JP2003526662A - 免疫調節性ポリヌクレオチド配列を用いた肝炎ウイルス感染症の抑制方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）及びＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症の治療のための方法を提供する。免疫活性化配列を含むポリヌクレオチドをＨＢＶ及び／又はＨＣＶにさらされたか又は感染した個体に投与する。上記ポリヌクレオチドはＨＣＶ又はＨＢＶ抗原と一緒には投与されない。上記ポリヌクレオチドの投与はＨＢＶ及び／又はＨＣＶ感染症の症状の改善をもたらす。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 関連特許 本出願は２０００年３月１０日に申請された米国仮出願第６０／１８８，３０
１号の優先権の利益を請求し、上記仮出願全体を本明細書中に援用する。

【０００２】 技術分野 本願発明は、免疫調節性ポリヌクレオチド、より特に肝炎ウイルス感染及び／
又は肝炎ウイルス感染の症状の改善又は予防へのそれらの使用の分野内にある。

【０００３】 背景技術 肝炎は肝臓の炎症を含む症患に対する一般用語である。ウイルス、薬剤、毒素
、及び自己免疫疾患を含むさまざまな因子が肝炎を引き起こしうる。加えて、肝
炎は非肝臓関連性疾患のために二次的に起こりうる。ウイルス感染が最も一般的
な肝炎の原因である。

【０００４】 少なくとも８の異なる肝炎ウイルスが存在すると考えられ、そしてＡ，Ｂ，Ｃ
，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ、及び特発性肝炎ウイルスを含む。上記肝炎ウイルスは多数の
異なるウイルス・ファミリーの間に広がっている。これらのウイルスのうち、Ｂ
型肝炎ウイルス（ＨＢＶ、ヘパドナウイルス）及びＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ、
フラビウイルス）は先進産業国における最大の公衆衛生問題を引き起こす。Ｂ型
及びＣ型肝炎は共に血液媒介疾患であるにもかかわらず、両ウイルスは周産期に
そして性的接触を介しても感染しうる。

【０００５】 Ｂ型及びＣ型肝炎はそれぞれ急性及び慢性感染を引き起こす。比較的低いレベ
ルの死亡率は急性Ｂ型及びＣ型肝炎に起因する（主に劇症肝炎による）。しかし
ながら、それぞれの疾患の慢性型は深刻な医療問題をもたらす。ＨＢＶは世界で
最も蔓延している慢性感染症であり、そしてＨＢＶに感染した母親の子として生
まれる子供の９０％が一生の保菌者となる、ＨＣＶよりもかなり高い周産期感染
の危険性をもたらす。現在、米国においてＨＣＶは肝臓移植の主な原因である。

【０００６】 ＨＢＶ感染の約半分のみ、そしてＨＣＶ感染のごくわずかが急性期において症
状が現われ、症状、例えば黄疸、倦怠感、腹痛、及び／又は食欲不振を典型的に
は示す。無症状感染はウイルス抗原及び／又はＤＮＡについての診断的試験を用
いて検出される。

【０００７】 ＨＢＶに感染した成人の大部分（９５〜９８％）では、彼らの疾患は自然治癒
し、そしてさらなる病的影響を経験しないが、新生児では、周産期感染した個体
の約８０〜９０％が慢性疾患を患う、慢性感染を患う大きな危険性が存在する。
慢性ＨＢＶ感染は典型的には無症状性であるが、急性Ｂ型肝炎のいくつかの症状
は存在しうる。慢性ＨＢＶ感染の長期後遺症は肝線維症／肝硬変、肝癌、肝不全
、及び死亡を含む。

【０００８】 慢性ＨＢＶ感染はアジアにおいて重大な公衆衛生問題であり、比較的高い割合
でその人々がＨＢＶに慢性的に感染している。慢性ＨＢＶ感染に伴う肝細胞癌（
ＨＣＣ）、つまり肝癌の割合は慢性感染のこれらの高い割合を反映している。

【０００９】 米国において、急性ＨＣＶ感染は、約１０％だけで、急性ＨＢＶ感染よりもず
っとまれである。しかしながら、慢性感染への進行の非常に高い危険性（≧８５
％）のために、慢性ＨＣＶ感染の罹患率は慢性ＨＢＶ感染のそれよりも２〜３倍
高い。加えて、ＨＣＶ感染は慢性肝疾患及び肝不全の進行のより大きな危険性を
持つ。

【００１０】 ＨＢＶとＨＣＶは全く異なるウイルスであるが、この２のウイルスによる慢性
感染に対する治療はほとんど同一である。現在、慢性Ｂ型及びＣ型肝炎に対して
利用可能な治療はインターフェロンに限られる。インターフェロンα−２ａ、イ
ンターフェロンα−２ｂ、及びインターフェロン・アルファコン−１（組換え、
非天然起源のインターフェロン１変異体）が現在慢性肝炎ウイルス感染の治療に
使用されているが、リバビリン（抗ウイルス剤）とインターフェロンα−２ｂに
よる「組合せ」療法が慢性Ｃ型肝炎の治療に認可されている。しかしながら、こ
れらの薬剤は頻繁な投与を必要とし、そして「インフルエンザ様」症状（例えば
倦怠感、発熱、筋肉痛）、白血球減少、血小板減少、吐き気、嘔吐、及び関節痛
を含む多くの副作用を伴う。インターフェロン投与の１つの珍しい厄介な問題は
肝細胞毒性であり、それは胎児の段階で存在しうる。不幸なことに、患者の約４
０％だけがインターフェロン治療によるいずれかの改善が見られ、そして治療完
了後に再発しうる。

【００１１】 現在、インターフェロンβ、インターフェロンγ、インターロイキン２、サイ
モシン、アシクロビル、ラミブジン（３ＴＣ）、及び顆粒球コロニー因子を含む
、多くの新しい薬剤が慢性ＨＢＶ感染の治療のために開発されている。これらの
薬剤は長い治療単位の投与を典型的には必要とし、そして大部分は明らかな副作
用を伴う。

【００１２】 免疫活性化配列又は「ＩＳＳ」として一般に知られるある種のＤＮＡ配列の投
与は、Ｔｈ１関連サイトカインの分泌により示されるＴｈ１型傾向を有する免疫
応答を誘発する。ヘルパー細胞のＴｈ１サブセットは古典的な細胞媒介性機能、
例えば遅延型過敏性及び細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬｓ）の活性化を担うのに
対して、Ｔｈ２サブセット機能はＢ細胞活性化のヘルパーとしてより効果的であ
る。抗原に対する免疫応答の種類はその抗原に応答した細胞により産生されるサ
イトカインにより一般的に影響を受ける。Ｔｈ１及びＴｈ２細胞によるサイトカ
イン分泌の違いはそれら２種類のサブセットの生物学的機能の違いを反映すると
考えられる。例えば、Romagnani (2000) Ann. Allergy Asthma Immunol. 85: 9-
18を参照のこと。

【００１３】 抗原を伴う免疫活性化ポリヌクレオチドの投与は、投与された抗原に対するＴ
ｈ１型免疫応答をもたらす、Roman et al. (1997) Nature Med. 3: 849-854。例
えば、生理食塩水中又はアジュバント・アルミニウム中のエッシェリシア・コリ
（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）（Ｅ．ｃｏｌｉ）β−ガラクトシダーゼ
（β−Ｇａｌ）を皮内注射したマウスはＩｇＧ１及びＩｇＥ抗体、並びにＩＬ−
４及びＩＬ−５を分泌するＣＤ４⁺ を特異的に産生したがＩＦＮ−γを産生しな
い応答をし、Ｔｈ２サブセットのＴ細胞が支配的であることを証明した。しかし
ながら、β−Ｇａｌをコードし、そしてＩＳＳを含む（生理食塩水中）プラスミ
ドＤＮＡを皮下（又はタイン（ｔｙｎｅ）スキン・スクラッチ・アプリケーター
を用いて）注射したマウスはＩｇＧ２ａ抗体及びＩＦＮ−γを分泌するＣＤ４⁺
細胞を産生したが、ＩＬ−４及びＩＬ−５を産生しない応答をし、主にＴｈ１サ
ブセットのＴ細胞が支配的であることを証明した。さらに、上記プラスミドＤＮ
Ａ注射マウスで特異的なＩｇＥ産生を６６〜７５％減少させた、Raz et al. (19
96) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 5141-5145。一般的に、むき出しのＤＮＡ
免疫に対する応答は、抗原刺激されたＣＤ４⁺ Ｔ細胞によるＩＬ−２，ＴＮＦα
、及びＩＦＮ−γの産生により特徴づけられ、それらの産生はＴｈ１型応答を示
す。これは減少したＩｇＥ産生により示されるアレルギー及び喘息の治療におい
て特に重要である。Ｔｈ１型免疫応答の刺激に対する免疫活性化ポリヌクレオチ
ドの能力は細菌性抗原、ウイルス性抗原、及びアレルゲンにより証明されている
（例えばＷＯ ９８／５５４９５を参照のこと）。

【００１４】 ＩＳＳを記載した他の参考文献は以下のものを含む：

【００１５】

【化１】

【００１６】

【化２】

【００１７】 急性及び慢性Ｂ型及びＣ型肝炎の有効な治療に対する技術分野における必要性
が存在する。

【００１８】 本明細書中に言及した全ての刊行物及び特許出願をそれら全体として本明細書
中に援用する。

【００１９】 本発明の開示 本発明は、免疫活性化ポリヌクレオチド配列を用いた個体の肝炎感染の抑制及
び／又は改善の方法を提供する。したがって、本発明は、ＨＢＶ又はＨＣＶ抗原
を投与することなしにＨＢＶ又はＨＣＶ感染の１以上の症状の予防、緩和、改善
、軽減、及び／又は解消方法を提供する。免疫活性化配列（ＩＳＳ）を含むポリ
ヌクレオチドをＨＢＶ及び／又はＨＣＶにさらされているか、あるいはＨＢＶ及
び／又はＨＣＶに感染した個体に投与する。上記ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドを
あらゆるＨＢＶ又はＨＣＶ抗原なしに投与する（つまり、ＨＢＶ又はＨＣＶ抗原
を同時投与しない）。上記ＩＳＳの投与はＨＢＶ及び／又はＨＣＶ感染の１以上
の症状の発症率及び／又は重さの減少をもたらす。

【００２０】 １の態様において、本発明は、個体の急性Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）又はＣ
型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染の症状の予防方法を提供し、上記方法はその個体
への免疫活性化配列（ＩＳＳ）を含むポリヌクレオチドを含む組成物の有効量（
つまり、急性ＨＢＶ又はＨＣＶ感染の症状の予防に十分な上記組成物の量）の投
与を伴う、ここで上記ＩＳＳは配列５′−Ｃ，Ｇ−３′を含み、そしてここでＨ
ＢＶ又はＨＣＶ抗原を上記組成物と一緒に投与しない（つまり、抗原は上記ＩＳ
Ｓ含有ポリヌクレオチドと一緒に投与しない）、これにより急性ＨＢＶ又はＨＣ
Ｖ感染の症状を予防する。上記個体はＨＢＶ又はＨＣＶにさらされているか、及
び／又は感染している。

【００２１】 本発明の他の態様は、個体の急性ＨＢＶ及び／又はＨＣＶ感染の症状の重症度
の軽減方法を提供し、上記方法はその個体へのＩＳＳを含むポリヌクレオチドを
含む組成物の有効量の投与を伴う、ここで上記ＩＳＳは配列５′−Ｃ，Ｇ−３′
を含み、そしてここでＨＢＶ又はＨＣＶ抗原を上記組成物と一緒に投与しない、
これにより急性ＨＢＶ又はＨＣＶ感染の症状の重症度を軽減する。上記個体はＨ
ＢＶ又はＨＣＶにさらされているか、及び／又は感染している。

【００２２】 本発明の他の態様は、個体の急性ＨＢＶ又はＨＣＶ感染の症状の進行の遅延方
法を提供し、上記方法はその個体へのＩＳＳを含むポリヌクレオチドを含む組成
物の有効量の投与を伴う、ここで上記ＩＳＳは配列５′−Ｃ，Ｇ−３′を含み、
そしてここでＨＢＶ又はＨＣＶ抗原を上記組成物と一緒に投与しない、これによ
り急性ＨＢＶ又はＨＣＶ感染の症状の進行を遅らせる。上記個体はＨＢＶ及び／
又はＨＣＶにさらされているか、及び／又は感染している。

【００２３】 本発明の他の態様は、個体の急性ＨＢＶ又はＨＣＶ感染の症状の継続期間の短
縮方法を提供し、上記方法はその個体へのＩＳＳを含むポリヌクレオチドを含む
組成物の有効量の投与を伴う、ここで上記ＩＳＳは配列５′−Ｃ，Ｇ−３′を含
み、そしてここでＨＢＶ又はＨＣＶ抗原を上記組成物と一緒に投与しない、これ
により急性ＨＢＶ又はＨＣＶ感染の症状の継続期間を短縮する。上記個体はＨＢ
Ｖ及び／又はＨＣＶにさらされているか、及び／又は感染している。

【００２４】 本発明の他の態様は、個体の慢性ＨＢＶ又はＨＣＶ感染の症状の予防方法を提
供し、上記方法はその個体へのＩＳＳを含むポリヌクレオチドを含む組成物の有
効量の投与を伴う、ここで上記ＩＳＳは配列５′−Ｃ，Ｇ−３′を含み、そして
ここでＨＢＶ又はＨＣＶ抗原を上記組成物と一緒に投与しない、これにより慢性
ＨＢＶ又はＨＣＶ感染の症状を予防する。上記個体はＨＢＶ及び／又はＨＣＶに
さらされているか、及び／又は感染している。

