＤＣ２）であることが示さ
れ、これは、微生物のチャレンジ後、他の血液細胞よりも２００〜１０００倍の
ＩＦＮを産生する。従って、ｐＤＣ２は、免疫系のエフェクター細胞型であり、
抗ウイルス免疫応答および抗腫瘍応答において重要である。これらは、ＨＩＶ感
染患者において重要な細胞と関連する。
【０２２７】 Ｔｏｌｌ様レセプター（ＴＬＲ）分子は、ＩＬ−１／Ｔｏｌｌレセプターファ
ミリーに所属する。ＴＬＲ２およびＴＬＲ４に対するリガンドは、同定され、そ
してそれらの機能は、微生物抗原または傷害に対する宿主免疫応答に関連する。
Ｔａｋｅｕｃｈｉら，（１９９９）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １１：４４３−４５１；
およびＮｏｓｈｉｎｏら，（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：３７４９
−３７５２。ＴＬＲの発現パターンは、拘束されるようである。Ｍｕｚｕｏら，
（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：５９９８−６００４。以下の知見に
基づいて：ｉ）ＴＬＲ１０は、ｐＤＣ２において非常に発現され、そして拘束さ
れる、そしてｉｉ）ｐＤＣ２は、ＮＩＰＣであり、ＴＬＲ１０は、宿主の本質的
な免疫応答に重要な役割を担うようである。
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ、Ｃａｅｎｏｒａｂｄｉｔｉｓ、およびヒトの
ＤＴＬＲのタンパク質構造、ならびに脊椎動物のＩＬ−１レセプターおよび植物
耐病性タンパク質に対するそれらの関係の概略的な比較を示す。３種のＤｒｏｓ
ｏｐｈｉｌａ（Ｄｍ）ＤＴＬＲ（Ｔｏｌｌ、１８ｗおよびＭｓｔ ＯＲＦフラグ
メント）（ＭｏｒｉｓａｔｏおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ（１９９５）Ａｎｎ．Ｒｅ
ｖ．Ｇｅｎｅｔ．２９：３７１−３９９；ＣｈｉａｎｇおよびＢｅａｃｈｙ（１
９９４）Ｍｅｃｈ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．４７：２２５−２３９；Ｍｉｔｃｈａｍら
（１９９６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：５７７７−５７８３；およびＥ
ｌｄｏｎら（１９９４）Ｄｅｖｅｌｏｐ．１２０：８８５−８９９）は、４種の
完全なヒト（Ｈｕ）レセプター（ＤＴＬＲ１〜４）および１種の部分的ヒトレセ
プター（ＤＴＬＲ５）のそばに整列されている。ＰＬＩＮＴＳ（Ａｔｔｗｏｏｄ
ら（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：２１２−２１７）
によって合図されるレセプター外部ドメインの個々のＬＲＲは、四角によって明
確に記している；ＬＲＲ整列のＣ末端またはＮ末端に隣接する「最上部」および
「底部」のＣｙｓに富んだクラスターは、それぞれ向かいあう半円によって記載
されている。ＤＴＬＲ１〜５における内部のＣｙｓに富んだ領域の欠失は、Ｔｏ
ｌｌおよび１８ｗの７８４および９７７ａａ伸長部と比較した場合、それらのよ
り小さな外部ドメイン（それぞれ、５５８，５７０，６９０，および６５２ａａ
）によって主に説明される。ＤｍＭｓｔおよびＨｕＤＴＬＲ５の不完全鎖（それ
ぞれ約５１９および１５３ａａ外部ドメイン）は、破線によって表される。ＤＴ
ＬＲ、ＩＬ−１型レセプター（ＩＬ−１Ｒ）、細胞内タンパク質Ｍｙｄ８８、お
よびタバコ耐病性遺伝子Ｎ産物（ＤＲｇＮ）に共通の細胞内情報伝達モジュール
は、膜の下に示される。例えば、Ｈａｒｄｉｍａｎら（１９９６）Ｏｎｃｏｇｅ
ｎｅ １３：２４６７−２４７５；およびＲｏｃｋら（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔ’１ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：５８８−を参照のこと。追加のド
メインは、ＩＬ−１Ｒ内の３つ組のＩｇ様モジュール（ジスルフィドで連結した
ループ）を含む；ＤＲｇＮタンパク質は、ＮＴＰａｓｅドメイン（四角）を特徴
とし、そしてＭｙｄ８８は致死ドメイン（黒の楕円形）を有する。
【図２Ａ】 図２Ａは、Ｔｏｌｌ様サイトカインレセプターおよびＩＬ−１様サイトカイン
レセプターのシグナル伝達ドメインにおける保存された構造パターン、ならびに
２つの分岐したモジュラータンパク質を示す。図２Ａは、共通のＴＨドメインの
配列の連続を示す。ＤＴＬＲは図１と同様に表示されている；ヒト（Ｈｕ）ＩＬ
−１ファミリーレセプターまたはマウス（Ｍｏ）ＩＬ−１ファミリーレセプター
（ＩＬ−１Ｒ１〜６）は以前に提唱されたように連続的に番号がつけられている
（Ｈａｒｄｉｍａｎら（１９９６）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １３：２４６７−２４７
５）；Ｍｙｄ８８ならびにタバコ（Ｔｏ）およびアマＬ．ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉ
