JP2003527308A

JP2003527308A - 多剤輸送体の阻害剤

Info

Publication number: JP2003527308A
Application number: JP2000584891A
Authority: JP
Inventors: マーカム，ペネロープ・エヌ; マルハーン，デビー・シー; ネイファク，アレクサンダー・エイ; クリッチ，デイヴィッド; ジェイバー，モハマド‐ラミ; ジョンソン，マイケル・イー
Original assignee: インフラックス，インコーポレイテッド
Priority date: 1998-12-04
Filing date: 1999-12-02
Publication date: 2003-09-16
Also published as: AU2476100A; DE1135132T1; CA2353557A1; WO2000032196A3; US6326391B1; IL143535A0; EP1135132A2; US6362229B1; US20030125337A1; WO2000032196A2; AU757777B2

Abstract

(57)【要約】本発明は、一般に、細菌学および真菌学の分野に関する。より詳しくは、本発明は、抗微生物剤の毒性効果を増加させるために、既存の抗細菌剤および／または抗真菌剤と組合せて使用し得る多剤輸送タンパク質の新規阻害剤を提供する。より具体的には、本発明は、多剤輸送体の阻害剤と組合せてフルオロキノロンを投与することにより、フルオロキノロンの抗細菌作用を増強するための、並びに、多剤輸送体の阻害剤と組合せてアゾール抗真菌剤を投与することにより、アゾール抗真菌剤の抗真菌作用を増強する方法および組成物を提供する。インドール、尿素、キノリンまたは芳香族アミドをベースとした阻害剤を含む組成物も開示する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本出願は、１９９８年１２月４日に提出された、米国仮特許出願第６０／１１
０，８４１号の優先権を主張する。上記に参照した開示の全文書を、一部放棄す
ることなく、本明細書の記載の一部となすものとする。米国政府は、国立保健研
究所による付与番号ＧＭ５５４４９−０１および１Ｒ４３ＡＩ４３０７６−０１
およびＧＭ５５４４９−０２に基づいた本発明に権利を所有し得る。

【０００２】１．発明の分野本発明は、一般に、細菌学および真菌学の分野に関する。より詳しくは、本発
明は、既存の抗生物質および抗真菌剤の効力を増加させる方法および組成物、並
びに、細菌および真菌耐性を克服する方法を提供する。

【０００３】２．関連技術の説明グラム陽性生物、特にブドウ球菌属、レンサ球菌属、およびエンテロコッカス
属は、感染症の主要な病原因子として見られることが次第に多くなっている。病
院の環境では、黄色ブドウ球菌およびエンテロコッカス・フェカーリスが、血流
感染からの単離物の５０％以上を占める（ＣｏｒｍｉｃａｎおよびＪｏｎｅｓ、
１９９６）。市中感染では、肺炎レンサ球菌が、依然として病気および死の主な
原因である（ＣｅｎｔｅｒｓｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌ、１９
９）。従って、これらの生物における抗生物質耐性の進行中で急速な出現および
広がりは、危機的割合の問題である。

【０００４】グラム陽性感染の処置の主要な障害の１つは、最近、抗生物質の武器に加えら
れたフルオロキノロンに対するその感受性が低いことである。それが１９８０年
中頃に導入されて以来、フルオロキノロン抗生物質は、世界で最も使用されるク
ラスの抗生物質となった（ＡｃａｒおおよびＧｏｌｄｓｔｅｉｎ、１９９７）。
その抗生物質の１つであるシプロフロキサシン（Ｄａｖｉｓら、１９９６）は、
医薬に使用される全キノロンの９０％を占める。その活性スペクトル、経口で利
用できること、および比較的コストが低いことから、シプロフロキサシンは、病
因が不明である感染を含む、広範囲の感染の処置に使用されてきた。１９９６年
には、シプロフロキサシンを使用する３つの新規な適応症が認可され、これは、
この抗生物質の使用が、これから長年続くことを示唆する。

【０００５】ほとんどのグラム陰性微生物に対して活性が高いが（０．１μｇ／ｍｌの範囲
のＭＩＣ₉₀）、シプロフロキサシンは、グラム陽性感染、特に好気性グラム陽性
球菌には効力が低い。黄色ブドウ球菌、Ｅ．フェカーリスおよび肺炎レンサ球菌
のＭＩＣ₉₀値は、１〜５μｇ／ｍｌの範囲であり、達成可能なシプロフロキサシ
ンの組織濃度は、僅か４μｇ／ｍｌである（Ｄａｖｉｓら、１９９６）。シプロ
フロキサシンに対する内在的な高い耐性、並びに、ヒトおよび脊椎動物の両方の
医薬におけるキノロンの広範な使用により、シプロフロキサシン耐性グラム陽性
株が出現および普及した。この限界のために、新規で、より効果的なフルオロキ
ノロンが探索されている。

【０００６】抗生物質耐性は、少なくとも一部には、多剤輸送体（ＭＤＴ）による標的細胞
からの薬物の排出により媒介される。これらの輸送体は、フルオロキノロン抗生
物質を含む、多種多様の薬物の、特定の感染に関与する細菌細胞からの、活発な
排出を促進する。１９９１年に、Ｎｅｙｆａｋｈらは、グラム陽性細菌である枯
草菌の染色体性にコードされる細菌多剤輸送体Ｂｍｒについて初めて記載を発表
した。それ以来、エシェリヒア、シュードモナス、マイコバクテリア等（Ｌｏｍ
ｏｖｓｋａｙａおよびＬｅｗｉｓ、１９９２；Ｐｏｏｌｅら、１９９３；Ｔａｋ
ｉｆｆら、１９９６（Ｎｉｋａｉｄｏ、１９９４に論評）；Ｌｅｗｉｓ、１９９
４）などの病原種を含む、解析した実質的に全ての細菌種が、１つ、またはさら
には数個の多剤輸送体を発現することが示された。例えば、枯草菌は、少なくと
も３つの多剤輸送体、相同ＢｍｒおよびＢｌｔ（Ａｈｍｅｄら、１９９５）およ
び進化的により遠いＢｍｒ３（ＯｈｋｉおよびＭｕｒａｔａ、１９９７）を発現
する。Ｂｍｒおよび黄色ブドウ球菌のその近い相同体であるＮｏｒＡは、臭化エ
チジウム、ローダミン、アクリジン、テトラフェニルホスホニウムおよびプロマ
イシンを含む種々の細菌毒性化合物の排出を促進し、フルオロキノロン抗生物質
が最善の輸送体基質の１つである（Ｙｏｓｈｉｄａら、１９９０；Ｎｅｙｆａｋ
ｈ、１９９２；Ｎｅｙｆａｋｈら、１９９３）。重要には、ＢｍｒおよびＮｏｒ
Ａ輸送体により媒介される薬物排出は、これ自体では細菌に有毒ではない植物ア
ルカロイドレセルピンにより完全に阻害できる（Ｎｅｙｆａｋｈら；Ｎｅｙｆａ
ｋｈ、１９９３）。

【０００７】多剤輸送体はまた、重要な真菌病原体の、抗真菌剤に対する、内在的および後
天的耐性の両方に重要な役割を果たしている。特に、多剤輸送体は、アゾール抗
真菌剤に対する、全院内感染の４番目に主要な原因である、カンジダ・アルビカ
ンスの耐性に寄与する。

【０００８】多剤輸送体の生理学的役割およびその作用機序に関する知見はほとんどないが
、それにも関わらず、これらの輸送体は、細菌細胞の、毒素および抗生物質に対
する内在的耐性に重要な役割を果たしているようである。染色体輸送体遺伝子の
不活化により、通常、細菌の、輸送体基質に対する感受性は劇的に増加する（Ｐ
ｏｏｌｅら、１９９３；Ａｈｍｅｄら、１９９４；Ｏｋｕｓｕら、１９９６；Ｙ
ａｍａｄａら、１９９７）。枯草菌のＢｍｒ遺伝子の破壊、またはレセルピンに
よるＢｍｒ輸送体の阻害により、典型的なフルオロキノロン抗生物質であるノル
フロキサシンの最小阻害濃度（ＭＩＣ）は５だけ減少する（Ｎｅｙｆａｋｈ、１
９９２）。同様に、多剤輸送体は、グラム陽性病原球菌の内在的フルオロキノロ
ン耐性にかなり寄与する。Ｙａｍａｄａら（１９９７）は、近年、ＮｏｒＡ遺伝
子の遺伝破損は、黄色ブドウ球菌の、ノルフロキサシンおよびシプロフロキサシ
ンに対する感受性を、それぞれ８および４倍増加させることを示した。ＮｏｒＡ
媒介薬物排出を阻害するレセルピンは、野生型黄色ブドウ球菌についてのノルフ
ロキサシンのＭＩＣを、少なくとも４倍減少させる（ＭａｒｋｈａｍおよびＮｅ
ｙｆａｋｈ、１９９６；ＫａａｔｚおよびＳｅｏ、１９９５）。肺炎レンサ球菌
の多剤輸送体は依然として同定されていないが、その存在は生理学的データによ
り強く支持されている（ＢａｒａｎｏｖａおよびＮｅｙｆａｋｈ、１９９７；Ｚ
ｅｌｌｅｒら、１９９７；Ｂｒｅｎｗａｌｄら；１９９７）。さらに、レセルピ
ンは、野生型肺炎レンサ球菌についてのノルフロキサシンおよびシプロフロキサ
シンのＭＩＣを２〜３だけ減少させることが示された（Ｂａｒａｎｏｖａおよび
Ｎｅｙｆａｋｈ、１９９７）。Ｅ．フェカーリスでは、フルオロキノロンの活発
な排出が、生化学的に実証され（Ｌｙｎｃｈら、１９９７）、ここでも、レセル
ピンは、フルオロキノロンに対するその感受性を２倍増加させる。

【０００９】フルオロキノロンに対するグラム陽性球菌の内在的耐性に関与することに加え
て、多剤輸送体は、後天的耐性に寄与し、これは、これらの抗生物質への曝露時
に選択される。黄色ブドウ球菌および肺炎レンサ球菌では、後天的耐性はこれま
で、フルオロキノロン作用の標的のトポイソメラーゼＩＶおよびＤＮＡジャイレ
ースにおける連続的な変異の獲得に主に帰していた（ＧａｍｂａｕおよびＧｕｔ
ｍａｎ、１９９３；Ｆｅｒｒｅｒｏら、１９９４；ＭｕｎｏｚおよびＤｅＬａ
Ｃａｍｐａ、１９９６；Ｔａｎｋｏｖｉ、１９９６）。Ｅ．フェカーリスにお
けるフルオロキノロン耐性機序の研究が少ないことから、ジャイレースの変異が
、少なくともいくつかの耐性レベルの高い単離株に存在しているようである（Ｋ
ｏｒｔｅｎら、１９９４）。しかし、近年、これらの後天的耐性機序は、多剤輸
送体の過剰発現により補完されることが明らかとなってきた。このような過剰発
現は、輸送体遺伝子の増幅により（Ｎｅｙｆａｋｈ、１９９１）、または、これ
らの遺伝子の調節領域またはその転写を制御する調節タンパク質の変異により生
じ得る（Ａｈｍｅｄら、１９９５；ＫａａｔｚおよびＳｅｏ、１９９５）。

【００１０】ＮｏｒＡ多剤輸送体の過剰発現が、インビトロ（Ｙｏｓｈｉｄａら、１９９０
；Ｋａａｔｚら、１９９０）およびインビボ（Ｔｒｕｃｋｓｉｓら、１９９１）
の両方で、フルオロキノロン耐性について選択した黄色ブドウ球菌株で報告され
た。上記の議論から、多剤輸送体は、グラム陽性病原侵襲の処置に主要な障害を
提示することは明らかである。これらの輸送体を回避して処置方式に有用な薬物
（群）が必要である。

【００１１】（発明の要約）本発明の目的を満たすため、微生物の多剤輸送体を阻害することにより、抗微
生物剤の抗微生物作用を増強させる方法を提供する。本発明の具体的な実施形態
は、細菌をＮｏｒＡ阻害剤と接触させることを含んでなるフルオロキノロンの抗
細菌作用を増強させる方法を考え、前記阻害剤はインドール、尿素、芳香族アミ
ドまたはキノリンである。

【００１２】より特定の実施形態において、阻害剤は、一般式：

【化９】［式中、Ｒ₁は、フェニル、２−ナフチル、ｏ−アニソールであり、Ｒ₂は、Ｈま
たはＣＨ₃であり、Ｒ₁およびＲ₂は、インドール環に縮合した２つのナフチル基
であり、Ｒ₃はＨであり、Ｒ₄はＮＯ₂、ＳＯ₃Ｈ、ＮＨ₂、およびＣＦ₃またはＣＣ
ｌ₃であり、Ｒ₅はＨであり、Ｒ₆はＨである］を有するインドールである。より特定すると、Ｒ₁はフェニル基であり得、Ｒ₄は
、ＳＯ₃ＨまたはＮＯ₂であり得る。他の具体的に好ましい実施形態において、Ｒ ₁ は２−ナフチルであり得、Ｒ₄はＣＣｌ₃またはＣＦ₃であり得る。さらに追加の
実施形態において、Ｒ₁はｏ−アニソールであり得、Ｒ₄はＮＯ₂であり得る。さ
らなる実施形態において、Ｒ₁およびＲ₂は、インドール環に縮合した２つのナフ
チル基である。追加の好ましい実施形態は、Ｒ₁がフェニルであり、Ｒ₂がＣＨ₃
であると考えられる。

【００１３】阻害剤が尿素である本発明の態様において、尿素は、一般式：

【化１０】［式中、Ｒ₁は、ＯＲ、Ｂｒ、ＣｌまたはＦであり、Ｒ₂は、ＯＲ、ＮＨＣＯ₂Ｒ
、Ｃｌ、Ｆ、またはＨであり、Ｒ₃は、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＲ、またはＣＯ₂Ｒであり
、Ｒ₄はＣｌまたはＢｒであり、Ｒ₅はＨであり、Ｒ₆はＨであり、Ｒ₇はＨであり
、Ｒ₈は、共役系または芳香族系であり、Ｒ₉は、Ｈ、ＯＲ、Ｃｌ、またはＢｒで
あり、Ｒ₁₀は、Ｈ、ＯＲ、またはＣｌである］を有し得る。より特定すると、Ｒ₁はＯＭｅであり得、Ｒ₃またはＲ₄はＣｌであ
り得、さらにＲ₈は、Ｃ（＝Ｏ）ＰｈまたはＲ₇−Ｒ₈の縮合芳香族環である。

【００１４】阻害剤が芳香族アミドである実施形態において、阻害剤は、一般式：

【化１１】［式中、Ｒ₁、Ｒ₄およびＲ₅はＨであり、Ｒ₂および／またはＲ₃は、小さい電子
吸引基であり、Ｒ₆は、フェニル環を有するまたは有さない、Ｏ、Ｎ、またはＳ
を含む少なくとも６つの原子の置換または非置換アルキルである］を有し得る。より特定すると、電子吸引基は、ＣｌおよびＦからなる群から選択
される。他の好ましい実施形態において、構造ＩＩＩの芳香族アミドのＲ₄およ
びＲ₆は、Ｃ、Ｏ、Ｎ、またはＳの２〜６原子のより小さな共役系であり、フェ
ニル環を含む。

【００１５】阻害剤がキノリンである実施形態において、阻害剤は、一般式：

【化１２】［式中、Ｒ₂は、３，４−ジメトキシベンゼンまたはｐ−トルエンであり、Ｒ₃は
Ｈであり、Ｒ₄は、ＣＯ₂Ｒ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２またはＨであり、Ｒ₅はＨであり
、Ｒ₆は、Ｈ、ＮＯ₂、ＳＯ₃Ｈ、ＮＨ₂、ＣＦ₃またはＣＣｌ₃であり、Ｒ₇は、ア
ルキル基、ＮＯ₂、ＳＯ₃Ｈ、ＮＨ₂、ＣＦ₃またはＣＣｌ₃であり、Ｒ₈はＨである
］を有し得る。特に、Ｒ₂が３，４−ジメトキシベンゼンであり、Ｒ₃がＨであり、
Ｒ₄がＣＯ₂Ｒであり、Ｒ₅がＨであり、Ｒ₆がＨであり、Ｒ₇がＭｅであり、Ｒ₈が
Ｈである組合せである。

【００１６】特に、細菌は、肺炎レンサ球菌（Streptococcus pneumonia）、エンテロコッ
カス・フェカーリス（Enterococcus faecalis）、黄色ブドウ球菌（Staphylococ
cus aureus）、化膿レンサ球菌（Streptococcus pyogenes）、大腸菌（Escheric
hia coli）、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）、表皮ブドウ球菌（Staphyloco
ccus epidermis）、スメグマ菌（Mycobacterium smegmatis）およびセラチア・
マルケセンス（Serratia marcesens）であると考えられる。勿論、当業者は、こ
れらの細菌に対する適用に有用であると判明した阻害剤も、他の細菌感染に対し
て有用であり得ると認識する。従って、これらは例示的細菌であり、本発明は、
これらの細菌により引き起こされる感染に限定されるとは捉えない。

【００１７】本発明の別の態様は、一般式：

【化１３】［式中、Ｒ₁は、フェニル、２−ナフチル、ｏ−アニソールであり、Ｒ₂は、Ｈま
たはＣＨ₃であり、Ｒ₁およびＲ₂は、インドール環に縮合した２つのナフチル基
であり、Ｒ₃はＨであり、Ｒ₄は、ＮＯ₂、ＳＯ₃Ｈ、ＮＨ₂およびＣＦ₃またはＣＣ
ｌ₃であり、Ｒ₅はＨであり、Ｒ₆はＨである］を有するインドールを提供する。具体的な実施形態において、Ｒ₁はフェニルで
あり、Ｒ₄は、ＳＯ₃ＨまたはＮＯ₂である。他の実施形態において、Ｒ₁は２−ナ
フチルであり、Ｒ₄はＣＣｌ₃またはＣＦ₃である。さらに追加の実施形態におい
て、Ｒ₁はｏ−アニソールであり、Ｒ₄はＮＯ₂である。他の実施形態は、Ｒ₁およ
びＲ₂が、インドール環に縮合した２つのナフチル基であるインドールを考える
。考えられるさらに別のインドール分子は、Ｒ₁がフェニルであり、Ｒ₂がＣＨ₃
のものである。

【００１８】また、一般式：

【化１４】［式中、Ｒ₁は、ＯＲ、Ｂｒ、Ｃｌ、またはＦであり、Ｒ₂は、ＯＲ、ＮＨＣＯ₂
Ｒ、Ｃｌ、Ｆ、またはＨであり、Ｒ₃は、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＲ、またはＣＯ₂Ｒであ
り、Ｒ₄は、ＣｌまたはＢｒであり、Ｒ₅はＨであり、Ｒ₆はＨであり、Ｒ₇はＨで
あり、Ｒ₈は、共役系または芳香族系であり、Ｒ₉は、Ｈ、ＯＲ、ＣｌまたはＢｒ
であり、Ｒ₁₀は、Ｈ、ＯＲ、またはＣｌである］を有する尿素も本明細書で考えられる。より特定すると、Ｒ₁はＯＭｅであり得
、Ｒ₃またはＲ₄はＣｌであり得、さらにＲ₈は、Ｃ（＝Ｏ）ＰｈまたはＲ₇−Ｒ₈
の縮合芳香族環である。

【００１９】また、一般式：

【化１５】［式中、Ｒ₁、Ｒ₄およびＲ₅はＨであり、Ｒ₂および／またはＲ₃は、小さな電子
吸引基であり、Ｒ₆は、フェニル環を有するまたは有さない、Ｃ、Ｏ、Ｎまたは
Ｓを含む少なくとも６つの原子の置換または非置換アルキルである］を有する芳香族アミドも本明細書で考えられる。具体的には、芳香族アミドは、
Ｒ₄およびＲ₆が、Ｃ、Ｏ、ＮまたはＳの２〜６原子のより小さな共役系であり、
フェニル環を含むものであり得る。

【００２０】本発明の別の態様は、一般式：

【化１６】［式中、Ｒ₂は３，４−ジメトキシベンゼンまたはｐ−トルエンであり、Ｒ₃はＨ
であり、Ｒ₄は、ＣＯ₂Ｒ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、またはＨであり、Ｒ₅はＨであり
、Ｒ₆は、Ｈ、ＮＯ₂、ＳＯ₃Ｈ、ＮＨ₂、ＣＦ₃またはＣＣｌ₃であり、Ｒ₇は、ア
ルキル基、ＮＯ₂、ＳＯ₃Ｈ、ＮＨ₂、ＣＦ₃またはＣＣｌ₃であり、Ｒ₈はＨである
］を有するキノリンを提供する。特に、Ｒ₂が３，４−ジメトキシベンゼンであり
、Ｒ₃がＨであり、Ｒ₄がＣＯ₂Ｒであり、Ｒ₅がＨであり、Ｒ₆がＨであり、Ｒ₇が
Ｍｅであり、Ｒ₈がＨである組合せである。

【００２１】本発明の別の態様は、唯１つの機能的輸送体を発現する細胞を提供し（前記輸
送体はＮｏｒＡである）、候補阻害物質の存在下で、前記細胞を、輸送可能なエ
レメントと接触させ、そして、前記細胞による前記エレメントの輸送を、前記候
補阻害基質の非存在下での前記エレメントの輸送と比較することを含んでなるＮ
ｏｒＡの阻害剤についてスクリーニングする方法を考える。

【００２２】特に好ましい実施形態において、細胞は細菌細胞である。追加の好ましい実施
形態において、細菌細胞は、グラム陰性細菌細胞である。他の好ましい実施形態
において、細菌細胞は、グラム陽性細菌細胞である。より特定すると、グラム陽
性細菌細胞は、枯草菌細胞である。具体的な実施形態において、枯草菌細胞は、
破壊されたＢｍｒおよびＢｌｔ遺伝子を含むと考えられる。

【００２３】他の好ましい実施形態において、ＮｏｒＡは、黄色ブドウ球菌ＮｏｒＡ、肺炎
レンサ球菌多剤輸送体、またはエンテロコッカス・フェカーリス多剤輸送体であ
ると考えられる。特定の実施形態において、輸送可能なエレメントは、臭化エチ
ジウムである。他の実施形態において、輸送可能なエレメントはフルオロキノロ
ンである。

【００２４】本発明の別の態様は、細菌感染に罹患した対象（被検者）を処置する方法であ
って、前記対象にフルオロキノロンおよびＮｏｒＡ阻害剤を提供することを含ん
でなり、前記阻害剤はインドール、尿素または芳香族アミドである方法を提供す
る。好ましい実施形態において、細菌は、肺炎レンサ球菌、エンテロコッカス・
フェカーリス、黄色ブドウ球菌、化膿レンサ球菌、大腸菌、緑膿菌、表皮ブドウ
球菌、スメグマ菌、およびセラチア・マルケセンスである。

