JP2003505095A - Ａｂｃトランスポートポリヌクレオチド、ポリペプチド、および抗体 - Google Patents
Ａｂｃトランスポートポリヌクレオチド、ポリペプチド、および抗体Info
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Abstract
(57)【要約】
本発明は、新規なヒトＡＢＣトランスポート（輸送）ポリペプチドおよびそのようなポリペプチドをコードする遺伝子のコード領域を含む単離された核酸に関する。また、ヒトＡＢＣトランスポートポリペプチドを産生するためのベクター、宿主細胞、抗体および組換え方法が提供される。本発明はさらに、これらの新規なヒトＡＢＣトランスポートポリペプチドに関する障害を診断および処置するために有用な診断方法および治療方法に関する。
Description
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、新規なＡＢＣトランスポート（ＡＢＣ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ：ＡＢ
Ｃ輸送）ファミリーのタンパク質に関する。より詳細には、新規なＡＢＣトラン
スポートポリペプチドをコードする単離された核酸分子が提供される。新規なＡ
ＢＣトランスポートポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに結合する抗体が
提供される。ヒトＡＢＣトランスポートポリヌクレオチドおよび／またはポリペ
プチドを産生するためのベクター、宿主細胞、ならびに組換え方法および合成方
法がまた提供される。本発明はさらに、これらの新規なＡＢＣトランスポートポ
リペプチドに関する障害を診断、処置、予防および／または予測するのに有用な
診断方法および治療方法に関する。本発明はさらに、本発明のポリヌクレオチド
およびポリペプチドのアゴニストおよびアンタゴニストを同定するためのスクリ
ーニング方法に関する。本発明はさらに、本発明のポリペプチドの産生および機
能を阻害する方法および／または組成物に関する。
Ｃ輸送）ファミリーのタンパク質に関する。より詳細には、新規なＡＢＣトラン
スポートポリペプチドをコードする単離された核酸分子が提供される。新規なＡ
ＢＣトランスポートポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに結合する抗体が
提供される。ヒトＡＢＣトランスポートポリヌクレオチドおよび／またはポリペ
プチドを産生するためのベクター、宿主細胞、ならびに組換え方法および合成方
法がまた提供される。本発明はさらに、これらの新規なＡＢＣトランスポートポ
リペプチドに関する障害を診断、処置、予防および／または予測するのに有用な
診断方法および治療方法に関する。本発明はさらに、本発明のポリヌクレオチド
およびポリペプチドのアゴニストおよびアンタゴニストを同定するためのスクリ
ーニング方法に関する。本発明はさらに、本発明のポリペプチドの産生および機
能を阻害する方法および／または組成物に関する。
【０００２】
（発明の背景）
ＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）トランスポーター（輸送）タンパク質は、膜を
横切る広範囲の基質のエネルギー依存性輸送に関与する原核生物および真核生物
の膜タンパク質の大きいファミリーを含む（Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｃ．Ｆ．ら、Ａｎ
ｎ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．８：６７〜１１３（１９９２））。真核生物
においては、ＡＢＣトランスポートタンパク質は、代表的には、２つの保存ＡＴ
Ｐ結合ドメインおよび２つの膜貫通ドメインを含む４つのドメインから構成され
る（Ｈｙｄｅら、Ｎａｔｕｒｅ，３４６：３６２〜５（１９９０））。真核生物
のＡＢＣトランスポートタンパク質の例は、Ｍｕｌｔｉ−Ｄｒｕｇ−Ｒｅｓｉｓ
ｔａｎｃｅ（多剤耐性）１タンパク質（ＭＤＲ１）である。このタンパク質はま
た、Ｐ−糖タンパク質とも呼ばれ、そして広範な薬物（例えば、化学療法薬物）
に対して細胞に耐性を付与することに関する（Ｇｏｔｔｅｓｍａｎら、Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：１２１６３〜６（１９８８））。さらなる例としては
、ＣＦＴＲ（嚢胞性線維症に関与する（Ｒｉｏｒｄａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２
４５：１０６６〜７３（１９８９））、ＴＡＰ輸送タンパク質（ヒトリンパ球抗
原（ＨＬＡ）クラスＩタンパク質の小ペプチド提示に関与する）（ｄｅ ｌａ
Ｓａｌｌｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６５：２３７〜４１（１９９４））、および
ＳＵＲタンパク質（この欠損は、幼少時の家族性持続性高インスリン性低血糖症
（ＰＨＨＩ）を有する患者における上方制御されたインスリン分泌に関与する）
（Ｔｈｏｍａｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６８：４２６〜９（１９９５））が挙げ
られる。
横切る広範囲の基質のエネルギー依存性輸送に関与する原核生物および真核生物
の膜タンパク質の大きいファミリーを含む（Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｃ．Ｆ．ら、Ａｎ
ｎ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．８：６７〜１１３（１９９２））。真核生物
においては、ＡＢＣトランスポートタンパク質は、代表的には、２つの保存ＡＴ
Ｐ結合ドメインおよび２つの膜貫通ドメインを含む４つのドメインから構成され
る（Ｈｙｄｅら、Ｎａｔｕｒｅ，３４６：３６２〜５（１９９０））。真核生物
のＡＢＣトランスポートタンパク質の例は、Ｍｕｌｔｉ−Ｄｒｕｇ−Ｒｅｓｉｓ
ｔａｎｃｅ（多剤耐性）１タンパク質（ＭＤＲ１）である。このタンパク質はま
た、Ｐ−糖タンパク質とも呼ばれ、そして広範な薬物（例えば、化学療法薬物）
に対して細胞に耐性を付与することに関する（Ｇｏｔｔｅｓｍａｎら、Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：１２１６３〜６（１９８８））。さらなる例としては
、ＣＦＴＲ（嚢胞性線維症に関与する（Ｒｉｏｒｄａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２
４５：１０６６〜７３（１９８９））、ＴＡＰ輸送タンパク質（ヒトリンパ球抗
原（ＨＬＡ）クラスＩタンパク質の小ペプチド提示に関与する）（ｄｅ ｌａ
Ｓａｌｌｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６５：２３７〜４１（１９９４））、および
ＳＵＲタンパク質（この欠損は、幼少時の家族性持続性高インスリン性低血糖症
（ＰＨＨＩ）を有する患者における上方制御されたインスリン分泌に関与する）
（Ｔｈｏｍａｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６８：４２６〜９（１９９５））が挙げ
られる。
【０００３】
このファミリーのタンパク質のメンバーにより媒介される特定の基質の輸送に
おける欠損は、上記で考察される多くの疾患を生じる。従って、ＡＢＣトランス
ポートファミリーのタンパク質の新規なメンバー（このファミリーのタンパク質
のメンバーによる、特定の基質の異常な輸送から生じる疾患に関与し得る）を同
定し、そして特徴付ける必要性が存在する。構造的に関連するが、これらのレセ
プターは、種々の細胞および組織型における多様かつ多面的な機能を有するよう
である。レセプター型分子は、低分子および他のこのような薬学的に価値のある
因子のための標的ベースのスクリーニングにおいて有用性を証明する。このよう
なレセプターに対して惹起されたモノクローナル抗体は、抗腫瘍能、診断能また
は他の能力において治療剤として有用性を証明し得る。さらに本明細書において
記載されるレセプターは、癌または他の免疫無防備疾患状態を有する患者におい
て、能動的または受動的な免疫治療的役割における有用性を証明し得る。
おける欠損は、上記で考察される多くの疾患を生じる。従って、ＡＢＣトランス
ポートファミリーのタンパク質の新規なメンバー（このファミリーのタンパク質
のメンバーによる、特定の基質の異常な輸送から生じる疾患に関与し得る）を同
定し、そして特徴付ける必要性が存在する。構造的に関連するが、これらのレセ
プターは、種々の細胞および組織型における多様かつ多面的な機能を有するよう
である。レセプター型分子は、低分子および他のこのような薬学的に価値のある
因子のための標的ベースのスクリーニングにおいて有用性を証明する。このよう
なレセプターに対して惹起されたモノクローナル抗体は、抗腫瘍能、診断能また
は他の能力において治療剤として有用性を証明し得る。さらに本明細書において
記載されるレセプターは、癌または他の免疫無防備疾患状態を有する患者におい
て、能動的または受動的な免疫治療的役割における有用性を証明し得る。
【０００４】
（発明の要旨）
本発明は、配列表に開示されるポリヌクレオチド配列ならびに／または表１に
記載されるヒトｃＤＮＡプラスミドに含まれるポリヌクレオチド配列、およびＡ
ｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ
）に寄託されたポリヌクレオチド配列を含むか、またはこれらから構成される単
離された核酸分子を包含する。これらの核酸分子のフラグメント、改変体および
誘導体もまた、本発明により包含される。本発明はまた、ＡＢＣトランスポート
ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むか、またはこのポリヌクレオ
チドから構成される単離された核酸分子を包含する。本発明はさらに、これらの
ポリヌクレオチドによりコードされるＡＢＣトランスポートポリペプチドを含む
。配列表に開示されるＡＢＣトランスポートポリペプチドならびに／または表１
に記載のヒトｃＤＮＡプラスミドにコードされたＡＢＣトランスポートポリペプ
チド、およびＡＴＣＣに寄託されたＡＢＣトランスポートポリペプチドを含むか
、またはこれらから構成されるアミノ酸配列がさらに提供される。これらのポリ
ペプチドに結合する抗体はまた、本発明により包含される。これらのアミノ酸配
列のポリペプチドフラグメント、改変体および誘導体はまた、これらのポリペプ
チドをコードするポリヌクレオチドおよびこれらのポリペプチドに結合する抗体
がそうであるように、本発明により包含される。
記載されるヒトｃＤＮＡプラスミドに含まれるポリヌクレオチド配列、およびＡ
ｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ
）に寄託されたポリヌクレオチド配列を含むか、またはこれらから構成される単
離された核酸分子を包含する。これらの核酸分子のフラグメント、改変体および
誘導体もまた、本発明により包含される。本発明はまた、ＡＢＣトランスポート
ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むか、またはこのポリヌクレオ
チドから構成される単離された核酸分子を包含する。本発明はさらに、これらの
ポリヌクレオチドによりコードされるＡＢＣトランスポートポリペプチドを含む
。配列表に開示されるＡＢＣトランスポートポリペプチドならびに／または表１
に記載のヒトｃＤＮＡプラスミドにコードされたＡＢＣトランスポートポリペプ
チド、およびＡＴＣＣに寄託されたＡＢＣトランスポートポリペプチドを含むか
、またはこれらから構成されるアミノ酸配列がさらに提供される。これらのポリ
ペプチドに結合する抗体はまた、本発明により包含される。これらのアミノ酸配
列のポリペプチドフラグメント、改変体および誘導体はまた、これらのポリペプ
チドをコードするポリヌクレオチドおよびこれらのポリペプチドに結合する抗体
がそうであるように、本発明により包含される。
【０００５】
（発明の詳細な説明）
（表）
表１は、本出願に関連してＡＴＣＣに寄託された、ＡＴＣＣ寄託物、寄託日、
およびＡＴＣＣ指定番号をまとめる。表１はさらに、以下に記載の各々の「遺伝
子番号（Ｇｅｎｅ Ｎｏ）」の付随する情報をまとめる。この情報には、ｃＤＮ
Ａクローン識別子（ＩＤ）、ｃＤＮＡクローン識別子（ＩＤ）に含まれるベクタ
ーの型、ヌクレオチド配列識別子番号、開示された配列に含まれるヌクレオチド
、開示された配列の開始コドンの５’ヌクレオチドの位置、アミノ酸配列識別子
番号、および開示された配列によりコードされるＯＲＦの最後のアミノ酸を含む
。
およびＡＴＣＣ指定番号をまとめる。表１はさらに、以下に記載の各々の「遺伝
子番号（Ｇｅｎｅ Ｎｏ）」の付随する情報をまとめる。この情報には、ｃＤＮ
Ａクローン識別子（ＩＤ）、ｃＤＮＡクローン識別子（ＩＤ）に含まれるベクタ
ーの型、ヌクレオチド配列識別子番号、開示された配列に含まれるヌクレオチド
、開示された配列の開始コドンの５’ヌクレオチドの位置、アミノ酸配列識別子
番号、および開示された配列によりコードされるＯＲＦの最後のアミノ酸を含む
。
【０００６】
（定義）
以下の定義は、本明細書を通じて使用される特定の用語の理解を容易にするた
めに提供される。
めに提供される。
【０００７】
本発明において、「単離された」とは、その本来の環境（例えば、それが天然
に存在する場合は天然の環境）から取り出された物質をいい、したがって、天然
の状態から「人間の手によって」変更されている。例えば、単離されたポリヌク
レオチドは、ベクターまたは組成物の一部であり得るか、あるいは細胞中に含ま
れ得、そしてなお「単離される」。なぜなら、ベクター、組成物、または特定の
細胞は、ポリヌクレオチドの本来の環境ではないからである。用語「単離された
」とは、ゲノムライブラリーまたはｃＤＮＡライブラリー、全細胞調製物または
ｍＲＮＡ調製物、ゲノムＤＮＡ調製物（電気泳動によって分離され、そしてブロ
ッティング上に移されたものを含む）、共有された全細胞ゲノムＤＮＡ調製物、
または他の組成物（当業者には本発明のポリヌクレオチド／配列の特徴と識別不
能である）を言わない。
に存在する場合は天然の環境）から取り出された物質をいい、したがって、天然
の状態から「人間の手によって」変更されている。例えば、単離されたポリヌク
レオチドは、ベクターまたは組成物の一部であり得るか、あるいは細胞中に含ま
れ得、そしてなお「単離される」。なぜなら、ベクター、組成物、または特定の
細胞は、ポリヌクレオチドの本来の環境ではないからである。用語「単離された
」とは、ゲノムライブラリーまたはｃＤＮＡライブラリー、全細胞調製物または
ｍＲＮＡ調製物、ゲノムＤＮＡ調製物（電気泳動によって分離され、そしてブロ
ッティング上に移されたものを含む）、共有された全細胞ゲノムＤＮＡ調製物、
または他の組成物（当業者には本発明のポリヌクレオチド／配列の特徴と識別不
能である）を言わない。
【０００８】
本明細書で使用される「ポリヌクレオチド」とは、配列番号Ｘに含まれる核酸
配列を有する分子（表１の第５列に記載）、またはｃＤＮＡプラスミド：Ｚ（表
１の第３列に記載され、そしてＡＴＣＣに寄託されたプラスミドのプール内に含
まれる）に含まれる核酸配列をいう。例えば、ポリヌクレオチドは、５’および
３’非翻訳配列、天然もしくは人工のシグナル配列を含むかもしくは含まないコ
ード領域、分泌タンパク質コード領域を含む全長ｃＤＮＡ配列のヌクレオチド配
列、ならびにこの核酸配列のフラグメント、エピトープ、ドメイン、および改変
体を含み得る。さらに、本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」とは、広
く定義される場合、本発明のポリヌクレオチドによりコードされるアミノ酸配列
を有する分子をいう（ｃＤＮＡに対応する配列のポリＡテールの翻訳から生じる
ポリ−フェニルアラニンまたはポリリジンペプチド配列は明らかに除外する）。
配列を有する分子（表１の第５列に記載）、またはｃＤＮＡプラスミド：Ｚ（表
１の第３列に記載され、そしてＡＴＣＣに寄託されたプラスミドのプール内に含
まれる）に含まれる核酸配列をいう。例えば、ポリヌクレオチドは、５’および
３’非翻訳配列、天然もしくは人工のシグナル配列を含むかもしくは含まないコ
ード領域、分泌タンパク質コード領域を含む全長ｃＤＮＡ配列のヌクレオチド配
列、ならびにこの核酸配列のフラグメント、エピトープ、ドメイン、および改変
体を含み得る。さらに、本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」とは、広
く定義される場合、本発明のポリヌクレオチドによりコードされるアミノ酸配列
を有する分子をいう（ｃＤＮＡに対応する配列のポリＡテールの翻訳から生じる
ポリ−フェニルアラニンまたはポリリジンペプチド配列は明らかに除外する）。
【０００９】
本発明において、配列番号Ｘの配列を含む代表的プラスミドは、アメリカンタ
イプカルチャーコレクション（「ＡＴＣＣ」）に寄託されているか、および／ま
たは表１に記載している。表１に示すように、各プラスミドは、ｃＤＮＡクロー
ンＩＤ（識別子）およびＡＴＣＣ寄託番号（ＡＴＣＣ受託番号：Ｚ）によって同
定される。プールされ，単一の寄託物として寄託されたプラスミドは、同じＡＴ
ＣＣ受託番号を有する。ＡＴＣＣは、アメリカ合衆国、バージニア２０１１０−
２２０９、マナサス、Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ大学 １０８０１に位置する。ＡＴＣ
Ｃ寄託は、特許手続上の微生物の寄託の国際承認に関するブダペスト条約の条項
によって行われた。
イプカルチャーコレクション（「ＡＴＣＣ」）に寄託されているか、および／ま
たは表１に記載している。表１に示すように、各プラスミドは、ｃＤＮＡクロー
ンＩＤ（識別子）およびＡＴＣＣ寄託番号（ＡＴＣＣ受託番号：Ｚ）によって同
定される。プールされ，単一の寄託物として寄託されたプラスミドは、同じＡＴ
ＣＣ受託番号を有する。ＡＴＣＣは、アメリカ合衆国、バージニア２０１１０−
２２０９、マナサス、Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ大学 １０８０１に位置する。ＡＴＣ
Ｃ寄託は、特許手続上の微生物の寄託の国際承認に関するブダペスト条約の条項
によって行われた。
【００１０】
本発明の「ポリヌクレオチド」はまた、ストリンジェントなハイブリダイゼー
ション条件下で、配列番号Ｘに含まれる配列、その相補体（例えば、本明細書に
記載のポリヌクレオチドフラグメントの任意の１、２、３、４またはそれ以上の
相補体）、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺに含まれた配列（例えば、本明
細書に記載のポリヌクレオチドフラグメントの任意の１、２、３、４またはそれ
以上の相補体）にハイブリダイズし得るそれらのポリヌクレオチドを含む。「ス
トリンジェントなハイブリダイゼーション条件」とは、５０％ホルムアミド、５
×ＳＳＣ（７５０ｍＭ ＮａＣｌ、７５ｍＭクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭリ
ン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×Ｄｅｎｈａｒｄｔ溶液、１０％硫酸デキス
トラン、および２０μｇ／ｍｌ変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中での４２℃
での一晩インキュベーション、次いで０．１×ＳＳＣ中で約６５℃にてフィルタ
ーを洗浄することをいう。
ション条件下で、配列番号Ｘに含まれる配列、その相補体（例えば、本明細書に
記載のポリヌクレオチドフラグメントの任意の１、２、３、４またはそれ以上の
相補体）、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺに含まれた配列（例えば、本明
細書に記載のポリヌクレオチドフラグメントの任意の１、２、３、４またはそれ
以上の相補体）にハイブリダイズし得るそれらのポリヌクレオチドを含む。「ス
トリンジェントなハイブリダイゼーション条件」とは、５０％ホルムアミド、５
×ＳＳＣ（７５０ｍＭ ＮａＣｌ、７５ｍＭクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭリ
ン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×Ｄｅｎｈａｒｄｔ溶液、１０％硫酸デキス
トラン、および２０μｇ／ｍｌ変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中での４２℃
での一晩インキュベーション、次いで０．１×ＳＳＣ中で約６５℃にてフィルタ
ーを洗浄することをいう。
【００１１】
より低いストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件で本発明のポリヌ
クレオチドにハイブリダイズする核酸分子もまた本発明の「ポリヌクレオチド」
のうちであると意図される。ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーおよ
びシグナル検出の変化は、主として、ホルムアミド濃度（より低い百分率のホル
ムアミドが、低下したストリンジェンシーを生じる）；塩条件、または温度の操
作によって達成される。例えば、より低いストリンジェンシー条件は、６×ＳＳ
ＰＥ（２０×ＳＳＰＥ＝３Ｍ ＮａＣｌ；０．２Ｍ ＮａＨ2ＰＯ4；０．０２Ｍ
ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）、０．５％ ＳＤＳ、３０％ホルムアミド、１００μ
ｇ／ｍｌサケ精子ブロッキングＤＮＡを含む溶液中での３７℃で一晩のインキュ
ベーション；次いで１×ＳＳＰＥ、０．１％ ＳＤＳを用いた５０℃での洗浄を
含む。さらに、さらになおより低いストリンジェンシーを達成するために、スト
リンジェントなハイブリダイゼーション後に実施される洗浄は、より高い塩濃度
（例えば、５×ＳＳＣ）で行われ得る。
クレオチドにハイブリダイズする核酸分子もまた本発明の「ポリヌクレオチド」
のうちであると意図される。ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーおよ
びシグナル検出の変化は、主として、ホルムアミド濃度（より低い百分率のホル
ムアミドが、低下したストリンジェンシーを生じる）；塩条件、または温度の操
作によって達成される。例えば、より低いストリンジェンシー条件は、６×ＳＳ
ＰＥ（２０×ＳＳＰＥ＝３Ｍ ＮａＣｌ；０．２Ｍ ＮａＨ2ＰＯ4；０．０２Ｍ
ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）、０．５％ ＳＤＳ、３０％ホルムアミド、１００μ
ｇ／ｍｌサケ精子ブロッキングＤＮＡを含む溶液中での３７℃で一晩のインキュ
ベーション；次いで１×ＳＳＰＥ、０．１％ ＳＤＳを用いた５０℃での洗浄を
含む。さらに、さらになおより低いストリンジェンシーを達成するために、スト
リンジェントなハイブリダイゼーション後に実施される洗浄は、より高い塩濃度
（例えば、５×ＳＳＣ）で行われ得る。
【００１２】
上記の条件における変化が、ハイブリダイゼーション実験においてバックグラ
ウンドを抑制するために使用される代替的なブロッキング試薬の包含および／ま
たは置換によって達成され得ることに留意すること。代表的なブロッキング試薬
としては、Ｄｅｎｈａｒｄｔ試薬、ＢＬＯＴＴＯ、ヘパリン、変性サケ精子ＤＮ
Ａ、および市販の専売処方物が挙げられる。特異的なブロッキング試薬の包含は
、適合性の問題に起因して、上記のハイブリダイゼーション条件の改変を必要と
し得る。
ウンドを抑制するために使用される代替的なブロッキング試薬の包含および／ま
たは置換によって達成され得ることに留意すること。代表的なブロッキング試薬
としては、Ｄｅｎｈａｒｄｔ試薬、ＢＬＯＴＴＯ、ヘパリン、変性サケ精子ＤＮ
Ａ、および市販の専売処方物が挙げられる。特異的なブロッキング試薬の包含は
、適合性の問題に起因して、上記のハイブリダイゼーション条件の改変を必要と
し得る。
【００１３】
もちろん、ポリＡ＋配列（例えば、配列表に示されるｃＤＮＡの任意の３’末
端ポリＡ＋領域（ｔｒａｃｔ））に、またはＴ（もしくはＵ）残基の相補的スト
レッチにのみハイブリダイズするポリヌクレオチドは、このようなポリヌクレオ
チドが、ポリ（Ａ）ストレッチまたはその相補体（例えば、プライマーとしてオ
リゴｄＴを用いて生成された、事実上任意の二本鎖ｃＤＮＡクローン）を含む任
意の核酸分子にハイブリダイズするので、「ポリヌクレオチド」の定義に包含さ
れない。
端ポリＡ＋領域（ｔｒａｃｔ））に、またはＴ（もしくはＵ）残基の相補的スト
レッチにのみハイブリダイズするポリヌクレオチドは、このようなポリヌクレオ
チドが、ポリ（Ａ）ストレッチまたはその相補体（例えば、プライマーとしてオ
リゴｄＴを用いて生成された、事実上任意の二本鎖ｃＤＮＡクローン）を含む任
意の核酸分子にハイブリダイズするので、「ポリヌクレオチド」の定義に包含さ
れない。
【００１４】
本発明のポリヌクレオチドは、任意のポリリボヌクレオチドまたはポリデオキ
シリボヌクレオチドから構成され得、これは、非改変ＲＮＡもしくは非改変ＤＮ
Ａまたは改変ＲＮＡもしくは改変ＤＮＡであり得る。例えば、ポリヌクレオチド
は、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖および二本鎖領域の混合物であるＤＮＡ
、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、ならびに一本鎖および二本鎖領域の混合物である
ＲＮＡ、一本鎖、またはより代表的には二本鎖もしくは一本鎖および二本鎖領域
の混合物であり得るＤＮＡおよびＲＮＡを含むハイブリッド分子から構成され得
る。さらに、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡもしくはＤＮＡ、またはＲＮＡおよび
ＤＮＡの両方を含む三本鎖領域から構成され得る。ポリヌクレオチドはまた、安
定性のために、または他の理由のために改変された１つ以上の改変された塩基ま
たはＤＮＡもしくはＲＮＡ骨格を含み得る。「改変された」塩基としては、例え
ば、トリチル化された塩基およびイノシンのような通常でない塩基が挙げられる
。種々の改変が、ＤＮＡおよびＲＮＡに対してなされ得；従って、「ポリヌクレ
オチド」は、化学的、酵素的、または代謝的に改変された形態を含む。
シリボヌクレオチドから構成され得、これは、非改変ＲＮＡもしくは非改変ＤＮ
Ａまたは改変ＲＮＡもしくは改変ＤＮＡであり得る。例えば、ポリヌクレオチド
は、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖および二本鎖領域の混合物であるＤＮＡ
、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、ならびに一本鎖および二本鎖領域の混合物である
ＲＮＡ、一本鎖、またはより代表的には二本鎖もしくは一本鎖および二本鎖領域
の混合物であり得るＤＮＡおよびＲＮＡを含むハイブリッド分子から構成され得
る。さらに、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡもしくはＤＮＡ、またはＲＮＡおよび
ＤＮＡの両方を含む三本鎖領域から構成され得る。ポリヌクレオチドはまた、安
定性のために、または他の理由のために改変された１つ以上の改変された塩基ま
たはＤＮＡもしくはＲＮＡ骨格を含み得る。「改変された」塩基としては、例え
ば、トリチル化された塩基およびイノシンのような通常でない塩基が挙げられる
。種々の改変が、ＤＮＡおよびＲＮＡに対してなされ得；従って、「ポリヌクレ
オチド」は、化学的、酵素的、または代謝的に改変された形態を含む。
【００１５】
特定の実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、少なくとも１５、少
なくとも３０、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なく
とも５００または少なくとも１０００個の連続するヌクレオチドであるが、長さ
が３００ｋｂ、２００ｋｂ、１００ｋｂ、５０ｋｂ、１５ｋｂ、１０ｋｂ、７．
５ｋｂ、５ｋｂ、２．５ｋｂ、２．０ｋｂまたは１ｋｂ以下である。さらなる実
施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、本明細書において開示される場
合、コード配列の一部を含むが、任意のイントロンの全てまたは一部を含まない
。別の実施形態において、コード配列を含むポリヌクレオチドは、ゲノム隣接遺
伝子（すなわち、ゲノムにおける目的の遺伝子に対して５’側または３’側）の
コード配列を含まない。他の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、１０
００、５００、２５０、１００、５０、２５、２０、１５、１０、５、４、３、
２、または１より多いゲノム隣接遺伝子コード配列を含まない。
なくとも３０、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なく
とも５００または少なくとも１０００個の連続するヌクレオチドであるが、長さ
が３００ｋｂ、２００ｋｂ、１００ｋｂ、５０ｋｂ、１５ｋｂ、１０ｋｂ、７．
５ｋｂ、５ｋｂ、２．５ｋｂ、２．０ｋｂまたは１ｋｂ以下である。さらなる実
施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、本明細書において開示される場
合、コード配列の一部を含むが、任意のイントロンの全てまたは一部を含まない
。別の実施形態において、コード配列を含むポリヌクレオチドは、ゲノム隣接遺
伝子（すなわち、ゲノムにおける目的の遺伝子に対して５’側または３’側）の
コード配列を含まない。他の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、１０
００、５００、２５０、１００、５０、２５、２０、１５、１０、５、４、３、
２、または１より多いゲノム隣接遺伝子コード配列を含まない。
【００１６】
「配列番号Ｘ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｘ）」とは、表１の第５列に記載のポリ
ヌクレオチド配列をいうが、「配列番号Ｙ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｙ）」とは、
表１の第１０列に記載のポリペプチド配列をいう。配列番号Ｘは、表１の第６列
に特定された整数によって識別される。配列番号Ｙのポリペプチド配列は、配列
番号Ｘのポリヌクレオチドによりコードされるオープンリーディングフレーム（
ＯＲＦ）の翻訳産物である。このポリヌクレオチド配列は、配列表に示されてお
り、その直後に全てのポリペプチド配列を示す。従って、配列番号２のポリヌク
レオチド配列に対応するポリペプチド配列は、配列表に示される第１のポリペプ
チド配列である。第２のポリペプチド配列は、配列番号３に示されるポリヌクレ
オチド配列などに対応する。
ヌクレオチド配列をいうが、「配列番号Ｙ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｙ）」とは、
表１の第１０列に記載のポリペプチド配列をいう。配列番号Ｘは、表１の第６列
に特定された整数によって識別される。配列番号Ｙのポリペプチド配列は、配列
番号Ｘのポリヌクレオチドによりコードされるオープンリーディングフレーム（
ＯＲＦ）の翻訳産物である。このポリヌクレオチド配列は、配列表に示されてお
り、その直後に全てのポリペプチド配列を示す。従って、配列番号２のポリヌク
レオチド配列に対応するポリペプチド配列は、配列表に示される第１のポリペプ
チド配列である。第２のポリペプチド配列は、配列番号３に示されるポリヌクレ
オチド配列などに対応する。
【００１７】
本発明のポリペプチドは、ペプチド結合または改変されたペプチド結合、すな
わち、ペプチドアイソスター（ｉｓｏｓｔｅｒｅ）によって互いに連結したアミ
ノ酸から構成され得、そして遺伝子がコードする２０個のアミノ酸以外のアミノ
酸を含み得る。ポリペプチドは、翻訳後プロセシングのような天然のプロセスに
よって、または当該分野で周知の化学的改変技術によってのいずれかで改変され
得る。このような改変は、基本的教科書、およびより詳細な研究論文、ならびに
多くの研究文献に十分記載される。改変は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖、およ
びアミノ末端またはカルボキシル末端を含むポリペプチドのいずれの箇所でも生
じ得る。同じ型の改変が、所定のポリペプチド中のいくつかの部位で同じまたは
種々の程度で存在し得ることが理解される。また、所定のポリペプチドは多くの
型の改変を含み得る。ポリペプチドは、例えば、ユビキチン化の結果として分枝
状であり得、そしてポリペプチドは、分枝を含むかまたは含まない環状であり得
る。環状、分枝状および分枝した環状ポリペプチドは、天然の翻訳後プロセスか
ら生じ得るか、または合成方法によって作製され得る。改変としては、アセチル
化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分
の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂
質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、ジ
スルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合架橋の形成、システインの形成、ピ
ログルタミン酸の形成、ホルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰ
Ｉアンカー形成、水酸化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、ＰＥＧ
化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）、タンパク質分解プロセシング、リン酸化、プレニ
ル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化のようなタンパク質への
アミノ酸のトランスファーＲＮＡ媒介の付加、およびユビキチン化が挙げられる
。（例えば、ＰＲＯＴＥＩＮＳ−ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ ＡＮＤ ＭＯＬＥＣＵＬ
ＡＲ ＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ， 第２版， Ｔ．Ｅ． Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，
Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （
１９９３）；ＰＯＳＴＴＲＡＮＳＬＡＴＩＯＮＡＬ ＣＯＶＡＬＥＮＴ ＭＯＤ
ＩＦＩＣＡＴＩＯＮ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮＳ， Ｂ．Ｃ． Ｊｏｈｎｓｏｎ編
， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １−１２頁 （１
９８３）；Ｓｅｉｆｔｅｒら， Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ １８２：６２６−
６４６ （１９９０）；Ｒａｔｔａｎら， Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ
６６３：４８−６２ （１９９２）を参照のこと）。
わち、ペプチドアイソスター（ｉｓｏｓｔｅｒｅ）によって互いに連結したアミ
ノ酸から構成され得、そして遺伝子がコードする２０個のアミノ酸以外のアミノ
酸を含み得る。ポリペプチドは、翻訳後プロセシングのような天然のプロセスに
よって、または当該分野で周知の化学的改変技術によってのいずれかで改変され
得る。このような改変は、基本的教科書、およびより詳細な研究論文、ならびに
多くの研究文献に十分記載される。改変は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖、およ
びアミノ末端またはカルボキシル末端を含むポリペプチドのいずれの箇所でも生
じ得る。同じ型の改変が、所定のポリペプチド中のいくつかの部位で同じまたは
種々の程度で存在し得ることが理解される。また、所定のポリペプチドは多くの
型の改変を含み得る。ポリペプチドは、例えば、ユビキチン化の結果として分枝
状であり得、そしてポリペプチドは、分枝を含むかまたは含まない環状であり得
る。環状、分枝状および分枝した環状ポリペプチドは、天然の翻訳後プロセスか
ら生じ得るか、または合成方法によって作製され得る。改変としては、アセチル
化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分
の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂
質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、ジ
スルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合架橋の形成、システインの形成、ピ
ログルタミン酸の形成、ホルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰ
Ｉアンカー形成、水酸化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、ＰＥＧ
化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）、タンパク質分解プロセシング、リン酸化、プレニ
ル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化のようなタンパク質への
アミノ酸のトランスファーＲＮＡ媒介の付加、およびユビキチン化が挙げられる
。（例えば、ＰＲＯＴＥＩＮＳ−ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ ＡＮＤ ＭＯＬＥＣＵＬ
ＡＲ ＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ， 第２版， Ｔ．Ｅ． Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，
Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （
１９９３）；ＰＯＳＴＴＲＡＮＳＬＡＴＩＯＮＡＬ ＣＯＶＡＬＥＮＴ ＭＯＤ
ＩＦＩＣＡＴＩＯＮ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮＳ， Ｂ．Ｃ． Ｊｏｈｎｓｏｎ編
， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １−１２頁 （１
９８３）；Ｓｅｉｆｔｅｒら， Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ １８２：６２６−
６４６ （１９９０）；Ｒａｔｔａｎら， Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ
６６３：４８−６２ （１９９２）を参照のこと）。
【００１８】
本発明のポリぺプチドは、任意の適切な様式で調製され得る。このようなポリ
ぺプチドとしては、単離された天然に存在するポリぺプチド、組換えによって生
成されたポリぺプチド、合成によって生成されたポリぺプチド、またはこれらの
方法の組合せによって生成されたポリぺプチドが挙げられる。このようなポリぺ
プチドを調製するための手段は、当該分野において十分に理解される。
ぺプチドとしては、単離された天然に存在するポリぺプチド、組換えによって生
成されたポリぺプチド、合成によって生成されたポリぺプチド、またはこれらの
方法の組合せによって生成されたポリぺプチドが挙げられる。このようなポリぺ
プチドを調製するための手段は、当該分野において十分に理解される。
【００１９】
このポリぺプチドは、分泌タンパク質の形態（成熟形態を含む）であり得るか
、またはより大きなタンパク質（例えば、融合タンパク質）の部分であり得る（
以下を参照のこと）。分泌配列またはリーダー配列、プロ配列、精製を補助する
配列（例えば、複数のヒスチジン残基）、あるいは組換え生成の間の安定性のた
めのさらなる配列を含む、さらなるアミノ酸配列を含むことは、しばしば有利で
ある。
、またはより大きなタンパク質（例えば、融合タンパク質）の部分であり得る（
以下を参照のこと）。分泌配列またはリーダー配列、プロ配列、精製を補助する
配列（例えば、複数のヒスチジン残基）、あるいは組換え生成の間の安定性のた
めのさらなる配列を含む、さらなるアミノ酸配列を含むことは、しばしば有利で
ある。
【００２０】
本発明のポリぺプチドは、好ましくは、単離された形態で提供され、そして好
ましくは実質的に精製される。ポリぺプチド（分泌ポリぺプチドを含む）の組換
えによって生成されたバージョン（ｖｅｒｓｉｏｎ）は、本明細書に記載される
化、そうでなければ当該分野で公知の技術、例えば、ＳｍｉｔｈおよびＪｏｈｎ
ｓｏｎ、Ｇｅｎｅ ６７：３１−４０（１９８８）に記載される１工程の方法に
よって実質的に精製され得る。本発明のポリぺプチドはまた、本明細書に記載さ
れているかまたは当該分野で公知である方法（例えば、当該分野において周知で
ある方法、本発明のポリペプチドに対して惹起された本発明の抗体）を使用して
、天然のまたは組換えの供給源から精製され得る。
ましくは実質的に精製される。ポリぺプチド（分泌ポリぺプチドを含む）の組換
えによって生成されたバージョン（ｖｅｒｓｉｏｎ）は、本明細書に記載される
化、そうでなければ当該分野で公知の技術、例えば、ＳｍｉｔｈおよびＪｏｈｎ
ｓｏｎ、Ｇｅｎｅ ６７：３１−４０（１９８８）に記載される１工程の方法に
よって実質的に精製され得る。本発明のポリぺプチドはまた、本明細書に記載さ
れているかまたは当該分野で公知である方法（例えば、当該分野において周知で
ある方法、本発明のポリペプチドに対して惹起された本発明の抗体）を使用して
、天然のまたは組換えの供給源から精製され得る。
【００２１】
「機能的活性」を示すポリペプチドとは、本発明のタンパク質の全長（完全）
ポリペプチドと関連した１つ以上の公知の機能的活性を示し得るポリペプチドを
意味する。このような機能的活性としては、生物学的活性、抗原性［本発明のポ
リペプチドに対する抗体に結合する（または結合することについて、本発明のポ
リペプチドと競合する）能力］、免疫原性（本発明のポリペプチドに結合する抗
体を生成する能力）、本発明のポリペプチドとマルチマーを形成する能力、およ
び本発明のポリペプチドについてのレセプターまたはリガンドに結合する能力が
挙げられるが、これらに限定されない。
ポリペプチドと関連した１つ以上の公知の機能的活性を示し得るポリペプチドを
意味する。このような機能的活性としては、生物学的活性、抗原性［本発明のポ
リペプチドに対する抗体に結合する（または結合することについて、本発明のポ
リペプチドと競合する）能力］、免疫原性（本発明のポリペプチドに結合する抗
体を生成する能力）、本発明のポリペプチドとマルチマーを形成する能力、およ
び本発明のポリペプチドについてのレセプターまたはリガンドに結合する能力が
挙げられるが、これらに限定されない。
【００２２】
「機能的活性を有するポリペプチド」とは、本発明のポリペプチドの活性と類
似の活性であるが、その活性と必ずしも同一でない活性を示すポリペプチド（用
量依存性ありまたはなしで、特定のアッセイ（例えば、生物学的アッセイ）にお
いて測定されるような、成熟型を含む）をいう。用量依存性が存在する場合、用
量依存性は、そのポリペプチドの用量依存性と同一である必要はなく、むしろ本
発明のポリペプチドと比較した所定の活性における用量依存性と実質的に類似で
ある（すなわち、候補ポリペプチドは、本発明のポリペプチドと比較してより高
い活性、すなわち約１／２５以上、好ましくは１／１０以上、そして最も好まし
くは、約１／３以上の活性を示す。
似の活性であるが、その活性と必ずしも同一でない活性を示すポリペプチド（用
量依存性ありまたはなしで、特定のアッセイ（例えば、生物学的アッセイ）にお
いて測定されるような、成熟型を含む）をいう。用量依存性が存在する場合、用
量依存性は、そのポリペプチドの用量依存性と同一である必要はなく、むしろ本
発明のポリペプチドと比較した所定の活性における用量依存性と実質的に類似で
ある（すなわち、候補ポリペプチドは、本発明のポリペプチドと比較してより高
い活性、すなわち約１／２５以上、好ましくは１／１０以上、そして最も好まし
くは、約１／３以上の活性を示す。
【００２３】
ポリペプチド、ならびにそのフラグメント、改変体、誘導体、およびアナログ
の機能的活性は、種々の方法によってアッセイされ得る。
の機能的活性は、種々の方法によってアッセイされ得る。
【００２４】
例えば、全長ポリペプチド抗体に対する抗体の結合について本発明の全長ポリ
ペプチドと結合または競合する能力についてアッセイする１つの実施形態におい
て、当該分野で公知の種々のイムノアッセイ系が使用され得、これらのアッセイ
系には、例えば、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定法
）、「サンドウィッチ」イムノアッセイ、免疫ラジオメトリック測定法、ゲル拡
散沈降反応、免疫拡散アッセイ、インサイチュイムノアッセイ（例えば、コロイ
ド状金、酵素標識または放射性同位元素標識を使用する）、ウェスタンブロット
、沈降反応、凝集アッセイ（例えば、ゲル凝集アッセイ、血球凝集アッセイ）、
補体結合アッセイ、免疫蛍光アッセイ、プロテインＡアッセイ、および免疫電気
泳動アッセイなどのような技術を使用する競合的および非競合的アッセイ系が含
まれるがこれらに限定されない。１つの実施形態において、抗体結合は、一次抗
体上の標識を検出することにより検出される。別の実施形態において、一次抗体
は、二次抗体の結合または一次抗体に対する試薬を検出することによって検出さ
れる。さらなる実施形態において、二次抗体が標識される。イムノアッセイにお
ける結合を検出するための多くの手段が当該分野において公知であり、そして本
発明の範囲内にある。
ペプチドと結合または競合する能力についてアッセイする１つの実施形態におい
て、当該分野で公知の種々のイムノアッセイ系が使用され得、これらのアッセイ
系には、例えば、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定法
）、「サンドウィッチ」イムノアッセイ、免疫ラジオメトリック測定法、ゲル拡
散沈降反応、免疫拡散アッセイ、インサイチュイムノアッセイ（例えば、コロイ
ド状金、酵素標識または放射性同位元素標識を使用する）、ウェスタンブロット
、沈降反応、凝集アッセイ（例えば、ゲル凝集アッセイ、血球凝集アッセイ）、
補体結合アッセイ、免疫蛍光アッセイ、プロテインＡアッセイ、および免疫電気
泳動アッセイなどのような技術を使用する競合的および非競合的アッセイ系が含
まれるがこれらに限定されない。１つの実施形態において、抗体結合は、一次抗
体上の標識を検出することにより検出される。別の実施形態において、一次抗体
は、二次抗体の結合または一次抗体に対する試薬を検出することによって検出さ
れる。さらなる実施形態において、二次抗体が標識される。イムノアッセイにお
ける結合を検出するための多くの手段が当該分野において公知であり、そして本
発明の範囲内にある。
【００２５】
別の実施形態において、リガンドが同定されるか、または本発明のポリペプチ
ドフラグメント、改変体、または誘導体をマルチマー化する能力が評価される場
合、結合は、例えば、当該分野で周知の手段（例えば、還元または非還元ゲルク
ロマトグラフィー、タンパク質アフィニティークロマトグラフィー、およびアフ
ィニティーブロッティング）によってアッセイされ得る。一般的には、Ｐｈｉｚ
ｉｃｋｙ，Ｅ．ら、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．５９：９４−１２３（１９９
５）を参照のこと。別の実施形態において、その基質に結合する本発明の生理学
的に相関するポリペプチド（シグナル伝達）がアッセイされ得る。
ドフラグメント、改変体、または誘導体をマルチマー化する能力が評価される場
合、結合は、例えば、当該分野で周知の手段（例えば、還元または非還元ゲルク
ロマトグラフィー、タンパク質アフィニティークロマトグラフィー、およびアフ
ィニティーブロッティング）によってアッセイされ得る。一般的には、Ｐｈｉｚ
ｉｃｋｙ，Ｅ．ら、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．５９：９４−１２３（１９９
５）を参照のこと。別の実施形態において、その基質に結合する本発明の生理学
的に相関するポリペプチド（シグナル伝達）がアッセイされ得る。
【００２６】
さらに、本明細書中に記載されるアッセイ（実施例を参照のこと）およびさも
なくば当該分野で公知のアッセイが、慣用的に、本発明のポリペプチドならびに
そのフラグメント、改変体、誘導体、およびアナログの、ポリペプチド関連生物
学的活性（インビトロまたはインビボのいずれかにおいて）を誘発する能力を測
定するために適用され得る。他の方法は、当業者に公知であり、そして本発明の
範囲にある。
なくば当該分野で公知のアッセイが、慣用的に、本発明のポリペプチドならびに
そのフラグメント、改変体、誘導体、およびアナログの、ポリペプチド関連生物
学的活性（インビトロまたはインビボのいずれかにおいて）を誘発する能力を測
定するために適用され得る。他の方法は、当業者に公知であり、そして本発明の
範囲にある。
【００２７】
（本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチド）
（遺伝子番号１によってコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子に対応する翻訳産物は、ヒトおよびＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ由
来のＡＢＣトランスポートタンパク質（それぞれ、Ｇｅｎｅｂａｎｋ受託番号Ｃ
ＡＡ０６２９０およびＢＡＡ０９２４８を参照のこと）と配列相同性を共有する
。このタンパク質は、細胞膜を横切る溶質のエネルギー依存性輸送に関与すると
考えられている。
来のＡＢＣトランスポートタンパク質（それぞれ、Ｇｅｎｅｂａｎｋ受託番号Ｃ
ＡＡ０６２９０およびＢＡＡ０９２４８を参照のこと）と配列相同性を共有する
。このタンパク質は、細胞膜を横切る溶質のエネルギー依存性輸送に関与すると
考えられている。
【００２８】
本発明の翻訳産物をコードする遺伝子は、ＡＢＣトランスポートファミリーの
タンパク質のメンバーである。これらのタンパク質は、原核生物および真核生物
の両方において、種々の異なる生物学的プロセスに関連するが、そのほとんどが
原形質膜を横切る親水性低分子の能動輸送に関与する。さらに、これらのタンパ
ク質は、ＡＴＰ結合ドメインを含み、従ってこれらのタンパク質は、膜を横切る
広いスペクトルの基質のエネルギー依存性輸送に関与する。これらのＡＴＰ結合
ドメインを同定するため、以下のコンセンサスパターンを開発した（Ｓｗｉｓｓ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ）：［ＡＧ］−ｘ
（４）−Ｇ−Ｋ−［ＳＴ］。本発明の好ましいポリペプチドは、以下：ＧＲＮＧ
ＬＧＫＴ（配列番号１４）および／またはＧＥＮＧＡＧＫＳ（配列番号１５）か
らなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはこれらのアミノ酸配列番
号から構成される。これらのポリペプチドのフラグメントおよび／または改変体
（例えば、本明細書において記載されるフラグメントおよび／または改変体など
）は、本発明により包含される。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチド（フラグメントおよび／または改変体を含む）はまた、これらのポリペプ
チドに結合する抗体がそうであるように、本発明により包含される。さらに、配
列番号１４および１５のＡＴＰ結合ドメイン、および配列番号８の少なくとも５
、１０、１５、２０、２５、３０、５０、または７５のさらなる連続するアミノ
酸残基を含むポリペプチドが好ましい。さらなる連続するアミノ酸残基は、ＡＴ
Ｐ結合ドメインのＮ末端またはＣ末端であり得る。あるいは、さらなる連続する
アミノ酸残基は、ＡＴＰ結合ドメインのＮ末端またはＣ末端の両方であり得、こ
こでＮ末端およびＣ末端の連続するアミノ酸残基の総数は特定の数に等しい。
タンパク質のメンバーである。これらのタンパク質は、原核生物および真核生物
の両方において、種々の異なる生物学的プロセスに関連するが、そのほとんどが
原形質膜を横切る親水性低分子の能動輸送に関与する。さらに、これらのタンパ
ク質は、ＡＴＰ結合ドメインを含み、従ってこれらのタンパク質は、膜を横切る
広いスペクトルの基質のエネルギー依存性輸送に関与する。これらのＡＴＰ結合
ドメインを同定するため、以下のコンセンサスパターンを開発した（Ｓｗｉｓｓ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ）：［ＡＧ］−ｘ
（４）−Ｇ−Ｋ−［ＳＴ］。本発明の好ましいポリペプチドは、以下：ＧＲＮＧ
ＬＧＫＴ（配列番号１４）および／またはＧＥＮＧＡＧＫＳ（配列番号１５）か
らなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、またはこれらのアミノ酸配列番
号から構成される。これらのポリペプチドのフラグメントおよび／または改変体
（例えば、本明細書において記載されるフラグメントおよび／または改変体など
）は、本発明により包含される。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチド（フラグメントおよび／または改変体を含む）はまた、これらのポリペプ
チドに結合する抗体がそうであるように、本発明により包含される。さらに、配
列番号１４および１５のＡＴＰ結合ドメイン、および配列番号８の少なくとも５
、１０、１５、２０、２５、３０、５０、または７５のさらなる連続するアミノ
酸残基を含むポリペプチドが好ましい。さらなる連続するアミノ酸残基は、ＡＴ
Ｐ結合ドメインのＮ末端またはＣ末端であり得る。あるいは、さらなる連続する
アミノ酸残基は、ＡＴＰ結合ドメインのＮ末端またはＣ末端の両方であり得、こ
こでＮ末端およびＣ末端の連続するアミノ酸残基の総数は特定の数に等しい。
【００２９】
開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第３染色体に存在すると考えられ
る。従って、本発明に関するポリヌクレオチドは第３染色体についての連鎖分析
におけるマーカーとして有用である。
る。従って、本発明に関するポリヌクレオチドは第３染色体についての連鎖分析
におけるマーカーとして有用である。
【００３０】
本発明の好ましいポリペプチドは、配列番号８において、残基Ｖａｌ−５１〜
Ｇｌｙ−６０、Ｇｌｕ−７６〜Ａｓｎ−８２，Ｉｌｅ−９６〜Ｔｈｒ−１０４、
Ｌｅｕ−１１０〜Ｓｅｒ−１１６、Ｌｙｓ−１２１〜Ａｌａ−１２６、Ｌｙｓ−
１３１〜Ｓｅｒ−１４６、Ａｌａ−１５９〜Ｓｅｒ−１７５、Ａｌａ−２４４〜
Ｐｒｏ−２４９、Ａｓｐ−２６３〜Ｇｌｕ−２７０、Ｐｒｏ−３１８〜Ｇｌｙ−
３３１、Ａｓｎ−３６８〜Ｐｒｏ−３７４、Ｇｌｎ−４００〜Ａｓｐ−４０８、
Ｉｌｅ−４１３〜Ｇｌｎ−４３５、Ａｒｇ−４４３〜Ｓｅｒ−４５２、Ｌｙｓ−
４６８〜Ｓｅｒ−４７４、Ａｓｐ−４８２〜Ｐｈｅ−４８７、Ａｓｐ−４９８〜
Ｌｙｓ−５０４、Ｐｈｅ−５８２〜Ｇｌｕ−５８９、Ｇｌｙ−６９０〜Ｔｙｒ−
６９５、およびＧｌｕ−７０１〜Ｇｌｙ−７０７として示される免疫原性エピト
ープのうち１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１
４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、または２０の全てを含むか、あるい
はそのような免疫原性エピトープから構成される。これらのポリペプチドのフラ
グメントおよび／または改変体（例えば、本明細書に記載のフラグメントおよび
／または改変体など）は、本発明により包含される。これらのポリペプチドをコ
ードするポリヌクレオチド（フラグメントおよび／または改変体を含む）はまた
、これらのポリペプチドに結合する抗体がそうであるように、本発明により包含
される。
Ｇｌｙ−６０、Ｇｌｕ−７６〜Ａｓｎ−８２，Ｉｌｅ−９６〜Ｔｈｒ−１０４、
Ｌｅｕ−１１０〜Ｓｅｒ−１１６、Ｌｙｓ−１２１〜Ａｌａ−１２６、Ｌｙｓ−
１３１〜Ｓｅｒ−１４６、Ａｌａ−１５９〜Ｓｅｒ−１７５、Ａｌａ−２４４〜
Ｐｒｏ−２４９、Ａｓｐ−２６３〜Ｇｌｕ−２７０、Ｐｒｏ−３１８〜Ｇｌｙ−
３３１、Ａｓｎ−３６８〜Ｐｒｏ−３７４、Ｇｌｎ−４００〜Ａｓｐ−４０８、
Ｉｌｅ−４１３〜Ｇｌｎ−４３５、Ａｒｇ−４４３〜Ｓｅｒ−４５２、Ｌｙｓ−
４６８〜Ｓｅｒ−４７４、Ａｓｐ−４８２〜Ｐｈｅ−４８７、Ａｓｐ−４９８〜
Ｌｙｓ−５０４、Ｐｈｅ−５８２〜Ｇｌｕ−５８９、Ｇｌｙ−６９０〜Ｔｙｒ−
６９５、およびＧｌｕ−７０１〜Ｇｌｙ−７０７として示される免疫原性エピト
ープのうち１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１
４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、または２０の全てを含むか、あるい
はそのような免疫原性エピトープから構成される。これらのポリペプチドのフラ
グメントおよび／または改変体（例えば、本明細書に記載のフラグメントおよび
／または改変体など）は、本発明により包含される。これらのポリペプチドをコ
ードするポリヌクレオチド（フラグメントおよび／または改変体を含む）はまた
、これらのポリペプチドに結合する抗体がそうであるように、本発明により包含
される。
【００３１】
この遺伝子は、主に胎盤肝臓／脾臓組織、胎盤組織、ならびに精巣上体および
精巣組織において発現される。
精巣組織において発現される。
【００３２】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチド（抗体を含む）は、生
物学的試料中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに以下：
免疫系および生殖系の疾患および／または障害、ならびに発生系の疾患および／
または障害を含むが、これらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬
として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する
抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブを提供するこ
とに有用である。上記組織または細胞の多くの障害、特に免疫系、生殖系および
発生系の多くの障害について、標準的な遺伝子発現レベル、すなわち、障害を有
さない個体からの健常組織または体液中の発現レベルに対して有意により高いま
たはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、特定の組織または細胞型（例えば、
免疫組織、生殖組織、発生組織、胎盤組織、癌性組織および創傷組織）または体
液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄液）またはこのような障害
を有する個体から採取された別の組織もしくは細胞試料中で慣用的に検出され得
る。
物学的試料中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに以下：
免疫系および生殖系の疾患および／または障害、ならびに発生系の疾患および／
または障害を含むが、これらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬
として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する
抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブを提供するこ
とに有用である。上記組織または細胞の多くの障害、特に免疫系、生殖系および
発生系の多くの障害について、標準的な遺伝子発現レベル、すなわち、障害を有
さない個体からの健常組織または体液中の発現レベルに対して有意により高いま
たはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、特定の組織または細胞型（例えば、
免疫組織、生殖組織、発生組織、胎盤組織、癌性組織および創傷組織）または体
液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄液）またはこのような障害
を有する個体から採取された別の組織もしくは細胞試料中で慣用的に検出され得
る。
【００３３】
胎児肝臓／脾臓組織、胎盤組織、ならびに精巣上体および精巣組織における組
織分布、ならびにＡＢＣトランスポートタンパク質に対する相同性は、この遺伝
子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物、および抗体が、免疫系、生殖系、お
よび発生系の疾患および／または障害の診断、検出および／または処置に有用で
あることを示す。胎児肝臓／脾臓組織における、この遺伝子に対応する翻訳産物
の発現は、潜在的な全ての造血細胞系列（血液幹細胞を含む）の増殖；生存；分
化；および／または活性化の調節における役割を示唆する。この遺伝子産物は、
サイトカイン産生、抗原提示、または癌の処置（例えば、免疫反応をブーストす
ることによる）においても有用性を示唆し得る他のプロセスの調節に関与し得る
。この遺伝子は、リンパ由来の細胞において発現されるので、この遺伝子に対応
するポリヌクレオチド、翻訳産物および抗体は、上記に挙げられた組織に対する
腫瘍マーカーおよび／または免疫治療の標的として有用性を示し得る。従って、
この遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物および抗体は、免疫障害（関
節炎、喘息、免疫欠陥疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、白血病、慢性関節リウマチ、
炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡、および乾癬を含む）の薬剤としてもまた使用され
得る。さらに、この遺伝子産物は、種々の血液系列の幹細胞および方向付けられ
た前駆細胞の増大において、ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖に
おいて商業的有用性を有し得る。
織分布、ならびにＡＢＣトランスポートタンパク質に対する相同性は、この遺伝
子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物、および抗体が、免疫系、生殖系、お
よび発生系の疾患および／または障害の診断、検出および／または処置に有用で
あることを示す。胎児肝臓／脾臓組織における、この遺伝子に対応する翻訳産物
の発現は、潜在的な全ての造血細胞系列（血液幹細胞を含む）の増殖；生存；分
化；および／または活性化の調節における役割を示唆する。この遺伝子産物は、
サイトカイン産生、抗原提示、または癌の処置（例えば、免疫反応をブーストす
ることによる）においても有用性を示唆し得る他のプロセスの調節に関与し得る
。この遺伝子は、リンパ由来の細胞において発現されるので、この遺伝子に対応
するポリヌクレオチド、翻訳産物および抗体は、上記に挙げられた組織に対する
腫瘍マーカーおよび／または免疫治療の標的として有用性を示し得る。従って、
この遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物および抗体は、免疫障害（関
節炎、喘息、免疫欠陥疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、白血病、慢性関節リウマチ、
炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡、および乾癬を含む）の薬剤としてもまた使用され
得る。さらに、この遺伝子産物は、種々の血液系列の幹細胞および方向付けられ
た前駆細胞の増大において、ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖に
おいて商業的有用性を有し得る。
【００３４】
あるいは、精巣上体および精巣組織におけるこの組織分布は、この遺伝子に対
応するポリヌクレオチド、翻訳産物および抗体が、適切な精巣機能（例えば、内
分泌機能、精子成熟）に関係する状態、ならびに癌の処置および／または診断に
有用であることを示す。従って、この遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳
産物および抗体は、雄性不妊および／またはインポテンス（不能症）の処置にお
いて有用である。この遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物および抗体
はまた、男性の避妊薬として有用な因子（アンタゴニスト）のような結合因子を
同定するために設計されたアッセイにおいて有用である。同様に、この遺伝子に
対応するポリヌクレオチド、翻訳産物および抗体は、精巣癌の処置および／また
は診断において有用であると考えられる。精巣はまた、身体の他の組織において
、特に低レベルで発現され得る転写物の活性な遺伝子発現部位である。従って、
この遺伝子に対応する翻訳産物は、他の特定の組織または器官において発現され
得、ここで、これらの翻訳産物は、他のプロセス（例えば、いくつかの標的指標
の可能性を挙げると、造血、炎症、骨形成、および腎機能）において、関連した
機能的な役割を果たし得る。この組織分布はさらに、この遺伝子に対応するポリ
ヌクレオチド、翻訳産物および抗体が、胎盤の障害の診断および／または処置に
有用であることを示唆する。
応するポリヌクレオチド、翻訳産物および抗体が、適切な精巣機能（例えば、内
分泌機能、精子成熟）に関係する状態、ならびに癌の処置および／または診断に
有用であることを示す。従って、この遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳
産物および抗体は、雄性不妊および／またはインポテンス（不能症）の処置にお
いて有用である。この遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物および抗体
はまた、男性の避妊薬として有用な因子（アンタゴニスト）のような結合因子を
同定するために設計されたアッセイにおいて有用である。同様に、この遺伝子に
対応するポリヌクレオチド、翻訳産物および抗体は、精巣癌の処置および／また
は診断において有用であると考えられる。精巣はまた、身体の他の組織において
、特に低レベルで発現され得る転写物の活性な遺伝子発現部位である。従って、
この遺伝子に対応する翻訳産物は、他の特定の組織または器官において発現され
得、ここで、これらの翻訳産物は、他のプロセス（例えば、いくつかの標的指標
の可能性を挙げると、造血、炎症、骨形成、および腎機能）において、関連した
機能的な役割を果たし得る。この組織分布はさらに、この遺伝子に対応するポリ
ヌクレオチド、翻訳産物および抗体が、胎盤の障害の診断および／または処置に
有用であることを示唆する。
【００３５】
胎盤内の特異的な発現は、この遺伝子に対応する翻訳産物が、胎盤機能の適切
な確立および維持において役割を果たし得ることを示唆する。あるいは、この遺
伝子に対応する翻訳産物は、胎盤により産生され得、次いで胚に輸送され、ここ
でこれらの翻訳産物は、胚または胎児の発達の発達および／または生存において
重要な役割を果たし得る。胎盤のような血管に富む組織におけるこの遺伝子産物
の発現はまた、これらの翻訳産物が内皮細胞または循環内でより一般的に産生さ
れ得ることを示唆する。このような場合、これらの翻訳産物は、血管機能（例え
ば、血管新生）において、より一般化された役割を果たし得る。この遺伝子に対
応するポリヌクレオチド、および翻訳産物はまた、血管内で産生され、そして循
環内の他の細胞（例えば、造血細胞）に影響を有し得る。この遺伝子に対応する
ポリヌクレオチドおよび翻訳産物は、造血細胞および全身にわたる他の細胞の増
殖、生存、活性化および／または分化を促進するように働き得る。さらに、この
遺伝子に対応する翻訳産物、ならびにこれらの翻訳産物に対する抗体は、上記に
列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用
性を示し得る。この遺伝子に対応する翻訳産物に対する抗体は、その天然に存在
するリガンドの結合をブロックするために用いられ得る。このタンパク質をコー
ドするＤＮＡインサートを有するベクターを含む宿主細胞は、ＡＢＣトランスポ
ートタンパク質に結合する化合物を同定するための方法において用いられ得る。
従って、本発明の好ましい実施形態は、ＡＢＣトランスポートタンパク質に結合
する化合物を検出する方法であり、この方法は、候補化合物に直接または間接的
に会合する標識の手段によるか、または標識した競合物との競合を含むアッセイ
における、細胞により発現されるＡＢＣトランスポートタンパク質に結合する候
補化合物の検出を包含する。
な確立および維持において役割を果たし得ることを示唆する。あるいは、この遺
伝子に対応する翻訳産物は、胎盤により産生され得、次いで胚に輸送され、ここ
でこれらの翻訳産物は、胚または胎児の発達の発達および／または生存において
重要な役割を果たし得る。胎盤のような血管に富む組織におけるこの遺伝子産物
の発現はまた、これらの翻訳産物が内皮細胞または循環内でより一般的に産生さ
れ得ることを示唆する。このような場合、これらの翻訳産物は、血管機能（例え
ば、血管新生）において、より一般化された役割を果たし得る。この遺伝子に対
応するポリヌクレオチド、および翻訳産物はまた、血管内で産生され、そして循
環内の他の細胞（例えば、造血細胞）に影響を有し得る。この遺伝子に対応する
ポリヌクレオチドおよび翻訳産物は、造血細胞および全身にわたる他の細胞の増
殖、生存、活性化および／または分化を促進するように働き得る。さらに、この
遺伝子に対応する翻訳産物、ならびにこれらの翻訳産物に対する抗体は、上記に
列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用
性を示し得る。この遺伝子に対応する翻訳産物に対する抗体は、その天然に存在
するリガンドの結合をブロックするために用いられ得る。このタンパク質をコー
ドするＤＮＡインサートを有するベクターを含む宿主細胞は、ＡＢＣトランスポ
ートタンパク質に結合する化合物を同定するための方法において用いられ得る。
従って、本発明の好ましい実施形態は、ＡＢＣトランスポートタンパク質に結合
する化合物を検出する方法であり、この方法は、候補化合物に直接または間接的
に会合する標識の手段によるか、または標識した競合物との競合を含むアッセイ
における、細胞により発現されるＡＢＣトランスポートタンパク質に結合する候
補化合物の検出を包含する。
【００３６】
多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったか
もしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範
囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好
ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号２の１〜２５２２の任意の整数であり、ｂは１５〜２５３６
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２に示されるヌクレオチド残
基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポ
リヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったか
もしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範
囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好
ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号２の１〜２５２２の任意の整数であり、ｂは１５〜２５３６
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２に示されるヌクレオチド残
基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポ
リヌクレオチドが除外される。
【００３７】
（遺伝子番号２によりコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子の翻訳産物は、ヒトＡＢＣ−１トランスポータータンパク質と配列
相同性を共有する（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＣＡＡ１０００５を参照のこと）。
このタンパク質は、マクロファージから単離され、そして細胞膜を横切る溶質の
輸送に関与すると考えられている。さらに、この遺伝子に対応する翻訳産物は、
マウスＡＴＰ−結合カセットトランスポータータンパク質（Ｇｅｎｂａｎｋ受託
番号ＣＡＡ５３５３０を参照のこと）と配列相同性を共有する。このタンパク質
も、細胞膜を横切る溶質の輸送に関与すると考えられる。
相同性を共有する（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＣＡＡ１０００５を参照のこと）。
このタンパク質は、マクロファージから単離され、そして細胞膜を横切る溶質の
輸送に関与すると考えられている。さらに、この遺伝子に対応する翻訳産物は、
マウスＡＴＰ−結合カセットトランスポータータンパク質（Ｇｅｎｂａｎｋ受託
番号ＣＡＡ５３５３０を参照のこと）と配列相同性を共有する。このタンパク質
も、細胞膜を横切る溶質の輸送に関与すると考えられる。
【００３８】
本発明の翻訳産物をコードする遺伝子は、ＡＢＣトランスポートファミリーの
タンパク質のメンバーである。これらのタンパク質は、原核生物および真核生物
の両方において、種々の異なる生物学的プロセスに関連するが、そのほとんどが
原形質膜を横切る親水性低分子の能動輸送に関与する。さらに、これらのタンパ
ク質は、ＡＴＰ結合ドメインを含み、従ってこれらのタンパク質は、膜を横切る
広いスペクトルの基質のエネルギー依存性輸送に関与する。これらのＡＴＰ結合
ドメインを同定するため、以下のコンセンサスパターンを開発した（Ｓｗｉｓｓ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ）：［ＡＧ］−ｘ
（４）−Ｇ−Ｋ−［ＳＴ］。本発明の好ましいポリペプチドは、以下：ＧＶＮＧ
ＡＧＫＴ（配列番号１６）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、ま
たはこれらのアミノ酸配列番号から構成される。これらのポリペプチドのフラグ
メントおよび／または改変体（例えば、本明細書において記載されるフラグメン
トおよび／または改変体など）は、本発明により包含される。これらのポリペプ
チドをコードするポリヌクレオチド（フラグメントおよび／または改変体を含む
）はまた、これらのポリペプチドに結合する抗体がそうであるように、本発明に
より包含される。さらに、配列番号１６のＡＴＰ結合ドメイン、および配列番号
９の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、５０、または７５のさらな
る連続するアミノ酸残基を含むポリペプチドが好ましい。さらなる連続するアミ
ノ酸残基は、ＡＴＰ結合ドメインのＮ末端またはＣ末端であり得る。あるいは、
さらなる連続するアミノ酸残基は、ＡＴＰ結合ドメインのＮ末端またはＣ末端の
両方であり得、ここでＮ末端およびＣ末端の連続するアミノ酸残基の総数は特定
の数に等しい。
タンパク質のメンバーである。これらのタンパク質は、原核生物および真核生物
の両方において、種々の異なる生物学的プロセスに関連するが、そのほとんどが
原形質膜を横切る親水性低分子の能動輸送に関与する。さらに、これらのタンパ
ク質は、ＡＴＰ結合ドメインを含み、従ってこれらのタンパク質は、膜を横切る
広いスペクトルの基質のエネルギー依存性輸送に関与する。これらのＡＴＰ結合
ドメインを同定するため、以下のコンセンサスパターンを開発した（Ｓｗｉｓｓ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ）：［ＡＧ］−ｘ
（４）−Ｇ−Ｋ−［ＳＴ］。本発明の好ましいポリペプチドは、以下：ＧＶＮＧ
ＡＧＫＴ（配列番号１６）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、ま
たはこれらのアミノ酸配列番号から構成される。これらのポリペプチドのフラグ
メントおよび／または改変体（例えば、本明細書において記載されるフラグメン
トおよび／または改変体など）は、本発明により包含される。これらのポリペプ
チドをコードするポリヌクレオチド（フラグメントおよび／または改変体を含む
）はまた、これらのポリペプチドに結合する抗体がそうであるように、本発明に
より包含される。さらに、配列番号１６のＡＴＰ結合ドメイン、および配列番号
９の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、５０、または７５のさらな
る連続するアミノ酸残基を含むポリペプチドが好ましい。さらなる連続するアミ
ノ酸残基は、ＡＴＰ結合ドメインのＮ末端またはＣ末端であり得る。あるいは、
さらなる連続するアミノ酸残基は、ＡＴＰ結合ドメインのＮ末端またはＣ末端の
両方であり得、ここでＮ末端およびＣ末端の連続するアミノ酸残基の総数は特定
の数に等しい。
【００３９】
特定の実施形態において、本発明のポリペプチドは、以下：
ＡＱＶＶＩＬＤＥＰＴＡＧＶＤＰＡＳＲ
ＲＧＩＷＥＬＬＬＫＹＲＥＧＲＴＬＩＬＳＴＨＨＬＤＥＡＥＬＬＧＤＲＶＡＶＶ
ＡＧＧＲＬＣＣＣＧＳＰＬＦＬＲＲＨＬＧＳＧＹＹＬＴＬＶＫＡＲＬＰＬＴＴＮ
ＥＫＡＤＴＤＭＥＧＳＶＤＴＲＱＥＫＫＮＧＳＱＧＳＲＶＧＴＰＱＬＬＡＬＶＱ
ＨＷＶＰＧＡＲＬＶＥＥＬＰＨＥＬＶＬＶＬＰＹＴＧＡＨＤＧＳＦＡＴＬＦＲＥ
ＬＤＴＲＬＡＥＬＲＬＴＧＹＧＩＳＤＴＳＬＥＥＩＦＬＫＶＶＥＥＣＡＡＤＴＤ
ＭＥＤＧＳＣＧＱＨＬＣＴＧＩＡＧＬＤＶＴＬＲＬＫＭＰＰＱＥＴＡＬＥＮＧＥ
ＰＡＧＳＡＰＥＴＤＱＧＳＧＰＤＡＶＧＲＶＱＧＷＡＬＴＲＱＱＬＱＡＬＬＬＫ
ＲＦＬＬＡＲＲＳＲＲＧＬＦＡＱ（配列番号１７）および／またはＳＥＤＡＰＧ
ＤＰＧＲＡＲＬＬＥＡＬＬＱＥＡＧＬＥＥＰＰＶＱＨＳＳＨＲＦＳＡＰＥＶＰＡ
ＥＶＡＫＶＬＡＳＧＮＷ ＴＰＥＳＰＳＰＡＣＱＣＳＲＰＧＡＲＲＬＬＰＤＣＰＡＡＡＧＧＰＰＰＰＱＡＶ
ＴＧＳＧＥＶＶＱＮＬＴＧＲＮＬＳＤＦＬＶＫＴＹＰＲＬＶＲＱＧＬＫＴＫＫＷ
ＶＮＥＶＲＹＧＧＦＳＬＧＧＲＤＰＧＬＰＳＧＱＥＬＧＲＳＶＥＥＬＷＡＬＬＳ
ＰＬＰＧＧＡＬＤＲＶＬＫＮＬＴＡＷＡＨＳＬＤＡＱＤＳＬＫＩＷＦＮＮＫＧＷ
ＨＳ（配列番号１８）、からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、また
はこれらのアミノ酸配列から構成される。これらのポリペプチドのフラグメント
および／または改変体（例えば、本明細書に記載のフラグメントおよび／または
改変体など）は、本発明により包含される。これらのポリペプチドをコードする
ポリヌクレオチド（フラグメントおよび／または改変体を含む）はまた、これら
のポリペプチドに結合する抗体がそうであるように、本発明により包含される。
ＡＧＧＲＬＣＣＣＧＳＰＬＦＬＲＲＨＬＧＳＧＹＹＬＴＬＶＫＡＲＬＰＬＴＴＮ
ＥＫＡＤＴＤＭＥＧＳＶＤＴＲＱＥＫＫＮＧＳＱＧＳＲＶＧＴＰＱＬＬＡＬＶＱ
ＨＷＶＰＧＡＲＬＶＥＥＬＰＨＥＬＶＬＶＬＰＹＴＧＡＨＤＧＳＦＡＴＬＦＲＥ
ＬＤＴＲＬＡＥＬＲＬＴＧＹＧＩＳＤＴＳＬＥＥＩＦＬＫＶＶＥＥＣＡＡＤＴＤ
ＭＥＤＧＳＣＧＱＨＬＣＴＧＩＡＧＬＤＶＴＬＲＬＫＭＰＰＱＥＴＡＬＥＮＧＥ
ＰＡＧＳＡＰＥＴＤＱＧＳＧＰＤＡＶＧＲＶＱＧＷＡＬＴＲＱＱＬＱＡＬＬＬＫ
ＲＦＬＬＡＲＲＳＲＲＧＬＦＡＱ（配列番号１７）および／またはＳＥＤＡＰＧ
ＤＰＧＲＡＲＬＬＥＡＬＬＱＥＡＧＬＥＥＰＰＶＱＨＳＳＨＲＦＳＡＰＥＶＰＡ
ＥＶＡＫＶＬＡＳＧＮＷ ＴＰＥＳＰＳＰＡＣＱＣＳＲＰＧＡＲＲＬＬＰＤＣＰＡＡＡＧＧＰＰＰＰＱＡＶ
ＴＧＳＧＥＶＶＱＮＬＴＧＲＮＬＳＤＦＬＶＫＴＹＰＲＬＶＲＱＧＬＫＴＫＫＷ
ＶＮＥＶＲＹＧＧＦＳＬＧＧＲＤＰＧＬＰＳＧＱＥＬＧＲＳＶＥＥＬＷＡＬＬＳ
ＰＬＰＧＧＡＬＤＲＶＬＫＮＬＴＡＷＡＨＳＬＤＡＱＤＳＬＫＩＷＦＮＮＫＧＷ
ＨＳ（配列番号１８）、からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、また
はこれらのアミノ酸配列から構成される。これらのポリペプチドのフラグメント
および／または改変体（例えば、本明細書に記載のフラグメントおよび／または
改変体など）は、本発明により包含される。これらのポリペプチドをコードする
ポリヌクレオチド（フラグメントおよび／または改変体を含む）はまた、これら
のポリペプチドに結合する抗体がそうであるように、本発明により包含される。
【００４０】
本発明の好ましいポリペプチドは、配列番号９おいて、残基Ｌｅｕ−２３４〜
Ｐｒｏ−２４２、Ｇｌｕ−２８９〜Ａｒｇ−３００、ｌａ−４３７〜Ｇｌｙ−４
４２、Ｓｅｒ−４４５〜Ｌｙｓ−４５１、およびＳｅｒ−６１９〜Ｇｌｕ−６３
３として示される免疫原性エピトープのうち１、２、３、４、５、または５の全
てを含むか、あるいはそのような免疫原性エピトープから構成される。これらの
ポリペプチドのフラグメントおよび／または改変体（例えば、本明細書に記載の
フラグメントおよび／または改変体など）は、本発明により包含される。これら
のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（フラグメントおよび／または改
変体を含む）はまた、これらのポリペプチドに結合する抗体がそうであるように
、本発明により包含される。
Ｐｒｏ−２４２、Ｇｌｕ−２８９〜Ａｒｇ−３００、ｌａ−４３７〜Ｇｌｙ−４
４２、Ｓｅｒ−４４５〜Ｌｙｓ−４５１、およびＳｅｒ−６１９〜Ｇｌｕ−６３
３として示される免疫原性エピトープのうち１、２、３、４、５、または５の全
てを含むか、あるいはそのような免疫原性エピトープから構成される。これらの
ポリペプチドのフラグメントおよび／または改変体（例えば、本明細書に記載の
フラグメントおよび／または改変体など）は、本発明により包含される。これら
のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（フラグメントおよび／または改
変体を含む）はまた、これらのポリペプチドに結合する抗体がそうであるように
、本発明により包含される。
【００４１】
この遺伝子は、主に好酸球において、そしてより少ない程度でＴ細胞において
発現される。
発現される。
【００４２】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に
存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに以下：免疫系の疾患お
よび／または障害を含むが、これらに限定されない疾患および状態の診断のため
の試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに
対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブを提供
することに有用である。上記組織または細胞の多くの障害、特に免疫系の多くの
障害について、標準的な遺伝子発現レベル、すなわち、障害を有さない個体から
の健常組織または体液中の発現レベルに対して有意により高いまたはより低いレ
ベルのこの遺伝子の発現が、特定の組織または細胞型（例えば、免疫組織、癌性
組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液およ
び髄液）またはこのような障害を有する個体から採取された別の組織もしくは細
胞試料中で慣用的に検出され得る。
存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに以下：免疫系の疾患お
よび／または障害を含むが、これらに限定されない疾患および状態の診断のため
の試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに
対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブを提供
することに有用である。上記組織または細胞の多くの障害、特に免疫系の多くの
障害について、標準的な遺伝子発現レベル、すなわち、障害を有さない個体から
の健常組織または体液中の発現レベルに対して有意により高いまたはより低いレ
ベルのこの遺伝子の発現が、特定の組織または細胞型（例えば、免疫組織、癌性
組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液およ
び髄液）またはこのような障害を有する個体から採取された別の組織もしくは細
胞試料中で慣用的に検出され得る。
【００４３】
好酸球およびＴ細胞における組織分布、ならびにＡＢＣトランスポートタンパ
ク質（詳細には、マクロファージから単離されたＡＢＣトランスポートタンパク
質）に対する相同性は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物、お
よび抗体が、免疫系の疾患および／または障害の検出、診断および／または処置
に有用であることを示す。好酸球における、この遺伝子に対応する翻訳産物の発
現は、免疫機能および免疫監視機構におけるこのタンパク質の役割を強力に示唆
する。さらに、このタンパク質に対応する翻訳産物は、サイトカイン産生、抗原
提示、または癌の処置（例えば、免疫反応をブーストすることによる）において
も有用性を示唆し得る他のプロセスの調節に関与し得る。
ク質（詳細には、マクロファージから単離されたＡＢＣトランスポートタンパク
質）に対する相同性は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物、お
よび抗体が、免疫系の疾患および／または障害の検出、診断および／または処置
に有用であることを示す。好酸球における、この遺伝子に対応する翻訳産物の発
現は、免疫機能および免疫監視機構におけるこのタンパク質の役割を強力に示唆
する。さらに、このタンパク質に対応する翻訳産物は、サイトカイン産生、抗原
提示、または癌の処置（例えば、免疫反応をブーストすることによる）において
も有用性を示唆し得る他のプロセスの調節に関与し得る。
【００４４】
この遺伝子は、リンパ由来の細胞において発現されるので、この遺伝子に対応
するポリヌクレオチド、翻訳産物および抗体は、上記に挙げられた組織に対する
腫瘍マーカーおよび／または免疫治療の標的として有用性を示し得る。従って、
この遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物および抗体は、免疫障害（関
節炎、喘息、免疫欠陥疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、白血病、慢性関節リウマチ、
炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡、および乾癬を含む）の薬剤としてもまた使用され
得る。さらに、この遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物および抗体は
、種々の血液系列の幹細胞および方向付けられた前駆細胞の増大において、なら
びに種々の細胞型の分化および／または増殖において商業的有用性を有し得る。
さらに、この遺伝子に対応する翻訳産物およびこれらの翻訳産物に対する抗体は
、上記に挙げられた組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫治療の標的と
して有用性を示し得る。この遺伝子に対応する翻訳産物に対する抗体は、その天
然に存在するリガンドの結合をブロックするために用いられ得る。このタンパク
質をコードするＤＮＡインサートを有するベクターを含む宿主細胞は、ＡＢＣト
ランスポートタンパク質に結合する化合物を同定するための方法において用いら
れ得る。従って、本発明の好ましい実施形態は、ＡＢＣトランスポートタンパク
質に結合する化合物を検出する方法であり、この方法は、候補化合物に直接また
は間接的に会合する標識の手段によるか、または標識した競合物との競合を含む
アッセイにおける、細胞により発現されるＡＢＣトランスポートタンパク質に結
合する候補化合物の検出を包含する。
するポリヌクレオチド、翻訳産物および抗体は、上記に挙げられた組織に対する
腫瘍マーカーおよび／または免疫治療の標的として有用性を示し得る。従って、
この遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物および抗体は、免疫障害（関
節炎、喘息、免疫欠陥疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、白血病、慢性関節リウマチ、
炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡、および乾癬を含む）の薬剤としてもまた使用され
得る。さらに、この遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物および抗体は
、種々の血液系列の幹細胞および方向付けられた前駆細胞の増大において、なら
びに種々の細胞型の分化および／または増殖において商業的有用性を有し得る。
さらに、この遺伝子に対応する翻訳産物およびこれらの翻訳産物に対する抗体は
、上記に挙げられた組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫治療の標的と
して有用性を示し得る。この遺伝子に対応する翻訳産物に対する抗体は、その天
然に存在するリガンドの結合をブロックするために用いられ得る。このタンパク
質をコードするＤＮＡインサートを有するベクターを含む宿主細胞は、ＡＢＣト
ランスポートタンパク質に結合する化合物を同定するための方法において用いら
れ得る。従って、本発明の好ましい実施形態は、ＡＢＣトランスポートタンパク
質に結合する化合物を検出する方法であり、この方法は、候補化合物に直接また
は間接的に会合する標識の手段によるか、または標識した競合物との競合を含む
アッセイにおける、細胞により発現されるＡＢＣトランスポートタンパク質に結
合する候補化合物の検出を包含する。
【００４５】
多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったか
もしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範
囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好
ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号３の１〜３６２１の任意の整数であり、ｂは１５〜３６３５
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３に示されるヌクレオチド残
基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポ
リヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったか
もしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範
囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好
ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号３の１〜３６２１の任意の整数であり、ｂは１５〜３６３５
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３に示されるヌクレオチド残
基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポ
リヌクレオチドが除外される。
【００４６】
（遺伝子番号３によりコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子に対応する翻訳産物は、ヒトＡＢＣ３およびＡＢＣ−Ｃタンパク質
と配列相同性を共有する（それぞれ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＡＣ５０９６７
およびＧｅｎｂａｎｋ受託番号ＣＡＡ６５８２５を参照のこと）。このタンパク
質は、細胞膜を横切る溶質の輸送に関与すると考えられている。
と配列相同性を共有する（それぞれ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＡＣ５０９６７
およびＧｅｎｂａｎｋ受託番号ＣＡＡ６５８２５を参照のこと）。このタンパク
質は、細胞膜を横切る溶質の輸送に関与すると考えられている。
【００４７】
本発明の翻訳産物をコードする遺伝子は、ＡＢＣトランスポートファミリーの
タンパク質のメンバーである。これらのタンパク質は、原核生物および真核生物
の両方において、種々の異なる生物学的プロセスに関連するが、そのほとんどが
原形質膜を横切る親水性低分子の能動輸送に関与する。さらに、これらのタンパ
ク質は、ＡＴＰ結合ドメインを含み、従ってこれらのタンパク質は、膜を横切る
広いスペクトルの基質のエネルギー依存性輸送に関与する。これらのＡＴＰ結合
ドメインを同定するため、以下のコンセンサスパターンを開発した（Ｓｗｉｓｓ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ）：［ＡＧ］−ｘ
（４）−Ｇ−Ｋ−［ＳＴ］。本発明の好ましいポリペプチドは、以下：ＧＨＮＧ
ＡＧＫＳ（配列番号１９）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、ま
たはこれらのアミノ酸配列番号から構成される。これらのポリペプチドのフラグ
メントおよび／または改変体（例えば、本明細書において記載されるフラグメン
トおよび／または改変体など）は、本発明により包含される。これらのポリペプ
チドをコードするポリヌクレオチド（フラグメントおよび／または改変体を含む
）はまた、これらのポリペプチドに結合する抗体がそうであるように、本発明に
より包含される。さらに、配列番号１９のＡＴＰ結合ドメイン、および配列番号
１０の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、５０、または７５のさら
なる連続するアミノ酸残基を含むポリペプチドが好ましい。さらなる連続するア
ミノ酸残基は、ＡＴＰ結合ドメインのＮ末端またはＣ末端であり得る。あるいは
、さらなる連続するアミノ酸残基は、ＡＴＰ結合ドメインのＮ末端またはＣ末端
の両方であり得、ここでＮ末端およびＣ末端の連続するアミノ酸残基の総数は特
定の数に等しい。
タンパク質のメンバーである。これらのタンパク質は、原核生物および真核生物
の両方において、種々の異なる生物学的プロセスに関連するが、そのほとんどが
原形質膜を横切る親水性低分子の能動輸送に関与する。さらに、これらのタンパ
ク質は、ＡＴＰ結合ドメインを含み、従ってこれらのタンパク質は、膜を横切る
広いスペクトルの基質のエネルギー依存性輸送に関与する。これらのＡＴＰ結合
ドメインを同定するため、以下のコンセンサスパターンを開発した（Ｓｗｉｓｓ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ）：［ＡＧ］−ｘ
（４）−Ｇ−Ｋ−［ＳＴ］。本発明の好ましいポリペプチドは、以下：ＧＨＮＧ
ＡＧＫＳ（配列番号１９）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、ま
たはこれらのアミノ酸配列番号から構成される。これらのポリペプチドのフラグ
メントおよび／または改変体（例えば、本明細書において記載されるフラグメン
トおよび／または改変体など）は、本発明により包含される。これらのポリペプ
チドをコードするポリヌクレオチド（フラグメントおよび／または改変体を含む
）はまた、これらのポリペプチドに結合する抗体がそうであるように、本発明に
より包含される。さらに、配列番号１９のＡＴＰ結合ドメイン、および配列番号
１０の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、５０、または７５のさら
なる連続するアミノ酸残基を含むポリペプチドが好ましい。さらなる連続するア
ミノ酸残基は、ＡＴＰ結合ドメインのＮ末端またはＣ末端であり得る。あるいは
、さらなる連続するアミノ酸残基は、ＡＴＰ結合ドメインのＮ末端またはＣ末端
の両方であり得、ここでＮ末端およびＣ末端の連続するアミノ酸残基の総数は特
定の数に等しい。
【００４８】
開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第１７染色体に存在すると考えら
れる。従って、本発明に関するポリヌクレオチドは第１７染色体についての連鎖
分析におけるマーカーとして有用である。
れる。従って、本発明に関するポリヌクレオチドは第１７染色体についての連鎖
分析におけるマーカーとして有用である。
【００４９】
本発明の好ましいポリペプチドは、配列番号１０において、残基：Ｌｙｓ−２
８〜Ｉｌｅ−４５、Ｇｌｙ−７９〜Ｔｈｒ−８４、Ｐｒｏ−１８５〜Ｇｌｎ−１
９６、Ｌｅｕ−２４６〜Ｌｙｓ−２５２、Ａｌａ−２８０〜Ｓｅｒ−２８７、お
よびＬｅｕ−３５７〜Ｐｒｏ−３６２として示される免疫原性エピトープのうち
１、２、３、４、５、６、または６の全てを含むか、あるいはそのような免疫原
性エピトープから構成される。これらのポリペプチドのフラグメントおよび／ま
たは改変体（例えば、本明細書に記載のフラグメントおよび／または改変体など
）は、本発明により包含される。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチド（フラグメントおよび／または改変体を含む）はまた、これらのポリペプ
チドに結合する抗体がそうであるように、本発明により包含される。
８〜Ｉｌｅ−４５、Ｇｌｙ−７９〜Ｔｈｒ−８４、Ｐｒｏ−１８５〜Ｇｌｎ−１
９６、Ｌｅｕ−２４６〜Ｌｙｓ−２５２、Ａｌａ−２８０〜Ｓｅｒ−２８７、お
よびＬｅｕ−３５７〜Ｐｒｏ−３６２として示される免疫原性エピトープのうち
１、２、３、４、５、６、または６の全てを含むか、あるいはそのような免疫原
性エピトープから構成される。これらのポリペプチドのフラグメントおよび／ま
たは改変体（例えば、本明細書に記載のフラグメントおよび／または改変体など
）は、本発明により包含される。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチド（フラグメントおよび／または改変体を含む）はまた、これらのポリペプ
チドに結合する抗体がそうであるように、本発明により包含される。
【００５０】
この遺伝子は、主に胎盤組織（例えば、胎児心臓および胎児肝臓／脾臓組織）
において発現される。
において発現される。
【００５１】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチド（抗体を含む）は、生
物学的試料中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに以下：
発生の疾患および／または障害を含むが、これらに限定されない疾患および状態
の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポ
リペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プ
ローブを提供することに有用である。上記組織または細胞の多くの障害、特に発
生系の多くの障害および癌について、標準的な遺伝子発現レベル、すなわち、障
害を有さない個体からの健常組織または体液中の発現レベルに対して有意により
高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、特定の組織または細胞型（例
えば、発生組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清
、血漿、尿、滑液および髄液）またはこのような障害を有する個体から採取され
た別の組織もしくは細胞試料中で慣用的に検出され得る。
物学的試料中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに以下：
発生の疾患および／または障害を含むが、これらに限定されない疾患および状態
の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポ
リペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プ
ローブを提供することに有用である。上記組織または細胞の多くの障害、特に発
生系の多くの障害および癌について、標準的な遺伝子発現レベル、すなわち、障
害を有さない個体からの健常組織または体液中の発現レベルに対して有意により
高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、特定の組織または細胞型（例
えば、発生組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清
、血漿、尿、滑液および髄液）またはこのような障害を有する個体から採取され
た別の組織もしくは細胞試料中で慣用的に検出され得る。
【００５２】
胎児組織における組織分布、ならびにＡＢＣトランスポートタンパク質に対す
る相同性は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物、および抗体が
、癌および他の増殖性障害の検出および／または処置に有用であることを示す。
胎児組織および増殖する細胞により特徴付けられる他の細胞供給源内での発現は
、この遺伝子に対応する翻訳産物が、細胞分裂の調節において役割を果たし得る
ことを示唆する。さらに、造血細胞（例えば、胎児肝臓組織）における発現は、
この遺伝子に対応する翻訳産物が、造血細胞系列の増殖、分化および／または生
存において役割を果し得ることを示唆する。このような事象では、この遺伝子に
対応するポリヌクレオチド、翻訳産物および抗体は、リンパ球増殖性障害の処置
において、ならびに初期造血性幹細胞および方向付けられた前駆細胞由来の種々
の造血細胞系列の維持および分化において、有用であり得る。さらに、この遺伝
子に対応する翻訳産物は、アポトーシスまたは組織分化に関与し得、従って、こ
の遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物、および抗体は、癌の治療にお
いて有用であり得る。さらに、この遺伝子に対応する翻訳産物、ならびにこれら
の翻訳産物に対する抗体は、上記に挙げられた組織に対する腫瘍マーカーおよび
／または免疫治療の標的として有用性を示し得る。この遺伝子に対応する翻訳産
物に対する抗体は、その天然に存在するリガンドの結合をブロックするために用
いられ得る。このタンパク質をコードするＤＮＡインサートを有するベクターを
含む宿主細胞は、ＡＢＣトランスポートタンパク質に結合する化合物を同定する
ための方法において用いられ得る。従って、本発明の好ましい実施形態は、ＡＢ
Ｃトランスポートタンパク質に結合する化合物を検出する方法であり、この方法
は、候補化合物に直接または間接的に会合する標識の手段によるか、または標識
した競合物との競合を含むアッセイにおける、細胞により発現されるＡＢＣトラ
ンスポートタンパク質に結合する候補化合物の検出を包含する。
る相同性は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物、および抗体が
、癌および他の増殖性障害の検出および／または処置に有用であることを示す。
胎児組織および増殖する細胞により特徴付けられる他の細胞供給源内での発現は
、この遺伝子に対応する翻訳産物が、細胞分裂の調節において役割を果たし得る
ことを示唆する。さらに、造血細胞（例えば、胎児肝臓組織）における発現は、
この遺伝子に対応する翻訳産物が、造血細胞系列の増殖、分化および／または生
存において役割を果し得ることを示唆する。このような事象では、この遺伝子に
対応するポリヌクレオチド、翻訳産物および抗体は、リンパ球増殖性障害の処置
において、ならびに初期造血性幹細胞および方向付けられた前駆細胞由来の種々
の造血細胞系列の維持および分化において、有用であり得る。さらに、この遺伝
子に対応する翻訳産物は、アポトーシスまたは組織分化に関与し得、従って、こ
の遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物、および抗体は、癌の治療にお
いて有用であり得る。さらに、この遺伝子に対応する翻訳産物、ならびにこれら
の翻訳産物に対する抗体は、上記に挙げられた組織に対する腫瘍マーカーおよび
／または免疫治療の標的として有用性を示し得る。この遺伝子に対応する翻訳産
物に対する抗体は、その天然に存在するリガンドの結合をブロックするために用
いられ得る。このタンパク質をコードするＤＮＡインサートを有するベクターを
含む宿主細胞は、ＡＢＣトランスポートタンパク質に結合する化合物を同定する
ための方法において用いられ得る。従って、本発明の好ましい実施形態は、ＡＢ
Ｃトランスポートタンパク質に結合する化合物を検出する方法であり、この方法
は、候補化合物に直接または間接的に会合する標識の手段によるか、または標識
した競合物との競合を含むアッセイにおける、細胞により発現されるＡＢＣトラ
ンスポートタンパク質に結合する候補化合物の検出を包含する。
【００５３】
多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号４に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったか
もしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範
囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好
ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号４の１〜１９７２の任意の整数であり、ｂは１５〜１９８６
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４に示されるヌクレオチド残
基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポ
リヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号４に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったか
もしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範
囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好
ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号４の１〜１９７２の任意の整数であり、ｂは１５〜１９８６
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４に示されるヌクレオチド残
基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポ
リヌクレオチドが除外される。
【００５４】
（遺伝子番号４によりコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子の翻訳産物は、ヒトＡＢＣ３およびＡＢＣ−Ｃタンパク質と配列相
同性を共有する（それぞれ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＡＣ５０９６７およびＧ
ｅｎｂａｎｋ受託番号ＣＡＡ６５８２５を参照のこと）。このタンパク質は、細
胞膜を横切る溶質の輸送に関与すると考えられている。
同性を共有する（それぞれ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＡＣ５０９６７およびＧ
ｅｎｂａｎｋ受託番号ＣＡＡ６５８２５を参照のこと）。このタンパク質は、細
胞膜を横切る溶質の輸送に関与すると考えられている。
【００５５】
本発明の翻訳産物をコードする遺伝子は、ＡＢＣトランスポートファミリーの
タンパク質のメンバーである。これらのタンパク質は、原核生物および真核生物
の両方において、種々の異なる生物学的プロセスに関連するが、そのほとんどが
原形質膜を横切る親水性低分子の能動輸送に関与する。さらに、これらのタンパ
ク質は、ＡＴＰ結合ドメインを含み、従ってこれらのタンパク質は、膜を横切る
広いスペクトルの基質のエネルギー依存性輸送に関与する。これらのＡＴＰ結合
ドメインを同定するため、以下のコンセンサスパターンを開発した（Ｓｗｉｓｓ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ）：［ＬＩＶＭＦ
ＹＣ］−［ＳＡ］−［ＳＡＰＧＬＶＦＹＫＱＨ］−Ｇ−［ＤＥＮＱＭＷ］−［Ｋ
ＲＱＡＳＰＣＬＩＭＦＷ］− ［ＫＲＮＱＳＴＡＶＭ］−［ＫＲＡＣＬＶＭ］−
［ＬＩＶＭＦＹＰＡＮ］−｛ＰＨＹ｝−［ＬＩＶＭＦＷ］−［ＳＡＧＣＬＩＶＰ
］−｛ＦＹＷＨＰ｝−｛ＫＲＨＰ｝−［ＬＩＶＭＦＹＷＳＴＡ］。本発明の好ま
しいポリペプチドは、以下のアミノ酸配列：ＬＳＧＧＱＫＲＫＬＳＬＧＩＡＶ（
配列番号２０）を含む。これらのポリペプチドのフラグメントおよび／または改
変体（例えば、本明細書において記載されるフラグメントおよび／または改変体
など）は、本発明により包含される。これらのポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチド（フラグメントおよび／または改変体を含む）はまた、これらのポリ
ペプチドに結合する抗体がそうであるように、本発明により包含される。さらに
、配列番号２０のＡＢＣトランスポートタンパク質ファミリードメイン、および
配列番号１１の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、５０、または７
５のさらなる連続するアミノ酸残基を含むポリペプチドが好ましい。さらなる連
続するアミノ酸残基は、ＡＢＣトランスポートタンパク質ファミリードメインの
Ｎ末端またはＣ末端であり得る。あるいは、さらなる連続するアミノ酸残基は、
ＡＢＣトランスポートタンパク質ファミリードメインのＮ末端およびＣ末端の両
方であり得、ここでＮ末端およびＣ末端の連続するアミノ酸残基の総数は特定の
数に等しい。
タンパク質のメンバーである。これらのタンパク質は、原核生物および真核生物
の両方において、種々の異なる生物学的プロセスに関連するが、そのほとんどが
原形質膜を横切る親水性低分子の能動輸送に関与する。さらに、これらのタンパ
ク質は、ＡＴＰ結合ドメインを含み、従ってこれらのタンパク質は、膜を横切る
広いスペクトルの基質のエネルギー依存性輸送に関与する。これらのＡＴＰ結合
ドメインを同定するため、以下のコンセンサスパターンを開発した（Ｓｗｉｓｓ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ）：［ＬＩＶＭＦ
ＹＣ］−［ＳＡ］−［ＳＡＰＧＬＶＦＹＫＱＨ］−Ｇ−［ＤＥＮＱＭＷ］−［Ｋ
ＲＱＡＳＰＣＬＩＭＦＷ］− ［ＫＲＮＱＳＴＡＶＭ］−［ＫＲＡＣＬＶＭ］−
［ＬＩＶＭＦＹＰＡＮ］−｛ＰＨＹ｝−［ＬＩＶＭＦＷ］−［ＳＡＧＣＬＩＶＰ
］−｛ＦＹＷＨＰ｝−｛ＫＲＨＰ｝−［ＬＩＶＭＦＹＷＳＴＡ］。本発明の好ま
しいポリペプチドは、以下のアミノ酸配列：ＬＳＧＧＱＫＲＫＬＳＬＧＩＡＶ（
配列番号２０）を含む。これらのポリペプチドのフラグメントおよび／または改
変体（例えば、本明細書において記載されるフラグメントおよび／または改変体
など）は、本発明により包含される。これらのポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチド（フラグメントおよび／または改変体を含む）はまた、これらのポリ
ペプチドに結合する抗体がそうであるように、本発明により包含される。さらに
、配列番号２０のＡＢＣトランスポートタンパク質ファミリードメイン、および
配列番号１１の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、５０、または７
５のさらなる連続するアミノ酸残基を含むポリペプチドが好ましい。さらなる連
続するアミノ酸残基は、ＡＢＣトランスポートタンパク質ファミリードメインの
Ｎ末端またはＣ末端であり得る。あるいは、さらなる連続するアミノ酸残基は、
ＡＢＣトランスポートタンパク質ファミリードメインのＮ末端およびＣ末端の両
方であり得、ここでＮ末端およびＣ末端の連続するアミノ酸残基の総数は特定の
数に等しい。
【００５６】
本発明の好ましいポリペプチドは、配列番号１１において、残基：Ｔｈｒ−３
〜Ｌｙｓ−１１、Ｓｅｒ−１３〜Ｌｙｓ−１９、Ｌｙｓ−５５〜Ａｓｎ−６０、
およびＧｌｎ−９２〜Ｓｅｒ−１０２として示される免疫原性エピトープのうち
１、２、３、４または４の全てを含むか、あるいはそのような免疫原性エピトー
プから構成される。これらのポリペプチドのフラグメントおよび／または改変体
（例えば、本明細書に記載のフラグメントおよび／または改変体など）は、本発
明により包含される。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（フ
ラグメントおよび／または改変体を含む）はまた、これらのポリペプチドに結合
する抗体がそうであるように、本発明により包含される。
〜Ｌｙｓ−１１、Ｓｅｒ−１３〜Ｌｙｓ−１９、Ｌｙｓ−５５〜Ａｓｎ−６０、
およびＧｌｎ−９２〜Ｓｅｒ−１０２として示される免疫原性エピトープのうち
１、２、３、４または４の全てを含むか、あるいはそのような免疫原性エピトー
プから構成される。これらのポリペプチドのフラグメントおよび／または改変体
（例えば、本明細書に記載のフラグメントおよび／または改変体など）は、本発
明により包含される。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（フ
ラグメントおよび／または改変体を含む）はまた、これらのポリペプチドに結合
する抗体がそうであるように、本発明により包含される。
【００５７】
この遺伝子は、主にヒトの胃組織において発現される。
【００５８】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に
存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに以下：胃腸疾患および
／または障害、ならびに癌を含むが、これらに限定されない疾患および状態の診
断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペ
プチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プロー
ブを提供することに有用である。上記組織または細胞の多くの障害、特に胃腸系
の多くの障害について、標準的な遺伝子発現レベル、すなわち、障害を有さない
個体からの健常組織または体液中の発現レベルに対して有意により高いまたはよ
り低いレベルのこの遺伝子の発現が、特定の組織または細胞型（例えば、胃腸組
織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、
滑液および髄液）またはこのような障害を有する個体から採取された別の組織も
しくは細胞試料中で慣用的に検出され得る。
存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに以下：胃腸疾患および
／または障害、ならびに癌を含むが、これらに限定されない疾患および状態の診
断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペ
プチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プロー
ブを提供することに有用である。上記組織または細胞の多くの障害、特に胃腸系
の多くの障害について、標準的な遺伝子発現レベル、すなわち、障害を有さない
個体からの健常組織または体液中の発現レベルに対して有意により高いまたはよ
り低いレベルのこの遺伝子の発現が、特定の組織または細胞型（例えば、胃腸組
織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、
滑液および髄液）またはこのような障害を有する個体から採取された別の組織も
しくは細胞試料中で慣用的に検出され得る。
【００５９】
ヒト胃組織における組織分布、ならびにＡＢＣトランスポートタンパク質に対
する相同性は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物、および抗体
が、胃腸障害（例えば、消化および食物吸収に関する疾患）、ならびに造血障害
（小腸のパイエル板を含む）、または身体内の他の造血細胞および組織の検出お
よび／または処置に有用であることを示す。さらに、この遺伝子に対応するポリ
ヌクレオチド、翻訳産物および抗体は、胃癌ならびにこの遺伝子の発現が観察さ
れた他の組織の癌のような癌の検出および／または処置に有用であり得る。この
遺伝子に対応する翻訳産物に対する抗体は、その天然に存在するリガンドの結合
をブロックするために用いられ得る。このタンパク質をコードするＤＮＡインサ
ートを有するベクターを含む宿主細胞は、ＡＢＣトランスポートタンパク質に結
合する化合物を同定するための方法において用いられ得る。従って、本発明の好
ましい実施形態は、ＡＢＣトランスポートタンパク質に結合する化合物を検出す
る方法であり、この方法は、候補化合物に直接または間接的に会合する標識の手
段によるか、または標識した競合物との競合を含むアッセイにおける、細胞によ
り発現されるＡＢＣトランスポートタンパク質に結合する候補化合物の検出を包
含する。
する相同性は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物、および抗体
が、胃腸障害（例えば、消化および食物吸収に関する疾患）、ならびに造血障害
（小腸のパイエル板を含む）、または身体内の他の造血細胞および組織の検出お
よび／または処置に有用であることを示す。さらに、この遺伝子に対応するポリ
ヌクレオチド、翻訳産物および抗体は、胃癌ならびにこの遺伝子の発現が観察さ
れた他の組織の癌のような癌の検出および／または処置に有用であり得る。この
遺伝子に対応する翻訳産物に対する抗体は、その天然に存在するリガンドの結合
をブロックするために用いられ得る。このタンパク質をコードするＤＮＡインサ
ートを有するベクターを含む宿主細胞は、ＡＢＣトランスポートタンパク質に結
合する化合物を同定するための方法において用いられ得る。従って、本発明の好
ましい実施形態は、ＡＢＣトランスポートタンパク質に結合する化合物を検出す
る方法であり、この方法は、候補化合物に直接または間接的に会合する標識の手
段によるか、または標識した競合物との競合を含むアッセイにおける、細胞によ
り発現されるＡＢＣトランスポートタンパク質に結合する候補化合物の検出を包
含する。
【００６０】
多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号５に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったか
もしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範
囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好
ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号５の１〜２０６５の任意の整数であり、ｂは１５〜２０７９
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号５に示されるヌクレオチド残
基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポ
リヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号５に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったか
もしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範
囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好
ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号５の１〜２０６５の任意の整数であり、ｂは１５〜２０７９
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号５に示されるヌクレオチド残
基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポ
リヌクレオチドが除外される。
【００６１】
（遺伝子番号５によりコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子に対応する翻訳産物は、マウスＡＢＣ２タンパク質と配列相同性を
共有する（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＣＡＡ５３５３１を参照のこと）。このタン
パク質は、多数の溶質の膜通過輸送において重要であると考えられている。
共有する（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＣＡＡ５３５３１を参照のこと）。このタン
パク質は、多数の溶質の膜通過輸送において重要であると考えられている。
【００６２】
特定の実施形態において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列：
ＮＰＳＶＶＬＬＤＥＬＦＴＧＭＤＰＥＧＱＱＱＭＷＱＩＬＱＡＴＩＫＮＱＥＲＧ
ＡＬＬＴＴＨＹＭＳＥＡＫＳＬＣＤＲＶＡＩＭＶＳＧＴＬＲＣＩＧＳＩＱＱＬＫ
Ｓ（配列番号２１）、を含むか、またはこのアミノ酸配列から構成される。これ
らのポリペプチドのフラグメントおよび／または改変体（例えば、本明細書に記
載のフラグメントおよび／または改変体など）は、本発明により包含される。こ
れらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（フラグメントおよび／また
は改変体を含む）はまた、これらのポリペプチドに結合する抗体がそうであるよ
うに、本発明により包含される。
ＡＬＬＴＴＨＹＭＳＥＡＫＳＬＣＤＲＶＡＩＭＶＳＧＴＬＲＣＩＧＳＩＱＱＬＫ
Ｓ（配列番号２１）、を含むか、またはこのアミノ酸配列から構成される。これ
らのポリペプチドのフラグメントおよび／または改変体（例えば、本明細書に記
載のフラグメントおよび／または改変体など）は、本発明により包含される。こ
れらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（フラグメントおよび／また
は改変体を含む）はまた、これらのポリペプチドに結合する抗体がそうであるよ
うに、本発明により包含される。
【００６３】
本発明の好ましいポリペプチドは、配列番号１２おいて、残基Ｍｅｔ−１〜Ｇ
ｌｎ−６、Ｌｅｕ−９８〜Ｓｅｒ−１０３として示される免疫原性エピトープの
うち１、２または両方を含むか、あるいはそのような免疫原性エピトープから構
成される。これらのポリペプチドのフラグメントおよび／または改変体（例えば
、本明細書に記載のフラグメントおよび／または改変体など）は、本発明により
包含される。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（フラグメン
トおよび／または改変体を含む）はまた、これらのポリペプチドに結合する抗体
がそうであるように、本発明により包含される。
ｌｎ−６、Ｌｅｕ−９８〜Ｓｅｒ−１０３として示される免疫原性エピトープの
うち１、２または両方を含むか、あるいはそのような免疫原性エピトープから構
成される。これらのポリペプチドのフラグメントおよび／または改変体（例えば
、本明細書に記載のフラグメントおよび／または改変体など）は、本発明により
包含される。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（フラグメン
トおよび／または改変体を含む）はまた、これらのポリペプチドに結合する抗体
がそうであるように、本発明により包含される。
【００６４】
この遺伝子は、主に多数の癌性組織（例えば、胃癌組織、副腎腫瘍組織、卵巣
癌組織および前立腺癌組織）において発現される。
癌組織および前立腺癌組織）において発現される。
【００６５】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的試料中に
存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに以下：ＡＢＣタンパク
質により媒介される基質輸送に関与する障害および癌を含むが、これらに限定さ
れない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプ
チドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同
定のための免疫学的プローブを提供することに有用である。上記組織または細胞
の多くの障害、特に細胞輸送系および癌の多くの障害について、標準的な遺伝子
発現レベル、すなわち、障害を有さない個体からの健常組織または体液中の発現
レベルに対して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、特
定の組織または細胞型（例えば、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば
、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄液）またはこのような障害を有する個
体から採取された別の組織もしくは細胞試料中で慣用的に検出され得る。
存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに以下：ＡＢＣタンパク
質により媒介される基質輸送に関与する障害および癌を含むが、これらに限定さ
れない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプ
チドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同
定のための免疫学的プローブを提供することに有用である。上記組織または細胞
の多くの障害、特に細胞輸送系および癌の多くの障害について、標準的な遺伝子
発現レベル、すなわち、障害を有さない個体からの健常組織または体液中の発現
レベルに対して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、特
定の組織または細胞型（例えば、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば
、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄液）またはこのような障害を有する個
体から採取された別の組織もしくは細胞試料中で慣用的に検出され得る。
【００６６】
多数の癌性組織における組織分布、ならびにマウスＡＢＣ２タンパク質に対す
る相同性は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物、および抗体が
、本発明のＡＢＣトランスポートタンパク質により媒介される異常な細胞輸送に
関与する障害の検出および／または処置に、そして胃癌、卵巣癌および前立腺癌
のような癌、ならびに発現が観察された他の組織の癌の検出および／または処置
に有用であることを示す。この遺伝子に対応する翻訳産物に対する抗体は、その
天然に存在するリガンドの結合をブロックするために用いられ得る。このタンパ
ク質をコードするＤＮＡインサートを有するベクターを含む宿主細胞は、ＡＢＣ
トランスポートタンパク質に結合する化合物を同定するための方法において用い
られ得る。従って、本発明の好ましい実施形態は、ＡＢＣトランスポートタンパ
ク質に結合する化合物を検出する方法であり、この方法は、候補化合物に直接ま
たは間接的に会合する標識の手段によるか、または標識した競合物との競合を含
むアッセイにおける、細胞により発現されるＡＢＣトランスポートタンパク質に
結合する候補化合物の検出を包含する。
る相同性は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物、および抗体が
、本発明のＡＢＣトランスポートタンパク質により媒介される異常な細胞輸送に
関与する障害の検出および／または処置に、そして胃癌、卵巣癌および前立腺癌
のような癌、ならびに発現が観察された他の組織の癌の検出および／または処置
に有用であることを示す。この遺伝子に対応する翻訳産物に対する抗体は、その
天然に存在するリガンドの結合をブロックするために用いられ得る。このタンパ
ク質をコードするＤＮＡインサートを有するベクターを含む宿主細胞は、ＡＢＣ
トランスポートタンパク質に結合する化合物を同定するための方法において用い
られ得る。従って、本発明の好ましい実施形態は、ＡＢＣトランスポートタンパ
ク質に結合する化合物を検出する方法であり、この方法は、候補化合物に直接ま
たは間接的に会合する標識の手段によるか、または標識した競合物との競合を含
むアッセイにおける、細胞により発現されるＡＢＣトランスポートタンパク質に
結合する候補化合物の検出を包含する。
【００６７】
多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号６に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったか
もしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範
囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好
ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号６の１〜１５０２の任意の整数であり、ｂは１５〜１５１６
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号６に示されるヌクレオチド残
基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポ
リヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号６に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったか
もしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範
囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好
ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号６の１〜１５０２の任意の整数であり、ｂは１５〜１５１６
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号６に示されるヌクレオチド残
基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポ
リヌクレオチドが除外される。
【００６８】
（遺伝子番号６によりコードされるタンパク質の特徴）
この遺伝子に対応する翻訳産物は、Ａｔｌａｎｔｉｃ Ｓａｌｍｏｎ（Ｓａｌ
ｍｏｎ ｓａｌａｒ）由来の輸送関連タンパク質と配列相同性を共有する（Ｇｅ
ｎｂａｎｋ受託番号ＣＡＢ０５９１９を参照のこと）。
ｍｏｎ ｓａｌａｒ）由来の輸送関連タンパク質と配列相同性を共有する（Ｇｅ
ｎｂａｎｋ受託番号ＣＡＢ０５９１９を参照のこと）。
【００６９】
本発明の好ましいポリペプチドは、配列番号１３において、残基：Ａｒｇ−６
〜Ｇｌｙ−１６、Ｌｅｕ−４７〜Ｌｙｓ−５６、Ａｌａ−７６〜Ｔｙｒ−８１と
して示される免疫原性エピトープのうち１、２、３または３つの全てを含むか、
あるいはそのような免疫原性エピトープから構成される。これらのポリペプチド
のフラグメントおよび／または改変体（例えば、本明細書に記載のフラグメント
および／または改変体など）は、本発明により包含される。これらのポリペプチ
ドをコードするポリヌクレオチド（フラグメントおよび／または改変体を含む）
はまた、これらのポリペプチドに結合する抗体がそうであるように、本発明によ
り包含される。
〜Ｇｌｙ−１６、Ｌｅｕ−４７〜Ｌｙｓ−５６、Ａｌａ−７６〜Ｔｙｒ−８１と
して示される免疫原性エピトープのうち１、２、３または３つの全てを含むか、
あるいはそのような免疫原性エピトープから構成される。これらのポリペプチド
のフラグメントおよび／または改変体（例えば、本明細書に記載のフラグメント
および／または改変体など）は、本発明により包含される。これらのポリペプチ
ドをコードするポリヌクレオチド（フラグメントおよび／または改変体を含む）
はまた、これらのポリペプチドに結合する抗体がそうであるように、本発明によ
り包含される。
【００７０】
この遺伝子は、主にヒト真皮内皮細胞において発現される。
【００７１】
従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチド（抗体を含む）は、生
物学的試料中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに以下：
内皮細胞の疾患および／または障害（内皮細胞の異常な増殖を含む）を含むが、
これらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同
様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細
胞型の示差的同定のための免疫学的プローブを提供することに有用である。上記
組織または細胞の多くの障害、特に内皮細胞の多くの障害について、標準的な遺
伝子発現レベル、すなわち、障害を有さない個体からの健常組織または体液中の
発現レベルに対して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現が
、特定の組織または細胞型（例えば、内皮組織、癌性組織および創傷組織）また
は体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄液）またはこのような
障害を有する個体から採取された別の組織もしくは細胞試料中で慣用的に検出さ
れ得る。
物学的試料中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに以下：
内皮細胞の疾患および／または障害（内皮細胞の異常な増殖を含む）を含むが、
これらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同
様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細
胞型の示差的同定のための免疫学的プローブを提供することに有用である。上記
組織または細胞の多くの障害、特に内皮細胞の多くの障害について、標準的な遺
伝子発現レベル、すなわち、障害を有さない個体からの健常組織または体液中の
発現レベルに対して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現が
、特定の組織または細胞型（例えば、内皮組織、癌性組織および創傷組織）また
は体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄液）またはこのような
障害を有する個体から採取された別の組織もしくは細胞試料中で慣用的に検出さ
れ得る。
【００７２】
内皮細胞における組織分布、ならびにＡＢＣトランスポートタンパク質に対す
る相同性は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物、および抗体が
、内皮細胞の疾患および／または障害（内皮細胞の異常な増殖を含む）の診断、
検出および／または処置に有用であることを示す。この遺伝子に対応する翻訳産
物に対する抗体は、その天然に存在するリガンドの結合をブロックするために用
いられ得る。このタンパク質をコードするＤＮＡインサートを有するベクターを
含む宿主細胞は、ＡＢＣトランスポートタンパク質に結合する化合物を同定する
ための方法において用いられ得る。従って、本発明の好ましい実施形態は、ＡＢ
Ｃトランスポートタンパク質に結合する化合物を検出する方法であり、この方法
は、候補化合物に直接または間接的に会合する標識の手段によるか、または標識
した競合物との競合を含むアッセイにおける、細胞により発現されるＡＢＣトラ
ンスポートタンパク質に結合する候補化合物の検出を包含する。
る相同性は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物、および抗体が
、内皮細胞の疾患および／または障害（内皮細胞の異常な増殖を含む）の診断、
検出および／または処置に有用であることを示す。この遺伝子に対応する翻訳産
物に対する抗体は、その天然に存在するリガンドの結合をブロックするために用
いられ得る。このタンパク質をコードするＤＮＡインサートを有するベクターを
含む宿主細胞は、ＡＢＣトランスポートタンパク質に結合する化合物を同定する
ための方法において用いられ得る。従って、本発明の好ましい実施形態は、ＡＢ
Ｃトランスポートタンパク質に結合する化合物を検出する方法であり、この方法
は、候補化合物に直接または間接的に会合する標識の手段によるか、または標識
した競合物との競合を含むアッセイにおける、細胞により発現されるＡＢＣトラ
ンスポートタンパク質に結合する候補化合物の検出を包含する。
【００７３】
多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号７に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったか
もしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範
囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好
ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号７の１〜２８６の任意の整数であり、ｂは１５〜３００の整
数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号７に示されるヌクレオチド残基の
位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌ
クレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号７に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であったか
もしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の範
囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、好
ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号７の１〜２８６の任意の整数であり、ｂは１５〜３００の整
数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号７に示されるヌクレオチド残基の
位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリヌ
クレオチドが除外される。
【００７４】
【表１】
表１は、上記の各「遺伝子番号」に対応する情報を要約する。「ヌクレオチド
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｘ」として同定されるヌクレオチド配列は、表１において
同定される「ｃＤＮＡクローンＩＤ」から、およびいくつかの場合において、さ
らなる関連のＤＮＡクローンから得られる部分的に相同な（「重複する」）配列
から構築された。重複する配列は、高い重複性の単一の連続した配列に構築され
（通常、各ヌクレオチド部位で３〜５個の重複する配列）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ
：Ｘとして同定される最終的な配列を得た。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｘ」として同定されるヌクレオチド配列は、表１において
同定される「ｃＤＮＡクローンＩＤ」から、およびいくつかの場合において、さ
らなる関連のＤＮＡクローンから得られる部分的に相同な（「重複する」）配列
から構築された。重複する配列は、高い重複性の単一の連続した配列に構築され
（通常、各ヌクレオチド部位で３〜５個の重複する配列）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ
：Ｘとして同定される最終的な配列を得た。
【００７５】
ｃＤＮＡクローンＩＤは、その日付に寄託され、そして「ＡＴＣＣ受託番号Ｚ
および日付」において列挙される対応する受託番号が与えられた。寄託物のいく
つかは、同じ遺伝子に対応する複数の異なるクローンを含む。「ベクター」とは
、ｃＤＮＡクローンＩＤにおいて含まれるベクターの型をいう。
および日付」において列挙される対応する受託番号が与えられた。寄託物のいく
つかは、同じ遺伝子に対応する複数の異なるクローンを含む。「ベクター」とは
、ｃＤＮＡクローンＩＤにおいて含まれるベクターの型をいう。
【００７６】
「総ヌクレオチド配列」は、「遺伝子番号」によって同定されるコンティグに
おけるヌクレオチドの総数をいう。寄託されたプラスミドは、これらの配列の全
てまたは大半を含み得、これらは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｘの「クローン配列の
５’ヌクレオチド」および「クローン配列の３’ヌクレオチド」として示される
ヌクレオチドの位置によって反映される。推定メチオニン開始コドンの配列番号
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ）Ｘのヌクレオチドの位置（もし存在するなら）は、「開
始コドンの５’ヌクレオチド」として同定される。同様に、推定シグナル配列の
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｘのヌクレオチドの位置は、「シグナルペプチドの最初の
アミノ酸の５’ヌクレオチド」として同定される。
おけるヌクレオチドの総数をいう。寄託されたプラスミドは、これらの配列の全
てまたは大半を含み得、これらは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｘの「クローン配列の
５’ヌクレオチド」および「クローン配列の３’ヌクレオチド」として示される
ヌクレオチドの位置によって反映される。推定メチオニン開始コドンの配列番号
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ）Ｘのヌクレオチドの位置（もし存在するなら）は、「開
始コドンの５’ヌクレオチド」として同定される。同様に、推定シグナル配列の
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｘのヌクレオチドの位置は、「シグナルペプチドの最初の
アミノ酸の５’ヌクレオチド」として同定される。
【００７７】
翻訳されたアミノ酸配列は、ポリヌクレオチド配列の最初の翻訳コドンで始ま
り、「アミノ酸ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｙ」として同定されるが、他のリーディン
グフレームもまた、公知の分子生物学技術を使用して容易に翻訳され得る。これ
らの選択的オープンリーディングフレームによって生成されるポリペプチドは、
本発明によって具体的に意図される。
り、「アミノ酸ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｙ」として同定されるが、他のリーディン
グフレームもまた、公知の分子生物学技術を使用して容易に翻訳され得る。これ
らの選択的オープンリーディングフレームによって生成されるポリペプチドは、
本発明によって具体的に意図される。
【００７８】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｘ（ここでＸは、配列表に開示される任意のポリヌクレ
オチド配列であり得る）および翻訳されたＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｙ（ここでＹは
、配列表に開示される任意のポリペプチド配列であり得る）は、十分に正確であ
り、そしてそうでなければ、当該分野において周知の種々の用途および以下でさ
らに記載される種々の用途に適切である。例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｘは、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｘにおいて含まれる核酸配列または寄託されたプラスミド
に含まれるｃＤＮＡを検出する核酸ハイブリダイゼーションプローブを設計する
ためが挙げられるがこれらに限定されない用途を有する。これらのプローブはま
た、生物学的サンプル中の核酸分子にハイブリダイズし、それによって本発明の
種々の法医学的方法、および診断方法を可能にする。同様に、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：Ｙから同定されるポリぺプチドは、例えば、表１において同定されるｃＤＮ
Ａクローンによってコードされる分泌タンパク質に特異的に結合する抗体を作製
するためが挙げられるがこれらに限定されない用途を有する。
オチド配列であり得る）および翻訳されたＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｙ（ここでＹは
、配列表に開示される任意のポリペプチド配列であり得る）は、十分に正確であ
り、そしてそうでなければ、当該分野において周知の種々の用途および以下でさ
らに記載される種々の用途に適切である。例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｘは、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｘにおいて含まれる核酸配列または寄託されたプラスミド
に含まれるｃＤＮＡを検出する核酸ハイブリダイゼーションプローブを設計する
ためが挙げられるがこれらに限定されない用途を有する。これらのプローブはま
た、生物学的サンプル中の核酸分子にハイブリダイズし、それによって本発明の
種々の法医学的方法、および診断方法を可能にする。同様に、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：Ｙから同定されるポリぺプチドは、例えば、表１において同定されるｃＤＮ
Ａクローンによってコードされる分泌タンパク質に特異的に結合する抗体を作製
するためが挙げられるがこれらに限定されない用途を有する。
【００７９】
それにもかかわらず、配列決定反応によって生成されるＤＮＡ配列は、配列決
定のエラーを含み得る。このエラーは、誤って同定されたヌクレオチドとして、
または生成されたＤＮＡ配列におけるヌクレオチドの挿入もしくは欠失として存
在する。誤って挿入されたか、または欠失されたヌクレオチドは、推定アミノ酸
配列のリーディングフレームにおいてフレームシフトを引き起こす。これらの場
合において、作製されるＤＮＡ配列が、実際のＤＮＡ配列と９９．９％（例えば
、１０００塩基を超えるオープンリーディングフレームにおける１塩基の挿入ま
たは欠失）を超えて同一であり得るとしても、推定アミノ酸配列は、実際のアミ
ノ酸配列とは異なる。
定のエラーを含み得る。このエラーは、誤って同定されたヌクレオチドとして、
または生成されたＤＮＡ配列におけるヌクレオチドの挿入もしくは欠失として存
在する。誤って挿入されたか、または欠失されたヌクレオチドは、推定アミノ酸
配列のリーディングフレームにおいてフレームシフトを引き起こす。これらの場
合において、作製されるＤＮＡ配列が、実際のＤＮＡ配列と９９．９％（例えば
、１０００塩基を超えるオープンリーディングフレームにおける１塩基の挿入ま
たは欠失）を超えて同一であり得るとしても、推定アミノ酸配列は、実際のアミ
ノ酸配列とは異なる。
【００８０】
従って、ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列における正確さを必要とするこ
れらの適用のために、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｘとして同定される作製
されたヌクレオチド配列、およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｙとして同定される推定
の翻訳されたアミノ酸配列のみならず、表１において記載されるような、ＡＴＣ
Ｃに寄託された本発明のヒトｃＤＮＡを含むプラスミドＤＮＡのサンプルもまた
提供する。各々の寄託されたプラスミドのヌクレオチド配列は、公知の方法に従
って、寄託されたプラスミドを配列決定することによって容易に決定され得る。
れらの適用のために、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｘとして同定される作製