ｍｕｍ（Ｌｕ）由来の配列は、それぞれより大きな、マルチドメイン分子のＣ末
端ドメインおよびＮ末端ドメインを表す。配列のギャップのないブロック（１〜
１０まで番号がつけられている）は、四角で囲まれている。三角形は、有害な変
異を示し、一方、矢印のＮ末端の短縮化は、ヒトＩＬ−１Ｒ１内の生物活性を排
除する（Ｈｅｇｕｙら（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：２６０５
−２６０９）。αヘリックス（Ｈ）、β鎖（Ｅ）、またはコイル（Ｌ）のＰＨＤ
（ＲｏｓｔおよびＳａｎｄｅｒ（１９９４）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ １９：５５−７
２）およびＤＳＣ（ＫｉｎｇおよびＳｔｅｒｎｂｅｒｇ（１９９６）Ｐｒｏｔｅ
ｉｎ Ｓｃｉ．５：２２９８−２３１０）の二次構造の予測は印が付けられてい
る。アミノ酸陰影図は、化学的に類似の残基を示す：疎水性の、酸性の、塩基性
の、Ｃｙｓの、芳香族の、構造破壊の、非常に小さなもの。ＩＬ−１Ｒ、ＤＴＬ
Ｒ、および完全な整列（ＡＬＬ）についての診断用配列パターンは、７５％のス
トリンジェンシーでＣｏｎｓｅｎｓｕｓによって誘導された。アミノ酸サブセッ
トの記号は以下のとおりである（詳細はインターネットサイトを参照のこと）：
ｏ、アルコール；ｌ、脂肪族の；・、任意のアミノ酸；ａ、芳香族の；ｃ、荷電
した（ｃｈａｒｇｅｄ）；ｈ、疎水性；−、陰性の；ｐ、極性の；＋、陽性の；
ｓ、小さい（ｓｍａｌｌ）；ｕ、非常に小さい（ｔｉｎｙ）；ｔ、ターン様の（
ｔｕｒｎｌｉｋｅ）。
【図２Ｂ】 図２Ｂは、Ｔｏｌｌ様サイトカインレセプターおよびＩＬ−１様サイトカイン
レセプターのシグナル伝達ドメインにおける保存された構造パターン、ならびに
２つの分岐したモジュラータンパク質を示す。図２Ｂは、共通のＴＨドメインの
配列の連続を示す。ＤＴＬＲは図１と同様に表示されている；ヒト（Ｈｕ）ＩＬ
−１ファミリーレセプターまたはマウス（Ｍｏ）ＩＬ−１ファミリーレセプター
（ＩＬ−１Ｒ１〜６）は以前に提唱されたように連続的に番号がつけられている
（Ｈａｒｄｉｍａｎら（１９９６）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １３：２４６７−２４７
５）；Ｍｙｄ８８ならびにタバコ（Ｔｏ）およびアマＬ．ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉ
ｍｕｍ（Ｌｕ）由来の配列は、それぞれより大きな、マルチドメイン分子のＣ末
端ドメインおよびＮ末端ドメインを表す。配列のギャップのないブロック（１〜
１０まで番号がつけられている）は、四角で囲まれている。三角形は、有害な変
異を示し、一方、矢印のＮ末端の短縮化は、ヒトＩＬ−１Ｒ１内の生物活性を排
除する（Ｈｅｇｕｙら（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：２６０５
−２６０９）。αヘリックス（Ｈ）、β鎖（Ｅ）、またはコイル（Ｌ）のＰＨＤ
（ＲｏｓｔおよびＳａｎｄｅｒ（１９９４）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ １９：５５−７
２）およびＤＳＣ（ＫｉｎｇおよびＳｔｅｒｎｂｅｒｇ（１９９６）Ｐｒｏｔｅ
ｉｎ Ｓｃｉ．５：２２９８−２３１０）の二次構造の予測は印が付けられてい
る。アミノ酸陰影図は、化学的に類似の残基を示す：疎水性の、酸性の、塩基性
の、Ｃｙｓの、芳香族の、構造破壊の、非常に小さなもの。ＩＬ−１Ｒ、ＤＴＬ
Ｒ、および完全な整列（ＡＬＬ）についての診断用配列パターンは、７５％のス
トリンジェンシーでＣｏｎｓｅｎｓｕｓによって誘導された。アミノ酸サブセッ
トの記号は以下のとおりである（詳細はインターネットサイトを参照のこと）：
ｏ、アルコール；ｌ、脂肪族の；・、任意のアミノ酸；ａ、芳香族の；ｃ、荷電
した（ｃｈａｒｇｅｄ）；ｈ、疎水性；−、陰性の；ｐ、極性の；＋、陽性の；
ｓ、小さい（ｓｍａｌｌ）；ｕ、非常に小さい（ｔｉｎｙ）；ｔ、ターン様の（
ｔｕｒｎｌｉｋｅ）。
【図２Ｃ】 図２Ｃは、Ｔｏｌｌ様サイトカインレセプターおよびＩＬ−１様サイトカイン
レセプターのシグナル伝達ドメインにおける保存された構造パターン、ならびに
２つの分岐したモジュラータンパク質を示す。図２Ｃは、提案されたＴＨβ／α
ドメイン折りたたみの局部図を示す。平行なβシート（β鎖Ａ〜Ｅ（黄色三角）
を有する）は、そのＣ末端に見られる；αヘリックス（１〜５と表示された円）
は、β鎖を連結する；鎖の連結は、前面（目に見える）または背面（隠れている
）に存在する。βシートのＣ末端で保存された、荷電した残基は、灰色（Ａｓｐ
）または孤立した黒丸（Ａｒｇ）残基に示されている（本文を参照のこと）。
【図３】 図３は、シグナル伝達ドメインスーパーファミリーの進化を示す。図２Ａ〜２
Ｂの複数のＴＨモジュール整列は、Ｎｅｉｇｈｂｏｒ−Ｊｏｉｎｉｎｇ法（Ｔｈ
ｏｍｐｓｏｎら（１９９４）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２２：４６