【００２５】 本発明の他の態様は、個体の慢性ＨＢＶ又はＨＣＶ感染の症状の重症度の軽減
方法を提供し、上記方法はその個体へのＩＳＳを含むポリヌクレオチドを含む組
成物の有効量の投与を伴う、ここで上記ＩＳＳは配列５′−Ｃ，Ｇ−３′を含み
、そしてここでＨＢＶ又はＨＣＶ抗原を上記組成物と一緒に投与しない、これに
より慢性ＨＢＶ又はＨＣＶ感染の症状の重症度を軽減する。上記個体はＨＢＶ及
び／又はＨＣＶにさらされているか、及び／又は感染している。

【００２６】 本発明の他の態様は、個体の慢性ＨＢＶ又はＨＣＶ感染の症状の進行の遅延方
法を提供し、上記方法はその個体へのＩＳＳを含むポリヌクレオチドを含む組成
物の有効量の投与を伴う、ここで上記ＩＳＳは配列５′−Ｃ，Ｇ−３′を含み、
そしてここでＨＢＶ又はＨＣＶ抗原を上記組成物と一緒に投与しない、これによ
り慢性ＨＢＶ又はＨＣＶ感染の症状の進行を遅らせる。上記個体はＨＢＶ及び／
又はＨＣＶにさらされているか、及び／又は感染している。

【００２７】 本発明の他の態様は、個体の慢性ＨＢＶ又はＨＣＶ感染の症状の継続期間の短
縮方法を提供し、上記方法はその個体へのＩＳＳを含むポリヌクレオチドを含む
組成物の有効量の投与を伴う、ここで上記ＩＳＳは配列５′−Ｃ，Ｇ−３′を含
み、そしてここでＨＢＶ又はＨＣＶ抗原を上記組成物と一緒に投与しない、これ
により慢性ＨＢＶ又はＨＣＶ感染の症状の継続期間を短縮する。上記個体はＨＢ
Ｖ及び／又はＨＣＶにさらされているか、及び／又は感染している。

【００２８】 本発明の他の態様は、ＨＢＶ又はＨＣＶに感染したか、あるいはその危険性が
ある個体のＨＢＶ又はＨＣＶ感染の抑制方法を提供し、上記方法はその個体への
ＩＳＳを含むポリヌクレオチドを含む組成物の有効量の投与を伴う、ここで上記
ＩＳＳは配列５′−Ｃ，Ｇ−３′を含み、そしてここでＨＢＶ又はＨＣＶ抗原を
上記組成物と一緒に投与しない、これによりＨＢＶ又はＨＣＶ感染を抑制する。

【００２９】 さらなる側面において、本発明は、ＨＢＶ及び／又はＨＣＶにさらされたか、
及び／又は感染した個体のウイルス血症の軽減方法を提供し、上記方法はその個
体へのＩＳＳを含むポリヌクレオチドを含む組成物の有効量の投与を伴う、ここ
で上記ＩＳＳは配列５′−Ｃ，Ｇ−３′を含み、そしてここでＨＢＶ又はＨＣＶ
抗原を上記組成物と一緒に投与しない、これによりＨＢＶ又はＨＣＶウイルス血
症を軽減する。

【００３０】 さらなる側面において、本発明は、個体の肝炎ウイルス抗原、好ましくはＨＢ
Ｖ又はＨＣＶ抗原の血中レベルの減少方法を提供し、上記方法はその個体へのＩ
ＳＳを含むポリヌクレオチドを含む組成物の有効量の投与を伴う、ここで上記Ｉ
ＳＳは配列５′−Ｃ，Ｇ−３′を含み、そしてここでＨＢＶ又はＨＣＶ抗原を上
記組成物と一緒に投与しない、これにより肝炎ウイルス抗原の血中レベルを減少
させる。上記個体はＨＢＶ又はＨＣＶにさらされているか、及び／又は感染して
いる。

【００３１】 他の側面において、本発明はＨＢＶ又はＨＣＶにさらされたか、及び／又は感
染した個体の急性又は慢性ＨＢＶ又はＨＣＶの症状の改善に使用するためのキッ
トを提供する。このキットはＩＳＳを含むポリヌクレオチドを含む組成物を含み
、ここで上記ＩＳＳは配列５′−Ｃ，Ｇ−３′を含み、ここで上記キットはＨＢ
Ｖ又はＨＣＶ抗原を含まず、かつ、ここで上記キットは、ＨＢＶ又はＨＣＶに感
染したか又はさらされた個体への上記組成物の投与のための取扱説明書を含む。

【００３２】 本発明の方法及びキットのいくつかの態様において、そのＩＳＳは、配列５′
−プリン、プリン、Ｃ，Ｇ、ピリミジン、ピリミジン、Ｃ，Ｇ−３′又は５′−
プリン、プリン、Ｃ，Ｇ、ピリミジン、ピリミジン、Ｃ，Ｃ−３′を含む。上記
方法及びキットのさらなる態様において、そのＩＳＳは、AACGTTCC, AACGTTCG,
GACGTTCC、及びGACGTTCGから成る群から選ばれる配列を含む。

【００３３】 本発明の方法及びキットのいくつかの態様において、そのＩＳＳは、配列５′
−Ｔ，Ｃ，Ｇ−３′を含む。本発明の方法及びキットのいくつかの態様において
、そのＩＳＳは配列５′−TGACTGTGAACGTTCGAGATGA−３′（配列番号１）を含む
。

【００３４】 本発明の方法及びキットのいくつかの態様において、その個体は哺乳動物であ
る。さらなる態様において、その哺乳動物はヒトである。

【００３５】 本発明の方法及びキットのいくつかの態様において、そのウイルスはＨＢＶで
ある。

【００３６】 本発明の方法及びキットのいくつかの態様において、そのウイルスはＨＣＶで
ある。

【００３７】 本発明の実施態様 我々は感染の急性及び／又は慢性期に適用できる、Ｂ型及びＣ型肝炎の治療方
法を発見した。免疫活性化配列（「ＩＳＳ」）を含むポリヌクレオチドをＢ型肝
炎ウイルス（ＨＢＶ）又はＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）にさらされたか、及び／
又は感染した個体に投与する。ウイルス抗原の同時投与を伴わない、好ましくは
肝炎抗原なしの上記ＩＳＳの投与は慢性Ｂ型肝炎感染の動物モデルにおいてＢ型
肝炎の力価、並びにＨＢＶの血清中抗原の減少をもたらす。このような減少が急
性及び／又は慢性感染に関係する１以上の症状の改善又はさらに予防を含む、感
染の重症度の軽減と解釈されるであろうことを我々は当然期待する。

【００３８】 本発明は、さらされた個体におけるＢ型肝炎及び／又はＣ型肝炎感染の治療及
び／又は予防のためのキットにも関する。肝炎ウイルス抗原を含まない上記キッ
トはＩＳＳを含むポリヌクレオチド、及び意図される治療のための個体へのＩＳ
Ｓの投与を説明した取扱説明書を含む。Ｂ型肝炎にさらされたか又は感染した個
体への使用を意図したキットはＢ型肝炎ウイルス抗原を含まない。Ｃ型肝炎にさ
らされたか、又は感染した個体への使用を意図したキットはＣ型肝炎ウイルス抗
原を含まない。Ｂ型肝炎及びＣ型肝炎の両方に感染した個体への使用を意図した
キットはＢ型肝炎抗原もＣ型肝炎ウイルス抗原も含まない。

【００３９】 一般的な技術 本発明の実施は特に別段の指示がなければ、（組換え技術を含む）分子生物学
、微生物学、細胞生物学、生化学、及び免疫学の慣用技術を用い、これらの技術
は当業者の範囲内にある。上述の技術は文献、例えばMolecular Cloning: A Lab
oratory Manual, second edition (Sambrook et al., 1989); Oligonucleotide
Synthesis (M.J. Gait, et., 1984); Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed
., 1987); Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Handbook of Expe
rimental Immunology (D.M. Weir & C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Ve
ctors for Mammalian Cells (J.M. Miller & M.P. Calos, eds., 1987); Curren
t Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel et al., eds., 1987); PCR:
The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Pro
tocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); The Immunoassay
Handbook (David Wild, ed., Stockton Press NY, 1994); 及びMethods of Immu
nological Analysis (R. Masseyeff, W.H. Albert, and N.A. Staines, eds., W
einheim: VCH Verlags gesellschaft mbH, 1993 ）の中に十分に説明されている
。

【００４０】 定義 用語「Ｂ型肝炎ウイルス」、つまり「ＨＢＶ」は本技術分野でよく理解された
用語であり、そしてヘパドナウイルス（ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ）科のメ
ンバーであるウイルスに関し、その科はオルソヘパドナウイルス（Ｏｒｔｈｏｈ
ｅｐａｄｎａｖｉｒｕｓ）属（哺乳動物に感染するヘパドナウイルス）及びアビ
ヘパドナウイルス（Ａｖｉｈｅｐａｄｎａｖｉｒｕｓ）属（鳥類に感染するヘパ
ドナウイルス）から成る。ＨＢＶはヒトに感染するオルソヘパドナウイルスであ
る。Ｂ型肝炎ウイルスは脂質エンベロープを持つ直径約４２nmのウイルスであり
、そして環状二本鎖ＤＮＡゲノムを含む。このゲノムは、表面抗原、つまり「ｓ
」抗原（ＨＢｓＡｇ）が点在する脂質エンベロープに囲まれたキャプシド内に包
含されている。上記２０nmの直径の粒子は感染性ではない。２５〜２７nmの直径
のキャプシドの主要な構造成分はコア、つまり「ｃ」タンパク質（ＨＢｃＡｇ）
である。ポリメラーゼ（「Ｐタンパク質」）も上記キャプシド内に含まれる。上
記ＨＢＶゲノムは「ｅ」タンパク質、つまり「ＨＢｅＡｇ」を含む多くのさらな
る産物をコードし、上記「ｅ」タンパク質、つまり「ＨＢｅＡｇ」は感染細胞に
よりビリオン及び他のビリオン関連粒子から独立に分泌される。上記抗原及び／
又は上記抗原に対する抗体が一般的にＨＢＶの診断に用いられる。

【００４１】 用語「Ｃ型肝炎ウイルス」、つまり「ＨＣＶ」は本技術分野でよく理解された
用語であり、そしてフラビノウイルス（ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）科の不特定
の属の唯一のメンバーであるウイルスに関する。多くのフラビノウイルスと異な
り、ＨＣＶは媒介動物、例えば昆虫を利用せず、ヒトだけが知られている宿主で
ある（けれど、チンパンジーを実験的に感染させうる）。Ｃ型肝炎ウイルスは約
３０〜８０nmの直径の脂質エンベロープを持つウイルスである。ＨＢＶと異なり
、ＨＣＶは正鎖ＲＮＡゲノムを持つ。しかしながら、ＨＣＶはレトロウイルスの
ように組み込まない。ＨＣＶの血清中力価が比較的低い傾向にあるため、多くの
診断アッセイは、ウイルス・タンパク質、例えばヌクレオキャプシド・タンパク
質、あるいはＮＳ３，ＮＳ４、及び／又はＮＳ５タンパク質に対する患者の抗体
の検出に頼る。さらに、診断アッセイは、ゲノム・ウイルスＲＮＡの検出が利用
可能である。

【００４２】 本明細書中で使用する場合、用語「急性肝炎感染症」は急性Ｂ型肝炎及び／又
は急性Ｃ型肝炎感染症に関するが、ＨＢＶ及び／又はＨＣＶに感染した全ての個
体が急性肝炎の臨床症状を示すわけではない。急性肝炎の臨床症状は、（明らか
な黄疸を含むまでの）ビリルビン・レベルの上昇、吐き気、倦怠感、肝酵素（例
えば、アラニン・アミノトランスフェラーゼ、つまりＡＬＴ及び／又はアスパラ
ギン酸アミノトランスフェラーゼ、つまりＡＳＴ）の血中レベルの上昇、及び関
節痛及び／又は腹痛を含む。急性肝炎はＨＢＶ又はＨＣＶによる初期感染の結果
であるか、あるいは慢性的な感染患者における「突然の再発（ｆｌａｒｅ ｕｐ
）」又は再発の結果である。ＨＢＶ又はＨＣＶによる初期感染の結果としての急
性肝炎は、抗肝炎ウイルス・イムノグロブリンの検査により再発性急性肝炎と見
分けられる。高レベルの抗ウイルスＩｇＭ（及び低レベルの抗ウイルスＩｇＧ）
がＨＢＶ又はＨＣＶの初期感染による急性肝炎において見られる一方で、その反
対が再発又は再発性急性肝炎において見られる。

【００４３】 本明細書中で使用される場合、用語「慢性肝炎」は、慢性ＨＢＶ又はＨＣＶ感
染症による肝臓の炎症が少なくとも連続６ヶ月間存在する疾患に関する。慢性肝
炎患者は倦怠感、全身倦怠、及び／又は腹痛に苦しむ。ＨＢＶ又はＨＣＶによる
慢性肝炎はＨＢＶ又はＨＣＶの存在について試験する診断の使用により診断され
る。慢性肝炎は、慢性活動性肝炎と慢性持続性肝炎の２種類（それらはいずれか
又はともに本発明中に含まれる）に分類される。慢性活動性肝炎は、肝臓に対す
る活動性傷害、例えば継続的な肝細胞壊死を引き起こす肝炎である。慢性持続性
肝炎は一般に傷害を引き起こさないが、事前の肝臓の傷害が存在しうる肝炎感染
症である。慢性持続性肝炎の患者の予後は慢性活動性肝炎の患者のそれよりも良
好である一方で、慢性持続性肝炎は慢性活動性肝炎に進行しうる。慢性肝炎の後
遺症は門脈圧亢進症、肝硬変、及び肝細胞癌（ＨＣＣ）を含む。

【００４４】 ウイルスに「さらす」とはＨＢＶ又はＨＣＶとの接触を意味し、例えば感染個
体からの輸血又は血液製剤での、例えば汚染された血液の注入、又はＨＢＶ又は
ＨＣＶ陽性個体に使用された針の使用によって生じる「針刺し」事故若しくは事
件により感染をもたらす。