されたヌクレオチド配列、およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｙとして同定される推定
の翻訳されたアミノ酸配列のみならず、表１において記載されるような、ＡＴＣ
Ｃに寄託された本発明のヒトｃＤＮＡを含むプラスミドＤＮＡのサンプルもまた
提供する。各々の寄託されたプラスミドのヌクレオチド配列は、公知の方法に従
って、寄託されたプラスミドを配列決定することによって容易に決定され得る。
【００８１】
次いで、推定アミノ酸配列は、このような寄託物から証明され得る。さらに、
特定のプラスミドによってコードされるタンパク質のアミノ酸配列はまた、ペプ
チド配列決定によって、または寄託されたヒトｃＤＮＡを含む適切な宿主細胞中
でタンパク質を発現させ、このタンパク質を収集し、そしてその配列を決定する
ことによって、直接的に決定され得る。
特定のプラスミドによってコードされるタンパク質のアミノ酸配列はまた、ペプ
チド配列決定によって、または寄託されたヒトｃＤＮＡを含む適切な宿主細胞中
でタンパク質を発現させ、このタンパク質を収集し、そしてその配列を決定する
ことによって、直接的に決定され得る。
【００８２】
また、表１には、ｃＤＮＡプラスミドを含むベクターの名前が提供される。そ
れぞれのベクターは、当該分野で慣用的に用いられる。便利のために以下のさら
なる情報を提供する。
れぞれのベクターは、当該分野で慣用的に用いられる。便利のために以下のさら
なる情報を提供する。
【００８３】
ベクターＬａｍｂｄａ Ｚａｐ（米国特許第５，１２８，２５６号および同第
５，２８６，６３６号）、Ｕｎｉ−Ｚａｐ ＸＲ（米国特許第５，１２８，２５
６号および同第５，２８６，６３６号）、Ｚａｐ Ｅｘｐｒｅｓｓ（米国特許第
５，１２８，２５６号および同第５，２８６，６３６号）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉ
ｐｔ（ｐＢＳ）（Ｓｈｏｒｔ，Ｊ．Ｍ．ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ．１６：７５８３−７６００（１９８８）；Ａｌｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓ，Ｍ．Ａ
．およびＳｈｏｒｔ，Ｊ．Ｍ．、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １７
：９４９４（１９８９））ならびにｐＢＫ（Ａｌｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓ，Ｍ．Ａ．
ら、Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ５：５８−６１（１９９２））は、Ｓｔｒａｔａｇ
ｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．、１１０１１ Ｎ．Ｔｏｒ
ｒｅｙ Ｐｉｎｅｓ Ｒｏａｄ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ，９２０３７から市販
されている。ｐＢＳは、アンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてｐＢＫはネオマ
イシン耐性遺伝子を含む。ファージミドｐＢＳは、ラムダＺａｐおよびＵｎｉ−
Ｚａｐ ＸＲベクターから切り出され得、そしてファージミドｐＢＫは、Ｚａｐ
発現ベクターから切り出され得る。両方とも、Ｅ．ｃｏｌｉ株ＸＬ−１ Ｂｌｕ
ｅ（これもまた、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能である）に形質転換され得
る。
５，２８６，６３６号）、Ｕｎｉ−Ｚａｐ ＸＲ（米国特許第５，１２８，２５
６号および同第５，２８６，６３６号）、Ｚａｐ Ｅｘｐｒｅｓｓ（米国特許第
５，１２８，２５６号および同第５，２８６，６３６号）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉ
ｐｔ（ｐＢＳ）（Ｓｈｏｒｔ，Ｊ．Ｍ．ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ．１６：７５８３−７６００（１９８８）；Ａｌｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓ，Ｍ．Ａ
．およびＳｈｏｒｔ，Ｊ．Ｍ．、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １７
：９４９４（１９８９））ならびにｐＢＫ（Ａｌｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓ，Ｍ．Ａ．
ら、Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ５：５８−６１（１９９２））は、Ｓｔｒａｔａｇ
ｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．、１１０１１ Ｎ．Ｔｏｒ
ｒｅｙ Ｐｉｎｅｓ Ｒｏａｄ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ，９２０３７から市販
されている。ｐＢＳは、アンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてｐＢＫはネオマ
イシン耐性遺伝子を含む。ファージミドｐＢＳは、ラムダＺａｐおよびＵｎｉ−
Ｚａｐ ＸＲベクターから切り出され得、そしてファージミドｐＢＫは、Ｚａｐ
発現ベクターから切り出され得る。両方とも、Ｅ．ｃｏｌｉ株ＸＬ−１ Ｂｌｕ
ｅ（これもまた、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能である）に形質転換され得
る。
【００８４】
ベクターｐＳｐｏｒｔ１．０、ｐＣＭＶＳｐｏｒｔ ２．０およびｐＣＭＶＳ
ｐｏｒｔ３．０をＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｐ．Ｏ．Ｂ
ｏｘ６００９、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ ２０８９７から入手した。全
てのＳｐｏｒｔベクターはアンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏｌｉ
株ＤＨ１０Ｂ（これもまた、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能
である）に形質転換され得る。（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ，Ｃ．Ｅ．ら、Ｆｏｃｕ
ｓ １５：５９（１９９３）を参照のこと）。ベクターｌａｆｍｉｄ ＢＡ（Ｂ
ｅｎｔｏ Ｓｏａｒｅｓ、Ｃｏｌｕｍｂｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、ＮＹ）は
、アンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏｌｉ株ＸＬ−１ Ｂｌｕｅに
形質転換され得る。ベクターｐＣＲ（登録商標）２．１（これはＩｎｖｉｔｒｏ
ｇｅｎ、１６００ Ｆａｒａｄａｙ Ａｖｅｎｕｅ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ
９２００８から入手可能である）は、アンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ
．ｃｏｌｉ株ＤＨ１０Ｂ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能で
ある）に形質転換され得る（例えば、Ｃｌａｒｋ，Ｊ．Ｍ．、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ
ｓ Ｒｅｓ．１６：９６７７−９６８６（１９８８）およびＭｅａｄ，Ｄ．ら、
Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：（１９９１）を参照のこと）。
ｐｏｒｔ３．０をＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｐ．Ｏ．Ｂ
ｏｘ６００９、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ ２０８９７から入手した。全
てのＳｐｏｒｔベクターはアンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏｌｉ
株ＤＨ１０Ｂ（これもまた、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能
である）に形質転換され得る。（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ，Ｃ．Ｅ．ら、Ｆｏｃｕ
ｓ １５：５９（１９９３）を参照のこと）。ベクターｌａｆｍｉｄ ＢＡ（Ｂ
ｅｎｔｏ Ｓｏａｒｅｓ、Ｃｏｌｕｍｂｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、ＮＹ）は
、アンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏｌｉ株ＸＬ−１ Ｂｌｕｅに
形質転換され得る。ベクターｐＣＲ（登録商標）２．１（これはＩｎｖｉｔｒｏ
ｇｅｎ、１６００ Ｆａｒａｄａｙ Ａｖｅｎｕｅ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ
９２００８から入手可能である）は、アンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ
．ｃｏｌｉ株ＤＨ１０Ｂ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能で
ある）に形質転換され得る（例えば、Ｃｌａｒｋ，Ｊ．Ｍ．、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ
ｓ Ｒｅｓ．１６：９６７７−９６８６（１９８８）およびＭｅａｄ，Ｄ．ら、
Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：（１９９１）を参照のこと）。
【００８５】
本発明はまた、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｘ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｙ、または寄
託されたプラスミド（ｃＤＮＡプラスミド：Ｚ）に対応する遺伝子に関する。対
応する遺伝子は、本明細書中に開示される配列情報を使用して、公知の方法に従
って単離され得る。このような方法は、開示された配列からプローブまたはプラ
イマーを調製する工程、およびゲノム物質の適切な供給源から対応する遺伝子を
同定または増幅する工程を包含するがこれらに限定されない。
託されたプラスミド（ｃＤＮＡプラスミド：Ｚ）に対応する遺伝子に関する。対
応する遺伝子は、本明細書中に開示される配列情報を使用して、公知の方法に従
って単離され得る。このような方法は、開示された配列からプローブまたはプラ
イマーを調製する工程、およびゲノム物質の適切な供給源から対応する遺伝子を
同定または増幅する工程を包含するがこれらに限定されない。
【００８６】
本発明においてまた提供されるものは、対立遺伝子改変体、オーソログ（ｏｒ
ｔｈｏｌｏｇ）、および／または種ホモログである。当該分野において公知の手
順を使用し、本明細書中に開示される配列またはＡＴＣＣに寄託されたクローン
からの情報を用いて、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｘ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｙまたは
ｃＤＮＡプラスミド：Ｚに対応する遺伝子の全長遺伝子、対立遺伝子改変体、ス
プライシング改変体、全長のコード部分、オーソログ、および／または種ホモロ
グを獲得し得る。例えば、対立遺伝子改変体および／または種ホモログは、本明
細書中に提供される配列から適切なプローブまたはプライマーを作製し、そして
対立遺伝子改変体および／または所望のホモログについて適切な核酸供給源をス
クリーニングすることによって単離および同定され得る。
ｔｈｏｌｏｇ）、および／または種ホモログである。当該分野において公知の手
順を使用し、本明細書中に開示される配列またはＡＴＣＣに寄託されたクローン
からの情報を用いて、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｘ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｙまたは
ｃＤＮＡプラスミド：Ｚに対応する遺伝子の全長遺伝子、対立遺伝子改変体、ス
プライシング改変体、全長のコード部分、オーソログ、および／または種ホモロ
グを獲得し得る。例えば、対立遺伝子改変体および／または種ホモログは、本明
細書中に提供される配列から適切なプローブまたはプライマーを作製し、そして
対立遺伝子改変体および／または所望のホモログについて適切な核酸供給源をス
クリーニングすることによって単離および同定され得る。
【００８７】
本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｘ、および／またはｃＤＮＡプラスミド：Ｚ
の核酸配列を含むか、あるいはそれらからなるポリヌクレオチドを提供する。本
発明はまた、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｙのポリペプチド配列、配列番号Ｘにコード
されるポリペプチド、および／またはｃＤＮＡプラスミド：Ｚ中のｃＤＮＡによ
りコードされるポリペプチドを含むか、あるいはそれらからなるポリペプチドを
提供する。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｙのポリペプチド配列、配列番号Ｘにコードさ
れるポリペプチド、および／またはｃＤＮＡプラスミド：Ｚ中に含まれるｃＤＮ
Ａによりコードされるポリペプチド配列を含むか、あるいはそれらからなるポリ
ペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に包含される。本発明は
さらに、配列番号Ｘの核酸配列の相補体、および／またはｃＤＮＡプラスミド：
Ｚ中のｃＤＮＡのコード鎖の相補体を含むか、またはそれらからなるポリヌクレ
オチドを包含する。
の核酸配列を含むか、あるいはそれらからなるポリヌクレオチドを提供する。本
発明はまた、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｙのポリペプチド配列、配列番号Ｘにコード
されるポリペプチド、および／またはｃＤＮＡプラスミド：Ｚ中のｃＤＮＡによ
りコードされるポリペプチドを含むか、あるいはそれらからなるポリペプチドを
提供する。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｙのポリペプチド配列、配列番号Ｘにコードさ
れるポリペプチド、および／またはｃＤＮＡプラスミド：Ｚ中に含まれるｃＤＮ
Ａによりコードされるポリペプチド配列を含むか、あるいはそれらからなるポリ
ペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に包含される。本発明は
さらに、配列番号Ｘの核酸配列の相補体、および／またはｃＤＮＡプラスミド：
Ｚ中のｃＤＮＡのコード鎖の相補体を含むか、またはそれらからなるポリヌクレ
オチドを包含する。
【００８８】
多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能であり、そして本発明の着想の
前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリ
ヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙する
ことは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載
されるヌクレオチド配列（ここで、ａは１と配列番号Ｘの最終ヌクレオチド−１
５の間の任意の整数であり、ｂは配列番号Ｘの１５から最終ヌクレオチドまでの
整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号Ｘに示されるヌクレオチド残基
の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリ
ヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能であり、そして本発明の着想の
前に公に利用可能であったかもしれない。好ましくは、このような関連するポリ
ヌクレオチドは、本発明の範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙する
ことは煩わしい。従って、好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載
されるヌクレオチド配列（ここで、ａは１と配列番号Ｘの最終ヌクレオチド−１
５の間の任意の整数であり、ｂは配列番号Ｘの１５から最終ヌクレオチドまでの
整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号Ｘに示されるヌクレオチド残基
の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポリ
ヌクレオチドが除外される。
【００８９】
（全長遺伝子の回収のためのＲＡＣＥプロトコル）
部分的ｃＤＮＡクローンは、Ｆｒｏｈｍａｎ，Ｍ．Ａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８５：８９９８−９００２（１９８８）に記載
されたｃＤＮＡ末端の高速増幅（ＲＡＣＥ）手順を利用することにより全長を作
製し得る。５’末端または３’末端のいずれかが欠失しているｃＤＮＡクローン
は、翻訳の開始コドンまたは終止コドンのそれぞれに伸長する欠失塩基対を含む
ように再構築され得る。いくつかの場合において、ｃＤＮＡは、そのために翻訳
の開始を欠失している。以下に、この本来の５’ＲＡＣＥ手順の改変を簡単に記
載する。ポリＡ＋または全ＲＮＡを、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩ（Ｇｉｂｃ
ｏ／ＢＲＬ）およびｃＤＮＡ配列に特異的なアンチセンスプライマーまたは相補
的プライマーを用いて逆転写する。そのプライマーを、Ｍｉｃｒｏｃｏｎ Ｃｏ
ｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ（Ａｍｉｃｏｎ）を用いて反応から除去する。次いで、第
１鎖ｃＤＮＡを、ｄＡＴＰおよび末端デオキシヌクレオチドトランスフェラーゼ
（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）を用いて、連結する。このように、アンカー配列を産生
し、これは、ＰＣＲ増幅のために必要である。第２鎖を、ｄＡ−テイル含有ＰＣ
Ｒ緩衝液、ＴａｑＤＮＡポリメラーゼ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｃｅｔｕｓ
）、５’末端で３つの隣接制限部位（ＸｈｏＩ、ＳａｌＩおよびＣｌａＩ）を含
むオリゴｄＴプライマーならびにこれらの制限部位を適切に含むプライマーから
合成する。この２本鎖ｃＤＮＡを同じプライマーならびにネスティッドｃＤＮＡ
特異的アンチセンスプライマーを用いて４０サイクルでＰＣＲ増幅する。このＰ
ＣＲ産物を、エチジウムブロマイドアガロースゲル上でサイズ分離し、そして欠
失しているタンパク質コードＤＮＡの推定サイズのｃＤＮＡ産物を含むゲルの領
域を取り出す。ｃＤＮＡを、Ｍａｇｉｃ ＰＣＲ Ｐｒｅｐ ｋｉｔ（Ｐｒｏｍ
ｅｇａ）を用いてアガロースゲルから精製し、ＸｈｏＩまたはＳａｌＩを用いて
制限消化し、そしてプラスミド（例えば、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫＩＩ（
Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ））にＸｈｏＩ部位およびＥｃｏＲＶ部位で連結する。こ
のＤＮＡを細菌に形質転換し、そしてこのプラスミドクローンを配列決定して、
正確なタンパク質コード挿入物を同定する。正確な５’末端を、推定的に同定さ
れた相同体を有するこの配列と部分的ｃＤＮＡクローンを有する重複を比較する
ことにより確認する。当該分野において公知の同様の方法および／または市販の
キットを使用して、増幅し、そして３’末端を回収する。
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８５：８９９８−９００２（１９８８）に記載
されたｃＤＮＡ末端の高速増幅（ＲＡＣＥ）手順を利用することにより全長を作
製し得る。５’末端または３’末端のいずれかが欠失しているｃＤＮＡクローン
は、翻訳の開始コドンまたは終止コドンのそれぞれに伸長する欠失塩基対を含む
ように再構築され得る。いくつかの場合において、ｃＤＮＡは、そのために翻訳
の開始を欠失している。以下に、この本来の５’ＲＡＣＥ手順の改変を簡単に記
載する。ポリＡ＋または全ＲＮＡを、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩ（Ｇｉｂｃ
ｏ／ＢＲＬ）およびｃＤＮＡ配列に特異的なアンチセンスプライマーまたは相補
的プライマーを用いて逆転写する。そのプライマーを、Ｍｉｃｒｏｃｏｎ Ｃｏ
ｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ（Ａｍｉｃｏｎ）を用いて反応から除去する。次いで、第
１鎖ｃＤＮＡを、ｄＡＴＰおよび末端デオキシヌクレオチドトランスフェラーゼ
（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）を用いて、連結する。このように、アンカー配列を産生
し、これは、ＰＣＲ増幅のために必要である。第２鎖を、ｄＡ−テイル含有ＰＣ
Ｒ緩衝液、ＴａｑＤＮＡポリメラーゼ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｃｅｔｕｓ
）、５’末端で３つの隣接制限部位（ＸｈｏＩ、ＳａｌＩおよびＣｌａＩ）を含
むオリゴｄＴプライマーならびにこれらの制限部位を適切に含むプライマーから
合成する。この２本鎖ｃＤＮＡを同じプライマーならびにネスティッドｃＤＮＡ
特異的アンチセンスプライマーを用いて４０サイクルでＰＣＲ増幅する。このＰ
ＣＲ産物を、エチジウムブロマイドアガロースゲル上でサイズ分離し、そして欠
失しているタンパク質コードＤＮＡの推定サイズのｃＤＮＡ産物を含むゲルの領
域を取り出す。ｃＤＮＡを、Ｍａｇｉｃ ＰＣＲ Ｐｒｅｐ ｋｉｔ（Ｐｒｏｍ
ｅｇａ）を用いてアガロースゲルから精製し、ＸｈｏＩまたはＳａｌＩを用いて
制限消化し、そしてプラスミド（例えば、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫＩＩ（
Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ））にＸｈｏＩ部位およびＥｃｏＲＶ部位で連結する。こ
のＤＮＡを細菌に形質転換し、そしてこのプラスミドクローンを配列決定して、
正確なタンパク質コード挿入物を同定する。正確な５’末端を、推定的に同定さ
れた相同体を有するこの配列と部分的ｃＤＮＡクローンを有する重複を比較する
ことにより確認する。当該分野において公知の同様の方法および／または市販の
キットを使用して、増幅し、そして３’末端を回収する。
【００９０】
いくつかの、品質管理キットが購入のために市販されている。上記のそれらと
同様の試薬および方法は、全長遺伝子を回収をするための５’ ＲＡＣＥおよび
３’ＲＡＣＥの両方について、Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬからキットの形態で供給され
る。第２のキットは、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから入手可能である。このキットは、Ｄ
ｕｍａｓら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９：５２２７−３２（
１９９１）により開発された、関連技術の改変（ＳＬＩＣ（一本鎖ｃＤＮＡへの
、一本鎖の連結））である。手順における主な違いは、ＲＮＡを、逆転写後にア
ルカリ加水分解し、そしてＲＮＡリガーゼを使用して、第１鎖ｃＤＮＡに、制限
部位を含むアンカープライマーを連結することである。これは、過去に配列決定
をするのが困難なポリＴの伸長を生じるｄＡテーリング反応における必要性を除
去する。
同様の試薬および方法は、全長遺伝子を回収をするための５’ ＲＡＣＥおよび
３’ＲＡＣＥの両方について、Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬからキットの形態で供給され
る。第２のキットは、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから入手可能である。このキットは、Ｄ
ｕｍａｓら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９：５２２７−３２（
１９９１）により開発された、関連技術の改変（ＳＬＩＣ（一本鎖ｃＤＮＡへの
、一本鎖の連結））である。手順における主な違いは、ＲＮＡを、逆転写後にア
ルカリ加水分解し、そしてＲＮＡリガーゼを使用して、第１鎖ｃＤＮＡに、制限
部位を含むアンカープライマーを連結することである。これは、過去に配列決定
をするのが困難なポリＴの伸長を生じるｄＡテーリング反応における必要性を除
去する。
【００９１】
ＲＮＡからの５’ｃＤＮＡまたは３’ｃＤＮＡを産生する代替方法は、ｃＤＮ
Ａライブラリー二本鎖ＤＮＡを使用することである。非対称性ＰＣＲ増幅アンチ
センスｃＤＮＡ鎖は、アンチセンスｃＤＮＡ特異的プライマーおよびプラスミド
アンカープライマーを用いて合成する。これらのプライマーを除去し、そして対
称ＰＣＲ反応を、ネストしたｃＤＮＡ特異的アンチセンスプライマーおよびプラ
スミドアンカープライマーを用いて実施する。
Ａライブラリー二本鎖ＤＮＡを使用することである。非対称性ＰＣＲ増幅アンチ
センスｃＤＮＡ鎖は、アンチセンスｃＤＮＡ特異的プライマーおよびプラスミド
アンカープライマーを用いて合成する。これらのプライマーを除去し、そして対
称ＰＣＲ反応を、ネストしたｃＤＮＡ特異的アンチセンスプライマーおよびプラ
スミドアンカープライマーを用いて実施する。
【００９２】
（５’末端配列または３’末端配列を産生し、全長遺伝子を得るための、ＲＮ
Ａリガーゼのプロトコル） 一旦、目的の遺伝子が同定されると、本来のｃＤＮＡプラスミド中には存在し
ないかもしれない遺伝子の５’部分または３’部分の同定のためのいくつかの方
法が利用可能になる。これらの方法は、以下を含むがこれらに限定されない：フ
ィルタープローブ探索、特異的プローブを使用するクローン富化、ならびに５’
ＲＡＣＥおよび３’ＲＡＣＥと類似および同一のプロトコル。全長遺伝子は、
ライブラリー中に存在し得、そして探索によって同定され得るが、一方、５’末
端または３’末端を生成するために有用な方法は、欠けている情報を生成するた
めに、本来のｃＤＮＡからの既存の配列情報を、使用することである。５’ＲＡ
ＣＥに類似する方法は、所望の全長遺伝子の欠けている５’末端を生成するため
に利用可能である（この方法は、Ｆｒｏｍｏｎｔ−Ｒａｃｉｎｅら、Ｎｕｃｌｅ
ｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２１（７）：１６８３−１６８４（１９９３）に
よって発表された）。簡潔には、特定のＲＮＡオリゴヌクレオチドを、全長遺伝
子ＲＮＡ転写物をおそらく含むＲＮＡの集団の５’末端に連結し、そして連結さ
れたＲＮＡオリゴヌクレオチドに特異的なプライマーおよび目的の遺伝子の公知
の配列に特異的なプライマーを含むプライマーセットを使用して、所望の全長遺
伝子の５’部分をＰＣＲ増幅する。次いで、この増幅した産物を配列決定し得、
そしてこれを使用して全長遺伝子を生成し得る。この方法は、所望の供給源から
単離された総ＲＮＡを用いて開始し、この手順における必要条件ではないが、ポ
リＡ ＲＮＡを使用し得る。次いで、ＲＮＡ調製物を、必要ならばホスファター
ゼで処理して、後のＲＮＡリガーゼ工程を妨害し得る分解または損傷ＲＮＡの５
’リン酸基を排除し得る。次いで、使用された場合、ホスファターゼを不活化し
、そしてＲＮＡをメッセンジャーＲＮＡの５’末端に存在するキャップ構造を除
去するために、タバコ酸性ピロホスファターゼを用いて処理する。この反応は、
次いでＴ４ ＲＮＡリガーゼを用いてＲＮＡオリゴヌクレオチドに連結され得る
、キャップ切断ＲＮＡの５’末端に５’リン酸基を残す。次いで、この改変型Ｒ
ＮＡ調製物を、遺伝子特異的なオリゴヌクレオチドを用いる、第一鎖ｃＤＮＡ合
成のためのテンプレートとして使用し得る。次いで、第一鎖合成反応物を、連結
されたＲＮＡオリゴヌクレオチドに特異的なプライマーおよび目的のＡＢＣトラ
ンスポート遺伝子の公知の配列に特異的なプライマーを用いる、所望の５’末端
のＰＣＲ増幅のためのテンプレートとして使用し得る。次いで、得られた生成物
を配列決定し、そして分析して５’末端配列が関連するＡＢＣトランスポート遺
伝子に属することを確認する。
Ａリガーゼのプロトコル） 一旦、目的の遺伝子が同定されると、本来のｃＤＮＡプラスミド中には存在し
ないかもしれない遺伝子の５’部分または３’部分の同定のためのいくつかの方
法が利用可能になる。これらの方法は、以下を含むがこれらに限定されない：フ
ィルタープローブ探索、特異的プローブを使用するクローン富化、ならびに５’
ＲＡＣＥおよび３’ＲＡＣＥと類似および同一のプロトコル。全長遺伝子は、
ライブラリー中に存在し得、そして探索によって同定され得るが、一方、５’末
端または３’末端を生成するために有用な方法は、欠けている情報を生成するた
めに、本来のｃＤＮＡからの既存の配列情報を、使用することである。５’ＲＡ
ＣＥに類似する方法は、所望の全長遺伝子の欠けている５’末端を生成するため
に利用可能である（この方法は、Ｆｒｏｍｏｎｔ−Ｒａｃｉｎｅら、Ｎｕｃｌｅ
ｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２１（７）：１６８３−１６８４（１９９３）に
よって発表された）。簡潔には、特定のＲＮＡオリゴヌクレオチドを、全長遺伝
子ＲＮＡ転写物をおそらく含むＲＮＡの集団の５’末端に連結し、そして連結さ
れたＲＮＡオリゴヌクレオチドに特異的なプライマーおよび目的の遺伝子の公知
の配列に特異的なプライマーを含むプライマーセットを使用して、所望の全長遺
伝子の５’部分をＰＣＲ増幅する。次いで、この増幅した産物を配列決定し得、
そしてこれを使用して全長遺伝子を生成し得る。この方法は、所望の供給源から
単離された総ＲＮＡを用いて開始し、この手順における必要条件ではないが、ポ
リＡ ＲＮＡを使用し得る。次いで、ＲＮＡ調製物を、必要ならばホスファター
ゼで処理して、後のＲＮＡリガーゼ工程を妨害し得る分解または損傷ＲＮＡの５
’リン酸基を排除し得る。次いで、使用された場合、ホスファターゼを不活化し
、そしてＲＮＡをメッセンジャーＲＮＡの５’末端に存在するキャップ構造を除
去するために、タバコ酸性ピロホスファターゼを用いて処理する。この反応は、
次いでＴ４ ＲＮＡリガーゼを用いてＲＮＡオリゴヌクレオチドに連結され得る
、キャップ切断ＲＮＡの５’末端に５’リン酸基を残す。次いで、この改変型Ｒ
ＮＡ調製物を、遺伝子特異的なオリゴヌクレオチドを用いる、第一鎖ｃＤＮＡ合
成のためのテンプレートとして使用し得る。次いで、第一鎖合成反応物を、連結
されたＲＮＡオリゴヌクレオチドに特異的なプライマーおよび目的のＡＢＣトラ
ンスポート遺伝子の公知の配列に特異的なプライマーを用いる、所望の５’末端
のＰＣＲ増幅のためのテンプレートとして使用し得る。次いで、得られた生成物
を配列決定し、そして分析して５’末端配列が関連するＡＢＣトランスポート遺
伝子に属することを確認する。
【００９３】
（ポリヌクレオチドフラグメントおよびポリペプチドフラグメント）
本発明はまた、本発明のポリヌクレオチド（核酸）の、ポリヌクレオチドフラ
グメントに関する。本発明において、「ポリヌクレオチドフラグメント」とは、
以下である核酸配列を有するポリヌクレオチドをいう：ｃＤＮＡプラスミドＺに
含まれるｃＤＮＡの一部か、もしくはｃＤＮＡプラスミドＺに含まれるｃＤＮＡ
によりコードされるポリペプチドをコードするｃＤＮＡの一部；配列番号Ｘもし
くはその相補鎖におけるポリヌクレオチド配列の一部；配列番号Ｙのポリペプチ
ドの一部をコードするポリヌクレオチド配列；あるいは配列番号Ｘによりコード
されるポリペプチドの一部をコードするポリヌクレオチド配列。本発明のヌクレ
オチドフラグメントは、好ましくは、少なくとも約１５ｎｔ、そしてより好まし
くは少なくとも約２０ｎｔ、さらにより好ましくは少なくとも約３０ｎｔ、そし
てなおより好ましくは少なくとも約４０ｎｔ、少なくとも約５０ｎｔ、少なくと
も約７５ｎｔ、少なくとも約１００ｎｔ、少なくとも約１２５ｎｔ、または少な
くとも約１５０ｎｔの長さである。例えば、「少なくとも約２０ｎｔの長さ」の
フラグメントは、例えばｃＤＮＡプラスミドＺのｃＤＮＡに含まれる配列または
配列番号Ｘに示されるヌクレオチド配列もしくはその相補鎖由来の２０以上の連
続する塩基を含むことが意図される。この文脈において「約（おおよそ）」は、
特に記載された値、あるいはそれより数個（５、４、３、２、または１）のヌク
レオチドだけ大きいかまたは小さな値を含む。これらのヌクレオチドフラグメン
トは、本明細書中で議論されるように、診断プローブおよびプライマーとしての
使用を含むが、それらに限定されない使用を有する。もちろん、より大きなフラ
グメント（例えば、少なくとも１５０、１７５、２００、２５０、５００、６０
０、１０００または２０００のヌクレオチドの長さ）もまた、本発明に含まれる
。
グメントに関する。本発明において、「ポリヌクレオチドフラグメント」とは、
以下である核酸配列を有するポリヌクレオチドをいう：ｃＤＮＡプラスミドＺに
含まれるｃＤＮＡの一部か、もしくはｃＤＮＡプラスミドＺに含まれるｃＤＮＡ
によりコードされるポリペプチドをコードするｃＤＮＡの一部；配列番号Ｘもし
くはその相補鎖におけるポリヌクレオチド配列の一部；配列番号Ｙのポリペプチ
ドの一部をコードするポリヌクレオチド配列；あるいは配列番号Ｘによりコード
されるポリペプチドの一部をコードするポリヌクレオチド配列。本発明のヌクレ
オチドフラグメントは、好ましくは、少なくとも約１５ｎｔ、そしてより好まし
くは少なくとも約２０ｎｔ、さらにより好ましくは少なくとも約３０ｎｔ、そし
てなおより好ましくは少なくとも約４０ｎｔ、少なくとも約５０ｎｔ、少なくと
も約７５ｎｔ、少なくとも約１００ｎｔ、少なくとも約１２５ｎｔ、または少な
くとも約１５０ｎｔの長さである。例えば、「少なくとも約２０ｎｔの長さ」の
フラグメントは、例えばｃＤＮＡプラスミドＺのｃＤＮＡに含まれる配列または
配列番号Ｘに示されるヌクレオチド配列もしくはその相補鎖由来の２０以上の連
続する塩基を含むことが意図される。この文脈において「約（おおよそ）」は、
特に記載された値、あるいはそれより数個（５、４、３、２、または１）のヌク
レオチドだけ大きいかまたは小さな値を含む。これらのヌクレオチドフラグメン
トは、本明細書中で議論されるように、診断プローブおよびプライマーとしての
使用を含むが、それらに限定されない使用を有する。もちろん、より大きなフラ
グメント（例えば、少なくとも１５０、１７５、２００、２５０、５００、６０
０、１０００または２０００のヌクレオチドの長さ）もまた、本発明に含まれる
。
【００９４】
さらに、本発明のポリヌクレオチドフラグメントの代表例としては、例えば、
配列番号Ｘのおおよそ以下のヌクレオチド数の配列、またはその相補鎖を含むか
、あるいはそれからなるフラグメントが挙げられる：１〜５０、５１〜１００、
１０１〜１５０、１５１〜２００、２０１〜２５０、２５１〜３００、３０１〜
３５０、３５１〜４００、４０１〜４５０、４５１〜５００、５０１〜５５０、
５５１〜６００、６５１〜７００、７０１〜７５０、７５１〜８００、８００〜
８５０、８５１〜９００、９０１〜９５０、９５１〜１０００、１００１〜１０
５０、１０５１〜１１００、１１０１〜１１５０、１１５１〜１２００、１２０
１〜１２５０、１２５１〜１３００、１３０１〜１３５０、１３５１〜１４００
、１４０１〜１４５０、１４５１〜１５００、１５０１〜１５５０、１５５１〜
１６００、１６０１〜１６５０、１６５１〜１７００、１７０１〜１７５０、１
７５１〜１８００、１８０１〜１８５０、１８５１〜１９００、１９０１〜１９
５０、１９５１〜２０００、２００１〜２０５０、２０５１〜２１００、２１０
１〜２１５０、２１５１〜２２００、２２０１〜２２５０、２２５１〜２３００
、２３０１〜２３５０、２３５１〜２４００、２４０１〜２４５０、２４５１〜
２５００、２５０１〜２５５０、２５５１〜２６００、２６０１〜２６５０、２
６５１〜２７００、２７０１〜２７５０、２７５１〜２８００、２８０１〜２８
５０、２８５１〜２９００、２９０１〜２９５０、２９５１〜３０００、３００
１〜３０５０、３０５１〜３１００、３１０１〜３１５０、３１５１〜３２００
、３２０１〜３２５０、３２５１〜３３００、３３０１〜３３５０、３３５１〜
３４００、３４０１〜３４５０、３４５１〜３５００、３５０１〜３５５０、３
５５１〜３６００、および／または３６０１〜３６３５。この文脈において、「
おおよそ（約）」は、特に記載された範囲、またはいずれかの末端もしくは両方
の末端において、これより数個（５、４、３、２、または１）のヌクレオチドだ
け大きいか、または小さな範囲を含む。好ましくは、これらのフラグメントは、
その配列が一部であるポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドの、機
能的活性（例えば、生物学的活性）を有するポリペプチドをコードする。より好
ましくは、これらのフラグメントは、本明細書中で議論されるようにプローブま
たはプライマーとして使用され得る。ストリンジェントなハイブリダイゼーショ
ン条件下またはより低いストリンジェンシー条件下でこれらのフラグメントの１
つ以上にハイブリダイズするポリヌクレオチドもまた本発明に含まれ、これらの
ポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドまたはフラグメントも同様に
含まれる。
配列番号Ｘのおおよそ以下のヌクレオチド数の配列、またはその相補鎖を含むか
、あるいはそれからなるフラグメントが挙げられる：１〜５０、５１〜１００、
１０１〜１５０、１５１〜２００、２０１〜２５０、２５１〜３００、３０１〜
３５０、３５１〜４００、４０１〜４５０、４５１〜５００、５０１〜５５０、
５５１〜６００、６５１〜７００、７０１〜７５０、７５１〜８００、８００〜
８５０、８５１〜９００、９０１〜９５０、９５１〜１０００、１００１〜１０
５０、１０５１〜１１００、１１０１〜１１５０、１１５１〜１２００、１２０
１〜１２５０、１２５１〜１３００、１３０１〜１３５０、１３５１〜１４００
、１４０１〜１４５０、１４５１〜１５００、１５０１〜１５５０、１５５１〜
１６００、１６０１〜１６５０、１６５１〜１７００、１７０１〜１７５０、１
７５１〜１８００、１８０１〜１８５０、１８５１〜１９００、１９０１〜１９
５０、１９５１〜２０００、２００１〜２０５０、２０５１〜２１００、２１０
１〜２１５０、２１５１〜２２００、２２０１〜２２５０、２２５１〜２３００
、２３０１〜２３５０、２３５１〜２４００、２４０１〜２４５０、２４５１〜
２５００、２５０１〜２５５０、２５５１〜２６００、２６０１〜２６５０、２
６５１〜２７００、２７０１〜２７５０、２７５１〜２８００、２８０１〜２８
５０、２８５１〜２９００、２９０１〜２９５０、２９５１〜３０００、３００
１〜３０５０、３０５１〜３１００、３１０１〜３１５０、３１５１〜３２００
、３２０１〜３２５０、３２５１〜３３００、３３０１〜３３５０、３３５１〜
３４００、３４０１〜３４５０、３４５１〜３５００、３５０１〜３５５０、３
５５１〜３６００、および／または３６０１〜３６３５。この文脈において、「
おおよそ（約）」は、特に記載された範囲、またはいずれかの末端もしくは両方
の末端において、これより数個（５、４、３、２、または１）のヌクレオチドだ
け大きいか、または小さな範囲を含む。好ましくは、これらのフラグメントは、
その配列が一部であるポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドの、機
能的活性（例えば、生物学的活性）を有するポリペプチドをコードする。より好
ましくは、これらのフラグメントは、本明細書中で議論されるようにプローブま
たはプライマーとして使用され得る。ストリンジェントなハイブリダイゼーショ
ン条件下またはより低いストリンジェンシー条件下でこれらのフラグメントの１
つ以上にハイブリダイズするポリヌクレオチドもまた本発明に含まれ、これらの
ポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドまたはフラグメントも同様に
含まれる。
【００９５】
さらに、本発明のポリヌクレオチドフラグメントの代表例としては、例えば、
ｃＤＮＡプラスミドＺに含まれるｃＤＮＡヌクレオチド配列の以下のおおよその
ヌクレオチド数の配列、またはその相補鎖を含むか、あるいはそれからなるフラ
グメントが挙げられる：１〜５０、５１〜１００、１０１〜１５０、１５１〜２
００、２０１〜２５０、２５１〜３００、３０１〜３５０、３５１〜４００、４
０１〜４５０、４５１〜５００、５０１〜５５０、５５１〜６００、６５１〜７
００、７０１〜７５０、７５１〜８００、８００〜８５０、８５１〜９００、９
０１〜９５０、９５１〜１０００、１００１〜１０５０、１０５１〜１１００、
１１０１〜１１５０、１１５１〜１２００、１２０１〜１２５０、１２５１〜１
３００、１３０１〜１３５０、１３５１〜１４００、１４０１〜１４５０、１４
５１〜１５００、１５０１〜１５５０、１５５１〜１６００、１６０１〜１６５
０、１６５１〜１７００、１７０１〜１７５０、１７５１〜１８００、１８０１
〜１８５０、１８５１〜１９００、１９０１〜１９５０、１９５１〜２０００、
２００１〜２０５０、２０５１〜２１００、２１０１〜２１５０、２１５１〜２
２００、２２０１〜２２５０、２２５１〜２３００、２３０１〜２３５０、２３
５１〜２４００、２４０１〜２４５０、２４５１〜２５００、２５０１〜２５５
０、２５５１〜２６００、２６０１〜２６５０、２６５１〜２７００、２７０１
〜２７５０、２７５１〜２８００、２８０１〜２８５０、２８５１〜２９００、
２９０１〜２９５０、２９５１〜３０００、３００１〜３０５０、３０５１〜３
１００、３１０１〜３１５０、３１５１〜３２００、３２０１〜３２５０、３２
５１〜３３００、３３０１〜３３５０、３３５１〜３４００、３４０１〜３４５
０、３４５１〜３５００、３５０１〜３５５０、３５５１〜３６００、および／
または３６０１〜３６３５。この文脈において、「おおよそ（約）」は、特に記
載された範囲、あるいはいずれかの末端もしくは両方の末端において、これより
数個（５、４、３、２、または１）のヌクレオチドだけ大きいか、または小さな
範囲を含む。好ましくは、これらのフラグメントは、ｃＤＮＡプラスミドＺに含
まれるｃＤＮＡヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドの機能的活
性（例えば、生物学的活性）を有するポリペプチドをコードする。より好ましく
は、これらのフラグメントは、本明細書中で議論されるように、プローブまたは
プライマーとして使用され得る。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条
件下あるいはより低いストリンジェンシー条件下で１つ以上のこれらのフラグメ
ントにハイブリダイズするポリヌクレオチドもまた本発明に含まれ、これらのポ
リヌクレオチドまたはフラグメントによりコードされるポリペプチドもまた、含
まれる。
ｃＤＮＡプラスミドＺに含まれるｃＤＮＡヌクレオチド配列の以下のおおよその
ヌクレオチド数の配列、またはその相補鎖を含むか、あるいはそれからなるフラ
グメントが挙げられる：１〜５０、５１〜１００、１０１〜１５０、１５１〜２
００、２０１〜２５０、２５１〜３００、３０１〜３５０、３５１〜４００、４
０１〜４５０、４５１〜５００、５０１〜５５０、５５１〜６００、６５１〜７
００、７０１〜７５０、７５１〜８００、８００〜８５０、８５１〜９００、９
０１〜９５０、９５１〜１０００、１００１〜１０５０、１０５１〜１１００、
１１０１〜１１５０、１１５１〜１２００、１２０１〜１２５０、１２５１〜１
３００、１３０１〜１３５０、１３５１〜１４００、１４０１〜１４５０、１４
５１〜１５００、１５０１〜１５５０、１５５１〜１６００、１６０１〜１６５
０、１６５１〜１７００、１７０１〜１７５０、１７５１〜１８００、１８０１
〜１８５０、１８５１〜１９００、１９０１〜１９５０、１９５１〜２０００、
２００１〜２０５０、２０５１〜２１００、２１０１〜２１５０、２１５１〜２
２００、２２０１〜２２５０、２２５１〜２３００、２３０１〜２３５０、２３
５１〜２４００、２４０１〜２４５０、２４５１〜２５００、２５０１〜２５５
０、２５５１〜２６００、２６０１〜２６５０、２６５１〜２７００、２７０１
〜２７５０、２７５１〜２８００、２８０１〜２８５０、２８５１〜２９００、
２９０１〜２９５０、２９５１〜３０００、３００１〜３０５０、３０５１〜３
１００、３１０１〜３１５０、３１５１〜３２００、３２０１〜３２５０、３２
５１〜３３００、３３０１〜３３５０、３３５１〜３４００、３４０１〜３４５
０、３４５１〜３５００、３５０１〜３５５０、３５５１〜３６００、および／
または３６０１〜３６３５。この文脈において、「おおよそ（約）」は、特に記
載された範囲、あるいはいずれかの末端もしくは両方の末端において、これより
数個（５、４、３、２、または１）のヌクレオチドだけ大きいか、または小さな
範囲を含む。好ましくは、これらのフラグメントは、ｃＤＮＡプラスミドＺに含
まれるｃＤＮＡヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドの機能的活
性（例えば、生物学的活性）を有するポリペプチドをコードする。より好ましく
は、これらのフラグメントは、本明細書中で議論されるように、プローブまたは
プライマーとして使用され得る。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条
件下あるいはより低いストリンジェンシー条件下で１つ以上のこれらのフラグメ
ントにハイブリダイズするポリヌクレオチドもまた本発明に含まれ、これらのポ
リヌクレオチドまたはフラグメントによりコードされるポリペプチドもまた、含
まれる。
【００９６】
本発明において、「ポリペプチドフラグメント」とは、配列番号Ｙに含まれる
アミノ酸配列の一部、配列番号Ｘのポリヌクレオチド配列によってコードされる
アミノ酸配列の一部、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺ中のｃＤＮＡによっ
てコードされるアミノ酸配列の一部であるアミノ酸配列をいう。タンパク質（ポ
リペプチド）フラグメントは、「自立構造（ｆｒｅｅ−ｓｔａｎｄｉｎｇ）」で
あり得るか、あるいはより大きなポリぺプチド（このフラグメントが、部分また
は領域（最も好ましくは単一の連続した領域として）を形成する）内に含まれ得
る。本発明のポリペプチドフラグメントの代表例としては、例えば、以下の配列
番号Ｙのコード領域の、以下のおおよそのアミノ酸数のアミノ酸配列を含むか、
あるいは以下のおおよそのアミノ酸数のアミノ酸配列からなるフラグメントが挙
げられる：１〜２０、２１〜４０、４１〜６０、６１〜８０、８１〜１００、１
０２〜１２０、１２１〜１４０、１４１〜１６０、１６１〜１８０、１８１〜２
００、２０１〜２２０、２２１〜２４０、２４１〜２６０、２６１〜２８０、２
８１〜３００、３０１〜３２０、３２１〜３４０、３４１〜３６０、３６１〜３
８０、３８１〜４００、４０１〜４２０、４２１〜４４０、４４１〜４６０、４
６１〜４８０、４８１〜５００、５０１〜５２０、５２１〜５４０、５４１〜５
６０、５６１〜５８０、５８１〜６００、６０１〜６２０、６２１〜６４０、６
４１〜６６０、６６１〜６８０、６８１〜７００、および／または７０１〜７０
９。さらに、本発明のポリペプチドフラグメントは、少なくとも約１０、１５、
２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、
８０、８５、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、または１５０の
アミノ酸の長さであり得る。この文脈において、「約（おおよそ）」とは、特に
列挙された範囲または値、あるいはいずれかの末端もしくは両方の末端において
、これより数個（５、４、３、２、または１）のアミノ酸だけ大きいかまたは小
さな、範囲または値を含む。これらのポリペプチドフラグメントをコードするポ
リヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。
アミノ酸配列の一部、配列番号Ｘのポリヌクレオチド配列によってコードされる
アミノ酸配列の一部、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺ中のｃＤＮＡによっ
てコードされるアミノ酸配列の一部であるアミノ酸配列をいう。タンパク質（ポ
リペプチド）フラグメントは、「自立構造（ｆｒｅｅ−ｓｔａｎｄｉｎｇ）」で
あり得るか、あるいはより大きなポリぺプチド（このフラグメントが、部分また
は領域（最も好ましくは単一の連続した領域として）を形成する）内に含まれ得
る。本発明のポリペプチドフラグメントの代表例としては、例えば、以下の配列
番号Ｙのコード領域の、以下のおおよそのアミノ酸数のアミノ酸配列を含むか、
あるいは以下のおおよそのアミノ酸数のアミノ酸配列からなるフラグメントが挙
げられる：１〜２０、２１〜４０、４１〜６０、６１〜８０、８１〜１００、１
０２〜１２０、１２１〜１４０、１４１〜１６０、１６１〜１８０、１８１〜２
００、２０１〜２２０、２２１〜２４０、２４１〜２６０、２６１〜２８０、２
８１〜３００、３０１〜３２０、３２１〜３４０、３４１〜３６０、３６１〜３
８０、３８１〜４００、４０１〜４２０、４２１〜４４０、４４１〜４６０、４
６１〜４８０、４８１〜５００、５０１〜５２０、５２１〜５４０、５４１〜５
６０、５６１〜５８０、５８１〜６００、６０１〜６２０、６２１〜６４０、６
４１〜６６０、６６１〜６８０、６８１〜７００、および／または７０１〜７０
９。さらに、本発明のポリペプチドフラグメントは、少なくとも約１０、１５、
２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、
８０、８５、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、または１５０の
アミノ酸の長さであり得る。この文脈において、「約（おおよそ）」とは、特に
列挙された範囲または値、あるいはいずれかの末端もしくは両方の末端において
、これより数個（５、４、３、２、または１）のアミノ酸だけ大きいかまたは小
さな、範囲または値を含む。これらのポリペプチドフラグメントをコードするポ
リヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。
【００９７】
タンパク質のＮ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失が、タンパク質の１つ以
上の生物学的機能の損失の改変を生じるとしても、他の機能的活性（例えば、生
物学的活性、多量体化する能力、リガンドに結合する能力）は、なお保持され得
る。例えば、ポリペプチドの完全な形態または成熟形態を認識する抗体を誘導す
し、そして／またはその抗体に結合する、短縮型ムテインの能力は、完全なポリ
ペプチド、または成熟ポリペプチドの大部分より少ない残基が、Ｎ末端から除去
される場合には、一般的に保持される。完全なポリペプチドのＮ末端残基を欠く
特定のポリペプチドが、このような免疫学的活性を保持するか否かは、本明細書
中に記載される慣用的な方法、および当該分野において公知の別の方法によって
容易に決定され得る。多数の欠失したＮ末端アミノ酸残基を有するムテインは、
いくつかの生物学的活性または免疫原性活性を保持し得るようである。実際に、
６つ程度に少ないアミノ酸残基からなるペプチドは、しばしば免疫応答を惹起し
得る。
上の生物学的機能の損失の改変を生じるとしても、他の機能的活性（例えば、生
物学的活性、多量体化する能力、リガンドに結合する能力）は、なお保持され得
る。例えば、ポリペプチドの完全な形態または成熟形態を認識する抗体を誘導す
し、そして／またはその抗体に結合する、短縮型ムテインの能力は、完全なポリ
ペプチド、または成熟ポリペプチドの大部分より少ない残基が、Ｎ末端から除去
される場合には、一般的に保持される。完全なポリペプチドのＮ末端残基を欠く
特定のポリペプチドが、このような免疫学的活性を保持するか否かは、本明細書
中に記載される慣用的な方法、および当該分野において公知の別の方法によって
容易に決定され得る。多数の欠失したＮ末端アミノ酸残基を有するムテインは、
いくつかの生物学的活性または免疫原性活性を保持し得るようである。実際に、
６つ程度に少ないアミノ酸残基からなるペプチドは、しばしば免疫応答を惹起し
得る。
【００９８】
従って、本発明のポリペプチドフラグメントとしては、分泌タンパク質ならび
に成熟形態が挙げられる。さらに好ましいポリペプチドフラグメントとしては、
アミノ末端もしくはカルボキシ末端またはその両方から、連続した一連の欠失し
た残基を有する分泌タンパク質、もしくは成熟形態が挙げられる。例えば、任意
の数のアミノ酸（１〜６０の範囲）は、分泌タンパク質もしくは成熟形態のいず
れかのアミノ末端から欠失され得る。同様に、任意の数のアミノ酸（１〜３０の
範囲）が、分泌タンパク質もしくは成熟形態のカルボキシ末端から欠失され得る
。さらに、上記のアミノ末端およびカルボキシ末端の欠失の任意の組み合わせは
好ましい。同様に、これらのポリペプチドフラグメントをコードするポリヌクレ
オチドもまた好ましい。
に成熟形態が挙げられる。さらに好ましいポリペプチドフラグメントとしては、
アミノ末端もしくはカルボキシ末端またはその両方から、連続した一連の欠失し
た残基を有する分泌タンパク質、もしくは成熟形態が挙げられる。例えば、任意
の数のアミノ酸（１〜６０の範囲）は、分泌タンパク質もしくは成熟形態のいず
れかのアミノ末端から欠失され得る。同様に、任意の数のアミノ酸（１〜３０の
範囲）が、分泌タンパク質もしくは成熟形態のカルボキシ末端から欠失され得る
。さらに、上記のアミノ末端およびカルボキシ末端の欠失の任意の組み合わせは
好ましい。同様に、これらのポリペプチドフラグメントをコードするポリヌクレ
オチドもまた好ましい。
【００９９】
本発明は、本明細書中で開示されるポリペプチド（例えば、配列番号Ｙのポリ
ペプチド、配列番号Ｘに含まれるポリヌクレオチド配列によりコードされるポリ
ペプチド、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺに含まれるｃＤＮＡによりコー
ドされるポリペプチド）のアミノ酸配列のアミノ末端から、１つ以上の残基を欠
失したポリペプチドを、さらに提供する。特に、Ｎ末端の欠失は、一般式ｍ−ｑ
によって記載され得、ここでｑは、本発明のポリペプチド（例えば、配列番号Ｙ
に開示されるポリペプチド）におけるアミノ酸残基の総数を表す全整数であり、
そしてｍは、２〜ｑ−６の範囲の任意の整数として定義される。これらのポリペ
プチドをコードするポリヌクレオチド（フラグメントおよび／または改変体を含
む）もまた、本発明に含まれる。
ペプチド、配列番号Ｘに含まれるポリヌクレオチド配列によりコードされるポリ
ペプチド、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺに含まれるｃＤＮＡによりコー
ドされるポリペプチド）のアミノ酸配列のアミノ末端から、１つ以上の残基を欠
失したポリペプチドを、さらに提供する。特に、Ｎ末端の欠失は、一般式ｍ−ｑ
によって記載され得、ここでｑは、本発明のポリペプチド（例えば、配列番号Ｙ
に開示されるポリペプチド）におけるアミノ酸残基の総数を表す全整数であり、
そしてｍは、２〜ｑ−６の範囲の任意の整数として定義される。これらのポリペ
プチドをコードするポリヌクレオチド（フラグメントおよび／または改変体を含
む）もまた、本発明に含まれる。
【０１００】
さらに、上記のように、タンパク質のＣ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失
が、このタンパク質の１つ以上の生物学的機能の損失の改変を生じるとしても、
他の機能的活性（例えば、生物学的活性、多量体化する能力、リガンドに結合す
る能力）は、なお保持され得る。例えば、ポリペプチドの完全な形態または成熟
形態を認識する抗体を誘導するおよび／またはこの抗体に結合する、短縮型ムテ
インの能力は、完全なポリペプチド、または成熟ポリペプチドの大部分より少な
い残基が、Ｃ末端から除去される場合には、一般的に保持される。完全なポリペ
プチドのＣ末端残基を欠く特定のポリペプチドが、このような免疫原性活性を保
持するか否かは、本明細書中に記載される慣用的な方法、およびそうでなければ
当該分野において公知の他の方法によって容易に決定され得る。多数の欠失した
Ｃ末端アミノ酸残基を有するムテインは、いくつかの生物学的活性または免疫源
性活性を保持し得るようである。実際に、６つと同じくらい少ないアミノ酸残基
からなるペプチドは、しばしば免疫応答を惹起し得る。
が、このタンパク質の１つ以上の生物学的機能の損失の改変を生じるとしても、
他の機能的活性（例えば、生物学的活性、多量体化する能力、リガンドに結合す
る能力）は、なお保持され得る。例えば、ポリペプチドの完全な形態または成熟
形態を認識する抗体を誘導するおよび／またはこの抗体に結合する、短縮型ムテ
インの能力は、完全なポリペプチド、または成熟ポリペプチドの大部分より少な
い残基が、Ｃ末端から除去される場合には、一般的に保持される。完全なポリペ
プチドのＣ末端残基を欠く特定のポリペプチドが、このような免疫原性活性を保
持するか否かは、本明細書中に記載される慣用的な方法、およびそうでなければ
当該分野において公知の他の方法によって容易に決定され得る。多数の欠失した
Ｃ末端アミノ酸残基を有するムテインは、いくつかの生物学的活性または免疫源
性活性を保持し得るようである。実際に、６つと同じくらい少ないアミノ酸残基
からなるペプチドは、しばしば免疫応答を惹起し得る。
【０１０１】
従って、本発明は、本明細書中で開示されるポリペプチド（例えば、配列番号
Ｙのポリペプチド、配列番号Ｘに含まれるポリヌクレオチド配列によりコードさ
れるポリペプチド、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺに含まれるｃＤＮＡに
よりコードされるポリペプチド）のアミノ酸配列のカルボキシ末端から、１つ以
上の残基が欠失されたポリペプチドを、さらに提供する。特に、Ｃ末端の欠失は
、一般式１−ｎによって記載され得、ここでｎは、６〜ｑ−１の範囲の任意の全
整数であり、そしてここでｎは、本発明のポリペプチドにおけるアミノ酸残基の
位置に対応する。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、
本発明により含まれる。
Ｙのポリペプチド、配列番号Ｘに含まれるポリヌクレオチド配列によりコードさ
れるポリペプチド、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺに含まれるｃＤＮＡに
よりコードされるポリペプチド）のアミノ酸配列のカルボキシ末端から、１つ以
上の残基が欠失されたポリペプチドを、さらに提供する。特に、Ｃ末端の欠失は
、一般式１−ｎによって記載され得、ここでｎは、６〜ｑ−１の範囲の任意の全
整数であり、そしてここでｎは、本発明のポリペプチドにおけるアミノ酸残基の
位置に対応する。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、
本発明により含まれる。
【０１０２】
さらに、上記のＮ末端またはＣ末端の欠失のいずれかを組み合わせて、Ｎ末端
およびＣ末端欠失型ポリペプチドを産生し得る。本発明はまた、アミノ末端およ
びカルボキシ末端の両方から１つ以上の欠失したアミノ酸を有するポリペプチド
を提供する。このポリペプチドは、一般的に、配列番号Ｘ（例えば、好ましくは
配列番号Ｙとして開示されるポリペプチドを含むが、これに限定されない）およ
び／またはｃＤＮＡプラスミドＺ中のｃＤＮＡ、ならびに／あるいはそれらの相
補鎖によってコードされるポリペプチドの、残基ｍ−ｎを有するものとして記載
され得、ここでｎおよびｍは、上記のような整数である。これらのポリペプチド
をコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。
およびＣ末端欠失型ポリペプチドを産生し得る。本発明はまた、アミノ末端およ
びカルボキシ末端の両方から１つ以上の欠失したアミノ酸を有するポリペプチド
を提供する。このポリペプチドは、一般的に、配列番号Ｘ（例えば、好ましくは
配列番号Ｙとして開示されるポリペプチドを含むが、これに限定されない）およ
び／またはｃＤＮＡプラスミドＺ中のｃＤＮＡ、ならびに／あるいはそれらの相
補鎖によってコードされるポリペプチドの、残基ｍ−ｎを有するものとして記載
され得、ここでｎおよびｍは、上記のような整数である。これらのポリペプチド
をコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれる。
【０１０３】
配列番号Ｙのポリペプチドに含まれる任意のポリペプチド配列、配列番号Ｘと
して記載されるポリヌクレオチド配列によってコードされる、任意のポリペプチ
ド配列、またはｃＤＮＡプラスミドＺ中のｃＤＮＡによってコードされる任意の
ポリペプチド配列は、そのポリペプチドの特定の好ましい領域を決定するために
、分析され得る。例えば、配列番号ＸまたはｃＤＮＡプラスミドＺ中のｃＤＮＡ
のポリヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドのアミノ酸配列は、
ＤＮＡＳＴＡＲコンピュータアルゴリズム（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ．，１２２
８ Ｓ．Ｐａｒｋ Ｓｔ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ ５３７１５ ＵＳＡ；ｈｔ
ｔｐ：／／ｗｗｗ．ｄｎａｓｔａｒ．ｃｏｍ／）のデフォルトパラメーターを使
用して、分析され得る。
して記載されるポリヌクレオチド配列によってコードされる、任意のポリペプチ
ド配列、またはｃＤＮＡプラスミドＺ中のｃＤＮＡによってコードされる任意の
ポリペプチド配列は、そのポリペプチドの特定の好ましい領域を決定するために
、分析され得る。例えば、配列番号ＸまたはｃＤＮＡプラスミドＺ中のｃＤＮＡ
のポリヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドのアミノ酸配列は、
ＤＮＡＳＴＡＲコンピュータアルゴリズム（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ．，１２２
８ Ｓ．Ｐａｒｋ Ｓｔ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ ５３７１５ ＵＳＡ；ｈｔ
ｔｐ：／／ｗｗｗ．ｄｎａｓｔａｒ．ｃｏｍ／）のデフォルトパラメーターを使
用して、分析され得る。
【０１０４】
ＤＮＡＳＴＡＲコンピューターアルゴリズムを使用して慣用的に得られ得るポ
リペプチドの領域としては、以下が挙げられるが、それらに限定されない：Ｇａ
ｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎのα−領域、β−領域、ターン領域、およびコイル領
域、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎのα−領域、β−領域、およびターン領域、Ｋｙｔ
ｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅの親水性領域および疎水性領域、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇの
α−両親媒性領域およびβ−両親媒性領域、Ｋａｒｐｌｕｓ−Ｓｃｈｕｌｚの可
撓性領域、Ｅｍｉｎｉの表面形成領域ならびに高い抗原性指標のＪａｍｅｓｏｎ
−Ｗｏｌｆの領域。この点で、本発明の非常に好ましいポリヌクレオチドの中に
、いくつかの構造的特徴（例えば、上記の特徴のいくつか（例えば、１、２、３
または４））と組み合わされる領域を含むポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチドがある。
リペプチドの領域としては、以下が挙げられるが、それらに限定されない：Ｇａ
ｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎのα−領域、β−領域、ターン領域、およびコイル領
域、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎのα−領域、β−領域、およびターン領域、Ｋｙｔ
ｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅの親水性領域および疎水性領域、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇの
α−両親媒性領域およびβ−両親媒性領域、Ｋａｒｐｌｕｓ−Ｓｃｈｕｌｚの可
撓性領域、Ｅｍｉｎｉの表面形成領域ならびに高い抗原性指標のＪａｍｅｓｏｎ
−Ｗｏｌｆの領域。この点で、本発明の非常に好ましいポリヌクレオチドの中に
、いくつかの構造的特徴（例えば、上記の特徴のいくつか（例えば、１、２、３
または４））と組み合わされる領域を含むポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチドがある。
【０１０５】
さらに、Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ親水性領域および疎水性領域、Ｅｍｉ
ｎｉ表面形成領域、ならびに高い抗原性指標のＪａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ領域（
すなわち、Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆプログラムのデフォルトパラメターを使用
して同定されるような、１．５より大きいか、または１．５に等しい抗原性指標
を有する、４つ以上の連続するアミノ酸を含む）は、抗原性に対する高い程度の
潜在性を表すポリペプチドの領域を決定するために慣用的に使用されている。高
い抗原性の領域は、免疫応答の開始プロセスにおいて、抗原認識が生じ得る環境
中のポリペプチドの表面上に曝されるようであるポリペプチドの領域を表す値を
選択することによって、ＤＮＡＳＴＡＲ分析によるデータから決定される。
ｎｉ表面形成領域、ならびに高い抗原性指標のＪａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ領域（
すなわち、Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆプログラムのデフォルトパラメターを使用
して同定されるような、１．５より大きいか、または１．５に等しい抗原性指標
を有する、４つ以上の連続するアミノ酸を含む）は、抗原性に対する高い程度の
潜在性を表すポリペプチドの領域を決定するために慣用的に使用されている。高
い抗原性の領域は、免疫応答の開始プロセスにおいて、抗原認識が生じ得る環境
中のポリペプチドの表面上に曝されるようであるポリペプチドの領域を表す値を
選択することによって、ＤＮＡＳＴＡＲ分析によるデータから決定される。
【０１０６】
本発明の好ましいポリペプチドフラグメントは、そのアミノ酸配列がフラグメ
ントであるポリペプチド配列の、機能的活性（例えば、生物学的活性）を示すア
ミノ酸配列を含むか、またはあるいは、これらからなるフラグメントである。「
機能的活性」を示すポリペプチドとは、全長タンパク質と関連した１つ以上の公
知の機能的活性（例えば、前述のような、生物学的活性、抗原性、免疫原性、お
よび／または多量体化など）を示し得るポリペプチドを意味する。
ントであるポリペプチド配列の、機能的活性（例えば、生物学的活性）を示すア
ミノ酸配列を含むか、またはあるいは、これらからなるフラグメントである。「
機能的活性」を示すポリペプチドとは、全長タンパク質と関連した１つ以上の公
知の機能的活性（例えば、前述のような、生物学的活性、抗原性、免疫原性、お
よび／または多量体化など）を示し得るポリペプチドを意味する。
【０１０７】
他の好ましいポリペプチドフラグメントは、生物学的に活性なフラグメントで
ある。生物学的に活性なフラグメントとは、本発明のポリペプチドの活性に対し
て、同一である必要はないが、類似する活性を示すフラグメントである。このフ
ラグメントの生物学的活性は、改善された所望の活性、または低下した望ましく
ない活性を含み得る。
ある。生物学的に活性なフラグメントとは、本発明のポリペプチドの活性に対し
て、同一である必要はないが、類似する活性を示すフラグメントである。このフ
ラグメントの生物学的活性は、改善された所望の活性、または低下した望ましく
ない活性を含み得る。
【０１０８】
好ましい実施形態において、本発明のポリペプチドは、配列番号Ｙのポリペプ
チドの１、２、３、４、５以上の抗原性フラグメントか、またはその部分を含む
か、またはあるいはそれらからなる。これらのポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチドもまた、本発明に含まれる。
チドの１、２、３、４、５以上の抗原性フラグメントか、またはその部分を含む
か、またはあるいはそれらからなる。これらのポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチドもまた、本発明に含まれる。
【０１０９】
本発明は、以下のポリペプチドを含むか、またはあるいは以下からなるポリペ
プチドを含む：配列番号Ｙに示されるポリペプチド配列のエピトープ、またはｃ
ＤＮＡプラスミドＺ中のｃＤＮＡによりコードされるポリペプチド配列のエピト
ープ、あるいは前述で定義されるように、ストリンジェントなハイブリダイゼー
ション条件下またはより低いストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下
で、配列番号Ｘのエピトープコード配列またはｃＤＮＡプラスミドＺに含まれる
エピトープコード配列の相補鎖にハイブリダイズするポリヌクレオチドによって
コードされるポリペプチド配列のエピトープ。本発明はさらに、本発明のポリペ
プチド配列のエピトープをコードするポリヌクレオチド配列（例えば、配列番号
Ｘに開示される配列など）、本発明のエピトープをコードするポリヌクレオチド
配列の相補鎖のポリヌクレオチド配列、および前記で定義されるように、ストリ
ンジェントなハイブリダイゼーション条件下またはより低いストリンジェンシー
条ハイブリダイゼーション件下で、この相補鎖にハイブリダイズするポリヌクレ
オチド配列を含む。
プチドを含む：配列番号Ｙに示されるポリペプチド配列のエピトープ、またはｃ
ＤＮＡプラスミドＺ中のｃＤＮＡによりコードされるポリペプチド配列のエピト
ープ、あるいは前述で定義されるように、ストリンジェントなハイブリダイゼー
ション条件下またはより低いストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下
で、配列番号Ｘのエピトープコード配列またはｃＤＮＡプラスミドＺに含まれる
エピトープコード配列の相補鎖にハイブリダイズするポリヌクレオチドによって
コードされるポリペプチド配列のエピトープ。本発明はさらに、本発明のポリペ
プチド配列のエピトープをコードするポリヌクレオチド配列（例えば、配列番号
Ｘに開示される配列など）、本発明のエピトープをコードするポリヌクレオチド
配列の相補鎖のポリヌクレオチド配列、および前記で定義されるように、ストリ
ンジェントなハイブリダイゼーション条件下またはより低いストリンジェンシー
条ハイブリダイゼーション件下で、この相補鎖にハイブリダイズするポリヌクレ
オチド配列を含む。
【０１１０】
用語「エピトープ」とは、本明細書中で使用される場合、動物において、好ま
しくは哺乳動物において、そして最も好ましくはヒトにおいて抗原性活性または
免疫原性活性を有するポリペプチドの部分をいう。好ましい実施形態において、
本発明は、エピトープを含むポリペプチド、およびこのポリペプチドをコードす
るポリヌクレオチドを含む。「免疫原性エピトープ」とは、本明細書中で使用さ
れる場合、当該分野で公知の任意の方法によって決定されるような（例えば、下
記に記載される抗体を産生するための方法による）、動物における抗体応答を誘
発するタンパク質の一部として定義される（例えば、Ｇｅｙｓｅｎら、Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：３９９８−４００２（１９８３
）を参照のこと）。用語「抗原性エピトープ」とは、本明細書中で使用される場
合、当該分野で周知の任意の方法（例えば、本明細書中に記載される免疫アッセ
イによる）によって決定されるような、抗体がその抗原に免疫特異的に結合し得
るタンパク質の一部として定義される。免疫特異的結合は、非特異的結合は除外
するが、他の抗原との交差反応を除外する必要はない。抗原性エピトープは、免
疫原性である必要はない。
しくは哺乳動物において、そして最も好ましくはヒトにおいて抗原性活性または
免疫原性活性を有するポリペプチドの部分をいう。好ましい実施形態において、
本発明は、エピトープを含むポリペプチド、およびこのポリペプチドをコードす
るポリヌクレオチドを含む。「免疫原性エピトープ」とは、本明細書中で使用さ
れる場合、当該分野で公知の任意の方法によって決定されるような（例えば、下
記に記載される抗体を産生するための方法による）、動物における抗体応答を誘
発するタンパク質の一部として定義される（例えば、Ｇｅｙｓｅｎら、Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：３９９８−４００２（１９８３
）を参照のこと）。用語「抗原性エピトープ」とは、本明細書中で使用される場
合、当該分野で周知の任意の方法（例えば、本明細書中に記載される免疫アッセ
イによる）によって決定されるような、抗体がその抗原に免疫特異的に結合し得
るタンパク質の一部として定義される。免疫特異的結合は、非特異的結合は除外
するが、他の抗原との交差反応を除外する必要はない。抗原性エピトープは、免
疫原性である必要はない。
【０１１１】
エピトープとして機能するフラグメントは、任意の従来の方法によって産生さ
れ得る。（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ，Ｒ．Ａ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：５１３１−５１３５（１９８５）を参照のこと。こ
れはさらに、米国特許第４，６３１，２１１号に記載される）。
れ得る。（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ，Ｒ．Ａ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：５１３１−５１３５（１９８５）を参照のこと。こ
れはさらに、米国特許第４，６３１，２１１号に記載される）。
【０１１２】
本発明においては、抗原性エピトープは、好ましくは、少なくとも４、少なく
とも５、少なくとも６、少なくとも７アミノ酸配列を含み、より好ましくは、少
なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２
、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも２０、少なく
とも２５、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０アミノ酸配列を含
み、そして最も好ましくは約１５アミノ酸と約３０アミノ酸との間の配列を含む
。免疫原性エピトープまたは抗原性エピトープを含有する好ましいポリペプチド
は、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５
、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または１００アミノ酸残基
の長さである。さらなる非排他的に好ましい抗原性エピトープは、本明細書中で
開示される抗原性エピトープおよびその一部を含む。抗原性エピトープは、有用
である（例えば、エピトープに特異的に結合する抗体（モノクローナル抗体を含
む）を惹起するため）。好ましい抗原性エピトープは、本明細書中で開示される
抗原性エピトープ、および２、３、４、５以上のこれらの抗原性エピトープの任
意の組合わせを含む。抗原性エピトープは、イムノアッセイにおいて、標的分子
として使用され得る。（例えば、Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ ３７：７６７−７
７８（１９８４）；Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２１９：６６０−
６６６（１９８３）を参照のこと）。
とも５、少なくとも６、少なくとも７アミノ酸配列を含み、より好ましくは、少
なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２
、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも２０、少なく
とも２５、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０アミノ酸配列を含
み、そして最も好ましくは約１５アミノ酸と約３０アミノ酸との間の配列を含む
。免疫原性エピトープまたは抗原性エピトープを含有する好ましいポリペプチド
は、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５
、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または１００アミノ酸残基
の長さである。さらなる非排他的に好ましい抗原性エピトープは、本明細書中で
開示される抗原性エピトープおよびその一部を含む。抗原性エピトープは、有用
である（例えば、エピトープに特異的に結合する抗体（モノクローナル抗体を含
む）を惹起するため）。好ましい抗原性エピトープは、本明細書中で開示される
抗原性エピトープ、および２、３、４、５以上のこれらの抗原性エピトープの任
意の組合わせを含む。抗原性エピトープは、イムノアッセイにおいて、標的分子
として使用され得る。（例えば、Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ ３７：７６７−７
７８（１９８４）；Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２１９：６６０−
６６６（１９８３）を参照のこと）。
【０１１３】
同様に、免疫原性エピトープを使用して、例えば、当該分野で周知の方法に従
う抗体を誘導し得る。（例えば、Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら、前出；Ｗｉｌｓｏｎら
，前出；Ｃｈｏｗら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：
９１０−９１４；およびＢｉｔｔｌｅら、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．６６：２３
４７−２３５４（１９８５）を参照のこと）。好ましい免疫原性エピトープは、
本明細書で開示される免疫原性および２、３、４、５以上のこれらの免疫原性エ
ピトープの任意の組合せを含む。１つ以上の免疫原性エピトープを含むポリペプ
チドは、キャリアタンパク質（例えば、アルブミン）とともに動物系（例えば、
ウサギまたはマウス）に対する抗体応答を誘発するために提示され得るか、また
はこのポリペプチドが十分に長い場合（少なくとも約２５アミノ酸）、そのポリ
ペプチドはキャリアなしで提示され得る。しかし、８〜１０個程度の少なさのア
ミノ酸を含む免疫原性エピトープは、少なくとも変性ポリペプチド中の直鎖状エ
ピトープに結合し得る抗体を惹起するには十分であることが示されている（例え
ば、ウェスタンブロッティングにおいて）。
う抗体を誘導し得る。（例えば、Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら、前出；Ｗｉｌｓｏｎら
，前出；Ｃｈｏｗら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：
９１０−９１４；およびＢｉｔｔｌｅら、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．６６：２３
４７−２３５４（１９８５）を参照のこと）。好ましい免疫原性エピトープは、
本明細書で開示される免疫原性および２、３、４、５以上のこれらの免疫原性エ
ピトープの任意の組合せを含む。１つ以上の免疫原性エピトープを含むポリペプ
チドは、キャリアタンパク質（例えば、アルブミン）とともに動物系（例えば、
ウサギまたはマウス）に対する抗体応答を誘発するために提示され得るか、また
はこのポリペプチドが十分に長い場合（少なくとも約２５アミノ酸）、そのポリ
ペプチドはキャリアなしで提示され得る。しかし、８〜１０個程度の少なさのア
ミノ酸を含む免疫原性エピトープは、少なくとも変性ポリペプチド中の直鎖状エ
ピトープに結合し得る抗体を惹起するには十分であることが示されている（例え
ば、ウェスタンブロッティングにおいて）。
【０１１４】
本発明のエピトープ保有ポリペプチドは、当該分野で周知の方法に従って抗体
を誘導するために使用され得る。これらの周知の方法としては、インビボ免疫、
インビトロ免疫、およびファージディスプレイ法が挙げられるが、それらに限定
されない。例えば、Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら、前出；Ｗｉｌｓｏｎら、前出、およ
びＢｉｔｔｌｅら、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．、６６：２３４７−２３５４（１
９８５）を参照のこと。インビボ免疫を使用する場合、動物を遊離ペプチドを用
いて免疫し得る；しかし、抗ペプチド抗体力価は、高分子キャリア（例えば、キ
ーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）または破傷風トキソイド）にペプチ
ドを結合させることによりブーストされ得る。例えば、システイン残基を含むペ
プチドは、マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（Ｍ
ＢＳ）のようなリンカーを用いてキャリアに結合され得る。その一方、他のペプ
チドは、より一般的な結合剤（例えば、グルタルアルデヒド）を用いてキャリア
に結合され得る。ウサギ、ラット、およびマウスのような動物は、遊離のペプチ
ドまたはキャリア結合ペプチドのいずれかを用いて、例えば、約１００μｇのペ
プチドまたはキャリアタンパク質およびフロイントアジュバントまたは免疫応答
を刺激することが公知である他のアジュバントを含むエマルジョンを腹腔内注射
および／または皮内注射することにより免疫される。いくつかのブースター注射
が、抗ペプチド抗体の有用な力価を提供するために、例えば、約２週間の間隔で
、必要とされ得る。この力価は、例えば、固体表面に吸着した遊離のペプチドを
用いるＥＬＩＳＡアッセイにより検出され得る。免疫した動物由来の血清中の抗
ペプチド抗体の力価は、抗ペプチド抗体の選択（例えば、当該分野で周知の方法
に従う固体支持体上のペプチドへの吸着および選択された抗体の溶出による）に
より上昇し得る。
を誘導するために使用され得る。これらの周知の方法としては、インビボ免疫、
インビトロ免疫、およびファージディスプレイ法が挙げられるが、それらに限定
されない。例えば、Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら、前出；Ｗｉｌｓｏｎら、前出、およ
びＢｉｔｔｌｅら、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．、６６：２３４７−２３５４（１
９８５）を参照のこと。インビボ免疫を使用する場合、動物を遊離ペプチドを用
いて免疫し得る；しかし、抗ペプチド抗体力価は、高分子キャリア（例えば、キ
ーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）または破傷風トキソイド）にペプチ
ドを結合させることによりブーストされ得る。例えば、システイン残基を含むペ
プチドは、マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（Ｍ
ＢＳ）のようなリンカーを用いてキャリアに結合され得る。その一方、他のペプ
チドは、より一般的な結合剤（例えば、グルタルアルデヒド）を用いてキャリア
に結合され得る。ウサギ、ラット、およびマウスのような動物は、遊離のペプチ
ドまたはキャリア結合ペプチドのいずれかを用いて、例えば、約１００μｇのペ
プチドまたはキャリアタンパク質およびフロイントアジュバントまたは免疫応答
を刺激することが公知である他のアジュバントを含むエマルジョンを腹腔内注射
および／または皮内注射することにより免疫される。いくつかのブースター注射
が、抗ペプチド抗体の有用な力価を提供するために、例えば、約２週間の間隔で
、必要とされ得る。この力価は、例えば、固体表面に吸着した遊離のペプチドを
用いるＥＬＩＳＡアッセイにより検出され得る。免疫した動物由来の血清中の抗
ペプチド抗体の力価は、抗ペプチド抗体の選択（例えば、当該分野で周知の方法
に従う固体支持体上のペプチドへの吸着および選択された抗体の溶出による）に
より上昇し得る。
【０１１５】
当業者に理解されるように、そして上記で考察されるように、本発明のポリペ
プチドおよびその免疫原性エピトープフラグメントおよび／または抗原性エピト
ープフラグメントは、他のポリペプチド配列に融合され得る。例えば、本発明の
ポリペプチドは、免疫グロブリン（ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ）の定常ド
メインまたはそれらの部分（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、またはそれらの任意の組
み合わせ、およびこれらの部分）と融合し得、これがキメラポリペプチドを生じ
る。このような融合タンパク質は、精製を容易にし得、そしてインビボにおける
半減期を増加し得る。このことは、ヒトＣＤ４ポリペプチドの最初の２つのドメ
インおよび哺乳動物の免疫グロブリンの重鎖または軽鎖の定常領域の種々のドメ
インからなるキメラタンパク質について示された。例えば、ＥＰ ３９４，８２
７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，３３１：８４−８６（１９８８）
を参照のこと。上皮の関門を横切っての免疫系への抗原の増強された送達は、Ｆ
ｃＲｎ結合パートナー（例えば、ＩｇＧフラグメントまたはＦｃフラグメント（
例えば、ＰＣＴ公開 ＷＯ９６／２２０２４およびＷＯ ９９／０４８１３を参
照のこと）に結合体化した抗原（例えば、インスリン）について実証されている
。ジスルフィド架橋二量体構造を有するＩｇＧ融合タンパク質はまた、そのＩｇ
Ｇ部分ジスルフィド結合に起因して、単量体ポリペプチドまたはそれらのフラグ
メント単独よりも、他の分子の結合および中和において効果的であることが見出
された。例えば、Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２７０
：３９５８−３９６４（１９９５）を参照のこと。
プチドおよびその免疫原性エピトープフラグメントおよび／または抗原性エピト
ープフラグメントは、他のポリペプチド配列に融合され得る。例えば、本発明の
ポリペプチドは、免疫グロブリン（ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ）の定常ド
メインまたはそれらの部分（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、またはそれらの任意の組
み合わせ、およびこれらの部分）と融合し得、これがキメラポリペプチドを生じ
る。このような融合タンパク質は、精製を容易にし得、そしてインビボにおける
半減期を増加し得る。このことは、ヒトＣＤ４ポリペプチドの最初の２つのドメ
インおよび哺乳動物の免疫グロブリンの重鎖または軽鎖の定常領域の種々のドメ
インからなるキメラタンパク質について示された。例えば、ＥＰ ３９４，８２
７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，３３１：８４−８６（１９８８）
を参照のこと。上皮の関門を横切っての免疫系への抗原の増強された送達は、Ｆ
ｃＲｎ結合パートナー（例えば、ＩｇＧフラグメントまたはＦｃフラグメント（
例えば、ＰＣＴ公開 ＷＯ９６／２２０２４およびＷＯ ９９／０４８１３を参
照のこと）に結合体化した抗原（例えば、インスリン）について実証されている
。ジスルフィド架橋二量体構造を有するＩｇＧ融合タンパク質はまた、そのＩｇ
Ｇ部分ジスルフィド結合に起因して、単量体ポリペプチドまたはそれらのフラグ
メント単独よりも、他の分子の結合および中和において効果的であることが見出
された。例えば、Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２７０
：３９５８−３９６４（１９９５）を参照のこと。
【０１１６】
同様に、ＥＰ−Ａ−Ｏ ４６４ ５３３（カナダ国対応出願２０４５８６９）
は、別のヒトタンパク質またはその一部とともに免疫グロブリン分子の定常領域
の種々の部分を含む、融合タンパク質を開示する。多くの場合、融合タンパク質
中のＦｃ部分は、治療および診断において有利であり、従って、例えば改善され
た薬物動態学的特性を生じ得る（ＥＰ−Ａ ０２３２ ２６２）。あるいは、融
合タンパク質が発現、検出、および精製された後に、Ｆｃ部分が欠失され得るこ
とが望ましい。例えば、融合タンパク質が、免疫の抗原として使用される場合、
そのＦｃ部分は、治療および診断を妨げ得る。薬物探索において、例えばｈＩＬ
−５のようなヒトタンパク質が、ｈＩＬ−５のアンタゴニストを同定するための
高処理能力スクリーニングアッセイの目的のためにＦｃ部分と融合されている。
（Ｄ．Ｂｅｎｎｅｔｔら、Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ
８：５２−５８（１９９５）；Ｋ．Ｊｏｈａｎｓｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．２７０：９４５９−９４７１（１９９５）を参照のこと。） さらに、本発明のポリペプチドは、融合されたポリペプチドの精製を容易にす
るペプチドのような、マーカー配列と融合され得る。好ましい実施形態において
、このマーカーアミノ酸配列は、とりわけ、ｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉ
ｎｃ．，９２５９ Ｅｔｏｎ Ａｖｅｎｕｅ，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ，９
１３１１）において提供されるタグのようなヘキサ−ヒスチジンペプチドであり
、それらの多くは市販されている。例えば、Ｇｅｎｔｚら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ
．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８２１−８２４（１９８９）に記載される
ように、ヘキサ−ヒスチジンは、融合タンパク質の簡便な精製を提供する。精製
に有用な他のペプチドタグである「ＨＡ」タグは、インフルエンザ赤血球凝集素
タンパク質由来のエピトープに対応する（Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ ３７：７
６７（１９８４））。
は、別のヒトタンパク質またはその一部とともに免疫グロブリン分子の定常領域
の種々の部分を含む、融合タンパク質を開示する。多くの場合、融合タンパク質
中のＦｃ部分は、治療および診断において有利であり、従って、例えば改善され
た薬物動態学的特性を生じ得る（ＥＰ−Ａ ０２３２ ２６２）。あるいは、融
合タンパク質が発現、検出、および精製された後に、Ｆｃ部分が欠失され得るこ
とが望ましい。例えば、融合タンパク質が、免疫の抗原として使用される場合、
そのＦｃ部分は、治療および診断を妨げ得る。薬物探索において、例えばｈＩＬ
−５のようなヒトタンパク質が、ｈＩＬ−５のアンタゴニストを同定するための
高処理能力スクリーニングアッセイの目的のためにＦｃ部分と融合されている。
（Ｄ．Ｂｅｎｎｅｔｔら、Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ
８：５２−５８（１９９５）；Ｋ．Ｊｏｈａｎｓｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．２７０：９４５９−９４７１（１９９５）を参照のこと。） さらに、本発明のポリペプチドは、融合されたポリペプチドの精製を容易にす
るペプチドのような、マーカー配列と融合され得る。好ましい実施形態において
、このマーカーアミノ酸配列は、とりわけ、ｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉ
ｎｃ．，９２５９ Ｅｔｏｎ Ａｖｅｎｕｅ，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ，９
１３１１）において提供されるタグのようなヘキサ−ヒスチジンペプチドであり
、それらの多くは市販されている。例えば、Ｇｅｎｔｚら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ
．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８２１−８２４（１９８９）に記載される
ように、ヘキサ−ヒスチジンは、融合タンパク質の簡便な精製を提供する。精製
に有用な他のペプチドタグである「ＨＡ」タグは、インフルエンザ赤血球凝集素
タンパク質由来のエピトープに対応する（Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ ３７：７
６７（１９８４））。
【０１１７】
従って、これら上記の任意の融合物は、本発明のポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドを用いて操作され得る。
ペプチドを用いて操作され得る。
【０１１８】
上記のエピトープをコードする核酸はまた、エピトープタグ（例えば、血球凝
集素（「ＨＡ」）タグまたはフラッグタグ（ｆｌａｇ ｔａｇ））として目的の
遺伝子と組換えられ、発現されたポリペプチドの検出および精製を補助し得る。
例えば、Ｊａｎｋｎｅｃｈｔらによって記載された系は、ヒト細胞株において発
現される非変性融合タンパク質の迅速な精製を可能にする（Ｊａｎｋｎｅｃｈｔ
ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：８９７２−８９７
（１９９１））。この系において、目的の遺伝子は、遺伝子の読み取り枠が、６
つのヒスチジン残基からなるアミノ末端タグと翻訳で融合されるように、ワクシ
ニア組換えプラスミド中にサブクローンされる。このタグは、融合タンパク質に
ついての基質結合ドメインとしてはたらく。組換えワクシニアウイルスに感染し
た細胞由来の抽出物は、Ｎｉ２＋ニトリロ三酢酸アガロースカラムに充填され、
そしてヒスチジンタグ化したタンパク質が、イミダゾール含有緩衝液を用いて選
択的に溶出され得る。
集素（「ＨＡ」）タグまたはフラッグタグ（ｆｌａｇ ｔａｇ））として目的の
遺伝子と組換えられ、発現されたポリペプチドの検出および精製を補助し得る。
例えば、Ｊａｎｋｎｅｃｈｔらによって記載された系は、ヒト細胞株において発
現される非変性融合タンパク質の迅速な精製を可能にする（Ｊａｎｋｎｅｃｈｔ
ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：８９７２−８９７
（１９９１））。この系において、目的の遺伝子は、遺伝子の読み取り枠が、６
つのヒスチジン残基からなるアミノ末端タグと翻訳で融合されるように、ワクシ
ニア組換えプラスミド中にサブクローンされる。このタグは、融合タンパク質に
ついての基質結合ドメインとしてはたらく。組換えワクシニアウイルスに感染し
た細胞由来の抽出物は、Ｎｉ２＋ニトリロ三酢酸アガロースカラムに充填され、
そしてヒスチジンタグ化したタンパク質が、イミダゾール含有緩衝液を用いて選
択的に溶出され得る。
【０１１９】
本発明のさらなる融合タンパク質は、遺伝子シャッフリング、モチーフシャッ
フリング、エキソンシャッフリング、および／またはコドンシャッフリング（総
称して「ＤＮＡシャッフリング」といわれる）の技術を通じて生成され得る。Ｄ
ＮＡシャッフリングを使用して、本発明のポリペプチドの活性を調節し得、この
ような方法を用いて、変化した活性を有するポリペプチド、ならびにそのポリペ
プチドのアゴニストおよびアンタゴニストを生成し得る。一般には、米国特許第
５，６０５，７９３号；同第５，８１１，２３８号；同第５，８３０，７２１号
；同第５，８３４，２５２号；および同第５，８３７，４５８号、ならびにＰａ
ｔｔｅｎら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：７２４−
３３（１９９７）；Ｈａｒａｙａｍａ、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．
１６（２）：７６−８２（１９９８）；Ｈａｎｓｓｏｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ
ｌ．２８７：２６５−７６（１９９９）；ならびにＬｏｒｅｎｚｏおよびＢｌａ
ｓｃｏ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２４（２）：３０８−１３（１９９８）
（これらの特許および刊行物の各々は、本明細書によってその全体が参考として
援用される）を参照のこと。１つの実施形態において、配列番号Ｘに対応するポ
リヌクレオチドおよびこれらのポリヌクレオチドによってコードされるポリペプ
チドの改変は、ＤＮＡシャッフリングにより達成され得る。ＤＮＡシャッフリン
グは、相同組換えまたは部位特異的組換えにより、２つ以上のＤＮＡセグメント
をアセンブリして、ポリヌクレオチド配列における変化を産生することを含む。
別の実施形態において、本発明のポリヌクオチドまたはコードされるポリペプチ
ドは、組換え前に、エラープローンＰＣＲ、ランダムヌクレオチド挿入または他
の方法による、ランダムな変異誘発に供されることによって改変され得る。別の
実施形態において、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの１つ
以上の成分、モチーフ、セクション（ｓｅｃｔｉｏｎ）、部分、ドメイン、フラ
グメントなどは、１つ以上の異種分子の１つ以上の成分、モチーフ、セクション
、部分、ドメイン、フラグメントなどと組み換えられ得る。
フリング、エキソンシャッフリング、および／またはコドンシャッフリング（総
称して「ＤＮＡシャッフリング」といわれる）の技術を通じて生成され得る。Ｄ
ＮＡシャッフリングを使用して、本発明のポリペプチドの活性を調節し得、この
ような方法を用いて、変化した活性を有するポリペプチド、ならびにそのポリペ
プチドのアゴニストおよびアンタゴニストを生成し得る。一般には、米国特許第
５，６０５，７９３号；同第５，８１１，２３８号；同第５，８３０，７２１号
；同第５，８３４，２５２号；および同第５，８３７，４５８号、ならびにＰａ
ｔｔｅｎら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：７２４−
３３（１９９７）；Ｈａｒａｙａｍａ、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．
１６（２）：７６−８２（１９９８）；Ｈａｎｓｓｏｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ
ｌ．２８７：２６５−７６（１９９９）；ならびにＬｏｒｅｎｚｏおよびＢｌａ
ｓｃｏ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２４（２）：３０８−１３（１９９８）
（これらの特許および刊行物の各々は、本明細書によってその全体が参考として
援用される）を参照のこと。１つの実施形態において、配列番号Ｘに対応するポ
リヌクレオチドおよびこれらのポリヌクレオチドによってコードされるポリペプ
チドの改変は、ＤＮＡシャッフリングにより達成され得る。ＤＮＡシャッフリン
グは、相同組換えまたは部位特異的組換えにより、２つ以上のＤＮＡセグメント
をアセンブリして、ポリヌクレオチド配列における変化を産生することを含む。
別の実施形態において、本発明のポリヌクオチドまたはコードされるポリペプチ
ドは、組換え前に、エラープローンＰＣＲ、ランダムヌクレオチド挿入または他
の方法による、ランダムな変異誘発に供されることによって改変され得る。別の
実施形態において、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの１つ
以上の成分、モチーフ、セクション（ｓｅｃｔｉｏｎ）、部分、ドメイン、フラ
グメントなどは、１つ以上の異種分子の１つ以上の成分、モチーフ、セクション
、部分、ドメイン、フラグメントなどと組み換えられ得る。
【０１２０】
（ポリヌクレオチド改変体およびポリペプチド改変体）
本発明はまた、ＡＢＣトランスポート改変体を含む。本発明は、配列番号Ｘに
開示されるポリヌクレオチド配列の改変体またはそれらに対する相補鎖の改変体
、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺ中に含まれるｃＤＮＡ配列の改変体に関
する。
開示されるポリヌクレオチド配列の改変体またはそれらに対する相補鎖の改変体
、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺ中に含まれるｃＤＮＡ配列の改変体に関
する。
【０１２１】
本発明はまた、配列番号Ｙに開示されるポリペプチド配列の改変体、配列番号
Ｘのポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド配列の改変体および／
またはｃＤＮＡプラスミドＺ中のｃＤＮＡによってコードされるポリペプチド配
列の改変体を含む。
Ｘのポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド配列の改変体および／
またはｃＤＮＡプラスミドＺ中のｃＤＮＡによってコードされるポリペプチド配
列の改変体を含む。
【０１２２】
「改変体」とは、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドとは異なるが
それらの特性は保持している、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドをいう。一
般的に、改変体は全体的に非常に類似しており、そして、多くの領域において、
本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドと同一である。
それらの特性は保持している、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドをいう。一
般的に、改変体は全体的に非常に類似しており、そして、多くの領域において、
本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドと同一である。
【０１２３】
従って、本発明の１つの局面は、以下からなる群より選択されるヌクレオチド
配列を有するポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子か、あるいはその代わ
りに以下からなる群より選択されるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド
からなる単離された核酸分子を提供する：（ａ）配列表に示さるようなアミノ酸
配列を有するＡＢＣトランスポートポリペプチドをコードし、そして配列番号Ｘ
またはｃＤＮＡプラスミドＺのｃＤＮＡに記載されるようなヌクレオチド配列；
（ｂ）配列表に示されそして配列番号ＸまたはｃＤＮＡプラスミドＺのｃＤＮＡ
に記載されるようなアミノ酸配列を有する成熟ＡＢＣトランスポートポリペプチ
ドをコードするヌクレオチド配列；（ｃ）配列表に示されそして配列番号Ｘまた
はｃＤＮＡプラスミドＺのｃＤＮＡに記載されるようなアミノ酸配列を有するＡ
ＢＣトランスポートポリペプチドの生物学的に活性なフラグメントをコードする
ヌクレオチド配列；（ｄ）配列表に示されそして配列番号ＸまたはｃＤＮＡプラ
スミドＺのｃＤＮＡに記載されるアミノ酸配列を有するＡＢＣトランスポートポ
リペプチドの抗原性フラグメントをコードするヌクレオチド配列；（ｅ）配列番
号ＸまたはｃＤＮＡプラスミドＺのｃＤＮＡ中に含まれるヒトｃＤＮＡプラスミ
ドによってコードされる完全アミノ酸配列を含むＡＢＣトランスポートポリペプ
チドをコードするヌクレオチド配列；（ｆ）配列番号ＸまたはｃＤＮＡプラスミ
ドＺのｃＤＮＡ中に含まれるヒトｃＤＮＡプラスミドによってコードされるアミ
ノ酸配列を有する成熟ＡＢＣトランスポートポリペプチドをコードするヌクレオ
チド配列；（ｇ）配列番号ＸまたはｃＤＮＡプラスミドＺのｃＤＮＡ中に含まれ
るヒトｃＤＮＡプラスミドによってコードされるアミノ酸配列を有するＡＢＣト
ランスポートポリペプチドの生物学的に活性なフラグメントをコードするヌクレ
オチド配列；（ｈ）配列番号ＸまたはｃＤＮＡプラスミドＺのｃＤＮＡ中に含ま
れるヒトｃＤＮＡプラスミドによってコードされるアミノ酸配列を有するＡＢＣ
トランスポートポリペプチドの抗原性フラグメントをコードするヌクレオチド配
列；（ｉ）上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）ま
たは（ｈ）における任意のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列。
配列を有するポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子か、あるいはその代わ
りに以下からなる群より選択されるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド
からなる単離された核酸分子を提供する：（ａ）配列表に示さるようなアミノ酸
配列を有するＡＢＣトランスポートポリペプチドをコードし、そして配列番号Ｘ
またはｃＤＮＡプラスミドＺのｃＤＮＡに記載されるようなヌクレオチド配列；
（ｂ）配列表に示されそして配列番号ＸまたはｃＤＮＡプラスミドＺのｃＤＮＡ
に記載されるようなアミノ酸配列を有する成熟ＡＢＣトランスポートポリペプチ
ドをコードするヌクレオチド配列；（ｃ）配列表に示されそして配列番号Ｘまた
はｃＤＮＡプラスミドＺのｃＤＮＡに記載されるようなアミノ酸配列を有するＡ
ＢＣトランスポートポリペプチドの生物学的に活性なフラグメントをコードする
ヌクレオチド配列；（ｄ）配列表に示されそして配列番号ＸまたはｃＤＮＡプラ
スミドＺのｃＤＮＡに記載されるアミノ酸配列を有するＡＢＣトランスポートポ
リペプチドの抗原性フラグメントをコードするヌクレオチド配列；（ｅ）配列番
号ＸまたはｃＤＮＡプラスミドＺのｃＤＮＡ中に含まれるヒトｃＤＮＡプラスミ
ドによってコードされる完全アミノ酸配列を含むＡＢＣトランスポートポリペプ
チドをコードするヌクレオチド配列；（ｆ）配列番号ＸまたはｃＤＮＡプラスミ
ドＺのｃＤＮＡ中に含まれるヒトｃＤＮＡプラスミドによってコードされるアミ
ノ酸配列を有する成熟ＡＢＣトランスポートポリペプチドをコードするヌクレオ
チド配列；（ｇ）配列番号ＸまたはｃＤＮＡプラスミドＺのｃＤＮＡ中に含まれ
るヒトｃＤＮＡプラスミドによってコードされるアミノ酸配列を有するＡＢＣト
ランスポートポリペプチドの生物学的に活性なフラグメントをコードするヌクレ
オチド配列；（ｈ）配列番号ＸまたはｃＤＮＡプラスミドＺのｃＤＮＡ中に含ま
れるヒトｃＤＮＡプラスミドによってコードされるアミノ酸配列を有するＡＢＣ
トランスポートポリペプチドの抗原性フラグメントをコードするヌクレオチド配
列；（ｉ）上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）ま
たは（ｈ）における任意のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列。
【０１２４】
本発明はまた、例えば上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ
）、（ｇ）、（ｈ）または（ｉ）中の任意のヌクレオチド配列に少なくとも８０
％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％
同一であるヌクレオチド配列を含むか、あるいはこれらからなる、核酸分子に関
する。これらの核酸分子によってコードされるポリペプチドもまた、本発明によ
って含まれる。別の実施形態において、本発明は、上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ
）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）または（ｉ）中のポリヌクレオチ
ドに、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下または低いストリンジ
ェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドを含むか、またはこれら
からなる、核酸分子を含む。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下
または低いストリンジェンシー条件下でこれらの核酸分子の相補体にハイブリダ
イズするポリヌクレオチドもまた、これらのポリヌクレオチドによってコードさ
れるポリペプチドと同様に、本発明によって含まれ得る。
）、（ｇ）、（ｈ）または（ｉ）中の任意のヌクレオチド配列に少なくとも８０
％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％
同一であるヌクレオチド配列を含むか、あるいはこれらからなる、核酸分子に関
する。これらの核酸分子によってコードされるポリペプチドもまた、本発明によ
って含まれる。別の実施形態において、本発明は、上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ
）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）または（ｉ）中のポリヌクレオチ
ドに、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下または低いストリンジ
ェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドを含むか、またはこれら
からなる、核酸分子を含む。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下
または低いストリンジェンシー条件下でこれらの核酸分子の相補体にハイブリダ
イズするポリヌクレオチドもまた、これらのポリヌクレオチドによってコードさ
れるポリペプチドと同様に、本発明によって含まれ得る。
【０１２５】
本発明の別の局面は、以下からなる群より選択されるヌクレオチド配列を有す
るポリヌクレオチドを含むかまたはそれからなる、単離された核酸分子を提供す
る：（ａ）配列表に示されかつ表１に記載されるアミノ酸配列を有するＡＢＣト
ランスポートポリペプチドをコードする、ヌクレオチド配列；（ｂ）配列表に示
されかつ表１に記載されるアミノ酸配列を有する成熟ＡＢＣトランスポートポリ
ペプチドをコードする、ヌクレオチド配列；（ｃ）配列表に示されかつ表１に記
載されるアミノ酸配列を有するＡＢＣトランスポートポリペプチドの生物学的に
活性なフラグメントをコードする、ヌクレオチド配列；（ｄ）配列表に示されか
つ表１に記載されるアミノ酸配列を有するＡＢＣトランスポートポリペプチドの
抗原性フラグメントをコードする、ヌクレオチド配列；（ｅ）ＡＴＣＣ寄託物中
に含まれるｃＤＮＡプラスミド中のヒトｃＤＮＡによりコードされかつ表１に記
載される完全アミノ酸配列を含むＡＢＣトランスポートポリペプチドをコードす
る、ヌクレオチド配列；（ｆ）ＡＴＣＣ寄託物に含まれるｃＤＮＡプラスミド中
のヒトｃＤＮＡによりコードされかつ表１に記載されるアミノ酸配列を有する成
熟ＡＢＣトランスポートポリペプチドをコードする、ヌクレオチド配列；（ｇ）
ＡＴＣＣ寄託物に含まれるｃＤＮＡプラスミド中のヒトｃＤＮＡによりコードさ
れかつ表１に記載されるアミノ酸配列を有するＡＢＣトランスポートポリペプチ
ドの生物学的に活性なフラグメントをコードする、ヌクレオチド配列；（ｈ）Ａ
ＴＣＣ寄託物に含まれるｃＤＮＡプラスミド中のヒトｃＤＮＡによりコードされ
かつ表１に記載されるアミノ酸配列を有するＡＢＣトランスポートポリペプチド
の抗原性フラグメントをコードする、ヌクレオチド配列；（ｉ）上記（ａ）、（
ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）または（ｈ）におけるヌクレオ
チド配列のいずれかに相補的な、ヌクレオチド配列。
るポリヌクレオチドを含むかまたはそれからなる、単離された核酸分子を提供す
る：（ａ）配列表に示されかつ表１に記載されるアミノ酸配列を有するＡＢＣト
ランスポートポリペプチドをコードする、ヌクレオチド配列；（ｂ）配列表に示
されかつ表１に記載されるアミノ酸配列を有する成熟ＡＢＣトランスポートポリ
ペプチドをコードする、ヌクレオチド配列；（ｃ）配列表に示されかつ表１に記
載されるアミノ酸配列を有するＡＢＣトランスポートポリペプチドの生物学的に
活性なフラグメントをコードする、ヌクレオチド配列；（ｄ）配列表に示されか
つ表１に記載されるアミノ酸配列を有するＡＢＣトランスポートポリペプチドの
抗原性フラグメントをコードする、ヌクレオチド配列；（ｅ）ＡＴＣＣ寄託物中
に含まれるｃＤＮＡプラスミド中のヒトｃＤＮＡによりコードされかつ表１に記
載される完全アミノ酸配列を含むＡＢＣトランスポートポリペプチドをコードす
る、ヌクレオチド配列；（ｆ）ＡＴＣＣ寄託物に含まれるｃＤＮＡプラスミド中
のヒトｃＤＮＡによりコードされかつ表１に記載されるアミノ酸配列を有する成
熟ＡＢＣトランスポートポリペプチドをコードする、ヌクレオチド配列；（ｇ）
ＡＴＣＣ寄託物に含まれるｃＤＮＡプラスミド中のヒトｃＤＮＡによりコードさ
れかつ表１に記載されるアミノ酸配列を有するＡＢＣトランスポートポリペプチ
ドの生物学的に活性なフラグメントをコードする、ヌクレオチド配列；（ｈ）Ａ
ＴＣＣ寄託物に含まれるｃＤＮＡプラスミド中のヒトｃＤＮＡによりコードされ
かつ表１に記載されるアミノ酸配列を有するＡＢＣトランスポートポリペプチド
の抗原性フラグメントをコードする、ヌクレオチド配列；（ｉ）上記（ａ）、（
ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）または（ｈ）におけるヌクレオ
チド配列のいずれかに相補的な、ヌクレオチド配列。
【０１２６】
本発明はまた、例えば、上記（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ
）、（ｇ）、（ｈ）または（ｉ）におけるヌクレオチド配列のいずれかに少なく
とも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、また
は１００％同一であるヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる、核酸分子
に関する。これらの核酸分子によりコードされるポリペプチドもまた、本発明に
より包含される。別の実施形態において、本発明は、上記（ａ）、（ｂ）、（ｃ
）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）または（ｉ）におけるポリヌクレ
オチドに、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下またはより低いス
トリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドを含むかまたは
それからなる、核酸分子を包含する。これらの核酸分子の相補体に、ストリンジ
ェントなハイブリダイゼーション条件下またはより低いストリンジェンシー条件
下でハイブリダイズするポリヌクレオチドもまた、本発明により包含され、同様
に、これらのポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドも、本発明によ
り包含される。
）、（ｇ）、（ｈ）または（ｉ）におけるヌクレオチド配列のいずれかに少なく
とも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、また
は１００％同一であるヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる、核酸分子
に関する。これらの核酸分子によりコードされるポリペプチドもまた、本発明に
より包含される。別の実施形態において、本発明は、上記（ａ）、（ｂ）、（ｃ
）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）または（ｉ）におけるポリヌクレ
オチドに、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下またはより低いス
トリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドを含むかまたは
それからなる、核酸分子を包含する。これらの核酸分子の相補体に、ストリンジ
ェントなハイブリダイゼーション条件下またはより低いストリンジェンシー条件
下でハイブリダイズするポリヌクレオチドもまた、本発明により包含され、同様
に、これらのポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドも、本発明によ
り包含される。
【０１２７】
本発明はまた、例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｙに示されるポリペプチド配列
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｘにおけるヌクレオチド配列によりコードされるポリペ
プチド配列、ｃＤＮＡプラスミドＺ中のｃＤＮＡによりコードされるポリペプチ
ド配列、および／またはこれらのポリペプチドのいずれかのポリペプチドフラグ
メント（例えば、本明細書中に記載されるフラグメント）に対して、少なくとも
８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１０
０％同一であるアミノ酸配列を含むかあるいはそれらからなる、ポリペプチドに
関する。これらのポリペプチドをコードする核酸分子の相補体に、ストリンジェ
ントなハイブリダイゼーション条件下またはより低いストリンジェンシーハイブ
リダイゼーション条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドもまた、本発明
により包含され、同様に、これらのポリヌクレオチドによりコードされるポリペ
プチドも本発明により包含される。
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｘにおけるヌクレオチド配列によりコードされるポリペ
プチド配列、ｃＤＮＡプラスミドＺ中のｃＤＮＡによりコードされるポリペプチ
ド配列、および／またはこれらのポリペプチドのいずれかのポリペプチドフラグ
メント（例えば、本明細書中に記載されるフラグメント）に対して、少なくとも
８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１０
０％同一であるアミノ酸配列を含むかあるいはそれらからなる、ポリペプチドに
関する。これらのポリペプチドをコードする核酸分子の相補体に、ストリンジェ
ントなハイブリダイゼーション条件下またはより低いストリンジェンシーハイブ
リダイゼーション条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドもまた、本発明
により包含され、同様に、これらのポリヌクレオチドによりコードされるポリペ
プチドも本発明により包含される。
【０１２８】
本発明の参照ヌクレオチド配列に、例えば、少なくとも９５％「同一」である
ヌクレオチド配列を有する核酸によって、その核酸のヌクレオチド配列が、その
ヌクレオチド配列がポリぺプチドをコードする参照ヌクレオチド配列の各１００
ヌクレオチドあたり５つまでの点変異を含み得ることを除いて、参照配列に対し
て同一であることを意図する。換言すれば、参照ヌクレオチド配列に対して少な
くとも９５％同一のヌクレオチド配列を有する核酸を得るために、参照配列のヌ
クレオチドの５％までが、欠失され得るか、または別のヌクレオチドで置換され
得るか、あるいは参照配列中の総ヌクレオチドの５％までの数のヌクレオチドが
参照配列中に挿入され得る。問い合わせ（ｑｕｅｒｙ）配列は、表１に示される
配列全体、ＯＲＦ（オープンリーディングフレーム）、または本明細書中で記載
されるように特定される任意のフラグメントであり得る。
ヌクレオチド配列を有する核酸によって、その核酸のヌクレオチド配列が、その
ヌクレオチド配列がポリぺプチドをコードする参照ヌクレオチド配列の各１００
ヌクレオチドあたり５つまでの点変異を含み得ることを除いて、参照配列に対し
て同一であることを意図する。換言すれば、参照ヌクレオチド配列に対して少な
くとも９５％同一のヌクレオチド配列を有する核酸を得るために、参照配列のヌ
クレオチドの５％までが、欠失され得るか、または別のヌクレオチドで置換され
得るか、あるいは参照配列中の総ヌクレオチドの５％までの数のヌクレオチドが
参照配列中に挿入され得る。問い合わせ（ｑｕｅｒｙ）配列は、表１に示される
配列全体、ＯＲＦ（オープンリーディングフレーム）、または本明細書中で記載
されるように特定される任意のフラグメントであり得る。
【０１２９】
実際問題として、任意の特定の核酸分子またはポリぺプチドが、本発明のヌク
レオチド配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９
７％、９８％、または９９％同一であるか否かは、公知のコンピュータープログ
ラムを使用して従来的に決定され得る。問い合わせ配列（本発明の配列）と対象
配列との間の最も良好な全体的な適合性（全体的な配列整列とも呼ばれる）を決
定するための好ましい方法は、Ｂｒｕｔｌａｇら（Ｃｏｍｐ．Ａｐｐ． Ｂｉｏ
ｓｃｉ．６：２３７−２４５（１９９０））のアルゴリズムに基づくＦＡＳＴＤ
Ｂコンピュータープログラムを使用して決定され得る。配列整列において、問い
合わせ配列および対象配列は、両方ともにＤＮＡ配列である。ＲＮＡ配列は、Ｕ
からＴに変換することによって比較され得る。この全体的な配列整列の結果は、
同一性パーセント（％）で示される。同一性パーセントを算定するためにＤＮＡ
配列のＦＡＳＴＤＢ整列において使用される好ましいパラメーターは：Ｍａｔｒ
ｉｘ＝Ｕｎｉｔａｒｙ、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝４、Ｍｉｓｍａｔｃｈ Ｐｅｎａｌｔ
ｙ＝１、Ｊｏｉｎｉｎｇ Ｐｅｎａｌｔｙ＝３０、Ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ
Ｇｒｏｕｐ Ｌｅｎｇｔｈ＝０、Ｃｕｔｏｆｆ Ｓｃｏｒｅ＝１、Ｇａｐ Ｐ
ｅｎａｌｔｙ＝５、Ｇａｐ Ｓｉｚｅ Ｐｅｎａｌｔｙ ０．０５、Ｗｉｎｄｏ
ｗ Ｓｉｚｅ＝５００または対象ヌクレオチド配列の長さ（どちらかより短い方
）である。
レオチド配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９
７％、９８％、または９９％同一であるか否かは、公知のコンピュータープログ
ラムを使用して従来的に決定され得る。問い合わせ配列（本発明の配列）と対象
配列との間の最も良好な全体的な適合性（全体的な配列整列とも呼ばれる）を決
定するための好ましい方法は、Ｂｒｕｔｌａｇら（Ｃｏｍｐ．Ａｐｐ． Ｂｉｏ
ｓｃｉ．６：２３７−２４５（１９９０））のアルゴリズムに基づくＦＡＳＴＤ
Ｂコンピュータープログラムを使用して決定され得る。配列整列において、問い
合わせ配列および対象配列は、両方ともにＤＮＡ配列である。ＲＮＡ配列は、Ｕ
からＴに変換することによって比較され得る。この全体的な配列整列の結果は、
同一性パーセント（％）で示される。同一性パーセントを算定するためにＤＮＡ
配列のＦＡＳＴＤＢ整列において使用される好ましいパラメーターは：Ｍａｔｒ
ｉｘ＝Ｕｎｉｔａｒｙ、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝４、Ｍｉｓｍａｔｃｈ Ｐｅｎａｌｔ
ｙ＝１、Ｊｏｉｎｉｎｇ Ｐｅｎａｌｔｙ＝３０、Ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ
Ｇｒｏｕｐ Ｌｅｎｇｔｈ＝０、Ｃｕｔｏｆｆ Ｓｃｏｒｅ＝１、Ｇａｐ Ｐ
ｅｎａｌｔｙ＝５、Ｇａｐ Ｓｉｚｅ Ｐｅｎａｌｔｙ ０．０５、Ｗｉｎｄｏ
ｗ Ｓｉｚｅ＝５００または対象ヌクレオチド配列の長さ（どちらかより短い方
）である。
【０１３０】
対象配列が、５’または３’欠失のために（内部欠失のためではなく）問い合
わせ配列より短い場合、手動の補正が結果に対してなされなけらばならない。こ
れは、同一性パーセントを計算する場合に、ＦＡＳＴＤＢプログラムが対象配列
の５’および３’の短縮を考慮しないからである。５’末端または３’末端で短
縮されている対象配列について、問い合わせ配列に対して、同一性パーセントは
、問い合わせ配列の総塩基のパーセントとして一致／整列されない対象配列の５
’および３’である問い合わせ配列の塩基の数を計算することによって補正され
る。ヌクレオチドが一致／整列されるか否かは、ＦＡＳＴＤＢ配列整列の結果に
よって決定される。次いで、このパーセントは、特定のパラメーターを用いて上
記のＦＡＳＴＤＢプログラムによって算定された同一性パーセントから差し引か
れ、最終的な同一性パーセントのスコアに到達する。この補正されたスコアが、
本発明の目的に使用されるものである。ＦＡＳＴＤＢ整列によって示されるよう
に、問い合わせ配列と一致／整列されない、対象配列の５’および３’の塩基の
外側の塩基のみが、同一性パーセントのスコアを手動で調整する目的で算定され
る。
わせ配列より短い場合、手動の補正が結果に対してなされなけらばならない。こ
れは、同一性パーセントを計算する場合に、ＦＡＳＴＤＢプログラムが対象配列
の５’および３’の短縮を考慮しないからである。５’末端または３’末端で短
縮されている対象配列について、問い合わせ配列に対して、同一性パーセントは
、問い合わせ配列の総塩基のパーセントとして一致／整列されない対象配列の５
’および３’である問い合わせ配列の塩基の数を計算することによって補正され
る。ヌクレオチドが一致／整列されるか否かは、ＦＡＳＴＤＢ配列整列の結果に
よって決定される。次いで、このパーセントは、特定のパラメーターを用いて上
記のＦＡＳＴＤＢプログラムによって算定された同一性パーセントから差し引か
れ、最終的な同一性パーセントのスコアに到達する。この補正されたスコアが、
本発明の目的に使用されるものである。ＦＡＳＴＤＢ整列によって示されるよう
に、問い合わせ配列と一致／整列されない、対象配列の５’および３’の塩基の
外側の塩基のみが、同一性パーセントのスコアを手動で調整する目的で算定され
る。
【０１３１】
例えば、９０塩基の対象配列が、同一性パーセントを決定するために１００塩
基の問い合わせ配列に整列される。欠失が、対象配列の５’末端で生じ、従って
、ＦＡＳＴＤＢ整列は、５’末端の最初の１０塩基で一致／整列を示さない。１
０個の不対合塩基は、配列の１０％（一致していない５’および３’の末端の塩
基の数／問い合わせ配列の塩基の総数）を表し、そのため１０％が、ＦＡＳＴＤ
Ｂプログラムによって算定される同一性パーセントのスコアから差し引かれる。
残りの９０塩基が完全に一致する場合は、最終的な同一性パーセントは９０％で
ある。別の例では、９０塩基の対象配列が、１００塩基の問い合わせ配列と比較
される。この場合、欠失は、内部欠失であり、その結果、対象配列の５’または
３’に問い合わせと一致／整列しない塩基が存在しない。この場合、ＦＡＳＴＤ
Ｂによって算定される同一性パーセントは手動で補正されない。再び、問い合わ
せ配列と一致／整列しない対象配列の５’または３’の塩基のみが手動で補正さ
れる。他の手動の補正は、本発明の目的のためにはなされない。
基の問い合わせ配列に整列される。欠失が、対象配列の５’末端で生じ、従って
、ＦＡＳＴＤＢ整列は、５’末端の最初の１０塩基で一致／整列を示さない。１
０個の不対合塩基は、配列の１０％（一致していない５’および３’の末端の塩
基の数／問い合わせ配列の塩基の総数）を表し、そのため１０％が、ＦＡＳＴＤ
Ｂプログラムによって算定される同一性パーセントのスコアから差し引かれる。
残りの９０塩基が完全に一致する場合は、最終的な同一性パーセントは９０％で
ある。別の例では、９０塩基の対象配列が、１００塩基の問い合わせ配列と比較
される。この場合、欠失は、内部欠失であり、その結果、対象配列の５’または
３’に問い合わせと一致／整列しない塩基が存在しない。この場合、ＦＡＳＴＤ
Ｂによって算定される同一性パーセントは手動で補正されない。再び、問い合わ
せ配列と一致／整列しない対象配列の５’または３’の塩基のみが手動で補正さ
れる。他の手動の補正は、本発明の目的のためにはなされない。
【０１３２】
本発明の問い合わせアミノ酸配列に、例えば、少なくとも９５％「同一」であ
るアミノ酸配列を有するポリぺプチドにより、対象ポリペプチドのアミノ酸配列
は、その対象ポリぺプチド配列が問い合わせアミノ酸配列の各１００個のアミノ
酸あたり５つまでのアミノ酸の変更を含み得ることを除いて、問い合わせ配列に
同一であることが意図される。換言すれば、問い合わせアミノ酸配列に少なくと
も９５％同一であるアミノ酸配列を有するポリぺプチドを得るために、対象配列
におけるアミノ酸残基の５％までが、挿入、欠失、（インデル（ｉｎｄｅｌｓ）
）または別のアミノ酸で置換され得る。参照配列のこれらの改変は、参照アミノ
酸配列のアミノ末端もしくはカルボキシ末端位置で生じ得るか、またはそれらの
末端位置の間のどこにでも生じ得、参照配列中の残基間で個々にかまたは参照配
列内の１個以上連続する群の状態かのいずれかで、散在する。
るアミノ酸配列を有するポリぺプチドにより、対象ポリペプチドのアミノ酸配列
は、その対象ポリぺプチド配列が問い合わせアミノ酸配列の各１００個のアミノ
酸あたり５つまでのアミノ酸の変更を含み得ることを除いて、問い合わせ配列に
同一であることが意図される。換言すれば、問い合わせアミノ酸配列に少なくと
も９５％同一であるアミノ酸配列を有するポリぺプチドを得るために、対象配列
におけるアミノ酸残基の５％までが、挿入、欠失、（インデル（ｉｎｄｅｌｓ）
）または別のアミノ酸で置換され得る。参照配列のこれらの改変は、参照アミノ
酸配列のアミノ末端もしくはカルボキシ末端位置で生じ得るか、またはそれらの
末端位置の間のどこにでも生じ得、参照配列中の残基間で個々にかまたは参照配
列内の１個以上連続する群の状態かのいずれかで、散在する。
【０１３３】
実際問題として、任意の特定のポリぺプチドが、例えば、表１に示されるアミ
ノ酸配列またはそのフラグメント、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｘにおけるヌクレオチ
ド配列によりコードされるアミノ酸配列またはそのフラグメント、あるいはｃＤ
ＮＡプラスミドＺにおけるｃＤＮＡによりコードされるアミノ酸配列またはその
フラグメントに対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、
９７％、９８％、または９９％同一であるか否かは、公知のコンピュータープロ
グラムを使用して従来のように決定され得る。問い合わせ配列（本発明の配列）
と対象配列との間での最良の全体的な一致（全体的配列整列とも呼ばれる）を決
定するための好ましい方法は、Ｂｒｕｔｌａｇら（Ｃｏｍｐ．Ａｐｐ．Ｂｉｏｓ
ｃｉ．６：２３７−２４５（１９９０））のアルゴリズムに基づくＦＡＳＴＤＢ
コンピュータープログラムを使用して決定され得る。配列整列において、問い合
わせ配列および対象配列は、両方ともヌクレオチド配列であるかまたは両方とも
アミノ酸配列であるかのいずれかである。上記の全体的配列整列の結果は、同一
性パーセントで示される。ＦＡＳＴＤＢアミノ酸整列に用いられる好ましいパラ
メーターは：Ｍａｔｒｉｘ＝ＰＡＭ ０、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝２、Ｍｉｓｍａｔｃ
ｈ Ｐｅｎａｌｔｙ＝１、Ｊｏｉｎｉｎｇ Ｐｅｎａｌｔｙ＝２０、Ｒａｎｄｏ
ｍｉｚａｔｉｏｎ Ｇｒｏｕｐ Ｌｅｎｇｔｈ＝０、Ｃｕｔｏｆｆ Ｓｃｏｒｅ
＝１、Ｗｉｎｄｏｗ Ｓｉｚｅ＝配列の長さ、Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔｙ＝５、Ｇ
ａｐ Ｓｉｚｅ Ｐｅｎａｌｔｙ＝０．０５、Ｗｉｎｄｏｗ Ｓｉｚｅ＝５００
または対象アミノ酸配列の長さ（どちらかより短い方）である。
ノ酸配列またはそのフラグメント、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｘにおけるヌクレオチ
ド配列によりコードされるアミノ酸配列またはそのフラグメント、あるいはｃＤ
ＮＡプラスミドＺにおけるｃＤＮＡによりコードされるアミノ酸配列またはその
フラグメントに対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、
９７％、９８％、または９９％同一であるか否かは、公知のコンピュータープロ
グラムを使用して従来のように決定され得る。問い合わせ配列（本発明の配列）
と対象配列との間での最良の全体的な一致（全体的配列整列とも呼ばれる）を決
定するための好ましい方法は、Ｂｒｕｔｌａｇら（Ｃｏｍｐ．Ａｐｐ．Ｂｉｏｓ
ｃｉ．６：２３７−２４５（１９９０））のアルゴリズムに基づくＦＡＳＴＤＢ
コンピュータープログラムを使用して決定され得る。配列整列において、問い合
わせ配列および対象配列は、両方ともヌクレオチド配列であるかまたは両方とも
アミノ酸配列であるかのいずれかである。上記の全体的配列整列の結果は、同一
性パーセントで示される。ＦＡＳＴＤＢアミノ酸整列に用いられる好ましいパラ
メーターは：Ｍａｔｒｉｘ＝ＰＡＭ ０、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝２、Ｍｉｓｍａｔｃ
ｈ Ｐｅｎａｌｔｙ＝１、Ｊｏｉｎｉｎｇ Ｐｅｎａｌｔｙ＝２０、Ｒａｎｄｏ
ｍｉｚａｔｉｏｎ Ｇｒｏｕｐ Ｌｅｎｇｔｈ＝０、Ｃｕｔｏｆｆ Ｓｃｏｒｅ
＝１、Ｗｉｎｄｏｗ Ｓｉｚｅ＝配列の長さ、Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔｙ＝５、Ｇ
ａｐ Ｓｉｚｅ Ｐｅｎａｌｔｙ＝０．０５、Ｗｉｎｄｏｗ Ｓｉｚｅ＝５００
または対象アミノ酸配列の長さ（どちらかより短い方）である。
【０１３４】
対象配列が、Ｎ末端またはＣ末端欠失により（内部の欠失のためではなく）問
い合わせ配列よりも短い場合、手動の補正が結果に対してなされなけらばならな
い。これは、ＦＡＳＴＤＢプログラムが、全体的な同一性パーセントを算定する
場合に、対象配列のＮ末端短縮およびＣ末端短縮を考慮しないからである。Ｎ末
端およびＣ末端で短縮されている対象配列について、問い合わせ配列に対して、
同一性パーセントは、問い合わせ配列の総塩基のパーセントとして、対応する対
象残基と一致／整列しない、対象配列のＮ末端およびＣ末端である問い合わせ配
列の残基の数を計算することによって補正される。残基が一致／整列されている
か否かは、ＦＡＳＴＤＢ配列整列の結果によって決定される。次いで、このパー
セントは、上記のＦＡＳＴＤＢプログラムによって特定のパラメーターを使用し
て計算された同一性パーセントから差し引かれ、最終的な同一性パーセントのス
コアに到達する。この最終的な同一性パーセントのスコアが、本発明の目的で使
用されるものである。問い合わせ配列と一致／整列していない対象配列のＮ末端
側およびＣ末端側の残基のみが、同一性パーセントのスコアを手動で調整する目
的のために考慮される。すなわち、対象配列の最も遠いＮ末端およびＣ末端残基
の外側の問い合わせ残基位置のみである。
い合わせ配列よりも短い場合、手動の補正が結果に対してなされなけらばならな
い。これは、ＦＡＳＴＤＢプログラムが、全体的な同一性パーセントを算定する
場合に、対象配列のＮ末端短縮およびＣ末端短縮を考慮しないからである。Ｎ末
端およびＣ末端で短縮されている対象配列について、問い合わせ配列に対して、
同一性パーセントは、問い合わせ配列の総塩基のパーセントとして、対応する対
象残基と一致／整列しない、対象配列のＮ末端およびＣ末端である問い合わせ配
列の残基の数を計算することによって補正される。残基が一致／整列されている
か否かは、ＦＡＳＴＤＢ配列整列の結果によって決定される。次いで、このパー
セントは、上記のＦＡＳＴＤＢプログラムによって特定のパラメーターを使用し
て計算された同一性パーセントから差し引かれ、最終的な同一性パーセントのス
コアに到達する。この最終的な同一性パーセントのスコアが、本発明の目的で使
用されるものである。問い合わせ配列と一致／整列していない対象配列のＮ末端
側およびＣ末端側の残基のみが、同一性パーセントのスコアを手動で調整する目
的のために考慮される。すなわち、対象配列の最も遠いＮ末端およびＣ末端残基
の外側の問い合わせ残基位置のみである。
【０１３５】
例えば、９０アミノ酸残基の対象配列が、同一性パーセントを決定するために
１００残基の問い合わせ配列と整列される。欠失が対象配列のＮ末端で生じ、そ
してそれゆえＦＡＳＴＤＢ整列は、Ｎ末端での最初の１０残基の一致／整列を示
さない。この１０個の不対合残基は、配列の１０％（一致していないＮ末端およ
びＣ末端の残基の数／問い合わせ配列中の残基の総数）を表し、その結果ＦＡＳ
ＴＤＢプログラムによって計算される同一性パーセントのスコアから１０％が差
し引かれる。残りの９０残基が完全に一致した場合、最終的な同一性パーセント
は９０％である。別の例において、９０残基の対象配列が、１００残基の問い合
わせ配列と比較される。この場合、欠失は、内部欠失であり、そのため問い合わ
せ配列と一致／整列しない対象配列のＮ末端またはＣ末端の残基は存在しない。
この場合、ＦＡＳＴＤＢによって算定される同一性パーセントは、手動で補正さ
れない。再び、ＦＡＳＴＤＢ整列において示される、問い合わせ配列と一致／整
列しない対象配列のＮ末端およびＣ末端の外側の残基位置のみが手動で補正され
る。他の手動の補正は、本発明の目的のためにはなされない。
１００残基の問い合わせ配列と整列される。欠失が対象配列のＮ末端で生じ、そ
してそれゆえＦＡＳＴＤＢ整列は、Ｎ末端での最初の１０残基の一致／整列を示
さない。この１０個の不対合残基は、配列の１０％（一致していないＮ末端およ
びＣ末端の残基の数／問い合わせ配列中の残基の総数）を表し、その結果ＦＡＳ
ＴＤＢプログラムによって計算される同一性パーセントのスコアから１０％が差
し引かれる。残りの９０残基が完全に一致した場合、最終的な同一性パーセント
は９０％である。別の例において、９０残基の対象配列が、１００残基の問い合
わせ配列と比較される。この場合、欠失は、内部欠失であり、そのため問い合わ
せ配列と一致／整列しない対象配列のＮ末端またはＣ末端の残基は存在しない。
この場合、ＦＡＳＴＤＢによって算定される同一性パーセントは、手動で補正さ
れない。再び、ＦＡＳＴＤＢ整列において示される、問い合わせ配列と一致／整
列しない対象配列のＮ末端およびＣ末端の外側の残基位置のみが手動で補正され
る。他の手動の補正は、本発明の目的のためにはなされない。
【０１３６】
改変体は、コード領域、非コード領域、またはその両方における変化を含み得
る。特に好ましいものは、サイレントな置換、付加、または欠失を生成するがコ
ードされるポリぺプチドの特性または活性を変化させない変化を含む、ポリヌク
レオチド改変体である。遺伝コードの縮重に起因するサイレントな置換によって
生成されるヌクレオチド改変体が、好ましい。さらに、５０アミノ酸未満、４０
アミノ酸未満、３０アミノ酸未満、２０アミノ酸未満、１０アミノ酸未満、ある
いは５〜５０アミノ酸、５〜２５アミノ酸、５〜１０アミノ酸、１〜５アミノ酸
、または１〜２アミノ酸が、任意の組合せで置換、欠失、または付加されている
改変体もまた、好ましい。ポリヌクレオチド改変体は、種々の理由（例えば、特
定の宿主についてのコドン発現を至適化する（ヒトｍＲＮＡにおけるコドンを、
Ｅ．ｃｏｌｉのような細菌宿主によって好ましいコドンに変化させる））のため
に、生成され得る。
る。特に好ましいものは、サイレントな置換、付加、または欠失を生成するがコ
ードされるポリぺプチドの特性または活性を変化させない変化を含む、ポリヌク
レオチド改変体である。遺伝コードの縮重に起因するサイレントな置換によって
生成されるヌクレオチド改変体が、好ましい。さらに、５０アミノ酸未満、４０
アミノ酸未満、３０アミノ酸未満、２０アミノ酸未満、１０アミノ酸未満、ある
いは５〜５０アミノ酸、５〜２５アミノ酸、５〜１０アミノ酸、１〜５アミノ酸
、または１〜２アミノ酸が、任意の組合せで置換、欠失、または付加されている
改変体もまた、好ましい。ポリヌクレオチド改変体は、種々の理由（例えば、特
定の宿主についてのコドン発現を至適化する（ヒトｍＲＮＡにおけるコドンを、
Ｅ．ｃｏｌｉのような細菌宿主によって好ましいコドンに変化させる））のため
に、生成され得る。
【０１３７】
天然に存在する改変体は、「対立遺伝子改変体」と呼ばれ、そして生物の染色
体上の所定の遺伝子座を占有する遺伝子のいくつかの代替の形態のうちの１つを
いう。（Ｇｅｎｅｓ ＩＩ、Ｌｅｗｉｎ，Ｂ．，編 Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆
Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８５））。これらの対立遺伝子改変体は、
ポリヌクレオチドレベルおよび／またはポリぺプチドレベルのいずれかで変化し
得、そして本発明に含まれる。あるいは、天然に存在しない改変体は、変異誘発
技術によってまたは直接的な合成によって生成され得る。
体上の所定の遺伝子座を占有する遺伝子のいくつかの代替の形態のうちの１つを
いう。（Ｇｅｎｅｓ ＩＩ、Ｌｅｗｉｎ，Ｂ．，編 Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆
Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８５））。これらの対立遺伝子改変体は、
ポリヌクレオチドレベルおよび／またはポリぺプチドレベルのいずれかで変化し
得、そして本発明に含まれる。あるいは、天然に存在しない改変体は、変異誘発
技術によってまたは直接的な合成によって生成され得る。
【０１３８】
タンパク質工学および組換えＤＮＡ技術の公知の方法を使用して、改変体は、
本発明のポリぺプチドの特性を改善または変化させるために作製され得る。例え
ば、本明細書中に考察されるように、１つ以上のアミノ酸が、生物学的機能の実
質的な欠損を伴わずに、本発明のポリペプチドのＮ末端またはＣ末端から欠失さ
れ得る。Ｒｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：２９８４−２９８８（１
９９３）の著者らは、３個、８個、または２７個のアミノ末端アミノ酸残基を欠
失させた後でさえもヘパリン結合活性を有する改変体ＫＧＦタンパク質を報告し
た。同様に、インターフェロンγは、このタンパク質のカルボキシ末端から８〜
１０個のアミノ酸残基を欠失させた後、１０倍までのより高い活性を示した（Ｄ
ｏｂｅｌｉら、Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７：１９９−２１６（１９８
８））。
本発明のポリぺプチドの特性を改善または変化させるために作製され得る。例え
ば、本明細書中に考察されるように、１つ以上のアミノ酸が、生物学的機能の実
質的な欠損を伴わずに、本発明のポリペプチドのＮ末端またはＣ末端から欠失さ
れ得る。Ｒｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：２９８４−２９８８（１
９９３）の著者らは、３個、８個、または２７個のアミノ末端アミノ酸残基を欠
失させた後でさえもヘパリン結合活性を有する改変体ＫＧＦタンパク質を報告し
た。同様に、インターフェロンγは、このタンパク質のカルボキシ末端から８〜
１０個のアミノ酸残基を欠失させた後、１０倍までのより高い活性を示した（Ｄ
ｏｂｅｌｉら、Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７：１９９−２１６（１９８
８））。
【０１３９】
さらに、豊富な証拠は、改変体が、天然に存在するタンパク質の生物学的活性
に類似する活性をしばしば保持することを実証する。例えば、Ｇａｙｌｅおよび
共同研究者ら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２６８：２２１０５−２２１１１（１
９９３））は、ヒトサイトカインＩＬ−１ａの広範囲にわたる変異分析を行った
。彼らは、ランダムな変異誘発を使用して、分子の全長にわたって改変体当たり
平均２．５アミノ酸の変化になる、３，５００個を超える個々のＩＬ−１ａ改変
体を作製した。複数の変異が、全ての可能なアミノ酸位置で試験された。この研
究者らは、「分子の大部分は、［結合活性または生物学的活性］のいずれに対し
てもほとんど影響を伴わないで変化され得る」ことを見出した。（要約を参照の
こと）。実際、試験された３，５００個を超えるヌクレオチド配列のうち、わず
か２３個の独特なアミノ酸配列が、野生型と活性が有意に異なるタンパク質を生
成した。
に類似する活性をしばしば保持することを実証する。例えば、Ｇａｙｌｅおよび
共同研究者ら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２６８：２２１０５−２２１１１（１
９９３））は、ヒトサイトカインＩＬ−１ａの広範囲にわたる変異分析を行った
。彼らは、ランダムな変異誘発を使用して、分子の全長にわたって改変体当たり
平均２．５アミノ酸の変化になる、３，５００個を超える個々のＩＬ−１ａ改変
体を作製した。複数の変異が、全ての可能なアミノ酸位置で試験された。この研
究者らは、「分子の大部分は、［結合活性または生物学的活性］のいずれに対し
てもほとんど影響を伴わないで変化され得る」ことを見出した。（要約を参照の
こと）。実際、試験された３，５００個を超えるヌクレオチド配列のうち、わず
か２３個の独特なアミノ酸配列が、野生型と活性が有意に異なるタンパク質を生
成した。
【０１４０】
さらに、本明細書中に議論されるように、ポリぺプチドのＮ末端またはＣ末端
からの１つ以上のアミノ酸の欠失が、１つ以上の生物学的機能の改変または欠失
を生じたとしても、他の生物学的活性はなお保持され得る。例えば、分泌形態を
認識する抗体を誘導および／または結合する、欠失改変体の能力は、分泌形態の
大多数より少ない残基が、Ｎ末端またはＣ末端から除去される場合に保持される
ようである。タンパク質のＮ末端残基またはＣ末端残基を欠損する特定のポリぺ
プチドが、このような免疫原性活性を保持するか否かは、本明細書中に記載され
る慣用的な方法、およびそうでなければ当該分野において公知の慣用的な方法に
よって容易に決定され得る。
からの１つ以上のアミノ酸の欠失が、１つ以上の生物学的機能の改変または欠失
を生じたとしても、他の生物学的活性はなお保持され得る。例えば、分泌形態を
認識する抗体を誘導および／または結合する、欠失改変体の能力は、分泌形態の
大多数より少ない残基が、Ｎ末端またはＣ末端から除去される場合に保持される
ようである。タンパク質のＮ末端残基またはＣ末端残基を欠損する特定のポリぺ
プチドが、このような免疫原性活性を保持するか否かは、本明細書中に記載され
る慣用的な方法、およびそうでなければ当該分野において公知の慣用的な方法に
よって容易に決定され得る。
【０１４１】
従って、本発明はさらに、本発明のポリペプチドの機能的活性（例えば、生物
学的活性）を示すポリペプチド改変体を含み、このポリペプチド改変体は、本発
明のポリペプチドの改変体である。このような改変体としては、活性に対する影
響をほとんど有さないように、当該分野において公知の一般的な法則に従って選
択される、欠失、挿入、逆位、反復、および置換が挙げられる。
学的活性）を示すポリペプチド改変体を含み、このポリペプチド改変体は、本発
明のポリペプチドの改変体である。このような改変体としては、活性に対する影
響をほとんど有さないように、当該分野において公知の一般的な法則に従って選
択される、欠失、挿入、逆位、反復、および置換が挙げられる。
【０１４２】
本願は、本明細書中に開示される核酸配列（例えば、Ｎ末端欠失および／また
はＣ末端欠失のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする）と少なくとも
８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１０
０％同一である、核酸分子に関し、これは、その核酸が機能的活性を有するポリ
ペプチドをコードするか否かに関わらない。これは、特定の核酸分子が機能的活
性を有するポリペプチドをコードしない場合でさえ、例えば、ハイブリダイゼー
ションプローブまたはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）プライマーとしてその核
酸を使用する方法を、当業者はなお知っているからである。機能的活性を有する