７３−４６８０）によって系統樹を誘導するために使用された。タンパク質は整
列内と同様に表示した；系統樹はＴｒｅｅＶｉｅｗを用いて提出された。
【図４】 図４Ａ〜４Ｄは、ヒトＤＴＬＲ遺伝子のＦＩＳＨ染色体マッピングを示す。ヒ
トリンパ球の同調培養物由来の変性した染色体を、位置決定のためにビオチン化
したＤＴＬＲ ｃＤＮＡプローブに対してハイブリダイズさせた。ＦＩＳＨマッ
ピングデータ（左側、図４Ａ、ＤＴＬＲ２；図４Ｂ、ＤＴＬＲ３；図４Ｃ、ＤＴ
ＬＲ４；図４Ｄ、ＤＴＬＲ５）と染色体バンドとの割当ては、ＤＡＰＩ分染染色
体とＦＩＳＨ信号を重ね合わせることによって達成された（中央のパネル）。Ｈ
ｅｎｇおよびＴｓｕｉ（１９９４）Ｍｅｔｈ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．３３：１
０９−１２２。分析は、ヒト染色体イディオグラムの形態でまとめられる（右の
パネル）。
【図５】 図５Ａ〜５Ｆは、ヒトＤＴＬＲのｍＲＮＡブロット分析を示す。１レーンあた
り約２μｇのポリ（Ａ）＋ＲＮＡを含むヒト複数組織ブロット（Ｈｅ、心臓；Ｂ
ｒ、脳；Ｐｌ、胎盤；Ｌｕ、肺；Ｌｉ、肝臓；Ｍｕ、筋肉；Ｋｉ、腎臓；Ｐｎ、
膵臓；Ｓｐ、脾臓；Ｔｈ、胸腺；Ｐｒ、前立腺；Ｔｅ、精巣；Ｏｖ、卵巣；ＳＩ
、小腸；Ｃｏ、結腸；ＰＢＬ、末梢血リンパ球）および癌細胞株（前骨髄球白血
病、ＨＬ６０；子宮頸癌、ＨＥＬＡＳ３；慢性骨髄性白血病、Ｋ５６２；リンパ
芽球性白血病、Ｍｏｌｔ４；結腸直腸腺癌、ＳＷ４８０；黒色腫、Ｇ３６１；バ
ーキットリンパ腫ラージ、Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ；結腸直腸腺癌、ＳＷ４８０；肺
癌、Ａ５４９）は、記載されるように、ＤＴＬＲ１（図５Ａ〜５Ｃ）、ＤＴＬＲ
２（図５Ｄ）、ＤＴＬＲ３（図５Ｅ）、およびＤＴＬＲ４（図５Ｆ）をコードす
る放射性標識されたｃＤＮＡを用いてプローブされた。ブロットを、−７０℃で
増感スクリーンを用いて、２日間（図５Ａ〜５Ｃ）または１週間（図５Ｄ〜５Ｆ
）Ｘ線フィルムに暴露させた。異常な０．３ｋＢ種がいくつかのレーンに現れ；
ハイブリダイゼーション実験は、ＤＴＬＲ細胞質フラグメントをコードするメッ
セージを排除する。
【配列表】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｋ 14/715 Ｃ０７Ｋ 19/00 ４Ｈ０４５ 16/28 Ｃ１２Ｎ 1/15 19/00 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 1/21 21/08 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 21/08 5/00 Ａ Ｃ１２Ｑ 1/02 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＯ，ＣＲ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＣ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ， ＧＥ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，Ｋ Ｇ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ， ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＺ ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ (72)発明者 ハーディマン， ジェラード ティー． アメリカ合衆国 カリフォルニア 92128， サン ディエゴ， ウッドラッシュ レ ーン 11276 (72)発明者 ロック， フェルナンド エル． アメリカ合衆国 カリフォルニア 94020， ラ ホンダ， キュースタ リアル 125 (72)発明者 バザン， ジェイ． フェルナンド アメリカ合衆国 カリフォルニア 94301， パロ アルト， ウェイバーリー スト リート 426， ナンバー ６ (72)発明者 カステライン， ロバート エイ． アメリカ合衆国 カリフォルニア 94062， レッドウッド シティ， サミット ド ライブ 463 (72)発明者 ホ， スティーブン ダブリュー． ケ イ． アメリカ合衆国 カリフォルニア 94087， サニーベイル， サウス ベルナルド アベニュー 745， ナンバーエイ206 (72)発明者 リウ， ヨン−ジュン アメリカ合衆国 カリフォルニア 94306， パロ アルト， ビラ ビスタ 4010 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 BA63 CA04 DA02 DA05 DA06 DA11 DA12 EA02 EA04 GA11 HA12 4B063 QA19 QA20 QQ08 QQ43 QR08 QR42 QR56 QS25 QS34 QX02 4B064 AG20 AG26 CA02 CA05 CA06 CA10 CA19 CA20 CC24 DA01 DA13 4B065 AA01X AA57X AA72X AA90X AA90Y AB01 BA02 CA24 CA25 CA44 CA46 4C084 AA02 AA07 BA01 BA02 BA08 BA22 BA23 CA18 DA01 DC50 MA52 MA56 MA59 MA60 NA14 ZB021 ZB211 ZC412 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 CA40 DA51 DA75 EA50 FA72 FA74

