JP2002543770A - 脱共役タンパク質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、新規な脱共役タンパク質に関する。より詳細には、新規な脱共役ポリペプチドをコードする単離された核酸分子が提供される。新規な脱共役ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに結合する抗体が提供される。ヒト脱共役ポリヌクレオチドおよび／またはヒト脱共役ポリペプチドを産生するためのベクター、宿主細胞、ならびに組換え方法および合成方法もまた、提供される。本発明はさらに、これらの新規な脱共役ポリペプチドに関連する障害の診断、処置、予防、および／または予後のために有用である診断方法および治療方法に関する。本発明はさらに、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドのアゴニストおよびアンタゴニストを同定するためのスクリーニング方法に関する。本発明はさらに、本発明のポリペプチドの生成および機能を阻害するための方法および／または組成物に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の分野） 本発明は、新規な脱共役タンパク質に関する。より詳細には、新規な脱共役ポ
リペプチドをコードする単離された核酸分子が提供される。新規な脱共役ポリペ
プチドおよびこれらのポリペプチドに結合する抗体が提供される。ヒト脱共役ポ
リヌクレオチドおよび／またはヒト脱共役ポリペプチドを産生するためのベクタ
ー、宿主細胞、ならびに組換え方法および合成方法もまた、提供される。本発明
はさらに、これらの新規な脱共役ポリペプチドに関連する障害の診断、処置、予
防、および／または予後のために有用である診断方法および治療方法に関する。
本発明はさらに、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドのアゴニストお
よびアンタゴニストを同定するためのスクリーニング方法に関する。本発明はさ
らに、本発明のポリペプチドの生成および機能を阻害するための方法および／ま
たは組成物に関する。

【０００２】 （発明の背景） 脱共役タンパク質はまた、ミトコンドリアキャリアタンパク質とも呼ばれ、代
謝および熱発生に関与するミトコンドリア内膜輸送タンパク質のファミリーを含
む。詳細には、脱共役タンパク質は、電子伝達鎖によって燃料の酸化から生じた
プロトン勾配を分散させ、従って、貯蔵されていたエネルギーを熱として放出す
る。熱発生の機能不全は、肥満および悪液質のような障害を誘導し得る。肥満は
、ヒトにおける熱発生の減少から生じ得ると考えられている。もう一方の悪液質
は、例えば、神経性食欲不振において、エネルギーの消費が食物の摂取を超えて
いる代謝状態である。脱共役タンパク質は、異常な代謝経路および発熱経路に関
与する疾患および／または障害の処置および／または予防のために有用であり得
る。

【０００３】 最初に同定された脱共役タンパク質である、脱共役タンパク質１（ＵＣＰ１）
は、他のいかなるエネルギー消費プロセスとも共役することなく、褐色脂肪組織
中でミトコンドリア内膜を横切るプロトン電気化学勾配の分散を可能にする経路
を作り出すことによって、熱および燃焼熱量を発生する際に重要な役割を果たす
（Ｊａｃｏｂｓｓｏｎ，Ａ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：１６２５０
−１６２５４（１９８５））。この遺伝子の組織分布は、褐色脂肪組織に特異的
であり、ヒトは限られた量のこの組織を有する。脱共役タンパク質２（ＵＣＰ２
）は、第２の、関連する脱共役タンパク質であり、これは成体ヒト組織（マクロ
ファージに富む組織を含む）において広く発現され、そして脂肪摂取に応答して
脂肪組織においてアップレギュレートされる（Ｆｌｅｕｒｙ，Ｃ．ら、Ｎａｔｕ
ｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１５：２６９−２７２（１９９７））。ＵＣＰ２は、
高インスリン血症および肥満と関連するヒト第１１染色体およびマウス第７染色
体の領域にマッピングされる。

【０００４】 より最近になって、脱共役タンパク質３（ＵＣＰ３）が発見された。このタン
パク質は、脱共役タンパク質ファミリーのタンパク質の別の関連するメンバーで
ある（Ｂｏｓｓ，Ｏ．ら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．４０８：３９−４２（１９９７
））。ＵＣＰ３は、豊富にかつ特異的に骨格筋において発現される。同様に、脳
ミトコンドリアキャリアタンパク質１（ＢＭＣＰ１）は、脱共役キャリアタンパ
ク質ファミリーのタンパク質と関連することが見出された（Ｓａｎｃｈｉｓ，Ｄ
．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７３：３４６１１−３４６１５（１９９８
））。ＢＭＣＰ１は、脳皮質、海馬、視床、扁桃、および視床下部のような神経
組織において発現される。

【０００５】 従って、新規な脱共役タンパク質を同定および開発するための明確な必要が存
在する。構造的に関連するが、このようなタンパク質は、種々の細胞および組織
型において多様で多面的な機能を有し得る。本発明の精製した脱共役ポリペプチ
ドは、例えば、熱発生に関与するさらなるタンパク質の同定、特徴付け、および
精製のための有用な研究ツールである。さらに、新規な脱共役ポリペプチドの同
定は、核酸およびタンパク質レベルでの一定の範囲の誘導体、アゴニストおよび
アンタゴニストの開発を可能にし、これは、次には、多くの他の状態の間で、例
えば、肥満および悪液質のような一定の範囲の状態の処置および診断における適
用を有する。

【０００６】 （発明の要旨） 本発明は、配列表において開示されるポリヌクレオチド配列および／または表
１に記載されそしてアメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に寄
託されたヒトｃＤＮＡプラスミドに含まれる配列を含むか、または代替的に、そ
の配列からなる単離された核酸分子を含む。これらの核酸分子のフラグメント、
改変体、および誘導体もまた、本発明に含まれる。本発明はまた、脱共役ポリペ
プチドをコードするポリヌクレオチドを含むか、あるいは、そのポリヌクレオチ
ドからなる単離された核酸分子を含む。本発明はさらに、これらのポリヌクレオ
チドによってコードされる脱共役ポリペプチドを含む。さらに、配列表において
開示される脱共役ポリペプチドおよび／または表１に記載されそしてＡＴＣＣに
寄託されたヒトｃＤＮＡプラスミドによってコードされる脱共役ポリペプチドを
含むか、あるいは、その配列からなるアミノ酸配列を提供する。これらのポリペ
プチドを結合する抗体もまた、本発明に含まれる。これらのアミノ酸配列のポリ
ペプチドフラグメント、改変体、および誘導体もまた、これらのポリペプチドを
コードするポリヌクレオチド、およびこれらのポリペプチドに結合する抗体と同
様に、本発明に含まれる。

【０００７】 （詳細な説明） （表） 表１は、本出願に関してＡＴＣＣになされた寄託物のＡＴＣＣ寄託証、寄託日
、およびＡＴＣＣ寄託番号を要約する。

【０００８】 表２は、公のＥＳＴを示し、これらのＥＳＴ配列の任意の１つ以上の少なくと
も１、２、３、４、５、１０、またはそれ以上が、本発明の特定の実施形態から
必要に応じて除外される。

【０００９】 （定義） 以下の定義は、本明細書を通して使用される特定の用語の理解を容易にするた
めに提供される。

【００１０】 本発明において、「単離された（単離した）」とは、その本来の環境（例えば
、それが天然に存在する場合は天然の環境）から取り出された物質をいい、した
がって、その天然の状態から「人間の手によって」変更されている。例えば、単
離されたポリヌクレオチドは、ベクターまたは組成物の一部であり得るか、ある
いは細胞中に含まれ得、そしてなお「単離されている」。なぜなら、そのベクタ
ー、組成物、または特定の細胞は、ポリヌクレオチドの本来の環境ではないから
である。用語「単離された」は、ゲノムライブラリーまたはｃＤＮＡライブラリ
ー、丸ごとの細胞全体またはｍＲＮＡ調製物、ゲノムＤＮＡ調製物（電気泳動に
より分離されたものおよびブロットにトランスファーされたものを含む）、せん
断された全細胞ゲノムＤＮＡ調製物、あるいは、当該分野が本発明のポリヌクレ
オチド／配列の際立った特徴を示せない他の組成物をいわない。

【００１１】 本明細書中で使用される場合、「ポリヌクレオチド」とは、配列番号Ｘ（ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：Ｘ）に含まれる核酸配列（表１の欄５に記載される）を有する
分子、またはｃＤＮＡプラスミド：Ｚ（表１の欄３に記載され、かつＡＴＣＣに
寄託されたプラスミドのプール内に含まれる）をいう。例えば、このポリヌクレ
オチドは、５’および３’非翻訳配列、天然もしくは人工のシグナル配列を含む
かもしくは含まないコード領域、タンパク質コード領域を含む全長ｃＤＮＡ配列
のヌクレオチド配列、ならびにこの核酸配列のフラグメント、エピトープ、ドメ
イン、および改変体を含み得る。さらに、本明細書で使用される場合、「ポリペ
プチド」とは、広く定義されるように、本発明のポリヌクレオチドによりコード
されるアミノ酸配列を有する分子（ｃＤＮＡに対応する配列のポリＡテイルの翻
訳から生じるポリフェニルアラニンまたはポリリジンのペプチド配列は明らかに
除かれる）をいう。

【００１２】 本発明において、配列番号Ｘの配列を含む代表的なプラスミドは、Ａｍｅｒｉ
ｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（「ＡＴＣＣ」）に
寄託され、そして／または表１に記載される。表１に示されるように、各々のプ
ラスミドは、ｃＤＮＡクローンＩＤ（Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ）およびＡＴＣＣ受
託番号（ＡＴＣＣ寄託番号Ｚ）によって同定される。単一の寄託として、プール
され、そして受託されるプラスミドは、同じＡＴＣＣ受託番号を有する。ＡＴＣ
Ｃは、アメリカ合衆国、バージニア２０１１０−２２０９、マナサス、Ｕｎｉｖ
ｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ １０８０１に位置する。ＡＴＣＣ寄託は、
特許手続の目的のための微生物の寄託の国際承認に係るブダペスト条約の条項に
よって行われた。

【００１３】 本発明の「ポリヌクレオチド」はまた、ストリンジェントなハイブリダイゼー
ション条件下で、配列番号Ｘに含まれる配列、またはその相補体（例えば、本明
細書中に記載されるポリヌクレオチドフラグメントの任意の１、２、３、４、ま
たはそれ以上の相補体）、および／またはｃＤＮＡ プラスミドＺに含まれる配
列（例えば、本明細書中に記載されるポリヌクレオチドフラグメントの１、２、
３、４、またはそれ以上の相補体）にハイブリダイズし得る、任意のポリヌクレ
オチドを含む。「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」とは、５０
％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（７５０ｍＭ ＮａＣｌ、７５ｍＭクエン酸三ナト
リウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハルト溶液、１
０％デキストラン硫酸、および２０μｇ／ｍｌ変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶
液中での４２℃での一晩インキュベーション、次いで０．１×ＳＳＣ中で約６５
℃にてフィルターを洗浄することをいう。

【００１４】 より低い、ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件で、本発明のポ
リヌクレオチドにハイブリダイズする核酸分子もまた、本発明の「ポリヌクレオ
チド」に含まれる。ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーおよびシグナ
ル検出の変化は、主として、ホルムアミド濃度（より低い百分率のホルムアミド
が、低下したストリンジェンシーを生じる）；塩条件、または温度の操作を通じ
て達成される。例えば、より低いストリンジェンシー条件は、６×ＳＳＰＥ（２
０×ＳＳＰＥ＝３Ｍ ＮａＣｌ；０．２Ｍ ＮａＨ₂ＰＯ₄；０．０２Ｍ ＥＤＴ
Ａ、ｐＨ７．４）、０．５％ ＳＤＳ、３０％ホルムアミド、１００μｇ／ｍｌ
サケ精子ブロッキングＤＮＡを含む溶液中、３７℃で一晩のインキュベーション
；次いで１×ＳＳＰＥ、０．１％ ＳＤＳを用いた５０℃での洗浄を含む。さら
に、なおより低いストリンジェンシーを達成するために、ストリンジェントなハ
イブリダイゼーション後に行われる洗浄は、より高い塩濃度（例えば、５×ＳＳ
Ｃ）で行われ得る。

【００１５】 上記の条件における変化が、ハイブリダイゼーション実験においてバックグラ
ウンドを抑制するために使用される代替的なブロッキング試薬の含有および／ま
たは置換によって達成され得ることに留意すること。代表的なブロッキング試薬
としては、デンハルト試薬、ＢＬＯＴＴＯ、ヘパリン、変性サケ精子ＤＮＡ、お
よび市販の専売処方物が挙げられる。特異的ブロッキング試薬の含有は、適合性
の問題に起因して、上記のハイブリダイゼーション条件の改変を必要とし得る。

【００１６】 もちろん、ポリＡ＋配列（例えば、配列表に示されるｃＤＮＡの任意の３’末
端ポリＡ＋領域（ｔｒａｃｔ））に、またはＴ（もしくはＵ）残基の相補的スト
レッチにのみハイブリダイズするポリヌクレオチドは、「ポリヌクレオチド」の
定義に包含されない。なぜなら、このようなポリヌクレオチドが、ポリ（Ａ）ス
トレッチまたはその相補体を含む任意の核酸分子（例えば、プライマーとしてオ
リゴｄＴを使用して産生される、事実上任意の二本鎖ｃＤＮＡクローン）にハイ
ブリダイズするからである。

【００１７】 本発明のポリヌクレオチドは、任意のポリリボヌクレオチドまたはポリデオキ
シリボヌクレオチドから構成され得、これは、非改変ＲＮＡもしくは非改変ＤＮ
Ａまたは改変ＲＮＡもしくは改変ＤＮＡであり得る。例えば、ポリヌクレオチド
は、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖および二本鎖領域の混合物であるＤＮＡ
、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、ならびに一本鎖および二本鎖領域の混合物である
ＲＮＡ、ハイブリッド分子（一本鎖、もしくはより代表的には二本鎖、または一
本鎖領域および二本鎖領域の混合物であり得るＤＮＡおよびＲＮＡを含む）から
構成され得る。さらに、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡもしくはＤＮＡ、またはＲ
ＮＡおよびＤＮＡの両方を含む三本鎖領域から構成され得る。ポリヌクレオチド
はまた、安定性のために、または他の理由のために改変された１つ以上の改変さ
れた塩基またはＤＮＡもしくはＲＮＡ骨格を含み得る。「改変された」塩基とし
ては、例えば、トリチル化された塩基、およびイノシンのような普通でない塩基
が挙げられる。種々の改変が、ＤＮＡおよびＲＮＡに対して行われ得；したがっ
て、「ポリヌクレオチド」は、化学的、酵素的、または代謝的に改変された形態
を含む。

【００１８】 特定の実施形態においては、本発明のポリヌクレオチドは、少なくとも１５の
、少なくとも３０の、少なくとも５０の、少なくとも１００の、少なくとも１２
５の、少なくとも５００の、または少なくとも１０００の連続するヌクレオチド
であるが、３００ｋｂ未満、２００ｋｂ未満、１００ｋｂ未満、５０ｋｂ未満、
１５ｋｂ未満、１０ｋｂ未満、７．５ｋｂ未満、５ｋｂ未満、２．５ｋｂ未満、
２．０ｋｂ未満、または１ｋｂ未満の長さである。さらなる実施形態においては
、本発明のポリヌクレオチドは、本明細書中に開示されたコード配列の一部を含
むが、任意のイントロンの全てまたは一部を含むわけではない。別の実施形態に
おいては、コード配列を含むポリヌクレオチドは、ゲノムの隣接遺伝子のコード
配列（すなわち、ゲノムにおける目的の遺伝子に対する５’または３’）を含ま
ない。他の実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、１０００、５００
、２５０、１００、５０、２５、２０、１５、１０、５、４、３、２または１よ
り多いゲノム隣接遺伝子のコード配列を含まない。

【００１９】 「配列番号Ｘ」とは、表１のカラム５に記載されるポリヌクレオチド配列をい
うが、「配列番号Ｙ」とは、表１のカラム１０に記載されるポリペプチド配列を
いう。配列番号Ｘは、表１のカラム６において特定される整数によって同定され
る。配列番号Ｙのポリペプチド配列は、配列番号Ｘのポリヌクレオチドによって
コードされる翻訳されたオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）である。ポリ
ヌクレオチド配列は、配列表に示され、直ちに全てのポリペプチド配列が続く。
従って、配列番号１のポリヌクレオチド配列に対応するポリペプチド配列は、配
列表に示される第１のポリペプチド配列である。第２のポリペプチド配列は、配
列番号２などとして示されるポリヌクレオチド配列に対応する。

【００２０】 本発明のポリペプチドは、ペプチド結合または改変されたペプチド結合、すな
わち、ペプチドアイソスター（ｉｓｏｓｔｅｒｅ）によって互いに連結したアミ
ノ酸から構成され得、そして遺伝子がコードする２０個のアミノ酸以外のアミノ
酸を含み得る。ポリペプチドは、翻訳後プロセシングのような天然のプロセスに
よって、または当該技術分野で周知の化学的改変技術のいずれかによって、改変
され得る。このような改変は、基本テキスト、およびより詳細な研究論文、なら
びに多くの研究文献に十分に記載される。改変は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖
、およびアミノ末端またはカルボキシル末端、を含むポリペプチドのどこにでも
生じ得る。同じ型の改変が、所定のポリペプチド中のいくつかの部位で、同じま
たは種々の程度で存在し得ることが理解される。また、所定のポリペプチドは多
くの型の改変を含み得る。ポリペプチドは、例えば、ユビキチン化の結果として
分枝状であり得、そしてそのポリペプチドは、分枝を含むかまたは含まない、環
状であり得る。環状、分枝状および分枝した環状のポリペプチドは、天然の翻訳
後プロセスから生じ得るか、または合成方法によって作製され得る。改変として
は、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結
合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、
脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトール（ｐｈｏｓｐｈ
ｏｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ）の共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合形
成、脱メチル化、共有結合架橋の形成、システインの形成、ピログルタミン酸の
形成、ホルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、
水酸化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、ペグ化（ｐｅｇｙｌａｔ
ｉｏｎ）、タンパク質分解プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セ
レノイル化、硫酸化、アルギニル化のようなタンパク質へのアミノ酸のトランス
ファーＲＮＡ媒介付加、およびユビキチン化が挙げられる。（例えば、ＰＲＯＴ
ＥＩＮＳ−ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ ＡＮＤ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＰＲＯＰＥＲＴ
ＩＥＳ、第２版、Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎ
ｄ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９３）；ＰＯＳＴＴＲＡＮＳＬＡ
ＴＩＯＮＡＬ ＣＯＶＡＬＥＮＴ ＭＯＤＩＦＩＣＡＴＩＯＮ ＯＦ ＰＲＯＴ
ＥＩＮＳ、Ｂ．Ｃ．Ｊｏｈｎｓｏｎ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ、１−１２頁（１９８３）；Ｓｅｉｆｔｅｒら、Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙ
ｍｏｌ．１８２：６２６−６４６（１９９０）；Ｒａｔｔａｎら、Ａｎｎ．Ｎ．
Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６３：４８−６２（１９９２）を参照のこと）。

【００２１】 本発明のポリペプチドは、任意の適切な様式で調製され得る。そのようなポリ
ペプチドとしては、単離された天然に存在するポリペプチド、組換え的に生成さ
れたポリペプチド、合成的に生成されたポリペプチド、またはこれらの方法の組
み合わせによって生成されたポリペプチドが挙げられる。このようなポリペプチ
ドを調製するための手段は、当該分野において十分に理解されている。

【００２２】 ポリペプチドは、分泌タンパク質の形態（成熟形態を含む）であり得るか、ま
たはより大きなタンパク質（例えば、融合タンパク質）の一部であり得る（下記
を参照のこと）。分泌配列またはリーダー配列、プロ配列、精製において補助す
る配列（例えば、複数のヒスチジン残基）、または組換え生成の間の安定性のた
めのさらなる配列を含むさらなるアミノ酸配列を含むことは、しばしば有利であ
る。

【００２３】 本発明のポリペプチドは、好ましくは単離された形態で提供され、そして好ま
しくは実質的に精製される。ポリペプチドの組換え的に生成されたバージョン（
分泌ポリペプチドを含む）は、本明細書中で記載される技術か、またはさもなく
ば当該分野で公知の技術を使用して（例えば、ＳｍｉｔｈおよびＪｏｈｎｓｏｎ
（Ｇｅｎｅ ６７：３１−４０（１９８８））において記載される１工程方法に
よって）、実質的に精製され得る。本発明のポリペプチドはまた、本明細書中で
記載される技術、または当該分野における他の周知の方法を使用して（例えば、
当該分野で周知の方法で本発明のポリペプチドに対して惹起された本発明の抗体
を使用して）、天然の供給源、合成的な供給源または組換え供給源から精製され
得る。

【００２４】 「機能的活性」を示すポリペプチドとは、本発明の全長（完全）タンパク質と
関連した１つ以上の公知の機能的活性を示し得るポリペプチドを意味する。この
ような機能的活性としては、生物学的活性、抗原性［抗ポリペプチド抗体に結合
する（または結合することについて、ポリペプチドと競合する）能力］、免疫原
性（本発明の特異的なポリペプチドに結合する抗体を生成する能力）、本発明の
ポリペプチドとマルチマーを形成する能力、およびポリペプチドについてのレセ
プターまたはリガンドに結合する能力が挙げられるが、これらに限定されない。

【００２５】 「機能的活性を有するポリペプチド」とは、特定のアッセイ（例えば、生物学
的アッセイ）で測定した場合、用量依存性を伴なっても伴なわなくても、本発明
のポリペプチド（成熟形態を含む）の活性と類似であるが、必ずしも同一ではな
い活性を示すポリペプチドをいう。用量依存性が存在する場合、本発明のポリペ
プチドの用量依存性と同一である必要はないが、むしろ本発明のポリペプチドと
比較した場合に、所定の活性における用量依存性に実質的に類似する（すなわち
、候補ポリペプチドは、本発明のポリペプチドと比較して、より大きな活性を示
すか、または約１／２５以上、そして好ましくは約１／１０以上の活性、そして
最も好ましくは約１／３以上の活性を示す）。

【００２６】 ポリペプチド、ならびにそれらのフラグメント、改変体、誘導体、およびアナ
ログの機能的活性は、種々の方法によってアッセイされ得る。

【００２７】 例えば、全長ポリペプチドの抗体への結合について本発明の全長ポリペプチド
に結合するか、またはそれと競合する能力についてアッセイする、１つの実施形
態では、当該分野で公知の種々の免疫アッセイが、用いられ得る。このようなア
ッセイとしては、放射免疫アッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）
、「サンドイッチ」免疫アッセイ、免疫放射分析アッセイ、ゲル拡散沈降反応、
免疫拡散アッセイ、インサイチュ免疫アッセイ（例えば、コロイド金、酵素また
は放射性同位体標識を用いる）、ウェスタンブロット、沈降反応、凝集アッセイ
（例えば、ゲル凝集アッセイ、血球凝集アッセイ）、補体結合アッセイ、免疫蛍
光アッセイ、プロテインＡアッセイ、および免疫電気泳動アッセイなどのような
技術を用いる競合および非競合アッセイ系が挙げられるが、これらに限定されな
い。１つの実施形態では、抗体結合が、一次抗体上の標識を検出することによっ
て検出される。別の実施形態では、この一次抗体は、この一次抗体に対する二次
抗体または試薬の結合を検出することによって検出される。さらなる実施形態で
は、この二次抗体が標識される。多くの手段が、免疫アッセイにおける結合の検
出について当該分野で公知であり、そして本発明の範囲内である。

【００２８】 別の実施形態では、リガンドが同定されるか、または本発明のポリペプチドフ
ラグメント、改変体、または誘導体がマルチマー化する能力が評価される場合、
結合が、例えば、還元および非還元ゲルクロマトグラフィー、タンパク質アフィ
ニティークロマトグラフィー、ならびにアフィニティーブロッティングのような
当該分野で周知の手段によって、アッセイされ得る。一般には、Ｐｈｉｚｉｃｋ
ｙ、Ｅ．ら、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．５９：９４−１２３（１９９５）を
参照のこと。別の実施形態では、その基質への本発明のポリペプチドの結合の生
理学的相関（シグナル伝達）がアッセイされ得る。

【００２９】 さらに、本明細書中に記載のアッセイ（実施例を参照のこと）およびさもなく
ば当該分野で公知である他のアッセイは、本発明のポリペプチドならびにそれら
のフラグメント、改変体、誘導体、およびアナログが、ポリペプチドの生物学的
活性に関連した関連の生物学的活性を（インビトロまたはインビボのいずれかで
）惹起する能力を測定するために、慣用的に適用され得る。他の方法は、当業者
に公知であり、そして本発明の範囲内である。

【００３０】 （本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチド） （遺伝子番号１によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、ミトコンドリアキャリアタンパク質であると考えら
れるヒトタンパク質と配列相同性を共有する（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号 ｇｉ｜
２５８８６２３を参照のこと）。好ましいドメインとして本発明に含まれるもの
は、ミトコンドリアエネルギー伝達タンパク質（ＭＥＴＰ）ドメインであり、Ｍ
ＥＴＰドメインはＰｒｏＳｉｔｅ分析ツールを用いて同定される。構造的に、ミ
トコンドリアエネルギー伝達タンパク質のファミリーのメンバーは、約１００残
基のドメインの３つのタンデムの繰り返しからなる。これらのドメインの各々は
、２つの膜貫通領域を含む。サインパターンとして、繰り返しドメインの最も保
存された領域の１つが選択され、第１の膜貫通領域の直下に配置される。この広
範なタンパク質のファミリーを検出するために、第１の膜貫通領域の直下に位置
した繰り返しドメイン中の最も保存された領域を含むコンセンサス配列が発達さ
れた。コンセンサスパターンは、以下の通りである：Ｐ−ｘ［ＤＥ］−ｘ−［Ｌ
ＩＶＡＴ］−［ＲＫ］−ｘ−［ＬＲＨ］−［ＬＩＶＭＦＹ］−［ＱＧＡＩＶＭ］
。本発明の好ましいポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含む：ＰＬＤＶＶＫ
ＶＲＬＱ（配列番号３８）。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチ
ドもまた、本発明に含まれる。さらに好ましいのは、配列番号３８のＭＥＴＰド
メイン、および配列番号２０の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、
５０または７５の連続する付加的なアミノ酸残基を含むポリペプチドである。こ
の連続した付加的なアミノ酸残基は、ＭＥＴＰドメインに対してＮ末端側または
Ｃ末端側である。あるいは、連続した付加的なアミノ酸残基は、ＭＥＴＰドメイ
ンに対してＮ末端側およびＣ末端側の両方であり、ここで、Ｎ末端およびＣ末端
の連続したアミノ酸残基の合計は、特定した数と等しい。上記の好ましいポリペ
プチドドメインは、ミトコンドリアエネルギー伝達タンパク質に対してサイン特
異的な特徴である。

【００３１】 この遺伝子は、主に卵巣癌組織および乳癌組織において、そしてより少ない程
度には胎児の肝臓／脾臓組織および精巣組織において発現される。

【００３２】 従って、本発明の核酸は、生物学的サンプル中に存在する組織または細胞型の
示差的同定のため、および生殖系の癌、ならびに免疫系の疾患および／または障
害を含む疾患および状態の診断のための、試薬として有効である。同様に、ポリ
ペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差
的同定のための免疫学的プローブを提供する際に有効である。上記の組織または
細胞（特に、生殖系および免疫系）の多くの障害に関して、標準的な遺伝子発現
レベル（すなわち、障害を有しない個体由来の健常な組織中の発現レベル）に対
して、有意に高いかまたは低いレベルのこの遺伝子の発現は、このような障害を
有する個体から採取された特定の組織（例えば、生殖組織、免疫組織、癌性組織
および創傷組織）もしくは体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および
髄液）中で、検出される。

【００３３】 本発明の好ましいポリペプチドは、配列番号２０に残基として示した：Ｍｅｔ
−１〜Ｇｌｙ−８、Ｌｅｕ−３９〜Ｓｅｒ−４５、Ｐｈｅ−９０〜Ｐｈｅ−９６
、Ｇｌｕ−１１０〜Ｌｅｕ−１１５、Ｌｅｕ−２３９〜Ｔｈｒ−２４５、Ａｒｇ
−３４２〜Ａｒｇ−３４７の免疫原性エピトープを含むか、あるいはこれらから
なる。上記のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含ま
れる。

【００３４】 生殖系ならびに免疫系の癌性組織の組織分布および推定ミトコンドリアタンパ
ク質に対する相同性は、このクローンのタンパク質産物が、生殖系および免疫系
の疾患、癌および／または障害の診断、検出および／または処置のために、なら
びにアンカップリングタンパク質の異常な活性（例えば、代謝活性における障害
、肥満、悪液質または奇形発生）に関連した疾患および／または障害の検出およ
び／または処置のために有効であることを示す。この遺伝子の翻訳産物に対する
抗体は、例えば、疾患に寄与するアンカップリングタンパク質の活性を阻害する
ことによって非限定的な仮説の目的に有効である。卵巣癌組織および乳癌組織に
おける組織分布は、この遺伝子がアンタゴニスト、特に低分子または抗体に対す
る、優れた標的であり得、その同族リガンドによってレセプターの結合をブロッ
クすることを示す。従って、好ましいのは、この遺伝子の翻訳産物の細胞外部分
に特異的に結合する抗体または低分子である。この細胞外領域は、上に記載され
たように膜貫通ドメインに関する情報から確認され得る。また、乳癌および／ま
たは卵巣癌を検出するためのキットを提供する。１つの実施形態において、この
ようなキットは、固体支持体に結合するこの遺伝子の翻訳産物に特異的な抗体を
含む。また、個体における乳癌および／または卵巣癌を検出する方法も提供され
、この方法は、この遺伝子の翻訳産物に特異的な抗体を、個体由来の体液（好ま
しくは、血清）に接触させ、そして抗体が、体液中に見出される抗原に結合する
か否かを確認する工程を包含する。好ましくは、この抗体は固体支持体と結合さ
れ、そして体液は血清である。上記の実施形態ならびに他の治療および診断試験
（キットおよび方法）は、本明細書中の他の場所でより詳細に記載する。さらに
、この組織分布は、このクローンのタンパク質産物が、種々の免疫障害の診断お
よび処置に有効であることを示す。胎児肝臓／脾臓組織におけるこの遺伝子産物
の発現は、増殖の調節；生存；分化；および／または血液幹細胞を含む、潜在的
な全ての造血細胞系統の活性化における役割を示す。この遺伝子産物は、サイト
カインの産生の調節、抗原の提示の調節、または癌の処置において有効性を示し
得る他のプロセス（例えば、免疫応答をブーストすることによって）に関与し得
る。この遺伝子は、リンパ起源の細胞において発現されるので、この遺伝子、ま
たはタンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上に列挙した組織に対
する腫瘍マーカーおよび／または免疫療法の標的として有効性を示し得る。従っ
て、この遺伝子はまた、免疫学的障害（関節炎、喘息、ＡＩＤＳのような免疫不
全障害、白血病、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡および乾癬を
含む）のための薬剤として使用され得る。加えてこの遺伝子産物は、幹細胞およ
び種々の血液系統の関係づけられた前駆体の拡大、および種々の細胞型の分化お
よび／または増殖における商業的有効性を有し得る。タンパク質ならびにそのタ
ンパク質に対する抗体は、上に列挙された組織に対する腫瘍マーカーおよび／ま
たは免疫療法の標的としての有効性を示し得る。

【００３５】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、配列データベースを
通して公に利用可能および入手可能である。これらの配列のいくつかは、配列番
号２に関連し、そして本発明の着想以前に公に利用可能であり得る。好ましくは
、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。
全ての関連する配列を列挙するのは、煩わしい。従って、好ましくは、本発明か
ら、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号２
の１〜１５４６の任意の整数であり、ｂは１５〜１５６０の整数であり、ここで
ａおよびｂの両方は配列番号２に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そ
してここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外
される。

【００３６】 （遺伝子番号２によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、ヒト呼吸アンカップリングタンパク質−２（ＵＣＰ
２）（ＧｅｎＳｅｑ登録番号 Ｗ６９１６６を参照のこと）ならびにナス塊（Ｓ
ｏｌａｎｕｍ ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）由来のミトコンドリアエネルギー伝達タン
パク質（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号 ｇｉ｜４１３８５８１を参照のこと）と配列
相同性を共有する。ヒト呼吸アンカップリングタンパク質は、サイトゾルからミ
トコンドリアマトリックスにプロトンを輸送することによって、酸化エネルギー
を熱に消散すると考えられる。好ましいドメインとして本発明み含まれるものは
、ミトコンドリアエネルギー伝達タンパク質（ＭＥＴＰ）ドメインであり、ＭＥ
ＴＰドメインは、ＰｒｏＳｉｔｅ分析ツール（Ｓｗｉｓｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ
ｏｆ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ）を用いて同定される。構造的に、ミト
コンドリアエネルギー伝達タンパク質のファミリーのメンバーは、約１００残基
のドメインの３つのタンデムの繰り返しからなる。これらのドメインの各々は、
２つの膜貫通領域を含む。サインパターンとして、繰り返しドメインの最も保存
された領域の１つが選択され、第１の膜貫通領域の直下に配置される。この広範
なタンパク質のファミリーを検出するために、第１の膜貫通領域の直下に位置し
た繰り返しドメイン中の最も保存された領域を含むコンセンサス配列が発達され
た。コンセンサスパターンは、以下の通りである：Ｐ−ｘ［ＤＥ］−ｘ−［ＬＩ
ＶＡＴ］−［ＲＫ］−ｘ−［ＬＲＨ］−［ＬＩＶＭＦＹ］−［ＱＧＡＩＶＭ］。
本発明の好ましいポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含む：ＰＦＤＶＩＫＩ
ＲＦＱ（配列番号３９）および／またはＰＶＤＶＬＲＴＲＦＡ（配列番号４０）
。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれ
る。さらに好ましいのは、配列番号３９のＭＥＴＰドメイン、および配列番号２
１の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、５０または７５の連続する
付加的なアミノ酸残基を含むポリペプチドである。この連続した付加的なアミノ
酸残基は、ＭＥＴＰドメインに対してＮ末端側またはＣ末端側であり得る。ある
いは、連続した付加的なアミノ酸残基は、ＭＥＴＰドメインに対してＮ末端側お
よびＣ末端側の両方であり、ここで、Ｎ末端およびＣ末端の連続したアミノ酸残
基の合計は、特定した数と等しい。さらに好ましいのは、配列番号４０のＭＥＴ
Ｐドメイン、および配列番号２１の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３
０、５０または７５の連続する付加的なアミノ酸残基を含むポリペプチドである
。この連続した付加的なアミノ酸残基は、ＭＥＴＰドメインに対してＮ末端側ま
たはＣ末端側であり得る。あるいは、連続した付加的なアミノ酸残基は、ＭＥＴ
Ｐドメインに対してＮ末端側およびＣ末端側の両方であり得、ここで、Ｎ末端お
よびＣ末端の連続したアミノ酸残基の合計は、特定した数と等しい。上記の好ま
しいポリペプチドドメインは、ミトコンドリアエネルギー伝達タンパク質に対し
てサイン特異的な特徴である。

【００３７】 この遺伝子は、主に精巣組織、ヒト下垂体組織および胎児の脳組織において発
現されることが見い出されている。

【００３８】 従って、本発明の核酸は、生物学的サンプル中に存在する組織または細胞型の
示差的同定のため、および以下の疾患および状態の診断のための、試薬として有
効である：生殖系障害、神経障害、発達障害および／またはホルモン障害ならび
に癌。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織
または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブを提供する際に有効である
。上記の組織または細胞（特に、生殖系、神経系および／または内分泌系）の多
くの障害に関して、標準的な遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有しない個体
由来の健常な組織の発現レベル）に対して、有意に高いかまたは低いレベルのこ
の遺伝子の発現は、このような障害を有する個体から採取された特定の組織（例
えば、生殖組織、神経組織、内分泌組織、癌性組織および創傷組織）もしくは体
液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄液）中で検出され得る。

【００３９】 本発明の好ましいポリペプチドは、配列番号２１に残基として示した：Ｔｙｒ
−４〜Ｌｙｓ−１５、Ｇｌｕ−４８〜Ｌｙｓ−５８、Ｇｌｕ−２１０〜Ｌｅｕ−
２１７、Ｖａｌ−２５９〜Ｇｌｙ−２６４、Ｍｅｔ−３１３〜Ａｒｇ−３２０の
免疫原性エピトープを含むか、あるいはこれらからなる。上記のポリペプチドを
コードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。

【００４０】 精巣組織、ヒト下垂体組織および胎児の脳組織の組織分布ならびにＵＣＰ２お
よびいくつかのミトコンドリアキャリアタンパク質に対する相同性は、このクロ
ーンのタンパク質産物が、神経系、生殖系または内分泌系の障害の検出および／
または処置のために、ならびにアンカップリングタンパク質の異常な活性（例え
ば、代謝活性における障害、肥満、悪液質または熱発生）に関連した疾患および
／または障害の検出および／または処置のために有効であることを示す。この遺
伝子の翻訳産物に対する抗体は、例えば、悪液質の処置および／または予防に有
効であり、疾患に寄与するアンカップリングタンパク質の活性を阻害することに
よって非限定的な仮説の目的に有効である。組織分布は、このクローンのタンパ
ク質産物が、適切な精巣機能に関する状態（例えば、内分泌機能、精子成熟）な
らびに癌の処置および／または診断に有効であることを示す。従って、この遺伝
子産物は、雄不妊症および／または不能症の処置において有効である。この遺伝
子産物はまた、結合因子を同定するために設計されたアッセイにおいて有用であ
り、このような薬剤（アンタゴニスト）は雄性避妊薬剤として有効である。同様
に、このタンパク質は、精巣癌の処置および／または診断において有効であると
考えれる。精巣はまた、体の他の組織において発現され得る（特に低いレベルで
）転写物の活性な遺伝子の発現の部位である。従ってこの遺伝子産物は、他の特
異的組織または器官において発現され得、他の過程（可能な標的指標を少し挙げ
るなら、例えば造血、炎症、骨形成および腎臓機能）において関連した機能的な
役割を果たし得る。あるいは、下垂体組織における組織分布は、このクローンの
タンパク質産物が、種々の内分泌障害および癌（特にアディソン病、クッシング
症候群）、ならびに膵臓（例えば、糖尿病）、副腎皮質、卵巣、下垂体（例えば
、下垂体機能亢進症、下垂体機能低下症）、甲状（例えば、甲状腺機能亢進症、
甲状腺機能低下症）、上皮小体（例えば、上皮小体機能亢進症、上皮小体機能低
下症）、視床下部および精巣の障害および／または癌の検出、処置および／また
は予防に有効であることを示す。胎児の脳組織における組織分布は、このクロー
ンのタンパク質産物が、神経変性疾患状態および行動障害（例えば、アルツハイ
マー病、パーキンソン病、ハンチントン病、ツレット症候群、精神分裂病、躁病
、痴呆、偏執症、強迫性障害、恐慌性障害、学習障害、ＡＬＳ、精神病、自閉、
および行動変化（栄養補給、睡眠パターン、平衡、および知覚の障害を含む）の
検出／処置のために有効であることを示す。加えて、この遺伝子または遺伝子産
物はまた、発達中の胚に関連した発達障害または伴性障害の処置および／または
検出において役割を果たし得る。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗
体は、上に列挙した組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫療法の標的と
して有効性を示し得る。特に好ましいのは、化合物（すなわち、抗体、低分子）
を、本発明の転移酵素タンパク質の発現または活性のためのアンタゴニストまた
はアゴニストとして作用するその能力についてスクリーニングするための方法で
ある。

【００４１】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、配列データベースを
通して公に利用可能および入手可能である。これらの配列のいくつかは、配列番
号３に関連し、そして本発明の着想以前に公に利用可能であり得る。好ましくは
、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。
全ての関連する配列を列挙するのは、煩わしい。従って、好ましくは、本発明か
ら、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号３
の１〜１５５２の任意の整数であり、ｂは１５〜１５６６の整数であり、ここで
ａおよびｂの両方は配列番号３に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そ
してここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外
される。

【００４２】 （遺伝子番号３によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、種々の長さのアシルカルニチンのミトコンドリア膜
にわたるカルニチンでの交換を触媒すると考えられるヒトカルニチンキャリア（
Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号 ｇ２７６５０７５を参照のこと）と配列相同性を共有
する。次いで、アシルカルニチンを介したミトコンドリアマトリックスへの脂肪
酸の転位置における中心的な役割を果たし、このアシル基は脂肪酸の酸化に使用
されるために放出される。好ましいドメインとして本発明に含まれるものは、ミ
トコンドリアエネルギー伝達タンパク質（ＭＥＴＰ）ドメインであり、ＭＥＴＰ
ドメインはＰｒｏＳｉｔｅ分析ツールを用いて同定される。構造的に、ミトコン
ドリアエネルギー伝達タンパク質のファミリーのメンバーは、約１００残基のド
メインの３つのタンデムの繰り返しからなる。これらのドメインの各々は、２つ
の膜貫通領域を含む。サインパターンとして、繰り返しドメインの最も保存され
た領域の１つが選択され、第１の膜貫通領域の直下に配置される。この広範なタ
ンパク質のファミリーを検出するために、第１の膜貫通領域の直下に位置した繰
り返しドメイン中の最も保存された領域を含むコンセンサス配列が発達された。
コンセンサスパターンは、以下の通りである：Ｐ−ｘ[ＤＥ]−ｘ−[ＬＩＶＡＴ]
−[ＲＫ]−ｘ−[ＬＲＨ]−[ＬＩＶＭＦＹ]−[ＱＧＡＩＶＭ]。本発明の好ましい
ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含む：ＰＴＥＬＶＫＣＲＬＱ（配列番号
４１）および／またはＰＶＤＣＩＫＳＲＩＱ（配列番号４２）。これらのポリペ
プチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。さらに好まし
いのは、配列番号４１のＭＥＴＰドメイン、および配列番号２２の少なくとも５
、１０、１５、２０、２５、３０、５０または７５の連続する付加的なアミノ酸
残基を含むポリペプチドである。この連続した付加的なアミノ酸残基は、ＭＥＴ
Ｐドメインに対してＮ末端側またはＣ末端側である。あるいは、連続した付加的
なアミノ酸残基は、ＭＥＴＰドメインに対してＮ末端側およびＣ末端側の両方で
あり得、ここで、Ｎ末端およびＣ末端の連続したアミノ酸残基の合計は、特定し
た数と等しい。さらに好ましいのは、配列番号４２のＭＥＴＰドメイン、および
配列番号２２の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、５０または７５
の連続する付加的なアミノ酸残基を含むポリペプチドである。この連続した付加
的なアミノ酸残基は、ＭＥＴＰドメインに対してＮ末端側またはＣ末端側である
。あるいは、連続した付加的なアミノ酸残基は、ＭＥＴＰドメインに対してＮ末
端側およびＣ末端側の両方であり、ここで、Ｎ末端およびＣ末端の連続したアミ
ノ酸残基の合計は、特定した数と等しい。上記の好ましいポリペプチドドメイン
は、ミトコンドリアエネルギー伝達タンパク質に対してサイン特異的な特徴であ
る。

【００４３】 この遺伝子は、主に精巣組織において発現されることが見い出されている。

【００４４】 従って、本発明の核酸は、生物学的サンプル中に存在する組織または細胞型の
示差的同定のため、および以下：生殖系の障害の疾患および状態の診断のための
試薬として有効である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対
する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブを提供す
る際に有効である。上記の組織または細胞（特に、生殖系）の多くの障害に関し
て、標準的な遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有しない個体由来の健常な組
織中の発現レベル）に対して、有意に高いかまたは低いレベルのこの遺伝子の発
現は、このような障害を有する個体から採取された特定の組織（例えば、生殖組
織、癌性組織および創傷組織）もしくは体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿
、滑液および髄液）で、検出される。

【００４５】 本発明の好ましいポリペプチドは、配列番号２２に残基：Ｇｌｙ−６２〜Ｔｈ
ｒ−６７、Ｇｌｙ−２０１〜Ｇｌｕ−２０６として示した免疫原性エピトープを
含むか、あるいはこれらからなる。上記のポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチドもまた、本発明に含まれる。

【００４６】 精巣組織における組織分布およびヒトカルニチンキャリアタンパク質に対する
相同性は、このクローンのタンパク質産物が、適切な精巣機能（例えば、内分泌
機能、精子成熟）ならびに癌に関連した状態の処置および／または診断のために
有効であることを示唆する。従って、この遺伝子産物は、雄不妊症および／また
は不能症の処置において有効である。この遺伝子産物はまた、雄避妊薬として有
効である因子（アンタゴニスト）のような結合因子を同定するために設定される
アッセイにおいて有効である。同様に、タンパク質は、精巣癌の処置および／ま
たは診断において有効であると考えられている。精巣はまた、体の他の組織にお
いて発現され得る（特に、低レベルで）転写物の活性な遺伝子発現の部位である
。従って、この遺伝子産物は、他の特定の組織または器官において発現され得、
他のプロセス（可能な標的指標のいくつかを挙げるならば、例えば、造血、炎症
、骨形成および腎臓機能）において関連した機能的役割を果たし得る。タンパク
質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上に列挙された組織に対する腫瘍マ
ーカーおよび／または免疫療法の標的としての有効性を示し得る。特に好ましい
のは、化合物（すなわち、抗体、低分子）を、本発明の転移酵素タンパク質の発
現または活性のためのアンタゴニストまたはアゴニストとして作用するその能力
についてスクリーニングするための方法である。さらに、本発明の遺伝子または
その翻訳産物は、カップリングタンパク質の異常な活性に関連した疾患および／
または障害（例えば、代謝活性、肥満、悪液質または奇形発生における障害）の
検出および／または処置のために有効である。この遺伝子の翻訳産物に対する抗
体は、例えば、疾患に寄与するアンカップリングタンパク質の活性を阻害するこ
とによって非限定的な仮説の目的に有効である。

【００４７】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、配列データベースを
通して公に利用可能および入手可能である。これらの配列のいくつかは、配列番
号４に関連し、そして本発明の着想以前に公に利用可能であり得る。好ましくは
、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。
全ての関連する配列を列挙するのは、煩わしい。従って、好ましくは、本発明か
ら、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号４
の１〜１３５６の任意の整数であり、ｂは１５〜１３７０の整数であり、ここで
ａおよびｂの両方は配列番号４に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そ
してここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外
される。

【００４８】 （遺伝子番号４によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、推定ミトコンドリアキャリアタンパク質（例えば、
Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ｇｉ｜３８７６１４６を参照のこと）であると考えられ
る多くのタンパク質と配列相同性を共有する。ミトコンドリアエネルギー転移タ
ンパク質（ＭＥＴＰ）ドメインは、好ましいドメインとして本発明中に含まれる
。このドメインは、このドメインは、ＰｒｏＳｉｔｅ分析ツールを用いて同定さ
れた。構造的に、ミトコンドリアエネルギー転移タンパク質のファミリーのメン
バーは、約１００残基のドメインの３つのタンデムリピートからなる。これらの
３つのドメインの各々は、２つの膜貫通領域を含む。特徴あるパターンとして、
第一の膜貫通領域の直後に位置する繰り返しドメイン中の多くの保存領域のうち
１つが、選択された。タンパク質のこの広範なファミリーを検出するために、コ
ンセンサス（ｃｏｎｃｅｎｓｕｓ）配列が、顕出された。この配列は、第一の膜
貫通領域の直後に位置される繰り返しドメイン中の多くの保存領域を含む。コン
センサスパターンは、以下の通りである：Ｐ−ｘ−［ＤＥ］−ｘ−［ＬＩＶＡＴ
］−［ＲＫ］−ｘ−［ＬＲＨ］−［ＬＩＶＭＦＹ］−［ＱＧＡＩＶＭ］。本発明
の好ましいポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含む：ＰＩＤＬＡＫＴＲＬＱ
（配列番号４３）、および／またはＰＣＤＶＶＫＴＲＬＱ（配列番号４４）。こ
れらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明により包含さ
れる。配列番号４３のＭＥＴＰドメイン、および配列番号２３の少なくとも５、
１０、1５、２０、２５、３０、５０、または７５のさらなる連続するアミノ酸
残基を含むポリペプチドは、さらに好ましい。このさらなる連続するアミノ酸残
基は、ＭＥＴＰドメインに対してＮ末端またはＣ末端であり得る。あるいは、さ
らなる連続するアミノ酸残基は、ＭＥＴＰドメインに対してＮ末端およびＣ末端
の両方であり得る。ここでＮ末端およびＣ末端の連続するアミノ酸残基の合計が
、特定される数字に等しい。さらに、配列番号４４のＭＥＴＰドメイン、および
配列番号２３の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、５０、または７
５のさらなる連続するアミノ酸残基を含むポリペプチドは、好ましい。このさら
なる連続するアミノ酸残基は、ＭＥＴＰドメインに対してＮ末端またはＣ末端で
あり得る。あるいは、さらなる連続するアミノ酸残基は、ＭＥＴＰドメインに対
してＮ末端およびＣ末端の両方であり得る。ここでＮ末端およびＣ末端の連続す
るアミノ酸残基の合計が、特定される数字に等しい。上記の好ましいポリペプチ
ドドメインは、ミトコンドリアエネルギー転移タンパク質に特異的な特徴を示す
。

【００４９】 この遺伝子は、主に脳組織、乳児脳組織、小脳組織、および精巣組織において
発現されることが、発見されている。

【００５０】 従って、本発明の核酸は、生物学的サンプル中に存在する組織または細胞型の
示差的同定のため、ならびに以下の疾患および状態の診断のための試薬として有
用である：神経系および生殖系の疾患および／または障害。同様に、ポリペプチ
ドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定
のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に神経
系および生殖系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障
害を有さない個体由来の健常組織中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低
いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特
定の組織（例えば、神経組織、生殖組織、癌性組織および創傷組織）または体液
（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液または髄液）中で検出され得る。

【００５１】 本発明の好ましいポリペプチドは、配列番号２３中で残基：Ａｒｇ−３５〜Ｖ
ａｌ−４５、Ｐｒｏ−２１７〜Ｐｒｏ−２２４、Ｇｌｙ−２５９〜Ｔｙｒ−２６
５として示される免疫原性エピトープを含むか、または代替的にこれらからなる
。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明により包
含される。

【００５２】 神経組織および精巣組織における組織分布、ならびに多くの推定ミトコンドリ
アキャリアタンパク質との相同性は、このクローンのタンパク質産物が、神経系
および生殖系の障害の検出および／または処置のため、ならびに脱共役タンパク
質の異常な活性と関連する疾患および／または障害（例えば、代謝活性、肥満症
、悪液質、または熱発生における障害）の検出および／または処置のために有用
であることを示唆する。例えば、非限定的な仮説により、この遺伝子の翻訳産物
に対する抗体は、疾患に寄与する脱共役タンパク質の活性を阻害することによっ
て有用である。さらに、神経組織における組織分布は、このクローンのタンパク
質産物が、神経変性疾患状態および行動障害（例えば、アルツハイマー病、パー
キンソン病、ハンチントン病、ツレット症候群、精神分裂病、躁病、痴呆、パラ
ノイア、強迫性障害、恐慌性障害、学習障害、ＡＬＳ、精神病、自閉症、ならび
に行動変化（栄養補給、睡眠のパターン、平衡、および知覚における障害を含む
）の検出／処置のために有用であることを示唆する。さらに、この遺伝子または
遺伝子産物はまた、胚発生、または性に結びつく障害に関連する発達障害の処置
および／または検出に役割を果たし得る。あるいは、精巣における組織分布は、
このクローンのタンパク質産物が、適切な精巣機能（例えば、内分泌機能、精子
成熟）および癌に関する状態の処置および診断のために有用であることを示す。
従って、この遺伝子産物は、男性不妊および／またはインポテンスの処置におい
て有用である。この遺伝子産物はまた、結合剤（男性避妊試薬剤として有用であ
る薬剤（アンタゴニスト））を同定するために設計されたアッセイにおいて、有
用である。同様に、このタンパク質は、精巣癌の処置および／または診断におい
て有用であると考えられている。精巣はまた、体の他の組織において、特に低レ
ベルで発現され得る転写産物の活性遺伝子発現の部位である。従って、この遺伝
子産物は、他の特定の組織または器官において発現され得、ここで他のプロセス
（例えば、可能な標的指標を少し挙げるなら、造血、炎症、骨形成、および腎臓
機能）において、関連する機能的な役割を果たし得る。タンパク質ならびにこの
タンパク質に対する抗体は、上記に挙げられた組織に対する腫瘍マーカーおよび
／または免疫治療の標的として有用性を示し得る。化合物（すなわち、抗体、低
分子）を、その化合物が本発明のタンパク質の発現または活性のためのアンタゴ
ニストもしくはアゴニストとして作用する能力についてスクリーニングするため
の方法は、特に好ましい。

【００５３】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号５に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったか
もしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範
囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好
ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号５の１〜２６５５の任意の整数であり、ｂは１５〜２６６９
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号５に示されるヌクレオチド残
基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポ
リヌクレオチドが除外される。

【００５４】 （遺伝子番号５によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、多くのミトコンドリアキャリアタンパク質（例えば
、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ｇｉ｜３８７８１１７、またはｇｉ｜４７２９００を
参照のこと）と配列相同性を共有する。ミトコンドリアエネルギー転移タンパク
質（ＭＥＴＰ）ドメインは、好ましいドメインとして本発明に含まれる。このド
メインは、ＰｒｏＳｉｔｅ分析ツールを用いて同定された。構造的に、ミトコン
ドリアエネルギー転移タンパク質のファミリーのメンバーは、約１００残基のド
メインの３つのタンデムリピートからなる。これらのドメインの各々は、２つの
膜貫通領域を含む。特徴あるパターンとして、第一の膜貫通領域の直ぐ後に位置
する繰り返しドメイン中の多くの保存領域のうち１つが、選択された。タンパク
質のこの広範なファミリーを検出するために、コンセンサス配列が、顕出された
。この配列は、第一の膜貫通領域の直後に位置される繰り返しドメイン中の多く
の保存領域を含む。コンセンサスパターンは、以下の通りである：Ｐ−ｘ−［Ｄ
Ｅ］−ｘ−［ＬＩＶＡＴ］−［ＲＫ］−ｘ−［ＬＲＨ］−［ＬＩＶＭＦＹ］−［
ＱＧＡＩＶＭ］。本発明の好ましいポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含む
：ＰＬＥＶＶＫＴＲＬＱ（配列番号４５）。これらのポリペプチドをコードする
ポリヌクレオチドもまた、本発明により包含される。配列番号４５のＭＥＴＰド
メイン、および配列番号２４の少なくとも５、１０、1５、２０、２５、３０、
５０、または７５のさらなる連続するアミノ酸残基を含むポリペプチドは、さら
に好ましい。このさらなる連続するアミノ酸残基は、ＭＥＴＰドメインに対して
Ｎ末端またはＣ末端であり得る。あるいは、さらなる連続するアミノ酸残基は、
ＭＥＴＰドメインに対してＮ末端およびＣ末端の両方であり得る。ここでＮ末端
およびＣ末端の連続するアミノ酸残基の合計が、特定される数字に等しい。上記
の好ましいポリペプチドドメインは、ミトコンドリアエネルギー転移タンパク質
に特異的な特徴を示す。本発明のさらなる実施形態は、以下のアミノ酸配列を含
むか、または代替的にそれらからなる：

【００５５】

【化１】 これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明により包含
される。開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第３染色体上に存在すると
考えられる。従って、本発明に関するポリヌクレオチドは、第３染色体のための
連鎖分析におけるマーカーとして有用である。

【００５６】 この遺伝子は、主に筋組織、内皮組織、および胚組織において発現されること
が、発見されている。

【００５７】 従って、本発明の核酸は、生物学的サンプル中に存在する組織または細胞型の
示差的同定のため、ならびに以下の疾患および状態の診断のための試薬として有
用である：脈管系および発達系の疾患および／または障害。同様に、ポリペプチ
ドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定
のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に脈管
系および発達系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障
害を有さない個体由来の健常組織中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低
いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特
定の組織（例えば、脈管組織、発達組織、癌性組織および創傷組織）または体液
（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液もしくは髄液）中で検出され得る。

【００５８】 本発明の好ましいポリペプチドは、配列番号２４中で残基：Ｌｙｓ−７４〜Ｓ
ｅｒ−７９、Ｓｅｒ−１０３〜Ａｓｐ−１１１、Ａｌａ−１５０〜Ｍｅｔ−１５
８、Ｌｙｓ−２０８〜Ｇｌｕ−２２２、Ａｒｇ−２５３〜Ａｒｇ−２６２、Ｇｌ
ｕ−２７４〜Ｓｅｒ−２７９として示される免疫原性エピトープを含むか、また
は代替的にこれらからなる。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチ
ドもまた、本発明により包含される。

【００５９】 脈管組織および発達組織における組織分布、ならびにミトコンドリアキャリア
タンパク質との相同性は、このクローンのタンパク質産物が、脈管系および発達
系の疾患および／または障害の検出および／または処置のため、ならびに脱共役
タンパク質の異常な活性と関連する疾患および／または障害（例えば、代謝活性
、肥満症、悪液質、または熱発生における障害）の検出および／または処置のた
めに有用であることを示唆する。例えば、非限定的な仮説により、この遺伝子の
翻訳産物に対する抗体は、疾患に寄与する脱共役タンパク質の活性を阻害するこ
とによって有用である。脈管組織における組織分布は、この遺伝子のタンパク質
産物が、心臓血管系の状態および症状（例えば、心臓病、再狭窄、アテローム性
動脈硬化症、発作、アンギナ、血栓症、および創傷治癒）の診断および処置のた
めに有用であることを示す。あるいは、増殖している細胞により特徴付けられる
胚組織および他の細胞源での発現は、このタンパク質が細胞分裂の調節において
役割を果たし得ること、ならびに癌および他の増殖性障害の診断および処置に有
用性を示し得ることを示唆する。同様に、胚発生はまた、パターン形成における
細胞分化および／またはアポトーシスを含む決定を含む。従って、このタンパク
質はまた、アポトーシスまたは組織分化に関与し得、そしてさらに癌治療におい
て有用であり得る。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に
挙げられた組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫治療の標的として有用
性を示し得る。化合物（すなわち、抗体、低分子）を、その化合物が、本発明の
トランスロカーゼタンパク質の活性または発現のためのアンタゴニストもしくは
アゴニストとして作用する能力についてスクリーニングするための方法は、特に
好ましい。

【００６０】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号６に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったか
もしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範
囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好
ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号６の１〜１３３０の任意の整数であり、ｂは１５〜１３４４
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号６に示されるヌクレオチド残
基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポ
リヌクレオチドが除外される。

【００６１】 （遺伝子番号６によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、ネマトーダＯｎｃｈｏｃｅｒｃａ ｖｏｌｖｕｌｕ
ｓ由来のミトコンドリア溶出キャリア（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｓｏｌｕ
ｔｅ ｃａｒｒｉｅｒ）（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ｇ１５１８４５８）と配列相
同性を共有する。ミトコンドリアエネルギー転移タンパク質（ＭＥＴＰ）ドメイ
ンは、好ましいドメインとして本発明中に含まれる。このドメインは、ＰｒｏＳ
ｉｔｅ分析ツールを用いて同定された。構造的に、ミトコンドリアエネルギー転
移タンパク質のファミリーのメンバーは、約１００残基のドメインの３つのタン
デムリピートからなる。これらのドメインの各々は、２つの膜貫通領域を含む。
特徴あるパターンとして、第一の膜貫通領域の直ぐ後に位置する繰り返しドメイ
ン中の多くの保存領域のうち１つが、選択された。タンパク質のこの広範なファ
ミリーを検出するために、コンセンサス配列が、顕出された。この配列は、第一
の膜貫通領域の直後に位置される繰り返しドメイン中の多くの保存領域を含む。
コンセンサスパターンは、以下の通りである：Ｐ−ｘ−［ＤＥ］−ｘ−［ＬＩＶ
ＡＴ］−［ＲＫ］−ｘ−［ＬＲＨ］−［ＬＩＶＭＦＹ］−［ＱＧＡＩＶＭ］。本
発明の好ましいポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含む：ＰＩＤＣＶＫＴＲ
ＭＱ（配列番号４７）、および／またはＰＡＥＶＶＫＱＲＭＱ（配列番号４８）
。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明により包
含される。配列番号４７のＭＥＴＰドメイン、および配列番号２５の少なくとも
５、１０、1５、２０、２５、３０、５０、または７５のさらなる連続するアミ
ノ酸残基を含むポリペプチドは、さらに好ましい。このさらなる連続するアミノ
酸残基は、ＭＥＴＰドメインに対してＮ末端またはＣ末端であり得る。あるいは
、さらなる連続するアミノ酸残基は、ＭＥＴＰドメインに対してＮ末端およびＣ
末端の両方であり得る。ここでＮ末端およびＣ末端の連続するアミノ酸残基の合
計が、特定される数字に等しい。さらに、配列番号４８のＭＥＴＰドメイン、お
よび配列番号２５の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、５０、また
は７５のさらなる連続するアミノ酸残基を含むポリペプチドは、好ましい。この
さらなる連続するアミノ酸残基は、ＭＥＴＰドメインに対してＮ末端またはＣ末
端であり得る。あるいは、さらなる連続するアミノ酸残基は、ＭＥＴＰドメイン
に対してＮ末端およびＣ末端の両方であり得る。ここでＮ末端およびＣ末端の連
続するアミノ酸残基の合計が、特定される数字に等しい。上記の好ましいポリペ
プチドドメインは、ミトコンドリアエネルギー転移タンパク質に特異的な特徴を
示す。

【００６２】 この遺伝子は、主に精巣組織、より少ない程度には、胎児肝臓組織／胎児脾臓
組織において発現することが、発見されている。

【００６３】 従って、本発明の核酸は、生物学的サンプル中に存在する組織または細胞型の
示差的同定のため、ならびに以下の疾患および状態の診断のための試薬として有
用である：生殖系および免疫系の疾患および／または障害。同様に、ポリペプチ
ドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定
のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に生殖
系および免疫系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障
害を有さない個体由来の健常組織中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低
いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特
定の組織（例えば、生殖組織、免疫組織、癌性組織および創傷組織）または体液
（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液または髄液）中で検出され得る。

【００６４】 本発明の好ましいポリペプチドは、配列番号２５中で残基：Ｌｙｓ−２２〜Ｐ
ｒｏ−３２、Ｇｌｎ−１２４〜Ａｒｇ−１３２、Ｔｙｒ−１５０〜Ｔｈｒ−１５
５、Ａｓｎ−１７９〜Ｓｅｒ−１８８、Ｔｈｒ−２７９〜Ｇｌｕ−２８４として
示される免疫原性エピトープを含むか、または代替的にこれらからなる。これら
のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明により包含される
。

【００６５】 精巣組織および胎児肝臓組織／胎児脾臓組織における組織分布は、このクロー
ンのタンパク質産物が、生殖系および免疫系の疾患および／または障害の検出お
よび／または処置のため、ならびに脱共役タンパク質の異常な活性と関連する疾
患および／または障害（例えば、代謝活性、肥満症、悪液質、または熱発生にお
ける障害）の検出および／または処置のために有用であることを示唆する。例え
ば、非限定的な仮説により、この遺伝子の翻訳産物に対する抗体は、疾患に寄与
する脱共役タンパク質の活性を阻害することによって有用である。精巣組織にお
ける組織分布は、このクローンのタンパク質産物が、適切な精巣機能（例えば、
内分泌機能、精子成熟）ならびに癌に関する状態の処置および／または診断のた
めに有用であることを示す。従って、この遺伝子産物はまた、男性不妊および／
またはインポテンスの処置において、有用である。この遺伝子産物はまた、結合
剤（男性避妊薬剤として有用である薬剤（アンタゴニスト））を同定するために
設計されたアッセイにおいて、有用である。同様に、このタンパク質は、精巣癌
の処置および／または診断において有用であると考えられている。精巣はまた、
体の他の組織において、特に低レベルで発現され得る転写物の活性遺伝子発現の
部位である。従って、この遺伝子産物は、他の特定の組織または器官において発
現され得、ここで他のプロセス（例えば、可能な標的指標を少し挙げるなら、造
血、炎症、骨形成、および腎臓機能）において、関連する機能的な役割を果たし
得る。あるいは、組織分布は、このクローンのタンパク質産物が、種々の免疫系
障害の診断および処置のために有用であることを示唆する。胎児肝臓組織／胎児
脾臓組織におけるこの遺伝子産物の発現は、潜在的に全ての造血細胞系列（血液
幹細胞を含む）の増殖；生存；分化；および／または活性化の調節における役割
を示唆する。この遺伝子産物は、サイトカイン産生、抗原提示、または癌の処置
（例えば、免疫応答をブーストすることによる）における有用性もまた示唆し得
る他のプロセスの調節に関与し得る。この遺伝子は、リンパ起源の細胞で発現さ
れるので、遺伝子またはタンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上
記に列挙された組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的として有
用性を示し得る。従って、この遺伝子はまた、免疫学的障害（関節炎、ぜん息、
免疫不全疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、白血病、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患
、敗血症、挫瘡および乾癬を含む）のための薬剤として、使用され得る。さらに
、この遺伝子産物は、種々の血液系列の幹細胞および方向付けられた前駆細胞の
増大において、ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖において商業的
有用性を有し得る。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に
列挙された組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的として有用性
を示し得る。化合物（すなわち、抗体、低分子）を、その化合物が本発明のトラ
ンスロカーゼタンパク質の発現または活性のためのアンタゴニストもしくはアゴ
ニストとして作用する能力についてスクリーニングするための方法は、特に好ま
しい。

【００６６】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号７に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったか
もしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範
囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好
ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号７の１〜１３２２の任意の整数であり、ｂは１５〜１３３６
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号７に示されるヌクレオチド残
基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポ
リヌクレオチドが除外される。

【００６７】 （遺伝子番号７によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、多数のミトコンドリアキャリアタンパク質（例えば
、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ｇｉ｜１７８５６３５｜を参照のこと）との配列相同
性を共有する。好ましいドメインとして本発明に含まれるものは、ミトコンドリ
アエネルギー伝達タンパク質（ＭＥＴＰ）ドメインであり、ＭＥＴＰドメインは
ＰｒｏＳｉｔｅ分析ツールを用いて同定される。構造的に、ミトコンドリアエネ
ルギー伝達タンパク質のファミリーのメンバーは、約１００残基のドメインの３
つのタンデムの繰り返しからなる。これらのドメインの各々は、２つの膜貫通領
域を含む。サインパターンとして、繰り返しドメインの最も保存された領域の１
つが選択され、第１の膜貫通領域の直下に配置される。この広範なタンパク質の
ファミリーを検出するために、第１の膜貫通領域の直下に位置した繰り返しドメ
イン中の最も保存された領域を含むコンセンサス配列が発達された。コンセンサ
スパターンは、以下の通りである：Ｐ−ｘ［ＤＥ］−ｘ−［ＬＩＶＡＴ］−［Ｒ
Ｋ］−ｘ−［ＬＲＨ］−［ＬＩＶＭＦＹ］−［ＱＧＡＩＶＭ］。本発明の好まし
いポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含む：ＰＬＤＬＬＫＴＲＬＱ（配列番
号４９）および／またはＰＡＤＶＩＫＴＨＭＱ（配列番号５０）。これらのポリ
ペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。さらに好ま
しいのは、配列番号４９のＭＥＴＰドメイン、および配列番号２６の少なくとも
５、１０、１５、２０、２５、３０、５０または７５の連続する付加的なアミノ
酸残基を含むポリペプチドである。この連続した付加的なアミノ酸残基は、ＭＥ
ＴＰドメインに対してＮ末端側またはＣ末端側である。あるいは、連続した付加
的なアミノ酸残基は、ＭＥＴＰドメインに対してＮ末端側およびＣ末端側の両方
であり、ここで、Ｎ末端およびＣ末端の連続したアミノ酸残基の合計は、特定し
た数と等しい。配列番号５０のＭＥＴＰドメイン、および配列番号２６の、少な
くとも５、１０、１５、２０、２５、３０、５０、または７５のさらなる連続す
るアミノ酸残基を含むポリペプチドが、さらに好ましい。さらなる連続するアミ
ノ酸残基は、ＭＥＴＰドメインに対してＮ末端またはＣ末端であり得る。あるい
は、さらなる連続するアミノ酸残基は、ＭＥＴＰドメインに対してＮ末端および
Ｃ末端の両方であり得る。ここでＮ末端およびＣ末端の連続するアミノ酸残基の
合計が、特定される数字と一致する。上記の好ましいポリペプチドドメインは、
ミトコンドリアエネルギー伝達タンパク質に対して、サイン特異的な特徴である
。開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第３染色体に存在すると考えられ
る。従って、本発明に関連するポリヌクレオチドは、第３染色体についての連鎖
解析におけるマーカーとして有用である。

【００６８】 この遺伝子は、主に活性化されたＴ細胞、および胎児の肝臓組織／脾臓組織に
おいて発現され、そしてより低い程度に乳児の脳組織において発現されることが
、発見されている。

【００６９】 従って、本発明の核酸は、生物学的サンプル中に存在する組織または細胞型の
示差的同定のため、ならびに以下の疾患および／または障害：免疫系疾患ならび
に神経系の疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリ
ペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差
的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特
に免疫および神経系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち
、その障害を有さない個体由来の健常組織中の発現レベル）に対して有意により
高いか、またはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する
個体から採取された特定の組織（例えば、免疫組織、神経組織、癌性組織および
創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）
中で、検出され得る。

【００７０】 本発明の好ましいポリペプチドは、配列番号２６で以下の残基：Ｇｌｎ−３〜
Ｓｅｒ−８、Ｇｌｎ−５９〜Ａｒｇ−６６、Ｔｈｒ−１４９〜Ｇｌｙ−１５７、
Ｓｅｒ−１７１〜Ｇｌｙ−１７６として示される免疫原性エピトープを含むか、
あるいはこれらからなる。前述のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドも
また、本発明に含まれる。

【００７１】 免疫組織および神経組織における、この組織分布およびミトコンドリアキャリ
アタンパク質に対する相同性は、このクローンのタンパク質産物が、免疫系およ
び神経系の、疾患および／または障害の、検出ならびに／あるいは処置において
、ならびに脱共役タンパク質の異常な活性を伴う疾患および／または障害（例え
ば、代謝活性における障害、肥満症、悪液質または熱発生）の、検出ならびに／
あるいは処置において有用であることを示唆する。この遺伝子の翻訳産物に対す
る抗体は、例えば、疾患に寄与する脱共役タンパク質の活性を阻害することによ
って非限定的な仮説の目的に有効である。この組織分布は、このクローンのタン
パク質産物が、種々の免疫系障害の診断および処置に有用であることを示唆する
。活性化されたＴ細胞および胎児の肝臓組織／脾臓組織の両方における、この遺
伝子産物の発現は、血液幹細胞を含む潜在的な全ての造血細胞株の増殖；生存；
分化；および／または活性化の調節における役割を示唆する。この遺伝子産物は
、サイトカイン産生、抗原提示、または癌の処置（例えば、免疫応答をブースト
することによる）に有用性を示唆し得る他のプロセスの調節に関与し得る。この
遺伝子は、リンパ起源の細胞において発現されるので、遺伝子またはタンパク質
ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙される組織に対する腫瘍マ
ーカー、および／または免疫治療の標的として有用性を示し得る。従って、抗体
はまた、関節炎、喘息、ＡＩＤＳのような免疫不全疾患、白血病、慢性関節リウ
マチ、炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡および乾癬を含む免疫学的障害のための薬剤
として使用される。さらに、この遺伝子産物は、種々の血液系統の幹細胞および
方向付けられた前駆細胞の増大において、ならびに種々の細胞型の分化および／
または増殖において商業的有用性を有し得る。あるいは、乳児脳組織における組
織分布は、このクローンのタンパク質産物が、アルツハイマー病、パーキンソン
病、ハンチントン病、ツレット症候群、精神分裂病、躁病、痴呆、妄想症、強迫
性障害、恐慌性障害、学習障害、ＡＬＳ、精神病、自閉、および行動変化（栄養
補給、睡眠パターン、平衡、および知覚の障害を含む）のような神経変性疾患状
態および行動障害の検出および／または処置に有用であることを示唆する。さら
に、この遺伝子または遺伝子産物はまた、発達中の胚と関連する発達障害、また
は性伴障害の処置および／または検出において役割を果たし得る。タンパク質な
らびにこのタンパク質に対する抗体は、上に列挙された組織に対する腫瘍マーカ
ーおよび／または免疫療法標的としての有用性を示し得る。特に好ましいのは、
化合物（すなわち、抗体、低分子）を、本発明の転移酵素タンパク質の発現また
は活性についてのアンタゴニストまたはアゴニストとして作用するその能力につ
いてスクリーニングするための方法である。

【００７２】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号８に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったか
もしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範
囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好
ましくは、本発明から、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここ
で、ａは配列番号８の１〜２０４５の任意の整数であり、ｂは１５〜２０５９の
整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号８に示されるヌクレオチド残基
の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリ
ヌクレオチドが除外される。

【００７３】 （遺伝子番号８によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、多くのミトコンドリアキャリアタンパク質と配列相
同性を共有する（例えばＧｅｎｂａｎｋ登録番号 ｇｉ｜３８７８１１７および
ｇｉ｜２２５７５５９を参照のこと）。好ましいドメインとして本発明に含まれ
るものは、ミトコンドリアエネルギー伝達タンパク質（ＭＥＴＰ）ドメインであ
り、ＭＥＴＰドメインはＰｒｏＳｉｔｅ分析ツールを用いて同定される。構造的
に、ミトコンドリアエネルギー伝達タンパク質のファミリーのメンバーは、約１
００残基のドメインの３つのタンデムの繰り返しからなる。これらのドメインの
各々は、２つの膜貫通領域を含む。サインパターンとして、繰り返しドメインの
最も保存された領域の１つが選択され、第１の膜貫通領域の直下に配置される。
この広範なタンパク質のファミリーを検出するために、第１の膜貫通領域の直下
に位置した繰り返しドメイン中の最も保存された領域を含むコンセンサス配列が
発達された。コンセンサスパターンは、以下の通りである：Ｐ−ｘ［ＤＥ］−ｘ
−［ＬＩＶＡＴ］−［ＲＫ］−ｘ−［ＬＲＨ］−［ＬＩＶＭＦＹ］−［ＱＧＡＩ
ＶＭ］。本発明の好ましいポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含む：ＰＬＤ
ＬＶＫＩＲＦＡ（配列番号５１）。これらのポリペプチドをコードするポリヌク
レオチドもまた、本発明に含まれる。さらに好ましいのは、配列番号５１のＭＥ
ＴＰドメイン、および配列番号２７の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、
３０、５０または７５の連続する付加的なアミノ酸残基を含むポリペプチドであ
る。この連続した付加的なアミノ酸残基は、ＭＥＴＰドメインに対してＮ末端側
またはＣ末端側であり得る。あるいは、連続した付加的なアミノ酸残基は、ＭＥ
ＴＰドメインに対してＮ末端側およびＣ末端側の両方であり、ここで、Ｎ末端お
よびＣ末端の連続したアミノ酸残基の合計は、特定した数と等しい。上記の好ま
しいポリペプチドドメインは、ミトコンドリアエネルギー伝達タンパク質に対し
てサイン特異的な特徴である。

【００７４】 この遺伝子は、主に精巣癌組織において発現されることが見い出されてる。

【００７５】 従って、本発明の核酸は、生物学的サンプル中に存在する組織または細胞型の
示差的同定のため、および以下：精巣癌の疾患および状態の診断のための、試薬
として有効である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する
抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブを提供する際
に有効である。上記の組織または細胞（特に、生殖系）の多くの障害に関して、
標準的な遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有しない個体由来の健常な組織中
の発現レベル）に対して、有意に高いかまたは低いレベルのこの遺伝子の発現は
、このような障害を有する個体から採取された特定の組織（例えば、生殖組織、
癌性組織および創傷組織）もしくは体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑
液および髄液）中で、検出され得る。

【００７６】 本発明の好ましいポリペプチドは、配列番号２７に残基として示した：Ｓｅｒ
−２６〜Ｍｅｔ−３４、Ｔｈｒ−１３７〜Ｇｌｙ−１４２の免疫原性エピトープ
を含むか、あるいはこれらからなる。上記のポリペプチドをコードするポリヌク
レオチドもまた、本発明に含まれる。

【００７７】 本発明のクローンの翻訳産物は、ミトコンドリアキャリアタンパク質と配列相
同性を共有する。その相同性は、このクローンのタンパク質産物が、脱共役タン
パク質の異常な活性に関連した疾患および／または障害（例えば、代謝活性にお
ける障害、肥満、悪液質または熱発生）の検出および／または処置のために有効
であることを示す。この遺伝子の翻訳産物に対する抗体は、例えば、疾患に寄与
する脱共役タンパク質の活性を阻害することによって非限定的な仮説の目的に有
効である。さらに精巣腫瘍組織における組織分布は、この遺伝子がアンタゴニス
ト、特に低分子または抗体に対する、優れた標的であり得、その同族リガンドに
よってレセプターの結合をブロックすることを示す。従って、好ましいのは、こ
の遺伝子の翻訳産物の細胞外部分に特異的に結合する抗体または低分子である。
この細胞外領域は、上に記載されたように膜貫通ドメインに関する情報から確認
され得る。また、精巣癌を検出するためのキットを提供する。１つの実施形態に
おいて、このようなキットは、固体支持体に結合するこの遺伝子の翻訳産物に特
異的な抗体を含む。また、個体における精巣癌を検出する方法も提供され、この
方法は、この遺伝子の翻訳産物に特異的な抗体を、個体由来の体液（好ましくは
、血清）に接触させ、そして抗体が、体液中に見出される抗原に結合するか否か
を確認する工程を包含する。好ましくは、この抗体は固体支持体と結合され、そ
して体液は血清である。上記の実施形態ならびに他の治療および診断試験（キッ
トおよび方法）は、本明細書中の他の場所でより詳細に記載する。タンパク質な
らびにこのタンパク質に対する抗体は、上に列挙した組織に対する腫瘍マーカー
および／または免疫療法の標的として有効性を示し得る。

【００７８】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、配列データベースを
通して公に利用可能および入手可能である。これらの配列のいくつかは、配列番
号９に関連し、そして本発明の着想以前に公に利用可能であり得る。好ましくは
、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。
全ての関連する配列を列挙するのは、煩わしい。従って、好ましくは、本発明か
ら、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号９
の１〜２６６２の任意の整数であり、ｂは１５〜２６７６の整数であり、ここで
ａおよびｂの両方は配列番号９に示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そ
してここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外
される。

【００７９】 （遺伝子番号９によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、多くのミトコンドリアキャリアタンパク質と配列相
同性を共有する（例えばＧｅｎｂａｎｋ登録番号 ｇｉ｜２７６５０７５および
ｇｉ｜１８４２２１１を参照のこと）。相同性に基づき、これらのタンパク質は
、少なくともいくらかの生物学的活性を共有し得ると考えられる。

【００８０】 この遺伝子は、主に肝臓および胎児肝臓組織において発現されることが見い出
されている。

【００８１】 従って、本発明の核酸は、生物学的サンプル中に存在する組織または細胞型の
示差的同定のため、および以下の疾患および／または障害：腎臓および免疫系の
疾患および状態の診断のための、試薬として有効である。同様に、ポリペプチド
およびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定の
ための免疫学的プローブを提供する際に有効である。上記の組織または細胞（特
に、腎臓および免疫系）の多くの障害に関して、標準的な遺伝子発現レベル（す
なわち、障害を有しない個体由来の健常な組織中の発現レベル）に対して、有意
に高いかまたは低いレベルのこの遺伝子の発現は、このような障害を有する個体
から採取された特定の組織（例えば、腎臓組織、免疫組織、癌性組織および創傷
組織）もしくは体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄液）中で
、検出され得る。

【００８２】 本発明の好ましいポリペプチドは、配列番号２８に残基として示した：Ｇｌｙ
−３９〜Ｔｈｒ−４７、Ｐｒｏ−６３〜Ｔｈｒ−６８、Ｇｌｙ−８８〜Ｇｌｕ−
９５、Ｔｈｒ−９７〜Ｇｌｎ−１０２、Ｐｒｏ−１２５〜Ｇｌｙ−１３１、Ｈｉ
ｓ−１６４〜Ｃｙｓ−１７５の免疫原性エピトープを含むか、あるいはこれらか
らなる。上記のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含
まれる。

【００８３】 肝臓組織における組織分布およびミトコンドリアキャリアタンパク質に対する
相同性は、このクローンのタンパク質産物が、腎臓および免疫系の疾患および／
または障害の検出ならびに／あるいは処置において、ならびに脱共役タンパク質
の異常な活性に関連した疾患および／または障害（例えば、代謝活性における障
害、肥満症、悪液質または熱発生）の検出ならびに／あるいは処置において有用
であることを示す。この遺伝子の翻訳産物に対する抗体は、例えば、疾患に寄与
する脱共役タンパク質の活性を阻害することによって非限定的な仮説の目的に有
効である。さらに肝臓組織における組織分布は、このクローンのタンパク質産物
が、肝臓障害および癌（例えば、胚芽細胞腫、黄疸、肝炎、肝前駆体細胞の分化
に起因し得る肝臓代謝疾患および状態）の検出および処置に有用であることを示
唆する。加えて、胎児における発現は、発達異常、胎児欠失、出産前の障害およ
び種々の創傷治癒モデルおよび／または組織外傷におけるタンパク質産物につい
ての有用な役割を示唆する。同様に、胎児肝臓組織におけるこの遺伝子産物の発
現は、血液幹細胞を含む潜在的なすべての造血細胞系統の増殖；生存；分化；お
よび／または活性化の調節における役割を示唆する。この遺伝子産物は、サイト
カイン産生、抗原提示、または癌の処置（例えば、免疫応答をブーストすること
による）における有用性を示唆し得る他のプロセスの調節に関与し得る。この遺
伝子は、リンパ起源の細胞において発現されるので、遺伝子またはタンパク質、
ならびにこのタンパク質に対して指向される抗体は、上記の列挙される組織にお
ける腫瘍マーカー、および／または免疫療法の標的としての有用性を示し得る。
従って、この遺伝子はまた、関節炎、喘息、ＡＩＤＳのような免疫不全疾患、白
血病、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡および乾癬を含む免疫学
的障害のための薬剤として使用される。さらに、この遺伝子産物は、種々の血液
系統の幹細胞および方向付けられた前駆細胞の増大において、ならびに種々の細
胞型の分化および／または増殖において商業的有用性を有し得る。タンパク質な
らびにこのタンパク質に対する抗体は、上に列挙された組織に対する腫瘍マーカ
ーおよび／または免疫療法標的としての有用性を示し得る。特に好ましいのは、
化合物（すなわち、抗体、低分子）を、本発明の転移酵素タンパク質の発現また
は活性についてのアンタゴニストまたはアゴニストとして作用するその能力につ
いてスクリーニングするための方法である。

【００８４】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、配列データベースを
通して公に利用可能および入手可能である。これらの配列のいくつかは、配列番
号１０に関連し、そして本発明の着想以前に公に利用可能であり得る。好ましく
は、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される
。全ての関連する配列を列挙するのは、煩わしい。従って、好ましくは、本発明
から、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号
１０の１〜１２４９の任意の整数であり、ｂは１５〜１２６３の整数であり、こ
こでａおよびｂの両方は配列番号１０に示されるヌクレオチド残基の位置に対応
し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチド
が除外される。

【００８５】 （遺伝子番号１０によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、多くの推定ミトコンドリアキャリアタンパク質と配
列相同性を共有する（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号 ｇｉ｜１２６２４２２
およびｇｉ｜３８７５３００を参照のこと）。好ましいドメインとして本発明に
含まれるものは、ミトコンドリアエネルギー伝達タンパク質（ＭＥＴＰ）ドメイ
ンであり、ＭＥＴＰドメインはＰｒｏＳｉｔｅ分析ツールを用いて同定される。
構造的に、ミトコンドリアエネルギー伝達タンパク質のファミリーのメンバーは
、約１００残基のドメインの３つのタンデムの繰り返しからなる。これらのドメ
インの各々は、２つの膜貫通領域を含む。サインパターンとして、繰り返しドメ
インの最も保存された領域の１つが選択され、第１の膜貫通領域の直下に配置さ
れる。この広範なタンパク質のファミリーを検出するために、第１の膜貫通領域
の直下に位置した繰り返しドメイン中の最も保存された領域を含むコンセンサス
配列が発達された。コンセンサスパターンは、以下の通りである：Ｐ−ｘ［ＤＥ
］−ｘ−［ＬＩＶＡＴ］−［ＲＫ］−ｘ−［ＬＲＨ］−［ＬＩＶＭＦＹ］−［Ｑ
ＧＡＩＶＭ］。本発明の好ましいポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含む：
ＰＬＤＴＩＫＴＲＬＱ（配列番号５２）。これらのポリペプチドをコードするポ
リヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。さらに好ましいのは、配列番号５２
のＭＥＴＰドメイン、および配列番号２９の少なくとも５、１０、１５、２０、
２５、３０、５０または７５の連続する付加的なアミノ酸残基を含むポリペプチ
ドである。この連続した付加的なアミノ酸残基は、ＭＥＴＰドメインに対してＮ
末端側またはＣ末端側であり得る。あるいは、連続した付加的なアミノ酸残基は
、ＭＥＴＰドメインに対してＮ末端側およびＣ末端側の両方であり得、ここで、
Ｎ末端およびＣ末端の連続したアミノ酸残基の合計は、特定した数と等しい。上
記の好ましいポリペプチドドメインは、ミトコンドリアエネルギー伝達タンパク
質に対してサイン特異的な特徴である。