ポリペプチドをコードしない本発明の核酸分子の使用としては、とりわけ、（１
）ｃＤＮＡライブラリーにおいて遺伝子またはその対立遺伝子改変体もしくはス
プライス改変体を単離すること；（２）Ｖｅｒｍａら、Ｈｕｍａｎ Ｃｈｒｏｍ
ｏｓｏｍｅｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、
Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８）に記載されるよ
うな、遺伝子の正確な染色体位置を提供するための、中期染色体スプレッドに対
するインサイチュハイブリダイゼーション（例えば、ＦＩＳＨ）；ならびに特定
の組織におけるｍＲＮＡ発現を検出するためのノーザンブロット分析が、挙げら
れる。
はＣ末端欠失のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする）と少なくとも
８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１０
０％同一である、核酸分子に関し、これは、その核酸が機能的活性を有するポリ
ペプチドをコードするか否かに関わらない。これは、特定の核酸分子が機能的活
性を有するポリペプチドをコードしない場合でさえ、例えば、ハイブリダイゼー
ションプローブまたはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）プライマーとしてその核
酸を使用する方法を、当業者はなお知っているからである。機能的活性を有する
ポリペプチドをコードしない本発明の核酸分子の使用としては、とりわけ、（１
）ｃＤＮＡライブラリーにおいて遺伝子またはその対立遺伝子改変体もしくはス
プライス改変体を単離すること；（２）Ｖｅｒｍａら、Ｈｕｍａｎ Ｃｈｒｏｍ
ｏｓｏｍｅｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、
Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８）に記載されるよ
うな、遺伝子の正確な染色体位置を提供するための、中期染色体スプレッドに対
するインサイチュハイブリダイゼーション（例えば、ＦＩＳＨ）；ならびに特定
の組織におけるｍＲＮＡ発現を検出するためのノーザンブロット分析が、挙げら
れる。
【０１４３】
しかし、好ましいのは、本発明のポリペプチドの機能的活性を有するポリペプ
チドを実際にコードする、本明細書中に開示される核酸配列と少なくとも８０％
、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同
一である配列を有する、核酸分子である。
チドを実際にコードする、本明細書中に開示される核酸配列と少なくとも８０％
、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同
一である配列を有する、核酸分子である。
【０１４４】
当然、遺伝子コードの縮重が原因で、例えば、ｃＤＮＡプラスミドＺ中のｃＤ
ＮＡの核酸配列、表１に示される核酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｘ）またはそ
れらのフラグメントと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９
７％、９８％、９９％、または１００％同一な配列を有する核酸分子の大多数が
、「機能的活性を有する」ポリペプチドをコードすることを、当業者はただちに
認識する。実際、これらのヌクレオチド配列のいずれかの縮重改変体はすべて同
じポリペプチドをコードするので、多くの場合において、上記の比較アッセイを
実施することなしでさえ、これは当業者には明らかである。縮重改変体でない核
酸分子について、妥当な数がまた、機能的活性を有するポリペプチドをコードす
ることが、当該分野でさらに認識される。これは、下記にさらに議論されるよう
に、タンパク質の機能にあまり影響しそうにないかまたは有意には影響しそうに
ないかのいずれかであるアミノ酸置換（例えば、１つの脂肪族アミノ酸を第２の
脂肪族アミノ酸で置換すること）を当業者が完全に承知しているからである。
ＮＡの核酸配列、表１に示される核酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：Ｘ）またはそ
れらのフラグメントと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９
７％、９８％、９９％、または１００％同一な配列を有する核酸分子の大多数が
、「機能的活性を有する」ポリペプチドをコードすることを、当業者はただちに
認識する。実際、これらのヌクレオチド配列のいずれかの縮重改変体はすべて同
じポリペプチドをコードするので、多くの場合において、上記の比較アッセイを
実施することなしでさえ、これは当業者には明らかである。縮重改変体でない核
酸分子について、妥当な数がまた、機能的活性を有するポリペプチドをコードす
ることが、当該分野でさらに認識される。これは、下記にさらに議論されるよう
に、タンパク質の機能にあまり影響しそうにないかまたは有意には影響しそうに
ないかのいずれかであるアミノ酸置換（例えば、１つの脂肪族アミノ酸を第２の
脂肪族アミノ酸で置換すること）を当業者が完全に承知しているからである。
【０１４５】
例えば、表現型的にサイレントなアミノ酸置換を作製する方法に関する指針が
、Ｂｏｗｉｅら「Ｄｅｃｉｐｈｅｒｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｅｓｓａｇｅ ｉｎ Ｐ
ｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ：Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｍｉｎｏ
Ａｃｉｄ Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ」Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１３０６〜
１３１０（１９９０）に提供され、この著者は、変化に対するアミノ酸配列の許
容性を研究する２つの主なストラテジーが存在することを示している。
、Ｂｏｗｉｅら「Ｄｅｃｉｐｈｅｒｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｅｓｓａｇｅ ｉｎ Ｐ
ｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ：Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｍｉｎｏ
Ａｃｉｄ Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ」Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１３０６〜
１３１０（１９９０）に提供され、この著者は、変化に対するアミノ酸配列の許
容性を研究する２つの主なストラテジーが存在することを示している。
【０１４６】
第１のストラテジーは、進化の過程の間の自然の選択によるアミノ酸置換の許
容性を利用する。異なる種におけるアミノ酸配列を比較して、保存的アミノ酸が
同定され得る。これらの保存的アミノ酸は、タンパク質の機能について重要であ
るようである。対照的に、置換が自然の選択によって許容されたアミノ酸の位置
は、これらの位置がタンパク質の機能に重要ではないことを示す。従って、アミ
ノ酸置換を許容する位置は、タンパク質の生物学的活性をなおも維持しつつ改変
され得る。
容性を利用する。異なる種におけるアミノ酸配列を比較して、保存的アミノ酸が
同定され得る。これらの保存的アミノ酸は、タンパク質の機能について重要であ
るようである。対照的に、置換が自然の選択によって許容されたアミノ酸の位置
は、これらの位置がタンパク質の機能に重要ではないことを示す。従って、アミ
ノ酸置換を許容する位置は、タンパク質の生物学的活性をなおも維持しつつ改変
され得る。
【０１４７】
第２のストラテジーは、タンパク質機能に重要な領域を同定するために、クロ
ーン化された遺伝子の特定の位置でアミノ酸変化を導入するための遺伝子工学を
使用する。例えば、部位特異的変異誘発またはアラニンスキャニング変異誘発（
分子中のどの残基にも１つのアラニン変異の導入）が、使用され得る。（Ｃｕｎ
ｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１−１０８
５（１９８９））。次いで、得られた変異分子は生物学的活性について試験され
得る。
ーン化された遺伝子の特定の位置でアミノ酸変化を導入するための遺伝子工学を
使用する。例えば、部位特異的変異誘発またはアラニンスキャニング変異誘発（
分子中のどの残基にも１つのアラニン変異の導入）が、使用され得る。（Ｃｕｎ
ｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１−１０８
５（１９８９））。次いで、得られた変異分子は生物学的活性について試験され
得る。
【０１４８】
著者らが述べるように、これらの２つのストラテジーは、タンパク質がアミノ
酸置換に驚くほど寛容であることを明らかにした。著者らはさらに、どのアミノ
酸変化が、タンパク質中の特定のアミノ酸位置で許容されるようであるかを示す
。例えば、最も埋もれている（タンパク質の三次構造内の）アミノ酸残基は、非
極性側鎖を必要とするが、表面側鎖の特徴は、一般にほとんど保存されない。さ
らに、寛容される保存的なアミノ酸置換は、脂肪族または疎水性アミノ酸のＡｌ
ａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅの置換；ヒドロキシル残基のＳｅｒおよびＴ
ｈｒの置換；酸性残基のＡｓｐおよびＧｌｕの置換；アミド残基のＡｓｎおよび
Ｇｌｎの置換、塩基性残基のＬｙｓ、Ａｒｇ、およびＨｉｓの置換；芳香族残基
のＰｈｅ、Ｔｙｒ、およびＴｒｐの置換、ならびに小さなサイズのアミノ酸のＡ
ｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｍｅｔ、およびＧｌｙの置換を含む。保存的なアミノ酸
置換以外に、本発明の改変体は、（ｉ）１つ以上の非保存的なアミノ酸残基での
置換、ここでは置換されるアミノ酸残基は、遺伝コードによってコードされるア
ミノ酸残基であってもよく、もしくはそうでなくてもよい、または（ｉｉ）置換
基を有する１つ以上のアミノ酸残基での置換、または（ｉｉｉ）別の化合物（例
えば、ポリぺプチドの安定性および／もしくは可溶性を増加するための化合物（
例えば、ポリエチレングリコール））との成熟ポリぺプチドの融合、または（ｉ
ｖ）さらなるアミノ酸（例えば、ＩｇＧ Ｆｃ融合領域ペプチド、またはリーダ
ーもしくは分泌配列、または精製を容易にする配列）とのポリぺプチドの融合を
含む。このような改変体ポリぺプチドは、本明細書中の教示から、当業者の範囲
内であることが考えられる。
酸置換に驚くほど寛容であることを明らかにした。著者らはさらに、どのアミノ
酸変化が、タンパク質中の特定のアミノ酸位置で許容されるようであるかを示す
。例えば、最も埋もれている（タンパク質の三次構造内の）アミノ酸残基は、非
極性側鎖を必要とするが、表面側鎖の特徴は、一般にほとんど保存されない。さ
らに、寛容される保存的なアミノ酸置換は、脂肪族または疎水性アミノ酸のＡｌ
ａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅの置換；ヒドロキシル残基のＳｅｒおよびＴ
ｈｒの置換；酸性残基のＡｓｐおよびＧｌｕの置換；アミド残基のＡｓｎおよび
Ｇｌｎの置換、塩基性残基のＬｙｓ、Ａｒｇ、およびＨｉｓの置換；芳香族残基
のＰｈｅ、Ｔｙｒ、およびＴｒｐの置換、ならびに小さなサイズのアミノ酸のＡ
ｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｍｅｔ、およびＧｌｙの置換を含む。保存的なアミノ酸
置換以外に、本発明の改変体は、（ｉ）１つ以上の非保存的なアミノ酸残基での
置換、ここでは置換されるアミノ酸残基は、遺伝コードによってコードされるア
ミノ酸残基であってもよく、もしくはそうでなくてもよい、または（ｉｉ）置換
基を有する１つ以上のアミノ酸残基での置換、または（ｉｉｉ）別の化合物（例
えば、ポリぺプチドの安定性および／もしくは可溶性を増加するための化合物（
例えば、ポリエチレングリコール））との成熟ポリぺプチドの融合、または（ｉ
ｖ）さらなるアミノ酸（例えば、ＩｇＧ Ｆｃ融合領域ペプチド、またはリーダ
ーもしくは分泌配列、または精製を容易にする配列）とのポリぺプチドの融合を
含む。このような改変体ポリぺプチドは、本明細書中の教示から、当業者の範囲
内であることが考えられる。
【０１４９】
例えば、他の荷電されたアミノ酸または中性のアミノ酸での、荷電されたアミ
ノ酸のアミノ酸置換を含むポリぺプチド改変体は、改善された特徴（例えば、よ
り少ない凝集性）を有するタンパク質を生成し得る。薬学的処方物の凝集は、凝
集体の免疫原活性に起因して、活性を減少し、かつクリアランスを増加する。（
Ｐｉｎｃｋａｒｄら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：３３１−３４０
（１９６７）；Ｒｏｂｂｉｎｓら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ ３６：８３８−８４５（
１９８７）；Ｃｌｅｌａｎｄら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ
Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ １０：３０７−３７７（１９９３
））。
ノ酸のアミノ酸置換を含むポリぺプチド改変体は、改善された特徴（例えば、よ
り少ない凝集性）を有するタンパク質を生成し得る。薬学的処方物の凝集は、凝
集体の免疫原活性に起因して、活性を減少し、かつクリアランスを増加する。（
Ｐｉｎｃｋａｒｄら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：３３１−３４０
（１９６７）；Ｒｏｂｂｉｎｓら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ ３６：８３８−８４５（
１９８７）；Ｃｌｅｌａｎｄら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ
Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ １０：３０７−３７７（１９９３
））。
【０１５０】
本発明のさらなる実施形態は、少なくとも１つのアミノ酸置換を含むが、５０
アミノ酸置換を超えず、さらにより好ましくは、４０アミノ酸置換を超えず、な
おより好ましくは、３０アミノ酸置換を超えず、そしてなおさらにより好ましく
は、２０アミノ酸置換を超えないアミノ酸配列を有するポリペプチドのアミノ酸
配列を含むポリペプチドに関する。もちろん、ポリペプチドは、好ましさの増大
する順番に、配列番号Ｙのポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列、配
列番号Ｘによりコードされるアミノ酸配列、および／または少なくとも１つのア
ミノ酸置換を含むが、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１アミノ
酸置換を超えないアミノ酸置換を含むｃＤＮＡプラスミドＺ中のｃＤＮＡにより
コードされるアミノ酸配列を有することが非常に好ましい。特定の実施形態にお
いて、配列番号Ｙのアミノ酸配列またはそのフラグメント（例えば、本明細書に
記載の成熟形態および／または他のフラグメント）、配列番号Ｘによりコードさ
れるアミノ酸配列またはそのフラグメント、ならびに／あるいはｃＤＮＡプラス
ミドＸＺによりコードされるアミノ酸配列またはそのフラグメントにおける付加
、置換、および／または欠失の数は、１〜５、５〜１０、５〜２５、５〜５０、
１０〜５０、または５０〜１５０であり、保存的アミノ酸置換が好ましい。本明
細書中で議論されるように、本発明の任意のポリペプチドは、融合タンパク質を
生成するために使用され得る。例えば、本発明のポリペプチドは、第２のタンパ
ク質と融合される場合、抗原性タグとして使用され得る。本発明のポリペプチド
に対して惹起される抗体は、ポリペプチドに結合することによって、第２のタン
パク質を間接的に検出するために使用され得る。さらに、分泌されるタンパク質
は、細胞位置を輸送シグナルに基づいて標的化するので、分泌されることが示さ
れている本発明のポリペプチドは、他のタンパク質に一旦融合されると標的化分
子として使用され得る。
アミノ酸置換を超えず、さらにより好ましくは、４０アミノ酸置換を超えず、な
おより好ましくは、３０アミノ酸置換を超えず、そしてなおさらにより好ましく
は、２０アミノ酸置換を超えないアミノ酸配列を有するポリペプチドのアミノ酸
配列を含むポリペプチドに関する。もちろん、ポリペプチドは、好ましさの増大
する順番に、配列番号Ｙのポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列、配
列番号Ｘによりコードされるアミノ酸配列、および／または少なくとも１つのア
ミノ酸置換を含むが、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１アミノ
酸置換を超えないアミノ酸置換を含むｃＤＮＡプラスミドＺ中のｃＤＮＡにより
コードされるアミノ酸配列を有することが非常に好ましい。特定の実施形態にお
いて、配列番号Ｙのアミノ酸配列またはそのフラグメント（例えば、本明細書に
記載の成熟形態および／または他のフラグメント）、配列番号Ｘによりコードさ
れるアミノ酸配列またはそのフラグメント、ならびに／あるいはｃＤＮＡプラス
ミドＸＺによりコードされるアミノ酸配列またはそのフラグメントにおける付加
、置換、および／または欠失の数は、１〜５、５〜１０、５〜２５、５〜５０、
１０〜５０、または５０〜１５０であり、保存的アミノ酸置換が好ましい。本明
細書中で議論されるように、本発明の任意のポリペプチドは、融合タンパク質を
生成するために使用され得る。例えば、本発明のポリペプチドは、第２のタンパ
ク質と融合される場合、抗原性タグとして使用され得る。本発明のポリペプチド
に対して惹起される抗体は、ポリペプチドに結合することによって、第２のタン
パク質を間接的に検出するために使用され得る。さらに、分泌されるタンパク質
は、細胞位置を輸送シグナルに基づいて標的化するので、分泌されることが示さ
れている本発明のポリペプチドは、他のタンパク質に一旦融合されると標的化分
子として使用され得る。
【０１５１】
本発明のポリペプチドと融合され得るドメインの例は、異種シグナル配列のみ
ならず、また他の異種機能性領域をも含む。融合は、必ずしも直接的である必要
はないが、リンカー配列を介して起こり得る。
ならず、また他の異種機能性領域をも含む。融合は、必ずしも直接的である必要
はないが、リンカー配列を介して起こり得る。
【０１５２】
特定の好ましい実施形態において、本発明のタンパク質は、ポリペプチドがＮ
末端欠失変異体および／またはＣ末端欠失変異体である融合ポリペプチドを含む
。好ましい実施形態において、本出願は、特定のＮ末端欠失変異体およびＣ末端
欠失変異体のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする核酸配列に対して
、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または
９９％同一の核酸分子に関する。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチド（フラグメントおよび／または改変体を含む）はまた、本発明により宇含
まれる。
末端欠失変異体および／またはＣ末端欠失変異体である融合ポリペプチドを含む
。好ましい実施形態において、本出願は、特定のＮ末端欠失変異体およびＣ末端
欠失変異体のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする核酸配列に対して
、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または
９９％同一の核酸分子に関する。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチド（フラグメントおよび／または改変体を含む）はまた、本発明により宇含
まれる。
【０１５３】
さらに、融合タンパク質はまた、本発明のポリペプチドの特徴を改良するため
に操作され得る。例えば、さらなるアミノ酸、特に荷電アミノ酸の領域が、宿主
細胞からの精製または続く取り扱いおよび貯蔵の間の安定性ならびに持続性を改
良するためにポリペプチドのＮ末端に付加され得る。また、ペプチド部分は、精
製を容易にするためにポリペプチドに付加され得る。このような領域は、ポリペ
プチドの最終調製の前に除去され得る。ポリペプチドの取り扱いを容易にするた
めのペプチド部分の付加は、当該分野でよく知られ、そして慣用技術である。
に操作され得る。例えば、さらなるアミノ酸、特に荷電アミノ酸の領域が、宿主
細胞からの精製または続く取り扱いおよび貯蔵の間の安定性ならびに持続性を改
良するためにポリペプチドのＮ末端に付加され得る。また、ペプチド部分は、精
製を容易にするためにポリペプチドに付加され得る。このような領域は、ポリペ
プチドの最終調製の前に除去され得る。ポリペプチドの取り扱いを容易にするた
めのペプチド部分の付加は、当該分野でよく知られ、そして慣用技術である。
【０１５４】
当業者に理解されるように、本発明のポリペプチドおよび上記のエピトープ保
有フラグメントは、異種ポリペプチド配列と組合わされ得る。例えば、本発明の
ポリペプチドは、異種ポリペプチド配列に融合され得る。例えば、本発明のポリ
ペプチドは、免疫グロブリン（ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ）の定常ドメイ
ンまたはそれらの部分（ドメイン全体もしくはその部分の両方を含む、ＣＨ１、
ＣＨ２、ＣＨ３、およびそれらの任意の組み合わせ）と融合され得、キメラポリ
ペプチドを生じる。これらの融合タンパク質は、精製を容易にし、そしてインビ
ボでの半減期の増大を示す。１つの報告された例は、ヒトＣＤ４−ポリペプチド
の最初の２つのドメインおよび哺乳動物の免疫グロブリンの重鎖または軽鎖の定
常領域の種々のドメインからなるキメラタンパク質を記載する（ＥＰ ３９４，
８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，３３１：８４〜８６（１９８
８））。ＩｇＧに起因するジスルフィド結合二量体構造を有する融合タンパク質
はまた、単量体ポリペプチドまたはそれらのタンパク質フラグメント単独よりも
、他の分子の結合および中和においてより効果的であり得る（Ｆｏｕｎｔｏｕｌ
ａｋｉｓら，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２７０：３９５８−３９６４（１９９５）
）。
有フラグメントは、異種ポリペプチド配列と組合わされ得る。例えば、本発明の
ポリペプチドは、異種ポリペプチド配列に融合され得る。例えば、本発明のポリ
ペプチドは、免疫グロブリン（ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ）の定常ドメイ
ンまたはそれらの部分（ドメイン全体もしくはその部分の両方を含む、ＣＨ１、
ＣＨ２、ＣＨ３、およびそれらの任意の組み合わせ）と融合され得、キメラポリ
ペプチドを生じる。これらの融合タンパク質は、精製を容易にし、そしてインビ
ボでの半減期の増大を示す。１つの報告された例は、ヒトＣＤ４−ポリペプチド
の最初の２つのドメインおよび哺乳動物の免疫グロブリンの重鎖または軽鎖の定
常領域の種々のドメインからなるキメラタンパク質を記載する（ＥＰ ３９４，
８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，３３１：８４〜８６（１９８
８））。ＩｇＧに起因するジスルフィド結合二量体構造を有する融合タンパク質
はまた、単量体ポリペプチドまたはそれらのタンパク質フラグメント単独よりも
、他の分子の結合および中和においてより効果的であり得る（Ｆｏｕｎｔｏｕｌ
ａｋｉｓら，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２７０：３９５８−３９６４（１９９５）
）。
【０１５５】
（ベクター、宿主細胞、およびタンパク質産生）
本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドを含むベクター、宿主細胞、および
組換え技術によるポリペプチドの産生に関する。例えば、ベクターは、ファージ
ベクター、プラスミドベクター、ウイルスベクター、またはレトロウイルスベク
ターであり得る。レトロウイルスベクターは、複製コンピテント、または複製欠
損であり得る。後者の場合、一般にウイルス増殖は、宿主細胞を補完する（ｃｏ
ｍｐｌｅｍｅｎｔｉｎｇ）際にのみ生じる。
組換え技術によるポリペプチドの産生に関する。例えば、ベクターは、ファージ
ベクター、プラスミドベクター、ウイルスベクター、またはレトロウイルスベク
ターであり得る。レトロウイルスベクターは、複製コンピテント、または複製欠
損であり得る。後者の場合、一般にウイルス増殖は、宿主細胞を補完する（ｃｏ
ｍｐｌｅｍｅｎｔｉｎｇ）際にのみ生じる。
【０１５６】
本発明のポリヌクレオチドは、宿主における増殖のために選択マーカーを含む
ベクターに連結され得る。一般に、プラスミドベクターは、リン酸カルシウム沈
澱物のような沈澱物、または荷電脂質との複合体において導入される。ベクター
がウイルスである場合、ウイルスベクターは、適切なパッケージング細胞株を使
用してインビトロでパッケージングされ得、次いで宿主細胞に形質導入され得る
。
ベクターに連結され得る。一般に、プラスミドベクターは、リン酸カルシウム沈
澱物のような沈澱物、または荷電脂質との複合体において導入される。ベクター
がウイルスである場合、ウイルスベクターは、適切なパッケージング細胞株を使
用してインビトロでパッケージングされ得、次いで宿主細胞に形質導入され得る
。
【０１５７】
ポリヌクレオチド挿入物は、適切なプロモーター（いくつか挙げれば、例えば
、ファージλＰＬプロモーター、Ｅ．ｃｏｌｉ ｌａｃプロモーター、ｔｒｐプ
ロモーター、ｐｈｏＡプロモーターおよびｔａｃプロモーター、ＳＶ４０初期プ
ロモーターおよびＳＶ４０後期プロモーター、ならびにレトロウイルスＬＴＲの
プロモーター）に作動可能に連結されるべきである。他の適切なプロモーターは
当業者に公知である。発現構築物はさらに、転写開始、転写終結のための部位、
および転写領域において、翻訳のためのリボソーム結合部位を含む。構築物によ
って発現される転写物のコード部分は、好ましくは、始めに翻訳開始コドン、お
よび翻訳されるポリペプチドの末端に適切に位置される終結コドン（ＵＡＡ、Ｕ
ＧＡまたはＵＡＧ）を含む。
、ファージλＰＬプロモーター、Ｅ．ｃｏｌｉ ｌａｃプロモーター、ｔｒｐプ
ロモーター、ｐｈｏＡプロモーターおよびｔａｃプロモーター、ＳＶ４０初期プ
ロモーターおよびＳＶ４０後期プロモーター、ならびにレトロウイルスＬＴＲの
プロモーター）に作動可能に連結されるべきである。他の適切なプロモーターは
当業者に公知である。発現構築物はさらに、転写開始、転写終結のための部位、
および転写領域において、翻訳のためのリボソーム結合部位を含む。構築物によ
って発現される転写物のコード部分は、好ましくは、始めに翻訳開始コドン、お
よび翻訳されるポリペプチドの末端に適切に位置される終結コドン（ＵＡＡ、Ｕ
ＧＡまたはＵＡＧ）を含む。
【０１５８】
示されるように、発現ベクターは、好ましくは少なくとも１つの選択マーカー
を含む。このようなマーカーは、真核細胞培養のためのジヒドロ葉酸レダクター
ゼ、Ｇ４１８、またはネオマイシン耐性、ならびにＥ．ｃｏｌｉおよび他の細菌
において培養するためのテトラサイクリン、カナマイシンまたはアンピシリン耐
性遺伝子を含む。適切な宿主の代表的な例は、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ
、ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓおよびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉ
ｕｍ細胞）；酵母細胞のような真菌細胞（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅまたはＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ（ＡＴＣＣ登録
番号２０１１７８））；Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ Ｓ２およびＳｐｏｄｏｐｔｅｒ
ａ Ｓｆ９細胞のような昆虫細胞；ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、２９３細胞、およ
びＢｏｗｅｓメラノーマ細胞のような動物細胞；ならびに植物細胞を含むが、こ
れらに限定されない。上記の宿主細胞のための適切な培養培地および条件は、当
該分野で公知である。
を含む。このようなマーカーは、真核細胞培養のためのジヒドロ葉酸レダクター
ゼ、Ｇ４１８、またはネオマイシン耐性、ならびにＥ．ｃｏｌｉおよび他の細菌
において培養するためのテトラサイクリン、カナマイシンまたはアンピシリン耐
性遺伝子を含む。適切な宿主の代表的な例は、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ
、ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓおよびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉ
ｕｍ細胞）；酵母細胞のような真菌細胞（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅまたはＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ（ＡＴＣＣ登録
番号２０１１７８））；Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ Ｓ２およびＳｐｏｄｏｐｔｅｒ
ａ Ｓｆ９細胞のような昆虫細胞；ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、２９３細胞、およ
びＢｏｗｅｓメラノーマ細胞のような動物細胞；ならびに植物細胞を含むが、こ
れらに限定されない。上記の宿主細胞のための適切な培養培地および条件は、当
該分野で公知である。
【０１５９】
細菌における使用のために好ましいベクターの中には、ｐＱＥ７０、ｐＱＥ６
０およびｐＱＥ−９（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．から入手可能）；ｐＢｌｕｅｓｃ
ｒｉｐｔベクター、Ｐｈａｇｅｓｃｒｉｐｔベクター、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１６
ａ、ｐＮＨ１８Ａ、ｐＮＨ４６Ａ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓ
ｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．から入手可能）；ならびにｐｔｒｃ９９ａ、ｐＫＫ２２
３−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤＲ５４０、ｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ
Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．から入手可能）を含む。好ましい真核生物ベクターの
中には、ｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１およびｐＳＧ（
Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能）；ならびにｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳ
ＧおよびｐＳＶＬ（Ｐｈａｒｍａｃｉａから入手可能）がある。酵母系における
使用のために好ましいベクターは、ｐＹＥＳ２、ｐＹＤ１、ｐＴＥＦ１／Ｚｅｏ
、ｐＹＥＳ２／ＧＳ、ｐＰＩＣＺ、ｐＧＡＰＺ、ｐＧＡＰＺａｌｐｈ、ｐＰＩＣ
９、ｐＰＩＣ３．５、ｐＨＩＬ−Ｄ２、ｐＨＩＬ−Ｓ１、ｐＰＩＣ３．５Ｋ、ｐ
ＰＩＣ９Ｋ、およびＰＡＯ８１５（全てＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｂａｄ
，ＣＡから入手可能）が挙げられるが、これらに限定されない。他の適切なベク
ターは当業者に容易に明らかである。
０およびｐＱＥ−９（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．から入手可能）；ｐＢｌｕｅｓｃ
ｒｉｐｔベクター、Ｐｈａｇｅｓｃｒｉｐｔベクター、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１６
ａ、ｐＮＨ１８Ａ、ｐＮＨ４６Ａ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓ
ｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．から入手可能）；ならびにｐｔｒｃ９９ａ、ｐＫＫ２２
３−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤＲ５４０、ｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ
Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．から入手可能）を含む。好ましい真核生物ベクターの
中には、ｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１およびｐＳＧ（
Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能）；ならびにｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳ
ＧおよびｐＳＶＬ（Ｐｈａｒｍａｃｉａから入手可能）がある。酵母系における
使用のために好ましいベクターは、ｐＹＥＳ２、ｐＹＤ１、ｐＴＥＦ１／Ｚｅｏ
、ｐＹＥＳ２／ＧＳ、ｐＰＩＣＺ、ｐＧＡＰＺ、ｐＧＡＰＺａｌｐｈ、ｐＰＩＣ
９、ｐＰＩＣ３．５、ｐＨＩＬ−Ｄ２、ｐＨＩＬ−Ｓ１、ｐＰＩＣ３．５Ｋ、ｐ
ＰＩＣ９Ｋ、およびＰＡＯ８１５（全てＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｂａｄ
，ＣＡから入手可能）が挙げられるが、これらに限定されない。他の適切なベク
ターは当業者に容易に明らかである。
【０１６０】
宿主細胞への構築物の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥ
ＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフ
ェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染、または他の方法によっ
てもたらされ得る。このような方法は、Ｄａｖｉｓら、Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （１９８６）のような多く
の標準的な研究室マニュアルに記載される。本発明のポリペプチドは、実際、組
換えベクターを欠損する宿主細胞によって発現され得ることが特に意図される。
ＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフ
ェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染、または他の方法によっ
てもたらされ得る。このような方法は、Ｄａｖｉｓら、Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （１９８６）のような多く
の標準的な研究室マニュアルに記載される。本発明のポリペプチドは、実際、組
換えベクターを欠損する宿主細胞によって発現され得ることが特に意図される。
【０１６１】
本発明のポリペプチドは、硫酸アンモニウム沈澱またはエタノール沈澱、酸抽
出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマ
トグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグ
ラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマト
グラフィーを含む周知の方法によって組換え細胞培養物から回収され得、そして
精製され得る。最も好ましくは、高速液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）
が精製のために使用される。
出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマ
トグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグ
ラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマト
グラフィーを含む周知の方法によって組換え細胞培養物から回収され得、そして
精製され得る。最も好ましくは、高速液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）
が精製のために使用される。
【０１６２】
本発明のポリペプチドはまた、以下から回収され得る：直接単離されるかまた
は培養されるかにかかわらず、体液、組織および細胞を含む天然の供給源から精
製される産物；化学的合成手順の産物；ならびに、例えば、細菌細胞、酵母細胞
、高等植物細胞、昆虫細胞、および哺乳動物細胞を含む、原核生物宿主または真
核生物宿主から組換え技術によって産生された産物。組換え産生手順において使
用される宿主に依存して、本発明のポリペプチドは、グリコシル化されてもよく
、またはグリコシル化されていなくてもよい。さらに、本発明のポリペプチドは
また、宿主媒介プロセスの結果として、いくつかの場合において、最初の改変さ
れたメチオニン残基を含み得る。従って、一般に、翻訳開始コドンによってコー
ドされるＮ末端メチオニンが、すべての真核生物細胞における翻訳後の任意のタ
ンパク質から高い効率で除去されることが、当該分野において周知である。ほと
んどのタンパク質においてＮ末端メチオニンはまた、ほとんどの原核生物におい
て効率的に除去されるが、いくつかのタンパク質について、この原核生物除去プ
ロセスは、Ｎ末端メチオニンが共有結合するアミノ酸の性質に依存して、非効率
的である。
は培養されるかにかかわらず、体液、組織および細胞を含む天然の供給源から精
製される産物；化学的合成手順の産物；ならびに、例えば、細菌細胞、酵母細胞
、高等植物細胞、昆虫細胞、および哺乳動物細胞を含む、原核生物宿主または真
核生物宿主から組換え技術によって産生された産物。組換え産生手順において使
用される宿主に依存して、本発明のポリペプチドは、グリコシル化されてもよく
、またはグリコシル化されていなくてもよい。さらに、本発明のポリペプチドは
また、宿主媒介プロセスの結果として、いくつかの場合において、最初の改変さ
れたメチオニン残基を含み得る。従って、一般に、翻訳開始コドンによってコー
ドされるＮ末端メチオニンが、すべての真核生物細胞における翻訳後の任意のタ
ンパク質から高い効率で除去されることが、当該分野において周知である。ほと
んどのタンパク質においてＮ末端メチオニンはまた、ほとんどの原核生物におい
て効率的に除去されるが、いくつかのタンパク質について、この原核生物除去プ
ロセスは、Ｎ末端メチオニンが共有結合するアミノ酸の性質に依存して、非効率
的である。
【０１６３】
１つの実施形態において、酵母Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓは、真核細胞
系において、本発明のポリペプチドを発現させるために使用される。Ｐｉｃｈｉ
ａ ｐａｓｔｏｒｉｓは、メタノールをその唯一の炭素供給源として代謝し得る
メチル栄養性（ｍｅｔｈｙｌｏｔｒｏｐｈｉｃ）酵母である。メタノール代謝経
路における主要な工程は、Ｏ2を使用してのホルムアルデヒドへのメタノールの
酸化である。この反応は、酵素アルコールオキシダーゼによって触媒される。そ
の唯一の炭素供給源としてメタノールを代謝するために、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓ
ｔｏｒｉｓは、Ｏ2に対するアルコールオキシダーゼの比較的低い親和性に部分
的に起因して、高レベルのアルコールオキシダーゼを生成する。結果的に、主要
な炭素供給源としてメタノールに依存する増殖培地において、２つのアルコール
オキシダーゼ遺伝子（ＡＯＸ１）のうちの１つのプロモーター領域は、非常に活
性である。メタノールの存在下で、ＡＯＸ１遺伝子から産生されるアルコールオ
キシダーゼは、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓにおける総可溶性タンパク質の
うちのおよそ３０％までを含む。Ｅｌｌｉｓ，Ｓ．Ｂ．ら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．
Ｂｉｏｌ．５：１１１１〜２１（１９８５）；Ｋｏｕｔｚ，Ｐ．Ｊ．ら、Ｙｅａ
ｓｔ ５：１６７〜７７（１９８９）；Ｔｓｃｈｏｐｐ，Ｊ．Ｆ．ら、Ｎｕｃｌ
．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１５：３８５９〜７６（１９８７）。従って、ＡＯＸ１
調節配列の全てまたは一部の転写調節下の異種コード配列（例えば、本発明のポ
リヌクレオチドなど）は、メタノールの存在下で増殖したＰｉｃｈｉａ酵母にお
いて、指数関数的に高レベルで発現される。
系において、本発明のポリペプチドを発現させるために使用される。Ｐｉｃｈｉ
ａ ｐａｓｔｏｒｉｓは、メタノールをその唯一の炭素供給源として代謝し得る
メチル栄養性（ｍｅｔｈｙｌｏｔｒｏｐｈｉｃ）酵母である。メタノール代謝経
路における主要な工程は、Ｏ2を使用してのホルムアルデヒドへのメタノールの
酸化である。この反応は、酵素アルコールオキシダーゼによって触媒される。そ
の唯一の炭素供給源としてメタノールを代謝するために、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓ
ｔｏｒｉｓは、Ｏ2に対するアルコールオキシダーゼの比較的低い親和性に部分
的に起因して、高レベルのアルコールオキシダーゼを生成する。結果的に、主要
な炭素供給源としてメタノールに依存する増殖培地において、２つのアルコール
オキシダーゼ遺伝子（ＡＯＸ１）のうちの１つのプロモーター領域は、非常に活
性である。メタノールの存在下で、ＡＯＸ１遺伝子から産生されるアルコールオ
キシダーゼは、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓにおける総可溶性タンパク質の
うちのおよそ３０％までを含む。Ｅｌｌｉｓ，Ｓ．Ｂ．ら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．
Ｂｉｏｌ．５：１１１１〜２１（１９８５）；Ｋｏｕｔｚ，Ｐ．Ｊ．ら、Ｙｅａ
ｓｔ ５：１６７〜７７（１９８９）；Ｔｓｃｈｏｐｐ，Ｊ．Ｆ．ら、Ｎｕｃｌ
．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１５：３８５９〜７６（１９８７）。従って、ＡＯＸ１
調節配列の全てまたは一部の転写調節下の異種コード配列（例えば、本発明のポ
リヌクレオチドなど）は、メタノールの存在下で増殖したＰｉｃｈｉａ酵母にお
いて、指数関数的に高レベルで発現される。
【０１６４】
１つの例において、プラスミドベクターｐＰＩＣ９Ｋは、「Ｐｉｃｈｉａ Ｐ
ｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ」，Ｄ．Ｒ．ＨｉｇｇｉｎｓおよびＪ．Ｃｒｅｇｇ編（Ｔｈｅ Ｈｕｍａｎａ
Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，１９９８）において本質的に記載されるよ
うに、Ｐｉｃｈｅａ酵母系において、本明細書中に示されるように本発明のポリ
ペプチドをコードするＤＮＡを発現させるために使用される。この発現ベクター
は、マルチクローニング部位の上流に位置するＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ
アルカリホスファターゼ（ＰＨＯ）分泌シグナルペプチド（すなわち、リーダー
）に連結された強力なＡＯＸ１プロモーターによって、本発明のタンパク質の発
現および分泌を可能にする。
ｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ」，Ｄ．Ｒ．ＨｉｇｇｉｎｓおよびＪ．Ｃｒｅｇｇ編（Ｔｈｅ Ｈｕｍａｎａ
Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，１９９８）において本質的に記載されるよ
うに、Ｐｉｃｈｅａ酵母系において、本明細書中に示されるように本発明のポリ
ペプチドをコードするＤＮＡを発現させるために使用される。この発現ベクター
は、マルチクローニング部位の上流に位置するＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ
アルカリホスファターゼ（ＰＨＯ）分泌シグナルペプチド（すなわち、リーダー
）に連結された強力なＡＯＸ１プロモーターによって、本発明のタンパク質の発
現および分泌を可能にする。
【０１６５】
多くの他の酵母ベクター（例えば、ｐＹＥＳ２、ｐＹＤ１、ｐＴＥＦ１／Ｚｅ
ｏ、ｐＹＥＳ２／ＧＳ、ｐＰＩＣＺ、ｐＧＡＰＺ、ｐＧＡＰＺａｌｐｈａ、ｐＰ
ＩＣ９、ｐＰＩＣ３．５、ｐＨＩＬ−Ｄ２、ｐＨＩＬ−Ｓ１、ｐＰＩＣ３．５Ｋ
、およびＰＡＯ８１５）は、当業者が容易に理解するように、提案された発現構
築物が必要とされる場合インフレームのＡＵＧを含む転写、翻訳、分泌（所望さ
れる場合）などの適切に配置されたシグナルを提供する限り、ｐＰＩＣ９Ｋの代
わりに使用され得る。
ｏ、ｐＹＥＳ２／ＧＳ、ｐＰＩＣＺ、ｐＧＡＰＺ、ｐＧＡＰＺａｌｐｈａ、ｐＰ
ＩＣ９、ｐＰＩＣ３．５、ｐＨＩＬ−Ｄ２、ｐＨＩＬ−Ｓ１、ｐＰＩＣ３．５Ｋ
、およびＰＡＯ８１５）は、当業者が容易に理解するように、提案された発現構
築物が必要とされる場合インフレームのＡＵＧを含む転写、翻訳、分泌（所望さ
れる場合）などの適切に配置されたシグナルを提供する限り、ｐＰＩＣ９Ｋの代
わりに使用され得る。
【０１６６】
別の実施形態において、異種コード配列（例えば、本発明のポリヌクレオチド
など）の高レベルの発現は、本発明の異種ポリヌクレオチドを発現ベクター（例
えば、ｐＧＡＰＺまたはｐＧＡＰＺａｌｐｈａなど）中にクローニングし、そし
てメタノールの非存在下で酵母培養物を増殖させることによって達成され得る。
など）の高レベルの発現は、本発明の異種ポリヌクレオチドを発現ベクター（例
えば、ｐＧＡＰＺまたはｐＧＡＰＺａｌｐｈａなど）中にクローニングし、そし
てメタノールの非存在下で酵母培養物を増殖させることによって達成され得る。
【０１６７】
本明細書において議論されるベクター構築物を含む宿主細胞を含むことに加え
て、本発明はまた、脊椎動物起源（特に、哺乳動物起源）の一次（ｐｒｉｍａｒ
ｙ）宿主細胞、二次（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ）宿主細胞、および不死化宿主細胞を
含む。これらの宿主細胞は、内因性の遺伝物質（例えば、コード配列）を欠失ま
たは置換するように操作されており、そして／あるいは本発明のポリヌクレオチ
ドと作動可能に連結された遺伝物質（例えば、異種ポリヌクレオチド配列）を含
むように操作され、そして内因性のポリヌクレオチドを活性化、変更、および／
または増幅する。例えば、当該分野で公知の技術は、相同組換えを介して、異種
制御領域（例えば、プロモーターおよび／またはエンハンサー）ならびに内因性
ポリヌクレオチド配列を作動可能に連結するために使用され得る（例えば、１９
９７年６月２４日に発行された米国特許第５，６４１，６７０号；１９９６年９
月２６日に公開された国際公開第ＷＯ ９６／２９４１１号；１９９４年８月４
日に公開された国際公開第ＷＯ ９４／１２６５０号；Ｋｏｌｌｅｒら，Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９３２−８９３５（１９８
９）；およびＺｉｊｌｓｔｒａら，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５−４３８（１
９８９）を参照のこと。これらの開示の各々は、それら全体において参考として
援用される）。
て、本発明はまた、脊椎動物起源（特に、哺乳動物起源）の一次（ｐｒｉｍａｒ
ｙ）宿主細胞、二次（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ）宿主細胞、および不死化宿主細胞を
含む。これらの宿主細胞は、内因性の遺伝物質（例えば、コード配列）を欠失ま
たは置換するように操作されており、そして／あるいは本発明のポリヌクレオチ
ドと作動可能に連結された遺伝物質（例えば、異種ポリヌクレオチド配列）を含
むように操作され、そして内因性のポリヌクレオチドを活性化、変更、および／
または増幅する。例えば、当該分野で公知の技術は、相同組換えを介して、異種
制御領域（例えば、プロモーターおよび／またはエンハンサー）ならびに内因性
ポリヌクレオチド配列を作動可能に連結するために使用され得る（例えば、１９
９７年６月２４日に発行された米国特許第５，６４１，６７０号；１９９６年９
月２６日に公開された国際公開第ＷＯ ９６／２９４１１号；１９９４年８月４
日に公開された国際公開第ＷＯ ９４／１２６５０号；Ｋｏｌｌｅｒら，Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９３２−８９３５（１９８
９）；およびＺｉｊｌｓｔｒａら，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５−４３８（１
９８９）を参照のこと。これらの開示の各々は、それら全体において参考として
援用される）。
【０１６８】
さらに、本発明のポリペプチドは、当該分野で公知の技術を用いて化学合成さ
れ得る（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，１９８３，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕ
ｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｗ．Ｈ．
Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．，Ｎ．Ｙ．およびＨｕｎｋａｐｉｌｌｅｒら，Ｎａ
ｔｕｒｅ，３１０：１０５−１１１（１９８４）を参照のこと）。例えば、本発
明のポリペプチド配列のフラグメントに対応するポリペプチドは、ペプチド合成
機の使用により合成され得る。さらに、所望の場合、非古典的アミノ酸または化
学的アミノ酸アナログが、置換または付加としてこのポリペプチド配列に導入さ
れ得る。非古典的アミノ酸としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない
：通常のアミノ酸のＤ異性体、２，４−ジアミノ酪酸、ａ−アミノイソ酪酸、４
−アミノ酪酸、Ａｂｕ、２−アミノ酪酸、ｇ−Ａｂｕ、ｅ−Ａｈｘ、６−アミノ
ヘキサン酸、Ａｉｂ、２−アミノイソ酪酸、３−アミノプロピオン酸、オルニチ
ン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン
、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、
フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、ｂ−アラニン、フルオロアミノ酸
、デザイナーアミノ酸（例えば、ｂ−メチルアミノ酸）、Ｃａ−メチルアミノ酸
、Ｎａ−メチルアミノ酸、および一般のアミノ酸アナログ。さらに、アミノ酸は
Ｄ（右旋性）またはＬ（左旋性）であり得る。
れ得る（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，１９８３，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕ
ｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｗ．Ｈ．
Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．，Ｎ．Ｙ．およびＨｕｎｋａｐｉｌｌｅｒら，Ｎａ
ｔｕｒｅ，３１０：１０５−１１１（１９８４）を参照のこと）。例えば、本発
明のポリペプチド配列のフラグメントに対応するポリペプチドは、ペプチド合成
機の使用により合成され得る。さらに、所望の場合、非古典的アミノ酸または化
学的アミノ酸アナログが、置換または付加としてこのポリペプチド配列に導入さ
れ得る。非古典的アミノ酸としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない
：通常のアミノ酸のＤ異性体、２，４−ジアミノ酪酸、ａ−アミノイソ酪酸、４
−アミノ酪酸、Ａｂｕ、２−アミノ酪酸、ｇ−Ａｂｕ、ｅ−Ａｈｘ、６−アミノ
ヘキサン酸、Ａｉｂ、２−アミノイソ酪酸、３−アミノプロピオン酸、オルニチ
ン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン
、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、
フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、ｂ−アラニン、フルオロアミノ酸
、デザイナーアミノ酸（例えば、ｂ−メチルアミノ酸）、Ｃａ−メチルアミノ酸
、Ｎａ−メチルアミノ酸、および一般のアミノ酸アナログ。さらに、アミノ酸は
Ｄ（右旋性）またはＬ（左旋性）であり得る。
【０１６９】
本発明は、翻訳の間または翻訳後に、例えば、グリコシル化、アセチル化、リ
ン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質
分解切断、抗体分子または他の細胞性リガンドへの結合などによって示差的に改
変される本発明のポリペプチドを含む。任意の多数の化学的改変は、以下を含む
がこれらに限定されない公知の技術によって実施され得る：臭化シアン、トリプ
シン、キモトリプシン、パパイン、Ｖ８プロテアーゼ、ＮａＢＨ4による特異的
化学的切断；アセチル化、ホルミル化、酸化、還元；ツニカマイシンの存在下で
の代謝合成；など。
ン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質
分解切断、抗体分子または他の細胞性リガンドへの結合などによって示差的に改
変される本発明のポリペプチドを含む。任意の多数の化学的改変は、以下を含む
がこれらに限定されない公知の技術によって実施され得る：臭化シアン、トリプ
シン、キモトリプシン、パパイン、Ｖ８プロテアーゼ、ＮａＢＨ4による特異的
化学的切断；アセチル化、ホルミル化、酸化、還元；ツニカマイシンの存在下で
の代謝合成；など。
【０１７０】
本発明によって含まれるさらなる翻訳後修飾としては、例えば、以下などが挙
げられる：Ｎ結合型もしくはＯ結合型の炭水化物鎖（Ｎ末端またはＣ末端のプロ
セシング）、アミノ酸バックボーンへの化学部分の結合、Ｎ結合型もしくはＯ結
合型の炭水化物鎖の化学修飾、および原核生物宿主細胞発現の結果としてのＮ末
端メチオニン残基の付加もしくは欠失。このポリペプチドはまた、検出可能な標
識（例えば、酵素標識、蛍光標識、同位体標識または親和性標識）を用いて改変
して、このタンパク質の検出および単離が可能にされ得る。
げられる：Ｎ結合型もしくはＯ結合型の炭水化物鎖（Ｎ末端またはＣ末端のプロ
セシング）、アミノ酸バックボーンへの化学部分の結合、Ｎ結合型もしくはＯ結
合型の炭水化物鎖の化学修飾、および原核生物宿主細胞発現の結果としてのＮ末
端メチオニン残基の付加もしくは欠失。このポリペプチドはまた、検出可能な標
識（例えば、酵素標識、蛍光標識、同位体標識または親和性標識）を用いて改変
して、このタンパク質の検出および単離が可能にされ得る。
【０１７１】
本発明によってまた、さらなる利点（例えば、このポリペプチドの溶解度、安
定性および循環時間の増加、または免疫原性の減少）を提供し得る、本発明のポ
リペプチドの化学修飾誘導体が提供される（米国特許第４，１７９，３３７号を
参照のこと）。誘導体化のための化学部分は、水溶性ポリマー（例えば、ポリエ
チレングリコール、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、カ
ルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコールなど）から選
択され得る。このポリペプチドは、この分子内のランダムな位置で、またはこの
分子内の所定の位置で改変され得、そして１、２、３以上の結合した化学部分を
含み得る。
定性および循環時間の増加、または免疫原性の減少）を提供し得る、本発明のポ
リペプチドの化学修飾誘導体が提供される（米国特許第４，１７９，３３７号を
参照のこと）。誘導体化のための化学部分は、水溶性ポリマー（例えば、ポリエ
チレングリコール、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、カ
ルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコールなど）から選
択され得る。このポリペプチドは、この分子内のランダムな位置で、またはこの
分子内の所定の位置で改変され得、そして１、２、３以上の結合した化学部分を
含み得る。
【０１７２】
このポリマーは、任意の分子量のポリマーであり得、そして分枝状であっても
非分枝状であってもよい。ポリエチレングリコールに関しては、好ましい分子量
は、取り扱いおよび製造の容易さのために、約１ｋＤａと約１００ｋＤａとの間
（用語「約」は、ポリエチレングリコールの調製において、いくつかの分子は示
した分子量よりも重く、いくつかは示した分子量よりも軽いことを示す）である
。所望の治療的プロフィール（例えば、所望される持続放出の持続時間、ある場
合には生物学的活性に対する効果、取り扱いの容易さ、抗原性の程度または抗原
性がないこと、および治療タンパク質またはアナログに対するポリエチレングリ
コールの他の公知の効果）に依存して、他のサイズが用いられ得る。例えば、ポ
リエチレングリコールは、約２００、５００、１０００、１５００、２０００、
２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００、５５００、６
０００、６５００、７０００、７５００、８０００、８５００、９０００、９５
００、１０，０００、１０，５００、１１，０００、１１，５００、１２，００
０、１２，５００、１３，０００、１３，５００、１４，０００、１４，５００
、１５，０００、１５，５００、１６，０００、１６，５００、１７，０００、
１７，５００、１８，０００、１８，５００、１９，０００、１９，５００、２
０，０００、２５，０００、３０，０００、３５，０００、４０，０００、５０
，０００、５５，０００、６０，０００、６５，０００、７０，０００、７５，
０００、８０，０００、８５，０００、９０，０００、９５，０００、または１
００，０００ｋＤａの平均分子量を有し得る。
非分枝状であってもよい。ポリエチレングリコールに関しては、好ましい分子量
は、取り扱いおよび製造の容易さのために、約１ｋＤａと約１００ｋＤａとの間
（用語「約」は、ポリエチレングリコールの調製において、いくつかの分子は示
した分子量よりも重く、いくつかは示した分子量よりも軽いことを示す）である
。所望の治療的プロフィール（例えば、所望される持続放出の持続時間、ある場
合には生物学的活性に対する効果、取り扱いの容易さ、抗原性の程度または抗原
性がないこと、および治療タンパク質またはアナログに対するポリエチレングリ
コールの他の公知の効果）に依存して、他のサイズが用いられ得る。例えば、ポ
リエチレングリコールは、約２００、５００、１０００、１５００、２０００、
２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００、５５００、６
０００、６５００、７０００、７５００、８０００、８５００、９０００、９５
００、１０，０００、１０，５００、１１，０００、１１，５００、１２，００
０、１２，５００、１３，０００、１３，５００、１４，０００、１４，５００
、１５，０００、１５，５００、１６，０００、１６，５００、１７，０００、
１７，５００、１８，０００、１８，５００、１９，０００、１９，５００、２
０，０００、２５，０００、３０，０００、３５，０００、４０，０００、５０
，０００、５５，０００、６０，０００、６５，０００、７０，０００、７５，
０００、８０，０００、８５，０００、９０，０００、９５，０００、または１
００，０００ｋＤａの平均分子量を有し得る。
【０１７３】
上記のように、ポリエチレングリコールは、分枝構造を有し得る。分枝したポ
リエチレングリコールは、例えば、米国特許第５，６４３，５７５号；Ｍｏｒｐ
ｕｒｇｏら，Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．５６：５９〜
７２（１９９６）；Ｖｏｒｏｂｊｅｖら，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅ
ｏｔｉｄｅｓ １８：２７４５〜２７５０（１９９９）；およびＣａｌｉｃｅｔ
ｉら，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１０：６３８〜６４６（１９９９）（こ
のそれぞれの開示は本明細書において参考として援用されている）に記載されて
いる。
リエチレングリコールは、例えば、米国特許第５，６４３，５７５号；Ｍｏｒｐ
ｕｒｇｏら，Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．５６：５９〜
７２（１９９６）；Ｖｏｒｏｂｊｅｖら，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅ
ｏｔｉｄｅｓ １８：２７４５〜２７５０（１９９９）；およびＣａｌｉｃｅｔ
ｉら，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１０：６３８〜６４６（１９９９）（こ
のそれぞれの開示は本明細書において参考として援用されている）に記載されて
いる。
【０１７４】
ポリエチレングリコール分子（または他の化学的部分）は、このタンパク質の
機能的ドメインまたは抗原性ドメインに対する効果を考慮してタンパク質に結合
されるべきである。当業者に利用可能な多数の結合方法が存在する（例えば、本
明細書中に参考として援用される、ＥＰ ０ ４０１ ３８４（Ｇ−ＣＳＦにＰ
ＥＧを結合する）、Ｍａｌｉｋら，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２０：１０２８−
１０３５（１９９２）（塩化トレシルを用いたＧＭ−ＣＳＦのペグ化（ｐｅｇｙ
ｌａｔｉｏｎ）を報告する）もまた参照のこと）。例えば、ポリエチレングリコ
ールは、反応性基（例えば、遊離のアミノ基またはカルボキシル基）によってア
ミノ酸残基を介して共有結合され得る。反応性基は、活性化ポリエチレングリコ
ール分子が結合し得る基である。遊離のアミノ基を有するアミノ酸残基としては
、リジン残基およびＮ末端アミノ酸残基が挙げられ得る；遊離のカルボキシル基
を有するアミノ酸残基としては、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基および
Ｃ末端アミノ酸残基が挙げられ得る。スルフヒドリル残基もまた、ポリエチレン
グリコール分子を結合するための反応性基として用いられ得る。治療目的のため
に好ましいのは、アミノ基での結合、例えば、Ｎ末端またはリジン基での結合で
ある。
機能的ドメインまたは抗原性ドメインに対する効果を考慮してタンパク質に結合
されるべきである。当業者に利用可能な多数の結合方法が存在する（例えば、本
明細書中に参考として援用される、ＥＰ ０ ４０１ ３８４（Ｇ−ＣＳＦにＰ
ＥＧを結合する）、Ｍａｌｉｋら，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２０：１０２８−
１０３５（１９９２）（塩化トレシルを用いたＧＭ−ＣＳＦのペグ化（ｐｅｇｙ
ｌａｔｉｏｎ）を報告する）もまた参照のこと）。例えば、ポリエチレングリコ
ールは、反応性基（例えば、遊離のアミノ基またはカルボキシル基）によってア
ミノ酸残基を介して共有結合され得る。反応性基は、活性化ポリエチレングリコ
ール分子が結合し得る基である。遊離のアミノ基を有するアミノ酸残基としては
、リジン残基およびＮ末端アミノ酸残基が挙げられ得る；遊離のカルボキシル基
を有するアミノ酸残基としては、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基および
Ｃ末端アミノ酸残基が挙げられ得る。スルフヒドリル残基もまた、ポリエチレン
グリコール分子を結合するための反応性基として用いられ得る。治療目的のため
に好ましいのは、アミノ基での結合、例えば、Ｎ末端またはリジン基での結合で
ある。
【０１７５】
Ｎ末端で化学修飾されたタンパク質を具体的に所望し得る。ポリエチレングリ
コールを本発明の組成の例示として用いて、種々のポリエチレングリコール分子
から（分子量、分枝などによって）、反応混合物中でのポリエチレングリコール
分子のタンパク質（ポリペプチド）分子に対する比、行われるべきペグ化反応の
型、および選択されたＮ末端ペグ化タンパク質の獲得方法を選択し得る。Ｎ末端
ペグ化調製物の獲得方法（すなわち、必要な場合、この部分を他のモノペグ化部
分から分離すること）は、ペグ化タンパク質分子の集団からの、Ｎ末端ペグ化物
質の精製により行われ得る。Ｎ末端修飾で化学修飾された選択的タンパク質は、
特定のタンパク質における誘導体化に利用可能な異なる型の第１級アミノ基（リ
ジン対Ｎ末端）の示差的反応性を利用する還元的アルキル化によって達成され得
る。適切な反応条件下では、カルボニル基含有ポリマーを用いた、Ｎ末端でのタ
ンパク質の実質的に選択的な誘導体化が達成される。
コールを本発明の組成の例示として用いて、種々のポリエチレングリコール分子
から（分子量、分枝などによって）、反応混合物中でのポリエチレングリコール
分子のタンパク質（ポリペプチド）分子に対する比、行われるべきペグ化反応の
型、および選択されたＮ末端ペグ化タンパク質の獲得方法を選択し得る。Ｎ末端
ペグ化調製物の獲得方法（すなわち、必要な場合、この部分を他のモノペグ化部
分から分離すること）は、ペグ化タンパク質分子の集団からの、Ｎ末端ペグ化物
質の精製により行われ得る。Ｎ末端修飾で化学修飾された選択的タンパク質は、
特定のタンパク質における誘導体化に利用可能な異なる型の第１級アミノ基（リ
ジン対Ｎ末端）の示差的反応性を利用する還元的アルキル化によって達成され得
る。適切な反応条件下では、カルボニル基含有ポリマーを用いた、Ｎ末端でのタ
ンパク質の実質的に選択的な誘導体化が達成される。
【０１７６】
本発明のポリペプチドは、モノマーまたはマルチマー（すなわち、ダイマー、
トリマー、テトラマーおよびより高度のマルチマー）であり得る。従って、本発
明は、モノマーおよびマルチマーの本発明のポリペプチド、それらの調製ならび
にそれらを含む組成物（好ましくは薬学的組成物）に関する。特定の実施形態で
は、本発明のポリペプチドは、モノマー、ダイマー、トリマーまたはテトラマー
である。さらなる実施形態では、本発明のマルチマーは、少なくともダイマー、
少なくともトリマー、または少なくともテトラマーである。
トリマー、テトラマーおよびより高度のマルチマー）であり得る。従って、本発
明は、モノマーおよびマルチマーの本発明のポリペプチド、それらの調製ならび
にそれらを含む組成物（好ましくは薬学的組成物）に関する。特定の実施形態で
は、本発明のポリペプチドは、モノマー、ダイマー、トリマーまたはテトラマー
である。さらなる実施形態では、本発明のマルチマーは、少なくともダイマー、
少なくともトリマー、または少なくともテトラマーである。
【０１７７】
本発明によって含まれるマルチマーは、ホモマーまたはヘテロマーであり得る
。本明細書中で用いられる場合、用語ホモマーは、（本明細書中に記載されるポ
リペプチドの、フラグメント、改変体、および融合タンパク質を含む）歯合い列
番号Ｙのアミノ酸配列または配列番号Ｘもしくは配列番号Ｘの相補体によってコ
ードされるアミノ酸配列および／あるいはｃＤＮＡプラスミド：Ｚによってコー
ドされるアミノ酸配列に対応するポリペプチドのみを含むマルチマーをいう。こ
れらのホモマーは、同一または異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み
得る。特定の実施形態では、本発明のホモマーは、同一のアミノ酸配列を有する
ポリペプチドのみを含むマルチマーである。別の特定の実施形態では、本発明の
ホモマーは、異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むマルチマーである
。特定の実施形態では、本発明のマルチマーは、ホモダイマー（例えば、同一ま
たは異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む）あるいはホモトリマー（
例えば、同一または異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む）である。
さらなる実施形態では、本発明のホモマー性マルチマーは、少なくともホモダイ
マー、少なくともホモトリマーまたは少なくともホモテトラマーである。
。本明細書中で用いられる場合、用語ホモマーは、（本明細書中に記載されるポ
リペプチドの、フラグメント、改変体、および融合タンパク質を含む）歯合い列
番号Ｙのアミノ酸配列または配列番号Ｘもしくは配列番号Ｘの相補体によってコ
ードされるアミノ酸配列および／あるいはｃＤＮＡプラスミド：Ｚによってコー
ドされるアミノ酸配列に対応するポリペプチドのみを含むマルチマーをいう。こ
れらのホモマーは、同一または異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み
得る。特定の実施形態では、本発明のホモマーは、同一のアミノ酸配列を有する
ポリペプチドのみを含むマルチマーである。別の特定の実施形態では、本発明の
ホモマーは、異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むマルチマーである
。特定の実施形態では、本発明のマルチマーは、ホモダイマー（例えば、同一ま
たは異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む）あるいはホモトリマー（
例えば、同一または異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む）である。
さらなる実施形態では、本発明のホモマー性マルチマーは、少なくともホモダイ
マー、少なくともホモトリマーまたは少なくともホモテトラマーである。
【０１７８】
本明細書中で用いられる場合、用語ヘテロマーとは、本発明のポリペプチドに
加えて１以上の異種ポリペプチド（すなわち、異なるタンパク質のポリペプチド
）を含むマルチマーをいう。特定の実施形態では、本発明のマルチマーは、ヘテ
ロダイマー、ヘテロトリマーまたはヘテロテトラマーである。さらなる実施形態
では、本発明のヘテロマー性マルチマーは、少なくともヘテロダイマー、少なく
ともヘテロトリマーまたは少なくともヘテロテトラマーである。
加えて１以上の異種ポリペプチド（すなわち、異なるタンパク質のポリペプチド
）を含むマルチマーをいう。特定の実施形態では、本発明のマルチマーは、ヘテ
ロダイマー、ヘテロトリマーまたはヘテロテトラマーである。さらなる実施形態
では、本発明のヘテロマー性マルチマーは、少なくともヘテロダイマー、少なく
ともヘテロトリマーまたは少なくともヘテロテトラマーである。
【０１７９】
本発明のマルチマーは、疎水性、親水性、イオン性および／もしくは共有結合
的な結合の結果であり得、そして／または例えば、リポソーム形成によって間接
連結され得る。従って、１つの実施形態では、本発明のマルチマー（例えば、ホ
モダイマーまたはホモトリマーなど）は、本発明のポリペプチドが溶液中で互い
に接触する場合に形成される。別の実施形態では、本発明のへテロマルチマー（
例えば、ヘテロトリマーまたはヘテロテトラマーなど）は、本発明のタンパク質
が、溶液中で本発明のポリペプチドに対する抗体（本発明の融合タンパク質にお
ける異種ポリペプチド配列に対する抗体を含む）と接触した場合に形成される。
他の実施形態では、本発明のマルチマーは、本発明のポリペプチドとの、および
／または本発明のポリペプチド間での共有結合によって形成される。このような
共有結合は、ポリぺプチド配列（例えば、配列番号Ｙに記載されるか、または配
列番号Ｘによってコードされるポリペプチドおよび／またはｃＤＮＡプラスミド
：Ｚ中に含まれる配列）に含まれる１以上のアミノ酸残基を含み得る。１例では
、この共有結合は、ネイティブ（すなわち、天然に存在する）ポリペプチドにお
いて相互作用するポリペプチド配列内に存在するシステイン残基間での架橋であ
る。別の例では、この共有結合は、化学的操作または組換え操作の結果である。
あるいは、このような共有結合は、融合タンパク質中の異種ポリペプチド配列に
おいて含まれる１以上のアミノ酸残基を含み得る。１例では、共有結合は、本発
明の融合タンパク質に含まれる異種配列間にある（例えば、米国特許第５，４７
８，９２５号を参照のこと）。特定の例では、この共有結合は、（本明細書中に
記載されるような）本発明のＦｃ融合タンパク質に含まれる異種配列間にある。
別の特定の例では、本発明の融合タンパク質の共有結合は、共有結合したマルチ
マーを形成し得る別のタンパク質（例えば、オステオプロテゲリン（ｏｓｅｔｅ
ｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ）など）由来の異種ポリペプチド配列間にある（例えば
、国際公開番号ＷＯ ９８／４９３０５号（この内容はその全体が本明細書中で
参考として援用される）を参照のこと）。別の実施形態では、２以上の本発明の
ポリペプチドは、ペプチドリンカーを通して連結される。例としては、米国特許
第５，０７３，６２７号（本明細書中に参考として援用される）に記載されるペ
プチドリンカーが挙げられる。ペプチドリンカーによって隔てられた本発明の複
数のポリペプチドを含むタンパク質は、従来の組換えＤＮＡ技術を用いて生成さ
れ得る。
的な結合の結果であり得、そして／または例えば、リポソーム形成によって間接
連結され得る。従って、１つの実施形態では、本発明のマルチマー（例えば、ホ
モダイマーまたはホモトリマーなど）は、本発明のポリペプチドが溶液中で互い
に接触する場合に形成される。別の実施形態では、本発明のへテロマルチマー（
例えば、ヘテロトリマーまたはヘテロテトラマーなど）は、本発明のタンパク質
が、溶液中で本発明のポリペプチドに対する抗体（本発明の融合タンパク質にお
ける異種ポリペプチド配列に対する抗体を含む）と接触した場合に形成される。
他の実施形態では、本発明のマルチマーは、本発明のポリペプチドとの、および
／または本発明のポリペプチド間での共有結合によって形成される。このような
共有結合は、ポリぺプチド配列（例えば、配列番号Ｙに記載されるか、または配
列番号Ｘによってコードされるポリペプチドおよび／またはｃＤＮＡプラスミド
：Ｚ中に含まれる配列）に含まれる１以上のアミノ酸残基を含み得る。１例では
、この共有結合は、ネイティブ（すなわち、天然に存在する）ポリペプチドにお
いて相互作用するポリペプチド配列内に存在するシステイン残基間での架橋であ
る。別の例では、この共有結合は、化学的操作または組換え操作の結果である。
あるいは、このような共有結合は、融合タンパク質中の異種ポリペプチド配列に
おいて含まれる１以上のアミノ酸残基を含み得る。１例では、共有結合は、本発
明の融合タンパク質に含まれる異種配列間にある（例えば、米国特許第５，４７
８，９２５号を参照のこと）。特定の例では、この共有結合は、（本明細書中に
記載されるような）本発明のＦｃ融合タンパク質に含まれる異種配列間にある。
別の特定の例では、本発明の融合タンパク質の共有結合は、共有結合したマルチ
マーを形成し得る別のタンパク質（例えば、オステオプロテゲリン（ｏｓｅｔｅ
ｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ）など）由来の異種ポリペプチド配列間にある（例えば
、国際公開番号ＷＯ ９８／４９３０５号（この内容はその全体が本明細書中で
参考として援用される）を参照のこと）。別の実施形態では、２以上の本発明の
ポリペプチドは、ペプチドリンカーを通して連結される。例としては、米国特許
第５，０７３，６２７号（本明細書中に参考として援用される）に記載されるペ
プチドリンカーが挙げられる。ペプチドリンカーによって隔てられた本発明の複
数のポリペプチドを含むタンパク質は、従来の組換えＤＮＡ技術を用いて生成さ
れ得る。
【０１８０】
本発明のマルチマーポリペプチドを調製するための別の方法は、ロイシンジッ
パーポリペプチド配列またはイソロイシンジッパーポリペプチド配列に融合され
た本発明のポリペプチドの使用を含む。ロイシンジッパードメインおよびイソロ
イシンジッパードメインは、そのドメインが見出されるタンパク質のマルチマー
形成を促進するポリペプチドである。ロイシンジッパーは元々、いくつかのＤＮ
Ａ結合タンパク質において同定され（Ｌａｎｄｓｃｈｕｌｚら，Ｓｃｉｅｎｃｅ
２４０：１７５９、（１９８８））、そしてそれ以来種々の異なるタンパク質
において見出されている。とりわけ公知のロイシンジッパーは、ダイマー形成ま
たはトリマー形成をする、天然に存在するペプチドおよびその誘導体である。本
発明の可溶性マルチマータンパク質を生成するために適切なロイシンジッパード
メインの例は、本明細書中に参考として援用されるＰＣＴ出願ＷＯ ９４／１０
３０８に記載されるロイシンジッパードメインである。溶液中でダイマー形成ま
たはトリマー形成をするポリペプチド配列に融合された本発明のポリペプチドを
含む組換え融合タンパク質は、適切な宿主細胞中で発現され、そして得られる可
溶性マルチマー融合タンパク質は、当該分野で公知の技術を用いて培養上清から
回収される。
パーポリペプチド配列またはイソロイシンジッパーポリペプチド配列に融合され
た本発明のポリペプチドの使用を含む。ロイシンジッパードメインおよびイソロ
イシンジッパードメインは、そのドメインが見出されるタンパク質のマルチマー
形成を促進するポリペプチドである。ロイシンジッパーは元々、いくつかのＤＮ
Ａ結合タンパク質において同定され（Ｌａｎｄｓｃｈｕｌｚら，Ｓｃｉｅｎｃｅ
２４０：１７５９、（１９８８））、そしてそれ以来種々の異なるタンパク質
において見出されている。とりわけ公知のロイシンジッパーは、ダイマー形成ま
たはトリマー形成をする、天然に存在するペプチドおよびその誘導体である。本
発明の可溶性マルチマータンパク質を生成するために適切なロイシンジッパード
メインの例は、本明細書中に参考として援用されるＰＣＴ出願ＷＯ ９４／１０
３０８に記載されるロイシンジッパードメインである。溶液中でダイマー形成ま
たはトリマー形成をするポリペプチド配列に融合された本発明のポリペプチドを
含む組換え融合タンパク質は、適切な宿主細胞中で発現され、そして得られる可
溶性マルチマー融合タンパク質は、当該分野で公知の技術を用いて培養上清から
回収される。
【０１８１】
本発明のトリマーポリペプチドは、増強された生物学的活性の利点を提供し得
る。好ましいロイシンジッパー部分およびイソロイシン部分は、トリマーを優先
的に形成する部分である。１例は、本明細書中に参考として援用されるＨｏｐｐ
ｅら（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ３４４：１９１，（１９９４））および米国
特許出願第０８／４４６，９２２号に記載される通りの肺サーファクタントプロ
テインＤ（ＳＰＤ）に由来するロイシンジッパーである。天然に存在するトリマ
ータンパク質由来の他のペプチドは、本発明のトリマーポリペプチドの調製にお
いて用いられ得る。
る。好ましいロイシンジッパー部分およびイソロイシン部分は、トリマーを優先
的に形成する部分である。１例は、本明細書中に参考として援用されるＨｏｐｐ
ｅら（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ３４４：１９１，（１９９４））および米国
特許出願第０８／４４６，９２２号に記載される通りの肺サーファクタントプロ
テインＤ（ＳＰＤ）に由来するロイシンジッパーである。天然に存在するトリマ
ータンパク質由来の他のペプチドは、本発明のトリマーポリペプチドの調製にお
いて用いられ得る。
【０１８２】
別の例では、本発明のタンパク質は、Ｆｌａｇ（登録商標）ポリぺプチド配列
を含む本発明の融合タンパク質に含まれるＦｌａｇ（登録商標）ポリペプチド配
列間の相互作用によって結合される。さらなる実施形態では、本発明のタンパク
質は、本発明のＦｌａｇ（登録商標）融合タンパク質に含まれる異種ポリペプチ
ド配列と抗Ｆｌａｇ（登録商標）抗体との間の相互作用によって結合する。
を含む本発明の融合タンパク質に含まれるＦｌａｇ（登録商標）ポリペプチド配
列間の相互作用によって結合される。さらなる実施形態では、本発明のタンパク
質は、本発明のＦｌａｇ（登録商標）融合タンパク質に含まれる異種ポリペプチ
ド配列と抗Ｆｌａｇ（登録商標）抗体との間の相互作用によって結合する。
【０１８３】
本発明のマルチマーは、当該分野で公知の化学技術を使用して生成され得る。
例えば、本発明のマルチマーに含まれることが所望されるポリペプチドは、当該
分野で公知のリンカー分子およびリンカー分子長最適化技術を使用して、化学的
に架橋され得る（例えば、米国特許第５，４７８，９２５号（これは本明細書中
で参考として援用される）を参照のこと）さらに、本発明のマルチマーは、当該
分野で公知の技術を使用して生成されて、マルチマー中に含まれることが所望さ
れるポリペプチドの配列内に位置するシステイン残基間に、１つ以上の分子間架
橋を形成し得る（例えば、米国特許第５，４７８，９２５号（これは、本明細書
中にその全体が参考として援用される）を参照のこと）。さらに、本発明のタン
パク質は、このポリぺプチドのＣ末端またはＮ末端へのシステインまたはビオチ
ンの付加により慣用的に改変され得、当該分野で公知の技術が、１つ以上のこれ
らの改変されたポリペプチドを含むマルチマーを生成するために適用され得る（
例えば、米国特許第５，４７８，９２５号（これはその全体が本明細書中で参考
として援用される）を参照のこと）。さらに、当該分野で公知技術は、本発明の
マルチマーに含まれることを所望されるポリペプチド成分を含むリポソームを生
成するために適用され得る（例えば、米国特許第５，４７８，９２５号（これは
その全体が本明細書中で参考として援用される）を参照のこと）。
例えば、本発明のマルチマーに含まれることが所望されるポリペプチドは、当該
分野で公知のリンカー分子およびリンカー分子長最適化技術を使用して、化学的
に架橋され得る（例えば、米国特許第５，４７８，９２５号（これは本明細書中
で参考として援用される）を参照のこと）さらに、本発明のマルチマーは、当該
分野で公知の技術を使用して生成されて、マルチマー中に含まれることが所望さ
れるポリペプチドの配列内に位置するシステイン残基間に、１つ以上の分子間架
橋を形成し得る（例えば、米国特許第５，４７８，９２５号（これは、本明細書
中にその全体が参考として援用される）を参照のこと）。さらに、本発明のタン
パク質は、このポリぺプチドのＣ末端またはＮ末端へのシステインまたはビオチ
ンの付加により慣用的に改変され得、当該分野で公知の技術が、１つ以上のこれ
らの改変されたポリペプチドを含むマルチマーを生成するために適用され得る（
例えば、米国特許第５，４７８，９２５号（これはその全体が本明細書中で参考
として援用される）を参照のこと）。さらに、当該分野で公知技術は、本発明の
マルチマーに含まれることを所望されるポリペプチド成分を含むリポソームを生
成するために適用され得る（例えば、米国特許第５，４７８，９２５号（これは
その全体が本明細書中で参考として援用される）を参照のこと）。
【０１８４】
あるいは、本発明のマルチマーは、当該分野で公知の遺伝子操作技術を用いて
生成され得る。１つの実施形態では、本発明のマルチマーに含まれるポリペプチ
ドは、本明細書中に記載されるかさもなくば当該分野で公知の融合タンパク質技
術を用いて組換え生成される（例えば、本明細書中にその全体が参考として援用
される、米国特許第５，４７８，９２５号を参照のこと）。特定の実施形態では
、本発明のホモダイマーをコードするポリヌクレオチドは、本発明のポリペプチ
ドをコードするポリヌクレオチド配列を、リンカーポリペプチドをコードする配
列に連結し、次いでさらに元々のＣ末端からＮ末端の方向とは逆方向でポリペプ
チドの翻訳産物をコードする合成ポリヌクレオチド（リーダー配列を欠く）に連
結することによって生成される（例えば、本明細書中にその全体が参考として援
用される、米国特許第５，４７８，９２５号を参照のこと）。別の実施形態では
、本明細書中に記載されるかさもなくば当該分野で公知の組換え技術を適用して
、膜貫通ドメイン（または疎水性もしくはシグナルペプチド）を含み、そして膜
再構成技術によってリポソームに取り込まれ得る、本発明の組換えポリペプチド
を生成する（例えば、本明細書中にその全体が参考として援用される、米国特許
第５，４７８，９２５号を参照のこと）。
生成され得る。１つの実施形態では、本発明のマルチマーに含まれるポリペプチ
ドは、本明細書中に記載されるかさもなくば当該分野で公知の融合タンパク質技
術を用いて組換え生成される（例えば、本明細書中にその全体が参考として援用
される、米国特許第５，４７８，９２５号を参照のこと）。特定の実施形態では
、本発明のホモダイマーをコードするポリヌクレオチドは、本発明のポリペプチ
ドをコードするポリヌクレオチド配列を、リンカーポリペプチドをコードする配
列に連結し、次いでさらに元々のＣ末端からＮ末端の方向とは逆方向でポリペプ
チドの翻訳産物をコードする合成ポリヌクレオチド（リーダー配列を欠く）に連
結することによって生成される（例えば、本明細書中にその全体が参考として援
用される、米国特許第５，４７８，９２５号を参照のこと）。別の実施形態では
、本明細書中に記載されるかさもなくば当該分野で公知の組換え技術を適用して
、膜貫通ドメイン（または疎水性もしくはシグナルペプチド）を含み、そして膜
再構成技術によってリポソームに取り込まれ得る、本発明の組換えポリペプチド
を生成する（例えば、本明細書中にその全体が参考として援用される、米国特許
第５，４７８，９２５号を参照のこと）。
【０１８５】
（抗体）
さらに、本発明のポリペプチドは、（特異的な抗体抗原結合をアッセイするた
めの当該分野で周知のイムノアッセイによって決定されるような）本発明の配列
番号Ｙの、ポリペプチド、ポリペプチドフラグメント、または改変体、および／
またはエピトープに免疫特異的に結合する抗体およびＴ細胞抗原レセプター（Ｔ
ＣＲ）に関する。本発明の抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、
多重特異的抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体、単鎖抗体、Ｆａｂフ
ラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生
されるフラグメント、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本発明の抗体
に対する抗Ｉｄ抗体を含む）、および上記のいずれかのエピトープ結合フラグメ
ントを含むが、限定されない。本明細書中で使用される場合、用語「抗体」とは
、免疫グロブリン分子および免疫グロリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわ
ち、免疫特異的に抗原に結合する抗原結合部位を含む分子をいう。本発明の免疫
グロブリン分子は、免疫グロブリン分子の任意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、
ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、
ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）または任意のサブク
ラスであり得る。
めの当該分野で周知のイムノアッセイによって決定されるような）本発明の配列
番号Ｙの、ポリペプチド、ポリペプチドフラグメント、または改変体、および／
またはエピトープに免疫特異的に結合する抗体およびＴ細胞抗原レセプター（Ｔ
ＣＲ）に関する。本発明の抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、
多重特異的抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体、単鎖抗体、Ｆａｂフ
ラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生
されるフラグメント、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本発明の抗体
に対する抗Ｉｄ抗体を含む）、および上記のいずれかのエピトープ結合フラグメ
ントを含むが、限定されない。本明細書中で使用される場合、用語「抗体」とは
、免疫グロブリン分子および免疫グロリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわ
ち、免疫特異的に抗原に結合する抗原結合部位を含む分子をいう。本発明の免疫
グロブリン分子は、免疫グロブリン分子の任意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、
ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、
ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）または任意のサブク
ラスであり得る。
【０１８６】
最も好ましくは、この抗体は、本発明のヒト抗原結合抗体フラグメントであり
、これには、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖Ｆｖｓ（ｓｃ
Ｆｖ）、単鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）ならびにＶＬまたはＶ
Ｈドメインのいずれかを含むフラグメントが挙げられるがこれらに限定されない
。単鎖抗体を含む抗原結合抗体フラグメントは、可変領域を単独で、または以下
の全体もしくは部分と組み合わせて含み得る：ヒンジ領域、ＣＨ１ドメイン、Ｃ
Ｈ２ドメインおよびＣＨ３ドメイン。また、可変領域とヒンジ領域、ＣＨ１ドメ
イン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインとの任意の組み合わせもまた含む抗
原結合フラグメントがまた本発明に含まれる。本発明の抗体は、鳥類および哺乳
動物を含む任意の動物起点由来であり得る。好ましくは、この抗体は、ヒト、ネ
ズミ（ｍｕｒｉｎｅ）（例えば、マウスおよびウサギ）、ロバ、シップウサギ（
ｓｈｉｐ ｒａｂｂｉｔ）、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、またはニワトリ
である。本明細書中で使用される場合、「ヒト」抗体は、ヒト免疫グロブリンの
アミノ酸配列を有する抗体を含み、そしてヒト免疫グロブリンライブラリーまた
は１つ以上のヒト免疫グロブリンについてトランスジェニックであり、そして内
因性免疫グロブリンを発現しない動物から単離さた抗体（下に記載のように、そ
して例えば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらによる米国特許第５，９３９，５９８
号において記載のような）を含む。
、これには、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖Ｆｖｓ（ｓｃ
Ｆｖ）、単鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）ならびにＶＬまたはＶ
Ｈドメインのいずれかを含むフラグメントが挙げられるがこれらに限定されない
。単鎖抗体を含む抗原結合抗体フラグメントは、可変領域を単独で、または以下
の全体もしくは部分と組み合わせて含み得る：ヒンジ領域、ＣＨ１ドメイン、Ｃ
Ｈ２ドメインおよびＣＨ３ドメイン。また、可変領域とヒンジ領域、ＣＨ１ドメ
イン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインとの任意の組み合わせもまた含む抗
原結合フラグメントがまた本発明に含まれる。本発明の抗体は、鳥類および哺乳
動物を含む任意の動物起点由来であり得る。好ましくは、この抗体は、ヒト、ネ
ズミ（ｍｕｒｉｎｅ）（例えば、マウスおよびウサギ）、ロバ、シップウサギ（
ｓｈｉｐ ｒａｂｂｉｔ）、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、またはニワトリ
である。本明細書中で使用される場合、「ヒト」抗体は、ヒト免疫グロブリンの
アミノ酸配列を有する抗体を含み、そしてヒト免疫グロブリンライブラリーまた
は１つ以上のヒト免疫グロブリンについてトランスジェニックであり、そして内
因性免疫グロブリンを発現しない動物から単離さた抗体（下に記載のように、そ
して例えば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらによる米国特許第５，９３９，５９８
号において記載のような）を含む。
【０１８７】
本発明の抗体は、一重特異的、二重特異的、三重特異的またはより多くの多重
特異性の抗体であり得る。多重特異的な抗体は、本発明のポリペプチドの異なる
エピトープに対して特異的であり得るか、または本発明のポリペプチドおよび異
種のエピトープ（例えば、異種ポリペプチドもしくは固体支持体物質）、の両方
に特異的であり得る。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ ９３／１７７１５；同ＷＯ ９
２／０８８０２；同ＷＯ ９１／００３６０；同ＷＯ ９２／０５７９３；Ｔｕ
ｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０−６９（１９９１）；米国特許第４
，４７４，８９３号、同第４，７１４，６８１号、同第４，９２５，６４８号、
同第５，５７３，９２０号、同第５，６０１，８１９号；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３（１９９２）を参照のこと。
特異性の抗体であり得る。多重特異的な抗体は、本発明のポリペプチドの異なる
エピトープに対して特異的であり得るか、または本発明のポリペプチドおよび異
種のエピトープ（例えば、異種ポリペプチドもしくは固体支持体物質）、の両方
に特異的であり得る。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ ９３／１７７１５；同ＷＯ ９
２／０８８０２；同ＷＯ ９１／００３６０；同ＷＯ ９２／０５７９３；Ｔｕ
ｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０−６９（１９９１）；米国特許第４
，４７４，８９３号、同第４，７１４，６８１号、同第４，９２５，６４８号、
同第５，５７３，９２０号、同第５，６０１，８１９号；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３（１９９２）を参照のこと。
【０１８８】
本発明の抗体は、これらが認識または特異的に結合する、本発明のポリペプチ
ドのエピトープまたは部分に関して記載または特定化され得る。このエピトープ
またはポリペプチドの部分は、例えば、Ｎ末端およびＣ末端位置によって、連続
するアミノ酸残基におけるサイズによって本明細書中に記載されるように、特定
化され得る。本発明の任意のエピトープまたはポリペプチドに特異的に結合する
抗体はまた、排除され得る。従って、本発明は、本発明のポリペプチドを特異的
に結合し、そして本発明のポリペプチドの排除を可能にする抗体を含む。
ドのエピトープまたは部分に関して記載または特定化され得る。このエピトープ
またはポリペプチドの部分は、例えば、Ｎ末端およびＣ末端位置によって、連続
するアミノ酸残基におけるサイズによって本明細書中に記載されるように、特定
化され得る。本発明の任意のエピトープまたはポリペプチドに特異的に結合する
抗体はまた、排除され得る。従って、本発明は、本発明のポリペプチドを特異的
に結合し、そして本発明のポリペプチドの排除を可能にする抗体を含む。
【０１８９】
本発明の抗体はまた、その交差反応性について記載または特定化され得る。本
発明のポリペプチドの任意の他のアナログ、オルソログまたはホモログを結合し
ない抗体が、含まれる。本発明のポリペプチドに対して少なくとも９５％、少な
くとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少な
くとも７０％、少なくとも６５％、少なくとも６０％、少なくとも５５％および
少なくとも５０％の同一性（当該分野で公知の方法および本明細書中に記載され
る方法を用いて計算される場合）を有するポリペプチドを結合する抗体もまた、
本発明に含まれる。特定の実施形態において、本発明の抗体は、ヒトタンパク質
の、マウスホモログ、ラットホモログおよび／またはウサギホモログならびに対
応するそれらのエピトープと交差反応する。本発明のポリペプチドに対して９５
％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５
％未満、６０％未満、５５％未満および５０％未満の同一性（当該分野で公知の
方法および本明細書中に記載される方法を用いて計算される場合）を有するポリ
ペプチドを結合しない抗体もまた、本発明に含まれる。特定の実施形態において
、上記の交差反応性は、本明細書中に開示された、任意の単一特異的な抗原性ま
たは免疫原性ポリペプチド、あるいは２、３、４、５以上の特異的抗原性および
／または免疫原生ポリペプチドの組み合わせに関する。さらに、ハイブリダイゼ
ーション条件下（本明細書中で記載されるような）で本発明のポリヌクレオチド
にハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドを結合
する抗体が、本発明に含まれる。本発明の抗体はまた、本発明のポリペプチドに
対するそれらの結合親和性について記載または特定化され得る。好ましい結合親
和性としては、５×１０-2Ｍ未満、１０-2Ｍ未満、５×１０-3Ｍ未満、１０-3Ｍ
未満、５×１０-4Ｍ未満、１０-4Ｍ未満、５×１０-5Ｍ未満、１０-5Ｍ未満、５
×１０-6Ｍ未満、１０-6Ｍ未満、５×１０-7Ｍ未満、１０-7Ｍ未満、５×１０-8 Ｍ未満、１０-8Ｍ未満、５×１０-9Ｍ未満、１０-9Ｍ未満、５×１０-10Ｍ未満
、１０-10Ｍ未満、５×１０-11Ｍ未満、１０-11Ｍ未満、５×１０-12Ｍ未満、１
０-12Ｍ未満、５×１０-13Ｍ未満、１０-13Ｍ未満、５×１０-14Ｍ未満、１０-1 4 Ｍ未満、５×１０-15Ｍ未満または１０-15Ｍ未満の解離定数すなわちＫｄを有
する親和性が挙げられる。
発明のポリペプチドの任意の他のアナログ、オルソログまたはホモログを結合し
ない抗体が、含まれる。本発明のポリペプチドに対して少なくとも９５％、少な
くとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少な
くとも７０％、少なくとも６５％、少なくとも６０％、少なくとも５５％および
少なくとも５０％の同一性（当該分野で公知の方法および本明細書中に記載され
る方法を用いて計算される場合）を有するポリペプチドを結合する抗体もまた、
本発明に含まれる。特定の実施形態において、本発明の抗体は、ヒトタンパク質
の、マウスホモログ、ラットホモログおよび／またはウサギホモログならびに対
応するそれらのエピトープと交差反応する。本発明のポリペプチドに対して９５
％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５
％未満、６０％未満、５５％未満および５０％未満の同一性（当該分野で公知の
方法および本明細書中に記載される方法を用いて計算される場合）を有するポリ
ペプチドを結合しない抗体もまた、本発明に含まれる。特定の実施形態において
、上記の交差反応性は、本明細書中に開示された、任意の単一特異的な抗原性ま
たは免疫原性ポリペプチド、あるいは２、３、４、５以上の特異的抗原性および
／または免疫原生ポリペプチドの組み合わせに関する。さらに、ハイブリダイゼ
ーション条件下（本明細書中で記載されるような）で本発明のポリヌクレオチド
にハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドを結合
する抗体が、本発明に含まれる。本発明の抗体はまた、本発明のポリペプチドに
対するそれらの結合親和性について記載または特定化され得る。好ましい結合親
和性としては、５×１０-2Ｍ未満、１０-2Ｍ未満、５×１０-3Ｍ未満、１０-3Ｍ
未満、５×１０-4Ｍ未満、１０-4Ｍ未満、５×１０-5Ｍ未満、１０-5Ｍ未満、５
×１０-6Ｍ未満、１０-6Ｍ未満、５×１０-7Ｍ未満、１０-7Ｍ未満、５×１０-8 Ｍ未満、１０-8Ｍ未満、５×１０-9Ｍ未満、１０-9Ｍ未満、５×１０-10Ｍ未満
、１０-10Ｍ未満、５×１０-11Ｍ未満、１０-11Ｍ未満、５×１０-12Ｍ未満、１
０-12Ｍ未満、５×１０-13Ｍ未満、１０-13Ｍ未満、５×１０-14Ｍ未満、１０-1 4 Ｍ未満、５×１０-15Ｍ未満または１０-15Ｍ未満の解離定数すなわちＫｄを有
する親和性が挙げられる。
【０１９０】
本発明はまた、競合性結合を決定するための当該分野で公知の任意の方法（例
えば、本明細書中で記載されるイムノアッセイ）によって決定されるような、本
発明のエピトープに対する抗体の結合を競合的に阻害する抗体を提供する。好ま
しい実施形態において、この抗体は、少なくとも９５％、少なくとも９０％、少
なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少
なくとも６０％、または少なくとも５０％、エピトープへの結合を競合的に阻害
する。
えば、本明細書中で記載されるイムノアッセイ）によって決定されるような、本
発明のエピトープに対する抗体の結合を競合的に阻害する抗体を提供する。好ま
しい実施形態において、この抗体は、少なくとも９５％、少なくとも９０％、少
なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少
なくとも６０％、または少なくとも５０％、エピトープへの結合を競合的に阻害
する。
【０１９１】
本発明の抗体は、本発明のポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストと
して作用し得る。例えば、本発明は、本発明のポリペプチドとのレセプター／リ
ガンド相互作用を部分的または完全にのいずれかで破壊する抗体を含む。好まし
くは、本発明の抗体は、本明細書中で開示された抗原性エピトープ、またはその
部分を結合する。本発明は、レセプター特異的抗体およびリガンド特異的抗体の
両方の特徴を有する。本発明はまた、リガンド結合を妨害しないがレセプター活
性化を妨害するレセプター特異的抗体の特徴を有する。レセプター活性化（すな
わち、シグナル伝達）は、本明細書中に記載の技術、そうでなければ、当該分野
で公知の技術により決定され得る。例えば、レセプター活性化は、レセプターの
リン酸化（例えば、チロシンまたはセリン／トレオニン）、または免疫沈降それ
に続くウェスタンブロット分析（例えば、上記のような）によってその基質を検
出することにより、決定され得る。特定の実施形態において、この抗体の非存在
下で、リガンド活性またはレセプター活性を、その活性の少なくとも９５％、少
なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少
なくとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％阻害する抗体が提
供される。
して作用し得る。例えば、本発明は、本発明のポリペプチドとのレセプター／リ
ガンド相互作用を部分的または完全にのいずれかで破壊する抗体を含む。好まし
くは、本発明の抗体は、本明細書中で開示された抗原性エピトープ、またはその
部分を結合する。本発明は、レセプター特異的抗体およびリガンド特異的抗体の
両方の特徴を有する。本発明はまた、リガンド結合を妨害しないがレセプター活
性化を妨害するレセプター特異的抗体の特徴を有する。レセプター活性化（すな
わち、シグナル伝達）は、本明細書中に記載の技術、そうでなければ、当該分野
で公知の技術により決定され得る。例えば、レセプター活性化は、レセプターの
リン酸化（例えば、チロシンまたはセリン／トレオニン）、または免疫沈降それ
に続くウェスタンブロット分析（例えば、上記のような）によってその基質を検
出することにより、決定され得る。特定の実施形態において、この抗体の非存在
下で、リガンド活性またはレセプター活性を、その活性の少なくとも９５％、少
なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少
なくとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％阻害する抗体が提
供される。
【０１９２】
本発明はまた、リガンド結合およびレセプター活性化の両方を妨げるレセプタ
ー特異的抗体、ならびにレセプターリガンド複合体を認識し、そして好ましくは
、結合していないレセプターまたは結合していないリガンドを特異的に認識しな
い抗体の特徴を有する。同様に、本発明は、リガンドと結合し、そしてレセプタ
ーへのリガンドの結合を妨げる中和抗体、およびリガントと結合し、それにより
レセプター活性化を妨げるが、リガンドがレセプターを結合することを妨げない
抗体を含む。さらに、本発明は、レセプターを活性化する抗体を含む。これらの
抗体は、レセプターアゴニストとして作用し得、すなわち、例えば、レセプター
の二量化を誘発することによってリガンド媒介レセプター活性化の生物学的活性
化の全てまたはサブセットのいずれかを増強するかまたは活性化し得る。この抗
体は、本明細書中に開示される本発明のペプチドの特異的生物学的活性を含む生
物学的活性についてのアゴニスト、アンタゴニストまたは逆アゴニストとして特
定化され得る。上記抗体アゴニストは、当該分野で公知の方法を用いて作製され
得る。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／４０２８１；米国特許第５，８１１，０９
７号；Ｄｅｎｇら、Ｂｌｏｏｄ ９２（６）：１９８１−１９８８（１９９８）
；Ｃｈｅｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８（１６）：３６６８−３６７８（１
９９８）；Ｈａｒｒｏｐら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１（４）：１７８６−１
７９４（１９９８）；Ｚｈｕら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ：５８（１５）：３２０
９−３２１４（１９９８）；Ｙｏｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０（７）：
３１７０−３１７９（１９９８）；Ｐｒａｔら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｓｃｉ．１１１
（Ｐｔ２）：２３７−２４７（１９９８）；Ｐｉｔａｒｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０５（２）：１７７−１９０（１９９７）；Ｌｉａｕｔ
ａｒｄら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ９（４）：２３３−２４１（１９９７）；Ｃａｒ
ｌｓｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１７）：１１２９５−１１３０
１（１９９７）；Ｔａｒｙｍａｎら、Ｎｅｕｒｏｎ １４（４）：７５５−７６
２（１９９５）；Ｍｕｌｌｅｒら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ６（９）：１１５３−
１１６７（１９９８）；Ｂａｒｔｕｎｅｋら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ８（１）：１
４−２０（１９９６）（これらは全て、その全体が参考として本明細書中に援用
される）を参照のこと。
ー特異的抗体、ならびにレセプターリガンド複合体を認識し、そして好ましくは
、結合していないレセプターまたは結合していないリガンドを特異的に認識しな
い抗体の特徴を有する。同様に、本発明は、リガンドと結合し、そしてレセプタ
ーへのリガンドの結合を妨げる中和抗体、およびリガントと結合し、それにより
レセプター活性化を妨げるが、リガンドがレセプターを結合することを妨げない
抗体を含む。さらに、本発明は、レセプターを活性化する抗体を含む。これらの
抗体は、レセプターアゴニストとして作用し得、すなわち、例えば、レセプター
の二量化を誘発することによってリガンド媒介レセプター活性化の生物学的活性
化の全てまたはサブセットのいずれかを増強するかまたは活性化し得る。この抗
体は、本明細書中に開示される本発明のペプチドの特異的生物学的活性を含む生
物学的活性についてのアゴニスト、アンタゴニストまたは逆アゴニストとして特
定化され得る。上記抗体アゴニストは、当該分野で公知の方法を用いて作製され
得る。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／４０２８１；米国特許第５，８１１，０９
７号；Ｄｅｎｇら、Ｂｌｏｏｄ ９２（６）：１９８１−１９８８（１９９８）
；Ｃｈｅｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８（１６）：３６６８−３６７８（１
９９８）；Ｈａｒｒｏｐら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１（４）：１７８６−１
７９４（１９９８）；Ｚｈｕら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ：５８（１５）：３２０
９−３２１４（１９９８）；Ｙｏｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０（７）：
３１７０−３１７９（１９９８）；Ｐｒａｔら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｓｃｉ．１１１
（Ｐｔ２）：２３７−２４７（１９９８）；Ｐｉｔａｒｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０５（２）：１７７−１９０（１９９７）；Ｌｉａｕｔ
ａｒｄら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ９（４）：２３３−２４１（１９９７）；Ｃａｒ
ｌｓｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１７）：１１２９５−１１３０
１（１９９７）；Ｔａｒｙｍａｎら、Ｎｅｕｒｏｎ １４（４）：７５５−７６
２（１９９５）；Ｍｕｌｌｅｒら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ６（９）：１１５３−
１１６７（１９９８）；Ｂａｒｔｕｎｅｋら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ８（１）：１
４−２０（１９９６）（これらは全て、その全体が参考として本明細書中に援用
される）を参照のこと。
【０１９３】
本発明の抗体は、例えば、これらに限定されないが、本発明のポリペプチドを
精製し、検出し、そして標的化するために使用され得る。これらは、インビトロ
およびインビボの両方での診断方法および治療方法を含む。例えば、この抗体は
、生物学的サンプルにおける本発明のポリペプチドのレベルを定性的におよび定
量的に測定するためのイムノアッセイにおける用途を有する。例えば、Ｈａｒｌ
ｏｗら，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（
Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，
第２版，１９８８）（本明細書中でその全体が参照として援用される）を参照の
こと。
精製し、検出し、そして標的化するために使用され得る。これらは、インビトロ
およびインビボの両方での診断方法および治療方法を含む。例えば、この抗体は
、生物学的サンプルにおける本発明のポリペプチドのレベルを定性的におよび定
量的に測定するためのイムノアッセイにおける用途を有する。例えば、Ｈａｒｌ
ｏｗら，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（
Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，
第２版，１９８８）（本明細書中でその全体が参照として援用される）を参照の
こと。
【０１９４】
以下にさらに詳細に議論されるように、本発明の抗体は、単独または他の化合
物との組み合わせのいずれかで使用され得る。この抗体はさらに、ポリペプチド
または他の化合物へＮ末端でもしくはＣ末端で異種ポリペプチドに組換え的に融
合され得るか、または化学的に結合（共有結合および非共有結合を含む）され得
る。例えば、本発明の抗体は、検出アッセイにおける標識として有用な分子およ
び異種ポリペプチド、薬剤、放射性核種、または毒素のようなエフェクター分子
へ組換え的に融合または結合され得る。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０８４９
５；ＷＯ９１／１４４３８；ＷＯ８９／１２６２４；米国特許第５，３１４，９
９５号；および欧州特許第３９６，３８７号を参照のこと。
物との組み合わせのいずれかで使用され得る。この抗体はさらに、ポリペプチド
または他の化合物へＮ末端でもしくはＣ末端で異種ポリペプチドに組換え的に融
合され得るか、または化学的に結合（共有結合および非共有結合を含む）され得
る。例えば、本発明の抗体は、検出アッセイにおける標識として有用な分子およ
び異種ポリペプチド、薬剤、放射性核種、または毒素のようなエフェクター分子
へ組換え的に融合または結合され得る。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０８４９
５；ＷＯ９１／１４４３８；ＷＯ８９／１２６２４；米国特許第５，３１４，９
９５号；および欧州特許第３９６，３８７号を参照のこと。
【０１９５】
本発明の抗体は、改変された（すなわち、共有結合性付着（ｃｏｖａｌｅｎｔ
ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ）が、抗体が抗イディオタイプ応答を産生するのを妨げ
ないような、抗体に対する任意の型の分子の共有結合性付着による）誘導体を含
む。例えば、制限されないが、抗体誘導体には、例えば、グリコシル化、アセチ
ル化、ぺグ化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）、リン酸化（ｐｈｏｓｐｈｙｌａｔｉｏ
ｎ）、アミド化、既知の保護基／ブロック基（ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｇｒｏｕｐ）
による誘導体化、タンパク質分解性切断、細胞性リガンドまたは他のタンパク質
への連結などによって改変された抗体が挙げられる。多数の任意の化学的改変が
、特異的化学切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝的合成など
を含むが、これらに制限されない公知の技術によって実行され得る。さらに、誘
導体は、１つ以上の非古典的アミノ酸を含み得る。
ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ）が、抗体が抗イディオタイプ応答を産生するのを妨げ
ないような、抗体に対する任意の型の分子の共有結合性付着による）誘導体を含
む。例えば、制限されないが、抗体誘導体には、例えば、グリコシル化、アセチ
ル化、ぺグ化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）、リン酸化（ｐｈｏｓｐｈｙｌａｔｉｏ
ｎ）、アミド化、既知の保護基／ブロック基（ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｇｒｏｕｐ）
による誘導体化、タンパク質分解性切断、細胞性リガンドまたは他のタンパク質
への連結などによって改変された抗体が挙げられる。多数の任意の化学的改変が
、特異的化学切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝的合成など
を含むが、これらに制限されない公知の技術によって実行され得る。さらに、誘
導体は、１つ以上の非古典的アミノ酸を含み得る。
【０１９６】
本発明の抗体は、当該分野で公知の任意の適切な方法によって産生され得る。
目的の抗原に対するポリクローナル抗体は、当該分野で周知の種々の手順によっ
て産生され得る。例えば、本発明のポリペプチドが種々の宿主動物（ウサギ、マ
ウス、ラットなどを含むがこれらに限定されない）に投与され得、抗原に対して
特異的なポリクローナル抗体を含む血清の産生を誘導する。種々のアジュバント
が、免疫学的応答を増加させるために使用され得、宿主種に依存し、そしてフロ
イント（完全および不完全）、水酸化アルミニウムのようなミネラルゲル（ｍｉ
ｎｅｒａｌ ｇｅｌ）、リゾレシチンのような表面活性物質、プルロニック（ｐ
ｌｕｒｏｎｉｃ）ポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油乳濁液、キーホール
リンペットヘモシアニン、ジニトロフェノール、ならびにＢＣＧ（カルメット−
ゲラン杆菌）およびｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍのような強
力に有用なヒトアジュバントを含むが、これらに限定されない。このようなアジ
ュバントはまた、当該分野で周知である。
目的の抗原に対するポリクローナル抗体は、当該分野で周知の種々の手順によっ
て産生され得る。例えば、本発明のポリペプチドが種々の宿主動物（ウサギ、マ
ウス、ラットなどを含むがこれらに限定されない）に投与され得、抗原に対して
特異的なポリクローナル抗体を含む血清の産生を誘導する。種々のアジュバント
が、免疫学的応答を増加させるために使用され得、宿主種に依存し、そしてフロ
イント（完全および不完全）、水酸化アルミニウムのようなミネラルゲル（ｍｉ
ｎｅｒａｌ ｇｅｌ）、リゾレシチンのような表面活性物質、プルロニック（ｐ
ｌｕｒｏｎｉｃ）ポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油乳濁液、キーホール
リンペットヘモシアニン、ジニトロフェノール、ならびにＢＣＧ（カルメット−
ゲラン杆菌）およびｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍのような強
力に有用なヒトアジュバントを含むが、これらに限定されない。このようなアジ
ュバントはまた、当該分野で周知である。
【０１９７】
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え、およびファージディスプレ
イ技術、またはそれらの組み合わせの使用を含む、当該分野で公知の広範な種々
の技術を用いて調製され得る。例えば、モノクローナル抗体は、当該分野で公知
の以下に挙げられるハイブリドーマ技術を使用して産生され得、例えば、Ｈａｒ
ｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，
（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ
，第２版、１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎ
ｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３−６
８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）（上記の参考文献は、その全体
が参考として援用される）に教示される。本明細書中で使用される場合、用語「
モノクローナル抗体」とは、ハイブリドーマ技術を通して生成された抗体に限定
されない。用語「モノクローナル抗体」とは、任意の真核生物、原核生物、また
はファージクローンを含む単一のクローンに由来する抗体をいい、そしてモノク
ローナル抗体が生成される方法ではない。
イ技術、またはそれらの組み合わせの使用を含む、当該分野で公知の広範な種々
の技術を用いて調製され得る。例えば、モノクローナル抗体は、当該分野で公知
の以下に挙げられるハイブリドーマ技術を使用して産生され得、例えば、Ｈａｒ
ｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，
（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ
，第２版、１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎ
ｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３−６
８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）（上記の参考文献は、その全体
が参考として援用される）に教示される。本明細書中で使用される場合、用語「
モノクローナル抗体」とは、ハイブリドーマ技術を通して生成された抗体に限定
されない。用語「モノクローナル抗体」とは、任意の真核生物、原核生物、また
はファージクローンを含む単一のクローンに由来する抗体をいい、そしてモノク
ローナル抗体が生成される方法ではない。
【０１９８】
ハイブリドーマ技術を用いて特定の抗体に対して産生およびスクリーニングす
る方法は、慣用的であり、そして当該分野において周知であり、実施例において
詳細に議論される。非限定な例において、マウスを、本発明のポリペプチドまた
はこのようなペプチドを発現する細胞を用いて免疫化し得る。一旦、免疫応答が
検出される（例えば、抗原に対して特異的な抗体がマウス血清中に検出される）
と、マウスの脾臓を回収し、そして脾細胞を単離する。次いで、脾細胞は、周知
の技術によって、任意の適切なミエローマ細胞（例えば、ＡＴＣＣから入手可能
な細胞株ＳＰ２０由来の細胞）へ融合される。ハイブリドーマを、限定希釈によ
り選択およびクローン化する。次いで、ハイブリドーマクローンを本発明のポリ
ペプチドを結合し得る抗体を分泌する細胞について、当該分野に公知の方法によ
ってアッセイする。一般的に高レベルの抗体を含む腹水を、ポジティブなハイブ
リドーマクローンを用いてマウスを免疫化することにより、産生し得る。
る方法は、慣用的であり、そして当該分野において周知であり、実施例において
詳細に議論される。非限定な例において、マウスを、本発明のポリペプチドまた
はこのようなペプチドを発現する細胞を用いて免疫化し得る。一旦、免疫応答が
検出される（例えば、抗原に対して特異的な抗体がマウス血清中に検出される）
と、マウスの脾臓を回収し、そして脾細胞を単離する。次いで、脾細胞は、周知
の技術によって、任意の適切なミエローマ細胞（例えば、ＡＴＣＣから入手可能
な細胞株ＳＰ２０由来の細胞）へ融合される。ハイブリドーマを、限定希釈によ
り選択およびクローン化する。次いで、ハイブリドーマクローンを本発明のポリ
ペプチドを結合し得る抗体を分泌する細胞について、当該分野に公知の方法によ
ってアッセイする。一般的に高レベルの抗体を含む腹水を、ポジティブなハイブ
リドーマクローンを用いてマウスを免疫化することにより、産生し得る。
【０１９９】
従って、本発明は、モノクローナル抗体、および本発明の抗体を分泌するハイ
ブリドーマ細胞を培養する工程を含む方法によって産生される抗体を、産生する
方法を提供し、ここで、好ましくは、このハイブリドーマは、ミエローマ細胞を
有する本発明の抗原を用いて免疫化されたマウスから単離された脾細胞を融合す
ることにより、次いで、本発明のペプチドを結合し得る抗体を分泌するハイブリ
ドーマクローンについて、その融合から生じるハイブリドーマをスクリーニング
することにより、産生される。
ブリドーマ細胞を培養する工程を含む方法によって産生される抗体を、産生する
方法を提供し、ここで、好ましくは、このハイブリドーマは、ミエローマ細胞を
有する本発明の抗原を用いて免疫化されたマウスから単離された脾細胞を融合す
ることにより、次いで、本発明のペプチドを結合し得る抗体を分泌するハイブリ
ドーマクローンについて、その融合から生じるハイブリドーマをスクリーニング
することにより、産生される。
【０２００】
特定のエピトープを認識する抗体フラグメントは、公知の技術により産生し得
る。例えば、本発明のＦａｂフラグメントおよびＦ（ａｂ’）２フラグメントは
、パパイン（Ｆａｂフラグメントを産生するため）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’
）２フラグメントを産生するため）のような酵素を使用して、免疫グロブリン分
子のタンパク質分解性切断によって産生され得る。Ｆ（ａｂ’）２フラグメント
は、可変領域、軽鎖定常領域および重鎖のＣＨ１ドメインを含む。
る。例えば、本発明のＦａｂフラグメントおよびＦ（ａｂ’）２フラグメントは
、パパイン（Ｆａｂフラグメントを産生するため）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’
）２フラグメントを産生するため）のような酵素を使用して、免疫グロブリン分
子のタンパク質分解性切断によって産生され得る。Ｆ（ａｂ’）２フラグメント
は、可変領域、軽鎖定常領域および重鎖のＣＨ１ドメインを含む。
【０２０１】
例えば、本発明の抗体はまた、当該分野に公知の種々のファージディスプレイ
方法を用いて産生され得る。ファージディスプレイ方法において、機能的な抗体
ドメインは、それらをコードするポリヌクレオチド配列を保有するファージ粒子
の表面上に提示される。特定の実施形態において、このようなファージを、レパ
ートリー抗体ライブラリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、
ヒトまたはマウス）から発現される抗原結合ドメインを提示するために利用し得
る。目的の抗原と結合する抗原結合ドメインを発現するファージを、抗原を用い
て、（例えば、標識化抗原、あるいは固体表面または固体ビーズへ結合または捕
捉された抗原を使用して）選択または同定し得る。これらの方法において使用さ
れるファージは、代表的に、ファージ遺伝子ＩＩＩタンパク質またはファージ遺
伝子ＶＩＩＩタンパク質のいずれかに組換え的に融合されたＦａｂ、Ｆｖまたは
ジスルフィド安定化されたＦｖの抗体ドメインを有するファージから発現された
ｆｄおよびＭ１３結合ドメインを含む糸状（ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ）ファージ
である。本発明の抗体を作製するために用いられ得るファージディスプレイ方法
の例としては、以下に開示される方法が挙げられる：Ｂｒｉｎｋｍａｎら、Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８２：４１〜５０（１９９５）；Ａｍｅｓ
ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８４：１７７〜１８６（１９９５
）；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：９５
２〜９５８（１９９４）；Ｐｅｒｓｉｃら、Ｇｅｎｅ １８７ ９〜１８（１９
９７）；Ｂｕｒｔｏｎら、Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５
７：１９１〜２８０（１９９４）；ＰＣＴ公開 ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４
；ＰＣＴ公開 ＷＯ９０／０２８０９；ＷＯ９１／１０７３７；ＷＯ９２／０１
０４７；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９３／１１２３６；ＷＯ９５／１５９８２
；ＷＯ９５／２０４０１；ならびに米国特許第５，６９８，４２６号；同第５，
２２３，４０９号；同第５，４０３，４８４号；同第５，５８０，７１７号；同
第５，４２７，９０８号；同第５，７５０，７５３号；同第５，８２１，０４７
号；同第５，５７１，６９８号；同第５，４２７，９０８号；同第５，５１６，
６３７号；同第５，７８０，２２５号；同第５，６５８，７２７号；同第５，７
３３，７４３号および同第５，９６９，１０８号（これらのそれぞれは、その全
体が参考として援用される）。
方法を用いて産生され得る。ファージディスプレイ方法において、機能的な抗体
ドメインは、それらをコードするポリヌクレオチド配列を保有するファージ粒子
の表面上に提示される。特定の実施形態において、このようなファージを、レパ
ートリー抗体ライブラリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、
ヒトまたはマウス）から発現される抗原結合ドメインを提示するために利用し得
る。目的の抗原と結合する抗原結合ドメインを発現するファージを、抗原を用い
て、（例えば、標識化抗原、あるいは固体表面または固体ビーズへ結合または捕
捉された抗原を使用して）選択または同定し得る。これらの方法において使用さ
れるファージは、代表的に、ファージ遺伝子ＩＩＩタンパク質またはファージ遺
伝子ＶＩＩＩタンパク質のいずれかに組換え的に融合されたＦａｂ、Ｆｖまたは
ジスルフィド安定化されたＦｖの抗体ドメインを有するファージから発現された
ｆｄおよびＭ１３結合ドメインを含む糸状（ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ）ファージ
である。本発明の抗体を作製するために用いられ得るファージディスプレイ方法
の例としては、以下に開示される方法が挙げられる：Ｂｒｉｎｋｍａｎら、Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８２：４１〜５０（１９９５）；Ａｍｅｓ
ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８４：１７７〜１８６（１９９５
）；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：９５
２〜９５８（１９９４）；Ｐｅｒｓｉｃら、Ｇｅｎｅ １８７ ９〜１８（１９
９７）；Ｂｕｒｔｏｎら、Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５
７：１９１〜２８０（１９９４）；ＰＣＴ公開 ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４
；ＰＣＴ公開 ＷＯ９０／０２８０９；ＷＯ９１／１０７３７；ＷＯ９２／０１
０４７；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９３／１１２３６；ＷＯ９５／１５９８２
；ＷＯ９５／２０４０１；ならびに米国特許第５，６９８，４２６号；同第５，
２２３，４０９号；同第５，４０３，４８４号；同第５，５８０，７１７号；同
第５，４２７，９０８号；同第５，７５０，７５３号；同第５，８２１，０４７
号；同第５，５７１，６９８号；同第５，４２７，９０８号；同第５，５１６，
６３７号；同第５，７８０，２２５号；同第５，６５８，７２７号；同第５，７
３３，７４３号および同第５，９６９，１０８号（これらのそれぞれは、その全
体が参考として援用される）。
【０２０２】
上記参考文献に記載されているように、ファージ選択後、ファージ由来の抗体
をコードする領域は、ヒト抗体を含む抗体の全体、または任意の他の所望の抗原
結合フラグメントを作製するために単離および使用され得、そして例えば、以下
に詳細に記載されるように、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母および細
菌を含む任意の所望の宿主において発現され得る。例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’お
よびＦ（ａｂ’）２フラグメントを組換え的に産生するための技術はまた、当該
分野で公知の方法を用いて使用され得る。この方法は、例えば、以下に開示され
る方法である：ＰＣＴ公開ＷＯ９２／２２３２４；Ｍｕｌｌｉｎａｘら、Ｂｉｏ
Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １２（６）：８６４−８６９（１９９２）；およびＳａ
ｗａｉら、ＡＪＲＩ ３４：２６−３４（１９９５）；およびＢｅｔｔｅｒら、
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１−１０４３（１９９８）（上記の参考文献は
、その全体が参考として援用される）。
をコードする領域は、ヒト抗体を含む抗体の全体、または任意の他の所望の抗原
結合フラグメントを作製するために単離および使用され得、そして例えば、以下
に詳細に記載されるように、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母および細
菌を含む任意の所望の宿主において発現され得る。例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’お
よびＦ（ａｂ’）２フラグメントを組換え的に産生するための技術はまた、当該
分野で公知の方法を用いて使用され得る。この方法は、例えば、以下に開示され
る方法である：ＰＣＴ公開ＷＯ９２／２２３２４；Ｍｕｌｌｉｎａｘら、Ｂｉｏ
Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １２（６）：８６４−８６９（１９９２）；およびＳａ
ｗａｉら、ＡＪＲＩ ３４：２６−３４（１９９５）；およびＢｅｔｔｅｒら、
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１−１０４３（１９９８）（上記の参考文献は
、その全体が参考として援用される）。
【０２０３】
単鎖のＦｖｓおよび抗体を産生するために用いられ得る技術の例としては、米
国特許第４，９４６，７７８号および同第５，２５８，４９８号；Ｈｕｓｔｏｎ
ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２０３：４６−８８（１９
９１）；Ｓｈｕら、ＰＮＡＳ ９０：７９９５−７９９９（１９９３）；および
Ｓｋｅｒｒａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０３８−１０４０（１９８８）に
記載される技術が挙げられる。ヒトにおける抗体のインビボ使用およびインビト
ロ検出アッセイを含むいくつかの用途のために、キメラ抗体、ヒト化抗体または
ヒト抗体の使用が好ましくあり得る。キメラ抗体は、この抗体の異なる部分が異
なる動物種に由来する分子（例えば、マウスモノクローナル抗体由来の可変領域
およびヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体）である。キメラ抗体を産生す
るための方法は、当該分野において公知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２（１９８５）；Ｏｉら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑ
ｕｅｓ ４：２１４（１９８６）；Ｇｉｌｌｉｅｓら、（１９８９）Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １２５：１９１−２０２；および米国特許第５，８
０７，７１５号；同第４，８１６，５６７号；および同第４，８１６，３９７号
を参照のこと（これらは、本明細書中でその全体が参照として援用される）。ヒ
ト化抗体は、非ヒト種由来の１以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）およびヒト免疫
グロブリン分子由来のフレームワーク領域を有する所望の抗原に結合する、非ヒ
ト種抗体由来の抗体分子である。しばしば、ヒトフレームワーク領域におけるフ
レームワーク残基は、ＣＤＲドナー抗体由来の対応する残基と置換され、抗原結
合を改変（好ましくは、改善）する。これらのフレームワーク置換は、当該分野
で周知の方法により同定され、例えば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を
同定するためのＣＤＲとフレームワーク残基との相互作用のモデリング、ならび
に特定の位置における異常なフレームワーク残基を同定するための配列比較によ
る。（例えば、Ｑｕｅｅｎら、米国特許第５，５８５，０８９号；Ｒｉｅｃｈｍ
ａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３（１９８８）（これらは本明細書中で
その全体が参考として援用される）を参照のこと）。抗体は、例えば、以下を含
む当該分野で公知の種々の技術を用いてヒト化され得る：ＣＤＲ−グラフティン
グ（ｇｒａｆｔｉｎｇ）（欧州特許第２３９，４００号；ＰＣＴ公開 ＷＯ９１
／０９９６７；米国特許第５，２２５，５３９号；同第５，５３０，１０１号お
よび同第５，５８５，０８９号）、ベニヤリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）または
リサーフェイシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（欧州特許第５９２，１０６号
；欧州特許第５１９，５９６号；Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕ
ｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９−４９８（１９９１）； Ｓｔｕｄｎｉ
ｃｋａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７（６）：８０５−８１
４（１９９４）；Ｒｏｇｕｓｋａら、ＰＮＡＳ ９１：９６９−９７３（１９９
４））、およびチェーンシャッフリング（ｃｈａｉｎ ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）（
米国特許第５，５６５，３３２号）。
国特許第４，９４６，７７８号および同第５，２５８，４９８号；Ｈｕｓｔｏｎ
ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２０３：４６−８８（１９
９１）；Ｓｈｕら、ＰＮＡＳ ９０：７９９５−７９９９（１９９３）；および
Ｓｋｅｒｒａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０３８−１０４０（１９８８）に
記載される技術が挙げられる。ヒトにおける抗体のインビボ使用およびインビト
ロ検出アッセイを含むいくつかの用途のために、キメラ抗体、ヒト化抗体または
ヒト抗体の使用が好ましくあり得る。キメラ抗体は、この抗体の異なる部分が異
なる動物種に由来する分子（例えば、マウスモノクローナル抗体由来の可変領域
およびヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体）である。キメラ抗体を産生す
るための方法は、当該分野において公知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２（１９８５）；Ｏｉら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑ
ｕｅｓ ４：２１４（１９８６）；Ｇｉｌｌｉｅｓら、（１９８９）Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １２５：１９１−２０２；および米国特許第５，８
０７，７１５号；同第４，８１６，５６７号；および同第４，８１６，３９７号
を参照のこと（これらは、本明細書中でその全体が参照として援用される）。ヒ
ト化抗体は、非ヒト種由来の１以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）およびヒト免疫
グロブリン分子由来のフレームワーク領域を有する所望の抗原に結合する、非ヒ
ト種抗体由来の抗体分子である。しばしば、ヒトフレームワーク領域におけるフ
レームワーク残基は、ＣＤＲドナー抗体由来の対応する残基と置換され、抗原結
合を改変（好ましくは、改善）する。これらのフレームワーク置換は、当該分野
で周知の方法により同定され、例えば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を
同定するためのＣＤＲとフレームワーク残基との相互作用のモデリング、ならび
に特定の位置における異常なフレームワーク残基を同定するための配列比較によ
る。（例えば、Ｑｕｅｅｎら、米国特許第５，５８５，０８９号；Ｒｉｅｃｈｍ
ａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３（１９８８）（これらは本明細書中で
その全体が参考として援用される）を参照のこと）。抗体は、例えば、以下を含
む当該分野で公知の種々の技術を用いてヒト化され得る：ＣＤＲ−グラフティン
グ（ｇｒａｆｔｉｎｇ）（欧州特許第２３９，４００号；ＰＣＴ公開 ＷＯ９１
／０９９６７；米国特許第５，２２５，５３９号；同第５，５３０，１０１号お
よび同第５，５８５，０８９号）、ベニヤリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）または
リサーフェイシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（欧州特許第５９２，１０６号
；欧州特許第５１９，５９６号；Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕ
ｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９−４９８（１９９１）； Ｓｔｕｄｎｉ
ｃｋａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７（６）：８０５−８１
４（１９９４）；Ｒｏｇｕｓｋａら、ＰＮＡＳ ９１：９６９−９７３（１９９
４））、およびチェーンシャッフリング（ｃｈａｉｎ ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）（
米国特許第５，５６５，３３２号）。
【０２０４】
完全なヒト抗体が、ヒト患者の治療的処置に対して特に望ましい。ヒト抗体は
、当該分野で公知の種々の方法によって作製され得、これらの方法としては、ヒ
ト免疫グロブリン配列由来の抗体ライブラリーを用いる上記のファージディスプ
レイ方法が挙げられる。米国特許第４，４４４，８８７号および同第４，７１６
，１１１号；ならびにＰＣＴ公開ＷＯ９８／４６６４５、ＷＯ９８／５０４３３
、ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９８／１６６５４、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ
９６／３３７３５、およびＷＯ９１／１０７４１（これらの各々は、その全体が
参考として本明細書中に援用される）もまた参照のこと。
、当該分野で公知の種々の方法によって作製され得、これらの方法としては、ヒ
ト免疫グロブリン配列由来の抗体ライブラリーを用いる上記のファージディスプ
レイ方法が挙げられる。米国特許第４，４４４，８８７号および同第４，７１６
，１１１号；ならびにＰＣＴ公開ＷＯ９８／４６６４５、ＷＯ９８／５０４３３
、ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９８／１６６５４、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ
９６／３３７３５、およびＷＯ９１／１０７４１（これらの各々は、その全体が
参考として本明細書中に援用される）もまた参照のこと。
【０２０５】
ヒト抗体はまた、機能的内因性免疫グロブリンの発現は出来ないが、ヒト免疫
グロブリン遺伝子を発現し得るトランスジェニックマウスを用いて産生され得る
。例えば、ヒト重鎖免疫グロブリン遺伝子およびヒト軽鎖免疫グロブリン遺伝子
の複合体は、無作為にまたは相同組換えによってマウス胚性幹細胞に導入され得
る。あるいは、ヒト可変領域、定常領域および多様性領域（ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｒｅｇｉｏｎ）は、ヒト重鎖遺伝子およびヒト軽鎖遺伝子に加えて、マウスの
胚性幹細胞に導入され得る。マウス重鎖免疫グロブリン遺伝子およびマウス軽鎖
免疫グロブリン遺伝子は、相同組換えによるヒト免疫グロブリン座の導入と別々
にまたは同時に非機能的にされ得る。特に、ＪＨ領域のホモ接合性の欠失は、内
因性抗体の産生を妨げる。この改変された胚性幹細胞を増殖させ、そして胚盤胞
に微量注入して、キメラマウスを産生する。次に、このキメラマウスを、ヒト抗
体を発現するホモ接合性の子孫を産生するために繁殖させる。トランスジェニッ
クマウスを、選択された抗原（例えば、本発明のポリペプチドの全体または一部
）を用いて通常の様式で免疫する。その抗原に対するモノクローナル抗体は、従
来のハイブリドーマ技術を用いた免疫したトランスジェニックマウスから得られ
得る。ヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、Ｂ細胞分化の間のトランスジェニック
マウスの再編成によってかくまわれ（ｈａｒｂｏｒｅｄ）、そしてその後、クラ
ススイッチングおよび体細胞変異を受ける。従って、そのような技術の使用によ
って、治療的に有用なＩｇＧ抗体、ＩｇＡ抗体、ＩｇＭ抗体およびＩｇＥ抗体の
産生が可能である。ヒト抗体を産生するためのこの技術の概要については、Ｌｏ
ｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ、Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５
−９３（１９９５）を参照のこと。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を産
生するためのこの技術のならびにそのような抗体を産生するためのプロトコール
の詳細な議論については、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９８／２４８９３；ＷＯ９２
／０１０４７；ＷＯ９６／３４０９６；ＷＯ９６／３３７３５；欧州特許第０
５９８ ８７７；米国特許第５，４１３，９２３号；同第５，６２５，１２６号
；同第５，６３３，４２５号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６６１，０
１６号；同第５，５４５，８０６号；同第５，８１４，３１８号；同第５，８８
５，７９３号；同第５，９１６，７７１号；および同第５，９３９，５９８号を
参照のこと（これらは、その全体が本明細書中に参考として援用される）。さら
に、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｅｍｏｎｔ，ＣＡ）およびＧｅｎｐｈａ
ｒｍ（Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）のような企業は、上記の技術に類似した技術を
用いて選択された抗原に対するヒト抗体を提供することに従事し得る。
グロブリン遺伝子を発現し得るトランスジェニックマウスを用いて産生され得る
。例えば、ヒト重鎖免疫グロブリン遺伝子およびヒト軽鎖免疫グロブリン遺伝子
の複合体は、無作為にまたは相同組換えによってマウス胚性幹細胞に導入され得
る。あるいは、ヒト可変領域、定常領域および多様性領域（ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｒｅｇｉｏｎ）は、ヒト重鎖遺伝子およびヒト軽鎖遺伝子に加えて、マウスの
胚性幹細胞に導入され得る。マウス重鎖免疫グロブリン遺伝子およびマウス軽鎖
免疫グロブリン遺伝子は、相同組換えによるヒト免疫グロブリン座の導入と別々
にまたは同時に非機能的にされ得る。特に、ＪＨ領域のホモ接合性の欠失は、内
因性抗体の産生を妨げる。この改変された胚性幹細胞を増殖させ、そして胚盤胞
に微量注入して、キメラマウスを産生する。次に、このキメラマウスを、ヒト抗
体を発現するホモ接合性の子孫を産生するために繁殖させる。トランスジェニッ
クマウスを、選択された抗原（例えば、本発明のポリペプチドの全体または一部
）を用いて通常の様式で免疫する。その抗原に対するモノクローナル抗体は、従
来のハイブリドーマ技術を用いた免疫したトランスジェニックマウスから得られ
得る。ヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、Ｂ細胞分化の間のトランスジェニック
マウスの再編成によってかくまわれ（ｈａｒｂｏｒｅｄ）、そしてその後、クラ
ススイッチングおよび体細胞変異を受ける。従って、そのような技術の使用によ
って、治療的に有用なＩｇＧ抗体、ＩｇＡ抗体、ＩｇＭ抗体およびＩｇＥ抗体の
産生が可能である。ヒト抗体を産生するためのこの技術の概要については、Ｌｏ
ｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ、Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５
−９３（１９９５）を参照のこと。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を産
生するためのこの技術のならびにそのような抗体を産生するためのプロトコール
の詳細な議論については、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９８／２４８９３；ＷＯ９２
／０１０４７；ＷＯ９６／３４０９６；ＷＯ９６／３３７３５；欧州特許第０
５９８ ８７７；米国特許第５，４１３，９２３号；同第５，６２５，１２６号
；同第５，６３３，４２５号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６６１，０
１６号；同第５，５４５，８０６号；同第５，８１４，３１８号；同第５，８８
５，７９３号；同第５，９１６，７７１号；および同第５，９３９，５９８号を
参照のこと（これらは、その全体が本明細書中に参考として援用される）。さら
に、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｅｍｏｎｔ，ＣＡ）およびＧｅｎｐｈａ
ｒｍ（Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）のような企業は、上記の技術に類似した技術を
用いて選択された抗原に対するヒト抗体を提供することに従事し得る。
【０２０６】
選択されたエピトープを完全に認識するヒト抗体を、「ガイドされた（ｇｕｉ
ｄｅｄ）選択」といわれる技術を用いて産生し得る。このアプローチにおいて、
選択された非ヒトモノクローナル抗体（例えば、マウス抗体）は、同じエピトー
プを完全に認識するヒト抗体の選択を導くために使用される（Ｊｅｓｐｅｒｓら
、Ｂｉｏ／ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １２：８９９−９０３（１９８８））。
ｄｅｄ）選択」といわれる技術を用いて産生し得る。このアプローチにおいて、
選択された非ヒトモノクローナル抗体（例えば、マウス抗体）は、同じエピトー
プを完全に認識するヒト抗体の選択を導くために使用される（Ｊｅｓｐｅｒｓら
、Ｂｉｏ／ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １２：８９９−９０３（１９８８））。
【０２０７】
さらに、本発明のポリペプチドに対する抗体は、当業者に周知の技術を用いて
、本発明のポリペプチドを「模倣する」抗イディオタイプ抗体を生成するために
順々に利用され得る。（例えば、ＧｒｅｅｎｓｐａｎおよびＢｏｎａ、ＦＡＳＥ
Ｂ Ｊ．７（５）：４３７−４４４（１９８９）；ならびにＮｉｓｓｉｎｏｆｆ
、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（８）：２４２９−２４３８（１９９１）を参照
のこと）。例えば、結合し、そしてポリペプチドのマルチマー化（ｍｕｌｔｉｍ
ｅｒｉｚａｔｉｏｎ）および／または本発明のポリペプチドのリガンドに対する
結合を競合的に阻害する抗体を用いて、このポリペプチドのマルチマー化および
／または結合ドメインを「模倣し」、そして結果として、ポリペプチドおよび／
またはそのリガンドに結合し、そして中和する抗イディオタイプを生成し得る。
このような中和抗イディオタイプまたはこのような抗イディオタイプのＦａｂフ
ラグメントは、治療レジメンにおいて使用されて、ポリペプチドリガンドを中和
し得る。例えば、このような抗イディオタイプ抗体を使用して、本発明のポリペ
プチドを結合し得るか、そして／またはそのリガンド／レセプターを結合し得、
それによって、その生物学的活性をブロックし得る。
、本発明のポリペプチドを「模倣する」抗イディオタイプ抗体を生成するために
順々に利用され得る。（例えば、ＧｒｅｅｎｓｐａｎおよびＢｏｎａ、ＦＡＳＥ
Ｂ Ｊ．７（５）：４３７−４４４（１９８９）；ならびにＮｉｓｓｉｎｏｆｆ
、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（８）：２４２９−２４３８（１９９１）を参照
のこと）。例えば、結合し、そしてポリペプチドのマルチマー化（ｍｕｌｔｉｍ
ｅｒｉｚａｔｉｏｎ）および／または本発明のポリペプチドのリガンドに対する
結合を競合的に阻害する抗体を用いて、このポリペプチドのマルチマー化および
／または結合ドメインを「模倣し」、そして結果として、ポリペプチドおよび／
またはそのリガンドに結合し、そして中和する抗イディオタイプを生成し得る。
このような中和抗イディオタイプまたはこのような抗イディオタイプのＦａｂフ
ラグメントは、治療レジメンにおいて使用されて、ポリペプチドリガンドを中和
し得る。例えば、このような抗イディオタイプ抗体を使用して、本発明のポリペ
プチドを結合し得るか、そして／またはそのリガンド／レセプターを結合し得、
それによって、その生物学的活性をブロックし得る。
【０２０８】
（抗体をコードするポリヌクレオチド）
本発明はさらに、本発明の抗体およびそのフラグメントをコードするヌクレオ
チド配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明はまた、ストリンジェント
な条件下またはより低いストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で（
例えば、上記のような）、抗体（好ましくは、本発明のポリペプチドへ特異的に
結合する抗体）をコードするポリヌクレオチド、好ましくは、配列番号Ｙのアミ
ノ酸配列を有するポリヌクレオチドに結合する抗体をコードするポリヌクレオチ
ド、に対してハイブリダイズするポリヌクレオチドを含む。
チド配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明はまた、ストリンジェント
な条件下またはより低いストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で（
例えば、上記のような）、抗体（好ましくは、本発明のポリペプチドへ特異的に
結合する抗体）をコードするポリヌクレオチド、好ましくは、配列番号Ｙのアミ
ノ酸配列を有するポリヌクレオチドに結合する抗体をコードするポリヌクレオチ
ド、に対してハイブリダイズするポリヌクレオチドを含む。
【０２０９】
当該分野で公知の任意の方法によって、これらのポリヌクレオチドが得られ得
、そしてこれらポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が、決定され得る。例えば
、抗体のヌクレオチド配列が公知である場合、この抗体をコードするポリヌクレ
オチドは、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドからアセンブルされ得（例え
ば、Ｋｕｔｍｅｉｅｒら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １７：２４２（１９９
４）に記載されるように）、これは、手短に言えば、抗体をコードする配列の部
分を含むオーバーラップするヌクレオチドの合成、それらのオリゴヌクレオチド
のアニーリングおよび連結、ならびに次いでＰＣＲによるこの連結されたオリゴ
ヌクレオチドの増幅を含む。
、そしてこれらポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が、決定され得る。例えば
、抗体のヌクレオチド配列が公知である場合、この抗体をコードするポリヌクレ
オチドは、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドからアセンブルされ得（例え
ば、Ｋｕｔｍｅｉｅｒら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １７：２４２（１９９
４）に記載されるように）、これは、手短に言えば、抗体をコードする配列の部
分を含むオーバーラップするヌクレオチドの合成、それらのオリゴヌクレオチド
のアニーリングおよび連結、ならびに次いでＰＣＲによるこの連結されたオリゴ
ヌクレオチドの増幅を含む。
【０２１０】
あるいは、抗体をコードするポリヌクレオチドは、適切な供給源からの核酸か
ら作製され得る。特定の抗体をコードする核酸を含むクローンは入手不可能だが
、その抗体分子の配列が既知である場合、免疫グロブリンをコードする核酸は、
化学的に合成され得るか、あるいは適切な供給源（例えば、抗体ｃＤＮＡライブ
ラリー、または抗体を発現する任意の組織もしくは細胞（例えば、本発明の抗体
の発現のために選択されたハイブリドーマ細胞）から生成されたｃＤＮＡライブ
ラリー、またはそれから単離された核酸（好ましくはポリＡ＋ＲＮＡ））を、例
えば、抗体をコードするｃＤＮＡライブラリーからのｃＤＮＡクローンを同定す
るために、その配列の３’末端および５’末端にハイブリダイズ可能な合成プラ
イマーを使用するＰＣＲ増幅によって、またはその特定の遺伝子配列に特異的な
オリゴヌクレオチドプローブを使用するクローニングによって得られ得る。ＰＣ
Ｒによって作製された増幅された核酸は、次いで、当該分野で周知の任意の方法
を用いて、複製可能なクローニングベクターにクローニングされ得る。
ら作製され得る。特定の抗体をコードする核酸を含むクローンは入手不可能だが
、その抗体分子の配列が既知である場合、免疫グロブリンをコードする核酸は、
化学的に合成され得るか、あるいは適切な供給源（例えば、抗体ｃＤＮＡライブ
ラリー、または抗体を発現する任意の組織もしくは細胞（例えば、本発明の抗体
の発現のために選択されたハイブリドーマ細胞）から生成されたｃＤＮＡライブ
ラリー、またはそれから単離された核酸（好ましくはポリＡ＋ＲＮＡ））を、例
えば、抗体をコードするｃＤＮＡライブラリーからのｃＤＮＡクローンを同定す
るために、その配列の３’末端および５’末端にハイブリダイズ可能な合成プラ
イマーを使用するＰＣＲ増幅によって、またはその特定の遺伝子配列に特異的な
オリゴヌクレオチドプローブを使用するクローニングによって得られ得る。ＰＣ
Ｒによって作製された増幅された核酸は、次いで、当該分野で周知の任意の方法
を用いて、複製可能なクローニングベクターにクローニングされ得る。
【０２１１】
一旦、抗体のヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列が決定されると、
抗体のヌクレオチド配列は、ヌクレオチド配列の操作について当該分野で周知の
方法（例えば、組換えＤＮＡ技術、部位指向性変異誘発、ＰＣＲなど（例えば、
Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９９０，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒ
ｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ
およびＡｕｓｕｂｅｌら編、１９９８，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ
ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ
，ＮＹに記載の技術を参照のこと。これらは両方がその全体において本明細書に
参考として援用される。））を用いて操作され、例えば、アミノ酸の置換、欠失
、および／または挿入を生成するように異なるアミノ酸配列を有する抗体を作製
し得る。
抗体のヌクレオチド配列は、ヌクレオチド配列の操作について当該分野で周知の
方法（例えば、組換えＤＮＡ技術、部位指向性変異誘発、ＰＣＲなど（例えば、
Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９９０，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒ
ｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ
およびＡｕｓｕｂｅｌら編、１９９８，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ
ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ
，ＮＹに記載の技術を参照のこと。これらは両方がその全体において本明細書に
参考として援用される。））を用いて操作され、例えば、アミノ酸の置換、欠失
、および／または挿入を生成するように異なるアミノ酸配列を有する抗体を作製
し得る。
【０２１２】
特定の実施形態では、重鎖および／または軽鎖の可変ドメインのアミノ酸配列
は、相補性決定領域（ＣＤＲ）の配列を同定するために、当該分野で周知の方法
、例えば、他の重鎖および軽鎖の可変領域の既知のアミノ酸配列を比較して、配
列超可変性領域を決定する方法、によって、調べられ得る。慣用的組換えＤＮＡ
技術を使用して、一つ以上のＣＤＲが、フレームワーク領域内、例えば、上記の
ように、非ヒト抗体をヒト化させるためにヒトフレームワーク領域内に挿入され
得る。このフレームワーク領域は、天然に存在、または共通するフレームワーク
領域であり得、そして好ましくはヒトフレームワーク領域であり得る（ヒトフレ
ームワーク領域の一覧については、例えばＣｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉ
ｏｌ． ２７８：４５７−４７９（１９９８）を参照のこと）。好ましくは、フ
レームワーク領域およびＣＤＲの組合せによって生成するポリヌクレオチドは、
本発明のポリペプチドに特異的に結合する抗体をコードする。好ましくは、上で
考察したように、一つ以上のアミノ酸の置換は、フレームワーク領域内で起こり
、そして好ましくは、このアミノ酸置換は、その抗原への抗体の結合を改善する
。さらに、このような方法は、アミノ酸置換させるため、または鎖内ジスルフィ
ド結合に参加している一つ以上の可変領域システイン残基を欠失させて、一つ以
上の鎖内ジスルフィド結合が欠けた抗体分子を生成させるために、使用され得る
。ポリペプチドに対する他の改変は、本発明および当該分野の技術によって達成
される。
は、相補性決定領域（ＣＤＲ）の配列を同定するために、当該分野で周知の方法
、例えば、他の重鎖および軽鎖の可変領域の既知のアミノ酸配列を比較して、配
列超可変性領域を決定する方法、によって、調べられ得る。慣用的組換えＤＮＡ
技術を使用して、一つ以上のＣＤＲが、フレームワーク領域内、例えば、上記の
ように、非ヒト抗体をヒト化させるためにヒトフレームワーク領域内に挿入され
得る。このフレームワーク領域は、天然に存在、または共通するフレームワーク
領域であり得、そして好ましくはヒトフレームワーク領域であり得る（ヒトフレ
ームワーク領域の一覧については、例えばＣｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉ
ｏｌ． ２７８：４５７−４７９（１９９８）を参照のこと）。好ましくは、フ
レームワーク領域およびＣＤＲの組合せによって生成するポリヌクレオチドは、
本発明のポリペプチドに特異的に結合する抗体をコードする。好ましくは、上で
考察したように、一つ以上のアミノ酸の置換は、フレームワーク領域内で起こり
、そして好ましくは、このアミノ酸置換は、その抗原への抗体の結合を改善する
。さらに、このような方法は、アミノ酸置換させるため、または鎖内ジスルフィ
ド結合に参加している一つ以上の可変領域システイン残基を欠失させて、一つ以
上の鎖内ジスルフィド結合が欠けた抗体分子を生成させるために、使用され得る
。ポリペプチドに対する他の改変は、本発明および当該分野の技術によって達成
される。
【０２１３】
さらに、適切な抗原特異性のマウス抗体分子からの遺伝子を、適切な生物学的
活性のヒト抗体分子からの遺伝子とともに、スプライシングすることによる、「
キメラ抗体」（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
８１：８５１−８５５（１９８４）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３
１２：６０４−６０８（１９８４）；Ｔａｋｅｄａら、Ｎａｔｕｒｅ ３１４：
４５２−４５４（１９８５））の産生のために開発された技術が、使用され得る
。上記のように、キメラ抗体は、異なる部分が異なる動物の種に由来する分子（
例えばマウスｍＡｂに由来する可変領域およびヒト免疫グロブリン定常領域を有
する分子）であり、例えばヒト化抗体である。
活性のヒト抗体分子からの遺伝子とともに、スプライシングすることによる、「
キメラ抗体」（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
８１：８５１−８５５（１９８４）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３
１２：６０４−６０８（１９８４）；Ｔａｋｅｄａら、Ｎａｔｕｒｅ ３１４：
４５２−４５４（１９８５））の産生のために開発された技術が、使用され得る
。上記のように、キメラ抗体は、異なる部分が異なる動物の種に由来する分子（
例えばマウスｍＡｂに由来する可変領域およびヒト免疫グロブリン定常領域を有
する分子）であり、例えばヒト化抗体である。
【０２１４】
あるいは、一本鎖抗体の産生について記載された技術（米国特許第４，９４６
，７７８号；Ｂｉｒｄ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２（１９９８）；
Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８
７９−５８８３（１９９８）；およびＷａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５４
４−５４（１９８９））は、一本鎖抗体を産生するために適合され得る。一本鎖
抗体は、アミノ酸架橋を介して、Ｆｖ領域の重鎖および軽鎖フラグメントを連結
し、一本鎖ポリペプチドを生じることによって形成される。Ｅ．ｃｏｌｉにおけ
る機能的Ｆｖフラグメントのアセンブリのための技術もまた使用され得る（Ｓｋ
ｅｒｒａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：１０３８−１０４１（１９９８））。
，７７８号；Ｂｉｒｄ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２（１９９８）；
Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８
７９−５８８３（１９９８）；およびＷａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５４
４−５４（１９８９））は、一本鎖抗体を産生するために適合され得る。一本鎖
抗体は、アミノ酸架橋を介して、Ｆｖ領域の重鎖および軽鎖フラグメントを連結
し、一本鎖ポリペプチドを生じることによって形成される。Ｅ．ｃｏｌｉにおけ
る機能的Ｆｖフラグメントのアセンブリのための技術もまた使用され得る（Ｓｋ
ｅｒｒａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：１０３８−１０４１（１９９８））。
【０２１５】
（抗体産生の方法）
本発明の抗体は、抗体の合成について当該技術分野で公知の方法によって、特
に化学合成によって、または好ましくは組換え発現技術によって、産生され得る
。
に化学合成によって、または好ましくは組換え発現技術によって、産生され得る
。
【０２１６】
本発明の抗体、またはそのフラグメント、誘導体もしくはアナログ（例えば、
本発明の抗体の重鎖もしくは軽鎖、または本発明の一本鎖抗体）の組換え発現は
、抗体をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの構築を必要とする。
本発明の、抗体分子または抗体の重鎖もしくは軽鎖、またはそれらの部分（好ま
しくは重鎖もしくは軽鎖の可変ドメインを含む）をコードするポリヌクレオチド
が一旦得られれば、抗体分子の産生のためのベクターは、当該分野で周知の技術
を使用する組換えＤＮＡ技術によって産生され得る。従って、ヌクレオチド配列
をコードする抗体を含むポリヌクレオチドの発現によってタンパク質を調製する
ための方法は、本明細書中に記載される。当業者に周知の方法は、抗体コード配
列ならびに適切な転写および翻訳制御シグナルを含む発現ベクターを構築するた
めに使用され得る。これらの方法は、例えば，インビトロ組換えＤＮＡ技術、合
成技術、およびインビボ遺伝子組換えを含む。従って、本発明は、本発明の抗体
分子をコードするヌクレオチド配列、またはその重鎖もしくは軽鎖、またはプロ
モーターに作動可能に連結された、重鎖もしくは軽鎖の可変ドメイン、を含む複
製可能ベクターを提供する。このようなベクターは、抗体分子の定常領域をコー
ドするヌクレオチド配列を含み（例えば、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ ８６／０５８
０７号；ＰＣＴ国際公開第ＷＯ ８９／０１０３６；および米国特許第５，１２
２，４６４号を参照のこと。）、そして、この抗体の可変領域は、重鎖または軽
鎖の全体の発現のためにこのようなベクター内にクローニングされ得る。
本発明の抗体の重鎖もしくは軽鎖、または本発明の一本鎖抗体）の組換え発現は
、抗体をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの構築を必要とする。
本発明の、抗体分子または抗体の重鎖もしくは軽鎖、またはそれらの部分（好ま
しくは重鎖もしくは軽鎖の可変ドメインを含む）をコードするポリヌクレオチド
が一旦得られれば、抗体分子の産生のためのベクターは、当該分野で周知の技術
を使用する組換えＤＮＡ技術によって産生され得る。従って、ヌクレオチド配列
をコードする抗体を含むポリヌクレオチドの発現によってタンパク質を調製する
ための方法は、本明細書中に記載される。当業者に周知の方法は、抗体コード配
列ならびに適切な転写および翻訳制御シグナルを含む発現ベクターを構築するた
めに使用され得る。これらの方法は、例えば，インビトロ組換えＤＮＡ技術、合
成技術、およびインビボ遺伝子組換えを含む。従って、本発明は、本発明の抗体
分子をコードするヌクレオチド配列、またはその重鎖もしくは軽鎖、またはプロ
モーターに作動可能に連結された、重鎖もしくは軽鎖の可変ドメイン、を含む複
製可能ベクターを提供する。このようなベクターは、抗体分子の定常領域をコー
ドするヌクレオチド配列を含み（例えば、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ ８６／０５８
０７号；ＰＣＴ国際公開第ＷＯ ８９／０１０３６；および米国特許第５，１２
２，４６４号を参照のこと。）、そして、この抗体の可変領域は、重鎖または軽
鎖の全体の発現のためにこのようなベクター内にクローニングされ得る。
【０２１７】
発現ベクターは、従来の技術によって宿主細胞に移入され、次いでトランスフ
ェクト細胞は、従来の技術によって本発明の抗体を産生するために培養される。
従って、本発明は、本発明の抗体をコードするポリヌクレオチド、またはその重
鎖もしくは軽鎖、または異種のプロモーターに作動可能に連結された、本発明の
一本鎖抗体を含む宿主細胞を含む。二本鎖抗体の発現のための好ましい実施形態
では、重鎖および軽鎖の両方をコードするベクターは、下記の詳細のように、免
疫グロブリン分子全体の発現のための宿主細胞において共発現され得る。
ェクト細胞は、従来の技術によって本発明の抗体を産生するために培養される。
従って、本発明は、本発明の抗体をコードするポリヌクレオチド、またはその重
鎖もしくは軽鎖、または異種のプロモーターに作動可能に連結された、本発明の
一本鎖抗体を含む宿主細胞を含む。二本鎖抗体の発現のための好ましい実施形態
では、重鎖および軽鎖の両方をコードするベクターは、下記の詳細のように、免
疫グロブリン分子全体の発現のための宿主細胞において共発現され得る。
【０２１８】
種々の宿主発現ベクター系は、本発明の抗体分子を発現させるために利用され
得る。このような宿主発現系は、目的のコード配列が産生され、かつ続いて精製
され得るビヒクルを表わすが、また、適切なヌクレオチドをコードする配列で形
質転換またはトランスフェクトされる場合に、インサイチュで本発明の抗体分子
を発現し得る細胞を表わす。これらには、以下が挙げられるが、これらに限定さ
れない：抗体をコードする配列を含む組換えバクテリオファージＤＮＡ発現ベク
ター、プラスミドＤＮＡ発現ベクターまたはコスミドＤＮＡ発現ベクターを用い
て形質転換された細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）のよう
な微生物；抗体をコードする配列を含む組換え酵母発現ベクターで形質転換され
た酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐｉｃｈｉａ）；抗体をコード
する配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感
染した昆虫細胞系；組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイ
クウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）に感染した植物細胞
系または抗体をコードする配列を含む組換えプラスミド発現ベクター（例えば、
Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系；あるいは哺乳動物細胞のゲノム
に由来するプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）または哺乳
動物のウイルスに由来するプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモー
ター；ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含む組換え発現構築物を保
有する哺乳動物細胞系（例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨＫ、２９３、３Ｔ３細胞
）。好ましくは、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉのような細菌細胞、そして
より好ましくは、特に、組換え抗体分子全体の発現のために真核生物細胞が、組
換え抗体分子の発現のために使用される。例えば、ヒトサイトメガロウイルス由
来の主要最初期遺伝子プロモーターエレメントのようなベクターと組み合わされ
た、チャイニーズハムスターの卵巣細胞（ＣＨＯ）のような哺乳動物細胞が、抗
体のための効果的な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇら、Ｇｅｎｅ ４５：１０
１（１９８６）；Ｃｏｃｋｅｔｔら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ８：２（
１９９０））。
得る。このような宿主発現系は、目的のコード配列が産生され、かつ続いて精製
され得るビヒクルを表わすが、また、適切なヌクレオチドをコードする配列で形
質転換またはトランスフェクトされる場合に、インサイチュで本発明の抗体分子
を発現し得る細胞を表わす。これらには、以下が挙げられるが、これらに限定さ
れない：抗体をコードする配列を含む組換えバクテリオファージＤＮＡ発現ベク
ター、プラスミドＤＮＡ発現ベクターまたはコスミドＤＮＡ発現ベクターを用い
て形質転換された細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）のよう
な微生物；抗体をコードする配列を含む組換え酵母発現ベクターで形質転換され
た酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐｉｃｈｉａ）；抗体をコード
する配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感
染した昆虫細胞系；組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイ
クウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）に感染した植物細胞
系または抗体をコードする配列を含む組換えプラスミド発現ベクター（例えば、
Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系；あるいは哺乳動物細胞のゲノム
に由来するプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）または哺乳
動物のウイルスに由来するプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモー
ター；ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含む組換え発現構築物を保
有する哺乳動物細胞系（例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨＫ、２９３、３Ｔ３細胞
）。好ましくは、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉのような細菌細胞、そして
より好ましくは、特に、組換え抗体分子全体の発現のために真核生物細胞が、組
換え抗体分子の発現のために使用される。例えば、ヒトサイトメガロウイルス由
来の主要最初期遺伝子プロモーターエレメントのようなベクターと組み合わされ
た、チャイニーズハムスターの卵巣細胞（ＣＨＯ）のような哺乳動物細胞が、抗
体のための効果的な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇら、Ｇｅｎｅ ４５：１０
１（１９８６）；Ｃｏｃｋｅｔｔら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ８：２（
１９９０））。
【０２１９】
細菌系において、多くの発現ベクターが、抗体分子の発現を意図する使用に依
存して有利に選択され得る。例えば、多量のこのようなタンパク質が産生される
場合、抗体分子の薬学的組成物の生成のために、容易に精製される融合タンパク
質産物の高レベルの発現を指向するベクターが所望され得る。このようなベクタ
ーには、以下が挙げられるが、これらに限定されない：抗体をコードする配列が
ｌａｃＺをコードする領域と共にベクターにインフレーム（ｉｎ ｆｒａｍｅ）
で個別に連結され得、その結果、融合タンパク質が産生されるＥ．ｃｏｌｉ発現
ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｔｈｅｒら、ＥＭＢＯ Ｊ．２：１７９１（１９８
３））；ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ＆Ｉｎｏｕｙｅ、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ
ｉｄｓ Ｒｅｓ．１３：３１０１−３１０９（１９８５）；Ｖａｎ Ｈｅｅｋｅ
＆Ｓｃｈｕｓｔｅｒ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４：５５０３−５５０９（１
９８９））など。ｐＧＥＸベクターもまた、グルタチオンＳ−トランスフェラー
ゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として、外来性ポリペプチドを発現させるため
に使用され得る。一般に、このような融合タンパク質は可溶性であり、そして溶
解した細胞から、マトリックスグルタチオン−アガロースビーズへの吸着および
結合、それに続く遊離グルタチオン存在化での溶出によって容易に精製され得る
。このｐＧＥＸベクターは、トロンビンまたはＸａ因子プロテアーゼ切断部位を
含むように設計され、その結果、このクローニングされた標的遺伝子産物は、Ｇ
ＳＴ部分から放出され得る。
存して有利に選択され得る。例えば、多量のこのようなタンパク質が産生される
場合、抗体分子の薬学的組成物の生成のために、容易に精製される融合タンパク
質産物の高レベルの発現を指向するベクターが所望され得る。このようなベクタ
ーには、以下が挙げられるが、これらに限定されない：抗体をコードする配列が
ｌａｃＺをコードする領域と共にベクターにインフレーム（ｉｎ ｆｒａｍｅ）
で個別に連結され得、その結果、融合タンパク質が産生されるＥ．ｃｏｌｉ発現
ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｔｈｅｒら、ＥＭＢＯ Ｊ．２：１７９１（１９８
３））；ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ＆Ｉｎｏｕｙｅ、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ
ｉｄｓ Ｒｅｓ．１３：３１０１−３１０９（１９８５）；Ｖａｎ Ｈｅｅｋｅ
＆Ｓｃｈｕｓｔｅｒ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４：５５０３−５５０９（１
９８９））など。ｐＧＥＸベクターもまた、グルタチオンＳ−トランスフェラー
ゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として、外来性ポリペプチドを発現させるため
に使用され得る。一般に、このような融合タンパク質は可溶性であり、そして溶
解した細胞から、マトリックスグルタチオン−アガロースビーズへの吸着および
結合、それに続く遊離グルタチオン存在化での溶出によって容易に精製され得る
。このｐＧＥＸベクターは、トロンビンまたはＸａ因子プロテアーゼ切断部位を
含むように設計され、その結果、このクローニングされた標的遺伝子産物は、Ｇ
ＳＴ部分から放出され得る。
【０２２０】
昆虫系においては、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体
病ウィルス（ＡｃＮＰＶ）は、異種遺伝子を発現するためのベクターとして使用
される。このウィルスは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞に
おいて増殖する。抗体をコードする配列は、このウィルスの非必須の領域（例え
ばポリヘドリン遺伝子）に個々にクローニングされ得、そしてＡｃＮＰＶプロモ
ーター（例えばポリヘドリンプロモーター）の制御下に配置され得る。
病ウィルス（ＡｃＮＰＶ）は、異種遺伝子を発現するためのベクターとして使用
される。このウィルスは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞に
おいて増殖する。抗体をコードする配列は、このウィルスの非必須の領域（例え
ばポリヘドリン遺伝子）に個々にクローニングされ得、そしてＡｃＮＰＶプロモ
ーター（例えばポリヘドリンプロモーター）の制御下に配置され得る。
【０２２１】
哺乳動物宿主細胞においては、多数のウィルスに基づく発現系が利用され得る
。アデノウィルスが発現ベクターとして使用される場合においては、目的の抗体
をコードする配列は、アデノウィルスの転写／翻訳制御複合体、例えば後期プロ
モーターおよび３つの部分に分かれるリーダー配列、に連結され得る。次いで、
このキメラ遺伝子は、インビトロまたはインビボでの組換えによって、アデノウ
ィルスゲノムに挿入され得る。ウィルスのゲノムの非必須領域（例えば、Ｅ１ま
たはＥ３領域）における挿入は、生存可能で、感染した宿主において抗体分子を
発現する能力のある組換えウィルスを生じる（例えば、Ｌｏｇａｎ＆Ｓｈｅｎｋ
、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：３５５−３５９（１
９８４）を参照のこと）。特異的開始シグナルはまた、挿入された抗体をコード
する配列の効率的な翻訳のために必要とされ得る。これらのシグナルは、ＡＴＧ
開始コドンおよび隣接する配列を含む。さらに、この開始コドンは、挿入部分全
体の翻訳を確実にするために、所望されるコード配列のリーディングフレーム（
ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ）と相が同じでなければならない。これらの外因性
翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、種々の起源、天然および合成の両方であ
り得る。発現の効率は、適切な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネータ
ー、などの含有によって高められ得る（Ｂｉｔｔｎｅｒら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉ
ｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１−５４４（１９８７）を参照のこと）。
。アデノウィルスが発現ベクターとして使用される場合においては、目的の抗体
をコードする配列は、アデノウィルスの転写／翻訳制御複合体、例えば後期プロ
モーターおよび３つの部分に分かれるリーダー配列、に連結され得る。次いで、
このキメラ遺伝子は、インビトロまたはインビボでの組換えによって、アデノウ
ィルスゲノムに挿入され得る。ウィルスのゲノムの非必須領域（例えば、Ｅ１ま
たはＥ３領域）における挿入は、生存可能で、感染した宿主において抗体分子を
発現する能力のある組換えウィルスを生じる（例えば、Ｌｏｇａｎ＆Ｓｈｅｎｋ
、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：３５５−３５９（１
９８４）を参照のこと）。特異的開始シグナルはまた、挿入された抗体をコード
する配列の効率的な翻訳のために必要とされ得る。これらのシグナルは、ＡＴＧ
開始コドンおよび隣接する配列を含む。さらに、この開始コドンは、挿入部分全
体の翻訳を確実にするために、所望されるコード配列のリーディングフレーム（
ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ）と相が同じでなければならない。これらの外因性
翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、種々の起源、天然および合成の両方であ
り得る。発現の効率は、適切な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネータ
ー、などの含有によって高められ得る（Ｂｉｔｔｎｅｒら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉ
ｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１−５４４（１９８７）を参照のこと）。
【０２２２】
さらに、宿主細胞系統は、選択され得、これは挿入配列の発現を調節し、また
は、所望される特異的な様式で遺伝子産物を改変し、そしてプロセシングする。
タンパク質産物のこのような改変（例えばグリコシル化）およびプロセシング（
例えば切断）は、タンパク質の機能のために重要であり得る。異なる宿主細胞は
、タンパク質および遺伝子産物の、翻訳後プロセシングおよび改変のための、特
徴的で特異的な機構を有する。適切な細胞株または宿主系は、発現された外来タ
ンパク質の正確な改変およびプロセシングを確実にするように選択され得る。こ
の目的のために、遺伝子産物の、第一の転写、グリコシル化、およびリン酸化の
正確なプロセシングのための細胞機構を有する、真核生物宿主細胞が、使用され
得る。このような哺乳動物宿主細胞は、ＣＨＯ、ＶＥＲＹ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、
ＣＯＳ、ＭＤＣＫ、２９３、３Ｔ３、ＷＩ３８、そして特に、例えば、ＢＴ４８
３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２０およびＴ４７Ｄのような乳癌細胞株、な
らびに、例えば、ＣＲＬ７０３０およびＨｓ５７８Ｂｓｔのような正常な乳腺細
胞株を含むが、これらに限定されない。
は、所望される特異的な様式で遺伝子産物を改変し、そしてプロセシングする。
タンパク質産物のこのような改変（例えばグリコシル化）およびプロセシング（
例えば切断）は、タンパク質の機能のために重要であり得る。異なる宿主細胞は
、タンパク質および遺伝子産物の、翻訳後プロセシングおよび改変のための、特
徴的で特異的な機構を有する。適切な細胞株または宿主系は、発現された外来タ
ンパク質の正確な改変およびプロセシングを確実にするように選択され得る。こ
の目的のために、遺伝子産物の、第一の転写、グリコシル化、およびリン酸化の
正確なプロセシングのための細胞機構を有する、真核生物宿主細胞が、使用され
得る。このような哺乳動物宿主細胞は、ＣＨＯ、ＶＥＲＹ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、
ＣＯＳ、ＭＤＣＫ、２９３、３Ｔ３、ＷＩ３８、そして特に、例えば、ＢＴ４８
３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２０およびＴ４７Ｄのような乳癌細胞株、な
らびに、例えば、ＣＲＬ７０３０およびＨｓ５７８Ｂｓｔのような正常な乳腺細
胞株を含むが、これらに限定されない。
【０２２３】
組換えタンパク質の長期間の高収率産生、安定発現が好ましい。例えば、安定
に抗体分子を発現する細胞株が操作され得る。ウィルスの複製起点を含む発現ベ
クターを使用するよりも、宿主細胞は、適切な発現制御エレメント（例えば、プ
ロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位、
など）、および選択マーカーによって制御されるＤＮＡで形質転換され得る。外
来ＤＮＡの導入に続いて、操作された細胞は、１〜２日間富化培地で増殖させら
れ得、次いで、選択培地に切り替えられる。組換えプラスミドにおける選択マー
カーは、選択に対する耐性を与え、そして細胞が、プラスミドをその染色体内に
安定に組み込み、そして増殖して、細胞増殖巣を形成し、これを今度はクローニ
ングし得、細胞株に拡大され得ることを可能にする。この方法は、抗体分子を発
現する細胞株を操作するために、有利に使用され得る。このような操作された細
胞株は、直接的または間接的に抗体分子と相互作用する化合物のスクリーニング
および評価において、特に有用であり得る。
に抗体分子を発現する細胞株が操作され得る。ウィルスの複製起点を含む発現ベ
クターを使用するよりも、宿主細胞は、適切な発現制御エレメント（例えば、プ
ロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位、
など）、および選択マーカーによって制御されるＤＮＡで形質転換され得る。外
来ＤＮＡの導入に続いて、操作された細胞は、１〜２日間富化培地で増殖させら
れ得、次いで、選択培地に切り替えられる。組換えプラスミドにおける選択マー
カーは、選択に対する耐性を与え、そして細胞が、プラスミドをその染色体内に
安定に組み込み、そして増殖して、細胞増殖巣を形成し、これを今度はクローニ
ングし得、細胞株に拡大され得ることを可能にする。この方法は、抗体分子を発
現する細胞株を操作するために、有利に使用され得る。このような操作された細
胞株は、直接的または間接的に抗体分子と相互作用する化合物のスクリーニング
および評価において、特に有用であり得る。
【０２２４】
多数の選択系が使用され得、この選択系は、単純ヘルペスウィルスチミジンキ
ナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒら、Ｃｅｌｌ １１：２２３（１９７７））、ヒポキサン
チン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ＆Ｓｚ
ｙｂａｌｓｋｉ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ４８：２０
２（１９９２））、およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗ
ｙら、Ｃｅｌｌ ２２：８１７（１９８０））の遺伝子を含むが限定されず、こ
れらの遺伝子は、ｔｋ−、ｈｇｐｒｔ−またはａｐｒｔ−細胞においてそれぞれ
使用され得る。また、代謝拮抗物質耐性は、以下の遺伝子の選択の根拠として使
用され得る：ｄｈｆｒ、これはメトトレキサートに対する耐性を与える（Ｗｉｇ
ｌｅｒら、Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：３５７（１９８０）；
Ｏ’Ｈａｒｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：１５
２７（１９８１））；ｇｐｔ、これはミコフェノール酸に対する耐性を与える（
Ｍｕｌｌｉｇａｎ＆Ｂｅｒｇ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
７８：２０７２（１９８１））；ｎｅｏ、これはアミノグリコシドＧ−４１８
に対する耐性を与える（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ １２：４８８−
５０５；Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ、Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７−９５（１９９
１）；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉ
ｃｏｌ． ３２：５７３−５９６（１９９３）；Ｍｕｌｌｉｇａｎ、Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２６０：９２６−９３２（１９９３）；およびＭｏｒｇａｎ ａｎｄ Ａ
ｎｄｅｒｓｏｎ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７（１
９９３）；Ｍａｙ、１９９３年、ＴＩＢ ＴＥＣＨ １１（５）：１５５−２１
５）；ならびにｈｙｇｒｏ、これはハイグロマイシンに対する耐性を与える（Ｓ
ａｎｔｅｒｒｅら、Ｇｅｎｅ ３０：１４７（１９８４））。組換えＤＮＡ技術
の分野で周知の方法は、所望の組換えクローンを選択するために、慣用的に適用
され得、そしてこのような方法は、以下に記載されている：例えば、Ａｕｓｕｂ
ｅｌら（編）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ＮＹ（１９９３）；Ｋ
ｒｉｅｇｌｅｒ、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
、Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ、
ＮＹ（１９９０）；ならびに１２章および１３章、Ｄｒａｃｏｐｏｌｉら（編）
、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ
、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ＮＹ（１９９４）；Ｃｏｌｂｅｒｒｅ−Ｇ
ａｒａｐｉｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ． １５０：１（１９８１）（これらは
その全体が本明細書中に参考として援用される）。
ナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒら、Ｃｅｌｌ １１：２２３（１９７７））、ヒポキサン
チン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ＆Ｓｚ
ｙｂａｌｓｋｉ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ４８：２０
２（１９９２））、およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗ
ｙら、Ｃｅｌｌ ２２：８１７（１９８０））の遺伝子を含むが限定されず、こ
れらの遺伝子は、ｔｋ−、ｈｇｐｒｔ−またはａｐｒｔ−細胞においてそれぞれ
使用され得る。また、代謝拮抗物質耐性は、以下の遺伝子の選択の根拠として使
用され得る：ｄｈｆｒ、これはメトトレキサートに対する耐性を与える（Ｗｉｇ
ｌｅｒら、Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：３５７（１９８０）；
Ｏ’Ｈａｒｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：１５
２７（１９８１））；ｇｐｔ、これはミコフェノール酸に対する耐性を与える（
Ｍｕｌｌｉｇａｎ＆Ｂｅｒｇ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
７８：２０７２（１９８１））；ｎｅｏ、これはアミノグリコシドＧ−４１８
に対する耐性を与える（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ １２：４８８−
５０５；Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ、Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７−９５（１９９
１）；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉ
ｃｏｌ． ３２：５７３−５９６（１９９３）；Ｍｕｌｌｉｇａｎ、Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２６０：９２６−９３２（１９９３）；およびＭｏｒｇａｎ ａｎｄ Ａ
ｎｄｅｒｓｏｎ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７（１
９９３）；Ｍａｙ、１９９３年、ＴＩＢ ＴＥＣＨ １１（５）：１５５−２１
５）；ならびにｈｙｇｒｏ、これはハイグロマイシンに対する耐性を与える（Ｓ
ａｎｔｅｒｒｅら、Ｇｅｎｅ ３０：１４７（１９８４））。組換えＤＮＡ技術
の分野で周知の方法は、所望の組換えクローンを選択するために、慣用的に適用
され得、そしてこのような方法は、以下に記載されている：例えば、Ａｕｓｕｂ
ｅｌら（編）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ＮＹ（１９９３）；Ｋ
ｒｉｅｇｌｅｒ、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
、Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ、
ＮＹ（１９９０）；ならびに１２章および１３章、Ｄｒａｃｏｐｏｌｉら（編）
、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ
、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ＮＹ（１９９４）；Ｃｏｌｂｅｒｒｅ−Ｇ
ａｒａｐｉｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ． １５０：１（１９８１）（これらは
その全体が本明細書中に参考として援用される）。
【０２２５】
抗体分子の発現レベルは、ベクター増幅によって増大され得る（総説として、
ＢｅｂｂｉｎｇｔｏｎおよびＨｅｎｔｓｃｈｅｌ、Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｖｅ
ｃｔｏｒｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｇｅｎｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｏ
ｒ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｌｏｎｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉｎ
ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ、Ｖｏｌ．３
．（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８７）を参照のこ
と）。抗体を発現するベクター系におけるマーカーが、増幅可能であると、宿主
細胞の培養物に存在するインヒビターのレベルにおける増加は、マーカー遺伝子
のコピーの数を増加する。増幅領域は抗体遺伝子と結合しているので、抗体の産
生もまた増加する（Ｃｒｏｕｓｅら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：２５７
（１９８３））。
ＢｅｂｂｉｎｇｔｏｎおよびＨｅｎｔｓｃｈｅｌ、Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｖｅ
ｃｔｏｒｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｇｅｎｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｏ
ｒ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｌｏｎｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉｎ
ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ、Ｖｏｌ．３
．（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８７）を参照のこ
と）。抗体を発現するベクター系におけるマーカーが、増幅可能であると、宿主
細胞の培養物に存在するインヒビターのレベルにおける増加は、マーカー遺伝子
のコピーの数を増加する。増幅領域は抗体遺伝子と結合しているので、抗体の産
生もまた増加する（Ｃｒｏｕｓｅら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：２５７
（１９８３））。
【０２２６】
宿主細胞は、本発明の二つの発現ベクター（重鎖由来のポリペプチドをコード
する第一のベクターおよび軽鎖由来のポリペプチドをコードする第二のベクター
）で、同時トランスフェクトされ得る。この二つのベクターは、重鎖および軽鎖
のポリペプチドの等しい発現を可能にする、同一の選択マーカーを含み得る。あ
るいは、単一のベクターが使用され得、これは重鎖および軽鎖両方のポリペプチ
ドをコードし、そして発現することができる。このような状況において、過剰の
毒性の遊離重鎖を避けるために、重鎖の前に軽鎖が配置されるべきである（Ｐｒ
ｏｕｄｆｏｏｔ、Ｎａｔｕｒｅ ３２２：５２（１９８６）；Ｋｏｈｌｅｒ、Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：２１９７（１９８０））
。重鎖および軽鎖のためのコード配列はｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡを含み得る
。
する第一のベクターおよび軽鎖由来のポリペプチドをコードする第二のベクター
）で、同時トランスフェクトされ得る。この二つのベクターは、重鎖および軽鎖
のポリペプチドの等しい発現を可能にする、同一の選択マーカーを含み得る。あ
るいは、単一のベクターが使用され得、これは重鎖および軽鎖両方のポリペプチ
ドをコードし、そして発現することができる。このような状況において、過剰の
毒性の遊離重鎖を避けるために、重鎖の前に軽鎖が配置されるべきである（Ｐｒ
ｏｕｄｆｏｏｔ、Ｎａｔｕｒｅ ３２２：５２（１９８６）；Ｋｏｈｌｅｒ、Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：２１９７（１９８０））
。重鎖および軽鎖のためのコード配列はｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡを含み得る
。
【０２２７】
一旦本発明の抗体分子が、動物によって産生されるか、化学的に合成されるか
、または組換えにより発現されると、当該分野で公知の、免疫グロブリン分子の
精製のための任意の方法、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、
アフィニティー（特に、プロテインＡの後に特異的抗原に対するアフィニティー
による）、およびサイズカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、溶解度差、ま
たはタンパク質精製のための任意の他の標準的な技術によって、精製され得る。
さらに、本発明の抗体またはそのフラグメントは、本明細書中に記載されるかま
たはそうでなければ当該分野において公知の、異種ポリペプチド配列に融合され
得、精製を容易にする。
、または組換えにより発現されると、当該分野で公知の、免疫グロブリン分子の
精製のための任意の方法、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、
アフィニティー（特に、プロテインＡの後に特異的抗原に対するアフィニティー
による）、およびサイズカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、溶解度差、ま
たはタンパク質精製のための任意の他の標準的な技術によって、精製され得る。
さらに、本発明の抗体またはそのフラグメントは、本明細書中に記載されるかま
たはそうでなければ当該分野において公知の、異種ポリペプチド配列に融合され
得、精製を容易にする。
【０２２８】
本発明は、本発明のポリペプチド（もしくはその部分、好ましくはこのポリペ
プチドの少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、
もしくは１００個のアミノ酸）に、組換えにより融合されるかまたは化学的に結
合されて（共有結合および非共有結合の両方を含む）、融合タンパク質を生成す
る抗体、を含む。この融合は、直接的である必要はないが、リンカー配列を介し
て起こり得る。この抗体は、本発明のポリペプチド（またはその部分、好ましく
はこのポリペプチドの少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、
８０、９０、もしくは１００個のアミノ酸）以外の抗原に特異的であり得る。例
えば、インビトロまたはインビボのいずれにおいても、本発明のポリペプチドを
特定の細胞表面のレセプターに特異的な抗体に融合または結合させることによっ
て、特定の細胞型に対して、本発明のポリペプチドを標的にするために、抗体が
使用され得る。本発明のポリぺプチドに融合または結合される抗体はまた、イン
ビトロ免疫アッセイおよび当該分野で公知の方法を使用する精製方法において使
用され得る。例えば、Ｈａｒｂｏｒら、上記、およびＰＣＴ公開ＷＯ９３／２１
２３２；ＥＰ４３９，０９５；Ｎａｒａｍｕｒａら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ
．３９：９１−９９（１９９４）；米国特許第５，４７４，９８１号；Ｇｉｌｌ
ｉｅｓら、ＰＮＡＳ ８９：１４２８−１４３２（１９９２）；Ｆｅｌｌら、Ｊ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：２４４６−２４５２（１９９１）を参照のこと。こ
れらは、その全体が参考として援用される。
プチドの少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、
もしくは１００個のアミノ酸）に、組換えにより融合されるかまたは化学的に結
合されて（共有結合および非共有結合の両方を含む）、融合タンパク質を生成す
る抗体、を含む。この融合は、直接的である必要はないが、リンカー配列を介し
て起こり得る。この抗体は、本発明のポリペプチド（またはその部分、好ましく
はこのポリペプチドの少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、
８０、９０、もしくは１００個のアミノ酸）以外の抗原に特異的であり得る。例
えば、インビトロまたはインビボのいずれにおいても、本発明のポリペプチドを
特定の細胞表面のレセプターに特異的な抗体に融合または結合させることによっ
て、特定の細胞型に対して、本発明のポリペプチドを標的にするために、抗体が
使用され得る。本発明のポリぺプチドに融合または結合される抗体はまた、イン
ビトロ免疫アッセイおよび当該分野で公知の方法を使用する精製方法において使
用され得る。例えば、Ｈａｒｂｏｒら、上記、およびＰＣＴ公開ＷＯ９３／２１
２３２；ＥＰ４３９，０９５；Ｎａｒａｍｕｒａら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ
．３９：９１−９９（１９９４）；米国特許第５，４７４，９８１号；Ｇｉｌｌ
ｉｅｓら、ＰＮＡＳ ８９：１４２８−１４３２（１９９２）；Ｆｅｌｌら、Ｊ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：２４４６−２４５２（１９９１）を参照のこと。こ
れらは、その全体が参考として援用される。
【０２２９】
本発明はさらに、抗体の可変領域以外のドメインに融合または結合された、本
発明のポリぺプチドを含む組成物を含む。例えば、本発明のポリぺプチドは、抗
体のＦｃ領域、またはその部分に融合または結合され得る。本発明のポリぺプチ
ドに融合されたこの抗体の部分は、定常領域、ヒンジ領域、ＣＨ１ドメイン、Ｃ
Ｈ２ドメイン、およびＣＨ３ドメイン、またはそのドメイン全体もしくは部分の
任意の組合せを含み得る。これらのポリぺプチドはまた、上記の抗体の部分に融
合または結合され得、多量体を形成する。例えば、本発明のポリぺプチドに融合
されたＦｃ部分は、このＦｃ部分の間のジスルフィド結合を通して二量体を形成
し得る。より高度の多量体形態は、ポリぺプチドをＩｇＡおよびＩｇＭの部分に
融合させることによって作製され得る。本発明のポリぺプチドを抗体部分に融合
または結合させるための方法は、当該分野において公知である。例えば、米国特
許第５，３３６，６０３号；同第５，６２２，９２９号；同第５，３５９，０４
６号；同第５，３４９，０５３号；同第５，４４７，８５１号；同第５，１１２
，９４６号；ＥＰ ３０７，４３４；ＥＰ ３６７，１６６；ＰＣＴ公開ＷＯ９
６／０４３８８；ＷＯ９１／０６５７０；Ａｓｈｋｅｎａｚｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１０５３５−１０５３９（１９９１
）；Ｚｈｅｎｇら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５５９０−５６００（１９９
５）；およびＶｉｌら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９
：１１３３７−１１３４１（１９９２）（前記の参考文献はその全体が参考とし
て援用される）を参照のこと。
発明のポリぺプチドを含む組成物を含む。例えば、本発明のポリぺプチドは、抗
体のＦｃ領域、またはその部分に融合または結合され得る。本発明のポリぺプチ
ドに融合されたこの抗体の部分は、定常領域、ヒンジ領域、ＣＨ１ドメイン、Ｃ
Ｈ２ドメイン、およびＣＨ３ドメイン、またはそのドメイン全体もしくは部分の
任意の組合せを含み得る。これらのポリぺプチドはまた、上記の抗体の部分に融
合または結合され得、多量体を形成する。例えば、本発明のポリぺプチドに融合
されたＦｃ部分は、このＦｃ部分の間のジスルフィド結合を通して二量体を形成
し得る。より高度の多量体形態は、ポリぺプチドをＩｇＡおよびＩｇＭの部分に
融合させることによって作製され得る。本発明のポリぺプチドを抗体部分に融合
または結合させるための方法は、当該分野において公知である。例えば、米国特
許第５，３３６，６０３号；同第５，６２２，９２９号；同第５，３５９，０４
６号；同第５，３４９，０５３号；同第５，４４７，８５１号；同第５，１１２
，９４６号；ＥＰ ３０７，４３４；ＥＰ ３６７，１６６；ＰＣＴ公開ＷＯ９
６／０４３８８；ＷＯ９１／０６５７０；Ａｓｈｋｅｎａｚｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１０５３５−１０５３９（１９９１
）；Ｚｈｅｎｇら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５５９０−５６００（１９９
５）；およびＶｉｌら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９
：１１３３７−１１３４１（１９９２）（前記の参考文献はその全体が参考とし
て援用される）を参照のこと。
【０２３０】
上記で考察されたように、ポリぺプチド、ポリぺプチドフラグメント、または
配列番号Ｙの変異体、に対応するポリぺプチドは、このポリぺプチドのインビボ
半減期を増大させるため、または当該分野で公知の方法を使用する免疫学的アッ
セイにおいて使用するために、上記の抗体部分に融合または結合体化され得る。
さらに、配列番号Ｙに対応するポリぺプチドを、上記の抗体部分に融合または結
合体化させて、精製を容易にし得る。１つの報告された例は、ヒトＣＤ４ポリペ
プチドの最初の２つのドメイン、および哺乳動物の免疫グロブリンの重鎖または
軽鎖の定常領域の種々のドメインからなるキメラタンパク質を記載している（Ｅ
Ｐ ３９４，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３３１：８４−
８６（１９８８））。ジスルフィド連結二量体構造（ＩｇＧに起因する）を有す
る抗体に融合または結合体化される本発明のポリぺプチドもまた、単量体分泌タ
ンパク質またはタンパク質フラグメント単独よりも、他の分子に結合しそして中
和するのにさらに効率的であり得る（Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら、Ｊ．Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ．２７０：３９５８−３９６４（１９９５））。多くの場合、融合タン
パク質のＦｃ部分は、治療および診断において有益であり、従って、例えば、改
良された薬物動態学的な特性を生じ得る（ＥＰ Ａ ２３２，２６２）。あるい
は、融合タンパク質が発現され、検出され、そして精製された後に、Ｆｃ部分を
欠失させることが望ましい。例えば、融合タンパク質が免疫化のための抗原とし
て使用される場合、Ｆｃ部分は、治療および診断を妨害し得る。例えば、薬物の
発見において、ｈＩＬ−５のようなヒトタンパク質は、ｈＩＬ−５のアンタゴニ
ストを同定するための高スループットスクリーニングアッセイの目的のためにＦ
ｃ部分と融合されてきた（Ｂｅｎｎｅｔｔら、Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｃ
ｏｇｎｉｔｉｏｎ ８：５２−５８（１９９５）；Ｊｏｈａｎｓｏｎら、Ｊ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：９４５９−９４７１（１９９５）を参照のこと）。
配列番号Ｙの変異体、に対応するポリぺプチドは、このポリぺプチドのインビボ
半減期を増大させるため、または当該分野で公知の方法を使用する免疫学的アッ
セイにおいて使用するために、上記の抗体部分に融合または結合体化され得る。
さらに、配列番号Ｙに対応するポリぺプチドを、上記の抗体部分に融合または結
合体化させて、精製を容易にし得る。１つの報告された例は、ヒトＣＤ４ポリペ
プチドの最初の２つのドメイン、および哺乳動物の免疫グロブリンの重鎖または
軽鎖の定常領域の種々のドメインからなるキメラタンパク質を記載している（Ｅ
Ｐ ３９４，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３３１：８４−
８６（１９８８））。ジスルフィド連結二量体構造（ＩｇＧに起因する）を有す
る抗体に融合または結合体化される本発明のポリぺプチドもまた、単量体分泌タ
ンパク質またはタンパク質フラグメント単独よりも、他の分子に結合しそして中
和するのにさらに効率的であり得る（Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら、Ｊ．Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ．２７０：３９５８−３９６４（１９９５））。多くの場合、融合タン
パク質のＦｃ部分は、治療および診断において有益であり、従って、例えば、改
良された薬物動態学的な特性を生じ得る（ＥＰ Ａ ２３２，２６２）。あるい
は、融合タンパク質が発現され、検出され、そして精製された後に、Ｆｃ部分を
欠失させることが望ましい。例えば、融合タンパク質が免疫化のための抗原とし
て使用される場合、Ｆｃ部分は、治療および診断を妨害し得る。例えば、薬物の
発見において、ｈＩＬ−５のようなヒトタンパク質は、ｈＩＬ−５のアンタゴニ
ストを同定するための高スループットスクリーニングアッセイの目的のためにＦ
ｃ部分と融合されてきた（Ｂｅｎｎｅｔｔら、Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｃ
ｏｇｎｉｔｉｏｎ ８：５２−５８（１９９５）；Ｊｏｈａｎｓｏｎら、Ｊ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：９４５９−９４７１（１９９５）を参照のこと）。
【０２３１】
さらに、本発明の抗体またはそのフラグメントは、精製を容易にするペプチド
のような、マーカー配列に融合され得る。好ましい実施形態において、マーカー
アミノ酸配列は、とりわけヘキサ−ヒスチジンペプチド（例えば、ｐＱＥベクタ
ー（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，９２５９ Ｅｔｏｎ Ａｖｅｎｕｅ，Ｃｈａｔｓ
ｗｏｒｔｈ，ＣＡ，９１３１１）において提供されるタグ）であり、これらの多
くのマーカーアミノ酸配列が市販されている。例えば、Ｇｅｎｔｚら、Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８２１−８２４（１９８９）に
記載されるように、ヘキサ−ヒスチジンは、融合タンパク質の都合の良い精製を
提供する。精製のために有用な別のペプチドタグは、インフルエンザ赤血球凝集
素タンパク質由来のエピトープに対応する「ＨＡ」タグ（Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅ
ｌｌ ３７：７６７（１９８４））、および「ｆｌａｇ」タグを含むが、これに
限定されない。
のような、マーカー配列に融合され得る。好ましい実施形態において、マーカー
アミノ酸配列は、とりわけヘキサ−ヒスチジンペプチド（例えば、ｐＱＥベクタ
ー（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，９２５９ Ｅｔｏｎ Ａｖｅｎｕｅ，Ｃｈａｔｓ
ｗｏｒｔｈ，ＣＡ，９１３１１）において提供されるタグ）であり、これらの多
くのマーカーアミノ酸配列が市販されている。例えば、Ｇｅｎｔｚら、Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８２１−８２４（１９８９）に
記載されるように、ヘキサ−ヒスチジンは、融合タンパク質の都合の良い精製を
提供する。精製のために有用な別のペプチドタグは、インフルエンザ赤血球凝集
素タンパク質由来のエピトープに対応する「ＨＡ」タグ（Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅ
ｌｌ ３７：７６７（１９８４））、および「ｆｌａｇ」タグを含むが、これに
限定されない。
【０２３２】
本発明は、診断剤または治療剤に結合体化される、抗体またはそのフラグメン
トをさらに含む。抗体は、例えば、臨床上の試験手順（例えば、所定の処置レジ
メン（ｒｅｇｉｍｅｎ）の効力を決定するため）の一部として、腫瘍の発生また
は進行をモニターするために、診断的に使用され得る。検出は、抗体を検出可能
な物質と連結させることによって容易にされ得る。検出可能な物質の例としては
、種々の酵素、補欠分子団、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、放射性物質、
種々の陽電子放射断層撮影を使用する陽電子放射金属、および非放射性常磁性金
属イオン、が挙げられる。この検出可能な物質は、抗体（またはそのフラグメン
ト）に対して、直接的または間接的のいずれかで、当該分野で公知の技術を使用
する媒介物（例えば、当該分野で公知のリンカーなど）を介して、連結または結
合体化され得る。例えば、本発明に従う診断薬としての使用のための抗体に結合
体化され得る金属イオンに関しては、米国特許第４，７４１，９００号を参照の
こと。適切な酵素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスフ
ァターゼ、β−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが挙げら
れ；適切な補欠分子団複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチンおよ
びアビジン／ビオチンが挙げられ；適切な蛍光物質の例としては、ウンベリフェ
ロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジク
ロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリト
リンが挙げられ；発光物質の例としては、ルミノールが挙げられ；生物発光物質
の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンが挙げられ；な
らびに、適切な放射性物質の例としては、125Ｉ、131Ｉ、111Ｉｎまたは99Ｔｃ
が挙げられる。
トをさらに含む。抗体は、例えば、臨床上の試験手順（例えば、所定の処置レジ
メン（ｒｅｇｉｍｅｎ）の効力を決定するため）の一部として、腫瘍の発生また
は進行をモニターするために、診断的に使用され得る。検出は、抗体を検出可能
な物質と連結させることによって容易にされ得る。検出可能な物質の例としては
、種々の酵素、補欠分子団、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、放射性物質、
種々の陽電子放射断層撮影を使用する陽電子放射金属、および非放射性常磁性金
属イオン、が挙げられる。この検出可能な物質は、抗体（またはそのフラグメン
ト）に対して、直接的または間接的のいずれかで、当該分野で公知の技術を使用
する媒介物（例えば、当該分野で公知のリンカーなど）を介して、連結または結
合体化され得る。例えば、本発明に従う診断薬としての使用のための抗体に結合
体化され得る金属イオンに関しては、米国特許第４，７４１，９００号を参照の
こと。適切な酵素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスフ
ァターゼ、β−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが挙げら
れ；適切な補欠分子団複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチンおよ
びアビジン／ビオチンが挙げられ；適切な蛍光物質の例としては、ウンベリフェ
ロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジク
ロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリト
リンが挙げられ；発光物質の例としては、ルミノールが挙げられ；生物発光物質
の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンが挙げられ；な
らびに、適切な放射性物質の例としては、125Ｉ、131Ｉ、111Ｉｎまたは99Ｔｃ
が挙げられる。
【０２３３】
さらに、抗体またはそのフラグメントは、治療用部分（例えば細胞毒（例えば
細胞増殖抑制性もしくは細胞殺傷性の薬剤））、治療剤または放射性金属イオン
（例えば、α−エミッタ−（例えば２１３Ｂｉ）など）に結合体化され得る。細
胞毒または細胞毒性薬剤は、細胞に対して有害な任意の薬剤を含む。例としては
、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｏｌ）、サイトカラシンＢ、グラミシジン
Ｄ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド（ｔ
ｅｎｏｐｏｓｉｄｅ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン（ｃｏｌ
ｃｈｉｃｉｎ）、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシン
ジオン（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ ａｎｔｈｒａｃｉｎ ｄｉｏｎｅ）、ミトキサン
トロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、
グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロー
ル、およびピューロマイシン、ならびにそのアナログまたはホモログ、が挙げら
れる。治療剤は、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプ
リン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン（５
−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ）、アルキル化剤（例え
ば、メクロレタミン、チオエパ（ｔｈｉｏｅｐａ）クロラムブシル、メルファラ
ン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファ
ミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、ブスルファン、ジブロモマンニト
ール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、ならびにｃｉｓ−ジクロロジア
ミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダ
ウノルビシン（以前はダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例
えば、ダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラ
マイシン、およびアントラマイシン（ａｎｔｈｒａｍｙｃｉｎ）（ＡＭＣ））、
ならびに抗有糸分裂剤（例えばビンクリスチンおよびビンブラスチン）、を含む
が、それらに限定されない。
細胞増殖抑制性もしくは細胞殺傷性の薬剤））、治療剤または放射性金属イオン
（例えば、α−エミッタ−（例えば２１３Ｂｉ）など）に結合体化され得る。細
胞毒または細胞毒性薬剤は、細胞に対して有害な任意の薬剤を含む。例としては
、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｏｌ）、サイトカラシンＢ、グラミシジン
Ｄ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド（ｔ
ｅｎｏｐｏｓｉｄｅ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン（ｃｏｌ
ｃｈｉｃｉｎ）、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシン
ジオン（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ ａｎｔｈｒａｃｉｎ ｄｉｏｎｅ）、ミトキサン
トロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、
グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロー
ル、およびピューロマイシン、ならびにそのアナログまたはホモログ、が挙げら
れる。治療剤は、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプ
リン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン（５
−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ）、アルキル化剤（例え
ば、メクロレタミン、チオエパ（ｔｈｉｏｅｐａ）クロラムブシル、メルファラ
ン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファ
ミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、ブスルファン、ジブロモマンニト
ール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、ならびにｃｉｓ−ジクロロジア
ミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダ
ウノルビシン（以前はダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例
えば、ダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラ
マイシン、およびアントラマイシン（ａｎｔｈｒａｍｙｃｉｎ）（ＡＭＣ））、
ならびに抗有糸分裂剤（例えばビンクリスチンおよびビンブラスチン）、を含む
が、それらに限定されない。
【０２３４】
本発明の結合体は、所定の生物学的応答を改変するために使用され得、治療剤
または薬物部分は、古典的な化学的治療剤に限定されると解釈されない。例えば
、薬物部分は、所望の生物学的活性を有するタンパク質またはポリぺプチドであ
り得る。このようなタンパク質としては、例えば、毒素（例えばアブリン、リシ
ンＡ、シュードモナス外毒素、またはジフテリア毒素）；タンパク質（例えば、
腫瘍壊死因子、ａ−インターフェロン、β−インターフェロン、神経発育因子、
血小板由来増殖因子、組織プラスミノゲンアクチベーター、アポトーシス性薬剤
（例えば、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＡＩＭ Ｉ（国際公開第ＷＯ９７／３３８
９９号を参照のこと）、ＡＩＭ ＩＩ（国際公開第ＷＯ９７／３４９１１号を参
照のこと）、Ｆａｓリガンド（Ｔａｋａｈａｓｈｉら、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ
．６：１５６７−１５７４（１９９４））、ＶＥＧＩ（国際公開第ＷＯ９９／２
３１０５号を参照のこと））、血栓症薬もしくは抗脈管形成薬（例えば、アンジ
オスタチンもしくはエンドスタチン）；または生物学的応答改変剤（例えばリン
ホカイン、インターロイキン−１（「ＩＬ−１」）、インターロイキン−２（「
ＩＬ−２」）、インターロイキン−６（「ＩＬ−６」）、顆粒球マクロファージ
コロニー刺激因子（「ＧＭ−ＣＳＦ」）、顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳ
Ｆ」）、または他の増殖因子など）、が挙げられ得る。
または薬物部分は、古典的な化学的治療剤に限定されると解釈されない。例えば
、薬物部分は、所望の生物学的活性を有するタンパク質またはポリぺプチドであ
り得る。このようなタンパク質としては、例えば、毒素（例えばアブリン、リシ
ンＡ、シュードモナス外毒素、またはジフテリア毒素）；タンパク質（例えば、
腫瘍壊死因子、ａ−インターフェロン、β−インターフェロン、神経発育因子、
血小板由来増殖因子、組織プラスミノゲンアクチベーター、アポトーシス性薬剤
（例えば、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＡＩＭ Ｉ（国際公開第ＷＯ９７／３３８
９９号を参照のこと）、ＡＩＭ ＩＩ（国際公開第ＷＯ９７／３４９１１号を参
照のこと）、Ｆａｓリガンド（Ｔａｋａｈａｓｈｉら、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ
．６：１５６７−１５７４（１９９４））、ＶＥＧＩ（国際公開第ＷＯ９９／２
３１０５号を参照のこと））、血栓症薬もしくは抗脈管形成薬（例えば、アンジ
オスタチンもしくはエンドスタチン）；または生物学的応答改変剤（例えばリン
ホカイン、インターロイキン−１（「ＩＬ−１」）、インターロイキン−２（「
ＩＬ−２」）、インターロイキン−６（「ＩＬ−６」）、顆粒球マクロファージ
コロニー刺激因子（「ＧＭ−ＣＳＦ」）、顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳ
Ｆ」）、または他の増殖因子など）、が挙げられ得る。
【０２３５】
抗体はまた、固体支持体に付着させられ得、この固体支持体は、標的抗原の免
疫アッセイまたは精製に特に有用である。このような固体支持体としては、ガラ
ス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニ
ルまたはポリプロピレン、が挙げられるがそれらに限定されない。
疫アッセイまたは精製に特に有用である。このような固体支持体としては、ガラ
ス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニ
ルまたはポリプロピレン、が挙げられるがそれらに限定されない。
【０２３６】
このような治療部分を抗体に結合体化する技術は周知であり、例えば、Ａｒｎ
ｏｎら、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎ
ｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐ
ｙ」Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔ
ｈｅｒａｐｙ、Ｒｅｉｓｆｅｌｄら（編）、２４３−５６頁（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌ
ｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄ
ｅｌｉｖｅｒｙ（第２版）、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら（編）、６２３−５３頁（Ｍａ
ｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ、「Ａｎｔｉｂｏ
ｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ」Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎ
ｔｉｂｏｄｉｅｓ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ
Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐｉｎｃｈｅｒａら（編）、４７５−５０６頁（１
９８５）；「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒ
ｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ
Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ
ａｐｙ」Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂａｌｄｗｉｎら（編）、３
０３−１６頁（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９８５）、およびＴｈｏｒｐ
ｅら、「Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐｒ
ｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ
ｓ」、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−５８（１９８２）を参照のこと
。
ｏｎら、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎ
ｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐ
ｙ」Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔ
ｈｅｒａｐｙ、Ｒｅｉｓｆｅｌｄら（編）、２４３−５６頁（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌ
ｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄ
ｅｌｉｖｅｒｙ（第２版）、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら（編）、６２３−５３頁（Ｍａ
ｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ、「Ａｎｔｉｂｏ
ｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ」Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎ
ｔｉｂｏｄｉｅｓ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ
Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐｉｎｃｈｅｒａら（編）、４７５−５０６頁（１
９８５）；「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒ
ｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ
Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ
ａｐｙ」Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂａｌｄｗｉｎら（編）、３
０３−１６頁（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９８５）、およびＴｈｏｒｐ
ｅら、「Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐｒ
ｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ
ｓ」、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−５８（１９８２）を参照のこと
。
【０２３７】
あるいは、抗体は第二の抗体に結合され、米国特許第４，６７６，９８０号（
これは、その全体が本明細書に参考として援用される）におけるＳｅｇａｌによ
る記載のような抗体異種結合体（ｈｅｔｅｒｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）を形成し得
る。
これは、その全体が本明細書に参考として援用される）におけるＳｅｇａｌによ
る記載のような抗体異種結合体（ｈｅｔｅｒｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）を形成し得
る。
【０２３８】
単独、あるいは細胞傷害性因子および／またはサイトカインと組み合わせて投
与される、抗体に結合する治療部分を有するかまたは有さない抗体が、治療薬と
して使用され得る。
与される、抗体に結合する治療部分を有するかまたは有さない抗体が、治療薬と
して使用され得る。
【０２３９】
（免疫表現型分類（ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ））
本発明の抗体は、細胞株および生物学的サンプルの免疫表現型分類のために利
用され得る。本発明の遺伝子の翻訳生成物は、細胞特異的マーカーとして、ある
いはより詳細には、特定の細胞型の分化および／または成熟の種々の段階で差示
的に発現される細胞マーカーとして有用であり得る。特異的エピトープ、または
エピトープの組み合わせに対して指向されるモノクロナール抗体は、マーカーを
発現する細胞集団のスクリーニングを可能とする。種々の技術が、マーカーを発
現する細胞集団をスクリーニングするために、モノクロナール抗体を用いて利用
され得、そしてその技術には、抗体でコーティングされた磁気ビーズを用いる磁
気分離、固体マトリクス（すなわち、プレート）に付着した抗体を用いる「パン
ニング」、ならびにフローサイトメトリー（例えば、米国特許第５，９８５，６
６０号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｃｅｌｌ，９６：７３７−４９（１９９９
）を参照のこと）が挙げられる。
用され得る。本発明の遺伝子の翻訳生成物は、細胞特異的マーカーとして、ある
いはより詳細には、特定の細胞型の分化および／または成熟の種々の段階で差示
的に発現される細胞マーカーとして有用であり得る。特異的エピトープ、または
エピトープの組み合わせに対して指向されるモノクロナール抗体は、マーカーを
発現する細胞集団のスクリーニングを可能とする。種々の技術が、マーカーを発
現する細胞集団をスクリーニングするために、モノクロナール抗体を用いて利用
され得、そしてその技術には、抗体でコーティングされた磁気ビーズを用いる磁
気分離、固体マトリクス（すなわち、プレート）に付着した抗体を用いる「パン
ニング」、ならびにフローサイトメトリー（例えば、米国特許第５，９８５，６
６０号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｃｅｌｌ，９６：７３７−４９（１９９９
）を参照のこと）が挙げられる。
【０２４０】
これらの技術は、血液学的悪性腫瘍（すなわち、急性白血病患者における最少
残留疾患（ｍｉｎｉｍａｌ ｒｅｓｉｄｕａｌ ｄｉｓｅａｓｅ）（ＭＲＤ））
および対宿主性移植片病（ＧＶＨＤ）を予防するための移植術における「非自己
」細胞と共に見出され得るような、細胞の特定集団のスクリーニングを可能にす
る。あるいは、これらの技術は、ヒト臍帯血において見出され得るような増殖お
よび／または分化を受け得る、造血幹細胞および先祖細胞のスクリーニングを可
能にする。
残留疾患（ｍｉｎｉｍａｌ ｒｅｓｉｄｕａｌ ｄｉｓｅａｓｅ）（ＭＲＤ））
および対宿主性移植片病（ＧＶＨＤ）を予防するための移植術における「非自己
」細胞と共に見出され得るような、細胞の特定集団のスクリーニングを可能にす
る。あるいは、これらの技術は、ヒト臍帯血において見出され得るような増殖お
よび／または分化を受け得る、造血幹細胞および先祖細胞のスクリーニングを可
能にする。
【０２４１】
（抗体結合についてのアッセイ）
本発明の抗体は、当該分野において公知の任意の方法により、免疫特異的結合
についてアッセイされ得る。用いられ得る免疫アッセイとしては、いくつかのも
のについてだけ名称を挙げると、ウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、
ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、「サンドイッチ」免疫アッセイ、免
疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセ
イ、補体結合アッセイ、免疫放射定量アッセイ、蛍光免疫アッセイ、プロテイン
Ａ免疫アッセイのような技術を用いる競合アッセイ系および非競合アッセイ系が
挙げられるが、これらに限定されない。このようなアッセイは慣用的であり、そ
して当該分野において周知である（例えば、その全体が本明細書中に参考として
援用される、Ａｕｓｕｂｅｌら編，１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏ
ｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌ
ｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと）。例示的な免疫ア
ッセイが、以下に簡潔に記載される（が、これらは限定を目的とすることが意図
されない）。
についてアッセイされ得る。用いられ得る免疫アッセイとしては、いくつかのも
のについてだけ名称を挙げると、ウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、
ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、「サンドイッチ」免疫アッセイ、免
疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセ
イ、補体結合アッセイ、免疫放射定量アッセイ、蛍光免疫アッセイ、プロテイン
Ａ免疫アッセイのような技術を用いる競合アッセイ系および非競合アッセイ系が
挙げられるが、これらに限定されない。このようなアッセイは慣用的であり、そ
して当該分野において周知である（例えば、その全体が本明細書中に参考として
援用される、Ａｕｓｕｂｅｌら編，１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏ
ｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌ
ｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと）。例示的な免疫ア
ッセイが、以下に簡潔に記載される（が、これらは限定を目的とすることが意図
されない）。
【０２４２】
免疫沈降プロトコルは、一般に、タンパク質ホスファターゼインヒビターおよ
び／またはプロテアーゼインヒビター（例えば、ＥＤＴＡ、ＰＭＳＦ、アプロチ
ニン、バナジン酸ナトリウム）を補充したＲＩＰＡ緩衝液（１％ ＮＰ−４０ま
たはＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、１％ デオキシコール酸ナトリウム、０．１％
ＳＤＳ、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．０１Ｍ リン酸ナトリウム（ｐＨ７．２
）、１％ Ｔｒａｓｙｌｏｌ）のような溶解緩衝液中で、細胞の集団を溶解する
工程、目的の抗体を細胞溶解物に添加する工程、一定時間（例えば、１〜４時間
）４℃でインキュベートする工程、プロテインＡセファロースビーズおよび／ま
たはプロテインＧセファロースビーズを細胞溶解物に添加する工程、約１時間以
上４℃でインキュベートする工程、溶解緩衝液中でビーズを洗浄する工程、およ
びＳＤＳ／サンプル緩衝液中でビーズを再懸濁する工程を包含する。目的の抗体
の、特定の抗原を免疫沈降する能力は、例えば、ウエスタンブロット分析により
、アッセイされ得る。当業者は、抗体の抗原への結合を増加するように、そして
バックグラウンドを減少させるように改変され得るパラメータ（例えば、セファ
ロースビーズを用いて細胞溶解物を事前にきれいにする工程）に関して、認め得
る。免疫沈降プロトコルに関するさらなる考察については、例えば、Ａｕｓｕｂ
ｅｌら編，１９９４、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｉｎｃ
．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１０．１６．１を参照のこと。
び／またはプロテアーゼインヒビター（例えば、ＥＤＴＡ、ＰＭＳＦ、アプロチ
ニン、バナジン酸ナトリウム）を補充したＲＩＰＡ緩衝液（１％ ＮＰ−４０ま
たはＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、１％ デオキシコール酸ナトリウム、０．１％
ＳＤＳ、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．０１Ｍ リン酸ナトリウム（ｐＨ７．２
）、１％ Ｔｒａｓｙｌｏｌ）のような溶解緩衝液中で、細胞の集団を溶解する
工程、目的の抗体を細胞溶解物に添加する工程、一定時間（例えば、１〜４時間
）４℃でインキュベートする工程、プロテインＡセファロースビーズおよび／ま
たはプロテインＧセファロースビーズを細胞溶解物に添加する工程、約１時間以
上４℃でインキュベートする工程、溶解緩衝液中でビーズを洗浄する工程、およ
びＳＤＳ／サンプル緩衝液中でビーズを再懸濁する工程を包含する。目的の抗体
の、特定の抗原を免疫沈降する能力は、例えば、ウエスタンブロット分析により
、アッセイされ得る。当業者は、抗体の抗原への結合を増加するように、そして
バックグラウンドを減少させるように改変され得るパラメータ（例えば、セファ
ロースビーズを用いて細胞溶解物を事前にきれいにする工程）に関して、認め得
る。免疫沈降プロトコルに関するさらなる考察については、例えば、Ａｕｓｕｂ
ｅｌら編，１９９４、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｉｎｃ
．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１０．１６．１を参照のこと。
【０２４３】
ウエスタンブロット分析は、一般に、タンパク質サンプルを調製する工程、ポ
リアクリルアミドゲル（例えば、抗原の分子量に応じた８％〜２０％ ＳＤＳ−
ＰＡＧＥ）中でのそのタンパク質サンプルの電気泳動、そのタンパク質サンプル
をそのポリアクリルアミドゲルからニトロセルロース、ＰＶＤＦまたはナイロン
のような膜に移す工程、ブロッキング溶液（例えば、３％ ＢＳＡまたは脱脂粉
乳を有するＰＢＳ）中でその膜をブロックする工程、洗浄緩衝液（例えば、ＰＢ
Ｓ−Ｔｗｅｅｎ ２０）中でその膜を洗浄する工程、ブロッキング緩衝液中で希
釈された一次抗体（目的の抗体）を用いてその膜をブロックする工程、洗浄緩衝
液中でその膜を洗浄する工程、ブロッキング緩衝液中で希釈された酵素基質（例
えば、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）あるいは放
射性分子（例えば、３２Ｐまたは１２５Ｉ）に結合した二次抗体（一次抗体を認
識する、例えば、抗ヒト抗体）を用いて、その膜をブロックする工程、洗浄緩衝
液中でその膜を洗浄する工程、ならびにその抗原の存在を検出する工程を包含す
る。当業者は、検出されるシグナルを増加させるように、そしてバックグラウン
ドノイズを減少させるように改変され得るパラメータに関して、認め得る。ウエ
スタンブロットプロトコルに関するさらなる考察については、例えば、Ａｕｓｕ
ｂｅｌら編，１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎ
ｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１０．８．１を参照のこと。
リアクリルアミドゲル（例えば、抗原の分子量に応じた８％〜２０％ ＳＤＳ−
ＰＡＧＥ）中でのそのタンパク質サンプルの電気泳動、そのタンパク質サンプル
をそのポリアクリルアミドゲルからニトロセルロース、ＰＶＤＦまたはナイロン
のような膜に移す工程、ブロッキング溶液（例えば、３％ ＢＳＡまたは脱脂粉
乳を有するＰＢＳ）中でその膜をブロックする工程、洗浄緩衝液（例えば、ＰＢ
Ｓ−Ｔｗｅｅｎ ２０）中でその膜を洗浄する工程、ブロッキング緩衝液中で希
釈された一次抗体（目的の抗体）を用いてその膜をブロックする工程、洗浄緩衝
液中でその膜を洗浄する工程、ブロッキング緩衝液中で希釈された酵素基質（例
えば、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）あるいは放
射性分子（例えば、３２Ｐまたは１２５Ｉ）に結合した二次抗体（一次抗体を認
識する、例えば、抗ヒト抗体）を用いて、その膜をブロックする工程、洗浄緩衝
液中でその膜を洗浄する工程、ならびにその抗原の存在を検出する工程を包含す
る。当業者は、検出されるシグナルを増加させるように、そしてバックグラウン
ドノイズを減少させるように改変され得るパラメータに関して、認め得る。ウエ
スタンブロットプロトコルに関するさらなる考察については、例えば、Ａｕｓｕ
ｂｅｌら編，１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎ
ｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１０．８．１を参照のこと。
【０２４４】
ＥＬＩＳＡは、抗原を調製する工程、９６ウェルマイクロタイタープレートの
ウェルをその抗原でコーティングする工程、酵素基質（例えば、西洋ワサビペル
オキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）のような検出可能な化合物に結合
した目的の抗体をそのウェルに添加し、そして一定時間インキュベートする工程
、およびその抗原の存在を検出する工程を包含する。ＥＬＩＳＡにおいて、目的
の抗体は、検出可能な化合物に結合している必要はない；その代わり、検出可能
な化合物に結合した第二の抗体（目的の抗体を認識する）が、ウェルに添加され
得る。さらに、ウェルを抗原でコーティングする代わりに、抗体がウェルにコー
ティングされ得る。この場合、検出可能な化合物に結合した第二の抗体が、コー
ティングされたウェルへの目的の抗原の添加に続いて、添加され得る。当業者は
、検出されるシグナルを増加させるように改変され得るパラメータ、および当該
分野において公知のＥＬＩＳＡの他のバリエーションに関して、認め得る。ＥＬ
ＩＳＡに関するさらなる考察については、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら編，１９９
４，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏ
ｌｏｇｙ，第１巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋ，１１．２．１を参照のこと。
ウェルをその抗原でコーティングする工程、酵素基質（例えば、西洋ワサビペル
オキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）のような検出可能な化合物に結合
した目的の抗体をそのウェルに添加し、そして一定時間インキュベートする工程
、およびその抗原の存在を検出する工程を包含する。ＥＬＩＳＡにおいて、目的
の抗体は、検出可能な化合物に結合している必要はない；その代わり、検出可能
な化合物に結合した第二の抗体（目的の抗体を認識する）が、ウェルに添加され
得る。さらに、ウェルを抗原でコーティングする代わりに、抗体がウェルにコー
ティングされ得る。この場合、検出可能な化合物に結合した第二の抗体が、コー
ティングされたウェルへの目的の抗原の添加に続いて、添加され得る。当業者は
、検出されるシグナルを増加させるように改変され得るパラメータ、および当該
分野において公知のＥＬＩＳＡの他のバリエーションに関して、認め得る。ＥＬ
ＩＳＡに関するさらなる考察については、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら編，１９９
４，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏ
ｌｏｇｙ，第１巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋ，１１．２．１を参照のこと。
【０２４５】
抗原に対する抗体の結合親和性および抗体−抗原相互作用のオフレート（ｏｆ
ｆ−ｒａｔｅ）が、競合結合アッセイにより決定され得る。競合結合アッセイの
一つの例は、ラジオイムノアッセイであり、ラジオイムノアッセイは、標識抗原
（例えば、３Ｈまたは１２５Ｉ）と、漸増量の非標識抗原の存在下での、目的の
抗体を用いるインキュベーション、および標識抗原に結合した抗体の検出を含む
。特定の抗原に対する目的の抗体の親和性、および結合オフレートは、スキャッ
チャードプロット分析によるデータから決定され得る。第二の抗体との競合はま
た、ラジオイムノアッセイを用いて決定され得る。この場合、抗原は、漸増量の
非標識の第二の抗体の存在下で、標識化合物（例えば、３Ｈまたは１２５Ｉ）に
結合した目的の抗体とともにインキュベートされる。
ｆ−ｒａｔｅ）が、競合結合アッセイにより決定され得る。競合結合アッセイの
一つの例は、ラジオイムノアッセイであり、ラジオイムノアッセイは、標識抗原
（例えば、３Ｈまたは１２５Ｉ）と、漸増量の非標識抗原の存在下での、目的の
抗体を用いるインキュベーション、および標識抗原に結合した抗体の検出を含む
。特定の抗原に対する目的の抗体の親和性、および結合オフレートは、スキャッ
チャードプロット分析によるデータから決定され得る。第二の抗体との競合はま
た、ラジオイムノアッセイを用いて決定され得る。この場合、抗原は、漸増量の
非標識の第二の抗体の存在下で、標識化合物（例えば、３Ｈまたは１２５Ｉ）に
結合した目的の抗体とともにインキュベートされる。
【０２４６】
（治療用途）
本発明はさらに、抗体ベースの治療に関し、この治療は、１つ以上の開示され
た疾患、障害、または状態を処置するために、動物、好ましくは哺乳動物、そし
て最も好ましくはヒトの患者に、本発明の抗体を投与する工程を包含する。本発
明の治療化合物としては、本発明の抗体（本明細書中に記載されるような、それ
らのフラグメント、アナログおよび誘導体を含む）ならびに本発明の抗体をコー
ドする核酸（本明細書中に記載されるような、それらのフラグメント、アナログ
および誘導体ならびに抗イディオタイプ抗体を含む）が挙げられるが、これらに
限定されない。本発明の抗体は、本発明のポリペプチドの異常な発現および／ま
たは活性に関連した疾患、障害または状態（本明細書中に記載される任意の１つ
以上の疾患、障害、または状態を含むがこれらに限定されない）を処置、阻害ま
たは予防するために使用され得る。本発明のポリペプチドの異常な発現および／
または活性に関連した疾患、障害または状態の処置および／または予防は、それ
らの疾患、障害または状態に関連した症状を緩和する工程を含むが、これに限定
されない。本発明の抗体は、当該分野で公知であるか、または本明細書中に記載
されるように、薬学的に受容可能な組成物中に提供され得る。
た疾患、障害、または状態を処置するために、動物、好ましくは哺乳動物、そし
て最も好ましくはヒトの患者に、本発明の抗体を投与する工程を包含する。本発
明の治療化合物としては、本発明の抗体（本明細書中に記載されるような、それ
らのフラグメント、アナログおよび誘導体を含む）ならびに本発明の抗体をコー
ドする核酸（本明細書中に記載されるような、それらのフラグメント、アナログ
および誘導体ならびに抗イディオタイプ抗体を含む）が挙げられるが、これらに
限定されない。本発明の抗体は、本発明のポリペプチドの異常な発現および／ま
たは活性に関連した疾患、障害または状態（本明細書中に記載される任意の１つ
以上の疾患、障害、または状態を含むがこれらに限定されない）を処置、阻害ま
たは予防するために使用され得る。本発明のポリペプチドの異常な発現および／
または活性に関連した疾患、障害または状態の処置および／または予防は、それ
らの疾患、障害または状態に関連した症状を緩和する工程を含むが、これに限定
されない。本発明の抗体は、当該分野で公知であるか、または本明細書中に記載
されるように、薬学的に受容可能な組成物中に提供され得る。
【０２４７】
本発明の抗体が治療的に使用され得る方法の要約は、身体内で局所的にまたは
全身的に、あるいは（例えば、補体（ＣＤＣ）により、またはエフェクター細胞
（ＡＤＣＣ）により媒介されるような）抗体の直接的細胞傷害性により、本発明
のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを結合させることを含む。これらのアプ
ローチのいくつかは、より詳細に以下に記載される。本明細書中で提供される教
示を与えられれば、当業者は、過度の実験なしに、診断上の目的、モニタリング
の目的あるいは治療上の目的のために、本発明の抗体を使用する方法がわかる。
全身的に、あるいは（例えば、補体（ＣＤＣ）により、またはエフェクター細胞
（ＡＤＣＣ）により媒介されるような）抗体の直接的細胞傷害性により、本発明
のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを結合させることを含む。これらのアプ
ローチのいくつかは、より詳細に以下に記載される。本明細書中で提供される教
示を与えられれば、当業者は、過度の実験なしに、診断上の目的、モニタリング
の目的あるいは治療上の目的のために、本発明の抗体を使用する方法がわかる。
【０２４８】
本発明の抗体は、例えば、抗体と相互作用するエフェクター細胞の数または活
性を増加させるために役立つ、他のモノクローナル抗体またはキメラ抗体、ある
いはリンホカインまたは造血増殖因子（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−３およびＩＬ
−７のような）と組み合わせて有利に利用され得る。
性を増加させるために役立つ、他のモノクローナル抗体またはキメラ抗体、ある
いはリンホカインまたは造血増殖因子（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−３およびＩＬ
−７のような）と組み合わせて有利に利用され得る。
【０２４９】
本発明の抗体は、単独で、または他の型の処置（例えば、放射線療法、化学療
法、ホルモン治療、免疫治療および抗腫瘍剤）との組み合わせで投与され得る。
一般的に、（抗体の場合には）患者の種と同じ種である種起源または種反応性の
生成物の投与が好ましい。従って、好ましい実施形態においては、ヒトの抗体、
フラグメント誘導体、アナログ、または核酸が、治療または予防のために、ヒト
の患者に投与される。
法、ホルモン治療、免疫治療および抗腫瘍剤）との組み合わせで投与され得る。
一般的に、（抗体の場合には）患者の種と同じ種である種起源または種反応性の
生成物の投与が好ましい。従って、好ましい実施形態においては、ヒトの抗体、
フラグメント誘導体、アナログ、または核酸が、治療または予防のために、ヒト
の患者に投与される。
【０２５０】
本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド（そのフラグメントを含む）に
関する免疫アッセイ、およびそれらに関連した障害の治療の両方のために、本発
明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドに対する、高親和性および／または強
力な、インビボでの阻害抗体および／または中和抗体、それらのフラグメント、
またはそれらの領域を使用することが好ましい。このような抗体、フラグメント
、または領域は、好ましくは、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド（
そのフラグメントを含む）に対して親和性を有する。好ましい結合親和性として
は、５×１０-2Ｍ、１０-2Ｍ、５×１０-3Ｍ、１０-3Ｍ、５×１０-4Ｍ、１０-4 Ｍ、５×１０-5Ｍ、１０-5Ｍ、５×１０-6Ｍ、１０-6Ｍ、５×１０-7Ｍ、１０-7 Ｍ、５×１０-8Ｍ、１０-8Ｍ、５×１０-9Ｍ、１０-9Ｍ、５×１０-10Ｍ、１０- 10 Ｍ、５×１０-11Ｍ、１０-11Ｍ、５×１０-12Ｍ、１０-12Ｍ、５×１０-13Ｍ
、１０-13Ｍ、５×１０-14Ｍ、１０-14Ｍ、５×１０-15Ｍ、および１０-15Ｍよ
り小さい解離定数すなわちＫｄを有する結合親和性が挙げられる。
関する免疫アッセイ、およびそれらに関連した障害の治療の両方のために、本発
明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドに対する、高親和性および／または強
力な、インビボでの阻害抗体および／または中和抗体、それらのフラグメント、
またはそれらの領域を使用することが好ましい。このような抗体、フラグメント
、または領域は、好ましくは、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド（
そのフラグメントを含む）に対して親和性を有する。好ましい結合親和性として
は、５×１０-2Ｍ、１０-2Ｍ、５×１０-3Ｍ、１０-3Ｍ、５×１０-4Ｍ、１０-4 Ｍ、５×１０-5Ｍ、１０-5Ｍ、５×１０-6Ｍ、１０-6Ｍ、５×１０-7Ｍ、１０-7 Ｍ、５×１０-8Ｍ、１０-8Ｍ、５×１０-9Ｍ、１０-9Ｍ、５×１０-10Ｍ、１０- 10 Ｍ、５×１０-11Ｍ、１０-11Ｍ、５×１０-12Ｍ、１０-12Ｍ、５×１０-13Ｍ
、１０-13Ｍ、５×１０-14Ｍ、１０-14Ｍ、５×１０-15Ｍ、および１０-15Ｍよ
り小さい解離定数すなわちＫｄを有する結合親和性が挙げられる。
【０２５１】
（遺伝子治療）
特定の実施形態において、抗体またはその機能的誘導体をコードする配列を含
む核酸は、本発明のポリペプチドの異常な発現および／または活性に関連した疾
患または障害を処置、阻害または予防するために、遺伝子治療の目的で投与され
る。遺伝子治療とは、発現したか、または発現可能な核酸の、被験体への投与に
より行われる治療をいう。本発明のこの実施形態において、核酸は、それらのコ
ードされたタンパク質を産生し、そのタンパク質は治療効果を媒介する。
む核酸は、本発明のポリペプチドの異常な発現および／または活性に関連した疾
患または障害を処置、阻害または予防するために、遺伝子治療の目的で投与され
る。遺伝子治療とは、発現したか、または発現可能な核酸の、被験体への投与に
より行われる治療をいう。本発明のこの実施形態において、核酸は、それらのコ
ードされたタンパク質を産生し、そのタンパク質は治療効果を媒介する。
【０２５２】
当該分野で利用可能な遺伝子治療のための任意の方法は、本発明に従って使用
され得る。例示的な方法が以下に記載される。
され得る。例示的な方法が以下に記載される。
【０２５３】
遺伝子治療の方法の一般的な概説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら，Ｃｌｉ
ｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ １２：４８８−５０５（１９９３）；Ｗｕおよ
びＷｕ，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７−９５（１９９１）；Ｔｏｌｓｔｏｓ
ｈｅｖ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３
−５９６（１９９３）；Ｍｕｌｌｉｇａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６−
９３２（１９９３）；ならびにＭｏｒｇａｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ，Ａｎｎ．
Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７（１９９３）；Ｍａｙ，ＴＩＢ
ＴＥＣＨ １１（５）：１５５−２１５（１９９３）を参照のこと。使用され得
る、組換えＤＮＡ技術分野において一般的に公知である方法は、Ａｕｓｕｂｅｌ
ら（編），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；および
Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏ
ｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ
，ＮＹ（１９９０）に記載される。
ｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ １２：４８８−５０５（１９９３）；Ｗｕおよ
びＷｕ，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７−９５（１９９１）；Ｔｏｌｓｔｏｓ
ｈｅｖ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３
−５９６（１９９３）；Ｍｕｌｌｉｇａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６−
９３２（１９９３）；ならびにＭｏｒｇａｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ，Ａｎｎ．
Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７（１９９３）；Ｍａｙ，ＴＩＢ
ＴＥＣＨ １１（５）：１５５−２１５（１９９３）を参照のこと。使用され得
る、組換えＤＮＡ技術分野において一般的に公知である方法は、Ａｕｓｕｂｅｌ
ら（編），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；および
Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏ
ｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ
，ＮＹ（１９９０）に記載される。
【０２５４】
好ましい局面において、化合物は抗体をコードする核酸配列を含有し、上記核
酸配列は、適切な宿主において、抗体、またはそのフラグメントもしくはキメラ
タンパク質、あるいはその重鎖もしくは軽鎖を発現する発現ベクターの一部であ
る。特に、このような核酸配列は、抗体コード領域に作動可能に連結したプロモ
ーターを有し、上記プロモーターは誘導性であるかまたは構成性であり、そして
必要に応じて組織特異的である。別の特定の実施形態においては、抗体をコード
する配列および任意の他の所望の配列がゲノム中の所望の部位での相同組換えを
促進する領域に隣接した核酸分子が使用され、従って抗体をコードする核酸の染
色体内の発現を提供する（ＫｏｌｌｅｒおよびＳｍｉｔｈｉｅｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９３２−８９３５（１９８９）；
Ｚｉｊｌｓｔｒａら，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５−４３８（１９８９））。
特定の実施形態において、発現した抗体分子は単鎖抗体であるか；あるいはこの
核酸配列は、この抗体の重鎖および軽鎖の両方をコードする配列またはそのフラ
グメントを含む。
酸配列は、適切な宿主において、抗体、またはそのフラグメントもしくはキメラ
タンパク質、あるいはその重鎖もしくは軽鎖を発現する発現ベクターの一部であ
る。特に、このような核酸配列は、抗体コード領域に作動可能に連結したプロモ
ーターを有し、上記プロモーターは誘導性であるかまたは構成性であり、そして
必要に応じて組織特異的である。別の特定の実施形態においては、抗体をコード
する配列および任意の他の所望の配列がゲノム中の所望の部位での相同組換えを
促進する領域に隣接した核酸分子が使用され、従って抗体をコードする核酸の染
色体内の発現を提供する（ＫｏｌｌｅｒおよびＳｍｉｔｈｉｅｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９３２−８９３５（１９８９）；
Ｚｉｊｌｓｔｒａら，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５−４３８（１９８９））。
特定の実施形態において、発現した抗体分子は単鎖抗体であるか；あるいはこの
核酸配列は、この抗体の重鎖および軽鎖の両方をコードする配列またはそのフラ
グメントを含む。
【０２５５】
核酸の患者への送達は、直接的（この場合、患者は核酸または核酸保有ベクタ
ーに直接的に曝される）か、または間接的（この場合、細胞は最初にインビトロ
で核酸で形質転換され、次いで患者に移植される）のいずれかであり得る。これ
らの２つのアプローチは、インビボ遺伝子治療として、またはエキソビボ遺伝子
治療としてそれぞれ公知である。
ーに直接的に曝される）か、または間接的（この場合、細胞は最初にインビトロ
で核酸で形質転換され、次いで患者に移植される）のいずれかであり得る。これ
らの２つのアプローチは、インビボ遺伝子治療として、またはエキソビボ遺伝子
治療としてそれぞれ公知である。
【０２５６】
特定の実施形態において、核酸配列はインビボで直接的に投与され、そこで核
酸配列は発現されて、コードされた生成物を産生する。これは、当該分野で公知
の多数の方法（例えば、それらを適切な核酸発現ベクターの一部分として構築し
、そしてそれを（例えば、欠損性または弱毒化したレトロウイルスまたは他のウ
イルスベクター（米国特許第４，９８０，２８６号を参照のこと）を用いる感染
により）細胞内になるように投与することにより、あるいは、裸のＤＮＡの直接
注射により、あるいは、微粒子ボンバードメント（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌ
ｉｓｔｉｃ、Ｄｕｐｏｎｔ）の使用により、あるいは脂質または細胞表面のレセ
プターでコーティングするか、もしくは薬剤をトランスフェクトすることにより
、あるいは、リポソーム、微粒子、またはマイクロカプセル中へのカプセル化に
より、あるいは、それらを核に入ることが公知であるペプチドと結合させて投与
することにより、レセプター媒介のエンドサイトーシスを受けるリガンドと結合
させて投与することにより（例えば、ＷｕおよびＷｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ
．２６２：４４２９−４４３２（１９８７）を参照のこと）（レセプターを特異
的に発現する細胞の型を標的にするために用いられ得る）などのいずれかにより
達成され得る。別の実施形態において、核酸−リガンド複合体が形成され得、こ
こで、このリガンドはエンドソームを破壊するフソジェニック（ｆｕｓｏｇｅｎ
ｉｃ）ウイルス性ペプチドを含み、この核酸がリソゾーム分解を回避することを
可能にする。さらに別の実施形態において、核酸は、特定のレセプターを標的化
することにより、細胞特異的な取り込みおよび発現についてインビボで標的化さ
れ得る（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／０６１８０号；同第ＷＯ９２／２２６
３５号；同第ＷＯ９２／２０３１６号；同第ＷＯ９３／１４１８８号、同第ＷＯ
９３／２０２２１号を参照のこと）。あるいは、核酸は、細胞内部に導入され得
、そして相同組換えにより、発現のために宿主細胞ＤＮＡ中に組み込まれ得る（
ＫｏｌｌｅｒおよびＳｍｉｔｈｉｅｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．ＵＳＡ ８６：８９３２−８９３５（１９８９）；Ｚｉｊｌｓｔｒａら，Ｎａ
ｔｕｒｅ ３４２：４３５−４３８（１９８９））。
酸配列は発現されて、コードされた生成物を産生する。これは、当該分野で公知
の多数の方法（例えば、それらを適切な核酸発現ベクターの一部分として構築し
、そしてそれを（例えば、欠損性または弱毒化したレトロウイルスまたは他のウ
イルスベクター（米国特許第４，９８０，２８６号を参照のこと）を用いる感染
により）細胞内になるように投与することにより、あるいは、裸のＤＮＡの直接
注射により、あるいは、微粒子ボンバードメント（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌ
ｉｓｔｉｃ、Ｄｕｐｏｎｔ）の使用により、あるいは脂質または細胞表面のレセ
プターでコーティングするか、もしくは薬剤をトランスフェクトすることにより
、あるいは、リポソーム、微粒子、またはマイクロカプセル中へのカプセル化に
より、あるいは、それらを核に入ることが公知であるペプチドと結合させて投与
することにより、レセプター媒介のエンドサイトーシスを受けるリガンドと結合
させて投与することにより（例えば、ＷｕおよびＷｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ
．２６２：４４２９−４４３２（１９８７）を参照のこと）（レセプターを特異
的に発現する細胞の型を標的にするために用いられ得る）などのいずれかにより
達成され得る。別の実施形態において、核酸−リガンド複合体が形成され得、こ
こで、このリガンドはエンドソームを破壊するフソジェニック（ｆｕｓｏｇｅｎ
ｉｃ）ウイルス性ペプチドを含み、この核酸がリソゾーム分解を回避することを
可能にする。さらに別の実施形態において、核酸は、特定のレセプターを標的化
することにより、細胞特異的な取り込みおよび発現についてインビボで標的化さ
れ得る（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／０６１８０号；同第ＷＯ９２／２２６
３５号；同第ＷＯ９２／２０３１６号；同第ＷＯ９３／１４１８８号、同第ＷＯ
９３／２０２２１号を参照のこと）。あるいは、核酸は、細胞内部に導入され得
、そして相同組換えにより、発現のために宿主細胞ＤＮＡ中に組み込まれ得る（
ＫｏｌｌｅｒおよびＳｍｉｔｈｉｅｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．ＵＳＡ ８６：８９３２−８９３５（１９８９）；Ｚｉｊｌｓｔｒａら，Ｎａ
ｔｕｒｅ ３４２：４３５−４３８（１９８９））。
【０２５７】
特定の実施形態において、本発明の抗体をコードする核酸配列を含むウイルス
ベクターが使用される。例えば、レトロウイルスベクターが用いられ得る（Ｍｉ
ｌｌｅｒら，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５８１−５９９（１９９３）
を参照のこと）。これらのレトロウイルスベクターは、ウイルス性ゲノムの正確
なパッケージングおよび宿主細胞ＤＮＡへの正確な組込みのために必要な構成要
素を含む。遺伝子治療において使用される抗体をコードする核酸配列は、一つ以
上のベクター中にクローニングされ、これは、患者内への遺伝子の送達を容易に
する。レトロウイルスベクターに関するさらなる詳細は、Ｂｏｅｓｅｎら，Ｂｉ
ｏｔｈｅｒａｐｙ ６：２９１−３０２（１９９４）（これは、幹細胞を化学療
法に対してより耐性にするために、ｍｄｒ１遺伝子を造血性幹細胞に送達するた
めの、レトロウイルスベクターの使用を記載する）に見出され得る。遺伝子治療
におけるレトロウイルスベクターの使用を説明する他の参考文献は、以下である
：Ｃｌｏｗｅｓら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９３：６４４−６５１（１９
９４）；Ｋｉｅｍら，Ｂｌｏｏｄ ８３：１４６７−１４７３（１９９４）；Ｓ
ａｌｍｏｎｓおよびＧｕｎｚｂｅｒｇ，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ
４：１２９−１４１（１９９３）；ならびにＧｒｏｓｓｍａｎおよびＷｉｌｓ
ｏｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．３
：１１０−１１４（１９９３）。
ベクターが使用される。例えば、レトロウイルスベクターが用いられ得る（Ｍｉ
ｌｌｅｒら，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５８１−５９９（１９９３）
を参照のこと）。これらのレトロウイルスベクターは、ウイルス性ゲノムの正確
なパッケージングおよび宿主細胞ＤＮＡへの正確な組込みのために必要な構成要
素を含む。遺伝子治療において使用される抗体をコードする核酸配列は、一つ以
上のベクター中にクローニングされ、これは、患者内への遺伝子の送達を容易に
する。レトロウイルスベクターに関するさらなる詳細は、Ｂｏｅｓｅｎら，Ｂｉ
ｏｔｈｅｒａｐｙ ６：２９１−３０２（１９９４）（これは、幹細胞を化学療
法に対してより耐性にするために、ｍｄｒ１遺伝子を造血性幹細胞に送達するた
めの、レトロウイルスベクターの使用を記載する）に見出され得る。遺伝子治療
におけるレトロウイルスベクターの使用を説明する他の参考文献は、以下である
：Ｃｌｏｗｅｓら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９３：６４４−６５１（１９
９４）；Ｋｉｅｍら，Ｂｌｏｏｄ ８３：１４６７−１４７３（１９９４）；Ｓ
ａｌｍｏｎｓおよびＧｕｎｚｂｅｒｇ，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ
４：１２９−１４１（１９９３）；ならびにＧｒｏｓｓｍａｎおよびＷｉｌｓ
ｏｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．３
：１１０−１１４（１９９３）。
【０２５８】
アデノウイルスは、遺伝子治療において使用され得る他のウイルスベクターで
ある。アデノウイルスは、特に、気道上皮へ遺伝子を送達するための魅力的なビ
ヒクルである。アデノウイルスは、自然に気道上皮に感染し、そこで軽い疾患を
起こす。アデノウイルスベースの送達システムの他の標的は、肝臓、中枢神経系
、内皮細胞、および筋肉である。アデノウイルスは、非分裂細胞を感染すること
ができるという利点を有する。ＫｏｚａｒｓｋｙおよびＷｉｌｓｏｎ，Ｃｕｒｒ
ｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍ
ｅｎｔ ３：４９９−５０３（１９９３）は、アデノウイルスベースの遺伝子治
療の概説を示す。Ｂｏｕｔら，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ５：３
−１０（１９９４）は、アカゲザルの気道上皮に遺伝子を移すためのアデノウイ
ルスベクターの使用を示した。遺伝子治療におけるアデノウイルスの使用の他の
例は、Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２：４３１−４３４（１９
９１）；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら，Ｃｅｌｌ ６８：１４３−１５５（１９９２）
；Ｍａｓｔｒａｎｇｅｌｉら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９１：２２５−２
３４（１９９３）；ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／１２６４９号；およびＷａｎｇら，
Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２：７７５−７８３（１９９５）に見出され得る。
好ましい実施形態において、アデノウイルスベクターが使用される。
ある。アデノウイルスは、特に、気道上皮へ遺伝子を送達するための魅力的なビ
ヒクルである。アデノウイルスは、自然に気道上皮に感染し、そこで軽い疾患を
起こす。アデノウイルスベースの送達システムの他の標的は、肝臓、中枢神経系
、内皮細胞、および筋肉である。アデノウイルスは、非分裂細胞を感染すること
ができるという利点を有する。ＫｏｚａｒｓｋｙおよびＷｉｌｓｏｎ，Ｃｕｒｒ
ｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍ
ｅｎｔ ３：４９９−５０３（１９９３）は、アデノウイルスベースの遺伝子治
療の概説を示す。Ｂｏｕｔら，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ５：３
−１０（１９９４）は、アカゲザルの気道上皮に遺伝子を移すためのアデノウイ
ルスベクターの使用を示した。遺伝子治療におけるアデノウイルスの使用の他の
例は、Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２：４３１−４３４（１９
９１）；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら，Ｃｅｌｌ ６８：１４３−１５５（１９９２）
；Ｍａｓｔｒａｎｇｅｌｉら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９１：２２５−２
３４（１９９３）；ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／１２６４９号；およびＷａｎｇら，
Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２：７７５−７８３（１９９５）に見出され得る。
好ましい実施形態において、アデノウイルスベクターが使用される。
【０２５９】
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）はまた、遺伝子治療における使用が提案されて
きた（Ｗａｌｓｈら，Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．２０４：
２８９−３００（１９９３）；米国特許第５，４３６，１４６号）。
きた（Ｗａｌｓｈら，Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．２０４：
２８９−３００（１９９３）；米国特許第５，４３６，１４６号）。
【０２６０】
遺伝子治療への別のアプローチは、エレクトロポレーション、リポフェクショ
ン、リン酸カルシウム媒介トランスフェクション、またはウイルス感染のような
方法により、組織培養中の細胞へ遺伝子を移入する工程を包含する。通常、移入
の方法は、選択可能なマーカーの細胞への移入を含む。次いで、細胞は、移入さ
れた遺伝子を取り込みそして発現する細胞を単離するために選沢下に置かれる。
次いで、それらの細胞は患者に送達される。
ン、リン酸カルシウム媒介トランスフェクション、またはウイルス感染のような
方法により、組織培養中の細胞へ遺伝子を移入する工程を包含する。通常、移入
の方法は、選択可能なマーカーの細胞への移入を含む。次いで、細胞は、移入さ
れた遺伝子を取り込みそして発現する細胞を単離するために選沢下に置かれる。
次いで、それらの細胞は患者に送達される。
【０２６１】
この実施形態においては、得られた組換え細胞のインビボ投与の前に、核酸が
細胞に導入される。このような導入は、当該分野において公知の任意の方法によ
り実施され得、それらの方法としては以下が挙げられるが、これらに限定されな
い：トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクショ
ン、核酸配列を含むウイルスベクターまたはバクテリオファージベクターでの感
染、細胞融合、染色体媒介の遺伝子移入、マイクロセル媒介の遺伝子移入、スフ
ェロプラスト融合など。外来遺伝子の細胞への導入については、当該分野におい
て多数の技術が公知であり（例えば、ＬｏｅｆｆｌｅｒおよびＢｅｈｒ，Ｍｅｔ
ｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５９９−６１８（１９９３）；Ｃｏｈｅｎら，Ｍ
ｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：６１８−６４４（１９９３）；Ｃｌｉｎｅ，
Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．２９：６９−９２ｍ（１９８５）を参照のこと）、
そしてレシピエント細胞の必要な発生的および生理学的機能が破壊されないなら
ば、本発明に従って使用され得る。この技術は、細胞への核酸の安定した移入を
提供するべきであり、その結果、この核酸は、細胞により発現可能であり、好ま
しくは、その細胞の子孫により遺伝性でかつ発現可能である。
細胞に導入される。このような導入は、当該分野において公知の任意の方法によ
り実施され得、それらの方法としては以下が挙げられるが、これらに限定されな
い：トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクショ
ン、核酸配列を含むウイルスベクターまたはバクテリオファージベクターでの感
染、細胞融合、染色体媒介の遺伝子移入、マイクロセル媒介の遺伝子移入、スフ
ェロプラスト融合など。外来遺伝子の細胞への導入については、当該分野におい
て多数の技術が公知であり（例えば、ＬｏｅｆｆｌｅｒおよびＢｅｈｒ，Ｍｅｔ
ｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５９９−６１８（１９９３）；Ｃｏｈｅｎら，Ｍ
ｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：６１８−６４４（１９９３）；Ｃｌｉｎｅ，
Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．２９：６９−９２ｍ（１９８５）を参照のこと）、
そしてレシピエント細胞の必要な発生的および生理学的機能が破壊されないなら
ば、本発明に従って使用され得る。この技術は、細胞への核酸の安定した移入を
提供するべきであり、その結果、この核酸は、細胞により発現可能であり、好ま
しくは、その細胞の子孫により遺伝性でかつ発現可能である。
【０２６２】
得られた組換え細胞は、当該分野において公知の様々な方法により、患者へ送
達され得る。組換え血球（例えば、造血幹細胞または造血前駆細胞）は、好まし
くは、静脈内に投与される。使用が考えられる細胞の量は、所望の効果、患者の
状態などに依存し、当業者により決定され得る。
達され得る。組換え血球（例えば、造血幹細胞または造血前駆細胞）は、好まし
くは、静脈内に投与される。使用が考えられる細胞の量は、所望の効果、患者の
状態などに依存し、当業者により決定され得る。
【０２６３】
遺伝子治療の目的のために核酸が導入され得る細胞は、任意の所望の入手可能
な細胞型を包含し、以下を含むがそれらに限定されない：上皮細胞、内皮細胞、
ケラチノサイト、線維芽細胞、筋肉細胞、肝細胞；Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単
球、マクロファージ、好中球、好酸球、巨核球、顆粒球のような血球；様々な幹
細胞または前駆細胞、特に、造血幹細胞または造血前駆細胞（例えば、骨髄、臍
帯血、末梢血、胎児の肝臓などから得られるような細胞）。
な細胞型を包含し、以下を含むがそれらに限定されない：上皮細胞、内皮細胞、
ケラチノサイト、線維芽細胞、筋肉細胞、肝細胞；Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単
球、マクロファージ、好中球、好酸球、巨核球、顆粒球のような血球；様々な幹
細胞または前駆細胞、特に、造血幹細胞または造血前駆細胞（例えば、骨髄、臍
帯血、末梢血、胎児の肝臓などから得られるような細胞）。
【０２６４】
好ましい実施形態において、遺伝子治療に使用される細胞は、患者に対して自
己である。
己である。
【０２６５】
遺伝子治療において組換え細胞が使用される実施形態において、抗体をコード
する核酸配列は、細胞またはそれらの子孫により核酸配列が発現可能であるよう
に細胞に導入され、そして次いで組み換え細胞は、治療的効果のためにインビボ
で投与される。具体的な実施形態において、幹細胞または前駆細胞が用いられる
。インビトロで単離され得、そしてインビトロで維持され得る任意の幹細胞およ
び／または前駆細胞は、本発明のこの実施形態に従って潜在的に使用され得る（
例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／０８５９８号：ＳｔｅｍｐｌｅおよびＡｎｄｅ
ｒｓｏｎ，Ｃｅｌｌ ７１：９７３−９８５（１９９２）；Ｒｈｅｉｎｗａｌｄ
，Ｍｅｔｈ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ．２１Ａ：２２９（１９８０）；ならびにＰｉｔ
ｔｅｌｋｏｗおよびＳｃｏｔｔ，Ｍａｙｏ Ｃｌｉｎｉｃ Ｐｒｏｃ．６１：７
７１（１９８６）を参照のこと）。
する核酸配列は、細胞またはそれらの子孫により核酸配列が発現可能であるよう
に細胞に導入され、そして次いで組み換え細胞は、治療的効果のためにインビボ
で投与される。具体的な実施形態において、幹細胞または前駆細胞が用いられる
。インビトロで単離され得、そしてインビトロで維持され得る任意の幹細胞およ
び／または前駆細胞は、本発明のこの実施形態に従って潜在的に使用され得る（
例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／０８５９８号：ＳｔｅｍｐｌｅおよびＡｎｄｅ
ｒｓｏｎ，Ｃｅｌｌ ７１：９７３−９８５（１９９２）；Ｒｈｅｉｎｗａｌｄ
，Ｍｅｔｈ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ．２１Ａ：２２９（１９８０）；ならびにＰｉｔ
ｔｅｌｋｏｗおよびＳｃｏｔｔ，Ｍａｙｏ Ｃｌｉｎｉｃ Ｐｒｏｃ．６１：７
７１（１９８６）を参照のこと）。
【０２６６】
特定の実施形態において、遺伝子治療の目的で導入されるべき核酸は、コード
領域に作動可能に連結された誘導性プロモーターを含有し、その結果、核酸の発
現は、適切な転写誘導因子の存在または不在を制御することにより制御可能であ
る。
領域に作動可能に連結された誘導性プロモーターを含有し、その結果、核酸の発
現は、適切な転写誘導因子の存在または不在を制御することにより制御可能であ
る。
【０２６７】
本発明の化合物または薬学的組成物は、好ましくは、ヒトでの使用の前にイン
ビトロで、そして次いでインビボで、所望の治療活性または予防活性について試
験される。例えば、化合物または薬学的組成物の、治療有用性または予防有用性
を証明するためのインビトロアッセイとしては、細胞株または患者組織サンプル
に対する化合物の効果が挙げられる。細胞株および／または組織サンプルに対す
る化合物または組成物の効果は、当業者に公知である技術（ロゼット形成アッセ
イおよび細胞溶解アッセイが挙げられるがこれらに限定されない）を利用して決
定され得る。本発明に従って、特定の化合物の投与が示されるか否かを決定する
ために用いられ得るインビトロアッセイとしては、インビトロ細胞培養アッセイ
が挙げられ、このアッセイでは、患者組織サンプルが培養物において増殖し、そ
して化合物に曝されるか、そうでなければ化合物が投与され、そして、組織サン
プルに対するそのような化合物の効果が観察される。
ビトロで、そして次いでインビボで、所望の治療活性または予防活性について試
験される。例えば、化合物または薬学的組成物の、治療有用性または予防有用性
を証明するためのインビトロアッセイとしては、細胞株または患者組織サンプル
に対する化合物の効果が挙げられる。細胞株および／または組織サンプルに対す
る化合物または組成物の効果は、当業者に公知である技術（ロゼット形成アッセ
イおよび細胞溶解アッセイが挙げられるがこれらに限定されない）を利用して決
定され得る。本発明に従って、特定の化合物の投与が示されるか否かを決定する
ために用いられ得るインビトロアッセイとしては、インビトロ細胞培養アッセイ
が挙げられ、このアッセイでは、患者組織サンプルが培養物において増殖し、そ
して化合物に曝されるか、そうでなければ化合物が投与され、そして、組織サン
プルに対するそのような化合物の効果が観察される。
【０２６８】
（治療的／予防的な投与および組成物）
本発明は、被験体への有効量の本発明の化合物または薬学的組成物、好ましく
は本発明のペプチドまたは抗体の投与による処置、阻害および予防の方法を提供
する。好ましい局面において、化合物は実質的に精製される（例えば、その効果
を制限するかまたは望ましくない副作用を生じる物質は実質的にない）。被験体
は好ましくは、ウシ、ブタ、ウマ、ニワトリ、ネコ、イヌなどの動物が挙げられ
るがそれらに限定されない動物であり、そして好ましくは哺乳動物であり、そし
て最も好ましくはヒトである。
は本発明のペプチドまたは抗体の投与による処置、阻害および予防の方法を提供
する。好ましい局面において、化合物は実質的に精製される（例えば、その効果
を制限するかまたは望ましくない副作用を生じる物質は実質的にない）。被験体
は好ましくは、ウシ、ブタ、ウマ、ニワトリ、ネコ、イヌなどの動物が挙げられ
るがそれらに限定されない動物であり、そして好ましくは哺乳動物であり、そし
て最も好ましくはヒトである。
【０２６９】
化合物が核酸または免疫グロブリンを含む場合に使用され得る処方および投与
方法は、上記に記載され；さらなる適切な処方および投与経路は、本明細書中で
以下に記載されたものの中から選択され得る。
方法は、上記に記載され；さらなる適切な処方および投与経路は、本明細書中で
以下に記載されたものの中から選択され得る。
【０２７０】
様々な送達システムが公知であり、そして本発明の化合物を投与するために用
いられ得る（例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセル、この化合物の発
現が可能な組換え細胞中でのカプセル化、レセプター媒介エンドサイトーシス（
例えば、ＷｕおよびＷｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３
２（１９８７）を参照のこと）、レトロウイルスまたは他のベクターの一部とし
ての核酸の構築など）。導入方法としては、皮内、筋内、腹腔内、静脈内、皮下
、鼻腔内、硬膜外、および経口経路が挙げられるがそれらに限定されない。化合
物または組成物は、任意の好都合な経路により（例えば、注入またはボーラス注
射により、上皮または粘膜内層（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜および腸粘膜など
）を通しての吸収により）投与され得、そして他の生物学的に活性な薬剤と一緒
に投与され得る。投与は、全身的または局所的であり得る。さらに、本発明の薬
学的化合物または組成物を、任意の適切な経路（脳室内注射および髄腔内注射を
包含し；脳室内注射は、例えば、Ｏｍｍａｙａリザーバのようなリザーバに取り
付けられた脳室内カテーテルにより容易にされ得る）により中枢神経系に導入す
ることが望まれ得る。例えば、吸入器または噴霧器の使用、およびエアゾール化
剤を用いた処方により、肺投与もまた使用され得る。
いられ得る（例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセル、この化合物の発
現が可能な組換え細胞中でのカプセル化、レセプター媒介エンドサイトーシス（
例えば、ＷｕおよびＷｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３
２（１９８７）を参照のこと）、レトロウイルスまたは他のベクターの一部とし
ての核酸の構築など）。導入方法としては、皮内、筋内、腹腔内、静脈内、皮下
、鼻腔内、硬膜外、および経口経路が挙げられるがそれらに限定されない。化合
物または組成物は、任意の好都合な経路により（例えば、注入またはボーラス注
射により、上皮または粘膜内層（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜および腸粘膜など
