JP2003501030A - 哺乳動物レセプタータンパク質；関連する試薬および方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 哺乳動物（例えば、霊長類）のレセプター、精製されたレセプタータンパク質およびそれらのフラグメントをコードする核酸。抗体（ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の両方）がまた、提供される。診断有用性および治療有用性の両方のための組成物を用いる方法が記載される。本発明は、ＤＣＲＳ２と名付けられた、１つのサブユニットの説明を提供する。本発明は、ポリペプチド自体をコードする核酸、ならびにそれらの生成および使用の方法を含む。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の分野） 本発明は、免疫系機能を含む、哺乳動物の生理学に影響を与える組成物および
方法に関する。詳細には、発生および／または免疫系を調節する方法を提供する
。これらの物質の診断用途および治療用途もまた開示する。これらの物質の診断
および治療での使用もまた、開示される。

【０００２】 （発明の背景） 組換えＤＮＡ技術は一般に、宿主への導入などを通じた、引き続く処理のため
の、ドナー供給源からベクターへの遺伝情報の組み込みの技術をいう。これによ
り移入された遺伝情報は、新しい環境において複製（コピー）され、そして／ま
たは発現される。通常、遺伝情報は、所望のタンパク質産物をコードするメッセ
ンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）から誘導された相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）の形態で
存在する。キャリアは頻繁に、宿主での後の複製のためにｃＤＮＡを組込み、そ
していくつかの場合には実際にｃＤＮＡの発現を制御し、それにより宿主におい
てコードされる産物の合成を指向する能力を有するプラスミドである。例えば、
Ｓａｍｂｒｏｏｋら、（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版、第１〜３巻、ＣＳＨ Ｐｒｅｓ
ｓ，ＮＹを参照のこと。

【０００３】 かねてから、哺乳動物免疫応答は、一連の複雑な細胞性の相互作用（「免疫ネ
ットワーク」と呼ばれる）に基づくことが知られている。近年の研究は、このネ
ットワークの内部の仕組みについて、新たな洞察を提供した。実際に、免疫応答
の多くが、リンパ球、マクロファージ、顆粒球、および他の細胞のネットワーク
様相互作用により展開されることは、明らかであるが、免疫学者は、現在、一般
的に、リンホカイン、サイトカイン、またはモノカインとして知られる可溶性タ
ンパク質が、これらの細胞性の相互作用の制御において重要な役割を果たすとい
う見解を有している。従って、かなりの興味が、細胞調節性因子の単離、特徴づ
け、および作用機構について存在し、この理解は、多くの医学的な異常（例えば
、免疫系障害）の診断および治療において、顕著な利点をもたらす。

【０００４】 リンホカインは、明らかに種々の方法で、細胞の活性を媒介する。例えば、Ｐ
ａｕｌ（１９９６編）Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第３版
）Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；およびＴｈｏｍｓｏｎ（１９９
４編）Ｔｈｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ（第２版）、Ａｃａｄｅｍ
ｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ ＤＩｅｇｏを参照のこと。かれらは、多能性の造血
幹細胞が、非常に多くの前駆体（複雑な免疫系を構成する多様な細胞系統を含む
）への増殖、発達、および／または分化を補助することを示している。細胞構成
成分間の、適切で、そしてバランスのとれた相互作用は、健常免疫応答のために
必要である。異なる細胞系統は、リンホカインが他の薬剤とともに投与される場
合、しばしば異なる様式で応答する。

【０００５】 細胞系統は、２つのクラスのリンパ球を含む免疫応答にとって特に重要である
：免疫グロブリン（外来物質を認識し、そして結合する能力を有し、外来物質の
除去を行うタンパク質）を産生および分泌し得るＢ細胞、ならびにリンホカイン
を分泌し、そしてＢ細胞および種々の他の細胞（他のＴ細胞を含む）を、誘導ま
たは抑制し、免疫ネットワークを構成する、種々のサブセットのＴ細胞。これら
のリンパ球は、多くの他の細胞型と相互作用する。

【０００６】 一般にインビトロで免疫系の細胞を維持することはできないので、種々の免疫
障害の良好な理解および処置のための探究は、妨げられてきた。免疫学者は、こ
れらの細胞の多くを培養することがＴ細胞および他の種々の増殖因子（多くのリ
ンホカインを含む）を含む細胞上清の使用を通じて達成され得ることを発見した
。

【０００７】 形態形成発生を調節する、種々の増殖因子および調節因子が存在する。これは
、例えば、ＩＬ−１レセプターに特徴的な構造的、機構的特色を共有するレセプ
ターへの結合を通じて信号を伝達するＴｏｌｌリガンドを含む。例えば、Ｌｅｍ
ａｉｔｒｅら、（１９９６） Ｃｅｌｌ ８６：９７３−９８３；ならびにＢｅ
ｌｖｉｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ（１９９６）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ ＆
Ｄｅｖｅｌ．Ｂｉｏｌ．１２：３９３−４１６を参照のこと。

【０００８】 サイトカインの他のレセプターもまた公知である。機能的なレセプターには、
しばしば、少なくとも２つの重要なサブユニットが存在する。例えば、Ｇｏｎｄ
ａおよびＤ’Ａｎｄｒｅａ（１９９７）Ｂｌｏｏｄ ８９：３５５〜３６９；Ｐ
ｒｅｓｋｙら（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ
９３：１４００２〜１４００７；ＤｒａｃｈｍａｎおよびＫａｕｓｈａｎｓｋｙ
（１９９５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２：２２〜２８；Ｔｈｅｚ
ｅ（１９９４）Ｅｕｒ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｎｅｔｗ．５：３５３〜３６８；な
らびに、ＬｅｍｍｏｎおよびＳｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ（１９９４）Ｔｒｅｎｄ
ｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１９：４５９〜４６３を参照のこと。

【０００９】 前述より、新規の可溶性タンパク質およびそのレセプター（リンホカインに類
似のものを含む）の発見および開発が、例えば、免疫系および／または造血細胞
の発生、分化または機能に直接的または間接的に関与する広範囲の変性状態また
は異常状態のための新規治療法に寄与するはずであることは、明らかである。詳
細には、他のリンホカインの有益な活性を亢進または増強するリンホカイン様分
子についての新規レセプターの発見および理解が、非常にに有利である。本発明
は、サイトカイン様組成物と類似性を示すリガンドについての新規レセプターお
よび関連する化合物、ならびにこれらの使用のための方法を提供する。

【００１０】 （発明の要旨） 本発明は、サイトカインレセプターに関連する新規なレセプター、例えば、Ｄ
ＮＡＸサイトカインレセプターサブユニット（ＤＮＡＸ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒ
ｅｃｅｐｔｏｒ Ｓｕｂｕｎｉｔ）（ＤＣＲＳ）と名付けられた、霊長類のサイ
トカインレセプター様分子構造、およびその生物学的に関する。詳細には、本発
明は、ＤＣＲＳ２と名付けられた、１つのサブユニットの説明を提供する。本発
明は、ポリペプチド自体をコードする核酸、ならびにそれらの生成および使用の
方法を含む。本発明の核酸は、部分的に、本明細書に包含されるクローニングさ
れた相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）に対するその相同性によって特徴付けられる。

【００１１】 本発明は、下記の群より選択される物質の組成物を提供する：配列番号２のセ
グメントと同一である少なくとも４アミノ酸の、少なくとも３つの異なる非重複
セグメントを含む、実質的に純粋なＤＣＲＳ２または組換えＤＣＲＳ２ポリペプ
チド；配列番号２のセグメントと同一である少なくとも５アミノ酸の、少なくと
も２つの異なる非重複セグメントを含む、実質的に純粋なＤＣＲＳ２または組換
えＤＣＲＳ２ポリペプチド；配列番号２の成熟配列（ｍａｔｕｒｅ ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：２）を含む天然配列のＤＣＲＳ２；あるいはＤＣＲＳ２配列を含む融
合ポリペプチド。特定の実施形態において、本発明は、このような実質的に純粋
なまたは単離された抗原性ＤＣＲＳ２ポリペプチドを包含する。ここで異なる非
重複セグメントの同一性は：少なくとも８アミノ酸である１つのセグメントを含
むか；少なくとも４アミノ酸である１つのセグメント、および少なくとも５アミ
ノ酸である第２のセグメントを含むか；少なくとも４アミノ酸、５アミノ酸、お
よび６アミノ酸である、少なくとも３つのセグメントを含むか、または少なくと
も１２のアミノ酸である１つのセグメントを含む。他の実施形態は、ＤＣＲＳ２
ポリペプチドを含む：ここで、ＤＣＲＳ２ポリペプチドは、表１の成熟配列を含
むか；ＤＣＲＳ２の非グリコシル化形態であるか；ヒトのような、霊長類由来で
あるか；配列番号２の少なくとも１７アミノ酸を含むか；配列番号２の少なくと
も７つのアミノ酸の、少なくとも４つの非重複セグメントを示すか；ＤＣＲＳ２
の天然の対立遺伝子改変体であるか；少なくとも約３０アミノ酸長を有するか；
霊長類ＤＣＲＳ２に特異的な少なくとも２つの非重複エピトープを示すか、グリ
コシル化されているか；天然のグリコシル化による少なくとも３０ｋＤの分子量
を有するか；合成ポリペプチドであるか；固体基材に付着されているか；別の化
学的部分と結合しているか；天然の配列より５以下の置換（５−ｆｏｌｄ ｏｒ
ｌｅｓｓ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）であるか；または、天然配列由来の欠
失改変体もしくは挿入改変体である。なお他の実施形態は、以下を含む組成物を
含む：実質的に純粋なＤＣＲＳ２および別のインターフェロンレセプターファミ
リーメンバー；滅菌ＤＣＲＳ２ポリペプチド；ＤＣＲＳ２ポリペプチドおよびキ
ャリア、ここでキャリアは：水、生理食塩水、および／または緩衝液を含む水性
化合物であるか；および／または経口投与、直腸投与、経鼻投与、局所的投与、
または非経口投与のために処方される。融合ポリペプチドの実施形態は、以下を
含む融合タンパク質を包含する：表１の成熟タンパク質配列；ＦＬＡＧ配列、Ｈ
ｉｓ６配列、またはＩｇ配列を含む検出タグもしくは精製タグ；あるいは、別の
インターフェロンレセプタータンパク質の配列。キットの実施形態は、以下を含
むキットを包含する：このようなポリペプチド、および；このタンパク質または
ポリペプチドを含む区画；または、キット中の試薬の使用または廃棄のための取
扱説明書。

【００１２】 結合化合物の実施形態は、以下を含む：例えば、天然のＤＣＲＳ２ポリペプチ
ドに特異的に結合する、抗体由来の抗原結合部位を含む結合化合物：ここで、こ
の結合化合物は容器中にあるか；ＤＣＲＳ２ポリペプチドは、ヒト由来であるか
；結合化合物は、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、またはＦａｂ２フラ
グメントであるか；結合化合物は、別の化学的部分と結合するか；または、抗体
は：表１の成熟ポリペプチドのペプチド配列に対して惹起されるか；成熟ＤＣＲ
Ｓ２に対して惹起されるか；精製ヒトＤＣＲＳ２に対して惹起されるか；免疫選
択されるか；ポリクローナル抗体であるか；変性ＤＣＲＳ２に結合するか；少な
くとも３０μＭの、抗原に対するＫｄを示すか；ビーズもしくはプラスチック膜
を含む固体基材に付着されるか；滅菌組成物中に存在するか；または、検出可能
に標識される（放射能標識または蛍光標識を含む）。キットは、結合化合物、お
よび：この結合化合物を含む区画；または、キット中の試薬の使用または廃棄の
ための取扱説明書を含むキットを包含する。

【００１３】 例えば、抗原：抗体複合体を産生するための方法が提供される。この方法は、
記載された抗体と霊長類ＤＣＲＳ２ポリペプチドを適切な条件下で接触させて、
これにより複合体の形成を可能にする工程を包含する。これは、以下を包含する
：ここで、この複合体は他のインターフェロンレセプターから精製されるか；こ
の複合体は他の抗体から精製されるか；この接触は、インターフェロンを含むサ
ンプルとであるか；この接触は抗原の定量的検出を可能にするか；この接触は抗
体を含むサンプルとであるか；またはこの接触は抗体の定量的検出を可能にする
。

【００１４】 種々の関連組成物が提供される。例えば組成物は以下を含む：記載されたよう
な滅菌結合化合物、または記載された結合化合物およびキャリア、ここでこのキ
ャリアは、水、生理食塩水、および／または緩衝液を含む水性化合物であるか；
および／または経口投与、直腸投与、経鼻投与、局所的投与、または非経口投与
のために処方される。

【００１５】 核酸の実施形態は、以下を含む：例えば、ＤＣＲＳ２ポリペプチドをコードす
る単離された核酸または組換え核酸、ここでＤＣＲＳ２は、ヒト由来であるか；
またはこの核酸は、表１の抗原性ペプチド配列をコードするか；表１の複数の抗
原性ペプチド配列をコードするか；少なくとも１３ヌクレオチドにわたって、こ
のセグメントをコードする天然のｃＤＮＡ対して同一性を示すか；発現ベクター
であるか；さらに、複製起点を含むか；天然供給源由来であるか；検出可能な標
識を含むか；合成ヌクレオチド配列を含むか；６ｋｂ未満であるか、好ましくは
３ｋｂ未満であるか；霊長類由来であるか；天然の全長コード配列を含むか；Ｄ
ＣＲＳ２をコードする遺伝子のハイブリダイゼーションプローブであるか；ある
いは、ＰＣＲプライマー、ＰＣＲ産物、または変異誘発プライマーである。本発
明の他の実施形態は、記載された組換え核酸を含む細胞または組織を包含する。
好ましくは、この細胞は：原核生物細胞；真核生物細胞；細菌細胞；酵母細胞；
昆虫細胞；哺乳動物細胞；マウス細胞；霊長類細胞；またはヒト細胞である。

【００１６】 キットの実施形態としては、記載された核酸、および：この核酸を含む区画；
霊長類ＤＣＲＳ２ポリペプチドをさらに含む区画；またはキット中の試薬の使用
または廃棄のための取扱説明書を含むキットが挙げられる。

【００１７】 別の核酸の実施形態は、核酸を含み、この核酸は：配列番号１のコード部分に
対し、３０℃かつ２Ｍ未満の塩、３０分間の洗浄条件下でハイブリダイズするか
；または霊長類ＤＣＲＳ２に対し、少なくとも約３０ヌクレオチドのストレッチ
にわたり、同一性を示す。好ましい実施形態は、以下を包含する：ここで、洗浄
条件は、４５℃および／または５００ｍＭ塩であるか；洗浄条件は、５５℃およ
び／または１５０ｍＭ塩であるか；ストレッチは、少なくとも５５ヌクレオチド
であるか；またはストレッチは少なくとも７５ヌクレオチドである。

【００１８】 他の方法は、細胞または組織培養細胞の生理学または発達を調節する方法を包
含する。この方法は、この細胞を、哺乳動物ＤＣＲＳ２のアゴニストまたはアン
タゴニストと接触させる工程を包含する。好ましくは、この細胞は、ＤＣＲＳ２
および別のサイトカインレセプターサブユニットをコードする核酸を用いて形質
転換される。

【００１９】 （好ましい実施形態の詳細な説明） （概要） Ｉ．一般 ＩＩ．活性 ＩＩＩ．核酸 Ａ．コードしているフラグメント、配列、プローブ Ｂ．変異、キメラ、融合 Ｃ．核酸の作製 Ｄ．細胞が含有するベクター ＩＶ．タンパク質、ペプチド Ａ．フラグメント、配列、免疫原、抗原 Ｂ．ムテイン Ｃ．アゴニスト／アンタゴニスト、機能的等価物 Ｄ．タンパク質の作製 Ｖ．核酸、タンパク質の作製 Ａ．合成 Ｂ．組換え Ｃ．天然供給源 ＶＩ．抗体 Ａ．ポリクローナル Ｂ．モノクローナル Ｃ．フラグメント；Ｋｄ Ｄ．抗イディオタイプ抗体 Ｅ．ハイブリドーマ細胞株 ＶＩＩ．ＤＣＲＳ２を定量するためのキットおよび方法 Ａ．ＥＬＩＳＡ Ｂ．コードしているｍＲＮＡのアッセイ Ｃ．定性的／定量的 Ｄ．キット ＶＩＩＩ．治療的組成物および方法 Ａ．組み合わせ組成物 Ｂ．単位用量 Ｃ．投与 ＩＸ．スクリーニング Ｘ．リガンド。

【００２０】 （Ｉ．一般） 本発明は、アミノ酸配列および哺乳動物（本明細書中では霊長類）のＤＮＡ配
列、サイトカインレセプター様サブユニット分子（これは、特定の規定された特
性（構造的および生物学的の両方）を有するＤＮＡＸサイトカインレセプターサ
ブユニット２（ＤＣＲＳ２）と命名された）を提供する。これらの分子をコード
する種々のｃＤＮＡは、霊長類（例えば、ヒト）のｃＤＮＡ配列ライブラリーか
ら得られた。他の霊長類または他の哺乳動物相当物もまた所望される。

【００２１】 いくつかの標準的な方法は、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら（１９８２）Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃ
ｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐ
ｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（
第二版），１−３巻、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌら，Ｂｉｏｌ
ｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｂｒｏ
ｏｋｌｙｎ，ＮＹ；またはＡｕｓｕｂｅｌら（１９８７および定期的な補遺）Ｃ
ｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ，Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（これらの各々は、本明細書
中で参考として援用される）に記載されるかまたはこれらにおいて引用される。

【００２２】 ヒトＤＣＲＳ２をコードするセグメントのヌクレオチド（配列番号１）および
対応するアミノ酸配列（配列番号２）が表１に示される。より長い細胞内ドメイ
ンを有する少なくとも１つのスプライス改変体が存在するようであり、これは、
恐らく特徴的なシグナル伝達モチーフを示す。推定シグナル配列が示されるが、
これは、細胞型に依存するかもしれないし、またはいずれかの方向の数個の残基
であるかもしれない。潜在的なＮグリコシル化部位は、アスパラギン残基６、２
４、５８、１１８、１５７、２０９および２５０に存在する。ジスルフィド結合
は、２９位におけるシステイン残基と７８位におけるシステイン残基との間で見
出されるようであり；そして保存されたＣ＿＿ＣＸＷモチーフは、１００／１２
１／１２３位において見出される。２１９におけるトリプトファンおよび２８１
〜２８５のＷｘｘＷＳモチーフは、注目に値する。およそ１〜１０１のセグメン
トは、Ｉｇドメインであり；およそ１０２〜１９５は、サイトカイン結合ドメイ
ン１であり；およそ１９６〜２９７は、サイトカイン結合ドメイン２であり；お
よそ２９８〜３３０は、リンカーであり；およそ３３１〜３５３は、膜貫通セグ
メントであり；そしておよそ３５４から３６１は、細胞内ドメインである。これ
らの部位および結合は、注目に値する。

【００２３】 逆翻訳核酸配列は、表２に提供される。

【００２４】 表１：ＤＮＡＸサイトカインレセプターサブユニット様の実施形態（ＤＣＲＳ
２）のヌクレオチド配列およびポリペプチド配列。霊長類（例えば、ヒトの実施
形態（配列番号１および２を参照のこと））。推定シグナル配列が示されるが、
数箇所の位置で変化し得、そして細胞型に依存するかもしれない。

【００２５】

【表１】 表２：霊長類（例えば、ヒト）のＤＣＲＳ２の逆翻訳物（配列番号３）：

【００２６】

【表２】 表３：種々のサイトカインレセプターサブユニットの整列。ヒトＮＲ６配列（
ｈＮＲ６）は、配列番号４であり（Ｅｌｓｏｎら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．１６１：１３７１−１３７９を参照のこと；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦ０
５２９３；Ｄｏｕｇｌａｓ Ｊ．Ｈｉｌｔｏｎ（オーストラリア）によってもま
た記載される）；マウスＮＲ６配列（ｍＮＲ６）は、配列番号５である。ヒトｐ
４０（ｈｐ４０）は、配列番号６であり（ＧｅｎＢａｎｋ Ｍ６５２７２を参照
のこと）；マウスｐ４０は、配列番号７（ＧｅｎＢａｎｋ Ｓ８２４２１を参照
のこと）である。マウス Ｅｂｉ３（ｍＥｂｉ３）は、配列番号８（ＧｅｎＢａ
ｎｋ ＡＦ０１３１１４を参照のこと）であり；ヒトＥｂｉ３（ｈＥｂｉ３）は
、配列番号９（ＧｅｎＢａｎｋ Ｌ０８１８７を参照のこと）である。マウスＩ
Ｌ−１１レセプターサブユニットα（ｍＩＬ−１１Ｒａ）は、配列番号１０（Ｇ
ｅｎＢａｎｋ Ｕ１４４１２を参照のこと）であり；ヒトＩＬ−１１レセプター
サブユニットα（ｈＩＬ−１１Ｒａ）は、配列番号１１（ＧｅｎＢａｎｋ Ｕ３
２３２４を参照のこと）である。ヒトＩＬ−６レセプターサブユニットα（ｈＩ
Ｌ−６Ｒａ）は、配列番号１２（ＧｅｎＢａｎｋ Ｘ５８２９８を参照のこと）
であり、マウスＩＬ−６レセプターサブユニットα（ｍＩＬ−６Ｒａ）は、配列
番号１３（ＧｅｎＢａｎｋ Ｘ５１９７５を参照のこと）である。