【００８６】 この遺伝子は、主に垂の上皮層に由来する口蓋癌組織、ならびに上皮組織にお
いて発現されることが見い出されている。

【００８７】 従って、本発明の核酸は、生物学的サンプル中に存在する組織または細胞型の
示差的同定のため、および以下の疾患および状態：上皮の疾患、障害および癌の
診断のための、試薬として有効である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポ
リペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プ
ローブを提供する際に有効である。上記の組織または細胞（特に、上皮）の多く
の障害に関して、標準的な遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有しない個体由
来の健常な組織中の発現レベル）に対して、有意に高いかまたは低いレベルのこ
の遺伝子の発現は、このような障害を有する個体から採取された特定の組織（例
えば、上皮組織、癌性組織および創傷組織）もしくは体液（例えば、リンパ、血
清、血漿、尿、滑液および髄液）中で、検出され得る。

【００８８】 本発明の好ましいポリペプチドは、配列番号２９に残基として示した：Ｉｌｅ
−３０〜Ｐｈｅ−４０の免疫原性エピトープを含むか、あるいはこれらからなる
。上記のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる
。

【００８９】 上皮組織およびその癌性組織における組織分布および推定ミトコンドリアキャ
リアタンパク質に対する相同性は、このクローンのタンパク質産物が、上皮の疾
患および／または障害の検出および／または処置のために、ならびに脱共役タン
パク質の異常な活性に関連した疾患および／または障害（例えば、代謝活性にお
ける障害、肥満、悪液質または熱発生）の検出および／または処置のために有効
であることを示す。この遺伝子の翻訳産物に対する抗体は、例えば、疾患に寄与
する脱共役タンパク質の活性を阻害することによって非限定的な仮説の目的に有
効である。さらに、垂の癌性上皮組織における組織分布は、この遺伝子がアンタ
ゴニスト、特に低分子または抗体に対する、優れた標的であり得、その同族リガ
ンドによってレセプターの結合をブロックすることを示す。従って、好ましいの
は、この遺伝子の翻訳産物の細胞外部分に特異的に結合する抗体または低分子で
ある。この細胞外領域は、上に記載されたように膜貫通ドメインに関する情報か
ら確認され得る。また、上皮癌を検出するためのキットを提供する。１つの実施
形態において、このようなキットは、固体支持体に結合するこの遺伝子の翻訳産
物に特異的な抗体を含む。また、個体における上皮癌を検出する方法も提供され
、この方法は、この遺伝子の翻訳産物に特異的な抗体を、個体由来の体液（好ま
しくは、血清）に接触させ、そして抗体が、体液中に見出される抗原に結合する
か否かを確認する工程を包含する。好ましくは、この抗体は固体支持体と結合さ
れ、そして体液は血清である。上記の実施形態ならびに他の処置および診断試験
（キットおよび方法）は、本明細書中の他の場所でより詳細に記載する。

【００９０】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、配列データベースを
通して公に利用可能および入手可能である。これらの配列のいくつかは、配列番
号１１に関連し、そして本発明の着想以前に公に利用可能であり得る。好ましく
は、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される
。全ての関連する配列を列挙するのは、煩わしい。従って、好ましくは、本発明
から、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号
１１の１〜１１４７の任意の整数であり、ｂは１５〜１１６１の整数であり、こ
こでａおよびｂの両方は配列番号１１に示されるヌクレオチド残基の位置に対応
し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチド
が除外される。

【００９１】 （遺伝子番号１１によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、ヒトペルオキシソームＣａ依存性溶質キャリア（Ｇ
ｅｎｂａｎｋ登録番号ｇ２３５２４２７を参照のこと）ならびに、ヒト脱共役タ
ンパク質３（ｈｕｍａｎ ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）（ＵＣＰ３
）（ＧｅｎＳｅｑ登録番号Ｗ８８２７９を参照のこと）と配列相同性を共有する
。

【００９２】 この遺伝子は、主に腎臓組織および初代樹状細胞で発現される。

【００９３】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、そして腎障害および免疫障
害、ならびに代謝障害および熱産生障害を含むがこれらに限定されない疾患およ
び状態の診断のための、試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこ
れらのポリペプチドに対する抗体は、この組織または細胞型の示差的同定のため
の免疫学的プローブを提供する際に有用である。上記組織または細胞、特に腎臓
系、代謝系、および免疫系の多くの障害について、標準的な遺伝子発現レベル、
すなわち、その障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベルに
対して有意に高いかまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を
有する個体から採取された特定の組織または細胞型（例えば、腎臓組織、免疫組
織、代謝組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、
血漿、尿、滑液および髄液）または別の組織もしくは試料中で慣用的に検出され
得る。

【００９４】 本発明の好ましいポリペプチドは、以下：配列番号３０中に残基：Ｇｌｕ−４
４〜Ｌｙｓ−５０、Ａｒｇ−１８０〜Ｇｌｙ−１８７、Ｇｌｕ−１９７〜Ｔｙｒ
−２０５、Ｇｌｎ−２３５〜Ａｌａ−２４２として支される免疫原性エピトープ
を含むか、またはこれらからなる。上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオ
チドもまた、本発明によって含まれる。

【００９５】 腎臓組織および初代樹状細胞における組織分布ならびにＵＣＰ３のようなミト
コンドリアキャリアタンパク質に対する相同性は、この遺伝子に対応するポリヌ
クレオチドおよびポリペプチドが、腎臓系ならびに免疫系の疾患および／または
障害の検出および／または処置、ならびに脱共役タンパク質の異常な活性に関連
する疾患および／または障害（例えば、代謝活性における障害、肥満症、悪液質
または熱発生）の検出および／または処置に対して、有用であることを示す。こ
の遺伝子の翻訳産物に対する抗体は有用であり、例えば非制限的な仮説として、
これはこの疾患に寄与する脱共役タンパク質の活性を阻害することによる。さら
に、初代樹状細胞における組織分布は、このクローンのタンパク質産物が、免疫
系障害の診断および／または処置に有用であることを示唆する。初代樹状細胞に
おけるこの遺伝子産物の発現はまた、これが感染に対する応答を媒介しかつ免疫
監視の間に生じるような免疫学的応答を制御する際に役割を果たし得ることを示
唆する。あるいは、腎臓における組織分布は、この遺伝子または遺伝子産物が、
腎不全、腎炎（ｎｅｐｈｒｉｔｕｓ）、尿細管性アシドーシス、蛋白尿、膿尿、
水腫、腎盂腎炎、水腎症（ｈｙｄｒｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ）、ネフローゼ症候群
、圧挫症候群、糸球体腎炎、血尿、腎仙痛、および腎臓結石（ｋｉｄｎｅｙ ｓ
ｔｏｎｅ）、さらにウィルムス腫瘍疾患および先天性腎臓異常（例えば、馬蹄腎
、多発性嚢胞腎およびファルコーニ（Ｆａｌｃｏｎｉ）症候群）を含む、腎臓疾
患の処置および／または検出において有用であることを示唆する。タンパク質な
らびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙される組織に対する腫瘍マー
カーおよび／または免疫治療の標的として有用性を示し得る。

【００９６】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１２に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明から、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号１２の１〜１２３２の間の任意の整数であり、ｂは１５〜１
２４６の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１２に示されるヌクレ
オチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ
以上のポリヌクレオチドが除外される。

【００９７】 （遺伝子番号１２によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、ヒトペルオキシソームＣａ依存性溶質キャリア（Ｇ
ｅｎｂａｎｋ登録番号ｇ２３５２４２７を参照のこと）ならびに、ヒト脱共役タ
ンパク質３（ＵＣＰ３）（ＧｅｎＳｅｑ登録番号Ｗ８８２７９を参照のこと）と
配列相同性を共有する。開示されたｃＤＮＡをコードしている遺伝子は、第９染
色体上に存在していると考えられる。従って、本発明に関連しているポリヌクレ
オチドは、第９染色体についての連鎖解析におけるマーカーとして有用である。

【００９８】 この遺伝子は、脳組織および乳児脳組織、ならびに好酸球において主に発現す
る。

【００９９】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、そして神経系障害および免
疫系障害、ならびに熱産生障害および代謝障害を含むが、これらに限定されない
疾患および状態の診断のための、試薬として有用である。同様に、ポリペプチド
およびこれらのポリペプチドに対する抗体は、この組織または細胞型の示差的同
定のための免疫学的プローブを提供する際に有用である。上記組織または細胞、
特に神経系、免疫系および代謝系の多くの障害について、標準的な遺伝子発現レ
ベル、すなわち、その障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レ
ベルに対して有意に高いかまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような
障害を有する個体から採取された特定の組織または細胞型（例えば、神経組織、
免疫組織、代謝組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、
血清、血漿、尿、滑液および髄液）または別の組織もしくは試料中で慣用的に検
出され得る。

【０１００】 本発明の好ましいポリペプチドとしては、配列番号３１中で残基：Ａｒｇ−１
１〜Ｇｌｙ−１８として示される免疫原性エピトープを含むか、またはそのかわ
りにこれからなる。上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた本発
明によって含まれる。

【０１０１】 好酸球および神経組織における組織分布ならびにＵＣＰ３のようなミトコンド
リアキャリアタンパク質に対する相同性は、この遺伝子に対応するポリヌクレオ
チドおよびポリペプチドが、神経系および免疫系の疾患および／または障害の診
断、検出および／または処置、ならびに脱共役タンパク質の異常な活性と関連す
る疾患および／または障害（例えば、代謝活性における障害、肥満症、悪液質ま
たは熱発生）の検出および／または処置に有用であることを示す。この遺伝子の
翻訳産物に対する抗体は有用であり、例えば非制限的な仮説として、これはこの
疾患に寄与する脱共役タンパク質の活性を阻害することによる。さらに、好酸球
における組織分布は、このクローンのタンパク質産物が、免疫系障害の診断およ
び／または処置に有用であることを示唆する。好酸球におけるこの遺伝子産物の
発現はまた、これが感染に対する応答を媒介しかつ免疫監視の間に生じるような
免疫学的応答を制御する際に役割を果たし得ることを示唆する。あるいは、神経
組織における組織分布は、このクローンのタンパク質産物が、アルツハイマー病
、パーキンソン病、ハンチントン病、ツレット症候群、精神分裂病、躁病、痴呆
、偏執症、強迫性障害、恐慌性障害、学習障害、ＡＬＳ、精神病、自閉、および
行動変化（栄養補給、睡眠パターン、平衡、および知覚の障害を含む）のような
神経変性疾患状態ならびに行動障害の検出／処置に対して有用であることを示唆
する。さらに、この遺伝子または遺伝子産物はまた、発生中の胚と関連する発生
障害または伴性障害の処置および／または検出に役割を果たし得る。タンパク質
ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙された組織に対する腫瘍マ
ーカーおよび／または免疫治療の標的として有用性を示し得る。

【０１０２】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１３に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明から、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号１３の１〜２５０３の間の任意の整数であり、ｂは１５〜２
５１７の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１３に示されるヌクレ
オチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ
以上のポリヌクレオチドが除外される。

【０１０３】 （遺伝子番号１３によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、多くの推定ミトコンドリアキャリアタンパク質（例
えば、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ｇｉ｜３８７６１４６およびｇｉ｜１３２６３６
７を参照のこと）と配列相同性を共有する。本発明に好ましいドメインとして含
まれるのは、ＰｒｏＳｉｔｅ分析手段を用いて同定されたミトコンドリアエネル
ギー転移タンパク質（ＭＥＴＰ）ドメインである。構造的に、ミトコンドリアエ
ネルギー転移タンパク質のファミリーのメンバーは、約１００残基のドメインの
３回直列反復からなる。これらのドメインの各々は、２つの膜貫通領域を含む。
特徴的なパターン（ｓｉｇｎａｔｕｒｅ ｐａｔｔｅｒｎ）として、最初の膜貫
通領域の直後に位置する、これらの反復ドメイン中の最も保存された領域の１つ
が、選択された。タンパク質のこの広範なファミリーを検出するために、最初の
膜貫通領域の直後に位置する、これらの反復ドメイン中の最も保存された領域を
含むコンセンサス配列が開発された。このコンセンサスパターンは、以下：

【０１０４】

【化２】 の通りである。本発明の好ましいポリペプチドは、以下のアミノ酸配列：ＰＬＤ
ＶＬＫＴＲＩＱ（配列番号５３）を含む。これらのポリペプチドをコードするポ
リヌクレオチドもまた本発明によって含まれる。さらに好ましいのは、配列番号
５３のＭＥＴＰドメイン、および配列番号３２の少なくとも５、１０、１５、２
０、２５、３０、５０または７５個のさらなる連続アミノ酸残基を含む、ポリペ
プチドである。このさらなる連続アミノ酸残基は、このＭＥＴＰドメインのＮ末
端側またはＣ末端側であり得る。あるいは、このさらなる連続アミノ酸残基は、
このＭＥＴＰドメインのＮ末端側とＣ末端側の両方であり得、ここで、Ｎ末端お
よびＣ末端の連続アミノ酸残基の総数は、明記された数と等しい。上記の好まし
いポリペプチドドメインは、ミトコンドリアエネルギー転移タンパク質に特異的
な特性（ｓｉｇｎａｔｕｒｅ）を示している。本発明のさらなる実施形態は、以
下：

【０１０５】

【化３】 のアミノ酸配列を含むか、あるいはその代わりにこれからなる。これらのポリペ
プチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明によって含まれる。開示さ
れたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第２２染色体上に位置すると考えられる。
従って、本発明に関連するポリヌクレオチドは、第２２染色体の連鎖分析におけ
るマーカーとして有用である。

【０１０６】 この遺伝子が、脳組織全体、乳児脳組織および脳の視床下部組織に主に発現す
ることが発見された。

【０１０７】 従って、本発明の核酸は、生物学的サンプル中に存在する組織または細胞型の
示差的同定のため、ならびに以下の疾患および状態：神経系疾患および／または
神経系障害の診断のための、試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよ
びこれらのポリペプチドに対する抗体は、この組織または細胞型の示差的同定の
ための免疫学的プローブを提供するために有用である。上記組織または細胞、特
に神経系の多くの障害について、標準的な遺伝子発現レベル、すなわち、その障
害を有さない個体由来の健常組織における発現レベルに対して有意に高いかまた
は低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取され
た特定の組織（例えば、神経組織、癌性組織ならびに創傷組織）または体液（例
えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄液）中で検出され得る。

【０１０８】 神経組織における組織分布ならびに推定ミトコンドリアキャリアタンパク質に
対する相同性は、このクローンのタンパク質産物が、神経系の疾患および／また
は障害の診断の検出ならびに／または処置、ならびに脱共役タンパク質の異常な
活性と関連する疾患および／または障害（例えば、代謝活性における障害、肥満
症、悪液質または熱発生）の検出ならびに／または処置に有用であることを示唆
する。この遺伝子の翻訳産物に対する抗体は有用であり、例えば非制限的な仮説
として、これはこの疾患に寄与する脱共役タンパク質の活性を阻害することによ
る。さらに、神経組織における組織分布は、このクローンのタンパク質産物が、
神経変性疾患状態および行動障害（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病
、ハンチントン病、ツレット症候群、精神分裂病、躁病、痴呆、偏執症、強迫性
障害、恐慌性障害、学習障害、ＡＬＳ、精神病、自閉、および行動変化（栄養補
給、睡眠パターン、平衡、および知覚の障害を含む）の検出／処置に対して有用
であることを示唆する。さらに、この遺伝子または遺伝子産物はまた、発生中の
胚に関連する発生障害または伴性障害の処置および／または検出に役割を果たし
得る。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙される組
織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫治療の標的として有用性を示し得る
。特に好ましいのは、化合物（すなわち、抗体、低分子）を、本発明のトランス
ロカーゼタンパク質の発現もしくは活性に対してアンタゴニストまたはアゴニス
トとして作用するその能力について、スクリーニングする方法である。

【０１０９】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１４に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明から、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号１４の１〜１０１０の間の任意の整数であり、ｂは１５〜１
０２４の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１４に示されるヌクレ
オチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ
以上のポリヌクレオチドが除外される。

【０１１０】 （遺伝子番号１４によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、ヒト肝臓ミトコンドリアカルニチン／アシルカルニ
チンキャリアタンパク質（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ｇｉ｜２７６５０７５を参照
のこと）と配列相同性を共有する。好ましいドメインとして本発明に含まれるの
は、ミトコンドリアエネルギー転移タンパク質（ＭＥＴＰ）ドメインであり、こ
れは、ＰｒｏＳｉｔｅ分析手段を用いて同定された。構造的に、ミトコンドリア
エネルギー転移タンパク質のファミリーのメンバーは、約１００残基のドメイン
の３回直列反復からなる。これらのドメインの各々は、２つの膜貫通領域を含む
。特徴的なパターンとして、最初の膜貫通領域の直後に位置する、これらの反復
ドメイン中の最も保存された領域の１つが、選択された。タンパク質のこの広範
なファミリーを検出するために、最初の膜貫通領域の直後に位置する、これらの
反復ドメイン中の最も保存された領域を含むコンセンサス配列が、開発された。
このコンセンサスパターンは、以下；

【０１１１】

【化４】 の通りである。本発明の好ましいポリペプチドは、以下のアミノ酸配列：ＰＴＥ
ＬＶＫＣＲＬＱ（配列番号５５）および／またはＰＶＤＣＩＫＳＲＩＱ（配列番
号５６）を含む。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた本
発明によって含まれる。さらに好ましいのは、配列番号５５および／または５６
のＭＥＴＰドメイン、および配列番号３３のうちの少なくとも５、１０、１５、
２０、２５、３０、５０または７５個のさらなる連続アミノ酸残基を含む、ポリ
ペプチドである。このさらなる連続アミノ酸残基は、このＭＥＴＰドメインのＮ
末端側またはＣ末端側であり得る。あるいは、このさらなる連続アミノ酸残基は
、このＭＥＴＰドメインのＮ末端側およびＣ末端側の両方であり得、ここで、Ｎ
末端およびＣ末端の連続アミノ酸残基の総数は、明記された数と等しい。上記の
好ましいポリペプチドドメインは、ミトコンドリアエネルギー転移タンパク質に
特異的な特性を示す。

【０１１２】 この遺伝子は、胎児心臓および平滑筋組織、精巣組織および乳房組織、ならび
に卵巣腫瘍組織において発現される。

【０１１３】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに心血管系および生
殖系の疾患および／または障害を含むがこれらに限定されない疾患および状態の
診断のための、試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポ
リペプチドに対する抗体は、この組織または細胞型の示差的同定のための免疫学
的プローブの提供する際に有用である。上記組織または細胞、特に心血管系およ
び生殖系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、この障害
を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高い
かまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採
取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、心血管組織、生殖組織、癌性組織
および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄
液）または別の組織もしくはサンプルの中で、慣用的に検出され得る。

【０１１４】 本発明の好ましいポリペプチドは、配列番号３３中で残基：Ｇｌｙ−６２〜Ｔ
ｈｒ−６７、Ｇｌｙ−２０１〜Ｇｌｕ−２０６として示される免疫原性エピトー
プを含むか、またはこれらからなる。上記ポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチドもまた、本発明によって含まれる。

【０１１５】 心血管系および生殖系における組織分布ならびに他のキャリアタンパク質に対
する相同性は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、
心血管系および生殖系の疾患および／または障害の診断、検出ならびに／または
処置、ならびに脱共役タンパク質の異常な活性に関連する疾患および／または障
害（例えば、代謝活性における障害、肥満症、悪液質または熱発生）の検出およ
び／または処置に対して、有用であることを示す。この遺伝子の翻訳産物に対す
る抗体は有用であり、例えば非制限的な仮説として、これはこの疾患に寄与する
脱共役タンパク質の活性を阻害することによる。精巣組織および乳房組織におけ
る組織分布は、この遺伝子の翻訳産物が、生殖系障害の診断、検出および／また
は処置に有用であることを示す。例えば、精巣組織におけるこのクローンの組織
分布は、この遺伝子の翻訳産物が、適切な精巣機能（例えば、内分泌機能、精子
成熟）ならびに癌に関連する状態の処置および診断に有用であることを示唆する
。従って、この遺伝子産物は、男性不妊症および／またはインポテンスの処置に
おいて有用である。この遺伝子産物はまた、結合剤を同定するために設計された
アッセイにおいて有用であり、同様にこのような薬剤（アンタゴニスト）は、男
性避妊剤として有用である。同様に、このタンパク質は、精巣癌の処置および／
または診断に有用であると考えられる。精巣はまた、身体の他の組織では特に低
いレベルで発現され得る転写物の活性な遺伝子発現部位である。従って、この遺
伝子産物は、他のプロセスにおいて関連する機能的役割（標的指標の可能ないく
つかを挙げると、例えば、造血機能、炎症機能、骨形成機能および腎機能）を果
たし得る、他の特定の組織または器官において発現され得る。同様に、卵巣癌組
織における組織分布は、この遺伝子が、その同族のリガンドによってレセプター
の結合を阻害するアンタゴニスト（特に低分子または抗体）に対する好ましい標
的であることを示す。従って、好ましいのは、この遺伝子の翻訳産物の部分に特
異的に結合する、抗体および低分子である。また提供されるのは、卵巣癌を検出
するためのキットである。そのようなキットは、１つの実施形態において、固体
支持体に結合したこの遺伝子の翻訳産物に特異的な抗体を含む。また提供される
のは、個体における卵巣癌を検出する方法であり、この方法は、この遺伝子の翻
訳産物に特異的な抗体をその個体由来の体液（好ましくは、血清）に接触させる
工程、および抗体が、その体液中に見出される抗原に結合するか否かを確認する
工程を包含する。好ましくは、この抗体は固体支持体と結合され、そしてこの体
液は血清である。上記の実施形態ならびに他の処置試験および診断試験（キット
および方法）は、本明細書中の他の場所でより詳細に記載される。あるいは、平
滑筋および胎児心臓組織における組織分布は、この遺伝子のタンパク質産物が、
心血管系の状態および病理（例えば、心臓病、再狭窄、アテローム性動脈硬化症
、発作（ｓｔｏｋｅ）、アンギナ、血栓症および創傷治癒）の診断ならびに処置
に対して有用であることを示す。タンパク質ならびにそのタンパク質に対する抗
体は、上記で列挙した組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫療法の標的
としての有用性を示し得る。

【０１１６】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１５に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明から、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号１５の１〜２８１５の間の任意の整数であり、ｂは１５〜２
８２９の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１５に示されるヌクレ
オチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ
以上のポリヌクレオチドが除外される。

【０１１７】 （遺伝子番号１５によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、多くのミトコンドリアキャリアタンパク質と配列の
相同性を共有する（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ｇｉ｜２５４４４９および
ｇｉ｜１７２２０５を参照のこと）。本発明の１つの実施形態は、以下のアミノ
酸配列を含むか、あるいはそれにより構成される： ＡＲＥＡＬＴＥＩＧＱＫＨＧＬＶＧＬＷＲＧＡＬＧＧＬＰＲＶＩＶＧＳＳＴＱＬ
ＣＴＦ ＳＳＴＫＤＬＬＳＱＷＥＩＦＰＰＱＳＷＫＬＡＬＶＡＡ（配列番号５７）。これ
らのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。開
示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第１７染色体に存在すると考えられる
。従って、本発明に関連するポリヌクレオチドは、第１７染色体についての連鎖
解析におけるマーカーとして有用である。

【０１１８】 この遺伝子は、主に子宮内膜腫瘍組織において発現することが発見された。

【０１１９】 従って、本発明の核酸は、生物学的サンプル中に存在する組織または細胞型の
示差的同定のため、ならびに以下の疾患および状態の診断のための試薬として有
用である：子宮内膜腫瘍。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに
対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブの提供
に有用である。上記組織または細胞、特に生殖系の多くの障害に関して、標準的
な遺伝子発現レベル、すなわち、障害を有さない個体からの健常組織の発現レベ
ルに対して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、このよ
うな障害を有する個体から採取された、特定の組織（例えば、生殖組織、癌性組
織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および
髄液）で検出され得る。

【０１２０】 本発明の好ましいポリペプチドは、配列番号３４において、残基：Ｌｅｕ−２
１〜Ｇｌｙ−３０、Ｔｙｒ−８３〜Ｌｙｓ−８８として示される免疫原性エピト
ープを含むか、あるいはこれらからなる。上記のポリペプチドをコードするポリ
ヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。

【０１２１】 このクローンの翻訳産物は、多くのミトコンドリアキャリアタンパク質と配列
の相同性を共有し、これは本発明の遺伝子またはその翻訳産物が、例えば代謝活
性、肥満、悪液質、もしくは熱発生における障害のようなアンカップリングタン
パク質の異常な活性に関連する疾患および／または障害の検出および／または処
置において有用であることを示唆する。この遺伝子の翻訳産物に対する抗体は、
例えば、疾患に寄与するアンカップリングタンパク質の活性を阻害することによ
る非制限的な仮説の目的で有用である。さらに、この子宮内膜腫瘍組織における
組織分布は、この遺伝子が、アンタゴニスト、特に、その同族のリガンドによっ
てレセプターの結合をブロックするアンタゴニスト、特に小分子または抗体に対
する良好な標的であることを示す。従って、この遺伝子の翻訳産物の細胞外部分
に特異的に結合する抗体および／または小分子が好ましい。この細胞外領域は、
上記のような膜貫通ドメインに関する情報から確認され得る。子宮内膜癌を検出
するためのキットもまた提供される。このようなキットは、１つの実施形態にお
いて、固体支持体に結合されたこの遺伝子の翻訳産物に特異的な抗体を含む。個
体における子宮内膜癌を検出する方法もまた提供され、この方法は、この遺伝子
の翻訳産物に特異的な抗体を個体由来の体液（好ましくは、血清）と接触させる
工程、および抗体が、この体液中に見出される抗原に結合するか否かを確認する
（ａｃｅｒｔａｉｎｉｎｇ）工程を包含する。好ましくは、抗体は固体支持体に
結合され、そして体液は血清である。上記の実施形態ならびに他の処置および診
断試験（キットおよび方法）は、本明細書中の他の箇所により詳細に記載される
。

【０１２２】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１６に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号１６の１〜９０７の任意の整数であり、ｂは１５〜９２１
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１６に示されるヌクレオチド
残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上の
ポリヌクレオチドが除外される。

【０１２３】 （遺伝子番号１６によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、ミトコンドリアキャリアのスーパーファミリーの新
しいメンバーであってカルシウムと結合し、そしてヒトの筋肉および脳に存在す
るＡｒａｌａｒと配列の相同性を共有する（例えば、ｄｅｌ ＡｒｃｏおよびＳ
ａｔｒｕｓｔｅｇｕｉ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：２３３２７−２３３
３４（１９９８）を参照のこと）。ミトコンドリアエネルギー輸送タンパク質（
ＭＥＴＰ）ドメインが好ましいドメインとして本発明に含まれ、これはＰｒｏＳ
ｉｔｅ分析ツールを使用して同定される。構造的に、ミトコンドリアエネルギー
輸送タンパク質のファミリーのメンバーは、約１００残基のドメインの３つの直
列の反復からなる。これらのドメインの各々は、２つの膜貫通領域を含む。サイ
ンパターンとして、第１の膜貫通領域のすぐ後に位置する、反復ドメインの最も
保存性の領域の１つが選択される。タンパク質のこの広範なファミリーを検出す
るために、第１の膜貫通領域のすぐ後に位置する反復ドメインにおける最も保存
性の領域を含むコンセンサス（ｃｏｎｃｅｎｓｕｓ）配列が開発された。コンセ
ンサスパターンは以下のようである：Ｐ−ｘ−［ＤＥ］−ｘ−［ＬＩＶＡＴ］−
［ＲＫ］−ｘ−［ＬＲＨ］−［ＬＩＶＭＦＹ］−［ＱＧＡＩＶＭ］。本発明の好
ましいポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含む：ＰＬＥＩＶＫＩＲＬＱ（配
列番号５９）およびＰＡＤＶＩＫＴＲＬＱ（配列番号６０）。これらのポリペプ
チドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。配列番号５９お
よび／または６０のＭＥＴＰドメイン、ならびに配列番号３５の少なくとも５、
１０、１５、２０、２５、３０、５０または７５個のさらなる連続したアミノ酸
残基を含むポリペプチドが、さらに好ましい。このさらなる連続したアミノ酸残
基は、ＭＥＴＰドメインに対してＮ末端またはＣ末端であり得る。あるいは、こ
のさらなる連続したアミノ酸残基は、ＭＥＴＰドメインに対してＮ末端およびＣ
末端の両方であり得、ここでＮ末端およびＣ末端の合計の連続したアミノ酸残基
は、特定数に等しい。上記の好ましいポリペプチドドメインは、ミトコンドリア
のエネルギー輸送タンパク質に特有のサインの特徴である。特定の実施形態にお
いて、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含む：ＩＤＬＶＫＴＲ（
配列番号５８）。別の実施形態において、推定シグナルペプチドの上流にあるオ
ープンリーディングフレームのアミノ酸配列を含むポリペプチドが、本発明によ
って意図される。具体的には、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を
含む：

【０１２４】

【化５】 （配列番号６１）。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた
、本発明に含まれる。本発明のポリヌクレオチドは、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ｇ
ｂ｜Ｊ０２９０８｜ＨＵＭＡＰＯＪ、ｇｂ｜Ｍ７４８１６｜ＨＵＭＳＧＬＹ、ｇ
ｂ｜Ｘ１４７２３｜ＨＳＣＳＰ４０、ｇｂ｜Ｍ６４７２２｜ＨＵＭＴＲＰＭ２Ａ
、またはｇｂ｜Ａ２１５７７｜Ａ２１５７７として示される核酸配列からはなら
ない（これらの登録を通して入手可能な全ての参考文献は、これによって本明細
書中に参考として援用される）。開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第
８染色体に存在すると考えられる。従って、本発明に関連するポリヌクレオチド
は、第８染色体についての連鎖解析におけるマーカーとして有用である。

【０１２５】 この遺伝子は、主に胎児の肝臓／脾臓、乳児の脳および胎盤において発現する
。

【０１２６】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに造血系の障害、お
よび／または胎児の発達障害を含むが、これらに限定されない疾患および状態の
診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリ
ペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プロ
ーブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に造血系および／または生殖
系の多くの障害に関して、標準的な遺伝子発現レベル、すなわち、障害を有さな
い個体からの健常組織または体液中の発現レベルに対して有意により高いまたは
より低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取さ
れた、特定の組織もしくは細胞型（例えば、胎児の組織、造血組織、癌性組織お
よび創傷組織）または体液（例えば、リンパ、羊水、血清、血漿、尿、滑液およ
び髄液）または別の組織もしくはサンプル中で慣用的に検出され得る。

【０１２７】 本発明の好ましいポリペプチドは、配列番号３５において、残基：Ｍｅｔ−１
〜Ｔｈｒ−７、Ａｌａ−１９９〜Ｔｙｒ−２０４、Ｌｅｕ−２１５〜Ｌｙｓ−２
２１、Ａｒｇ−２３３〜Ｐｈｅ−２３８、Ｐｒｏ−２６６〜Ａｒｇ−２７１、Ａ
ｌａ−２７６〜Ｇｌｙ−２８４として示される免疫原性エピトープを含むか、あ
るいはこれらからなる。上記のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもま
た、本発明に含まれる。

【０１２８】 胎児の肝臓／脾臓を含む、発達している組織における組織分布およびカルシウ
ム依存ミトコンドリアキャリアタンパク質であるＡｒａｌａｒに対する相同性は
、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、発達性障害ま
たは造血系の障害の検出、予防および／または処置において、ならびに、例えば
代謝活性、肥満、悪液質、もしくは熱発生における障害のようなアンカップリン
グタンパク質の異常な活性に関連する疾患および／または障害の検出および／ま
たは処置のために有用である。この遺伝子の翻訳産物に対する抗体は、例えば、
疾患に寄与するアンカップリングタンパク質の活性を阻害することによる非制限
的な仮説の目的で有用である。この遺伝子産物は、主に造血細胞および造血組織
において発現し、このことは、造血系統の生存、増殖、および／または分化にお
ける役割を果たすことを示唆する。これは、胎児肝臓におけるこの遺伝子産物の
発現によって特に支持され、最終的な造血の２つの主要な部位である。代表的な
用途は、以下の「免疫活性」および「感染性疾患」の節、実施例１１、１３、１
４、１６、１８、１９、２０および２７、ならびに本明細書中の他の箇所に記載
される。簡潔には、この使用には、骨髄細胞のエキソビボ培養、骨髄移植、骨髄
再構成、新形成の放射線治療または化学療法が挙げられる。さらに、胎盤におけ
る組織分布は、このクローンのタンパク質産物が、胎盤の障害の診断および／ま
たは処置に有用であることを示す。胎盤内での特異的発現は、この遺伝子産物が
、胎盤機能の適切な確立および維持における役割を果たし得ることを示唆する。
あるいは、この遺伝子産物は、胎盤によって産生され得、次いで胚に移送され、
そこで発達中の胚または胎児の発達および／または生存において重大な役割を果
たし得る。胎盤のような血管豊富な組織におけるこの遺伝子産物の発現はまた、
この遺伝子産物が、内皮細胞または循環内においてより一般的に産生され得るこ
とを示唆する。このような場合において、この遺伝子産物は、新脈管形成のよう
な血管機能において、より一般化された役割を果たし得る。この遺伝子産物はま
た、血管系において産生され、そして、例えば造血細胞のような循環内の他の細
胞に効果を有し得る。上記のように、この遺伝子産物は、造血細胞ならびに身体
全体の他の細胞の増殖、生存、活性化、および／または分化の促進に貢献し得る
。さらに、このタンパク質はまた、その栄養補給剤としての使用に加えて、生物
学的活性を決定するために、抗体を惹起するために、組織マーカーとして、同族
のリガンドまたはレセプターを単離するために、それらの相互作用を調節する薬
剤を同定するために使用され得る。タンパク質ならびにこのタンパク質に対して
指向される抗体は、上記に列挙された組織の腫瘍マーカーおよび／または免疫療
法の標的としての有用性を示し得る。本発明の転位酵素（ｔｒａｎｓｌｏｃａｓ
ｅ）タンパク質の発現または活性のためのアンタゴニストまたはアゴニストとし
て作用するその能力について、化合物（すなわち、抗体、小分子）をスクリーニ
ングするための方法が特に好ましい。

【０１２９】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１７に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号１７の１〜２８６２の任意の整数であり、ｂは１５〜２８
７６の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１７に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。

【０１３０】 （遺伝子番号１７によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、カルニチン／アシルカルニチン転位酵素タンパク質
を含むが、これらに限定されないヒトミトコンドリアキャリアタンパク質ファミ
リー（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ｇｉ｜２７６５０７５｜ｅｍｂ｜ＣＡＡ
７１３６７．１｜（これらの登録を通して入手可能な全ての参考文献は、本明細
書中に参考として援用される）を参照のこと）、およびヒトアデノシンヌクレオ
チドトランスロケーター４（例えば、ＧｅｎｅＳｅｑ登録番号Ｗ９９６５４（こ
れらの登録を通して入手可能な全ての参考文献は、本明細書中に参考として援用
される）を参照のこと）と配列の相同性を共有する。開示されたｃＤＮＡをコー
ドする遺伝子は、第１４染色体に存在すると考えられる。従って、本発明に関連
するポリヌクレオチドは、第１４染色体についての連鎖解析におけるマーカーと
して有用である。特定の実施形態において、本発明のポリペプチドは、以下のア
ミノ酸配列を含むか、あるいはこれらからなる：

【０１３１】

【化６】 これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる
。ミトコンドリアエネルギー輸送タンパク質（ＭＥＴＰ）ドメインが、好ましい
ドメインとして本発明に含まれ、これはＰｒｏＳｉｔｅ分析ツールを使用して同
定された。構造的に、ミトコンドリアエネルギー輸送タンパク質のファミリーの
メンバーは、約１００残基のドメインの３つの直列の反復からなる。これらのド
メインの各々は、２つの膜貫通領域を含む。サインパターンとして、本発明者ら
は、第１の膜貫通領域のすぐ後に位置する、反復ドメインの最も保存性の領域の
１つを選択した。タンパク質のこの広範なファミリーを検出するために、第１の
膜貫通領域のすぐ後に位置する反復ドメインにおける、最も保存性の領域を含む
コンセンサス（ｃｏｎｃｅｎｓｕｓ）配列が開発された。コンセンサスパターン
は以下のようである：Ｐ−ｘ−［ＤＥ］−ｘ−［ＬＩＶＡＴ］−［ＲＫ］−ｘ−
［ＬＲＨ］−［ＬＩＶＭＦＹ］−［ＱＧＡＩＶＭ］。本発明の好ましいポリペプ
チドは、以下のアミノ酸配列を含む：ＰＭＥＬＡＫＴＲＬＱ（配列番号６５）お
よび／またはＰＶＤＶＶＫＳＲＬＱ（配列番号６６）。これらのポリペプチドを
コードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。配列番号６５および／
または６６のＭＥＴＰドメイン、ならびに配列番号３６の少なくとも５、１０、
１５、２０、２５、３０、５０または７５個のさらなる連続したアミノ酸残基を
含むポリペプチドが、さらに好ましい。このさらなる連続したアミノ酸残基は、
ＭＥＴＰドメインに対してＮ末端またはＣ末端であり得る。あるいは、このさら
なる連続したアミノ酸残基は、ＭＥＴＰドメインに対してＮ末端およびＣ末端の
両方であり得、ここでＮ末端およびＣ末端の合計の連続したアミノ酸残基は、特
定数に等しい。上記の好ましいポリペプチドドメインは、ミトコンドリアのエネ
ルギー輸送タンパク質に特有のサインの特徴である。

【０１３２】 この遺伝子は、主に卵巣腫瘍および嗅上皮において発現する。

【０１３３】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに嗅覚系または雌性
の生殖系の障害を含むが、これらに限定されない疾患および状態の診断のための
試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対
する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に
有用である。上記組織または細胞、特に嗅覚系または雌性の生殖系の多くの障害
に関して、標準的な遺伝子発現レベル、すなわち、障害を有さない個体からの健
常組織または体液中の発現レベルに対して有意により高いまたはより低いレベル
のこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された、特定の組
織もしくは細胞型（例えば、嗅覚組織、卵巣組織、癌性組織および創傷組織）ま
たは体液（例えば、痰、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄液）または別の
組織もしくはサンプル中で慣用的に検出され得る。

【０１３４】 本発明の好ましいポリペプチドは、配列番号３６において、残基：Ｇｌｙ−６
０〜Ｓｅｒ−６８、Ｇｌｙ−１５８〜Ｇｌｙ−１６４、Ｓｅｒ−１７２〜Ｇｌｙ
−１７７、Ａｒｇ−２１１〜Ｇｌｕ−２１８として示される免疫原性エピトープ
を含むか、あるいはこれらからなる。上記のポリペプチドをコードするポリヌク
レオチドもまた、本発明に含まれる。

【０１３５】 卵巣腫瘍における組織分布およびミトコンドリアキャリアタンパク質に対する
相同性は、このクローンのタンパク質産物が、卵巣癌のような雌性の生殖系の障
害の検出、処置および／または予防において、ならびに、例えば代謝活性、肥満
、悪液質、もしくは熱発生における障害のようなアンカップリングタンパク質の
異常な活性に関連する疾患および／または障害の検出および／または処置のため
に有用であることを示す。この遺伝子の翻訳産物に対する抗体は、例えば、疾患
に寄与するアンカップリングタンパク質の活性を阻害することによる非制限的な
仮説の目的で有用である。さらに、嗅上皮における組織分布は、この遺伝子の翻
訳産物が、種々の嗅覚障害および感覚障害の診断、処置および／または予防にお
ける有用性を示し得ることを示す。さらに、このタンパク質はまた、その栄養補
給剤としての使用に加えて、生物学的活性を決定するために、抗体を惹起するた
めに、組織マーカーとして、同族のリガンドまたはレセプターを単離するために
、それらの相互作用を調節する薬剤を同定するために使用され得る。タンパク質
ならびにこのタンパク質に対して指向される抗体は、上記に列挙された組織の腫
瘍マーカーおよび／または免疫療法の標的としての有用性を示し得る。本発明の
転位酵素タンパク質の発現または活性のためのアンタゴニストまたはアゴニスト
として作用するその能力について、化合物（すなわち、抗体、小分子）をスクリ
ーニングするための方法が特に好ましい。

【０１３６】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１８に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号１８の１〜２１５１の任意の整数であり、ｂは１５〜２１
６５の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１８に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。

【０１３７】 （遺伝子番号１８によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、マウス脱共役タンパク質３と配列相同性を共有する
（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ｇｉ｜３７０２６９３を参照のこと。） この遺伝子は、精巣組織および乳癌組織において発現する。

【０１３８】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに生殖系の疾患およ
び／または障害、ならびに乳癌を含むがそれらに限定されない疾患および状態の
診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリ
ペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プロ
ーブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に生殖系の多くの障害に関し
て、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、この障害を有さない個体由来の健常組
織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いかまたは有意に低いレベルの
この遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織も
しくは細胞型（例えば、精巣組織、胸部組織、癌性組織および創傷組織）または
体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織
もしくはサンプルの中で、慣用的に検出され得る。

【０１３９】 精巣組織および乳癌組織におけるその組織分布、およびマウスＵＣＰ−３タン
パク質に対する相同性は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペ
プチドが、生殖系の疾患および／または障害の診断、検出および／または処置、
乳癌の診断、検出および／または処置、ならびに脱共役タンパク質の異常な活性
に関連する疾患および／または障害（例えば、代謝活性、肥満症、悪液質、また
は熱発生における障害）の検出および／または処置のために有用であることを示
す。例えば、非限定的な仮説により、この遺伝子の翻訳産物に対する抗体は、疾
患に寄与する脱共役タンパク質の活性を阻害することによって有用である。この
組織分布は、このクローンのタンパク質産物が、適切な精巣機能（例えば、内分
泌機能、精巣成熟）に関する状態ならびに癌の処置および診断に有用であること
を示す。従って、この遺伝子産物は、男性不妊および／またはインポテンスの処
置に有用である。この遺伝子産物はまた、結合剤（例えば、男性避妊薬剤として
有用である薬剤（アンタゴニスト））を同定するために設計されたアッセイにお
いて、有用である。同様に、このタンパク質は、精巣癌の処置および／または診
断において有用であると考えられる。精巣はまた、体の他の組織において、特に
低レベルで発現され得る転写産物の活性な遺伝子発現の部位である。従って、こ
の遺伝子産物は、他の特定の組織または器官において発現され得、ここでこの遺
伝子産物は、他のプロセス（例えば、可能な標的指標を少し挙げるなら、造血、
炎症、骨形成、および腎臓機能）において、関連する機能的な役割を果たし得る
。あるいは、乳癌組織における組織分布は、この遺伝子が同種のリガンドによる
レセプターの結合をブロックするアンタゴニスト（特に、低分子または抗体）に
ついてのよい標的であることを示す。従って、この遺伝子の転写産物の一部に特
異的に結合する、抗体およびまたは低分子が好ましい。乳癌を検出するキットも
また提供される。このようなキットは、１つの実施形態において、固体支持体に
結合されたこの遺伝子の翻訳産物に特異的な抗体を含む。個体における乳癌を検
出する方法もまた提供され、この方法は、この遺伝子の翻訳産物に特異的な抗体
を個体由来の体液（好ましくは、血清）と接触させる工程、および抗体がこの体
液に見出される抗原に結合するか否かを確認する工程を包含する。好ましくは、
抗体は固体支持体に結合され、そして体液は血清である。上記の実施形態ならび
に他の処置および診断試験（キットおよび方法）は、本明細書中の他の箇所に、
より詳細に記載される。

【０１４０】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１９に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号１９の１〜１１６４の任意の整数であり、ｂは１５〜１１
７８の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１９に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。

【０１４１】

【表１】 表１は、上記の各「遺伝子番号」に対応する情報を要約する。「ヌクレオチド
配列番号Ｘ」として同定されるヌクレオチド配列は、表１において同定される「
ｃＤＮＡクローンＩＤ」から、およびいくつかの場合において、さらなる関連の
ＤＮＡクローンから得られる、部分的に相同な（「重複する」）配列から構築さ
れた。重複する配列は、高い冗長性の単一の連続した配列に構築され（通常、各
ヌクレオチド位置で３〜５個の重複する配列）、配列番号Ｘとして同定される最
終的な配列を得た。

【０１４２】 ｃＤＮＡクローンＩＤは、その日付に寄託され、そして「ＡＴＣＣ寄託番号Ｚ
および日付」において列挙される対応する寄託番号が与えられた。寄託物のいく
つかは、同じ遺伝子に対応する複数の異なるクローンを含む。「ベクター」は、
ｃＤＮＡクローンＩＤにおいて含まれるベクターの型をいう。

【０１４３】 「総ヌクレオチド配列」は、「遺伝子番号」によって同定されるコンティグに
おけるヌクレオチドの総数をいう。寄託されたプラスミドは、これらの配列の全
てを含み得、この配列は、配列番号Ｘの「クローン配列の５’ヌクレオチド」お
よび「クローン配列の３’ヌクレオチド」として示されるヌクレオチドの位置に
よって反映される。推定メチオニン開始コドンの配列番号Ｘのヌクレオチドの位
置は（存在する場合）、「開始コドンの５’ヌクレオチド」として同定される。
同様に、推定シグナル配列の配列番号Ｘのヌクレオチドの位置は（存在する場合
）、「シグナルペプチドの第一のアミノ酸の５’ヌクレオチド」として同定され
る。

【０１４４】 翻訳されたアミノ酸配列は、ポリヌクレオチド配列の第１翻訳コドンで始まり
、「アミノ酸配列番号Ｙ」として同定されるが、他のリーディングフレームもま
た、公知の分子生物学技術を使用して容易に翻訳され得る。これらの代替的オー
プンリーディングフレームによって産生されるポリペプチドは、本発明によって
具体的に意図される。

【０１４５】 配列番号Ｘ（ここで、Ｘは、配列表に開示されたポリヌクレオチド配列のいず
れかであり得る）および翻訳される配列番号Ｙ（ここで、Ｙは、配列表に開示さ
れたポリペプチド配列のいずれかであり得る）は、十分に正確であり、そしてそ
うでなければ、当該分野において周知でありかつ以下でさらに記載される種々の
使用に適切である。例えば、配列番号Ｘは、配列番号Ｘにおいて含まれる核酸配
列または寄託されたプラスミドに含まれるｃＤＮＡを検出する核酸ハイブリダイ
ゼーションプローブを設計することを含む使用を有するが、これらに限定されな
い。これらのプローブはまた、生物学的サンプル中の核酸分子にハイブリダイズ
し、それによって本発明の種々の法医学の方法、および診断の方法を可能にする
。同様に、配列番号Ｙから同定されるポリぺプチドは、表１において同定された
ｃＤＮＡクローンによりコードされる分泌タンパク質に特異的に結合する抗体を
産生することを含むが、これらに限定されない使用を有する。

【０１４６】 それにもかかわらず、配列決定反応によって生じるＤＮＡ配列は、配列決定の
エラーを含み得る。エラーは、誤って同定されたヌクレオチドとして、または生
じたＤＮＡ配列におけるヌクレオチドの挿入または欠失として存在する。誤って
挿入されたか、または欠失されたヌクレオチドは、推定アミノ酸配列のリーディ
ングフレームにおいてフレームシフトを引き起こす。これらの場合において、生
じたＤＮＡ配列は、実際のＤＮＡ配列と９９．９％（例えば、１０００塩基を超
えるオープンリーディングフレームにおける１塩基の挿入または欠失）を超えて
同一であり得るにもかかわらず、推定アミノ酸配列は、実際のアミノ酸配列とは
異なる。

【０１４７】 従って、ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列における正確さを必要とするこ
れらの適用のために、本発明は、配列番号Ｘとして同定された作製されたヌクレ
オチド配列、および配列番号Ｙとして同定された推定の翻訳されたアミノ酸配列
のみではなく、表１において記載されるような、ＡＴＣＣに寄託された本発明の
ヒトｃＤＮＡを含むプラスミドＤＮＡのサンプルもまた提供する。各々の寄託さ
れたプラスミドのヌクレオチド配列は、公知の方法に従って寄託されたプラスミ
ドの配列決定により容易に決定され得る。

【０１４８】 次いで、推定アミノ酸配列は、このような寄託物から証明され得る。さらに、
特定のプラスミドによりコードされるタンパク質のアミノ酸配列はまた、ペプチ
ド配列決定により、または寄託されたヒトｃＤＮＡを含む適切な宿主細胞中でタ
ンパク質を発現し、このタンパク質を収集し、そしてその配列を決定することに
より、直接的に決定され得る。

【０１４９】 また、ｃＤＮＡプラスミドを含むベクターの名前を表１に提供する。各ベクタ
ーは、当該分野において、慣用的に使用される。以下のさらなる情報は、利便性
のために提供される。

【０１５０】 ベクターＬａｍｂｄａ Ｚａｐ（米国特許第５，１２８，２５６号および同第
５，２８６，６３６号）、Ｕｎｉ−Ｚａｐ ＸＲ（米国特許第５，１２８，２５
６号および同第５，２８６，６３６号）、Ｚａｐ Ｅｘｐｒｅｓｓ（米国特許第
５，１２８，２５６号および同第５，２８６，６３６号）ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐ
ｔ（ｐＢＳ）（Ｓｈｏｒｔ，Ｊ．Ｍ．ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ
． １６：７５８３−７６００（１９８８）；Ａｌｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓ，Ｍ．Ａ
．およびＳｈｏｒｔ，Ｊ．Ｍ．、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １７
：９４９４（１９８９））ならびにｐＢＫ（Ａｌｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓ，Ｍ．Ａ．
ら、Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ５：５８−６１（１９９２））は、Ｓｔｒａｔａｇ
ｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．、１１０１１ Ｎ．Ｔｏｒ
ｒｅｙ Ｐｉｎｅｓ Ｒｏａｄ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ，９２０３７から市販
されている。ｐＢＳは、アンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてｐＢＫはネオマ
イシン耐性遺伝子を含む。ファージミドｐＢＳは、λＺａｐベクターおよびＵｎ
ｉ−Ｚａｐ ＸＲベクターから切り出され得、そしてファージミドｐＢＫは、Ｚ
ａｐ発現ベクターから切り出され得る。両方のファージイミドは、Ｅ．ｃｏｌｉ
株ＸＬ−１ Ｂｌｕｅ（これもまた、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能である
）に形質転換され得る。

【０１５１】 ベクターｐＳｐｏｒｔ１、ｐＣＭＶＳｐｏｒｔ １．０、ｐＣＭＶＳｐｏｒｔ
２．０およびｐＣＭＶＳｐｏｒｔ３．０は、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉ
ｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ ６００９、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ
２０８９７から得られた。全てのＳｐｏｒｔベクターはアンピシリン耐性遺伝
子を含み、そしてＥ．ｃｏｌｉ株ＤＨ１０Ｂ（これもまた、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能である）に形質転換され得る。例えば、Ｇｒｕｂ
ｅｒ，Ｃ．Ｅ．ら、Ｆｏｃｕｓ １５：５９（１９９３）を参照のこと。ベクタ
ーｌａｆｍｉｄ ＢＡ（Ｂｅｎｔｏ Ｓｏａｒｅｓ、Ｃｏｌｕｍｂｉａ Ｕｎｉ
ｖｅｒｓｉｔｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ）は、アンピシリン耐性遺伝子を含み
、そしてＥ．ｃｏｌｉ株ＸＬ−１ Ｂｌｕｅに形質転換され得る。ベクターｐＣ
Ｒ（登録商標）２．１（これはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１６００ Ｆａｒａｄａ
ｙ Ａｖｅｎｕｅ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ ９２００８から入手可能である）
は、アンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏｌｉ株ＤＨ１０Ｂ（Ｌｉｆ
ｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能である）に形質転換され得る。例え
ば、Ｃｌａｒｋ，Ｊ．Ｍ．、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１６：９６７７−９
６８６（１９８８）およびＭｅａｄ，Ｄ．ら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
９：（１９９１）を参照のこと。

【０１５２】 本発明はまた、配列番号Ｘ、配列番号Ｙ、および／または寄託されたプラスミ
ド（ｃＤＮＡプラスミド：Ｚ）に対応する遺伝子に関する。この対応する遺伝子
は、本明細書中に開示される配列情報を使用して、公知の方法に従って単離され
得る。このような方法は、開示された配列からプローブまたはプライマーを調製
する工程、およびゲノム物質の適切な供給源から対応する遺伝子を同定または増
幅する工程を包含するが、これらに限定されない。

【０１５３】 本発明においてまた提供されるものは、対立遺伝子改変体、オルトログ（ｏｒ
ｔｈｏｌｏｇ）、および／または種相同体である。当該分野において公知である
手順は、本明細書中で開示された配列またはＡＴＣＣに寄託されたクローンから
の情報を用いて、配列番号Ｘ、配列番号Ｙ、および／またはｃＤＮＡプラスミド
：Ｚに対応する遺伝子の全長遺伝子、対立遺伝子改変体、スプライス改変体、全
長コード部分、オルトログ、および／または種相同体を得るために使用され得る
。例えば、対立遺伝子改変体および／または種相同体は、本明細書中に提供され
る配列から適切なプローブまたはプライマーを作製し、そして対立遺伝子改変体
および／または所望の相同体について適切な核酸供給源をスクリーニングするこ
とにより単離および同定され得る。

【０１５４】 本発明は、配列番号Ｘの核酸配列および／またはｃＤＮＡプラスミド：Ｚを含
むか、または代替的にこれらからなるポリヌクレオチドを提供する。本発明はま
た、配列番号Ｙのポリペプチド配列、配列番号Ｘによりコードされるポリペプチ
ド、および／またはｃＤＮＡプラスミド：Ｚ中のｃＤＮＡによりコードされるポ
リペプチドを含むか、または代替的にこれらからなるポリペプチドを提供する。
配列番号Ｙのポリペプチド配列、配列番号Ｘによりコードされるポリペプチド、
および／またはｃＤＮＡプラスミド：Ｚ中のｃＤＮＡによりコードされるポリペ
プチドを含むか、または代替的にこれらからなるポリペプチドをコードするポリ
ヌクレオチドはまた、本発明により包含される。本発明はさらに、配列番号Ｘの
核酸配列の相補体、および／またはｃＤＮＡプラスミド：Ｚ中のｃＤＮＡのコー
ド鎖の相補体を含むか、または代替的にこれらからなるポリヌクレオチドを包含
する。

【０１５５】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能であり、そして本発明の着想の
前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリ
ヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙する
ことは、本出願の開示では非常に煩わしい。従って、好ましくは、配列番号Ｘは
、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（ここで、ａは配列番号Ｘの
１と配列番号Ｘの最終ヌクレオチド−１５との間の任意の整数であり、ｂは１５
〜配列番号Ｘの最終ヌクレオチドの整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列
番号Ｘに示されるヌクレオチド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４
以上である）を含む１つ以上のポリヌクレオチドが除外される。

【０１５６】 （全長遺伝子の回収のためのＲＡＣＥプロトコル） 部分的ｃＤＮＡクローンは、Ｆｒｏｈｍａｎ，Ｍ．Ａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８５：８９９８−９００２（１９８８）に記載
されたｃＤＮＡ末端の高速増幅（ＲＡＣＥ）手順を利用することにより全長を作
製し得る。５’末端または３’末端のいずれかが欠失しているｃＤＮＡクローン
は、翻訳の開始コドンまたは終止コドンのそれぞれに伸長する欠失塩基対を含む
ように再構築され得る。いくつかの場合において、ｃＤＮＡは、そのために翻訳
の開始を欠失している。以下に、この本来の５’ＲＡＣＥ手順の改変を簡単に記
載する。ポリＡ＋または全ＲＮＡを、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩ（Ｇｉｂｃ
ｏ／ＢＲＬ）およびｃＤＮＡ配列に特異的なアンチセンスプライマーまたは相補
的プライマーを用いて逆転写する。そのプライマーを、Ｍｉｃｒｏｃｏｎ Ｃｏ
ｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ（Ａｍｉｃｏｎ）を用いて反応から除去する。次いで、第
１鎖ｃＤＮＡを、ｄＡＴＰおよび末端デオキシヌクレオチドトランスフェラーゼ
（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）を用いて、添付する。このように、アンカー配列を産生
し、これは、ＰＣＲ増幅のために必要である。第２鎖をｄＡ−テイル含有ＰＣＲ
緩衝液、ＴａｑＤＮＡポリメラーゼ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｃｅｔｕｓ）
、５’末端で３つの隣接制限部位（ＸｈｏＩ、ＳａｌＩおよびＣｌａＩ）を含む
オリゴｄＴプライマーならびにこれらの制限部位を正しく含むプライマーから合
成する。この２本鎖ｃＤＮＡを同じプライマーならびにネスティッドｃＤＮＡ特
異的アンチセンスプライマーを用いて４０サイクルでＰＣＲ増幅する。このＰＣ
Ｒ産物を、エチジウムブロマイドアガロースゲル上でサイズ分離し、そして欠失
しているタンパク質コードＤＮＡの推定サイズのｃＤＮＡ産物を含むゲルの領域
を取り出す。ｃＤＮＡをＭａｇｉｃ ＰＣＲ Ｐｒｅｐ ｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇ
ａ）を用いてアガロースゲルから精製し、ＸｈｏＩまたはＳａｌＩを用いて制限
消化し、そしてプラスミド（例えば、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫＩＩ（Ｓｔ
ｒａｔａｇｅｎｅ））にＸｈｏＩ部位およびＥｃｏＲＶ部位で連結する。このＤ
ＮＡを細菌に形質転換し、そしてこのプラスミドクローンを配列決定して、正確
なタンパク質コード挿入物を同定する。正確な５’末端を、推定的に同定された
相同体を有するこの配列と部分的ｃＤＮＡクローンを有する重複を比較すること
により確認する。当該分野において公知の同様の方法および／または市販のキッ
トを使用して、増幅し、そして３’末端を回収する。

【０１５７】 いくつかの、品質制御キットが購入のために市販されている。上記のそれらと
同様の試薬および方法は、全長遺伝子を回収をするための５’ ＲＡＣＥおよび
３’ＲＡＣＥの両方について、Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬからキットの形態で供給され
る。第２のキットは、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから入手可能である。このキットは、Ｄ
ｕｍａｓら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９：５２２７−３２（
１９９１）により開発された、関連技術の改変（ＳＬＩＣ（一本鎖ｃＤＮＡへの
、一本鎖の連結））である。手順における主な違いは、ＲＮＡを、逆転写後にア
ルカリ加水分解し、そしてＲＮＡリガーゼを使用して、第１鎖ｃＤＮＡに、制限
部位を含むアンカープライマーを連結することである。これは、過去に配列決定
をするのが困難なポリＴの伸長を生じるｄＡテーリング反応における必要性を除
去する。

【０１５８】 ＲＮＡからの５’ｃＤＮＡまたは３’ｃＤＮＡを産生する代替は、ｃＤＮＡラ
イブラリー二本鎖ＤＮＡを使用することである。非対称性ＰＣＲ増幅アンチセン
スｃＤＮＡ鎖は、アンチセンスｃＤＮＡ特異的プライマーおよびプラスミドアン
カープライマーを用いて合成する。これらのプライマーを除去し、そして対称Ｐ
ＣＲ反応を、ネストしたｃＤＮＡ特異的アンチセンスプライマーおよびプラスミ
ドアンカープライマーを用いて実施する。

【０１５９】 （５’末端配列または３’末端配列を産生し、全長遺伝子を得るための、ＲＮ
Ａリガーゼのプロトコル） 一旦、目的の遺伝子が同定されると、本来のｃＤＮＡプラスミド中には存在し
ないかもしれない遺伝子の５’部分または３’部分の同定のためのいくつかの方
法が利用可能になる。これらの方法は、以下を含むがこれらに限定されない：フ
ィルタープローブ探索、特異的プローブを使用するクローン富化、ならびに５’
ＲＡＣＥおよび３’ＲＡＣＥと類似および同一のプロトコル。全長遺伝子は、
ライブラリー中に存在し得、そして探索によって同定され得るが、一方、５’末
端または３’末端を生成するために有用な方法は、欠けている情報を生成するた
めに、本来のｃＤＮＡからの既存の配列情報を、使用することである。５’ＲＡ
ＣＥに類似する方法は、所望の全長遺伝子の欠けている５’末端を生成するため
に利用可能である（この方法は、Ｆｒｏｍｏｎｔ−Ｒａｃｉｎｅら、Ｎｕｃｌｅ
ｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２１（７）：１６８３−１６８４（１９９３）に
よって発表された）。簡潔には、特定のＲＮＡオリゴヌクレオチドを、全長遺伝
子ＲＮＡ転写物をおそらく含むＲＮＡの集団の５’末端に連結し、そして連結さ
れたＲＮＡオリゴヌクレオチドに特異的なプライマーおよび目的の遺伝子の公知
の配列に特異的なプライマーを含むプライマーセットを使用して、所望の全長遺
伝子の５’部分をＰＣＲ増幅する。次いで、この増幅した産物を配列決定し得、
そしてこれを使用して全長遺伝子を生成し得る。この方法は、所望の供給源から
単離された総ＲＮＡを用いて開始し、この手順における必要条件ではないが、ポ
リＡ ＲＮＡを使用し得る。次いで、ＲＮＡ調製物を、必要ならばホスファター
ゼで処理して、後のＲＮＡリガーゼ工程を妨害し得る分解または損傷ＲＮＡの５
’リン酸基を排除し得る。次いで、使用された場合、ホスファターゼを不活化し
、そしてＲＮＡをメッセンジャーＲＮＡの５’末端に存在するキャップ構造を除
去するために、タバコ酸性ピロホスファターゼを用いて処理する。この反応は、
次いでＴ４ ＲＮＡリガーゼを用いてＲＮＡオリゴヌクレオチドに連結され得る
、キャップ切断ＲＮＡの５’末端に５’リン酸基を残す。次いで、この改変型Ｒ
ＮＡ調製物を、遺伝子特異的なオリゴヌクレオチドを用いる、第一鎖ｃＤＮＡ合
成のためのテンプレートとして使用し得る。次いで、第一鎖合成反応物を、連結
されたＲＮＡオリゴヌクレオチドに特異的なプライマーおよび目的の脱共役の公
知の配列に特異的なプライマーを用いる、所望の５’末端のＰＣＲ増幅のための
テンプレートとして使用し得る。次いで、得られた生成物を配列決定し、そして
分析して５’末端配列が関連する脱共役に属することを確認する。

【０１６０】 （ポリヌクレオチドフラグメントおよびポリペプチドフラグメント） 本発明はまた、本発明のポリヌクレオチド（核酸）の、ポリヌクレオチドフラ
グメントに関する。本発明において、「ポリヌクレオチドフラグメント」とは、
以下である核酸配列を有するポリヌクレオチドをいう：ｃＤＮＡプラスミドＺに
含まれるｃＤＮＡの一部か、もしくはｃＤＮＡプラスミドＺに含まれるｃＤＮＡ
によりコードされるポリペプチドをコードするｃＤＮＡの一部；配列番号Ｘもし
くはその相補鎖におけるポリヌクレオチド配列の一部；配列番号Ｙのポリペプチ
ドの一部をコードするポリヌクレオチド配列；あるいは配列番号Ｘによりコード
されるポリペプチドの一部をコードするポリヌクレオチド配列。本発明のヌクレ
オチドフラグメントは、好ましくは、少なくとも約１５ｎｔ、そしてより好まし
くは少なくとも約２０ｎｔ、さらにより好ましくは少なくとも約３０ｎｔ、そし
てなおより好ましくは少なくとも約４０ｎｔ、少なくとも約５０ｎｔ、少なくと
も約７５ｎｔ、少なくとも約１００ｎｔ、少なくとも約１２５ｎｔ、または少な
くとも約１５０ｎｔの長さである。例えば、「少なくとも約２０ｎｔの長さ」の
フラグメントは、例えばｃＤＮＡプラスミドＺのｃＤＮＡ配列に含まれる配列ま
たは配列番号Ｘに示されるヌクレオチド配列もしくはその相補鎖由来の２０以上
の連続する塩基を含むことが意図される。この文脈において「約（おおよそ）」
は、特に記載された値、あるいはそれより数個（５、４、３、２、または１）の
ヌクレオチドだけ大きいかまたは小さな値を含む。これらのヌクレオチドフラグ
メントは、本明細書中で議論されるように、診断プローブおよびプライマーとし
ての使用を含むが、それらに限定されない使用を有する。もちろん、より大きな
フラグメント（例えば、少なくとも１５０、１７５、２００、２５０、５００、
６００、１０００または２０００のヌクレオチドの長さ）もまた、本発明に含ま
れる。

【０１６１】 さらに、本発明のポリヌクレオチドフラグメントの代表例としては、例えば、
以下の配列番号Ｘ、またはその相補鎖のおおよそのヌクレオチド数の配列を含む
か、あるいは以下からなるフラグメントが挙げられる：１〜５０、５１〜１００
、１０１〜１５０、１５１〜２００、２０１〜２５０、２５１〜３００、３０１
〜３５０、３５１〜４００、４０１〜４５０、４５１〜５００、５０１〜５５０
、５５１〜６００、６５１〜７００、７０１〜７５０、７５１〜８００、８００
〜８５０、８５１〜９００、９０１〜９５０、９５１〜１０００、１００１〜１
０５０、１０５１〜１１００、１１０１〜１１５０、１１５１〜１２００、１２
０１〜１２５０、１２５１〜１３００、１３０１〜１３５０、１３５１〜１４０
０、１４０１〜１４５０、１４５１〜１５００、１５０１〜１５５０、１５５１
〜１６００、１６０１〜１６５０、１６５１〜１７００、１７０１〜１７５０、
１７５１〜１８００、１８０１〜１８５０、１８５１〜１９００、１９０１〜１
９５０、１９５１〜２０００、２００１〜２０５０、２０５１〜２１００、２１
０１〜２１５０、２１５１〜２２００、２２０１〜２２５０、２２５１〜２３０
０、２３０１〜２３５０、２３５１〜２４００、２４０１〜２４５０、２４５１
〜２５００、２５０１〜２５５０、２５５１〜２６００、２６０１〜２６５０、
２６５１〜２７００、２７０１〜２７５０、２７５１〜２８００、２８０１〜２
８５０および／または２８５１〜２８７６。この文脈において、「おおよそ（約
）」は、特に記載された範囲、またはいずれかの末端もしくは両方の末端におい
て、これより数個（５、４、３、２、または１）のヌクレオチドだけ大きいか、
または小さな範囲を含む。好ましくは、これらのフラグメントは、その配列が一
部であるポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドの、機能的活性（例
えば、生物学的活性）を有するポリペプチドをコードする。より好ましくは、こ
れらのフラグメントは、本明細書中、議論されるようにプローブまたはプライマ
ーとして使用され得る。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下また
はより低いストリンジェンシー条件下でこれらのフラグメントの１つ以上にハイ
ブリダイズするポリヌクレオチドもまた本発明に含まれ、これらのポリヌクレオ
チドによりコードされるポリペプチドまたはフラグメントも同様に含まれる。

【０１６２】 さらに、本発明のポリヌクレオチドフラグメントの代表例としては、例えば、
ｃＤＮＡプラスミドＺに含まれるｃＤＮＡヌクレオチド配列、またはその相補鎖
の以下のおおよそのヌクレオチド数の配列を含むか、あるいは以下からなるフラ
グメントが挙げられる：１〜５０、５１〜１００、１０１〜１５０、１５１〜２
００、２０１〜２５０、２５１〜３００、３０１〜３５０、３５１〜４００、４
０１〜４５０、４５１〜５００、５０１〜５５０、５５１〜６００、６５１〜７
００、７０１〜７５０、７５１〜８００、８００〜８５０、８５１〜９００、９
０１〜９５０、９５１〜１０００、１００１〜１０５０、１０５１〜１１００、
１１０１〜１１５０、１１５１〜１２００、１２０１〜１２５０、１２５１〜１
３００、１３０１〜１３５０、１３５１〜１４００、１４０１〜１４５０、１４
５１〜１５００、１５０１〜１５５０、１５５１〜１６００、１６０１〜１６５
０、１６５１〜１７００、１７０１〜１７５０、１７５１〜１８００、１８０１
〜１８５０、１８５１〜１９００、１９０１〜１９５０、１９５１〜２０００、
２００１〜２０５０、２０５１〜２１００、２１０１〜２１５０、２１５１〜２
２００、２２０１〜２２５０、２２５１〜２３００、２３０１〜２３５０、２３
５１〜２４００、２４０１〜２４５０、２４５１〜２５００、２５０１〜２５５
０、２５５１〜２６００、２６０１〜２６５０、２６５１〜２７００、２７０１
〜２７５０、２７５１〜２８００、２８０１〜２８５０および／または２８５１
〜２８７６。この文脈において、「おおよそ（約）」は、特に記載された範囲、
あるいはいずれかの末端もしくは両方の末端において、これより数個（５、４、
３、２、または１）のヌクレオチドだけ大きいか、または小さな範囲を含む。好
ましくは、これらのフラグメントは、ｃＤＮＡプラスミドＺに含まれるｃＤＮＡ
ヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドの機能的活性（例えば、生
物学的活性）を有するポリペプチドをコードする。より好ましくは、これらのフ
ラグメントは、本明細書中で議論されるように、プローブまたはプライマーとし
て使用され得る。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下またはより
低いストリンジェンシー条件下で１つ以上のこれらのフラグメントにハイブリダ
イズするポリヌクレオチドもまた本発明に含まれ、これらのポリヌクレオチドま
たはフラグメントによりコードされるポリペプチドもまた、含まれる。

【０１６３】 本発明において、「ポリペプチドフラグメント」とは、配列番号Ｙに含まれる
アミノ酸配列の一部、配列番号Ｘのポリヌクレオチド配列によってコードされる
アミノ酸配列の一部、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺ中のｃＤＮＡによっ
てコードされるアミノ酸配列の一部であるアミノ酸配列をいう。タンパク質（ポ
リペプチド）フラグメントは、「自立構造（ｆｒｅｅ−ｓｔａｎｄｉｎｇ）」で
あり得るか、あるいはより大きなポリぺプチド（このフラグメントが、部分また
は領域（最も好ましくは単一の連続した領域として）を形成する）内に含まれ得
る。本発明のポリペプチドフラグメントの代表例としては、例えば、以下の配列
番号Ｙのコード領域の、以下のおおよそのアミノ酸数のアミノ酸配列を含むか、
あるいは以下のおおよそのアミノ酸数のアミノ酸配列からなるフラグメントが挙
げられる：１〜２０、２１〜４０、４１〜６０、６１〜８０、８１〜１００、１
０２〜１２０、１２１〜１４０、１４１〜１６０、１６１〜１８０、１８１〜２
００、２０１〜２２０、２２１〜２４０、２４１〜２６０、２６１〜２８０、２
８１〜３００、３０１〜３２０、３２１〜３４０および／または３４１〜３５１
。さらに、本発明のポリペプチドフラグメントは、少なくとも約１０、１５、２
０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８
０、８５、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、または１５０のア
ミノ酸の長さであり得る。この文脈において、「約（おおよそ）」とは、特に記
載された範囲または値、あるいはいずれかの末端もしくは両方の末端において、
これより数個（５、４、３、２、または１）のアミノ酸だけ大きいかまたは小さ
な、範囲または値を含む。これらのポリペプチドフラグメントをコードするポリ
ヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。

【０１６４】 タンパク質のＮ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失が、タンパク質の１つ以
上の生物学的機能の損失の改変を生じるとしても、他の機能的活性（例えば、生
物学的活性、多量体化する能力、リガンドに結合する能力）は、なお保持され得
る。例えば、ポリペプチドの完全な形態または成熟形態を認識する抗体を誘導す
るおよび／またはその抗体に結合する、短縮型ムテインの能力は、完全なポリペ
プチド、または成熟ポリペプチドの大部分より少ない残基が、Ｎ末端から除去さ
れる場合には、一般的に保持される。完全なポリペプチドのＮ末端残基を欠く特
定のポリペプチドが、このような免疫学的活性を保持するかどうかは、本明細書
中に記載される慣用的な方法、および当該分野において公知の別の方法によって
容易に決定され得る。多数の欠失したＮ末端アミノ酸残基を有するムテインは、
いくつかの生物学的活性または免疫原性活性を保持し得るようである。実際に、
６つ程度に少ないアミノ酸残基からなるペプチドは、しばしば免疫応答を惹起し
得る。

【０１６５】 従って、本発明のポリペプチドフラグメントとしては、分泌タンパク質ならび
に成熟形態が挙げられる。さらに好ましいポリペプチドフラグメントとしては、
アミノ末端もしくはカルボキシ末端またはその両方から、連続した一連の欠失し
た残基を有する分泌タンパク質、もしくは成熟形態が挙げられる。例えば、任意
の数のアミノ酸（１〜６０の範囲）は、分泌ポリペプチドもしくは成熟形態のい
ずれかのアミノ末端から欠失され得る。同様に、任意の数のアミノ酸（１〜３０
の範囲）が、分泌タンパク質もしくは成熟形態のカルボキシ末端から欠失され得
る。さらに、上記のアミノ末端およびカルボキシ末端の欠失の任意の組み合わせ
は好ましい。同様に、これらのポリペプチドフラグメントをコードするポリヌク
レオチドもまた好ましい。

【０１６６】 本発明は、本明細書中で開示されるポリペプチド（例えば、配列番号Ｙのポリ
ペプチド、配列番号Ｘに含まれるポリヌクレオチド配列によりコードされるポリ
ペプチド、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺに含まれるｃＤＮＡによりコー
ドされるポリペプチド）のアミノ酸配列のアミノ末端から、欠失した１つ以上の
残基を有するポリペプチドを、さらに提供する。特に、Ｎ末端の欠失は、一般式
ｍ−ｑによって記載され得、ここでｑは、本発明のポリペプチド（例えば、配列
番号Ｙに開示されるポリペプチド）におけるアミノ酸残基の総数を表す全整数で
あり、そしてｍは、２〜ｑ−６の範囲の任意の整数として定義される。これらの
ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。

【０１６７】 また、上記のように、タンパク質のＣ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失が
、このタンパク質の１つ以上の生物学的機能の損失の改変を生じる場合でさえ、
他の機能的活性（例えば、生物学的活性、多量体化する能力、リガンドに結合す
る能力）は、なお保持され得る。例えば、ポリペプチドの完全な形態または成熟
形態を認識する抗体を誘導するおよび／またはこの抗体に結合する、短縮型ムテ
インの能力は、完全なポリペプチド、または成熟ポリペプチドの大部分より少な
い残基が、Ｃ末端から除去される場合には、一般的に保持される。完全なポリペ
プチドのＣ末端残基を欠く特定のポリペプチドが、このような免疫学的活性を保
持するか否かは、本明細書中に記載される慣用的な方法、および当該分野におい
て公知の他の方法によって容易に決定され得る。多数の欠失したＣ末端アミノ酸
残基を有するムテインは、いくつかの生物学的活性または免疫原性活性を保持し
得るようである。実際に、６つ程度に少ないアミノ酸残基からなるペプチドは、
しばしば免疫応答を惹起し得る。

【０１６８】 従って、本発明は、本明細書中で開示されるポリペプチド（例えば、配列番号
Ｙのポリペプチド、配列番号Ｘに含まれるポリヌクレオチド配列によりコードさ
れるポリペプチド、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺに含まれるｃＤＮＡに
よりコードされるポリペプチド）のアミノ酸配列のカルボキシ末端由来の、１つ
以上の残基を有するポリペプチドを、さらに提供する。特に、Ｃ末端の欠失は、
一般式１−ｎによって記載され得、ここでｎは、６〜ｑ−１の範囲の任意の全整
数であり、そしてここでｎは、本発明のポリペプチドにおけるアミノ酸残基の位
置に対応する。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本
発明により含まれる。

【０１６９】 さらに、上記のＮ末端またはＣ末端の欠失のいずれかを組み合わせて、Ｎ末端
およびＣ末端欠失型ポリペプチドを産生し得る。本発明はまた、アミノ末端およ
びカルボキシ末端の両方から欠失した１つ以上のアミノ酸を有するポリペプチド
を提供し、このポリペプチドは、一般的に、配列番号Ｘ（例えば、配列番号Ｙと
して開示される好ましいポリペプチドを含むが、これらに限定されない）および
／またはｃＤＮＡプラスミドＺ中のｃＤＮＡ、ならびに／あるいはそれらの相補
鎖によってコードされるポリペプチドの、残基ｍ−ｎを有するとして記載され得
、ここでｎおよびｍは、上記のような整数である。これらのポリペプチドをコー
ドするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。

【０１７０】 配列番号Ｙのポリペプチドに含まれる任意のポリペプチド配列、配列番号Ｘと
して記載されるポリヌクレオチド配列によってコードされる任意のポリペプチド
配列、またはｃＤＮＡプラスミドＺ中のｃＤＮＡによってコードされる任意のポ
リペプチド配列は、そのポリペプチドの特定の好ましい領域を決定するために、
分析され得る。例えば、配列番号ＸまたはｃＤＮＡプラスミドＺ中のｃＤＮＡの
ポリヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドのアミノ酸配列は、Ｄ
ＮＡＳＴＡＲコンピュータアルゴリズム（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ．，１２２８
Ｓ．Ｐａｒｋ Ｓｔ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ ５３７１５ ＵＳＡ；ｈｔｔ
ｐ：／／ｗｗｗ．ｄｎａｓｔａｒ．ｃｏｍ／）のデフォルトパラメーターを使用
して、分析され得る。

【０１７１】 ＤＮＡＳＴＡＲコンピューターアルゴリズムを使用して慣用的に得られ得るポ
リペプチドの領域としては、以下が挙げられるが、それらに限定されない：Ｇａ
ｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎのα−領域、β−領域、ターン領域、およびコイル領
域、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎのα−領域、β−領域、およびターン領域、Ｋｙｔ
ｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅの親水性領域および疎水性領域、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇの
α−両親媒性領域およびβ−両親媒性領域、Ｋａｒｐｌｕｓ−Ｓｃｈｕｌｚの可
撓性領域、Ｅｍｉｎｉの表面形成領域ならびに高い抗原性指標のＪａｍｅｓｏｎ
−Ｗｏｌｆの領域。この点で、本発明の非常に好ましいポリヌクレオチドの中に
、いくつかの構造的特徴（例えば、上記の特徴のいくつか（例えば、１、２、３
または４））と組み合わされる領域を含むポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチドがある。

【０１７２】 さらに、Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ親水性領域および疎水性領域、Ｅｍｉ
ｎｉ表面形成領域、ならびに高い抗原性指標のＪａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ領域（
すなわち、Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆプログラムのデフォルトパラメターを使用
して同定されるような、１．５以上の抗原性指標を有する、４つ以上の連続する
アミノ酸を含む）を慣用的に使用して、抗原性に対する高い程度の可能性を示す
ポリペプチドの領域を決定し得る。高い抗原性の領域は、免疫応答の開始プロセ
スにおいて、抗原認識が生じ得る環境中のポリペプチドの表面上に曝されるよう
であるポリペプチドの領域を表す値を選択することによって、ＤＮＡＳＴＡＲ分
析によるデータから決定される。

【０１７３】 本発明の好ましいポリペプチドフラグメントは、そのアミノ酸配列がフラグメ
ントであるポリペプチド配列の、機能的活性（例えば、生物学的活性）を示すア
ミノ酸配列を含むか、またはあるいは、これらからなるフラグメントである。「
機能的活性」を示すポリペプチドとは、全長タンパク質と関連した１つ以上の公
知の機能的活性（例えば、前述のような、生物学的活性、抗原性、免疫原性、お
よび／または多量体化のような）を示し得るポリペプチドを意味する。

【０１７４】 他の好ましいポリペプチドフラグメントは、生物学的に活性なフラグメントで
ある。生物学的に活性なフラグメントとは、本発明のポリペプチドの活性に対し
て、類似する活性を示すフラグメントであるが、同一である必要はない。このフ
ラグメントの生物学的活性は、改善された所望の活性、または低下した望ましく
ない活性を含み得る。

【０１７５】 好ましい実施形態において、本発明のポリペプチドは、配列番号Ｙのポリペプ
チドの１、２、３、４、５またはそれ以上の抗原性フラグメントか、またはその
部分を含むか、またはあるいはそれらからなる。これらのポリペプチドをコード
するポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。

【０１７６】 本発明は、配列番号Ｙに示されるポリペプチド配列のエピトープ、またはｃＤ
ＮＡプラスミドＺ中のｃＤＮＡによりコードされるポリペプチド配列のエピトー
プ、あるいは前述で定義されるように、ストリンジェントなハイブリダイゼーシ
ョン条件下またはより低いストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件下
で、配列番号Ｘのエピトープコード配列またはｃＤＮＡプラスミドＺに含まれる
エピトープコード配列の相補鎖にハイブリダイズする、ポリヌクレオチドによっ
てコードされるポリペプチド配列のエピトープを含むか、またはあるいは、それ
らからなる、ポリペプチドを含む。本発明はさらに、本発明のポリペプチド配列
のエピトープをコードするポリヌクレオチド配列（例えば、配列番号Ｘに開示さ
れる配列のような）、本発明のエピトープをコードするポリヌクレオチド配列の
相補鎖のポリヌクレオチド配列、および前記で定義されるように、ストリンジェ
ントなハイブリダイゼーション条件下またはより低いストリンジェンシーハイブ
リダイゼーション条件下で、この相補鎖にハイブリダイズするポリヌクレオチド
配列を含む。

【０１７７】 用語「エピトープ」とは、本明細書中で使用される場合、動物において、好ま
しくは哺乳動物において、そして最も好ましくはヒトにおいて抗原性活性または
免疫原性活性を有するポリペプチドの部分をいう。好ましい実施形態において、
本発明は、エピトープを含むポリペプチド、ならびにこのポリペプチドをコード
するポリヌクレオチドを含む。「免疫原性エピトープ」とは、本明細書中で使用
される場合、当該分野で公知の任意の方法によって決定されるような（例えば、
下記に記載される抗体を産生するための方法による）、動物における抗体応答を
誘発するタンパク質の一部として定義される（例えば、Ｇｅｙｓｅｎら、Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：３９９８−４００２（１９８
３）を参照のこと）。用語「抗原性エピトープ」とは、本明細書中で使用される
場合、当該分野で周知の任意の方法（例えば、本明細書中に記載される免疫アッ
セイによる）によって決定されるような、抗体がその抗原に免疫特異的に結合し
得るタンパク質の一部として定義される。免疫特異的結合は、非特異的結合は除
外するが、他の抗原との交差反応性を除外する必要はない。抗原性エピトープは
、免疫原性である必要はない。

【０１７８】 エピトープとして機能するフラグメントは、任意の従来の方法によって産生さ
れ得る。（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ，Ｒ．Ａ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：５１３１−５１３５（１９８５）を参照のこと。こ
れはさらに、米国特許第４，６３１，２１１号に記載される）。

【０１７９】 本発明においては、抗原性エピトープは、好ましくは、少なくとも４、少なく
とも５、少なくとも６、少なくとも７アミノ酸配列を含み、より好ましくは、少
なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２
、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも２０、少なく
とも２５、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０アミノ酸配列を含
み、そして最も好ましくは約１５アミノ酸と約３０アミノ酸との間の配列を含む
。免疫原性エピトープまたは抗原性エピトープを含有する好ましいポリペプチド
は、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５
、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または１００アミノ酸残基
の長さである。さらなる非排他的に好ましい抗原性エピトープは、本明細書中で
開示される抗原性エピトープならびにその一部を含む。抗原性エピトープは、例
えばエピトープに特異的に結合する抗体（モノクローナル抗体を含む）を惹起す
るため有用である。好ましい抗原性エピトープは、本明細書中で開示される抗原
性エピトープ、ならびに２、３、４、５またはそれ以上のこれらの抗原性エピト
ープの任意の組合わせを含む。抗原性エピトープは、イムノアッセイにおいて、
標的分子として使用され得る。（例えば、Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ ３７：７
６７−７７８（１９８４）；Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２１９：
６６０−６６６（１９８３）を参照のこと）。

【０１８０】 同様に、例えば、当該分野で周知の方法に従って抗体を誘導するために、免疫
原性エピトープを使用し得る。（例えば、Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら、前出；Ｗｉｌ
ｓｏｎら，前出；Ｃｈｏｗら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
８２：９１０−９１４；およびＢｉｔｔｌｅら、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．６
６：２３４７−２３５４（１９８５）を参照のこと）。好ましい免疫原性エピト
ープは、本明細書で開示される免疫原性エピトープならびに２、３、４、５また
はそれ以上のこれらの免疫原性エピトープの任意の組合せを含む。１つ以上の免
疫原性エピトープを含むポリペプチドは、キャリアタンパク質（アルブミンのよ
うな）とともに動物系（ウサギまたはマウスのような）に対する抗体応答を誘発
するために提示され得、あるいはこのポリペプチドが十分に長い場合（少なくと
も約２５アミノ酸）、そのポリペプチドはキャリアなしで提示され得る。しかし
、８〜１０個程度の少なさのアミノ酸を含む免疫原性エピトープは、少なくとも
変性ポリペプチド中の直鎖状エピトープに結合し得る抗体を惹起するには十分で
あることが示されている（例えば、ウェスタンブロッティングにおいて）。