【００２５】また本明細書で、フルオロキノロンおよびＮｏｒＡ阻害剤を含む医薬組成物が
提供され、前記阻害剤は、インドール、尿素または芳香族アミドである。ある実
施形態において、フルオロキノロンは、スパルフロキサシン、レボフロキサシン
、グレパフロキサシン、テマフロキサシン、クリナフロキサシン、Ｂａｙ１２−
８０３９、トロバフロキサシン、ＤＵ６８５９ａ、サラフロキサシンからなる群
から選択される。フルオロキノロンに加えて、フルオロナフチリドンなどの他の
キノロンが、本発明の組成物に有用であり得ると考えられる。特に好ましいキノ
ロンはＬＢ２０３０４である。勿論、当業者は、本発明の阻害剤と組合せ得る、
他の抗細菌フルオロキノロンが存在することを認識する。従って、本発明は、列
挙したフルオロキノロンのみを用いた組成物でにおける使用に限定されず、むし
ろ、阻害剤は、任意のフルオロキノロンまたは抗細菌活性を有する他の薬剤との
組合せで有用である。さらに、本発明の阻害剤は、細菌での多剤輸送体により創
製される耐性の存在がなければ、細菌の増殖の死滅、減少またはさもなくば消失
に効果的であるか効果的であろう抗細菌剤と共に有用である。

【００２６】本発明の別の態様は、真菌を、真菌多剤輸送タンパク質の阻害剤と接触させる
ことを含んでなるアゾール抗真菌剤の抗真菌作用を増強する方法を記載し、前記
阻害剤は、インドール、尿素、芳香族アミドまたはキノリンである。より特定す
ると、インドールは、一般式Ｉを有し、尿素は一般式ＩＩを有し、芳香族アミド
は一般式ＩＩＩを有し、キノリンは一般式ＸＶを有する。特に、真菌は、カンジ
ダ、クリプトコッカス、ブラストミセス、ヒストプラズマ、トルロピス、コクシ
ジオイデス、パラコクシジオイデスおよびアスペルギルスからなる群から選択さ
れる種に由来する。勿論、当業者は、本発明は、これらの真菌感染の処置のみに
限定されず、むしろ、阻害剤は、多くの他の真菌種に対して有用のようであるこ
とを認識する。

【００２７】本発明のさらに別の実施形態は、唯１つの機能的輸送体のみを発現する細胞を
提供し（前記輸送体は真菌多剤輸送体である）、候補阻害物質の存在下で、前記
細胞を、輸送可能なエレメントと接触させ、そして、前記細胞による前記エレメ
ントの輸送を、前記候補阻害基質の非存在下での前記エレメントの輸送と比較す
ることを含んでなる真菌多剤輸送体阻害剤についてスクリーニングする方法を提
供する。具体的な実施形態において、細胞は真菌細胞である。

【００２８】特に好ましい実施形態において、細胞は、カンジダ種である。他の好ましい実
施形態において、多剤輸送体は、カンジダ多剤輸送体である。ある実施形態にお
いて、抗真菌剤は、トリアゾール抗真菌剤である。他の好ましい実施形態におい
て、トリアゾールは、ケトコナゾール、ミコナゾール、イトラコナゾール、フル
コナゾール、グリセオフルコナゾール、クロトリマゾール、エコナゾール、テル
コナゾールおよびブタコナゾールからなる群から選択される。これらのトリアゾ
ール抗真菌剤は、例示的薬剤であり、追加のアゾールも本発明に有用であり得る
ことを理解する。かかる追加のアゾールは、列挙したこれらのアゾールから得ら
れ得るか、またはこれらの化合物と類似の作用形態を有する。

【００２９】本発明の別の態様は、真菌感染に罹患した対象（被検者）を処置する方法であ
って、前記対象に、アゾール抗真菌剤および真菌多剤輸送タンパク質阻害剤を提
供することを含んでなり、前記阻害剤はインドール、尿素、芳香族アミドまたは
キノリンである方法を提供する。具体的な実施形態において、抗真菌剤は、ケト
コナゾール、ミコナゾール、イトラコナゾール、フルコナゾール、グリセオフル
コナゾール、クロトリマゾール、エコナゾール、テルコナゾールおよびブタコナ
ゾールからなる群から選択される。

【００３０】また本明細書で、アゾール抗真菌剤および真菌多剤輸送体阻害剤を含む医薬組
成物も提供され、前記阻害剤は、インドール、尿素または芳香族アミドである。

【００３１】本発明の他の目的、特徴および利点は、以下の詳細な説明から明らかとなろう
。しかし、詳細な説明および具体的な実施例は、ここでは本発明の好ましい実施
形態を示しているが、単に説明のために提供されることを理解する。よって本発
明の精神および範囲内の様々な変更および修飾が、この詳細な説明から当業者に
は明らかとなろう。

【００３２】本特許のファイルは、カラーで作成した少なくとも１つの図面を含む。カラー
図面（群）を含む本特許のコピーは、要請および必要な料金の支払い時に、米国
特許商標庁により提供される。以下の図面は、本明細書の一部を形成し、本発明
のある態様をさらに実証するために含まれる。本発明は、本明細書に提示した具
体的な実施形態の詳細な記載と組合せて、１つ以上のこれらの図面を参照してよ
り良く理解されよう。

【００３３】（例示的実施形態の説明）グラム陽性病原細菌である黄色ブドウ球菌および肺炎レンサ球菌の多剤排出輸
送体の臨床的に有用な阻害剤の開発は、これらの日和見グラム陽性感染を効果的
に処置したい場合に必須である。上記したように、グラム陽性感染は、処置が困
難なことで有名である。グラム陽性感染の効果的な処置に対する１つの主な障害
は、多剤輸送体により媒介される抗生物質耐性である。これらの輸送体は、フル
オロキノロン抗生物質に対する内在的および後天的耐性の両方に関与する。２つ
の極めて臨床的に重要な病原体であるブドウ球菌属および肺炎球菌属は、フルオ
ロキノロン療法に特に難治性である。さらに、真菌病原体はまた、ＮｏｒＡとか
なりの相同性を共有する多剤輸送体を有することが知られている。本出願は、細
菌病原体の多剤輸送体の阻害は、これらの病原体のフルオロキノロンに対する内
在的感受性が増加すること並びに薬剤耐性変異形の出現を抑制することの両方に
より、フルオロキノロン療法の効力を劇的に増加させることを実証する。さらに
、ＮｏｒＡに対して活性であると本明細書に同定した阻害剤はまた、真菌多剤輸
送体と交差反応性を示すようであり、内在的または後天的アゾール耐性を減少さ
せることによりアゾール抗真菌剤の抗真菌効果を増強するに有用であることが判
明する。

【００３４】本発明は、多剤輸送体阻害剤と組合わせたフルオロキノロンの使用により、そ
の有効濃度を数倍減少させることにより（その実際的に到達可能な組織レベルよ
り十分下に移動）、および、薬物耐性変異形の出現を防ぐことの両方により、こ
れらの抗生物質の抗細菌効力を劇的に向上させることを示す。これらの阻害剤は
また、抗真菌適用にも有用であり得る。

【００３５】本発明以前には、レセルピンが、唯一の既知の細菌多剤輸送体阻害剤であった
。残念なことに、レセルピンは、必要濃度でのその神経毒性から、フルオロキノ
ロンの増強に使用できない。発明者は、代替の阻害剤を開発できることを実証し
、黄色ブドウ球菌および肺炎レンサ球菌の両方の多剤輸送体に対して高度に活性
な、多くの構造的に多様なリード化合物を同定した。新規に同定された阻害剤の
この交差種活性は、非常に励みになる。大半の臨床症例、例えば、肺炎、中耳炎
等において、医師は、病原体の生物学的性質を知ることなく患者の処置を強いら
れることが多い。本発明は、潜在的に広い臨床的有用性をもつ強力な数々の広域
スペクトル阻害剤を提供する。

【００３６】１．本発明発明者は、合成化学物質ライブラリーをスクリーニングし、黄色ブドウ球菌多
剤輸送体ＮｏｒＡを効果的に阻害する数個の有望なリード化合物を同定した。こ
れらのリード化合物のいくつかは、現在は同定されていない肺炎レンサ球菌の多
剤輸送体に対しても効果的であることが判明した。

【００３７】化合物ライブラリーをスクリーニングし、３９９個の化合物が、可能性ある阻
害剤として示唆された。これらの３９９個の中で、５４個が、５μｇ／ｍＬまた
はそれ以下で活性を示したが、他のものは、１０〜２０μｇ／ｍＬで中程度から
低い活性を示した。３個の最も強力な化合物を、インドール部分を有するＩＮＦ
５５、尿素化合物であるＩＮＦ２７１、および芳香族アミド官能基を有するＩＮ
Ｆ２４０として以下に示す。ＮｏｒＡが１つ以上の潜在的な結合部位を有するか
どうかは不明であるので、化合物をインドール（ニトロインドール）、尿素、お
よび芳香族アミドの３群にさらに分類した。これらの３クラスの化合物を、提供
された活性データを使用して評価し、ＣｏＭＦＡ場を、３Ｄ−ＱＳＡＲ関係が存
在するかを調べるために作成した。

【００３８】ＩＦＮ５５、ＩＮＦ２７１およびＩＮＦ２４０の構造

【化１７】

【００３９】実施した解析から得られた洞察を使用して、本発明は、細菌を、フルオロキノ
ロン療法と組合わせてＮｏｒＡ阻害剤と接触させることを含んでなるフルオロキ
ノロンの抗細菌作用を増強する方法を提供する。それ故、阻害剤は、インドール
、尿素または芳香族アミドであり得る。より特定すると、インドールは、Ｒ₁が
、フェニル、２−ナフチル、またはｏ−アニソールであり、Ｒ₂が、ＨまたはＣ
Ｈ₃であり、Ｒ₁およびＲ₂が、インドール環に縮合した２つのナフチル基であり
、Ｒ₃がＨであり、Ｒ₄がＮＯ₂、ＳＯ₃Ｈ、ＮＨ₂、およびＣＦ₃またはＣＣｌ₃で
あり、Ｒ₅がＨであり、Ｒ₆がＨである一般式（Ｉ）を有する。

【化１８】

【００４０】本発明に使用したインドールの特定の例において、Ｒ₁はフェニル基であり、
Ｒ₄はＳＯ₃Ｈ基であり（構造ＩＶ）、別の例では、インドールは、Ｒ₁にフェニ
ル基およびＲ₄にＮＯ₂基を有する（構造Ｖ）。構造ＶＩは、Ｒ₁が２−ナフチル
であり、Ｒ₄がＣＣｌ₃である本発明のインドールを示し、構造ＶＩＩのインドー
ルは、Ｒ₁に２−ナフチルおよびＲ₄にＣＦ₃を有する。構造ＶＩＩＩは、Ｒ₁がｏ
−アニソールであり、Ｒ₄がＮＯ₂である本発明のインドールを示す。本発明のさ
らに別のインドールは、インドール環に縮合したナフチル基を有する（構造ＩＸ
）。Ｒ₁がフェニルであり、Ｒ₂がＣＨ₃である構造（構造Ｘ）も本発明に有用で
あると考えられ、この構造を有するより特定して定義したインドールは、構造Ｘ
Ｉに示され、ここでＲ₄は、ＮＯ₂基としてさらに定義される。勿論、これらは、
本発明の例示的なインドールであり、追加のインドールも、本明細書に記載した
ように有用であり得る。

【化１９】

【化２０】

【化２１】

【００４１】本発明の具体的な実施形態において、阻害剤は、一般式：

【化２２】［式中、Ｒ₁は、ＯＲ、Ｂｒ、ＣｌまたはＦであり、Ｒ₂は、ＯＲ、ＮＨＣＯ₂Ｒ
、Ｃｌ、Ｆ、またはＨであり、Ｒ₃は、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＲ、またはＣＯ₂Ｒであり
、Ｒ₄はＣｌまたはＢｒであり、Ｒ₅はＨであり、Ｒ₆はＨであり、Ｒ₇はＨであり
、Ｒ₈は、共役系または芳香族系であり、Ｒ₉は、Ｈ、ＯＲ、Ｃｌ、またはＢｒで
あり、Ｒ₁₀は、Ｈ、ＯＲ、またはＣｌである］を有する尿素である。より特定すると、本発明は、Ｒ₁がＯＭｅであり、Ｒ₃また
はＲ₄がＣｌであり得、さらにＲ₈がＣ（＝Ｏ）Ｐｈであり、Ｒ₇−Ｒ₈で縮合芳香
族環であるか、またはＲ₇でＰｈであるビフェニル尿素を考える。他の例におい
て、Ｒ₁がＯＭｅであり、Ｒ₄がＣｌであり、そしてＲ₉が、ＯＲ、Ｂｒ、または
Ｉである。ある例はまた、Ｒ₂およびＲ₃がＣｌであり、Ｒ₈がＣ（＝Ｏ）Ｐｈで
あり、Ｒ₄がＣｌであるか、またはＲ₁およびＲ₄がＣｌであるか、またはＲ₉がＯ
Ｒである、尿素（ＩＩ）を有する。

【００４２】具体的な実施形態において、阻害剤は、一般式：

【化２３】［式中、Ｒ₁、Ｒ₄およびＲ₅はＨであり、Ｒ₂および／またはＲ₃は、小さい電子
吸引基であり、そしてＲ₆は、フェニル環を有するまたは有さない、Ｏ、Ｎ、ま
たはＳを含む少なくとも６つの原子の置換または非置換アルキルである］を有する芳香族アミドである。より特定すると、電子吸引基は、ＣｌまたはＦ部
分であり得る。本発明の他の芳香族アミドは、Ｒ₄およびＲ₆に、Ｃ、Ｏ、Ｎまた
はＳの２〜６原子のより小さい共役系を有し、フェニル環を含む。

【００４３】他の実施形態において、阻害剤は、一般式：

【化２４】［式中、Ｒ₂は、３，４−ジメトキシベンゼンまたはｐ−トルエンであり得、Ｒ₃ はＨであり、Ｒ₄は、ＣＯ₂Ｒ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ₂またはＨであり、Ｒ₅はＨであり
、Ｒ₆は、Ｈ、ＮＯ₂、ＳＯ₃Ｈ、ＮＨ₂、ＣＦ₃またはＣＣｌ₃であり、Ｒ₇は、ア
ルキル基、ＮＯ₂、ＳＯ₃Ｈ、ＮＨ₂、ＣＦ₃またはＣＣｌ₃であり、Ｒ₈はＨである
］を有するキノリンである。特に、Ｒ₂が３，４−ジメトキシベンゼンであり、Ｒ₃ がＨであり、Ｒ₄がＣＯ₂Ｒであり、Ｒ₅がＨであり、Ｒ₆がＨであり、Ｒ₇がＭｅ
であり、そしてＲ₈がＨである組合せである。

【００４４】本明細書は、上記化合物が、細菌およびより特定するとグラム陽性細菌感染の
処置に、フルオロキノロンと組合せて有用であることを示す。これらの化合物は
また、抗真菌適用にも有用であり得る。これらの化合物を製造および／またはそ
の活性をスクリーニングするための方法および組成物は、本明細書の以下にさら
に詳細に議論する。同様に、これらの化合物は、細菌および真菌病原体の多剤輸
送体の阻害剤として有用な追加の化合物を製造するためのリード化合物として使
用し得る。

【００４５】２．多剤耐性細菌における薬物排出タンパク質細菌は、その細胞質膜に数々の輸送タンパク質を含む。多くのこれらのタンパ
ク質が、毒性化合物に対する内在的および後天的耐性の付与に重要な役割を果た
している。枯草菌（Bacillus subtilis）のＢｍｒ（Ｎｅｙｆａｋｈら、１９９
１）、Ｂｌｔ（Ａｈｍｅｄら、１９９５）、Ｂｍｒ３（ＯｈｋｉおよびＭｕｒａ
ｔａ、１９９７）、黄色ブドウ球菌のＮｏｒＡ（Ｎｅｙｆａｋｈら、１９９３；
Ｙｏｓｈｉｄａら、１９９０）、乳酸菌（Lactobacillus lactis）のＬｍｒＰ（
Ｂｏｌｈｕｉｓら、１９９５）およびＬｍｒＡ（ｖａｎＶｅｅｎら、１９９６
）、およびスメグマ菌のＬｆｒＡ（Ｔａｋｉｆｆら、１９９６）を含む数個の染
色体性にコードされた多剤輸送体がグラム陽性細菌で同定されている。

【００４６】グラム陰性感染を制御するための最も効果的な方式の１つは、フルオロキノロ
ン化合物を使用する。このような化合物の１であるシプロフロキサシン（Ｄａｖ
ｉｓら、１９９６）は、医薬に使用される全キノロンの９０％を占める（Ａｃａ
ｒおよびＧｏｌｄｓｔｅｉｎ、１９９７）。その活性スペクトル、経口で利用で
きること、および比較的コストが低いことから、シプロフロキサシンは、病因が
不明である感染を含む広範囲の感染の処置に使用されてきた。ほとんどのグラム
陰性微生物に対して活性が高いが（０．１μｇ／ｍｌの範囲のＭＩＣ₉₀）、シプ
ロフロキサシンは、グラム陽性感染、特に好気性グラム陽性球菌には効力がはる
かに低い。黄色ブドウ球菌、Ｅ．フェカーリスおよび肺炎レンサ球菌のＭＩＣ₉₀ 値は、１〜５μｇ／ｍｌの範囲であるが、達成可能なシプロフロキサシンの組織
濃度は、僅か４μｇ／ｍｌである（Ｄａｖｉｓら、１９９６）。シプロフロキサ
シンに対する内在的な高い耐性、並びに、ヒトおよび脊椎動物の両方の医薬にお
けるキノロンの広範な使用により、シプロフロキサシン耐性グラム陽性株が出現
および普及した。この耐性は、グラム陽性細菌における特定の多剤輸送体の存在
に起因すると考えられる。

【００４７】フルオロキノロンに対するグラム陽性球菌の内在的耐性に関与することに加え
て、多剤輸送体は、後天的耐性に寄与し、これは、これらの抗生物質への曝露時
に選択される。黄色ブドウ球菌および肺炎レンサ球菌では、後天的耐性は、これ
まで、フルオロキノロン作用の標的のトポイソメラーゼＩＶおよびＤＮＡジャイ
レースにおける連続的な変異の獲得に主に帰していた（ＧａｍｂａｕおよびＧｕ
ｔｍａｎ、１９９３；Ｆｅｒｒｅｒｏら、１９９４；ＭｕｎｏｚおよびＤｅＬ
ａＣａｍｐａ、１９９６；Ｔａｎｋｏｖｉ、１９９６）。Ｅ．フェカーリスで
のフルオロキノロン耐性機序の研究が少ないことから、ジャイレースの変異は、
少なくともいくつかの耐性レベルの高い単離株に存在しているようである（Ｋｏ
ｒｔｅｎら、１９９４）。しかし、近年、これらの後天的耐性機序は、多剤輸送
体の過剰発現により補完されることが明らかとなってきた。このような過剰発現
は、輸送体遺伝子の増幅により（Ｎｅｙｆａｋｈ、１９９１）、または、これら
の遺伝子の調節領域またはその転写を制御するタンパク質の変異により生じ得る
（Ａｈｍｅｄら、１９９５；ＫａａｔｚおよびＳｅｏ、１９９５）。

【００４８】ＮｏｒＡは、細菌細胞からの活発な排出により、多くの汎用されているフルオ
ロキノロン抗生物質を含む、様々な非関連化合物に対する、病原体黄色ブドウ球
菌の内在的および後天的耐性の両方に関与する多剤輸送体である。本発明は、Ｎ
ｏｒＡの多くの阻害剤を同定および特徴づける。

【００４９】発明者の近年の研究により、多剤排出機序はまた、シプロフロキサシンには中
程度の感受性しか有さない（ＭＩＣ₉₀１〜２μｇ／ｍｌ）別の臨床的に重要なグ
ラム陽性病原体である、肺炎レンサ球菌の内在的および後天的フルオロキノロン
耐性にも寄与するようであることが示される。本発明は、いくつかの最も活性な
ＮｏｒＡ阻害剤は、肺炎レンサ球菌においてシプロフロキサシン細菌毒性を促進
するのにも効果的であることを示す。発明者は、リード阻害剤は、黄色ブドウ球
菌だけでなく、肺炎レンサ球菌およびＥ．フェカーリスにおいてフルオロキノロ
ン細菌毒性を促進するのにも効果的であることを示唆する。以下の章は、近年の
知見を要約し、多剤排出機序が、肺炎レンサ球菌のシプロフロキサシン耐性に関
与することを支持する。

【００５０】本発明者は、近年、臭化エチジウムへの耐性増加について選択した肺炎レンサ
球菌における排出依存性フルオロキノロン耐性機序の存在を報告した（Ｂａｒａ
ｎｏｖａおよびＮｅｙｆａｋｈ、１９９７）。ＥＢＲと称される選択株でのエチ
ジウム耐性は、この薬物の排出増加から生じることが示された。ＥＢＲはまた、
フルオロキノロンのシプロフロキサシンおよびノルフロキサシンに対する耐性の
増加を示し、これは、仮にＰｍｒＡと名付けた多剤排出輸送体の寄与を示唆する
。この株の、ＢｍｒおよびＮｏｒＡ基質ローダミンに対する交差耐性は観察され
ていないが、無毒性濃度でのレセルピンは、エチジウム排出を阻害し、エチジウ
ムおよびフルオロキノロンの両方に対する耐性を逆転させた。さらに、レセルピ
ンは、野生型肺炎レンサ球菌の、エチジウムおよびフルオロキノロンに対する感
受性を２〜３倍増強することが示された。これにより、グラム陽性細菌の他の多
剤輸送体と同様に、この排出機序は、肺炎レンサ球菌のフルオロキノロン抗生物
質に対する内在的および後天的耐性に寄与し得ることを示唆する。