Claims (21)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 組成物であって、以下： ａ）配列番号４に少なくとも約１２アミノ酸長にわたって同一性を示す実質的
    に純粋なＤＴＬＲ２タンパク質またはペプチドあるいは組換えＤＴＬＲ２タンパ
    ク質またはペプチド； ｂ）配列番号４を含む天然の配列ＤＴＬＲ２； ｃ）ＤＴＬＲ２配列を含む融合タンパク質； ｄ）配列番号６に少なくとも約１２アミノ酸長にわたって同一性を示す実質的
    に純粋なＤＴＬＲ３タンパク質またはペプチドあるいは組換えＤＴＬＲ３タンパ
    ク質またはペプチド； ｅ）配列番号６を含む天然の配列ＤＴＬＲ３； ｆ）ＤＴＬＲ３配列を含む融合タンパク質； ｇ）配列番号８に少なくとも約１２アミノ酸長にわたって同一性を示す実質的
    に純粋なＤＴＬＲ４タンパク質またはペプチドあるいは組換えＤＴＬＲ４タンパ
    ク質またはペプチド； ｈ）配列番号８を含む天然の配列ＤＴＬＲ４； ｉ）ＤＴＬＲ４配列を含む融合タンパク質； ｊ）配列番号１０に少なくとも約１２アミノ酸長にわたって同一性を示す実質
    的に純粋なＤＴＬＲ５タンパク質またはペプチドあるいは組換えＤＴＬＲ５タン
    パク質またはペプチド； ｋ）配列番号１０を含む天然の配列ＤＴＬＲ５； ｌ）ＤＴＬＲ５配列を含む融合タンパク質； ｍ）配列番号１２、２８または３０に少なくとも約１２アミノ酸長にわたって
    同一性を示す実質的に純粋なＤＴＬＲ６タンパク質またはペプチドあるいは組換
    えＤＴＬＲ６タンパク質またはペプチド； ｎ）配列番号１２、２８または３０を含む天然の配列ＤＴＬＲ６； ｏ）ＤＴＬＲ６配列を含む融合タンパク質； ｐ）配列番号１６、１８または３７に少なくとも約１２アミノ酸長にわたって
    同一性を示す実質的に純粋なＤＴＬＲ７タンパク質またはペプチドあるいは組換
    えＤＴＬＲ７タンパク質またはペプチド； ｑ）配列番号１６、１８または３７を含む天然の配列ＤＴＬＲ７； ｒ）ＤＴＬＲ７配列を含む融合タンパク質； ｓ）配列番号３２または３９に少なくとも約１２アミノ酸長にわたって同一性
    を示す実質的に純粋なＤＴＬＲ８タンパク質またはペプチドあるいは組換えＤＴ
    ＬＲ８タンパク質またはペプチド； ｔ）配列番号３２または３９を含む天然の配列ＤＴＬＲ８； ｕ）ＤＴＬＲ８配列を含む融合タンパク質； ｖ）配列番号２２または４１に少なくとも約１２アミノ酸長にわたって同一性
    を示す実質的に純粋なＤＴＬＲ９タンパク質またはペプチドあるいは組換えＤＴ
    ＬＲ９タンパク質またはペプチド； ｗ）配列番号２２または４１を含む天然の配列ＤＴＬＲ９； ｘ）ＤＴＬＲ９配列を含む融合タンパク質； ｙ）配列番号３４、４３または４５に少なくとも約１２アミノ酸長にわたって
    同一性を示す実質的に純粋なＤＴＬＲ１０タンパク質またはペプチドあるいは組
    換えＤＴＬＲ１０タンパク質またはペプチド； ｚ）配列番号３４、４３または４５を含む天然の配列ＤＴＬＲ１０； ｚｚ）ＤＴＬＲ１０配列を含む融合タンパク質、 からなる群から選択される、組成物。
  2. 【請求項２】 実質的に純粋または単離されたタンパク質であって、該タン
    パク質は、以下： ａ）請求項１のＤＴＬＲ２、そして相同性は、少なくとも： ａ）約１５アミノ酸； ｂ）約１９アミノ酸；または ｃ）約２５アミノ酸、 にわたる； ｂ）請求項１のＤＴＬＲ３、そして相同性は、少なくとも： ａ）約１５アミノ酸； ｂ）約１９アミノ酸；または ｃ）約２５アミノ酸、 にわたる； ｃ）請求項１のＤＴＬＲ４、そして相同性は、少なくとも： ａ）約１５アミノ酸； ｂ）約１９アミノ酸；または ｃ）約２５アミノ酸、 にわたる； ｄ）請求項１のＤＴＬＲ５、そして相同性は、少なくとも： ａ）約１５アミノ酸； ｂ）約１９アミノ酸；または ｃ）約２５アミノ酸、 にわたる； ｅ）請求項１のＤＴＬＲ６、そして相同性は、少なくとも： ａ）約１５アミノ酸； ｂ）約１９アミノ酸；または ｃ）約２５アミノ酸、 にわたる； ｆ）請求項１のＤＴＬＲ７、そして相同性は、少なくとも： ａ）約１５アミノ酸； ｂ）約１９アミノ酸；または ｃ）約２５アミノ酸、 にわたる； ｇ）請求項１のＤＴＬＲ８、そして相同性は、少なくとも： ａ）約１５アミノ酸； ｂ）約１９アミノ酸；または ｃ）約２５アミノ酸、 にわたる； ｈ）請求項１のＤＴＬＲ９、そして相同性は、少なくとも： ａ）約１５アミノ酸； ｂ）約１９アミノ酸；または ｃ）約２５アミノ酸、 にわたる； ｉ）請求項１のＤＴＬＲ１０、そして相同性は、少なくとも： ａ）約１５アミノ酸； ｂ）約１９アミノ酸；または ｃ）約２５アミノ酸、 にわたる、 対応する部分に配列同一性を示すセグメントを含む、タンパク質。