【００２７】

【表３】 表３は、霊長類（例えば、ヒト）のＤＣＲＳ２（ＡＳ１１）を有する霊長類お
よびげっ歯類レセプターの利用可能な配列の比較を示す。ＤＣＲＳ２は、ｐ４０
およびＩＬ−６レセプターαサブユニットと整列され得るが、ＤＣＲＳ２は、Ｉ
Ｌ−１１レセプターサブユニットαに対する特定の類似性を示す。ＤＣＲＳ２は
、αサブユニットであるようであり、従ってこれは、βサブユニットを必要とせ
ずにリガンドと結合するはずである。この生物学は、ＩＬ−６レセプターサブユ
ニットと類似するようである。

【００２８】 本明細書中で使用される場合、用語ＤＣＲＳ２は、表１に示されるアミノ酸配
列を含むタンパク質を示すために使用される（ｓｈａｌｌ）。多くの場合、それ
らの実質的なフラグメントは、機能的または構造的に等価であり、これらとして
は、例えば、細胞外ドメインおよび細胞内ドメインが挙げられる。本発明はまた
、個々のＤＣＲＳ２対立遺伝子のタンパク質のバリエーションを含み、これらの
配列が、提供される（例えば、ムテインまたは可溶性細胞外構築物）。典型的に
は、このようなアゴニストまたはアンタゴニストは、約１０％未満の配列の相違
を示し、従ってしばしば１と１１との間（例えば、２、３、５、７など）の置換
（ｆｏｌｄ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）を有する。このようなアゴニストまた
はアンタゴニストはまた、記載されるタンパク質の対立遺伝子および他の改変体
（例えば、天然多型）を含む。典型的には、このようなアゴニストまたはアンタ
ゴニストは、恐らくαレセプターサブユニットとの二量体化状態で、高親和性で
（例えば、少なくとも１００ｎＭ、通常約３０ｎＭより良好に、好ましくは、約
１０ｎＭより良好に、そしてより好ましくは、約３ｎＭより良好で）その対応す
る生物学的リガンドと結合する。用語（ｓｈａｌｌ）はまた、本明細書中で使用
される場合、関連する天然に存在する形態（例えば、対立遺伝子、多型改変体、
および哺乳動物タンパク質の代謝改変体）をいう。レセプター複合体の好ましい
形態は、リガンド−レセプター相互作用について適切な親和性および選択性で適
切なリガンドと結合する。

【００２９】 本発明はまた、表１中のアミノ酸配列と実質的なアミノ酸配列同一性を有する
タンパク質またはペプチドの組み合わせを含む。この組み合わせには、比較的わ
ずかな置換（例えば、好ましくは約３〜５未満）しか有さない配列改変体が挙げ
られる。

【００３０】 実質的なポリペプチド「フラグメント」または「セグメント」は、少なくとも
約８アミノ酸、アミノ酸（しばしば少なくとも１４アミノ酸、より大抵少なくと
も１６アミノ酸、典型的には少なくとも１８アミノ酸、より典型的には少なくと
も２０アミノ酸、通常少なくとも２２アミノ酸、より通常少なくとも２４アミノ
酸、好ましくは少なくとも２６アミノ酸、より好ましくは少なくとも２８アミノ
酸、および特に好ましい実施形態においては、少なくとも約３０以上のアミノ酸
）のアミノ酸残基のストレッチである。異なるタンパク質のセグメントの配列は
、適切な長さのストレッチにわたり互いに比較され得る。多くの場合、フラグメ
ントは、インタクトなサブユニットの機能特性を示し得る。例えば、膜貫通レセ
プターの細胞外ドメインは、リガンド結合特色を保持し得、そして可溶性レセプ
ター様複合体を調製するために使用され得る。

【００３１】 アミノ酸配列相同性または配列同一性は、残基の一致を至適化することにより
決定される。いくつかの比較において、必要に応じて、ギャップが導入され得る
。例えば、Ｎｅｅｄｌｅｈａｍら（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４
４３−４５３；Ｓａｎｋｏｆｆら（１９８３）第１節、Ｔｉｍｅ Ｗａｒｐｓ，
Ｓｔｒｉｎｇ編、およびＭａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：Ｔｈｅ Ｔｈｅｏｒｙ
ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ
，Ａｄｄｉｓｏｎ−Ｗｅｓｌｅｙ，Ｒｅａｄｉｎｇ，ＭＡ；ならびにＩｎｔｅｌ
ｌｉＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡおよびＵｎｉｖｅｒ
ｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ
Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ），Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ製のソフトウェアパッケージ（こ
れらの各々は、本明細書中で参考として援用される）を参照のこと。保存的置換
が一致として考慮する場合に、これは変化する。保存的置換は、代表的には、以
下の群内の置換を含む：グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン
；アスパラギン酸、グルタミン酸；アスパラギン、グルタミン；セリン、スレオ
ニン；リジン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チロシン。相同性アミノ
酸配列は、サイトカン配列における天然対立遺伝子および種間のバリエーション
を含むことを意図される。代表的な相同性タンパク質またはペプチドは、表１の
アミノ酸配列セグメントと、５０〜１００％相同性（ギャップが導入され得る場
合）から６０〜１００％相同性（保存的置換が導入される場合）までを有する。
相同性の評価は、少なくとも約７０％、一般的には少なくとも７６％、より一般
的には少なくとも８１％、しばしば少なくとも８５％、よりしばしば少なくとも
８８％、典型的には少なくとも９０％、より典型的には少なくとも９２％、通常
少なくとも９４％、より通常には少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９６
％、そしてより好ましくは少なくとも９７％、そして特に好ましい実施形態では
、少なくとも９８％以上である。相同性の程度は、比較されるセグメントの長さ
と共に変化する。相同タンパク質またはペプチド（例えば、対立遺伝子改変体）
は、表１に記載される実施形態と、ほとんどの生物学的活性を共有する。

【００３２】 本明細書中で使用される場合、用語「生物学的活性」は、限定を伴わずに、サ
イトカイン様リガンドによる、炎症応答、生得免疫、および／または形態形成発
達に対する効果を記載するために使用される。例えば、これらのレセプターは、
ホスファターゼまたはホスホリラーゼ活性を媒介し、この活性は、標準的な手順
により容易に測定される。例えば、Ｈａｒｄｉｅら（１９９５編）Ｔｈｅ Ｐｒ
ｏｔｅｉｎ Ｋｉｎａｓｅ ＦａｃｔＢｏｏｋ 第Ｉ巻および第ＩＩ巻、Ａｃａ
ｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；Ｈａｎｋｓら（１９９１
）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２００：３８−６２；Ｈｕｎｔｅｒら（１９９２
）Ｃｅｌｌ ７０：３７５−３８８；Ｌｅｗｉｎ（１９９０）Ｃｅｌｌ ６１：
７４３−７５２；Ｐｉｎｅｓら（１９９１）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ
ｏｒ Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５６：４４９−４６３；およびＰａｒ
ｋｅｒら（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ ３６３：７３６−７３８を参照のこと。レ
セプターまたはその一部は、一般または特異的な基質を標識するためにホスフェ
ート標識酵素として有用であり得る。サブユニットはまた機能的免疫原であり得
、認識抗体を誘起するかまたは抗体に結合し得る抗原であり得る。

【００３３】 用語リガンド、アゴニスト、アンタゴニストおよびアナログ（例えば、ＤＣＲ
Ｓ２の）は、サイトカインリガンドタンパク質に対する特徴的な細胞応答を調節
する分子、ならびにリガンド−レセプター相互作用（例えば、レセプターが天然
のレセプターまたは抗体である場合）のより標準的な構造的結合競合特色を所有
する分子を含む。細胞応答は、典型的には、レセプターチロシンキナーゼ経路を
介して媒介されるようである。

【００３４】 また、リガンドは、上記レセプターまたはそのアナログが結合する天然のリガ
ンドか、または天然のリガンドの機能的アナログである分子のいずれかとして機
能する分子である。機能的アナログは、構造的改変を有するリガンドであり得る
か、または適切なリガンド結合決定因子と相互作用する分子形状を有する全体的
に無関係な分子であり得る。このリガンドは、アゴニストまたはアンタゴニスト
として機能し得る（例えば、Ｇｏｏｄｍａｎら（１９９０編）Ｇｏｏｄｍａｎ＆
Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏ
ｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋを参照のこと）。

【００３５】 合理的な薬物設計はまた、レセプターまたは抗体および他のエフェクターまた
はリガンドの分子形状の構造的研究に基づく。例えば、Ｈｅｒｚら（１９９７）
Ｊ．Ｒｅｃｅｐｔ．Ｓｉｇｎａｌ Ｔｒａｎｓｄｕｃｔ．Ｒｅｓ．１７：６７１
−７７６；およびＣｈａｉｋｅｎら（１９９６）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ
ｎｏｌ．１４．３６９−３７５を参照のこと。エフェクターは、リガンドの結合
に応答して他の機能を媒介する他のタンパク質であるかもしれないし、またレセ
プターと正常に相互作用する他のタンパク質であるかもしれない。特定の他のタ
ンパク質と相互作用する部位を決定するための手段の１つは、物理的構造決定法
（例えば、ｘ線結晶学または２次元ＮＭＲ技術）である。これらは、アミノ酸が
分子の接触領域を形成することに関するガイダンスを提供する。タンパク質構造
決定法の詳細な説明については、例えば、ＢｌｕｎｄｅｌｌおよびＪｏｈｎｓｏ
ｎ（１９７６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ，Ａｃａｄｅ
ｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（これは、本明細書中で、参考として本
明細書により援用される）を参照のこと。

【００３６】 （ＩＩ．活性） サイトカインレセプター様タンパク質は、例えば、細胞増殖の調節またはホス
フェート代謝において多くの異なる生物学的活性を有し、特定の基質（代表的に
はタンパク質）に添加されるかまたはそこから除去される。このようなものは、
一般に、炎症性の機能の調節、他の先天的免疫応答、または形態学的効果を生じ
る。このサブユニットは、おそらくこのリガンドへの特異的な低い親和性の結合
を有する。

【００３７】 ＤＣＲＳ２は、ＪＡＫ経路を介するレセプターシグナル伝達の特徴的なモチー
フを有する。例えば、Ｉｈｌｅら（１９９７）Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ １５（補
遺１）：１０５−１１１；Ｓｉｌｖｅｎｎｏｉｎｅｎら（１９９７）ＡＰＭＩＳ
１０５：４９７−５０９；Ｌｅｖｙ（１９９７）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗ
ｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖｉｅｗ ８：８１−９０；ＷｉｎｓｔｏｎおよびＨ
ｕｎｔｅｒ（１９９６）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌ．６：６６８−６７１；Ｂａ
ｒｒｅｔｔ（１９９６）Ｂａｉｌｌｉｅｒｅｓ Ｃｌｉｎ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔ
ｅｒｏｌ．１０：１−１５；ならびにＢｒｉｓｃｏｅら（１９９６）Ｐｈｉｌｏ
ｓ．Ｔｒａｎｓ．Ｒ．Ｓｏｃ．Ｌｏｎｄ．Ｂ．Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．３５１：１６
７−１７１を参照のこと。

【００３８】 サイトカインレセプターサブユニットの生物学的活性は、代表的には特異的な
様式で、しかし時折非特異的な様式で、基質に対するホスフェート部分の付加ま
たは除去に関連する。基質は、同定され得るか、または酵素活性についての条件
が標準的な方法によって（例えば、Ｈａｒｄｉｅら（編、１９９５）Ｔｈｅ Ｐ
ｒｏｔｅｉｎ Ｋｉｎａｓｅ ＦａｃｔＢｏｏｋ ＩおよびＩＩ巻、Ａｃａｄｅ
ｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；Ｈａｎｋｓら（１９９１）Ｍ
ｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２００：３８−６２；Ｈｕｎｔｅｒら（１９９２）Ｃ
ｅｌｌ ７０：３７２−３８８；Ｌｅｗｉｎ（１９９０）Ｃｅｌｌ ６１：７４
３−７５２；Ｐｉｎｅｓら（１９９１）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ
Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５６：４４９−４６３；ならびにＰａｒｋ
ｅｒら（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ ３６３：７３６−７３８に記載されるのよう
な）アッセイされ得る。

【００３９】 レセプターサブユニットは、組合わせられて機能的複合体（例えばこれは、リ
ガンドを結合するためまたは抗体を調製するために有用であり得る）を形成し得
る。これらは、検出または定量を含む実質的な診断用途を有する。

【００４０】 （ＩＩＩ．核酸） 本発明は、例えば、これらのタンパク質もしくはそのフラグメントまたは密接
に関連するタンパク質またはそのフラグメントをコードする、単離された核酸ま
たはフラグメントの、例えば、対応するポリぺプチド（好ましくは生物学的に活
性であるポリぺプチド）をコードするための使用を意図する。さらに、本発明は
、例えば、ＤＣＲＳ２の特徴的配列を有するこのようなタンパク質またはポリぺ
プチドの組合せをコードする、単離されたまたは組換えのＤＮＡを包含する。代
表的には、核酸は、適切な条件下で、表１に示される核酸配列セグメントとハイ
ブリダイズし得るが、好ましくは表３に記載される他のレセプターの対応するセ
グメントとはハイブリダイズし得ない。上記の生物学的に活性なタンパク質また
はポリぺプチドは、全長タンパク質またはフラグメントであり得、そして代表的
には、表１に示されるアミノ酸配列に高度に相同なアミノ酸配列のセグメント（
例えば、有意な同一性のストレッチを示す）を有する。さらに、本発明は、ＤＣ
ＲＳ２タンパク質に等価なフラグメントを有するタンパク質をコードする単離さ
れたまたは組換えの、核酸またはそのフラグメントの使用を包含する。単離され
た核酸は、５’側および３’側においてそれぞれの調節配列（例えば、天然の遺
伝子由来のプロモーター、エンハンサー、ポリＡ付加シグナル）を有し得る。記
載されるような組合せがまた、提供される。

【００４１】 「単離された」核酸は、例えば、元々の種からのリボソーム、ポリメラーゼ、
および隣接ゲノム配列のような天然の配列にもともと付随する他の成分から分離
された、実質的に純粋な核酸（例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡ、または混合ポリマー）
である。この用語は、その天然に存在する環境から除去されている核酸配列を包
含し、そして組換えまたはクローン化のＤＮＡ単離体を包含し、これらはこれに
関して、天然に存在する組成物、および化学的に合成されたアナログまたは異種
系によって生物学的に合成されたアナログから区別され得る。実質的に純粋な分
子には、完全に純粋または実質的に純粋のいずれかの分子の単離された形態が含
まれる。

【００４２】 単離された核酸は、一般に、分子の均一な組成物であるが、いくつかの実施態
様においては、不均一性（好ましくは少量）を含む。この不均一性は、代表的に
は、所望の生物学的な機能または活性に対して重要でないポリマー末端または部
分で見出される。

【００４３】 「組換え」核酸は、代表的には、その産生方法またはその構造のいずれかによ
って規定されている。その産生（例えば、プロセスによって生成される産物）の
方法に関して、プロセスは、組換え核酸技術（例えば、ヌクレオチド配列におけ
る人為的介入を含む）の使用である。代表的には、この介入には、インビトロ操
作を含むが、特定の状況下では、それはより古典的な動物繁殖技術を含み得る。
あるいは、組換え核酸は、天然には互いに連続しない２つのフラグメントの融合
を含む配列を生成することによって作製される核酸であり得るが、天然の産物（
例えば、その天然の状態に見出されるような天然に存在する変異体）は除外する
ことを意味する。従って、例えば、天然に存在しないベクターで細胞を形質転換
することによって作製される産物が、任意の合成的オリゴヌクレオチドプロセス
を使用して誘導される配列を含む核酸と同様に含まれる。このようなプロセスは
、しばしば、代表的には制限酵素配列認識部位を導入または除去しながら、同一
または保存されたアミノ酸をコードする縮重コドンでコドンを置換するためにな
される。あるいは、このプロセスは、所望の機能の核酸セグメントを一緒に結合
して、一般に入手できる天然の形態において見出されない所望の機能の組み合わ
せを含む単一の遺伝子実体（例えば、融合タンパク質をコードする）を生成する
ために行われる。制限酵素認識部位は、しばしば、このような人為的な操作の標
的であるが、他の部位特異的な標的（例えば、プロモーター、ＤＮＡ複製部位、
調節配列、制御配列、または他の有用な特徴）は、設計によって組込まれ得る。
類似の概念が、組換え（例えば、融合のポリぺプチド）について意図される。こ
れには、二量体反復が含まれる。詳細には、遺伝暗号の縮重によって、ＤＣＲＳ
２のフラグメントおよび種々の異なる関連する分子（例えば、他のサイトカイン
レセプターファミリーのメンバー）由来の配列の融合物に等価なポリぺプチドを
コードする合成核酸が含まれる。

【００４４】 核酸の状況における「フラグメント」は、少なくとも約１７ヌクレオチド、一
般には少なくとも２１ヌクレオチド、より一般的には少なくとも２５ヌクレオチ
ド、通常少なくとも３０ヌクレオチド、より通常には少なくとも３５ヌクレオチ
ド、しばしば少なくとも３９ヌクレオチド、よりしばしば少なくとも４５ヌクレ
オチド、代表的には少なくとも５０ヌクレオチド、より代表的には少なくとも５
５ヌクレオチド、通常少なくとも６０ヌクレオチド、より通常には少なくとも６
６ヌクレオチド、好ましくは少なくとも７２ヌクレオチド、より好ましくは少な
くとも７９ヌクレオチドの連続するセグメントであり、そして特に好ましい実施
態様において、少なくとも８５以上のヌクレオチドである。代表的には、異なる
遺伝子配列のフラグメントは、適切な長さのストレッチ、特に以下に記載するド
メインような規定されたセグメントにわたって互いに比較され得る。

【００４５】 ＤＣＲＳ２をコードする核酸は、それ自体または密接に関連するタンパク質を
コードする遺伝子、ｍＲＮＡ、およびｃＤＮＡ種、ならびに多型性の、対立遺伝
子または他の遺伝的改変体（例えば、異なる個体または関連する種由来の）をコ
ードするＤＮＡを同定するために特に有用である。このようなスクリーニングに
とって好ましいプローブは、異なる多型性改変体間で保存されるかまたは特異性
を欠失するヌクレオチドを含有するインターロイキンの領域であり、そして好ま
しくは全長またはそれに近い。他の状況では、多型性改変体特異的配列はより有
用である。

【００４６】 本発明は、本明細書中に示される単離されたＤＮＡに同一または高度に相同な
核酸配列を有する組換え核酸分子およびフラグメントをさらに包含する。特に、
この配列は、しばしば、転写、翻訳、およびＤＮＡ複製を制御するＤＮＡセグメ
ントに作動可能に連結している。これらのさらなるセグメントは、代表的には、
所望の核酸セグメントの発現を補助する。

【００４７】 相同な、すなわち高度に同一性の核酸配列は、互いに（例えば、ＤＣＲＳ２配
列）比較された場合、有意な類似性を示す。核酸における相同性の標準は、配列
比較によって当該分野で一般に使用される相同性の尺度であるか、またはハイブ
リダイゼーション条件に基づくかのいずれかである。比較ハイブリダイゼーショ
ン条件は、より詳細に以下に記載される。