【００５１】黄色ブドウ球菌に類似して、トポイソメラーゼＩＶの変異が、段階的に選択し
た肺炎レンサ球菌のシプロフロキサシン耐性変異体のジャイレースの変異に先行
する（Ｔａｎｋｏｖｉｃら、１９９６）。しかし、黄色ブドウ球菌とは異なり、
トポイソメラーゼＩＶの変異の獲得に先行する追加の段階が存在するようであり
、すなわち、選択した細胞は、トポイソメラーゼまたはジャイレース遺伝子に検
出可能な変異を有さずに、フルオロキノロン耐性の上昇を示す（Ｔａｎｋｏｖｉ
ｃら、１９９６）。発明者は、この段階でのフルオロキノロン耐性は、推定上の
多剤排出輸送体ＰｍｒＡの発現増加から生じ得、従って、かかる変異体が、臭化
エチジウムに対する交差耐性を示すだけでなく、レセルピンも、その増大した薬
物耐性を減少させるであろうと推測した。この可能性を調べるために、発明者は
、インビトロで、シプロフロキサシンのＭＩＣ（２μｇ／ｍｌ）の４倍に耐性の
、肺炎レンサ球菌の第一段階の変異体（ＡＴＣＣ４９６１９）を選択した。１０ ⁹ 個の細胞を選択すると、かかる変異体が１５個得られ、その中の３個をさらに
解析した。親株と比較して、３個全ての変異体が、シプロフロキサシンＭＩＣの
８倍増加を示した。興味深いことに、これら３個の変異体の臭化エチジウムのＭ
ＩＣも、８〜１６倍増加した。さらに、レセルピンの無毒性濃度は、シプロフロ
キサシンおよび臭化エチジウムの両方に対する耐性を逆転させた。ＥＢＲ株と同
様に、ローダミンに対する耐性の増加は観察されず、これは、同じ輸送体Ｐｍｒ
Ａの関与を示唆する。

【００５２】これらのデータは、多剤排出輸送体は、肺炎レンサ球菌の内在的フルオロキノ
ロンに寄与するだけでなく、この病原体の第一段階変異体のフルオロキノロンに
対する耐性も媒介することを示す。この概念を支持して、Ｚｅｌｌｅｒら（１９
９７）は、近年、ＴｏｐｏＩＶに変化を有さない、第一段階のインビトロで選択
したシプロフロキサシン耐性の肺炎レンサ球菌変異体は、シプロフロキサシンの
排出増加およびＮｏｒＡ発現により付与されるプロフィールに似た薬物耐性プロ
フィールを示すことを報告した。

【００５３】多剤輸送体はまた、抗真菌剤に対する重要な真菌病原体の内在的および後天的
耐性の両方に重要な役割を果たす。特に、多剤輸送体は、アゾール抗真菌剤に対
する、全院内感染の第四に主要な原因である、カンジダ・アルビカンスの耐性に
寄与する。多くのこれらの真菌多剤輸送体が、膜輸送体の主要な促進因子スーパ
ーファミリーに属し、ＮｏｒＡとかなりの相同性を共有する。ＮｏｒＡに対して
活性と同定された阻害剤は、真菌多剤輸送体と交差反応性を示す可能性が高いよ
うであり、内在的または後天的アゾール耐性を減少させることにより、アゾール
抗真菌剤の抗真菌効果を増強するのに有用であることが判明する。

【００５４】３．リード阻害剤の多様な類似体の化学合成本明細書のいずれかに記載したように、発明者は、様々な多剤輸送体阻害活性
を有するかなりの化合物データベースを保有する。少なくとも数個の場合におい
て、芳香環上の１つの位置分の結合の移動が、いくつかの最も強力な阻害剤の活
性をかなり消失させ得ることは特に興味深く、これは、結合および阻害に非常に
特異的な構造必要条件があることを示唆する。活性および不活性類似体の両方に
関する広範な構造的情報が入手できることにより、活性に対する様々な構造変化
の効果に関する質の高い解析が提供される。

【００５５】多くのこれらの阻害剤は非常に柔軟であり、これにより、慣用的な「２Ｄ」Ｑ
ＳＡＲ解析の実施は実際的でない。しかし、３Ｄ幾何学による化合物の分類、お
よび活性の様々な「分子場」効果への分解を可能とする近年の技術が開発されて
いる。ＤＩＳＣＯ（Ｔｒｉｐｏｓ）およびＣｏＭＦＡ（Ｔｒｉｐｏｓ）ソフトウ
ェアが、これらの解析に使用された。従って、この解析の目的は、重要なファル
マコフォア間の３次元すなわち「トポロジー的」関係に重点を置いて、結合特異
性の増強に最も効果的である、様々な阻害剤の構造的特徴を決定することであっ
た。

【００５６】前記したように、最も活性の高い活性阻害剤は、数個の化学的に異なるクラス
に該当し、これは、複数の結合機構が存在し、異なる化学構造は、排出タンパク
質内の部分的にまたは完全に別個の部位に結合する。しかし、構造活性パターン
のＤＩＳＣＯ解析により、類似の機構で結合する化合物をクラスター形成し、明
らかに異なる様式で結合するクラスター間を識別することが可能である（Ｍａｒ
ｔｉｎら、１９９３）。この戦略を使用して、物理的に異なる機構で結合してい
る様々な化学的クラスの確率を評価することが可能である。「コア」化学構造は
異なるが、いくつかの「外部」部分の類似性により、３次元トポロジーに類似性
が存在し得ることが示唆されることを注記する。

【００５７】ＩＮＦ５５およびＩＮＦ２７１は、より高い活性を有するさらなる類似体の予
測のためのファルマコフォアモデルとして使用した。なぜなら、発明者の最初の
データにより、これらの２つの阻害剤は、両方共、効果的な阻害剤であり、耐性
の発達がほぼ最小限である機構で結合するようであることが示されたからである
。次いで、これらのファルマコフォアモデルおよび発明者の他の活性の高い阻害
剤を、以下に図で概略を示した合成戦略の指針として使用する。それ故、本章は、科学的および経済的理由の両方のために、第二世代の阻害剤
類似体の開発における、慣用的な化学合成戦略の詳細を提供する。この段階で、
発明者は、類似体開発のために幾分異なる合成戦略を必要とする数個のリード化
合物を有する。これらのリード化合物は、３つの広いクラスのインドール、尿素
および芳香族アミドに該当する。これらの各クラスの合成戦略は本章で議論する
。

【００５８】ａ．インドール最初のスクリーニングプロセスは、一連のニトロインドール誘導体を同定した
。これらの中で最も強力なのは、化合物１〜６であり、その活性は１＞２〜３＞
４〜５〜６の順に減少する。

【化２５】Ｚ＝電子吸引基、Ｘ＝電子供与基、Ｙ＝ヘテロ原子置換基、Ｒ＝親油性基

【００５９】これらの６個の化合物は、広く、ｉ）インドール部分のベンゼン環に電子吸引
性ニトロ基、およびｉｉ）ヘテロ環の２または３位または両方に結合した親油性
アルキルまたはアリール基を有するとして要約され得る。ベンゼン環上に電子供
与基および／またはヘテロ環上に極性ヘテロ原子をベースにした側鎖を有するさ
らなる一連のインドールは、かなり低い活性またはさらには不活性と考えた。全
ての活性インドールは、遊離インドールＮＨ基を有する。従って、このシリーズ
の化合物では、式（７）により示される一般的なクラスの合理的な類似体の系統
的試験を行うことが最も適切のようである。合成は段階的に進行する。第一に、
２および３−アルキルまたはアリールインドール誘導体のさらなるシリーズ（全
て５−ニトロ置換基を有する）を合成する。続いて、最適なアルキル基および位
置で、電子吸引基の性質および位置を系統的に変化させることが可能である。

【００６０】ｉ．親油性置換基の最適化構造１〜４の賢明な組合せにより、化合物９および１０は、調査に高い優先性
を有することが示唆される。９も１０も既知化合物ではないが、ニトロ基がプロ
トンにより置換された対応する誘導体は両方共知られており、フィッシャーイン
ドール合成により調製されている（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ、１９８２；Ｋｕｌａｇｏ
ｗｓｋｉら、１９８５；ＫａｔｒｉｔｚｋｙおよびＷａｎｇ、１９８８）。これ
により、発明者は、９および１０は両方共、４−ニトロフェニルヒドラジンと、
それぞれα−およびβ−テトラロンのフィッシャーインドール反応により１段階
で入手できるという高い確信を得ることができる（スキーム１および２）。全て
のこれらの出発物質は市販で入手できる。発明者は、１１が１０の合成の少量生
成物であると期待しており、１１はクロマトグラフィーで１０から容易に分離さ
れ、日常的なＮＭＲ分光法により容易に識別され、そして勿論、活性についてス
クリーニングされる。

【００６１】スキーム１４−ニトロフェニルヒドラジンとα−テトラロンの１段階フィッシ
ャーインドール反応を使用した化合物９の合成スキーム２４−ニトロフェニルヒドラジンとβ−テトラロンの１段階フィッシ
ャーインドール反応を使用した化合物１０および１１の合成

【化２６】

【００６２】化合物１および化合物３の両方のフェニルおよびインドール環は、立体相互作
用を最小限にするために、例えば化合物１３に示したように非平面コンフォメー
ションを採用するようである。これが実際に事実である場合、および主コンフォ
メーションが束縛コンフォメーションである場合、モデル１０および１１は、共
平面に近い２つのアリール基を有するので、理想以下である。この可能性につい
て試験するために、化合物１０および化合物１１のより高い相同体（化合物１４
〜１７）を、再度α−およびβ−テトラロンを、対応する容易に入手できるベン
ゾシクロヘプタノンおよびベンゾシクロオクタノンにより置換するフィッシャー
インドール合成により合成する。このシリーズで、ｎが１から２から３に増加す
ると、２つの環の間のねじれ角は増加し、結合に最適なコンフォメーションの探
索が可能となる。最大ねじれ角（９０°）は、化合物１８のように、鎖状系を介
して最も良く探索される。ここでも、この系は、ケトン成分として２−メチルプ
ロピオフェノンを使用して、フィッシャーインドール合成により得ることができ
る。このシリーズの束縛２−および３−フェニルインドール類似体に加えて、２
および３位が十分である脂肪族置換基も有用であり得、実際、化合物２および化
合物５の活性は、これは事実であり得ることを示唆する。アルキル基のかさが系
統的に増加したかかるシリーズの化合物も、フィッシャーインドール合成により
容易に得ることができる。例えば、位置異性体１９および２０は、４−ニトロフ
ェニルヒドラジンと、それぞれピナコロン（ｔｅｒｔ−ブチルメチルケトン）お
よび２−ｔｅｒｔ−ブチルアセトアルデヒドとの縮合により調製する。

【００６３】

【化２７】

【００６４】上記の各４−ニトロインドールの調製は、極めて単刀直入であり、４−ニトロ
フェニルヒドラジンおよび単純なケトンから１段階で行う。さらに、必要なほと
んどのケトンは、市販で入手できる。市販で入手できないものは、全て既知化合
物であり、その短く簡単な調製が文献に記載されている。従って、当業者は、ス
クリーニングに十分な量のこれらの化合物を調製および精製できる。これらの化
合物から、次いで、さらなるアルキルおよびアリール組合せを、初期相の後にア
ッセイし得ると期待される。

【００６５】ｉｉ．電子吸引基の位置および性質２および３位でアルキルおよびアリール基の最適の組合せが確立されたので、
ベンゼン環の極性基の最善の位置を決定する。これは、比較的単刀直入なプロセ
スを含む。なぜなら、５−ニトロ誘導体にすでに使用したｐ−ニトロフェニルヒ
ドラジンに加えて、ｏ−およびｍ−ニトロフェニルヒドラジンも市販で入手でき
る化合物であるからである。合成は、例示的ケトンとしてアセトフェノンを用い
て、スキーム３および４で説明し、これにより、調査の初期相からの最も活性の
ある阻害剤であった２−フェニル−５−ニトロ化合物（化合物１）の位置異性体
が得られる。しかし、上記のスキーム１および２の合成から決定したように、疎
水性基の最適な選択をもたらすケトンを、これらの日常的なインドール合成に実
際的に使用することが理解される。

【００６６】ｍ−ニトロフェニルヒドラジンを用いて、合成により、４−および６−ニトロ
インドール、それぞれ、すなわち化合物２１、およびすなわち化合物２２の混合
物が得られる（スキーム３）。これらの化合物は、標準的なクロマトグラフィー
法を使用して分離する。続くＮＭＲ分光法で、分離した化合物に適切な構造を指
摘する。７ニトロインドール誘導体２３は、スキーム４に示したようにｏ−ニト
ロフェニルヒドラジンを使用して調製する。

【００６７】スキーム３ｍ−ニトロフェニルヒドラジンを使用した化合物２１および２２の
合成スキーム４ｏ−ニトロフェニルヒドラジンを使用した化合物２３の合成

【化２８】

【００６８】最後に、発明者は次に、電子吸引基の性質のことを考えた。この合成のリード
化合物は、ヘテロ環の親油性基の化合物からの最適阻害活性を示し、両方共上記
で決定したようなベンゼン環の最適位置のものである。以下は、リード化合物１
のように、５位に電子吸引基をもつ２−フェニルインドールの合成の化学反応の
説明を提供する。同様に、本明細書に記載の最適阻害活性が判明した任意の他の
位置異性体は、スキーム３および４に概略を示したように誘導体化し得る。

【００６９】別に、適切に置換されたヒドラジンが市販で入手できる場合には、発明者はそ
れをフィッシャーインドール反応にかける。これは４−フルオルおよび４−メチ
ルスルホニルヒドラジンの場合であった（スキーム５）。発明者は、２−および
３−フルオロフェニルヒドラジンも市販されていることを記述し、これは、位置
異性体インドールは必要である場合には最小限の努力で入手できることを意味す
る。

【００７０】スキーム５４−フルオロ−および４−メチルスルホニルヒドラジンからの化合
物２４および２５の合成

【化２９】

【００７１】ある場合には、対応する置換アニリン誘導体からフィッシャーインドール反応
に必要なヒドラゾンを合成することが簡便であることが分かる。例えば、このア
プローチは、ｏ−、ｍ−およびｐ−トリフルオロメチルアニリンは全て容易に市
販で入手できるので、トリフルオロメチル置換シリーズ（スキーム６）に簡便で
あり得る。

【００７２】同様に、同じ反応形式を使用して、２−フェニル５−ヨードインドール（また
はその位置異性体）を調製し得、これは続いてインドール窒素上でベンジル化す
ると、誘導体化合物２７が得られる（スキーム７）。

【００７３】スキーム６化合物２６の合成

【化３０】

【００７４】化合物２７は、ｔｅｒｔ−ブチルリチウムを用いて金属交換反応すると、５−
リト誘導体化合物２８が得られ得、これは次いでカルボン酸（化合物２９）、ス
ルホン酸（化合物３０）、およびホスホン酸（化合物３１）誘導体の誘導に役立
つ。これらの各カップリングは、水素化分解によるＮ−ベンジルインドールの最
終的脱保護を必要とする（スキーム８）。

【化３１】

【００７５】ｂ．尿素化合物最初のスクリーニングで、発明者は、高い阻害活性を有するが、かなり構造的
に変化した３個の尿素化合物（３２〜２４）を単離した。これらの尿素リードの
最適化は、本明細書の以下に詳述する。

【００７６】尿素の化学反応は、比較的単刀直入であり、医薬品化学における前記化合物の
効力は十分によく確立されている。ＨＩＶの処置のために過去数年間に導入され
た極めて成功裡の尿素をベースとしたプロテアーゼ阻害剤ほどよく強調されてい
るものはない。尿素をベースとしたプロテアーゼ阻害化合物は、ここで描く構造
よりもかなり複雑であるが、尿素合成の化学反応は、非常に大規模で商業的に製
造し得るようなものである。最も単刀直入な非対称尿素合成は、第一級アミンを
ホスゲンと縮合して、イソシアネートを生成し、これを続いて使用して第二アミ
ンを捕獲することを含む（スキーム９）。この型の反応のために、数多くの有機
合成プロトコルを利用できる。

【００７７】リード化合物３２〜３４の１つの共通の因子は、少なくとも１つの非極性芳香
族置換基の存在、すなわち、化合物３２の４−クロロフェニル、化合物３３の２
−ナフチル、および化合物３４の３，４−ジクロロフェニルである。４−クロロ
フェニルイソシアネート（化合物３５）が市販で入手できることにより、最適化
への半合成アプローチの出発点として選択するに適した候補である。従って、化
合物３５は、市販の一級芳香族および脂肪族アミンの幅広い選択肢と縮合させて
、化合物３６などの尿素を得る（スキーム１０）。アミンＲ'−ＮＨ₂は、標的尿
素の「右手側」基（Ｒ'）の必須の必要条件を探索するために選択し得る。従っ
て、アリールまたはアルキル基が好ましいか、および電子供与または電子吸引官
能基が有利であるか、そして有利である場合、どの部位で有利であるかを決定で
きる。

【００７８】最初のスクリーニングで単離した尿素

【化３２】スキーム９非対称尿素の合成

【００７９】スキーム１０４−クロロフェニルイソシアネートから対応する尿素への変換

【化３３】

【００８０】スキーム１１化合物３８と化合物３９の縮合による化合物４０の生成

【化３４】

【００８１】一旦、最適Ｒ'基が分子の「右手側」に位置すると、その前駆アミンＲ'−ＮＨ ₂ （化合物３７）を、対応するイソシアネートである化合物３９に変換し、これ
を次いで、一級芳香族および脂肪族アミン（ここでＲ''−ＮＨ₂である）の同選
択肢と縮合して、化合物４０の左手側基（Ｒ''）の最適必要条件を探索する（ス
キーム１１）。最適アミンＲ'−ＮＨ（化合物３７）に存在する官能基に応じて
、イソシアネート化合物３９を、ホスゲンでまたはカルボニルイミダゾリド（化
合物３８）で変換できる。ホスゲンは、迅速さおよび精製し易さのために、Ｒ'
が、他の求核中心のない単純な脂肪族または芳香族アミンである場合に使用され
、その緩和でより識別できる類似体３８（ＳｔａａｂおよびＢｅｎｚ、１９６１
）はより感受性のＲ'基の場合に使用される。

【００８２】このように、４−クロロフェニルイソシアネート（化合物３５）および５０個
の市販の一級アミンの購入により、最初の５０個の尿素（３６）の群を合成でき
る。この選択肢から最適のＲ'基を選び（化合物３７）、それをイソシアネート
３９に変換し、次いで、同じ５０個のアミンと縮合すると、第二世代の５０個の
尿素４０のシリーズが得られ、これから進んだリード尿素化合物が選択され得、
Ｒ'およびＲ''の両方のより正確な必要条件が決定され得る。

【００８３】ｃ．２，５−二置換ピリミジン−４，６−ジオンこのカテゴリーで最も活性のあるリード化合物は、チオウラシル誘導体４１化
合物であった。より一般的な構造は、式化合物４２により示される。２つの疎水
性置換基に関してファルマコフォアの必要条件を探索するために、ＲおよびＲ'
を系統的に変化させた多様な化合物４２を合成する。化合物４２およびその直ぐ
の前駆化合物４３に固有な対称により、これらの化合物は、基本的なピリミジン
合成の一般的な変形により、最も容易に得られることが示唆される。この非常に
よく確立された化学反応は、近年（１９９４）のピリミジン文献の百科事典編集
（Ｂｒｏｗｎ、１９９４）に十分に文書化されている。

【化３５】

【００８４】従って、スキーム１２に示したように、一連のジエチルアルキルマロン酸エス
テル４４は、ナトリウムエトキシドの存在下で、チオ尿素と縮合すると、化合物
４３が得られ得る。基本的合成のこの変形は、全てのクラスのアルキル基（Ｒ'
）について十分に確立され、多くの例が近年の論評（Ｂｒｏｗｎ、１９９４）に
記載されている。Ｒ'が一級または二級アルキル基である場合、マロネート４４
は、スキーム１２に示したように、ジエチルマロネート（化合物４５）のアルキ
ル化により日常的に得られる。Ｒ'が３級アルキル、アリール、またはビニルで
ある場合、マロネート４４は、ここでもスキーム１２に示したように、適切なエ
ステル４６とクロロギ酸エチルの縮合により最善に得られる。

【００８５】４３が得られたので、次に４１の類似体の合成を考えることが可能である。こ
こで、所望のアルキル基Ｒが単純な一級または二級アルキルである場合、４３を
、適切なハロゲン化アルキルおよび塩基を用いて単刀直入にアルキル化する（ス
キーム１３）。ここでも、ピリミジン文献（Ｂｒｏｗｎ、１９９４）にかかるプ
ロセスの多くの例がある。窒素上のアルキル化も、２個の酸素原子でのアルキル
化競合も、硫黄上のかかる分子の求核性が非常に高いために問題であるとは報告
されていない（Ｂｒｏｗｎ、１９９４）。

【００８６】過剰の３級チオールまたはアレーンチオールの存在下での４２の加熱により、
メタンチオールの置換および誘導体４７および４８の形成が可能となり、これは
、直接的なアルキル化経路では調製できない（スキーム１４）。このような求核
置換反応でのピリミジンからのチオールの置換は、当業者には公知である（Ｂｒ
ｏｗｎ、１９９４）。

【００８７】スキーム１２とスキーム１３

【化３６】

【００８８】スキーム１４

【化３７】

【００８９】４２の硫黄原子を、式４９および５０のように、酸素または窒素原子と交換す
ることは興味深い。ここでも、これは、４２の保護（Ｒ＝Ｍｅ）および適宜過剰
のアルコールまたは塩基での処理により容易に達成される（スキーム１５）（Ｂ
ｒｏｗｎ、１９９４）。確かに、このような求核置換で脱離基として塩素を使用
することがピリミジン化学反応ではより通常である。次いで、必要な塩素は、Ｐ
ＯＣｌ₃または関連物質での処理によりピリミドンから調製される。残念なこと
に、これはここでは選択肢ではない。なぜなら、４２の２−オキソ−類似体のＰ
ＯＣｌ₃での処理は、４および６位に塩素を優先的に導入するからである（Ｂｒ
ｏｗｎ、１９９４）。従って、スキーム１４および１５で進んだ化学反応は、ｉ
）容易に入手できる４２および４３を最大活用することにより実験室での労力を
最小限にする、およびｉｉ）Ｃ２に塩素を選択的に導入するための遠回りの経路
の必要性を克服することの２つの目的のために設計される。スキーム１５

【化３８】

【００９０】最後に、Ｃ２にヘテロ原子を有することが必要であるか否かを決定することが
重要である。２位の全ての炭素側鎖を有する類似体は、基本的合成（Ｂｒｏｗｎ
、１９９４）の別の既知の変形により調製され得、ここでアミジンは、スキーム
１６に示したように、マロン酸エステル４４と縮合する。スキーム１６

【化３９】

【００９１】これらの４１の類似体の合成において、発明者は、最も効率的なアプローチは
、ＲおよびＲ'基の十分に相違した、広範囲の化合物４２を調製しスクリーニン
グすることであると論断する。一旦、ＲおよびＲ'の良好な組合せが同定されれ
ば、次いで、発明者は、より限定された範囲の、合成的に僅かにより凝った誘導
体４７〜５１の合成を目標にする。