【００４５】 本技術分野の標準的な方法、例えばＥＬＩＳＡを用いて個体からの血液又は血
清サンプル中にウイルスに対する特異的な抗体が検出されない場合、その個体は
そのウイルスに対して「血清陰性」である。逆に、本技術分野の標準的な方法、
例えばＥＬＩＳＡを用いて個体からの血液又は血清サンプル中にウイルスに対す
る特異的な抗体が検出される場合、その個体はそのウイルスに対して「血清陽性
」である。ウイルスに対する抗体がこれまで血清陰性であった個体からの血液又
は血清で検出される時、その個体はそのウイルスに対して「血清変換した」と言
われる。

【００４６】 「ＨＢＶ又はＨＣＶの症状」はＨＢＶ及び／又はＨＣＶ感染症の症状に関する
。上述の症状は本技術分野で周知であり、そして急性及び慢性Ｂ型及びＣ型肝炎
の症状を含む。ＨＢＶ又はＨＣＶの症状は身体的症状、例えば黄疸、腹痛、倦怠
感（ｆａｔｉｇｕｅ，ｍａｌａｉｓｅ）、吐き気、及び嘔吐、並びに肝炎に関係
する臨床的／検査所見、例えば上昇した肝酵素レベル（例えば、アラニン・アミ
ノトランスフェラーゼ、つまりＡＬＴ、アスパラギン酸アミノトランスフェラー
ゼ、つまりＡＳＴ、及び／又は乳酸デヒドロゲナーゼ、つまりＬＤＨ）、上昇し
たビリルビン、ＨＢＶ及び／又はＨＣＶウイルス血症又は抗原レベル、門脈圧亢
進症、肝硬変、食欲不振、そして本技術分野で認知される他の症状を含む。

【００４７】 肝炎ウイルス感染症の「抑制」は、Ｂ型又はＣ型肝炎ウイルス感染症のあらゆ
る側面、例えば身体的症状（例えば黄疸、倦怠感、腹痛）、肝炎関連の検査所見
（例えば血中肝酵素レベル又は肝硬変）、ウイルス複製、あるいはウイルスの量
（力価）が、本発明による治療を行わなかった個体又は個体集団におけるウイル
ス感染症の側面で比較した場合に本発明によるＩＳＳ含有ポリヌクレオチドを用
いて治療をした個体又は個体集団において、（重症度及び／又は継続期間の点で
）短縮、阻害又は軽減されることに関する。ウイルス力価の減少は、制限される
ことなく、感染部位又は個体からのウイルスの排除を含む。ウイルス感染症は、
制限されることなく、症状の検出、臨床検査による肝機能の計測、肝生検、肝門
脈圧の直接的又は間接的計測、及びウイルス粒子、ウイルス核酸又はウイルス抗
原力価の計測、そして抗ウイルス抗体の検出及び／又は計測を含む本技術分野で
知られるいずれかの手段により評価される。抗ウイルス抗体はウイルス感染症の
検出及び観察に広く利用され、そして一般に市販されている。

【００４８】 疾患又は疾患若しくは感染症の１以上の症状の「緩和」は、本発明によるＩＳ
Ｓにより治療した個体又は個体集団における疾患状態又は感染症の望まれない臨
床症状の発症率及び／又は時間的経過の減少を意味する。

【００４９】 本明細書中で使用する場合、ウイルス感染症又は肝炎の症状の進行の「遅延」
は、本発明の方法の不使用と比べた場合に、疾患又は症状の進行を延ばす、妨げ
る、遅らせる（ｓｌｏｗ，ｒｅｔａｒｄ）、安定させる、及び／又は延期するこ
とを意味する。この遅延は、治療する疾患及び／又は個体の過程に依存して時間
の長さを変える。当業者には明らかなことだが、事実上、十分な又は有意な遅延
は予防を含むことができ、その個体において疾患を進行させない。

【００５０】 ウイルス感染症の「症状の重症度軽減」又は「症状の改善」はＩＳＳ含有ポリ
ヌクレオチドを投与しない場合と比較した肝炎の１以上の症状の軽減又は改善を
意味する。「重症度の軽減」は症状の継続期間の短縮又は減少をも含む。Ｂ型肝
炎及びＣ型肝炎について、それらの症状は本技術分野で周知であり、そして制限
されることなく、黄疸、腹痛、倦怠感（ｆａｔｉｇｕｅ，ｍａｌａｉｓｅ）、吐
き気、及び嘔吐、並びに肝炎に関係する臨床／検査所見、例えば上昇した肝酵素
レベル（例えば、ＡＬＴ，ＡＳＴ、及び／又はＬＤＨ）、上昇したビリルビン、
ＨＢＶ及び／又はＨＣＶウイルス血症、あるいは抗原レベル、門脈圧亢進症、肝
硬変、食欲不振、そして本技術分野で認められる他の症状を含む。

【００５１】 「ウイルス感染症の継続期間の減少」は、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドを投与
しない場合と比較したウイルス感染（通常症状により示される）時間の減少又は
短縮を意味する。

【００５２】 肝炎ウイルスによる「感染症症状の予防」はそのウイルスにさらされた後に症
状が現れないことを意味する。

【００５３】 本明細書中で使用する場合、用語「感染した個体」はＨＢＶ及び／又はＨＣＶ
に感染した個体に関する。ＨＢＶ感染の症状は、抗ＨＢｓＡｇ，ＨＢｅＡｇ又は
ＨＢｃＡｇに対する血清反応陽性、その個体からのサンプル中のＨＢｓＡｇ，Ｈ
ＢｅＡｇ又はＨＢｃＡｇの存在、あるいはその個体からのサンプル中のＨＢＶ
ＤＮＡの存在、並びに本技術分野で知られる他の症状を含む。ＨＣＶ感染症の症
状は、ヌクレオキャプシド・タンパク質又はＮＳ３，ＮＳ４、及び／若しくはＮ
Ｓ５タンパク質に対する抗体についての血清反応陽性、その個体からのサンプル
中のヌクレオキャプシド・タンパク質又はＮＳ３，ＮＳ４、及び／若しくはＮＳ
５タンパク質の存在、あるいは個体からのサンプル中のＨＣＶ ＲＮＡ又はＤＮ
Ａの存在、並びに本技術分野で知られる他の症状を含む。

【００５４】 「生理学的サンプル」は個体から得られるさまざまなサンプルの種類を含み、
そして診断又は観察アッセイに使用される。上記の定義は、血液及び生物起源の
他の液体サンプル、固形の組織サンプル、例えば生検標本若しくは組織培養又は
それら由来の細胞、及びその子孫を含む。上記の定義はそれらの調達後にいずれ
かの方法、例えば試薬による処理、可溶化又は特定の成分、例えばタンパク質又
はポリヌクレオチドの濃縮により操作されたサンプルをも含む。上記用語「生物
学的サンプル」は臨床サンプルを含み、そして培養中の細胞、細胞上清、細胞溶
解物、血清、血漿、生物学的体液、及び組織サンプルをも含む。

【００５５】 「ウイルス力価」は本技術分野で周知の用語であり、与えられた生物学的サン
プル中のウイルスの量を示す。「ウイルス血症」は血流中のウイルスの存在及び
／又は血液又は血清サンプル中のウイルス力価として、本技術分野で周知の用語
である。ウイルスの量は、制限されることなく、ウイルス核酸の量；ウイルス粒
子（例えばＨＢｓＡｇ、つまりＢ型肝炎表面抗原粒子）の存在；複製単位（ＲＵ
）；プラーク形成単位（ＰＦＵ）を含むさまざまな計測により示される。一般的
に、体液サンプル、例えば血液及び尿について、ウイルスの量は単位体液、例え
ばミリリットルにつき測定される。固形サンプル、例えば組織サンプルについて
、ウイルスの量は、重量単位、例えばグラムにつき測定される。

【００５６】 「個体」は脊椎動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。哺乳
動物は、制限されることなく、ヒト、家畜、スポーツ動物（ｓｐｏｒｔ ａｎｉ
ｍａｌｓ）、げっ歯類、霊長類、及び一部のペットを含む。脊椎動物は制限され
ることなく、鳥（つまり、鳥類の個体）及びは虫類（つまり、は虫類の個体）を
も含む。

【００５７】 本明細書中で使用する場合、用語「ＩＳＳ」は、インビトロ、インビボ、及び
／又はエクスビボにおいて計測される時に計測可能な免疫応答に影響を与えるポ
リヌクレオチド配列に関する。計測可能な免疫応答の例は、制限されることなく
、抗原特異的抗体産生、サイトカインの分泌、リンパ球集団、例えばＮＫ細胞、
ＣＤ４⁺ Ｔリンパ球、ＣＤ８⁺ Ｔリンパ球、Ｂリンパ球等の活性化又は展開を含
む。好ましくは、ＩＳＳ配列は優先的にＴｈ１型応答を活性化する。本発明の方
法に使用するためのポリヌクレオチドは少なくとも１のＩＳＳを含む。

【００５８】 本明細書中で互換性を持って使用する場合、用語「ポリヌクレオチド」と「オ
リゴヌクレオチド」は、１本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）、２本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮ
Ａ）、１本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）、及び２本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、修飾オ
リゴヌクレオチド及びオリゴヌクレオシド又はそれらの組合せ物を含む。上記オ
リゴヌクレオチドは線状又は環状の構造をとるか、あるいは上記オリゴヌクレオ
チドは線状及び環状セグメントの両方を含む。

【００５９】 「アジュバント」は、免疫誘発物質、例えば抗原に加えた時にその混合物にさ
らされる受容宿主において上記抗原に対する免疫応答を非特異的に促進又は可能
にする物質に関する。

【００６０】 物質の「有効量」又は「十分な量」は、臨床的な結果を含む有益な効果をもた
らすか又は所望の結果をもたらすのに十分な量である。有効量は１以上の投与で
投与される。「治療として有効量」は、制限されることなく、ウイルス感染症に
関係する１以上の症状の軽減、並びに疾患の予防（例えば感染症の１以上の症状
の予防）を含む臨床結果に有益な効果をもたらす量である。

【００６１】 それが通常の哺乳動物の生理条件下で分解されうるか又は徐々に破壊されうる
場合、マイクロキャリアは「生分解性」と考えられる。一般的に、それが正常ヒ
ト血清中、３７℃で７２時間インキュベートした後に分解される（つまり、その
質量及び／又は平均重合体長の少なくとも５％が失われる）場合、マイクロキャ
リアは生分解性だと考えられる。逆にそれが通常の哺乳動物の生理条件下で分解
されないか又は破壊されない場合、マイクロキャリアは「非生分解性」と考えら
れる。一般的に、それが正常ヒト血清中、３７℃で７２時間インキュベートした
後に分解されない（つまり、その質量及び／又は平均重合体長の５％未満しか失
われない）場合、マイクロキャリアは非生分解性だと考えられる。

【００６２】 用語「免疫活性化配列−マイクロキャリア複合体」、つまり「ＩＳＳ−ＭＣ複
合体」はＩＳＳ含有ポリヌクレオチドとマイクロキャリアの複合体に関する。上
記複合体の要素は共有又は非共有結合されている。非共有結合は、疎水的相互作
用、イオン（静電）結合、水素結合、及び／又はファンデルワールス引力を含む
いずれかの非共有結合力により媒介される。疎水結合の場合、その結合は一般的
に上記ＩＳＳに共有結合した疎水性分子（例えばコレステロール）を介する。

【００６３】 本明細書中で使用する場合、用語「含む」及びその同種の語はそれらの包含的
な意味で使用される；上記の意味は上記用語「含む」及び対応する同種の語の相
当語句である。

【００６４】 本明細書中で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は別段
の指示がなければ複数の言及を含む。例えば、ウイルス感染症の症状（「ａ」ｓ
ｙｍｐｔｏｍ）は１以上のさらなる症状を含む。

【００６５】 本発明の方法 本発明は急性及び／又は慢性ＨＢＶ及びＨＣＶウイルス感染症の１以上の症状
を改善（つまり、重症度の軽減）及び／又は予防方法を提供し、上記方法は個体
にＨＢＶ又はＨＣＶ抗原の投与を伴わずＩＳＳ含有ポリヌクレオチド（本明細書
中で「ＩＳＳ」と互換性を持って使用する）の投与によりＨＢＶ及び／又はＨＣ
Ｖ感染症の後遺症（つまり、肝硬変又は劇症肝不全）の発症率の低下又は出現の
遅延を含む。本発明はウイルス血症の軽減方法、並びに血中肝炎ウイルス抗原の
レベル低下方法をも提供する。肝炎ウイルスは急性疾患を引き起こすだけでなく
、慢性感染症及び他の疾患状態をももたらすため、個体中のウイルス負荷の制御
及び／又は軽減はいくつかの有益な側面を持つ。加えて、Ｂ型及びＣ型肝炎の伝
染は血液及び血液製剤を通して、周産期に、並びに性的接触により起こる。上記
肝炎ウイルスはＨＢＶ又はＨＣＶであるが、ＨＢＶとＨＣＶの両方による同時感
染も治療しうる。Ｄ型肝炎ウイルス感染症がＨＢＶに感染した個体の中に存在し
うることに留意すべきである。

【００６６】 ＨＢＶ及びＨＣＶ抗原のどちらも含まないＩＳＳ含有組成物をＨＢＶ及び／又
はＨＣＶにさらされたか、感染したか、及び／又はそれによる感染の１以上の症
状を示す個体に投与する。ＩＳＳを受ける個体は好ましくは哺乳動物、より好ま
しくはヒトである。本発明により、ＨＢＶ又はＨＣＶ抗原のいずれもＩＳＳ投与
と一緒に個体に投与されない（つまり、上記ＩＳＳ投与の時又はその頃とは別の
投与で投与される）。