【００４８】 核酸配列比較の状況における実質的な同一性とは、セグメントまたはその相補
鎖が、比較される場合、適切なヌクレオチド挿入または欠失を伴って最適に整列
された際に、ヌクレオチドの少なくとも約６０％、一般的には少なくとも６６％
、通常少なくとも７１％、しばしば少なくとも７６％、よりしばしば少なくとも
８０％、通常少なくとも８４％、より通常には少なくとも８８％、代表的には少
なくとも９１％、より代表的には少なくとも約９３％、好ましくは少なくとも約
９５％、より好ましくは少なくとも約９６％〜９８％以上において、そして特定
の実施態様では、ヌクレオチドの約９９％以上までの高さにおいて、同一である
ことのいずれかを意味し、例えば、以下に記載されるのセグメントような構造的
ドメインをコードするセグメントを包含する。あるいは、実質的な同一性は、セ
グメントが選択的ハイブリダイゼーション条件下で、鎖またはその相補鎖に、代
表的には表１に由来する配列を使用して、ハイブリダイズする場合に存在する。
代表的には、選択的ハイブリダイゼーションは、少なくとも約１４ヌクレオチド
のストレッチにわたって少なくとも約５５％の相同性、より代表的には少なくと
も約６５％、好ましくは少なくとも約７５％、そしてより好ましくは少なくとも
約９０％の相同性が存在する場合に生じる。Ｋａｎｅｈｉｓａ（１９８４）Ｎｕ
ｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１２：２０３−２１３（これは、本明細書中で参考
として援用される）を参照のこと。相同性比較の長さは、記載されるように、よ
り長いストレッチにわたり得、そして特定の実施態様においては、少なくとも約
１７ヌクレオチド、一般的には少なくとも約２０ヌクレオチド、通常（ｏｒｄｉ
ｎａｒｉｌｙ）少なくとも約２４ヌクレオチド、通常（ｕｓｕａｌｌｙ）少なく
とも約２８ヌクレオチド、代表的には少なくとも約３２ヌクレオチド、より代表
的には少なくとも約４０ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約５０ヌクレオチ
ドのストレッチにわたり、そしてより好ましくは少なくとも約７５％〜１００以
上のヌクレオチドにわたる。これには、例えば、１２５、１５０、１７５、２０
０、２２５、２４６、２７３および他の長さが挙げられる。

【００４９】 ストリンジェントな条件は、ハイブリダイゼーションの状況において相同性を
いう場合、ハイブリダイゼーション反応において代表的に制御される塩、温度、
有機溶媒、および他のパラメーターを組み合わせたストリンジェントな条件であ
る。ストリンジェントな温度条件は、通常、約３０℃を超える温度、より通常に
は約３７℃を超える温度、代表的には約４５℃を超える温度、より代表的には約
５５℃を超える温度、好ましくは約６５℃を超える温度、そしてより好ましくは
約７０℃を超える温度を含む。ストリンジェントな塩条件は、通常、約５００ｍ
Ｍ未満、通常、約４００ｍＭ未満、より通常には、約３００ｍＭ未満、代表的に
は、約２００ｍＭ未満、好ましくは、約１００ｍＭ未満、そしてより好ましくは
約８０ｍＭ未満、さらに約２０ｍＭ未満までである。しかし、パラメーターの組
み合わせは、任意の単一のパラメーターの尺度よりもさらに重要である。例えば
、ＷｅｔｍｕｒおよびＤａｖｉｄｓｏｎ（１９６８）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３
１：３４９−３７０（これは、本明細書中によって参考として本明細書中に援用
される）を参照のこと。

【００５０】 単離されたＤＮＡは、ヌクレオチド置換、ヌクレオチド欠失、ヌクレオチド挿
入、およびヌクレオチドストレッチの反転によって容易に改変され得る。これら
の改変は、本発明のタンパク質またはその誘導体をコードする新規なＤＮＡ配列
を生じる。これらの改変された配列は、変異体タンパク質（ムテイン）を生成す
るために、または改変種の発現を増強するために使用され得る。増強された発現
は、遺伝子増幅、増加された転写、増加された翻訳、および他の機構を含み得る
。このような変異体ＤＣＲＳ２様誘導体は、タンパク質またはそのフラグメント
の、予め決定された変異または部位特異的変異を包含し、遺伝暗号縮重を使用す
るサイレントな変異を含む。本明細書中で使用される場合「変異体ＤＣＲＳ２」
は、欠失、置換、または挿入のいずれかの手段によって、天然において見出され
るような他のサイトカインレセプター様タンパク質のアミノ酸配列とは異なるア
ミノ酸配列を有するものを除き、そうでなければ上述に記載されるようなＤＣＲ
Ｓ２の相同性の定義の中にあるポリぺプチドを含む。特に、「部位特異的変異体
ＤＣＲＳ２」は、表１のタンパク質と実質的な配列相同性を有するタンパク質を
含み、そして代表的に、本明細書中で開示される形態の生物学的活性または効果
の大部分を共有する。

【００５１】 部位特異的変異部位は予め定められているが、変異体は部位特異的である必要
はない。哺乳動物ＤＣＲＳ２変異誘発は、発現と相まって、遺伝子におけるアミ
ノ酸挿入または欠失の作製によって達成され得る。置換、欠失、挿入、または多
くの組み合わせは、最終構築物で到達するために生成され得る。挿入は、アミノ
末端融合またはカルボキシ末端融合を包含する。ランダム変異誘発は、標的コド
ンで行われ得、そして発現された哺乳動物ＤＣＲＳ２変異体は、次いで所望の活
性についてスクリーニングされ得、構造−活性の関連性のいくつかの局面を提供
する。公知の配列を有するＤＮＡにおいて所定の部位に置換変異を作成する方法
は、例えば、当該分野で周知であるＭ１３プライマー変異誘発による。Ｓａｍｂ
ｒｏｏｋら（１９８９）およびＡｕｓｕｂｅｌら（１９８７年および定期補遺）
もまた参照のこと。

【００５２】 ＤＮＡの変異は、正常には、リーディングフレームの外のコード配列に配置す
べきではなく、そして好ましくは、ループまたはヘアピンのような二次ｍＲＮＡ
構造を産生するためにハイブリダイズし得る相補領域を生成しない。

【００５３】 ＢｅａｕｃａｇｅおよびＣａｒｒｕｔｈｅｒｓ（１９８１）Ｔｅｔｒａ．Ｌｅ
ｔｔｓ．２２：１８５９−１８６２によって記載されるホスホロアミダイト法は
、適切な合成ＤＮＡフラグメントを産生する。二本鎖フラグメントは、相補鎖を
合成し、そして適切な条件下で互いの鎖をアニーリングすることによって、また
は適切なプライマー配列を有するＤＮＡポリメラーゼを使用して相補鎖を付加す
ることによってのいずれかでしばしば得られる。

【００５４】 ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術は、しばしば、変異誘発において適用さ
れ得る。あるいは、変異誘発プライマーは、予め決定された部位で規定された変
異を作製するために一般に使用される方法である。例えば、Ｉｎｎｉｓら（編、
１９９０）ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄ
ｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａ
ｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ；ならびにＤｉｅｆｆｅｎｂａｃｈおよびＤｖｅｋｓｌｅ
ｒ（１９９５；編）ＰＣＲ Ｐｒｉｍｅｒ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎ
ｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、ＣＳＨ、ＮＹを
参照のこと。

【００５５】 本発明の特定の実施形態は、記載されるレセプターまたはリガンド配列を含む
組み合わせ組成物に関する。他の実施形態において、この配列の機能的部分が結
合されて、融合タンパク質をコードし得る。他の形態において、記載される配列
の改変体が置換され得る。

【００５６】 （ＩＶ．タンパク質、ペプチド） 上記されるように、本発明は、霊長類ＤＣＲＳ２を含み、例えば、その配列は
、表１において開示され、そして上記される。対立遺伝子および他の改変体もま
た意図され、例えば、他の配列（例えば、エピトープタグおよび機能的ドメイン
を含む）と、このような配列の部分とを組合わせる融合タンパク質を含む。

【００５７】 本発明はまた、組換えタンパク質（例えば、これらの霊長類または齧歯類タン
パク質からのセグメントを使用する異種融合タンパク質）を提供する。異種融合
タンパク質は、天然で同じ様式において通常融合されないタンパク質またはセグ
メントの融合である。従って、別のサイトカインレセプターとＤＣＲＳ２との融
合産物は、代表的なペプチド結合において融合される配列を有する連続的なタン
パク質分子であり、代表的に単一の翻訳産物として作製され、そして各供給源ペ
プチドに由来する特性（例えば、配列または抗原性）を示す。同様の概念が、異
種核酸配列に適用される。種々の示されたタンパク質の複合体への組み合わせも
また、提供される。

【００５８】 さらに、新しい構築物は、他の関連タンパク質（例えば、サイトカインレセプ
ターまたはＴｏｌｌ様レセプター（特定の改変体を含む））からの類似の機能的
または構造的ドメインを組み合わせることから作製され得る。例えば、リガンド
結合セグメントまたは他のセグメントは、異なる新しい融合ポリペプチドまたは
フラグメント間で、「交換」され得る。例えば、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍら（１９
８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４３：１３３０−１３３６；およびＯ’Ｄｏｗｄら（
１９８８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：１５９８５−１５９９２（これら
の各々は、本明細書中で参考として援用される）を参照のこと。従って、特異性
の新しい組み合わせを示す新しいキメラポリペプチドは、レセプター結合特異性
の機能的連結から生じる。例えば、他の関連のレセプター分子からのリガンド結
合ドメインは、付加され得るか、あるいは本発明のタンパク質または関連のタン
パク質の他のドメインと置換され得る。得られるタンパク質は、しばしば、ハイ
ブリッド機能および特性を有する。例えば、融合タンパク質は、特定の細胞オル
ガネラへの、融合タンパク質の隔離を提供するように作用し得る、標的化ドメイ
ンを含み得る。

【００５９】 候補融合パートナーおよび配列は、種々の配列データベース（例えば、Ｇｅｎ
Ｂａｎｋ、ｃ／ｏ ＩｎｔｅｌｌｉＧｅｎｅｔｉｃｓ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉ
ｅｗ、ＣＡ；およびＢＣＧ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ、Ｍａｄｉｓ
ｏｎ、ＷＩ（これらは、各々本明細書中に参考として援用される）から選択され
得る。特に、表１および表３に提供されるポリペプチド配列の組み合わせが、特
に好ましい。タンパク質の改変体形態は、記載される組み合わせに置換され得る
。

【００６０】 本発明は特に、サイトカイン様リガンドに結合し、そして／またはシグナル伝
達において影響されるムテインを提供する。サイトカインレセプターファミリー
の他のメンバーと、ヒトＤＣＲＳ２との構造アラインメントは、保存された特徴
／残基を示す。表３を参照のこと。サイトカインレセプターファミリーの他のメ
ンバーとのヒトＤＣＲＳ２配列のアラインメントは、種々の構造的および機能的
に共有された特徴を示す。Ｂａｚａｎら、（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ ３７９：
５９１；Ｌｏｄｉら、（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６３：１７６２−１７６
６；ＳａｙｌｅおよびＭｉｌｎｅｒ−Ｗｈｉｔｅ（１９９５）ＴＩＢＳ ２０：
３７４−３７６；ならびにＧｒｏｎｅｎｂｅｒｇら（１９９１）Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ４：２６３−２６９もまた参照のこと。

【００６１】 マウス配列またはヒト配列のいずれかでの置換が特に好ましい。逆に、リガン
ド結合相互作用領域から離れた保存的な置換は、おそらく、大部分のシグナル伝
達活性を保存し；そして細胞内ドメインから離れた保存的な置換は、おそらく、
大部分のリガンド結合性質を保存する。

【００６２】 霊長類ＤＣＲＳ２の「誘導体」には、アミノ酸配列変異体、グリコシル化改変
体、代謝誘導体、および他の化学部分との共有結合体または凝集結合体が含まれ
る。共有結合的誘導体は、例えば、当該技術分野で周知の手段によって、ＤＣＲ
Ｓ２アミノ酸側鎖またはＮ末端もしくはＣ末端で見られる基への機能性の連結に
よって調製され得る。これらの誘導体には、カルボキシル末端の、またはカルボ
キシル側鎖を含む残基の脂肪族エステルまたはアミド、ヒドロキシル基含有残基
のＯ−アシル誘導体、およびアミノ末端アミノ酸またはアミノ基含有残基（例え
ば、リジンまたはアルギニン）のＮ−アシル誘導体が非限定的に含まれ得る。ア
シル基は、Ｃ３〜Ｃ１８の正常アルキルを含むアルキル部分の群から選択され、
それによってアルカノイルアロイル種を形成する。

【００６３】 特に、グリコシル化変化が含まれ、例えば、その合成およびプロセシング中に
、または更なるプロセシング工程において、ポリペプチドのグリコシル化パター
ンを改変することによって作製される。これを達成するために特に好ましい手段
は、このようなプロセシングを通常は提供する細胞に由来するグリコシル化酵素
、例えば、哺乳動物グリコシル化酵素に、ポリペプチドを曝露することによる。
脱グリコシル化酵素もまた意図される。また、他のマイナーな改変を有する同じ
一次アミノ酸配列の型を含み、これには、リン酸化アミノ酸残基（例えば、ホス
ホチロシン、ホスホセリン、またはホスホトレオニン）が含まれる。

【００６４】 誘導体の主要な群は、ポリペプチドの他のタンパク質と、レセプターまたはそ
のフラグメントとの共有結合体である。これらの誘導体は、Ｎ−またはＣ−末端
融合体のような組換え培養物中で、あるいは反応性側基によってタンパク質を架
橋することにおけるそれらの有用性について当該技術分野で公知の薬剤の使用に
よって、合成され得る。架橋剤との好ましい誘導体化部位は、遊離アミノ基、炭
水化物部分、およびシステイン残基にある。

【００６５】 レセプターと他の同種または異種タンパク質との間の融合ポリペプチドもまた
提供される。同種ポリペプチドは、異なるレセプター間の融合物であり得、例え
ば、複数の異なるサイトカインリガンドの結合特異性を示すハイブリッドタンパ
ク質、または基質効果の特異性を広げるかもしくは弱め得るレセプターを生じる
。同様に、誘導体タンパク質の特性または活性の組み合わせを示す異種融合物が
、構築され得る。代表的な例は、レポーターポリペプチド（例えば、ルシフェラ
ーゼ）のレセプターのセグメントまたはドメイン（例えば、リガンド結合セグメ
ント）との融合物であり、その結果、所望のリガンドの存在または位置が容易に
決定され得る。例えば、Ｄｕｌｌら、米国特許第４，８５９，６０９号（これを
本明細書中で参考として援用する）を参照のこと。他の遺伝子融合パートナーに
は、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、細菌性β−ガラクトシ
ダーゼ、ｔｒｐＥ、プロテインＡ、β−ラクタマーゼ、αアミラーゼ、アルコー
ルデヒドロゲナーゼ、および酵母α接合因子が挙げられる。例えば、Ｇｏｄｏｗ
ｓｋｉら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：８１２−８１６を参照のこと。
標識されたタンパク質は、記載されたタンパク質の組み合わせにしばしば置換さ
れる。

【００６６】 ＢｅａｕｃａｇｅおよびＣａｒｒｕｔｈｅｒｓ（１９８１）Ｔｅｔｒａ．Ｌｅ
ｔｔｓ．２２：１８５９−１８６２によって記載されたホスホロアミダイト法は
、適切な合成ＤＮＡフラグメントを産生する。二本鎖フラグメントは、相補鎖を
合成し、そして適切な条件下で互いの鎖をアニーリングすることによって、また
は適切なプライマー配列を有するＤＮＡポリメラーゼを使用して相補鎖を付加す
ることによってのいずれかでしばしば得られる。

【００６７】 このようなポリペプチドはまた、リン酸化、スルホン化、ビオチン化、または
他の部分の付加もしくは除去によって化学的に改変されているアミノ酸残基、特
にリン酸基に類似の分子形状を有する残基を有し得る。いくつかの実施形態では
、改変は、有用な標識試薬であり、または精製標的、例えば、アフィニティーリ
ガンドとして役立つ。

【００６８】 融合タンパク質は、代表的に、組換え核酸法によってまたは合成ポリぺプチド
法によってのいずれかで作製される。核酸操作および発現についての技術は、例
えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：
Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版）第１〜３巻、Ｃｏｌｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、およびＡｕｓｕｂｅｌら（
編）（１９８７および定期的な補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉ
ｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ（これらはそれぞれ、本明細書中に参考として援用される）において
、一般に記載される。ポリぺプチドの合成についての技術は、例えば、Ｍｅｒｒ
ｉｆｉｅｌｄ（１９６３）Ｊ． Ａｍｅｒ． Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ． ８５：２１
４９−２１５６；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３２：
３４１−３４７；およびＡｔｈｅｒｔｏｎら（１９８９）Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓ
ｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐ
ｒｏａｃｈ、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ；（これらのそれぞれは、本明
細書中に参考として援用される）において記載される。より長いポリぺプチドを
作製するための方法について、Ｄａｗｓｏｎら（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２
６６：７７６−７７９もまた参照のこと。

【００６９】 本発明はまた、アミノ酸配列またはグリコシル化における改変以外のＤＣＲＳ
２の誘導体の使用を意図する。このような誘導体は、化学部分との共有結合的な
または凝集的な会合を含み得る。これらの誘導体は、一般に、３つのクラスに分
類される：（１）塩、（２）側鎖および末端残基の共有結合的な改変、ならびに
（３）例えば、細胞膜との、吸着複合体。このような共有結合誘導体または凝集
誘導体は、免疫原として、イムノアッセイにおける試薬として、またはレセプタ
ーまたは他の結合分子（例えば、抗体）のアフィニティー精製のためのような精
製方法において、有用である。例えば、サイトカインリガンドは、サイトカイン
レセプター、抗体、または他の類似の分子のアッセイまたは精製における使用の
ために、当該分野において周知である方法により、臭化シアン活性化Ｓｅｐｈａ
ｒｏｓｅのような固体支持体へ共有結合によって固定化され得るか、または、グ
ルタルアルデヒド架橋を用いるかまたは用いないで、ポリオレフィン表面上に吸
着され得る。リガンドはまた、検出可能な基で標識され得、例えばクロラミンＴ
手順によって放射性ヨウ素化（ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｅ）され得るか、希土
類キレートに共有結合され得るか、または診断アッセイにおける使用のために、
別の蛍光部分に結合され得る。

【００７０】 本発明の組み合わせ物（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）（例えば、ＤＣＲＳ２を含
む）は、記載される組み合わせ物に特異的な（例えば、他のサイトカインレセプ
ターファミリーメンバーの間を区別し得る）、抗血清または抗体の生成のための
免疫原として使用され得る。複合体は、タンパク質を含有する不純な調製物の種
々の形態での免疫化によって調製されたモノクローナル抗体または抗原結合フラ
グメントをスクリーニングするために使用され得る。特に、用語「抗体」はまた
、天然の抗体の抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆｖなど）
を包含する。精製されたＤＣＲＳ２はまた、上昇したレベルの発現の存在に応答
して産生された抗体、または内因性レセプターに対する抗体産生を導く免疫障害
を検出するための試薬として使用され得る。さらに、ＤＣＲＳ２フラグメントは
また、すぐ下に記載されるように、本発明の抗体を産生するための免疫原として
役立ち得る。例えば、本発明は、表１に示されるアミノ酸配列、そのフラグメン
ト、または種々の相同的なペプチドに対して結合親和性を有するか、またはそれ
に対して惹起される抗体を意図する。特に、本発明は、ネイティブなＤＣＲＳ２
の外部タンパク質表面で曝露されることが予測されるか、または実際に曝露され
る、特異的なフラグメントに対し、結合親和性を有するかまたはそれに対して惹
起された抗体を意図する。タンパク質の組み合わせの複合体はまた、有用であり
、そしてそれに対する抗体調製物が作製され得る。

【００７１】 レセプターリガンドに応答する生理学的応答のブロックは、おそらく競合的阻
害を介する、レセプターに対するリガンドの結合の阻害から生じ得る。従って、
本発明のインビトロアッセイにおいて、抗体、またはこれらの抗体の抗原結合セ
グメント、または固相基体に付着されるフラグメントを、しばしば使用する。こ
れらのアッセイはまた、リガンド結合領域の変異および改変、または他の変異お
よび改変（例えば、シグナル伝達または酵素機能に影響する）のいずれかの効果
の診断的な決定を可能にする。

【００７２】 本発明はまた、競合的な薬物スクリーニングアッセイの使用を意図し、例えば
、レセプター複合体またはフラグメントに対する中和抗体は、リガンドまたは他
の抗体への結合について、試験化合物と競合する。この様式において、中和抗体
またはフラグメントは、レセプターに対する１つ以上の結合部位を共有するポリ
ぺプチドの存在を検出するために使用され得、そしてそうでなければリガンドを
結合し得る、レセプターにおける結合部位を占有するためにまた使用され得る。

【００７３】 （Ｖ．核酸およびタンパク質の作製） タンパク質またはそのフラグメントをコードするＤＮＡは、化学合成、ｃＤＮ
Ａライブラリーのスクリーニングによって、または広範な種々の細胞株もしくは
組識サンプルから調製されたゲノムライブラリーのスクリーニングによって入手
され得る。天然の配列は、標準的な方法、および本明細書中（例えば、表１）に
提供される配列を使用して、単離され得る。他の種対応物は、ハイブリダイゼー
ション技術によって、または種々のＰＣＲ技術によって、配列データベース（例
えば、ＧｅｎＢａｎｋ）における検索と組合わせて、またはこの検索によって、
同定され得る。