【００９２】ｄ．芳香族アミドＩＮＦ２４０に関連した芳香族アミドの調製は、単刀直入であるとは期待され
ない。従って、例えば、アミノ安息香酸エチル５２（スキーム１７）（そのオル
ト、メタ−およびパラ−異性体は全て市販で入手できる）を、そのｔｅｒｔ−ブ
チルオキシカルボニル誘導体５３に変換することは当業者の技術の十分範囲内で
ある。次いで、ジイソブチルアルミニウムハイドライド（ＤＩＢＡＬ−Ｈ）を用
いた−７８℃での制御還元により、アルデヒド５４が提供される（Ｊｕｒｃｚａ
ｋら、１９８９）。続いてウィティッヒオレフィン化により５５が得られる。ウ
ィティッヒおよび関連オレフィン化反応によるシスおよびトランス−アルケンの
両方の優先的形成のための条件を利用でき、二重結合の回りの両方の立体異性体
が容易に入手できる（ＭａｒｙａｎｏｆｆおよびＲｅｉｔｚ、１９８９；Ｖｅｄ
ｅｊｓおよびＰｅｔｅｒｓｏｎ、１９９４）。５５をトリフルオロ酢酸で処理す
ると、カーボネートが切断され、５６が得られ、これを次いで、塩化アシルにカ
ップリングすると最終生成物５７が得られる。この単刀直入なスキームのさらな
る変化は、５５の接触還元を含み、５８が得られ、これを次いで５９を介して６
０、すなわち５７の飽和類似体に変換する。分子の右手側の十分な調査を可能と
する莫大な種類の酸塩化物が市販で入手できる。同様に、かなりの数のウィティ
ッヒ試薬が市販で入手でき、多くの他の試薬も、対応するハロゲン化アルキルか
ら標準的なプロトコルにより容易に調製される。従って、この反応スキームは、
異なって置換された芳香族アミドの広範な代表例の獲得を提供することが期待さ
れる。

【００９３】

【化４０】スキーム１７

【００９４】４．スクリーニングある実施形態において、本発明は、細菌の多剤輸送体タンパク質の阻害剤を同
定する方法に関する。より具体的には、細菌はグラム陽性細菌である。該方法は
また、真菌病原体の多剤輸送体の阻害剤の同定にも関する。多剤輸送体タンパク
質は、細菌細胞から抗細菌剤の排出に関与し、よって特定の細菌の薬物耐性に寄
与する任意のタンパク質であり得る。阻害剤により処置し得る細菌感染の例は、
黄色ブドウ球菌（S. aureus）、肺炎レンサ球菌（S. pneumoniae）、枯草菌（B.
subtilis）、Ｅ．フェカーリス（E. faecalis）、表皮ブドウ球菌（S. epiderm
idis）、スメグマ菌（M. smegmatis）、結核菌（M. tuberculosis）、および化
膿レンサ球菌（S. pyogenes）により媒介されるものを含むが、これに限定され
ない。真菌感染も、本発明の阻害剤により処置し得る。かかる真菌感染は、カン
ジダ・アルビカンス（Candida albicans）および他のカンジダ種、並びに、クリ
プトコッカス・ネオフォルマンス（Cryptococcus neoformans）、ブラストミセ
ス・デルマチチジス（Blastomyces dermatitidis）、ヒストプラズマ・カプスラ
ーツム（Histoplasma capsulatum）、トルロピス・グラブラタ（Torulopis glab
rata）、コクシジオイデス・イミティス（Coccidioides immitis）、ブラジル・
パラコクシジオイデス（Paracoccidioides braziliensis）およびアスペルギル
ス（Aspergillis）などの病原体から生じ得る。従って、本発明は、ＮｏｒＡ、
Ｂｍｒ、Ｂｌｔ、Ｂｍｒ３、ＰｍｒＡ、ＬｍｒＰおよびＬｍｒＡなどの多剤輸送
タンパク質の阻害剤を同定する方法を提供する。このスクリーニング技術は、多
剤耐性細菌（または真菌）におけるフルオロキノロンの排出を阻害し、それ故、
細胞のフルオロキノロンの効果を増強する、任意の化合物の一般的同定に有用で
あると考えられる。

【００９５】この点で有用な化合物は、上記したものに限定されない。活性化合物は、天然
化合物の断片または一部を含み得るか、または、単に、さもなくば不活性である
既知化合物の活発な組合せとして見出され得る。しかし、ヒトおよび動物モデル
でかかる化合物を試験する前に、どれが効力があるかを決定するために様々な候
補を試験する必要があり得る。

【００９６】従って、細菌および真菌の多剤輸送体を阻害する医薬を同定するスクリーニン
グアッセイにおいて、動物、細菌、真菌、葉および樹皮を含む植物源、および海
洋サンプルなどの天然源から単離した化合物を、潜在的に有用な医薬の存在につ
いての候補としてアッセイし得ることが提案される。

【００９７】一方、有用な化合物の同定を「強いる」努力において有用な薬物の基本的基準
を満たすと考えられる小分子ライブラリーを、様々な市販源から、単純に獲得し
得る。組合せ的に作成されたライブラリーを含む、かかるライブラリーのスクリ
ーニングは、多くの関連（および非関連）化合物を活性についてスクリーニング
する迅速かつ効率的な方法である。組合せアプローチは、活性であるが、他の点
では望ましくない化合物をモデルにした第二、第三および第四世代の化合物の創
製による可能性ある薬物の迅速な生成に役立つ。

【００９８】本発明で同定した１つの化合物ライブラリーは、ダイバーセット（登録商標）
（ＣｈｅｍＢｒｉｄｇｅ社、Ｇｌｅｎｖｉｅｗ、ＩＬ）である。９，６００個の
化合物からなるこのライブラリーのスクリーニングが完了した。化学物質ライブ
ラリーを、ＮｏｒＡ基質の臭化エチジウムに対する、特別に創製した枯草菌株Ｎ
Ａの耐性を逆転させるにおいて、２０μｇ／ｍｌまたはそれ以下の濃度で効果的
な化合物についてスクリーニングした。本発明は、スクリーニングアッセイに多
剤輸送体としてＮｏｒＡを使用したが、本明細書で同定した化合物は、他の多剤
輸送体にも適用できるようであることが当業者により理解されるだろう。

【００９９】これらの実施形態において、本発明は、一般に、（ａ）唯１つの機能的多剤輸送体を発現する細胞を提供し、ここでの輸送体はＮ
ｏｒＡであり、（ｂ）候補阻害剤物質の存在下で、前記細胞を、輸送可能なエレメントと接触さ
せ、そして（ｃ）前記細胞による前記エレメントの輸送を、前記候補阻害物質の非存在下で
の前記エレメントの輸送と比較する段階を含んでなるＮｏｒＡ活性阻害剤に対す
る候補物質の能力を決定する方法に関する。

【０１００】ＮｏｒＡ活性を阻害できるとして候補物質を同定するために、添加候補物質の
非存在下で、ＮｏｒＡを発現する細胞による輸送可能な物質（例えば臭化エチジ
ウム）の輸送を測定または決定する。次いで、候補物質を細胞に加え、候補物質
の存在下で臭化エチジウムの排出を再度決定する。臭化エチジウムの輸送を、そ
の非存在下での輸送に比べて減少させる候補物質は、阻害能力を有する候補物質
を示す。本章は、輸送可能なエレメントとしての臭化エチジウムを議論するが、
これらのアッセイはまた、効果が細菌毒性または殺真菌アッセイによりモニタリ
ングされ得る任意のフルオロキノロンを使用して実施され得ると理解される。

【０１０１】候補スクリーニングアッセイは、構成および実施が極めて簡単である。従って
、活発な多剤輸送体を有する適切な試験細胞を得た後、候補物質を細胞と、輸送
可能な物質の存在下で、例えば臭化エチジウム、抗生物質フルオロキノロンおよ
びその他などの輸送可能な物質の取込みが可能な条件下で混合する。従って、輸
送体の阻害剤は、例えば増殖をモニタリングすることにより測定できる。

【０１０２】例示的アッセイにおいて、ＮｏｒＡの阻害剤としての候補物質を同定するため
に、枯草菌株ＮＡを使用し得る。対数増殖期の細胞を、例えば０．００２などの
ＯＤ６００まで希釈し、有効量の候補物質と共に、臭化エチジウム、フルオロキ
ノロンおよびその他の存在下で（例えば、１／４ＭＩＣの臭化エチジウムの最終
濃度）インキュベートする。細胞を、適切な期間、至適増殖条件の加湿チャンバ
ーに移し（例えば３７℃で５時間）、続いて増殖について調べる。可能性ある輸
送阻害剤を、臭化エチジウム、フルオロキノロンおよびその他の殺細菌効果を増
加させる化合物として同定し得る。

【０１０３】ある環境での「有効量」は、多剤耐性細菌細胞における臭化エチジウムまたは
フルオロキノロンの静細菌作用を、候補物質の非存在下での臭化エチジウムまた
はフルオロキノロンの殺細菌活性のレベルと比較して、再現可能に増加させるに
有効な量である。フルオロキノロンの殺細菌活性の有意な適切な変化を達成する
化合物を使用する。従って、一連の化合物を、インビトロでスクリーニングして
、本発明に使用する他の薬剤を同定し得る。この点で有用な阻害剤の量は、当業
者により決定され得、約１０ｎｇ／ｍｌから約１００μｇ／ｍｌまで変化し得る
。従って、２０ｎｇ／ｍｌ、４０ｎｇ／ｍｌ、６０ｎｇ／ｍｌ、８０ｎｇ／ｍｌ
、１００ｎｇ／ｍｌ、１２０ｎｇ／ｍｌ、１４０ｎｇ／ｍｌ、１６０ｎｇ／ｍｌ
、１８０ｎｇ／ｍｌ、２００ｎｇ／ｍｌ、３５０ｎｇ／ｍｌ、４００ｎｇ／ｍｌ
、４５０ｎｇ／ｍｌ、５００ｎｇ／ｍｌ、５５０ｎｇ／ｍｌ、６００ｎｇ／ｍｌ
、６５０ｎｇ／ｍｌ、７００ｎｇ／ｍｌ、７５０ｎｇ／ｍｌ、８００ｎｇ／ｍｌ
、９００ｎｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、１５μｇ
／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ、２５μｇ／ｍｌ、３０μｇ／ｍｌ、３５μｇ／ｍｌ、
４０μｇ／ｍｌ、４５μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌ、５５μｇ／ｍｌ、６０μｇ
／ｍｌ、６５μｇ／ｍｌ、７０μｇ／ｍｌ、７５μｇ／ｍｌ、８０μｇ／ｍｌ、
８５μｇ／ｍｌ、９０μｇ／ｍｌ、および１００μｇ／ｍｌを含むがこれに限定
されない、これらの濃度間の濃度範囲が有用であると考えられる。

【０１０４】殺細菌（または殺真菌）活性の有意な増加（例えば増殖曲線解析を使用して測
定）は、少なくとも約３０〜４０％の細菌（または真菌）増殖の減少、および最
も好ましくは、少なくとも約５０％の減少により示され、勿論より高い値も可能
である。細菌および真菌増殖アッセイは当分野で公知である。それ故、候補物質
がこの型の試験で多剤耐性阻害を示す場合、本発明の使用に適切な化合物のよう
である。

【０１０５】阻害剤の定量的インビトロ試験は、本発明の必要条件ではない。なぜなら、薬
剤は、その既知の特性に基づいて、或いは、効果的であるとすでに実証された薬
剤に対する構造的および／または機能的比較により選択されることが多いと一般
に想定されるからである。それ故、有効量は、例えば、本明細書に開示したよう
に、別の脈略で動物への投与に安全であると提案された量であることが多い。化
学療法剤単独の使用および用量に関するかなりの情報が入手できるので、この情
報は今回本発明に使用し得る。

【０１０６】５．フルオロキノロンフルオロキノロンとして知られる治療化合物のクラスは広範に知られ、抗細菌
処置に使用されている（米国特許第４，４４８，９６２号、ＤＥ第３，１４２，
８５４号、ＥＰ第２０６２８３号、米国特許第４，４９９，０９１号、米国特許
第４，７０４，４５９号、米国特許第４，７９５，７５１号、米国特許第４，６
６８，７８４号、米国特許第５，５３２，２３９号、各々をここに引用すること
により本明細書の記載の一部となすものとする）。本発明の多剤輸送阻害剤と組
合せて使用するに特に好ましいフルオロキノロンは、ペフロキサシン、ノルフロ
キサシン、シプロフロキサシン、オフロキサシン、スパルフロキサシン、グレパ
フロキサシン、Ｂａｙ１２−８０３９、トロバフロキサシン、ＤＵ６８５９ａ、
サラフロキサシン、ＬＢ２０３０４、レボフロキサシン、エノキサシン、フレロ
キサシン、ロメフロキサシン、テモフロキサシン、アミフロキサシン、トスフロ
キサシン、フルメクイン、ルフロキサシン、クリナフロキサシン等を含むがこれ
に限定されない。以下の章は、あるフルオロキノロンを使用した処置方式を記載
し、これらの例は単に、およその濃度および使用し得るフルオロキノロン製剤を
提供し、いずれにしても限定するとは捉えない。

【０１０７】レボフロキサシンは、名称レバクイン（登録商標）（Ｏｒｔｈｏ−ＭｃＮｅｉ
ｌ）で販売される市販で入手できるフルオロキノロンである。静脈内投与および
経口投与用に製剤化し得る広域スペクトルの合成抗細菌剤である。化学的には、
薬物物質オフロキサシンのＳ−エナンチオマーであるキラルのフッ化カルボキシ
キノロンである。レバクイン（登録商標）は、単回使用注射液で、並びに、予混
合屈曲性容器中の適切に作成する溶液で容易に入手可能である。

【０１０８】健常ボランティアに５００ｍｇのレボフロキサシンを１回、６０分間、静脈内
注入した後、達成されたピーク血漿中濃度は、６．２μｇ／ｍｌである。静脈内
投与後のレボフロキサシンの血漿濃度プロフィールは、等量（ｍｇ／ｍｇ）を投
与した場合に、レボフロキサシン錠剤に観察されたものと比べて、曝露の程度に
おいて、類似および同等である。従って、経口および静脈内投与経路は交換可能
と考えることができる。

【０１０９】レボフロキサシンは、グラム陰性およびグラム陽性細菌に対して活性であると
示されている。レボフロキサシンが有用であると示されたグラム陽性細菌の例は
、とりわけ、Ｅ．フェカーリス（E. faecalis）、黄色ブドウ球菌（S. aureus）
、肺炎レンサ球菌（S. pneumoniae）、化膿レンサ球菌（S. pyogens）、Ｃ．ペ
ルフリンゲンス（C. perfringens）、表皮ブドウ球菌（S. epidermidis）、レン
サ球菌属（Ｃ／Ｆ群）（Streptococcus (Group C/F)）、レンサ球菌属（Ｇ群）
（Streptococcus (Group G)）、腐生ブドウ球菌（Staphylococcus saprophyticu
s）、およびストレプトコッカス・アガラクチエ（Streptococcus agalactiae）
を含む。レボフロキサシンにより阻害されることが示されたグラム陰性細菌は、
Ｅ．クロアカエ（E. cloacae）、Ｅ．コリ（E. coil）、Ｈ．インフルエンザ（H
. influenzae）、Ｈ．パラインフルエンザ（H parainfluenzae）、Ｋ．ニューモ
ニエ（K. pneumoniae）、Ｌ．ニューモフィラ（L. pneumophila）、Ｍ．カタラ
ーリス（M. catarrhalis）、Ｐ．ミラビリス（P. mirabilis）、緑膿菌（P. aer
uginosa）、Ｃ．ニューモニエ（C. pneumoniae）、Ｍ．ニューモニエ（M. pneum
oniae）、Ａ．アニトラタス（A. anitratus）、Ａ．バウマンニイ（A. baumanni
i）、Ａ．カルコアセティクス（A. calcoaceticus）、Ａ．レオフィイ（A. lwof
fii）、百日咳菌（B. pertussis）、Ｃ．ディベルサス（C. diversus）、Ｃ．フ
ロインディー（C. freundii）、Ｅ．エロゲネス（E. aerogenes）、Ｅ．アグロ
メランス（E. agglomerans）、Ｋ．オキシトカ（K. oxytoca）、Ｍ．モルガニイ
（M. morganii）、尋常性天疱瘡（P. vulgaris）、Ｐ．レッゲリ（P. rettgeri
）、Ｐ．スチュアーティイ（P. stuartii）、Ｐ．フルオレッセンス（P. fluore
scens）を含む。本発明で同定したＭＤＴ阻害剤は、レボフロキサシンと組合せ
て使用して、これらのいくつかまたは全ての生物の増殖を阻害または減少し得る
と考えられる。

【０１１０】特に、レボフロキサシンは、指定した微生物株により引き起こされる軽度、中
程度、および重度の感染に罹患した個体の処置に適応されてきた。特定の適応症
は、急性上顎洞炎、急性細菌性気管支炎増悪、後天性肺炎、単純皮膚および皮膚
構造感染、複雑性尿路感染症、および急性腎盂腎炎を含む。

【０１１１】レバクイン（登録商標）の通常の用量は、５００ｍｇの２４時間毎の６０分間
におよぶゆっくりとした注入投与であるか、または適切なクレアチニンクリアラ
ンスに従って医師により決定される。レバクイン（登録商標）錠剤は、２４時間
毎に５００ｍｇを経口投与し得る。当業者は、投与の量および期間に関する詳細
については、医師卓上参考書（第５２版、１９９８、ここに引用することにより
本明細書の記載の一部となすものとする）を参照する。

【０１１２】ノルフロキサシンは、眼溶液として臨床名チブロキシン（登録商標）（Ｍｅｒ
ｃｋ＆Ｃｏ．）および経口投与用のノロキシン（登録商標）（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ
．）錠剤として販売されている。断食中の健常ボランティアにおいて、ノロキシ
ンの経口用量の少なくとも３０〜４０％が吸収される。吸収は、２００ｍｇ、４
００ｍｇおよび８００ｍｇの１回の用量後に迅速である。それぞれの単回用量で
は、０．８、１．５および２．４μｇ／ｍｌの平均ピーク血清および血漿濃度が
、投与後約１時間で達成される。

【０１１３】ノルフロキサシンは、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、スタフィロコッカス
・ワルネリイ、および肺炎レンサ球菌グラム陽性細菌のほとんどの株に対して活
性であることが示されている。ノルフロキサシンが臨床的に有用なグラム陰性細
菌は、アシネトバクター・カルコアセティクス（Acinetobacter calcoaceticus
）、アエロモナス・ヒドロフィラ（Aeromonas hydrophila）、ヘモフィルス・イ
ンフルエンザ（Haemophilus influenza）、プロテウス・ミラビリス（Proteus m
irabilis）、緑膿菌（Pseudomonas aeruginos）およびセラチア菌（Serratia）
を含む。ノルフロキサシンは、また、バシラス・セレウス（Bacillus cereus）
、エンテロコッカス・フェカーリス（Entercoccus faecalis）（以前はストレプ
トコッカス・フェカーリス（Streptococcus faecalis））、腐生ブドウ球菌（St
aphylococcus saprophyticus）（全てグラム陽性細菌）およびシトロバクター・
ディベルサス（Citrobacter diversus）、シトロバクター・フロインディー（Ci
trobacter freundii）、エドワードシエラ・タルダ（Edwardsiella tarda）、エ
ンテロバクター・エロゲネス（Enterobacter aerogenes）、エンテロバクター・
クロアカエ（Enterobacter cloacae）、大腸菌（Escherichia coli）、ハフニア
・アルベイ（Hafnia alvei）、ヘモフィルス・エジプチウス（Haemophilus aegy
ptius）（コッホ−ウィークス菌(Koch-Weeks bacillus)）、クレブシエラ・オキ
シトカ（Klebsiella oxytoca）、肺炎桿菌（Klebsiella pneumoniae）、鼻硬腫
菌（Klebsiella rhinoscleromatis）、モルガネラ・モルガニイ（Morganella mo
rganii）、淋菌（Neisseria gonorrhoeae）、プロテウス・ブルガリス（Proteus
vulgaris）、プロビデンシア・アルカリファシエンス（Providencia alcalifac
iens）、プロビデンシア・レットゲリ（Providencia rettgeri）、プロビデンシ
ア・スチュアーティ（Providencia stuartii）、腸チフス菌（Salmonella typhi
）、コレラ菌（Vibrio cholerae）、腸炎ビブリオ（Vibrio parahemolyticus）
、腸炎エルシニア（Yersinia enterocolitica）（グラム陰性細菌）に対してイ
ンビトロで価値があることが示されている。

【０１１４】ノルフロキサシンは、尿素感染、性感染症および前立腺炎に罹患した成人の処
置に適応される。これらの感染を媒介する具体的微生物に関するより詳細な開示
については、当業者は医師卓上参考書（６０７〜６０８項；第５２版、１９９８
、本明細書の記載の一部となす）を参照する。ノルフロキサシン錠剤は、単回用
量または複数回用量で投与され得、推奨される用量は、感染の性質に応じて、約
１日から約２８日の間、１日１回、４００ｍｇの錠剤である。当業者は、投与の
量および期間に関する詳細については、医師卓上参考書（第５２版、１９９８、
本明細書の記載の一部となす）を参照する。

【０１１５】シプロフロキサシンは、眼用溶液、静脈内注射溶液および錠剤製剤で利用でき
る。シプロ（登録商標）は、経口投与後に胃腸管から迅速かつ十分に吸収される
、１００ｍｇ、２５０ｍｇ、５００ｍｇおよび７５０ｍｇのコーティング錠剤で
入手可能である広域スペクトルのフルオロキノロンである。