【００６７】 いくつかの態様において、上記個体はＨＢＶ及び／又はＨＣＶにさらされてい
る。さらされた個体は熟練の臨床医又は疫学者により容易に確認されうる。一般
に、さらされた個体は、ＨＢＶ及び／又はＨＣＶを伝染しうる経路を通してＨＢ
Ｖ及び／又はＨＣＶにさらされた個体である。例えば、さらされた個体は（例え
ば、輸血又は「針刺し」事故により）ＨＢＶ及び／又はＨＣＶに感染した個人に
由来する血液又は血液製剤に経皮的にさらされたヒトである。あるいは、さらさ
れた個体はＨＢＶ又はＨＣＶに感染した個体から生まれた子供であるか、あるい
は障害法避妊を行わないＨＢＶ又はＨＣＶ感染した個体の性交渉の相手である。

【００６８】 他の態様において、上記個体はＨＢＶ及び／又はＨＣＶに感染している。ＨＢ
Ｖ又はＨＣＶによる感染症は診断試験又は感染した個体の臨床評価により検出さ
れる。全ての感染個体が肝炎の明らかな症状を示すわけではないので、ウイルス
抗原、ウイルスＤＮＡ又はＲＮＡ、ウイルス抗原に対する宿主抗体を検出する診
断アッセイは感染症のより確実な指標と考えられる。一般的にＨＢｓＡｇがＨＢ
Ｖに関する診断抗原であり、そしてヌクレオキャプシド、ＮＳ３，ＮＳ４、及び
／又はＮＳ５タンパク質がＨＣＶに関する診断抗原である。感染は通常、感染個
体からの血液又は血液製剤に経皮的にさらされること、例えば輸血、静中薬剤使
用中の針の共有又は「針刺し」事件により引き起こされるが、性感染及び出産又
は周産期の間の母から子供への「垂直」感染が感染経路でもある。

【００６９】 いくつかの態様において、上記個体は慢性又は急性Ｂ型及び／又はＣ型肝炎を
持つ。急性肝炎は当業者により容易に見分けられ、そして黄疸、倦怠感（ｆａｔ
ｉｇｕｅ，ｍａｌａｉｓｅ）、上昇した肝酵素、例えばＡＳＴ及び／又はＡＬＴ
の血中レベル、暗色尿、及び当業者に知られる他の症状により特徴づけられる。
しかしながら、肝炎の種類の大部分はこれらの症状により特徴づけられるので、
ＨＢＶ又はＨＣＶに関する陽性診断試験はＢ型肝炎又はＣ型肝炎のそれぞれを同
定することが求められる。慢性Ｂ型肝炎及びＣ型肝炎は一般的にいずれか特有の
明らかな症状により特徴づけされないが、これらの疾患の後遺症、例えば肝腫張
、（肝臓により産生される凝固因子のレベルの低下による）崩壊した血液凝固、
腹水形成、肝硬変、門脈圧亢進等が臨床医により確認される。しかしながら、（
肝酵素の血中レベル増加により証明される）変貌した肝機能は検査試験により検
出される。さらに、慢性Ｂ型肝炎及びＣ型肝炎患者は時々発生する「突然の再発
」の対象であり、それで急性肝炎の症状に戻る。

【００７０】 ＩＳＳ 本願発明の方法はＩＳＳを含むポリヌクレオチド（又はそのようなポリヌクレ
オチドを含む組成物）の投与を含む。本発明により、上記免疫活性化ポリヌクレ
オチドは少なくとも１のＩＳＳを含み、そして複合ＩＳＳｓを含みうる。上記Ｉ
ＳＳｓは上記のポリヌクレオチド内で隣接するか、又はそれらは上記ポリヌクレ
オチド内で付加的なヌクレオチド塩基により分けられる。あるいは、複合ＩＳＳ
ｓは別個のポリヌクレオチドとしてデリバリーされる。

【００７１】 ＩＳＳは本技術分野で説明され、そして免疫応答のさまざまな側面、例えばサ
イトカイン分泌、抗体産生、ＮＫ細胞活性化、及びＴ細胞増加を示す標準的なア
ッセイを用いてすでに同定されている。例えば、ＷＯ ９７／２８２５９；ＷＯ
９８／１６２４７；ＷＯ ９９／１１２７５；Krieg et al. (1995); Yamamot
o et al. (1992); Ballas et al. (1996); Klinman et al. (1997); Sato et al
. (1996); Pisetsky (1996a); Shimada et al. (1986) Jpn. J. Cancer Res. 77
: 808-816; Cowdery et al. (1996) J. Immunol. 156: 4570-4575; Roman et al
. (1997); 及びLipford et al. (1997a)を参照のこと。

【００７２】 上記ＩＳＳは６塩基又は塩基対より多いあらゆる長さであり、そして一般的に
配列５′−シトシン、グアニン−３′を含み、好ましくは１５塩基又は塩基対超
、より好ましくは２０塩基又は塩基対超の長さである。本技術分野で周知である
ように、上記５′−シトシン、グアニン−３′配列のシトシンはメチル化されて
いない。ＩＳＳは配列５′−プリン、プリン、Ｃ，Ｇ、ピリミジン、ピリミジン
、Ｃ，Ｇ−３′をも含む。ＩＳＳは配列５′−プリン、プリン、Ｃ，Ｇ、ピリミ
ジン、ピリミジン、Ｃ，Ｃ−３′をも含む。以下のポリヌクレオチド配列に示さ
れるとおり、ＩＳＳは配列５′−Ｔ，Ｃ，Ｇ−３′を含む（つまり１以上の配列
５′−Ｔ，Ｃ，Ｇ−３′を含む）。いくつかの態様において、ＩＳＳは配列５′
−Ｃ，Ｇ、ピリミジン、ピリミジン、Ｃ，Ｇ−３′（例えば５′−CGTTCG−３′
）を含む。いくつかの態様において、ＩＳＳは配列５′−Ｃ，Ｇ、ピリミジン、
ピリミジン、Ｃ，Ｇ、プリン、プリン−３′を含む。いくつかの態様において、
ＩＳＳは配列５′−プリン、プリン、Ｃ，Ｇ、ピリミジン、ピリミジン−３′（
例えば５′−AACGTT−３′）を含む。

【００７３】 いくつかの態様において、ＩＳＳは配列５′−プリン、Ｔ，Ｃ，Ｇ、ピリミジ
ン、ピリミジン−３′を含む。

【００７４】 いくつかの態様において、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは（塩基又は塩基対と
して）以下の長さのいずれかに関してそれよりも短かい：１０，０００；５，０
００；２５００；２０００；１５００；１２５０；１０００；７５０；５００；
３００；２５０；２００；１７５；１５０；１２５；１００；７５；５０；２５
；１０。いくつかの態様において、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは（塩基又は塩
基対として）以下の長さのいずれかに関してそれよりも長い：８；１０；１５；
２０；２５；３０；４０；５０；６０；７５；１００；１２５；１５０；１７５
；２００；２５０；３００；３５０；４００；５００；７５０；１０００；２０
００；５０００；７５００；１００００；２００００：５００００。あるいは、
上記ＩＳＳは、１０，０００；５，０００；２５００；２０００；１５００；１
２５０；１０００；７５０；５００；３００；２５０；２００；１７５；１５０
；１２５；１００；７５；５０；２５；又は１０の上限、そして独立に選ばれる
、８；１０；１５；２０；２５；３０；４０；５０；６０；７５；１００；１２
５；１５０；１７５；２００；２５０；３００；３５０；４００；５００；７５
０；１０００；２０００；５０００；７５００、の下限を持ついずれかのサイズ
の範囲であり、ここで上記下限は上記上限より低い。

【００７５】 いくつかの態様において、上記ＩＳＳは以下の配列のいずれかを含む：GACGCT
CC; GACGTCCC; GACGTTCC; GACGCCCC; AGCGTTCC; AGCGCTCC; AGCGTCCC; AGCGCCCC
; AACGTCCC; AACGCCCC; AACGTTCC; AACGCTCC; GGCGTTCC; GGCGCTCC; GGCGTCCC;
GGCGCCCC; GACGCTCG; GACGTCCG; GACGCCCG; GACGTTCG; AGCGCTCG; AGCGTTCG; AG
CGTCCG; AGCGCCCG; AACGTCCG; AACGCCCG; AACGTTCG; AACGCTCG; GGCGTTCG; GGCG
CTCG; GGCGTCCG; GGCGCCCG。いくつかの態様において、上記免疫活性化ポリヌク
レオチドは配列５′−TGACTGTGAACGTTCGAGATGA−３′（配列番号１）を含む。

【００７６】 いくつかの態様において、上記ＩＳＳは以下の配列のいずれかを含む：GACGCU
; GACGUC; GACGUU; GACGUT; GACGTU; AGCGUU; AGCGCU; AGCGUC; AGCGUT; AGCGTU
; AACGUC; AACGUU; AACGCU; AACGUT; AACGTU; GGCGUU; GGCGCU; GGCGUC; GGCGUT
; GGCGTU。

【００７７】 いくつかの態様において、上記ＩＳＳは以下の配列のいずれかを含む：GABGCT
CC; GABGTCCC; GABGTTCC; GABGCCCC; AGBGTTCC; AGBGCTCC; AGBGTCCC; AGBGCCCC
; AABGTCCC; AABGCCCC; AABGTTCC; AABGCTCC; GGBGTTCC; GGBGCTCC; GGBGTCCC;
GGBGCCCC; GABGCTCG; GABGTCCG; GABGCCCG; GABGTTCG; AGBGCTCG; AGBGTTCG; AG
BGTCCG; AGBGCCCG; AABGTCCG; AABGCCCG; AABGTTCG; AABGCTCG; GGBGTTCG; GGBG
CTCG; GGBGTCCG; GGBGCCCG; GABGCTBG; GABGTCBG; GABGCCBG; GABGTTBG; AGBGCT
BG; AGBGTTBG; AGBGTCBG; AGBGCCBG; AABGTCBG; AABGCCBG; AABGTTBG; AABGCTBG
; GGBGTTBG; GGBGCTBG; GGBGTCBG; GGBGCCBG、ここでＢは５−ブロモシトシンで
ある。

【００７８】 いくつかの態様において、上記ＩＳＳは以下の配列のいずれかを含む：GABGCU
CC; GABGUCCC; GABGUTCC; GABGTUCC; GABGUUCC; AGBGUUCC; AGBGTUCC; AGBGUTCC
; AGBGCUCC; AGBGUCCC; AABGUCCC; AABGUUCC; AABGUTCC; AABGTUCC; AABGCUCC;
GGBGUUCC; GGBGUTCC; GGBGTUCC; GGBGCUCC; GGBGUCCC; GABGCUCG; GABGUCCG; GA
BGUUCG; GABGUTCG; GABGTUCG; AGBGCUCG; AGBGUUCG; AGBGUTCG; AGBGTUCG; AGBGUCCG; AA
BGUCCG; AABGUUCG; AABGUTCG; AABGTUCG; AABGCUCG; GGBGUUCG; GGBGUTCG; GGBG
TUCG; GGBGCUCG; GGBGUCCG; GABGCUBG; GABGUCBG; GABGUUBG; GABGUTBG; GABGTU
BG; AGBGCUBG; AGBGUUBG; AGBGUCBG; AGBGUTBG; AGBGTUBG; AABGUCBG; AABGUUBG
; AABGUTBG; AABGTUBG; AABGCUBG; GGBGUUBG; GGBGUTBG; GGBGTUBG; GGBGCUBG;
GGBGUCBG、ここでＢは５−ブロモシトシンである。

【００７９】 他の態様において、上記ＩＳＳは以下の配列のいずれかを含む： ５′−TGACCGTGAACGTTCGAGATGA−３′（配列番号２）； ５′−TCATCTCGAACGTTCCACAGTCA−３′（配列番号３）； ５′−TGACTGTGAACGTTCCAGATGA−３′（配列番号４）； ５′−TCCATAACGTTCGCCTAACGTTCGTC−３′（配列番号５）； ５′−TGACTGTGAABGTTCCAGATGA−３′（配列番号６）、ここでＢは５−ブロモシ
トシンであり； ５′−TGACTGTGAABGTTCGAGATGA−３′（配列番号７）、ここでＢは５−ブロモシ
トシンであり； ５′−TGACTGTGAABGTTBGAGATGA−３′（配列番号８）、ここでＢは５−ブロモシ
トシンである。

【００８０】 ＩＳＳ及び／又はＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは修飾を含む。ＩＳＳの修飾は
本技術分野で知られるいずれかで、制限されることなく、３′−ＯＨ又は５′−
ＯＨの修飾、ヌクレオチド塩基の修飾、糖成分の修飾、及びリン酸基の修飾を含
む。このようなさまざまな修飾を以下に説明する。

【００８１】 ＩＳＳは１本鎖又は２本鎖ＤＮＡ、並びに１本鎖又は２本鎖ＲＮＡ、あるいは
他の修飾ポリヌクレオチドである。ＩＳＳは先に記載のモチーフ内に存在するか
又はそのモチーフを越えて広がる１以上のパリンドローム領域を含むかどうかわ
からない。ＩＳＳは付加的なフランキング配列を含み、そのいくつかを本明細書
中に記載する。ＩＳＳは天然又は修飾された、非天然塩基を含み、そして修飾さ
れた糖、リン酸、及び／又は末端を含む。例えば、リン酸修飾物は、制限される
ことなく、ホスホン酸メチル、ホスホロチオエート、ホスホルアミドエート（架
橋又は未架橋）、ホスホトリエステル、及びホスホロジチオエートを含み、そし
てあらゆる組合せで使用される。他の非リン酸結合をも使用する。好ましくは、
本発明のオリゴヌクレオチド又はホスホロチオエート骨格を含む。本技術分野で
知られる糖修飾物、例えば２′−アルコキシ−ＲＮＡアナログ、２′−アミノ−
ＲＮＡアナログ、及び２′−アルコキシ−又はアミノ−ＲＮＡ／ＤＮＡキメラ、
並びに本明細書中に記載される他のものを作製し、そしていずれかのリン酸修飾
物と組合せる。塩基修飾物の例は、制限されることなく、上記ＩＳＳのシトシン
のＣ−５及び／又はＣ−６への電子求引性部分（例えば５−ブロモシトシン、５
−クロロシトシン、５−フルオロシトシン、５−ヨードシトシン）の付加を含む
。