【００７４】 このＤＮＡは、完全長のレセプターまたはフラグメントの合成のために、広範
な種々の宿主細胞において発現され得、次いで完全長のレセプターまたはフラグ
メントは、例えば、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体を生成するために
；結合研究のために；改変されたリガンド結合またはキナーゼ／ホスファターゼ
ドメインの構築および発現のために；および構造／機能研究のために、使用され
得る。改変体またはフラグメントは、適切な発現ベクターで形質転換またはトラ
ンスフェクトされる宿主細胞において発現され得る。これらの分子は、組換え宿
主に由来する分子以外のタンパク質または細胞性の夾雑物を実質的に含有しない
ことが可能であり、それゆえ、薬学的に受容可能なキャリアおよび／または希釈
剤と組合わされる場合、薬学的組成物において特に有用である。タンパク質、ま
たはその部分は、他のタンパク質との融合物として発現され得る。記載されたタ
ンパク質、またはそれらをコードする核酸の組み合わせは、特に興味深い。

【００７５】 発現ベクターは、代表的には、所望のレセプター遺伝子またはそのフラグメン
ト（通常、適切な宿主細胞において認識される適切な遺伝子制御エレメントに作
動可能に連結される）を含有する自己複製するＤＮＡまたはＲＮＡ構築物である
。複数の遺伝子が、協調的に発現され得、そしてポリシストロニックメッセージ
上にあり得る。発現をもたらすために必要な制御エレメントの特定の型は、結果
として使用される宿主細胞に依存する。一般に、遺伝子制御エレメントは、原核
生物プロモーター系または真核生物プロモーター発現制御系を含み得、そして代
表的に、転写プロモーター、必要に応じて、転写の開始を制御するオペレーター
、ｍＲＮＡの発現のレベルを上昇する転写エンハンサー、適切なリボソーム結合
部位をコードする配列、ならびに転写および翻訳を終結する配列を含み得る。発
現ベクターはまた、通常、ベクターが宿主細胞から独立して複製することを可能
する、複製の起点を含む。

【００７６】 本発明のベクターとしては、記載されるようなタンパク質の組み合わせ、また
は生物学的に活性な等価なポリぺプチドををコードするＤＮＡを含むベクターが
挙げられる。ＤＮＡは、ウイルスプロモーターの制御下にあり得、そして選択マ
ーカーをコードし得る。本発明はさらに、原核生物宿主または真核生物宿主にお
いて、このようなタンパク質をコードする真核生物ｃＤＮＡを発現し得る、この
ような発現ベクターの使用を意図し、ここでベクターは、宿主と適合性であり、
および真核生物ｃＤＮＡはベクターに挿入され、それによってベクターを含む宿
主の増殖は、問題のｃＤＮＡを発現する。通常、発現ベクターは、それらの宿主
細胞における安定な複製のために、または細胞あたりの所望の遺伝子の総コピー
数を非常に増加する増幅のために、設計される。発現ベクターが、宿主細胞にお
いて複製することが、いつも必要であるわけではなく、例えば、宿主細胞によっ
て認識される複製起点を含まないベクターを使用して、種々の宿主において、タ
ンパク質またはそのフラグメントの一過性の発現を生じることが可能である。組
換えによる、宿主ＤＮＡへの、タンパク質をコードする部分の組込みを引き起こ
すベクターの使用はまた、可能である。

【００７７】 本明細書中で使用される場合、ベクターは、プラスミド、ウイルス、バクテリ
オファージ、組込み可能なＤＮＡフラグメント、および宿主のゲノムへのＤＮＡ
フラグメントの組込みを可能にする他のビヒクルを含む。発現ベクターは、作動
可能に連結された遺伝子の発現をもたらす遺伝子制御エレメントを含む特殊化さ
れたベクターである。プラスミドは、ベクターの最も一般に使用される形態であ
るが、等価な機能を提供し、および当該分野において公知であるか、または公知
になる、全ての他の形態は、本明細書における使用に適切である。例えば、Ｐｏ
ｕｗｅｌｓら（１９８５および補遺）Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎ．Ｙ．、およびＲｏ
ｄｒｉｑｕｅｚら（編、１９８８）Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｓｕｒｖｅｙ ｏｆ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ
Ｕｓｅｓ、Ｂｕｔｔｅｒｓｗｏｒｔｈ、Ｂｏｓｔｏｎ（これらは本明細書中に参
考として援用される）を参照のこと。

【００７８】 形質転換された細胞は、組換えＤＮＡ技術を使用して構築されたレセプターベ
クターで形質転換されたまたはトランスフェクトされた細胞、好ましくは哺乳動
物細胞である。形質転換された宿主細胞は、通常、所望のタンパク質またはその
フラグメントを発現するが、そのＤＮＡのクローニング、増幅、および操作の目
的のために、本発明のタンパク質を発現する必要はない。本発明はさらに、栄養
培地において、形質転換された細胞を培養することを意図し、従って、タンパク
質が、蓄積することを可能する。タンパク質は、培養物または特定の場合におい
て培養培地のいずれかから、回収され得る。

【００７９】 本発明の目的のために、ＤＮＡ配列は、それが互いに機能的に関連する場合、
作動可能に連結している。例えば、プレ配列または分泌リーダーについてのＤＮ
Ａは、それがプレタンパク質として発現されるか、またはポリペプチドを細胞膜
もしくはそのポリペプチドの分泌へと指向させるのに関与する場合、そのポリペ
プチドに作動可能に連結されている。プロモーターは、それがポリペプチドの転
写を制御する場合、コード配列に作動可能に連結されている；リボソーム結合部
位は、それが翻訳を可能にする位置にある場合、コード配列に作動可能に連結さ
れている。通常、作動可能な連結とは、連続でかつインフレームであることを意
味するが、しかし、リプレッサー遺伝子のような特定の遺伝子エレメントは、オ
ペレーター配列に連続して連結していないが、なお結合しており、これは次いで
発現を制御する。

【００８０】 適切な宿主細胞は、例えば、原核生物、下等真核生物および高等真核生物を含
む。原核生物は、グラム陰性およびグラム陽性の両方の生物を含む（例えば、Ｅ
．ｃｏｌｉおよびＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）。下等真核生物は、酵母（例えば、Ｓ
．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅおよびＰｉｃｈｉａ）、およびＤｉｃｔｙｏｓｔｅｌｉ
ｕｍ属の種を含む。高等真核生物は、非哺乳動物起源（例えば、昆虫細胞および
鳥類）および哺乳動物起源（例えば、ヒト、霊長類および齧歯類）の動物細胞か
ら樹立された組織培養細胞株を含む。

【００８１】 原核生物宿主ベクター系は、多数の異なる種について広汎な種々のベクターを
含む。本明細書において使用される場合、Ｅ．ｃｏｌｉおよびそのベクターは、
他の原核生物において使用される等価なベクターを包含するために遺伝的に使用
される。ＤＮＡを増幅するための代表的なベクターは、ｐＢＲ３２２またはその
多くの誘導体である。ＤＮＡを増幅するための代表的なベクターは、ｐＢＲ３２
２または多くのその誘導体である。レセプターまたはそのフラグメントを発現す
るために使用され得るベクターとしては、例えば、以下を含有するベクターが挙
げられるが、これらに限定されない：ｌａｃプロモーター（ｐＵＣシリーズ）；
ｔｒｐプロモーター（ｐＢＲ３２２−ｔｒｐ）；Ｉｐｐプロモーター（ｐＩＮシ
リーズ）；λ−ｐＰまたはｐＲプロモーター（ｐＯＴＳ）；またはハイブリッド
プロモーター（例えば、ｐｔａｃ（ｐＤＲ５４０））。Ｂｒｏｓｉｕｓら、（１
９８８）「Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｅｍｐｌｏｙｉｎｇ Ｌａ
ｍｂｄａ−、ｔｒｐ−、ｌａｃ−、ａｎｄ Ｉｐｐ−ｄｅｒｉｖｅｄ Ｐｒｏｍ
ｏｔｏｒｓ」Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｓｕｒｖｅｙ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｕｓｅｓ（Ｒｏｄｒｉ
ｇｕｅｚおよびＤｅｎｈａｒｄｔ編）、Ｂｕｔｔｅｒｓｗｏｒｔｈ、Ｂｏｓｔｏ
ｎ、第１０章、２０５−２３６頁（本明細書中で参考として援用される）を参照
のこと。

【００８２】 下等真核生物（例えば、酵母およびＤｉｃｔｙｏｓｔｅｌｉｕｍ）は、ＤＣＲ
Ｓ２配列含有ベクターで形質転換され得る。本発明の目的のために、最も一般的
な下等真核生物宿主は、パン酵母Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓ
ｉａｅである。これは、一般的に下等真核生物を代表するように使用されるが、
多くの他の株および種もまた利用可能である。酵母ベクターは、代表的に、複製
起点（組み込み型でない場合）、選択遺伝子、プロモーター、レセプターまたは
そのフラグメントをコードするＤＮＡ、ならびに翻訳終結、ポリアデニル化およ
び転写終結のための配列からなる。酵母のための適切な発現ベクターは、３−ホ
スホグリセリン酸キナーゼおよび種々の他の解糖系酵素遺伝子プロモーターのよ
うな構成的プロモーター、またはアルコールデヒドロゲナーゼ２プロモーターま
たはメタロチオネインプロモーターのような誘導性プロモーターが挙げられる。
適切なベクターとしては、以下の型の誘導体が挙げられる：自己複製性低コピー
数（例えば、ＹＲｐシリーズ）、自己複製性高コピー数（例えば、ＹＥｐシリー
ズ）；組み込み型（例えば、ＹＩｐシリーズ）またはミニ染色体（例えば、ＹＣ
ｐシリーズ）。

【００８３】 高等真核生物組織培養細胞は、通常には、機能的に活性なインターロイキンま
たはレセプタータンパク質の発現のための好ましい宿主細胞である。原理的に、
多くの高等真核生物組織培養細胞株（例えば、昆虫バキュロウイルス系）が、無
脊椎動物供給源または脊椎動物供給源にかかわらず、実用可能である。しかし、
哺乳動物細胞が好ましい。このような細胞の形質転換またはトランスフェクショ
ンおよび増殖は、慣用的手段となっている。有用な細胞株の例は、ＨｅＬａ細胞
、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株、乳児ラット腎臓（ＢＲＫ）細
胞株、昆虫細胞株、鳥類細胞株、およびサル（ＣＯＳ）細胞株が挙げられる。こ
のような細胞株のための発現ベクターは、通常、複製起点、プロモーター、翻訳
開始部位、ＲＮＡスプライス部位（ゲノムＤＮＡを使用する場合）、ポリアデニ
ル化部位、および転写終結部位を含む。これらのベクターはまた、通常、選択遺
伝子または増幅遺伝子を含む。適切な発現ベクターは、例えば、アデノウイルス
、ＳＶ４０、パルボウイルス、ワクシニアウイルスまたはサイトメガロウイルス
のような供給源由来のプロモーターを含有する、プラスミド、ウイルス、あるい
はレトロウイルスであり得る。適切な発現ベクターの代表的な例は、ｐＣＤＮＡ
１；ｐＣＤ（Ｏｋａｙａｍａら、（１９８５）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．５
：１１３６−１１４２を参照のこと）；ｐＭＣ１ｎｅｏ ＰｏｌｙＡ（Ｔｈｏｍ
ａｓら、（１９８７）Ｃｅｌｌ ５１：５０３−５１２を参照のこと）；および
バキュロウイルスベクター（例えば、ｐＡＣ３７３またはｐＡＣ６１０）。

【００８４】 分泌タンパク質およびいくつかの膜タンパク質について、オープンリーディン
グフレームは、通常、そのＮ末端でシグナルペプチドに共有結合的に連結されて
いる成熟産物または分泌産物からなるポリペプチドをコードする。このシグナル
ペプチドは、成熟（または、活性）ポリペプチドの分泌前に切断される。切断部
位は、経験則（例えば、ｖｏｎ−Ｈｅｉｊｎｅ（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａ
ｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １４：４６８３−４６９０およびＮｉｅｌｓｅｎ
ら（１９９７）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１０：１−１２）から高度な正確性で
予測され得、そしてシグナルペプチドの正確なアミノ酸組成は、その機能に重要
ではないようである（例えば、Ｒａｎｄａｌｌら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ
２４３：１１５６−１１５９；Ｋａｉｓｅｒら（１９８７）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２
３５：３１２−３１７）。本発明の成熟タンパク質は、標準的な方法を使用して
容易に決定され得る。

【００８５】 特定のグリコシル化パターンまたは規定されたグリコシル化パターンを提供す
る系においてこれらのポリペプチドを発現することが、しばしば所望される。こ
の場合において、通常のパターンは、その発現系によって自然に提供されるパタ
ーンである。しかし、このパターンは、このポリペプチド（例えば、非グリコシ
ル化形態）を、異種発現系に導入された適切なグリコシル化タンパク質に曝露す
ることによって、改変可能である。例えば、レセプター遺伝子を、哺乳動物また
は他のグリコシル化酵素をコードする１以上の遺伝子と同時形質転換し得る。こ
のアプローチを使用して、特定の哺乳動物グリコシル化パターンが、原核生物ま
たは他の細胞において達成可能である。原核生物細胞における発現は、代表的に
、タンパク質の非グリコシル化形態を導く。

【００８６】 ＤＣＲＳ２の供給源は、上記のような組換えＤＣＲＳ２を発現する真核生物ま
たは原核生物宿主であり得る。この供給源はまた、細胞株であり得るが、他の哺
乳動物細胞株もまた、本発明に意図され、好ましい細胞株は、ヒト種由来である
。

【００８７】 現在配列が公知であるので、霊長類ＤＣＲＳ２、そのフラグメントまたは誘導
体は、ペプチドを合成するための従来のプロセスによって調製され得る。これら
は、以下に記載されるようなプロセスを含む：ＳｔｅｗａｒｔおよびＹｏｕｎｇ
（１９８４）Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、
Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ；Ｂｏｄａ
ｎｓｚｋｙおよびＢｏｄａｎｓｚｋｙ（１９８４）Ｔｈｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ
ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ
、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；およびＢｏｄａｎｓｚｋｙ（１９８４）Ｔｈｅ Ｐｒｉｎ
ｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ
−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（これらは全て、本明細書中に参考として援
用される）。例えば、アジドプロセス、酸塩化物プロセス、酸無水物プロセス、
混合無水物プロセス、活性エステルプロセス（例えば、ｐ−ニトロフェニルエス
テル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、またはシアノメチルエステル）
、カルボジイミダゾールプロセス、酸化還元プロセス、またはジシクロヘキシル
カルボジイミド（ＤＣＣＤ）／付加プロセスが使用され得る。固相合成および液
相合成の両方は、上記のプロセスに適用可能である。類似の技術が、部分ＤＣＲ
Ｓ２配列と共に使用され得る。

【００８８】 ＤＣＲＳ２、フラグメントまたは誘導体が、ペプチド合成において代表的に使
用されるような、上記のプロセスに従って適切に調製され、これは、一般に、い
わゆる段階プロセス（これは、アミノ酸を末端アミノ酸に１つずつ順番に縮合さ
せる工程を含む）によるか、または末端アミノ酸にペプチドフラグメントを結合
させることによる。結合反応において使用されないアミノ基は、不正確な位置で
の結合を予防するために保護されねばならない。

【００８９】 固相合成が適用される場合、Ｃ末端アミノ酸は、そのカルボキシル基を介して
不溶性キャリアまたは支持体に結合される。その不溶性キャリアは、それが反応
性カルボキシル基への結合能を有する限り、特に限定されない。このような不溶
性のキャリアの例は、ハロメチル樹脂（例えば、クロロメチル樹脂またはブロモ
メチル樹脂、ヒドロキシメチル樹脂、フェノール樹脂、ｔｅｒｔ−アルキルオキ
シカルボニルヒドラジド化樹脂など）を含む。

【００９０】 アミノ基保護アミノ酸は、その活性化されたカルボキシル基と先に形成された
ペプチドまたは鎖の反応性アミノ基との縮合を介して順番に結合されて、ペプチ
ドを段階的に合成する。完全な配列を合成した後、ペプチドを、不溶性キャリア
から分離して、そのペプチドを産生する。この固相アプローチは、Ｍｅｒｒｉｆ
ｉｅｌｄら（１９６３）、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−２１
５６（本明細書中に参考として援用される）によって一般的に記載される。

【００９１】 調製された抗原およびそのフラグメントは、ペプチド分離の手段（例えば、抽
出、沈澱、電気泳動および種々の形態のクロマトグラフィーなど）によって反応
混合物から単離および精製され得る。本発明のレセプターは、その所望される用
途に応じて、種々の程度の純度で入手され得る。精製は、本明細書に開示される
タンパク質精製技術の使用によって（以下を参照のこと）、または免疫吸着アフ
ィニティークロマトグラフィーの方法において記載される本明細書中の抗体の使
用によって、達成され得る。この免疫吸着アフィニティークロマトグラフィーは
、例えば、まずその抗体を固相支持体に結合し、次いでその結合された抗体に、
適切な細胞の可溶化溶解物、レセプターを発現する他の細胞の溶解物、あるいは
ＤＮＡ技術の結果としてこのタンパク質を産生する細胞の溶解物または上清を接
触させることによって実行される。下記を参照のこと。

【００９２】 一般に、精製されたタンパク質は、少なくとも約４０％純粋であり、通常少な
くとも約５０％純粋であり、通常少なくとも約６０％純粋であり、代表的に少な
くとも約７０％純粋であり、より代表的には少なくとも約８０％純粋であり、好
ましくは少なくとも約９０％純粋であり、より好ましくは少なくとも約９５％純
粋であり、および特定の実施形態において、９７％〜９９％以上純粋である。純
度は、通常、重量基準であるが、またモル基準でもあり得る。異なるアッセイが
、適切な場合、適用される。個々のタンパク質は精製され、その後合わせられ得
る。

【００９３】 （ＶＩ．抗体） 抗体は、種々の哺乳動物（例えば、霊長類）のＤＣＲＳ２タンパク質ならびに
そのフラグメント（天然に存在するネイティブな形態およびそれらの組換え形態
の両方）に対して惹起され得、その差異は、活性なレセプターに対する抗体が、
ネイティブな立体構造においてのみ存在するエピトープをより認識するようであ
るということである。変性された抗原の検出はまた、例えば、ウエスタン分析に
おいて、有用であり得る。抗イディオタイプ抗体がまた、意図され、これは、天
然のレセプターまたは抗体のアゴニストまたはアンタゴニストとして有用である
。

【００９４】 タンパク質の予め決定されたフラグメントに対する抗体（結合フラグメントお
よび単鎖バージョンを含む）は、そのフラグメントと免疫原性タンパク質との結
合体での動物の免疫によって惹起され得る。モノクローナル抗体は、所望の抗体
を分泌する細胞から調製される。これらの抗体は、正常なタンパク質もしくは欠
損性タンパク質への結合についてスクリーニングされ得るか、またはアゴニスト
活性もしくはアンタゴニスト活性についてスクリーニングされ得る。これらのモ
ノクローナル抗体は通常、少なくとも約１ｍＭ、より通常には少なくとも約３０
０μＭ、代表的には少なくとも約１００μＭ、より代表的には少なくとも約３０
μＭ、好ましくは少なくとも約１０μＭ、およびより好ましくは少なくとも約３
μＭまたはそれよりも良好なＫ_Dで結合する。

【００９５】 本発明の抗体（抗原結合フラグメントを含む）は、有意な診断的または治療学
的な価値を有し得る。それらは、レセプターに結合しそしてリガンドへの結合を
阻害するか、またはレセプターが生物学的応答を誘発する（例えば、その基質に
作用する）能力を阻害する、強力なアンタゴニストであり得る。それらはまた、
非中和抗体として有用であり得、そしてトキシンまたは放射性核種に結合されて
、産生細胞（またはインターロイキンの供給源に局在化される細胞）を結合し得
る。さらに、これらの抗体は、薬物または他の治療薬剤に、直接的に、またはリ
ンカーの手段によって間接的にのいずれかで、結合され得る。

【００９６】 本発明の抗体はまた、診断的適用において有用であり得る。捕捉抗体または非
中和抗体として、これらは、リガンド結合または基質結合を阻害することなくレ
セプターに結合し得る。中和抗体として、これらは、競合結合アッセイにおいて
有用であり得る。これらはまた、リガンドの検出または定量に有用である。これ
らは、それぞれのタンパク質のウエスタンブロット分析あるいは免疫沈降または
免疫精製のための試薬として使用され得る。同様に、核酸およびタンパク質は、
アフィニティー精製または検出方法のための固体基質に固定され得る。この基質
は、例えば、固体樹脂ビーズまたはプラスチックシートであり得る。

