JP2003524413A - プラスミノーゲン様ポリヌクレオチド、ポリペプチド、および抗体 - Google Patents

プラスミノーゲン様ポリヌクレオチド、ポリペプチド、および抗体

Info

Publication number
JP2003524413A
JP2003524413A JP2001527814A JP2001527814A JP2003524413A JP 2003524413 A JP2003524413 A JP 2003524413A JP 2001527814 A JP2001527814 A JP 2001527814A JP 2001527814 A JP2001527814 A JP 2001527814A JP 2003524413 A JP2003524413 A JP 2003524413A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
polypeptide
sequence
polynucleotide
antibody
polypeptides
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
JP2001527814A
Other languages
English (en)
Inventor
ジアン ニ，
ポール イー． ヤング，
スティーブン エム． ルーベン，
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Human Genome Sciences Inc
Original Assignee
Human Genome Sciences Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Human Genome Sciences Inc filed Critical Human Genome Sciences Inc
Publication of JP2003524413A publication Critical patent/JP2003524413A/ja
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/6435—Plasmin (3.4.21.7), i.e. fibrinolysin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21007—Plasmin (3.4.21.7), i.e. fibrinolysin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/968—Plasmin, i.e. fibrinolysin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)

Abstract

(57)【要約】 本発明は、新規なヒトプラスミノーゲン様ポリペプチドに関し、そしてこのようなポリペプチドをコードする遺伝子のコード領域を含む単離された核酸に関する。本発明はまた、ヒトプラスミノーゲン様レセプターポリペプチドを産生するためのベクター、宿主細胞、抗体、および組換方法を提供する。本発明はさらに、これらの新規なヒトプラスミノーゲン様ポリペプチドに関する障害を診断および処置するために有用な診断方法に関し、そして本発明はさらにこのような障害の治療方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （発明の分野） 本発明は、新規なプラスミノーゲン様タンパク質に関する。より詳細には、新
規なプラスミノーゲン様ポリペプチドをコードする単離された核酸分子が提供さ
れる。新規なプラスミノーゲン様ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに結
合する抗体が提供される。また、ヒトプラスミノーゲン様ポリヌクレオチドおよ
び／またはポリペプチドを産生するためのベクター、宿主細胞、ならびに組換え
方法および合成方法が提供される。本発明はさらに、これらの新規なプラスミノ
ーゲン様ポリペプチドに関する障害を診断、処置、予防および／または予測する
のに有用な診断方法および治療方法に関する。本発明はさらに、本発明のポリヌ
クレオチドおよびポリペプチドのアゴニストおよびアンタゴニストを同定するた
めのスクリーニング方法に関する。本発明はさらに、本発明のポリペプチドの産
生および機能を阻害する方法および／または組成物に関する。
【０００２】 （発明の背景） 止血は、フィブリン溶解の逆の作用および血液凝固を通じて維持される。血餅
の形成は、傷害および外傷に対する身体の自然な反応の一部である。血餅形成は
、プロトロンビン性酵素トロンビンを生じる、凝血経路を通じて維持される。ト
ロンビンは、循環中のフィブリノーゲンをフィブリン（血餅の骨組みを形成する
フィブリノーゲンの不溶性ポリマーである）に変換する。得られた血餅は、傷害
または外傷（例えば、切断または組織創傷）の部位からの血液の流れを止めるよ
うに働く（Ｈ．Ａ．Ｃｈａｐｍａｎ、Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌｏｇｙ，９：７１４〜
２４（１９９７））。
【０００３】 傷害の部位から血液の停止を促進することにおいては利点があるが、身体の不
適切な部位での血餅の形成は、有害な作用をも生じ得る。特に危険な血餅の例と
しては、環系のいずれかの場所での形成部位から剥がれてきた、浮遊している（
ｆｒｅｅ−ｆｌｏａｔｉｎｇ）血餅から生じる塞栓症が挙げられる。浮遊血餅か
ら生じる塞栓症は、発作および心臓麻痺などの病理を生じ得る。さらに、このよ
うな血餅は、循環系のより小さいチャネルに引っ掛かり、循環系通路の狭窄また
は狭小化を生じ得る。このような狭窄は、身体の特別な器官または領域に対する
血液の流れを減じ得る。
【０００４】 血餅形成に反対する自然の過程は、フィブリン溶解であり、ここで血餅は可溶
化されて正常な血流を回復する。フィブリン溶解の主な媒介物（メディエーター
）は、不活性な酵素前駆体であるプラスミノーゲンである。プラスミノーゲンは
、加水分解されて、活性な２本鎖セリンプロテアーゼであるプラスミンを生じる
。プラスミンは、ペプチド結合切断において求核原子としてセリンを使用するタ
ンパク質のキモトリプシンスーパーファミリーのメンバーである。プラスミノー
ゲンは、プラスミノーゲン中のａｒｇ５６０−ｖａｌ５６１ペプチド結合の加水
分解により活性化されてプラスミンを形成する。この加水分解は、天然に存在す
る「プラスミノーゲンアクチベータ（活性化因子）」であるウロキナーゼプラス
ミノーゲンアクチベータ（ｕ−ＰＡ）、およびヒト組織プラスミノーゲン活性化
因子（ｔ−ＰＡ）によって、そしてストレプトキナーゼおよびスタフィロキナー
ゼタンパク質によって行われる。
【０００５】 フィブリン溶解に加えて、プラスミンは、細胞外マトリックス変性、組織再構
築、細胞遊走、神経細胞遊走、炎症、脈管形成、および創傷治癒のようないくつ
かの他の生理学的プロセスに関している（Ｂｕｇｇｅ、Ｔ．Ｈ．ら、Ｃｅｌｌ，
８７：７０９〜１９（１９９６））。同様に、プラスミンは、広範な基質特異性
を有し、そしてインビトロでいくつかの共通の細胞外マトリックス糖タンパク質
を分解することが公知であると考えられる（Ｂｕｇｇｅ、Ｔ．Ｈ．ら（１９９６
））。
【０００６】 プラスミンに対するプラスミノーゲンの活性化は、プラスミノーゲン活性化因
子阻害剤（ＰＡＩ）１型（プラスミノーゲン活性化因子ｕ−ＰＡおよびｔ−ＰＡ
の活性を阻害する）のようなセリンプロテアーゼ阻害剤の活性によって、厳密に
調節される（Ｃｈａｐｍａｎ、Ｈ．Ａ．（１９９７））。例えば、ＰＡＩ−１は
、約５０ｋｄの糖タンパク質であり、心筋梗塞の生還者由来の血漿のフィブリン
溶解能の低下の原因として考えられる（Ｈａｍｓｔｅｎ，Ａら、Ｎｅｗ Ｅｎｇ
．Ｊ．Ｍｅｄ．，３１３：１５５７〜１５６３（１９８５）；Ｐａｎｎｅｋｏｅ
ｋ，Ｈら、ＥＭＢＯ Ｊ．，５：２５３９〜２５４４（１９８６）；Ｇｉｎｓｂ
ｅｒｇ，Ｄら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，７８：１６７３〜１６８０）１
９８０））。
【０００７】 従って、セリンプロテアーゼのプラスミノーゲン様キモトリプシンファミリー
の新規なメンバーを同定および利用する必要性が明確に存在する。構造的に関連
するが、このようなタンパク質は、種々の細胞型および組織型において多様でか
つ多面的な機能を保有し得る。本発明の精製されたプラスミノーゲン様ポリペプ
チドは、さらなるプラスミノーゲン活性化分子の同定、特徴付け、および精製の
ために有用な検索ツールである。さらに、新しいセリンプロテアーゼの同定によ
り、多くの他の状態のうちでも、癌、炎症、神経学的障害および血液凝固障害の
ような範囲の状態を処置および診断するのにおいて適用を有する核酸およびタン
パク質のレベルで、誘導体、アゴニストおよびアンタゴニストの範囲の開発が可
能になる。
【０００８】 （発明の要旨） 本発明は、配列表に開示のポリヌクレオチド配列ならびに／または表１に記載
のヒトｃＤＮＡプラスミドに含まれるポリヌクレオチド配列、およびＡｍｅｒｉ
ｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に寄託
されたポリヌクレオチド配列を含むか、またはこれらから構成される単離された
核酸分子を包含する。これらの核酸分子のフラグメント、改変体および誘導体も
また、本発明により包含される。本発明はまた、プラスミノーゲン様ポリペプチ
ドをコードするポリヌクレオチドを含むか、またはこのポリヌクレオチドから構
成される単離された核酸分子を包含する。本発明はさらに、これらのポリヌクレ
オチドによりコードされるプラスミノーゲン様ポリペプチドを含む。配列表に開
示のプラスミノーゲン様ポリペプチドならびに／または表１に記載のヒトｃＤＮ
Ａプラスミドにコードされたプラスミノーゲン様ポリペプチド、およびＡＴＣＣ
に寄託されたプラスミノーゲン様ポリペプチドを含むか、またはこれらから構成
されるアミノ酸配列がさらに提供される。これらのポリペプチドに結合する抗体
はまた、本発明により包含される。これらのアミノ酸配列のポリペプチドフラグ
メント、改変体および誘導体はまた、これらのポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチドおよびこれらのポリペプチドに結合する抗体がそうであるように、本
発明により包含される。
【０００９】 （詳細な説明） （表） 表１は、本出願に関連してＡＴＣＣに寄託された、ＡＴＣＣ寄託物、寄託日、
およびＡＴＣＣ指定番号をまとめる。表１はさらに、以下に記載の各々の「遺伝
子番号（Ｇｅｎｅ Ｎｏ）」の付随する情報をまとめる。この情報には、ｃＤＮ
Ａクローン識別子（ＩＤ）、ｃＤＮＡクローン識別子（ＩＤ）に含まれるベクタ
ーの型、ヌクレオチド配列識別子番号、開示された配列に含まれるヌクレオチド
、開示された配列の開始コドンの５’ヌクレオチドの位置、アミノ酸配列識別子
番号、および開示された配列によりコードされるＯＲＦの最後のアミノ酸を含む
。
【００１０】 表２は、公的なＥＳＴを示す。これらの公的ＥＳＴ配列の任意の１つ以上の少
なくとも１、２、３、４、５、１０またはそれ以上が、本発明の特定の実施形態
から必要に応じて除外される。
【００１１】 表３は、表１に開示されるクローンに対応するポリヌクレオチドの発現プロフ
ィールをまとめる。１列目は、表１に開示される各コンティグ配列に関するｃＤ
ＮＡクローンについての、特定のクローン識別子「クローン番号Ｚ」を提供する
。２列目の「ライブラリーコード」は、本発明のポリヌクレオチドを発現する組
織および/または細胞株のライブラリーの発現プロフィールを示す。第２列の各
ライブラリーのコードは、表４に提供されるライブラリーコードおよびライブラ
リーの詳細（Ｌｉｂｒａｒｙ ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ）に対応する組織／細胞
供給源の識別子コードを示す。これらのポリヌクレオチドの発現は、試験した他
の組織および／または細胞ライブラリーにおいては観察されなかった。当業者は
、慣用的に、この情報を用いて、本発明の対応するポリヌクレオチドの優勢な発
現パターンを示す組織を同定するか、または優勢なおよび／または特異的な組織
発現を示すポリヌクレオチドを同定し得る。
【００１２】 表４の第１列は、表３の２列目に開示されたライブラリーコードを提供する。
２列目は、対応するライブラリーが誘導された組織または細胞の供給源の詳細を
提供する。
【００１３】 （定義） 以下の定義は、本明細書を通じて使用される特定の用語の理解を容易にするた
めに提供される。
【００１４】 本発明において、「単離された」とは、その本来の環境（例えば、それが天然
に存在する場合は天然の環境）から取り出された物質をいい、したがって、天然
の状態から「人間の手によって」変更されている。例えば、単離されたポリヌク
レオチドは、ベクターまたは組成物の一部であり得るか、あるいは細胞中に含ま
れ得、そしてなお「単離される」。なぜなら、ベクター、組成物、または特定の
細胞は、ポリヌクレオチドの本来の環境ではないからである。用語「単離された
」とは、ゲノムライブラリーまたはｃＤＮＡライブラリー、全細胞調製物または
ｍＲＮＡ調製物、ゲノムＤＮＡ調製物（電気泳動によって分離され、そしてブロ
ッティング上に移されたものを含む）、共有された全細胞ゲノムＤＮＡ調製物、
または他の組成物（当業者には本発明のポリヌクレオチド／配列の特徴と識別不
能である）を言わない。
【００１５】 本明細書で使用される「ポリヌクレオチド」とは、配列番号Ｘに含まれる核酸
配列を有する分子（表１の第５列に記載）、またはｃＤＮＡプラスミド：Ｚ（表
１の第３列に記載され、そしてＡＴＣＣに寄託されたプラスミドのプール内に含
まれる）に含まれる核酸配列をいう。例えば、ポリヌクレオチドは、５’および
３’非翻訳配列、天然もしくは人工のシグナル配列を含むかもしくは含まないコ
ード領域、タンパク質コード領域を含む全長ｃＤＮＡ配列のヌクレオチド配列、
ならびにこの核酸配列のフラグメント、エピトープ、ドメイン、および改変体を
含み得る。さらに、本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」とは、広く定
義される場合、本発明のポリヌクレオチドによりコードされるアミノ酸配列を有
する分子をいう（ｃＤＮＡに対応する配列のポリＡテールの翻訳から生じるポリ
−フェニルアラニンまたはポリリジンペプチド配列は明らかに除外する）。
【００１６】 本発明において、配列番号Ｘの配列を含む代表的プラスミドは、アメリカンタ
イプカルチャーコレクション（「ＡＴＣＣ」）に寄託されているか、および／ま
たは表１に記載している。表１に示すように、各プラスミドは、ｃＤＮＡクロー
ンＩＤ（識別子）およびＡＴＣＣ寄託番号（ＡＴＣＣ受託番号：Ｚ）によって同
定される。プールされ，単一の寄託物として寄託されたプラスミドは、同じＡＴ
ＣＣ受託番号を有する。ＡＴＣＣは、アメリカ合衆国、バージニア２０１１０−
２２０９、マナサス、Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ大学 １０８０１に位置する。ＡＴＣ
Ｃ寄託は、特許手続上の微生物の寄託の国際承認に関するブダペスト条約の条項
によって行われた。
【００１７】 本発明の「ポリヌクレオチド」はまた、ストリンジェントなハイブリダイゼー
ション条件下で、配列番号Ｘに含まれる配列、その相補体（例えば、本明細書に
記載のポリヌクレオチドフラグメントの任意の１、２、３、４またはそれ以上の
相補体）、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺに含まれた配列（例えば、本明
細書に記載のポリヌクレオチドフラグメントの任意の１、２、３、４またはそれ
以上の相補体）にハイブリダイズし得るそれらのポリヌクレオチドを含む。「ス
トリンジェントなハイブリダイゼーション条件」とは、５０％ホルムアミド、５
×ＳＳＣ（７５０ｍＭ ＮａＣｌ、７５ｍＭクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭリ
ン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×Ｄｅｎｈａｒｄｔ溶液、１０％硫酸デキス
トラン、および２０μｇ／ｍｌ変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中での４２℃
での一晩インキュベーション、次いで０．１×ＳＳＣ中で約６５℃にてフィルタ
ーを洗浄することをいう。
【００１８】 より低いストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件で本発明のポリヌ
クレオチドにハイブリダイズする核酸分子もまた本発明の「ポリヌクレオチド」
のうちであると意図される。ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーおよ
びシグナル検出の変化は、主として、ホルムアミド濃度（より低い百分率のホル
ムアミドが、低下したストリンジェンシーを生じる）；塩条件、または温度の操
作によって達成される。例えば、より低いストリンジェンシー条件は、６×ＳＳ
ＰＥ（２０×ＳＳＰＥ＝３Ｍ ＮａＣｌ；０．２Ｍ ＮａＨ2ＰＯ4；０．０２Ｍ
ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）、０．５％ ＳＤＳ、３０％ホルムアミド、１００μ
ｇ／ｍｌサケ精子ブロッキングＤＮＡを含む溶液中での３７℃で一晩のインキュ
ベーション；次いで１×ＳＳＰＥ、０．１％ ＳＤＳを用いた５０℃での洗浄を
含む。さらに、さらになおより低いストリンジェンシーを達成するために、スト
リンジェントなハイブリダイゼーション後に実施される洗浄は、より高い塩濃度
（例えば、５×ＳＳＣ）で行われ得る。
【００１９】 上記の条件における変化が、ハイブリダイゼーション実験においてバックグラ
ウンドを抑制するために使用される代替的なブロッキング試薬の包含および／ま
たは置換によって達成され得ることに留意すること。代表的なブロッキング試薬
としては、Ｄｅｎｈａｒｄｔ試薬、ＢＬＯＴＴＯ、ヘパリン、変性サケ精子ＤＮ
Ａ、および市販の専売処方物が挙げられる。特異的なブロッキング試薬の包含は
、適合性の問題に起因して、上記のハイブリダイゼーション条件の改変を必要と
し得る。
【００２０】 当然ながら、ポリＡ＋配列（例えば、配列表に示されるｃＤＮＡの任意の３’
末端ポリＡ＋領域（ｔｒａｃｔ））に、またはＴ（もしくはＵ）残基の相補的ス
トレッチにのみハイブリダイズするポリヌクレオチドは、このようなポリヌクレ
オチドが、ポリ（Ａ）ストレッチまたはその相補体（例えば、プライマートシテ
オリゴｄＴを用いて生成される、事実上任意の二本鎖ｃＤＮＡクローン）を含む
任意の核酸分子にハイブリダイズするので、「ポリヌクレオチド」の定義に包含
されない。
【００２１】 本発明のポリヌクレオチドは、任意のポリリボヌクレオチドまたはポリデオキ
シリボヌクレオチドから構成され得、これは、非改変ＲＮＡもしくは非改変ＤＮ
Ａまたは改変ＲＮＡもしくは改変ＤＮＡであり得る。例えば、ポリヌクレオチド
は、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖および二本鎖領域の混合物であるＤＮＡ
、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、ならびに一本鎖および二本鎖領域の混合物である
ＲＮＡ、一本鎖、またはより代表的には二本鎖もしくは一本鎖および二本鎖領域
の混合物であり得るＤＮＡおよびＲＮＡを含むハイブリッド分子から構成され得
る。さらに、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡもしくはＤＮＡ、またはＲＮＡおよび
ＤＮＡの両方を含む三本鎖領域から構成され得る。ポリヌクレオチドはまた、安
定性のために、または他の理由のために改変された１つ以上の改変された塩基ま
たはＤＮＡもしくはＲＮＡ骨格を含み得る。「改変された」塩基としては、例え
ば、トリチル化された塩基およびイノシンのような通常でない塩基が挙げられる
。種々の改変が、ＤＮＡおよびＲＮＡに対してなされ得；従って、「ポリヌクレ
オチド」は、化学的、酵素的、または代謝的に改変された形態を含む。
【００２２】 特定の実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、少なくとも１５、少
なくとも３０、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なく
とも５００または少なくとも１０００個の連続するヌクレオチドであるが、長さ
が３００ｋｂ、２００ｋｂ、１００ｋｂ、５０ｋｂ、１５ｋｂ、１０ｋｂ、７．
５ｋｂ、５ｋｂ、２．５ｋｂ、２．０ｋｂまたは１ｋｂ以下である。さらなる実
施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、本明細書において開示される場
合、コード配列の一部を含むが、任意のイントロンの全てまたは一部を含まない
。別の実施形態において、コード配列を含むポリヌクレオチドは、ゲノム隣接遺
伝子（すなわち、ゲノムにおける目的の遺伝子に対して５’側または３’側）の
コード配列を含まない。他の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、１０
００、５００、２５０、１００、５０、２５、２０、１５、１０、５、４、３、
２、または１より多いゲノム隣接遺伝子コード配列を含まない。
【００２３】 「配列番号Ｘ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｘ）」とは、表１の第５列に記載のポリ
ヌクレオチド配列をいうが、「配列番号Ｙ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｙ）」とは、
表１の第１０列に記載のポリペプチド配列をいう。配列番号Ｘは、表１の第６列
に特定された整数によって識別される。配列番号Ｙのポリペプチド配列は、配列
番号Ｘのポリヌクレオチドによりコードされるオープンリーディングフレーム（
ＯＲＦ）の翻訳産物である。このポリヌクレオチド配列は、配列表に示されてお
り、その直後に全てのポリペプチド配列を示す。従って、配列番号２のポリヌク
レオチド配列に対応するポリペプチド配列は、配列表に示される第１のポリペプ
チド配列である。第２のポリペプチド配列は、配列番号３に示されるポリヌクレ
オチド配列などに対応する。
【００２４】 本発明のポリペプチドは、ペプチド結合または改変されたペプチド結合、すな
わち、ペプチドアイソスター（ｉｓｏｓｔｅｒｅ）によって互いに連結したアミ
ノ酸から構成され得、そして遺伝子がコードする２０個のアミノ酸以外のアミノ
酸を含み得る。このポリペプチドは、翻訳後プロセシングのような天然のプロセ
スによって、または当該分野で周知の化学的改変技術によってのいずれかで改変
され得る。このような改変は、基本的教科書、およびより詳細な研究論文、なら
びに多くの研究文献に十分記載される。改変は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖、
およびアミノ末端またはカルボキシル末端を含むポリペプチドのいずれの箇所で
も生じ得る。同じ型の改変が、所定のポリペプチド中のいくつかの部位で同じま
たは種々の程度で存在し得ることが理解される。また、所定のポリペプチドは多
くの型の改変を含み得る。ポリペプチドは、例えば、ユビキチン化の結果として
分枝状であり得、そしてポリペプチドは、分枝を含むかまたは含まない環状であ
り得る。環状、分枝状および分枝した環状ポリペプチドは、天然の翻訳後プロセ
スから生じ得るか、または合成方法によって作製され得る。改変としては、アセ
チル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム
部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質また
は脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化
、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合架橋の形成、システインの形成
、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、
ＧＰＩアンカー形成、水酸化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、ペ
グ化（ＰＥＧ化：ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）、タンパク質分解プロセシング、リン
酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化のようなタ
ンパク質へのアミノ酸のトランスファーＲＮＡ媒介の付加、およびユビキチン化
が挙げられる。（例えば、ＰＲＯＴＥＩＮＳ−ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ ＡＮＤ Ｍ
ＯＬＥＣＵＬＡＲ ＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ， 第２版， Ｔ．Ｅ． Ｃｒｅｉｇ
ｈｔｏｎ， Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ （１９９３）；ＰＯＳＴＴＲＡＮＳＬＡＴＩＯＮＡＬ ＣＯＶＡＬＥ
ＮＴ ＭＯＤＩＦＩＣＡＴＩＯＮ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮＳ， Ｂ．Ｃ． Ｊｏ
ｈｎｓｏｎ編， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １−
１２頁 （１９８３）；Ｓｅｉｆｔｅｒら， Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ １８
２：６２６−６４６ （１９９０）；Ｒａｔｔａｎら， Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａ
ｄ Ｓｃｉ ６６３：４８−６２ （１９９２）を参照のこと）。
【００２５】 本発明のポリぺプチドは、任意の適切な様式で調製され得る。このようなポリ
ぺプチドとしては、単離された天然に存在するポリぺプチド、組換えによって生
成されたポリぺプチド、合成によって生成されたポリぺプチド、またはこれらの
方法の組合せによって生成されたポリぺプチドが挙げられる。このようなポリぺ
プチドを調製するための手段は、当該分野において十分に理解される。
【００２６】 このポリぺプチドは、分泌タンパク質の形態（成熟形態を含む）であり得るか
、またはより大きなタンパク質（例えば、融合タンパク質）の部分であり得る（
以下を参照のこと）。分泌配列またはリーダー配列、プロ配列、精製を補助する
配列（例えば、複数のヒスチジン残基）、あるいは組換え生成の間の安定性のた
めのさらなる配列を含む、さらなるアミノ酸配列を含むことは、しばしば有利で
ある。
【００２７】 本発明のポリぺプチドは、好ましくは、単離された形態で提供され、そして好
ましくは実質的に精製される。ポリぺプチド（分泌ポリぺプチドを含む）の組換
えによって生成されたバージョン（ｖｅｒｓｉｏｎ）は、本明細書に記載される
か、そうでなければ当該分野で公知の技術、例えば、ＳｍｉｔｈおよびＪｏｈｎ
ｓｏｎ、Ｇｅｎｅ ６７：３１−４０（１９８８）に記載される１工程の方法に
よって実質的に精製され得る。本発明のポリぺプチドはまた、本明細書に記載さ
れているかまたは当該分野で公知である方法（例えば、当該分野において周知で
ある方法、本発明のポリペプチドに対して惹起された本発明の抗体）を使用して
、天然のまたは組換えの供給源から精製され得る。
【００２８】 「機能的活性」を示すポリペプチドとは、本発明のタンパク質の全長（完全）
ポリペプチドと関連した１つ以上の公知の機能的活性を示し得るポリペプチドを
意味する。このような機能的活性としては、生物学的活性、抗原性［本発明のポ
リペプチドに対する抗体に結合する（または結合することについて、本発明のポ
リペプチドと競合する）能力］、免疫原性（本発明のポリペプチドに結合する抗
体を生成する能力）、本発明のポリペプチドとマルチマーを形成する能力、およ
び本発明のポリペプチドについてのレセプターまたはリガンドに結合する能力が
挙げられるが、これらに限定されない。
【００２９】 「機能的活性を有するポリペプチド」とは、本発明のポリペプチドの活性と類
似の活性であるが、その活性と必ずしも同一でない活性を示すポリペプチド（用
量依存性ありまたはなしで、特定のアッセイ（例えば、生物学的アッセイ）にお
いて測定されるような、成熟型を含む）をいう。用量依存性が存在する場合、用
量依存性は、そのポリペプチドの用量依存性と同一である必要はなく、むしろ本
発明のポリペプチドと比較した所定の活性における用量依存性と実質的に類似で
ある（すなわち、候補ポリペプチドは、本発明のポリペプチドと比較してより高
い活性、すなわち約１／２５以上、好ましくは１／１０以上、そして最も好まし
くは、約１／３以上の活性を示す。
【００３０】 ポリペプチド、ならびにそのフラグメント、改変体、誘導体、およびアナログ
の機能的活性は、種々の方法によってアッセイされ得る。
【００３１】 例えば、全長ポリペプチド抗体に対する抗体の結合について本発明の全長ポリ
ペプチドと結合または競合する能力についてアッセイする１つの実施形態におい
て、当該分野で公知の種々のイムノアッセイ系が使用され得、これらのアッセイ
系には、例えば、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定法
）、「サンドウィッチ」イムノアッセイ、免疫ラジオメトリック測定法、ゲル拡
散沈降反応、免疫拡散アッセイ、インサイチュイムノアッセイ（例えば、コロイ
ド状金、酵素標識または放射性同位元素標識を使用する）、ウェスタンブロット
、沈降反応、凝集アッセイ（例えば、ゲル凝集アッセイ、血球凝集アッセイ）、
補体結合アッセイ、免疫蛍光アッセイ、プロテインＡアッセイ、および免疫電気
泳動アッセイなどのような技術を使用する競合的および非競合的アッセイ系が含
まれるがこれらに限定されない。１つの実施形態において、抗体結合は、一次抗
体上の標識を検出することにより検出される。別の実施形態において、一次抗体
は、二次抗体の結合または一次抗体に対する試薬を検出することによって検出さ
れる。さらなる実施形態において、二次抗体が標識される。イムノアッセイにお
ける結合を検出するための多くの手段が当該分野において公知であり、そして本
発明の範囲内にある。
【００３２】 別の実施形態において、リガンドが同定されるか、または本発明のポリペプチ
ドフラグメント、改変体、または誘導体をマルチマー化する能力が評価される場
合、結合は、例えば、当該分野で周知の手段（例えば、還元または非還元ゲルク
ロマトグラフィー、タンパク質アフィニティークロマトグラフィー、およびアフ
ィニティーブロッティング）によってアッセイされ得る。一般的には、Ｐｈｉｚ
ｉｃｋｙ，Ｅ．ら、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．５９：９４−１２３（１９９
５）を参照のこと。別の実施形態において、その基質に結合する本発明の生理学
的に相関するポリペプチド（シグナル伝達）がアッセイされ得る。
【００３３】 さらに、本明細書中に記載されるアッセイ（実施例を参照のこと）およびさも
なくば当該分野で公知のアッセイが、慣用的に、本発明のポリペプチドならびに
そのフラグメント、改変体、誘導体、およびアナログの、ポリペプチド関連生物
学的活性（インビトロまたはインビボのいずれかにおいて）を誘発する能力を測
定するために適用され得る。他の方法は、当業者に公知であり、そして本発明の
範囲にある。
【００３４】 （本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチド） （遺伝子番号１によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子に対応する翻訳産物は、精液から単離されたヒトセリンプロテアー
ゼ分子であるプロスタシンと配列相同性を共有する（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ａ
ＡＢ１９０７１を参照のこと）。
【００３５】 本発明の翻訳産物をコードする遺伝子は、セリンプロテアーゼである。セリン
プロテアーゼヒスチジン活性部位ドメインを検出するため、以下のコンセンサス
パターンが開発された（Ｓｗｉｓｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｉｎｆ
ｏｒｍａｔｉｃｓ）：［ＬＩＶＭ］−［ＳＴ］−Ａ−［ＳＴＡＧ］−Ｈ−Ｃ［Ｈ
は、活性部位残基］。本発明の好ましいポリペプチドは、以下のアミノ酸配列：
ＬＴＡＡＨＣ（配列番号６）を含むか、あるいはこのようなアミノ酸配列から構
成される。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた、これら
のポリペプチドの１つ以上に結合する抗体がそうであるように、本発明によって
包含される。さらに、これらのポリペプチドのフラグメントおよび改変体（例え
ば、本明細書に記載のフラグメント、これらのポリペプチドに少なくとも、８０
％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である
ポリペプチド、およびこれらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドにス
トリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードさ
れるポリペプチド、またはその相補体など）が、本発明により包含される。本発
明のこれらのフラグメントおよび改変体に結合する抗体がまた、本発明により包
含される。これらのフラグメントおよび改変体をコードするポリヌクレオチドは
また、本発明により包含される。さらに好ましいのは、配列番号６のセリンプロ
テアーゼヒスチジン活性部位ドメイン、および配列番号４の少なくとも５、１０
、１５、２０、２５、３０、５０または７５のさらなる連続するアミノ酸残基を
含むポリペプチドである。このさらなる連続するアミノ酸残基は、セリンプロテ
アーゼヒスチジン活性部位ドメインのＮ末端またはＣ末端であり得る。あるいは
、さらなる連続するアミノ酸残基は、セリンプロテアーゼヒスチジン活性部位ド
メインのＮ末端およびＣ末端の両方であり得、ここで連続するアミノ酸残基のＮ
末端およびＣ末端の総数は、特定の数に等しい。
【００３６】 特定の実施形態において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列：Ｑ
ＧＤＳＧＧＰＬＴＣＬＱＳＧＳＷＶＬＶＧＶＶＳＷＧＫＧＣＡＬＰＮＲＰＧＶＹ
ＴＳＶＡＴＹＳＰＷＩＱＡＲＶＳ（配列番号７）を含むか、あるいはこのような
アミノ酸配列から構成される。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオ
チドはまた、これらのポリペプチドの１つ以上に結合する抗体がそうであるよう
に、本発明によって包含される。さらに、これらのポリペプチドのフラグメント
および改変体（例えば、本明細書に記載のフラグメント、これらのポリペプチド
に少なくとも、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％また
は９９％同一であるポリペプチド、およびこれらのポリペプチドをコードするポ
リヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオ
チドによりコードされるポリペプチド、またはその相補体など）が、本発明によ
り包含される。本発明のこれらのフラグメントおよび改変体に結合する抗体がま
た、本発明により包含される。これらのフラグメントおよび改変体をコードする
ポリヌクレオチドはまた、本発明により包含される。
【００３７】 本発明の好ましいポリペプチドは、配列番号４において残基：Ａｒｇ−４１〜
Ｇｌｕ−４７、Ｐｒｏ−１１６〜Ａｒｇ−１２４、Ｇｌｙ−１５１〜Ｇｌｙ−１
５７、Ｐｒｏ−２２０〜Ａｌａ−２２６、Ｔｈｒ−２３１〜Ｇｌｎ−２４４、お
よびＰｒｏ−２４６〜Ｇｌｎ−２６１として示される免疫原性エピトープのうち
１、２、３、４、５、６、または６つ全てを含むかあるいはこのようなエピトー
プから構成される。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた
、これらのポリペプチドの１つ以上に結合する抗体がそうであるように、本発明
によって包含される。さらに、これらのポリペプチドのフラグメントおよび改変
体（例えば、本明細書に記載のフラグメント、これらのポリペプチドに少なくと
も、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同
一であるポリペプチド、およびこれらのポリペプチドをコードするポリヌクレオ
チドにストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドにより
コードされるポリペプチド、またはその相補体など）が、本発明により包含され
る。本発明のこれらのフラグメントおよび改変体に結合する抗体がまた、本発明
により包含される。これらのフラグメントおよび改変体をコードするポリヌクレ
オチドはまた、本発明により包含される。
【００３８】 この遺伝子は、好酸球および上皮組織および創傷治癒組織において、ならびに
Ｔ細胞および初代樹状細胞において発現される。
【００３９】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチド（抗体を含む）は、生
物学的サンプル中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに以
下：免疫系、血管および創傷治癒の疾患および／または障害を含むが、これらに
限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポ
リペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示
差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、
特に免疫系、血管組織、および創傷治癒に関する組織の多くの障害に関して、標
準の遺伝子発現レベル（すなわち、この障害を有さない個体由来の健常組織また
は体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺
伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは
細胞型（例えば、免疫組織、血管組織、創傷治癒組織、癌性組織および創傷組織
）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄液）または別の
組織もしくはサンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【００４０】 免疫組織、血管組織、および創傷治癒組織における組織分布、ならびにヒトセ
リンプロテアーゼプロスタチンに対する相同性は、この遺伝子に対応するポリヌ
クレオチド、翻訳産物および抗体が、免疫系、血管、および創傷治癒組織の疾患
および／または障害の診断、検出、および／または処置のために有用であること
を示す。組織分布によって、この遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物
および抗体が、血管に関する障害の診断および／または処置に有用であることが
示唆される。この遺伝子に対応する翻訳産物の発現の上昇は、これらの翻訳産物
が内皮細胞機能；分泌；増殖；または脈管形成の調節において重要な役割を果た
し得ることを示唆する。あるいは、このことは、この遺伝子産物が内皮で発現さ
れて、種々の標的器官上の離れた作用の部位に輸送されることを示し得る。
【００４１】 同様に、創傷治癒組織におけるこの遺伝子の発現により、この遺伝子の翻訳産
物が、適切な創傷治癒、血餅分解、細胞外マトチックス分解、および組織再構築
に関与し得ることが示唆される。
【００４２】 好酸球におけるこの遺伝子の発現により、この遺伝子に対応する翻訳産物、な
らびにアンタゴニストおよび／またはアゴニストが、免疫系活性化において役割
を果たし得ること、および／または、感染、アレルギー、および炎症のような免
疫系チャレンジを媒介し得ることが示唆される。好酸球におけるこの遺伝子産物
の発現は、潜在的に全ての造血細胞系列（血液幹細胞を含む）の増殖；生存；分
化；および／または活性化の調節における役割を示唆する。この遺伝子産物は、
サイトカイン産生、抗原提示、または他のプロセスの調節に関与し得、このこと
はまた、癌の処置（例えば、免疫応答をブーストすることによる）における有用
性を示唆する。この遺伝子は、リンパ起源の細胞において発現するので、この遺
伝子またはタンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙され
た組織の腫瘍マーカーおよび／または免疫療法標的としての有用性を示し得る。
従って、これはまた、関節炎、喘息、免疫不全疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、白血
病、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡、および乾癬、を含む免疫
学的障害のための薬剤として有用であり得る。さらに、この遺伝子産物は、種々
の血液系列の幹細胞および方向付けられた前駆体の拡大において、ならびに種々
の細胞型の分化および／または増殖において商業的有用性を有し得る。タンパク
質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙された組織の腫瘍マーカ
ーおよび／または免疫療法標的としての有用性を示し得る。
【００４３】 （遺伝子番号２によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子に対応する翻訳産物は、膜貫通ドメインを含む、ヒト膜貫通トリプ
ターゼタンパク質と配列相同性を共有する（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＡＦ０３
６９５を参照のこと）。この遺伝子に対応する翻訳産物はまた、トリプシノーゲ
ンから酸性プロペプチドを特異的に切断して活性なトリプシンを生成する内部刷
子縁（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｂｒｕｓｈ ｂｏｒｄｅｒ）のプロテアーゼであ
る、ウシエンテロキナーゼと配列相同性を共有する。この切断は、多くの膵臓酵
素前駆体の活性化を導くタンパク質分解反応のカスケードを示す（Ｇｅｎｂａｎ
ｋ登録番号ＡＡＢ４００２６を参照のこと）。さらに、この遺伝子に対応する翻
訳産物は、新規なヒトカリクレインタンパク質と配列相同性を共有する。このタ
ンパク質は、種々の循環および免疫系機能において作用する、相同なセリンプロ
テアーゼの大きいファミリーであるカリクレインファミリーのタンパク質のメン
バーである（国際公開番号ＷＯ９８０３６６５を参照のこと）。
【００４４】 本発明の翻訳産物をコードする遺伝子は、セリンプロテアーゼである。セリン
プロテアーゼヒスチジン活性部位ドメインを検出するため、以下のコンセンサス
パターンが開発された（Ｓｗｉｓｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｉｎｆ
ｏｒｍａｔｉｃｓ）：［ＬＩＶＭ］−［ＳＴ］−Ａ−［ＳＴＡＧ］−Ｈ−Ｃ［Ｈ
は、活性部位残基］。本発明の好ましいポリペプチドは、以下のアミノ酸配列：
ＬＴＡＡＨＣ（配列番号８）を含むか、あるいはこのようなアミノ酸配列から構
成される。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた、これら
のポリペプチドの１つ以上に結合する抗体がそうであるように、本発明によって
包含される。さらに、これらのポリペプチドのフラグメントおよび改変体（例え
ば、本明細書に記載のフラグメント、これらのポリペプチドに少なくとも、８０
％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である
ポリペプチド、およびこれらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドにス
トリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードさ
れるポリペプチド、またはその相補体など）が、本発明により包含される。本発
明のこれらのフラグメントおよび改変体に結合する抗体がまた、本発明により包
含される。これらのフラグメントおよび改変体をコードするポリヌクレオチドは
また、本発明により包含される。さらに好ましいのは、配列番号８のセリンプロ
テアーゼヒスチジン活性部位ドメイン、および配列番号５の少なくとも５、１０
、１５、２０、２５、３０、５０または７５のさらなる連続するアミノ酸残基を
含むポリペプチドである。このさらなる連続するアミノ酸残基は、セリンプロテ
アーゼヒスチジン活性部位ドメインのＮ末端またはＣ末端であり得る。あるいは
、さらなる連続するアミノ酸残基は、セリンプロテアーゼヒスチジン活性部位ド
メインのＮ末端およびＣ末端の両方であり得、ここで連続するアミノ酸残基のＮ
末端およびＣ末端の総数は、特定の数に等しい。
【００４５】 本発明の好ましいポリペプチドは、配列番号５において残基：Ｈｉｓ−８〜Ｐ
ｒｏ−１８、Ａｓｐ−２４〜Ｓｅｒ−３７、Ｇｌｙ−１０６〜Ｇｌｕ−１１３、
Ｐｒｏ−１２４〜Ｐｈｅ−１３１、およびＧｌｎ−１５７〜Ａｌａ−１６４とし
て示される免疫原性エピトープのうち、１、２、３、４、５、または５つ全てを
含むか、あるいはこのようなエピトープから構成される。これらのポリペプチド
をコードするポリヌクレオチドはまた、これらのポリペプチドの１つ以上に結合
する抗体がそうであるように、本発明によって包含される。さらに、これらのポ
リペプチドのフラグメントおよび改変体（例えば、本明細書に記載のフラグメン
ト、これらのポリペプチドに少なくとも、８０％、８５％、９０％、９５％、９
６％、９７％、９８％または９９％同一であるポリペプチド、およびこれらのポ
リペプチドをコードするポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブ
リダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド、またはその相
補体など）が、本発明により包含される。本発明のこれらのフラグメントおよび
改変体に結合する抗体がまた、本発明により包含される。これらのフラグメント
および改変体をコードするポリヌクレオチドはまた、本発明により包含される。
【００４６】 この遺伝子は、結腸癌腫組織および膵臓島細胞腫瘍組織において発現される。
【００４７】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチド（抗体を含む）は、生
物学的サンプル中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに以
下：結腸および膵臓癌腫、ならびに他の癌を含むが、これらに限定されない疾患
および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよび
これらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための
免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に結腸および膵
臓の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、この障害を有さ
ない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意により高いま
たはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採
取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、結腸組織、膵臓組織、癌性組織お
よび創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄液
）または別の組織もしくはサンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【００４８】 結腸癌および膵臓癌組織における組織分布、ならびに他のプロテアーゼ分子に
対する相同性は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物および抗体
が、結腸および膵臓癌、ならびに他の組織の癌の診断、検出および／または処置
に有用であることを示す。
【００４９】 非限定的な仮説として、この遺伝子に対応する翻訳産物は、細胞外マトリック
ス組織および／または他の組織の分解に関与し得、それによって癌細胞の侵襲的
特性を増強し、および／または癌細胞の転移を可能にする。結腸および膵臓癌組
織における組織分布は、この遺伝子がアンタゴニスト（特に低分子または抗体）
の良好な標的であることを示す。
【００５０】 従って、この遺伝子の翻訳産物の一部に特異的に結合する抗体および低分子が
好ましい。また、結腸癌を検出するためのキットを提供する。１つの実施形態に
おいて、このようなキットは、固体支持体に結合するこの遺伝子の翻訳産物に特
異的な抗体を含む。また、個体において結腸癌を検出する方法も提供され、この
方法は、この遺伝子の翻訳産物に特異的な抗体を、個体由来の体液（好ましくは
、血清）に接触させる工程、および抗体が、体液中に見出される抗原に結合する
か否かを確認する工程を包含する。好ましくは、この抗体は固体支持体と結合さ
れ、そして体液は血清である。上記の実施形態ならびに他の治療および診断試験
（キットおよび方法）は、本明細書中の他の場所でより詳細に記載される。タン
パク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙された組織の腫瘍マ
ーカーおよび／または免疫療法標的としての有用性を示し得る。
【００５１】
【表１】 表１は、上記の各「遺伝子番号」に対応する情報を要約する。「ヌクレオチド
配列番号Ｘ」として同定されるヌクレオチド配列は、表１において同定される「
ｃＤＮＡクローンＩＤ」から、およびいくつかの場合において、さらなる関連の
ＤＮＡクローンから得られる、部分的に相同な（「重複する」）配列から構築さ
れた。重複する配列は、高い冗長性の単一の連続した配列に構築され（通常、各
ヌクレオチド位置で３〜５個の重複する配列）、配列番号Ｘとして同定される最
終的な配列を得た。
【００５２】 ｃＤＮＡクローンＩＤは、その日付に寄託され、そして「ＡＴＣＣ寄託番号Ｚ
および日付」において列挙される対応する寄託番号が与えられた。寄託物のいく
つかは、同じ遺伝子に対応する複数の異なるクローンを含む。「ベクター」は、
ｃＤＮＡクローンＩＤにおいて含まれるベクターの型をいう。
【００５３】 「総ＮＴ配列」は、「遺伝子番号」によって同定されるコンティグにおけるヌ
クレオチドの総数をいう。寄託されたプラスミドは、これらの配列の全てを含み
得、この配列は、配列番号Ｘの「クローン配列の５’ＮＴ」および「クローン配
列の３’ＮＴ」として示されるヌクレオチドの位置によって反映される。推定メ
チオニン開始コドンの配列番号ＸのＮＴの位置は（存在する場合）、「開始コド
ンの５’ＮＴ」として同定される。同様に、推定シグナル配列の配列番号Ｘのヌ
クレオチドの位置は（存在する場合）、「シグナルペプチドの第一のアミノ酸の
５’ＮＴ」として同定される。
【００５４】 翻訳されたアミノ酸配列は、ポリヌクレオチド配列の第１翻訳コドンで始まり
、「アミノ酸配列番号Ｙ」として同定されるが、他のリーディングフレームもま
た、公知の分子生物学技術を使用して容易に翻訳され得る。これらの代替的オー
プンリーディングフレームによって産生されるポリペプチドは、本発明によって
具体的に意図される。
【００５５】 配列番号Ｘ（ここで、Ｘは、配列表に開示されたポリヌクレオチド配列のいず
れかであり得る）および翻訳される配列番号Ｙ（ここで、Ｙは、配列表に開示さ
れたポリペプチド配列のいずれかであり得る）は、十分に正確であり、そしてそ
うでなければ、当該分野において周知でありかつ以下でさらに記載される種々の
使用に適切である。例えば、配列番号Ｘは、配列番号Ｘにおいて含まれる核酸配
列または寄託されたプラスミドに含まれるｃＤＮＡを検出する核酸ハイブリダイ
ゼーションプローブを設計することを含む使用を有するが、これらに限定されな
い。これらのプローブはまた、生物学的サンプル中の核酸分子にハイブリダイズ
し、それによって本発明の種々の法医学の方法、および診断の方法を可能にする
。同様に、配列番号Ｙから同定されるポリぺプチドは、表１において同定された
ｃＤＮＡクローンによりコードされる分泌タンパク質に特異的に結合する抗体を
産生することを含むが、これらに限定されない使用を有する。
【００５６】 それにもかかわらず、配列決定反応によって生じるＤＮＡ配列は、配列決定の
エラーを含み得る。エラーは、誤って同定されたヌクレオチドとして、または生
じたＤＮＡ配列におけるヌクレオチドの挿入または欠失として存在する。誤って
挿入されたか、または欠失されたヌクレオチドは、推定アミノ酸配列のリーディ
ングフレームにおいてフレームシフトを引き起こす。これらの場合において、生
じたＤＮＡ配列は、実際のＤＮＡ配列と９９．９％（例えば、１０００塩基を超
えるオープンリーディングフレームにおける１塩基の挿入または欠失）を超えて
同一であり得るにもかかわらず、推定アミノ酸配列は、実際のアミノ酸配列とは
異なる。
【００５７】 従って、ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列における正確さを必要とするこ
れらの適用のために、本発明は、配列番号Ｘとして同定された作製されたヌクレ
オチド配列、および配列番号Ｙとして同定された推定の翻訳されたアミノ酸配列
のみではなく、表１において記載されるような、ＡＴＣＣに寄託された本発明の
ヒトｃＤＮＡを含むプラスミドＤＮＡのサンプルもまた提供する。各々の寄託さ
れたプラスミドのヌクレオチド配列は、公知の方法に従って寄託されたプラスミ
ドの配列決定により容易に決定され得る。
【００５８】 次いで、推定アミノ酸配列は、このような寄託物から証明され得る。さらに、
特定のプラスミドによりコードされるタンパク質のアミノ酸配列はまた、ペプチ
ド配列決定により、または寄託されたヒトｃＤＮＡを含む適切な宿主細胞中でタ
ンパク質を発現し、このタンパク質を収集し、そしてその配列を決定することに
より、直接的に決定され得る。
【００５９】 また、ｃＤＮＡプラスミドを含むベクターの名前を表１に提供する。各ベクタ
ーは、当該分野において、慣用的に使用される。以下のさらなる情報は、利便性
のために提供される。
【００６０】 ベクターＬａｍｂｄａ Ｚａｐ（米国特許第５，１２８，２５６号および同第
５，２８６，６３６号）、Ｕｎｉ−Ｚａｐ ＸＲ（米国特許第５，１２８，２５
６号および同第５，２８６，６３６号）、Ｚａｐ Ｅｘｐｒｅｓｓ（米国特許第
５，１２８，２５６号および同第５，２８６，６３６号）ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐ
ｔ（ｐＢＳ）（Ｓｈｏｒｔ，Ｊ．Ｍ．ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ
． １６：７５８３−７６００（１９８８）；Ａｌｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓ，Ｍ．Ａ
．およびＳｈｏｒｔ，Ｊ．Ｍ．、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １７
：９４９４（１９８９））ならびにｐＢＫ（Ａｌｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓ，Ｍ．Ａ．
ら、Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ５：５８−６１（１９９２））は、Ｓｔｒａｔａｇ
ｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．、１１０１１ Ｎ．Ｔｏｒ
ｒｅｙ Ｐｉｎｅｓ Ｒｏａｄ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ，９２０３７から市販
されている。ｐＢＳは、アンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてｐＢＫはネオマ
イシン耐性遺伝子を含む。ファージミドｐＢＳは、λＺａｐベクターおよびＵｎ
ｉ−Ｚａｐ ＸＲベクターから切り出され得、そしてファージミドｐＢＫは、Ｚ
ａｐ発現ベクターから切り出され得る。両方のファージイミドは、Ｅ．ｃｏｌｉ
株ＸＬ−１ Ｂｌｕｅ（これもまた、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能である
）に形質転換され得る。
【００６１】 ベクターｐＳｐｏｒｔ１、ｐＣＭＶＳｐｏｒｔ １．０、ｐＣＭＶＳｐｏｒｔ
２．０およびｐＣＭＶＳｐｏｒｔ３．０は、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉ
ｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ ６００９、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ
２０８９７から得られた。全てのＳｐｏｒｔベクターはアンピシリン耐性遺伝
子を含み、そしてＥ．ｃｏｌｉ株ＤＨ１０Ｂ（これもまた、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能である）に形質転換され得る。例えば、Ｇｒｕｂ
ｅｒ，Ｃ．Ｅ．ら、Ｆｏｃｕｓ １５：５９（１９９３）を参照のこと。ベクタ
ーｌａｆｍｉｄ ＢＡ（Ｂｅｎｔｏ Ｓｏａｒｅｓ、Ｃｏｌｕｍｂｉａ Ｕｎｉ
ｖｅｒｓｉｔｙ、ＮＹ）は、アンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏｌ
ｉ株ＸＬ−１ Ｂｌｕｅに形質転換され得る。ベクターｐＣＲ（登録商標）２．
１（これはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１６００ Ｆａｒａｄａｙ Ａｖｅｎｕｅ、
Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ ９２００８から入手可能である）は、アンピシリン耐
性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏｌｉ株ＤＨ１０Ｂ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｉｅｓから入手可能である）に形質転換され得る。例えば、Ｃｌａｒｋ，Ｊ
．Ｍ．、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１６：９６７７−９６８６（１９８８）
およびＭｅａｄ，Ｄ．ら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：（１９９１）を
参照のこと。
【００６２】 本発明はまた、配列番号Ｘ、配列番号Ｙ、および／または寄託されたプラスミ
ド（ｃＤＮＡプラスミド：Ｚ）に対応する遺伝子に関する。対応する遺伝子は、
本明細書中に開示される配列情報を使用して、公知の方法に従って単離され得る
。このような方法は、開示された配列からプローブまたはプライマーを調製する
工程、およびゲノム物質の適切な供給源から対応する遺伝子を同定または増幅す
る工程を包含するが、これらに限定されない。
【００６３】 本発明においてまた提供されるものは、対立遺伝子改変体、オルトログ（ｏｒ
ｔｈｏｌｏｇ）、および／または種相同体である。当該分野において公知である
手順は、本明細書中で開示された配列またはＡＴＣＣに寄託されたクローンから
の情報を用いて、配列番号Ｘ、配列番号Ｙ、および／またはｃＤＮＡプラスミド
：Ｚに対応する遺伝子の全長遺伝子、対立遺伝子改変体、スプライス改変体、全
長コード部分、オルトログ、および／または種相同体を得るために使用され得る
。例えば、対立遺伝子改変体および／または種相同体は、本明細書中に提供され
る配列から適切なプローブまたはプライマーを作製し、そして対立遺伝子改変体
および／または所望の相同体について適切な核酸供給源をスクリーニングするこ
とにより単離および同定され得る。
【００６４】 本発明は、配列番号Ｘの核酸配列および／またはｃＤＮＡプラスミド：Ｚを含
むか、または代替的にこれらからなるポリヌクレオチドを提供する。本発明はま
た、配列番号Ｙのポリペプチド配列、配列番号Ｘによりコードされるポリペプチ
ド、および／またはｃＤＮＡプラスミド：Ｚ中のｃＤＮＡによりコードされるポ
リペプチドを含むか、または代替的にこれらからなるポリペプチドを提供する。
配列番号Ｙのポリペプチド配列、配列番号Ｘによりコードされるポリペプチド、
および／またはｃＤＮＡプラスミド：Ｚ中のｃＤＮＡによりコードされるポリペ
プチドを含むか、または代替的にこれらからなるポリペプチドをコードするポリ
ヌクレオチドはまた、本発明により包含される。本発明はさらに、配列番号Ｘの
核酸配列の相補体、および／またはｃＤＮＡプラスミド：Ｚ中のｃＤＮＡのコー
ド鎖の相補体を含むか、または代替的にこれらからなるポリヌクレオチドを包含
する。
【００６５】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能であり、そして本発明の着想の
前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリ
ヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙する
ことは、本出願の開示では非常に煩わしい。従って、好ましくは、配列番号Ｘは
、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号Ｘの
１と配列番号Ｘの最終ヌクレオチド−１５との間の任意の整数であり、ｂは１５
〜配列番号Ｘの最終ヌクレオチドの整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列
番号Ｘに示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４
以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【００６６】 （全長遺伝子の回収のためのＲＡＣＥプロトコル） 部分的ｃＤＮＡクローンは、Ｆｒｏｈｍａｎ，Ｍ．Ａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８５：８９９８−９００２（１９８８）に記載
されたｃＤＮＡ末端の高速増幅（ＲＡＣＥ）手順を利用することにより全長を作
製し得る。５’末端または３’末端のいずれかが欠失しているｃＤＮＡクローン
は、翻訳の開始コドンまたは終止コドンのそれぞれに伸長する欠失塩基対を含む
ように再構築され得る。いくつかの場合において、ｃＤＮＡは、そのために翻訳
の開始を欠失している。以下に、この本来の５’ＲＡＣＥ手順の改変を簡単に記
載する。ポリＡ＋または全ＲＮＡを、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩ（Ｇｉｂｃ
ｏ／ＢＲＬ）およびｃＤＮＡ配列に特異的なアンチセンスプライマーまたは相補
的プライマーを用いて逆転写する。そのプライマーを、Ｍｉｃｒｏｃｏｎ Ｃｏ
ｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ（Ａｍｉｃｏｎ）を用いて反応から除去する。次いで、第
１鎖ｃＤＮＡを、ｄＡＴＰおよび末端デオキシヌクレオチドトランスフェラーゼ
（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）を用いて、添付する。このように、アンカー配列を産生
し、これは、ＰＣＲ増幅のために必要である。第２鎖をｄＡ−テイル含有ＰＣＲ
緩衝液、ＴａｑＤＮＡポリメラーゼ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｃｅｔｕｓ）
、５’末端で３つの隣接制限部位（ＸｈｏＩ、ＳａｌＩおよびＣｌａＩ）を含む
オリゴｄＴプライマーならびにこれらの制限部位を正しく含むプライマーから合
成する。この２本鎖ｃＤＮＡを同じプライマーならびにネスティッドｃＤＮＡ特
異的アンチセンスプライマーを用いて４０サイクルでＰＣＲ増幅する。このＰＣ
Ｒ産物を、エチジウムブロマイドアガロースゲル上でサイズ分離し、そして欠失
しているタンパク質コードＤＮＡの推定サイズのｃＤＮＡ産物を含むゲルの領域
を取り出す。ｃＤＮＡをＭａｇｉｃ ＰＣＲ Ｐｒｅｐ ｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇ
ａ）を用いてアガロースゲルから精製し、ＸｈｏＩまたはＳａｌＩを用いて制限
消化し、そしてプラスミド（例えば、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫＩＩ（Ｓｔ
ｒａｔａｇｅｎｅ））にＸｈｏＩ部位およびＥｃｏＲＶ部位で連結する。このＤ
ＮＡを細菌に形質転換し、そしてこのプラスミドクローンを配列決定して、正確
なタンパク質コード挿入物を同定する。正確な５’末端を、推定的に同定された
相同体を有するこの配列と部分的ｃＤＮＡクローンを有する重複を比較すること
により確認する。当該分野において公知の同様の方法および／または市販のキッ
トを使用して、増幅し、そして３’末端を回収する。
【００６７】 いくつかの、品質制御キットが購入のために市販されている。上記のそれらと
同様の試薬および方法は、全長遺伝子を回収をするための５’ＲＡＣＥおよび３
’ＲＡＣＥの両方について、Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬからキットの形態で供給される
。第２のキットは、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから入手可能である。このキットは、Ｄｕ
ｍａｓら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９：５２２７−３２（１
９９１）により開発された、関連技術の改変（ＳＬＩＣ（一本鎖ｃＤＮＡへの、
一本鎖の連結））である。手順における主な違いは、ＲＮＡを、逆転写後にアル
カリ加水分解し、そしてＲＮＡリガーゼを使用して、第１鎖ｃＤＮＡに、制限部
位を含むアンカープライマーを連結することである。これは、過去に配列決定を
するのが困難なポリＴの伸長を生じるｄＡテーリング反応における必要性を除去
する。
【００６８】 ＲＮＡからの５’ｃＤＮＡまたは３’ｃＤＮＡを産生する代替は、ｃＤＮＡラ
イブラリー二本鎖ＤＮＡを使用することである。非対称性ＰＣＲ増幅アンチセン
スｃＤＮＡ鎖は、アンチセンスｃＤＮＡ特異的プライマーおよびプラスミドアン
カープライマーを用いて合成する。これらのプライマーを除去し、そして対称Ｐ
ＣＲ反応を、ネストしたｃＤＮＡ特異的アンチセンスプライマーおよびプラスミ
ドアンカープライマーを用いて実施する。
【００６９】 （５’末端配列または３’末端配列を産生し、全長遺伝子を得るための、ＲＮ
Ａリガーゼのプロトコル） 一旦、目的の遺伝子が同定されると、本来のｃＤＮＡプラスミド中には存在し
ないかもしれない遺伝子の５’部分または３’部分の同定のためのいくつかの方
法が利用可能になる。これらの方法は、以下を含むがこれらに限定されない：フ
ィルタープローブ探索、特異的プローブを使用するクローン富化、５’ＲＡＣＥ
および３’ＲＡＣＥと類似および同一のプロトコル。全長遺伝子は、ライブラリ
ー中に存在し得、そして探索によって同定され得るが、一方、５’末端または３
’末端を生成するために有用な方法は、欠けている情報を生成するために、本来
のｃＤＮＡからの既存の配列情報を、使用することである。５’ＲＡＣＥに類似
する方法は、所望の全長遺伝子の欠けている５’末端を生成するために利用可能
である（この方法は、Ｆｒｏｍｏｎｔ−Ｒａｃｉｎｅら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ
ｉｄｓ Ｒｅｓ．，２１（７）：１６８３−１６８４（１９９３）によって発表
された）。簡潔には、特定のＲＮＡオリゴヌクレオチドを、全長遺伝子ＲＮＡ転
写物をおそらく含むＲＮＡの集団の５’末端に連結し、そして連結されたＲＮＡ
オリゴヌクレオチドに特異的なプライマーおよび目的の遺伝子の公知の配列に特
異的なプライマーを含むプライマーセットを使用して、所望の全長遺伝子の５’
部分をＰＣＲ増幅する。次いで、この増幅した産物を配列決定し得、そしてこれ
を使用して全長遺伝子を生成し得る。この方法は、所望の供給源から単離された
総ＲＮＡを用いて開始し、この手順における必要条件ではないが、ポリＡ ＲＮ
Ａを使用し得る。次いで、ＲＮＡ調製物を、必要ならばホスファターゼで処理し
て、後のＲＮＡリガーゼ工程を妨害し得る分解または損傷ＲＮＡの５’リン酸基
を排除し得る。次いで、使用された場合、ホスファターゼを不活化し、そしてＲ
ＮＡをメッセンジャーＲＮＡの５’末端に存在するキャップ構造を除去するため
に、タバコ酸性ピロホスファターゼを用いて処理する。この反応は、次いでＴ４
ＲＮＡリガーゼを用いてＲＮＡオリゴヌクレオチドに連結され得る、キャップ
切断ＲＮＡの５’末端に５’リン酸基を残す。次いで、この改変型ＲＮＡ調製物
を、遺伝子特異的なオリゴヌクレオチドを用いる、第一鎖ｃＤＮＡ合成のための
テンプレートとして使用し得る。次いで、第一鎖合成反応物を、連結されたＲＮ
Ａオリゴヌクレオチドに特異的なプライマーおよび目的のセルピン（Ｓｅｒｐｉ
ｎ）の公知の配列に特異的なプライマーを用いる、所望の５’末端のＰＣＲ増幅
のためのテンプレートとして使用し得る。次いで、得られた生成物を配列決定し
、そして分析して５’末端配列が直接的に関連するセルピンに属することを確認
する。
【００７０】 （ポリヌクレオチドフラグメントおよびポリペプチドフラグメント） 本発明はまた、本発明のポリヌクレオチド（核酸）の、ポリヌクレオチドフラ
グメントに関する。本発明において、「ポリヌクレオチドフラグメント」とは、
以下である核酸配列を有するポリヌクレオチドをいう：ｃＤＮＡプラスミドＺに
含まれるｃＤＮＡの一部か、もしくはｃＤＮＡプラスミドＺに含まれるｃＤＮＡ
によりコードされるポリペプチドをコードするｃＤＮＡの一部；配列番号Ｘもし
くはその相補鎖におけるポリヌクレオチド配列の一部；配列番号Ｙのポリペプチ
ドの一部をコードするポリヌクレオチド配列；あるいは配列番号Ｘによりコード
されるポリペプチドの一部をコードするポリヌクレオチド配列。本発明のヌクレ
オチドフラグメントは、好ましくは、少なくとも約１５ｎｔ、そしてより好まし
くは少なくとも約２０ｎｔ、さらにより好ましくは少なくとも約３０ｎｔ、そし
てなおより好ましくは少なくとも約４０ｎｔ、少なくとも約５０ｎｔ、少なくと
も約７５ｎｔ、少なくとも約１００ｎｔ、少なくとも約１２５ｎｔ、または少な
くとも約１５０ｎｔの長さである。例えば、「少なくとも約２０ｎｔの長さ」の
フラグメントは、ｃＤＮＡプラスミドＺのｃＤＮＡ配列に含まれる配列または配
列番号Ｘもしくはその相補鎖に示されるヌクレオチド配列由来の２０以上の連続
する塩基を含むことが意図される。この文脈において「約（おおよそ）」は、特
に記載された値、あるいはそれより数個（５、４、３、２、または１）のヌクレ
オチドだけ大きいかまたは小さな値を含む。これらのヌクレオチドフラグメント
は、本明細書中で議論されるように、診断プローブおよびプライマーとしての使
用を含むが、それらに限定されない使用を有する。もちろん、より大きなフラグ
メント（例えば、少なくとも１５０、１７５、２００、２５０、５００、６００
、１０００または２０００のヌクレオチドの長さ）もまた、本発明に含まれる。
【００７１】 さらに、本発明のポリヌクレオチドフラグメントの代表例としては、例えば、
以下の配列番号Ｘ、またはその相補鎖のおおよそのヌクレオチド数の配列を含む
か、あるいは以下からなるフラグメントが挙げられる：１〜５０、５１〜１００
、１０１〜１５０、１５１〜２００、２０１〜２５０、２５１〜３００、３０１
〜３５０、３５１〜４００、４０１〜４５０、４５１〜５００、５０１〜５５０
、５５１〜６００、６５１〜７００、７０１〜７５０、７５１〜８００、８００
〜８５０、８５１〜９００、９０１〜９５０、９５１〜１０００、１００１〜１
０５０、１０５１〜１１００、１１０１〜１１５０、１１５１〜１２００、１２
０１〜１２５０、１２５１〜１３００、１３０１〜１３５０、１３５１〜１４０
０、１４０１〜１４５０、１４５１〜１５００、１５０１〜１５５０、１５５１
〜１６００、１６０１〜１６５０、１６５１〜１７００、１７０１〜１７５０、
１７５１〜１８００、および／または１８０１〜１８３６。この文脈において、
「おおよそ（約）」は、特に記載された範囲、またはいずれかの末端もしくは両
方の末端において、これより数個（５、４、３、２、または１）のヌクレオチド
だけ大きいか、または小さな範囲を含む。好ましくは、これらのフラグメントは
、配列の一部であるポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドの、機能
的活性（例えば、生物学的活性）を有するポリペプチドをコードする。より好ま
しくは、これらのフラグメントは、本明細書中、上記で議論されるようにプロー
ブまたはプライマーとして使用され得る。ストリンジェントなハイブリダイゼー
ション条件下またはより低いストリンジェンシー条件下でこれらのフラグメント
の１つ以上にハイブリダイズするポリヌクレオチドもまた本発明に含まれ、これ
らのポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドまたはフラグメントも同
様に含まれる。
【００７２】 さらに、本発明のポリヌクレオチドフラグメントの代表例としては、例えば、
ｃＤＮＡプラスミドＺに含まれるｃＤＮＡヌクレオチド配列、またはその相補鎖
の以下のおおよそのヌクレオチド数の配列を含むか、あるいは以下からなるフラ
グメントが挙げられる：１〜５０、５１〜１００、１０１〜１５０、１５１〜２
００、２０１〜２５０、２５１〜３００、３０１〜３５０、３５１〜４００、４
０１〜４５０、４５１〜５００、５０１〜５５０、５５１〜６００、６５１〜７
００、７０１〜７５０、７５１〜８００、８００〜８５０、８５１〜９００、９
０１〜９５０、９５１〜１０００、１００１〜１０５０、１０５１〜１１００、
１１０１〜１１５０、１１５１〜１２００、１２０１〜１２５０、１２５１〜１
３００、１３０１〜１３５０、１３５１〜１４００、１４０１〜１４５０、１４
５１〜１５００、１５０１〜１５５０、１５５１〜１６００、１６０１〜１６５
０、１６５１〜１７００、１７０１〜１７５０、１７５１〜１８００、および／
または１８０１〜１８３６。この文脈において、「おおよそ（約）」は、特に記
載された範囲、あるいはいずれかの末端もしくは両方の末端において、これより
数個（５、４、３、２、または１）のヌクレオチドだけ大きいか、または小さな
範囲を含む。好ましくは、これらのフラグメントは、ｃＤＮＡプラスミドＺに含
まれるｃＤＮＡヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドの機能的活
性（例えば、生物学的活性）を有するポリペプチドをコードする。より好ましく
は、これらのフラグメントは、本明細書中で議論されるように、プローブまたは
プライマーとして使用され得る。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条
件下またはより低いストリンジェンシー条件下で１つ以上のこれらのフラグメン
トにハイブリダイズするポリヌクレオチドもまた本発明に含まれ、これらのポリ
ヌクレオチドまたはフラグメントによりコードされるポリペプチドもまた、含ま
れる。
【００７３】 本発明において、「ポリペプチドフラグメント」とは、配列番号Ｙに含まれる
アミノ酸配列の一部、配列番号Ｘのポリヌクレオチド配列によってコードされる
アミノ酸配列の一部、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺ中のｃＤＮＡによっ
てコードされるアミノ酸配列の一部であるアミノ酸配列をいう。タンパク質（ポ
リペプチド）フラグメントは、「自立構造（ｆｒｅｅ−ｓｔａｎｄｉｎｇ）」で
あり得るか、あるいはより大きなポリぺプチド（このフラグメントが、部分また
は領域（最も好ましくは単一の連続した領域として）を形成する）内に含まれ得
る。本発明のポリペプチドフラグメントの代表例としては、例えば、以下の配列
番号Ｙのコード領域の、おおよそのアミノ酸数のアミノ酸配列を含むか、あるい
は以下からなるフラグメントが挙げられる：１〜２０、２１〜４０、４１〜６０
、６１〜８０、８１〜１００、１０２〜１２０、１２１〜１４０、１４１〜１６
０、１６１〜１８０、１８１〜２００、２０１〜２２０、２２１〜２４０、２４
１〜２６０および／または２６１〜２７９。さらに、本発明のポリペプチドフラ
グメントは、少なくとも約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、
５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、１００、１１０、１
２０、１３０、１４０または１５０のアミノ酸の長さであり得る。この文脈にお
いて、「約（おおよそ）」とは、特に記載された範囲または値、あるいはいずれ
かの末端もしくは両方の末端において、これより数個（５、４、３、２、または
１）のアミノ酸だけ大きいかまたは小さな、範囲または値を含む。これらのポリ
ペプチドフラグメントをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる
。
【００７４】 タンパク質のＮ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失が、タンパク質の１つ以
上の生物学的機能の損失の改変を生じるとしても、他の機能的活性（例えば、生
物学的活性、多量体化する能力、リガンドに結合する能力）は、なお保持され得
る。例えば、ポリペプチドの完全な形態または成熟形態を認識する抗体を誘導す
るおよび／または抗体に結合する、短縮型ムテインの能力は、完全なポリペプチ
ド、または成熟ポリペプチドの大部分より少ない残基が、Ｎ末端から除去される
場合には、一般的に保持される。完全なポリペプチドのＮ末端残基を欠く特定の
ポリペプチドが、このような免疫原性活性を保持するかどうかは、本明細書中に
記載される慣用的な方法、およびそうでなければ当該分野において公知の別の方
法によって容易に決定され得る。多数の欠失したＮ末端アミノ酸残基を有するム
テインは、いくつかの生物学的活性または免疫源性活性を保持し得るようである
。実際に、６つと同じくらい少ないアミノ酸残基からなるペプチドは、しばしば
免疫応答を惹起し得る。
【００７５】 従って、本発明のポリペプチドフラグメントとしては、分泌タンパク質および
成熟形態が挙げられる。さらに好ましいポリペプチドフラグメントとしては、ア
ミノ末端もしくはカルボキシ末端またはその両方から、連続した一連の欠失した
残基を有する分泌タンパク質、もしくは成熟形態が挙げられる。例えば、任意の
数のアミノ酸（１〜６０の範囲）は、分泌ポリペプチドもしくは成熟形態のいず
れかのアミノ末端から欠失され得る。同様に、任意の数のアミノ酸（１〜３０の
範囲）が、分泌タンパク質もしくは成熟形態のカルボキシ末端から欠失され得る
。さらに、上記のアミノ末端およびカルボキシ末端の欠失の任意の組み合わせは
好ましい。同様に、これらのポリペプチドフラグメントをコードするポリヌクレ
オチドもまた好ましい。
【００７６】 本発明は、本明細書中で開示されるポリペプチド（例えば、配列番号Ｙのポリ
ペプチド、配列番号Ｘに含まれるポリヌクレオチド配列によりコードされるポリ
ペプチド、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺに含まれるｃＤＮＡによりコー
ドされるポリペプチド）のアミノ酸配列のアミノ末端から、１つ以上の残基が欠
失したポリペプチドを、さらに提供する。特に、Ｎ末端の欠失は、一般式ｍ−ｑ
によって記載され得、ここでｑは、本発明のポリペプチド（例えば、配列番号Ｙ
に開示されるポリペプチド）におけるアミノ酸残基の総数を表す全整数であり、
そしてｍは、２〜ｑ−６の範囲の任意の整数として定義される。これらのポリペ
プチド(フラグメントおよび／または改変体を含む）をコードするポリヌクレオ
チドもまた、本発明に含まれる。
【００７７】 また、上記のように、タンパク質のＣ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失が
、このタンパク質の１つ以上の生物学的機能の損失の改変を生じるとしても、他
の機能的活性（例えば、生物学的活性、多量体化する能力、リガンドに結合する
能力）は、なお保持され得る。例えば、ポリペプチドの完全な形態または成熟形
態を認識する抗体を誘導し、そして／またはこの抗体に結合する、短縮型ムテイ
ンの能力は、完全なポリペプチドまたは成熟ポリペプチドの大部分より少ない残
基が、Ｃ末端から除去される場合には、一般的に保持される。完全なポリペプチ
ドのＣ末端残基を欠く特定のポリペプチドが、このような免疫原性活性を保持す
るか否かは、本明細書中に記載される慣用的な方法、およびそうでなければ当該
分野において公知の他の方法によって容易に決定され得る。多数の欠失したＣ末
端アミノ酸残基を有するムテインは、いくつかの生物学的活性または免疫原性活
性を保持し得るようである。実際に、６つ程度の少ないアミノ酸残基から構成さ
れるペプチドは、しばしば免疫応答を惹起し得る。
【００７８】 従って、本発明は、本明細書中で開示されるポリペプチド（例えば、配列番号
Ｙのポリペプチド、配列番号Ｘに含まれるポリヌクレオチド配列によりコードさ
れるポリペプチド、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺに含まれるｃＤＮＡに
よりコードされるポリペプチド）のアミノ酸配列のカルボキシ末端から、１つ以
上の残基が欠失したポリペプチドを、さらに提供する。特に、Ｃ末端の欠失は、
一般式１−ｎによって記載され得、ここでｎは、６〜ｑ−１の範囲の任意の全整
数であり、そしてここでｎは、本発明のポリペプチドにおけるアミノ酸残基の位
置に対応する。これらのポリペプチド（フラグメントおよび／または改変体を含
む）をコードするポリヌクレオチドもまた、本発明により含まれる。
【００７９】 さらに、上記のＮ末端またはＣ末端の欠失のいずれかを組み合わせて、Ｎ末端
欠失型ポリペプチドおよびＣ末端欠失型ポリペプチドを産生し得る。本発明はま
た、アミノ末端およびカルボキシ末端の両方から１つ以上のアミノ酸が欠失した
ポリペプチドを提供する。このポリペプチドは、一般的に、配列番号Ｘによって
コードされるポリペプチド（例えば、配列番号Ｙとして開示される好ましいポリ
ペプチドを含むが、これに限定されない）および／またはｃＤＮＡプラスミドＺ
中のｃＤＮＡによってコードされるポリペプチド、ならびに／あるいはそれらの
相補鎖によってコードされるポリペプチドの、残基ｍ−ｎを有するように記載さ
れ得、ここでｎおよびｍは、上記のような整数である。これらのポリペプチド（
フラグメントおよび／または改変体を含む）をコードするポリヌクレオチドもま
た、本発明に含まれる。
【００８０】 配列番号Ｙのポリペプチドに含まれる任意のポリペプチド配列、配列番号Ｘと
して記載されるポリヌクレオチド配列によってコードされる任意のポリペプチド
配列、またはｃＤＮＡプラスミドＺ中のｃＤＮＡによってコードされる任意のポ
リペプチド配列は、そのポリペプチドの特定の好ましい領域を決定するために、
分析され得る。例えば、配列番号ＸまたはｃＤＮＡプラスミドＺ中のｃＤＮＡの
ポリヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドのアミノ酸配列は、Ｄ
ＮＡＳＴＡＲコンピュータアルゴリズム（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ．，１２２８
Ｓ．Ｐａｒｋ Ｓｔ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ ５３７１５ ＵＳＡ；ｈｔｔ
ｐ：／／ｗｗｗ．ｄｎａｓｔａｒ．ｃｏｍ／）のデフォルトパラメーターを使用
して、分析され得る。
【００８１】 ＤＮＡＳＴＡＲコンピューターアルゴリズムを使用して慣用的に得られ得るポ
リペプチドの領域としては、以下が挙げられるが、それらに限定されない：Ｇａ
ｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎのα−領域、β−領域、ターン領域、およびコイル領
域、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎのα−領域、β−領域、およびターン領域、Ｋｙｔ
ｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅの親水性領域および疎水性領域、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇの
α−両親媒性領域およびβ−両親媒性領域、Ｋａｒｐｌｕｓ−Ｓｃｈｕｌｚの可
撓性領域、Ｅｍｉｎｉの表面形成領域ならびに高い抗原性指標のＪａｍｅｓｏｎ
−Ｗｏｌｆの領域。この点で、本発明の非常に好ましいポリヌクレオチドの中に
、いくつかの構造的特徴（例えば、上記の特徴のいくつか（例えば、１、２、３
または４））と組み合わされる領域を含むポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチドがある。
【００８２】 さらに、Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ親水性領域および疎水性領域、Ｅｍｉ
ｎｉ表面形成領域、ならびに高い抗原性指標のＪａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ領域（
すなわち、Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆプログラムのデフォルトパラメターを使用
して同定される場合、１．５以上の抗原性指標を有する、４つ以上連続するアミ
ノ酸を含む）を慣用的に使用して、抗原性について高い程度の潜在性を表すポリ
ペプチドの領域を決定する。高い抗原性の領域は、免疫応答の開始プロセスにお
いて、抗原認識が生じ得る環境中のポリペプチドの表面上に曝されるようである
ポリペプチドの領域を表す値を選択することによって、ＤＮＡＳＴＡＲ分析によ
るデータから決定される。
【００８３】 本発明の好ましいポリペプチドフラグメントは、そのアミノ酸配列がフラグメ
ントであるポリペプチド配列の、機能的活性（例えば、生物学的活性）を示すア
ミノ酸配列を含むかまたはあるいはこれらからなる、フラグメントである。「機
能的活性」を示すポリペプチドとは、全長タンパク質と関連した１つ以上の公知
の機能的活性（例えば、前述のような、生物学的活性、抗原性、免疫原性、およ
び／または多量体化など）を示し得るポリペプチドを意味する。
【００８４】 他の好ましいポリペプチドフラグメントは、生物学的に活性なフラグメントで
ある。生物学的に活性なフラグメントは、本発明のポリペプチドの活性と類似す
るが必ずしも同一ではない活性を示す、フラグメントである。このフラグメント
の生物学的活性は、改善された所望の活性または減少した所望でない活性を含み
得る。これらのポリペプチドフラグメントをコードするポリヌクレオチドもまた
、本発明に含まれる。
【００８５】 好ましい実施形態において、本発明のポリペプチドは、配列番号Yのポリペプ
チドの抗原性フラグメントまたはその部分の１つ、２つ、３つ、４つ、５つまた
はそれ以上を、含むかまたはそれらからなる。これらのポリペプチド（フラグメ
ントおよび／または改変体を含む）をコードするポリヌクレオチドもまた、本発
明に含まれる。
【００８６】 本発明は、配列番号Ｙに示されるポリペプチド配列のエピトープ、またはｃＤ
ＮＡプラスミドＺ中のｃＤＮＡによりコードされるポリペプチド配列のエピトー
プ、または配列番号Ｘのエピトープコード配列の相補体にハイブリダイズするポ
リヌクレオチドによりコードされるポリペプチド配列のエピトープ、または上記
で規定されたようなストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下もしくは
より低いストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件下でｃＤＮＡプラス
ミドＺに含まれるエピトープコード配列を含むかあるいはそれらからなる、ポリ
ペプチドを含む。本発明はさらに、本発明のポリペプチド配列（例えば、配列番
号Ｘで開示された配列）のエピトープをコードするポリヌクレオチド配列、本発
明のエピトープをコードするポリヌクレオチド配列の相補鎖のポリヌクレオチド
配列、および上記で定義されたストリンジェントなハイブリダイゼーション条件
またはより低いストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件でこの相補鎖
にハイブリダイズするポリヌクレオチド配列を含む。
【００８７】 本明細書中で使用される用語「エピトープ」とは、動物、好ましくは哺乳動物
、そして最も好ましくはヒトにおいて抗原性活性または免疫原性活性を有するポ
リペプチドの部分をいう。好ましい実施形態において、本発明は、エピトープを
含むポリペプチド、ならびにこのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを
含む。本明細書で使用される場合、「免疫原性エピトープ」は、動物における抗
体応答を誘発するタンパク質の一部分として定義され、当該分野で公知の任意の
方法（例えば、以下に記載された抗体作製の方法）によって決定される。（例え
ば、Ｇｅｙｓｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：
３９９８−４００２（１９８３）を参照のこと）。本明細書中で使用される場合
、用語「抗原性エピトープ」とは、当該分野で周知の任意の方法（例えば、本明
細書中に記載されたイムノアッセイ）によって測定される場合、抗体がその抗原
に免疫特異的に結合し得るタンパク質の一部として定義される。免疫特異的な結
合は、非特異的な結合を除外するが、必ずしも他の抗原との交差反応性を除外は
しない。抗原性エピトープは、必ずしも免疫原性を必要とはしない。
【００８８】 エピトープとして機能するフラグメントは、任意の従来の手段により作製され
得る。（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ，Ｒ．Ａ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ
．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：５１３１−５１３５（１９８５）（米国特許第４，６
３１，２１１号にさらに記載される）を参照のこと）。
【００８９】 本発明においては、抗原性エピトープは、好ましくは、少なくとも４アミノ酸
、少なくとも５アミノ酸、少なくとも６アミノ酸、少なくとも７アミノ酸の配列
を含み、より好ましくは、少なくとも８アミノ酸、少なくとも９アミノ酸、少な
くとも１０アミノ酸、少なくとも１１アミノ酸、少なくとも１２アミノ酸、少な
くとも１３アミノ酸、少なくとも１４アミノ酸、少なくとも１５アミノ酸、少な
くとも２０アミノ酸、少なくとも２５アミノ酸、少なくとも３０アミノ酸、少な
くとも４０アミノ酸、少なくとも５０アミノ酸の配列を含み、そして最も好まし
くは約１５アミノ酸と約３０アミノ酸との間の配列を含む。免疫原性エピトープ
または抗原性エピトープを含有する好ましいポリペプチドは、少なくとも１０、
１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、
７５、８０、８５、９０、９５または１００アミノ酸残基の長さである。さらに
、非排他的に好ましい抗原性エピトープとしては、本明細書中で開示される抗原
性エピトープおよびその一部が挙げられる。抗原性エピトープは、例えば、エピ
トープに特異的に結合する抗体（モノクローナル抗体を含む）を惹起するために
、有用である。好ましい抗原性エピトープとしては、本明細書中で開示される抗
原性エピトープ、およびこれらの抗原性エピトープの２、３、４、５以上の任意
の組合わせが挙げられる。抗原性エピトープは、イムノアッセイにおいて、標的
分子として使用され得る。（例えば、Ｗｉｌｓｏｎら，Ｃｅｌｌ ３７：７６７
−７７８（１９８４）；Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２１９：６６
０−６６６（１９８３）を参照のこと）。
【００９０】 同様に、当該分野で周知の方法に従って、免疫原性エピトープを使用して、例
えば、抗体を誘導し得る。（例えば、Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら、前出；Ｗｉｌｓｏ
ｎら，前出；Ｃｈｏｗら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８
２：９１０−９１４；およびＢｉｔｔｌｅら、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．６６：
２３４７−２３５４（１９８５）を参照のこと）。好ましい免疫原性エピトープ
として、本明細書中に開示される免疫原性エピトープ、およびこれらの免疫原性
エピトープの２、３、４、５以上の任意の組み合わせが挙げられる。１つ以上の
免疫原性エピトープを含むポリペプチドは、キャリアタンパク質（例えば、アル
ブミン）とともに動物系（例えば、ウサギまたはマウス）に抗体応答を誘発する
ために提示され得るか、あるいはこのポリペプチドが十分に長い場合（少なくと
も約２５アミノ酸）、このポリペプチドは、キャリアなしで動物系に提示され得
る。しかし、８アミノ酸〜１０アミノ酸程度の少ないアミノ酸を含む免疫原性エ
ピトープは、少なくとも変性ポリペプチド中の直鎖状エピトープに結合し得る抗
体を惹起するには十分であることが示されている（例えば、ウェスタンブロッテ
ィングにおいて）。
【００９１】 本発明のエピトープ保有ポリペプチドは、当該分野で周知の方法に従って抗体
を誘導するために使用され得る。これらの周知の方法としては、インビボ免疫、
インビトロ免疫、およびファージディスプレイ法が挙げられるが、それらに限定
されない。例えば、Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら，前出；Ｗｉｌｓｏｎら，前出；およ
びＢｉｔｔｌｅら，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．６６：２３４７−２３５４（１９
８５）を参照のこと。インビボ免疫を使用する場合、動物を遊離ペプチドを用い
て免疫し得る；しかし、抗ペプチド抗体力価は、高分子キャリア（例えば、キー
ホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）または破傷風トキソイド）にペプチド
を結合させることによりブーストされ得る。例えば、システイン残基を含むペプ
チドは、マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢ
Ｓ）のようなリンカーを用いてキャリアに結合され得る。その一方、他のペプチ
ドは、より一般的な結合剤（例えば、グルタルアルデヒド）を用いてキャリアに
結合され得る。ウサギ、ラット、およびマウスのような動物は、遊離のペプチド
またはキャリア結合ペプチドのいずれかを用いて、例えば、エマルジョン（約１
００μｇのペプチドまたはキャリアタンパク質、およびフロイントアジュバント
、あるいは免疫応答を刺激するために公知の他の任意のアジュバントを含む）の
腹腔内注射および／または皮内注射により免疫される。いくつかのブースター注
射が、抗ペプチド抗体の有用な力価を提供するために、例えば、約２週間の間隔
で、必要とされ得る。この力価は、例えば、固体表面に吸着した遊離のペプチド
を用いるＥＬＩＳＡアッセイにより検出され得る。免疫した動物由来の血清中の
抗ペプチド抗体の力価は、抗ペプチド抗体の選択（例えば、当該分野で周知の方
法に従う固体支持体上のペプチドの吸着および選択された抗体の溶出による）に
より上昇し得る。
【００９２】 当業者に理解されるように、そして上記で考察されるように、本発明のポリペ
プチドならびにその免疫原性エピトープフラグメントおよび／または抗原性エピ
トープフラグメントは、他のポリペプチド配列に融合され得る。例えば、本発明
のポリペプチドは、免疫グロブリン（ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ）の定常
ドメインまたはそれらの部分（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、またはそれらの任意の
組み合わせ、およびそれらの部分）と融合し得、これがキメラポリペプチドを生
じる。これらの融合タンパク質は、精製を容易にし得、そしてインビボにおいて
半減期を増加させ得る。これは、ヒトＣＤ４ポリペプチドの最初の２つのドメイ
ンおよび哺乳動物の免疫グロブリンの重鎖または軽鎖の定常領域の種々のドメイ
ンからなる、キメラタンパク質について示された。例えば、ＥＰ ３９４，８２
７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，３３１：８４〜８６（１９８８）
を参照のこと。上皮関門を横切る免疫系への、抗原の増強された送達は、ＦｃＲ
ｎ結合パートナー（例えば、ＩｇＧフラグメントまたはＦｃフラグメント（例え
ば、ＰＣＴ公開 ＷＯ９６／２２０２４およびＷＯ ９９／０４８１３を参照の
こと）に結合体化した抗原（例えば、インスリン）について実証されている。Ｉ
ｇＧ部分に起因してジスルフィド架橋二量体構造を有するＩｇＧ融合タンパク質
はまた、それらの単量体ポリペプチドまたはフラグメント単独よりも、他の分子
の結合および中和においてより効果的であることが見出されている。例えば、Ｆ
ｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２７０：３９５８〜３９６
４（１９９５）を参照のこと。
【００９３】 同様に、ＥＰ−Ａ−Ｏ ４６４ ５３３（カナダ国対応出願２０４５８６９）
は、別のヒトタンパク質またはその一部とともに免疫グロブリン分子の定常領域
の種々の部分を含む、融合タンパク質を開示する。多くの場合、融合タンパク質
中のＦｃ部分は、治療および診断に有利であり、従って、例えば改善された薬物
動態学的特性を生じ得る（ＥＰＡ ０２３２ ２６２）。従って、特定の実施形
態において、本発明の融合タンパク質は、Ｆｃポリペプチド配列に融合した、配
列番号２のアミノ酸残基１〜３１０を含むか、またはそれらからなる。あるいは
融合タンパク質が発現、検出、および精製された後に、Ｆｃ部分が欠失されるこ
とが望ましくあり得る。例えば、融合タンパク質が免疫のための抗原として使用
されるべき場合、Ｆｃ部分が、治療および診断を妨げ得る。薬物探索において、
例えばｈＩＬ−５のようなヒトタンパク質が、ｈＩＬ−５のアンタゴニストを同
定するためのハイスループットスクリーニングアッセイの目的のためにＦｃ部分
と融合されている。Ｄ．Ｂｅｎｎｅｔｔら、Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ
ｉｏｎ ８：５２−５８（１９９５）；Ｋ．Ｊｏｈａｎｓｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．２７０：９４５９−９４７１（１９９５）を参照のこと。
【００９４】 さらに、本発明のポリペプチドは、マーカー配列（例えば、融合されたポリペ
プチドの精製を促進するペプチド）と融合され得る。好ましい実施形態において
、このマーカーアミノ酸配列は、数ある中でも、ヘキサヒスチジンペプチド（例
えば、ｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ、Ｉｎｃ．、９２５９ Ｅｔｏｎ Ａｖｅ
ｎｕｅ，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ，９１３１１）において提供されるタグ）
であり、これらの多くは商業的に入手可能である。Ｇｅｎｔｚら、Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８２１−８２４（１９８９）に記載
されるように、例えば、ヘキサ−ヒスチジンは、融合タンパク質の簡便な精製を
提供する。精製に有用な別のペプチドタグである「ＨＡ」タグは、インフルエン
ザ赤血球凝集素タンパク質に由来するエピトープに対応する（Ｗｉｌｓｏｎら、
Ｃｅｌｌ ３７：７６７（１９８４））。
【００９５】 従って、これらの上記の融合物はいずれも、本発明のポリヌクレオチドまたは
ポリペプチドを使用して操作され得る。
【００９６】 上記のエピトープをコードする核酸はまた、エピトープタグ（例えば、血球凝
集素（「ＨＡ」）タグまたはフラッグタグ（ｆｌａｇ ｔａｇ））として目的の
遺伝子と組換えられ、発現されたポリペプチドの検出および精製を補助し得る。
例えば、Ｊａｎｋｎｅｃｈｔらによって記載された系は、ヒト細胞株において発
現される非変性融合タンパク質の迅速な精製を可能にする（Ｊａｎｋｎｅｃｈｔ
ら、１９９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：８９７
２−８９７）。この系において、目的の遺伝子は、遺伝子の読み取り枠が、６つ
のヒスチジン残基からなるアミノ末端タグと翻訳的に融合されるように、ワクシ
ニア組換えプラスミド中にサブクローン化される。このタグは、融合タンパク質
についての膜結合ドメインとして働く。組換えワクシニアウイルスに感染した細
胞由来の抽出物は、Ｎｉ2+ニトリロ酢酸−アガロースカラムに充填され、そして
ヒスチジンタグ化したタンパク質は、イミダゾール含有緩衝液を用いて選択的に
溶出され得る。
【００９７】 本発明のさらなる融合タンパク質は、遺伝子シャッフリング、モチーフシャッ
フリング、エキソンシャッフリング、および／またはコドンシャッフリング（総
称して「ＤＮＡシャッフリング」といわれる）の技術を通じて生成され得る。Ｄ
ＮＡシャッフリングは、本発明のポリペプチドの活性を調節するために用いられ
得、このような方法は、変化した活性を有するポリペプチド、ならびにこのポリ
ペプチドのアゴニストおよびアンタゴニストを生成するために用いられ得る。一
般には、米国特許第５，６０５，７９３号、同第５，８１１，２３８号、同第５
，８３０，７２１号、同第５，８３４，２５２号および同第５，８３７，４５８
号、ならびにＰａｔｔｅｎら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏ
ｌ．８：７２４−３３（１９９７）；Ｈａｒａｙａｍａ、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏ
ｔｅｃｈｎｏｌ．１６（２）：７６−８２（１９９８）；Ｈａｎｓｓｏｎら、Ｊ
．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７：２６５−７６（１９９９）；ならびにＬｏｒｅｎ
ｚｏおよびＢｌａｓｃｏ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２４（２）：３０８−
１３（１９９８）（これらの特許および刊行物の各々が、本明細書により全体が
参考として援用される）を参照のこと。１つの実施形態において、配列番号Ｘに
対応するポリヌクレオチドの改変およびこれらのポリヌクレオチドによりコード
されるポリペプチドの改変は、ＤＮＡシャッフリングにより達成され得る。ＤＮ
Ａシャッフリングは、このポリヌクレオチド配列中にバリエーションを生成する
ための、相同組換えまたは部位特異的組換えによる、２つ以上のＤＮＡセグメン
トのアセンブリを含む。別の実施形態において、本発明のポリヌクレオチドまた
はコードされるポリペプチドは、組換え前に、エラープローン（ｅｒｒｏｒ−ｐ
ｒｏｎｅ）ＰＣＲ、ランダムなヌクレオチド挿入または他の方法により、ランダ
ムな変異誘発に供されることによって改変され得る。別の実施形態において、本
発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの１つ以上の成分、モチーフ
、区切り（ｓｅｃｔｉｏｎ）、部分、ドメイン、フラグメントなどは、１つ以上
の異種分子の１つ以上の成分、モチーフ、区切り（ｓｅｃｔｉｏｎ）、部分、ド
メイン、フラグメントなどと組み換えられ得る。
【００９８】 （ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの改変体） 本発明はまた、プラスミノーゲン様改変体を含む。本発明は、配列番号Ｘに開
示されるポリヌクレオチド配列もしくはそれらに対する相補鎖の改変体、および
／またはｃＤＮＡプラスミドＺに含まれるｃＤＮＡ配列の改変体に関する。
【００９９】 本発明はまた、配列番号Ｙにおいて開示されるポリペプチド配列の改変体、配
列番号Ｘのポリヌクレオチド配列によりコードされるポリペプチド配列の改変体
および／またはｃＤＮＡプラスミドＺにおけるｃＤＮＡによりコードされるポリ
ペプチド配列の改変体を含む。
【０１００】 「改変体」は、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドとは異なるが、
それらの性質は保持する、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドをいう。一般的
に、改変体は、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドと、全体にわたり
密接に類似し、そして多くの領域において、同一である。
【０１０１】 従って、本発明の１つの局面は、以下からなる群から選択されるヌクレオチド
配列を有するポリヌクレオチドを含むかまたはこれらのポリヌクレオチドからな
る、単離された核酸分子を提供する：（ａ）配列表に示されかつ配列番号Ｘまた
はｃＤＮＡプラスミドＺにおけるｃＤＮＡに記載されるようなアミノ酸配列を有
する、プラスミノーゲン様ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｂ）
配列表に示されかつ配列番号ＸまたはｃＤＮＡプラスミドＺにおけるｃＤＮＡに
記載されるようなアミノ酸配列を有する、成熟プラスミノーゲン様ポリペプチド
をコードするヌクレオチド配列；（ｃ）配列表に示されそして配列番号Ｘまたは
ｃＤＮＡプラスミドＺにおけるｃＤＮＡに記載されるアミノ酸配列を有する、プ
ラスミノーゲン様ポリペプチドの生物学的に活性なフラグメントをコードするヌ
クレオチド配列；（ｄ）配列表に示されそして配列番号ＸまたはｃＤＮＡプラス
ミドＺにおけるｃＤＮＡに記載されるアミノ酸配列を有する、プラスミノーゲン
様ポリペプチドの抗原性フラグメントをコードするヌクレオチド配列；（ｅ）配
列番号ＸまたはｃＤＮＡプラスミドＺにおけるｃＤＮＡに含まれる、ヒトｃＤＮ
Ａプラスミドによりコードされる完全アミノ酸配列を含むプラスミノーゲン様ポ
リペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｆ）配列番号ＸまたはｃＤＮＡプ
ラスミドＺにおけるｃＤＮＡに含まれるヒトｃＤＮＡプラスミドによりコードさ
れるアミノ酸配列を有する、成熟プラスミノーゲン様ポリペプチドをコードする
ヌクレオチド配列；（ｇ）配列番号ＸまたはｃＤＮＡプラスミドＺにおけるｃＤ
ＮＡに含まれる、ヒトｃＤＮＡプラスミドによりコードされるアミノ酸配列を有
するプラスミノーゲン様ポリペプチドの生物学的に活性なフラグメントをコード
するヌクレオチド配列；（ｈ）配列番号ＸまたはｃＤＮＡプラスミドＺにおける
ｃＤＮＡに含まれる、ヒトｃＤＮＡプラスミドによりコードされるアミノ酸配列
を有するプラスミノーゲン様ポリペプチドの抗原性フラグメントをコードするヌ
クレオチド配列；（ｉ）上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ
）、（ｇ）または（ｈ）におけるヌクレオチド配列のいずれかに相補的なヌクレ
オチド配列。
【０１０２】 本発明はまた、例えば、上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（
ｆ）、（ｇ）、（ｈ）または（ｉ）のヌクレオチド配列のいずれかに、少なくと
も８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１
００％同一であるヌクレオチド配列を含むかまたはこれらからなる、核酸分子に
関する。これらの核酸分子によりコードされるポリペプチドはまた、本発明によ
り含まれる。別の実施形態では、本発明は、ストリンジェントなハイブリダイゼ
ーション条件下で、あるいはより低いストリンジェンシー条件下で、上記の（ａ
）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）または（ｉ）に
おけるポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドを含むかまたは
これらからなる、核酸分子を含む。ストリンジェントなハイブリダイゼーション
条件下、またはより低いストリンジェンシー条件下で、これらの核酸分子の相補
体にハイブリダイズするポリヌクレオチドもまた、これらのポリヌクレオチドに
よりコードされるポリペプチドと同様に、本発明により包含される。
【０１０３】 本発明の別の局面は、以下からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有す
るポリヌクレオチドを含むかあるいはこれらからなる、単離された核酸分子を提
供する：（ａ）配列表において示されかつ表１に記載されるようなアミノ酸配列
を有する、プラスミノーゲン様ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（
ｂ）配列表において示されかつ表１に記載されるようなアミノ酸配列を有する、
成熟プラスミノーゲン様ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｃ）配
列表において示されかつ表１に記載されるアミノ酸配列を有する、プラスミノー
ゲン様ポリペプチドの生物学的に活性なフラグメントをコードするヌクレオチド
配列；（ｄ）配列表において示されかつ表１に記載されるアミノ酸配列を有する
、プラスミノーゲン様ポリペプチドの抗原性フラグメントをコードするヌクレオ
チド配列；（ｅ）ＡＣＴＴ寄託物に含まれかつ表１に記載されるｃＤＮＡプラス
ミドのヒトｃＤＮＡによりコードされる完全アミノ酸配列を含む、プラスミノー
ゲン様ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｆ）ＡＣＴＴ寄託物に含
まれかつ表１に記載されるｃＤＮＡプラスミドのヒトｃＤＮＡによりコードされ
るアミノ酸配列を含む、成熟プラスミノーゲン様ポリペプチドをコードするヌク
レオチド配列；（ｇ）ＡＣＴＴ寄託物に含まれかつ表１に記載されるｃＤＮＡプ
ラスミドのヒトｃＤＮＡによりコードされるアミノ酸配列を有する、プラスミノ
ーゲン様ポリペプチドの生物学的に活性なフラグメントをコードするヌクレオチ
ド配列；（ｈ）ＡＣＴＴ寄託物に含まれかつ表１に記載されるｃＤＮＡプラスミ
ドのヒトｃＤＮＡによりコードされるアミノ酸配列を有する、プラスミノーゲン
様ポリペプチドの抗原性フラグメントをコードするヌクレオチド配列；（ｉ）上
記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）または（ｈ）に
おけるヌクレオチド配列のいずれかに相補的なヌクレオチド配列。
【０１０４】 本発明はまた、例えば上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ
）、（ｇ）、（ｈ）または（ｉ）中の任意のヌクレオチド配列に少なくとも８０
％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％
同一であるヌクレオチド配列を含むかあるいはこれらからなる、核酸分子に関す
る。これらの核酸分子によってコードされるポリペプチドもまた、本発明によっ
て含まれる。別の実施形態において、本発明は、上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）
、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）または（ｉ）中のポリヌクレオチド
に、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下またはより低いストリン
ジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドを含むかまたはこれら
からなる、核酸分子を含む。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下
またはより低いストリンジェンシー条件下でこれらの核酸分子の相補体にハイブ
リダイズするポリヌクレオチドもまた、これらのポリヌクレオチドによってコー
ドされるポリペプチドと同様に、本発明によって含まれ得る。
【０１０５】 本発明はまた、例えば、配列番号Ｙに示されるポリペプチド配列、配列番号Ｘ
のヌクレオチド配列によりコードされるポリペプチド配列、ｃＤＮＡプラスミド
ＺのｃＤＮＡによりコードされるポリペプチド配列、および／またはこれらのポ
リペプチドのいずれかのポリペプチドフラグメント（例えば、本明細書中に記載
される、フラグメント）に少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％
、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むかある
いはこれらからなる、ポリペプチドに関する。ストリンジェントなハイブリダイ
ゼーション条件下あるいはより低ストリンジェンシー条件下でこれらのポリペプ
チドをコードする核酸分子の相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドもま
た、これらのポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドと同様に、本発
明により含まれる。
【０１０６】 本発明の参照ヌクレオチド配列に、例えば、少なくとも９５％「同一」である
ヌクレオチド配列を有する核酸によって、核酸のヌクレオチド配列が、ヌクレオ
チド配列がポリぺプチドをコードする参照ヌクレオチド配列の各１００ヌクレオ
チドあたり５つまでの点変異を含み得ることを除いて、参照配列に対して同一で
あることを意図する。換言すれば、参照ヌクレオチド配列に対して少なくとも９
５％同一のヌクレオチド配列を有する核酸を得るために、参照配列のヌクレオチ
ドの５％までが、欠失され得るか、または別のヌクレオチドで置換され得るか、
または参照配列中の総ヌクレオチドの５％までの多数のヌクレオチドが参照配列
中に挿入され得る。問い合わせ（ｑｕｅｒｙ）配列は、表１に言及される配列全
体、ＯＲＦ（オープンリーディングフレーム）、または本明細書中で記載される
ように特定される任意のフラグメントであり得る。
【０１０７】 実際問題として、任意の特定の核酸分子またはポリぺプチドが、本発明のヌク
レオチド配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９
７％、９８％、または９９％同一であるか否かは、公知のコンピュータープログ
ラムを使用して従来的に決定され得る。問い合わせ配列（本発明の配列）と対象
配列との間の最も良好な全体的な適合性（全体的な配列整列としてもまた参照さ
れる）を決定するための好ましい方法は、Ｂｒｕｔｌａｇら（Ｃｏｍｐ．Ａｐｐ
． Ｂｉｏｓｃｉ．６：２３７−２４５（１９９０））のアルゴリズムに基づく
ＦＡＳＴＤＢコンピュータープログラムを使用して決定され得る。配列整列にお
いて、問い合わせ配列および対象配列は、両方ともにＤＮＡ配列である。ＲＮＡ
配列は、ＵからＴに変換することによって比較され得る。この全体的な配列整列
の結果は、同一性パーセント（％）で示される。同一性パーセントを算定するた
めにＤＮＡ配列のＦＡＳＴＤＢ整列において使用される好ましいパラメーターは
：Ｍａｔｒｉｘ＝Ｕｎｉｔａｒｙ、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝４、Ｍｉｓｍａｔｃｈ Ｐ
ｅｎａｌｔｙ＝１、Ｊｏｉｎｉｎｇ Ｐｅｎａｌｔｙ＝３０、Ｒａｎｄｏｍｉｚ
ａｔｉｏｎ Ｇｒｏｕｐ Ｌｅｎｇｔｈ＝０、Ｃｕｔｏｆｆ Ｓｃｏｒｅ＝１、
Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔｙ＝５、Ｇａｐ Ｓｉｚｅ Ｐｅｎａｌｔｙ ０．０５、
Ｗｉｎｄｏｗ Ｓｉｚｅ＝５００または対象ヌクレオチド配列の長さ（どちらか
より短い方）である。
【０１０８】 対象配列が、５’または３’欠失のために（内部欠失のためではなく）問い合
わせ配列より短い場合、手動の補正が結果に対してなされなけらばならない。こ
れは、同一性パーセントを計算する場合に、ＦＡＳＴＤＢプログラムが対象配列
の５’および３’切断を考慮しないからである。５’末端または３’末端で切断
される対象配列について、問い合わせ配列に対して、同一性パーセントは、問い
合わせ配列の総塩基のパーセントとして一致／整列されない対象配列の５’およ
び３’である問い合わせ配列の塩基の数を計算することによって補正される。ヌ
クレオチドが一致／整列されるか否かは、ＦＡＳＴＤＢ配列整列の結果によって
決定される。次いで、このパーセントは、同一性パーセントから差し引かれ、特
定のパラメーターを用いて上記のＦＡＳＴＤＢプログラムによって算定され、最
終的な同一性パーセントのスコアに到達する。この補正されたスコアが、本発明
の目的に使用されるものである。ＦＡＳＴＤＢ整列によって示されるように、問
い合わせ配列と一致／整列されない、対象配列の５’および３’塩基の外側の塩
基のみが、同一性パーセントのスコアを手動で調整する目的で算定される。
【０１０９】 例えば、９０塩基の対象配列は、同一性パーセントを決定するために１００塩
基の問い合わせ配列に整列される。欠失は、対象配列の５’末端で生じ、従って
、ＦＡＳＴＤＢ整列は、５’末端の最初の１０塩基で一致／整列を示さない。１
０個の不対合塩基は、配列の１０％（一致していない５’および３’末端での塩
基の数／問い合わせ配列の塩基の総数）を表し、そのため１０％は、ＦＡＳＴＤ
Ｂプログラムによって算定される同一性パーセントのスコアから差し引かれる。
残りの９０塩基が完全に一致する場合は、最終的な同一性パーセントは９０％で
ある。別の例では、９０塩基の対象配列が、１００塩基の問い合わせ配列と比較
される。この場合、欠失は、内部欠失であり、その結果、問い合わせと一致／整
列しない対象配列の５’または３’に塩基が存在しない。この場合、ＦＡＳＴＤ
Ｂによって算定される同一性パーセントは手動で補正されない。再び、問い合わ
せ配列と一致／整列しない対象配列の５’または３’の塩基のみが手動で補正さ
れる。他の手動の補正は、本発明の目的のためにはなされない。
【０１１０】 本発明の問い合わせアミノ酸配列に、例えば、少なくとも９５％「同一」であ
るアミノ酸配列を有するポリぺプチドにより、対象ポリペプチドのアミノ酸配列
は、対象ポリぺプチド配列が、問い合わせアミノ酸配列の各１００個のアミノ酸
あたり５つまでのアミノ酸の変更を含み得ることを除いて、問い合わせ配列に同
一であることが意図される。換言すれば、問い合わせアミノ酸配列に少なくとも
９５％同一であるアミノ酸配列を有するポリぺプチドを得るために、対象配列に