【０１８１】 本発明のエピトープ保有ポリペプチドは、当該分野で周知の方法に従って抗体
を誘導するために使用され得、その方法としては、インビボ免疫、インビトロ免
疫、およびファージディスプレイ法が挙げられるが、それらに限定されない。例
えば、Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら、前出；Ｗｉｌｓｏｎら、前出、およびＢｉｔｔｌ
ｅら、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．、６６：２３４７−２３５４（１９８５）を参
照のこと。インビボ免疫を使用する場合、遊離ペプチドを用いて動物を免疫化し
得る；しかし、抗ペプチド抗体力価は、高分子キャリア（キーホールリンペット
ヘモシアニン（ＫＬＨ）または破傷風トキソイドのような）にペプチドを結合さ
せることによりブーストされ得る。例えば、システイン残基を含むペプチドは、
マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）のよ
うなリンカーを用いてキャリアに結合され得、その一方で、他のペプチドは、よ
り一般的な結合剤（グルタルアルデヒドのような）を用いてキャリアに結合され
得る。ウサギ、ラット、およびマウスのような動物は、遊離のペプチドまたはキ
ャリア結合ペプチドのいずれかを用いて、例えば、約１００μｇのペプチドまた
はキャリアタンパク質およびフロイントアジュバントまたは免疫応答を刺激する
ことが公知である任意の他のアジュバントを含むエマルジョンを腹腔内注射およ
び／または皮内注射することにより免疫される。例えば、抗ペプチド抗体の有用
な力価を提供するために、約２週間の間隔で、数回のブースター注射が必要とさ
れ得、この抗体は、例えば、固体表面に吸着した遊離のペプチドを用いるＥＬＩ
ＳＡアッセイにより検出され得る。免疫した動物由来の血清中の抗ペプチド抗体
の力価は、抗ペプチド抗体の選択（例えば、当該分野で周知の方法に従う、固体
支持体上のペプチドへの吸着および選択された抗体の溶出による）により上昇し
得る。

【０１８２】 当業者が理解するように、そして上記で議論されるように、免疫原性エピトー
プおよび／またはそれらの抗原性エピトープフラグメントは、他のポリペプチド
配列に融合され得る。例えば、本発明のポリペプチドは、免疫グロブリン（Ｉｇ
Ａ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ）の定常ドメインまたはそれらの部分（ＣＨ１、Ｃ
Ｈ２、ＣＨ３、またはそれらの任意の組み合わせおよびそれらの部分）と融合さ
れ得、これがキメラポリペプチドを生じる。このような融合タンパク質は、精製
を容易にし得、そしてインビボにおいて半減期を増加し得る。これは、例えば、
ヒトＣＤ４ポリペプチドの最初の２つのドメインおよび哺乳動物の免疫グロブリ
ンの重鎖または軽鎖の定常領域の種々のドメインからなるキメラタンパク質につ
いて示された。例えば、ＥＰ３９４，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔ
ｕｒｅ，３３１：８４〜８６（１９８８）を参照のこと。免疫系に対して上皮障
害を横切る抗原の増強された送達は、ＩｇＧまたはＦｃフラグメントのようなＦ
ｃＲｃ結合パートナーへ結合された抗原（例えば、インシュリン）について実証
された（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／２２０２４および同ＷＯ９９／０４８１
３を参照のこと）。ＩｇＧ部分のジスルフィド結合に起因するジスルフィド結合
二量体構造を有するＩｇＧ融合タンパク質はまた、単量体ポリペプチドまたはそ
れらのフラグメント単独よりも、他の分子の結合および中和においてより効果的
であることが見出された。例えば、Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら，Ｊ．Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．，２７０：３９５８−３９６４（１９９５）を参照のこと。

【０１８３】 同様に、ＥＰ−Ａ−Ｏ ４６４ ５３３（カナダ国対応特許第２０４５８６９
号）は、別のヒトタンパク質またはその部分とともに免疫グロブリン分子の定常
領域の種々の部分を含む融合タンパク質を開示する。多くの場合、融合タンパク
質のＦｃ部分は、治療および診断において有益であり、従って、例えば、改良さ
れた薬物動態学的な特性を生じ得る（ＥＰ−Ａ ０２３２ ２６２）。あるいは
、融合タンパク質が発現され、検出され、そして精製された後に、Ｆｃ部分を欠
失することが望ましい。例えば、融合タンパク質が免疫化のための抗原として使
用される場合、Ｆｃ部分は、治療および診断を妨害し得る。例えば、薬物の発見
において、ｈＩＬ−５のようなヒトタンパク質は、ｈＩＬ−５のアンタゴニスト
を同定するための高処理能力スクリーニングアッセイの目的のためにＦｃ部分と
融合されてきた（Ｄ．Ｂｅｎｎｅｔｔら、Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｃｏｇ
ｎｉｔｉｏｎ ８：５２−５８（１９９５）；Ｋ．Ｊｏｈａｎｓｏｎら、Ｊ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：９４５９−９４７１（１９９５）を参照のこと）。

【０１８４】 さらに、本発明のポリペプチドは、マーカー配列（例えば、融合されたポリペ
プチドの精製を容易にするペプチド）に融合され得る。好ましい実施形態におい
て、マーカーアミノ酸配列は、とりわけヘキサ−ヒスチジンペプチド（例えば、
ｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，９２５９ Ｅｔｏｎ Ａｖｅｎｕｅ
，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ，９１３１１）において提供されるタグ）であり
、これらの多くのマーカーアミノ酸配列が市販されている。例えば、Ｇｅｎｔｚ
ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８２１−８２４（
１９８９）に記載されるように、ヘキサ−ヒスチジンは、融合タンパク質の都合
の良い精製を提供する。精製のために有用な別のペプチドタグである「ＨＡ」タ
グは、インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質由来のエピトープに対応する（Ｗ
ｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ ３７：７６７（１９８４））。

【０１８５】 従って、これら上記の融合物のいずれかは、本発明のポリヌクレオチドまたは
ポリペプチドを使用して操作され得る。

【０１８６】 上記のエピトープをコードする核酸はまた、エピトープタグ（例えば、赤血球
凝集素（「ＨＡ」）タグまたはフラッグ（ｆｌａｇ）タグ）として目的の遺伝子と
組換えられ、発現されたポリペプチドの検出および精製を補助し得る。例えば、
Ｊａｎｋｎｅｃｈｔらによって記載される系は、ヒト細胞株中で発現される非変
性融合タンパク質の容易な精製を可能にする（Ｊａｎｋｎｅｃｈｔら、Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：８９７２−８９７（１９９１）
）。この系において、目的の遺伝子はワクシニア組換えプラスミドへサブクロー
ン化され、その結果、この遺伝子のオープンリーディングフレームが、６つのヒ
スチジン残基からなるアミノ末端タグへ翻訳時に融合される。このタグは、融合
タンパク質についての基質結合ドメインとしての機能を果たす。組換えワクシニ
アウイルスを用いて感染された細胞からの抽出物は、Ｎｉ２＋ニトリロ酢酸−ア
ガロースカラム上へロードされ、そしてヒスチジンタグ化タンパク質は、イミダ
ゾール含有緩衝液を用いて選択的に溶出され得る。

【０１８７】 本発明のさらなる融合タンパク質は、遺伝子シャッフリング、モチーフシャッ
フリング、エキソンシャッフリング、および／またはコドンシャッフリング（総
称して「ＤＮＡシャッフリング」といわれる）の技術を通じて生成され得る。Ｄ
ＮＡシャッフリングを利用して、本発明のポリペプチドの活性を調節し得、この
方法を使用することにより、改変された活性を有するポリペプチド、ならびにこ
れらのポリペプチドのアゴニストおよびアンタゴニストを生成し得る。一般には
、米国特許第５，６０５，７９３号；同第５，８１１，２３８号；同第５，８３
０，７２１号；同第５，８３４，２５２号；および同第５，８３７，４５８号、
ならびにＰａｔｔｅｎら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．
８：７２４−３３（１９９７）；Ｈａｒａｙａｍａ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅ
ｃｈｎｏｌ．１６（２）：７６−８２（１９９８）；Ｈａｎｓｓｏｎら、Ｊ．Ｍ
ｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７：２６５−７６（１９９９）；ならびにＬｏｒｅｎｚｏ
およびＢｌａｓｃｏ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２４（２）：３０８−１３
（１９９８）（これらの特許および刊行物の各々が本明細書によってその全体が
参考として援用される）を参照のこと。１つの実施形態において、配列番号Ｘに
対応するポリヌクレオチドおよびこれらのポリヌクレオチドによってコードされ
るポリペプチドの改変は、ＤＮＡシャッフリングにより達成され得る。ＤＮＡシ
ャッフリングは、相同組換えまたは部位特異的組換えにより、ポリヌクレオチド
配列において変化を生じるように２つ以上のＤＮＡセグメントをアセンブルする
ことを含む。別の実施形態において、本発明のポリヌクレオチドまたはそのコー
ドされるポリペプチドは、組換え前に、誤りがちの（ｅｒｒｏｒ−ｐｒｏｎｅ）
ＰＣＲ、ランダムヌクレオチド挿入または他の方法による、ランダム変異誘発に
供されることによって改変され得る。別の実施形態において、本発明のポリペプ
チドをコードするポリヌクレオチドの１つ以上の成分、モチーフ、セクション、
部分、ドメイン、フラグメントなどは、１つ以上の異種分子の、１つ以上の成分
、モチーフ、セクション、部分、ドメイン、フラグメントなどと組み換えられ得
る。

【０１８８】 （ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの改変体） 本発明はまた、非カップリング改変体を含む。本発明は、配列番号Ｘもしくは
それらに対する相補鎖および／またはｃＤＮＡプラスミドＺに含まれるｃＤＮＡ
配列に開示されるポリヌクレオチド配列の改変体に関する。

【０１８９】 本発明はまた、配列番号Ｙにおいて開示されるポリペプチド配列、配列番号Ｘ
のポリヌクレオチド配列によりコードされるポリペプチド配列および／またはｃ
ＤＮＡプラスミドＺにおけるｃＤＮＡによりコードされるポリペプチド配列の改
変体を含む。

【０１９０】 「改変体」は、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドとは異なるポリ
ヌクレオチドまたはポリペプチドをいうが、それらの性質は保持する。一般的に
、改変体は、全体にわたり密接に類似し、そして多くの領域において、本発明の
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドに同一である。

【０１９１】 従って、本発明の１つの局面は、以下からなる群から選択されるヌクレオチド
配列を有するポリヌクレオチドを含むか、またはこれらのポリヌクレオチドから
なる、単離された核酸分子を提供する：（ａ）配列表に示され、かつ配列番号Ｘ
またはｃＤＮＡプラスミドＺにおけるｃＤＮＡに記載されるようなアミノ酸配列
を有する、非カップリングポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｂ）
配列表に示され、かつ配列番号ＸまたはｃＤＮＡプラスミドＺにおけるｃＤＮＡ
に記載されるようなアミノ酸配列を有する、成熟非カップリングポリペプチドを
コードするヌクレオチド配列；（ｃ）配列表に示され、そして配列番号Ｘまたは
ｃＤＮＡプラスミドＺにおけるｃＤＮＡに記載されるアミノ酸配列を有する非カ
ップリングポリペプチドの生物学的に活性なフラグメントをコードするヌクレオ
チド配列；（ｄ）配列表に示され、そして配列番号ＸまたはｃＤＮＡプラスミド
ＺにおけるｃＤＮＡに記載されるアミノ酸配列を有する非カップリングポリペプ
チドの抗原性フラグメントをコードするヌクレオチド配列；（ｅ）配列番号Ｘま
たはｃＤＮＡプラスミドＺにおけるｃＤＮＡに含まれるヒトｃＤＮＡプラスミド
によりコードされる完全アミノ酸配列を含む非カップリングポリペプチドをコー
ドするヌクレオチド配列；（ｆ）配列番号ＸまたはｃＤＮＡプラスミドＺにおけ
るｃＤＮＡに含まれるヒトｃＤＮＡプラスミドによりコードされるアミノ酸配列
を有する成熟非カップリングポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｇ
）配列番号ＸまたはｃＤＮＡプラスミドＺにおけるｃＤＮＡに含まれるヒトｃＤ
ＮＡプラスミドによりコードされるアミノ酸配列を有する非カップリングポリペ
プチドの生物学的に活性なフラグメントをコードするヌクレオチド配列；（ｈ）
配列番号ＸまたはｃＤＮＡプラスミドＺにおけるｃＤＮＡに含まれるヒトｃＤＮ
Ａプラスミドによりコードされるアミノ酸配列を有する非カップリングポリペプ
チドの免疫原性フラグメントをコードするヌクレオチド配列；（ｉ）上記の（ａ
）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）または（ｈ）におけるヌ
クレオチド配列のいずれかに相補的なヌクレオチド配列。

【０１９２】 本発明はまた、例えば、上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（
ｆ）、（ｇ）、（ｈ）または（ｉ）のヌクレオチド配列のいずれかに、少なくと
も８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１
００％同一であるヌクレオチド配列を含むか、またはこれらからなる核酸分子に
関する。これらの核酸分子によりコードされるポリペプチドはまた、本発明によ
り含まれる。別の実施形態では、本発明は、ストリンジェントなハイブリダイゼ
ーション条件下で、あるいは低ストリンジェンシー条件下で、上記の（ａ）、（
ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）または（ｉ）における
ポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドを含む、あるいはこれ
らからなる核酸分子を含む。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下
、あるいは低ストリンジェンシー条件下で、これらの核酸分子の相補鎖にハイブ
リダイズするポリヌクレオチドもまた、これらのポリヌクレオチドによりコード
されるポリペプチドと同様に、本発明により含まれる。

【０１９３】 本発明の別の局面は、以下からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有す
るポリヌクレオチドを含むか、あるいはこれらからなる、単離された核酸分子を
提供する：（ａ）配列表において示され、かつ表１に記載されるようなアミノ酸
配列を有する非カップリングポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｂ
）配列表において示され、かつ表１に記載されるようなアミノ酸配列を有する成
熟非カップリングポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｃ）配列表に
おいて示され、かつ表１に記載されるアミノ酸配列を有する非カップリングポリ
ペプチドの生物学的に活性なフラグメントをコードするヌクレオチド配列；（ｄ
）配列表において示され、かつ表１に記載されるアミノ酸配列を有する非カップ
リングポリペプチドの抗原性フラグメントをコードするヌクレオチド配列；（ｅ
）ＡＣＴＴ寄託物に含まれ、かつ表１に記載されるｃＤＮＡプラスミドのヒトｃ
ＤＮＡによりコードされる完全アミノ酸配列を含む非カップリングポリペプチド
をコードするヌクレオチド配列；（ｆ）ＡＣＴＴ寄託物に含まれ、かつ表１に記
載されるｃＤＮＡプラスミドのヒトｃＤＮＡによりコードされるアミノ酸配列を
含む成熟非カップリングポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｇ）Ａ
ＣＴＴ寄託物に含まれ、かつ表１に記載されるｃＤＮＡプラスミドのヒトｃＤＮ
Ａによりコードされるアミノ酸配列を有する非カップリングポリペプチドの生物
学的に活性なフラグメントをコードするヌクレオチド配列；（ｈ）ＡＣＴＴ寄託
物に含まれ、かつ表１に記載されるｃＤＮＡプラスミドのヒトｃＤＮＡによりコ
ードされるアミノ酸配列を有する非カップリングポリペプチドの抗原性フラグメ
ントをコードするヌクレオチド配列；（ｉ）上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（
ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）または（ｈ）におけるヌクレオチド配列のいずれ
かに相補的なヌクレオチド配列。

【０１９４】 本発明はまた、例えば、上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（
ｆ）、（ｇ）、（ｈ）または（ｉ）のヌクレオチド配列のいずれかに、少なくと
も８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１
００％同一であるヌクレオチド配列を含むか、またはこれらからなる核酸分子に
関する。これらの核酸分子によりコードされるポリペプチドはまた、本発明によ
り含まれる。別の実施形態では、本発明は、ストリンジェントなハイブリダイゼ
ーション条件下で、あるいは低ストリンジェンシー条件下で、上記の（ａ）、（
ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）または（ｉ）における
ポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドを含むか、またはこれ
らからなる核酸分子を含む。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下
、または低ストリンジェンシー条件下で、これらの核酸分子の相補鎖にハイブリ
ダイズするポリヌクレオチドもまた、これらのポリヌクレオチドによりコードさ
れるポリペプチドと同様に、本発明により包まれる。

【０１９５】 本発明はまた、例えば、配列番号Ｙに示されるポリペプチド配列、配列番号Ｘ
のヌクレオチド配列によりコードされるポリペプチド配列、ｃＤＮＡプラスミド
ＺのｃＤＮＡによりコードされるポリペプチド配列、および／またはこれらのポ
リペプチドのいずれかのポリペプチドフラグメント（例えば、本明細書中に記載
される、フラグメント）に少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％
、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、あ
るいはこれらからなるポリペプチドに関する。ストリンジェントなハイブリダイ
ゼーション条件下、あるいは低ストリンジェンシー条件下で、これらのポリペプ
チドをコードする核酸分子の相補鎖にハイブリダイズするポリヌクレオチドもま
た、これらのポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドと同様に、本発
明により含まれる。

【０１９６】 本発明の参照ヌクレオチド配列に、例えば、少なくとも９５％「同一」である
ヌクレオチド配列を有する核酸によって、核酸のヌクレオチド配列が、ヌクレオ
チド配列がポリぺプチドをコードする参照ヌクレオチド配列の各１００ヌクレオ
チドあたり５つまでの点変異を含み得ることを除いて、参照配列に対して同一で
あることを意図する。換言すれば、参照ヌクレオチド配列に対して少なくとも９
５％同一のヌクレオチド配列を有する核酸を得るために、参照配列のヌクレオチ
ドの５％までが、欠失され得るか、または別のヌクレオチドで置換され得るか、
または参照配列中の総ヌクレオチドの５％までの多数のヌクレオチドが参照配列
中に挿入され得る。問い合わせ（ｑｕｅｒｙ）配列は、表１に示される配列全体
、ＯＲＦ（オープンリーディングフレーム）、または本明細書中で記載されるよ
うに特定される任意のフラグメントであり得る。

【０１９７】 実際問題として、任意の特定の核酸分子またはポリぺプチドが、本発明のヌク
レオチド配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９
７％、９８％、または９９％同一であるか否かは、公知のコンピュータープログ
ラムを使用して従来的に決定され得る。問い合わせ配列（本発明の配列）と対象
配列との間の最も良好な全体的な適合性（全体的な配列整列ともいわれる）を決
定するための好ましい方法は、Ｂｒｕｔｌａｇら（Ｃｏｍｐ．Ａｐｐ．Ｂｉｏｓ
ｃｉ．６：２３７−２４５（１９９０））のアルゴリズムに基づくＦＡＳＴＤＢ
コンピュータープログラムを使用して決定され得る。配列整列において、問い合
わせ配列および対象配列は、両方ともにＤＮＡ配列である。ＲＮＡ配列は、Ｕか
らＴに変換することによって比較され得る。この全体的な配列整列の結果は、同
一性パーセント（％）で示される。同一性パーセントを算定するためにＤＮＡ配
列のＦＡＳＴＤＢ整列において使用される好ましいパラメーターは：Ｍａｔｒｉ
ｘ＝Ｕｎｉｔａｒｙ、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝４、Ｍｉｓｍａｔｃｈ Ｐｅｎａｌｔｙ
＝１、Ｊｏｉｎｉｎｇ Ｐｅｎａｌｔｙ＝３０、Ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ
Ｇｒｏｕｐ Ｌｅｎｇｔｈ＝０、Ｃｕｔｏｆｆ Ｓｃｏｒｅ＝１、Ｇａｐ Ｐｅ
ｎａｌｔｙ＝５、Ｇａｐ Ｓｉｚｅ Ｐｅｎａｌｔｙ ０．０５、Ｗｉｎｄｏｗ
Ｓｉｚｅ＝５００または対象ヌクレオチド配列の長さ（どちらかより短い方）
である。

【０１９８】 対象配列が、５’または３’欠失のために（内部欠失のためではなく）問い合
わせ配列より短い場合、手動の補正が結果に対してなされなけらばならない。こ
れは、同一性パーセントを計算する場合に、ＦＡＳＴＤＢプログラムが対象配列
の５’および３’切断を考慮しないからである。５’末端または３’末端で切断
される対象配列について、問い合わせ配列に対して、同一性パーセントは、問い
合わせ配列の総塩基のパーセントとして一致／整列されない対象配列の５’およ
び３’である問い合わせ配列の塩基の数を計算することによって補正される。ヌ
クレオチドが一致／整列されるか否かは、ＦＡＳＴＤＢ配列整列の結果によって
決定される。次いで、このパーセントは、同一性パーセントから差し引かれ、特
定のパラメーターを用いて上記のＦＡＳＴＤＢプログラムによって算定され、最
終的な同一性パーセントのスコアに到達する。この補正されたスコアが、本発明
の目的に使用されるものである。ＦＡＳＴＤＢ整列によって示されるように、問
い合わせ配列と一致／整列されない、対象配列の５’および３’塩基の外側の塩
基のみが、同一性パーセントのスコアを手動で調整する目的で算定される。

【０１９９】 例えば、９０塩基の対象配列は、同一性パーセントを決定するために１００塩
基の問い合わせ配列に整列される。欠失は、対象配列の５’末端で生じ、従って
、ＦＡＳＴＤＢ整列は、５’末端の最初の１０塩基で一致／整列を示さない。１
０個の不対合塩基は、配列の１０％（一致していない５’および３’末端での塩
基の数／問い合わせ配列の塩基の総数）を表し、そのため１０％は、ＦＡＳＴＤ
Ｂプログラムによって算定される同一性パーセントのスコアから差し引かれる。
残りの９０塩基が完全に一致する場合は、最終的な同一性パーセントは９０％で
ある。別の例では、９０塩基の対象配列が、１００塩基の問い合わせ配列と比較
される。この場合、欠失は、内部欠失であり、その結果、問い合わせと一致／整
列しない対象配列の５’または３’に塩基が存在しない。この場合、ＦＡＳＴＤ
Ｂによって算定される同一性パーセントは手動で補正されない。再び、問い合わ
せ配列と一致／整列しない対象配列の５’および３’の塩基のみが手動で補正さ
れる。他の手動の補正は、本発明の目的のためにはなされない。

【０２００】 本発明の問い合わせアミノ酸配列に、例えば、少なくとも９５％「同一」であ
るアミノ酸配列を有するポリぺプチドにより、対象ポリペプチドのアミノ酸配列
は、対象ポリぺプチド配列が、問い合わせアミノ酸配列の各１００個のアミノ酸
あたり５つまでのアミノ酸の変更を含み得ることを除いて、問い合わせ配列に同
一であることが意図される。換言すれば、問い合わせアミノ酸配列に少なくとも
９５％同一であるアミノ酸配列を有するポリぺプチドを得るために、対象配列に
おけるアミノ酸残基の５％までが、挿入、欠失、（消えない（ｉｎｄｅｌｓ））
または別のアミノ酸で置換され得る。参照配列のこれらの変化は、参照アミノ酸
配列のアミノ末端もしくはカルボキシ末端位置で生じ得るか、またはそれらの末
端位置の間のどこにでも生じ得、参照配列中の残基間で個々に、または参照配列
内の１つ以上の連続する群においてのいずれかで、散在される。

【０２０１】 実際問題として、任意の特定のポリぺプチドが、例えば、表１に示されるアミ
ノ酸配列もしくはそれらのフラグメントに対して、または配列番号Ｘのヌクレオ
チド配列によりコードされるアミノ酸配列もしくはそれらのフラグメントに対し
て、またはｃＤＮＡプラスミドＺのｃＤＮＡによりコードされるアミノ酸配列に
対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％
、または９９％同一であるか否かは、従来的に、公知のコンピュータープログラ
ムを使用して決定され得る。問い合わせ配列（本発明の配列）と対象配列との間
での最良の全体的な一致（全体的配列整列としても参照される）を決定するため
の好ましい方法は、Ｂｒｕｔｌａｇら（Ｃｏｍｐ．Ａｐｐ．Ｂｉｏｓｃｉ．６：
２３７−２４５（１９９０））のアルゴリズムに基づくＦＡＳＴＤＢコンピュー
タープログラムを使用して決定され得る。配列整列において、問い合わせ配列お
よび対象配列は、両方ともヌクレオチド配列であるかまたは両方ともアミノ酸配
列であるかのいずれかである。上記の全体的配列整列の結果は、同一性パーセン
トで示される。ＦＡＳＴＤＢアミノ酸整列に用いられる好ましいパラメーターは
：Ｍａｔｒｉｘ＝ＰＡＭ ０、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝２、Ｍｉｓｍａｔｃｈ Ｐｅｎ
ａｌｔｙ＝１、Ｊｏｉｎｉｎｇ Ｐｅｎａｌｔｙ＝２０、Ｒａｎｄｏｍｉｚａｔ
ｉｏｎ Ｇｒｏｕｐ Ｌｅｎｇｔｈ＝０、Ｃｕｔｏｆｆ Ｓｃｏｒｅ＝１、Ｗｉ
ｎｄｏｗ Ｓｉｚｅ ＝ 配列の長さ、Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔｙ＝５、Ｇａｐ
Ｓｉｚｅ Ｐｅｎａｌｔｙ ＝ ０．０５、Ｗｉｎｄｏｗ Ｓｉｚｅ＝５００ま
たは対象アミノ酸配列の長さ（どちらかより短い方）である。

【０２０２】 対象配列が、Ｎ末端またはＣ末端欠失により（内部の欠失のためではなく）問
い合わせ配列よりも短い場合、手動の補正が結果に対してなされなけらばならな
い。これは、ＦＡＳＴＤＢプログラムが、全体的な同一性パーセントを算定する
場合に、対象配列のＮ末端切断およびＣ末端切断を考慮しないからである。Ｎ末
端およびＣ末端で短縮されている対象配列について、問い合わせ配列に対して、
同一性パーセントは、問い合わせ配列の総塩基のパーセントとして、対応する対
象残基と一致／整列しない、対象配列のＮ末端およびＣ末端である問い合わせ配
列の残基の数を計算することによって補正される。残基が一致／整列されている
か否かは、ＦＡＳＴＤＢ配列整列の結果によって決定される。次いで、このパー
セントは、同一性パーセントから差し引かれ、上記のＦＡＳＴＤＢプログラムに
よって特定のパラメーターを使用して計算され、最終的な同一性パーセントのス
コアに到達する。この最終的な同一性パーセントのスコアは、本発明の目的で使
用されるものである。問い合わせ配列と一致／整列していない対象配列のＮ末端
およびＣ末端側の残基のみが、同一性パーセントのスコアを手動で調整する目的
のために考慮される。すなわち、問い合わせ残基位置のみが、対象配列の最も遠
いＮ末端およびＣ末端残基の外側に位置する。

【０２０３】 例えば、９０アミノ酸残基の対象配列は、同一性パーセントを決定するために
１００残基の問い合わせ配列に整列される。欠失は、対象配列のＮ末端で生じ、
従って、ＦＡＳＴＤＢ整列は、Ｎ末端の最初の１０残基で一致／整列を示さない
。１０個の不対合残基は、配列の１０％（一致していないＮおよびＣ末端での残
基の数／問い合わせ配列の残基の総数）を表し、そのため１０％は、ＦＡＳＴＤ
Ｂプログラムによって算定される同一性パーセントのスコアから差し引かれる。
残りの９０残基が完全に一致する場合は、最終的な同一性パーセントは９０％で
ある。別の例では、９０残基の対象配列が、１００残基の問い合わせ配列と比較
される。この場合、欠失は、内部欠失であり、その結果、問い合わせと一致／整
列しない対象配列のＮまたはＣに残基が存在しない。この場合、ＦＡＳＴＤＢに
よって算定される同一性パーセントは手動で補正されない。再び、問い合わせ配
列と一致／整列しない対象配列のＮおよびＣ末端の外側の残基部分のみが手動で
補正される。他の手動の補正は、本発明の目的のためにはなされない。

【０２０４】 改変体は、コード領域、非コード領域、またはその両方における変化を含み得
る。特に好ましいものは、サイレントな置換、付加、または欠失を生成するが、
コードされるポリぺプチドの特性または活性を変化させない変化を含むポリヌク
レオチド改変体である。遺伝コードの縮重に起因するサイレントな置換によって
生成されるヌクレオチド改変体が、好ましい。さらに、任意の組合せにおいて、
５０未満、４０未満、３０未満、２０未満、１０未満、または５〜５０、５〜２
５、５〜１０、１〜５、もしくは１〜２アミノ酸が置換、欠失、または付加され
る改変体もまた、好ましい。ポリヌクレオチド改変体は、種々の理由（例えば、
特定の宿主についてのコドン発現を至適化する（ヒトｍＲＮＡにおけるコドンを
、Ｅ．ｃｏｌｉのような細菌宿主によって好ましいコドンに変化させる））のた
めに、生成され得る。

【０２０５】 天然に存在する改変体は、「対立遺伝子改変体」と呼ばれ、そして生物の染色
体上の所定の遺伝子座を占有する遺伝子のいくつかの代替の形態のうちの１つを
いう。（Ｇｅｎｅｓ ＩＩ、Ｌｅｗｉｎ，Ｂ．，編 Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆
Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８５））。これらの対立遺伝子改変体は、
ポリヌクレオチドレベルおよび／またはポリぺプチドレベルのいずれかで変化し
得、そして本発明に含まれる。あるいは、天然に存在しない改変体は、変異誘発
技術によってまたは直接的な合成によって生成され得る。

【０２０６】 タンパク質工学および組換えＤＮＡ技術の公知の方法を使用して、改変体は、
本発明のポリぺプチドの特性を改善または変化させるために作製され得る。例え
ば、本明細書中で議論されるように、１つ以上のアミノ酸は、生物学的機能の実
質的な欠損を伴わずに、本発明のポリペプチドのＮ末端またはＣ末端から欠失さ
れ得る。Ｒｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：２９８４−２９８８（１
９９３）の著者らは、３、８、または２７個のアミノ末端のアミノ酸残基を欠失
させた後でさえもヘパリン結合活性を有する改変体ＫＧＦタンパク質を報告した
。同様に、インターフェロンγは、このタンパク質のカルボキシ末端から８〜１
０個のアミノ酸残基を欠失させた後、１０倍までのより高い活性を示した（Ｄｏ
ｂｅｌｉら、Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７：１９９−２１６（１９８８
））。

【０２０７】 さらに、豊富な証拠は、改変体が、天然に存在するタンパク質の生物学的活性
に類似する活性をしばしば保持することを実証する。例えば、Ｇａｙｌｅおよび
共同研究者ら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２６８：２２１０５−２２１１１（１
９９３））は、ヒトサイトカインＩＬ−１ａの広範囲にわたる変異分析を行った
。彼らは、ランダムな変異誘発を使用して、分子の全長にわたって改変体当たり
平均２．５アミノ酸の変化になる、３，５００個を超える個々のＩＬ−１ａ変異
体を作製した。複数の変異が、全ての潜在的なアミノ酸の位置で試験された。こ
の研究者らは、「分子の大部分は、［結合活性または生物学的活性］のいずれに
対してもほとんど影響を伴わないで変化され得る」ことを見出した。（要約を参
照のこと）。実際、試験された３，５００個を超えるヌクレオチド配列のうち、
わずか２３個の独特なアミノ酸配列が、野生型と活性が有意に異なるタンパク質
を生成した。

【０２０８】 さらに、本明細書中で議論されるように、ポリぺプチドのＮ末端またはＣ末端
からの１つ以上のアミノ酸の欠失が、１つ以上の生物学的機能の改変または欠失
を生じたとしても、他の生物学的活性はなお保持され得る。例えば、分泌される
形態を認識する抗体を誘導および／または結合する、欠失改変体の能力は、分泌
される形態の大多数より少ない残基が、Ｎ末端またはＣ末端から除去される場合
に保持されるようである。タンパク質のＮ末端またはＣ末端残基を欠損する特定
のポリぺプチドが、このような免疫原性活性を保持するか否かは、本明細書中に
記載される慣用的な方法、およびそうでなければ当該分野において公知の慣用的
な方法によって容易に決定され得る。

【０２０９】 従って、本発明はさらに、本発明のポリペプチドの機能的活性（例えば、生物
学的活性）を示すポリぺプチド改変体を含み、これらは、本発明のポリペプチド
の改変体である。このような改変体としては、活性に対する影響をほとんど有さ
ないように、当該分野において公知の一般的な法則に従って選択される、欠失、
挿入、逆位、反復、および置換が挙げられる。

【０２１０】 本出願は、本明細書中に開示される核酸配列（例えば、Ｎ末端および／または
Ｃ末端の欠失を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする）に対し
て、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９
９％または１００％同一な核酸分子に関し、これらが機能的活性を有するポリぺ
プチドをコードするか否かに拘らない。これはなぜなら、特定の核酸分子が機能
的活性を有するポリぺプチドをコードしない場合でさえ、当業者は、核酸分子を
、例えば、ハイブリダイゼーションプローブまたはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣ
Ｒ）プライマーとしてどのように使用するかを理解するからである。機能的活性
を有するポリぺプチドをコードしない本発明の核酸分子の使用としては、とりわ
け、以下が挙げられる：（１）ｃＤＮＡライブラリー中の遺伝子またはその対立
遺伝子改変体あるいはそのスプライス改変体の単離；（２）遺伝子の正確な染色
体位置を提供するための、分裂中期染色体スプレッドへのインサイチュハイブリ
ダイゼーション（例えば、「ＦＩＳＨ」）（Ｖｅｒｍａら，Ｈｕｍａｎ Ｃｈｒ
ｏｍｏｓｏｍｅｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ
ｓ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８）に記載され
る）；および（３）特定の組織におけるｍＲＮＡ発現を検出するためのノーザン
ブロット分析。

【０２１１】 しかし、本明細書中で開示される核酸配列に対して、少なくとも８０％、８５
％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であ
る配列を有する核酸分子が好ましく、これらは事実、本発明のポリペプチドの機
能的活性を有するポリぺプチドをコードする。

【０２１２】 当然のことながら、遺伝コードの縮重に起因して、当業者は、例えば、ｃＤＮ
Ａプラスミド：Ｚ中のｃＤＮＡの核酸配列、表１に示される核酸配列（配列番号
Ｘ）またはそれらのフラグメントに対して、少なくとも８０％、８５％、９０％
、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一な配列を有する
多くの核酸分子が、「機能的活性を有する」ポリぺプチドをコードすることを即
座に認識する。事実、これらのヌクレオチド配列の任意の縮重改変体は全て、同
じポリぺプチドをコードするので、このことは、多くの場合、たとえ上記した比
較アッセイを行わなくても当業者にとって明らかである。縮重改変体ではない核
酸分子に関しては、その相当数がまた、機能的活性を有するポリぺプチドをコー
ドすることが、当該分野においてさらに認識される。これはなぜなら、以下にさ
らに記載されるように、当業者は、タンパク質機能にあまり有意に影響を及ぼし
そうにないか、または有意に影響を及ぼしそうにないかのいずれかのアミノ酸置
換（例えば、ある脂肪族アミノ酸を第二の脂肪族アミノ酸と置換する）を十分に
認識しているからである。

【０２１３】 例えば、表現型的にサイレントなアミノ酸置換の作製方法に関するガイダンス
が、Ｂｏｗｉｅら，「Ｄｅｃｉｐｈｅｒｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｅｓｓａｇｅ ｉｎ
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｍｉｎｏ
Ａｃｉｄ Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ」，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１３０
６−１３１０（１９９０）に提供され、ここで、著者らは変化に対するアミノ酸
配列の寛容性を研究するための２つの主要なストラテジーがあることを指摘する
。

【０２１４】 第１のストラテジーは、進化の過程の間の自然の選択によるアミノ酸置換の寛
容を利用する。異なる種におけるアミノ酸配列を比較することによって、保存さ
れるアミノ酸が同定され得る。これらの保存されるアミノ酸は、タンパク質の機
能について重要であるようである。対照的に、置換が自然の選択によって寛容さ
れたアミノ酸の位置は、これらの位置がタンパク質の機能に重要ではないことを
示す。従って、アミノ酸置換を寛容する位置は改変され得るが、タンパク質の生
物学的活性をなおも維持する。

【０２１５】 第２のストラテジーは、タンパク質機能に重要な領域を同定するために、クロ
ーン化された遺伝子の特定の位置でアミノ酸変化を導入するための遺伝子工学を
使用する。例えば、部位特異的変異誘発またはアラニンスキャニング変異誘発（
分子中の全ての残基で１つのアラニン変異の導入）が、使用され得る。（Ｃｕｎ
ｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１−１０８
５（１９８９））。次いで、得られた変異分子は生物学的活性について試験され
得る。

【０２１６】 著者らが言及するように、これらの２つのストラテジーは、タンパク質がアミ
ノ酸置換に驚くほど寛容であることを明らかにした。著者らはさらに、どのアミ
ノ酸変化が、タンパク質中の特定のアミノ酸位置で許容されるようであるかを示
す。例えば、（タンパク質の三次構造内に）ほとんど埋もれているアミノ酸残基
は、非極性側鎖を必要とするが、表面側鎖の特徴は、一般にほとんど保存されな
い。さらに、寛容される保存的なアミノ酸置換は、脂肪族または疎水性アミノ酸
のＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅの置換；ヒドロキシル残基のＳｅｒお
よびＴｈｒの置換；酸性残基のＡｓｐおよびＧｌｕの置換；アミド残基のＡｓｎ
およびＧｌｎの置換、塩基性残基のＬｙｓ、Ａｒｇ、およびＨｉｓの置換；芳香
族残基のＰｈｅ、Ｔｙｒ、およびＴｒｐの置換、ならびに小さなサイズのアミノ
酸のＡｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｍｅｔ、およびＧｌｙの置換を含む。保存的なア
ミノ酸置換に加えて、本発明の改変体は、（ｉ）１つ以上の非保存的なアミノ酸
残基との置換、ここでは置換されるアミノ酸残基は、遺伝コードによってコード
されるアミノ酸残基であってもよく、もしくはそうでなくてもよい、または（ｉ
ｉ）置換基を有する１つ以上のアミノ酸残基での置換、または（ｉｉｉ）別の化
合物（例えば、ポリぺプチドの安定性および／もしくは可溶性を増加するための
化合物（例えば、ポリエチレングリコール））との成熟ポリぺプチドの融合、ま
たは（ｉｖ）さらなるアミノ酸（例えば、ＩｇＧ Ｆｃ融合領域ペプチド、また
はリーダーもしくは分泌配列、または精製を容易にする配列）とのポリぺプチド
の融合を含む。このような改変体ポリぺプチドは、本明細書中の教示から、当業
者の範囲内であると考えられる。

【０２１７】 例えば、他の荷電されたアミノ酸または中性のアミノ酸での荷電されたアミノ
酸のアミノ酸置換を含むポリぺプチド改変体は、改善された特性（例えば、より
少ない凝集性）を有するタンパク質を生成し得る。薬学的処方物の凝集は、凝集
体の免疫原活性に起因して、活性の減少およびクリアランスの増加の両方をもた
らす。（Ｐｉｎｃｋａｒｄら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：３３１
−３４０（１９６７）；Ｒｏｂｂｉｎｓら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ ３６：８３８−
８４５（１９８７）；Ｃｌｅｌａｎｄら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒａｐｅｕ
ｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ １０：３０７−３７７（
１９９３））。

【０２１８】 本発明のさらなる実施形態は、少なくとも１つのアミノ酸置換を含むが、５０
アミノ酸置換を超えず、さらにより好ましくは、４０アミノ酸置換を超えず、な
おより好ましくは、３０アミノ酸置換を超えず、そしてなおさらにより好ましく
は、２０アミノ酸置換を超えないアミノ酸配列を有するポリペプチドのアミノ酸
配列を含むポリペプチドに関する。当然のことながら、ポリペプチドに関して、
配列番号Ｙのポリペプチドのアミノ酸配列、配列番号Ｘによってコードされるア
ミノ酸配列、および／または好ましさの増大する順番に、少なくとも１つのアミ
ノ酸置換を含むが、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１アミノ酸
置換を超えないｃＤＮＡプラスミド：ＺにおけるｃＤＮＡによってコードされる
アミノ酸配列を含むアミノ酸配列を有することが非常に好ましい。特定の実施形
態において、配列番号Ｙのアミノ酸配列またはそのフラグメント（例えば、本明
細書に記載の成熟形態および／または他のフラグメント）、配列番号Ｘによって
コードされるアミノ酸配列またはそのフラグメント、および／またはｃＤＮＡプ
ラスミド：Ｚによってコードされるアミノ酸配列またはそのフラグメントにおけ
る付加、置換、および／または欠失の数は、１〜５、５〜１０、５〜２５、５〜
５０、１０〜５０、または５０〜１５０であり、保存的アミノ酸置換が好ましい
。本明細書中で議論されるように、本発明の任意のポリペプチドが、融合タンパ
ク質を生成するために使用され得る。例えば、本発明のポリペプチドが、第２の
タンパク質に融合する場合、抗原タグとして使用され得る。本発明のポリペプチ
ドに対して惹起される抗体が使用され、ポリペプチドと結合することにより、第
２のタンパク質を間接的に検出し得る。さらに、分泌タンパク質は、トラフィッ
キング（ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ）シグナルに基づいて、細胞の位置を標的化す
るので、分泌されることが示される本発明のポリペプチドは、一旦他のタンパク
質と融合される標的分子として使用され得る。

【０２１９】 本発明のポリペプチドに融合され得るドメインの例は、異種シグナル配列だけ
ではなく、他の異種機能的領域を含む。この融合は、必ずしも直接的である必要
はないが、リンカー配列を介して起こり得る。

【０２２０】 特定の好ましい実施形態において、本発明のタンパク質は、ポリペプチドがＮ
および／またはＣ末端欠失変異体である融合タンパク質を含む。好ましい実施形
態において、この適用は、特定のＮ−およびＣ−末端欠失変異体のアミノ酸配列
を有するポリペプチドをコードする核酸配列に対して、少なくとも８０％、８５
％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である核散分子
に関する。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明
に含まれる。

【０２２１】 さらに、融合タンパク質はまた、本発明のポリペプチドの特徴を改善するため
に操作され得る。例えば、さらなるアミノ酸（特に荷電アミノ酸）の領域は、宿
主細胞からの精製の間、または連続した操作および保存の間に、安定性および持
続性を改善するために、ポリペプチドのＮ末端に付加され得る。また、ペプチド
部分が、精製を容易にするためにポリペプチドに付加され得る。このような領域
は、ポリペプチドの最終調製の前に除去され得る。ポリペプチドの操作を容易に
するためのペプチド部分の付加は、当該分野で精通し、そして慣用的な技術であ
る。

【０２２２】 当業者に理解されるように、本発明のポリペプチドおよび上記のこれらのエピ
トープ保有フラグメントは、異種ポリペプチド配列と組み合わされ得る。例えば
、本発明のポリペプチドは、異種ポリペプチド配列と融合され得、例えば、本発
明のポリペプチドは、免疫グロブリン（ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ）の定
常ドメインまたはそれらの部分（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびそれらの任意
の組み合わせ（ドメイン全体およびそれらの部分の両方を含む））と融合され得
、キメラポリペプチドを生じる。これらの融合タンパク質は、精製を容易にし、
そしてインビボにおいて増加した半減期を示す。報告例は、ヒトＣＤ４ポリペプ
チドの最初の２つのドメインおよび哺乳動物の免疫グロブリンの重鎖または軽鎖
の定常領域の種々のドメインからなるキメラタンパク質を記載する。（ＥＰ Ａ
３９４，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，３３１：８４−８
６（１９８８）。）ＩｇＧ部分に起因してジスルフィド連結二量体構造を有する
融合タンパク質はまた、単量体タンパク質またはタンパク質フラグメント単独よ
りも、他の分子の結合および中和においてより効果的であり得る。（Ｆｏｕｎｔ
ｏｕｌａｋｉｓら，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２７０：３９５８−３９６４（１９
９５）。） （ベクター、宿主細胞、およびタンパク質生成） 本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドを含むベクター、宿主細胞、および
組換え技術によるポリペプチドの生成に関する。ベクターは、例えば、ファージ
ベクター、プラスミドベクター、ウイルスベクター、またはレトロウイルスベク
ターであり得る。レトロウイルスベクターは、複製能があるかまたは複製欠損で
あり得る。後者の場合、ウイルス増殖は、一般に、相補的な宿主細胞においての
み起こる。

【０２２３】 本発明のポリヌクレオチドは、宿主における増殖のために、選択マーカーを含
むベクターに連結され得る。一般に、プラスミドベクターは、リン酸カルシウム
沈澱のような沈澱、または荷電した脂質との複合体において導入される。このベ
クターがウイルスである場合、適切なパッケージング細胞株を使用してインビト
ロでパッケージングされ得、次いで宿主細胞に形質導入され得る。

【０２２４】 そのポリヌクレオチドインサートは、例えば、いくつかの名前を挙げると、フ
ァージλＰＬプロモーター、Ｅ．ｃｏｌｉ ｌａｃ、ｔｒｐ、ｐｈｏＡ、および
ｔａｃプロモーター、ＳＶ４０初期および後期プロモーター、ならびにレトロウ
イルスＬＴＲのプロモーターなどのような、適切なプロモーターに作動可能に連
結されるべきである。他の適切なプロモーターは、当業者に公知である。発現構
築物は、転写開始のための部位、転写終結のための部位、および転写された領域
において翻訳のためのリボソーム結合部位をさらに含む。構築物によって発現さ
れる転写物のコード部分は、好ましくは、翻訳されるポリペプチドの始めの翻訳
開始コドンおよび翻訳されるポリペプチドの最後に適切に位置する終結コドン（
ＵＡＡ、ＵＧＡまたはＵＡＧ）を含む。

【０２２５】 示されたように、発現ベクターは、好ましくは、少なくとも１つの選択マーカ
ーを含む。このようなマーカーとしては、真核生物細胞培養についてはジヒドロ
葉酸レダクターゼ、Ｇ４１８、またはネオマイシン耐性、ならびにＥ．ｃｏｌｉ
および他の細菌における培養についてはテトラサイクリン耐性遺伝子、カナマイ
シン耐性遺伝子、またはアンピシリン耐性遺伝子が挙げられる。適切な宿主の代
表的な例としては、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ細胞、およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ細胞）；酵
母細胞のような真菌細胞（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉ
ｓｉａｅまたはＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ（ＡＴＣＣ受託番号２０１１７
８））；昆虫細胞（例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ Ｓ２細胞およびＳｐｏｄｏ
ｐｔｅｒａ Ｓｆ９細胞）；動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、２９
３細胞、およびＢｏｗｅｓメラノーマ細胞）；ならびに植物細胞が挙げられるが
、これらに限定されない。上記の宿主細胞のための適切な培養培地および条件は
当該分野で公知である。

【０２２６】 細菌における使用に好ましいベクターには、ｐＱＥ７０、ｐＱＥ６０、および
ｐＱＥ−９（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．から入手可能）；ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ
ベクター、Ｐｈａｇｅｓｃｒｉｐｔベクター、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮ
Ｈ１８Ａ、ｐＮＨ４６Ａ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅ
ｍｓ，Ｉｎｃ．から入手可能）；ならびにｐｔｒｃ９９ａ、ｐＫＫ２２３−３、
ｐＫＫ２３３−３、ｐＤＲ５４０、ｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔ
ｅｃｈ，Ｉｎｃ．から入手可能）が含まれる。好ましい真核生物ベクターの中に
は、ｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１、およびｐＳＧ（Ｓ
ｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能）；ならびにｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ
およびｐＳＶＬ（Ｐｈａｒｍａｃｉａから入手可能）が含まれる。酵母系での使
用のための、好ましい発現ベクターとしては、ｐＹＥＳ２、ｐＹＤ１、ｐＴＥＦ
１／Ｚｅｏ、ｐＹＥＳ２／ＧＳ、ｐＰＩＣＺ、ｐＧＡＰＺ、ｐＧＡＰＺα、ｐＰ
ＩＣ９、ｐＰＩＣ３．５、ｐＨＩＬ−Ｄ２、ｐＨＩＬ−Ｓ１、ｐＰＩＣ３．５Ｋ
、ｐＰＩＣ９Ｋ、およびＰＡＯ８１５（全てＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｂ
ａｄ，ＣＡから入手可能）が挙げられるが、これらに限定されない。他の適切な
ベクターは、当業者に容易に明らかである。

【０２２７】 宿主細胞への構築物の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥ
ＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフ
ェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染または他の方法によって
もたらされ得る。このような方法は、多くの標準的研究室マニュアルに記載され
ている（例えば、Ｄａｖｉｓら、Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９８６））。本発明のポリペプチドは、組換え
ベクターを欠如する宿主細胞により実際に発現され得ることが具体的に意図され
る。

【０２２８】 本発明のポリペプチドは、硫酸アンモニウム沈澱またはエタノール沈澱、酸抽
出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマ
トグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグ
ラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、およびレクチンクロマ
トグラフィーを含む周知の方法によって組換え細胞培養物から回収され、そして
精製され得る。最も好ましくは、高速液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）
が精製のために用いられる。

【０２２９】 本発明のポリペプチドはまた、以下から収集され得る：天然の供給源からの精
製産物（直接的に単離されたか、または培養されたかのいずれにせよ、体液、組
織、および細胞を含む）；化学合成手順の産物；および原核生物宿主または真核
生物宿主（例えば、細菌細胞、酵母細胞、高等植物細胞、昆虫細胞、および哺乳
動物細胞を含む）から組換え技術によって産生された産物。組換え産生手順にお
いて用いられる宿主に依存して、本発明のポリペプチドは、グリコシル化されて
いてもよく、またはグリコシル化されていなくてもよい。さらに、本発明のポリ
ペプチドはまた、いくつかの場合、宿主媒介プロセスの結果として、改変された
開始メチオニン残基を含み得る。従って、翻訳開始コドンによってコードされて
いるＮ末端メチオニンは、一般的に、すべての真核生物細胞において翻訳後に任
意のタンパク質から高い効率で除去されることが当該分野において周知である。
大部分のタンパク質上のＮ末端メチオニンはまた、大部分の原核生物において効
率的に除去されるが、いくつかのタンパク質では、この原核生物の除去プロセス
は、Ｎ末端メチオニンが共有結合しているアミノ酸の性質に依存して、非効率的
である。

【０２３０】 １つの実施形態において、酵母Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓを使用して、
真核生物系において本発明のポリぺプチドを、発現する。Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓ
ｔｏｒｉｓは、メチロトローフ酵母であり、その唯一の炭素源としてメタノール
を代謝し得る。メタノール代謝経路における主な工程は、Ｏ₂を使用するホルム
アルデヒドへのメタノールの酸化である。この反応は、酵素アルコールオキシダ
ーゼにより触媒される。それの唯一の炭素源としてメタノールを代謝するために
、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓは、Ｏ₂に対するアルコールオキシダーゼの
比較的低い親和性に一部起因して、アルコールオキシダーゼを高レベルで産生し
なければならない。従って、主な炭素源としてメタノールに依存する増殖培地に
おいて、２つのアルコールオキシダーゼ遺伝子（ＡＯＸ１）のうちの１つのプロ
モーター領域は非常に活性型である。メタノールの存在下で、ＡＯＸ１遺伝子か
ら産生されるアルコールオキシダーゼは、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ中の
全可溶性タンパク質の約３０％までを構成する。Ｅｌｌｉｓ，Ｓ．Ｂら、Ｍｏｌ
．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：１１１１−２１（１９８５）；Ｋｏｕｔｚ，Ｐ．Ｊ
ら、Ｙｅａｓｔ ５：１６７−７７（１９８９）；Ｔｓｃｈｏｐｐ，Ｊ．Ｆ．ら
、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１５：３８５９−７６（１９８７）を参照の
こと。従って、例えば、全てまたは一部のＡＯＸ１調節配列の転写調節下で、本
発明のポリヌクレオチドのような異種コード配列は、メタノール存在下で生育さ
れたＰｉｃｈｉａ酵母中に例外的に高レベルで発現される。

【０２３１】 １つの実施例において、本明細書中に記載されたように、プラスミドベクター
ｐＰＩＣ９Ｋを使用して、Ｐｉｃｈｉａ酵母系（「Ｐｉｃｈｉａ Ｐｒｏｔｏｃ
ｏｌｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」，Ｄ．
Ｒ．ＨｉｇｇｉｎｓおよびＪ．Ｃｒｅｇｇ編、Ｔｈｅ Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓ
ｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，１９９８に基本的に記載されたように）において本発
明のポリペプチドをコードするＤＮＡを発現する。この発現ベクターは、マルチ
クローニング部位の上流に位置するＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓアルカリホ
スファターゼ（ＰＨＯ）分泌シグナルペプチド（すなわち、リーダー）に連結さ
れた強力なＡＯＸ１プロモーターの効果により本発明のポリぺプチドの発現およ
び分泌を可能にする。

【０２３２】 多くの他の酵母ベクターが、当業者が容易に理解するように、提案された発現
構築物が転写、翻訳、分泌（所望の場合）などについての適切に配置されたシグ
ナル（必要な場合インフレームＡＵＧを含む）を提供する限りは、ｐＰＩＣ９Ｋ
の代わりに使用され得、そのようなベクターは、例えば、ｐＹＥＳ２、ｐＹＤ１
、ｐＴＥＦ１／Ｚｅｏ、ｐＹＥＳ２／ＧＳ、ｐＰＩＣＺ、ｐＧＡＰＺ、ｐＧＡＰ
Ｚα、ｐＰＩＣ９、ｐＰＩＣ３．５、ｐＨＩＬ−Ｄ２、ｐＨＩＬ−Ｓ１、ｐＰＩ
Ｃ３．５Ｋ、およびＰＡＯ８１５である。

【０２３３】 別の実施形態において、例えば、本発明のポリヌクレオチドのような異種コー
ド配列の高レベル発現は、発現ベクター（例えば、ｐＧＡＰＺまたはｐＧＡＰＺ
αのような）に本発明の異種ポリヌクレオチドをクローニングすることならびに
メタノール非存在下での酵母培養物を増殖することにより達成され得る。

【０２３４】 本明細書において議論されるベクター構築物を含む宿主細胞を含むことに加え
て、本発明はまた、脊椎動物起源（特に、哺乳動物起源）の一次宿主細胞、二次
宿主細胞、および不死化宿主細胞を含む。これらの宿主細胞は、内因性の遺伝物
質（例えば、コード配列）を欠失または置換するように操作されており、そして
／または本発明のポリヌクレオチドと作動可能に連結された遺伝物質（例えば、
異種ポリヌクレオチド配列）を含むように操作されており、そして内因性ポリヌ
クレオチドを活性化、改変、および／または増幅する。例えば、当該分野で公知
の技術が、相同組換えを介して、異種制御領域（例えば、プロモーターおよび／
またはエンハンサー）および内因性ポリヌクレオチド配列を作動可能に連結する
ために使用され得る（例えば、１９９７年６月２４日に発行された米国特許第５
，６４１，６７０号；１９９６年９月２６日に公開された国際公開第ＷＯ ９６
／２９４１１号；１９９４年８月４日に公開された国際公開第ＷＯ ９４／１２
６５０；Ｋｏｌｌｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８
６：８９３２−８９３５（１９８９）；およびＺｉｊｌｓｔｒａら，Ｎａｔｕｒ
ｅ ３４２：４３５−４３８（１９８９）を参照のこと。これら各々の開示は、
それら全体が参考として援用される）。

【０２３５】 さらに、本発明のポリペプチドは、当該分野で公知の技術を用いて化学合成さ
れ得る（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，１９８３，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕ
ｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｗ．Ｈ．
Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．，Ｎ．Ｙ．，およびＨｕｎｋａｐｉｌｌｅｒら，Ｎ
ａｔｕｒｅ，３１０：１０５−１１１（１９８４）を参照のこと）。例えば、ポ
リペプチドのフラグメントに対応するポリペプチドは、ペプチド合成機の使用に
より合成され得る。さらに、所望の場合、非古典的アミノ酸または化学的アミノ
酸アナログが、置換または付加としてこのポリペプチド配列に導入され得る。非
古典的アミノ酸としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：通常のア
ミノ酸のＤ異性体、２，４−ジアミノ酪酸、ａ−アミノイソ酪酸、４−アミノ酪
酸、Ａｂｕ、２−アミノ酪酸、ｇ−Ａｂｕ、ｅ−Ａｈｘ、６−アミノヘキサン酸
、Ａｉｂ，２−アミノイソ酪酸、３−アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロ
イシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシト
ルリン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、フェニルグ
リシン、シクロヘキシルアラニン、ｂ−アラニン、フルオロアミノ酸、デザイナ
ーアミノ酸（例えば、β−メチルアミノ酸、Ｃａ−メチルアミノ酸、Ｎａ−メチ
ルアミノ酸）、および一般のアミノ酸アナログ。さらにアミノ酸はＤ（右旋性）
であってもまたはＬ（左旋性）であってよい。

【０２３６】 本発明は、翻訳の間または翻訳後に、例えば、グリコシル化、アセチル化、リ
ン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロック基による誘導体化、タンパク質分解
切断、抗体分子または他の細胞性リガンドへの結合などによって示差的に改変さ
れる本発明のポリペプチドを含む。多数の化学的改変のうちのいずれをも、以下
を含むがこれらに限定されない公知の技術によって実施され得る：臭化シアン、
トリプシン、キモトリプシン、パパイン、Ｖ８プロテアーゼ、ＮａＢＨ₄による
特異的化学的切断；アセチル化、ホルミル化、酸化、還元；ツニカマイシンの存
在下での代謝合成；など。

【０２３７】 本発明によって含まれるさらなる翻訳後修飾としては、例えば、以下などが挙
げられる：Ｎ結合型もしくはＯ結合型の糖鎖（Ｎ末端またはＣ末端のプロセシン
グ）、アミノ酸骨格への化学部分の結合、Ｎ結合型もしくはＯ結合型の糖鎖の化
学修飾、および原核生物宿主細胞発現の結果としてのＮ末端メチオニン残基の付
加もしくは欠失。このポリペプチドはまた、検出可能な標識（例えば、酵素標識
、蛍光標識、同位体標識または親和性標識）を用いて改変され、このタンパク質
の検出および単離を可能にし得る。さらに、本発明のポリペプチドは、ヨウ素化
により改変され得る。

【０２３８】 本発明によってまた、さらなる利点（例えば、このポリペプチドの溶解度、安
定性および循環時間の増加、または免疫原性の減少）を提供し得る、本発明のポ
リぺプチドの化学修飾誘導体が提供される（米国特許第４，１７９，３３７号を
参照のこと）。誘導体化のための化学部分は、水溶性ポリマー（例えば、ポリエ
チレングリコール、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、カ
ルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコールなど）から選
択され得る。このポリペプチドは、この分子内のランダムな位置でか、またはこ
の分子内の所定の位置で改変され得、そして１、２、３以上の結合した化学部分
を含み得る。

【０２３９】 このポリマーは、任意の分子量のポリマーであり得、そして分枝状であっても
非分枝状であってもよい。ポリエチレングリコールに関しては、好ましい分子量
は、取り扱いおよび製造の容易さのために、約１ｋＤａと約１００ｋＤａとの間
（用語「約（およそ）」は、ポリエチレングリコールの調製において、いくつか
の分子は示した分子量よりも重く、いくつかは示した分子量よりも軽いことを示
す）である。所望の治療プロフィール（例えば、所望される持続放出の持続時間
、存在する場合には生物学的活性に対する効果、取り扱いの容易さ、抗原性の程
度または抗原性がないこと、および治療タンパク質またはアナログに対するポリ
エチレングリコールの他の公知の効果）に依存して、他のサイズが用いられ得る
。

【０２４０】 ポリエチレングリコール分子（または他の化学的部分）は、このタンパク質の
機能的ドメインまたは抗原性ドメインに対する効果を考慮してこのタンパク質に
結合されるべきである。当業者に利用可能な多数の結合方法が存在する（例えば
、本明細書中に参考として援用される、ＥＰ ０ ４０１ ３８４（Ｇ−ＣＳＦ
にＰＥＧを結合する）、Ｍａｌｉｋら，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２０：１０２
８−１０３５（１９９２）（塩化トレシル（ｔｒｅｓｙｌ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）
を用いたＧＭ−ＣＳＦのペグ化を報告する）もまた参照のこと）。例えば、ポリ
エチレングリコールは、反応性基（例えば、遊離のアミノ基またはカルボキシル
基）を介してアミノ酸残基により共有結合性に結合され得る。反応性基は、活性
化ポリエチレングリコール分子が結合し得る基である。遊離のアミノ基を有する
アミノ酸残基としては、リジン残基およびＮ末端アミノ酸残基が挙げられ得る；
遊離のカルボキシル基を有するアミノ酸残基としては、アスパラギン酸残基、グ
ルタミン酸残基およびＣ末端アミノ酸残基が挙げられ得る。スルフヒドリル残基
もまた、ポリエチレングリコール分子を結合するための反応性基として用いられ
得る。治療目的のために好ましいのは、アミノ基での結合、例えば、Ｎ末端また
はリジン基での結合である。

【０２４１】 Ｎ末端で化学修飾されたタンパク質が特に所望され得る。ポリエチレングリコ
ールを本発明の組成物の例示として用いて、種々のポリエチレングリコール分子
から（分子量、分枝などによって）、反応混合物中でのポリエチレングリコール
分子のタンパク質（またはポリペプチド）分子に対する比、行われるべきペグ化
反応の型、および選択されたＮ末端ペグ化タンパク質の獲得方法を選択し得る。
Ｎ末端ペグ化調製物の獲得方法（すなわち、必要な場合、この部分を他のモノペ
グ化部分から分離すること）は、ペグ化タンパク質分子の集団からの、Ｎ末端ペ
グ化物質の精製により行われ得る。Ｎ末端修飾で化学修飾された選択的タンパク
質は、特定のタンパク質における誘導体化に利用可能な異なる型の第１級アミノ
基（リジン対Ｎ末端）の示差的反応性を利用する還元的アルキル化によって達成
され得る。適切な反応条件下では、カルボニル基含有ポリマーを用いた、Ｎ末端
でのタンパク質の実質的に選択的な誘導体化が達成される。

【０２４２】 本発明のポリペプチドは、モノマーまたはマルチマー（すなわち、ダイマー、
トリマー、テトラマーおよびより高度のマルチマー）であり得る。従って、本発
明は、モノマーおよびマルチマーの本発明のポリペプチド、それらの調製物およ
びそれらを含む組成物（好ましくは治療物）に関する。特定の実施形態では、本
発明のポリペプチドは、モノマー、ダイマー、トリマーまたはテトラマーである
。さらなる実施形態では、本発明のマルチマーは、少なくともダイマー、少なく
ともトリマー、または少なくともテトラマーである。

【０２４３】 本発明によって含まれるマルチマーは、ホモマーまたはヘテロマーであり得る
。本明細書中で用いられる場合、用語ホモマーは、配列番号Ｙのアミノ酸配列ま
たは配列番号Ｘもしくは配列番号Ｘの相補体によってコードされるアミノ酸配列
、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺによりコードされるアミノ酸配列（フラ
グメント、改変体、スプライス改変体、および融合タンパク質を含み、本明細書
中に記載されるように、フラグメント、改変体、スプライス改変体、および融合
タンパク質に対応する）に対応するポリぺプチドのみを含むマルチマーをいう。
これらのホモマーは、同一または異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含
み得る。特定の実施形態では、本発明のホモマーは、同一のアミノ酸配列を有す
るポリペプチドのみを含むマルチマーである。別の特定の実施形態では、本発明
のホモマーは、異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むマルチマーであ
る。特定の実施形態では、本発明のマルチマーは、ホモダイマー（例えば、同一
または異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む）またはホモトリマー（
例えば、同一および／または異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む）
である。さらなる実施形態では、本発明のホモマー性マルチマーは、少なくとも
ホモダイマー、少なくともホモトリマーまたは少なくともホモテトラマーである
。

【０２４４】 本明細書中で用いられる場合、用語ヘテロマーとは、本発明のポリペプチドに
加えて、１つ以上の異種ポリペプチド（すなわち、異なるタンパク質のポリペプ
チド）を含むマルチマーをいう。特定の実施形態では、本発明のマルチマーは、
ヘテロダイマー、ヘテロトリマーまたはヘテロテトラマーである。さらなる実施
形態では、本発明のヘテロマー性マルチマーは、少なくともヘテロダイマー、少
なくともヘテロトリマーまたは少なくともヘテロテトラマーである。

【０２４５】 本発明のマルチマーは、疎水性、親水性、イオン性および／もしくは共有結合
性の結合の結果であり得、ならびに／または例えば、リポソーム形成によって間
接的に連結され得る。従って、１つの実施形態では、本発明のマルチマー（例え
ば、ホモダイマーまたはホモトリマーなど）は、本発明のポリペプチドが溶液中
で互いに接触する場合に形成される。別の実施形態では、本発明のへテロマルチ
マー（例えば、ヘテロトリマーまたはヘテロテトラマーなど）は、本発明のポリ
ペプチドが、溶液中で本発明のポリペプチドに対する抗体（本発明の融合タンパ
ク質における異種ポリペプチド配列に対する抗体を含む）と接触する場合に、形
成される。他の実施形態では、本発明のマルチマーは、本発明のポリペプチドと
の、および／または本発明のポリペプチド間での共有結合によって形成される。
このような共有結合は、ポリペプチド配列（例えば、配列番号Ｙに記載されるか
、または配列番号Ｘ、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺによってコードされ
るポリぺプチドに含まれる）中に含まれる１以上のアミノ酸残基を含み得る。１
例では、この共有結合は、ネイティブ（すなわち、天然に存在する）ポリペプチ
ドにおいて相互作用するポリペプチド配列内に存在するシステイン残基間での架
橋である。別の例では、この共有結合は、化学的操作または組換え操作の結果で
ある。あるいは、このような共有結合は、融合タンパク質中の異種ポリペプチド
配列中に含まれる、１以上のアミノ酸残基を含み得る。１例では、共有結合は、
本発明の融合タンパク質に含まれる異種配列間にある（例えば、米国特許第５，
４７８，９２５号を参照のこと）。特定の例では、この共有結合は、（本明細書
中に記載されるような）本発明のＦｃ融合タンパク質に含まれる異種配列間にあ
る。別の特定の例では、本発明の融合タンパク質の共有結合は、共有結合したマ
ルチマーを形成し得る別のタンパク質（例えば、オステオプロテゲリン（ｏｓｅ
ｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ）（例えば、国際公開第ＷＯ ９８／４９３０５号
（この内容はその全体が本明細書中で参考として援用される）を参照のこと）な
ど）由来の異種ポリペプチド配列間にある。別の実施形態では、２以上の本発明
のポリペプチドは、ペプチドリンカーを介して連結される。例としては、米国特
許第５，０７３，６２７号（本明細書中に参考として援用される）に記載される
ペプチドリンカーが挙げられる。ペプチドリンカーによって隔てられた複数の本
発明のポリペプチドを含むタンパク質は、従来の組換えＤＮＡ技術を用いて生成
され得る。

【０２４６】 本発明のマルチマーポリペプチドを調製するための別の方法は、ロイシンジッ
パーポリペプチド配列またはイソロイシンジッパーポリぺプチド配列に融合され
た本発明のポリペプチドの使用を含む。ロイシンジッパードメインおよびイソロ
イシンジッパードメインは、そのドメインが見出されるタンパク質のマルチマー
形成を促進するポリペプチドである。ロイシンジッパーは元々、いくつかのＤＮ
Ａ結合タンパク質において同定され（Ｌａｎｄｓｃｈｕｌｚら，Ｓｃｉｅｎｃｅ
２４０：１７５９、（１９８８））、そしてそれ以来、種々の異なるタンパク
質において見出されている。公知のロイシンジッパーの中には、ダイマー形成ま
たはトリマー形成をする、天然に存在するペプチドおよびその誘導体がある。本
発明の可溶性マルチマータンパク質の生成に適切なロイシンジッパードメインの
例は、本明細書中に参考として援用されるＰＣＴ出願ＷＯ ９４／１０３０８に
記載されるロイシンジッパードメインである。溶液中でダイマー形成またはトリ
マー形成をするポリペプチド配列に融合された、本発明のポリペプチドを含む組
換え融合タンパク質は、適切な宿主細胞中で発現され、そして得られる可溶性マ
ルチマー融合タンパク質は、当該分野で公知の技術を用いて、培養上清から回収
される。

【０２４７】 本発明のトリマーポリぺプチドは、増強された生物学的活性という利点を提供
し得る。好ましいロイシンジッパー部分およびイソロイシン部分は、トリマーを
優先的に形成する部分である。１例は、本明細書中に参考として援用されるＨｏ
ｐｐｅら（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ３４４：１９１，（１９９４））および
米国特許出願第０８／４４６，９２２号に記載されるような、肺サーファクタン
トプロテインＤ（ＳＰＤ）に由来するロイシンジッパーである。天然に存在する
トリマータンパク質由来の他のペプチドは、本発明のトリマーポリぺプチドの調
製において用いられ得る。

【０２４８】 別の例では、本発明のタンパク質は、Ｆｌａｇ（登録商標）ポリぺプチド配列
を含む本発明の融合タンパク質に含まれるＦｌａｇ（登録商標）ポリペプチド配
列間の相互作用によって結合される。さらなる実施形態では、本発明のタンパク
質は、本発明のＦｌａｇ（登録商標）融合タンパク質に含まれる異種ポリペプチ
ド配列と抗Ｆｌａｇ（登録商標）抗体との間の相互作用によって結合する。

【０２４９】 本発明のマルチマーは、当該分野で公知の化学技術を用いて生成され得る。例
えば、本発明のマルチマーに含まれることが所望されるポリペプチドは、当該分
野で公知のリンカー分子およびリンカー分子長最適化技術を用いて、化学的に架
橋され得る（例えば、本明細書中にその全体が参考として援用される、米国特許
第５，４７８，９２５号を参照のこと）。さらに、本発明のマルチマーは、当該
分野で公知の技術を用いて生成されて、マルチマーに含まれることが所望される
、ポリペプチドの配列内に存在するシステイン残基間の、１以上の分子間架橋を
形成し得る（例えば、本明細書中にその全体が参考として援用される、米国特許
第５，４７８，９２５号を参照のこと）。さらに、本発明のポリペプチドは、ポ
リペプチドのＣ末端またはＮ末端へのシステインまたはビオチンの付加によって
慣用的に改変され得、そして当該分野で公知の技術が、１以上のこれらの改変さ
れたポリペプチドを含むマルチマーを生成するために、適用され得る（例えば、
本明細書中にその全体が参考として援用される、米国特許第５，４７８，９２５
号を参照のこと）。さらに、当該分野で公知の技術は、本発明のマルチマーに含
まれることが所望される、ポリペプチド成分を含むリポソームを生成するために
、適用され得る（例えば、本明細書中にその全体が参考として援用される、米国
特許第５，４７８，９２５号を参照のこと）。

【０２５０】 あるいは、本発明のマルチマーは、当該分野で公知の遺伝子操作技術を用いて
生成され得る。１つの実施形態では、本発明のマルチマーに含まれるポリペプチ
ドは、本明細書中に記載されるか、さもなくば当該分野で公知の融合タンパク質
技術を用いて組換え生成される（例えば、本明細書中にその全体が参考として援
用される、米国特許第５，４７８，９２５号を参照のこと）。特定の実施形態で
は、本発明のホモダイマーをコードするポリヌクレオチドは、本発明のポリペプ
チドをコードするポリヌクレオチド配列を、リンカーポリペプチドをコードする
配列に連結し、次いでさらに元々のＣ末端からＮ末端の方向とは逆方向でポリペ
プチドの翻訳産物をコードする合成ポリヌクレオチド（リーダー配列を欠く）に
連結することによって生成される（例えば、本明細書中にその全体が参考として
援用される、米国特許第５，４７８，９２５号を参照のこと）。別の実施形態で
は、本明細書中に記載されるか、さもなくば当該分野で公知の組換え技術を適用
して、膜貫通ドメイン（または疎水性ペプチドもしくはシグナルペプチド）を含
み、そして膜再構成技術によってリポソームに取り込まれ得る、本発明の組換え
ポリペプチドを生成する（例えば、本明細書中にその全体が参考として援用され
る、米国特許第５，４７８，９２５号を参照のこと）。

【０２５１】 （抗体） 本発明のさらなるポリぺプチドは、本発明のポリペプチド、ポリぺプチドフラ
グメント、もしくは配列番号Ｙの改変体、および／またはエピトープに免疫特異
的に結合する（特異的な抗原−抗体結合のアッセイのための、当該分野で周知の
イムノアッセイによって決定される）、抗体およびＴ細胞抗原レセプター（ＴＣ
Ｒ）に関する。本発明の抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、多
重特異的抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体、単鎖抗体、Ｆａｂフラ
グメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生さ
れるフラグメント、抗イディオタイプ（抗−Ｉｄ）抗体（例えば、本発明の抗体
に対する抗−Ｉｄ抗体を含む）、および上記の任意のエピトープ結合フラグメン
トを含むが、これらに限定されない。本明細書中で使用される場合、用語「抗体
」は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、
すなわち、抗原を免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子をいう。本発明
の免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン分子の任意の型（例えば、ＩｇＧ、Ｉ
ｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、Ｉ
ｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスであ
り得る。

【０２５２】 最も好ましくは、この抗体は、本発明のヒト抗原結合抗体フラグメントであり
、そしてこれには、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖Ｆｖ（
ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）ならびにＶＬドメイ
ンまたはＶＨドメインのいずれかを含むフラグメントが挙げられるが、これらに
限定されない。単鎖抗体を含む抗原結合抗体フラグメントは、可変領域を単独で
、または以下の全体もしくは部分と組み合わせて含み得る：ヒンジ領域、ＣＨ１
ドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメイン。可変領域とヒンジ領域、ＣＨ
１ドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインとの任意の組み合わせもまた
含む抗原結合フラグメントもまた、本発明に含まれる。本発明の抗体は、鳥類お
よび哺乳動物を含む任意の動物起源由来であり得る。好ましくは、これらの抗体
は、ヒト、ネズミ（例えば、マウスおよびラット）、ロバ、船ウサギ（ｓｈｉｐ
ｒａｂｂｉｔ）、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、またはニワトリである。
本明細書で使用される場合、「ヒト」抗体は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配
列を有する抗体を含み、そしてこれは、ヒト免疫グロブリンライブラリーから、
または１つ以上のヒト免疫グロブリンに対してトランスジェニックな動物から単
離され、そして以下および例えば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらによる米国特許
第５，９３９，５９８号に記載されるように、内因性免疫グロブリンを発現しな
い抗体を含む。

【０２５３】 本発明の抗体は、一重特異的、二重特異的、三重特異的またはより多くの多重
特異的であり得る。多重特異的な抗体は、本発明のポリペプチドの異なるエピト
ープに対して特異的であり得るか、または本発明のポリペプチドおよび異種エピ
トープ（例えば、異種ポリペプチドまたは固体支持体物質）の両方に特異的であ
り得る。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９３／１７７１５；ＷＯ９２／０８８０２；Ｗ
Ｏ９１／００３６０；ＷＯ９２／０５７９３；Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ
．１４７：６０−６９（１９９１）；米国特許第４，４７４，８９３号；同第４
，７１４，６８１号；同第４，９２５，６４８号；同第５，５７３，９２０号；
同第５，６０１，８１９号；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８
：１５４７−１５５３（１９９２）を参照のこと。

【０２５４】 本発明の抗体は、それらが認識するかまたは特異的に結合する本発明のポリペ
プチドのエピトープまたは部分によって、記載されるかまたは特定化され得る。
このエピトープまたはポリペプチドの部分は、本明細書中に記載されるように、
例えば、Ｎ末端およびＣ末端位置により、または連続するアミノ酸残基における
サイズにより、特定化され得る。本発明の任意のエピトープまたはポリペプチド
を特異的に結合する抗体はまた排除され得る。従って、本発明は、本発明のポリ
ペプチドを特異的に結合し、そしてこのポリペプチドの排除を可能にする抗体を
含む。

【０２５５】 本発明の抗体はまた、その交差反応性によって記載されるか、または特定化さ
れ得る。本発明のポリペプチドの任意の他のアナログ、オルソログ（ｏｒｔｈｏ
ｌｏｇ）またはホモログを結合しない抗体が、含まれる。本発明のポリペプチド
に対して少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも
８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６５％、少なくとも
６０％、少なくとも５５％および少なくとも５０％の同一性（当該分野で公知の
方法および本明細書において記載された方法を用いて計算される場合）を有する
ポリペプチドを結合する抗体もまた、本発明に含まれる。特定の実施形態におい
て、本発明の抗体は、ヒトタンパク質のマウスホモログ、ラットホモログおよび
／またはウサギホモログならびにそれらの対応するエピトープと交差反応する。
本発明のポリペプチドに対して９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未
満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満および５０
％未満の同一性（当該分野で公知の方法および本明細書において記載された方法
を用いて計算される場合）を有するポリペプチドに結合しない抗体もまた、本発
明に含まれる。特定の実施形態において、上記の交差反応性は、本明細書中に開
示される任意の単一特異的抗原もしくは免疫原性ポリペプチド、または２、３、
４、５もしくはそれ以上の特異的抗原性ポリペプチドおよび／または免疫原性ポ
リペプチドの組み合わせに関する。さらに本発明には、（本明細書中に記載され
るような）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で本発明のポリヌ
クレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプ
チドを結合する抗体が含まれる。本発明の抗体はまた、本発明のポリペプチドに
対するその結合親和性によって記載または特定され得る。好ましい結合親和性と
しては、５×１０^-2Ｍ、１０^-2Ｍ、５×１０^-3Ｍ、１０^-3Ｍ、５×１０^-4Ｍ、１
０^-4Ｍ、５×１０^-5Ｍ、１０^-5Ｍ、５×１０^-6Ｍ、１０^-6Ｍ、５×１０^-7Ｍ、１
０^-7Ｍ、５×１０^-8Ｍ、１０^-8Ｍ、５×１０^-9Ｍ、１０^-9Ｍ、５×１０^-10Ｍ、
１０^-10Ｍ、５×１０^-11Ｍ、１０^-11Ｍ、５×１０^-12Ｍ、１０^-12Ｍ、５×１０^{- 13} Ｍ、１０^-13Ｍ、５×１０^-14Ｍ、１０^-14Ｍ、５×１０^-15Ｍ、または１０^-15
Ｍ未満の解離定数すなわちＫ_dを有する結合親和性が挙げられる。

【０２５６】 本発明はまた、競合的な結合を決定するための当該分野で公知の任意の方法（
例えば、本明細書中に記載されるイムノアッセイ）によって決定される際の、本
発明のエピトープに対する抗体の結合を競合的に阻害する抗体を提供する。好ま
しい実施形態において、抗体は、少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なく
とも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なく
とも６０％、または少なくとも５０％、エピトープに対する結合を競合的に阻害
する。

【０２５７】 本発明の抗体は、本発明のポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストと
して作用し得る。例えば、本発明は、レセプター／リガンドと本発明のポリペプ
チド部分または全体のいずれかとの相互作用を途絶させる抗体を含む。好ましく
は、本発明の抗体は、本明細書中に開示される抗原性のエピトープまたはその部
分に結合する。本発明は、レセプター特異的抗体およびリガンド特異的抗体の両
方を特徴とする。本発明はまた、リガンド結合を妨げないがレセプターの活性化
を妨げるレセプター特異的抗体の特徴を有する。レセプターの活性化（すなわち
、シグナル伝達）は、本明細書中に記載される技術、またはさもなくば当該分野
で公知の技術によって決定され得る。例えば、レセプターの活性化は、レセプタ
ーまたはその基質のリン酸化（例えば、チロシンまたはセリン／スレオニン）を
、（例えば上記に記載されたような）免疫沈降、それに続くウエスタンブロット
により検出することによって決定され得る。特定の実施形態において、抗体の非
存在下での活性の少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少
なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、ま
たは少なくとも５０％、リガンド活性またはレセプター活性を阻害する抗体が提
供される。

【０２５８】 本発明はまた、リガンド結合およびレセプター活性化の両方を妨げるレセプタ
ー特異的抗体、ならびにレセプター−リガンド複合体を認識し、そして、好まし
くは、結合していないレセプターまたは結合していないリガンドを特異的に認識
しない抗体の特徴とする。同様に、本発明には、リガンドに結合し、そしてリガ
ンドのレセプターへの結合を妨げる中和抗体、ならびにリガンドに結合し、それ
によってレセプター活性化を妨げるが、リガンドがレセプターに結合することは
妨げない抗体が含まれる。さらに本発明に含まれるのは、レセプターを活性化す
る抗体である。これらの抗体は、レセプターアゴニストとして作用し得、すなわ
ち、リガンド媒介のレセプター活性化（例えば、レセプターの二量体化を誘導す
ることによる）の生物学的活性の全体またはサブセット（ｓｕｂｓｅｔ）のいず
れかを増強または活性化する。この抗体は、本明細書中に開示される本発明のペ
プチドの特異的な生物学的活性を含む生物学的活性に対するアゴニスト、アンタ
ゴニストまたはインバース（ｉｎｖｅｒｓｅ）アゴニストとして特定化され得る
。上記の抗体アゴニストは、当該分野で公知の方法を用いて作製され得る。例え
ば、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／４０２８１；米国特許第５，８１１，０９７号；Ｄｅ
ｎｇら、Ｂｌｏｏｄ ９２（６）：１９８１−１９８８（１９９８）；Ｃｈｅｎ
ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８（１６）：３６６８−３６７８（１９９８）；
Ｈａｒｒｏｐら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１（４）：１７８６−１７９４（１
９９８）；Ｚｈｕら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ：５８（１５）：３２０９−３２１
４（１９９８）；Ｙｏｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０（７）：３１７０−
３１７９（１９９８）；Ｐｒａｔら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｓｃｉ．１１１（Ｐｔ２）
：２３７−２４７（１９９８）；Ｐｉｔａｒｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔ
ｈｏｄｓ ２０５（２）：１７７−１９０（１９９７）；Ｌｉａｕｔａｒｄら、
Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ９（４）：２３３−２４１（１９９７）；Ｃａｒｌｓｏｎら
、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１７）：１１２９５−１１３０１（１９９
７）；Ｔａｒｙｍａｎら、Ｎｅｕｒｏｎ １４（４）：７５５−７６２（１９９
５）；Ｍｕｌｌｅｒら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ６（９）：１１５３−１１６７（
１９９８）；Ｂａｒｔｕｎｅｋら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ８（１）：１４−２０（
１９９６）（上記の文献は、その全体が本明細書中で参考として援用される）を
参照のこと。

【０２５９】 本発明の抗体は、例えば、インビトロおよびインビボの両方における診断方法
ならびに治療方法を含む、本発明のポリペプチドを精製、検出および標的化する
のために使用され得るが、これらに限定されない。例えば、この抗体は、生物学
的サンプルにおいて本発明のポリペプチドのレベルを定性的および定量的に測定
するためのイムノアッセイにおける用途を有する。例えば、Ｈａｒｌｏｗら，Ａ
ｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，第２版，１
９８８）（その全体が参考として本明細書中に援用される）を参照のこと。

【０２６０】 以下でより詳細に議論されるように、本発明の抗体は、単独で、または他の組
成物との組み合わせのいずれかで用いられ得る。この抗体は、さらに、Ｎ末端も
しくはＣ末端で異種ポリペプチドに組換え的に融合され得るか、またはポリペプ
チドもしくは他の組成物に化学的に結合（共有結合および非共有結合を含む）さ
れ得る。例えば、本発明の抗体は、検出アッセイにおける標識として有用な分子
およびエフェクター分子（例えば、異種ポリペプチド、薬物、放射性核種または
毒素）に組換え的に融合または結合され得る。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０
８４９５；ＷＯ９１／１４４３８；ＷＯ８９／１２６２４；米国特許第５，３１
４，９９５号；および欧州特許第３９６，３８７号を参照のこと。

【０２６１】 本発明の抗体は、改変された（すなわち、共有結合性付着（ｃｏｖａｌｅｎｔ
ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ）が、抗体が抗イディオタイプ応答を産生するのを妨が
ないような抗体に対する任意の型の分子の共有結合性付着による）誘導体を含む
。例えば、制限の目的ではないが、抗体誘導体には、例えば、グリコシル化、ア
セチル化、ぺグ化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）、リン酸化（ｐｈｏｓｐｈｙｌａｔ
ｉｏｎ）、アミド化、公知の保護基／ブロック基（ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｇｒｏｕ
ｐ）による誘導体化、タンパク質分解性切断、細胞性リガンドまたは他のタンパ
ク質への連結などによって改変された抗体が挙げられる。多数の任意の化学的改
変が、特異的化学切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝的合成
などを含むが、これらに制限されない公知の技術によって実行され得る。さらに
、誘導体は、１つ以上の非古典的アミノ酸を含み得る。