【００９７】 タンパク質フラグメントは、免疫原として使用される融合されたポリペプチド
または共有結合されたポリぺプチドのように、他の物質（特に、ポリぺプチド）
に結合され得る。哺乳動物サイトカインレセプターおよびフラグメントは、種々
の免疫原（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、ウシ血清アルブミン、
破傷風トキソイドなど）に融合されるか、または共有結合的に連結され得る。ポ
リクローナル抗血清を調製する方法の記載については、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇ
ｙ、Ｈｏｅｂｅｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ、ＨａｒｐｅｒおよびＲ
ｏｗ、１９６９；Ｌａｎｄｓｔｅｉｎｅｒ（１９６２）Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ
ｏｆ Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ、Ｄｏｖｅｒ Ｐｕｂｌ
ｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；およびＷｉｌｌｉａｍｓら（１９６７）
Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ、第１巻 Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；（こ
れらは各々、本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。代表的な方法
は、抗原での動物の超免疫を含む。次いで、この動物の血液を、繰返しの免疫の
すぐ後に回収し、そしてγグロブリンを単離する。

【００９８】 いくつかの例において、種々の哺乳動物宿主（例えば、マウス、齧歯類、霊長
類、ヒトなど）からモノクローナル抗体を調製することが望ましい。このような
モノクローナル抗体を調製するための技術の記載は、例えば、Ｓｔｉｔｅｓら（
編）Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第４版）
、Ｌａｎｇｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｌｏｓ Ａｌｔｏ
ｓ、ＣＡおよびそこに引用される参考文献；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９
８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、ＣＳ
Ｈ Ｐｒｅｓｓ；Ｇｏｄｉｎｇ（１９８６）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂ
ｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（第２版）Ａｃ
ａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；および特に、Ｋｏｈｌｅｒおよ
びＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７（これ
は、モノクローナル抗体を作製する１つの方法を議論する）において、見出され
得る。これらの参考文献のそれぞれは、本明細書中に参考として援用される。簡
潔にまとめると、この方法は、免疫原を動物に注射する工程を包含する。次いで
、この動物を屠殺し、そして細胞をその脾臓から採取し、次いで、この細胞を骨
髄腫細胞と融合する。結果は、ハイブリッド細胞すなわち「ハイブリドーマ」で
あり、これはインビトロで増殖（ｒｅｐｒｏｄｕｃｅ）させることが可能である
。次いで、このハイブリドーマの集団をスクリーニングして、個々のクローンを
単離し、このクローンの各々は、この免疫原に対する単一の抗体種を分泌する。
この様式において、得られる個々の抗体種は、この免疫動物由来の不死化および
クローン化された単一Ｂ細胞の産物であり、これは、免疫原性物質上の認識され
る特異的部位に応答して作製される。

【００９９】 他の適切な技術としては、抗原性ポリぺプチドあるいはファージベクターまた
は同様のベクターにおける抗体のライブラリーの選択への、インビトロでのリン
パ球の曝露を含む。Ｈｕｓｅら（１９８９）「Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａ
Ｌａｒｇｅ Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ ｔｈｅ
Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｒｅｐｅｒｔｏｒｉｅ ｉｎ Ｐｈａｒｇｅ
Ｌａｍｂｄａ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１；およびＷａｒ
ｄら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６（これらのそれぞれは
、本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。本発明のポリぺプチドお
よび抗体は、改変を伴うかまたは伴わないで使用され得、これにはキメラ抗体ま
たはヒト化抗体を含む。しばしば、ポリぺプチドおよび抗体は、共有結合的にま
たは非共有結合的にのいずれかで、検出可能なシグナルを提供する物質を結合す
ることによって標識される。広範な種々の標識および結合体化技術が公知であり
、そして科学文献および特許文献の両方において、広範に報告される。適切な標
識としては、放射性核種、酵素、基質、補因子、インヒビター、蛍光部分、化学
発光部分、磁性粒子などが挙げられる。このような標識の使用を教示する特許と
しては、米国特許第３，８１７，８３７号；同第３，８５０，７５２号；同第３
，９３９，３５０号；同第３，９９６，３４５号；同第４，２７７，４３７号；
同第４，２７５，１４９号；および同第４，３６６，２４１号が挙げられる。ま
た、組換え免疫グロブリンまたはキメラ免疫グロブリンが生成され得るか（Ｃａ
ｂｉｌｌｙ、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）；またはトランス
ジェニックマウスにおいて作製され得る（Ｍｅｎｄｅｚら（１９９７）Ｎａｔｕ
ｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６−１５６を参照のこと）。これらの参考
文献は、本明細書中に参考として援用される。

【０１００】 本発明の抗体はまた、ＤＣＲＳ２タンパク質またはポリペプチドの単離におけ
る、アフィニティークロマトグラフィーのために使用され得る。抗体が固体支持
体（例えば、アガロース、Ｓｅｐｈａｄｅｘなどのような粒子）に連結されてい
るカラムを調製し得、ここで、細胞溶解物を、カラムに通過させ得、カラムを洗
浄し、続いて、漸増濃度の穏やかな変性剤で洗浄し、これにより、精製タンパク
質を放出させる。あるいは、このタンパク質を使用して、抗体を精製し得る。適
切な交差吸収または枯渇が適用され得る。

【０１０１】 抗体はまた、特定の発現産物について、発現ライブラリーをスクリーニングす
るために使用され得る。通常、このような手順において使用される抗体は、抗体
結合によって抗原の存在の容易な検出を可能にする部分で標識される。

【０１０２】 サイトカインレセプターに対して惹起される抗体はまた、抗イディオタイプ抗
体を惹起するために使用される。これらは、タンパク質の発現、またはそのタン
パク質を発現する細胞に関連する、種々の免疫学的状態を検出または診断するの
に有用である。これらはまた、リガンドのアゴニストまたはアンタゴニストとし
て有用であり、天然に存在するリガンドについての、競合的なインヒビターまた
は置換体であり得る。

【０１０３】 規定された免疫原（例えば、配列番号２のアミノ酸配列からなる免疫原）に対
して生成された抗体と特異的に結合するか、またはこのような抗体と特異的に免
疫反応性であるサイトカインレセプタータンパク質は、代表的に、イムノアッセ
イにおいて測定される。イムノアッセイは、代表的には、例えば、配列番号２の
タンパク質に対して惹起されたポリクローナル抗血清を使用する。この抗血清は
、他のサイトカインレセプターファミリーメンバー（例えば、ＩＬ−１１レセプ
ターサブユニットα、ＩＬ−６レセプターサブユニットαまたはｐ４０（好まし
くは同じ種由来の））に対して、低い交差反応性を有するように選択され、そし
てこのような交差反応性はいずれも、イムノアッセイで使用する前に免疫吸着法
により除去される。

【０１０４】 イムノアッセイで使用する抗血清を生成するために、配列番号２のタンパク質
を、本明細書に記載されるように単離する。例えば、組換えタンパク質を哺乳動
物細胞株で生成し得る。適切な宿主、例えば、Ｂａｌｂ／ｃのようなマウスの同
系交配系統を、代表的には標準的アジュバント（例えば、フロイントアジュバン
ト）および標準的マウス免疫プロトコル（ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、前出）
を使用して、選択されたタンパク質で免疫する。あるいは、本明細書中に開示さ
れた配列に由来し、そしてキャリアタンパク質に結合体化させた合成ペプチドを
免疫原に使用し得る。ポリクローナル血清を収集し、イムノアッセイ（例えば、
固体支持体上に固定した免疫原による固相イムノアッセイ）において免疫原タン
パク質に対して力価測定する。力価が１０⁴以上のポリクローナル抗血清が選択
され、他のサイトカインレセプターファミリーメンバー（例えば、ＩＬ−１１レ
セプターサブユニットαおよび／またはｐ４０）に対する交差反応性について、
ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、前述、５７０−５７３頁に記載されるような競合
結合イムノアッセイを使用して試験される。好ましくは、少なくとも２つのサイ
トカインレセプターファミリーメンバーが、この測定において使用される。これ
らのサイトカインレセプターファミリーメンバーは、組換えタンパク質として生
成され得、そして本明細書に記載される標準的分子生物学およびタンパク質化学
技術を使用して単離され得る。

【０１０５】 競合結合形式のイムノアッセイが、交差反応性測定に使用され得る。例えば、
配列番号２のタンパク質を、固体支持体に固定し得る。このアッセイに添加され
るタンパク質は、固定された抗原に対する抗血清の結合と競合する。固定された
タンパク質に対する抗血清の結合と競合する上記タンパク質の能力を、このタン
パク質（例えば、ＩＬ−１１レセプターサブユニットαまたはｐ４０）の能力と
比較する。上記タンパク質に対するパーセント交差反応性を、標準的算出法を使
用して算出する。上記に列挙した各タンパク質との交差反応性が１０％より低い
抗血清を選択およびプールする。次いで、上記に列挙したタンパク質との免疫吸
着法により、交差反応抗体をプール抗血清から取り出す。

【０１０６】 次いで、免疫吸着およびプールした抗血清を、上記のように、競合結合イムノ
アッセイで使用し、第２のタンパク質を免疫原タンパク質（例えば、配列番号２
のＤＣＲＳ２様タンパク質）と比較する。この比較を行うため、この２つのタン
パク質を広範囲の濃度でそれぞれアッセイし、そして固定されたタンパク質への
抗血清の結合を５０％阻害するのに必要な各タンパク質量を測定する。必要とさ
れる第２のタンパク質量が、必要とされる分泌タンパク質のタンパク質量の２倍
より少ない場合、第２のタンパク質は、免疫原に対して生成した抗体と特異的に
結合すると言われる。

【０１０７】 これらのサイトカインレセプタータンパク質は、これまで同定された少なくと
も６個の遺伝子を含む相同性タンパク質のファミリーのメンバーであることが理
解される。ＤＣＲＳ２のような特定の遺伝子生成物に対して、この用語は、本明
細書に開示したアミノ酸配列だけではなく、対立遺伝子、非対立遺伝子または種
改変体である他のタンパク質をもいう。また、この用語は、単一の部位変異のよ
うな従来の組換え技術を使用する意図的な変異によるか、またはそれぞれのタン
パク質をコードするＤＮＡの短い部分を切除することによるか、または新規アミ
ノ酸の置換するかもしくは新規アミノ酸の付加により導入された非天然の変異を
含むことが理解される。代表的にはこのような重大でない改変は、本来の分子の
免疫同一性および／またはその生物学的活性を実質的に維持する。従って、これ
らの改変は、示された天然に存在するＤＣＲＳ２タンパク質と特異的に免疫反応
性であるタンパク質を含む。タンパク質を適切な細胞株で発現させ、そして例え
ばトランスフェクトされたリンパ球に及ぼす適切な効果を測定することにより、
改変タンパク質の生物学的特性が決定され得る。重大でないと考えられる特定の
タンパク質の改変には、サイトカインレセプターファミリーについて上で総括し
て記載したように、類似した化学特性を有するアミノ酸の保存的置換が含まれる
。タンパク質をサイトカインレセプタータンパク質と最適にアラインメントさせ
、そして本明細書に記載した従来のイムノアッセイを使用して免疫同一性を測定
することにより、本発明のタンパク質組成物を決定し得る。

【０１０８】 （ＶＩＩ．キットおよび定量） 本発明のサイトカインレセプター様分子の天然に存在する形態および組換え形
態は共に、キットおよびアッセイ法において特に有用である。例えば、これらの
方法はまた、結合活性（例えば、これらのタンパク質に対するリガンド）につい
てのスクリーニングに適用される。最近、いくつかの自動化アッセイ法が開発さ
れており、１年当たり何万もの化合物のスクリーニングを可能にしている。例え
ば、ＢＩＯＭＥＫ自動化ワークステーション、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｉｎｓｔｒｕｍ
ｅｎｔｓ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、およびＦｏｄｏｒら、
（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：７６７−７７３（これらは、参考として
本明細書中に援用される）を参照のこと。後者は、固体基質上に合成された複数
の規定されたポリマーによる結合を試験する手段を記載している。リガンドまた
はアゴニスト／アンタゴニストの相同性タンパク質のスクリーニングに適したア
ッセイの開発は、本発明により提供されるように、大量の精製可溶性サイトカイ
ンレセプターが活性状態で入手可能なことにより、非常に容易にされ得る。

【０１０９】 前述のリガンドスクリーニング技術での使用のために、精製ＤＣＲＳ２はプレ
ート上に直接コートされ得る。しかし、これらのタンパク質に対する非中和抗体
は、例えば、診断的な使用において、有用な固相上に各レセプターを固定化する
捕獲抗体として使用され得る。

【０１１０】 本発明はまた、様々な診断用キットにおける、ＤＣＲＳ２、そのフラグメント
、ペプチド、およびそれらの融合産物の使用、ならびにタンパク質またはそのリ
ガンドの存在を検出する方法も意図される。あるいは、またはさらに、この分子
に対する抗体が、キットおよび方法に組み込まれ得る。代表的には、キットは、
ＤＣＲＳ２ペプチド、または遺伝子セグメント、あるいは一方もしくは他方を認
識する試薬のいずれかを含む区画を有する。代表的には、ペプチドの場合、認識
試薬はレセプターまたは抗体であり、あるいは遺伝子セグメントの場合には、通
常、ハイブリダイゼーションプローブである。

【０１１１】 サンプル中のＤＣＲＳ２の濃度測定に好ましいキットは、代表的には、ＤＣＲ
Ｓ２に対する既知の結合親和性を有する標識化化合物（例えば、リガンドまたは
抗体）、ポジティブコントロールとしてＤＣＲＳ２の供給源（天然に存在する、
または組換え体）、および遊離の標識化合物（例えば、試験サンプル中のＤＣＲ
Ｓ２を固定化する固相）から結合を分離する手段、を含む。試薬を含む区画、お
よび説明書が、通常提供される。キットを含む適切な核酸またはタンパク質もま
た、提供される。

【０１１２】 哺乳動物ＤＣＲＳ２またはペプチドフラグメントに特異的な抗原結合フラグメ
ントあるいはレセプターフラグメントを含む抗体は、上昇したレベルのリガンド
および／またはそのフラグメントの存在を検出するための診断的な適用に有用で
ある。診断アッセイは、均質性（遊離試薬と抗体−抗原複合体との間の分離工程
を含まない）または異質性（分離工程を含む）であり得る。種々の市販のアッセ
イ（例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合イムノソルベント検定
法（ＥＬＩＳＡ）、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、酵素増幅イムノアッセイ技
術（ＥＭＩＴ）、基質−標識化蛍光イムノアッセイ（ＳＬＦＩＡ）など）が存在
する。例えば、標識され、かつサイトカインレセプターまたはその特定のフラグ
メントに対する抗体を認識する二次抗体を使用することにより、非標識化抗体が
使用され得る。これらのアッセイもまた、文献で広範囲に議論されている。例え
ば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ＣＳＨ．、ならびにＣｏｌｉｇａｎ（編、１
９９１および定期的な補遺）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｉ
ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこ
と。

【０１１３】 抗イディオタイプの抗体は、サイトカインレセプターのアゴニストまたはアン
タゴニストとして作用する類似の用途を有し得る。これらは、適切な状況下で治
療用試薬として有用であるようである。

【０１１４】 しばしば、診断アッセイのための試薬は、アッセイの感受性を最適化するため
に、キットに補充される。本発明について、アッセイの性質、プロトコル、およ
び標識に依存して、標識化または非標識化抗体あるいは標識化リガンドのいずれ
かが提供される。これは、通常、緩衝剤、安定化剤、酵素の基質などのようなシ
グナルの産生に必要な材料などの他の添加物と組み合わされる。好ましくは、キ
ットはまた、適切な使用および使用後の含有物の廃棄についての説明書を包含す
る。代表的には、キットは、有用な各試薬の区画を有し、そして適切な使用およ
び試薬の廃棄についての説明書を含む。望ましくは、試薬は乾燥した凍結乾燥粉
末として提供され、この試薬は、アッセイを行うのに適した濃度を有する水性媒
体中で再構成され得る。

【０１１５】 診断アッセイの上記の構成成分は、改変を行うことなく使用され得るか、また
は種々の方法において改変され得る。例えば、標識は、検出可能なシグナルを直
接または間接的に提供する部分を共有結合または非共有結合することによって達
成され得る。多くのこれらのアッセイにおいて、試験化合物、サイトカインレセ
プター、またはそれに対する抗体は、直接または間接のいずれかで標識され得る
。直接標識についての可能性は、標識基：放射性標識（例えば、¹²⁵Ｉ）、酵素
（米国特許第３，６４５，０９０号）（例えば、ペルオキシダーゼおよびアルカ
リホスファターゼ、ならびに蛍光標識（米国特許第３，９４０，４７５号）（こ
れは、蛍光強度における変化、波長シフト、または蛍光偏光をモニターし得る）
を含む。これらの特許の両方は、本明細書中に参考として援用される。間接標識
についての可能性としては、１つの構成成分のビオチン化、続いて上記の標識基
の一つに結合したアビジンへの結合が挙げられる。

【０１１６】 遊離のリガンドから結合したもの、あるいは遊離の試験化合物から結合したも
のを分離する多くの方法もまた存在する。サイトカインレセプターは、種々のマ
トリクスに固定され得、続いて洗浄され得る。適切なマトリックスは、ＥＬＩＳ
Ａプレート、フィルター、およびビーズのようなプラスチックを含む。レセプタ
ーをマトリックスに固定する方法としては、プラスチックへの直接接着、捕捉抗
体の使用、化学結合、およびビオチン−アビジンが挙げられるがこれらに限定さ
れない。このアプローチの最後の工程は、いくつかの方法（これは、例えばポリ
エチレングリコールのような有機溶媒または硫酸アンモニウムのような塩を利用
する方法を含む）のいずれかによる抗体／抗原複合体の沈殿を含む。他の適切な
分離技術は、Ｒａｔｔｌｅら（１９８４）Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．３０（９）１４
５７−１４６１に記載されるフルオレセイン抗体磁化粒子方法、および米国特許
第４，６５９，６７８号に記載されるような二重抗体磁性粒子分離（これらの各
々は、本明細書において参考として援用される）を含むが、これに限定されない
。

【０１１７】 種々の標識へ、タンパク質またはフラグメントを連結するための方法は，文献
において広範に報告されており、そしてここでは詳細な議論を必要としない。こ
れらの技術の多くは，ペプチド結合を形成するためのカルボジイミドまたは活性
エステルのいずれかの使用を介した活性化カルボキシル基の使用、連結のために
、活性化ハロゲン（例えば、クロロアセチル）または活性化オレフィン（例えば
、マレイミド）を用いたメルカプト基の反応によるチオエーテルの形成などを含
む。融合タンパク質もまた、これらの適用において用途が見出される。

【０１１８】 本発明の別の診断的局面は、サイトカインレセプターの配列から採取したオリ
ゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチド配列の使用を含む。これらの配列は、免
疫学的障害を有すると疑われる患者におけるそれぞれのサイトカインレセプター
のレベルを検出するためのプローブとして使用され得る。ＲＮＡおよびＤＮＡの
両方のヌクレオチド配列の調製、配列の標識、および好ましいサイズの配列は、
文献において、充分な記載および議論がなされている（ｒｅｃｅｉｖｅ）。通常
、オリゴヌクレオチドプローブは、少なくとも約１４ヌクレオチド、通常少なく
とも約１８ヌクレオチドを有するべきであり、そしてポリヌクレオチドプローブ
は数キロベースにまで及び得る。種々の標識、最も一般的には、放射性核種、特
に³²Ｐが使用され得る。しかし、他の技術もまた、使用され得る。例えば、ポリ
ヌクレオチドへの導入のためのビオチン改変ヌクレオチドの使用である。次いで
、ビオチンは、アビジンまたは抗体への結合のための部位として作用し、これは
、広範で種々の標識（例えば、放射性核種、蛍光剤、酵素など）で標識され得る
。あるいは、特定の二重鎖（ＤＮＡ二重鎖、ＲＮＡ二重鎖、ＤＮＡ−ＲＮＡハイ
ブリッド二重鎖、またはＤＮＡ−タンパク質二重鎖を含む）を認識し得る抗体が
使用され得る。次いで抗体は、標識され得、そして二重鎖が表面に結合し、その
結果、表面上の二重鎖の形成に際して二重鎖に結合した抗体の存在が検出され得
るアッセイが、行われる。新規のアンチセンスＲＮＡに対するプローブの使用は
、従来の技術（例えば、核酸ハイブリダイゼーション、プラスおよびマイナスス
クリーニング、組換えプロービング、ハイブリッド遊離翻訳（ｈｙｂｒｉｄ ｒ
ｅｌｅａｓｅｄ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ）（ＨＲＴ）、およびハイブリッド拘
束翻訳（ｈｙｂｒｉｄ ａｒｒｅｓｔｅｄ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ）（ＨＡＲ
Ｔ））において行われ得る。これはまた、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）のよ
うな増幅技術を含む。

【０１１９】 他のマーカーの定性的存在または定量的存在についてもまた試験する診断キッ
トもまた、意図される。診断または予後は、マーカーとして使用される多重指標
の組合せに依存し得る。従って、キットはマーカーの組み合わせについて試験し
得る。例えば、Ｖｉａｌｌｅｔら、（１９８９）Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｇｒ
ｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｓ．１；８９−９７を参照のこと。