【０１１６】シプロフロキサシンは、インビトロおよび臨床感染の両方で、以下の微生物の
ほとんどの株に対して活性であることが示されている。シプロフロキサシンが活
性である好気性グラム陽性細菌は、エンテロコッカス・フェカーリス、表皮ブド
ウ球菌、腐生ブドウ球菌、肺炎レンサ球菌、化膿レンサ球菌、黄色ブドウ球菌を
含む。シプロフロキサシンは、カンピロバクター・イェユニ（Campylobacter je
juni）、シトロバクター・ディベルサス（Citrobacter diversus）、シトロバク
ター・フロインディー（Citrobacter freundii）、エンテロバクター・クロアカ
エ（Enterobacter cloacae）、大腸菌（Escherichia coli）、ヘモフィルス・イ
ンフルエンザ（Haemophilus influenzae）、ヘモフィルス・パラインフルエンザ
（Haemophilus parainfluenzae）、肺炎桿菌（Klebsiella pneumoniae）、モラ
クセラ・カタラーリス（Moraxella catarrhalis）、モルガネラ・モルガニイ（M
organella morganii）、淋菌（Neisseria gonorrhoeae）、プロテウス・ミラビ
リス（Proteus mirabilis）、プロテウス・ブルガリス（Proteus vulgaris）、
プロビデンシア・レットゲリ（Providencia rettgeri）、プロビデンシア・スチ
ュアーティ（Providencia stuartii）、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）、腸
チフス菌（Salmonella typhi）、セラチア・マルケセンス（Serratia marcensen
s）、ボイド赤痢菌（Shigella boydii）、シゲラ・ディセンテリエ（Shigella d
ysenteriae）、シゲラ・フレクスナー（Shigella flexneri）、およびシゲラ・
ソンネイ（Shigella sonnei）を含む、様々な好気性グラム陰性細菌に対して臨
床的に細菌毒性である。シプロフロキサシンは、以下の微生物のほとんどの株（
＞９０％）に対して≦１μｇ／ｍＬのインビトロ最小阻害濃度（ＭＩＣ）を示す
が、しかし、これらの微生物による臨床感染を処置する上でのシプロフロキサシ
ンの安全性および効力は、適切かつ十分に制御された臨床試験で確立されていな
い。これらの細菌は、アシネトバクター・ルオフィイ（Acinetobacter Iwoffi）
、アエロモナス・カビエ（Aeromonas caviae）、アエロモナス・ヒドロフィラ（
Aeromonas hydrophila）、マルタ熱菌（Brucella melitensis）、カンピロバク
ター・コリ（Campylobacter coli）、エドワードシエラ・タルダ（Edwardsiella
tarda）、軟性下疳菌（Haemophilus ducreyi）、クレブシエラ・オキシトカ（K
lebsiella oxytoca）、レジオネラ・ニューモフィラ（Legionella penumophila
）、ナイセリア・メニンギティデス（Neisseria meningitidis）、パスツレラ・
ムルトシダ（Pasteurella multocida）、腸炎菌（Salmonella enteritidis）、
コレラ菌（Vibrio cholerae）、腸炎ビブリオ（Vibrio paraphaemolyticus）、
ビブリオ・ブルニフィカス（Vibrio vulnificus）、腸炎エルシニア（Yersinia
enterocolitica）を含む。

【０１１７】シプロ（登録商標）は、急性副鼻腔炎、下気道感染症、尿路感染、女性の急性
単純性膀胱炎、慢性細菌性前立腺炎、複雑性腹腔内感染、皮膚および皮膚構造感
染、骨および骨関節感染、伝染性下痢症、腸チフスおよび単純性頸部および尿道
淋病などの感染の処置に適応される。これらの感染を媒介する具体的な微生物に
関するより詳細な開示については、当業者は、医師卓上参考書（６０７〜６０８
項；第５２版、１９９８、本明細書の記載の一部となす）を参照する。

【０１１８】急性副鼻腔炎のシプロ（登録商標）の用量は、１２時間毎に５００ｍｇである
。下気道感染は、１２時間毎に５００ｍｇで処置し得る。より重度または複雑な
感染では、７５０ｍｇの用量を、１２時間毎に投与し得る。尿路感染は、感染の
重度に応じて、１２時間毎に２５０ｍｇ〜５００ｍｇで処置し得る。女性の急性
単純性膀胱炎は、通常、１２時間毎に１００ｍｇを必要とする。この感染では３
日間の処置で適当であり得るが、他の尿路感染では７〜１４日間が推奨される。
慢性細菌性前立腺炎は、１２時間毎に５００ｍｇの方式を使用する。

【０１１９】複雑性腹腔内感染の成人用量は、５００ｍｇを毎日投与する連続的経口療法で
ある。当業者は、かかる連続療法の詳細なプロトコルについて、医師卓上参考書
（６０８項；第５２版、１９９８、本明細書の記載の一部となす）を参照する。
皮膚および皮膚構造感染、伝染性下痢、腸チフス並びに骨および骨関節感染は、
一般に、毎日５００ｍｇの用量で処置し、一方、尿道および頸部淋病感染は、１
回の２５０ｍｇ用量で処置し得る。医師卓上参考書は、用量、投与時間指摘、並
びに、これおよび記載した他のフルオロキノロンの禁忌に関するより詳細なプロ
トコルを提供する。

【０１２０】フロキシン（登録商標）は、オフロキサシンの静脈内製剤の商標名である。そ
れは別の広域スペクトルの、広く処方されているフルオロキノロンである。経口
および静脈内投与は、等量（ｍｇ／ｍｇ）を投与した場合に観察されたものと比
べて、曝露の程度において、類似および同等である。従って、経口および静脈内
投与経路は交換可能と考えることができる。

【０１２１】フロキシン（登録商標）は、以下の細菌、黄色ブドウ球菌、肺炎レンサ球菌、
化膿レンサ球菌、並びに、Ｃ．ディベルサス、Ｅ．エロゲネス、Ｅ．コリ、Ｈ．
インフルエンザ、肺炎桿菌、淋菌、Ｐ．ミラビリスおよび緑膿菌に対して効果的
であることが示されている。静脈内投与用フロキシンはまた、表皮ブドウ球菌、
溶血性ブドウ球菌、腐生ブドウ球菌、アシネトバクター・カルコアセティクス、
アエロモナス・カビエ、アエロモナス・ヒドロフィラ、パラ百日咳菌、百日咳菌
、シトロバクター・フィロインディー、エンテロバクター・クロアカエ、軟性下
疳菌、クレブシエラ・オキシトカ、モラクセラ・カタラーリス、モルガネラ・モ
ルガニイ、プロテウス・ブルガリス、プロビデンシア・レットゲリ、プロビデン
シア・スチュアーティイ、セラチア・マルケセンスおよび腸炎ビブリオに対して
有用であることが示されている。

【０１２２】フロキシン（登録商標）は、急性細菌性慢性気管支炎増悪、院外感染性肺炎、
単純性皮膚および皮膚構造感染、急性および単純性淋菌性尿道および頸管炎、非
淋菌性尿道炎および子宮頸炎、尿道および頸部の混合感染、急性骨盤内炎症性疾
患、単純性膀胱炎、複雑性尿路感染、および前立腺炎に適応される。これらの感
染を媒介する具体的微生物のさらに詳細な開示については、当業者は医師卓上参
考書を参照する（１９９０〜１９９１項；第５２版、１９９８、本明細書の記載
の一部となす）。

【０１２３】製造業者の指示に従って（Ｏｒｔｈｏ−ＭｃＮｅｉｌ）、静脈内投与用フロキ
シン（登録商標）は、静脈内注入によってのみ投与すべきであり、筋肉内、髄腔
内、腹腔内、または皮下投与に使用してはならない。フロキシン（登録商標）注
射は、６０分以上の期間をかけてゆっくりと投与すべきである。フロキシン（登
録商標）の通常の用量は、軽度から中程度の感染および普通の腎機能を提示する
患者のために、１２時間毎にゆっくりとした注入投与により２００ｍｇ〜４００
ｍｇである。従って、フロキシンの投与量は、１日あたり４００ｍｇ〜６００ｍ
ｇまで変化し得、処置期間は、１日から多くて６週間までの間であり得る。特定
の適応症のための投与の投与量および期間に関する具体的な詳細については、当
業者は、医師卓上参考書（第５２版、１９９８、本明細書の記載の一部となす）
の１９９３項を参照する。フロキシン（登録商標）の経口製剤も入手可能であり
、当業者は、投与の投与量および期間に関するさらなる開示について医師卓上参
考書の１９９７項を参照する。

【０１２４】ペネトレックス（登録商標）は、広域スペクトルの特異性をもつ、別の市販で
入手可能なフルオロキノロンである。ペネトレックス（登録商標）は、エノキサ
シンの商標名であり、経口製剤で入手可能である。エノキサシンは、細菌酵素Ｄ
ＮＡジャイレースの阻害剤であり、殺細菌剤である。エノキサシンは、異なる機
序により作用する薬物に耐性の病原体に対して活性であり得る。

【０１２５】ペネトレックス（登録商標）は、インビトロおよび臨床感染の両方において、
以下の生物、表皮ブドウ球菌および腐生ブドウ球菌（グラム陽性好気菌）および
エンテロバクター・クロアカエ、大腸菌、肺炎桿菌、淋菌、プロテウス・ミラビ
リス、緑膿菌（グラム陰性好気菌）のほとんどの株に対して活性であることが示
されている。さらに、エノキサシンは、ある他の生物のほとんどの株に対して、
２．０μｇ／ｍＬまたはそれ以下のインビトロでの最小阻害濃度（ＭＩＣ）を示
すが、しかし、これらの生物による臨床感染の処置におけるエノキサシンの安全
性および効力は、適切かつ十分に制御された試験で確立されておらず、これらの
グラム陰性好気菌は、アエロモナス・ヒドロフィラ、シトロバクター・ディベル
サス、シトロバクター・フロインディー、シトロバクター・コセリ、エンテロバ
クター・エロゲネス、軟性下疳菌、クレブシエラ・オキシトカ、臭鼻菌（Klebsi
ella ozaenae）、モルガネラ・モルガニイ、プロテウス・ブルガリス、プロビデ
ンシア・スチュアーティイ、プロビデンシア・アルカリファシエンス、セラチア
・マルケセンス、セラチア・プロテアマキュランス（以前にはＳ．リクエファシ
エンス）を含む。

【０１２６】ペネトレックス（登録商標）は、性感染症および尿路感染を提示する成人の処
置に適応される。具体的な投与の詳細は、医師卓上参考書２３７９〜２３８０項
から得られる。

【０１２７】ロメフロキサシンは、経口投与用の錠剤形のメキサクイン（登録商標）として
入手可能である。メキサクインは、４００ｍｇのロメフロキサシン基剤を含むフ
ィルムコーティング錠として入手可能である。ロメフロキサシンは、広範囲のグ
ラム陰性およびグラム陽性生物に対してインビトロ活性を有する殺細菌剤である
。ロメフロキサシンの殺細菌作用は、細菌ＤＮＡの転写および複製に必要な、細
菌酵素ＤＮＡジャイレースの活性の妨害によりもたらされる。最小殺細菌濃度（
ＭＢＣ）は、一般に、２以上、最小阻害濃度（ＭＩＣ）を超えず、ただしブドウ
球菌は例外で、これはＭＩＣの２〜４倍のＭＢＣを有する。

【０１２８】ロメフロキサシンは、インビトロおよび臨床感染の両方において、以下の生物
のほとんどの株に対して活性であることが示されている：腐生ブドウ球菌グラム
陽性細菌、並びに、シトロバクター・ディベルサス、エンテロバクター・クロア
カエ、エシェリヒア・クレブシエラ（Escherichia Klebsiella）、ニューモニア
エ・コリ（pneumoniae coli）、ヘモフィルス・インフルエンザ、モラクセラ（
ブランハメラ）カタラーリス、プロテウス・ミラビリス、緑膿菌（尿管のみ）を
含む長いリストのグラム陰性細菌。ロメフロキサシンは、以下の生物のほとんど
の株に対して、２μｇ／ｍＬまたはそれ以下のインビトロＭＩＣを示すが、しか
し、これらの生物による臨床感染の処置におけるロメフロキサシンの安全性およ
び効力は、適切かつ十分に制御された試験では確立されていない。インビトロデ
ータは、黄色ブドウ球菌（メチシリン耐性株を含む）、表皮ブドウ球菌（メチシ
リン耐性株を含む）、グラム陽性好気菌および様々なグラム陰性細菌（アエロモ
ナス・ヒドロフィラ、シトロバクター・フロインディー、エンテロバクター・エ
ロゲネス、エンテロバクター・アグロメランス（Enterobacter agglomerans）、
ヘモフィルス・パラインフルエンザ、ハフニア・アルベイ、クレブシエラ・オキ
シトカ、臭鼻菌、モルガネラ・モルガニイ、セラチア・リクエファシエンス（Se
rratia liquefaciens）、プロテウス・ブルガリス、プロビデンシア・アルカリ
ファシエンス、プロビデンシア・レットゲリおよびセラチア・マルケセンスを含
む）に対して入手可能である。

【０１２９】マキサクイン（登録商標）錠剤は、下気道感染および尿路感染などの容態の微
生物の感受性株により引き起こされる軽度から中程度の感染に罹患した成人の処
置に適応される。マキサクイン（登録商標）は、経直腸前立腺生検および経尿道
的手術手順の防止および予防に特に適応される。どちらの場合でも、４００ｍｇ
の１回用量を、手術手順前の１〜６時間に経口投与し得る。投与プロトコルのさ
らなる詳細については、当業者は、医師卓上参考書２７４４〜２７４８項を参照
する。

【０１３０】上記に議論したフルオロキノロンは、本発明のＭＤＴ阻害剤と組合せて使用し
得る例示的フルオロキノロンである。本発明のＭＤＴ阻害組成物は、そのフルオ
ロキノロンの効果を増強するために、および／またはかかる薬物に対する耐性を
回避または防ぐために、任意のフルオロキノロンと組合せて使用し得ると理解さ
れる。さらに、本明細書の上記に列挙した任意の感染またはフルオロキノロン投
与により処置可能な任意の他の感染は、フルオロキノロン処置と組合せて、本発
明のＭＤＴ阻害剤での処置を受けられると考えられる。

【０１３１】６．組合せ療法抗生物質に対する細菌の内在的および後天的耐性は、細菌感染の臨床管理にお
ける主要な問題を示す。この耐性は、少なくとも一部には、現在は細菌に豊富で
あることが知られている多剤排出タンパク質の能力により媒介される。これらの
ＭＤＴタンパク質の作用による細菌細胞からの活発な排出がなければ、細菌感染
の駆除において優れた治療剤であろう抗生物質剤が数多くある。従って、現在の
化学療法研究の目標の１つは、細菌感染に対する既存の殺細菌化合物の効力を向
上させる方法を発見することである。

【０１３２】かかる有益な治療結果を達成する１つの方法は、伝統的な抗生物質を、多剤輸
送体の排出活性を阻害する薬剤と組合わせることである。かかる組合せ抗生物質
療法は、概念的に、β−ラクタムまたはセファロスポリン抗生物質と、β−ラク
タマーゼの阻害剤のすでに汎用されている組合せに類似している。事実、１つの
かかる組合せのオーグメンチンは、米国で最も頻繁に処方されている抗生物質調
製物となっている。より具体的には、本発明の目標は、フルオロキノロン活性の
効力を向上させることである。発明者は、多剤輸送体阻害剤と組合わせたフルオ
ロキノロンの臨床利用は、その有効濃度を数倍減少させ（その実際的に到達可能
な組織レベルの十分下に移動）、薬物耐性変異形の出現を防ぐことの両方により
、これらの抗生物質の臨床効力を劇的に向上させることを提案する。より具体的
には、本発明は、グラム陽性感染を駆除するための、フルオロキノロンと多剤輸
送体阻害剤（ＭＤＴ阻害剤）の組合せを提供する。真菌適用でも同等に、ＭＤＴ
阻害剤を、他の抗真菌処置と組合せ得る。

【０１３３】本発明の方法および組成物を使用して、細菌細胞を死滅させるか、細菌細胞増
殖を阻害するか、或いはさもなくば薬物耐性変異形細菌腫の出現に対する抑制効
果を逆転または減少させるために、一般に、「標的」細胞を、ＭＤＴ阻害剤およ
び少なくとも１つのフルオロキノロンと接触させる。本発明の抗真菌適用は、死
滅、阻害または抑制される細胞が真菌細胞であることを除いて、類似している。
組成物は、細菌細胞増殖を死滅または阻害するに効果的な組合せ量で提供される
。このプロセスは、細胞をＭＤＴ阻害剤およびフルオロキノロン（群）または他
の殺細菌因子（群）と同時に接触させることを含み得る。これは、細胞を、単一
組成物または両方の薬剤を含む薬理学的製剤と接触させることにより、または細
胞を、２つの別個の組成物または製剤と同時に接触させることにより達成され得
、ここでのある組成物は、ＭＤＴ阻害剤を含み、他はフルオロキノロンを含む。

【０１３４】ＭＤＴ阻害剤処置は、数分から数時間から数日までの範囲の間隔で、他のフル
オロキノロンの前でも後でもよい。フルオロキノロンおよびＭＤＴ阻害剤が別々
に投与される実施形態において、一般に、各送達時期の間にかなりの時間が経過
しないようにして、フルオロキノロンおよびＭＤＴ阻害剤が、細菌感染の排除に
対して有利な組合せ効果が依然として奏効できることを確実にする。かかる場合
、両方のモダリティーを、互いの約１２〜２４時間以内、より好ましくは、互い
の約６〜１２時間以内に投与し、遅延時間は僅か約１２時間が最も好ましいと考
えられる。細菌細胞をフルオロキノロン処置に感作させるために、ＭＤＴ阻害剤
を、フルオロキノロン処置の十分な時間の前に（１、２、３、４、５、６、７、
８、１２、２４時間）投与するであろう。ある状況では、処置期間をかなり延長
することが望ましくあり得るが、数日間（２、３、４、５、６または７）から数
週間（１、２、３、４、５、６、７または８）がそれぞれの投与の間に経過する
。同等に、細菌細胞をフルオロキノロン処置に感作させるために、複数回の用量
のＭＤＴ阻害剤を投与することが必要であり得る。

【０１３５】また、１回以上のＭＤＴ阻害剤またはフルオロキノロンの投与が望ましいと考
えられる。様々な組合せを使用し得、下記に例示したように、ＭＤＴ阻害剤は「
Ａ」であり、フルオロキノロンは「Ｂ」である：Ａ／Ｂ／ＡＢ／Ａ／ＢＢ／Ｂ／ＡＡ／Ａ／ＢＢ／Ａ／ＡＡ／Ｂ／Ｂ
Ｂ／Ｂ／Ｂ／ＡＢ／Ｂ／Ａ／ＢＡ／Ａ／Ｂ／ＢＡ／Ｂ／Ａ／ＢＡ／Ｂ／
Ｂ／ＡＢ／Ｂ／Ａ／ＡＢ／Ａ／Ｂ／ＡＢ／Ａ／Ａ／ＢＢ／Ｂ／Ｂ／Ａ
Ａ／Ａ／Ａ／ＢＢ／Ａ／Ａ／ＡＡ／Ｂ／Ａ／ＡＡ／Ａ／Ｂ／ＡＡ／Ｂ／
Ｂ／ＢＢ／Ａ／Ｂ／ＢＢ／Ｂ／Ａ／Ｂ

【０１３６】他の組合せも考えられる。ここでも、細菌細胞死滅を達成するために、両方の
薬剤が、細胞を死滅させ感染を除去するに効果的な組み合わせ量で細胞に送達さ
れる。

【０１３７】組合せ療法に使用するに適した薬剤または因子は、細菌細胞に適用されると傷
害を誘導する任意のフルオロキノロン化学化合物または処置法である。より特定
すると、本発明は、本発明のＭＤＴ阻害剤と組合せてフルオロキノロンを使用す
る。かかるフルオロキノロンは、ペフロキサシン、ノルフロキサシン、シプロフ
ロキサシン、オフロキサシン、レボフロキサシン、エノキサシン、フレロキサシ
ン、ロメフロキサシン、テモフロキサシン、アミフロキサシン、トスフロキサシ
ン、フルメクイン、ルフロキサシン、クリナフロキサシン等を含むがこれに限定
されない。

【０１３８】ある実施形態において、本発明のＭＤＴ阻害剤は、真菌感染を駆除するための
抗真菌剤と組合せて使用し得る。かかる抗真菌剤は、アムホテリシンＢ、フルシ
トシン、ケトコナゾール、ミコナゾール、イトラコナゾール、フルコナゾール、
グリセオフルコナゾール、クロトリマゾール、エコナゾール、テルコナゾール、
ブタコナゾール、ナイスタチン、ハロプロギン、ロプロックス、ナタマイシン、
ウンデシレン酸およびその他を含むがこれに限定されない。

【０１３９】本発明に記載の細菌感染を処置するにおいて、細菌細胞を、ＭＤＴ阻害剤に加
えてフルオロキノロン剤と接触させる。これは、対象に、フルオロキノロン化合
物を含む治療有効量の医薬組成物および治療有効量のＭＤＴ阻害剤を投与するこ
とにより、細菌細胞を薬剤と接触させることにより達成され得る。同様に、本発
明に記載の真菌感染を処置するにおいて、真菌細胞を、ＭＤＴ阻害剤に加えて抗
真菌剤と接触させる。抗真菌剤または抗細菌剤は、上記のように、それをＭＤＴ
阻害剤と合わせることにより、組合せ治療組成物、すなわちキットとして調製お
よび使用され得る。当業者は、特定のフルオロキノロンに関する詳細な具体的な開示を見出すため
に、「医師卓上参考書」第５２版を参照する。投与量のいくらかの変更が、処置
する対象の容態に応じて必要となる。投与に関与する人は、どんなことがあって
も、個々の対象の適切な投与量を決定する。さらに、ヒト投与において、調製物
は、米国ＦＤＡ局の生物学的製剤標準により要求される無菌性、発熱原性、全体
的な安全性、および純度標準を満たすべきである。

【０１４０】発明者は、グラム陽性細菌感染に罹患した対象（患者）へのＭＤＴ阻害剤およ
び／またはフルオロキノロン組成物の局部的送達は、臨床疾病を打ち消すための
治療的に有効な組成物を送達する上で非常に効率的な方法であることを提案する
。別に、ＭＤＴ阻害剤および／またはフルオロキノロンの全身送達も、本発明の
組成物からの治療利点を達成する最も適切な方法であり得る。同様に、ＭＤＴ阻
害剤および／または抗真菌剤組成物は、局部的送達、全身送達または局部適用と
して、真菌感染に罹患した患者に投与し得る。

【０１４１】任意の前記のＭＤＴ阻害剤は、細菌または真菌感染の処置にそれ自体有用であ
り得ることを指摘する。これに関して、組合せ化学療法に関する言及も、これら
のアプローチは別々に使用し得るという考えとして読むべきである。

【０１４２】７．医薬投与本発明の医薬組成物は、一般に、医薬的に許容される担体または水性媒体に溶
解または分散した有効量のＭＤＴ阻害剤を含む。医薬組成物はさらに、フルオロ
キノロン組成物を含み得る。

【０１４３】「医薬的にまたは薬理学的に許容される」なる語は、適宜、動物またはヒトに
投与した場合に、副作用、アレルギー反応または他の望ましくない反応をもたら
さない分子実体および組成物を意味する。本明細書に使用したように、「医薬的
に許容される担体」は、任意および全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗細
菌剤および抗真菌剤、等張性および吸収遅延剤等を含む。かかる媒体および医薬
的に活性な物質用の薬剤の使用は当分野で公知である。任意の慣用的な媒体また
は薬剤が活性成分と適合性である限り、治療組成物における使用に考えられる。
補助的活性成分も組成物に取込むことができる。