おけるアミノ酸残基の５％までが、挿入、欠失、（消えない（ｉｎｄｅｌｓ））
または別のアミノ酸で置換され得る。参照配列のこれらの改変は、参照アミノ酸
配列のアミノ末端もしくはカルボキシ末端位置で生じ得るか、またはそれらの末
端位置の間のどこにでも生じ得、参照配列中の残基間で個々に、または参照配列
内の１つ以上の連続する群においてのいずれかで、散在される。
【０１１１】 実際問題として、任意の特定のポリぺプチドが、例えば、表１におけるアミノ
酸配列もしくはそのフラグメントに対して、ｃＤＮＡプラスミドＺに含まれるｃ
ＤＮＡによってコードされるアミノ酸配列もしくはそのフラグメントに対して、
少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または
９９％同一であるか否かは、従来的に、公知のコンピュータープログラムを使用
して決定され得る。問い合わせ配列（本発明の配列）と対象配列との間での最良
の全体的な一致（全体的配列整列としても参照される）を決定するための好まし
い方法は、Ｂｒｕｔｌａｇら（Ｃｏｍｐ．Ａｐｐ．Ｂｉｏｓｃｉ．６：２３７−
２４５（１９９０））のアルゴリズムに基づくＦＡＳＴＤＢコンピュータープロ
グラムを使用して決定され得る。配列整列において、問い合わせ配列および対象
配列は、両方ともヌクレオチド配列であるかまたは両方ともアミノ酸配列である
かのいずれかである。上記の全体的配列整列の結果は、同一性パーセントで示さ
れる。ＦＡＳＴＤＢアミノ酸整列に用いられる好ましいパラメーターは：Ｍａｔ
ｒｉｘ＝ＰＡＭ ０、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝２、Ｍｉｓｍａｔｃｈ Ｐｅｎａｌｔｙ
＝１、Ｊｏｉｎｉｎｇ Ｐｅｎａｌｔｙ＝２０、Ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ
Ｇｒｏｕｐ Ｌｅｎｇｔｈ＝０、Ｃｕｔｏｆｆ Ｓｃｏｒｅ＝１、Ｗｉｎｄｏｗ
Ｓｉｚｅ＝配列の長さ、Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔｙ＝５、Ｇａｐ Ｓｉｚｅ Ｐ
ｅｎａｌｔｙ＝０．０５、Ｗｉｎｄｏｗ Ｓｉｚｅ＝５００または対象アミノ酸
配列の長さ（どちらかより短い方）である。
【０１１２】 対象配列が、Ｎ末端またはＣ末端欠失により（内部の欠失のためではなく）問
い合わせ配列よりも短い場合、手動の補正が結果に対してなされなけらばならな
い。これは、ＦＡＳＴＤＢプログラムが、全体的な同一性パーセントを算定する
場合に、対象配列のＮ末端切断およびＣ末端切断を考慮しないからである。Ｎ末
端およびＣ末端で短縮されている対象配列について、問い合わせ配列に対して、
同一性パーセントは、問い合わせ配列の総塩基のパーセントとして、対応する対
象残基と一致／整列しない、対象配列のＮ末端およびＣ末端である問い合わせ配
列の残基の数を計算することによって補正される。残基が一致／整列されている
か否かは、ＦＡＳＴＤＢ配列整列の結果によって決定される。次いで、このパー
セントは、同一性パーセントから差し引かれ、上記のＦＡＳＴＤＢプログラムに
よって特定のパラメーターを使用して計算され、最終的な同一性パーセントのス
コアに到達する。この最終的な同一性パーセントのスコアは、本発明の目的で使
用されるものである。問い合わせ配列と一致／整列していない対象配列のＮ末端
およびＣ末端側の残基のみが、同一性パーセントのスコアを手動で調整する目的
のために考慮される。すなわち、問い合わせ残基のみが、対象配列の最も遠いＮ
末端およびＣ末端残基の外側に位置する。
【０１１３】 例えば、９０アミノ酸残基の対象配列は、同一性パーセントを決定するために
１００残基の問い合わせ配列と整列される。欠失が対象配列のＮ末端で生じ、そ
してそれゆえＦＡＳＴＤＢ整列は、Ｎ末端での最初の１０残基の一致／整列を示
さない。１０個の不対合残基は、配列の１０％（一致していないＮ末端およびＣ
末端での残基の数／問い合わせ配列中の残基の総数）を表し、その結果ＦＡＳＴ
ＤＢプログラムによって計算される同一性パーセントのスコアから１０％が差し
引かれる。残りの９０残基が完全に一致した場合、最終的な同一性パーセントは
９０％である。別の例において、９０残基の対象配列が、１００残基の問い合わ
せ配列と比較される。この場合、欠失は、内部欠失であり、そのため問い合わせ
配列と一致／整列しない対象配列のＮ末端またはＣ末端の残基は存在しない。こ
の場合、ＦＡＳＴＤＢによって算定される同一性パーセントは、手動で補正され
ない。再び、ＦＡＳＴＤＢ整列において示される、問い合わせ配列と一致／整列
しない対象配列のＮ末端およびＣ末端の外の残基位置のみが手動で補正される。
他の手動の補正は、本発明の目的のためにはなされない。
【０１１４】 改変体は、コード領域、非コード領域、またはその両方における変化を含み得
る。特に好ましいものは、サイレントな置換、付加、または欠失を生成するが、
コードされるポリぺプチドの特性または活性を変化させない変化を含むポリヌク
レオチド改変体である。遺伝コードの縮重に起因するサイレントな置換によって
生成されるヌクレオチド改変体が、好ましい。さらに、任意の組合せにおいて５
０未満、４０未満、３０未満、２０未満、１０未満、または５〜５０、５〜２５
、５〜１０、１〜５、もしくは１〜２アミノ酸が置換、欠失、または付加される
改変体もまた、好ましい。ポリヌクレオチド改変体は、種々の理由（例えば、特
定の宿主についてのコドン発現を至適化する（例えば、当業者がヒトｍＲＮＡに
おけるコドンを、Ｅ．ｃｏｌｉのような細菌宿主によって好ましいコドンに変化
させ得る））のために、生成され得る。
【０１１５】 天然に存在する改変体は、「対立遺伝子改変体」と呼ばれ、そして生物の染色
体上の所定の遺伝子座を占有する遺伝子のいくつかの代替の形態のうちの１つを
いう。（Ｇｅｎｅｓ ＩＩ、Ｌｅｗｉｎ，Ｂ．，編 Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆
Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８５））。これらの対立遺伝子改変体は、
ポリヌクレオチドレベルおよび／またはポリぺプチドレベルのいずれかで変化し
得、そして本発明に含まれる。あるいは、天然に存在しない改変体は、変異誘発
技術によってまたは直接的な合成によって生成され得る。
【０１１６】 タンパク質工学および組換えＤＮＡ技術の公知の方法を使用して、改変体は、
本発明のポリぺプチドの特性を改善または変化させるために作製され得る。例え
ば、本明細書中で議論されるように、１つ以上のアミノ酸は、生物学的機能の実
質的な欠損を伴わずに、本発明のポリペプチドのＮ末端またはＣ末端から欠失さ
れ得る。Ｒｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：２９８４−２９８８（１
９９３）の著者らは、３、８、または２７個のアミノ末端のアミノ酸残基を欠失
させた後でさえもヘパリン結合活性を有する改変体ＫＧＦタンパク質を報告した
。同様に、インターフェロンγは、このタンパク質のカルボキシ末端から８〜１
０個のアミノ酸残基を欠失させた後、１０倍までのより高い活性を示した（Ｄｏ
ｂｅｌｉら、Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７：１９９−２１６（１９８８
））。
【０１１７】 さらに、豊富な証拠は、改変体が、天然に存在するタンパク質の生物学的活性
に類似する活性をしばしば保持することを実証する。例えば、Ｇａｙｌｅおよび
共同研究者ら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２６８：２２１０５−２２１１１（１
９９３））は、ヒトサイトカインＩＬ−１ａの広範囲にわたる変異分析を行った
。彼らは、ランダムな変異誘発を使用して、分子の全長にわたって改変体当たり
平均２．５アミノ酸の変化になる、３，５００個を超える個々のＩＬ−１ａ変異
体を作製した。複数の変異が、全ての潜在的なアミノ酸の位置で試験された。こ
の研究者らは、「分子の大部分は、［結合活性または生物学的活性］のいずれに
対してもほとんど影響を伴わないで変化され得る」ことを見出した。（要約を参
照のこと）。実際、試験された３，５００個を超えるヌクレオチド配列のうち、
わずか２３個の独特なアミノ酸配列が、野生型と活性が有意に異なるタンパク質
を生成した。
【０１１８】 さらに、ポリぺプチドのＮ末端またはＣ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失
が、１つ以上の生物学的機能の改変または欠失を生じたとしても、他の生物学的
活性はなお保持され得る。例えば、分泌される形態を認識する抗体を誘導および
／または結合する、欠失改変体の能力は、分泌される形態の大多数より少ない残
基が、Ｎ末端またはＣ末端から除去される場合に保持されるようである。タンパ
ク質のＮ末端またはＣ末端残基を欠損する特定のポリぺプチドが、このような免
疫原性活性を保持するか否かは、本明細書中に記載される慣用的な方法、および
そうでなければ当該分野において公知の慣用的な方法によって容易に決定され得
る。
【０１１９】 従って、本発明はさらに、本発明のポリペプチドの機能的活性（例えば、実質
的な生物学的活性）を示すポリぺプチド改変体を含む。このような改変体として
は、活性に対する影響をほとんど有さないように、当該分野において公知の一般
的な法則に従って選択される、欠失、挿入、逆位、反復、および置換が挙げられ
る。
【０１２０】 本出願は、本明細書中で開示される核酸配列（例えば、Ｎ末端および／または
Ｃ末端欠失のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする）に対して少なく
とも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または
１００％同一の核酸分子に関し、それらが機能活性を有するポリペプチドをコー
ドするか否かに無関係である。なぜならば、特定の核酸分子が、機能活性を有す
るポリペプチドをコードしない場合でさえ、当業者は、核酸分子を（例えば、ハ
イブリダイゼーションプローブまたはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）プライマ
ーとして）使用する方法をなお知っているからである。機能活性を有するポリペ
プチドをコードしない本発明の核酸分子の使用は、特に、以下：（１）ｃＤＮＡ
ライブラリーにおける遺伝子またはその対立遺伝子改変体もしくはそのスプライ
ス改変体を単離する工程；（２）Ｖｅｒｍａら、Ｈｕｍａｎ Ｃｈｒｏｍｏｓｏ
ｍｅｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｐｅｒ
ｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８）に記載されるように、
遺伝子の正確な染色体位置を提供する中期染色体スプレッド（ｓｐｒｅａｄ）に
インサイチュハイブリダイゼーションする工程（例えば「ＦＩＳＨ」）；および
（３）特異的組織におけるｍＲＮＡ発現を検出するためのノーザンブロット分析
、を包含する。
【０１２１】 しかし、本明細書中で開示される核酸配列に対して少なくとも８０％、８５％
、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一の配
列を有する核酸分子が好ましく、これらの核酸分子は、実際に、機能活性を有す
るポリペプチドをコードする。
【０１２２】 当然のことながら、遺伝子コードの縮重に起因して、例えば、寄託されたクロ
ーンの核酸配列、表１（配列番号Ｘ）中に言及される核酸配列またはそのフラグ
メントに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、
９８％、９９％、または１００％同一の配列を有する多数の核酸分子が、「機能
活性を有する」ポリペプチドをコードするということを、当業者は、直ちに理解
する。実際に、これらのヌクレオチド配列のいずれかの縮重改変体すべてが、同
じポリぺプチドをコードするので、多くの場合、このことは、上記の比較アッセ
イを実行しなくても、当業者に明らかである。縮重改変体でないような核酸分子
について、合理的な数がまた、機能活性を有するポリペプチドをコードすること
が、当該分野でさらに理解される。なぜならば、当業者が、さらに以下に記載さ
れるように、タンパク質を有意に機能させるかまたは機能しそうにないアミノ酸
置換（例えば、１つの脂肪族アミノ酸を第２の脂肪族アミノ酸と置換すること）
を完全に知っているからである。
【０１２３】 例えば、表現型的にサイレントなアミノ酸置換を作製する方法に関する指針は
、Ｂｏｗｉｅら、「Ｄｅｃｉｐｈｅｒｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｅｓｓａｇｅ ｉｎ
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ： Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｍｉｎ
ｏ Ａｃｉｄ Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１３
０６−１３１０（１９９０）において提供され、ここで、著者らは変化に対する
アミノ酸配列の寛容性を研究するための２つの主要なストラテジーがあることを
指摘する。
【０１２４】 第１のストラテジーは、進化の過程の間の自然の選択によるアミノ酸置換の寛
容を利用する。異なる種におけるアミノ酸配列を比較して、保存されるアミノ酸
が同定され得る。これらの保存されるアミノ酸は、タンパク質の機能について重
要であるようである。対照的に、置換が自然の選択によって寛容されたアミノ酸
の位置は、これらの位置がタンパク質の機能に重要ではないことを示す。従って
、アミノ酸置換を寛容する位置は改変され得るが、タンパク質の生物学的活性を
なおも維持する。
【０１２５】 第２のストラテジーは、タンパク質機能に重要な領域を同定するために、クロ
ーン化された遺伝子の特定の位置でアミノ酸変化を導入するための遺伝子工学を
使用する。例えば、部位特異的変異誘発またはアラニンスキャニング変異誘発（
分子中の各残基で１つのアラニン変異の導入）が、使用され得る。（Ｃｕｎｎｉ
ｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１−１０８５（
１９８９））。次いで、得られた変異分子は生物学的活性について試験され得る
。
【０１２６】 著者らが言及するように、これらの２つのストラテジーは、タンパク質がアミ
ノ酸置換に驚くほど寛容であることを明らかにした。著者らはさらに、どのアミ
ノ酸変化が、タンパク質中の特定のアミノ酸位置で許容されるようであるかを示
す。例えば、（タンパク質の三次構造内に）ほとんど埋もれているアミノ酸残基
は、非極性側鎖を必要とするが、表面側鎖の特徴は、一般にほとんど保存されな
い。さらに、寛容される保存的なアミノ酸置換は、脂肪族または疎水性アミノ酸
のＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅの置換；ヒドロキシル残基のＳｅｒお
よびＴｈｒの置換；酸性残基のＡｓｐおよびＧｌｕの置換；アミド残基のＡｓｎ
およびＧｌｎの置換、塩基性残基のＬｙｓ、Ａｒｇ、およびＨｉｓの置換；芳香
族残基のＰｈｅ、Ｔｙｒ、およびＴｒｐの置換、ならびに小さなサイズのアミノ
酸のＡｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｍｅｔ、およびＧｌｙの置換を含む。保存的なア
ミノ酸置換に加えて、本発明の改変体は、（ｉ）１つ以上の非保存的なアミノ酸
残基との置換、ここでは置換されるアミノ酸残基は、遺伝コードによってコード
されるアミノ酸残基であってもよく、もしくはそうでなくてもよい、または（ｉ
ｉ）置換基を有する１つ以上のアミノ酸残基での置換、または（ｉｉｉ）別の化
合物（例えば、ポリぺプチドの安定性および／もしくは可溶性を増加するための
化合物（例えば、ポリエチレングリコール））との成熟ポリぺプチドの融合、ま
たは（ｉｖ）さらなるアミノ酸（例えば、ＩｇＧ Ｆｃ融合領域ペプチド、また
はリーダーもしくは分泌配列、または精製を容易にする配列のような）とのポリ
ぺプチドの融合を含む。このような改変体ポリぺプチドは、本明細書中の教示か
ら、当業者の範囲内であると考えられる。
【０１２７】 例えば、他の荷電されたアミノ酸または中性のアミノ酸での荷電されたアミノ
酸のアミノ酸置換を含むポリぺプチド改変体は、改善された特性（例えば、より
少ない凝集性）を有するタンパク質を生成し得る。薬学的処方物の凝集は、凝集
体の免疫原活性に起因して、活性の減少およびクリアランスの増加の両方をもた
らす。（Ｐｉｎｃｋａｒｄら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：３３１
−３４０（１９６７）；Ｒｏｂｂｉｎｓら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ ３６：８３８−
８４５（１９８７）；Ｃｌｅｌａｎｄら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒａｐｅｕ
ｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ １０：３０７−３７７（
１９９３））。
【０１２８】 本発明のさらなる実施形態は、少なくとも１つのアミノ酸置換を含むが、５０
アミノ酸置換を超えず、さらにより好ましくは、４０アミノ酸置換を超えず、な
おより好ましくは、３０アミノ酸置換を超えず、そしてなおさらにより好ましく
は、２０アミノ酸置換を超えないアミノ酸配列を有するポリペプチドのアミノ酸
配列を含むポリペプチドに関する。もちろん、ポリペプチドは、好ましさが常に
増大する順番で、少なくとも１つのアミノ酸置換を含むが、１０、９、８、７、
６、５、４、３、２、または１アミノ酸置換を超えない、配列番号Ｙのポリペプ
チドのアミノ酸配列、配列番号Ｘによってコードされるアミノ酸配列、および／
またはｃＤＮＡプラスミドＺに含まれるｃＤＮＡによってコードされるアミノ酸
配列を含むアミノ酸配列を有することが非常に好ましい。特定の実施形態におい
て、配列番号Ｙのアミノ酸配列もしくはそのフラグメント（例えば、本明細書に
記載の成熟形態および／または他のフラグメント）、配列番号Ｘによってコード
されるアミノ酸配列もしくはそのフラグメント、および／またはＡＴＣＣ受託番
号Ｚにに含まれるｃＤＮＡによってコードされるアミノ酸配列もしくはそのフラ
グメントにおける付加、置換、および／または欠失の数は、１〜５、５〜１０、
５〜２５、５〜５０、１０〜５０、または５０〜１５０であり、保存的アミノ酸
置換が好ましい。本明細書中で議論されるように、本発明のポリペプチドは、融
合タンパク質を生成するために使用され得る。例えば、本発明のポリペプチドは
、第２のタンパク質に融合される場合、抗原性タグとして使用され得る。本発明
のポリペプチドに対して惹起された抗体は、ポリペプチドに結合することによっ
て、第２のタンパク質を間接的に検出するために使用され得る。さらに、分泌タ
ンパク質は、輸送シグナルに基づいて細胞位置を標的化するため、分泌されるこ
とが示される本発明のポリペプチドは、一旦他のタンパク質に融合されるた標的
分子として使用され得る。
【０１２９】 本発明のポリペプチドに融合され得るドメインの例としては、異種シグナル配
列だけでなく、他の異種機能的領域が挙げられる。この融合は、必ずしも直接的
である必要はないが、リンカー配列を介して起こり得る。
【０１３０】 特定の好ましい実施形態において、本発明のタンパク質は、ポリペプチドがＮ
末端欠失変異体および／またはＣ末端欠失変異体である融合タンパク質を含む。
好ましい実施形態において、本願は、特定のＮ末端欠失変異体およびＣ末端欠失
変異体のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする核酸配列と少なくとも
９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である核酸分子に
関する。これらのポリペプチド（フラグメントおよび／または改変体を含む）を
コードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。
【０１３１】 さらに、融合タンパク質はまた、本発明のポリペプチドの特性を改善するよう
に操作され得る。例えば、さらなるアミノ酸、特に荷電したアミノ酸の領域は、
宿主細胞からの精製、またはその後の操作および貯蔵の間、安定性および持続性
を改善するために、ポリペプチドのＮ末端に付加され得る。また、ペプチド部分
は、精製を容易にするために、ポリペプチドに付加され得る。このような領域は
、ポリペプチドの最終調製の前に、除去され得る。ポリペプチドの操作を容易に
するためのペプチド部分の付加は、当該分野で精通し慣用的な技術である。
【０１３２】 当業者に理解されるように、上記の本発明のポリペプチド、およびそれらのエ
ピトープ保有フラグメントは、異種ポリペプチド配列に融合され得る。例えば、
本発明のポリペプチドは、免疫グロブリン（ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ）
の定常ドメインまたはそれらの部分（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、またはそれらの
任意の組み合わせおよびそれらの部分）と融合され得、キメラポリペプチドを生
じる。このような融合タンパク質は、精製を容易にし得、そしてインビボでの半
減期を増大させ得る。これは、ヒトＣＤ４−ポリペプチドの最初の２つのドメイ
ンおよび哺乳動物の免疫グロブリンの重鎖または軽鎖の定常領域の種々のドメイ
ンからなるキメラタンパク質について示されている。例えば、ＥＰ ３９４，８
２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，３３１：８４〜８６（１９８８
）を参照のこと。ＩｇＧ部分のジスルフィド結合に起因するジスルフィド結合二
量体構造を有するＩｇＧ融合タンパク質はまた、単量体ポリペプチドまたはそれ
らのフラグメント単独よりも、他の分子の結合および中和においてより効果的で
あることが見出された。（Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．
，２７０：３９５８−３９６４（１９９５））。
【０１３３】 （ベクター、宿主細胞、およびタンパク質産生） 本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドを含むベクター、宿主細胞、および
組換え技術によるポリペプチドの産生に関連する。例えば、ベクターは、ファー
ジベクター、プラスミドベクター、ウイルスベクター、またはレトロウイルスベ
クターであり得る。レトロウイルスベクターは、複製コンピテント、または複製
欠損であり得る。後者の場合、一般的にウイルス増殖は、補完性（ｃｏｍｐｌｅ
ｍｅｎｔｉｎｇ）宿主細胞にのみ生じる。
【０１３４】 本発明のポリヌクレオチドは、宿主における増殖のために選択マーカーを含む
ベクターに連結され得る。一般に、プラスミドベクターは、リン酸カルシウム沈
澱物のような沈澱物、または荷電脂質との複合体において導入される。ベクター
がウイルスである場合、このベクターは、適切なパッケージング細胞株を使用し
てインビトロでパッケージングされ、次いで宿主細胞に形質導入され得る。
【０１３５】 ポリヌクレオチド挿入物は、適切なプロモーター（いくつか挙げれば、例えば
、ファージλＰＬプロモーター、Ｅ．ｃｏｌｉ ｌａｃプロモーター、ｔｒｐプ
ロモーター、ｐｈｏＡプロモーターおよびｔａｃプロモーター、ＳＶ４０初期プ
ロモーターおよびＳＶ４０後期プロモーター、ならびにレトロウイルスＬＴＲの
プロモーター）に作動可能に連結されるべきである。他の適切なプロモーターは
当業者に公知である。発現構築物はさらに、転写開始、転写終結のための部位、
および転写領域において、翻訳のためのリボソーム結合部位を含む。この構築物
によって発現される転写物のコード部分は、好ましくは、始めに翻訳開始コドン
、および翻訳されるべきポリペプチドの末端に適切に位置される終結コドン（Ｕ
ＡＡ、ＵＧＡまたはＵＡＧ）を含む。
【０１３６】 示されるように、発現ベクターは、好ましくは少なくとも１つの選択マーカー
を含む。このようなマーカーは、真核細胞培養のためのジヒドロ葉酸レダクター
ゼ、Ｇ４１８、またはネオマイシン耐性遺伝子、ならびにＥ．ｃｏｌｉおよび他
の細菌において培養するためのテトラサイクリン、カナマイシンまたはアンピシ
リン耐性遺伝子を含む。適切な宿主の代表的な例は、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃ
ｏｌｉ、ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓおよびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍ
ｕｒｉｕｍ細胞）；真菌細胞（例えば、酵母細胞（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍ
ｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅまたはＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ（ＡＴ
ＣＣ受託番号２０１１７８）））；昆虫細胞（例えばＤｒｏｓｏｐｈｉｌｉａ
Ｓ２およびＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ Ｓｆ９細胞）；動物細胞（例えば、ＣＨＯ細
胞、ＣＯＳ細胞、２９３細胞、およびＢｏｗｅｓメラノーマ細胞）；ならびに植
物細胞を含むが、これらに限定されない。上記の宿主細胞のための適切な培養培
地および条件は、当該分野で公知である。
【０１３７】 細菌における使用のために好ましいベクターの中には、ｐＱＥ７０、ｐＱＥ６
０およびｐＱＥ−９（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．から入手可能）；ｐＢｌｕｅｓｃ
ｒｉｐｔベクター、Ｐｈａｇｅｓｃｒｉｐｔベクター、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１６
ａ、ｐＮＨ１８Ａ、ｐＮＨ４６Ａ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓ
ｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．から入手可能）；およびｐｔｒｃ９９ａ、ｐＫＫ２２３
−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤＲ５４０、ｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂ
ｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．から入手可能）を含む。好ましい真核生物ベクターの中
には、ｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１およびｐＳＧ（Ｓ
ｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能）；ならびにｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ
およびｐＳＶＬ（Ｐｈａｒｍａｃｉａから入手可能）がある。酵母系における使
用のために好ましい発現ベクターとしては、ｐＹＥＳ２、ｐＹＤ１、ｐＴＥＦ１
／Ｚｅｏ、ｐＹＥＳ２／ＧＳ、ｐＰＩＣＺ、ｐＧＡＰＺ、ｐＧＡＰＺａｌｐｈ、
ｐＰＩＣ９、ｐＰＩＣ３．５、ｐＨＩＬ−Ｄ２、ｐＨＩＬ−Ｓ１、ｐＰＩＣ３．
５Ｋ、ｐＰＩＣ９Ｋ、およびＰＡＯ８１５（全てが、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃ
ａｒｌｂａｄ，ＣＡから入手可能）が挙げられるがこれらに限定されない。他の
適切なベクターは、当業者に容易に明らかである。
【０１３８】 宿主細胞への構築物の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥ
ＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフ
ェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染、または他の方法によっ
てもたらされ得る。このような方法は、Ｄａｖｉｓら、Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （１９８６）のような多く
の標準的研究室マニュアルに記載される。本発明のポリペプチドは、実際、組換
えベクターを欠損する宿主細胞によって発現され得ることが特に意図される。
【０１３９】 本発明のポリペプチドは、硫酸アンモニウム沈殿またはエタノール沈殿、酸抽
出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマ
トグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグ
ラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマト
グラフィーを含む周知の方法によって組換え細胞培養物から回収され得、そして
精製され得る。最も好ましくは、高速液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）
が精製のために使用される。
【０１４０】 本発明のポリペプチドはまた、以下から回収され得る：直接単離されるかまた
は培養されるかにかかわらず、体液、組織および細胞を含む天然の供給源から精
製された産物；化学的合成手順の産物；ならびに、例えば、細菌細胞、酵母細胞
、高等植物細胞、昆虫細胞、および哺乳動物細胞を含む、原核生物宿主または真
核生物宿主から組換え技術によって産生された産物。組換え産生手順に使用され
る宿主に依存して、本発明のポリペプチドは、グリコシル化されてもまたはグリ
コシル化されていなくてもよい。さらに、本発明のポリペプチドはまた、宿主媒
介プロセスの結果として、いくつかの場合において、最初の改変されたメチオニ
ン残基を含み得る。従って、一般に、翻訳開始コドンによってコードされるＮ末
端メチオニンが、すべての真核生物細胞における翻訳後の任意のタンパク質から
高い効率で除去されることは当該分野において周知である。ほとんどのタンパク
質においてＮ末端メチオニンもまた、ほとんどの原核生物において効果的に除去
されるが、いくつかのタンパク質について、この原核生物除去プロセスは、Ｎ末
端メチオニンが共有結合するアミノ酸の性質に依存しており、非効率的である。
【０１４１】 １つの実施形態において、酵母Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓは、真核細胞
系において、本発明のポリペプチドを発現させるために使用される。Ｐｉｃｈｉ
ａ ｐａｓｔｏｒｉｓは、メタノールをその唯一の炭素供給源として代謝し得る
メチル栄養性（ｍｅｔｈｙｌｏｔｒｏｐｈｉｃ）酵母である。メタノール代謝経
路における主要な工程は、Ｏ2を使用してのホルムアルデヒドへのメタノールの
酸化である。この反応は、酵素アルコールオキシダーゼによって触媒される。そ
の唯一の炭素供給源としてメタノールを代謝するために、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓ
ｔｏｒｉｓは、Ｏ2に対するアルコールオキシダーゼの比較的低い親和性に部分
的に起因して、高レベルのアルコールオキシダーゼを生成する。結果的に、主要
な炭素供給源としてメタノールに依存する増殖培地において、２つのアルコール
オキシダーゼ遺伝子（ＡＯＸ１）のうちの１つのプロモーター領域は、非常に活
性である。メタノールの存在下で、ＡＯＸ１遺伝子から産生されるアルコールオ
キシダーゼは、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓにおける総可溶性タンパク質の
うちのおよそ３０％までを含む。Ｅｌｌｉｓ，Ｓ．Ｂ．ら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．
Ｂｉｏｌ．５：１１１１〜２１（１９８５）；Ｋｏｕｔｚ，Ｐ．Ｊ．ら、Ｙｅａ
ｓｔ ５：１６７〜７７（１９８９）；Ｔｓｃｈｏｐｐ，Ｊ．Ｆ．ら、Ｎｕｃｌ
．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１５：３８５９〜７６（１９８７）を参照のこと。従っ
て、ＡＯＸ１調節配列の全てまたは一部の転写調節下の異種コード配列（例えば
、本発明のポリヌクレオチドなど）は、メタノールの存在下で増殖したＰｉｃｈ
ｉａ酵母において、指数関数的に高レベルで発現される。
【０１４２】 １つの例において、プラスミドベクターｐＰＩＣ９Ｋは、「Ｐｉｃｈｉａ Ｐ
ｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ」，Ｄ．Ｒ．ＨｉｇｇｉｎｓおよびＪ．Ｃｒｅｇｇ編（Ｔｈｅ Ｈｕｍａｎａ
Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，１９９８）において本質的に記載されるよ
うに、Ｐｉｃｈｅａ酵母系において、本明細書中に示されるように本発明のポリ
ペプチドをコードするＤＮＡを発現させるために使用される。この発現ベクター
は、マルチクローニング部位の上流に位置するＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ
アルカリホスファターゼ（ＰＨＯ）分泌シグナルペプチド（すなわち、リーダー
）に連結された強力なＡＯＸ１プロモーターによって、本発明のポリペプチドの
発現および分泌を可能にする。
【０１４３】 多くの他の酵母ベクター（例えば、ｐＹＥＳ２、ｐＹＤ１、ｐＴＥＦ１／Ｚｅ
ｏ、ｐＹＥＳ２／ＧＳ、ｐＰＩＣＺ、ｐＧＡＰＺ、ｐＧＡＰＺａｌｐｈａ、ｐＰ
ＩＣ９、ｐＰＩＣ３．５、ｐＨＩＬ−Ｄ２、ｐＨＩＬ−Ｓ１、ｐＰＩＣ３．５Ｋ
、およびＰＡＯ８１５）は、当業者が容易に理解するように、提案された発現構
築物が必要とされる場合インフレームのＡＵＧを含む転写、翻訳、分泌（所望さ
れる場合）などの適切に配置されたシグナルを提供する限り、ｐＰＩＣ９Ｋの代
わりに使用され得る。
【０１４４】 別の実施形態において、異種コード配列（例えば、本発明のポリヌクレオチド
など）の高レベルの発現は、本発明の異種ポリヌクレオチドを発現ベクター（例
えば、ｐＧＡＰＺまたはｐＧＡＰＺａｌｐｈａなど）中にクローニングし、そし
てメタノールの非存在下で酵母培養物を増殖させることによって達成され得る。
【０１４５】 本明細書において議論されるベクター構築物を含む宿主細胞を含むことに加え
て、本発明はまた、脊椎動物起源（特に、哺乳動物起源）の一次（ｐｒｉｍａｒ
ｙ）宿主細胞、二次（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ）宿主細胞、および不死化宿主細胞を
含む。これらの宿主細胞は、内因性の遺伝物質（例えば、コード配列）を欠失ま
たは置換するように操作されており、そして／または本発明のポリヌクレオチド
と作動可能に連結された遺伝物質（例えば、異種ポリヌクレオチド配列）を含む
ように操作され、そして内因性のポリヌクレオチドを活性化、変更、および／ま
たは増幅する。例えば、当該分野で公知の技術は、相同組換えを介して、異種制
御領域（例えば、プロモーターおよび／またはエンハンサー）ならびに内因性ポ
リヌクレオチド配列を作動可能に連結するために使用され得る（例えば、１９９
７年６月２４日に発行された米国特許第５，６４１，６７０号；１９９６年９月
２６日に公開された国際公開第ＷＯ ９６／２９４１１号；１９９４年８月４日
に公開された国際公開第ＷＯ ９４／１２６５０号；Ｋｏｌｌｅｒら，Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９３２−８９３５（１９８９
）；およびＺｉｊｌｓｔｒａら，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５−４３８（１９
８９）を参照のこと。これらの開示の各々は、それら全体において参考として援
用される）。
【０１４６】 さらに、本発明のポリペプチドは、当該分野で公知の技術を用いて化学合成さ
れ得る（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，１９８３，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕ
ｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｗ．Ｈ．
Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．，Ｎ．Ｙ．およびＨｕｎｋａｐｉｌｌｅｒら，Ｎａ
ｔｕｒｅ，３１０：１０５−１１１（１９８４）を参照のこと）。例えば、ポリ
ペプチドのフラグメントに対応するポリペプチドは、ペプチド合成機の使用によ
り合成され得る。さらに、所望の場合、非古典的アミノ酸または化学的アミノ酸
アナログが、置換または付加としてこのポリペプチド配列に導入され得る。非古
典的アミノ酸としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：通常のアミ
ノ酸のＤ異性体、２，４−ジアミノ酪酸、ａ−アミノイソ酪酸、４−アミノ酪酸
、Ａｂｕ、２−アミノ酪酸、ｇ−Ａｂｕ、ｅ−Ａｈｘ、６−アミノヘキサン酸、
Ａｉｂ、２−アミノイソ酪酸、３−アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイ
シン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトル
リン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、フェニルグリ
シン、シクロヘキシルアラニン、ｂ−アラニン、フルオロアミノ酸、デザイナー
アミノ酸（例えば、ｂ−メチルアミノ酸）、Ｃａ−メチルアミノ酸、Ｎａ−メチ
ルアミノ酸、および一般のアミノ酸アナログ。さらに、アミノ酸はＤ（右旋性）
またはＬ（左旋性）であり得る。
【０１４７】 本発明は、翻訳の間または翻訳後に、例えば、グリコシル化、アセチル化、リ
ン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質
分解切断、抗体分子または他の細胞性リガンドへの結合などによって示差的に改
変される本発明のポリペプチドを含む。任意の多数の化学的改変は、以下を含む
がこれらに限定されない公知の技術によって実施され得る：臭化シアン、トリプ
シン、キモトリプシン、パパイン、Ｖ８プロテアーゼ、ＮａＢＨ4による特異的
化学的切断；アセチル化、ホルミル化、酸化、還元；ツニカマイシンの存在下で
の代謝合成；など。
【０１４８】 本発明によって含まれるさらなる翻訳後修飾としては、例えば、以下などが挙
げられる：Ｎ結合型もしくはＯ結合型の炭水化物鎖（Ｎ末端またはＣ末端のプロ
セシング）、アミノ酸骨格への化学部分の結合、Ｎ結合型もしくはＯ結合型の炭
水化物鎖の化学修飾、および原核生物宿主細胞発現の結果としてのＮ末端メチオ
ニン残基の付加もしくは欠失。このポリペプチドはまた、検出可能な標識（例え
ば、酵素標識、蛍光標識、同位体標識または親和性標識）を用いて改変して、こ
のタンパク質の検出および単離が可能にされ得る。
【０１４９】 本発明によってまた、さらなる利点（例えば、このポリペプチドの溶解度、安
定性および循環時間の増加、または免疫原性の減少）を提供し得る、本発明のポ
リペプチドの化学修飾誘導体が提供される（米国特許第４，１７９，３３７号を
参照のこと）。誘導体化のための化学部分は、水溶性ポリマー（例えば、ポリエ
チレングリコール、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、カ
ルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコールなど）から選
択され得る。このポリペプチドは、この分子内のランダムな位置で、またはこの
分子内の所定の位置で改変され得、そして１、２、３以上の結合した化学部分を
含み得る。
【０１５０】 このポリマーは、任意の分子量のポリマーであり得、そして分枝状であっても
非分枝状であってもよい。ポリエチレングリコールに関しては、好ましい分子量
は、取り扱いおよび製造の容易さのために、約１ｋＤａと約１００ｋＤａとの間
（用語「約」は、ポリエチレングリコールの調製において、いくつかの分子は示
した分子量よりも重く、いくつかは示した分子量よりも軽いことを示す）である
。所望の治療的プロフィール（例えば、所望される持続放出の持続時間、ある場
合には生物学的活性に対する効果、取り扱いの容易さ、抗原性の程度または抗原
性がないこと、および治療タンパク質またはアナログに対するポリエチレングリ
コールの他の公知の効果）に依存して、他のサイズが用いられ得る。
【０１５１】 ポリエチレングリコール分子（または他の化学的部分）は、このタンパク質の
機能的ドメインまたは抗原性ドメインに対する効果を考慮してタンパク質に結合
されるべきである。当業者に利用可能な多数の結合方法が存在する（例えば、本
明細書中に参考として援用される、ＥＰ ０ ４０１ ３８４（Ｇ−ＣＳＦにＰ
ＥＧを結合する）、Ｍａｌｉｋら，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２０：１０２８−
１０３５（１９９２）（塩化トレシルを用いたＧＭ−ＣＳＦのペグ化（ｐｅｇｙ
ｌａｔｉｏｎ）を報告する）もまた参照のこと）。例えば、ポリエチレングリコ
ールは、反応性基（例えば、遊離のアミノ基またはカルボキシル基）によってア
ミノ酸残基を介して共有結合され得る。反応性基は、活性化ポリエチレングリコ
ール分子が結合し得る基である。遊離のアミノ基を有するアミノ酸残基としては
、リジン残基およびＮ末端アミノ酸残基が挙げられ得る；遊離のカルボキシル基
を有するアミノ酸残基としては、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基および
Ｃ末端アミノ酸残基が挙げられ得る。スルフヒドリル残基もまた、ポリエチレン
グリコール分子を結合するための反応性基として用いられ得る。治療目的のため
に好ましいのは、アミノ基での結合、例えば、Ｎ末端またはリジン基での結合で
ある。
【０１５２】 Ｎ末端で化学修飾されたタンパク質を具体的に所望し得る。ポリエチレングリ
コールを本発明の組成の例示として用いて、種々のポリエチレングリコール分子
から（分子量、分枝などによって）、反応混合物中でのポリエチレングリコール
分子のタンパク質（ポリペプチド）分子に対する比、行われるべきペグ化反応の
型、および選択されたＮ末端ペグ化タンパク質の獲得方法を選択し得る。Ｎ末端
ペグ化調製物の獲得方法（すなわち、必要な場合、この部分を他のモノペグ化部
分から分離すること）は、ペグ化タンパク質分子の集団からの、Ｎ末端ペグ化物
質の精製により行われ得る。Ｎ末端修飾で化学修飾された選択的タンパク質は、
特定のタンパク質における誘導体化に利用可能な異なる型の第１級アミノ基（リ
ジン対Ｎ末端）の示差的反応性を利用する還元的アルキル化によって達成され得
る。適切な反応条件下では、カルボニル基含有ポリマーを用いた、Ｎ末端でのタ
ンパク質の実質的に選択的な誘導体化が達成される。
【０１５３】 本発明のポリペプチドは、単量体または多量体（すなわち、二量体、三量体、
四量体およびより高度の多量体）であり得る。従って、本発明は、単量体および
多量体の本発明のポリペプチド、それらの調製ならびにそれらを含む組成物（好
ましくは治療薬）に関する。特定の実施形態では、本発明のポリペプチドは、単
量体、二量体、三量体または四量体である。さらなる実施形態では、本発明の多
量体は、少なくとも二量体、少なくとも三量体、または少なくとも四量体である
。
【０１５４】 本発明によって含まれる多量体は、ホモマーまたはヘテロマーであり得る。本
明細書中で用いられる場合、用語ホモマーは、配列番号Ｙのアミノ酸配列に対応
するかまたは配列番号Ｘによってコードされるアミノ酸配列または配列番号Ｘの
相補体、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺによってコードされるアミノ酸配
列（本明細書中に記載されるこれらに対応する、フラグメント、改変体、スプラ
イス改変体および融合タンパク質を含む）のみを含む多量体をいう。これらのホ
モマーは、同一または異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み得る。特
定の実施形態では、本発明のホモマーは、同一のアミノ酸配列を有するポリペプ
チドのみを含む多量体である。別の特定の実施形態では、本発明のホモマーは、
異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む多量体である。特定の実施形態
では、本発明の多量体は、ホモ二量体（例えば、同一または異なるアミノ酸配列
を有するポリペプチドを含む）あるいはホモ三量体（例えば、同一および／また
は異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む）である。さらなる実施形態
では、本発明のホモマー性多量体は、少なくともホモ二量体、少なくともホモ三
量体または少なくともホモ四量体である。
【０１５５】 本明細書中で用いられる場合、用語ヘテロマーとは、本発明のポリペプチドに
加えて、１つ以上の異種ポリペプチド（すなわち、異なるタンパク質のポリペプ
チド）を含む多量体をいう。特定の実施形態では、本発明の多量体は、ヘテロ二
量体、ヘテロ三量体またはヘテロ四量体である。さらなる実施形態では、本発明
のヘテロマー性多量体は、少なくともヘテロ二量体、少なくともヘテロ三量体ま
たは少なくともヘテロ四量体である。
【０１５６】 本発明の多量体は、疎水性、親水性、イオン性および／もしくは共有結合性の
結合の結果であり得、ならびに／または例えば、リポソーム形成によって間接的
に連結され得る。従って、１つの実施形態では、本発明の多量体（例えば、ホモ
二量体またはホモ三量体など）は、本発明のポリペプチドが溶液中で互いに接触
する場合に形成される。別の実施形態では、本発明のへテロ多量体（例えば、ヘ
テロ三量体またはヘテロ四量体など）は、本発明のポリペプチドが、溶液中で本
発明のポリペプチドに対する抗体（本発明の融合タンパク質中の異種ポリペプチ
ド配列に対する抗体を含む）と接触する場合に、形成される。他の実施形態では
、本発明の多量体は、本発明のポリペプチドとの、および／または本発明のポリ
ペプチド間での共有結合によって形成される。このような共有結合は、ポリペプ
チド配列（例えば、配列番号Ｙに列挙されるか、または配列番号Ｘおよび／もし
くはｃＤＮＡプラスミド：Ｚによってコードされるポリペプチド中に含まれる、
ポリペプチド配列）中に含まれる１以上のアミノ酸残基を含み得る。１例では、
この共有結合は、ネイティブ（すなわち、天然に存在する）ポリペプチドにおい
て相互作用するポリペプチド配列間に存在するシステイン残基間での架橋である
。別の例では、この共有結合は、化学的操作または組換え操作の結果である。あ
るいは、このような共有結合は、融合タンパク質中の異種ポリペプチド配列にお
いて含まれる、１以上のアミノ酸残基を含み得る。１例では、共有結合は、本発
明の融合タンパク質に含まれる異種配列間にある（例えば、米国特許第５，４７
８，９２５号を参照のこと）。特定の例では、この共有結合は、（本明細書中に
記載されるような）本発明のＦｃ融合タンパク質に含まれる異種配列間にある。
別の特定の例では、本発明の融合タンパク質の共有結合は、共有結合した多量体
を形成し得る別のタンパク質（例えば、オステオプロテゲリン（ｏｓｔｅｏｐｒ
ｏｔｅｇｅｒｉｎ）（例えば、国際公開第ＷＯ ９８／４９３０５号（この内容
はその全体が本明細書中で参考として援用される）を参照のこと）など）由来の
異種ポリペプチド配列間にある。別の実施形態では、２以上の本発明のポリペプ
チドは、ペプチドリンカーを介して連結される。例としては、米国特許第５，０
７３，６２７号（本明細書中に参考として援用される）に記載されるペプチドリ
ンカーが挙げられる。ペプチドリンカーによって隔てられた本発明の複数のポリ
ペプチドを含むタンパク質は、従来の組換えＤＮＡ技術を用いて生成され得る。
【０１５７】 本発明の多量体ポリペプチドを調製する別の方法は、ロイシンジッパーまたは
イソロイシンジッパーのポリペプチド配列に融合した本発明のポリペプチドの使
用を含む。ロイシンジッパードメインおよびイソロイシンジッパードメインは、
それらが発見されたタンパク質の多量体化を促進するポリペプチドである。ロイ
シンジッパーは、本来、いくつかのＤＮＡ結合タンパク質（Ｌａｎｄｓｃｈｕｌ
ｚら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１７５９（１９８８））において同定され、そ
してそれ以来、種々の異なるタンパク質から見出されている。公知のロイシンジ
ッパーは、二量体化または三量体化する天然に存在するペプチド、およびそれら
の誘導体である。本発明の可溶性多量体タンパク質を産生するために適切なロイ
シンジッパードメインの例は、ＰＣＴ出願ＷＯ９４／１０３０８（本明細書中で
参考として援用される）に記載されるロイシンジッパードメインである。溶液中
で二量体化または三量体化するポリペプチド配列と融合した、本発明のポリペプ
チドを含む組換え融合タンパク質は、適切な宿主細胞において発現され、そして
得られる可溶性多量体融合タンパク質は、当該分野で公知の技術を使用して、培
養上清から回収される。
【０１５８】 本発明の三量体ポリペプチドは、増大した生物学的活性の利点を提供し得る。
好ましいロイシンジッパー部分およびイソロイシン部分は、優先的に三量体を形
成するものである。１つの例は、Ｈｏｐｐｅら（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ３
４４：１９１，（１９９４））および米国特許出願第０８／４４６，９２２号（
本明細書中で参考として援用される）に記載されるような、肺サーファクタント
タンパク質Ｄ（ＳＰＤ）から誘導されるロイシンジッパーである。天然に存在す
る三量体タンパク質から誘導される他のペプチドは、本発明の三量体ポリペプチ
ドの調製において使用され得る。
【０１５９】 別の例において、本発明のタンパク質は、Ｆｌａｇ（登録商標）ポリペプチド
配列を含む本発明の融合タンパク質に含まれるＦｌａｇ（登録商標）ポリペプチ
ド配列間の相互作用によって結合される。さらなる実施形態において、本発明の
結合タンパク質は、本発明のＦｌａｇ（登録商標）融合タンパク質に含まれる異
種ポリペプチド配列と抗Ｆｌａｇ（登録商標）抗体との間の相互作用によって結
合される。
【０１６０】 本発明の多量体は、当該分野で公知の化学技術を用いて生成され得る。例えば
、本発明の多量体中に含まれることが所望されるポリペプチドは、当該分野で公
知のリンカー分子およびリンカー分子長最適化技術を用いて化学的に架橋され得
る（例えば、米国特許第５，４７８，９２５号を参照のこと、これは、本明細書
中でその全体が参考として援用される）。さらに、本発明の多量体は、多量体中
に含まれることが所望されるポリペプチドの配列中に位置するシステイン残基間
に１つ以上の分子間架橋を形成するために、当該分野で公知の技術を用いて生成
され得る（例えば、米国特許第５，４７８，９２５号を参照のこと、これは、本
明細書中でその全体が参考として援用される）。さらに、本発明のポリペプチド
は、そのポリペプチドのＣ末端またはＮ末端へのシステインまたはビオチンの付
加によって慣用的に改変され得、そして当該分野で公知の技術が、１つ以上のこ
れらの改変したポリペプチドを含む多量体を生成するために適用され得る（例え
ば、米国特許第５，４７８，９２５号を参照のこと、これは、本明細書中でその
全体が参考として援用される）。さらに、当該分野で公知の技術は、本発明の多
量体に含まれることが所望されるポリペプチド成分を含むリポソームを生成する
ために適用され得る（例えば、米国特許第５，４７８，９２５号を参照のこと、
これは、本明細書中でその全体が参考として援用される）。
【０１６１】 あるいは、本発明の多量体は、当該分野で公知の遺伝子工学技術を用いて生成
され得る。１つの実施形態において、本発明の多量体中に含まれるポリペプチド
は、本明細書中に記載されるかまたはさもなくば当該分野で公知の融合タンパク
質技術を用いて組換え産生される（例えば、米国特許第５，４７８，９２５号を
参照のこと、これは、本明細書中でその全体が参考として援用される）。特定の
実施形態において、本発明のホモ二量体をコードするポリヌクレオチドは、本発
明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を、リンカーポリペプチド
をコードする配列に連結し、次いで、もともとのＣ末端からＮ末端へ逆方向にポ
リペプチドの翻訳産物をコードする合成ポリヌクレオチド（リーダー配列を欠く
）に、さらに連結することによって生成される（例えば、米国特許第５，４７８
，９２５号を参照のこと、これは、本明細書中でその全体が参考として援用され
る）。別の実施形態において、本明細書中に記載されるかまたはさもなくば当該
分野で公知の組換え技術が適用されて、膜貫通ドメイン（あるいは疎水性ペプチ
ドまたはシグナルペプチド）を含む本発明の組換えポリペプチドを生成し、そし
てこれは、膜再構成技術によってリポソームに取り込まれ得る（例えば、米国特
許第５，４７８，９２５号を参照のこと、これは、本明細書中でその全体が参考
として援用される）。
【０１６２】 （抗体） 本発明のさらなるポリペプチドは、本発明の配列番号Ｙのポリペプチド、ポリ
ペプチドフラグメント、もしくは改変体、および／または本発明のエピトープに
免疫特異的に結合する（特異的抗体−抗原結合をアッセイするための当該分野で
周知のイムノアッセイにより決定されるような）抗体およびＴ−細胞抗原レセプ
ター（ＴＣＲ）に関する。本発明の抗体としては、ポリクローナル抗体、モノク
ローナル抗体、多重特異的抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体、単
鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、Ｆａｂ発現ライブラ
リーによって産生されたフラグメント、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例え
ば、本発明の抗体に対する抗Ｉｄ抗体が挙げられる）、および任意の上記抗体の
エピトープ結合フラグメントが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書
中で使用される場合、用語「抗体」とは、免疫グロブリン分子および免疫グロブ
リン分子の免疫学的に活性な部分（すなわち、抗原に免疫特異的に結合する抗原
結合部位を含む分子）をいう。本発明の免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン
分子の任意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩ
ｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１
およびＩｇＡ２）またはサブクラスの分子であり得る。
【０１６３】 最も好ましくは、抗体は、本発明のヒト抗原結合抗体フラグメントであり、そ
してＦａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、単
鎖抗体、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｓｄＦｖ）およびＶＬドメインまたはＶＨドメ
インのいずれかを含むフラグメントが挙げられるが、これらに限定されない。単
鎖抗体を含む抗原結合抗体フラグメントは、可変領域を、単独であるいは以下：
ヒンジ領域、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインの全体また
は部分との組み合わせで含み得る。ヒンジ領域、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイ
ンおよびＣＨ３ドメインと可変領域の任意の組み合わせをもまた含む抗原結合フ
ラグメントもまた、本発明に含まれる。本発明の抗体は、鳥類および哺乳動物を
含む任意の動物起源由来であり得る。好ましくは、この抗体は、ヒト、ネズミ（
例えば、マウスおよびラット）、ロバ、ウサギ（ｓｈｉｐ ｒａｂｂｉｔ）、ヤ
ギ、モルモット、ラクダ、ウマ、またはニワトリである。本明細書中で使用され
る場合、「ヒト」抗体は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含
み、そしてヒト免疫グロブリンライブラリーから、または１つ以上のヒト免疫グ
ロブリンについてトランスジェニックでかつ内因性免疫グロブリンを発現しない
動物（以下および、例えば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらによる米国特許第５，
９３９，５９８号に記載されるような）から単離された抗体を含む。
【０１６４】 本発明の抗体は、一重特異的、二重特異的、三重特異的またはより多価の多重
特異的であり得る。多重特異的な抗体は、本発明のポリペプチドの異なるエピト
ープに対して特異的であり得るか、または本発明のポリペプチドおよび異種エピ
トープ（例えば、異種ポリペプチドまたは固体支持体物質）の両方に特異的であ
り得る。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ ９３／１７７１５；ＷＯ９２／０８８０２；
ＷＯ ９１／００３６０；ＷＯ ９２／０５７９３；Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．１４７：６０−６９（１９９１）；米国特許第４，４７４，８９３号；
同第４，７１４，６８１号；同第４，９２５，６４８号；同第５，５７３，９２
０号；同第５，６０１，８１９号；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
１４８：１５４７−１５５３（１９９２）を参照のこと。
【０１６５】 本発明の抗体は、これらが認識または特異的に結合する、本発明のポリペプチ
ドのエピトープまたは部分に関して記載または特定化され得る。このエピトープ
またはポリペプチドの部分は、例えば、Ｎ末端およびＣ末端位置によって、連続
するアミノ酸残基におけるサイズによって本明細書中に記載されるように特定さ
れ得る。本発明の任意のエピトープまたはポリペプチドに特異的に結合する抗体
はまた、排除され得る。従って、本発明は、本発明のポリペプチドを特異的に結
合し、そして本発明のポリペプチドの排除を可能にする抗体を含む。
【０１６６】 本発明の抗体はまた、その交差反応性について記載または特定化され得る。本
発明のポリペプチドの任意の他のアナログ、オルソログまたはホモログを結合し
ない抗体が、含まれる。本発明のポリペプチドに対して少なくとも９５％、少な
くとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少な
くとも７０％、少なくとも６５％、少なくとも６０％、少なくとも５５％および
少なくとも５０％の同一性（当該分野で公知の方法および本明細書中に記載され
る方法を用いて計算されるように）を有するポリペプチドを結合する抗体もまた
、本発明に含まれる。特定の実施形態において、本発明の抗体は、ヒトタンパク
質の、マウスホモログ、ラットホモログおよび／またはウサギホモログならびに
対応するそれらのエピトープと交差反応する。本発明のポリペプチドに対して９
５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６
５％未満、６０％未満、５５％未満および５０％未満の同一性（当該分野で公知
の方法および本明細書中に記載される方法を用いて計算されるように）を有する
ポリペプチドを結合しない抗体もまた、本発明に含まれる。特定の実施形態にお
いて、上記の交差反応性は、本明細書中に開示された、任意の単一特異的な抗原
性または免疫原性ポリペプチド、あるいは２、３、４、５以上の特異的抗原性お
よび／または免疫原生ポリペプチドの組み合わせに関する。さらに、ストリンジ
ェントなハイブリダイゼーション条件下（本明細書中で記載されるような）で本
発明のポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードさ
れるポリペプチドを結合する抗体が、本発明に含まれる。本発明の抗体はまた、
本発明のポリペプチドに対するそれらの結合親和性について記載または特定化さ
れ得る。好ましい結合親和性としては、５×１０-2Ｍ未満、１０-2Ｍ未満、５×
１０-3Ｍ未満、１０-3Ｍ未満、５×１０-4Ｍ未満、１０-4Ｍ未満、５×１０-5Ｍ
未満、１０-5Ｍ未満、５×１０-6Ｍ未満、１０-6Ｍ未満、５×１０-7Ｍ未満、１
０-7Ｍ未満、５×１０-8Ｍ未満、１０-8Ｍ未満、５×１０-9Ｍ未満、１０-9Ｍ未
満、５×１０-10Ｍ未満、１０-10Ｍ未満、５×１０-11Ｍ未満、１０-11Ｍ未満、
５×１０-12Ｍ未満、１０-12Ｍ未満、５×１０-13Ｍ未満、１０-13Ｍ未満、５×
１０-14Ｍ未満、１０-14Ｍ未満、５×１０-15Ｍ未満または１０-15Ｍ未満の解離
定数すなわちＫｄを有する親和性が挙げられる。
【０１６７】 本発明はまた、競合性結合を決定するための当該分野で公知の任意の方法（例
えば、本明細書中で記載されるイムノアッセイ）によって決定されるような、本
発明のエピトープに対する抗体の結合を競合的に阻害する抗体を提供する。好ま
しい実施形態において、この抗体は、少なくとも９５％、少なくとも９０％、少
なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少
なくとも６０％、または少なくとも５０％、エピトープへの結合を競合的に阻害
する。
【０１６８】 本発明の抗体は、本発明のポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストと
して作用し得る。例えば、本発明は、本発明のポリペプチドとのレセプター／リ
ガンド相互作用を部分的または完全にのいずれかで破壊する抗体を含む。好まし
くは、本発明の抗体は、本明細書中で開示された抗原性エピトープ、またはその
部分を結合する。本発明は、レセプター特異的抗体およびリガンド特異的抗体の
両方の特徴を有する。本発明はまた、リガンド結合を妨害しないがレセプター活
性化を妨害するレセプター特異的抗体の特徴を有する。レセプター活性化（すな
わち、シグナル伝達）は、本明細書中に記載の技術、そうでなければ、当該分野
で公知の技術により決定され得る。例えば、レセプター活性化は、レセプターの
リン酸化（例えば、チロシンまたはセリン／トレオニン）、または免疫沈降それ
に続いてウェスタンブロット分析（例えば、上記のような）によってその基質を
検出することにより、決定され得る。特定の実施形態において、この抗体の非存
在下で、リガンド活性またはレセプター活性を、その活性の少なくとも９５％、
少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、
少なくとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％阻害する抗体が
提供される。
【０１６９】 本発明はまた、リガンド結合およびレセプター活性化の両方を妨げるレセプタ
ー特異的抗体、ならびにレセプターリガンド複合体を認識し、そして好ましくは
、結合していないレセプターまたは結合していないリガンドを特異的に認識しな
いレセプター特異的抗体の特徴を有する。同様に、本発明は、リガンドと結合し
、そしてレセプターへのリガンドの結合を妨げる中和抗体、およびリガントと結
合し、それによりレセプター活性化を妨げるが、リガンドがレセプターを結合す
ることを妨げない抗体を含む。さらに、本発明は、レセプターを活性化する抗体
を含む。これらの抗体は、レセプターアゴニストとして作用し得、すなわち、例
えば、レセプターの二量化を誘発することによってリガンド媒介レセプター活性
化の生物学的活性化の全てまたはサブセットのいずれかを増強するかまたは活性
化し得る。この抗体は、本明細書中に開示される本発明のペプチドの特異的生物
学的活性を含む生物学的活性についてのアゴニスト、アンタゴニストまたは逆ア
ゴニストとして特定化され得る。上記抗体アゴニストは、当該分野で公知の方法
を用いて作製され得る。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／４０２８１；米国特許第
５，８１１，０９７号；Ｄｅｎｇら、Ｂｌｏｏｄ ９２（６）：１９８１−１９
８８（１９９８）；Ｃｈｅｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８（１６）：３６６
８−３６７８（１９９８）；Ｈａｒｒｏｐら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１（４
）：１７８６−１７９４（１９９８）；Ｚｈｕら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ：５８
（１５）：３２０９−３２１４（１９９８）；Ｙｏｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ
．１６０（７）：３１７０−３１７９（１９９８）；Ｐｒａｔら、Ｊ．Ｃｅｌｌ
．Ｓｃｉ．１１１（Ｐｔ２）：２３７−２４７（１９９８）；Ｐｉｔａｒｄら、
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０５（２）：１７７−１９０（１９９
７）；Ｌｉａｕｔａｒｄら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ９（４）：２３３−２４１（１
９９７）；Ｃａｒｌｓｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１７）：１１
２９５−１１３０１（１９９７）；Ｔａｒｙｍａｎら、Ｎｅｕｒｏｎ １４（４
）：７５５−７６２（１９９５）；Ｍｕｌｌｅｒら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ６（
９）：１１５３−１１６７（１９９８）；Ｂａｒｔｕｎｅｋら、Ｃｙｔｏｋｉｎ
ｅ ８（１）：１４−２０（１９９６）（上記の文献は、全て、その全体が参考
として本明細書中に援用される）を参照のこと。
【０１７０】 本発明の抗体は、例えば、これらに限定されないが、本発明のポリペプチドを
精製し、検出し、そして標的化するために使用され得る。これらは、インビトロ
およびインビボの両方での診断方法および治療方法を含む。例えば、この抗体は
、生物学的サンプルにおける本発明のポリペプチドのレベルを定性的におよび定
量的に測定するためのイムノアッセイにおける使用を有す。例えば、Ｈａｒｌｏ
ｗら，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃ
ｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，第
２版，１９８８）（本明細書中でその全体が参照として援用される）を参照のこ
と。
【０１７１】 以下にさらに詳細に議論されるように、本発明の抗体は、単独または他の化合
物との組み合わせのいずれかで使用され得る。この抗体はさらに、ポリペプチド
または他の化合物へＮ末端でもしくはＣ末端で異種ポリペプチドに組換え的に融
合され得るか、または化学的に結合（共有結合および非共有結合を含む）され得
る。例えば、本発明の抗体は、検出アッセイにおける標識として有用な分子およ
び異種ポリペプチド、薬剤、放射性核種、または毒素のようなエフェクター分子
へ組換え的に融合または結合され得る。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０８４９
５；ＷＯ９１／１４４３８；ＷＯ８９／１２６２４；米国特許第５，３１４，９
９５号；および欧州特許第３９６，３８７号を参照のこと。
【０１７２】 本発明の抗体は、改変された（すなわち、共有結合性付着（ｃｏｖａｌｅｎｔ
ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ）が、抗体が抗イディオタイプ応答を産生するのを妨げ
ないような、抗体に対する任意の型の分子の共有結合性付着による）誘導体を含
む。例えば、制限されないが、抗体誘導体には、例えば、グリコシル化、アセチ
ル化、ぺグ化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）、リン酸化（ｐｈｏｓｐｈｙｌａｔｉｏ
ｎ）、アミド化、既知の保護基／ブロック基（ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｇｒｏｕｐ）
による誘導体化、タンパク質分解性切断、細胞性リガンドまたは他のタンパク質
への連結などによって改変された抗体が挙げられる。多数の任意の化学的改変が
、特異的化学切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝的合成など
を含むが、これらに制限されない公知の技術によって実行され得る。さらに、誘
導体は、１つ以上の非古典的アミノ酸を含み得る。
【０１７３】 本発明の抗体は、当該分野で公知の任意の適切な方法によって産生され得る。
目的の抗原に対するポリクローナル抗体は、当該分野で周知の種々の手順によっ
て産生され得る。例えば、本発明のポリペプチドが種々の宿主動物（ウサギ、マ
ウス、ラットなどを含むがこれらに限定されない）に投与されて、抗原に対して
特異的なポリクローナル抗体を含む血清の産生を誘導し得る。種々のアジュバン
トが、宿主種に依存して、免疫学的応答を増加させるために使用され得、そして
フロイント（完全および不完全）、水酸化アルミニウムのようなミネラルゲル（
ｍｉｎｅｒａｌ ｇｅｌ）、リゾレシチンのような界面活性物質、プルロニック
（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）ポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油エマルジョン、
キーホールリンペットヘモシアニン、ジニトロフェノール、ならびにＢＣＧ（カ
ルメット−ゲラン杆菌）およびｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ
のような潜在的に有用なヒトアジュバントを含むが、これらに限定されない。こ
のようなアジュバントはまた、当該分野で周知である。
【０１７４】 モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え、およびファージディスプレ
イ技術、またはそれらの組み合わせの使用を含む、当該分野で公知の広範な種々
の技術を用いて調製され得る。例えば、モノクローナル抗体は、当該分野で公知
の以下に挙げられるハイブリドーマ技術を使用して産生され得、例えば、Ｈａｒ
ｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，
（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ
，第２版、１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎ
ｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３−６
８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．１９８１）（上記の参考文献は、その全体が
参考として援用される）に教示される。本明細書中で使用される場合、用語「モ
ノクローナル抗体」とは、ハイブリドーマ技術を通して生成された抗体に限定さ
れない。用語「モノクローナル抗体」とは、任意の真核生物、原核生物、または
ファージクローンを含む単一のクローンに由来する抗体をいい、そしてその生成
される方法に由来する抗体ではない。
【０１７５】 ハイブリドーマ技術を用いて特異的抗体を産生およびスクリーニングする方法
は、当該分野で慣用的かつ周知であり、そして実施例に詳細に議論される。非限
定的な実施例において、マウスは、本発明のポリペプチドまたはそのようなペプ
チドを発現する細胞を用いて免疫され得る。一旦免疫応用が検出される（例えば
、抗原に特異的な抗体がマウスの血清中に検出される）と、マウスの脾臓を収集
しそして脾細胞を単離する。次に、その脾細胞を周知の技術によって任意の適切
な骨髄腫細胞（例えば、ＡＴＣＣから入手可能な細胞株ＳＰ２０由来の細胞）に
融合させる。ハイブリドーマを限界希釈によって選択およびクローン化する。次
に、ハイブリドーマクローンを、本発明のポリペプチドに結合し得る抗体を分泌
する細胞について、当該分野で公知の方法によってアッセイする。一般的に高い
レベルの抗体を含む腹水（ａｓｃｉｔｅｓ ｆｌｕｉｄ）が、陽性ハイブリドー
マクローンを用いてマウスを免疫させることによって、産生され得る。
【０１７６】 従って、本発明は、モノクローナル抗体および本発明の抗体を分泌するハイブ
リドーマ細胞を培養する工程を包含する方法によって産生される抗体を、生成す
る方法を提供し、ここで、好ましくは、このハイブリドーマは、骨髄腫細胞と本
発明の抗原で免疫したマウスから単離された脾細胞とを融合させ、次いで本発明
のポリペプチドと結合し得る抗体を分泌するハイブリドーマクローンについて、
融合物から生じるハイブリドーマをスクリーニングすることによって生成される
。
【０１７７】 特定のエピトープを認識する抗体フラグメントは、公知の技術により産生し得
る。例えば、本発明のＦａｂフラグメントおよびＦ（ａｂ’）２フラグメントは
、パパイン（Ｆａｂフラグメントを産生するため）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’
）２フラグメントを産生するため）のような酵素を使用して、免疫グロブリン分
子のタンパク質分解性切断によって産生され得る。Ｆ（ａｂ’）２フラグメント
は、可変領域、軽鎖定常領域および重鎖のＣＨ１ドメインを含む。
【０１７８】 例えば、本発明の抗体はまた、当該分野に公知の種々のファージディスプレイ
方法を用いて産生され得る。ファージディスプレイ方法において、機能的な抗体
ドメインは、それらをコードするポリヌクレオチド配列を保有するファージ粒子
の表面上に提示される。特定の実施形態において、このようなファージを、レパ
ートリー抗体ライブラリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、
ヒトまたはマウス）から発現される抗原結合ドメインを提示するために利用し得
る。目的の抗原と結合する抗原結合ドメインを発現するファージを、抗原を用い
て、（例えば、標識化抗原、あるいは固体表面または固体ビーズへ結合または捕
捉された抗原を使用して）選択または同定し得る。これらの方法において使用さ
れるファージは、代表的に、ファージ遺伝子ＩＩＩタンパク質またはファージ遺
伝子ＶＩＩＩタンパク質のいずれかに組換え的に融合されたＦａｂ、Ｆｖまたは
ジスルフィド安定化されたＦｖの抗体ドメインを有するファージから発現された
ｆｄおよびＭ１３結合ドメインを含む糸状（ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ）ファージ
である。本発明の抗体を作製するために用いられ得るファージディスプレイ方法
の例としては、以下に開示される方法が挙げられる：Ｂｒｉｎｋｍａｎら、Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８２：４１〜５０（１９９５）；Ａｍｅｓ
ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８４：１７７〜１８６（１９９５
）；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：９５
２〜９５８（１９９４）；Ｐｅｒｓｉｃら、Ｇｅｎｅ １８７ ９〜１８（１９
９７）；Ｂｕｒｔｏｎら、Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５
７：１９１〜２８０（１９９４）；ＰＣＴ公開 ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４
；ＰＣＴ公開 ＷＯ９０／０２８０９；ＷＯ９１／１０７３７；ＷＯ９２／０１
０４７；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９３／１１２３６；ＷＯ９５／１５９８２
；ＷＯ９５／２０４０１；ならびに米国特許第５，６９８，４２６号；同第５，
２２３，４０９号；同第５，４０３，４８４号；同第５，５８０，７１７号；同
第５，４２７，９０８号；同第５，７５０，７５３号；同第５，８２１，０４７
号；同第５，５７１，６９８号；同第５，４２７，９０８号；同第５，５１６，
６３７号；同第５，７８０，２２５号；同第５，６５８，７２７号；同第５，７
３３，７４３号および同第５，９６９，１０８号（これらのそれぞれは、その全
体が参考として援用される）。
【０１７９】 上記参考文献に記載されているように、ファージ選択後、ファージ由来の抗体
をコードする領域は、ヒト抗体を含む抗体の全体、または任意の他の所望の抗原
結合フラグメントを作製するために単離および使用され得、そして例えば、以下
に詳細に記載されるように、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母および細
菌を含む任意の所望の宿主において発現され得る。例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’お
よびＦ（ａｂ’）２フラグメントを組換え的に産生するための技術はまた、当該
分野で公知の方法を用いて使用され得る。この方法は、例えば、以下に開示され
る方法である：ＰＣＴ公開ＷＯ９２／２２３２４；Ｍｕｌｌｉｎａｘら、Ｂｉｏ
Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １２（６）：８６４−８６９（１９９２）；およびＳａ
ｗａｉら、ＡＪＲＩ ３４：２６−３４（１９９５）；およびＢｅｔｔｅｒら、
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１−１０４３（１９９８）（上記の参考文献は
、その全体が参考として援用される）。
【０１８０】 単鎖のＦｖｓおよび抗体を産生するために用いられ得る技術の例としては、米
国特許第４，９４６，７７８号および同第５，２５８，４９８号；Ｈｕｓｔｏｎ
ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２０３：４６−８８（１９
９１）；Ｓｈｕら、ＰＮＡＳ ９０：７９９５−７９９９（１９９３）；および
Ｓｋｅｒｒａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０３８−１０４０（１９８８）に
記載される技術が挙げられる。ヒトにおける抗体のインビボ使用およびインビト
ロ検出アッセイを含むいくつかの用途のために、キメラ抗体、ヒト化抗体または
ヒト抗体の使用が好ましくあり得る。キメラ抗体は、この抗体の異なる部分が異
なる動物種に由来する分子（例えば、マウスモノクローナル抗体由来の可変領域
およびヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体）である。キメラ抗体を産生す
るための方法は、当該分野において公知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２（１９８５）；Ｏｉら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑ
ｕｅｓ ４：２１４（１９８６）；Ｇｉｌｌｉｅｓら、（１９８９）Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １２５：１９１−２０２；および米国特許第５，８
０７，７１５号；同第４，８１６，５６７号；および同第４，８１６，３９７号
を参照のこと（これらは、本明細書中でその全体が参照として援用される）。ヒ
ト化抗体は、非ヒト種由来の１以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）およびヒト免疫
グロブリン分子由来のフレームワーク領域を有する所望の抗原に結合する、非ヒ
ト種抗体由来の抗体分子である。しばしば、ヒトフレームワーク領域におけるフ
レームワーク残基は、ＣＤＲドナー抗体由来の対応する残基と置換され、抗原結
合を改変（好ましくは、改善）する。これらのフレームワーク置換は、当該分野
で周知の方法により同定され、例えば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を
同定するためのＣＤＲとフレームワーク残基との相互作用のモデリング、ならび
に特定の位置における異常なフレームワーク残基を同定するための配列比較によ
る。（例えば、Ｑｕｅｅｎら、米国特許第５，５８５，０８９号；Ｒｉｅｃｈｍ
ａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３（１９８８）（これらは本明細書中で
その全体が参考として援用される）を参照のこと）。抗体は、例えば、以下を含
む当該分野で公知の種々の技術を用いてヒト化され得る：ＣＤＲ−グラフティン
グ（ｇｒａｆｔｉｎｇ）（欧州特許第２３９，４００号；ＰＣＴ公開 ＷＯ９１
／０９９６７；米国特許第５，２２５，５３９号；同第５，５３０，１０１号お
よび同第５，５８５，０８９号）、ベニヤリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）または
リサーフェイシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（欧州特許第５９２，１０６号
；欧州特許第５１９，５９６号；Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕ
ｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９−４９８（１９９１）；Ｓｔｕｄｎｉｃ
ｋａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７（６）：８０５−８１４
（１９９４）；Ｒｏｇｕｓｋａら、ＰＮＡＳ ９１：９６９−９７３（１９９４
））、およびチェーンシャッフリング（ｃｈａｉｎ ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）（米
国特許第５，５６５，３３２号）。
【０１８１】 完全なヒト抗体が、ヒト患者の治療的処置に対して特に望ましい。ヒト抗体は
、当該分野で公知の種々の方法によって作製され得、これらの方法としては、ヒ
ト免疫グロブリン配列由来の抗体ライブラリーを用いる上記のファージディスプ
レイ方法が挙げられる。米国特許第４，４４４，８８７号および同第４，７１６
，１１１号；ならびにＰＣＴ公開ＷＯ９８／４６６４５、ＷＯ９８／５０４３３
、ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９８／１６６５４、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ
９６／３３７３５、およびＷＯ９１／１０７４１（これらの各々は、その全体が
参考として本明細書中に援用される）もまた参照のこと。
【０１８２】 ヒト抗体はまた、機能的内因性免疫グロブリンの発現は出来ないが、ヒト免疫
グロブリン遺伝子を発現し得るトランスジェニックマウスを用いて産生され得る
。例えば、ヒト重鎖免疫グロブリン遺伝子およびヒト軽鎖免疫グロブリン遺伝子
の複合体は、無作為にまたは相同組換えによってマウス胚性幹細胞に導入され得
る。あるいは、ヒト可変領域、定常領域および多様性領域（ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｒｅｇｉｏｎ）は、ヒト重鎖遺伝子およびヒト軽鎖遺伝子に加えて、マウスの
胚性幹細胞に導入され得る。マウス重鎖免疫グロブリン遺伝子およびマウス軽鎖
免疫グロブリン遺伝子は、相同組換えによるヒト免疫グロブリン座の導入と別々
にまたは同時に非機能的にされ得る。特に、ＪＨ領域のホモ接合性の欠失は、内
因性抗体の産生を妨げる。この改変された胚性幹細胞を増殖させ、そして胚盤胞
に微量注入して、キメラマウスを産生する。次に、このキメラマウスを、ヒト抗
体を発現するホモ接合性の子孫を産生するために繁殖させる。トランスジェニッ
クマウスを、選択された抗原（例えば、本発明のポリペプチドの全体または一部
）を用いて通常の様式で免疫する。その抗原に対するモノクローナル抗体は、従
来のハイブリドーマ技術を用いた免疫したトランスジェニックマウスから得られ
得る。ヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、Ｂ細胞分化の間のトランスジェニック
マウスの再編成によってかくまわれ（ｈａｒｂｏｒｅｄ）、そしてその後、クラ
ススイッチングおよび体細胞変異を受ける。従って、そのような技術の使用によ
って、治療的に有用なＩｇＧ抗体、ＩｇＡ抗体、ＩｇＭ抗体およびＩｇＥ抗体の
産生が可能である。ヒト抗体を産生するためのこの技術の概要については、Ｌｏ
ｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ、Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５
−９３（１９９５）を参照のこと。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を産
生するためのこの技術のならびにそのような抗体を産生するためのプロトコール
の詳細な議論については、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９８／２４８９３；ＷＯ９２
／０１０４７；ＷＯ９６／３４０９６；ＷＯ９６／３３７３５；欧州特許第０
５９８ ８７７；米国特許第５，４１３，９２３号；同第５，６２５，１２６号
；同第５，６３３，４２５号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６６１，０
１６号；同第５，５４５，８０６号；同第５，８１４，３１８号；同第５，８８
５，７９３号；同第５，９１６，７７１号；および同第５，９３９，５９８号を
参照のこと（これらは、その全体が本明細書中に参考として援用される）。さら
に、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｅｍｏｎｔ，ＣＡ）およびＧｅｎｐｈａ
ｒｍ（Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）のような企業は、上記の技術に類似した技術を
用いて選択された抗原に対するヒト抗体を提供することに従事し得る。
【０１８３】 選択されたエピトープを完全に認識するヒト抗体を、「ガイドされた（ｇｕｉ
ｄｅｄ）選択」といわれる技術を用いて産生し得る。このアプローチにおいて、
選択された非ヒトモノクローナル抗体（例えば、マウス抗体）は、同じエピトー
プを完全に認識するヒト抗体の選択を導くために使用される（Ｊｅｓｐｅｒｓら
、Ｂｉｏ／ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １２：８９９−９０３（１９８８））。
【０１８４】 さらに、本発明のポリペプチドに対する抗体は、当業者に周知の技術を用いて
、本発明のポリペプチドを「模倣する」抗イディオタイプ抗体を生成するために
順々に利用され得る。（例えば、ＧｒｅｅｎｓｐａｎおよびＢｏｎａ、ＦＡＳＥ
Ｂ Ｊ．７（５）：４３７−４４４（１９８９）；ならびにＮｉｓｓｉｎｏｆｆ
、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（８）：２４２９−２４３８（１９９１）を参照
のこと）。例えば、結合し、そしてポリペプチドのマルチマー化（ｍｕｌｔｉｍ
ｅｒｉｚａｔｉｏｎ）および／または本発明のポリペプチドのリガンドに対する
結合を競合的に阻害する抗体を用いて、このポリペプチドのマルチマー化および
／または結合ドメインを「模倣し」、そして結果として、ポリペプチドおよび／
またはそのリガンドに結合し、そして中和する抗イディオタイプを生成し得る。
このような中和抗イディオタイプまたはこのような抗イディオタイプのＦａｂフ
ラグメントは、治療レジメンにおいて使用されて、ポリペプチドリガンドを中和
し得る。例えば、このような抗イディオタイプ抗体を使用して、本発明のポリペ
プチドを結合し得るか、そして／またはそのリガンド／レセプターを結合し得、
それによって、その生物学的活性をブロックし得る。
【０１８５】 （抗体をコードするポリヌクレオチド） 本発明はさらに、本発明の抗体およびそのフラグメントをコードするヌクレオ
チド配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明はまた、ストリンジェント
な条件下またはより低いストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で（
例えば、上記のような）、抗体（好ましくは、本発明のポリペプチドへ特異的に
結合する抗体）をコードするポリヌクレオチド、好ましくは、配列番号２および
／または４のアミノ酸配列を有するポリヌクレオチドに結合する抗体をコードす
るポリヌクレオチド、に対してハイブリダイズするポリヌクレオチドを含む。
【０１８６】 当該分野で公知の任意の方法によって、これらのポリヌクレオチドが得られ得
、そしてこれらポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が、決定され得る。例えば
、抗体のヌクレオチド配列が公知である場合、この抗体をコードするポリヌクレ
オチドは、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドからアセンブルされ得（例え
ば、Ｋｕｔｍｅｉｅｒら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １７：２４２（１９９
４）に記載されるように）、これは、手短に言えば、抗体をコードする配列の部
分を含むオーバーラップするヌクレオチドの合成、それらのオリゴヌクレオチド
のアニーリングおよび連結、ならびに次いでＰＣＲによるこの連結されたオリゴ
ヌクレオチドの増幅を含む。
【０１８７】 あるいは、抗体をコードするポリヌクレオチドは、適切な供給源からの核酸か
ら作製され得る。特定の抗体をコードする核酸を含むクローンは入手不可能だが
、その抗体分子の配列が既知である場合、免疫グロブリンをコードする核酸は、
化学的に合成され得るか、あるいは適切な供給源（例えば、抗体ｃＤＮＡライブ
ラリー、または抗体を発現する任意の組織もしくは細胞（例えば、本発明の抗体
の発現のために選択されたハイブリドーマ細胞）から生成されたｃＤＮＡライブ
ラリー、またはそれから単離された核酸（好ましくはポリＡ＋ＲＮＡ））を、例
えば、抗体をコードするｃＤＮＡライブラリーからのｃＤＮＡクローンを同定す
るために、その配列の３’末端および５’末端にハイブリダイズ可能な合成プラ
イマーを使用するＰＣＲ増幅によって、またはその特定の遺伝子配列に特異的な
オリゴヌクレオチドプローブを使用するクローニングによって得られ得る。ＰＣ
Ｒによって作製された増幅された核酸は、次いで、当該分野で周知の任意の方法
を用いて、複製可能なクローニングベクターにクローニングされ得る。
【０１８８】 一旦、抗体のヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列が決定されると、
抗体のヌクレオチド配列は、ヌクレオチド配列の操作について当該分野で周知の
方法（例えば、組換えＤＮＡ技術、部位指向性変異誘発、ＰＣＲなど（例えば、
Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９９０，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒ
ｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ
およびＡｕｓｕｂｅｌら編、１９９８，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ
ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ
，ＮＹに記載の技術を参照のこと。これらは両方がその全体において本明細書に
参考として援用される。））を用いて操作され、例えば、アミノ酸の置換、欠失
、および／または挿入を生成するように異なるアミノ酸配列を有する抗体を作製
し得る。
【０１８９】 特定の実施形態では、重鎖および／または軽鎖の可変ドメインのアミノ酸配列
は、相補性決定領域（ＣＤＲ）の配列を同定するために、当該分野で周知の方法
、例えば、他の重鎖および軽鎖の可変領域の既知のアミノ酸配列を比較して、配
列超可変性領域を決定する方法、によって、調べられ得る。慣用的組換えＤＮＡ
技術を使用して、一つ以上のＣＤＲが、フレームワーク領域内、例えば、上記の
ように、非ヒト抗体をヒト化させるためにヒトフレームワーク領域内に挿入され
得る。このフレームワーク領域は、天然に存在、または共通するフレームワーク
領域であり得、そして好ましくはヒトフレームワーク領域であり得る（ヒトフレ
ームワーク領域の一覧については、例えばＣｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉ
ｏｌ． ２７８：４５７−４７９（１９９８）を参照のこと）。好ましくは、フ
レームワーク領域およびＣＤＲの組合せによって生成するポリヌクレオチドは、
本発明のポリペプチドに特異的に結合する抗体をコードする。好ましくは、上で
考察したように、一つ以上のアミノ酸の置換は、フレームワーク領域内で起こり
、そして好ましくは、このアミノ酸置換は、その抗原への抗体の結合を改善する
。さらに、このような方法は、アミノ酸置換させるため、または鎖内ジスルフィ
ド結合に参加している一つ以上の可変領域システイン残基を欠失させて、一つ以
上の鎖内ジスルフィド結合が欠けた抗体分子を生成させるために、使用され得る
。ポリペプチドに対する他の改変は、本発明および当該分野の技術によって達成
される。
【０１９０】 さらに、適切な抗原特異性のマウス抗体分子からの遺伝子を、適切な生物学的
活性のヒト抗体分子からの遺伝子とともに、スプライシングすることによる、「
キメラ抗体」（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
８１：８５１−８５５（１９８４）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３
１２：６０４−６０８（１９８４）；Ｔａｋｅｄａら、Ｎａｔｕｒｅ ３１４：
４５２−４５４（１９８５））の産生のために開発された技術が、使用され得る
。上記のように、キメラ抗体は、異なる部分が異なる動物の種に由来する分子（
例えばマウスｍＡｂに由来する可変領域およびヒト免疫グロブリン定常領域を有
する分子）であり、例えばヒト化抗体である。
【０１９１】 あるいは、一本鎖抗体の産生について記載された技術（米国特許第４，９４６
，７７８号；Ｂｉｒｄ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２（１９９８）；
Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８
７９−５８８３（１９９８）；およびＷａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５４
４−５４（１９８９））は、一本鎖抗体を産生するために適合され得る。一本鎖
抗体は、アミノ酸架橋を介して、Ｆｖ領域の重鎖および軽鎖フラグメントを連結
し、一本鎖ポリペプチドを生じることによって形成される。Ｅ．ｃｏｌｉにおけ
る機能的Ｆｖフラグメントのアセンブリのための技術もまた使用され得る（Ｓｋ
ｅｒｒａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：１０３８−１０４１（１９８８））。
【０１９２】 （抗体産生の方法） 本発明の抗体は、抗体の合成について当該技術分野で公知の任意の方法によっ
て、特に化学合成によって、または好ましくは組換え発現技術によって、産生さ
れ得る。
【０１９３】 本発明の抗体、またはそのフラグメント、誘導体もしくはアナログ（例えば、
本発明の抗体の重鎖もしくは軽鎖、または本発明の一本鎖抗体）の組換え発現は
、抗体をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの構築を必要とする。
本発明の、抗体分子または抗体の重鎖もしくは軽鎖、またはそれらの部分（好ま
しくは重鎖もしくは軽鎖の可変ドメインを含む）をコードするポリヌクレオチド
が一旦得られれば、抗体分子の産生のためのベクターは、当該分野で周知の技術
を使用する組換えＤＮＡ技術によって産生され得る。従って、ヌクレオチド配列
をコードする抗体を含むポリヌクレオチドの発現によってタンパク質を調製する
ための方法は、本明細書中に記載される。当業者に周知の方法は、抗体コード配
列ならびに適切な転写および翻訳制御シグナルを含む発現ベクターを構築するた
めに使用され得る。これらの方法は、例えば，インビトロ組換えＤＮＡ技術、合
成技術、およびインビボ遺伝子組換えを含む。従って、本発明は、本発明の抗体
分子をコードするヌクレオチド配列、またはその重鎖もしくは軽鎖、またはプロ
モーターに作動可能に連結された、重鎖もしくは軽鎖の可変ドメイン、を含む複
製可能ベクターを提供する。このようなベクターは、抗体分子の定常領域をコー
ドするヌクレオチド配列を含み得（例えば、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ ８６／０５
８０７号；ＰＣＴ国際公開第ＷＯ ８９／０１０３６；および米国特許第５，１
２２，４６４号を参照のこと）、そして、この抗体の可変領域は、重鎖または軽
鎖の全体の発現のためにこのようなベクター内にクローニングされ得る。
【０１９４】 発現ベクターは、従来の技術によって宿主細胞に移入され、次いでトランスフ
ェクト細胞は、従来の技術によって本発明の抗体を産生するために培養される。
従って、本発明は、本発明の抗体をコードするポリヌクレオチド、またはその重
鎖もしくは軽鎖、または異種のプロモーターに作動可能に連結された、本発明の
一本鎖抗体を含む宿主細胞を含む。二本鎖抗体の発現のための好ましい実施形態
では、重鎖および軽鎖の両方をコードするベクターは、下記に詳細に記載したよ
うに、免疫グロブリン分子全体の発現のための宿主細胞において同時発現され得
る。
【０１９５】 種々の宿主発現ベクター系は、本発明の抗体分子を発現させるために利用され
得る。このような宿主発現系は、目的のコード配列が産生され、かつ続いて精製
され得るビヒクルを表わすが、また、適切なヌクレオチドをコードする配列で形
質転換またはトランスフェクトされる場合に、インサイチュで本発明の抗体分子
を発現し得る細胞を表わす。これらには、以下が挙げられるが、これらに限定さ
れない：抗体をコードする配列を含む組換えバクテリオファージＤＮＡ発現ベク
ター、プラスミドＤＮＡ発現ベクターまたはコスミドＤＮＡ発現ベクターを用い
て形質転換された細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）のよう
な微生物；抗体をコードする配列を含む組換え酵母発現ベクターで形質転換され
た酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐｉｃｈｉａ）；抗体をコード
する配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感
染した昆虫細胞系；組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイ
クウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）に感染した植物細胞
系または抗体をコードする配列を含む組換えプラスミド発現ベクター（例えば、
Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系；あるいは哺乳動物細胞のゲノム
に由来するプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）または哺乳
動物のウイルスに由来するプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモー
ター；ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含む組換え発現構築物を保
有する哺乳動物細胞系（例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨＫ、２９３、３Ｔ３細胞
）。好ましくは、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉのような細菌細胞、そして
より好ましくは、特に、組換え抗体分子全体の発現のために真核生物細胞が、組
換え抗体分子の発現のために使用される。例えば、ヒトサイトメガロウイルス由
来の主要最初期遺伝子プロモーターエレメントのようなベクターと組み合わされ
た、チャイニーズハムスターの卵巣細胞（ＣＨＯ）のような哺乳動物細胞が、抗
体のための効果的な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇら、Ｇｅｎｅ ４５：１０
１（１９８６）；Ｃｏｃｋｅｔｔら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ８：２（
１９９０））。
【０１９６】 細菌系において、多くの発現ベクターが、抗体分子の発現を意図する使用に依
存して有利に選択され得る。例えば、多量のこのようなタンパク質が産生される
場合、抗体分子の薬学的組成物の生成のために、容易に精製される融合タンパク
質産物の高レベルの発現を指向するベクターが所望され得る。このようなベクタ
ーには、以下が挙げられるが、これらに限定されない：抗体をコードする配列が
ｌａｃＺをコードする領域と共にベクターにインフレーム（ｉｎ ｆｒａｍｅ）
で個別に連結され得、その結果、融合タンパク質が産生されるＥ．ｃｏｌｉ発現
ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｔｈｅｒら、ＥＭＢＯ Ｊ．２：１７９１（１９８
３））；ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ＆Ｉｎｏｕｙｅ、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ
ｉｄｓ Ｒｅｓ．１３：３１０１−３１０９（１９８５）；Ｖａｎ Ｈｅｅｋｅ
＆Ｓｃｈｕｓｔｅｒ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４：５５０３−５５０９（１
９８９））など。ｐＧＥＸベクターもまた、グルタチオンＳ−トランスフェラー
ゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として、外来性ポリペプチドを発現させるため
に使用され得る。一般に、このような融合タンパク質は可溶性であり、そして溶
解した細胞から、マトリックスグルタチオン−アガロースビーズへの吸着および
結合、それに続く遊離グルタチオン存在化での溶出によって容易に精製され得る
。このｐＧＥＸベクターは、トロンビンまたはＸａ因子プロテアーゼ切断部位を
含むように設計され、その結果、このクローニングされた標的遺伝子産物は、Ｇ
ＳＴ部分から放出され得る。
【０１９７】 昆虫系においては、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体
病ウィルス（ＡｃＮＰＶ）は、異種遺伝子を発現するためのベクターとして使用
される。このウィルスは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞に
おいて増殖する。抗体をコードする配列は、このウィルスの非必須の領域（例え
ばポリヘドリン遺伝子）に個々にクローニングされ得、そしてＡｃＮＰＶプロモ
ーター（例えばポリヘドリンプロモーター）の制御下に配置され得る。
【０１９８】 哺乳動物宿主細胞においては、多数のウィルスに基づく発現系が利用され得る
。アデノウィルスが発現ベクターとして使用される場合においては、目的の抗体
をコードする配列は、アデノウィルスの転写／翻訳制御複合体、例えば後期プロ
モーターおよび３つの部分に分かれるリーダー配列、に連結され得る。次いで、
このキメラ遺伝子は、インビトロまたはインビボでの組換えによって、アデノウ
ィルスゲノムに挿入され得る。ウィルスのゲノムの非必須領域（例えば、Ｅ１ま
たはＥ３領域）における挿入は、生存可能で、感染した宿主において抗体分子を
発現する能力のある組換えウィルスを生じる（例えば、Ｌｏｇａｎ＆Ｓｈｅｎｋ
、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：３５５−３５９（１
９８４）を参照のこと）。特異的開始シグナルはまた、挿入された抗体をコード
する配列の効率的な翻訳のために必要とされ得る。これらのシグナルは、ＡＴＧ
開始コドンおよび隣接する配列を含む。さらに、この開始コドンは、挿入部分全
体の翻訳を確実にするために、所望されるコード配列のリーディングフレーム（
ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ）と相が同じでなければならない。これらの外因性
翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、種々の起源、天然および合成の両方であ
り得る。発現の効率は、適切な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネータ
ー、などの含有によって高められ得る（Ｂｉｔｔｎｅｒら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉ
ｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１−５４４（１９８７）を参照のこと）。
【０１９９】 さらに、宿主細胞系統は、選択され得、これは挿入配列の発現を調節し、また
は、所望される特異的な様式で遺伝子産物を改変し、そしてプロセシングする。
タンパク質産物のこのような改変（例えばグリコシル化）およびプロセシング（
例えば切断）は、タンパク質の機能のために重要であり得る。異なる宿主細胞は
、タンパク質および遺伝子産物の、翻訳後プロセシングおよび改変のための、特
徴的で特異的な機構を有する。適切な細胞株または宿主系は、発現された外来タ
ンパク質の正確な改変およびプロセシングを確実にするように選択され得る。こ
の目的のために、遺伝子産物の、第一の転写、グリコシル化、およびリン酸化の
正確なプロセシングのための細胞機構を有する、真核生物宿主細胞が、使用され
得る。このような哺乳動物宿主細胞は、ＣＨＯ、ＶＥＲＹ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、
ＣＯＳ、ＭＤＣＫ、２９３、３Ｔ３、ＷＩ３８、そして特に、例えば、ＢＴ４８
３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２０およびＴ４７Ｄのような乳癌細胞株、な
らびに、例えば、ＣＲＬ７０３０およびＨｓ５７８Ｂｓｔのような正常な乳腺細
胞株を含むが、これらに限定されない。
【０２００】 組換えタンパク質の長期間の高収率産生、安定発現が好ましい。例えば、安定
に抗体分子を発現する細胞株が操作され得る。ウィルスの複製起点を含む発現ベ
クターを使用するよりも、宿主細胞は、適切な発現制御エレメント（例えば、プ
ロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位、
など）、および選択マーカーによって制御されるＤＮＡで形質転換され得る。外
来ＤＮＡの導入に続いて、操作された細胞は、１〜２日間富化培地で増殖させら
れ得、次いで、選択培地に切り替えられる。組換えプラスミドにおける選択マー
カーは、選択に対する耐性を与え、そして細胞が、プラスミドをその染色体内に
安定に組み込み、そして増殖して、細胞増殖巣を形成し、これを今度はクローニ
ングし得、細胞株に拡大され得ることを可能にする。この方法は、抗体分子を発
現する細胞株を操作するために、有利に使用され得る。このような操作された細
胞株は、直接的または間接的に抗体分子と相互作用する化合物のスクリーニング
および評価において、特に有用であり得る。
【０２０１】 多数の選択系が使用され得、この選択系は、単純ヘルペスウィルスチミジンキ
ナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒら、Ｃｅｌｌ １１：２２３（１９７７））、ヒポキサン
チン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ＆Ｓｚ
ｙｂａｌｓｋｉ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ４８：２０
２（１９９２））、およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗ
ｙら、Ｃｅｌｌ ２２：８１７（１９８０））の遺伝子を含むが限定されず、こ
れらの遺伝子は、ｔｋ−、ｈｇｐｒｔ−またはａｐｒｔ−細胞においてそれぞれ
使用され得る。また、代謝拮抗物質耐性は、以下の遺伝子の選択の根拠として使
用され得る：ｄｈｆｒ、これはメトトレキサートに対する耐性を与える（Ｗｉｇ
ｌｅｒら、Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：３５７（１９８０）；
Ｏ’Ｈａｒｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：１５
２７（１９８１））；ｇｐｔ、これはミコフェノール酸に対する耐性を与える（
Ｍｕｌｌｉｇａｎ＆Ｂｅｒｇ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
７８：２０７２（１９８１））；ｎｅｏ、これはアミノグリコシドＧ−４１８
に対する耐性を与える（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ １２：４８８−
５０５；Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ、Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７−９５（１９９
１）；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉ
ｃｏｌ． ３２：５７３−５９６（１９９３）；Ｍｕｌｌｉｇａｎ、Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２６０：９２６−９３２（１９９３）；およびＭｏｒｇａｎ ａｎｄ Ａ
ｎｄｅｒｓｏｎ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７（１
９９３）；Ｍａｙ、１９９３年、ＴＩＢ ＴＥＣＨ １１（５）：１５５−２１
５）；ならびにｈｙｇｒｏ、これはハイグロマイシンに対する耐性を与える（Ｓ
ａｎｔｅｒｒｅら、Ｇｅｎｅ ３０：１４７（１９８４））。組換えＤＮＡ技術
の分野で周知の方法は、所望の組換えクローンを選択するために、慣用的に適用
され得、そしてこのような方法は、以下に記載されている：例えば、Ａｕｓｕｂ
ｅｌら（編）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ＮＹ（１９９３）；Ｋ
ｒｉｅｇｌｅｒ、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
、Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ、
ＮＹ（１９９０）；ならびに１２章および１３章、Ｄｒａｃｏｐｏｌｉら（編）
、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ
、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ＮＹ（１９９４）；Ｃｏｌｂｅｒｒｅ−Ｇ
ａｒａｐｉｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ． １５０：１（１９８１）（これらは
その全体が本明細書中に参考として援用される）。
【０２０２】 抗体分子の発現レベルは、ベクター増幅によって増大され得る（総説として、
ＢｅｂｂｉｎｇｔｏｎおよびＨｅｎｔｓｃｈｅｌ、Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｖｅ
ｃｔｏｒｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｇｅｎｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｏ
ｒ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｌｏｎｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉｎ
ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ、Ｖｏｌ．３
．（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８７）を参照のこ
と）。抗体を発現するベクター系におけるマーカーが、増幅可能であると、宿主
細胞の培養物に存在するインヒビターのレベルにおける増加は、マーカー遺伝子
のコピーの数を増加する。増幅領域は抗体遺伝子と結合しているので、抗体の産
生もまた増加する（Ｃｒｏｕｓｅら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：２５７
（１９８３））。
【０２０３】 宿主細胞は、本発明の二つの発現ベクター（重鎖由来のポリペプチドをコード
する第一のベクターおよび軽鎖由来のポリペプチドをコードする第二のベクター
）で、同時トランスフェクトされ得る。この二つのベクターは、重鎖および軽鎖
のポリペプチドの等しい発現を可能にする、同一の選択マーカーを含み得る。あ
るいは、単一のベクターが使用され得、これは重鎖および軽鎖両方のポリペプチ
ドをコードし、そして発現することができる。このような状況において、過剰の
毒性の遊離重鎖を避けるために、重鎖の前に軽鎖が配置されるべきである（Ｐｒ
ｏｕｄｆｏｏｔ、Ｎａｔｕｒｅ ３２２：５２（１９８６）；Ｋｏｈｌｅｒ、Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：２１９７（１９８０））
。重鎖および軽鎖のためのコード配列はｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡを含み得る
。
【０２０４】 一旦本発明の抗体分子が、動物によって産生されるか、化学的に合成されるか
、または組換えにより発現されると、当該分野で公知の、免疫グロブリン分子の
精製のための任意の方法、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、
アフィニティー（特に、プロテインＡの後に特異的抗原に対するアフィニティー
による）、およびサイズカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、溶解度差、ま
たはタンパク質精製のための任意の他の標準的な技術によって、精製され得る。
さらに、本発明の抗体またはそのフラグメントは、本明細書中に記載されるかま
たはそうでなければ当該分野において公知の、異種ポリペプチド配列に融合され
得、精製を容易にする。
【０２０５】 本発明は、本発明のポリペプチド（もしくはその部分、好ましくはこのポリペ
プチドの少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、
もしくは１００個のアミノ酸）に、組換えにより融合されるかまたは化学的に結
合されて（共有結合および非共有結合の両方を含む）、融合タンパク質を生成す
る抗体、を含む。この融合は、直接的である必要はないが、リンカー配列を介し
て起こり得る。この抗体は、本発明のポリペプチド（またはその部分、好ましく
はこのポリペプチドの少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、
８０、９０、もしくは１００個のアミノ酸）以外の抗原に特異的であり得る。例
えば、インビトロまたはインビボのいずれにおいても、本発明のポリペプチドを
特定の細胞表面のレセプターに特異的な抗体に融合または結合させることによっ
て、特定の細胞型に対して、本発明のポリペプチドを標的にするために、抗体が
使用され得る。本発明のポリぺプチドに融合または結合される抗体はまた、イン
ビトロ免疫アッセイおよび当該分野で公知の方法を使用する精製方法において使
用され得る。例えば、Ｈａｒｂｏｒら、上記、およびＰＣＴ公開ＷＯ９３／２１
２３２；ＥＰ４３９，０９５；Ｎａｒａｍｕｒａら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ
．３９：９１−９９（１９９４）；米国特許第５，４７４，９８１号；Ｇｉｌｌ
ｉｅｓら、ＰＮＡＳ ８９：１４２８−１４３２（１９９２）；Ｆｅｌｌら、Ｊ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：２４４６−２４５２（１９９１）を参照のこと。こ
れらは、その全体が参考として援用される。
【０２０６】 本発明はさらに、抗体の可変領域以外のドメインに融合または結合された、本
発明のポリぺプチドを含む組成物を含む。例えば、本発明のポリぺプチドは、抗
体のＦｃ領域、またはその部分に融合または結合され得る。本発明のポリぺプチ
ドに融合されたこの抗体の部分は、定常領域、ヒンジ領域、ＣＨ１ドメイン、Ｃ
Ｈ２ドメイン、およびＣＨ３ドメイン、またはそのドメイン全体もしくは部分の
任意の組合せを含み得る。これらのポリぺプチドはまた、上記の抗体の部分に融
合または結合され得、多量体を形成する。例えば、本発明のポリぺプチドに融合
されたＦｃ部分は、このＦｃ部分の間のジスルフィド結合を通して二量体を形成
し得る。より高度の多量体形態は、ポリぺプチドをＩｇＡおよびＩｇＭの部分に
融合させることによって作製され得る。本発明のポリぺプチドを抗体部分に融合
または結合させるための方法は、当該分野において公知である。例えば、米国特
許第５，３３６，６０３号；同第５，６２２，９２９号；同第５，３５９，０４
６号；同第５，３４９，０５３号；同第５，４４７，８５１号；同第５，１１２
，９４６号；ＥＰ ３０７，４３４；ＥＰ ３６７，１６６；ＰＣＴ公開ＷＯ９
６／０４３８８；ＷＯ９１／０６５７０；Ａｓｈｋｅｎａｚｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１０５３５−１０５３９（１９９１
）；Ｚｈｅｎｇら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５５９０−５６００（１９９
５）；およびＶｉｌら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９