【０１２０】 （ＶＩＩＩ．治療的有用性） 本発明は、有意な治療的価値を有する試薬を提供する。例えば、Ｌｅｖｉｔｚ
ｋｉ（１９９６）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８：２３９−２４
４を参照のこと。サイトカインレセプター（天然に存在するかまたは組換え）、
そのフラグメント、ムテインレセプター、および抗体、ならびにこのレセプター
または抗体に対する結合親和性を有するとして同定された化合物は、このレセプ
ターまたはこれらのリガンドの異常な発現を示す状態の処置において有用である
はずである。このような異常性は、代表的には、免疫障害によって明らかにされ
る。従って、本発明は、リガンドへの応答の異常な発現または異常な誘発と関連
する、種々の疾患または障害において治療的価値を提供するはずである。例えば
、ＩＬ−１リガンドは、形態発生（例えば、背腹極性決定および免疫応答、特に
初期の生得性応答）に関与することが示唆されている。例えば、Ｓｕｎら（１９
９１）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９６：２４７−２５４；およびＨｕｌｔ
ｍａｒｋ（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ ３６７：１１６−１１７を参照のこと。

【０１２１】 組換えサイトカインレセプター、ムテイン、アゴニスト、またはそれらに対す
るアンタゴニスト抗体、あるいは抗体は精製され、次いで患者に投与され得る。
これらの試薬は、さらなる活性成分とともに治療的使用のために、例えば、従来
の薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤中で、生理的に無害な安定剤および
賦形剤とともに合わされ得る。これらの組み合わせは、例えば、濾過により滅菌
され得、そして投薬バイアル中における凍結乾燥によるような投薬形態または安
定化した水性調製物中における保存物へと配置される。本発明はまた、相補的結
合ではない抗体またはその結合フラグメントの使用を意図する。

【０１２２】 サイトカインレセプターまたはそのフラグメントを用いたリガンドスクリーニ
ングを行って、レセプターに対する結合親和性を有する分子を同定し得る。次い
で、続く生物学的アッセイを利用して推定リガンドが競合的な結合（これは、内
因性の刺激活性をブロックし得る）を提供し得るか否かを決定し得る。レセプタ
ーフラグメントは、リガンドの活性をブロックするという点で、ブロッカーまた
はアンタゴニストとして使用され得る。同様に、内因性刺激活性を有する化合物
は、レセプターを活性化し得、従って、この化合物は、リガンドの活性を刺激（
例えば、シグナル伝達の誘発）するという点で、アゴニストである。本発明はさ
らに、サイトカインレセプターに対する抗体のアンタゴニストとしての治療的用
途を意図する。

【０１２３】 有効な治療に必要な試薬の量は、多くの異なる因子に依存し、これには、投与
手段、標的部位、試薬の生理学的な寿命、薬理学的な寿命、患者の生理学的状態
、および投与される他の医薬品が含まれる。従って、処置投薬量を、力価測定し
て、安全性および効力を最適化するべきである。代表的には、インビトロで使用
される投薬量によって、これらの試薬のインサイチュでの投与のために有用な量
における、有用なガイダンスを提供し得る。特定の障害の処置についての有効用
量の動物試験は、ヒトの投薬量の予測的な指標をさらに提供する。種々の考慮事
項が以下に記載されている。例えば、Ｇｉｌｍａｎら（編）（１９９０）Ｇｏｏ
ｄｍａｎおよびＧｉｌｍａｎ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａ
ｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第８版、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅ
ｓｓ；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉ
ｅｎｃｅｓ、第１７版（１９９０）、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．
、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎ。これらは、各々が本明細書において参考として本明
細書によって援用される。投与方法は、そこに議論されており、そして以下、例
えば、経口、静脈内、腹腔内、または筋肉内投与、経皮拡散などである。薬学的
に受容可能なキャリアには、水、生理食塩水、緩衝液、および、例えば、Ｍｅｒ
ｃｋ Ｉｎｄｅｘ，Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．Ｒａｈｗａｙ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅ
ｙに記載された他の化合物が挙げられる。推定リガンドとそのレセプターとの間
の予想される高親和性結合、すなわちターンオーバー数に起因して、まず、低用
量のこれらの試薬が、有効であることが予想される。そして、シグナル伝達経路
により、極めて少量のリガンドが効果を有し得ることが示唆される。従って、投
薬量範囲は、通常、１ｍＭ濃度よりも低い量であり、代表的には、約１０μＭ濃
度より低く、通常、約１００ｎＭより低く、好ましくは約１０ｐＭ（ピコモル濃
度）より低く、そして最も好ましくは約１ｆＭ（フェムトモル濃度）より低い量
で、適切なキャリアと共に存在することが予想される。徐放性処方物または徐放
性装置が、しばしば、連続投与に利用される。

【０１２４】 サイトカインレセプター、そのフラグメント、および抗体またはそのフラグメ
ント、アンタゴニストおよびアゴニストが、処置される宿主に直接投与され得る
か、または化合物のサイズに依存して、オボアルブミンまたは血清アルブミンな
どのキャリアタンパク質にそれらを結合させた後、投与されるのが望ましくあり
得る。治療用処方物を、従来の多くの投薬処方において投与し得る。活性成分を
単独投与することは可能であるが、薬学的処方物として活性成分を提示させるの
が好ましい。処方物は、上記に規定したような少なくとも一種の活性成分を、一
種以上のその受容可能なキャリアと共に含む。各キャリアは、他の成分と適合性
があり、患者にとって有害ではないという意味で、薬学的および生理学的の両方
で受容可能でなければならない。処方物は、経口、直腸内、鼻腔内または非経口
的（皮下、筋肉内、静脈内および皮内を含む）投与に適したものを含む。処方物
は、都合良く、単位投薬量形態で存在し得、そして薬学分野において周知の方法
により調製され得る。例えば、Ｇｉｌｍａｎら（編）（１９９０年）Ｇｏｏｄｍ
ａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａ
ｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第８版，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅ
ｓｓ；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉ
ｅｎｃｅｓ，第１７版（１９９０），Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．
，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎ．；Ａｖｉｓら（編、１９９３年）Ｐｈａｒｍａｃｅ
ｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃ
ａｔｉｏｎｓ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編、１９９０年）
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ
Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；およびＬｉｅｂｅｒｍａｎら（編、１９９０年）Ｐｈａｒ
ｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓ
ｔｅｍｓ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹを参照のこと。本発明の治療は、他の治療的薬剤
（特に、他のサイトカインレセプターファミリーのメンバーのアゴニストまたは
アンタゴニスト）と組み合わせられ得るか、またはそれらに付随して使用され得
る。

【０１２５】 （ＩＸ．スクリーニング） ＤＣＲＳ２またはそのフラグメントを使用する薬物スクリーニングは、レセプ
ターサブユニットへの結合親和性を有する化合物を同定するために実施され得、
これは会合した成分の単離する工程を包含する。次いで、その後の生物学的アッ
セイを利用して、化合物が本来の刺激活性を有し、それ故リガンドの活性をブロ
ックするという点で、ブロッカーまたはアンタゴニストであるか否かを決定する
。同様に、固有の刺激活性を有する化合物は、レセプターを活性化し得、故にサ
イトカインリガンドの活性を刺激するという点で、アゴニストである。本発明は
、さらに、サイトカインのアゴニストまたはアンタゴニストとしてのレセプター
に対する抗体の治療用途を意図する。

【０１２６】 同様に、複数のタンパク質を含む複合体が、複合体を認識し得る、リガンドま
たは試薬をスクリーニングするために使用され得る。多くのサイトカインレセプ
ターは、少なくとも２つのサブユニットを含み、それは同一であり得るか、また
は別個のものであり得る。あるいは、膜貫通レセプターは、別の溶解性タンパク
質（例えば、第二のレセプターサブユニットとして機能する）に関連したサイト
カイン様リガンドを含む複合体に結合し得る。

【０１２７】 薬物スクリーニングの１つの方法は、別のサイトカインレセプターサブユニッ
トと組み合わせて、ＤＣＲＳ２を発現する組換えＤＮＡ分子で安定に形質転換さ
れる真核生物または原核生物の宿主細胞を利用する。他の機能的レセプターから
分離されたレセプターを発現する細胞を単離し得る。このような細胞は、生存可
能なまたは固定された形態のいずれかで、標準的な抗原／抗原またはリガンド/
レセプター結合アッセイのために使用され得る。Ｐａｒｃｅら（１９８９）Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ ２４６：２４３−２４７；およびＯｗｉｃｋｉら（１９９０）Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：４００７−４０１１（こ
れらは、細胞性応答を検出するための感度の高い方法を記載する）もまた参照の
こと。競合アッセイが、特に有用であり、ここで、細胞（推定のリガンドの供給
源）が、リガンドに対する既知の結合親和性を有する標識化レセプターまたは標
識化抗体（例えば、¹²⁵Ｉ−抗体）および結合組成物に対する結合親和性が測定
される試験サンプルと接触されそしてインキュベートされる。次いで、結合した
標識結合組成物および遊離標識結合組成物を分離して、リガンド結合の程度を評
価する。結合した試験化合物の量は、公知の供給源に対する標識化レセプター結
合の量に反比例する。多くの技法が、リガンド結合の程度を評価するために、遊
離のリガンドから結合したものを分離するために使用され得る。この分離工程は
、代表的には、フィルターへの接着その後の洗浄、プラスチックへの接着その後
の洗浄、または細胞膜の遠心分離のような手順を包含し得る。生細胞もまた、サ
イトカイン媒介機能、例えば第２メッセンジャーレベル、すなわちＣａ⁺⁺；細胞
増殖；イノシトールリン酸プール変換（ｐｏｏｌ ｃｈａｎｇｅ）；などに対す
る薬物の効果についてスクリーニングするために使用され得る。いくつかの検出
方法は、分離工程の削除を可能にする（例えば、近接感度検出システム）。カル
シウム感受性色素は、蛍光定量器（ｆｌｕｏｒｉｍｅｔｅｒ）または蛍光細胞選
別装置を用いて、Ｃａ⁺⁺レベルを検出するのに有用である。

【０１２８】 （Ｘ．リガンド） 本明細書におけるＤＣＲＳ２の説明は、上記のように、リガンドを同定する手
段を提供する。このようなリガンドは、適度に高い親和性を有するそれぞれのレ
セプターと特異的に結合するはずである。種々の構築物が、利用可能となり、こ
れによっていずれのレセプターの標識方法によってもそのリガンドを検出し得る
。例えば、サイトカインレセプターの直接標識、二次標識のためのマーカー（例
えば、ＦＬＡＧまたは他のエピトープタグ等）を融合させることにより、レセプ
ターの検出を可能にする。これは、生化学的精製のための親和性方法、または発
現クローニングアプローチでの標識化もしくは選択のように、組織学的であり得
る。ツーハイブリッド選択系もまた、利用可能なサイトカインレセプター配列を
有する適切な構築物の作製に応用され得る。例えば、ＦｉｅｌｄｓおよびＳｏｎ
ｇ（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４０：２４５−２４６を参照のこと。

【０１２９】 本発明の広い範囲は、以下の実施例を参照することにより最も良く理解される
が、これらは発明を特定の実施形態に限定することを意図するものではない。

【０１３０】 （実施例） （Ｉ．一般的な方法） いくつかの標準的な方法を、記述または参照する（例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ
ら、（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ；Ｓａｍｂｒｏｏ
ｋら、（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、（第２版）、第１〜３巻、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；
またはＡｕｓｕｂｅｌら、（１９８７および補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏ
ｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌ
ｅｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。タンパク質の精製のための方法としては、硫酸アン
モニウム沈殿、カラムクロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離、結晶化などの
ような方法が挙げられる。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら、（１９８７および周期的
な補遺）；Ｃｏｌｉｇａｎら、（編１９９６年）および定期的な補遺、Ｃｕｒｒ
ｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｇｒｅ
ｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ（１９９０）「Ｇ
ｕｉｄｅ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ」Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第１８２巻およびこのシリーズの他の巻；なら
びにタンパク質精製製品の使用の際の製造業社の文献（例えば、Ｐｈａｒｍａｃ
ｉａ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．、またはＢｉｏ−Ｒａｄ、Ｒｉｃｈｍｏ
ｎｄ、ＣＡ．）を参照のこと。組換え技術と組み合わせて、適切なセグメント（
例えば、ＦＬＡＧ配列またはプロテアーゼ除去配列を介して融合され得る等価物
）への融合を可能にする。例えば、Ｈｏｃｈｕｌｉ（１９９０）「Ｐｕｒｉｆｉ
ｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｉｔｈ
Ｍｅｔａｌ Ｃｈｅｌａｔｅ Ａｂｓｏｒｂｅｎｔ」 Ｓｅｔｌｏｗ（編）Ｇｅ
ｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ａｎｄ Ｍｅｔｈ
ｏｄｓ １２：８７−９８、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．；およびＣｒ
ｏｗｅら、（１９９２）ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓ：Ｔｈｅ Ｈｉｇｈ Ｌｅｖｅｌ
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ＆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓ
ｙｓｔｅｍ ＱＵＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．、Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡを参照の
こと。

【０１３１】 コンピューター配列分析を、例えば、ＧＣＧ（Ｕ．Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）およ
びＧｅｎＢａｎｋ供給源からのプログラムを含む、入手可能なソフトウェアプロ
グラムを用いて実行する。公の配列データベースはまた、例えば、ＧｅｎＢａｎ
ｋなどからのデータベースを使用した。

【０１３２】 ＩＬ−１０レセプターに対して適用可能な多くの技術は、例えば、ＵＳＳＮ０
８／１１０，６８３号（これは、本明細書中に参考として援用される）（ＩＬ−
１０レセプター）に記述されるようにＤＣＲＳ２に対して適用され得る。

【０１３３】 （ＩＩ．コンピューター分析） サイトカインレセプターに関するヒト配列を、例えば、ＢＬＡＳＴサーバー（
Ａｌｔｓｃｈｕｌら、（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．６：１１９−１
２９）を用いてゲノム配列データベースから同定した。標準的な分析プログラム
を用いて、構造を評価し得る（例えば、ＰＨＤ（ＲｏｓｔおよびＳａｎｄｅｒ（
１９９４）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ １９：５５−７２）およびＤＳＣ（Ｋｉｎｇおよ
びＳｔｅｒｎｂｅｒｇ（１９９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．５：２２９８−２
３１０））。標準的な比較ソフトウェアとしては、例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら
、（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０；Ｗａｔｅｒｍａ
ｎ（１９９５）Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ
Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ｍａｐｓ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅｓ
Ｃｈａｐｍａｎ ＆ Ｈａｌｌ；ＬａｎｄｅｒおよびＷａｔｅｒｍａｎ（編、１
９９５）Ｃａｌｃｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｓｅｃｒｅｔｓ ｏｆ Ｌｉｆｅ：
Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃａｌ Ｓｃｉ
ｅｎｃｅｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ａｃａｄｅｍｙ Ｐｒｅｓｓ；ならびにＳｐｅｅｄおよびＷａｔｅｒｍａｎ（編
、１９９６）Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｍａｐｐｉｎｇ ａｎｄ ＤＮＡ Ｓｅｑｕｅｎ
ｃｉｎｇ（ＩＭＡ Ｖｏｌｕｍｅｓ ｉｎ Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ ａｎｄ
Ｉｔｓ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、第８１巻）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａ
ｇが挙げられる。

【０１３４】 （ＩＩＩ．全長ＤＣＲＳ２ ｃＤＮＡのクローニング；染色体の位置決定） ＤＣＲＳ２配列由来のＰＣＲプライマーを使用して、ヒトｃＤＮＡライブラリ
ーを調査する。配列は、例えば、表１（好ましくは、配列の末端に隣接した配列
）から得られ得る。霊長類、げっ歯類、または他の種のＤＣＲＳ２についての全
長ｃＤＮＡを、例えば、λｇｔ１０ファージのＤＮＡハイブリダイゼーションス
クリーニングによってクローン化する。ＰＣＲ反応を、適切な条件下でＴ．ａｑ
ｕａｔｉｃｕｓ Ｔａｑｐｌｕｓ ＤＮＡポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ
）を用いて行う。

【０１３５】 染色体スプレッドを調製する。インサイチュハイブリダイゼーションを、７２
時間培養したフィトヘムアグルチニン刺激したヒトリンパ球から得た染色体調製
物に対して実行する。良質のハイブリダイゼーション後の染色体バンド形成を確
実にするために、培養（６０μｇ／ｍｌの培地）の最後の７時間、５−ブロモデ
オキシウリジンを添加した。

【０１３６】 プライマーの助けを用いて増幅されたＰＣＲフラグメントを、適切なベクター
にクローン化する。このベクターを³Ｈでのニックトランスレーションによって
標識する。放射性標識プローブを、Ｍａｔｔｅｉら（１９８５）Ｈｕｍ．Ｇｅｎ
ｅｔ．６９：３２７−３３１に記載のように、最終濃度２００ｎｇ／ｍｌのハイ
ブリダイゼーション溶液で、中期スプレッドにハイブリダイズさせる。

【０１３７】 核トラックエマルジョン（ＫＯＤＡＫ ＮＴＢ₂）でコーティングした後、ス
ライドを露出させる。バンド形成手順の間の銀粒の任意のスリッピングを避ける
ために、染色体スプレッドを緩衝化ギムザ溶液でまず染色し、そして中期を写真
撮影する。次いで、蛍光色素−光分解−ギムザ（ＦＰＧ）法によってＲバンド形
成を行い、そして中期を再度写真撮影し、その後分析する。

【０１３８】 同様の適切な方法を、他の種に対して用いる。

【０１３９】 （ＩＶ．ＤＣＲＳ２ ｍＲＮＡの位置決定） １レーンあたり約２μｇのポリ（Ａ）⁺ＲＮＡを含む、ヒト複合組織（Ｃａｔ
番号１，２）およびガン細胞株のブロット（Ｃａｔ番号７７５７−１）を、Ｃｌ
ｏｎｔｅｃｈ（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）から購入する。プローブを、例えば
、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｒｅｄｉｐｒｉｍｅ ランダムプライマー標識キット（Ｒ
ＰＮ１６３３）を使用して、［α−³²Ｐ］ｄＡＴＰで放射標識する。プレハイブ
リダイゼーションおよびハイブリダイゼーションを、例えば、０．５Ｍ Ｎａ₂
ＨＰＯ₄、７％ ＳＤＳ、０．５Ｍ ＥＤＴＡ（ｐＨ ８．０）中、６５℃にて
行う。高ストリンジェンシーの洗浄を、最初に２回、２×ＳＳＣ、０．１％ Ｓ
ＤＳで４０分間、続く洗浄を０．１×ＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳで２０分間、６
５℃にて行う。次いで、膜を増感スクリーンの存在下で−７０℃にてＸ線フィル
ム（Ｋｏｄａｋ）に露光した。ｃＤＮＡライブラリーのサザンによるより詳細な
研究を、選択された適切なヒトＤＣＲＳ２クローンを用いて行って、造血細胞の
サブセットまたは他の細胞のサブセットにおけるそれらの発現を調べる。

【０１４０】 あるいは、２つの適切なプライマーを表１から選択する。ＲＴ−ＰＣＲを、メ
ッセージの存在について選択された適切なｍＲＮＡサンプル（例えば、この遺伝
子を発現するサンプル）に対して用いて、ｃＤＮＡを生成する。

【０１４１】 全長クローンを、ＰＣＲシグナルによって前もって選択された適切な組織由来
のｃＤＮＡライブラリーのハイブリダイゼーションによって単離し得る。ノーザ
ンブロットを行い得る。

【０１４２】 ＤＣＲＳ２をコードする遺伝子のメッセージを、適切な技術（例えば、ＰＣＲ
、免疫アッセイ、ハイブリダイゼーションまたは他の技術）によってアッセイす
る。組織および器官のｃＤＮＡの調製物は、例えば、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｍｏｕ
ｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡから入手可能である。天然の発現の供給源の同定は
記載されるように有用である。そして、機能的レセプターサブユニット対形成の
同定は、細胞が、サイトカインリガンドの各々に対する生理学的応答性を生じる
レセプターサブユニットの組み合わせを発現するという予測を可能にする。

【０１４３】 マウス分布のために、例えば、サザン分析が行われ得る：１次増幅したｃＤＮ
Ａライブラリー由来のＤＮＡ（５μｇ）を、適切な制限酵素を用いて消化し、挿
入物を離し、１％アガロースゲルに流し、そしてナイロン膜（Ｓｃｈｌｅｉｃｈ
ｅｒ ａｎｄ Ｓｃｈｕｅｌｌ、Ｋｅｅｎｅ、ＮＨ）に転写した。