【０１４４】本発明のＭＤＴ阻害剤は、しばしば、非経口投与用に製剤化され、例えば、静
脈内、筋肉内、皮下、または、感染または疾病部位への直接的点滴を含む他のか
かる経路を介した注射のために製剤化される。活性成分としてＭＤＴ阻害剤を含
む水性組成物の調製は、本開示に鑑みて当業者には公知である。典型的には、か
かる組成物は、注射液として（液状溶液または懸濁液として）調製でき、注射前
に液体の添加時に溶液または懸濁液を調製するために使用するに適した固体形も
調製でき、そしてまた調製物は乳化できる。

【０１４５】遊離塩基または薬理学的に許容される塩としての活性化合物の溶液は、ヒドロ
キシプロピルセルロースなどの界面活性剤と適切に混合した水中で調製できる。
分散液はまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびその混合物
中および油中で調製できる。通常の保存および使用条件下で、これらの調製物は
、微生物の増殖を防止する保存剤を含む。

【０１４６】注射に使用するのに適した医薬形は、無菌水溶液または分散液と、ゴマ油、落
花生油または水性プロピレングリコールを含む製剤と、無菌注射溶液または懸濁
液の即時調製用の無菌粉末とを含む。全ての場合において、形は無菌でなければ
ならず、シリンジが容易に使用できる程度に流体でなければならない。製造およ
び保存の条件下で安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作
用に対して保存されていなければならない。

【０１４７】ＭＤＴ阻害剤は、中性または塩の形の組成物に製剤化できる。医薬的に許容さ
れる塩は、酸付加塩（タンパク質の遊離アミノ基を用いて形成）を含み、これは
、例えば、塩酸またはリン酸などの無機酸、または酢酸、シュウ酸、酒石酸、マ
ンデル酸等のような有機酸を用いて形成される。遊離カルボキシル基で形成され
る塩はまた、例えば、水酸化ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム
、または鉄などの無機塩基、およびイソプロピルアミン、トリエチルアミン、ヒ
スチジン、プロカイン等のような有機塩基から得ることができる。

【０１４８】担体はまた、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、
プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール等）、適切なその混
合物、および植物油を含む、溶媒または分散媒体であり得る。適切な流動性が、
例えば、レシチンなどのコーティングの使用により、分散液の場合には必要な粒
子サイズの維持により、および、界面活性剤の使用により維持できる。微生物の
作用の防止は、様々な抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタ
ノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサール等によりもたらすことができる
。多くの場合、等張化剤、例えば糖または塩化ナトリウムを含めることが好まし
い。注射組成物の延長吸収は、吸収遅延剤、例えばモノステアリン酸アルミニウ
ムおよびゼラチンの組成物への使用によりもたらすことができる。

【０１４９】無菌注射溶液は、必要量の活性化合物を、適切な溶媒に、必要であれば上記に
列挙した様々な他の成分と共に取込み、その後、ろ過滅菌することにより調製す
る。一般に、分散液は、様々な滅菌活性成分を、基本的な分散媒体および上記に
列挙した必要な他の成分を含む無菌ビークルに取込むことにより調製される。無
菌注射溶液の調製用の無菌粉末の場合、好ましい調製法は、活性成分の粉末およ
び以前にろ過滅菌したその溶液からの任意の追加の所望の成分を生じる真空乾燥
および凍結乾燥技法である。

【０１５０】製剤化時に、溶液は、投与製剤に適合性の様式で、治療有効量で投与する。製
剤は、上記の注射溶液の型などの様々な投与形で容易に投与されるが、薬物放出
カプセル等も使用できる。

【０１５１】本発明に記載の適切な医薬組成物は、一般に、目的の用途に応じて、一連の最
終濃度を与えるため、許容される医薬的希釈剤または無菌水溶液などの添加剤と
混合したＭＤＴ阻害剤の量を含む。調製技法は、一般に、レミングトンの医薬科
学、第１６版、Ｍａｃｋ出版社、１９８０（ここに引用することにより本明細書
の記載の一部となすものとする）により例示されるように当分野で公知である。
ヒトへの投与では、調製物は、米国ＦＤＡ局の生物学的製剤標準により要求され
る無菌性、発熱原性、全体的な安全性、および純度標準を満たすべきであると理
解する。

【０１５２】治療に有効な用量は、本明細書に詳述した試験に示したように、動物モデルを
使用して容易に決定できる。細菌または真菌感染を有する実験動物は、頻繁に、
臨床環境に変える前に、適切な治療用量を最適化するために使用される。かかる
モデルは、効果的な抗細菌および抗真菌戦略の予測に非常に信頼性があることが
知られている。

【０１５３】静脈内または筋肉内注射などの、非経口投与用に製剤化した化合物に加えて、
錠剤または経口投与用の他の固体、徐放性カプセル剤、リポソーム形等などの、
他の医薬的に許容される形も考えられる。他の医薬製剤はまた、処置する容態に
応じて使用し得る。

【０１５４】経口投与のために、本発明のＭＤＴ阻害剤は、添加剤と共に取込み得、摂取で
きないうがい剤および歯磨き粉の形で使用し得る。うがい剤は、必要量の活性成
分を、ホウ酸ナトリウム（Ｄｏｂｅｌｌ溶液）などの適切な溶媒に取込んで調製
し得る。別に、活性成分は、ホウ酸ナトリウム、グリセリンおよび重炭酸ナトリ
ウムを含む防腐洗浄液に取込み得る。活性成分はまた、ゲル、ペースト、粉末お
よびスラリーを含む歯磨き粉に分散し得る。活性成分は、治療有効量で、水、結
合剤、研磨剤、矯味剤、発泡剤、および湿潤剤を含み得るペースト歯磨き粉に加
え得る。

【０１５５】本発明はまた、本明細書に記載したＭＤＴ阻害剤を含む治療キットを提供する
。かかるキットは、一般に、適切な容器手段に、本発明に記載の少なくとも１つ
のＭＤＴ阻害剤の医薬的に許容される製剤を含む。キットはまた、フルオロキノ
ロンなどの抗生物質を含むものなどの、他の医薬的に許容される製剤、および任
意の１つ以上の一連の化学療法薬も含み得る。

【０１５６】キットは、任意の追加の成分を含むまたは含まない、ＭＤＴ阻害剤を含む１つ
の容器手段を有し得るか、または、各所望の薬剤のための別個の容器手段を有し
得る。本発明のある好ましいキットは、フルオロキノロンの共投与と組合せて使
用するためのキットに梱包された、ＭＤＴ阻害剤を含む。かかるキットにおいて
、ＭＤＴ阻害剤およびフルオロキノロンは、等モル量の組合せで、または１つの
成分を他の成分より過剰にして、前以て複合体を形成させ得るか、または、キッ
トの各ＭＤＴ阻害剤およびフルオロキノロン成分は、患者への投与前に、別個の
容器内に別々に維持し得る。他の好ましいキットは、「古典的な」化学療法剤と
組合わせた本発明の任意のＭＤＴ阻害剤を含む。これは、全てのかかるＭＤＴ阻
害剤キットおよび一般的なキット組合せの調製に適用できる考察の例である。

【０１５７】キットの成分が１つ以上の液体溶液で提供される場合、液体溶液は、水溶液で
あり、無菌水溶液が特に好ましい。しかし、キットの成分は、乾燥粉末（群）と
して提供してもよい。試薬または成分が乾燥粉末として提供される場合、粉末は
、適切な溶媒の添加により復元できる。溶媒も、別の容器手段に提供され得ると
考えられる。

【０１５８】キットの容器手段は、一般に、少なくとも１つのバイアル、試験チューブ、フ
ラスコ、瓶、シリンジまたは他の容器手段を含み、その中に、ＭＤＴ阻害剤、お
よび任意の他の所望の薬剤を入れ、好ましくは適切に等分し得る。追加の成分を
含める場合、キットはまた、一般に、第二バイアルまたは他の容器を含み、その
中に、別々に設計された用量の投与を可能とするようにこれらを入れる。キット
はまた、無菌で医薬的に許容される緩衝液または他の希釈剤を含むための第二／
第三溶液手段を含み得る。

【０１５９】キットはまた、ＭＤＴ阻害剤を動物または患者に投与するための手段、例えば
、１つ以上の針またはシリンジ、またはさらには点眼器、ピペット、または他の
似たような装置を含み得、これから製剤を、動物に注射され得るかまたは身体の
疾病領域に適用し得る。本発明のキットはまた、注射または吹込み成形プラスチ
ック容器（これに所望のバイアルおよび他の装置を入れ維持する）などの、典型
的には、バイアル、またはそのようなもの、および他の成分を、市販用に密に包
含して含む手段を含む。

【０１６０】８．実施例以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を示すために含まれる。以下の実
施例に開示した技術は、本発明の実施に十分に機能するように発明者により発見
された技術を示し、従って、その実施の好ましい形態を構成すると考え得ること
が当業者により理解される。しかし、当業者は、本開示に鑑みて、多くの変更を
、開示された特定の実施形態に行い得、依然として本発明の精神および範囲から
逸脱することなく、同様または類似の結果が得られることを理解する。

【０１６１】実施例１多剤輸送体ＮｏｒＡの可能性ある阻害剤のＣｏＭＦＡ（３Ｄ−ＱＳＡＲ）解析化学化合物のダイバーセット（登録商標）ライブラリーを、ＮｏｒＡ基質の臭
化エチジウムに対する、特別に創製した枯草菌株ＮＡの耐性を逆転させるにおい
て、２０μｇ／ｍｌまたはそれ以下の濃度で効果的な化合物についてスクリーニ
ングした。３９９個の化合物が可能性ある阻害剤として示唆された。これらの３
９９個の中で、５４個が、５μｇ／ｍＬまたはそれ以下で活性を示したが、他の
ものは、１０〜２０μｇ／ｍＬで中程度から低い活性を示した。３個の最も強力
な化合物が、インドール部分を有するＩＮＦ５５、尿素化合物であるＩＮＦ２７
１、および芳香族アミド官能基を有するＩＮＦ２４０として以下に示されている
。このセットの多くの他の化合物がこれらの３個に従って分類でき、そして、Ｎ
ｏｒＡが１つ以上の可能性ある結合部位を有するかどうかは不明であるので、化
合物を、インドール（およびニトロインドール）、尿素、および芳香族アミドに
さらに分類した。これらの３クラスの化合物は、提供された活性データを使用し
て評価し、ＣｏＭＦＡ場を、３Ｄ−ＱＳＡＲ関係が存在するかを調べるために作
成した。

【０１６２】コンピューター法試験の全ての化合物を、最初に、ＭＭ３を使用して最適化し、コンフォメーシ
ョン探索を、最低エネルギーのコンホマーを発見するために実施した。続いて、
最低エネルギーのコンホマーを次いで再度最適化し（またＭＭ３で）、発明者の
最初の幾何構造として使用した。部分原子電荷を、Ｓｙｂｙｌ６．４（Ｔｒｉ
ｐｏｓ社、セントルイス、ＭＯ）内のＡＭ１（Ｄｅｗａｒら、１９８５）を使用
して作成した。ＣｏＭＦＡ解析は、Ｓｙｂｙｌ６．４を使用して実施した。Ｃ
ｏＭＦＡ解析の大きな関心事の１つは、上重ねの選択である。発明者は、分子を
重ね合わせるためにＤＩＳＣＯ（Ｍａｔｉｎら、１９９３）を使用することを選
択し、これは、セット化合物内の共通のファルマコフォア点（およびそのコンホ
マー）を発見する。１つ以上のＤＩＳＣＯモデルが一般に認められ、最善にフィ
ット（重ね合わせ）するモデルを、各クラスの化合物について使用した。次いで
、この分子の重ね合わせを使用して、ＣｏＭＦＡ立体および静電場を作成した。
ＣｏＭＦＡおよび活性データを使用して、ＰＬＳ解析を実施して、モデルの有効
性を確認した。最初の相互検証ＰＬＳを行い、成分数を最適化し、ｒ² _cvを確認
した。発明者の解析では、ｒ² _cv値は、どの発明者の系についても０．４２以下
ではなかった。次いで、ｒ²およびＦ値を、最適数の成分を用いておよび相互検
証せずに決定した。これらの数値は全ての系について表１に提示する。

【０１６３】結果インドール。ニトロインドールおよびインドールは、解析した最初のクラスの
化合物であった。最初に、これらの２つを別々に試験した。試験したのはほんの
少数のニトロインドールで、１３個の化合物であり、平凡なモデルが得られた（
表１参照）。窒素位置に置換基を有さない計４０個のインドールがあり、これも
モデリングし、ニトロインドールよりも良好なモデルが得られた。しかし、作成
した最善のモデル（ＰＬＳ解析から、表１）は、インドールと共にニトロインド
ールを封入した場合であり、発明者は計４９個の化合物を有した。次いで、この
モデルを使用して、全ての立体および静電場を評価し、他のインドールの活性の
予測に使用した。ＣｏＭＦＡにより作成した立体および静電場等高線図を、図１
および図２にＩＮＦ５５を用いて示す。

【０１６４】

【表１】

【０１６５】

【表２】

【０１６６】

【化４１】インドールモデル１〜３

【０１６７】全体的に、上のモデルを使用して、よりかさ高い基がＲ₁、並びに、ニトロ基
がモデル１および２にある場所、またはより一般的なモデル３についてはＲ₃、
Ｒ₄、およびＲ₅の近くにある場所に配置する場合、活性の増強が示唆される。Ｒ ₂ およびＲ₆は単に水素であることが最善のようである。静電気的には、Ｒ₃、Ｒ₄ 、またはＲ₅位の置換基（群）は、強力な電子吸引基である場合には最適であり
、その結果、これらの領域はより陰性な領域となり、インドール環中心の周りは
より陽性な領域となる。陰性荷電が好ましくあり得るいくつかの非常に小さな領
域を除いて、Ｒ₁の置換基の荷電にはあまり優先性がないようである。

【０１６８】これらの結果から、３０個の新規インドール化合物を、このモデルを使用して
解析し、その活性を予測し、（１）フェニル基以外にＲ₁により良好な置換基が
存在するか、および（２）ニトロ基の代わりにＲ₄位により好ましい置換基が存
在するかを調べる。表２は、活性の増加または減少に大きな衝撃を及ぼす基を要
約する。Ｒ₁に関して、２−ナフチルおよび２−アニソール、ＸＩＩおよびＶＩ
ＩＩは、ＩＮＦ５５と同等な活性を示すと予測された。２つ以外は、インドール
環に縮合したナフチル基を有し、Ｒ₁のフェニルと共にＲ₂位にメチル基の付加を
有するので（ＩＸおよびＸＩ）、ＩＮＦ５５よりも僅かに低い強度であると予測
された。それ故、Ｒ₁での最善の基は、フェニルまたは２−ナフチルであろう。
Ｒ₁のフェニル基または２−ナフチルを使用して、次いで、Ｒ₄を変化させて、ニ
トロの代わりにより適切な基を見つけた。ＩＶで示したスルホニル基は、ニトロ
基ほど活性ではなく見たところ最善であると予測されるが、５μｇ／ｍＬで活性
であることが知られる、レセルピンよりも少なくとも２倍の高さを依然として示
すだろう。また、Ｒ₄位のアミンの配置についても記載し（ＸＩＩＩ）、これは
、スルホニル基とほぼ同程度に活性であると予測される。レセルピンの活性と同
等であると予測された他の化合物は、Ｒ₄のトリフルオロ−およびトリクロロメ
チル基であり、これらの場合、ＸＩＶのようなＲ₁の２−ナフチル基は、フェニ
ル基よりも良好な活性を示した。

【０１６９】

【化４２】

【０１７０】

【化４３】

【０１７１】インドールについて全体的に、ＣｏＭＦＡモデルにより、Ｒ₄位により電子陰
性な基およびＲ₁に芳香族環系を配置することが示唆される。Ｒ₁の芳香族環系は
、分子のサイズを増加させるが、同時に、分子を比較的強固かつフラットに、見
かけ上好ましい３Ｄ構造に維持する。

【０１７２】尿素。新規に合成されたビフェニル尿素からの活性データと共に最初の活性デ
ータを使用して、新規ＣｏＭＦＡモデルを作成した。尿素系の最善モデルは、＋
１の荷電のｓｐ³炭素原子を使用して、１３２個の化合物から得られた。表１参
照。場内に配置されたＩＮＦ２７１、２７６の立体場等高線図は、図３に示す。
最新のＣｏＭＦＡモデルに関連した立体場の観察は以下を示す。

【化４４】

【０１７３】この新規なモデルは、かさ高い置換基が尿素中心から離れた場所に配置される
必要がある点で、最初のモデルを補強する。さらに、カルボニル基は、「立体的
に障害しない」ままである必要がある、すなわち、Ｒ₅またはＲ₆に置換がないこ
とが必要であるようである。静電場等高線図を図４に示す。このアップデートさ
れた静電場は以下を示唆する。

【化４５】

【０１７４】静電気的指摘は、陰性荷電基、すなわち電子吸引基が、Ｒ₇、Ｒ₈およびＲ₉を
囲む領域で好ましいことである。陽性荷電基、電気陰性が非常に少ないか電子供
与基であるものは、Ｒ₁およびＲ₃位で好ましい。陽性荷電基はまた、芳香族環か
ら離れている限り、Ｒ₆およびＲ₇の領域が好ましい。上記の結果からおよびビフ
ェニル尿素の活性を増強することが知られる置換基に基づいて、以下のモデルが
示唆される。

【０１７５】尿素に示唆されるモデル

【化４６】

【０１７６】このモデルでは、２つの位置が重要であり、Ｒ₁は、アルコキシ基を有するこ
とが必要であり、フェニル、ベンゾイルなどのＲ₈の芳香族基、またはＲ₇−Ｒ₈
の縮合芳香族環が必要である。置換基はまた、Ｒ₃およびＲ₉で置換できるという
証拠もある。現在、発明者は、さらに多いビフェニル尿素を解析して、これらの
位置のこれらの置換基をさらに最適化することを計画する。

【０１７７】芳香族アミド。ＤＩＳＣＯ内に尿素と同じファルマコフォア点を有するために
、新規ＣｏＭＦＡモデルおよびＰＬＳ解析を、芳香族アミドおよび尿素の両方を
使用して実施した。計５０個の化合物を解析した。立体および静電場のＣｏＭＦ
Ａ結果は、図５および図６であり、これらの等高線内にＩＮＦ２４０を配置した
。下のモデルを使用して、ＣｏＭＦＡは、以下を示唆する。かさ高い基はＲ₂お
よび、長鎖Ｒ₆（ここでは、かさ高い置換基が芳香族アミドそれ自体から離れて
いる）に限定される。また、Ｒ₆が長鎖ではない（４炭素以下）場合、芳香族環
上の置換基はまたＲ₄位で起こり得る。Ｒ₄／Ｒ₆の組合せは、１つの領域にかさ
高い基を維持するために、かなり強固かつ平面でなければならない。静電学はこ
こでも、アミド基の一方の側上の大きな陽性および大きな陰性領域を示し（尿素
系のように）、この基から離れた指摘を提供しない。

【化４７】

【０１７８】要約ＣｏＭＦＡ解析は、かなり強固な構造を有するインドール系についての示唆を
与える。最初の試験セットから、構造的に多様な尿素および芳香族アミドＣｏＭ
ＦＡのセットは、あまり特異的なモデルをもたらさなかった。しかし、さらなる
解析時に、大量のビフェニル尿素が、活性を増加させていることが判明した。我
々の化合物セットから、１４２個のビフェニル尿素が活性であることが判明した
（１０μｇ／ｍｌ以下で無毒性で活性）。これらの１４２個のビフェニル尿素の
中で、それらの１３２個が、信頼性のあるＣｏＭＦＡ解析をもたらした。尿素の
最新のＣｏＭＦＡ研究が、活性を増強させるより最適な置換基に関する情報を提
供する。芳香族アミドは、尿素のインドールほど有望なリードモデルではないよ
うであり、これは、ほとんど、化合物のはるかに高い柔軟度に起因するようであ
る。しかし、尿素に示唆されたのと全く同じように、芳香族アミドの型を限定す
ることは、この系をより良く記載する１つの代用案であり得る。

【０１７９】実施例２同定化合物の阻害作用の特徴づけ本実施例は、同定化合物の阻害活性の測定に関する説明を提供する。

【０１８０】５個の選択した阻害剤とエチジウムの組合せの細菌増殖に対する効果の定量相乗作用試験を、２倍連続ブロス微量希釈を使用して、マイクロタイタープレ
ートでチェックボード滴定によりＮＡ株で実施した（Ｅｌｉｏｐｏｕｌｕｓおよ
びＭｏｅｌｌｅｒｉｎｇＪｒ．、１９９６）。各候補阻害剤を、１１個の濃度
で試験し（５０ｎｇ／ｍｌ〜５０μｇ／ｍｌ）、エチジウムを３０ｎｇ／ｍｌ〜
４０μｇ／ｍｌの範囲の１１個の濃度で試験した（ＮＡ株のＭＩＣ）。ウェルを
１８時間のインキュベート期間の後に増殖について眼で評価した。分割阻害濃度
（ＦＩＣ）を各阻害剤とエチジウムの組合せについて計算した。以下の式を使用
して、ＦＩＣ係数を計算した。薬物ＡのＦＩＣ＝組合せの薬物ＡのＭＩＣ／薬物Ａ単独のＭＩＣ薬物ＢのＦＩＣ＝組合せの薬物ＢのＭＩＣ／薬物Ｂ単独のＭＩＣＦＩＣ係数＝薬物ＡのＦＩＣ＋薬物ＢのＦＩＣ

【０１８１】相乗作用は、＜０．５のＦＩＣ係数として定義した。図７は、阻害剤の１つと
エチジウムの組合せについて得られた、代表的な相乗曲線を示す。計算されたＦ
ＩＣ係数を表３に示す。

【０１８２】

【表３】

【０１８３】全５個の候補阻害剤のＦＩＣ係数は、＜＜０．５であり、これは、これらの化
合物が、エチジウムの静細菌効果の促進において強度に相乗的であることを示し
、エチジウム耐性機序、特にこの場合ではＮｏｒＡの阻害剤について期待される
ことである。

【０１８４】

【化４８】

【０１８５】ＮｏｒＡによる排出を抑制することにより、毒性を促進する候補阻害剤の能力の
評価ＮｏｒＡを過剰発現しているＮＡ細胞に、レセルピン（２０μｇ／ｍｌ）の存
在下で、臭化エチジウムを添加した。洗浄後、細胞を、新しい培地と共に蛍光光
度計キュベットに入れた。エチジウムはそれが細胞内に位置しＤＮＡに結合して
いる場合にのみ蛍光を発するので、細胞は、ＮｏｒＡ媒介エチジウム排出により
蛍光の急速な減少を示した。図８に示したように、この蛍光の減少は、細胞をレ
セルピンまたは各５個の試験化合物の存在下で排出させた場合に、劇的に阻害さ
れた。発明者は、リード化合物は、臭化エチジウムの毒性を、ＮｏｒＡ多剤排出
輸送体による薬物に排出の阻害により、相乗的に促進したと結論する。