：１１３３７−１１３４１（１９９２）（前記の参考文献はその全体が参考とし
て援用される）を参照のこと。
【０２０７】 上記で考察されたように、ポリぺプチド、ポリぺプチドフラグメント、または
配列番号Ｙの改変体、に対応するポリぺプチドは、このポリぺプチドのインビボ
半減期を増大させるため、または当該分野で公知の方法を使用する免疫学的アッ
セイにおいて使用するために、上記の抗体部分に融合または結合体化され得る。
さらに、配列番号Ｙに対応するポリぺプチドを、上記の抗体部分に融合または結
合体化させて、精製を容易にし得る。１つの報告された例は、ヒトＣＤ４ポリペ
プチドの最初の２つのドメイン、および哺乳動物の免疫グロブリンの重鎖または
軽鎖の定常領域の種々のドメインからなるキメラタンパク質を記載している（Ｅ
Ｐ ３９４，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３３１：８４−
８６（１９８８））。ジスルフィド連結二量体構造（ＩｇＧに起因する）を有す
る抗体に融合または結合体化される本発明のポリぺプチドもまた、単量体分泌タ
ンパク質またはタンパク質フラグメント単独よりも、他の分子に結合しそして中
和するのにさらに効率的であり得る（Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら、Ｊ．Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ．２７０：３９５８−３９６４（１９９５））。多くの場合、融合タン
パク質のＦｃ部分は、治療および診断において有益であり、従って、例えば、改
良された薬物動態学的な特性を生じ得る（ＥＰ Ａ ２３２，２６２）。あるい
は、融合タンパク質が発現され、検出され、そして精製された後に、Ｆｃ部分を
欠失させることが望ましい。例えば、融合タンパク質が免疫化のための抗原とし
て使用される場合、Ｆｃ部分は、治療および診断を妨害し得る。例えば、薬物の
発見において、ｈＩＬ−５のようなヒトタンパク質は、ｈＩＬ−５のアンタゴニ
ストを同定するための高スループットスクリーニングアッセイの目的のためにＦ
ｃ部分と融合されてきた（Ｂｅｎｎｅｔｔら、Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｃ
ｏｇｎｉｔｉｏｎ ８：５２−５８（１９９５）；Ｊｏｈａｎｓｏｎら、Ｊ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：９４５９−９４７１（１９９５）を参照のこと）。
【０２０８】 さらに、本発明の抗体またはそのフラグメントは、精製を容易にするペプチド
のような、マーカー配列に融合され得る。好ましい実施形態において、マーカー
アミノ酸配列は、とりわけヘキサ−ヒスチジンペプチド（例えば、ｐＱＥベクタ
ー（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，９２５９ Ｅｔｏｎ Ａｖｅｎｕｅ，Ｃｈａｔｓ
ｗｏｒｔｈ，ＣＡ，９１３１１）において提供されるタグ）であり、これらの多
くのマーカーアミノ酸配列が市販されている。例えば、Ｇｅｎｔｚら、Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８２１−８２４（１９８９）に
記載されるように、ヘキサ−ヒスチジンは、融合タンパク質の都合の良い精製を
提供する。精製のために有用な別のペプチドタグは、インフルエンザ赤血球凝集
素タンパク質由来のエピトープに対応する「ＨＡ」タグ（Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅ
ｌｌ ３７：７６７（１９８４））、および「ｆｌａｇ」タグを含むが、これに
限定されない。
【０２０９】 本発明は、診断剤または治療剤に結合体化される、抗体またはそのフラグメン
トをさらに含む。抗体は、例えば、臨床上の試験手順（例えば、所定の処置レジ
メン（ｒｅｇｉｍｅｎ）の効力を決定するため）の一部として、腫瘍の発生また
は進行をモニターするために、診断的に使用され得る。検出は、抗体を検出可能
な物質と連結させることによって容易にされ得る。検出可能な物質の例としては
、種々の酵素、補欠分子団、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、放射性物質、
種々の陽電子放射断層撮影を使用する陽電子放射金属、および非放射性常磁性金
属イオン、が挙げられる。この検出可能な物質は、抗体（またはそのフラグメン
ト）に対して、直接的または間接的のいずれかで、当該分野で公知の技術を使用
する媒介物（例えば、当該分野で公知のリンカーなど）を介して、連結または結
合体化され得る。例えば、本発明に従う診断薬としての使用のための抗体に結合
体化され得る金属イオンに関しては、米国特許第４，７４１，９００号を参照の
こと。適切な酵素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスフ
ァターゼ、β−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが挙げら
れ；適切な補欠分子団複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチンおよ
びアビジン／ビオチンが挙げられ；適切な蛍光物質の例としては、ウンベリフェ
ロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジク
ロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリト
リンが挙げられ；発光物質の例としては、ルミノールが挙げられ；生物発光物質
の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンが挙げられ；な
らびに、適切な放射性物質の例としては、125Ｉ、131Ｉ、111Ｉｎまたは99Ｔｃ
が挙げられる。
【０２１０】 さらに、抗体またはそのフラグメントは、治療用部分（例えば細胞毒（例えば
細胞増殖抑制性もしくは細胞殺傷性の薬剤））、治療剤または放射性金属イオン
（例えば、α−エミッタ−（例えば２１３Ｂｉ）など）に結合体化され得る。細
胞毒または細胞毒性薬剤は、細胞に対して有害な任意の薬剤を含む。例としては
、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｏｌ）、サイトカラシンＢ、グラミシジン
Ｄ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド（ｔ
ｅｎｏｐｏｓｉｄｅ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン（ｃｏｌ
ｃｈｉｃｉｎ）、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシン
ジオン（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ ａｎｔｈｒａｃｉｎ ｄｉｏｎｅ）、ミトキサン
トロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、
グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロー
ル、およびピューロマイシン、ならびにそのアナログまたはホモログ、が挙げら
れる。治療剤は、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプ
リン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン（５
−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ）、アルキル化剤（例え
ば、メクロレタミン、チオエパ（ｔｈｉｏｅｐａ）クロラムブシル、メルファラ
ン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファ
ミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、ブスルファン、ジブロモマンニト
ール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、ならびにｃｉｓ−ジクロロジア
ミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダ
ウノルビシン（以前はダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例
えば、ダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラ
マイシン、およびアントラマイシン（ａｎｔｈｒａｍｙｃｉｎ）（ＡＭＣ））、
ならびに抗有糸分裂剤（例えばビンクリスチンおよびビンブラスチン）、を含む
が、それらに限定されない。
【０２１１】 本発明の結合体は、所定の生物学的応答を改変するために使用され得、治療剤
または薬物部分は、古典的な化学的治療剤に限定されると解釈されない。例えば
、薬物部分は、所望の生物学的活性を有するタンパク質またはポリぺプチドであ
り得る。このようなタンパク質としては、例えば、毒素（例えばアブリン、リシ
ンＡ、シュードモナス外毒素、またはジフテリア毒素）；タンパク質（例えば、
腫瘍壊死因子、ａ−インターフェロン、β−インターフェロン、神経発育因子、
血小板由来増殖因子、組織プラスミノゲンアクチベーター、アポトーシス性薬剤
（例えば、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＡＩＭ Ｉ（国際公開第ＷＯ９７／３３８
９９号を参照のこと）、ＡＩＭ ＩＩ（国際公開第ＷＯ９７／３４９１１号を参
照のこと）、Ｆａｓリガンド（Ｔａｋａｈａｓｈｉら、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ
．６：１５６７−１５７４（１９９４））、ＶＥＧＩ（国際公開第ＷＯ９９／２
３１０５号を参照のこと））、血栓症薬もしくは抗脈管形成薬（例えば、アンジ
オスタチンもしくはエンドスタチン）；または生物学的応答改変剤（例えばリン
ホカイン、インターロイキン−１（「ＩＬ−１」）、インターロイキン−２（「
ＩＬ−２」）、インターロイキン−６（「ＩＬ−６」）、顆粒球マクロファージ
コロニー刺激因子（「ＧＭ−ＣＳＦ」）、顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳ
Ｆ」）、または他の増殖因子など）、が挙げられ得る。
【０２１２】 抗体はまた、固体支持体に付着させられ得、この固体支持体は、標的抗原の免
疫アッセイまたは精製に特に有用である。このような固体支持体としては、ガラ
ス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニ
ルまたはポリプロピレン、が挙げられるがそれらに限定されない。
【０２１３】 このような治療部分を抗体に結合体化する技術は周知であり、例えば、Ａｒｎ
ｏｎら、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎ
ｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐ
ｙ」Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔ
ｈｅｒａｐｙ、Ｒｅｉｓｆｅｌｄら（編）、２４３−５６頁（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌ
ｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄ
ｅｌｉｖｅｒｙ（第２版）、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら（編）、６２３−５３頁（Ｍａ
ｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ、「Ａｎｔｉｂｏ
ｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ」Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎ
ｔｉｂｏｄｉｅｓ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ
Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐｉｎｃｈｅｒａら（編）、４７５−５０６頁（１
９８５）；「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒ
ｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ
Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ
ａｐｙ」Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂａｌｄｗｉｎら（編）、３
０３−１６頁（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９８５）、およびＴｈｏｒｐ
ｅら、「Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐｒ
ｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ
ｓ」、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−５８（１９８２）を参照のこと
。
【０２１４】 あるいは、抗体は第二の抗体に結合され、米国特許第４，６７６，９８０号（
これは、その全体が本明細書に参考として援用される）におけるＳｅｇａｌによ
る記載のような抗体異種結合体（ｈｅｔｅｒｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）を形成し得
る。
【０２１５】 単独、あるいは細胞傷害性因子および／またはサイトカインと組み合わせて投
与される、抗体に結合する治療部分を有するかまたは有さない抗体が、治療薬と
して使用され得る。
【０２１６】 （免疫表現型分類（ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ）） 本発明の抗体は、細胞株および生物学的サンプルの免疫表現型分類のために利
用され得る。本発明の遺伝子の翻訳生成物は、細胞特異的マーカーとして、ある
いはより詳細には、特定の細胞型の分化および／または成熟の種々の段階で差示
的に発現される細胞マーカーとして有用であり得る。特異的エピトープ、または
エピトープの組み合わせに対するモノクロナール抗体は、マーカーを発現する細
胞集団のスクリーニングを可能とする。種々の技術が、マーカーを発現する細胞
集団をスクリーニングするために、モノクロナール抗体を用いて使用され得、そ
してその技術には、抗体でコーティングされた磁気ビーズを用いる磁気分離、固
体マトリクス（すなわち、プレート）に付着した抗体を用いる「パニング」、な
らびにフローサイトメトリー（例えば、米国特許第５，９８５，６６０号；およ
びＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｃｅｌｌ，９６：７３７−４９（１９９９）を参照のこ
と）が挙げられる。
【０２１７】 これらの技術は、血液学的悪性腫瘍（すなわち、急性白血病患者における最少
残留疾患（ｍｉｎｉｍａｌ ｒｅｓｉｄｕａｌ ｄｉｓｅａｓｅ）（ＭＲＤ））
および対宿主性移植片病（ＧＶＨＤ）を予防するための移植術における「非自己
」細胞と共に見出され得るような、細胞の特定集団のスクリーニングを可能にす
る。あるいは、これらの技術は、ヒト臍帯血において見出され得るような増殖お
よび／または分化を受け得る、造血幹細胞および前駆細胞のスクリーニングを可
能にする。
【０２１８】 （抗体結合についてのアッセイ） 本発明の抗体は、当該分野において公知の任意の方法により、免疫特異的結合
についてアッセイされ得る。用いられ得る免疫アッセイとしては、いくつかのも
のについてだけ名称を挙げると、ウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、
ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、「サンドイッチ」免疫アッセイ、免
疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセ
イ、補体結合アッセイ、免疫放射定量アッセイ、蛍光免疫アッセイ、プロテイン
Ａ免疫アッセイのような技術を用いる競合アッセイ系および非競合アッセイ系が
挙げられるが、これらに限定されない。このようなアッセイは慣用的であり、そ
して当該分野において周知である（例えば、その全体が本明細書中に参考として
援用される、Ａｕｓｕｂｅｌら編，１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏ
ｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌ
ｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと）。例示的な免疫ア
ッセイが、以下に簡潔に記載される（が、これらは限定を目的とすることが意図
されない）。
【０２１９】 免疫沈降プロトコルは、一般に、タンパク質ホスファターゼインヒビターおよ
び／またはプロテアーゼインヒビター（例えば、ＥＤＴＡ、ＰＭＳＦ、アプロチ
ニン、バナジン酸ナトリウム）を補充したＲＩＰＡ緩衝液（１％ ＮＰ−４０ま
たはＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、１％ デオキシコール酸ナトリウム、０．１％
ＳＤＳ、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．０１Ｍ リン酸ナトリウム（ｐＨ７．２
）、１％ Ｔｒａｓｙｌｏｌ）のような溶解緩衝液中で、細胞の集団を溶解する
工程、目的の抗体を細胞溶解物に添加する工程、一定時間（例えば、１〜４時間
）４℃でインキュベートする工程、プロテインＡセファロースビーズおよび／ま
たはプロテインＧセファロースビーズを細胞溶解物に添加する工程、約１時間以
上４℃でインキュベートする工程、溶解緩衝液中でビーズを洗浄する工程、およ
びＳＤＳ／サンプル緩衝液中でビーズを再懸濁する工程を包含する。目的の抗体
が特定の抗原を免疫沈降する能力は、例えば、ウエスタンブロット分析により、
評価され得る。当業者は、抗体の抗原への結合を増加するように、そしてバック
グラウンドを減少させるように改変され得るパラメータ（例えば、セファロース
ビーズを用いて細胞溶解物を事前にきれいにする工程）に関して、認識し得る。
免疫沈降プロトコルに関するさらなる考察については、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ
ら編，１９９４、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｉｎｃ．，
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１０．１６．１を参照のこと。
【０２２０】 ウエスタンブロット分析は、一般に、タンパク質サンプルを調製する工程、ポ
リアクリルアミドゲル（例えば、抗原の分子量に応じた８％〜２０％ ＳＤＳ−
ＰＡＧＥ）中でのそのタンパク質サンプルの電気泳動、そのタンパク質サンプル
をそのポリアクリルアミドゲルからニトロセルロース、ＰＶＤＦまたはナイロン
のような膜に転写する工程、ブロッキング溶液（例えば、３％ ＢＳＡまたは脱
脂粉乳を有するＰＢＳ）中でその膜をブロックする工程、洗浄緩衝液（例えば、
ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ ２０）中でその膜を洗浄する工程、ブロッキング緩衝液中
で希釈された一次抗体（目的の抗体）を用いてその膜をブロックする工程、洗浄
緩衝液中でその膜を洗浄する工程、ブロッキング緩衝液中で希釈された酵素基質
（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）あるい
は放射性分子（例えば、３２Ｐまたは１２５Ｉ）に結合体化された二次抗体（一
次抗体を認識する、例えば、抗ヒト抗体）を用いて、その膜をブロックする工程
、洗浄緩衝液中でその膜を洗浄する工程、ならびにその抗原の存在を検出する工
程を包含する。当業者は、検出されるシグナルを増加させるように、そしてバッ
クグラウンドノイズを減少させるように改変され得るパラメータに関して、認識
し得る。ウエスタンブロットプロトコルに関するさらなる考察については、例え
ば、Ａｕｓｕｂｅｌら編，１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉ
ｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓ
ｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１０．８．１を参照のこと。
【０２２１】 ＥＬＩＳＡは、抗原を調製する工程、９６ウェルマイクロタイタープレートの
ウェルをその抗原でコーティングする工程、酵素基質（例えば、西洋ワサビペル
オキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）のような検出可能な化合物に結合
体化された目的の抗体をそのウェルに添加し、そして一定時間インキュベートす
る工程、およびその抗原の存在を検出する工程を包含する。ＥＬＩＳＡにおいて
、目的の抗体は、検出可能な化合物に結合している必要はない；その代わり、検
出可能な化合物に結合体化された第二の抗体（目的の抗体を認識する）が、ウェ
ルに添加され得る。さらに、ウェルを抗原でコーティングする代わりに、抗体が
ウェルにコーティングされ得る。この場合、検出可能な化合物に結合体化された
第二の抗体が、コーティングされたウェルへの目的の抗原の添加に続いて、添加
され得る。当業者は、検出されるシグナルを増加させるように改変され得るパラ
メータ、および当該分野において公知のＥＬＩＳＡの他のバリエーションに関し
て、認識する。ＥＬＩＳＡに関するさらなる考察については、例えば、Ａｕｓｕ
ｂｅｌら編，１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎ
ｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１１．２．１を参照のこと。
【０２２２】 抗原に対する抗体の結合親和性および抗体−抗原相互作用のオフレート（ｏｆ
ｆ−ｒａｔｅ）が、競合結合アッセイにより決定され得る。競合結合アッセイの
一つの例は、ラジオイムノアッセイであり、ラジオイムノアッセイは、漸増量の
非標識抗原の存在下での、目的の抗体との標識抗原（例えば、３Ｈまたは１２５
Ｉ）のインキュベーション、および標識抗原に結合体化された抗体の検出を含む
。特定の抗原に対する目的の抗体の親和性、および結合オフレートは、スキャッ
チャードプロット分析によるデータから決定され得る。第二の抗体との競合はま
た、ラジオイムノアッセイを用いて決定され得る。この場合、抗原は、漸増量の
非標識の第二の抗体の存在下で、標識化合物（例えば、３Ｈまたは１２５Ｉ）に
結合した目的の抗体とともにインキュベートされる。
【０２２３】 （治療用途） 本発明はさらに、抗体ベースの治療に関し、この治療は、１つ以上の開示され
た疾患、障害、または状態を処置するために、動物、好ましくは哺乳動物、そし
て最も好ましくはヒトの患者に、本発明の抗体を投与する工程を包含する。本発
明の治療化合物としては、本発明の抗体（本明細書中に記載されるような抗体の
フラグメント、アナログおよび誘導体を含む）ならびに本発明の抗体（本明細書
中に記載されるような抗体のフラグメント、アナログおよび誘導体ならびに抗イ
ディオタイプ抗体を含む）をコードする核酸が挙げられるが、これらに限定され
ない。本発明の抗体は、本発明のポリペプチドの異常な発現および／または活性
に関連した疾患、障害または状態（本明細書中に記載される任意の１つ以上の疾
患、障害、または状態を含むがこれらに限定されない）を処置、阻害または予防
するために使用され得る。本発明のポリペプチドの異常な発現および／または活
性に関連した疾患、障害または状態の処置および／または予防は、それらの疾患
、障害または状態に関連した症状を緩和する工程を含むが、これに限定されない
。本発明の抗体は、当該分野で公知であるか、または本明細書中に記載されるよ
うに、薬学的に受容可能な組成物中に提供され得る。
【０２２４】 本発明の抗体が治療的に使用され得る方法の要約は、身体内で局所的にまたは
全身的に、あるいは（例えば、補体（ＣＤＣ）により、またはエフェクター細胞
（ＡＤＣＣ）により媒介されるような）抗体の直接的細胞傷害性により、本発明
のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを結合させることを含む。これらのアプ
ローチのいくつかは、より詳細に以下に記載される。本明細書中で提供される教
示を与えられれば、当業者は、過度の実験なしに、診断上の目的、モニタリング
の目的あるいは治療上の目的のために、本発明の抗体を使用する方法がわかる。
【０２２５】 本発明の抗体は、例えば、抗体と相互作用するエフェクター細胞の数または活
性を増加させるために役立つ、他のモノクローナル抗体またはキメラ抗体、ある
いはリンホカインまたは造血増殖因子（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−３およびＩＬ
−７のような）と組み合わせて有利に利用され得る。
【０２２６】 本発明の抗体は、単独で、または他の型の処置（例えば、放射線療法、化学療
法、ホルモン治療、免疫治療および抗腫瘍剤）との組み合わせで投与され得る。
一般的に、（抗体の場合には）患者の種と同じ種である種起源または種反応性の
生成物の投与が好ましい。従って、好ましい実施形態においては、ヒトの抗体、
フラグメント誘導体、アナログ、または核酸が、治療または予防のために、ヒト
患者に投与される。
【０２２７】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド（それらのフラグメントを含む
）に対するイムノアッセイ、およびそれらに関連した障害の治療の両方のために
、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドに対する、高親和性および／ま
たは強力な、インビボでの阻害抗体および／または中和抗体、それらのフラグメ
ント、またはその領域を使用することが好ましい。このような抗体、フラグメン
ト、または領域は、好ましくは、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド
（それらのフラグメントを含む）に対して親和性を有する。好ましい結合親和性
としては、５×１０-2Ｍ、１０-2Ｍ、５×１０-3Ｍ、１０-3Ｍ、５×１０-4Ｍ、
１０-4Ｍ、５×１０-5Ｍ、１０-5Ｍ、５×１０-6Ｍ、１０-6Ｍ、５×１０-7Ｍ、
１０-7Ｍ、５×１０-8Ｍ、１０-8Ｍ、５×１０-9Ｍ、１０-9Ｍ、５×１０-10Ｍ
、１０-10Ｍ、５×１０-11Ｍ、１０-11Ｍ、５×１０-12Ｍ、１０-12Ｍ、５×１
０-13Ｍ、１０-13Ｍ、５×１０-14Ｍ、１０-14Ｍ、５×１０-15Ｍ、および１０- 15 Ｍよりも小さい解離定数すなわちＫｄを有する結合親和性が挙げられる。
【０２２８】 （遺伝子治療） 特定の実施形態において、抗体またはその機能的誘導体をコードする配列を含
む核酸は、本発明のポリペプチドの異常な発現および／または活性に関連した疾
患または障害を処置、阻害または予防するために、遺伝子治療の目的で投与され
る。遺伝子治療とは、発現したか、または発現可能な核酸の、被験体への投与に
より行われる治療をいう。本発明のこの実施形態において、核酸は、それらのコ
ードされたタンパク質を産生し、そのタンパク質は治療効果を媒介する。
【０２２９】 当該分野で利用可能な遺伝子治療のための任意の方法は、本発明に従って使用
され得る。例示的な方法が以下に記載される。
【０２３０】 遺伝子治療の方法の一般的な概説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら，Ｃｌｉ
ｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ １２：４８８−５０５（１９９３）；Ｗｕおよ
びＷｕ，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７−９５（１９９１）；Ｔｏｌｓｔｏｓ
ｈｅｖ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３
−５９６（１９９３）；Ｍｕｌｌｉｇａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６−
９３２（１９９３）；ならびにＭｏｒｇａｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ，Ａｎｎ．
Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７（１９９３）；Ｍａｙ，ＴＩＢ
ＴＥＣＨ １１（５）：１５５−２１５（１９９３）を参照のこと。使用され得
る、組換えＤＮＡ技術分野において一般的に公知である方法は、Ａｕｓｕｂｅｌ
ら（編），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；お
よびＫｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓ
ｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅ
ｓｓ，ＮＹ（１９９０）に記載される。
【０２３１】 好ましい局面において、化合物は抗体をコードする核酸配列を含有し、上記核
酸配列は、適切な宿主において、抗体、あるいはそのフラグメントもしくはキメ
ラタンパク質、またはその重鎖もしくは軽鎖を発現する発現ベクターの一部であ
る。特に、このような核酸配列は、抗体コード領域に作動可能に連結したプロモ
ーターを有し、上記プロモーターは誘導性であるかまたは構成性であり、そして
必要に応じて組織特異的である。別の特定の実施形態においては、抗体をコード
する配列および任意の他の所望の配列がゲノム中の所望の部位での相同組換えを
促進する領域に隣接した核酸分子が使用され、それにより抗体をコードする核酸
の染色体内の発現を提供する（ＫｏｌｌｅｒおよびＳｍｉｔｈｉｅｓ，Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９３２−８９３５（１９８９
）；Ｚｉｊｌｓｔｒａら，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５−４３８（１９８９）
）。特定の実施形態において、発現した抗体分子は単鎖抗体であるか；あるいは
この核酸配列は、この抗体の重鎖および軽鎖の両方をコードする配列またはその
フラグメントを含む。
【０２３２】 核酸の患者への送達は、直接的（この場合、患者は核酸または核酸保有ベクタ
ーに直接的に曝される）か、または間接的（この場合、細胞は最初にインビトロ
で核酸を用いて形質転換され、次いで患者に移植される）のいずれかであり得る
。これらの２つのアプローチは、インビボ遺伝子治療として、またはエキソビボ
遺伝子治療としてそれぞれ公知である。
【０２３３】 特定の実施形態において、核酸配列はインビボで直接的に投与され、そこで核
酸配列は発現されて、コードされた生成物を産生する。これは、当該分野で公知
の多数の方法（例えば、それらを適切な核酸発現ベクターの一部として構築し、
そしてそれを細胞内になるように投与することにより（例えば、欠損性または弱
毒化したレトロウイルスまたは他のウイルスベクター（米国特許第４，９８０，
２８６号を参照のこと）を用いた感染により）、あるいは、裸のＤＮＡの直接注
射により、あるいは、微粒子ボンバードメント（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉ
ｓｔｉｃ、Ｄｕｐｏｎｔ）の使用により、あるいは脂質または細胞表面レセプタ
ーまたはトランスフェクト剤でコーティングするか、リポソーム、微粒子、また
はマイクロカプセル中へのカプセル化により、あるいは、核に入ることが公知で
あるペプチドと結合させて投与することにより、レセプター媒介のエンドサイト
ーシスを受けるリガンドと結合させて投与することにより（例えば、Ｗｕおよび
Ｗｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２（１９８７）を参
照のこと）（レセプターを特異的に発現する細胞の型を標的にするために用いら
れ得る）などのいずれかにより達成され得る。別の実施形態において、核酸−リ
ガンド複合体が形成され得、ここで、リガンドはエンドソームを破壊するフソジ
ェニック（ｆｕｓｏｇｅｎｉｃ）ウイルス性ペプチドを含み、核酸がリソソーム
分解を回避することを可能にする。さらに別の実施形態において、核酸は、特異
的なレセプターを標的化することにより、細胞特異的な取り込みおよび発現につ
いてインビボで標的化され得る（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／０６１８０号
；同第ＷＯ９２／２２６３５号；同第ＷＯ９２／２０３１６号；同第ＷＯ９３／
１４１８８号、同第ＷＯ９３／２０２２１号を参照のこと）。あるいは、核酸は
、細胞内部に導入され得、そして相同組換えにより、発現のために宿主細胞ＤＮ
Ａ中に組み込まれ得る（ＫｏｌｌｅｒおよびＳｍｉｔｈｉｅｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９３２−８９３５（１９８９）；Ｚ
ｉｊｌｓｔｒａら，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５−４３８（１９８９））。
【０２３４】 特定の実施形態において、本発明の抗体をコードする核酸配列を含むウイルス
ベクターが使用される。例えば、レトロウイルスベクターが用いられ得る（Ｍｉ
ｌｌｅｒら，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５８１−５９９（１９９３）
を参照のこと）。これらのレトロウイルスベクターは、ウイルス性ゲノムの正確
なパッケージングおよび宿主細胞ＤＮＡへの組込みのために必要な構成要素を含
む。遺伝子治療において使用される抗体をコードする核酸配列は、一つ以上のベ
クター中にクローン化され、これは、患者内への遺伝子の送達を容易にする。レ
トロウイルスベクターに関するさらなる詳細は、Ｂｏｅｓｅｎら，Ｂｉｏｔｈｅ
ｒａｐｙ ６：２９１−３０２（１９９４）（これは、幹細胞を化学療法に対し
てより耐性にするために、ｍｄｒ１遺伝子を造血性幹細胞に送達するための、レ
トロウイルスベクターの使用を記載する）に見出され得る。遺伝子治療における
レトロウイルスベクターの使用を説明する他の参考文献は、以下である：Ｃｌｏ
ｗｅｓら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９３：６４４−６５１（１９９４）；
Ｋｉｅｍら，Ｂｌｏｏｄ ８３：１４６７−１４７３（１９９４）；Ｓａｌｍｏ
ｎｓおよびＧｕｎｚｂｅｒｇ，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ４：１
２９−１４１（１９９３）；ならびにＧｒｏｓｓｍａｎおよびＷｉｌｓｏｎ，Ｃ
ｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．３：１１０
−１１４（１９９３）。
【０２３５】 アデノウイルスは、遺伝子治療において使用され得る他のウイルスベクターで
ある。アデノウイルスは、特に、気道上皮へ遺伝子を送達するための魅力的なビ
ヒクルである。アデノウイルスは、自然に気道上皮に感染し、そこで軽い疾患を
起こす。アデノウイルスベースの送達システムの他の標的は、肝臓、中枢神経系
、内皮細胞、および筋肉である。アデノウイルスは、非分裂細胞に感染すること
ができるという利点を有する。ＫｏｚａｒｓｋｙおよびＷｉｌｓｏｎ，Ｃｕｒｒ
ｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍ
ｅｎｔ ３：４９９−５０３（１９９３）は、アデノウイルスベースのく遺伝子
治療の概説を示す。Ｂｏｕｔら，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ５：
３−１０（１９９４）は、アカゲザルの気道上皮に遺伝子を移入するためのアデ
ノウイルスベクターの使用を証明した。遺伝子治療におけるアデノウイルスの使
用の他の例は、Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２：４３１−４３
４（１９９１）；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら，Ｃｅｌｌ ６８：１４３−１５５（１
９９２）；Ｍａｓｔｒａｎｇｅｌｉら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９１：２
２５−２３４（１９９３）；ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／１２６４９号；およびＷａ
ｎｇら，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２：７７５−７８３（１９９５）に見出さ
れ得る。好ましい実施形態において、アデノウイルスベクターが使用される。
【０２３６】 アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）はまた、遺伝子治療における使用が提案されて
きた（Ｗａｌｓｈら，Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．２０４：
２８９−３００（１９９３）；米国特許第５，４３６，１４６号）。
【０２３７】 遺伝子治療への別のアプローチは、エレクトロポレーション、リポフェクショ
ン、リン酸カルシウム媒介トランスフェクション、またはウイルス感染のような
方法により、組織培養中の細胞へ遺伝子を移入する工程を包含する。通常、移入
の方法は、選択可能なマーカーの細胞への移入を含む。次いで、細胞は、移入さ
れた遺伝子を取り込みそして発現する細胞を単離するために選沢下に置かれる。
次いで、それらの細胞は患者に送達される。
【０２３８】 この実施形態においては、得られた組換え細胞のインビボ投与の前に、核酸が
細胞に導入される。このような導入は、当該分野において公知の任意の方法によ
り実施され得、それらの方法としては以下が挙げられるが、これらに限定されな
い：トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクショ
ン、核酸配列を含むウイルスベクターまたはバクテリオファージベクターでの感
染、細胞融合、染色体媒介の遺伝子移入、マイクロセル媒介の遺伝子移入、スフ
ェロプラスト融合など。外来遺伝子の細胞への導入については、当該分野におい
て多数の技術が公知であり（例えば、ＬｏｅｆｆｌｅｒおよびＢｅｈｒ，Ｍｅｔ
ｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５９９−６１８（１９９３）；Ｃｏｈｅｎら，Ｍ
ｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：６１８−６４４（１９９３）；Ｃｌｉｎｅ，
Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．２９：６９−９２ｍ（１９８５）を参照のこと）、
そしてレシピエント細胞の必要な発生的および生理学的機能が破壊されないなら
ば、本発明に従って使用され得る。この技術は、細胞への核酸の安定した移入を
提供するはずであり、その結果、この核酸は、細胞により発現可能であり、好ま
しくは、その細胞の子孫により遺伝性でかつ発現可能である。
【０２３９】 得られた組換え細胞は、当該分野において公知の様々な方法により、患者へ送
達され得る。組換え血球（例えば、造血幹細胞または造血前駆細胞）は、好まし
くは、静脈内に投与される。使用が考えられる細胞の量は、所望の効果、患者の
状態などに依存し、当業者により決定され得る。
【０２４０】 遺伝子治療の目的のために核酸が導入され得る細胞は、任意の所望の入手可能
な細胞型を包含し、以下を含むがそれらに限定されない：上皮細胞、内皮細胞、
ケラチノサイト、線維芽細胞、筋肉細胞、肝細胞；Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単
球、マクロファージ、好中球、好酸球、巨核球、顆粒球のような血球；様々な幹
細胞または前駆細胞、特に、造血幹細胞または造血前駆細胞（例えば、骨髄、臍
帯血、末梢血、胎児の肝臓などから得られるような細胞）。
【０２４１】 好ましい実施形態において、遺伝子治療に使用される細胞は、患者に対して自
己である。
【０２４２】 遺伝子治療において組換え細胞が使用される実施形態において、抗体をコード
する核酸配列は、細胞またはそれらの子孫により核酸配列が発現可能であるよう
に細胞に導入され、そして次いで組み換え細胞は、治療的効果のためにインビボ
で投与される。具体的な実施形態において、幹細胞または前駆細胞が用いられる
。インビトロで単離され得、そしてインビトロで維持され得る任意の幹細胞およ
び／または前駆細胞は、本発明のこの実施形態に従って潜在的に使用され得る（
例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／０８５９８号：ＳｔｅｍｐｌｅおよびＡｎｄｅ
ｒｓｏｎ，Ｃｅｌｌ ７１：９７３−９８５（１９９２）；Ｒｈｅｉｎｗａｌｄ
，Ｍｅｔｈ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ．２１Ａ：２２９（１９８０）；ならびにＰｉｔ
ｔｅｌｋｏｗおよびＳｃｏｔｔ，Ｍａｙｏ Ｃｌｉｎｉｃ Ｐｒｏｃ．６１：７
７１（１９８６）を参照のこと）。
【０２４３】 具体的な実施形態において、遺伝子治療の目的で導入される核酸は、コード領
域に作動可能に連結された誘導性プロモーターを含有し、その結果、核酸の発現
は、適切な転写誘導因子の存在または不在を制御することにより制御可能である
。
【０２４４】 （治療活性または予防活性の証明） 本発明の化合物または薬学的組成物は、好ましくは、ヒトでの使用の前にイン
ビトロで、そして次いでインビボで、所望の治療活性または予防活性について試
験される。例えば、化合物または薬学的組成物の、治療有用性または予防有用性
を証明するためのインビトロアッセイとしては、細胞株または患者組織サンプル
に対する化合物の効果が挙げられる。細胞株および／または組織サンプルに対す
る化合物または組成物の効果は、当業者に公知である技術（ロゼット形成アッセ
イおよび細胞溶解アッセイが挙げられるがこれらに限定されない）を利用して決
定され得る。本発明に従って、特定の化合物の投与が示されるか否かを決定する
ために用いられ得るインビトロアッセイとしては、インビトロ細胞培養アッセイ
が挙げられ、このアッセイでは、患者組織サンプルが培養物において増殖し、そ
して化合物に曝されるか、そうでなければ化合物が投与され、そして、組織サン
プルに対するそのような化合物の効果が観察される。
【０２４５】 （治療的／予防的な投与および組成物） 本発明は、被験体への有効量の本発明の化合物または薬学的組成物、好ましく
は本発明のポリペプチドまたは抗体の投与による処置、阻害および予防の方法を
提供する。好ましい局面において、化合物は実質的に精製される（例えば、その
効果を制限するかまたは望ましくない副作用を生じる物質は実質的にない）。被
験体は好ましくは、ウシ、ブタ、ウマ、ニワトリ、ネコ、イヌなどの動物が挙げ
られるがそれらに限定されない動物であり、そして好ましくは哺乳動物であり、
そして最も好ましくはヒトである。
【０２４６】 化合物が核酸または免疫グロブリンを含む場合に使用され得る処方および投与
方法は、上記に記載され；さらなる適切な処方および投与経路は、本明細書中で
以下に記載されたものの中から選択され得る。
【０２４７】 様々な送達系が公知であり、そして本発明の化合物を投与するために用いられ
得る（例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセル、この化合物の発現が可
能な組換え細胞中でのカプセル化、レセプター媒介エンドサイトーシス（例えば
、ＷｕおよびＷｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２（１
９８７）を参照のこと）、レトロウイルスまたは他のベクターの一部としての核
酸の構築など）。導入方法としては、皮内、筋内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔
内、硬膜外、および経口経路が挙げられるがそれらに限定されない。化合物また
は組成物は、任意の好都合な経路により（例えば、注入またはボーラス注射によ
り、上皮または粘膜内層（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜および腸粘膜など）を通
しての吸収により）投与され得、そして他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与
され得る。投与は、全身的または局所的であり得る。さらに、本発明の薬学的化
合物または組成物を、任意の適切な経路（脳室内注射および髄腔内注射を包含し
；脳室内注射は、例えば、Ｏｍｍａｙａリザーバのようなリザーバに取り付けら
れた脳室内カテーテルにより容易にされ得る）により中枢神経系に導入すること
が望まれ得る。例えば、吸入器または噴霧器の使用、およびエアゾール化剤を用
いた処方により、肺投与もまた使用され得る。
【０２４８】 具体的な実施形態において、本発明の薬学的化合物または組成物を、処置の必
要な領域に局所的に投与することが望まれ得る；これは、制限する目的ではない
が、例えば、手術中の局部注入、局所適用（例えば、手術後の創傷包帯との組み
合わせて）により、注射により、カテーテルにより、坐剤により、またはインプ
ラント（このインプラントは、シアラスティック（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜のよ
うな膜または繊維を含む、多孔性、非多孔性、または膠様材料である）により達
成され得る。好ましくは、抗体を含む本発明のタンパク質を投与する際、タンパ
ク質が吸収されない材料を使用するために注意が払われなければならない。
【０２４９】 別の実施形態において、化合物または組成物は、小胞、特に、リポソーム中へ
送達され得る（Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３（
１９９０）；Ｔｒｅａｔら，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐ
ｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ，Ｌ
ｏｐｅｚ−ＢｅｒｅｓｔｅｉｎおよびＦｉｄｌｅｒ（編），Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ，３５３〜３６５頁（１９８９）；Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ，
同書３１７〜３２７頁を参照のこと；広く同書を参照のこと）。
【０２５０】 さらに別の実施形態において、化合物または組成物は制御された放出システム
中で送達され得る。１つの実施形態において、ポンプが用いられ得る（Ｌａｎｇ
ｅｒ（前出）；Ｓｅｆｔｏｎ，ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎ
ｇ．１４：２０１（１９８７）；Ｂｕｃｈｗａｌｄら，Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８：
５０７（１９８０）；Ｓａｕｄｅｋら，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５
７４（１９８９）を参照のこと）。別の実施形態において、ポリマー材料が用い
られ得る（Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌ
ｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ（編），ＣＲＣ Ｐｒｅ
ｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌ
ｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ
Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，ＳｍｏｌｅｎおよびＢａｌ
ｌ（編），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４）；ＲａｎｇｅｒおよびＰ
ｅｐｐａｓ，Ｊ．、Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．２３：６１（１９８３）を参照のこと；Ｌｅｖｙら，Ｓｃｉｅｎｃｅ
２２８：１９０（１９８５）；Ｄｕｒｉｎｇら，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：
３５１（１９８９）；Ｈｏｗａｒｄら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５
（１９８９）もまた参照のこと）。さらに別の実施形態において、制御された放
出システムは、治療標的、即ち、脳の近くに置かれ得、従って、全身用量の一部
のみを必要とする（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａ
ｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ（前出），第２巻，
１１５〜１３８頁（１９８４）を参照のこと）。
【０２５１】 他の制御された放出システムは、Ｌａｎｇｅｒにより総説において議論される
（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３（１９９０））。
【０２５２】 本発明の化合物がタンパク質をコードする核酸である、具体的な実施形態にお
いて、その核酸は、それを適切な核酸発現ベクターの一部として構成し、そして
それが細胞内になるように投与することにより（例えば、レトロウイルスベクタ
ーの使用により（米国特許第４，９８０，２８６号を参照のこと）、または直接
注射により、または微粒子ボンバードメント（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓ
ｔｉｃ，Ｄｕｐｏｎｔ）の使用により、または脂質もしくは細胞表面レセプター
もしくはトランスフェクト剤でコーティングすることにより、または核に入るこ
とが公知であるホメオボックス様ペプチドと結合させて投与すること（例えば、
Ｊｏｌｉｏｔら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１８
６４−１８６８（１９９１）を参照のこと）などにより、そのコードされたタン
パク質の発現を促進するようにインビボで投与され得る。あるいは、核酸は、細
胞内に導入され得、そして、発現のために相同組換えにより宿主細胞ＤＮＡ内に
組み込まれ得る。
【０２５３】 本発明はまた、薬学的組成物を提供する。このような組成物は、治療有効量の
化合物、および薬学的に受容可能なキャリアを含む。具体的な実施形態において
、用語「薬学的に受容可能な」とは、動物における、そしてさらに特にヒトにお
ける使用のために、連邦規制当局もしくは米国政府により認められたか、または
米国薬局方もしくは他の一般に認められた薬局方に列挙されたことを意味する。
用語「キャリア」とは、治療剤とともに投与される、希釈剤、アジュバンド、賦
形剤、またはビヒクルをいう。このような薬学的なキャリアは、水および油（石
油起源、動物起源、植物起源、または合成起源の油（例えば、ピーナッツ油、大
豆油、鉱油、ゴマ油など）を含む）のような滅菌した液体であり得る。水は、薬
学的組成物が静脈内に投与される場合に、好ましいキャリアである。生理食塩水
溶液、ならびにデキストロースおよびグリセロールの水溶液はまた、特に注射可
能な溶液のために、液体キャリアとして使用され得る。適切な薬学的賦形剤とし
ては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、イネ
、フラワー、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン
酸グリセロール、滑石、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン
、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。組成物はまた、所望されるな
らば、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含み得る。これらの組
成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、持続放出処方物
などの形態を取り得る。この組成物は、従来の結合剤およびトリグリセリドのよ
うなキャリアとともに、坐剤として処方され得る。経口処方物は、薬学的等級の
マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリン
ナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどのような標準キャリアを含み得
る。適切な薬学的キャリアの例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇ
ｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載される
。このような組成物は、治療有効量の化合物を、好ましくは精製された形態で、
適切な量のキャリアとともに含んで、患者への適切な投与のための形態を提供す
る。処方物は、投与形態に適するべきである。
【０２５４】 好ましい実施形態において、組成物は、慣用手順に従って、ヒトへの静脈内投
与のために採用された薬学的組成物として、処方される。代表的には、静脈内投
与のための組成物は、滅菌等張水性緩衝液の溶液である。必要な場合、組成物は
また、可溶化剤および注射の部位での痛みを緩和するリグノカインのような局部
麻酔を含み得る。一般的には、成分は、別々にかまたは単一投薬形態で一緒に混
合してのどちらかで、例えば、一定量の活性薬剤を示すアンプルまたは小袋（ｓ
ａｃｈｅｔｔｅ）のような密封された容器中の凍結乾燥粉末または水を含まない
濃縮物として供給される。組成物が注入により投与されるべき場合には、組成物
は、滅菌した薬学的等級の水または生理食塩水を含む注入ボトルに分配され得る
。組成物が注射により投与される場合、成分が投与の前に混合され得るように、
注射用滅菌水または生理食塩水のアンプルが提供され得る。
【０２５５】 本発明の化合物は、中性のまたは塩の形態として処方され得る。薬学的に受容
可能な塩としては、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するもの
のようなアニオンとともに形成される塩、およびナトリウム、カリウム、アンモ
ニウム、カルシウム、水酸化第２鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、
２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するもののよ
うなカチオンとともに形成される塩が挙げられる。
【０２５６】 この処置（本発明のポリペプチドの異常な発現および／または活性と関連する
疾患または障害の抑制および予防）において効果的である本発明の化合物の量は
、標準的な臨床技術により決定され得る。さらに、インビトロアッセイは、必要
に応じて、使用して最適な投薬量の範囲を同定するのを助け得る。処方において
使用されるべき正確な用量はまた、投与の経路、および疾患または障害の重篤さ
に依存し、そして開業医の判断および各患者の状況に従って決定されるべきであ
る。有効用量は、インビトロまたは動物モデル試験系から得られた用量反応曲線
から外插され得る。
【０２５７】 抗体に関して、患者に投与される投薬量は、代表的に、患者の体重１ｋｇあた
り０．１ｍｇ〜１００ｍｇである。好ましくは、患者に投与される投薬量は、患
者の体重１ｋｇあたり０．１ｍｇと２０ｍｇとの間であり、より好ましくは、患
者の体重１ｋｇあたり１ｍｇ〜１０ｍｇである。一般に、ヒト抗体は、外来ポリ
ペプチドへの免疫応答に起因して、他種由来の抗体よりもヒト体内で長い半減期
を有する。従って、ヒト抗体の低い投薬量および頻度の低い投与は、しばしば可
能である。さらに、本発明の抗体の投与の投薬量および頻度は、改変（例えば、
脂溶化（ｌｉｐｉｄａｔｉｏｎ）のような）による抗体の取り込みおよび組織浸
透（例えば、脳への）を増強することにより減少され得る。
【０２５８】 本発明はまた、本発明の薬学的組成物の一つ以上の成分で満たされている一つ
以上の容器を備える薬学的パックまたはキットを提供する。薬学的製品または生
物学的製品の製造、使用または販売を規制している政府機関により規定される形
式における通告は、このような容器に、必要に応じて伴ない得る。この通告は、
ヒトの投与のための製造、使用または販売のこの機関による認可を反映する。
【０２５９】 （診断および画像化） 目的のポリペプチドに特異的に結合する標識化抗体、ならびにその誘導体およ
びそのアナログは、診断目的のために使用されて、本発明のポリペプチドの異常
な発現および／または活性に関連する疾患および／または障害を検出、診断また
はモニターし得る。本発明は、目的のポリペプチドの異常な発現の検出について
提供し、これは、（ａ）目的のポリペプチドに特異的な１つ以上の抗体を使用し
て、個体の細胞または体液中の目的のポリペプチドの発現をアッセイする工程、
および（ｂ）この遺伝子発現レベルと標準的な遺伝子発現のレベルを比較する工
程、を包含し、これによって、その標準的な発現レベルと比較されるアッセイさ
れたポリペプチド遺伝子発現レベルの増加または減少が、異常な発現を示す。
【０２６０】 本発明は、障害を診断するための診断アッセイを提供し、このアッセイは、（
ａ）目的のポリペプチドに特異的な１つ以上の抗体を使用して、個体の細胞また
は体液中の目的のポリペプチドの発現をアッセイする工程、および（ｂ）この遺
伝子発現レベルと標準的な遺伝子発現のレベルを比較する工程、を包含し、これ
によって、その標準的な発現レベルと比較されるアッセイされたポリペプチド遺
伝子発現レベルの増加または減少が、特定の障害を示す。癌に関して、個体由来
の生検組織における比較的高い量の転写物の存在は、疾患の発生のための素因を
示し得るか、または実際の臨床症状の出現前に疾患を検出するための手段を提供
し得る。この型のより決定的な診断は、保健専門家に予防手段を使用させること
、または早期の積極的な処置を可能にし得、これにより、癌の発生またはさらな
る進行を予防する。
【０２６１】 本発明の抗体を使用して、当業者に公知の古典的な免疫組織学的方法を使用し
て生物学的サンプル中のタンパク質レベルをアッセイし得る（例えば、Ｊａｌｋ
ａｎｅｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：９７６−９８５（１９８５）；
Ｊａｌｋａｎｅｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７−３０９６（
１９８７）を参照のこと）。タンパク質遺伝子発現を検出するために有用な、抗
体に基づく他の方法としては、イムノアッセイ（例えば、酵素結合イムノソルベ
ント検定法（ＥＬＩＳＡ）および放射免疫測定法（ＲＩＡ））が挙げられる。適
切な抗体アッセイ標識は、当該分野において公知であり、そして酵素標識（例え
ば、グルコースオキシダーゼ）；放射性同位体（例えば、ヨウ素（１２５Ｉ、１
２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム
（１１２Ｉｎ）、およびテクネチウム（９９Ｔｃ））；発光標識（例えば、ルミ
ノール）；ならびに蛍光標識（例えば、フルオレセインおよびローダミン）、な
らびにビオチンが挙げられる。
【０２６２】 本発明の１つの局面は、動物、好ましくは哺乳動物、そして最も好ましくはヒ
トにおける、目的のポリペプチドの異常な発現と関連する疾患または障害の検出
および診断である。１つの実施形態において、診断は、ａ）目的のポリペプチド
に特異的に結合する有効量の標識化分子を被験体に（例えば、非経口的に、皮下
に、または腹腔内に）投与する工程；ｂ）このポリペプチドが発現する被験体内
の部位でこの標識化分子が優先的に濃縮することを可能にするために（および結
合していない標識化分子がバックグラウンドレベルまで除去されるために）投与
後、時間間隔を待つ工程；ｃ）バックグラウンドレベルを決定する工程；および
ｄ）この被験体中の標識化分子を検出する工程、を包含し、その結果、このバッ
クグラウンドレベルを越える標識化分子の検出は、この被験体が目的のポリペプ
チドの異常な発現と関連する特定の疾患または障害を有することを示す。バック
グラウンドレベルは、特定の系について以前に決定された標準的な値と、検出さ
れた標識化分子の量を比較する工程を包含する種々の方法により決定され得る。
【０２６３】 被験体の大きさおよび使用される画像化システムが、診断の画像を産生するた
めに必要である画像化部分の量を決定するということは、当該分野において理解
される。放射性同位体部分の場合、ヒト被験体について、注入される放射能の量
は、通常、約５〜２０ｍキュリーの範囲の９９ｍＴｃである。次いで、標識化抗
体または標識化抗体フラグメントは、特定のタンパク質を含む細胞の位置で優先
的に蓄積する。インビボでの腫瘍の画像化は、Ｓ．Ｗ．Ｂｕｒｃｈｉｅｌら、「
Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌ
ｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ」（Ｔ
ｕｍｏｒ Ｉｍａｇｉｎｇ、第１３章：Ｔｈｅ Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，Ｓ．Ｗ．ＢｕｒｃｈｉｅｌおよびＢ
．Ａ．Ｒｈｏｄｅｓ編、Ｍａｓｓｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｉｎｃ．（１９
８２）において、記載される。
【０２６４】 使用する標識の型および投与の様式を含む、いくつかの変動に依存して、標識
化分子が被験体中の部位に優先的に濃縮することを可能にするため、および結合
していない標識化分子がバックグラウンドレベルまで除去されるための投与後の
時間間隔は、６〜４８時間もしくは６〜２４時間または６〜１２時間である。別
の実施形態において、投与後の時間間隔は、５〜２０日間または５〜１０日間で
ある。
【０２６５】 １つの実施形態において、疾患および障害をモニターすることは、疾患または
障害（ｄｉｓｅａｓｅ）を診断するための方法を繰り返すことによって実施され
る（例えば、最初の診断から１ヶ月後、最初の診断から６ヶ月後、最初の診断か
ら１年後、など）。
【０２６６】 標識化分子の存在は、インビボスキャニングについての当該分野で公知の方法
を使用して患者中で検出され得る。これらの方法は、使用される標識の型に依存
する。当業者は、特定の標識を決定するための適切な方法を決定することができ
る。本発明の診断方法において使用され得る方法およびデバイスは、コンピュー
タ連動断層撮影法（ＣＴ）、体全体のスキャン（例えば、陽子（ｐｏｓｉｔｉｏ
ｎ）放射断層撮影法（ＰＥＴ））、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、および超音波診
断法を含むが、これらに限定されない。
【０２６７】 特定の実施形態において、分子を放射性同位体で標識し、そして放射応答外科
的機器（ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｓｕｒｇｉｃａｌ ｉｎ
ｓｔｒｕｍｅｎｔ）（Ｔｈｕｒｓｔｏｎら、米国特許第５，４４１，０５０号）
を使用して患者中で検出する。別の実施形態において、分子を蛍光化合物で標識
し、そして蛍光応答スキャニング機器を使用して患者中で検出する。別の実施形
態において、分子を陽電子射出金属で標識し、そして陽電子射出断層撮影法を使
用して患者中で検出する。さらに別の実施形態において、分子を常磁性標識で標
識し、そして磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）を使用して患者中で検出する。
【０２６８】 （キット） 本発明は、上記の方法において使用され得るキットを提供する。１つの実施形
態において、キットは、１つ以上の容器において、本発明の抗体、好ましくは精
製した抗体を備える。特定の実施形態において、本発明のキットは、エピトープ
を含む実質的に単離されたポリペプチドを備える。このエピトープは、キット中
に含まれる抗体と特異的に免疫反応する。好ましくは、本発明のキットは、目的
のポリペプチドと反応しないコントロール抗体をさらに備える。別の特定の実施
形態において、本発明のキットは、目的のポリペプチドへの抗体の結合を検出す
るための手段を備える（例えば、この抗体は、検出可能な基質（例えば、蛍光化
合物、酵素基質、放射性化合物もしくは発光化合物）に結合体化され得るか、ま
たは一次抗体を認識する二次抗体が、検出可能な基質と結合体化され得る）。
【０２６９】 本発明の別の特定の実施形態において、キットは、増殖性および／または癌性
のポリヌクレオチドおよびポリペプチドに対して特異的な抗体を含む血清のスク
リーニングに使用するための診断キットである。このようなキットは、目的のポ
リペプチドと反応しないコントロール抗体を備え得る。このようなキットは、エ
ピトープを含む実質的に単離されたポリペプチド抗原を備え得る。このエピトー
プは、少なくとも１つの抗ポリペプチド抗原抗体と特異的に免疫反応する。さら
に、このようなキットは、抗原に対する上記の抗体の結合を検出するための手段
を備える（例えば、抗体は、蛍光化合物（例えば、フローサイトメトリーにより
検出され得るフルオレセインまはたローダミン）と結合体化され得る）。特定の
実施形態において、キットは、組換え的に産生されたポリペプチド抗原または化
学的に合成されたポリペプチド抗原を備え得る。キットのポリペプチド抗原はま
た、固体支持体に付着され得る。
【０２７０】 より特定の実施形態において、上記のキットの検出手段は、上記のポリペプチ
ド抗原が付着する固体支持体を備える。このようなキットはまた、非付着レポー
ター標識化抗ヒト抗体を備え得る。この実施形態において、ポリペプチド抗原へ
の抗体の結合は、上記のレポーター標識化抗体の結合によって検出され得る。
【０２７１】 さらなる実施形態において、本発明は、本発明のポリペプチドの抗原を含む血
清のスクリーニングにおいて使用するための、診断キットを含む。この診断キッ
トは、ポリペプチド抗原またはポリヌクレオチド抗原と特異的に免疫反応する実
質的に単離された抗体、およびこの抗体へのこのポリヌクレオチド抗原またはポ
リペプチド抗原の結合を検出するための手段を備える。１つの実施形態において
、抗体は、固体支持体に付着される。特定の実施形態において、抗体は、モノク
ロナール抗体であり得る。キットのこの検出手段は、二次標識化モノクロナール
抗体を含み得る。あるいは、またはさらに、この検出手段は、標識化競合抗原を
含み得る。
【０２７２】 １つの診断構成において、試験血清を、本発明の方法により得られる表面結合
抗原を有する固相試薬と反応させる。特定の抗原抗体とこの試薬との結合、およ
び洗浄することによる結合していない血清成分の除去の後、この試薬をレポータ
ー標識化抗ヒト抗体と反応させて、固体支持体上に、結合した抗抗原抗体の量に
比例して、この試薬にレポーターを結合させる。この試薬を再び洗浄して、結合
していない標識化抗体を除去し、そしてこの試薬と会合するレポーターの量を決
定する。代表的に、レポーターは、酵素であり、この酵素は、適切な蛍光性基質
、発光性基質または比色用基質（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）の存在
下で固相をインキュベートすることにより検出される。
【０２７３】 上記のアッセイにおける固体表面試薬は、タンパク質材料を固体支持体材料（
例えば、高分子ビーズ、計深棒、９６ウェルプレートまたは濾過材料）に付着さ
せるための公知の技術により調製される。これらの付着方法としては、一般的に
、支持体へのタンパク質の非特異的な吸着または固体支持体上の化学的に活性な
基（例えば、活性化カルボキシル基、ヒドロキシル基、またはアルデヒド基）と
のタンパク質の共有結合（ｃｏｖａｌｅｎｔ ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ）（代表的
には、遊離アミン基を介する）が挙げられる。あるいは、ストレプトアビジンで
コートされたプレートが、ビオチン化された抗原と共に使用され得る。
【０２７４】 従って、本発明は、この診断方法を行うためのアッセイ系またはキットを提供
する。このキットは、一般的に、表面結合された組換え抗原を有する支持体、お
よび表面結合された抗抗原抗体を検出するための、レポーター標識された抗ヒト
抗体を備える。
【０２７５】 （ポリヌクレオチドの使用） 本明細書中で同定された各々のポリヌクレオチドは、試薬として多数の方法に
おいて使用され得る。以下の説明は例示的であるとみなされるべきであり、そし
て公知の技術を利用する。
【０２７６】 本発明のポリヌクレオチドは、染色体同定のために有用である。実際の配列デ
ータ（反復多型性）に基づく染色体マーキング試薬は現在ほとんど利用可能では
ないため、新しい染色体マーカーを同定する必要性が存在するままである。各々
の配列は、個々のヒト染色体上の特定の位置に特に標的化され、そしてこの位置
にハイブリダイズされ得る。従って、本発明の各々のポリヌクレオチドは、当該
分野で公知の技術を用いて染色体マーカーとして慣用的に使用され得る。
【０２７７】 簡単に言うと、配列は、配列番号Ｘで示される配列またはそれに対する相補体
からＰＣＲプライマー（好ましくは、少なくとも１５ｂｐ（例えば、１５〜２５
ｂｐ））を調製することによって染色体にマッピングされ得る。プライマーが、
ゲノムＤＮＡ中の１つより多くの予測されたエキソンにまたがらないように、プ
ライマーは、コンピューター分析を使用して必要に応じて選択され得る。次いで
、これらのプライマーは、個々のヒト染色体を含む体細胞ハイブリッドのＰＣＲ
スクリーニングのために使用される。配列番号Ｘに対応するヒト遺伝子を含むハ
イブリッドのみが、増幅されたフラグメントを産生する。
【０２７８】 同様に、体細胞ハイブリッドは、特定の染色体に対してポリヌクレオチドをＰ
ＣＲマッピングする迅速な方法を提供する。単一のサーマルサイクラーを使用し
て１日あたり３つ以上のクローンが割り当てられ得る。さらに、ポリヌクレオチ
ドの下位位置決定（ｓｕｂｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ）は、特定の染色体フラグ
メントのパネルを用いて達成され得る。使用され得る他の遺伝子マッピング戦略
は、インサイチュハイブリダイゼーション、標識フローソート（ｌａｂｅｌｅｄ
ｆｌｏｗ ｓｏｒｔｅｄ）染色体でのプレスクリーニング、染色体特異的ｃＤ
ＮＡライブラリーを構築するためのハイブリダイゼーションによる前選択、およ
びコンピューターマッピング技術（例えば、その全体が本明細書中に参考として
援用される、Ｓｈｕｌｅｒ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １６：４５
６−４５９（１９９８）など）を含む。
【０２７９】 ポリヌクレオチドの正確な染色体位置はまた、中期染色体スプレッド（ｓｐｒ
ｅａｄ）の蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を使用して獲
得され得る。この技術は５００または６００塩基ほどの短さのポリヌクレオチド
を使用する；しかし２，０００〜４，０００ｂｐのポリヌクレオチドが好ましい
。この技術の総説に関しては、Ｖｅｒｍａら、「Ｈｕｍａｎ Ｃｈｒｏｍｏｓｏ
ｍｅｓ：ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」，Ｐｅ
ｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９８８）を参照のこと。
【０２８０】 染色体マッピングについては、ポリヌクレオチドは、個々に（単一染色体また
はその染色体上の単一部位をマークするために）またはパネルで（複数部位およ
び／または複数染色体をマークするために）使用され得る。
【０２８１】 従って、本発明はまた、染色体の位置決定のための方法も提供し、この方法は
、（ａ）表１におけるポリヌクレオチド配列および配列番号ＸからＰＣＲプライ
マーを調製する工程、ならびに（ｂ）個々の染色体を含む体細胞ハイブリッドを
スクリーニングする工程を包含する。
【０２８２】 本発明のポリヌクレオチドは、同様に、放射線ハイブリッドマッピング、ＨＡ
ＰＰＹマッピング、および長範囲制限マッピングに有用である。これらの技術お
よび当該分野で公知の他の技術の概説について、例えば、Ｄｅａｒ「Ｇｅｎｏｍ
ｅ Ｍａｐｐｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ」ＩＲＬ Ｐ
ｒｅｓｓ ａｔ Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｌｏｎｄ
ｏｎ（１９９７）；Ａｙｄｉｎ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７７：６９１〜６９４（
１９９９）；Ｈａｃｉａら、Ｍｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ３：４８３〜４９
２（１９９８）；Ｈｅｒｒｉｃｋら、Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ Ｒｅｓ．７：４０
９〜４２３（１９９９）；Ｈａｍｉｌｔｏｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂ
ｉｏｌ．６２：２６５〜２８０（２０００）；および／またはＯｔｔ、Ｊ．Ｈｅ
ｒｅｄ．９０：６８〜７０（１９９９）（これらの各々は、その全体が参考とし
て本明細書中に援用される）を参照のこと。
【０２８３】 一旦、ポリヌクレオチドが正確な染色体位置にマップされると、ポリヌクレオ
チドの物理的位置は、連鎖分析において使用され得る。連鎖分析は、染色体位置
と特定の疾患の提示との間の同時遺伝（ｃｏｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ）を確立す
る。（疾患マッピングデータは、例えば、Ｖ．ＭｃＫｕｓｉｃｋ，Ｍｅｎｄｅｌ
ｉａｎ Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ ｉｎ Ｍａｎ（Ｊｏｈｎｓ Ｈｏｐｋｉｎｓ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｗｅｌｃｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｉｂｒａｒｙを通し
てオンラインで利用可能である）において見い出される）。１メガベースマッピ
ング解像度および２０ｋｂあたり１遺伝子と仮定すると、疾患と関連する染色体
領域に正確に位置決定されるｃＤＮＡは、５０〜５００の潜在的な原因遺伝子の
うちの１つであり得る。
【０２８４】 従って、一旦、同時遺伝が確立されると、罹患個体と非罹患個体との間での本
発明のポリヌクレオチドおよび対応する遺伝子における差異が試験され得る。ま
ず、染色体中の可視的構造変化（例えば、欠失または転座）は染色体スプレッド
において、またはＰＣＲによって試験される。構造的変化が存在しない場合、点
変異の存在が確認される。何人かのまたは全ての罹患個体で観察されたが、正常
な個体では観察されなかった変異は、この変異がこの疾患を引き起こし得ること
を示す。しかし、いくつかの正常な個体由来のポリペプチドおよび対応する遺伝
子の完全な配列決定は、変異を多型性と区別するために要求される。新しい多型
性が同定される場合、この多型ポリペプチドはさらなる連鎖分析のために使用さ
れ得る。
【０２８５】 さらに、非罹患個体と比較した、罹患個体の遺伝子の増加または減少した発現
が、本発明のポリヌクレオチドを使用して評価され得る。任意のこれらの変化（
変化した発現、染色体再配置、または変異）は、診断マーカーまたは予後マーカ
ーとして使用され得る。
【０２８６】 従って、本発明はまた、障害の診断の間に有用な診断方法を提供し、この方法
は、個体由来の細胞または体液中の本発明のポリヌクレオチドの発現レベルを測
定する工程、および測定された遺伝子発現レベルを標準のポリヌクレオチド発現
レベルと比較する工程を包含し、これによって、標準と比較して、遺伝子発現レ
ベルの増加または減少が、障害の指標になる。
【０２８７】 なお別の実施形態では、本発明は、サンプルを、試験被験体に由来する増殖性
および／またはガン性のポリヌクレオチドの存在について分析するためのキット
を含む。一般的実施形態において、このキットは、本発明のポリヌクレオチドと
特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む少なくとも１つのポリヌク
レオチドプローブ、および適切な容器を備える。特定の実施形態では、このキッ
トは、本発明のポリヌクレオチドの内部領域を規定する２つのポリヌクレオチド
プローブを含み、ここで各プローブは、この領域に対して内部に３１’マー末端
を含む１つの鎖を有する。さらなる実施形態では、このプローブは、ポリメラー
ゼ連鎖反応増幅のためのプライマーとして有用であり得る。
【０２８８】 例えば、腫瘍の診断を含む、関連障害の診断が既に従来方法によって行われて
いる場合、本発明は、予後インジケーターとして有用であり、それによって増強
または抑制された本発明のポリヌクレオチドの発現を示す患者が、標準レベルに
より近いレベルでこの遺伝子を発現する患者と比較して悪い臨床結果を経験する
。
【０２８９】 「本発明のポリヌクレオチドの発現レベルを測定する（こと）」によって、本
発明のポリペプチドのレベルまたは本発明のポリペプチドをコードするｍＲＮＡ
のレベルを、第１の生物学的サンプルにおいて直接的（例えば、絶対のタンパク
質レベルまたはｍＲＮＡレベルを決定または評価することによって）または相対
的（例えば、第２の生物学的サンプル中のポリペプチドレベルまたはｍＲＮＡレ
ベルに対して比較することによって）のいずれかで定性的または定量的に測定ま
たは評価することが意図される。好ましくは、第１の生物学的サンプル中のポリ
ペプチドレベルまたはｍＲＮＡレベルが測定または評価され、そして標準のポリ
ペプチドレベルまたはｍＲＮＡレベルに対して比較され、この標準は、関連障害
を有さない個体から得られる第２の生物学的サンプルから得られるかまたは関連
障害を有さない個体の集団由来のレベルを平均することによって決定される。当
該分野で認識されるように、一旦標準的なポリペプチドレベルまたはｍＲＮＡレ
ベルが公知になれば、これを、比較のための標準として反復して用い得る。
【０２９０】 「生物学的サンプル」によって、本発明のポリペプチドまたは対応するｍＲＮ
Ａを含む、個体、体液、細胞株、組織培養物または他の供給源から得られる任意
の生物学的サンプルが意図される。示されるように、生物学的サンプルは、本発
明のポリペプチドを含む体液（例えば、精液、リンパ、血清、血漿、尿、滑液お
よび髄液）、本発明のポリペプチドを発現することが見出された組織供給源を含
む。哺乳動物から組織生検および体液を得るための方法は、当該分野で周知であ
る。生物学的サンプルがｍＲＮＡを含む場合、組織生検が好ましい供給源である
。
【０２９１】 上記で提供された方法は好ましくは、本発明のポリヌクレオチドおよび／また
はポリペプチドが固体支持体に結合される、診断方法および／またはキットに適
用され得る。１つの例示的な方法では、この支持体は、米国特許第５，８３７，
８３２号、同第５，８７４，２１９号および同第５，８５６，１７４号に記載さ
れる、「遺伝子チップ」または「生物学的チップ」であり得る。さらに、本発明
のポリヌクレオチドが結合されたこのような遺伝子チップを用いて、単離された
本発明のポリヌクレオチド配列と、試験被験体から単離されたポリヌクレオチド
との間の多型性を同定し得る。このような多型の知識（すなわち、その多型の位
置、およびその多型の存在）は、多くの障害（例えば、神経障害、免疫系障害、
筋肉障害、生殖障害、胃腸障害、肺障害、心血管障害、腎障害、増殖性障害、な
らびに／または癌性疾患および癌性状態）について、疾患遺伝子座を同定する際
に有益である。このような方法は、米国特許第５，８５８，６５９号および同第
５，８５６，１０４号に記載される。上記に参照した米国特許は、その全体が本
明細書中に参考として援用される。
【０２９２】 本発明は、化学的に合成された、または、ペプチド核酸（ＰＮＡ）として再現
された、あるいは当該分野で公知の他の方法に従って、本発明のポリヌクレオチ
ドを包含する。ＰＮＡの使用は、本発明のポリヌクレオチドが固体支持体、また
は、遺伝子チップに取り込まれる場合、好ましい形態として役立つ。本発明の目
的のために、ペプチド核酸（ＰＮＡ）は、ポリアミド型のＤＮＡアナログであり
、そしてアデニン、グアニン、チミンおよびシトシンについてのモノマー単位が
市販されている（Ｐｅｒｃｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）。ＤＮＡの特
定の成分（例えば、リン、酸化リンまたはデオキシリボース誘導体）は、ＰＮＡ
中に存在しない。Ｐ．Ｅ．Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｍ．Ｅｇｈｏｌｍ，Ｒ．Ｈ．Ｂｅｒ
ｇおよびＯ．Ｂｕｃｈａｒｄｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４，１４９７（１９９７
）；ならびにＭ．Ｅｇｈｏｌｍ，Ｏ．Ｂｕｃｈａｒｄｔ，Ｌ．Ｃｈｒｉｓｔｅｎ
ｓｅｎ，Ｃ．Ｂｅｈｒｅｎｓ，Ｓ．Ｍ．Ｆｒｅｉｅｒ，Ｄ．Ａ．Ｄｒｉｖｅｒ，
Ｒ．Ｈ．Ｂｅｒｇ、Ｓ．Ｋ．Ｋｉｍ，Ｂ．ＮｏｒｄｅｎおよびＰ．Ｅ．Ｎｉｅｌ
ｓｅｎ，Ｎａｔｕｒｅ ３６５，６６６（１９９３）によって開示されるように
、ＰＮＡは、相補的なＤＮＡ鎖に対して特異的かつ緊密に結合し、そしてヌクレ
アーゼによって分解されない。実際、ＰＮＡは、ＤＮＡ自体が結合するよりも強
力にＤＮＡに結合する。これはおそらく、２つの鎖の間に静電斥力が存在せず、
そしてまたポリアミド骨格がより可撓性が高いことによる。これによって、ＰＮ
Ａ／ＤＮＡ二重鎖は、ＤＮＡ／ＤＮＡ二重鎖よりも広範囲のストリンジェンシー
条件下で結合し、多重鎖ハイブリダイゼーションを行うのをより容易にする。強
力な結合に起因して、ＤＮＡを用いてよりも小さいプローブが用いられ得る。さ
らに、おそらく、単一の塩基ミスマッチが、ＰＮＡ／ＤＮＡハイブリダイゼーシ
ョンを用いて決定され得る。なぜなら、ＰＮＡ／ＤＮＡの１５マーにおける単一
のミスマッチは、ＤＮＡ／ＤＮＡの１５マー二重鎖については４℃〜１６℃であ
るのに対して、融点（Ｔ．ｓｕｂ．ｍ）を８〜２０℃低下させるからである。ま
た、ＰＮＡ中に電荷基が存在しないことは、ハイブリダイゼーションが、低いイ
オン強度で行われ得、そして分析の間の塩によって可能な妨害を減少させること
を意味する。
【０２９３】 本発明は、哺乳動物におけるガンの検出を含むがこれらに限定されない用途を
有する。特に、本発明は、以下を含むがこれらに限定されない、病理学的細胞増
殖新形成の診断の間に有用である：急性骨髄性白血病（急性単球性白血病、急性
骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性赤白血
病、急性巨核球性白血病、および急性未分化白血病などを含む）；および慢性骨
髄性白血病（慢性骨髄単球性白血病、慢性顆粒球性白血病などを含む）。好まし
い哺乳動物としては、有尾猿（ｍｏｎｋｅｙ）、無尾猿（ａｐｅ）、ネコ、イヌ
、ウシ、ブタ、ウマ、ウサギおよびヒトが挙げられる。特に好ましいのは、ヒト
である。
【０２９４】 病理学的細胞増殖障害はしばしば、原癌遺伝子の不適切な活性化に関連する（
Ｇｅｌｍａｎｎ，Ｅ．Ｐ．ら，「Ｔｈｅ Ｅｔｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ａｃｕｔｅ
Ｌｅｕｋｅｍｉａ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｖｉｒ
ａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ」，Ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ
ｔｈｅ Ｂｌｏｏｄ，第１巻，Ｗｉｅｒｎｉｋ、Ｐ．Ｈ．ら編，１６１−１８２
（１９８５））。新形成は現在、ウイルス配列の染色体への挿入、より活性に転
写される領域への遺伝子の染色体転座、または何らかの他の機構による、正常な
細胞遺伝子産物の定性的変化から、または遺伝子発現の定量的改変から生じると
考えられている（Ｇｅｌｍａｎｎら、前出）。特定の遺伝子の変異または変更さ
れた発現が、他の組織および他の細胞型の中でも、いくつかの白血病の病因と関
与するようである（Ｇｅｌｍａｎｎら、前出）。実際、いくつかの動物新形成に
関与する癌遺伝子のヒト対応物は、ヒトの白血病および癌のいくつかの症例にお
いて増幅または転座されている（Ｇｅｌｍａｎｎら、前出）。
【０２９５】 例えば、ｃ−ｍｙｃ発現は、非リンパ球性白血病細胞株ＨＬ−６０において高
度に増幅される。ＨＬ−６０細胞が増幅を止めるように化学的に誘導される場合
、ｃ−ｍｙｃのレベルは、ダウンレギュレートされることが見出される（国際公
開番号ＷＯ９１／１５５８０）。しかし、ｃ−ｍｙｃまたはｃ−ｍｙｂの５’末
端に相補的であるＤＮＡ構築物へのＨＬ−６０細胞の暴露が、ｃ−ｍｙｃタンパ
ク質またはｃ−ｍｙｂタンパク質の発現をダウンレギュレートする対応するｍＲ
ＮＡの翻訳をブロックし、処理した細胞の細胞増殖および分化の停止を引き起こ
すことが示されている（国際公開番号ＷＯ９１／１５５８０；Ｗｉｃｋｓｔｒｏ
ｍら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５：１０２８（１９８８）；
Ａｎｆｏｓｓｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８６：３３７９（
１９８９））。しかし、当業者は、増殖表現型を示すことが公知である種々の起
源の多数の細胞および細胞型を考慮すれば、本発明の有用性が造血性の細胞およ
び組織の増殖性障害の処置に限定されないことを認識する。
【０２９６】 前記に加えて、本発明のポリヌクレオチドは、三重らせん形成を通して、また
はアンチセンスＤＮＡもしくはＲＮＡを通して遺伝子発現を制御するために使用
され得る。アンチセンス技術は、例えば、Ｏｋａｎｏ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ
．５６：５６０（１９９１）；「Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ
ａｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐ
ｒｅｓｓｉｏｎ」，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１９８
８）において考察される。三重らせん形成は例えば、Ｌｅｅら、Ｎｕｃｌｅｉｃ
Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６：３０７３（１９７９）；Ｃｏｏｎｅｙら
、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：４５６（１９８８）；およびＤｅｒｖａｎら、Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ ２５１：１３６０（１９９１）において考察される。両方の方法は
、相補的ＤＮＡまたは相補的ＲＮＡへのポリヌクレオチドの結合に依存する。こ
れらの技術に関して、好ましいポリヌクレオチドは通常、２０〜４０塩基長のオ
リゴヌクレオチドであり、そして転写に関与する遺伝子領域（三重らせん−Ｌｅ
ｅら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．６：３０７３（１９７９）；Ｃｏｏｎｅ
ｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：４５６（１９８８）；およびＤｅｒｖａｎら、
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：１３６０（１９９１）を参照のこと）またはｍＲＮＡ
自体（アンチセンス−Ｏｋａｎｏ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．５６：５６０（１
９９１）；Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙ−ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｓ
ｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ｃ
ＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１９８８））のいずれかに相
補的である。三重らせん形成は、最適にはＤＮＡからのＲＮＡ転写の遮断を生じ
るが、アンチセンスＲＮＡハイブリダイゼーションは、ポリペプチドへのｍＲＮ
Ａ分子の翻訳を阻止する。上記に記載のオリゴヌクレオチドはまた、アンチセン
スＲＮＡまたはＤＮＡが、インビボで発現されて本発明の抗原のポリペプチド産
生を阻害し得るように細胞に送達され得る。両方の技術は、モデル系において効
果的であり、そして本明細書に開示される情報は、疾患を処置するための試みに
おいて、特に、増殖性疾患および／または状態の処置のために、アンチセンスま
たは三重らせんポリヌクレオチドを設計するために使用され得る。
【０２９７】 本発明のポリヌクレオチドはまた、遺伝子治療において有用である。遺伝子治
療の１つの目標は、遺伝欠損を修正する試みにおいて、欠損遺伝子を有する生物
へ正常遺伝子を挿入することである。本発明に開示されるポリヌクレオチドは、
高度に正確な様式でこのような遺伝欠損を標的とする手段を提供する。別の目標
は、宿主ゲノム中には存在しなかった新しい遺伝子を挿入し、それによって宿主
細胞中に新しい形質を生成することである。
【０２９８】 ポリヌクレオチドはまた、微小な生物学的サンプルから個体を同定するために
有用である。例えば、米国軍は、その職員を同定するために制限フラグメント長
の多型性（ＲＦＬＰ）の使用を考慮している。この技術において、個体のゲノム
ＤＮＡは１つ以上の制限酵素で消化され、そして職員を同定するため固有なバン
ドを生じるためのサザンブロットについてプローブされる。この方法は、「認識
票（Ｄｏｇ ｔａｇ）」（これは、失われたり、交換されたり、または盗まれた
りすることにより、ポジティブな同定を困難にし得る）の現在の限界を受けない
。本発明のポリヌクレオチドは、ＲＦＬＰのためのさらなるＤＮＡマーカーとし
て使用され得る。
【０２９９】 本発明のポリヌクレオチドはまた、個体のゲノムの選択された部分の実際の塩
基ごとのＤＮＡ配列を決定することによって、ＲＦＬＰに対する代替物として使
用され得る。これらの配列は、このような選択されたＤＮＡを増幅しそして単離
するためにＰＣＲプライマーを調製するために使用され得、次いで、この選択さ
れたＤＮＡは、配列決定され得る。各個体が固有のセットのＤＮＡ配列を有する
ので、この技術を使用して、個体が同定され得る。一旦、固有のＩＤデータベー
スが個体について確立されると、その個体が生存していようとまたは死亡してい
ようと、その個体のポジティブ同定が、極めて小さな組織サンプルからなされ得
る。
【０３００】 法医学生物学もまた、本明細書に開示されるようなＤＮＡに基づく同定技術を
使用して利益を得る。組織（例えば、髪または皮膚）、または体液（例えば、血
液、唾液、精液、滑液、羊水、乳汁、リンパ、肺痰（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｓｐ
ｕｔｕｍ）またはサーファクタント、尿、糞便物質など）のような非常に小さな
生物学的サンプルから得られたＤＮＡ配列は、ＰＣＲを使用して増幅され得る。
ある先行技術において、ＤＱａクラスＩＩ ＨＬＡ遺伝子のような多型性遺伝子
座から増幅された遺伝子配列は、個体を同定するための法医学生物学において使
用される。（Ｅｒｌｉｃｈ，Ｈ．，ＰＣＲ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｆｒｅｅｍ
ａｎ ａｎｄ Ｃｏ．（１９９２））。一旦、これらの特異的多型性遺伝子座が
増幅されると、これらは１つ以上の制限酵素で消化される。これは、ＤＱａクラ
スＩＩ ＨＬＡ遺伝子に対応するＤＮＡでプローブされたサザンブロットについ
てのバンドの同定セットを生じる。同様に、本発明のポリヌクレオチドは、法医
学的目的のための多型性マーカーとして使用され得る。
【０３０１】 また、特定の組織の供給源を同定し得る試薬についての必要性が存在する。例
えば、未知の起源の組織が提供される場合、法医学においてこのような必要性が
生じる。適切な試薬は、例えば、本発明の配列から調製される、ＤＮＡプローブ
またはプライマーを含み得る。このような試薬のパネルは、種および／または器
官型によって組織を同定し得る。同様の様式で、これらの試薬は、夾雑物につい
て組織培養物をスクリーニングするために使用され得る。
【０３０２】 本発明のポリヌクレオチドはまた、生物学的サンプル中に存在する組織または
細胞型の示差的同定のためのハイブリダイゼーションプローブとして有用である
。同様に、本発明のポリペプチドに関するポリペプチドおよび抗体は、組織（例
えば、免疫組織化学アッセイ）または細胞型（例えば、免疫細胞学アッセイ）の
示差的同定のための免疫学的プローブを提供するのに有用である。さらに、「標
準」遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有しない個体由来の健康組織の発現レ
ベル）と比較して、上記の組織または細胞の多くの障害に対して、本発明のポリ
ヌクレオチド／ポリペプチドの有意に高いかまたは低いレベルの遺伝子発現が、
このような障害を有する個体から採取された特定の組織（例えば、本発明のポリ
ペプチドおよび／またはポリヌクレオチドを発現する組織、および／または癌性
組織および／または創傷組織）または体液（例えば、漿液、血漿、尿、滑液また
は髄液）において検出され得る。
【０３０３】 従って、本発明は、以下の工程を含む障害の診断方法を提供する：（ａ）個体
の細胞または体液中の遺伝子発現レベルをアッセイする工程；（ｂ）標準的な遺
伝子発現レベルと、この遺伝子発現レベルを比較し、それにより、標準の発現レ
ベルと比較して、アッセイされた遺伝子発現レベルの増加または減少が障害を示
す、工程。
【０３０４】 少なくとも、本発明のポリヌクレオドは、サザンブロットのゲル上の分子量マ
ーカーとして、特定の細胞型における特異的ｍＲＮＡの存在についての診断プロ
ーブとして、新規のポリヌクレオドを発見するプロセスにおける「減算した（ｓ
ｕｂｔｒａｃｔ−ｏｕｔ）」公知の配列に対するプローブとして、「遺伝子チッ
プ」または他の支持体に付着するためのオリゴマーを選択および作製するために
、ＤＮＡ免疫技術を用いて抗ＤＮＡ抗体を惹起するために、および免疫応答を惹
起する抗原として使用され得る。
【０３０５】 （ポリペプチドの使用） 本明細書中で同定される各々のポリペプチドは、多くの方法において使用され
得る。以下の記述は、例示として考慮されるべきであり、そして公知の技術を利
用する。
【０３０６】 本発明のポリペプチドに対して指向されるポリペプチドおよび抗体は、組織（
例えば、ＡＢＣ免疫ペルオキシダーゼのような免疫組織化学アッセイ（Ｈｓｕら
、Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．２９：５７７−５８０（１９８
１））または細胞型（例えば、免疫細胞化学アッセイ）の差次的同定のための免
疫学的プローブを提供するために有用である。
【０３０７】 抗体を使用して、当業者に公知の古典的な免疫組織学的な方法を用いて、生物
学的サンプル中の本発明のポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドの
レベルをアッセイし得る（例えば、Ｊａｌｋａｎｅｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏ
ｌ．１０１：９７６−９８５（１９８５）；Ｊａｌｋａｎｅｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ
．Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７−３０９６（１９８７）を参照のこと）。タンパ
ク質の遺伝子発現を検出するのに有用な、他の抗体に基づく方法には、免疫学的
検定（例えば、酵素結合イムノソルベント検定（ＥＬＩＳＡ）およびラジオイム
ノアッセイ（ＲＩＡ））が含まれる。適切な抗体アッセイの標識は、当該分野で
公知であり、そして酵素標識（例えば、グルコースオキシダーゼ）；放射性同位
体（例えば、ヨウ素（131Ｉ、125Ｉ、123Ｉ、121Ｉ）、炭素（14Ｃ）、硫黄（35 Ｓ）、トリチウム（3Ｈ）、インジウム（115mＩｎ、113mＩｎ、112Ｉｎ、111Ｉ
ｎ）、およびテクネチウム（99Ｔｃ、99mＴｃ）、タリウム（201Ｔｌ）、ガリウ
ム（68Ｇａ、67Ｇａ）、パラジウム（103Ｐｄ）、モリブデン（99Ｍｏ）、キセ
ノン（133Ｘｅ）、フッ素（18Ｆ）、153Ｓｍ、177Ｌｕ、159Ｇｄ、149Ｐｍ、140 Ｌａ、175Ｙｂ、166Ｈｏ、90Ｙ、47Ｓｃ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、142Ｐｒ、105Ｒｈ
、97Ｒｕ；発光標識（例えば、ルミノール）；ならびに蛍光標識（例えば、フル
オレセインおよびローダミン）ならびにビオチンが挙げられる。
【０３０８】 生物学的サンプル中の本発明のポリペプチドのレベルをアッセイすることに加
えて、タンパク質はまた、画像化によりインビボで検出され得る。タンパク質の
インビボ画像化のための抗体の標識またはマーカーは、Ｘ線撮影法、ＮＭＲ、ま
たはＥＳＲにより検出可能なものを含む。Ｘ線撮影法のために適切な標識は、放
射性同位体（例えば、バリウムまたはセシウム）を含み、これは検出可能な放射
線を放射するが、被験体に対して明らかに有害ではない。ＮＭＲおよびＥＳＲの
ための適切なマーカーは、検出可能な特徴的なスピンを有するマーカー（例えば
、重水素）を含み、これは、関連するハイブリドーマのための栄養分を標識する
ことにより抗体中に取り込まれ得る。
【０３０９】 放射性同位体（例えば、131Ｉ、112Ｉｎ、99mＴｃ、（131Ｉ、125Ｉ、123Ｉ、 121 Ｉ）、炭素（14Ｃ）、硫黄（35Ｓ）、トリチウム（3Ｈ）、インジウム（115m Ｉｎ、113mＩｎ、112Ｉｎ、111Ｉｎ）、およびテクネチウム（99Ｔｃ、99mＴｃ
）、タリウム（201Ｔｌ）、ガリウム（68Ｇａ、67Ｇａ）、パラジウム（103Ｐｄ
）、モリブデン（99Ｍｏ）、キセノン（133Ｘｅ）、フッ素（18Ｆ）、153Ｓｍ、 177 Ｌｕ、159Ｇｄ、149Ｐｍ、140Ｌａ、175Ｙｂ、166Ｈｏ、90Ｙ、47Ｓｃ、186
Ｒｅ、188Ｒｅ、142Ｐｒ、105Ｒｈ、97Ｒｕ）、放射線不透過性物質、または核
磁気共鳴により検出可能な材料のような適切な検出可能な画像化部分で標識され
た、タンパク質特異的抗体または抗体フラグメントは、免疫系の障害について検
査されるべき哺乳動物に（例えば、非経口的、皮下、または腹腔内に）導入され
る。被験体のサイズおよび用いられる画像化システムは、診断画像を生成するた
めに必要な画像化部分の量を決定することが当該分野で理解される。放射性同位
体部分の場合には、ヒト被験体について、注射される放射能の量は、通常、99m
Ｔｃの約５〜２０ミリキュリーの範囲である。次いで、標識された抗体または抗
体フラグメントは、本発明のポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド
を発現する細胞の位置に優先的に蓄積される。インビボ腫瘍画像化は、Ｓ．Ｗ．
Ｂｕｒｃｈｉｅｌら、「Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ
Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｆ
ｒａｇｍｅｎｔｓ」（Ｔｕｍｏｒ Ｉｍａｇｉｎｇの第１３章：Ｔｈｅ Ｒａｄ
ｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ、Ｓ．Ｗ．Ｂ
ｕｒｃｈｉｅｌおよびＢ．Ａ．Ｒｈｏｄｅｓ編、Ｍａｓｓｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈ
ｉｎｇ Ｉｎｃ．（１９８２））に記載される。
【０３１０】 １つの実施形態において、本発明は、異種ポリペプチドまたは核酸と会合する
本発明のポリペプチド（例えば、本発明のポリヌクレオチドによりコードされる
ポリペプチドおよび／または抗体）を投与することによる、本発明の組成物の細
胞への特異的な送達のための方法を提供する。１つの例において、本発明は、治
療タンパク質を標的化細胞中へ送達するための方法を提供する。別の例において
、本発明は、一本鎖核酸（例えば、アンチセンスまたはリボザイム）または二本
鎖核酸（例えば、細胞のゲノムに組み込み得るか、またはエピソームにて複製し
得、そして転写され得るＤＮＡ）を、標的化細胞に送達するための方法を提供す
る。
【０３１１】 別の実施形態において、本発明は、毒素または細胞傷害性プロドラッグに関連
する本発明のポリペプチドを投与することによる細胞の特異的な破壊（例えば、
腫瘍細胞の破壊）のための方法を提供する。
【０３１２】 「毒素」とは、内因性の細胞傷害性エフェクタ系、放射性同位体、ホロ毒素（
ｈｏｌｏｔｏｘｉｎ）、改変型毒素、毒素の触媒サブユニット、または規定の条
件下で細胞死を引き起こす細胞中もしくは細胞表面には通常存在しない任意の分
子もしくは酵素を結合および活性化する１つ以上の化合物を意味する。本発明の
方法に従って使用され得る毒素としては、以下が挙げられるが、これらに限定さ
れない：当該分野で公知の放射性同位体、固有のまたは誘導された内因性の細胞
傷害性エフェクタ系に結合する化合物（例えば、抗体（またはその補体固定含有
部分））、チミジンキナーゼ、エンドヌクレアーゼ、ＲＮＡｓｅ、α毒素、リシ
ン、アブリン、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素Ａ、ジフテリア毒素、サポリン、
モモルジン（ｍｏｍｏｒｄｉｎ）、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ヤマゴボウ抗
ウイルスタンパク質、αサルシン（ｓａｒｃｉｎ）およびコレラ毒素。「毒素」
はまた、細胞分裂停止剤もしくは細胞破壊剤、治療薬または放射活性金属イオン
（例えば、α−放射体（例えば、213Ｂｉ））もしくは他の放射性同位体（例え
ば、103Ｐｄ、133Ｘｅ、131Ｉ、68Ｇｅ、57Ｃｏ、65Ｚｎ、85Ｓｒ、32Ｐ、35Ｓ
、90Ｙ、153Ｓｍ、153Ｇｄ、169Ｙｂ、51Ｃｒ、54Ｍｎ、75Ｓｅ、113Ｓｎ、90イ
ットリウム、117スズ、186レニウム、166ホルミウム、および188レニウム）；発
光標識（例えば、ルミノール）；および蛍光標識（例えば、フルオレセインおよ
びローダミン）、ならびにビオチンを含む。
【０３１３】 当該分野において公知の技術は、本発明のポリペプチド（抗体を含む）を標識
化するために適用され得る。このような技術としては、二官能性結合剤の使用（
例えば、米国特許第５，７５６，０６５号；同第５，７１４，６３１号；同第５
，６９６，２３９号；同第５，６５２，３６１号；同第５，５０５，９３１号；
同第５，４８９，４２５号；同第５，４３５，９９０号；同第５，４２８，１３
９号；同第５，３４２，６０４号；同第５，２７４，１１９号；同第４，９９４
，５６０号；および同第５，８０８，００３号を参照のこと；これら各々の内容
は、本明細書中に参考としてその全体を援用する）が挙げられるが、これに限定
されない。
【０３１４】 従って、本発明は、障害の診断方法を提供し、これは以下を含む：（ａ）個体
の細胞または体液における本発明のポリペプチドの発現レベルをアッセイする工
程；および（ｂ）アッセイされたポリペプチドの発現レベルを標準のポリペプチ
ドの発現レベルと比較し、それによって標準の発現レベルと比較してアッセイさ
れたポリペプチドの発現レベルにおける増加または減少が障害を示す工程。癌に
関しては、個体由来の生検された組織中の相対的に高い量の転写物の存在は、疾
患の発症の素因を示し得るか、または実際の臨床的な症状が明らかとなる前に疾
患を検出するための手段を提供し得る。より決定的なこのタイプの診断は、保健
専門家がより早く予防策または積極的な処置を使用し、それによって癌の発症ま
たはさらなる進行を防ぐことを可能にし得る。
【０３１５】 さらに、本発明のポリペプチドを用いて疾患または状態（例えば、神経障害、
免疫系障害、筋肉障害、生殖障害、胃腸障害、肺障害、心血管障害、腎臓障害、
増殖障害ならびに／または癌性疾患および状態など）を処置または予防し得る。
例えば、患者は、ポリペプチドの非存在またはレベルの減少を元に戻すこと（例
えば、インスリン）、異なるポリペプチドの非存在またはレベルの減少を補充す
ること（例えば、ヘモグロビンＢに対するヘモグロビンＳ、ＳＯＤ、カタラーゼ
、ＤＮＡ修復タンパク質）、ポリペプチドの活性を阻害すること（例えば、癌遺
伝子または腫瘍抑制因子）、ポリペプチドの活性を活性化すること（例えば、レ
セプターに結合することによって）、遊離リガンドについて膜結合レセプターと
競合させることによって膜結合レセプターの活性を減少させること（例えば、炎
症を低減させる際に用いられる可溶性ＴＮＦレセプター）、または所望の応答を
もたらすこと（例えば、血管の成長の阻害、増殖細胞または組織に対する免疫応
答の増強）の試みにおいて、本発明のポリペプチドが投与され得る。
【０３１６】 同様に、本発明のポリペプチドに対して指向される抗体もまた用いられ、疾患
（上記、および本明細書中のどこかに記載されるような）を処置し得る。例えば
、本発明のポリペプチドに対して指向される抗体の投与には、ポリペプチドを結
合して、そして／またはポリペプチドを中和し、そして／またはポリペプチドの
過剰産生を低減し得る。同様に、抗体の投与は、例えば、膜に結合したポリペプ
チド（レセプター）へ結合することにより、ポリペプチドを活性化し得る。
【０３１７】 少なくとも、本発明のポリペプチドは、当業者に周知の方法を用いるＳＤＳ−
ＰＡＧＥゲルまたは分子ふるいゲル濾過カラムの分子量マーカーとして使用され
得る。宿主細胞の形質転換を評価する方法として、ポリペプチドがまた用いられ
、抗体を惹起し得、次いで、この抗体が使用され、組換え細胞からのタンパク質
発現を測定する。さらに、本発明のポリペプチドが使用され、以下の生物学的活
性を試験し得る。
【０３１８】 （遺伝子治療方法） 本発明の別の局面は、障害、疾患および状態を処置または予防するための遺伝
子治療方法である。この遺伝子治療方法は、本発明のポリペプチドの発現を達成
するための、核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡおよびアンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡ）配
列の動物への導入に関する。この方法は、標的組織によるこのポリペプチドの発
現のために必要なプロモータおよび他の任意の遺伝因子と、作動可能に連結した
本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを必要とする。このような
遺伝子治療および送達技術は当該分野において公知である（例えば、本明細書中
に参考として援用される、ＷＯ９０／１１０９２を参照のこと）。
【０３１９】 従って、例えば、患者由来の細胞は、エキソビボで本発明のポリヌクレオチド
と作動可能に連結したプロモーターを含むポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮ
Ａ）を用いて操作され得、次いで、操作された細胞は、本発明のポリペプチドを
用いて処置される患者に提供される。このような方法は、当該分野において周知
である。例えば、Ｂｅｌｌｄｅｇｒｕｎ，Ａ．ら、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ
Ｉｎｓｔ．８５：１０７−２１６（１９９３）；Ｆｅｒｒａｎｔｉｎｉ，Ｍ．
ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５３：１１０７−１１１２（１９９３）
；Ｆｅｒｒａｎｔｉｎｉ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １５３：４６０
４−４６１５（１９９４）；Ｋａｉｄｏ，Ｔ．ら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ
６０：２２１−２２９（１９９５）；Ｏｇｕｒａ，Ｈ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓｅａｒｃｈ ５０：５１０２−５１０６（１９９０）；Ｓａｎｔｏｄｏｎａｔ
ｏ，Ｌ．ら、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ７：１−１０（１９９６
）；Ｓａｎｔｏｄｏｎａｔｏ，Ｌ．ら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ４：１２４
６−１２５５（１９９７）；およびＺｈａｎｇ，Ｊ．−Ｆ．ら、Ｃａｎｃｅｒ
Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ３：３１−３８（１９９６）を参照のこと。これら
は、本明細書中に参考として援用される。１つの実施形態においては、操作され
る細胞は、動脈細胞である。この動脈細胞は、動脈、動脈の周囲の組織への直接
的な注射を介して、またはカテーテル注入を介して患者に再導入され得る。
【０３２０】 以下により詳細に考察されるように、このポリヌクレオチド構築物は、注射可
能な物質を動物の細胞に送達する任意の方法（例えば、組織（心臓、筋肉、皮膚
、肺、肝臓など）の間質空間への注射）により送達され得る。このポリヌクレオ
チド構築物は、薬学的に受容可能な液体または水性のキャリア中で送達され得る
。
【０３２１】 １つの実施形態においては、本発明のポリヌクレオチドは、裸のポリヌクレオ
チドとして送達される。用語「裸の」ポリヌクレオチド、ＤＮＡまたはＲＮＡと
は、細胞への侵入を補助し、促進し、または容易にするために作用するいかなる
送達ビヒクル（ウイルス配列、ウイルス粒子、リポソーム処方物、リポフェクチ
ンまたは沈殿剤などを含む）も含まない配列をいう。しかし、本発明のポリヌク
レオチドはまた、当業者に周知の方法により調製され得るリポソーム処方物中お
よびリポフェクチン処方物中などで送達され得る。このような方法は、例えば、
米国特許第５，５９３，９７２号、同第５，５８９，４６６号および同第５，５
８０，８５９号（これらは、本明細書中に参考として援用される）に記載される
。
【０３２２】 遺伝子治療方法において使用されるポリヌクレオチドベクター構築物は、好ま
しくは、宿主ゲノム中に組み込まれないかまたは複製を可能にする配列を含まな
い構築物である。適切なベクターとしては、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能
なｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１およびｐＳＧ；Ｐｈａ
ｒｍａｃｉａから入手可能なｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧおよびｐＳＶＬ；
ならびにＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手可能なｐＥＦ１／Ｖ５、ｐｃＤＮＡ３．
１、およびｐＲｃ／ＣＭＶ２が挙げられる。他の適切なベクターは、当業者に容
易に明らかである。
【０３２３】 当業者に公知の任意の強力なプロモーターは、ポリヌクレオチド配列の発現を
駆動するために用いられ得る。適切なプロモーターとしては、アデノウイルスプ
ロモーター（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター）；または異種プロ
モーター（例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター）；ＲＳウイ
ルス（ＲＳＶ）プロモーター；誘導性プロモーター（例えば、ＭＭＴプロモータ
ー、メタロチオネインプロモーター）；熱ショックプロモーター；アルブミンプ
ロモーター；ＡｐｏＡＩプロモーター；ヒトグロビンプロモーター；ウイルスチ
ミジンキナーゼプロモーター（例えば、単純ヘルペスチミジンキナーゼプロモー
ター）；レトロウイルスＬＴＲ；ｂ−アクチンプロモーター；およびヒト成長ホ
ルモンプロモーターが挙げられる。このプロモーターはまた、本発明のポリヌク
レオチドについてネイティブなプロモーターであり得る。
【０３２４】 他の遺伝子治療技術とは異なり、裸の核酸配列を標的細胞に導入する１つの主
要な利点は、その細胞におけるポリヌクレオチド合成の一過性の性質である。研
究によって、非複製ＤＮＡ配列が細胞に導入されて、６ヶ月までの期間の間、所
望のポリペプチドの産生を提供し得ることが示された。
【０３２５】 ポリヌクレオチド構築物は、動物内の組織（筋肉、皮膚、脳、肺、肝臓、脾臓
、骨髄、胸腺、心臓、リンパ、血液、骨、軟骨、膵臓、腎臓、胆嚢、胃、腸、精
巣、卵巣、子宮、直腸、神経系、眼、腺、および結合組織を包含する）の間隙空
間に送達され得る。この組織の間隙空間は、器官組織の細網線維間の、細胞間の
液体ムコ多糖類基質、血管または室の壁における弾性線維、線維性組織のコラー
ゲン線維、あるいは結合組織鞘性筋肉細胞（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕ
ｅ ｅｎｓｈｅａｔｈｉｎｇ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ）内または骨の裂孔中の
同じ基質を包含する。これは、同様に、循環の血漿およびリンパチャンネルのリ
ンパ液により占められた空間である。筋肉組織の間隙空間への送達は、以下で議
論される理由のために好ましい。本発明のポリヌクレオチド構築物は、これらの
細胞を含む組織への注射によって、好都合に送達され得る。本発明のポリヌクレ
オチド構築物は、好ましくは、分化した持続性の非分裂細胞に送達され、そして
その細胞において発現されるが、送達および発現は、非分化細胞または完全には
分化していない細胞（例えば、血液の幹細胞または皮膚線維芽細胞）において達
成され得る。インビボでの筋肉細胞は、ポリヌクレオチドを取り込み、そして発
現する能力において、特に適格である。
【０３２６】 裸の核酸配列注射のために、ＤＮＡまたはＲＮＡの有効投薬量は、約０．０５
ｍｇ／ｋｇ体重から約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲にある。好ましくは、この投薬
量は、約０．００５ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇであり、そしてより好まし
くは約０．０５ｍｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇである。もちろん、当業者が認識
するように、この投薬量は、注射の組織部位に応じて変化する。核酸配列の適切
かつ有効な投薬量は、当業者によって容易に決定され得、そして処置される状態
および投与経路に依存し得る。
【０３２７】 好ましい投与経路は、組織の間隙空間への非経口注射経路による。しかし、他
の非経口経路もまた用いられ得、これには、例えば、特に、肺または気管支の組
織、咽喉または鼻の粘膜への送達のためのエアロゾル処方物の吸入が挙げられる
。さらに、裸のＤＮＡ構築物が、血管形成術の間にこの手順において用いられる
カテーテルによって動脈に送達され得る。
【０３２８】 裸のポリヌクレオチドは、送達部位での直接の針注射、静脈内注射、局所投与
、カテーテル注入、およびいわゆる「遺伝子銃」を含むがこれらに限定されない
、当該分野で公知の任意の方法によって送達される。これらの送達方法は、当該
分野で公知である。
【０３２９】 この構築物はまた、ウイルス配列、ウイルス粒子、リポソーム処方物、リポフ
ェクチン、沈殿剤などのような送達ビヒクルを用いて送達され得る。このような
送達方法は、当該分野で公知である。
【０３３０】 特定の実施形態において、ポリヌクレオチド構築物は、リポソーム調製物中で
複合体化している。本発明にて使用するためのリポソーム調製物は、カチオン性
（正に荷電した）、アニオン性（負に荷電した）および中性の調製物を包含する
。しかしながら、カチオン性リポソームとポリアニオン性核酸との間で強固な荷
電複合体を形成し得るので、カチオン性リポソームが特に好ましい。カチオン性
リポソームは、機能的形態において、プラスミドＤＮＡ（本明細書中で参考とし
て援用される、Ｆｅｌｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ（１９８７）８４：７４１３〜７４１６）；ｍＲＮＡ（本明細書中で参考と
して援用される、Ｍａｌｏｎｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ（１９８９）８６：６０７７〜６０８１）；および精製された転写因子（本
明細書中で参考として援用される、Ｄｅｂｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１
９９０）２６５：１０１８９〜１０１９２）の細胞内送達を媒介することが示さ
れている。
【０３３１】 カチオン性リポソームは容易に入手可能である。例えば、Ｎ［１−２，３−ジ
オレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリエチルアンモニウム（ＤＯＴＭ
Ａ）リポソームは特に有用であり、そして商標ＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎのもとにＧ
ＩＢＣＯ ＢＲＬ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，Ｎ．Ｙ．（本明細書中で参考と
して援用される、Ｆｅｌｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ（１９８７）８４：７４１３〜７４１６をもまた参照のこと、）より入手
可能である。他の市販のリポソームとしては、トランスフェクテース（ｔｒａｎ
ｓｆｅｃｔａｃｅ）（ＤＤＡＢ／ＤＯＰＥ）およびＤＯＴＡＰ／ＤＯＰＥ（Ｂｏ
ｅｈｒｉｎｇｅｒ）が挙げられる。
【０３３２】 当該分野で周知の技術を使用して、他のカチオン性リポソームを、容易に入手
可能な物質より調製し得る。ＤＯＴＡＰ（１，２−ビス（オレオイルオキシ）−