【００８２】 上記ＩＳＳを、制限されることなく、酵素的方法、化学的方法、及びより長い
オリゴヌクレオチド配列の分解を含む本技術分野で周知の技術及び核酸合成装置
を用いて合成しうる。例えばAusubel et al. (1987); 及びSambrook et al. (19
89) を参照のこと。酵素的に会合させる場合、個々の単位は、例えばリガーゼ、
例えばＴ４ ＤＮＡ又はＲＮＡリガーゼにより連結される。米国特許第５，１２
４，２４６号。オリゴヌクレオチドの分解は、オリゴヌクレオチドを米国特許第
４，６５０，６７５号に例示されるヌクレアーゼにさらすことを通して達成され
る。

【００８３】 上記ＩＳＳは慣用のポリヌクレオチド単離手順を用いて単離される。上記手順
は、制限されることなく、ゲノム又はｃＤＮＡライブラリーへのプローブのハイ
ブリダイゼーション及びポリメラーゼ連鎖反応による部分的な天然配列の合成を
含む。

【００８４】 環状ＩＳＳは組換え技術を通して単離、合成されるか又は化学的に合成される
。上記環状ＩＳＳが単離又は組換え法を通して得られる場合、上記ＩＳＳは好ま
しくはプラスミドであろう。より小さな環状オリゴヌクレオチドの化学合成は文
献に記載のいずれかの方法を用いて実施される。例えば、Gao et al. (1995) Nu
cleic Acids Res. 23: 2025-2029; 及びWang et al. (1994) Nucleic Acids Res
. 22: 2326-2333を参照のこと。

【００８５】 オリゴヌクレオチド及び修飾オリゴヌクレオチド作製技術は本技術分野で知ら
れている。リン酸ジエステル結合を含む天然ＤＮＡ又はＲＮＡは３′末端で固形
支持体に付着した成長オリゴヌクレオチドの５′水酸基への適当なヌクレオシド
・ホルホルアミダイトの連続した連結と、それに続く媒介亜リン酸トリエステル
のリン酸トリエステルへの酸化により一般に合成される。所望のオリゴヌクレオ
チド配列が合成されるとすぐに、そのオリゴヌクレオチドを上記支持体から外し
、そのリン酸トリエステル基を脱保護してリン酸ジエステルにし、そしてそのヌ
クレオシド塩基をアンモニア水又は他の塩基を用いて脱保護する。例えば、Beau
cage (1993)“Oligodeoxyribonucleotide Synthesis”in Protocols for Oligon
ucleotides and Analogs, Synthesis and Properties (Agrawal, ed.) Humana P
ress, Totowa, NJ; Warner et al. (1984) DNA 3: 401 、及び米国特許第４，４
５８，０６６号を参照のこと。

【００８６】 上記ＩＳＳはリン酸修飾オリゴヌクレオチドを含むこともできる。修飾リン酸
結合又は非リン酸結合を含むポリヌクレオチドの合成が本技術分野で知られてい
る。概説として、Matteucci (1997)“Oligonucleotide Analogs: an Overview”
in Oligonucleotides as Therapeutic Agents, (D.J. Chadwick and G. Cardew,
ed.) John Wiley and Sons, New York, NY を参照のこと。本発明のオリゴヌク
レオチド中の糖又は糖アナログに付着しうるリン誘導体（又は修飾リン酸基）は
１リン酸、２リン酸、３リン酸、アルキルホスホネート、ホスホロチオエート、
ホスホロジチオエート等である。先に記載したリン酸アナログの調製、並びにそ
れらのヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、及びオリゴヌクレオチド内への組み込
み自体は知られてもおり、本明細書中に詳細に記載する必要はない。Peyrottes
et al. (1996) Nucleic Acids Res. 24: 1841-1848; Chaturvedi et al. (1996)
Nucleic Acids Res. 24: 2318-2323; 及びSchultz et al. (1996) Nucleic Aci
ds Res. 24: 2966-2973 。例えば、ホスホロチオエート・オリゴヌクレオチドの
合成は、酸化ステップが硫化ステップに置き換えられていることを除いて天然の
オリゴヌクレオチドに関する先の記載に類似している（Zon (1993)“Oligonucle
oside Phosphorothioates”in Protocols for Oligonucleotides and Analogs,
Synthesis and Properties (Agrawal, ed.) Humana Press, pp. 165-190)。同様
に、他のリン酸アナログ、例えばホスホトリエステル（Miller et al. (1971) J
ACS 93: 6657-6665）、未架橋ホスホルアミドエート（Jager et al. (1988) Bio
chem. 27: 7247-7246), N3'→P5'ホスホルアミドエート（Nelson et al. (1997)
JOC 62: 7278-7287）及びホスホロジチオエート（米国特許第５，４５３，４９
６号）の合成が記載されてもいる。他の非リン・ベースの修飾オリゴヌクレオチ
ドを使用することもできる（Stirchak et al. (1989) Nucleic Acids Res. 17:
6129-6141）。ホスホロチオエート骨格を持つオリゴヌクレオチドはホスホジエ
ステル骨格を持つものよりも免疫原性であり、そして宿主への注入後の分解に対
してより抵抗性であるように見える。Braun et al. (1988) J. Immunol. 141: 2
084-2089; 及びLatimer et al. (1995) Mol. Immunol. 32: 1057-1064。

【００８７】 本発明で使用されるＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは、（唯一の又は主要な糖成
分としてリボースを含む）リボヌクレオチド、（主要な糖成分としてデオキシリ
ボースを含む）デオキシリボヌクレオチドを含むか、あるいは本技術分野で知ら
れるような修飾糖若しくは糖アナログをそのＩＳＳ内に組み込みうる。よって、
リボース及びデオキシリボースに加え、上記糖部分はペントース、デオキシペン
トース、ヘキソース、デオキシヘキソース、グルコース、アラビノース、キシロ
ース、リキソース、及び糖「アナログ」シクロペンチル基でありうる。上記糖は
ピラノシル又はフラノシル型でありうる。上記ＩＳＳ中、好ましくは上記糖部分
はリボース、デオキシリボース、アラビノース又は２′−Ｏ−アルキルリボース
のフラノシドであり、そして上記糖をα又はβアノマー配置いずれかのそれぞれ
のヘテロ環式基に付着しうる。糖修飾は、制限されることなく、２′−アルコキ
シ−ＲＮＡアナログ、２′−アミノ−ＲＮＡアナログ、及び２′−アルコキシ−
又はアミノ−ＲＮＡ／ＤＮＡキメラを含む。これらの糖又は糖アナログ、及び上
記糖又は糖アナログがヘテロ環式基（核酸塩基）に付着されるところのそれぞれ
の「ヌクレオシド」自体の調製は知られ、そして上述の調製がいずれかの特有の
実施例に関する範囲を除いて、本明細書中に記載する必要はない。糖修飾はＩＳ
Ｓの製造において作製され、そしていずれかのリン酸修飾と組合せられうる。

【００８８】 上記ＩＳＳ内に組み込まれるヘテロ環式基又は核酸塩基は天然の主要なプリン
及びピリミジン塩基（すなわち、前述のとおり、ウラシル又はチミン、シトシン
、アデニン、及びグアニン）、並びに天然及び上記主要塩基の合成的修飾である
。

【００８９】 当業者は、さまざまなヘテロ環式基及びさまざまな糖部分（及び糖アナログ）
を含む多数の「合成」非天然ヌクレオシドが本技術分野で利用可能であり、そし
て本発明の他の基準を満たす限り、上記ＩＳＳは天然核酸の主要な５の塩基成分
以外の１又はいくつかのヘテロ環式基を含みうる。好ましくは、しかしながら、
上記ＩＳＳ内のヘテロ環式基は、プリンが上記ＩＳＳの糖部分にその９位を介し
て、ピリミジンが１位を介して、ピロロピリミジンが７位を介して、及びピラゾ
ロピリミジンが１位を介して付着する時、制限されることなく、ウラシル−５−
イル、シトシン−５−イル、アデニン−７−イル、アデニン−８−イル、グアニ
ン−７−イル、グアニン−８−イル、４−アミノピロロ［２，３−ｄ］ピリミジ
ン−５−イル、２−アミノ−４−オキソピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−
イル、２−アミノ−４−オキソピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−３−イル基を
含む。

【００９０】 上記ＩＳＳは少なくとも１の修飾塩基、例えば一般に認められている国際出願
第９９／６２９２３号のものを含む。本明細書中で使用する場合、用語「修飾塩
基」は「塩基アナログ」と同義である、例えば「修飾シトシン」は「シトシン・
アナログ」と同義である。同様に、「修飾」ヌクレオシド又はヌクレオチドはヌ
クレオシド又はヌクレオチド「アナログ」と同義であると本明細書中で定義され
る。塩基修飾の例は、制限されることなく、上記ＩＳＳのシトシンのＣ−５及び
／又はＣ−６への電子求引性部分の付加を含む。好ましくは、上記電子求引性部
分はハロゲンである。上記修飾シトシンは、制限されることなく、アザシトシン
、５−ブロモシトシン、ブロモウラシル、５−クロロシトシン、塩素化シトシン
、シクロシトシン、シトシン・アラビノシド、５−フルオロシトシン、フルオロ
ピリミジン、フルオロウラシル、５，６−ジヒドロシトシン、５−ヨードシトシ
ン、ヒドロキシウレア、ヨードウラシル、５−ニトロシトシン、ウラシル、及び
あらゆる他のピリミジン・アナログ又は修飾ピリミジンを含む。

【００９１】 塩基修飾ヌクレオシドの製造、及び前駆物質として上記塩基修飾ヌクレオシド
を用いた修飾オリゴヌクレオチドの合成は、例えば米国特許第４，９１０，３０
０号、同第４，９４８，８８２号、及び同第５，０９３，２３２号に記載されて
いる。これらの塩基修飾ヌクレオシドは、それらが化学合成によりオリゴヌクレ
オチドの末端又は内側部分のいずれかに組み込まれるように設計されている。オ
リゴヌクレオチドの末端か又は内側部分のいずれかに存在する上述の塩基修飾オ
リゴヌクレオシドはペプチド又は他の抗原の付着部位としての機能を果たす。そ
れらの糖部分を修飾したヌクレオシドも記載され（制限されることなく、米国特
許第４，８４９，５１３号、同第５，０１５，７３３号、同第５，１１８，８０
０号、同第５，１１８，８０２号を含む）、そして同様に使用されうる。

【００９２】 本発明の方法に使用されるＩＳＳはＩＳＳ−マイクロキャリア複合体として製
造される。ＩＳＳ−マイクロキャリア複合体はマイクロキャリア（ＭＣ）に結合
したＩＳＳ含有ポリヌクレオチドを含む。ＩＳＳ−ＭＣ複合体は、マイクロキャ
リアーの表面に結合されたＩＳＳ（つまり、上記ＩＳＳはそのＭＣ内に封入され
ていない）、マイクロキャリア内に同化されたＩＳＳ（例えばＰＬＧＡビーズに
同化されたＩＳＳ）、又はＭＣ内に封入されたＩＳＳ（例えばリポソーム内に取
り込まれたＩＳＳ）を含む。

【００９３】 微細粒子（ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）ビーズ）に結合したＩＳＳ含有オリゴ
ヌクレオチドはインビトロにおいて免疫活性化活性を持つことがあらかじめ示さ
れている（Liang et al., (1996), J. Clin. Invest 98: 1119-1129)。しかしな
がら、最近の結果は、金、ラテックス、及び磁性粒子に結合したＩＳＳ含有オリ
ゴヌクレオチドが７ＴＤＩ細胞の増加刺激に活性がないことを示し（Manzel et
al., (1999), Antisense Nucl. Acid Drug Dev. 9: 459-464）、上記細胞はＩＳ
Ｓ含有オリゴヌクレオチドに対する応答により増加する。

【００９４】 マイクロキャリアは純水中で可溶性ではなく、かつ、サイズが約５０〜６０μ
ｍ未満、好ましくは約１０μｍ未満、より好ましくは約１０nm〜約１０μｍ、２
５nm〜約５μｍ、５０nm〜約４．５μｍ又は１．０μｍ〜約２．０μｍである。
マイクロキャリアはあらゆる形状、例えば球状、楕円状、棒状等であるが、球状
マイクロキャリアが通常好ましい。好ましいマイクロキャリアは５０nm、２００
nm、１μｍ、１．２μｍ、１．４μｍ、１．５μｍ、１．６μｍ、１．８μｍ、
２．０μｍ、２．５μｍ又は４．５μｍの、あるいはほぼそれ位のサイズを有す
る。マイクロキャリアの「サイズ」は一般的に製造業者により示される粒子の「
設計サイズ」又は意図されたサイズである。サイズは直接的計測される寸法、例
えば平均又は最大直径であるか、あるいは間接的なアッセイ、例えばろ過選別ア
ッセイにより決定される。マイクロキャリア・サイズの直接的計測は、既知のサ
イズの粒子と比較して、顕微鏡、一般的には光学顕微鏡又は走査型電子顕微鏡（
ＳＥＭ）によるか、あるいはマイクロメータを参照することにより典型的には実
施される。製造工程の間にサイズの軽微なばらつきが生じるので、計測値がその
マイクロキャリアが示された計測値の約±５〜１０％であることを示す場合、マ
イクロキャリアは示されたサイズであると考えられる。サイズの特徴は動的光散
乱により測定されもする。あるいは、マイクロキャリア・サイズはろ過選別アッ
セイにより決定される。少なくとも９７％の粒子がその示されたサイズの「選別
型」フィルター（つまり、保持された粒子をそのフィルター内にとどめる「デプ
ス・フィルター」ではなく、保持された粒子をそのフィルター、例えばポリカー
ボネート又はポリエーテルスルホンフィルターの表面上に存在するフィルター）
を通過する場合、そのマイクロキャリアは示されたサイズに満たない。マイクロ
キャリア粒子の少なくとも約９７％がその示されたサイズの選別型フィルターに
より保持される場合、そのマイクロキャリアは示されたサイズより大きい。よっ
て、サイズが約１０μｍ〜約１０nmのマイクロキャリアの少なくとも９７％は１
０μｍ孔の選別フィルターを通過し、そして１０nmの選別フィルターにより保持
される。