）を通しての吸収により）投与され得、そして他の生物学的に活性な薬剤と一緒
に投与され得る。投与は、全身的または局所的であり得る。さらに、本発明の薬
学的化合物または組成物を、任意の適切な経路（脳室内注射および髄腔内注射を
包含し；脳室内注射は、例えば、Ｏｍｍａｙａリザーバのようなリザーバに取り
付けられた脳室内カテーテルにより容易にされ得る）により中枢神経系に導入す
ることが望まれ得る。例えば、吸入器または噴霧器の使用、およびエアゾール化
剤を用いた処方により、肺投与もまた使用され得る。
【０２７１】
具体的な実施形態において、本発明の薬学的化合物または組成物を、処置の必
要な領域に局所的に投与することが望まれ得る；これは、制限する目的ではない
が、例えば、手術中の局部注入、局所適用（例えば、手術後の創傷包帯との組み
合わせて）により、注射により、カテーテルにより、坐剤により、またはインプ
ラント（このインプラントは、シアラスティック（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜のよ
うな膜または繊維を含む、多孔性、非多孔性、または膠様材料である）により達
成され得る。好ましくは、抗体を含む本発明のタンパク質を投与する際、タンパ
ク質が吸収されない材料を使用するために注意が払われなければならない。
要な領域に局所的に投与することが望まれ得る；これは、制限する目的ではない
が、例えば、手術中の局部注入、局所適用（例えば、手術後の創傷包帯との組み
合わせて）により、注射により、カテーテルにより、坐剤により、またはインプ
ラント（このインプラントは、シアラスティック（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜のよ
うな膜または繊維を含む、多孔性、非多孔性、または膠様材料である）により達
成され得る。好ましくは、抗体を含む本発明のタンパク質を投与する際、タンパ
ク質が吸収されない材料を使用するために注意が払われなければならない。
【０２７２】
別の実施形態において、化合物または組成物は、小胞、特に、リポソーム中へ
送達され得る（Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３（
１９９０）；Ｔｒｅａｔら，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐ
ｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ，Ｌ
ｏｐｅｚ−ＢｅｒｅｓｔｅｉｎおよびＦｉｄｌｅｒ（編），Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ，３５３〜３６５頁（１９８９）；Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ，
同書３１７〜３２７頁を参照のこと；広く同書を参照のこと）。
送達され得る（Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３（
１９９０）；Ｔｒｅａｔら，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐ
ｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ，Ｌ
ｏｐｅｚ−ＢｅｒｅｓｔｅｉｎおよびＦｉｄｌｅｒ（編），Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ，３５３〜３６５頁（１９８９）；Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ，
同書３１７〜３２７頁を参照のこと；広く同書を参照のこと）。
【０２７３】
さらに別の実施形態において、化合物または組成物は制御された放出システム
中で送達され得る。１つの実施形態において、ポンプが用いられ得る（Ｌａｎｇ
ｅｒ，（前出）；Ｓｅｆｔｏｎ，ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅ
ｎｇ．１４：２０１（１９８７）；Ｂｕｃｈｗａｌｄら，Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８
：５０７（１９８０）；Ｓａｕｄｅｋら，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：
５７４（１９８９）を参照のこと）。別の実施形態において、高分子材料が用い
られ得る（Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌ
ｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ（編），ＣＲＣ Ｐｒｅ
ｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌ
ｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ
Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，ＳｍｏｌｅｎおよびＢａｌ
ｌ（編），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４）；ＲａｎｇｅｒおよびＰ
ｅｐｐａｓ，Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈ
ｅｍ．２３：６１（１９８３）を参照のこと；Ｌｅｖｙら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２
２８：１９０（１９８５）；Ｄｕｒｉｎｇら，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３
５１（１９８９）；Ｈｏｗａｒｄら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５（
１９８９）もまた参照のこと）。さらに別の実施形態において、制御された放出
システムは、治療標的、即ち、脳の近くに置かれ得、従って、全身用量の一部の
みを必要とする（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔ
ｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，（前出），第２巻，
１１５〜１３８頁（１９８４）を参照のこと）。
中で送達され得る。１つの実施形態において、ポンプが用いられ得る（Ｌａｎｇ
ｅｒ，（前出）；Ｓｅｆｔｏｎ，ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅ
ｎｇ．１４：２０１（１９８７）；Ｂｕｃｈｗａｌｄら，Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８
：５０７（１９８０）；Ｓａｕｄｅｋら，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：
５７４（１９８９）を参照のこと）。別の実施形態において、高分子材料が用い
られ得る（Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌ
ｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ（編），ＣＲＣ Ｐｒｅ
ｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌ
ｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ
Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，ＳｍｏｌｅｎおよびＢａｌ
ｌ（編），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４）；ＲａｎｇｅｒおよびＰ
ｅｐｐａｓ，Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈ
ｅｍ．２３：６１（１９８３）を参照のこと；Ｌｅｖｙら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２
２８：１９０（１９８５）；Ｄｕｒｉｎｇら，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３
５１（１９８９）；Ｈｏｗａｒｄら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５（
１９８９）もまた参照のこと）。さらに別の実施形態において、制御された放出
システムは、治療標的、即ち、脳の近くに置かれ得、従って、全身用量の一部の
みを必要とする（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔ
ｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，（前出），第２巻，
１１５〜１３８頁（１９８４）を参照のこと）。
【０２７４】
他の制御された放出システムは、Ｌａｎｇｅｒにより総説において議論される
（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３（１９９０））。
（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３（１９９０））。
【０２７５】
本発明の化合物がタンパク質をコードする核酸である、具体的な実施形態にお
いて、その核酸は、それを適切な核酸発現ベクターの一部として構成し、そして
それが細胞内になるように投与することにより（例えば、レトロウイルスベクタ
ーの使用により（米国特許第４，９８０，２８６号を参照のこと）、または直接
注射により、または微粒子ボンバードメント（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓ
ｔｉｃ，Ｄｕｐｏｎｔ）の使用により、または脂質もしくは細胞表面レセプター
もしくはトランスフェクト剤でコーティングすることにより、または核に入るこ
とが公知であるホメオボックス様ペプチドと結合させて投与すること（例えば、
Ｊｏｌｉｏｔら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１８
６４−１８６８（１９９１）を参照のこと）などにより、そのコードされたタン
パク質の発現を促進するようにインビボで投与され得る。あるいは、核酸は、細
胞内に導入され得、そして、発現のために相同組換えにより宿主細胞ＤＮＡ内に
組み込まれ得る。
いて、その核酸は、それを適切な核酸発現ベクターの一部として構成し、そして
それが細胞内になるように投与することにより（例えば、レトロウイルスベクタ
ーの使用により（米国特許第４，９８０，２８６号を参照のこと）、または直接
注射により、または微粒子ボンバードメント（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓ
ｔｉｃ，Ｄｕｐｏｎｔ）の使用により、または脂質もしくは細胞表面レセプター
もしくはトランスフェクト剤でコーティングすることにより、または核に入るこ
とが公知であるホメオボックス様ペプチドと結合させて投与すること（例えば、
Ｊｏｌｉｏｔら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１８
６４−１８６８（１９９１）を参照のこと）などにより、そのコードされたタン
パク質の発現を促進するようにインビボで投与され得る。あるいは、核酸は、細
胞内に導入され得、そして、発現のために相同組換えにより宿主細胞ＤＮＡ内に
組み込まれ得る。
【０２７６】
本発明はまた、薬学的組成物を提供する。このような組成物は、治療有効量の
化合物、および薬学的に受容可能なキャリアを含む。具体的な実施形態において
、用語「薬学的に受容可能な」とは、動物における、そしてさらに特にヒトにお
ける使用のために、連邦規制当局もしくは米国政府により認められたか、または
米国薬局方もしくは他の一般に認められた薬局方に列挙されたことを意味する。
用語「キャリア」とは、治療剤とともに投与される、希釈剤、アジュバンド、賦
形剤、またはビヒクルをいう。このような薬学的なキャリアは、水および油（石
油起源、動物起源、植物起源、または合成起源の油（例えば、ピーナッツ油、大
豆油、鉱油、ゴマ油など）を含む）のような滅菌した液体であり得る。水は、薬
学的組成物が静脈内に投与される場合に、好ましいキャリアである。生理食塩水
溶液、ならびにデキストロースおよびグリセロールの水溶液はまた、特に注射可
能な溶液のために、液体キャリアとして使用され得る。適切な薬学的賦形剤とし
ては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、イネ
、フラワー、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン
酸グリセロール、滑石、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン
、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。組成物はまた、所望されるな
らば、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含み得る。これらの組
成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、持続放出処方物
などの形態を取り得る。この組成物は、従来の結合剤およびトリグリセリドのよ
うなキャリアとともに、坐剤として処方され得る。経口処方物は、薬学的等級の
マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリン
ナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどのような標準キャリアを含み得
る。適切な薬学的キャリアの例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇ
ｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載される
。このような組成物は、治療有効量の化合物を、好ましくは精製された形態で、
適切な量のキャリアとともに含んで、患者への適切な投与のための形態を提供す
る。処方物は、投与形態に適するべきである。
化合物、および薬学的に受容可能なキャリアを含む。具体的な実施形態において
、用語「薬学的に受容可能な」とは、動物における、そしてさらに特にヒトにお
ける使用のために、連邦規制当局もしくは米国政府により認められたか、または
米国薬局方もしくは他の一般に認められた薬局方に列挙されたことを意味する。
用語「キャリア」とは、治療剤とともに投与される、希釈剤、アジュバンド、賦
形剤、またはビヒクルをいう。このような薬学的なキャリアは、水および油（石
油起源、動物起源、植物起源、または合成起源の油（例えば、ピーナッツ油、大
豆油、鉱油、ゴマ油など）を含む）のような滅菌した液体であり得る。水は、薬
学的組成物が静脈内に投与される場合に、好ましいキャリアである。生理食塩水
溶液、ならびにデキストロースおよびグリセロールの水溶液はまた、特に注射可
能な溶液のために、液体キャリアとして使用され得る。適切な薬学的賦形剤とし
ては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、イネ
、フラワー、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン
酸グリセロール、滑石、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン
、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。組成物はまた、所望されるな
らば、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含み得る。これらの組
成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、持続放出処方物
などの形態を取り得る。この組成物は、従来の結合剤およびトリグリセリドのよ
うなキャリアとともに、坐剤として処方され得る。経口処方物は、薬学的等級の
マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリン
ナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどのような標準キャリアを含み得
る。適切な薬学的キャリアの例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇ
ｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載される
。このような組成物は、治療有効量の化合物を、好ましくは精製された形態で、
適切な量のキャリアとともに含んで、患者への適切な投与のための形態を提供す
る。処方物は、投与形態に適するべきである。
【０２７７】
好ましい実施形態において、組成物は、慣用手順に従って、ヒトへの静脈内投
与のために採用された薬学的組成物として、処方される。代表的には、静脈内投
与のための組成物は、滅菌等張水性緩衝液の溶液である。必要な場合、組成物は
また、可溶化剤および注射の部位での痛みを緩和するリグノカインのような局部
麻酔を含み得る。一般的には、成分は、別々にかまたは単一投薬形態で一緒に混
合してのどちらかで、例えば、一定量の活性薬剤を示すアンプルまたは小袋（ｓ
ａｃｈｅｔｔｅ）のような密封された容器中の凍結乾燥粉末または水を含まない
濃縮物として供給される。組成物が注入により投与されるべき場合には、組成物
は、滅菌した薬学的等級の水または生理食塩水を含む注入ボトルに分配され得る
。組成物が注射により投与される場合、成分が投与の前に混合され得るように、
注射用滅菌水または生理食塩水のアンプルが提供され得る。
与のために採用された薬学的組成物として、処方される。代表的には、静脈内投
与のための組成物は、滅菌等張水性緩衝液の溶液である。必要な場合、組成物は
また、可溶化剤および注射の部位での痛みを緩和するリグノカインのような局部
麻酔を含み得る。一般的には、成分は、別々にかまたは単一投薬形態で一緒に混
合してのどちらかで、例えば、一定量の活性薬剤を示すアンプルまたは小袋（ｓ
ａｃｈｅｔｔｅ）のような密封された容器中の凍結乾燥粉末または水を含まない
濃縮物として供給される。組成物が注入により投与されるべき場合には、組成物
は、滅菌した薬学的等級の水または生理食塩水を含む注入ボトルに分配され得る
。組成物が注射により投与される場合、成分が投与の前に混合され得るように、
注射用滅菌水または生理食塩水のアンプルが提供され得る。
【０２７８】
本発明の化合物は、中性のまたは塩の形態として処方され得る。薬学的に受容
可能な塩としては、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するもの
のようなアニオンとともに形成される塩、およびナトリウム、カリウム、アンモ
ニウム、カルシウム、水酸化第２鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、
２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するもののよ
うなカチオンとともに形成される塩が挙げられる。
可能な塩としては、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するもの
のようなアニオンとともに形成される塩、およびナトリウム、カリウム、アンモ
ニウム、カルシウム、水酸化第２鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、
２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するもののよ
うなカチオンとともに形成される塩が挙げられる。
【０２７９】
この処置（本発明のポリペプチドの異常な発現および／または活性と関連する
疾患または障害の抑制および予防）において効果的である本発明の化合物の量は
、標準的な臨床技術により決定され得る。さらに、インビトロアッセイは、必要
に応じて、使用して最適な投薬量の範囲を同定するのを助け得る。処方において
使用されるべき正確な用量はまた、投与の経路、および疾患または障害の重篤さ
に依存し、そして開業医の判断および各患者の状況に従って決定されるべきであ
る。有効用量は、インビトロまたは動物モデル試験系から得られた用量反応曲線
から外插され得る。
疾患または障害の抑制および予防）において効果的である本発明の化合物の量は
、標準的な臨床技術により決定され得る。さらに、インビトロアッセイは、必要
に応じて、使用して最適な投薬量の範囲を同定するのを助け得る。処方において
使用されるべき正確な用量はまた、投与の経路、および疾患または障害の重篤さ
に依存し、そして開業医の判断および各患者の状況に従って決定されるべきであ
る。有効用量は、インビトロまたは動物モデル試験系から得られた用量反応曲線
から外插され得る。
【０２８０】
抗体に関して、患者に投与される投薬量は、代表的に、患者の体重１ｋｇあた
り０．１ｍｇ〜１００ｍｇである。好ましくは、患者に投与される投薬量は、患
者の体重１ｋｇあたり０．１ｍｇと２０ｍｇとの間であり、より好ましくは、患
者の体重１ｋｇあたり１ｍｇ〜１０ｍｇである。一般に、ヒト抗体は、外来ポリ
ペプチドへの免疫応答に起因して、他種由来の抗体よりもヒト体内で長い半減期
を有する。従って、ヒト抗体の低い投薬量および頻度の低い投与は、しばしば可
能である。さらに、本発明の抗体の投与の投薬量および頻度は、改変（例えば、
脂溶化（ｌｉｐｉｄａｔｉｏｎ）のような）による抗体の取り込みおよび組織浸
透（例えば、脳への）を増強することにより減少され得る。
り０．１ｍｇ〜１００ｍｇである。好ましくは、患者に投与される投薬量は、患
者の体重１ｋｇあたり０．１ｍｇと２０ｍｇとの間であり、より好ましくは、患
者の体重１ｋｇあたり１ｍｇ〜１０ｍｇである。一般に、ヒト抗体は、外来ポリ
ペプチドへの免疫応答に起因して、他種由来の抗体よりもヒト体内で長い半減期
を有する。従って、ヒト抗体の低い投薬量および頻度の低い投与は、しばしば可
能である。さらに、本発明の抗体の投与の投薬量および頻度は、改変（例えば、
脂溶化（ｌｉｐｉｄａｔｉｏｎ）のような）による抗体の取り込みおよび組織浸
透（例えば、脳への）を増強することにより減少され得る。
【０２８１】
本発明はまた、本発明の薬学的組成物の一つ以上の成分で満たされている一つ
以上の容器を備える薬学的パックまたはキットを提供する。薬学的製品または生
物学的製品の製造、使用または販売を規制している政府機関により規定される形
式における通告は、このような容器に、必要に応じて伴ない得る。この通告は、
ヒトの投与のための製造、使用または販売のこの機関による認可を反映する。
以上の容器を備える薬学的パックまたはキットを提供する。薬学的製品または生
物学的製品の製造、使用または販売を規制している政府機関により規定される形
式における通告は、このような容器に、必要に応じて伴ない得る。この通告は、
ヒトの投与のための製造、使用または販売のこの機関による認可を反映する。
【０２８２】
（診断および画像化）
目的のポリペプチドに特異的に結合する標識化抗体、ならびにその誘導体およ
びそのアナログは、診断目的のために使用されて、本発明のポリペプチドの異常
な発現および／または活性に関連する疾患および／または障害を検出、診断また
はモニターし得る。本発明は、目的のポリペプチドの異常な発現の検出について
提供し、これは、（ａ）目的のポリペプチドに特異的な１つ以上の抗体を使用し
て、個体の細胞または体液中の目的のポリペプチドの発現をアッセイする工程、
および（ｂ）この遺伝子発現レベルと標準的な遺伝子発現のレベルを比較する工
程、を包含し、これによって、その標準的な発現レベルと比較されるアッセイさ
れたポリペプチド遺伝子発現レベルの増加または減少が、異常な発現を示す。
びそのアナログは、診断目的のために使用されて、本発明のポリペプチドの異常
な発現および／または活性に関連する疾患および／または障害を検出、診断また
はモニターし得る。本発明は、目的のポリペプチドの異常な発現の検出について
提供し、これは、（ａ）目的のポリペプチドに特異的な１つ以上の抗体を使用し
て、個体の細胞または体液中の目的のポリペプチドの発現をアッセイする工程、
および（ｂ）この遺伝子発現レベルと標準的な遺伝子発現のレベルを比較する工
程、を包含し、これによって、その標準的な発現レベルと比較されるアッセイさ
れたポリペプチド遺伝子発現レベルの増加または減少が、異常な発現を示す。
【０２８３】
本発明は、障害を診断するための診断アッセイを提供し、このアッセイは、（
ａ）目的のポリペプチドに特異的な１つ以上の抗体を使用して、個体の細胞また
は体液中の目的のポリペプチドの発現をアッセイする工程、および（ｂ）この遺
伝子発現レベルと標準的な遺伝子発現のレベルを比較する工程、を包含し、これ
によって、その標準的な発現レベルと比較されるアッセイされたポリペプチド遺
伝子発現レベルの増加または減少が、特定の障害を示す。癌に関して、個体由来
の生検組織における比較的高い量の転写物の存在は、疾患の発生のための素因を
示し得るか、または実際の臨床症状の出現前に疾患を検出するための手段を提供
し得る。この型のより決定的な診断は、保健専門家に予防手段を使用させること
、または早期の積極的な処置を可能にし得、これにより、癌の発生またはさらな
る進行を予防する。
ａ）目的のポリペプチドに特異的な１つ以上の抗体を使用して、個体の細胞また
は体液中の目的のポリペプチドの発現をアッセイする工程、および（ｂ）この遺
伝子発現レベルと標準的な遺伝子発現のレベルを比較する工程、を包含し、これ
によって、その標準的な発現レベルと比較されるアッセイされたポリペプチド遺
伝子発現レベルの増加または減少が、特定の障害を示す。癌に関して、個体由来
の生検組織における比較的高い量の転写物の存在は、疾患の発生のための素因を
示し得るか、または実際の臨床症状の出現前に疾患を検出するための手段を提供
し得る。この型のより決定的な診断は、保健専門家に予防手段を使用させること
、または早期の積極的な処置を可能にし得、これにより、癌の発生またはさらな
る進行を予防する。
【０２８４】
本発明の抗体を使用して、当業者に公知の古典的な免疫組織学的方法を使用し
て生物学的サンプル中のタンパク質レベルをアッセイし得る（例えば、Ｊａｌｋ
ａｎｅｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：９７６−９８５（１９８５）；
Ｊａｌｋａｎｅｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７−３０９６（
１９８７）を参照のこと）。タンパク質遺伝子発現を検出するために有用な、抗
体に基づく他の方法としては、イムノアッセイ（例えば、酵素結合イムノソルベ
ント検定法（ＥＬＩＳＡ）および放射免疫測定法（ＲＩＡ））が挙げられる。適
切な抗体アッセイ標識は、当該分野において公知であり、そして酵素標識（例え
ば、グルコースオキシダーゼ）；放射性同位体（例えば、ヨウ素（１２５Ｉ、１
２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム
（１１２Ｉｎ）、およびテクネチウム（９９Ｔｃ））；発光標識（例えば、ルミ
ノール）；ならびに蛍光標識（例えば、フルオレセインおよびローダミン）、な
らびにビオチンが挙げられる。
て生物学的サンプル中のタンパク質レベルをアッセイし得る（例えば、Ｊａｌｋ
ａｎｅｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：９７６−９８５（１９８５）；
Ｊａｌｋａｎｅｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７−３０９６（
１９８７）を参照のこと）。タンパク質遺伝子発現を検出するために有用な、抗
体に基づく他の方法としては、イムノアッセイ（例えば、酵素結合イムノソルベ
ント検定法（ＥＬＩＳＡ）および放射免疫測定法（ＲＩＡ））が挙げられる。適
切な抗体アッセイ標識は、当該分野において公知であり、そして酵素標識（例え
ば、グルコースオキシダーゼ）；放射性同位体（例えば、ヨウ素（１２５Ｉ、１
２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム
（１１２Ｉｎ）、およびテクネチウム（９９Ｔｃ））；発光標識（例えば、ルミ
ノール）；ならびに蛍光標識（例えば、フルオレセインおよびローダミン）、な
らびにビオチンが挙げられる。
【０２８５】
本発明の１つの局面は、動物、好ましくは哺乳動物、そして最も好ましくはヒ
トにおける、目的のポリペプチドの異常な発現と関連する疾患または障害の検出
および診断である。１つの実施形態において、診断は、ａ）目的のポリペプチド
に特異的に結合する有効量の標識化分子を被験体に（例えば、非経口的に、皮下
に、または腹腔内に）投与する工程；ｂ）このポリペプチドが発現する被験体内
の部位でこの標識化分子が優先的に濃縮することを可能にするために（および結
合していない標識化分子がバックグラウンドレベルまで除去されるために）投与
後、時間間隔を待つ工程；ｃ）バックグラウンドレベルを決定する工程；および
ｄ）この被験体中の標識化分子を検出する工程、を包含し、その結果、このバッ
クグラウンドレベルを越える標識化分子の検出は、この被験体が目的のポリペプ
チドの異常な発現と関連する特定の疾患または障害を有することを示す。バック
グラウンドレベルは、特定の系について以前に決定された標準的な値と、検出さ
れた標識化分子の量を比較する工程を包含する種々の方法により決定され得る。
トにおける、目的のポリペプチドの異常な発現と関連する疾患または障害の検出
および診断である。１つの実施形態において、診断は、ａ）目的のポリペプチド
に特異的に結合する有効量の標識化分子を被験体に（例えば、非経口的に、皮下
に、または腹腔内に）投与する工程；ｂ）このポリペプチドが発現する被験体内
の部位でこの標識化分子が優先的に濃縮することを可能にするために（および結
合していない標識化分子がバックグラウンドレベルまで除去されるために）投与
後、時間間隔を待つ工程；ｃ）バックグラウンドレベルを決定する工程；および
ｄ）この被験体中の標識化分子を検出する工程、を包含し、その結果、このバッ
クグラウンドレベルを越える標識化分子の検出は、この被験体が目的のポリペプ
チドの異常な発現と関連する特定の疾患または障害を有することを示す。バック
グラウンドレベルは、特定の系について以前に決定された標準的な値と、検出さ
れた標識化分子の量を比較する工程を包含する種々の方法により決定され得る。
【０２８６】
被験体の大きさおよび使用される画像化システムが、診断の画像を産生するた
めに必要である画像化部分の量を決定するということは、当該分野において理解
される。放射性同位体部分の場合、ヒト被験体について、注入される放射能の量
は、通常、約５〜２０ｍキュリーの範囲の９９ｍＴｃである。次いで、標識化抗
体または標識化抗体フラグメントは、特定のタンパク質を含む細胞の位置で優先
的に蓄積する。インビボでの腫瘍の画像化は、Ｓ．Ｗ．Ｂｕｒｃｈｉｅｌら、「
Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌ
ｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ」（Ｔ
ｕｍｏｒ Ｉｍａｇｉｎｇ、第１３章：Ｔｈｅ Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，Ｓ．Ｗ．ＢｕｒｃｈｉｅｌおよびＢ
．Ａ．Ｒｈｏｄｅｓ編、Ｍａｓｓｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｉｎｃ．（１９
８２）において、記載される。
めに必要である画像化部分の量を決定するということは、当該分野において理解
される。放射性同位体部分の場合、ヒト被験体について、注入される放射能の量
は、通常、約５〜２０ｍキュリーの範囲の９９ｍＴｃである。次いで、標識化抗
体または標識化抗体フラグメントは、特定のタンパク質を含む細胞の位置で優先
的に蓄積する。インビボでの腫瘍の画像化は、Ｓ．Ｗ．Ｂｕｒｃｈｉｅｌら、「
Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌ
ｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ」（Ｔ
ｕｍｏｒ Ｉｍａｇｉｎｇ、第１３章：Ｔｈｅ Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，Ｓ．Ｗ．ＢｕｒｃｈｉｅｌおよびＢ
．Ａ．Ｒｈｏｄｅｓ編、Ｍａｓｓｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｉｎｃ．（１９
８２）において、記載される。
【０２８７】
使用する標識の型および投与の様式を含む、いくつかの変動に依存して、標識
化分子が被験体中の部位に優先的に濃縮することを可能にするため、および結合
していない標識化分子がバックグラウンドレベルまで除去されるための投与後の
時間間隔は、６〜４８時間もしくは６〜２４時間または６〜１２時間である。別
の実施形態において、投与後の時間間隔は、５〜２０日間または５〜１０日間で
ある。
化分子が被験体中の部位に優先的に濃縮することを可能にするため、および結合
していない標識化分子がバックグラウンドレベルまで除去されるための投与後の
時間間隔は、６〜４８時間もしくは６〜２４時間または６〜１２時間である。別
の実施形態において、投与後の時間間隔は、５〜２０日間または５〜１０日間で
ある。
【０２８８】
１つの実施形態において、疾患および障害をモニターすることは、疾患または
障害（ｄｉｓｅａｓｅ）を診断するための方法を繰り返すことによって実施され
る（例えば、最初の診断から１ヶ月後、最初の診断から６ヶ月後、最初の診断か
ら１年後、など）。
障害（ｄｉｓｅａｓｅ）を診断するための方法を繰り返すことによって実施され
る（例えば、最初の診断から１ヶ月後、最初の診断から６ヶ月後、最初の診断か
ら１年後、など）。
【０２８９】
標識化分子の存在は、インビボスキャニングについての当該分野で公知の方法
を使用して患者中で検出され得る。これらの方法は、使用される標識の型に依存
する。当業者は、特定の標識を決定するための適切な方法を決定することができ
る。本発明の診断方法において使用され得る方法およびデバイスは、コンピュー
タ連動断層撮影法（ＣＴ）、体全体のスキャン（例えば、陽子（ｐｏｓｉｔｉｏ
ｎ）放射断層撮影法（ＰＥＴ））、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、および超音波診
断法を含むが、これらに限定されない。
を使用して患者中で検出され得る。これらの方法は、使用される標識の型に依存
する。当業者は、特定の標識を決定するための適切な方法を決定することができ
る。本発明の診断方法において使用され得る方法およびデバイスは、コンピュー
タ連動断層撮影法（ＣＴ）、体全体のスキャン（例えば、陽子（ｐｏｓｉｔｉｏ
ｎ）放射断層撮影法（ＰＥＴ））、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、および超音波診
断法を含むが、これらに限定されない。
【０２９０】
特定の実施形態において、分子を放射性同位体で標識し、そして放射応答外科
的機器（ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｓｕｒｇｉｃａｌ ｉｎ
ｓｔｒｕｍｅｎｔ）（Ｔｈｕｒｓｔｏｎら、米国特許第５，４４１，０５０号）
を使用して患者中で検出する。別の実施形態において、分子を蛍光化合物で標識
し、そして蛍光応答スキャニング機器を使用して患者中で検出する。別の実施形
態において、分子を陽電子射出金属で標識し、そして陽電子射出断層撮影法を使
用して患者中で検出する。さらに別の実施形態において、分子を常磁性標識で標
識し、そして磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）を使用して患者中で検出する。 （キット） 本発明は、上記の方法において使用され得るキットを提供する。１つの実施形
態において、キットは、１つ以上の容器において、本発明の抗体、好ましくは精
製した抗体を備える。特定の実施形態において、本発明のキットは、エピトープ
を含む実質的に単離されたポリペプチドを備える。このエピトープは、キット中
に含まれる抗体と特異的に免疫反応する。好ましくは、本発明のキットは、目的
のポリペプチドと反応しないコントロール抗体をさらに備える。別の特定の実施
形態において、本発明のキットは、目的のポリペプチドへの抗体の結合を検出す
るための手段を備える（例えば、この抗体は、検出可能な基質（例えば、蛍光化
合物、酵素基質、放射性化合物もしくは発光化合物）に結合体化され得るか、ま
たは一次抗体を認識する二次抗体が、検出可能な基質と結合体化され得る）。
的機器（ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｓｕｒｇｉｃａｌ ｉｎ
ｓｔｒｕｍｅｎｔ）（Ｔｈｕｒｓｔｏｎら、米国特許第５，４４１，０５０号）
を使用して患者中で検出する。別の実施形態において、分子を蛍光化合物で標識
し、そして蛍光応答スキャニング機器を使用して患者中で検出する。別の実施形
態において、分子を陽電子射出金属で標識し、そして陽電子射出断層撮影法を使
用して患者中で検出する。さらに別の実施形態において、分子を常磁性標識で標
識し、そして磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）を使用して患者中で検出する。 （キット） 本発明は、上記の方法において使用され得るキットを提供する。１つの実施形
態において、キットは、１つ以上の容器において、本発明の抗体、好ましくは精
製した抗体を備える。特定の実施形態において、本発明のキットは、エピトープ
を含む実質的に単離されたポリペプチドを備える。このエピトープは、キット中
に含まれる抗体と特異的に免疫反応する。好ましくは、本発明のキットは、目的
のポリペプチドと反応しないコントロール抗体をさらに備える。別の特定の実施
形態において、本発明のキットは、目的のポリペプチドへの抗体の結合を検出す
るための手段を備える（例えば、この抗体は、検出可能な基質（例えば、蛍光化
合物、酵素基質、放射性化合物もしくは発光化合物）に結合体化され得るか、ま
たは一次抗体を認識する二次抗体が、検出可能な基質と結合体化され得る）。
【０２９１】
本発明の別の特定の実施形態において、キットは、増殖性および／または癌性
のポリヌクレオチドおよびポリペプチドに対して特異的な抗体を含む血清のスク
リーニングに使用するための診断キットである。このようなキットは、目的のポ
リペプチドと反応しないコントロール抗体を備え得る。このようなキットは、エ
ピトープを含む実質的に単離されたポリペプチド抗原を備え得る。このエピトー
プは、少なくとも１つの抗ポリペプチド抗原抗体と特異的に免疫反応する。さら
に、このようなキットは、抗原に対する上記の抗体の結合を検出するための手段
を備える（例えば、抗体は、蛍光化合物（例えば、フローサイトメトリーにより
検出され得るフルオレセインまはたローダミン）と結合体化され得る）。特定の
実施形態において、キットは、組換え的に産生されたポリペプチド抗原または化
学的に合成されたポリペプチド抗原を備え得る。キットのポリペプチド抗原はま
た、固体支持体に付着され得る。
のポリヌクレオチドおよびポリペプチドに対して特異的な抗体を含む血清のスク
リーニングに使用するための診断キットである。このようなキットは、目的のポ
リペプチドと反応しないコントロール抗体を備え得る。このようなキットは、エ
ピトープを含む実質的に単離されたポリペプチド抗原を備え得る。このエピトー
プは、少なくとも１つの抗ポリペプチド抗原抗体と特異的に免疫反応する。さら
に、このようなキットは、抗原に対する上記の抗体の結合を検出するための手段
を備える（例えば、抗体は、蛍光化合物（例えば、フローサイトメトリーにより
検出され得るフルオレセインまはたローダミン）と結合体化され得る）。特定の
実施形態において、キットは、組換え的に産生されたポリペプチド抗原または化
学的に合成されたポリペプチド抗原を備え得る。キットのポリペプチド抗原はま
た、固体支持体に付着され得る。
【０２９２】
より特定の実施形態において、上記のキットの検出手段は、上記のポリペプチ
ド抗原が付着する固体支持体を備える。このようなキットはまた、非付着レポー
ター標識化抗ヒト抗体を備え得る。この実施形態において、ポリペプチド抗原へ
の抗体の結合は、上記のレポーター標識化抗体の結合によって検出され得る。
ド抗原が付着する固体支持体を備える。このようなキットはまた、非付着レポー
ター標識化抗ヒト抗体を備え得る。この実施形態において、ポリペプチド抗原へ
の抗体の結合は、上記のレポーター標識化抗体の結合によって検出され得る。
【０２９３】
さらなる実施形態において、本発明は、本発明のポリペプチドの抗原を含む血
清のスクリーニングにおいて使用するための、診断キットを含む。この診断キッ
トは、ポリペプチド抗原またはポリヌクレオチド抗原と特異的に免疫反応する実
質的に単離された抗体、およびこの抗体へのこのポリヌクレオチド抗原またはポ
リペプチド抗原の結合を検出するための手段を備える。１つの実施形態において
、抗体は、固体支持体に付着される。特定の実施形態において、抗体は、モノク
ロナール抗体であり得る。キットのこの検出手段は、二次標識化モノクロナール
抗体を含み得る。あるいは、またはさらに、この検出手段は、標識化競合抗原を
含み得る。
清のスクリーニングにおいて使用するための、診断キットを含む。この診断キッ
トは、ポリペプチド抗原またはポリヌクレオチド抗原と特異的に免疫反応する実
質的に単離された抗体、およびこの抗体へのこのポリヌクレオチド抗原またはポ
リペプチド抗原の結合を検出するための手段を備える。１つの実施形態において
、抗体は、固体支持体に付着される。特定の実施形態において、抗体は、モノク
ロナール抗体であり得る。キットのこの検出手段は、二次標識化モノクロナール
抗体を含み得る。あるいは、またはさらに、この検出手段は、標識化競合抗原を
含み得る。
【０２９４】
１つの診断構成において、試験血清を、本発明の方法により得られる表面結合
抗原を有する固相試薬と反応させる。特定の抗原抗体とこの試薬との結合、およ
び洗浄することによる結合していない血清成分の除去の後、この試薬をレポータ
ー標識化抗ヒト抗体と反応させて、固体支持体上に、結合した抗抗原抗体の量に
比例して、この試薬にレポーターを結合させる。この試薬を再び洗浄して、結合
していない標識化抗体を除去し、そしてこの試薬と会合するレポーターの量を決
定する。代表的に、レポーターは、酵素であり、この酵素は、適切な蛍光性基質
、発光性基質または比色用基質（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）の存在
下で固相をインキュベートすることにより検出される。
抗原を有する固相試薬と反応させる。特定の抗原抗体とこの試薬との結合、およ
び洗浄することによる結合していない血清成分の除去の後、この試薬をレポータ
ー標識化抗ヒト抗体と反応させて、固体支持体上に、結合した抗抗原抗体の量に
比例して、この試薬にレポーターを結合させる。この試薬を再び洗浄して、結合
していない標識化抗体を除去し、そしてこの試薬と会合するレポーターの量を決
定する。代表的に、レポーターは、酵素であり、この酵素は、適切な蛍光性基質
、発光性基質または比色用基質（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）の存在
下で固相をインキュベートすることにより検出される。
【０２９５】
上記のアッセイにおける固体表面試薬は、タンパク質材料を固体支持体材料（
例えば、高分子ビーズ、計深棒、９６ウェルプレートまたは濾過材料）に付着さ
せるための公知の技術により調製される。これらの付着方法としては、一般的に
、支持体へのタンパク質の非特異的な吸着または固体支持体上の化学的に活性な
基（例えば、活性化カルボキシル基、ヒドロキシル基、またはアルデヒド基）と
のタンパク質の共有結合（ｃｏｖａｌｅｎｔ ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ）（代表的
には、遊離アミン基を介する）が挙げられる。あるいは、ストレプトアビジンで
コートされたプレートが、ビオチン化された抗原と共に使用され得る。
例えば、高分子ビーズ、計深棒、９６ウェルプレートまたは濾過材料）に付着さ
せるための公知の技術により調製される。これらの付着方法としては、一般的に
、支持体へのタンパク質の非特異的な吸着または固体支持体上の化学的に活性な
基（例えば、活性化カルボキシル基、ヒドロキシル基、またはアルデヒド基）と
のタンパク質の共有結合（ｃｏｖａｌｅｎｔ ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ）（代表的
には、遊離アミン基を介する）が挙げられる。あるいは、ストレプトアビジンで
コートされたプレートが、ビオチン化された抗原と共に使用され得る。
【０２９６】
従って、本発明は、この診断方法を行うためのアッセイ系またはキットを提供
する。このキットは、一般的に、表面結合された組換え抗原を有する支持体、お
よび表面結合された抗抗原抗体を検出するための、レポーター標識された抗ヒト
抗体を備える。
する。このキットは、一般的に、表面結合された組換え抗原を有する支持体、お
よび表面結合された抗抗原抗体を検出するための、レポーター標識された抗ヒト
抗体を備える。
【０２９７】
（ポリヌクレオチドの使用）
本明細書中で同定された各々のポリヌクレオチドは、試薬として多数の方法に
おいて使用され得る。以下の説明は例示的であるとみなされるべきであり、そし
て公知の技術を利用する。
おいて使用され得る。以下の説明は例示的であるとみなされるべきであり、そし
て公知の技術を利用する。
【０２９８】
本発明のポリヌクレオチドは、染色体同定のために有用である。実際の配列デ
ータ（反復多型性）に基づく染色体マーキング試薬は現在ほとんど利用可能では
ないため、新しい染色体マーカーを同定する必要性が存在するままである。各々
の配列は、個々のヒト染色体上の特定の位置に特に標的化され、そしてこの位置
にハイブリダイズされ得る。従って、本発明の各々のポリヌクレオチドは、当該
分野で公知の技術を用いて染色体マーカーとして慣用的に使用され得る。
ータ（反復多型性）に基づく染色体マーキング試薬は現在ほとんど利用可能では
ないため、新しい染色体マーカーを同定する必要性が存在するままである。各々
の配列は、個々のヒト染色体上の特定の位置に特に標的化され、そしてこの位置
にハイブリダイズされ得る。従って、本発明の各々のポリヌクレオチドは、当該
分野で公知の技術を用いて染色体マーカーとして慣用的に使用され得る。
【０２９９】
簡単に言うと、配列は、配列番号Ｘで示される配列またはそれに対する相補体
からＰＣＲプライマー（好ましくは、少なくとも１５ｂｐ（例えば、１５〜２５
ｂｐ））を調製することによって染色体にマッピングされ得る。プライマーが、
ゲノムＤＮＡ中の１つより多くの予測されたエキソンにまたがらないように、プ
ライマーは、コンピューター分析を使用して必要に応じて選択され得る。次いで
、これらのプライマーは、個々のヒト染色体を含む体細胞ハイブリッドのＰＣＲ
スクリーニングのために使用される。配列番号Ｘに対応するヒト遺伝子を含むハ
イブリッドのみが、増幅されたフラグメントを産生する。
からＰＣＲプライマー（好ましくは、少なくとも１５ｂｐ（例えば、１５〜２５
ｂｐ））を調製することによって染色体にマッピングされ得る。プライマーが、
ゲノムＤＮＡ中の１つより多くの予測されたエキソンにまたがらないように、プ
ライマーは、コンピューター分析を使用して必要に応じて選択され得る。次いで
、これらのプライマーは、個々のヒト染色体を含む体細胞ハイブリッドのＰＣＲ
スクリーニングのために使用される。配列番号Ｘに対応するヒト遺伝子を含むハ
イブリッドのみが、増幅されたフラグメントを産生する。
【０３００】
同様に、体細胞ハイブリッドは、特定の染色体に対してポリヌクレオチドをＰ
ＣＲマッピングする迅速な方法を提供する。単一のサーマルサイクラーを使用し
て１日あたり３つ以上のクローンが割り当てられ得る。さらに、ポリヌクレオチ
ドの下位位置決定（ｓｕｂｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ）は、特定の染色体フラグ
メントのパネルを用いて達成され得る。使用され得る他の遺伝子マッピング戦略
は、インサイチュハイブリダイゼーション、標識フローソート（ｌａｂｅｌｅｄ
ｆｌｏｗ ｓｏｒｔｅｄ）染色体でのプレスクリーニング、染色体特異的ｃＤ
ＮＡライブラリーを構築するためのハイブリダイゼーションによる前選択、およ
びコンピューターマッピング技術（例えば、その全体が本明細書中に参考として
援用される、Ｓｈｕｌｅｒ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １６：４５
６−４５９（１９９８）など）を含む。
ＣＲマッピングする迅速な方法を提供する。単一のサーマルサイクラーを使用し
て１日あたり３つ以上のクローンが割り当てられ得る。さらに、ポリヌクレオチ
ドの下位位置決定（ｓｕｂｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ）は、特定の染色体フラグ
メントのパネルを用いて達成され得る。使用され得る他の遺伝子マッピング戦略
は、インサイチュハイブリダイゼーション、標識フローソート（ｌａｂｅｌｅｄ
ｆｌｏｗ ｓｏｒｔｅｄ）染色体でのプレスクリーニング、染色体特異的ｃＤ
ＮＡライブラリーを構築するためのハイブリダイゼーションによる前選択、およ
びコンピューターマッピング技術（例えば、その全体が本明細書中に参考として
援用される、Ｓｈｕｌｅｒ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １６：４５
６−４５９（１９９８）など）を含む。
【０３０１】
ポリヌクレオチドの正確な染色体位置はまた、中期染色体スプレッド（ｓｐｒ
ｅａｄ）の蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を使用して獲
得され得る。この技術は５００または６００塩基ほどの短さのポリヌクレオチド
を使用する；しかし２，０００〜４，０００ｂｐのポリヌクレオチドが好ましい
。この技術の総説に関しては、Ｖｅｒｍａら、「Ｈｕｍａｎ Ｃｈｒｏｍｏｓｏ
ｍｅｓ：ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」，Ｐｅ
ｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９８８）を参照のこと。
ｅａｄ）の蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を使用して獲
得され得る。この技術は５００または６００塩基ほどの短さのポリヌクレオチド
を使用する；しかし２，０００〜４，０００ｂｐのポリヌクレオチドが好ましい
。この技術の総説に関しては、Ｖｅｒｍａら、「Ｈｕｍａｎ Ｃｈｒｏｍｏｓｏ
ｍｅｓ：ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」，Ｐｅ
ｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９８８）を参照のこと。
【０３０２】
染色体マッピングについては、ポリヌクレオチドは、個々に（単一染色体また
はその染色体上の単一部位をマークするために）またはパネルで（複数部位およ
び／または複数染色体をマークするために）使用され得る。
はその染色体上の単一部位をマークするために）またはパネルで（複数部位およ
び／または複数染色体をマークするために）使用され得る。
【０３０３】
従って、本発明はまた、染色体の位置決定のための方法も提供し、この方法は
、（ａ）表１におけるポリヌクレオチド配列および配列番号ＸからＰＣＲプライ
マーを調製する工程、ならびに（ｂ）個々の染色体を含む体細胞ハイブリッドを
スクリーニングする工程を包含する。
、（ａ）表１におけるポリヌクレオチド配列および配列番号ＸからＰＣＲプライ
マーを調製する工程、ならびに（ｂ）個々の染色体を含む体細胞ハイブリッドを
スクリーニングする工程を包含する。
【０３０４】
本発明のポリヌクレオチドは、同様に、放射線ハイブリッドマッピング、ＨＡ
ＰＰＹマッピング、および長範囲制限マッピングに有用である。これらの技術お
よび当該分野で公知の他の技術の概説について、例えば、Ｄｅａｒ「Ｇｅｎｏｍ
ｅ Ｍａｐｐｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ」ＩＲＬ Ｐ
ｒｅｓｓ ａｔ Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｌｏｎｄ
ｏｎ（１９９７）；Ａｙｄｉｎ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７７：６９１〜６９４（
１９９９）；Ｈａｃｉａら、Ｍｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ３：４８３〜４９
２（１９９８）；Ｈｅｒｒｉｃｋら、Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ Ｒｅｓ．７：４０
９〜４２３（１９９９）；Ｈａｍｉｌｔｏｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂ
ｉｏｌ．６２：２６５〜２８０（２０００）；および／またはＯｔｔ、Ｊ．Ｈｅ
ｒｅｄ．９０：６８〜７０（１９９９）（これらの各々は、その全体が参考とし
て本明細書中に援用される）を参照のこと。
ＰＰＹマッピング、および長範囲制限マッピングに有用である。これらの技術お
よび当該分野で公知の他の技術の概説について、例えば、Ｄｅａｒ「Ｇｅｎｏｍ
ｅ Ｍａｐｐｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ」ＩＲＬ Ｐ
ｒｅｓｓ ａｔ Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｌｏｎｄ
ｏｎ（１９９７）；Ａｙｄｉｎ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７７：６９１〜６９４（
１９９９）；Ｈａｃｉａら、Ｍｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ３：４８３〜４９
２（１９９８）；Ｈｅｒｒｉｃｋら、Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ Ｒｅｓ．７：４０
９〜４２３（１９９９）；Ｈａｍｉｌｔｏｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂ
ｉｏｌ．６２：２６５〜２８０（２０００）；および／またはＯｔｔ、Ｊ．Ｈｅ
ｒｅｄ．９０：６８〜７０（１９９９）（これらの各々は、その全体が参考とし
て本明細書中に援用される）を参照のこと。
【０３０５】
一旦、ポリヌクレオチドが正確な染色体位置にマップされると、ポリヌクレオ
チドの物理的位置は、連鎖分析において使用され得る。連鎖分析は、染色体位置
と特定の疾患の提示との間の同時遺伝（ｃｏｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ）を確立す
る。（疾患マッピングデータは、例えば、Ｖ．ＭｃＫｕｓｉｃｋ，Ｍｅｎｄｅｌ
ｉａｎ Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ ｉｎ Ｍａｎ（Ｊｏｈｎｓ Ｈｏｐｋｉｎｓ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｗｅｌｃｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｉｂｒａｒｙを通し
てオンラインで利用可能である）において見い出される）。１メガベースマッピ
ング解像度および２０ｋｂあたり１遺伝子と仮定すると、疾患と関連する染色体
領域に正確に位置決定されるｃＤＮＡは、５０〜５００の潜在的な原因遺伝子の
うちの１つであり得る。
チドの物理的位置は、連鎖分析において使用され得る。連鎖分析は、染色体位置
と特定の疾患の提示との間の同時遺伝（ｃｏｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ）を確立す
る。（疾患マッピングデータは、例えば、Ｖ．ＭｃＫｕｓｉｃｋ，Ｍｅｎｄｅｌ
ｉａｎ Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ ｉｎ Ｍａｎ（Ｊｏｈｎｓ Ｈｏｐｋｉｎｓ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｗｅｌｃｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｉｂｒａｒｙを通し
てオンラインで利用可能である）において見い出される）。１メガベースマッピ
ング解像度および２０ｋｂあたり１遺伝子と仮定すると、疾患と関連する染色体
領域に正確に位置決定されるｃＤＮＡは、５０〜５００の潜在的な原因遺伝子の
うちの１つであり得る。
【０３０６】
従って、一旦、同時遺伝が確立されると、罹患個体と非罹患個体との間での本
発明のポリヌクレオチドおよび対応する遺伝子における差異が試験され得る。ま
ず、染色体中の可視的構造変化（例えば、欠失または転座）は染色体スプレッド
において、またはＰＣＲによって試験される。構造的変化が存在しない場合、点
変異の存在が確認される。何人かのまたは全ての罹患個体で観察されたが、正常
な個体では観察されなかった変異は、この変異がこの疾患を引き起こし得ること
を示す。しかし、いくつかの正常な個体由来のポリペプチドおよび対応する遺伝
子の完全な配列決定は、変異を多型性と区別するために要求される。新しい多型
性が同定される場合、この多型ポリペプチドはさらなる連鎖分析のために使用さ
れ得る。
発明のポリヌクレオチドおよび対応する遺伝子における差異が試験され得る。ま
ず、染色体中の可視的構造変化（例えば、欠失または転座）は染色体スプレッド
において、またはＰＣＲによって試験される。構造的変化が存在しない場合、点
変異の存在が確認される。何人かのまたは全ての罹患個体で観察されたが、正常
な個体では観察されなかった変異は、この変異がこの疾患を引き起こし得ること
を示す。しかし、いくつかの正常な個体由来のポリペプチドおよび対応する遺伝
子の完全な配列決定は、変異を多型性と区別するために要求される。新しい多型
性が同定される場合、この多型ポリペプチドはさらなる連鎖分析のために使用さ
れ得る。
【０３０７】
さらに、非罹患個体と比較した、罹患個体の遺伝子の増加または減少した発現
が、本発明のポリヌクレオチドを使用して評価され得る。任意のこれらの変化（
変化した発現、染色体再配置、または変異）は、診断マーカーまたは予後マーカ
ーとして使用され得る。
が、本発明のポリヌクレオチドを使用して評価され得る。任意のこれらの変化（
変化した発現、染色体再配置、または変異）は、診断マーカーまたは予後マーカ
ーとして使用され得る。
【０３０８】
従って、本発明はまた、障害の診断の間に有用な診断方法を提供し、この方法
は、個体由来の細胞または体液中の本発明のポリヌクレオチドの発現レベルを測
定する工程、および測定された遺伝子発現レベルを標準のポリヌクレオチド発現
レベルと比較する工程を包含し、これによって、標準と比較して、遺伝子発現レ
ベルの増加または減少が、障害の指標になる。
は、個体由来の細胞または体液中の本発明のポリヌクレオチドの発現レベルを測
定する工程、および測定された遺伝子発現レベルを標準のポリヌクレオチド発現
レベルと比較する工程を包含し、これによって、標準と比較して、遺伝子発現レ
ベルの増加または減少が、障害の指標になる。
【０３０９】
なお別の実施形態では、本発明は、サンプルを、試験被験体に由来する増殖性
および／またはガン性のポリヌクレオチドの存在について分析するためのキット
を含む。一般的実施形態において、このキットは、本発明のポリヌクレオチドと
特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む少なくとも１つのポリヌク
レオチドプローブ、および適切な容器を備える。この特定の実施形態では、この
キットは、本発明のポリヌクレオチドの内部領域を規定する２つのポリヌクレオ
チドプローブを含み、ここで各プローブは、この領域に対して内部に３１’マー
末端を含む１つの鎖を有する。さらなる実施形態では、このプローブは、ポリメ
ラーゼ連鎖反応増幅のためのプライマーとして有用であり得る。
および／またはガン性のポリヌクレオチドの存在について分析するためのキット
を含む。一般的実施形態において、このキットは、本発明のポリヌクレオチドと
特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む少なくとも１つのポリヌク
レオチドプローブ、および適切な容器を備える。この特定の実施形態では、この
キットは、本発明のポリヌクレオチドの内部領域を規定する２つのポリヌクレオ
チドプローブを含み、ここで各プローブは、この領域に対して内部に３１’マー
末端を含む１つの鎖を有する。さらなる実施形態では、このプローブは、ポリメ
ラーゼ連鎖反応増幅のためのプライマーとして有用であり得る。
【０３１０】
例えば、腫瘍の診断を含む、関連障害の診断が既に従来方法によって行われて
いる場合、本発明は、予後インジケーターとして有用であり、それによって増強
または抑制された本発明のポリヌクレオチドの発現を示す患者が、標準レベルに
より近いレベルでこの遺伝子を発現する患者と比較して悪い臨床結果を経験する
。
いる場合、本発明は、予後インジケーターとして有用であり、それによって増強
または抑制された本発明のポリヌクレオチドの発現を示す患者が、標準レベルに
より近いレベルでこの遺伝子を発現する患者と比較して悪い臨床結果を経験する
。
【０３１１】
「本発明のポリヌクレオチドの発現レベルを測定する（こと）」とは、本発明
のポリペプチドのレベルまたは本発明のポリペプチドをコードするｍＲＮＡのレ
ベルを、第１の生物学的サンプルにおいて直接的（例えば、絶対のタンパク質レ
ベルまたはｍＲＮＡレベルを決定または評価することによって）または相対的（
例えば、第２の生物学的サンプル中のポリペプチドレベルまたはｍＲＮＡレベル
に対して比較することによって）のいずれかで定性的または定量的に測定または
評価することを意図する。好ましくは、第１の生物学的サンプル中のポリペプチ
ドレベルまたはｍＲＮＡレベルが測定または評価され、そして標準のポリペプチ
ドレベルまたはｍＲＮＡレベルに対して比較され、この標準は、関連障害を有さ
ない個体から得られる第２の生物学的サンプルから得られるかまたは関連障害を
有さない個体の集団由来のレベルを平均することによって決定される。当該分野
で認識されるように、一旦標準的なポリペプチドレベルまたはｍＲＮＡレベルが
公知になれば、これを、比較のための標準として反復して用い得る。
のポリペプチドのレベルまたは本発明のポリペプチドをコードするｍＲＮＡのレ
ベルを、第１の生物学的サンプルにおいて直接的（例えば、絶対のタンパク質レ
ベルまたはｍＲＮＡレベルを決定または評価することによって）または相対的（
例えば、第２の生物学的サンプル中のポリペプチドレベルまたはｍＲＮＡレベル
に対して比較することによって）のいずれかで定性的または定量的に測定または
評価することを意図する。好ましくは、第１の生物学的サンプル中のポリペプチ
ドレベルまたはｍＲＮＡレベルが測定または評価され、そして標準のポリペプチ
ドレベルまたはｍＲＮＡレベルに対して比較され、この標準は、関連障害を有さ
ない個体から得られる第２の生物学的サンプルから得られるかまたは関連障害を
有さない個体の集団由来のレベルを平均することによって決定される。当該分野
で認識されるように、一旦標準的なポリペプチドレベルまたはｍＲＮＡレベルが
公知になれば、これを、比較のための標準として反復して用い得る。
【０３１２】
「生物学的サンプル」とは、本発明のポリペプチドまたは対応するｍＲＮＡを
含む、個体、体液、細胞株、組織培養物または他の供給源から得られる任意の生
物学的サンプルを意図する。示されるように、生物学的サンプルは、本発明のポ
リペプチドを含む体液（例えば、精液、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄
液）、本発明のポリペプチドを発現することが見出された組織供給源を含む。哺
乳動物から組織生検および体液を得るための方法は、当該分野で周知である。生
物学的サンプルがｍＲＮＡを含む場合、組織生検が好ましい供給源である。
含む、個体、体液、細胞株、組織培養物または他の供給源から得られる任意の生
物学的サンプルを意図する。示されるように、生物学的サンプルは、本発明のポ
リペプチドを含む体液（例えば、精液、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄
液）、本発明のポリペプチドを発現することが見出された組織供給源を含む。哺
乳動物から組織生検および体液を得るための方法は、当該分野で周知である。生
物学的サンプルがｍＲＮＡを含む場合、組織生検が好ましい供給源である。
【０３１３】
上記で提供された方法は好ましくは、本発明のポリヌクレオチドおよび／また
はポリペプチドが固体支持体に結合される、診断方法および／またはキットに適
用され得る。１つの例示的な方法では、この支持体は、米国特許第５，８３７，
８３２号、同第５，８７４，２１９号および同第５，８５６，１７４号に記載さ
れる、「遺伝子チップ」または「生物学的チップ」であり得る。さらに、本発明
のポリヌクレオチドが結合されたこのような遺伝子チップを用いて、本発明のポ
リヌクレオチド配列と、試験被験体から単離されたポリヌクレオチドとの間の多
型性を同定し得る。このような多型の知識（すなわち、その多型の位置、および
その多型の存在）は、多くの障害（例えば、神経障害、免疫系障害、筋肉障害、
生殖障害、胃腸障害、肺障害、心血管障害、腎障害、増殖性障害、ならびに／ま
たは癌性疾患および癌性状態）について、疾患遺伝子座を同定する際に有益であ
る。このような方法は、米国特許第５，８５８，６５９号および同第５，８５６
，１０４号に記載される。上記に参照した米国特許は、その全体が本明細書中に
参考として援用される。
はポリペプチドが固体支持体に結合される、診断方法および／またはキットに適
用され得る。１つの例示的な方法では、この支持体は、米国特許第５，８３７，
８３２号、同第５，８７４，２１９号および同第５，８５６，１７４号に記載さ
れる、「遺伝子チップ」または「生物学的チップ」であり得る。さらに、本発明
のポリヌクレオチドが結合されたこのような遺伝子チップを用いて、本発明のポ
リヌクレオチド配列と、試験被験体から単離されたポリヌクレオチドとの間の多
型性を同定し得る。このような多型の知識（すなわち、その多型の位置、および
その多型の存在）は、多くの障害（例えば、神経障害、免疫系障害、筋肉障害、
生殖障害、胃腸障害、肺障害、心血管障害、腎障害、増殖性障害、ならびに／ま
たは癌性疾患および癌性状態）について、疾患遺伝子座を同定する際に有益であ
る。このような方法は、米国特許第５，８５８，６５９号および同第５，８５６
，１０４号に記載される。上記に参照した米国特許は、その全体が本明細書中に
参考として援用される。
【０３１４】
本発明は、化学的に合成された（すなわち、ペプチド核酸（ＰＮＡ）として再
現された）または当該分野で公知の他の方法に従って合成された、本発明のポリ
ヌクレオチドを包含する。ＰＮＡの使用は、本発明のポリヌクレオチドが固体支
持体、すなわち、遺伝子チップに取り込まれる場合、好ましい形態として役立つ
。本発明の目的のために、ペプチド核酸（ＰＮＡ）は、ポリアミド型のＤＮＡア
ナログであり、そしてアデニン、グアニン、チミンおよびシトシンについてのモ
ノマー単位が市販されている（Ｐｅｒｃｅｐｔｉｃｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）
。ＤＮＡの特定の成分（例えば、リン、酸化リンまたはデオキシリボース誘導体
）は、ＰＮＡ中に存在しない。Ｐ．Ｅ．Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｍ．Ｅｇｈｏｌｍ，Ｒ
．Ｈ．ＢｅｒｇおよびＯ．Ｂｕｃｈａｒｄｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４，１４９
７（１９９７）；ならびにＭ．Ｅｇｈｏｌｍ，Ｏ．Ｂｕｃｈａｒｄｔ，Ｌ．Ｃｈ
ｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ｃ．Ｂｅｈｒｅｎｓ，Ｓ．Ｍ．Ｆｒｅｉｅｒ，Ｄ．Ａ．Ｄ
ｒｉｖｅｒ，Ｒ．Ｈ．Ｂｅｒｇ、Ｓ．Ｋ．Ｋｉｍ，Ｂ．ＮｏｒｄｅｎおよびＰ．
Ｅ．Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｎａｔｕｒｅ ３６５，６６６（１９９３）によって開示
されるように、ＰＮＡは、相補的なＤＮＡ鎖に対して特異的かつ緊密に結合し、
そしてヌクレアーゼによって分解されない。実際、ＰＮＡは、ＤＮＡ自体が結合
するよりも強力にＤＮＡに結合する。これはおそらく、２つの鎖の間に静電斥力
が存在せず、そしてまたポリアミド骨格がより可撓性が高いことによる。これに
よって、ＰＮＡ／ＤＮＡ二重鎖は、ＤＮＡ／ＤＮＡ二重鎖よりも広範囲のストリ
ンジェンシー条件下で結合し、多重鎖ハイブリダイゼーションを行うのをより容
易にする。強力な結合に起因して、ＤＮＡを用いてよりも小さいプローブが用い
られ得る。さらに、おそらく、単一の塩基ミスマッチが、ＰＮＡ／ＤＮＡハイブ
リダイゼーションを用いて決定され得る。なぜなら、ＰＮＡ／ＤＮＡの１５マー
における単一のミスマッチは、ＤＮＡ／ＤＮＡの１５マー二重鎖については４℃
〜１６℃であるのに対して、融点（Ｔ．ｓｕｂ．ｍ）を８〜２０℃低下させるか
らである。また、ＰＮＡ中に電荷基が存在しないことは、ハイブリダイゼーショ
ンが、低いイオン強度で行われ得、そして分析の間の塩によって可能な妨害を減
少させることを意味する。
現された）または当該分野で公知の他の方法に従って合成された、本発明のポリ
ヌクレオチドを包含する。ＰＮＡの使用は、本発明のポリヌクレオチドが固体支
持体、すなわち、遺伝子チップに取り込まれる場合、好ましい形態として役立つ
。本発明の目的のために、ペプチド核酸（ＰＮＡ）は、ポリアミド型のＤＮＡア
ナログであり、そしてアデニン、グアニン、チミンおよびシトシンについてのモ
ノマー単位が市販されている（Ｐｅｒｃｅｐｔｉｃｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）
。ＤＮＡの特定の成分（例えば、リン、酸化リンまたはデオキシリボース誘導体
）は、ＰＮＡ中に存在しない。Ｐ．Ｅ．Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｍ．Ｅｇｈｏｌｍ，Ｒ
．Ｈ．ＢｅｒｇおよびＯ．Ｂｕｃｈａｒｄｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４，１４９
７（１９９７）；ならびにＭ．Ｅｇｈｏｌｍ，Ｏ．Ｂｕｃｈａｒｄｔ，Ｌ．Ｃｈ
ｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ｃ．Ｂｅｈｒｅｎｓ，Ｓ．Ｍ．Ｆｒｅｉｅｒ，Ｄ．Ａ．Ｄ
ｒｉｖｅｒ，Ｒ．Ｈ．Ｂｅｒｇ、Ｓ．Ｋ．Ｋｉｍ，Ｂ．ＮｏｒｄｅｎおよびＰ．
Ｅ．Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｎａｔｕｒｅ ３６５，６６６（１９９３）によって開示
されるように、ＰＮＡは、相補的なＤＮＡ鎖に対して特異的かつ緊密に結合し、
そしてヌクレアーゼによって分解されない。実際、ＰＮＡは、ＤＮＡ自体が結合
するよりも強力にＤＮＡに結合する。これはおそらく、２つの鎖の間に静電斥力
が存在せず、そしてまたポリアミド骨格がより可撓性が高いことによる。これに
よって、ＰＮＡ／ＤＮＡ二重鎖は、ＤＮＡ／ＤＮＡ二重鎖よりも広範囲のストリ
ンジェンシー条件下で結合し、多重鎖ハイブリダイゼーションを行うのをより容
易にする。強力な結合に起因して、ＤＮＡを用いてよりも小さいプローブが用い
られ得る。さらに、おそらく、単一の塩基ミスマッチが、ＰＮＡ／ＤＮＡハイブ
リダイゼーションを用いて決定され得る。なぜなら、ＰＮＡ／ＤＮＡの１５マー
における単一のミスマッチは、ＤＮＡ／ＤＮＡの１５マー二重鎖については４℃
〜１６℃であるのに対して、融点（Ｔ．ｓｕｂ．ｍ）を８〜２０℃低下させるか
らである。また、ＰＮＡ中に電荷基が存在しないことは、ハイブリダイゼーショ
ンが、低いイオン強度で行われ得、そして分析の間の塩によって可能な妨害を減
少させることを意味する。
【０３１５】
本発明は、哺乳動物におけるガンの検出を含むがこれらに限定されない用途を
有する。特に、本発明は、以下を含むがこれらに限定されない、病理学的細胞増
殖新形成の診断の間に有用である：急性骨髄性白血病（急性単球性白血病、急性
骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性赤白血
病、急性巨核球性白血病、および急性未分化白血病などを含む）；および慢性骨
髄性白血病（慢性骨髄単球性白血病、慢性顆粒球性白血病などを含む）。好まし
い哺乳動物としては、有尾猿（ｍｏｎｋｅｙ）、無尾猿（ａｐｅ）、ネコ、イヌ
、ウシ、ブタ、ウマ、ウサギおよびヒトが挙げられる。特に好ましいのは、ヒト
である。
有する。特に、本発明は、以下を含むがこれらに限定されない、病理学的細胞増
殖新形成の診断の間に有用である：急性骨髄性白血病（急性単球性白血病、急性
骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性赤白血
病、急性巨核球性白血病、および急性未分化白血病などを含む）；および慢性骨
髄性白血病（慢性骨髄単球性白血病、慢性顆粒球性白血病などを含む）。好まし
い哺乳動物としては、有尾猿（ｍｏｎｋｅｙ）、無尾猿（ａｐｅ）、ネコ、イヌ
、ウシ、ブタ、ウマ、ウサギおよびヒトが挙げられる。特に好ましいのは、ヒト
である。
【０３１６】
病理学的細胞増殖障害はしばしば、原癌遺伝子の不適切な活性化に関連する（
Ｇｅｌｍａｎｎ，Ｅ．Ｐ．ら，「Ｔｈｅ Ｅｔｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ａｃｕｔｅ
Ｌｅｕｋｅｍｉａ：Ｍｏｌｅｖｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｖｉｒ
ａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ」，Ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ
ｔｈｅ Ｂｌｏｏｄ，第１巻，Ｗｉｅｒｎｉｋ、Ｐ．Ｈ．ら編，１６１−１８２
（１９８５））。新形成は現在、ウイルス配列の染色体への挿入、より活性に転
写される領域への遺伝子の染色体転座、または何らかの他の機構による、正常な
細胞遺伝子産物の定性的変化から、または遺伝子発現の定量的改変から生じると
考えられている（Ｇｅｌｍａｎｎら、前出）。特定の遺伝子の変異または変更さ
れた発現が、他の組織および他の細胞型の中でも、いくつかの白血病の病因と関
与するようである（Ｇｅｌｍａｎｎら、前出）。実際、いくつかの動物新形成に
関与する癌遺伝子のヒト対応物は、ヒトの白血病および癌のいくつかの症例にお
いて増幅または転座されている（Ｇｅｌｍａｎｎら、前出）。
Ｇｅｌｍａｎｎ，Ｅ．Ｐ．ら，「Ｔｈｅ Ｅｔｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ａｃｕｔｅ
Ｌｅｕｋｅｍｉａ：Ｍｏｌｅｖｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｖｉｒ
ａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ」，Ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ
ｔｈｅ Ｂｌｏｏｄ，第１巻，Ｗｉｅｒｎｉｋ、Ｐ．Ｈ．ら編，１６１−１８２
（１９８５））。新形成は現在、ウイルス配列の染色体への挿入、より活性に転
写される領域への遺伝子の染色体転座、または何らかの他の機構による、正常な
細胞遺伝子産物の定性的変化から、または遺伝子発現の定量的改変から生じると
考えられている（Ｇｅｌｍａｎｎら、前出）。特定の遺伝子の変異または変更さ
れた発現が、他の組織および他の細胞型の中でも、いくつかの白血病の病因と関
与するようである（Ｇｅｌｍａｎｎら、前出）。実際、いくつかの動物新形成に
関与する癌遺伝子のヒト対応物は、ヒトの白血病および癌のいくつかの症例にお
いて増幅または転座されている（Ｇｅｌｍａｎｎら、前出）。
【０３１７】
例えば、ｃ−ｍｙｃ発現は、非リンパ球性白血病細胞株ＨＬ−６０において高
度に増幅される。ＨＬ−６０細胞が増幅を止めるように化学的に誘導される場合
、ｃ−ｍｙｃのレベルは、ダウンレギュレートされることが見出される（国際公
開番号ＷＯ９１／１５５８０号）。しかし、ｃ−ｍｙｃまたはｃ−ｍｙｂの５’
末端に相補的であるＤＮＡ構築物へのＨＬ−６０細胞の暴露が、ｃ−ｍｙｃタン
パク質またはｃ−ｍｙｂタンパク質の発現をダウンレギュレートする対応するｍ
ＲＮＡの翻訳をブロックし、処理した細胞の細胞増殖および分化の停止を引き起
こすことが示されている（国際公開番号ＷＯ９１／１５５８０号；Ｗｉｃｋｓｔ
ｒｏｍら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５：１０２８（１９８８
）；Ａｎｆｏｓｓｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８６：３３７
９（１９８９））。しかし、当業者は、増殖表現型を示すことが公知である種々
の起源の多数の細胞および細胞型を考慮すれば、本発明の有用性が造血性の細胞
および組織の増殖性障害の処置に限定されないことを認識する。
度に増幅される。ＨＬ−６０細胞が増幅を止めるように化学的に誘導される場合
、ｃ−ｍｙｃのレベルは、ダウンレギュレートされることが見出される（国際公
開番号ＷＯ９１／１５５８０号）。しかし、ｃ−ｍｙｃまたはｃ−ｍｙｂの５’
末端に相補的であるＤＮＡ構築物へのＨＬ−６０細胞の暴露が、ｃ−ｍｙｃタン
パク質またはｃ−ｍｙｂタンパク質の発現をダウンレギュレートする対応するｍ
ＲＮＡの翻訳をブロックし、処理した細胞の細胞増殖および分化の停止を引き起
こすことが示されている（国際公開番号ＷＯ９１／１５５８０号；Ｗｉｃｋｓｔ
ｒｏｍら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５：１０２８（１９８８
）；Ａｎｆｏｓｓｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８６：３３７
９（１９８９））。しかし、当業者は、増殖表現型を示すことが公知である種々
の起源の多数の細胞および細胞型を考慮すれば、本発明の有用性が造血性の細胞
および組織の増殖性障害の処置に限定されないことを認識する。
【０３１８】
前記に加えて、本発明のポリヌクレオチドは、三重らせん形成を通して、また
はアンチセンスＤＮＡもしくはＲＮＡを通して遺伝子発現を制御するために使用
され得る。アンチセンス技術は、例えば、Ｏｋａｎｏ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ
．５６：５６０（１９９１），「Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ
ａｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐ
ｒｅｓｓｉｏｎ」，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１９８
８）において考察される。三重らせん形成は例えば、Ｌｅｅら、Ｎｕｃｌｅｉｃ
Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６：３０７３（１９７９）；Ｃｏｏｎｅｙら
、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：４５６（１９８８）；およびＤｅｒｖａｎら、Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ ２５１：１３６０（１９９１）において考察される。両方の方法は
、相補的ＤＮＡまたは相補的ＲＮＡへのポリヌクレオチドの結合に依存する。こ
れらの技術に関して、好ましいポリヌクレオチドは通常、２０〜４０塩基長のオ
リゴヌクレオチドであり、そして転写に関与する遺伝子領域（三重らせん−Ｌｅ
ｅら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．６：３０７３（１９７９）；Ｃｏｏｎｅ
ｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：４５６（１９８８）；およびＤｅｒｖａｎら、
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：１３６０（１９９１）を参照のこと）またはｍＲＮＡ
自体（アンチセンス−Ｏｋａｎｏ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．５６：５６０（１
９９１）；Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙ−ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｓ
ｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ｃ
ＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１９８８））のいずれかに相
補的である。三重らせん形成は、最適にはＤＮＡからのＲＮＡ転写の遮断を生じ
るが、アンチセンスＲＮＡハイブリダイゼーションは、ポリペプチドへのｍＲＮ
Ａ分子の翻訳を阻止する。上記のオリゴヌクレオチドはまた、アンチセンスＲＮ
ＡまたはＤＮＡが、インビボで発現されて本発明の抗原のポリペプチド産生を阻
害し得るように細胞に送達され得る。両方の技術は、モデル系において効果的で
あり、そして本明細書に開示される情報は、疾患を処置するための試みにおいて
、特に、増殖性疾患および／または状態の処置のために、アンチセンスまたは三
重らせんポリヌクレオチドを設計するために使用され得る。
はアンチセンスＤＮＡもしくはＲＮＡを通して遺伝子発現を制御するために使用
され得る。アンチセンス技術は、例えば、Ｏｋａｎｏ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ
．５６：５６０（１９９１），「Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ
ａｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐ
ｒｅｓｓｉｏｎ」，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１９８
８）において考察される。三重らせん形成は例えば、Ｌｅｅら、Ｎｕｃｌｅｉｃ
Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６：３０７３（１９７９）；Ｃｏｏｎｅｙら
、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：４５６（１９８８）；およびＤｅｒｖａｎら、Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ ２５１：１３６０（１９９１）において考察される。両方の方法は
、相補的ＤＮＡまたは相補的ＲＮＡへのポリヌクレオチドの結合に依存する。こ
れらの技術に関して、好ましいポリヌクレオチドは通常、２０〜４０塩基長のオ
リゴヌクレオチドであり、そして転写に関与する遺伝子領域（三重らせん−Ｌｅ
ｅら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．６：３０７３（１９７９）；Ｃｏｏｎｅ
ｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：４５６（１９８８）；およびＤｅｒｖａｎら、
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：１３６０（１９９１）を参照のこと）またはｍＲＮＡ
自体（アンチセンス−Ｏｋａｎｏ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．５６：５６０（１
９９１）；Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙ−ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｓ
ｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ｃ
ＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１９８８））のいずれかに相
補的である。三重らせん形成は、最適にはＤＮＡからのＲＮＡ転写の遮断を生じ
るが、アンチセンスＲＮＡハイブリダイゼーションは、ポリペプチドへのｍＲＮ
Ａ分子の翻訳を阻止する。上記のオリゴヌクレオチドはまた、アンチセンスＲＮ
ＡまたはＤＮＡが、インビボで発現されて本発明の抗原のポリペプチド産生を阻
害し得るように細胞に送達され得る。両方の技術は、モデル系において効果的で
あり、そして本明細書に開示される情報は、疾患を処置するための試みにおいて
、特に、増殖性疾患および／または状態の処置のために、アンチセンスまたは三
重らせんポリヌクレオチドを設計するために使用され得る。
【０３１９】
本発明のポリヌクレオチドはまた、遺伝子治療において有用である。遺伝子治
療の１つの目標は、遺伝欠損を修正する試みにおいて、欠損遺伝子を有する生物
へ正常遺伝子を挿入することである。本発明に開示されるポリヌクレオチドは、
高度に正確な様式でこのような遺伝欠損を標的とする手段を提供する。別の目標
は、宿主ゲノム中には存在しなかった新しい遺伝子を挿入し、それによって宿主
細胞中に新しい形質を生成することである。
療の１つの目標は、遺伝欠損を修正する試みにおいて、欠損遺伝子を有する生物
へ正常遺伝子を挿入することである。本発明に開示されるポリヌクレオチドは、
高度に正確な様式でこのような遺伝欠損を標的とする手段を提供する。別の目標
は、宿主ゲノム中には存在しなかった新しい遺伝子を挿入し、それによって宿主
細胞中に新しい形質を生成することである。
【０３２０】
本発明のポリヌクレオチドはまた、微小な生物学的サンプルから個体を同定す
るために有用である。例えば、米国軍は、その職員を同定するために制限フラグ
メント長の多型性（ＲＦＬＰ）の使用を考慮している。この技術において、個体
のゲノムＤＮＡは１つ以上の制限酵素で消化され、そして職員を同定するため固
有なバンドを生じるためのサザンブロットについてプローブされる。この方法は
、「認識票（Ｄｏｇ ｔａｇ）」（これは、失われたり、交換されたり、または
盗まれたりすることにより、ポジティブな同定を困難にし得る）の現在の限界を
受けない。本発明のポリヌクレオチドは、ＲＦＬＰのためのさらなるＤＮＡマー
カーとして使用され得る。
るために有用である。例えば、米国軍は、その職員を同定するために制限フラグ
メント長の多型性（ＲＦＬＰ）の使用を考慮している。この技術において、個体
のゲノムＤＮＡは１つ以上の制限酵素で消化され、そして職員を同定するため固
有なバンドを生じるためのサザンブロットについてプローブされる。この方法は
、「認識票（Ｄｏｇ ｔａｇ）」（これは、失われたり、交換されたり、または
盗まれたりすることにより、ポジティブな同定を困難にし得る）の現在の限界を
受けない。本発明のポリヌクレオチドは、ＲＦＬＰのためのさらなるＤＮＡマー
カーとして使用され得る。
【０３２１】
本発明のポリヌクレオチドはまた、個体のゲノムの選択された部分の実際の塩
基ごとのＤＮＡ配列を決定することによって、ＲＦＬＰに対する代替物として使
用され得る。これらの配列は、このような選択されたＤＮＡを増幅しそして単離
するためにＰＣＲプライマーを調製するために使用され得、次いで、この選択さ
れたＤＮＡは、配列決定され得る。各個体が固有のセットのＤＮＡ配列を有する
ので、この技術を使用して、個体が同定され得る。一旦、固有のＩＤデータベー
スが個体について確立されると、その個体が生存していようとまたは死亡してい
ようとにかかわらず、その個体のポジティブ同定が、極めて小さな組織サンプル
からなされ得る。
基ごとのＤＮＡ配列を決定することによって、ＲＦＬＰに対する代替物として使
用され得る。これらの配列は、このような選択されたＤＮＡを増幅しそして単離
するためにＰＣＲプライマーを調製するために使用され得、次いで、この選択さ
れたＤＮＡは、配列決定され得る。各個体が固有のセットのＤＮＡ配列を有する
ので、この技術を使用して、個体が同定され得る。一旦、固有のＩＤデータベー
スが個体について確立されると、その個体が生存していようとまたは死亡してい
ようとにかかわらず、その個体のポジティブ同定が、極めて小さな組織サンプル
からなされ得る。
【０３２２】
法医学生物学もまた、本明細書に開示されるようなＤＮＡに基づく同定技術を
使用して利益を得る。組織（例えば、髪または皮膚）、または体液（例えば、血
液、唾液、精液、滑液、羊水、乳汁、リンパ、肺痰（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｓｐ
ｕｔｕｍ）またはサーファクタント、尿、糞便物質など）のような非常に小さな
生物学的サンプルから得られたＤＮＡ配列は、ＰＣＲを使用して増幅され得る。
ある先行技術において、ＤＱａクラスＩＩ ＨＬＡ遺伝子のような多型性遺伝子
座から増幅された遺伝子配列は、個体を同定するための法医学生物学において使
用される。（Ｅｒｌｉｃｈ，Ｈ．，ＰＣＲ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｆｒｅｅｍ
ａｎ ａｎｄ Ｃｏ．（１９９２））。一旦、これらの特異的多型性遺伝子座が
増幅されると、これらは１つ以上の制限酵素で消化される。これは、ＤＱａクラ
スＩＩ ＨＬＡ遺伝子に対応するＤＮＡでプローブされたサザンブロットについ
てのバンドの同定セットを生じる。同様に、本発明のポリヌクレオチドは、法医
学的目的のための多型性マーカーとして使用され得る。
使用して利益を得る。組織（例えば、髪または皮膚）、または体液（例えば、血
液、唾液、精液、滑液、羊水、乳汁、リンパ、肺痰（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｓｐ
ｕｔｕｍ）またはサーファクタント、尿、糞便物質など）のような非常に小さな
生物学的サンプルから得られたＤＮＡ配列は、ＰＣＲを使用して増幅され得る。
ある先行技術において、ＤＱａクラスＩＩ ＨＬＡ遺伝子のような多型性遺伝子
座から増幅された遺伝子配列は、個体を同定するための法医学生物学において使
用される。（Ｅｒｌｉｃｈ，Ｈ．，ＰＣＲ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｆｒｅｅｍ
ａｎ ａｎｄ Ｃｏ．（１９９２））。一旦、これらの特異的多型性遺伝子座が
増幅されると、これらは１つ以上の制限酵素で消化される。これは、ＤＱａクラ
スＩＩ ＨＬＡ遺伝子に対応するＤＮＡでプローブされたサザンブロットについ
てのバンドの同定セットを生じる。同様に、本発明のポリヌクレオチドは、法医
学的目的のための多型性マーカーとして使用され得る。
【０３２３】
また、特定の組織の供給源を同定し得る試薬についての必要性が存在する。例
えば、未知の起源の組織が提供される場合、法医学においてこのような必要性が
生じる。適切な試薬は、例えば、本発明の配列から調製される、前立腺または前
立腺癌ポリヌクレオチドに特異的なＤＮＡプローブまたはプライマーを含み得る
。このような試薬のパネルは、種および／または器官型によって組織を同定し得
る。同様の様式で、これらの試薬は、夾雑物について組織培養物をスクリーニン
グするために使用され得る。
えば、未知の起源の組織が提供される場合、法医学においてこのような必要性が
生じる。適切な試薬は、例えば、本発明の配列から調製される、前立腺または前
立腺癌ポリヌクレオチドに特異的なＤＮＡプローブまたはプライマーを含み得る
。このような試薬のパネルは、種および／または器官型によって組織を同定し得
る。同様の様式で、これらの試薬は、夾雑物について組織培養物をスクリーニン
グするために使用され得る。
【０３２４】
本発明のポリヌクレオチドはまた、生物学的サンプル中に存在する組織または
細胞型の示差的同定のためのハイブリダイゼーションプローブとして有用である
。同様に、本発明のポリペプチドに関するポリペプチドおよび抗体は、組織（例
えば、免疫組織化学アッセイ）または細胞型（例えば、免疫細胞学アッセイ）の
示差的同定のための免疫学的プローブを提供するのに有用である。さらに、「標
準」遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有しない個体からの健康組織の発現レ
ベル）と比較して、上記の組織または細胞の多くの障害に対して、本発明のポリ
ヌクレオチド／ポリペプチドの有意に高いかまたは低いレベルの遺伝子発現が、
例えば、障害を有する個体から採取された特定の組織（例えば、本発明のポリペ
プチドおよび／またはポリヌクレオチドを発現する組織、および／または癌性組
織および／または創傷組織）または体液（例えば、漿液、血漿、尿、滑液または
髄液）において検出され得る。
細胞型の示差的同定のためのハイブリダイゼーションプローブとして有用である
。同様に、本発明のポリペプチドに関するポリペプチドおよび抗体は、組織（例
えば、免疫組織化学アッセイ）または細胞型（例えば、免疫細胞学アッセイ）の
示差的同定のための免疫学的プローブを提供するのに有用である。さらに、「標
準」遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有しない個体からの健康組織の発現レ
ベル）と比較して、上記の組織または細胞の多くの障害に対して、本発明のポリ
ヌクレオチド／ポリペプチドの有意に高いかまたは低いレベルの遺伝子発現が、
例えば、障害を有する個体から採取された特定の組織（例えば、本発明のポリペ
プチドおよび／またはポリヌクレオチドを発現する組織、および／または癌性組
織および／または創傷組織）または体液（例えば、漿液、血漿、尿、滑液または
髄液）において検出され得る。
【０３２５】
従って、本発明は、以下の工程を含む障害の診断方法を提供する：（ａ）個体
の細胞または体液中の遺伝子発現レベルをアッセイする工程；（ｂ）標準的な遺
伝子発現レベルと、この遺伝子発現レベルを比較し、それにより、標準の発現レ
ベルと比較して、アッセイされた遺伝子発現レベルの増加または減少が障害を示
す、工程。
の細胞または体液中の遺伝子発現レベルをアッセイする工程；（ｂ）標準的な遺
伝子発現レベルと、この遺伝子発現レベルを比較し、それにより、標準の発現レ
ベルと比較して、アッセイされた遺伝子発現レベルの増加または減少が障害を示
す、工程。
【０３２６】
少なくとも、本発明のポリヌクレオドは、サザンブロットのゲル上の分子量マ
ーカーとして、特定の細胞型における特異的ｍＲＮＡの存在についての診断プロ
ーブとして、新規のポリヌクレオドを発見するプロセスにおける「減算した（ｓ
ｕｂｔｒａｃｔ−ｏｕｔ）」公知の配列に対するプローブとして、「遺伝子チッ
プ」または他の支持体に付着するためのオリゴマーを選択および作製するために
、ＤＮＡ免疫技術を用いて抗ＤＮＡ抗体を惹起するために、および免疫応答を惹
起する抗原として使用され得る。
ーカーとして、特定の細胞型における特異的ｍＲＮＡの存在についての診断プロ
ーブとして、新規のポリヌクレオドを発見するプロセスにおける「減算した（ｓ
ｕｂｔｒａｃｔ−ｏｕｔ）」公知の配列に対するプローブとして、「遺伝子チッ
プ」または他の支持体に付着するためのオリゴマーを選択および作製するために
、ＤＮＡ免疫技術を用いて抗ＤＮＡ抗体を惹起するために、および免疫応答を惹
起する抗原として使用され得る。
【０３２７】
（ポリペプチドの使用）
本明細書中で同定される各々のポリペプチドは、多くの方法において使用され
得る。以下の記述は、例示として考慮されるべきであり、そして公知の技術を利
用する。
得る。以下の記述は、例示として考慮されるべきであり、そして公知の技術を利
用する。
【０３２８】
本発明のポリペプチドに指向されるポリペプチドおよび抗体は、組織（例えば
、ＡＢＣ免疫ペルオキシダーゼのような免疫組織化学アッセイ（Ｈｓｕら、Ｊ．
Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．ｃｙｔｏｃｈｅｍ．２９：５７７−５８０（１９８１））
または細胞型（例えば、免疫細胞化学アッセイ）の差次的同定のための免疫学的
プローブを提供するために有用である。
、ＡＢＣ免疫ペルオキシダーゼのような免疫組織化学アッセイ（Ｈｓｕら、Ｊ．
Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．ｃｙｔｏｃｈｅｍ．２９：５７７−５８０（１９８１））
または細胞型（例えば、免疫細胞化学アッセイ）の差次的同定のための免疫学的
プローブを提供するために有用である。
【０３２９】
抗体を使用して、当業者に公知の古典的な免疫組織学的な方法を用いて、生物
学的サンプル中の本発明のポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドの
レベルをアッセイし得る。（例えば、Ｊａｌｋａｎｅｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉ
ｏｌ．１０１：９７６−９８５（１９８５）；Ｊａｌｋａｎｅｎら、Ｊ．Ｃｅｌ
ｌ．Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７−３０９６（１９８７）を参照のこと）。タン
パク質の遺伝子発現を検出するのに有用な、他の抗体に基づく方法には、イムノ
アッセイ（例えば、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）およびラ
ジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））が含まれる。適切な抗体アッセイの標識は、当
該分野で公知であり、そして酵素標識（例えば、グルコースオキシダーゼ）；放
射性同位体（例えば、ヨウ素（131Ｉ、125Ｉ、123Ｉ、121Ｉ）、炭素（14Ｃ）、
硫黄（35Ｓ）、トリチウム（3Ｈ）、インジウム（115mＩｎ、113mＩｎ、112Ｉｎ
、111Ｉｎ）、およびテクネチウム（99Ｔｃ、99mＴｃ）、タリウム（201Ｔｌ）
、ガリウム（68Ｇａ、67Ｇａ）、パラジウム（103Ｐｄ）、モリブデン（99Ｍｏ
）、キセノン（133Ｘｅ）、フッ素（18Ｆ）、153Ｓｍ、177Ｌｕ、159Ｇｄ、149
Ｐｍ、140Ｌａ、175Ｙｂ、166Ｈｏ、90Ｙ、47Ｓｃ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、142Ｐｒ
、105Ｒｈ、97Ｒｕ；発光標識（例えば、ルミノール）；ならびに蛍光標識（例
えば、フルオレセインおよびローダミン）ならびにビオチンが挙げられる。
学的サンプル中の本発明のポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドの
レベルをアッセイし得る。（例えば、Ｊａｌｋａｎｅｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉ
ｏｌ．１０１：９７６−９８５（１９８５）；Ｊａｌｋａｎｅｎら、Ｊ．Ｃｅｌ
ｌ．Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７−３０９６（１９８７）を参照のこと）。タン
パク質の遺伝子発現を検出するのに有用な、他の抗体に基づく方法には、イムノ
アッセイ（例えば、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）およびラ
ジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））が含まれる。適切な抗体アッセイの標識は、当
該分野で公知であり、そして酵素標識（例えば、グルコースオキシダーゼ）；放
射性同位体（例えば、ヨウ素（131Ｉ、125Ｉ、123Ｉ、121Ｉ）、炭素（14Ｃ）、
硫黄（35Ｓ）、トリチウム（3Ｈ）、インジウム（115mＩｎ、113mＩｎ、112Ｉｎ
、111Ｉｎ）、およびテクネチウム（99Ｔｃ、99mＴｃ）、タリウム（201Ｔｌ）
、ガリウム（68Ｇａ、67Ｇａ）、パラジウム（103Ｐｄ）、モリブデン（99Ｍｏ
）、キセノン（133Ｘｅ）、フッ素（18Ｆ）、153Ｓｍ、177Ｌｕ、159Ｇｄ、149
Ｐｍ、140Ｌａ、175Ｙｂ、166Ｈｏ、90Ｙ、47Ｓｃ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、142Ｐｒ
、105Ｒｈ、97Ｒｕ；発光標識（例えば、ルミノール）；ならびに蛍光標識（例
えば、フルオレセインおよびローダミン）ならびにビオチンが挙げられる。
【０３３０】
生物学的サンプル中の本発明のポリペプチドのレベルをアッセイすることに加
えて、タンパク質はまた、画像化によりインビボで検出され得る。タンパク質の
インビボ画像化のための抗体の標識またはマーカーは、Ｘ線撮影法、ＮＭＲ、ま
たはＥＳＲにより検出可能なものを含む。Ｘ線撮影法のために適切な標識は、放
射性同位体（例えば、バリウムまたはセシウム）を含み、これは検出可能な放射
線を放射するが、被験体に対して明らかに有害ではない。ＮＭＲおよびＥＳＲの
ための適切なマーカーは、検出可能な特徴的なスピンを有するマーカー（例えば
、重水素）を含み、これは、関連するハイブリドーマのための栄養分を標識する
ことにより抗体中に取り込まれ得る。 放射性同位体（例えば、131Ｉ、112Ｉｎ、99mＴｃ、（131Ｉ、125Ｉ、123Ｉ、12 1 Ｉ）、炭素（14Ｃ）、硫黄（35Ｓ）、トリチウム（3Ｈ）、インジウム（115mＩ
ｎ、113mＩｎ、112Ｉｎ、111Ｉｎ）、およびテクネチウム（99Ｔｃ、99mＴｃ）
、タリウム（201Ｔｌ）、ガリウム（68Ｇａ、67Ｇａ）、パラジウム（103Ｐｄ）
、モリブデン（99Ｍｏ）、キセノン（133Ｘｅ）、フッ素（18Ｆ）、153Ｓｍ、17 7 Ｌｕ、159Ｇｄ、149Ｐｍ、140Ｌａ、175Ｙｂ、166Ｈｏ、90Ｙ、47Ｓｃ、186Ｒ
ｅ、188Ｒｅ、142Ｐｒ、105Ｒｈ、97Ｒｕ）、放射線不透過性物質、または核磁
気共鳴により検出可能な材料のような適切な検出可能な画像化部分で標識された
、タンパク質特異的抗体または抗体フラグメントは、免疫系の障害について検査
されるべき哺乳動物に（例えば、非経口的、皮下、または腹腔内に）導入される
。被験体のサイズおよび用いられる画像化システムは、診断画像を生成するため
に必要な画像化部分の量を決定することが当該分野で理解される。放射性同位体
部分の場合には、ヒト被験体について、注射される放射能の量は、通常、99mＴ
ｃの約５〜２０ミリキュリーの範囲である。次いで、標識された抗体または抗体
フラグメントは、本発明のポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドを
発現する細胞の位置に優先的に蓄積される。インビボ腫瘍画像化は、Ｓ．Ｗ．Ｂ
ｕｒｃｈｉｅｌら、「Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ
Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｆｒ
ａｇｍｅｎｔｓ」（Ｔｕｍｏｒ Ｉｍａｇｉｎｇ：Ｔｈｅ Ｒａｄｉｏｃｈｅｍ
ｉｃａｌ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒの第１３章、Ｓ．Ｗ．Ｂｕ
ｒｃｈｉｅｌおよびＢ．Ａ．Ｒｈｏｄｅｓ編、Ｍａｓｓｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉ
ｎｇ Ｉｎｃ．（１９８２））に記載される。
えて、タンパク質はまた、画像化によりインビボで検出され得る。タンパク質の
インビボ画像化のための抗体の標識またはマーカーは、Ｘ線撮影法、ＮＭＲ、ま
たはＥＳＲにより検出可能なものを含む。Ｘ線撮影法のために適切な標識は、放
射性同位体（例えば、バリウムまたはセシウム）を含み、これは検出可能な放射
線を放射するが、被験体に対して明らかに有害ではない。ＮＭＲおよびＥＳＲの
ための適切なマーカーは、検出可能な特徴的なスピンを有するマーカー（例えば
、重水素）を含み、これは、関連するハイブリドーマのための栄養分を標識する
ことにより抗体中に取り込まれ得る。 放射性同位体（例えば、131Ｉ、112Ｉｎ、99mＴｃ、（131Ｉ、125Ｉ、123Ｉ、12 1 Ｉ）、炭素（14Ｃ）、硫黄（35Ｓ）、トリチウム（3Ｈ）、インジウム（115mＩ
ｎ、113mＩｎ、112Ｉｎ、111Ｉｎ）、およびテクネチウム（99Ｔｃ、99mＴｃ）
、タリウム（201Ｔｌ）、ガリウム（68Ｇａ、67Ｇａ）、パラジウム（103Ｐｄ）
、モリブデン（99Ｍｏ）、キセノン（133Ｘｅ）、フッ素（18Ｆ）、153Ｓｍ、17 7 Ｌｕ、159Ｇｄ、149Ｐｍ、140Ｌａ、175Ｙｂ、166Ｈｏ、90Ｙ、47Ｓｃ、186Ｒ
ｅ、188Ｒｅ、142Ｐｒ、105Ｒｈ、97Ｒｕ）、放射線不透過性物質、または核磁
気共鳴により検出可能な材料のような適切な検出可能な画像化部分で標識された
、タンパク質特異的抗体または抗体フラグメントは、免疫系の障害について検査
されるべき哺乳動物に（例えば、非経口的、皮下、または腹腔内に）導入される
。被験体のサイズおよび用いられる画像化システムは、診断画像を生成するため
に必要な画像化部分の量を決定することが当該分野で理解される。放射性同位体
部分の場合には、ヒト被験体について、注射される放射能の量は、通常、99mＴ
ｃの約５〜２０ミリキュリーの範囲である。次いで、標識された抗体または抗体
フラグメントは、本発明のポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドを
発現する細胞の位置に優先的に蓄積される。インビボ腫瘍画像化は、Ｓ．Ｗ．Ｂ
ｕｒｃｈｉｅｌら、「Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ
Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｆｒ
ａｇｍｅｎｔｓ」（Ｔｕｍｏｒ Ｉｍａｇｉｎｇ：Ｔｈｅ Ｒａｄｉｏｃｈｅｍ
ｉｃａｌ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒの第１３章、Ｓ．Ｗ．Ｂｕ
ｒｃｈｉｅｌおよびＢ．Ａ．Ｒｈｏｄｅｓ編、Ｍａｓｓｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉ
ｎｇ Ｉｎｃ．（１９８２））に記載される。
【０３３１】
１つの実施形態において、本発明は、異種ポリペプチドまたは核酸と会合する
本発明のポリペプチド（例えば、本発明のポリヌクレオチドによりコードされる
ポリペプチドおよび／または抗体）を投与することによる、本発明の組成物の細
胞への特異的な送達のための方法を提供する。１つの例において、本発明は、治
療タンパク質を標的化細胞中へ送達するための方法を提供する。別の例において
、本発明は、一本鎖核酸（例えば、アンチセンスまたはリボザイム）または二本
鎖核酸（例えば、細胞のゲノムに組み込み得るか、またはエピソームにて複製し
得、そして転写され得るＤＮＡ）を、標的化細胞に送達するための方法を提供す
る。
本発明のポリペプチド（例えば、本発明のポリヌクレオチドによりコードされる
ポリペプチドおよび／または抗体）を投与することによる、本発明の組成物の細
胞への特異的な送達のための方法を提供する。１つの例において、本発明は、治
療タンパク質を標的化細胞中へ送達するための方法を提供する。別の例において
、本発明は、一本鎖核酸（例えば、アンチセンスまたはリボザイム）または二本
鎖核酸（例えば、細胞のゲノムに組み込み得るか、またはエピソームにて複製し
得、そして転写され得るＤＮＡ）を、標的化細胞に送達するための方法を提供す
る。
【０３３２】
別の実施形態において、本発明は、毒素または細胞傷害性プロドラッグに関連
する本発明のポリペプチドを投与することによる細胞の特異的な破壊（例えば、
腫瘍細胞の破壊）のための方法を提供する。
する本発明のポリペプチドを投与することによる細胞の特異的な破壊（例えば、
腫瘍細胞の破壊）のための方法を提供する。
【０３３３】
「毒素」とは、内因性の細胞傷害性エフェクタ系、放射性同位体、ホロ毒素（
ｈｏｌｏｔｏｘｉｎ）、改変型毒素、毒素の触媒サブユニット、または規定の条
件下で細胞死を引き起こす細胞中もしくは細胞表面には通常存在しない任意の分
子もしくは酵素を結合および活性化する１つ以上の化合物を意味する。本発明の
方法に従って使用され得る毒素としては、以下が挙げられるが、これらに限定さ
れない：当該分野で公知の放射性同位体、固有のまたは誘導された内因性の細胞
傷害性エフェクタ系に結合する化合物（例えば、抗体（またはその補体固定含有
部分））、チミジンキナーゼ、エンドヌクレアーゼ、ＲＮＡｓｅ、α毒素、リシ
ン、アブリン、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素Ａ、ジフテリア毒素、サポリン、
モモルジン（ｍｏｍｏｒｄｉｎ）、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ヤマゴボウ抗
ウイルスタンパク質、αサルシン（ｓａｒｃｉｎ）およびコレラ毒素。「毒素」
はまた、細胞分裂停止剤もしくは細胞破壊剤、治療薬または放射活性金属イオン
（例えば、α−放射体（例えば、213Ｂｉ））もしくは他の放射性同位体（例え
ば、103Ｐｄ、133Ｘｅ、131Ｉ、68Ｇｅ、57Ｃｏ、65Ｚｎ、85Ｓｒ、32Ｐ、35Ｓ
、90Ｙ、153Ｓｍ、153Ｇｄ、169Ｙｂ、51Ｃｒ、54Ｍｎ、75Ｓｅ、113Ｓｎ、90イ
ットリウム、117スズ、186レニウム、166ホルミウム、および188レニウム）；発
光標識（例えば、ルミノール）；および蛍光標識（例えば、フルオレセインおよ
びローダミン）、ならびにビオチンを含む。
ｈｏｌｏｔｏｘｉｎ）、改変型毒素、毒素の触媒サブユニット、または規定の条
件下で細胞死を引き起こす細胞中もしくは細胞表面には通常存在しない任意の分
子もしくは酵素を結合および活性化する１つ以上の化合物を意味する。本発明の
方法に従って使用され得る毒素としては、以下が挙げられるが、これらに限定さ
れない：当該分野で公知の放射性同位体、固有のまたは誘導された内因性の細胞
傷害性エフェクタ系に結合する化合物（例えば、抗体（またはその補体固定含有
部分））、チミジンキナーゼ、エンドヌクレアーゼ、ＲＮＡｓｅ、α毒素、リシ
ン、アブリン、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素Ａ、ジフテリア毒素、サポリン、
モモルジン（ｍｏｍｏｒｄｉｎ）、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ヤマゴボウ抗
ウイルスタンパク質、αサルシン（ｓａｒｃｉｎ）およびコレラ毒素。「毒素」
はまた、細胞分裂停止剤もしくは細胞破壊剤、治療薬または放射活性金属イオン
（例えば、α−放射体（例えば、213Ｂｉ））もしくは他の放射性同位体（例え
ば、103Ｐｄ、133Ｘｅ、131Ｉ、68Ｇｅ、57Ｃｏ、65Ｚｎ、85Ｓｒ、32Ｐ、35Ｓ
、90Ｙ、153Ｓｍ、153Ｇｄ、169Ｙｂ、51Ｃｒ、54Ｍｎ、75Ｓｅ、113Ｓｎ、90イ
ットリウム、117スズ、186レニウム、166ホルミウム、および188レニウム）；発
光標識（例えば、ルミノール）；および蛍光標識（例えば、フルオレセインおよ
びローダミン）、ならびにビオチンを含む。
【０３３４】
当該分野において公知の技術は、本発明のポリペプチド（抗体を含む）を標識
化するために適用され得る。このような技術としては、二官能性結合剤の使用（
例えば、米国特許第５，７５６，０６５号；同第５，７１４，６３１号；同第５
，６９６，２３９号；同第５，６５２，３６１号；同第５，５０５，９３１号；
同第５，４８９，４２５号；同第５，４３５，９９０号；同第５，４２８，１３
９号；同第５，３４２，６０４号；同第５，２７４，１１９号；同第４，９９４
，５６０号；および同第５，８０８，００３号を参照のこと；これら各々の内容
は、本明細書中に参考としてその全体を援用する）が挙げられるが、これに限定
されない。
化するために適用され得る。このような技術としては、二官能性結合剤の使用（
例えば、米国特許第５，７５６，０６５号；同第５，７１４，６３１号；同第５
，６９６，２３９号；同第５，６５２，３６１号；同第５，５０５，９３１号；
同第５，４８９，４２５号；同第５，４３５，９９０号；同第５，４２８，１３
９号；同第５，３４２，６０４号；同第５，２７４，１１９号；同第４，９９４
，５６０号；および同第５，８０８，００３号を参照のこと；これら各々の内容
は、本明細書中に参考としてその全体を援用する）が挙げられるが、これに限定
されない。
【０３３５】
従って、本発明は、障害の診断方法を提供し、これは以下を含む：（ａ）個体
の細胞または体液における本発明のポリペプチドの発現レベルをアッセイする工
程；および（ｂ）アッセイされたポリペプチドの発現レベルを標準のポリペプチ
ドの発現レベルと比較し、それによって標準の発現レベルと比較してアッセイさ
れたポリペプチドの発現レベルにおける増加または減少が障害を示す工程。癌に
関しては、個体由来の生検された組織中の相対的に高い量の転写物の存在は、疾
患の発症の素因を示し得るか、または実際の臨床的な症状が明らかとなる前に疾
患を検出するための手段を提供し得る。より決定的なこのタイプの診断は、保健
専門家がより早く予防策または積極的な処置を使用し、それによって癌の発症ま
たはさらなる進行を防ぐことを可能にし得る。
の細胞または体液における本発明のポリペプチドの発現レベルをアッセイする工
程；および（ｂ）アッセイされたポリペプチドの発現レベルを標準のポリペプチ
ドの発現レベルと比較し、それによって標準の発現レベルと比較してアッセイさ
れたポリペプチドの発現レベルにおける増加または減少が障害を示す工程。癌に
関しては、個体由来の生検された組織中の相対的に高い量の転写物の存在は、疾
患の発症の素因を示し得るか、または実際の臨床的な症状が明らかとなる前に疾
患を検出するための手段を提供し得る。より決定的なこのタイプの診断は、保健
専門家がより早く予防策または積極的な処置を使用し、それによって癌の発症ま
たはさらなる進行を防ぐことを可能にし得る。
【０３３６】
さらに、本発明のポリペプチドを用いて疾患または状態（例えば、神経障害、
免疫系障害、筋肉障害、生殖障害、胃腸障害、肺障害、心血管障害、腎臓障害、
増殖障害ならびに／または癌性疾患および状態など）を処置または予防し得る。
例えば、患者は、ポリペプチドの非存在またはレベルの減少を元に戻すこと（例
えば、インスリン）、異なるポリペプチドの不在またはレベルの減少を補充する
こと（例えば、ヘモグロビンＢに対するヘモグロビンＳ、ＳＯＤ、カタラーゼ、
ＤＮＡ修復タンパク質）、ポリペプチドの活性を阻害すること（例えば、癌遺伝
子または腫瘍抑制因子）、ポリペプチドの活性を活性化すること（例えば、レセ
プターに結合することによって）、遊離リガンドについて膜結合レセプターと競
合させることによって膜結合レセプターの活性を減少させること（例えば、炎症
を低減させる際に用いられる可溶性ＴＮＦレセプター）、または所望の応答をも
たらすこと（例えば、血管の成長の阻害、増殖細胞または組織に対する免疫応答
の増強）の試みにおいて、本発明のポリペプチドが投与され得る。
免疫系障害、筋肉障害、生殖障害、胃腸障害、肺障害、心血管障害、腎臓障害、
増殖障害ならびに／または癌性疾患および状態など）を処置または予防し得る。
例えば、患者は、ポリペプチドの非存在またはレベルの減少を元に戻すこと（例
えば、インスリン）、異なるポリペプチドの不在またはレベルの減少を補充する
こと（例えば、ヘモグロビンＢに対するヘモグロビンＳ、ＳＯＤ、カタラーゼ、
ＤＮＡ修復タンパク質）、ポリペプチドの活性を阻害すること（例えば、癌遺伝
子または腫瘍抑制因子）、ポリペプチドの活性を活性化すること（例えば、レセ
プターに結合することによって）、遊離リガンドについて膜結合レセプターと競
合させることによって膜結合レセプターの活性を減少させること（例えば、炎症
を低減させる際に用いられる可溶性ＴＮＦレセプター）、または所望の応答をも
たらすこと（例えば、血管の成長の阻害、増殖細胞または組織に対する免疫応答
の増強）の試みにおいて、本発明のポリペプチドが投与され得る。
【０３３７】
同様に、本発明のポリペプチドに対して指向される抗体もまた用いられ、疾患
（上記、および本明細書中のどこかに記載されるような）を処置し得る。例えば
、本発明のポリペプチドに対して指向される抗体の投与には、ポリペプチドを結
合して、そして／またはポリペプチドを中和し、そして／またはポリペプチドの
過剰産生を低減し得る。同様に、抗体の投与は、例えば、膜に結合したポリペプ
チド（レセプター）へ結合することにより、ポリペプチドを活性化し得る。
（上記、および本明細書中のどこかに記載されるような）を処置し得る。例えば
、本発明のポリペプチドに対して指向される抗体の投与には、ポリペプチドを結
合して、そして／またはポリペプチドを中和し、そして／またはポリペプチドの
過剰産生を低減し得る。同様に、抗体の投与は、例えば、膜に結合したポリペプ
チド（レセプター）へ結合することにより、ポリペプチドを活性化し得る。
【０３３８】
少なくとも、本発明のポリペプチドは、当業者に周知の方法を用いるＳＤＳ−
ＰＡＧＥゲルまたは分子ふるいゲル濾過カラムの分子量マーカーとして使用され
得る。宿主細胞の形質転換を評価する方法として、ポリペプチドがまた用いられ
、抗体を惹起し得、次いで、この抗体が使用され、組換え細胞からのタンパク質
発現を測定する。さらに、本発明のポリペプチドが使用され、以下の生物学的活
性を試験し得る。
ＰＡＧＥゲルまたは分子ふるいゲル濾過カラムの分子量マーカーとして使用され
得る。宿主細胞の形質転換を評価する方法として、ポリペプチドがまた用いられ
、抗体を惹起し得、次いで、この抗体が使用され、組換え細胞からのタンパク質
発現を測定する。さらに、本発明のポリペプチドが使用され、以下の生物学的活
性を試験し得る。
【０３３９】
（遺伝子治療方法）
本発明の別の局面は、障害、疾患および状態を処置または予防するための遺伝
子治療方法である。この遺伝子治療方法は、本発明のポリペプチドの発現を達成
するための、核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡおよびアンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡ）配
列の動物への導入に関する。この方法は、標的組織によるこのポリペプチドの発
現のために必要なプロモータおよび他の任意の遺伝因子と、作動可能に連結した
本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを必要とする。このような
遺伝子治療および送達技術は当該分野において公知である（例えば、本明細書中
に参考として援用される、ＷＯ９０／１１０９２を参照のこと）。
子治療方法である。この遺伝子治療方法は、本発明のポリペプチドの発現を達成
するための、核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡおよびアンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡ）配
列の動物への導入に関する。この方法は、標的組織によるこのポリペプチドの発
現のために必要なプロモータおよび他の任意の遺伝因子と、作動可能に連結した
本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを必要とする。このような
遺伝子治療および送達技術は当該分野において公知である（例えば、本明細書中
に参考として援用される、ＷＯ９０／１１０９２を参照のこと）。
【０３４０】
従って、例えば、患者由来の細胞は、エキソビボで本発明のポリヌクレオチド
と作動可能に連結したプロモーターを含むポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮ
Ａ）を用いて操作され得、次いで、操作された細胞は、本発明のポリペプチドを
用いて処置される患者に提供される。このような方法は、当該分野において周知
である。例えば、Ｂｅｌｌｄｅｇｒｕｎ，Ａ．ら、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ
Ｉｎｓｔ．８５：１０７−２１６（１９９３）；Ｆｅｒｒａｎｔｉｎｉ，Ｍ．
ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５３：１１０７−１１１２（１９９３）
；Ｆｅｒｒａｎｔｉｎｉ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １５３：４６０
４−４６１５（１９９４）；Ｋａｉｄｏ，Ｔ．ら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ
６０：２２１−２２９（１９９５）；Ｏｇｕｒａ，Ｈ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓｅａｒｃｈ ５０：５１０２−５１０６（１９９０）；Ｓａｎｔｏｄｏｎａｔ
ｏ，Ｌ．ら、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ７：１−１０（１９９６
）；Ｓａｎｔｏｄｏｎａｔｏ，Ｌ．ら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ４：１２４
６−１２５５（１９９７）；およびＺｈａｎｇ，Ｊ．−Ｆ．ら、Ｃａｎｃｅｒ
Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ３：３１−３８（１９９６）を参照のこと。これら
は、本明細書中に参考として援用される。１つの実施形態においては、操作され
る細胞は、動脈細胞である。この動脈細胞は、動脈、動脈の周囲の組織への直接
的な注射を介して、またはカテーテル注入を介して患者に再導入され得る。
と作動可能に連結したプロモーターを含むポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮ
Ａ）を用いて操作され得、次いで、操作された細胞は、本発明のポリペプチドを
用いて処置される患者に提供される。このような方法は、当該分野において周知
である。例えば、Ｂｅｌｌｄｅｇｒｕｎ，Ａ．ら、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ
Ｉｎｓｔ．８５：１０７−２１６（１９９３）；Ｆｅｒｒａｎｔｉｎｉ，Ｍ．
ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５３：１１０７−１１１２（１９９３）
；Ｆｅｒｒａｎｔｉｎｉ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １５３：４６０
４−４６１５（１９９４）；Ｋａｉｄｏ，Ｔ．ら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ
６０：２２１−２２９（１９９５）；Ｏｇｕｒａ，Ｈ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓｅａｒｃｈ ５０：５１０２−５１０６（１９９０）；Ｓａｎｔｏｄｏｎａｔ
ｏ，Ｌ．ら、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ７：１−１０（１９９６
）；Ｓａｎｔｏｄｏｎａｔｏ，Ｌ．ら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ４：１２４
６−１２５５（１９９７）；およびＺｈａｎｇ，Ｊ．−Ｆ．ら、Ｃａｎｃｅｒ
Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ３：３１−３８（１９９６）を参照のこと。これら
は、本明細書中に参考として援用される。１つの実施形態においては、操作され
る細胞は、動脈細胞である。この動脈細胞は、動脈、動脈の周囲の組織への直接
的な注射を介して、またはカテーテル注入を介して患者に再導入され得る。
【０３４１】
以下により詳細に考察されるように、このポリヌクレオチド構築物は、注射可
能な物質を動物の細胞に送達する任意の方法（例えば、組織（心臓、筋肉、皮膚
、肺、肝臓など）の間質空間への注射）により送達され得る。このポリヌクレオ
チド構築物は、薬学的に受容可能な液体または水性のキャリア中で送達され得る
。
能な物質を動物の細胞に送達する任意の方法（例えば、組織（心臓、筋肉、皮膚
、肺、肝臓など）の間質空間への注射）により送達され得る。このポリヌクレオ
チド構築物は、薬学的に受容可能な液体または水性のキャリア中で送達され得る
。
【０３４２】
１つの実施形態においては、本発明のポリヌクレオチドは、裸のポリヌクレオ
チドとして送達される。用語「裸の」ポリヌクレオチド、ＤＮＡまたはＲＮＡと
は、細胞への侵入を補助し、促進し、または容易にするために作用するいかなる
送達ビヒクル（ウイルス配列、ウイルス粒子、リポソーム処方物、リポフェクチ
ンまたは沈殿剤などを含む）も含まない配列をいう。しかし、本発明のポリヌク
レオチドはまた、当業者に周知の方法により調製され得るリポソーム処方物中お
よびリポフェクチン処方物中などで送達され得る。このような方法は、例えば、
米国特許第５，５９３，９７２号、同第５，５８９，４６６号および同第５，５
８０，８５９号（これらは、本明細書中に参考として援用される）に記載される
。
チドとして送達される。用語「裸の」ポリヌクレオチド、ＤＮＡまたはＲＮＡと
は、細胞への侵入を補助し、促進し、または容易にするために作用するいかなる
送達ビヒクル（ウイルス配列、ウイルス粒子、リポソーム処方物、リポフェクチ
ンまたは沈殿剤などを含む）も含まない配列をいう。しかし、本発明のポリヌク
レオチドはまた、当業者に周知の方法により調製され得るリポソーム処方物中お
よびリポフェクチン処方物中などで送達され得る。このような方法は、例えば、
米国特許第５，５９３，９７２号、同第５，５８９，４６６号および同第５，５
８０，８５９号（これらは、本明細書中に参考として援用される）に記載される
。
【０３４３】
遺伝子治療方法において使用されるポリヌクレオチドベクター構築物は、好ま
しくは、宿主ゲノム中に組み込まれないかまたは複製を可能にする配列を含まな
い構築物である。適切なベクターとしては、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能
なｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１およびｐＳＧ；Ｐｈａ
ｒｍａｃｉａから入手可能なｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧおよびｐＳＶＬ；
ならびにＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手可能なｐＥＦ１／Ｖ５、ｐｃＤＮＡ３．
１、およびｐＲｃ／ＣＭＶ２が挙げられる。他の適切なベクターは、当業者に容
易に明らかである。
しくは、宿主ゲノム中に組み込まれないかまたは複製を可能にする配列を含まな
い構築物である。適切なベクターとしては、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能
なｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１およびｐＳＧ；Ｐｈａ
ｒｍａｃｉａから入手可能なｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧおよびｐＳＶＬ；
ならびにＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手可能なｐＥＦ１／Ｖ５、ｐｃＤＮＡ３．
１、およびｐＲｃ／ＣＭＶ２が挙げられる。他の適切なベクターは、当業者に容
易に明らかである。
【０３４４】
当業者に公知の任意の強力なプロモーターは、ポリヌクレオチド配列の発現を
駆動するために用いられ得る。適切なプロモーターとしては、アデノウイルスプ
ロモーター（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター）；または異種プロ
モーター（例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター）；ＲＳウイ
ルス（ＲＳＶ）プロモーター；誘導性プロモーター（例えば、ＭＭＴプロモータ
ー、メタロチオネインプロモーター）；熱ショックプロモーター；アルブミンプ
ロモーター；ＡｐｏＡＩプロモーター；ヒトグロビンプロモーター；ウイルスチ
ミジンキナーゼプロモーター（例えば、単純ヘルペスチミジンキナーゼプロモー
ター）；レトロウイルスＬＴＲ；ｂ−アクチンプロモーター；およびヒト成長ホ
ルモンプロモーターが挙げられる。このプロモーターはまた、本発明のポリヌク
レオチドについてネイティブなプロモーターであり得る。
駆動するために用いられ得る。適切なプロモーターとしては、アデノウイルスプ
ロモーター（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター）；または異種プロ
モーター（例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター）；ＲＳウイ
ルス（ＲＳＶ）プロモーター；誘導性プロモーター（例えば、ＭＭＴプロモータ
ー、メタロチオネインプロモーター）；熱ショックプロモーター；アルブミンプ
ロモーター；ＡｐｏＡＩプロモーター；ヒトグロビンプロモーター；ウイルスチ
ミジンキナーゼプロモーター（例えば、単純ヘルペスチミジンキナーゼプロモー
ター）；レトロウイルスＬＴＲ；ｂ−アクチンプロモーター；およびヒト成長ホ
ルモンプロモーターが挙げられる。このプロモーターはまた、本発明のポリヌク
レオチドについてネイティブなプロモーターであり得る。
【０３４５】
他の遺伝子治療技術とは異なり、裸の核酸配列を標的細胞に導入する１つの主
要な利点は、その細胞におけるポリヌクレオチド合成の一過性の性質である。研
究によって、非複製ＤＮＡ配列が細胞に導入されて、６ヶ月までの期間の間、所
望のポリペプチドの産生を提供し得ることが示された。
要な利点は、その細胞におけるポリヌクレオチド合成の一過性の性質である。研
究によって、非複製ＤＮＡ配列が細胞に導入されて、６ヶ月までの期間の間、所
望のポリペプチドの産生を提供し得ることが示された。
【０３４６】
ポリヌクレオチド構築物は、動物内の組織（筋肉、皮膚、脳、肺、肝臓、脾臓
、骨髄、胸腺、心臓、リンパ、血液、骨、軟骨、膵臓、腎臓、胆嚢、胃、腸、精
巣、卵巣、子宮、直腸、神経系、眼、腺、および結合組織を包含する）の間隙空
間に送達され得る。この組織の間隙空間は、器官組織の細網線維間の、細胞間の
液体ムコ多糖類基質、血管または室の壁における弾性線維、線維性組織のコラー
ゲン線維、あるいは結合組織鞘性筋肉細胞（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕ
ｅ ｅｎｓｈｅａｔｈｉｎｇ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ）内または骨の裂孔中の
同じ基質を包含する。これは、同様に、循環の血漿およびリンパチャンネルのリ
ンパ液により占められた空間である。筋肉組織の間隙空間への送達は、以下で議
論される理由のために好ましい。本発明のポリヌクレオチド構築物は、これらの
細胞を含む組織への注射によって、好都合に送達され得る。本発明のポリヌクレ
オチド構築物は、好ましくは、分化した持続性の非分裂細胞に送達され、そして
その細胞において発現されるが、送達および発現は、非分化細胞または完全には
分化していない細胞（例えば、血液の幹細胞または皮膚線維芽細胞）において達
成され得る。インビボでの筋肉細胞は、ポリヌクレオチドを取り込み、そして発
現する能力において、特に適格である。
、骨髄、胸腺、心臓、リンパ、血液、骨、軟骨、膵臓、腎臓、胆嚢、胃、腸、精
巣、卵巣、子宮、直腸、神経系、眼、腺、および結合組織を包含する）の間隙空
間に送達され得る。この組織の間隙空間は、器官組織の細網線維間の、細胞間の
液体ムコ多糖類基質、血管または室の壁における弾性線維、線維性組織のコラー
ゲン線維、あるいは結合組織鞘性筋肉細胞（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕ
ｅ ｅｎｓｈｅａｔｈｉｎｇ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ）内または骨の裂孔中の
同じ基質を包含する。これは、同様に、循環の血漿およびリンパチャンネルのリ
ンパ液により占められた空間である。筋肉組織の間隙空間への送達は、以下で議
論される理由のために好ましい。本発明のポリヌクレオチド構築物は、これらの
細胞を含む組織への注射によって、好都合に送達され得る。本発明のポリヌクレ
オチド構築物は、好ましくは、分化した持続性の非分裂細胞に送達され、そして
その細胞において発現されるが、送達および発現は、非分化細胞または完全には
分化していない細胞（例えば、血液の幹細胞または皮膚線維芽細胞）において達
成され得る。インビボでの筋肉細胞は、ポリヌクレオチドを取り込み、そして発
現する能力において、特に適格である。
【０３４７】
裸の核酸配列注射のために、ＤＮＡまたはＲＮＡの有効投薬量は、約０．０５
ｍｇ／ｋｇ体重から約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲にある。好ましくは、この投薬
量は、約０．００５ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇであり、そしてより好まし
くは約０．０５ｍｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇである。もちろん、当業者が認識
するように、この投薬量は、注射の組織部位に応じて変化する。核酸配列の適切
かつ有効な投薬量は、当業者によって容易に決定され得、そして処置される状態
および投与経路に依存し得る。
ｍｇ／ｋｇ体重から約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲にある。好ましくは、この投薬
量は、約０．００５ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇであり、そしてより好まし
くは約０．０５ｍｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇである。もちろん、当業者が認識
するように、この投薬量は、注射の組織部位に応じて変化する。核酸配列の適切
かつ有効な投薬量は、当業者によって容易に決定され得、そして処置される状態
および投与経路に依存し得る。
【０３４８】
好ましい投与経路は、組織の間隙空間への非経口注射経路による。しかし、他
の非経口経路もまた用いられ得、これには、例えば、特に、肺または気管支の組
織、咽喉または鼻の粘膜への送達のためのエアロゾル処方物の吸入が挙げられる
。さらに、裸のＤＮＡ構築物が、血管形成術の間にこの手順において用いられる
カテーテルによって動脈に送達され得る。
の非経口経路もまた用いられ得、これには、例えば、特に、肺または気管支の組
織、咽喉または鼻の粘膜への送達のためのエアロゾル処方物の吸入が挙げられる
。さらに、裸のＤＮＡ構築物が、血管形成術の間にこの手順において用いられる
カテーテルによって動脈に送達され得る。
【０３４９】
裸のポリヌクレオチドは、送達部位での直接の針注射、静脈内注射、局所投与
、カテーテル注入、およびいわゆる「遺伝子銃」を含むがこれらに限定されない
、当該分野で公知の任意の方法によって送達される。これらの送達方法は、当該
分野で公知である。
、カテーテル注入、およびいわゆる「遺伝子銃」を含むがこれらに限定されない
、当該分野で公知の任意の方法によって送達される。これらの送達方法は、当該
分野で公知である。
【０３５０】
この構築物はまた、ウイルス配列、ウイルス粒子、リポソーム処方物、リポフ
ェクチン、沈殿剤などのような送達ビヒクルを用いて送達され得る。このような
送達方法は、当該分野で公知である。
ェクチン、沈殿剤などのような送達ビヒクルを用いて送達され得る。このような
送達方法は、当該分野で公知である。
【０３５１】
特定の実施形態において、ポリヌクレオチド構築物は、リポソーム調製物中で
複合体化している。本発明にて使用するためのリポソーム調製物は、カチオン性
（正に荷電した）、アニオン性（負に荷電した）および中性の調製物を包含する
。しかしながら、カチオン性リポソームとポリアニオン性核酸との間で強固な荷
電複合体を形成し得るので、カチオン性リポソームが特に好ましい。カチオン性
リポソームは、機能的形態において、プラスミドＤＮＡ（本明細書中で参考とし
て援用される、Ｆｅｌｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ（１９８７）８４：７４１３〜７４１６）；ｍＲＮＡ（本明細書中で参考と
して援用される、Ｍａｌｏｎｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ（１９８９）８６：６０７７〜６０８１）；および精製された転写因子（本
明細書中で参考として援用される、Ｄｅｂｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１
９９０）２６５：１０１８９〜１０１９２）の細胞内送達を媒介することが示さ
れている。
複合体化している。本発明にて使用するためのリポソーム調製物は、カチオン性
（正に荷電した）、アニオン性（負に荷電した）および中性の調製物を包含する
。しかしながら、カチオン性リポソームとポリアニオン性核酸との間で強固な荷
電複合体を形成し得るので、カチオン性リポソームが特に好ましい。カチオン性
リポソームは、機能的形態において、プラスミドＤＮＡ（本明細書中で参考とし
て援用される、Ｆｅｌｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ（１９８７）８４：７４１３〜７４１６）；ｍＲＮＡ（本明細書中で参考と
して援用される、Ｍａｌｏｎｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ（１９８９）８６：６０７７〜６０８１）；および精製された転写因子（本
明細書中で参考として援用される、Ｄｅｂｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１
９９０）２６５：１０１８９〜１０１９２）の細胞内送達を媒介することが示さ
れている。
【０３５２】
カチオン性リポソームは容易に入手可能である。例えば、Ｎ［１−２，３−ジ
オレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリエチルアンモニウム（ＤＯＴＭ
Ａ）リポソームは特に有用であり、そして商標ＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎのもとにＧ
ＩＢＣＯ ＢＲＬ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，Ｎ．Ｙ．（本明細書中で参考と
して援用される、Ｆｅｌｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ（１９８７）８４：７４１３〜７４１６をもまた参照のこと、）より入手
可能である。他の市販のリポソームとしては、トランスフェクテース（ｔｒａｎ
ｓｆｅｃｔａｃｅ）（ＤＤＡＢ／ＤＯＰＥ）およびＤＯＴＡＰ／ＤＯＰＥ（Ｂｏ
ｅｈｒｉｎｇｅｒ）が挙げられる。
オレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリエチルアンモニウム（ＤＯＴＭ
Ａ）リポソームは特に有用であり、そして商標ＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎのもとにＧ
ＩＢＣＯ ＢＲＬ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，Ｎ．Ｙ．（本明細書中で参考と
して援用される、Ｆｅｌｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ（１９８７）８４：７４１３〜７４１６をもまた参照のこと、）より入手
可能である。他の市販のリポソームとしては、トランスフェクテース（ｔｒａｎ
ｓｆｅｃｔａｃｅ）（ＤＤＡＢ／ＤＯＰＥ）およびＤＯＴＡＰ／ＤＯＰＥ（Ｂｏ
ｅｈｒｉｎｇｅｒ）が挙げられる。
【０３５３】
当該分野で周知の技術を使用して、他のカチオン性リポソームを、容易に入手
可能な物質より調製し得る。ＤＯＴＡＰ（１，２−ビス（オレオイルオキシ）−
３−（トリメチルアンモニオ）プロパン）リポソームの合成の記述に関して、例
えばＰＣＴ公開第ＷＯ ９０／１１０９２号（本明細書中で参考として援用され
る）を参照のこと。ＤＯＴＭＡリポソームの調製は文献にて説明されており、例
えば、本明細書中で参考として援用される、Ｐ．Ｆｅｌｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８４：７４１３〜７４１７を参照のこと
。類似した方法を使用して、他のカチオン性脂質物質よりリポソームを調製し得
る。
可能な物質より調製し得る。ＤＯＴＡＰ（１，２−ビス（オレオイルオキシ）−
３−（トリメチルアンモニオ）プロパン）リポソームの合成の記述に関して、例
えばＰＣＴ公開第ＷＯ ９０／１１０９２号（本明細書中で参考として援用され
る）を参照のこと。ＤＯＴＭＡリポソームの調製は文献にて説明されており、例
えば、本明細書中で参考として援用される、Ｐ．Ｆｅｌｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８４：７４１３〜７４１７を参照のこと
。類似した方法を使用して、他のカチオン性脂質物質よりリポソームを調製し得
る。
【０３５４】
同様に、アニオン性リポソームおよび中性リポソームは、例えば、Ａｖａｎｔ
ｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，Ａｌａ．）から容易に
入手可能であり、または容易に入手可能な物質を使用して簡単に調製され得る。
そのような物質としてはとりわけ、ホスファチジルコリン、コレステロール、ホ
スファチジルエタノールアミン、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ
）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジオレオイルホス
ファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）が挙げられる。これらの物質はまた、
ＤＯＴＭＡ出発物資およびＤＯＴＡＰ出発物質と適切な割合において混合され得
る。これらの物質を使用してリポソームを生成する方法は、当該分野で周知であ
る。
ｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，Ａｌａ．）から容易に
入手可能であり、または容易に入手可能な物質を使用して簡単に調製され得る。
そのような物質としてはとりわけ、ホスファチジルコリン、コレステロール、ホ
スファチジルエタノールアミン、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ
）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジオレオイルホス
ファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）が挙げられる。これらの物質はまた、
ＤＯＴＭＡ出発物資およびＤＯＴＡＰ出発物質と適切な割合において混合され得
る。これらの物質を使用してリポソームを生成する方法は、当該分野で周知であ
る。
【０３５５】
例えば、商業的に、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジオレ
オイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、およびジオレオイルホスファ
チジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を種々の組み合わせにおいて使用し、コレ
ステロールを添加してもしなくても、従来のリポソームを生成し得る。従って、
例えば、超音波処理バイアル中への窒素ガス流下で、各５０ｍｇのＤＯＰＧおよ
びＤＯＰＣを乾燥することにより、ＤＯＰＧ／ＤＯＰＣ小胞を調製し得る。この
サンプルを一晩真空ポンプ下に置き、そして次の日、脱イオン水で水和する。次
いで、浴を、１５ＥＣで循環させながら、最大設定にて、逆位カップ（浴タイプ
）プローブを装備したＨｅａｔ Ｓｙｓｔｅｍｓ モデル３５０超音波処理器を
使用して、このサンプルを栓をしたバイアル中にて２時間超音波処理する。ある
いは、負に荷電した小胞を、超音波処理なしで調製して多重膜小胞を生成し得る
か、または核孔膜（ｎｕｃｌｅｏｐｏｒｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ）を通して押し出
すことにより別々の大きさの単膜小胞を生成し得る。他の方法は、当業者に公知
でありそして利用可能である。
オイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、およびジオレオイルホスファ
チジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を種々の組み合わせにおいて使用し、コレ
ステロールを添加してもしなくても、従来のリポソームを生成し得る。従って、
例えば、超音波処理バイアル中への窒素ガス流下で、各５０ｍｇのＤＯＰＧおよ
びＤＯＰＣを乾燥することにより、ＤＯＰＧ／ＤＯＰＣ小胞を調製し得る。この
サンプルを一晩真空ポンプ下に置き、そして次の日、脱イオン水で水和する。次
いで、浴を、１５ＥＣで循環させながら、最大設定にて、逆位カップ（浴タイプ
）プローブを装備したＨｅａｔ Ｓｙｓｔｅｍｓ モデル３５０超音波処理器を
使用して、このサンプルを栓をしたバイアル中にて２時間超音波処理する。ある
いは、負に荷電した小胞を、超音波処理なしで調製して多重膜小胞を生成し得る
か、または核孔膜（ｎｕｃｌｅｏｐｏｒｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ）を通して押し出
すことにより別々の大きさの単膜小胞を生成し得る。他の方法は、当業者に公知
でありそして利用可能である。
【０３５６】
このリポソームとしては、多重膜小胞（ＭＬＶ）、小さな単膜小胞（ＳＵＶ）
または大きな単膜小胞（ＬＵＶ）が挙げられ得、ＳＵＶが好ましい。当該分野で
周知の方法を使用して、種々のリポソーム−核酸複合体が調製される。例えば、
本明細書中で参考として援用される、Ｓｔｒａｕｂｉｎｇｅｒら、Ｍｅｔｈｏｄ
ｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１０１：５１２〜５２７（１９８３）を参照
のこと。例えば、核酸を含有するＭＬＶは、ガラスチューブの壁面にリン脂質の
薄膜を堆積させ、そしてその後、カプセル化されるべき物質の溶液で水和するこ
とによって調製され得る。ＳＵＶはＭＬＶの長期超音波処理により調製され、単
膜リポソームの均質集団を生成する。封入されるべき物質を、予め形成されたＭ
ＬＶの懸濁液に添加し、次いで、超音波処理する。カチオン性脂質を含むリポソ
ームを使用する場合、乾燥した脂質膜を、滅菌水または１０ｍＭ Ｔｒｉｓ／Ｎ
ａＣｌのような等張性緩衝溶液のような適切な溶液中に再懸濁し、超音波処理し
、次いで、予め形成されたリポソームをＤＮＡと直接混合する。正に荷電したリ
ポソームのカチオン性ＤＮＡへの結合に起因して、リポソームおよびＤＮＡは非
常に安定な複合体を形成する。ＳＵＶは、小核酸フラグメントを用いての用途を
見出す。ＬＵＶは、当該分野で周知の多くの方法により調製される。一般に使用
される方法としては、Ｃａ2+−ＥＤＴＡキレート化（Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕ
ｌｏｓら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ（１９７５）３９４：４
８３；Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ（１９７９））１７：７７；エーテル注入（Ｄ
ｅａｍｅｒ，Ｄ．およびＢａｎｇｈａｍ，Ａ．、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙ
ｓ．Ａｃｔａ（１９７６）４４３：６２９；Ｏｓｔｒｏら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｍ．（１９７７）７６：８３６；Ｆｒａｌｅ
ｙら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９７９）７６：３３
４８）；界面活性剤透析（Ｅｎｏｃｈ，Ｈ．およびＳｔｒｉｔｔｍａｔｔｅｒ，
Ｐ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９７９）７６：１４
５）；および逆相エバポレーション（ＲＥＶ）（Ｆｒａｌｅｙら、Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．（１９８０）２５５：１０４３１；Ｓｚｏｋａ、Ｆ．およびＰａｐ
ａｈａｄｊｏｐｕｏｌｏｓ，Ｄ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ（１９７８）７５：１４５；Ｓｃｈａｅｆｅｒ−Ｒｉｄｄｅｒら、Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ（１９８２）２１５：１６６）が挙げられ、これらの文献は本明細書中で