３−（トリメチルアンモニオ）プロパン）リポソームの合成の記述に関して、例
えばＰＣＴ公開第ＷＯ ９０／１１０９２号（本明細書中で参考として援用され
る）を参照のこと。ＤＯＴＭＡリポソームの調製は文献にて説明されており、例
えば、本明細書中で参考として援用される、Ｐ．Ｆｅｌｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８４：７４１３〜７４１７を参照のこと
。類似した方法を使用して、他のカチオン性脂質物質よりリポソームを調製し得
る。
【０３３３】 同様に、アニオン性リポソームおよび中性リポソームは、例えば、Ａｖａｎｔ
ｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，Ａｌａ．）から容易に
入手可能であり、または容易に入手可能な物質を使用して簡単に調製され得る。
そのような物質としてはとりわけ、ホスファチジルコリン、コレステロール、ホ
スファチジルエタノールアミン、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ
）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジオレオイルホス
ファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）が挙げられる。これらの物質はまた、
ＤＯＴＭＡ出発物資およびＤＯＴＡＰ出発物質と適切な割合において混合され得
る。これらの物質を使用してリポソームを生成する方法は、当該分野で周知であ
る。
【０３３４】 例えば、商業的に、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジオレ
オイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、およびジオレオイルホスファ
チジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を種々の組み合わせにおいて使用し、コレ
ステロールを添加してもしなくても、従来のリポソームを生成し得る。従って、
例えば、超音波処理バイアル中への窒素ガス流下で、各５０ｍｇのＤＯＰＧおよ
びＤＯＰＣを乾燥することにより、ＤＯＰＧ／ＤＯＰＣ小胞を調製し得る。この
サンプルを一晩真空ポンプ下に置き、そして次の日、脱イオン水で水和する。次
いで、浴（バス）を、１５ＥＣで循環させながら、最大設定にて、逆位カップ（
浴タイプ）プローブを装備したＨｅａｔ Ｓｙｓｔｅｍｓ モデル３５０超音波
処理器を使用して、このサンプルを栓をしたバイアル中にて２時間超音波処理す
る。あるいは、負に荷電した小胞を、超音波処理なしで調製して多重膜小胞を生
成し得るか、または核孔膜（ｎｕｃｌｅｏｐｏｒｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ）を通し
て押し出すことにより別々の大きさの単膜小胞を生成し得る。他の方法は、当業
者に公知でありそして利用可能である。
【０３３５】 このリポソームとしては、多重膜小胞（ＭＬＶ）、小さな単膜小胞（ＳＵＶ）
または大きな単膜小胞（ＬＵＶ）が挙げられ得、ＳＵＶが好ましい。当該分野で
周知の方法を使用して、種々のリポソーム−核酸複合体が調製される。例えば、
本明細書中で参考として援用される、Ｓｔｒａｕｂｉｎｇｅｒら、Ｍｅｔｈｏｄ
ｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１０１：５１２〜５２７（１９８３）を参照
のこと。例えば、核酸を含有するＭＬＶは、ガラスチューブの壁面にリン脂質の
薄膜を堆積させ、そしてその後、カプセル化されるべき物質の溶液で水和するこ
とによって調製され得る。ＳＵＶはＭＬＶの長期超音波処理により調製され、単
膜リポソームの均質集団を生成する。封入されるべき物質を、予め形成されたＭ
ＬＶの懸濁液に添加し、次いで、超音波処理する。カチオン性脂質を含むリポソ
ームを使用する場合、乾燥した脂質膜を、滅菌水または１０ｍＭ Ｔｒｉｓ／Ｎ
ａＣｌのような等張性緩衝溶液のような適切な溶液中に再懸濁し、超音波処理し
、次いで、予め形成されたリポソームをＤＮＡと直接混合する。正に荷電したリ
ポソームのカチオン性ＤＮＡへの結合に起因して、リポソームおよびＤＮＡは非
常に安定な複合体を形成する。ＳＵＶは、小核酸フラグメントを用いての用途を
見出す。ＬＵＶは、当該分野で周知の多くの方法により調製される。一般に使用
される方法としては、Ｃａ2+−ＥＤＴＡキレート化（Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕ
ｌｏｓら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ（１９７５）３９４：４
８３；Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ（１９７９））１７：７７；エーテル注入（Ｄ
ｅａｍｅｒ，Ｄ．およびＢａｎｇｈａｍ，Ａ．、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙ
ｓ．Ａｃｔａ（１９７６）４４３：６２９；Ｏｓｔｒｏら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｍ．（１９７７）７６：８３６；Ｆｒａｌｅ
ｙら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９７９）７６：３３
４８）；界面活性剤透析（Ｅｎｏｃｈ，Ｈ．およびＳｔｒｉｔｔｍａｔｔｅｒ，
Ｐ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９７９）７６：１４
５）；および逆相エバポレーション（ＲＥＶ）（Ｆｒａｌｅｙら、Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．（１９８０）２５５：１０４３１；Ｓｚｏｋａ、Ｆ．およびＰａｐ
ａｈａｄｊｏｐｕｏｌｏｓ，Ｄ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ（１９７８）７５：１４５；Ｓｃｈａｅｆｅｒ−Ｒｉｄｄｅｒら、Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ（１９８２）２１５：１６６）が挙げられ、これらの文献は本明細書中で
参考として援用される。
【０３３６】 一般に、ＤＮＡのリポソームに対する割合は約１０：１から約１：１０までで
ある。好ましくは、その割合（ｒａｔｉｏｎ）は約５：１から約１：５までであ
る。より好ましくは、その割合は約３：１から約１：３までである。さらにより
好ましくは、その割合は約１：１である。
【０３３７】 米国特許第５，６７６，９５４号（本明細書中で参考として援用される）はカ
チオン性リポソームキャリアと複合体化された遺伝物質のマウスへの注入につい
て報告する。米国特許第４，８９７，３５５号、同第４，９４６，７８７号、同
第５，０４９，３８６号、同第５，４５９，１２７号、同第５，５８９，４６６
号、同第５，６９３，６２２号、同第５，５８０，８５９号、同第５，７０３，
０５５号および国際公開第ＷＯ９４／９４６９号（これらは本明細書中で参考と
して援用される）は、ＤＮＡを細胞および哺乳動物にトランスフェクトする際に
使用するためのカチオン性脂質を提供する。米国特許第５，５８９，４６６号、
同第５，６９３，６２２号、同第５，５８０，８５９号、同第５，７０３，０５
５号および国際公開第ＷＯ９４／９４６９号（これらは本明細書中で参考として
援用される）は、ＤＮＡ−カチオン性脂質複合体を哺乳動物に送達する方法を提
供する。
【０３３８】 特定の実施形態において、本発明のポリペプチドをコードする配列を含むＲＮ
Ａを含むレトロウイルス粒子を使用して、エキソビボまたはインビボで細胞を操
作する。レトロウイルスプラスミドベクターを誘導し得るレトロウイルスとして
は、モロニーマウス白血病ウイルス、脾臓壊死ウイルス、ラウス肉腫ウイルス、
ハーベイ肉腫ウイルス、ニワトリ白血病ウイルス、テナガザル白血病ウイルス、
ヒト免疫不全ウイルス、骨髄増殖性肉腫ウイルス、および乳癌ウイルスが挙げら
れるが、これらに限定されない。
【０３３９】 このレトロウイルスプラスミドベクターを使用して、パッケージング細胞株を
形質導入し、プロデューサー細胞株を形成する。トランスフェクトされ得るパッ
ケージング細胞株の例としては、その全体が本明細書中で参考として援用される
、Ｍｉｌｌｅｒ、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅａｐｙ、１：５〜１４（１９９
０）にて記載されるようなＰＥ５０１、ＰＡ３１７、Ｒ−２、Ｒ−ＡＭ、ＰＡ１
２、Ｔ１９−１４Ｘ、ＶＴ−１９−１７−Ｈ２、ＲＣＲＥ、ＲＣＲＩＰ、ＧＰ＋
Ｅ−８６、ＧＰ＋ｅｎｖＡｍ１２およびＤＡＮ細胞株が挙げられるが、これらに
限定されない。このベクターは、当該分野で公知の任意の手段により、パッケー
ジング細胞を形質導入し得る。そのような手段としては、エレクトロポレーショ
ン、リポソームの使用、およびＣａＰＯ4沈殿が挙げられるが、それらに限定さ
れない。１つの代替法において、このレトロウイルスプラスミドベクターをリポ
ソームにカプセル化するか、または脂質に結合して、次いで宿主に投与し得る。
【０３４０】 このプロデューサー細胞株は、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチドを含む感染性レトロウイルスベクター粒子を産生する。次いで、そのよう
なレトロウイルスベクター粒子を使用して、インビトロまたはインビボのどちら
かにおいて、真核生物細胞を形質導入し得る。この形質導入された真核生物細胞
は、本発明のポリペプチドを発現する。
【０３４１】 特定の他の実施形態において、アデノウイルスベクター中に含まれるポリヌク
レオチドを用いて、エキソビボまたはインビボで細胞を操作する。アデノウイル
スは、それが本発明のポリペプチドをコードし、そして発現し、それと同時に通
常の溶解性ウイルス生活環にて複製するその能力に関して不活性化されるように
操作され得る。アデノウイルス発現は、そのウイルスＤＮＡの宿主細胞染色体へ
の組み込み無しに達成され、その結果、挿入性変異誘発についての心配が軽減さ
れる。さらに、アデノウイルスは、何年もの間、腸の生ワクチンとして優れた安
全側面を伴って使用されている（Ｓｃｈｗａｒｔｚｅｔ，Ａ．Ｒ．ら、（１９７
４）Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．、１０９：２３３−２３８）。最終
的に、アデノウイルス媒介性遺伝子移入が、コトンラットの肺へのα−１−アン
チトリプシンおよびＣＦＴＲの移入を含む多くの例において実証されている（Ｒ
ｏｓｅｎｆｅｌｄ，Ｍ．Ａ．ら、（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５２：４３１
〜４３４；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら、（１９９２）Ｃｅｌｌ ６８：１４３〜１５
５）。さらに、ヒト癌における原因物質としてアデノウイルスを確立しようとす
る広範な研究は、一様に否定的であった（Ｇｒｅｅｎ，Ｍ．ら（１９７９）Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７６：６６０６）。
【０３４２】 本発明において有用である適切なアデノウイルスベクターが、例えば、Ｋｏｚ
ａｒｓｋｙおよびＷｉｌｓｏｎ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖｅｌ
．、３：４９９〜５０３（１９９３）；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら、Ｃｅｌｌ、６８
：１４３〜１５５（１９９２）；Ｅｎｇｅｌｈａｒｄｔら、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎ
ｅｔ．Ｔｈｅｒ．、４：７５９〜７６９（１９９３）；Ｙａｎｇら、Ｎａｔｕｒ
ｅ Ｇｅｎｅｔ、７：３６２〜３６９（１９９４）；Ｗｉｌｓｏｎら、Ｎａｔｕ
ｒｅ、３６５:６９１〜６９２（１９９３）；および米国特許第５，６５２，２
２４号に記載されており、これらは本明細書中で参考として援用される。例えば
、アデノウイルスベクターＡｄ２が有用であり、そしてヒト２９３細胞にて増殖
され得る。これらの細胞は、アデノウイルスのＥ１領域を含み、そして構成的に
ＥｌａおよびＥｌｂを発現し、このことは、このベクターから欠失している遺伝
子の産物を提供することによって欠損アデノウイルスを補完する。Ａｄ２に加え
て、他の多様なアデノウイルス（例えば、Ａｄ３、Ａｄ５、およびＡｄ７）もま
た、本発明において有用である。
【０３４３】 好ましくは、本発明において使用されるアデノウイルスは、複製欠損性である
。複製欠損アデノウイルスは、感染性粒子を形成するために、ヘルパーウイルス
および／またはパッケージング細胞株の助けを必要とする。得られたウイルスは
、細胞に感染する能力があり、そしてプロモーターに作動可能に連結された目的
のポリヌクレオチドを発現し得るが、ほとんどの細胞にて複製し得ない。複製欠
損アデノウイルスは、次の遺伝子：Ｅ１ａ、Ｅ１ｂ、Ｅ３、Ｅ４、Ｅ２ａまたは
Ｌ１からＬ５までのすべてまたは一部のうちの１つ以上にて欠失され得る。
【０３４４】 特定の他の実施形態において、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を使用して、エ
キソビボまたはインビボでこの細胞を操作する。ＡＡＶは、感染性粒子を生成す
るためにヘルパーウイルスを必要とする、天然に存在する欠損ウイルスである（
Ｍｕｚｙｃｚｋａ，Ｎ．，Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５８：９７（１９９２））。ＡＡＶはまた、分裂中では
ない細胞の中にそのＤＮＡを組み込み得る数少ないウイルスの中の１つである。
３００塩基対程度の小さいＡＡＶを含むベクターがパッケージされ得、そして組
み込み得るが、外来性ＤＮＡのためのスペースは約４．５ｋｂに限られる。その
ようなＡＡＶの生成および使用の方法は当該分野で公知である。例えば、米国特
許第５，１３９，９４１号、同第５，１７３，４１４号、同第５，３５４，６７
８号、同第５，４３６，１４６号、同第５，４７４，９３５号、同第５，４７８
，７４５号および同第５，５８９，３７７号を参照のこと。
【０３４５】 例えば、本発明において使用するために適切なＡＡＶベクターは、ＤＮＡ複製
、キャプシド形成、および宿主細胞組み込みに必要な配列すべてを含む。Ｓａｍ
ｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（１９
８９）において見い出される方法のような、標準的クローニング方法を使用して
、ポリヌクレオチド構築物を、このＡＡＶベクターに挿入する。次いで、リポフ
ェクション、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿などを含む、任意
の標準的技術を使用して、この組み換えＡＡＶベクターを、ヘルパーウイルスに
感染しているパッケージング細胞にトランスフェクトする。適切なヘルパーウイ
ルスとしては、アデノウイルス、サイトメガロウイルス、ワクシニアウイルス、
またはヘルペスウイルスが挙げられる。一旦パッケージング細胞がトランスフェ
クトおよび感染されると、それらはポリヌクレオチド構築物を含む感染性ＡＡＶ
ウイルス粒子を生成する。次いで、エキソビボまたはインビボのいずれかで、こ
れらのウイルス粒子を使用して真核生物細胞を形質導入する。この形質導入細胞
は、そのゲノムに組み込まれたポリヌクレオチド構築物を含み、そして本発明の
ポリペプチドを発現する。
【０３４６】 遺伝子治療の別の方法は、相同組み換え（例えば、米国特許第５，６４１，６
７０号、１９９７年６月２４日発行；国際公開第ＷＯ９６／２９４１１号、１９
９６年９月２６日公開；国際公開第ＷＯ９４／１２６５０号、１９９４年８月４
日公開；Ｋｏｌｌｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８
６：８９３２〜８９３５（１９８９）；およびＺｉｊｌｓｔｒａら、Ｎａｔｕｒ
ｅ、３４２：４３５〜４３８（１９８９）を参照のこと）を介して、異種制御領
域および内在性ポリヌクレオチド配列（例えば、本発明のポリペプチドをコード
している配列）を作動可能に連結する工程を含む。この方法は、標的細胞中に存
在しているが、通常はその細胞中で発現しないかまたは所望するよりも低いレベ
ルで発現する、遺伝子の活性化を含む。
【０３４７】 当該分野で既知の標準的技術を使用して、ポリヌクレオチド構築物を作製する
。この構築物は、プロモーターを、そのプロモーターに隣接した標的化配列とと
もに含む。適切なプロモーターが、本明細書中に記載されている。標的化配列は
、内在性配列に対して十分に相補的であり、プロモーター−標的化配列と内在性
配列との相同組換えを可能にする。標的化配列は、所望される内在性ポリヌクレ
オチド配列の５’末端の十分近くに存在し、それゆえ、相同組換えに際して、プ
ロモーターは、内在性配列に作動可能に連結される。
【０３４８】 このプロモーターおよび標的化配列は、ＰＣＲを使用して増幅され得る。好ま
しくは、この増幅されたプロモーターは、５’末端および３’末端に別の制限酵
素部位を含む。好ましくは、第１の標的化配列の３’末端は、増幅されたプロモ
ーターの５’末端と同じ制限酵素部位を含み、そして第２の標的化配列の５’末
端は、増幅されたプロモーターの３’末端と同じ制限部位を含む。増幅されたプ
ロモーターおよび標的化配列を消化し、そしてともに連結する。
【０３４９】 裸のポリヌクレオチドとしてか、もしくは上記により詳細に記載されるような
リポソーム、ウイルス配列、ウイルス粒子、ウイルス全体、リポフェクション、
沈殿剤などのようなトランスフェクション促進剤と一緒にかのいずれかで、この
プロモーター−標的化配列構築物を細胞に送達する。直接針注射、静脈内注射、
局所投与、カテーテル注入、粒子加速器などを含む任意の方法により、Ｐプロモ
ーター−標的化配列を送達し得る。この方法を、下記により詳細に記載する。
【０３５０】 プロモーター−標的化配列構築物は、細胞により取り込まれる。この構築物と
内在性配列との間に相同組換えが起こり、その結果、内在性配列は、このプロモ
ーターの制御下に配置される。次いで、このプロモーターは、内在性配列の発現
を駆動する。
【０３５１】 好ましくは、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、そのタ
ンパク質の分泌を促進する分泌シグナル配列を含む。代表的に、このシグナル配
列は、ポリヌクレオチドのコード領域の５’末端に向かってかまたは５’末端で
発現される、そのポリヌクレオチドのコード領域に位置する。このシグナル配列
は、目的のポリヌクレオチドに対して同種または異種であり得、そしてトランス
フェクトされる細胞に対して同種または異種であり得る。さらに、当該分野で公
知の方法を使用して、このシグナル配列は化学合成され得る。
【０３５２】 その投与形態によって、治療効果を提供するのに十分な量にて１つ以上の分子
が発現される限り、上記のポリヌクレオチド構築物のうちのいずれかの任意の投
与形態が使用され得る。これは、直接針注射、全身注射、カテーテル注入、バイ
オリスティック（ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ）注射器、粒子加速器（すなわち、「遺伝
子銃」）、ゲルフォームスポンジデポー（ｄｅｐｏｔ）、他の市販デポー（ｄｅ
ｐｏｔ）物質、浸透圧ポンプ（例えば、Ａｌｚａミニポンプ）、経口用または坐
剤用の固形（錠剤または丸剤）薬学的処方物、および手術中のデカンティングま
たは局所適用を含む。例えば、ラット肝臓およびラット脾臓へのリン酸カルシウ
ム沈澱した裸のプラスミドの直接注射、または門脈へのタンパク質被覆プラスミ
ド直接注射は、ラット肝臓における外来遺伝子の遺伝子発現をもたらした（Ｋａ
ｎｅｄａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４３：３７５（１９８９））。
【０３５３】 局所投与の好ましい方法は、直接注射によるものである。好ましくは、送達ビ
ヒクルと複合体を形成した本発明の組換え分子は、動脈領域内部に直接注射によ
り投与されるか、または動脈領域内部に局所投与される。動脈領域内部での組成
物の局所投与とは、その組成物を動脈内に数センチメートル、好ましくは数ミリ
メートルで注射することを言う。
【０３５４】 局所投与の別の方法は、外科的創傷内またはその周辺に本発明のポリヌクレオ
チド構築物を接触させることである。例えば、患者は手術を経験し得、そしてこ
のポリヌクレオチド構築物を創傷内部の組織表面上に被覆され得るか、またはそ
の構築物を創傷内部の組織領域に注射され得る。
【０３５５】 全身投与に有用な治療組成物は、本発明の標的化された送達ビヒクルと複合体
を形成した本発明の組換え分子を含む。全身投与で使用するために適切な送達ビ
ヒクルは、特定部位に対してそのビヒクルを標的化するリガンドを含むリポソー
ムを含む。
【０３５６】 全身投与の好ましい方法としては、静脈内注射、エアロゾル、経口および経皮
（局所的）送達が挙げられる。当該分野で標準的な方法を使用して、静脈内注射
が実行され得る。当該分野で標準的な方法を使用して、エアロゾル送達もまた実
行され得る（例えば、本明細書中で参考として援用される、Ｓｔｒｉｂｌｉｎｇ
ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１８９：１１２７７〜１
１２８１、１９９２を参照のこと）。動物の腸内の消化酵素による分解に耐える
能力をもつキャリアに対して本発明のポリヌクレオチド構築物が複合体を形成す
ることにより、経口送達は実行され得る。そのようなキャリアの例としては、当
該分野で公知であるもののような、プラスチックカプセルまたは錠剤が挙げられ
る。皮膚内へ通過可能な親油性試薬（例えば、ＤＭＳＯ）と本発明のポリヌクレ
オチド構築物を混合することによって、局所的送達は実行され得る。
【０３５７】 送達される物質の有効量を決定することは、例えば、その物質の化学構造およ
び生物学的活性、動物の年齢および体重、処置を必要とする正確な状態およびそ
の重症度、ならびに投与経路を含む、多数の因子に依存し得る。処置の頻度は、
１用量あたりの投与されるポリヌクレオチド構築物の量ならびに被験体の健康お
よび病歴のような多くの因子に依存する。正確な量、投薬回数および投薬のタイ
ミングは、主治医または主治獣医により決定される。
【０３５８】 本発明の治療的組成物は、任意の動物に、好ましくは哺乳動物および鳥類に投
与され得る。好ましい哺乳動物としては、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、ラット、
ウサギ、ヒツジ、ウシ、ウマおよびブタが挙げられ、特にヒトが好ましい。
【０３５９】 （生物学的活性） 本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくは
アンタゴニストをアッセイに使用し、１つ以上の生物学的活性について試験し得
る。本発明のこれらのポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニス
トもしくはアンタゴニストが特定のアッセイにおいて活性を示す場合、これらの
分子はその生物学的活性に関連した疾患に関与し得るようである。従って、この
ポリヌクレオチドおよびポリペプチド、ならびにアゴニストもしくはアンタゴニ
ストを使用し、関連した疾患を処置し得る。
【０３６０】 プラスミノーゲン様タンパク質は、セリンプロテアーゼ化っせ位に関連する生
物学的活性に関与すると考えられる。従って、本発明の組成物（本発明のポリヌ
クレオチド、ポリペプチドおよび抗体、ならびにそのフラグメントおよび改変体
を含む）は、異常なセリンプロテアーゼ活性に関連する疾患および／または障害
の診断、検出および／または処置において用いられ得る。好ましい実施形態にお
いて、本明細書の組成物（本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチドおよび抗体
、ならびにそのフラグメントおよび改変体を含む）は、心血管系障害に関する疾
患および／または障害（例えば、狭窄、血栓塞栓症、閉塞性障害、および／また
は以下の「心血管系障害」において記載されるものなど）、組織再構築、免疫系
障害（例えば、炎症、および／または、以下の「免疫活性」において記載される
ものなど）、創傷治癒の障害（例えば、以下の「創傷治癒および上皮細胞増殖」
において記載されるものなど）、細胞および神経細胞遊走障害、細胞外マトリク
ス変性（例えば、転移、および／または以下の「過剰増殖性障害」において記載
されるものなど）、および脈管形成障害（例えば、血管増殖、および／または以
下の「抗脈管形成活性」において記載されるものなど）の診断、検出および／ま
たは処置において用いられ得る。従って、本発明のポリヌクレオチド、翻訳産物
および抗体は、以下：心血管障害、狭窄、血栓塞栓、閉塞性障害、組織再構築、
炎症、創傷治癒障害、細胞遊走障害、細胞外マトリクス変性障害、癌転移、およ
び脈管形成障害が挙げられるがこれらに限定されない活性に関連する疾患および
／または障害の診断、検出および／または処置に有用である。
【０３６１】 より一般的には、この遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物および抗
体は以下の系に関連する疾患および／または障害の診断、検出および／または処
置に有用であり得る。
【０３６２】 （免疫活性） 本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、抗体、および／またはアゴニスト
もしくはアンタゴニストは、例えば、免疫細胞の増殖、分化、もしくは動員（走
化性）を活性化または阻害することにより、免疫系の疾患、障害および／または
状態を、処置、予防、および／または診断するのに有用であり得る。免疫細胞は
、造血と呼ばれるプロセスを介して発達し、多能性幹細胞から骨髄性細胞（血小
板、赤血球、好中球およびマクロファージ）およびリンパ系細胞（Ｂリンパ球お
よびＴリンパ球）を生成する。これら免疫疾患、障害および／または状態の病因
は、遺伝的、身体的（ｓｏｍａｔｉｃ）（例えば、癌およびいくつかの自己免疫
性疾患）、後天的（例えば、化学療法もしくは毒素による）または感染的であり
得る。さらに、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、抗体、および／また
はアゴニストもしくはアンタゴニストは、特定の免疫系の疾患または障害のマー
カーまたは検出物質（ｄｅｔｅｃｔｏｒ）として使用され得る。
【０３６３】 本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、抗体、および／またはアゴニスト
もしくはアンタゴニストは、造血細胞の疾患、障害および／または状態の処置、
予防および／または診断において有用であり得る。本発明のポリヌクレオチド、
ポリペプチド、抗体、および／またはアゴニストもしくはアンタゴニストは、特
定の（または多くの）型の造血細胞の減少に関連した疾患、障害および／または
状態を処置または予防する試みにおいて、多能性幹細胞を含む造血細胞の分化お
よび増殖を増加させるために用いられ得る。免疫不全症候群の例としては、血液
タンパク質の疾患、障害および／または状態（例えば、無ガンマグロブリン血症
、低ガンマグロブリン血症）、毛細血管拡張性運動失調、分類不能型免疫不全、
ディ・ジョージ症候群、ＨＩＶ感染、ＨＴＬＶ−ＢＬＶ感染、白血球接着不全症
候群、リンパ球減少、食細胞殺細菌機能不全、重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）
、ヴィスコット−オールドリッチ障害、貧血、血小板減少、またはヘモグロビン
尿症が挙げられるが、それらに限定されない。
【０３６４】 さらに、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、抗体、および／またはア
ゴニストもしくはアンタゴニストをまた使用して、止血性活性（出血を止めるこ
と）または血栓崩壊活性（血餅形成）を調節し得る。例えば、止血活性または血
栓崩壊活性を増大させることにより、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペ
プチド、および／またはアゴニストもしくはアンタゴニストを使用し、血液凝固
の疾患、障害および／または状態（例えば、無線維素原血症、因子欠損症）、血
液血小板の疾患、障害および／または状態（例えば、血小板減少症）、あるいは
外傷、手術または他の原因から生じる創傷を処置または予防し得る。あるいは、
止血活性または血栓崩壊活性を減少させ得る本発明のポリヌクレオチド、ポリペ
プチド、抗体、および／またはアゴニストもしくはアンタゴニストを使用し、凝
血を阻害または溶解し得る。心臓発作（梗塞）、発作（ｓｔｒｏｋｅ）または瘢
痕の処置または予防において、これらの分子は重要であり得る。
【０３６５】 自己免疫障害の処置、予防および／または診断において、本発明のポリヌクレ
オチド、ポリペプチド、抗体、および／またはアゴニストもしくはアンタゴニス
トはまた、有用であり得る。多くの自己免疫障害は、免疫細胞によって外来性物
質として不適切に自己認識することから生じる。この不適切な認識は、宿主組織
の破壊をもたらす免疫応答を引き起こす。従って、免疫応答、特にＴ細胞の増殖
、分化または走化性を阻害し得る本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチド
の投与は、自己免疫障害の防止において効果的な治療であり得る。
【０３６６】 本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、抗体、および／またはアゴニスト
もしくはアンタゴニストによって処置、予防および／または診断され得る自己免
疫疾患および障害としては、以下の１つ以上が挙げられるがこれらに限定されな
い：自己免疫溶血性貧血、自己免疫新生児血小板減少症、特発性血小板減少性紫
斑病、自己免疫性血球減少症、溶血性貧血、抗リン脂質症候群、皮膚炎、アレル
ギー性脳脊髄炎、心筋炎、再発性多発性軟骨炎、リウマチ性心疾患、糸球体腎炎
（例えば、ＩｇＡネフロパシー）、多発性硬化症、神経炎、ブドウ膜炎眼炎、多
発性内分泌腺症、紫斑（例えば、ヘノッホ−シェーンライン（Ｈｅｎｌｏｃｈ−
Ｓｃｏｅｎｌｅｉｎ）紫斑病）、ライター病、Ｓｔｉｆｆ−Ｍａｎ症候群、自己
免疫肺炎症、自閉症、ギヤン−バレー症候群、インシュリン依存性糖尿病（ｍｅ
ｌｌｉｔｉｓ）、および自己免疫炎症性眼、自己免疫甲状腺炎、甲状腺機能低下
症（すなわち、橋本甲状腺炎）、全身性エリテマトーデス、グッドパスチャー症
候群、天疱瘡、レセプター自己免疫（例えば、（ａ）グレーヴズ病、（ｂ）重症
筋無力症、および（ｃ）インシュリン耐性など）、自己免疫溶血性貧血、自己免
疫血小板減少性紫斑病、慢性関節リウマチ、抗コラーゲン抗体を伴う強皮症（ｓ
ｃｈｌｅｒｏｄｅｒｍａ）、混合結合組織病、多発性筋炎／皮膚筋炎、悪性貧血
、特発性アディソン病、不妊症、糸球体腎炎（原発性糸球体腎炎およびＩｇＡネ
フロパシーなど）、水疱性類天疱瘡、シェーグレン症候群、糖尿病およびアドレ
ナリン作用性薬剤耐性（喘息または嚢胞性線維症を伴うアドレナリン作用性薬剤
耐性を含む）、慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、他の内分泌腺不全、白斑
、脈管炎、心筋梗塞後（ｐｏｓｔ−ＭＩ）、心臓切開症候群、じんま疹、アトピ
ー性皮膚炎、喘息、炎症性ミオパシーならびに他の炎症性障害、肉芽腫性障害、
変性障害および萎縮性障害。
【０３６７】 本発明の組成物によって処置、予防および／または診断され得る、さらなる、
自己免疫障害（起こり得る）としては、以下が挙げられるがこれらに限定されな
い：慢性関節リウマチ（例えば、関節における免疫複合体によってしばしば特徴
付けられる）、抗コラーゲン抗体を伴う強皮症（ｓｃｈｌｅｒｏｄｅｒｍａ）（
例えば、核小体抗体および他の核抗体によってしばしば特徴付けられる）、混合
結合組織病（例えば、可溶性核抗原（例えば、リボ核タンパク質）に対する抗体
によってしばしば特徴付けられる）、多発性筋炎（例えば、非ヒストンＡＮＡに
よってしばしば特徴付けられる）、悪性貧血（例えば、抗壁細胞、ミクロソーム
、および内因子抗体によってしばしば特徴付けられる）、特発性アジソン病（例
えば、体液および細胞媒介性副腎細胞傷害性によってしばしば特徴付けられる）
、不妊症（例えば、抗精子抗体によってしばしば特徴付けられる）、糸球体腎炎
（例えば、糸球体基底膜抗体または免疫複合体によってしばしば特徴付けられる
）、水疱性類天疱瘡（例えば、基底膜中のＩｇＧおよび補体によってしばしば特
徴付けられる）、シェーグレン症候群（例えば、多重組織抗体、および／または
特定の非ヒストンＡＮＡ（ＳＳ−Ｂ）によってしばしば特徴付けられる）、糖尿
病（例えば、細胞媒介性および体液性島細胞抗体によってしばしば特徴付けられ
る）、ならびにアドレナリン作動性薬剤抵抗性（喘息または嚢胞性線維症を伴う
アドレナリン作動性薬剤抵抗性を含む）（例えば、βアドレナリンレセプター抗
体によってしばしば特徴付けられる）。
【０３６８】 本発明の組成物を用いて処置、予防、および／または診断され得る、さらなる
自己免疫性障害（これらはあり得る）としては、以下が挙げられるが、これらに
限定されない：慢性活性肝炎（例えば、平滑筋抗体によってしばしば特徴付けら
れる）、原発性胆汁性肝硬変（例えば、ミトコンドリア抗体によってしばしば特
徴付けられる）、他の内分泌腺不全（例えば、いくつかの場合は、特定の組織抗
体によってしばしば特徴付けられる）、白斑（例えば、メラノサイト抗体によっ
てしばしば特徴付けられる）、脈管炎（例えば、脈管壁におけるＩｇおよび補体
ならびに／または低血清補体によってしばしば特徴付けられる）、ＭＩ後（例え
ば、心筋抗体によってしばしば特徴付けられる）、心臓切開症候群（例えば、心
筋抗体によってしばしば特徴付けられる）、じんま疹（例えば、ＩｇＥに対する
ＩｇＧ抗体およびＩｇＭ抗体によってしばしば特徴付けられる）、アトピー性皮
膚炎（例えば、ＩｇＥに対するＩｇＧ抗体およびＩｇＭ抗体によってしばしば特
徴付けられる）、喘息（例えば、ＩｇＥに対するＩｇＧ抗体およびＩｇＭ抗体に
よってしばしば特徴付けられる）、ならびに多くの他の炎症性障害、肉芽種性障
害、変性障害、および萎縮性障害。
【０３６９】 好ましい実施形態においては、自己免疫性疾患および障害ならびに／または上
記に列挙された疾患および障害に関連する状態は、例えば、本発明のアンタゴニ
スト、またはアゴニスト、ポリペプチドまたはポリヌクレオチド、または抗体を
用いて、処置、予防、および／または診断される。
【０３７０】 好ましい実施形態においては、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、抗
体、および／またはアゴニストもしくはアンタゴニストが、Ｂ細胞および／また
はＴ細胞の免疫不全個体の中で免疫反応性をブーストするための薬剤として用い
られ得る。
【０３７１】 本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、および／またはアゴニストを投与
することにより回復されるかまたは処置され得るＢ細胞免疫不全としては、以下
が挙げられるがこれらに限定されない：重篤な複合型免疫欠損（ＳＣＩＤ）−Ｘ
連鎖、ＳＣＩＤ−常染色体、アデノシンデアミナーゼ欠損（ＡＤＡ欠損）、Ｘ連
鎖無ガンマグロブリン血症（ＸＬＡ）、Ｂｒｕｔｏｎ’ｓ病、先天性無ガンマグ
ロブリン血症、Ｘ連鎖乳児無ガンマグロブリン血症、後天性無ガンマグロブリン
血症、成人発症無ガンマグロブリン血症、後期発症無ガンマグロブリン血症、異
常ガンマグロブリン血症、低ガンマグロブリン血症、一過性乳児低ガンマグロブ
リン血症、非特異的低ガンマグロブリン血症、無ガンマグロブリン血症、分類不
能型免疫不全（ＣＶＩ）（後天性）、ヴィスコット−オールドリッチ症候群（Ｗ
ＡＳ）、過剰ＩｇＭを伴うＸ連鎖免疫欠損、過剰ＩｇＭを伴う非Ｘ連鎖免疫欠損
、選択的ＩｇＡ欠損、ＩｇＧサブクラス欠損（ＩｇＡ欠損を伴うかまたは伴わな
い）、正常なＩｇまたは上昇したＩｇを伴う抗体欠損、胸腺腫を伴う免疫欠損、
Ｉｇ重鎖欠失、κ鎖欠損、Ｂ細胞リンパ球増殖性障害（ＢＬＰＤ）、選択的Ｉｇ
Ｍ免疫欠損、退縮無ガンマグロブリン血症（Ｓｗｉｓｓ型）、網様発育不全、新
生児好中球減少症、重篤な先天性白血球減少症、免疫欠損を伴う胸腺リンパ形成
不全症−発育不全症または形成異常症、毛細血管拡張性運動失調、短肢（ｓｈｏ
ｒｔ ｌｉｍｂｅｄ）小人症、Ｘ連鎖リンパ球増殖症候群（ＸＬＰ）、Ｉｇを伴
うネゼロフ症候群複合免疫欠損、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ欠損（ＰＮ
Ｐ）、ＭＨＣクラスＩＩ欠失（不全リンパ球症候群）および重症複合型免疫不全
。
【０３７２】 本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチド、および／またはそのアゴニス
トを投与することによって、緩和または処置され得るＴ細胞不全としては、以下
が挙げられるがこれらに限定されない：例えば、ディジョージ奇形、胸腺発育不
全、第３および第４咽頭嚢症候群、２２ｑ１１．２欠損、慢性粘膜皮膚カンジダ
症、ナチュラルキラー細胞欠損（ＮＫ）、特発性ＣＤ４＋ Ｔリンパ球減少、顕
著なＴ細胞欠損を伴う免疫欠損（不特定）、および細胞媒介免疫の不特定の免疫
欠損。特定の実施形態において、ディジョージ奇形またはディジョージ奇形に関
連する状態は、例えば、本発明のポリペプチドもしくはポリヌクレオチド、また
はそのアンタゴニストもしくはアゴニストを投与することによって、緩和される
か処置される。
【０３７３】 本発明のポリペプチドもしくはポリヌクレオチド、および／またはそれらのア
ゴニストもしくはアンタゴニストを投与することによって寛解または処置され得
る他の免疫不全症としては、重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ；例えば、Ｘ連鎖Ｓ
ＣＩＤ、常染色体ＳＣＩＤ、およびアデノシンデアミナーゼ不全症）、毛細血管
拡張性運動失調、ヴィスコット−オールドリッチ症候群、短肢性（ｓｈｏｒｔ−
ｌｉｍｂｅｒ）小人症、Ｘ連鎖リンパ球増多症症候群（ＸＬＰ）、ネゼロフ症候
群（例えば、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ不全症）、ＭＨＣクラスＩＩ不
全症が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、毛細血
管拡張性運動失調または毛細血管拡張性運動失調に関連する状態が、本発明のポ
リペプチドもしくはポリヌクレオチド、および／またはそれらのアゴニストを投
与することによって寛解または処置される。
【０３７４】 特定の好ましい実施形態において、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド
、抗体および／またはアゴニストもしくはアンタゴニストを用いて、慢性関節リ
ウマチが処置、予防、および／または診断される。別の特定の実施形態において
、全身性エリテマトーデスが、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、抗体
および／またはアゴニストもしくはアンタゴニストを用いて処置、予防および／
または診断される。別の特定の好ましい実施形態において、本発明のポリヌクレ
オチド、ポリペプチド、抗体および／またはアゴニストもしくはアンタゴニスト
を用いて、特発性血小板減少性紫斑病が処置、予防および／または診断される。
別の特定の好ましい実施形態において、ＩｇＡネフロパシーは、本発明のポリヌ
クレオチド、ポリペプチド、抗体、および／またはアゴニストもしくはアンタゴ
ニストを用いて、処置、予防および／または診断される。好ましい実施形態にお
いて、自己免疫疾患および自己免疫障害ならびに／または上記の疾患および障害
と関連する状態は、本発明のタンパク質に対する抗体を用いて、処置、予防、お
よび／または診断される。
【０３７５】 同様に、アレルギー反応および状態（例えば、喘息（特にアレルギー性喘息）
または他の呼吸障害）はまた、本発明のポリペプチド、抗体、もしくはポリヌク
レオチド、および／またはそれらのアゴニストもしくはアンタゴニストを用いて
、処置、予防および／または診断され得る。さらに、これらの分子は、アナフィ
ラキシー、抗原性分子に対する過敏性、または血液型不適合を処置、予防および
／または診断するために用いられ得る。
【０３７６】 さらに、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、抗体、および／またはア
ゴニストもしくはアンタゴニストをまた用いて、炎症状態を処置、診断、および
／または予防し得る。このような炎症性状態としては、以下が挙げられるがこれ
らに限定されない：例えば、呼吸器障害（例えば、喘息およびアレルギーなど）
；胃腸障害（例えば、炎症性腸疾患など）；癌（例えば、胃癌、卵巣癌、肺癌、
膀胱癌、肝臓癌、および乳癌など）；ＣＮＳ障害（例えば、多発性硬化症、血液
脳関門透過性、虚血性脳損傷、および／または脳梗塞、外傷性脳損傷、神経変性
性障害（例えば、パーキンソン病およびアルツハイマー病など）、ＡＩＤＳ関連
痴呆、およびプリオン病など）；心血管障害（例えば、アテローム性動脈硬化症
、心筋炎、心血管疾患、および心肺バイパス合併症など）；ならびに炎症によっ
て特徴付けられる多くのさらなる疾患、状態、および障害（例えば、慢性肝炎（
ＢおよびＣ）、慢性関節リウマチ、痛風、外傷、敗血性ショック、膵炎、サルコ
イドーシス、皮膚炎、腎虚血再還流障害、グレーヴス病、全身性エリテマトーデ
ス、真性糖尿病（例えば、Ｉ型糖尿病）、および同種異系移植拒絶など）。
【０３７７】 特定の実施形態において、本発明のポリペプチド、抗体、もしくはポリヌクレ
オチド、および／またはそれらのアゴニストもしくはアンタゴニストは、移植拒
絶、対宿主性移植片病、自己免疫および炎症性疾患（例えば、免疫複合体誘導血
管炎、糸球体腎炎、溶血性貧血、重症筋無力症、ＩＩ型コラーゲン誘導動脈炎、
実験アレルギー性および超急性異種移植変拒絶、慢性関節リウマチ、および全身
性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を処置、診断、および／または予防するのに有用
である。器官拒絶は、免疫反応による、移植された組織の宿主免疫細胞破壊によ
って生じる。同様に、免疫反応はまた、ＧＶＨＤに関するが、この場合、外来の
移植された免疫細胞が、宿主組織を破壊する。本発明のポリペプチド、抗体、も
しくはポリヌクレオチドおよび／またはそのアゴニストもしくはアンタゴニスト
（免疫応答、特にＴ細胞の活性化、増殖、分化、または走化性を阻害する）は、
器官拒絶またはＧＶＨＤを予防するのに有効な治療であり得る。
【０３７８】 同様に、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、抗体および／またはアゴ
ニストもしくはアンタゴニストをまた使用し、炎症を調節および／または診断し
得る。例えば、本発明のポリペプチド、抗体、もしくはポリヌクレオチド、およ
び／または本発明のアゴニストもしくはアンタゴニストは、炎症応答に関与する
細胞の活性化、増殖および／または分化を阻害し得るので、これらの分子を使用
して、感染に関連する炎症（例えば、敗血症性ショック、敗血症、または全身炎
症応答症候群（ＳＩＲＳ））、虚血再灌流傷害に関連する炎症、内毒素致死に関
連する炎症、関節炎に関連する炎症、補体媒介性超急性拒絶に関連する炎症、腎
炎に関連する炎症、サイトカインまたはケモカインが誘導する肺傷害に関連する
炎症、炎症性腸疾患に関連する炎症、クローン病に関連する炎症ならびにサイト
カイン（例えば、ＴＮＦまたはＩＬ−１）の過剰生成から生じる炎症を含むがこ
れらに限定されない、慢性および急性の両方の状態の炎症状態を処置、診断また
は予後判定し得る。
【０３７９】 本発明のポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチドおよび／またはアゴニストも
しくはアンタゴニストは、感染性因子を処置、検出、および／または予防するた
めに用いられ得る。例えば、免疫応答を増大することによって、特にＢ細胞およ
び／またはＴ細胞の増殖、活性化および／または分化を増大することによって、
感染性疾患は、処置、検出、および／または予防され得る。免疫応答は、既存の
免疫応答を増大するか、または新しい免疫応答を惹起するかのいずれかによって
、増大され得る。あるいは、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、抗体お
よび／またはアゴニストもしくはアンタゴニストはまた、免疫応答の必然的な惹
起なしに、感染性因子（感染性因子の適用列挙の節などで述べる）を直接阻害し
得る。
【０３８０】 本発明のさらなる好ましい実施形態としては、以下の適用におけるポリペプチ
ド、抗体、ポリヌクレオチドおよび／またはアゴニストもしくはアンタゴニスト
の使用が挙げられるがこれらに限定されない： 免疫系をブーストし、１つ以上の抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、お
よびＩｇＥ）の量の増大を生じ、高い親和性の抗体産生（例えば、ＩｇＧ、Ｉｇ
Ａ、ＩｇＭおよびＩｇＥ）を誘導し、および／または免疫応答を増大するための
動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター、モルモット、ブタ、ミニ
ブタ、ニワトリ、ラクダ、ヤギ、ウマ、ウシ、ヒツジ、イヌ、ネコ、非ヒト霊長
類、およびヒト、最も好ましくはヒト）への投与。
【０３８１】 機能的な内因性抗体分子を産生できないか、さもなければ易感染性の内因性免
疫系を有するが、別の動物由来の再構成されたか、または部分的に再構成された
免疫系によってヒト免疫グロブリン分子を産生し得る、動物（上記に列挙した動
物を含むがこれに限定されず、またトランスジェニック動物も含む）への投与（
例えば、ＰＣＴ公開番号、ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ
９６／３３７３５、およびＷＯ９１／１０７４１を参照のこと）。
【０３８２】 特定の抗原に対する免疫応答性を増強するワクチンアジュバント。
【０３８３】 腫瘍特異的免疫応答を増強するためのアジュバント。
【０３８４】 抗ウイルス免疫応答を増強するアジュバント。アジュバントとして本発明の組
成物を用いて増強され得、抗ウイルス免疫応答としては、本明細書において記載
されるかさもなければ当該分野で公知のウイルスならびにウイルス関連疾患およ
び症状が挙げられる。特定の実施形態において、本発明の組成物は、以下：ＡＩ
ＤＳ、髄膜炎、デング、ＥＢＶ、および肝炎（例えば、Ｂ型肝炎）からなる群よ
り選択される、ウイルス、疾患または症状に対する免疫応答を増強するためのア
ジュバントとして用いられる。別の特定の実施形態において、本発明の組成物は
、以下：ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、ＲＳウイルス、デング、ロタウイルス、日本脳炎、
インフルエンザＡおよびＢ、パラインフルエンザ、麻疹、サイトメガロウイルス
、狂犬病、Ｊｕｎｉｎウイルス、チクングニヤウイルス、リフトバレー熱、単純
疱疹、および黄熱病からなる群より選択されるウイルス、疾患または症状に対す
る免疫応答を増強するアジュバントとして用いられる。
【０３８５】 抗細菌免疫応答または抗真菌免疫応答を増大するためのアジュバント。アジュ
バントとして本発明の組成物を使用して増大され得る抗細菌免疫応答または抗真
菌免疫応答としては、細菌または真菌、および本明細書中に記載されるか、また
はさもなくば当該分野で公知の疾患または症状に関連する細菌または真菌が挙げ
られる。特定の実施形態において、本発明の組成物は、細菌または真菌、疾患、
または症状（これは、破傷風、ジフテリア、ボツリスム、およびＢ型髄膜炎から
なる群から選択される）に対する免疫応答を増大するためのアジュバントとして
使用される。特定の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、細菌または
真菌、疾患、または症状（これは、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｍｙｃｏ
ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ、Ｓａ
ｌｍｏｎｅｌｌａ ｐａｒａｔｙｐｈｉ、Ｍｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉ
ｔｉｄｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｇｒｏｕｐ
Ｂ ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｐｐ．、Ｅｎｔｅｒ
ｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｅｎｔｅｒｏｈｅ
ｍｏｒｒｈａｇｉｃ Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒ
ｉ、およびＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ（マラリア）からなる群から選択される）に対
する免疫応答を増大するためのアジュバントとして使用される。
【０３８６】 抗寄生生物免疫応答を増大するためのアジュバント。アジュバントとして本発
明の組成物を使用して増大され得る抗寄生生物免疫応答としては、寄生生物、お
よび本明細書中に記載されるかまたはさもなくば当該分野で公知の寄生生物に関
連する疾患または症状が挙げられる。特定の実施形態において、本発明の組成物
は、寄生生物に対する免疫応答を増大するためのアジュバントとして使用される
。別の特定の実施形態において、本発明の組成物は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ（マ
ラリア）に対する免疫応答を増大するためのアジュバントとして使用される。
【０３８７】 病原に対するＢ細胞応答性の刺激物質として。
【０３８８】 Ｔ細胞のアクチベーターとして。
【０３８９】 免疫抑制性治療を受ける前の、個体の免疫状態を増大させる薬剤として。
【０３９０】 より高い親和性抗体を誘導するための薬剤として。
【０３９１】 血清免疫グロブリン濃度を増加するための薬剤として。
【０３９２】 免疫無防備状態の個体の回復を促進するための薬剤として。
【０３９３】 高齢の集団の間の免疫応答性をブーストするための薬剤として。
【０３９４】 骨髄移植および／または他の移植（例えば、同種異系または外因性の器官移植
）の前、間、または後の免疫系エンハンサーとして。移植に関して、本発明の組
成物は、移植の前、同時、および／または後に投与され得る。特定の実施形態に
おいて、本発明の組成物は、移植の後、Ｔ細胞集団の回復の開始前に投与される
。別の特定の実施形態において、本発明の組成物は、移植の後、Ｔ細胞集団の回
復の開始後であるが、Ｂ細胞集団の完全な回復の前に最初に投与される。
【０３９５】 Ｂ細胞機能の後天的欠損を有する個体間で免疫応答性をブーストするための薬
剤として。ポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチドおよび／またはそれらのアゴ
ニストもしくはアンタゴニストを投与することによって寛解または処置され得る
、Ｂ細胞機能の後天的欠損を生じる状態としては、ＨＩＶ感染、ＡＩＤＳ、骨髄
移植、およびＢ細胞慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）が挙げられるが、これらに
限定されない。
【０３９６】 一時的な免疫不全を有する個体間で免疫応答性をブーストするための薬剤とし
て。ポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチドおよび／またはそれらのアゴニスト
もしくはアンタゴニストを投与することによって寛解または処置され得る、一時
的な免疫不全を生じる状態としては、ウイルス感染（例えば、インフルエンザ）
からの回復、栄養失調に関連する状態、感染性単核細胞症からの回復、またはス
トレスに関連する状態、麻疹からの回復、輸血からの回復、手術からの回復が挙
げられるが、これらに限定されない。
【０３９７】 単球、樹状細胞および／またはＢ細胞による抗原提示のレギュレーターとして
。１つの実施形態において、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、抗体、
および／またはアゴニストもしくはアンタゴニストは、インビトロまたはインビ
ボで抗原提示を増強するかまたは抗原提示をアンタゴナイズする。さらに、関連
する実施形態において、この抗原提示の増強またはアンタゴナイズは、抗腫瘍処
置としてかまたは免疫系を調節するために有用であり得る。
【０３９８】 個体の免疫系を、ＴＨ１細胞性応答とは反対に、体液性応答（すなわち、ＴＨ
２）の発生に指向するための薬剤として。
【０３９９】 腫瘍増殖を誘導し、従って、腫瘍を抗腫瘍性薬剤に対してより感受性にするた
めの手段として。例えば、多発性骨髄腫は、緩慢な細胞分裂（ｄｉｖｉｄｉｎｇ
）の疾患であり、従って、実質的に全ての抗腫瘍性レジメンに対して不応性であ
る。これらの細胞は、より迅速に増殖させた場合、これらの感受性プロフィール
は、おそらく変化するであろう。
【０４００】 ＡＩＤＳ、慢性リンパ球障害および／または分類不能性免疫不全症（Ｃｏｍｍ
ｏｎ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｉｍｍｕｎｏｄｉｆｉｃｉｅｎｃｙ）のような病理に
おけるＢ細胞の産生の刺激因子として。
【０４０１】 手術、外傷または遺伝的欠陥後のリンパ組織の生成および／または再生のため
の治療として。
【０４０２】 ＳＣＩＤ患者の間で観察されるような免疫不全を生じる遺伝性の障害のための
遺伝子ベースの治療として。
【０４０３】 本発明のポリペプチドに対する免疫媒介応答を阻害または増強するための抗体
を生成するための抗原として。
【０４０４】 Ｔ細胞を活性化する手段として。
【０４０５】 単球に影響を及ぼす寄生生物疾患（リーシュマニア属（Ｌｅｓｈｍａｎｉａ）
）に対して防御するために単球／マクロファージを活性化する手段として。
【０４０６】 移植前の骨髄サンプルの前処理として。このような処理は、Ｂ細胞提示を増加
し、従って回復を加速する。
【０４０７】 本発明のポリペプチドによって誘発される分泌サイトカインを調節する手段と
して。
【０４０８】 さらに、本発明の本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチド、および／ま
たはそれらのアゴニストは、ＩｇＥ媒介アレルギー応答を処置または予防するた
めに使用され得る。このようなアレルギー反応としては、ぜん息、鼻炎および湿
疹が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４０９】 上記の適用の全ては、獣医学的医療に適用され得る。
【０４１０】 本発明のアンタゴニストとしては、例えば、結合および／または阻害性の抗体
、アンチセンス核酸、リボザイムまたは可溶性形態のプラスミノーゲン様（例え
ば、プラスミノーゲン様−Ｆｃ融合タンパク質）（例えば、実施例９を参照のこ
と）が挙げられる。これらは、上記のリガンドの活性の多くを無効にし、そして
以下のような臨床的または実用的な適用を見い出すことが予測される： 外来因子または自己に対する種々の局面の免疫応答をブロックする手段として
。例としては、狼瘡および関節炎のような自己免疫障害、ならびに皮膚アレルギ
ー、炎症、腸疾患、損傷および病原体に対する免疫応答が挙げられる。
【０４１１】 自己免疫疾患（例えば、特発性血小板減少性紫斑病、全身性エリテマトーデス
およびＭＳ）に関連するＢ細胞増殖およびＩｇ分泌を妨げるための治療として。
【０４１２】 内皮細胞におけるＢ細胞および／またはＴ細胞の遊走のインヒビターとして。
この活性は、組織構造または同属の応答を破壊し、そして例えば、免疫応答の破
壊および敗血症のブロックにおいて有用である。
【０４１３】 対宿主性移植片病または移植片拒絶のインヒビターとして。
【０４１４】 ＡＬＬ、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、プラスマ
細胞腫、多発性骨髄腫、バーキットリンパ腫およびＥＢＶ変換性（ＥＢＶ−ｔｒ
ａｎｓｆｏｒｍｅｄ）疾患のようなＢ細胞および／またはＴ細胞の悪性疾患のた
めの治療。
【０４１５】 未定量有意性の単一クローン性高ガンマグロブリン血症（ｍｏｎｏｃｌｏｎａ
ｌｇａｍｍｏｐａｔｈｙ ｏｆ ｕｎｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃ
ａｎｃｅ）（ＭＧＵＳ）、ヴァルデンストレーム疾患、関連する特発性単一クロ
ーン性高ガンマグロブリン血症、およびプラスマ細胞腫のような疾患における、
慢性の高ガンマグロブリン血症事象のための治療。
【０４１６】 ラージＢ細胞リンパ腫の細胞増殖を減少するための治療。
【０４１７】 慢性骨髄性白血病に関連するＢ細胞およびＩｇの関与を減少する手段。
【０４１８】 免疫抑制剤。
【０４１９】 本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、抗体、および／またはアゴニスト
もしくはアンタゴニストは、インビトロまたはインビボでのＩｇＥ濃度を調節す
るために使用され得る。
【０４２０】 別の実施形態において、本発明のポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチドおよ
び／またはアゴニストもしくはアンタゴニストの投与は、ぜん息、鼻炎および湿
疹を含むがこれらに限定されない、ＩｇＥ媒介アレルギー反応を処置または予防
するために使用され得る。
【０４２１】 アゴニストおよびアンタゴニストは、例えば、上記のような、薬学的に受容可
能なキャリアを含む組成物において使用され得る。
【０４２２】 アゴニストまたはアンタゴニストは、例えば、特定の自己免疫疾患および慢性
炎症疾患および感染性疾患における、マクロファージおよびその前駆体、ならび
に好中球、好塩基球、Ｂリンパ球およびいくつかのＴ細胞サブセット（例えば、
活性化Ｔ細胞およびＣＤ８細胞傷害性Ｔ細胞ならびにナチュラルキラー細胞）の
、ポリペプチド走化性および活性化を阻害するために使用され得る。本明細書中
に記載される自己免疫疾患の例としては、多発性硬化症およびインスリン依存性
糖尿病が挙げられる。アンタゴニストまたはアゴニストはまた、例えば、単核食
細胞の漸増および活性化を妨げることによって、珪肺症、サルコイドーシス、特
発性肺線維症を含む、感染性疾患を処置するために使用され得る。これらはまた
、例えば、好酸球の産生および遊走を妨げることによって、特発性好酸球増多症
候群を処置するために使用され得る。アンタゴニストまたはアゴニストはまた、
例えば、動脈壁における単球浸潤を妨げることによって、アテローム性動脈硬化
症を処置するために使用され得る。
【０４２３】 本発明のポリペプチドに対する抗体は、ＡＲＤＳを処置するために使用され得
る。
【０４２４】 本発明のアゴニストおよび／またはアンタゴニストはまた、創傷および組織の
修復の刺激、新脈管形成の刺激、血管またはリンパの疾患または障害の修復の刺
激における用途を有する。さらに、本発明のアゴニストおよびアンタゴニストは
、粘膜表面の再生を刺激するために使用され得る。
【０４２５】 特定の実施形態において、ポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、および／
またはそれらのアゴニストは、原発性もしくは後天性の免疫不全、欠損性の血清
免疫グロブリン産生、再発性の感染および／または免疫機能不全によって特徴付
けられる障害を処置または予防するために使用される。さらに、ポリヌクレオチ
ドまたはポリペプチド、および／またはそれらのアゴニストは、関節、骨、皮膚
および／または耳下腺の感染、血液由来の感染（例えば、敗血症、髄膜炎、敗血
症性関節炎および／または骨髄炎）、自己免疫疾患（例えば、本明細書中に開示
されるような自己免疫疾患）、炎症性障害、および悪性疾患、ならびに／あるい
はこれらの感染、疾患および／または悪性疾患に関連する任意の疾患または障害
または状態（ＣＶＩＤ、他の原発性免疫不全、ＨＩＶ疾患、ＣＬＬ、再発性気管
支炎、静脈洞炎、中耳炎、結膜炎、肺炎、肝炎、髄膜炎、帯状ヘルペス（例えば
、重篤な帯状ヘルペス）および／またはニューモシスティスを含むが、これらに
限定されない）を処置または予防するために使用され得る。
【０４２６】 別の実施形態において、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、抗体、お
よび／またはアゴニストもしくはアンタゴニストは、分類不能性免疫不全症（Ｃ
ｏｍｍｏｎ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｉｍｍｕｎｏｄｉｆｉｃｉｅｎｃｙ）（「ＣＶ
ＩＤ」；「後天性無ガンマグロブリン血症」および「後天性低ガンマグロブリン
血症」としても公知である）またはこの疾患のサブセットを有する個体を、処置
、および／または診断するために使用され得る。
【０４２７】 特定の実施形態において、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、抗体、
および／またはアゴニストもしくはアンタゴニストは、（１）癌または新生物お
よび（２）自己免疫細胞または組織関連の癌または新生物を処置、診断および／
または予防するために使用され得る。好ましい実施形態において、本明細書中に
記載されるように、毒素または放射化性同位体に結合体化された本発明のポリヌ
クレオチド、ポリペプチド、抗体、および／またはアゴニストもしくはアンタゴ
ニストは、急性骨髄性白血病を処置、診断、および／または予防するために使用
され得る。さらに好ましい実施形態において、本明細書中に記載されるように、
毒素または放射活性同位体に結合体化された本発明のポリヌクレオチド、ポリペ
プチド、抗体、および／またはアゴニストもしくはアンタゴニストは、慢性骨髄
性白血病、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、および／またはホジキン病を処
置、診断、および／または予防するために用いられ得る。
【０４２８】 別の特異的実施形態において、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチ
ド、および／またはアゴニストもしくはアンタゴニストを使用して、選択的Ｉｇ
Ａ欠損、ミエロペルオキシダーゼ欠損、Ｃ２欠損、毛細管拡張性運動失調、Ｄｉ
Ｇｅｏｒｇｅ奇形、分類不能型免疫不全（ＣＶＩ）、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン
血、重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）、慢性肉芽腫症（ＣＧＤ）、およびＷｉｓｋ
ｏｔｔ−Ａｌｄｒｉｃｈ症候群を処置、診断、予後、および／または予防するた
めに使用され得る。
【０４２９】 処置または検出され得る自己免疫障害の例としては、アディソン病、溶血性貧
血、抗リン脂質症候群、慢性関節リウマチ、皮膚炎、アレルギー性脳脊髄炎、糸
球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーヴズ病、多発性硬化症、重症筋無力
症、神経炎、眼炎痛、水疱性類天疱瘡、天疱瘡、多発性内分泌腺症、紫斑病、ラ
イター病、スティッフマン症候群、自己免疫性甲状腺炎、全身性エリテマトーデ
ス、自己免疫性の肺の炎症、ギヤン−バレー症候群、インスリン依存性糖尿病、
および自己免疫炎症性眼疾患が挙げられるが、それらに限定されない。
【０４３０】 好ましい実施形態において、上記の疾患および障害に関連した自己免疫疾患お
よび障害および／または状態は、本発明のプラスミノーゲン様抗体および／また
は抗プラスミノーゲン様抗体および／または可溶性プラスミノーゲン様ポリペプ
チドを使用して、処置、予防、および／または診断される。
【０４３１】 特定の実施形態では、本発明の組成物は、Ｂ細胞免疫不全個体（例えば、部分
的かまたは完全な脾臓摘出を経験する個体）の間で、免疫応答性をブーストする
ための薬物として使用される。
【０４３２】 さらに、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、および／またはアンタゴ
ニストは、アポトーシスに影響し得、従って、増加した細胞生存またはアポトー
シスの阻害に関連した多数の疾患を処置する際に有用である。例えば、本発明の
ポリヌクレオチド、ポリペプチド、および／またはアンタゴニストによって、処
置または検出され得る増加した細胞生存またはアポトーシスの阻害に関連した疾
患には、癌（例えば、濾胞性リンパ腫、ｐ５３変異を有する癌腫、およびホルモ
ン依存性腫瘍、これらは以下：結腸癌、心臓腫瘍、膵臓癌、黒色腫、網膜芽細胞
腫、神経膠芽細胞腫、肺癌、腸の癌、精巣癌、胃癌、神経芽細胞腫、粘液腫、筋
腫、リンパ腫、内皮腫、骨芽細胞腫、骨巨細胞腫、骨肉腫、軟骨肉腫、腺腫、乳
癌、前立腺癌、カポージ肉腫および卵巣癌を含むが、これらに限定されない）；
自己免疫性障害（例えば、多発性硬化症、シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、
胆汁性肝硬変、ベーチェット病（Ｂｅｈｃｅｔ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、クロー
ン病、多発性筋炎、全身性エリテマトーデスおよび免疫関連糸球体腎炎ならびに
慢性関節リウマチ）およびウイルス感染（例えば、ヘルペスウイルス、ポックス
ウイルスおよびアデノウイルス）、炎症、対宿主性移植片病、急性移植片拒絶、
ならびに慢性移植片拒絶、が挙げられる。好ましい実施形態において、本発明の
ポリヌクレオチド、ポリペプチド、および／またはアンタゴニストは、特に上記
に列挙される、癌の増殖、進行、および／または転移（ｍｅｔａｓｉｓ）を阻害
するために使用される。
【０４３３】 本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、および／またはアンタゴニストに
よって処置または検出され得る細胞生存の増大に関連するさらなる疾患または状
態には、悪性疾患の進行および／または転移ならびに以下のような関連する障害
が挙げられるが、これらに限定されない：白血病（急性白血病（例えば、急性リ
ンパ性白血病、急性骨髄性白血病（骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球
性および赤白血病を含む）を含む）ならびに慢性白血病（例えば、慢性骨髄性（
顆粒球性）白血病および慢性リンパ球性白血病））、真性赤血球増加症、リンパ
腫（例えば、ホジキン病および非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ヴァルデンスト
レームマクログロブリン血症、Ｈ鎖病、ならびに固形腫瘍（肉腫および癌腫（例
えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉
腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リンパ管肉腫、リンパ
管内皮腫、骨膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌
腫、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌
、皮脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原生癌、腎細胞
癌、肝細胞癌腫、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、頸
部癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、神経膠星状細
胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、脳室上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴
神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、黒色腫、神経芽細
胞腫、および網膜芽細胞腫）を含むが、これらに限定されない）。
【０４３４】 本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、および／またはアンタゴニストに
よって処置または検出され得るアポトーシスの増大に関連する疾患には、以下が
挙げられる：ＡＩＤＳ；神経変性障害（例えば、アルツハイマー病、パーキンソ
ン病、筋萎縮性側索硬化症、色素性網膜炎、小脳変性および脳腫瘍または以前に
関連した疾患）；自己免疫性障害（例えば、多発性硬化症、シェーグレン症候群
、橋本甲状腺炎、胆汁性肝硬変、ベーチェット病（Ｂｅｈｃｅｔ’ｓ ｄｉｓｅ
ａｓｅ）、クローン病、多発性筋炎、全身性エリテマトーデスおよび免疫関連糸
球体腎炎ならびに慢性関節リウマチ）、脊髄形成異常症候群（例えば、再生不良
性貧血）、対宿主性移植片病、虚血性傷害（心筋梗塞、発作および再灌流傷害に
よって生じるようなもの）、肝臓傷害（例えば、肝炎関連肝臓傷害、虚血／再灌
流傷害、胆汁うっ滞（ｃｈｏｌｅｓｔｏｓｉｓ）（胆管傷害）および肝臓癌）；
毒物誘導性肝臓疾患（アルコールによって引き起こされるようなもの）、敗血症
性ショック、悪液質ならびに食欲不振。
【０４３５】 本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、および／またはアンタゴニストに
よって検出および／または処置され得る過増殖性の疾患および／または障害の例
としては、肝臓、腹部、骨、胸、消化系、膵臓、腹膜、内分泌腺（副腎、上皮小
体、下垂体、精巣、卵巣、胸腺、甲状腺）、眼、頭および首、神経（中枢および
末梢）、リンパ系、骨盤、皮膚、軟組織、脾臓、胸郭、ならびに尿生殖器に位置
する新生物が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４３６】 同様に、他の過増殖性の障害もまた、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチ
ド、および／またはアンタゴニストにより処置または検出され得る。そのような
過増殖性の障害の例としては、高ガンマグロブリン血症、リンパ増殖性障害、パ
ラプロテイン血症、紫斑病、類肉腫症、セザリー症候群、ヴァルデンストレーム
マクログロブリン血症、ゴシェ病、組織球増殖症、ならびに任意の他の過増殖疾
患、さらに上記に収載されている器官系に位置している新生物が挙げられるが、
それらに限定されない。
【０４３７】 （過増殖障害） 本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくは
アンタゴニストを使用して、新生物を含む過増殖性障害を処置または検出し得る
。本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくは
アンタゴニストは、直接的または間接的な相互作用を介してこの障害の増殖を阻
害し得る。あるいは、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、または
アゴニストもしくはアンタゴニストは、過増殖障害を阻害し得る他の細胞を増殖
させ得る。
【０４３８】 例えば、免疫応答を増大させること、特に過増殖障害の抗原性の質を増大させ
ることによって、またはＴ細胞を増殖、分化、もしくは動員することによって、
過増殖性の疾患を処置し得る。既存の免疫応答を増強するか、または新たな免疫
応答を開始するかのいずれかによって、この免疫応答を増大させ得る。あるいは
、免疫応答を減少させることもまた、化学療法剤のような、過増殖性障害を処置
する方法であり得る。
【０４３９】 本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくは
アンタゴニストによって処置または検出され得る過増殖性障害の例としては、結
腸、腹部、骨、胸、消化系、肝臓、膵臓、腹膜、内分泌腺（副腎、上皮小体、下
垂体、精巣、卵巣、胸腺、甲状腺）、眼、頭および首、神経（中枢および末梢）
、リンパ系、骨盤、皮膚、軟組織、脾臓、胸郭、ならびに尿生殖器に位置する新
生物が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４４０】 同様に、他の過増殖性の障害もまた、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリ
ペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストにより処置または検出され
得る。そのような過増殖性障害の例としては、高ガンマグロブリン血症、リンパ
増殖性の疾患、障害、パラプロテイン血症、紫斑病、類肉腫症、セザリー症候群
、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、ゴシェ病、組織球増殖症、なら
びに任意の他の過増殖疾患、さらに上記に収載されている器官系に位置している
新生物が挙げられるが、それらに限定されない。
【０４４１】 １つの好ましい実施形態は、本発明のポリヌクレオチドを利用して、本発明、
および／またはタンパク質融合物もしくはそのフラグメントを用いる遺伝子治療
により、異常な細胞分裂を阻害する。
【０４４２】 従って、本発明は、異常に増殖している細胞に、本発明のポリヌクレオチドを
挿入することにより細胞増殖性障害を処置するための方法を提供する。ここで、
上記のポリヌクレオチドは、上記の発現を抑制する。
【０４４３】 本発明の別の実施形態は、個体における細胞増殖性の障害を処置する方法を提
供し、この方法は、異常に増殖している細胞に本発明の１つ以上の活性な遺伝子
コピーを投与する工程を包含する。好ましい実施形態において、本発明のポリヌ
クレオチドは、上記のポリヌクレオチドをコードするＤＮＡ配列を発現する際に
有効な組換え発現ベクターを含むＤＮＡ構築物である。本発明の別の好ましい実
施形態において、本発明のポリヌクレオチドをコードするＤＮＡ構築物を細胞に
挿入して、レトロウイルス（または、より好ましくは、アデノウイルスベクター
）を利用して処置する（参考として本明細書中に援用される、Ｇ Ｊ．Ｎａｂｅ
ｌら、ＰＮＡＳ １９９９ ９６：３２４−３２６を参照のこと）。最も好まし
い実施形態において、このウイルスベクターは欠損性であり、そして非増殖細胞
を形質転換せず、増殖細胞のみを形質転換する。さらに、好ましい実施形態にお
いて、増殖している細胞に、単独で、または他のポリヌクレオチドとともに、も
しくは他のポリヌクレオチドと融合して挿入される本発明のポリヌクレオチドは
、次いで、外部刺激（すなわち、磁性、特定の低分子、化学物質、または薬物投
与など）により調節され得る。この刺激は、上記のポリヌクレオチドの上流にあ
るプロモーターに作用して、コードされたタンパク質産物の発現を誘導する。こ
のようにして、本発明の有益な治療効果は、上記の外部刺激に基づいて、明らか
に調節され得る（すなわち、本発明のポリヌクレオチドの発現を増加、減少、ま
たは阻害するために）。
【０４４４】 本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、他の脈管形成タンパ
ク質をコードする他のポリヌクレオチドと一緒に投与され得る。脈管形成タンパ
ク質としては、酸性および塩基性の線維芽細胞増殖因子、ＶＥＧＦ−１、ＶＥＧ
Ｆ−２、ＶＥＧＦ−３、上皮増殖因子αおよびβ、血小板由来の内皮細胞増殖因
子、血小板由来増殖因子、腫瘍壊死因子α、肝細胞増殖因子、インスリン様増殖
因子、コロニー刺激因子、マクロファージコロニー刺激因子、顆粒球／マクロフ
ァージコロニー刺激因子、および一酸化窒素シンターゼが挙げられるが、これら
に限定されない。
【０４４５】 本発明のポリヌクレオチドは、発癌性遺伝子または抗原の発現を抑制する際に
有用であり得る。「発癌性遺伝子の発現を抑制する」は、遺伝子の転写の抑制、
遺伝子転写物（プレメッセージＲＮＡ）の分解、スプライシングの阻害、メッセ
ンジャーＲＮＡの破壊、タンパク質の翻訳後改変の防止、タンパク質の破壊、ま
たはタンパク質の正常機能の阻害を意図する。
【０４４６】 異常に増殖する細胞に対する局所的な投与に関しては、本発明のポリヌクレオ
チドは、当業者に公知の任意の方法により投与され得、この方法としては、トラ
ンスフェクション、エレクトロポレーション、細胞のマイクロインジェクション
、例えば、リポソームのようなビヒクルにおいて、リポフェクチン、または裸の
ポリヌクレオチド、または本明細書中全体を通して記載される任意の他の方法が
挙げられるが、これらに限定されない。本発明のポリヌクレオチドは、公知の遺
伝子送達系（例えば、当業者に公知のレトロウイルスベクター（Ｇｉｌｂｏａ，
Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ４４：８４５（１９８２）；Ｈｏｃｋｅ，Ｎａｔｕｒｅ
３２０：２７５（１９８６）；Ｗｉｌｓｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８５：３０１４）；ワクシニアウイルス系（Ｃｈａｋｒａ
ｂａｒｔｙら，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．５：３４０３（１９８５））また
は他の効率的なＤＮＡ送達系（Ｙａｔｅｓら，Ｎａｔｕｒｅ ３１３：８１２（
１９８５））に限定されない）により送達され得る。これらの参考文献は、例示
にすぎず、そして本明細書中に参考として援用される。異常に増殖している細胞
に特異的に送達するか、またはそれをトランスフェクトし、そして非分裂細胞を
残す（ｓｐａｒｅ）ために、当業者に公知のレトロウイルスまたはアデノウイル
ス（例えば、当該分野または本明細書中で記載される）送達系を利用することが
好ましい。宿主ＤＮＡ複製は組み込むためにレトロウイルスＤＮＡが必要である
ので、このレトロウイルスは、その生活環についての必要とされるレトロウイル
ス遺伝子の欠如に起因して自己複製できない。本発明のポリヌクレオチドのため
に、このようなレトロウイルス送達系を利用して、上記の遺伝子および構築物を
、異常に増殖している細胞に標的化し、そして非分裂性の正常細胞を残す。
【０４４７】 本発明のポリヌクレオチドは、疾患部位に直接注射針を導くために使用される
画像化デバイスの使用によって、内部器官、体腔などにおける細胞増殖性障害／
疾患部位に直接送達され得る。本発明のポリヌクレオチドはまた、手術介入時に
疾患部位に投与され得る。
【０４４８】 「細胞増殖性疾患」により、任意のヒトもしくは動物の疾患または障害が、器
官、腔、または身体部分のいずれか１つもしくはいずれかの組み合わせを冒して
いることを意味される。この疾患は、良性または悪性に拘わらず、細胞、細胞群
、もしくは組織の単一または複数の局所的な異常な増殖により特徴づけられる。
【０４４９】 本発明のポリヌクレオチドの任意の量は、この量が、処置細胞の増殖に対して
生物学的に阻害性の効果を有する限り、投与され得る。さらに、本発明の１つよ
り多くのポリヌクレオチドを、同時に同じ部位に投与することが可能である。「
生物学的に阻害性の」により、部分的または全体的な成長阻害ならびに細胞の増
殖または成長の速度における減少を意味する。生物学的に阻害性の用量は、標的
の悪性または組織培養において異常に増殖している細胞の成長、動物および細胞
培養物における腫瘍成長に対する本発明のポリヌクレオチドの効果を評価するこ
と、あるいは当業者に公知の任意の他の方法により決定され得る。
【０４５０】 本発明はさらに、抗体に基づく治療に関し、この方法は、記載される障害の１
つ以上を処置するために、哺乳動物（好ましくはヒト）の患者に抗ポリペプチド
抗体および抗ポリヌクレオチド抗体を投与する工程を包含する。抗ポリペプチド
抗体および抗ポリヌクレオチド抗体（ポリクローナル抗体およびモノクローナル
抗体）を生成するための方法は、本明細書中の他の箇所に詳細に記載される。こ
のような抗体は、当該分野で公知のように、または本明細書中に記載されるよう
に薬学的に受容可能な組成物中に提供され得る。
【０４５１】 本発明の抗体が治療的に使用され得る方法の概要は、本発明のポリヌクレオチ
ドまたはポリペプチドを、身体において局所的もしくは全身的に、または抗体の
直接的な細胞傷害性（例えば、補体による媒介（ＣＤＣ）もしくはエフェクター
細胞による媒介（ＡＤＣＣ））により結合させる工程を包含する。これらのアプ
ローチのいくつかは、以下により詳細に記載される。本明細書中に提供される教
示があれば、当業者は、本発明の抗体を、過度の実験なくして、診断、モニタリ
ングまたは治療の目的のために使用する方法を知る。
【０４５２】 詳細には、本発明の抗体、フラグメントおよび誘導体は、本明細書中に記載さ
れるような細胞増殖性障害および／または細胞分化障害を有しているかまたは発
症している被験体を処置するために有用である。このような処置は、抗体もしく
はフラグメント、誘導体またはそれらの結合体の単一または複数の用量を投与す
る工程を包含する。
【０４５３】 本発明の抗体は、例えば、他のモノクロナール抗体もしくはキメラ抗体と組み
合わせて、またはリンホカインもしくは造血成長因子と組み合わせて有利に使用
され得、これは抗体と相互作用するエフェクター細胞の数または活性を増加させ
るために役立つ。
【０４５４】 本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドに対して高親和性および／また
は強力なインビボ阻害および／または中和抗体、それらのフラグメントもしくは
領域を、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド（それらのフラグメント
を含む）に関するイムノアッセイおよびそれらに関連する障害の治療の両方のた
めに使用することが好ましい。このような抗体、フラグメントまたは領域は、好
ましくは、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド（それらのフラグメントを含む
）に対する親和性を有する。好ましい結合親和性としては、５×１０-6Ｍ、１０ -6 Ｍ、５×１０-7Ｍ、１０-7Ｍ、５×１０-8Ｍ、１０-8Ｍ、５×１０-9Ｍ、１０ -9 Ｍ、５×１０-10Ｍ、１０-10Ｍ、５×１０-11Ｍ、１０-11Ｍ、５×１０-12Ｍ
、１０-12Ｍ、５×１０-13Ｍ、１０-13Ｍ、５×１０-14Ｍ、１０-14Ｍ、５×１
０-15Ｍおよび１０-15Ｍ未満の解離定数すなわちＫｄを伴う結合親和性が挙げら
れる。
【０４５５】 さらに、本明細書中のいずれかに記載されるように、本発明のポリペプチドは
、単独で、融合タンパク質として、または他のポリペプチドと組み合わせて、直
接的または間接的のいずれかで、増殖性細胞または組織の新脈管形成の阻害にお
いて有用である。最も好ましい実施形態においては、この抗新脈管形成効果は、
例えば造血性細胞、腫瘍特異的細胞（例えば、腫瘍関連マクロファージ）の阻害
を通して、間接的に達成され得る（Ｊｏｓｅｐｈ ＩＢら、Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａ
ｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ，９０（２１）：１６４８−５３（１９９８）（これは本明
細書中に参考として援用される）を参照のこと）。本発明のポリペプチドまたは
ポリヌクレオチドを指向する抗体はまた、直接的または間接的に新脈管形成の阻
害を生じ得る（Ｗｉｔｔｅ Ｌら、Ｃａｎｃｅｒ Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ Ｒｅ
ｖ．１７（２）：１５５−６１（１９９８）（これは本明細書中に参考として援
用される）を参照のこと）。
【０４５６】 本発明のポリペプチド（融合タンパク質を含む）またはそのフラグメントは、
アポトーシスの誘導を通した増殖性細胞または組織の阻害において有用であり得
る。このポリペプチドは、デスドメインレセプター（例えば、腫瘍壊死因子（Ｔ
ＮＦ）レセプター１、ＣＤ９５（Ｆａｓ／ＡＰＯ−１）、ＴＮＦレセプター関連
アポトーシス媒介タンパク質（ＴＲＡＭＰ）およびＴＮＦ関連アポトーシス誘導
リガンド（ＴＲＡＩＬ）レセプター１およびレセプター２）の活性化において、
直接的または間接的のいずれかで、増殖性細胞および組織のアポトーシスを誘導
するために作用し得る（Ｓｃｈｕｌｚｅ−Ｏｓｔｈｏｆｆ Ｋら、Ｅｕｒ Ｊ
Ｂｉｏｃｈｅｍ ２５４（３）：４３９−５９（１９９８）（これは本明細書中
に参考として援用される）を参照のこと）。さらに、本発明の別の好ましい実施
形態においては、このポリペプチドは、他の機構を通して（例えば、アポトーシ
スを活性化する他のタンパク質の活性化において）、あるいは単独または小分子
薬物もしくはアジュバント（例えば、アポプトニン（ａｐｏｐｔｏｎｉｎ）、ガ
レクチン、チオレドキシン、抗炎症タンパク質）との組み合わせのいずれかで、
このタンパク質の発現の刺激を通して、アポトーシスを誘導し得る（例えば、Ｍ
ｕｔａｔ Ｒｅｓ ４００（１−２）：４４７−５５（１９９８）、Ｍｅｄ Ｈ
ｙｐｏｔｈｅｓｅｓ．５０（５）：４２３−３３（１９９８）、Ｃｈｅｍ Ｂｉ
ｏｌ Ｉｎｔｅｒａｃｔ．Ａｐｒ ２４；１１１−１１２：２３−３４（１９９
８）、Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．７６（６）：４０２−１２（１９９８）、Ｉｎｔ
Ｊ Ｔｉｓｓｕｅ Ｒｅａｃｔ；２０（１）：３−１５（１９９８）（これらは
すべて本明細書中に参考として援用される）を参照のこと）。
【０４５７】 本発明のポリペプチド（それとの融合タンパク質もしくはそのフラグメントを
含む）は、増殖性細胞または組織の転移の阻害において有用である。阻害は、ポ
リペプチド、または本明細書中のいずれかに記載されるようなこのポリペプチド
を指向する抗体の投与の直接的な結果として、あるいは間接的に（例えば、転移
を阻害することが知られているタンパク質（例えば、α４インテグリン）の発現
の活性化）生じ得る（例えば、Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ １９９８；２３１：１２５−４１（これは本明細書中に参考として援
用される）を参照のこと）。本発明のこのような治療的効果は、単独、または小
分子薬物もしくはアジュバントとの組み合わせのいずれかで達成され得る。
【０４５８】 別の実施形態においては、本発明は、本発明のポリペプチドを含有する組成物
（例えば、異種ポリペプチド、異種核酸、毒素、またはプロドラッグに会合する
ポリペプチドまたはポリペプチド抗体を含有する組成物）を、本発明のポリペプ
チドを発現する標的細胞に送達する方法を提供する。本発明のポリペプチドまた
はポリペプチド抗体は、疎水性、親水性、イオン性および／または共有結合性相
互作用を介して、異種ポリペプチド、異種核酸、毒素、またはプロドラッグに会
合し得る。
【０４５９】 本発明のポリペプチド、それらとの融合タンパク質またはそれらのフラグメン
トは、直接的（例えば、本発明のポリペプチドが増殖性抗原および免疫原に応答
するために、免疫応答を「ワクチン接種した」場合に起こるように）、または間
接的（例えば、この抗原および免疫原に対する免疫応答を増強することが知られ
ているタンパク質（例えば、ケモカイン）の発現の活性化におけるように）のい
ずれかで、増殖細胞または組織の免疫原性および／または抗原性の増強において
有用である。
【０４６０】 （心臓血管障害） 本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくは
アンタゴニストを使用して、四肢虚血のような末梢動脈疾患を含む、心臓血管障
害を処置し得る。
【０４６１】 心臓血管障害としては、動動脈瘻（ａｒｔｅｒｉｏ−ａｒｔｅｒｉａｌ ｆｉ
ｓｔｕｌａ）、動静脈瘻、大脳動静脈先天異常、先天性心欠陥（ｃｏｎｇｅｎｉ
ｔａｌ ｈｅａｒｔ ｄｅｆｅｃｔｓ）、肺動脈弁閉鎖症、およびシミター症候
群のような心臓血管異常が挙げられる。先天性心欠陥としては、大動脈縮窄、三
房心、冠状脈管奇形（ｃｏｒｏｎａｒｙ ｖｅｓｓｅｌ ａｎｏｍａｌｉｅｓ）
、交差心、右胸心、開存性動脈管（ｐａｔｅｎｔ ｄｕｃｔｕｓ ａｒｔｅｒｉ
ｏｓｕｓ）、エブスタイン奇形、アイゼンメンガー複合体、左心室発育不全症候
群、左胸心、ファロー四徴症、大血管転位症、両大血管右室起始症、三尖弁閉鎖
症、動脈管遺残、および心中隔欠損症（ｈｅａｒｔ ｓｅｐｔａｌ ｄｅｆｅｃ
ｔｓ）（例えば、大動脈肺動脈中隔欠損症（ａｏｒｔｏｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｓ
ｅｐｔａｌ ｄｅｆｅｃｔ）、心内膜床欠損症、リュタンバッシェ症候群、ファ
ロー三徴症、心室心中隔欠損症（ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｈｅａｒｔ ｓｅｐ
ｔａｌ ｄｅｆｅｃｔｓ））が挙げられる。
【０４６２】 心臓血管障害としてはまた、不整脈、カルチノイド心臓病、高心拍出量（ｈｉ
ｇｈ ｃａｒｄｉａｃ ｏｕｔｐｕｔ）、低心拍出量（ｌｏｗ ｃａｒｄｉａｃ
ｏｕｔｐｕｔ）、心タンポナーデ、心内膜炎（細菌性を含む）、心臓動脈瘤、
心停止、うっ血性心不全、うっ血性心筋症、発作性呼吸困難、心臓水腫、心肥大
、うっ血性心筋症、左心室肥大、右心室肥大、梗塞後心破裂（ｐｏｓｔ−ｉｎｆ
ａｒｃｔｉｏｎ ｈｅａｒｔ ｒｕｐｔｕｒｅ）、心室中隔破裂、心臓弁疾患、
心筋疾患、心筋虚血、心内膜液浸出、心外膜炎（梗塞性および結核性を含む）、
気心膜症、心膜切開後症候群、右心疾患、リウマチ性心疾患、心室機能不全、充
血、心臓血管妊娠合併症（ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ
ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）、シミター症候群、心血管梅毒、および心血管
結核（ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）のような心
臓病が挙げられる。
【０４６３】 不整脈としては、洞性不整脈、心房性細動、心房粗動、徐脈、期外収縮、アダ
ムズ−ストークス症候群、脚ブロック、洞房ブロック、長ＱＴ症候群（ｌｏｎｇ
ＱＴ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、副収縮、ローン−ギャノング−レヴァイン症候群
、マヘーム型早期興奮症候群（Ｍａｈａｉｍ−ｔｙｐｅ ｐｒｅ−ｅｘｃｉｔａ
ｔｉｏｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ウルフ−パーキンソン−ホワイト症候群、洞不
全症候群、頻拍、および心室性細動が挙げられる。頻拍としては、発作性頻拍、
上室性頻拍、心室固有調律促進、房室結節性再入頻拍（ａｔｒｉｏｖｅｎｔｒｉ
ｃｕｌａｒ ｎｏｄａｌ ｒｅｅｎｔｒｙ ｔａｃｈｙｃａｒｄｉａ）、異所心
房性頻拍、異所接合部頻拍、洞房結節性再入頻拍（ｓｉｎｏａｔｒｉａｌ ｎｏ
ｄａｌ ｒｅｅｎｔｒｙ ｔａｃｈｙｃａｒｄｉａ）、洞性頻拍、トルサード・
ド・ポワント、および心室性頻拍が挙げられる。
【０４６４】 心臓弁疾患としては、大動脈弁機能不全症、大動脈弁狭窄症、心雑音（ｈｅａ
ｒ ｍｕｒｍｕｒｓ）、大動脈弁逸脱症、僧帽弁逸脱症、三尖弁逸脱症、僧帽弁
機能不全、僧帽弁狭窄症、肺動脈弁閉鎖症、肺動脈弁機能不全、肺動脈弁狭窄症
、三尖閉鎖症、三尖弁機能不全、および三尖弁狭窄症が挙げられる。
【０４６５】 心筋疾患としては、アルコール性心筋症、うっ血性心筋症、肥大型心筋症、弁
下部性大動脈狭搾症、弁下部性肺動脈狭搾症、拘束型心筋症、シャーガス心筋症
、心内膜線維弾性症、心内膜心筋線維症、キーンズ症候群、心筋再灌流障害、お
よび心筋炎が挙げられる。
【０４６６】 心筋性虚血としては、狭心症、冠動脈瘤、冠動脈硬化、冠動脈血栓症、冠動脈
血管痙攣、心筋梗塞、および心筋気絶（ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｓｔｕｎｎｉｎ
ｇ）のような冠動脈疾患が挙げられる。
【０４６７】 心臓血管疾患としてはまた、動脈瘤、血管形成異常、血管腫症、細菌性血管腫
症状、ヒッペル−リンダラ疾患（Ｈｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕ Ｄｉｓｅａｓｅ
）、クリペル−トルノネー−ウェーバー症候群、スタージ−ウェーバー症候群、
血管運動神経性水腫、大動脈疾患、高安動脈炎、大動脈炎、ルリーシュ症候群、
動脈閉塞疾患、動脈炎、動脈内膜炎（ｅｎａｒｔｅｒｉｔｉｓ）、結節性多発性
動脈炎、脳血管障害、糖尿病性血管障害、糖尿病性網膜症、塞栓症、血栓症、先
端紅痛症、痔、肝静脈閉塞障害、高血圧、低血圧、虚血、末梢血管障害、静脈炎
、肺静脈閉塞疾患、高血圧、低血圧、虚血、末梢血管疾患、静脈炎、肺静脈閉塞
疾患、レーノー病、ＣＲＥＳＴ症候群、網膜静脈閉塞、シミター症候群、上大静
脈症候群、毛細血管拡張症、毛細血管拡張性運動失調（ａｔａｃｉａ ｔｅｌａ
ｎｇｉｅｃｔａｓｉａ）、遺伝性出血性毛細管拡張症、精索静脈瘤、拡張蛇行静
脈、静脈瘤性潰瘍、脈管炎、および静脈機能不全のような血管疾患が挙げられる
。
【０４６８】 動脈瘤としては、解離性動脈瘤、偽動脈瘤、感染した動脈瘤、破裂した動脈瘤
、大動脈性動脈瘤、大脳性動脈瘤、冠動脈瘤、心動脈瘤、および腸骨性動脈瘤が
挙げられる。
【０４６９】 動脈閉塞疾患としては、動脈硬化症、間欠性跛行、頸動脈狭窄症、線維筋性形
成異常、腸間膜性血管閉塞、モヤモヤ病、腎動脈閉塞、網膜動脈閉塞、および閉
塞性血栓性血管炎が挙げられる。
【０４７０】 脳血管障害としては、頸動脈疾患、脳のアミロイドアンギオパチー、大脳動脈
瘤、大脳無酸素症、大脳動脈硬化、大脳動静脈先天異常、大脳動脈疾患、大脳の
塞栓症および血栓症、頸動脈血栓症、洞血栓症、ヴァレンベルク症候群、大脳出
血、硬膜上血腫、硬膜下血腫、クモ膜下出血（ｓｕｂａｒａｘｈｎｏｉｄ ｈｅ
ｍｏｒｒｈａｇｅ）、大脳梗塞、大脳虚血（一過性を含む）、鎖骨下動脈盗血症
候群、室周白軟化症（ｐｅｒｉｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｌｅｕｋｏｍａｌａｃ
ｉａ）、血管性頭痛、群発性頭痛、片頭痛、および椎骨基部（ｖｅｒｔｅｂｒｏ
ｂａｓｉｌａｒ）機能不全が挙げられる。
【０４７１】 塞栓症としては、空気塞栓症、羊水塞栓症、コレステロール塞栓症、爪先チア
ノーゼ症候群、脂肪塞栓症、肺動脈塞栓症、および血栓塞栓症が挙げられる。血
栓症としては、冠状動脈血栓症、肝静脈血栓症、網膜静脈閉塞、頸動脈血栓症、
洞血栓症、ヴァレンベルク症候群、および血栓性静脈炎が挙げられる。
【０４７２】 虚血としては、大脳虚血、虚血性大腸炎、仕切り症候群（ｃｏｍｐａｒｔｍｅ
ｎｔ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、前仕切り症候群（ａｎｔｅｒｉｏｒ ｃｏｍｐａｒ
ｔｍｅｎｔ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心筋虚血、再灌流傷害、および末梢四肢虚血
が挙げられる。脈管炎としては、大動脈炎、動脈炎、ベーチェット（Ｂｅｈｃｅ
ｔ）症候群、チャーグ−ストラウス症候群、粘膜皮膚リンパ節症候群、閉塞性血
栓性血管炎、過敏性血管炎、シェーンライン−ヘーノホ紫斑病（Ｓｃｈｏｅｎｌ
ｅｉｎ−Ｈｅｎｏｃｈ ｐｕｒｐｕｒａ）、アレルギー性皮膚血管炎およびヴェ
ーゲナー肉芽腫症が挙げられる。
【０４７３】 本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくは
アンタゴニストは、危険な四肢虚血および冠状動脈疾患の処置に対して特に有効
である。
【０４７４】 ポリペプチドは、当該分野で公知である任意の方法を使用して投与され得、こ
れらの方法としては、送達部位における直接的針注射、静脈内注射、局所投与、
カテーテル注入、微粒子銃（ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ）注射、粒子加速器、ゲルフォ
ームスポンジデポー、他の市販デポー物質、浸透圧ポンプ、経口または坐剤の固
形薬学的処方物、手術中のデカンティングまたは局所適用、エアロゾル送達が挙
げられるが、これらに限定されない。そのような方法は当該分野で公知である。
ポリペプチドは、下記でより詳細に記載される、治療剤（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉ
ｃ）の一部として投与され得る。ポリヌクレオチドを送達する方法は本明細書中
でより詳細に記載される。
【０４７５】 （抗新脈管形成活性） 新脈管形成の内因性の、刺激因子とインヒビターとの間の天然に存在する平衡
は、阻害影響が優勢である平衡である。Ｒａｓｔｉｎｅｊａｄら、Ｃｅｌｌ ５
６：３４５〜３５５（１９８９）。新生血管形成が正常な生理学的条件下におい
て生じるまれな場合（例えば、創傷治癒、器官再生、胚発生、および雌性生殖プ
ロセス）において、新脈管形成は、厳密に調節され、そして空間的および時間的
に定められる。病的な新脈管形成の条件（例えば、固形腫瘍増殖を特徴付ける）
の下において、これらの調節の制御はできない。調節されていない新脈管形成は
病的になり、そして多くの新生物性疾患および非新生物性疾患の進行を維持する
。多くの重篤な疾患は、固形腫瘍の増殖および転移、関節炎、いくつかの型の眼
の障害および乾癬を含む、異常な新生血管形成により支配される。例えば、Ｍｏ
ｓｅｓら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．９：６３０〜６３４（１９９１）；Ｆｏｌｋｍａｎ
ら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３３３：１７５７〜１７６３（１９９５）；
Ａｕｅｒｂａｃｈら、Ｊ．Ｍｉｃｒｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．２９：４０１〜４１１
（１９８５）；Ｆｏｌｋｍａｎ、Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓｅａｒｃｈ、ＫｌｅｉｎおよびＷｅｉｎｈｏｕｓｅ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ
ｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１７５〜２０３頁（１９８５）；Ｐａｔｚ、Ａｍ
．Ｊ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．９４：７１５〜７４３（１９８２）；およびＦｏｌ
ｋｍａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２１：７１９〜７２５（１９８３）による概説
を参照のこと。多くの病的状態において、新脈管形成のプロセスは、その疾患状
態に寄与する。例えば、固形腫瘍の増殖が新脈管形成に依存することを示唆する
有意なデータが蓄積されている。ＦｏｌｋｍａｎおよびＫｌａｇｓｂｒｕｎ、Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ ２３５：４４２〜４４７（１９８７）。
【０４７６】 本発明は、本発明のポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチド、ならびに
本発明のアゴニストまたはアンタゴニストの投与による新生血管形成に関連する
疾患または障害の処置を提供する。本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストを用いて処置し得る悪性状態およ
び転移性状態には、本明細書に記載の悪性疾患、固形腫瘍、および癌、ならびに
当該分野で公知の他のもの（このような障害の総説については、Ｆｉｓｈｍａｎ
ら、Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第２版、Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏ．，Ｐｈ
ｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９８５）を参照のこと）が挙げられるが、これらに限
定されない。従って、本発明は、新脈管形成関連疾患および／または障害の処置
の方法を提供し、この方法は、治療有効量の、本発明のポリヌクレオチド、ポリ
ペプチド、アンタゴニストおよび／またはアゴニストを、その処置の必要な個体
に投与する工程を包含する。例えば、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタ
ゴニストおよび／またはアゴニストは、癌または腫瘍を治療的に処置するために
、種々のさらなる方法で利用され得る。ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アン
タゴニストおよび／またはアゴニストで処置され得る癌としては、前立腺癌、肺
癌、乳癌、卵巣癌、胃癌、膵臓癌、喉頭癌、食道癌、精巣癌、肝臓癌、耳下腺癌
、胆管癌、結腸癌、直腸癌、頸部癌、子宮癌、子宮内膜癌、腎臓癌、膀胱癌、甲
状腺癌を含む固形腫瘍；原発性腫瘍および転移；黒色腫；膠芽腫；カポージ肉腫
；平滑筋肉腫；非小細胞肺癌；結腸直腸癌；進行性（ａｄｖａｎｃｅｄ）悪性疾
患；および血液から生じる腫瘍（例えば、白血病）が挙げられるが、これらに限
定されない。例えば、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストおよび
／またはアゴニストは、皮膚癌、頭頸部腫瘍、乳房腫瘍およびカポージ肉腫のよ
うな癌を処置するために、局所送達され得る。
【０４７７】 なお他の局面において、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストお
よび／またはアゴニストは、例えば膀胱内投与によって膀胱癌の表面形態を処置
するために利用され得る。ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストお
よび／またはアゴニストは、腫瘍に直接的に、または注射もしくはカテーテルを
介して腫瘍部位付近に送達され得る。当然のことながら、当業者が理解するよう
に、適切な投与様式は、処置されるべき癌によって変化する。他の送達様式は本
明細書中において議論される。
【０４７８】 ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストおよび／またはアゴニスト
は、癌に加えて、他の障害（新脈管形成を含む）を処置する際に有用であり得る
。これらの障害としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：良性腫
瘍（例えば、血管腫、聴神経腫、神経線維腫、トラコーマ、および化膿性肉芽腫
）；動脈硬化プラーク；眼の脈管形成疾患（例えば、糖尿病性網膜症、未熟網膜
症、黄斑変性、角膜移植拒絶、血管新生緑内障、水晶体後線維増殖、ルベオーシ
ス、網膜芽細胞腫、ブドウ膜炎（ｕｖｉｅｔｉｓ）および眼の翼状片（Ｐｔｅｒ
ｙｇｉａ）（異常な血管増殖））；慢性関節リウマチ；乾癬；遅延型創傷治癒；
子宮内膜症；脈管形成；顆粒化；過形成性瘢痕（ケロイド）；偽関節骨折；強皮
症；トラコーマ；血管接着；心筋の新脈管形成；冠状側副枝（ｃｏｒｏｎａｒｙ
ｃｏｌｌａｔｅｒａｌｓ）；大脳側副枝；動静脈奇形；虚血性四肢新脈管形成
；オースラー−ウェーバー（Ｏｓｌｅｒ−Ｗｅｂｂｅｒ）症候群；プラーク新生
血管形成；毛細血管拡張症；血友病性関節；血管線維腫；線維筋性形成異常；創
傷顆粒化；クローン病；およびアテローム性動脈硬化症。
【０４７９】 例えば、本発明の１つの局面において、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプ
チド、アンタゴニストおよび／またはアゴニストを過形成性瘢痕またはケロイド
に投与する工程を包含する、過形成性瘢痕およびケロイドを処置するための方法
が提供される。
【０４８０】 本発明の１つの実施形態において、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタ
ゴニストおよび／またはアゴニストは、過形成性瘢痕またはケロイドに、これら
の病変の進行を妨げるために直接注射される。この治療は、過形成性瘢痕および
ケロイド（例えば、やけど）の発生を生じることが知られている状態の予防処置
において特に価値があり、そして好ましくは、増殖期が進行する時間（最初の傷
害の約１４日後）を有した後であるが、過形成性瘢痕またはケロイドの発生の前
に開始される。上述のように、本発明はまた、眼の新生血管形成疾患（例えば、
角膜新生血管形成、血管新生緑内障、増殖性糖尿病網膜症、水晶体後線維増殖お
よび黄斑変性を含む）を処置するための方法を提供する。
【０４８１】 さらに、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチド（アゴニストおよび／
またはアンタゴニストを含む）を用いて処置され得る新生血管形成に関連する眼
の障害としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：血管新生緑内障
、糖尿病網膜症、網膜芽細胞腫、水晶体後線維増殖症、ブドウ膜炎、未熟網膜症
、黄斑変性、角膜移植新生血管形成、ならびに他の眼の炎症性疾患、眼の腫瘍、
および脈絡膜または虹彩の新生血管形成に関連する疾患。例えば、Ｗａｌｔｍａ
ｎら、Ａｍ．Ｊ．Ｏｐｈｔｈａｌ．８５：７０４〜７１０（１９７８）およびＧ
ａｒｔｎｅｒら、Ｓｕｒｖ．Ｏｐｈｔｈａｌ．２２：２９１〜３１２（１９７８
）による総説を参照のこと。
【０４８２】 従って、本発明の１つの局面において、治療有効量の化合物（上記）を患者に
対して、血管の形成が阻害されるように角膜に投与する工程を包含する、角膜新
生血管形成（角膜移植新生血管形成を含む）のような眼の新生血管形成疾患を処
置するための方法が、提供される。簡潔には、角膜は、通常には血管を欠く組織
である。しかし、特定の病的状態において、毛細血管は、縁の角膜周囲脈管叢か
ら角膜に伸長し得る。角膜が血管化されるようになる場合、角膜はまた混濁され
るようになり、患者の視力の衰えを生じる。角膜が完全に不透明になる（ｏｐａ
ｃｉｔａｔｅ）場合に、視力喪失が完全になり得る。広範な種々の障害は、例え
ば、以下を含む角膜新生血管形成を生じ得る：角膜感染（例えば、トラコーマ、
単純ヘルペス角膜炎、リーシュマニア症およびオンコセルカ症）、免疫学的プロ
セス（例えば、移植片拒絶およびスティーヴンズ−ジョンソン症候群）、アルカ
リやけど、外傷、炎症（任意の原因による）、毒性および栄養欠乏状態、ならび
にコンタクトレンズを装着することの合併症として。
【０４８３】 特に好ましい実施形態において、本発明は、生理食塩水（眼に用いる調製物に
おいて一般に使用される任意の保存剤および抗菌剤と組合せて）中で局所投与の
ために調製され得、そして点眼剤形態で投与され得る。溶液または懸濁液は、そ
の純粋な形態で調製され得、そして１日に数回投与され得る。あるいは、上記の
ように調製される抗脈管形成組成物はまた、角膜に直接投与され得る。好ましい
実施形態において、抗脈管形成組成物は、角膜に結合する粘膜接着性ポリマーと
ともに調製される。さらなる実施形態において、抗脈管形成因子または抗脈管形
成組成物は、従来のステロイド治療に対する補助剤として利用され得る。局所治
療はまた、脈管形成応答（例えば、化学的やけど）を誘導する高い可能性を有す
ることが公知である角膜病変において予防的に有用であり得る。これらの場合に
おいて、処置（おそらくステロイドと組み合わせられる）は、その後の合併症を
予防するのを補助するために直ちに開始され得る。
【０４８４】 他の実施形態において、上記の化合物は、角膜支質に直接、顕微鏡の案内の下
で眼科医によって注入され得る。好ましい注射部位は、個々の病巣の形態で変化
し得るが、投与の目標は、脈管構造の前進している面に組成物を置くこと（すな
わち、血管と正常な角膜との間に分散される）である。ほとんどの場合において
、これは、前進している血管から角膜を「防御」するための縁周囲（ｐｅｒｉｌ
ｉｍｂｉｃ）角膜注射を含む。この方法はまた、角膜新生血管形成を予防的に防
ぐために、角膜傷害の直後に利用され得る。この状況において、この物質は、角
膜病巣とその所望されない潜在的な血液供給の縁との間に分散して縁周囲角膜に
注射され得る。このような方法はまた、類似の様式で、移植された角膜の毛細血
管浸潤を予防するために利用され得る。徐放形態において、注入は、１年に２〜
３回のみ必要とされ得る。ステロイドもまた、注入溶液に添加され、その注射自
体から生じる炎症を低減し得る。
【０４８５】 本発明の別の局面において、患者に、血管の形成を阻害するように、治療有効
量のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストおよび／またはアゴニス
トを眼に投与する工程を包含する、血管新生緑内障を処置するための方法が提供
される。１つの実施形態において、化合物は、血管新生緑内障の早期形態を処置
するために、眼に局所投与され得る。他の実施形態において、化合物は、前方角
（ａｎｔｅｒｉｏｒ ｃｈａｍｂｅｒ ａｎｇｌｅ）の領域に注入によって移植
され得る。他の実施形態において、化合物はまた、化合物が眼房水に連続的に放
出されるように、任意の位置に置かれ得る。本発明の別の局面において、患者に
、血管の形成が阻害されるように、治療有効量のポリヌクレオチド、ポリペプチ
ド、アンタゴニストおよび／またはアゴニストを眼に投与する工程を包含する、
増殖性糖尿病性網膜症を処置するための方法が提供される。
【０４８６】 本発明の特に好ましい実施形態において、増殖性糖尿病性網膜症は、網膜にお
けるポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストおよび／またはアゴニス
トの局所濃度を増加させるために、眼房水または硝子体への注入によって処置さ
れ得る。好ましくは、この処置は、光凝固を必要とする重篤な疾患の獲得の前に
開始されるべきである。
【０４８７】 本発明の別の局面において、血管の形成が阻害されるように、患者に、治療有
効量のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストおよび／またはアゴニ
ストを眼に投与する工程を包含する、水晶体後線維増殖症を処置するための方法
が、提供される。化合物は、硝子体内注射を介して、および／または眼内移植を
介して局所投与され得る。
【０４８８】 さらに、このポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび／またはア
ゴニストで処置され得る障害としては、以下が挙げられるが、それらに限定され
ない：血管腫、関節炎、乾癬、血管線維腫、アテローム性プラーク、遅延型創傷
治癒、顆粒化、血友病性関節、過形成性瘢痕、偽関節骨折、オースラー−ウェー
バー（Ｏｓｌｅｒ−Ｗｅｂｅｒ）症候群、化膿性肉芽腫、強皮症、トラコーマ、
および血管接着。
【０４８９】 さらに、このポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび／またはア
ゴニストで処置され得る障害および／または状態としては、以下が挙げられるが
、それらに限定されない：固形腫瘍、血液由来の（ｂｌｏｏｄ ｂｏｒｎ）腫瘍
（例えば、白血病）、腫瘍転移、カポージ肉腫、良性腫瘍（例えば、血管腫、聴
神経腫、神経線維腫、トラコーマ、および化膿性肉芽腫）、慢性関節リウマチ、
乾癬、眼の脈管形成疾患（例えば、糖尿病性網膜症、未熟網膜症、黄斑変性、角
膜移植拒絶、血管新生緑内障、水晶体後線維増殖症、ルベオーシス、網膜芽細胞
腫、およびブドウ膜炎）、遅延型創傷治癒、子宮内膜症、脈管形成、顆粒化、過
形成性瘢痕（ケロイド）、偽関節骨折、強皮症、トラコーマ、血管接着、心筋の
新脈管形成、冠状側副枝（ｃｏｒｏｎａｒｙ ｃｏｌｌａｔｅｒａｌｓ）、大脳
側副枝、動静脈奇形、虚血性四肢新脈管形成、オースラー−ウェーバー症候群、
プラーク新生血管形成、毛細血管拡張症、血友病性関節、血管線維腫、線維筋性
形成異常、創傷顆粒化、クローン病、アテローム性動脈硬化症、産児制限薬剤（
月経を制御する、胎芽着床のために必要な血管新生を予防することによる）、病
原性の結果（例えば、ネコ引っかき病（Ｒｏｃｈｅｌｅ ｍｉｎａｌｉａ ｑｕ
ｉｎｔｏｓａ）、潰瘍（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）、バルトネ
ラ症および細菌性血管腫症状）のような新脈管形成を有する疾患。
【０４９０】 出産制限方法の１つの局面において、胎芽着床をブロックするに十分な化合物
の量は、性交および受精が起こる前またはその後に投与され、従って産児制限の
有効な方法、おそらく「事後用（ｍｏｒｎｉｎｇ ａｆｔｅｒ）」方法を提供す
る。ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび／またはアゴニストは
また、月経を制御することにおいて使用され得るか、または子宮内膜症の処置に
おける腹膜洗浄液として、もしくは腹膜移植のためのいずれかで投与され得る。
【０４９１】 本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび／またはアゴニ
ストは、縫合（ｓｔｉｔｃｈ）肉芽腫を予防するために、外科縫合に組み込まれ
得る。
【０４９２】 ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび／またはアゴニストは、
広範な種々の外科手順において利用され得る。例えば、本発明の１つの局面にお
いて、組成物（例えば、スプレーまたはフィルムの形態において）は、悪性組織
から正常な周囲の組織を分離するため、そして／または周囲の組織への疾患の広
がりを予防するために、腫瘍の除去の前に、領域をコートまたはスプレーするた
めに利用され得る。本発明の他の局面において、組成物（例えば、スプレーの形
態において）は、腫瘍をコートするため、または所望の場所において新脈管形成
を阻害するために、内視鏡手順を介して送達され得る。本発明のなお他の局面に
おいて、本発明の抗脈管形成組成物でコートされている外科メッシュが、外科メ
ッシュが利用され得る任意の手順において利用され得る。例えば、本発明の１つ
の実施形態において、抗脈管形成組成物を有した外科メッシュレーデン（ｌａｄ
ｅｎ）は、構造に対する支持を提供するため、そして一定の量の抗脈管形成因子
を放出するために、腹部癌切除手術の間（例えば、結腸切除の後）に利用され得
る。
【０４９３】 本発明のさらなる局面において、癌の局所的再発およびその部位での新しい血
管の形成が阻害されるように、切除後にポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴ
ニストおよび／またはアゴニストを腫瘍の切除縁に投与する工程を包含する、腫
瘍切除部位を処置するための方法が提供される。本発明の１つの実施形態におい
て、抗脈管形成化合物は、腫瘍切除部位に直接投与される（例えば、塗布、ブラ
ッシング（ｂｒｕｓｈｉｎｇ）、または他の方法で抗脈管形成化合物で腫瘍の切
除縁をコートすることによって適用される）。あるいは、抗脈管形成化合物は、
投与前に公知の外科ペーストに組み込まれ得る。本発明の特に好ましい実施形態
において、抗脈管形成化合物は、悪性疾患についての肝切除後および神経外科手
術後に適用される。
【０４９４】 本発明の１つの局面において、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニスト
および／またはアゴニストは、広範な種々の腫瘍（例えば、乳房腫瘍、結腸腫瘍
、脳腫瘍および肝腫瘍を含む）の切除縁に投与され得る。例えば、本発明の１つ
の実施形態において、抗脈管形成化合物は、切除後に、神経学的腫瘍の部位に、
その部位での新しい血管の形成が阻害されるように投与され得る。
【０４９５】 本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび／またはアゴニ
ストはまた、他の抗脈管形成因子とともに投与され得る。他の抗脈管形成因子の
代表的な例としては以下が挙げられる：抗侵襲性因子、レチノイン酸およびその
誘導体、パクリタキセル、スラミン、メタロプロテイナーゼ−１の組織インヒビ
ター、メタロプロテイナーゼ−２の組織インヒビター、プラスミノーゲン活性化
インヒビター−１、プラスミノーゲン活性化インヒビター−２および種々の形態
のより軽い「ｄ群」遷移金属。
【０４９６】 より軽い「ｄ群」遷移金属には、例えばバナジウム、モリブデン、タングステ
ン、チタン、ニオブおよびタンタル種が挙げられる。そのような遷移金属種は、
遷移金属錯体を形成し得る。上記の遷移金属種の適切な錯体としては、オキソ遷
移金属錯体が挙げられる。
【０４９７】 バナジウム錯体の代表的な例としては、バナデート錯体およびバナジル錯体の
ようなオキソバナジウム錯体が挙げられる。適切なバナデート錯体としては、例
えばメタバナジン酸アンモニウム、メタバナジン酸ナトリウムおよびオルトバナ
ジン酸ナトリウムのようなメタバナデート錯体およびオルトバナデート錯体が挙
げられる。適切なバナジル錯体としては、例えばバナジルアセチルアセトネート
および硫酸バナジル（硫酸バナジル一水和物および硫酸バナジル三水和物のよう
な硫酸バナジル水和物を含む）が挙げられる。
【０４９８】 タングステン錯体およびモリブデン錯体の代表的な例としてはまた、オキソ錯
体が挙げられる。適切なオキソタングステン錯体としては、タングステート錯体
およびタングステンオキシド錯体が挙げられる。適切なタングステート錯体とし
ては、タングステン酸アンモニウム、タングステン酸カルシウム、タングステン
酸ナトリウム二水和物およびタングステン酸が挙げられる。適切なタングステン
オキシドとしては、タングステン（ＩＶ）オキシドおよびタングステン（ＶＩ）
オキシドが挙げられる。適切なオキソモリブデン錯体としては、モリブデート、
モリブデンオキシドおよびモリブデニル錯体が挙げられる。適切なモリブデート
錯体としては、モリブデン酸アンモニウムおよびその水和物、モリブデン酸ナト
リウムおよびその水和物、ならびにモリブデン酸カリウムおよびその水和物が挙
げられる。適切なモリブデンオキシドとしては、モリブデン（ＶＩ）オキシド、
モリブデン（ＶＩ）オキシドおよびモリブデン酸が挙げられる。適切なモリブデ
ニル錯体としては、例えばモリブデニルアセチルアセトネートが挙げられる。他
の適切なタングステン錯体およびモリブデン錯体としては、例えばグリセロール
、酒石酸および糖由来のヒドロキソ誘導体が挙げられる。
【０４９９】 広範な種々の他の抗脈管形成因子もまた、本発明の状況において利用され得る
。代表的な例としては、以下が挙げられる：血小板因子４；硫酸プロタミン；硫
酸化キチン誘導体（クイーンクラブ（ｑｕｅｅｎ ｃｒａｂ）の殻から調製され
る）（Ｍｕｒａｔａら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５１：２２〜２６、１９９１）
；硫酸化多糖ペプチドグリカン複合体（ＳＰ−ＰＧ）（この化合物の機能は、ス
テロイド（例えば、エストロゲン）およびクエン酸タモキシフェンの存在によっ
て、増強され得る）；スタウロスポリン；基質代謝の調節因子（例えば、プロリ
ンアナログ、シスヒドロキシプロリン、ｄ，Ｌ−３，４−デヒドロプロリン、チ
アプロリン、α，α−ジピリジル，アミノプロピオニトリルフマレートを含む）
；４−プロピル−５−（４−ピリジニル）−２（３Ｈ）−オキサゾロン；メトト
レキサート；ミトザントロン；ヘパリン；インターフェロン；２マクログロブリ
ン−血清；ＣｈＩＭＰ−３（Ｐａｖｌｏｆｆら、Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２６７
：１７３２１〜１７３２６、１９９２）；キモスタチン（Ｔｏｍｋｉｎｓｏｎら