  3. 【請求項３】 請求項１に記載の組成物であって、ここで、 ａ）前記ＤＴＬＲ２は： ｉ）表２の成熟配列を含む；または ｉｉ）翻訳後修飾を欠く； ｂ）前記ＤＴＬＲ３は： ｉ）表３の成熟配列を含む；または ｉｉ）翻訳後修飾を欠く； ｃ）前記ＤＴＬＲ４は： ｉ）表４の成熟配列を含む；または ｉｉ）翻訳後修飾を欠く； ｄ）前記ＤＴＬＲ５は： ｉ）表５の成熟配列を含む；または ｉｉ）翻訳後修飾を欠く； ｅ）前記ＤＴＬＲ６は： ｉ）表６の成熟配列を含む；または ｉｉ）翻訳後修飾を欠く； ｆ）前記ＤＴＬＲ７は： ｉ）表７の成熟配列を含む；または ｉｉ）翻訳後修飾を欠く； ｇ）前記ＤＴＬＲ８は： ｉ）表８の成熟配列を含む；または ｉｉ）翻訳後修飾を欠く； ｈ）前記ＤＴＬＲ９は： ｉ）表９の成熟配列を含む；または ｉｉ）翻訳後修飾を欠く； ｉ）前記ＤＴＬＲ１０は： ｉ）表１０の成熟配列を含む；または ｉｉ）翻訳後修飾を欠く； ｊ）前記タンパク質またはペプチドは： ｉ）ヒトのような霊長類を含む、哺乳動物から選択される温血動物由来であ
    る； ｉｉ）配列番号４、６、２６、１０、１２、２８、３０、１６、１８、３７
    、３９、３２、２２、３４、４３または４５の少なくとも１つのポリペプチドセ
    グメントを含む； ｉｉｉ）同一な複数の該セグメントを示す； ｉｖ）ＤＴＬＲ２、ＤＴＬＲ３、ＤＴＬＲ４、ＤＴＬＲ５、ＤＴＬＲ６、Ｄ
    ＴＬＲ７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ９またはＤＴＬＲ１０の天然の対立遺伝子改変
    体である； ｖ）少なくとも約３０アミノ酸長を有する； ｖｉ）霊長類ＤＴＬＲ２、ＤＴＬＲ３、ＤＴＬＲ４、ＤＴＬＲ５、ＤＴＬＲ
    ６、ＤＴＬＲ７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ９またはＤＴＬＲ１０に特異的である少
    なくとも２つの重複エピトープを示す； ｖｉｉ）霊長類ＤＴＬＲ２、ＤＴＬＲ３、ＤＴＬＲ４、ＤＴＬＲ５、ＤＴＬ
    Ｒ６、ＤＴＬＲ７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ９またはＤＴＬＲ１０に少なくとも約
    ３５アミノ酸長にわたり同一である配列を示す； ｖｉｉｉ）霊長類ＤＴＬＲ２、ＤＴＬＲ３、ＤＴＬＲ４、ＤＴＬＲ５、ＤＴ
    ＬＲ６、ＤＴＬＲ７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ９またはＤＴＬＲ１０に特異的であ
    る少なくとも２つの重複エピトープをさらに示す； ｉｘ）げっ歯類ＤＴＬＲ６に少なくとも約２０アミノ酸長にわたって同一性
    を示す； ｘ）グリコシル化される； ｘｉ）天然のグリコシル化を含んで、少なくとも１００ｋＤａの分子量を有
    する ｘｉｉ）合成ポリペプチドである； ｘｉｉｉ）固体基材に付着する； ｘｉｖ）別の化学的部分に結合する； ｘｖ）天然の配列から５倍以下の置換体である；または ｘｖｉ）天然の配列由来の欠失改変体または挿入改変体である、 組成物。
  4. 【請求項４】 以下を含む組成物： ａ）請求項１に記載の滅菌ＤＴＬＲ２タンパク質もしくはペプチド； ｂ）請求項１に記載のＤＴＬＲ２タンパク質もしくはペプチドおよびキャリア
    であって、ここで該キャリアは、 ｉ）水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む水性化合物であり；そ
    して／または ｉｉ）経口、直腸、鼻、局所、もしくは非経口投与のために処方されている
    、 キャリア； ｃ）請求項１に記載の滅菌ＤＴＬＲ３タンパク質もしくはペプチド； ｄ）請求項１に記載のＤＴＬＲ３タンパク質もしくはペプチドおよびキャリア
    であって、ここで該キャリアは、 ｉ）水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む水性化合物であり；そ
    して／または ｉｉ）経口、直腸、鼻、局所、もしくは非経口投与のために処方されている
    、キャリア； ｅ）請求項１に記載の滅菌ＤＴＬＲ４タンパク質もしくはペプチド； ｆ）請求項１に記載のＤＴＬＲ４タンパク質もしくはペプチドおよびキャリア
    であって、ここで該キャリアは、 ｉ）水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む水性化合物であり；そ
    して／または ｉｉ）経口、直腸、鼻、局所、もしくは非経口投与のために処方されている
    、キャリア； ｇ）請求項１に記載の滅菌ＤＴＬＲ５タンパク質もしくはペプチド； ｈ）請求項１に記載のＤＴＬＲ５タンパク質もしくはペプチドおよびキャリア
    であって、ここで該キャリアは、 ｉ）水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む水性化合物であり；そ