【０１４４】 マウスｍＲＮＡの単離のためのサンプルとしては、以下が挙げられ得る：休止
マウス繊維芽細胞性Ｌ細胞株（Ｃ２００）；Ｂｒａｆ：ＥＲ（エストロゲンレセ
プターに対するＢｒａｆ融合物）トランスフェクト細胞（コントロール）（Ｃ２
０１）；Ｔ細胞（ＴＨ１極性化した）（Ｍｅｌ１４明，脾臓由来の、ＩＦＮγお
よび抗ＩＬ−４で７日間極性化したＣＤ４＋細胞；Ｔ２００）；Ｔ細胞（ＴＨ２
極性化した）（Ｍｅｌ１４明，脾臓由来の、ＩＬ−４および抗ＩＦＮγで７日間
極性化したＣＤ４＋細胞；Ｔ２０１）；Ｔ細胞（高度にＴＨ１極性化した）（Ｏ
ｐｅｎｓｈａｗら（１９９５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：１３５７−１３６
７を参照のこと；抗ＣＤ３で２、６、１６時間活性化し、プールした；Ｔ２０２
）；Ｔ細胞（高度にＴＨ２極性化した）（Ｏｐｅｎｓｈａｗら（１９９５）Ｊ．
Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：１３５７−１３６７を参照のこと；抗ＣＤ３で２、６
、１６時間活性化し、プールした；Ｔ２０３）；ＣＤ４４−ＣＤ２５＋プレＴ細
胞（胸腺から分類した）（Ｔ２０４）；ＴＨ１ Ｔ細胞クローン Ｄ１．１（抗
原での最後の刺激後３週間休止する）（Ｔ２０５）；ＴＨ１ Ｔ細胞クローンＤ
１．１（１０μｇ／ｍｌ ＣｏｎＡを１５時間刺激した）（Ｔ２０６）；ＴＨ２
Ｔ細胞クローンＣＤＣ３５（抗原での最後の刺激後３週間休止する）（Ｔ２０
７）；ＴＨ２ Ｔ細胞クローンＣＤＣ３５（１０ μｇ／ｍｌ ＣｏｎＡを１５
時間刺激した）（Ｔ２０８）；Ｍｅｌ１４＋脾臓由来ナイーブＴ細胞（休止）（
Ｔ２０９）；Ｍｅｌ１４＋ Ｔ細胞（ＩＦＮ−γ／ＩＬ−１２／抗ＩＬ−４でＴ
ｈ１を６、１２、２４時間極性化し、プールした）（Ｔ２１０）；Ｍｅｌ１４＋
Ｔ細胞（ＩＬ−４／抗ＩＦＮ−γでＴｈ２を６、１３、２４時間極性化し、プ
ールした）（Ｔ２１１）；未刺激成熟Ｂ細胞白血病細胞株Ａ２０（Ｂ２００）；
未刺激Ｂ細胞株ＣＨ１２（Ｂ２０１）；未刺激脾臓由来大Ｂ細胞（Ｂ２０２）；
全脾臓由来Ｂ細胞（ＬＰＳ活性化した）（Ｂ２０３）；脾臓由来のメトリザマイ
ド富化樹状細胞（休止）（Ｄ２００）；骨髄由来の樹状細胞（休止）（Ｄ２０１
）；ＬＰＳで４時間活性化した単球細胞株ＲＡＷ２６４．７（Ｍ２００）；ＧＭ
およびＭ−ＣＳＦ由来骨髄マクロファージ（Ｍ２０１）；マクロファージ細胞株
Ｊ７７４（休止）（Ｍ２０２）；０．５、１、３、６、１２時間プールしたマク
ロファージ細胞株Ｊ７７４＋ＬＰＳ＋抗ＩＬ１０（Ｍ２０３）；０．５、１、３
、５、１２時間プールしたマクロファージ細胞株Ｊ７７４＋ＬＰＳ＋ＩＬ１０（
Ｍ２０４）；エアロゾルでチャレンジしたマウス肺組織（Ｔｈ２プライマー、７
、１４、２３時間プールしたエアロゾルＯＶＡチャレンジ）（Ｇａｒｌｉｓｉら
、（１９９５）Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎ
ｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ７５：７５−８３を参照のこと；Ｘ２０６）；Ｎｉｐｐ
ｏｓｔｒｏｎｇｕｌｕｓ−感染肺組織（Ｃｏｆｆｍａｎら、（１９８９）Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ ２４５：３０８−３１０を参照のこと；Ｘ２００）；全成人肺（正常
）（Ｏ２００）；全肺ｒａｇ−１（Ｓｃｈｗａｒｔら（１９９３）Ｉｍｍｕｎｏ
ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ４：２４９−２５２を参照のこと；Ｏ２０５）；ＩＬ−
１０ Ｋ．Ｏ．脾臓（Ｋｕｈｎ ら、（１９９１）Ｃｅｌｌ ７５：２６３−２
７４を参照のこと；Ｘ２０１）；全成人脾臓（正常）（Ｏ２０１）；全脾臓ｒａ
ｇ−１（Ｏ２０７）；ＩＬ−１０ Ｋ．Ｏ．パイアー斑（Ｏ２０２）；全パイア
ー斑（正常）（Ｏ２１０）；ＩＬ−１０ Ｋ．Ｏ．腸間膜リンパ節（Ｘ２０３）
；全腸間膜リンパ節（正常）（Ｏ２１１）；ＩＬ−１０ Ｋ．Ｏ．結腸（Ｘ２０
３）；全結腸（正常）（Ｏ２１２）；ＮＯＤ マウス膵臓（Ｍａｋｉｎｏら、（
１９８０）Ｊｉｋｋｅｎ Ｄｏｂｕｔｓｕ ２９：１−１３を参照のこと；Ｘ２
０５）；全胸腺ｒａｇ−１（Ｏ２０８）；全腎臓ｒａｇ−１（０２０９）；全心
臓ｒａｇ−１（Ｏ２０２）；全脳ｒａｇ−１（Ｏ２０３）；全精巣ｒａｇ−１（
Ｏ２０４）；全肝臓ｒａｇ−１（Ｏ２０６）；ラット正常関節組織（Ｏ３００）
；ラット関節炎関節組織（Ｘ３００）。

【０１４５】 ヒトｍＲＮＡの単離のためのサンプルとしては、以下が挙げられ得る：末梢血
単核細胞（単球、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、顆粒球、Ｂ細胞）（休止）（Ｔ１００）；
末梢血単核細胞（抗ＣＤ３で２、６、１２時間活性化し、プールした）（Ｔ１０
１）；Ｔ細胞ＴＨ０クローンＭｏｔ７２（休止）（Ｔ１０２）；Ｔ細胞ＴＨ０ク
ローンＭｏｔ７２（抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３で３、６、１２時間活性化し、プ
ールした）（Ｔ１０３）；Ｔ細胞ＴＨ０クローンＭｏｔ７２（特異的ペプチドで
２、７、１２時間アネルギー処理し、プールした）（Ｔ１０４）；Ｔ細胞ＴＨ１
クローンＨＹ０６（休止）（Ｔ１０７）；Ｔ細胞、ＴＨ１クローンＨＹ０６（抗
ＣＤ２８および抗ＣＤ３で３、６、１２時間活性化し、プールした）（Ｔ１０８
）；Ｔ細胞、ＴＨ１クローンＨＹ０６（特異的ペプチドで２、６、１２時間アネ
ルギー処理し、プールした）（Ｔ１０９）；Ｔ細胞、ＴＨ２クローンＨＹ９３５
（休止）（Ｔ１１０）；Ｔ細胞、ＴＨ２クローンＨＹ９３５（抗ＣＤ２８および
抗ＣＤ３で２、７、１２時間活性化し、プールした）（Ｔ１１１）；Ｔ細胞ＣＤ
４＋ＣＤ４５ＲＯ− Ｔ細胞（抗ＣＤ２８、ＩＬ−４、および抗ＩＦＮ−γにお
いて２７日間極性化し、ＴＨ２極性化し、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８で４時間活
性化した）（Ｔ１１６）；Ｔ細胞腫瘍株ジャーカットおよびＨｕｔ７８（休止）
（Ｔ１１７）；Ｔ細胞クローン、プールしたＡＤ１３０．２、Ｔｃ７８３．１２
、Ｔｃ７８３．１３、Ｔｃ７８３．５８、Ｔｃ７８２．６９（休止）（Ｔ１１８
）；Ｔ細胞ランダムγδＴ細胞クローン（休止）（Ｔ１１９）；脾細胞（休止）
（Ｂ１００）；脾細胞（抗ＣＤ４０およびＩＬ−４で活性化した）（Ｂ１０１）
；Ｂ細胞ＥＢＶ株、プールしたＷＴ４９、ＲＳＢ、ＪＹ、ＣＶＩＲ、７２１．２
２１、ＲＭ３、ＨＳＹ（休止）（Ｂ１０２）；Ｂ細胞株ＪＹ（ＰＭＡおよびイオ
ノマイシンで１、６時間活性化し、プールした）（Ｂ１０３）；プールしたＮＫ
２０クローン（休止）（Ｋ１００）；プールしたＮＫ２０クローン（ＰＭＡおよ
びイオノマイシンで６時間活性化した）（Ｋ１０１）；ＮＫＬクローン（ＬＧＬ
白血病患者の末梢血由来、ＩＬ−２処理した）（Ｋ１０６）；ＮＫ細胞傷害性ク
ローン６４０−Ａ３０−１（休止）（Ｋ１０７）；造血前駆株ＴＦ１（ＰＭＡお
よびイオノマイシンで１、６時間活性化し、プールした）（Ｃ１００）；Ｕ９３
７前単球株（休止）（Ｍ１００）；Ｕ９３７前単球株（ＰＭＡおよびイオノマイ
シンで１、６時間活性化し、プールした）（Ｍ１０１）；溶離した単球（ｅｌｕ
ｔｒｉａｔｅｄ ｍｏｎｏｃｙｔｅ）（ＬＰＳ、ＩＦＮγ、抗ＩＬ−１０で１、
２、６、１２、２４時間活性化し、プールした）（Ｍ１０２）；溶離した単球（
ＬＰＳ、ＩＦＮγ、ＩＬ−１０で１、２、６、１２、２４時間活性化し、プール
した）（Ｍ１０３）；溶離した単球（ＬＰＳ、ＩＦＮγ、抗ＩＬ−１０で４、１
６時間活性化し、プールした）（Ｍ１０６）；溶離した単球（ＬＰＳ、ＩＦＮγ
、ＩＬ−１０で４、１６時間活性化し、プールした）（Ｍ１０７）；溶離した単
球（ＬＰＳで１時間活性化した（Ｍ１０８）；溶離した単球（ＬＰＳで６時間活
性化した）（Ｍ１０９）；ＤＣ ７０％ ＣＤ１ａ＋（ＣＤ３４＋ＧＭ−ＣＳＦ
、ＴＮＦα１２日間由来、休止）（Ｄ１０１）；ＤＣ ７０％ ＣＤ１ａ＋（Ｃ
Ｄ３４＋ ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα１２日間由来、ＰＭＡおよびイオノマイシン
で１時間活性化した）（Ｄ１０２）；ＤＣ ７０％ ＣＤ１ａ＋（ＣＤ３４＋
ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα１２日間由来、ＰＭＡおよびイオノマイシンで６時間活
性化した）（Ｄ１０３）；ＤＣ ９５％ ＣＤ１ａ＋（ＣＤ３４＋ ＧＭ−ＣＳ
Ｆ、ＴＮＦα１２日間ＦＡＣＳ選別由来、ＰＭＡおよびイオノマイシンで１、６
時間活性化し、プールした）（Ｄ１０４）；ＤＣ ９５％ ＣＤ１４＋（ＣＤ３
４＋ ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα１２日間ＦＡＣＳ選別由来、ＰＭＡおよびイオノ
マイシンで１、６時間活性化し、プールした）（Ｄ１０５）；ＤＣ ＣＤ１ａ＋
ＣＤ８６＋（ＣＤ３４＋ ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα１２日間ＦＡＣＳ選別由来
、ＰＭＡおよびイオノマイシンで１、６時間活性化し、プールした）（Ｄ１０６
）；ＤＣ（単球ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４ ５日間由来、休止）（Ｄ１０７）；Ｄ
Ｃ（単球ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４ ５日間由来、休止）（Ｄ１０８）；ＤＣ（単
球ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４ ５日間由来、ＬＰＳで４、１６時間活性化し、プー
ルした）（Ｄ１０９）；ＤＣ（単球ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４ ５日間由来、ＴＮ
Ｆα、単球上清（ｓｕｐｅ）で４、１６時間活性化し、プールした）（Ｄ１１０
）；平滑筋腫Ｌ１１良性腫瘍（Ｘ１０１）；正常子宮筋層Ｍ５（０１１５）；悪
性平滑筋肉腫ＧＳ１（Ｘ１０３）；肺繊維芽細胞肉腫株ＭＲＣ５（ＰＭＡおよび
イオノマイシンで１、６時間活性化し、プールした）（Ｃ１０１）；腎臓上皮癌
細胞株ＣＨＡ（ＰＭＡおよびイオノマイシンで１、６時間活性化し、プールした
）（Ｃ１０２）；２８週齢雄性胎児腎（Ｏ１００）；２８週齢雄性胎児肺（Ｏ１
０１）；２８週齢雄性胎児肝臓（Ｏ１０２）；２８週齢雄性胎児心臓（Ｏ１０３
）；２８週齢雄性胎児脳（Ｏ１０４）；２８週齢雄性胎児胆嚢（Ｏ１０６）；２
８週齢雄性胎児小腸（Ｏ１０７）；２８週齢雄性胎児脂肪組織（Ｏ１０８）；２
５週齢雌性胎児卵巣（Ｏ１０９）；２５週齢雌性胎児子宮（Ｏ１１０）；２８週
齢雄性胎児精巣（Ｏ１１１）；２８週齢雄性胎児脾臓（Ｏ１１２）；成人の２８
週齢胎盤（Ｏ１１３）；および１２歳由来の炎症扁桃（Ｘ１００）。

【０１４６】 同様のサンプルは、評価のために他の種において単離し得る。

【０１４７】 （Ｖ．ＤＣＲＳ２の種相対物のクローニング） 種々のストラテジーを用いて、ＤＣＲＳ２の種相対物を、好ましくは他の霊長
類またはげっ歯類から得る。１つの方法は、密接に関連した種のＤＮＡプローブ
を使用するクロスハイブリダイゼーションによる方法である。中間段階として、
進化的に類似の種を調査するのは有用であり得る。別の方法は、遺伝子間（例え
ば、高度に保存されたかもしくは保存されていないポリペプチドまたはヌクレオ
チド配列の領域）の類似性または相違するブロックの同定に基づく特異的なＰＣ
Ｒプライマーを用いることによる方法である。

【０１４８】 （ＶＩ．哺乳動物ＤＣＲＳ２タンパク質の産生） 適切な（例えば、ＧＳＴ）融合構築物を、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉで発現させる
ために操作する。例えば、マウスＩＧＩＦ ｐＧｅｘプラスミドを構築し、そし
てＥ．ｃｏｌｉに形質転換する。新たに形質転換した細胞を、例えば、５０μｇ
／ｍｌアンピシリン含有ＬＢ培地で増殖させ、そしてＩＰＴＧ（Ｓｉｇｍａ，Ｓ
ｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で誘導する。一晩の誘導後、この細菌を収集し、そして
ＤＣＲＳ２タンパク質を含むペレットを単離する。このペレットを、例えば、Ｔ
Ｅ緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−塩基 ｐＨ８．０， １０ｍＭ ＥＤＴＡおよ
び２ｍＭペファブロック（ｐｅｆａｂｌｏｃ））２リットル中でホモジナイズす
る。この物質を、微量流動化装置（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）（Ｍｉｃｒ
ｏｆｌｕｉｄｉｃｓ，Ｎｅｗｔｏｎ，ＭＡ）を三回通過させる。流動化した上清
を、Ｓｏｒｖａｌｌ ＧＳ−３ローターにより１３，０００ｒｐｍで１時間スピ
ンダウンさせる。得られたこのサイトカインレセプタータンパク質含有上清を濾
過し、そして５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−塩基 ｐＨ８．０で平衡化したグルタチオン
−ＳＥＰＨＡＲＯＳＥカラムに通す。ＤＣＲＳ２−ＧＳＴ融合タンパク質を含む
画分をプールし、そして例えば、トロンビン（Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ Ｂｅｎｄ，ＩＮ）で切断
する。次いで、切断したプールを、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−塩基で平衡化したＱ−
ＳＥＰＨＡＲＯＳＥカラムに通す。ＤＣＲＳ２を含む画分をプールし、そして冷
却した蒸留Ｈ₂Ｏで希釈して伝導率を低下させ、そして新鮮なＱ−Ｓｅｐｈａｒ
ｏｓｅカラム単独に、または続いて免疫アフィニティー抗体カラムに戻して通し
た。ＤＣＲＳ２タンパク質を含む画分をプールし、アリコートにし、そして−７
０℃の冷凍庫で保存する。

【０１４９】 ＣＤスペクトルのサイトカインレセプタータンパク質との比較により、このタ
ンパク質が正確に折り畳まれていることを示唆し得る。Ｈａｚｕｄａら、（１９
６９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１６８９−１６９３を参照のこと。 （ＶＩＩ．ＤＣＲＳ２に特異的な抗体の調製） 近交系Ｂａｌｂ／ｃマウスを、組換え形態のタンパク質（例えば、精製したＤ
ＣＲＳ２または安定なトランスフェクトしたＮＩＨ−３Ｔ３細胞で腹腔内免疫す
る。動物を、適切な時点で、タンパク質（さらなるアジュバントを含むか、また
は含まない）でブーストし、抗体の産生をさらに刺激する。血清を収集するか、
またはハイブリドーマを収集した脾臓で産生する。

【０１５０】 あるいは、Ｂａｌｂ／ｃマウスを、遺伝子もしくはそのフラグメントで形質転
換した細胞（内因性細胞または外因性細胞のいずれか）で免疫するか、または抗
原の発現を富化した単離された膜で免疫する。血清を適切な時点で、代表的には
多くのさらなる投与後に収集する。種々の遺伝子治療技術は、例えば、免疫応答
を生成するためのインサイチュでのタンパク質産生において有用であり得る。血
清または抗体の調製物を、クロス吸収（ｃｒｏｓｓ−ａｂｓｏｒｂ）または免疫
選択して、規定された特異性および高親和性の実質的に精製された抗体を調製し
得る。

【０１５１】 モノクローナル抗体を作製し得る。例えば、脾細胞を、適切な融合パートナー
と融合し、そしてハイブリドーマを標準手順により増殖培地で選択する。ハイブ
リドーマの上清を、ＤＣＲＳ２に結合する抗体の存在について、例えば、ＥＬＩ
ＳＡまたは他のアッセイによりスクリーニングする。特定のＤＣＲＳ２の実施形
態を特異的に認識する抗体もまた、選択または調製され得る。

【０１５２】 別の方法において、合成ペプチドまたは精製タンパク質を免疫系に提示し、モ
ノクローナル抗体またはポリクローナル抗体を生成する。例えば、Ｃｏｌｉｇａ
ｎ（１９９１版）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ；ならびにＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１
９８９）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃ
ｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照のこと。適切な状況に
おいて、結合試薬を上記のように（例えば、蛍光または他の方法）標識するか、
またはパンニング法のための基体に固定化するかのいずれかである。核酸はまた
、動物の細胞に導入されて抗原（これは、免疫応答を誘発するのに役立つ）を産
生し得る。例えば、Ｗａｎｇら、（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ
．Ｓｃｉ．９０：４１５６−４１６０；Ｂａｒｒｙら、（１９９４）ＢｉｏＴｅ
ｃｈｎｉｑｕｅｓ１６：６１６−６１９；およびＸｉａｎｇら、（１９９５）Ｉ
ｍｍｕｎｉｔｙ ２：１２９−１３５を参照のこと。

【０１５３】 （ＶＩＩＩ．ＤＣＲＳ２を有する融合タンパク質の産生） 種々の融合構築物を、ＤＣＲＳ２を用いて作製する。この適切な遺伝子の部分
を、エピトープタグ（例えば、ＦＬＡＧタグ）、またはツーハイブリッドシステ
ム構築物に融合する。例えば、ＦｉｅｌｄｓおよびＳｏｎｇ（１９８９）Ｎａｔ
ｕｒｅ ３４０：２４５−２４６を参照のこと。

【０１５４】 このエピトープタグを、結合パートナー（例えば、それぞれのサイトカインレ
セプターのためのリガンド）を検出する抗ＦＬＡＧ抗体での検出を用いる発現ク
ローニング手順に使用し得る。ツーハイブリッドシステムはまた、ＤＣＲＳ２に
特異的に結合するタンパク質を単離するために使用され得る。