、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２８６：４７５〜４８０、１９９２）；シクロデキスト
リンテトラデカサルフェート；エポネマイシン；カンプトテシン；フマギリン（
Ｉｎｇｂｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５５〜５５７、１９９０）；チオリ
ンゴ酸金ナトリウム（「ＧＳＴ」；ＭａｔｓｕｂａｒａおよびＺｉｆｆ、Ｊ．Ｃ
ｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７９：１４４０〜１４４６、１９８７）；アンチコラゲ
ナーゼ−血清；α２−抗プラスミン（Ｈｏｌｍｅｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ
．２６２（４）：１６５９〜１６６４、１９８７）；ビサントレン（Ｎａｔｉｏ
ｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）；ロベンザリット二ナトリウム（
Ｎ−（２）−カルボキシフェニル−４−クロロアントロニル酸（ｃｈｌｏｒｏａ
ｎｔｈｒｏｎｉｌｉｃ ａｃｉｄ）二ナトリウム、すなわち「ＣＣＡ」；Ｔａｋ
ｅｕｃｈｉら、Ａｇｅｎｔｓ Ａｃｔｉｏｎｓ ３６：３１２〜３１６、１９９
２）；サリドマイド；Ａｎｇｏｓｔａｔｉｃステロイド；ＡＧＭ−１４７０；カ
ルボキシアミノイミダゾール（ｃａｒｂｏｘｙｎａｍｉｎｏｌｍｉｄａｚｏｌｅ
）；およびメタロプロテイナーゼインヒビター（例えば、ＢＢ９４）。
【０５００】 （細胞レベルでの疾患） 本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアンタゴニストも
しくはアゴニストによって処置または検出され得る細胞生存の増大あるいはアポ
トーシスの阻害に関連する疾患には、癌（例えば、濾胞性リンパ腫、ｐ５３変異
を有する癌腫、およびホルモン依存性腫瘍、これらは以下：結腸癌、心臓腫瘍、
膵臓癌、黒色腫、網膜芽細胞腫、神経膠芽細胞腫、肺癌、腸癌、精巣癌、胃癌、
神経芽細胞腫、粘液腫、筋腫、リンパ腫、内皮腫、骨芽細胞腫、骨巨細胞腫、骨
肉腫、軟骨肉腫、腺腫、乳癌、前立腺癌、カポージ肉腫および卵巣癌を含むが、
これらに限定されない）；自己免疫障害（例えば、多発性硬化症、シェーグレン
症候群、橋本甲状腺炎、胆汁性肝硬変、ベーチェット病（Ｂｅｈｃｅｔ’ｓ ｄ
ｉｓｅａｓｅ）、クローン病、多発性筋炎、全身性エリテマトーデスおよび免疫
関連糸球体腎炎ならびに慢性関節リウマチ）およびウイルス感染（例えば、ヘル
ペスウイルス、ポックスウイルスおよびアデノウイルス）、炎症、対宿主性移植
片病、急性移植片拒絶、ならびに慢性移植片拒絶、が挙げられる。好ましい実施
形態において、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、および／またはアン
タゴニストは、特に上記に列挙される、癌の増殖、進行、および／または転移（
ｍｅｔａｓｉｓ）を阻害するために使用される。
【０５０１】 本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくは
アンタゴニストによって処置あるいは検出され得る細胞生存の増大に関連するさ
らなる疾患または状態には、悪性疾患の進行および／または転移ならびに以下の
ような関連する障害が挙げられるが、これらに限定されない：白血病（急性白血
病（例えば、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病（骨髄芽球性、前骨髄球性
、骨髄単球性、単球性および赤白血病を含む）を含む）ならびに慢性白血病（例
えば、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病および慢性リンパ球性白血病））、真性赤
血球増加症、リンパ腫（例えば、ホジキン病および非ホジキン病）、多発性骨髄
腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、Ｈ鎖病、ならびに固形腫瘍（
肉腫および癌腫（例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉
腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リ
ンパ管肉腫、リンパ管内皮腫、骨膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、
横紋筋肉腫、結腸癌腫、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細
胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気
管支原生癌、腎細胞癌、肝細胞癌腫、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胎生期癌、
ウィルムス腫瘍、頸部癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経
膠腫、神経膠星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、脳室上衣細胞腫、松果体腫
、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）
、黒色腫、神経芽細胞腫、および網膜芽細胞腫）を含むが、これらに限定されな
い）。
【０５０２】 本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしく
はアンタゴニストによって処置あるいは検出され得るアポトーシスの増大に関連
する疾患には、以下が挙げられる：ＡＩＤＳ；神経変性障害（例えば、アルツハ
イマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、色素性網膜炎、小脳変性およ
び脳腫瘍または以前に関連した疾患）；自己免疫障害（例えば、多発性硬化症、
シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、胆汁性肝硬変、ベーチェット病（Ｂｅｈｃ
ｅｔ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、クローン病、多発性筋炎、全身性エリテマトーデ
スおよび免疫関連糸球体腎炎ならびに慢性関節リウマチ）、脊髄形成異常症候群
（例えば、再生不良性貧血）、対宿主性移植片病、虚血性傷害（心筋梗塞、発作
および再灌流傷害によって生じるようなもの）、肝臓傷害（例えば、肝炎関連肝
臓傷害、虚血／再灌流傷害、胆汁うっ滞（ｃｈｏｌｅｓｔｏｓｉｓ）（胆管傷害
）および肝臓癌）；毒物誘導性肝臓疾患（アルコールによって引き起こされるよ
うなもの）、敗血症性ショック、悪液質ならびに食欲不振。
【０５０３】 （創傷治癒および上皮細胞増殖） 本発明のなおさらなる局面に従って、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペ
プチド、ならびにアンタゴニストまたはアゴニストを、治療目的のため、例えば
、創傷治癒の目的のために上皮細胞増殖および基底ケラチノサイトを刺激するた
め、ならびに毛包生成および皮膚創傷の治癒を刺激するために、利用するプロセ
スが提供される。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴ
ニストまたはアンタゴニストは、以下を含む創傷治癒を刺激する際に臨床的に有
用であり得る：外科的創傷、切除の創傷、深い創傷（真皮および表皮の損傷を含
む）、眼組織の創傷、歯組織の創傷、口腔創傷、糖尿病性潰瘍、皮膚の潰瘍、肘
の潰瘍、動脈の潰瘍、静脈うっ滞潰瘍、熱への曝露または化学物質から生ずる熱
傷、および他の異常な創傷治癒状態（例えば、尿毒症、栄養失調、ビタミン欠乏
、ならびにステロイド、放射線療法および抗腫瘍性薬物および代謝拮抗物質を用
いる全身性処置に関連する合併症。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチ
ド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストは、皮膚損失後の皮膚の回復を促
進するために使用され得る。
【０５０４】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはア
ンタゴニストは、創傷床（ｗｏｕｎｄ ｂｅｄ）への皮膚移植片の接着を増大す
るため、および創傷床からの再上皮形成を刺激するために使用され得る。以下は
、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、アゴニストまたはアンタゴニ
ストが創傷床への接着を増大するために使用され得る、移植片の型である：自家
移植片、人工皮膚、同種移植片（ａｌｌｏｇｒａｆｔ）、自己植皮片、自己表皮
移植片（ａｕｔｏｅｐｄｅｒｍｉｃ ｇｒａｆｔ）、無血管性（ａｖａｃｕｌａ
ｒ）移植片、ブレア−ブラウン移植片、骨移植片、胚胎組織移植片、真皮移植片
、遅延移植片、皮膚移植片、表皮移植片、筋膜移植片、全層皮膚移植片、異種移
植片（ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ ｇｒａｆｔ）、異種移植片（ｘｅｎｏｇｒａ
ｆｔ）、同種移植片（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｇｒａｆｔ）、増殖性移植片、層
板状移植片、網状移植片、粘膜移植片、オリエ−ティールシュ移植片、大網移植
片、パッチの移植片（ｐａｔｃｈ ｇｒａｆｔ）、茎状移植片、全層移植片（ｐ
ｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｇｒａｆｔ）、分層植皮片（ｓｐｌｉｔ ｓｋｉｎ ｇ
ｒａｆｔ）、分層植皮片（ｔｈｉｃｋ ｓｐｌｉｔ ｇｒａｆｔ）。本発明のポ
リヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニスト
は、皮膚の強度を助長するため、および加齢した皮膚の外見を改善するために使
用され得る。
【０５０５】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはア
ンタゴニストはまた、肝細胞増殖、および肺、乳房、膵臓、胃、小腸（ｓｍａｌ
ｌ ｉｎｔｅｓｔｉｎｇ）、および大腸における上皮細胞増殖における変化を生
じると考えられる。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにア
ゴニストもしくはアンタゴニストは、上皮細胞（例えば、皮脂細胞（ｓｅｂｏｃ
ｙｔｅ）、毛包、肝細胞、ＩＩ型肺胞上皮細胞（ｔｙｐｅ ＩＩ ｐｎｅｕｍｏ
ｃｙｔｅ）、ムチン産生杯細胞、および他の上皮細胞、ならびに皮膚、肺、肝臓
、および胃腸管内に含まれるそれらの前駆体）の増殖を促進し得る。本発明のポ
リヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニスト
は、内皮細胞、ケラチノサイト、および基底ケラチノサイトの増殖を促進し得る
。
【０５０６】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはア
ンタゴニストはまた、照射、化学療法処置またはウイルス感染から生じる腸の毒
性の副作用を低減するために使用され得る。本発明のポリヌクレオチドまたはポ
リペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストは、小腸粘膜に対して細
胞保護的な（ｃｙｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ）効果を有し得る。本発明のポリヌ
クレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストはま
た、化学療法およびウイルス感染から生じる粘膜炎（ｍｕｃｏｓｉｔｉｓ）（口
潰瘍）の治癒を刺激し得る。
【０５０７】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはア
ンタゴニストは、熱傷を含む、完全な厚さおよび部分的な厚さの皮膚欠損におけ
る皮膚の完全な再生（すなわち、毛包、汗腺、および皮脂腺の再増殖）、乾癬の
ような他の皮膚欠損の処置においてさらに使用され得る。本発明のポリヌクレオ
チドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストは、表皮水
疱症（これらの損傷の再上皮形成を促進することによる頻繁な開放性かつ疼痛性
の水疱を生じる、下層の真皮への表皮の接着の欠損）を処置するために使用され
得る。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまた
はアンタゴニストはまた、胃潰瘍および十二指腸（ｄｏｕｄｅｎａｌ）潰瘍を処
置し、そして粘膜の内層の瘢痕形成ならびに腺の粘膜および十二指腸の粘膜の内
層の再生による治癒を、より迅速に補助するために使用され得る。炎症性腸疾患
、例えば、クローン病および潰瘍性大腸炎は、それぞれ、小腸または大腸の粘膜
表面の破壊を生じる疾患である。従って、本発明のポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストは、粘膜表面の再表面形成
（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）を促進して、より迅速な炎症性腸疾患の治癒を補助
し、そして炎症性腸疾患の進行を予防するために、使用され得る。本発明のポリ
ヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストを
用いる処置は、胃腸管全体の粘液の産生に対して有意な効果を有すると予期され
、そして摂取された有害な物質からかまたは外科手術後に、腸粘膜を有害な物質
から保護するために使用され得る。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチ
ド、ならびにアゴニストまたアンタゴニストは、その発現不足に関連する疾患を
処置するために使用され得る。
【０５０８】 さらに、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニスト
またはアンタゴニストは、種々の病的状態に起因する肺への損傷を予防および治
癒するために使用され得る。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、な
らびにアゴニストまたはアンタゴニストは、急性または慢性の肺損傷を予防また
は処置するために、肺胞および細気管支（ｂｒｏｃｈｉｏｌａｒ）上皮の増殖お
よび分化を刺激し得、そしてその修復を促進し得る。例えば、肺胞（ａｖｅｏｌ
ｉ）の進行性の損失を生じる気腫、および細気管支上皮および肺胞の壊死を生じ
る吸入傷害（ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ）（すなわち、煙の吸入およ
び熱傷から生じる）は、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、アゴニ
ストまたはアンタゴニストを使用して、効果的に処置され得る。また、本発明の
ポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニス
トは、ＩＩ型肺胞上皮細胞の増殖および分化を刺激するために使用され得、これ
は、未熟な乳児における肺硝子膜症（例えば、乳児呼吸窮迫症候群および気管支
肺異形成症）のような疾患を処置または予防するのを助け得る。
【０５０９】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはア
ンタゴニストは、肝細胞の増殖および分化を刺激し得、従って、肝臓の疾患およ
び病状（例えば、肝硬変により生じる劇症肝不全、ウイルス性肝炎および毒性物
質（すなわち、アセトアミノフェン、四塩化炭素（ｃａｒｂｏｎ ｔｅｔｒａｈ
ｏｌｏｒｉｄｅ）、および当該分野で公知の他の肝臓毒素）により生じる肝臓損
傷）を緩和または処置するために用いられ得る。
【０５１０】 さらに、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニスト
またはアンタゴニストは、真性糖尿病の発症を処置または予防するために使用さ
れ得る。新たにＩ型糖尿病およびＩＩ型糖尿病と診断された患者において、いく
らかの島細胞機能が残っている場合、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプ
チド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストは、その疾患の永続的な発現を
、緩和、遅延または予防するように、その島機能を維持するために使用され得る
。また、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストま
たはアンタゴニストは、島細胞機能を改善または促進するための島細胞移植にお
ける補助として使用され得る。
【０５１１】 （神経活性および神経学的疾患） 本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチドおよびアゴニストまたはアンタゴニ
ストは、脳および／または神経系の疾患、障害、損傷または傷害の診断および／
または処置のために用いられ得る。本発明の組成物（例えば、免疫グロブリンス
ーパーファミリーポリペプチド、ポリヌクレオチド、および／またはアゴニスト
もしくはアンタゴニスト）を用いて処置され得る神経系の障害としては、軸索の
切断、ニューロンの減少もしくは変性、または脱髄のいずれかを引き起こす、神
経系損傷および、疾患または障害が挙げられるが、これらに限定されない。本発
明に従って、患者（ヒト患者および非ヒト哺乳動物患者を含む）において処置、
予防および／または診断され得る神経系病変には、以下、または中枢神経系（脊
髄、脳を含む）もしくは末梢神経系のいずれかの病変が挙げられるが、これらに
限定されない：（１）虚血病変（ここで、神経系の一部における酸素不足により
、ニューロンの損傷または死が生じ、これには大脳梗塞もしくは虚血、または脊
髄梗塞もしくは虚血が挙げられる）；（２）外傷病変（身体的損傷により生じる
かまたは手術に関連する病変、例えば、神経系の一部分を切断する病変、または
圧縮損傷を含む）；（３）悪性病変（ここで、神経系の一部分は、神経系関連悪
性疾患もしくは非神経系組織由来の悪性疾患のいずれかである悪性組織により破
壊または損傷される）；（４）感染性病変（ここで、神経系の一部分は、例えば
、膿瘍による感染の結果として、破壊または損傷されるか、あるいはヒト免疫不
全ウイルス、帯状ヘルペスもしくは単純ヘルペスウイルスによる感染と関連する
か、ライム病、結核、梅毒に関連する）；（５）変性病変（ここで、神経系の一
部分は、変性プロセスの結果として破壊または損傷され、これには、パーキンソ
ン病、アルツハイマー病、ハンティングトン病または筋萎縮性側索硬化症（ＡＬ
Ｓ）に関連する変性が挙げられるが、これらに限定されない）；（６）栄養性の
疾患、障害および／または状態に関連する病変（ここで、神経系の一部分は、栄
養障害または代謝障害によって破壊または損傷され、これには、ビタミンＢ１２
欠乏症、葉酸欠乏症、ヴェルニッケ病、タバコ−アルコール弱視、マルキアファ
ーヴァ−ビニャーミ病（脳梁の一次変性）およびアルコール小脳変性が挙げられ
るが、これらに限定されない）；（７）全身性疾患に関連する神経性病変（糖尿
病（糖尿病性ニューロパシー、ベル麻痺）、全身性エリテマトーデス、癌または
類肉腫症が挙げられるが、これらに限定されない）；（８）毒性物質（アルコー
ル、鉛または特定の神経毒を含む）により生じる病変；ならびに（９）脱髄性病
変（ここで、神経系の一部分は、脱髄性執権によって破壊または損傷され、これ
には、多発性硬化症、ヒト免疫不全ウイルス関連脊髄障害、横断脊髄障害または
種々の病因、進行性多病巣性白質脳障害、および橋中央ミエリン溶解が挙げられ
るが、これらに限定されない）。
【０５１２】 １つの実施形態において、本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、または
アゴニストもしくはアンタゴニストは、低酸素症の損傷効果から神経細胞を保護
するために用いられる。さらに好ましい実施形態において、本発明のポリペプチ
ド、ポリヌクレオチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストは、大脳底酸
素症の損傷効果から神経細胞を保護するために用いられる。この実施形態による
と、本発明の組成物は、大脳底酸素症に関連する神経細胞損傷を処置、予防およ
び／または診断するために用いられる。この実施形態の１つの局面において、本
発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニ
ストは、大脳虚血と関連する神経細胞損傷を処置、予防および／または診断する
ために用いられる。この実施形態の別の局面において、本発明のポリペプチド、
ポリヌクレオチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストは、大脳梗塞に関
連する神経細胞損傷を処置、予防および／または診断するために用いられる。
【０５１３】 別の好ましい実施形態において、本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、
またはアゴニストもしくはアンタゴニストを用いて、卒中（ｓｔｒｏｋｅ）に関
連する神経細胞損傷を処置または予防する。特定の実施形態において、本発明の
ポリペプチド、ポリヌクレオチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストは
、卒中に関連する脳神経細胞損傷を処置または予防するために用いられる。
【０５１４】 別の好ましい実施形態において本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、ま
たはアゴニストもしくはアンタゴニストは、心臓発作に関連する神経細胞損傷を
処置、予防および／または診断もしくは予防するために用いられる。特定の実施
形態において、本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、またはアゴニストも
しくはアンタゴニストは、心臓発作に関連する神経細胞損傷を処置または予防す
るために用いられる。
【０５１５】 神経系障害を処置または予防するのに有用な本発明の組成物は、ニューロンの
生存または分化の促進における生物学的活性について試験することによって、選
択され得る。例えば、制限する目的ではないが、以下の効果のいずれかを誘発す
る本発明の組成物は、本発明によると有用であり得る：（１）培地におけるニュ
ーロンの増加した生存時間；（２）培地またはインビボにおけるニューロンの増
加した出芽；（３）培地またはインビボにおけるニューロン関連分子（例えば、
運動ニューロンに関して、コリンアセチルトランスフェラーゼまたはアセチルコ
リンステラーゼ）の増加した産生；あるいは（４）インビボにおけるニューロン
機能障害の軽減した症状。このような効果は、当該分野で公知の任意の方法によ
って測定され得る。好ましくは、非制限的な実施形態において、ニューロンの増
加した生存時間は、本明細書中に記載される方法、またはそうでなければ当該分
野で公知の方法（例えば、Ｚｈａｎｇら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃ
ｉ ＵＳＡ ９７：３６３７〜４２（２０００）またはＡｒａｋａｗａら（Ｊ．
Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１０：３５０７〜３５１５（１９９０））に記載される方法
）を使用して慣用的に測定され得；ニューロンの増加した出芽は、当該分野で公
知の方法（例えば、Ｐｅｓｔｒｏｎｋら（Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．７０：６５〜
８２（１９８０））またはＢｒｏｗｎら（Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．
４：１７〜４２（１９８１））に記載される方法）によって検出され得；ニュー
ロン関連分子の増加した産生は、当該分野で公知の技術を使用し、測定されるべ
き分子に基づいて、バイオアッセイ、酵素アッセイ、抗体結合、ノザンブロット
アッセイなどによって、測定され得；そして運動ニューロンの機能障害は、運動
ニューロン障害の物理的発現（例えば、弱さ、運動ニューロンの伝導速度、また
は機能障害）を評価することによって、測定され得る。
【０５１６】 特定の実施形態において、本発明に従って処置、予防および／または診断され
得る運動ニューロンの障害には、運動ニューロンおよび神経系の他の成分に影響
を与え得る障害（例えば、梗塞、感染、毒素への暴露、外傷、外科的損傷、変性
疾患、または悪性疾患）、ならびにニューロンに選択的に影響する障害（例えば
、筋萎縮性側索硬化症）が挙げられるが、これらに限定されず、そしてこれには
、進行性脊髄性筋萎縮症、進行性球延髄麻痺、原発性側索硬化症、小児筋萎縮お
よび若年性筋萎縮、小児期の進行性球麻痺（ファチオ−ロンデ病）、ポリオおよ
びポリオ後症状、ならびに遺伝性運動感覚性神経障害（シャルコー−マリー−ト
ゥース病）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０５１７】 さらに、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、ニューロン生存、
シナプス形成；伝達；神経分化などにおいて役割を果たし得る。従って、本発明
の組成物（ポリヌクレオチド、ポリペプチド、およびアゴニストまたはアンタゴ
ニストを含む）は、学習および/または認識の障害を含むがこれに限定されない
、これらの役割に関連する疾患または障害を、診断、および/または処置または
予防するのに用いられ得る。本発明の組成物は、神経変性性疾患状態および/ま
たは行動障害の処置または予防において有用であり得る。このような神経変性性
疾患状態および/または行動障害としては以下が挙げられるがこれらに限定され
ない：アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、ツレット症候群、
髄膜炎、精神分裂病、躁病、痴呆、偏執症、強迫性障害、鬱病、恐慌性障害、学
習障害、ＡＬＳ、精神病、自閉、および行動変化（栄養補給、睡眠パターン、平
衡、および知覚の障害を含む）。さらに、本発明の組成物は、発生中の胚、また
は伴性障害に関連する発生の障害の処置、予防および/または検出において役割
を果たし得る。
【０５１８】 さらに、本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、および/またはアゴニス
トまたはアンタゴニストは、以下を含むが挙げられるがこれらに限定されない脳
血管障害に関連する、疾患、傷害、障害または、損傷から、神経細胞を防御する
のに有用であり得る：脳血管障害（例えば、頸動脈血栓症、頸動脈狭窄およびモ
ヤモヤ病を含む頸動脈疾患）、脳のアミロイドアンギオパチー、大脳動脈瘤、脳
低酸素症、大脳動脈硬化症、大脳動静脈奇形、大脳動脈疾患、脳塞栓症および血
栓（例えば、頸動脈血栓症、洞血栓症およびヴァレンベルク症候群）、硬膜上血
腫（例えば、硬膜外血腫または硬膜下血腫およびクモ膜下出血）、脳亀裂骨折、
脳虚血（例えば、一過性脳虚血、鎖骨下動脈盗血症候群、または椎骨脳底不全（
ｖｅｒｔｅｂｒｏｂａｓｉｌａｒ ｉｎｓｕｆｆｉｃｉｅｎｃｙ））、血管性痴
呆（たとえば、多発脳梗塞性痴呆）、脳室周囲白質軟化症、ならびに血管性頭痛
（例えば、群発性頭痛）。
【０５１９】 本発明のなおさらなる局面によれば、治療目的で、神経学的細胞増殖および/
または分化を刺激するために、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、
ならびにアゴニストまたはアンタゴニストを利用するためのプロセスが提供され
る。従って、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび/ま
たはアンタゴニストは、神経学的疾患を処置、および/または検出するために用
いられ得る。さらに、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、または
アゴニストもしくはアンタゴニストは、特定の神経系疾患または傷害のマーカー
または検出因子として用いられ得る。
【０５２０】 本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび/またはアンタ
ゴニストを用いて処置または検出され得る神経学的疾患の例としては、以下が挙
げられる：脳疾患（例えば、母系フェニルケトン尿症のようなフェニルケトン尿
症を含む代謝性脳疾患）、ピルビン酸カルボキシラーゼ欠乏症、ピルビン酸デヒ
ドロゲナーゼ複合体欠乏症、ヴェルニッケ脳障害、脳水腫、テント下（ｉｎｆｒ
ａｔｅｎｔｏｒｉａｌ）新生物を含む小脳性新生物のような脳新生物、脈絡叢新
生物のような脳室新生物、視床下部性新生物、テント上新生物、キャナヴァン病
、毛細血管拡張性運動失調のような脊髄小脳性退化を含む小脳性運動失調のよう
な小脳疾患、小脳性共同運動障害、フリードライヒ失調症、マチャド−ジョセフ
病、オリーブ橋小脳萎縮、テント下新生物のような小脳性新生物、びまん性軸周
囲性脳炎、球様細胞白質萎縮症、異染性白質萎縮症および亜急性硬化性汎脳炎の
ようなびまん性脳硬化。
【０５２１】 本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび/またはアンタ
ゴニストは、を用いて処置または検出され得るさらなる神経学的疾患としては、
以下が挙げられる：脳血管障害（例えば、頸動脈血栓症、頸動脈狭窄およびモヤ
モヤ病を含む頸動脈疾患）、脳のアミロイドアンギオパチー、大脳動脈瘤、大脳
動脈硬化症、大脳動静脈奇形、大脳動脈疾患、頸動脈血栓症、洞血栓症およびヴ
ァレンベルク症候群のような脳塞栓症および血栓症、硬膜上血腫、硬膜下血腫お
よびクモ膜下出血のような脳出血、脳亀裂骨折、一過性脳虚血、鎖骨下動脈盗血
症候群および椎骨脳底不全（ｖｅｒｔｅｂｒｏｂａｓｉｌａｒ ｉｎｓｕｆｆｉ
ｃｉｅｎｃｙ）のような脳虚血、多発脳梗塞性痴呆のような血管性痴呆、脳室周
囲白質軟化症、群発性頭痛のような血管性頭痛。
【０５２２】 本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび/またはアンタ
ゴニストを用いて処置または検出され得るさらなる神経学的疾患としては以下が
挙げられる：エイズ痴呆複合症のような痴呆症、アルツハイマー病およびクロイ
ツフェルト−ヤーコプ病のような初老期痴呆、アルツハイマー病および進行性核
上性麻痺のような老年痴呆、多発脳梗塞性痴呆のような血管性痴呆、びまん性軸
周囲性脳炎のような脳炎、流行性脳炎、日本脳炎、セントルイス脳炎、マダニ媒
介性脳炎および西ナイル熱のようなウイルス性脳炎、急性播種性脳脊髄炎、ブド
ウ膜髄膜炎症候群、脳炎後パーキンソン病および亜球性硬化性汎脳炎のような髄
膜脳脊髄炎、室周白斑症のような脳軟化症、点頭痙攣を含む全身てんかんのよう
なてんかん、アプサンスてんかん（ａｂｓｅｎｃｅ ｅｐｉｌｅｐｓｙ）、ＭＥ
ＲＲＦ症候群を含むミオクローヌスてんかん、強直・間代てんかん、複雑部分て
んかん、前頭葉てんかんおよび側頭葉てんかんのような部分てんかん、外傷後て
んかん、持続性部分てんかんのようなてんかん重積持続状態、ハレルフォルデン
−シュパッツ症候群。
【０５２３】 本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび/またはアンタ
ゴニストを用いて処置または検出され得るさらなる神経学的疾患としては、以下
が挙げられる：ダンディ−ウォーカー症候群および正常圧水頭症のような水頭症
、視床下部性新生物のような視床下部性疾患、大脳マラリア、脱力発作を含むナ
ルコレプシー、延髄ポリオ（ｂｕｌｂａｒ ｐｏｉｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）、大脳
偽腫瘍、レット症候群、ライ症候群、視床疾患、大脳トキソプラスマ症、頭蓋内
結核腫およびツェルヴェーガー症候群、エイズ痴呆複合症のような中枢神経系感
染、脳膿瘍、硬膜下蓄膿症、ウマの脳脊髄炎のような脳脊髄炎、ベネズエラウマ
脳脊髄炎、壊死性出血性脳脊髄炎、ビスナ、ならびに大脳マラリア。
【０５２４】 本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび/またはアンタ
ゴニストを用いて処置または検出され得るさらなる神経学的疾患としては、以下
が挙げられる：クモ膜炎のような髄膜炎、リンパ球性脈絡髄膜炎を含むウイルス
性髄膜炎のような無菌性髄膜炎、ヘモフィルス髄膜炎を含む細菌性髄膜炎、リス
テリア髄膜炎、ウォーターハウス−フリーデリックセン症候群のような髄膜炎菌
性脳脊髄膜炎、肺炎球菌髄膜炎および髄膜結核症、クリプトコックス髄膜炎のよ
うな真菌性髄膜炎、硬膜下滲出、ブドウ膜髄膜脳炎症候群のような髄膜脳炎、横
行脊髄炎（ｔｒａｎｓｖｅｒｓｅ ｍｙｅｌｉｔｉｓ）のような脊髄炎、脊髄ろ
うのような神経梅毒、延髄ポリオおよびポリオ後症候群を含むポリオ、プリオン
病（例えば、クロイツフェルト−ヤーコプ病、ウシの海綿状脳症、ゲルストコン
−シュトロイスラー症候群、クールー、スクラピー）、ならびに大脳トキソプラ
スマ症。
【０５２５】 本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび/またはアンタ
ゴニストを用いて処置または検出され得るさらなる神経学的疾患としては、以下
が挙げられる：テント下新生物のような小脳性新生物を含む脳新生物のような中
枢神経系新生物、脈絡叢新生物、視床下部性新生物およびテント上新生物のよう
な脳室新生物、髄膜新生物、硬膜外新生物を含む脊髄新生物、キャナヴァン病の
ような脱髄疾患、副腎脳白質ジストロフィーを含むびまん性大脳硬化症（ｄｉｆ
ｆｕｓｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｓｃｅｌｏｒｉｓ）、びまん性軸周囲性脳炎、球
様細胞白質萎縮症、異染性白質萎縮症のようびまん性大脳硬化症、アレルギー性
脳脊髄炎、壊死性出血性脳脊髄炎、進行性多病巣性白質脳障害、多発性硬化症、
橋中央ミエリン溶解、横行脊髄炎、視神経脊髄炎、スクラピー、脊柱前弯症、慢
性疲労症候群、ビスナ、高圧神経質症候群（Ｈｉｇｈ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ Ｎｅ
ｒｖｏｕｓ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、髄膜症、先天性筋無緊張症のような脊髄疾患
、筋萎縮性側索硬化症、ヴェルドニッヒ−ホフマン病のような棘筋萎縮、脊髄圧
搾、硬膜外新生物のような脊髄新生物、脊髄空洞症、脊髄ろう、スティッフマン
症候群、母親由来１５ ｑ‐１３微少欠損のような精神遅滞、ネコ鳴き症候群、
ド・ランゲ症候群、ダウン症候群、ガングリオシドーシスＧ（Ｍ１）のようなガ
ングリオシドーシス、ザントホフ病、テイ−サックス病、ハートナップ病、ホモ
シスチン尿症、ローレンス−ムーン−ビードル症候群、レッシュ−ナイハン症候
群、カエデシロップ病、フコース蓄積症のようなムコリピドーシス、ニューロン
セロイド脂褐素沈着症、眼脳腎症候群、母系フェニルケトン尿のようなフェニル
ケトン尿症、プラーダー−ヴィリ症候群、レット症候群、ルービンスタイン−テ
ービ症候群、結節硬化症、ＷＡＧＲ症候群、全前脳症のような神経系異常、水無
能症（ｈｙｄｒａｎｇｅｎｃｅｐｈａｌｙ）を含む無能症のような神経管不全、
アルノルト−キアーリ奇形、脳ヘルニア、髄膜瘤、髄膜脊髄瘤、嚢胞性二分脊椎
および潜在性二分脊椎のような脊髄癒合不全。
【０５２６】 本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび/またはアンタ
ゴニストを用いて処置または検出され得るさらなる神経学的疾患としては、以下
が挙げられる：シャルコー−マリー疾患を含む遺伝性の運動および感覚ニューロ
ン障害、視覚萎縮症、レフスム病、遺伝性痙性対麻痺、ヴェルドニッヒ−ホフマ
ン病、先天性痛覚脱失症および家族性自律神経障害のような遺伝性感覚および自
律性ニューロパシー、神経学的症状発現（例えば、ゲルストマン症候群を含む失
認）、逆向性健忘症のような健忘症、失行症、神経因性膀胱、脱力発作、難聴、
部分聴覚欠失および大声（ｌｕｄｎｅｓｓ）レクルートメントおよび耳鳴を含む
聴覚障害のような情報伝達障害、失書症、ブロカ失語症およびヴェルニッケ失語
症を含む失語症のような言語障害、急性失読症のような失読症、言語発達障害、
名称失語症、ブロカ失語症およびヴェルニッケ失語症を含む失語症のような発語
障害、蓄積障害、構語障害、反響言語、無言症およびどもりを含む発語障害のよ
うな情報伝達障害、失声症および嗄声のような発声障害、除脳硬直状態、せん妄
、線維束性攣縮、幻覚、髄膜症、母親由来１５ ｑ‐１３微少欠損、運動失調、
アテトーシス、舞踏病、失調症、運動低下症、筋肉緊張低下、ミオクローヌス、
チック、斜頸および振せんのような運動障害、スティッフマン症候群のような筋
肉硬直のような筋肉緊張亢進、筋肉痙性、耳帯状疱疹を含む顔面神経麻痺のよう
な神経麻痺、胃不全麻痺、片麻痺、複視のような眼筋麻痺、デュエーン症候群、
ホルナー症候群、キーンズ症候群のような慢性進行性外眼筋麻痺症、球麻痺、熱
帯性痙攣不全対麻痺、ブラウン−セカール症候群、四肢麻痺、呼吸麻痺および声
帯麻痺のような対麻痺、不全麻痺、幻肢、無味覚症および味覚不全のような味覚
障害、弱視、失明、色覚異常、複視、半盲、視野暗点および準正常視覚（ｓｕｂ
ｎｏｒｍａｌ ｖｉｓｉｏｎ）のような視覚障害、クライネ−レヴィン症候群、
不眠症および夢遊症を含む過眠症のような睡眠障害、開口障害のような痙縮、昏
睡、持続性植物状態および失神およびめまいのような意識消失、先天性筋無緊張
症のような神経筋疾患、筋萎縮性側索硬化症、ランバート−イートン筋無力症症
候群、運動神経疾患、棘筋萎縮、シャルコー−マリー疾患およびヴェルドニッヒ
−ホフマン病のような筋萎縮、後ポリオ症候群、筋ジストロフィー、重症筋無力
症、萎縮性筋緊張症、先天性筋緊張症、ネマリンミオパシー、家族性期性四肢麻
痺、多発性パラミロクローヌス（Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ Ｐａｒａｍｙｌｏｃｌｏ
ｎｕｓ）、熱帯性痙攣不全対麻痺およびスティッフマン症候群、先端肢端疼痛症
のような末梢神経系疾患、腎アミロイドーシス、アーディー症候群、Ｂａｒｒｅ
−Ｌｉｅｏｕ症候群、家族性自律神経障害、ホルナー症候群、反射性交感神経性
ジストロフィーおよびシャイ−ドレーガー症候群のような自律神経系疾患、神経
線維腫症２を含む聴神経腫のような内耳神経疾患のような脳神経疾患、顔面神経
痛のような顔面神経疾患、メルカーソン−ローゼンタール症候群、弱視を含む眼
球運動性障害、眼振、眼球運動麻痺、デュエーン症候群のような眼筋麻痺、ホル
ナー症候群、キーンズ症候群を含む慢性進行性外眼筋麻痺症、内斜視および外斜
視のような斜視、動眼神経麻痺、遺伝性眼萎縮症を含む眼萎縮症のような眼神経
疾患、視神経円板結晶腔、視神経脊髄炎のような視神経炎、乳頭水腫、三叉神経
痛、声帯麻痺、視神経脊髄炎および脊柱前弯症のような脱髄疾患、糖尿病性足の
ような糖尿病性ニューロパシー。
【０５２７】 本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび/またはアンタ
ゴニストを用いて処置または検出され得るさらなる神経学的疾患としては、以下
が挙げられる：手根管症候群のような神経圧搾症候群、足根管症候群、頸肋症候
群のような胸郭出口症候群、尺骨神経圧搾症候群、カウザルギー、頸腕神経痛、
顔面神経痛および三叉神経痛のような神経痛、実験的アレルギー性神経炎、眼神
経炎、多発性神経炎、多発性神経根神経炎および神経根炎（例えば、多発性神経
根炎、遺伝性運動および感覚ニューロパシー（例えば、シャルコー−マリエ疾患
、遺伝性眼萎縮症、レフサム病、遺伝性痙性対麻痺およびヴェルドニッヒ‐ホフ
マン病、遺伝性感覚および自律神経ニューロパシー（先天性痛覚脱失および．家
族性自律神経障害を含む）、ＰＯＥＭＳ症候群、坐骨神経痛、味覚性発汗症候群
およびテタニー））のような神経炎。
【０５２８】 （感染性疾患） 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはア
ンタゴニストは、感染因子を処置または検出するために用いられ得る。例えば、
免疫応答を上昇させることによって、特にＢ細胞および／またはＴ細胞の増殖お
よび分化を増加させることによって、感染性疾患が処置され得る。免疫応答は、
既存の免疫応答を上昇させるか、または新たな免疫応答を開始させるかのいずれ
かにより上昇され得る。あるいは、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチ
ド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストはまた、必ずしも免疫応答を誘発
することなく、感染因子を直接阻害し得る。
【０５２９】 ウイルスは、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびに／ある
いはアゴニストまたはアンタゴニストにより処置または検出され得る疾患または
症状を引き起こし得る感染因子の一例である。ウイルスの例としては、以下のＤ
ＮＡおよびＲＮＡのウイルスおよびウイルス科が挙げられるがこれらに限定され
ない：アルボウイルス、アデノウイルス科、アレナウイルス科、アルテリウイル
ス、ビルナウイルス科、ブンヤウイルス科、カルシウイルス科、サルコウイルス
科（Ｃｉｒｃｏｖｉｒｉｄａｅ）、コロナウイルス科、デング熱、ＥＢＶ、ＨＩ
Ｖ、フラビウイルス科、ヘパドナウイルス科（肝炎）、ヘルペスウイルス科（例
えば、サイトメガロウイルス、単純ヘルペス、ヘルペス帯状疱疹）、モノネガウ
イルス（Ｍｏｎｏｎｅｇａｖｉｒｕｓ）（例えば、パラミクソウイルス科、麻疹
ウイルス、ラブドウイルス科）、オルソミクソウイルス科（例えば、インフルエ
ンザＡ、インフルエンザＢ、およびパラインフルエンザ）、パピローマウイルス
、パポバウイルス科、パルボウイルス科、ピコルナウイルス科、ポックスウイル
ス科（例えば、痘瘡またはワクシニア）、レオウイルス科（例えば、ロタウイル
ス）、レトロウイルス科（ＨＴＬＶ−Ｉ、ＨＴＬＶ−ＩＩ、レンチウイルス）、
およびトガウイルス科（例えば、ルビウイルス属）。これらの科内に入るウイル
スは、以下を含むがこれらに限定されない種々の疾患または症状を引き起こし得
る：関節炎、細気管支炎（ｂｒｏｎｃｈｉｏｌｌｉｔｉｓ）、呼吸性シンシチウ
ムウイルス、脳炎、眼性感染症（例えば、結膜炎、角膜炎）、慢性疲労症候群、
肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｅ型、慢性活動性、デルタ）、日本脳炎、アルゼンチ
ン出血熱、チングニア、リフトバレー熱、黄熱病、髄膜炎、日和見感染症（例え
ば、ＡＩＤＳ）、肺炎、バーキットリンパ腫、水痘、出血熱、麻疹、流行性耳下
腺炎、パラインフルエンザ、狂犬病、感冒、ポリオ、白血病、風疹、性感染症、
皮膚病（例えば、カポージ、いぼ）、およびウイルス血症。本発明のポリペプチ
ドもしくはポリヌクレオチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストを用い
て、任意のこれらの症状または疾患が処置または検出され得る。特定の実施形態
において、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、またはアゴニストもしく
はアンタゴニストは、以下の処置に使用される：髄膜炎、デング熱、ＥＢＶ、お
よび／または肝炎（例えば、Ｂ型肝炎）。さらなる具体的な実施形態において、
本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴ
ニストは、１以上の他の市販の肝炎ワクチンに非応答性の患者を処置するために
使用される。さらに具体的な実施形態において、本発明のポリヌクレオチド、ポ
リペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストは、ＡＩＤＳを処置する
ために使用される。
【０５３０】 同様に、疾患または症状を引き起こし得、かつ本発明のポリヌクレオチドまた
はポリペプチド、ならびに／またはアゴニストまたはアンタゴニストによって処
置または検出され得る細菌性因子あるいは真菌性因子は、以下のグラム陰性およ
びグラム陽性細菌および細菌科ならびに真菌を含むがこれらに限定されない：Ａ
ｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ（例えば、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｍ
ｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｎｏｒｃａｒｄｉａ）、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ
ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｏｓｉｓ、Ｂａｃｉｌｌａｃｅａ
ｅ（例えば、Ａｎｔｈｒａｘ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄ
ａｃｅａｅ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｏｓｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｂｏｒｒｅ
ｌｉａ（例えば、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、Ｂｒｕｃｅｌ
ｌｏｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄｉａｓｉｓ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｃｏｃｃ
ｉｄｉｏｉｄｏｍｙｃｏｓｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｏｓｉｓ、Ｄｅｒｍａｔ
ｏｃｙｃｏｓｅｓ、Ｅ．ｃｏｌｉ（例えば、Ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃ
Ｅ．ｃｏｌｉおよびＥｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｅ
ｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｓａｌｍｏｎｅ
ｌｌａ（例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ、およびＳａｌｍｏｎｅｌ
ｌａ ｐａｒａｔｙｐｈｉ）、Ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、Ｅｒｙ
ｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌｏｓ
ｉｓ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒｏｓｉｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ
ｔａｌｅｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈ
ｏｌｅｒａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｃｅａｅ（例えば、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔ
ｅｒ、Ｇｏｎｏｒｒｈｅａ、Ｍｅｎｉｇｏｃｏｃｃａｌ）、Ｍｅｉｓｓｅｒｉａ
ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｃｅａの感染症（例えば
、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｈｅａｍｏｐｈｉｌｕｓ（例えば、Ｈｅａｍ
ｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｂ型）、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）、Ｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｃｅａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｃ
ｅａｅ、Ｓｙｐｈｉｌｉｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｐｐ．、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃ
ｏｃｃａｌ、Ｍｅｎｉｎｇｉｏｃｏｃｃａｌ、Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃａｌおよび
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕ
ｍｏｎｉａｅおよびＢ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）。これらの細菌または真
菌の科は、以下を含むがこれらに限定されない疾患または症状を引き起こし得る
：菌血症、心内膜炎、眼感染症（結膜炎、結核、ブドウ膜炎）、歯肉炎、日和見
感染症（例えば、ＡＩＤＳに関連した感染症）、爪周囲炎、プロテーゼ関連感染
症、ライター病、気道感染症（例えば、百日咳または蓄膿症）、敗血症、ライム
病、ネコ引っ掻き病、赤痢、パラチフス熱、食中毒、腸チフス、肺炎、淋病、髄
膜炎（例えば、髄膜炎Ａ型およびＢ型）、クラミジア、梅毒、ジフテリア、ライ
病、パラ結核、結核、狼瘡、ボツリヌス中毒、壊疽、破傷風、膿痂疹、リウマチ
熱、猩紅熱、性感染病、皮膚病（例えば、蜂巣炎、皮膚真菌症（ｄｅｒｍａｔｏ
ｃｙｃｏｓｅｓ））、毒血症、尿路感染症、創傷感染症。本発明のポリペプチド
もしくはポリヌクレオチド、アゴニストもしくはアンタゴニストを用いて、任意
のこれらの症状もしくは疾患を処置または検出し得る。具体的な実施形態におい
て、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストまたはアンタゴニス
トは、以下を処置するために使用される：破傷風、ジフテリア、ボツリヅム、お
よび／またはＢ型髄膜炎。
【０５３１】 さらに、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、および／またはア
ゴニストもしくはアンタゴニストにより処置または検出され得る、寄生生物性因
子が引き起こす疾患または症状としては以下のファミリーまたはクラスが挙げら
れるがこれらに限定されない：アメーバ症、バベシア症、コクシジウム症、クリ
プトスポリジウム症、二核アメーバ症（Ｄｉｅｎｔａｍｏｅｂｉａｓｉｓ）、交
疫、外部寄生生物性、ジアルジア鞭毛虫症、蠕虫症、リーシュマニア症、タイレ
リア症、トキソプラスマ症、トリパノソーマ症、およびトリコモナス（Ｔｒｉｃ
ｈｏｍｏｎａｓ）症、ならびに胞子虫症（Ｓｐｏｒｏｚｏａｎ）（例えば、Ｐｌ
ａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｒａｘ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｉｕ
ｍ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｍａｌａｒｉａｅおよびＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｏ
ｖａｌｅ）。これらの寄生生物は、以下を含むがこれらに限定されない種々の疾
患または症状を引き起こし得る：疥癬、ツツガムシ病、眼性感染症、腸疾患（例
えば、赤痢、ジアルジア鞭毛虫症）、肝臓疾患、肺疾患、日和見感染症（例えば
、ＡＩＤＳ関連）、マラリア、妊娠合併症、およびトキソプラスマ症。本発明の
ポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニ
ストを用いて、任意のこれらの症状または疾患を処置または検出し得る。
【０５３２】 本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしく
はアンタゴニストは、患者に有効量のポリペプチドを投与するか、または患者か
ら細胞を取り出して、本発明のポリヌクレオチドをこの細胞に供給し、そして操
作した細胞を患者に戻す（エキソビボ治療）かのいずれかによるものであり得る
。さらに、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドはワクチン中の抗原と
して用いられて、感染性疾患に対する免疫応答を惹起し得る。
【０５３３】 （再生） 本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしく
はアンタゴニストを用いて、細胞を分化させ、増殖させ、そして誘引して、組織
の再生を導き得る（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７６：５９−８７（１９９７）を参照の
こと）。組織の再生を用いて、先天性欠損、外傷（創傷、熱傷、切開、または潰
瘍）、加齢、疾患（例えば、骨粗鬆症、変形性関節炎（ｏｓｔｅｏｃａｒｔｈｒ
ｉｔｉｓ）、歯周病、肝不全）、美容形成手術を含む手術、線維症、再灌流傷害
、もしくは全身性サイトカイン損傷により損傷を受けた組織を修復、置換、また
は保護し得る。
【０５３４】 本発明を用いて再生し得る組織としては、以下が挙げられる：器官（例えば、
膵臓、肝臓、腸、腎臓、皮膚、内皮）、筋肉（平滑筋、骨格筋、または心筋）、
血管系（血管およびリンパ管を含む）、神経、造血、および骨格（骨、軟骨、腱
、および靭帯）の組織。好ましくは、再生は、瘢痕なく、または瘢痕が低減され
て生じる。再生はまた、新脈管形成を含み得る。
【０５３５】 さらに、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニス
トもしくはアンタゴニストは、治癒するのが困難な組織の再生を増加させ得る。
例えば、腱／靭帯の再生を増大させることによって、損傷後の回復時間が早まる
。本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしく
はアンタゴニストはまた、損傷を回避する試みにおいて予防的に使用され得る。
処置され得る特定の疾患は、腱炎、手根管症候群、および他の腱欠損または靭帯
欠損を含む。非治癒創傷の組織再生のさらなる例としては、褥瘡性潰瘍、脈管不
全、外科的創傷、および外傷性創傷に関連する潰瘍が挙げられる。
【０５３６】 同様に、神経および脳組織はまた、神経細胞を増殖および分化させるために本
発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしくはア
ンタゴニストを使用することによって再生され得る。本方法を用いて処置され得
る疾患としては、中枢神経系疾患および末梢神経系疾患、神経障害、または機械
的および外傷性障害（例えば、脊髄障害、頭部外傷、脳血管疾患、および発作（
ｓｔｏｋｅ））が挙げられる。詳細には、末梢神経傷害と関連する疾患、末梢神
経障害（例えば、化学療法または他の医学的療法から生じる）、局在神経障害、
および中枢神経系疾患（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチン
トン病、筋萎縮性側索硬化症、およびシャイ−ドレーガー症候群）はすべて、本
発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしくはア
ンタゴニストを用いて処置され得る。
【０５３７】 （走化性） 本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしく
はアンタゴニストは、走化性活性を有し得る。走化性分子は、細胞（例えば、単
球、線維芽細胞、好中球、Ｔ細胞、肥満細胞、好酸球、上皮細胞および／または
内皮細胞）を、身体中の特定の部位（例えば、炎症、感染、または過剰増殖の部
位）に誘引または動員する。次いで、動員された細胞は、特定の外傷または異常
性を撃退および／または治癒し得る。
【０５３８】 本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしく
はアンタゴニストは、特定の細胞の走化性活性を増大し得る。次いで、これらの
走化性分子を使用して、身体中の特定の位置に標的化した細胞の数を増加させる
ことによって、炎症、感染、過剰増殖性障害、または任意の免疫系障害を処置し
得る。例えば、走化性分子を使用して、傷害を受けた位置に免疫細胞を誘引する
ことによって、組織に対する創傷および他の外傷を処置し得る。本発明の走化性
分子はまた、線維芽細胞を誘引し得、これは創傷を処置するために使用され得る
。
【０５３９】 本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしく
はアンタゴニストが走化性活性を阻害し得ることもまた意図される。これらの分
子はまた、障害を処置するために使用され得る。従って、本発明のポリヌクレオ
チドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしくはアンタゴニストは、走
化性のインヒビターとして使用され得る。
【０５４０】 （結合活性） 本発明のポリペプチドは、このポリペプチドに結合する分子、またはこのポリ
ペプチドが結合する分子についてスクリーニングするために使用され得る。この
ポリペプチドとこの分子との結合は、結合したポリペプチドまたは分子の活性を
活性化（アゴニスト）、増大、阻害（アンタゴニスト）、または減少させ得る。
そのような分子の例としては、抗体、オリゴヌクレオチド、タンパク質（例えば
、レセプター）、または低分子が挙げられる。
【０５４１】 好ましくは、この分子は、このポリペプチドの天然のリガンド（例えば、リガ
ンドのフラグメント）、または天然の基質、リガンド、構造的模倣物、もしくは
機能的模倣物に密接に関連する（Ｃｏｌｉｇａｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔ
ｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １（２）：第５章（１９９１）を参
照のこと）。同様に、この分子は、このポリペプチドが結合する天然のレセプタ
ー、または少なくとも、このポリペプチドによって結合され得るレセプターのフ
ラグメント（例えば、活性部位）に密接に関連し得る。いずれの場合においても
、この分子は、公知の技術を用いて合理的に設計され得る。
【０５４２】 好ましくは、これらの分子についてのスクリーニングは、このポリペプチドを
発現する適切な細胞を産生する工程を包含する。好ましい細胞としては、哺乳動
物、酵母、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ、またはＥ．ｃｏｌｉ由来の細胞が挙げられる
。次いで、このポリペプチドを発現する細胞（または、発現されたポリペプチド
を含む細胞膜）を、好ましくは、このポリペプチドまたはこの分子のいずれかの
結合、活性の刺激、または活性の阻害を観察するための分子を潜在的に含む試験
化合物と接触させる。
【０５４３】 アッセイは、このポリペプチドへの候補化合物の結合を単純に試験し得、ここ
で結合は、標識によって、または標識された競合物との競合に関するアッセイに
おいて検出される。さらに、アッセイは、候補化合物がこのポリペプチドへの結
合によって生成されるシグナルを生じるか否かを試験し得る。
【０５４４】 あるいは、アッセイは、無細胞調製物、固体支持体に接着されたポリペプチド
／分子、化学ライブラリー、または天然産物の混合物を用いて実施され得る。ア
ッセイはまた、候補化合物を、ポリペプチドを含む溶液と混合する工程、ポリペ
プチド／分子の活性または結合を測定する工程、およびポリペプチド／分子の活
性または結合を、標準と比較する工程を単純に包含し得る。
【０５４５】 好ましくは、ＥＬＩＳＡアッセイは、モノクローナル抗体またはポリクローナ
ル抗体を用いて、サンプル（例えば、生物学的サンプル）におけるポリペプチド
のレベルまたは活性を測定し得る。抗体は、ポリペプチドへの直接的もしくは間
接的のいずれかの結合、または基質についてのポリペプチドとの競合によって、
ポリペプチドのレベルまたは活性を測定し得る。
【０５４６】 さらに、本発明のポリペプチドが結合するレセプターは、当業者に公知の多く
の方法（例えば、リガンドパニングおよびＦＡＣＳソーティング（Ｃｏｌｉｇａ
ｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎ．，１（２）、
第５章（１９９１））によって同定され得る。例えば、発現クローニングは、ポ
リアデニル化ＲＮＡがこのポリペプチドに応答する細胞から調製される場合に用
いらされ、例えば、ＮＩＨ３Ｔ３細胞（これは、ＦＧＦファミリータンパク質に
対する複数のレセプターを含むことが公知である）、およびＳＣ−３細胞、およ
びこのＲＮＡから作製されたｃＤＮＡライブラリーは、プールに分けられ、そし
てこのポリペプチドに応答性でないＣＯＳ細胞または他の細胞をトランスフェク
トするために使用される。ガラススライド上で増殖しているトランスフェクトさ
れた細胞は、それらを標識化した後に、本発明のポリペプチドに曝露される。こ
のポリペプチドは、種々の手段（部位特異的プロテインキナーゼに対する認識部
位のヨウ素化または封入を含む）によって標識化され得る。
【０５４７】 固定化およびインキュベーション後、スライドは、オートラジオグラフィー分
析に供される。陽性プールを同定し、そしてサブプールを、反復性のサププール
化および再スクリーニングプロセスを使用して調製および再びトランスフェクト
して、最終的に推定レセプターをコードする単一のクローンを生じる。
【０５４８】 レセプター同定のための代替のアプローチとして、標識ポリペプチドは、細胞
膜と光親和性に連結し得るか、またはレセプター分子を発現する調製物を抽出し
得る。架橋された材料は、ＰＡＧＥ分析によって分離され、そしてＸ線フィルム
に曝露される。ポリペプチドのレセプターを含む標識複合体が切り出され得、ペ
プチドフラグメントへと分離され得、そしてタンパク質微量配列決定に供され得
る。微量配列決定から得られるアミノ酸配列を使用して、１組の縮重オリゴヌク
レオチドプローブを設計してｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングし、推定レ
セプターをコードする遺伝子を同定する。
【０５４９】 さらに、遺伝子シャッフリング、モチーフシャッフリング、エキソンシャッフ
リング、および／またはコドンシャッフリングの技術（集合的に「ＤＮＡシャッ
フリング」という）を利用して、本発明のポリペプチドの活性を調節し得、それ
によって本発明のポリペプチドのアゴニストおよびアンタゴニストを効果的に生
成する。一般に、米国特許第５，６０５，７９３号、同第５，８１１，２３８号
、同第５，８３０，７２１号、同第５，８３４，２５２号、および同第５，８３
７，４５８号、ならびにＰａｔｔｅｎ，Ｐ．Ａ．ら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：７２４〜３３（１９９７）；Ｈａｒａｙａｍａ，
Ｓ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６（２）：７６〜８２（１９９８
）；Ｈａｎｓｓｏｎ，Ｌ．Ｏ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７：２６５〜７
６（１９９９）；ならびにＬｏｒｅｎｚｏ，Ｍ．Ｍ．およびＢｌａｓｃｏ，Ｒ．
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２４（２）：３０８〜１３（１９９８）（これら
の特許および刊行物の各々は、本明細書において参考として援用される）を参照
のこと。１つの実施形態において、ポリヌクレオチドおよび対応するポリペプチ
ドの変更は、ＤＮＡシャッフリングによって達成され得る。ＤＮＡシャッフリン
グは、相同組換えまたは部位特異的な組換えによる、２つ以上のＤＮＡセグメン
トの、本発明の分子の所望の分子への構築を含む。別の実施形態において、本発
明のポリヌクレオチドおよび対応するポリペプチドは、組換えの前に、誤りがち
な（ｅｒｒｏｒ−ｐｒｏｎｅ）ＰＣＲ、ランダムヌクレオチド挿入または他の方
法によるランダム変異誘発に供することによって、変更され得る。別の実施形態
において、本発明のポリペプチドの１つ以上の成分、モチーフ、切片、部分、ド
メイン、フラグメントなどは、１つ以上の異種分子の１つ以上の成分、モチーフ
、切片、部分、ドメイン、フラグメントなどと組換えられ得る。好ましい実施形
態において、この異種分子は、ファミリーのメンバーである。さらに好ましい実
施形態において、この異種分子は、例えば、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、
インスリン様増殖因子（ＩＧＦ−Ｉ）、トランスホーミング増殖因子（ＴＧＦ）
−α、表皮増殖因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、ＴＧＦ−β、
骨形成タンパク質（ＢＭＰ）−２、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−５、ＢＭＰ−６、ＢＭ
Ｐ−７、アクチビンＡおよびアクチビンＢ、デカペンタプレジック（ｄｅｃａｐ
ｅｎｔａｐｌｅｇｉｃ）（ｄｐｐ）、６０Ａ、ＯＰ−２、ドーサリン（ｄｏｒｓ
ａｌｉｎ）、増殖分化因子（ＧＤＦ）、結節（ｎｏｄａｌ）、ＭＩＳ、インヒビ
ン−α、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＴＧＦ−β５、および神
経膠由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）のような増殖因子である。
【０５５０】 他の好ましいフラグメントは、本発明のポリペプチドの生物学的に活性なフラ
グメントである。生物学的に活性なフラグメントは、本発明のポリぺプチドの活
性に類似の活性を示すが、必ずしも同一ではないフラグメントである。このフラ
グメントの生物学的活性は、改善された所望の活性、または減少した所望されな
い活性を含み得る。
【０５５１】 さらに、本発明は、本発明のポリペプチドの作用を調節する化合物を同定する
ために化合物をスクリーニングする方法を提供する。このようなアッセイの例は
、哺乳動物線維芽細胞、本発明のポリペプチド、スクリーニングされるべき化合
物および3[Ｈ]チミジンを、線維芽細胞が通常増殖する細胞培養条件下で合わせ
る工程を包含する。コントロールアッセイは、スクリーニングされるべき化合物
の非存在下で実施され得、そしてこの化合物の存在下での線維芽細胞の増殖の量
と比較して、各々の場合における3[Ｈ]チミジンの取り込みの決定によって、こ
の化合物が増殖を刺激するか否かを決定し得る。線維芽細胞の増殖の量は、3[Ｈ
]チミジンの取り込みを測定する液体シンチレーションクロマトグラフィーによ
って測定される。アゴニスト化合物およびアンタゴニスト化合物の両方が、この
手順により同定され得る。
【０５５２】 別の方法において、本発明のポリペプチドに対するレセプターを発現する哺乳
動物細胞または膜調製物は、この化合物の存在下において標識化した本発明のポ
リペプチドとともにインキュベートされる。次いで、この化合物がこの相互作用
を増強またはブロックする能力が、測定され得る。あるいは、スクリーニングさ
れるべき化合物とレセプターとの相互作用に続く既知のセカンドメッセンジャー
系の応答が測定され、そしてこの化合物がこのレセプターに結合し、そしてセカ
ンドメッセンジャー応答を誘発する能力を測定して、この化合物が潜在的なアゴ
ニストまたはアンタゴニストであるか否かを決定する。このようなセカンドメッ
センジャー系には、ｃＡＭＰグアニル酸シクラーゼ、イオンチャネルまたはホス
ホイノシチド加水分解が挙げられるが、これらに限定されない。
【０５５３】 これらの上記のアッセイの全ては、診断マーカーまたは予後マーカーとして使
用され得る。これらのアッセイを用いて発見される分子は、ポリペプチド／分子
を活性化または阻害することによって、疾患を処置するか、あるいは患者に特定
の結果（例えば、血管増殖）をもたらすために使用され得る。さらに、アッセイ
は、適切に操作された細胞または組織からの本発明のポリペプチドの産生を阻害
または増強し得る因子を発見し得る。
【０５５４】 従って、本発明は、以下の工程を含む本発明のポリペプチドに結合する化合物
を同定する方法を包含する：（ａ）候補結合化合物を本発明のポリペプチドとと
もにインキュベートする工程；および（ｂ）結合が生じたか否かを決定する工程
。さらに、本発明は、以下の工程を含むアゴニスト／アンタゴニストを同定する
方法を包含する：（ａ）候補化合物を本発明のポリペプチドとともにインキュベ
ートする工程、（ｂ）生物学的活性をアッセイする工程、および（ｂ）ポリペプ
チドの生物学的活性が改変されているか否かを決定する工程。
【０５５５】 （標的化された送達） 別の実施形態において、本発明は、組成物を、本発明のポリペプチドについて
のレセプターを発現する標的化細胞、または本発明のポリペプチドの細胞結合形
態を発現する細胞に送達する方法を提供する。
【０５５６】 本明細書中で議論される場合、本発明のポリペプチドまたは抗体は、異種ポリ
ペプチド、異種核酸、毒素またはプロドラッグと、疎水性、親水性、イオン性お
よび／または共有結合性の相互作用を介して会合し得る。１つの実施形態におい
て、本発明は、異種ポリペプチドまたは核酸と会合した本発明のポリペプチド（
抗体を含む）を投与することによる、本発明の組成物の細胞への特異的な送達の
ための方法を提供する。１つの例において、本発明は、治療タンパク質を標的化
細胞中へ送達するための方法を提供する。別の例において、本発明は、一本鎖核
酸（例えば、アンチセンスまたはリボザイム）あるいは二本鎖核酸（例えば、細
胞のゲノムに組み込まれ得るか、またはエピソームにて複製し得、そして転写さ
れ得る、ＤＮＡ）を、標的化細胞に送達するための方法を提供する。
【０５５７】 別の実施形態において、本発明は、毒素または細胞傷害性プロドラッグと会合
した本発明のポリペプチド（例えば、本発明のポリペプチドまたは本発明の抗体
）を投与することによる細胞の特異的破壊（例えば、腫瘍細胞の破壊）のための
方法を提供する。
【０５５８】 「毒素」とは、内因性の細胞傷害性エフェクター系、放射性同位体、ホロ毒素
（ｈｏｌｏｔｏｘｉｎ）、改変型毒素、毒素の触媒サブユニット、または規定の
条件下で細胞死を引き起こす細胞中もしくは細胞表面には通常存在しない任意の
分子もしくは酵素を、結合および活性化する化合物を意味する。本発明の方法に
従って使用され得る毒素としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない
：当該分野で公知の放射性同位体、固有のまたは誘導された内因性の細胞傷害性
エフェクター系を結合する化合物（例えば、抗体（またはその補体固定を含む部
分））、チミジンキナーゼ、エンドヌクレアーゼ、ＲＮＡｓｅ、α毒素、リシン
、アブリン、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素Ａ、ジフテリア毒素、サポリン、モ
モルジン（ｍｏｍｏｒｄｉｎ）、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ヨウシュヤマゴ
ボウ抗ウイルスタンパク質、α−サルシン（ｓａｒｃｉｎ）およびコレラ毒素。
「細胞傷害性プロドラッグ」とは、通常細胞内に存在する酵素によって、細胞傷
害性化合物へと変換される非毒性の化合物を意味する。本発明の方法に従って使
用され得る細胞傷害性プロドラッグとしては、安息香酸マスタードアルキル化剤
のグルタミル誘導体、エトポシドまたはマイトマイシンＣのリン酸誘導体、シト
シンアラビノシド、ダウノルビシン、およびドキソルビシンのフェノキシアセト
アミド誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０５５９】 （薬物スクリーニング） 本発明のポリペプチドの活性を改変する分子についてスクリーニングするため
の、本発明のポリペプチド、またはこれらのポリペプチドをコードするポリヌク
レオチドの使用が、さらに意図される。このような方法は、本発明のポリペプチ
ドを、アンタゴニスト活性またはアゴニスト活性を有することが疑われる選択さ
れた化合物と接触させる工程、および結合に続いてこれらのポリペプチドの活性
をアッセイする工程を包含する。
【０５６０】 本発明は、種々の薬物スクリーニング技術のいずれかにおいて、本発明のポリ
ペプチド、またはそれらの結合フラグメントを使用することによって治療用化合
物をスクリーニングするために特に有用である。このような試験に用いられるポ
リペプチドまたはフラグメントは、固体支持体に固定化され得、細胞表面上に発
現され得、溶液中で遊離であり得、または細胞内に局在化され得る。薬物スクリ
ーニングの１つの方法は、ポリペプチドまたはフラグメントを発現する組換え核
酸を用いて安定に形質転換される真核生物宿主細胞または原核生物宿主細胞を利
用する。薬物は、競合結合アッセイにおいて、このような形質転換細胞に対して
スクリーニングされる。例えば、試験されている薬剤と本発明のポリペプチドと
の間の複合体の形成（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｎ）を測定し得る。
【０５６１】 従って、本発明は、本発明のポリペプチドによって媒介される活性に影響を及
ぼす薬物または任意の他の薬剤についてのスクリーニング方法を提供する。これ
らの方法は、当該分野で周知の方法によって、このような薬剤を本発明のポリペ
プチドもしくはそのフラグメントと接触させる工程、およびこの薬剤とこのポリ
ペプチドもしくはそのフラグメントとの間の複合体の存在についてアッセイする
工程を包含する。このような競合結合アッセイにおいて、スクリーニングされる
薬剤は、代表的に、標識化される。インキュベーション後に、遊離の薬剤は、結
合形態で存在する薬剤から分離され、そして遊離または複合体化されていない標
識の量は、特定の薬剤が本発明のポリペプチドに結合する能力の尺度である。
【０５６２】 薬物スクリーニングについての別の技術は、本発明のポリペプチドに対する適
切な結合親和性を有する化合物に対するハイスループットスクリーニングを提供
し、そして欧州特許出願８４／０３５６４（１９８４年９月１３日公開）（これ
は、本明細書中で参考として援用される）に非常に詳細に記載される。簡潔にい
うと、大量の異なる小さなペプチド試験化合物は、固体基材（例えば、プラスチ
ックピンまたは何らかの他の表面）上で合成される。ペプチド試験化合物を、本
発明のポリペプチドと反応させ、そして洗浄する。次いで、結合したポリペプチ
ドは、当該分野で周知の方法によって検出される。精製されたポリペプチドは、
前述の薬物スクリーニング技術での使用のためにプレート上に直接コーディング
される。さらに、非中和抗体を使用して、このペプチドを捕捉し得、そして固体
支持体上にそれを固定し得る。
【０５６３】 本発明はまた、競合薬物スクリーニングアッセイの使用を意図し、ここで、本
発明のポリペプチドを結合し得る中和抗体は、ポリペプチドまたはそのフラグメ
ントに対する結合について試験化合物と特異的に競合する。この様式において、
抗体を使用して、本発明のポリペプチドと１つ以上の抗原性エピトープを共有す
る任意のペプチドの存在を検出する。
【０５６４】 （アンチセンスおよびリボザイム（アンタゴニスト）） 特定の実施形態において、本発明に従うアンタゴニストは、配列番号Ｘに含ま
れる配列またはその相補鎖に対応する核酸、および／あるいは表１で同定するｃ
ＤＮＡプラスミドＺに含まれるヌクレオチド配列に対応する核酸である。１つの
実施形態において、アンチセンス配列は、生物体により内部で生成され、別の実
施形態において、アンチセンス配列は別々に投与される（例えば、Ｏ’Ｃｏｎｎ
ｏｒ，Ｊ．，Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．５６：５６０（１９９１）を参照のこと）。
Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｉ
ｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＣＲＣ Ｐｒｅ
ｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１９８８）。アンチセンス技術を使用して
、アンチセンスＤＮＡもしくはＲＮＡを通してか、または３重らせんの形成を通
して遺伝子発現を制御し得る。アンチセンス技術は、例えば、Ｏｋａｎｏ，Ｊ．
，Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．５６：５６０（１９９１）；Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕ
ｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ
Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏ
ｎ，ＦＬ（１９８８）に考察される。３重らせん形成は、例えば、Ｌｅｅら、Ｎ
ｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６：３０７３（１９７９）；Ｃ
ｏｏｎｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４１：４５６（１９８８）；およびＤｅｒｖ
ａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５１：１３００（１９９１）において考察される。
これらの方法は、相補的なＤＮＡまたはＲＮＡへのポリヌクレオチドの結合に基
づく。
【０５６５】 例えば、非リンパ性白血病細胞株ＨＬ−６０および他の細胞株の増殖を阻害す
るためのｃ−ｍｙｃおよびｃ−ｍｙｂアンチセンスＲＮＡ構築物の使用は、以前
に記載された（Ｗｉｃｋｓｔｒｏｍら（１９８８）；Ａｎｆｏｓｓｉら（１９８
９））。これらの実験は、細胞をオリゴリボヌクレオチドとインキュベーション
することによってインビトロで行われた。インビボ用途のための類似の手順は、
ＷＯ９１／１５５８０に記載される。簡単には、所定のアンチセンスＲＮＡにつ
いてのオリゴヌクレオチドの対は、以下のように生成される：オープンリーディ
ングフレームの最初の１５塩基に相補的な配列を、５末端のＥｃｏＲＩ部位およ
び３末端のＨｉｎｄＩＩＩ部位に隣接させる。次に、オリゴヌクレオチドの対は
、９０℃で１分間加熱され、次いで２×連結緩衝液（２０ｍＭ ＴＲＩＳ ＨＣ
ｌ ｐＨ７．５、１０ｍＭ ＭｇＣｌ2、１０ｍＭ ジチオスレイトール（ＤＴ
Ｔ）および０．２ｍＭ ＡＴＰ）中でアニーリングされ、次いで、レトロウイル
スベクターＰＭＶ７のＥｃｏＲ１／ＨｉｎｄＩＩＩ部位に連結される（ＷＯ９１
／１５５８０）。
【０５６６】 例えば、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの５’コード部
分を使用して、約１０〜４０塩基対長のアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチド
を設計し得る。ＤＮＡオリゴヌクレオチドは、転写に関与する遺伝子の領域に相
補的であるように設計され、それにより転写およびレセプターの産生を阻害する
。アンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドは、インビボでｍＲＮＡにハイブリダ
イズし、そしてｍＲＮＡ分子のレセプターポリペプチドへの翻訳をブロックする
。
【０５６７】 １つの実施形態において、本発明のアンチセンス核酸は、外来の配列からの転
写により細胞内で産生される。例えば、ベクターまたはその一部が転写され、本
発明のアンチセンス核酸（ＲＮＡ）を産生する。このようなベクターは、本発明
のアンチセンス核酸をコードする配列を含む。このようなベクターは、それが転
写されて所望のアンチセンスＲＮＡを産生し得る限り、エピソームを保持し得る
か、または染色体に組込まれ得る。このようなベクターは、当該分野において標
準的な組換えＤＮＡ技術方法により構築され得る。ベクターは、脊椎動物細胞に
おいて複製および発現のために使用される、当該分野で公知のプラスミド、ウイ
ルスなどであり得る。本発明のポリペプチドをコードする配列またはそのフラグ
メントの発現は、脊椎動物、好ましくはヒト細胞において作用することが当該分
野で公知の任意のプロモーターにより得る。そのようなプロモーターは、誘導性
または構成性であり得る。このようなプロモーターとしては、ＳＶ４０初期プロ
モーター領域（ＢｅｒｎｏｉｓｔおよびＣｈａｍｂｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ、２９：
３０４−３１０（１９８１））、ラウス肉腫ウイルスの３’長末端反復に含まれ
るプロモーター（Ｙａｍａｍｏｔｏら、Ｃｅｌｌ、２２：７８７−７９７（１９
８０））、ヘルペスチミジンプロモーター（Ｗａｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７８：１４４１−１４４５（１９８１））
、メタロチオネイン遺伝子の調節配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２
９６：３９−４２（１９８２））などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０５６８】 本発明のアンチセンス核酸は、少なくとも本発明の遺伝子のＲＮＡ転写物の一
部に相補的な配列を含む。しかし、完全に相補的であることは好ましいが、必要
ではない。本明細書中で言及される「少なくともＲＮＡの一部に相補的な」配列
は、ＲＮＡとハイブリダイズし得るに十分な相補性を有し、安定な二重鎖を形成
する配列を意味し；従って、本発明の二本鎖アンチセンス核酸の場合において、
二重鎖ＤＮＡの一本鎖が試験され得るか、または三重鎖形成がアッセイされ得る
。ハイブリダイズする能力は、相補性の程度およびアンチセンス核酸の長さの両
方に依存する。一般的に、ハイブリダイズする核酸が長いほど、ＲＮＡとのより
多くの塩基ミスマッチを含み得、これは、安定な二重鎖（または三重鎖の場合も
あり得る）を含み得、そしてなお形成し得る。当業者は、ハイブリダイズ複合体
の融点を決定するために標準的な手順を使用することによりミスマッチの許容の
程度を確認し得る。
【０５６９】 メッセージの５’末端に相補的であるオリゴヌクレオチド（例えば、ＡＵＧ開
始コドンまででかつＡＵＧ開始コドンを含む５’非翻訳配列）は、翻訳の阻害の
際に最も効率的に働くべきである。しかし、ｍＲＮＡの３’非翻訳配列に相補的
な配列は、同様にｍＲＮＡの翻訳を阻害する際に有効であることが示された。一
般的に、Ｗａｇｎｅｒ，Ｒ．、Ｎａｔｕｒｅ ３７２：３３３−３３５（１９９
４）を参照のこと。従って、本明細書中に記載されるポリヌクレオチド配列の５
’−または３’−の非翻訳非コード領域のいずれかに相補的なオリゴヌクレオチ
ドは、内因性ｍＲＮＡの翻訳を阻害するアンチセンスアプローチに使用され得る
。ｍＲＮＡの５’非翻訳領域に相補的なオリゴヌクレオチドは、ＡＵＧ開始コド
ンの相補物を含むべきである。ｍＲＮＡコード領域に相補的なアンチセンスオリ
ゴヌクレオチドは、翻訳のあまり効率的でないインヒビターであるが、本発明に
従って使用され得る。本発明のｍＲＮＡの５’領域、３’領域またはコード領域
にハイブリダイズするように設計されるか否かにかかわらず、アンチセンス核酸
は、少なくとも６ヌクレオチド長であるべきであり、そして好ましくは６〜約５
０ヌクレオチド長にわたるオリゴヌクレオチドである。特定の局面において、こ
のオリゴヌクレオチドは、少なくとも１０ヌクレオチド、少なくとも１７ヌクレ
オチド、少なくとも２５ヌクレオチドまたは少なくとも５０ヌクレオチドである
。
【０５７０】 本発明のポリヌクレオチドは、ＤＮＡ、もしくはＲＮＡ、またはキメラ混合物
、あるいはそれらの誘導体もしくは改変バージョン、一本鎖、または二本鎖であ
り得る。このオリゴヌクレオチドは、塩基部分、糖部分、またはリン酸骨格で改
変されて、例えば、分子の安定性、ハイブリダーゼーションなどを改善し得る。
このオリゴヌクレオチドは、ペプチドのような他の付加基（例えば、インビボに
おいて宿主細胞レセプターを標的化するために）、または細胞膜を通した輸送を
促進する因子（例えば、Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ
．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：６５５３−６５５６（１９８９）；Ｌｅｍａｉｔ
ｒｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８４：６４８−６５２（１９
８７）；ＰＣＴ公開番号ＷＯ８８／０９８１０（１９８８年１２月１５日公開）
を参照のこと）、または血液脳関門（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ８９／１０１
３４（１９８８年４月２５日公開）を参照のこと）、ハイブリダイゼーション誘
引切断剤（ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ−ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ ｃｌｅａｖａｇ
ｅ ａｇｅｎｔ）（例えば、Ｋｒｏｌら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、６：９
５８−９７６（１９８８）を参照のこと）、またはインターカレート剤（例えば
、Ｚｏｎ，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．５：５３９−５４９（１９８８）を参照のこと
）を含み得る。この目的のために、オリゴヌクレオチドは、別の分子（例えば、
ペプチド、ハイブリダーゼーション誘引架橋剤、輸送剤、ハイブリダイゼーショ
ン誘引切断剤など）に結合体化され得る。
【０５７１】 アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの改変された塩基部分を
含み得、この塩基部分は、以下を含むがそれらに限定されない群から選択される
：５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨー
ドウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４−アセチルシトシン、５−（カル
ボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２
−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシ
ル、β−Ｄ−ガラクトシルキューオシン、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデ
ニン、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、
２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシ
トシン、Ｎ６−アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシ
ル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルキュー
オシン、５’−メトキシカルボキシメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２
−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ
）、ワイブトキソシン（ｗｙｂｕｔｏｘｏｓｉｎｅ）、プソイドウラシル、キュ
ーオシン、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシ
ル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチル
エステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、５−メチル−２−チオウラシル、
３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシプロピル）ウラシル、（ａｃｐ３）
ｗ、および２，６−ジアミノプリン。
【０５７２】 アンチセンスオリゴヌクレオチドはまた、以下を含むがそれらに限定されない
群から選択される少なくとも１つの改変された糖部分を含み得る：アラビノース
、２−フルオロアラビノース、キシルロース、およびヘキソース。
【０５７３】 なお別の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下を含む
がそれらに限定されない群から選択される少なくとも１つの改変されたリン酸骨
格を含む：ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロアミドチオエ
ート、ホスホロアミデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄａｔｅ）、ホスホロジア
ミデート、メチルホスホネート、アルキルホスホトリエステル、およびホルムア
セタール（ｆｏｒｍａｃｅｔａｌ）またはそれらのアナログ。
【０５７４】 なお別の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ａ−アノマ
ーオリゴヌクレオチドである。ａ−アノマーオリゴヌクレオチドは、相補的なＲ
ＮＡと特異的な二本鎖ハイブリッドを形成し、通常のｂ−ユニットとは反対に、
その鎖は互いに平行にする（Ｇａｕｔｉｅｒら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ
．、１５：６６２５−６６４１（１９８７））。このオリゴヌクレオチドは、２
’−０−メチルリボヌクレオチドであるか（Ｉｎｏｕｅら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ
ｓ Ｒｅｓ．、１５：６１３１−６１４８（１９８７））、またはキメラＲＮＡ
−ＤＮＡアナログである（Ｉｎｏｕｅら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２１５：３２７
−３３０（１９８７））。
【０５７５】 本発明のポリヌクレオチドは当該分野で公知の標準的な方法（例えば、自動Ｄ
ＮＡ合成機により（このような装置はＢｉｏｓｅａｒｃｈ，Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂ
ｉｏｓｙｓｔｅｍｓなどから市販されている）の使用により）合成され得る。例
えば、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、Ｓｔｅｉｎらの方法（Ｎｕｃ
ｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、１６：３２０９（１９８８））により合成され得、
メチルホスホネートオリゴヌクレオチドは、コントロールドポアガラス（ｃｏｎ
ｔｒｏｌｌｅｄ ｐｏｒｅ ｇｌａｓｓ）ポリマー支持体（Ｓａｒｉｎら、Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、８５：７４４８−７４５１
（１９８８））などの使用により調製され得る。
【０５７６】 コード領域配列に相補的なアンチセンスヌクレオチドが使用され得るが、転写
された非翻訳領域に相補的なアンチセンスヌクレオチドが最も好ましい。
【０５７７】 本発明による潜在的なアンタゴニストはまた、触媒ＲＮＡ、すなわちリボザイ
ムを含む（例えば、ＰＣＴ国際公開ＷＯ９０／１１３６４、１９９０年１０月４
日公開；Ｓａｒｖｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４７：１２２２−１２２５（１９
９０）を参照のこと）。一方、部位特異的認識配列でｍＲＮＡを切断するリボザ
イムを使用して、ｍＲＮＡを破壊し得るが、ハンマーヘッド型リボザイムの使用
が好ましい。ハンマーヘッド型リボザイムは、標的ｍＲＮＡと相補的な塩基対を
形成する隣接領域により決定される位置で、ｍＲＮＡを切断する。たった１つの
必要条件は、標的ｍＲＮＡが以下の２つの塩基配列を有することである：５’−
ＵＧ−３’。ハンマーヘッド型リボザイムの構築および生成は当該分野で周知で
あり、そしてＨａｓｅｌｏｆｆおよびＧｅｒｌａｃｈ、Ｎａｔｕｒｅ、３３４：
５８５−５９１（１９８８）により十分に記載される。配列番号Ｘのヌクレオチ
ド配列内に多くの潜在的なハンマーヘッド型リボザイム切断部位が存在する。好
ましくは、このリボザイムは、切断認識部位がｍＲＮＡの５’末端付近に位置す
るように；すなわち、効率を増大し、そして非機能的ｍＲＮＡ転写物の細胞内蓄
積を最小化するように、操作される。
【０５７８】 アンチセンスアプローチの場合、本発明のリボザイムは、改変されたオリゴヌ
クレオチド（例えば、安定性、標的化などを改良するために）から構成され得、
そしてインビボにおいて本発明のポリペプチドを発現する細胞に送達されるべき
である。リボザイムをコードするＤＮＡ構築物は、ＤＮＡをコードするアンチセ
ンスの導入のための上記と同じ様式において細胞中に導入され得る。送達の好ま
しい方法は、強力な構成性プロモーター（例えば、ｐｏｌ ＩＩＩまたはｐｌ
ＩＩプロモーターのような）の制御下で、リボザイムを「コードする」ＤＮＡ構
築物を使用することを含み、その結果トランスフェクトした細胞が、内因性メッ
セージを破壊し、そして翻訳を阻害するに十分な量のリボザイムを生成する。リ
ボザイムはアンチセンス分子と異なり触媒性であるので、より低い細胞内濃度が
効率のために必要とされる。
【０５７９】 アンタゴニスト／アゴニスト化合物を利用して、腫瘍性の細胞および組織に対
する本発明のポリペプチドの細胞増殖（ｇｒｏｗｔｈ）および増殖（ｐｒｏｌｉ
ｆｅｒａｔｉｏｎ）効果を阻害し得る。すなわち、腫瘍のアゴニストを刺激し、
それにより異常な細胞成長および増殖を（例えば、腫瘍形成または増殖において
）遅延または防止する。
【０５８０】 アンタゴニスト／アゴニストをまた利用して、血管過多の疾患を予防し得、そ
して水晶体嚢外白内障（ｅｘｔｒａｃａｐｓｕｌａｒ ｃａｔａｒａｃｔ）手術
後の上皮レンズ細胞の増殖を防止し得る。本発明のポリペプチドのマイトジェン
活性の防止はまた、例えば、バルーン血管形成術後の再狭窄のような場合に要求
され得る。
【０５８１】 アンタゴニスト／アゴニストをまた利用して、創傷治癒の間の瘢痕組織の増殖
防止し得る。
【０５８２】 アンタゴニスト／アゴニストをまた利用して、本明細書中に記載される疾患を
処置し得る。
【０５８３】 従って、本発明は、障害または疾患（本発明のポリヌクレオチドの過剰発現に
関連する、本願の全体に渡って列挙される障害または疾患が含まれるが、これら
に限定されない）を処置する方法であって、（ａ）本発明のポリヌクレオチドに
関するアンチセンス分子、および／または（ｂ）本発明のポリヌクレオチドに関
するリボザイムを、患者に投与することによって処置する方法を提供する。発明
、および／または（ｂ）本発明のポリヌクレオチドに関するリボザイム。
【０５８４】 （結合ペプチドおよび他の分子） 本発明はまた、ポリペプチドおよびプラスミノーゲン様ポリペプチドを結合す
る非ポリペプチドを同定するためのスクリーニング方法、ならびにそれによって
同定されたプラスミノーゲン様結合分子を包含する。これらの結合分子は、例え
ば、プラスミノーゲン様ペプチドのアゴニストおよびアンタゴニストとして有用
である。このようなアゴニストおよびアンタゴニストは、本発明に従って、以下
に詳細に記載される治療実施形態において使用され得る。
【０５８５】 この方法は、以下の工程： ａ．プラスミノーゲン様ポリペプチドを、複数の分子と接触させる工程；およ
び ｂ．プラスミノーゲン様ポリペプチドに結合する分子を同定する工程、 を包含する。
【０５８６】 プラスミノーゲン様ポリペプチドを、複数の分子と接触させる工程は、多くの
方法でもたらせられ得る。例えば、当業者は、固体支持体上にプラスミノーゲン
様ポリペプチドを固定化し、そして複数の分子の溶液を固定化されたプラスミノ
ーゲン様ポリペプチドと接触させることを意図し得る。このような手順は、アフ
ィニティークロマトグラフィープロセスに類似し、アフィニティーマトリックス
は、固定化されたプラスミノーゲン様ポリペプチドから構成される。次いで、プ
ラスミノーゲン様ポリペプチドに対する選択的親和性を有する分子が、親和性選
択によって精製され得る。固体支持体の性質、固体支持体へのプラスミノーゲン
様ポリペプチドの付着のためのプロセス、溶媒、および親和性単離または選択の
条件は、非常に従来的であり、かつ当業者に周知である。
【０５８７】 あるいは、当業者はまた、個々のポリペプチドまたはこれらのサブセットを含
む実質的な分離画分に複数のポリペプチドを分離し得る。例えば、複数のポリペ
プチドを、ゲル電気泳動、カラムクロマトグラフィー、またはポリペプチドの分
離についての当業者に公知の類似の方法によって、分離し得る。個々のポリペプ
チドはまた、形質転換された宿主細胞によって、その外側表面（例えば、組換え
ファージ）上またはそのあたりに発現されるように生成され得る。次いで、個々
の単離物は、必要に応じて、発現のために必要とされるものであるべきインデュ
ーサーの存在下で、プラスミノーゲン様ポリペプチドによって「プローブ」され
て、任意の選択的親和性相互作用が、プラスミノーゲン様ポリペプチドと個々の
クローンとの間に起こるか否かを決定し得る。プラスミノーゲン様ポリペプチド
を個々のポリペプチドを含む各画分と接触させる前に、最初に、このポリペプチ
ドは、さらなる利便性のために、固体支持体に移動され得る。このような固体支
持体は、濾過膜（例えば、ニトロセルロースまたはナイロンから作製されるもの
）の単なる断片であり得る。このようにして、陽性クローンは、発現ライブラリ
ーの形質転換された宿主細胞の収集から同定され得、この発現ライブラリーは、
プラスミノーゲン様ポリペプチドに対する選択的親和性を有するポリペプチドを
コードするＤＮＡ構築物を保有する。さらに、プラスミノーゲン様ポリペプチド
に対する選択的親和性を有するポリペプチドのアミノ酸配列が、従来の手順によ
って直接的に決定され得るか、またはこのポリペプチドをコードするＤＮＡのコ
ード配列が、しばしば、より好都合に決定され得る。次いで、１次配列が、対応
するＤＮＡ配列から推定され得る。アミノ酸配列が、ポリペプチド自体から決定
される場合、当業者は、ミクロ配列決定技術を使用し得る。配列決定技術は、質
量分析法を含み得る。
【０５８８】 特定の状況において、選択的親和性相互作用の存在を決定または検出する試み
の前に、任意の未結合のプラスミノーゲン様ポリペプチド、あるいは未結合のポ
リペプチドを、プラスミノーゲン様ポリペプチドおよび複数のポリペプチドの混
合物から洗い流すことが所望され得る。プラスミノーゲン様ポリペプチド、ある
いは複数のポリペプチドが、固体支持体に結合される場合に、このような洗浄工
程は、特に所望され得る。
【０５８９】 この方法に従って提供される複数の分子は、多様なライブラリー（例えば、ラ
ンダムまたは組換え的なペプチドまたは非ペプチドライブラリー（これは、プラ
スミノーゲン様ポリペプチドに特異的に結合する分子についてスクリーニングさ
れ得る））によって提供され得る。使用され得る多くのライブラリーは、当該分
野で公知であり、例えば、化学的に合成されたライブラリー、組換え（例えば、
ファージディスプレイライブラリー）、およびインビトロ転移ベースのライブラ
リーを含む。化学的に合成されたライブラリーの例は、以下に記載される：Ｆｏ
ｄｏｒら，１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：７６７−７７３；Ｈｏｕｇｈｔ
ｅｎら，１９９１，Ｎａｔｕｒｅ ３５４：８４−８６；Ｌａｍら，１９９１，
Ｎａｔｕｒｅ ３５４：８２−８４；Ｍｅｄｙｎｓｋｉ，１９９４，Ｂｉｏ／Ｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １２：７０９−７１０；Ｇａｌｌｏｐら，１９９４，Ｊ．
Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３７（９）：１２３３−１２５１；
Ｏｈｌｍｅｙｅｒら，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ ９０：１０９２２−１０９２６；Ｅｒｂら，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ
．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：１１４２２−１１４２６；Ｈｏｕｇｈｔｅ
ｎら，１９９２，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １３：４１２；Ｊａｙａｗｉｃ
ｋｒｅｍｅら，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９
１：１６１４−１６１８；Ｓａｌｍｏｎら，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：１１７０８−１１７１２；ＰＣＴ出願公開番号
ＷＯ ９３／２０２４２；ならびにＢｒｅｎｎｅｒおよびＬｅｒｎｅｒ，１９９
２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：５３８１−５３８
３。
【０５９０】 ファージディスプレイライブラリーの例は、以下に記載される：Ｓｃｏｔｔお
よびＳｍｉｔｈ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３８６−３９０；Ｄｅｖ
ｌｉｎら，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４９：４０４−４０６；Ｃｈｒｉｓｔ
ｉａｎ，Ｒ．Ｂ．ら，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７１１−７１
８）；Ｌｅｎｓｔｒａ，１９９２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１５２：１
４９−１５７；Ｋａｙら，１９９３，Ｇｅｎｅ １２８：５９−６５；ならびに
ＰＣＴ出願公開第ＷＯ ９４／１８３１８（１９９４年８月１８日）。
【０５９１】 インビトロ転移ベースのライブラリーは、以下に記載されるライブラリーを含
むが、これらに限定されない：ＰＣＴ出願公開第ＷＯ ９１／０５０５８（１９
９１年４月１８日）；およびＭａｔｔｈｅａｋｉｓら，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：９０２２−９０２６。
【０５９２】 非ペプチドライブラリーの例示の目的で、ベンゾジアゼピンライブラリー（例
えば、Ｂｕｎｉｎら，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ ９１：４７０８−４７１２を参照のこと）が、使用のために適合され得る。
ペプトイドライブラリー（Ｓｉｍｏｎら，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：９３６７−９３７１）もまた、使用され得る。使
用され得るライブラリー（ここで、ペプチドにおけるアミド官能基が、ペルメチ
ル化されて（ｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｅ）、化学的に変換されたライブラリーを
生成する）の別の例は、Ｏｓｔｒｅｓｈら（１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：１１１３８−１１１４２）によって記述される
。
【０５９３】 本発明において有用な非ペプチドライブラリーのバリエティーは、広い。例え
ば、ＥｃｋｅｒおよびＣｒｏｏｋｅ，１９９５，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
１３：３５１−３６０は、種々のライブラリーの基礎を形成する化学種の中で
、ベンゾジアゼピン、ヒダントイン、ピペラジンジオン（ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ
ｄｉｏｎｅ）、ビフェニル、糖アナログ、β−メルカプトケトン、アリール酢酸
、アシルピペリジン、ベンゾピラン、クバン、キサンチン、アミンイミド、およ
びオキサゾロンなどを列挙する。
【０５９４】 非ペプチドライブラリーは、２つの型に広く分類され得る：修飾された（ｄｅ
ｃｏｒａｔｅｄ）モノマーおよびオリゴマー。修飾されたモノマーライブラリー
は、種々の官能基が付加される際に、比較的単純な骨格構造を使用する。しばし
ば、この骨格は、既知の有用な薬理学活性を有する分子である。例えば、この骨
格は、ベンゾジアゼピン構造であり得る。
【０５９５】 非ペプチドオリゴマーライブラリーは、モノマーの順序に依存して新規な形状
に生成する様式で、一緒に組み立てられる非常に多数のモノマーを使用する。使
用されているモノマー単位は、カルバメート、ピロリノン、およびモルホリノで
ある。ペプトイド（側鎖が、α−炭素よりもむしろα−アミノ基に付着されるペ
プチド様オリゴマー）は、非ペプチドオリゴマーライブラリーの別のバージョン
の基礎を形成する。第一の非ペプチドオリゴマーライブラリーは、１つの型のモ
ノマーを利用し、従って、繰返し骨格を含んだ。最近のライブラリーは、１より
多いモノマーを利用し、ライブラリーに多様性（ｆｌｅｘｉｂｉｌｉｔｙ）を与
える。
【０５９６】 ライブラリーをスクリーニングすることは、種々の一般に公知の方法のいずれ
かによって達成され得る。例えば、ペプチドライブラリーのスクリーニングを開
示する、以下の参考文献を参照のこと：ＰａｒｍｌｅｙおよびＳｍｉｔｈ，１９
８９，Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２５１：２１５−２１８；Ｓｃｏｔ
ｔおよびＳｍｉｔｈ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３８６−３９０；Ｆ
ｏｗｌｋｅｓら，１９９２；ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １３：４２２−４２
７；Ｏｌｄｅｎｂｕｒｇら，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．ＵＳＡ ８９：５３９３−５３９７；Ｙｕら，１９９４，Ｃｅｌｌ ７６：９
３３−９４５；Ｓｔａｕｄｔら，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：５７７−
５８０；Ｂｏｃｋら，１９９２，Ｎａｔｕｒｅ ３５５：５６４−５６６；Ｔｕ
ｅｒｋら，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：
６９８８−６９９２；Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎら，１９９２，Ｎａｔｕｒｅ ３５５
：８５０−８５２；米国特許第５，０９６，８１５号、米国特許第５，２２３，
４０９号、および米国特許第５，１９８，３４６号（全てＬａｄｎｅｒら）；Ｒ
ｅｂａｒおよびＰａｂｏ，１９９３，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６３：６７１−６７３
；およびＰＣＴ出願公開第ＷＯ ９４／１８３１８。
【０５９７】 特定の実施形態において、プラスミノーゲン様ポリペプチドに結合する分子を
同定するためのスクリーニングは、ライブラリーメンバーを、固体相上に結合さ
れたプラスミノーゲン様ポリペプチドと接触させ、そしてプラスミノーゲン様ポ
リペプチドに結合するこれらのライブラリーメンバーを収集することによって、
実施され得る。このようなスクリーニング方法（「パニング」技術と名付けられ
た）の例は、例として、ＰａｒｍｌｅｙおよびＳｍｉｔｈ，１９８８，Ｇｅｎｅ
７３：３０５−３１８；Ｆｏｗｌｋｅｓら，１９９２，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑ
ｕｅｓ １３：４２２−４２７；ＰＣＴ出願公開第ＷＯ ９４／１８３１８；な
らびに本明細書中に記載される参考文献に記載される。
【０５９８】 別の実施形態において、酵母において、相互作用するタンパク質を選択するた
めの２−ハイブリッド系（ＦｉｅｌｄｓおよびＳｏｎｇ，１９８９，Ｎａｔｕｒ
ｅ ３４０：２４５−２４６；Ｃｈｉｅｎら，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：９５７８−９５８２）が、プラスミノーゲン
様ポリペプチドに特異的に結合する分子を同定するために使用され得る。
【０５９９】 プラスミノーゲン様結合分子がポリペプチドである場合、このポリペプチドは
、任意のペプチドライブラリー（ランダムペプチドライブラリー、組合せペプチ
ドライブラリー、または偏った（ｂｉａｓｅｄ）ペプチドライブラリー）から好
都合に選択され得る。用語「偏った」は、この場合のペプチドにおいて、ライブ
ラリーを生成する方法が、分子の得られた収集の多様性を支配する１つ以上のパ
ラメータを制限するように操作されることを意味するために、本明細書中で使用
される。
【０６００】 従って、真にランダムペプチドライブラリーは、ペプチドの所定の位置におい
て特定のアミノ酸を見出す確率が全ての２０のアミノ酸について同じである、ペ
プチドの収集を生成する。しかし、偏りは、例えば、リジンが、５番目のアミノ
酸ごとに存在すること、またはデカペプチドライブラリーの位置４、８、および
９が、アルギニンのみを含むように固定されることを、特定することによってラ
イブラリーに導入され得る。明らかに、偏りの多くの型が意図され得、そして本
発明が、任意の特定の偏りに制限されない。さらに、本発明は、特定の型のペプ
チドライブラリー（例えば、ファージ提示ペプチドライブラリーおよびＤＮＡ挿
入物を有するλファージベクターを含むＤＮＡ構築物を利用するもの）を意図す
る。
【０６０１】 上記のように、ポリペプチドであるプラスミノーゲン様結合分子の場合におい
て、このポリポリペプチドは、約６〜約６０未満のアミノ酸残基、好ましくは、
約６〜約１０のアミノ酸残基、および最も好ましくは、約６〜約２２のアミノ酸
残基を有し得る。別の実施形態において、プラスミノーゲン様結合ポリペプチド
は、１５〜１００アミノ酸、または２０〜５０アミノ酸の範囲を有する。
【０６０２】 選択されたプラスミノーゲン様結合ポリペプチドは、化学合成または組換え発
現によって得られ得る。
【０６０３】 （他の活性） 本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニスト、またはアンタゴニス
トは、血管内皮細胞増殖を刺激する能力の結果として、種々の疾患状態（例えば
、血栓症、動脈硬化、および他の心臓血管の状態）に起因する虚血組織の血管再
生を刺激するための処置において利用され得る。本発明のポリペプチド、ポリヌ
クレオチド、アゴニスト、またはアンタゴニストはまた、上記で議論されたよう
に新脈管形成および四肢の再生を刺激するために利用され得る。
【０６０４】 本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニスト、またはアンタゴニス
トを、傷害、火傷、手術後の組織修復、および潰瘍に起因する創傷の処置にもま
た利用し得る。なぜなら、それらは異なる起源の種々の細胞（例えば、線維芽細
胞および骨格筋細胞）に対してマイトジェン性であり、それゆえ損傷組織または
疾患組織の修復または置換を促進するからである。
【０６０５】 本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニスト、またはアンタゴニス
トをまた、ニューロンの成長を刺激し、そして特定のニューロンの障害または神
経変性状態（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、およびエイズ関連複
合体）において生じるニューロンの損傷を処置および予防するために利用し得る
。本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニスト、またはアンタゴニス
トは、軟骨細胞増殖を刺激する能力を有し得、それゆえ、骨および歯周の再生を
増強し、そして組織移植片または骨の移植片を補助するために利用され得る。
【０６０６】 本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニスト、またはアンタゴニス
トをまた利用して、ケラチノサイト増殖を刺激することにより、日焼けに起因す
る皮膚の老化を予防し得る。
【０６０７】 本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニスト、またはアンタゴニス
トをまた、抜け毛を予防するために利用し得る。なぜなら、ＦＧＦファミリーの
メンバーは、髪形成細胞を活性化し、そしてメラノサイト増殖を促進するからで
ある。同じ方針にそって、本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニス
ト、またはアンタゴニストを利用して、他のサイトカインと組み合わせて使用し
た場合、造血細胞および骨髄細胞の増殖および分化を刺激し得る。
【０６０８】 本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニスト、またはアンタゴニス
トをまた利用して、移植前の器官を維持し得るか、または初代組織の細胞培養を
支持し得る。本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニスト、またはア
ンタゴニストはまた、初期胚における分化のための中胚葉起源の組織を誘導する
ために利用され得る。
【０６０９】 本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニスト、またはアンタゴニス
トはまた、先に議論されたような造血系統に加えて、胚性幹細胞の分化または増
殖を増加または減少し得る。
【０６１０】 本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニスト、またはアンタゴニス
トはまた、哺乳動物の特徴（例えば、身長、体重、毛の色、眼の色、皮膚、脂肪
組織の割合、色素沈着、大きさ、および形）を調節するために使用され得る（例
えば、美容外科）。同様に、本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニ
スト、またはアンタゴニストは、異化作用、同化作用、プロセシング、利用、お
よびエネルギーの貯蔵に影響を及ぼす哺乳動物の代謝を調節するために使用され
得る。
【０６１１】 本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニスト、またはアンタゴニス
トは、バイオリズム、カリカディック（ｃａｒｉｃａｄｉｃ）リズム、うつ病（
抑うつ性の障害を含む）、暴力の傾向、痛みへの耐性、生殖能力（好ましくは、
アクチビンまたはインヒビン様活性によって）、ホルモンレベルもしくは内分泌
物レベル、食欲、性欲、記憶、ストレス、または他の認知の質に影響を及ぼすこ
とによって、哺乳動物の精神状態または身体状態を変更するために使用され得る
。
【０６１２】 本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニスト、またはアンタゴニス
トはまた、例えば、貯蔵能力、脂肪含有量、脂質、タンパク質、炭水化物、ビタ
ミン、ミネラル、補因子、または他の栄養成分を増加または減少させるための、
食品添加物または保存剤として使用され得る。
【０６１３】 上記の適用は、広範な種々の宿主における使用を有する。このような宿主とし
ては、ヒト、マウス、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、マウス、ラッ
ト、ハムスター、ブタ、ミニブタ、ニワトリ、ヤギ、ウシ、ヒツジ、イヌ、ネコ
、非ヒト霊長類、およびヒトが挙げられるが、これらの限定されない。特定の実
施形態において、宿主は、マウス、ウサギ、ヤギ、モルモット、ニワトリ、ラッ
ト、ハムスター、ブタ、ヒツジ、イヌまたはネコである。好ましい実施形態にお
いて、宿主は哺乳動物である。最も好ましい実施形態において、宿主は、ヒトで
ある。 （他の好ましい実施形態） 本願発明の他の好ましい実施形態は、配列番号Ｘまたはその相補鎖、および／
またはｃＤＮＡプラスミドＺのヌクレオチド配列中の少なくとも約５０の連続し
たヌクレオチドの配列に、少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む
、単離された核酸分子を含む。
【０６１４】 連続するヌクレオチドの上記配列が、表１の配列番号Ｘに対して同定された位
置の範囲の配列番号Ｘのヌクレオチド配列に含まれる、核酸分子もまた好ましい
。
【０６１５】 配列番号Ｘまたはその相補鎖、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺのヌクレ
オチド配列中の少なくとも約１５０の連続したヌクレオチドの配列に、少なくと
も９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子もまた好まし
い。
【０６１６】 配列番号Ｘまたはその相補鎖、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺのヌクレ
オチド配列中の少なくとも約５００の連続したヌクレオチドの配列に、少なくと
も９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子がさらに好ま
しい。
【０６１７】 さらに好ましい実施得形態は、表１の配列番号Ｘに対して同定された位置の範
囲において配列番号Ｘのヌクレオチド配列に少なくとも９５％同一であるヌクレ
オチド配列を含む核酸分子である。
【０６１８】 さらに好ましい実施形態は、配列番号Ｘまたはその相補鎖、および／またはｃ
ＤＮＡプラスミドＺの完全なヌクレオチド配列に、少なくとも９５％同一である
ヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子である。
【０６１９】 配列番号Ｘまたはその相補鎖および／またはｃＤＮＡプラスミドＺのヌクレオ
チド配列を含む核酸分子に、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下
で、ハイブリダイズする、単離された核酸分子もまた、好ましく、ここで、この
核酸分子は、Ａ残基またはＴ残基のみからなるヌクレオチド配列を有する核酸分
子に、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリザイズしな
い。
【０６２０】 ｃＤＮＡプラスミドＺを含むＤＮＡ分子を含む組成物もまた好ましい。
【０６２１】 ｃＤＮＡプラスミドＺのヌクレオチド配列において少なくとも５０の連続する
ヌクレオチドの配列に、少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む単
離された核酸分子もまた好ましい。
【０６２２】 上記の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列が、ｃＤＮＡプラスミド