【０１８６】細菌毒性の促進における、阻害剤とシプロフロキサシンの間の相乗作用の評価発明者は、ＮｏｒＡ阻害剤と、現在最も汎用されているフルオロキノロンであ
り、二番目に多く処方されている抗生物質であるシプロフロキサシンの組合せの
効果を定量した。相乗作用試験は、エチジウムについて上記したチェックボード
滴定により実施した。４ｎｇ／ｍｌから４μｇ／ｍｌ（ＭＩＣの２倍）の範囲の
１１個の濃度のシプロフロキサシンを、ＮＡ株およびＮｏｒＡ遺伝子の１つの染
色体コピーからのＮｏｒＡを過剰発現する黄色ブドウ球菌株ＳＡ１１９９Ｂの両
方と共に使用した（Ｋａａｔｚら、１９９０）。全５個の化合物が、シプロフロ
キサシンと相乗作用し、＜０．５のＦＩＣ係数を示した（表４参照）。発明者は
、エチジウムの細菌毒性に対するその効果と同じように、試験した各ＮｏｒＡ阻
害剤は、相乗的にシプロフロキサシンの細菌毒性を促進すると結論した。

【０１８７】

【表４】

【０１８８】野生型黄色ブドウ球菌のシプロフロキサシンに対する内在的感受性に対する阻害
剤の効果の評価野生型黄色ブドウ球菌のＮｏｒＡの発現は、ノルフロキサシンおよびシプロフ
ロキサシンを含む多くのフルオロキノロンに対する、有意な内在的耐性を付与す
る（Ｙａｍａｄａら、１９９７）。それ故、発明者は、新規に同定した阻害剤が
、野生型黄色ブドウ球菌のフルオロキノロンの細菌毒性効果を増強し得るかを評
価した。図９に示したように、全ての同定したＮｏｒＡ阻害剤が、少なくとも３
倍、シプロフロキサシンのＩＣ₅₀を減少させた。従って、任意の同定した阻害剤
とシプロフロキサシンの組合せの臨床使用は、黄色ブドウ球菌についてのこの抗
生物質のＭＩＣ₉₀を、臨床的に到達可能な濃度より十分低くに移動させるようで
ある。低いレベルのフルオロキノロン耐性の出現の頻度は、２倍のＭＩＣの差異
を選択した場合に（４倍対２倍）、２次数減少させ得るので（Ｗａｋａｂａｙａ
ｓｈｉおよびＭｉｔｓｕｈａｓｈｉ、１９９４）、発明者は、次に、ＮｏｒＡ阻
害剤は、抗生物質の細胞内蓄積を促進することにより、シプロフロキサシン耐性
変異形の出現率を減少させ得るかを評価した。

【０１８９】黄色ブドウ球菌におけるシプロフロキサシン耐性の出現率に対する阻害剤の効果野生型黄色ブドウ球菌ＳＡ１１９９（Ｋａａｔｚら、１９９０）のインビトロ
で選択した１段階シプロフロキサシン耐性変異体の出現率に対する阻害剤の効果
を決定した。２〜４×１０¹⁰のＳＡ１１９９細胞を、１μｇ／ｍｌの濃度（２×
ＭＩＣ）のシプロフロキサシンを含むＬＢ寒天プレート上に播いた後、自然発生
変異体を得た。変異選択の頻度は、薬物を含むプレート上で増殖したコロニー数
と、薬物の非存在下で適切な希釈液に播いた時に得られたコロニーの数と比較す
ることにより、２×１０^-9であると決定された。発明者のノルフロキサシンを用
いた以前の研究と同じように（ＭａｒｋｈａｍおよびＮｅｙｆａｋｈ、１９９６
）、レセルピンは、１次数以上、シプロフロキサシン耐性の出現を阻害した。重
要には、表５に示したように、試験した各阻害剤はまた、５０倍またはそれ以上
で、シプロフロキサシン耐性の自然発生的出現の頻度を減少させた。この劇的な
効果は、阻害剤の毒性効果に帰することができない。なぜなら、同じ濃度の阻害
剤は、コロニー形成能にも、シプロフロキサシンの非存在下で播いたＳＡ１１９
９細胞のコロニーサイズにも影響を及ぼさなかったからである。

【０１９０】

【表５】

【０１９１】黄色ブドウ球菌の第一段階のインビトロで選択した変異体におけるシプロフロ
キサシン耐性は、主に、この薬物の標的であるトポイソメラーゼＩＶおよびジャ
イレースにおける特異的な点変異に起因する（ＣａｍｂａｕおよびＧｕｔｍａｎ
、１９９３、Ｆｅｒｒｅｒｏら、１９９４）。これはスルホン酸エチルメタンに
よる黄色ブドウ球菌の化学的変異誘発が、１次数、シプロフロキサシン耐性変異
体の出現率を増加させることを説明する（表５）。しかし、変異誘発細胞でさえ
、ＮｏｒＡ阻害剤は、薬物耐性コロニーの出現を強力に抑制した。結論すると、
同定されたリード阻害剤は、レセルピンのように、黄色ブドウ球菌のフルオロキ
ノロン耐性の出現を阻害した。

【０１９２】変異により阻害剤に非感受性となったＮｏｒＡの可能性の評価耐性機序の抗生物質と阻害剤の組合せに対する１つのあり得る限界は、阻害剤
に対して非感受性とする変異を発達する耐性機序の可能性である。かかる状況は
、β−ラクタマーゼ遺伝子の変異を介して、オーグメンチンに対する耐性を発達
させた細菌について観察されている（アンピシリンと、β−ラクタマーゼ阻害剤
であるクラブラン酸の組合せ）。同様に、ＮｏｒＡの変異は、理論的に、Ｎｏｒ
Ａに、阻害剤に対する耐性を発達させ得る。実際、ＮｏｒＡの近い相同体である
Ｂｍｒを用いた以前の研究では、この多剤排出輸送体は、薬物排出活性を維持し
つつ、レセルピンの阻害効果に耐えるように変異できることを示した（Ａｈｍｅ
ｄら、１９９３）。

【０１９３】ＮｏｒＡ輸送体に生じたかかる変異の可能性を評価するために、発明者は、Ｎ
ｏｒＡ阻害剤の存在に関わらず、ＮｏｒＡ基質に対する耐性を保持した、Ｎｏｒ
Ａを過剰発現している黄色ブドウ球菌のＳＡ１１９９Ｂの変異体の出現頻度を決
定した。これらの細胞は、スルホン酸エチルメタンを用いて化学的に変異誘発さ
せ（ＭａｒｋｈａｍおよびＮｅｙｆａｋｈ、１９９６）、次いで、２〜４×１０ ⁹ 個の細胞を、ＮｏｒＡ基質の臭化エチジウム（１０μｇ／ｍｌ−ＭＩＣの４分
の１）およびレセルピン（２０μｇ／ｍｌ）または５個のリード阻害剤の１つ（
５μｇ／ｍｌ）を含むプレート上で選択した。４８時間のインキュベート期間後
、各プレート上のコロニー数を決定した。

【０１９４】レセルピンに対して非感受性の変異体は、約２×１０^-8の頻度で生じた。表６
に示したように、ＩＮＦ３９２に対して非感受性の変異体は、さらに高い頻度で
生じた。しかし、非常に少ない変異体（２．５〜５×１０^-9）が、ＩＮＦ２７７
およびＩＮＦ２４０を用いて得ることができ、最も励みとなることに、ＩＮＦ５
５またはＩＮＦ２７１に対して非感受性の変異体は全く得られなかった。これは
、ＮｏｒＡが適合できない阻害剤を開発できることを強く示す。

【０１９５】

【表６】

【０１９６】実施例３同定した阻害剤の毒性試験ここでは、発明者は、同定したリード化合物の、数個のヒト細胞系に対する毒
性を試験することを提案した。現在までに、発明者は、ＨｅＬａ細胞系について
のリード化合物のＩＣ₅₀を決定し、その結果を表６に示す。０．７μｇ／ｍｌか
ら１００μｇ／ｍｌの範囲の濃度の化合物の毒性を、１ウェルあたり１０⁴の密
度で播いた２４時間後に、化合物を細胞に加えることにより、９６ウェルプレー
トで決定した。化合物と共に３日間インキュベートした後、細胞増殖に対する効
果を、セルタイター９６ＡＱ_ueousＭＴＳをベースとしたアッセイ（プロメガ、
マジソン、ＷＩ）を使用して決定した。

【０１９７】実施例４本発明の医薬組成物本発明のＭＤＴ組成物は、本明細書の上記の医薬組成物の章で議論したような
錠剤としてまたは注射溶液として製剤化し得る。本章は、細菌または真菌感染に
罹患した被検者の処置に使用するためのＭＤＴ組成物の例を提供することを意図
する。細菌感染の処置において、従って、これらのＭＤＴ組成物は、フルオロキ
ノロンと組合せて被検者に提供され得る。フルオロキノロンは、別々の組成物で
提供され得るか、または生物化学的に許容可能であれば、フルオロキノロンは、
ＭＤＴ組成物の活性成分の一部を形成し得る。真菌感染の処置において、ＭＤＴ
組成物は、抗真菌剤と組合せて被検者に提供され得る。

【０１９８】本発明のＭＤＴ阻害剤の用量、１００、２００、３００、４００または５００
ｍｇを含む組成物を以下のように調製する。適切に水和または脱水和した形のＭ
ＤＴ阻害剤は、組成物の活性成分を形成する。錠剤製剤化では、添加剤コアの例
は、コアとして、小麦デンプン、ゼラチン、タルク、ステアリン酸マグネシウム
、カルボキシメチルデンプンナトリウムを含み得、コーティングは、ヒドロキシ
プロピルメチルセルロース、エチルセルロース、セバシン酸ジブチル、酸化チタ
ン、タルク、ポリエチレングリコール６００を含む。単一のＭＤＴ阻害剤を含む組成物に加えて、組成物の活性成分は、２つ以上の
ＭＤＴ阻害剤を含んで、より広域スペクトルの活性を提供するように製剤化し得
ることが考えられる。

【０１９９】さらに、本発明の治療組成物は、追加の活性成分、１つ以上のフルオロキノロ
ン、例えば、ペフロキサシン、ノルフロキサシン、シプロフロキサシン、オフロ
キサシン、スパルフロキサシン、グレパフロキサシン、Ｂａｙ１２−８０３９、
トロバフロキサシン、ＤＵ６８５９ａ、サラフロキサシン、ＬＢ２０３０４、レ
ボフロキサシン、エノキサシン、フレロキサシン、ロメフロキサシン、テモフロ
キサシン、アミフロキサシン、トスフロキサシン、フルメクイン、ルフロキサシ
ン、クリナフロキサシン等を含み得ると考えられる。

【０２００】抗真菌適用において、本発明の治療組成物は、追加の活性成分、１つ以上の抗
真菌剤、例えば、アムホテリシンＢ、フルシトシン、ケトコナゾール、ミコナゾ
ール、イトラコナゾール、フルコナゾール、グリセオフルコナゾール、ナイスタ
チン、ハロプロギン、ロプロックス、ナタマイシン、ウンデシレン酸等を含み得
る。

【０２０１】上記の製剤は、例示のために提供され、当業者は、本明細書で同定した阻害剤
が治療送達の目的のために任意の医薬担体に配置され得る組成物を製剤化できる
ことが理解される。

【０２０２】本明細書で開示および特許請求した全ての組成物および／または方法は、本開
示に鑑みて、過度の実験を行うことなく、製造および実施できる。本発明の組成
物および方法は、好ましい実施形態に関して記載したが、本発明の概念、精神お
よび範囲から逸脱することなく、変更を、組成物および／または方法、並びに、
段階または本明細書に記載した方法の一連の段階に適用し得ることは当業者には
明らかである。より具体的には、化学的および生理学的の両方に関連したある薬
剤を、本明細書に記載した薬剤と置換し得、一方で、同じまたは類似の結果が達
成されることは明らかである。当業者に明らかである全てのかかる類似の置換お
よび修飾は、添付の特許請求の範囲により定義した本発明の精神、範囲および概
念内であると考えられる。

【０２０３】参考文献以下の参考文献は、本明細書に示したものに捕捉的な例示的手順または他の詳
細を提供する程度に、本明細書の記載の一部をなすものとする。 U.S. Patent 4,448,962 U.S. Patent 4,499,091 U.S. Patent 4,668,784 U.S. Patent 4,704,459 U.S. Patent 4,795,751 U.S. Patent 5,532,239 DE Patent Number 3,142,854 EP Number 206283 Acar and Goldstein, "Trends in bacterial resistance to fluoroquinolones,
" Clin. Infect. Dis., 24(1):67-73, 1997. Ahmed et al., "Mutants of the Bacillus subtilis multidrug transporter Bm
r with altered sensitivity to the antihypertensive alkaloid reserpine,"
J. Biol. Chem., 268:11086-11089, 1993. Ahmed et al., "A protein that activates expression of a multidrug efflux
transporter upon binding the transporter substrates," J. Biol. Chem., 2
69:28506-28513, 1994. Ahmed et al., "Two highly similar multidrug transporters of Bacillus sub
tilis whose expression is differentially regulated," J. Bacteriol., 177:
3904-3910, 1995. Baranova and Neyfakh, "Apparent involvement of a multidrug transporter i
n the fluoroquinolone resistance of Staphylococcus aureus," Antimicrob.
Agents Chemother., 41:1396-1398, 1997. Bolhuis et al., "The Lactococcal lmrP gene encodes a proton motive force
-dependent drug transporter." J Biol Chem. 270(44): 26092-26098, 1995. Brenwald et al., "The effect of reserpine, an inhibitor of multidrug eff
lux pumps, on the in vitro susceptibilities of fluorquinolone-resistant
strains of Streptococcus pneumoniae to norfloxacin," Antimicrob. Agents
Chemother., 40:458-460, 1997. Brown, "The pyrimidines," Wiley Interscience, NY, pp 1-1509, 1994. Cambau and Gutman, "Mechanisms of resistance to quinolones," Drugs, 45:1
5-23, 1993. Cormican and Jones, "Emerging resistance to antimicrobial agents in gram
positive bacteria," Drugs, 51(1):6-12, 1996. Davis et al., "Ciprofloxacin," Drugs, 51(6):1019-1074, 1996. Dewar et al., Am. Chem. Soc., 107:3902-3909, 1985. Eliopoulus and Moellering, Antimicrobial combinations, In: Antibiotics
in laboratory medicine, (ed.) Lorian, The Williams and Wilkins Co., Balt
imore, Md., pp. 330-396, 1996. Ferrero et al., "Cloning and primary structure of Staphylococcus aureus
DNA topoisomerase IV: a primary target of fluoroquinolones," Mol. Micro
biol., 13:641-653, 1994. Jurczak and Golebiowski, "Optically Active N-protected amino Aldehydes i
n Organice Synthesis" Chem. Rev. 89, 149-164, 1989. Kaatz and Seo, "Inducible NorA-mediated multidrug resistance in Staphylo
coccus aureus," Antimicrob. Agents Chemother., 39:2650-2655, 1995. Kaatz, et al., "Mechanisms of fluoroquinolone resistance in Staphylococ
cus aureus," J. Infect. Dis., 163:1080-1086, 1990. Katritzky and Wang, 25:671-675, 1998. Korten et al., "Analysis by PCR and direct sequencing of gyrA mutations
associated with fluoroquinolone resistance in Enterococcus faecalis," An
timicrob. Agents Chemother., 38:2091-2094, 1994. Kulagowski et al., "Preparation and Rearrangement of 6a-Methyl-6aH-benzo
[a]carbazole and 11b-Methyl-11bHbenzo[c]carbazole," J. Chem. Soc. Perkin
Trans., 1:2733-2739, 1985. Lewis, "Multidrug-resistance pumps in bacteria: variations on a them,"
Trends Biochem. Sci., 19:119-123, 1994. Lomovskaya and Lewis, "Emr, and E. coli locus for multidrug resistance,"
Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:8938-8942, 1992. Lynch et al., "Active efflux of antimicrobial agents in wild-type strain
s of Enterococci," Antimicrob. Agents Chemother., 41:869-871, 1997. Markham and Neyfakh, "Inhibition of the multidrug transporter NorA preve
nts emergence of norfloxacin resistance in Staphylococcus aureus," Antim
icrob. Agents Chemother., 40:2673-2674, 1996. Martin et al., " A fast new approach to pharmacophore mapping and its ap
plication to dopaminergic and benzodiazepine agonists" J. Computer-Aided
Molec. Design, 7:83-102, 1993. Maryanoff and Reitz "The Wittig Olefination Reaction and modifications i
nvolving Phosphoryl-stablizied carbanions. Stereochemistry, mechanism a
nd selected synthetic aspects", Chem. Rev. 89, 863-927, 1989. Munoz and De La Campa, "ParC subunit of DNA topoisomerase IV of Streptoc
occus pneumoniae is a primary target of fluoroquinolones and cooperates
with DNA gyrase A subunit in forming resistance phenotype," Antimicrob.
Agents Chemother., 40:2252-2257, 1996. Neyfakh, "The multidrug efflux transporter of Bacillus subtilis is a str
uctural and functional homolog of the Staphylococcus NorA protein," Anti
microb. Agents Chemother., 36:484-485, 1992. Neyfakh et al., "Efflux-mediated multidrug resistance in Bacillus subtil
is: similarities and dissimilarities with the mammalian system," Proc. N
atl. Acad. Sci. USA, 88:4781-4785. Neyfakh et al., "Fluoroquinolone resistance protein NorA of Staphylococc
us aureus is a multidrug efflux transporter," Antimicrob. Agents Chemoth
er., 37:128-129, 1993. Nikaido, "Prevention of drug access to bacterial targets: permeability
barriers and active efflux," Science, 264:382-388, 1994. Novick, "The Staphylococcus as a molecular genetic system," In: Molecul
ar biology of the Staphylococci, (ed) Novick, VCH Publishers, NY, p. 1-3
7, 1990. Ohki and Murata, "bmr3, a third multidrug transporter gene of Bacillus s
ubtilis," J. Bacteriol., 179:1423-1427, 1997. Okusu et al., "AcrAB efflux pump plays a major role in the antibiotic re
sistance phenotype of E. coli multiple-antibiotic-resistance (Mar) mutan
ts," J. Bacteriol., 178:306-308, 1996. Poole et al., "Multiple antibiotic resistance in Pseudomonas aeruginosa:
evidence for involvement of an efflux operon," J. Bacteriol., 175:7363
-7372, 1993. Robinson, "The Fischer Indole synthesis," Wiley, Chichester, pp. 1-923,
1982. Staab and Benz, Liebigs Ann., (72)648, 1961. Stein, "Kinetics of the multidrug transporter (P-glycoprotein) and its r
eversal," Physiol. Rev., 77:545-589, 1997. Takiff et al., "Efflux pumps of the proton antiporter family confer low
level fluoroquinolone resistance in Mycobacterium smegmatis," Proc. Natl
. Acad. Sci. USA, 93:362-366, 1996. Tankovic et al., "Contribution of mutations in gyrA and parC genes to fl
uoroquinolone resistance of mutants of Streptococcus pneumoniae obtained
in vivo and in vitro," Antimicrob. Agents Chemother., 40:2505-2510, 199
6. Trucksis et al., "A novel locus conferring fluoroquinolone resistance in
Straphylococcus aureus," J. Bacteriol., 173:5854-5860, 1991. U.S. Food and Drug Administration, "New antimicrobial agents approved in
1996 and new indications for previously used agents," Antimicrob. Agent
s Chemother., 41:878, 1997. van Veen et al., "Multidrug resistance mediated by a bacterial homolog o
f the human multidrug transporter MDR1." Proc Natl Acad Sci U S A. 93(20
): 10668-10672, 1996. Vedejs and Peterson, "Stereochemistry and Mechanism in the Wittig Reacti
on", Top. Stereochem., 21, 1-157, 1994. Wakabayashi and Mitsuhashi, "In vitro antibacterial activity of AM-1155,
a new 6-fluoro-8-methoxy quinolone," Antimicrob. Agents Chemother., 38:
594-601, 1994. Yamada et al., "Quinolone susceptibility of norA-disrupted Staphylococcu
s aureus," Antimicrob. Agents Chemother., 41:2308-2309, 1997. Yoshida et al., "Nucleotide sequence and characterization of the Staphyl
ococcus aureus nor A gene, which confers resistance to quinolones," J. B
acteriol., 172:6942-6949, 1990. Zeller et al., "Active efflux as a mechanism of resistance to ciprofloxa
cin in Streptococcus pneumoniae," Antimicrob. Agents Chemother., 41:1973
-1978, 1997. Zhou et al., "Multiple binding modes of flavones as protein tyrosine kin
ase inhibitors," J. Computer-Aided Molec. Design,.