    して／または ｉｉ）経口、直腸、鼻、局所、もしくは非経口投与のために処方されている
    、キャリア； ｉ）請求項１に記載の滅菌ＤＴＬＲ６タンパク質もしくはペプチド； ｊ）請求項１に記載のＤＴＬＲ６タンパク質もしくはペプチドおよびキャリア
    であって、ここで該キャリアは、 ｉ）水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む水性化合物であり；そ
    して／または ｉｉ）経口、直腸、鼻、局所、または非経口投与のために処方されている、
    キャリア； ｋ）請求項１に記載の滅菌ＤＴＬＲ７タンパク質もしくはペプチド； ｌ）請求項１に記載のＤＴＬＲ７タンパク質もしくはペプチドおよびキャリア
    であって、ここで該キャリアは、 ｉ）水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む水性化合物であり；そ
    して／または ｉｉ）経口、直腸、鼻、局所、もしくは非経口投与のために処方されている
    、キャリア； ｍ）請求項１に記載の滅菌ＤＴＬＲ８タンパク質もしくはペプチド； ｎ）請求項１に記載のＤＴＬＲ８タンパク質もしくはペプチドおよびキャリア
    であって、ここで該キャリアは、 ｉ）水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む水性化合物であり；そ
    して／または ｉｉ）経口、直腸、鼻、局所、もしくは非経口投与のために処方されている
    、キャリア； ｏ）請求項１に記載の滅菌ＤＴＬＲ９タンパク質もしくはペプチド； ｐ）請求項１に記載のＤＴＬＲ９タンパク質もしくはペプチドおよびキャリア
    であって、ここで該キャリアは、 ｉ）水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む水性化合物であり；そ
    して／または ｉｉ）経口、直腸、鼻、局所、もしくは非経口投与のために処方されている
    、キャリア； ｑ）請求項１に記載の滅菌ＤＴＬＲ１０タンパク質もしくはペプチド； ｒ）請求項１に記載のＤＴＬＲ１０タンパク質もしくはペプチドおよびキャリ
    アであって、ここで該キャリアは、 ｉ）水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む水性化合物であり；そ
    して／または ｉｉ）経口、直腸、鼻、局所、もしくは非経口投与のために処方されている
    、キャリア。
  5. 【請求項５】 請求項１に記載の融合タンパク質であって、以下： ａ）表２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０の配列を含む成熟タンパ
    ク質； ｂ）ＦＬＡＧ、Ｈｉｓ６、もしくはＩｇ配列を含む、検出タグもしくは精製タ
    グ；または ｃ）別のレセプタータンパク質の配列、 を含む、融合タンパク質。
  6. 【請求項６】 請求項１に記載のタンパク質またはポリペプチド、ならびに
    以下を含む、キット： ａ）該タンパク質もしくはポリペプチドを含む区画；および／または ｂ）該キットにおける試薬の使用もしくは廃棄のための説明書。
  7. 【請求項７】 抗体に由来する抗原結合部位を含む結合化合物であって、該
    結合化合物は、請求項１に記載の天然のＤＴＬＲ２、ＤＴＬＲ３、ＤＴＬＲ４、
    ＤＴＬＲ５、ＤＴＬＲ６、ＤＴＬＲ７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ９もしくはＤＴＬ
    Ｒ１０タンパク質に特異的に結合し、ここで： ａ）該タンパク質が霊長類タンパク質であるか； ｂ）該結合化合物が、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、もしくはＦａ
    ｂ２フラグメントであるか； ｃ）該結合化合物が、別の化学部分に結合されているか；あるいは ｄ）該抗体が： ｉ）表２、３、４，５、６、７、８、９または１０の成熟ポリペプチドのペ
    プチド配列に対して惹起されるか； ｉｉ）成熟ＤＤＴＬＲ２、ＤＴＬＲ３、ＤＴＬＲ４、ＤＴＬＲ５、ＤＴＬＲ
    ６、ＤＴＬＲ７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ９もしくはＤＴＬＲ１０に対して惹起さ
    れるか； ｉｉｉ）精製されたヒトＤＴＬＲ２、ＤＴＬＲ３、ＤＴＬＲ４、ＤＴＬＲ５
    、ＤＴＬＲ６、ＤＴＬＲ７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ９もしくはＤＴＬＲ１０に対
    して惹起されるか； ｉｖ）免疫選択されるか； ｖ）ポリクローナル抗体であるか； ｖｉ）変性ＤＴＬＲ２、ＤＴＬＲ３、ＤＴＬＲ４、ＤＴＬＲ５、ＤＴＬＲ６
    、ＤＴＬＲ７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ９もしくはＤＴＬＲ１０に結合するか； ｖｉｉ）少なくとも３０μＭの、抗原に対するＫｄを示すか； ｖｉｉｉ）固体基材に付着されるか、ここで、該固体基材としては、ビーズ