Ｚによってコードされるによってコードされるオープンリーディングフレームの
配列のヌクレオチド配列中に含まれる、単離された核酸分子もまた好ましい。
【０６２３】 ｃＤＮＡプラスミドによってコードされるヌクレオチド配列中の少なくとも１
５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチド
配列を含む、単離された核酸分子もまた好ましい。
【０６２４】 さらに好ましい実施形態は、ｃＤＮＡプラスミドによってコードされるヌクレ
オチド配列中の少なくとも５００の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９
５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子である。
【０６２５】 さらに好ましい実施形態は、ｃＤＮＡプラスミドによってコードされる完全な
ヌクレオチド配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離
された核酸分子である。
【０６２６】 さらに好ましい実施形態は、以下からなる群から選択される配列中の少なくと
も５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチ
ド配列を含む核酸分子を、生物学的サンプルにおいて検出するための方法である
：配列番号Ｘのヌクレオチド配列またはそれに相補的な鎖、およびｃＤＮＡプラ
スミドＺによってコードされるヌクレオチド配列；この方法は、上記サンプル中
の少なくとも１つの核酸分子のヌクレオチド配列を、上記の群から選択された配
列と比較する工程および上記サンプル中の上記核酸分子の配列が、上記選択され
た配列に少なくとも９５％同一であるか否かを決定する工程を包含する。
【０６２７】 上記の配列を比較する工程が、上記サンプル中の核酸分子と、上記の群から選
択される上記の配列を含む核酸分子との間の核酸ハイブリダイゼーションの程度
を決定する工程を包含する、上記方法もまた好ましい。同様に、上記の配列を比
較する工程が、上記サンプル中の核酸分子から決定されるヌクレオチド配列と、
上記の群から選択される配列とを比較する工程によって実施される、上記方法も
また好ましい。核酸分子は、ＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子を含み得る。
【０６２８】 さらに好ましい実施形態は、生物学的サンプルの種、組織、または細胞型を同
定するための方法であって、この方法は、以下からなる群から選択される配列中
の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一である
ヌクレオチド配列を含む上記サンプル中の核酸分子を（もしあれば）検出する工
程を包含する：配列番号Ｘのヌクレオチド配列またはその相補鎖およびｃＤＮＡ
プラスミドＺによってコードされるヌクレオチド配列。
【０６２９】 生物学的サンプルの種、組織、または細胞型を同定するための方法は、少なく
とも２つのヌクレオチド配列のパネル中のヌクレオチド配列を含む核酸分子を検
出する工程を包含し得、ここで上記パネル中の少なくとも１つの配列は、上記の
群から選択される配列中の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少な
くとも９５％同一である。
【０６３０】 タンパク質をコードする配列番号Ｘまたはその相補鎖またはｃＤＮＡプラスミ
ドＺのヌクレオチド配列の異常な構造または発現と関連する病理学的状態を、被
験体において診断するための方法もまた好ましく、この方法は、以下からなる群
から選択される配列中の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なく
とも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、核酸分子（もしあれば）を、上
記被験体から得られる生物学的サンプルにおいて検出する工程を包含する：配列
番号Ｘのヌクレオチド配列またはその相補鎖およびｃＤＮＡのプラスミドＺのヌ
クレオチド配列。
【０６３１】 病理学的状態を診断するための方法は、少なくとも２つのヌクレオチド配列の
パネル中のヌクレオチド配列を含む核酸分子を検出する工程を包含し得、ここで
、上記パネル中の少なくとも１つの配列は、上記群から選択される配列中の少な
くとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一である。
【０６３２】 上記の核酸分子のヌクレオチド配列が、少なくとも２つのヌクレオチド配列の
パネルを含む、単離された核酸分子を含む組成物もまた好ましく、ここで上記の
パネル中の少なくとも１つの配列は、以下からなる群から選択される配列中の少
なくとも５０個連続したヌクレオチドの配列と少なくとも９５％同一である：配
列番号Ｘのヌクレオチド配列またはその相補鎖およびｃＤＮＡプラスミドＺによ
りコードされるヌクレオチド配列。この核酸分子は、ＤＮＡ分子またはＲＮＡ分
子を含み得る。
【０６３３】 配列番号Ｙのポリペプチド配列；配列番号Ｘもしくはその相補鎖によりコード
されるポリペプチドおよび／またはｃＤＮＡプラスミドＺによりコードされるポ
リペプチド中の少なくとも約１０個連続したアミノ酸の配列と少なくとも９０％
同一のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた好ましい。
【０６３４】 配列番号Ｙのアミノ酸配列；配列番号Ｘもしくはその相補鎖によりコードされ
るポリペプチドのアミノ酸配列および／またはｃＤＮＡプラスミドＺによりコー
ドされるポリペプチドのアミノ酸配列中の少なくとも約３０個連続したアミノ酸
の配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド
もまた好ましい。
【０６３５】 配列番号Ｙのアミノ酸配列；配列番号Ｘもしくはその相補鎖によりコードされ
るポリペプチドのアミノ酸配列および／またはｃＤＮＡプラスミドＺによりコー
ドされるポリペプチドのアミノ酸配列中の少なくとも約１００個連続したアミノ
酸の配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチ
ドはさらに好ましい。
【０６３６】 配列番号Ｙの完全アミノ酸配列；配列番号Ｘもしくはその相補鎖によりコード
されるポリペプチドの完全アミノ酸配列および／またはｃＤＮＡプラスミドＺに
よりコードされるポリペプチドの完全アミノ酸配列と少なくとも９５％同一のア
ミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドはさらに好ましい。
【０６３７】 ｃＤＮＡプラスミドＺによりコードされるポリペプチドの完全アミノ酸配列中
の少なくとも約１０個連続したアミノ酸の配列と少なくとも９０％同一のアミノ
酸配列を含む、単離されたポリペプチドはさらに好ましい。
【０６３８】 上記の連続したアミノ酸の配列が、ｃＤＮＡプラスミドＺによってコードされ
るポリペプチド；配列番号Ｘもしくはその相補鎖によりコードされるポリペプチ
ドおよび／または配列番号Ｙのポリペプチド配列の一部のアミノ酸配列に含まれ
る、ポリペプチドもまた好ましい。
【０６３９】 ｃＤＮＡプラスミドＺによってコードされるポリペプチドのアミノ酸配列中の
少なくとも約３０個連続したアミノ酸の配列と少なくとも９５％同一であるアミ
ノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた、好ましい。
【０６４０】 ｃＤＮＡプラスミドＺによってコードされるポリペプチドのアミノ酸配列中の
少なくとも約１００個連続したアミノ酸の配列と少なくとも９５％同一であるア
ミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた、好ましい。
【０６４１】 ｃＤＮＡプラスミドＺによってコードされるポリペプチドのアミノ酸配列と少
なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた
、好ましい。
【０６４２】 以下からなる群から選択される配列中の、少なくとも１０個連続したアミノ酸
の配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドに対して
特異的に結合する単離された抗体は、さらに好ましい：配列番号Ｙのポリペプチ
ド；配列番号Ｘもしくはその相補鎖によりコードされるポリペプチド配列および
ｃＤＮＡプラスミドＺによりコードされるポリペプチド。
【０６４３】 以下：配列番号Ｙのポリペプチド配列；配列番号Ｘもしくはその相補鎖により
コードされるポリペプチドおよびｃＤＮＡプラスミドＺによりコードされるポリ
ペプチドからなる群から選択された配列中の、少なくとも１０個連続したアミノ
酸の配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドを、生
物学的サンプルにおいて検出する方法はさらに好ましく；この方法は、このサン
プル中における少なくとも１つのポリペプチド分子のアミノ酸配列をこの群から
選択された配列と比較する工程およびこのサンプル中におけるこのポリペプチド
分子の配列が、少なくとも１０個連続したアミノ酸のこの配列と少なくとも９０
％同一であるかどうかを決定する工程を含む。
【０６４４】 このサンプル中における少なくとも１つのポリペプチド分子のアミノ酸配列を
、この群から選択された配列と比較するこの工程が、このサンプル中のポリペプ
チドの、以下：配列番号Ｙのポリペプチド配列；配列番号Ｘもしくはその相補鎖
によりコードされるポリペプチドおよびｃＤＮＡプラスミドＺによりコードされ
るポリペプチドからなる群から選択された配列中の少なくとも１０個連続したア
ミノ酸の配列に対して、少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペ
プチドと特異的に結合する抗体に対する特異的な結合の程度を決定することを含
む、上記の方法もまた、好ましい。
【０６４５】 配列を比較する工程が、このサンプル中のポリペプチド分子から決定されたア
ミノ酸配列を、この群から選択されたこの配列と比較することによって行われる
、上記の方法もまた好ましい。
【０６４６】 生物学的サンプルの種、組織または細胞型を同定する方法もまた好ましく、こ
こでこの方法は、もし存在するならば、以下からなる群から選択される配列にお
ける少なくとも１０個連続したアミノ酸の配列と少なくとも９０％同一であるア
ミノ酸配列を含むポリペプチド分子をこのサンプル中で検出する工程を含む：配
列番号Ｙのポリペプチド配列；配列番号Ｘもしくはその相補鎖によりコードされ
るポリペプチドおよびｃＤＮＡプラスミドＺによりコードされるポリペプチド。
【０６４７】 生物学的サンプルの種、組織または細胞型を同定する上記の方法もまた好まし
く、ここでこの方法は、少なくとも２つのアミノ酸配列のパネルにおけるアミノ
酸配列を含むポリペプチド分子を検出する工程を含み、ここでこのパネル中の少
なくとも１つの配列は、上記の群から選択された配列における少なくとも１０個
連続したアミノ酸の配列と少なくとも９０％同一である。
【０６４８】 被験体において、表１において同定された、ポリペプチドをコードする核酸配
列の異常な構造または発現に関連する病的状態を診断する方法もまた、好ましく
、ここで、この方法は、この被験体から得られた生物学的サンプルにおいて、少
なくとも２つのアミノ酸配列のパネルにおけるアミノ酸配列を含むポリペプチド
分子を検出する工程を含み、ここでこのパネル中の少なくとも１つの配列は、以
下からなる群から選択される配列における少なくとも１０個連続したアミノ酸の
配列と少なくとも９０％同一である：配列番号Ｙのポリペプチド配列；配列番号
Ｘもしくはその相補鎖によりコードされるポリペプチドおよびｃＤＮＡプラスミ
ドＺによりコードされるポリペプチド。
【０６４９】 これらの方法のいずれかにおいて、上記ポリペプチド分子を検出する工程は、
抗体を使用することを包含する。
【０６５０】 以下からなる群から選択された配列中の、少なくとも１０個連続したアミノ酸
の配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコード
するヌクレオチド配列と、少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む
、単離された核酸分子もまた、好ましい：配列番号Ｙのポリペプチド配列；配列
番号Ｘもしくはその相補鎖によりコードされるポリペプチドおよびｃＤＮＡプラ
スミドＺによりコードされるポリペプチド。
【０６５１】 上記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、原核生物宿主でのこのポ
リペプチドの発現について最適化されている、単離された核酸分子もまた、好ま
しい。
【０６５２】 上記ポリペプチドが以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、単離
された核酸分子もまた、好ましい：配列番号Ｙのポリペプチド配列；配列番号Ｘ
もしくはその相補鎖によりコードされるポリペプチドおよびｃＤＮＡプラスミド
Ｚによりコードされるポリペプチド。
【０６５３】 上記の単離された核酸分子のいずれかをベクター中に挿入する工程を含む、組
換えベクターの作製方法はさらに好ましい。この方法によって生成された組換え
ベクターも、好ましい。宿主細胞中にベクターを導入する工程を含む、組換え宿
主細胞を作製する方法、ならびにこの方法によって生成された組換え宿主細胞も
また、好ましい。
【０６５４】 単離されたポリペプチドを作製する方法であって、このポリペプチドが発現さ
れるような条件下でこの組換え宿主細胞を培養する工程、およびこのポリペプチ
ドを回収する工程を包含する、方法もまた好ましい。この組換え宿主細胞が真核
生物細胞であり、そしてこのポリペプチドが以下からなる群から選択されたアミ
ノ酸配列を含むヒトタンパク質である、単離されたポリペプチドを作製するこの
方法もまた好ましい：配列番号Ｙのポリペプチド配列；配列番号Ｘもしくはその
相補鎖によりコードされるポリペプチドおよびｃＤＮＡプラスミドＺによりコー
ドされるポリペプチド。この方法によって生成された単離されたポリペプチドも
また、好ましい。
【０６５５】 増加したレベルのタンパク質活性を必要とする個体を処置する方法もまた、好
ましく、ここで、この方法は、このような個体に、この個体においてこのタンパ
ク質の活性のレベルを増加させるのに有効な量の、本願発明の単離されたポリペ
プチド、ポリヌクレオチド、その免疫原性フラグメントもしくはアナログ、結合
因子、抗体、あるいは抗原フラグメントを含む治療剤を投与する工程を包含する
。
【０６５６】 減少したレベルのタンパク質活性を必要とする個体を処置する方法もまた、好
ましく、ここで、この方法は、このような個体に、この個体においてこのタンパ
ク質の活性のレベルを減少させるのに有効な量の、本願発明の単離されたポリペ
プチド、ポリヌクレオチド、その免疫原性フラグメントもしくはアナログ、結合
因子、抗体、あるいは抗原フラグメントを含む治療剤を投与する工程を包含する
。
【０６５７】 本発明の特定の実施形態では、表２の４番目の列に列挙される各「コンティグ
ＩＤ」について、好ましくは、表２の５番目の列で参照されるヌクレオチド配列
、および一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここでａおよびｂは
、表２の列３で参照される対応する配列番号Ｘについて独自に決定される）を含
むか、またはそのようなヌクレオチド配列からなる、１つ以上のポリヌクレオチ
ドが除外される。さらに特定の実施形態は、表２の５番目の列において参照され
る特定のポリヌクレオチド配列の１、２、３、４個、またはそれ以上を除外する
ポリヌクレオチド配列に関する。この表は、この一般式により除外され得る配列
の全てを含むことを決して意味せず、この表は、単に例示的な例である。これら
の登録を通じて利用可能な全ての文献は、本明細書によりその全体が参考として
援用される。
【０６５８】
【表２】
【０６５９】
【表３】
【０６６０】
【表４】 概して、本発明を記載してきたが、例示の目的のために提供されかつ限定する
ことを意図しない、以下の実施例を参照することによって、本発明はより容易に
理解される。
【０６６１】 （実施例） （実施例１：選択されたｃＤＮＡクローンの寄託されたサンプルからの単離） 引用されるＡＴＣＣ受託物中の各ｃＤＮＡクローンは、プラスミドベクター中
に含まれる。表１は、各クローンが単離されたｃＤＮＡライブラリーを構築する
ために用いられたベクターを同定する。多くの場合において、ライブラリーを構
築するために使用されたベクターは、プラスミドが切り出されたファージベクタ
ーである。すぐ下の表は、ｃＤＮＡライブラリーを構築する際に使用される各フ
ァージベクターについて関連するプラスミドを相関づける。例えば、特定のクロ
ーンがベクター「Ｌａｍｂｄａ Ｚａｐ」中に単離されていると表１に同定され
る場合、対応する受託クローンは、「ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ」である。
【０６６２】
【表５】 ベクターＬａｍｂｄａ Ｚａｐ（米国特許第５，１２８，２５６号および同第
５，２８６，６３６号）、Ｕｎｉ−Ｚａｐ ＸＲ（米国特許第５，１２８，２５
６号および同第５，２８６，６３６号）、Ｚａｐ Ｅｘｐｒｅｓｓ（米国特許第
５，１２８，２５６号および同第５，２８６，６３６号）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉ
ｐｔ（ｐＢＳ）（Ｓｈｏｒｔら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１６：
７５８３−７６００（１９８８）；Ａｌｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓら、Ｎｕｃｌｅｉｃ
Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １７：９４９４（１９８９））ならびにｐＢＫ（Ａｌ
ｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓら、Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ５：５８−６１（１９９２））
は、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．、１１
０１１ Ｎ．Ｔｏｒｒｅｙ Ｐｉｎｅｓ Ｒｏａｄ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ，
９２０３７から市販されている。ｐＢＳは、アンピシリン耐性遺伝子を含み、そ
してｐＢＫはネオマイシン耐性遺伝子を含む。両方とも、Ｅ．ｃｏｌｉ株ＸＬ−
１ Ｂｌｕｅ（これもまた、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能である）に形質
転換され得る。ｐＢＳは、ＳＫ＋、ＳＫ−、ＫＳ＋およびＫＳの４形態で入荷す
る。ＳおよびＫとは、ポリリンカー領域（「Ｓ」とはＳａｃＩであり、そして「
Ｋ」とは、ＫｐｎＩのことであり、これらは、リンカーのそれぞれの各末端での
最初の部位である）に隣接するＴ７およびＴ３プライマー配列に対するポリリン
カーの配向をいう。「＋」または「−」とは 、ある方向においてｆ１ ｏｒｉ
から開始される一本鎖レスキューがセンス鎖ＤＮＡを生成し、そして他方におい
てアンチセンスであるようなｆ１複製起点（「ｏｒｉ」）の配向をいう。
【０６６３】 ベクターｐＳｐｏｒｔ１、ｐＣＭＶＳｐｏｒｔ ２．０およびｐＣＭＶＳｐｏ
ｒｔ３．０をＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ
６００９、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ ２０８９７から入手した。全ての
Ｓｐｏｒｔベクターはアンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏｌｉ株Ｄ
Ｈ１０Ｂ（これもまた、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能であ
る）に形質転換され得る。（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ，Ｃ．Ｅ．ら、Ｆｏｃｕｓ
１５：５９（１９９３）を参照のこと）。ベクターｌａｆｍｉｄ ＢＡ（Ｂｅｎ
ｔｏ Ｓｏａｒｅｓ、Ｃｏｌｕｍｂｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、ＮＹ）は、ア
ンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏｌｉ株ＸＬ−１ Ｂｌｕｅに形質
転換され得る。ベクターｐＣＲ（登録商標）２．１（これはＩｎｖｉｔｒｏｇｅ
ｎ、１６００ Ｆａｒａｄａｙ Ａｖｅｎｕｅ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ ９２
００８から入手可能である）は、アンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃ
ｏｌｉ株ＤＨ１０Ｂ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能である
）に形質転換され得る（例えば、Ｃｌａｒｋ、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１
６：９６７７−９６８６（１９８８）およびＭｅａｄら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ ９：（１９９１）を参照のこと）。好ましくは、本発明のポリヌクレ
オチドは、表１における特定のクローンについて同定されたファージベクター配
列、ならびに上記に示された対応するプラスミドベクター配列を含まない。
【０６６４】 表１に引用される、任意の所定のｃＤＮＡクローンについてＡＴＣＣ受託番号
を与えられたサンプルにおける寄託された物質はまた、１つ以上のさらなるプラ
スミド（これは各々、その所定のクローンとは異なるｃＤＮＡクローンを含む）
を含み得る。従って、同じＡＴＣＣ受託番号を共有する寄託物は、表１に同定さ
れる各ｃＤＮＡクローンのためのプラスミドを少なくとも含む。代表的には、表
１に引用される各ＡＴＣＣ寄託物のサンプルは、ほぼ等量（重量で）の約５０個
のプラスミドＤＮＡ（これは各々、異なるｃＤＮＡクローンを含む）の混合物を
含む；しかし、このような寄託サンプルは、５０個よりも多いかまたは少ないｃ
ＤＮＡクローン（約５００個までのｃＤＮＡクローン）のためのプラスミドを含
み得る。
【０６６５】 表１における特定のクローンについて引用されるプラスミドＤＮＡの寄託サン
プルからそのクローンを単離するために２つのアプローチが使用され得る。第一
に、プラスミドを、配列番号Ｘに対応するポリヌクレオチドプローブを使用して
、クローンをスクリーニングすることによって直接単離する。
【０６６６】 特に、３０〜４０ヌクレオチドを有する特定のポリヌクレオチドを、報告され
ている配列に従って、Ａｐｐｌｉｅｄ ＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓのＤＮＡ合成装置
を使用して合成する。オリゴヌクレオチドを、例えば、32Ｐ−γ−ＡＴＰで、Ｔ
４ポリヌクレオチドキナーゼを用いて標識し、そして慣用的な方法に従って精製
する。（例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：
Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ
ｏｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ、ＮＹ（１９８２））。プラスミド
混合物を、当業者に公知の技術（例えば、ベクター供給者によって提供される技
術または上記で引用された関連の刊行物もしくは特許において提供される技術）
を用いて、上記のような適切な宿主（例えば、ＸＬ−１ Ｂｌｕｅ（Ｓｔｒａｔ
ａｇｅｎｅ））に形質転換する。形質転換体を１．５％寒天プレート（適切な選
択薬剤、例えば、アンピシリンを含む）に、１プレートあたり約１５０の形質転
換体（コロニー）の密度でプレーティングする。これらのプレートを、細菌コロ
ニースクリーニングについての慣用的な方法（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ
、第２版、（１９８９）、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１．９３〜１．１０４頁）または当業者に公知の他の
技術に従って、ナイロンメンブレンを使用してスクリーニングする。
【０６６７】 あるいは、配列番号Ｘの両端（すなわち、表１に規定されるクローンの５’Ｎ
Ｔおよび３’ＮＴによって囲まれる配列番号Ｘの領域内）に由来する、１７〜２
０ヌクレオチドの２つのプライマーを合成し、そしてこれらを使用して、寄託さ
れたｃＤＮＡプラスミドをテンプレートとして使用して、所望のｃＤＮＡを増幅
する。ポリメラーゼ連鎖反応を、慣用的な条件下で、例えば、０．５μｇの上記
ｃＤＮＡテンプレートとの反応混合物の２５μｌ中で実施する。便利な反応混合
物は、１．５〜５ｍＭ ＭｇＣｌ2、０．０１％（ｗ／ｖ）ゼラチン、それぞれ
２０μＭのｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ、２５ｐｍｏｌの各プライ
マーおよび０．２５ユニットのＴａｑポリメラーゼである。３５サイクルのＰＣ
Ｒ（９４℃での変性を１分間；５５℃でのアニールを１分間；７２℃での伸長を
１分間）を、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｃｅｔｕｓ自動化サーマルサイクラー
を用いて実施する。増幅産物をアガロースゲル電気泳動により分析し、そして予
想される分子量のＤＮＡバンドを切り出し、そして精製する。ＰＣＲ産物を、Ｄ
ＮＡ産物をサブクローニングおよび配列決定することによって、選択された配列
であることを確認する。
【０６６８】 寄託されたクローンに存在しないかもしれない遺伝子の５’非コード部分また
は３’非コード部分の同定のために、いくつかの方法が利用可能である。これら
の方法は、以下を含むがこれらに限定されない：フィルタープローブ探索、特異
的プローブを使用するクローン富化、および当該分野で周知である５’および３
’「ＲＡＣＥ」プロトコルと類似するかまたは同一のプロトコル。例えば、５’
ＲＡＣＥに類似する方法は、所望の全長転写物の欠けている５’末端を生成する
ために利用可能である（Ｆｒｏｍｏｎｔ−Ｒａｃｉｎｅら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａ
ｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２１（７）：１６８３−１６８４（１９９３））。
【０６６９】 簡潔には、特定のＲＮＡオリゴヌクレオチドを、全長遺伝子ＲＮＡ転写物をお
そらく含むＲＮＡの集団の５’末端に連結する。連結されたＲＮＡオリゴヌクレ
オチドに特異的なプライマーおよび目的の遺伝子の公知の配列に特異的なプライ
マーを含むプライマーセットを使用して、所望の全長遺伝子の５’部分をＰＣＲ
増幅する。次いで、この増幅した産物を配列決定し得、そしてこれを使用して全
長遺伝子を生成し得る。
【０６７０】 この上記の方法は、所望の供給源から単離された総ＲＮＡを用いて開始するが
、ポリＡ＋ＲＮＡをも使用し得る。次いで、ＲＮＡ調製物を、必要ならばホスフ
ァターゼで処理して、後のＲＮＡリガーゼ工程を妨害し得る分解または損傷ＲＮ
Ａの５’リン酸基を排除し得る。次いで、ホスファターゼを不活化するべきであ
り、そしてＲＮＡをメッセンジャーＲＮＡの５’末端に存在するキャップ構造を
除去するために、タバコ酸性ピロホスファターゼを用いて処理するべきである。
この反応は、次いでＴ４ ＲＮＡリガーゼを用いてＲＮＡオリゴヌクレオチドに
連結され得る、キャップ切断ＲＮＡの５’末端に５’リン酸基を残す。
【０６７１】 この改変型ＲＮＡ調製物を、遺伝子特異的なオリゴヌクレオチドを用いる、第
一鎖ｃＤＮＡ合成のためのテンプレートとして使用する。第一鎖合成反応物を、
連結されたＲＮＡオリゴヌクレオチドに特異的なプライマーおよび目的の遺伝子
の公知の配列に特異的なプライマーを用いる、所望の５’末端のＰＣＲ増幅のた
めのテンプレートとして使用する。次いで、得られた産物を配列決定し、そして
分析して５’末端配列が所望の遺伝子に属することを確認する。
【０６７２】 （実施例２：ポリヌクレオチドに対応するゲノムクローンの単離） ヒトゲノムＰ１ライブラリー（Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ．）
を、実施例１に記載される方法に従って、配列番号Ｘに対応するｃＤＮＡ配列に
ついて選択されたプライマーを用いるＰＣＲによってスクリーニングする（Ｓａ
ｍｂｒｏｏｋもまた参照のこと）。
【０６７３】 （実施例３：ポリペプチドの組織分布） 本発明のポリヌクレオチドのｍＲＮＡ発現の組織分布を、とりわけ、Ｓａｍｂ
ｒｏｏｋらによって記載されるノーザンブロット分析についてのプロトコルを用
いて決定する。例えば、実施例１に記載される方法によって生成されるｃＤＮＡ
プローブを、ｒｅｄｉｐｒｉｍｅTM ＤＮＡ ｌａｂｅｌｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ
（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて、製造者の指示に従
って、Ｐ32で標識する。標識後、プローブを、ＣＨＲＯＭＡ ＳＰＩＮ−１００ TM カラム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．）を使用し
て、製造者のプロトコル番号ＰＴ１２００−１に従って精製する。次いで、精製
した標識プローブを使用して、種々のヒト組織をｍＲＮＡ発現について試験する
。
【０６７４】 種々のヒト組織（Ｈ）またはヒト免疫系組織（ＩＭ）を含む多重組織ノーザン
（ＭＴＮ）ブロット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を、ＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂTMハイブリ
ダイゼーション溶液（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用いて、製造者のプロトコル番号Ｐ
Ｔ１１９０−１に従って、標識プローブで試験する。ハイブリダイゼーションお
よび洗浄後、ブロットをマウントして、そして−７０℃で一晩フィルムに露出し
、そしてフィルムを標準的な手順に従って現像する。
【０６７５】 （実施例４：ポリヌクレオチドの染色体マッピング） オリゴヌクレオチドプライマーのセットを、配列番号Ｘの５’末端の配列に従
って設計する。このプライマーは、好ましくは約１００ヌクレオチドにわたる。
次いで、このプライマーセットを、以下のセットの条件下でポリメラーゼ連鎖反
応に使用する：９５℃で３０秒；５６℃で１分；７０℃で１分。このサイクルを
３２回反復し、次いで１回、７０℃で５分間のサイクルを行う。個々の染色体ま
たは染色体フラグメントを含む体細胞ハイブリッドパネル（Ｂｉｏｓ，Ｉｎｃ）
に加えて、ヒト、マウス、およびハムスターのＤＮＡを鋳型として使用する。反
応物を、８％ポリアクリルアミドゲルまたは３．５％アガロースゲルのいずれか
で分析する。染色体マッピングを、特定の体細胞ハイブリッドにおける約１００
ｂｐのＰＣＲフラグメントの存在によって決定する。
【０６７６】 （実施例５：ポリペプチドの細菌性発現） 本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを、実施例１に概説する
ように、ＤＮＡ配列の５’および３’末端に対応するＰＣＲオリゴヌクレオチド
プライマーを使用して増幅して挿入フラグメントを合成する。ｃＤＮＡ挿入物を
増幅するために使用されるプライマーは、発現ベクターに増幅産物をクローニン
グするために、ＢａｍＨＩおよびＸｂａＩのような制限部位、ならびに、必要な
らば、開始／停止コドンを好ましくは含むべきである。例えば、ＢａｍＨＩおよ
びＸｂａＩは、細菌性発現ベクターｐＱＥ−９（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｃｈ
ａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ）の制限酵素部位に対応する。このプラスミドベクター
は、抗生物質耐性（Ａｍｐr）、細菌の複製起点（ｏｒｉ）、ＩＰＴＧで調節可
能なプロモーター／オペレーター（Ｐ／Ｏ）、リボソーム結合部位（ＲＢＳ）、
６−ヒスチジンタグ（６−Ｈｉｓ）、および制限酵素クローニング部位をコード
する。
【０６７７】 ｐＱＥ−９ベクターをＢａｍＨＩおよびＸｂａＩで消化し、そして、増幅され
たフラグメントを細菌性ＲＢＳにおいて開始されるリーディングフレームを維持
しながらｐＱＥ−９ベクターに連結する。次いで、連結混合物を、ｌａｃＩリプ
レッサーを発現し、またカナマイシン耐性（Ｋａｎr）を与えるプラスミドｐＲ
ＥＰ４の多重コピーを含む、Ｅ．ｃｏｌｉ株Ｍ１５／ｒｅｐ４（Ｑｉａｇｅｎ，
Ｉｎｃ．）を形質転換するために使用する。形質転換体を、ＬＢプレート上で生
育するそれらの能力によって同定し、そしてアンピシリン／カナマイシン耐性コ
ロニーを選択する。プラスミドＤＮＡを単離し、そして制限分析によって確認す
る。
【０６７８】 所望の構築物を含むクローンを、Ａｍｐ（１００μｇ／ｍｌ）およびＫａｎ（
２５μｇ／ｍｌ）の両方を補充したＬＢ培地における液体培養で一晩（Ｏ／Ｎ）
増殖させる。Ｏ／Ｎ培養物を、１：１００〜１：２５０の比で大量培養物に接種
するために使用する。細胞を、０．４と０．６との間の光学密度６００（Ｏ．Ｄ
．600）まで増殖させる。次いで、ＩＰＴＧ（イソプロピル−Ｂ−Ｄ−チオガラ
クトピラノシド）を最終濃度１ｍＭになるように加える。ＩＰＴＧは、ｌａｃＩ
リプレッサーの不活化により誘導され、Ｐ／Ｏを除去し、遺伝子発現の増加を導
く。
【０６７９】 細胞を、さらに３〜４時間増殖させる。次いで、細胞を遠心分離（６０００×
ｇで２０分間）によって収集する。細胞ペレットを、カオトロピック剤である６
ＭグアニジンＨＣｌ中に、４℃で３〜４時間攪拌することによって可溶化させる
。細胞細片を遠心分離によって取り除き、そしてポリペプチドを含む上清を、ニ
ッケル−ニトリロ三酢酸（「Ｎｉ−ＮＴＡ」）アフィニティー樹脂カラム（ＱＩ
ＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．前出より入手可能）にロードする。６×Ｈｉｓタグを有する
タンパク質は、Ｎｉ−ＮＴＡ樹脂に高い親和性で結合し、そして単純な１工程手
順で精製され得る（詳細には、Ｔｈｅ ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｓｔ（１
９９５）ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，前出を参照のこと）。
【０６８０】 手短に言えば、上清を、６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ８のカラムにロードし
、そのカラムを、最初に１０容量の６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ８で洗浄し、
次いで１０容量の６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ６で洗浄し、そして最後にポリ
ペプチドを、６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ５で溶出する。
【０６８１】 次いで、精製したタンパク質を、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）または５
０ｍＭ 酢酸ナトリウム、ｐＨ６の緩衝液および２００ｍＭ ＮａＣｌに対して
透析することにより再生させる。あるいは、タンパク質はＮｉ−ＮＴＡカラムに
固定化している間に、首尾よく再折畳みされ得る。推奨条件は以下の通りである
：プロテアーゼインヒビターを含む、５００ｍＭ ＮａＣｌ、２０％グリセロー
ル、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ｐＨ７．４中の６Ｍ〜１Ｍ尿素の直線勾配を
使用する再生。再生は１．５時間以上の時間をかけて行うべきである。再生後、
タンパク質を２５０ｍＭイミダゾールの添加によって溶出させる。イミダゾール
を、ＰＢＳまたは５０ｍＭ酢酸ナトリウム ｐＨ６の緩衝液および２００ｍＭ
ＮａＣｌに対する最終の透析工程によって除去する。精製したタンパク質を、４
℃で保存するか、または−８０℃で冷凍する。
【０６８２】 上記の発現ベクターに加えて、本発明はさらに、本発明のポリヌクレオチドに
作動可能に連結されたファージオペレーターおよびプロモーターエレメントを含
み、ｐＨＥ４ａと呼ばれる発現ベクターを含む（ＡＴＣＣ受託番号２０９６４５
、１９９８年２月２５日に寄託）。このベクターは以下を含む：１）選択マーカ
ーとしてのネオマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子、２）Ｅ．ｃｏｌｉ複
製起点、３）Ｔ５ファージプロモーター配列、４）２つのｌａｃオペレーター配
列、５）シャイン−ダルガーノ配列、および６）ラクトースオペロンリプレッサ
ー遺伝子（ｌａｑＩｑ）。複製起点（ｏｒｉＣ）は、ｐＵＣ１９（ＬＴＩ，Ｇａ
ｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）に由来する。プロモーター配列およびオペレータ
ー配列を合成的に作製する。
【０６８３】 ＮｄｅＩおよびＸｂａＩ、ＢａｍＨＩ、ＸｈｏＩ、またはＡｓｐ７１８によっ
てベクターを制限処理し、制限生成物をゲルで泳動し、そしてより大きな方のフ
ラグメント（スタッファー（ｓｔｕｆｆｅｒ）フラグメントは約３１０塩基対で
あるべきである）を単離することによって、ＤＮＡをｐＨＥａに挿入し得る。Ｄ
ＮＡ挿入物を、ＮｄｅＩ（５’プライマー）およびＸｂａＩ、ＢａｍＨＩ、Ｘｈ
ｏＩ、またはＡｓｐ７１８（３’プライマー）に対する制限部位を有するＰＣＲ
プライマーを使用して、実施例１に記載のＰＣＲプロトコルに従って生成する。
ＰＣＲ挿入物を、ゲル精製し、そして適合する酵素で制限処理する。挿入物およ
びベクターを標準的なプロトコルに従って連結する。
【０６８４】 操作されたベクターは、上記のプロトコルにおいて、細菌系でタンパク質を発
現させるために容易に置換され得る。
【０６８５】 （実施例６：封入体からのポリペプチドの精製） 以下の別の方法は、ポリペプチドが封入体の形態で存在する場合に、Ｅ．ｃｏ
ｌｉ中で発現されたポリペプチドを精製するために使用され得る。他に指定され
ない場合には、以下のすべての工程は４〜１０℃で行われる。
【０６８６】 Ｅ．ｃｏｌｉ発酵の生産期の完了後、細胞培養物を４〜１０℃に冷却し、そし
て１５，０００ｒｐｍの連続遠心分離（Ｈｅｒａｅｕｓ Ｓｅｐａｔｅｃｈ）に
よって細胞を採集する。細胞ペーストの単位重量あたりのタンパク質の予想され
る収量および必要とされる精製タンパク質の量に基づいて、細胞ペーストの適切
な量（重量による）を、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ、５０ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．
４を含む緩衝溶液に懸濁させる。細胞を、高剪断ミキサーを使用して均質な懸濁
液に分散させる。
【０６８７】 次いで、細胞をマイクロフルイダイザー（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）（
Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ，Ｃｏｒｐ．またはＡＰＶ Ｇａｕｌｉｎ，Ｉｎｃ
．）に２回、４０００〜６０００ｐｓｉで溶液を通すことによって溶解させる。
次いでホモジネートを、最終濃度０．５Ｍ ＮａＣｌになるようにＮａＣｌ溶液
と混合し、続いて７０００×ｇで１５分間遠心分離を行う。得られたペレットを
、０．５Ｍ ＮａＣｌ、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ、５０ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．
４を使用して再度洗浄する。
【０６８８】 得られた洗浄した封入体を、１．５Ｍ 塩酸グアニジン（ＧｕＨＣｌ）で２〜
４時間可溶化する。７０００×ｇで１５分間の遠心分離の後、ペレットを廃棄し
、そしてポリペプチドを含む上清を４℃で一晩インキュベートしてさらなるＧｕ
ＨＣｌ抽出を可能にする。
【０６８９】 不溶性粒子を除去するための高速遠心分離（３０，０００×ｇ）に続き、Ｇｕ
ＨＣｌ可溶化タンパク質を、ＧｕＨＣｌ抽出物と、５０ｍＭ ナトリウム、ｐＨ
４．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０容量の緩衝液とを
、激しい攪拌で迅速に混合することによって、再折畳みさせる。再折畳みした希
釈タンパク質溶液を、さらなる精製工程の前の１２時間、混合しないで４℃で保
つ。
【０６９０】 再折畳みされたポリペプチド溶液を清澄にするために、４０ｍＭ酢酸ナトリウ
ム、ｐＨ６．０で平衡化した、適切な表面積を有する０．１６μｍメンブレンフ
ィルターを備えるあらかじめ準備した接線濾過ユニット（例えば、Ｆｉｌｔｒｏ
ｎ）を使用する。濾過したサンプルを、カチオン交換樹脂（例えば、Ｐｏｒｏｓ
ＨＳ−５０，Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）上にロードする
。このカラムを４０ｍＭ 酢酸ナトリウム、ｐＨ６．０で洗浄し、そして同じ緩
衝液中の２５０ｍＭ、５００ｍＭ、１０００ｍＭ、および１５００ｍＭ ＮａＣ
ｌで、段階的な様式で溶出する。溶出液の２８０ｎｍにおける吸光度を連続的に
モニターする。画分を収集し、そしてＳＤＳ−ＰＡＧＥによってさらに分析する
。
【０６９１】 次いでポリペプチドを含む画分をプールし、そして４容量の水と混合する。次
いで希釈されたサンプルを、あらかじめ準備した強アニオン（Ｐｏｒｏｓ ＨＱ
−５０，Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）交換樹脂および弱アニ
オン（Ｐｏｒｏｓ ＣＭ−２０，Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ
）交換樹脂の直列カラムのセットにロードする。カラムを４０ｍＭ 酢酸ナトリ
ウム、ｐＨ６．０で平衡化する。両方のカラムを、４０ｍＭ 酢酸ナトリウム、
ｐＨ６．０、２００ｍＭ ＮａＣｌで洗浄する。次いでＣＭ−２０カラムを１０
カラム容量の直線勾配（０．２Ｍ ＮａＣｌ、５０ｍＭ 酢酸ナトリウム、ｐＨ
６．０から１．０Ｍ ＮａＣｌ、５０ｍＭ 酢酸ナトリウム、ｐＨ６．５の範囲
）を用いて溶出させる。画分を、溶出液の定常Ａ280モニタリング下で収集する
。次いで、（例えば、１６％ ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって判明した）ポリペプチ
ドを含む画分をプールする。
【０６９２】 得られたポリペプチドは、上記の再折畳みおよび精製工程の後で９５％より高
い純度を示すはずである。５μｇの精製タンパク質がロードされる場合、いかな
る主たる混在バンドも、クマシーブルー染色した１６％ ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル
から観察されないはずである。精製タンパク質はまた、エンドトキシン／ＬＰＳ
混在について試験され得、そして代表的には、ＬＰＳ含量はＬＡＬアッセイに従
って、０．１ｎｇ／ｍｌ未満である。
【０６９３】 （実施例７：バキュロウイルス発現系におけるポリペプチドのクローニングお
よび発現） この実施例において、プラスミドシャトルベクターｐＡ２を使用して、ポリヌ
クレオチドをバキュロウイルスに挿入し、ポリペプチドを発現する。この発現ベ
クターは、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多核体ウイルス（
ＡｃＭＮＰＶ）の強力なポリヘドリンプロモーター、続いてＢａｍＨＩ、Ｘｂａ
Ｉ、およびＡｓｐ７１８のような簡便な制限部位を含む。シミアンウイルス４０
（「ＳＶ４０」）のポリアデニル化部位を、効率的なポリアデニル化のために使
用する。組換えウイルスの容易な選択のために、このプラスミドは、同方向の弱
いＤｒｏｓｏｐｈｉｌａプロモーターの制御下で、Ｅ．ｃｏｌｉ由来のβ−ガラ
クトシダーゼ遺伝子、続いてポリヘドリン遺伝子のポリアデニル化シグナルを含
む。挿入された遺伝子は、クローン化したポリヌクレオチドを発現する生存可能
なウイルスを生成する、野生型ウイルスＤＮＡとの細胞媒介性の相同組換えのた
めのウイルス配列と両方の側で隣接する。
【０６９４】 他の多くのバキュロウイルスベクター（例えば、ｐＡｃ３７３、ｐＶＬ９４１
、およびｐＡｃＩＭ１）は、当業者が容易に理解するように、構築物が転写、翻
訳、分泌などのために適切に配置されたシグナル（必要とされる場合、シグナル
ペプチドおよびインフレームなＡＵＧを含む）を提供する限りにおいて、上記の
ベクターの代わりに使用され得る。このようなベクターは、例えば、Ｌｕｃｋｏ
ｗら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７０：３１−３９（１９８９）に記載される。
【０６９５】 具体的には、寄託されたクローンに含まれるｃＤＮＡ配列を、適切な制限部位
および開始／停止コドンを有するプライマーを使用して、実施例１に記載される
ＰＣＲプロトコルを使用して増幅させる。天然に存在するシグナル配列を使用し
て分泌タンパク質を産生する場合、ｐＡ２ベクターは第２のシグナルペプチドを
必要としない。あるいは、Ｓｕｍｍｅｒｓら、「Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｉｎ
ｓｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ」、Ｔｅｘａｓ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｉｏｎ Ｂｕ
ｌｌｅｔｉｎ ＮＯ．：１５５５（１９８７）に記載される標準的な方法を用い
て、このベクターを、バキュロウイルスリーダー配列を含むように改変し得る（
ｐＡ２ＧＰ）。
【０６９６】 増幅されたフラグメントを、市販のキット（「Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」、ＢＩＯ
１０１ Ｉｎｃ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａ．）を使用して、１％アガロース
ゲルから単離する。次いで、このフラグメントを適切な制限酵素で消化し、そし
て再び１％アガロースゲル上で精製する。
【０６９７】 このプラスミドを対応する制限酵素で消化し、そして必要に応じて、当該分野
で公知の慣用の手順を用いて、仔ウシ腸ホスファターゼを用いて脱リン酸し得る
。次いで、このＤＮＡを、市販のキット（「Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」ＢＩＯ １０
１ Ｉｎｃ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａ．）を使用して、１％アガロースゲルか
ら単離する。
【０６９８】 このフラグメントおよび脱リン酸したプラスミドを、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼを
用いて互いに連結する。Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１細胞またはＸＬ−１ Ｂｌｕ
ｅ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌａ Ｊｏｌｌ
ａ，ＣＡ）細胞のような他の適切なＥ．ｃｏｌｉ宿主を、連結混合液で形質転換
し、そして培養プレート上に拡げる。このプラスミドを含む細菌を、個々のコロ
ニー由来のＤＮＡを消化し、そしてゲル電気泳動によって消化産物を分析するこ
とにより同定する。クローニングしたフラグメントの配列を、ＤＮＡ配列決定に
よって確認する。
【０６９９】 このポリヌクレオチドを含む５μｇのプラスミドを、Ｆｅｌｇｎｅｒら、Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：７４１３−７４１７（１９
８７）によって記載されたリポフェクション法を使用して、１．０μｇの市販の
線状化バキュロウイルスＤＮＡ（「ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄTM ｂａｃｕｌｏｖｉ
ｒｕｓ ＤＮＡ」，Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）と同時
トランスフェクトする。１μｇのＢａｃｕｌｏＧｏｌｄTM ウイルスＤＮＡおよ
び５μｇのプラスミドを、５０μｌの無血清グレース培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を含む、マイ
クロタイタープレートの滅菌したウェル中で混合する。その後、１０μｌのリポ
フェクチンおよび９０μｌグレース培地を加え、混合し、そして室温で１５分間
インキュベートする。次いで、トランスフェクション混合液を、無血清のグレー
ス培地１ｍｌを加えた３５ｍｍ組織培養プレートに播種したＳｆ９昆虫細胞（Ａ
ＴＣＣ ＣＲＬ １７１１）に滴下する。次いで、このプレートを２７℃で５時
間インキュベートする。次いで、トランスフェクション溶液をこのプレートから
除去し、そして１０％ウシ胎仔血清を補充した１ｍｌのグレース昆虫培地を添加
する。次いで、培養を２７℃で４日間継続する。
【０７００】 ４日後上清を収集し、そしてＳｕｍｍｅｒｓおよびＳｍｉｔｈ（前出）によっ
て記載されるようにプラークアッセイを行う。「Ｂｌｕｅ Ｇａｌ」（Ｌｉｆｅ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ）を含むア
ガロースゲルを使用して、ｇａｌが発現しているクローン（青色に染色したプラ
ークを生ずる）の容易な同定および単離を可能にする。（この型の「プラークア
ッセイ」の詳細な説明はまた、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．
，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，９−１０頁によって頒布される、昆虫細胞培養お
よびバキュロウイルス学のための使用者ガイドの中に見出され得る）。適切なイ
ンキュベーションの後、青色に染色したプラークを、マイクロピペッターのチッ
プ（例えば、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）で拾う。次いで、組換えウイルスを含む寒天
を、２００μｌのグレース培地を含む微小遠心分離チューブ中で再懸濁させ、そ
して組換えバキュロウイルスを含む懸濁液を使用して、３５ｍｍディッシュに播
種したＳｆ９細胞を感染させる。４日後、これらの培養ディッシュの上清を採集
し、次いで４℃に貯蔵する。
【０７０１】 ポリペプチドの発現を確認するために、１０％熱非働化ＦＢＳを補充したグレ
ース培地中で、Ｓｆ９細胞を増殖させる。この細胞を、約２の感染効率（「ＭＯ
Ｉ」）で、このポリヌクレオチドを含む組換えバキュロウイルスで感染させる。
放射性標識したタンパク質を所望する場合には、６時間後に培地を除去し、そし
てメチオニンおよびシステインを含まないＳＦ９００ ＩＩ培地（Ｌｉｆｅ Ｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．， Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ， ＭＤから入手可
能）に置き換える。４２時間後、５μＣｉの35Ｓ−メチオニンおよび５μＣｉの 35 Ｓ−システイン（Ａｍｅｒｓｈａｍから入手可能）を添加する。細胞をさらに
１６時間インキュベートし、次いで遠心分離によって採集する。上清中のタンパ
ク質ならびに細胞内タンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって、次いでオートラ
ジオグラフィーによって（放射性標識した場合）分析する。
【０７０２】 精製タンパク質のアミノ末端のアミノ酸配列の微量配列決定法を使用して、産
生されたタンパク質のアミノ末端配列を決定し得る。
【０７０３】 （実施例８：哺乳動物細胞におけるポリペプチドの発現） 本発明のポリペプチドを、哺乳動物細胞において発現させ得る。代表的な哺乳
動物発現ベクターは、ｍＲＮＡの転写の開始を媒介するプロモーターエレメント
、タンパク質コード配列、および転写の終結および転写物のポリアデニル化に必
要なシグナルを含む。さらなるエレメントは、エンハンサー、コザック（Ｋｏｚ
ａｋ）配列、ならびに、ＲＮＡスプライシングのためのドナー部位およびアクセ
プター部位に隣接する介在配列を含む。非常に効率的な転写は、ＳＶ４０由来の
初期および後期プロモーター、レトロウイルス（例えばＲＳＶ、ＨＴＬＶＩ、Ｈ
ＩＶＩ）由来の長末端反復（ＬＴＲ）、およびサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）
の初期プロモーターを用いて達成される。しかし、細胞内エレメント（例えば、
ヒトアクチンプロモーター）もまた、使用され得る。
【０７０４】 本発明を実施する際の使用に適切な発現ベクターは、例えば、ｐＳＶＬおよび
ｐＭＳＧ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）、ｐＲＳＶｃ
ａｔ（ＡＴＣＣ ３７１５２）、ｐＳＶ２ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ ３７１４６）、
ｐＢＣ１２ＭＩ（ＡＴＣＣ ６７１０９）、ｐＣＭＶＳｐｏｒｔ２．０、ならび
にｐＣＭＶＳｐｏｒｔ３．０のようなベクターを含む。使用され得る哺乳動物宿
主細胞としては、ヒトのＨｅｌａ細胞、２９３細胞、Ｈ９細胞およびＪｕｒｋａ
ｔ細胞、マウスのＮＩＨ３Ｔ３細胞およびＣ１２７細胞、Ｃｏｓ １細胞、Ｃｏ
ｓ ７細胞およびＣＶ１細胞、ウズラのＱＣ１−３細胞、マウスのＬ細胞、およ
びチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞が挙げられる。
【０７０５】 あるいは、ポリペプチドは、染色体に組み込まれたポリヌクレオチドを含む、
安定な細胞株中で発現され得る。ｄｈｆｒ、ｇｐｔ、ネオマイシン、ハイグロマ
イシンのような選択マーカーを用いる同時トランスフェクションは、トランスフ
ェクトされた細胞の同定および単離を可能にする。
【０７０６】 トランスフェクトされた遺伝子はまた、大量のコードされたタンパク質を発現
するために増幅され得る。ＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸レダクターゼ）マーカーは、
目的の遺伝子の数百または数千さえものコピーを有する細胞株の開発に有用であ
る（例えば、Ａｌｔ，Ｆ．Ｗ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５３：１３５７
−１３７０（１９７８）；Ｈａｍｌｉｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．ｅｔ Ｂｉｏｐｈ
ｙｓ．Ａｃｔａ、１０９７：１０７−１４３（１９９０）；Ｐａｇｅら、Ｂｉｏ
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、９：６４−６８（１９９１）を参照のこと）。別の有用
な選択マーカーは、酵素グルタミンシンターゼ（ＧＳ）である（Ｍｕｒｐｈｙら
、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２２７：２７７−２７９（１９９１）；Ｂｅｂｂｉｎｇ
ｔｏｎら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：１６９−１７５（１９９２）
）。これらのマーカーを使用して、哺乳動物細胞を選択培地中で増殖させ、そし
てもっとも高い耐性を有する細胞を選択する。これらの細胞株は、染色体に組み
込まれた、増幅した遺伝子を含む。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）およ
びＮＳＯ細胞は、タンパク質の産生のためにしばしば使用される。
【０７０７】 プラスミドｐＳＶ２−ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ受託番号３７１４６）の誘導体であ
る、発現ベクターｐＣ４（ＡＴＣＣ受託番号２０９６４６）およびｐＣ６（ＡＴ
ＣＣ受託番号２０９６４７）は、ラウス肉腫ウイルス（Ｃｕｌｌｅｎら、Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、４３８−４４７（
１９８５年３月））の強力なプロモーター（ＬＴＲ）、およびＣＭＶ−エンハン
サー（Ｂｏｓｈａｒｔら、Ｃｅｌｌ ４１：５２１−５３０ （１９８５））の
フラグメントを含む。例えば、ＢａｍＨＩ、ＸｂａＩ、およびＡｓｐ７１８の制
限酵素切断部位を有するマルチプルクローニングサイトは、目的の遺伝子のクロ
ーニングを容易にする。このベクターはまた、３’イントロン、ラットプレプロ
インスリン遺伝子のポリアデニル化シグナルおよび終結シグナル、ならびに、Ｓ
Ｖ４０初期プロモーターの制御下にあるマウスＤＨＦＲ遺伝子を含む。
【０７０８】 具体的には、例えば、プラスミドｐＣ６を、適切な制限酵素を用いて消化し、
次いで当該分野で公知の手順によって、仔ウシ腸ホスファターゼ（ｐｈｏｓｐｈ
ａｔｅ）を使用して脱リン酸する。次いで、ベクターを１％アガロースゲルから
単離する。
【０７０９】 本発明のポリヌクレオチドは、必要ならば、適切な制限部位および開始／停止
コドンを有するプライマーを使用して、実施例１に概説するプロトコルに従って
増幅される。分泌が必要な場合、このベクターは、異種シグナル配列を含むよう
に改変され得る（例えば、ＷＯ９６／３４８９１を参照のこと）。
【０７１０】 増幅フラグメントを、市販のキット（「Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」、ＢＩＯ １０
１ Ｉｎｃ．、Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａ．）を使用して、１％アガロースゲルか
ら単離する。次いで、このフラグメントを、適切な制限酵素で消化し、そして再
び１％アガロースゲル上で精製する。
【０７１１】 次いで、増幅フラグメントを同じ制限酵素で消化し、そして１％アガロースゲ
ル上で精製する。次いで、単離されたフラグメントおよび脱リン酸したベクター
を、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼで連結する。次いで、Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１細胞
またはＸＬ−１ Ｂｌｕｅ細胞を形質転換し、そしてプラスミドｐＣ６に挿入さ
れたフラグメントを含む細菌を、例えば、制限酵素分析を用いて同定する。
【０７１２】 活性なＤＨＦＲ遺伝子を欠損するチャイニーズハムスター卵巣細胞を、トラン
スフェクションに使用する。５μｇの発現プラスミドｐＣ６を、リポフェクチン
を用いて、０．５μｇのプラスミドｐＳＶｎｅｏと同時トランスフェクトする（
Ｆｅｌｇｎｅｒら、前出）。プラスミドｐＳＶ２−ｎｅｏは、優性で選択マーカ
ーであるところの、Ｇ４１８を含む抗生物質の群に対する耐性を付与する酵素を
コードするＴｎ５由来のｎｅｏ遺伝子を含む。この細胞を、１ｍｇ／ｍｌのＧ４
１８を補充したαマイナスＭＥＭに播種する。２日後、この細胞をトリプシン処
理し、そして１０、２５、または５０ｎｇ／ｍｌのメトトレキサートおよび１ｍ
ｇ／ｍｌのＧ４１８を補充したαマイナスＭＥＭ中のハイブリドーマクローニン
グプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ，Ｇｅｒｍａｎｙ）中に播種する。約１０〜１４日
後、単一のクローンをトリプシン処理し、次いで異なる濃度のメトトレキサート
（５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、８００ｎＭ）を使用して、
６ウェルのペトリ皿または１０ｍｌのフラスコに播種する。次いで、最高濃度の
メトトレキサートで増殖するクローンを、さらに高い濃度のメトトレキサート（
１μＭ、２μＭ、５μＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ）を含む新たな６ウェルプレート
に移す。同じ手順を、１００〜２００μＭの濃度で増殖するクローンが得られる
まで繰り返す。所望の遺伝子産物の発現を、例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウ
エスタンブロットによって、または逆相ＨＰＬＣ分析によって分析する。
【０７１３】 （実施例９：タンパク質融合物） 本発明のポリぺプチドは、好ましくは、他のタンパク質に融合される。これら
の融合タンパク質は、種々の適用について使用され得る。例えば、本発明のポリ
ぺプチドの、Ｈｉｓタグ、ＨＡタグ、プロテインＡ、ＩｇＧドメイン、およびマ
ルトース結合タンパク質への融合は、精製を容易にする（実施例５を参照のこと
；ＥＰ Ａ ３９４，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３３１
：８４−８６（１９８８）もまた参照のこと）。これらのポリぺプチドはまた、
分泌または細胞内往来（ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ）（例えば、ＫＤＥＬ）を促進
するために、異種ポリぺプチド配列に融合され得る。さらに、ＩｇＧ−１、Ｉｇ
Ｇ−３、およびアルブミンへの融合は、インビボでの半減期を増大させる。本発
明のポリぺプチドに融合した核局在化シグナルは、タンパク質を特定の細胞下（
ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ）局在に標的化し得る。一方、共有結合ヘテロダイマー
またはホモダイマーは、融合タンパク質の活性を増大または減少させ得る。融合
タンパク質はまた、１つより多い機能を有するキメラ分子を作製し得る。最後に
、融合タンパク質は、非融合タンパク質と比較して、融合タンパク質の可溶性お
よび／または安定性を増大させ得る。上記の融合タンパク質の全ての型は、ポリ
ぺプチドのＩｇＧ分子への融合を概説する以下のプロトコル、または実施例５に
記載されるプロトコルを改変することによって作製され得る。
【０７１４】 簡単には、ＩｇＧ分子のヒトＦｃ部分は、以下に記載の配列の５’および３’
末端にわたるプライマーを使用してＰＣＲ増幅され得る。これらのプライマーは
また、発現ベクター（好ましくは、哺乳動物発現ベクター）へのクローニングを
容易にする都合の良い制限酵素部位および必要であれば開始／終止コドンを有す
るべきである。
【０７１５】 例えば、ｐＣ４（受託番号第２０９６４６号）が使用される場合、ヒトＦｃ部
分は、ＢａｍＨＩクローニング部位に連結され得る。３’ＢａｍＨＩ部位が破壊
されるべきであることに注意のこと。次に、ヒトＦｃ部分を含有するベクターが
、ＢａｍＨＩによって再び制限処理され、ベクターを線状化し、そして実施例１
に記載するＰＣＲプロトコルによって単離された本発明のポリヌクレオチドが、
このＢａｍＨＩ部位に連結される。ポリヌクレオチドは、終止コドンなしにクロ
ーニングされ、そうでなければ、融合タンパク質は産生されないことに注意する
こと。
【０７１６】 天然に存在するシグナル配列が分泌タンパク質を産生するために使用される場
合、ｐＣ４は、第二のシグナルペプチドを必要としない。あるいは、天然に存在
するシグナル配列が使用されない場合、ベクターは、異種シグナル配列を含むよ
うに改変され得る（例えば、ＷＯ ９６／３４８９１を参照のこと）。
【０７１７】
【化１】 （実施例１０：ポリペプチドの処方） ポリペプチド組成物を、個々の患者の臨床状態（特に、分泌ポリペプチド単独
処置の副作用）、送達部位、投与方法、投与計画および当業者に公知の他の因子
を考慮に入れ、医療実施基準（ｇｏｏｄ ｍｅｄｉｃａｌ ｐｒａｃｔｉｃｅ）
を遵守する方式で処方および投薬する。従って、本明細書において目的とする「
有効量」は、このような考慮により決定される。
【０７１８】 一般的提案として、用量当り、非経口的に投与されるポリペプチドの合計薬学
的有効量は、患者体重の、約１μｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲にあ
るが、上記のようにこれは治療的裁量に委ねられる。さらに好ましくは、このホ
ルモンについて、この用量は、少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、そして最も
好ましくはヒトに対して約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日と約１ｍｇ／ｋｇ／日との間
である。連続投与する場合、代表的には、ポリペプチドを約１μｇ／ｋｇ／時間
〜約５０μｇ／ｋｇ／時間の投薬速度で１日に１〜４回の注射かまたは連続皮下
注入（例えばミニポンプを用いる）のいずれかにより投与する。静脈内用バッグ
溶液もまた使用し得る。変化を観察するために必要な処置期間および応答が生じ
る処置後の間隔は、所望の効果に応じて変化するようである。
【０７１９】 本発明のポリぺプチドを含む薬学的組成物を、経口的、直腸内、非経口的、槽
内（ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｍａｌｌｙ）、膣内、腹腔内、局所的（粉末、軟膏、
ゲル、点滴剤、または経皮パッチによるなど）、口内あるいは経口または鼻腔ス
プレーとして投与する。「薬学的に受容可能なキャリア」とは、非毒性の固体、
半固体または液体フィラー、希釈剤、被包材または任意の型の製剤補助剤をいう
。本明細書で用いる用語「非経口的」とは、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、
皮下および関節内の注射および注入を含む投与の様式をいう。
【０７２０】 ポリペプチドはまた、徐放性システムにより適切に投与される。徐放性組成物
の適切な例は、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの成形品の形態の半透
過性ポリマーマトリックスを包含する。徐放性マトリックスとしては、ポリラク
チド（米国特許第３，７７３，９１９号、ＥＰ５８，４８１）、Ｌ−グルタミン
酸およびγ−エチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー（Ｓｉｄｍａｎら、Ｂｉｏ
ｐｏｌｙｍｅｒｓ，２２：５４７−５５６（１９８３））、ポリ（２−ヒドロキ
シエチルメタクリレート）（Ｌａｎｇｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．
Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７（１９８１）、およびＬａｎｇｅｒ，Ｃｈｅｍ．
Ｔｅｃｈ．１２：９８−１０５（１９８２））、エチレンビニルアセテート（Ｒ
．Ｌａｎｇｅｒら）またはポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ１３３
，９８８）が挙げられる。徐放性組成物はまた、リポソームに封入されたポリペ
プチドを包含する。分泌ポリペプチドを含有するリポソームは、それ自体が公知
である方法により調製される：ＤＥ３，２１８，１２１；Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：３６８８−３６９２（１
９８５）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７
７：４０３０−４０３４（１９８０）；ＥＰ５２，３２２；ＥＰ３６，６７６；
ＥＰ８８，０４６；ＥＰ１４３，９４９；ＥＰ１４２，６４１；日本国特許出願
第８３−１１８００８号；米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４
４，５４５号；ならびにＥＰ第１０２，３２４号。通常、リポソームは、小さな
（約２００〜８００オングストローム）単層状型であり、脂質含有量は、約３０
モル％コレステロールよりも多く、選択された割合が、最適分泌ポリペプチド治
療のために調整される。
【０７２１】 非経口投与のために、１つの実施形態において、一般に、ポリペプチドは、そ
れを所望の程度の純度で、薬学的に受容可能なキャリア、すなわち、用いる投薬
量および濃度でレシピエントに対して毒性がなく、かつ処方物の他の成分と適合
するものと、単位投薬量の注射可能な形態（溶液、懸濁液または乳濁液）で混合
することにより処方される。例えば、この処方物は、好ましくは、酸化剤、およ
びポリペプチドに対して有害であることが知られている他の化合物を含まない。
【０７２２】 一般に、ポリペプチドを液体キャリアまたは微細分割固体キャリアあるいはそ
の両方と均一および緊密に接触させて処方物を調製する。次に、必要であれば、
生成物を所望の処方物に成形する。好ましくは、キャリアは、非経口的キャリア
であり、より好ましくはレシピエントの血液と等張である溶液である。このよう
なキャリアビヒクルの例としては、水、生理食塩水、リンゲル溶液およびデキス
トロース溶液が挙げられる。不揮発性油およびオレイン酸エチルのような非水性
ビヒクルもまた、リポソームと同様に本明細書において有用である。
【０７２３】 キャリアは、等張性および化学的安定性を増強する物質のような微量の添加剤
を適切に含有する。このような物質は、用いる投薬量および濃度でレシピエント
に対して毒性がなく、そしてこのような物質としては、リン酸塩、クエン酸塩、
コハク酸塩、酢酸および他の有機酸またはその塩類のような緩衝剤；アスコルビ
ン酸のような抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド（例えば、ポ
リアルギニンまたはトリペプチド）；血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロ
ブリンのようなタンパク質；ポリビニルピロリドンのような親水性ポリマー；グ
リシン、グルタミン酸、アスパラギン酸またはアルギニンのようなアミノ酸；セ
ルロースまたはその誘導体、ブドウ糖、マンノースまたはデキストリンを含む、
単糖類、二糖類、および他の炭水化物；ＥＤＴＡのようなキレート剤；マンニト
ールまたはソルビトールのような糖アルコール；ナトリウムのような対イオン；
および／またはポリソルベート、ポロキサマーもしくはＰＥＧのような非イオン
性界面活性剤が挙げられる。
【０７２４】 ポリペプチドは、代表的には約０．１ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌ、好まし
くは１〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度で、約３〜８のｐＨで、このようなビヒクル中に
処方される。前記の特定の賦形剤、キャリアまたは安定化剤を使用することによ
り、ポリペプチド塩が形成されることが理解される。
【０７２５】 治療的投与に用いられる任意のポリペプチドは無菌状態であり得る。滅菌濾過
膜（例えば０．２ミクロンメンブレン）で濾過することにより無菌状態は容易に
達成される。一般に、治療用ポリペプチド組成物は、滅菌アクセスポートを有す
る容器、例えば、皮下用注射針で穿刺可能なストッパー付の静脈内用溶液バッグ
またはバイアルに配置される。
【０７２６】 ポリペプチドは、通常、単位用量または複数用量容器、例えば、密封アンプル
またはバイアルに、水溶液または再構成するための凍結乾燥処方物として貯蔵さ
れる。凍結乾燥処方物の例として、１０ｍｌのバイアルに、滅菌濾過した１％（
ｗ／ｖ）ポリペプチド水溶液５ｍｌを充填し、そして得られる混合物を凍結乾燥
する。凍結乾燥したポリペプチドを注射用静菌水を用いて再構成して注入溶液を
調製する。
【０７２７】 本発明はまた、本発明の薬学的組成物の１つ以上の成分を満たした一つ以上の
容器を備える薬学的パックまたはキットを提供する。医薬品または生物学的製品
の製造、使用または販売を規制する政府機関が定めた形式の通知が、このような
容器に付属し得、この通知は、ヒトへの投与に対する製造、使用または販売に関
する政府機関による承認を表す。さらに、本発明のポリペプチドを他の治療用化
合物と組み合わせて使用し得る。
【０７２８】 （実施例１１：ポリペプチドのレベル低下を処置する方法） 個体におけるポリペプチドの標準の発現レベルまたは正常発現レベルの低下に
より引き起こされる状態は、本発明のポリペプチドを、好ましくは分泌形態およ
び／または可溶性形態で投与することにより処置し得ることが理解される。従っ
て、本発明はまた、このポリペプチドのレベルの増加が必要な個体の処置方法を
提供する。この方法は、このような個体に、このような個体でこのポリペプチド
の活性レベルを増加させる量のポリペプチドを含む薬学的組成物を投与する工程
を包含する。
【０７２９】 例えば、ポリペプチドのレベルが低下した患者は、そのポリペプチドを、１日
用量０．１〜１００μｇ／ｋｇで６日続けて服用する。好ましくは、そのポリペ
プチドは分泌形態である。投与および処方物に基づく投薬計画の正確な詳細は、
実施例１０に提供されている。
【０７３０】 （実施例１２：ポリペプチドのレベル上昇を処置する方法） アンチセンス技術を使用して本発明のポリペプチドの産生を阻害する。この技
術は、癌のような様々な病因に起因するポリペプチド（好ましくは、分泌形態）
のレベルを低下させる方法の１つの例である。
【０７３１】 例えば、ポリペプチドのレベルが異常に上昇したと診断された患者に、アンチ
センスポリヌクレオチドを、０．５、１．０、１．５、２．０および３．０ｍｇ
／ｋｇ／日で２１日間、静脈内投与する。この処置に対して十分に寛容化された
場合は、７日間の休薬期間後に、この処置を繰り返す。このアンチセンスポリヌ
クレオチドの処方は、実施例１０に提供されている。
【０７３２】 （実施例１３：遺伝子治療を使用する処置方法−エキソビボ） 遺伝子治療の１つの方法は、ポリペプチドを発現し得る線維芽細胞を患者に移
植する。一般に、線維芽細胞は、皮膚生検により被験者から得られる。得られた
組織を組織培養培地中に配置し、小片に分割する。組織の小塊を組織培養フラス
コの湿潤表面に置き、約１０片を各フラスコに置く。このフラスコを倒置し、し
っかりと閉めた後、室温で一晩放置する。室温で２４時間後、フラスコを反転さ
せ、組織塊をフラスコの底に固定させたままにし、そして新鮮な培地（例えば、
１０％ＦＢＳ、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含有するＨａｍのＦ１２
培地）を添加する。次に、フラスコを３７℃で約１週間インキュベートする。
【０７３３】 この時点で、新鮮な培地を添加し、次いで数日ごとに取り換える。さらに二週
間培養した後に、単層の線維芽細胞が出現する。この単層をトリプシン処理し、
さらに大きなフラスコにスケールアップする。
【０７３４】 モロニーマウス肉腫ウイルスの長末端反復が隣接するｐＭＶ−７（Ｋｉｒｓｃ
ｈｍｅｉｅｒ，Ｐ．Ｔ．ら、ＤＮＡ，７：２１９−２５（１９８８））をＥｃｏ
ＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化した後、仔ウシ腸ホスファターゼで処理する。
線状ベクターをアガロースゲル上で分画し、そしてガラスビーズを使用して精製
する。
【０７３５】 本発明のポリペプチドをコードするｃＤＮＡを、必要な場合、プライマーを用
いそして適切な制限部位および開始／終止コドンを有する、実施例１に記載のそ
れぞれ５’末端配列および３’末端配列に対応するＰＣＲプライマーを使用して
増幅し得る。好ましくは、この５’プライマーはＥｃｏＲＩ部位を含み、そして
この３’プライマーはＨｉｎｄＩＩＩ部位を含む。等量の、モロニーマウス肉腫
ウイルスの線状骨格および増幅したＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩフラグメン
トを、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼの存在下で一緒に加える。得られた混合物を、この
２つのフラグメントを連結するのに適した条件下で維持する。次に、連結混合物
を使用し、細菌ＨＢ１０１を形質転換する。次に、それを、カナマイシンを含む
寒天上にプレーティングし、ベクターが正確に挿入された目的の遺伝子を有する
ことを確認する。
【０７３６】 アンホトロピックｐＡ３１７またはＧＰ＋ａｍ１２パッケージング細胞を、１
０％仔ウシ血清（ＣＳ）、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含むダルベッ
コ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、組織培養でコンフルエントな密度まで増殖
させる。次に、その目的の遺伝子を含むＭＳＶベクターを培地に加え、そしてパ
ッケージング細胞をこのベクターで形質導入する。このとき、このパッケージン
グ細胞は、その遺伝子を含む感染性ウイルス粒子を産生する（ここで、このパッ
ケージング細胞をプロデューサー細胞という）。
【０７３７】 形質導入されたプロデューサー細胞に新鮮な培地を添加し、次いでこの培地を
１０ｃｍプレートのコンフルエントなプロデューサー細胞から採取する。感染性
ウイルス粒子を含む使用済み培地を、ミリポアーフィルターを通して濾過し、は
がれたプロデューサー細胞を除去した後、この培地を使用して、線維芽細胞を感
染させる。線維芽細胞のサブコンフルエントなプレートから培地を除去し、そし
てプロデューサー細胞からの培地で速やかに置き換える。この培地を除去し、そ
して新鮮な培地と置き換える。ウイルスの力価が高ければ、実質的にすべての線
維芽細胞が感染され、選択は必要ではない。力価が非常に低ければ、ｎｅｏまた
はｈｉｓのような選択マーカーを有するレトロウイルスベクターを使用すること
が必要である。一旦、線維芽細胞が効率的に感染したなら、その線維芽細胞を分
析し、タンパク質が産生されているか否かを決定する。
【０７３８】 次に、操作された線維芽細胞を、単独で、またはサイトデックス３マイクロキ
ャリアビーズ上でコンフルエントに増殖させた後のいずれかで、宿主に移植する
。
【０７３９】 （実施例１４：内因性プラスミノーゲン様遺伝子を使用する遺伝子治療） 本発明に従う遺伝子治療の別の方法は、内因性プラスミノーゲン様遺伝子配列
を、例えば、米国特許番号５，６４１，６７０（１９９７年６月２４日発行）；
国際公開番号ＷＯ ９６／２９４１１（１９９６年９月２６日公開）；国際公開
番号ＷＯ ９４／１２６５０（１９９４年８月４日公開）；Ｋｏｌｌｅｒら、Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：８９３２〜８９３５（１
９８９）；およびＺｉｊｌｓｔｒａら、Ｎａｔｕｒｅ，３４２：４３５〜４３８
（１９８９）に記載されるように、相同組換えを介してプロモーターに作動可能
に結合する工程を包含する。この方法は、その標的細胞中に存在するが、その細
胞中では発現されないかまたは所望されるよりも低いレベルで発現される、遺伝
子の活性化を包含する。
【０７４０】 プロモーターおよび標的化配列を含むポリヌクレオチド構築物を作製する。こ
の標的配列は、プロモーターに隣接する、内因性プラスミノーゲン様遺伝子の５
’非コード配列に相同である。この標的化配列は、プラスミノーゲン様遺伝子の
５’末端に十分に近く、その結果、このプロモーターは、相同組換えの際にこの
内因性配列に作動可能に連結される。このプロモーターおよび標的化配列を、Ｐ
ＣＲを使用して増幅し得る。好ましくは、この増幅したプロモーターは、５’末
端および３’末端上に異なる制限酵素部位を含む。好ましくは、第１の標的化配
列の３’末端は、増幅したプロモーターの５’末端と同じ制限酵素部位を含み、
そして第２の標的化配列の５’末端は、増幅したプロモーターの３’末端と同じ
制限部位を含む。
【０７４１】 この増幅したプロモーターおよび増幅した標的化配列を、適切な制限酵素で消
化し、続いてウシ腸ホスファターゼで処理する。消化したプロモーターおよび消
化した標的化配列を、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼの存在下でともに加える。生じた混
合物を、これら２つのフラグメントの連結に適切な条件下で維持する。この構築
物をアガロースゲル上でサイズ分画し、次いでフェノール抽出およびエタノール
沈殿により精製する。
【０７４２】 この実施例において、このポリヌクレオチド構築物を、エレクトロポレーショ
ンを介して裸のポリヌクレオチドとして投与する。しかし、このポリヌクレオチ
ド構築物はまた、トランスフェクション促進剤（例えば、リポソーム、ウイルス
配列、ウイルス粒子、沈殿剤など）とともに投与され得る。送達のこのような方
法は、当該分野で公知である。
【０７４３】 一旦、細胞をトランスフェクトすると、相同組換えが生じて、このプロモータ
ーがこの内因性プラスミノーゲン様遺伝子配列に作動可能に連結される。これは
、この細胞中におけるプラスミノーゲン様の発現を生じる。発現は、免疫学的染
色または当該分野で公知の他の任意の方法により、検出され得る。
【０７４４】 線維芽細胞を、皮膚生検により被験者から得る。得られた組織を、ＤＭＥＭ＋
１０％ウシ胎仔血清中に配置する。対数増殖期または定常期初期の線維芽細胞を
、トリプシン処理し、そしてプラスチックの表面から栄養培地でリンスする。細
胞懸濁液のアリコートを、計数のために取り出し、そして残りの細胞を遠心分離
に供する。上清を吸引し、そしてペレットを５ｍｌのエレクトロポレーション緩
衝液（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．３、１３７ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ Ｋ
Ｃｌ、０．７ｍＭ Ｎａ2ＨＰＯ4、６ｍＭデキストロース）に再懸濁する。この
細胞を再遠心分離し、上清を吸引し、そして細胞をアセチル化ウシ血清アルブミ
ン１ｍｇ／ｍｌを含むエレクトロポレーション緩衝液に再懸濁する。この最終細
胞懸濁物は、約３×１０6細胞／ｍｌを含む。エレクトロポレーションを、再懸
濁直後に実施すべきである。
【０７４５】 プラスミドＤＮＡを、標準的技術に従って調製する。例えば、プラスミノーゲ
ン様遺伝子座に標的化するためのプラスミドを構築するために、プラスミドｐＵ
Ｃ１８（ＭＢＩ Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ、Ａｍｈｅｒｓｔ、ＮＹ）をＨｉｎｄＩＩ
Ｉで消化する。ＣＭＶプロモーターを、５’末端にＸｂａＩ部位および３’末端
にＢａｍＨＩ部位を備えてＰＣＲにより増幅する。２つのプラスミノーゲン様非
コード遺伝子配列をＰＣＲを介して増幅する：一方のプラスミノーゲン様非コー
ド配列（プラスミノーゲン様フラグメント１）を、５’末端にＨｉｎｄＩＩＩ部
位および３’末端にＸｂａ部位を備えて増幅する；他方のプラスミノーゲン様非
コード配列（プラスミノーゲン様フラグメント２）を、５’末端にＢａｍＨＩ部
位および３’末端にＨｉｎｄＩＩＩ部位を備えて増幅する。このＣＭＶプロモー
ターおよびプラスミノーゲン様フラグメントを、適切な酵素（ＣＭＶプロモータ
ー−ＸｂａＩおよびＢａｍＨＩ；プラスミノーゲン様フラグメント１−ＸｂａＩ
；プラスミノーゲン様フラグメント２−ＢａｍＨＩ）で消化し、そしてともに連
結する。生じた連結生成物をＨｉｎｄＩＩＩで消化し、そしてＨｉｎｄＩＩＩで
消化したｐＵＣ１８プラスミドと連結する。
【０７４６】 プラスミドＤＮＡを、０．４ｃｍの電極ギャップを備える滅菌キュベット（Ｂ
ｉｏ−Ｒａｄ）に添加する。最終ＤＮＡ濃度は、一般的に、少なくとも１２０μ
ｇ／ｍｌである。次いで、この細胞懸濁液の０．５ｍｌ（約１．５×１０6細胞
を含む）をこのキュベットに添加し、そしてこの細胞懸濁液およびＤＮＡ溶液を
、穏やかに混合する。エレクトロポレーションを、Ｇｅｎｅ−Ｐｕｌｓｅｒ装置
（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いて実施する。キャパシタンスおよび電圧を、それぞれ
、９６０μＦおよび２５０〜３００Ｖに設定する。電圧が増加すると、細胞の生
存が減少するが、導入されたＤＮＡをそのゲノム中に安定に組込む生存細胞の割
合が劇的に増加する。これらのパラメーターの場合、パルス時間約１４〜２０ｍ
Ｓｅｃが観察されるはずである。
【０７４７】 エレクトロポレーションした細胞を、室温で約５分間維持し、次いで、このキ
ュベットの中身を、滅菌した移動ピペットを用いて穏やかに取り出す。この細胞
を、１０ｃｍのディッシュ中の、予め温めた栄養培地（１５％ウシ血清を含むＤ
ＭＥＭ）１０ｍｌに直接加え、そして３７℃でインキュベートする。翌日、この
培地を吸引し、そして１０ｍｌの新鮮な培地で置換し、そしてさらに１６〜２４
時間インキュベートする。
【０７４８】 次いで、操作された線維芽細胞を、宿主中に、単独か、またはサイトデックス
（ｃｙｔｏｄｅｘ）３マイクロキャリア（ｍｉｃｒｏｃａｒｒｉｅｒ）ビーズ上
でコンフルエントになるまで増殖させた後かのいずれかで、注入する。ここで、
この線維芽細胞は、タンパク質産物を生成する。次いで、この線維芽細胞を、上
記のような患者に導入し得る。
【０７４９】 （実施例１５：遺伝子治療を使用する処置方法−インビボ） 本発明の別の局面は、障害、疾患、および状態を処置するためにインビボ遺伝
子治療方法を使用することである。この遺伝子治療法は、プラスミノーゲン様ポ
リペプチドの発現を増大または減少させるための、動物への裸の核酸（ＤＮＡ、
ＲＮＡ、およびアンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡ）プラスミノーゲン様配列の導
入に関する。プラスミノーゲン様ポリヌクレオチドは、プロモーター、または標
的組織によるプラスミノーゲン様ポリペプチドの発現に必要な任意の他の遺伝子
エレメントに、作動可能に連結され得る。このような遺伝子治療および送達の技
術および方法は、当該分野で公知であり、例えば、ＷＯ９０／１１０９２、ＷＯ
９８／１１７７９；米国特許第５６９３６２２号、同第５７０５１５１号、同第
５５８０８５９号；Ｔａｂａｔａら、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．３５（３
）：４７０−４７９（１９９７）；Ｃｈａｏ Ｊ．ら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒ
ｅｓ．３５（６）：５１７−５２２（１９９７）；Ｗｏｌｆｆ、Ｎｅｕｒｏｍｕ
ｓｃｕｌ．Ｄｉｓｏｒｄ．７（５）：３１４−３１８（１９９７）、Ｓｃｈｗａ
ｒｔｚら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ． ３（５）：４０５−４１１（１９９６）；Ｔ
ｓｕｒｕｍｉ Ｙら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ９４（１２）：３２８１−３２
９０（１９９６）（本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。
【０７５０】 プラスミノーゲン様ポリヌクレオチド構築物は、注入可能な物質を動物の細胞
に送達する任意の方法（例えば、組織（心臓、筋肉、皮膚、肺、肝臓、腸など）
の間隙空間への注入）によって送達され得る。プラスミノーゲン様ポリヌクレオ
チド構築物は、薬学的に受容可能な液体または水性キャリア中で送達され得る。
【０７５１】 用語「裸の」ポリヌクレオチド、ＤＮＡまたはＲＮＡは、細胞への侵入を補助
、促進、または容易にするように作用するいかなる送達ビヒクル（ウイルス配列
、ウイルス粒子、リポソーム処方物、リポフェクチン、または沈澱剤などを含む
）も含まない配列をいう。しかし、プラスミノーゲン様ポリヌクレオチドはまた
、当業者に周知の方法によって調製され得るリポソーム処方物（例えば、Ｆｅｌ
ｇｎｅｒら、Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７７２：１２６−１３９（１９
９５）およびＡｂｄａｌｌａｈら、Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ ８５（１）：１−７（
１９９５）で教示されたもの）中で送達され得る。
【０７５２】 この遺伝子治療方法において使用されるプラスミノーゲン様ポリヌクレオチド
ベクター構築物は、好ましくは、宿主ゲノムに組み込まれず、複製を可能にする
配列も含まない構築物である。当業者に公知の任意の強力なプロモーターが、Ｄ
ＮＡの発現を駆動するために用いられ得る。他の遺伝子治療技術とは異なり、裸
の核酸配列を標的細胞に導入する１つの主要な利点は、その細胞におけるポリヌ
クレオチド合成の一過性の性質である。研究によって、非複製ＤＮＡ配列が細胞
に導入されて、６ヶ月までの間の期間、所望のポリペプチドの産生を提供し得る
ことが示された。
【０７５３】 このポリヌクレオチド構築物は、動物内の組織（筋肉、皮膚、脳、肺、肝臓、
脾臓、骨髄、胸腺、心臓、リンパ、血液、骨、軟骨、膵臓、腎臓、胆嚢、胃、腸
、精巣、卵巣、子宮、直腸、神経系、眼、腺、および結合組織を包含する）の間
隙空間に送達され得る。この組織の間隙空間は、細胞間液、ムコ多糖基質（器官
組織の細網線維、血管または腔（ｃｈａｍｂｅｒ）の壁における弾性線維、線維
性組織のコラーゲン線維間にある）、あるいは結合組織鞘性筋肉細胞内または骨
の裂孔中の同じ基質を包含する。これは、同様に、循環の血漿およびリンパチャ
ンネルのリンパ液により占められた空間である。筋肉組織の間隙空間への送達は
、以下に考察する理由のために好ましい。それらは、これらの細胞を含む組織へ
の注入によって、好都合に送達され得る。それらは、好ましくは、分化した持続
性の非分裂細胞に送達され、そしてその細胞において発現されるが、送達および
発現は、非分化細胞または完全には分化していない細胞（例えば、血液の幹細胞
または皮膚線維芽細胞など）において達成され得る。インビボで、筋肉細胞は、
ポリヌクレオチドを取り込み、そして発現するそれらの能力において、特に適格
である。
【０７５４】 裸のプラスミノーゲン様ポリヌクレオチド注入について、ＤＮＡまたはＲＮＡ
の有効投薬量は、約０．０５ｇ／ｋｇ体重から約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲にあ
る。好ましくは、この投薬量は、約０．００５ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇ
であり、そしてより好ましくは、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇであ
る。もちろん、当業者が認識するように、この投薬量は、注入の組織部位に従っ
て変化する。核酸配列の適切かつ有効な投薬量は、当業者によって容易に決定さ
れ得、そして処置される状態および投与経路に依存し得る。好ましい投与経路は
、組織の間隙空間への非経口注入経路によってである。しかし、他の非経口経路
もまた用いられ得、これには、例えば、特に肺または気管支組織、咽喉、または
鼻の粘膜への送達のためのエアロゾル処方物の吸入が挙げられる。さらに、裸の
プラスミノーゲン様ポリヌクレオチド構築物が、血管形成術の間に、この手順に
おいて用いられるカテーテルによって動脈に送達され得る。
【０７５５】 インビボでの筋肉における注入プラスミノーゲン様ポリヌクレオチドの用量応
答効果を、以下のようにして決定する。プラスミノーゲン様ポリペプチドをコー
ドするｍＲＮＡの生成のための適切なプラスミノーゲン様テンプレートＤＮＡを
、標準的な組換えＤＮＡ方法論に従って調製する。テンプレートＤＮＡ（これは
環状または線状のいずれかであり得る）を裸のＤＮＡとして使用するか、または
リポソームと複合体化するかのいずれかである。次いで、マウスの四頭筋に、種
々の量のテンプレートＤＮＡを注入する。
【０７５６】 ５〜６週齢の雌性および雄性のＢａｌｂ／Ｃマウスに、０．３ｍｌの２．５％
Ａｖｅｒｔｉｎを腹腔内注射することにより麻酔する。１．５ｃｍの切開を大腿
前部で行い、そして四頭筋を直接可視化する。プラスミノーゲン様テンプレート
ＤＮＡを、０．１ｍｌのキャリアに入れて、１ｃｃ注射器で２７ゲージ針を通し
て１分間にわたって、筋肉の遠位挿入部位から約０．５ｃｍのところで膝に、そ
して約０．２ｃｍの深さで注入する。縫合を、将来の位置決定のために注入部位
の上に配置し、そしてその皮膚をステンレス鋼クリップで閉じる。
【０７５７】 適切なインキュベーション時間（例えば、７日）後、筋肉抽出物を、四頭全体
を切り出すことによって調製する。個々の四頭筋の５枚毎の１５μｍ切片を、プ
ラスミノーゲン様タンパク質発現について組織化学的に染色する。プラスミノー
ゲン様タンパク質発現についてのタイムコースを、異なるマウスからの四頭を異
なる時間で採取すること以外は、同様な様式で行い得る。注入後の筋肉中のプラ
スミノーゲン様ＤＮＡの持続性を、注入したマウスおよびコントロールマウスか
らの全細胞性ＤＮＡおよびＨＩＲＴ上清を調製した後、サザンブロット分析によ
って決定し得る。マウスにおける上記実験の結果を、プラスミノーゲン様の裸の
ＤＮＡを用いて、ヒトおよび他の動物において適切な投薬量および他の処置パラ
メーターを外挿するために使用し得る。
【０７５８】 （実施例１６：抗体の産生） （ａ．ハイブリドーマ技術） 本発明の抗体は、種々の方法によって調製され得る。（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒ
ｏｔｏｃｏｌｓ，第２章を参照のこと）。このような方法の１つの例として、プ
ラスミノーゲン様ポリペプチドを発現する細胞は、ポリクローナル抗体を含む血
清の産生を誘導するために動物に投与される。好ましい方法において、プラスミ
ノーゲン様ポリペプチドの調製物が調製され、そして精製されて、天然の夾雑物
を実質的に含まないようにされる。次いで、より大きな比活性のポリクローナル
抗血清を生成するために、このような調製物は、動物に導入される。
【０７５９】 プラスミノーゲン様ポリペプチドに対して特異的なモノクローナル抗体は、ハ
イブリドーマ技術を使用して調製される（Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ２５
６：４９５（１９７５）；Ｋｏｈｌｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：
５１１（１９７６）；Ｋｏｈｌｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：２９
２（１９７６）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂ
ｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ
，Ｎ．Ｙ．、５６３−６８１頁（１９８１））。一般に、動物（好ましくはマウ
ス）は、プラスミノーゲン様ポリペプチドで、またはより好ましくは分泌プラス
ミノーゲン様ポリペプチド発現細胞で免疫される。このようなポリペプチド発現
細胞は、任意の適切な組織培養培地において、好ましくは１０％ウシ胎仔血清（
約５６℃で非働化した）を補充し、そして約１０ｇ／ｌの非必須アミノ酸、約１
，０００Ｕ／ｍｌのペニシリン、および約１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシ
ンを補充したＥａｒｌｅ改変イーグル培地において培養される。
【０７６０】 このようなマウスの脾細胞は抽出され、そして適切な骨髄腫細胞株と融合され
る。任意の適切な骨髄腫細胞株は、本発明に従って用いられ得る；しかし、ＡＴ
ＣＣから入手可能な親骨髄腫細胞株（ＳＰ２Ｏ）を利用することが好ましい。融
合後、得られるハイブリドーマ細胞を、ＨＡＴ培地において選択的に維持し、次
いでＷａｎｄｓら（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ８０：２２５−２３２
（１９８１））により記載されるように限界希釈によってクローニングする。次
いで、このような選択を通して得られるハイブリドーマ細胞は、プラスミノーゲ
ン様ポリぺプチドを結合し得る抗体を分泌するクローンを同定するためにアッセ
イされる。
【０７６１】 あるいは、プラスミノーゲン様ポリぺプチドに結合し得るさらなる抗体を、抗
イディオタイプ抗体を使用して２段階工程の手順において生成し得る。このよう
な方法は、抗体それ自体が抗原であり、それゆえ第二の抗体に結合する抗体を得
ることが可能であるという事実を利用する。この方法に従って、タンパク質特異
的抗体を使用して、動物（好ましくは、マウス）を免疫する。次いで、このよう
な動物の脾細胞を使用して、ハイブリドーマ細胞を産生する。そして、このハイ
ブリドーマ細胞は、抗体のプラスミノーゲン様タンパク質特異的抗体に結合する
能力がプラスミノーゲン様ポリペプチドによってブロックされ得る抗体を産生す
るクローンを同定するためにスクリーニングされる。このような抗体は、プラス
ミノーゲン様タンパク質特異的抗体に対する抗イディオタイプ抗体を含み、そし
て動物を免疫してさらなるプラスミノーゲン様タンパク質特異的抗体の形成を誘
導するために使用される。
【０７６２】 ヒトにおける抗体のインビボ使用のために、抗体は、「ヒト化」される。この
ような抗体は、上記のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞に由来
する遺伝的構築物を使用して産生され得る。キメラ抗体およびヒト化抗体を産生
するための方法は当該分野で公知であり、そして本明細書中で議論される（総説
については、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２（１９８５
）；Ｏｉら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４（１９８６）；Ｃａｂｉ
ｌｌｙら、米国特許第４，８１６，５６７号；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら、ＥＰ １
７１４９６；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、ＥＰ １７３４９４；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら
、ＷＯ ８６０１５３３；Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、ＷＯ ８７０２６７１；Ｂｏｕ
ｌｉａｎｎｅら、Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６４３（１９８４）；Ｎｅｕｂｅｒｇ
ｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３１４：２６８（１９８５）を参照のこと）。
【０７６３】 （ｂ．ｓｃＦｖｓのライブラリーからのプラスミノーゲン様ポリペプチドに対
して指向される抗体フラグメントの単離） ヒトＰＢＬから単離した天然に存在するＶ遺伝子を、ドナーが曝され得たかま
たは曝され得なかったプラスミノーゲン様ポリペプチドに対する反応性を含む抗
体フラグメントのライブラリーに構築する（例えば、米国特許第５，８８５，７
９３号（その全体が参考として本明細書に援用される）を参照のこと）。
【０７６４】 （ライブラリーのレスキュー） ＰＣＴ公開ＷＯ ９２／０１０４７に記載のように、ヒトＰＢＬのＲＮＡから
ｓｃＦｖｓのライブラリーを構築する。抗体フラグメントを提示するファージを
レスキューするため、ファージミドを保有する約１０9個のＥ．ｃｏｌｉを用い
て、５０ｍｌの２×ＴＹ（１％グルコースおよび１００μｇ／ｍｌのアンピシリ
ンを含有する）（２×ＴＹ−ＡＭＰ−ＧＬＵ）を接種し、そして振盪しながら０
．８のＯ．Ｄ．まで増殖させる。この培養物の５ｍｌを用いて５０ｍｌの２×Ｔ
Ｙ−ＡＭＰ−ＧＬＵに接種し、２×１０８ＴＵのΔ遺伝子３ヘルパー（Ｍ１３Δ
遺伝子ＩＩＩ、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０１０４７を参照のこと）を添加し、そし
て培養物を振盪なしで３７℃で４５分間インキュベートし、次いで振盪しながら
３７℃で４５分間インキュベートする。この培養物を１０分間４０００ｒ．ｐ．
ｍ．で遠心分離し、そしてペレットを２リットルの２×ＴＹ（１００μｇ／ｍｌ
アンピシリンおよび５０μｇ／ｍｌカナマイシンを含有する）中に再懸濁し、そ
して一晩増殖させる。ファージをＰＣＴ公開ＷＯ９２／０１０４７に記載のよう
に調製する。
【０７６５】 Ｍ１３Δ遺伝子ＩＩＩを以下のように調製する：Ｍ１３Δ遺伝子ＩＩＩヘルパ
ーファージは、遺伝子ＩＩＩタンパク質をコードしない。それゆえ、抗体フラグ
メントを提示するファージ（ファージミド）は、抗原に対するより大きい結合ア
ビディティーを有する。ファージ形態形成の間、野生型遺伝子ＩＩＩタンパク質
を供給するｐＵＣ１９誘導体を保有する細胞においてヘルパーファージを増殖さ
せることにより、感染性Ｍ１３Δ遺伝子ＩＩＩ粒子を作製する。培養物を振盪な
しで３７℃で１時間インキュベートし、次いで振盪しながら３７℃でさらにイン
キュベートする。細胞を遠心沈殿（ＩＥＣ−Ｃｅｎｔｒａ ８，４００ｒ．ｐ．
ｍ．で１０分間）し、１００μｇ／ｍｌのアンピシリンおよび２５μｇ／ｍｌの
カナマイシンを含有する２×ＴＹブロス（２×ＴＹ−ＡＭＰ−ＫＡＮ）３００ｍ
ｌ中で再懸濁し、そして３７℃で振盪しながら一晩増殖させる。ファージ粒子を
、２回のＰＥＧ沈殿（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９９０）により培養培地から精製
および濃縮し、２ｍｌ ＰＢＳに再懸濁し、そして０．４５μｍのフィルター（
Ｍｉｎｉｓａｒｔ ＮＭＬ；Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）を通過させ、約１０13形質導
入単位／ｍｌ（アンピシリン耐性クローン）の最終濃度を得る。
【０７６６】 （ライブラリーのパニング） Ｉｍｍｕｎｏｔｕｂｅｓ（Ｎｕｎｃ）を、本発明のポリペプチドの１００μｇ
／ｍｌまたは１０μｇ／ｍｌのいずれかの４ｍｌを用いてＰＢＳ中で一晩被膜す
る。チューブを２％ Ｍａｒｖｅｌ−ＰＢＳを用いて３７℃で２時間ブロックし
、次いでＰＢＳ中で３回洗浄する。約１０13ＴＵのファージをチューブに適用し
、そして、回転盤上で上下にタンブリングしながら室温で３０分間インキュベー
トし、次いでさらに１．５時間静置しておく。チューブをＰＢＳ ０．１％ Ｔ
ｗｅｅｎ−２０で１０回、そしてＰＢＳで１０回洗浄する。１ｍｌの１００ｍＭ
トリエチルアミンを添加し、そして回転盤上で１５分間上下に回転させることに
よりファージを溶出し、その後この溶液を０．５ｍｌの１．０Ｍ Ｔｒｉｓ−Ｈ
Ｃｌ，ｐＨ７．４で直ちに中和する。次いで、溶出したファージを細菌とともに
３７℃で３０分間インキュベートすることにより、ファージを用いて、１０ｍｌ
の対数増殖中期のＥ．ｃｏｌｉ ＴＧ１に感染させる。次いで、Ｅ．ｃｏｌｉを
１％グルコースおよび１００μｇ／ｍｌアンピシリンを含有するＴＹＥプレート
上にプレートする。次いで、得られる細菌ライブラリーを、上記のようにΔ遺伝
子３ヘルパーファージでレスキューし、次の回の選択のためのファージを調製す
る。次いで、このプロセスを、アフィニティー精製の全４回について反復し、３
回目および４回目にはチューブ洗浄をＰＢＳ、０．１％ Ｔｗｅｅｎ−２０で２
０回、そしてＰＢＳで２０回に増加する。
【０７６７】 （結合剤の特徴付け） 第３回目および４回目の選択から溶出したファージを用いて、Ｅ．ｃｏｌｉ
ＨＢ ２１５１を感染させ、そして可溶性ｓｃＦｖをアッセイのために単一コロ
ニーから生成する（Ｍａｒｋｓら、１９９１）。５０ｍＭ炭酸水素塩、ｐＨ９．
６中の本発明のポリペプチドの１０ｐｇ／ｍｌのいずれかで被膜したマイクロタ
イタープレートを用いてＥＬＩＳＡを実施する。ＥＬＩＳＡ中の陽性クローンを
ＰＣＲフィンガープリンティング（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０１０４７を
参照のこと）、次いで配列決定することによりさらに特徴付ける。これらのＥＬ
ＩＳＡ陽性クローンはまた、当該分野において公知の技術（例えば、エピトープ
マッピング、結合親和性、レセプターシグナル形質導入、抗体／抗原結合をブロ
ックするかまたは競合的に阻害する能力、および競合的アゴニスト活性または競
合的アンタゴニスト活性など）によりさらに特徴付けられ得る。
【０７６８】 （実施例１７：活性の分析） （Ａ．発色体結合アッセイ） 発色体物質Ｓ２２５１の存在下で、プラスミノーゲン様ポリペプチドおよびト
ロンビンを一緒にインキュベートし、そして活性化により生成されたプラスミン
は直接Ｓ２２５１を切断し、緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ、０．１ｍＭ
ＥＤＴＡ、０．００５％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００および０．１％ＨＡＳを含
有する）中で総容積８８０μｌで吸収の増加をもたらす。Ｓ２５５１を０．３５
μｇ／ｍｌの最終濃度に添加し、そして用いられるプラスミノーゲン様ポリペプ
チドの濃度は３μｇ／ｍｌである。用いられるトロンビン濃度は４．５５ＮＩＨ
Ｕ／ｍｌである。反応の１００μｌのアリコートを３７℃でのインキュベーショ
ンの間に取り出し、そしてマイクロタイタープレート中の２５μｌ ｄ ４％酢
酸に添加して反応を停止させた。時間経過の終了時にこのプレートをマイクロプ
レートリーダー上で４０５ｎｍの波長で読み取る。
【０７６９】 （Ｂ．インビトロ血餅溶解アッセイ） ５０μｌのウサギ血漿の混合物（３．８％クエン酸３ナトリウムで抗凝血処理
した）、５０μｌ ＡＰＴＴ試薬（Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｌａｂｓ
）および適切な容量のプラスミノーゲンアナログを含有する０．１Ｍ Ｔｒｉｓ
ＨＣｌ ｐＨ７．４を、９６ウェルマイクロタイタープレートのウェル中に同
じ緩衝液を用いて２００μｌとする。別のウェルはプラスミノーゲンアナログを
含有するウェルに５０．６μｌのＣａＣｌ2と混合した４．４μｌの５００ｍＭ ＣａＣｌ2を含む。３７℃１時間の連続インキュベーションの間の時間間隔で
、４０５ｎｍ（参照６２０ｎｍ）での吸収を測定することによって、血餅形成お
よび血餅溶解の進行を追跡する。
【０７７０】 （実施例１８−プロテアーゼ基質特異性の同定） セリンプロテアーゼ活性を有する本発明のポリペプチドの基質特異性を決定す
るために、当該分野で公知の方法または本明細書において記載の方法を用い得る
。基質特異性を決定する好ましい方法は、ＧＢ２３２４５２９（その全体が参考
として本明細書に援用される）に記載のように合成コンビナトリアルライブラリ
ーの位置的スキャンニングを用いる。
【０７７１】 （実施例１９−プラスミノーゲン活性アッセイ） ｕ−ＰＡおよびｔ−ＰＡのようなプラスミノーゲンアクチベータによるプラス
ミノーゲン様タンパク質の活性を測定するために、Ｋａｓｓａｍら（Ｋａｓｓａ
ｍ，Ｇら、ＪＢＣ，２７３：４７９０〜（１９９８））（その全体が参考として
本明細書において援用される）のプラスミノーゲン活性化およびアミド溶解活性
アッセイを利用する。簡略に言えば、この反応は最終濃度１０４μｍで基質スペ
クトロザイム（Ｓｐｅｃｔｒｏｚｙｍｅ）２５１で、そして５０ｍＭ Ｔｒｉｓ
−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１００ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＣａＣｌ2および５．
６ｎＭのプラスミノーゲンアクチベーター（例えば、ｔ−ＰＡ、ｕ−ＰＡ）から
なる緩衝液中で行われる。０．６ｍｌの最終容量で２５℃でこの反応を行う。本
発明の０．１１μＭのプラスミノーゲン様ポリペプチドの添加によってこの反応
を開始し、そして反応の進行を４０５ｎｍでモニターする。不活性な酵素前駆体
（チモーゲン）形態から活性なセリンプロテアーゼへの本発明のプラスミノーゲ
ン様ポリペプチドの活性化は、活性なプロテアーゼがこの基質を切断するので、
分光光学的に可視である。
【０７７２】 本発明の特定のプラスミノーゲン様のポリヌクレオチドおよびポリペプチド（
抗体を含む）は、米国仮出願番号第６０／１５８，０４４（これは、その全体が
本明細書中に参考として援用される）に開示された。
【０７７３】 本発明を、前述の説明および実施例に詳細に記載された以外の方法で実施し得
ることは、明らかである。本発明の多数の改変およびバリエーションが、上記の
教示を考慮して可能であり、従って、それは、添付の特許請求の範囲の範囲内に
ある。
【０７７４】 発明の背景、詳細な説明および実施例において引用された各文書の全開示（特
許、特許出願、学術文献、要約、実験室マニュアル、書籍または他の開示を含む
）は、本明細書中に参考として援用される。さらに、本明細書とともに提出され
た配列表のハードコピーおよび対応するコンピュ−ター読み出し形態は、両方と
も本明細書中にその全体が参考として援用される。
【０７７５】
【表６】 ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−７３７ （カナダ） 出願人は、出願に基づきカナダ国特許が発行されるか、あるいは同出願が拒絶
または放棄されて回復され得なくなるかもしくは取り下げられるまでは、特許庁
長官（Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎｅｒ ｏｆ Ｐａｔｅｎｔｓ）が、長官により指名
された独立の専門家に対してのみ出願中で言及された寄託済みの生物学的材料の
サンプルの供与を許可する旨を請求し、出願人は、国際出願の公表のための規則
上の準備が完了する前に、書面によりその旨を国際事務局に告知しなければなら
ない。
【０７７６】 （ノルウェー） 出願人はここにおいて、出願が（ノルウェー特許庁により）公開に付されるか
あるいは公開を経ずにノルウェー特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの
供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は
、ノルウェー特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能
にされる時点以前に、出願人によりノルウェー特許庁に対してなされるものとす
る。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供
与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家
は、ノルウェー特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ ｏｆ
ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、
個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７７７】 （オーストラリア） 出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は、特許の付与前において、
あるいは出願の放棄（ｌａｐｓｉｎｇ）、拒絶あるいは取り下げ前において、発
明に対し利害関係を有さない当業者である対象者（ｓｋｉｌｌｅｄ ａｄｄｒｅ
ｓｓｅｅ）に対してのみ行われる旨を、告知するものである（オーストラリア国
特許法第３．２５（３）号規定）。
【０７７８】 （フィンランド） 出願人はここにおいて、出願が（特許および統制委員会（Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ｂｏａｒｄ ｏｆ Ｐａｔｅｎｔｓ ａｎｄ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）により
）公開に付されるかあるいは公開を経ずに国立特許および法規委員会による決定
を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を
、請求する。
【０７７９】 （英国） 出願人はここにおいて、微生物のサンプルは専門家に対してのみ利用可能にさ
れる旨を、請求する。この旨の請求は、出願の国際公表のための規則上の準備が
完了する前に、出願人により国際事務局に対してなされなければならない。 ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−６２９ （デンマーク） 出願人はここにおいて、出願が（デンマーク特許庁により）公開に付されるか
あるいは公開を経ずにデンマーク特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの
供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は
、デンマーク特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能
にされる時点以前に、出願人によりデンマーク特許庁に対してなされるものとす
る。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供
与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家
は、デンマーク特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ ｏｆ
ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、
個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７８０】 （スウェーデン） 出願人はここにおいて、出願が（スウェーデン特許庁により）公開に付される
かあるいは公開を経ずにスウェーデン特許庁による決定を受けるまでは、サンプ
ルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請
求は、優先日から１６ヶ月が経過するよりも前に、出願人により国際事務局に対
してなされるものとする（好ましくはＰＣＴ Ａｐｐｌｉｃａｎｔ’ｓ Ｇｕｉ
ｄｅのＶｏｌｕｍｅ Ｉのａｎｎｅｘ Ｚに記載された書式ＰＣＴ／ＲＯ／１３
４による）。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサン
プルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする
。専門家は、スウェーデン特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓ
ｔ ｏｆ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、
あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７８１】 （オランダ） 出願人はここにおいて、オランダ特許の発行日まで、あるいは出願が拒絶、取
り下げあるいは放棄（ｌａｐｓｅｄ）される日までは、特許法３１Ｆ（１）の規
定に基づき、微生物は専門家へのサンプル供与の形でのみ行われる旨を、請求す
る。この旨の請求は、オランダ王国特許法の第２２Ｃ条または第２５条に基づき
出願が公に利用可能にされる日のうちいずれか早い方の日付よりも前に、出願人
によりオランダ工業所有権局に対して提出されるものとする。
【配列表】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 3/00 Ａ６１Ｐ 9/00 ４Ｃ０８５ 7/00 17/00 ４Ｃ０８７ 7/02 19/00 ４Ｈ０４５ 9/00 25/00 17/00 27/02 19/00 29/00 25/00 31/00 27/02 33/00 29/00 35/00 31/00 37/00 33/00 37/06 35/00 43/00 １０５ 37/00 １１１ 37/06 Ｃ０７Ｋ 14/745 43/00 １０５ 16/36 １１１ Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ０７Ｋ 14/745 1/19 16/36 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 1/19 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ 1/21 33/50 Ｚ 5/10 33/53 Ｄ Ｃ１２Ｐ 21/02 33/566 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ａ６１Ｋ 35/76 33/50 39/395 Ｄ 33/53 Ｎ 33/566 45/00 // Ａ６１Ｋ 35/76 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 39/395 5/00 Ａ Ａ６１Ｋ 37/02 45/00 37/47 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ， ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，Ｃ Ａ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ， ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，Ｋ Ｅ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ， ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，Ｒ Ｕ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ， ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ニ， ジアン アメリカ合衆国 メリーランド 20853， ロックビル， マナーフィールド ロー ド 5502 (72)発明者 ヤング， ポール イー． アメリカ合衆国 メリーランド 20878， ゲイザースバーグ， ベックウィズ ス トリート 122 (72)発明者 ルーベン， スティーブン エム． アメリカ合衆国 メリーランド 20832， オルネイ， ヘリテイジ ヒルズ ドラ イブ 18528 Ｆターム(参考） 2G045 AA34 AA35 BB05 BB10 BB14 BB20 BB29 BB51 CB01 DA13 DA14 DA36 FB01 FB02 FB05 4B024 AA01 BA80 CA04 DA02 EA02 HA06 HA17 4B064 AG01 BH09 CA19 CE11 DA01 4B065 AA90X AA93Y AB01 CA24 CA44 4C084 AA02 AA03 AA06 AA07 AA13 AA17 BA01 BA02 CA53 DC06 DC36 NA14 ZA362 ZA542 ZB082 ZC202 4C085 AA13 AA14 DD62 4C087 AA01 AA02 BC83 CA12 NA14 ZA36 ZA54 ZC20 4H045 AA10 AA11 AA20 BA10 CA40 DA65 DA75 EA20 FA74