【０２６２】 本発明の抗体は、当該分野で公知の任意の適切な方法によって産生され得る。
目的の抗原に対するポリクローナル抗体は、当該分野で周知の種々の手順によっ
て産生され得る。例えば、本発明のポリペプチドが種々の宿主動物（ウサギ、マ
ウス、ラットなどを含むがこれらに限定されない）に投与され得、抗原に対して
特異的なポリクローナル抗体を含む血清の産生を誘導する。種々のアジュバント
が、免疫学的応答を増加させるために使用され得、宿主種に依存し、そしてフロ
イント（完全および不完全）、水酸化アルミニウムのようなミネラルゲル（ｍｉ
ｎｅｒａｌ ｇｅｌ）、リゾレシチンのような表面活性物質、プルロニック（ｐ
ｌｕｒｏｎｉｃ）ポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油乳濁液、キーホール
リンペットヘモシアニン、ジニトロフェノール、ならびにＢＣＧ（カルメット−
ゲラン杆菌）および挫瘡コリネバクテリウムのような強力に有用なヒトアジュバ
ントを含むが、これらに限定されない。このようなアジュバントはまた、当該分
野において周知である。

【０２６３】 モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え、およびファージディスプレ
イ技術、またはそれらの組み合わせの使用を含む、当該分野で公知の広範な種々
の技術を用いて調製され得る。例えば、モノクローナル抗体は、当該分野で公知
であり、そして例えば以下に教示される技術を含むハイブリドーマ技術を使用し
て産生され得る：Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，第２版、１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら、Ｍｏ
ｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉ
ｄｏｍａｓ ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．１９８１）（上記の
参考文献は、その全体が参考として援用される）。本明細書中で使用される場合
、用語「モノクローナル抗体」は、ハイブリドーマ技術を通して産生された抗体
に限定されない。用語「モノクローナル抗体」は、任意の真核生物、原核生物、
またはファージクローンを含む単一のクローンに由来する抗体をいい、そしてモ
ノクローナル抗体が産生される方法ではない。

【０２６４】 ハイブリドーマ技術を用いて特定の抗体を産生およびスクリーニングする方法
は、慣用的であり、そして当該分野に周知であり、そして実施例（例えば、実施
例１６）に詳細に議論される。非限定的な実施例において、マウスは、本発明の
ポリペプチドまたはそのようなペプチドを発現する細胞を用いて免疫され得る。
一旦免疫応用が検出される（例えば、抗原に特異的な抗体がマウスの血清中に検
出される）と、マウスの脾臓を収集しそして脾細胞を単離する。次に、脾細胞を
周知の技術によって任意の適切なメラノーマ細胞（例えば、ＡＴＣＣから入手可
能な細胞株ＳＰ２０由来の細胞）に融合させる。ハイブリドーマを限定希釈によ
って選択し、そしておよびクローン化する。次に、ハイブリドーマクローンを、
本発明のポリペプチドに結合し得る抗体を分泌する細胞について当該分野で公知
の方法によってアッセイする。一般的に高いレベルの抗体を含む腹水（ａｓｃｉ
ｔｅｓ ｆｌｕｉｄ）が、陽性ハイブリドーマクローンを用いてマウスを免疫さ
せることによって、産生され得る。

【０２６５】 従って、本発明は、モノクローナル抗体および本発明の抗体を分泌するハイブ
リドーマ細胞を培養する工程を包含する方法によって産生される抗体を、産生す
る方法を提供し、ここで、好ましくは、このハイブリドーマは、骨髄腫細胞を用
いた本発明の抗原と免疫させたマウスから単離された脾細胞とを融合させること
によって、次いで本発明のポリペプチドと結合し得る抗体を分泌するハイブリド
ーマクローンについての融合物から生じるハイブリドーマをスクリーニングする
ことによって産生される。

【０２６６】 特定のエピトープを認識する抗体フラグメントは、公知の技術によって産生さ
れ得る。例えば、本発明のＦａｂおよびＦ（ａｂ）’２フラグメントは、（Ｆａ
ｂフラグメントを産生するための）パパインまたは（Ｆ（ａｂ’）２フラグメン
トを産生するための）ペプシンのような酵素を使用して、免疫グロブリン分子の
タンパク質分解切断によって産生され得る。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、可
変領域、軽鎖定常領域および重鎖のＣＨ１ドメインを含む。

【０２６７】 例えば、本発明の抗体はまた、当該分野で公知の種々のファージディスプレイ
方法を用いて産生され得る。ファージディスプレイ法において、機能的抗体ドメ
インは、それらをコードするポリヌクレオチド配列を保有するファージ粒子の表
面上に提示される。特定の実施形態において、このようなファージは、レパート
リーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒトまたはマウス）か
ら発現される抗原結合ドメインを提示するために利用され得る。目的の抗原に結
合する抗原結合ドメインを発現するファージは、抗原を用いて選択または同定さ
れ得る（例えば、標識した抗原、あるいは固体表面またはビーズに結合または補
足された抗原を使用する）。これらの方法において用いられるファージは、代表
的には、ファージ遺伝子ＩＩＩタンパク質またはファージ遺伝子ＶＩＩＩタンパ
ク質のいずれかに組換え的に融合されたＦａｂ、Ｆｖまたはジスルフィド安定化
されたＦｖの抗体ドメインを有するファージから発現されたｆｄおよびＭ１３結
合ドメインを含む糸状ファージ（ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ ｐｈａｇｅ）である
。本発明の抗体を作製するために用いられ得るファージディスプレイ方法の例と
しては、以下に開示される方法が挙げられる：Ｂｒｉｎｋｍａｎら、Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８２：４１−５０（１９９５）；Ａｍｅｓら、Ｊ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８４：１７７−１８６（１９９５）；Ｋ
ｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：９５２−９
５８（１９９４）；Ｐｅｒｓｉｃら、Ｇｅｎｅ １８７ ９−１８（１９９７）
；Ｂｕｒｔｏｎら、Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５７：１
９１−２８０（１９９４）；ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４；Ｐ
ＣＴ公開ＷＯ９０／０２８０９；ＷＯ９１／１０７３７；ＷＯ９２／０１０４７
；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９３／１１２３６；ＷＯ９５／１５９８２；ＷＯ
９５／２０４０１；ならびに米国特許第５，６９８，４２６号；同第５，２２３
，４０９号；同第５，４０３，４８４号；同第５，５８０，７１７号；同第５，
４２７，９０８号；同第５，７５０，７５３号；同第５，８２１，０４７号；同
第５，５７１，６９８号；同第５，４２７，９０８号；同第５，５１６，６３７
号；同第５，７８０，２２５号；同第５，６５８，７２７号；同第５，７３３，
７４３号および同第５，９６９，１０８号（これらの各々は、本明細書中でその
全体が参考として援用される）。

【０２６８】 上記参考文献に記載されるように、ファージ選択後、ファージ由来の抗体をコ
ードする領域は、抗体（ヒト抗体を含む）全体、または任意の他の所望の抗原結
合フラグメントを作製するために単離されそして用いられ得、そして（例えば、
以下で詳細に記載されるように）哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母およ
び細菌を含む任意の所望の宿主において発現され得る。例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ
’およびＦ（ａｂ’）２フラグメントを組換え的に作製するための技術はまた、
当該分野で公知の方法を用いて使用され得る。このような方法は、例えば、以下
に開示される：ＰＣＴ公開ＷＯ９２／２２３２４；Ｍｕｌｌｉｎａｘら、Ｂｉｏ
Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １２（６）：８６４−８６９（１９９２）；およびＳａ
ｗａｉら、ＡＪＲＩ ３４：２６−３４（１９９５）；およびＢｅｔｔｅｒら、
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１−１０４３（１９９８）（上記の参考文献は
、その全体が参考として援用される）。

【０２６９】 単鎖のＦｖｓおよび抗体を作製するために用いられ得る技術の例としては、米
国特許第４，９４６，７７８号および同第５，２５８，４９８号；Ｈｕｓｔｏｎ
ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２０３：４６−８８（１９
９１）；Ｓｈｕら、ＰＮＡＳ ９０：７９９５−７９９９（１９９３）；および
Ｓｋｅｒｒａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０３８−１０４０（１９８８）に
記載される技術が挙げられる。ヒトにおける抗体のインビボにおける使用および
インビトロ検出アッセイを含むいくつかの用途のために、キメラ抗体、ヒト化抗
体またはヒト抗体を使用することが好ましくあり得る。キメラ抗体とは、抗体の
異なる部分が、異なる動物種に由来する分子（例えば、マウスモノクローナル抗
体由来の可変領域およびヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体）である。キ
メラ抗体を作製するための方法は、当該分野において公知である。例えば、Ｍｏ
ｒｒｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２（１９８５）；Ｏｉら、Ｂｉ
ｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４（１９８６）；Ｇｉｌｌｉｅｓら、（１９
８９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １２５：１９１−２０２；米国特
許第５，８０７，７１５号；同第４，８１６，５６７号；および同第４，８１６
，３９７号を参照のこと（これらはそれらの全体が参考として本明細書中に援用
される）。ヒト化抗体は、非ヒト種由来の１つ以上の相補生決定領域（ＣＤＲ）
およびヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域を有する所望の抗体に
結合する非ヒト種抗体由来の抗体分子である。しばしば、ヒトフレームワーク領
域内のフレームワーク残基（ｆｒａｍｅｗｏｒｋ ｒｅｓｉｄｕｅ）は、抗原結
合を変化させるため（好ましくは改善させるために）ＣＤＲドナー抗体由来の対
応残基と置換される。これらフレームワークの置換は、当該分野で周知の方法に
よって同定され、例えば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を同定するため
のＣＤＲおよびフレームワーク残基の相互作用のモデリング、ならびに特定の位
置における異常なフレームワーク残基を同定するための配列比較による。（例え
ば、Ｑｕｅｅｎら、米国特許第５，５８５，０８９号；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ．ら
、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３（１９８８）を参照のこと。これらはそれらの
全体が参考として本明細書中に援用される）。抗体は、以下に挙げる当該分野で
公知の種々の技術を用いてヒト化され得る：例えば、ＣＤＲ−移植（欧州特許第
２３９，４００号；ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０９９６７；米国特許第５，２２５，
５３９号；同第５，５３０，１０１号および同第５，５８５，０８９号）、ベニ
ヤリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）またはリサーフェイシング（ｒｅｓｕｒｆａｃ
ｉｎｇ）（欧州特許第５９２，１０６号；同第５１９，５９６号；Ｐａｄｌａｎ
、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９−４９
８（１９９１）； Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒ
ｉｎｇ ７（６）：８０５−８１４（１９９４）；Ｒｏｇｕｓｋａら、ＰＮＡＳ
９１：９６９−９７３（１９９４））、およびチェーンシャッフリング（ｃｈ
ａｉｎ ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）（米国特許第５，５６５，３３２号）。

【０２７０】 完全なヒト抗体は、ヒト患者の治療的処置に対して特に所望される。ヒト抗体
は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリーを用いた上記のファー
ジディスプレイ法を含む当該分野で公知の種々の方法により作製され得る。米国
特許第４，４４４，８８７号および同第４，７１６，１１１号；ならびにＰＣＴ
公開ＷＯ９８／４６６４５、ＷＯ９８／５０４３３、ＷＯ９８／２４８９３、Ｗ
Ｏ９８／１６６５４、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ９６／３３７３５、およびＷ
Ｏ９１／１０７４１；（これらの各々はその全体が参考として本明細書中に援用
される）もまた参照のこと。

【０２７１】 ヒト抗体はまた、機能的内因性免疫グロブリンの発現は出来ないが、ヒト免疫
グロブリン遺伝子を発現し得るトランスジェニックマウスを用いて産生され得る
。例えば、ヒト重鎖免疫グロブリン遺伝子およびヒト軽鎖免疫グロブリン遺伝子
の複合体は、無作為にまたは相同組換えによってマウス胚性幹細胞に導入され得
る。あるいは、ヒト可変領域、定常領域および多様性領域（ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｒｅｇｉｏｎ）は、ヒト重鎖遺伝子およびヒト軽鎖遺伝子に加えて、マウスの
胚性幹細胞に導入され得る。マウス重鎖免疫グロブリン遺伝子およびマウス軽鎖
免疫グロブリン遺伝子は、相同組換えによるヒト免疫グロブリン座の導入と別々
にまたは同時に非機能的にされ得る。特に、ＪＨ領域のホモ接合性の欠失は、内
因性抗体の産生を妨げる。改変された胚性幹細胞を発展させ、そしてキメラマウ
スを産生するために未分化胚芽細胞中に微量注入する。次いで、キメラマウスを
、ヒト抗体を発現するホモ接合性の子孫を産生するために繁殖させる。トランス
ジェニックマウスを、選択された抗原（例えば、本発明のポリペプチドの全体ま
たは部分）を用いて通常の様式で免疫する。抗原に指向するモノクローナル抗体
は、従来のハイブリドーマ技術を用いた免疫したトランスジェニックマウスから
得られる。ヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、トランスジェニックマウスの再編
成によってＢ細胞分化の間かくまわれ、そしてクラススイッチングおよび体細胞
変異が引き続いて起こる。従って、このような技術を使用して、治療的に有用な
ＩｇＧ抗体、ＩｇＡ抗体、ＩｇＭ抗体およびＩｇＥ抗体の産生が可能である。ヒ
ト抗体を産生するためのこの技術の概要については、ＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕ
ｓｚａｒ、Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３（１９９５）を
参照のこと。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのこの技術
、ならびにこのような抗体を産生するためのプロトコルの詳細な議論については
、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９８／２４８９３；ＷＯ９２／０１０４７；ＷＯ９６
／３４０９６；ＷＯ９６／３３７３５；欧州特許第０ ５９８ ８７７；米国特
許第５，４１３，９２３号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２
５号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６６１，０１６号；同第５，５４５
，８０６号；同第５，８１４，３１８号；同第５，８８５，７９３号；同第５，
９１６，７７１号；および同第５，９３９，５９８号を参照のこと（これらはそ
の全体が本明細書中に参考として援用される）。さらに、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎ
ｃ．（Ｆｒｅｅｍｏｎｔ，ＣＡ）およびＧｅｎｐｈａｒｍ（Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，
ＣＡ）のような企業は、上記の技術に類似した技術を用いて、選択した抗原に対
するヒト抗体を提供することに従事し得る。

【０２７２】 選択されたエピトープを完全に認識するヒト抗体を、「ガイドされた（ｇｕｉ
ｄｅｄ）選択」といわれる技術を用いて産生し得る。このアプローチにおいて、
選択された非ヒトモノクローナル抗体（例えば、マウス抗体）は、同じエピトー
プを完全に認識するヒト抗体の選択を導くために使用される。（Ｊｅｓｐｅｒｓ
ら、Ｂｉｏ／ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １２：８９９−９０３（１９８８）） さらに、本発明のポリペプチドに対する抗体は、当業者に周知の技術を用いて
本発明のポリペプチドを「模倣する」抗イディオタイプ抗体を産生するために順
々に利用され得る。（例えば、ＧｒｅｅｎｓｐａｎおよびＢｏｎａ、ＦＡＳＥＢ
Ｊ．７（５）：４３７−４４４；（１９８９）およびＮｉｓｓｉｎｏｆｆ，Ｊ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（８）：２４２９−２４３８（１９９１）を参照のこ
と）。例えば、結合して、そしてポリペプチドのマルチマー化（ｍｕｌｔｉｍｅ
ｒｉｚａｔｉｏｎ）および／またはリガンドに対する本発明のポリペプチドの結
合を競合的に阻害する抗体が、そのポリペプチドのマルチマー化ドメインおよび
／または結合ドメインを「模倣する」抗イディオタイプを産生するために使用さ
れ得、そして結果としてポリペプチドおよび／またはそのリガンドに結合し、そ
して中和する。このような中和抗イディオタイプ、またはこのような抗イディオ
タイプのＦａｂフラグメントは、ポリペプチドリガンドを中和するための治療的
レジメンにおいて使用され得る。例えば、このような抗イディオタイプ抗体は、
本発明のポリペプチドに結合するためおよび／またはそのリガンド／レセプター
に結合するために使用され得、そしてそれによってその生物学的活性がブロック
する。

【０２７３】 （抗体をコードするポリヌクレオチド） 本発明はさらに、本発明の抗体およびそのフラグメントをコードするヌクレオ
チド配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明はまた、ストリンジェント
な、またはより低いストリジェンシーのハイブリダイゼーション条件下で（例え
ば、上記に定義されるような）抗体（好ましくは、本発明のポリペプチドと特異
的に結合する、好ましくは、配列番号Ｙのアミノ酸配列を有するポリペプチドに
結合する抗体）をコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレ
オチドを含む。

【０２７４】 ポリヌクレオチドが、当該分野で公知の任意の方法によって得られ得、そして
そのポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が決定される。例えば、抗体のヌクレ
オチド配列が知られている場合、この抗体をコードするポリヌクレオチドは、化
学的に合成されたオリゴヌクレオチドから構築され得（例えば、Ｋｕｔｍｅｉｅ
ｒら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １７：２４２（１９９４）に記載されるよ
うな）、これは、簡単にいうと、以下の工程を包含する：この抗体をコードする
配列の部分を含むオーバーラップするオリゴヌクレオチドの合成、これらのオリ
ゴヌクレオチドのアニーリングおよび連結、次いでＰＣＲによる連結されたオリ
ゴヌクレオチドの増幅。

【０２７５】 あるいは、抗体をコードするポリヌクレオチドは、適切な供給源からの核酸か
ら生成され得る。特定の抗体をコードする核酸を含むクローンは入手不可能だが
、その抗体分子の配列が既知である場合、その免疫グロブリンをコードする核酸
は、化学的に合成され得るか、あるいは適切な供給源（例えば、抗体ｃＤＮＡラ
イブラリー、または抗体を発現する任意の組織もしくは細胞（例えば、本発明の
抗体の発現のために選択されたハイブリドーマ細胞）から生成されたｃＤＮＡラ
イブラリー、またはそれから単離された核酸（好ましくはポリＡ＋ＲＮＡ））か
ら、例えば、その抗体をコードするｃＤＮＡライブラリーからのｃＤＮＡクロー
ンを同定するために、配列の３’末端および５’末端にハイブリダイズ可能な合
成プライマーを使用するＰＣＲ増幅によって、または特定の遺伝子配列に特異的
なオリゴヌクレオチドプローブを使用するクローニングによって得られ得る。Ｐ
ＣＲによって生成された増幅された核酸は、次いで、当該分野で周知の任意の方
法を用いて、複製可能なクローニングベクターにクローニングされ得る。

【０２７６】 一旦、抗体のヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列が決定されると、
抗体のヌクレオチド配列は、ヌクレオチド配列の操作について当該分野で周知の
方法（例えば、組換えＤＮＡ技術、部位特異的変異誘発、ＰＣＲなど（例えば、
Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９９０，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒ
ｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ
およびＡｕｓｕｂｅｌら編、１９９８，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ
ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ
，ＮＹに記載の技術を参照のこと。これらは両方がその全体において本明細書に
参考として援用される。））を用いて操作され、例えば、アミノ酸の置換、欠失
、および／または挿入を作製するように異なるアミノ酸配列を有する抗体を生成
し得る。

【０２７７】 特定の実施形態において、重鎖および／または軽鎖の可変ドメインのアミノ酸
配列は、相補性決定領域（ＣＤＲ）の配列の同定のために、当該分野において周
知の方法によって（例えば、配列超可変性の領域を決定するために、他の重鎖、
および軽鎖の可変領域を既知のアミノ酸配列と比較することによって）調べられ
得る。慣用的な組換えＤＮＡ技術を用いて、１つ以上のＣＤＲが、前述のように
フレームワーク領域内に（例えば、非ヒト抗体をヒト化するために、ヒトフレー
ムワーク領域中に）挿入され得る。このフレームワーク領域は天然に存在し得る
か、またはコンセンサスフレームワーク領域であり得、そして好ましくはヒトフ
レームワーク領域であり得る（例えば、列挙したヒトフレームワーク領域につい
ては、Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７８：４５７−４７９（１
９９８）を参照のこと）。好ましくは、フレームワーク領域およびＣＤＲの組み
合わせによって生成されたポリヌクレオチドは、本発明のポリペプチドに特異的
に結合する抗体をコードする。好ましくは、上記に議論されるように、１つ以上
のアミノ酸置換は、フレームワーク領域内で作製され得、そして好ましくは、そ
のアミノ酸置換は、抗体のその抗原への結合を改善する。さらに、このような方
法は、１つ以上の鎖内ジスルフィド結合が欠如した抗体分子を生成するように、
鎖内ジスルフィド結合に関与する１つ以上の可変領域のシステイン残基のアミノ
酸置換または欠失を作製するために使用され得る。ポリヌクレオチドへの他の変
更は、本発明によって、および当該分野の技術において包含される。

【０２７８】 さらに、適切な抗原特異性のマウス抗体分子由来の遺伝子を、適切な生物学的
活性のヒト抗体分子由来の遺伝子と共にスプライシングさせることによって、「
キメラ抗体」を産生するために開発された技術（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：８５１−８５５（１９８４）；Ｎｅｕｂ
ｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６０４−６０８（１９８４）；Ｔａｋｅ
ｄａら、Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４５２−４５４（１９８５））が使用され得る
。上記のように、キメラ抗体は、異なる部分が異なる動物種に由来する分子であ
り、このような分子は、マウスｍＡｂおよびヒト免疫グロブリンの定常領域由来
の可変領域を有する（例えば、ヒト化抗体）。

【０２７９】 あるいは、単鎖抗体の産生に関する記載された技術（米国特許第４，９４６，
７７８号；Ｂｉｒｄ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２（１９８８）；Ｈ
ｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７
９−５８８３（１９８８）；およびＷａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５４４
−５４（１９８９））が、単鎖抗体の産生に適応され得る。単鎖抗体は、Ｆｖ領
域の重鎖フラグメントおよび軽鎖フラグメントがアミノ酸架橋を介して連結され
れることによって形成され、単鎖ポリペプチドを生じる。Ｅ．ｃｏｌｉにおける
機能性Ｆｖフラグメントのアセンブリのための技術もまた、使用され得る（Ｓｋ
ｅｒｒａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：１０３８−１０４１（１９８８））。

【０２８０】 （抗体を産生する方法） 本発明の抗体は、抗体を合成するための当該分野で公知の任意の方法によって
、特に、化学合成によって、または、好ましくは、組換え発現技術によって産生
され得る。

【０２８１】 本発明の抗体、またはそのフラグメント、誘導体もしくはアナログ（例えば、
本発明の抗体の重鎖もしくは軽鎖または本発明の単鎖抗体）の組換え発現は、そ
の抗体をコードするポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの構築を必要とす
る。一旦、本発明の抗体分子または抗体の重鎖もしくは軽鎖、あるいはそれらの
部分（好ましくは、重鎖または軽鎖の可変ドメインを含有する）をコードするポ
リヌクレオチドが得られると、抗体分子の産生のためのベクターは、当該分野で
周知の技術を用いる組換えＤＮＡ技術によって生成され得る。従って、抗体をコ
ードするヌクレオチド配列を含有するポリヌクレオチドの発現によってタンパク
質を調製するための方法は、本明細書に記載される。当業者に周知の方法は、抗
体をコードする配列ならびに適切な転写制御シグナルおよび翻訳制御シグナルを
含有する発現ベクターの構築のために使用され得る。これらの方法には、例えば
、インビトロの組換えＤＮＡ技術、合成技術、およびインビボの遺伝子組換えが
挙げられる。従って、本発明は、プロモーターに作動可能に連結された、本発明
の抗体分子、あるいはその重鎖もしくは軽鎖、または重鎖もしくは軽鎖の可変ド
メインをコードするヌクレオチド配列を含む、複製可能なベクターを提供する。
このようなベクターは、抗体分子の定常領域（例えば、ＰＣＴ公開 ＷＯ８６／
０５８０７；ＰＣＴ公開 ＷＯ８９／０１０３６；および米国特許第５，１２２
，４６４号を参照のこと）をコードするヌクレオチド配列を含み得、そしてこの
抗体の可変ドメインは、重鎖または軽鎖の全体の発現のためにこのようなベクタ
ーにクローニングされ得る。

【０２８２】 この発現ベクターは、従来技術によって宿主細胞へと移入され、そしてこのト
ランスフェクトされた細胞は、次いで、本発明の抗体を産生するために、従来技
術によって培養される。従って、本発明は、異種プロモーターに作動可能に連結
された、本発明の抗体、あるいはその重鎖もしくは軽鎖、または本発明の単鎖抗
体をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を含む。二重鎖抗体の発現につ
いての好ましい実施形態において、重鎖および軽鎖の両方をコードするベクター
は、以下に詳述されるように、免疫グロブリン分子全体の発現のために宿主細胞
中に同時発現され得る。

【０２８３】 種々の宿主発現ベクター系は、本発明の抗体分子を発現させるために利用され
得る。このような宿主発現系は、目的のコード配列が産生され、かつ続いて精製
され得るビヒクルを表わすが、また、適切なヌクレオチドをコードする配列で形
質転換またはトランスフェクトされる場合に、インサイチュで本発明の抗体分子
を発現し得る細胞を表わす。これらには、抗体をコードする配列を含む組換えバ
クテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡまたはコスミドＤＮＡ発現ベクター
を用いて形質転換された細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）
のような微生物；抗体をコードする配列を含む組換え酵母発現ベクターで形質転
換された酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐｉｃｈｉａ）；抗体を
コードする配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス
）に感染した昆虫細胞系；組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワー
モザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）に感染した植
物細胞系または抗体をコードする配列を含む組換えプラスミド発現ベクター（例
えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系；あるいは哺乳動物細胞の
ゲノムに由来するプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）また
は哺乳動物のウイルスに由来するプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プ
ロモーター；ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含む組換え発現構築
物を保有する哺乳動物細胞系（例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨＫ、２９３、３Ｔ
３細胞）が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、Ｅｓｃｈｅｒｉ
ｃｈｉａ ｃｏｌｉのような細菌細胞、そしてより好ましくは、特に、組換え抗
体分子全体の発現のために真核生物細胞が、組換え抗体分子の発現のために使用
される。例えば、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要最初期遺伝子プロモータ
ーエレメントのようなベクターと組み合わされた、チャイニーズハムスターの卵
巣細胞（ＣＨＯ）のような哺乳動物細胞が、抗体のための効果的な発現系である
（Ｆｏｅｃｋｉｎｇら、Ｇｅｎｅ ４５：１０１（１９８６）；Ｃｏｃｋｅｔｔ
ら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ８：２（１９９０））。

【０２８４】 細菌系において、多くの発現ベクターが、抗体分子の発現を意図する使用に依
存して有利に選択され得る。例えば、多量のこのようなタンパク質が産生される
べき場合、抗体分子の薬学的組成物の生成のために、容易に精製される融合タン
パク質産物の高レベルの発現を指向するベクターが所望され得る。このようなベ
クターには、抗体をコードする配列がｌａｃＺをコードする領域と共にベクター
にインフレーム（ｉｎ ｆｒａｍｅ）で個別に連結され得、その結果、融合タン
パク質が産生されるＥ．ｃｏｌｉ発現ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｔｈｅｒら、
ＥＭＢＯ Ｊ．２：１７９１（１９８３））；ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅお
よびＩｎｏｕｙｅ、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１３：３１０１−３
１０９（１９８５）；Ｖａｎ ＨｅｅｋｅおよびＳｃｈｕｓｔｅｒ、Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．２４：５５０３−５５０９（１９８９））などが挙げられるが、
これらに限定されない。ｐＧＥＸベクターもまた、グルタチオンＳ−トランスフ
ェラーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として、外来性ポリペプチドを発現させ
るために使用され得る。一般に、このような融合タンパク質は可溶性であり、そ
して溶解した細胞から、マトリックスグルタチオン−アガロースビーズへの吸着
および結合、それに続く遊離グルタチオン存在化での溶出によって容易に精製さ
れ得る。このｐＧＥＸベクターは、トロンビンまたはＸａ因子プロテアーゼ切断
部位を含むように設計され、その結果、このクローニングされた標的遺伝子産物
は、ＧＳＴ部分から放出され得る。

【０２８５】 昆虫系において、オートグラファカリフォルニカ核多核体病ウイルス（Ａｕｔ
ｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ ｎｕｃｌｅａｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒ
ｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ）（ＡｃＮＰＶ）は、外来性遺伝子を発現させるためのベ
クターとして使用される。このウイルスは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉ
ｐｅｒｄａ細胞中で増殖する。この抗体をコードする配列は、ウイルスの非必須
領域（例えば、ポリヘドリン（ｐｏｌｙｈｅｄｒｉｎ）遺伝子）に個々にクロー
ニングされ得、そしてＡｃＮＰＶプロモーター（例えば、ポリヘドリンプロモー
ター）の制御下に配置され得る。

【０２８６】 哺乳動物の宿主細胞において、多くのウイルスに基づいた発現系が利用され得
る。アデノウイルスが発現ベクターとして使用される場合、抗体をコードする目
的の配列は、アデノウイルス転写／翻訳制御複合体（例えば、後期プロモーター
および３部からなるリーダー配列）に連結され得る。次いで、このキメラ遺伝子
は、インビトロまたはインビボの組換えによって、アデノウイルスゲノム中に挿
入され得る。ウイルスのゲノムの非必須領域（例えば、領域Ｅ１またはＥ３）へ
の挿入は、感染した宿主において生存し、かつ抗体分子を発現し得る組換えウイ
ルスを生じる（例えば、ＬｏｇａｎおよびＳｈｅｎｋ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：３５５−３５９（１９８４）を参照のこと）。
特定の開始シグナルもまた、挿入された抗体をコードする配列の効率的な翻訳の
ために必要とされ得る。これらのシグナルは、ＡＴＧ開始コドンおよび隣接する
配列を含む。さらに、この開始コドンは、挿入物全体の翻訳を保証するように、
所望のコード配列のリーディングフレームと同調（ｉｎ ｐｈａｓｅ）でなけれ
ばならない。これらの外因性翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、天然および
合成の両方の種々の起源であり得る。発現の効率は、適切な転写エンハンサーエ
レメント、転写ターミネーターなどを含めることによって増大され得る（Ｂｉｔ
ｔｎｅｒら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１−５４４（
１９８７）を参照のこと）。

【０２８７】 さらに、挿入された配列の発現を調節するか、または遺伝子産物を所望の特定
の様式に改変およびプロセスする宿主細胞株が、選択され得る。タンパク質産物
のこのような改変（例えば、グリコシル化）およびプロセシング（例えば、切断
）は、タンパク質の機能にとって重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパク
質産物および遺伝子産物の翻訳後プロセシングおよび改変について特徴的かつ特
有の機構を有する。適切な細胞株または宿主系は、発現した外来性タンパク質の
正確な改変およびプロセシングを保証するように選択され得る。この目的のため
に、一次転写物の適切なプロセシング、遺伝子産物のグリコシル化、およびリン
酸化のための細胞の機構を有する真核生物の宿主細胞が使用され得る。このよう
な哺乳動物の宿主細胞には、ＣＨＯ、ＶＥＲＹ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＣＯＳ、Ｍ
ＤＣＫ、２９３、３Ｔ３、ＷＩ３８、および、特に、乳癌細胞株（例えば、ＢＴ
４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２０およびＴ４７Ｄなど）、ならびに正
常な乳腺細胞株（例えば、ＣＲＬ７０３０およびＨｓ５７８Ｂｓｔなど）が挙げ
られるが、これらに限定されない。

【０２８８】 組換えタンパク質の長期の高収率の産生のために、安定した発現が好ましい。
例えば、抗体分子を安定して発現する細胞株が操作され得る。ウイルスの複製起
点を含む発現ベクターの使用よりも、むしろ宿主細胞は、適切な発現制御エレメ
ント（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリ
アデニル化部位など）によって制御されるＤＮＡ、および選択可能なマーカーで
形質転換され得る。外来性ＤＮＡの導入に続いて、操作された細胞は、濃縮され
た培地中で１〜２日間増殖され得、次いで選択培地に切り換えられる。組換えプ
ラスミド中の選択マーカーは、選択への耐性を与え、そして細胞がプラスミドを
それらの染色体に安定に組み込み、そして増殖し、次いで細胞株にクローニング
および増殖され得る、増殖巣（ｆｏｃｉ）を形成することを可能にする。この方
法は、抗体分子を発現する細胞株を操作するために有利に使用され得る。このよ
うな操作された細胞株は、抗体分子と直接的または間接的に相互作用する化合物
のスクリーニングおよび評価において特に有用であり得る。

【０２８９】 多くの選択系が使用され得、それらには、それぞれｔｋ−、ｈｇｐｒｔ−、ま
たはａｐｒｔ−細胞において使用され得る、単純ヘルペスウイルスチミジンキナ
ーゼ（Ｗｉｇｌｅｒら、Ｃｅｌｌ １１：２２３（１９７７））、ヒポキサンチ
ン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＳｚｙｂａｌｓｋａおよびＳ
ｚｙｂａｌｓｋｉ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ４８：２
０２（１９９２））、およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏ
ｗｙら、Ｃｅｌｌ ２２：８１７（１９８０））遺伝子が挙げられるが、これら
に限定されない。また、代謝拮抗物質耐性は、以下の遺伝子に関する選択の基礎
として使用され得る：メトトレキサートへの耐性を与えるｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅ
ｒら、Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：３５７（１９８０））；Ｏ
’Ｈａｒｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：１５２
７（１９８１）；ミコフェノール酸への耐性を与えるｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ
およびＢｅｒｇ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：２０
７２（１９８１））；アミノグリコシドＧ−４１８への耐性を与えるｎｅｏ（Ｃ
ｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ １２：４８８−５０５；ＷｕおよびＷｕ、
Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７−９５（１９９１）；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ、
Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６
（１９９３）；Ｍｕｌｌｉｇａｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６−９３２（
１９９３）；ならびにＭｏｒｇａｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．
Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７（１９９３）；１９９３年５月，ＴＩＢ
ＴＥＣＨ １１（５）：１５５−２１５）；ならびにハイグロマイシンへの耐
性を与えるｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅら、Ｇｅｎｅ ３０：１４７（１９８
４））。当該分野で一般に公知である組換えＤＮＡ技術の方法は、所望の組換え
クローンの選択に慣用的に適用され得、そしてこのような方法は、例えば、Ａｕ
ｓｕｂｅｌら（編）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３
）；Ｋｒｉｅｇｌｅｒ、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓ
ｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅ
ｓｓ，ＮＹ（１９９０）；ならびにＤｒａｃｏｐｏｌｉら（編）、Ｃｕｒｒｅｎ
ｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ Ｗ
ｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９４）の１２および１３章；Ｃｏｌｂｅｒｒｅ
−Ｇａｒａｐｉｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５０：１（１９８１）に記載さ
れ、これらはその全体が本明細書において参考として援用される。

【０２９０】 抗体分子の発現レベルは、ベクター増幅によって増加され得る（総説について
は、ＢｅｂｂｉｎｇｔｏｎおよびＨｅｎｔｓｃｈｅｌ、Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ
ｖｅｃｔｏｒｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｇｅｎｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｌｏｎｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉ
ｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ，第３巻
（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）を参照のこと
）。抗体を発現するベクター系においてマーカーが増幅できる場合、宿主細胞の
培養液に存在するインヒビターのレベルの増加は、マーカー遺伝子のコピーの数
を増加する。この増幅された領域が抗体遺伝子と結合しているために、この抗体
の産生もまた、増加する（Ｃｒｏｕｓｅら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：
２５７（１９８３））。

【０２９１】 その宿主細胞は、本発明の２つの発現ベクター（重鎖に由来するポリペプチド
をコードする第１のベクターおよび軽鎖に由来するポリペプチドをコードする第
２のベクター）で同時トランスフェクトされ得る。この２つのベクターは、重鎖
および軽鎖のポリペプチドの等しい発現を可能とする同一の選択マーカーを含み
得る。あるいは、重鎖および軽鎖のポリペプチドの両方をコードし、かつその発
現を可能とする単一のベクターが使用され得る。このような状況において、この
軽鎖は、過剰の有毒な遊離重鎖を避けるために、重鎖の前に配置されるべきであ
る（Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ、Ｎａｔｕｒｅ ３２２：５２（１９８６）；Ｋｏｈｌ
ｅｒ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：２１９７（１９
８０））。重鎖および軽鎖のコード配列は、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡを含み
得る。

【０２９２】 一旦、本発明の抗体分子が、動物、化学合成、または組換え発現によって産生
されると、この抗体分子は、免疫グロブリン分子の精製に関する当該分野で公知
の任意の方法によって（例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換クロ
マトグラフィー、アフィニティー（特に、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａの後の特異的抗原
へのアフィニティーによる）クロマトグラフィー、およびサイジング（ｓｉｚｉ
ｎｇ）カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、差示的溶解度によって、または
タンパク質の精製に関する他の任意の標準的な技術によって）精製され得る。さ
らに、本発明の抗体またはそのフラグメントは、精製を容易にするために、本明
細書に記載されるか、またはそうでなければ当該分野で公知の異種ポリペプチド
配列と融合され得る。

【０２９３】 本発明は、融合タンパク質を生成するために、本発明のポリペプチド（または
それらの一部、好ましくは、ポリペプチドの少なくとも１０、２０、３０、４０
、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００個のアミノ酸）に組換え的に融
合されたか、あるいは化学的に結合（共有結合および非共有結合の両方を含む）
された抗体を含む。この融合は、必ずしも直接的である必要はないが、リンカー
配列を通して起こり得る。この抗体は、本発明のポリペプチド（またはそれらの
一部、好ましくは、ポリペプチドの少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、
６０、７０、８０、９０もしくは１００個のアミノ酸）以外の抗原に特異的であ
り得る。例えば、本発明のポリペプチドを、特定の細胞表面レセプターに特異的
な抗体に融合させるかまたは結合させることによって、抗体は、インビトロまた
はインビボのいずれかで本発明のポリペプチドを特定の細胞型に標的化するため
に使用され得る。本発明のポリペプチドに融合されたかまたは結合された抗体は
また、当該分野で公知の方法を使用してインビトロイムノアッセイおよび精製方
法にて使用され得る。例えば、Ｈａｒｂｏｒら、前出およびＰＣＴ公開ＷＯ ９
３／２１２３２；ＥＰ ４３９，０９５；Ｎａｒａｍｕｒａら、Ｉｍｍｕｎｏｌ
．Ｌｅｔｔ．３９：９１−９９（１９９４）；米国特許第５，４７４，９８１号
；Ｇｉｌｌｉｅｓら、ＰＮＡＳ ８９：１４２８−１４３２（１９９２）；Ｆｅ
ｌｌら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：２４４６−２４５２（１９９１）（これ
らは、それらの全体において参考として援用される）を参照のこと。

【０２９４】 本発明はさらに、可変領域以外の抗体のドメインに融合されたかまたは結合さ
れた本発明のポリペプチドを含む組成物を含む。例えば、本発明のポリペプチド
を、抗体のＦｃ領域、あるいはその一部に融合または結合され得る。本発明のポ
リペプチドに融合された抗体部分は、定常領域、ヒンジ領域、ＣＨ１ドメイン、
ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメイン、あるいはそれらのドメイン全体または
部分の任意の組合せを含み得る。このポリペプチドはまた、上記の抗体部分に融
合または結合され、マルチマーを形成し得る。例えば、本発明のポリペプチドに
融合されたＦｃ部分は、Ｆｃ部分間のジスルフィド結合を介して二量体を形成し
得る。より高次なマルチマー形態は、このポリペプチドをＩｇＡおよびＩｇＭの
部分に融合することにより作製され得る。本発明のポリペプチドを抗体部分に融
合または結合するための方法は、当該分野において公知である。例えば、米国特
許第５，３３６，６０３号；同第５，６２２，９２９号；同第５，３５９，０４
６号；同第５，３４９，０５３号；同第５，４４７，８５１号；同第５，１１２
，９４６号；ＥＰ ３０７，４３４；ＥＰ ３６７，１６６；ＰＣＴ公開ＷＯ
９６／０４３８８；ＷＯ ９１／０６５７０；Ａｓｈｋｅｎａｚｉら、Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１０５３５−１０５３９（１９
９１）；Ｚｈｅｎｇら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５５９０−５６００（１
９９５）；およびＶｉｌら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
８９：１１３３７−１１３４１（１９９２）（上記の参考文献は、それらの全体
が参考として援用される）を参照のこと。

【０２９５】 上記で議論されたように、配列番号Ｙのポリペプチド、ポリペプチドフラグメ
ント、または改変体に対応するポリペプチドは、上記の抗体部分に融合または結
合され得、このポリペプチドのインビボの半減期を増加するか、または当該分野
で公知の方法を使用するイムノアッセイにおいて使用される。さらに、配列番号
Ｙに対応するポリペプチドは、精製を容易にするために、上記の抗体部分に融合
または結合され得る。１つの報告された例は、ヒトＣＤ４ポリペプチドの最初の
２つのドメインおよび哺乳動物免疫グロブリンの重鎖または軽鎖の定常領域の種
々のドメインからなるキメラタンパク質を記載する。（ＥＰ ３９４，８２７；
Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３３１：８４−８６（１９８８））。
ジスルフィド連結した二量体構造（ＩｇＧに起因する）を有する抗体に融合また
は結合された本発明のポリペプチドはまた、単量体分泌タンパク質またはタンパ
ク質フラグメント単独よりも、他の分子との結合および中和においてより効率的
であり得る。（Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７０：３
９５８−３９６４（１９９５））。多くの場合において、融合タンパク質のＦｃ
部分は、治療および診断において有利であり、従って、例えば、改良された薬物
動態学的な特性を生じ得る。（ＥＰ Ａ ２３２，２６２）。あるいは、融合タ
ンパク質が発現、検出、および精製された後のＦｃ部分の欠損は、好ましい。例
えば、この融合タンパク質が免疫化のための抗原として使用される場合、このＦ
ｃタンパク質は、治療および診断を妨げ得る。薬物の発見において、例えば、ヒ
トタンパク質（例えばｈＩＬ−５）は、ｈＩＬ−５のアンタゴニストを同定する
ための高スループットスクリーニングアッセイの目的のために、Ｆｃタンパク質
と融合された。（Ｂｅｎｎｅｔｔら、Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｃｏｇｎｉ
ｔｉｏｎ ８：５２−５８（１９９５）；Ｊｏｈａｎｓｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．
Ｃｈｅｍ．２７０：９４５９−９４７１（１９９５）を参照のこと。） さらに、本発明の抗体またはそれらのフラグメントは、精製を容易にするペプ
チドのような、マーカー配列と融合され得る。好ましい実施形態において、この
マーカーアミノ酸配列は、とりわけ、ｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ、Ｉｎｃ．
，９２５９ Ｅｔｏｎ Ａｖｅｎｕｅ，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ，９１３１
１）において提供されるタグのようなヘキサ−ヒスチジンペプチドであり、それ
らの多くは市販されている。例えば、Ｇｅｎｔｚら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８２１−８２４（１９８９）に記載されるように
、ヘキサ−ヒスチジンは、融合タンパク質の簡便な精製を提供する。精製に有用
な他のペプチドタグには、インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質由来のエピト
ープに対応する「ＨＡ」タグ（Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ ３７：７６７（１９
８４））および「ｆｌａｇ」タグが挙げられるが、これらに限定されない。

【０２９６】 本発明はさらに、診断剤または治療剤に結合される抗体またはそのフラグメン
トを含む。この抗体は、例えば、臨床試験の手順の一部（例えば、所定の治療レ
ジメンの有効性を決定するための）として、腫瘍の発生または進行をモニターす
るために診断的に使用され得る。検出は、抗体を検出可能な物質にカップリング
することによって容易にされ得る。検出可能な物質の例には、種々の酵素、補欠
分子群、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、放射性物質、種々の陽子射出断層
撮影法を使用する陽電子放射金属、および非放射性常磁性金属イオンが挙げられ
る。この検出可能な物質は、当該分野で公知の技術を用いて、抗体（または、そ
れらのフラグメント）に直接的にか、または中間体（例えば、当該分野で公知の
リンカーなど）を介して間接的にかのいずれかで、カップリングまたは結合され
得る。本発明に従う診断剤として使用するための抗体に結合され得る金属イオン
については、例えば、米国特許第４，７４１，９００号を参照のこと。適切な酵
素の例には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラ
クトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが挙げられ；適切な補欠分子
群複合体の例には、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが
挙げられ；適切な蛍光物質の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フル
オレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフル
オレセイン、ダンシルクロライドまたはフィコエリトリンが挙げられ；発光物質
の例には、ルミノールが挙げられ；生物発光物質の例には、ルシフェラーゼ、ル
シフェリン、およびエクオリンが挙げられ；そして適切な放射性物質の例には、
１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎまたは９９Ｔｃが挙げられる。

【０２９７】 さらに、抗体またはそのフラグメントは、細胞毒（例えば、細胞増殖抑制剤ま
たは細胞破壊剤）、治療剤または放射性金属イオン（例えば、α線放射体（ａｌ
ｐｈａ−ｅｍｉｔｔｅｒ）（例えば、２１３Ｂｉなど））のような治療的な部分
と結合され得る。細胞毒または細胞毒性の薬剤は、細胞に有害な任意の薬剤を含
む。例には、パクリタキセル、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウム
ブロマイド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド（ｔｅｎｏｐ
ｏｓｉｄｅ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン
、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトザントロン、ミトラ
マイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコ
イド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびプロ
マイシンならびにそれらのアナログまたはホモログが挙げられる。治療剤として
は、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チ
オグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤
（例えば、メクロレタミン（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、チオエパ（ｔ
ｉｏｅｐａ）クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）および
ロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉ
ｄｅ）、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン（ｓｔｒｅ
ｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ）、マイトマイシンＣ、およびシス−ジクロロジアミン白
金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（ａｎｔｈｒａｃｙ
ｃｌｉｎｅ）（例えば、ダウノルビシン（以前はダウノマイシン）、およびドキ
ソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前は、アクチノマイシ
ン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ａｎｔｈｒ
ａｍｙｃｉｎ）（ＡＭＣ））、ならびに抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチン
およびビンブラスチン）が挙げられるが、これらに限定されない。

【０２９８】 本発明の結合体は、所定の生物学的応答の改変のために使用され得、この治療
剤または薬物部分は、古典的な化学治療剤に制限されると解釈されるべきではな
い。例えば、この薬物部分は、所望の生物学的活性を保有するタンパク質または
ポリペプチドであり得る。このようなタンパク質には、例えば、アブリン、リシ
ンＡ、シュードモナス外毒素、またはジフテリア毒素のような毒素；腫瘍壊死因
子、α−インターフェロン、β−インターフェロン、神経成長因子、血小板由来
成長因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、アポトーシス剤（例えば、ＴＮＦ
−α、ＴＮＦ−β、ＡＩＭ Ｉ（国際公開番号ＷＯ ９７／３３８９９を参照の
こと）、ＡＩＭ ＩＩ（国際公開番号ＷＯ ９７／３４９１１を参照のこと）、
Ｆａｓリガンド（Ｔａｋａｈａｓｈｉら、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、６：１５
６７−１５７４（１９９４））、ＶＥＧＩ（国際公開番号ＷＯ ９９／２３１０
５を参照のこと）、血栓剤または抗脈管形成剤（例えば、アンジオスタチン（ａ
ｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）またはエンドスタチン（ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ））のよ
うなタンパク質；あるいは、生物学的応答改変剤（例えば、リンホカイン、イン
ターロイキン−１（「ＩＬ−１」）、インターロイキン−２（「ＩＬ−２」）、
インターロイキン−６（「ＩＬ−６」）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因
子（「ＧＭ−ＣＳＦ」）、顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳＦ」）、または
他の増殖因子など）が挙げられ得る。

【０２９９】 抗体はまた、標的抗原のイムノアッセイまたは精製に特に有用な固体支持体に
付着され得る。このような固体支持体には、ガラス、セルロース、ポリアクリル
アミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニルまたはポリプロピレンが挙げ
られるが、これらに限定されない。

【０３００】 このような治療部分を抗体に結合する技術は周知であり、例えば、Ａｒｎｏｎ
ら、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔ
ａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」
Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅ
ｒａｐｙ、Ｒｅｉｓｆｅｌｄら（編）、２４３−５６頁（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓ
ｓ，Ｉｎｃ．１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆ
ｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅ
ｌｉｖｅｒｙ（第２版）、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら（編）、６２３−５３頁（Ｍａｒ
ｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ、「Ａｎｔｉｂｏｄ
ｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａ
ｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ」、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎ
ｔｉｂｏｄｉｅｓ‘８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ
Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐｉｎｃｈｅｒａら（編）、４７５−５０６頁（１
９８５）；「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒ
ｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ
Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃｎａｃｅｒ Ｔｈｅｒ
ａｐｙ」、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅ
ｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂａｌｄｗｉｎら（編）、
３０３−１６頁（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９８５）、およびＴｈｏｒ
ｐｅら、「Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐ
ｒｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔ
ｅｓ」、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−５８（１９８２）を参照のこ
と。

【０３０１】 あるいは、抗体は２次抗体に結合され、米国特許第４，６７６，９８０号（こ
れは、その全体が本明細書に参考として援用される）におけるＳｅｇａｌによる
記載のような抗体異種結合体（ｈｅｔｅｒｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）を形成し得る
。

【０３０２】 単独、あるいは細胞毒性因子および／またはサイトカインと組み合わせて投与
される、抗体に結合される治療部分を有するかまたは有さない抗体が、治療薬と
して使用され得る。

【０３０３】 （免疫表現型分類（ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ）） 本発明の抗体は、細胞株および生物学的サンプルの免疫表現型分類のために利
用され得る。本発明の遺伝子の翻訳生成物は、細胞特異的マーカーとして、ある
いはより詳細には、特定の細胞型の分化および／または成熟の種々の段階で差示
的に発現される細胞マーカーとして有用であり得る。特異的エピトープ、または
エピトープの組み合わせに対して指向されるモノクロナール抗体は、マーカーを
発現する細胞集団のスクリーニングを可能とする。種々の技術が、マーカーを発
現する細胞集団をスクリーニングするために、モノクロナール抗体を用いて利用
され得、そしてその技術には、抗体でコーティングされた磁気ビーズを用いる磁
気分離、固体マトリクス（すなわち、プレート）に付着した抗体を用いる「パン
ニング（ｐａｎｎｉｎｇ）」、ならびにフローサイトメトリーが挙げられる（例
えば、米国特許第５，９８５，６６０号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｃｅｌｌ
，９６：７３７−４９（１９９９）を参照のこと）。

【０３０４】 これらの技術は、血液学的悪性腫瘍（すなわち、急性白血病患者における最少
残留疾患（ｍｉｎｉｍａｌ ｒｅｓｉｄｕａｌ ｄｉｓｅａｓｅ）（ＭＲＤ））
および対宿主性移植片病（ＧＶＨＤ）を予防するための移植術における「非自己
」細胞と共に見出され得るような、細胞の特定集団のスクリーニングを可能にす
る。あるいは、これらの技術は、ヒト臍帯血において見出され得るような増殖お
よび／または分化を起こし得る、造血幹細胞および先祖細胞のスクリーニングを
可能にする。

【０３０５】 （抗体結合についてのアッセイ） 本発明の抗体は、当該分野において公知の任意の方法により、免疫特異的結合
についてアッセイされ得る。用いられ得る免疫アッセイとしては、（いくつかの
ものについてだけ名称を挙げると、ウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ
、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、「サンドイッチ」イムノアッセイ
、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集ア
ッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射定量アッセイ、蛍光イムノアッセイ、プロ
テインＡイムノアッセイのような技術を用いる競合アッセイ系および非競合アッ
セイ系が挙げられるが、これらに限定されない。このようなアッセイは慣用的で
あり、そして当該分野において周知である（例えば、その全体が本明細書中に参
考として援用される、Ａｕｓｕｂｅｌら編，１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏ
ｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻、Ｊｏｈｎ
Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと）。例
示的なイムノアッセイが、以下に簡潔に記載される（しかし、これらは限定を目
的とすることが意図されない）。

【０３０６】 免疫沈降プロトコルは一般に、タンパク質ホスファターゼおよび／またはプロ
テアーゼインヒビター（例えば、ＥＤＴＡ、ＰＭＳＦ、アプロチニン、バナジン
酸ナトリウム）を補充したＲＩＰＡ緩衝液（１％ ＮＰ−４０またはＴｒｉｔｏ
ｎ Ｘ−１００、１％ デオキシコール酸ナトリウム、０．１％ ＳＤＳ、０．
１５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ７．２での０．０１Ｍ リン酸ナトリウム、１％ Ｔｒ
ａｓｙｌｏｌ）のような溶解緩衝液中で細胞の集団を溶解する工程、目的の抗体
を細胞溶解物に添加する工程、一定時間（例えば、１〜４時間）４℃でインキュ
ベートする工程、プロテインＡおよび／またはプロテインＧセファロースビーズ
を細胞溶解物に添加する工程、約１時間以上４℃でインキュベートする工程、溶
解緩衝液中でビーズを洗浄する工程、ならびにＳＤＳ／サンプル緩衝液中でビー
ズを再懸濁する工程を含む。目的の抗体の、特定の抗原を免疫沈降する能力は、
例えば、ウエスタンブロット分析により、アッセイされ得る。当業者は、抗体の
抗原への結合を増加させ、そしてバックグラウンドを減少させるように改変され
得るパラメータ（例えば、セファロースビーズを用いて細胞溶解物を事前にきれ
いにすること）に関して、精通している。免疫沈降プロトコルに関するさらなる
考察については、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら編，１９９４、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐ
ｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻、Ｊｏ
ｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１０．１６．
１を参照のこと。

【０３０７】 ウエスタンブロット分析は、一般に、タンパク質サンプルを調製する工程、タ
ンパク質サンプルをポリアクリルアミドゲル（例えば、抗原の分子量に応じた８
％〜２０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）中で電気泳動する工程、タンパク質サンプルをそ
のポリアクリルアミドゲルからニトロセルロース、ＰＶＤＦまたはナイロンのよ
うな膜に移す工程、ブロッキング溶液（例えば、３％ ＢＳＡまたは脱脂粉乳を
有するＰＢＳ）中でその膜をブロッキングする工程、その膜を洗浄緩衝液（例え
ば、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ ２０）中で洗浄する工程、ブロッキング緩衝液中で希
釈された一次抗体（目的の抗体）を有するその膜をブロッキングする工程、その
膜を洗浄緩衝液中で洗浄する工程、ブロッキング緩衝液中で希釈された酵素基質
（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）あるい
は放射性分子（例えば、３２Ｐまたは１２５Ｉ）に結合した二次抗体（一次抗体
を認識する、例えば、抗ヒト抗体）を用いてその膜をブロッキングする工程、洗
浄緩衝液中でその膜を洗浄する工程、ならびにその抗原の存在を検出する工程を
含む。当業者は、検出されるシグナルを増加させ、そしてバックグラウンドノイ
ズを減少させるように改変され得るパラメータに関して、精通している。ウエス
タンブロットプロトコルに関するさらなる考察については、例えば、Ａｕｓｕｂ
ｅｌら編，１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉ
ｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１０．８．１を参照のこと。

【０３０８】 ＥＬＩＳＡは、抗原を調製する工程、９６ウェルマイクロタイタープレートの
ウェルをその抗原でコーティングする工程、酵素基質（例えば、西洋ワサビペル
オキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）のような検出可能な化合物に結合
した目的の抗体をそのウェルに添加し、そして一定時間インキュベートする工程
、および抗原の存在を検出する工程を含む。ＥＬＩＳＡにおいて、目的の抗体は
、検出可能な化合物に結合されている必要はない；その代わり、検出可能な化合
物に結合した二次抗体（目的の抗体を認識する）がウェルに添加され得る。さら
に、ウェルを抗原でコーティングする代わりに、抗体がウェルにコーティングさ
れ得る。この場合、検出可能な化合物に結合した二次抗体が、コーティングされ
たウェルへの目的の抗原の添加に続いて、添加され得る。当業者は、検出される
シグナルを増加させるように改変され得るパラメータ、および当該分野において
公知のＥＬＩＳＡの他のバリエーションに関して、精通している。ＥＬＩＳＡに
関するさらなる考察については、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら編，１９９４，Ｃｕ
ｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ
，第１巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ
，１１．２．１を参照のこと。

【０３０９】 抗体の抗原に対する抗体の結合親和性および抗体−抗原相互作用のオフレート
（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）が、競合結合アッセイにより決定され得る。競合結合アッ
セイの一つの例は、ラジオイムノアッセイであり、ラジオイムノアッセイは、漸
増量の非標識抗原の存在下での標識した抗原（例えば、３Ｈまたは１２５Ｉ）と
目的の抗体とのインキュベーション、および標識した抗原に結合した抗体の検出
を含む。目的の抗体の、特定の抗原に対する親和性、および結合オフレートは、
スキャッチャードプロット分析によるデータから決定され得る。二次抗体との競
合はまた、ラジオイムノアッセイを用いて決定され得る。この場合、抗原は、漸
増量の非標識二次抗体の存在下で、標識した化合物（例えば、３Ｈまたは１２５
Ｉ）に結合した目的の抗体とともにインキュベートされる。

【０３１０】 （治療用途） 本発明はさらに、抗体を基礎とした治療に関し、この治療は、本発明の抗体を
、１つ以上の開示された疾患、障害、または状態を処置するために、動物、好ま
しくは哺乳動物、そして最も好ましくはヒトの患者に投与する工程を含む。本発
明の治療化合物としては、本発明の抗体（本明細書中に記載するような、それら
のフラグメント、アナログおよび誘導体を含む）ならびに本発明の抗体をコード
する核酸（本明細書中に記載するような、それらのフラグメント、アナログおよ
び誘導体ならびに抗イディオタイプ抗体を含む）が挙げられるがこれらに限定さ
れない。本発明の抗体は、本発明のポリペプチドの異常な発現および／または活
性に関連した疾患、障害または状態（本明細書中に記載する任意の１つ以上の疾
患、障害、または状態を含むがこれらに限定されない）を処置、阻害または予防
するために使用され得る。本発明のポリペプチドの異常な発現および／または活
性に関連した疾患、障害または状態の処置および／または予防は、それらの疾患
、障害または状態に関連した症状の緩和を含むがこれに限定されない。本発明の
抗体は、当該分野で公知であるように、または本明細書中に記載されるように、
薬学的に受容可能な組成物中に提供され得る。

【０３１１】 本発明の抗体が治療的に使用され得る方法の１つの要約は、身体内で局所的に
または全身的に、あるいは（例えば、補体（ＣＤＣ）により、またはエフェクタ
ー細胞（ＡＤＣＣ）により媒介されるような）抗体の直接的細胞傷害性により、
本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを結合させることを含む。これら
のアプローチのいくつかは、より詳細に以下に記載される。本明細書中で提供さ
れる教示を与えられれば、当業者は、過度の実験なしに、診断上の目的、モニタ
リングの目的あるいは治療上の目的のために、本発明の抗体を使用する方法を理
解する。

【０３１２】 本発明の抗体は、例えば、抗体と相互作用するエフェクター細胞の数または活
性を増加させるために役立つ、他のモノクローナル抗体またはキメラ抗体、ある
いはリンホカインまたは造血増殖因子（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−３およびＩＬ
−７など）と組み合わせて有利に利用され得る。

【０３１３】 本発明の抗体は、単独で、または他の型の処置（例えば、放射線療法、化学療
法、ホルモン治療、免疫治療および抗腫瘍剤）との組み合わせで投与され得る。
一般的に、（抗体の場合には）患者の種と同じ種である種起源または種反応性の
生成物の投与が好ましい。従って、好ましい実施形態においては、ヒトの抗体、
フラグメント誘導体、アナログ、または核酸が、治療または予防のために、ヒト
の患者に投与される。

【０３１４】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド（それらのフラグメントを含む
）に対するイムノアッセイ、およびそれらに関連した障害の治療の両方のために
、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドに対する、高親和性および／ま
たは強力な、インビボでの阻害抗体および／または中和抗体、それらのフラグメ
ント、またはその領域を使用することが好ましい。このような抗体、フラグメン
ト、または領域は、好ましくは、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド
（それらのフラグメントを含む）に対して親和性を有する。好ましい結合親和性
としては、５×１０^-2Ｍ、１０^-2Ｍ、５×１０^-3Ｍ、１０^-3Ｍ、５×１０^-4Ｍ、
１０^-4Ｍ、５×１０^-5Ｍ、１０^-5Ｍ、５×１０^-6Ｍ、１０^-6Ｍ、５×１０^-7Ｍ、
１０^-7Ｍ、５×１０^-8Ｍ、１０^-8Ｍ、５×１０^-9Ｍ、１０^-9Ｍ、５×１０^-10Ｍ
、１０^-10Ｍ、５×１０^-11Ｍ、１０^-11Ｍ、５×１０^-12Ｍ、１０^-12Ｍ、５×１
０^-13Ｍ、１０^-13Ｍ、５×１０^-14Ｍ、１０^-14Ｍ、５×１０^-15Ｍ、および１０^{- 15} Ｍよりも小さい解離定数すなわちＫｄを有する結合親和性が挙げられる。

【０３１５】 （遺伝子治療） 特定の実施形態において、抗体またはその機能的誘導体をコードする配列を含
む核酸は、本発明のポリペプチドの異常な発現および／または活性に関連した疾
患または障害を処置、阻害または予防するために、遺伝子治療の目的で投与され
る。遺伝子治療とは、発現したか、または発現可能な核酸の、被験体への投与に
より行われる治療をいう。本発明のこの実施形態において、核酸は、それらのコ
ードされたタンパク質を産生し、そのタンパク質は治療効果を媒介する。

【０３１６】 当該分野で利用可能な遺伝子治療のための任意の方法は、本発明に従って使用
され得る。例示的な方法が以下に記載される。

【０３１７】 遺伝子治療の方法の一般的な概説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら，Ｃｌｉ
ｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ １２：４８８−５０５（１９９３）；Ｗｕおよ
びＷｕ，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７−９５（１９９１）；Ｔｏｌｓｔｏｓ
ｈｅｖ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３
−５９６（１９９３）；Ｍｕｌｌｉｇａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６−
９３２（１９９３）；ならびにＭｏｒｇａｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ，Ａｎｎ．
Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７（１９９３）；Ｍａｙ，ＴＩＢ
ＴＥＣＨ １１（５）：１５５−２１５（１９９３）を参照のこと。使用され得
る、組換えＤＮＡ技術分野において一般的に公知である方法は、Ａｕｓｕｂｅｌ
ら（編），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；お
よびＫｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓ
ｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅ
ｓｓ，ＮＹ（１９９０）に記載される。

【０３１８】 好ましい局面において、化合物は抗体をコードする核酸配列を含有し、上記核
酸配列は、適切な宿主において、抗体、あるいはそのフラグメントもしくはキメ
ラタンパク質、またはその重鎖もしくは軽鎖を発現する発現ベクターの一部であ
る。特に、このような核酸配列は、抗体コード領域に作動可能に連結したプロモ
ーターを有し、上記プロモーターは誘導性であるかまたは構成性であり、そして
必要に応じて組織特異的である。別の特定の実施形態においては、抗体をコード
する配列および任意の他の所望の配列がゲノム中の所望の部位での相同組換えを
促進する領域に隣接した核酸分子が使用され、それにより抗体をコードする核酸
の染色体内の発現を提供する（ＫｏｌｌｅｒおよびＳｍｉｔｈｉｅｓ，Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９３２−８９３５（１９８９
）；Ｚｉｊｌｓｔｒａら，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５−４３８（１９８９）
）。特定の実施形態において、発現した抗体分子は単鎖抗体であるか；あるいは
この核酸配列は、この抗体の重鎖および軽鎖の両方をコードする配列またはその
フラグメントを含む。

【０３１９】 核酸の患者への送達は、直接的（この場合、患者は核酸または核酸保有ベクタ
ーに直接的に曝される）か、または間接的（この場合、細胞は最初にインビトロ
で核酸で形質転換され、次いで患者に移植される）のいずれかであり得る。これ
らの２つのアプローチは、インビボ遺伝子治療として、またはエキソビボ遺伝子
治療としてそれぞれ公知である。

【０３２０】 特定の実施形態において、核酸配列はインビボで直接的に投与され、そこで核
酸配列は発現されて、コードされた生成物を産生する。これは、当該分野で公知
の多数の方法（例えば、それらを適切な核酸発現ベクターの一部として構築し、
そしてそれを細胞内になるように投与することにより（例えば、欠損性または弱
毒化したレトロウイルスまたは他のウイルスベクター（米国特許第４，９８０，
２８６号を参照のこと）を用いた感染により）、あるいは、裸のＤＮＡの直接注
射により、あるいは、微粒子ボンバードメント（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉ
ｓｔｉｃ、Ｄｕｐｏｎｔ）の使用により、あるいは脂質または細胞表面レセプタ
ーでコーティングするか、あるいは薬剤をトランスフェクトすること、リポソー
ム、微粒子、またはマイクロカプセル中へのカプセル化により、あるいは、それ
らを核に入ることが公知であるペプチドと結合させて投与することにより、レセ
プター媒介のエンドサイトーシスを受けるリガンドと結合させて投与することに
より（例えば、ＷｕおよびＷｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−
４４３２（１９８７）を参照のこと）（レセプターを特異的に発現する細胞の型
を標的にするために用いられ得る）などのいずれかにより達成され得る。別の実
施形態において、核酸−リガンド複合体が形成され得、ここで、リガンドはエン
ドソームを破壊するフソジェニック（ｆｕｓｏｇｅｎｉｃ）ウイルス性ペプチド
を含み、核酸がリソソーム分解を回避することを可能にする。さらに別の実施形
態において、核酸は、特異的なレセプターを標的化することにより、細胞特異的
な取り込みおよび発現についてインビボで標的化され得る（例えば、ＰＣＴ公開
第ＷＯ９２／０６１８０号；同第ＷＯ９２／２２６３５号；同第ＷＯ９２／２０
３１６号；同第ＷＯ９３／１４１８８号、同第ＷＯ９３／２０２２１号を参照の
こと）。あるいは、核酸は、細胞内部に導入され得、そして相同組換えにより、
発現のために宿主細胞ＤＮＡ中に組み込まれ得る（ＫｏｌｌｅｒおよびＳｍｉｔ
ｈｉｅｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９３２−
８９３５（１９８９）；Ｚｉｊｌｓｔｒａら，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５−
４３８（１９８９））。

【０３２１】 特定の実施形態において、本発明の抗体をコードする核酸配列を含むウイルス
ベクターが使用される。例えば、レトロウイルスベクターが用いられ得る（Ｍｉ
ｌｌｅｒら，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５８１−５９９（１９９３）
を参照のこと）。これらのレトロウイルスベクターは、ウイルス性ゲノムの正確
なパッケージングおよび宿主細胞ＤＮＡへの組込みのために必要な構成要素を含
む。遺伝子治療において使用される抗体をコードする核酸配列は、一つ以上のベ
クター中にクローン化され、これは、患者内への遺伝子の送達を容易にする。レ
トロウイルスベクターに関するさらなる詳細は、Ｂｏｅｓｅｎら，Ｂｉｏｔｈｅ
ｒａｐｙ ６：２９１−３０２（１９９４）（これは、幹細胞を化学療法に対し
てより耐性にするために、ｍｄｒＩ遺伝子を造血性幹細胞に送達するための、レ
トロウイルスベクターの使用を記載する）に見出され得る。遺伝子治療における
レトロウイルスベクターの使用を説明する他の参考文献は、以下である：Ｃｌｏ
ｗｅｓら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９３：６４４−６５１（１９９４）；
Ｋｉｅｍら，Ｂｌｏｏｄ ８３：１４６７−１４７３（１９９４）；Ｓａｌｍｏ
ｎｓおよびＧｕｎｚｂｅｒｇ，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ４：１
２９−１４１（１９９３）；ならびにＧｒｏｓｓｍａｎおよびＷｉｌｓｏｎ，Ｃ
ｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．３：１１０−１１
４（１９９３）。

【０３２２】 アデノウイルスは、遺伝子治療において使用され得る他のウイルスベクターで
ある。アデノウイルスは、特に、気道上皮へ遺伝子を送達するための魅力的なビ
ヒクルである。アデノウイルスは、自然に気道上皮に感染し、そこで軽い疾患を
起こす。アデノウイルスに基づく送達システムの他の標的は、肝臓、中枢神経系
、内皮細胞、および筋肉である。アデノウイルスは、非分裂細胞に感染すること
ができるという利点を有する。ＫｏｚａｒｓｋｙおよびＷｉｌｓｏｎ，Ｃｕｒｒ
ｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍ
ｅｎｔ ３：４９９−５０３（１９９３）は、アデノウイルスに基づく遺伝子治
療の概説を示す。Ｂｏｕｔら，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ５：３
−１０（１９９４）は、アカゲザルの気道上皮に遺伝子を移入するためのアデノ
ウイルスベクターの使用を証明した。遺伝子治療におけるアデノウイルスの使用
の他の例は、Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２：４３１−４３４
（１９９１）；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら，Ｃｅｌｌ ６８：１４３−１５５（１９
９２）；Ｍａｓｔｒａｎｇｅｌｉら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９１：２２
５−２３４（１９９３）；ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／１２６４９号；およびＷａｎ
ｇら，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２：７７５−７８３（１９９５）に見出され
得る。好ましい実施形態において、アデノウイルスベクターが使用される。

【０３２３】 アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）はまた、遺伝子治療における使用について提唱
されている（Ｗａｌｓｈら、Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．２
０４：２８９〜３００（１９９３）；米国特許第５，４３６，１４６号）。

【０３２４】 遺伝子治療の別のアプローチは、エレクトロポレーション、リポフェクチン、
リン酸カルシウム媒介トランスフェクションまたはウイルス感染のような方法に
より組織培養中の細胞に遺伝子を移入する工程を包含する。通常、移入の方法は
、細胞への選択マーカーの移入を含む。次いで、この細胞は、取り上げられそし
て移入された遺伝子を発現しているそれらの細胞を単離する選択下に配置される
。次いで、これらの細胞は、患者に送達される。

【０３２５】 この実施形態において、核酸は、細胞に導入され、その後、得られた組換え細
胞がインビボ投与される。このような導入は、当該分野で公知の任意の方法によ
り実行され得る。この方法としては、トランスフェクション、エレクトロポレー
ション、マイクロインジェクション、この核酸配列を含むウイルスまたはバクテ
リオファージベクターを用いた感染、細胞融合、染色体媒介遺伝子移入、微小核
体（ｍｉｃｒｏｃｅｌｌ）媒介遺伝子移入、スフェロプラスト融合などが挙げら
れるがこれらに限定されない。多くの技術が細胞への外来遺伝子の導入のために
当該分野で公知であり（例えば、ＬｏｅｆｆｌｅｒおよびＢｅｈｒ、Ｍｅｔｈ．
Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５９９〜６１８（１９９３）；Ｃｏｈｅｎら、Ｍｅｔ
ｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：６１８〜６４４（１９９３）；Ｃｌｉｎｅ，Ｐｈ
ａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．２９：６９〜９２ｍ（１９８５）を参照のこと）、そし
て、レシピエント細胞の必要な発生機能および生理学的機能が破壊されない条件
下であれば、本発明に従って用いられ得る。この技術は、核酸が細胞で発現可能
であり、そして好ましくはその細胞の子孫に遺伝および発現可能であるようにそ
の細胞への核酸の安定な移入を提供するべきである。

【０３２６】 得られた組換え細胞は、当該分野で公知の種々の方法により患者に送達され得
る。組換え血球（例えば、造血幹細胞または前駆細胞）は、好ましくは静脈内投
与される。使用のために想定される細胞の量は、所望の効果、患者状態などに依
存し、そして当業者により決定され得る。

【０３２７】 遺伝子治療のために核酸が導入され得る細胞は、任意の所望の利用可能な細胞
型を包含し、そして以下が挙げられるがこれらに限定されない：上皮細胞、内皮
細胞、ケラチノサイト、線維芽細胞、筋細胞、肝細胞；血球（例えば、Ｔリンパ
球、Ｂリンパ球、単核球、マクロファージ、好中球、好酸球、巨核球、顆粒球）
；種々の幹細胞または前駆細胞、特に造血幹細胞または造血前駆細胞（例えば、
骨髄、臍帯血、末梢血、胎児肝臓などから得られるような）。

【０３２８】 好ましい実施形態においては、遺伝子治療に用いられる細胞は、患者にとって
自系である。

【０３２９】 組換え細胞が遺伝子治療に用いられる実施形態において、抗体をコードする核
酸配列は、それらが細胞またはその子孫により発現可能であるように細胞に導入
され、次いでこの組換え細胞は、治療効果のためにインビボ投与される。特定の
実施形態において、幹細胞または前駆細胞が用いられる。インビトロで単離され
、そして維持され得る任意の幹細胞および／または前駆細胞が、本発明のこの実
施形態に従って可能性としては用いられ得る（例えば、ＰＣＴ公開 ＷＯ９４／
０８５９８；ＳｔｅｍｐｌｅおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ、Ｃｅｌｌ ７１：９７３
〜９８５（１９９２）；Ｒｈｅｉｎｗａｌｄ，Ｍｅｔｈ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ．２
１Ａ：２２９（１９８０）；ならびにＰｉｔｔｅｌｋｏｗおよびＳｃｏｔｔ、Ｍ
ａｙｏ Ｃｌｉｎｉｃ Ｐｒｏｃ．６１：７７１（１９８６）を参照のこと）。

【０３３０】 特定の実施形態において、遺伝子治療のために導入されるべき核酸は、コード
領域に作動可能に連結している誘導性プロモーターを含み、この結果、転写の適
切なインデューサーの存在または非存在を制御することにより核酸の発現が制御
可能である。治療活性または予防活性の実証 本発明の化合物または薬学的組成物は、好ましくは、ヒトでの使用の前に、イ
ンビトロで、次いで所望の治療活性または予防活性についてインビボで、試験さ
れる。例えば、化合物または薬学的組成物の治療的有用性または予防的有用性を
実証するためのインビトロアッセイは、細胞株または患者組織サンプルへの化合
物の影響を含む。細胞株および／または組織サンプルへの化合物または組成物の
の影響は、当業者に公知の技術を利用して決定され得る。この技術には、ロゼッ
ト形成アッセイおよび細胞溶解アッセイが挙げられるがこれらに限定されない。
本発明に従って、特定の化合物の投与が指示されるか否かを決定するために用い
られ得るインビトロアッセイとしては、インビトロ細胞培養アッセイ（患者組織
サンプルが培養中で増殖され、化合物に曝露されるか、さもなければ化合物が投
与され、そして組織サンプルへのこのような化合物の効果が観察される）が挙げ
られる。

【０３３１】 （治療用／予防用の投与および組成物） 本発明は、本発明の有効量の化合物または薬学的組成物（好ましくは本発明の
ポリペプチドまたは抗体）の被験体への投与による処置、阻害および予防の方法
を提供する。好ましい局面において、この化合物は、実質的に純粋（例えば、そ
の効果を限定するかまたは所望されない副作用を生成する物質を実質的に含まな
い）である。この被験体は、好ましくは動物（ウシ、ブタ、ウマ、ニワトリ、ネ
コ、イヌなどが挙げられるがこれに限定されない）であり、そして好ましくは哺
乳動物、そして最も好ましくはヒトである。

【０３３２】 化合物が核酸または免疫グロブリンを含む場合、使用され得る投与の処方物お
よび方法は上記されている；さらなる適切な処方物および投与の経路は、本明細
書中以下に記載されるもののなかから選択され得る。

【０３３３】 種々の送達系（例えば、リポソームへのカプセル化、微粒子、マイクロカプセ
ル、化合物を発現し得る組換え細胞、レセプター媒介エンドサイトーシス（例え
ば、ＷｕおよびＷｕ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９〜４４３２（
１９８７）を参照のこと）、レトロウイルスまたは他のベクターの一部として核
酸の核酸の構築、など）が公知であり、そして本発明の化合物を投与するために
用いられ得る。導入の方法としては、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、経
鼻、硬膜外および経口経路が挙げられるがこれらに限定されない。この化合物ま
たは組成物は、任意の都合の良い経路、例えば、注入またはボーラス注射、上皮
または皮膚粘膜裏打ち層（例えば、口内粘膜、直腸粘膜および腸管粘膜など）を
通じた吸収により投与され得、そして他の生物学的に活性な因子と一緒に投与さ
れ得る。投与は、全身的または局所的であり得る。さらに、本発明の薬学的化合
物または組成物を、任意の適切な経路（脳室内（ｉｎｔｒａｖｅｎｔｒｉｃｕｌ
ａｒ）注射およびクモ膜下注射）により中枢神経系に導入することが所望され得
る；脳室内注射は、例えば、リザバー（例えば、オマヤレザバー）に接続された
脳室内カテーテルにより促進され得る。肺投与はまた、例えば、吸入器またはネ
ブライザーの使用、およびエアゾール剤を有する処方物により、使用され得る。

【０３３４】 特定の実施形態において、本発明の薬学的化合物または組成物を、処置の必要
な領域に局所的に投与することが所望され得る；これは、例えば、限定はしない
が、手術中の局所注入、局所適用（例えば、手術後の創傷包帯との組み合わせで
）、注射により、カテーテルにより、座剤により、またはインプラント（このイ
ンプラントは、シアラスティックメンブレンのようなメンブレンまたはファイバ
ーを含む、多孔性、非多孔性またはゼラチン状物質である）により達成され得る
。好ましくは、本発明のタンパク質（抗体を含む）を投与する場合、タンパク質
を吸収しない材料を用いる気遣いが必要である。

【０３３５】 別の実施形態において、この化合物または組成物は、小胞、特にリポソームで
送達され得る（Ｌａｎｇｅｒ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７〜１５３３（
１９９０）；Ｔｒｅａｔら、Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐ
ｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ、Ｌ
ｏｐｅｚ−ＢｅｒｅｓｔｅｉｎおよびＦｉｄｌｅｒ（編）Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ Ｙ
ｏｒｋ ３５３〜３６５頁（１９８９）；Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ、同
書、第３１７〜３２７頁を参照のこと；一般的には同書を参照のこと）。

【０３３６】 なお別の実施形態では、化合物または組成物が制御された放出システムで送達
され得る。１つの実施形態では、ポンプが用いられ得る（Ｌａｎｇｅｒ、前出；
Ｓｅｆｔｏｎ、ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０
１（１９８７）；Ｂｕｃｈｗａｌｄら、Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８：５０７（１９８
０）；Ｓａｕｄｅｋら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４（１９８９
）を参照のこと）。別の実施形態では、ポリマー材料が、用いられ得る（Ｍｅｄ
ｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅ
ａｓｅ，ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ（編）、ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ
Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ
Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ
ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，ＳｍｏｌｅｎおよびＢａｌｌ（編）、Ｗｉｌ
ｅｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４）；ＲａｎｇｅｒおよびＰａｐｐａｓ，Ｊ．
Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１
（１９８３）を参照のこと；また、Ｌｅｖｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１９
０（１９８５）；Ｄｕｒｉｎｇら、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１（１９
８９）；Ｈｏｗａｒｄら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５（１９８９）
を参照のこと）。別の実施形態において、制御放出システムは、治療標的（すな
わち、脳）の近位に配置され得、従って、全身用量のある画分のみを必要とする
（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ、Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ
Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、前出、第２巻、第１１５〜１３８頁
（１９８４）を参照のこと）。

【０３３７】 他の制御された放出システムがＬａｎｇｅｒによる概説に考察されている（Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７〜１５３３（１９９０））。

【０３３８】 本発明の化合物がタンパク質をコードする核酸である特定の実施形態では、こ
の核酸は、インビボで投与され、そのコードされたタンパク質の発現を促進し得
る。これは、この核酸を適切な核酸発現ベクターの一部として構築することおよ
びそれを投与することによる。その結果、この核酸は、例えば、以下によって細
胞内にはいる：レトロウイルスベクターの使用（米国特許第４，９８０，２８６
号を参照のこと）、または直接注射または微小粒子ボンバードメントの使用（例
えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ，Ｄｕｐｏｎｔ）、または脂質もしくは細
胞表面レセプターもしくはトランスフェクト剤でのコーティング、またはホメオ
ボックス様ペプチド（核に進入することが知られている）との連結でのこの核酸
の投与（例えば、Ｊｏｌｉｏｔら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ ８８：１８６４〜１８６８（１９９１））など。あるいは、核酸は、相同
組換えによって細胞内に導入され、そして宿主細胞ＤＮＡに組み込まれて発現し
得る。

【０３３９】 本発明はまた、薬学的組成物を提供する。このような組成物は、治療上有効な
量の化合物および薬学的に受容可能なキャリアを含む。特定の実施形態では、用
語「薬学的に受容可能な」とは、連邦政府の監督官庁もしくは合衆国政府により
承認されるか、または米国薬局方もしくは動物、そしてより詳細にはヒトでの使
用のための他の一般に認識された薬局方に列挙されたことを意味する。用語「キ
ャリア」は、この治療剤が投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビ
ヒクルをいう。このような薬学的キャリアは、水またはオイル（ピーナツ油、大
豆油、鉱油、ゴマ油などのような石油、動物、植物または合成起源のオイルを含
む）のような滅菌液であり得る。水は、薬学的組成物が静脈内投与される場合、
好ましいキャリアである。生理食塩水溶液および水性デキストロースおよびグリ
セロール溶液はまた、液体キャリアとして、特に注射用溶液に、使用され得る。
適切な薬学的賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース
、ゼラチン、モルト、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナト
リウム、グリセロールモノステアレート、滑石、塩化ナトリウム、粉末スキムミ
ルク、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールなどが挙げられる
。この組成物は、所望の場合、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝化
剤を含み得る。これらの組成物は、溶液の形態、懸濁液の形態、エマルジョンの
形態、錠剤の形態、丸剤の形態、カプセルの形態、粉末の形態、除放化処方物の
形態などをとり得る。この組成物は、従来の結合剤およびキャリア（例えば、グ
リセリド）とともに座剤として処方され得る。経口処方物は、標準的キャリア（
例えば、製薬等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネ
シウム、ナトリウムサッカリン、セルロース、炭酸マグネシウムなど）を含み得
る。適切な薬学的キャリアの例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎの「Ｒｅｍｉｎｇｔｏ
ｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載されている
。このような組成物は、患者への適切な投与のための形態を提供するように、治
療上有効な量の化合物を、好ましくは精製形態で、適切な量のキャリアと一緒に
含む。この処方物は、投与の様式に適切であるべきである。

【０３４０】 好ましい実施形態において、この組成物は、ヒトへの静脈内投与のために適合
した薬学的組成物として慣用的手順に従って処方される。代表的には、静脈投与
のための組成物は、滅菌の等張性水性緩衝液中の溶液である。必要な場合、組成
物はまた、可溶化剤および局所麻酔剤（注射部位で疼痛を緩和するためのリグノ
カインのような）を含み得る。一般に、成分は、単位用量形態で別々にまたは一
緒に混合してのいずれかで（例えば、活性因子の量を示す、密封容器（例えば、
アンプルまたはサック（ｓａｃｈｅｔｔｅ））中の、凍結乾燥粉末または水なし
の濃縮物として）供給される。組成物が注入により投与されるべき場合、製剤等
級の滅菌水または生理食塩水を含有する注入ボトルで調剤され得る。組成物が注
射により投与される場合、投与前に成分が混合され得るように、注射用滅菌水ま
たは生理食塩水のアンプルが、提供され得る。

【０３４１】 本発明の化合物は、中性または塩の形態で処方され得る。薬学的に受容可能な
塩としては、塩酸塩、リン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、酒石酸などに由来するア
ニオンのようなアニオンで形成された塩、ならびにナトリウム、カリウム、アン
モニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イスプロピルアミン、トリエチルアミン
、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するカチオ
ンのようなカチオンで形成された塩が挙げられる。

【０３４２】 本発明のポリペプチドの異常な発現および／または活性に関連する疾患または
障害の処置、阻害および予防において有効である本発明の化合物の量は、標準的
な臨床的技術により決定され得る。さらに、至適投与量範囲を同定することを補
助するために必要に応じてインビトロアッセイが使用され得る。この処方物中で
使用されるべき正確な用量はまた、投与の経路、および疾患または障害の重篤度
に依存し、そして医師の判断およびそれぞれの患者の状況に従って決定されるべ
きである。有効用量は、インビトロまたは動物モデルの試験系に由来する用量応
答曲線から推定され得る。

【０３４３】 抗体については、患者に投与される投薬量は、代表的には、患者の体重の０．
１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである。好ましくは、患者に投与されるべき用
量は、患者の体重の０．１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、患者
の体重の１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇである。一般には、ヒト抗体は、外来ポ
リペプチドへの免疫応答に起因して、他の種由来の抗体よりもヒトの身体内でよ
り長い半減期を有する。従って、ヒト抗体では、より少ない投薬量およびより低
い頻度の投与がしばしば可能である。さらに、本発明の抗体の投与の投薬量およ
び頻度は、例えば、脂質化（ｌｉｐｉｄａｔｉｏｎ）のような改変により、抗体
の取りこみおよび組織進入（例えば、脳への）を増強することによって低下させ
られ得る。

【０３４４】 本発明はまた、本発明の薬学的組成物の１つ以上の成分で充填した１つ以上の
容器を備える薬学的パックまたはキットを提供する。必要に応じて、このような
容器を伴うことは、製剤または生物学的製品の製造、使用または販売を規制する
政府機関の所定の形式で通知され得る。この通知は、ヒト投与のための製造、使
用または販売の機関による承認を反映する。