    もしくはプラスチック膜が挙げられ； ｉｘ）滅菌組成物中にあるか；または ｘ）検出可能に標識され、これらとしては、放射性標識もしくは蛍光標識が
    挙げられる、 結合化合物。
  8. 【請求項８】 請求項７に記載の結合化合物、ならびに以下を含むキット： ａ）該結合化合物を含む区画；および／または ｂ）該キットにおける試薬の使用もしくは廃棄のための説明書。
  9. 【請求項９】 方法であって、以下： Ａ）請求項７に記載の抗体を作製する工程であって、以下： ａ）霊長類ＤＴＬＲ２； ｂ）霊長類ＤＴＬＲ３； ｃ）霊長類ＤＴＬＲ４； ｄ）霊長類ＤＴＬＲ５； ｅ）霊長類ＤＴＬＲ６； ｆ）霊長類ＤＴＬＲ７； ｇ）霊長類ＤＴＬＲ８； ｈ）霊長類ＤＴＬＲ９；または ｉ）霊長類ＤＴＬＲ１０； の免疫原性量を用いて免疫系を免疫し、それによって該抗体の産生を生じる工程
    を包含する、工程：あるいは Ｂ）抗原：抗体複合体を生成する工程であって、請求項７に記載の抗体を、以
    下： ａ）哺乳動物ＤＴＬＲ２タンパク質もしくはペプチド； ｂ）哺乳動物ＤＴＬＲ３タンパク質もしくはペプチド； ｃ）哺乳動物ＤＴＬＲ４タンパク質もしくはペプチド； ｄ）哺乳動物ＤＴＬＲ５タンパク質もしくはペプチド； ｅ）哺乳動物ＤＴＬＲ６タンパク質もしくはペプチド； ｆ）哺乳動物ＤＴＬＲ７タンパク質もしくはペプチド； ｇ）哺乳動物ＤＴＬＲ８タンパク質もしくはペプチド； ｈ）哺乳動物ＤＴＬＲ９タンパク質もしくはペプチド；または ｉ）哺乳動物ＤＴＬＲ２タンパク質もしくはペプチド； と接触させて、それによって該複合体を形成させる工程を包含する、工程、 を包含する、方法。
  10. 【請求項１０】 以下を含む、組成物： ａ）滅菌した、請求項７に記載の結合化合物、あるいは ｂ）請求項７に記載の結合化合物およびキャリアであって、ここで、該キャリ
    アが： ｉ）水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む水性化合物であり；そ
    して／または ｉｉ）経口、直腸、鼻、局所、もしくは非経口投与のために処方されている
    。
  11. 【請求項１１】 請求項１に記載のタンパク質またはペプチドまたは融合タ
    ンパク質をコードする、単離された核酸または組換え核酸であって、ここで： ａ）前記ＤＴＬＲが、哺乳動物由来であるか；あるいは ｂ）該核酸が： ｉ）表２、３、４、５、６、７、８、９または１０に記載の抗原性ペプチド
    配列をコードするか； ｉｉ）表２、３、４、５、６、７、８、９または１０に記載の抗原性ペプチ
    ド配列のうちの複数をコードするか； ｉｉｉ）前記セグメントをコードする天然のｃＤＮＡに対して少なくとも約
    ８０％の同一性を示すか； ｉｖ）発現ベクターであるか； ｖ）複製起点をさらに含むか； ｖｉ）天然の供給源由来であるか； ｖｉｉ）検出可能な標識を含むか； ｖｉｉｉ）合成ヌクレオチド配列を含むか； ｉｘ）６ｋｂ未満、好ましくは３ｋｂ未満であるか； ｘ）霊長類を含む哺乳動物由来であるか； ｘｉ）天然の全長コード配列を含むか； ｘｉｉ）該ＤＴＬＲをコードする遺伝子に対するハイブリダイゼーションプ
    ローブであるか； ｘｉｉｉ）表２、３、４、５、６、７、８、９または１０由来の、少なくと
    も１７連続ヌクレオチドを含むか； ｘｉｖ）表２、３、４、５、６、７、８、９または１０由来の、少なくとも
    １７連続ヌクレオチドの、複数の非重複セグメントを含むか；または ｘｖ）ＰＣＲプライマー、ＰＣＲ産物、もしくは変異誘発プライマーである
    、 核酸。
  12. 【請求項１２】 請求項１１に記載の組換え核酸を含む、細胞、組織または
    器官。
  13. 【請求項１３】 請求項１２に記載の細胞であって、ここで該細胞は、以下
    ： ａ）原核生物細胞； ｂ）真核生物細胞； ｃ）細菌細胞； ｄ）酵母細胞； ｅ）昆虫細胞； ｆ）哺乳動物細胞； ｇ）マウス細胞； ｈ）霊長類細胞；または ｉ）ヒト細胞、 である、細胞。
  14. 【請求項１４】 請求項１１に記載の核酸、および以下を含む、キット： ａ）該核酸を含む区画； ｂ）霊長類ＤＴＬＲ２、ＤＴＬＲ３、ＤＴＬＲ４、ＤＴＬＲ５、ＤＴＬＲ６、
    ＤＴＬＲ７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ９もしくはＤＴＬＲ１０タンパク質またはポ
    リペプチドをさらに含む区画；あるいは ｃ）該キットにおける試薬の使用もしくは廃棄のための説明書。
  15. 【請求項１５】 方法であって、以下： Ａ）ポリペプチドを作製する工程であって、請求項１１に記載の核酸を発現さ
    せ、それによって該ポリペプチドを生成する工程を包含する、工程；または Ｂ）二重鎖核酸を作製する工程であって、請求項１１に記載の核酸を相補的な
    核酸に接触させ、それによって該二重鎖を形成させる工程を包含する、工程 を包含する、方法。
  16. 【請求項１６】 核酸であって、該核酸は、以下： ａ）３０℃および２Ｍ未満の塩で３０分間の洗浄条件下で、配列番号３にハイ