Claims (21)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 単離された核酸分子であって、以下： （ａ）配列番号Ｘに示されるポリヌクレオチド、またはＡＴＣＣ受託番号Ｚに
    含まれるｃＤＮＡによってコードされるポリヌクレオチド； （ｂ）配列番号Ｙの生物学的に活性なポリペプチドフラグメント、またはＡＴ
    ＣＣ受託番号Ｚに含まれるｃＤＮＡ配列によってコードされる生物学的に活性な
    ポリペプチドフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド； （ｃ）配列番号Ｙのポリペプチドエピトープ、またはＡＴＣＣ受託番号Ｚに含
    まれるｃＤＮＡ配列によってコードされるポリペプチドエピトープをコードする
    、ポリヌクレオチド； （ｄ）（ａ）〜（ｃ）において特定されるポリヌクレオチドのいずれか１つに
    ストリンジェント条件下でハイブリダイズし得るポリヌクレオチドであって、こ
    こで、該ポリヌクレオチドは、Ａ残基のみまたはＴ残基のみのヌクレオチド配列
    を有する核酸分子に、ストリンジェント条件下でハイブリダイズしない、ポリヌ
    クレオチド、 からなる群より選択されるポリヌクレオチドを含む、単離された核酸分子。
  2. 【請求項２】 前記ポリヌクレオチドが、可溶性ポリペプチドをコードする
    ヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載の単離された核酸分子。
  3. 【請求項３】 前記ポリヌクレオチドが、配列番号Ｙとして同定される配列
    をコードするヌクレオチド配列、またはＡＴＣＣ受託番号Ｚに含まれるｃＤＮＡ
    配列によってコードされるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、
    請求項１に記載の単離された核酸分子。
  4. 【請求項４】 前記ポリヌクレオチドが、配列番号Ｘの全体のヌクレオチド
    配列、またはＡＴＣＣ受託番号Ｚに含まれるｃＤＮＡを含む、請求項１に記載の
    単離された核酸分子。
  5. 【請求項５】 前記ポリヌクレオチドがＤＮＡである、請求項２に記載の単
    離された核酸分子。
  6. 【請求項６】 前記ポリヌクレオチドがＲＮＡである、請求項３に記載の単
    離された核酸分子。
  7. 【請求項７】 請求項１に記載の単離された核酸分子を含む、ベクター。
  8. 【請求項８】 請求項７に記載のベクターを含む、宿主細胞。
  9. 【請求項９】 遺伝子発現を制御する異種調節エレメントに作動可能に連結
    されている請求項１に記載の核酸分子を含む、組換え宿主細胞。
  10. 【請求項１０】 請求項９に記載の宿主細胞からコードされたポリペプチド
    を発現する工程、および該ポリペプチドを回収する工程を包含する、ポリペプチ
    ドの産生方法。
  11. 【請求項１１】 単離されたポリペプチドであって、以下： （ａ）配列番号Ｙに示されるポリペプチド、またはｃＤＮＡによってコードさ
    れるポリペプチド； （ｂ）配列番号Ｙのポリペプチドフラグメント、またはｃＤＮＡによってコー
    ドされるポリペプチド； （ｃ）配列番号Ｙのポリペプチドエピトープ、またはｃＤＮＡによってコード
    されるポリペプチド；および （ｄ）配列番号Ｙの改変体、 からなる群より選択される配列に少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、
    単離されたポリペプチド。
  12. 【請求項１２】 配列番号Ｙを有するポリペプチドを含む、請求項１１に記
    載の単離されたポリペプチド。
  13. 【請求項１３】 請求項１１に記載の単離されたポリペプチドに特異的に結
    合する、単離された抗体。
  14. 【請求項１４】 請求項１１に記載の単離されたポリペプチドを発現する、
    組換え宿主細胞。
  15. 【請求項１５】 単離されたポリペプチドを作製する方法であって、以下： （ａ）該ポリペプチドが発現されるような条件下で、請求項１４に記載の組換
    え宿主細胞を培養する工程；および （ｂ）該ポリペプチドを回収する工程、 を包含する、方法。
  16. 【請求項１６】 請求項１５に記載の方法によって産生される、ポリペプチ
    ド。
  17. 【請求項１７】 医学的状態を予防、処置、または緩和する方法であって、
    請求項１１に記載のポリペプチドまたは請求項１に記載のポリヌクレオチドの治
    療有効量を、哺乳動物被験体に投与する工程を包含する、方法。
  18. 【請求項１８】 被験体における病理学的状態、または病理学的状態に対す
    る感受性を診断する方法であって、以下： （ａ）請求項１に記載のポリヌクレオチドにおける変異の存在または非存在を
    決定する工程；および （ｂ）該変異の存在または非存在に基づいて病理学的状態、または病理学的状
    態に対する感受性を診断する工程、 を包含する、方法。
  19. 【請求項１９】 被験体において病理学的状態、または病理学的状態に対す
    る感受性を診断する方法であって、以下： （ａ）生物学的サンプルにおける請求項１１に記載のポリペプチドの発現の存
    在または量を決定する工程；および （ｂ）該ポリペプチドの発現の存在または量に基づいて病理学的状態、または
    病理学的状態に対する感受性を診断する工程、 を包含する、方法。
  20. 【請求項２０】 請求項１１に記載のポリペプチドに対する結合パートナー
    を同定する方法であって、以下： （ａ）請求項１１に記載のポリペプチドを結合パートナーと接触させる工程；
    および （ｂ）該結合パートナーが該ポリペプチドの活性をもたらすか否かを決定する
    工程、 を包含する、方法。
  21. 【請求項２１】 請求項１１に記載のポリペプチドの活性を改変する分子を
    スクリーニングする方法であって、以下： （ａ）該ポリペプチドを、アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する
    と疑われる化合物と接触させる工程；および （ａ）該ポリペプチドの活性をアッセイする工程； を包含する、方法。
JP2001527814A 1999-10-07 2000-10-04 プラスミノーゲン様ポリヌクレオチド、ポリペプチド、および抗体 Withdrawn JP2003524413A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US15804499P 1999-10-07 1999-10-07
US60/158,044 1999-10-07
PCT/US2000/027253 WO2001024815A1 (en) 1999-10-07 2000-10-04 Plasminogen-like polynucleotides, polypeptides, and antibodies