【０３４５】 （診断および画像化） 標識した抗体、ならびにその誘導体およびアナログ（目的のポリペプチドに特
異的に結合する）は、本発明のポリペプチドの異常な発現および／または活性に
関連した疾患、障害および／または状態を検出、診断またはモニターするための
診断目的に用いられ得る。本発明は、目的のポリペプチドの異常な発現の検出を
提供する。これは、（ａ）目的のポリペプチドに特異的な１つ以上の抗体を用い
て個体の細胞または体液中の目的のポリペプチドの発現をアッセイする工程、お
よび（ｂ）標準的な遺伝子発現レベルと遺伝子発現レベルを比較する工程であっ
て、これにより、標準的な発現レベルに比較してアッセイされたポリペプチド遺
伝子発現レベルの増加または低下が異常な発現の指標である工程、を包含する。

【０３４６】 本発明は、障害を診断するための診断アッセイを提供する。これには、（ａ）
目的のポリペプチドに特異的な１つ以上の抗体を用いて個体の細胞または体液中
の目的のポリペプチドの発現をアッセイする工程、および（ｂ）標準的な遺伝子
発現レベルと遺伝子発現レベルを比較する工程であって、これにより、標準的な
発現レベルに比較してアッセイされたポリペプチド遺伝子発現レベルの増加また
は低下が特定の障害の指標である工程、を包含する。ガンに関しては、個体由来
の生検された組織中の比較的高い量の転写物の存在は、疾患の発生の素因を示し
得るか、または実際の臨床徴候の発現前に疾患を検出するための手段を提供し得
る。この型の決定的な診断により、保健の専門家が予防的測定または積極的な処
置を早期に使用することが可能になり、これによりガンの発生またはさらなる進
行を予防する。

【０３４７】 本発明の抗体は、当業者に公知の伝統的な免疫組織学的方法を用いて生物学的
サンプル中のタンパク質レベルをアッセイするために用いられ得る（例えば、Ｊ
ａｌｋａｎｅｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：９７６〜９８５（１９８
５）；Ｊａｌｋａｎｅｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７〜３０
９６（１９８７）を参照のこと）。タンパク質遺伝子発現の検出に有用な他の抗
体ベースの方法としては、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）およびラジ
オイムノアッセイ（ＲＩＡ）のようなイムノアッセイが挙げられる。適切な抗体
アッセイ標識は、当該分野で公知であり、そして例えば、グルコースオキシダー
ゼのような酵素標識；ヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（
３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１２Ｉｎ）、およびテクネチウ
ム（９９^mＴｃ）のような放射性同位体；ルミノールのような発光性標識；なら
びにフルオレセインおよびローダミンのような蛍光標識；ならびにビオチンが挙
げられる。

【０３４８】 本発明の１つの局面は、動物（好ましくは哺乳動物、そして最も好ましくはヒ
ト）における目的のポリペプチドの異常な発現と関連した疾患または障害の検出
および診断である。１つの実施形態において、診断は、以下の工程を包含する：
ａ）目的のポリペプチドに特異的に結合する有効量の標識分子を被験体に投与（
例えば、非経口的に、皮下的に、または腹腔内に）する工程；ｂ）標識した分子
を被験体の部位に優先的に濃縮することを可能にするために（そしてバックグラ
ウンドレベルに対して除去されるべき未結合の標識分子のために）投与後、時間
間隔を空ける工程であって、ここでこのポリペプチドが発現される工程；ｃ）バ
ックグラウンドレベルを検出する工程；ならびにｄ）被験体中の標識分子を検出
して、これによりバックグラウンドレベルをこえる標識分子の検出が、この患者
は、目的のポリペプチドの異常な発言と関連した特定の疾患または障害を有する
ことを示す、工程。バックグラウンドレベルは、種々の方法により決定され得る
。この方法は、特定の系について事前に決定された標準値に対して、標識分子の
検出された量を比較する工程を含む。

【０３４９】 被験体のサイズおよび用いられる画像化システムは、診断画像を作成するのに
必要な画像部分の量を決定することが当該分野で理解される。放射性同位体部分
の場合は、ヒト被験体について、注射した放射線活性の量は、通常、９９ｍＴｃ
の約５〜２０ミリキュリーの範囲である。次いで、標識された抗体または抗体フ
ラグメントは、特定のタンパク質を含む細胞の位置に優先的に蓄積される。イン
ビボ腫瘍画像化は、Ｓ．Ｗ．Ｂｕｒｃｈｉｅｌら、「Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａ
ｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅ
ｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ．」（Ｔｕｍｏｒ Ｉｍａｇｉｎ
ｇ：Ｔｈｅ Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎ
ｃｅｒの第１３章、Ｓ．Ｗ．ＢｕｒｃｈｉｅｌおよびＢ．Ａ．Ｒｈｏｄｅｓ編、
Ｍａｓｓｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｉｎｃ．（１９８２））に記載される。

【０３５０】 用いられる標識の型および投与の様式を含む、いくつかの変数に依存して、標
識した分子を被験体の部位に優先的に濃縮することを可能にするための、そして
バックグラウンドレベルに対して除去されるべき未結合の標識分子のための、投
与後の時間間隔は、６〜４８時間または６〜２４時間または６〜１２時間である
。別の実施形態において、投与後の時間間隔は、５〜２０日または５〜１０日で
ある。

【０３５１】 １つの実施形態において、疾患または障害のモニタリングは、疾患または障害
を診断する方法を繰り返す（例えば、初回診断後１ヶ月、初回診断後６ヶ月、初
回診断後１年など）ことにより実行される。

【０３５２】 標識化分子の存在は、インビボスキャニングについての当該分野で公知の方法
を使用して患者中で検出され得る。これらの方法は、使用される標識の型に依存
する。当業者は、特定の標識を検出するための適切な方法を決定し得る。本発明
の診断方法において使用され得る方法およびデバイスは、コンピュータ断層撮影
法（ＣＴ）、体全体のスキャン（例えば、陽電子（ｐｏｓｉｔｉｏｎ）射出断層
撮影法（ＰＥＴ））、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、および超音波診断法を含むが
、これらに限定されない。

【０３５３】 特定の実施形態において、分子を放射性同位体で標識し、そして放射応答外科
的機器（ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｓｕｒｇｉｃａｌ ｉｎ
ｓｔｒｕｍｅｎｔ）（Ｔｈｕｒｓｔｏｎら、米国特許第５，４４１，０５０号）
を使用して患者中で検出する。別の実施形態において、分子を蛍光化合物で標識
し、そして蛍光応答スキャニング機器を使用して患者中で検出する。別の実施形
態において、分子を陽電子射出金属で標識し、そして陽電子射出断層撮影法を使
用して患者中で検出する。さらに別の実施形態において、分子を常磁性標識で標
識し、そして磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）を使用して患者中で検出する。 （キット） 本発明は、上記の方法において使用され得るキットを提供する。１つの実施形
態において、キットは、１つ以上の容器において、本発明の抗体、好ましくは精
製した抗体を備える。特定の実施形態において、本発明のキットは、エピトープ
を含む実質的に単離されたポリペプチドを備える。このエピトープは、キット中
に含まれる抗体と特異的に免疫反応する。好ましくは、本発明のキットは、目的
のポリペプチドと反応しないコントロール抗体をさらに備える。別の特定の実施
形態において、本発明のキットは、目的のポリペプチドへの抗体の結合を検出す
るための手段を備える（例えば、この抗体は、検出可能な基質（例えば、蛍光化
合物、酵素基質、放射性化合物もしくは発光化合物）に結合体化され得るか、ま
たは１次抗体を認識する２次抗体が、検出可能な基質と結合体化され得る）。

【０３５４】 本発明の別の特定の実施形態において、キットは、増殖性および／または癌性
のポリヌクレオチドおよびポリペプチドに対して特異的な抗体を含む血清のスク
リーニングに使用するための診断キットである。このようなキットは、目的のポ
リペプチドと反応しないコントロール抗体を備え得る。このようなキットは、エ
ピトープを含む実質的に単離されたポリペプチド抗原を備え得る。このエピトー
プは、少なくとも１つの抗ポリペプチド抗原抗体と特異的に免疫反応する。さら
に、このようなキットは、抗原に対する上記の抗体の結合を検出するための手段
を備える（例えば、この抗体は、蛍光化合物（例えば、フローサイトメトリーに
より検出され得るフルオレセインまはたローダミン）と結合体化され得る）。特
定の実施形態において、キットは、組換え的に産生されたポリペプチド抗原また
は化学的に合成されたポリペプチド抗原を備え得る。キットのポリペプチド抗原
はまた、固体支持体に付着され得る。

【０３５５】 より特定の実施形態において、上記のキットの検出手段は、上記のポリペプチ
ド抗原が付着する固体支持体を備える。このようなキットはまた、非付着レポー
ター標識化抗ヒト抗体を備え得る。この実施形態において、ポリペプチド抗原へ
の抗体の結合は、上記のレポーター標識抗体の結合によって検出され得る。

【０３５６】 さらなる実施形態において、本発明は、本発明のポリペプチドの抗原を含む血
清のスクリーニングにおいて使用するための、診断キットを含む。この診断キッ
トは、ポリペプチド抗原またはポリヌクレオチド抗原と特異的に免疫反応する実
質的に単離された抗体、およびこの抗体へのこのポリヌクレオチド抗原またはポ
リペプチド抗原の結合を検出するための手段を備える。１つの実施形態において
、この抗体は、固体支持体に付着される。特定の実施形態において、この抗体は
、モノクロナール抗体であり得る。キットのこの検出手段は、２次の標識化モノ
クロナール抗体を含み得る。あるいは、またはさらに、この検出手段は、標識化
競合抗原を含み得る。

【０３５７】 １つの診断の構成においては、試験血清は、本発明の方法により得られる表面
結合抗原を有する固相試薬と反応する。特異的な抗原抗体をこの試薬と結合させ
、そして結合されない血清成分を洗浄により除去した後、固体支持体上に結合す
る抗抗原抗体の量に応じて、レポーターをこの試薬と結合させるために、この試
薬をレポーター標識抗ヒト抗体と反応させる。この試薬は、結合されない標識抗
体を除去するため、再度洗浄され、そしてこの試薬と会合したレポーターの量が
決定される。代表的には、レポーターは、適切な蛍光定量的基質、発光基質また
は比色基質（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）の存在下で、この固相をイ
ンキュベートすることにより検出される酵素である。

【０３５８】 上記のアッセイにおける固体表面試薬は、タンパク質材料を固体支持体材料（
例えば、高分子ビーズ、ディップスティック、９６ウェルプレートまたはフィル
ター材料）に付着させるための公知の技術により調製される。これらの付着方法
としては、一般的に、支持体へのタンパク質の非特異的な吸着または固体支持体
上の化学的に反応性の基（例えば、活性化されたカルボキシル基、ヒドロキシル
基、またはアルデヒド基）とのタンパク質の共有結合（ｃｏｖａｌｅｎｔ ａｔ
ｔａｃｈｍｅｎｔ）（代表的には、遊離アミン基を介する）が挙げられる。ある
いは、ストレプトアビジンでコートされたプレートが、ビオチン化された抗原と
共に使用され得る。

【０３５９】 従って、本発明は、この診断方法を行うためのアッセイ系またはキットを提供
する。このキットは、一般的に、表面結合された組み換え抗原を有する支持体、
および表面結合された抗抗原抗体を検出するための、レポーター標識された抗ヒ
ト抗体を含む。

【０３６０】 （ポリヌクレオチドの使用） 本明細書中で同定された各々のポリヌクレオチドは、試薬として多数の方法に
おいて使用され得る。以下の説明は例示的であるとみなされるべきであり、そし
て公知の技術を利用する。

【０３６１】 本発明のポリヌクレオチドは、染色体同定のために有用である。実際の配列デ
ータ（反復多型性）に基づく染色体マーキング試薬は現在ほとんど利用可能では
ないため、新しい染色体マーカーを同定する必要性が存在するままである。各々
の配列は、個々のヒト染色体上の特定の位置に特異的に標的化され得、そしてこ
の特定の位置とハイブリダイズし得る。従って、本発明の各々のポリヌクレオチ
ドは、当該分野で公知の技術を使用して、染色体マーカーとして慣用的に使用さ
れ得る。

【０３６２】 簡単に言うと、配列は、配列番号Ｘで示される配列からＰＣＲプライマー（好
ましくは、少なくとも１５ｂｐ（例えば、１５〜２５ｂｐ））を調製することに
よって染色体にマッピングされ得る。プライマーが、ゲノムＤＮＡ中の１つより
多くの予測されたエキソンにまたがらないように、プライマーは、必要に応じて
、コンピューター分析を使用して選択され得る。次いで、これらのプライマーは
、個々のヒト染色体を含む体細胞ハイブリッドのＰＣＲスクリーニングのために
使用される。配列番号Ｘに対応するヒト遺伝子を含むハイブリッドのみが、増幅
されたフラグメントを産生する。

【０３６３】 同様に、体細胞ハイブリッドは、特定の染色体に対してポリヌクレオチドをＰ
ＣＲマッピングする迅速な方法を提供する。単一のサーマルサイクラーを使用し
て１日あたり３つ以上のクローンが割り当てられ得る。さらに、ポリヌクレオチ
ドの準位置決定（ｓｕｂｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ）は、特定の染色体フラグメ
ントのパネルを用いて達成され得る。使用され得る他の遺伝子マッピング戦略と
しては、インサイチュハイブリダイゼーション、標識フローソート（ｌａｂｅｌ
ｅｄ ｆｌｏｗ ｓｏｒｔｅｄ）染色体でのプレスクリーニング、染色体特異的
ｃＤＮＡライブラリーを構築するためのハイブリダイゼーションによる前選択、
およびコンピューターマッピング技術（例えば、本明細書によりその全体が参考
として援用される、Ｓｈｕｌｅｒ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １６
：４５６−４５９（１９９８）を参照のこと）が挙げられる。

【０３６４】 ポリヌクレオチドの正確な染色体位置はまた、中期染色体スプレッド（ｓｐｒ
ｅａｄ）の蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を使用して獲
得され得る。この技術は５００または６００塩基ほどの短さのポリヌクレオチド
を使用する；しかし２，０００〜４，０００ｂｐのポリヌクレオチドが好ましい
。この技術の総説に関しては、Ｖｅｒｍａら、「Ｈｕｍａｎ Ｃｈｒｏｍｏｓｏ
ｍｅｓ： ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」，
Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９８８）を参照のこ
と。

【０３６５】 染色体マッピングについては、ポリヌクレオチドは、個々に（単一染色体また
はその染色体上の単一部位をマークするために）またはパネルで（複数部位およ
び／または複数染色体をマークするために）使用され得る。

【０３６６】 従って、本発明はまた、表１および配列番号Ｘにおけるポリヌクレオチド配列
からＰＣＲプライマーを調製する工程、ならびに（ｂ）個々の染色体を含む体細
胞ハイブリッドをスクリーニングする工程を包含する、染色体位置決定のための
方法を提供する。

【０３６７】 本発明のポリヌクレオチドは、同様に、照射ハイブリッドマッピング（ｒａｄ
ｉａｔｉｏｎ ｈｙｂｒｉｄ ｍａｐｐｉｎｇ）、ＨＡＰＰＹマッピング、およ
び長距離制限マッピング（ｌｏｎｇ ｒａｎｇｅ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｍ
ａｐｐｉｎｇ）のために有用である。これらの技術および当該分野で公知の他の
技術についての総説に関しては、例えば、Ｄｅａｒ「Ｇｅｎｏｍｅ Ｍａｐｐｉ
ｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ」ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ ａｔ
Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ（１９９７
）；Ａｙｄｉｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７７：６９１−６９４（１９９９）；Ｈ
ａｃｉａら、Ｍｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ３：４８３−４９２（１９９８）
；Ｈｅｒｒｉｃｋら、Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ Ｒｅｓ．７：４０９−４２３（１
９９９）；Ｈａｍｉｌｔｏｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．６２：
２６５−２８０（２０００）；および／またはＯｔｔ，Ｊ．Ｈｅｒｅｄ．９０：
６８−７０（１９９９）を参照のこと（これらの各々は、その全体が本明細書に
より参考として援用される）。

【０３６８】 一旦、ポリヌクレオチドが正確な染色体位置にマップされると、ポリヌクレオ
チドの物理的位置は、連鎖分析において使用され得る。連鎖分析は、染色体位置
と特定の疾患の提示との間の同時遺伝（ｃｏｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ）を確立す
る。（疾患マッピングデータは、例えば、Ｖ．ＭｃＫｕｓｉｃｋ，Ｍｅｎｄｅｌ
ｉａｎ Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ ｉｎ Ｍａｎ（Ｊｏｈｎｓ Ｈｏｐｋｉｎｓ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｗｅｌｃｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｉｂｒａｒｙを通し
てオンラインで利用可能である）において見い出される）。１メガベースマッピ
ング解像度および２０ｋｂあたり１遺伝子と仮定すると、疾患と関連する染色体
領域に正確に位置決定されるｃＤＮＡは、５０〜５００の潜在的な原因遺伝子の
うちの１つであり得る。

【０３６９】 従って、一旦、同時遺伝が確立されると、罹患個体と非罹患個体との間での本
発明のポリヌクレオチドおよび対応する遺伝子における差異が試験され得る。ま
ず、染色体中の可視的構造変化（例えば、欠失または転座）は染色体スプレッド
において、またはＰＣＲによって試験される。構造的変化が存在しない場合、点
変異の存在が確認される。何人かのまたは全ての罹患された個体で観察されたが
、正常な個体では観察されなかった変異は、この変異がこの疾患を引き起こし得
ることを示す。しかし、いくつかの正常な個体由来のポリペプチドおよび対応す
る遺伝子の完全な配列決定は、変異を多型性と区別するために要求される。新し
い多型性が同定される場合、この多型ポリペプチドはさらなる連鎖分析のために
使用され得る。

【０３７０】 さらに、非罹患個体と比較した、罹患個体の遺伝子の増加または減少した発現
が、本発明のポリヌクレオチドを使用して評価され得る。任意のこれらの変化（
変化した発現、染色体再配置、または変異）は、診断マーカーまたは予後マーカ
ーとして使用され得る。

【０３７１】 従って、本発明はまた、障害の診断の間に有用な診断方法を提供し、この方法
は、個体由来の細胞または体液中の本発明のポリヌクレオチドの発現レベルを測
定する工程、および測定された遺伝子発現レベルをポリヌクレオチド発現レベル
の標準レベルと比較する工程を包含し、これによって、標準と比較して、遺伝子
発現レベルの増加または減少が、障害の指標になる。

【０３７２】 なお別の実施形態では、本発明は、サンプルを、試験被験体に由来する増殖性
および／またはガン性のポリヌクレオチドの存在について分析するためのキット
を含む。一般的実施形態において、このキットは、本発明のポリヌクレオチドと
特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む少なくとも１つのポリヌク
レオチドプローブ、および適切な容器を備える。この特定の実施形態では、この
キットは、本発明のポリヌクレオチドの内部領域を規定する２つのポリヌクレオ
チドプローブを含み、ここで各プローブは、この領域に対して内部に３１’マー
末端を含む１つの鎖を有する。さらなる実施形態では、このプローブは、ポリメ
ラーゼ連鎖反応増幅のためのプライマーとして有用であり得る。

【０３７３】 関連する障害の診断（例えば、腫瘍の診断を含む）が既に従来方法によって行
われている場合、本発明は、予後インジケーターとして有用であり、それによっ
て増強または抑制された本発明のポリヌクレオチド発現を示す患者が、標準レベ
ルにより近いレベルでこの遺伝子を発現する患者と比較して悪い臨床結果を経験
する。

【０３７４】 「本発明のポリヌクレオチドの発現レベルを測定する（こと）」によって、本
発明のポリペプチドのレベルまたは本発明のポリペプチドをコードするｍＲＮＡ
のレベルを、第１の生物学的サンプルにおいて直接的（例えば、絶対のタンパク
質レベルまたはｍＲＮＡレベルを決定または評価することによって）または相対
的（例えば、第２の生物学的サンプル中のポリペプチドレベルまたはｍＲＮＡレ
ベルに対して比較することによって）のいずれかで定性的または定量的に測定ま
たは評価することが意図される。好ましくは、第１の生物学的サンプル中のポリ
ペプチドレベルまたはｍＲＮＡレベルが測定または評価され、そして標準のポリ
ペプチドレベルまたはｍＲＮＡレベルに対して比較され、この標準は、関連する
障害を有さない個体から得られる第２の生物学的サンプルから得られるかまたは
関連する障害を有さない個体の集団由来のレベルを平均することによって決定さ
れる。当該分野で認識されるように、一旦標準的なポリペプチドレベルまたはｍ
ＲＮＡレベルが公知になれば、これを、比較のための標準として反復して用い得
る。

【０３７５】 「生物学的サンプル」によって、本発明のポリペプチドまたは対応するｍＲＮ
Ａを含む、個体、体液、細胞株、組織培養物または他の供給源から得られる任意
の生物学的サンプルが意図される。示されるように、生物学的サンプルは、本発
明のポリペプチドを含む体液（例えば、精液、リンパ、血清、血漿、尿、滑液お
よび髄液）、および本発明のポリペプチドを発現することが見出された組織供給
源を含む。哺乳動物から組織生検および体液を得るための方法は、当該分野で周
知である。生物学的サンプルがｍＲＮＡを含む場合、組織生検が好ましい供給源
である。

【０３７６】 上記で提供された方法は好ましくは、本発明のポリヌクレオチドおよび／また
はポリペプチドが固体支持体に結合される、診断方法および／またはキットに適
用され得る。１つの例示的な方法では、この支持体は、米国特許第５，８３７，
８３２号、同第５，８７４，２１９号および同第５，８５６，１７４号に記載さ
れる、「遺伝子チップ」または「生物学的チップ」であり得る。さらに、本発明
のポリヌクレオチドが結合されたこのような遺伝子チップを用いて、本発明のポ
リヌクレオチド配列と、試験被験体から単離されたポリヌクレオチドとの間の多
型性を同定し得る。このような多型性の知見（すなわち、それらの位置ならびに
それらの存在）は、例えば、神経障害、免疫系障害、筋肉障害、生殖障害、胃腸
障害、肺障害、心臓血管障害、腎臓障害、増殖性障害、ならびに／またはガン性
の疾患および状態のような多くの障害についての疾患の遺伝子座を同定する際に
有益である。このような方法は、米国特許第５，８５８，６５９号および同第５
，８５６，１０４号に記載される。上記に参照した米国特許は、その全体が本明
細書中に参考として援用される。

【０３７７】 本発明は、化学的に合成された（すなわち、ペプチド核酸（ＰＮＡ）として再
現された）または当該分野で公知の他の方法に従って合成された、本発明のポリ
ヌクレオチドを包含する。ＰＮＡの使用は、本発明のポリヌクレオチドが固体支
持体、すなわち、遺伝子チップに取り込まれる場合、好ましい形態として役立つ
。本発明の目的のために、ペプチド核酸（ＰＮＡ）は、ポリアミド型のＤＮＡア
ナログであり、そしてアデニン、グアニン、チミンおよびシトシンについてのモ
ノマー単位が市販される（Ｐｅｒｃｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）。Ｄ
ＮＡの特定の成分（例えば、リン、酸化リンまたはデオキシリボース誘導体）は
、ＰＮＡ中に存在しない。Ｐ．Ｅ．Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｍ．Ｅｇｈｏｌｍ，Ｒ．Ｈ
．ＢｅｒｇおよびＯ．Ｂｕｃｈａｒｄｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４，１４９７（
１９９７）；ならびにＭ．Ｅｇｈｏｌｍ，Ｏ．Ｂｕｃｈａｒｄｔ，Ｌ．Ｃｈｒｉ
ｓｔｅｎｓｅｎ，Ｃ．Ｂｅｈｒｅｎｓ，Ｓ．Ｍ．Ｆｒｅｉｅｒ，Ｄ．Ａ．Ｄｒｉ
ｖｅｒ，Ｒ．Ｈ．Ｂｅｒｇ、Ｓ．Ｋ．Ｋｉｍ，Ｂ．ＮｏｒｄｅｎおよびＰ．Ｅ．
Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｎａｔｕｒｅ ３６５，６６６（１９９３）によって開示され
るように、ＰＮＡは、相補的なＤＮＡ鎖に対して特異的かつ緊密に結合し、そし
てヌクレアーゼによって分解されない。実際、ＰＮＡは、ＤＮＡ自体が結合する
よりも強力にＤＮＡに結合する。これはおそらく、２つの鎖の間に静電斥力が存
在せず、そしてまたポリアミド骨格がより可撓性が高いことによる。これによっ
て、ＰＮＡ／ＤＮＡ二重鎖は、ＤＮＡ／ＤＮＡ二重鎖よりも広範囲のストリンジ
ェンシー条件下で結合し、多重鎖ハイブリダイゼーションを行うのをより容易に
する。強力な結合に起因して、ＤＮＡを用いてよりも小さいプローブが用いられ
得る。さらに、おそらく、単一の塩基ミスマッチが、ＰＮＡ／ＤＮＡハイブリダ
イゼーションを用いて決定され得る。なぜなら、ＰＮＡ／ＤＮＡの１５マーにお
ける単一のミスマッチは、ＤＮＡ／ＤＮＡの１５マー二重鎖については４℃〜１
６℃であるのに対して、融点（Ｔ．ｓｕｂ．ｍ）を８〜２０℃低下させるからで
ある。また、ＰＮＡ中に電荷基が存在しないことは、ハイブリダイゼーションが
、低いイオン強度で行われ得、そして分析の間の塩によって可能な妨害を減少さ
せることを意味する。

【０３７８】 本発明は、哺乳動物におけるガンの検出を含む用途を有するが、これらに限定
されない。特に、本発明は、以下を含むがこれらに限定されない、病理学的細胞
増殖新形成の診断の間に有用である：急性骨髄性白血病（急性単球性白血病、急
性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性赤白
血病、急性巨核球性白血病、および急性未分化白血病などを含む）；および慢性
骨髄性白血病（慢性骨髄単球性白血病、慢性顆粒球性白血病などを含む）。好ま
しい哺乳動物としては、有尾猿（ｍｏｎｋｅｙ）、無尾猿（ａｐｅ）、ネコ、イ
ヌ、ウシ、ブタ、ウマ、ウサギおよびヒトが挙げられる。特に好ましいのは、ヒ
トである。

【０３７９】 病理学的細胞増殖障害はしばしば、原癌遺伝子の非適切な活性化に関連する（
Ｇｅｌｍａｎｎ，Ｅ．Ｐ．ら，「Ｔｈｅ Ｅｔｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ａｃｕｔｅ
Ｌｅｕｋｅｍｉａ：Ｍｏｌｅｖｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｖｉｒ
ａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ」，Ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ
ｔｈｅ Ｂｌｏｏｄ，第１巻，Ｗｉｅｒｎｉｋ、Ｐ．Ｈ．ら編，１６１−１８２
（１９８５））。新形成は現在、ウイルス配列の染色体への挿入、より活性に転
写される領域への遺伝子の染色体転座、または何らかの他の機構による、正常な
細胞遺伝子産物の定性的変化から、または遺伝子発現の定量的改変から生じると
考えられている（Ｇｅｌｍａｎｎら、前出）。特定の遺伝子の変異または変更さ
れた発現が、他の組織および他の細胞型の中でも、いくつかの白血病の病因と関
与するようである（Ｇｅｌｍａｎｎら、前出）。実際、いくつかの動物新形成に
関与する癌遺伝子のヒト対応物は、ヒトの白血病および癌のいくつかの症例にお
いて増幅または転座されている（Ｇｅｌｍａｎｎら、前出）。

【０３８０】 例えば、ｃ−ｍｙｃ発現は、非リンパ球性白血病細胞株ＨＬ−６０において高
度に増幅される。ＨＬ−６０細胞が増幅を止めるように化学的に誘導される場合
、ｃ−ｍｙｃのレベルは、ダウンレギュレートされることが見出される（国際公
開第ＷＯ９１／１５５８０号）。しかし、ｃ−ｍｙｃまたはｃ−ｍｙｂの５’末
端に相補的であるＤＮＡ構築物へのＨＬ−６０細胞の曝露が、ｃ−ｍｙｃタンパ
ク質またはｃ−ｍｙｂタンパク質の発現をダウンレギュレートする対応するｍＲ
ＮＡの翻訳をブロックし、処理した細胞の細胞増殖および分化の停止を引き起こ
すことが示されている（国際公開第ＷＯ９１／１５５８０号；Ｗｉｃｋｓｔｒｏ
ｍら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５：１０２８（１９８８）；
Ａｎｆｏｓｓｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８６：３３７９（
１９８９））。しかし、当業者は、増殖表現型を示すことが公知である種々の起
源の多数の細胞および細胞型を考慮すれば、本発明の有用性が造血性の細胞およ
び組織の増殖性障害の処置に限定されないことを認識する。

【０３８１】 前記に加えて、本発明のポリヌクレオチドは、三重らせん形成またはアンチセ
ンスＤＮＡもしくはＲＮＡによって遺伝子発現を制御するために使用され得る。
アンチセンス技術は例えば、Ｏｋａｎｏ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．５６：５６
０（１９９１），「Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎ
ｔｉｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏ
ｎ」，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１９８８）に考察さ
れる。三重らせん形成は例えば、Ｌｅｅら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓｅａｒｃｈ ６：３０７３（１９７９）；Ｃｏｏｎｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ
２４１：４５６（１９８８）；およびＤｅｒｖａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１
：１３６０（１９９１）に考察される。両方の方法は、相補的ＤＮＡまたはＲＮ
Ａへのポリヌクレオチドの結合に依存する。これらの技術に関して、好ましいポ
リヌクレオチドは通常、２０〜４０塩基長のオリゴヌクレオチドであり、そして
転写に関与する遺伝子領域（三重らせん−Ｌｅｅら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒ
ｅｓ．６：３０７３（１９７９）；Ｃｏｏｎｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：
４５６（１９８８）；およびＤｅｒｖａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：１３６
０（１９９１）を参照のこと）またはｍＲＮＡ自体（アンチセンス−Ｏｋａｎｏ
，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．５６：５６０（１９９１）；Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙ
−ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ
ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒ
ａｔｏｎ，ＦＬ（１９８８））のいずれかに相補的である。三重らせん形成は、
最適にはＤＮＡからのＲＮＡ転写の遮断を生じるが、アンチセンスＲＮＡハイブ
リダイゼーションは、ポリペプチドへのｍＲＮＡ分子の翻訳を阻止する。上記の
オリゴヌクレオチドはまた、アンチセンスＲＮＡまたはＤＮＡが、本発明の抗原
のポリペプチドの生成を阻害するためにインビボで発現され得るように、細胞に
送達され得る。両方の技術は、モデル系において効果的であり、そして本明細書
に開示される情報は、疾患を処置するための試みにおいて、特に、増殖性の疾患
および／または状態の処置のために、アンチセンスまたは三重らせんポリヌクレ
オチドを設計するために使用され得る。

【０３８２】 本発明のポリヌクレオチドはまた、遺伝子治療において有用である。遺伝子治
療の１つの目標は、遺伝欠損を修正する試みにおいて、欠損遺伝子を有する生物
へ正常遺伝子を挿入することである。本発明に開示されるポリヌクレオチドは、
高度に正確な様式でこのような遺伝欠損を標的とする手段を提供する。別の目標
は、宿主ゲノム中には存在しなかった新しい遺伝子を挿入し、それによって宿主
細胞中に新しい形質を生成することである。

【０３８３】 ポリヌクレオチドはまた、微小な生物学的サンプルから個体を同定するために
有用である。例えば、米国軍は、その職員を同定するために制限フラグメント長
の多型性（ＲＦＬＰ）の使用を考慮している。この技術において、個体のゲノム
ＤＮＡは１つ以上の制限酵素で消化され、そして職員を同定するため固有なバン
ドを生じるためのサザンブロットについてプローブされる。この方法は、「認識
票（Ｄｏｇ ｔａｇ）」（これは、失われたり、交換されたり、または盗まれた
りすることにより、ポジティブな同定を困難にし得る）の現在の限界を受けない
。本発明のポリヌクレオチドは、ＲＦＬＰのためのさらなるＤＮＡマーカーとし
て使用され得る。

【０３８４】 本発明のポリヌクレオチドはまた、個体のゲノムの選択された部分の実際の塩
基ごとのＤＮＡ配列を決定することによって、ＲＦＬＰに対する代替物として使
用され得る。これらの配列は、このような選択されたＤＮＡを増幅しそして単離
するためのＰＣＲプライマーを調製するために使用され得、次いで、この選択さ
れたＤＮＡは、配列決定され得る。各個体が固有のセットのＤＮＡ配列を有する
ので、この技術を使用して、個体が同定され得る。一旦、固有のＩＤデータベー
スが個体について確立されると、その個体が生存していようとまたは死亡してい
ようと、その個体のポジティブ同定が、極めて小さな組織サンプルからなされ得
る。

【０３８５】 法医学生物学もまた、本明細書に開示されるようなＤＮＡに基づく同定技術を
使用して利益を得る。組織（例えば、髪または皮膚）、または体液（例えば、血
液、唾液、精液、滑液、羊水、乳汁、リンパ、肺痰（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｓｐ
ｕｔｕｍ）またはサーファクタント、尿、糞便物質など）のような非常に小さな
生物学的サンプルから得られたＤＮＡ配列は、ＰＣＲを使用して増幅され得る。
ある先行技術において、ＤＱａクラスＩＩ ＨＬＡ遺伝子のような多型性遺伝子
座から増幅された遺伝子配列は、個体を同定するための法医学生物学において使
用される。（Ｅｒｌｉｃｈ，Ｈ．，ＰＣＲ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｆｒｅｅｍ
ａｎ ａｎｄ Ｃｏ．（１９９２））。一旦、これらの特異的多型性遺伝子座が
増幅されると、これらは１つ以上の制限酵素で消化される。これは、ＤＱａクラ
スＩＩ ＨＬＡ遺伝子に対応するＤＮＡでプローブされたサザンブロットについ
てのバンドの同定セットを生じる。同様に、本発明のポリヌクレオチドは、法医
学的目的のための多型性マーカーとして使用され得る。

【０３８６】 また、特定の組織の供給源を同定し得る試薬についての必要性が存在する。例
えば、未知の起源の組織が提供される場合、法医学においてこのような必要性が
生じる。適切な試薬は、例えば、本発明の配列から調製される、特定の組織に特
異的なＤＮＡプローブまたはプライマーを含み得る。このような試薬のパネルは
、種および／または器官型によって組織を同定し得る。同様の様式で、これらの
試薬は、夾雑物について組織培養物をスクリーニングするために使用され得る。

【０３８７】 本発明のポリヌクレオチドは、生物学的サンプル中に存在する組織または細胞
型の示差的同定のためのハイブリダイゼーションプローブとして有用である。同
様に、本発明のポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織
（例えば、免疫組織化学的アッセイ）または細胞型（例えば、免疫細胞化学的ア
ッセイ）の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。さらに、
上記組織または細胞の多くの障害に関して、「標準」の遺伝子発現レベル（すな
わち、この障害を有さない個体由来の健常組織中の発現レベル）に対して有意に
より高いまたはより低いレベルの、本発明のポリヌクレオチド／ポリペプチドの
遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織（例え
ば、本発明のポリペプチドおよび／もしくはポリヌクレオチドを発現する組織な
らびに／または癌性組織ならびに／または創傷組織）または体液（例えば、血清
、血漿、尿、滑液または髄液）の中で検出される。

【０３８８】 従って、本発明は、障害の診断方法を提供し、この方法は、以下の工程：（ａ
）細胞または個体の体液における遺伝子発現レベルをアッセイする工程；（ｂ）
その遺伝子発現レベルを標準遺伝子発現レベルと比較する工程、を包含し、これ
によって、標準発現レベルと比較して、アッセイされた遺伝子発現レベルの増加
または減少が、障害の指標になる。

【０３８９】 少なくとも、本発明のポリヌクレオチドは、サザンゲルでの分子量マーカーと
して、特定の細胞型における特定のｍＲＮＡの存在に関する診断プローブとして
、新規なポリヌクレオチドを発見するプロセスでの公知の配列を「差し引き」す
るためのプローブとして、「遺伝子チップ」または他の支持体に付着させるため
のオリゴマーを選択および作製するため、ＤＮＡ免疫技術を用いて抗ＤＮＡ抗体
を惹起させるため、および免疫応答を誘発する抗原として、使用され得る。

【０３９０】 （ポリペプチドの使用） 本明細書中に同定される各ポリペプチドは、多くの方法に使用され得る。以下
の説明は、例示としてみなされるべきであり、そして公知の技術を利用する。

【０３９１】 本発明のポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織（例
えば、ＡＢＣイムノペルオキシダーゼ（Ｈｓｕら、Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃ
ｙｔｏｃｈｅｍ．２９：５７７−５８０（１９８１）のような免疫組織化学的ア
ッセイ）または細胞型（免疫細胞化学的アッセイ）の示差的同定のための免疫学
的プローブの提供に有用である。

【０３９２】 抗体は、当業者に公知の古典的な免疫組織学的方法を用いて、生物学的サンプ
ル中の本発明のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドのレベルを
アッセイするために使用され得る（例えば、Ｊａｌｋａｎｅｎ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｃ
ｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：９７６−９８５（１９８５）；Ｊａｌｋａｎｅｎ，
Ｍ．ら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７−３０９６（１９８７）を
参照のこと）。タンパク質遺伝子発現を検出するのに有用である、抗体に基づい
た他の方法には、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）およびラジオイムノ
アッセイ（ＲＩＡ）のような免疫アッセイが含まれる。適切な抗体アッセイの標
識は、当該技術分野で公知であり、そして例えば、グルコースオキシダーゼのよ
うな酵素標識、ならびにヨウ素（¹³¹Ｉ、¹²⁵Ｉ、¹²³Ｉ、¹²¹Ｉ）、炭素（¹⁴Ｃ）
、硫黄（³⁵Ｓ）、トリチウム（³Ｈ）、インジウム（^115mＩｎ、^113mＩｎ、¹¹²Ｉ
ｎ、¹¹¹Ｉｎ）、およびテクネチウム（⁹⁹Ｔｃ、^99mＴｃ）、タリウム（²⁰¹Ｔｉ
）、ガリウム（⁶⁸Ｇａ、⁶⁷Ｇａ）、パラジウム（¹⁰³Ｐｄ）、モリブデン（⁹⁹Ｍ
ｏ）、キセノン（¹³³Ｘｅ）、フッ素（¹⁸Ｆ）、¹⁵³Ｓｍ、¹⁷⁷Ｌｕ、¹⁵⁹Ｇｄ、^{14 9} Ｐｍ、¹⁴⁰Ｌａ、¹⁷⁵Ｙｂ、¹⁶⁶Ｈｏ、⁹⁰Ｙ、⁴⁷Ｓｃ、¹⁸⁶Ｒｅ、¹⁸⁸Ｒｅ、¹⁴²Ｐ
ｒ、¹⁰⁵Ｒｈ、⁹⁷Ｒｕのような放射性同位体；ルミノールのような発光標識；な
らびにフルオレセインおよびローダミンのような蛍光標識、ならびにビオチンが
挙げられる。

【０３９３】 生物学的サンプル中の本発明のポリペプチドのレベルをアッセイすることに加
えて、タンパク質はまた、画像化によりインビボで検出され得る。タンパク質を
インビボで画像化するための抗体の標識またはマーカーとしては、Ｘ線ラジオグ
ラフィー、ＮＭＲまたはＥＳＲにより検出可能なものが挙げられる。Ｘ線ラジオ
グラフィーについては、適切な標識は、検出可能な放射線を発するが、被験体に
対して明白には有害ではないバリウムまたはセシウムのような放射性同位体を含
む。ＮＭＲおよびＥＳＲに適切なマーカーには、例えば重水素のような検出可能
な特徴的なスピンを有するものが含まれ、これは、関連したハイブリドーマのた
めの栄養素を標識することにより抗体に取り込まれ得る。

【０３９４】 放射性同位体（例えば、¹³¹Ｉ、¹¹²Ｉｎ、^99mＴｃ、（¹³¹Ｉ、¹²⁵Ｉ、¹²³Ｉ、 ¹²¹ Ｉ）、炭素（¹⁴Ｃ）、硫黄（³⁵Ｓ）、トリチウム（³Ｈ）、インジウム（^115m Ｉｎ、^113mＩｎ、¹¹²Ｉｎ、¹¹¹Ｉｎ）、およびテクネチウム（⁹⁹Ｔｃ、^99mＴｃ
）、タリウム（²⁰¹Ｔｉ）、ガリウム（⁶⁸Ｇａ、⁶⁷Ｇａ）、パラジウム（¹⁰³Ｐｄ
）、モリブデン（⁹⁹Ｍｏ）、キセノン（¹³³Ｘｅ）、フッ素（¹⁸Ｆ）、¹⁵³Ｓｍ、 ¹⁷⁷ Ｌｕ、¹⁵⁹Ｇｄ、¹⁴⁹Ｐｍ、¹⁴⁰Ｌａ、¹⁷⁵Ｙｂ、¹⁶⁶Ｈｏ、⁹⁰Ｙ、⁴⁷Ｓｃ、¹⁸⁶
Ｒｅ、¹⁸⁸Ｒｅ、¹⁴²Ｐｒ、¹⁰⁵Ｒｈ、⁹⁷Ｒｕ）、放射線不透過性物質、または核
磁気共鳴により検出可能な材料のような適切な検出可能な画像化部分で標識され
た、タンパク質特異的抗体または抗体フラグメントは、免疫系障害について試験
される哺乳動物に（例えば、非経口的、皮下、または腹腔内に）導入される。被
験体のサイズおよび用いられる画像化システムは、診断画像を生成するために必
要な画像化部分の量を決定することが当該分野で理解される。放射性同位体部分
の場合には、ヒト被験体について、注射される放射能の量は、通常、９９ｍＴｃ
の約５〜２０ミリキュリーの範囲である。次いで、標識された抗体または抗体フ
ラグメントは、本発明のポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドを発
現する細胞の位置に優先的に蓄積される。インビボ腫瘍画像化は、Ｓ．Ｗ．Ｂｕ
ｒｃｈｉｅｌら、「Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ Ｒ
ａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｆｒａ
ｇｍｅｎｔｓ．」（Ｔｕｍｏｒ Ｉｍａｇｉｎｇ：Ｔｈｅ Ｒａｄｉｏｃｈｅｍ
ｉｃａｌ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒの第１３章、Ｓ．Ｗ．Ｂｕ
ｒｃｈｉｅｌおよびＢ．Ａ．Ｒｈｏｄｅｓ編、Ｍａｓｓｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉ
ｎｇ Ｉｎｃ．（１９８２））に記載される。

【０３９５】 １つの実施形態において、本発明は、異種ポリペプチドまたは核酸と会合する
本発明のポリペプチド（例えば、本発明のポリヌクレオチドによりコードされる
ポリペプチド、および／または抗体を含む）を投与することによる、本発明の組
成物の細胞への特定の送達のための方法を提供する。１つの例において、本発明
は、治療タンパク質を標的化細胞に送達するための方法を提供する。別の例にお
いて、本発明は、一本鎖核酸（例えば、アンチセンスまたはリボザイム）または
二本鎖核酸（例えば、細胞のゲノムに組み込まれるか、またはエピソームにて複
製し得、そして転写され得るＤＮＡ）を、標的化細胞に送達するための方法を提
供する。

【０３９６】 別の実施形態において、本発明は、本発明のポリペプチドをトキシンまたは細
胞傷害性プロドラッグと組み合わせて投与することによる細胞の特定の破壊（例
えば、腫瘍細胞の破壊）のための方法が提供される。

【０３９７】 「トキシン」とは、内因性の細胞傷害性エフェクタ系、ラジオアイソトープ、
ホロトキシン（ｈｏｌｏｔｏｘｉｎ）、改変型トキシン、トキシンの触媒サブユ
ニット、または細胞中もしくは細胞表面には通常存在しない規定の条件下で細胞
死を引き起こす任意の分子もしくは酵素を結合および活性化する１つ以上の化合
物を意味する。本発明の方法に従って使用され得るトキシンとしては、当該分野
で公知のラジオアイソトープ、固有のまたは誘導された内因性の細胞傷害性エフ
ェクタ系に結合する化合物（例えば、抗体（またはその一部を含む補体固定）、
チミジンキナーゼ、エンドヌクレアーゼ、ＲＮＡｓｅ、αトキシン、リシン、ア
ブリン、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素Ａ、ジフテリア毒素、サポリン、モモル
ジン（ｍｏｍｏｒｄｉｎ）、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ヤマゴボウ抗ウイル
スタンパク質、αサルシン（ｓａｒｃｉｎ）およびコレラ毒素が挙げられるが、
これらに限定されない。「トキシン」はまた、細胞増殖抑制性薬剤（ｃｙｔｏｓ
ｔａｔｉｃ ａｇｅｎｔ）または細胞殺傷薬剤（ｃｙｔｏｃｉｄａｌ ａｇｅｎ
ｔ）、治療剤または放射活性金属イオン（例えば、²¹³Ｂｉのようなアルファエ
ミッター）、または他の放射放射性同位体（例えば、¹⁰³Ｐｄ、¹³³Ｘｅ、¹³¹Ｉ
、⁶⁸Ｇｅ、⁵⁷Ｃｏ、⁶⁵Ｚｎ、⁸⁵Ｓｒ、³²Ｐ、³⁵Ｓ、⁹⁰Ｙ、¹⁵³Ｓｍ、¹⁵³Ｇｄ、^{16 9} Ｙｂ、⁵¹Ｃｒ、⁵⁴Ｍｎ、⁷⁵Ｓｅ、¹¹³Ｓｎ、⁹⁰イットリウム、¹¹⁷Ｔｉｎ、¹⁸⁶レ
ニウム、¹⁶⁶ホルミウムおよび¹⁸⁸レニウム）；ルミノールのような発光標識；な
らびにフルオロセインおよびローダミンのような蛍光標識、ならびにビオチンが
挙げられる。

【０３９８】 当該分野で公知の技術は、本発明のポリペプチド（抗体を含む）を標識するた
めに適用され得る。このような技術としては、二官能性結合剤の使用が挙げられ
るが、これらに限定されない（例えば、米国特許第５，７５６，０６５号、同第
５，７１４，６３１号；同第５，６９６，２３９号；同第５，６５２，３６１号
；同第５，５０５，９３１号；同第５，４８９，４２５号；同第５，４３５，９
９０号；同第５，４２８，１３９号；同第５，３４２，６０４号；同第５，２７
４，１１９号；同第４，９９４，５６０号；および同第５，８０８，００３号を
参照のこと；これらの各々の内容は、その全体が本明細書中に参考として援用さ
れる）。

【０３９９】 従って、本発明は、障害の診断方法を提供し、この方法は以下を含む：（ａ）
個体の細胞または体液における本発明のポリペプチドの発現レベルをアッセイす
る工程；および（ｂ）アッセイされたポリペプチドの発現レベルを標準のポリペ
プチドの発現レベルと比較し、それによって標準の発現レベルと比較したアッセ
イされたポリペプチドの発現レベルにおける増加または減少が障害を示す工程。
癌に関しては、個体由来の生検を実施された組織中の相対的に高い量の転写物の
存在が、その疾患の発症の素因を示し得るか、または実際の臨床的な症状が出現
する前に疾患を検出するための手段を提供し得る。より決定的なこのタイプの診
断は、保健専門家が早く予防策または積極的な処置を使用し、それによって癌の
発症またはさらなる進行を防ぐことを可能にし得る。

【０４００】 さらに、本発明のポリペプチドを用いて疾患または状態（例えば、神経障害、
免疫系障害、筋肉障害、生殖障害、胃腸障害、肺障害、心血管障害、腎臓障害、
増殖障害ならびに／または癌性疾患および状態など）を処置または予防し得る。
例えば、患者は、そのポリペプチドの非存在またはレベルの減少を元に戻すこと
（例えば、インスリン）、異なるポリペプチドの不在またはレベルの減少を補充
すること（例えば、ヘモグロビンＢ、ＳＯＤ、カタラーゼ、ＤＮＡ修復タンパク
質に対するヘモグロビンＳ）、ポリペプチドの活性を阻害すること（例えば、癌
遺伝子または腫瘍抑制因子）、ポリペプチドの活性を活性化すること（例えば、
レセプターに結合することによって）、遊離リガンドについて膜結合レセプター
と競合させることによって膜結合レセプターの活性を減少させること（例えば、
炎症を低減させる際に用いられる可溶性ＴＮＦレセプター）、または所望の応答
をもたらすこと（例えば、血管の成長の阻害、増殖細胞または組織に対する免疫
応答の増強）の試みにおいて、本発明のポリペプチドが投与され得る。

【０４０１】 同様に、本発明のポリペプチドに対する抗体もまた用いられ、疾患（上記、お
よび本明細書中のどこかに記載されるような）を処置し得る。例えば、本発明の
ポリペプチドに対する抗体の投与は、そのポリペプチドを結合し、そして／また
はそのポリペプチドを中和し、そして／またはそのポリペプチドの過剰産生を低
減し得る。同様に、抗体の投与は、例えば、膜に結合したポリペプチド（レセプ
ター）へ結合することにより、そのポリペプチドを活性化し得る。

【０４０２】 少なくとも、本発明のポリペプチドは、当業者に周知の方法を用いるＳＤＳ−
ＰＡＧＥゲルまたは分子ふるいゲル濾過カラムの分子量マーカーとして使用され
得る。宿主細胞の形質転換を評価する方法として、ポリペプチドがまた用いられ
、抗体を惹起し得、次いで、この抗体が使用され、組換え細胞からのタンパク質
発現が測定される。さらに、本発明のポリペプチドが使用され、以下の生物学的
活性を試験し得る。

【０４０３】 （遺伝子治療方法） 本発明の別の局面は、障害、疾患および状態を処置または予防するための遺伝
子治療方法である。この遺伝子治療方法は、本発明のポリペプチドの発現を達成
するための、動物への核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡおよびアンチセンスＤＮＡまたはア
ンチセンスＲＮＡ）配列の導入に関する。この方法は、標的組織によるこのポリ
ペプチドの発現のために必要なプロモーターおよび他の任意の遺伝因子と、作動
可能に連結した本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを必要とす
る。このような遺伝子治療および送達技術は当該分野において公知である（例え
ば、本明細書中に参考として援用される、ＷＯ９０／１１０９２を参照のこと）
。

【０４０４】 従って、例えば、患者由来の細胞が、エキソビボで本発明のポリヌクレオチド
と作動可能に連結したプロモーターを含むポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮ
Ａ）を用いて操作され得、次いで、操作された細胞は、本発明のポリペプチドを
用いて処置される患者に提供される。このような方法は、当該分野において周知
である。例えば、Ｂｅｌｌｄｅｇｒｕｎ，Ａ．ら、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ
Ｉｎｓｔ．８５：２０７−２１６（１９９３）；Ｆｅｒｒａｎｔｉｎｉ，Ｍ．
ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５３：１１０７−１１１２（１９９３）
；Ｆｅｒｒａｎｔｉｎｉ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １５３：４６０
４−４６１５（１９９４）；Ｋａｉｄｏ，Ｔ．ら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ
６０：２２１−２２９（１９９５）；Ｏｇｕｒａ，Ｈ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓｅａｒｃｈ ５０：５１０２−５１０６（１９９０）；Ｓａｎｔｏｄｏｎａｔ
ｏ，Ｌ．ら、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ７：１−１０（１９９６
）；Ｓａｎｔｏｄｏｎａｔｏ，Ｌ．ら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ４：１２４
６−１２５５（１９９７）；およびＺｈａｎｇ，Ｊ．−Ｆ．ら、Ｃａｎｃｅｒ
Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ３：３１−３８（１９９６）を参照のこと。これら
は、本明細書中に参考として援用される。１つの実施形態においては、操作され
る細胞は、動脈細胞である。この動脈細胞は、動脈、動脈の周囲の組織への直接
的な注射を介してか、またはカテーテル注入を介して、患者に再導入され得る。

【０４０５】 以下により詳細に考察されるように、このポリヌクレオチド構築物は、注射可
能な物質を動物の細胞に送達する任意の方法（例えば、組織（心臓、筋肉、皮膚
、肺、肝臓など）の間隙空間への注射）により送達され得る。このポリヌクレオ
チド構築物は、薬学的に受容可能な液体または水性のキャリア中で送達され得る
。

【０４０６】 １つの実施形態においては、本発明のポリヌクレオチドは、裸のポリヌクレオ
チドとして送達される。用語「裸の」ポリヌクレオチド、ＤＮＡまたはＲＮＡと
は、細胞への侵入を補助し、促進し、または容易にするように作用するいかなる
送達ビヒクル（ウイルス配列、ウイルス粒子、リポソーム処方物、リポフェクチ
ンまたは沈殿剤などを含む）も含まない配列をいう。しかし、本発明のポリヌク
レオチドはまた、当業者に周知の方法により調製され得るリポソーム処方物中お
よびリポフェクチン処方物中などで送達され得る。このような方法は、例えば、
米国特許第５，５９３，９７２号、同第５，５８９，４６６号および同第５，５
８０，８５９号（これらは、本明細書中に参考として援用される）に記載される
。

【０４０７】 遺伝子治療方法において使用されるポリヌクレオチドベクター構築物は、好ま
しくは、宿主ゲノム中に組み込まれない構築物であり、そしてこれらはまた複製
を可能にする配列を含まない。適切なベクターとしては、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ
から入手可能なｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１およびｐ
ＳＧ；Ｐｈａｒｍａｃｉａから入手可能なｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧおよ
びｐＳＶＬ；ならびにＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手可能なｐＥＦ１／Ｖ５、ｐ
ｃＤＮＡ３．１、およびｐＲｃ／ＣＭＶ２が挙げられる。他の適切なベクターは
、当業者に容易に明らかである。

【０４０８】 当業者に公知の任意の強力なプロモーターは、本発明のポリヌクレオチド配列
の発現を駆動するために用いられ得る。適切なプロモーターとしては、アデノウ
イルスプロモーター（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター）；または
異種プロモーター（例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター）；
ＲＳウイルス（ＲＳＶ）プロモーター；誘導性プロモーター（例えば、ＭＭＴプ
ロモーター、メタロチオネインプロモーター）；熱ショックプロモーター；アル
ブミンプロモーター；ＡｐｏＡＩプロモーター；ヒトグロビンプロモーター；ウ
イルスチミジンキナーゼプロモーター（例えば、単純ヘルペスチミジンキナーゼ
プロモーター）；レトロウイルスＬＴＲ；ｂ−アクチンプロモーター；およびヒ
ト成長ホルモンプロモーターが挙げられる。このプロモーターはまた、本発明の
ポリヌクレオチドについてネイティブなプロモーターであり得る。

【０４０９】 他の遺伝子治療技術とは異なり、裸の核酸配列を標的細胞に導入する１つの主
要な利点は、その細胞におけるポリヌクレオチド合成の一過性の性質である。研
究によって、非複製ＤＮＡ配列が細胞に導入されて、６ヶ月までの期間の間、所
望のポリペプチドの産生を提供し得ることが示された。

【０４１０】 本発明のポリヌクレオチド構築物は、動物内の組織（筋肉、皮膚、脳、肺、肝
臓、脾臓、骨髄、胸腺、心臓、リンパ、血液、骨、軟骨、膵臓、腎臓、胆嚢、胃
、腸、精巣、卵巣、子宮、直腸、神経系、眼、腺、および結合組織を包含する）
の間隙空間に送達され得る。この組織の間隙空間は、器官組織の細網線維間の、
細胞間の液体ムコ多糖類基質、血管または室の壁における弾性線維、線維性組織
のコラーゲン線維、あるいは結合組織鞘性筋肉細胞（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔ
ｉｓｓｕｅ ｅｎｓｈｅａｔｈｉｎｇ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ）内または骨の
裂孔中の同じ基質を包含する。これは、同様に、循環の血漿およびリンパチャン
ネルのリンパ液により占められた空間である。筋肉組織の間隙空間への送達が、
以下で議論される理由のために好ましい。本発明のポリヌクレオチド構築物は、
これらの細胞を含む組織への注射によって、好都合に送達され得る。本発明のポ
リヌクレオチド構築物は、好ましくは、分化した持続性の非分裂細胞に送達され
、そしてその細胞において発現されるが、送達および発現は、非分化細胞または
完全には分化していない細胞（例えば、血液の幹細胞または皮膚線維芽細胞）に
おいて達成され得る。インビボでの筋肉細胞は、ポリヌクレオチドを取り込み、
そして発現する能力において、特に適格である。

【０４１１】 裸の核酸配列注射のために、ＤＮＡまたはＲＮＡの有効投薬量は、約０．０５
ｍｇ／ｋｇ体重から約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲にある。好ましくは、この投薬
量は、約０．００５ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇであり、そしてより好まし
くは約０．０５ｍｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇである。もちろん、当業者が認識
するように、この投薬量は、注射の組織部位に応じて変化する。核酸配列の適切
かつ有効な投薬量は、当業者によって容易に決定され得、そして処置される状態
および投与経路に依存し得る。

【０４１２】 好ましい投与経路は、組織の間隙空間への非経口注射経路による。しかし、他
の非経口経路もまた用いられ得、これには、例えば、特に、肺または気管支の組
織、咽喉または鼻の粘膜への送達のための、エアロゾル処方物の吸入が挙げられ
る。さらに、裸のＤＮＡ構築物は、血管形成術の間にこの手順において用いられ
るカテーテルによって動脈に送達され得る。

【０４１３】 裸のポリヌクレオチドは、送達部位での直接の針注射、静脈内注射、局所投与
、カテーテル注入、およびいわゆる「遺伝子銃」を含むがこれらに限定されない
、当該分野で公知の任意の方法によって送達される。これらの送達方法は、当該
分野で公知である。

【０４１４】 この構築物はまた、ウイルス配列、ウイルス粒子、リポソーム処方物、リポフ
ェクチン、沈殿剤などのような送達ビヒクルを用いて送達され得る。このような
送達方法は、当該分野で公知である。

【０４１５】 特定の実施形態において、本発明のポリヌクレオチド構築物は、リポソーム調
製物中で複合体化している。本発明にて使用するためのリポソーム調製物として
は、カチオン性（正に荷電した）調製物、アニオン性（負に荷電した）調製物お
よび中性の調製物が挙げられる。しかしながら、カチオン性リポソームとポリア
ニオン性核酸との間で強固な荷電複合体を形成し得るので、カチオン性リポソー
ムが特に好ましい。カチオン性リポソームは、機能的形態にて、プラスミドＤＮ
Ａ（本明細書中で参考として援用される、Ｆｅｌｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９８７）８４：７４１３〜７４１６）；ｍＲ
ＮＡ（本明細書中で参考として援用される、Ｍａｌｏｎｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９８９）８６：６０７７〜６０８１）；およ
び精製された転写因子（本明細書中で参考として援用される、Ｄｅｂｓら、Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９０）２６５：１０１８９〜１０１９２）の細胞内
送達を媒介することが示されている。

【０４１６】 カチオン性リポソームは容易に入手可能である。例えば、Ｎ［１−２，３−ジ
オレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリエチルアンモニウム（ＤＯＴＭ
Ａ）リポソームは特に有用であり、そして商標ＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎのもとにＧ
ＩＢＣＯ ＢＲＬ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，Ｎ．Ｙ．より入手可能である（
本明細書中で参考として援用される、Ｐ．Ｆｅｌｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９８７）８４：７４１３〜７４１６もまた参
照のこと、）。他の市販のリポソームとしては、トランスフェクテース（ｔｒａ
ｎｓｆｅｃｔａｃｅ）（ＤＤＡＢ／ＤＯＰＥ）およびＤＯＴＡＰ／ＤＯＰＥ（Ｂ
ｏｅｈｒｉｎｇｅｒ）が挙げられる。

【０４１７】 当該分野で周知の技術を使用して、他のカチオン性リポソームを、容易に入手
可能な物質から調製し得る。ＤＯＴＡＰ（１，２−ビス（オレオイルオキシ）−
３−（トリメチルアンモニオ）プロパン）リポソームの合成の記述に関して、例
えばＰＣＴ公開番号ＷＯ ９０／１１０９２（本明細書中で参考として援用され
る）を参照のこと。ＤＯＴＭＡリポソームの調製は文献にて説明されており、例
えば、本明細書中で参考として援用される、Ｐ．Ｆｅｌｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８４：７４１３〜７４１７を参照のこと
。類似した方法を使用して、他のカチオン性脂質物質よりリポソームを調製し得
る。

【０４１８】 同様に、アニオン性リポソームおよび中性リポソームは、例えば、Ａｖａｎｔ
ｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，Ａｌａ．）から容易に
入手可能であるし、または容易に入手可能な物質を使用して簡単に調製され得る
。そのような物質としてはとりわけ、ホスファチジルコリン、コレステロール、
ホスファチジルエタノールアミン、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰ
Ｃ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジオレオイルホ
スファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）が挙げられる。これらの物質はまた
、ＤＯＴＭＡ出発物資およびＤＯＴＡＰ出発物質と適切な割合にて混合され得る
。これらの物質を使用してリポソームを生成する方法は、当該分野で周知である
。

【０４１９】 例えば、商業的に、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジオレ
オイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、およびジオレオイルホスファ
チジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を種々の組み合わせにて使用し、コレステ
ロールを添加してもしなくても、従来のリポソームを生成し得る。従って、例え
ば、超音波処理バイアル中への窒素ガス流下で、ＤＯＰＧおよびＤＯＰＣの各５
０ｍｇを乾燥することにより、ＤＯＰＧ／ＤＯＰＣ小胞を調製し得る。このサン
プルを一晩真空ポンプ下に置き、そして次の日、脱イオン水で水和する。次いで
、水槽を、１５ＥＣで循環させながら、最大設定にて、倒立カップ（浴タイプ）
プローブを装備したＨｅａｔ Ｓｙｓｔｅｍｓモデル３５０超音波処理器を使用
して、このサンプルを栓をしたバイアル中にて２時間超音波処理する。あるいは
、負に荷電した小胞を、超音波処理なしで調製して多重膜小胞を生成し得るか、
または核孔膜（ｎｕｃｌｅｏｐｏｒｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ）を通して押し出すこ
とにより別々の大きさの単膜小胞を生成し得る。他の方法は、当業者に公知であ
りそして利用可能である。

【０４２０】 このリポソームとしては、多重膜リポソーム（ＭＬＶ）、小さな単膜リポソー
ム（ＳＵＶ）または大きな単膜リポソーム（ＬＵＶ）が挙げられ得、ＳＵＶが好
ましい。当該分野で周知の方法を使用して、種々のリポソーム−核酸複合体が調
製される。例えば、本明細書中で参考として援用される、Ｓｔｒａｕｂｉｎｇｅ
ｒら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９８３）１０１：５１
２〜５２７を参照のこと。例えば、核酸を含有するＭＬＶは、ガラスチューブの
壁面にリン脂質の薄膜を堆積させ、そしてその後、カプセル化されるべき物質の
溶液で水和することによって調製され得る。ＳＵＶはＭＬＶの長期超音波処理に
より調製され、単膜リポソームの均質集団を生成する。封入されるべき物質を、
予め形成されたＭＬＶの懸濁液に添加し、次いで、超音波処理する。カチオン性
脂質を含むリポソームを使用する場合、乾燥した脂質フィルムを、滅菌水または
１０ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＮａＣｌのような等張性緩衝溶液のような適切な溶液中に
再懸濁し、超音波処理し、次いで、予め形成されたリポソームをＤＮＡと直接混
合する。カチオン性ＤＮＡへの正に荷電したリポソームの結合に起因して、リポ
ソームおよびＤＮＡは非常に安定な複合体を形成する。ＳＵＶは、小核酸フラグ
メントを用いての用途が見出される。ＬＵＶは、当該分野で周知の多くの方法に
より調製される。一般に使用される方法としては、Ｃａ²⁺−ＥＤＴＡキレート化
（Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃ
ｔａ（１９７５）３９４：４８３；Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ（１９７９）１７
：７７）；エーテル注入（Ｄｅａｍｅｒ，Ｄ．およびＢａｎｇｈａｍ，Ａ．、Ｂ
ｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ（１９７６）４４３：６２９；Ｏｓｔ
ｒｏら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｍ．（１９７７
）７６：８３６；Ｆｒａｌｅｙら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ（１９７９）７６：３３４８）；界面活性剤透析（Ｅｎｏｃｈ，Ｈ．および
Ｓｔｒｉｔｔｍａｔｔｅｒ，Ｐ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ（１９７９）７６：１４５）；および逆相エバポレーション（ＲＥＶ）（Ｆ
ｒａｌｅｙら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９８０）２５５：１０４３１；Ｓ
ｚｏｋａ，Ｆ．およびＰａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ，Ｄ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９７８）７５：１４５；Ｓｃｈａｅｆｅｒ
−Ｒｉｄｄｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８２）２１５：１６６）が挙げられ、
これらの文献は本明細書中で参考として援用される。

【０４２１】 一般に、ＤＮＡのリポソームに対する割合は約１０：１から約１：１０までで
ある。好ましくは、その割合（ｒａｔｉｏｎ）は約５：１から約１：５までであ
る。より好ましくは、その割合は約３：１から約１：３までである。さらにより
好ましくは、その割合は約１：１である。

【０４２２】 米国特許第５，６７６，９５４号（本明細書中で参考として援用される）はカ
チオン性リポソームキャリアと複合体化された遺伝物質のマウスへの注入につい
て報告する。米国特許第４，８９７，３５５号、同第４，９４６，７８７号、同
第５，０４９，３８６号、同第５，４５９，１２７号、同第５，５８９，４６６
号、同第５，６９３，６２２号、同第５，５８０，８５９号、同第５，７０３，
０５５号および国際公開番号ＷＯ９４／９４６９（これらは本明細書中で参考と
して援用される）は、ＤＮＡを細胞および哺乳動物にトランスフェクトする際に
使用するためのカチオン性脂質を提供する。米国特許第５，５８９，４６６号、
同第５，６９３，６２２号、同第５，５８０，８５９号、同第５，７０３，０５
５号および国際公開番号ＷＯ９４／９４６９（これらは本明細書中で参考として
援用される）は、ＤＮＡ−カチオン性脂質複合体を哺乳動物に送達する方法を提
供する。

【０４２３】 特定の実施形態において、本発明のポリペプチドをコードする配列を含むＲＮ
Ａを含むレトロウイルス粒子を使用して、エキソビボまたはインビボで細胞を操
作する。レトロウイルスプラスミドベクターを誘導し得るレトロウイルスとして
は、モロニーマウス白血病ウイルス、脾臓壊死ウイルス、ラウス肉腫ウイルス、
ハーベイ肉腫ウイルス、ニワトリ白血病ウイルス、テナガザル白血病ウイルス、
ヒト免疫不全ウイルス、骨髄増殖性肉腫ウイルス、および乳癌ウイルスが挙げら
れるが、これらに限定されない。

【０４２４】 このレトロウイルスプラスミドベクターを使用して、パッケージング細胞株を
形質導入し、プロデューサー細胞株を形成する。トランスフェクトされ得るパッ
ケージング細胞株の例としては、その全体が本明細書中で参考として援用される
、Ｍｉｌｌｅｒ、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅａｐｙ １：５〜１４（１９９
０）にて記載されるようなＰＥ５０１、ＰＡ３１７、Ｒ−２、Ｒ−ＡＭ、ＰＡ１
２、Ｔ１９−１４Ｘ、ＶＴ−１９−１７−Ｈ２、ＲＣＲＥ、ＲＣＲＩＰ、ＧＰ＋
Ｅ−８６、ＧＰ＋ｅｎｖＡｍ１２およびＤＡＮ細胞株が挙げられるが、これらに
限定されない。このベクターは、当該分野で公知の任意の手段により、これらの
パッケージング細胞を形質導入し得る。そのような手段としては、エレクトロポ
レーション、リポソームの使用、およびＣａＰＯ₄沈殿が挙げられるが、それら
に限定されない。１つの代替法において、このレトロウイルスプラスミドベクタ
ーをリポソームにカプセル化するか、または脂質に結合して、次いで宿主に投与
し得る。

【０４２５】 このプロデューサー細胞株は、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチドを含む感染性レトロウイルスベクター粒子を産生する。次いで、そのよう
なレトロウイルスベクター粒子を使用して、インビトロまたはインビボのどちら
かにおいて、真核生物細胞を形質導入し得る。この形質導入された真核生物細胞
は、本発明のポリペプチドを発現する。

【０４２６】 特定の他の実施形態において、アデノウイルスベクター中に含まれるポリヌク
レオチドを用いて、エキソビボまたはインビボで細胞を操作する。アデノウイル
スは、それが本発明のポリペプチドをコードし、そして発現し、それと同時に通
常の溶解性ウイルス生活環にて複製するその能力に関して不活性化されるように
操作され得る。アデノウイルス発現は、宿主細胞染色体へのそのウイルスＤＮＡ
の組み込み無しに達成され、その結果、挿入性変異誘発についての心配が軽減さ
れる。さらに、アデノウイルスは、何年もの間、腸の生ワクチンとして優れた安
全側面を伴って使用されている（Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ａ．Ｒ．ら、（１９７４）
Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．１０９：２３３−２３８）。最終的に、
アデノウイルス媒介性遺伝子移入が、コトンラットの肺へのα−１−アンチトリ
プシンおよびＣＦＴＲの移入を含む多くの例において実証されている（Ｒｏｓｅ
ｎｆｅｌｄ，Ｍ．Ａ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９１）２５２：４３１〜４３４
；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら、Ｃｅｌｌ（１９９２）６８：１４３〜１５５）。さら
に、ヒト癌における原因物質としてアデノウイルスを確立しようとする広範な研
究は、一様に否定的であった（Ｇｒｅｅｎ，Ｍ．ら（１９７９）Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７６：６６０６）。

【０４２７】 本発明において有用である適切なアデノウイルスベクターが、例えば、Ｋｏｚ
ａｒｓｋｙおよびＷｉｌｓｏｎ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖｅｌ
．３：４９９〜５０３（１９９３）；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら、Ｃｅｌｌ ６８：
１４３〜１５５（１９９２）；Ｅｎｇｅｌｈａｒｄｔら、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ
ｔ．Ｔｈｅｒ．４：７５９〜７６９（１９９３）；Ｙａｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ
Ｇｅｎｅｔ．７：３６２〜３６９（１９９４）；Ｗｉｌｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ
３６５:６９１〜６９２（１９９３）；および米国特許第５，６５２，２２４
号に記載されており、これらは本明細書中で参考として援用される。例えば、ア
デノウイルスベクターＡｄ２が有用であり、そしてヒト２９３細胞にて増殖され
得る。これらの細胞は、アデノウイルスのＥ１領域を含み、そして構成的にＥｌ
ａおよびＥｌｂを発現し、このことは、このベクターから欠失している遺伝子の
産物を提供することによって欠損アデノウイルスを補完する。Ａｄ２に加えて、
他の多様なアデノウイルス（例えば、Ａｄ３、Ａｄ５、およびＡｄ７）もまた、
本発明において有用である。

【０４２８】 好ましくは、本発明において使用されるアデノウイルスは、複製欠損性である
。複製欠損アデノウイルスは、感染性粒子を形成するために、ヘルパーウイルス
および／またはパッケージング細胞株の助けを必要とする。得られたウイルスは
、細胞に感染する能力があり、そしてプロモーターに作動可能に連結された目的
のポリヌクレオチドを発現し得るが、ほとんどの細胞にて複製し得ない。複製欠
損アデノウイルスは、次の遺伝子：Ｅ１ａ、Ｅ１ｂ、Ｅ３、Ｅ４、Ｅ２ａまたは
Ｌ１からＬ５までのすべてまたは一部のうちの１つ以上にて欠失され得る。

【０４２９】 特定の他の実施形態において、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を使用して、エ
キソビボまたはインビボで細胞を操作する。ＡＡＶは、感染性粒子を生成するた
めにヘルパーウイルスを必要とする、天然に存在する欠損ウイルスである（Ｍｕ
ｚｙｃｚｋａ，Ｎ．、Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．，１５８：９７（１９９２））。ＡＡＶはまた、分裂中ではない
細胞の中にそのＤＮＡを組み込み得る少数のウイルスの中の１つである。３００
個程度の少ない塩基対のＡＡＶを含むベクターがパッケージされ得、そして組み
込み得るが、外来性ＤＮＡのためのスペースは約４．５ｋｂに限られる。そのよ
うなＡＡＶの生成および使用の方法は当該分野で公知である。例えば、米国特許
第５，１３９，９４１号、同第５，１７３，４１４号、同第５，３５４，６７８
号、同第５，４３６，１４６号、同第５，４７４，９３５号、同第５，４７８，
７４５号および同第５，５８９，３７７号を参照のこと。

【０４３０】 例えば、本発明において使用するために適切なＡＡＶベクターは、ＤＮＡ複製
、キャプシド形成、および宿主細胞組み込みに必要な配列すべてを含む。Ｓａｍ
ｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（１９
８９）において見い出される方法のような、標準的クローニング方法を使用して
、このポリヌクレオチド構築物を、このＡＡＶベクターに挿入する。次いで、リ
ポフェクション、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿などを含む、
任意の標準的技術を使用して、この組み換えＡＡＶベクターを、ヘルパーウイル
スに感染しているパッケージング細胞にトランスフェクトする。適切なヘルパー
ウイルスとしては、アデノウイルス、サイトメガロウイルス、ワクシニアウイル
ス、またはヘルペスウイルスが挙げられる。一旦パッケージング細胞がトランス
フェクトおよび感染されると、それらは、このポリヌクレオチド構築物を含む感
染性ＡＡＶウイルス粒子を生成する。次いで、エキソビボまたはインビボのいず
れかで、これらのウイルス粒子を使用して真核生物細胞を形質導入する。この形
質導入細胞は、そのゲノムに組み込まれたポリヌクレオチド構築物を含み、そし
て本発明のポリペプチドを発現する。

【０４３１】 遺伝子治療の別の方法は、相同組み換え（例えば、米国特許第５，６４１，６
７０号、１９９７年６月２４日発行；国際公開番号ＷＯ９６／２９４１１、１９
９６年９月２６日公開；国際公開番号ＷＯ９４／１２６５０、１９９４年８月４
日公開；Ｋｏｌｌｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８
６：８９３２〜８９３５（１９８９）；およびＺｉｊｌｓｔｒａら、Ｎａｔｕｒ
ｅ ３４２：４３５〜４３８（１９８９）を参照のこと）を介して、異種制御領
域および内在性ポリヌクレオチド配列（例えば、目的のポリペプチド配列をコー
ドしている配列）を作動可能に連結する工程を含む。この方法は、標的細胞中に
存在しているが、通常はその細胞中で発現しないかまたは所望されるよりも低い
レベルで発現する、遺伝子の活性化を含む。

【０４３２】 当該分野で公知の標準的技術を使用して、ポリヌクレオチド構築物を作製する
。この構築物は、プロモーターを、そのプロモーターに隣接した標的化配列とと
もに含む。適切なプロモーターは、本明細書中に記載されている。標的化配列は
、内在性配列に対して十分に相補的であり、内在性配列とのプロモーター−標的
化配列の相同組換えを可能にする。標的化配列は、所望される内在性ポリヌクレ
オチド配列の５’末端の十分近くに存在し、それゆえ、相同組換えに際して、プ
ロモーターは、その内在性配列に作動可能に連結される。

【０４３３】 このプロモーターおよび標的化配列は、ＰＣＲを使用して増幅され得る。好ま
しくは、この増幅されたプロモーターは、５’末端および３’末端に別の制限酵
素部位を含む。好ましくは、第１の標的化配列の３’末端は、増幅されたプロモ
ーターの５’末端と同じ制限酵素部位を含み、そして第２の標的化配列の５’末
端は、増幅されたプロモーターの３’末端と同じ制限部位を含む。増幅されたプ
ロモーターおよび標的化配列を消化し、そしてともに連結する。

【０４３４】 裸のポリヌクレオチドとしてか、もしくは上記により詳細に記載されるような
リポソーム、ウイルス配列、ウイルス粒子、ウイルス全体、リポフェクション、
沈殿剤などのようなトランスフェクション促進剤と一緒にかのいずれかで、この
プロモーター−標的化配列構築物を細胞に送達する。直接針注射、静脈内注射、
局所投与、カテーテル注入、粒子加速器などを含む任意の方法により、このプロ
モーター−標的化配列を送達し得る。この方法を、下記により詳細に記載する。

【０４３５】 このプロモーター−標的化配列構築物は、細胞により取り込まれる。この構築
物と内在性配列との間に相同組換えが起こり、その結果、内在性配列は、このプ
ロモーターの制御下に配置される。次いで、このプロモーターは、その内在性配
列の発現を駆動する。

【０４３６】 好ましくは、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、そのタ
ンパク質の分泌を促進する分泌シグナル配列を含む。代表的に、このシグナル配
列は、そのコード領域の５’末端に向かってかまたは５’末端で発現される、そ
のポリヌクレオチドのコード領域に位置する。このシグナル配列は、目的のポリ
ヌクレオチドに対して同種であってもまたは異種であってもよく、そしてトラン
スフェクトされる細胞に対して同種あってもまたは異種であってもよい。さらに
、当該分野で公知の方法を使用して、このシグナル配列は化学合成され得る。

【０４３７】 その投与形態によって、治療効果を提供するのに十分な量にて１つ以上の分子
が発現される限り、上記のポリヌクレオチド構築物のうちのいずれかの任意の投
与形態が使用され得る。これは、直接針注射、全身注射、カテーテル注入、バイ
オリスティック（ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ）注射器、粒子加速器（すなわち、「遺伝
子銃」）、ゲルフォームスポンジデポー（ｄｅｐｏｔ）、他の市販デポー（ｄｅ
ｐｏｔ）物質、浸透圧ポンプ（例えば、Ａｌｚａミニポンプ）、経口用または坐
剤用の固形（錠剤または丸剤）薬学的処方物、および手術中のデカンティングま
たは局所適用を含む。例えば、ラット肝臓およびラット脾臓へのリン酸カルシウ
ム沈澱した裸のプラスミドの直接注射、または門脈へのタンパク質被覆プラスミ
ド直接注射は、ラット肝臓における外来遺伝子の遺伝子発現をもたらした（Ｋａ
ｎｅｄａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４３：３７５（１９８９））。

【０４３８】 局所投与の好ましい方法は、直接注射によるものである。好ましくは、送達ビ
ヒクルと複合体を形成した本発明の組換え分子は、動脈領域内部に直接注射によ
り投与されるか、または動脈領域内部に局所投与される。動脈領域内部での組成
物の局所投与とは、その組成物を動脈内に数センチメートル、好ましくは数ミリ
メートルで注射することを言う。

【０４３９】 局所投与の別の方法は、外科的創傷内またはその周辺に本発明のポリヌクレオ
チド構築物を接触させることである。例えば、患者は手術を経験し得、そしてこ
のポリヌクレオチド構築物を創傷内部の組織表面上に被覆され得るか、またはそ
の構築物を創傷内部の組織領域に注射され得る。

【０４４０】 全身投与に有用な治療組成物は、本発明の標的化された送達ビヒクルと複合体
を形成した本発明の組換え分子を含む。全身投与で使用するために適切な送達ビ
ヒクルは、特定部位に対してそのビヒクルを標的化するリガンドを含むリポソー
ムを含む。

【０４４１】 全身投与の好ましい方法としては、静脈内注射、エアロゾル、経口および経皮
（局所的）送達が挙げられる。当該分野で標準的な方法を使用して、静脈内注射
が実行され得る。当該分野で標準的な方法を使用して、エアロゾル送達もまた実
行され得る（例えば、本明細書中で参考として援用される、Ｓｔｒｉｂｌｉｎｇ
ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１８９：１１２７７〜１
１２８１（１９９２）を参照のこと）。動物の腸内の消化酵素による分解に耐え
る能力をもつキャリアに対して本発明のポリヌクレオチド構築物が複合体を形成
することにより、経口送達は実行され得る。そのようなキャリアの例としては、
当該分野で公知であるもののような、プラスチックカプセルまたは錠剤が挙げら
れる。皮膚内へ通過可能な親油性試薬（例えば、ＤＭＳＯ）と本発明のポリヌク
レオチド構築物を混合することによって、局所的送達は実行され得る。

【０４４２】 送達される物質の有効量を決定することは、例えば、その物質の化学構造およ
び生物学的活性、動物の年齢および体重、処置を必要とする正確な状態およびそ
の重症度、ならびに投与経路を含む、多数の因子に依存し得る。処置の頻度は、
１用量あたりの投与されるポリヌクレオチド構築物の量ならびに被験体の健康お
よび病歴のような多くの因子に依存する。正確な量、投薬回数および投薬のタイ
ミングは、主治医または主治獣医により決定される。本発明の治療的組成物は、
任意の動物に、好ましくは哺乳動物および鳥類に投与され得る。好ましい哺乳動
物としては、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ウシ、ウマ
およびブタが挙げられ、特にヒトである。

【０４４３】 （生物学的活性） 本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくは
アンタゴニストをアッセイに使用し、１つ以上の生物学的活性について試験し得
る。これらのポリヌクレオチドおよびポリペプチドが特定のアッセイにおいて活
性を示す場合、これらの分子はその生物学的活性に関連した疾患に関与し得るよ
うである。従って、このポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニ
ストもしくはアンタゴニストを使用し、関連した疾患を処置し得る。

【０４４４】 （免疫活性） 本発明のポリペプチドもしくはポリヌクレオチド、またはアゴニストもしくは
アンタゴニストは、免疫細胞の増殖、分化、もしくは動員（走化性）を活性化ま
たは阻害することにより、免疫系の疾患、障害および／または状態の処置、予防
および／または診断において有用であり得る。免疫細胞は、造血と呼ばれるプロ
セスを介して発達し、多能性幹細胞から骨髄性細胞（血小板、赤血球、好中球お
よびマクロファージ）およびリンパ系細胞（Ｂリンパ球およびＴリンパ球）を生
成する。これら免疫の疾患、障害および／または状態の病因は、遺伝的、身体的
（ｓｏｍａｔｉｃ）（例えば、癌またはいくつかの自己免疫性の疾患、障害およ
び／または状態）、後天的（例えば、化学療法もしくは毒素による）または感染
的であり得る。さらに、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、また
はアゴニストもしくはアンタゴニストは、特定の免疫系の疾患または障害のマー
カーまたは検出物質（ｄｅｔｅｃｔｏｒ）として使用され得る。

【０４４５】 本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくは
アンタゴニストは、造血細胞の疾患、障害および／または状態の処置、予防およ
び／または診断において有用であり得る。本発明のポリヌクレオチドもしくはポ
リペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストは、特定の（または多く
の）型の造血細胞の減少に関連した疾患、障害および／または状態を処置または
予防する試みにおいて、多能性幹細胞を含む造血細胞の分化および増殖を増加さ
せるために用いられ得る。免疫不全症候群の例としては、血液タンパク質の疾患
、障害および／または状態（例えば、無ガンマグロブリン血症、低ガンマグロブ
リン血症）、毛細血管拡張性運動失調、分類不能型免疫不全、ディ・ジョージ症
候群、ＨＩＶ感染、ＨＴＬＶ−ＢＬＶ感染、白血球接着不全症候群、リンパ球減
少、食細胞殺細菌機能不全、重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）、ヴィスコット−
オールドリッチ障害、貧血、血小板減少、またはヘモグロビン尿症が挙げられる
が、それらに限定されない。

【０４４６】 さらに、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニスト
もしくはアンタゴニストをまた使用して、止血性活性（出血を止めること）また
は血栓崩壊活性（血餅形成）を調節し得る。例えば、止血活性または血栓崩壊活
性を増大させることにより、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、
またはアゴニストもしくはアンタゴニストを使用し、血液凝固の疾患、障害およ
び／または状態（例えば、無線維素原血症、因子欠損症）、血液血小板の疾患、
障害および／または状態（例えば、血小板減少症）、あるいは外傷、手術または
他の原因から生じる創傷を処置または予防し得る。あるいは、止血活性または血
栓崩壊活性を減少させ得る本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ま
たはアゴニストもしくはアンタゴニストを使用し、凝血を阻害または溶解し得る
。心臓発作（梗塞）、発作（ｓｔｒｏｋｅ）または瘢痕の治療または予防におい
て、これらの分子は重要であり得る。

【０４４７】 自己免疫の疾患、障害および／または状態の処置、予防および／または診断に
おいて、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストも
しくはアンタゴニストはまた、有用であり得る。多くの自己免疫の疾患、障害お
よび／または状態は、免疫細胞によって外来性物質として不適切に自己認識する
ことから生じる。この不適切な認識は、宿主組織の破壊をもたらす免疫応答を引
き起こす。従って、免疫応答、特にＴ細胞の増殖、分化または走化性を阻害する
本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくはア
ンタゴニストの投与は、自己免疫の疾患、障害および／または状態の防止におい
て効果的な治療であり得る。

【０４４８】 本発明により処置、予防および／もしくは診断され得るかまたは検出され得る
自己免疫の疾患、障害および／または状態の例としては、アディソン病、溶血性
貧血、抗リン脂質症候群、慢性関節リウマチ、皮膚炎、アレルギー性脳脊髄炎、
糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーヴズ病、多発性硬化症、重症筋無
力症、神経炎、眼炎、水疱性類天疱瘡、天疱瘡、多発性内分泌腺症、紫斑病、ラ
イター病、スティッフマン症候群、自己免疫性甲状腺炎、全身性エリテマトーデ
ス、自己免疫性の肺の炎症、ギヤン−バレー症候群、インスリン依存性糖尿病、
および自己免疫炎症性眼疾患が挙げられるが、それらに限定されない。