【図面の簡単な説明】

【図１】インドール立体場のＣｏＭＦＡ等高線図。ＩＮＦ５５がこの場内に描かれてい
る。緑の領域は、バルクの好ましい領域を示し、黄色はバルク基に好ましくない
領域を示す。

【図２】インドール静電場のＣｏＭＦＡ等高線図。ＩＮＦ５５がこの場内に描かれてい
る。赤い領域は、陰性荷電の好ましい領域を示し、青は陽性荷電の好ましい領域
を示す。

【図３】ビフェニル尿素立体場のＣｏＭＦＡ等高線図。ＩＦＮ２７１、２７６がこの場
内に描かれている。緑の領域は、バルクの好ましい領域を示し、黄色はバルク基
に好ましくない領域を示す。

【図４】ビフェニル尿素静電場のＣｏＭＦＡ等高線図。ＩＦＮ２７１、２７６がこの場
内に描かれている。赤い領域は、陰性荷電の好ましい領域を示し、青は、陽性荷
電の好ましい領域を示す。

【図５】芳香族アミド立体場のＣｏＭＦＡ等高線図。ＩＮＦ２４０がこの場内に描かれ
ている。緑の領域は、バルクの好ましい領域を示し、黄色は、バルク基に好まし
くない領域を示す。

【図６】芳香族アミド静電場のＣｏＭＦＡ等高線図。ＩＮＦ２４０がこの場内に描かれ
ている。赤い領域は陰性荷電の好ましい領域を示し、青は陽性荷電の好ましい領
域を示す。

【図７】ＩＮＦ５５とエチジウムの組合せの相乗曲線。

【図８】ＮＡ細胞からのエチジウム排出に対するリード阻害剤の効果。ＮＡ細胞に、レ
セルピンの存在下でエチジウムを添加し、レセルピンの非存在下（Ａ）、２０μ
ｇ／ｍｌのレセルピン（Ｂ）、５μｇ／ｍｌのＩＮＦ５５（Ｃ）、５μｇ／ｍｌ
のＩＮＦ２４０（Ｄ）、５μｇ／ｍｌのＩＮＦ２７１（Ｅ）、５μｇ／ｍｌのＩ
ＮＦ３９２（Ｆ）、または１０μｇ／ｍｌのＩＮＦ２７７（Ｇ）の存在下で排出
させた。蛍光強度は、細胞内に残るエチジウムの量に比例する。

【図９】野生型黄色ブドウ球菌（ＳＡ１１９９）のシプロフロキサシンへの感受性に対
するリード阻害剤の効果。細胞を、様々な濃度のシプロフロキサシン（１．５倍
希釈）および阻害剤なし（Ａ）、２０μｇ／ｍｌのレセルピン（Ｂ）、５μｇ／
ｍｌのＩＮＦ５５（Ｃ）、５μｇ／ｍｌのＩＮＦ２４０（Ｄ）、５μｇ／ｍｌの
ＩＮＦ２７１（Ｅ）、１．２５μｇ／ｍｌのＩＮＦ２７７（Ｆ）、１．２５μｇ
／ｍｌのＩＮＦ３９２（Ｇ）を含むＬＢ培地を用いて、０．０１のＯＤ₆₀₀とな
るまでチューブに希釈した。光学密度は、３時間インキュベートした後に決定し
た。

【手続補正書】

【提出日】平成１４年１月１８日（２００２．１．１８）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【化１】［式中、Ｒ₁は、フェニル、２−ナフチル、ｏ−アニソールであり、Ｒ₂は、Ｈま
たはＣＨ₃であり、Ｒ₁およびＲ₂は、インドール環に縮合した２つのナフチル基
であり、Ｒ₃はＨであり、Ｒ₄はＮＯ₂、ＳＯ₃Ｈ、ＮＨ₂、およびＣＦ₃またはＣＣ
ｌ₃であり、Ｒ₅はＨであり、Ｒ₆はＨである］を有する請求項２の方法。

【化２】［式中、Ｒ₁は、ＯＲ、Ｂｒ、ＣｌまたはＦであり、Ｒ₂は、ＯＲ、ＮＨＣＯ₂Ｒ
、Ｃｌ、Ｆ、またはＨであり、Ｒ₃は、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＲ、またはＣＯ₂Ｒであり
、Ｒ₄はＣｌまたはＢｒであり、Ｒ₅はＨであり、Ｒ₆はＨであり、Ｒ₇はＨであり
、Ｒ₈は、共役系または芳香族系であり、Ｒ₉は、Ｈ、ＯＲ、Ｃｌ、またはＢｒで
あり、Ｒ₁₀は、Ｈ、ＯＲ、またはＣｌであり、Ｒはアルキルまたは芳香族である
］を有する請求項３の方法。

【化３】［式中、Ｒ₁、Ｒ₄およびＲ₅はＨであり、Ｒ₂および／またはＲ₃は小さい電子吸
引基であり、Ｒ₆はフェニル環を有するまたは有さないでＯ、Ｎ、またはＳを含
む少なくとも６つの原子の置換または非置換アルキルである］を有する請求項４の方法。

【化４】［式中、Ｒ₂は３，４−ジメトキシベンゼンであり、Ｒ₃はＨであり、Ｒ₄はＣＯ₂ Ｒ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲまたはＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒであり、Ｒ₅はＨであり、Ｒ₆はＨ
、ＮＯ₂、ＳＯ₃Ｈ、ＮＨ₂、ＣＦ₃またはＣＣｌ₃であり、Ｒ₇はアルキル基、ＮＯ ₂ 、ＳＯ₃Ｈ、ＮＨ₂、ＣＦ₃またはＣＣｌ₃であり、Ｒ₈はＨであり、Ｒはアルキル
または芳香族である］を有する請求項５の方法。

【化５】［式中、Ｒ₁はフェニル、２−ナフチル、ｏ−アニソールであり、Ｒ₂はＨまたは
ＣＨ₃であり、Ｒ₁およびＲ₂はインドール環に縮合した２つのナフチル基であり
、Ｒ₃はＨであり、Ｒ₄はＮＯ₂、ＳＯ₃Ｈ、ＮＨ₂およびＣＦ₃またはＣＣｌ₃であ
り、Ｒ₅はＨであり、Ｒ₆はＨである］を有するインドール。

【化６】［式中、Ｒ₁はＯＲ、Ｂｒ、Ｃｌ、またはＦであり、Ｒ₂はＯＲ、ＮＨＣＯ₂Ｒ、
Ｃｌ、Ｆ、またはＨであり、Ｒ₃はＣｌ、Ｂｒ、ＯＲまたはＣＯ₂Ｒであり、Ｒ₄
はＣｌまたはＢｒであり、Ｒ₅はＨであり、Ｒ₆はＨであり、Ｒ₇はＨであり、Ｒ₈ は共役系または芳香族系であり、Ｒ₉はＨ、ＯＲ、ＣｌまたはＢｒであり、Ｒ₁₀
はＨ、ＯＲまたはＣｌであり、Ｒはアルキルまたは芳香族である］を有する尿素。

【化７】［式中、Ｒ₁、Ｒ₄およびＲ₅はＨであり、Ｒ₂および／またはＲ₃は小さな電子吸
引基であり、Ｒ₆はフェニル環を有するまたは有さないでＣ、Ｏ、ＮまたはＳを
含む少なくとも６つの原子の置換または非置換アルキルである］を有する芳香族アミド。

【化８】［式中、Ｒ₂は３，４−ジメトキシベンゼンであり、Ｒ₃はＨであり、Ｒ₄はＣＯ₂ Ｒ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲまたはＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒであり、Ｒ₅はＨであり、Ｒ₆はＨ
、ＮＯ₂、ＳＯ₃Ｈ、ＮＨ₂、ＣＦ₃またはＣＣｌ₃であり、Ｒ₇はアルキル基、ＮＯ ₂ 、ＳＯ₃Ｈ、ＮＨ₂、ＣＦ₃またはＣＣｌ₃であり、Ｒ₈はＨであり、Ｒはアルキル
または芳香族である］を有するキノリン。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 31/473 Ａ６１Ｋ 31/473 31/519 31/519 Ａ６１Ｐ 31/04 Ａ６１Ｐ 31/04 31/10 31/10 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ 33/50 33/50 Ｚ 37/00 １０３ 37/00 １０３ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者ネイファク，アレクサンダー・エイアメリカ合衆国イリノイ州60187，オーク・パーク，ウェスト・ワシントン 943，＃ケイ２ (72)発明者クリッチ，デイヴィッドアメリカ合衆国イリノイ州60610，シカゴ，サウス・ウェルズ 800，アパートメント 1040 (72)発明者ジェイバー，モハマド‐ラミアメリカ合衆国イリノイ州60446，ロミオヴィル，オンタリオ・ドライヴ 962 (72)発明者ジョンソン，マイケル・イーアメリカ合衆国イリノイ州60093−2616，ウィネッカ，エルム・ストリート 575 Ｆターム(参考） 2G045 BB20 CB21 DA80 FB04 GC22 JA20 4B063 QA20 QQ06 4C086 AA01 AA02 BC10 BC13 BC27 BC28 BC38 BC50 BC60 CB22 GA02 GA07 GA12 GA16 MA02 MA04 NA05 NA14 ZB35 ZC75 4C206 AA01 AA02 GA01 GA31 HA30 KA01 KA04 MA02 MA04 NA05 NA14 ZB35 ZC75

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】細菌をＮｏｒＡの阻害剤と接触させることを含んでなり、前
記阻害剤はインドール、尿素、芳香族アミドまたはキノリンであるフルオロキノ
ロンの抗細菌作用を増強する方法。
【請求項２】前記阻害剤はインドールである請求項１の方法。
【請求項３】前記阻害剤は尿素である請求項１の方法。
【請求項４】前記阻害剤は芳香族アミドである請求項１の方法。
【請求項５】前記阻害剤はキノリンである請求項１の方法。
【請求項６】前記インドールは、一般式：【化１】［式中、Ｒ₁は、フェニル、２−ナフチル、ｏ−アニソールであり、Ｒ₂は、Ｈま
たはＣＨ₃であり、Ｒ₁およびＲ₂は、インドール環に縮合した２つのナフチル基
であり、Ｒ₃はＨであり、Ｒ₄はＮＯ₂、ＳＯ₃Ｈ、ＮＨ₂、およびＣＦ₃またはＣＣ
ｌ₃であり、Ｒ₅はＨであり、Ｒ₆はＨである］を有する請求項２の方法。
【請求項７】Ｒ₁はフェニルであり、Ｒ₄はＳＯ₃ＨまたはＮＯ₂である請求
項６の方法。
【請求項８】Ｒ₂は２−ナフチルであり、Ｒ₄はＣＣｌ₃またはＣＦ₃である
請求項６の方法。
【請求項９】Ｒ₁はｏ−アニソールであり、Ｒ₄はＮＯ₂である請求項６の
方法。
【請求項１０】Ｒ₁およびＲ₂はインドール環に縮合した２つのナフチル基
である請求項６の方法。
【請求項１１】Ｒ₁はフェニルであり、Ｒ₂はＣＨ₃である請求項６の方法
。
【請求項１２】前記尿素は、一般式：【化２】［式中、Ｒ₁は、ＯＲ、Ｂｒ、ＣｌまたはＦであり、Ｒ₂は、ＯＲ、ＮＨＣＯ₂Ｒ
、Ｃｌ、Ｆ、またはＨであり、Ｒ₃は、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＲ、またはＣＯ₂Ｒであり
、Ｒ₄はＣｌまたはＢｒであり、Ｒ₅はＨであり、Ｒ₆はＨであり、Ｒ₇はＨであり
、Ｒ₈は、共役系または芳香族系であり、Ｒ₉は、Ｈ、ＯＲ、Ｃｌ、またはＢｒで
あり、Ｒ₁₀は、Ｈ、ＯＲ、またはＣｌである］を有する請求項３の方法。
【請求項１３】Ｒ₃はＣｌまたはＣＯ₂Ｒであり、Ｒ₆はＣｌまたはＣＯ₂Ｒ
である請求項１２の方法。
【請求項１４】Ｒ₁はＯＲ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＯ₂Ｒであり、Ｒ₆はＣｌまたは
Ｆである請求項１２の方法。
【請求項１５】前記芳香族アミドは、一般式：【化３】［式中、Ｒ₁、Ｒ₄およびＲ₅はＨであり、Ｒ₂および／またはＲ₃は小さい電子吸
引基であり、Ｒ₆はフェニル環を有するまたは有さないでＯ、Ｎ、またはＳを含
む少なくとも６つの原子の置換または非置換アルキルである］を有する請求項４の方法。
【請求項１６】前記の電子吸引基はＣｌ、ＦおよびＢｒからなる群から選
択される請求項１５の方法。
【請求項１７】Ｒ₄およびＲ₆はＣ、Ｏ、Ｎ、またはＳの２〜６原子のより
小さな共役系であり、フェニル環を含む請求項１５の方法。
【請求項１８】前記キノリンは、一般式：【化４】［式中、Ｒ₂は３，４−ジメトキシベンゼンであり、Ｒ₃はＨであり、Ｒ₄はＣＯ₂ Ｒ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲまたはＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒであり、Ｒ₅はＨであり、Ｒ₆はＨ
、ＮＯ₂、ＳＯ₃Ｈ、ＮＨ₂、ＣＦ₃またはＣＣｌ₃であり、Ｒ₇はアルキル基、ＮＯ ₂ 、ＳＯ₃Ｈ、ＮＨ₂、ＣＦ₃またはＣＣｌ₃であり、Ｒ₈はＨである］を有する請求項５の方法。
【請求項１９】Ｒ₂はｐ−トルエンであり、Ｒ₄はＣＯ₂ＮＨ₂であり、Ｒ₆
はＦまたはＣｌである請求項１８のキノリン。
【請求項２０】Ｒ₂はＮＲ₂であり、Ｒ₈はＯＲまたはＮＣ（＝Ｏ）Ｒであ
る請求項１８のキノリン。
【請求項２１】前記細菌は肺炎レンサ球菌、エンテロコッカス・フェカー
リス、黄色ブドウ球菌、化膿レンサ球菌、大腸菌、緑膿菌、表皮ブドウ球菌、ス
メグマ菌およびセラチア・マルケセンスである請求項１の方法。
【請求項２２】一般式：【化５】［式中、Ｒ₁はフェニル、２−ナフチル、ｏ−アニソールであり、Ｒ₂はＨまたは
ＣＨ₃であり、Ｒ₁およびＲ₂はインドール環に縮合した２つのナフチル基であり
、Ｒ₃はＨであり、Ｒ₄はＮＯ₂、ＳＯ₃Ｈ、ＮＨ₂およびＣＦ₃またはＣＣｌ₃であ
り、Ｒ₅はＨであり、Ｒ₆はＨである］を有するインドール。
【請求項２３】Ｒ₁はフェニルであり、Ｒ₄はＳＯ₃ＨまたはＮＯ₂である請
求項２２のインドール。
【請求項２４】Ｒ₁は２−ナフチルであり、Ｒ₄はＣＣｌ₃またはＣＦ₃であ
る請求項２２のインドール。
【請求項２５】Ｒ₁はｏ−アニソールであり、Ｒ₄はＮＯ₂である請求項２
２のインドール。
【請求項２６】Ｒ₁およびＲ₂はインドール環に縮合した２つのナフチル基
である請求項２２のインドール。
【請求項２７】Ｒ₁はフェニルであり、Ｒ₂はＣＨ₃である請求項２２のイ
ンドール。
【請求項２８】一般式：【化６】［式中、Ｒ₁はＯＲ、Ｂｒ、Ｃｌ、またはＦであり、Ｒ₂はＯＲ、ＮＨＣＯ₂Ｒ、
Ｃｌ、Ｆ、またはＨであり、Ｒ₃はＣｌ、Ｂｒ、ＯＲまたはＣＯ₂Ｒであり、Ｒ₄
はＣｌまたはＢｒであり、Ｒ₅はＨであり、Ｒ₆はＨであり、Ｒ₇はＨであり、Ｒ₈ は共役系または芳香族系であり、Ｒ₉はＨ、ＯＲ、ＣｌまたはＢｒであり、Ｒ₁₀
はＨ、ＯＲまたはＣｌである］を有する尿素。
【請求項２９】Ｒ₃はＣｌまたはＣＯ₂Ｒであり、Ｒ₆はＣｌまたはＣＯ₂Ｒ
である請求項２８の尿素。
【請求項３０】Ｒ₁はＯＲ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＯ₂Ｒであり、Ｒ₆はＣｌまたは
Ｆである請求項２８の尿素。
【請求項３１】一般式：【化７】［式中、Ｒ₁、Ｒ₄およびＲ₅はＨであり、Ｒ₂および／またはＲ₃は小さな電子吸
引基であり、Ｒ₆はフェニル環を有するまたは有さないでＣ、Ｏ、ＮまたはＳを
含む少なくとも６つの原子の置換または非置換アルキルである］を有する芳香族アミド。
【請求項３２】Ｒ₄およびＲ₆はＣ、Ｏ、ＮまたはＳの２〜６原子のより小
さな共役系であり、フェニル環を含む請求項３１の芳香族アミド。
【請求項３３】一般式：【化８】［式中、Ｒ₂は３，４−ジメトキシベンゼンであり、Ｒ₃はＨであり、Ｒ₄はＣＯ₂ Ｒ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲまたはＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒであり、Ｒ₅はＨであり、Ｒ₆はＨ
、ＮＯ₂、ＳＯ₃Ｈ、ＮＨ₂、ＣＦ₃またはＣＣｌ₃であり、Ｒ₇はアルキル基、ＮＯ ₂ 、ＳＯ₃Ｈ、ＮＨ₂、ＣＦ₃またはＣＣｌ₃であり、Ｒ₈はＨである］を有するキノリン。
【請求項３４】Ｒ₂はｐ−トルエンであり、Ｒ₄はＣＯ₂ＮＨ₂であり、そし
てＲ₆はＦまたはＣｌである請求項３３のキノリン。
【請求項３５】Ｒ₂はＮＲ₂であり、Ｒ₈はＯＲまたはＮＣ（＝Ｏ）Ｒであ
る請求項３３のキノリン。
【請求項３６】ＮｏｒＡの阻害剤についてスクリーニングする方法であっ
て、（ａ）唯１つの機能的輸送体を発現する細胞を提供し、ここでの輸送体はＮｏｒ
Ａであり、（ｂ）候補阻害物質の存在下で、前記細胞を、輸送可能なエレメントと接触させ
、そして（ｃ）前記細胞による前記エレメントの輸送を、前記候補阻害物質の非存在下で
の前記エレメントの輸送と比較することを含んでなる方法。
【請求項３７】前記細胞は細菌細胞である請求項３６の方法。
【請求項３８】前記細菌細胞はグラム陰性細菌細胞である請求項３７の方
法。
【請求項３９】前記細菌細胞はグラム陽性細菌細胞である請求項３７の方
法。
【請求項４０】前記グラム陽性細菌細胞は枯草菌細胞である請求項３９の
方法。
【請求項４１】前記枯草菌細胞は破壊されたＢｍｒおよびＢｌｔ遺伝子を
含む請求項４０の方法。
【請求項４２】前記ＮｏｒＡは黄色ブドウ球菌ＮｏｒＡ、肺炎レンサ球菌
多剤輸送体またはエンテロコッカス・フェカーリス多剤輸送体である請求項３６
の方法。
【請求項４３】前記の輸送可能なエレメントは臭化エチジウムである請求
項３６の方法。
【請求項４４】前記の輸送可能なエレメントはフルオロキノロンである請
求項３６の方法。
【請求項４５】細菌感染に罹患した対象を処置する方法であって、前記対
象にフルオロキノロンおよびＮｏｒＡの阻害剤を提供することを含んでなり、前
記阻害剤はインドール、尿素、または芳香族アミドである方法。
【請求項４６】前記細菌は肺炎レンサ球菌、エンテロコッカス・フェカー
リス、黄色ブドウ球菌、淋菌、結核菌、化膿レンサ球菌、大腸菌、緑膿菌、表皮
ブドウ球菌、スメグマ菌およびセラチア・マルケセンスである請求項４５の方法
。
【請求項４７】フルオロキノロンおよびＮｏｒＡの阻害剤を含む医薬組成
物であって、前記阻害剤はインドール、尿素または芳香族アミドである医薬組成
物。
【請求項４８】前記フルオロキノロンはスパルフロキサシン、シプロフロ
キサシン、モキシフロキサシン、レボフロキサシン、グレパフロキサシン、テマ
フロキサシン、シナフロキサシン、Ｂａｙ１２−８０３９、トロバフロキサシン
、ＤＵ６８５９ａおよびサラフロキサシンからなる群から選択される請求項４３
の組成物。
【請求項４９】真菌を真菌多剤輸送タンパク質の阻害剤と接触させること
を含んでなり、前記阻害剤はインドール、尿素または芳香族アミドであるアゾー
ル抗真菌剤の抗真菌作用を増強する方法。
【請求項５０】前記インドールは一般式Ｉを有する請求項４９の方法。
【請求項５１】前記尿素は一般式ＩＩを有する請求項４９の方法。
【請求項５２】前記芳香族アミドは一般式ＩＩＩを有する請求項４９の方
法。
【請求項５３】前記真菌はカンジダ、クリプトコッカス、ブラストミセス
、ヒストプラズマ、トルロピス、コクシジオイデス、パラコクシジオイデスおよ
びアスペルギルスからなる群から選択される種に由来する請求項４９の方法。
【請求項５４】真菌多剤輸送体の阻害剤についてスクリーニングする方法
であって、（ａ）唯１つの機能的輸送体を発現する細胞を提供し、前記トンラスポーターは
、真菌多剤輸送体であり、（ｂ）候補阻害物質の存在下で、前記細胞を、輸送可能なエレメントと接触させ
、そして（ｃ）前記細胞による前記エレメントの輸送を、前記候補阻害物質の非存在下で
の前記エレメントの輸送と比較することを含んでなる方法。
【請求項５５】前記細胞は真菌細胞である請求項５４の方法。
【請求項５６】前記真菌細胞はカンジダ、クリプトコッカス、ブラストミ
セス、ヒストプラズマ、トルロピス、コクシジオイデス、パラコクシジオイデス
およびアスペルギルスからなる群から選択される種から選択される請求項５５の
方法。
【請求項５７】前記細胞はカンジダ種由来である請求項５６の方法。
【請求項５８】前記多剤輸送体はカンジダ多剤輸送体である請求項５４の
方法。
【請求項５９】前記抗真菌剤はトリアゾール抗真菌剤である請求項５４の
方法。
【請求項６０】前記トリアゾールはケトコナゾール、ミコナゾール、イト
ラコナゾール、フルコナゾール、グリセオフルコナゾール、クロトリマゾール、
エコナゾール、テルコナゾールおよびブタコナゾールからなる群から選択される
請求項５４の方法。
【請求項６１】真菌感染に罹患した対象を処置する方法であって、前記対
象に、アゾール抗真菌剤および真菌多剤輸送タンパク質の阻害剤を提供すること
を含んでなり、前記阻害剤はインドール、尿素、または芳香族アミドである方法
。
【請求項６２】前記真菌感染はカンジダ、クリプトコッカス、ブラストミ
セス、ヒストプラズマ、トルロピス、コクシジオイデス、パラコクシジオイデス
およびアスペルギルスからなる群から選択される種の真菌により媒介される請求
項６１の方法。
【請求項６３】前記抗真菌剤はケトコナゾール、ミコナゾール、イトラコ
ナゾール、フルコナゾール、グリセオフルコナゾール、クロトリマゾール、エコ
ナゾール、テルコナゾールおよびブタコナゾールからなる群から選択される請求
項６１の方法。
【請求項６４】アゾール抗真菌剤および真菌多剤輸送体の阻害剤を含んで
なる医薬組成物であって、前記阻害剤はインドール、尿素、または芳香族アミド
である医薬組成物。
【請求項６５】前記抗真菌剤はケトコナゾール、ミコナゾール、イトラコ
ナゾール、フルコナゾール、グリセオフルコナゾール、クロトリマゾール、エコ
ナゾール、テルコナゾールおよびブタコナゾールからなる群から選択されたアゾ
ールである請求項６４の医薬組成物。
【請求項６６】細菌を排出阻害剤と接触させることを含んでなり、前記阻
害剤はインドール、尿素、芳香族アミドまたはキノリンである細菌におけるフル
オロキノロン耐性の出現を抑制する方法。