参考として援用される。
または大きな単膜小胞（ＬＵＶ）が挙げられ得、ＳＵＶが好ましい。当該分野で
周知の方法を使用して、種々のリポソーム−核酸複合体が調製される。例えば、
本明細書中で参考として援用される、Ｓｔｒａｕｂｉｎｇｅｒら、Ｍｅｔｈｏｄ
ｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１０１：５１２〜５２７（１９８３）を参照
のこと。例えば、核酸を含有するＭＬＶは、ガラスチューブの壁面にリン脂質の
薄膜を堆積させ、そしてその後、カプセル化されるべき物質の溶液で水和するこ
とによって調製され得る。ＳＵＶはＭＬＶの長期超音波処理により調製され、単
膜リポソームの均質集団を生成する。封入されるべき物質を、予め形成されたＭ
ＬＶの懸濁液に添加し、次いで、超音波処理する。カチオン性脂質を含むリポソ
ームを使用する場合、乾燥した脂質膜を、滅菌水または１０ｍＭ Ｔｒｉｓ／Ｎ
ａＣｌのような等張性緩衝溶液のような適切な溶液中に再懸濁し、超音波処理し
、次いで、予め形成されたリポソームをＤＮＡと直接混合する。正に荷電したリ
ポソームのカチオン性ＤＮＡへの結合に起因して、リポソームおよびＤＮＡは非
常に安定な複合体を形成する。ＳＵＶは、小核酸フラグメントを用いての用途を
見出す。ＬＵＶは、当該分野で周知の多くの方法により調製される。一般に使用
される方法としては、Ｃａ2+−ＥＤＴＡキレート化（Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕ
ｌｏｓら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ（１９７５）３９４：４
８３；Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ（１９７９））１７：７７；エーテル注入（Ｄ
ｅａｍｅｒ，Ｄ．およびＢａｎｇｈａｍ，Ａ．、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙ
ｓ．Ａｃｔａ（１９７６）４４３：６２９；Ｏｓｔｒｏら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｍ．（１９７７）７６：８３６；Ｆｒａｌｅ
ｙら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９７９）７６：３３
４８）；界面活性剤透析（Ｅｎｏｃｈ，Ｈ．およびＳｔｒｉｔｔｍａｔｔｅｒ，
Ｐ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９７９）７６：１４
５）；および逆相エバポレーション（ＲＥＶ）（Ｆｒａｌｅｙら、Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．（１９８０）２５５：１０４３１；Ｓｚｏｋａ、Ｆ．およびＰａｐ
ａｈａｄｊｏｐｕｏｌｏｓ，Ｄ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ（１９７８）７５：１４５；Ｓｃｈａｅｆｅｒ−Ｒｉｄｄｅｒら、Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ（１９８２）２１５：１６６）が挙げられ、これらの文献は本明細書中で
参考として援用される。
【０３５７】
一般に、ＤＮＡのリポソームに対する割合は約１０：１から約１：１０までで
ある。好ましくは、その割合（ｒａｔｉｏｎ）は約５：１から約１：５までであ
る。より好ましくは、その割合は約３：１から約１：３までである。さらにより
好ましくは、その割合は約１：１である。
ある。好ましくは、その割合（ｒａｔｉｏｎ）は約５：１から約１：５までであ
る。より好ましくは、その割合は約３：１から約１：３までである。さらにより
好ましくは、その割合は約１：１である。
【０３５８】
米国特許第５，６７６，９５４号（本明細書中で参考として援用される）はカ
チオン性リポソームキャリアと複合体化された遺伝物質のマウスへの注入につい
て報告する。米国特許第４，８９７，３５５号、同第４，９４６，７８７号、同
第５，０４９，３８６号、同第５，４５９，１２７号、同第５，５８９，４６６
号、同第５，６９３，６２２号、同第５，５８０，８５９号、同第５，７０３，
０５５号および国際公開第ＷＯ９４／９４６９号（これらは本明細書中で参考と
して援用される）は、ＤＮＡを細胞および哺乳動物にトランスフェクトする際に
使用するためのカチオン性脂質を提供する。米国特許第５，５８９，４６６号、
同第５，６９３，６２２号、同第５，５８０，８５９号、同第５，７０３，０５
５号および国際公開第ＷＯ９４／９４６９号（これらは本明細書中で参考として
援用される）は、ＤＮＡ−カチオン性脂質複合体を哺乳動物に送達する方法を提
供する。
チオン性リポソームキャリアと複合体化された遺伝物質のマウスへの注入につい
て報告する。米国特許第４，８９７，３５５号、同第４，９４６，７８７号、同
第５，０４９，３８６号、同第５，４５９，１２７号、同第５，５８９，４６６
号、同第５，６９３，６２２号、同第５，５８０，８５９号、同第５，７０３，
０５５号および国際公開第ＷＯ９４／９４６９号（これらは本明細書中で参考と
して援用される）は、ＤＮＡを細胞および哺乳動物にトランスフェクトする際に
使用するためのカチオン性脂質を提供する。米国特許第５，５８９，４６６号、
同第５，６９３，６２２号、同第５，５８０，８５９号、同第５，７０３，０５
５号および国際公開第ＷＯ９４／９４６９号（これらは本明細書中で参考として
援用される）は、ＤＮＡ−カチオン性脂質複合体を哺乳動物に送達する方法を提
供する。
【０３５９】
特定の実施形態において、本発明のポリペプチドをコードする配列を含むＲＮ
Ａを含むレトロウイルス粒子を使用して、エキソビボまたはインビボで細胞を操
作する。レトロウイルスプラスミドベクターを誘導し得るレトロウイルスとして
は、モロニーマウス白血病ウイルス、脾臓壊死ウイルス、ラウス肉腫ウイルス、
ハーベイ肉腫ウイルス、ニワトリ白血病ウイルス、テナガザル白血病ウイルス、
ヒト免疫不全ウイルス、骨髄増殖性肉腫ウイルス、および乳癌ウイルスが挙げら
れるが、これらに限定されない。
Ａを含むレトロウイルス粒子を使用して、エキソビボまたはインビボで細胞を操
作する。レトロウイルスプラスミドベクターを誘導し得るレトロウイルスとして
は、モロニーマウス白血病ウイルス、脾臓壊死ウイルス、ラウス肉腫ウイルス、
ハーベイ肉腫ウイルス、ニワトリ白血病ウイルス、テナガザル白血病ウイルス、
ヒト免疫不全ウイルス、骨髄増殖性肉腫ウイルス、および乳癌ウイルスが挙げら
れるが、これらに限定されない。
【０３６０】
このレトロウイルスプラスミドベクターを使用して、パッケージング細胞株を
形質導入し、プロデューサー細胞株を形成する。トランスフェクトされ得るパッ
ケージング細胞株の例としては、その全体が本明細書中で参考として援用される
、Ｍｉｌｌｅｒ、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅａｐｙ、１：５〜１４（１９９
０）にて記載されるようなＰＥ５０１、ＰＡ３１７、Ｒ−２、Ｒ−ＡＭ、ＰＡ１
２、Ｔ１９−１４Ｘ、ＶＴ−１９−１７−Ｈ２、ＲＣＲＥ、ＲＣＲＩＰ、ＧＰ＋
Ｅ−８６、ＧＰ＋ｅｎｖＡｍ１２およびＤＡＮ細胞株が挙げられるが、これらに
限定されない。このベクターは、当該分野で公知の任意の手段により、パッケー
ジング細胞を形質導入し得る。そのような手段としては、エレクトロポレーショ
ン、リポソームの使用、およびＣａＰＯ4沈殿が挙げられるが、それらに限定さ
れない。１つの代替法において、このレトロウイルスプラスミドベクターをリポ
ソームにカプセル化するか、または脂質に結合して、次いで宿主に投与し得る。
形質導入し、プロデューサー細胞株を形成する。トランスフェクトされ得るパッ
ケージング細胞株の例としては、その全体が本明細書中で参考として援用される
、Ｍｉｌｌｅｒ、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅａｐｙ、１：５〜１４（１９９
０）にて記載されるようなＰＥ５０１、ＰＡ３１７、Ｒ−２、Ｒ−ＡＭ、ＰＡ１
２、Ｔ１９−１４Ｘ、ＶＴ−１９−１７−Ｈ２、ＲＣＲＥ、ＲＣＲＩＰ、ＧＰ＋
Ｅ−８６、ＧＰ＋ｅｎｖＡｍ１２およびＤＡＮ細胞株が挙げられるが、これらに
限定されない。このベクターは、当該分野で公知の任意の手段により、パッケー
ジング細胞を形質導入し得る。そのような手段としては、エレクトロポレーショ
ン、リポソームの使用、およびＣａＰＯ4沈殿が挙げられるが、それらに限定さ
れない。１つの代替法において、このレトロウイルスプラスミドベクターをリポ
ソームにカプセル化するか、または脂質に結合して、次いで宿主に投与し得る。
【０３６１】
このプロデューサー細胞株は、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチドを含む感染性レトロウイルスベクター粒子を産生する。次いで、そのよう
なレトロウイルスベクター粒子を使用して、インビトロまたはインビボのどちら
かにおいて、真核生物細胞を形質導入し得る。この形質導入された真核生物細胞
は、本発明のポリペプチドを発現する。
オチドを含む感染性レトロウイルスベクター粒子を産生する。次いで、そのよう
なレトロウイルスベクター粒子を使用して、インビトロまたはインビボのどちら
かにおいて、真核生物細胞を形質導入し得る。この形質導入された真核生物細胞
は、本発明のポリペプチドを発現する。
【０３６２】
特定の他の実施形態において、アデノウイルスベクター中に含まれるポリヌク
レオチドを用いて、エキソビボまたはインビボで細胞を操作する。アデノウイル
スは、それが本発明のポリペプチドをコードし、そして発現し、それと同時に通
常の溶解性ウイルス生活環にて複製するその能力に関して不活性化されるように
操作され得る。アデノウイルス発現は、そのウイルスＤＮＡの宿主細胞染色体へ
の組み込み無しに達成され、その結果、挿入性変異誘発についての心配が軽減さ
れる。さらに、アデノウイルスは、何年もの間、腸の生ワクチンとして優れた安
全側面を伴って使用されている（Ｓｃｈｗａｒｔｚｅｔ，Ａ．Ｒ．ら、（１９７
４）Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．、１０９：２３３−２３８）。最終
的に、アデノウイルス媒介性遺伝子移入が、コトンラットの肺へのα−１−アン
チトリプシンおよびＣＦＴＲの移入を含む多くの例において実証されている（Ｒ
ｏｓｅｎｆｅｌｄ，Ｍ．Ａ．ら、（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５２：４３１
〜４３４；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら、（１９９２）Ｃｅｌｌ ６８：１４３〜１５
５）。さらに、ヒト癌における原因物質としてアデノウイルスを確立しようとす
る広範な研究は、一様に否定的であった（Ｇｒｅｅｎ，Ｍ．ら（１９７９）Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７６：６６０６）。
レオチドを用いて、エキソビボまたはインビボで細胞を操作する。アデノウイル
スは、それが本発明のポリペプチドをコードし、そして発現し、それと同時に通
常の溶解性ウイルス生活環にて複製するその能力に関して不活性化されるように
操作され得る。アデノウイルス発現は、そのウイルスＤＮＡの宿主細胞染色体へ
の組み込み無しに達成され、その結果、挿入性変異誘発についての心配が軽減さ
れる。さらに、アデノウイルスは、何年もの間、腸の生ワクチンとして優れた安
全側面を伴って使用されている（Ｓｃｈｗａｒｔｚｅｔ，Ａ．Ｒ．ら、（１９７
４）Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．、１０９：２３３−２３８）。最終
的に、アデノウイルス媒介性遺伝子移入が、コトンラットの肺へのα−１−アン
チトリプシンおよびＣＦＴＲの移入を含む多くの例において実証されている（Ｒ
ｏｓｅｎｆｅｌｄ，Ｍ．Ａ．ら、（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５２：４３１
〜４３４；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら、（１９９２）Ｃｅｌｌ ６８：１４３〜１５
５）。さらに、ヒト癌における原因物質としてアデノウイルスを確立しようとす
る広範な研究は、一様に否定的であった（Ｇｒｅｅｎ，Ｍ．ら（１９７９）Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７６：６６０６）。
【０３６３】
本発明において有用である適切なアデノウイルスベクターが、例えば、Ｋｏｚ
ａｒｓｋｙおよびＷｉｌｓｏｎ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖｅｌ
．、３：４９９〜５０３（１９９３）；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら、Ｃｅｌｌ、６８
：１４３〜１５５（１９９２）；Ｅｎｇｅｌｈａｒｄｔら、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎ
ｅｔ．Ｔｈｅｒ．、４：７５９〜７６９（１９９３）；Ｙａｎｇら、Ｎａｔｕｒ
ｅ Ｇｅｎｅｔ、７：３６２〜３６９（１９９４）；Ｗｉｌｓｏｎら、Ｎａｔｕ
ｒｅ、３６５:６９１〜６９２（１９９３）；および米国特許第５，６５２，２
２４号に記載されており、これらは本明細書中で参考として援用される。例えば
、アデノウイルスベクターＡｄ２が有用であり、そしてヒト２９３細胞にて増殖
され得る。これらの細胞は、アデノウイルスのＥ１領域を含み、そして構成的に
ＥｌａおよびＥｌｂを発現し、このことは、このベクターから欠失している遺伝
子の産物を提供することによって欠損アデノウイルスを補完する。Ａｄ２に加え
て、他の多様なアデノウイルス（例えば、Ａｄ３、Ａｄ５、およびＡｄ７）もま
た、本発明において有用である。
ａｒｓｋｙおよびＷｉｌｓｏｎ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖｅｌ
．、３：４９９〜５０３（１９９３）；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら、Ｃｅｌｌ、６８
：１４３〜１５５（１９９２）；Ｅｎｇｅｌｈａｒｄｔら、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎ
ｅｔ．Ｔｈｅｒ．、４：７５９〜７６９（１９９３）；Ｙａｎｇら、Ｎａｔｕｒ
ｅ Ｇｅｎｅｔ、７：３６２〜３６９（１９９４）；Ｗｉｌｓｏｎら、Ｎａｔｕ
ｒｅ、３６５:６９１〜６９２（１９９３）；および米国特許第５，６５２，２
２４号に記載されており、これらは本明細書中で参考として援用される。例えば
、アデノウイルスベクターＡｄ２が有用であり、そしてヒト２９３細胞にて増殖
され得る。これらの細胞は、アデノウイルスのＥ１領域を含み、そして構成的に
ＥｌａおよびＥｌｂを発現し、このことは、このベクターから欠失している遺伝
子の産物を提供することによって欠損アデノウイルスを補完する。Ａｄ２に加え
て、他の多様なアデノウイルス（例えば、Ａｄ３、Ａｄ５、およびＡｄ７）もま
た、本発明において有用である。
【０３６４】
好ましくは、本発明において使用されるアデノウイルスは、複製欠損性である
。複製欠損アデノウイルスは、感染性粒子を形成するために、ヘルパーウイルス
および／またはパッケージング細胞株の助けを必要とする。得られたウイルスは
、細胞に感染する能力があり、そしてプロモーターに作動可能に連結された目的
のポリヌクレオチドを発現し得るが、ほとんどの細胞にて複製し得ない。複製欠
損アデノウイルスは、次の遺伝子：Ｅ１ａ、Ｅ１ｂ、Ｅ３、Ｅ４、Ｅ２ａまたは
Ｌ１からＬ５までのすべてまたは一部のうちの１つ以上にて欠失され得る。
。複製欠損アデノウイルスは、感染性粒子を形成するために、ヘルパーウイルス
および／またはパッケージング細胞株の助けを必要とする。得られたウイルスは
、細胞に感染する能力があり、そしてプロモーターに作動可能に連結された目的
のポリヌクレオチドを発現し得るが、ほとんどの細胞にて複製し得ない。複製欠
損アデノウイルスは、次の遺伝子：Ｅ１ａ、Ｅ１ｂ、Ｅ３、Ｅ４、Ｅ２ａまたは
Ｌ１からＬ５までのすべてまたは一部のうちの１つ以上にて欠失され得る。
【０３６５】
特定の他の実施形態において、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を使用して、エ
キソビボまたはインビボでこの細胞を操作する。ＡＡＶは、感染性粒子を生成す
るためにヘルパーウイルスを必要とする、天然に存在する欠損ウイルスである（
Ｍｕｚｙｃｚｋａ，Ｎ．，Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５８：９７（１９９２））。ＡＡＶはまた、分裂中では
ない細胞の中にそのＤＮＡを組み込み得る数少ないウイルスの中の１つである。
３００塩基対程度の小さいＡＡＶを含むベクターがパッケージされ得、そして組
み込み得るが、外来性ＤＮＡのためのスペースは約４．５ｋｂに限られる。その
ようなＡＡＶの生成および使用の方法は当該分野で公知である。例えば、米国特
許第５，１３９，９４１号、同第５，１７３，４１４号、同第５，３５４，６７
８号、同第５，４３６，１４６号、同第５，４７４，９３５号、同第５，４７８
，７４５号および同第５，５８９，３７７号を参照のこと。
キソビボまたはインビボでこの細胞を操作する。ＡＡＶは、感染性粒子を生成す
るためにヘルパーウイルスを必要とする、天然に存在する欠損ウイルスである（
Ｍｕｚｙｃｚｋａ，Ｎ．，Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５８：９７（１９９２））。ＡＡＶはまた、分裂中では
ない細胞の中にそのＤＮＡを組み込み得る数少ないウイルスの中の１つである。
３００塩基対程度の小さいＡＡＶを含むベクターがパッケージされ得、そして組
み込み得るが、外来性ＤＮＡのためのスペースは約４．５ｋｂに限られる。その
ようなＡＡＶの生成および使用の方法は当該分野で公知である。例えば、米国特
許第５，１３９，９４１号、同第５，１７３，４１４号、同第５，３５４，６７
８号、同第５，４３６，１４６号、同第５，４７４，９３５号、同第５，４７８
，７４５号および同第５，５８９，３７７号を参照のこと。
【０３６６】
例えば、本発明において使用するために適切なＡＡＶベクターは、ＤＮＡ複製
、キャプシド形成、および宿主細胞組み込みに必要な配列すべてを含む。Ｓａｍ
ｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（１９
８９）において見い出される方法のような、標準的クローニング方法を使用して
、ポリヌクレオチド構築物を、このＡＡＶベクターに挿入する。次いで、リポフ
ェクション、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿などを含む、任意
の標準的技術を使用して、この組み換えＡＡＶベクターを、ヘルパーウイルスに
感染しているパッケージング細胞にトランスフェクトする。適切なヘルパーウイ
ルスとしては、アデノウイルス、サイトメガロウイルス、ワクシニアウイルス、
またはヘルペスウイルスが挙げられる。一旦パッケージング細胞がトランスフェ
クトおよび感染されると、それらはポリヌクレオチド構築物を含む感染性ＡＡＶ
ウイルス粒子を生成する。次いで、エキソビボまたはインビボのいずれかで、こ
れらのウイルス粒子を使用して真核生物細胞を形質導入する。この形質導入細胞
は、そのゲノムに組み込まれたポリヌクレオチド構築物を含み、そして本発明の
ポリペプチドを発現する。
、キャプシド形成、および宿主細胞組み込みに必要な配列すべてを含む。Ｓａｍ
ｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（１９
８９）において見い出される方法のような、標準的クローニング方法を使用して
、ポリヌクレオチド構築物を、このＡＡＶベクターに挿入する。次いで、リポフ
ェクション、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿などを含む、任意
の標準的技術を使用して、この組み換えＡＡＶベクターを、ヘルパーウイルスに
感染しているパッケージング細胞にトランスフェクトする。適切なヘルパーウイ
ルスとしては、アデノウイルス、サイトメガロウイルス、ワクシニアウイルス、
またはヘルペスウイルスが挙げられる。一旦パッケージング細胞がトランスフェ
クトおよび感染されると、それらはポリヌクレオチド構築物を含む感染性ＡＡＶ
ウイルス粒子を生成する。次いで、エキソビボまたはインビボのいずれかで、こ
れらのウイルス粒子を使用して真核生物細胞を形質導入する。この形質導入細胞
は、そのゲノムに組み込まれたポリヌクレオチド構築物を含み、そして本発明の
ポリペプチドを発現する。
【０３６７】
遺伝子治療の別の方法は、相同組み換え（例えば、米国特許第５，６４１，６
７０号、１９９７年６月２４日発行；国際公開第ＷＯ９６／２９４１１号、１９
９６年９月２６日公開；国際公開第ＷＯ９４／１２６５０号、１９９４年８月４
日公開；Ｋｏｌｌｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８
６：８９３２〜８９３５（１９８９）；およびＺｉｊｌｓｔｒａら、Ｎａｔｕｒ
ｅ、３４２：４３５〜４３８（１９８９）を参照のこと）を介して、異種制御領
域および内在性ポリヌクレオチド配列（例えば、本発明のポリペプチドをコード
している配列）を作動可能に連結する工程を含む。この方法は、標的細胞中に存
在しているが、通常はその細胞中で発現しないかまたは所望するよりも低いレベ
ルで発現する、遺伝子の活性化を含む。
７０号、１９９７年６月２４日発行；国際公開第ＷＯ９６／２９４１１号、１９
９６年９月２６日公開；国際公開第ＷＯ９４／１２６５０号、１９９４年８月４
日公開；Ｋｏｌｌｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８
６：８９３２〜８９３５（１９８９）；およびＺｉｊｌｓｔｒａら、Ｎａｔｕｒ
ｅ、３４２：４３５〜４３８（１９８９）を参照のこと）を介して、異種制御領
域および内在性ポリヌクレオチド配列（例えば、本発明のポリペプチドをコード
している配列）を作動可能に連結する工程を含む。この方法は、標的細胞中に存
在しているが、通常はその細胞中で発現しないかまたは所望するよりも低いレベ
ルで発現する、遺伝子の活性化を含む。
【０３６８】
当該分野で既知の標準的技術を使用して、ポリヌクレオチド構築物を作製する
。この構築物は、プロモーターを、そのプロモーターに隣接した標的化配列とと
もに含む。適切なプロモーターが、本明細書中に記載されている。標的化配列は
、内在性配列に対して十分に相補的であり、プロモーター−標的化配列と内在性
配列との相同組換えを可能にする。標的化配列は、所望される内在性ポリヌクレ
オチド配列の５’末端の十分近くに存在し、それゆえ、相同組換えに際して、プ
ロモーターは、内在性配列に作動可能に連結される。
。この構築物は、プロモーターを、そのプロモーターに隣接した標的化配列とと
もに含む。適切なプロモーターが、本明細書中に記載されている。標的化配列は
、内在性配列に対して十分に相補的であり、プロモーター−標的化配列と内在性
配列との相同組換えを可能にする。標的化配列は、所望される内在性ポリヌクレ
オチド配列の５’末端の十分近くに存在し、それゆえ、相同組換えに際して、プ
ロモーターは、内在性配列に作動可能に連結される。
【０３６９】
このプロモーターおよび標的化配列は、ＰＣＲを使用して増幅され得る。好ま
しくは、この増幅されたプロモーターは、５’末端および３’末端に別の制限酵
素部位を含む。好ましくは、第１の標的化配列の３’末端は、増幅されたプロモ
ーターの５’末端と同じ制限酵素部位を含み、そして第２の標的化配列の５’末
端は、増幅されたプロモーターの３’末端と同じ制限部位を含む。増幅されたプ
ロモーターおよび標的化配列を消化し、そしてともに連結する。
しくは、この増幅されたプロモーターは、５’末端および３’末端に別の制限酵
素部位を含む。好ましくは、第１の標的化配列の３’末端は、増幅されたプロモ
ーターの５’末端と同じ制限酵素部位を含み、そして第２の標的化配列の５’末
端は、増幅されたプロモーターの３’末端と同じ制限部位を含む。増幅されたプ
ロモーターおよび標的化配列を消化し、そしてともに連結する。
【０３７０】
裸のポリヌクレオチドとしてか、もしくは上記により詳細に記載されるような
リポソーム、ウイルス配列、ウイルス粒子、ウイルス全体、リポフェクション、
沈殿剤などのようなトランスフェクション促進剤と一緒にかのいずれかで、この
プロモーター−標的化配列構築物を細胞に送達する。直接針注射、静脈内注射、
局所投与、カテーテル注入、粒子加速器などを含む任意の方法により、Ｐプロモ
ーター−標的化配列を送達し得る。この方法を、下記により詳細に記載する。
リポソーム、ウイルス配列、ウイルス粒子、ウイルス全体、リポフェクション、
沈殿剤などのようなトランスフェクション促進剤と一緒にかのいずれかで、この
プロモーター−標的化配列構築物を細胞に送達する。直接針注射、静脈内注射、
局所投与、カテーテル注入、粒子加速器などを含む任意の方法により、Ｐプロモ
ーター−標的化配列を送達し得る。この方法を、下記により詳細に記載する。
【０３７１】
プロモーター−標的化配列構築物は、細胞により取り込まれる。この構築物と
内在性配列との間に相同組換えが起こり、その結果、内在性配列は、このプロモ
ーターの制御下に配置される。次いで、このプロモーターは、内在性配列の発現
を駆動する。
内在性配列との間に相同組換えが起こり、その結果、内在性配列は、このプロモ
ーターの制御下に配置される。次いで、このプロモーターは、内在性配列の発現
を駆動する。
【０３７２】
好ましくは、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、そのタ
ンパク質の分泌を促進する分泌シグナル配列を含む。代表的に、このシグナル配
列は、ポリヌクレオチドのコード領域の５’末端に向かってかまたは５’末端で
発現される、そのポリヌクレオチドのコード領域に位置する。このシグナル配列
は、目的のポリヌクレオチドに対して同種または異種であり得、そしてトランス
フェクトされる細胞に対して同種または異種であり得る。さらに、当該分野で公
知の方法を使用して、このシグナル配列は化学合成され得る。
ンパク質の分泌を促進する分泌シグナル配列を含む。代表的に、このシグナル配
列は、ポリヌクレオチドのコード領域の５’末端に向かってかまたは５’末端で
発現される、そのポリヌクレオチドのコード領域に位置する。このシグナル配列
は、目的のポリヌクレオチドに対して同種または異種であり得、そしてトランス
フェクトされる細胞に対して同種または異種であり得る。さらに、当該分野で公
知の方法を使用して、このシグナル配列は化学合成され得る。
【０３７３】
その投与形態によって、治療効果を提供するのに十分な量にて１つ以上の分子
が発現される限り、上記のポリヌクレオチド構築物のうちのいずれかの任意の投
与形態が使用され得る。これは、直接針注射、全身注射、カテーテル注入、バイ
オリスティック（ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ）注射器、粒子加速器（すなわち、「遺伝
子銃」）、ゲルフォームスポンジデポー（ｄｅｐｏｔ）、他の市販デポー（ｄｅ
ｐｏｔ）物質、浸透圧ポンプ（例えば、Ａｌｚａミニポンプ）、経口用または坐
剤用の固形（錠剤または丸剤）薬学的処方物、および手術中のデカンティングま
たは局所適用を含む。例えば、ラット肝臓およびラット脾臓へのリン酸カルシウ
ム沈澱した裸のプラスミドの直接注射、または門脈へのタンパク質被覆プラスミ
ド直接注射は、ラット肝臓における外来遺伝子の遺伝子発現をもたらした（Ｋａ
ｎｅｄａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４３：３７５（１９８９））。
が発現される限り、上記のポリヌクレオチド構築物のうちのいずれかの任意の投
与形態が使用され得る。これは、直接針注射、全身注射、カテーテル注入、バイ
オリスティック（ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ）注射器、粒子加速器（すなわち、「遺伝
子銃」）、ゲルフォームスポンジデポー（ｄｅｐｏｔ）、他の市販デポー（ｄｅ
ｐｏｔ）物質、浸透圧ポンプ（例えば、Ａｌｚａミニポンプ）、経口用または坐
剤用の固形（錠剤または丸剤）薬学的処方物、および手術中のデカンティングま
たは局所適用を含む。例えば、ラット肝臓およびラット脾臓へのリン酸カルシウ
ム沈澱した裸のプラスミドの直接注射、または門脈へのタンパク質被覆プラスミ
ド直接注射は、ラット肝臓における外来遺伝子の遺伝子発現をもたらした（Ｋａ
ｎｅｄａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４３：３７５（１９８９））。
【０３７４】
局所投与の好ましい方法は、直接注射によるものである。好ましくは、送達ビ
ヒクルと複合体を形成した本発明の組換え分子は、動脈領域内部に直接注射によ
り投与されるか、または動脈領域内部に局所投与される。動脈領域内部での組成
物の局所投与とは、その組成物を動脈内に数センチメートル、好ましくは数ミリ
メートルで注射することを言う。
ヒクルと複合体を形成した本発明の組換え分子は、動脈領域内部に直接注射によ
り投与されるか、または動脈領域内部に局所投与される。動脈領域内部での組成
物の局所投与とは、その組成物を動脈内に数センチメートル、好ましくは数ミリ
メートルで注射することを言う。
【０３７５】
局所投与の別の方法は、外科的創傷内またはその周辺に本発明のポリヌクレオ
チド構築物を接触させることである。例えば、患者は手術を経験し得、そしてこ
のポリヌクレオチド構築物を創傷内部の組織表面上に被覆され得るか、またはそ
の構築物を創傷内部の組織領域に注射され得る。
チド構築物を接触させることである。例えば、患者は手術を経験し得、そしてこ
のポリヌクレオチド構築物を創傷内部の組織表面上に被覆され得るか、またはそ
の構築物を創傷内部の組織領域に注射され得る。
【０３７６】
全身投与に有用な治療組成物は、本発明の標的化された送達ビヒクルと複合体
を形成した本発明の組換え分子を含む。全身投与で使用するために適切な送達ビ
ヒクルは、特定部位に対してそのビヒクルを標的化するリガンドを含むリポソー
ムを含む。
を形成した本発明の組換え分子を含む。全身投与で使用するために適切な送達ビ
ヒクルは、特定部位に対してそのビヒクルを標的化するリガンドを含むリポソー
ムを含む。
【０３７７】
全身投与の好ましい方法としては、静脈内注射、エアロゾル、経口および経皮
（局所的）送達が挙げられる。当該分野で標準的な方法を使用して、静脈内注射
が実行され得る。当該分野で標準的な方法を使用して、エアロゾル送達もまた実
行され得る（例えば、本明細書中で参考として援用される、Ｓｔｒｉｂｌｉｎｇ
ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１８９：１１２７７〜１
１２８１、１９９２を参照のこと）。動物の腸内の消化酵素による分解に耐える
能力をもつキャリアに対して本発明のポリヌクレオチド構築物が複合体を形成す
ることにより、経口送達は実行され得る。そのようなキャリアの例としては、当
該分野で公知であるもののような、プラスチックカプセルまたは錠剤が挙げられ
る。皮膚内へ通過可能な親油性試薬（例えば、ＤＭＳＯ）と本発明のポリヌクレ
オチド構築物を混合することによって、局所的送達は実行され得る。
（局所的）送達が挙げられる。当該分野で標準的な方法を使用して、静脈内注射
が実行され得る。当該分野で標準的な方法を使用して、エアロゾル送達もまた実
行され得る（例えば、本明細書中で参考として援用される、Ｓｔｒｉｂｌｉｎｇ
ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１８９：１１２７７〜１
１２８１、１９９２を参照のこと）。動物の腸内の消化酵素による分解に耐える
能力をもつキャリアに対して本発明のポリヌクレオチド構築物が複合体を形成す
ることにより、経口送達は実行され得る。そのようなキャリアの例としては、当
該分野で公知であるもののような、プラスチックカプセルまたは錠剤が挙げられ
る。皮膚内へ通過可能な親油性試薬（例えば、ＤＭＳＯ）と本発明のポリヌクレ
オチド構築物を混合することによって、局所的送達は実行され得る。
【０３７８】
送達される物質の有効量を決定することは、例えば、その物質の化学構造およ
び生物学的活性、動物の年齢および体重、処置を必要とする正確な状態およびそ
の重症度、ならびに投与経路を含む、多数の因子に依存し得る。処置の頻度は、
１用量あたりの投与されるポリヌクレオチド構築物の量ならびに被験体の健康お
よび病歴のような多くの因子に依存する。正確な量、投薬回数および投薬のタイ
ミングは、主治医または主治獣医により決定される。
び生物学的活性、動物の年齢および体重、処置を必要とする正確な状態およびそ
の重症度、ならびに投与経路を含む、多数の因子に依存し得る。処置の頻度は、
１用量あたりの投与されるポリヌクレオチド構築物の量ならびに被験体の健康お
よび病歴のような多くの因子に依存する。正確な量、投薬回数および投薬のタイ
ミングは、主治医または主治獣医により決定される。
【０３７９】
本発明の治療的組成物は、任意の動物に、好ましくは哺乳動物および鳥類に投
与され得る。好ましい哺乳動物としては、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、ラット、
ウサギ、ヒツジ、ウシ、ウマおよびブタが挙げられ、特にヒトが好ましい。
与され得る。好ましい哺乳動物としては、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、ラット、
ウサギ、ヒツジ、ウシ、ウマおよびブタが挙げられ、特にヒトが好ましい。
【０３８０】
（生物学的活性）
本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくは
アンタゴニストをアッセイに使用し、１つ以上の生物学的活性について試験し得
る。本発明のこれらのポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニス
トもしくはアンタゴニストが特定のアッセイにおいて活性を示す場合、これらの
分子はその生物学的活性に関連した疾患に関与し得るようである。従って、この
ポリヌクレオチドおよびポリペプチド、ならびにアゴニストもしくはアンタゴニ
ストを使用し、関連した疾患を処置し得る。
アンタゴニストをアッセイに使用し、１つ以上の生物学的活性について試験し得
る。本発明のこれらのポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニス
トもしくはアンタゴニストが特定のアッセイにおいて活性を示す場合、これらの
分子はその生物学的活性に関連した疾患に関与し得るようである。従って、この
ポリヌクレオチドおよびポリペプチド、ならびにアゴニストもしくはアンタゴニ
ストを使用し、関連した疾患を処置し得る。
【０３８１】
ＡＢＣトランスポートファミリーのタンパク質のメンバーは、細胞膜を横切る
種々の溶質の輸送に関する生物学的活性に関与すると考えられている。従って、
本発明の組成物（本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチドおよび抗体、ならび
にそのフラグメントおよび改変体を含む）は、異常なＡＢＣトランスポーター活
性と関連する疾患および／または障害の診断、検出、および／または処置におい
て用いられ得る。好ましい実施形態において、本発明の組成物（本発明のポリヌ
クレオチド、ポリペプチドおよび抗体、ならびにそのフラグメントおよび改変体
を含む）は、血液障害に関連する疾患および／または障害（例えば、タンジアー
病ならびに／または以下の「免疫活性」および「心血管系障害」において記載さ
れるものなど）、嚢胞性線維症、多剤耐性、若年期家族性持続性高インスリン性
低血糖症、およびウイルス感染に関する適切な抗原提示（例えば、ウイルス感染
、および／または以下の「免疫活性」で記載されるものなど）の診断、検出、お
よび／または処置において用いられ得る。本発明のポリヌクレオチド、翻訳産物
、および抗体は、嚢胞性線維症、多剤耐性、若年期家族性持続性高インスリン性
低血糖症、タンジアー病、および抗原プロセシングを含むがこれに限定されない
活性に関連する疾患および／または障害の診断、検出および／または処置におい
て有用である。
種々の溶質の輸送に関する生物学的活性に関与すると考えられている。従って、
本発明の組成物（本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチドおよび抗体、ならび
にそのフラグメントおよび改変体を含む）は、異常なＡＢＣトランスポーター活
性と関連する疾患および／または障害の診断、検出、および／または処置におい
て用いられ得る。好ましい実施形態において、本発明の組成物（本発明のポリヌ
クレオチド、ポリペプチドおよび抗体、ならびにそのフラグメントおよび改変体
を含む）は、血液障害に関連する疾患および／または障害（例えば、タンジアー
病ならびに／または以下の「免疫活性」および「心血管系障害」において記載さ
れるものなど）、嚢胞性線維症、多剤耐性、若年期家族性持続性高インスリン性
低血糖症、およびウイルス感染に関する適切な抗原提示（例えば、ウイルス感染
、および／または以下の「免疫活性」で記載されるものなど）の診断、検出、お
よび／または処置において用いられ得る。本発明のポリヌクレオチド、翻訳産物
、および抗体は、嚢胞性線維症、多剤耐性、若年期家族性持続性高インスリン性
低血糖症、タンジアー病、および抗原プロセシングを含むがこれに限定されない
活性に関連する疾患および／または障害の診断、検出および／または処置におい
て有用である。
【０３８２】
より一般的には、この遺伝子に対応するポリヌクレオチド、翻訳産物、および
抗体は、以下の系に関連する疾患および／または障害の診断、検出および／また
は処置に有用であり得る。
抗体は、以下の系に関連する疾患および／または障害の診断、検出および／また
は処置に有用であり得る。
【０３８３】
（免疫活性）
本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくは
アンタゴニストは、免疫細胞の増殖、分化、もしくは動員（走化性）を活性化ま
たは阻害することにより、免疫系の欠損または障害の処置において有用であり得
る。免疫細胞は、造血と呼ばれるプロセスを介して発達し、多能性幹細胞から骨
髄性細胞（血小板、赤血球、好中球およびマクロファージ）およびリンパ系細胞
（Ｂリンパ球およびＴリンパ球）を生成する。これら免疫の欠損または障害の病
因は、遺伝的、身体的（ｓｏｍａｔｉｃ）（例えば、癌またはいくつかの自己免
疫性障害）、後天的（例えば、化学療法もしくは毒素による）または感染的であ
り得る。さらに、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴ
ニストもしくはアンタゴニストは、特定の免疫系の疾患または障害のマーカーま
たは検出物質（ｄｅｔｅｃｔｏｒ）として使用され得る。
アンタゴニストは、免疫細胞の増殖、分化、もしくは動員（走化性）を活性化ま
たは阻害することにより、免疫系の欠損または障害の処置において有用であり得
る。免疫細胞は、造血と呼ばれるプロセスを介して発達し、多能性幹細胞から骨
髄性細胞（血小板、赤血球、好中球およびマクロファージ）およびリンパ系細胞
（Ｂリンパ球およびＴリンパ球）を生成する。これら免疫の欠損または障害の病
因は、遺伝的、身体的（ｓｏｍａｔｉｃ）（例えば、癌またはいくつかの自己免
疫性障害）、後天的（例えば、化学療法もしくは毒素による）または感染的であ
り得る。さらに、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴ
ニストもしくはアンタゴニストは、特定の免疫系の疾患または障害のマーカーま
たは検出物質（ｄｅｔｅｃｔｏｒ）として使用され得る。
【０３８４】
本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくは
アンタゴニストは、造血細胞の欠損または障害の処置または検出において有用で
あり得る。本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニスト
もしくはアンタゴニストは、特定の（または多くの）型の造血細胞の減少に関連
した障害を処置する試みにおいて、多能性幹細胞を含む造血細胞の分化および増
殖を増加させるために用いられ得る。免疫不全症候群の例としては、血液タンパ
ク質の障害（例えば、無ガンマグロブリン血症、低ガンマグロブリン血症）、毛
細血管拡張性運動失調、分類不能型免疫不全、ディ・ジョージ症候群、ＨＩＶ感
染、ＨＴＬＶ−ＢＬＶ感染、白血球接着不全症候群、リンパ球減少、食細胞殺細
菌機能不全、重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）、ヴィスコット−オールドリッチ
障害、貧血、血小板減少、またはヘモグロビン尿症が挙げられるが、それらに限
定されない。
アンタゴニストは、造血細胞の欠損または障害の処置または検出において有用で
あり得る。本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニスト
もしくはアンタゴニストは、特定の（または多くの）型の造血細胞の減少に関連
した障害を処置する試みにおいて、多能性幹細胞を含む造血細胞の分化および増
殖を増加させるために用いられ得る。免疫不全症候群の例としては、血液タンパ
ク質の障害（例えば、無ガンマグロブリン血症、低ガンマグロブリン血症）、毛
細血管拡張性運動失調、分類不能型免疫不全、ディ・ジョージ症候群、ＨＩＶ感
染、ＨＴＬＶ−ＢＬＶ感染、白血球接着不全症候群、リンパ球減少、食細胞殺細
菌機能不全、重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）、ヴィスコット−オールドリッチ
障害、貧血、血小板減少、またはヘモグロビン尿症が挙げられるが、それらに限
定されない。
【０３８５】
さらに、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニスト
もしくはアンタゴニストをまた使用して、止血性活性（出血を止めること）また
は血栓崩壊活性（血餅形成）を調節し得る。例えば、止血活性または血栓崩壊活
性を増大させることにより、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、
またはアゴニストもしくはアンタゴニストを使用し、血液凝固の障害（例えば、
無線維素原血症、因子欠損症）、血液血小板の障害（例えば、血小板減少症）、
あるいは外傷、手術または他の原因から生じる創傷を処置し得る。あるいは、止
血活性または血栓崩壊活性を減少させ得る本発明のポリヌクレオチドもしくはポ
リペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストを使用し、凝血を阻害ま
たは溶解し得る。心臓発作（梗塞）、発作（ｓｔｒｏｋｅ）または瘢痕の処置に
おいて、これらの分子は重要であり得る。
もしくはアンタゴニストをまた使用して、止血性活性（出血を止めること）また
は血栓崩壊活性（血餅形成）を調節し得る。例えば、止血活性または血栓崩壊活
性を増大させることにより、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、
またはアゴニストもしくはアンタゴニストを使用し、血液凝固の障害（例えば、
無線維素原血症、因子欠損症）、血液血小板の障害（例えば、血小板減少症）、
あるいは外傷、手術または他の原因から生じる創傷を処置し得る。あるいは、止
血活性または血栓崩壊活性を減少させ得る本発明のポリヌクレオチドもしくはポ
リペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストを使用し、凝血を阻害ま
たは溶解し得る。心臓発作（梗塞）、発作（ｓｔｒｏｋｅ）または瘢痕の処置に
おいて、これらの分子は重要であり得る。
【０３８６】
自己免疫障害の処置または検出において、本発明のポリヌクレオチドもしくは
ポリペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストはまた、有用であり得
る。多くの自己免疫障害は、免疫細胞によって外来性物質として不適切に自己認
識することから生じる。この不適切な認識は、宿主組織の破壊をもたらす免疫応
答を引き起こす。従って、免疫応答、特にＴ細胞の増殖、分化または走化性を阻
害し得る本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストも
しくはアンタゴニストの投与は、自己免疫障害の防止において効果的な治療であ
り得る。
ポリペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストはまた、有用であり得
る。多くの自己免疫障害は、免疫細胞によって外来性物質として不適切に自己認
識することから生じる。この不適切な認識は、宿主組織の破壊をもたらす免疫応
答を引き起こす。従って、免疫応答、特にＴ細胞の増殖、分化または走化性を阻
害し得る本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストも
しくはアンタゴニストの投与は、自己免疫障害の防止において効果的な治療であ
り得る。
【０３８７】
処置または検出され得る自己免疫障害の例としては、アディソン病、溶血性貧
血、抗リン脂質症候群、慢性関節リウマチ、皮膚炎、アレルギー性脳脊髄炎、糸
球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーヴズ病、多発性硬化症、重症筋無力
症、神経炎、眼炎、水疱性類天疱瘡、類天疱瘡、多発性内分泌腺症、紫斑病、ラ
イター病、スティッフマン症候群、自己免疫性甲状腺炎、全身性エリテマトーデ
ス、自己免疫性の肺の炎症、ギヤン−バレー症候群、インスリン依存性糖尿病、
および自己免疫炎症性眼疾患が挙げられるが、それらに限定されない。
血、抗リン脂質症候群、慢性関節リウマチ、皮膚炎、アレルギー性脳脊髄炎、糸
球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーヴズ病、多発性硬化症、重症筋無力
症、神経炎、眼炎、水疱性類天疱瘡、類天疱瘡、多発性内分泌腺症、紫斑病、ラ
イター病、スティッフマン症候群、自己免疫性甲状腺炎、全身性エリテマトーデ
ス、自己免疫性の肺の炎症、ギヤン−バレー症候群、インスリン依存性糖尿病、
および自己免疫炎症性眼疾患が挙げられるが、それらに限定されない。
【０３８８】
同様に、ぜん息（特にアレルギー性ぜん息）または他の呼吸の問題のような、
アレルギー反応およびアレルギー状態もまた、本発明のポリヌクレオチドもしく
はポリペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストにより処置され得る
。さらに、これらの分子を使用し、抗原性分子に対するアナフィラキシー、過敏
症または血液型不適合性を処置し得る。
アレルギー反応およびアレルギー状態もまた、本発明のポリヌクレオチドもしく
はポリペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストにより処置され得る
。さらに、これらの分子を使用し、抗原性分子に対するアナフィラキシー、過敏
症または血液型不適合性を処置し得る。
【０３８９】
本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくは
アンタゴニストをまた使用し、器官拒絶または対宿主性移植片病（ＧＶＨＤ）を
処置および／または予防し得る。器官拒絶は、免疫応答を介して宿主免疫細胞に
よる移植組織の破壊によって起こる。同様に、免疫応答はＧＶＨＤにもまた関与
しているが、この場合、外来性の移植免疫細胞が宿主組織を破壊する。免疫応答
、特にＴ細胞の増殖、分化または走化性を阻害する、本発明のポリヌクレオチド
もしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストの投与は、器
官拒絶またはＧＶＨＤの防止において効果的な治療であり得る。
アンタゴニストをまた使用し、器官拒絶または対宿主性移植片病（ＧＶＨＤ）を
処置および／または予防し得る。器官拒絶は、免疫応答を介して宿主免疫細胞に
よる移植組織の破壊によって起こる。同様に、免疫応答はＧＶＨＤにもまた関与
しているが、この場合、外来性の移植免疫細胞が宿主組織を破壊する。免疫応答
、特にＴ細胞の増殖、分化または走化性を阻害する、本発明のポリヌクレオチド
もしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストの投与は、器
官拒絶またはＧＶＨＤの防止において効果的な治療であり得る。
【０３９０】
同様に、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニスト
もしくはアンタゴニストをもまた使用し、炎症を調節し得る。例えば、このポリ
ヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニスト
は、炎症応答に関与する細胞の増殖および分化を阻害し得る。これらの分子を使
用して、慢性の前立腺炎、肉芽腫性前立腺炎およびマラコプラキア、感染に関連
する炎症（例えば、敗血症性ショック、敗血症、または全身炎症応答症候群（Ｓ
ＩＲＳ））、虚血再灌流傷害に関連する炎症、内毒素致死に関連する炎症、関節
炎に関連する炎症、補体媒介性超急性拒絶に関連する炎症、腎炎に関連する炎症
、サイトカインまたはケモカインが誘導する肺傷害に関連する炎症、炎症性腸疾
患に関連する炎症、クローン病に関連する炎症またはサイトカイン（例えば、Ｔ
ＮＦまたはＩＬ−１）の過剰生成から生じる炎症を含む、慢性および急性の両方
の状態の炎症状態を処置し得る。
もしくはアンタゴニストをもまた使用し、炎症を調節し得る。例えば、このポリ
ヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニスト
は、炎症応答に関与する細胞の増殖および分化を阻害し得る。これらの分子を使
用して、慢性の前立腺炎、肉芽腫性前立腺炎およびマラコプラキア、感染に関連
する炎症（例えば、敗血症性ショック、敗血症、または全身炎症応答症候群（Ｓ
ＩＲＳ））、虚血再灌流傷害に関連する炎症、内毒素致死に関連する炎症、関節
炎に関連する炎症、補体媒介性超急性拒絶に関連する炎症、腎炎に関連する炎症
、サイトカインまたはケモカインが誘導する肺傷害に関連する炎症、炎症性腸疾
患に関連する炎症、クローン病に関連する炎症またはサイトカイン（例えば、Ｔ
ＮＦまたはＩＬ−１）の過剰生成から生じる炎症を含む、慢性および急性の両方
の状態の炎症状態を処置し得る。
【０３９１】
（過剰増殖障害）
本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくは
アンタゴニストを使用し、新生物を含む過剰増殖障害を処置または検出し得る。
本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくはア
ンタゴニストは、直接的または間接的な相互作用を介してこの障害の増殖を阻害
し得る。あるいは、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはア
ゴニストもしくはアンタゴニストは、過剰増殖障害を阻害し得る他の細胞を増殖
し得る。
アンタゴニストを使用し、新生物を含む過剰増殖障害を処置または検出し得る。
本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくはア
ンタゴニストは、直接的または間接的な相互作用を介してこの障害の増殖を阻害
し得る。あるいは、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはア
ゴニストもしくはアンタゴニストは、過剰増殖障害を阻害し得る他の細胞を増殖
し得る。
【０３９２】
例えば、免疫応答を増大させること、特に過剰増殖障害の抗原性の質を増大さ
せることによって、またはＴ細胞を増殖、分化、もしくは動員することによって
、過剰増殖障害を処置し得る。既存の免疫応答を増強するか、または新たな免疫
応答を開始するかのいずれかによって、この免疫応答を増大させ得る。あるいは
、免疫応答を減少させることもまた、化学療法剤のような、過剰増殖障害を処置
する方法であり得る。
せることによって、またはＴ細胞を増殖、分化、もしくは動員することによって
、過剰増殖障害を処置し得る。既存の免疫応答を増強するか、または新たな免疫
応答を開始するかのいずれかによって、この免疫応答を増大させ得る。あるいは
、免疫応答を減少させることもまた、化学療法剤のような、過剰増殖障害を処置
する方法であり得る。
【０３９３】
本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくは
アンタゴニストによって処置または検出され得る過剰増殖障害の例としては、結
腸、腹部、骨、乳房、消化器系、肝臓、膵臓、腹膜、内分泌腺（副腎、上皮小体
、下垂体、精巣、卵巣、胸腺、甲状腺）、眼、頭部および頸部、神経（中枢およ
び末梢）、リンパ系、骨盤、皮膚、軟組織、脾臓、胸部、ならびに泌尿生殖器に
位置する新生物が挙げられるが、これらに限定されない。
アンタゴニストによって処置または検出され得る過剰増殖障害の例としては、結
腸、腹部、骨、乳房、消化器系、肝臓、膵臓、腹膜、内分泌腺（副腎、上皮小体
、下垂体、精巣、卵巣、胸腺、甲状腺）、眼、頭部および頸部、神経（中枢およ
び末梢）、リンパ系、骨盤、皮膚、軟組織、脾臓、胸部、ならびに泌尿生殖器に
位置する新生物が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３９４】
同様に、他の過剰増殖障害もまた、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペ
プチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストにより処置または検出され得
る。このような過剰増殖性障害の例としては、以下が挙げられるがこれらに限定
されない：高ガンマグロブリン血症、リンパ球増殖性障害、パラプロテイン血症
、紫斑、サルコイドーシス、セザリー症候群、ヴァルデンストレームマクログロ
ブリン血症、ゴシェ病、組織球増殖症、および任意の他の過剰増殖性疾患、加え
て上記に列挙した器官系に見出される新生物。
プチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストにより処置または検出され得
る。このような過剰増殖性障害の例としては、以下が挙げられるがこれらに限定
されない：高ガンマグロブリン血症、リンパ球増殖性障害、パラプロテイン血症
、紫斑、サルコイドーシス、セザリー症候群、ヴァルデンストレームマクログロ
ブリン血症、ゴシェ病、組織球増殖症、および任意の他の過剰増殖性疾患、加え
て上記に列挙した器官系に見出される新生物。
【０３９５】
本発明のポリヌクレオチドを利用する１つの好ましい実施形態は、本発明およ
び／または融合タンパク質もしくはそのフラグメントを用いる遺伝子治療によっ
て、異常な細胞分裂を阻害することである。
び／または融合タンパク質もしくはそのフラグメントを用いる遺伝子治療によっ
て、異常な細胞分裂を阻害することである。
【０３９６】
従って、本発明は、本発明のポリヌクレオチドを異常に増殖している細胞に挿
入することによって、細胞増殖性障害を処置するための方法を提供し、ここでこ
のポリヌクレオチドはこの発現を示す。
入することによって、細胞増殖性障害を処置するための方法を提供し、ここでこ
のポリヌクレオチドはこの発現を示す。
【０３９７】
本発明の別の実施形態は、個体における細胞増殖性障害を処置する方法を提供
し、この方法は、本発明の１以上の活性遺伝子コピーを異常に増殖している１つ
の細胞または複数の細胞に投与することを包含する。好ましい実施形態において
は、本発明のポリヌクレオチドは、このポリヌクレオチドをコードするＤＮＡ配
列の発現において有効な組換え発現ベクターを含むＤＮＡ構築物である。本発明
の別の好ましい実施形態においては、本発明のポリヌクレオチドをコードするＤ
ＮＡ構築物は、レトロウイルスベクター、またはより好ましくは、アデノウイル
スベクターを用いて、処理されるべき細胞に挿入される（Ｇ Ｊ．Ｎａｂｅｌら
、ＰＮＡＳ １９９９ ９６：３２４〜３２６（これは、本明細書中に参考とし
て援用される）を参照のこと）。最も好ましい実施形態においては、ウイルスベ
クターは不完全であり、非増殖性細胞ではなく増殖性細胞のみを形質転換する。
さらに、好ましい実施形態においては、単独、または他のポリヌクレオチドと組
み合わされたかもしくは融合されたかのいずれかで増殖性細胞に挿入される本発
明のポリヌクレオチドは、次いで外部刺激（すなわち、磁気、特異的小分子、化
学的、または薬物投与など）を介して調節され得、これはこのポリヌクレオチド
の上流のプロモーターに作用し、コードされたタンパク質産物の発現を誘導する
。このように、本発明の有益な治療効果は、この外部刺激に基づいて明確に調節
され得る（すなわち、本発明の発現を増加、減少、または阻害する）。
し、この方法は、本発明の１以上の活性遺伝子コピーを異常に増殖している１つ
の細胞または複数の細胞に投与することを包含する。好ましい実施形態において
は、本発明のポリヌクレオチドは、このポリヌクレオチドをコードするＤＮＡ配
列の発現において有効な組換え発現ベクターを含むＤＮＡ構築物である。本発明
の別の好ましい実施形態においては、本発明のポリヌクレオチドをコードするＤ
ＮＡ構築物は、レトロウイルスベクター、またはより好ましくは、アデノウイル
スベクターを用いて、処理されるべき細胞に挿入される（Ｇ Ｊ．Ｎａｂｅｌら
、ＰＮＡＳ １９９９ ９６：３２４〜３２６（これは、本明細書中に参考とし
て援用される）を参照のこと）。最も好ましい実施形態においては、ウイルスベ
クターは不完全であり、非増殖性細胞ではなく増殖性細胞のみを形質転換する。
さらに、好ましい実施形態においては、単独、または他のポリヌクレオチドと組
み合わされたかもしくは融合されたかのいずれかで増殖性細胞に挿入される本発
明のポリヌクレオチドは、次いで外部刺激（すなわち、磁気、特異的小分子、化
学的、または薬物投与など）を介して調節され得、これはこのポリヌクレオチド
の上流のプロモーターに作用し、コードされたタンパク質産物の発現を誘導する
。このように、本発明の有益な治療効果は、この外部刺激に基づいて明確に調節
され得る（すなわち、本発明の発現を増加、減少、または阻害する）。
【０３９８】
本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、他の脈管形成タンパ
ク質をコードする他のポリヌクレオチドと一緒に投与され得る。脈管形成タンパ
ク質としては、酸性および塩基性の線維芽細胞増殖因子、ＶＥＧＦ−１、ＶＥＧ
Ｆ−２、ＶＥＧＦ−３、上皮増殖因子αおよびβ、血小板由来の内皮細胞増殖因
子、血小板由来増殖因子、腫瘍壊死因子α、肝細胞増殖因子、インスリン様増殖
因子、コロニー刺激因子、マクロファージコロニー刺激因子、顆粒球／マクロフ
ァージコロニー刺激因子、および一酸化窒素シンターゼが挙げられるが、これら
に限定されない。
ク質をコードする他のポリヌクレオチドと一緒に投与され得る。脈管形成タンパ
ク質としては、酸性および塩基性の線維芽細胞増殖因子、ＶＥＧＦ−１、ＶＥＧ
Ｆ−２、ＶＥＧＦ−３、上皮増殖因子αおよびβ、血小板由来の内皮細胞増殖因
子、血小板由来増殖因子、腫瘍壊死因子α、肝細胞増殖因子、インスリン様増殖
因子、コロニー刺激因子、マクロファージコロニー刺激因子、顆粒球／マクロフ
ァージコロニー刺激因子、および一酸化窒素シンターゼが挙げられるが、これら
に限定されない。
【０３９９】
本発明のポリヌクレオチドは、発癌遺伝子または抗原の発現の抑制において有
用であり得る。「発癌遺伝子の発現の抑制」によって、遺伝子の転写の抑制、遺
伝子転写物の分解（プレメッセージ（ｐｒｅ−ｍｅｓｓａｇｅ）ＲＮＡ）、スプ
ライシングの阻害、メッセンジャーＲＮＡの破壊、タンパク質の翻訳後改変の予
防、タンパク質の破壊、またはタンパク質の正常な機能の阻害が意図される。
用であり得る。「発癌遺伝子の発現の抑制」によって、遺伝子の転写の抑制、遺
伝子転写物の分解（プレメッセージ（ｐｒｅ−ｍｅｓｓａｇｅ）ＲＮＡ）、スプ
ライシングの阻害、メッセンジャーＲＮＡの破壊、タンパク質の翻訳後改変の予
防、タンパク質の破壊、またはタンパク質の正常な機能の阻害が意図される。
【０４００】
異常に増殖している細胞への局所的投与のために、本発明のポリヌクレオチド
は当業者に公知の任意の方法によって投与され得、この方法としては、トランス
フェクション、エレクトロポレーション、細胞の微量注入、またはビヒクル（例
えば、リポソーム、リポフェクチン）中で、または裸のポリヌクレオチドとして
、または本明細書を通して記載される任意の他の方法が挙げられるが、これらに
限定されない。本発明のポリヌクレオチドは、公知の遺伝子送達系（例えば、レ
トロウイルスベクター（Ｇｉｌｂｏａ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ４４：８４５（
１９８２）；Ｈｏｃｋｅ，Ｎａｔｕｒｅ ３２０：２７５（１９８６）；Ｗｉｌ
ｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：３０１
４）、ワクシニアウイルス系（Ｃｈａｋｒａｂａｒｔｙら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ
Ｂｉｏｌ．５：３４０３（１９８５））または当業者に公知の他の有効なＤＮＡ
送達系（Ｙａｔｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３１３：８１２（１９８５））があるが
、これらに限定されない）によって送達され得る。これらの参考文献は、例示の
みであり、本明細書中に参考として援用される。異常に増殖している細胞を特異
的に送達またはトランスフェクトし、そして非分裂細胞を使わないために、当業
者に公知のレトロウイルス、またはアデノウイルス（当該分野および本明細書中
のいずれかに記載のような）送達系を使用することが好ましい。宿主ＤＮＡ複製
は、組み込みのためにレトロウイルスＤＮＡを必要とし、レトロウイルスはその
ライフサイクルに必要なレトロウイルス遺伝子を欠くために自己複製できないか
らである。このようなレトロウイルス送達系を本発明のポリヌクレオチドのため
に用いることによって、この遺伝子および構築物は異常に増殖している細胞を標
的とし、そして非分裂正常細胞を使用しない。
は当業者に公知の任意の方法によって投与され得、この方法としては、トランス
フェクション、エレクトロポレーション、細胞の微量注入、またはビヒクル（例
えば、リポソーム、リポフェクチン）中で、または裸のポリヌクレオチドとして
、または本明細書を通して記載される任意の他の方法が挙げられるが、これらに
限定されない。本発明のポリヌクレオチドは、公知の遺伝子送達系（例えば、レ
トロウイルスベクター（Ｇｉｌｂｏａ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ４４：８４５（
１９８２）；Ｈｏｃｋｅ，Ｎａｔｕｒｅ ３２０：２７５（１９８６）；Ｗｉｌ
ｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：３０１
４）、ワクシニアウイルス系（Ｃｈａｋｒａｂａｒｔｙら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ
Ｂｉｏｌ．５：３４０３（１９８５））または当業者に公知の他の有効なＤＮＡ
送達系（Ｙａｔｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３１３：８１２（１９８５））があるが
、これらに限定されない）によって送達され得る。これらの参考文献は、例示の
みであり、本明細書中に参考として援用される。異常に増殖している細胞を特異
的に送達またはトランスフェクトし、そして非分裂細胞を使わないために、当業
者に公知のレトロウイルス、またはアデノウイルス（当該分野および本明細書中
のいずれかに記載のような）送達系を使用することが好ましい。宿主ＤＮＡ複製
は、組み込みのためにレトロウイルスＤＮＡを必要とし、レトロウイルスはその
ライフサイクルに必要なレトロウイルス遺伝子を欠くために自己複製できないか
らである。このようなレトロウイルス送達系を本発明のポリヌクレオチドのため
に用いることによって、この遺伝子および構築物は異常に増殖している細胞を標
的とし、そして非分裂正常細胞を使用しない。
【０４０１】
本発明のポリヌクレオチドは、注射針を疾患部位に直接導くために使用される
画像化デバイスの使用によって、内部器管、体腔などにおける細胞増殖性障害／
疾患部位へ直接送達され得る。本発明のポリヌクレオチドはまた、外科的処置の
ときに疾患部位へ投与され得る。
画像化デバイスの使用によって、内部器管、体腔などにおける細胞増殖性障害／
疾患部位へ直接送達され得る。本発明のポリヌクレオチドはまた、外科的処置の
ときに疾患部位へ投与され得る。
【０４０２】
「細胞増殖性疾患」とは、器管、腔、または身体の部分の任意の１つまたは任
意の組み合わせに影響を与える、任意のヒトまたは動物の疾患もしくは障害を意
味し、これは良性であるか悪性であるかに関わらず、細胞、細胞の群、または組
織の単一または複数の局所的異常増殖によって特徴付けられる。
意の組み合わせに影響を与える、任意のヒトまたは動物の疾患もしくは障害を意
味し、これは良性であるか悪性であるかに関わらず、細胞、細胞の群、または組
織の単一または複数の局所的異常増殖によって特徴付けられる。
【０４０３】
本発明のポリヌクレオチドが処置される細胞の増殖に対して生物学的に阻害す
る効果を有する限り、本発明のポリヌクレオチドの任意の量が投与され得る。さ
らに、本発明のポリヌクレオチドの１つより多くを、同じ部位へ同時に投与する
ことが可能である。「生物学的に阻害する」によって、細胞の部分的または全体
的な増殖阻害および細胞の増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）または成長（ｇ
ｒｏｗｔｈ）の速度における減少が意味される。生物学的阻害用量は、組織培養
物における標的悪性細胞増殖もしくは異常増殖細胞増殖、動物および細胞培養物
における腫瘍増殖に対する本発明のポリヌクレオチドの効果を評価することによ
って、または当業者に公知の任意の他の方法によって決定され得る。
る効果を有する限り、本発明のポリヌクレオチドの任意の量が投与され得る。さ
らに、本発明のポリヌクレオチドの１つより多くを、同じ部位へ同時に投与する
ことが可能である。「生物学的に阻害する」によって、細胞の部分的または全体
的な増殖阻害および細胞の増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）または成長（ｇ
ｒｏｗｔｈ）の速度における減少が意味される。生物学的阻害用量は、組織培養
物における標的悪性細胞増殖もしくは異常増殖細胞増殖、動物および細胞培養物
における腫瘍増殖に対する本発明のポリヌクレオチドの効果を評価することによ
って、または当業者に公知の任意の他の方法によって決定され得る。
【０４０４】
本発明はさらに、抗体に基づく治療に関し、この治療は、１以上の記載された
障害を処置するために、抗ポリペプチド抗体および抗ポリヌクレオチド抗体を哺
乳動物（好ましくは、ヒト）患者に投与する工程を包含する。抗ポリペプチド抗
体および抗ポリヌクレオチド抗体のポリクロナール抗体およびモノクロナール抗
体を生成するための方法は、本明細書中のいずれかに詳細に記載される。このよ
うな抗体は、当該分野において公知であるかまたは本明細書中に記載されるよう
な薬学的に受容可能な組成物中に提供され得る。
障害を処置するために、抗ポリペプチド抗体および抗ポリヌクレオチド抗体を哺
乳動物（好ましくは、ヒト）患者に投与する工程を包含する。抗ポリペプチド抗
体および抗ポリヌクレオチド抗体のポリクロナール抗体およびモノクロナール抗
体を生成するための方法は、本明細書中のいずれかに詳細に記載される。このよ
うな抗体は、当該分野において公知であるかまたは本明細書中に記載されるよう
な薬学的に受容可能な組成物中に提供され得る。
【０４０５】
本発明の抗体が治療的に使用され得る方法の要旨は、本発明のポリヌクレオチ
ドまたはポリペプチドを、身体中で局所的もしくは全体的に、または抗体の直接
的な細胞傷害性によって（例えば、相補細胞（ＣＤＣ）またはエフェクター細胞
（ＡＤＣＣ）によって媒介されるように）結合させる工程を包含する。これらの
アプローチのいくつかは、以下により詳細に記載される。本明細書中に提供され
る教示によって、当業者は過度の実験なしで、本発明の抗体を診断目的、モニタ
リング目的または治療目的のために使用する方法を理解する。
ドまたはポリペプチドを、身体中で局所的もしくは全体的に、または抗体の直接
的な細胞傷害性によって（例えば、相補細胞（ＣＤＣ）またはエフェクター細胞
（ＡＤＣＣ）によって媒介されるように）結合させる工程を包含する。これらの
アプローチのいくつかは、以下により詳細に記載される。本明細書中に提供され
る教示によって、当業者は過度の実験なしで、本発明の抗体を診断目的、モニタ
リング目的または治療目的のために使用する方法を理解する。
【０４０６】
特に、本発明の抗体、フラグメントおよび誘導体は、本明細書中に記載される
ような細胞増殖性障害および／または細胞分化障害を有しているかまたは発症し
ている被験体を処置するために有用である。このような処置は、抗体もしくはフ
ラグメント、誘導体またはそれらの結合体の単一または複数の用量を投与する工
程を包含する。
ような細胞増殖性障害および／または細胞分化障害を有しているかまたは発症し
ている被験体を処置するために有用である。このような処置は、抗体もしくはフ
ラグメント、誘導体またはそれらの結合体の単一または複数の用量を投与する工
程を包含する。
【０４０７】
本発明の抗体は、例えば、他のモノクロナール抗体もしくはキメラ抗体と組み
合わせて、またはリンホカインもしくは造血成長因子と組み合わせて有利に使用
され得、これは抗体と相互作用するエフェクター細胞の数または活性を増加させ
るために役立つ。
合わせて、またはリンホカインもしくは造血成長因子と組み合わせて有利に使用
され得、これは抗体と相互作用するエフェクター細胞の数または活性を増加させ
るために役立つ。
【０４０８】
本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドに対して高親和性および／また
は強力なインビボ阻害および／または中和抗体、それらのフラグメントもしくは
領域を、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド（それらのフラグメント
を含む）に関するイムノアッセイおよびそれらに関連する障害の治療の両方のた
めに使用することが好ましい。このような抗体、フラグメントまたは領域は、好
ましくは、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド（それらのフラグメントを含む
）に対する親和性を有する。好ましい結合親和性としては、５×１０-6Ｍ、１０ -6 Ｍ、５×１０-7Ｍ、１０-7Ｍ、５×１０-8Ｍ、１０-8Ｍ、５×１０-9Ｍ、１０ -9 Ｍ、５×１０-10Ｍ、１０-10Ｍ、５×１０-11Ｍ、１０-11Ｍ、５×１０-12Ｍ
、１０-12Ｍ、５×１０-13Ｍ、１０-13Ｍ、５×１０-14Ｍ、１０-14Ｍ、５×１
０-15Ｍおよび１０-15Ｍ未満の解離定数すなわちＫｄを伴う結合親和性が挙げら
れる。
は強力なインビボ阻害および／または中和抗体、それらのフラグメントもしくは
領域を、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド（それらのフラグメント
を含む）に関するイムノアッセイおよびそれらに関連する障害の治療の両方のた
めに使用することが好ましい。このような抗体、フラグメントまたは領域は、好
ましくは、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド（それらのフラグメントを含む
）に対する親和性を有する。好ましい結合親和性としては、５×１０-6Ｍ、１０ -6 Ｍ、５×１０-7Ｍ、１０-7Ｍ、５×１０-8Ｍ、１０-8Ｍ、５×１０-9Ｍ、１０ -9 Ｍ、５×１０-10Ｍ、１０-10Ｍ、５×１０-11Ｍ、１０-11Ｍ、５×１０-12Ｍ
、１０-12Ｍ、５×１０-13Ｍ、１０-13Ｍ、５×１０-14Ｍ、１０-14Ｍ、５×１
０-15Ｍおよび１０-15Ｍ未満の解離定数すなわちＫｄを伴う結合親和性が挙げら
れる。
【０４０９】
さらに、本明細書中のいずれかに記載されるように、本発明のポリペプチドは
、単独で、融合タンパク質として、または他のポリペプチドと組み合わせて、直
接的または間接的のいずれかで、増殖性細胞または組織の新脈管形成の阻害にお
いて有用である。最も好ましい実施形態においては、この抗新脈管形成効果は、
例えば造血性細胞、腫瘍特異的細胞（例えば、腫瘍関連マクロファージ）の阻害
を通して、間接的に達成され得る（Ｊｏｓｅｐｈ ＩＢら、Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａ
ｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ，９０（２１）：１６４８−５３（１９９８）（これは本明
細書中に参考として援用される）を参照のこと）。本発明のポリペプチドまたは
ポリヌクレオチドを指向する抗体はまた、直接的または間接的に新脈管形成の阻
害を生じ得る（Ｗｉｔｔｅ Ｌら、Ｃａｎｃｅｒ Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ Ｒｅ
ｖ．１７（２）：１５５−６１（１９９８）（これは本明細書中に参考として援
用される）を参照のこと）。
、単独で、融合タンパク質として、または他のポリペプチドと組み合わせて、直
接的または間接的のいずれかで、増殖性細胞または組織の新脈管形成の阻害にお
いて有用である。最も好ましい実施形態においては、この抗新脈管形成効果は、
例えば造血性細胞、腫瘍特異的細胞（例えば、腫瘍関連マクロファージ）の阻害
を通して、間接的に達成され得る（Ｊｏｓｅｐｈ ＩＢら、Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａ
ｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ，９０（２１）：１６４８−５３（１９９８）（これは本明
細書中に参考として援用される）を参照のこと）。本発明のポリペプチドまたは
ポリヌクレオチドを指向する抗体はまた、直接的または間接的に新脈管形成の阻
害を生じ得る（Ｗｉｔｔｅ Ｌら、Ｃａｎｃｅｒ Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ Ｒｅ
ｖ．１７（２）：１５５−６１（１９９８）（これは本明細書中に参考として援
用される）を参照のこと）。
【０４１０】
本発明のポリペプチド（融合タンパク質を含む）またはそのフラグメントは、
アポトーシスの誘導を通した増殖性細胞または組織の阻害において有用であり得
る。このポリペプチドは、デスドメインレセプター（例えば、腫瘍壊死因子（Ｔ
ＮＦ）レセプター１、ＣＤ９５（Ｆａｓ／ＡＰＯ−１）、ＴＮＦレセプター関連
アポトーシス媒介タンパク質（ＴＲＡＭＰ）およびＴＮＦ関連アポトーシス誘導
リガンド（ＴＲＡＩＬ）レセプター１およびレセプター２）の活性化において、
直接的または間接的のいずれかで、増殖性細胞および組織のアポトーシスを誘導
するために作用し得る（Ｓｃｈｕｌｚｅ−Ｏｓｔｈｏｆｆ Ｋら、Ｅｕｒ Ｊ
Ｂｉｏｃｈｅｍ ２５４（３）：４３９−５９（１９９８）（これは本明細書中
に参考として援用される）を参照のこと）。さらに、本発明の別の好ましい実施
形態においては、このポリペプチドは、他の機構を通して（例えば、アポトーシ
スを活性化する他のタンパク質の活性化において）、あるいは単独または小分子
薬物もしくはアジュバント（例えば、アポプトニン（ａｐｏｐｔｏｎｉｎ）、ガ
レクチン、チオレドキシン、抗炎症タンパク質）との組み合わせのいずれかで、
このタンパク質の発現の刺激を通して、アポトーシスを誘導し得る（例えば、Ｍ
ｕｔａｔ Ｒｅｓ ４００（１−２）：４４７−５５（１９９８）、Ｍｅｄ Ｈ
ｙｐｏｔｈｅｓｅｓ．５０（５）：４２３−３３（１９９８）、Ｃｈｅｍ Ｂｉ
ｏｌ Ｉｎｔｅｒａｃｔ．Ａｐｒ ２４；１１１−１１２：２３−３４（１９９
８）、Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．７６（６）：４０２−１２（１９９８）、Ｉｎｔ
Ｊ Ｔｉｓｓｕｅ Ｒｅａｃｔ；２０（１）：３−１５（１９９８）（これらは
すべて本明細書中に参考として援用される）を参照のこと）。
アポトーシスの誘導を通した増殖性細胞または組織の阻害において有用であり得
る。このポリペプチドは、デスドメインレセプター（例えば、腫瘍壊死因子（Ｔ
ＮＦ）レセプター１、ＣＤ９５（Ｆａｓ／ＡＰＯ−１）、ＴＮＦレセプター関連
アポトーシス媒介タンパク質（ＴＲＡＭＰ）およびＴＮＦ関連アポトーシス誘導
リガンド（ＴＲＡＩＬ）レセプター１およびレセプター２）の活性化において、
直接的または間接的のいずれかで、増殖性細胞および組織のアポトーシスを誘導
するために作用し得る（Ｓｃｈｕｌｚｅ−Ｏｓｔｈｏｆｆ Ｋら、Ｅｕｒ Ｊ
Ｂｉｏｃｈｅｍ ２５４（３）：４３９−５９（１９９８）（これは本明細書中
に参考として援用される）を参照のこと）。さらに、本発明の別の好ましい実施
形態においては、このポリペプチドは、他の機構を通して（例えば、アポトーシ
スを活性化する他のタンパク質の活性化において）、あるいは単独または小分子
薬物もしくはアジュバント（例えば、アポプトニン（ａｐｏｐｔｏｎｉｎ）、ガ
レクチン、チオレドキシン、抗炎症タンパク質）との組み合わせのいずれかで、
このタンパク質の発現の刺激を通して、アポトーシスを誘導し得る（例えば、Ｍ
ｕｔａｔ Ｒｅｓ ４００（１−２）：４４７−５５（１９９８）、Ｍｅｄ Ｈ
ｙｐｏｔｈｅｓｅｓ．５０（５）：４２３−３３（１９９８）、Ｃｈｅｍ Ｂｉ
ｏｌ Ｉｎｔｅｒａｃｔ．Ａｐｒ ２４；１１１−１１２：２３−３４（１９９
８）、Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．７６（６）：４０２−１２（１９９８）、Ｉｎｔ
Ｊ Ｔｉｓｓｕｅ Ｒｅａｃｔ；２０（１）：３−１５（１９９８）（これらは
すべて本明細書中に参考として援用される）を参照のこと）。
【０４１１】
本発明のポリペプチド（それとの融合タンパク質もしくはそのフラグメントを
含む）は、増殖性細胞または組織の転移の阻害において有用である。阻害は、ポ
リペプチド、または本明細書中のいずれかに記載されるようなこのポリペプチド
を指向する抗体の投与の直接的な結果として、あるいは間接的に（例えば、転移
を阻害することが知られているタンパク質（例えば、α４インテグリン）の発現
の活性化）生じ得る（例えば、Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ １９９８；２３１：１２５−４１（これは本明細書中に参考として援
用される）を参照のこと）。本発明のこのような治療的効果は、単独、または小
分子薬物もしくはアジュバントとの組み合わせのいずれかで達成され得る。
含む）は、増殖性細胞または組織の転移の阻害において有用である。阻害は、ポ
リペプチド、または本明細書中のいずれかに記載されるようなこのポリペプチド
を指向する抗体の投与の直接的な結果として、あるいは間接的に（例えば、転移
を阻害することが知られているタンパク質（例えば、α４インテグリン）の発現
の活性化）生じ得る（例えば、Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ １９９８；２３１：１２５−４１（これは本明細書中に参考として援
用される）を参照のこと）。本発明のこのような治療的効果は、単独、または小
分子薬物もしくはアジュバントとの組み合わせのいずれかで達成され得る。
【０４１２】
別の実施形態においては、本発明は、本発明のポリペプチドを含有する組成物
（例えば、異種ポリペプチド、異種核酸、毒素、またはプロドラッグに会合する
ポリペプチドまたはポリペプチド抗体を含有する組成物）を、本発明のポリペプ
チドを発現する標的細胞に送達する方法を提供する。本発明のポリペプチドまた
はポリペプチド抗体は、疎水性、親水性、イオン性および／または共有結合性相
互作用を介して、異種ポリペプチド、異種核酸、毒素、またはプロドラッグに会
合し得る。
（例えば、異種ポリペプチド、異種核酸、毒素、またはプロドラッグに会合する
ポリペプチドまたはポリペプチド抗体を含有する組成物）を、本発明のポリペプ
チドを発現する標的細胞に送達する方法を提供する。本発明のポリペプチドまた
はポリペプチド抗体は、疎水性、親水性、イオン性および／または共有結合性相
互作用を介して、異種ポリペプチド、異種核酸、毒素、またはプロドラッグに会
合し得る。
【０４１３】
本発明のポリペプチド、それらとの融合タンパク質またはそれらのフラグメン
トは、直接的（例えば、本発明のポリペプチドが増殖性抗原および免疫原に応答
するために、免疫応答を「ワクチン接種した」場合に起こるように）、または間
接的（例えば、この抗原および免疫原に対する免疫応答を増強することが知られ
ているタンパク質（例えば、ケモカイン）の発現の活性化におけるように）のい
ずれかで、増殖細胞または組織の免疫原性および／または抗原性の増強において
有用である。
トは、直接的（例えば、本発明のポリペプチドが増殖性抗原および免疫原に応答
するために、免疫応答を「ワクチン接種した」場合に起こるように）、または間
接的（例えば、この抗原および免疫原に対する免疫応答を増強することが知られ
ているタンパク質（例えば、ケモカイン）の発現の活性化におけるように）のい
ずれかで、増殖細胞または組織の免疫原性および／または抗原性の増強において
有用である。
【０４１４】
（心臓血管障害）
本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくは
アンタゴニストを使用して、四肢虚血のような末梢動脈疾患を含む、心臓血管障
害を処置し得る。
アンタゴニストを使用して、四肢虚血のような末梢動脈疾患を含む、心臓血管障
害を処置し得る。
【０４１５】
心臓血管障害としては、動動脈瘻（ａｒｔｅｒｉｏ−ａｒｔｅｒｉａｌ ｆｉ
ｓｔｕｌａ）、動静脈瘻、大脳動静脈先天異常、先天性心欠陥（ｃｏｎｇｅｎｉ
ｔａｌ ｈｅａｒｔ ｄｅｆｅｃｔｓ）、肺動脈弁閉鎖症、およびシミター症候
群のような心臓血管異常が挙げられる。先天性心欠陥としては、大動脈縮窄、三
房心、冠状脈管奇形（ｃｏｒｏｎａｒｙ ｖｅｓｓｅｌ ａｎｏｍａｌｉｅｓ）
、交差心、右胸心、開存性動脈管（ｐａｔｅｎｔ ｄｕｃｔｕｓ ａｒｔｅｒｉ
ｏｓｕｓ）、エブスタイン奇形、アイゼンメンガー複合体、左心室発育不全症候
群、左胸心、ファロー四徴症、大血管転位症、両大血管右室起始症、三尖弁閉鎖
症、動脈管遺残、および心中隔欠損症（ｈｅａｒｔ ｓｅｐｔａｌ ｄｅｆｅｃ
ｔｓ）（例えば、大動脈肺動脈中隔欠損症（ａｏｒｔｏｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｓ
ｅｐｔａｌ ｄｅｆｅｃｔ）、心内膜床欠損症、リュタンバッシェ症候群、ファ
ロー三徴症、心室心中隔欠損症（ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｈｅａｒｔ ｓｅｐ
ｔａｌ ｄｅｆｅｃｔｓ））が挙げられる。
ｓｔｕｌａ）、動静脈瘻、大脳動静脈先天異常、先天性心欠陥（ｃｏｎｇｅｎｉ
ｔａｌ ｈｅａｒｔ ｄｅｆｅｃｔｓ）、肺動脈弁閉鎖症、およびシミター症候
群のような心臓血管異常が挙げられる。先天性心欠陥としては、大動脈縮窄、三
房心、冠状脈管奇形（ｃｏｒｏｎａｒｙ ｖｅｓｓｅｌ ａｎｏｍａｌｉｅｓ）
、交差心、右胸心、開存性動脈管（ｐａｔｅｎｔ ｄｕｃｔｕｓ ａｒｔｅｒｉ
ｏｓｕｓ）、エブスタイン奇形、アイゼンメンガー複合体、左心室発育不全症候
群、左胸心、ファロー四徴症、大血管転位症、両大血管右室起始症、三尖弁閉鎖
症、動脈管遺残、および心中隔欠損症（ｈｅａｒｔ ｓｅｐｔａｌ ｄｅｆｅｃ
ｔｓ）（例えば、大動脈肺動脈中隔欠損症（ａｏｒｔｏｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｓ
ｅｐｔａｌ ｄｅｆｅｃｔ）、心内膜床欠損症、リュタンバッシェ症候群、ファ
ロー三徴症、心室心中隔欠損症（ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｈｅａｒｔ ｓｅｐ
ｔａｌ ｄｅｆｅｃｔｓ））が挙げられる。
【０４１６】
心臓血管障害としてはまた、不整脈、カルチノイド心臓病、高心拍出量（ｈｉ
ｇｈ ｃａｒｄｉａｃ ｏｕｔｐｕｔ）、低心拍出量（ｌｏｗ ｃａｒｄｉａｃ
ｏｕｔｐｕｔ）、心タンポナーデ、心内膜炎（細菌性を含む）、心臓動脈瘤、
心停止、うっ血性心不全、うっ血性心筋症、発作性呼吸困難、心臓水腫、心肥大
、うっ血性心筋症、左心室肥大、右心室肥大、梗塞後心破裂（ｐｏｓｔ−ｉｎｆ
ａｒｃｔｉｏｎ ｈｅａｒｔ ｒｕｐｔｕｒｅ）、心室中隔破裂、心臓弁疾患、
心筋疾患、心筋虚血、心内膜液浸出、心外膜炎（梗塞性および結核性を含む）、
気心膜症、心膜切開後症候群、右心疾患、リウマチ性心疾患、心室機能不全、充
血、心臓血管妊娠合併症（ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ
ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）、シミター症候群、心血管梅毒、タンジアー病
および心血管結核（ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ
）のような心臓病が挙げられる。
ｇｈ ｃａｒｄｉａｃ ｏｕｔｐｕｔ）、低心拍出量（ｌｏｗ ｃａｒｄｉａｃ
ｏｕｔｐｕｔ）、心タンポナーデ、心内膜炎（細菌性を含む）、心臓動脈瘤、
心停止、うっ血性心不全、うっ血性心筋症、発作性呼吸困難、心臓水腫、心肥大
、うっ血性心筋症、左心室肥大、右心室肥大、梗塞後心破裂（ｐｏｓｔ−ｉｎｆ
ａｒｃｔｉｏｎ ｈｅａｒｔ ｒｕｐｔｕｒｅ）、心室中隔破裂、心臓弁疾患、
心筋疾患、心筋虚血、心内膜液浸出、心外膜炎（梗塞性および結核性を含む）、
気心膜症、心膜切開後症候群、右心疾患、リウマチ性心疾患、心室機能不全、充
血、心臓血管妊娠合併症（ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ
ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）、シミター症候群、心血管梅毒、タンジアー病
および心血管結核（ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ
）のような心臓病が挙げられる。
【０４１７】
不整脈としては、洞性不整脈、心房性細動、心房粗動、徐脈、期外収縮、アダ
ムズ−ストークス症候群、脚ブロック、洞房ブロック、長ＱＴ症候群（ｌｏｎｇ
ＱＴ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、副収縮、ローン−ギャノング−レヴァイン症候群
、マヘーム型早期興奮症候群（Ｍａｈａｉｍ−ｔｙｐｅ ｐｒｅ−ｅｘｃｉｔａ
ｔｉｏｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ウルフ−パーキンソン−ホワイト症候群、洞不
全症候群、頻拍、および心室性細動が挙げられる。頻拍としては、発作性頻拍、
上室性頻拍、心室固有調律促進、房室結節性再入頻拍（ａｔｒｉｏｖｅｎｔｒｉ
ｃｕｌａｒ ｎｏｄａｌ ｒｅｅｎｔｒｙ ｔａｃｈｙｃａｒｄｉａ）、異所心
房性頻拍、異所接合部頻拍、洞房結節性再入頻拍（ｓｉｎｏａｔｒｉａｌ ｎｏ
ｄａｌ ｒｅｅｎｔｒｙ ｔａｃｈｙｃａｒｄｉａ）、洞性頻拍、トルサード・
ド・ポワント、および心室性頻拍が挙げられる。
ムズ−ストークス症候群、脚ブロック、洞房ブロック、長ＱＴ症候群（ｌｏｎｇ
ＱＴ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、副収縮、ローン−ギャノング−レヴァイン症候群
、マヘーム型早期興奮症候群（Ｍａｈａｉｍ−ｔｙｐｅ ｐｒｅ−ｅｘｃｉｔａ
ｔｉｏｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ウルフ−パーキンソン−ホワイト症候群、洞不
全症候群、頻拍、および心室性細動が挙げられる。頻拍としては、発作性頻拍、
上室性頻拍、心室固有調律促進、房室結節性再入頻拍（ａｔｒｉｏｖｅｎｔｒｉ
ｃｕｌａｒ ｎｏｄａｌ ｒｅｅｎｔｒｙ ｔａｃｈｙｃａｒｄｉａ）、異所心
房性頻拍、異所接合部頻拍、洞房結節性再入頻拍（ｓｉｎｏａｔｒｉａｌ ｎｏ
ｄａｌ ｒｅｅｎｔｒｙ ｔａｃｈｙｃａｒｄｉａ）、洞性頻拍、トルサード・
ド・ポワント、および心室性頻拍が挙げられる。
【０４１８】
心臓弁疾患としては、大動脈弁機能不全症、大動脈弁狭窄症、心雑音（ｈｅａ
ｒ ｍｕｒｍｕｒｓ）、大動脈弁逸脱症、僧帽弁逸脱症、三尖弁逸脱症、僧帽弁
機能不全、僧帽弁狭窄症、肺動脈弁閉鎖症、肺動脈弁機能不全、肺動脈弁狭窄症
、三尖閉鎖症、三尖弁機能不全、および三尖弁狭窄症が挙げられる。
ｒ ｍｕｒｍｕｒｓ）、大動脈弁逸脱症、僧帽弁逸脱症、三尖弁逸脱症、僧帽弁
機能不全、僧帽弁狭窄症、肺動脈弁閉鎖症、肺動脈弁機能不全、肺動脈弁狭窄症
、三尖閉鎖症、三尖弁機能不全、および三尖弁狭窄症が挙げられる。
【０４１９】
心筋疾患としては、アルコール性心筋症、うっ血性心筋症、肥大型心筋症、弁
下部性大動脈狭搾症、弁下部性肺動脈狭搾症、拘束型心筋症、シャーガス心筋症
、心内膜線維弾性症、心内膜心筋線維症、キーンズ症候群、心筋再灌流障害、お
よび心筋炎が挙げられる。
下部性大動脈狭搾症、弁下部性肺動脈狭搾症、拘束型心筋症、シャーガス心筋症
、心内膜線維弾性症、心内膜心筋線維症、キーンズ症候群、心筋再灌流障害、お
よび心筋炎が挙げられる。
【０４２０】
心筋性虚血としては、狭心症、冠動脈瘤、冠動脈硬化、冠動脈血栓症、冠動脈
血管痙攣、心筋梗塞、および心筋気絶（ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｓｔｕｎｎｉｎ
ｇ）のような冠動脈疾患が挙げられる。
血管痙攣、心筋梗塞、および心筋気絶（ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｓｔｕｎｎｉｎ
ｇ）のような冠動脈疾患が挙げられる。
【０４２１】
心臓血管疾患としてはまた、動脈瘤、血管形成異常、血管腫症、細菌性血管腫
症状、ヒッペル−リンダラ疾患（Ｈｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕ Ｄｉｓｅａｓｅ
）、クリペル−トルノネー−ウェーバー症候群、スタージ−ウェーバー症候群、
血管運動神経性水腫、大動脈疾患、高安動脈炎、大動脈炎、ルリーシュ症候群、
動脈閉塞疾患、動脈炎、動脈内膜炎（ｅｎａｒｔｅｒｉｔｉｓ）、結節性多発性
動脈炎、脳血管障害、糖尿病性血管障害、糖尿病性網膜症、塞栓症、血栓症、先
端紅痛症、痔、肝静脈閉塞障害、高血圧、低血圧、虚血、末梢血管障害、静脈炎
、肺静脈閉塞疾患、高血圧、低血圧、虚血、末梢血管疾患、静脈炎、肺静脈閉塞
疾患、レーノー病、ＣＲＥＳＴ症候群、網膜静脈閉塞、シミター症候群、上大静
脈症候群、毛細血管拡張症、毛細血管拡張性運動失調（ａｔａｃｉａ ｔｅｌａ
ｎｇｉｅｃｔａｓｉａ）、遺伝性出血性毛細管拡張症、精索静脈瘤、拡張蛇行静
脈、静脈瘤性潰瘍、脈管炎、および静脈機能不全のような血管疾患が挙げられる
。
症状、ヒッペル−リンダラ疾患（Ｈｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕ Ｄｉｓｅａｓｅ
）、クリペル−トルノネー−ウェーバー症候群、スタージ−ウェーバー症候群、
血管運動神経性水腫、大動脈疾患、高安動脈炎、大動脈炎、ルリーシュ症候群、
動脈閉塞疾患、動脈炎、動脈内膜炎（ｅｎａｒｔｅｒｉｔｉｓ）、結節性多発性
動脈炎、脳血管障害、糖尿病性血管障害、糖尿病性網膜症、塞栓症、血栓症、先
端紅痛症、痔、肝静脈閉塞障害、高血圧、低血圧、虚血、末梢血管障害、静脈炎
、肺静脈閉塞疾患、高血圧、低血圧、虚血、末梢血管疾患、静脈炎、肺静脈閉塞
疾患、レーノー病、ＣＲＥＳＴ症候群、網膜静脈閉塞、シミター症候群、上大静
脈症候群、毛細血管拡張症、毛細血管拡張性運動失調（ａｔａｃｉａ ｔｅｌａ
ｎｇｉｅｃｔａｓｉａ）、遺伝性出血性毛細管拡張症、精索静脈瘤、拡張蛇行静
脈、静脈瘤性潰瘍、脈管炎、および静脈機能不全のような血管疾患が挙げられる
。
【０４２２】
動脈瘤としては、解離性動脈瘤、偽動脈瘤、感染した動脈瘤、破裂した動脈瘤
、大動脈性動脈瘤、大脳性動脈瘤、冠動脈瘤、心動脈瘤、および腸骨性動脈瘤が
挙げられる。
、大動脈性動脈瘤、大脳性動脈瘤、冠動脈瘤、心動脈瘤、および腸骨性動脈瘤が
挙げられる。
【０４２３】
動脈閉塞疾患としては、動脈硬化症、間欠性跛行、頸動脈狭窄症、線維筋性形
成異常、腸間膜性血管閉塞、モヤモヤ病、腎動脈閉塞、網膜動脈閉塞、および閉
塞性血栓性血管炎が挙げられる。
成異常、腸間膜性血管閉塞、モヤモヤ病、腎動脈閉塞、網膜動脈閉塞、および閉
塞性血栓性血管炎が挙げられる。
【０４２４】
脳血管障害としては、頸動脈疾患、脳のアミロイドアンギオパチー、大脳動脈
瘤、大脳無酸素症、大脳動脈硬化、大脳動静脈先天異常、大脳動脈疾患、大脳の
塞栓症および血栓症、頸動脈血栓症、洞血栓症、ヴァレンベルク症候群、大脳出
血、硬膜上血腫、硬膜下血腫、クモ膜下出血（ｓｕｂａｒａｘｈｎｏｉｄ ｈｅ
ｍｏｒｒｈａｇｅ）、大脳梗塞、大脳虚血（一過性を含む）、鎖骨下動脈盗血症
候群、室周白軟化症（ｐｅｒｉｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｌｅｕｋｏｍａｌａｃ
ｉａ）、血管性頭痛、群発性頭痛、片頭痛、および椎骨基部（ｖｅｒｔｅｂｒｏ
ｂａｓｉｌａｒ）機能不全が挙げられる。
瘤、大脳無酸素症、大脳動脈硬化、大脳動静脈先天異常、大脳動脈疾患、大脳の
塞栓症および血栓症、頸動脈血栓症、洞血栓症、ヴァレンベルク症候群、大脳出
血、硬膜上血腫、硬膜下血腫、クモ膜下出血（ｓｕｂａｒａｘｈｎｏｉｄ ｈｅ
ｍｏｒｒｈａｇｅ）、大脳梗塞、大脳虚血（一過性を含む）、鎖骨下動脈盗血症
候群、室周白軟化症（ｐｅｒｉｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｌｅｕｋｏｍａｌａｃ
ｉａ）、血管性頭痛、群発性頭痛、片頭痛、および椎骨基部（ｖｅｒｔｅｂｒｏ
ｂａｓｉｌａｒ）機能不全が挙げられる。
【０４２５】
塞栓症としては、空気塞栓症、羊水塞栓症、コレステロール塞栓症、爪先チア
ノーゼ症候群、脂肪塞栓症、肺動脈塞栓症、および血栓塞栓症が挙げられる。血
栓症としては、冠状動脈血栓症、肝静脈血栓症、網膜静脈閉塞、頸動脈血栓症、
洞血栓症、ヴァレンベルク症候群、および血栓性静脈炎が挙げられる。
ノーゼ症候群、脂肪塞栓症、肺動脈塞栓症、および血栓塞栓症が挙げられる。血
栓症としては、冠状動脈血栓症、肝静脈血栓症、網膜静脈閉塞、頸動脈血栓症、
洞血栓症、ヴァレンベルク症候群、および血栓性静脈炎が挙げられる。
【０４２６】
虚血としては、大脳虚血、虚血性大腸炎、仕切り症候群（ｃｏｍｐａｒｔｍｅ
ｎｔ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、前仕切り症候群（ａｎｔｅｒｉｏｒ ｃｏｍｐａｒ
ｔｍｅｎｔ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心筋虚血、再灌流傷害、および末梢四肢虚血
が挙げられる。脈管炎としては、大動脈炎、動脈炎、ベーチェット（Ｂｅｈｃｅ
ｔ）症候群、チャーグ−ストラウス症候群、粘膜皮膚リンパ節症候群、閉塞性血
栓性血管炎、過敏性血管炎、シェーンライン−ヘーノホ紫斑病（Ｓｃｈｏｅｎｌ
ｅｉｎ−Ｈｅｎｏｃｈ ｐｕｒｐｕｒａ）、アレルギー性皮膚血管炎およびヴェ
ーゲナー肉芽腫症が挙げられる。
ｎｔ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、前仕切り症候群（ａｎｔｅｒｉｏｒ ｃｏｍｐａｒ
ｔｍｅｎｔ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心筋虚血、再灌流傷害、および末梢四肢虚血
が挙げられる。脈管炎としては、大動脈炎、動脈炎、ベーチェット（Ｂｅｈｃｅ
ｔ）症候群、チャーグ−ストラウス症候群、粘膜皮膚リンパ節症候群、閉塞性血
栓性血管炎、過敏性血管炎、シェーンライン−ヘーノホ紫斑病（Ｓｃｈｏｅｎｌ
ｅｉｎ−Ｈｅｎｏｃｈ ｐｕｒｐｕｒａ）、アレルギー性皮膚血管炎およびヴェ
ーゲナー肉芽腫症が挙げられる。
【０４２７】
本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくは
アンタゴニストは、危険な四肢虚血および冠状動脈疾患の処置に対して特に有効
である。
アンタゴニストは、危険な四肢虚血および冠状動脈疾患の処置に対して特に有効
である。
【０４２８】
ポリペプチドは、当該分野で公知である任意の方法を使用して投与され得、こ
れらの方法としては、送達部位における直接的針注射、静脈内注射、局所投与、
カテーテル注入、微粒子銃（ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ）注射、粒子加速器、ゲルフォ
ームスポンジデポー、他の市販デポー物質、浸透圧ポンプ、経口または坐剤の固
形薬学的処方物、手術中のデカンティングまたは局所適用、エアロゾル送達が挙
げられるが、これらに限定されない。そのような方法は当該分野で公知である。
ポリペプチドは、下記でより詳細に記載される、治療剤（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉ
ｃ）の一部として投与され得る。ポリヌクレオチドを送達する方法は本明細書中
でより詳細に記載される。
れらの方法としては、送達部位における直接的針注射、静脈内注射、局所投与、
カテーテル注入、微粒子銃（ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ）注射、粒子加速器、ゲルフォ
ームスポンジデポー、他の市販デポー物質、浸透圧ポンプ、経口または坐剤の固
形薬学的処方物、手術中のデカンティングまたは局所適用、エアロゾル送達が挙
げられるが、これらに限定されない。そのような方法は当該分野で公知である。
ポリペプチドは、下記でより詳細に記載される、治療剤（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉ
ｃ）の一部として投与され得る。ポリヌクレオチドを送達する方法は本明細書中
でより詳細に記載される。
【０４２９】
（抗新脈管形成活性）
新脈管形成の内因性の、刺激因子とインヒビターとの間の天然に存在する平衡
は、阻害影響が優勢である平衡である。Ｒａｓｔｉｎｅｊａｄら、Ｃｅｌｌ ５
６：３４５〜３５５（１９８９）。新生血管形成が正常な生理学的条件下におい
て生じるまれな場合（例えば、創傷治癒、器官再生、胚発生、および雌性生殖プ
ロセス）において、新脈管形成は、厳密に調節され、そして空間的および時間的
に定められる。病的な新脈管形成の条件（例えば、固形腫瘍増殖を特徴付ける）
の下において、これらの調節の制御はできない。調節されていない新脈管形成は
病的になり、そして多くの新生物性疾患および非新生物性疾患の進行を維持する
。多くの重篤な疾患は、固形腫瘍の増殖および転移、関節炎、いくつかの型の眼
の障害および乾癬を含む、異常な新生血管形成により支配される。例えば、Ｍｏ
ｓｅｓら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．９：６３０〜６３４（１９９１）；Ｆｏｌｋｍａｎ
ら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３３３：１７５７〜１７６３（１９９５）；
Ａｕｅｒｂａｃｈら、Ｊ．Ｍｉｃｒｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．２９：４０１〜４１１
（１９８５）；Ｆｏｌｋｍａｎ、Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓｅａｒｃｈ、ＫｌｅｉｎおよびＷｅｉｎｈｏｕｓｅ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ
ｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１７５〜２０３頁（１９８５）；Ｐａｔｚ、Ａｍ
．Ｊ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．９４：７１５〜７４３（１９８２）；およびＦｏｌ
ｋｍａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２１：７１９〜７２５（１９８３）による概説
を参照のこと。多くの病的状態において、新脈管形成のプロセスは、その疾患状
態に寄与する。例えば、固形腫瘍の増殖が新脈管形成に依存することを示唆する
有意なデータが蓄積されている。ＦｏｌｋｍａｎおよびＫｌａｇｓｂｒｕｎ、Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ ２３５：４４２〜４４７（１９８７）。
は、阻害影響が優勢である平衡である。Ｒａｓｔｉｎｅｊａｄら、Ｃｅｌｌ ５
６：３４５〜３５５（１９８９）。新生血管形成が正常な生理学的条件下におい
て生じるまれな場合（例えば、創傷治癒、器官再生、胚発生、および雌性生殖プ
ロセス）において、新脈管形成は、厳密に調節され、そして空間的および時間的
に定められる。病的な新脈管形成の条件（例えば、固形腫瘍増殖を特徴付ける）
の下において、これらの調節の制御はできない。調節されていない新脈管形成は
病的になり、そして多くの新生物性疾患および非新生物性疾患の進行を維持する
。多くの重篤な疾患は、固形腫瘍の増殖および転移、関節炎、いくつかの型の眼
の障害および乾癬を含む、異常な新生血管形成により支配される。例えば、Ｍｏ
ｓｅｓら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．９：６３０〜６３４（１９９１）；Ｆｏｌｋｍａｎ
ら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３３３：１７５７〜１７６３（１９９５）；
Ａｕｅｒｂａｃｈら、Ｊ．Ｍｉｃｒｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．２９：４０１〜４１１
（１９８５）；Ｆｏｌｋｍａｎ、Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓｅａｒｃｈ、ＫｌｅｉｎおよびＷｅｉｎｈｏｕｓｅ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ
ｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１７５〜２０３頁（１９８５）；Ｐａｔｚ、Ａｍ
．Ｊ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．９４：７１５〜７４３（１９８２）；およびＦｏｌ
ｋｍａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２１：７１９〜７２５（１９８３）による概説
を参照のこと。多くの病的状態において、新脈管形成のプロセスは、その疾患状
態に寄与する。例えば、固形腫瘍の増殖が新脈管形成に依存することを示唆する
有意なデータが蓄積されている。ＦｏｌｋｍａｎおよびＫｌａｇｓｂｒｕｎ、Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ ２３５：４４２〜４４７（１９８７）。
【０４３０】
本発明は、本発明のポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチド、ならびに
本発明のアゴニストまたはアンタゴニストの投与による新生血管形成に関連する
疾患または障害の処置を提供する。本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストを用いて処置し得る悪性状態およ
び転移性状態には、本明細書に記載の悪性疾患、固形腫瘍、および癌、ならびに
当該分野で公知の他のもの（このような障害の総説については、Ｆｉｓｈｍａｎ
ら、Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第２版、Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏ．，Ｐｈ
ｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９８５）を参照のこと）が挙げられるが、これらに限
定されない。従って、本発明は、新脈管形成関連疾患および／または障害の処置
の方法を提供し、この方法は、治療有効量の、本発明のポリヌクレオチド、ポリ
ペプチド、アンタゴニストおよび／またはアゴニストを、その処置の必要な個体
に投与する工程を包含する。例えば、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタ
ゴニストおよび／またはアゴニストは、癌または腫瘍を治療的に処置するために
、種々のさらなる方法で利用され得る。ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アン
タゴニストおよび／またはアゴニストで処置され得る癌としては、前立腺癌、肺
癌、乳癌、卵巣癌、胃癌、膵臓癌、喉頭癌、食道癌、精巣癌、肝臓癌、耳下腺癌
、胆管癌、結腸癌、直腸癌、頸部癌、子宮癌、子宮内膜癌、腎臓癌、膀胱癌、甲
状腺癌を含む固形腫瘍；原発性腫瘍および転移；黒色腫；膠芽腫；カポージ肉腫
；平滑筋肉腫；非小細胞肺癌；結腸直腸癌；進行性（ａｄｖａｎｃｅｄ）悪性疾
患；および血液から生じる腫瘍（例えば、白血病）が挙げられるが、これらに限
定されない。例えば、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストおよび
／またはアゴニストは、皮膚癌、頭頸部腫瘍、乳房腫瘍およびカポージ肉腫のよ
うな癌を処置するために、局所送達され得る。
本発明のアゴニストまたはアンタゴニストの投与による新生血管形成に関連する
疾患または障害の処置を提供する。本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストを用いて処置し得る悪性状態およ
び転移性状態には、本明細書に記載の悪性疾患、固形腫瘍、および癌、ならびに
当該分野で公知の他のもの（このような障害の総説については、Ｆｉｓｈｍａｎ
ら、Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第２版、Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏ．，Ｐｈ
ｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９８５）を参照のこと）が挙げられるが、これらに限
定されない。従って、本発明は、新脈管形成関連疾患および／または障害の処置
の方法を提供し、この方法は、治療有効量の、本発明のポリヌクレオチド、ポリ
ペプチド、アンタゴニストおよび／またはアゴニストを、その処置の必要な個体
に投与する工程を包含する。例えば、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタ
ゴニストおよび／またはアゴニストは、癌または腫瘍を治療的に処置するために
、種々のさらなる方法で利用され得る。ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アン
タゴニストおよび／またはアゴニストで処置され得る癌としては、前立腺癌、肺
癌、乳癌、卵巣癌、胃癌、膵臓癌、喉頭癌、食道癌、精巣癌、肝臓癌、耳下腺癌
、胆管癌、結腸癌、直腸癌、頸部癌、子宮癌、子宮内膜癌、腎臓癌、膀胱癌、甲
状腺癌を含む固形腫瘍；原発性腫瘍および転移；黒色腫；膠芽腫；カポージ肉腫
；平滑筋肉腫；非小細胞肺癌；結腸直腸癌；進行性（ａｄｖａｎｃｅｄ）悪性疾
患；および血液から生じる腫瘍（例えば、白血病）が挙げられるが、これらに限
定されない。例えば、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストおよび
／またはアゴニストは、皮膚癌、頭頸部腫瘍、乳房腫瘍およびカポージ肉腫のよ
うな癌を処置するために、局所送達され得る。
【０４３１】
なお他の局面において、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストお
よび／またはアゴニストは、例えば膀胱内投与によって膀胱癌の表面形態を処置
するために利用され得る。ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストお
よび／またはアゴニストは、腫瘍に直接的に、または注射もしくはカテーテルを
介して腫瘍部位付近に送達され得る。当然のことながら、当業者が理解するよう
に、適切な投与様式は、処置されるべき癌によって変化する。他の送達様式は本
明細書中において議論される。
よび／またはアゴニストは、例えば膀胱内投与によって膀胱癌の表面形態を処置
するために利用され得る。ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストお
よび／またはアゴニストは、腫瘍に直接的に、または注射もしくはカテーテルを
介して腫瘍部位付近に送達され得る。当然のことながら、当業者が理解するよう
に、適切な投与様式は、処置されるべき癌によって変化する。他の送達様式は本
明細書中において議論される。
【０４３２】
ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストおよび／またはアゴニスト
は、癌に加えて、他の障害（新脈管形成を含む）を処置する際に有用であり得る
。これらの障害としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：良性腫
瘍（例えば、血管腫、聴神経腫、神経線維腫、トラコーマ、および化膿性肉芽腫
）；動脈硬化プラーク；眼の脈管形成疾患（例えば、糖尿病性網膜症、未熟網膜
症、黄斑変性、角膜移植拒絶、血管新生緑内障、水晶体後線維増殖、ルベオーシ
ス、網膜芽細胞腫、ブドウ膜炎（ｕｖｉｅｔｉｓ）および眼の翼状片（Ｐｔｅｒ
ｙｇｉａ）（異常な血管増殖））；慢性関節リウマチ；乾癬；遅延型創傷治癒；
子宮内膜症；脈管形成；顆粒化；過形成性瘢痕（ケロイド）；偽関節骨折；強皮
症；トラコーマ；血管接着；心筋の新脈管形成；冠状側副枝（ｃｏｒｏｎａｒｙ
ｃｏｌｌａｔｅｒａｌｓ）；大脳側副枝；動静脈奇形；虚血性四肢新脈管形成
；オースラー−ウェーバー（Ｏｓｌｅｒ−Ｗｅｂｂｅｒ）症候群；プラーク新生
血管形成；毛細血管拡張症；血友病性関節；血管線維腫；線維筋性形成異常；創
傷顆粒化；クローン病；およびアテローム性動脈硬化症。
は、癌に加えて、他の障害（新脈管形成を含む）を処置する際に有用であり得る
。これらの障害としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：良性腫
瘍（例えば、血管腫、聴神経腫、神経線維腫、トラコーマ、および化膿性肉芽腫
）；動脈硬化プラーク；眼の脈管形成疾患（例えば、糖尿病性網膜症、未熟網膜
症、黄斑変性、角膜移植拒絶、血管新生緑内障、水晶体後線維増殖、ルベオーシ
ス、網膜芽細胞腫、ブドウ膜炎（ｕｖｉｅｔｉｓ）および眼の翼状片（Ｐｔｅｒ
ｙｇｉａ）（異常な血管増殖））；慢性関節リウマチ；乾癬；遅延型創傷治癒；
子宮内膜症；脈管形成；顆粒化；過形成性瘢痕（ケロイド）；偽関節骨折；強皮
症；トラコーマ；血管接着；心筋の新脈管形成；冠状側副枝（ｃｏｒｏｎａｒｙ
ｃｏｌｌａｔｅｒａｌｓ）；大脳側副枝；動静脈奇形；虚血性四肢新脈管形成
；オースラー−ウェーバー（Ｏｓｌｅｒ−Ｗｅｂｂｅｒ）症候群；プラーク新生
血管形成；毛細血管拡張症；血友病性関節；血管線維腫；線維筋性形成異常；創
傷顆粒化；クローン病；およびアテローム性動脈硬化症。
【０４３３】
例えば、本発明の１つの局面において、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプ
チド、アンタゴニストおよび／またはアゴニストを過形成性瘢痕またはケロイド
に投与する工程を包含する、過形成性瘢痕およびケロイドを処置するための方法
が提供される。
チド、アンタゴニストおよび／またはアゴニストを過形成性瘢痕またはケロイド
に投与する工程を包含する、過形成性瘢痕およびケロイドを処置するための方法
が提供される。
【０４３４】
本発明の１つの実施形態において、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタ
ゴニストおよび／またはアゴニストは、過形成性瘢痕またはケロイドに、これら
の病変の進行を妨げるために直接注射される。この治療は、過形成性瘢痕および
ケロイド（例えば、やけど）の発生を生じることが知られている状態の予防処置
において特に価値があり、そして好ましくは、増殖期が進行する時間（最初の傷
害の約１４日後）を有した後であるが、過形成性瘢痕またはケロイドの発生の前
に開始される。上述のように、本発明はまた、眼の新生血管形成疾患（例えば、
角膜新生血管形成、血管新生緑内障、増殖性糖尿病網膜症、水晶体後線維増殖お
よび黄斑変性を含む）を処置するための方法を提供する。
ゴニストおよび／またはアゴニストは、過形成性瘢痕またはケロイドに、これら
の病変の進行を妨げるために直接注射される。この治療は、過形成性瘢痕および
ケロイド（例えば、やけど）の発生を生じることが知られている状態の予防処置
において特に価値があり、そして好ましくは、増殖期が進行する時間（最初の傷
害の約１４日後）を有した後であるが、過形成性瘢痕またはケロイドの発生の前
に開始される。上述のように、本発明はまた、眼の新生血管形成疾患（例えば、
角膜新生血管形成、血管新生緑内障、増殖性糖尿病網膜症、水晶体後線維増殖お
よび黄斑変性を含む）を処置するための方法を提供する。
【０４３５】
さらに、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチド（アゴニストおよび／
またはアンタゴニストを含む）を用いて処置され得る新生血管形成に関連する眼
の障害としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：血管新生緑内障
、糖尿病網膜症、網膜芽細胞腫、水晶体後線維増殖症、ブドウ膜炎、未熟網膜症
、黄斑変性、角膜移植新生血管形成、ならびに他の眼の炎症性疾患、眼の腫瘍、
および脈絡膜または虹彩の新生血管形成に関連する疾患。例えば、Ｗａｌｔｍａ
ｎら、Ａｍ．Ｊ．Ｏｐｈｔｈａｌ．８５：７０４〜７１０（１９７８）およびＧ
ａｒｔｎｅｒら、Ｓｕｒｖ．Ｏｐｈｔｈａｌ．２２：２９１〜３１２（１９７８
）による総説を参照のこと。
またはアンタゴニストを含む）を用いて処置され得る新生血管形成に関連する眼
の障害としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：血管新生緑内障
、糖尿病網膜症、網膜芽細胞腫、水晶体後線維増殖症、ブドウ膜炎、未熟網膜症
、黄斑変性、角膜移植新生血管形成、ならびに他の眼の炎症性疾患、眼の腫瘍、
および脈絡膜または虹彩の新生血管形成に関連する疾患。例えば、Ｗａｌｔｍａ
ｎら、Ａｍ．Ｊ．Ｏｐｈｔｈａｌ．８５：７０４〜７１０（１９７８）およびＧ
ａｒｔｎｅｒら、Ｓｕｒｖ．Ｏｐｈｔｈａｌ．２２：２９１〜３１２（１９７８
）による総説を参照のこと。
【０４３６】
従って、本発明の１つの局面において、治療有効量の化合物（上記）を患者に
対して、血管の形成が阻害されるように角膜に投与する工程を包含する、角膜新
生血管形成（角膜移植新生血管形成を含む）のような眼の新生血管形成疾患を処
置するための方法が、提供される。簡潔には、角膜は、通常には血管を欠く組織
である。しかし、特定の病的状態において、毛細血管は、縁の角膜周囲脈管叢か
ら角膜に伸長し得る。角膜が血管化されるようになる場合、角膜はまた混濁され
るようになり、患者の視力の衰えを生じる。角膜が完全に不透明になる（ｏｐａ
ｃｉｔａｔｅ）場合に、視力喪失が完全になり得る。広範な種々の障害は、例え
ば、以下を含む角膜新生血管形成を生じ得る：角膜感染（例えば、トラコーマ、
単純ヘルペス角膜炎、リーシュマニア症およびオンコセルカ症）、免疫学的プロ
セス（例えば、移植片拒絶およびスティーヴンズ−ジョンソン症候群）、アルカ
リやけど、外傷、炎症（任意の原因による）、毒性および栄養欠乏状態、ならび
にコンタクトレンズを装着することの合併症として。
対して、血管の形成が阻害されるように角膜に投与する工程を包含する、角膜新
生血管形成（角膜移植新生血管形成を含む）のような眼の新生血管形成疾患を処
置するための方法が、提供される。簡潔には、角膜は、通常には血管を欠く組織
である。しかし、特定の病的状態において、毛細血管は、縁の角膜周囲脈管叢か
ら角膜に伸長し得る。角膜が血管化されるようになる場合、角膜はまた混濁され
るようになり、患者の視力の衰えを生じる。角膜が完全に不透明になる（ｏｐａ
ｃｉｔａｔｅ）場合に、視力喪失が完全になり得る。広範な種々の障害は、例え
ば、以下を含む角膜新生血管形成を生じ得る：角膜感染（例えば、トラコーマ、
単純ヘルペス角膜炎、リーシュマニア症およびオンコセルカ症）、免疫学的プロ
セス（例えば、移植片拒絶およびスティーヴンズ−ジョンソン症候群）、アルカ
リやけど、外傷、炎症（任意の原因による）、毒性および栄養欠乏状態、ならび
にコンタクトレンズを装着することの合併症として。
【０４３７】
特に好ましい実施形態において、本発明は、生理食塩水（眼に用いる調製物に
おいて一般に使用される任意の保存剤および抗菌剤と組合せて）中で局所投与の
ために調製され得、そして点眼剤形態で投与され得る。溶液または懸濁液は、そ
の純粋な形態で調製され得、そして１日に数回投与され得る。あるいは、上記の
ように調製される抗脈管形成組成物はまた、角膜に直接投与され得る。好ましい
実施形態において、抗脈管形成組成物は、角膜に結合する粘膜接着性ポリマーと
ともに調製される。さらなる実施形態において、抗脈管形成因子または抗脈管形
成組成物は、従来のステロイド治療に対する補助剤として利用され得る。局所治
療はまた、脈管形成応答（例えば、化学的やけど）を誘導する高い可能性を有す
ることが公知である角膜病変において予防的に有用であり得る。これらの場合に
おいて、処置（おそらくステロイドと組み合わせられる）は、その後の合併症を
予防するのを補助するために直ちに開始され得る。
おいて一般に使用される任意の保存剤および抗菌剤と組合せて）中で局所投与の
ために調製され得、そして点眼剤形態で投与され得る。溶液または懸濁液は、そ
の純粋な形態で調製され得、そして１日に数回投与され得る。あるいは、上記の
ように調製される抗脈管形成組成物はまた、角膜に直接投与され得る。好ましい
実施形態において、抗脈管形成組成物は、角膜に結合する粘膜接着性ポリマーと
ともに調製される。さらなる実施形態において、抗脈管形成因子または抗脈管形
成組成物は、従来のステロイド治療に対する補助剤として利用され得る。局所治
療はまた、脈管形成応答（例えば、化学的やけど）を誘導する高い可能性を有す
ることが公知である角膜病変において予防的に有用であり得る。これらの場合に
おいて、処置（おそらくステロイドと組み合わせられる）は、その後の合併症を
予防するのを補助するために直ちに開始され得る。
【０４３８】
他の実施形態において、上記の化合物は、角膜支質に直接、顕微鏡の案内の下
で眼科医によって注入され得る。好ましい注射部位は、個々の病巣の形態で変化
し得るが、投与の目標は、脈管構造の前進している面に組成物を置くこと（すな
わち、血管と正常な角膜との間に分散される）である。ほとんどの場合において
、これは、前進している血管から角膜を「防御」するための縁周囲（ｐｅｒｉｌ
ｉｍｂｉｃ）角膜注射を含む。この方法はまた、角膜新生血管形成を予防的に防
ぐために、角膜傷害の直後に利用され得る。この状況において、この物質は、角
膜病巣とその所望されない潜在的な血液供給の縁との間に分散して縁周囲角膜に
注射され得る。このような方法はまた、類似の様式で、移植された角膜の毛細血
管浸潤を予防するために利用され得る。徐放形態において、注入は、１年に２〜
３回のみ必要とされ得る。ステロイドもまた、注入溶液に添加され、その注射自
体から生じる炎症を低減し得る。
で眼科医によって注入され得る。好ましい注射部位は、個々の病巣の形態で変化
し得るが、投与の目標は、脈管構造の前進している面に組成物を置くこと（すな
わち、血管と正常な角膜との間に分散される）である。ほとんどの場合において
、これは、前進している血管から角膜を「防御」するための縁周囲（ｐｅｒｉｌ
ｉｍｂｉｃ）角膜注射を含む。この方法はまた、角膜新生血管形成を予防的に防
ぐために、角膜傷害の直後に利用され得る。この状況において、この物質は、角
膜病巣とその所望されない潜在的な血液供給の縁との間に分散して縁周囲角膜に
注射され得る。このような方法はまた、類似の様式で、移植された角膜の毛細血
管浸潤を予防するために利用され得る。徐放形態において、注入は、１年に２〜
３回のみ必要とされ得る。ステロイドもまた、注入溶液に添加され、その注射自
体から生じる炎症を低減し得る。
【０４３９】
本発明の別の局面において、患者に、血管の形成を阻害するように、治療有効
量のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストおよび／またはアゴニス
トを眼に投与する工程を包含する、血管新生緑内障を処置するための方法が提供
される。１つの実施形態において、化合物は、血管新生緑内障の早期形態を処置
するために、眼に局所投与され得る。他の実施形態において、化合物は、前方角
（ａｎｔｅｒｉｏｒ ｃｈａｍｂｅｒ ａｎｇｌｅ）の領域に注入によって移植
され得る。他の実施形態において、化合物はまた、化合物が眼房水に連続的に放
出されるように、任意の位置に置かれ得る。本発明の別の局面において、患者に
、血管の形成が阻害されるように、治療有効量のポリヌクレオチド、ポリペプチ
ド、アンタゴニストおよび／またはアゴニストを眼に投与する工程を包含する、
増殖性糖尿病性網膜症を処置するための方法が提供される。
量のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストおよび／またはアゴニス
トを眼に投与する工程を包含する、血管新生緑内障を処置するための方法が提供
される。１つの実施形態において、化合物は、血管新生緑内障の早期形態を処置
するために、眼に局所投与され得る。他の実施形態において、化合物は、前方角
（ａｎｔｅｒｉｏｒ ｃｈａｍｂｅｒ ａｎｇｌｅ）の領域に注入によって移植
され得る。他の実施形態において、化合物はまた、化合物が眼房水に連続的に放
出されるように、任意の位置に置かれ得る。本発明の別の局面において、患者に
、血管の形成が阻害されるように、治療有効量のポリヌクレオチド、ポリペプチ
ド、アンタゴニストおよび／またはアゴニストを眼に投与する工程を包含する、
増殖性糖尿病性網膜症を処置するための方法が提供される。
【０４４０】
本発明の特に好ましい実施形態において、増殖性糖尿病性網膜症は、網膜にお
けるポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストおよび／またはアゴニス
トの局所濃度を増加させるために、眼房水または硝子体への注入によって処置さ
れ得る。好ましくは、この処置は、光凝固を必要とする重篤な疾患の獲得の前に
開始されるべきである。
けるポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストおよび／またはアゴニス
トの局所濃度を増加させるために、眼房水または硝子体への注入によって処置さ
れ得る。好ましくは、この処置は、光凝固を必要とする重篤な疾患の獲得の前に
開始されるべきである。
【０４４１】
本発明の別の局面において、血管の形成が阻害されるように、患者に、治療有
効量のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストおよび／またはアゴニ
ストを眼に投与する工程を包含する、水晶体後線維増殖症を処置するための方法
が、提供される。化合物は、硝子体内注射を介して、および／または眼内移植を
介して局所投与され得る。
効量のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アンタゴニストおよび／またはアゴニ
ストを眼に投与する工程を包含する、水晶体後線維増殖症を処置するための方法
が、提供される。化合物は、硝子体内注射を介して、および／または眼内移植を
介して局所投与され得る。
【０４４２】
さらに、このポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび／またはア
ゴニストで処置され得る障害としては、以下が挙げられるが、それらに限定され
ない：血管腫、関節炎、乾癬、血管線維腫、アテローム性プラーク、遅延型創傷
治癒、顆粒化、血友病性関節、過形成性瘢痕、偽関節骨折、オースラー−ウェー
バー（Ｏｓｌｅｒ−Ｗｅｂｅｒ）症候群、化膿性肉芽腫、強皮症、トラコーマ、
および血管接着。
ゴニストで処置され得る障害としては、以下が挙げられるが、それらに限定され
ない：血管腫、関節炎、乾癬、血管線維腫、アテローム性プラーク、遅延型創傷
治癒、顆粒化、血友病性関節、過形成性瘢痕、偽関節骨折、オースラー−ウェー
バー（Ｏｓｌｅｒ−Ｗｅｂｅｒ）症候群、化膿性肉芽腫、強皮症、トラコーマ、
および血管接着。
【０４４３】
さらに、このポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび／またはア
ゴニストで処置され得る障害および／または状態としては、以下が挙げられるが
、それらに限定されない：固形腫瘍、血液由来の（ｂｌｏｏｄ ｂｏｒｎ）腫瘍
（例えば、白血病）、腫瘍転移、カポージ肉腫、良性腫瘍（例えば、血管腫、聴
神経腫、神経線維腫、トラコーマ、および化膿性肉芽腫）、慢性関節リウマチ、
乾癬、眼の脈管形成疾患（例えば、糖尿病性網膜症、未熟網膜症、黄斑変性、角
膜移植拒絶、血管新生緑内障、水晶体後線維増殖症、ルベオーシス、網膜芽細胞
腫、およびブドウ膜炎）、遅延型創傷治癒、子宮内膜症、脈管形成、顆粒化、過
形成性瘢痕（ケロイド）、偽関節骨折、強皮症、トラコーマ、血管接着、心筋の
新脈管形成、冠状側副枝（ｃｏｒｏｎａｒｙ ｃｏｌｌａｔｅｒａｌｓ）、大脳
側副枝、動静脈奇形、虚血性四肢新脈管形成、オースラー−ウェーバー症候群、
プラーク新生血管形成、毛細血管拡張症、血友病性関節、血管線維腫、線維筋性
形成異常、創傷顆粒化、クローン病、アテローム性動脈硬化症、産児制限薬剤（
月経を制御する、胎芽着床のために必要な血管新生を予防することによる）、病
原性の結果（例えば、ネコ引っかき病（Ｒｏｃｈｅｌｅ ｍｉｎａｌｉａ ｑｕ
ｉｎｔｏｓａ）、潰瘍（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）、バルトネ
ラ症および細菌性血管腫症状）のような新脈管形成を有する疾患。
ゴニストで処置され得る障害および／または状態としては、以下が挙げられるが
、それらに限定されない：固形腫瘍、血液由来の（ｂｌｏｏｄ ｂｏｒｎ）腫瘍
（例えば、白血病）、腫瘍転移、カポージ肉腫、良性腫瘍（例えば、血管腫、聴
神経腫、神経線維腫、トラコーマ、および化膿性肉芽腫）、慢性関節リウマチ、
乾癬、眼の脈管形成疾患（例えば、糖尿病性網膜症、未熟網膜症、黄斑変性、角
膜移植拒絶、血管新生緑内障、水晶体後線維増殖症、ルベオーシス、網膜芽細胞
腫、およびブドウ膜炎）、遅延型創傷治癒、子宮内膜症、脈管形成、顆粒化、過
形成性瘢痕（ケロイド）、偽関節骨折、強皮症、トラコーマ、血管接着、心筋の
新脈管形成、冠状側副枝（ｃｏｒｏｎａｒｙ ｃｏｌｌａｔｅｒａｌｓ）、大脳
側副枝、動静脈奇形、虚血性四肢新脈管形成、オースラー−ウェーバー症候群、
プラーク新生血管形成、毛細血管拡張症、血友病性関節、血管線維腫、線維筋性
形成異常、創傷顆粒化、クローン病、アテローム性動脈硬化症、産児制限薬剤（
月経を制御する、胎芽着床のために必要な血管新生を予防することによる）、病
原性の結果（例えば、ネコ引っかき病（Ｒｏｃｈｅｌｅ ｍｉｎａｌｉａ ｑｕ
ｉｎｔｏｓａ）、潰瘍（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）、バルトネ
ラ症および細菌性血管腫症状）のような新脈管形成を有する疾患。
【０４４４】
出産制限方法の１つの局面において、胎芽着床をブロックするに十分な化合物
の量は、性交および受精が起こる前またはその後に投与され、従って産児制限の
有効な方法、おそらく「事後用（ｍｏｒｎｉｎｇ ａｆｔｅｒ）」方法を提供す
る。ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび／またはアゴニストは
また、月経を制御することにおいて使用され得るか、または子宮内膜症の処置に
おける腹膜洗浄液として、もしくは腹膜移植のためのいずれかで投与され得る。
の量は、性交および受精が起こる前またはその後に投与され、従って産児制限の
有効な方法、おそらく「事後用（ｍｏｒｎｉｎｇ ａｆｔｅｒ）」方法を提供す
る。ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび／またはアゴニストは
また、月経を制御することにおいて使用され得るか、または子宮内膜症の処置に
おける腹膜洗浄液として、もしくは腹膜移植のためのいずれかで投与され得る。
【０４４５】
本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび／またはアゴニ
ストは、縫合（ｓｔｉｔｃｈ）肉芽腫を予防するために、外科縫合に組み込まれ
得る。
ストは、縫合（ｓｔｉｔｃｈ）肉芽腫を予防するために、外科縫合に組み込まれ
得る。
【０４４６】
ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび／またはアゴニストは、
広範な種々の外科手順において利用され得る。例えば、本発明の１つの局面にお
いて、組成物（例えば、スプレーまたはフィルムの形態において）は、悪性組織
から正常な周囲の組織を分離するため、そして／または周囲の組織への疾患の広
がりを予防するために、腫瘍の除去の前に、領域をコートまたはスプレーするた
めに利用され得る。本発明の他の局面において、組成物（例えば、スプレーの形
態において）は、腫瘍をコートするため、または所望の場所において新脈管形成
を阻害するために、内視鏡手順を介して送達され得る。本発明のなお他の局面に
おいて、本発明の抗脈管形成組成物でコートされている外科メッシュが、外科メ
ッシュが利用され得る任意の手順において利用され得る。例えば、本発明の１つ
の実施形態において、抗脈管形成組成物を有した外科メッシュレーデン（ｌａｄ
ｅｎ）は、構造に対する支持を提供するため、そして一定の量の抗脈管形成因子
を放出するために、腹部癌切除手術の間（例えば、結腸切除の後）に利用され得
る。
広範な種々の外科手順において利用され得る。例えば、本発明の１つの局面にお
いて、組成物（例えば、スプレーまたはフィルムの形態において）は、悪性組織
から正常な周囲の組織を分離するため、そして／または周囲の組織への疾患の広
がりを予防するために、腫瘍の除去の前に、領域をコートまたはスプレーするた
めに利用され得る。本発明の他の局面において、組成物（例えば、スプレーの形
態において）は、腫瘍をコートするため、または所望の場所において新脈管形成
を阻害するために、内視鏡手順を介して送達され得る。本発明のなお他の局面に
おいて、本発明の抗脈管形成組成物でコートされている外科メッシュが、外科メ
ッシュが利用され得る任意の手順において利用され得る。例えば、本発明の１つ
の実施形態において、抗脈管形成組成物を有した外科メッシュレーデン（ｌａｄ
ｅｎ）は、構造に対する支持を提供するため、そして一定の量の抗脈管形成因子
を放出するために、腹部癌切除手術の間（例えば、結腸切除の後）に利用され得
る。
【０４４７】
本発明のさらなる局面において、癌の局所的再発およびその部位での新しい血
管の形成が阻害されるように、切除後にポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴ
ニストおよび／またはアゴニストを腫瘍の切除縁に投与する工程を包含する、腫
瘍切除部位を処置するための方法が提供される。本発明の１つの実施形態におい
て、抗脈管形成化合物は、腫瘍切除部位に直接投与される（例えば、塗布、ブラ
ッシング（ｂｒｕｓｈｉｎｇ）、または他の方法で抗脈管形成化合物で腫瘍の切
除縁をコートすることによって適用される）。あるいは、抗脈管形成化合物は、
投与前に公知の外科ペーストに組み込まれ得る。本発明の特に好ましい実施形態
において、抗脈管形成化合物は、悪性疾患についての肝切除後および神経外科手
術後に適用される。
管の形成が阻害されるように、切除後にポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴ
ニストおよび／またはアゴニストを腫瘍の切除縁に投与する工程を包含する、腫
瘍切除部位を処置するための方法が提供される。本発明の１つの実施形態におい
て、抗脈管形成化合物は、腫瘍切除部位に直接投与される（例えば、塗布、ブラ
ッシング（ｂｒｕｓｈｉｎｇ）、または他の方法で抗脈管形成化合物で腫瘍の切
除縁をコートすることによって適用される）。あるいは、抗脈管形成化合物は、
投与前に公知の外科ペーストに組み込まれ得る。本発明の特に好ましい実施形態
において、抗脈管形成化合物は、悪性疾患についての肝切除後および神経外科手
術後に適用される。
【０４４８】
本発明の１つの局面において、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニスト
および／またはアゴニストは、広範な種々の腫瘍（例えば、乳房腫瘍、結腸腫瘍
、脳腫瘍および肝腫瘍を含む）の切除縁に投与され得る。例えば、本発明の１つ
の実施形態において、抗脈管形成化合物は、切除後に、神経学的腫瘍の部位に、
その部位での新しい血管の形成が阻害されるように投与され得る。
および／またはアゴニストは、広範な種々の腫瘍（例えば、乳房腫瘍、結腸腫瘍
、脳腫瘍および肝腫瘍を含む）の切除縁に投与され得る。例えば、本発明の１つ
の実施形態において、抗脈管形成化合物は、切除後に、神経学的腫瘍の部位に、
その部位での新しい血管の形成が阻害されるように投与され得る。
【０４４９】
本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび／またはアゴニ
ストはまた、他の抗脈管形成因子とともに投与され得る。他の抗脈管形成因子の
代表的な例としては以下が挙げられる：抗侵襲性因子、レチノイン酸およびその
誘導体、パクリタキセル、スラミン、メタロプロテイナーゼ−１の組織インヒビ
ター、メタロプロテイナーゼ−２の組織インヒビター、プラスミノーゲン活性化
インヒビター−１、プラスミノーゲン活性化インヒビター−２および種々の形態
のより軽い「ｄ群」遷移金属。
ストはまた、他の抗脈管形成因子とともに投与され得る。他の抗脈管形成因子の
代表的な例としては以下が挙げられる：抗侵襲性因子、レチノイン酸およびその
誘導体、パクリタキセル、スラミン、メタロプロテイナーゼ−１の組織インヒビ
ター、メタロプロテイナーゼ−２の組織インヒビター、プラスミノーゲン活性化
インヒビター−１、プラスミノーゲン活性化インヒビター−２および種々の形態
のより軽い「ｄ群」遷移金属。
【０４５０】
より軽い「ｄ群」遷移金属には、例えばバナジウム、モリブデン、タングステ
ン、チタン、ニオブおよびタンタル種が挙げられる。そのような遷移金属種は、
遷移金属錯体を形成し得る。上記の遷移金属種の適切な錯体としては、オキソ遷
移金属錯体が挙げられる。
ン、チタン、ニオブおよびタンタル種が挙げられる。そのような遷移金属種は、
遷移金属錯体を形成し得る。上記の遷移金属種の適切な錯体としては、オキソ遷
移金属錯体が挙げられる。
【０４５１】
バナジウム錯体の代表的な例としては、バナデート錯体およびバナジル錯体の
ようなオキソバナジウム錯体が挙げられる。適切なバナデート錯体としては、例
えばメタバナジン酸アンモニウム、メタバナジン酸ナトリウムおよびオルトバナ
ジン酸ナトリウムのようなメタバナデート錯体およびオルトバナデート錯体が挙
げられる。適切なバナジル錯体としては、例えばバナジルアセチルアセトネート
および硫酸バナジル（硫酸バナジル一水和物および硫酸バナジル三水和物のよう
な硫酸バナジル水和物を含む）が挙げられる。
ようなオキソバナジウム錯体が挙げられる。適切なバナデート錯体としては、例
えばメタバナジン酸アンモニウム、メタバナジン酸ナトリウムおよびオルトバナ
ジン酸ナトリウムのようなメタバナデート錯体およびオルトバナデート錯体が挙
げられる。適切なバナジル錯体としては、例えばバナジルアセチルアセトネート
および硫酸バナジル（硫酸バナジル一水和物および硫酸バナジル三水和物のよう
な硫酸バナジル水和物を含む）が挙げられる。
【０４５２】
タングステン錯体およびモリブデン錯体の代表的な例としてはまた、オキソ錯
体が挙げられる。適切なオキソタングステン錯体としては、タングステート錯体
およびタングステンオキシド錯体が挙げられる。適切なタングステート錯体とし
ては、タングステン酸アンモニウム、タングステン酸カルシウム、タングステン
酸ナトリウム二水和物およびタングステン酸が挙げられる。適切なタングステン
オキシドとしては、タングステン（ＩＶ）オキシドおよびタングステン（ＶＩ）
オキシドが挙げられる。適切なオキソモリブデン錯体としては、モリブデート、
モリブデンオキシドおよびモリブデニル錯体が挙げられる。適切なモリブデート
錯体としては、モリブデン酸アンモニウムおよびその水和物、モリブデン酸ナト
リウムおよびその水和物、ならびにモリブデン酸カリウムおよびその水和物が挙
げられる。適切なモリブデンオキシドとしては、モリブデン（ＶＩ）オキシド、
モリブデン（ＶＩ）オキシドおよびモリブデン酸が挙げられる。適切なモリブデ
ニル錯体としては、例えばモリブデニルアセチルアセトネートが挙げられる。他
の適切なタングステン錯体およびモリブデン錯体としては、例えばグリセロール
、酒石酸および糖由来のヒドロキソ誘導体が挙げられる。
体が挙げられる。適切なオキソタングステン錯体としては、タングステート錯体
およびタングステンオキシド錯体が挙げられる。適切なタングステート錯体とし
ては、タングステン酸アンモニウム、タングステン酸カルシウム、タングステン
酸ナトリウム二水和物およびタングステン酸が挙げられる。適切なタングステン
オキシドとしては、タングステン（ＩＶ）オキシドおよびタングステン（ＶＩ）
オキシドが挙げられる。適切なオキソモリブデン錯体としては、モリブデート、
モリブデンオキシドおよびモリブデニル錯体が挙げられる。適切なモリブデート
錯体としては、モリブデン酸アンモニウムおよびその水和物、モリブデン酸ナト
リウムおよびその水和物、ならびにモリブデン酸カリウムおよびその水和物が挙
げられる。適切なモリブデンオキシドとしては、モリブデン（ＶＩ）オキシド、
モリブデン（ＶＩ）オキシドおよびモリブデン酸が挙げられる。適切なモリブデ
ニル錯体としては、例えばモリブデニルアセチルアセトネートが挙げられる。他
の適切なタングステン錯体およびモリブデン錯体としては、例えばグリセロール
、酒石酸および糖由来のヒドロキソ誘導体が挙げられる。
【０４５３】
広範な種々の他の抗脈管形成因子もまた、本発明の状況において利用され得る
。代表的な例としては、以下が挙げられる：血小板因子４；硫酸プロタミン；硫
酸化キチン誘導体（クイーンクラブ（ｑｕｅｅｎ ｃｒａｂ）の殻から調製され
る）（Ｍｕｒａｔａら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５１：２２〜２６、１９９１）
；硫酸化多糖ペプチドグリカン複合体（ＳＰ−ＰＧ）（この化合物の機能は、ス
テロイド（例えば、エストロゲン）およびクエン酸タモキシフェンの存在によっ
て、増強され得る）；スタウロスポリン；基質代謝の調節因子（例えば、プロリ
ンアナログ、シスヒドロキシプロリン、ｄ，Ｌ−３，４−デヒドロプロリン、チ
アプロリン、α，α−ジピリジル，アミノプロピオニトリルフマレートを含む）
；４−プロピル−５−（４−ピリジニル）−２（３Ｈ）−オキサゾロン；メトト
レキサート；ミトザントロン；ヘパリン；インターフェロン；２マクログロブリ
ン−血清；ＣｈＩＭＰ−３（Ｐａｖｌｏｆｆら、Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２６７
：１７３２１〜１７３２６、１９９２）；キモスタチン（Ｔｏｍｋｉｎｓｏｎら
、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２８６：４７５〜４８０、１９９２）；シクロデキスト
リンテトラデカサルフェート；エポネマイシン；カンプトテシン；フマギリン（
Ｉｎｇｂｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５５〜５５７、１９９０）；チオリ
ンゴ酸金ナトリウム（「ＧＳＴ」；ＭａｔｓｕｂａｒａおよびＺｉｆｆ、Ｊ．Ｃ
ｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７９：１４４０〜１４４６、１９８７）；アンチコラゲ
ナーゼ−血清；α２−抗プラスミン（Ｈｏｌｍｅｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ
．２６２（４）：１６５９〜１６６４、１９８７）；ビサントレン（Ｎａｔｉｏ
ｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）；ロベンザリット二ナトリウム（
Ｎ−（２）−カルボキシフェニル−４−クロロアントロニル酸（ｃｈｌｏｒｏａ
ｎｔｈｒｏｎｉｌｉｃ ａｃｉｄ）二ナトリウム、すなわち「ＣＣＡ」；Ｔａｋ
ｅｕｃｈｉら、Ａｇｅｎｔｓ Ａｃｔｉｏｎｓ ３６：３１２〜３１６、１９９
２）；サリドマイド；Ａｎｇｏｓｔａｔｉｃステロイド；ＡＧＭ−１４７０；カ
ルボキシアミノイミダゾール（ｃａｒｂｏｘｙｎａｍｉｎｏｌｍｉｄａｚｏｌｅ
）；およびメタロプロテイナーゼインヒビター（例えば、ＢＢ９４）。
。代表的な例としては、以下が挙げられる：血小板因子４；硫酸プロタミン；硫
酸化キチン誘導体（クイーンクラブ（ｑｕｅｅｎ ｃｒａｂ）の殻から調製され
る）（Ｍｕｒａｔａら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５１：２２〜２６、１９９１）
；硫酸化多糖ペプチドグリカン複合体（ＳＰ−ＰＧ）（この化合物の機能は、ス
テロイド（例えば、エストロゲン）およびクエン酸タモキシフェンの存在によっ
て、増強され得る）；スタウロスポリン；基質代謝の調節因子（例えば、プロリ
ンアナログ、シスヒドロキシプロリン、ｄ，Ｌ−３，４−デヒドロプロリン、チ
アプロリン、α，α−ジピリジル，アミノプロピオニトリルフマレートを含む）
；４−プロピル−５−（４−ピリジニル）−２（３Ｈ）−オキサゾロン；メトト
レキサート；ミトザントロン；ヘパリン；インターフェロン；２マクログロブリ
ン−血清；ＣｈＩＭＰ−３（Ｐａｖｌｏｆｆら、Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２６７
：１７３２１〜１７３２６、１９９２）；キモスタチン（Ｔｏｍｋｉｎｓｏｎら
、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２８６：４７５〜４８０、１９９２）；シクロデキスト
リンテトラデカサルフェート；エポネマイシン；カンプトテシン；フマギリン（
Ｉｎｇｂｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５５〜５５７、１９９０）；チオリ
ンゴ酸金ナトリウム（「ＧＳＴ」；ＭａｔｓｕｂａｒａおよびＺｉｆｆ、Ｊ．Ｃ
ｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７９：１４４０〜１４４６、１９８７）；アンチコラゲ
ナーゼ−血清；α２−抗プラスミン（Ｈｏｌｍｅｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ
．２６２（４）：１６５９〜１６６４、１９８７）；ビサントレン（Ｎａｔｉｏ
ｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）；ロベンザリット二ナトリウム（
Ｎ−（２）−カルボキシフェニル−４−クロロアントロニル酸（ｃｈｌｏｒｏａ
ｎｔｈｒｏｎｉｌｉｃ ａｃｉｄ）二ナトリウム、すなわち「ＣＣＡ」；Ｔａｋ
ｅｕｃｈｉら、Ａｇｅｎｔｓ Ａｃｔｉｏｎｓ ３６：３１２〜３１６、１９９
２）；サリドマイド；Ａｎｇｏｓｔａｔｉｃステロイド；ＡＧＭ−１４７０；カ
ルボキシアミノイミダゾール（ｃａｒｂｏｘｙｎａｍｉｎｏｌｍｉｄａｚｏｌｅ
）；およびメタロプロテイナーゼインヒビター（例えば、ＢＢ９４）。
【０４５４】
（細胞レベルでの疾患）
本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアンタゴニストも
しくはアゴニストによって処置または検出され得る細胞生存の増大あるいはアポ
トーシスの阻害に関連する疾患には、癌（例えば、濾胞性リンパ腫、ｐ５３変異
を有する癌腫、およびホルモン依存性腫瘍、これらは以下：結腸癌、心臓腫瘍、
膵臓癌、黒色腫、網膜芽細胞腫、神経膠芽細胞腫、肺癌、腸癌、精巣癌、胃癌、
神経芽細胞腫、粘液腫、筋腫、リンパ腫、内皮腫、骨芽細胞腫、骨巨細胞腫、骨
肉腫、軟骨肉腫、腺腫、乳癌、前立腺癌、カポージ肉腫および卵巣癌を含むが、
これらに限定されない）；自己免疫障害（例えば、多発性硬化症、シェーグレン
症候群、橋本甲状腺炎、胆汁性肝硬変、ベーチェット病（Ｂｅｈｃｅｔ’ｓ ｄ
ｉｓｅａｓｅ）、クローン病、多発性筋炎、全身性エリテマトーデスおよび免疫
関連糸球体腎炎ならびに慢性関節リウマチ）およびウイルス感染（例えば、ヘル
ペスウイルス、ポックスウイルスおよびアデノウイルス）、炎症、対宿主性移植
片病、急性移植片拒絶、ならびに慢性移植片拒絶、が挙げられる。好ましい実施
形態において、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、および／またはアン
タゴニストは、特に上記に列挙される、癌の増殖、進行、および／または転移（
ｍｅｔａｓｉｓ）を阻害するために使用される。
しくはアゴニストによって処置または検出され得る細胞生存の増大あるいはアポ
トーシスの阻害に関連する疾患には、癌（例えば、濾胞性リンパ腫、ｐ５３変異
を有する癌腫、およびホルモン依存性腫瘍、これらは以下：結腸癌、心臓腫瘍、
膵臓癌、黒色腫、網膜芽細胞腫、神経膠芽細胞腫、肺癌、腸癌、精巣癌、胃癌、
神経芽細胞腫、粘液腫、筋腫、リンパ腫、内皮腫、骨芽細胞腫、骨巨細胞腫、骨
肉腫、軟骨肉腫、腺腫、乳癌、前立腺癌、カポージ肉腫および卵巣癌を含むが、
これらに限定されない）；自己免疫障害（例えば、多発性硬化症、シェーグレン
症候群、橋本甲状腺炎、胆汁性肝硬変、ベーチェット病（Ｂｅｈｃｅｔ’ｓ ｄ
ｉｓｅａｓｅ）、クローン病、多発性筋炎、全身性エリテマトーデスおよび免疫
関連糸球体腎炎ならびに慢性関節リウマチ）およびウイルス感染（例えば、ヘル
ペスウイルス、ポックスウイルスおよびアデノウイルス）、炎症、対宿主性移植
片病、急性移植片拒絶、ならびに慢性移植片拒絶、が挙げられる。好ましい実施
形態において、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、および／またはアン
タゴニストは、特に上記に列挙される、癌の増殖、進行、および／または転移（
ｍｅｔａｓｉｓ）を阻害するために使用される。
【０４５５】
本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくは
アンタゴニストによって処置あるいは検出され得る細胞生存の増大に関連するさ
らなる疾患または状態には、悪性疾患の進行および／または転移ならびに以下の
ような関連する障害が挙げられるが、これらに限定されない：白血病（急性白血
病（例えば、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病（骨髄芽球性、前骨髄球性
、骨髄単球性、単球性および赤白血病を含む）を含む）ならびに慢性白血病（例
えば、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病および慢性リンパ球性白血病））、真性赤
血球増加症、リンパ腫（例えば、ホジキン病および非ホジキン病）、多発性骨髄
腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、Ｈ鎖病、ならびに固形腫瘍（
肉腫および癌腫（例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉
腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リ
ンパ管肉腫、リンパ管内皮腫、骨膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、
横紋筋肉腫、結腸癌腫、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細
胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気
管支原生癌、腎細胞癌、肝細胞癌腫、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胎生期癌、
ウィルムス腫瘍、頸部癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経
膠腫、神経膠星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、脳室上衣細胞腫、松果体腫
、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）
、黒色腫、神経芽細胞腫、および網膜芽細胞腫）を含むが、これらに限定されな
い）。
アンタゴニストによって処置あるいは検出され得る細胞生存の増大に関連するさ
らなる疾患または状態には、悪性疾患の進行および／または転移ならびに以下の
ような関連する障害が挙げられるが、これらに限定されない：白血病（急性白血
病（例えば、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病（骨髄芽球性、前骨髄球性
、骨髄単球性、単球性および赤白血病を含む）を含む）ならびに慢性白血病（例
えば、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病および慢性リンパ球性白血病））、真性赤