【０１５５】 （ＩＸ．構造活性相関） 特定の残基の重要性に関する情報を、標準的手順および分析を使用して決定す
る。標準的変異誘発分析を、例えば、所定の位置（例えば、上記で同定した位置
）で多くの異なる改変体を作製し、そしてこの改変体の生物学的活性を評価する
ことにより行う。これを、活性を改変する位置を決定するまで、または生物学的
活性を保持、ブロック、もしくは調節のいずれかをさせるために置換され得る残
基を決定するために特定の位置に焦点をあてるまで実施し得る。

【０１５６】 あるいは、天然の改変体の分析は、どの位置が天然の変異に寛容かを示し得る
。これは、個体間、または株間もしくは種間のバリエーションの集団分析から生
じ得る。選択した個体由来のサンプルを、例えば、ＰＣＲ分析および配列決定に
より分析する。これにより、集団多型の評価が可能になる。

【０１５７】 （Ｘ．ＤＣＲＳ２のためのリガンドの単離） サイトカインレセプターを、特異的結合試薬として使用し、抗体が使用される
のと同様に、その結合特異性の利点を利用することにより、その結合パートナー
を同定し得る。結合レセプターは、レセプターサブユニットのヘテロ二量体であ
り得る；または例えば、別のサブユニットを有するＤＣＲＳ２の複合体を含み得
る。結合試薬は、上記のように（例えば、蛍光または他の方法で）標識するか、
またはパンニング法の基体に固定するかのいずれかである。

【０１５８】 結合組成物を使用して、結合パートナー（すなわち、好ましくは膜と会合した
、リガンド）を発現する細胞株から作製した発現ライブラリーのスクリーニング
を行う。標準的染色技術を使用して、表面に発現されるリガンドを検出または選
別するか、または表面に発現する形質転換細胞をパンニングによりスクリーニン
グする。細胞内発現のスクリーニングを、種々の染色または免疫蛍光手順により
行う。ＭｃＭａｈａｎら、（１９９１）ＥＭＢＯ Ｊ．１０：２８２１−２８３
２もまた参照のこと。

【０１５９】 例えば、０日目に、２チャンバーパーマノックス（ｐｅｒｍａｎｏｘ）スライ
ドを、チャンバーあたり１ｍｌのフィブロネクチン（ＰＢＳ中１０ｎｇ／ｍｌ）
で、室温にて３０分間、予め被覆する。ＰＢＳで１回リンスする。次に、ＣＯＳ
細胞を、１．５ｍｌの増殖培地中、２〜３×１０⁵細胞／チャンバーでプレーテ
ィングする。３７℃で一晩インキュベートする。

【０１６０】 各サンプルについて、１日目に、無血清ＤＭＥ中の６６μｇ／ｍｌ ＤＥＡＥ
−デキストラン、６６μＭクロロキン、および４μｇ ＤＮＡの溶液０．５ｍｌ
を調製する。各セットについて、例えば、１および１／２００希釈のＤＣＲＳ２
−ＦＬＡＧ ｃＤＮＡの陽性コントロール、ならびに陰性モックを調製する。細
胞を無血清ＤＭＥでリンスする。ＤＮＡ溶液を添加し、そして３７℃で５時間イ
ンキュベートする。培地を除去し、そしてＤＭＥ中の１０％ＤＭＳＯの０．５ｍ
ｌを２．５分間添加する。これを除去し、ＤＭＥで一度洗浄する。１．５ｍｌの
増殖培地を添加し、そして一晩インキュベートする。

【０１６１】 ２日目、培地を交換する。３または４日目、細胞を固定し、そして染色する。
細胞をＨａｎｋ緩衝化生理食塩水溶液（Ｈａｎｋ’ｓ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａ
ｌｉｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（ＨＢＳＳ）で二回リンスし、そして４％パラホ
ルムアルデヒド（ＰＦＡ）／グルコースで５分間固定する。ＨＢＳＳで３回洗浄
する。すべての液体を除去した後、スライドを−８０℃で保存し得る。各チャン
バーについて、０．５ｍｌインキュベーションを以下のように行う。３２μｌ／
ｍｌの１Ｍ ＮａＮ₃を含むＨＢＳＳ／サポニン（０．１％）を、２０分間添加
する。次に、細胞をＨＢＳＳ／サポニンで１回洗浄する。適切なＤＣＲＳ２また
はＤＣＲＳ２／抗体複合体を細胞に添加し、そして３０分間インキュベートする
。細胞をＨＢＳＳ／サポニンで二回洗浄する。適切な場合、１次抗体を３０分間
添加する。２次抗体、例えば、ベクター抗マウス抗体を１／２００希釈で添加し
、そして３０分間インキュベートする。ＥＬＩＳＡ溶液（例えば、Ｖｅｃｔｏｒ
Ｅｌｉｔｅ ＡＢＣ西洋ワサビペルオキシダーゼ溶液）を調製し、そして３０
分間プレインキュベートする。例えば、ＨＢＳＳ／サポニン２．５ｍｌ当たり、
溶液Ａ（アビジン）１滴および溶液Ｂ（ビオチン）１滴を使用する。細胞をＨＢ
ＳＳ／サポニンで二回洗浄する。ＡＢＣ ＨＲＰ溶液を添加し、そして３０分間
インキュベートする。細胞をＨＢＳＳで二回洗浄し、二回目の洗浄を２分間行い
、これは細胞を閉鎖する。次いで、Ｖｅｃｔｏｒジアミノ安息香酸（ＤＡＢ）を
５〜１０分間添加する。ガラス蒸留水５ｍｌ当たり、緩衝液２滴に加えてＤＡＢ
４滴およびＨ₂Ｏ₂ ２滴を使用する。チャンバーを注意深く除去し、そしてス
ライドを水中でリンスする。数分間、風乾し、次いでＣｒｙｓｔａｌ Ｍｏｕｎ
ｔ１滴を添加し、そしてカバースリップを加える。８５〜９０℃で５分間焼く。

【０１６２】 プールの陽性染色を評価し、そして結合の原因となる単一遺伝子を単離するま
で進行的にサブクローニングする。

【０１６３】 あるいは、レセプター試薬を使用し、推定リガンドを発現する細胞をアフィニ
ティー精製するか、または選別する。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、またはＡｕ
ｓｕｂｅｌらを参照のこと。

【０１６４】 別のストラテジーは、パンニングにより膜結合型レセプターについてスクリー
ニングすることである。レセプターｃＤＮＡを、上記のように構築する。固定化
は、例えば、ＤＣＲＳ２融合構築物のＦＬＡＧ配列を認識する適切な抗体を使用
するか、または１次抗体に対して惹起された抗体を使用することにより達成され
得る。選択および増幅の反復周期により、適切なクローンが富化され、その結果
、レセプターを発現するクローンが単離される。

【０１６５】 ファージ発現ライブラリーを、哺乳動物ＤＣＲＳ２によりスクリーニングし得
る。適切な標識技術、例えば、抗ＦＬＡＧ抗体は、適切なクローンの特異的な標
識を可能にする。

【０１６６】 本明細書中におけるすべての引用物は、各個々の刊行物または特許出願が、参
考として援用されることが特別にかつ個々に示されるのと同程度に、本明細書中
に参考として援用される。

【０１６７】 当業者にとって明白なように、本発明の多くの改変および変更は、本発明の精
神および範囲から逸脱することなく行なわれ得る。本明細書中に記載される特定
の実施態様は、例示として提供するだけであり、そして本発明は、このような特
許請求の範囲が権利を付与される等価物の全範囲を伴う添付の特許請求の範囲の
用語により制限される；そして本発明は本明細書に実施例として提示した特定の
実施態様により制限されない。

【０１６８】 配列番号１は、霊長類ＤＣＲＳ２ヌクレオチド配列である。

【０１６９】 配列番号２は、霊長類ＤＣＲＳ２ポリペプチド配列である。

【０１７０】 配列番号３は、霊長類ＤＣＲＳ２逆翻訳物である。

【０１７１】 配列番号４は、霊長類ＮＲ６ポリペプチド配列である。

【０１７２】 配列番号５は、げっ歯類ＮＲ６ポリペプチド配列である。

【０１７３】 配列番号６は、霊長類ｐ４０ポリペプチド配列である。

【０１７４】 配列番号７は、げっ歯類ｐ４０ポリペプチド配列である。

【０１７５】 配列番号８は、げっ歯類Ｅｂｉ３ポリペプチド配列である。

【０１７６】 配列番号９は、霊長類Ｅｂｉ３ポリペプチド配列である。

【０１７７】 配列番号１０は、げっ歯類ＩＬ−１１レセプターサブユニットαポリペプチド
配列である。

【０１７８】 配列番号１１は、霊長類ＩＬ−１１レセプターサブユニットαポリペプチド配
列である。

【０１７９】 配列番号１２は、霊長類ＩＬ−６レセプターサブユニットαポリペプチド配列
である。

【０１８０】 配列番号１３は、げっ歯類ＩＬ−６レセプターサブユニットαポリペプチド配
列である。

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 37/02 ４Ｈ０４５ 37/02 Ｃ０７Ｋ 14/715 Ｃ０７Ｋ 14/715 16/28 16/28 19/00 19/00 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/19 1/19 1/21 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｃ１２Ｑ 1/68 33/50 Ｚ Ｇ０１Ｎ 33/15 33/53 Ｍ 33/50 Ｎ 33/53 33/566 33/58 Ａ 33/566 Ｚ 33/58 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 5/00 Ａ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ， ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，Ｃ Ｈ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，Ｌ Ｋ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ， ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，Ｔ Ｔ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ (72)発明者 ドウリング， リネッテ エム． アメリカ合衆国 カリフォルニア 94062， レッドウッド シティ， キャニオン ロード 751 (72)発明者 ティマンス， ジャクリーン シー． アメリカ合衆国 カリフォルニア 94043， マウンテン ビュー， カンナ コート 1538 (72)発明者 ゴーマン， ダニエル エム． アメリカ合衆国 カリフォルニア 94560， ニューアーク， セントラル アベニュ ー 6371 (72)発明者 カステレイン， ロバート エイ． アメリカ合衆国 カリフォルニア 94062， レッドウッド シティ， サミット ド ライブ 463 (72)発明者 バザン， フェルナンド ジェイ． アメリカ合衆国 カリフォルニア 94025， メンロ パーク， ユニバーシティ ド ライブ 775 Ｆターム(参考） 2G045 AA25 AA40 BB20 CB01 DA12 DA13 DA14 DA36 DA77 FB02 FB03 FB07 4B024 AA01 AA11 BA63 CA04 CA05 CA09 HA01 HA12 HA14 4B063 QA01 QA18 QA19 QQ43 QR56 QR60 QR62 QS25 QS33 QS34 4B065 AB01 BA02 CA44 CA46 4C085 AA02 AA08 AA13 AA14 BB11 CC02 CC22 CC23 EE01 EE03 EE05 GG02 GG03 GG06 GG08 4H045 AA10 AA11 AA30 BA09 BA41 CA40 DA51 DA75 EA22 EA50

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 組成物であって、以下： ａ）配列番号２のセグメントと同一である少なくとも４アミノ酸の、少なくと
   も３つの異なる非重複セグメントを含む、実質的に純粋なＤＣＲＳ２ポリペプチ
   ドまたは組換えＤＣＲＳ２ポリペプチド； ｂ）配列番号２のセグメントと同一である少なくとも５アミノ酸の、少なくと
   も２つの異なる非重複セグメントを含む、実質的に純粋なＤＣＲＳ２ポリペプチ
   ドまたは組換えＤＣＲＳ２ポリペプチド； ｃ）配列番号２の成熟配列を含む天然配列のＤＣＲＳ２；または ｄ）ＤＣＲＳ２配列を含む融合ポリペプチド から選択される、組成物。
2. 【請求項２】 請求項１に記載の、実質的に純粋な抗原性ＤＣＲＳ２ポリペ
   プチドまたは単離された抗原性ＤＣＲＳ２ポリペプチドであって、ここで、同一
   である前記異なる非重複セグメントが： ａ）少なくとも８アミノ酸である１つのセグメントを含むか； ｂ）少なくとも４アミノ酸である１つのセグメントおよび少なくとも５アミノ
   酸である第２のセグメントを含むか； ｃ）少なくとも４アミノ酸、少なくとも５アミノ酸および少なくとも６アミノ
   酸である、少なくとも３セグメントを含むか、または ｄ）少なくとも１２アミノ酸である１つのセグメントを含む、 ポリペプチド。
3. 【請求項３】 請求項１の組成物であって、ここで： （ａ）前記ＤＣＲＳ２ポリペプチドが： ｉ）表１の成熟配列を含むか； ｉｉ）ＤＣＲＳ２の非グリコシル化形態であるか； ｉｉｉ）ヒトのような、霊長類由来であるか； ｉｖ）配列番号２の少なくとも１７アミノ酸を含むか ｖ）配列番号２の少なくとも７アミノ酸の、少なくとも４つの非重複セグ
   メントを示すか； ｖｉ）ＤＣＲＳ２の天然の対立遺伝子改変体であるか； ｖｉｉ）少なくとも約３０アミノ酸の長さを有するか； ｖｉｉｉ）霊長類ＤＣＲＳ２に特異的である少なくとも２つの非重複エピ
   トープを示すか； ｉｘ）グリコシル化されているか； ｘ）天然のグリコシル化を伴って少なくとも３０ｋＤの分子量を有するか
   ； ｘｉ）合成ポリペプチドであるか； ｘｉｉ）固体基材に付着されているか； ｘｉｉｉ）別の化学部分に結合されているか； ｘｉｖ）天然の配列から５以下の置換であるか；または ｘｖ）天然の配列の欠失改変体または挿入改変体である、 組成物。
4. 【請求項４】 以下を含む、組成物： ａ）実質的に純粋なＤＣＲＳ２および別のサイトカインレセプターファミリー
   のメンバー； ｂ）滅菌した請求項１に記載のＤＣＲＳ２ポリペプチド； ｃ）請求項１に記載のＤＣＲＳ２ポリペプチド、およびキャリアであって、こ
   こで該キャリアは、 ｉ）水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む水性化合物であり；そ
   して／または ｉｉ）経口投与、直腸投与、経鼻投与、局所投与、または非経口投与のため
   に処方されている。
5. 【請求項５】 請求項１に融合ポリペプチドであって、以下： ａ）表１に記載の成熟タンパク質配列； ｂ）ＦＬＡＧ配列、Ｈｉｓ６配列、もしくはＩｇ配列を含む、検出タグまたは
   精製タグ；あるいは ｃ）別のサイトカインレセプタータンパク質の配列 を含む、融合ペプチド。
6. 【請求項６】 請求項１に記載のポリペプチド、および以下を含む、キット
   ： ａ）該タンパク質もしくはポリペプチドを含む区画；または ｂ）該キットにおける試薬の使用もしくは廃棄のための説明書。
7. 【請求項７】 抗体に由来する抗原結合部分を含む結合化合物であって、該
   結合化合物は、請求項１に記載の天然のＤＣＲＳ２ポリペプチドに特異的に結合
   し、ここで： ａ）該結合化合物が、容器の中にあるか； ｂ）該ＤＣＲＳ２ポリペプチドが、ヒト由来であるか； ｃ）該結合化合物が、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、またはＦａｂ
   ２フラグメントであるか； ｄ）該結合化合物が、別の化学部分に結合されているか；あるいは ｅ）該抗体が： ｉ）表１の成熟ポリペプチドのペプチド配列に対して惹起されるか； ｉｉ）成熟ＤＣＲＳ２に対して惹起されるか； ｉｉｉ）精製されたヒトＤＣＲＳ２に対して惹起されるか； ｉｖ）免疫選択されるか； ｖ）ポリクローナル抗体であるか； ｖｉ）変性ＤＣＲＳ２に結合するか； ｖｉｉ）少なくとも３０μＭの、抗原に対するＫｄを示すか； ｖｉｉｉ）固体基材に付着されるか、ここで、該固体基材としては、ビー
   ズもしくはプラスチック膜が挙げられ； ｉｘ）滅菌組成物中にあるか；または ｘ）検出可能に標識され、これには、放射性標識もしくは蛍光標識が挙げ
   られる、 結合化合物。
8. 【請求項８】 請求項７に記載の結合化合物、および以下を含む、キット： ａ）該結合化合物を含む区画；または ｂ）該キットにおける試薬の使用もしくは廃棄のための説明書。
9. 【請求項９】 抗原：抗体複合体を生成する方法であって、適切な条件下で
   、霊長類ＤＣＲＳ２ポリペプチドを請求項７に記載の抗体と接触させる工程であ
   って、それによって該複合体の形成を可能にする、工程、を包含する、方法。
10. 【請求項１０】 請求項９に記載の方法であって、ここで： ａ）前記複合体が、他のサイトカインレセプターから精製されるか； ｂ）前記複合体が、他の抗体から精製されるか； ｃ）前記接触させる工程が、インターフェロンを含むサンプルを用いるか； ｄ）前記接触させる工程が、前記抗原の定量的検出を可能にするか； ｅ）前記接触させる工程が、前記抗体を含むサンプルを用いるか；または ｆ）前記接触させる工程が、前記抗体の定量的検出を可能にする、 方法。
11. 【請求項１１】 以下を含む、組成物： ａ）滅菌した請求項７に記載の結合化合物、あるいは ｂ）請求項７に記載の結合化合物およびキャリアであって、ここで、該キャリ
    アが： ｉ）水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む水性化合物であり；
    そして／または ｉｉ）経口投与、直腸投与、経鼻投与、局所投与、または非経口投与のた
    めに処方されている、結合化合物およびキャリア。
12. 【請求項１２】 請求項１に記載のＤＣＲＳ２ポリペプチドをコードする、
    単離された核酸または組換え核酸であって、ここで： ａ）該ＤＣＲＳ２が、ヒト由来であるか；あるいは ｂ）該核酸が： ｉ）表１に記載の抗原性ペプチド配列をコードするか； ｉｉ）表１に記載の抗原性ペプチド配列のうちの複数をコードするか； ｉｉｉ）少なくとも１３ヌクレオチドにわたって、前記セグメントをコー
    ドする天然のｃＤＮＡに対して同一性を示すか； ｉｖ）発現ベクターであるか； ｖ）複製起点をさらに含むか； ｖｉ）天然の供給源由来であるか； ｖｉｉ）検出可能な標識を含むか； ｖｉｉｉ）合成ヌクレオチド配列を含むか； ｉｘ）６ｋｂ未満、好ましくは３ｋｂ未満であるか； ｘ）霊長類由来であるか； ｘｉ）天然の全長コード配列を含むか； ｘｉｉ）該ＤＣＲＳ２をコードする遺伝子についてのハイブリダイゼーシ
    ョンプローブであるか；または ｘｉｉｉ）ＰＣＲプライマー、ＰＣＲ産物、もしくは変異誘発プライマー
    である、 核酸。
13. 【請求項１３】 請求項１２に記載の組換え核酸を含む、細胞または組織。
14. 【請求項１４】 請求項１３に記載の細胞であって、ここで該細胞は、以下
    ： ａ）原核生物細胞； ｂ）真核生物細胞； ｃ）細菌細胞； ｄ）酵母細胞； ｅ）昆虫細胞； ｆ）哺乳動物細胞； ｇ）マウス細胞； ｈ）霊長類細胞；または ｉ）ヒト細胞、 である、細胞。
15. 【請求項１５】 請求項１２に記載の核酸、および以下を含む、キット： ａ）該核酸を含む区画； ｂ）霊長類ＤＣＲＳ２ポリペプチドをさらに含む区画；または ｃ）該キットにおける試薬の使用もしくは廃棄のための説明書。
16. 【請求項１６】 核酸であって、該核酸は、以下： ａ）３０℃および２Ｍ未満の塩で３０分間の洗浄条件下で、配列番号１のコー
    ド部分にハイブリダイズするか；または ｂ）少なくとも約３０ヌクレオチドのストレッチにわたって、霊長類ＤＣＲＳ
    ２に対して同一性を示す、 核酸。
17. 【請求項１７】 請求項１６に記載の核酸であって、ここで： ａ）前記洗浄条件が、４５℃および／もしくは５００ｍＭの塩であるか；また
    は ｂ）前記ストレッチが、少なくとも５５ヌクレオチドである、 核酸。
18. 【請求項１８】 請求項１６に記載の核酸であって、ここで： ａ）前記洗浄条件が、５５℃および／もしくは１５０ｍＭの塩であるか；また
    は ｂ）前記ストレッチが、少なくとも７５ヌクレオチドである、 核酸。
19. 【請求項１９】 細胞または組織培養細胞の生理機能または発達を調節する
    方法であって、該細胞と、哺乳動物ＤＣＲＳ２のアゴニストまたはアンタゴニス
    トとを接触させる工程を包含する、方法。
20. 【請求項２０】 請求項１９に記載の方法であって、ここで、前記細胞が、
    ＤＣＲＳ２および別のサイトカインレセプターサブユニットをコードする核酸を
    用いて形質転換される、方法。