【０４４９】 同様に、ぜん息（特にアレルギー性ぜん息）または他の呼吸の問題のような、
アレルギー反応およびアレルギー状態もまた、本発明のポリヌクレオチドもしく
はポリペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストにより処置、予防お
よび／または診断され得る。さらに、これらの分子を使用し、抗原性分子に対す
るアナフィラキシー、過敏症または血液型不適合性を処置し得る。

【０４５０】 本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくは
アンタゴニストをまた使用し、器官拒絶または対宿主性移植片病（ＧＶＨＤ）を
処置、予防および／または診断し得る。器官拒絶は、免疫応答を介して宿主免疫
細胞による移植組織の破壊によって起こる。同様に、免疫応答はＧＶＨＤにもま
た関与しているが、この場合、外来性の移植免疫細胞が宿主組織を破壊する。免
疫応答、特にＴ細胞の増殖、分化または走化性を阻害する、本発明のポリヌクレ
オチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストの投与
は、器官拒絶またはＧＶＨＤの防止において効果的な治療であり得る。

【０４５１】 同様に、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニスト
もしくはアンタゴニストをもまた使用し、炎症を調節し得る。例えば、このポリ
ペプチドもしくはポリヌクレオチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニスト
は、炎症応答に関与する細胞の増殖および分化を阻害し得る。これらの分子を使
用して、慢性前立腺炎、肉芽腫性前立腺炎、マラコプラキア、感染に関連する炎
症（例えば、敗血症性ショック、敗血症、または全身炎症応答症候群（ＳＩＲＳ
））、虚血再灌流傷害に関連する炎症、内毒素致死に関連する炎症、関節炎に関
連する炎症、補体媒介性超急性拒絶に関連する炎症、腎炎に関連する炎症、サイ
トカインまたはケモカインが誘導する肺傷害に関連する炎症、炎症性腸疾患に関
連する炎症、クローン病に関連する炎症またはサイトカイン（例えば、ＴＮＦま
たはＩＬ−１）の過剰生成から生じる炎症を含む、慢性および急性の両方の状態
の炎症状態を処置、予防および／または診断し得る。

【０４５２】 （過増殖障害） 本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくは
アンタゴニストを使用し、新生物を含む過増殖性の疾患、障害および／または状
態を処置、予防および／または診断し得る。本発明のポリヌクレオチドもしくは
ポリペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストは、直接的または間接
的な相互作用を介してこの障害の増殖を阻害し得る。あるいは、本発明のポリヌ
クレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストは
、過増殖障害を阻害し得る他の細胞を増殖させ得る。

【０４５３】 例えば、免疫応答を増大させること、特に過増殖障害の抗原性の質を増大させ
ることによって、またはＴ細胞を増殖、分化、もしくは動員することによって、
過増殖性の疾患、障害および／または状態を処置、予防および／または診断し得
る。既存の免疫応答を増強するか、または新たな免疫応答を開始するかのいずれ
かによって、この免疫応答を増大させ得る。あるいは、免疫応答を減少させるこ
ともまた、化学療法剤のような、過増殖性の疾患、障害および／または状態を処
置、予防および／または診断する方法であり得る。

【０４５４】 本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくは
アンタゴニストによって処置、予防および／または診断され得る過増殖性の疾患
、障害および／または状態の例としては、結腸、腹部、骨、胸、消化系、肝臓、
膵臓、腹膜、内分泌腺（副腎、上皮小体、下垂体、精巣、卵巣、胸腺、甲状腺）
、眼、頭および首、神経（中枢および末梢）、リンパ系、骨盤、皮膚、軟組織、
脾臓、胸郭、ならびに尿生殖器に位置する新生物が挙げられるが、それらに限定
されない。

【０４５５】 同様に、他の過増殖疾患、障害および／または状態もまた、本発明のポリヌク
レオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストによ
り処置、予防および／または診断され得る。そのような過増殖疾患、障害および
／または状態の例としては、高ガンマグロブリン血症、リンパ増殖疾患、障害お
よび／または状態、パラプロテイン血症、紫斑病、類肉腫症、セザリー症候群、
ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、ゴシェ病、組織球増殖症、および
任意の他の過増殖疾患、さらに上記に収載されている器官系に位置している新生
物が挙げられるが、それらに限定されない。

【０４５６】 １つの好ましい実施形態は、本発明のポリヌクレオチドを利用して、本発明、
および／またはタンパク質融合物もしくはそのフラグメントを用いる遺伝子治療
により、異常な細胞分裂を阻害する。

【０４５７】 従って、本発明は、異常に増殖している細胞に、本発明のポリヌクレオチドを
挿入することにより細胞増殖障害を処置するための方法を提供する。ここで、上
記のポリヌクレオチドは、上記の発現を抑制する。

【０４５８】 本発明の別の実施形態は、個体における細胞増殖疾患、障害および／または状
態を処置または予防する方法を提供し、この方法は、異常に増殖している細胞（
単数または複数）に本発明の１つ以上の活性な遺伝子コピーを投与する工程を包
含する。好ましい実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、上記のポリ
ヌクレオチドをコードするＤＮＡ配列を発現する際に有効な組換え発現ベクター
を含むＤＮＡ構築物である。本発明の別の好ましい実施形態において、本発明の
ポリヌクレオチドをコードするＤＮＡ構築物を細胞に挿入して、レトロウイルス
（または、より好ましくは、アデノウイルスベクター）を利用して処置する（参
考として本明細書中に援用される、Ｇ Ｊ．Ｎａｂｅｌら、ＰＮＡＳ １９９９
９６：３２４−３２６を参照のこと）。最も好ましい実施形態において、この
ウイルスベクターは欠損性であり、そして非増殖細胞を形質転換せず、増殖細胞
のみを形質転換する。さらに、好ましい実施形態において、増殖している細胞に
、単独で、または他のポリヌクレオチドとともに、もしくは他のポリヌクレオチ
ドと融合して挿入される本発明のポリヌクレオチドは、次いで、外部刺激（すな
わち、磁性、特定の低分子、化学物質、または薬物投与など）により調節され得
る。この刺激は、上記のポリヌクレオチドの上流にあるプロモーターに作用して
、コードされたタンパク質産物の発現を誘導する。このようにして、本発明の有
益な治療効果は、上記の外部刺激に基づいて、明らかに調節され得る（すなわち
、本発明のポリヌクレオチドの発現を増加、減少、または阻害するために）。

【０４５９】 本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、他の脈管形成タンパ
ク質をコードする他のポリヌクレオチドと一緒に投与され得る。脈管形成タンパ
ク質としては、酸性および塩基性の線維芽細胞増殖因子、ＶＥＧＦ−１、ＶＥＧ
Ｆ−２（ＶＥＧＦ−Ｃ）、ＶＥＧＦ−３（ＶＥＧＦ−Ｂ）、上皮増殖因子αおよ
びβ、血小板由来の内皮細胞増殖因子、血小板由来増殖因子、腫瘍壊死因子α、
肝細胞増殖因子、インスリン様増殖因子、コロニー刺激因子、マクロファージコ
ロニー刺激因子、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子、および一酸化窒素
シンターゼが挙げられるが、これらに限定されない。

【０４６０】 本発明のポリヌクレオチドは、発癌性遺伝子または抗原の発現を抑制する際に
有用であり得る。「発癌性遺伝子の発現を抑制する」により、遺伝子の転写の抑
制、遺伝子転写物の分解（前メッセンジャー（ｐｒｅ−ｍａｓｓａｇｅ）ＲＮＡ
）、スプライシングの阻害、メッセンジャーＲＮＡの破壊、タンパク質の翻訳後
修飾の妨げ、タンパク質の破壊、またはタンパク質の正常機能の阻害を意図する
。

【０４６１】 異常に増殖する細胞に対する局所的な投与に関しては、本発明のポリヌクレオ
チドは、当業者に公知の任意の方法により投与され得、この方法としては、トラ
ンスフェクション、エレクトロポレーション、細胞のマイクロインジェクション
、例えば、リポソームのようなビヒクルにおいて、リポフェクチン、または裸の
ポリヌクレオチド、または本明細書中全体を通して記載される任意の他の方法が
挙げられるが、これらに限定されない。本発明のポリヌクレオチドは、公知の遺
伝子送達系（例えば、当業者に公知のレトロウイルスベクター（Ｇｉｌｂｏａ，
Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ４４：８４５（１９８２）；Ｈｏｃｋｅ，Ｎａｔｕｒｅ
３２０：２７５（１９８６）；Ｗｉｌｓｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８５：３０１４）；ワクシニアウイルス系（Ｃｈａｋｒａ
ｂａｒｔｙら，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．５：３４０３（１９８５））また
は他の効率的なＤＮＡ送達系（Ｙａｔｅｓら，Ｎａｔｕｒｅ ３１３：８１２（
１９８５））に限定されない）により送達され得る。これらの参考文献は、例示
にすぎず、そして本明細書中に参考として援用される。異常に増殖している細胞
に特異的に送達するか、またはそれをトランスフェクトし、そして非分裂細胞を
残す（ｓｐａｒｅ）ために、当業者に公知のレトロウイルスまたはアデノウイル
ス（例えば、当該分野または本明細書中で記載される）送達系を利用することが
好ましい。宿主ＤＮＡ複製は組み込むためにレトロウイルスＤＮＡが必要である
ので、このレトロウイルスは、その生活環についての必要とされるレトロウイル
ス遺伝子の欠如に起因して自己複製できない。本発明のポリヌクレオチドのため
に、このようなレトロウイルス送達系を利用して、上記の遺伝子および構築物を
、異常に増殖している細胞に標的化し、そして非分裂性の正常細胞を残す。

【０４６２】 本発明のポリヌクレオチドは、疾患部位に直接注射針を導くために使用される
画像化デバイスの使用によって、内部器官、体腔などにおける細胞増殖性障害／
疾患部位に直接送達され得る。本発明のポリヌクレオチドはまた、手術介入時に
疾患部位に投与され得る。

【０４６３】 「細胞増殖性障害」により、任意のヒトもしくは動物の疾患または障害が、器
官、腔、または身体部分のいずれか１つもしくはいずれかの組み合わせを冒して
いることを意味される。この疾患は、良性または悪性に拘わらず、細胞、細胞群
、もしくは組織の単一または複数の局所的な異常な増殖により特徴づけられる。

【０４６４】 本発明のポリヌクレオチドの任意の量は、この量が、処置細胞の増殖に対して
生物学的に阻害性の効果を有する限り、投与され得る。さらに、本発明の１つよ
り多くのポリヌクレオチドを、同時に同じ部位に投与することが可能である。「
生物学的に阻害性の」により、部分的または全体的な成長阻害ならびに細胞の増
殖または成長の速度における減少を意味する。生物学的に阻害性の用量は、標的
の悪性または組織培養において異常に増殖している細胞の成長、動物および細胞
培養物における腫瘍成長に対する本発明のポリヌクレオチドの効果を評価するこ
と、あるいは当業者に公知の任意の他の方法により決定され得る。

【０４６５】 本発明はさらに、抗体に基づく治療に関し、この方法は、上記の疾患、障害お
よび／または状態の１つ以上を処置、予防および／または診断するために、哺乳
動物患者（特にヒト患者）に抗ポリペプチド抗体および抗ポリヌクレオチド抗体
を投与する工程を包含する。抗ポリペプチド抗体および抗ポリヌクレオチド抗体
（ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体）を生成するための方法は、本
明細書中の他の箇所に詳細に記載される。このような抗体は、当該分野で公知の
ように、または本明細書中に記載されるように薬学的に受容可能な組成物中に提
供され得る。

【０４６６】 本発明の抗体が治療的に使用され得る方法の概要は、例えば、補体（ＣＤＣ）
もしくはエフェクター細胞（ＡＤＣＣ）により媒介されるように、本発明のポリ
ヌクレオチドまたはポリペプチドを、身体において局所的もしくは全身的に、ま
たは抗体の直接的な細胞傷害性により結合させる工程を包含する。これらのアプ
ローチのいくつかは、以下により詳細に記載される。本明細書中に提供される教
示があれば、当業者は、本発明の抗体を、過度の実験なくして、診断、モニタリ
ングまたは治療の目的のために使用する方法を知る。

【０４６７】 詳細には、本発明の抗体、フラグメントおよび誘導体は、本明細書中に記載さ
れるように、細胞増殖性疾患、障害および／または状態および／もしくは分化疾
患、障害および／または状態を有するか、または発症している被験体を処置、予
防および／または診断するために有用である。このような処置は、単一用量また
は複数用量の抗体、あるいはそのフラグメント、誘導体、または結合体を投与す
る工程を包含する。

【０４６８】 本発明の抗体は、他のモノクローナル抗体もしくはキメラ抗体と組み合わせて
、またはリンホカインもしくは造血増殖因子（例えば、これは、抗体と相互作用
するエフェクター細胞の数または活性が増加するように作用する）と組み合わせ
て、有利に利用され得る。

【０４６９】 本発明のポリペプチドもしくはポリヌクレオチド、そのフラグメントもしくは
領域に対して、高親和性および／または強力なインビボ阻害抗体および／または
中和抗体を使用することは、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド（
そのフラグメントを含む）に関する疾患、障害および／または状態に関するイム
ノアッセイおよびその治療の両方のために好ましい。このような抗体、フラグメ
ント、または領域は、好ましくは、ポリヌクレオチドもしくはポリペプチド（そ
のフラグメントを含む）に対する親和性を有する。好ましい結合親和性は、５×
１０^-6Ｍ、１０^-6Ｍ、５×１０^-7Ｍ、１０^-7Ｍ、５×１０^-8Ｍ、１０^-8Ｍ、５×
１０^-9Ｍ、１０^-9Ｍ、５×１０^-10Ｍ、１０^-10Ｍ、５×１０^-11Ｍ、１０^-11Ｍ、
５×１０^-12Ｍ、１０^-12Ｍ、５×１０^-13Ｍ、１０^-13Ｍ、５×１０^-14Ｍ、１０^{- 14} Ｍ、５×１０^-15Ｍ、および１０^-15Ｍ未満の解離定数すなわちＫｄを有する親
和性を含む。

【０４７０】 さらに、本発明のポリペプチドは、本明細書中の他の箇所に記載されるように
、単独で、融合タンパク質として、または直接的にもしくは間接的に他のポリペ
プチドとの組み合わせでかのいずれかで、増殖性細胞もしくは組織の脈管形成を
阻害する際に有用である。最も好ましい実施形態において、上記の抗脈管形成効
果は、間接的に、例えば、造血性の腫瘍特異的細胞（例えば、腫瘍関連マクロフ
ァージ）の阻害を通じて、達成され得る（本明細書中に参考として援用される、
Ｊｏｓｅｐｈ ＩＢら、Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ，９０（２１）
：１６４８−５３（１９９８）を参照のこと）。本発明のポリペプチドまたはポ
リヌクレオチドに対する抗体はまた、脈管形成の直接的または間接的な阻害を生
じ得る（本明細書中に参考として援用される、Ｗｉｔｔｅ Ｌ．ら、Ｃａｎｃｅ
ｒ Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ Ｒｅｖ．１７（２）：１５５−６１（１９９８）を
参照のこと）。

【０４７１】 本発明のポリペプチド（タンパク質融合物を含む）、またはそのフラグメント
は、アポトーシスの誘導を通じて増殖性細胞または組織を阻害する際に有用であ
り得る。上記のポリペプチドは、直接的または間接的のいずれかで、増殖性の細
胞および組織のアポトーシスを誘導するように、例えば、死ドメインレセプター
（例えば、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）レセプター１、ＣＤ９５（Ｆａｓ／ＡＰＯ−
１）、ＴＮＦレセプター関連アポトーシス媒介タンパク質（ＴＲＡＭＰ）ならび
にＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）レセプター１および２（
本明細書中に参考として援用されるＳｃｈｕｌｚｅ−Ｏｓｔｈｏｆｆ Ｋ，ら、
Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２５４（３）：４３９−５９（１９９８）を参照
のこと））の活性化において作用し得る。さらに、本発明の別の好ましい実施形
態において、上記のポリペプチドは、他の機構を通じて（例えば、アポトーシス
を活性化する他のタンパク質の活性化において）あるいは上記タンパク質の発現
を単独でまたは低分子薬物もしくはアジュバント（例えば、アポプトニン、ガレ
クチン、チオレドキシン、抗炎症性タンパク質）と組み合わせてかのいずれかで
刺激することを通じて、アポトーシスを誘導し得る（例えば、本明細書中に参考
として援用される、Ｍｕｔａｔ Ｒｅｓ ４００（１−２）：４４７−５５（１
９９８），Ｍｅｄ Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ．５０（５）：４２３−３３（１９９
８），Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ Ｉｎｔｅｒａｃｔ．Ａｐｒ ２４；１１１−１１２
；２３−３４（１９９８））、Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．７６（６）：４０２−１２
（１９９８），Ｉｎｔ Ｊ Ｔｉｓｓｕｅ Ｒｅａｃｔ；２０（１）：３−１５
（１９９８）を参照のこと）。

【０４７２】 本発明のポリペプチド（それに対するタンパク質融合物を含む）、またはその
フラグメントは、増殖性細胞または組織の転移を阻害する際に有用である。阻害
は、本明細書中他の箇所に記載されるように、ポリペプチドまたは上記ポリペプ
チドに対する抗体を投与する工程の直接的結果として、または間接的に（例えば
、転移を阻害することが公知のタンパク質（例えば、α４インテグリン）の発現
を活性化する）生じ得る（例えば、本明細書中に参考として援用される、Ｃｕｒ
ｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９８；２３１：１２５
−４１を参照のこと）。本発明のこのような治療的影響は、単独で、または低分
子薬物もしくはアジュバントと組み合わせてかのいずれかで達成され得る。

【０４７３】 別の実施形態において、本発明は、本発明のポリペプチド（例えば、ポリペプ
チドまたは異種ポリペプチドに関連するポリペプチド抗体、異種核酸、毒素、ま
たはプロドラッグを含む組成物）を含む組成物を、本発明のポリペプチドを発現
する標的とされた細胞に送達する方法を提供する。本発明のポリペプチドまたは
ポリペプチド抗体は、異種ポリペプチド、異種核酸、毒素、またはプロドラッグ
と、疎水性、親水性、イオン性および／または共有結合的な相互作用を通じて関
連し得る。

【０４７４】 本発明のポリペプチド、それに対するタンパク質融合物、またはそのフラグメ
ントは、上記の抗原および免疫原に対して、直接的（例えば、本発明のポリペプ
チドが「ワクチン接種」された場合、増殖性抗原および免疫原に対して応答する
ように免疫応答を生じる）または間接的（例えば、免疫応答を増強することが公
知のタンパク質（例えば、ケモカイン）の発現を活性化することにおいて）のい
ずれかで、増殖している細胞または組織の免疫原性および／または抗原性を増強
する際に有用である。

【０４７５】 （心臓血管障害） 本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくは
アンタゴニストを使用して、四肢虚血のような末梢動脈疾患を含む、心臓血管障
害を処置し得る。

【０４７６】 心臓血管障害としては、動動脈瘻（ａｒｔｅｒｉｏ−ａｒｔｅｒｉａｌ ｆｉ
ｓｔｕｌａ）、動静脈瘻、大脳動静脈先天異常、先天性心欠損症（ｃｏｎｇｅｎ
ｉｔａｌ ｈｅａｒｔ ｄｅｆｅｃｔ）、肺動脈弁閉鎖症、およびシミター症候
群のような心臓血管異常が挙げられる。先天性心欠損症としては、大動脈縮窄、
三房心、冠状脈管奇形（ｃｏｒｏｎａｒｙ ｖｅｓｓｅｌ ａｎｏｍａｌｉｅｓ
）、交差心、右胸心、開存性動脈管（ｐａｔｅｎｔ ｄｕｃｔｕｓ ａｒｔｅｒ
ｉｏｓｕｓ）、エブスタイン奇形、アイゼンメンガー複合体、左心室発育不全症
候群、左胸心、ファロー四徴症、大血管転位症、両大血管右室起始症、三尖弁閉
鎖症、動脈管遺残、および心中隔欠損症（ｈｅａｒｔ ｓｅｐｔａｌ ｄｅｆｅ
ｃｔｓ）（例えば、大動脈肺動脈中隔欠損症（ａｏｒｔｏｐｕｌｍｏｎａｒｙ
ｓｅｐｔａｌ ｄｅｆｅｃｔ）、心内膜床欠損症、リュタンバッシェ症候群、フ
ァロー三徴症、心室心中隔欠損症（ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｈｅａｒｔ ｓｅ
ｐｔａｌ ｄｅｆｅｃｔｓ））が挙げられる。

【０４７７】 心臓血管障害としてはまた、不整脈、カルチノイド心臓病、高心拍出量（ｈｉ
ｇｈ ｃａｒｄｉａｃ ｏｕｔｐｕｔ）、低心拍出量（ｌｏｗ ｃａｒｄｉａｃ
ｏｕｔｐｕｔ）、心タンポナーデ（ｃａｒｄｉａｃ ｔａｍｐｏｎａｄｅ）、
心内膜炎（細菌性を含む）、心臓動脈瘤、心停止、うっ血性心不全、うっ血性心
筋症、発作性呼吸困難、心臓水腫、心肥大、うっ血性心筋症、左心室肥大、右心
室肥大、梗塞後心破裂、心室中隔破裂、心臓弁疾患、心筋疾患、心筋虚血、心内
膜液浸出、心外膜炎（梗塞性および結核性を含む）、気心膜症、心膜切開後症候
群、右心疾患、リウマチ性心疾患、心室機能不全、充血、心臓血管妊娠合併症（
ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏ
ｎｓ）、シミター症候群、心血管梅毒、および心血管結核（ｃａｒｄｉｏｖａｓ
ｃｕｌａｒ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）のような心臓病が挙げられる。

【０４７８】 不整脈としては、洞性不整脈、心房性細動、心房粗動、徐脈、期外収縮、アダ
ムズ−ストークス症候群、脚ブロック、洞房ブロック、長ＱＴ症候群、副収縮、
ローン−ギャノング−レヴァイン症候群、マヘーム型早期興奮症候群、ウルフ−
パーキンソン−ホワイト症候群、洞不全症候群、頻拍、および心室性細動が挙げ
られる。頻拍としては、発作性頻拍、上室性頻拍、心室固有調律促進、房室結節
性再入頻拍、異所心房性頻拍、異所接合部頻拍、洞房結節再入頻拍、洞性頻拍、
トルサード・ド・ポワント、および心室性頻拍が挙げられる。

【０４７９】 心臓弁疾患としては、大動脈弁機能不全症、大動脈弁狭窄症、心雑音（ｈｅａ
ｒ ｍｕｒｍｕｒｓ）、大動脈弁逸脱症、僧帽弁逸脱症、三尖弁逸脱症、僧帽弁
機能不全、僧帽弁狭窄症、肺動脈弁閉鎖症、肺動脈弁機能不全、肺動脈弁狭窄症
、三尖閉鎖症、三尖弁機能不全、および三尖弁狭窄症が挙げられる。

【０４８０】 心筋疾患としては、アルコール性心筋症、うっ血性心筋症、肥大型心筋症、弁
下部性大動脈狭搾症、弁下部性肺動脈狭搾症、拘束型心筋症、シャーガス心筋症
、心内膜線維弾性症、心内膜心筋線維症、キーンズ症候群、心筋再灌流障害、お
よび心筋炎が挙げられる。

【０４８１】 心筋性虚血としては、狭心症、冠動脈瘤、冠動脈硬化、冠動脈血栓症、冠動脈
血管痙攣、心筋梗塞、および心筋気絶（ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｓｔｕｎｎｉｎ
ｇ）のような冠動脈疾患が挙げられる。

【０４８２】 心臓血管疾患としてはまた、動脈瘤、血管形成異常、血管腫症、細菌性血管腫
症、ヒッペル−リンダウ疾患、クリペル−トルノネー−ウェーバー症候群、スタ
ージ−ウェーバー症候群、血管運動神経性水腫、大動脈疾患、高安動脈炎、大動
脈炎、ルリーシュ症候群、動脈閉塞疾患、動脈炎、動脈内膜炎（ｅｎａｒｔｅｒ
ｉｔｉｓ）、結節性多発性動脈炎、脳血管障害、糖尿病性血管障害、糖尿病性網
膜症、塞栓症、血栓症、先端紅痛症、痔、肝静脈閉塞疾患、高血圧、低血圧、虚
血、末梢血管疾患、静脈炎、肺静脈閉塞疾患、レーノー病、ＣＲＥＳＴ症候群、
網膜静脈閉塞、シミター症候群、上大静脈症候群、毛細血管拡張症、毛細血管拡
張性運動失調、遺伝性出血性毛細血管拡張症、精索静脈瘤、拡張蛇行静脈、静脈
瘤性潰瘍、脈管炎、および静脈機能不全のような血管疾患が挙げられる。

【０４８３】 動脈瘤としては、解離性動脈瘤、偽動脈瘤、感染した動脈瘤、破裂した動脈瘤
、大動脈性動脈瘤、大脳性動脈瘤、冠動脈瘤、心動脈瘤、および腸骨性動脈瘤が
挙げられる。

【０４８４】 動脈閉塞疾患としては、動脈硬化症、間欠性跛行、頸動脈狭窄症、線維筋性形
成異常、腸間膜性血管閉塞、モヤモヤ病、腎動脈閉塞、網膜動脈閉塞、および閉
塞性血栓性血管炎が挙げられる。

【０４８５】 脳血管障害としては、頸動脈疾患、脳のアミロイド血管症、大脳動脈瘤、大脳
無酸素症、大脳動脈硬化、大脳動静脈先天異常、大脳動脈疾患、大脳の閉塞症お
よび血栓症、頸動脈血栓症、洞血栓症、ヴァレンベルク症候群、大脳出血、硬膜
上血腫、硬膜下血腫、クモ膜下出血（ｓｕｂａｒａｘｈｎｏｉｄ ｈｅｍｏｒｒ
ｈａｇｅ）、大脳梗塞、大脳虚血（一過性を含む）、鎖骨下動脈盗血症候群、室
周白軟化症（ｐｅｒｉｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｌｅｕｋｏｍａｌａｃｉａ）、
血管性頭痛、群発性頭痛、片頭痛、および椎骨基部（ｖｅｒｔｅｂｒｏｂａｓｉ
ｌａｒ）機能不全が挙げられる。

【０４８６】 塞栓症としては、空気塞栓症、羊水塞栓症、コレステロール塞栓症、爪先チア
ノーゼ症候群、脂肪塞栓症、肺動脈塞栓症、および血栓塞栓症が挙げられる。血
栓症としては、冠状動脈血栓症、肝静脈血栓症、網膜静脈閉塞、頸動脈血栓症、
洞血栓症、ヴァレンベルク症候群、および血栓性静脈炎が挙げられる。

【０４８７】 虚血としては、大脳虚血、虚血性大腸炎、区画症候群、前区画症候群、心筋虚
血、再灌流傷害、および末梢四肢虚血が挙げられる。脈管炎としては、大動脈炎
、動脈炎、ベーチェット（Ｂｅｈｃｅｔ）症候群、チャーグ−ストラウス症候群
、皮膚粘膜リンパ節症候群、閉塞性血栓性血管炎、過敏性血管炎、シェーンライ
ン−ヘーノホ紫斑病（Ｓｃｈｏｅｎｌｅｉｎ−Ｈｅｎｏｃｈ ｐｕｒｐｕｒａ）
、アレルギー性皮膚血管炎およびヴェーゲナー肉芽腫症が挙げられる。

【０４８８】 本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくは
アンタゴニストは、危険な四肢虚血および冠状動脈疾患の処置に対して特に有効
である。

【０４８９】 ポリペプチドは、当該分野で公知である任意の方法を使用して投与され得、こ
れらの方法としては、送達部位における直接的針注射、静脈内注射、局所投与、
カテーテル注入、バイオリスティック（ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ）注射、粒子加速器
、ゲルフォームスポンジデポー、他の市販デポー物質、浸透圧ポンプ、経口また
は坐剤の固形薬学的処方物、手術中のデカンティングまたは局所適用、エアロゾ
ル送達が挙げられるが、これらに限定されない。そのような方法は当該分野で公
知である。ポリペプチドは、下記により詳細に記載される、治療剤の一部として
投与され得る。ポリヌクレオチドの送達方法は本明細書中にてより詳細に記載さ
れる。

【０４９０】 （抗新脈管形成活性） 新脈管形成の内因性の、刺激因子とインヒビターとの間の天然に存在する平衡
は、阻害の影響が優勢である平衡である。Ｒａｓｔｉｎｅｊａｄら、Ｃｅｌｌ
５６：３４５〜３５５（１９８９）。新生血管形成が正常な生理学的条件下にお
いて生じるまれな場合（例えば、創傷治癒、器官再生、胚発生、および雌性生殖
プロセス）において、新脈管形成は、厳密に調節され、そして空間的および時間
的に範囲が定められる。病的な新脈管形成（例えば、固形腫瘍増殖を特徴付ける
病的な新脈管形成）の条件下において、これらの調節の制御ができない。調節さ
れていない新脈管形成は病的になり、そして多くの新生物性疾患および非新生物
性疾患の進行を支持する。固形腫瘍の増殖および転移、関節炎、いくつかの型の
眼の障害および乾癬を含む、多くの重篤な疾患は、異常な新生血管形成により支
配される。例えば、Ｍｏｓｅｓら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．９：６３０〜６３４（１９
９１）；Ｆｏｌｋｍａｎら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３３３：１７５７〜
１７６３（１９９５）；Ａｕｅｒｂａｃｈら、Ｊ．Ｍｉｃｒｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ
．２９：４０１〜４１１（１９８５）；Ｆｏｌｋｍａｎ、Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉ
ｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、ＫｌｅｉｎおよびＷｅｉｎｈｏｕｓｅ編
、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１７５〜２０３頁（１９
８５）；Ｐａｔｚ、Ａｍ．Ｊ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．９４：７１５〜７４３（１
９８２）；およびＦｏｌｋｍａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２１：７１９〜７２５
（１９８３）による概説を参照のこと。多くの病的状態において、新脈管形成の
プロセスは、その疾患状態に寄与する。例えば、固形腫瘍の増殖が新脈管形成に
依存することを示唆する有意なデータが蓄積されている。Ｆｏｌｋｍａｎおよび
Ｋｌａｇｓｂｒｕｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３５：４４２〜４４７（１９８７）。

【０４９１】 本発明は、本発明のポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチド、ならびに
本発明のアゴニストまたはアンタゴニストの投与による新生血管形成に関連する
疾患または障害の処置を提供する。本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストを用いて処置し得る悪性状態およ
び転移性状態には、本明細書に記載されるかさもなければ当該分野で公知の悪性
疾患、固形腫瘍、および癌（このような障害の総説については、Ｆｉｓｈｍａｎ
ら、Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第２版、Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏ．，Ｐｈ
ｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９８５）を参照のこと）が挙げられるが、これらに限
定されない。従って、本発明は、治療有効量の、本発明のポリヌクレオチド、ポ
リペプチド、アンタゴニストおよび／またはアゴニストをそれの必要な個体に投
与する工程を包含する、新脈管形成に関連する疾患および／または障害の処置の
方法を提供する。例えば、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストお
よび／またはアゴニストは、癌または腫瘍を治療的に処置するために、種々のさ
らなる方法で利用され得る。ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニスト
および／またはアゴニストで処置され得る癌としては、前立腺癌、肺癌、乳癌、
卵巣癌、胃癌、膵臓癌、喉頭癌、食道癌、精巣癌、肝臓癌、耳下腺癌、胆管癌、
結腸癌、直腸癌、頸部癌、子宮癌、子宮内膜癌、腎臓癌、膀胱癌、甲状腺癌を含
む固形腫瘍；原発性腫瘍および転移；黒色腫；神経膠芽細胞腫；カポージ肉腫；
平滑筋肉腫；非小細胞肺癌；結腸直腸癌；進行性（ａｄｖａｎｃｅｄ）悪性疾患
；および血液から生じる腫瘍（例えば、白血病）が挙げられるが、これらに限定
されない。例えば、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストおよび／
またはアゴニストは、皮膚癌、頭頸部腫瘍、乳房腫瘍およびカポージ肉腫のよう
な癌を処置するために、局所送達され得る。

【０４９２】 なお他の局面において、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストお
よび／またはアゴニストは、例えば、膀胱内投与によって膀胱癌の表面形態を処
置するために利用され得る。ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニスト
および／またはアゴニストは、注射またはカテーテルを介して腫瘍に直接的にま
たは腫瘍部位付近に送達され得る。当然のことながら、当業者が理解するように
、適切な投与様式は、処置されるべき癌によって変化する。他の送達様式は本明
細書において議論される。

【０４９３】 ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストおよび／またはアゴニスト
は、癌に加えて、他の障害（新脈管形成を含む）を処置する際に有用であり得る
。これらの障害としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：良性腫
瘍（例えば、血管腫、聴神経腫、神経線維腫、トラコーマ、および化膿性肉芽腫
）；アテローム性動脈硬化（ａｒｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｉｃ）プラーク；眼の脈
管形成疾患（例えば、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、黄斑変性、角膜移植片拒
絶、血管新生緑内障、水晶体後線維増殖、ルベオーシス、網膜芽細胞腫、ブドウ
膜炎（ｕｖｉｅｔｉｓ）および眼の翼状片（Ｐｔｅｒｙｇｉａ）（異常な血管増
殖））；慢性関節リウマチ；乾癬；遅延型創傷治癒；子宮内膜症；脈管形成；顆
粒化；過形成性瘢痕（ケロイド）；偽関節骨折；強皮症；トラコーマ；血管接着
；心筋の新脈管形成；冠状側副枝（ｃｏｒｏｎａｒｙ ｃｏｌｌａｔｅｒａｌｓ
）；大脳側副枝；動静脈奇形；虚血性四肢新脈管形成；オースラー−ウェーバー
（Ｏｓｌｅｒ−Ｗｅｂｂｅｒ）症候群；プラーク新生血管形成；毛細血管拡張症
；血友病性関節；血管線維腫；線維筋性形成異常；創傷顆粒化；クローン病；お
よびアテローム性動脈硬化症。

【０４９４】 例えば、本発明の１つの局面において、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプ
チド、アンタゴニストおよび／またはアゴニストを過形成性瘢痕またはケロイド
に投与する工程を包含する、過形成性瘢痕およびケロイドを処置するための方法
が提供される。

【０４９５】 本発明の１つの実施形態において、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタ
ゴニストおよび／またはアゴニストは、過形成性瘢痕またはケロイドに、これら
の病変の進行を妨げるために直接注射される。この治療は、過形成性瘢痕および
ケロイド（例えば、熱傷）の発生を生じることが知られている状態の予防処置に
おいて特に価値があり、そして好ましくは、増殖期が進行する時間（最初の傷害
の約１４日後）を有した後であるが、過形成性瘢痕またはケロイドの発生の前に
開始される。上述のように、本発明はまた、眼の新生血管形成疾患（例えば、角
膜新生血管形成、血管新生緑内障、増殖性糖尿病網膜症、水晶体後線維増殖およ
び黄斑変性を含む）を処置するための方法を提供する。

【０４９６】 さらに、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチド（アゴニストおよび／
またはアンタゴニストを含む）を用いて処置され得る新生血管形成に関連する眼
の障害としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：血管新生緑内障
、糖尿病網膜症、網膜芽細胞腫、水晶体後線維増殖症、ブドウ膜炎、未熟児網膜
症、黄斑変性、角膜移植新生血管形成、ならびに他の眼の炎症性疾患、眼の腫瘍
、および脈絡膜または虹彩の新生血管形成に関連する疾患。例えば、Ｗａｌｔｍ
ａｎら、Ａｍ．Ｊ．Ｏｐｈｔｈａｌ．８５：７０４〜７１０（１９７８）および
Ｇａｒｔｎｅｒら、Ｓｕｒｖ．Ｏｐｈｔｈａｌ．２２：２９１〜３１２（１９７
８）による総説を参照のこと。

【０４９７】 従って、本発明の１つの局面において、治療有効量の化合物（上記）を患者に
対して、血管の形成が阻害されるように角膜に投与する工程を包含する、角膜新
生血管形成（角膜移植片新生血管形成を含む）のような眼の新生血管形成疾患を
処置するための方法が提供される。簡潔には、角膜は、通常には血管を欠く組織
である。しかし、特定の病的状態において、毛細血管は、縁の角膜周囲脈管叢か
ら角膜に伸長し得る。角膜が血管化されるようになる場合、角膜はまた混濁され
るようになり、患者の視力の衰えを生じる。角膜が完全に不透明になる（ｏｐａ
ｃｉｔａｔｅ）場合に、視力喪失が完全になり得る。広範な種々の障害は、例え
ば、以下を含む角膜新生血管形成を生じ得る：角膜感染（例えば、トラコーマ、
単純ヘルペス角膜炎、リーシュマニア症およびオンコセルカ症）、免疫学的プロ
セス（例えば、移植片拒絶およびスティーヴンズ−ジョンソン症候群）、アルカ
リ熱傷、外傷、炎症（任意の原因による）、毒性および栄養欠乏状態、ならびに
コンタクトレンズを装着することの合併症として。

【０４９８】 特に好ましい実施形態において、本発明は、生理食塩水（眼に用いる調製物に
おいて一般に使用される任意の保存剤および抗菌剤と組合せて）中で局所投与の
ために調製され、そして点眼剤形態で投与され得る。溶液または懸濁液は、純粋
な形態で調製され、そして１日に数回投与され得る。あるいは、上記のように調
製される抗脈管形成組成物はまた、角膜に直接投与され得る。好ましい実施形態
において、抗脈管形成組成物は、角膜に結合する粘膜接着性ポリマーとともに調
製される。さらなる実施形態において、抗脈管形成因子または抗脈管形成組成物
は、従来のステロイド治療に対する補助剤として利用され得る。局所治療はまた
、脈管形成応答（例えば、化学的熱傷）を誘導する高い可能性を有することが公
知の角膜病巣において予防的に有用であり得る。これらの場合において、処置（
おそらくステロイドと組み合わされる）は、その後の合併症を予防するのを補助
するために直ちに開始され得る。

【０４９９】 他の実施形態において、上記の化合物は、角膜支質に直接、顕微鏡の案内の下
で眼科医によって注入され得る。好ましい注射部位は、個々の病巣の形態に伴っ
て変化し得るが、投与の目標は、脈管構造の前進している面に組成物を置くこと
（すなわち、血管と正常な角膜との間に分散される）である。ほとんどの場合に
おいて、これは、前進している血管から角膜を「防御」するための縁周囲（ｐｅ
ｒｉｌｉｍｂｉｃ）角膜注射を含む。この方法はまた、角膜新生血管形成を予防
的に防ぐために、角膜傷害の直後に利用され得る。この状況において、この物質
は、角膜病巣とその所望されない潜在的な血液供給の縁部との間に分散して縁周
囲角膜に注射され得る。このような方法はまた、類似の様式で、移植された角膜
の毛細血管侵入を予防するために利用され得る。持続放出形態において、注入は
、１年に２〜３回のみ必要とされ得る。ステロイドもまた、注入溶液に添加され
て、その注射自体から生じる炎症を低減し得る。

【０５００】 本発明の別の局面において、患者に、血管の形成を阻害するように、治療有効
量のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストおよび／またはアゴニス
トを眼に投与する工程を包含する、血管新生緑内障を処置するための方法が提供
される。１つの実施形態において、化合物は、血管新生緑内障の早期形態を処置
するために、眼に局所投与され得る。他の実施形態において、化合物は、前房角
（ａｎｔｅｒｉｏｒ ｃｈａｍｂｅｒ ａｎｇｌｅ）の領域に注入によって移植
され得る。他の実施形態において、化合物はまた、化合物が眼房水に連続的に放
出されるように、任意の位置に置かれ得る。本発明の別の局面において、患者に
、血管の形成が阻害されるように、治療有効量のポリヌクレオチド、ポリペプチ
ド、アンタゴニストおよび／またはアゴニストを眼に投与する工程を包含する、
増殖性糖尿病性網膜症を処置するための方法が提供される。

【０５０１】 本発明の特に好ましい実施形態において、増殖性糖尿病性網膜症は、網膜にお
けるポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストおよび／またはアゴニス
トの局所濃度を増加させるために、眼房水または硝子体への注入によって処置さ
れ得る。好ましくは、この処置は、光凝固を必要とする重篤な疾患の獲得の前に
開始されるべきである。

【０５０２】 本発明の別の局面において、血管の形成が阻害されるように、治療有効量のポ
リヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストおよび／またはアゴニストを患
者に、眼に投与する工程を包含する、水晶体後線維増殖症を処置するための方法
が提供される。化合物は、硝子体内注射を介して、および／または眼内移植を介
して局所投与され得る。

【０５０３】 さらに、このポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび／またはア
ゴニストで処置され得る障害としては、以下が挙げられるが、それらに限定され
ない：血管腫、関節炎、乾癬、血管線維腫、アテローム性動脈硬化プラーク、遅
延型創傷治癒、顆粒化、血友病性関節、過形成性瘢痕、偽関節骨折、オースラー
−ウェーバー（Ｏｓｌｅｒ−Ｗｅｂｅｒ）症候群、化膿性肉芽腫、強皮症、トラ
コーマ、および血管接着。

【０５０４】 さらに、このポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび／またはア
ゴニストで処置され得る障害および／または状態としては、以下が挙げられるが
、それらに限定されない：固形腫瘍、血液由来の（ｂｌｏｏｄ ｂｏｒｎ）腫瘍
（例えば、白血病）、腫瘍転移、カポージ肉腫、良性腫瘍（例えば、血管腫、聴
神経腫、神経線維腫、トラコーマ、および化膿性肉芽腫）、慢性関節リウマチ、
乾癬、眼の脈管形成疾患（例えば、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、黄斑変性、
角膜移植片拒絶、血管新生緑内障、水晶体後線維増殖症、ルベオーシス、網膜芽
細胞腫、およびブドウ膜炎（ｕｖｉｅｔｉｓ））、遅延型創傷治癒、子宮内膜症
、脈管形成、顆粒化、過形成性瘢痕（ケロイド）、偽関節骨折、強皮症、トラコ
ーマ、血管接着、心筋の新脈管形成、冠状側副枝（ｃｏｒｏｎａｒｙ ｃｏｌｌ
ａｔｅｒａｌｓ）、大脳側副枝、動静脈奇形、虚血性四肢新脈管形成、オースラ
ー−ウェーバー症候群、プラーク新生血管形成、毛細血管拡張症、血友病性関節
、血管線維腫、線維筋性形成異常、創傷顆粒化、クローン病、アテローム性動脈
硬化症、産児制限薬剤（月経を制御する、胎芽着床のために必要な血管新生を予
防することによる）、病原性の結果（例えば、ネコ引っかき病（Ｒｏｃｈｅｌｅ
ｍｉｎａｌｉａ ｑｕｉｎｔｏｓａ）、潰瘍（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐ
ｙｌｏｒｉ）、バルトネラ症および細菌性血管腫症状）のような新脈管形成を有
する疾患。

【０５０５】 出産制限方法の１つの局面において、胎芽着床をブロックするに十分な化合物
の量は、性交および受精が起こる前またはその後に投与され、従って産児制限の
有効な方法、おそらく「事後用（ｍｏｒｎｉｎｇ ａｆｔｅｒ）」方法を提供す
る。ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび／またはアゴニストは
また、月経を制御することにおいて使用され得るか、または子宮内膜症の処置に
おける腹膜洗浄液として、もしくは腹膜移植のためのいずれかで投与され得る。

【０５０６】 本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび／またはアゴニ
ストは、縫合（ｓｔｉｔｃｈ）肉芽腫を予防するために、外科縫合糸に取り込ま
れ得る。

【０５０７】 ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび／またはアゴニストは、
広範な種々の外科手順において利用され得る。例えば、本発明の１つの局面にお
いて、組成物（例えば、スプレーまたはフィルムの形態において）は、悪性組織
から正常な周囲の組織を分離するため、そして／または周囲の組織への疾患の広
がりを予防するために、腫瘍の除去の前に、領域をコートまたはスプレーするた
めに利用され得る。本発明の他の局面において、組成物（例えば、スプレーの形
態において）は、腫瘍をコートするため、または所望の場所において新脈管形成
を阻害するために、内視鏡手順を介して送達され得る。本発明のなお他の局面に
おいて、本発明の抗脈管形成組成物でコートされている外科用メッシュが、外科
用メッシュが利用され得る任意の手順において利用され得る。例えば、本発明の
１つの実施形態において、抗脈管形成組成物を有した外科用メッシュレーデン（
ｌａｄｅｎ）は、構造に対する支持を提供するため、そして一定の量の抗脈管形
成因子を放出するために、腹部癌切除手術の間（例えば、結腸切除の後）に利用
され得る。

【０５０８】 本発明のさらなる局面において、癌の局所的再発およびその部位での新しい血
管の形成が阻害されるように、切除後にポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴ
ニストおよび／またはアゴニストを腫瘍の切除縁に投与する工程を包含する、腫
瘍切除部位を処置するための方法が提供される。本発明の１つの実施形態におい
て、抗脈管形成化合物は、腫瘍切除部位に直接投与される（例えば、抗脈管形成
化合物を腫瘍の切除縁に綿球で塗るか、ブラッシング（ｂｒｕｓｈｉｎｇ）する
か、さもなければコーティングすることによって適用される）。あるいは、抗脈
管形成化合物は、投与前に公知の外科用ペーストに組み込まれ得る。本発明の特
に好ましい実施形態において、抗脈管形成化合物は、悪性疾患についての肝切除
後および神経外科手術後に適用される。

【０５０９】 本発明の１つの局面において、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニスト
および／またはアゴニストは、広範な種々の腫瘍（例えば、乳房腫瘍、結腸腫瘍
、脳腫瘍および肝腫瘍を含む）の切除縁に投与され得る。例えば、本発明の１つ
の実施形態において、抗脈管形成化合物は、切除後に、神経学的腫瘍の部位に、
その部位での新しい血管の形成が阻害されるように投与され得る。

【０５１０】 本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび／またはアゴニ
ストはまた、他の抗脈管形成因子とともに投与され得る。他の抗脈管形成因子の
代表的な例としては以下が挙げられる：抗侵襲性因子、レチノイン酸およびその
誘導体、パクリタキセル、スラミン、メタロプロテイナーゼ−１の組織インヒビ
ター、メタロプロテイナーゼ−２の組織インヒビター、プラスミノーゲンアクチ
ベーターインヒビター−１、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター−２
および種々の形態のより軽い「ｄ族」遷移金属。

【０５１１】 より軽い「ｄ族」遷移金属としては、例えば、バナジウム、モリブデン、タン
グステン、チタン、ニオブおよびタンタル種が挙げられる。そのような遷移金属
種は、遷移金属錯体を形成し得る。上記の遷移金属種の適切な錯体としては、オ
キソ遷移金属錯体が挙げられる。

【０５１２】 バナジウム錯体の代表的な例としては、バナデート錯体およびバナジル錯体の
ようなオキソバナジウム錯体が挙げられる。適切なバナデート錯体としては、例
えばメタバナジン酸アンモニウム、メタバナジン酸ナトリウムおよびオルトバナ
ジン酸ナトリウムのようなメタバナデート錯体およびオルトバナデート錯体が挙
げられる。適切なバナジル錯体としては、例えば、バナジルアセチルアセトネー
トおよび硫酸バナジル（硫酸バナジル一水和物および硫酸バナジル三水和物のよ
うな硫酸バナジル水和物を含む）が挙げられる。

【０５１３】 タングステン錯体およびモリブデン錯体の代表的な例としてはまた、オキソ錯
体が挙げられる。適切なオキソタングステン錯体としては、タングステート錯体
およびタングステンオキシド錯体が挙げられる。適切なタングステート錯体とし
ては、タングステン酸アンモニウム、タングステン酸カルシウム、タングステン
酸ナトリウム二水和物およびタングステン酸が挙げられる。適切なタングステン
オキシドとしては、タングステン（ＩＶ）オキシドおよびタングステン（ＶＩ）
オキシドが挙げられる。適切なオキソモリブデン錯体としては、モリブデート、
モリブデンオキシドおよびモリブデニル錯体が挙げられる。適切なモリブデート
錯体としては、モリブデン酸アンモニウムおよびその水和物、モリブデン酸ナト
リウムおよびその水和物、ならびにモリブデン酸カリウムおよびその水和物が挙
げられる。適切なモリブデンオキシドとしては、モリブデン（ＶＩ）オキシド、
モリブデン（ＶＩ）オキシドおよびモリブデン酸が挙げられる。適切なモリブデ
ニル錯体としては、例えばモリブデニルアセチルアセトネートが挙げられる。他
の適切なタングステン錯体およびモリブデン錯体としては、例えばグリセロール
、酒石酸および糖由来のヒドロキソ誘導体が挙げられる。

【０５１４】 広範な種類の他の抗脈管形成因子もまた、本発明の状況において利用され得る
。代表的例は、以下を含む：血小板因子４；硫酸プロタミン；硫酸化キチン誘導
体（クイーンクラブ（ｑｕｅｅｎ ｃｒａｂ）の殻から調製される）（Ｍｕｒａ
ｔａら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５１：２２〜２６、１９９１）；硫酸化多糖ペ
プチドグリカン複合体（ＳＰ−ＰＧ）（この化合物の機能は、ステロイド（例え
ば、エストロゲン）およびクエン酸タモキシフェンの存在によって、増強され得
る）；スタウロスポリン；基質代謝の調節因子（例えば、プロリンアナログ、シ
スヒドロキシプロリン、ｄ，Ｌ−３，４−デヒドロプロリン、チアプロリン、α
，α−ジピリジル，アミノプロピオニトリルフマレートを含む）；４−プロピル
−５−（４−ピリジニル）−２（３Ｈ）−オキサゾロン；メトトレキサート；ミ
トザントロン；ヘパリン；インターフェロン；２マクログロブリン−血清；Ｃｈ
ＩＭＰ−３（Ｐａｖｌｏｆｆら、Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２６７：１７３２１〜
１７３２６、１９９２）；キモスタチン（Ｔｏｍｋｉｎｓｏｎら、Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ Ｊ．２８６：４７５〜４８０、１９９２）；シクロデキストリンテトラデカ
サルフェート；エポネマイシン；カンプトテシン；フマギリン（Ｉｎｇｂｅｒら
、Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５５〜５５７、１９９０）；チオリンゴ酸金ナトリ
ウム（「ＧＳＴ」；ＭａｔｓｕｂａｒａおよびＺｉｆｆ、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖ
ｅｓｔ．７９：１４４０〜１４４６、１９８７）；アンチコラゲナーゼ−血清；
α２−抗プラスミン（Ｈｏｌｍｅｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２（４）
：１６５９〜１６６４、１９８７）；ビサントレン（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎ
ｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）；ロベンザリット二ナトリウム（Ｎ−（２）−カ
ルボキシフェニル−４−クロロアントロニル酸（ｃｈｌｏｒｏａｎｔｈｒｏｎｉ
ｌｉｃ ａｃｉｄ）二ナトリウム、すなわち「ＣＣＡ」；Ｔａｋｅｕｃｈｉら、
Ａｇｅｎｔｓ Ａｃｔｉｏｎｓ ３６：３１２〜３１６、１９９２）；サリドマ
イド；Ａｎｇｏｓｔａｔｉｃステロイド；ＡＧＭ−１４７０；カルボキシアミノ
イミダゾール（ｃａｒｂｏｘｙｎａｍｉｎｏｌｍｉｄａｚｏｌｅ）；およびメタ
ロプロテイナーゼインヒビター（例えば、ＢＢ９４）。

【０５１５】 （細胞レベルでの疾患） 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドならびにアンタゴニストまたは
アゴニストによって、処置または検出され得る、細胞生存の増大またはアポトー
シスの阻害に関連する疾患には、以下が挙げられる：癌（例えば、濾胞性リンパ
腫、ｐ５３変異を伴う癌腫、およびホルモン依存性腫瘍（以下を含むが、これら
に限定されない：結腸癌、心臓腫瘍、膵臓癌、黒色腫、網膜芽細胞腫、神経膠芽
細胞腫、肺癌、腸管癌、精巣癌、胃癌、神経芽細胞腫、粘液腫、筋腫、リンパ腫
、内皮腫、骨芽細胞腫、破骨細胞腫、骨肉腫、軟骨肉腫、腺腫、乳癌、前立腺癌
、カポージ肉腫および卵巣癌）；自己免疫障害（例えば、多発性硬化症、シェー
グレン症候群、橋本甲状腺炎、胆汁性肝硬変、ベーチェット病、クローン病、多
発性筋炎、全身性エリテマトーデスおよび免疫関連糸球体腎炎ならびに慢性関節
リウマチ）、ならびにウイルス感染（例えば、ヘルペスウイルス、ポックスウイ
ルスおよびアデノウイルス）、炎症、対宿主性移植片病、急性移植片拒絶、なら
びに慢性移植片拒絶）。好ましい実施形態において、本発明のポリヌクレオチド
、ポリペプチドおよび／またはアンタゴニストは、特に上記に列挙されたものに
おいて、癌の増殖、進行、および／または転移（ｍｅｔａｓｉｓ）を阻害するた
めに使用される。

【０５１６】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドあるいはアゴニストまたはアン
タゴニストによって処置または検出され得る、細胞生存の増大に関連するさらな
る疾患または状態には、悪性疾患の進行および／または転移ならびに以下のよう
な関連障害が挙げられるが、これらに限定されない：白血病（急性白血病（例え
ば、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病（骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白
血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病および赤白血病を含む）を含む）ならび
に慢性白血病（例えば、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病および慢性リンパ性白血
病））、真性赤血球増加症、リンパ腫（例えば、ホジキン病および非ホジキン病
）、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、Ｈ鎖病、なら
びに固形腫瘍（以下を含むが、これらに限定されない：肉腫および癌腫（例えば
、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、
内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リンパ管肉腫、リンパ管内
皮腫、骨膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌腫、
膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮
脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原生癌、腎細胞癌、
肝細胞癌腫、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、頸部癌
、精巣の腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、神経膠星状細胞
腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、脳室上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神
経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、黒色腫、神経芽細胞
腫、および網膜芽細胞腫））。

【０５１７】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはア
ンタゴニストによって処置または検出され得る、アポトーシスの増大に関連する
疾患には、以下が挙げられる：ＡＩＤＳ；神経変性障害（例えば、アルツハイマ
ー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、色素性網膜炎、小脳変性および脳
腫瘍または前記に関連した疾患）；自己免疫障害（例えば、多発性硬化症、シェ
ーグレン症候群、橋本甲状腺炎、胆汁性肝硬変、ベーチェット病、クローン病、
多発性筋炎、全身性エリテマトーデスおよび免疫関連糸球体腎炎ならびに慢性関
節リウマチ）、脊髄形成異常症候群（例えば、再生不良性貧血）、対宿主性移植
片病、虚血性損傷（心筋梗塞、発作および再灌流損傷によって引き起こされるよ
うなもの）、肝臓損傷（例えば、肝炎関連肝臓損傷、虚血／再灌流障害、胆汁う
っ滞（ｃｈｏｌｅｓｔｏｓｉｓ）（胆管損傷）および肝臓癌）；毒物誘導性肝臓
疾患（アルコールによって引き起こされるようなもの）、敗血症性ショック、悪
液質ならびに食欲不振。

【０５１８】 （創傷治癒および上皮細胞増殖） 本発明のなおさらなる局面に従って、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペ
プチド、ならびにアンタゴニストまたはアゴニストを、治療目的のため、例えば
、創傷治癒の目的のために上皮細胞増殖および基底ケラチノサイトを刺激するた
め、ならびに毛包生成および皮膚創傷の治癒を刺激するために、利用するプロセ
スが提供される。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴ
ニストまたはアンタゴニストは、以下を含む創傷治癒を刺激する際に臨床的に有
用であり得る：外科的創傷、切除の創傷、深い創傷（真皮および表皮の損傷を含
む）、眼組織の創傷、歯組織の創傷、口腔創傷、糖尿病性潰瘍、皮膚の潰瘍、肘
の潰瘍、動脈の潰瘍、静脈うっ滞潰瘍、熱への曝露または化学物質から生ずる熱
傷、および他の異常な創傷治癒状態（例えば、尿毒症、栄養失調、ビタミン欠乏
、ならびにステロイド、放射線療法および抗腫瘍性薬物および代謝拮抗物質を用
いる全身性処置に関連する合併症。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチ
ド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストは、皮膚損失後の皮膚の回復を促
進するために使用され得る。

【０５１９】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはア
ンタゴニストは、創傷床（ｗｏｕｎｄ ｂｅｄ）への皮膚移植片の接着を増大す
るため、および創傷床からの再上皮形成を刺激するために使用され得る。以下は
、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、アゴニストまたはアンタゴニ
ストが創傷床への接着を増大するために使用され得る、移植片の型である：自家
移植片、人工皮膚、同種移植片（ａｌｌｏｇｒａｆｔ）、自己植皮片、自己表皮
移植片（ａｕｔｏｅｐｄｅｒｍｉｃ ｇｒａｆｔ）、無血管性（ａｖａｃｕｌａ
ｒ）移植片、ブレア−ブラウン移植片、骨移植片、胚胎組織移植片、真皮移植片
、遅延移植片、皮膚移植片、表皮移植片、筋膜移植片、全層皮膚移植片、異種移
植片（ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ ｇｒａｆｔ）、異種移植片（ｘｅｎｏｇｒａ
ｆｔ）、同種移植片（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｇｒａｆｔ）、増殖性移植片、層
板状移植片、網状移植片、粘膜移植片、オリエ−ティールシュ移植片、大網移植
片、パッチの移植片（ｐａｔｃｈ ｇｒａｆｔ）、茎状移植片、全層移植片（ｐ
ｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｇｒａｆｔ）、分層植皮片（ｓｐｌｉｔ ｓｋｉｎ ｇ
ｒａｆｔ）、分層植皮片（ｔｈｉｃｋ ｓｐｌｉｔ ｇｒａｆｔ）。本発明のポ
リヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニスト
は、皮膚の強度を助長するため、および加齢した皮膚の外見を改善するために使
用され得る。

【０５２０】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはア
ンタゴニストはまた、肝細胞増殖、および肺、乳房、膵臓、胃、小腸（ｓｍａｌ
ｌ ｉｎｔｅｓｔｉｎｇ）、および大腸における上皮細胞増殖における変化を生
じると考えられる。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにア
ゴニストもしくはアンタゴニストは、上皮細胞（例えば、皮脂細胞（ｓｅｂｏｃ
ｙｔｅ）、毛包、肝細胞、ＩＩ型肺胞上皮細胞（ｔｙｐｅ ＩＩ ｐｎｅｕｍｏ
ｃｙｔｅ）、ムチン産生杯細胞、および他の上皮細胞、ならびに皮膚、肺、肝臓
、および胃腸管内に含まれるそれらの前駆体）の増殖を促進し得る。本発明のポ
リヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニスト
は、内皮細胞、ケラチノサイト、および基底ケラチノサイトの増殖を促進し得る
。

【０５２１】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはア
ンタゴニストはまた、照射、化学療法処置またはウイルス感染から生じる腸の毒
性の副作用を低減するために使用され得る。本発明のポリヌクレオチドまたはポ
リペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストは、小腸粘膜に対して細
胞保護的な（ｃｙｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ）効果を有し得る。本発明のポリヌ
クレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストはま
た、化学療法およびウイルス感染から生じる粘膜炎（ｍｕｃｏｓｉｔｉｓ）（口
潰瘍）の治癒を刺激し得る。

【０５２２】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはア
ンタゴニストは、熱傷を含む、完全な厚さおよび部分的な厚さの皮膚欠損におけ
る皮膚の完全な再生（すなわち、毛包、汗腺、および皮脂腺の再増殖）、乾癬の
ような他の皮膚欠損の処置においてさらに使用され得る。本発明のポリヌクレオ
チドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストは、表皮水
疱症（これらの損傷の再上皮形成を促進することによる頻繁な開放性かつ疼痛性
の水疱を生じる、下層の真皮への表皮の接着の欠損）を処置するために使用され
得る。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまた
はアンタゴニストはまた、胃潰瘍および十二指腸（ｄｏｕｄｅｎａｌ）潰瘍を処
置し、そして粘膜の内層の瘢痕形成ならびに腺の粘膜および十二指腸の粘膜の内
層の再生による治癒を、より迅速に補助するために使用され得る。炎症性腸疾患
、例えば、クローン病および潰瘍性大腸炎は、それぞれ、小腸または大腸の粘膜
表面の破壊を生じる疾患である。従って、本発明のポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストは、粘膜表面の再表面形成
（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）を促進して、より迅速な炎症性腸疾患の治癒を補助
し、そして炎症性腸疾患の進行を予防するために、使用され得る。本発明のポリ
ヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストを
用いる処置は、胃腸管全体の粘液の産生に対して有意な効果を有すると予期され
、そして摂取された有害な物質からかまたは外科手術後に、腸粘膜を有害な物質
から保護するために使用され得る。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチ
ド、ならびにアゴニストまたアンタゴニストは、その発現不足に関連する疾患を
処置するために使用され得る。

【０５２３】 さらに、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニスト
またはアンタゴニストは、種々の病的状態に起因する肺への損傷を予防および治
癒するために使用され得る。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、な
らびにアゴニストまたはアンタゴニストは、急性または慢性の肺損傷を予防また
は処置するために、肺胞および細気管支（ｂｒｏｃｈｉｏｌａｒ）上皮の増殖お
よび分化を刺激し得、そしてその修復を促進し得る。例えば、肺胞（ａｖｅｏｌ
ｉ）の進行性の損失を生じる気腫、および細気管支上皮および肺胞の壊死を生じ
る吸入傷害（ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ）（すなわち、煙の吸入およ
び熱傷から生じる）は、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、アゴニ
ストまたはアンタゴニストを使用して、効果的に処置され得る。また、本発明の
ポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニス
トは、ＩＩ型肺胞上皮細胞の増殖および分化を刺激するために使用され得、これ
は、未熟な乳児における肺硝子膜症（例えば、乳児呼吸窮迫症候群および気管支
肺異形成症）のような疾患を処置または予防するのを助け得る。

【０５２４】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはア
ンタゴニストは、肝細胞の増殖および分化を刺激し得、従って、肝臓の疾患およ
び病状（例えば、肝硬変により生じる劇症肝不全、ウイルス性肝炎および毒性物
質（すなわち、アセトアミノフェン、四塩化炭素（ｃａｒｂｏｎ ｔｅｔｒａｈ
ｏｌｏｒｉｄｅ）、および当該分野で公知の他の肝臓毒素）により生じる肝臓損
傷）を緩和または処置するために用いられ得る。

【０５２５】 さらに、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニスト
またはアンタゴニストは、真性糖尿病の発症を処置または予防するために使用さ
れ得る。新たにＩ型糖尿病およびＩＩ型糖尿病と診断された患者において、いく
らかの島細胞機能が残っている場合、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプ
チド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストは、その疾患の永続的な発現を
、緩和、遅延または予防するように、その島機能を維持するために使用され得る
。また、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストま
たはアンタゴニストは、島細胞機能を改善または促進するための島細胞移植にお
ける補助として使用され得る。

【０５２６】 （神経学的疾患） 本発明のなおさらなる局面に従って、治療目的のため、例えば、神経学的細胞
の増殖および／または分化を刺激するために、本発明のポリヌクレオチドまたは
ポリペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストを利用するためのプロ
セスが提供される。従って、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニ
ストおよび／またはアンタゴニストは、神経学的疾患を処置および／または検出
するために使用され得る。さらに、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチ
ド、あるいはアゴニストまたはアンタゴニストは、特定の神経系疾患または障害
のマーカーまたはディテクター（ｄｅｔｅｃｔｏｒ）として使用され得る。

【０５２７】 本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび／またはアンタ
ゴニストを用いて処置または検出され得る神経学的疾患の例としては、以下が挙
げられる：脳疾患（例えば、母系フェニルケトン尿症のようなフェニルケトン尿
症を含む代謝性脳疾患）、ピルビン酸カルボキシラーゼ欠乏症、ピルビン酸デヒ
ドロゲナーゼ複合体欠乏症、ヴェルニッケ脳障害、脳水腫、テント下（ｉｎｆｒ
ａｔｅｎｔｏｒｉａｌ）新生物を含む小脳性新生物のような脳新生物、脈絡叢新
生物のような脳室新生物、視床下部性新生物、テント上新生物、キャナヴァン病
、毛細血管拡張性運動失調のような脊髄小脳性退化を含む小脳性運動失調のよう
な小脳疾患、小脳性共同運動障害、フリードライヒ失調症、マチャド−ジョセフ
病、オリーブ橋小脳萎縮、テント下新生物のような小脳性新生物、軸周囲性脳炎
、球様細胞白質萎縮症、異染性白質萎縮症および亜急性硬化性汎脳炎のようなび
まん性脳硬化、脳血管障害（例えば、頸動脈血栓症、頸動脈狭窄およびモヤモヤ
病を含む頸動脈疾患）、脳のアミロイド血管症、大脳動脈瘤、大脳無酸素症、大
脳動脈硬化症、大脳動静脈奇形、大脳動脈疾患、頸動脈血栓症、洞血栓症および
ヴァレンベルク症候群のような脳塞栓症および血栓症、硬膜上血腫、硬膜下血腫
およびクモ膜下出血のような脳出血、脳梗塞形成、一過性脳虚血、鎖骨下動脈盗
血症候群および椎骨脳底不全（ｖｅｒｔｅｂｒｏｂａｓｉｌａｒ ｉｎｓｕｆｆ
ｉｃｉｅｎｃｙ）のような脳虚血、多発脳梗塞性痴呆のような血管性痴呆、室周
白斑症（ｐｅｒｉｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｌｅｕｋｏｍａｌａｃｉａ）、群発
性頭痛のような血管性頭痛、偏頭痛、エイズ痴呆複合症のような痴呆症、アルツ
ハイマー病およびクロイツフェルト−ヤーコプ病のような初老期痴呆、アルツハ
イマー病および進行性核上性麻痺のような老年痴呆、多発脳梗塞性痴呆のような
血管性痴呆、軸周囲性脳炎を含む脳炎、流行性脳炎、日本脳炎、セントルイス脳
炎、ダニ媒介脳炎および西ナイル熱のようなウイルス性脳炎、急性播種性脳脊髄
炎、ブドウ膜髄膜脳炎症候群、脳炎後パーキンソン病および亜球性硬化性汎脳炎
のような髄膜脳炎、室周白斑症のような脳軟化症、点頭痙攣を含む全身てんかん
のようなてんかん、アプサンスてんかん（ａｂｓｅｎｃｅ ｅｐｉｌｅｐｓｙ）
、ＭＥＲＲＦ症候群を含むミオクローヌスてんかん、強直・間代てんかん、複雑
部分てんかん、前頭葉てんかんおよび側頭葉てんかんのような部分てんかん、外
傷後てんかん、持続性部分てんかんのようなてんかん重積持続状態、ハレルフォ
ルデン−シュパッツ症候群、ダンディ−ウォーカー症候群および正常圧水頭症の
ような水頭症、視床下部性新生物のような視床下部性疾患、大脳マラリア、脱力
発作を含むナルコレプシー、延髄ポリオ（ｂｕｌｂａｒ ｐｏｉｏｍｙｅｌｉｔ
ｉｓ）、大脳偽腫瘍、レット症候群、ライ症候群、視床疾患、大脳トキソプラス
マ症、頭蓋内結核腫およびツェルヴェーガー症候群、エイズ痴呆複合症のような
中枢神経系感染、脳膿瘍、硬膜下蓄膿症、ウマの脳脊髄炎のような脳脊髄炎、ベ
ネズエラウマ脳脊髄炎、壊死性出血性脳脊髄炎、ビスナ、大脳マラリア、クモ膜
炎のような髄膜炎、リンパ球性脈絡髄膜炎を含むウイルス性髄膜炎のような無菌
性髄膜炎、ヘモフィルス髄膜炎を含む細菌性髄膜炎、リステリア髄膜炎、ウォー
ターハウス−フリーデリックセン症候群のような髄膜炎菌性脳脊髄膜炎、肺炎球
菌髄膜炎および髄膜結核症、クリプトコックス髄膜炎のような真菌性髄膜炎、硬
膜下滲出、ブドウ膜髄膜脳炎症候群のような髄膜脳炎、横行脊髄炎のような脊髄
炎、脊髄ろうのような神経梅毒、延髄ポリオおよびポリオ後症候群を含むポリオ
、プリオン病（例えば、クロイツフェルト−ヤーコプ病、ウシの海綿状脳症、ゲ
ルストマン−シュトロイスラー症候群、クールー、スクラピー）、大脳トキソプ
ラスマ症、テント下新生物のような小脳性新生物を含む脳新生物のような中枢神
経系新生物、脈絡叢新生物、視床下部性新生物およびテント上新生物のような脳
室新生物、髄膜新生物、硬膜外新生物を含む脊髄新生物、キャナヴァン病のよう
な脱髄疾患、副腎脳白質ジストロフィーを含むびまん性大脳硬化症（ｄｉｆｆｕ
ｓｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｓｃｅｌｏｒｉｓ）、軸周囲性脳炎、球様細胞白質萎
縮症、異染性白質萎縮症のようなびまん性大脳硬化症、アレルギー性脳脊髄炎、
壊死性出血性脳脊髄炎、進行性多病巣性白質脳症、多発性硬化症、橋中央ミエリ
ン溶解、横行脊髄炎、視神経脊髄炎、スクラピー、脊柱前弯症、慢性疲労症候群
、ビスナ、高圧神経質症候群（Ｈｉｇｈ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ Ｎｅｒｖｏｕｓ
Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、髄膜症、先天性筋無緊張症のような脊髄疾患、筋萎縮性側
索硬化症、ヴェルドニッヒ−ホフマン病のような棘筋萎縮、脊髄圧搾、硬膜外新
生物のような脊髄新生物、脊髄空洞症、脊髄ろう、スティッフマン症候群、アン
ゲルマン症候群のような精神遅滞、ネコ鳴き症候群、ド・ランゲ症候群、ダウン
症候群、ガングリオシドーシスＧ（Ｍ１）のようなガングリオシドーシス、ザン
トホフ病、テイ−サックス病、ハートナップ病、ホモシスチン尿症、ローレンス
−ムーン−ビードル症候群、レッシュ−ナイハン症候群、カエデシロップ病、フ
コース蓄積症のようなムコリピドーシス、ニューロンセロイド脂褐素沈着症、眼
脳腎症候群、母系フェニルケトン尿症のようなフェニルケトン尿症、プラーダー
−ヴィリ症候群、レット症候群、ルービンスタイン−テービ症候群、結節硬化症
、ＷＡＧＲ症候群、全前脳症のような神経系異常、水無脳症（ｈｙｄｒａｎｇｅ
ｎｃｅｐｈａｌｙ）を含む無脳症のような神経管不全、アルノルト−キアーリ奇
形、脳ヘルニア、髄膜瘤、髄膜脊髄瘤、嚢胞性二分脊椎および潜在性二分脊椎の
ような脊髄癒合不全、シャルコー−マリー病を含む遺伝性の運動および感覚ニュ
ーローパシー、遺伝性視覚萎縮症、レフサム病、遺伝性痙性対麻痺、ヴェルドニ
ッヒ−ホフマン病、先天性痛覚脱失症および家族性自律神経障害のような遺伝性
感覚および自律神経性ニューロパシー、神経学的症状発現（例えば、ゲルストマ
ン症候群を含む失認）、逆向性健忘症のような健忘症、失行症、神経因性膀胱、
脱力発作、難聴、部分聴覚欠失および大声（ｌｕｄｎｅｓｓ）レクルートメント
および耳鳴を含む聴覚障害のような情報伝達障害、失書症、名称失語症、ブロカ
失語症およびヴェルニッケ失語症を含む失語症のような言語障害、後天性失読症
のような失読症、言語発達障害、名称失語症、ブロカ失語症およびヴェルニッケ
失語症を含む失語症のような発語障害、発音障害、構語障害、反響言語、無言症
およびどもりを含む発語障害のような情報伝達障害、失声症および嗄声のような
発声障害、除脳硬直状態、せん妄、線維束性攣縮、幻覚、髄膜症、アンゲルマン
症候群、運動失調、アテトーシス、舞踏病、失調症、運動低下症、筋肉緊張低下
、ミオクローヌス、チック、斜頸および振せんのような運動障害、スティッフマ
ン症候群のような筋肉硬直のような筋肉緊張亢進、筋肉痙性、耳帯状疱疹を含む
顔面神経麻痺のような麻痺、胃不全麻痺、片麻痺、複視のような眼筋麻痺、デュ
エーン症候群、ホルナー症候群、キーンズ症候群のような慢性進行性外眼筋麻痺
症、球麻痺、熱帯性痙攣対麻痺、ブラウン−セカール症候群、四肢麻痺、呼吸麻
痺および声帯麻痺のような対麻痺、不全麻痺、幻肢、無味覚症および味覚不全の
ような味覚障害、弱視、失明、色覚異常、複視、半盲、視野暗点および準正常視
覚（ｓｕｂｎｏｒｍａｌ ｖｉｓｉｏｎ）のような視覚障害、クライネ−レヴィ
ン症候群、不眠症および夢遊症を含む過眠症のような睡眠障害、開口障害のよう
な痙縮、昏睡、持続性植物状態および失神およびめまいのような意識消失、先天
性筋無緊張症のような神経筋疾患、筋萎縮性側索硬化症、ランバート−イートン
筋無力症症候群、運動ニューロン疾患、棘筋萎縮、シャルコー−マリー疾患およ
びヴェルドニッヒ−ホフマン病のような筋萎縮、ポリオ後症候群、筋ジストロフ
ィー、重症筋無力症、萎縮性筋緊張症、先天性筋緊張症（ｍｙｏｔｏｎｉａ ｃ
ｏｎｆｅｎｉｔａ）、ネマリンミオパシー、家族性周期性四肢麻痺、多発性パラ
ミロクローヌス（Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ Ｐａｒａｍｙｌｏｃｌｏｎｕｓ）、熱帯
性痙攣対麻痺およびスティッフマン症候群、先端肢端疼痛症のような末梢神経系
疾患、アミロイドニューロパシー、アーディー症候群、バレー・ニュー症候群、
家族性自律神経障害、ホルナー症候群、反射性交感神経性ジストロフィーおよび
シャイ−ドレーガー症候群のような自律神経系疾患、神経線維腫症２を含む聴神
経腫のような内耳神経疾患のような脳神経疾患、顔面神経痛のような顔面神経疾
患、メルカーソン−ローゼンタール症候群、弱視を含む眼球運動性障害、眼振、
動眼神経麻痺、デュエーン症候群のような眼筋麻痺、ホルナー症候群、キーンズ
症候群を含む慢性進行性外眼筋麻痺症、内斜視および外斜視のような斜視、動眼
神経麻痺、遺伝性眼萎縮症を含む眼萎縮症のような眼神経疾患、視神経円板結晶
腔、視神経脊髄炎のような視神経炎、乳頭水腫、三叉神経痛、声帯麻痺、視神経
脊髄炎および脊柱前弯症のような脱髄疾患、糖尿病性足のような糖尿病性ニュー
ロパシー、手根管症候群のような神経圧搾症候群、足根管症候群、頸肋症候群の
ような胸郭出口症候群、尺骨神経圧搾症候群、カウザルギー、頸腕神経痛、顔面
神経痛および三叉神経痛のような神経痛、実験的アレルギー性神経炎、視神経炎
、多発性神経炎、多発性神経根神経炎および神経根炎（例えば、多発性神経根炎
、遺伝性運動および感覚ニューロパシー（例えば、シャルコー−マリー病、遺伝
性眼萎縮症、レフサム病、遺伝性痙性対麻痺およびヴェルドニッヒ‐ホフマン病
、遺伝性感覚および自律神経ニューロパシー（先天性痛覚脱失および家族性自律
神経障害を含む）、ＰＯＥＭＳ症候群、坐骨神経痛、味覚性発汗症およびテタニ
ー）のような神経炎）。

【０５２８】 （感染性疾患） 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはア
ンタゴニストは、感染因子を処置または検出するために用いられ得る。例えば、
免疫応答を増加させることによって、特にＢ細胞および／またはＴ細胞の増殖お
よび分化を増加させることによって、感染性疾患が処置され得る。免疫応答は、
既存の免疫応答を増加させるか、または新たな免疫応答を開始させるかのいずれ
かにより上昇され得る。あるいは、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチ
ド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストはまた、必ずしも免疫応答を誘発
することなく、感染因子を直接阻害し得る。

【０５２９】 ウイルスは、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびに／ある
いはアゴニストまたはアンタゴニストにより処置または検出され得る疾患または
症状を引き起こし得る感染因子の一例である。ウイルスの例としては、以下のＤ
ＮＡおよびＲＮＡのウイルスおよびウイルス科が挙げられるがこれらに限定され
ない：アルボウイルス、アデノウイルス科、アレナウイルス科、アルテリウイル
ス、ビルナウイルス科、ブンヤウイルス科、カルシウイルス科、サルコウイルス
科（Ｃｉｒｃｏｖｉｒｉｄａｅ）、コロナウイルス科、デング熱、ＥＢＶ、ＨＩ
Ｖ、フラビウイルス科、ヘパドナウイルス科（肝炎）、ヘルペスウイルス科（例
えば、サイトメガロウイルス、単純ヘルペス、帯状疱疹）、モノネガウイルス（
Ｍｏｎｏｎｅｇａｖｉｒｕｓ）（例えば、パラミクソウイルス科、麻疹ウイルス
、ラブドウイルス科）、オルソミクソウイルス科（例えば、インフルエンザＡ、
インフルエンザＢ、およびパラインフルエンザ）、パピローマウイルス、パポバ
ウイルス科、パルボウイルス科、ピコルナウイルス科、ポックスウイルス科（例
えば、痘瘡またはワクシニア）、レオウイルス科（例えば、ロタウイルス）、レ
トロウイルス科（ＨＴＬＶ−Ｉ、ＨＴＬＶ−ＩＩ、レンチウイルス）、およびト
ガウイルス科（例えば、ルビウイルス属）。これらの科内に入るウイルスは、以
下を含むがこれらに限定されない種々の疾患または症状を引き起こし得る：関節
炎、細気管支炎（ｂｒｏｎｃｈｉｏｌｌｉｔｉｓ）、ＲＳウイルス、脳炎、眼感
染症（例えば、結膜炎、角膜炎）、慢性疲労症候群、肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、
Ｅ型、慢性活動性、デルタ）、日本脳炎、フニン、チングニア、リフトバレー熱
、黄熱病、髄膜炎、日和見感染症（例えば、ＡＩＤＳ）、肺炎、バーキットリン
パ腫、水痘、出血熱、麻疹、流行性耳下腺炎、パラインフルエンザ、狂犬病、感
冒、ポリオ、白血病、風疹、性感染症、皮膚病（例えば、カポージ、いぼ）、お
よびウイルス血症。本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはア
ゴニストもしくはアンタゴニストを用いて、任意のこれらの症状または疾患が処
置または検出され得る。特定の実施形態において、本発明のポリヌクレオチド、
ポリペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストは、以下の処置に使用
される：髄膜炎、デング熱、ＥＢＶ、および／または肝炎（例えば、Ｂ型肝炎）
。さらなる特定の実施形態において、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド
、またはアゴニストもしくはアンタゴニストは、１以上の他の市販の肝炎ワクチ
ンに非応答性の患者を処置するために使用される。さらに特定の実施形態におい
て、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、またはアゴニストもしくはアン
タゴニストは、ＡＩＤＳを処置するために使用される。

【０５３０】 同様に、疾患または症状を引き起こし得、かつ本発明のポリヌクレオチドまた
はポリペプチド、ならびに／またはアゴニストまたはアンタゴニストによって処
置または検出され得る細菌性因子あるいは真菌性因子は、以下のグラム陰性およ
びグラム陽性の細菌および細菌科ならびに真菌を含むがこれらに限定されない：
Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ（例えば、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ、
Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｎｏｒｃａｒｄｉａ）、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕ
ｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｏｓｉｓ、Ｂａｃｉｌｌａｃｅ
ａｅ（例えば、Ａｎｔｈｒａｘ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、Ｂａｃｔｅｒｏｉ
ｄａｃｅａｅ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｏｓｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｂｏｒｒ
ｅｌｉａ（例えば、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、Ｂｒｕｃｅ
ｌｌｏｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄｉａｓｉｓ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｃｏｃ
ｃｉｄｉｏｉｄｏｍｙｃｏｓｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｏｓｉｓ、Ｄｅｒｍａ
ｔｏｃｙｃｏｓｅｓ、Ｅ．ｃｏｌｉ（例えば、Ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃ
Ｅ．ｃｏｌｉおよびＥｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ Ｅ．ｃｏｌｉ）、
Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｓａｌｍｏｎ
ｅｌｌａ（例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ、およびＳａｌｍｏｎｅ
ｌｌａ ｐａｒａｔｙｐｈｉ）、Ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、Ｅｒ
ｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌｏ
ｓｉｓ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒｏｓｉｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍ
ａｔａｌｅｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃ
ｈｏｌｅｒａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｃｅａｅ（例えば、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃ
ｔｅｒ、Ｇｏｎｏｒｒｈｅａ、Ｍｅｎｉｇｏｃｏｃｃａｌ）、Ｍｅｉｓｓｅｒｉ
ａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｃｅａの感染症（例え
ば、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｈｅａｍｏｐｈｉｌｕｓ（例えば、Ｈｅａ
ｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｂ型）、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）、
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｃｅａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ
ｃｅａｅ、Ｓｙｐｈｉｌｉｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｐｐ．、Ｓｔａｐｈｙｌｏ
ｃｏｃｃａｌ、Ｍｅｎｉｎｇｉｏｃｏｃｃａｌ、Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃａｌおよ
びＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅ
ｕｍｏｎｉａｅおよびＢ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）。これらの細菌または
真菌の科は、以下を含むがこれらに限定されない疾患または症状を引き起こし得
る：菌血症、心内膜炎、眼感染症（結膜炎、結核、ブドウ膜炎）、歯肉炎、日和
見感染症（例えば、ＡＩＤＳに関連した感染症）、爪周囲炎、プロテーゼ関連感
染症（ｐｒｏｓｔｈｅｓｉｓ−ｒｅｌａｔｅｄ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）、ライタ
ー病、気道感染症（例えば、百日咳または蓄膿症）、敗血症、ライム病、ネコ引
っ掻き病、赤痢、パラチフス熱、食中毒、腸チフス、肺炎、淋病、髄膜炎（例え
ば、髄膜炎Ａ型およびＢ型）、クラミジア、梅毒、ジフテリア、らい病、パラ結
核、結核、狼瘡、ボツリヌス中毒、壊疽、破傷風、膿痂疹、リウマチ熱、猩紅熱
、性感染病、皮膚病（例えば、蜂巣炎、皮膚真菌症（ｄｅｒｍａｔｏｃｙｃｏｓ
ｅｓ））、毒血症、尿路感染症、創傷感染症。本発明のポリヌクレオチドもしく
はポリペプチド、アゴニストもしくはアンタゴニストを用いて、任意のこれらの
症状もしくは疾患を処置または検出し得る。特定の実施形態において、本発明の
ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストまたはアンタゴニストは、以下を
処置するために使用される：破傷風、ジフテリア、ボツリスム、および／または
Ｂ型髄膜炎。

【０５３１】 さらに、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、および／またはア
ゴニストもしくはアンタゴニストにより処置または検出され得る、寄生生物性因
子が引き起こす疾患または症状としては以下の科またはクラスが挙げられるがこ
れらに限定されない：アメーバ症、バベシア症、コクシジウム症、クリプトスポ
リジウム症、二核アメーバ症（Ｄｉｅｎｔａｍｏｅｂｉａｓｉｓ）、交疫、外部
寄生生物性（Ｅｃｔｏｐａｒａｓｉｔｉｃ）、ジアルジア鞭毛虫症、蠕虫症、リ
ーシュマニア症、タイレリア症、トキソプラスマ症、トリパノソーマ症、および
トリコモナス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ）症、ならびに胞子虫症（Ｓｐｏｒｏｚ
ｏａｎ）（例えば、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｒａｘ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ
ｆａｌｃｉｐａｒｉｕｍ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｍａｌａｒｉａｅおよびＰ
ｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｏｖａｌｅ）。これらの寄生生物は、以下を含むがこれら
に限定されない種々の疾患または症状を引き起こし得る：疥癬、ツツガムシ病、
眼感染症、腸疾患（例えば、赤痢、ジアルジア鞭毛虫症）、肝臓疾患、肺疾患、
日和見感染症（例えば、ＡＩＤＳ関連）、マラリア、妊娠合併症、およびトキソ
プラスマ症。本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニス
トもしくはアンタゴニストを用いて、任意のこれらの症状または疾患を処置また
は検出し得る。