【００９５】 先の議論が示すとおり、マイクロキャリアのサイズ又はサイズ範囲に対する言
及は、近いばらつき及び示されたサイズ及び／又はサイズ範囲の近似値を暗に含
む。これはサイズ及び／又はサイズ範囲に対して言及する場合の用語「約」の使
用により反映されるので、「約」に対する言及のないサイズ又はサイズ範囲に対
する言及がそのサイズ及び／又はサイズ範囲が厳密であることを意味するわけで
はない。

【００９６】 マイクロキャリアは固相（例えばポリスチレン・ビーズ）又は液相（例えばリ
ポソーム、ミセル又は油及び水エマルジョン状態の油滴）である。液相マイクロ
キャリアはリポソーム、ミセル、油滴、及び他の脂質又は油ベースの粒子を含む
。１の好ましい液相マイクロキャリアは油／水エマルジョン中の油滴である。好
ましくは、マイクロキャリアとして使用される油／水エマルジョンは生体適合性
物質、例えばスクアレンを含む。液相マイクロキャリアは通常非生分解性である
と考えられるが、しかしその液体マイクロキャリア組成物中への１以上の生分解
性重合体の組み込みにより製造されうる生分解性液相マイクロキャリアでもあり
うる。１の好ましい態様において、上記マイクロキャリアは、水性pHバッファー
中、スクアレン、ソルビタン、トリオレエート、ＴＷＥＥＮ８０（商標）の乳化
により製造される油／水エマルジョン中の油滴である。

【００９７】 ＩＳＳ−マイクロキャリア複合体に使用するための固相マイクロキャリアは生
分解性材料又は非生分解性材料から作製され、そしてアガロース又は修飾アガロ
ースマイクロキャリアを含むかもしれない。有用な固相生分解性マイクロキャリ
アは、制限されることなく：生分解性重合体、例えばポリ（乳酸）、ポリ（グリ
コール酸）、及びそれらの共重合体（ブロック共重合体を含む）、並びにポリ（
乳酸）とポリ（エチレングリコール）のブロック共重合体；ポリオルソエステル
、例えば３，９−ジエチリデン−２，４，８，１０−テトラオキサスピロ［５，
５］ウンデカン（ＤＥＴＯＳＵ）ベースの重合体；ポリ無水物、例えばセバシン
酸、ｐ−（カルボキシフェノキシ）プロパン又はｐ−（カルボキシフェノキシ）
ヘキサン・ベースのポリ（無水物）重合体；ポリ無水物イミド、例えばアミノ酸
、例えばグリシン又はアラニンを組み込んだ（つまり、上記アミノ末端窒素を通
してイミド結合によりセバシン酸に連結した）セバシン酸誘導モノマー・ベース
のポリ無水物重合体；ポリ無水物エステル；ポリホスファゼン、特にカルボン酸
基の発生を通してその重合体骨格の分解を触媒しうる加水分解感受性エステル基
を含むポリ（ホスファゼン）（Schacht et al. (1996) Biotechnol. Bioeng. 19
96: 102); そしてポリアミド、例えばポリ（乳酸−ｃｏ−リジン）を含む。マイ
クロキャリアの製造に好適な多種多様な非生分解性材料も知られ、制限されるこ
となく、ポリスチレン、ポリエチレン、ラテックス、金、及び強磁性又は常磁性
材料を含む。固相マイクロキャリアを共有的に修飾し、例えばアミン反応性架橋
剤を用いた共有結合のためのアミン基の付加により上記ＩＳＳの連結のための１
以上の部分を組み込む。

【００９８】 上記ＩＳＳ−マイクロキャリア複合体は共有的又は非共有的に結合される。共
有結合ＩＳＳ−ＭＣ複合体は直接的に結合されるか又は１以上の原子の架橋部分
（典型的には架橋剤の残基）により結合される。上記ＩＳＳは修飾されて（例え
ば、共有架橋のための遊離のメルカプト基の組み込みか、又は疎水結合のための
疎水部分、例えば脂質、ステロイド、ステロール、例えばコレステロール、及び
テルペンの付加により）上記ＭＣへの結合をもたらす又は増強されるが、非修飾
ＩＳＳは静電的相互作用によるか又は（例えば、そのマイクロキャリアに結合す
る相補オリゴヌクレオチドを有するＩＳＳの少なくとも一部分での塩基対形成に
よる）塩基対形成により非共有的ＩＳＳ−ＭＣ複合体の形成のために使用される
。ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは固相マイクロキャリア又は本技術分野で知られ
る慣用技術を用いたＩＳＳ−ＭＣ複合体形成を促進するための他の化学部分に連
結される。ここで上記慣用技術は、例えば利用可能なヘテロビ（ｈｅｔｅｒｏｂ
ｉ）機能性架橋剤（例えばアミン誘導化マイクロキャリアと遊離メルカプト基を
含めるために修飾したＩＳＳの共有結合のためのサクシンイミジル４−（Ｎ−マ
レイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート又はそのスルホン基誘
導体）の使用か又は疎水性マイクロキャリア、例えば油／水エマルジョン中の油
滴への結合を促進するための（例えば、Godard et al. (1995) Eur. J. Biochem
. 232: 404-410の方法での）化合物、例えばコレステロールの付加による。ある
いは、例えば本技術分野で知られる修飾ヌクレオシド又はヌクレオチドを上記Ｉ
ＳＳのいずれかの末端又は内側の位置に組み込みうる。これらはブロックされた
官能基を含み、これらの官能基は脱ブロックされた時に上記マイクロキャリア又
はマイクロキャリアへの結合を促進するであろう部分に存在するか又は付着され
たさまざまな官能基と反応しうる。結合ペア（例えば抗体とその同系の抗原又は
ビオチンとストレプトアビジン若しくはアビジン）を利用する非共有結合ＩＳＳ
−ＭＣ複合体のある態様、ここで上記結合ペアの一方のメンバーを上記ＩＳＳに
結合させ、そして上記マイクロキャリアをその結合ペアの他方のメンバーにより
誘導化する（例えば、ビオチン化ＩＳＳとストレプトアビジン誘導マイクロキャ
リアは連結し非共有結合ＩＳＳ−ＭＣ複合体を形成する）。

【００９９】 非共有結合ＩＳＳ−ＭＣ複合体は典型的にはそのポリヌクレオチド骨格の高い
陰性荷電を利用する静電的結合により結合した。したがって、非共有結合ＩＳＳ
−ＭＣ複合体に使用するためのマイクロキャリアは生理的なpH（例えば、約pH６
．８〜７．４）で陽性に荷電する。上記マイクロキャリアは元来陽性荷電を有す
るが、しかし、通常は陽性荷電を持たない化合物から作製されるマイクロキャリ
アは誘導体化されるか又は陽性荷電を持つように別の方法で修飾される。例えば
、上記マイクロキャリアに使用される重合体は、陽性荷電基、例えば第１アミン
を付加して誘導体化される。あるいは、陽性荷電化合物を製造の間にそのマイク
ロキャリアの配合物中に組み込む（例えば、得られたマイクロキャリア粒子に陽
性荷電を与えるために、陽性荷電界面活性剤をポリ（乳酸）／ポリ（グリコール
酸）共重合体の製造の間に使用する）。

【０１００】 固相マイクロキャリアを本技術分野で知られる技術を用いて製造する。例えば
、それらはエマルジョン−溶媒抽出／留去技術により製造する。一般的に、この
技術において、エマルジョンの分散相（ＤＰ）を形成するために生分解性重合体
、例えばポリ無水物、ポリ（アルキル−α−シアノアクリレート）及びポリ（α
−ヒドロキシ・エステル）、例えばポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ
（Ｄ，Ｌ−乳酸−ｃｏ−グリコール酸）、及びポリ（カプロラクトン）を好適な
有機溶媒、例えばメチレン・クロライド中に溶解する。溶解界面活性剤、例えば
ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）又はポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）を含む過
剰量の水性連続相（ＣＰ）中にＤＰを高速の均質化により乳化させる。ＣＰ中の
界面活性剤は個々の、そして好適なサイズのエマルジョン滴の形成を確保する。
次にその有機溶媒を上記ＣＰにより抽出し、続いてシステム温度を上げることに
より留去する。次に上記固形微粒子を遠心分離又はろ過により分離し、そして、
例えば凍結乾燥又は減圧の利用により乾燥させて、４℃で保存する。

【０１０１】 一般的に、カチオン性ミクロスフィアを製造するために、カチオン性脂質又は
重合体、例えば１，２−ジオレオリル−１，２，３−トリメチルアンモニオプロ
パン（ＤＯＴＡＰ）、臭化セチルトリメチルアンモニウム（ＣＴＡＢ）又はポリ
リジンをＤＰ又はＣＰの相の中のそれらの溶解性のためにＤＰ又はＣＰのいずれ
かに加える。乾燥ミクロスフィアの物理化学的特徴、例えば平均サイズ、サイズ
分布、及び表面荷電を測定する。サイズの特徴を、例えば動的光散乱法により測
定し、そして上記表面荷電をゼータ電位を計測することにより測定した。

【０１０２】 一般的に、ＩＳＳ含有ヌクレオチドは、ＩＳＳとその粒子を４℃で一晩水性イ
ンキュベーションすることにより上記カチオン性ミクロスフィア中に吸収されう
る。ミクロスフィアはＩＳＳ適用前後のサイズ及び表面荷電により特徴づけられ
る。次に選択したバッチを本明細書に記載した活性について評価した。

【０１０３】 投与 ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドをＨＢＶ及び／又はＨＣＶにさらした後、並びに
／あるいはＨＢＶ及び／又はＨＣＶに感染した後に投与する。ある例において、
上記ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドをウイルス感染症の身体的症状（例えば黄疸、
倦怠感等）のない感染個体に投与する。適宜、ＨＢＶ及び／又はＨＣＶにさらす
、感染する、並びに／あるいはその感染の症状の始まりに関係して、ＩＳＳ含有
ポリヌクレオチドの投与はさまざまな回数でなされる。加えて、ＩＳＳ含有ポリ
ヌクレオチドを用いた治療は、他の治療又は「第一線」治療の失敗の後に用いら
れる「第二線」治療と一緒に用いられもする（例えば、ＩＳＳ含有ポリヌクレオ
チド療法はインターフェロン療法の失敗後に用いられうる）。さらに、ＩＳＳ含
有ポリヌクレオチドは単回投薬又は複数回投薬で投与される。上記ＩＳＳ含有ポ
リヌクレオチドが複数回に投与される場合、そのＩＳＳは臨床医により選ばれる
いずれかの計画、例えば毎日、１日おき、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日
ごと、毎週、隔週、毎月又はあらゆる長さの間隔（これらは治療の経過の間、同
じく続くかもしれない）に投与される。複数投与が与えられる場合、そのＩＳＳ
含有ポリヌクレオチドは２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上の
別々の投与として与えられる。

【０１０４】 いくつかの態様において、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドがＨＢＶ及び／又はＨ
ＣＶにさらされた個体に投与される場合、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドはＨＢＶ
及び／又はＨＣＶの身体的症状の発症より前に投与される。好ましくは、ＩＳＳ
含有ポリヌクレオチドはＨＢＶ及び／又はＨＣＶにさらされた後、約２８、２１
又は１４日未満で、好ましくはＨＢＶ及び／又はＨＣＶにさらされた後、約１０
日未満で、より好ましくはＨＢＶ及び／又はＨＣＶにさらされた後、約７日未満
で、さらにより好ましくはＨＢＶ及び／又はＨＣＶにさらされた後、約５日未満
でＨＢＶ及び／又はＨＣＶにさらされた個体に投与される。いくつかの態様にお
いて、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドはＨＢＶ及び／又はＨＣＶにさらされた後、
約３日で投与される。他の態様において、上記ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドはさ
らされたことを知った後（例えば、針を刺すか、あるいはＨＢＶ及び／又はＨＣ
Ｖに汚染されたと分かっているか又は考えられる体液又は他の物質に経皮的にさ
らされた後）できるだけ早く投与される。このような態様において、上記ＩＳＳ
含有ポリヌクレオチドはさらされた後、４８、３６、２４又は１２時間以内に好
ましくは投与される。

【０１０５】 他の態様において、上記ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドはＨＢＶ又はＨＣＶ感染
症の少なくとも１の症状の発症により、又はその後に投与される。好ましくは、
ＩＳＳ含有ヌクレオチドはＨＢＶ及び／又はＨＣＶ感染症の症状発症を受けて、
約２８、２１、１４、７、５又は３日以内に投与される。しかしながら、症状を
示したある感染個体は他の療法（例えばインターフェロン・ベースの療法）によ
る治療の１以上の治療単位がすでに始められているであろう。このような個体又
はそれらの症状の意味の察知に失敗した個体において、上記ＩＳＳ含有ポリヌク
レオチド感染を受けてあらゆる時点でも投与される。

【０１０６】 ＨＢＶ及び／又はＨＣＶに感染したある個体は無症状であり、そして所定の検
査（例えば献血した時）を通して確認される。よって、感知しうる又は気付きう
る身体的症状の存在しない個体のために、上記ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは感
染に続いてどの時点でも投与される。

【０１０７】 ＩＳＳポリヌクレオチドは本技術分野で知られるいずれの形態、例えば乾燥散
剤、半固形剤又は液剤中に配合される。非経口投与のために、好ましくは、ＩＳ
Ｓポリヌクレオチドを液剤で投与したが、特に上記ＩＳＳポリヌクレオチドが徐
放性製剤の形態で配合される場合に、固形又は半固形製剤が利用されもする。