血球増加症、リンパ腫（例えば、ホジキン病および非ホジキン病）、多発性骨髄
腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、Ｈ鎖病、ならびに固形腫瘍（
肉腫および癌腫（例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉
腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リ
ンパ管肉腫、リンパ管内皮腫、骨膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、
横紋筋肉腫、結腸癌腫、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細
胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気
管支原生癌、腎細胞癌、肝細胞癌腫、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胎生期癌、
ウィルムス腫瘍、頸部癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経
膠腫、神経膠星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、脳室上衣細胞腫、松果体腫
、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）
、黒色腫、神経芽細胞腫、および網膜芽細胞腫）を含むが、これらに限定されな
い）。
【０４５６】
本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしく
はアンタゴニストによって処置あるいは検出され得るアポトーシスの増大に関連
する疾患には、以下が挙げられる：ＡＩＤＳ；神経変性障害（例えば、アルツハ
イマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、色素性網膜炎、小脳変性およ
び脳腫瘍または以前に関連した疾患）；自己免疫障害（例えば、多発性硬化症、
シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、胆汁性肝硬変、ベーチェット病（Ｂｅｈｃ
ｅｔ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、クローン病、多発性筋炎、全身性エリテマトーデ
スおよび免疫関連糸球体腎炎ならびに慢性関節リウマチ）、脊髄形成異常症候群
（例えば、再生不良性貧血）、対宿主性移植片病、虚血性傷害（心筋梗塞、発作
および再灌流傷害によって生じるようなもの）、肝臓傷害（例えば、肝炎関連肝
臓傷害、虚血／再灌流傷害、胆汁うっ滞（ｃｈｏｌｅｓｔｏｓｉｓ）（胆管傷害
）および肝臓癌）；毒物誘導性肝臓疾患（アルコールによって引き起こされるよ
うなもの）、敗血症性ショック、悪液質ならびに食欲不振。
はアンタゴニストによって処置あるいは検出され得るアポトーシスの増大に関連
する疾患には、以下が挙げられる：ＡＩＤＳ；神経変性障害（例えば、アルツハ
イマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、色素性網膜炎、小脳変性およ
び脳腫瘍または以前に関連した疾患）；自己免疫障害（例えば、多発性硬化症、
シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、胆汁性肝硬変、ベーチェット病（Ｂｅｈｃ
ｅｔ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、クローン病、多発性筋炎、全身性エリテマトーデ
スおよび免疫関連糸球体腎炎ならびに慢性関節リウマチ）、脊髄形成異常症候群
（例えば、再生不良性貧血）、対宿主性移植片病、虚血性傷害（心筋梗塞、発作
および再灌流傷害によって生じるようなもの）、肝臓傷害（例えば、肝炎関連肝
臓傷害、虚血／再灌流傷害、胆汁うっ滞（ｃｈｏｌｅｓｔｏｓｉｓ）（胆管傷害
）および肝臓癌）；毒物誘導性肝臓疾患（アルコールによって引き起こされるよ
うなもの）、敗血症性ショック、悪液質ならびに食欲不振。
【０４５７】
（創傷治癒および上皮細胞増殖）
本発明のなおさらなる局面に従って、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリ
ペプチド、ならびにアゴニストもしくはアンタゴニストを、治療目的のため、例
えば、創傷治癒の目的のために上皮細胞増殖および基底ケラチノサイトを刺激す
るため、ならびに毛包産生および皮膚創傷の治癒を刺激するために、利用するた
めのプロセスが提供される。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、な
らびにアゴニストまたはアンタゴニストは、以下を含む創傷治癒を刺激すること
において臨床的に有用であり得る：外科的創傷、切除の創傷、深い創傷（真皮お
よび表皮の損傷を含む）、眼組織の創傷、歯の組織の創傷、口腔の創傷、糖尿病
性潰瘍、皮膚の潰瘍、肘の潰瘍、動脈性の潰瘍、静脈うっ滞潰瘍、熱への曝露ま
たは化学物質による熱傷、および他の異常な創傷治癒状態（例えば、尿毒症、栄
養失調、ビタミン欠乏、ならびにステロイド、放射能療法および抗腫瘍性薬物お
よび代謝拮抗物質を用いる全身性処置に関連する合併症。本発明のポリヌクレオ
チドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしくはアンタゴニストは、皮
膚の欠失後の皮膚の回復を促進するために使用され得る。
ペプチド、ならびにアゴニストもしくはアンタゴニストを、治療目的のため、例
えば、創傷治癒の目的のために上皮細胞増殖および基底ケラチノサイトを刺激す
るため、ならびに毛包産生および皮膚創傷の治癒を刺激するために、利用するた
めのプロセスが提供される。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、な
らびにアゴニストまたはアンタゴニストは、以下を含む創傷治癒を刺激すること
において臨床的に有用であり得る：外科的創傷、切除の創傷、深い創傷（真皮お
よび表皮の損傷を含む）、眼組織の創傷、歯の組織の創傷、口腔の創傷、糖尿病
性潰瘍、皮膚の潰瘍、肘の潰瘍、動脈性の潰瘍、静脈うっ滞潰瘍、熱への曝露ま
たは化学物質による熱傷、および他の異常な創傷治癒状態（例えば、尿毒症、栄
養失調、ビタミン欠乏、ならびにステロイド、放射能療法および抗腫瘍性薬物お
よび代謝拮抗物質を用いる全身性処置に関連する合併症。本発明のポリヌクレオ
チドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしくはアンタゴニストは、皮
膚の欠失後の皮膚の回復を促進するために使用され得る。
【０４５８】
本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしく
はアンタゴニストは、創傷床（ｗｏｕｎｄ ｂｅｄ）への皮膚移植片の付着を増
大するため、および創傷床からの再上皮形成を刺激するために使用され得る。以
下は、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、アゴニストまたはアンタ
ゴニストが創傷床への付着を増大するために使用され得る、移植片の型である：
自家移植片、人工皮膚、同種移植片（ａｌｌｏｇｒａｆｔ）、自己植皮片、自己
表皮移植片（ａｕｔｏｅｐｄｅｒｍｉｃ ｇｒａｆｔ）、無血管性（ａｖａｃｕ
ｌａｒ）移植片、ブレア−ブラウン移植片、骨移植片、胚胎組織移植片、真皮移
植片、遅延移植片、皮膚移植片、表皮移植片、筋膜移植片、全層皮膚移植片、異
種移植片（ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ ｇｒａｆｔ）、異種移植片（ｘｅｎｏｇ
ｒａｆｔ）、同種移植片（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｇｒａｆｔ）、増殖性移植片
、層板状の移植片、網状移植片、粘膜移植片、オリエ−ティールシュ移植片、大
網移植片（ｏｍｅｎｐａｌ ｇｒａｆｔ）、パッチの移植片、茎状移植片、全層
移植片（ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｇｒａｆｔ）、分層植皮片、分層皮膚移植片
。本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしく
はアンタゴニストは、皮膚の強度を助長するため、および高齢の皮膚の外見を改
善するために使用され得る。
はアンタゴニストは、創傷床（ｗｏｕｎｄ ｂｅｄ）への皮膚移植片の付着を増
大するため、および創傷床からの再上皮形成を刺激するために使用され得る。以
下は、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、アゴニストまたはアンタ
ゴニストが創傷床への付着を増大するために使用され得る、移植片の型である：
自家移植片、人工皮膚、同種移植片（ａｌｌｏｇｒａｆｔ）、自己植皮片、自己
表皮移植片（ａｕｔｏｅｐｄｅｒｍｉｃ ｇｒａｆｔ）、無血管性（ａｖａｃｕ
ｌａｒ）移植片、ブレア−ブラウン移植片、骨移植片、胚胎組織移植片、真皮移
植片、遅延移植片、皮膚移植片、表皮移植片、筋膜移植片、全層皮膚移植片、異
種移植片（ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ ｇｒａｆｔ）、異種移植片（ｘｅｎｏｇ
ｒａｆｔ）、同種移植片（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｇｒａｆｔ）、増殖性移植片
、層板状の移植片、網状移植片、粘膜移植片、オリエ−ティールシュ移植片、大
網移植片（ｏｍｅｎｐａｌ ｇｒａｆｔ）、パッチの移植片、茎状移植片、全層
移植片（ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｇｒａｆｔ）、分層植皮片、分層皮膚移植片
。本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしく
はアンタゴニストは、皮膚の強度を助長するため、および高齢の皮膚の外見を改
善するために使用され得る。
【０４５９】
本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしく
はアンタゴニストはまた、肝細胞増殖、および肺、乳房、膵臓、胃、小腸（ｓｍ
ａｌｌ ｉｎｔｅｓｔｉｎｇ）、および大腸における上皮細胞増殖における変化
を生じると考えられる。本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、なら
びにアゴニストもしくはアンタゴニストは、上皮細胞（例えば、皮脂細胞（ｓｅ
ｂｏｃｙｔｅ）、毛包、肝実質細胞、肺胞上皮細胞ＩＩ型（ｔｙｐｅ ＩＩ ｐ
ｎｅｕｍｏｃｙｔｅ）、ムチン産生杯細胞、および他の上皮細胞、ならびに皮膚
、肺、肝臓、および胃腸管内に含まれるそれらの先祖）の増殖を促進し得る。本
発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、アゴニストもしくはアンタゴニ
ストは、内皮細胞、ケラチノサイト、および基底ケラチノサイトの増殖を促進し
得る。
はアンタゴニストはまた、肝細胞増殖、および肺、乳房、膵臓、胃、小腸（ｓｍ
ａｌｌ ｉｎｔｅｓｔｉｎｇ）、および大腸における上皮細胞増殖における変化
を生じると考えられる。本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、なら
びにアゴニストもしくはアンタゴニストは、上皮細胞（例えば、皮脂細胞（ｓｅ
ｂｏｃｙｔｅ）、毛包、肝実質細胞、肺胞上皮細胞ＩＩ型（ｔｙｐｅ ＩＩ ｐ
ｎｅｕｍｏｃｙｔｅ）、ムチン産生杯細胞、および他の上皮細胞、ならびに皮膚
、肺、肝臓、および胃腸管内に含まれるそれらの先祖）の増殖を促進し得る。本
発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、アゴニストもしくはアンタゴニ
ストは、内皮細胞、ケラチノサイト、および基底ケラチノサイトの増殖を促進し
得る。
【０４６０】
本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはア
ンタゴニストはまた、照射、化学療法処置またはウイルス感染から生じる腸の毒
性の副作用を低減するために使用され得る。本発明のポリヌクレオチドまたはポ
リペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストは、小腸粘膜上で細胞保
護的な効果を有し得る。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならび
にアゴニストまたはアンタゴニストはまた、化学療法およびウイルス感染から生
じる粘膜炎（ｍｕｃｏｓｉｔｉｓ）（口粘膜）の治癒を刺激し得る。
ンタゴニストはまた、照射、化学療法処置またはウイルス感染から生じる腸の毒
性の副作用を低減するために使用され得る。本発明のポリヌクレオチドまたはポ
リペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストは、小腸粘膜上で細胞保
護的な効果を有し得る。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならび
にアゴニストまたはアンタゴニストはまた、化学療法およびウイルス感染から生
じる粘膜炎（ｍｕｃｏｓｉｔｉｓ）（口粘膜）の治癒を刺激し得る。
【０４６１】
本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはア
ンタゴニストは、熱傷を含む、完全なおよび部分的な厚さの皮膚欠損における皮
膚の十分な再生（すなわち、毛包、汗腺、および皮脂腺の再増殖）、乾癬のよう
な他の皮膚欠損の処置においてさらに使用され得る。本発明のポリヌクレオチド
またはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストは、表皮水疱症
、これらの損傷の再上皮形成を促進することによる頻繁な開放性かつ疼痛性の水
疱を生じる内在的な真皮への表皮の接着における欠損を処置するために使用され
得る。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまた
はアンタゴニストはまた、胃潰瘍および十二指腸潰瘍を処置し、そして粘膜の内
層の瘢痕形成ならびにより迅速な腺の粘膜および十二指腸の粘膜の内層の再生に
よる治癒を助けるために使用され得る。炎症性腸疾患（例えば、クーロン病およ
び潰瘍性大腸結腸炎）は、それぞれ、小腸または大腸の粘膜表面の崩壊を生じる
疾患である。従って、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびに
アゴニストまたはアンタゴニストは、粘膜表面の再表面化（ｒｅｓｕｌｆａｃｉ
ｎｇ）を促進して、より迅速な治癒を助けるため、および炎症性腸疾患の進行を
予防するために、使用され得る。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド
、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストを用いる処置は、胃腸管全体の粘膜
の産生に対して有意な効果を有することが予測され、そして腸粘膜を、摂取され
たかまたは外科手術後の有害な物質から保護するために使用され得る。本発明の
ポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニス
トは、本発明のポリヌクレオチドの発現下に関連する疾患を処置するために使用
され得る。
ンタゴニストは、熱傷を含む、完全なおよび部分的な厚さの皮膚欠損における皮
膚の十分な再生（すなわち、毛包、汗腺、および皮脂腺の再増殖）、乾癬のよう
な他の皮膚欠損の処置においてさらに使用され得る。本発明のポリヌクレオチド
またはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストは、表皮水疱症
、これらの損傷の再上皮形成を促進することによる頻繁な開放性かつ疼痛性の水
疱を生じる内在的な真皮への表皮の接着における欠損を処置するために使用され
得る。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまた
はアンタゴニストはまた、胃潰瘍および十二指腸潰瘍を処置し、そして粘膜の内
層の瘢痕形成ならびにより迅速な腺の粘膜および十二指腸の粘膜の内層の再生に
よる治癒を助けるために使用され得る。炎症性腸疾患（例えば、クーロン病およ
び潰瘍性大腸結腸炎）は、それぞれ、小腸または大腸の粘膜表面の崩壊を生じる
疾患である。従って、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびに
アゴニストまたはアンタゴニストは、粘膜表面の再表面化（ｒｅｓｕｌｆａｃｉ
ｎｇ）を促進して、より迅速な治癒を助けるため、および炎症性腸疾患の進行を
予防するために、使用され得る。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド
、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストを用いる処置は、胃腸管全体の粘膜
の産生に対して有意な効果を有することが予測され、そして腸粘膜を、摂取され
たかまたは外科手術後の有害な物質から保護するために使用され得る。本発明の
ポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニス
トは、本発明のポリヌクレオチドの発現下に関連する疾患を処置するために使用
され得る。
【０４６２】
さらに、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニスト
またはアンタゴニストは、種々の病的状態に起因する肺への損傷を予防および治
癒するために使用され得る。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、な
らびにアゴニストまたはアンタゴニストは、急性または慢性の肺損傷を予防また
は処置するために、増殖および分化を刺激し得、そして肺胞および気管支（ｂｒ
ｏｃｈｉｏｌａｒ）上皮の修復を促進し得る。例えば、気管支上皮および肺胞（
ａｖｅｏｌｉ）の壊死を生じる、気腫（これは、肺胞の進行性の損失を生じる）
および吸入損傷（すなわち、煙の吸入および熱傷から生じる）は、本発明のポリ
ヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストを
使用して効果的に処置され得る。また、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペ
プチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストは、肺胞上皮細胞ＩＩ型の増
殖および分化を刺激するために使用され得、これは、未熟な乳児における硝子膜
疾患（例えば、乳児呼吸窮迫症候群および気管支肺異形成症）のような疾患を処
置または予防することを助け得る。
またはアンタゴニストは、種々の病的状態に起因する肺への損傷を予防および治
癒するために使用され得る。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、な
らびにアゴニストまたはアンタゴニストは、急性または慢性の肺損傷を予防また
は処置するために、増殖および分化を刺激し得、そして肺胞および気管支（ｂｒ
ｏｃｈｉｏｌａｒ）上皮の修復を促進し得る。例えば、気管支上皮および肺胞（
ａｖｅｏｌｉ）の壊死を生じる、気腫（これは、肺胞の進行性の損失を生じる）
および吸入損傷（すなわち、煙の吸入および熱傷から生じる）は、本発明のポリ
ヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストを
使用して効果的に処置され得る。また、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペ
プチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストは、肺胞上皮細胞ＩＩ型の増
殖および分化を刺激するために使用され得、これは、未熟な乳児における硝子膜
疾患（例えば、乳児呼吸窮迫症候群および気管支肺異形成症）のような疾患を処
置または予防することを助け得る。
【０４６３】
本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはア
ンタゴニストは、肝実質細胞の増殖および分化を刺激し得、そして従って、肝臓
疾患および病状（例えば、肝硬変により生じる劇症肝不全、肝炎ウイルスおよび
毒性物質（すなわち、アセトアミノフェン、四塩化炭素（ｃａｒｂｏｎ ｔｅｔ
ｒａｈｏｌｏｒｉｄｅ）、および他の当該分野で公知の肝臓毒素）により生じる
肝臓損傷）を緩和または処置するために使用され得る。
ンタゴニストは、肝実質細胞の増殖および分化を刺激し得、そして従って、肝臓
疾患および病状（例えば、肝硬変により生じる劇症肝不全、肝炎ウイルスおよび
毒性物質（すなわち、アセトアミノフェン、四塩化炭素（ｃａｒｂｏｎ ｔｅｔ
ｒａｈｏｌｏｒｉｄｅ）、および他の当該分野で公知の肝臓毒素）により生じる
肝臓損傷）を緩和または処置するために使用され得る。
【０４６４】
さらに、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニスト
またはアンタゴニストは、真性糖尿病の発症を処置または予防するために使用さ
れ得る。新たにＩ型糖尿病およびＩＩ型糖尿病と診断された患者において、いく
つかの島細胞機能が残っている場合、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプ
チド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストは、その疾患の持続性の発現を
緩和、遅延または予防するように、その島機能を維持するために使用され得る。
また、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまた
はアンタゴニストは、島細胞機能を改善または促進するための島細胞移植におけ
る補助として使用され得る。
またはアンタゴニストは、真性糖尿病の発症を処置または予防するために使用さ
れ得る。新たにＩ型糖尿病およびＩＩ型糖尿病と診断された患者において、いく
つかの島細胞機能が残っている場合、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプ
チド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストは、その疾患の持続性の発現を
緩和、遅延または予防するように、その島機能を維持するために使用され得る。
また、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまた
はアンタゴニストは、島細胞機能を改善または促進するための島細胞移植におけ
る補助として使用され得る。
【０４６５】
（神経学的疾患）
本発明のなおさらなる局面に従って、治療目的のため、例えば、神経学的細胞
増殖および／または分化を刺激するために、本発明のポリヌクレオチドまたはポ
リペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストを利用するためのプロセ
スが提供される。従って、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニス
トおよび／またはアンタゴニストは、神経学的疾患を処置および／または検出す
るために使用され得る。さらに、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド
、あるいはアゴニストまたはアンタゴニストは、特定の神経系疾患または障害の
マーカーまたはディテクターとして使用され得る。
増殖および／または分化を刺激するために、本発明のポリヌクレオチドまたはポ
リペプチド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストを利用するためのプロセ
スが提供される。従って、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニス
トおよび／またはアンタゴニストは、神経学的疾患を処置および／または検出す
るために使用され得る。さらに、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド
、あるいはアゴニストまたはアンタゴニストは、特定の神経系疾患または障害の
マーカーまたはディテクターとして使用され得る。
【０４６６】
本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび／またはアンタ
ゴニストを用いて処置または検出され得る神経学的疾患の例としては、以下が挙
げられる：脳疾患（例えば、母系フェニルケトン尿症のようなフェニルケトン尿
症を含む代謝性脳疾患）、ピルビン酸カルボキシラーゼ欠乏症、ピルビン酸デヒ
ドロゲナーゼ複合体欠乏症、ヴェルニッケ脳障害、脳水腫、テント下（ｉｎｆｒ
ａｔｅｎｔｏｒｉａｌ）新生物を含む小脳性新生物のような脳新生物、脈絡叢新
生物のような脳室新生物、視床下部性新生物、テント上新生物、キャナヴァン病
、毛細血管拡張性運動失調のような脊髄小脳性退化を含む小脳性運動失調のよう
な小脳疾患、小脳性共同運動障害、フリードライヒ失調症、マチャド−ジョセフ
病、オリーブ橋小脳萎縮、テント下新生物のような小脳性新生物、びまん性軸周
囲性脳炎、球様細胞白質萎縮症、異染性白質萎縮症および亜急性硬化性汎脳炎の
ようなびまん性脳硬化、脳血管障害（例えば、頸動脈血栓症、頸動脈狭窄および
モヤモヤ病を含む頸動脈疾患）、脳のアミロイドアンギオパチー、大脳動脈瘤、
大脳動脈硬化症、大脳動静脈奇形、大脳動脈疾患、頸動脈血栓症、洞血栓症およ
びヴァレンベルク症候群のような脳塞栓症および血栓症、硬膜上血腫、硬膜下血
腫およびクモ膜下出血のような脳出血、脳亀裂骨折、一過性脳虚血、鎖骨下動脈
盗血症候群および椎骨脳底不全（ｖｅｒｔｅｂｒｏｂａｓｉｌａｒ ｉｎｓｕｆ
ｆｉｃｉｅｎｃｙ）のような脳虚血、多発脳梗塞性痴呆のような血管性痴呆、室
周白斑症（ｐｅｒｉｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｌｅｕｋｏｍａｌａｃｉａ）、群
発性頭痛のような血管性頭痛、偏頭痛、エイズ痴呆複合症のような痴呆症、アル
ツハイマー病およびクロイツフェルト−ヤーコプ病のような初老期痴呆、アルツ
ハイマー病および進行性核上性麻痺のような老年痴呆、多発脳梗塞性痴呆のよう
な血管性痴呆、びまん性軸周囲性脳炎のような脳炎、流行性脳炎、日本脳炎、セ
ントルイス脳炎、マダニ媒介性脳炎および西ナイル熱のようなウイルス性脳炎、
急性播種性脳脊髄炎、ブドウ膜髄膜炎症候群、脳炎後パーキンソン病および亜球
性硬化性汎脳炎のような髄膜脳脊髄炎、室周白斑症のような脳軟化症、点頭痙攣
を含む全身てんかんのようなてんかん、アプサンスてんかん（ａｂｓｅｎｃｅ
ｅｐｉｌｅｐｓｙ）、ＭＥＲＲＦ症候群を含むミオクローヌスてんかん、強直・
間代てんかん、複雑部分てんかん、前頭葉てんかんおよび側頭葉てんかんのよう
な部分てんかん、外傷後てんかん、持続性部分てんかんのようなてんかん重積持
続状態、ハレルフォルデン−シュパッツ症候群、ダンディ−ウォーカー症候群お
よび正常圧水頭症のような水頭症、視床下部性新生物のような視床下部性疾患、
大脳マラリア、脱力発作を含むナルコレプシー、延髄ポリオ（ｂｕｌｂａｒ ｐ
ｏｉｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）、大脳偽腫瘍、レット症候群、ライ症候群、視床疾患
、大脳トキソプラスマ症、頭蓋内結核腫およびツェルヴェーガー症候群、エイズ
痴呆複合症のような中枢神経系感染、脳膿瘍、硬膜下蓄膿症、ウマの脳脊髄炎の
ような脳脊髄炎、ベネズエラウマ脳脊髄炎、壊死性出血性脳脊髄炎、ビスナ、大
脳マラリア、クモ膜炎のような髄膜炎、リンパ球性脈絡髄膜炎を含むウイルス性
髄膜炎のような無菌性髄膜炎、ヘモフィルス髄膜炎を含む細菌性髄膜炎、リステ
リア髄膜炎、ウォーターハウス−フリーデリックセン症候群のような髄膜炎菌性
脳脊髄膜炎、肺炎球菌髄膜炎および髄膜結核症、クリプトコックス髄膜炎のよう
な真菌性髄膜炎、硬膜下滲出、ブドウ膜髄膜脳炎症候群のような髄膜脳炎、横行
脊髄炎（ｔｒａｎｓｖｅｒｓｅ ｍｙｅｌｉｔｉｓ）のような脊髄炎、脊髄ろう
のような神経梅毒、延髄ポリオおよびポリオ後症候群を含むポリオ、プリオン病
（例えば、クロイツフェルト−ヤーコプ病、ウシの海綿状脳症、ゲルストコン−
シュトロイスラー症候群、クールー、スクラピー）大脳トキソプラスマ症、テン
ト下新生物のような小脳性新生物を含む脳新生物のような中枢神経系新生物、脈
絡叢新生物、視床下部性新生物およびテント上新生物のような脳室新生物、髄膜
新生物、硬膜外新生物を含む脊髄新生物、キャナヴァン病のような脱髄疾患、副
腎脳白質ジストロフィーを含むびまん性大脳硬化症（ｄｉｆｆｕｓｅ ｃｅｒｅ
ｂｒａｌ ｓｃｅｌｏｒｉｓ）、びまん性軸周囲性脳炎、球様細胞白質萎縮症、
異染性白質萎縮症のようびまん性大脳硬化症、アレルギー性脳脊髄炎、壊死性出
血性脳脊髄炎、進行性多病巣性白質脳障害、多発性硬化症、橋中央ミエリン溶解
、横行脊髄炎、視神経脊髄炎、スクラピー、脊柱前弯症、慢性疲労症候群、ビス
ナ、高圧神経質症候群（Ｈｉｇｈ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ Ｎｅｒｖｏｕｓ Ｓｙｎ
ｄｒｏｍｅ）、髄膜症、先天性筋無緊張症のような脊髄疾患、筋萎縮性側索硬化
症、ヴェルドニッヒ−ホフマン病のような棘筋萎縮、脊髄圧搾、硬膜外新生物の
ような脊髄新生物、脊髄空洞症、脊髄ろう、スティッフマン症候群、母親由来１
５ ｑ‐１３微少欠損のような精神遅滞、ネコ鳴き症候群、ド・ランゲ症候群、
ダウン症候群、ガングリオシドーシスＧ（Ｍ１）のようなガングリオシドーシス
、ザントホフ病、テイ−サックス病、ハートナップ病、ホモシスチン尿症、ロー
レンス−ムーン−ビードル症候群、レッシュ−ナイハン症候群、カエデシロップ
病、フコース蓄積症のようなムコリピドーシス、ニューロンセロイド脂褐素沈着
症、眼脳腎症候群、母系フェニルケトン尿のようなフェニルケトン尿症、プラー
ダー−ヴィリ症候群、レット症候群、ルービンスタイン−テービ症候群、結節硬
化症、ＷＡＧＲ症候群、全前脳症のような神経系異常、水無能症（ｈｙｄｒａｎ
ｇｅｎｃｅｐｈａｌｙ）を含む無能症のような神経管不全、アルノルト−キアー
リ奇形、脳ヘルニア、髄膜瘤、髄膜脊髄瘤、嚢胞性二分脊椎および潜在性二分脊
椎のような脊髄癒合不全、シャルコー−マリー疾患を含む遺伝性の運動および感
覚ニューロン障害、視覚萎縮症、レフスム病、遺伝性痙性対麻痺、ヴェルドニッ
ヒ−ホフマン病、先天性痛覚脱失症および家族性自律神経障害のような遺伝性感
覚および自律性ニューロパシー、神経学的症状発現（例えば、ゲルストマン症候
群を含む失認）、逆向性健忘症のような健忘症、失行症、神経因性膀胱、脱力発
作、難聴、部分聴覚欠失および大声（ｌｕｄｎｅｓｓ）レクルートメントおよび
耳鳴を含む聴覚障害のような情報伝達障害、失書症、ブロカ失語症およびヴェル
ニッケ失語症を含む失語症のような言語障害、急性失読症のような失読症、言語
発達障害、名称失語症、ブロカ失語症およびヴェルニッケ失語症を含む失語症の
ような発語障害、蓄積障害、構語障害、反響言語、無言症およびどもりを含む発
語障害のような情報伝達障害、失声症および嗄声のような発声障害、除脳硬直状
態、せん妄、線維束性攣縮、幻覚、髄膜症、母親由来１５ ｑ‐１３微少欠損、
運動失調、アテトーシス、舞踏病、失調症、運動低下症、筋肉緊張低下、ミオク
ローヌス、チック、斜頸および振せんのような運動障害、スティッフマン症候群
のような筋肉硬直のような筋肉緊張亢進、筋肉痙性、耳帯状疱疹を含む顔面神経
麻痺のような神経麻痺、胃不全麻痺、片麻痺、複視のような眼筋麻痺、デュエー
ン症候群、ホルナー症候群、キーンズ症候群のような慢性進行性外眼筋麻痺症、
球麻痺、熱帯性痙攣不全対麻痺、ブラウン−セカール症候群、四肢麻痺、呼吸麻
痺および声帯麻痺のような対麻痺、不全麻痺、幻肢、無味覚症および味覚不全の
ような味覚障害、弱視、失明、色覚異常、複視、半盲、視野暗点および準正常視
覚（ｓｕｂｎｏｒｍａｌ ｖｉｓｉｏｎ）のような視覚障害、クライネ−レヴィ
ン症候群、不眠症および夢遊症を含む過眠症のような睡眠障害、開口障害のよう
な痙縮、昏睡、持続性植物状態および失神およびめまいのような意識消失、先天
性筋無緊張症のような神経筋疾患、筋萎縮性側索硬化症、ランバート−イートン
筋無力症症候群、運動神経疾患、棘筋萎縮、シャルコー−マリー疾患およびヴェ
ルドニッヒ−ホフマン病のような筋萎縮、後ポリオ症候群、筋ジストロフィー、
重症筋無力症、萎縮性筋緊張症、先天性筋緊張症、ネマリンミオパシー、家族性
期性四肢麻痺、多発性パラミロクローヌス（Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ Ｐａｒａｍｙ
ｌｏｃｌｏｎｕｓ）、熱帯性痙攣不全対麻痺およびスティッフマン症候群、先端
肢端疼痛症のような末梢神経系疾患、腎アミロイドーシス、アーディー症候群、
Ｂａｒｒｅ−Ｌｉｅｏｕ症候群、家族性自律神経障害、ホルナー症候群、反射性
交感神経性ジストロフィーおよびシャイ−ドレーガー症候群のような自律神経系
疾患、神経線維腫症２を含む聴神経腫のような内耳神経疾患のような脳神経疾患
、顔面神経痛のような顔面神経疾患、メルカーソン−ローゼンタール症候群、弱
視を含む眼球運動性障害、眼振、眼球運動麻痺、デュエーン症候群のような眼筋
麻痺、ホルナー症候群、キーンズ症候群を含む慢性進行性外眼筋麻痺症、内斜視
および外斜視のような斜視、動眼神経麻痺、遺伝性眼萎縮症を含む眼萎縮症のよ
うな眼神経疾患、視神経円板結晶腔、視神経脊髄炎のような視神経炎、乳頭水腫
、三叉神経痛、声帯麻痺、視神経脊髄炎および脊柱前弯症のような脱髄疾患、糖
尿病性足のような糖尿病性ニューロパシー、手根管症候群のような神経圧搾症候
群、足根管症候群、頸肋症候群のような胸郭出口症候群、尺骨神経圧搾症候群、
カウザルギー、頸腕神経痛、顔面神経痛および三叉神経痛のような神経痛、実験
的アレルギー性神経炎、眼神経炎、多発性神経炎、多発性神経根神経炎および神
経根炎（例えば、多発性神経根炎、遺伝性運動および感覚ニューロパシー（例え
ば、シャルコー−マリエ疾患、遺伝性眼萎縮症、レフサム病、遺伝性痙性対麻痺
およびヴェルドニッヒ‐ホフマン病、遺伝性感覚および自律神経ニューロパシー
（先天性痛覚脱失および．家族性自律神経障害を含む）、ＰＯＥＭＳ症候群、坐
骨神経痛、味覚性発汗症候群およびテタニー））のような神経炎。
ゴニストを用いて処置または検出され得る神経学的疾患の例としては、以下が挙
げられる：脳疾患（例えば、母系フェニルケトン尿症のようなフェニルケトン尿
症を含む代謝性脳疾患）、ピルビン酸カルボキシラーゼ欠乏症、ピルビン酸デヒ
ドロゲナーゼ複合体欠乏症、ヴェルニッケ脳障害、脳水腫、テント下（ｉｎｆｒ
ａｔｅｎｔｏｒｉａｌ）新生物を含む小脳性新生物のような脳新生物、脈絡叢新
生物のような脳室新生物、視床下部性新生物、テント上新生物、キャナヴァン病
、毛細血管拡張性運動失調のような脊髄小脳性退化を含む小脳性運動失調のよう
な小脳疾患、小脳性共同運動障害、フリードライヒ失調症、マチャド−ジョセフ
病、オリーブ橋小脳萎縮、テント下新生物のような小脳性新生物、びまん性軸周
囲性脳炎、球様細胞白質萎縮症、異染性白質萎縮症および亜急性硬化性汎脳炎の
ようなびまん性脳硬化、脳血管障害（例えば、頸動脈血栓症、頸動脈狭窄および
モヤモヤ病を含む頸動脈疾患）、脳のアミロイドアンギオパチー、大脳動脈瘤、
大脳動脈硬化症、大脳動静脈奇形、大脳動脈疾患、頸動脈血栓症、洞血栓症およ
びヴァレンベルク症候群のような脳塞栓症および血栓症、硬膜上血腫、硬膜下血
腫およびクモ膜下出血のような脳出血、脳亀裂骨折、一過性脳虚血、鎖骨下動脈
盗血症候群および椎骨脳底不全（ｖｅｒｔｅｂｒｏｂａｓｉｌａｒ ｉｎｓｕｆ
ｆｉｃｉｅｎｃｙ）のような脳虚血、多発脳梗塞性痴呆のような血管性痴呆、室
周白斑症（ｐｅｒｉｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｌｅｕｋｏｍａｌａｃｉａ）、群
発性頭痛のような血管性頭痛、偏頭痛、エイズ痴呆複合症のような痴呆症、アル
ツハイマー病およびクロイツフェルト−ヤーコプ病のような初老期痴呆、アルツ
ハイマー病および進行性核上性麻痺のような老年痴呆、多発脳梗塞性痴呆のよう
な血管性痴呆、びまん性軸周囲性脳炎のような脳炎、流行性脳炎、日本脳炎、セ
ントルイス脳炎、マダニ媒介性脳炎および西ナイル熱のようなウイルス性脳炎、
急性播種性脳脊髄炎、ブドウ膜髄膜炎症候群、脳炎後パーキンソン病および亜球
性硬化性汎脳炎のような髄膜脳脊髄炎、室周白斑症のような脳軟化症、点頭痙攣
を含む全身てんかんのようなてんかん、アプサンスてんかん（ａｂｓｅｎｃｅ
ｅｐｉｌｅｐｓｙ）、ＭＥＲＲＦ症候群を含むミオクローヌスてんかん、強直・
間代てんかん、複雑部分てんかん、前頭葉てんかんおよび側頭葉てんかんのよう
な部分てんかん、外傷後てんかん、持続性部分てんかんのようなてんかん重積持
続状態、ハレルフォルデン−シュパッツ症候群、ダンディ−ウォーカー症候群お
よび正常圧水頭症のような水頭症、視床下部性新生物のような視床下部性疾患、
大脳マラリア、脱力発作を含むナルコレプシー、延髄ポリオ（ｂｕｌｂａｒ ｐ
ｏｉｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）、大脳偽腫瘍、レット症候群、ライ症候群、視床疾患
、大脳トキソプラスマ症、頭蓋内結核腫およびツェルヴェーガー症候群、エイズ
痴呆複合症のような中枢神経系感染、脳膿瘍、硬膜下蓄膿症、ウマの脳脊髄炎の
ような脳脊髄炎、ベネズエラウマ脳脊髄炎、壊死性出血性脳脊髄炎、ビスナ、大
脳マラリア、クモ膜炎のような髄膜炎、リンパ球性脈絡髄膜炎を含むウイルス性
髄膜炎のような無菌性髄膜炎、ヘモフィルス髄膜炎を含む細菌性髄膜炎、リステ
リア髄膜炎、ウォーターハウス−フリーデリックセン症候群のような髄膜炎菌性
脳脊髄膜炎、肺炎球菌髄膜炎および髄膜結核症、クリプトコックス髄膜炎のよう
な真菌性髄膜炎、硬膜下滲出、ブドウ膜髄膜脳炎症候群のような髄膜脳炎、横行
脊髄炎（ｔｒａｎｓｖｅｒｓｅ ｍｙｅｌｉｔｉｓ）のような脊髄炎、脊髄ろう
のような神経梅毒、延髄ポリオおよびポリオ後症候群を含むポリオ、プリオン病
（例えば、クロイツフェルト−ヤーコプ病、ウシの海綿状脳症、ゲルストコン−
シュトロイスラー症候群、クールー、スクラピー）大脳トキソプラスマ症、テン
ト下新生物のような小脳性新生物を含む脳新生物のような中枢神経系新生物、脈
絡叢新生物、視床下部性新生物およびテント上新生物のような脳室新生物、髄膜
新生物、硬膜外新生物を含む脊髄新生物、キャナヴァン病のような脱髄疾患、副
腎脳白質ジストロフィーを含むびまん性大脳硬化症（ｄｉｆｆｕｓｅ ｃｅｒｅ
ｂｒａｌ ｓｃｅｌｏｒｉｓ）、びまん性軸周囲性脳炎、球様細胞白質萎縮症、
異染性白質萎縮症のようびまん性大脳硬化症、アレルギー性脳脊髄炎、壊死性出
血性脳脊髄炎、進行性多病巣性白質脳障害、多発性硬化症、橋中央ミエリン溶解
、横行脊髄炎、視神経脊髄炎、スクラピー、脊柱前弯症、慢性疲労症候群、ビス
ナ、高圧神経質症候群（Ｈｉｇｈ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ Ｎｅｒｖｏｕｓ Ｓｙｎ
ｄｒｏｍｅ）、髄膜症、先天性筋無緊張症のような脊髄疾患、筋萎縮性側索硬化
症、ヴェルドニッヒ−ホフマン病のような棘筋萎縮、脊髄圧搾、硬膜外新生物の
ような脊髄新生物、脊髄空洞症、脊髄ろう、スティッフマン症候群、母親由来１
５ ｑ‐１３微少欠損のような精神遅滞、ネコ鳴き症候群、ド・ランゲ症候群、
ダウン症候群、ガングリオシドーシスＧ（Ｍ１）のようなガングリオシドーシス
、ザントホフ病、テイ−サックス病、ハートナップ病、ホモシスチン尿症、ロー
レンス−ムーン−ビードル症候群、レッシュ−ナイハン症候群、カエデシロップ
病、フコース蓄積症のようなムコリピドーシス、ニューロンセロイド脂褐素沈着
症、眼脳腎症候群、母系フェニルケトン尿のようなフェニルケトン尿症、プラー
ダー−ヴィリ症候群、レット症候群、ルービンスタイン−テービ症候群、結節硬
化症、ＷＡＧＲ症候群、全前脳症のような神経系異常、水無能症（ｈｙｄｒａｎ
ｇｅｎｃｅｐｈａｌｙ）を含む無能症のような神経管不全、アルノルト−キアー
リ奇形、脳ヘルニア、髄膜瘤、髄膜脊髄瘤、嚢胞性二分脊椎および潜在性二分脊
椎のような脊髄癒合不全、シャルコー−マリー疾患を含む遺伝性の運動および感
覚ニューロン障害、視覚萎縮症、レフスム病、遺伝性痙性対麻痺、ヴェルドニッ
ヒ−ホフマン病、先天性痛覚脱失症および家族性自律神経障害のような遺伝性感
覚および自律性ニューロパシー、神経学的症状発現（例えば、ゲルストマン症候
群を含む失認）、逆向性健忘症のような健忘症、失行症、神経因性膀胱、脱力発
作、難聴、部分聴覚欠失および大声（ｌｕｄｎｅｓｓ）レクルートメントおよび
耳鳴を含む聴覚障害のような情報伝達障害、失書症、ブロカ失語症およびヴェル
ニッケ失語症を含む失語症のような言語障害、急性失読症のような失読症、言語
発達障害、名称失語症、ブロカ失語症およびヴェルニッケ失語症を含む失語症の
ような発語障害、蓄積障害、構語障害、反響言語、無言症およびどもりを含む発
語障害のような情報伝達障害、失声症および嗄声のような発声障害、除脳硬直状
態、せん妄、線維束性攣縮、幻覚、髄膜症、母親由来１５ ｑ‐１３微少欠損、
運動失調、アテトーシス、舞踏病、失調症、運動低下症、筋肉緊張低下、ミオク
ローヌス、チック、斜頸および振せんのような運動障害、スティッフマン症候群
のような筋肉硬直のような筋肉緊張亢進、筋肉痙性、耳帯状疱疹を含む顔面神経
麻痺のような神経麻痺、胃不全麻痺、片麻痺、複視のような眼筋麻痺、デュエー
ン症候群、ホルナー症候群、キーンズ症候群のような慢性進行性外眼筋麻痺症、
球麻痺、熱帯性痙攣不全対麻痺、ブラウン−セカール症候群、四肢麻痺、呼吸麻
痺および声帯麻痺のような対麻痺、不全麻痺、幻肢、無味覚症および味覚不全の
ような味覚障害、弱視、失明、色覚異常、複視、半盲、視野暗点および準正常視
覚（ｓｕｂｎｏｒｍａｌ ｖｉｓｉｏｎ）のような視覚障害、クライネ−レヴィ
ン症候群、不眠症および夢遊症を含む過眠症のような睡眠障害、開口障害のよう
な痙縮、昏睡、持続性植物状態および失神およびめまいのような意識消失、先天
性筋無緊張症のような神経筋疾患、筋萎縮性側索硬化症、ランバート−イートン
筋無力症症候群、運動神経疾患、棘筋萎縮、シャルコー−マリー疾患およびヴェ
ルドニッヒ−ホフマン病のような筋萎縮、後ポリオ症候群、筋ジストロフィー、
重症筋無力症、萎縮性筋緊張症、先天性筋緊張症、ネマリンミオパシー、家族性
期性四肢麻痺、多発性パラミロクローヌス（Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ Ｐａｒａｍｙ
ｌｏｃｌｏｎｕｓ）、熱帯性痙攣不全対麻痺およびスティッフマン症候群、先端
肢端疼痛症のような末梢神経系疾患、腎アミロイドーシス、アーディー症候群、
Ｂａｒｒｅ−Ｌｉｅｏｕ症候群、家族性自律神経障害、ホルナー症候群、反射性
交感神経性ジストロフィーおよびシャイ−ドレーガー症候群のような自律神経系
疾患、神経線維腫症２を含む聴神経腫のような内耳神経疾患のような脳神経疾患
、顔面神経痛のような顔面神経疾患、メルカーソン−ローゼンタール症候群、弱
視を含む眼球運動性障害、眼振、眼球運動麻痺、デュエーン症候群のような眼筋
麻痺、ホルナー症候群、キーンズ症候群を含む慢性進行性外眼筋麻痺症、内斜視
および外斜視のような斜視、動眼神経麻痺、遺伝性眼萎縮症を含む眼萎縮症のよ
うな眼神経疾患、視神経円板結晶腔、視神経脊髄炎のような視神経炎、乳頭水腫
、三叉神経痛、声帯麻痺、視神経脊髄炎および脊柱前弯症のような脱髄疾患、糖
尿病性足のような糖尿病性ニューロパシー、手根管症候群のような神経圧搾症候
群、足根管症候群、頸肋症候群のような胸郭出口症候群、尺骨神経圧搾症候群、
カウザルギー、頸腕神経痛、顔面神経痛および三叉神経痛のような神経痛、実験
的アレルギー性神経炎、眼神経炎、多発性神経炎、多発性神経根神経炎および神
経根炎（例えば、多発性神経根炎、遺伝性運動および感覚ニューロパシー（例え
ば、シャルコー−マリエ疾患、遺伝性眼萎縮症、レフサム病、遺伝性痙性対麻痺
およびヴェルドニッヒ‐ホフマン病、遺伝性感覚および自律神経ニューロパシー
（先天性痛覚脱失および．家族性自律神経障害を含む）、ＰＯＥＭＳ症候群、坐
骨神経痛、味覚性発汗症候群およびテタニー））のような神経炎。
【０４６７】
（感染性疾患）
本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびにアゴニストまたはア
ンタゴニストは、感染因子を処置または検出するために用いられ得る。例えば、
免疫応答を上昇させることによって、特にＢ細胞および／またはＴ細胞の増殖お
よび分化を増加させることによって、感染性疾患が処置され得る。免疫応答は、
既存の免疫応答を上昇させるか、または新たな免疫応答を開始させるかのいずれ
かにより上昇され得る。あるいは、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチ
ド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストはまた、必ずしも免疫応答を誘発
することなく、感染因子を直接阻害し得る。
ンタゴニストは、感染因子を処置または検出するために用いられ得る。例えば、
免疫応答を上昇させることによって、特にＢ細胞および／またはＴ細胞の増殖お
よび分化を増加させることによって、感染性疾患が処置され得る。免疫応答は、
既存の免疫応答を上昇させるか、または新たな免疫応答を開始させるかのいずれ
かにより上昇され得る。あるいは、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチ
ド、ならびにアゴニストまたはアンタゴニストはまた、必ずしも免疫応答を誘発
することなく、感染因子を直接阻害し得る。
【０４６８】
ウイルスは、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、および／また
はアゴニストもしくはアンタゴニストにより処置または検出され得る疾患または
症状を引き起こし得る感染因子の一例である。ウイルスの例としては、以下のＤ
ＮＡおよびＲＮＡのウイルスおよびウイルス科が挙げられるがこれらに限定され
ない：アルボウイルス、アデノウイルス科、アレナウイルス科、アルテリウイル
ス、ビルナウイルス科、ブンヤウイルス科、カルシウイルス科、サルコウイルス
科（Ｃｉｒｃｏｖｉｒｉｄａｅ）、コロナウイルス科、デング熱、ＥＢＶ、ＨＩ
Ｖ、フラビウイルス科、ヘパドナウイルス科（肝炎）、ヘルペスウイルス科（例
えば、サイトメガロウイルス、単純ヘルペス、ヘルペス帯状疱疹）、モノネガウ
イルス（Ｍｏｎｏｎｅｇａｖｉｒｕｓ）（例えば、パラミクソウイルス科、麻疹
ウイルス、ラブドウイルス科）、オルソミクソウイルス科（例えば、インフルエ
ンザＡ、インフルエンザＢ、およびパラインフルエンザ）、パピローマウイルス
、パポバウイルス科、パルボウイルス科、ピコルナウイルス科、ポックスウイル
ス科（例えば、痘瘡またはワクシニア）、レオウイルス科（例えば、ロタウイル
ス）、レトロウイルス科（ＨＴＬＶ−Ｉ、ＨＴＬＶ−ＩＩ、レンチウイルス）、
およびトガウイルス科（例えば、ルビウイルス属）。これらの科内に入るウイル
スは、以下を含むがこれらに限定されない種々の疾患または症状を引き起こし得
る：関節炎、細気管支炎（ｂｒｏｎｃｈｉｏｌｌｉｔｉｓ）、呼吸性シンシチウ
ムウイルス、脳炎、眼性感染症（例えば、結膜炎、角膜炎）、慢性疲労症候群、
肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｅ型、慢性活動性、デルタ）、日本脳炎Ｂ型、アルゼ
ンチン出血熱、チングニア、リフトバレー熱、黄熱病、髄膜炎、日和見感染症（
例えば、ＡＩＤＳ）、肺炎、バーキットリンパ腫、水痘、出血熱、麻疹、流行性
耳下腺炎、パラインフルエンザ、狂犬病、感冒、ポリオ、白血病、風疹、性感染
症、皮膚病（例えば、カポージ、いぼ）、およびウイルス血症。本発明のポリヌ
クレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストを
用いて、任意のこれらの症状または疾患が処置または検出され得る。特定の実施
形態において、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、またはアゴニストも
しくはアンタゴニストは、以下の処置に使用される：髄膜炎、デング熱、ＥＢＶ
、および／または肝炎（例えば、Ｂ型肝炎）。さらなる具体的な実施形態におい
て、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、またはアゴニストもしくはアン
タゴニストは、１以上の他の市販の肝炎ワクチンに非応答性の患者を処置するた
めに使用される。さらに具体的な実施形態において、本発明のポリヌクレオチド
、ポリペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストは、ＡＩＤＳを処置
するために使用される。
はアゴニストもしくはアンタゴニストにより処置または検出され得る疾患または
症状を引き起こし得る感染因子の一例である。ウイルスの例としては、以下のＤ
ＮＡおよびＲＮＡのウイルスおよびウイルス科が挙げられるがこれらに限定され
ない：アルボウイルス、アデノウイルス科、アレナウイルス科、アルテリウイル
ス、ビルナウイルス科、ブンヤウイルス科、カルシウイルス科、サルコウイルス
科（Ｃｉｒｃｏｖｉｒｉｄａｅ）、コロナウイルス科、デング熱、ＥＢＶ、ＨＩ
Ｖ、フラビウイルス科、ヘパドナウイルス科（肝炎）、ヘルペスウイルス科（例
えば、サイトメガロウイルス、単純ヘルペス、ヘルペス帯状疱疹）、モノネガウ
イルス（Ｍｏｎｏｎｅｇａｖｉｒｕｓ）（例えば、パラミクソウイルス科、麻疹
ウイルス、ラブドウイルス科）、オルソミクソウイルス科（例えば、インフルエ
ンザＡ、インフルエンザＢ、およびパラインフルエンザ）、パピローマウイルス
、パポバウイルス科、パルボウイルス科、ピコルナウイルス科、ポックスウイル
ス科（例えば、痘瘡またはワクシニア）、レオウイルス科（例えば、ロタウイル
ス）、レトロウイルス科（ＨＴＬＶ−Ｉ、ＨＴＬＶ−ＩＩ、レンチウイルス）、
およびトガウイルス科（例えば、ルビウイルス属）。これらの科内に入るウイル
スは、以下を含むがこれらに限定されない種々の疾患または症状を引き起こし得
る：関節炎、細気管支炎（ｂｒｏｎｃｈｉｏｌｌｉｔｉｓ）、呼吸性シンシチウ
ムウイルス、脳炎、眼性感染症（例えば、結膜炎、角膜炎）、慢性疲労症候群、
肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｅ型、慢性活動性、デルタ）、日本脳炎Ｂ型、アルゼ
ンチン出血熱、チングニア、リフトバレー熱、黄熱病、髄膜炎、日和見感染症（
例えば、ＡＩＤＳ）、肺炎、バーキットリンパ腫、水痘、出血熱、麻疹、流行性
耳下腺炎、パラインフルエンザ、狂犬病、感冒、ポリオ、白血病、風疹、性感染
症、皮膚病（例えば、カポージ、いぼ）、およびウイルス血症。本発明のポリヌ
クレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストを
用いて、任意のこれらの症状または疾患が処置または検出され得る。特定の実施
形態において、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、またはアゴニストも
しくはアンタゴニストは、以下の処置に使用される：髄膜炎、デング熱、ＥＢＶ
、および／または肝炎（例えば、Ｂ型肝炎）。さらなる具体的な実施形態におい
て、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、またはアゴニストもしくはアン
タゴニストは、１以上の他の市販の肝炎ワクチンに非応答性の患者を処置するた
めに使用される。さらに具体的な実施形態において、本発明のポリヌクレオチド
、ポリペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストは、ＡＩＤＳを処置
するために使用される。
【０４６９】
同様に、疾患または症状を引き起こし得、かつ本発明のポリヌクレオチドもし
くはポリペプチド、および／またはアゴニストもしくはアンタゴニストによって
処置または検出され得る細菌性因子あるいは真菌性因子は、以下のグラム陰性お
よびグラム陽性細菌および細菌科ならびに真菌を含むがこれらに限定されない：
Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ（例えば、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ、
Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｎｏｒｃａｒｄｉａ）、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕ
ｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｏｓｉｓ、Ｂａｃｉｌｌａｃｅ
ａｅ（例えば、Ａｎｔｈｒａｘ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、Ｂａｃｔｅｒｏｉ
ｄａｃｅａｅ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｏｓｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｂｏｒｒ
ｅｌｉａ（例えば、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、Ｂｒｕｃｅ
ｌｌｏｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄｉａｓｉｓ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｃｏｃ
ｃｉｄｉｏｉｄｏｍｙｃｏｓｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｏｓｉｓ、Ｄｅｒｍａ
ｔｏｃｙｃｏｓｅｓ、Ｅ．ｃｏｌｉ（例えば、Ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃ
Ｅ．ｃｏｌｉおよびＥｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ Ｅ．ｃｏｌｉ）、
Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｓａｌｍｏｎ
ｅｌｌａ（例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ、およびＳａｌｍｏｎｅ
ｌｌａ ｐａｒａｔｙｐｈｉ）、Ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、Ｅｒ
ｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌｏ
ｓｉｓ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒｏｓｉｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍ
ａｔａｌｅｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃ
ｈｏｌｅｒａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｃｅａｅ（例えば、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃ
ｔｅｒ、Ｇｏｎｏｒｒｈｅａ、Ｍｅｎｉｇｏｃｏｃｃａｌ）、Ｍｅｉｓｓｅｒｉ
ａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｃｅａの感染症（例え
ば、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｈｅａｍｏｐｈｉｌｕｓ（例えば、Ｈｅａ
ｍｏｐｈｉｌｕｓインフルエンザＢ型）、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）、Ｐｓｅｕ
ｄｏｍｏｎａｓ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｃｅａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｃｅａｅ
、Ｓｙｐｈｉｌｉｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｐｐ．、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃ
ａｌ、Ｍｅｎｉｎｇｉｏｃｏｃｃａｌ、ＰｎｅｕｍｏｃｏｃｃａｌならびにＳｔ
ｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏ
ｎｉａｅおよびＢ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）。これらの細菌または真菌の
科は、以下を含むがこれらに限定されない疾患または症状を引き起こし得る：菌
血症、心内膜炎、眼感染症（結膜炎、結核、ブドウ膜炎）、歯肉炎、日和見感染
症（例えば、ＡＩＤＳに関連した感染症）、爪周囲炎、プロテーゼ関連感染症、
ライター病、気道感染症（例えば、百日咳または蓄膿症）、敗血症、ライム病、
ネコ引っ掻き病、赤痢、パラチフス熱、食中毒、腸チフス、肺炎、淋病、髄膜炎
（例えば、髄膜炎Ａ型およびＢ型）、クラミジア、梅毒、ジフテリア、ライ病、
パラ結核、結核、狼瘡、ボツリヌス中毒、壊疽、破傷風、膿痂疹、リウマチ熱、
猩紅熱、性感染病、皮膚病（例えば、蜂巣炎、皮膚真菌症（ｄｅｒｍａｔｏｃｙ
ｃｏｓｅｓ））、毒血症、尿路感染症、創傷感染症。本発明のポリペプチドもし
くはポリヌクレオチド、アゴニストもしくはアンタゴニストを用いて、これらの
症状もしくは疾患のいずれかを処置または検出し得る。具体的な実施形態におい
て、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストまたはアンタゴニス
トは、以下を処置するために使用される：破傷風、ジフテリア、ボツリヅム、お
よび／またはＢ型髄膜炎。
くはポリペプチド、および／またはアゴニストもしくはアンタゴニストによって
処置または検出され得る細菌性因子あるいは真菌性因子は、以下のグラム陰性お
よびグラム陽性細菌および細菌科ならびに真菌を含むがこれらに限定されない：
Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ（例えば、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ、
Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｎｏｒｃａｒｄｉａ）、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕ
ｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｏｓｉｓ、Ｂａｃｉｌｌａｃｅ
ａｅ（例えば、Ａｎｔｈｒａｘ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、Ｂａｃｔｅｒｏｉ
ｄａｃｅａｅ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｏｓｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｂｏｒｒ
ｅｌｉａ（例えば、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、Ｂｒｕｃｅ
ｌｌｏｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄｉａｓｉｓ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｃｏｃ
ｃｉｄｉｏｉｄｏｍｙｃｏｓｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｏｓｉｓ、Ｄｅｒｍａ
ｔｏｃｙｃｏｓｅｓ、Ｅ．ｃｏｌｉ（例えば、Ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃ
Ｅ．ｃｏｌｉおよびＥｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ Ｅ．ｃｏｌｉ）、
Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｓａｌｍｏｎ
ｅｌｌａ（例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ、およびＳａｌｍｏｎｅ
ｌｌａ ｐａｒａｔｙｐｈｉ）、Ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、Ｅｒ
ｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌｏ
ｓｉｓ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒｏｓｉｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍ
ａｔａｌｅｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃ
ｈｏｌｅｒａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｃｅａｅ（例えば、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃ
ｔｅｒ、Ｇｏｎｏｒｒｈｅａ、Ｍｅｎｉｇｏｃｏｃｃａｌ）、Ｍｅｉｓｓｅｒｉ
ａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｃｅａの感染症（例え
ば、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｈｅａｍｏｐｈｉｌｕｓ（例えば、Ｈｅａ
ｍｏｐｈｉｌｕｓインフルエンザＢ型）、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）、Ｐｓｅｕ
ｄｏｍｏｎａｓ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｃｅａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｃｅａｅ
、Ｓｙｐｈｉｌｉｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｐｐ．、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃ
ａｌ、Ｍｅｎｉｎｇｉｏｃｏｃｃａｌ、ＰｎｅｕｍｏｃｏｃｃａｌならびにＳｔ
ｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏ
ｎｉａｅおよびＢ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）。これらの細菌または真菌の
科は、以下を含むがこれらに限定されない疾患または症状を引き起こし得る：菌
血症、心内膜炎、眼感染症（結膜炎、結核、ブドウ膜炎）、歯肉炎、日和見感染
症（例えば、ＡＩＤＳに関連した感染症）、爪周囲炎、プロテーゼ関連感染症、
ライター病、気道感染症（例えば、百日咳または蓄膿症）、敗血症、ライム病、
ネコ引っ掻き病、赤痢、パラチフス熱、食中毒、腸チフス、肺炎、淋病、髄膜炎
（例えば、髄膜炎Ａ型およびＢ型）、クラミジア、梅毒、ジフテリア、ライ病、
パラ結核、結核、狼瘡、ボツリヌス中毒、壊疽、破傷風、膿痂疹、リウマチ熱、
猩紅熱、性感染病、皮膚病（例えば、蜂巣炎、皮膚真菌症（ｄｅｒｍａｔｏｃｙ
ｃｏｓｅｓ））、毒血症、尿路感染症、創傷感染症。本発明のポリペプチドもし
くはポリヌクレオチド、アゴニストもしくはアンタゴニストを用いて、これらの
症状もしくは疾患のいずれかを処置または検出し得る。具体的な実施形態におい
て、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストまたはアンタゴニス
トは、以下を処置するために使用される：破傷風、ジフテリア、ボツリヅム、お
よび／またはＢ型髄膜炎。
【０４７０】
さらに、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、および／またはア
ゴニストもしくはアンタゴニストにより処置または検出され得る、寄生生物性因
子が引き起こす疾患または症状としては以下のファミリーまたはクラスが挙げら
れるがこれらに限定されない：アメーバ症、バベシア症、コクシジウム症、クリ
プトスポリジウム症、二核アメーバ症（Ｄｉｅｎｔａｍｏｅｂｉａｓｉｓ）、交
疫、外部寄生生物性、ジアルジア鞭毛虫症、蠕虫症、リーシュマニア症、タイレ
リア症、トキソプラスマ症、トリパノソーマ症、およびトリコモナス（Ｔｒｉｃ
ｈｏｍｏｎａｓ）症、ならびに胞子虫症（Ｓｐｏｒｏｚｏａｎ）（例えば、Ｐｌ
ａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｒａｘ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｉｕ
ｍ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｍａｌａｒｉａｅおよびＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｏ
ｖａｌｅ）。これらの寄生生物は、以下を含むがこれらに限定されない種々の疾
患または症状を引き起こし得る：疥癬、ツツガムシ病、眼性感染症、腸疾患（例
えば、赤痢、ジアルジア鞭毛虫症）、肝臓疾患、肺疾患、日和見感染症（例えば
、ＡＩＤＳ関連）、マラリア、妊娠合併症、およびトキソプラスマ症。本発明の
ポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニ
ストを用いて、これらの症状または疾患のいずれかを処置または検出し得る。特
定の実施形態において、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、またはアゴ
ニストもしくはアンタゴニストは、マラリアを処置するために使用される。
ゴニストもしくはアンタゴニストにより処置または検出され得る、寄生生物性因
子が引き起こす疾患または症状としては以下のファミリーまたはクラスが挙げら
れるがこれらに限定されない：アメーバ症、バベシア症、コクシジウム症、クリ
プトスポリジウム症、二核アメーバ症（Ｄｉｅｎｔａｍｏｅｂｉａｓｉｓ）、交
疫、外部寄生生物性、ジアルジア鞭毛虫症、蠕虫症、リーシュマニア症、タイレ
リア症、トキソプラスマ症、トリパノソーマ症、およびトリコモナス（Ｔｒｉｃ
ｈｏｍｏｎａｓ）症、ならびに胞子虫症（Ｓｐｏｒｏｚｏａｎ）（例えば、Ｐｌ
ａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｒａｘ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｉｕ
ｍ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｍａｌａｒｉａｅおよびＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｏ
ｖａｌｅ）。これらの寄生生物は、以下を含むがこれらに限定されない種々の疾
患または症状を引き起こし得る：疥癬、ツツガムシ病、眼性感染症、腸疾患（例
えば、赤痢、ジアルジア鞭毛虫症）、肝臓疾患、肺疾患、日和見感染症（例えば
、ＡＩＤＳ関連）、マラリア、妊娠合併症、およびトキソプラスマ症。本発明の
ポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニ
ストを用いて、これらの症状または疾患のいずれかを処置または検出し得る。特
定の実施形態において、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、またはアゴ
ニストもしくはアンタゴニストは、マラリアを処置するために使用される。
【０４７１】
本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしく
はアンタゴニストは、患者に有効量のポリペプチドを投与するか、または患者か
ら細胞を取り出して、本発明のポリヌクレオチドをこの細胞に供給し、そして操
作した細胞を患者に戻す（エキソビボ治療）かのいずれかによるものであり得る
。さらに、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドはワクチン中の抗原と
して用いられて、感染性疾患に対する免疫応答を惹起し得る。
はアンタゴニストは、患者に有効量のポリペプチドを投与するか、または患者か
ら細胞を取り出して、本発明のポリヌクレオチドをこの細胞に供給し、そして操
作した細胞を患者に戻す（エキソビボ治療）かのいずれかによるものであり得る
。さらに、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドはワクチン中の抗原と
して用いられて、感染性疾患に対する免疫応答を惹起し得る。
【０４７２】
（再生）
本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしく
はアンタゴニストを用いて、細胞を分化させ、増殖させ、そして誘引して、組織
の再生を導き得る（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７６：５９−８７（１９９７）を参照の
こと）。組織の再生を用いて、先天性欠損、外傷（創傷、熱傷、切開、または潰
瘍）、加齢、疾患（例えば、骨粗鬆症、変形性関節炎（ｏｓｔｅｏｃａｒｔｈｒ
ｉｔｉｓ）、歯周病、肝不全）、美容形成手術を含む手術、線維症、再灌流傷害
、もしくは全身性サイトカイン損傷により損傷を受けた組織を修復、置換、また
は保護し得る。
はアンタゴニストを用いて、細胞を分化させ、増殖させ、そして誘引して、組織
の再生を導き得る（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７６：５９−８７（１９９７）を参照の
こと）。組織の再生を用いて、先天性欠損、外傷（創傷、熱傷、切開、または潰
瘍）、加齢、疾患（例えば、骨粗鬆症、変形性関節炎（ｏｓｔｅｏｃａｒｔｈｒ
ｉｔｉｓ）、歯周病、肝不全）、美容形成手術を含む手術、線維症、再灌流傷害
、もしくは全身性サイトカイン損傷により損傷を受けた組織を修復、置換、また
は保護し得る。
【０４７３】
本発明を用いて再生し得る組織としては、以下が挙げられる：器官（例えば、
膵臓、肝臓、腸、腎臓、皮膚、内皮）、筋肉（平滑筋、骨格筋、または心筋）、
血管系（血管およびリンパ管を含む）、神経、造血、および骨格（骨、軟骨、腱
、および靭帯）の組織。好ましくは、再生は、瘢痕なく、または瘢痕が低減され
て生じる。再生はまた、新脈管形成を含み得る。
膵臓、肝臓、腸、腎臓、皮膚、内皮）、筋肉（平滑筋、骨格筋、または心筋）、
血管系（血管およびリンパ管を含む）、神経、造血、および骨格（骨、軟骨、腱
、および靭帯）の組織。好ましくは、再生は、瘢痕なく、または瘢痕が低減され
て生じる。再生はまた、新脈管形成を含み得る。
【０４７４】
さらに、本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニス
トもしくはアンタゴニストは、治癒するのが困難な組織の再生を増加させ得る。
例えば、腱／靭帯の再生を増大させることによって、損傷後の回復時間が早まる
。本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしく
はアンタゴニストはまた、損傷を回避する試みにおいて予防的に使用され得る。
処置され得る特定の疾患は、腱炎、手根管症候群、および他の腱欠損または靭帯
欠損を含む。非治癒創傷の組織再生のさらなる例としては、褥瘡性潰瘍、脈管不
全、外科的創傷、および外傷性創傷に関連する潰瘍が挙げられる。
トもしくはアンタゴニストは、治癒するのが困難な組織の再生を増加させ得る。
例えば、腱／靭帯の再生を増大させることによって、損傷後の回復時間が早まる
。本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、ならびにアゴニストもしく
はアンタゴニストはまた、損傷を回避する試みにおいて予防的に使用され得る。
処置され得る特定の疾患は、腱炎、手根管症候群、および他の腱欠損または靭帯
欠損を含む。非治癒創傷の組織再生のさらなる例としては、褥瘡性潰瘍、脈管不
全、外科的創傷、および外傷性創傷に関連する潰瘍が挙げられる。
【０４７５】
同様に、神経および脳組織はまた、神経細胞を増殖および分化させるために本
発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチドならびにアゴニストもしくはアン
タゴニストを使用することによって再生され得る。本方法を用いて処置され得る
疾患としては、中枢神経系疾患および末梢神経系疾患、神経障害、または機械的
および外傷性障害（例えば、脊髄障害、頭部外傷、脳血管疾患、および発作（ｓ
ｔｏｋｅ））が挙げられる。詳細には、末梢神経傷害と関連する疾患、末梢神経
障害（例えば、化学療法または他の医学的療法から生じる）、局在神経障害、お
よび中枢神経系疾患（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチント
ン病、筋萎縮性側索硬化症、およびシャイ−ドレーガー症候群）はすべて、本発
明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチドならびにアゴニストもしくはアンタ
ゴニストを用いて処置され得る。
発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチドならびにアゴニストもしくはアン
タゴニストを使用することによって再生され得る。本方法を用いて処置され得る
疾患としては、中枢神経系疾患および末梢神経系疾患、神経障害、または機械的
および外傷性障害（例えば、脊髄障害、頭部外傷、脳血管疾患、および発作（ｓ
ｔｏｋｅ））が挙げられる。詳細には、末梢神経傷害と関連する疾患、末梢神経
障害（例えば、化学療法または他の医学的療法から生じる）、局在神経障害、お
よび中枢神経系疾患（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチント
ン病、筋萎縮性側索硬化症、およびシャイ−ドレーガー症候群）はすべて、本発
明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチドならびにアゴニストもしくはアンタ
ゴニストを用いて処置され得る。
【０４７６】
（走化性）
本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチドならびにアゴニストもしくは
アンタゴニストは、走化性活性を有し得る。走化性分子は、細胞（例えば、単球
、線維芽細胞、好中球、Ｔ細胞、肥満細胞、好酸球、上皮細胞および／または内
皮細胞）を、身体中の特定の部位（例えば、炎症、感染、または過剰増殖の部位
）に誘引または動員する。次いで、動員された細胞は、特定の外傷または異常性
を撃退および／または治癒し得る。
アンタゴニストは、走化性活性を有し得る。走化性分子は、細胞（例えば、単球
、線維芽細胞、好中球、Ｔ細胞、肥満細胞、好酸球、上皮細胞および／または内
皮細胞）を、身体中の特定の部位（例えば、炎症、感染、または過剰増殖の部位
）に誘引または動員する。次いで、動員された細胞は、特定の外傷または異常性
を撃退および／または治癒し得る。
【０４７７】
本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチドならびにアゴニストもしくは
アンタゴニストは、特定の細胞の走化性活性を増大し得る。次いで、これらの走
化性分子を使用して、身体中の特定の位置に標的化した細胞の数を増加させるこ
とによって、炎症、感染、過剰増殖性障害、または任意の免疫系障害を処置し得
る。例えば、走化性分子を使用して、傷害を受けた位置に免疫細胞を誘引するこ
とによって、組織に対する創傷および他の外傷を処置し得る。本発明の走化性分
子はまた、線維芽細胞を誘引し得、これは創傷を処置するために使用され得る。
アンタゴニストは、特定の細胞の走化性活性を増大し得る。次いで、これらの走
化性分子を使用して、身体中の特定の位置に標的化した細胞の数を増加させるこ
とによって、炎症、感染、過剰増殖性障害、または任意の免疫系障害を処置し得
る。例えば、走化性分子を使用して、傷害を受けた位置に免疫細胞を誘引するこ
とによって、組織に対する創傷および他の外傷を処置し得る。本発明の走化性分
子はまた、線維芽細胞を誘引し得、これは創傷を処置するために使用され得る。
【０４７８】
本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチドならびにアゴニストもしくは
アンタゴニストが走化性活性を阻害し得ることもまた意図される。これらの分子
はまた、障害を処置するために使用され得る。従って、本発明のポリヌクレオチ
ドもしくはポリペプチドならびにアゴニストもしくはアンタゴニストは、走化性
のインヒビターとして使用され得る。
アンタゴニストが走化性活性を阻害し得ることもまた意図される。これらの分子
はまた、障害を処置するために使用され得る。従って、本発明のポリヌクレオチ
ドもしくはポリペプチドならびにアゴニストもしくはアンタゴニストは、走化性
のインヒビターとして使用され得る。
【０４７９】
（結合活性）
本発明のポリペプチドは、このポリペプチドに結合する分子、またはこのポリ
ペプチドが結合する分子についてスクリーニングするために使用され得る。この
ポリペプチドとこの分子との結合は、結合したポリペプチドまたは分子の活性を
活性化（アゴニスト）、増大、阻害（アンタゴニスト）、または減少させ得る。
そのような分子の例としては、抗体、オリゴヌクレオチド、タンパク質（例えば
、レセプター）、または低分子が挙げられる。
ペプチドが結合する分子についてスクリーニングするために使用され得る。この
ポリペプチドとこの分子との結合は、結合したポリペプチドまたは分子の活性を
活性化（アゴニスト）、増大、阻害（アンタゴニスト）、または減少させ得る。
そのような分子の例としては、抗体、オリゴヌクレオチド、タンパク質（例えば
、レセプター）、または低分子が挙げられる。
【０４８０】
好ましくは、この分子は、このポリペプチドの天然のリガンド（例えば、リガ
ンドのフラグメント）、または天然の基質、リガンド、構造的模倣物、もしくは
機能的模倣物に密接に関連する（Ｃｏｌｉｇａｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔ
ｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １（２）：第５章（１９９１）を参
照のこと）。同様に、この分子は、このポリペプチドが結合する天然のレセプタ
ー、または少なくとも、このポリペプチドによって結合され得るレセプターのフ
ラグメント（例えば、活性部位）に密接に関連し得る。いずれの場合においても
、この分子は、公知の技術を用いて合理的に設計され得る。
ンドのフラグメント）、または天然の基質、リガンド、構造的模倣物、もしくは
機能的模倣物に密接に関連する（Ｃｏｌｉｇａｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔ
ｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １（２）：第５章（１９９１）を参
照のこと）。同様に、この分子は、このポリペプチドが結合する天然のレセプタ
ー、または少なくとも、このポリペプチドによって結合され得るレセプターのフ
ラグメント（例えば、活性部位）に密接に関連し得る。いずれの場合においても
、この分子は、公知の技術を用いて合理的に設計され得る。
【０４８１】
好ましくは、これらの分子についてのスクリーニングは、ポリペプチドを発現
する適切な細胞を産生する工程を包含する。好ましい細胞としては、哺乳動物、
酵母、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ、またはＥ．ｃｏｌｉ由来の細胞が挙げられる。次
いで、このポリペプチドを発現する細胞（または、発現されたポリペプチドを含
む細胞膜）を、好ましくは、このポリペプチドまたはこの分子のいずれかの結合
、活性の刺激、または活性の阻害を観察するための分子を潜在的に含む試験化合
物と接触させる。
する適切な細胞を産生する工程を包含する。好ましい細胞としては、哺乳動物、
酵母、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ、またはＥ．ｃｏｌｉ由来の細胞が挙げられる。次
いで、このポリペプチドを発現する細胞（または、発現されたポリペプチドを含
む細胞膜）を、好ましくは、このポリペプチドまたはこの分子のいずれかの結合
、活性の刺激、または活性の阻害を観察するための分子を潜在的に含む試験化合
物と接触させる。
【０４８２】
アッセイは、このポリペプチドへの候補化合物の結合を単純に試験し得、ここ
で結合は、標識によって、または標識された競合物との競合に関するアッセイに
おいて検出される。さらに、アッセイは、候補化合物がこのポリペプチドへの結
合によって生成されるシグナルを生じるか否かを試験し得る。
で結合は、標識によって、または標識された競合物との競合に関するアッセイに
おいて検出される。さらに、アッセイは、候補化合物がこのポリペプチドへの結
合によって生成されるシグナルを生じるか否かを試験し得る。
【０４８３】
あるいは、アッセイは、無細胞調製物、固体支持体に接着されたポリペプチド
／分子、化学ライブラリー、または天然産物の混合物を用いて実施され得る。ア
ッセイはまた、候補化合物を、ポリペプチドを含む溶液と混合する工程、ポリペ
プチド／分子の活性または結合を測定する工程、およびポリペプチド／分子の活
性または結合を、標準と比較する工程を単純に包含し得る。
／分子、化学ライブラリー、または天然産物の混合物を用いて実施され得る。ア
ッセイはまた、候補化合物を、ポリペプチドを含む溶液と混合する工程、ポリペ
プチド／分子の活性または結合を測定する工程、およびポリペプチド／分子の活
性または結合を、標準と比較する工程を単純に包含し得る。
【０４８４】
好ましくは、ＥＬＩＳＡアッセイは、モノクローナル抗体またはポリクローナ
ル抗体を用いて、サンプル（例えば、生物学的サンプル）におけるポリペプチド
のレベルまたは活性を測定し得る。抗体は、ポリペプチドへの直接的もしくは間
接的のいずれかの結合、または基質についてのポリペプチドとの競合によって、
ポリペプチドのレベルまたは活性を測定し得る。
ル抗体を用いて、サンプル（例えば、生物学的サンプル）におけるポリペプチド
のレベルまたは活性を測定し得る。抗体は、ポリペプチドへの直接的もしくは間
接的のいずれかの結合、または基質についてのポリペプチドとの競合によって、
ポリペプチドのレベルまたは活性を測定し得る。
【０４８５】
さらに、本発明のポリペプチドが結合するレセプターは、当業者に公知の多く
の方法（例えば、リガンドパニングおよびＦＡＣＳソーティング（Ｃｏｌｉｇａ
ｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎ．，１（２）、
第５章（１９９１））によって同定され得る。例えば、発現クローニングは、ポ
リアデニル化ＲＮＡがこのポリペプチドに応答する細胞から調製される場合に用
いられ、例えば、ＮＩＨ３Ｔ３細胞（これは、ＦＧＦファミリータンパク質に対
する複数のレセプターを含むことが公知である）、およびＳＣ−３細胞、および
このＲＮＡから作製されたｃＤＮＡライブラリーは、プールに分けられ、そして
このポリペプチドに応答性でないＣＯＳ細胞または他の細胞をトランスフェクト
するために使用される。ガラススライド上で増殖しているトランスフェクトされ
た細胞は、それらを標識化した後に、本発明のポリペプチドに曝露される。この
ポリペプチドは、種々の手段（部位特異的プロテインキナーゼに対する認識部位
のヨウ素化または封入を含む）によって標識化され得る。
の方法（例えば、リガンドパニングおよびＦＡＣＳソーティング（Ｃｏｌｉｇａ
ｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎ．，１（２）、
第５章（１９９１））によって同定され得る。例えば、発現クローニングは、ポ
リアデニル化ＲＮＡがこのポリペプチドに応答する細胞から調製される場合に用
いられ、例えば、ＮＩＨ３Ｔ３細胞（これは、ＦＧＦファミリータンパク質に対
する複数のレセプターを含むことが公知である）、およびＳＣ−３細胞、および
このＲＮＡから作製されたｃＤＮＡライブラリーは、プールに分けられ、そして
このポリペプチドに応答性でないＣＯＳ細胞または他の細胞をトランスフェクト
するために使用される。ガラススライド上で増殖しているトランスフェクトされ
た細胞は、それらを標識化した後に、本発明のポリペプチドに曝露される。この
ポリペプチドは、種々の手段（部位特異的プロテインキナーゼに対する認識部位
のヨウ素化または封入を含む）によって標識化され得る。
【０４８６】
固定化およびインキュベーション後、スライドは、オートラジオグラフィー分
析に供される。陽性プールを同定し、そしてサブプールを、反復性のサププール
化および再スクリーニングプロセスを使用して調製および再びトランスフェクト
して、最終的に推定レセプターをコードする単一のクローンを生じる。
析に供される。陽性プールを同定し、そしてサブプールを、反復性のサププール
化および再スクリーニングプロセスを使用して調製および再びトランスフェクト
して、最終的に推定レセプターをコードする単一のクローンを生じる。
【０４８７】
レセプター同定のための代替のアプローチとして、標識ポリペプチドは、レセ
プター分子を発現する調製物を、細胞膜と光親和性に連結し得るか、または抽出
し得る。架橋された材料は、ＰＡＧＥ分析によって分離され、そしてＸ線フィル
ムに曝露される。ポリペプチドのレセプターを含む標識複合体が切り出され得、
ペプチドフラグメントへと分離され得、そしてタンパク質微小配列決定に供され
得る。微小配列決定から得られるアミノ酸配列を使用して、１組の縮重オリゴヌ
クレオチドプローブを設計してｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングし、推定
レセプターをコードする遺伝子を同定する。
プター分子を発現する調製物を、細胞膜と光親和性に連結し得るか、または抽出
し得る。架橋された材料は、ＰＡＧＥ分析によって分離され、そしてＸ線フィル
ムに曝露される。ポリペプチドのレセプターを含む標識複合体が切り出され得、
ペプチドフラグメントへと分離され得、そしてタンパク質微小配列決定に供され
得る。微小配列決定から得られるアミノ酸配列を使用して、１組の縮重オリゴヌ
クレオチドプローブを設計してｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングし、推定
レセプターをコードする遺伝子を同定する。
【０４８８】
さらに、遺伝子シャッフリング、モチーフシャッフリング、エキソンシャッフ
リング、および／またはコドンシャッフリングの技術（集合的に「ＤＮＡシャッ
フリング」という）を利用して、本発明のポリペプチドの活性を調節し得、それ
によって本発明のポリペプチドのアゴニストおよびアンタゴニストを効果的に生
成する。一般に、米国特許第５，６０５，７９３号、同第５，８１１，２３８号
、同第５，８３０，７２１号、同第５，８３４，２５２号、および同第５，８３
７，４５８号、ならびにＰａｔｔｅｎ，Ｐ．Ａ．ら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：７２４〜３３（１９９７）；Ｈａｒａｙａｍａ，
Ｓ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６（２）：７６〜８２（１９９８
）；Ｈａｎｓｓｏｎ，Ｌ．Ｏ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７：２６５〜７
６（１９９９）；ならびにＬｏｒｅｎｚｏ，Ｍ．Ｍ．およびＢｌａｓｃｏ，Ｒ．
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２４（２）：３０８〜１３（１９９８）（これら
の特許および刊行物の各々は、本明細書において参考として援用される）を参照
のこと。１つの実施態様において、本発明のポリヌクレオチドおよび対応するポ
リペプチドの変更は、ＤＮＡシャッフリングによって達成され得る。ＤＮＡシャ
ッフリングは、相同組換えまたは部位特異的な組換えによる、２つ以上のＤＮＡ
セグメントの、所望の分子へのアセンブリを含む。別の実施態様において、本発
明のポリヌクレオチドおよび対応するポリペプチドは、組換えの前に、誤りがち
な（ｅｒｒｏｒ−ｐｒｏｎｅ）ＰＣＲ、ランダムヌクレオチド挿入または他の方
法によるランダム変異誘発に供することによって、変更され得る。別の実施態様
において、本発明のポリペプチドの１つ以上の成分、モチーフ、切片、部分、ド
メイン、フラグメントなどは、１つ以上の異種分子の１つ以上の成分、モチーフ
、切片、部分、ドメイン、フラグメントなどと組換えられ得る。好ましい実施態
様において、この異種分子は、ファミリーのメンバーである。さらに好ましい実
施態様において、この異種分子は、例えば、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、
インスリン様増殖因子（ＩＧＦ−Ｉ）、トランスホーミング増殖因子（ＴＧＦ）
−α、表皮増殖因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、ＴＧＦ−β、
骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）−２、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−５、ＢＭＰ−６、
ＢＭＰ−７、アクチビンＡおよびアクチビンＢ、デカペンタプレジック（ｄｅｃ
ａｐｅｎｔａｐｌｅｇｉｃ）（ｄｐｐ）、６０Ａ、ＯＰ−２、ドーサリン（ｄｏ
ｒｓａｌｉｎ）、増殖分化因子（ＧＤＦ）、結節（ｎｏｄａｌ）、ＭＩＳ、イン
ヒビン−α、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＴＧＦ−β５、およ
び神経膠由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）のような増殖因子である。
リング、および／またはコドンシャッフリングの技術（集合的に「ＤＮＡシャッ
フリング」という）を利用して、本発明のポリペプチドの活性を調節し得、それ
によって本発明のポリペプチドのアゴニストおよびアンタゴニストを効果的に生
成する。一般に、米国特許第５，６０５，７９３号、同第５，８１１，２３８号
、同第５，８３０，７２１号、同第５，８３４，２５２号、および同第５，８３
７，４５８号、ならびにＰａｔｔｅｎ，Ｐ．Ａ．ら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：７２４〜３３（１９９７）；Ｈａｒａｙａｍａ，
Ｓ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６（２）：７６〜８２（１９９８
）；Ｈａｎｓｓｏｎ，Ｌ．Ｏ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７：２６５〜７
６（１９９９）；ならびにＬｏｒｅｎｚｏ，Ｍ．Ｍ．およびＢｌａｓｃｏ，Ｒ．
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２４（２）：３０８〜１３（１９９８）（これら
の特許および刊行物の各々は、本明細書において参考として援用される）を参照
のこと。１つの実施態様において、本発明のポリヌクレオチドおよび対応するポ
リペプチドの変更は、ＤＮＡシャッフリングによって達成され得る。ＤＮＡシャ
ッフリングは、相同組換えまたは部位特異的な組換えによる、２つ以上のＤＮＡ
セグメントの、所望の分子へのアセンブリを含む。別の実施態様において、本発
明のポリヌクレオチドおよび対応するポリペプチドは、組換えの前に、誤りがち
な（ｅｒｒｏｒ−ｐｒｏｎｅ）ＰＣＲ、ランダムヌクレオチド挿入または他の方
法によるランダム変異誘発に供することによって、変更され得る。別の実施態様
において、本発明のポリペプチドの１つ以上の成分、モチーフ、切片、部分、ド
メイン、フラグメントなどは、１つ以上の異種分子の１つ以上の成分、モチーフ
、切片、部分、ドメイン、フラグメントなどと組換えられ得る。好ましい実施態
様において、この異種分子は、ファミリーのメンバーである。さらに好ましい実
施態様において、この異種分子は、例えば、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、
インスリン様増殖因子（ＩＧＦ−Ｉ）、トランスホーミング増殖因子（ＴＧＦ）
−α、表皮増殖因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、ＴＧＦ−β、
骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）−２、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−５、ＢＭＰ−６、
ＢＭＰ−７、アクチビンＡおよびアクチビンＢ、デカペンタプレジック（ｄｅｃ
ａｐｅｎｔａｐｌｅｇｉｃ）（ｄｐｐ）、６０Ａ、ＯＰ−２、ドーサリン（ｄｏ
ｒｓａｌｉｎ）、増殖分化因子（ＧＤＦ）、結節（ｎｏｄａｌ）、ＭＩＳ、イン
ヒビン−α、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＴＧＦ−β５、およ
び神経膠由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）のような増殖因子である。
【０４８９】
他の好ましいフラグメントは、本発明のポリペプチドの生物学的に活性なフラ
グメントである。生物学的に活性なフラグメントは、本発明のポリぺプチドの活
性に類似の活性を示すが、必ずしも同一ではないフラグメントである。このフラ
グメントの生物学的活性は、改善された所望の活性、または減少した所望されな
い活性を含み得る。
グメントである。生物学的に活性なフラグメントは、本発明のポリぺプチドの活
性に類似の活性を示すが、必ずしも同一ではないフラグメントである。このフラ
グメントの生物学的活性は、改善された所望の活性、または減少した所望されな
い活性を含み得る。
【０４９０】
さらに、本発明は、本発明のポリペプチドの作用を調節する化合物を同定する
ために化合物をスクリーニングする方法を提供する。このようなアッセイの例は
、哺乳動物線維芽細胞、本発明のポリペプチド、スクリーニングされるべき化合
物および3[Ｈ]チミジンを、線維芽細胞が通常増殖する細胞培養条件下で組み合
わせる工程を包含する。コントロールアッセイは、スクリーニングされるべき化
合物の非存在下で実施され得、そしてこの化合物の存在下での線維芽細胞の増殖
の量と比較して、各々の場合における3[Ｈ]チミジンの取り込みの決定によって
、この化合物が増殖を刺激するか否かを決定し得る。線維芽細胞の増殖の量は、 3 [Ｈ]チミジンの取り込みを測定する液体シンチレーションクロマトグラフィー
によって測定される。アゴニスト化合物およびアンタゴニスト化合物の両方が、
この手順により同定され得る。
ために化合物をスクリーニングする方法を提供する。このようなアッセイの例は
、哺乳動物線維芽細胞、本発明のポリペプチド、スクリーニングされるべき化合
物および3[Ｈ]チミジンを、線維芽細胞が通常増殖する細胞培養条件下で組み合
わせる工程を包含する。コントロールアッセイは、スクリーニングされるべき化
合物の非存在下で実施され得、そしてこの化合物の存在下での線維芽細胞の増殖
の量と比較して、各々の場合における3[Ｈ]チミジンの取り込みの決定によって
、この化合物が増殖を刺激するか否かを決定し得る。線維芽細胞の増殖の量は、 3 [Ｈ]チミジンの取り込みを測定する液体シンチレーションクロマトグラフィー
によって測定される。アゴニスト化合物およびアンタゴニスト化合物の両方が、
この手順により同定され得る。
【０４９１】
別の方法において、本発明のポリペプチドに対するレセプターを発現する哺乳
動物細胞または膜調製物は、この化合物の存在下において標識化した本発明のポ
リペプチドとともにインキュベートされる。次いで、この化合物がこの相互作用
を増強またはブロックする能力が、測定され得る。あるいは、スクリーニングさ
れるべき化合物の相互作用に従う既知のセカンドメッセンジャー系の応答および
レセプターが測定され、そしてこの化合物がこのレセプターに結合し、そしてセ
カンドメッセンジャー応答を誘発する能力を測定して、この化合物が潜在的なア
ゴニストまたはアンタゴニストであるか否かを決定する。このようなセカンドメ
ッセンジャー系には、ｃＡＭＰグアニル酸シクラーゼ、イオンチャネルまたはホ
スホイノシチド加水分解が挙げられるが、これらに限定されない。
動物細胞または膜調製物は、この化合物の存在下において標識化した本発明のポ
リペプチドとともにインキュベートされる。次いで、この化合物がこの相互作用
を増強またはブロックする能力が、測定され得る。あるいは、スクリーニングさ
れるべき化合物の相互作用に従う既知のセカンドメッセンジャー系の応答および
レセプターが測定され、そしてこの化合物がこのレセプターに結合し、そしてセ
カンドメッセンジャー応答を誘発する能力を測定して、この化合物が潜在的なア
ゴニストまたはアンタゴニストであるか否かを決定する。このようなセカンドメ
ッセンジャー系には、ｃＡＭＰグアニル酸シクラーゼ、イオンチャネルまたはホ
スホイノシチド加水分解が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４９２】
これらの上記のアッセイの全ては、診断マーカーまたは予後マーカーとして使
用され得る。これらのアッセイを用いて発見される分子は、ポリペプチド／分子
を活性化または阻害することによって、疾患を処置するか、または患者における
特定の結果（例えば、血管増殖）をもたらすために使用され得る。さらに、アッ
セイは、適切に操作された細胞または組織からの本発明のポリペプチドの産生を
阻害または増強し得る因子を発見し得る。
用され得る。これらのアッセイを用いて発見される分子は、ポリペプチド／分子
を活性化または阻害することによって、疾患を処置するか、または患者における
特定の結果（例えば、血管増殖）をもたらすために使用され得る。さらに、アッ
セイは、適切に操作された細胞または組織からの本発明のポリペプチドの産生を
阻害または増強し得る因子を発見し得る。
【０４９３】
従って、本発明は、以下の工程を含む本発明のポリペプチドに結合する化合物
を同定する方法を包含する：（ａ）候補結合化合物を本発明のポリペプチドとと
もにインキュベートする工程；および（ｂ）結合が生じたか否かを決定する工程
。さらに、本発明は、以下の工程を含むアゴニスト／アンタゴニストを同定する
方法を包含する：（ａ）候補化合物を本発明のポリペプチドとともにインキュベ
ートする工程、（ｂ）生物学的活性をアッセイする工程、および（ｂ）ポリペプ
チドの生物学的活性が改変されているか否かを決定する工程。
を同定する方法を包含する：（ａ）候補結合化合物を本発明のポリペプチドとと
もにインキュベートする工程；および（ｂ）結合が生じたか否かを決定する工程
。さらに、本発明は、以下の工程を含むアゴニスト／アンタゴニストを同定する
方法を包含する：（ａ）候補化合物を本発明のポリペプチドとともにインキュベ
ートする工程、（ｂ）生物学的活性をアッセイする工程、および（ｂ）ポリペプ
チドの生物学的活性が改変されているか否かを決定する工程。
【０４９４】
（標的化された送達）
別の実施形態において、本発明は、組成物を、本発明のポリペプチドについて
のレセプターを発現する標的化細胞、または本発明のポリペプチドの細胞結合形
態を発現する細胞に送達する方法を提供する。
のレセプターを発現する標的化細胞、または本発明のポリペプチドの細胞結合形
態を発現する細胞に送達する方法を提供する。
【０４９５】
本明細書中で議論される場合、本発明のポリペプチドまたは抗体は、異種ポリ
ペプチド、異種核酸、毒素またはプロドラッグと、疎水性、親水性、イオン性お
よび／または共有結合性の相互作用を介して会合し得る。１つの実施形態におい
て、本発明は、異種ポリペプチドまたは核酸と会合した本発明のポリペプチド（
抗体を含む）を投与することによる、本発明の組成物の細胞への特異的な送達の
ための方法を提供する。１つの例において、本発明は、治療タンパク質を標的化
細胞中へ送達するための方法を提供する。別の例において、本発明は、一本鎖核
酸（例えば、アンチセンスまたはリボザイム）あるいは二本鎖核酸（例えば、細
胞のゲノムに組み込まれ得るか、またはエピソームにて複製し得、そして転写さ
れ得る、ＤＮＡ）を、標的化細胞に送達するための方法を提供する。
ペプチド、異種核酸、毒素またはプロドラッグと、疎水性、親水性、イオン性お
よび／または共有結合性の相互作用を介して会合し得る。１つの実施形態におい
て、本発明は、異種ポリペプチドまたは核酸と会合した本発明のポリペプチド（
抗体を含む）を投与することによる、本発明の組成物の細胞への特異的な送達の
ための方法を提供する。１つの例において、本発明は、治療タンパク質を標的化
細胞中へ送達するための方法を提供する。別の例において、本発明は、一本鎖核
酸（例えば、アンチセンスまたはリボザイム）あるいは二本鎖核酸（例えば、細
胞のゲノムに組み込まれ得るか、またはエピソームにて複製し得、そして転写さ
れ得る、ＤＮＡ）を、標的化細胞に送達するための方法を提供する。
【０４９６】
別の実施形態において、本発明は、毒素または細胞傷害性プロドラッグと会合
した本発明のポリペプチド（例えば、本発明のポリペプチドまたは本発明の抗体
）を投与することによる細胞の特異的破壊（例えば、腫瘍細胞の破壊）のための
方法を提供する。
した本発明のポリペプチド（例えば、本発明のポリペプチドまたは本発明の抗体
）を投与することによる細胞の特異的破壊（例えば、腫瘍細胞の破壊）のための
方法を提供する。
【０４９７】
「毒素」とは、内因性の細胞傷害性エフェクター系、放射性同位体、ホロ毒素
（ｈｏｌｏｔｏｘｉｎ）、改変型毒素、毒素の触媒サブユニット、または規定の
条件下で細胞死を引き起こす細胞中もしくは細胞表面には通常存在しない任意の
分子もしくは酵素を、結合および活性化する化合物を意味する。本発明の方法に
従って使用され得る毒素としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない
：当該分野で公知の放射性同位体、固有のまたは誘導された内因性の細胞傷害性
エフェクター系を結合する化合物（例えば、抗体（またはその一部を含む補体固
定）、チミジンキナーゼ、エンドヌクレアーゼ、ＲＮＡｓｅ、α毒素、リシン、
アブリン、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ内毒素Ａ、ジフテリア毒素、サポリン、モモ
ルジン（ｍｏｍｏｒｄｉｎ）、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ヨウシュヤマゴボ
ウ抗ウイルスタンパク質、α−サルシン（ｓａｒｃｉｎ）およびコレラ毒素。「
細胞傷害性プロドラッグ」とは、通常細胞内に存在する酵素によって、細胞傷害
性化合物へと変換される非毒性の化合物を意味する。本発明の方法に従って使用
され得る細胞傷害性プロドラッグとしては、安息香酸マスタードアルキル化剤の
グルタミル誘導体、エトポシドまたはマイトマイシンＣのリン酸誘導体、シトシ
ンアラビノシド、ダウノルビシン、およびドキソルビシンのフェノキシアセトア
ミド誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
（ｈｏｌｏｔｏｘｉｎ）、改変型毒素、毒素の触媒サブユニット、または規定の
条件下で細胞死を引き起こす細胞中もしくは細胞表面には通常存在しない任意の
分子もしくは酵素を、結合および活性化する化合物を意味する。本発明の方法に
従って使用され得る毒素としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない
：当該分野で公知の放射性同位体、固有のまたは誘導された内因性の細胞傷害性
エフェクター系を結合する化合物（例えば、抗体（またはその一部を含む補体固
定）、チミジンキナーゼ、エンドヌクレアーゼ、ＲＮＡｓｅ、α毒素、リシン、
アブリン、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ内毒素Ａ、ジフテリア毒素、サポリン、モモ
ルジン（ｍｏｍｏｒｄｉｎ）、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ヨウシュヤマゴボ
ウ抗ウイルスタンパク質、α−サルシン（ｓａｒｃｉｎ）およびコレラ毒素。「
細胞傷害性プロドラッグ」とは、通常細胞内に存在する酵素によって、細胞傷害
性化合物へと変換される非毒性の化合物を意味する。本発明の方法に従って使用
され得る細胞傷害性プロドラッグとしては、安息香酸マスタードアルキル化剤の
グルタミル誘導体、エトポシドまたはマイトマイシンＣのリン酸誘導体、シトシ
ンアラビノシド、ダウノルビシン、およびドキソルビシンのフェノキシアセトア
ミド誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４９８】
（薬物スクリーニング）
本発明のポリペプチドの活性を改変する分子についてスクリーニングするため
に、本発明のポリペプチド、またはこれらのポリペプチドをコードするポリヌク
レオチドの使用が、さらに意図される。このような方法は、本発明のポリペプチ
ドを、アンタゴニスト活性またはアゴニスト活性を有することが疑われる選択さ
れた化合物と接触させる工程、および結合に続いてこれらのポリペプチドの活性
をアッセイする工程を包含する。
に、本発明のポリペプチド、またはこれらのポリペプチドをコードするポリヌク
レオチドの使用が、さらに意図される。このような方法は、本発明のポリペプチ
ドを、アンタゴニスト活性またはアゴニスト活性を有することが疑われる選択さ
れた化合物と接触させる工程、および結合に続いてこれらのポリペプチドの活性
をアッセイする工程を包含する。
【０４９９】
本発明は、種々の薬物スクリーニング技術のいずれかにおいて、本発明のポリ
ペプチド、またはそれらの結合フラグメントを使用することによって治療用化合
物をスクリーニングするために特に有用である。このような試験に用いられるポ
リペプチドまたはフラグメントは、固体支持体に固定化され得、細胞表面上に発
現され得、溶液中で遊離であり得、または細胞内に局在化され得る。薬物スクリ
ーニングの１つの方法は、ポリペプチドまたはフラグメントを発現する組換え核
酸を用いて安定に形質転換される真核生物宿主細胞または原核生物宿主細胞を利
用する。薬物は、競合結合アッセイにおいて、このような形質転換細胞に対して
スクリーニングされる。例えば、試験されている薬剤と本発明のポリペプチドと
の間の複合体の形成（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｎ）を測定し得る。
ペプチド、またはそれらの結合フラグメントを使用することによって治療用化合
物をスクリーニングするために特に有用である。このような試験に用いられるポ
リペプチドまたはフラグメントは、固体支持体に固定化され得、細胞表面上に発
現され得、溶液中で遊離であり得、または細胞内に局在化され得る。薬物スクリ
ーニングの１つの方法は、ポリペプチドまたはフラグメントを発現する組換え核
酸を用いて安定に形質転換される真核生物宿主細胞または原核生物宿主細胞を利
用する。薬物は、競合結合アッセイにおいて、このような形質転換細胞に対して
スクリーニングされる。例えば、試験されている薬剤と本発明のポリペプチドと
の間の複合体の形成（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｎ）を測定し得る。
【０５００】
従って、本発明は、本発明のポリペプチドによって媒介される活性に影響を及
ぼす薬物または任意の他の薬剤についてのスクリーニング方法を提供する。これ
らの方法は、当該分野で周知の方法によって、このような薬剤を本発明のポリペ
プチドもしくはそのフラグメントと接触させる工程、およびこの薬剤とこのポリ
ペプチドもしくはそのフラグメントとの間の複合体の存在についてアッセイする
工程を包含する。このような競合結合アッセイにおいて、スクリーニングされる
薬剤は、典型的には標識化される。インキュベーション後に、遊離の薬剤は、結
合形態中に存在する薬剤から分離され、そして遊離または複合体化されていない
標識の量は、特定の薬剤が本発明のポリペプチドに結合する能力の尺度である。
ぼす薬物または任意の他の薬剤についてのスクリーニング方法を提供する。これ
らの方法は、当該分野で周知の方法によって、このような薬剤を本発明のポリペ
プチドもしくはそのフラグメントと接触させる工程、およびこの薬剤とこのポリ
ペプチドもしくはそのフラグメントとの間の複合体の存在についてアッセイする
工程を包含する。このような競合結合アッセイにおいて、スクリーニングされる
薬剤は、典型的には標識化される。インキュベーション後に、遊離の薬剤は、結
合形態中に存在する薬剤から分離され、そして遊離または複合体化されていない
標識の量は、特定の薬剤が本発明のポリペプチドに結合する能力の尺度である。
【０５０１】
薬物スクリーニングについての別の技術は、本発明のポリペプチドに対する適
切な結合親和性を有する化合物についての高処理能力スクリーニングを提供し、
そして欧州特許出願８４／０３５６４（１９８４年９月１３日公開）（これは、
本明細書中で参考として援用される）に非常に詳細に記載される。簡潔にいうと
、大量の異なる小さなペプチド試験化合物は、固体基材（例えば、プラスチック
ピンまたはいくつかの他の表面）上で合成される。ペプチド試験化合物は、本発
明のポリペプチドと反応させられ、そして洗浄される。次いで、結合したポリペ
プチドは、当該分野で周知の方法によって検出される。精製されたポリペプチド
は、前述の薬物スクリーニング技術での使用のためにプレート上に直接コーディ
ングされる。さらに、非中和抗体を使用して、このペプチドを捕捉し得、そして
固体支持体上にそれを固定し得る。
切な結合親和性を有する化合物についての高処理能力スクリーニングを提供し、
そして欧州特許出願８４／０３５６４（１９８４年９月１３日公開）（これは、
本明細書中で参考として援用される）に非常に詳細に記載される。簡潔にいうと
、大量の異なる小さなペプチド試験化合物は、固体基材（例えば、プラスチック
ピンまたはいくつかの他の表面）上で合成される。ペプチド試験化合物は、本発
明のポリペプチドと反応させられ、そして洗浄される。次いで、結合したポリペ
プチドは、当該分野で周知の方法によって検出される。精製されたポリペプチド
は、前述の薬物スクリーニング技術での使用のためにプレート上に直接コーディ
ングされる。さらに、非中和抗体を使用して、このペプチドを捕捉し得、そして
固体支持体上にそれを固定し得る。
【０５０２】
本発明はまた、競合薬物スクリーニングアッセイの使用を意図し、ここで、本
発明のポリペプチドを結合し得る中和抗体は、ポリペプチドまたはそのフラグメ
ントに対する結合について試験化合物と特異的に競合する。この様式において、
抗体を使用して、本発明のポリペプチドと１つ以上の抗原性エピトープを共有す
る任意のペプチドの存在を検出する。
発明のポリペプチドを結合し得る中和抗体は、ポリペプチドまたはそのフラグメ
ントに対する結合について試験化合物と特異的に競合する。この様式において、
抗体を使用して、本発明のポリペプチドと１つ以上の抗原性エピトープを共有す
る任意のペプチドの存在を検出する。
【０５０３】
（アンチセンスおよびリボザイム（アンタゴニスト））
特定の実施形態において、本発明に従うアンタゴニストは、配列番号Ｘに含ま
れる配列またはその相補鎖に対応する核酸、および／または表１において同定さ
れる関連するｃＤＮＡプラスミドＺに含まれるヌクレオチド配列に対応する核酸
である。１つの実施形態において、アンチセンス配列は、生物体により内部で生
成され、別の実施形態において、アンチセンス配列は別々に投与される（例えば
、Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ，Ｊ．，Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．５６：５６０（１９９１）を
参照のこと）。Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉ
ｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，
ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１９８８）。アンチセンス
技術を使用して、アンチセンスＤＮＡもしくはＲＮＡを通してか、または３重ら
せんの形成を通して遺伝子発現を制御し得る。アンチセンス技術は、例えば、Ｏ
ｋａｎｏ，Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．５６：５６０（１９９１）；Ｏｌｉｇｏｄｅｏ
ｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ
ｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ
Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１９８８）で議論される。３重らせん形成は、例えば、Ｌｅ
ｅら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６：３０７３（１９７
９）；Ｃｏｏｎｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：４５６（１９８８）；および
Ｄｅｒｖａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５１：１３００（１９９１）において議論
される。これらの方法は、相補的なＤＮＡまたはＲＮＡへのポリヌクレオチドの
結合に基づく。
れる配列またはその相補鎖に対応する核酸、および／または表１において同定さ
れる関連するｃＤＮＡプラスミドＺに含まれるヌクレオチド配列に対応する核酸
である。１つの実施形態において、アンチセンス配列は、生物体により内部で生
成され、別の実施形態において、アンチセンス配列は別々に投与される（例えば
、Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ，Ｊ．，Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．５６：５６０（１９９１）を
参照のこと）。Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉ
ｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，
ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１９８８）。アンチセンス
技術を使用して、アンチセンスＤＮＡもしくはＲＮＡを通してか、または３重ら
せんの形成を通して遺伝子発現を制御し得る。アンチセンス技術は、例えば、Ｏ
ｋａｎｏ，Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．５６：５６０（１９９１）；Ｏｌｉｇｏｄｅｏ
ｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ
ｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ
Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１９８８）で議論される。３重らせん形成は、例えば、Ｌｅ
ｅら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６：３０７３（１９７
９）；Ｃｏｏｎｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：４５６（１９８８）；および
Ｄｅｒｖａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５１：１３００（１９９１）において議論
される。これらの方法は、相補的なＤＮＡまたはＲＮＡへのポリヌクレオチドの
結合に基づく。
【０５０４】
例えば、非リンパ性白血病細胞株ＨＬ−６０および他の細胞株の増殖を阻害す
るためのｃ−ｍｙｃおよびｃ−ｍｙｂアンチセンスＲＮＡ構築物の使用は、以前
に記載された（Ｗｉｃｋｓｔｒｏｍら（１９８８）；Ａｎｆｏｓｓｉら（１９８
９））。これらの実験は、細胞をオリゴリボヌクレオチドとインキュベーション
することによってインビトロで行われた。インビボ用途のための同様の手順は、
ＷＯ９１／１５５８０に記載される。簡単には、所定のアンチセンスＲＮＡにつ
いてのオリゴヌクレオチドの対は、以下のように生成される：オープンリーディ
ングフレームの最初の１５塩基に相補的な配列を、５末端のＥｃｏＲＩ部位およ
び３末端のＨｉｎｄＩＩＩ部位に隣接させる。次に、オリゴヌクレオチドの対は
、９０℃で１分間加熱され、次いで２×ライゲーション緩衝液（２０ｍＭ ＴＲ
ＩＳ ＨＣｌ ｐＨ７．５、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１０ＭＭ ジチオスレイト
ール（ＤＴＴ）および０．２ｍＭ ＡＴＰ）中でアニーリングされ、次いで、レ
トロウイルスベクターＰＭＶ７のＥｃｏＲ１／ＨｉｎｄＩＩＩ部位に連結される
（ＷＯ９１／１５５８０）。
るためのｃ−ｍｙｃおよびｃ−ｍｙｂアンチセンスＲＮＡ構築物の使用は、以前
に記載された（Ｗｉｃｋｓｔｒｏｍら（１９８８）；Ａｎｆｏｓｓｉら（１９８
９））。これらの実験は、細胞をオリゴリボヌクレオチドとインキュベーション
することによってインビトロで行われた。インビボ用途のための同様の手順は、
ＷＯ９１／１５５８０に記載される。簡単には、所定のアンチセンスＲＮＡにつ
いてのオリゴヌクレオチドの対は、以下のように生成される：オープンリーディ
ングフレームの最初の１５塩基に相補的な配列を、５末端のＥｃｏＲＩ部位およ
び３末端のＨｉｎｄＩＩＩ部位に隣接させる。次に、オリゴヌクレオチドの対は
、９０℃で１分間加熱され、次いで２×ライゲーション緩衝液（２０ｍＭ ＴＲ
ＩＳ ＨＣｌ ｐＨ７．５、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１０ＭＭ ジチオスレイト
ール（ＤＴＴ）および０．２ｍＭ ＡＴＰ）中でアニーリングされ、次いで、レ
トロウイルスベクターＰＭＶ７のＥｃｏＲ１／ＨｉｎｄＩＩＩ部位に連結される
（ＷＯ９１／１５５８０）。
【０５０５】
例えば、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの５’コード部
分を使用して、約１０〜４０塩基対長のアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチド
を設計し得る。ＤＮＡオリゴヌクレオチドは、転写に関与する遺伝子の領域に相
補的であるように設計され、それにより転写およびレセプターの産生を阻害する
。アンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドは、インビボでｍＲＮＡにハイブリダ
イズし、そしてｍＲＮＡ分子のレセプターポリペプチドへの翻訳をブロックする
。
分を使用して、約１０〜４０塩基対長のアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチド
を設計し得る。ＤＮＡオリゴヌクレオチドは、転写に関与する遺伝子の領域に相
補的であるように設計され、それにより転写およびレセプターの産生を阻害する
。アンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドは、インビボでｍＲＮＡにハイブリダ
イズし、そしてｍＲＮＡ分子のレセプターポリペプチドへの翻訳をブロックする
。
【０５０６】
１つの実施形態において、本発明のアンチセンス核酸は、外来の配列からの転
写により細胞内で産生される。例えば、ベクターまたはその一部が転写され、本
発明のアンチセンス核酸（ＲＮＡ）を産生する。このようなベクターは、アンチ
センス核酸をコードする配列を含む。このようなベクターは、それが転写されて
所望のアンチセンスＲＮＡを産生し得る限り、エピソームのベクターのままであ
るか、または染色体に組込まれ得る。このようなベクターは、当該分野において
標準的な組換えＤＮＡ技術方法により構築され得る。ベクターは、脊椎動物細胞
において複製および発現のために使用される、当該分野で公知のプラスミド、ウ
イルスなどであり得る。本発明のポリペプチドをコードする配列またはそのフラ
グメントの発現は、脊椎動物、好ましくはヒト細胞において作用する、当該分野
で公知の任意のプロモーターにより得る。そのようなプロモーターは、誘導性ま
たは構成的であり得る。このようなプロモーターは、ＳＶ４０初期プロモーター
領域（ＢｅｒｎｏｉｓｔおよびＣｈａｍｂｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ、２９：３０４−
３１０（１９８１））、ラウス肉腫ウイルスの３’長末端反復に含まれるプロモ
ーター（Ｙａｍａｍｏｔｏら、Ｃｅｌｌ、２２：７８７−７９７（１９８０））
、ヘルペスチミジンプロモーター（Ｗａｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７８：１４４１−１４４５（１９８１））、メタロ
チオネイン遺伝子の調節配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２９６：３
９−４２（１９８２））などが挙げられるが、これらに限定されない。
写により細胞内で産生される。例えば、ベクターまたはその一部が転写され、本
発明のアンチセンス核酸（ＲＮＡ）を産生する。このようなベクターは、アンチ
センス核酸をコードする配列を含む。このようなベクターは、それが転写されて
所望のアンチセンスＲＮＡを産生し得る限り、エピソームのベクターのままであ
るか、または染色体に組込まれ得る。このようなベクターは、当該分野において
標準的な組換えＤＮＡ技術方法により構築され得る。ベクターは、脊椎動物細胞
において複製および発現のために使用される、当該分野で公知のプラスミド、ウ
イルスなどであり得る。本発明のポリペプチドをコードする配列またはそのフラ
グメントの発現は、脊椎動物、好ましくはヒト細胞において作用する、当該分野
で公知の任意のプロモーターにより得る。そのようなプロモーターは、誘導性ま
たは構成的であり得る。このようなプロモーターは、ＳＶ４０初期プロモーター
領域（ＢｅｒｎｏｉｓｔおよびＣｈａｍｂｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ、２９：３０４−
３１０（１９８１））、ラウス肉腫ウイルスの３’長末端反復に含まれるプロモ
ーター（Ｙａｍａｍｏｔｏら、Ｃｅｌｌ、２２：７８７−７９７（１９８０））
、ヘルペスチミジンプロモーター（Ｗａｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７８：１４４１−１４４５（１９８１））、メタロ
チオネイン遺伝子の調節配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２９６：３
９−４２（１９８２））などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０５０７】
本発明のアンチセンス核酸は、少なくとも本発明の遺伝子のＲＮＡ転写物の一
部に相補的な配列を含む。しかし、完全に相補的であることは好ましいが、必ず
しも必要ではない。本明細書中で言及される「少なくともＲＮＡの一部に相補的
な」配列は、ＲＮＡとハイブリダイズし得るに十分な相補性を有し、安定な二重
鎖を形成する配列を意味し；従って、二本鎖アンチセンス核酸の場合において、
二重鎖ＤＮＡの一本鎖が試験され得るか、または三重鎖形成がアッセイされ得る
。ハイブリダイズする能力は、相補性の程度およびアンチセンス核酸の長さの両
方に依存する。一般的に、ハイブリダイズする核酸が長いほど、ＲＮＡとのより
多くの塩基ミスマッチを含み得、これは、安定な二重鎖（または三重鎖の場合も
あり得る）を含み得、そしてなお形成し得る。当業者は、ハイブリダイズ複合体
の融点を決定するために標準的な手順を使用することによりミスマッチの許容の
程度を確認し得る。
部に相補的な配列を含む。しかし、完全に相補的であることは好ましいが、必ず
しも必要ではない。本明細書中で言及される「少なくともＲＮＡの一部に相補的
な」配列は、ＲＮＡとハイブリダイズし得るに十分な相補性を有し、安定な二重
鎖を形成する配列を意味し；従って、二本鎖アンチセンス核酸の場合において、
二重鎖ＤＮＡの一本鎖が試験され得るか、または三重鎖形成がアッセイされ得る
。ハイブリダイズする能力は、相補性の程度およびアンチセンス核酸の長さの両
方に依存する。一般的に、ハイブリダイズする核酸が長いほど、ＲＮＡとのより
多くの塩基ミスマッチを含み得、これは、安定な二重鎖（または三重鎖の場合も
あり得る）を含み得、そしてなお形成し得る。当業者は、ハイブリダイズ複合体
の融点を決定するために標準的な手順を使用することによりミスマッチの許容の
程度を確認し得る。
【０５０８】
メッセージの５’末端に相補的であるオリゴヌクレオチド（例えば、ＡＵＧ開
始コドンまででかつＡＵＧ開始コドンを含む５’非翻訳配列）は、翻訳の阻害の
際に最も効率的に働くべきである。しかし、ｍＲＮＡの３’非翻訳配列に相補的
な配列は、同様にｍＲＮＡの翻訳を阻害する際に有効であることが示された。一
般的に、Ｗａｇｎｅｒ，Ｒ．、１９９４、Ｎａｔｕｒｅ ３７２：３３３−３３
５を参照のこと。従って、本明細書中に記載されるポリヌクレオチド配列の５’
−または３’−の非翻訳非コード領域のいずれかに相補的なオリゴヌクレオチド
は、内因性ｍＲＮＡの翻訳を阻害するアンチセンスアプローチに使用され得る。
ｍＲＮＡの５’非翻訳領域に相補的なオリゴヌクレオチドは、ＡＵＧ開始コドン
の相補物を含むべきである。ｍＲＮＡコード領域に相補的なアンチセンスオリゴ
ヌクレオチドは、翻訳のあまり効率的でないインヒビターであるが、本発明に従
って使用され得る。本発明のｍＲＮＡの５’領域、３’領域またはコード領域に
ハイブリダイズするように設計されるか否かにかかわらず、アンチセンス核酸は
、少なくとも６ヌクレオチド長であるべきであり、そして好ましくは６〜約５０
ヌクレオチド長にわたるオリゴヌクレオチドである。特定の局面において、この
オリゴヌクレオチドは、少なくとも１０ヌクレオチド、少なくとも１７ヌクレオ
チド、少なくとも２５ヌクレオチドまたは少なくとも５０ヌクレオチドである。
始コドンまででかつＡＵＧ開始コドンを含む５’非翻訳配列）は、翻訳の阻害の
際に最も効率的に働くべきである。しかし、ｍＲＮＡの３’非翻訳配列に相補的
な配列は、同様にｍＲＮＡの翻訳を阻害する際に有効であることが示された。一
般的に、Ｗａｇｎｅｒ，Ｒ．、１９９４、Ｎａｔｕｒｅ ３７２：３３３−３３
５を参照のこと。従って、本明細書中に記載されるポリヌクレオチド配列の５’
−または３’−の非翻訳非コード領域のいずれかに相補的なオリゴヌクレオチド
は、内因性ｍＲＮＡの翻訳を阻害するアンチセンスアプローチに使用され得る。
ｍＲＮＡの５’非翻訳領域に相補的なオリゴヌクレオチドは、ＡＵＧ開始コドン
の相補物を含むべきである。ｍＲＮＡコード領域に相補的なアンチセンスオリゴ
ヌクレオチドは、翻訳のあまり効率的でないインヒビターであるが、本発明に従
って使用され得る。本発明のｍＲＮＡの５’領域、３’領域またはコード領域に
ハイブリダイズするように設計されるか否かにかかわらず、アンチセンス核酸は
、少なくとも６ヌクレオチド長であるべきであり、そして好ましくは６〜約５０
ヌクレオチド長にわたるオリゴヌクレオチドである。特定の局面において、この
オリゴヌクレオチドは、少なくとも１０ヌクレオチド、少なくとも１７ヌクレオ
チド、少なくとも２５ヌクレオチドまたは少なくとも５０ヌクレオチドである。
【０５０９】
本発明のポリヌクレオチドは、ＤＮＡ、もしくはＲＮＡ、またはキメラ混合物
、あるいはそれらの誘導体もしくは改変バージョン、一本鎖、または二本鎖であ
り得る。このオリゴヌクレオチドは、塩基部分、糖部分、またはリン酸骨格にお
いて改変され、例えば、分子の安定性、ハイブリダーゼーションなどを改善し得
る。このオリゴヌクレオチドは、ペプチドのような他の付加基（例えば、インビ
ボで宿主細胞レセプターを標的化するために）、または細胞膜を通した輸送を促
進する因子（例えば、Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら、１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：６５５３−６５５６；Ｌｅｍａｉｔｒｅ
ら、１９８７、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８４：６４８−６５２
；ＰＣＴ公開番号ＷＯ８８／０９８１０（１９８８年１２月１５日公開）を参照
のこと）、または血液脳関門（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ８９／１０１３４（
１９８８年４月２５日公開）を参照のこと）、ハイブリダイゼーション誘引切断
剤（ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ−ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ ｃｌｅａｖａｇｅ ａ
ｇｅｎｔ）（例えば、Ｋｒｏｌら、１９８８，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、６
：９５８−９７６を参照のこと）、またはインターカレート剤（例えば、Ｚｏｎ
，１９８８，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．５：５３９−５４９を参照のこと）を含み得
る。この目的のために、オリゴヌクレオチドは、別の分子（例えば、ペプチド、
ハイブリダーゼーション誘引架橋剤、輸送剤、ハイブリダイゼーション誘引切断
剤など）に結合体化され得る。
、あるいはそれらの誘導体もしくは改変バージョン、一本鎖、または二本鎖であ
り得る。このオリゴヌクレオチドは、塩基部分、糖部分、またはリン酸骨格にお
いて改変され、例えば、分子の安定性、ハイブリダーゼーションなどを改善し得
る。このオリゴヌクレオチドは、ペプチドのような他の付加基（例えば、インビ
ボで宿主細胞レセプターを標的化するために）、または細胞膜を通した輸送を促
進する因子（例えば、Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら、１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：６５５３−６５５６；Ｌｅｍａｉｔｒｅ
ら、１９８７、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８４：６４８−６５２
；ＰＣＴ公開番号ＷＯ８８／０９８１０（１９８８年１２月１５日公開）を参照
のこと）、または血液脳関門（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ８９／１０１３４（
１９８８年４月２５日公開）を参照のこと）、ハイブリダイゼーション誘引切断
剤（ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ−ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ ｃｌｅａｖａｇｅ ａ
ｇｅｎｔ）（例えば、Ｋｒｏｌら、１９８８，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、６
：９５８−９７６を参照のこと）、またはインターカレート剤（例えば、Ｚｏｎ
，１９８８，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．５：５３９−５４９を参照のこと）を含み得
る。この目的のために、オリゴヌクレオチドは、別の分子（例えば、ペプチド、
ハイブリダーゼーション誘引架橋剤、輸送剤、ハイブリダイゼーション誘引切断
剤など）に結合体化され得る。
【０５１０】
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの改変された塩基部分を
含み得、この塩基部分は、以下を含むがそれらに限定されない群から選択される
：５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨー
ドウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４−アセチルシトシン、５−（カル
ボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２
−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシ
ル、β−Ｄ−ガラクトシルキューオシン、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデ
ニン、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、
２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシ
トシン、Ｎ６−アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシ
ル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルキュー
オシン、５’−メトキシカルボキシメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２
−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ
）、ワイブトキソシン（ｗｙｂｕｔｏｘｏｓｉｎｅ）、プソイドウラシル、キュ
ーオシン、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシ
ル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチル
エステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、５−メチル−２−チオウラシル、
３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシプロピル）ウラシル、（ａｃｐ３）
ｗ、および２，６−ジアミノプリン。
含み得、この塩基部分は、以下を含むがそれらに限定されない群から選択される
：５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨー
ドウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４−アセチルシトシン、５−（カル
ボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２
−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシ
ル、β−Ｄ−ガラクトシルキューオシン、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデ
ニン、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、
２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシ
トシン、Ｎ６−アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシ
ル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルキュー
オシン、５’−メトキシカルボキシメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２
−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ
）、ワイブトキソシン（ｗｙｂｕｔｏｘｏｓｉｎｅ）、プソイドウラシル、キュ
ーオシン、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシ
ル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチル
エステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、５−メチル−２−チオウラシル、
３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシプロピル）ウラシル、（ａｃｐ３）
ｗ、および２，６−ジアミノプリン。
【０５１１】
アンチセンスオリゴヌクレオチドはまた、以下を含むがそれらに限定されない
群から選択される少なくとも１つの改変された糖部分を含み得る：アラビノース
、２−フルオロアラビノース、キシルロース、およびヘキソース。
群から選択される少なくとも１つの改変された糖部分を含み得る：アラビノース
、２−フルオロアラビノース、キシルロース、およびヘキソース。
【０５１２】
さらなる別の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下を
含むがそれらに限定されない群から選択される少なくとも１つの改変されたリン
酸骨格を含む：ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロアミドチ
オエート、ホスホロアミデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄａｔｅ）、ホスホロ
ジアミデート、メチルホスホネート、アルキルホスホトリエステル、およびホル
ムアセタール（ｆｏｒｍａｃｅｔａｌ）またはそれらのアナログ。
含むがそれらに限定されない群から選択される少なくとも１つの改変されたリン
酸骨格を含む：ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロアミドチ
オエート、ホスホロアミデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄａｔｅ）、ホスホロ
ジアミデート、メチルホスホネート、アルキルホスホトリエステル、およびホル
ムアセタール（ｆｏｒｍａｃｅｔａｌ）またはそれらのアナログ。
【０５１３】
さらなる別の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ａ−ア
ノマーオリゴヌクレオチドである。ａ−アノマーオリゴヌクレオチドは、相補的
なＲＮＡと特異的な二本鎖ハイブリッドを形成し、通常のｂ−ユニットとは反対
に、その鎖は互いに平行にする（Ｇａｕｔｉｅｒら、１９８７、Ｎｕｃｌ．Ａｃ
ｉｄｓ Ｒｅｓ．、１５：６６２５−６６４１）。このオリゴヌクレオチドは、
２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドであるか（Ｉｎｏｕｅら、１９８７、Ｎｕｃ
ｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、１５：６１３１−６１４８）、またはキメラＲＮＡ
−ＤＮＡアナログである（Ｉｎｏｕｅら、１９８７、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２１
５：３２７−３３０）。
ノマーオリゴヌクレオチドである。ａ−アノマーオリゴヌクレオチドは、相補的
なＲＮＡと特異的な二本鎖ハイブリッドを形成し、通常のｂ−ユニットとは反対
に、その鎖は互いに平行にする（Ｇａｕｔｉｅｒら、１９８７、Ｎｕｃｌ．Ａｃ
ｉｄｓ Ｒｅｓ．、１５：６６２５−６６４１）。このオリゴヌクレオチドは、
２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドであるか（Ｉｎｏｕｅら、１９８７、Ｎｕｃ
ｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、１５：６１３１−６１４８）、またはキメラＲＮＡ
−ＤＮＡアナログである（Ｉｎｏｕｅら、１９８７、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２１
５：３２７−３３０）。
【０５１４】
本発明のポリヌクレオチドは当該分野で公知の標準的な方法（例えば、自動Ｄ
ＮＡ合成機により（このような装置はＢｉｏｓｅａｒｃｈ，Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂ
ｉｏｓｙｓｔｅｍｓなどから市販されている）の使用により）合成され得る。例
えば、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、Ｓｔｅｉｎらの方法（１９８
８、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１６：３２０９）により合成され得、メチ
ルホスホネートオリゴヌクレオチドは、制御された細孔ガラス（ｃｏｎｔｒｏｌ
ｌｅｄ ｐｏｒｅ ｇｌａｓｓ）ポリマー支持体（Ｓａｒｉｎら、１９８８、Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：７４４８−７４５１
）の使用などにより調製され得る。
ＮＡ合成機により（このような装置はＢｉｏｓｅａｒｃｈ，Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂ
ｉｏｓｙｓｔｅｍｓなどから市販されている）の使用により）合成され得る。例
えば、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、Ｓｔｅｉｎらの方法（１９８
８、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１６：３２０９）により合成され得、メチ
ルホスホネートオリゴヌクレオチドは、制御された細孔ガラス（ｃｏｎｔｒｏｌ
ｌｅｄ ｐｏｒｅ ｇｌａｓｓ）ポリマー支持体（Ｓａｒｉｎら、１９８８、Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：７４４８−７４５１
）の使用などにより調製され得る。
【０５１５】
一方、コード領域配列に相補的なアンチセンスヌクレオチドが、使用され得、
転写された非翻訳領域に相補的なアンチセンスヌクレオチドが最も好ましい。
転写された非翻訳領域に相補的なアンチセンスヌクレオチドが最も好ましい。
【０５１６】
本発明による潜在的なアンタゴニストはまた、触媒ＲＮＡ、すなわちリボザイ
ムを含む（例えば、ＰＣＴ国際公開ＷＯ９０／１１３６４、１９９０年１０月４
日公開；Ｓａｒｖｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４７：１２２２−１２２５（１９
９０）を参照のこと）。一方、部位特異的認識配列でｍＲＮＡを切断するリボザ
イムを使用して、ｍＲＮＡを破壊し得るが、ハンマーヘッド型リボザイムの使用
が好ましい。ハンマーヘッド型リボザイムは、標的ｍＲＮＡと相補的な塩基対を
形成する隣接領域により決定される位置で、ｍＲＮＡを切断する。たった１つの
必要条件は、標的ｍＲＮＡが以下の２つの塩基の配列を有することである：５’
−ＵＧ−３’。ハンマーヘッド型リボザイムの構築および生成は当該分野で周知
であり、そしてＨａｓｅｌｏｆｆおよびＧｅｒｌａｃｈ、Ｎａｔｕｒｅ、３３４
：５８５−５９１（１９８８）に、より十分に記載される。配列番号Ｘのヌクレ
オチド配列内に多くの潜在的なハンマーヘッド型リボザイム切断部位が存在する
。好ましくは、このリボザイムは、切断認識部位がｍＲＮＡの５’末端付近に位
置するように；すなわち、効率を増大し、そして非機能的ｍＲＮＡ転写物の細胞
内蓄積を最小化するように、操作される。
ムを含む（例えば、ＰＣＴ国際公開ＷＯ９０／１１３６４、１９９０年１０月４
日公開；Ｓａｒｖｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４７：１２２２−１２２５（１９
９０）を参照のこと）。一方、部位特異的認識配列でｍＲＮＡを切断するリボザ
イムを使用して、ｍＲＮＡを破壊し得るが、ハンマーヘッド型リボザイムの使用
が好ましい。ハンマーヘッド型リボザイムは、標的ｍＲＮＡと相補的な塩基対を
形成する隣接領域により決定される位置で、ｍＲＮＡを切断する。たった１つの
必要条件は、標的ｍＲＮＡが以下の２つの塩基の配列を有することである：５’
−ＵＧ−３’。ハンマーヘッド型リボザイムの構築および生成は当該分野で周知
であり、そしてＨａｓｅｌｏｆｆおよびＧｅｒｌａｃｈ、Ｎａｔｕｒｅ、３３４
：５８５−５９１（１９８８）に、より十分に記載される。配列番号Ｘのヌクレ
オチド配列内に多くの潜在的なハンマーヘッド型リボザイム切断部位が存在する
。好ましくは、このリボザイムは、切断認識部位がｍＲＮＡの５’末端付近に位
置するように；すなわち、効率を増大し、そして非機能的ｍＲＮＡ転写物の細胞
内蓄積を最小化するように、操作される。
【０５１７】
アンチセンスアプローチの場合、本発明のリボザイムは、改変されたオリゴヌ
クレオチド（例えば、安定性、標的化などについて改良された）から構成され得
、そしてインビボにおいて発現する細胞に送達されるべきである。リボザイムを
コードするＤＮＡ構築物は、ＤＮＡをコードするアンチセンスの導入のための上
記と同じ様式で細胞中に導入され得る。送達の好ましい方法は、強力な構成的プ
ロモーター（例えば、ｐｏｌ ＩＩＩまたはｐｌ ＩＩプロモーターのような）
の制御下でリボザイムを「コードする」ＤＮＡ構築物を使用することを含み、そ
の結果、トランスフェクトした細胞は、内因性メッセージを破壊しそして翻訳を
阻害するに十分な量のリボザイムを生成する。リボザイムはアンチセンス分子と
異なり触媒性であるので、より低い細胞内濃度が効率のために必要とされる。
クレオチド（例えば、安定性、標的化などについて改良された）から構成され得
、そしてインビボにおいて発現する細胞に送達されるべきである。リボザイムを
コードするＤＮＡ構築物は、ＤＮＡをコードするアンチセンスの導入のための上
記と同じ様式で細胞中に導入され得る。送達の好ましい方法は、強力な構成的プ
ロモーター（例えば、ｐｏｌ ＩＩＩまたはｐｌ ＩＩプロモーターのような）
の制御下でリボザイムを「コードする」ＤＮＡ構築物を使用することを含み、そ
の結果、トランスフェクトした細胞は、内因性メッセージを破壊しそして翻訳を
阻害するに十分な量のリボザイムを生成する。リボザイムはアンチセンス分子と
異なり触媒性であるので、より低い細胞内濃度が効率のために必要とされる。
【０５１８】
アンタゴニスト／アゴニスト化合物を利用して、腫瘍性の細胞および組織上で
の本発明のポリペプチドの細胞増殖（ｇｒｏｗｔｈ）および増殖（ｐｒｏｌｉｆ
ｅｒａｔｉｏｎ）効果を阻害し得る。すなわち、腫瘍のアゴニストを刺激し、そ
れにより異常な細胞成長および増殖を（例えば、腫瘍形成または増殖において）
遅延または防止する。
の本発明のポリペプチドの細胞増殖（ｇｒｏｗｔｈ）および増殖（ｐｒｏｌｉｆ
ｅｒａｔｉｏｎ）効果を阻害し得る。すなわち、腫瘍のアゴニストを刺激し、そ
れにより異常な細胞成長および増殖を（例えば、腫瘍形成または増殖において）
遅延または防止する。
【０５１９】
アンタゴニスト／アゴニストをまた利用して、血管過多の疾患をも阻害し得、
そして水晶体嚢外白内障（ｅｘｔｒａｃａｐｓｕｌａｒ ｃａｔａｒａｃｔ）手
術後の上皮レンズ細胞の増殖をも防止する。本発明のポリペプチドのマイトジェ
ン活性の防止はまた、例えば、バルーン血管形成術後の再狭窄のような場合に要
求され得る。
そして水晶体嚢外白内障（ｅｘｔｒａｃａｐｓｕｌａｒ ｃａｔａｒａｃｔ）手
術後の上皮レンズ細胞の増殖をも防止する。本発明のポリペプチドのマイトジェ
ン活性の防止はまた、例えば、バルーン血管形成術後の再狭窄のような場合に要
求され得る。
【０５２０】
アンタゴニスト／アゴニストをまた利用して、創傷治癒の間の瘢痕組織の増殖
をも防止し得る。
をも防止し得る。
【０５２１】
アンタゴニスト／アゴニストをまた利用して、本明細書中に記載される疾患を
も処置し得る。
も処置し得る。
【０５２２】
従って、本発明は、疾患、障害および／または状態（本発明のポリヌクレオチ
ドの過剰発現に関連する、本願の全体に渡って列挙される疾患、障害および／ま
たは状態が含まれるが、これらに限定されない）を、（ａ）本発明のポリヌクレ
オチドに指向されたアンチセンス分子、および／または（ｂ）本発明のポリヌク
レオチドに指向されたリボザイムを、患者に投与することによって処置する方法
を提供する。
ドの過剰発現に関連する、本願の全体に渡って列挙される疾患、障害および／ま
たは状態が含まれるが、これらに限定されない）を、（ａ）本発明のポリヌクレ
オチドに指向されたアンチセンス分子、および／または（ｂ）本発明のポリヌク
レオチドに指向されたリボザイムを、患者に投与することによって処置する方法
を提供する。
【０５２３】
（他の活性）
本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニストまたはアンタゴニスト
は、血管内皮細胞増殖を刺激する能力の結果として、種々の疾患状態（例えば、
血栓症、動脈硬化、および他の心臓血管の状態）に起因する虚血組織の血管再生
を刺激するための処置において利用され得る。本発明のポリペプチド、ポリヌク
レオチド、アゴニストまたはアンタゴニストをまた利用して、上記で議論される
ように新脈管形成および肢の再形成を刺激し得る。
は、血管内皮細胞増殖を刺激する能力の結果として、種々の疾患状態（例えば、
血栓症、動脈硬化、および他の心臓血管の状態）に起因する虚血組織の血管再生
を刺激するための処置において利用され得る。本発明のポリペプチド、ポリヌク
レオチド、アゴニストまたはアンタゴニストをまた利用して、上記で議論される