【０５３２】 本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしく
はアンタゴニストは、患者に有効量のポリペプチドを投与するか、または患者か
ら細胞を取り出して、本発明のポリヌクレオチドをこの細胞に供給し、そして操
作した細胞を患者に戻す（エキソビボ治療）かのいずれかによるものであり得る
。さらに、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドはワクチン中の抗原と
して用いられて、感染性疾患に対する免疫応答を惹起し得る。

【０５３３】 （再生） 本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしく
はアンタゴニストを用いて、細胞を分化させ、増殖させ、そして誘引して、組織
の再生を導き得る（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７６：５９−８７（１９９７）を参照の
こと）。組織の再生を用いて、先天性欠損、外傷（創傷、熱傷、切開、または潰
瘍）、加齢、疾患（例えば、骨粗鬆症、変形性関節炎（ｏｓｔｅｏｃａｒｔｈｒ
ｉｔｉｓ）、歯周病、肝不全）、美容形成手術を含む手術、線維症、再灌流傷害
、もしくは全身性サイトカイン損傷により損傷を受けた組織を修復、置換、また
は保護し得る。

【０５３４】 本発明を用いて再生し得る組織としては、以下が挙げられる：器官（例えば、
膵臓、肝臓、腸、腎臓、皮膚、内皮）、筋肉（平滑筋、骨格筋、または心筋）、
血管系（血管およびリンパ管を含む）、神経、造血、および骨格（骨、軟骨、腱
、および靭帯）の組織。好ましくは、再生は、瘢痕なく、または瘢痕が低減され
て生じる。再生はまた、新脈管形成を含み得る。

【０５３５】 さらに、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニス
トもしくはアンタゴニストは、治癒するのが困難な組織の再生を増加させ得る。
例えば、腱／靭帯の再生を増大させることによって、損傷後の回復時間が早まる
。本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしく
はアンタゴニストはまた、損傷を回避する試みにおいて予防的に使用され得る。
処置され得る特定の疾患は、腱炎、手根管症候群、および他の腱欠損または靭帯
欠損を含む。非治癒創傷の組織再生のさらなる例としては、褥瘡性潰瘍、脈管不
全、外科的創傷、および外傷性創傷に関連する潰瘍が挙げられる。

【０５３６】 同様に、神経および脳組織はまた、神経細胞を増殖および分化させるために本
発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしくはア
ンタゴニストを使用することによって再生され得る。本方法を用いて処置され得
る疾患としては、中枢神経系疾患および末梢神経系疾患、神経障害、または機械
的および外傷性障害（例えば、脊髄障害、頭部外傷、脳血管疾患、および発作（
ｓｔｏｋｅ））が挙げられる。詳細には、末梢神経傷害と関連する疾患、末梢神
経障害（例えば、化学療法または他の医学的療法から生じる）、局在神経障害、
および中枢神経系疾患（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチン
トン病、筋萎縮性側索硬化症、およびシャイ−ドレーガー症候群）はすべて、本
発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしくはア
ンタゴニストを用いて処置され得る。

【０５３７】 （走化性） 本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしく
はアンタゴニストは、走化性活性を有し得る。走化性分子は、細胞（例えば、単
球、線維芽細胞、好中球、Ｔ細胞、肥満細胞、好酸球、上皮細胞および／または
内皮細胞）を、身体内の特定の部位（例えば、炎症、感染、または過剰増殖の部
位）に誘引または動員する。次いで、動員された細胞は、特定の外傷または異常
性を撃退および／または治癒し得る。

【０５３８】 本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしく
はアンタゴニストは、特定の細胞の走化性活性を増大し得る。次いで、これらの
走化性分子を使用して、身体内の特定の位置に標的化した細胞の数を増加させる
ことによって、炎症、感染、過増殖障害、または任意の免疫系障害を処置し得る
。例えば、走化性分子を使用して、傷害を受けた位置に免疫細胞を誘引すること
によって、組織に対する創傷および他の外傷を処置し得る。本発明の走化性分子
はまた、線維芽細胞を誘引し得、これは創傷を処置するために使用され得る。

【０５３９】 本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしく
はアンタゴニストが走化性活性を阻害し得ることもまた意図される。これらの分
子はまた、障害を処置するために使用され得る。従って、本発明のポリヌクレオ
チドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしくはアンタゴニストは、走
化性のインヒビターとして使用され得る。

【０５４０】 （結合活性） 本発明のポリペプチドは、このポリペプチドに結合する分子、またはこのポリ
ペプチドが結合する分子についてスクリーニングするために使用され得る。この
ポリペプチドとこの分子との結合は、結合したポリペプチドまたは分子の活性を
活性化（アゴニスト）、増大、阻害（アンタゴニスト）、または減少させ得る。
そのような分子の例としては、抗体、オリゴヌクレオチド、タンパク質（例えば
、レセプター）、または低分子が挙げられる。

【０５４１】 好ましくは、この分子は、このポリペプチドの天然のリガンド（例えば、リガ
ンドのフラグメント）、または天然の基質、リガンド、構造的模倣物、もしくは
機能的模倣物に密接に関連する（Ｃｏｌｉｇａｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔ
ｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １（２）：第５章（１９９１）を参
照のこと）。同様に、この分子は、このポリペプチドが結合する天然のレセプタ
ー、または少なくとも、このポリペプチドによって結合され得るレセプターのフ
ラグメント（例えば、活性部位）に密接に関連し得る。いずれの場合においても
、この分子は、公知の技術を用いて合理的に設計され得る。

【０５４２】 好ましくは、これらの分子についてのスクリーニングは、このポリペプチドを
発現する適切な細胞を産生する工程を包含する。好ましい細胞としては、哺乳動
物、酵母、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ、またはＥ．ｃｏｌｉ由来の細胞が挙げられる
。次いで、このポリペプチドを発現する細胞（または、発現されたポリペプチド
を含む細胞膜）を、好ましくは、このポリペプチドまたはこの分子のいずれかの
結合、活性の刺激、または活性の阻害を観察するための分子を潜在的に含む試験
化合物と接触させる。

【０５４３】 アッセイは、このポリペプチドへの候補化合物の結合を単純に試験し得、ここ
で結合は、標識によって、または標識された競合物との競合に関するアッセイに
おいて検出される。さらに、アッセイは、候補化合物がこのポリペプチドへの結
合によって生成されるシグナルを生じるか否かを試験し得る。

【０５４４】 あるいは、アッセイは、無細胞調製物、固体支持体に接着されたポリペプチド
／分子、化学ライブラリー、または天然産物の混合物を用いて実施され得る。ア
ッセイはまた、候補化合物を、ポリペプチドを含む溶液と混合する工程、ポリペ
プチド／分子の活性または結合を測定する工程、およびポリペプチド／分子の活
性または結合を、標準と比較する工程を単純に包含し得る。

【０５４５】 好ましくは、ＥＬＩＳＡアッセイは、モノクローナル抗体またはポリクローナ
ル抗体を用いて、サンプル（例えば、生物学的サンプル）におけるポリペプチド
のレベルまたは活性を測定し得る。抗体は、ポリペプチドへの直接的もしくは間
接的のいずれかの結合、または基質についてのポリペプチドとの競合によって、
ポリペプチドのレベルまたは活性を測定し得る。

【０５４６】 さらに、本発明のポリペプチドが結合するレセプターは、当業者に公知の多く
の方法（例えば、リガンドパニングおよびＦＡＣＳソーティング（Ｃｏｌｉｇａ
ｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎ．，１（２）、
第５章（１９９１））によって同定され得る。例えば、発現クローニングは、ポ
リアデニル化ＲＮＡがこのポリペプチドに応答する細胞から調製される場合に用
いらされ、例えば、ＮＩＨ３Ｔ３細胞（これは、ＦＧＦファミリータンパク質に
対する複数のレセプターを含むことが公知である）、およびＳＣ−３細胞、およ
びこのＲＮＡから作製されたｃＤＮＡライブラリーは、プールに分けられ、そし
てこのポリペプチドに応答性でないＣＯＳ細胞または他の細胞をトランスフェク
トするために使用される。ガラススライド上で増殖しているトランスフェクトさ
れた細胞は、それらを標識化した後に、本発明のポリペプチドに曝露される。こ
のポリペプチドは、種々の手段（部位特異的プロテインキナーゼに対する認識部
位のヨウ素化または封入を含む）によって標識化され得る。

【０５４７】 固定化およびインキュベーション後、スライドは、オートラジオグラフィー分
析に供される。陽性プールを同定し、そしてサブプールを、反復性のサププール
化および再スクリーニングプロセスを使用して調製および再びトランスフェクト
して、最終的に推定レセプターをコードする単一のクローンを生じる。

【０５４８】 レセプター同定のための代替のアプローチとして、標識ポリペプチドは、レセ
プター分子を発現する調製物を、細胞膜と光親和性に連結し得るか、または抽出
し得る。架橋された材料は、ＰＡＧＥ分析によって分離され、そしてＸ線フィル
ムに曝露される。ポリペプチドのレセプターを含む標識複合体が切り出され得、
ペプチドフラグメントへと分離され得、そしてタンパク質微小配列決定に供され
得る。微小配列決定から得られるアミノ酸配列を使用して、１組の縮重オリゴヌ
クレオチドプローブを設計してｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングし、推定
レセプターをコードする遺伝子を同定する。

【０５４９】 さらに、遺伝子シャッフリング、モチーフシャッフリング、エキソンシャッフ
リング、および／またはコドンシャッフリングの技術（集合的に「ＤＮＡシャッ
フリング」という）を利用して、本発明のポリペプチドの活性を調節し得、それ
によって本発明のポリペプチドのアゴニストおよびアンタゴニストを効果的に生
成する。一般に、米国特許第５，６０５，７９３号、同第５，８１１，２３８号
、同第５，８３０，７２１号、同第５，８３４，２５２号、および同第５，８３
７，４５８号、ならびにＰａｔｔｅｎ，Ｐ．Ａ．ら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：７２４〜３３（１９９７）；Ｈａｒａｙａｍａ，
Ｓ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６（２）：７６〜８２（１９９８
）；Ｈａｎｓｓｏｎ，Ｌ．Ｏ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７：２６５〜７
６（１９９９）；ならびにＬｏｒｅｎｚｏ，Ｍ．Ｍ．およびＢｌａｓｃｏ，Ｒ．
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２４（２）：３０８〜１３（１９９８）（これら
の特許および刊行物の各々は、本明細書において参考として援用される）を参照
のこと。１つの実施形態において、本発明のポリヌクレオチドおよび対応するポ
リペプチドの変更は、ＤＮＡシャッフリングによって達成され得る。ＤＮＡシャ
ッフリングは、相同組換えまたは部位特異的な組換えによる、２つ以上のＤＮＡ
セグメントの、所望の分子への構築を含む。別の実施形態において、ポリヌクレ
オチドおよび対応するポリペプチドは、組換えの前に、誤りがちな（ｅｒｒｏｒ
−ｐｒｏｎｅ）ＰＣＲ、ランダムヌクレオチド挿入または他の方法によるランダ
ム変異誘発に供することによって、変更され得る。別の実施形態において、本発
明のポリペプチドの１つ以上の成分、モチーフ、切片、部分、ドメイン、フラグ
メントなどは、１つ以上の異種分子の１つ以上の成分、モチーフ、切片、部分、
ドメイン、フラグメントなどと組換えられ得る。好ましい実施形態において、こ
の異種分子は、ファミリーのメンバーである。さらに好ましい実施形態において
、この異種分子は、例えば、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、インスリン様増
殖因子（ＩＧＦ−Ｉ）、トランスホーミング増殖因子（ＴＧＦ）−α、表皮増殖
因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、ＴＧＦ−β、骨形成タンパク
質（ＢＭＰ）−２、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−５、ＢＭＰ−６、ＢＭＰ−７、アクチ
ビンＡおよびＢ、デカペンタプレジック（ｄｐｐ）、６０Ａ、ＯＰ−２、ドーサ
リン、増殖分化因子（ＧＤＦ）、結節（ｎｏｄａｌ）、ＭＩＳ、インヒビン−α
、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＴＧＦ−β５、および神経膠由
来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）のような増殖因子である。

【０５５０】 他の好ましいフラグメントは、本発明のポリペプチドの生物学的に活性なフラ
グメントである。生物学的に活性なフラグメントは、本発明のポリぺプチドの活
性に類似の活性を示すが、必ずしも同一ではないフラグメントである。このフラ
グメントの生物学的活性は、改善された所望の活性、または減少した所望されな
い活性を含み得る。

【０５５１】 さらに、本発明は、本発明のポリペプチドの作用を調節する化合物を同定する
ために化合物をスクリーニングする方法を提供する。このようなアッセイの例は
、哺乳動物線維芽細胞、本発明のポリペプチド、スクリーニングされるべき化合
物および³[Ｈ]チミジンを、線維芽細胞が通常増殖する細胞培養条件下で合わせ
る工程を包含する。コントロールアッセイは、スクリーニングされるべき化合物
の非存在下で実施され得、そしてこの化合物の存在下での線維芽細胞の増殖の量
と比較して、各々の場合における³[Ｈ]チミジンの取り込みの決定によって、こ
の化合物が増殖を刺激するか否かを決定し得る。線維芽細胞の増殖の量は、³[Ｈ
]チミジンの取り込みを測定する液体シンチレーションクロマトグラフィーによ
って測定される。アゴニスト化合物およびアンタゴニスト化合物の両方が、この
手順により同定され得る。

【０５５２】 別の方法において、本発明のポリペプチドに対するレセプターを発現する哺乳
動物細胞または膜調製物は、この化合物の存在下において標識化した本発明のポ
リペプチドとともにインキュベートされる。次いで、この化合物がこの相互作用
を増強またはブロックする能力が、測定され得る。あるいは、スクリーニングさ
れるべき化合物の相互作用に従う既知のセカンドメッセンジャー系の応答および
レセプターが測定され、そしてこの化合物がこのレセプターを結合し、そしてセ
カンドメッセンジャー応答を誘発する能力を測定して、この化合物が潜在的なア
ゴニストまたはアンタゴニストであるか否かを決定する。このようなセカンドメ
ッセンジャー系には、ｃＡＭＰグアニル酸シクラーゼ、イオンチャネルまたはホ
スホイノシチド加水分解が挙げられるが、これらに限定されない。

【０５５３】 これらの上記のアッセイの全ては、診断マーカーまたは予後マーカーとして使
用され得る。これらのアッセイを用いて発見される分子は、ポリペプチド／分子
を活性化または阻害することによって、疾患を処置するか、または患者における
特定の結果（例えば、血管増殖）をもたらすために使用され得る。さらに、アッ
セイは、適切に操作された細胞または組織からの本発明のポリペプチドの産生を
阻害または増強し得る因子を発見し得る。

【０５５４】 従って、本発明は、以下の工程を包含する本発明のポリペプチドに結合する化
合物を同定する方法を包含する：（ａ）候補結合化合物を本発明のポリペプチド
とともにインキュベートする工程；および（ｂ）結合が生じたか否かを決定する
工程。さらに、本発明は、以下の工程を包含するアゴニスト／アンタゴニストを
同定する方法を包含する：（ａ）候補化合物を本発明のポリペプチドとともにイ
ンキュベートする工程、（ｂ）生物学的活性をアッセイする工程、および（ｂ）
ポリペプチドの生物学的活性が改変されているか否かを決定する工程。

【０５５５】 （標的化された送達） 別の実施形態において、本発明は、組成物を、例えば、本発明のポリペプチド
についてのレセプターを発現する標的化細胞、または本発明のポリペプチドの細
胞結合形態を発現する細胞に送達する方法を提供する。

【０５５６】 本明細書中で議論される場合、本発明のポリペプチドまたは抗体は、異種ポリ
ペプチド、異種核酸、毒素またはプロドラッグと、疎水性、親水性、イオン性お
よび／または共有結合的な相互作用を介して会合し得る。１つの実施形態におい
て、本発明は、異種ポリペプチドまたは核酸と会合した本発明のポリペプチド（
抗体を含む）を投与することによる、本発明の組成物の細胞への特異的な送達の
ための方法を提供する。１つの例において、本発明は、治療タンパク質を標的化
細胞中へ送達するための方法を提供する。別の例において、本発明は、一本鎖核
酸（例えば、アンチセンスまたはリボザイム）または二本鎖核酸（例えば、細胞
のゲノムに組み込まれ得るか、またはエピソームにて複製し得、そして転写され
得る、ＤＮＡ）を、標的化細胞に送達するための方法を提供する。

【０５５７】 別の実施形態において、本発明は、毒素または細胞傷害性プロドラッグと会合
した本発明のポリペプチド（例えば、本発明のポリペプチドまたは本発明の抗体
）を投与することによる細胞の特異的破壊（例えば、腫瘍細胞の破壊）のための
方法を提供する。

【０５５８】 「毒素」とは、内因性の細胞傷害性エフェクター系、放射性同位体、ホロ毒素
（ｈｏｌｏｔｏｘｉｎ）、改変型毒素、毒素の触媒サブユニット、または規定の
条件下で細胞死を引き起こす細胞中もしくは細胞表面には通常存在しない任意の
分子もしくは酵素を結合および活性化する化合物を意味する。本発明の方法に従
って使用され得る毒素としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
当該分野で公知の放射性同位体、固有のまたは誘導された内因性の細胞傷害性エ
フェクター系に結合する化合物（例えば、抗体（またはその一部を含む補体固定
）、チミジンキナーゼ、エンドヌクレアーゼ、ＲＮＡｓｅ、α毒素、リシン、ア
ブリン、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ内毒素Ａ、ジフテリア毒素、サポリン、モモル
ジン（ｍｏｍｏｒｄｉｎ）、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ヨウシュヤマゴボウ
抗ウイルスタンパク質、α−サルシン（ｓａｒｃｉｎ）およびコレラ毒素。「細
胞傷害性プロドラッグ」とは、通常細胞内に存在する酵素によって、細胞傷害性
化合物へと変換される非毒性の化合物を意味する。本発明の方法に従って使用さ
れ得る細胞傷害性プロドラッグとしては、安息香酸マスタードアルキル化剤のグ
ルタミル誘導体、エトポシドまたはマイトマイシンＣのリン酸誘導体、シトシン
アラビノシド、ダウノルビシン、およびドキソルビシンのフェノキシアセトアミ
ド誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。

【０５５９】 （薬物スクリーニング） 本発明のポリペプチドの活性を改変する分子についてスクリーニングするため
の、本発明のポリペプチド、またはこれらのポリペプチドをコードするポリヌク
レオチドの使用が、さらに意図される。このような方法は、本発明のポリペプチ
ドを、アンタゴニスト活性またはアゴニスト活性を有することが疑われる選択さ
れた化合物と接触させる工程、および結合に続いてこれらのポリペプチドの活性
をアッセイする工程を含む。

【０５６０】 本発明は、種々の薬物スクリーニング技術のいずれかにおいて、本発明のポリ
ペプチド、またはそれらの結合フラグメントを使用することによって治療用化合
物をスクリーニングするために特に有用である。このような試験に用いられるポ
リペプチドまたはフラグメントは、固体支持体に固定化され得、細胞表面上に発
現され得、溶液中で遊離であり得、または細胞内に局在化され得る。薬物スクリ
ーニングの１つの方法は、ポリペプチドまたはフラグメントを発現する組換え核
酸を用いて安定に形質転換される真核生物宿主細胞または原核生物宿主細胞を利
用する。薬物は、競合結合アッセイにおいて、このような形質転換細胞に対して
スクリーニングされる。例えば、試験されている薬物と本発明のポリペプチドと
の間の複合体の形成を測定し得る。

【０５６１】 従って、本発明は、本発明のポリペプチドによって媒介される活性に影響を及
ぼす薬物または任意の他の薬剤についてのスクリーニング方法を提供する。これ
らの方法は、当該分野で周知の方法によって、このような薬剤を本発明のポリペ
プチドもしくはそのフラグメントと接触させる工程、およびこの薬剤とこのポリ
ペプチドもしくはそのフラグメントとの間の複合体の存在についてアッセイする
工程を包含する。このような競合結合アッセイにおいて、スクリーニングされる
薬剤は、代表的に、標識化される。インキュベーション後に、遊離の薬剤は、結
合形態中に存在する薬物から分離され、そして遊離または複合体化されていない
標識の量は、特定の薬剤が本発明のポリペプチドに結合する能力の尺度である。

【０５６２】 薬物スクリーニングについての別の技術は、本発明のポリペプチドに対する適
切な結合親和性を有する化合物に対する高処理能力スクリーニングを提供し、そ
して欧州特許出願８４／０３５６４（１９８４年９月１３日公開）（これは、本
明細書中で参考として援用される）に非常に詳細に記載される。簡潔にいうと、
大量の異なる小さなペプチド試験化合物は、固体基材（例えば、プラスチックピ
ンまたはいくつかの他の表面）上で合成される。ペプチド試験化合物を、本発明
のポリペプチドと反応させ、そして洗浄する。次いで、結合したポリペプチドは
、当該分野で周知の方法によって検出される。精製されたポリペプチドは、前述
の薬物スクリーニング技術での使用のためにプレート上に直接コーディングされ
る。さらに、非中和抗体を使用して、このペプチドを捕捉し得、そして固体支持
体上にそれを固定し得る。

【０５６３】 本発明はまた、競合薬物スクリーニングアッセイの使用を意図し、ここで、本
発明のポリペプチドを結合し得る中和抗体は、ポリペプチドまたはそのフラグメ
ントに対する結合について試験化合物と特異的に競合する。この様式において、
抗体を使用して、本発明のポリペプチドと１つ以上の抗原性エピトープを共有す
る任意のペプチドの存在を検出する。

【０５６４】 （アンチセンスおよびリボザイム（アンタゴニスト）） 特定の実施形態において、本発明に従うアンタゴニストは、配列番号Ｘに含ま
れる配列またはその相補鎖に対応する核酸および／あるいは表１において同定さ
れるｃＤＮＡプラスミドＺに含まれるヌクレオチド配列に対応する核酸である。
１つの実施形態において、アンチセンス配列は、生物体により内部で生成され、
別の実施形態において、アンチセンス配列は別々に投与される（例えば、Ｏ’Ｃ
ｏｎｎｏｒ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．５６：５６０（１９９１）を参照のこと
）。Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ
Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＣＲＣ Ｐ
ｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１９８８）。アンチセンス技術を使用
して、アンチセンスＤＮＡもしくはＲＮＡを通してか、または３重らせんの形成
を通して遺伝子発現を制御し得る。アンチセンス技術は、例えば、Ｏｋａｎｏ，
Ｊ．、Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．５６：５６０（１９９１）；Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙ
ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ
ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａ
ｔｏｎ，ＦＬ（１９８８）に考察される。３重らせん形成は、例えば、Ｌｅｅら
、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６：３０７３（１９７９）
；Ｃｏｏｎｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４１：４５６（１９８８）；およびＤｅ
ｒｖａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５１：１３００（１９９１）において考察され
る。これらの方法は、相補的なＤＮＡまたはＲＮＡへのポリヌクレオチドの結合
に基づく。

【０５６５】 例えば、非リンパ性白血病細胞株ＨＬ−６０および他の細胞株の増殖を阻害す
るためのｃ−ｍｙｃおよびｃ−ｍｙｂアンチセンスＲＮＡ構築物の使用は、以前
に記載された（Ｗｉｃｋｓｔｒｏｍら（１９８８）；Ａｎｆｏｓｓｉら（１９８
９））。これらの実験は、細胞をオリゴリボヌクレオチドとインキュベーション
することによってインビトロで行われた。インビボ用途のための類似の手順は、
ＷＯ９１／１５５８０に記載される。簡単には、所定のアンチセンスＲＮＡにつ
いてのオリゴヌクレオチドの対は、以下のように生成される：オープンリーディ
ングフレームの最初の１５塩基に相補的な配列を、５末端のＥｃｏＲＩ部位およ
び３末端のＨｉｎｄＩＩＩ部位に隣接させる。次に、オリゴヌクレオチドの対は
、９０℃で１分間加熱され、次いで２×ライゲーション緩衝液（２０ｍＭ ＴＲ
ＩＳ ＨＣｌ ｐＨ７．５、１０ｍＭ ＭｇＣｌ₂、１０ｍＭ ジチオスレイト
ール（ＤＴＴ）および０．２ｍＭ ＡＴＰ）中でアニーリングされ、次いで、レ
トロウイルスベクターＰＭＶ７のＥｃｏＲ１／ＨｉｎｄＩＩＩ部位に連結される
（ＷＯ９１／１５５８０）。

【０５６６】 例えば、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの５’コード部
分を使用して、約１０〜４０塩基対長のアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチド
を設計し得る。ＤＮＡオリゴヌクレオチドは、転写に関与する遺伝子の領域に相
補的であるように設計され、それにより転写およびレセプターの産生を阻害する
。アンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドは、インビボでｍＲＮＡにハイブリダ
イズし、そしてｍＲＮＡ分子のレセプターポリペプチドへの翻訳をブロックする
。

【０５６７】 １つの実施形態において、本発明のアンチセンス核酸は、外来の配列からの転
写により細胞内で産生される。例えば、ベクターまたはその一部が転写され、本
発明のアンチセンス核酸（ＲＮＡ）を産生する。このようなベクターは、アンチ
センス核酸をコードする配列を含む。このようなベクターは、それが転写されて
所望のアンチセンスＲＮＡを産生し得る限り、エピソームを保持し得るか、また
は染色体に組込まれ得る。このようなベクターは、当該分野において標準的な組
換えＤＮＡ技術方法により構築され得る。ベクターは、脊椎動物細胞において複
製および発現のために使用される、当該分野で公知のプラスミド、ウイルスなど
であり得る。本発明のポリペプチドをコードする配列またはそのフラグメントの
発現は、脊椎動物、好ましくはヒト細胞において作用する、当該分野で公知の任
意のプロモーターにより得る。そのようなプロモーターは、誘導性または構成性
であり得る。このようなプロモーターは、ＳＶ４０初期プロモーター領域（Ｂｅ
ｒｎｏｉｓｔおよびＣｈａｍｂｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ、２９：３０４−３１０（１
９８１））、ラウス肉腫ウイルスの３’長末端反復に含まれるプロモーター（Ｙ
ａｍａｍｏｔｏら、Ｃｅｌｌ、２２：７８７−７９７（１９８０））、ヘルペス
チミジンプロモーター（Ｗａｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７８：１４４１−１４４５（１９８１））、メタロチオネイン
遺伝子の調節配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２９６：３９−４２（
１９８２））などが挙げられるが、これらに限定されない。

【０５６８】 本発明のアンチセンス核酸は、少なくとも本発明の遺伝子のＲＮＡ転写物の一
部に相補的な配列を含む。しかし、完全に相補的であることは好ましいが、必要
ではない。本明細書中で言及される「少なくともＲＮＡの一部に相補的な」配列
は、ＲＮＡとハイブリダイズし得るに十分な相補性を有し、安定な二重鎖を形成
する配列を意味し；従って、二本鎖アンチセンス核酸の場合において、二重鎖Ｄ
ＮＡの一本鎖が試験され得るか、または三重鎖形成がアッセイされ得る。ハイブ
リダイズする能力は、相補性の程度およびアンチセンス核酸の長さの両方に依存
する。一般的に、ハイブリダイズする核酸が長いほど、ＲＮＡとのより多くの塩
基ミスマッチを含み得、そしてなお安定な二重鎖（または三重鎖の場合もあり得
る）を形成し得る。当業者は、ハイブリダイズ複合体の融点を決定するために標
準的な手順を使用することによりミスマッチの許容の程度を確認し得る。

【０５６９】 メッセージの５’末端に相補的であるオリゴヌクレオチド（例えば、ＡＵＧ開
始コドンまででかつＡＵＧ開始コドンを含む５’非翻訳配列）は、翻訳の阻害の
際に最も効率的に働く。しかし、ｍＲＮＡの３’非翻訳配列に相補的な配列は、
同様にｍＲＮＡの翻訳を阻害する際に有効であることが示された。一般的に、Ｗ
ａｇｎｅｒ，Ｒ．、１９９４、Ｎａｔｕｒｅ ３７２：３３３−３３５を参照の
こと。従って、本明細書中に記載されるポリヌクレオチド配列の５’−または３
’−の非翻訳非コード領域のいずれかに相補的なオリゴヌクレオチドは、内因性
ｍＲＮＡの翻訳を阻害するアンチセンスアプローチに使用され得る。ｍＲＮＡの
５’非翻訳領域に相補的なオリゴヌクレオチドは、ＡＵＧ開始コドンの相補物を
含む。ｍＲＮＡコード領域に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドは、翻訳
のあまり効率的でないインヒビターであるが、本発明に従って使用され得る。本
発明のｍＲＮＡの５’領域、３’領域またはコード領域にハイブリダイズするよ
うに設計されるか否かにかかわらず、アンチセンス核酸は、少なくとも６ヌクレ
オチド長であるべきであり、そして好ましくは６〜約５０ヌクレオチド長にわた
るオリゴヌクレオチドである。特定の局面において、このオリゴヌクレオチドは
、少なくとも１０ヌクレオチド、少なくとも１７ヌクレオチド、少なくとも２５
ヌクレオチドまたは少なくとも５０ヌクレオチドである。

【０５７０】 本発明のポリヌクレオチドは、ＤＮＡ、もしくはＲＮＡ、またはキメラ混合物
、あるいはそれらの誘導体もしくは改変バージョン、一本鎖、または二本鎖であ
り得る。このオリゴヌクレオチドは、例えば、塩基部分、糖部分、またはリン酸
骨格で改変され、分子の安定性、ハイブリダーゼーションなどを改善し得る。こ
のオリゴヌクレオチドは、ペプチドのような他の付加基（例えば、インビボにお
いて宿主細胞レセプターを標的化するために）、または細胞膜を通した輸送を促
進する因子（例えば、Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら、１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：６５５３−６５５６；Ｌｅｍａｉｔｒｅ
ら、１９８７、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８４：６４８−６５２
；ＰＣＴ公開番号ＷＯ８８／０９８１０（１９８８年１２月１５日公開）を参照
のこと）、または血液脳関門（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ８９／１０１３４（
１９８８年４月２５日公開）を参照のこと）、ハイブリダイゼーション誘引切断
剤（ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ−ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ ｃｌｅａｖａｇｅ ａ
ｇｅｎｔ）（例えば、Ｋｒｏｌら、１９８８、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、６
：９５８−９７６を参照のこと）、またはインターカレート剤（例えば、Ｚｏｎ
，１９８８、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．５：５３９−５４９を参照のこと）を含み得
る。この目的のために、オリゴヌクレオチドは、別の分子（例えば、ペプチド、
ハイブリダーゼーション誘引架橋剤、輸送剤、ハイブリダイゼーション誘引切断
剤など）に結合体化され得る。

【０５７１】 アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの改変された塩基部分を
含み得、この塩基部分は、以下を含むがそれらに限定されない群から選択される
：５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨー
ドウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４−アセチルシトシン、５−（カル
ボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２
−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシ
ル、β−Ｄ−ガラクトシルキューオシン、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデ
ニン、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、
２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシ
トシン、Ｎ６−アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシ
ル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルキュー
オシン、５’−メトキシカルボキシメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２
−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ
）、ワイブトキソシン（ｗｙｂｕｔｏｘｏｓｉｎｅ）、プソイドウラシル、キュ
ーオシン、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシ
ル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチル
エステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、５−メチル−２−チオウラシル、
３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシプロピル）ウラシル、（ａｃｐ３）
ｗ、および２，６−ジアミノプリン。

【０５７２】 アンチセンスオリゴヌクレオチドはまた、以下を含むがそれらに限定されない
群から選択される少なくとも１つの改変された糖部分を含み得る：アラビノース
、２−フルオロアラビノース、キシルロース、およびヘキソース。

【０５７３】 さらに別の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下を含
むがそれらに限定されない群から選択される少なくとも１つの改変リン酸骨格を
含む：ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホラミドチオエート、
ホスホラミデート、ホスホルジアミデート、メチルホスホネート、アルキルホス
ホトリエステル、およびホルムアセタールまたはそのアナログ。

【０５７４】 さらに別の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ａ−アノ
マーオリゴヌクレオチドである。ａ−アノマーオリゴヌクレオチドは、相補的な
ＲＮＡと特異的な二本鎖ハイブリッドを形成し、通常のｂ−ユニットとは反対に
、その鎖は互いに平行にする（Ｇａｕｔｉｅｒら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ．１５：６６２５−６６４１（１９８７））。このオリゴヌクレオチドは、２
’−０−メチルリボヌクレオチドであるか（Ｉｎｏｕｅら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ
ｓ Ｒｅｓ．１５：６１３１−６１４８（１９８７））、またはキメラＲＮＡ−
ＤＮＡアナログである（Ｉｎｏｕｅら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２１５：３２７−
３３０（１９８７））。

【０５７５】 本発明のポリヌクレオチドは当該分野で公知の標準的な方法（例えば、自動Ｄ
ＮＡ合成機により（このような装置はＢｉｏｓｅａｒｃｈ，Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂ
ｉｏｓｙｓｔｅｍｓなどから市販されている）の使用により合成され得る。例え
ば、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、Ｓｔｅｉｎらの方法（Ｎｕｃｌ
．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１６：３２０９（１９８８））により合成され得、メチ
ルホスホネートオリゴヌクレオチドは、制御化細孔ガラス（ｐｏｒｅ ｇｌａｓ
ｓ）ポリマー支持体（Ｓａｒｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：７４４８−７４５１（１９８８））などの使用により調製さ
れ得る。

【０５７６】 コード領域配列に相補的なアンチセンスヌクレオチドが、使用され得るが一方
で、転写された非翻訳領域に相補的なアンチセンスヌクレオチドが最も好ましい
。

【０５７７】 本発明による潜在的なアンタゴニストはまた、触媒ＲＮＡ、すなわちリボザイ
ムを含む（例えば、ＰＣＴ国際公開ＷＯ９０／１１３６４、１９９０年１０月４
日公開；Ｓａｒｖｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４７：１２２２−１２２５（１９
９０）を参照のこと）。一方、部位特異的認識配列でｍＲＮＡを切断するリボザ
イムを使用して、ｍＲＮＡを破壊し得るが、ハンマーヘッド型リボザイムの使用
が好ましい。ハンマーヘッド型リボザイムは、標的ｍＲＮＡと相補的な塩基対を
形成する隣接領域により決定される位置で、ｍＲＮＡを切断する。たった１つの
必要条件は、標的ｍＲＮＡが以下の２つの塩基の配列を有することである：５’
−ＵＧ−３’。ハンマーヘッド型リボザイムの構築および生成は当該分野で周知
であり、そしてＨａｓｅｌｏｆｆおよびＧｅｒｌａｃｈ、Ｎａｔｕｒｅ、３３４
：５８５−５９１（１９８８）により十分に記載される。配列番号Ｘのヌクレオ
チド配列内に多くの潜在的なハンマーヘッド型リボザイム切断部位が存在する。
好ましくは、このリボザイムは、切断認識部位がｍＲＮＡの５’末端付近に位置
するように；すなわち、効率を増大し、そして非機能的ｍＲＮＡ転写物の細胞内
蓄積を最小化するように、操作される。

【０５７８】 アンチセンスアプローチの場合、本発明のリボザイムは、改変されたオリゴヌ
クレオチド（例えば、安定性、標的化などについて改良された）から構成され得
、そしてインビボにおいて本発明のポリペプチドを発現する細胞に送達されるべ
きである。リボザイムをコードするＤＮＡ構築物は、ＤＮＡをコードするアンチ
センスの導入のための上記と同じ様式において細胞中に導入され得る。送達の好
ましい方法は、強力な構成性プロモーター（例えば、ｐｏｌ ＩＩＩまたはｐｏ
ｌ ＩＩプロモーターのような）の制御下で、リボザイムを「コードする」ＤＮ
Ａ構築物を使用することを含み、その結果トランスフェクトした細胞が内因性メ
ッセージを破壊し、そして翻訳を阻害するに十分な量のリボザイムを生成する。
リボザイムはアンチセンス分子と異なり触媒性であるので、より低い細胞内濃度
が効率のために必要とされる。

【０５７９】 アンタゴニスト／アゴニスト化合物を利用して、腫瘍性の細胞および組織に対
する本発明のポリペプチドの細胞増殖（ｇｒｏｗｔｈ）および増殖（ｐｒｏｌｉ
ｆｅｒａｔｉｏｎ）効果を阻害し得る。すなわち、腫瘍の脈管形成を刺激し、そ
れにより異常な細胞増殖および増殖を（例えば、腫瘍形成または増殖において）
遅延または防止する。

【０５８０】 アンタゴニスト／アゴニストをまた利用して、血管過多の疾患を予防し得、そ
して水晶体嚢外白内障（ｅｘｔｒａｃａｐｓｕｌａｒ ｃａｔａｒａｃｔ）手術
後の上皮レンズ細胞の増殖を予防する。本発明のポリペプチドのマイトジェン活
性の防止はまた、例えば、バルーン血管形成術後の再狭窄のような場合に要求さ
れ得る。

【０５８１】 アンタゴニスト／アゴニストをまた利用して、創傷治癒の間の瘢痕組織の増殖
防止し得る。

【０５８２】 アンタゴニスト／アゴニストをまた利用して、本明細書中に記載される疾患を
処置し得る。

【０５８３】 従って、本発明は、障害または疾患（本発明のポリヌクレオチドの過剰発現に
関連する、本願の全体に渡って列挙される障害または疾患が含まれるが、これら
に限定されない）を、（ａ）本発明のポリヌクレオチドに指向されたアンチセン
ス分子、および／または（ｂ）本発明のポリヌクレオチドに指向されたリボザイ
ムを、患者に投与することによって処置する方法を提供する。

【０５８４】 （他の活性） 本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニストまたはアンタゴニスト
は、血管内皮細胞増殖を刺激する能力の結果として、種々の疾患状態（例えば、
血栓症、動脈硬化、および他の心臓血管の状態）に起因する虚血組織の血管再生
を刺激するための処置において利用され得る。本発明のポリペプチド、ポリヌク
レオチド、アゴニストまたはアンタゴニストをまた利用して、上記で議論される
ように脈管形成および肢の再形成を刺激し得る。

【０５８５】 本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニストまたはアンタゴニスト
はまた、傷害、火傷、手術後組織修復、および瘢痕に起因する創傷の処置にもま
た利用し得る。なぜなら、それらは異なる起源の種々の細胞（例えば、線維芽細
胞および骨格筋細胞）に対してマイトジェン性であり、それゆえダメージを受け
た組織または疾患組織の修復または置換を促進するからである。

【０５８６】 本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニストまたはアンタゴニスト
はまた、ニューロンの成長を刺激し、そして特定のニューロンの障害または神経
変性状態（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、およびエイズ関連複合
体）において生じるニューロンのダメージを処置および予防するために利用し得
る。本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニストまたはアンタゴニス
トは、軟骨細胞増殖を刺激する能力を有し得、それゆえ、骨および歯周の再形成
を増強し、そして組織移植片または骨の移植片における補助のために利用され得
る。

【０５８７】 本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニストまたはアンタゴニスト
をまた利用して、ケラチノサイト増殖を刺激することにより、日焼けに起因する
皮膚の老化を予防し得る。

【０５８８】 本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニストまたはアンタゴニスト
をまた、抜け毛を予防するために利用し得る。なぜなら、ＦＧＦファミリーのメ
ンバーは、髪形成細胞を活性化し、そしてメラノサイト増殖を促進するからであ
る。同じ系列にそって、本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニスト
またはアンタゴニストを利用して、他のサイトカインと組み合わせて使用した場
合、造血細胞および骨髄細胞の増殖および分化を刺激し得る。

【０５８９】 本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニストまたはアンタゴニスト
をまた利用して、移植前の器官を維持し得るか、または始原組織の細胞培養を支
持するために使用し得る。

【０５９０】 本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニストまたはアンタゴニスト
はまた、初期胚における分化のための中胚葉起源の組織を誘導するために利用さ
れ得る。

【０５９１】 本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニストまたはアンタゴニスト
はまた、先に議論されるように造血系統に加えて、胚性幹細胞の分化もしくは増
殖を増加または減少し得る。

【０５９２】 本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニストまたはアンタゴニスト
はまた、哺乳動物の特徴（例えば、身長、体重、毛の色、眼の色、皮膚、脂肪組
織の割合、色素沈着、大きさ、および形状（例えば、美容外科））を調節するた
めに使用され得る。同様に、本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニ
ストまたはアンタゴニストは、異化作用、同化作用、プロセシング、利用、およ
びエネルギーの貯蔵に影響を及ぼす哺乳動物の代謝を調節するために使用され得
る。

【０５９３】 本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニストまたはアンタゴニスト
は、バイオリズム、カリカディック（ｃａｒｉｃａｄｉｃ）リズム、うつ病（抑
うつ性障害を含む）、暴力の傾向、痛みへの耐性、生殖能力（好ましくは、アク
チビンまたはインヒビン様活性によって）、ホルモンレベルもしくは内分泌レベ
ル、食欲、性欲、記憶、ストレス、または他の認知の質に影響を及ぼすことによ
って、哺乳動物の精神状態または身体状態を変更するために使用され得る。

【０５９４】 本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニストまたはアンタゴニスト
はまた、例えば、貯蔵能力、脂肪含有量、脂質、タンパク質、炭水化物、ビタミ
ン、ミネラル、補因子、または他の栄養成分を増加または減少させるような食品
添加物または保存剤として使用され得る。

【０５９５】 上記の適用は、広範に種々の宿主において使用されている。そのような宿主と
しては、ヒト、ネズミ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、マウス、ラ
ット、ハムスター、ブタ、ミクロピッグ（ｍｉｃｒｏ ｐｉｇ）、ニワトリ、ヤ
ギ、ウシ、ヒツジ、イヌ、ネコ、非ヒト霊長類、およびヒトが挙げられるが、こ
れらに限定されない。特定の実施形態において、宿主は、マウス、ウサギ、ヤギ
、モルモット、ニワトリ、ラット、ハムスター、ブタ、ヒツジ、イヌまたはネコ
である。好ましい実施形態において、宿主は、哺乳動物である。最も好ましい実
施形態において、宿主は、ヒトである。

【０５９６】 （他の好ましい実施形態） 本願発明の他の好ましい実施形態は、配列番号Ｘのヌクレオチド配列もしくは
その相補鎖、および／またはｃＤＮＡプラスミド：Ｚ中の少なくとも約５０の連
続したヌクレオチドの配列に、少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を
含む、単離された核酸分子を含む。

【０５９７】 上記連続したヌクレオチドの配列が、表１中の配列番号Ｘについて同定される
位置の範囲で、配列番号Ｘのヌクレオチド配列に含まれる、核酸分子もまた好ま
しい。

【０５９８】 配列番号Ｘのヌクレオチド配列もしくはその相補鎖および／またはｃＤＮＡプ
ラスミド：Ｚ中の少なくとも約１５０の連続したヌクレオチドの配列に、少なく
とも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子もまた好ま
しい。

【０５９９】 配列番号Ｘのヌクレオチド配列もしくはその相補鎖、および／またはｃＤＮＡ
プラスミド：Ｚ中の少なくとも約５００の連続したヌクレオチドの配列に、少な
くとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子もまた好
ましい。

【０６００】 さらに好ましい実施形態は、表１の配列番号Ｘについて同定される位置の範囲
で、配列番号Ｘのヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド
配列を含む核酸分子である。

【０６０１】 さらに好ましい実施形態は、配列番号Ｘの完全ヌクレオチド配列もしくはその
相補鎖、および／またはｃＤＮＡプラスミド：Ｚと少なくとも９５％同一である
ヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子である。

【０６０２】 ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号Ｘのヌクレオ
チド配列もしくはその相補鎖、および／またはｃＤＮＡプラスミド：Ｚを含む核
酸分子にハイブリダイズする単離された核酸分子もまた好ましく、ここで上記の
ハイブリダイズする核酸分子は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条
件下で、Ａ残基のみまたはＴ残基のみからなるヌクレオチド配列を有する核酸分
子にハイブリダイズしない。

【０６０３】 ｃＤＮＡプラスミド：Ｚを含むＤＮＡ分子を含む物質の組成物もまた、好まし
い。

【０６０４】 ｃＤＮＡプラスミド：Ｚのヌクレオチド配列内の少なくとも５０の連続したヌ
クレオチドの配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む単離さ
れた核酸分子もまた、好ましい。

【０６０５】 単離された核酸分子もまた好ましく、ここで、上記配列の少なくとも５０の連
続したヌクレオチドが、ｃＤＮＡプラスミド：Ｚによってコードされるオープン
リーディングフレーム配列のヌクレオチド配列内に含まれる。

【０６０６】 ｃＤＮＡプラスミド：Ｚによりコードされるヌクレオチド配列内の少なくとも
１５０の連続したヌクレオチドの配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチ
ド配列を含む単離された核酸分子もまた、好ましい。

【０６０７】 さらに好ましい実施形態は、ｃＤＮＡプラスミド：Ｚによりコードされるヌク
レオチド配列内の少なくとも５００の連続したヌクレオチドの配列と少なくとも
９５％同一であるヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子である。

【０６０８】 さらに好ましい実施形態は、ｃＤＮＡプラスミド：Ｚによりコードされる完全
ヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む単離さ
れた核酸分子である。

【０６０９】 さらに好ましい実施形態は、以下からなる群から選択される配列中の少なくと
も５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチ
ド配列を含む核酸分子を、生物学的サンプルにおいて検出するための方法である
：配列番号Ｘのヌクレオチド配列もしくはその相補鎖およびｃＤＮＡプラスミド
：Ｚによりコードされるヌクレオチド配列；上記の方法は、上記の群から選択さ
れる配列と、上記のサンプル中の少なくとも１つの核酸分子のヌクレオチド配列
とを比較する工程、および上記サンプル中の上記核酸分子の配列が、上記の選択
された配列に対して少なくとも９５％同一であるか否かを決定する工程を包含す
る。

【０６１０】 配列を比較する上記の工程が、上記サンプル中の核酸分子と、上記の群から選
択される上記の配列を含む核酸分子との間の核酸ハイブリダイゼーションの程度
を決定する工程を包含する、上記方法もまた好ましい。同様に、配列を比較する
上記の工程が、上記サンプル中の核酸分子から決定されるヌクレオチド配列と、
上記の群から選択される上記の配列とを比較する工程によって実施される、上記
方法もまた好ましい。核酸分子は、ＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子を含み得る。

【０６１１】 さらに好ましい実施形態は、生物学的サンプルの種、組織、または細胞型を同
定するための方法であって、この方法は、以下からなる群から選択される配列中
の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一である
ヌクレオチド配列を含む上記サンプル中の核酸分子を（もしあれば）検出する工
程を包含する：配列番号Ｘのヌクレオチド配列またはその相補鎖およびｃＤＮＡ
プラスミド：Ｚによってコードされるヌクレオチド配列。

【０６１２】 生物学的サンプルの種、組織、または細胞型を同定するための方法は、少なく
とも２つのヌクレオチド配列のパネル中のヌクレオチド配列を含む核酸分子を検
出する工程を包含し得、ここで上記パネル中の少なくとも１つの配列は、上記の
群から選択される配列中の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少な
くとも９５％同一である。

【０６１３】 タンパク質をコードする、配列番号Ｘのヌクレオチドもしくはその相補鎖また
はｃＤＮＡプラスミド：Ｚの異常な構造または発現と関連する病理学的状態を、
被験体において診断するための方法もまた好ましく、この方法は、以下からなる
群から選択される配列中の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少な
くとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、核酸分子を、（もしあれば）
上記被験体から得られる生物学的サンプルにおいて検出する工程を包含する：配
列番号Ｘのヌクレオチド配列またはその相補鎖およびｃＤＮＡプラスミドＺのヌ
クレオチド配列。

【０６１４】 病理学的状態を診断するための方法は、少なくとも２つのヌクレオチド配列の
パネル中のヌクレオチド配列を含む核酸分子を検出する工程を包含し得、ここで
、上記パネル中の少なくとも１つの配列は、上記群から選択される配列中の少な
くとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一である。

【０６１５】 上記の核酸分子のヌクレオチド配列が、少なくとも２つのヌクレオチド配列の
パネルを含む、単離された核酸分子を含む物質の組成物もまた好ましく、ここで
上記のパネル中の少なくとも１つの配列は、以下からなる群から選択される配列
中の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であ
る：配列番号Ｘのヌクレオチド配列もしくはその相補鎖およびｃＤＮＡプラスミ
ド：Ｚによりコードされるヌクレオチド配列。核酸分子は、ＤＮＡ分子またはＲ
ＮＡ分子を含み得る。

【０６１６】 配列番号Ｙのポリペプチド配列；配列番号Ｘもしくはその相補鎖によってコー
ドされるポリペプチドおよび／またはｃＤＮＡプラスミド：Ｚによりコードされ
るポリペプチド中の少なくとも約１０の連続したアミノ酸の配列に、少なくとも
９０％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた好ましい。

【０６１７】 配列番号Ｙのアミノ酸配列；配列番号Ｘもしくはその相補鎖によってコードさ
れるポリペプチドおよび／またはｃＤＮＡプラスミド：Ｚによりコードされるポ
リペプチド中の少なくとも約３０の連続したアミノ酸の配列に、少なくとも９５
％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた好ましい。

【０６１８】 配列番号Ｙのアミノ酸配列；配列番号Ｘもしくはその相補鎖によってコードさ
れるポリペプチドおよび／またはｃＤＮＡプラスミド：Ｚによりコードされるポ
リペプチド中の少なくとも約１００の連続したアミノ酸の配列に、少なくとも９
５％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまたさらに好ましい
。

【０６１９】 配列番号Ｙの完全アミノ酸配列；配列番号Ｘもしくはその相補鎖によってコー
ドされるポリペプチドおよび／またはｃＤＮＡプラスミド：Ｚによりコードされ
るポリペプチドに、少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたポ
リペプチドもまたさらに好ましい。

【０６２０】 ｃＤＮＡプラスミド：Ｚによりコードされるポリペプチドの完全アミノ酸配列
中の少なくとも約１０の連続したアミノ酸の配列と少なくとも９０％同一のアミ
ノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドがさらに好ましい。

【０６２１】 ｃＤＮＡプラスミド：Ｚによってコードされる上記ポリペプチド；配列番号Ｘ
またはその相補鎖によりコードされるポリペプチドおよび／または配列番号Ｙの
ポリペプチド配列の一部のアミノ酸配列中に、上記の連続するアミノ酸配列が含
まれる、ポリペプチドもまた好ましい。

【０６２２】 ｃＤＮＡプラスミド：Ｚによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列中の
少なくとも約３０の連続したアミノ酸の配列に、少なくとも９５％同一のアミノ
酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた好ましい。

【０６２３】 ｃＤＮＡプラスミド：Ｚによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列中の
少なくとも約１００の連続したアミノ酸の配列に、少なくとも９５％同一のアミ
ノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた好ましい。

【０６２４】 ｃＤＮＡプラスミド：Ｚによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列に対
して、少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドも
また好ましい。

【０６２５】 ポリペプチドに特異的に結合する単離された抗体がさらに好ましく、そのポリ
ペプチドは、以下からなる群より選択される配中の少なくとも１０の連続するア
ミノ酸の配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む：配列番号Ｙの
ポリペプチド配列；配列番号Ｘもしくはその相補鎖によりコードされるポリペプ
チドおよびｃＤＮＡプラスミド：Ｚによってコードされるポリペプチド。

【０６２６】 以下からなる群から選択される配列中の少なくとも１０の連続したアミノの配
列に少なくとも９０％同一であるアミノ配列を含むポリペプチドを、生物学的サ
ンプルにおいて検出するための方法がさらに好ましい：配列番号Ｙのポリペプチ
ド配列；配列番号Ｘまたはその相補鎖によりコードされるポリペプチドおよびｃ
ＤＮＡプラスミド：Ｚによりコードされるポリペプチド；上記の方法は、上記の
群から選択される配列と、上記のサンプル中の少なくとも１つのポリペプチド分
子のアミノ酸配列とを比較する工程、および上記サンプル中の上記ポリペプチド
分子の配列が、上記の少なくとも１０の連続したアミノ酸の配列に対して少なく
とも９０％同一であるか否かを決定する工程を包含する。

【０６２７】 上記の方法もまた好ましく、ここで上記群から選択される配列と上記サンプル
内の少なくとも一つのポリペプチド分子のアミノ酸配列を比較する工程は、以下
からなる群から選択される配列内の少なくとも１０の連続するアミノ酸の配列と
少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと特異的に結合す
る抗体に対する上記サンプル中のポリペプチドの特異的結合の程度を決定する工
程を包含する：配列番号Ｙのポリペプチド配列；配列番号Ｘまたはその相補鎖に
よりコードされるポリペプチドおよびｃＤＮＡプラスミド：Ｚによりコードされ
れるポリペプチド。

【０６２８】 上記群から選択される上記配列を有する上記サンプル内のポリペプチド分子か
ら決定されるアミノ酸配列を比較することによって、配列を比較する上記工程が
実施される、上記の方法もまた好ましい。

【０６２９】 生物学的サンプルの種、組織、または細胞型を同定するための方法もまた好ま
しく、この方法は、上記サンプル中のポリペプチド分子（もしあれば）を検出す
る工程を包含し、このサンプルは、以下からなる群から選択される配列内の少な
くとも１０の連続するアミノ酸の配列と少なくとも９０％同一アミノ酸配列を含
む；配列番号Ｙのポリペプチド配列；配列番号Ｘまたはその相補鎖によりコード
されるポリペプチドおよびｃＤＮＡプラスミド：Ｚによりコードされるポリペプ
チド。

【０６３０】 生物学的サンプルの種、組織、または細胞型を同定するための上記の方法もま
た好ましく、この方法は、少なくとも２つのアミノ酸配列のパネルにおけるアミ
ノ酸配列を含むポリペプチド分子を検出する工程を包含し、ここで、上記パネル
における少なくとも一つの配列が、上記群から選択される配列内の少なくとも１
０の連続するアミノ酸の配列と少なくとも９０％同一である。

【０６３１】 ポリペプチドをコードする、表１において同定される核酸配列の異常な構造ま
たは発現と関連する病理学的状態を被験体において診断するための方法もまた好
ましく、この方法は、少なくとも２つのアミノ酸配列のパネルにおけるアミノ酸
配列を含む上記被験体のポリペプチド分子から得られた生物学的サンプルにおい
て検出する工程を包含し、ここで、上記パネル内の少なくとも一つの配列が、以
下からなる群より選択される配列において少なくとも１０の連続したアミノ酸の
配列と少なくとも９０％同一である：配列番号Ｙのポリペプチド配列；配列番号
Ｘまたはその相補鎖によりコードされるポリペプチドおよびｃＤＮＡプラスミド
：Ｚによってコードされるポリペプチド。

【０６３２】 これらの方法のいずれかにおいて、上記ポリペプチド分子を検出する工程は、
抗体を使用する工程を包含する。

【０６３３】 ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌ
クレオチド配列を含む単離された核酸分子もまた好ましく、ここで上記ポリペプ
チドは、以下からなる群から選択される配列内の少なくとも１０の連続するアミ
ノ酸の配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む：配列番号Ｙのポ
リペプチド配列；配列番号Ｘまたはその相補鎖によりコードされるポリペプチド
およびｃＤＮＡプラスミド：Ｚによりコードされるポリペプチド。

【０６３４】 ポリペプチドをコードする上記ヌクレオチド配列が、原核生物宿主において上
記ポリペプチドの発現のために最適化された、単離された核酸分子もまた好まし
い。

【０６３５】 単離された核酸分子もまた好ましく、ここで上記ポリペプチドは、以下からな
る群から選択されるアミノ酸配列を含む：配列番号Ｙのポリペプチド配列；配列
番号Ｘまたはその相補鎖によりコードされるポリペプチドおよびｃＤＮＡプラス
ミド：Ｚによりコードされるポリペプチド。

【０６３６】 上記の単離された核酸分子のいずれかをベクター中に挿入する工程を含む、組
換えベクターの作製方法はさらに好ましい。この方法によって生成された組換え
ベクターも、好ましい。宿主細胞中にベクターを導入する工程を含む、組換え宿
主細胞を作製する方法、ならびにこの方法によって生成された組換え宿主細胞も
また、好ましい。

【０６３７】 単離されたポリペプチドを作製する方法であって、このポリペプチドが発現さ
れるような条件下でこの組換え宿主細胞を培養する工程、およびこのポリペプチ
ドを回収する工程を包含する、方法もまた、好ましい。単離されたポリペプチド
を作製するこの方法もまた好ましく、ここでこの組換え宿主細胞は真核生物細胞
であり、そしてこのポリペプチドは、以下からなる群から選択されたアミノ酸配
列を含むヒトタンパク質である：配列番号Ｙのポリペプチド配列；配列番号Ｘま
たはその相補鎖によりコードされるポリペプチドおよびｃＤＮＡプラスミドＺに
よりコードされるポリペプチド。この方法によって産生された、単離されたポリ
ペプチドもまた、好ましい。

【０６３８】 増加したレベルのタンパク質活性を必要とする個体を処置する方法もまた、好
ましい。ここで、この方法は、このような個体に、この個体においてこのタンパ
ク質の活性のレベルを増加させるのに有効な、ある量の本願発明の単離されたポ
リペプチド、ポリヌクレオチド、免疫原性フラグメントまたはそのアナログ、結
合剤、抗体あるいは抗原結合フラグメントを含む治療的組成物を投与する工程を
包含する。

【０６３９】 減少したレベルのタンパク質活性を必要とする個体を処置する方法もまた、好
ましい。ここで、この方法は、このような個体に、この個体においてこのタンパ
ク質の活性のレベルを減少させるのに有効な、ある量の本願発明の単離されたポ
リペプチド、ポリヌクレオチド、免疫原性フラグメントまたはそのアナログ、結
合剤、抗体あるいは抗原結合フラグメントを含む治療的組成物を投与する工程を
包含する。

【０６４０】 本発明の特定の実施形態において、表２の第４列に列挙される各「コンティグ
ＩＤ」について、表２の第４列に参照されかつａ−ｂの一般式（ａおよびｂは、
表２の列３に言及される、対応する配列番号Ｘについて独自に決定されるが）に
よって記載されるヌクレオチド配列を含むか、あるいはそれらからなる一つ以上
のポリヌクレオチドが好ましくは、除外される。さらなる特定の実施形態は、表
２の第４列に言及される１つ、２つ、３つ、４つ以上の特定のポリヌクレオチド
配列を除くポリヌクレオチド配列に方向付けられる。この一覧表は、決して、一
般式により除外され得る全ての配列を含むことを意味するわけでなく、それはた
だの代表的な例である。これらの到達によって利用可能な全ての参考文献は、そ
の全体において、参考として本明細書中に援用される。

【０６４１】

【表２】 概して、本発明を記載してきたが、本発明は、例示の目的のために提供され、
そして限定を意図しない、以下の実施例を参照することによってより容易に理解
される。

【０６４２】 （実施例） （実施例１：選択されたｃＤＮＡクローンの寄託されたサンプルからの単離） 引用されるＡＴＣＣ寄託物中の各ｃＤＮＡクローンは、プラスミドベクター中
に含まれる。表１は、各クローンが単離されたｃＤＮＡライブラリーを構築する
ために用いられたベクターを同定する。多くの場合において、ライブラリーを構
築するために使用されたベクターは、プラスミドが切り出されたファージベクタ
ーである。すぐ下の表は、ｃＤＮＡライブラリーを構築する際に使用される各フ
ァージベクターについて関連するプラスミドを相関づける。例えば、特定のクロ
ーンがベクター「Ｌａｍｂｄａ Ｚａｐ」中に単離されていると表１に同定され
る場合、対応する寄託クローンは、「ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ」である。

【０６４３】

【表３】 ベクターＬａｍｂｄａ Ｚａｐ（米国特許第５，１２８，２５６号および同第
５，２８６，６３６号）、Ｕｎｉ−Ｚａｐ ＸＲ（米国特許第５，１２８，２５
６号および同第５，２８６，６３６号）、Ｚａｐ Ｅｘｐｒｅｓｓ（米国特許第
５，１２８，２５６号および同第５，２８６，６３６号）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉ
ｐｔ（ｐＢＳ）（Ｓｈｏｒｔら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１６：
７５８３−７６００（１９８８）；Ａｌｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓら、Ｎｕｃｌｅｉｃ
Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １７：９４９４（１９８９））ならびにｐＢＫ（Ａｌ
ｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓら、Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ５：５８−６１（１９９２））
は、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．、１１
０１１ Ｎ．Ｔｏｒｒｅｙ Ｐｉｎｅｓ Ｒｏａｄ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ，
９２０３７から市販されている。ｐＢＳは、アンピシリン耐性遺伝子を含み、そ
してｐＢＫはネオマイシン耐性遺伝子を含む。両方とも、Ｅ．ｃｏｌｉ株ＸＬ−
１ Ｂｌｕｅ（これもまた、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能である）に形質
転換され得る。ｐＢＳは、ＳＫ＋、ＳＫ−、ＫＳ＋およびＫＳの４形態で入荷す
る。ＳおよびＫとは、ポリリンカー領域（「Ｓ」とはＳａｃＩであり、そして「
Ｋ」とは、ＫｐｎＩのことであり、これらは、リンカーのそれぞれの各末端での
最初の部位である）に隣接するＴ７プライマー配列およびＴ３プライマー配列に
対するポリリンカーの配向をいう。「＋」または「−」とは 、ある方向におい
てｆ１ ｏｒｉから開始される一本鎖レスキューがセンス鎖ＤＮＡを生成し、そ
して他方においてアンチセンスであるようなｆ１複製起点（「ｏｒｉ」）の配向
をいう。

【０６４４】 ベクターｐＳｐｏｒｔ１、ｐＣＭＶＳｐｏｒｔ ２．０およびｐＣＭＶＳｐｏ
ｒｔ３．０をＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ
６００９、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ ２０８９７から入手した。全ての
Ｓｐｏｒｔベクターはアンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏｌｉ株Ｄ
Ｈ１０Ｂ（これもまた、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能であ
る）に形質転換され得る。（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ，Ｃ．Ｅ．ら、Ｆｏｃｕｓ
１５：５９（１９９３）を参照のこと）。ベクターｌａｆｍｉｄ ＢＡ（Ｂｅｎ
ｔｏ Ｓｏａｒｅｓ、Ｃｏｌｕｍｂｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、ＮＹ）は、ア
ンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏｌｉ株ＸＬ−１ Ｂｌｕｅに形質
転換され得る。ベクターｐＣＲ（登録商標）２．１（これはＩｎｖｉｔｒｏｇｅ
ｎ、１６００ Ｆａｒａｄａｙ Ａｖｅｎｕｅ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ ９２
００８から入手可能である）は、アンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃ
ｏｌｉ株ＤＨ１０Ｂ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能である
）に形質転換され得る（例えば、Ｃｌａｒｋ、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１
６：９６７７−９６８６（１９８８）およびＭｅａｄら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ ９：（１９９１）を参照のこと）。好ましくは、本発明のポリヌクレ
オチドは、表１における特定のクローンについて同定されたファージベクター配
列、ならびに上記に示された対応するプラスミドベクター配列を含まない。

【０６４５】 表１に引用される、任意の所定のｃＤＮＡクローンについてＡＴＣＣ受託番号
を与えられたサンプルにおける寄託された物質はまた、１つ以上のさらなるプラ
スミド（これは各々、その所定のクローンとは異なるｃＤＮＡクローンを含む）
を含み得る。従って、同じＡＴＣＣ受託番号を共有する寄託物は、表１に同定さ
れる各ｃＤＮＡクローンのためのプラスミドを少なくとも含む。代表的には、表
１に引用される各ＡＴＣＣ寄託物のサンプルは、ほぼ等量（重量で）の約５０個
のプラスミドＤＮＡ（これは各々、異なるｃＤＮＡクローンを含む）の混合物を
含む；しかし、このような寄託サンプルは、５０個よりも多いかまたは少ないｃ
ＤＮＡクローン（約５００個までのｃＤＮＡクローン）のためのプラスミドを含
み得る。

【０６４６】 表１における特定のクローンについて引用されるプラスミドＤＮＡの寄託サン
プルからそのクローンを単離するために２つのアプローチが使用され得る。第一
に、プラスミドを、配列番号Ｘに対応するポリヌクレオチドプローブを使用して
、クローンをスクリーニングすることによって直接単離する。

【０６４７】 特に、３０〜４０ヌクレオチドを有する特定のポリヌクレオチドを、報告され
ている配列に従って、Ａｐｐｌｉｅｄ ＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓのＤＮＡ合成装置
を使用して合成する。オリゴヌクレオチドを、例えば、³²Ｐ−γ−ＡＴＰで、Ｔ
４ポリヌクレオチドキナーゼを用いて標識し、そして慣用的な方法に従って精製
する。（例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：
Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ
ｏｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ、ＮＹ（１９８２））。プラスミド
混合物を、当業者に公知の技術（例えば、ベクター供給者によって提供される技
術または上記で引用された関連の刊行物もしくは特許において提供される技術）
を用いて、上記のような適切な宿主（例えば、ＸＬ−１ Ｂｌｕｅ（Ｓｔｒａｔ
ａｇｅｎｅ））に形質転換する。形質転換体を１．５％寒天プレート（適切な選
択薬剤、例えば、アンピシリンを含む）に、１プレートあたり約１５０の形質転
換体（コロニー）の密度でプレーティングする。これらのプレートを、細菌コロ
ニースクリーニングについての慣用的な方法（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ
、第２版、（１９８９）、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１．９３〜１．１０４頁）または当業者に公知の他の
技術に従って、ナイロンメンブレンを使用してスクリーニングする。

【０６４８】 あるいは、配列番号Ｘの両端（すなわち、表１に規定されるクローンの５’Ｎ
Ｔおよび３’ＮＴによって囲まれる配列番号Ｘの領域内）に由来する、１７〜２
０ヌクレオチドの２つのプライマーを合成し、そしてこれらを使用して、寄託さ
れたｃＤＮＡプラスミドをテンプレートとして使用して、所望のｃＤＮＡを増幅
する。ポリメラーゼ連鎖反応を、慣用的な条件下で、例えば、０．５μｇの上記
ｃＤＮＡテンプレートとの反応混合物の２５μｌ中で実施する。便利な反応混合
物は、１．５〜５ｍＭ ＭｇＣｌ₂、０．０１％（ｗ／ｖ）ゼラチン、それぞれ
２０μＭのｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ、２５ｐｍｏｌの各プライ
マーおよび０．２５ユニットのＴａｑポリメラーゼである。３５サイクルのＰＣ
Ｒ（９４℃での変性を１分間；５５℃でのアニールを１分間；７２℃での伸長を
１分間）を、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｃｅｔｕｓ自動化サーマルサイクラー
を用いて実施する。増幅産物をアガロースゲル電気泳動により分析し、そして予
想される分子量を有するＤＮＡバンドを切り出し、そして精製する。ＰＣＲ産物
を、ＤＮＡ産物をサブクローニングおよび配列決定することによって、選択され
た配列であることを確認する。

【０６４９】 寄託されたクローンに存在しないかもしれない遺伝子の５’非コード部分また
は３’非コード部分の同定のために、いくつかの方法が利用可能である。これら
の方法は、以下を含むが、これらに限定されない：フィルタープローブ探索、特
異的プローブを使用するクローン富化、および当該分野で周知である５’ 「Ｒ
ＡＣＥ」プロトコルおよび３’「ＲＡＣＥ」プロトコルと類似するかまたは同一
のプロトコル。例えば、５’ＲＡＣＥに類似する方法は、所望の全長転写物の欠
けている５’末端を生成するために利用可能である（Ｆｒｏｍｏｎｔ−Ｒａｃｉ
ｎｅら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２１（７）：１６８３−１６８
４（１９９３））。

【０６５０】 簡潔には、特定のＲＮＡオリゴヌクレオチドを、全長遺伝子ＲＮＡ転写物をお
そらく含むＲＮＡの集団の５’末端に連結する。連結されたＲＮＡオリゴヌクレ
オチドに特異的なプライマーおよび目的の遺伝子の公知の配列に特異的なプライ
マーを含むプライマーセットを使用して、所望の全長遺伝子の５’部分をＰＣＲ
増幅する。次いで、この増幅した産物を配列決定し得、そしてこれを使用して全
長遺伝子を生成し得る。

【０６５１】 この上記の方法は、所望の供給源から単離された総ＲＮＡを用いて開始するが
、ポリＡ＋ＲＮＡをも使用し得る。次いで、ＲＮＡ調製物を、必要ならばホスフ
ァターゼで処理して、後のＲＮＡリガーゼ工程を妨害し得る分解ＲＮＡまたは損
傷ＲＮＡの５’リン酸基を排除し得る。次いで、このホスファターゼを不活化す
るべきであり、そしてＲＮＡをメッセンジャーＲＮＡの５’末端に存在するキャ
ップ構造を除去するために、タバコ酸性ピロホスファターゼを用いて処理するべ
きである。次いで、この反応は、Ｔ４ ＲＮＡリガーゼを用いてＲＮＡオリゴヌ
クレオチドに連結され得る、キャップ切断ＲＮＡの５’末端に５’リン酸基を残
す。

【０６５２】 この改変型ＲＮＡ調製物を、遺伝子特異的なオリゴヌクレオチドを用いる、第
一鎖ｃＤＮＡ合成のためのテンプレートとして使用する。第一鎖合成反応物を、
連結されたＲＮＡオリゴヌクレオチドに特異的なプライマーおよび目的の遺伝子
の公知の配列に特異的なプライマーを用いる、所望の５’末端のＰＣＲ増幅のた
めのテンプレートとして使用する。次いで、得られた生成物を配列決定し、そし
て分析して、５’末端配列が所望の遺伝子に属することを確認する。

【０６５３】 （実施例２：ポリヌクレオチドに対応するゲノムクローンの単離） ヒトゲノムＰ１ライブラリー（Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ．）
を、実施例１に記載される方法に従って、配列番号Ｘに対応するｃＤＮＡ配列に
ついて選択されたプライマーを用いるＰＣＲによってスクリーニングする（Ｓａ
ｍｂｒｏｏｋもまた参照のこと）。

【０６５４】 （実施例３：ポリペプチドの組織分布） 本発明のポリヌクレオチドのｍＲＮＡ発現の組織分布を、とりわけ、Ｓａｍｂ
ｒｏｏｋらによって記載されるノーザンブロット分析についてのプロトコルを用
いて決定する。例えば、実施例１に記載される方法によって生成されるｃＤＮＡ
プローブを、ｒｅｄｉｐｒｉｍｅ^TM ＤＮＡ ｌａｂｅｌｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ
（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて、製造者の指示に従
って、Ｐ³²で標識する。標識後、プローブを、ＣＨＲＯＭＡ ＳＰＩＮ−１００ ^TM カラム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．）を使用し
て、製造者のプロトコル番号ＰＴ１２００−１に従って精製する。次いで、精製
した標識プローブを使用して、種々のヒト組織をｍＲＮＡ発現について試験する
。

【０６５５】 種々のヒト組織（Ｈ）またはヒト免疫系組織（ＩＭ）を含む多重組織ノーザン
（ＭＴＮ）ブロット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を、ＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂ^TMハイブリ
ダイゼーション溶液（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用いて、製造者のプロトコル番号Ｐ
Ｔ１１９０−１に従って、標識プローブで試験する。ハイブリダイゼーションお
よび洗浄後、ブロットをマウントして、そして−７０℃で一晩フィルムに露出し
、そしてフィルムを標準的な手順に従って現像する。

【０６５６】 （実施例４：ポリヌクレオチドの染色体マッピング） オリゴヌクレオチドプライマーのセットを、配列番号Ｘの５’末端の配列に従
って設計する。このプライマーは、好ましくは約１００ヌクレオチドにわたる。
次いで、このプライマーセットを、以下のセットの条件下でポリメラーゼ連鎖反
応に使用する：９５℃で３０秒；５６℃で１分；７０℃で１分。このサイクルを
３２回反復し、次いで１回、７０℃で５分間のサイクルを行う。個々の染色体ま
たは染色体フラグメントを含む体細胞ハイブリッドパネル（Ｂｉｏｓ，Ｉｎｃ）
に加えて、ヒト、マウス、およびハムスターのＤＮＡを鋳型として使用する。反
応物を、８％ポリアクリルアミドゲルまたは３．５％アガロースゲルのいずれか
で分析する。染色体マッピングを、特定の体細胞ハイブリッドにおける約１００
ｂｐのＰＣＲフラグメントの存在によって決定する。

【０６５７】 （実施例５：ポリペプチドの細菌性発現） 本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを、実施例１に概説する
ように、ＤＮＡ配列の５’および３’末端に対応するＰＣＲオリゴヌクレオチド
プライマーを使用して増幅して、挿入フラグメントを合成する。ｃＤＮＡ挿入物
を増幅するために使用されるプライマーは、発現ベクターに増幅産物をクローニ
ングするために、必要ならば、制限部位（例えば、ＢａｍＨＩおよびＸｂａＩ）
ならびに開始コドン／終止コドンを好ましくは含むべきである。例えば、Ｂａｍ
ＨＩおよびＸｂａＩは、細菌性発現ベクターｐＱＥ−９（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ
．，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ）の制限酵素部位に対応する。このプラスミド
ベクターは、抗生物質耐性（Ａｍｐ^r）、細菌の複製起点（ｏｒｉ）、ＩＰＴＧ
で調節可能なプロモーター／オペレーター（Ｐ／Ｏ）、リボソーム結合部位（Ｒ
ＢＳ）、６−ヒスチジンタグ（６−Ｈｉｓ）、および制限酵素クローニング部位
をコードする。

【０６５８】 ｐＱＥ−９ベクターをＢａｍＨＩおよびＸｂａＩで消化し、そして、増幅され
たフラグメントを細菌性ＲＢＳにおいて開始されるリーディングフレームを維持
しながらｐＱＥ−９ベクターに連結する。次いで、連結混合物を、ｌａｃＩリプ
レッサーを発現し、またカナマイシン耐性（Ｋａｎ^r）を与えるプラスミドｐＲ
ＥＰ４の多重コピーを含む、Ｅ．ｃｏｌｉ株Ｍ１５／ｒｅｐ４（Ｑｉａｇｅｎ，
Ｉｎｃ．）を形質転換するために使用する。形質転換体を、ＬＢプレート上で生
育するそれらの能力によって同定し、そしてアンピシリン／カナマイシン耐性コ
ロニーを選択する。プラスミドＤＮＡを単離し、そして制限分析によって確認す
る。

【０６５９】 所望の構築物を含むクローンを、Ａｍｐ（１００ｕｇ（μｇ）／ｍｌ）および
Ｋａｎ（２５ｕｇ／ｍｌ）の両方を補充したＬＢ培地における液体培養で一晩（
Ｏ／Ｎ）増殖させる。Ｏ／Ｎ培養物を、１：１００〜１：２５０の比で大量培養
物に接種するために使用する。細胞を、０．４と０．６との間の吸光度６００（
Ｏ．Ｄ．⁶⁰⁰）まで増殖させる。次いで、ＩＰＴＧ（イソプロピル−Ｂ−Ｄ−チ
オガラクトピラノシド）を最終濃度１ｍＭになるように加える。ＩＰＴＧは、ｌ
ａｃＩリプレッサーの不活化により誘導され、Ｐ／Ｏの障害物を除去し、遺伝子
発現の増加を導く。

【０６６０】 細胞を、さらに３〜４時間増殖させる。次いで、細胞を遠心分離（６０００×
ｇで２０分間）によって収集する。細胞ペレットを、カオトロピック剤である６
Ｍ グアニジンＨＣｌ中に、４℃で３〜４時間攪拌することによって可溶化させ
る。細胞細片を遠心分離によって取り除き、そしてポリペプチドを含む上清を、
ニッケル−ニトリロ三酢酸（「Ｎｉ−ＮＴＡ」）アフィニティー樹脂カラム（Ｑ
ＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．前出より入手可能）にロードする。６×Ｈｉｓタグを有す
るタンパク質は、Ｎｉ−ＮＴＡ樹脂に高い親和性で結合し、そして単純な１工程
手順で精製され得る（詳細には、Ｔｈｅ ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｓｔ（
１９９５）ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，前出を参照のこと）。

【０６６１】 手短に言えば、上清を、６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ８のカラムにロードし
、そのカラムを、最初に１０容量の６Ｍ グアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ８で洗浄し
、次いで１０容量の６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ６で洗浄し、最後にポリペプ
チドを、６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ５で溶出する。

【０６６２】 次いで、精製したタンパク質を、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）または５
０ｍＭ 酢酸ナトリウム、ｐＨ６の緩衝液および２００ｍＭ ＮａＣｌに対して
透析することにより再生させる。あるいは、タンパク質はＮｉ−ＮＴＡカラムに
固定化している間に、首尾よく再折畳みされ得る。推奨条件は以下の通りである
：プロテアーゼインヒビターを含む、５００ｍＭ ＮａＣｌ、２０％グリセロー
ル、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ｐＨ７．４中の６Ｍ〜１Ｍ尿素の直線勾配を
使用する再生。再生は１．５時間以上の時間をかけて行うべきである。再生後、
タンパク質を２５０ｍＭイミダゾールの添加によって溶出させる。イミダゾール
を、ＰＢＳまたは５０ｍＭ酢酸ナトリウム ｐＨ６の緩衝液および２００ｍＭ
ＮａＣｌに対する最終の透析工程によって除去する。精製したタンパク質を、４
℃で保存するか、または−８０℃で冷凍する。

【０６６３】 上記の発現ベクターに加えて、本発明はさらに、本発明のポリヌクレオチドに
作動可能に連結されたファージのオペレーターエレメントおよびプロモーターエ
レメントを含み、ｐＨＥ４ａと呼ばれる発現ベクターを含む（ＡＴＣＣ受託番号
２０９６４５、１９９８年２月２５日に寄託）。このベクターは以下を含む：１
）選択マーカーとしてのネオマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子、２）Ｅ
．ｃｏｌｉ複製起点、３）Ｔ５ファージプロモーター配列、４）２つのｌａｃオ
ペレーター配列、５）シャイン−ダルガーノ配列、および６）ラクトースオペロ
ンリプレッサー遺伝子（ｌａｑＩｑ）。複製起点（ｏｒｉＣ）は、ｐＵＣ１９（
ＬＴＩ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）に由来する。プロモーター配列およ
びオペレーター配列を合成的に作製する。

【０６６４】 ＮｄｅＩおよびＸｂａＩ、ＢａｍＨＩ、ＸｈｏＩ、またはＡｓｐ７１８によっ
てベクターを制限処理し、制限生成物をゲルで泳動し、そしてより大きな方のフ
ラグメント（スタッファー（ｓｔｕｆｆｅｒ）フラグメントは約３１０塩基対で
あるべきである）を単離することによって、ＤＮＡをｐＨＥａに挿入し得る。Ｄ
ＮＡ挿入物を、ＮｄｅＩ（５’プライマー）およびＸｂａＩ、ＢａｍＨＩ、Ｘｈ
ｏＩ、またはＡｓｐ７１８（３’プライマー）に対する制限部位を有するＰＣＲ
プライマーを使用して、実施例１に記載のＰＣＲプロトコルに従って生成する。
ＰＣＲ挿入物を、ゲル精製し、そして適合する酵素で制限処理する。挿入物およ
びベクターを標準的なプロトコルに従って連結する。

【０６６５】 操作されたベクターは、上記のプロトコルにおいて、細菌系でタンパク質を発
現させるために容易に置換され得る。

【０６６６】 （実施例６：封入体からのポリペプチドの精製） 以下の別の方法は、ポリペプチドが封入体の形態で存在する場合に、Ｅ．ｃｏ
ｌｉ中で発現されたポリペプチドを精製するために使用され得る。他に指定され
ない場合には、以下のすべての工程は４〜１０℃で行われる。

【０６６７】 Ｅ．ｃｏｌｉ発酵の生産期の完了後、細胞培養物を４〜１０℃に冷却し、そし
て１５，０００ｒｐｍの連続遠心分離（Ｈｅｒａｅｕｓ Ｓｅｐａｔｅｃｈ）に
よって細胞を採集する。細胞ペーストの単位重量あたりのタンパク質の予想され
る収量および必要とされる精製タンパク質の量に基づいて、細胞ペーストの適切
な量（重量による）を、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ、５０ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．
４を含む緩衝溶液に懸濁させる。細胞を、高剪断ミキサーを使用して均質な懸濁
液に分散させる。

【０６６８】 次いで、細胞をマイクロフルイダイザー（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）（
Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ，Ｃｏｒｐ．またはＡＰＶ Ｇａｕｌｉｎ，Ｉｎｃ
．）に２回、４０００〜６０００ｐｓｉで溶液を通すことによって溶解させる。
次いでホモジネートを、最終濃度０．５Ｍ ＮａＣｌになるようにＮａＣｌ溶液
と混合し、続いて７０００×ｇで１５分間遠心分離を行う。得られたペレットを
、０．５Ｍ ＮａＣｌ、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ、５０ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．
４を使用して再度洗浄する。

【０６６９】 得られた洗浄した封入体を、１．５Ｍ 塩酸グアニジン（ＧｕＨＣｌ）で２〜
４時間可溶化する。７０００×ｇで１５分間の遠心分離の後、ペレットを廃棄し
、そしてポリペプチドを含む上清を４℃で一晩インキュベートしてさらなるＧｕ
ＨＣｌ抽出を可能にする。

【０６７０】 不溶性粒子を除去するための高速遠心分離（３０，０００×ｇ）に続き、Ｇｕ
ＨＣｌ可溶化タンパク質を、ＧｕＨＣｌ抽出物と、５０ｍＭ ナトリウム、ｐＨ
４．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０容量の緩衝液とを
、激しい攪拌で迅速に混合することによって、再折畳みさせる。再折畳みした希
釈タンパク質溶液を、さらなる精製工程の前の１２時間、混合しないで４℃で保
つ。

【０６７１】 再折畳みされたポリペプチド溶液を清澄にするために、４０ｍＭ酢酸ナトリウ
ム、ｐＨ６．０で平衡化した、適切な表面積を有する０．１６μｍメンブレンフ
ィルターを備えるあらかじめ準備した接線濾過ユニット（例えば、Ｆｉｌｔｒｏ
ｎ）を使用する。濾過したサンプルを、カチオン交換樹脂（例えば、Ｐｏｒｏｓ
ＨＳ−５０，Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）上にロードする
。このカラムを４０ｍＭ 酢酸ナトリウム、ｐＨ６．０で洗浄し、そして同じ緩
衝液中の２５０ｍＭ、５００ｍＭ、１０００ｍＭ、および１５００ｍＭ ＮａＣ
ｌで、段階的な様式で溶出する。溶出液の２８０ｎｍにおける吸収を連続的にモ
ニターする。画分を収集し、そしてＳＤＳ−ＰＡＧＥによってさらに分析する。

【０６７２】 次いでポリペプチドを含む画分をプールし、そして４容量の水と混合する。次
いで希釈されたサンプルを、あらかじめ準備した強アニオン（Ｐｏｒｏｓ ＨＱ
−５０，Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）交換樹脂および弱アニ
オン（Ｐｏｒｏｓ ＣＭ−２０，Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ
）交換樹脂の直列カラムのセットにロードする。カラムを４０ｍＭ 酢酸ナトリ
ウム、ｐＨ６．０で平衡化する。両方のカラムを、４０ｍＭ 酢酸ナトリウム、
ｐＨ６．０、２００ｍＭ ＮａＣｌで洗浄する。次いでＣＭ−２０カラムを１０
カラム容量の直線勾配（０．２Ｍ ＮａＣｌ、５０ｍＭ 酢酸ナトリウム、ｐＨ
６．０から１．０Ｍ ＮａＣｌ、５０ｍＭ 酢酸ナトリウム、ｐＨ６．５の範囲
）を用いて溶出させる。画分を、溶出液の定常Ａ₂₈₀モニタリング下で収集する
。次いで、（例えば、１６％ ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって判明した）ポリペプチ
ドを含む画分をプールする。

【０６７３】 得られたポリペプチドは、上記の再折畳みおよび精製工程の後で９５％より高
い純度を示すはずである。５μｇの精製タンパク質がロードされる場合、いかな
る主たる混在バンドも、クマシーブルー染色した１６％ ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル
から観察されないはずである。精製タンパク質はまた、エンドトキシン／ＬＰＳ
混在について試験され得、そして代表的には、ＬＰＳ含量はＬＡＬアッセイに従
って、０．１ｎｇ／ｍｌ未満である。

【０６７４】 （実施例７：バキュロウイルス発現系におけるポリペプチドのクローニングお
よび発現） この実施例では、ポリペプチドを発現するために、プラスミドシャトルベクタ
ーｐＡ２を使用してポリヌクレオチドをバキュロウイルスに挿入する。この発現
ベクターは、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイル
ス（ＡｃＭＮＰＶ）の強力なポリヘドリンプロモーター、続いてＢａｍＨＩ、Ｘ
ｂａＩ、およびＡｓｐ７１８のような便利な制限部位を含む。シミアンウイルス
４０（「ＳＶ４０」）のポリアデニル化部位を、効率的なポリアデニル化のため
に使用する。組換えウイルスの容易な選択のために、プラスミドは、同方向にあ
る弱いＤｒｏｓｏｐｈｉｌａプロモーターの制御下でＥ．ｃｏｌｉ由来のβ−ガ
ラクトシダーゼ遺伝子、続いてポリヘドリン遺伝子のポリアデニル化シグナルを
含む。挿入された遺伝子は、両方の側で、クローン化したポリヌクレオチドを発
現する生存可能なウイルスを生成するために、野生型ウイルスＤＮＡとの細胞媒
介性の相同組換えのためのウイルス配列と隣接する。