    ブリダイズするか； ｂ）３０℃および２Ｍ未満の塩で３０分間の洗浄条件下で、配列番号５にハイ
    ブリダイズするか； ｃ）３０℃および２Ｍ未満の塩で３０分間の洗浄条件下で、配列番号２５にハ
    イブリダイズするか； ｄ）３０℃および２Ｍ未満の塩で３０分間の洗浄条件下で、配列番号９にハイ
    ブリダイズするか； ｅ）３０℃および２Ｍ未満の塩で３０分間の洗浄条件下で、配列番号１１、２
    ７もしくは２９にハイブリダイズするか； ｆ）３０℃および２Ｍ未満の塩で３０分間の洗浄条件下で、配列番号１５、１
    ７もしくは３６にハイブリダイズするか； ｇ）３０℃および２Ｍ未満の塩で３０分間の洗浄条件下で、配列番号３１もし
    くは３８にハイブリダイズするか； ｈ）３０℃および２Ｍ未満の塩で３０分間の洗浄条件下で、配列番号２１また
    は４０にハイブリダイズするか； ｉ）３０℃および２Ｍ未満の塩で３０分間の洗浄条件下で、配列番号３３、３
    ５、４２もしくは４４にハイブリダイズするか； ｊ）少なくとも約３０ヌクレオチドのストレッチにわたって、霊長類のＤＴＬ
    Ｒ２に対して少なくとも約８５％の同一性を示すか； ｋ）少なくとも約３０ヌクレオチドのストレッチにわたって、霊長類のＤＴＬ
    Ｒ３に対して少なくとも約８５％の同一性を示すか； ｌ）少なくとも約３０ヌクレオチドのストレッチにわたって、霊長類のＤＴＬ
    Ｒ４に対して少なくとも約８５％の同一性を示すか； ｍ）少なくとも約３０ヌクレオチドのストレッチにわたって、霊長類のＤＴＬ
    Ｒ５に対して少なくとも約８５％の同一性を示すか； ｎ）少なくとも約３０ヌクレオチドのストレッチにわたって、霊長類のＤＴＬ
    Ｒ６に対して少なくとも約８５％の同一性を示すか； ｏ）少なくとも約３０ヌクレオチドのストレッチにわたって、霊長類のＤＴＬ
    Ｒ７に対して少なくとも約８５％の同一性を示すか； ｐ）少なくとも約３０ヌクレオチドのストレッチにわたって、霊長類のＤＴＬ
    Ｒ８に対して少なくとも約８５％の同一性を示すか； ｑ）少なくとも約３０ヌクレオチドのストレッチにわたって、霊長類のＤＴＬ
    Ｒ９に対して少なくとも約８５％の同一性を示すか；または ｒ）少なくとも約３０ヌクレオチドのストレッチにわたって、霊長類のＤＴＬ
    Ｒ１０に対して少なくとも約８５％の同一性を示す、 核酸。
  17. 【請求項１７】 請求項１６に記載の核酸であって、ここで： ａ）前記洗浄条件が、４５℃および／もしくは５００ｍＭの塩であるか；また
    は ｂ）前記同一性が、少なくとも９０％であり、そして／もしくは前記ストレッ
    チが、少なくとも５５ヌクレオチドである、 核酸。
  18. 【請求項１８】 請求項１７に記載の核酸であって、ここで： ａ）前記洗浄条件が、５５℃および／もしくは１５０ｍＭの塩であるか；また
    は ｂ）前記同一性が、少なくとも９５％であり、そして／もしくは前記ストレッ
    チが、少なくとも７５ヌクレオチドである、 核酸。
  19. 【請求項１９】 リガンド：レセプター複合体を生成する方法であって、以
    下： ａ）候補Ｔｏｌｌリガンドに、組換えタンパク質または合成的に生成されたタ
    ンパク質を含む、実質的に純粋なＤＴＬＲ２を； ｂ）候補Ｔｏｌｌリガンドに、組換えタンパク質または合成的に生成されたタ
    ンパク質を含む、実質的に純粋なＤＴＬＲ３を； ｃ）候補Ｔｏｌｌリガンドに、組換えタンパク質または合成的に生成されたタ
    ンパク質を含む、実質的に純粋なＤＴＬＲ４を； ｄ）候補Ｔｏｌｌリガンドに、組換えタンパク質または合成的に生成されたタ
    ンパク質を含む、実質的に純粋なＤＴＬＲ５を； ｅ）候補Ｔｏｌｌリガンドに、組換えタンパク質または合成的に生成されたタ
    ンパク質を含む、実質的に純粋なＤＴＬＲ６を； ｆ）候補Ｔｏｌｌリガンドに、組換えタンパク質または合成的に生成されたタ
    ンパク質を含む、実質的に純粋なＤＴＬＲ７を； ｇ）候補Ｔｏｌｌリガンドに、組換えタンパク質または合成的に生成されたタ
    ンパク質を含む、実質的に純粋なＤＴＬＲ８を； ｈ）候補Ｔｏｌｌリガンドに、組換えタンパク質または合成的に生成されたタ
    ンパク質を含む、実質的に純粋なＤＴＬＲ９を； ｉ）候補Ｔｏｌｌリガンドに、組換えタンパク質または合成的に生成されたタ
    ンパク質を含む、実質的に純粋なＤＴＬＲ１０を、 接触させ、それによって該複合体を形成させる工程を包含する、方法。
  20. 【請求項２０】 細胞または組織培養細胞の生理機能または発達を調節する
    方法であって、該細胞と、哺乳動物ＤＴＬＲ２、ＤＴＬＲ３、ＤＴＬＲ４、ＤＴ
    ＬＲ５、ＤＴＬＲ６、ＤＴＬＲ７、ＤＴＬＲ８、ＤＴＬＲ９もしくはＤＴＬＲ１
    ０のアゴニストまたはアンタゴニストとを接触させる工程を包含する、方法。
  21. 【請求項２１】 前記アゴニストまたはアンタゴニストがＤＴＬＲ１０のア
    ゴニストまたはアンタゴニストであり、そして前記細胞がｐＤＣ２細胞である、
    請求項２０に記載の方法。
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