【０１０８】 ＩＳＳポリヌクレオチド製剤はさらなる成分、例えば塩、緩衝剤、増量剤、オ
スモライト、抗酸化剤、界面活性剤（ｄｅｔｅｒｇｅｎｔｓ、ｓｕｒｆａｃｔａ
ｎｔｓ）、及び本技術分野で知られる医薬として許容される賦形剤を含む。一般
的に、液体ＩＳＳポリヌクレオチド製剤は注入のためのＶＳＰ水により作製し、
そして無菌であり、等張であり、かつ、生理学的に許容されるpH、例えば約pH６
．８〜７．５にpH緩衝化する。

【０１０９】 ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドはデリバリー媒体、例えばリポソーム、油／水エ
マルジョン又は徐放性製剤中に配合される。ポリヌクレオチドをこれらの形態中
に配合する方法は本技術分野で周知である。

【０１１０】 ＩＳＳ含有ポリヌクレオチド製剤は免疫調節物質、例えば本技術分野で周知の
アジュバント及び免疫刺激性サイトカインをも含むかどうかわからない。

【０１１１】 好適な用量範囲又は有効量は所望の症状の軽減及び／又はウイルス感染症の抑
制を提供するものであり、そして詳しい肝炎ウイルス、そのポリヌクレオチドの
ＩＳＳ配列、そのポリヌクレオチドの分子量、及び投与経路を含む多くの要因に
依存する。用量は、本技術分野で知られるさまざまなパラメーター、例えば症状
の重さ、患者の病歴等に従い医師又は他の医療従事者により一般的に選ばれる。
一般的に、約２０塩基のＩＳＳ含有ポリヌクレオチドについて、用量範囲は、例
えば独立に選ばれる、例えば約０．１、０．２５、０．５、１、２、５、１０、
２０、３０、４０、５０、６０、８０、１００、２００、３００、４００又は５
００μｇ／kgの下限から下限より大きく、独立に選ばれる約６０、８０、１００
、２００、３００、４００、５００、７５０、１０００、１５００、２０００、
３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００又は
１００００μｇ／kgの上限から選ばれる。例えば、用量はおよそ以下のいずれか
である：０．１〜１００μｇ／kg、０．１〜５０μｇ／kg、０．１〜２５μｇ／
kg、０．１〜１０μｇ／kg、１〜５００μｇ／kg、１００〜４００μｇ／kg、２
００〜３００μｇ／kg、１〜１００μｇ／kg、１００〜２００μｇ／kg、３００
〜４００μｇ／kg、４００〜５００μｇ／kg、５００〜１０００μｇ／kg、５０
０〜５０００μｇ／kg、又は５００〜１０，０００μｇ／kg。一般に、非経口経
路の投与は、増加した長さのＩＳＳ含有ポリヌクレオチドが行う感染組織への直
接適用よりも高い用量のＩＳＳを必要とする。

【０１１２】 ＩＳＳを含むポリヌクレオチドは全身的（例えば非経口的に）又は局所／局部
的投与により投与されるが、感染部位の到達しにくさに関係するため、全身的投
与が好ましい。局所／局部的投与のために、ＩＳＳを含むポリヌクレオチドは門
脈に投与されるが、しかしこの投与経路は手順の侵襲性の理由から好ましくない
。

【０１１３】 他の態様において、上記ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは非経口的に投与される
。非経口投与経路は、制限されることなく、経皮、経粘膜、鼻咽喉、肺、及び直
接注入を含む。注入による非経口投与は、制限されることなく、静中（ＩＶ）、
腹腔内（ＩＰ）、筋中（ＩＭ）、皮下（ＳＣ）、及び皮内（ＩＤ）経路を含むい
ずれかの非経口注入経路による。経皮及び経粘膜投与は、例えば担体（例えばジ
メチルスルフォキシド、ＤＭＳＯ）の包含、電気的刺激（例えばイオントフォレ
ーゼ）又はそれらの組合せにより達成される。さまざまなデバイスが本発明によ
り使用されうる経皮投与に利用可能である。

【０１１４】 鼻咽喉及び肺経路の投与は、制限されることなく、鼻腔内、吸入、経気管支、
及び経肺胞経路を含む。よって、上記ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドはエアゾール
、噴霧液体又は粉末の吸入により投与される。ＩＳＳ含有組成物の吸入による投
与に好適なデバイスは、制限されることなく、ネブライザー、アトマイザー、ベ
ポライザー、及び測定された用量の吸入器を含む。上記ＩＳＳ含有ポリヌクレオ
チドを含む製剤に満たされているか、又はそれを含むリザーバを用いるネブライ
ザー、アトマイザー、ベポライザー、及び測定された用量の吸入器は、上記ＩＳ
Ｓ含有ポリヌクレオチドの吸入デリバリーに使用されるために好適なさまざまな
デバイスの中にある。他の呼吸粘膜へのデリバリーの方法は、例えば点鼻剤によ
る液剤のデリバリーを含む。

【０１１５】 ＩＶ、ＩＰ、ＩＭ及びＩＤ投与はボーラス又は注入投与による。ＳＣ投与につ
いて、投与はボーラス、注入又は移植可能なデバイス、例えば移植可能なミニポ
ンプ（例えば浸透性又は機械的なミニポンプ）又は徐放性インプラントによる。
上記ＩＳＳポリヌクレオチドはＩＶ、ＩＰ、ＩＭ、ＩＤ又はＳＣ投与に適合した
徐放性製剤にデリバリーされもする。吸入による投与は個々用量（例えば測定さ
れた用量の吸入器）で好ましくは達成されるが、注入に類似したデリバリーはネ
ブライザーの使用により達成される。経皮及び経粘膜経路を介した投与は連続性
か又は拍動性である。

【０１１６】 評価 いくつかの態様において、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドの投与はＨＢＶ又はＨ
ＣＶの１以上の症状の予防、緩和、及び／又は改善をもたらす。予防、緩和又は
改善の厳密な形態は特定の肝炎ウイルス、その患者が経験した症状、及び肝炎の
ステージに依存するが、しかし１以上の身体的症状、例えば黄疸、倦怠感、腹痛
等、及び／又は肝炎に関する臨床的／検査所見、例えばウイルス血症、肝酵素の
血中レベル門脈圧亢進症、肝硬変等の軽減又は改善を含む。

【０１１７】 感染症の症状をＩＳＳ含有ポリヌクレオチドの投与前及び／又は投与後に評価
する。当業者には明らかなことだが、計測される症状及びそれらの計測の方法は
特定の肝炎ウイルス及び感染のステージに依存して変わる。急性ＨＢＶ及び／又
はＨＣＶ感染症の身体的症状は黄疸、倦怠感、腹痛、暗色尿、及び本技術分野で
知られる他の症状を含む。自覚的な身体的症状、例えば腹痛及び倦怠感を定性（
例えば有／無）ベースで又は視覚的スケール・システムを用いて定量化して計測
する。黄疸を定性ベースで又はビリルビンの血中又は血清中レベルの計測により
定量化する。

【０１１８】 肝炎に関する臨床的／検査所見を臨床試験、診断アッセイ、及び組織学的試験
を通して通常どおり計測する。例えば、肝酵素の血／血清中レベルをその個体の
血液又は血清中のＡＳＴ及びＡＬＴレベルの定量化を含む標準的な臨床検査の肝
機能パネルの試験を行うことにより定量化する。ウイルス血症（つまり、血液又
は血清サンプル中のウイルス力価）を本技術分野で知られるいずれかの方法、例
えばウイルス粒子の定量化（例えば分離及び可視化によるか又はＤＮａｓｅ抵抗
性粒子のアッセイによる）、血液又は血清サンプル中のウイルス抗原の検出、血
液又は血清サンプル中の抗ウイルス抗体の検出、並びに／又はウイルス核酸の検
出（例えばＨＢＶ又はＨＣＶ特異的プライマーを用いたＰＣＲ増幅によるか又は
ウイルス特異的プローブによるｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションによる）
により計測する。ウイルス力価を肝組織生検においても一般的にウイルス核酸の
定量化により計測するが、ウイルス抗原をウイルス力価の計算に使用することも
できる。組織サンプルからのウイルス力価を組織の単位重量当たりのウイルス粒
子で計算する。

【０１１９】 本発明のキット 本発明は本発明の方法（つまり、ＨＢＶ及び／又はＨＣＶ感染症の治療及び／
又は予防）を実施するためのキットを提供する。それ故に、さまざまなキットを
提供する。上記キットは以下のいずれか１以上のために使用される（そして、そ
れに応じて、以下の用途のいずれか１以上のための取扱説明書を含む）：Ｂ型肝
炎及び／又はＣ型肝炎に感染した個体における血中のＢ型肝炎及び／又はＣ型肝
炎の抗原レベルの減少；Ｂ型肝炎及び／又はＣ型肝炎に感染したか又はさらされ
た個体におけるウイルス血症の減少；Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎又はＢ型及びＣ型肝炎
の両方にさらされた個体におけるＢ型肝炎及び／又はＣ型肝炎感染症の１以上の
症状の予防；Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎又はＢ型及びＣ型肝炎の両方に感染した個体に
おけるＢ型肝炎及び／又はＣ型肝炎感染症の１以上の症状の重傷度の軽減；Ｂ型
肝炎、Ｃ型肝炎又はＢ型及びＣ型肝炎の両方に感染した個体におけるＢ型肝炎及
び／又はＣ型肝炎感染症の１以上の症状の進行の遅延；Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎又は
Ｂ型及びＣ型肝炎の両方に感染した個体におけるＢ型肝炎及び／又はＣ型肝炎感
染症の１以上の症状の継続期間の短縮；Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎又はＢ型及びＣ型肝
炎の両方に感染した個体における慢性Ｂ型肝炎及び／又はＣ型肝炎感染症の１以
上の症状の重傷度の軽減；Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎又はＢ型及びＣ型肝炎の両方に感
染した個体における慢性Ｂ型肝炎及び／又はＣ型肝炎感染症の１以上の症状の予
防；Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎又はＢ型及びＣ型肝炎の両方に感染した個体における慢
性Ｂ型肝炎及び／又はＣ型肝炎感染症の１以上の症状の進行の遅延；Ｂ型肝炎、
Ｃ型肝炎又はＢ型及びＣ型肝炎の両方に感染した個体における慢性Ｂ型肝炎及び
／又はＣ型肝炎感染症の１以上の症状の継続期間の短縮。本技術分野で理解され
ているとおり、これらの用途のいずれか１以上がＢ型肝炎及び／又はＣ型肝炎感
染症の治療又は予防を指示する取扱説明書に含まれるであろう。

【０１２０】 本発明のキットはＩＳＳ含有ポリヌクレオチドを含む１以上の容器、及び取扱
説明書のセットを含む、上記取扱説明書は、一般的に書面に取扱説明書であるが
、取扱説明書を含む電子記憶媒体（例えば磁気ディスケット又は光ディスク）も
利用可能であり、そして意図された治療（例えば、Ｂ型肝炎及び／又はＣ型肝炎
に感染した個体における血中のＢ型肝炎及び／又はＣ型肝炎の抗原レベルの減少
；Ｂ型肝炎及び／又はＣ型肝炎に感染したか又はさらされた個体におけるウイル
ス血症の減少；Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎又はＢ型及びＣ型肝炎の両方にさらされた個
体におけるＢ型肝炎及び／又はＣ型肝炎感染症の１以上の症状の予防；Ｂ型肝炎
、Ｃ型肝炎又はＢ型及びＣ型肝炎の両方に感染した個体におけるＢ型肝炎及び／
又はＣ型肝炎感染症の１以上の症状の重傷度の軽減；Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎又はＢ
型及びＣ型肝炎の両方に感染した個体におけるＢ型肝炎及び／又はＣ型肝炎感染
症の１以上の症状の進行の遅延；Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎又はＢ型及びＣ型肝炎の両
方に感染した個体におけるＢ型肝炎及び／又はＣ型肝炎感染症の１以上の症状の
継続期間の短縮；Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎又はＢ型及びＣ型肝炎の両方に感染した個
体における慢性Ｂ型肝炎及び／又はＣ型肝炎感染症の１以上の症状の重傷度の軽
減；Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎又はＢ型及びＣ型肝炎の両方に感染した個体における慢
性Ｂ型肝炎及び／又はＣ型肝炎感染症の１以上の症状の予防；Ｂ型肝炎、Ｃ型肝
炎又はＢ型及びＣ型肝炎の両方に感染した個体における慢性Ｂ型肝炎及び／又は
Ｃ型肝炎感染症の１以上の症状の進行の遅延；Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎又はＢ型及び
Ｃ型肝炎の両方に感染した個体における慢性Ｂ型肝炎及び／又はＣ型肝炎感染症
の１以上の症状の継続期間の短縮）についてのＩＳＳ含有ポリヌクレオチドの使
用及び用量に関する。上記キットに含まれる取扱説明書は意図される治療につい
ての用量、投薬計画、及び投与計画に関する情報を一般的に含む。ＩＳＳの容器
は単位用量、バルク包装（例えば複数回投薬包装）又はサブユニット用量である
。

【０１２１】 本発明のキットは肝炎ウイルスからのウイルス抗原を含むあらゆる包装又は容
器を含まない。上記キットは治療に使用されることを意図する。よって、Ｂ型肝
炎にさらされたか又は感染した個体での使用を意図するキットにおいてそのキッ
ト中のＩＳＳ含有ポリヌクレオチドを含む容器と他の容器はいずれもＢ型肝炎ウ
イルス抗原を含まず、Ｃ型肝炎にさらされたか又は感染した個体での使用を意図
するキットにおいて、そのキット中のＩＳＳ含有ポリヌクレオチドを含む容器と
他の容器はいずれもＣ型肝炎ウイルス抗原を含まず、そしてＢ型肝炎及びＣ型肝
炎の両方に感染した個体での使用を意図するキットにおいて、そのキット中のＩ
ＳＳ含有ポリヌクレオチドを含む容器と他の容器はいずれもＢ型肝炎又はＣ型肝
炎ウイルス抗原を含まない。