【０６７５】 他の多くのバキュロウイルスベクター（例えば、ｐＡｃ３７３、ｐＶＬ９４１
、およびｐＡｃＩＭ１）は、当業者が容易に理解するように、その構築物が転写
、翻訳、分泌などのために適切に配置されたシグナル（必要とされる場合、シグ
ナルペプチドおよびインフレームなＡＵＧを含む）を提供する限りにおいて、上
記のベクターの代わりに使用され得る。このようなベクターは、例えば、Ｌｕｃ
ｋｏｗら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７０：３１−３９（１９８９）に記載される。

【０６７６】 具体的には、寄託されたクローンに含まれるｃＤＮＡ配列を、適切な制限部位
および開始コドン／終止コドンを有するプライマーを使用して、実施例１に記載
されるＰＣＲプロトコルを使用して増幅させる。天然に存在するシグナル配列を
使用して分泌タンパク質を産生する場合、ｐＡ２ベクターは第２のシグナルペプ
チドを必要としない。あるいは、ベクターは、Ｓｕｍｍｅｒｓら（「Ａ Ｍａｎ
ｕａｌ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ Ｖｅｃｔｏ
ｒｓ ａｎｄ Ｉｎｓｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ
ｓ」、Ｔｅｘａｓ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｓ
ｔａｔｉｏｎ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ Ｎｏ：１５５５（１９８７））に記載される
標準的な方法を用いて改変され、バキュロウイルスリーダー配列を含むように改
変され得る（ｐＡ２ ＧＰ）。

【０６７７】 増幅されたフラグメントを、市販のキット（「Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」，ＢＩＯ
１０１ Ｉｎｃ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａ）を使用して、１％アガロースゲ
ルから単離する。次いでフラグメントを適切な制限酵素で消化し、そして再び１
％アガロースゲルで精製する。

【０６７８】 プラスミドを対応する制限酵素で消化し、そして必要に応じて、当該分野で公
知の慣用的な手順を用いて、仔ウシ腸ホスファターゼを用いて脱リン酸化し得る
。次いでＤＮＡを、市販のキット（「Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」ＢＩＯ １０１ Ｉ
ｎｃ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａ）を使用して、１％アガロースゲルから単離す
る。

【０６７９】 フラグメントおよび脱リン酸化したプラスミドを、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼを用
いて互いに連結する。Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１またはＸＬ−１ Ｂｌｕｅ（Ｓ
ｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃ
ａ）細胞のような他の適切なＥ．ｃｏｌｉ宿主を、連結混合液で形質転換し、そ
して培養プレート上に拡げる。プラスミドを含む細菌を、個々のコロニー由来の
ＤＮＡを消化し、そして消化産物をゲル電気泳動によって分析することにより同
定する。クローニングしたフラグメントの配列をＤＮＡ配列決定によって確認す
る。

【０６８０】 このポリヌクレオチドを含む５μｇのプラスミドを、Ｆｅｌｇｎｅｒら、Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：７４１３−７４１７（１９
８７）によって記載されたリポフェクション法を使用して、１．０μｇの市販の
線状化バキュロウイルスＤＮＡ（「ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄ^TM ｂａｃｕｌｏｖｉ
ｒｕｓ ＤＮＡ」，Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）ととも
に同時トランスフェクトする。１μｇのＢａｃｕｌｏＧｏｌｄ^TMウイルスＤＮＡ
および５μｇのプラスミドを、５０μｌの無血清グレース培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を含む、
マイクロタイタープレートの滅菌したウェル中で混合する。その後、１０μｌの
リポフェクチンおよび９０μｌグレース培地を加え、混合し、そして室温で１５
分間インキュベートする。次いで、トランスフェクション混合液を、無血清グレ
ース培地１ｍｌを加えた３５ｍｍ組織培養プレートに播種したＳｆ９昆虫細胞（
ＡＴＣＣ ＣＲＬ １７１１）に滴下して加える。次いでプレートを２７℃で５
時間インキュベートする。次いで、トランスフェクション溶液をプレートから除
去し、そして１０％ウシ胎仔血清を補充した１ｍｌのグレース昆虫培地を添加す
る。次いで培養を２７℃で４日間継続する。

【０６８１】 ４日後上清を収集し、そしてＳｕｍｍｅｒｓおよびＳｍｉｔｈ、前出によって
記載されたようにプラークアッセイを行う。「Ｂｌｕｅ Ｇａｌ」（Ｌｉｆｅ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ）を含むアガ
ロースゲルを、ｇａｌが発現しているクローン（青色に着色したプラークを生ず
る）の容易な同定および単離を可能にするために使用する。（この型の「プラー
クアッセイ」の詳細な説明はまた、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎ
ｃ．， Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇによって配布される、昆虫細胞培養およびバ
キュロウイルス学のための使用者ガイドの中の９−１０頁に見出され得る）。適
切なインキュベーションの後、青色に着色したプラークをマイクロピペッター（
例えば、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）のチップで拾う。次いで、組換えウイルスを含む
寒天を、２００μｌのグレース培地を含む微小遠心分離チューブ中で再懸濁させ
、そして組換えバキュロウイルスを含む懸濁液を、３５ｍｍディッシュに播種し
たＳｆ９細胞に感染させるために使用する。４日後、これらの培養ディッシュの
上清を採集し、次いで４℃に貯蔵する。

【０６８２】 ポリペプチドの発現を確認するために、１０％熱非働化ＦＢＳを補充したグレ
ース培地中でＳｆ９細胞を増殖させる。細胞を、約２の感染多重度（「ＭＯＩ」
）で、ポリヌクレオチドを含む組換えバキュロウイルスで感染させる。放射性標
識したタンパク質を所望する場合には、６時間後に培地を除去し、そしてメチオ
ニンおよびシステインを含まないＳＦ９００ ＩＩ培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎ
ｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤから入手可能）に置き換
える。４２時間後、５μＣｉの³⁵Ｓ−メチオニンおよび５μＣｉの³⁵Ｓ−システ
イン（Ａｍｅｒｓｈａｍから入手可能）を添加する。細胞をさらに１６時間イン
キュベートし、次いで遠心分離によって採集する。上清中のタンパク質および細
胞内タンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、次いで（放射性標識した場合）オートラ
ジオグラフィーによって分析する。

【０６８３】 精製タンパク質のアミノ末端のアミノ酸配列の微量配列決定法を使用して、産
生されたタンパク質のアミノ末端配列を決定し得る。

【０６８４】 （実施例８：哺乳動物細胞におけるポリペプチドの発現） 本発明のポリペプチドを、哺乳動物細胞中で発現させ得る。代表的な哺乳動物
発現ベクターとしては、ｍＲＮＡの転写の開始を媒介するプロモーターエレメン
ト、タンパク質コード配列、および転写の終結および転写物のポリアデニル化に
必要なシグナルが挙げられる。さらなるエレメントとしては、エンハンサー、コ
ザック配列、ならびにＲＮＡスプライシングのドナー部位およびアクセプター部
位に隣接する介在配列が挙げられる。非常に効率的な転写は、ＳＶ４０由来の初
期プロモーターおよび後期プロモーター、レトロウイルス（例えばＲＳＶ、ＨＴ
ＬＶＩ、ＨＩＶＩ）由来の長末端反復（ＬＴＲ）、およびサイトメガロウイルス
（ＣＭＶ）の初期プロモーターを用いて達成される。しかし、細胞エレメント（
例えば、ヒトアクチンプロモーター）もまた、使用され得る。

【０６８５】 本発明を実施する際の使用に適切な発現ベクターとしては、例えば、ｐＳＶＬ
およびｐＭＳＧ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）、ｐＲ
ＳＶｃａｔ（ＡＴＣＣ ３７１５２）、ｐＳＶ２ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ ３７１４
６）、ｐＢＣ１２ＭＩ（ＡＴＣＣ ６７１０９）、ｐＣＭＶＳｐｏｒｔ２．０、
ならびにｐＣＭＶＳｐｏｒｔ３．０のようなベクターが挙げられる。使用され得
る哺乳動物宿主細胞としては、ヒトＨｅｌａ細胞、２９３細胞、Ｈ９細胞および
Ｊｕｒｋａｔ細胞、マウスＮＩＨ３Ｔ３細胞およびＣ１２７細胞、Ｃｏｓ１細胞
、Ｃｏｓ７細胞およびＣＶ１細胞、ウズラＱＣ１−３細胞、マウスＬ細胞、なら
びにチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞が挙げられる。

【０６８６】 あるいは、ポリペプチドは、染色体に組み込まれたポリヌクレオチドを含む、
安定な細胞株中で発現され得る。ｄｈｆｒ、ｇｐｔ、ネオマイシン、ハイグロマ
イシンのような選択可能なマーカーを用いる同時トランスフェクションは、トラ
ンスフェクトされた細胞の同定および単離を可能にする。

【０６８７】 トランスフェクトされた遺伝子はまた、大量のコードされたタンパク質を発現
するために増幅され得る。ＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸還元酵素）マーカーは、目的
の遺伝子の数百または数千さえものコピーを有する細胞株の開発に有用である。
（例えば、Ａｌｔら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５３：１３５７−１３７０（
１９７８）；Ｈａｍｌｉｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔ
ａ、１０９７：１０７−１４３（１９９０）：Ｐａｇｅら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ ９：６４−６８（１９９１）を参照のこと）。別の有用な選択マーカ
ーは、酵素グルタミンシンターゼ（ＧＳ）である（Ｍｕｒｐｈｙら、Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ Ｊ．２２７：２７７−２７９（１９９１）；Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎら、Ｂ
ｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６９−１７５（１９９２））。これらの
マーカーを使用して、哺乳動物細胞を選択培地中で増殖させ、そして最も高い耐
性を有する細胞を選択する。これらの細胞株は、染色体に組み込まれた、増幅さ
れた遺伝子を含む。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞およびＮＳＯ細
胞は、タンパク質の産生のためにしばしば使用される。

【０６８８】 プラスミドｐＳＶ２−ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ受託番号３７１４６）の誘導体であ
る、発現ベクターｐＣ４（ＡＴＣＣ受託番号２０９６４６）およびｐＣ６（ＡＴ
ＣＣ受託番号２０９６４７）は、ラウス肉腫ウイルス（Ｃｕｌｌｅｎら、Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４３８−４４７（
１９８５年３月））の強力なプロモーター（ＬＴＲ）、およびＣＭＶエンハンサ
ー（Ｂｏｓｈａｒｔら、Ｃｅｌｌ ４１：５２１−５３０（１９８５））のフラ
グメントを含む。例えば、ＢａｍＨＩ、ＸｂａＩ、およびＡｓｐ７１８の制限酵
素切断部位を有する多重クローニング部位は、目的の遺伝子のクローニングを容
易にする。ベクターはまた、ラットプレプロインスリン遺伝子の３’イントロン
、ポリアデニル化および終結シグナル、ならびに、ＳＶ４０初期プロモーターの
制御下にあるマウスＤＨＦＲ遺伝子を含む。

【０６８９】 具体的には、例えば、プラスミドｐＣ６を、適切な制限酵素によって消化し、
次いで当該分野で公知の手順によって、仔ウシ腸ホスファターゼ（ｐｈｏｓｐｈ
ａｔｅ）を使用して脱リン酸化する。次いで、このベクターを１％アガロースゲ
ルから単離する。

【０６９０】 本発明のポリヌクレオチドを、実施例１に概説するプロトコルに従い、必要な
らば、適切な制限部位および開始コドン／終止コドンを有するプライマーを使用
して増幅する。分泌のために必要な場合には、このベクターは異種シグナル配列
を含むように改変され得る（例えば、ＷＯ９６／３４８９１を参照のこと）。

【０６９１】 増幅フラグメントを、市販のキット（「Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」、ＢＩＯ １０
１ Ｉｎｃ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａ．）を使用して１％アガロースゲルから
単離する。次いで、フラグメントを、適切な制限酵素で消化し、そして再び１％
アガロースゲル上で精製する。

【０６９２】 次いで、増幅フラグメントを同じ制限酵素で消化し、そして１％アガロースゲ
ルで精製する。次いで、単離されたフラグメントおよび脱リン酸化したベクター
を、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼで連結する。次いで、Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１また
はＸＬ−１ Ｂｌｕｅ細胞を形質転換し、そしてプラスミドｐＣ６に挿入された
フラグメントを含む細菌を、例えば、制限酵素分析を用いて同定する。

【０６９３】 活性なＤＨＦＲ遺伝子を欠損するチャイニーズハムスター卵巣細胞を、トラン
スフェクションに使用する。５μｇの発現プラスミドｐＣ６を、リポフェクチン
（Ｆｅｌｇｎｅｒら、前出）を用いて、０．５μｇのプラスミドｐＳＶｎｅｏと
ともに同時トランスフェクトする。プラスミドｐＳＶ２−ｎｅｏは、優性選択マ
ーカーである、Ｇ４１８を含む抗生物質の群に対する耐性を付与する酵素をコー
ドするＴｎ５由来のｎｅｏ遺伝子を含む。細胞を、１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８を補
充したαマイナスＭＥＭに播種する。２日後、細胞をトリプシン処理し、そして
１０、２５、または５０ｎｇ／ｍｌのメトトレキサートおよび１ｍｇ／ｍｌのＧ
４１８を補充したαマイナスＭＥＭ中のハイブリドーマクローニングプレート（
Ｇｒｅｉｎｅｒ，Ｇｅｒｍａｎｙ）中に播種する。約１０〜１４日後、単一のク
ローンをトリプシン処理し、次いでメトトレキサートの異なる濃度（５０ｎＭ、
１００ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、８００ｎＭ）を使用して、６ウェルのペ
トリ皿または１０ｍｌのフラスコに播種する。次いで、最高濃度のメトトレキサ
ートで増殖するクローンを、さらに高い濃度（１μＭ、２μＭ、５μＭ、１０ｍ
Ｍ、２０ｍＭ）のメトトレキサートを含む新たな６ウェルプレートに移す。同じ
手順を、１００〜２００μＭの濃度で増殖するクローンが得られるまで繰り返す
。所望の遺伝子産物の発現を、例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタンブロ
ットによって、または逆相ＨＰＬＣ分析によって分析する。

【０６９４】 （実施例９：タンパク質融合物） 本発明のポリぺプチドは、好ましくは、他のタンパク質に融合される。これら
の融合タンパク質は、種々の適用について使用され得る。例えば、Ｈｉｓタグ、
ＨＡタグ、プロテインＡ、ＩｇＧドメイン、およびマルトース結合タンパク質へ
の本発明のポリぺプチドの融合は、精製を容易にする（実施例５を参照のこと；
ＥＰ Ａ ３９４，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３３１：
８４−８６（１９８８）もまた参照のこと）。ポリペプチドはまた、分泌および
細胞内輸送を容易にするための異種ポリペプチド配列（例えば、ＫＤＥＬ）に融
合され得る。さらに、ＩｇＧ−１、ＩｇＧ−３、およびアルブミンへの融合は、
インビボでの半減期を増大させる。本発明のポリぺプチドに融合した核局在化シ
グナルは、タンパク質を特定の細胞内局在に標的化し得る。一方、共有結合ヘテ
ロダイマーまたはホモダイマーは、融合タンパク質の活性を増大または減少させ
得る。融合タンパク質はまた、１つより多い機能を有するキメラ分子を作製し得
る。最後に、融合タンパク質は、非融合タンパク質と比較して、融合タンパク質
の可溶性および／または安定性を増大させ得る。上記の融合タンパク質の全ての
型は、ポリぺプチドのＩｇＧ分子への融合を概説する以下のプロトコル、または
実施例５に記載されるプロトコルを改変することによって作製され得る。

【０６９５】 簡単には、ＩｇＧ分子のヒトＦｃ部分は、以下に記載の配列の５’および３’
末端にわたるプライマーを使用してＰＣＲ増幅され得る。これらのプライマーは
また、発現ベクター（好ましくは、哺乳動物発現ベクター）へのクローニングを
容易にする、都合の良い制限酵素部位、および必要に応じて、開始／終止コドン
を有するべきである。

【０６９６】 例えば、ｐＣ４（受託番号第２０９６４６号）が使用される場合、ヒトＦｃ部
分は、ＢａｍＨＩクローニング部位に連結され得る。３’ＢａｍＨＩ部位が破壊
されるべきであることに留意のこと。次に、ヒトＦｃ部分を含有するベクターが
、ＢａｍＨＩによって再び制限処理され、ベクターを直鎖化し、そして実施例１
に記載するＰＣＲプロトコルによって単離された本発明のポリヌクレオチドが、
このＢａｍＨＩ部位に連結される。このポリヌクレオチドは、終止コドンなしに
クローン化され、そうでなければ、融合タンパク質は産生されないことに留意の
こと。

【０６９７】 天然に存在するシグナル配列が分泌タンパク質を産生するために使用される場
合、ｐＣ４は、第二のシグナルペプチドを必要としない。あるいは、天然に存在
するシグナル配列が使用されない場合、このベクターは、異種シグナル配列を含
むように改変され得る（例えば、ＷＯ ９６／３４８９１を参照のこと）。

【０６９８】 ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域。

【０６９９】

【化７】 （実施例１０：ポリペプチド処方） ポリペプチド組成物を、個々の患者の臨床状態（特に、分泌ポリペプチド単独
処置の副作用）、送達部位、投与方法、投与計画および当業者に公知の他の因子
を考慮に入れ、医療実施基準（ｇｏｏｄ ｍｅｄｉｃａｌ ｐｒａｃｔｉｃｅ）
を遵守する方式で処方および投薬する。従って、本明細書において目的とする「
有効量」は、このような考慮を行って決定される。

【０７００】 一般的提案として、用量当り、非経口的に投与されるポリペプチドの合計薬学
的有効量は、患者体重の、約１μｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲にあ
るが、上記のようにこれは治療的裁量に委ねられる。さらに好ましくは、このホ
ルモンについて、この用量は、少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、そして最も
好ましくはヒトに対して約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日と約１ｍｇ／ｋｇ／日との間
である。連続投与する場合、代表的には、ポリペプチドを約１μｇ／ｋｇ／時間
〜約５０μｇ／ｋｇ／時間の投薬速度で１日に１〜４回の注射かまたは連続皮下
注入（例えばミニポンプを用いる）のいずれかにより投与する。静脈内用バッグ
溶液もまた使用し得る。変化を観察するために必要な処置期間および応答が生じ
る処置後の間隔は、所望の効果に応じて変化するようである。

【０７０１】 本発明のポリペプチドを含む薬学的組成物は、経口的、直腸内、非経口的、槽
内（ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｍａｌｌｙ）、膣内、腹腔内、局所的（散剤、軟膏、
ゲル、点滴剤、または経皮パッチによるなど）、口内あるいは経口または鼻腔ス
プレーとして投与し得る。「薬学的に受容可能なキャリア」とは、非毒性の固体
、半固体または液体の充填剤、希釈剤、被包材または任意の型の製剤補助剤をい
う。本明細書で用いる場合、用語「非経口的」とは、静脈内、筋肉内、腹腔内、
胸骨内、皮下および関節内の注射および注入を含む投与の様式をいう。

【０７０２】 ポリペプチドはまた、徐放性システムにより適切に投与される。徐放性組成物
の適切な例は、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの成形品の形態の半透
過性ポリマーマトリックスを包含する。徐放性マトリックスとしては、ポリラク
チド（米国特許第３，７７３，９１９号、ＥＰ５８，４８１）、Ｌ−グルタミン
酸およびγ−エチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー（Ｓｉｄｍａｎら、Ｂｉｏ
ｐｏｌｙｍｅｒｓ ２２：５４７−５５６（１９８３））、ポリ（２−ヒドロキ
シエチルメタクリレート）（Ｌａｎｇｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．
Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７（１９８１）、およびＬａｎｇｅｒ，Ｃｈｅｍ．
Ｔｅｃｈ．１２：９８−１０５（１９８２））、エチレンビニルアセテート（Ｒ
．Ｌａｎｇｅｒら）またはポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ１３３
，９８８）が挙げられる。徐放性組成物はまた、リポソームに封入された本発明
のポリペプチドを包含する。分泌ポリペプチドを含有するリポソームは、それ自
体が公知である方法により調製される：ＤＥ３，２１８，１２１；Ｅｐｓｔｅｉ
ｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：３６８８−３６
９２（１９８５）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ ７７：４０３０−４０３４（１９８０）；ＥＰ５２，３２２；ＥＰ３６，
６７６；ＥＰ８８，０４６；ＥＰ１４３，９４９；ＥＰ１４２，６４１；日本国
特許出願第８３−１１８００８号；米国特許第４，４８５，０４５号および同第
４，５４４，５４５号；ならびにＥＰ１０２，３２４。通常、リポソームは、小
さな（約２００〜８００Å）ユニラメラ型であり、そこでは、脂質含有量は、約
３０モル％コレステロールよりも多く、選択された割合が、最適な分泌ポリペプ
チド治療のために調整される。

【０７０３】 非経口投与のために、１つの実施形態において、一般に、ポリペプチドは、そ
れを所望の程度の純度で、薬学的に受容可能なキャリア、すなわち用いる投薬量
および濃度でレシピエントに対して毒性がなく、かつ処方物の他の成分と適合す
るキャリアと、単位投薬量の注射可能な形態（溶液、懸濁液または乳濁液）で混
合することにより処方される。例えば、この処方物は、好ましくは、酸化剤、お
よびポリペプチドに対して有害であることが知られている他の化合物を含まない
。

【０７０４】 一般に、ポリペプチドを液体キャリアまたは微細分割固体キャリアあるいはそ
の両方と均一および緊密に接触させて処方物を調製する。次いで、必要であれば
、生成物を所望の処方物に成形する。好ましくは、キャリアは、非経口的キャリ
ア、より好ましくはレシピエントの血液と等張である溶液である。このようなキ
ャリアビヒクルの例としては、水、生理食塩水、リンゲル溶液およびデキストロ
ース溶液が挙げられる。不揮発性油およびオレイン酸エチルのような非水性ビヒ
クルもまた、リポソームと同様に本明細書において有用である。

【０７０５】 キャリアは、等張性および化学安定性を高める物質のような微量の添加剤を適
切に含有する。このような物質は、用いる投薬量および濃度でレシピエントに対
して毒性がなく、そしてこのような物質としては、リン酸塩、クエン酸塩、コハ
ク酸塩、酢酸および他の有機酸またはその塩類のような緩衝剤；アスコルビン酸
のような抗酸化剤；低分子量（約１０残基より少ない）ポリペプチド（例えば、
ポリアルギニンまたはトリペプチド）；血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グ
ロブリンのようなタンパク質；ポリビニルピロリドンのような親水性ポリマー；
グリシン、グルタミン酸、アスパラギン酸またはアルギニンのようなアミノ酸；
セルロースまたはその誘導体、ブドウ糖、マンノースまたはデキストリンを含む
、単糖類、二糖類、および他の炭水化物；ＥＤＴＡのようなキレート剤；マンニ
トールまたはソルビトールのような糖アルコール；ナトリウムのような対イオン
；および／またはポリソルベート、ポロキサマーもしくはＰＥＧのような非イオ
ン性界面活性剤が挙げられる。

【０７０６】 ポリペプチドは、代表的には約０．１ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌ、好まし
くは１〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度で、約３〜８のｐＨで、このようなビヒクル中に
処方される。前記の特定の賦形剤、キャリアまたは安定化剤を使用することによ
り、ポリペプチド塩が形成されることが理解される。

【０７０７】 治療的投与に用いられる任意のポリペプチドは無菌状態であり得る。滅菌濾過
膜（例えば０．２ミクロンメンブレン）で濾過することにより無菌状態は容易に
達成される。一般に、治療ポリペプチド組成物は、滅菌アクセスポートを有する
容器、例えば、皮下用注射針で穿刺可能なストッパー付の静脈内用溶液バッグま
たはバイアルに配置される。

【０７０８】 ポリペプチドは、通常、単位用量または複数用量容器、例えば、密封アンプル
またはバイアルに、水溶液または再構成するための凍結乾燥処方物として貯蔵さ
れる。凍結乾燥処方物の例として、１０ｍｌのバイアルに、滅菌濾過した１％（
ｗ／ｖ）ポリペプチド水溶液５ｍｌを充填し、そして得られる混合物を凍結乾燥
する。凍結乾燥したポリペプチドを、注射用静菌水を用いて再構成して注入溶液
を調製する。

【０７０９】 本発明はまた、本発明の薬学的組成物の１つ以上の成分を充填した一つ以上の
容器を備える薬学的パックまたはキットを提供する。医薬品または生物学的製品
の製造、使用または販売を規制する政府機関が定めた形式の通知が、このような
容器に付属し得、この通知は、ヒトへの投与に対する製造、使用または販売に関
する政府機関による承認を表す。さらに、本発明のポリペプチドを他の治療用化
合物と組み合わせて使用し得る。

【０７１０】 （実施例１１：ポリペプチドのレベル低下を処置する方法） 個体におけるポリペプチドの標準または正常発現レベルの低下により引き起こ
される状態は、本発明のポリペプチドを、好ましくは分泌形態および／または可
溶性形態で投与することにより処置し得ることが理解される。従って、本発明は
また、ポリペプチドのレベルの増加が必要な個体の処置方法を提供する。この方
法は、このような個体に、このような個体でポリペプチドの活性レベルを増加さ
せる量のポリペプチドを含む薬学的組成物を投与する工程を包含する。

【０７１１】 例えば、ポリペプチドのレベルが低下した患者は、ポリペプチドを、１日用量
０．１〜１００μｇ／ｋｇで６日続けて服用する。好ましくは、ポリペプチドは
分泌形態である。投与および処方物に基づく投薬計画の正確な詳細は、実施例１
０に提供されている。

【０７１２】 （実施例１２：ポリペプチドのレベル上昇を処置する方法） アンチセンス技術を使用して本発明のポリペプチドの産生を阻害する。この技
術は、ガンのような様々な病因に起因するポリペプチド、好ましくは分泌形態の
ポリペプチドのレベルを低下させる方法の１つの例である。

【０７１３】 例えば、ポリペプチドのレベルが異常に上昇したと診断された患者に、アンチ
センスポリヌクレオチドを、０．５、１．０、１．５、２．０および３．０ｍｇ
／ｋｇ／日で静脈内に２１日間投与する。この処置に対して十分な耐性があれば
、７日間の休薬期間後に、この処置を繰り返す。アンチセンスポリヌクレオチド
の処方は、実施例１０に提供されている。

【０７１４】 （実施例１３：遺伝子治療を使用する処置方法−エキソビボ） 遺伝子治療の１つの方法は、ポリペプチドを発現し得る線維芽細胞を患者に移
植する方法である。一般に、線維芽細胞は、皮膚生検により被験者から得られる
。得られた組織を組織培養培地中に配置し、小片に分割する。組織の小塊を組織
培養フラスコの湿潤表面に置き、約１０片を各フラスコに置く。このフラスコを
倒置し、しっかりと閉めた後、室温で一晩放置する。室温で２４時間後、フラス
コを反転させ、組織塊をフラスコの底に固定させたままにし、そして新鮮培地（
例えば、１０％ＦＢＳ、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含有するＨａｍ
のＦ１２培地）を添加する。次いで、フラスコを３７℃で約１週間インキュベー
トする。

【０７１５】 この時点で、新鮮培地を添加し、次いで数日ごとに取り換える。さらに二週間
培養した後に単層の線維芽細胞が出現する。単層をトリプシン処理し、さらに大
きなフラスコにスケールアップする。

【０７１６】 Ｍｏｌｏｎｅｙマウス肉腫ウイルスの長末端反復が隣接するｐＭＶ−７（Ｋｉ
ｒｓｃｈｍｅｉｅｒ，Ｐ．Ｔ．ら、ＤＮＡ，７：２１９−２５（１９８８））を
ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化した後、仔ウシ腸ホスファターゼで処理
する。線状ベクターをアガロースゲルで分画し、そしてガラスビーズを使用して
精製する。

【０７１７】 本発明のポリペプチドをコードするｃＤＮＡを、必要な場合、プライマーを用
いそして適切な制限部位および開始／終止コドンを有する、実施例１に記載のそ
れぞれ５’および３’末端配列に対応するＰＣＲプライマーを使用して増幅し得
る。好ましくは、５’プライマーはＥｃｏＲＩ部位を含み、そして３’プライマ
ーはＨｉｎｄＩＩＩ部位を含む。等量の、Ｍｏｌｏｎｅｙマウス肉腫ウイルス線
状骨格および増幅したＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩフラグメントを、Ｔ４
ＤＮＡリガーゼの存在下で一緒に加える。得られた混合物を二つのフラグメント
を連結するのに適した条件下で維持する。次いで、連結混合物を使用し、細菌Ｈ
Ｂ１０１を形質転換する。次いで、それを、カナマイシンを含む寒天上にプレー
ティングし、ベクターが正確に挿入された目的の遺伝子を有することを確認する
。

【０７１８】 アンフォトロピックｐＡ３１７またはＧＰ＋ａｍ１２パッケージング細胞を、
１０％仔ウシ血清（ＣＳ）、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含むＤｕｌ
ｂｅｃｃｏ改変Ｅａｇｌｅｓ培地（ＤＭＥＭ）中、組織培養でコンフルエントな
密度まで増殖させる。次いで、遺伝子を含むＭＳＶベクターを培地に加え、そし
てパッケージング細胞にベクターを形質導入する。このとき、パッケージング細
胞は遺伝子を含む感染性ウイルス粒子を産生する（ここで、パッケージング細胞
をプロデューサー細胞という）。

【０７１９】 形質導入されたプロデューサー細胞に新鮮培地を添加し、次いで培地を１０ｃ
ｍプレートのコンフルエントなプロデューサー細胞から採取する。感染性ウイル
ス粒子を含む使用済み培地を、ミリポアーフィルターを通して濾過し、はがれた
プロデューサー細胞を除去した後、この培地を使用して、線維芽細胞を感染させ
る。線維芽細胞のサブコンフルエントなプレートから培地を除去し、そしてプロ
デューサー細胞からの培地で速やかに置き換える。この培地を除去し、そして新
鮮培地と置き換える。ウイルスの力価が高ければ、実質的にすべての線維芽細胞
が感染され、選択は必要ではない。力価が非常に低ければ、ｎｅｏまたはｈｉｓ
のような選択マーカーを有するレトロウイルスベクターを使用することが必要で
ある。一旦、線維芽細胞が効率的に感染したなら、線維芽細胞を分析し、タンパ
ク質が産生されているか否かを決定する。

【０７２０】 次いで、操作された線維芽細胞を、単独で、またはサイトデックス３マイクロ
キャリアビーズ上でコンフルエントに増殖させた後のいずれかで宿主に移植する
。

【０７２１】 （実施例１４：内因性非結合遺伝子を使用する遺伝子治療） 本発明に従う遺伝子治療の別の方法は、内因性非結合遺伝子配列を、例えば、
米国特許第５，６４１，６７０号（１９９７年６月２４日出願）；国際公開第Ｗ
Ｏ ９６／２９４１１号（１９９６年９月２６日公開）；国際公開第ＷＯ ９４
／１２６５０号（１９９４年８月４日公開）；Ｋｏｌｌｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：８９３２〜８９３５（１９８９）；お
よびＺｉｊｌｓｔｒａら、Ｎａｔｕｒｅ，３４２：４３５〜４３８（１９８９）
に記載されるように、相同組換えを介してプロモーターに作動可能に結合する工
程を包含する。この方法は、その標的細胞中に存在するが、その細胞中で発現さ
れないかまたは所望されるよりも低いレベルで発現される、遺伝子の活性化を包
含する。

【０７２２】 プロモーターおよび標的化配列を含むポリヌクレオチド構築物を作製する。こ
の標的配列は、プロモーターに隣接する、内因性非結合遺伝子の５’非コード配
列に相同である。この標的化配列は、この非結合遺伝子の５’末端に十分に近く
、その結果、このプロモーターは、相同組換えの際にこの内因性配列に作動可能
に連結される。このプロモーターおよび標的化配列を、ＰＣＲを使用して増幅し
得る。好ましくは、この増幅したプロモーターは、５’末端および３’末端上に
異なる制限酵素部位を含む。好ましくは、第１の標的化配列の３’末端は、増幅
したプロモーターの５’末端と同じ制限酵素部位を含み、そして第２の標的化配
列の５’末端は、増幅したプロモーターの３’末端と同じ制限部位を含む。

【０７２３】 この増幅したプロモーターおよび増幅した標的化配列を、適切な制限酵素で消
化し、続いて仔ウシ腸ホスファターゼで処理する。消化したプロモーターおよび
消化した標的化配列を、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼの存在下でともに加える。生じた
混合物を、これら２つのフラグメントの連結に適切な条件下で維持する。この構
築物をアガロースゲル上でサイズ分画し、次いでフェノール抽出およびエタノー
ル沈殿により精製する。

【０７２４】 この実施例において、このポリヌクレオチド構築物を、エレクトロポレーショ
ンを介して裸のポリヌクレオチドとして投与する。しかし、このポリヌクレオチ
ド構築物はまた、トランスフェクション促進剤（例えば、リポソーム、ウイルス
配列、ウイルス粒子、沈殿剤など）とともに投与され得る。送達のこのような方
法は、当該分野で公知である。

【０７２５】 一旦、細胞をトランスフェクトすると、相同組換えが、このプロモーターで生
じて、内因性非結合遺伝子配列に作動可能に連結される。これは、この細胞中に
おける非結合の発現を生じる。発現は、免疫学的染色または当該分野で公知の他
の任意の方法により、検出され得る。

【０７２６】 線維芽細胞を、皮膚生検により被験者から得る。得られた組織を、ＤＭＥＭ＋
１０％胎仔ウシ血清中に配置する。対数増殖期または定常期初期の線維芽細胞を
、トリプシン処理し、そしてプラスチックの表面から栄養培地でリンスする。細
胞懸濁液のアリコートを、計数のために取り出し、そして残りの細胞を遠心分離
に供する。上清を吸引し、そしてペレットを５ｍｌのエレクトロポレーション緩
衝液（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．３、１３７ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ Ｋ
Ｃｌ、０．７ｍＭ Ｎａ₂ＨＰＯ₄、６ｍＭデキストロース）に再懸濁する。この
細胞を再遠心分離し、上清を吸引し、そして細胞をアセチル化ウシ血清アルブミ
ン１ｍｇ／ｍｌを含むエレクトロポレーション緩衝液に再懸濁する。この最終細
胞懸濁物は、約３×１０⁶細胞／ｍｌを含む。エレクトロポレーションを、再懸
濁直後に実施すべきである。

【０７２７】 プラスミドＤＮＡを、標準的技術に従って調製する。例えば、非結合遺伝子座
に標的化するためのプラスミドを構築するために、プラスミドｐＵＣ１８（ＭＢ
Ｉ Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ、Ａｍｈｅｒｓｔ、ＮＹ）をＨｉｎｄＩＩＩで消化する
。ＣＭＶプロモーターを、５’末端にＸｂａＩ部位および３’末端にＢａｍＨＩ
部位を備えてＰＣＲにより増幅する。２つの非結合の非コード配列をＰＣＲを介
して増幅する：一方の非結合の非コード配列（非結合フラグメント１）を、５’
末端にＨｉｎｄＩＩＩ部位および３’末端にＸｂａＩ部位を備えて増幅する；他
方の非結合の非コード配列（非結合フラグメント２）を、５’末端にＢａｍＨＩ
部位および３’末端にＨｉｎｄＩＩＩ部位を備えて増幅する。このＣＭＶプロモ
ーターおよび非結合フラグメントを、適切な酵素（ＣＭＶプロモーター−Ｘｂａ
ＩおよびＢａｍＨＩ；非結合フラグメント１−ＸｂａＩ；非結合フラグメント２
−ＢａｍＨＩ）で消化し、そしてともに連結する。生じた連結生成物をＨｉｎｄ
ＩＩＩで消化し、そしてＨｉｎｄＩＩＩで消化したｐＵＣ１８プラスミドと連結
する。

【０７２８】 プラスミドＤＮＡを、０．４ｃｍの電極ギャップを備える滅菌キュベット（Ｂ
ｉｏ−Ｒａｄ）に添加する。最終ＤＮＡ濃度は、一般的に、少なくとも１２０μ
ｇ／ｍｌである。次いで、この細胞懸濁液の０．５ｍｌ（約１．５×１０⁶細胞
を含む）をこのキュベットに添加し、そしてこの細胞懸濁液およびＤＮＡ溶液を
、穏やかに混合する。エレクトロポレーションを、Ｇｅｎｅ−Ｐｕｌｓｅｒ装置
（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いて実施する。容量および電圧を、それぞれ、９６０μ
Ｆおよび２５０〜３００Ｖに設定する。電圧が増加すると、細胞の生存が減少す
るが、導入されたＤＮＡをそのゲノム中に安定に組込む生存細胞の割合が劇的に
増加する。これらのパラメーターを与えると、パルス時間約１４〜２０ｍＳｅｃ
が観察されるはずである。

【０７２９】 エレクトロポレーションした細胞を、室温で約５分間維持し、次いで、このキ
ュベットの中身を、滅菌した移動ピペットを用いて穏やかに取り出す。この細胞
を、１０ｃｍのディッシュ中の、予め温めた栄養培地（１５％仔ウシ血清を含む
ＤＭＥＭ）１０ｍｌに直接加え、そして３７℃でインキュベートする。翌日、こ
の培地を吸引し、そして１０ｍｌの新鮮な培地で置換し、そしてさらに１６〜２
４時間インキュベートする。

【０７３０】 次いで、操作された線維芽細胞を、宿主中に、単独か、またはサイトデックス
３マイクロキャリアビーズ上でコンフルエントになるまで増殖させた後かのいず
れかで、注入する。ここで、この線維芽細胞は、タンパク質産物を生成する。次
いで、この線維芽細胞を、上記のような患者に導入し得る。

【０７３１】 （実施例１５：遺伝子治療を使用する処置方法−インビボ） 本発明の別の局面は、障害、疾患、および状態を処置するためにインビボ遺伝
子治療方法を使用することである。この遺伝子治療法は、非共役ポリペプチドの
発現を増大または減少させるための、動物への裸の核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ、およ
びアンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡ）非共役配列の導入に関する。非共役ポリヌ
クレオチドは、プロモーター、または標的組織による非共役ポリペプチドの発現
に必要な任意の他の遺伝子エレメントに、作動可能に連結され得る。このような
遺伝子治療および送達の技術および方法は、当該分野で公知であり、例えば、Ｗ
Ｏ９０／１１０９２、ＷＯ９８／１１７７９；米国特許第５６９３６２２号、同
第５７０５１５１号、同第５５８０８５９号；Ｔａｂａｔａら、Ｃａｒｄｉｏｖ
ａｓｃ．Ｒｅｓ．３５（３）：４７０−４７９（１９９７）；Ｃｈａｏ Ｊ．ら
、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｓ．３５（６）：５１７−５２２（１９９７）、Ｗ
ｏｌｆｆ、Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌ．Ｄｉｓｏｒｄ．７（５）：３１４−３１８
（１９９７）、Ｓｃｈｗａｒｔｚら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．、３（５）：４０５
−４１１（１９９６）；Ｔｓｕｒｕｍｉ Ｙ．ら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ９
４（１２）：３２８１−３２９０（１９９６）（本明細書中に参考として援用さ
れる）を参照のこと。

【０７３２】 非共役ポリヌクレオチド構築物は、注入可能な物質を動物の細胞に送達する任
意の方法（例えば、組織（心臓、筋肉、皮膚、肺、肝臓、腸など）の間隙空間へ
の注入）によって送達され得る。この非共役ポリヌクレオチド構築物は、薬学的
に受容可能な液体または水性キャリア中で送達され得る。

【０７３３】 用語「裸の」ポリヌクレオチド、ＤＮＡまたはＲＮＡは、細胞への進入を補助
、促進、または容易にするように作用するいかなる送達ビヒクル（ウイルス配列
、ウイルス粒子、リポソーム処方物、リポフェクチン、または沈澱剤などを含む
）も含まない配列をいう。しかし、非共役ポリヌクレオチドはまた、当業者に周
知の方法によって調製され得るリポソーム処方物（例えば、Ｆｅｌｇｎｅｒ Ｐ
．Ｌ．ら、Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７７２：１２６−１３９（１９９
５）およびＡｂｄａｌｌａｈ Ｂ．ら、Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ ８５（１）：１−
７（１９９５）で教示されたもの）中で送達され得る。

【０７３４】 この遺伝子治療方法において使用される非共役ポリヌクレオチドベクター構築
物は、好ましくは、宿主ゲノムに組み込まれず、複製を可能にする配列も含まな
い構築物である。当業者に公知の任意の強力なプロモーターが、ＤＮＡの発現を
駆動するために用いられ得る。他の遺伝子治療技術とは異なり、裸の核酸配列を
標的細胞に導入する１つの主要な利点は、その細胞におけるポリヌクレオチド合
成の一過性の性質である。研究によって、非複製ＤＮＡ配列が細胞に導入されて
、６ヶ月までの間の期間、所望のポリペプチドの産生を提供し得ることが示され
た。

【０７３５】 このポリヌクレオチド構築物は、動物内の組織（筋肉、皮膚、脳、肺、肝臓、
脾臓、骨髄、胸腺、心臓、リンパ、血液、骨、軟骨、膵臓、腎臓、胆嚢、胃、腸
、精巣、卵巣、子宮、直腸、神経系、眼、腺、および結合組織を包含する）の間
隙空間に送達され得る。この組織の間隙空間は、細胞間液、ムコ多糖基質（器官
組織の細網線維、血管または腔（ｃｈａｍｂｅｒ）の壁における弾性線維、線維
性組織におけるコラーゲン線維に間にある）、あるいは結合組織鞘性筋肉細胞内
または骨の裂孔中の同じ基質を包含する。これは、同様に、循環の血漿およびリ
ンパチャンネルのリンパ液により占められた空間である。筋肉組織の間隙空間へ
の送達は、以下に考察する理由のために好ましい。それらは、これらの細胞を含
む組織への注入によって、好都合に送達され得る。それらは、好ましくは、分化
した持続性の非分裂細胞に送達され、そしてその細胞において発現されるが、送
達および発現は、非分化細胞または完全には分化していない細胞（例えば、血液
の幹細胞または皮膚線維芽細胞など）において達成され得る。インビボで、筋肉
細胞は、ポリヌクレオチドを取り込み、そして発現するそれらの能力において、
特に適格である。

【０７３６】 裸の非共役ポリヌクレオチド注入のために、ＤＮＡまたはＲＮＡの有効投薬量
は、約０．０５ｇ／ｋｇ体重から約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲にある。好ましく
は、この投薬量は、約０．００５ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇであり、そし
てより好ましくは、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇである。もちろん
、当業者が認識するように、この投薬量は、注入の組織部位に従って変化する。
核酸配列の適切かつ有効な投薬量は、当業者によって容易に決定され得、そして
処置される状態および投与経路に依存し得る。好ましい投与経路は、組織の間隙
空間への非経口注入経路によってである。しかし、他の非経口経路もまた用いら
れ得、これには、例えば、特に肺または気管支組織、咽喉、または鼻の粘膜への
送達のためのエアロゾル処方物の吸入が挙げられる。さらに、裸の非共役ポリヌ
クレオチド構築物が、血管形成術の間にこの手順において用いられるカテーテル
によって動脈に送達され得る。

【０７３７】 インビボでの筋肉における注入非共役ポリヌクレオチドの用量応答効果を、以
下のようにして決定する。非共役ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの生成のた
めの適切な非共役鋳型ＤＮＡを、標準的な組換えＤＮＡ方法論に従って調製する
。この鋳型ＤＮＡ（これは環状または線状のいずれかであり得る）を裸のＤＮＡ
として使用するか、またはリポソームと複合体化するかのいずれかであり得る。
次いで、マウスの四頭筋に、種々の量の鋳型ＤＮＡを注入する。

【０７３８】 ５〜６週齢の雌性および雄性のＢａｌｂ／Ｃマウスに、０．３ｍｌの２．５％
Ａｖｅｒｔｉｎを腹腔内注射することにより麻酔する。１．５ｃｍの切開を大腿
前部で行い、そして四頭筋を直接可視化する。非共役鋳型ＤＮＡを、０．１ｍｌ
のキャリアに入れて、１ｃｃ注射器で２７ゲージ針を通して１分間にわたって、
筋肉の遠位挿入部位から約０．５ｃｍのところで膝に、そして約０．２ｃｍの深
さで注入する。縫合を、将来の位置決定のために注入部位の上で行い、そしてそ
の皮膚をステンレス鋼クリップで閉じる。

【０７３９】 適切なインキュベーション時間（例えば、７日）後、筋肉抽出物を、四頭全体
を切り出すことによって調製する。個々の四頭筋の５枚毎の１５μｍ切片を、非
共役タンパク質発現について組織化学的に染色する。非共役タンパク質発現につ
いてのタイムコースは、異なるマウスからの四頭を異なる時間で採取すること以
外は、同様な様式で行い得る。注入後の筋肉中の非共役ＤＮＡの持続性を、注入
したマウスおよびコントロールマウスからの全細胞性ＤＮＡおよびＨＩＲＴ上清
を調製した後、サザンブロット分析によって決定し得る。マウスにおける上記実
験の結果を、裸の非共役ＤＮＡを用いて、ヒトおよび他の動物において適切な投
薬量および他の処置パラメーターを外挿するために使用し得る。

【０７４０】 （実施例１６：抗体の産生） （ａ）ハイブリドーマ技術 本発明の抗体は、種々の方法によって調製され得る。（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒ
ｏｔｏｃｏｌｓ，第２章を参照のこと）。そのような方法の１つの例として、非
共役ポリペプチドを発現する細胞を、ポリクローナル抗体を含む血清の産生を誘
導するために動物に投与する。好ましい方法において、本発明のポリペプチドの
調製物を調製し、そして精製して、天然の夾雑物を実質的に含まないようにする
。次いで、より大きな比活性のポリクローナル抗血清を生成するために、このよ
うな調製物を、動物に導入する。

【０７４１】 非共役ポリペプチドに対して特異的なモノクローナル抗体を、ハイブリドーマ
技術を使用して調製する（Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５（１
９７５）；Ｋｏｈｌｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１（１９７
６）；Ｋｏｈｌｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：２９２（１９７６）
；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａ
ｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．、５
６３−６８１頁（１９８１））。一般に、動物（好ましくは、マウス）を、非共
役ポリぺプチド、またはより好ましくは、分泌性非共役ポリぺプチド発現細胞で
免疫する。このようなポリペプチド発現細胞は、任意の適切な組織培養培地にお
いて培養され、好ましくは、１０％ウシ胎仔血清（約５６℃で非働化した）を補
充し、そして約１０ｇ／ｌの非必須アミノ酸、約１，０００Ｕ／ｍｌのペニシリ
ン、および約１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを補充したＥａｒｌｅ改変
イーグル培地において培養される。

【０７４２】 このようなマウスの脾細胞を抽出し、そして適切な骨髄腫細胞株と融合する。
任意の適切な骨髄腫細胞株を、本発明に従って用い得る；しかし、ＡＴＣＣから
入手可能な親骨髄腫細胞株（ＳＰ２Ｏ）を用いることが好ましい。融合後、得ら
れるハイブリドーマ細胞を、ＨＡＴ培地において選択的に維持し、次いでＷａｎ
ｄｓら（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ８０：２２５−２３２（１９８１
））に記載されるように限界希釈によってクローニングする。次いで、このよう
な選択によって得られるハイブリドーマ細胞を、非共役ポリぺプチドを結合し得
る抗体を分泌するクローンを同定するためにアッセイする。

【０７４３】 あるいは、非共役ポリぺプチドに結合し得るさらなる抗体を、抗イディオタイ
プ抗体を使用して２工程の手順において生成し得る。このような方法は、抗体が
それ自体抗原であり、それゆえ第二の抗体に結合する抗体を得ることが可能であ
るという事実を利用する。この方法に従って、タンパク質特異的抗体を使用して
、動物（好ましくは、マウス）を免疫する。次いで、このような動物の脾細胞を
使用して、ハイブリドーマ細胞を産生し、そしてこのハイブリドーマ細胞を、非
共役タンパク質特異的抗体に結合する能力が非共役ポリペプチドによってブロッ
クされ得る抗体を産生するクローンを同定するためにスクリーニングする。この
ような抗体は、非共役タンパク質特異的抗体に対する抗イディオタイプ抗体を含
み、そして動物を免疫してさらなる非共役タンパク質特異的抗体の形成を誘導す
るために使用する。

【０７４４】 ヒトにおける抗体のインビボ使用のために、抗体は、「ヒト化」される。この
ような抗体は、上記のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞に由来
する遺伝的構築物を使用することによって産生され得る。キメラ抗体およびヒト
化抗体を産生するための方法は、当該分野で公知であり、そして本明細書中で考
察される。（総説については、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１
２０２（１９８５）；Ｏｉら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４（１９
８６）；Ｃａｂｉｌｌｙら、米国特許第４，８１６，５６７号；Ｔａｎｉｇｕｃ
ｈｉら、ＥＰ １７１４９６；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、ＥＰ １７３４９４；Ｎｅ
ｕｂｅｒｇｅｒら、ＷＯ ８６０１５３３；Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、ＷＯ ８７０
２６７１；Ｂｏｕｌｉａｎｎｅら、Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６４３（１９８４）
；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３１４：２６８（１９８５）を参照の
こと） （ｂ）ｓｃＦｖのライブラリー由来の非共役ポリペプチドに対する抗体フラグ
メントの単離） ヒトＰＢＬから単離した天然に存在するＶ−遺伝子を、ドナーが曝露されても
、曝露されなくてもよい非共役ポリペプチドに対する反応性を含む抗体フラグメ
ントをライブラリーへと構築する（例えば、米国特許第５，８８５，７９３号（
その全体が参考として本明細書に援用される）を参照のこと）。

【０７４５】 （ライブラリーのレスキュー） ＰＣＴ公開ＷＯ ９２／０１０４７に記載のように、ヒトＰＢＬのＲＮＡから
ｓｃＦｖのライブラリーを構築する。抗体フラグメントを提示するファージをレ
スキューするため、ファージミドを保有する約１０⁹個のＥ．ｃｏｌｉを用いて
、５０ｍｌの２×ＴＹ（１％グルコースおよび１００μｇ／ｍｌのアンピシリン
を含有する）（２×ＴＹ−ＡＭＰ−ＧＬＵ）に接種し、そして振盪しながら０．
８のＯ．Ｄ．まで増殖させる。この培養物の５ｍｌを用いて５０ｍｌの２×ＴＹ
−ＡＭＰ−ＧＬＵに接種し、２×１０⁸ＴＵのΔ遺伝子３ヘルパー（Ｍ１３Δ遺
伝子ＩＩＩ、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０１０４７を参照のこと）を添加し、そして
培養物を振盪なしで３７℃で４５分間インキュベートし、次いで振盪しながら３
７℃で４５分間インキュベートする。この培養物を１０分間４０００ｒ．ｐ．ｍ
．で遠心分離し、そしてペレットを２リットルの２×ＴＹ（１００μｇ／ｍｌア
ンピシリンおよび５０μｇ／ｍｌカナマイシンを含有する）中に再懸濁し、そし
て一晩増殖させる。ファージをＰＣＴ公開ＷＯ９２／０１０４７に記載のように
調製する。

【０７４６】 Ｍ１３Δ遺伝子ＩＩＩを以下のように調製する：Ｍ１３Δ遺伝子ＩＩＩヘルパ
ーファージは、遺伝子ＩＩＩタンパク質をコードしない。それゆえ、抗体フラグ
メントを提示するファージ（ファージミド）は、抗原に対してより大きい結合ア
ビディティーを有する。ファージ形態形成の間、野生型遺伝子ＩＩＩタンパク質
を供給するｐＵＣ１９誘導体を保有する細胞においてヘルパーファージを増殖さ
せることにより、感染性Ｍ１３Δ遺伝子ＩＩＩ粒子を作製する。培養物を振盪な
しで３７℃で１時間インキュベートし、次いで振盪しながら３７℃でさらに１時
間インキュベートする。細胞をスピンダウン（ＩＥＣ−Ｃｅｎｔｒａ ８，４０
０ ｒ．ｐ．ｍで１０分間）し、１００μｇ／ｍｌのアンピシリンおよび２５μ
ｇ／ｍｌのカナマイシンを含有する、３００ｍｌの２×ＴＹブロス（２×ＴＹ−
ＡＭＰ−ＫＡＮ）中に再懸濁し、そして３７℃で振盪しながら一晩増殖させた。
ファージ粒子を、２回のＰＥＧ沈殿（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９９０）により培
養培地から精製および濃縮し、２ｍｌ ＰＢＳに再懸濁し、そして０．４５μｍ
のフィルター（Ｍｉｎｉｓａｒｔ ＮＭＬ；Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）を通過させ、
約１０¹³形質導入単位／ｍｌ（アンピシリン耐性クローン）の最終濃度を得た。

【０７４７】 （ライブラリーのパニング） Ｉｍｍｕｎｏｔｕｂｅｓ（Ｎｕｎｃ）を、１００μｇ／ｍｌまたは１０μｇ／
ｍｌのいずれかの本発明のポリペプチド４ｍｌを用いてＰＢＳ中で一晩被膜する
。チューブを２％Ｍａｒｖｅｌ−ＰＢＳを用いて３７℃で２時間ブロックし、次
いでＰＢＳ中で３回洗浄する。約１０¹³ＴＵのファージをこのチューブに適用し
、そして、回転盤で上下に傾けながら室温で３０分間インキュベートし、次いで
さらに１．５時間静置しておく。チューブをＰＢＳ ０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０
で１０回、そしてＰＢＳで１０回洗浄する。１ｍｌの１００ｍＭトリエチルアミ
ンを添加し、そして回転盤で１５分間上下に回転させることによりファージを溶
出し、その後、この溶液を０．５ｍｌの１．０Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．
４で直ちに中和する。次いで、溶出したファージを細菌とともに３７℃で３０分
間インキュベートすることにより、ファージを用いて、１０ｍｌの対数増殖中期
のＥ．ｃｏｌｉ ＴＧ１に感染させる。次いで、Ｅ．ｃｏｌｉを、１％グルコー
スおよび１００μｇ／ｍｌアンピシリンを含有するＴＹＥプレート上にプレーテ
ィングする。次いで、生じた細菌ライブラリーを、上記のようにΔ遺伝子３ヘル
パーファージでレスキューし、次の回の選択のためのファージを調製する。次い
で、このプロセスを、アフィニティー精製の全４回について反復し、３回目およ
び４回目にはチューブ洗浄をＰＢＳ、０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０で２０回、そし
てＰＢＳで２０回に増加する。

【０７４８】 （結合剤の特徴付け） ３回目および４回目の選択から溶出したファージを用いて、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｈ
Ｂ ２１５１に感染させ、そして可溶性ｓｃＦｖをアッセイのために１個のコロ
ニーから生成する（Ｍａｒｋｓら、１９９１）。５０ｍＭ炭酸水素塩（ｐＨ９．
６）中の１０ｐｇ／ｍｌの本発明のポリペプチドの１０ｐｇ／ｍｌのいずれかで
被膜したマイクロタイタープレートを用いてＥＬＩＳＡを実行する。ＥＬＩＳＡ
での陽性クローンを、ＰＣＲフィンガープリントにより（例えば、ＰＣＴ公開Ｗ
Ｏ９２／０１０４７を参照のこと）、次いで配列決定することによりさらに特徴
付ける。例えば、エピトープマッピング、結合親和性、レセプターシグナル伝達
、抗体／抗原結合をブロックまたは競合阻害する能力、および競合アゴニスト活
性またはアンタゴニスト活性のような、当該分野で公知の技術により、これらの
ＥＬＩＳＡ陽性クローンをまた、さらに特徴付け得る。

【０７４９】 （実施例１７：非共役タンパク質活性を決定する方法） （Ａ）以下の方法は、本発明のポリペプチド（全長タンパク質のフラグメント
および改変体を含む）の呼吸非共役活性の決定を提供する。簡潔には、酵母に、
Ｂｏｕｉｌｌａｕｄら（ＥＭＢＯ Ｊ．１３：１９９０（１９９４））（その全
体において、本明細書中に参考として援用される）により以前に記載されたよう
に、発現ベクター中の非共役タンパク質ポリペプチドをトランスフェクトする。
形質転換された酵母の液体培地での増殖速度を、国際公開番号ＷＯ９８／３１３
９６（その全体において本明細書中に参考として援用される）に記載されるよう
に、発現を誘導するガラクトースの存在下で測定する。瞬間（ｉｎｓｔａｎｔｅ
ｏｕｓ）の生成時間を、非共役タンパク質ポリペプチドと適切なコントロールと
の間で比較する。

【０７５０】 呼吸の非共役と関連する膜電位のインビボでの減少を、潜在的感受性プローブ
ＤｉＯＣ６（３）（３，３’−ジヘキシルオキサカルボシアニンヨウ素、Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）で標識した酵母のフローサ
イトメトリーにより分析する。従って、非共役タンパク質ポリペプチドがミトコ
ンドリア活性に影響する能力および非共役呼吸を、決定する。

【０７５１】 （Ｂ）組換えヒト非共役タンパク質ポリペプチドを発現している線維芽細胞様
細胞株、およびＪＣ−１蛍光色素を利用するさらなるアッセイは、国際公開番号
ＷＯ９８／４５４３８（その全体において参考として本明細書中に援用される）
に記載されるように、生存細胞におけるミトコンドリア膜電位を迅速に評価する
ことを可能にする。非共役タンパク質ポリペプチドを発現している細胞株におけ
る蛍光に対する試験化合物の効果と、非共役タンパク質ポリペプチドを発現して
いないコントロールにおける蛍光に対する試験化合物の効果とを比較することに
よって、非共役タンパク質ポリペプチドの特異的アクチベーターおよび／または
インヒビターを同定することが可能である。簡潔には、非共役タンパク質ポリペ
プチドを発現している組換え細胞、およびこのポリペプチドを発現していないコ
ントロール細胞を、９６ウェルプレートにおいて増殖させる。プレートをリンス
し、そしてＪＣ−１色素を、全てのウェルに添加する。後に、プレートを洗浄し
、そして蛍光を蛍光測定器において決定する。

【０７５２】 蛍光の増大は、試験化合物が細胞の膜電位を増大させることを示す。蛍光の増
大が非共役タンパク質ポリペプチド発現細胞において観察されるが、コントロー
ル細胞では観察されない場合、この試験化合物は、非共役タンパク質ポリペプチ
ドのアンタゴニストであることが推測され得る。あるいは、蛍光の減少は、試験
化合物が細胞の膜電位を減少させることを示す。蛍光の減少が非共役タンパク質
ポリペプチド発現細胞において観察されるが、コントロール細胞では観察されな
い場合、この試験化合物は、非共役タンパク質ポリペプチドのアゴニストである
ことが推測され得る。

【０７５３】 （実施例１８：ノックアウトマウス） 内因性非共役タンパク質遺伝子発現もまた、標的化された相同組換えを使用し
て非共役タンパク質遺伝子および／またはそのプロモーターを不活性化あるいは
「ノックアウトする」ことによって減少し得る（例えば、Ｓｍｉｔｈｉｅｓら、
Ｎａｔｕｒｅ ３１７：２３０−２３４（１９８５）；ＴｈｏｍａｓおよびＣａ
ｐｅｃｃｈｉ、Ｃｅｌｌ ５１：５０３−５１２（１９８７）；Ｔｈｏｍｐｓｏ
ｎら、Ｃｅｌｌ ５：３１３−３２１（１９８９）を参照のこと；これらの各々
は、本明細書中でその全体が参考として援用される）。例えば、内因性ポリヌク
レオチド配列（この遺伝子のコード領域または調節領域のいずれか）と相同性の
ＤＮＡに隣接される、本発明の非機能的な変異ポリヌクレオチド（または完全に
関連のないＤＮＡ配列）を、選択マーカーおよび／またはネガティブ選択マーカ
ーを用いてまたは用いずに使用し、インビボで本発明のポリペプチドを発現する
細胞をトランスフェクトし得る。別の実施形態において、当該分野で公知の技術
を、目的の遺伝子を含むが、発現しない細胞中でノックアウトを作製するために
使用する。標的化された相同組換えを介した、このＤＮＡ構築物の挿入は、標的
化された遺伝子の不活性化を生じる。このようなアプローチは、胚性幹細胞に対
する改変が不活性な標的化された遺伝子を有する動物の子孫を作製するために使
用され得る研究および農業分野に特に適する（例えば、ＴｈｏｍａｓおよびＣａ
ｐｅｃｃｈｉ １９８７およびＴｈｏｍｐｓｏｎ １９８９、前出を参照のこと
）。しかし、このアプローチは、当業者に明白な適切なウイルスベクターを使用
して、組換えＤＮＡ構築物がインビボで要求された部位に直接投与され、または
標的化される場合、ヒトにおける使用に慣用的に適合され得る。

【０７５４】 本発明のさらなる実施形態において、本発明のポリペプチドを発現するように
遺伝子操作される細胞、あるいは本発明のポリペプチドを発現しないように遺伝
子操作される細胞（例えば、ノックアウト）を、インビボで患者に投与する。こ
のような細胞は、患者（すなわち、ヒトを含む動物）またはＭＨＣ適合性ドナー
から入手され得、そして線維芽細胞、骨髄細胞、血球（例えば、リンパ球）、脂
肪細胞、筋細胞、内皮細胞などを含み得るが、それらに限定されない。この細胞
を、例えば、形質導入（ウイルスベクターおよび好ましくは細胞ゲノム中に導入
遺伝子を組み込むベクターを使用する）、またはトランスフェクション手順（プ
ラスミド、コスミド、ＹＡＣ、裸のＤＮＡ、エレクトロポレーション、リポソー
ムなどの使用を含むが、これらに限定されない）によって、細胞中に本発明のポ
リペプチドのコード配列を導入するために、あるいはこのコード配列および／ま
たは本発明のポリペプチドに結合している内因性の調節配列を破壊するために、
組換えＤＮＡ技術を、使用してインビトロで遺伝子操作する。本発明のポリペプ
チドのコード配列を強力な構成的プロモーターもしくは誘導性プロモーターまた
はプロモーター／エンハンサーの制御下に配置し、非共役タンパク質ポリペプチ
ドの発現および好ましくは分泌を達成し得る。本発明のポリペプチドを発現およ
び好ましくは分泌する操作した細胞を、例えば、循環中において、または腹腔内
で患者中へ全身的に導入し得る。

【０７５５】 あるいは、この細胞をマトリックスに組み込み得、そして身体に移植し得る（
例えば、遺伝子操作した線維芽細胞を皮膚移植片の一部として移植し得る）；遺
伝子操作した内皮細胞をリンパ移植片または脈管移植片の一部として移植し得る
（例えば、Ａｎｄｅｒｓｏｎら、米国特許第５，３９９，３４９号ならびにＭｕ
ｌｌｉｇａｎおよびＷｉｌｓｏｎ、米国特許第５，４６０，９５９号を参照のこ
と。これらの各々は、本明細書中でその全体が参考として援用される）。

【０７５６】 投与される細胞が非自己または非ＭＨＣ適合性細胞である場合、それらを、こ
の導入細胞に対する宿主免疫応答の発生を妨害する周知の技術を使用して投与し
得る。例えば、この細胞をカプセル化形態で導入し得、これは、成分と細胞のす
ぐ外の環境との交換が可能である間は、導入細胞が宿主免疫系によって認識され
ることを可能にしない。

【０７５７】 本発明のノックアウト動物は、非共役タンパク質ポリペプチドの生物学的機能
の詳述、異常な非共役タンパク質発現に関連する状態および／または障害の研究
、ならびにこのような状態および／または障害を寛解させる場合に有効な化合物
のスクリーニングにおいて、有用な動物モデル系を含むが、それらに限定されな
い用途を有する。

【０７５８】 非共役タンパク質の活性における変化は、標的化される相同組換えを使用して
、非共役タンパク質遺伝子および／またはそのプロモーターを「ノックアウト」
することによって観察され得る（例えば、Ｓｍｉｔｈｉｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ
３１７：２３０〜２３４（１９８５）；ＴｈｏｍａｓおよびＣａｐｅｃｃｈｉ、
Ｃｅｌｌ ５１：５０３〜５１２（１９８７）；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、Ｃｅｌｌ
５：３１３〜３２１（１９８９）；これらの各々は、その全体において本明細
書中で参考として援用される）。これは、疾患（例えば、肥満）と関連する遺伝
子座に位置する非共役タンパク質について特に有用であり得る。このようなノッ
クアウトは、国際公開番号ＷＯ９８／３１３９６に議論されるように、自然の肥
満のモデルを生じ得る。

【０７５９】 （実施例１９：自然の肥満のマウスモデルにおける非共役タンパク質の役割） 体脂肪百分率および平均体温は、実施例１８のノックアウトマウスおよび内因
性非共役タンパク質を発現している正常マウスの両方における非共役タンパク質
の発現と相関する。非共役タンパク質をコードするｍＲＮＡを、実施例３（前出
）において決定されるように、非共役タンパク質を発現している組織から単離す
る。相関を、国際公開番号ＷＯ９８／３１３９６に記載されるように、マウスの
ｍＲＮＡレベルと体脂肪の百分率との間で決定する。負の相関（すなわち、非共
役タンパク質の発現の増加および体脂肪百分率の減少）は、非共役タンパク質が
マウスにおける体脂肪百分率に影響することを示唆する。さらに、体脂肪百分率
における増加が、自然の肥満モデルのノックアウトマウスにおいて観察される場
合、これはまた、非共役タンパク質がマウスにおける体脂肪百分率に影響するこ
とを示唆する。

【０７６０】 さらに、中心の体温を、固形試料の食餌（ｃｈｏｗ）において維持された４５
匹のＢＳＢマウスの離乳後、毎週決定する。体温の増加と非共役タンパク質の発
現の増加との間の正の相関は、非共役タンパク質がマウスにおける体温に影響す
ることを示唆する。さらに、体温における減少が、自然の肥満モデルのノックア
ウトマウスにおいて観察される場合、これはまた、非共役タンパク質がマウスに
おける体温に影響することを示唆する。

【０７６１】 本発明は、前述の記載および実施例において特に記載される以外にも実施され
得ることが明らかである。本発明の多くの改変およびバリエーションが、上記の
教示を鑑みて可能であり、従って、添付の特許請求の範囲の範囲内である。

【０７６２】 発明の背景、詳細な説明、および実施例において引用される各文書の全開示（
特許、特許出願、学術文献、要約、実験室マニュアル、書物、または他の開示を
含む）は、本明細書によって、本明細書中に参考として援用される。さらに、本
明細書とともに提出される配列表のハードコピーおよび対応するコンピュータ読
み出し形式は、それらの全体において本明細書中に参考として両方が援用される
。

【０７６３】

【表４】 （ＡＴＣＣ受託番号 ＰＴＡ−３２１） （カナダ） 出願人は、出願に基づきカナダ国特許が発行されるか、あるいは同出願が拒絶
または放棄されて回復され得なくなるかもしくは取り下げられるまでは、特許庁
長官（Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎｅｒ ｏｆ Ｐａｔｅｎｔｓ）が、長官により指名
された独立の専門家に対してのみ出願中で言及された寄託済みの生物学的材料の
サンプルの供与を許可する旨を請求し、出願人は、国際出願の公表のための規則
上の準備が完了する前に、書面によりその旨を国際事務局に告知しなければなら
ない。

【０７６４】 （ノルウェー） 出願人はここにおいて、出願が（ノルウェー特許庁により）公開に付されるか
あるいは公開を経ずにノルウェー特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの
供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は
、ノルウェー特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能
にされる時点以前に、出願人によりノルウェー特許庁に対してなされるものとす
る。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供
与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家
は、ノルウェー特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ ｏｆ
ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、
個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。

【０７６５】 （オーストラリア） 出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は、特許の付与前において、
あるいは出願の放棄（ｌａｐｓｉｎｇ）、拒絶あるいは取り下げ前において、発
明に対し利害関係を有さない当業者である対象者（ｓｋｉｌｌｅｄ ａｄｄｒｅ
ｓｓｅｅ）に対してのみ行われる旨を、告知するものである（オーストラリア国
特許法第３．２５（３）号規定）。

【０７６６】 （フィンランド） 出願人はここにおいて、出願が（特許および統制委員会（Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ｂｏａｒｄ ｏｆ Ｐａｔｅｎｔｓ ａｎｄ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）により
）公開に付されるかあるいは公開を経ずに国立特許および法規委員会による決定
を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を
、請求する。

【０７６７】 （英国） 出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は専門家に対してのみ利用可
能にされる旨を、請求する。この旨の請求は、出願の国際公表のための規則上の
準備が完了する前に、出願人により国際事務局に対してなされなければならない
。

【０７６８】 （デンマーク） 出願人はここにおいて、出願が（デンマーク特許庁により）公開に付されるか
あるいは公開を経ずにデンマーク特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの
供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は
、デンマーク特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能
にされる時点以前に、出願人によりデンマーク特許庁に対してなされるものとす
る。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供
与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家
は、デンマーク特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ ｏｆ
ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、
個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。

【０７６９】 （スウェーデン） 出願人はここにおいて、出願が（スウェーデン特許庁により）公開に付される
かあるいは公開を経ずにスウェーデン特許庁による決定を受けるまでは、サンプ
ルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請
求は、優先日から１６ヶ月が経過するよりも前に、出願人により国際事務局に対
してなされるものとする（好ましくはＰＣＴ Ａｐｐｌｉｃａｎｔ’ｓ Ｇｕｉ
ｄｅのＶｏｌｕｍｅ Ｉのａｎｎｅｘ Ｚに記載された書式ＰＣＴ／ＲＯ／１３
４による）。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサン
プルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする
。専門家は、スウェーデン特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓ
ｔ ｏｆ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、
あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。

【０７７０】 （オランダ） 出願人はここにおいて、オランダ特許の発行日まで、あるいは出願が拒絶、取
り下げあるいは放棄（ｌａｐｓｅｄ）される日までは、特許法３１Ｆ（１）の規
定に基づき、微生物は専門家へのサンプル供与の形でのみ行われる旨を、請求す
る。この旨の請求は、オランダ王国特許法の第２２Ｃ条または第２５条に基づき
出願が公に利用可能にされる日のうちいずれか早い方の日付よりも前に、出願人
によりオランダ工業所有権局に対して提出されるものとする。

【０７７１】

【表５】 （ＡＴＣＣ受託番号 ＰＴＡ−１９７） （カナダ） 出願人は、出願に基づきカナダ国特許が発行されるか、あるいは同出願が拒絶
または放棄されて回復され得なくなるかもしくは取り下げられるまでは、特許庁
長官（Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎｅｒ ｏｆ Ｐａｔｅｎｔｓ）が、長官により指名
された独立の専門家に対してのみ出願中で言及された寄託済みの生物学的材料の
サンプルの供与を許可する旨を請求し、出願人は、国際出願の公表のための規則
上の準備が完了する前に、書面によりその旨を国際事務局に告知しなければなら
ない。

【０７７２】 （ノルウェー） 出願人はここにおいて、出願が（ノルウェー特許庁により）公開に付されるか
あるいは公開を経ずにノルウェー特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの
供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は
、ノルウェー特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能
にされる時点以前に、出願人によりノルウェー特許庁に対してなされるものとす
る。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供
与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家
は、ノルウェー特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ ｏｆ
ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、
個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。

【０７７３】 （オーストラリア） 出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は、特許の付与前において、
あるいは出願の放棄（ｌａｐｓｉｎｇ）、拒絶あるいは取り下げ前において、発
明に対し利害関係を有さない当業者である対象者（ｓｋｉｌｌｅｄ ａｄｄｒｅ
ｓｓｅｅ）に対してのみ行われる旨を、告知するものである（オーストラリア国
特許法第３．２５（３）号規定）。

【０７７４】 （フィンランド） 出願人はここにおいて、出願が（特許および統制委員会（Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ｂｏａｒｄ ｏｆ Ｐａｔｅｎｔｓ ａｎｄ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）により
）公開に付されるかあるいは公開を経ずに国立特許および法規委員会による決定
を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を
、請求する。

【０７７５】 （英国） 出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は専門家に対してのみ利用可
能にされる旨を、請求する。この旨の請求は、出願の国際公表のための規則上の
準備が完了する前に、出願人により国際事務局に対してなされなければならない
。

【０７７６】 （デンマーク） 出願人はここにおいて、出願が（デンマーク特許庁により）公開に付されるか
あるいは公開を経ずにデンマーク特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの
供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は
、デンマーク特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能
にされる時点以前に、出願人によりデンマーク特許庁に対してなされるものとす
る。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供
与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家
は、デンマーク特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ ｏｆ
ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、
個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。

【０７７７】 （スウェーデン） 出願人はここにおいて、出願が（スウェーデン特許庁により）公開に付される
かあるいは公開を経ずにスウェーデン特許庁による決定を受けるまでは、サンプ
ルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請
求は、優先日から１６ヶ月が経過するよりも前に、出願人により国際事務局に対
してなされるものとする（好ましくはＰＣＴ Ａｐｐｌｉｃａｎｔ’ｓ Ｇｕｉ
ｄｅのＶｏｌｕｍｅ Ｉのａｎｎｅｘ Ｚに記載された書式ＰＣＴ／ＲＯ／１３
４による）。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサン
プルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする
。専門家は、スウェーデン特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓ
ｔ ｏｆ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、
あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。

【０７７８】 （オランダ） 出願人はここにおいて、オランダ特許の発行日まで、あるいは出願が拒絶、取
り下げあるいは放棄（ｌａｐｓｅｄ）される日までは、特許法３１Ｆ（１）の規
定に基づき、微生物は専門家へのサンプル供与の形でのみ行われる旨を、請求す
る。この旨の請求は、オランダ王国特許法の第２２Ｃ条または第２５条に基づき
出願が公に利用可能にされる日のうちいずれか早い方の日付よりも前に、出願人
によりオランダ工業所有権局に対して提出されるものとする。

【０７７９】

【表６】 （ＡＴＣＣ受託番号 ＰＴＡ−９２８） （カナダ） 出願人は、出願に基づきカナダ国特許が発行されるか、あるいは同出願が拒絶
または放棄されて回復され得なくなるかもしくは取り下げられるまでは、特許庁
長官（Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎｅｒ ｏｆ Ｐａｔｅｎｔｓ）が、長官により指名
された独立の専門家に対してのみ出願中で言及された寄託済みの生物学的材料の
サンプルの供与を許可する旨を請求し、出願人は、国際出願の公表のための規則
上の準備が完了する前に、書面によりその旨を国際事務局に告知しなければなら
ない。

【０７８０】 （ノルウェー） 出願人はここにおいて、出願が（ノルウェー特許庁により）公開に付されるか
あるいは公開を経ずにノルウェー特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの
供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は
、ノルウェー特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能
にされる時点以前に、出願人によりノルウェー特許庁に対してなされるものとす
る。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供
与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家
は、ノルウェー特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ ｏｆ
ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、
個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。

【０７８１】 （オーストラリア） 出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は、特許の付与前において、
あるいは出願の放棄（ｌａｐｓｉｎｇ）、拒絶あるいは取り下げ前において、発
明に対し利害関係を有さない当業者である対象者（ｓｋｉｌｌｅｄ ａｄｄｒｅ
ｓｓｅｅ）に対してのみ行われる旨を、告知するものである（オーストラリア国
特許法第３．２５（３）号規定）。

【０７８２】 （フィンランド） 出願人はここにおいて、出願が（特許および統制委員会（Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ｂｏａｒｄ ｏｆ Ｐａｔｅｎｔｓ ａｎｄ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）により
）公開に付されるかあるいは公開を経ずに国立特許および法規委員会による決定
を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を
、請求する。

【０７８３】 （英国） 出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は専門家に対してのみ利用可
能にされる旨を、請求する。この旨の請求は、出願の国際公表のための規則上の
準備が完了する前に、出願人により国際事務局に対してなされなければならない
。

【０７８４】 （デンマーク） 出願人はここにおいて、出願が（デンマーク特許庁により）公開に付されるか
あるいは公開を経ずにデンマーク特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの
供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は
、デンマーク特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能
にされる時点以前に、出願人によりデンマーク特許庁に対してなされるものとす
る。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供
与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家
は、デンマーク特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ ｏｆ
ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、
個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。

【０７８５】 （スウェーデン） 出願人はここにおいて、出願が（スウェーデン特許庁により）公開に付される
かあるいは公開を経ずにスウェーデン特許庁による決定を受けるまでは、サンプ
ルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請
求は、優先日から１６ヶ月が経過するよりも前に、出願人により国際事務局に対
してなされるものとする（好ましくはＰＣＴ Ａｐｐｌｉｃａｎｔ’ｓ Ｇｕｉ
ｄｅのＶｏｌｕｍｅ Ｉのａｎｎｅｘ Ｚに記載された書式ＰＣＴ／ＲＯ／１３
４による）。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサン
プルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする
。専門家は、スウェーデン特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓ
ｔ ｏｆ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、
あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。

【０７８６】 （オランダ） 出願人はここにおいて、オランダ特許の発行日まで、あるいは出願が拒絶、取
り下げあるいは放棄（ｌａｐｓｅｄ）される日までは、特許法３１Ｆ（１）の規
定に基づき、微生物は専門家へのサンプル供与の形でのみ行われる旨を、請求す
る。この旨の請求は、オランダ王国特許法の第２２Ｃ条または第２５条に基づき
出願が公に利用可能にされる日のうちいずれか早い方の日付よりも前に、出願人
によりオランダ工業所有権局に対して提出されるものとする。

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｋ 16/18 Ｃ１２Ｎ 1/19 ４Ｃ０８４ Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 ４Ｈ０４５ 1/19 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｃ１２Ｐ 21/02 33/50 Ｚ Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｇ０１Ｎ 33/15 5/00 Ａ 33/50 Ａ６１Ｋ 37/02 (31)優先権主張番号 ６０／１４９，４４８ (32)優先日 平成11年８月18日(1999．8．18) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ６０／１６４，７５１ (32)優先日 平成11年11月12日(1999．11．12) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ルーベン， スティーブン エム． アメリカ合衆国 メリーランド 20832， オルニー， ヘリテイジ ヒルズ ドラ イブ 18528 (72)発明者 ニ， ジアン アメリカ合衆国 メリーランド 20853， ロックビル， マナーフィールド ロー ド 5502 (72)発明者 コマットソウリス， ジョージ アメリカ合衆国 メリーランド 20901， シルバー スプリング， ギャーウッド ストリート 9518 (72)発明者 ローゼン， クレイグ エイ． アメリカ合衆国 メリーランド 20882， レイトンズビル， ローリング ヒル ロード 22400 (72)発明者 ソペット， ダニエル アール． アメリカ合衆国 バージニア 22020， センタービル， スティルフィールド プ レイス 15050 Ｆターム(参考） 2G045 AA40 DA12 DA13 DA36 FB02 FB03 4B024 AA01 AA11 BA80 CA04 DA02 DA06 EA02 EA04 GA11 HA01 HA12 HA15 HA17 4B063 QA01 QA07 QA12 QA17 QA19 QQ43 QR56 QS25 QS34 4B064 AG01 CA02 CA10 CA19 CC24 DA01 DA13 4B065 AA26X AA90X AA93Y AB01 AC14 BA01 CA24 CA44 CA46 4C084 AA02 AA07 AA13 BA01 BA08 BA16 BA17 BA18 BA19 BA20 BA21 BA22 BA23 CA53 NA14 ZA512 ZA592 ZA682 ZA702 ZA812 ZA892 ZA962 ZB012 ZB152 ZB262 ZB272 ZB352 ZC552 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 BA41 CA40 EA21 EA22 EA27 EA28 EA29 EA50 FA74

Claims (21)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 単離された核酸分子であって、以下： （ａ）配列番号Ｘに示されるポリヌクレオチド、またはＡＴＣＣ受託番号Ｚに
   含まれるｃＤＮＡによってコードされるポリヌクレオチド； （ｂ）配列番号Ｙの生物学的に活性なポリペプチドフラグメント、またはＡＴ
   ＣＣ受託番号Ｚに含まれるｃＤＮＡ配列によってコードされる生物学的に活性な
   ポリペプチドフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド； （ｃ）配列番号Ｙのポリペプチドエピトープ、またはＡＴＣＣ受託番号Ｚに含
   まれるｃＤＮＡ配列によってコードされるポリペプチドエピトープをコードする
   、ポリヌクレオチド； （ｄ）（ａ）〜（ｃ）において特定されるポリヌクレオチドのいずれか１つに
   ストリンジェント条件下でハイブリダイズし得るポリヌクレオチドであって、こ
   こで、該ポリヌクレオチドは、Ａ残基のみまたはＴ残基のみのヌクレオチド配列
   を有する核酸分子に、ストリンジェント条件下でハイブリダイズしない、ポリヌ
   クレオチド、 からなる群より選択されるポリヌクレオチドを含む、単離された核酸分子。
2. 【請求項２】 前記ポリヌクレオチドが、可溶性ポリペプチドをコードする
   ヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載の単離された核酸分子。
3. 【請求項３】 前記ポリヌクレオチドが、配列番号Ｙとして同定される配列
   をコードするヌクレオチド配列、またはＡＴＣＣ受託番号Ｚに含まれるｃＤＮＡ
   配列によってコードされるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、
   請求項１に記載の単離された核酸分子。
4. 【請求項４】 前記ポリヌクレオチドが、配列番号Ｘの全体のヌクレオチド
   配列、またはＡＴＣＣ受託番号Ｚに含まれるｃＤＮＡを含む、請求項１に記載の
   単離された核酸分子。
5. 【請求項５】 前記ポリヌクレオチドがＤＮＡである、請求項２に記載の単
   離された核酸分子。
6. 【請求項６】 前記ポリヌクレオチドがＲＮＡである、請求項３に記載の単
   離された核酸分子。
7. 【請求項７】 請求項１に記載の単離された核酸分子を含む、ベクター。
8. 【請求項８】 請求項７に記載のベクターを含む、宿主細胞。
9. 【請求項９】 遺伝子発現を制御する異種調節エレメントに作動可能に連結
   されている請求項１に記載の核酸分子を含む、組換え宿主細胞。
10. 【請求項１０】 請求項９に記載の宿主細胞からコードされたポリペプチド
    を発現する工程、および該ポリペプチドを回収する工程を包含する、ポリペプチ
    ドの産生方法。
11. 【請求項１１】 単離されたポリペプチドであって、以下： （ａ）配列番号Ｙに示されるポリペプチド、またはｃＤＮＡによってコードさ
    れるポリペプチド； （ｂ）配列番号Ｙのポリペプチドフラグメント、またはｃＤＮＡによってコー
    ドされるポリペプチド； （ｃ）配列番号Ｙのポリペプチドエピトープ、またはｃＤＮＡによってコード
    されるポリペプチド；および （ｄ）配列番号Ｙの改変体、 からなる群より選択される配列に少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、
    単離されたポリペプチド。
12. 【請求項１２】 配列番号Ｙを有するポリペプチドを含む、請求項１１に記
    載の単離されたポリペプチド。
13. 【請求項１３】 請求項１１に記載の単離されたポリペプチドに特異的に結
    合する、単離された抗体。
14. 【請求項１４】 請求項１１に記載の単離されたポリペプチドを発現する、
    組換え宿主細胞。
15. 【請求項１５】 単離されたポリペプチドを作製する方法であって、以下： （ａ）該ポリペプチドが発現されるような条件下で、請求項１４に記載の組換
    え宿主細胞を培養する工程；および （ｂ）該ポリペプチドを回収する工程、 を包含する、方法。
16. 【請求項１６】 請求項１５に記載の方法によって産生される、ポリペプチ
    ド。
17. 【請求項１７】 医学的状態を予防、処置、または緩和する方法であって、
    請求項１１に記載のポリペプチドまたは請求項１に記載のポリヌクレオチドの治
    療有効量を、哺乳動物被験体に投与する工程を包含する、方法。
18. 【請求項１８】 被験体における病理学的状態、または病理学的状態に対す
    る感受性を診断する方法であって、以下： （ａ）請求項１に記載のポリヌクレオチドにおける変異の存在または非存在を
    決定する工程；および （ｂ）該変異の存在または非存在に基づいて病理学的状態、または病理学的状
    態に対する感受性を診断する工程、 を包含する、方法。
19. 【請求項１９】 被験体において病理学的状態、または病理学的状態に対す
    る感受性を診断する方法であって、以下： （ａ）生物学的サンプルにおける請求項１１に記載のポリペプチドの発現の存
    在または量を決定する工程；および （ｂ）該ポリペプチドの発現の存在または量に基づいて病理学的状態、または
    病理学的状態に対する感受性を診断する工程、 を包含する、方法。
20. 【請求項２０】 請求項１１に記載のポリペプチドに対する結合パートナー
    を同定する方法であって、以下： （ａ）請求項１１に記載のポリペプチドを結合パートナーと接触させる工程；
    および （ｂ）該結合パートナーが該ポリペプチドの活性をもたらすか否かを決定する
    工程、 を包含する、方法。
21. 【請求項２１】 請求項１１に記載のポリペプチドの活性を改変する分子を
    スクリーニングする方法であって、以下： （ａ）該ポリペプチドを、アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する
    と疑われる化合物と接触させる工程；および （ｂ）該ポリペプチドの活性をアッセイする工程； を包含する、方法。