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2003524413A true JP2003524413A (ja) 2003-08-19

Family

ID=22566477

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2001527814A Withdrawn JP2003524413A (ja) 1999-10-07 2000-10-04 プラスミノーゲン様ポリヌクレオチド、ポリペプチド、および抗体

Country Status (6)

Country Link
US (2) US20020094955A1 (ja)
EP (1) EP1227833A1 (ja)
JP (1) JP2003524413A (ja)
AU (1) AU1191001A (ja)
CA (1) CA2385703A1 (ja)
WO (1) WO2001024815A1 (ja)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6485957B1 (en) * 1999-04-30 2002-11-26 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. DNA encoding the human serine protease EOS
ES2258099T3 (es) * 2000-06-23 2006-08-16 Bayer Healthcare Ag Regulacion de la serina proteasa similar a la prostatina humana.
WO2002024886A2 (en) * 2000-09-25 2002-03-28 Bayer Aktiengesellschaft Regulation of human serine protease
US20050203169A1 (en) * 2001-08-06 2005-09-15 Moskowitz David W. Methods and compositions for treating diseases associated with excesses in ACE
AU2002355419A1 (en) * 2001-08-06 2003-02-24 Genomed, Llc Methods and compositions for treating diseases associated with excesses in ace
WO2003044179A2 (en) * 2001-11-20 2003-05-30 Dendreon San Diego Llc Nucleic acid molecules encoding serine protease 17, the encoded polypeptides and methods based thereon
CN1753683B (zh) * 2002-12-20 2010-05-26 视可舒研究公司 预防和治疗不良眼部病症的眼用制剂
US20060172972A1 (en) * 2002-12-20 2006-08-03 Chakshu Research Inc Formulation and method for administration of ophthalmologically active agents
US20060166879A1 (en) * 2002-12-20 2006-07-27 Chakshu Research Inc Treatment of conditions associated with the presence of macromolecular aggregates, particularly ophthalmic disorders
US20060177430A1 (en) * 2002-12-20 2006-08-10 Chakshu Research Inc Treatment of ocular disorders with ophthalmic formulations containing methylsulfonylmethane as a transport enhancer
WO2005107470A2 (en) * 2004-04-29 2005-11-17 University Of Florida Research Foundation, Inc. Use of carbonic anhydrase inhibitors for insect control and malaria treatment
EP1907006A2 (en) * 2005-07-15 2008-04-09 Chakshu Research, Inc. Prevention and treatment of ophthalmic complications of diabetes
EP2026833A4 (en) * 2006-06-01 2012-05-30 Univ Vermont METHODS FOR INHIBITING CARDIAC PAI-1
KR101712208B1 (ko) 2008-01-09 2017-03-03 인트렉손 코포레이션 Ｐａｉ―１ 작용의 치료학적 억제제 및 이의 사용 방법
US20120316211A1 (en) * 2011-05-11 2012-12-13 The Board or Regents of the University of Texas System Diagnostic Methods for Assessing Risk of Chagas Disease and Heart Failure
TWI725092B (zh) 2015-12-18 2021-04-21 大陸商深圳瑞健生命科學硏究院有限公司 纖溶酶原在製備預防或治療糖尿病腎病或其相關病症之藥劑上的用途
JP6749412B2 (ja) 2015-12-18 2020-09-02 タレンゲン インターナショナル リミテッドＴａｌｅｎｇｅｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｌｉｍｉｔｅｄ 糖尿病性神経損傷及びその関連疾患を予防または治療するための方法
WO2017101870A1 (zh) 2015-12-18 2017-06-22 深圳瑞健生命科学研究院有限公司 一种预防或治疗糖尿病性视网膜病变的方法
WO2017101871A1 (zh) 2015-12-18 2017-06-22 深圳瑞健生命科学研究院有限公司 一种预防和治疗心血管病的新方法
WO2018107703A1 (zh) 2016-12-15 2018-06-21 深圳瑞健生命科学研究院有限公司 一种促进胰岛β细胞损伤修复和减少胰岛纤维化的方法
JP7487970B2 (ja) * 2020-02-06 2024-05-21 タレンゲン インターナショナル リミテッド 多発性硬化症を予防及び治療する方法並びに薬剤

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2254316B1 (ja) * 1973-12-18 1977-04-22 Choay Sa

Also Published As

Publication number Publication date
WO2001024815A1 (en) 2001-04-12
US20030180934A1 (en) 2003-09-25
AU1191001A (en) 2001-05-10
US20020094955A1 (en) 2002-07-18
CA2385703A1 (en) 2001-04-12
EP1227833A1 (en) 2002-08-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2003517304A (ja) クニッツ型プロテアーゼインヒビターポリヌクレオチド、ポリペプチド、および抗体
JP2003514510A (ja) ヒト膵臓および膵臓癌関連遺伝子配列およびポリペプチド
JP2003524413A (ja) プラスミノーゲン様ポリヌクレオチド、ポリペプチド、および抗体
JP2003512819A (ja) Ｂ７様ポリヌクレオチド、ポリペプチドおよび抗体
JP2003501016A (ja) Ａｄａｍのポリヌクレオチドおよびポリペプチド
JP2003503010A (ja) アポトーシス関連遺伝子
JP2003507036A (ja) レチノイドレセプター相互作用ポリヌクレオチド、ポリペプチド、および抗体
JP2003512856A (ja) ウテログロビン様ポリヌクレオチド、ポリペプチド、および抗体
JP2003508036A (ja) アトラクチン様ポリヌクレオチド、ポリペプチド、および抗体
JP2003507033A (ja) １３個のヒト結腸タンパク質および結腸癌に関連するタンパク質
JP2004500034A (ja) カルシウムチャネル輸送ポリヌクレオチド、ペプチドおよび抗体
JP2002543777A (ja) セリンプロテアーゼ
JP2003512044A (ja) プロテインチロシンキナーゼレセプターポリヌクレオチド、ポリペプチド、および抗体
JP2004500810A (ja) Ｉｌ−６様ポリヌクレオチド、ポリペプチド、および抗体
JP2003508033A (ja) ＴＲＦ−βレセプターポリヌクレオチド、ポリペプチド、および抗体
JP2002537810A (ja) ヒトセルピンタンパク質
JP2003527076A (ja) 骨形態形成タンパク質
JP2003503014A (ja) ７回膜貫通レセプター遺伝子
JP2002543770A (ja) 脱共役タンパク質
JP2003515325A (ja) ４ジスルフィドコアドメイン含有（ｆｄｃｄ）ポリヌクレオチド、ポリペプチド、および抗体
US20030050466A1 (en) TM4SF polynucleotides, polypeptides, and antibodies
JP2004500058A (ja) サイトカインレセプター様ポリヌクレオチド、ポリペプチド、および抗体
JP2003533968A (ja) 免疫グロブリンスーパーファミリーポリヌクレオチド、ポリペプチド、および抗体
JP2003505101A (ja) セリンプロテアーゼ
JP2003505095A (ja) Ａｂｃトランスポートポリヌクレオチド、ポリペプチド、および抗体

Legal Events

Date Code Title Description
A300 Application deemed to be withdrawn because no request for examination was validly filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300

Effective date: 20071204