【０１２２】 上記キットのＩＳＳ成分はいずれかの都合の良い適当な包装により包装されて
いる。例えば上記ＩＳＳが凍結乾燥製剤である場合、弾性の栓を持つアンプルが
通常用いられる、なぜなら弾性の栓を通して流体を注入することでその薬剤を容
易に再構築しうるからである。非弾性の取り外し可能なふた（例えば密封された
ガラス容器）又は弾性の栓を持つアンプルがＩＳＳの注入可能な形態のために最
も慣用的に使用される。また、上記キットがＩＳＳ含有ポリヌクレオチドの液剤
により提供される場合、充填済シリンジが使用される。特定のデバイス、例えば
吸入器、鼻腔内投与デバイス（例えばアトマイザー）又は注入デバイス、例えば
ミニポンプと組合せて使用するための包装が考えられもする。

【０１２３】 上記のとおり、本明細書中に記載したあらゆるＩＳＳ含有ポリヌクレオチド、
例えば以下のＩＳＳのいずれかを含むあらゆるポリヌクレオチドが使用されうる
：配列５′−シトシン、グアニン−３′、配列５′−Ｔ、Ｃ、Ｇ−３′、配列５
′−Ｃ、Ｇ、ピリミジン、ピリミジン、Ｃ、Ｇ−３′、配列５′−プリン、プリ
ン、Ｃ、Ｇ、ピリミジン、ピリミジン、Ｃ、Ｇ−３′、配列５′−プリン、プリ
ン、Ｃ、Ｇ、ピリミジン、ピリミジン、Ｃ、Ｃ−３′；配列番号１の配列；配列
５′−プリン、プリン、Ｂ、Ｇ、ピリミジン、ピリミジン−３′、ここでＢは５
−ブロモシトシン、又は配列５′−プリン、プリン、Ｂ、Ｇ、ピリミジン、ピリ
ミジン、Ｃ、Ｇ−３′ここでＢは５−ブロモシトシン。

【０１２４】 以下の実施例を説明のために提供するが、本発明を制限するものではない。

【０１２５】 実施例 実施例１：慢性ＨＢＶ感染症の動物モデルへのＩＳＳの投与 ＩＳＳ活性を慢性肝炎のモデル動物において試験した。ＩＳＳ含有ホスホロチ
オエート・オリゴヌクレオチド（５′−TGACTGTGAACGTTCGAGATGA−３′（配列番
号１）をＳＴＣ系トランスジェニック・マウスにデリバリーし、続いてＨＢＶ
ＤＮＡ及びＨＢｓＡｇ製造の計測をした。

【０１２６】 ＳＴＣ系マウスはPatricia Marionによりスタンフォード大学で作製された。
これらのマウスの大部分はＡｙｗ遺伝子型のＨＢＶ（Galibert et al. (1979) N
ature 281: 646）を血清１ml当たり１０^6-8 ウイルス・ゲノム等量の力価まで分
泌する。ＳＴＣマウスを、ＦＶＢ系から誘導し、そしてＨＢＶゲノムＤＮＡのマ
イクロインジェクションにより構築した。ＳＴＣマウスはＨＢＶの複製を阻害す
る薬剤に対して応答性であることが示されているため、慢性ＨＢＶの優れたモデ
ルと考えられる。

【０１２７】 約１ヶ月齢のマウスを育成し、そしてウイルスＤＮＡ力価の予測となるＨＢｓ
Ａｇの血清レベルを試験した。ほぼ同じレベルのＨＢｓＡｇを持つ４０匹のＳＴ
Ｃマウスのプールを選び、そしてそれぞれ動物１０匹の４の処理群に無作為に割
り当てた。上記の群を以下のとおり処理した： １．１００μｇのＩＳＳを週１回３週間（０、７、１４日目）、皮下注射 ２．１００μｇのＩＳＳを１４日目に皮下注射 ３．１００ngのマウスＩＬ−１２を１２、１３、及び１４日目に腹腔内注射 ４．ＰＢＳを皮下注射（０、７、１４日目） 血液サンプルを０、７、１４、１５（最後のＩＬ−１２注射の２２時間後）、
１８、２８、及び３５日目に採取した。その血液サンプルから調製した血清を定
量的ＰＣＲ（Hepadnavirus Testing, Inc.に委託して行った試験）によりＨＢＶ
ＤＮＡについて、並びにAbbott Laboratories から市販の、ＨＢｓＡｇのため
のＥＩＡキットを用いてＨＢｓＡｇについて試験した。動物を３５日目に屠殺し
、そして肝臓を組織学的分析のために回収した。

【０１２８】 ＩＳＳ、マウスＩＬ−１２又はＰＢＳにより処理したＨＢＶ産生マウスにおけ
る血清ＨＢＶ ＤＮＡレベルについての定量的ＰＣＲの結果を図１にまとめる。
上記結果をそれぞれの一連のサンプルによる４の群それぞれのＨＢＶ ＤＮＡレ
ベルの平均としてプロットする。サンプルが分析者に分からないようにした。Ｉ
ＳＳ及びマウスＩＬ−１２の両方がＳＴＣマウスにおけるウイルス力価減少に有
効であった。非常に大幅な力価減少の大部分は第２群（１４日目でのＩＳＳの単
回皮下注射）で見られ、ここでその平均ウイルスＤＮＡを注射３日後に９０分の
１まで減少させた。

【０１２９】 ＩＳＳ、マウスＩＬ−１２又はＰＢＳにより処理したＨＢＶ産生マウスにおけ
る血清ＨＢｓＡｇレベルについての分析結果を図２にまとめる。上記結果をそれ
ぞれの一連のサンプルによる４の群それぞれの抗原レベルの平均としてプロット
する。そのデータはＰＢＳにより処理した対照マウスに比べＩＳＳにより処理し
た動物の平均ＨＢｓＡｇ値が減少に向かう傾向を示した。

【０１３０】 留意すべきは、ＨＢＶ産生マウスの全ての系統と同様に、一部の動物で上記観
察期間に、処理前でさえ、あるいは上記対照による処理により力価がはっきりと
減少した。−７日目のランダム化にもかかわらず、これらのマウスのより多くが
第３と第４群（それぞれＩＬ−１２と対象）で見つかり、おそらく上記ＩＳＳに
よるより劇的な効果をあいまいにしているであろう。

【０１３１】 本明細書を直接的な記載及び実施例の両方により詳細に述べてきた。本発明の
相当物及び修飾物は当業者に明白であり、そして本発明の範囲の中に含まれる。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１（Ａ）〜（Ｄ）はＳＴＣマウスへのＩＳＳ及び対照試薬の投与のウイルス
力価に対する効果を表すグラフである。示された結果は経時的（日）な血中ウイ
ルスＤＮＡ力価（１ml当たりのコピー）である。図１（Ａ）は０、７、及び１４
日目（０、１、及び２週目）でＩＳＳを注射したＳＴＣマウスについての結果を
表し；図１（Ｂ）は１４日目（２週目）だけＩＳＳを注射したＳＴＣマウスにつ
いての結果を表し；図１（Ｃ）は１２、１３、及び１４日目に１００ngのマウス
ＩＬ−１２を注射したＳＴＣマウスについての結果を表し；そして図１（Ｄ）は
０、７、及び１４日目に生理的食塩水（ＰＢＳ）を注射したＳＴＣマウスについ
ての結果を表す。エラー・バーは±標準偏差を示す。

【図２】 図２はＳＴＣマウスへのＩＳＳ及び対照試薬の投与のＢ型肝炎表面抗原（ＨＢ
ｓＡｇ）レベルに対する効果を表すグラフである。結果は経時的（日）に−１日
目での値に対する割合として示される。白ぬき四角形は０、７、及び１４日目（
０、１、及び２週目）でＩＳＳを注射したＳＴＣマウスについての結果を示し；
黒ひし形は１４日目（２週目）だけＩＳＳを注射したＳＴＣマウスについての結
果を示し；黒四角形は１２、１３、及び１４日目に１００ngのマウスＩＬ−１２
を注射したＳＴＣマウスについての結果を示し；そして白ぬきひし形は０、７、
及び１４日目に生理的食塩水を注射したＳＴＣマウスについての結果を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 43/00 １０５ Ａ６１Ｐ 43/00 １０５ // Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＯ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ， ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，Ｉ Ｓ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ， ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，Ｐ Ｔ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ， ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 アイデン，ジョセフ ジェイ．ジュニア アメリカ合衆国，カリフォルニア 94506， ダンビル，シェイドウェル ドライブ 115 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 CA05 HA19 4C084 AA02 AA03 AA13 BA35 DA01 MA13 MA17 MA22 MA24 MA27 MA34 MA56 MA59 MA63 MA65 MA66 MA67 NA14 ZA752 ZB022 ZB052 ZB092 ZB212 ZB332 ZC412 ZC542 4C086 AA01 AA02 EA16 MA01 MA04 MA13 MA17 MA22 MA24 MA27 MA34 MA56 MA59 MA63 MA65 MA66 MA67 NA14 ZA75 ZB02 ZB05 ZB09 ZB21 ZB33 ZC41 ZC54

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）に感染した個体におけるウイル
   ス血症の軽減方法であって、前記個体に免疫活性化配列（ＩＳＳ）を含むポリヌ
   クレオチドを含む組成物の投与を含み、ここで前記ＩＳＳは配列５′−Ｃ，Ｇ−
   ３′を含み、ここでＨＢＶ抗原を前記組成物と一緒に投与せず、かつ、ここで前
   記組成物をＨＢＶウイルス血症の軽減に十分な量で投与する前記方法。
2. 【請求項２】 前記ＩＳＳが配列５′−Ｔ，Ｃ，Ｇ−３′を含む、請求項１
   に記載の方法。
3. 【請求項３】 前記ＩＳＳが配列５′−プリン、プリン、Ｃ，Ｇ、ピリミジ
   ン、ピリミジン、Ｃ，Ｇ−３′又は５′−プリン、プリン、Ｃ，Ｇ、ピリミジン
   、ピリミジン、Ｃ，Ｃ−３′を含む、請求項１に記載の方法。
4. 【請求項４】 前記ＩＳＳが５′−AACGTTCC−３′，５′−AACGTTCG−３′
   ，５′−GACGTTCC−３′、及び５′−GACGTTCG−３′から成る群から選ばれる配
   列を含む、請求項３に記載の方法。
5. 【請求項５】 前記ＩＳＳが配列５′−TGACTGTGAACGTTCGAGATGA−３′（配
   列番号１）を含む、請求項１に記載の方法。
6. 【請求項６】 前記個体が哺乳動物である、請求項１に記載の方法。
7. 【請求項７】 投与を静中又は皮下に行う、請求項１に記載の方法。
8. 【請求項８】 Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）に感染した個体における肝炎ウ
   イルス抗原の血中レベルを下げる方法であって、前記個体に免疫活性化配列（Ｉ
   ＳＳ）を含むポリヌクレオチドを含む組成物の投与を含み、ここで前記ＩＳＳは
   配列５′−Ｃ，Ｇ−３′を含み、ここでＨＢＶ抗原を前記組成物と一緒に投与せ
   ず、かつ、ここで前記組成物を肝炎ウイルス抗原の血中レベルを下げるのに十分
   な量で投与する前記方法。
9. 【請求項９】 前記ＩＳＳが配列５′−Ｔ，Ｃ，Ｇ−３′を含む、請求項８
   に記載の方法。
10. 【請求項１０】 前記ＩＳＳが配列５′−プリン、プリン、Ｃ，Ｇ、ピリミ
    ジン、ピリミジン、Ｃ，Ｇ−３′又は５′−プリン、プリン、Ｃ，Ｇ、ピリミジ
    ン、ピリミジン、Ｃ，Ｃ−３′を含む、請求項８に記載の方法。
11. 【請求項１１】 前記ＩＳＳが５′−AACGTTCC−３′，５′−AACGTTCG−３
    ′，５′−GACGTTCC−３′、及び５′−GACGTTCG−３′から成る群から選ばれる
    配列を含む、請求項１０に記載の方法。
12. 【請求項１２】 前記ＩＳＳが配列５′−TGACTGTGAACGTTCGAGATGA−３′（
    配列番号１）を含む、請求項８に記載の方法。
13. 【請求項１３】 前記個体が哺乳動物である、請求項８に記載の方法。
14. 【請求項１４】 投与を静中又は皮下に行う、請求項８に記載の方法。
15. 【請求項１５】 前記肝炎ウイルス抗原がＨＢｓＡｇである、請求項８に記
    載の方法。
16. 【請求項１６】 ＨＢＶに感染したか又はさらされた個体におけるウイルス
    血症の軽減のためのキットであって、免疫活性化配列（ＩＳＳ）を含むポリヌク
    レオチドを含む組成物を含み、ここで前記ＩＳＳは配列５′−Ｃ，Ｇ−３′を含
    み、ここで前記キットはＨＢＶ抗原を含まず、かつ、ここで前記キットはウイル
    ス血症を軽減するためのＨＢＶに感染したか又はさらされた個体への前記組成物
    の投与についての取扱説明書を含む前記キット。
17. 【請求項１７】 前記ＩＳＳが配列５′−Ｔ，Ｃ，Ｇ−３′を含む、請求項
    １６に記載のキット。
18. 【請求項１８】 前記ＩＳＳが配列５′−プリン、プリン、Ｃ，Ｇ、ピリミ
    ジン、ピリミジン、Ｃ，Ｇ−３′又は５′−プリン、プリン、Ｃ，Ｇ、ピリミジ
    ン、ピリミジン、Ｃ，Ｃ−３′を含む、請求項１６に記載のキット。
19. 【請求項１９】 前記ＩＳＳが配列５′−AACGTTCG−３′を含む、請求項１
    ８に記載のキット。
20. 【請求項２０】 前記ＩＳＳが配列５′−TGACTGTGAACGTTCGAGATGA−３′（
    配列番号１）を含む、請求項１６に記載のキット。