ように新脈管形成および肢の再形成を刺激し得る。
【０５２４】
本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニストまたはアンタゴニスト
をまた、傷害、熱傷、手術後組織修復、および瘢痕に起因する創傷の処置にも利
用し得る。なぜなら、それらは異なる起源の種々の細胞（例えば、線維芽細胞お
よび骨格筋細胞）に対してマイトジェン性であり、それゆえダメージを受けた組
織または疾患組織の修復または置換を促進するからである。
をまた、傷害、熱傷、手術後組織修復、および瘢痕に起因する創傷の処置にも利
用し得る。なぜなら、それらは異なる起源の種々の細胞（例えば、線維芽細胞お
よび骨格筋細胞）に対してマイトジェン性であり、それゆえダメージを受けた組
織または疾患組織の修復または置換を促進するからである。
【０５２５】
本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニストまたはアンタゴニスト
をまた使用して、ニューロンの成長を刺激し、そして特定のニューロンの障害ま
たは神経変性状態（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、およびＡＩＤ
Ｓ関連複合体）において生じるニューロンのダメージを処置および予防し得る。
本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニストまたはアンタゴニストは
、軟骨細胞増殖を刺激する能力を有し得、それゆえ、骨および歯周の再形成を増
強し、そして組織移植片または骨の移植片における補助のために利用され得る。
をまた使用して、ニューロンの成長を刺激し、そして特定のニューロンの障害ま
たは神経変性状態（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、およびＡＩＤ
Ｓ関連複合体）において生じるニューロンのダメージを処置および予防し得る。
本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニストまたはアンタゴニストは
、軟骨細胞増殖を刺激する能力を有し得、それゆえ、骨および歯周の再形成を増
強し、そして組織移植片または骨の移植片における補助のために利用され得る。
【０５２６】
本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニストまたはアンタゴニスト
をまた利用して、ケラチノサイト増殖を刺激することにより、日焼けに起因する
皮膚の老化を予防し得る。
をまた利用して、ケラチノサイト増殖を刺激することにより、日焼けに起因する
皮膚の老化を予防し得る。
【０５２７】
本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニストまたはアンタゴニスト
をまた、抜け毛を予防するためにも利用し得る。なぜなら、ＦＧＦファミリーの
メンバーは、髪形成細胞を活性化し、そしてメラノサイト増殖を促進するからで
ある。同じ系列にそって、本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニス
トまたはアンタゴニストを利用して、他のサイトカインと組み合わせて使用した
場合、造血細胞および骨髄細胞の増殖および分化を刺激し得る。
をまた、抜け毛を予防するためにも利用し得る。なぜなら、ＦＧＦファミリーの
メンバーは、髪形成細胞を活性化し、そしてメラノサイト増殖を促進するからで
ある。同じ系列にそって、本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニス
トまたはアンタゴニストを利用して、他のサイトカインと組み合わせて使用した
場合、造血細胞および骨髄細胞の増殖および分化を刺激し得る。
【０５２８】
本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニストまたはアンタゴニスト
をまた利用して、移植前の器官を維持し得るか、または始原組織の細胞培養を支
持するために使用し得る。本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニス
トまたはアンタゴニストはまた、初期胚における分化のための中胚葉起源の組織
を誘導するために利用され得る。
をまた利用して、移植前の器官を維持し得るか、または始原組織の細胞培養を支
持するために使用し得る。本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニス
トまたはアンタゴニストはまた、初期胚における分化のための中胚葉起源の組織
を誘導するために利用され得る。
【０５２９】
本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニストまたはアンタゴニスト
はまた、先に議論されるように、造血系統に加えて胚性幹細胞の分化または増殖
を増加または減少し得る。
はまた、先に議論されるように、造血系統に加えて胚性幹細胞の分化または増殖
を増加または減少し得る。
【０５３０】
本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニストまたはアンタゴニスト
はまた、哺乳動物の特徴（例えば、身長、体重、毛の色、眼の色、皮膚、脂肪組
織の割合、色素沈着、大きさ、および形（例えば、美容外科））を調節するため
に使用され得る。同様に、本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニス
トまたはアンタゴニストは、異化作用、同化作用、プロセシング、利用、および
エネルギーの貯蔵に影響を及ぼす哺乳動物の代謝を調節するために使用され得る
。
はまた、哺乳動物の特徴（例えば、身長、体重、毛の色、眼の色、皮膚、脂肪組
織の割合、色素沈着、大きさ、および形（例えば、美容外科））を調節するため
に使用され得る。同様に、本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニス
トまたはアンタゴニストは、異化作用、同化作用、プロセシング、利用、および
エネルギーの貯蔵に影響を及ぼす哺乳動物の代謝を調節するために使用され得る
。
【０５３１】
本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニストまたはアンタゴニスト
は、バイオリズム、カリカディック（ｃａｒｉｃａｄｉｃ）リズム、うつ病（抑
うつ性障害を含む）、暴力の傾向、痛みへの耐性、生殖能力（好ましくは、アク
チビンまたはインヒビン様活性によって）、ホルモンレベルもしくは内分泌レベ
ル、食欲、性欲、記憶、ストレス、または他の認知の質に影響を及ぼすことによ
って、哺乳動物の精神状態または身体状態を変更するために使用され得る。
は、バイオリズム、カリカディック（ｃａｒｉｃａｄｉｃ）リズム、うつ病（抑
うつ性障害を含む）、暴力の傾向、痛みへの耐性、生殖能力（好ましくは、アク
チビンまたはインヒビン様活性によって）、ホルモンレベルもしくは内分泌レベ
ル、食欲、性欲、記憶、ストレス、または他の認知の質に影響を及ぼすことによ
って、哺乳動物の精神状態または身体状態を変更するために使用され得る。
【０５３２】
本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、アゴニストまたはアンタゴニスト
はまた、例えば、貯蔵能力、脂肪含有量、脂質、タンパク質、炭水化物、ビタミ
ン、ミネラル、補因子、または他の栄養成分を増加または減少させるような食品
添加物または保存剤として使用され得る。
はまた、例えば、貯蔵能力、脂肪含有量、脂質、タンパク質、炭水化物、ビタミ
ン、ミネラル、補因子、または他の栄養成分を増加または減少させるような食品
添加物または保存剤として使用され得る。
【０５３３】
上記に列挙される用途は、広範な種々の宿主において使用される。このような
宿主としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：ヒト、ネズミ、ウサ
ギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、マウス、ラット、ハムスター、ブタ、ミ
ニブタ（ｍｉｃｒｏ ｐｉｇ）、ニワトリ、ヤギ、ウシ、ヒツジ、イヌ、ネコ、
非ヒト霊長類、およびヒト。特定の実施形態において、宿主は、マウス、ウサギ
、ヤギ、モルモット、ニワトリ、ラット、ハムスター、ブタ、ヒツジ、イヌまた
はネコである。好ましい実施形態において、宿主は哺乳動物である。最も好まし
い実施形態において、宿主は、ヒトである。
宿主としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：ヒト、ネズミ、ウサ
ギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、マウス、ラット、ハムスター、ブタ、ミ
ニブタ（ｍｉｃｒｏ ｐｉｇ）、ニワトリ、ヤギ、ウシ、ヒツジ、イヌ、ネコ、
非ヒト霊長類、およびヒト。特定の実施形態において、宿主は、マウス、ウサギ
、ヤギ、モルモット、ニワトリ、ラット、ハムスター、ブタ、ヒツジ、イヌまた
はネコである。好ましい実施形態において、宿主は哺乳動物である。最も好まし
い実施形態において、宿主は、ヒトである。
【０５３４】
（他の好ましい実施形態）
本願発明の他の好ましい実施形態は、配列番号Ｘのヌクレオチド配列またはそ
れに対する相補鎖、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺにおける少なくとも約
５０の連続したヌクレオチドの配列に、少なくとも９５％同一であるヌクレオチ
ド配列を含む、単離された核酸分子を含む。
れに対する相補鎖、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺにおける少なくとも約
５０の連続したヌクレオチドの配列に、少なくとも９５％同一であるヌクレオチ
ド配列を含む、単離された核酸分子を含む。
【０５３５】
上記連続したヌクレオチドの配列が、表１中の配列番号Ｘについて同定される
位置の範囲で、配列番号Ｘのヌクレオチド配列に含まれる核酸分子もまた好まし
い。
位置の範囲で、配列番号Ｘのヌクレオチド配列に含まれる核酸分子もまた好まし
い。
【０５３６】
配列番号Ｘまたはその相補鎖のヌクレオチド配列、および／またはｃＤＮＡプ
ラスミドＺのヌクレオチド配列中の、少なくとも約１５０の連続するヌクレオチ
ドの配列に、少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された
核酸分子もまた好ましい。
ラスミドＺのヌクレオチド配列中の、少なくとも約１５０の連続するヌクレオチ
ドの配列に、少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された
核酸分子もまた好ましい。
【０５３７】
配列番号Ｘまたはその相補鎖のヌクレオチド配列、および／またはｃＤＮＡプ
ラスミドＺのヌクレオチド配列中の、少なくとも約５００の連続するヌクレオチ
ドの配列に、少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された
核酸分子は、さらに好ましい。
ラスミドＺのヌクレオチド配列中の、少なくとも約５００の連続するヌクレオチ
ドの配列に、少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された
核酸分子は、さらに好ましい。
【０５３８】
さらに好ましい実施形態は、表１において配列番号Ｘについて同定された位置
の範囲における配列番号Ｘのヌクレオチド配列に少なくとも９５％同一であるヌ
クレオチド配列を含む核酸分子である。
の範囲における配列番号Ｘのヌクレオチド配列に少なくとも９５％同一であるヌ
クレオチド配列を含む核酸分子である。
【０５３９】
さらに好ましい実施形態は、配列番号Ｘの完全ヌクレオチド配列もしくはその
相補鎖、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺのヌクレオチド配列に少なくとも
９５％同一であるヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子である。
相補鎖、および／またはｃＤＮＡプラスミドＺのヌクレオチド配列に少なくとも
９５％同一であるヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子である。
【０５４０】
配列番号Ｘのヌクレオチド配列もしくはその相補鎖、および／またはｃＤＮＡ
プラスミドＺのヌクレオチド配列を含む核酸分子に、ストリンジェントなハイブ
リダイゼーション条件下でハイブリダイズする単離された核酸分子もまた好まし
く、ここで上記のハイブリダイズする核酸分子は、ストリンジェントなハイブリ
ダイゼーション条件下で、Ａ残基のみまたはＴ残基のみからなるヌクレオチド配
列を有する核酸分子にハイブリダイズしない。
プラスミドＺのヌクレオチド配列を含む核酸分子に、ストリンジェントなハイブ
リダイゼーション条件下でハイブリダイズする単離された核酸分子もまた好まし
く、ここで上記のハイブリダイズする核酸分子は、ストリンジェントなハイブリ
ダイゼーション条件下で、Ａ残基のみまたはＴ残基のみからなるヌクレオチド配
列を有する核酸分子にハイブリダイズしない。
【０５４１】
ｃＤＮＡプラスミドＺを含むＤＮＡ分子を含む組成物もまた、好ましい。
【０５４２】
ｃＤＮＡプラスミドＺのヌクレオチド配列中の少なくとも５０の連続するヌク
レオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む単離され
た核酸分子もまた好ましい。
レオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む単離され
た核酸分子もまた好ましい。
【０５４３】
少なくとも５０の連続するヌクレオチドの上記配列が、ｃＤＮＡプラスミドＺ
によりコードされるオープンリーディングフレーム配列のヌクレオチド配列に含
まれる、単離された核酸分子もまた好ましい。
によりコードされるオープンリーディングフレーム配列のヌクレオチド配列に含
まれる、単離された核酸分子もまた好ましい。
【０５４４】
ｃＤＮＡプラスミドＺによりコードされるヌクレオチド配列において少なくと
も１５０の連続するヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオ
チド配列を含む単離された核酸分子もまた好ましい。
も１５０の連続するヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオ
チド配列を含む単離された核酸分子もまた好ましい。
【０５４５】
さらに好ましい実施形態は、ｃＤＮＡプラスミドＺによりコードされるヌクレ
オチド配列中の少なくとも５００の連続するヌクレオチドの配列に少なくとも９
５％同一であるヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子である。
オチド配列中の少なくとも５００の連続するヌクレオチドの配列に少なくとも９
５％同一であるヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子である。
【０５４６】
さらに好ましい実施形態は、ｃＤＮＡプラスミドＺによりコードされる完全ヌ
クレオチド配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む単離され
た核酸分子である。
クレオチド配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む単離され
た核酸分子である。
【０５４７】
さらに好ましい実施形態は、以下からなる群から選択される配列中の少なくと
も５０の連続するヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチ
ド配列を含む核酸分子を生物学的サンプルにおいて検出するための方法である：
配列番号Ｘまたはその相補鎖のヌクレオチド配列、およびｃＤＮＡプラスミドＺ
によりコードされるヌクレオチド配列。この方法は、上記群から選択される配列
と上記サンプル中の少なくとも１つの核酸分子のヌクレオチド配列とを比較する
工程、および上記サンプル中の上記核酸分子の配列が、上記選択配列に少なくと
も９５％同一であるか否かを決定する工程を包含する。
も５０の連続するヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチ
ド配列を含む核酸分子を生物学的サンプルにおいて検出するための方法である：
配列番号Ｘまたはその相補鎖のヌクレオチド配列、およびｃＤＮＡプラスミドＺ
によりコードされるヌクレオチド配列。この方法は、上記群から選択される配列
と上記サンプル中の少なくとも１つの核酸分子のヌクレオチド配列とを比較する
工程、および上記サンプル中の上記核酸分子の配列が、上記選択配列に少なくと
も９５％同一であるか否かを決定する工程を包含する。
【０５４８】
配列を比較する上記工程が上記サンプル中の核酸分子と上記群から選択される
上記配列を含む核酸分子との間で核酸ハイブリダイゼーションの範囲を決定する
ことを含む方法もまた好ましい。同様に、配列を比較する上記工程が、上記群か
ら選択される上記配列と上記サンプル中の核酸分子から決定されるヌクレオチド
配列とを比較することにより行われる、上記方法もまた好ましい。この核酸分子
は、ＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子を含み得る。
上記配列を含む核酸分子との間で核酸ハイブリダイゼーションの範囲を決定する
ことを含む方法もまた好ましい。同様に、配列を比較する上記工程が、上記群か
ら選択される上記配列と上記サンプル中の核酸分子から決定されるヌクレオチド
配列とを比較することにより行われる、上記方法もまた好ましい。この核酸分子
は、ＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子を含み得る。
【０５４９】
さらに好ましい実施形態は、以下からなる群から選択される配列において少な
くとも５０の連続するヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレ
オチド配列を含む上記サンプル中の核酸分子を（もしあれば）検出する工程を包
含する、生物学的サンプルの種、組織または細胞型を同定するための方法である
：配列番号Ｘまたはその相補鎖のヌクレオチド配列、およびｃＤＮＡプラスミド
Ｚによってコードされるヌクレオチド配列。
くとも５０の連続するヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレ
オチド配列を含む上記サンプル中の核酸分子を（もしあれば）検出する工程を包
含する、生物学的サンプルの種、組織または細胞型を同定するための方法である
：配列番号Ｘまたはその相補鎖のヌクレオチド配列、およびｃＤＮＡプラスミド
Ｚによってコードされるヌクレオチド配列。
【０５５０】
生物学的サンプルの種、組織、または細胞型を同定するための方法は、少なく
とも２つのヌクレオチド配列のパネル中のヌクレオチド配列を含む核酸分子を検
出する工程を包含し得、ここで上記パネル中の少なくとも１つの配列は、上記の
群から選択される配列中の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少な
くとも９５％同一である。
とも２つのヌクレオチド配列のパネル中のヌクレオチド配列を含む核酸分子を検
出する工程を包含し得、ここで上記パネル中の少なくとも１つの配列は、上記の
群から選択される配列中の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少な
くとも９５％同一である。
【０５５１】
配列番号Ｘまたはその相補鎖のヌクレオチド配列、またはタンパク質をコード
するｃＤＮＡプラスミドＺのヌクレオチド配列の異常な構造または発現と関連す
る病理学的状態を、被験体において診断するための方法もまた好ましく、この方
法は、以下からなる群から選択される配列中の少なくとも５０の連続するヌクレ
オチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸分子を
（もしあれば）上記被験体から得られた生物学的サンプルにおいて検出する工程
を包含する：配列番号Ｘまたはその相補鎖のヌクレオチド配列、およびｃＤＮＡ
プラスミドＺのヌクレオチド配列。
するｃＤＮＡプラスミドＺのヌクレオチド配列の異常な構造または発現と関連す
る病理学的状態を、被験体において診断するための方法もまた好ましく、この方
法は、以下からなる群から選択される配列中の少なくとも５０の連続するヌクレ
オチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸分子を
（もしあれば）上記被験体から得られた生物学的サンプルにおいて検出する工程
を包含する：配列番号Ｘまたはその相補鎖のヌクレオチド配列、およびｃＤＮＡ
プラスミドＺのヌクレオチド配列。
【０５５２】
病的状態を診断するための方法は、少なくとも２つのヌクレオチド配列のパネ
ル中にヌクレオチド配列を含む核酸分子を検出する工程を包含し得、ここで、上
記パネル中の少なくとも１つの配列は、上記の群から選択された配列中の少なく
とも５０個の連続ヌクレオチドの配列に、少なくとも９５％同一である。
ル中にヌクレオチド配列を含む核酸分子を検出する工程を包含し得、ここで、上
記パネル中の少なくとも１つの配列は、上記の群から選択された配列中の少なく
とも５０個の連続ヌクレオチドの配列に、少なくとも９５％同一である。
【０５５３】
単離された核酸分子を含む組成物がまた好ましく、ここで、上記核酸分子のヌ
クレオチド配列が、少なくとも２つのヌクレオチド配列のパネルを含み、ここで
、上記パネル中の少なくとも１つの配列が、以下からなる群より選択される配列
中の少なくとも５０個の連続ヌクレオチドの配列に、少なくとも９５％同一であ
る：配列番号Ｘのヌクレオチド配列またはそれに対する相補鎖およびｃＤＮＡプ
ラスミドＺによってコードされるヌクレオチド配列。この核酸分子は、ＤＮＡ分
子またはＲＮＡ分子を含み得る。
クレオチド配列が、少なくとも２つのヌクレオチド配列のパネルを含み、ここで
、上記パネル中の少なくとも１つの配列が、以下からなる群より選択される配列
中の少なくとも５０個の連続ヌクレオチドの配列に、少なくとも９５％同一であ
る：配列番号Ｘのヌクレオチド配列またはそれに対する相補鎖およびｃＤＮＡプ
ラスミドＺによってコードされるヌクレオチド配列。この核酸分子は、ＤＮＡ分
子またはＲＮＡ分子を含み得る。
【０５５４】
配列番号Ｙのポリペプチド配列中の少なくとも約１０個の連続アミノ酸の配列
に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチド；配
列番号Ｘまたはその相補鎖によってコードされるポリペプチドおよび／またはｃ
ＤＮＡプラスミドＺによってコードされるポリペプチドもまた好ましい。
に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチド；配
列番号Ｘまたはその相補鎖によってコードされるポリペプチドおよび／またはｃ
ＤＮＡプラスミドＺによってコードされるポリペプチドもまた好ましい。
【０５５５】
配列番号Ｙのアミノ酸配列中の少なくとも約３０個の連続アミノ酸の配列に少
なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチド；配列番
号Ｘまたはそれに対する相補鎖によってコードされるポリペプチドおよび／また
はｃＤＮＡプラスミドＺによってコードされるポリペプチドもまた好ましい。
なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチド；配列番
号Ｘまたはそれに対する相補鎖によってコードされるポリペプチドおよび／また
はｃＤＮＡプラスミドＺによってコードされるポリペプチドもまた好ましい。
【０５５６】
配列番号Ｙのアミノ酸配列中の少なくとも約１００個の連続アミノ酸の配列に
少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチド；配列
番号Ｘまたはそれに対する相補鎖によってコードされるポリペプチドおよび／ま
たはｃＤＮＡプラスミドＺによってコードされるポリペプチドはさらに好ましい
。
少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチド；配列
番号Ｘまたはそれに対する相補鎖によってコードされるポリペプチドおよび／ま
たはｃＤＮＡプラスミドＺによってコードされるポリペプチドはさらに好ましい
。
【０５５７】
配列番号Ｙの完全アミノ酸配列に少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を
含む単離されたポリペプチド；配列番号Ｘまたはそれに対する相補鎖によってコ
ードされるポリペプチドおよび／またはｃＤＮＡプラスミドＺによってコードさ
れるポリペプチドはさらに好ましい。
含む単離されたポリペプチド；配列番号Ｘまたはそれに対する相補鎖によってコ
ードされるポリペプチドおよび／またはｃＤＮＡプラスミドＺによってコードさ
れるポリペプチドはさらに好ましい。
【０５５８】
ｃＤＮＡプラスミドＺによってコードされるポリペプチドの完全アミノ酸配列
中の、少なくとも約１０個の連続アミノ酸の配列に、少なくとも９０％同一であ
るアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドはさらに好ましい。
中の、少なくとも約１０個の連続アミノ酸の配列に、少なくとも９０％同一であ
るアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドはさらに好ましい。
【０５５９】
上記連続アミノ酸の配列が、ｃＤＮＡプラスミドＺによってコードされるポリ
ペプチドの部分のアミノ酸配列中に含まれる、ポリペプチド；配列番号Ｘまたは
それに対する相補鎖によってコードされるポリペプチドおよび／または配列番号
Ｙのポリペプチド配列がまた、好ましい。
ペプチドの部分のアミノ酸配列中に含まれる、ポリペプチド；配列番号Ｘまたは
それに対する相補鎖によってコードされるポリペプチドおよび／または配列番号
Ｙのポリペプチド配列がまた、好ましい。
【０５６０】
ｃＤＮＡプラスミドＺによってコードされるポリペプチドのアミノ酸配列中の
、少なくとも約３０個の連続アミノ酸の配列に、少なくとも９５％同一であるア
ミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドがまた、好ましい。
、少なくとも約３０個の連続アミノ酸の配列に、少なくとも９５％同一であるア
ミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドがまた、好ましい。
【０５６１】
ｃＤＮＡプラスミドＺによってコードされるポリペプチドのアミノ酸配列にお
ける、少なくとも約１００の連続したアミノ酸の配列に、少なくとも９５％同一
のアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドもまた好ましい。
ける、少なくとも約１００の連続したアミノ酸の配列に、少なくとも９５％同一
のアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドもまた好ましい。
【０５６２】
ｃＤＮＡプラスミドＺによってコードされるポリペプチドのアミノ酸配列に、
少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドもまた好ま
しい。
少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドもまた好ま
しい。
【０５６３】
以下からなる群から選択される配列中の、少なくとも１０の連続したアミノ酸
の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドに特異的
に結合する、単離された抗体はさらに好ましい：配列番号Ｙのポリペプチド配列
；配列番号Ｘまたはそれに対する相補鎖によってコードされるポリペプチドおよ
びｃＤＮＡプラスミドＺによってコードされるポリペプチド。
の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドに特異的
に結合する、単離された抗体はさらに好ましい：配列番号Ｙのポリペプチド配列
；配列番号Ｘまたはそれに対する相補鎖によってコードされるポリペプチドおよ
びｃＤＮＡプラスミドＺによってコードされるポリペプチド。
【０５６４】
以下からなる群から選択される配列中の、少なくとも１０の連続したアミノ酸
の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドを、生物
学的サンプルにおいて検出する方法はさらに好ましい：配列番号Ｙのポリペプチ
ド配列；配列番号Ｘまたはそれに対する相補鎖によってコードされるポリペプチ
ドおよびｃＤＮＡプラスミドＺによってコードされるポリペプチド；この方法は
、このサンプル中における少なくとも１つのポリペプチド分子のアミノ酸配列を
、この群から選択される配列と比較する工程、およびこのサンプル中のこのポリ
ペプチド分子の配列が、少なくとも１０の連続したアミノ酸のこの配列と少なく
とも９０％同一であるかどうかを決定する工程を包含する。
の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドを、生物
学的サンプルにおいて検出する方法はさらに好ましい：配列番号Ｙのポリペプチ
ド配列；配列番号Ｘまたはそれに対する相補鎖によってコードされるポリペプチ
ドおよびｃＤＮＡプラスミドＺによってコードされるポリペプチド；この方法は
、このサンプル中における少なくとも１つのポリペプチド分子のアミノ酸配列を
、この群から選択される配列と比較する工程、およびこのサンプル中のこのポリ
ペプチド分子の配列が、少なくとも１０の連続したアミノ酸のこの配列と少なく
とも９０％同一であるかどうかを決定する工程を包含する。
【０５６５】
このサンプル中の少なくとも１つのポリペプチド分子のアミノ酸配列を、この
群から選択される配列と比較する上記の工程が、このサンプル中のポリペプチド
の、以下からなる群から選択される配列中の少なくとも１０の連続したアミノ酸
の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと特異的
に結合する抗体に対する特異的な結合の程度を決定する工程を含む、上記の方法
もまた、好ましい：配列番号Ｙのポリペプチド配列；配列番号Ｘまたはそれに対
する相補鎖によってコードされるポリペプチドおよびｃＤＮＡプラスミドＺによ
ってコードされるポリペプチド。
群から選択される配列と比較する上記の工程が、このサンプル中のポリペプチド
の、以下からなる群から選択される配列中の少なくとも１０の連続したアミノ酸
の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと特異的
に結合する抗体に対する特異的な結合の程度を決定する工程を含む、上記の方法
もまた、好ましい：配列番号Ｙのポリペプチド配列；配列番号Ｘまたはそれに対
する相補鎖によってコードされるポリペプチドおよびｃＤＮＡプラスミドＺによ
ってコードされるポリペプチド。
【０５６６】
配列を比較する上記の工程が、このサンプル中のポリペプチド分子から決定さ
れたアミノ酸配列を、この群から選択される配列と比較することによって行われ
る、上記の方法もまた好ましい。
れたアミノ酸配列を、この群から選択される配列と比較することによって行われ
る、上記の方法もまた好ましい。
【０５６７】
生物学的サンプルの種、組織または細胞型を同定する方法もまた好ましく、こ
の方法は、以下からなる群から選択される配列における少なくとも１０の連続し
たアミノ酸の配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチ
ド分子（もし存在すれば）をこのサンプル中で検出する工程を包含する：配列番
号Ｙのポリペプチド配列；配列番号Ｘまたはそれに対する相補鎖によってコード
されるポリペプチドおよびｃＤＮＡプラスミドＺによってコードされるポリペプ
チド。
の方法は、以下からなる群から選択される配列における少なくとも１０の連続し
たアミノ酸の配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチ
ド分子（もし存在すれば）をこのサンプル中で検出する工程を包含する：配列番
号Ｙのポリペプチド配列；配列番号Ｘまたはそれに対する相補鎖によってコード
されるポリペプチドおよびｃＤＮＡプラスミドＺによってコードされるポリペプ
チド。
【０５６８】
生物学的サンプルの種、組織または細胞型を同定する上記の方法もまた好まし
く、この方法は、少なくとも２つのアミノ酸配列のパネルにおけるアミノ酸配列
を含むポリペプチド分子を検出する工程を含み、ここでこのパネル中の少なくと
も１つの配列は、上記の群から選択される配列における少なくとも１０の連続し
たアミノ酸の配列と少なくとも９０％同一である。
く、この方法は、少なくとも２つのアミノ酸配列のパネルにおけるアミノ酸配列
を含むポリペプチド分子を検出する工程を含み、ここでこのパネル中の少なくと
も１つの配列は、上記の群から選択される配列における少なくとも１０の連続し
たアミノ酸の配列と少なくとも９０％同一である。
【０５６９】
被験体において、表１において同定された、ポリペプチドをコードする核酸配
列の異常な構造または発現に関連する病的状態を診断する方法もまた、好ましい
。この方法は、この被験体から得られた生物学的サンプルにおいて、少なくとも
２つのアミノ酸配列のパネルにおけるアミノ酸配列を含むポリペプチド分子を検
出する工程を含み、ここでこのパネル中の少なくとも１つの配列は、以下からな
る群から選択される配列における少なくとも１０の連続したアミノ酸の配列と少
なくとも９０％同一である：配列番号Ｙのポリペプチド配列；配列番号Ｘまたは
それに対する相補鎖によってコードされるポリペプチドおよびｃＤＮＡプラスミ
ドＺによってコードされるポリペプチド。
列の異常な構造または発現に関連する病的状態を診断する方法もまた、好ましい
。この方法は、この被験体から得られた生物学的サンプルにおいて、少なくとも
２つのアミノ酸配列のパネルにおけるアミノ酸配列を含むポリペプチド分子を検
出する工程を含み、ここでこのパネル中の少なくとも１つの配列は、以下からな
る群から選択される配列における少なくとも１０の連続したアミノ酸の配列と少
なくとも９０％同一である：配列番号Ｙのポリペプチド配列；配列番号Ｘまたは
それに対する相補鎖によってコードされるポリペプチドおよびｃＤＮＡプラスミ
ドＺによってコードされるポリペプチド。
【０５７０】
これらの方法のいずれかにおいて、このポリペプチド分子を検出する工程は、
抗体を使用することを包含する。
抗体を使用することを包含する。
【０５７１】
ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に少なくとも９５％同一であるヌ
クレオチド配列を含む単離された核酸分子もまた好ましく、ここでこのポリペプ
チドは、配列番号Ｙのポリペプチド配列；配列番号Ｘまたはそれに対する相補鎖
によってコードされるポリペプチドおよびｃＤＮＡプラスミドＺによってコード
されるポリペプチドからなる群より選択される配列内の少なくとも１０の連続す
るアミノ酸の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。
クレオチド配列を含む単離された核酸分子もまた好ましく、ここでこのポリペプ
チドは、配列番号Ｙのポリペプチド配列；配列番号Ｘまたはそれに対する相補鎖
によってコードされるポリペプチドおよびｃＤＮＡプラスミドＺによってコード
されるポリペプチドからなる群より選択される配列内の少なくとも１０の連続す
るアミノ酸の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０５７２】
また好ましいのは、単離された核酸分子であり、ポリペプチドをコードするこ
の核酸配列は、原核生物宿主におけるポリペプチドの発現のために最適化されて
いる。
の核酸配列は、原核生物宿主におけるポリペプチドの発現のために最適化されて
いる。
【０５７３】
また好ましいのは、単離された核酸分子であり、このポリペプチドは、配列番
号Ｙのポリペプチド配列；配列番号Ｘまたはそれに対する相補鎖によってコード
されるポリペプチドおよびｃＤＮＡプラスミドＺによってコードされるポリペプ
チドからなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
号Ｙのポリペプチド配列；配列番号Ｘまたはそれに対する相補鎖によってコード
されるポリペプチドおよびｃＤＮＡプラスミドＺによってコードされるポリペプ
チドからなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【０５７４】
さらに好ましいのは、組換えベクターの作製方法であり、この方法は、上記の
単離された核酸分子のいずれかをベクターに挿入する工程を包含する。また好ま
しいのは、この方法によって産生される組換えベクターである。また好ましいの
は、組換え宿主細胞の作製方法であり、この方法は、ベクターを宿主細胞に導入
する工程を包含する。ならびに、この方法によって産生される組換え宿主細胞も
また好ましい。
単離された核酸分子のいずれかをベクターに挿入する工程を包含する。また好ま
しいのは、この方法によって産生される組換えベクターである。また好ましいの
は、組換え宿主細胞の作製方法であり、この方法は、ベクターを宿主細胞に導入
する工程を包含する。ならびに、この方法によって産生される組換え宿主細胞も
また好ましい。
【０５７５】
また好ましいのは、単離されたポリペプチドの作製方法であり、この方法は、
このポリペプチドが発現され、そしてこのポリペプチドが収集される条件化で、
この組換え宿主細胞を培養する工程を包含する。また好ましいのは、単離された
ポリペプチドのこの作製方法であり、ここで組換え宿主細胞は、真核生物細胞で
あり、そしてこのポリペプチドは、配列番号Ｙのポリペプチド配列；配列番号Ｘ
またはそれに対する相補鎖によってコードされるポリペプチドおよびｃＤＮＡプ
ラスミドＺによってコードされるポリペプチドからなる群より選択されるアミノ
酸配列を含むヒトタンパク質である。この方法によって産生される単離されたポ
リペプチドもまた好ましい。
このポリペプチドが発現され、そしてこのポリペプチドが収集される条件化で、
この組換え宿主細胞を培養する工程を包含する。また好ましいのは、単離された
ポリペプチドのこの作製方法であり、ここで組換え宿主細胞は、真核生物細胞で
あり、そしてこのポリペプチドは、配列番号Ｙのポリペプチド配列；配列番号Ｘ
またはそれに対する相補鎖によってコードされるポリペプチドおよびｃＤＮＡプ
ラスミドＺによってコードされるポリペプチドからなる群より選択されるアミノ
酸配列を含むヒトタンパク質である。この方法によって産生される単離されたポ
リペプチドもまた好ましい。
【０５７６】
また好ましいのは、上昇したレベルのタンパク質活性を必要とする個体の処置
方法であり、この方法は、このような個体に治療剤（この個体における、このタ
ンパク質活性のレベルを増加するのに有効な本発明の単離されたポリペプチド、
ポリヌクレオチド、免疫原性フラグメントあるいはそのアナログ、結合剤、抗体
、または抗原結合フラグメントのある程度の量を含む）を投与する工程を包含す
る。
方法であり、この方法は、このような個体に治療剤（この個体における、このタ
ンパク質活性のレベルを増加するのに有効な本発明の単離されたポリペプチド、
ポリヌクレオチド、免疫原性フラグメントあるいはそのアナログ、結合剤、抗体
、または抗原結合フラグメントのある程度の量を含む）を投与する工程を包含す
る。
【０５７７】
また好ましいのは、減少したレベルのタンパク質活性を必要とする個体の処置
方法であり、この方法は、このような個体に治療物（この個体における、このタ
ンパク質の活性のレベルを減少するのに有効な本発明の単離されたポリペプチド
、ポリヌクレオチド、免疫原性フラグメントあるいはそのアナログ、結合剤、抗
体、または抗原結合フラグメントのある程度の量を含む）を投与する工程を包含
する。
方法であり、この方法は、このような個体に治療物（この個体における、このタ
ンパク質の活性のレベルを減少するのに有効な本発明の単離されたポリペプチド
、ポリヌクレオチド、免疫原性フラグメントあるいはそのアナログ、結合剤、抗
体、または抗原結合フラグメントのある程度の量を含む）を投与する工程を包含
する。
【０５７８】
概して、本発明を記載してきたが、本発明は以下の実施例を参照することによ
って容易に理解される。この実施例は例示の目的のために提供されるものであり
、限定することを意図するものではない。
って容易に理解される。この実施例は例示の目的のために提供されるものであり
、限定することを意図するものではない。
【０５７９】
（実施例）
（実施例１：選択されたｃＤＮＡクローンの寄託されたサンプルからの単離）
引用されるＡＴＣＣ寄託物中の各ｃＤＮＡクローンは、プラスミドベクター中
に含まれる。表１は、各クローンが単離されたｃＤＮＡライブラリーを構築する
ために用いられたベクターを示す。多くの場合において、ライブラリーを構築す
るために使用されたベクターは、プラスミドが切り出されたファージベクターで
ある。直下の表は、ｃＤＮＡライブラリーを構築する際に使用される各ファージ
ベクターについて関連するプラスミドを相関づける。例えば、特定のクローンが
ベクター「Ｌａｍｂｄａ Ｚａｐ」中に単離されていると表１に示される場合、
対応する寄託クローンは、「ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ」である。
に含まれる。表１は、各クローンが単離されたｃＤＮＡライブラリーを構築する
ために用いられたベクターを示す。多くの場合において、ライブラリーを構築す
るために使用されたベクターは、プラスミドが切り出されたファージベクターで
ある。直下の表は、ｃＤＮＡライブラリーを構築する際に使用される各ファージ
ベクターについて関連するプラスミドを相関づける。例えば、特定のクローンが
ベクター「Ｌａｍｂｄａ Ｚａｐ」中に単離されていると表１に示される場合、
対応する寄託クローンは、「ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ」である。
【０５８０】
【表２】
ベクターＬａｍｂｄａ Ｚａｐ（米国特許第５，１２８，２５６号および同第
５，２８６，６３６号）、Ｕｎｉ−Ｚａｐ ＸＲ（米国特許第５，１２８，２５
６号および同第５，２８６，６３６号）、Ｚａｐ Ｅｘｐｒｅｓｓ（米国特許第
５，１２８，２５６号および同第５，２８６，６３６号）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉ
ｐｔ（ｐＢＳ）（Ｓｈｏｒｔら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１６
：７５８３−７６００（１９８８）；Ａｌｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓら、Ｎｕｃｌｅｉ
ｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１７：９４９４（１９８９））ならびにｐＢＫ（Ａ
ｌｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓら、Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，５：５８−６１（１９９２）
）は、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．、１
１０１１ Ｎ．Ｔｏｒｒｅｙ Ｐｉｎｅｓ Ｒｏａｄ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ
，９２０３７から市販されている。ｐＢＳは、アンピシリン耐性遺伝子を含み、
そしてｐＢＫはネオマイシン耐性遺伝子を含む。両方とも、Ｅ．ｃｏｌｉ株ＸＬ
−１ Ｂｌｕｅ（これもまた、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能である）に形
質転換され得る。ｐＢＳは、ＳＫ＋、ＳＫ−、ＫＳ＋およびＫＳの４形態で入荷
する。ＳおよびＫとは、ポリリンカー領域（「Ｓ」とはＳａｃＩであり、そして
「Ｋ」とは、ＫｐｎＩのことであり、これらは、それぞれのリンカーの各末端で
の最初の部位である）に隣接するＴ７およびＴ３プライマー配列に対するポリリ
ンカーの配向をいう。「＋」または「−」とは、ある方向においてｆ１ ｏｒｉ
から開始される一本鎖レスキューがセンス鎖ＤＮＡを生成し、そして他方におい
てアンチセンス鎖ＤＮＡを生成するようなｆ１複製起点（「ｏｒｉ」）の配向を
いう。
５，２８６，６３６号）、Ｕｎｉ−Ｚａｐ ＸＲ（米国特許第５，１２８，２５
６号および同第５，２８６，６３６号）、Ｚａｐ Ｅｘｐｒｅｓｓ（米国特許第
５，１２８，２５６号および同第５，２８６，６３６号）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉ
ｐｔ（ｐＢＳ）（Ｓｈｏｒｔら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１６
：７５８３−７６００（１９８８）；Ａｌｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓら、Ｎｕｃｌｅｉ
ｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１７：９４９４（１９８９））ならびにｐＢＫ（Ａ
ｌｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓら、Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，５：５８−６１（１９９２）
）は、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．、１
１０１１ Ｎ．Ｔｏｒｒｅｙ Ｐｉｎｅｓ Ｒｏａｄ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ
，９２０３７から市販されている。ｐＢＳは、アンピシリン耐性遺伝子を含み、
そしてｐＢＫはネオマイシン耐性遺伝子を含む。両方とも、Ｅ．ｃｏｌｉ株ＸＬ
−１ Ｂｌｕｅ（これもまた、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能である）に形
質転換され得る。ｐＢＳは、ＳＫ＋、ＳＫ−、ＫＳ＋およびＫＳの４形態で入荷
する。ＳおよびＫとは、ポリリンカー領域（「Ｓ」とはＳａｃＩであり、そして
「Ｋ」とは、ＫｐｎＩのことであり、これらは、それぞれのリンカーの各末端で
の最初の部位である）に隣接するＴ７およびＴ３プライマー配列に対するポリリ
ンカーの配向をいう。「＋」または「−」とは、ある方向においてｆ１ ｏｒｉ
から開始される一本鎖レスキューがセンス鎖ＤＮＡを生成し、そして他方におい
てアンチセンス鎖ＤＮＡを生成するようなｆ１複製起点（「ｏｒｉ」）の配向を
いう。
【０５８１】
ベクターｐＳｐｏｒｔ１、ｐＣＭＶＳｐｏｒｔ２．０およびｐＣＭＶＳｐｏｒ
ｔ３．０をＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ６
００９、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ ２０８９７から入手した。全てのＳ
ｐｏｒｔベクターはアンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏｌｉ株ＤＨ
１０Ｂ（これもまた、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能である
）に形質転換され得る。（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ，Ｃ．Ｅ．ら、Ｆｏｃｕｓ １
５：５９（１９９３）を参照のこと）。ベクターｌａｆｍｉｄ ＢＡ（Ｂｅｎｔ
ｏ Ｓｏａｒｅｓ、Ｃｏｌｕｍｂｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、ＮＹ）は、アン
ピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏｌｉ株ＸＬ−１ Ｂｌｕｅに形質転
換され得る。ベクターｐＣＲ（登録商標）２．１（これはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ
、１６００ Ｆａｒａｄａｙ Ａｖｅｎｕｅ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ ９２０
０８から入手可能である）は、アンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏ
ｌｉ株ＤＨ１０Ｂ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能である）
に形質転換され得る（例えば、Ｃｌａｒｋ、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１
６：９６７７−９６８６（１９８８）およびＭｅａｄら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ，９：（１９９１）を参照のこと）。好ましくは、本発明のポリヌクレ
オチドは、表１における特定のクローンについて同定されたファージベクター配
列、ならびに上記に示された対応するプラスミドベクター配列を含まない。
ｔ３．０をＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ６
００９、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ ２０８９７から入手した。全てのＳ
ｐｏｒｔベクターはアンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏｌｉ株ＤＨ
１０Ｂ（これもまた、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能である
）に形質転換され得る。（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ，Ｃ．Ｅ．ら、Ｆｏｃｕｓ １
５：５９（１９９３）を参照のこと）。ベクターｌａｆｍｉｄ ＢＡ（Ｂｅｎｔ
ｏ Ｓｏａｒｅｓ、Ｃｏｌｕｍｂｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、ＮＹ）は、アン
ピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏｌｉ株ＸＬ−１ Ｂｌｕｅに形質転
換され得る。ベクターｐＣＲ（登録商標）２．１（これはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ
、１６００ Ｆａｒａｄａｙ Ａｖｅｎｕｅ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ ９２０
０８から入手可能である）は、アンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏ
ｌｉ株ＤＨ１０Ｂ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能である）
に形質転換され得る（例えば、Ｃｌａｒｋ、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１
６：９６７７−９６８６（１９８８）およびＭｅａｄら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ，９：（１９９１）を参照のこと）。好ましくは、本発明のポリヌクレ
オチドは、表１における特定のクローンについて同定されたファージベクター配
列、ならびに上記に示された対応するプラスミドベクター配列を含まない。
【０５８２】
表１に引用される、任意の所定のｃＤＮＡクローンについてＡＴＣＣ受託番号
を与えられたサンプルにおける寄託された物質はまた、１つ以上のさらなるプラ
スミド（これは各々、その所定のクローンとは異なるｃＤＮＡクローンを含む）
を含み得る。従って、同じＡＴＣＣ受託番号を共有する寄託物は、表１に示され
る各ｃＤＮＡクローンのためのプラスミドを少なくとも含む。代表的には、表１
に引用される各ＡＴＣＣ寄託物のサンプルは、ほぼ等量（重量で）の約５０個の
プラスミドＤＮＡ（これは各々、異なるｃＤＮＡクローンを含む）の混合物を含
む；しかし、このような寄託サンプルは、５０個よりも多いかまたは少ないｃＤ
ＮＡクローン（約５００個までのｃＤＮＡクローン）のためのプラスミドを含み
得る。
を与えられたサンプルにおける寄託された物質はまた、１つ以上のさらなるプラ
スミド（これは各々、その所定のクローンとは異なるｃＤＮＡクローンを含む）
を含み得る。従って、同じＡＴＣＣ受託番号を共有する寄託物は、表１に示され
る各ｃＤＮＡクローンのためのプラスミドを少なくとも含む。代表的には、表１
に引用される各ＡＴＣＣ寄託物のサンプルは、ほぼ等量（重量で）の約５０個の
プラスミドＤＮＡ（これは各々、異なるｃＤＮＡクローンを含む）の混合物を含
む；しかし、このような寄託サンプルは、５０個よりも多いかまたは少ないｃＤ
ＮＡクローン（約５００個までのｃＤＮＡクローン）のためのプラスミドを含み
得る。
【０５８３】
表１における特定のクローンについて引用されるプラスミドＤＮＡの寄託サン
プルからそのクローンを単離するために２つのアプローチが使用され得る。第一
に、プラスミドを、配列番号Ｘに対応するポリヌクレオチドプローブを使用して
、クローンをスクリーニングすることによって直接単離する。
プルからそのクローンを単離するために２つのアプローチが使用され得る。第一
に、プラスミドを、配列番号Ｘに対応するポリヌクレオチドプローブを使用して
、クローンをスクリーニングすることによって直接単離する。
【０５８４】
特に、３０〜４０ヌクレオチドを有する特定のポリヌクレオチドを、報告され
ている配列に従って、Ａｐｐｌｉｅｄ ＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓのＤＮＡ合成装置
を使用して合成する。オリゴヌクレオチドを、例えば、32Ｐ−γ−ＡＴＰで、Ｔ
４ポリヌクレオチドキナーゼを用いて標識し、そして慣用の方法に従って精製す
る。（例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏ
ｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ、ＮＹ（１９８２））。プラスミド混
合物を、当業者に公知の技術（例えば、ベクター供給者によって提供される技術
または上記で引用された関連の刊行物もしくは特許において提供される技術）を
用いて、上記のような適切な宿主（例えば、ＸＬ−１ Ｂｌｕｅ（Ｓｔｒａｔａ
ｇｅｎｅ））に形質転換する。形質転換体を１．５％寒天プレート（適切な選択
薬剤、例えば、アンピシリンを含む）に、１プレートあたり約１５０の形質転換
体（コロニー）の密度でプレートする。これらのプレートを、細菌コロニースク
リーニングについての慣用の方法（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版、
（１９８９）、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｐｒｅｓｓ、１．９３〜１．１０４頁）または当業者に公知の他の技術に従っ
て、ナイロンメンブレンを使用してスクリーニングする。
ている配列に従って、Ａｐｐｌｉｅｄ ＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓのＤＮＡ合成装置
を使用して合成する。オリゴヌクレオチドを、例えば、32Ｐ−γ−ＡＴＰで、Ｔ
４ポリヌクレオチドキナーゼを用いて標識し、そして慣用の方法に従って精製す
る。（例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏ
ｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ、ＮＹ（１９８２））。プラスミド混
合物を、当業者に公知の技術（例えば、ベクター供給者によって提供される技術
または上記で引用された関連の刊行物もしくは特許において提供される技術）を
用いて、上記のような適切な宿主（例えば、ＸＬ−１ Ｂｌｕｅ（Ｓｔｒａｔａ
ｇｅｎｅ））に形質転換する。形質転換体を１．５％寒天プレート（適切な選択
薬剤、例えば、アンピシリンを含む）に、１プレートあたり約１５０の形質転換
体（コロニー）の密度でプレートする。これらのプレートを、細菌コロニースク
リーニングについての慣用の方法（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版、
（１９８９）、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｐｒｅｓｓ、１．９３〜１．１０４頁）または当業者に公知の他の技術に従っ
て、ナイロンメンブレンを使用してスクリーニングする。
【０５８５】
あるいは、配列番号Ｘの両端（すなわち、表１に規定されるクローンの５’Ｎ
Ｔおよび３’ＮＴによって囲まれる配列番号Ｘの領域内）に由来する、１７〜２
０ヌクレオチドの２つのプライマーを合成し、そしてこれらを使用して、寄託さ
れたｃＤＮＡプラスミドを鋳型として用いて、所望のｃＤＮＡを増幅する。ポリ
メラーゼ連鎖反応を、慣用の条件下で、例えば、０．５μｇの上記ｃＤＮＡ鋳型
との反応混合物の２５μｌ中で実施する。簡便な反応混合物は、１．５〜５ｍＭ
ＭｇＣｌ2、０．０１％（ｗ／ｖ）ゼラチン、それぞれ２０μＭのｄＡＴＰ、
ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ、２５ｐｍｏｌの各プライマーおよび０．２５ユ
ニットのＴａｑポリメラーゼである。３５サイクルのＰＣＲ（９４℃での変性を
１分間；５５℃でのアニールを１分間；７２℃での伸長を１分間）を、Ｐｅｒｋ
ｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｃｅｔｕｓ自動化サーマルサイクラーを用いて実施する。増
幅産物をアガロースゲル電気泳動により分析し、そして予想される分子量のＤＮ
Ａバンドを切り出し、そして精製する。ＰＣＲ産物を、ＤＮＡ産物をサブクロー
ニングおよび配列決定することによって選択された配列であることを確認する。
Ｔおよび３’ＮＴによって囲まれる配列番号Ｘの領域内）に由来する、１７〜２
０ヌクレオチドの２つのプライマーを合成し、そしてこれらを使用して、寄託さ
れたｃＤＮＡプラスミドを鋳型として用いて、所望のｃＤＮＡを増幅する。ポリ
メラーゼ連鎖反応を、慣用の条件下で、例えば、０．５μｇの上記ｃＤＮＡ鋳型
との反応混合物の２５μｌ中で実施する。簡便な反応混合物は、１．５〜５ｍＭ
ＭｇＣｌ2、０．０１％（ｗ／ｖ）ゼラチン、それぞれ２０μＭのｄＡＴＰ、
ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ、２５ｐｍｏｌの各プライマーおよび０．２５ユ
ニットのＴａｑポリメラーゼである。３５サイクルのＰＣＲ（９４℃での変性を
１分間；５５℃でのアニールを１分間；７２℃での伸長を１分間）を、Ｐｅｒｋ
ｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｃｅｔｕｓ自動化サーマルサイクラーを用いて実施する。増
幅産物をアガロースゲル電気泳動により分析し、そして予想される分子量のＤＮ
Ａバンドを切り出し、そして精製する。ＰＣＲ産物を、ＤＮＡ産物をサブクロー
ニングおよび配列決定することによって選択された配列であることを確認する。
【０５８６】
寄託されたクローンに存在し得ない遺伝子の５’非コード部分または３’非コ
ード部分の同定のために、いくつかの方法が利用可能である。これらの方法は、
以下を含むがこれらに限定されない：フィルタープローブ探索、特異的プローブ
を使用するクローン富化、および当該分野で周知である５’および３’「ＲＡＣ
Ｅ」プロトコルと類似するかまたは同一のプロトコル。例えば、５’ＲＡＣＥに
類似する方法は、所望の全長転写物の５’末端の欠失を生成するために利用可能
である（Ｆｒｏｍｏｎｔ−Ｒａｃｉｎｅら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ．，２１（７）：１６８３−１６８４（１９９３））。
ード部分の同定のために、いくつかの方法が利用可能である。これらの方法は、
以下を含むがこれらに限定されない：フィルタープローブ探索、特異的プローブ
を使用するクローン富化、および当該分野で周知である５’および３’「ＲＡＣ
Ｅ」プロトコルと類似するかまたは同一のプロトコル。例えば、５’ＲＡＣＥに
類似する方法は、所望の全長転写物の５’末端の欠失を生成するために利用可能
である（Ｆｒｏｍｏｎｔ−Ｒａｃｉｎｅら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ．，２１（７）：１６８３−１６８４（１９９３））。
【０５８７】
簡潔には、特定のＲＮＡオリゴヌクレオチドを、全長遺伝子ＲＮＡ転写物をお
そらく含むＲＮＡの集団の５’末端に連結する。連結されたＲＮＡオリゴヌクレ
オチドに特異的なプライマーおよび目的の遺伝子の公知の配列に特異的なプライ
マーを含むプライマーセットを使用して、所望の全長遺伝子の５’部分をＰＣＲ
増幅する。次いで、この増幅した産物を配列決定し得、そしてこれを使用して全
長遺伝子を生成し得る。
そらく含むＲＮＡの集団の５’末端に連結する。連結されたＲＮＡオリゴヌクレ
オチドに特異的なプライマーおよび目的の遺伝子の公知の配列に特異的なプライ
マーを含むプライマーセットを使用して、所望の全長遺伝子の５’部分をＰＣＲ
増幅する。次いで、この増幅した産物を配列決定し得、そしてこれを使用して全
長遺伝子を生成し得る。
【０５８８】
この上記の方法は、所望の供給源から単離された全ＲＮＡを用いて開始するが
、ポリＡ＋ＲＮＡをも使用し得る。次いで、ＲＮＡ調製物を、必要ならばホスフ
ァターゼで処理して、後のＲＮＡリガーゼ工程を妨害し得る分解または損傷ＲＮ
Ａの５’リン酸基を排除し得る。次いで、ホスファターゼを不活化するべきであ
り、そしてＲＮＡをメッセンジャーＲＮＡの５’末端に存在するキャップ構造を
除去するために、タバコ酸ピロホスファターゼを用いて処理するべきである。こ
の反応は、次いでＴ４ ＲＮＡリガーゼを用いてＲＮＡオリゴヌクレオチドに連
結され得る、キャップ切断ＲＮＡの５’末端に５’リン酸基を残す。
、ポリＡ＋ＲＮＡをも使用し得る。次いで、ＲＮＡ調製物を、必要ならばホスフ
ァターゼで処理して、後のＲＮＡリガーゼ工程を妨害し得る分解または損傷ＲＮ
Ａの５’リン酸基を排除し得る。次いで、ホスファターゼを不活化するべきであ
り、そしてＲＮＡをメッセンジャーＲＮＡの５’末端に存在するキャップ構造を
除去するために、タバコ酸ピロホスファターゼを用いて処理するべきである。こ
の反応は、次いでＴ４ ＲＮＡリガーゼを用いてＲＮＡオリゴヌクレオチドに連
結され得る、キャップ切断ＲＮＡの５’末端に５’リン酸基を残す。
【０５８９】
この改変型ＲＮＡ調製物を、遺伝子特異的なオリゴヌクレオチドを用いる、第
一鎖ｃＤＮＡ合成のための鋳型として使用する。第一鎖合成反応物を、連結され
たＲＮＡオリゴヌクレオチドに特異的なプライマーおよび目的の遺伝子の公知の
配列に特異的なプライマーを用いる、所望の５’末端のＰＣＲ増幅のための鋳型
として使用する。次いで、得られた生成物を配列決定し、そして分析して５’末
端配列が所望の遺伝子に属することを確認する。
一鎖ｃＤＮＡ合成のための鋳型として使用する。第一鎖合成反応物を、連結され
たＲＮＡオリゴヌクレオチドに特異的なプライマーおよび目的の遺伝子の公知の
配列に特異的なプライマーを用いる、所望の５’末端のＰＣＲ増幅のための鋳型
として使用する。次いで、得られた生成物を配列決定し、そして分析して５’末
端配列が所望の遺伝子に属することを確認する。
【０５９０】
（実施例２：ポリヌクレオチドに対応するゲノムクローンの単離）
ヒトゲノムＰ１ライブラリー（Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ．）
を、実施例１に記載される方法に従って、配列番号Ｘに対応するｃＤＮＡ配列に
ついて選択されたプライマーを用いるＰＣＲによってスクリーニングする（Ｓａ
ｍｂｒｏｏｋもまた参照のこと）。
を、実施例１に記載される方法に従って、配列番号Ｘに対応するｃＤＮＡ配列に
ついて選択されたプライマーを用いるＰＣＲによってスクリーニングする（Ｓａ
ｍｂｒｏｏｋもまた参照のこと）。
【０５９１】
（実施例３：ポリペプチドの組織分布）
本発明のポリヌクレオチドのｍＲＮＡ発現の組織分布を、とりわけ、Ｓａｍｂ
ｒｏｏｋらによって記載されるノーザンブロット分析についてのプロトコルを用
いて決定する。例えば、実施例１に記載される方法によって生成されるｃＤＮＡ
プローブを、ｒｅｄｉｐｒｉｍｅTM ＤＮＡ ｌａｂｅｌｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ
（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて、製造者の指示に従
って、Ｐ32で標識する。標識後、プローブを、ＣＨＲＯＭＡ ＳＰＩＮ−１００ TM カラム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．）を使用し
て、製造者のプロトコル番号ＰＴ１２００−１に従って精製する。次いで、この
精製した標識プローブを使用して、種々のヒト組織をｍＲＮＡ発現について試験
する。
ｒｏｏｋらによって記載されるノーザンブロット分析についてのプロトコルを用
いて決定する。例えば、実施例１に記載される方法によって生成されるｃＤＮＡ
プローブを、ｒｅｄｉｐｒｉｍｅTM ＤＮＡ ｌａｂｅｌｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ
（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて、製造者の指示に従
って、Ｐ32で標識する。標識後、プローブを、ＣＨＲＯＭＡ ＳＰＩＮ−１００ TM カラム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．）を使用し
て、製造者のプロトコル番号ＰＴ１２００−１に従って精製する。次いで、この
精製した標識プローブを使用して、種々のヒト組織をｍＲＮＡ発現について試験
する。
【０５９２】
種々のヒト組織（Ｈ）またはヒト免疫系組織（ＩＭ）を含む多重組織ノーザン
（ＭＴＮ）ブロット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を、ＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂTMハイブリ
ダイゼーション溶液（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用いて、製造者のプロトコル番号Ｐ
Ｔ１１９０−１に従って、標識プローブで試験する。ハイブリダイゼーションお
よび洗浄後、ブロットをマウントして、そして−７０℃で一晩フィルムに曝露し
、そしてフィルムを標準的な手順に従って現像する。
（ＭＴＮ）ブロット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を、ＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂTMハイブリ
ダイゼーション溶液（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用いて、製造者のプロトコル番号Ｐ
Ｔ１１９０−１に従って、標識プローブで試験する。ハイブリダイゼーションお
よび洗浄後、ブロットをマウントして、そして−７０℃で一晩フィルムに曝露し
、そしてフィルムを標準的な手順に従って現像する。
【０５９３】
（実施例４：ポリヌクレオチドの染色体マッピング）
オリゴヌクレオチドプライマーのセットを、配列番号Ｘの５’末端の配列に従
って設計する。このプライマーは、好ましくは約１００ヌクレオチドにわたる。
次いで、このプライマーセットを、以下のセットの条件下でポリメラーゼ連鎖反
応に使用する：９５℃で３０秒；５６℃で１分；７０℃で１分。このサイクルを
３２回反復し、次いで１回、７０℃で５分間のサイクルを行う。個々の染色体ま
たは染色体フラグメントを含む体細胞ハイブリッドパネル（Ｂｉｏｓ，Ｉｎｃ）
に加えて、ヒト、マウス、およびハムスターのＤＮＡを鋳型として使用する。反
応物を、８％ポリアクリルアミドゲルまたは３．５％アガロースゲルのいずれか
で分析する。染色体マッピングを、特定の体細胞ハイブリッドにおける約１００
ｂｐのＰＣＲフラグメントの存在によって決定する。
って設計する。このプライマーは、好ましくは約１００ヌクレオチドにわたる。
次いで、このプライマーセットを、以下のセットの条件下でポリメラーゼ連鎖反
応に使用する：９５℃で３０秒；５６℃で１分；７０℃で１分。このサイクルを
３２回反復し、次いで１回、７０℃で５分間のサイクルを行う。個々の染色体ま
たは染色体フラグメントを含む体細胞ハイブリッドパネル（Ｂｉｏｓ，Ｉｎｃ）
に加えて、ヒト、マウス、およびハムスターのＤＮＡを鋳型として使用する。反
応物を、８％ポリアクリルアミドゲルまたは３．５％アガロースゲルのいずれか
で分析する。染色体マッピングを、特定の体細胞ハイブリッドにおける約１００
ｂｐのＰＣＲフラグメントの存在によって決定する。
【０５９４】
（実施例５：ポリペプチドの細菌発現）
本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを、実施例１に概説する
ように、ＤＮＡ配列の５’および３’末端に対応するＰＣＲオリゴヌクレオチド
プライマーを使用して増幅し、挿入フラグメントを合成する。ｃＤＮＡ挿入物を
増幅するために使用されるプライマーは、発現ベクターに増幅産物をクローニン
グするために、好ましくはＢａｍＨＩおよびＸｂａＩのような制限部位、ならび
に必要な場合、開始／終止コドンを含むべきである。例えば、ＢａｍＨＩおよび
ＸｂａＩは、細菌発現ベクターｐＱＥ−９（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｃｈａｔ
ｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ）の制限酵素部位に対応する。このプラスミドベクターは、
抗生物質耐性（Ａｍｐr）、細菌の複製起点（ｏｒｉ）、ＩＰＴＧで調節可能な
プロモーター／オペレーター（Ｐ／Ｏ）、リボソーム結合部位（ＲＢＳ）、６−
ヒスチジンタグ（６−Ｈｉｓ）、および制限酵素クローニング部位をコードする
。
ように、ＤＮＡ配列の５’および３’末端に対応するＰＣＲオリゴヌクレオチド
プライマーを使用して増幅し、挿入フラグメントを合成する。ｃＤＮＡ挿入物を
増幅するために使用されるプライマーは、発現ベクターに増幅産物をクローニン
グするために、好ましくはＢａｍＨＩおよびＸｂａＩのような制限部位、ならび
に必要な場合、開始／終止コドンを含むべきである。例えば、ＢａｍＨＩおよび
ＸｂａＩは、細菌発現ベクターｐＱＥ−９（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｃｈａｔ
ｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ）の制限酵素部位に対応する。このプラスミドベクターは、
抗生物質耐性（Ａｍｐr）、細菌の複製起点（ｏｒｉ）、ＩＰＴＧで調節可能な
プロモーター／オペレーター（Ｐ／Ｏ）、リボソーム結合部位（ＲＢＳ）、６−
ヒスチジンタグ（６−Ｈｉｓ）、および制限酵素クローニング部位をコードする
。
【０５９５】
ｐＱＥ−９ベクターをＢａｍＨＩおよびＸｂａＩで消化し、そして、増幅され
たフラグメントを細菌性ＲＢＳにおいて開始されるリーディングフレームを維持
するｐＱＥ−９ベクターに連結する。次いで、連結混合物を、ｌａｃＩリプレッ
サーを発現し、またカナマイシン耐性（Ｋａｎr）を与えるプラスミドｐＲＥＰ
４の多重コピーを含む、Ｅ．ｃｏｌｉ株Ｍ１５／ｒｅｐ４（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎ
ｃ．）を形質転換するために使用する。形質転換体を、それらのＬＢプレート上
で生育できる能力によって同定し、そしてアンピシリン／カナマイシン耐性コロ
ニーを選択する。プラスミドＤＮＡを単離し、そして制限分析によって確認する
。
たフラグメントを細菌性ＲＢＳにおいて開始されるリーディングフレームを維持
するｐＱＥ−９ベクターに連結する。次いで、連結混合物を、ｌａｃＩリプレッ
サーを発現し、またカナマイシン耐性（Ｋａｎr）を与えるプラスミドｐＲＥＰ
４の多重コピーを含む、Ｅ．ｃｏｌｉ株Ｍ１５／ｒｅｐ４（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎ
ｃ．）を形質転換するために使用する。形質転換体を、それらのＬＢプレート上
で生育できる能力によって同定し、そしてアンピシリン／カナマイシン耐性コロ
ニーを選択する。プラスミドＤＮＡを単離し、そして制限分析によって確認する
。
【０５９６】
所望の構築物を含むクローンを、Ａｍｐ（１００μｇ／ｍｌ）およびＫａｎ（
２５μｇ／ｍｌ）の両方を補充したＬＢ培地における液体培養で一晩（Ｏ／Ｎ）
増殖させる。Ｏ／Ｎ培養物を、１：１００〜１：２５０の比で大量培養に接種す
るために使用する。細胞を、０．４〜０．６の間の吸光度６００（Ｏ．Ｄ．600
）まで増殖させる。次いで、ＩＰＴＧ（イソプロピル−Ｂ−Ｄ−チオガラクトピ
ラノシド）を最終濃度１ｍＭになるように加える。ＩＰＴＧは、ｌａｃＩリプレ
ッサーの不活化によりＰ／Ｏの活性化（ｃｌｅａｒｉｎｇ）を誘導し、遺伝子発
現の増加を導く。
２５μｇ／ｍｌ）の両方を補充したＬＢ培地における液体培養で一晩（Ｏ／Ｎ）
増殖させる。Ｏ／Ｎ培養物を、１：１００〜１：２５０の比で大量培養に接種す
るために使用する。細胞を、０．４〜０．６の間の吸光度６００（Ｏ．Ｄ．600
）まで増殖させる。次いで、ＩＰＴＧ（イソプロピル−Ｂ−Ｄ−チオガラクトピ
ラノシド）を最終濃度１ｍＭになるように加える。ＩＰＴＧは、ｌａｃＩリプレ
ッサーの不活化によりＰ／Ｏの活性化（ｃｌｅａｒｉｎｇ）を誘導し、遺伝子発
現の増加を導く。
【０５９７】
細胞を、さらに３〜４時間増殖させる。次いで、細胞を遠心分離（６０００×
ｇで２０分間）によって収集する。細胞ペレットを、カオトロピック試薬である
６ＭグアニジンＨＣｌ中に、４℃で３〜４時間攪拌することによって可溶化させ
る。細胞細片を遠心分離によって取り除き、そしてポリペプチドを含む上清を、
ニッケル−ニトリロ−三酢酸（「Ｎｉ−ＮＴＡ」）アフィニティー樹脂カラムに
ロードする（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．（前出）より入手可能）。６×Ｈｉｓタグ
を有するタンパク質は、Ｎｉ−ＮＴＡ樹脂に高い親和性で結合し、そして単純な
１工程手順で精製され得る（詳細については、Ｔｈｅ ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓｉ
ｏｎｉｓｔ（１９９５）ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．（前出）を参照のこと）。
ｇで２０分間）によって収集する。細胞ペレットを、カオトロピック試薬である
６ＭグアニジンＨＣｌ中に、４℃で３〜４時間攪拌することによって可溶化させ
る。細胞細片を遠心分離によって取り除き、そしてポリペプチドを含む上清を、
ニッケル−ニトリロ−三酢酸（「Ｎｉ−ＮＴＡ」）アフィニティー樹脂カラムに
ロードする（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．（前出）より入手可能）。６×Ｈｉｓタグ
を有するタンパク質は、Ｎｉ−ＮＴＡ樹脂に高い親和性で結合し、そして単純な
１工程手順で精製され得る（詳細については、Ｔｈｅ ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓｉ
ｏｎｉｓｔ（１９９５）ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．（前出）を参照のこと）。
【０５９８】
手短に言えば、上清を、６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ８のカラムにロードし
、カラムを、最初に１０容量の６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ８で洗浄し、次い
で１０容量の６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ６で洗浄し、最後にポリペプチドを
、６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ５で溶出する。
、カラムを、最初に１０容量の６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ８で洗浄し、次い
で１０容量の６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ６で洗浄し、最後にポリペプチドを
、６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ５で溶出する。
【０５９９】
次いで、精製したタンパク質を、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）または５
０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ６の緩衝液および２００ｍＭ ＮａＣｌに対して透
析することにより再生させる。あるいは、タンパク質はＮｉ−ＮＴＡカラムに固
定化している間に、首尾よく再折り畳みされ得る。推奨条件は以下の通りである
：プロテアーゼインヒビターを含む、５００ｍＭ ＮａＣｌ、２０％グリセロー
ル、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ｐＨ７．４中の６Ｍ〜１Ｍ尿素の直線勾配を
使用する再生。再生は１．５時間以上の時間をかけて行うべきである。再生後、
タンパク質を２５０ｍＭイミダゾールの添加によって溶出する。イミダゾールを
、ＰＢＳまたは５０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ６の緩衝液および２００ｍＭ Ｎａ
Ｃｌに対する最終の透析工程によって除去する。精製したタンパク質を、４℃で
保存するか、または−８０℃で凍結する。
０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ６の緩衝液および２００ｍＭ ＮａＣｌに対して透
析することにより再生させる。あるいは、タンパク質はＮｉ−ＮＴＡカラムに固
定化している間に、首尾よく再折り畳みされ得る。推奨条件は以下の通りである
：プロテアーゼインヒビターを含む、５００ｍＭ ＮａＣｌ、２０％グリセロー
ル、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ｐＨ７．４中の６Ｍ〜１Ｍ尿素の直線勾配を
使用する再生。再生は１．５時間以上の時間をかけて行うべきである。再生後、
タンパク質を２５０ｍＭイミダゾールの添加によって溶出する。イミダゾールを
、ＰＢＳまたは５０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ６の緩衝液および２００ｍＭ Ｎａ
Ｃｌに対する最終の透析工程によって除去する。精製したタンパク質を、４℃で
保存するか、または−８０℃で凍結する。
【０６００】
上記の発現ベクターに加えて、本発明はさらに、本発明のポリヌクレオチドに
作動可能に連結されたファージオペレーターおよびプロモーターエレメントを含
む、ｐＨＥ４ａと呼ばれる発現ベクターを含む（ＡＴＣＣ受託番号２０９６４５
、１９９８年２月２５日に寄託。）。このベクターは以下を含む：１）選択マー
カーとしてのネオマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子、２）Ｅ．ｃｏｌｉ
複製起点、３）Ｔ５ファージプロモーター配列、４）２つのｌａｃオペレーター
配列、５）シャイン−ダルガーノ配列、および６）ラクトースオペロンリプレッ
サー遺伝子（ｌａｃＩｑ）。複製起点（ｏｒｉＣ）は、ｐＵＣ１９（ＬＴＩ，Ｇ
ａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）に由来する。プロモーター配列およびオペレー
ター配列を合成的に作製する。
作動可能に連結されたファージオペレーターおよびプロモーターエレメントを含
む、ｐＨＥ４ａと呼ばれる発現ベクターを含む（ＡＴＣＣ受託番号２０９６４５
、１９９８年２月２５日に寄託。）。このベクターは以下を含む：１）選択マー
カーとしてのネオマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子、２）Ｅ．ｃｏｌｉ
複製起点、３）Ｔ５ファージプロモーター配列、４）２つのｌａｃオペレーター
配列、５）シャイン−ダルガーノ配列、および６）ラクトースオペロンリプレッ
サー遺伝子（ｌａｃＩｑ）。複製起点（ｏｒｉＣ）は、ｐＵＣ１９（ＬＴＩ，Ｇ
ａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）に由来する。プロモーター配列およびオペレー
ター配列を合成的に作製する。
【０６０１】
ＮｄｅＩおよびＸｂａＩ、ＢａｍＨＩ、ＸｈｏＩ、またはＡｓｐ７１８によっ
てベクターを制限処理し、制限生成物をゲルで泳動し、そしてより大きなフラグ
メント（スタッファー（ｓｔｕｆｆｅｒ）フラグメントは約３１０塩基対である
べきである）を単離することによって、ＤＮＡをｐＨＥａに挿入し得る。ＤＮＡ
挿入物を、ＮｄｅＩ（５’プライマー）およびＸｂａＩ、ＢａｍＨＩ、ＸｈｏＩ
、またはＡｓｐ７１８（３’プライマー）に対する制限部位を有するＰＣＲプラ
イマーを使用して、実施例１に記載のＰＣＲプロトコールに従って生成する。Ｐ
ＣＲ挿入物を、ゲル精製し、そして適合する酵素で制限処理する。挿入物および
ベクターを標準的なプロトコールに従って連結する。
てベクターを制限処理し、制限生成物をゲルで泳動し、そしてより大きなフラグ
メント（スタッファー（ｓｔｕｆｆｅｒ）フラグメントは約３１０塩基対である
べきである）を単離することによって、ＤＮＡをｐＨＥａに挿入し得る。ＤＮＡ
挿入物を、ＮｄｅＩ（５’プライマー）およびＸｂａＩ、ＢａｍＨＩ、ＸｈｏＩ
、またはＡｓｐ７１８（３’プライマー）に対する制限部位を有するＰＣＲプラ
イマーを使用して、実施例１に記載のＰＣＲプロトコールに従って生成する。Ｐ
ＣＲ挿入物を、ゲル精製し、そして適合する酵素で制限処理する。挿入物および
ベクターを標準的なプロトコールに従って連結する。
【０６０２】
操作されたベクターは、上記のプロトコールにおいて、細菌系でタンパク質を
発現させるために容易に置換され得る。
発現させるために容易に置換され得る。
【０６０３】
（実施例６：封入体からのポリペプチドの精製）
以下の代替的な方法は、ポリペプチドが封入体の形態で存在する場合に、Ｅ．
ｃｏｌｉ中で発現されたポリペプチドを精製するために使用され得る。他に指定
されない場合には、以下のすべての工程は４〜１０℃で行われる。
ｃｏｌｉ中で発現されたポリペプチドを精製するために使用され得る。他に指定
されない場合には、以下のすべての工程は４〜１０℃で行われる。
【０６０４】
Ｅ．ｃｏｌｉ発酵の生産期の完了後、細胞培養物を４〜１０℃に冷却し、そし
て１５，０００ｒｐｍの連続遠心分離（Ｈｅｒａｅｕｓ Ｓｅｐａｔｅｃｈ）に
よって細胞を収集する。細胞ペーストの単位重量あたりのタンパク質の予想され
る収量および必要とされる精製タンパク質の量に基づいて、細胞ペーストの適切
な量（重量による）を、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ、５０ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．
４を含む緩衝溶液に懸濁する。細胞を、高剪断ミキサーを使用して均質な懸濁液
に分散させる。
て１５，０００ｒｐｍの連続遠心分離（Ｈｅｒａｅｕｓ Ｓｅｐａｔｅｃｈ）に
よって細胞を収集する。細胞ペーストの単位重量あたりのタンパク質の予想され
る収量および必要とされる精製タンパク質の量に基づいて、細胞ペーストの適切
な量（重量による）を、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ、５０ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．
４を含む緩衝溶液に懸濁する。細胞を、高剪断ミキサーを使用して均質な懸濁液
に分散させる。
【０６０５】
次いで、細胞をマイクロフルイダイザー（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）（
Ｍｉｃｒｏｆｕｉｄｉｃｓ，Ｃｏｒｐ．またはＡＰＶ Ｇａｕｌｉｎ，Ｉｎｃ．
）に２回、４０００〜６０００ｐｓｉで溶液を通すことによって溶解する。次い
でホモジネートを、最終濃度０．５Ｍ ＮａＣｌになるようにＮａＣｌ溶液と混
合し、続いて７０００×ｇで１５分間遠心分離を行う。得られたペレットを、０
．５Ｍ ＮａＣｌ、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ、５０ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４を
使用して再度洗浄する。
Ｍｉｃｒｏｆｕｉｄｉｃｓ，Ｃｏｒｐ．またはＡＰＶ Ｇａｕｌｉｎ，Ｉｎｃ．
）に２回、４０００〜６０００ｐｓｉで溶液を通すことによって溶解する。次い
でホモジネートを、最終濃度０．５Ｍ ＮａＣｌになるようにＮａＣｌ溶液と混
合し、続いて７０００×ｇで１５分間遠心分離を行う。得られたペレットを、０
．５Ｍ ＮａＣｌ、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ、５０ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４を
使用して再度洗浄する。
【０６０６】
得られた洗浄した封入体を、１．５Ｍ塩酸グアニジン（ＧｕＨＣｌ）で２〜４
時間可溶化する。７０００×ｇで１５分間の遠心分離の後、ペレットを廃棄し、
そしてポリペプチドを含む上清を４℃で一晩インキュベートしてさらなるＧｕＨ
Ｃｌ抽出を可能にする。
時間可溶化する。７０００×ｇで１５分間の遠心分離の後、ペレットを廃棄し、
そしてポリペプチドを含む上清を４℃で一晩インキュベートしてさらなるＧｕＨ
Ｃｌ抽出を可能にする。
【０６０７】
不溶性粒子を除去するための高速遠心分離（３０，０００×ｇ）に続き、Ｇｕ
ＨＣｌ可溶化タンパク質を、ＧｕＨＣｌ抽出物と、５０ｍＭナトリウム、ｐＨ４
．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０容量の緩衝液とを、
激しい攪拌で迅速に混合することによって、再折畳みさせる。再折畳みした希釈
タンパク質溶液を、さらなる精製工程の前の１２時間、混合しないで４℃で保つ
。
ＨＣｌ可溶化タンパク質を、ＧｕＨＣｌ抽出物と、５０ｍＭナトリウム、ｐＨ４
．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０容量の緩衝液とを、
激しい攪拌で迅速に混合することによって、再折畳みさせる。再折畳みした希釈
タンパク質溶液を、さらなる精製工程の前の１２時間、混合しないで４℃で保つ
。
【０６０８】
再折畳みされたポリペプチド溶液を清澄にするために、予め調製した４０ｍＭ
酢酸ナトリウム、ｐＨ６．０で平衡化された、適切な表面積を有する０．１６μ
ｍメンブレンフィルターを備える接触濾過ユニット（ｔａｎｇｅｎｔｉａｌ ｆ
ｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｕｎｉｔ）（例えば、Ｆｉｌｔｒｏｎ）を使用する。濾過
したサンプルを、カチオン交換樹脂（例えば、Ｐｏｒｏｓ ＨＳ−５０，Ｐｅｒ
ｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）上にロードする。カラムを４０ｍＭ酢
酸ナトリウム、ｐＨ６．０で洗浄し、そして同じ緩衝液中の２５０ｍＭ、５００
ｍＭ、１０００ｍＭ、および１５００ｍＭ ＮａＣｌで、段階的な様式で溶出す
る。溶出液の２８０ｎｍにおける吸光度を継続的にモニターする。画分を収集し
、そしてＳＤＳ−ＰＡＧＥによってさらに分析する。
酢酸ナトリウム、ｐＨ６．０で平衡化された、適切な表面積を有する０．１６μ
ｍメンブレンフィルターを備える接触濾過ユニット（ｔａｎｇｅｎｔｉａｌ ｆ
ｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｕｎｉｔ）（例えば、Ｆｉｌｔｒｏｎ）を使用する。濾過
したサンプルを、カチオン交換樹脂（例えば、Ｐｏｒｏｓ ＨＳ−５０，Ｐｅｒ
ｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）上にロードする。カラムを４０ｍＭ酢
酸ナトリウム、ｐＨ６．０で洗浄し、そして同じ緩衝液中の２５０ｍＭ、５００
ｍＭ、１０００ｍＭ、および１５００ｍＭ ＮａＣｌで、段階的な様式で溶出す
る。溶出液の２８０ｎｍにおける吸光度を継続的にモニターする。画分を収集し
、そしてＳＤＳ−ＰＡＧＥによってさらに分析する。
【０６０９】
次いでポリペプチドを含む画分をプールし、そして４容量の水と混合する。次
いで希釈されたサンプルを、予め調製した強アニオン（Ｐｏｒｏｓ ＨＱ−５０
，Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）および弱アニオン（Ｐｏｒｏ
ｓ ＣＭ−２０，Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）交換樹脂の直
列カラムのセットにロードする。カラムを４０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ６．０
で平衡化する。両方のカラムを、４０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ６．０、２００
ｍＭ ＮａＣｌで洗浄する。次いでＣＭ−２０カラムを、１０カラム容量の直線
的勾配（０．２Ｍ ＮａＣｌ、５０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ６．０から１．０
Ｍ ＮａＣｌ、５０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ６．５の範囲）を用いて溶出する
。画分を、溶出液の定常Ａ280モニタリング下で収集する。次いで、（例えば、
１６％ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって判明した）ポリペプチドを含む画分をプールす
る。
いで希釈されたサンプルを、予め調製した強アニオン（Ｐｏｒｏｓ ＨＱ−５０
，Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）および弱アニオン（Ｐｏｒｏ
ｓ ＣＭ−２０，Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）交換樹脂の直
列カラムのセットにロードする。カラムを４０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ６．０
で平衡化する。両方のカラムを、４０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ６．０、２００
ｍＭ ＮａＣｌで洗浄する。次いでＣＭ−２０カラムを、１０カラム容量の直線
的勾配（０．２Ｍ ＮａＣｌ、５０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ６．０から１．０
Ｍ ＮａＣｌ、５０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ６．５の範囲）を用いて溶出する
。画分を、溶出液の定常Ａ280モニタリング下で収集する。次いで、（例えば、
１６％ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって判明した）ポリペプチドを含む画分をプールす
る。
【０６１０】
得られたポリペプチドは、上記の再折畳みおよび精製工程の後で９５％より高
い純度を示すべきである。５μｇの精製タンパク質がロードされる場合、いかな
る主たる夾雑バンドも、クマシーブルー染色した１６％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルか
ら観察されないはずである。精製タンパク質はまた、エンドトキシン／ＬＰＳ夾
雑物について試験され得、そして代表的には、ＬＰＳ含量はＬＡＬアッセイに従
って、０．１ｎｇ／ｍｌ未満である。
い純度を示すべきである。５μｇの精製タンパク質がロードされる場合、いかな
る主たる夾雑バンドも、クマシーブルー染色した１６％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルか
ら観察されないはずである。精製タンパク質はまた、エンドトキシン／ＬＰＳ夾
雑物について試験され得、そして代表的には、ＬＰＳ含量はＬＡＬアッセイに従
って、０．１ｎｇ／ｍｌ未満である。
【０６１１】
（実施例７：バキュロウイルス発現系におけるポリペプチドのクローニングお
よび発現） この実施例では、ポリペプチドを発現するために、プラスミドシャトルベクタ
ーｐＡ２を使用してポリヌクレオチドをバキュロウイルスに挿入する。この発現
ベクターは、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多核体病ウイル
ス（ＡｃＭＮＰＶ）の強力なポリヘドリンプロモーター、続いてＢａｍＨＩ、Ｘ
ｂａＩ、およびＡｓｐ７１８のような便利な制限部位を含む。シミアンウイルス
４０（「ＳＶ４０」）のポリアデニル化部位を、効率的なポリアデニル化のため
に使用する。組換えウイルスの容易な選択のために、プラスミドは、同方向にあ
る弱いＤｒｏｓｏｐｈｉｌａプロモーターの制御下でＥ．ｃｏｌｉ由来のβ−ガ
ラクトシダーゼ遺伝子、続いてポリヘドリン遺伝子のポリアデニル化シグナルを
含む。挿入された遺伝子は、クローニングしたポリヌクレオチドを発現する生存
可能なウイルスを生成する、野生型ウイルスＤＮＡとの細胞媒介性の相同組換え
のためのウイルス配列と両側で隣接する。
よび発現） この実施例では、ポリペプチドを発現するために、プラスミドシャトルベクタ
ーｐＡ２を使用してポリヌクレオチドをバキュロウイルスに挿入する。この発現
ベクターは、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多核体病ウイル
ス（ＡｃＭＮＰＶ）の強力なポリヘドリンプロモーター、続いてＢａｍＨＩ、Ｘ
ｂａＩ、およびＡｓｐ７１８のような便利な制限部位を含む。シミアンウイルス
４０（「ＳＶ４０」）のポリアデニル化部位を、効率的なポリアデニル化のため
に使用する。組換えウイルスの容易な選択のために、プラスミドは、同方向にあ
る弱いＤｒｏｓｏｐｈｉｌａプロモーターの制御下でＥ．ｃｏｌｉ由来のβ−ガ
ラクトシダーゼ遺伝子、続いてポリヘドリン遺伝子のポリアデニル化シグナルを
含む。挿入された遺伝子は、クローニングしたポリヌクレオチドを発現する生存
可能なウイルスを生成する、野生型ウイルスＤＮＡとの細胞媒介性の相同組換え
のためのウイルス配列と両側で隣接する。
【０６１２】
多くの他のバキュロウイルスベクター（例えば、ｐＡｃ３７３、ｐＶＬ９４１
、およびｐＡｃＩＭ１）は、当業者が容易に理解するように、構築物が転写、翻
訳、分泌などのために適切に配置されたシグナル（必要とされる場合、シグナル
ペプチドおよびインフレームなＡＵＧを含む）を提供する限りにおいて、上記の
ベクターの代わりに使用され得る。このようなベクターは、例えば、Ｌｕｃｋｏ
ｗら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７０：３１−３９（１９８９）に記載される。
、およびｐＡｃＩＭ１）は、当業者が容易に理解するように、構築物が転写、翻
訳、分泌などのために適切に配置されたシグナル（必要とされる場合、シグナル
ペプチドおよびインフレームなＡＵＧを含む）を提供する限りにおいて、上記の
ベクターの代わりに使用され得る。このようなベクターは、例えば、Ｌｕｃｋｏ
ｗら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７０：３１−３９（１９８９）に記載される。
【０６１３】
具体的には、寄託されたクローンに含まれるｃＤＮＡ配列を、適切な制限部位
および開始／終止コドンを含むプライマーを用いて、実施例１に記載されるＰＣ
Ｒプロトコルを使用して増幅させる。天然に存在するシグナル配列を使用して分
泌タンパク質を産生する場合、ｐＡ２ベクターは第２のシグナルペプチドを必要
としない。あるいは、ベクターは、Ｓｕｍｍｅｒｓら、「Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏ
ｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎ
ｄ Ｉｎｓｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ」、Ｔｅ
ｘａｓ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｉｏ
ｎ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ Ｎｏ．１５５５（１９８７）に記載される標準的な方法
を用いて、バキュロウイルスリーダー配列を含むように改変され得る（ｐＡ２
ＧＰ）。
および開始／終止コドンを含むプライマーを用いて、実施例１に記載されるＰＣ
Ｒプロトコルを使用して増幅させる。天然に存在するシグナル配列を使用して分
泌タンパク質を産生する場合、ｐＡ２ベクターは第２のシグナルペプチドを必要
としない。あるいは、ベクターは、Ｓｕｍｍｅｒｓら、「Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏ
ｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎ
ｄ Ｉｎｓｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ」、Ｔｅ
ｘａｓ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｉｏ
ｎ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ Ｎｏ．１５５５（１９８７）に記載される標準的な方法
を用いて、バキュロウイルスリーダー配列を含むように改変され得る（ｐＡ２
ＧＰ）。
【０６１４】
増幅されたフラグメントを、市販のキット（「Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」ＢＩＯ
１０１ Ｉｎｃ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａ）を使用して、１％アガロースゲル
から単離する。次いでフラグメントを適切な制限酵素で消化し、そして再度１％
アガロースゲルで精製する。
１０１ Ｉｎｃ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａ）を使用して、１％アガロースゲル
から単離する。次いでフラグメントを適切な制限酵素で消化し、そして再度１％
アガロースゲルで精製する。
【０６１５】
プラスミドを対応する制限酵素で消化し、そして必要に応じて、当該分野で公
知の慣用の手順を用いて、仔ウシ腸ホスファターゼを用いて脱リン酸化し得る。
次いでＤＮＡを、市販のキット（「Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」ＢＩＯ １０１ Ｉｎ
ｃ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａ）を使用して、１％アガロースゲルから単離する
。
知の慣用の手順を用いて、仔ウシ腸ホスファターゼを用いて脱リン酸化し得る。
次いでＤＮＡを、市販のキット（「Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」ＢＩＯ １０１ Ｉｎ
ｃ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａ）を使用して、１％アガロースゲルから単離する
。
【０６１６】
フラグメントおよび脱リン酸化したプラスミドを、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼを用
いて共に連結する。Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１またはＸＬ−１ Ｂｌｕｅ（Ｓｔ
ｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ
）細胞のような他の適切なＥ．ｃｏｌｉ宿主を、連結混合液で形質転換し、そし
て培養プレート上に拡げる。プラスミドを含む細菌を、個々のコロニー由来のＤ
ＮＡを消化し、そして消化産物をゲル電気泳動によって分析することにより同定
する。クローニングしたフラグメントの配列をＤＮＡ配列決定によって確認する
。
いて共に連結する。Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１またはＸＬ−１ Ｂｌｕｅ（Ｓｔ
ｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ
）細胞のような他の適切なＥ．ｃｏｌｉ宿主を、連結混合液で形質転換し、そし
て培養プレート上に拡げる。プラスミドを含む細菌を、個々のコロニー由来のＤ
ＮＡを消化し、そして消化産物をゲル電気泳動によって分析することにより同定
する。クローニングしたフラグメントの配列をＤＮＡ配列決定によって確認する
。
【０６１７】
このポリヌクレオチドを含む５μｇのプラスミドを、Ｆｅｌｇｎｅｒら、Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：７４１３−７４１７（１９
８７）によって記載されたリポフェクション法を使用して、１．０μｇの市販の
線状化バキュロウイルスＤＮＡ（「ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄTM ｂａｃｕｌｏｖｉ
ｒｕｓ ＤＮＡ」，Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）ととも
に同時トランスフェクトする。１μｇのＢａｃｕｌｏＧｏｌｄTMウイルスＤＮＡ
および５μｇのプラスミドを、５０μｌの無血清グレース培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を含む、
マイクロタイタープレートの滅菌したウェル中で混合する。その後、１０μｌの
リポフェクチンおよび９０μｌグレース培地を加え、混合し、そして室温で１５
分間インキュベートする。次いで、トランスフェクション混合液を、無血清グレ
ース培地１ｍｌを加えた３５ｍｍ組織培養プレートに播種したＳｆ９昆虫細胞（
ＡＴＣＣ ＣＲＬ １７１１）に滴下して加える。次いでプレートを２７℃で５
時間インキュベートする。次いで、トランスフェクション溶液をプレートから除
去し、そして１０％ウシ胎仔血清を補充した１ｍｌのグレース昆虫培地を添加す
る。次いで培養を２７℃で４日間継続する。
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：７４１３−７４１７（１９
８７）によって記載されたリポフェクション法を使用して、１．０μｇの市販の
線状化バキュロウイルスＤＮＡ（「ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄTM ｂａｃｕｌｏｖｉ
ｒｕｓ ＤＮＡ」，Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）ととも
に同時トランスフェクトする。１μｇのＢａｃｕｌｏＧｏｌｄTMウイルスＤＮＡ
および５μｇのプラスミドを、５０μｌの無血清グレース培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を含む、
マイクロタイタープレートの滅菌したウェル中で混合する。その後、１０μｌの
リポフェクチンおよび９０μｌグレース培地を加え、混合し、そして室温で１５
分間インキュベートする。次いで、トランスフェクション混合液を、無血清グレ
ース培地１ｍｌを加えた３５ｍｍ組織培養プレートに播種したＳｆ９昆虫細胞（
ＡＴＣＣ ＣＲＬ １７１１）に滴下して加える。次いでプレートを２７℃で５
時間インキュベートする。次いで、トランスフェクション溶液をプレートから除
去し、そして１０％ウシ胎仔血清を補充した１ｍｌのグレース昆虫培地を添加す
る。次いで培養を２７℃で４日間継続する。
【０６１８】
４日後、上清を収集し、そしてＳｕｍｍｅｒｓおよびＳｍｉｔｈ（前出）によ
って記載されたようにプラークアッセイを行う。「Ｂｌｕｅ Ｇａｌ」（Ｌｉｆ
ｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ）を含む
アガロースゲルを、ｇａｌ発現クローン（青色に着色したプラークを生ずる）の
容易な同定および単離を可能にするために使用する。（この型の「プラークアッ
セイ」の詳細な説明はまた、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，
Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，によって配布される、昆虫細胞培養およびバキュロ
ウイルス学のための使用者ガイド（９−１０頁）の中に見出され得る）。適切な
インキュベーションの後、青色に着色したプラークをマイクロピペッター（例え
ば、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）のチップで拾う。次いで、組換えウイルスを含む寒天
を、２００μｌのグレース培地を含む微小遠心分離チューブ中で再懸濁し、そし
て組換えバキュロウイルスを含む懸濁液を、３５ｍｍディッシュに播種したＳｆ
９細胞に感染させるために使用する。４日後、これらの培養ディッシュの上清を
収集し、次いで４℃で保存する。
って記載されたようにプラークアッセイを行う。「Ｂｌｕｅ Ｇａｌ」（Ｌｉｆ
ｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ）を含む
アガロースゲルを、ｇａｌ発現クローン（青色に着色したプラークを生ずる）の
容易な同定および単離を可能にするために使用する。（この型の「プラークアッ
セイ」の詳細な説明はまた、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，
Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，によって配布される、昆虫細胞培養およびバキュロ
ウイルス学のための使用者ガイド（９−１０頁）の中に見出され得る）。適切な
インキュベーションの後、青色に着色したプラークをマイクロピペッター（例え
ば、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）のチップで拾う。次いで、組換えウイルスを含む寒天
を、２００μｌのグレース培地を含む微小遠心分離チューブ中で再懸濁し、そし
て組換えバキュロウイルスを含む懸濁液を、３５ｍｍディッシュに播種したＳｆ
９細胞に感染させるために使用する。４日後、これらの培養ディッシュの上清を
収集し、次いで４℃で保存する。
【０６１９】
ポリペプチドの発現を確認するために、１０％熱非働化ＦＢＳを補充したグレ
ース培地中でＳｆ９細胞を増殖させる。細胞を、約２の感染多重度（「ＭＯＩ」
）でポリヌクレオチドを含む組換えバキュロウイルスに感染させる。放射性標識
したタンパク質を所望する場合には、６時間後に培地を除去し、そしてメチオニ
ンおよびシステインを含まないＳＦ９００ ＩＩ培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤから入手可能）に置き換え
る。４２時間後、５μＣｉの35Ｓ−メチオニンおよび５μＣｉの35Ｓ−システイ
ン（Ａｍｅｒｓｈａｍから入手可能）を添加する。細胞をさらに１６時間インキ
ュベートし、次いで遠心分離によって収集する。上清中のタンパク質および細胞
内タンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、次いで（放射性標識した場合）オートラジ
オグラフィーによって分析する。
ース培地中でＳｆ９細胞を増殖させる。細胞を、約２の感染多重度（「ＭＯＩ」
）でポリヌクレオチドを含む組換えバキュロウイルスに感染させる。放射性標識
したタンパク質を所望する場合には、６時間後に培地を除去し、そしてメチオニ
ンおよびシステインを含まないＳＦ９００ ＩＩ培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤから入手可能）に置き換え
る。４２時間後、５μＣｉの35Ｓ−メチオニンおよび５μＣｉの35Ｓ−システイ
ン（Ａｍｅｒｓｈａｍから入手可能）を添加する。細胞をさらに１６時間インキ
ュベートし、次いで遠心分離によって収集する。上清中のタンパク質および細胞
内タンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、次いで（放射性標識した場合）オートラジ
オグラフィーによって分析する。
【０６２０】
精製タンパク質のアミノ末端のアミノ酸配列の微量配列決定法を使用して、産
生されたタンパク質のアミノ末端配列を決定し得る。
生されたタンパク質のアミノ末端配列を決定し得る。
【０６２１】
（実施例８：哺乳動物細胞におけるポリペプチドの発現）
本発明のポリペプチドを、哺乳動物細胞中で発現させ得る。代表的な哺乳動物
発現ベクターは、ｍＲＮＡの転写の開始を仲介するプロモーターエレメント、タ
ンパク質コード配列、ならびに転写の終結および転写物のポリアデニル化に必要
なシグナルを含む。さらなるエレメントは、エンハンサー、コザック配列、およ
び、ＲＮＡスプライシングのドナーおよびアクセプター部位に隣接する介在配列
を含む。非常に効率的な転写は、ＳＶ４０由来の初期および後期プロモーター、
レトロウイルス（例えばＲＳＶ、ＨＴＬＶＩ、ＨＩＶＩ）由来の長い末端反復（
ＬＴＲ）、およびサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の初期プロモーターを用いて
達成される。しかし、細胞エレメント（例えば、ヒトアクチンプロモーター）も
また、使用され得る。
発現ベクターは、ｍＲＮＡの転写の開始を仲介するプロモーターエレメント、タ
ンパク質コード配列、ならびに転写の終結および転写物のポリアデニル化に必要
なシグナルを含む。さらなるエレメントは、エンハンサー、コザック配列、およ
び、ＲＮＡスプライシングのドナーおよびアクセプター部位に隣接する介在配列
を含む。非常に効率的な転写は、ＳＶ４０由来の初期および後期プロモーター、
レトロウイルス（例えばＲＳＶ、ＨＴＬＶＩ、ＨＩＶＩ）由来の長い末端反復（
ＬＴＲ）、およびサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の初期プロモーターを用いて
達成される。しかし、細胞エレメント（例えば、ヒトアクチンプロモーター）も
また、使用され得る。
【０６２２】
本発明を実施する際の使用に適切な発現ベクターは、例えば、ｐＳＶＬおよび
ｐＭＳＧ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）、ｐＲＳＶｃ
ａｔ（ＡＴＣＣ ３７１５２）、ｐＳＶ２ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ ３７１４６）、
ｐＢＣ１２ＭＩ（ＡＴＣＣ ６７１０９）、ｐＣＭＶＳｐｏｒｔ２．０、ならび
にｐＣＭＶＳｐｏｒｔ３．０のようなベクターを含む。使用され得る哺乳動物宿
主細胞としては、ヒトＨｅｌａ細胞、２９３細胞、Ｈ９細胞およびＪｕｒｋａｔ
細胞、マウスＮＩＨ３Ｔ３細胞およびＣ１２７細胞、Ｃｏｓ １細胞、Ｃｏｓ
７細胞およびＣＶ１細胞、ウズラＱＣ１−３細胞、マウスＬ細胞、ならびにチャ
イニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞が挙げられる。
ｐＭＳＧ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）、ｐＲＳＶｃ
ａｔ（ＡＴＣＣ ３７１５２）、ｐＳＶ２ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ ３７１４６）、
ｐＢＣ１２ＭＩ（ＡＴＣＣ ６７１０９）、ｐＣＭＶＳｐｏｒｔ２．０、ならび
にｐＣＭＶＳｐｏｒｔ３．０のようなベクターを含む。使用され得る哺乳動物宿
主細胞としては、ヒトＨｅｌａ細胞、２９３細胞、Ｈ９細胞およびＪｕｒｋａｔ
細胞、マウスＮＩＨ３Ｔ３細胞およびＣ１２７細胞、Ｃｏｓ １細胞、Ｃｏｓ
７細胞およびＣＶ１細胞、ウズラＱＣ１−３細胞、マウスＬ細胞、ならびにチャ
イニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞が挙げられる。
【０６２３】
あるいは、ポリペプチドは、染色体に組み込まれたポリヌクレオチドを含む、
安定な細胞株中で発現され得る。ｄｈｆｒ、ｇｐｔ、ネオマイシン、ハイグロマ
イシンのような選択可能なマーカーを用いる同時トランスフェクションは、トラ
ンスフェクトされた細胞の同定および単離を可能にする。
安定な細胞株中で発現され得る。ｄｈｆｒ、ｇｐｔ、ネオマイシン、ハイグロマ
イシンのような選択可能なマーカーを用いる同時トランスフェクションは、トラ
ンスフェクトされた細胞の同定および単離を可能にする。
【０６２４】
トランスフェクトされた遺伝子はまた、大量のコードされたタンパク質を発現
するために増幅され得る。ＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸還元酵素）マーカーは、目的
の遺伝子の数百または数千さえものコピーを有する細胞株の開発に有用である。
（例えば、Ａｌｔら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５３：１３５７−１３７０（
１９７８）；Ｈａｍｌｉｎ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ
、１０９７：１０７−１４３（１９９０）：Ｐａｇｅら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｙ ９：６４−６８（１９９１）を参照のこと）。別の有用な選択マーカー
は、酵素グルタミンシンターゼ（ＧＳ）である（Ｍｕｒｐｈｙら、Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ Ｊ．２２７：２７７−２７９（１９９１）；Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎら、Ｂｉ
ｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６９−１７５（１９９２））。これらのマ
ーカーを使用して、哺乳動物細胞を選択培地中で増殖させ、そしてもっとも高い
耐性を有する細胞を選択する。これらの細胞株は、染色体に組み込まれた増幅さ
れた遺伝子を含む。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）およびＮＳＯ細胞は
、タンパク質の産生のためにしばしば使用される。
するために増幅され得る。ＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸還元酵素）マーカーは、目的
の遺伝子の数百または数千さえものコピーを有する細胞株の開発に有用である。
（例えば、Ａｌｔら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５３：１３５７−１３７０（
１９７８）；Ｈａｍｌｉｎ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ
、１０９７：１０７−１４３（１９９０）：Ｐａｇｅら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｙ ９：６４−６８（１９９１）を参照のこと）。別の有用な選択マーカー
は、酵素グルタミンシンターゼ（ＧＳ）である（Ｍｕｒｐｈｙら、Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ Ｊ．２２７：２７７−２７９（１９９１）；Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎら、Ｂｉ
ｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６９−１７５（１９９２））。これらのマ
ーカーを使用して、哺乳動物細胞を選択培地中で増殖させ、そしてもっとも高い
耐性を有する細胞を選択する。これらの細胞株は、染色体に組み込まれた増幅さ
れた遺伝子を含む。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）およびＮＳＯ細胞は
、タンパク質の産生のためにしばしば使用される。
【０６２５】
プラスミドｐＳＶ２−ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ受託番号３７１４６）の誘導体であ
る、発現ベクターｐＣ４（ＡＴＣＣ受託番号２０９６４６）およびｐＣ６（ＡＴ
ＣＣ受託番号２０９６４７）は、ラウス肉腫ウイルス（Ｃｕｌｌｅｎら、Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４３８−４４７（
１９８５年３月））の強力なプロモーター（ＬＴＲ）、およびＣＭＶエンハンサ
ー（Ｂｏｓｈａｒｔら、Ｃｅｌｌ ４１：５２１−５３０（１９８５））のフラ
グメントを含む。例えば、ＢａｍＨＩ、ＸｂａＩ、およびＡｓｐ７１８の制限酵
素切断部位を有する複数のクローニングサイトは、目的の遺伝子のクローニング
を容易にする。ベクターはまた、３’イントロン、ラットプレプロインシュリン
遺伝子のポリアデニル化および終結シグナル、ならびに、ＳＶ４０初期プロモー
ターの制御下にあるマウスＤＨＦＲ遺伝子を含む。
る、発現ベクターｐＣ４（ＡＴＣＣ受託番号２０９６４６）およびｐＣ６（ＡＴ
ＣＣ受託番号２０９６４７）は、ラウス肉腫ウイルス（Ｃｕｌｌｅｎら、Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４３８−４４７（
１９８５年３月））の強力なプロモーター（ＬＴＲ）、およびＣＭＶエンハンサ
ー（Ｂｏｓｈａｒｔら、Ｃｅｌｌ ４１：５２１−５３０（１９８５））のフラ
グメントを含む。例えば、ＢａｍＨＩ、ＸｂａＩ、およびＡｓｐ７１８の制限酵
素切断部位を有する複数のクローニングサイトは、目的の遺伝子のクローニング
を容易にする。ベクターはまた、３’イントロン、ラットプレプロインシュリン
遺伝子のポリアデニル化および終結シグナル、ならびに、ＳＶ４０初期プロモー
ターの制御下にあるマウスＤＨＦＲ遺伝子を含む。
【０６２６】
具体的には、例えば、プラスミドｐＣ６は、適切な制限酵素によって消化され
、次いで当該分野で公知の手順に従って、仔ウシ腸ホスファターゼ（ｐｈｏｓｐ
ｈａｔｅ）を使用して脱リン酸化される。次いで、ベクターを１％アガロースゲ
ルから単離する。
、次いで当該分野で公知の手順に従って、仔ウシ腸ホスファターゼ（ｐｈｏｓｐ
ｈａｔｅ）を使用して脱リン酸化される。次いで、ベクターを１％アガロースゲ
ルから単離する。
【０６２７】
本発明のポリヌクレオチドは、必要ならば適切な制限部位およ開始／終止コド
ンを有するプライマーを使用して、実施例１に概説するプロトコルに従って増幅
される。分泌のために必要な場合、ベクターは異種シグナル配列を含むように改
変され得る（例えば、ＷＯ９６／３４８９１を参照のこと）。
ンを有するプライマーを使用して、実施例１に概説するプロトコルに従って増幅
される。分泌のために必要な場合、ベクターは異種シグナル配列を含むように改
変され得る（例えば、ＷＯ９６／３４８９１を参照のこと）。
【０６２８】
増幅フラグメントを、市販のキット（「Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」、ＢＩＯ １０
１ Ｉｎｃ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａ．）を使用して１％アガロースゲルから
単離する。次いで、フラグメントを、適切な制限酵素で消化し、そして再度１％
アガロースゲル上で精製する。
１ Ｉｎｃ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａ．）を使用して１％アガロースゲルから
単離する。次いで、フラグメントを、適切な制限酵素で消化し、そして再度１％
アガロースゲル上で精製する。
【０６２９】
次いで、増幅フラグメントを同じ制限酵素で消化し、そして１％アガロースゲ
ルで精製する。次いで、単離されたフラグメントおよび脱リン酸化したベクター
を、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼで連結する。次いで、Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１また
はＸＬ−１ Ｂｌｕｅ細胞を形質転換し、そしてプラスミドｐＣ６に挿入された
フラグメントを含む細菌を、例えば、制限酵素分析を用いて同定する。
ルで精製する。次いで、単離されたフラグメントおよび脱リン酸化したベクター
を、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼで連結する。次いで、Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１また
はＸＬ−１ Ｂｌｕｅ細胞を形質転換し、そしてプラスミドｐＣ６に挿入された
フラグメントを含む細菌を、例えば、制限酵素分析を用いて同定する。
【０６３０】
活性なＤＨＦＲ遺伝子を欠失するチャイニーズハムスター卵巣細胞を、トラン
スフェクションに使用する。５μｇの発現プラスミドｐＣ６を、リポフェクチン
を用いて、０．５μｇのプラスミドｐＳＶｎｅｏとともに同時トランスフェクト
する（Ｆｅｌｇｎｅｒら、前出）。プラスミドｐＳＶ２−ｎｅｏは、優性選択マ
ーカーであるところの、Ｇ４１８を含む抗生物質の群に対する耐性を付与する酵
素をコードするＴｎ５由来のｎｅｏ遺伝子を含む。細胞を、１ｍｇ／ｍｌのＧ４
１８を補充したαマイナスＭＥＭに播種する。２日後、細胞をトリプシン処理し
、そして１０、２５、または５０ｎｇ／ｍｌのメトトレキサートおよび１ｍｇ／
ｍｌのＧ４１８を補充したαマイナスＭＥＭ中のハイブリドーマクローニングプ
レート（Ｇｒｅｉｎｅｒ，Ｇｅｒｍａｎｙ）中に播種する。約１０〜１４日後、
単一のクローンをトリプシン処理し、次いでメトトレキサートの異なる濃度（５
０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、８００ｎＭ）を使用して、６ウ
ェルのペトリ皿または１０ｍｌのフラスコに播種する。次いで、メトトレキサー
トの最高濃度で増殖するクローンを、さらに高い濃度（１μＭ、２μＭ、５μＭ
、１０ｍＭ、２０ｍＭ）のメトトレキサートを含む新たな６ウェルプレートに移
す。同じ手順を、１００〜２００μＭの濃度で増殖するクローンが得られるまで
繰り返す。所望の遺伝子産物の発現を、例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエス
タンブロットによって、または逆相ＨＰＬＣ分析によって分析する。
スフェクションに使用する。５μｇの発現プラスミドｐＣ６を、リポフェクチン
を用いて、０．５μｇのプラスミドｐＳＶｎｅｏとともに同時トランスフェクト
する（Ｆｅｌｇｎｅｒら、前出）。プラスミドｐＳＶ２−ｎｅｏは、優性選択マ
ーカーであるところの、Ｇ４１８を含む抗生物質の群に対する耐性を付与する酵
素をコードするＴｎ５由来のｎｅｏ遺伝子を含む。細胞を、１ｍｇ／ｍｌのＧ４
１８を補充したαマイナスＭＥＭに播種する。２日後、細胞をトリプシン処理し
、そして１０、２５、または５０ｎｇ／ｍｌのメトトレキサートおよび１ｍｇ／
ｍｌのＧ４１８を補充したαマイナスＭＥＭ中のハイブリドーマクローニングプ
レート（Ｇｒｅｉｎｅｒ，Ｇｅｒｍａｎｙ）中に播種する。約１０〜１４日後、
単一のクローンをトリプシン処理し、次いでメトトレキサートの異なる濃度（５
０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、８００ｎＭ）を使用して、６ウ
ェルのペトリ皿または１０ｍｌのフラスコに播種する。次いで、メトトレキサー
トの最高濃度で増殖するクローンを、さらに高い濃度（１μＭ、２μＭ、５μＭ
、１０ｍＭ、２０ｍＭ）のメトトレキサートを含む新たな６ウェルプレートに移
す。同じ手順を、１００〜２００μＭの濃度で増殖するクローンが得られるまで
繰り返す。所望の遺伝子産物の発現を、例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエス
タンブロットによって、または逆相ＨＰＬＣ分析によって分析する。
【０６３１】
（実施例９：タンパク質融合物）
本発明のポリぺプチドは、好ましくは、他のタンパク質に融合される。これら
の融合タンパク質は、種々の適用について使用され得る。例えば、本発明のポリ
ぺプチドの、Ｈｉｓタグ、ＨＡタグ、プロテインＡ、ＩｇＧドメイン、およびマ
ルトース結合タンパク質への融合は、精製を容易にする（実施例５を参照のこと
；ＥＰ Ａ ３９４，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３３１
：８４−８６（１９８８）もまた参照のこと）。これらのポリぺプチドはまた、
分泌または細胞内往来（ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ）（例えば、ＫＤＥＬ）を促進
するために、異種ポリぺプチド配列に融合され得る。さらに、ＩｇＧ−１、Ｉｇ
Ｇ−３、およびアルブミンへの融合は、インビボでの半減期を増大させる。本発
明のポリぺプチドに融合した核局在化シグナルは、タンパク質を特定の細胞下（
ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ）局在に標的化し得る。一方、共有結合ヘテロダイマー
またはホモダイマーは、融合タンパク質の活性を増大または減少させ得る。融合
タンパク質はまた、１つより多い機能を有するキメラ分子を作製し得る。最後に
、融合タンパク質は、非融合タンパク質と比較して、融合タンパク質の可溶性お
よび／または安定性を増大させ得る。上記の融合タンパク質の全ての型は、ポリ
ぺプチドのＩｇＧ分子への融合を概説する以下のプロトコル、または実施例５に
記載されるプロトコルを改変することによって作製され得る。
の融合タンパク質は、種々の適用について使用され得る。例えば、本発明のポリ
ぺプチドの、Ｈｉｓタグ、ＨＡタグ、プロテインＡ、ＩｇＧドメイン、およびマ
ルトース結合タンパク質への融合は、精製を容易にする（実施例５を参照のこと
；ＥＰ Ａ ３９４，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３３１
：８４−８６（１９８８）もまた参照のこと）。これらのポリぺプチドはまた、
分泌または細胞内往来（ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ）（例えば、ＫＤＥＬ）を促進
するために、異種ポリぺプチド配列に融合され得る。さらに、ＩｇＧ−１、Ｉｇ
Ｇ−３、およびアルブミンへの融合は、インビボでの半減期を増大させる。本発
明のポリぺプチドに融合した核局在化シグナルは、タンパク質を特定の細胞下（
ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ）局在に標的化し得る。一方、共有結合ヘテロダイマー
またはホモダイマーは、融合タンパク質の活性を増大または減少させ得る。融合
タンパク質はまた、１つより多い機能を有するキメラ分子を作製し得る。最後に
、融合タンパク質は、非融合タンパク質と比較して、融合タンパク質の可溶性お
よび／または安定性を増大させ得る。上記の融合タンパク質の全ての型は、ポリ
ぺプチドのＩｇＧ分子への融合を概説する以下のプロトコル、または実施例５に
記載されるプロトコルを改変することによって作製され得る。
【０６３２】
簡単には、ＩｇＧ分子のヒトＦｃ部分は、以下に記載の配列の５’および３’
末端にわたるプライマーを使用してＰＣＲ増幅され得る。これらのプライマーは
また、発現ベクター（好ましくは、哺乳動物発現ベクター）へのクローニングを
容易にする都合の良い制限酵素部位および必要であれば開始／終止コドンを有す
るべきである。
末端にわたるプライマーを使用してＰＣＲ増幅され得る。これらのプライマーは
また、発現ベクター（好ましくは、哺乳動物発現ベクター）へのクローニングを
容易にする都合の良い制限酵素部位および必要であれば開始／終止コドンを有す
るべきである。
【０６３３】
例えば、ｐＣ４（受託番号第２０９６４６号）が使用される場合、ヒトＦｃ部
分は、ＢａｍＨＩクローニング部位に連結され得る。３’ＢａｍＨＩ部位が破壊
されるべきであることに注意のこと。次に、ヒトＦｃ部分を含有するベクターが
、ＢａｍＨＩによって再び制限処理され、ベクターを線状化し、そして実施例１
に記載するＰＣＲプロトコルによって単離された本発明のポリヌクレオチドが、
このＢａｍＨＩ部位に連結される。ポリヌクレオチドは、終止コドンなしにクロ
ーニングされ、そうでなければ、融合タンパク質は産生されないことに注意する
こと。
分は、ＢａｍＨＩクローニング部位に連結され得る。３’ＢａｍＨＩ部位が破壊
されるべきであることに注意のこと。次に、ヒトＦｃ部分を含有するベクターが
、ＢａｍＨＩによって再び制限処理され、ベクターを線状化し、そして実施例１
に記載するＰＣＲプロトコルによって単離された本発明のポリヌクレオチドが、
このＢａｍＨＩ部位に連結される。ポリヌクレオチドは、終止コドンなしにクロ
ーニングされ、そうでなければ、融合タンパク質は産生されないことに注意する
こと。
【０６３４】
天然に存在するシグナル配列が分泌タンパク質を産生するために使用される場
合、ｐＣ４は、第二のシグナルペプチドを必要としない。あるいは、天然に存在
するシグナル配列が使用されない場合、ベクターは、異種シグナル配列を含むよ
うに改変され得る（例えば、ＷＯ ９６／３４８９１を参照のこと）。
合、ｐＣ４は、第二のシグナルペプチドを必要としない。あるいは、天然に存在
するシグナル配列が使用されない場合、ベクターは、異種シグナル配列を含むよ
うに改変され得る（例えば、ＷＯ ９６／３４８９１を参照のこと）。
【０６３５】
【化１】
（実施例１０：ポリペプチドの処方）
ポリペプチド組成物を、個々の患者の臨床状態（特に、分泌ポリペプチド単独
処置の副作用）、送達部位、投与方法、投与計画および当業者に公知の他の因子
を考慮に入れ、医療実施基準（ｇｏｏｄ ｍｅｄｉｃａｌ ｐｒａｃｔｉｃｅ）
を遵守する方式で処方および投薬する。従って、本明細書において目的とする「
有効量」は、このような考慮により決定される。
処置の副作用）、送達部位、投与方法、投与計画および当業者に公知の他の因子
を考慮に入れ、医療実施基準（ｇｏｏｄ ｍｅｄｉｃａｌ ｐｒａｃｔｉｃｅ）
を遵守する方式で処方および投薬する。従って、本明細書において目的とする「
有効量」は、このような考慮により決定される。
【０６３６】
一般的提案として、用量当り、非経口的に投与されるポリペプチドの合計薬学
的有効量は、患者体重の、約１μｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲にあ
るが、上記のようにこれは治療的裁量に委ねられる。さらに好ましくは、このホ
ルモンについて、この用量は、少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、そして最も
好ましくはヒトに対して約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日と約１ｍｇ／ｋｇ／日との間
である。連続投与する場合、代表的には、ポリペプチドを約１μｇ／ｋｇ／時間
〜約５０μｇ／ｋｇ／時間の投薬速度で１日に１〜４回の注射かまたは連続皮下
注入（例えばミニポンプを用いる）のいずれかにより投与する。静脈内用バッグ
溶液もまた使用し得る。変化を観察するために必要な処置期間および応答が生じ
る処置後の間隔は、所望の効果に応じて変化するようである。
的有効量は、患者体重の、約１μｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲にあ
るが、上記のようにこれは治療的裁量に委ねられる。さらに好ましくは、このホ
ルモンについて、この用量は、少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、そして最も
好ましくはヒトに対して約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日と約１ｍｇ／ｋｇ／日との間
である。連続投与する場合、代表的には、ポリペプチドを約１μｇ／ｋｇ／時間
〜約５０μｇ／ｋｇ／時間の投薬速度で１日に１〜４回の注射かまたは連続皮下
注入（例えばミニポンプを用いる）のいずれかにより投与する。静脈内用バッグ
溶液もまた使用し得る。変化を観察するために必要な処置期間および応答が生じ
る処置後の間隔は、所望の効果に応じて変化するようである。
【０６３７】
本発明のポリぺプチドを含む薬学的組成物を、経口的、直腸内、非経口的、槽
内（ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｍａｌｌｙ）、膣内、腹腔内、局所的（粉末、軟膏、
ゲル、点滴剤、または経皮パッチによるなど）、口内あるいは経口または鼻腔ス
プレーとして投与する。「薬学的に受容可能なキャリア」とは、非毒性の固体、
半固体または液体の充填剤、希釈剤、被包材または任意の型の製剤補助剤をいう
。本明細書で用いる用語「非経口的」とは、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、
皮下および関節内の注射および注入を含む投与の様式をいう。
内（ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｍａｌｌｙ）、膣内、腹腔内、局所的（粉末、軟膏、
ゲル、点滴剤、または経皮パッチによるなど）、口内あるいは経口または鼻腔ス
プレーとして投与する。「薬学的に受容可能なキャリア」とは、非毒性の固体、
半固体または液体の充填剤、希釈剤、被包材または任意の型の製剤補助剤をいう
。本明細書で用いる用語「非経口的」とは、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、
皮下および関節内の注射および注入を含む投与の様式をいう。
【０６３８】
ポリペプチドはまた、徐放性システムにより適切に投与される。徐放性組成物
の適切な例は、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの成形品の形態の半透
過性ポリマーマトリックスを包含する。徐放性マトリックスとしては、ポリラク
チド（米国特許第３，７７３，９１９号、ＥＰ５８，４８１）、Ｌ−グルタミン
酸およびγ−エチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー（Ｓｉｄｍａｎら、Ｂｉｏ
ｐｏｌｙｍｅｒｓ２２：５４７−５５６（１９８３））、ポリ（２−ヒドロキシ
エチルメタクリレート）（Ｌａｎｇｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒ
ｅｓ．１５：１６７−２７７（１９８１）、およびＬａｎｇｅｒ，Ｃｈｅｍ．Ｔ
ｅｃｈ．１２：９８−１０５（１９８２））、エチレンビニルアセテート（Ｒ．
Ｌａｎｇｅｒら）またはポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ１３３，
９８８）が挙げられる。徐放性組成物はまた、リポソームに封入されたポリペプ
チドを包含する。分泌ポリペプチドを含有するリポソームは、それ自体が公知で
ある方法により調製される：ＤＥ３，２１８，１２１；Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：３６８８−３６９２（１９
８５）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７
：４０３０−４０３４（１９８０）；ＥＰ５２，３２２；ＥＰ３６，６７６；Ｅ
Ｐ８８，０４６；ＥＰ１４３，９４９；ＥＰ１４２，６４１；日本国特許出願第
８３−１１８００８号；米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４
，５４５号；ならびにＥＰ第１０２，３２４号。通常、リポソームは、小さな（
約２００〜８００オングストローム）単層状型であり、脂質含有量は、約３０モ
ル％コレステロールよりも多く、選択された割合が、最適分泌ポリペプチド治療
のために調整される。
の適切な例は、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの成形品の形態の半透
過性ポリマーマトリックスを包含する。徐放性マトリックスとしては、ポリラク
チド（米国特許第３，７７３，９１９号、ＥＰ５８，４８１）、Ｌ−グルタミン
酸およびγ−エチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー（Ｓｉｄｍａｎら、Ｂｉｏ
ｐｏｌｙｍｅｒｓ２２：５４７−５５６（１９８３））、ポリ（２−ヒドロキシ
エチルメタクリレート）（Ｌａｎｇｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒ
ｅｓ．１５：１６７−２７７（１９８１）、およびＬａｎｇｅｒ，Ｃｈｅｍ．Ｔ
ｅｃｈ．１２：９８−１０５（１９８２））、エチレンビニルアセテート（Ｒ．
Ｌａｎｇｅｒら）またはポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ１３３，
９８８）が挙げられる。徐放性組成物はまた、リポソームに封入されたポリペプ
チドを包含する。分泌ポリペプチドを含有するリポソームは、それ自体が公知で
ある方法により調製される：ＤＥ３，２１８，１２１；Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：３６８８−３６９２（１９
８５）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７
：４０３０−４０３４（１９８０）；ＥＰ５２，３２２；ＥＰ３６，６７６；Ｅ
Ｐ８８，０４６；ＥＰ１４３，９４９；ＥＰ１４２，６４１；日本国特許出願第
８３−１１８００８号；米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４
，５４５号；ならびにＥＰ第１０２，３２４号。通常、リポソームは、小さな（
約２００〜８００オングストローム）単層状型であり、脂質含有量は、約３０モ
ル％コレステロールよりも多く、選択された割合が、最適分泌ポリペプチド治療
のために調整される。
【０６３９】
非経口投与のために、１つの実施態様において、一般に、分泌ポリペプチドは
、それを所望の程度の純度で、薬学的に受容可能なキャリア、すなわち、用いる
投薬量および濃度でレシピエントに対して毒性がなく、かつ処方物の他の成分と
適合するものと、単位投薬量の注射可能な形態（溶液、懸濁液または乳濁液）で
混合することにより処方される。例えば、この処方物は、好ましくは、酸化剤、
およびポリペプチドに対して有害であることが知られている他の化合物を含まな
い。
、それを所望の程度の純度で、薬学的に受容可能なキャリア、すなわち、用いる
投薬量および濃度でレシピエントに対して毒性がなく、かつ処方物の他の成分と
適合するものと、単位投薬量の注射可能な形態（溶液、懸濁液または乳濁液）で
混合することにより処方される。例えば、この処方物は、好ましくは、酸化剤、
およびポリペプチドに対して有害であることが知られている他の化合物を含まな
い。
【０６４０】
一般に、ポリペプチドを液体キャリアまたは微細分割固体キャリアあるいはそ
の両方と均一および緊密に接触させて処方物を調製する。次に、必要であれば、
生成物を所望の処方物に成形する。好ましくは、キャリアは、非経口的キャリア
であり、より好ましくはレシピエントの血液と等張である溶液である。このよう
なキャリアビヒクルの例としては、水、生理食塩水、リンゲル溶液およびデキス
トロース溶液が挙げられる。不揮発性油およびオレイン酸エチルのような非水性
ビヒクルもまた、リポソームと同様に本明細書において有用である。
の両方と均一および緊密に接触させて処方物を調製する。次に、必要であれば、
生成物を所望の処方物に成形する。好ましくは、キャリアは、非経口的キャリア
であり、より好ましくはレシピエントの血液と等張である溶液である。このよう
なキャリアビヒクルの例としては、水、生理食塩水、リンゲル溶液およびデキス
トロース溶液が挙げられる。不揮発性油およびオレイン酸エチルのような非水性
ビヒクルもまた、リポソームと同様に本明細書において有用である。
【０６４１】
キャリアは、等張性および化学的安定性を増強する物質のような微量の添加剤
を適切に含有する。このような物質は、用いる投薬量および濃度でレシピエント
に対して毒性がなく、そしてこのような物質としては、リン酸塩、クエン酸塩、
コハク酸塩、酢酸および他の有機酸またはその塩類のような緩衝剤；アスコルビ
ン酸のような抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド（例えば、ポ
リアルギニンまたはトリペプチド）；血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロ
ブリンのようなタンパク質；ポリビニルピロリドンのような親水性ポリマー；グ
リシン、グルタミン酸、アスパラギン酸またはアルギニンのようなアミノ酸；セ
ルロースまたはその誘導体、ブドウ糖、マンノースまたはデキストリンを含む、
単糖類、二糖類、および他の炭水化物；ＥＤＴＡのようなキレート剤；マンニト
ールまたはソルビトールのような糖アルコール；ナトリウムのような対イオン；
および／またはポリソルベート、ポロキサマーもしくはＰＥＧのような非イオン
性界面活性剤が挙げられる。
を適切に含有する。このような物質は、用いる投薬量および濃度でレシピエント
に対して毒性がなく、そしてこのような物質としては、リン酸塩、クエン酸塩、
コハク酸塩、酢酸および他の有機酸またはその塩類のような緩衝剤；アスコルビ
ン酸のような抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド（例えば、ポ
リアルギニンまたはトリペプチド）；血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロ
ブリンのようなタンパク質；ポリビニルピロリドンのような親水性ポリマー；グ
リシン、グルタミン酸、アスパラギン酸またはアルギニンのようなアミノ酸；セ
ルロースまたはその誘導体、ブドウ糖、マンノースまたはデキストリンを含む、
単糖類、二糖類、および他の炭水化物；ＥＤＴＡのようなキレート剤；マンニト
ールまたはソルビトールのような糖アルコール；ナトリウムのような対イオン；
および／またはポリソルベート、ポロキサマーもしくはＰＥＧのような非イオン
性界面活性剤が挙げられる。
【０６４２】
ポリペプチドは、代表的には約０．１ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌ、好まし
くは１〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度で、約３〜８のｐＨで、このようなビヒクル中に
処方される。前記の特定の賦形剤、キャリアまたは安定化剤を使用することによ
り、ポリペプチド塩が形成されることが理解される。
くは１〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度で、約３〜８のｐＨで、このようなビヒクル中に
処方される。前記の特定の賦形剤、キャリアまたは安定化剤を使用することによ
り、ポリペプチド塩が形成されることが理解される。
【０６４３】
治療的投与に用いられる任意のポリペプチドは無菌状態であり得る。滅菌濾過
膜（例えば０．２ミクロンメンブレン）で濾過することにより無菌状態は容易に
達成される。一般に、治療用ポリペプチド組成物は、滅菌アクセスポートを有す
る容器、例えば、皮下用注射針で穿刺可能なストッパー付の静脈内用溶液バッグ
またはバイアルに配置される。
膜（例えば０．２ミクロンメンブレン）で濾過することにより無菌状態は容易に
達成される。一般に、治療用ポリペプチド組成物は、滅菌アクセスポートを有す
る容器、例えば、皮下用注射針で穿刺可能なストッパー付の静脈内用溶液バッグ
またはバイアルに配置される。
【０６４４】
ポリペプチドは、通常、単位用量または複数用量容器、例えば、密封アンプル
またはバイアルに、水溶液または再構成するための凍結乾燥処方物として貯蔵さ
れる。凍結乾燥処方物の例として、１０ｍｌのバイアルに、滅菌濾過した１％（
ｗ／ｖ）ポリペプチド水溶液５ｍｌを充填し、そして得られる混合物を凍結乾燥
する。凍結乾燥したポリペプチドを注射用静菌水を用いて再構成して注入溶液を
調製する。
またはバイアルに、水溶液または再構成するための凍結乾燥処方物として貯蔵さ
れる。凍結乾燥処方物の例として、１０ｍｌのバイアルに、滅菌濾過した１％（
ｗ／ｖ）ポリペプチド水溶液５ｍｌを充填し、そして得られる混合物を凍結乾燥
する。凍結乾燥したポリペプチドを注射用静菌水を用いて再構成して注入溶液を
調製する。
【０６４５】
本発明はまた、本発明の薬学的組成物の１つ以上の成分を満たした一つ以上の
容器を備える薬学的パックまたはキットを提供する。医薬品または生物学的製品
の製造、使用または販売を規制する政府機関が定めた形式の通知が、このような
容器に付属し得、この通知は、ヒトへの投与に対する製造、使用または販売に関
する政府機関による承認を表す。さらに、本発明のポリペプチドを他の治療用化
合物と組み合わせて使用し得る。
容器を備える薬学的パックまたはキットを提供する。医薬品または生物学的製品
の製造、使用または販売を規制する政府機関が定めた形式の通知が、このような
容器に付属し得、この通知は、ヒトへの投与に対する製造、使用または販売に関
する政府機関による承認を表す。さらに、本発明のポリペプチドを他の治療用化
合物と組み合わせて使用し得る。
【０６４６】
（実施例１１：ポリペプチドのレベル低下を処置する方法）
個体におけるポリペプチドの標準の発現レベルまたは正常発現レベルの低下に
より引き起こされる状態は、本発明のポリペプチドを、好ましくは分泌形態およ
び／または可溶性形態において投与することにより処置し得ることが理解される
。従って、本発明はまた、このポリペプチドのレベルの増加が必要な個体の処置
方法を提供する。この方法は、このような個体に、このような個体でこのポリペ
プチドの活性レベルを増加させる量のポリペプチドを含む薬学的組成物を投与す
る工程を包含する。
より引き起こされる状態は、本発明のポリペプチドを、好ましくは分泌形態およ
び／または可溶性形態において投与することにより処置し得ることが理解される
。従って、本発明はまた、このポリペプチドのレベルの増加が必要な個体の処置
方法を提供する。この方法は、このような個体に、このような個体でこのポリペ
プチドの活性レベルを増加させる量のポリペプチドを含む薬学的組成物を投与す
る工程を包含する。
【０６４７】
例えば、ポリペプチドのレベルが低下した患者は、そのポリペプチドを、１日
用量０．１〜１００μｇ／ｋｇで６日続けて服用する。好ましくは、そのポリペ
プチドは分泌形態である。投与および処方物に基づく投薬計画の正確な詳細は、
実施例１０に提供されている。
用量０．１〜１００μｇ／ｋｇで６日続けて服用する。好ましくは、そのポリペ
プチドは分泌形態である。投与および処方物に基づく投薬計画の正確な詳細は、
実施例１０に提供されている。
【０６４８】
（実施例１２：ポリペプチドのレベル上昇を処置する方法）
アンチセンス技術を使用して本発明のポリペプチドの産生を阻害する。この技
術は、癌のような様々な病因に起因するポリペプチド（好ましくは、分泌形態）
のレベルを低下させる方法の１つの例である。
術は、癌のような様々な病因に起因するポリペプチド（好ましくは、分泌形態）
のレベルを低下させる方法の１つの例である。
【０６４９】
例えば、ポリペプチドのレベルが異常に上昇したと診断された患者に、アンチ
センスポリヌクレオチドを、０．５、１．０、１．５、２．０および３．０ｍｇ
／ｋｇ／日で２１日間、静脈内投与する。この処置に対して十分に寛容化された
場合は、７日間の休薬期間後に、この処置を繰り返す。このアンチセンスポリヌ
クレオチドの処方は、実施例１０に提供されている。
センスポリヌクレオチドを、０．５、１．０、１．５、２．０および３．０ｍｇ
／ｋｇ／日で２１日間、静脈内投与する。この処置に対して十分に寛容化された
場合は、７日間の休薬期間後に、この処置を繰り返す。このアンチセンスポリヌ
クレオチドの処方は、実施例１０に提供されている。
【０６５０】
（実施例１３：遺伝子治療を使用する処置方法−エキソビボ）
遺伝子治療の１つの方法は、ポリペプチドを発現し得る線維芽細胞を患者に移
植する。一般に、線維芽細胞は、皮膚生検により被験者から得られる。得られた
組織を組織培養培地中に配置し、小片に分割する。組織の小塊を組織培養フラス
コの湿潤表面に置き、約１０片を各フラスコに置く。このフラスコを倒置し、し
っかりと閉めた後、室温で一晩放置する。室温で２４時間後、フラスコを反転さ
せ、組織塊をフラスコの底に固定させたままにし、そして新鮮な培地（例えば、
１０％ＦＢＳ、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含有するＨａｍのＦ１２
培地）を添加する。次に、フラスコを３７℃で約１週間インキュベートする。
植する。一般に、線維芽細胞は、皮膚生検により被験者から得られる。得られた
組織を組織培養培地中に配置し、小片に分割する。組織の小塊を組織培養フラス
コの湿潤表面に置き、約１０片を各フラスコに置く。このフラスコを倒置し、し
っかりと閉めた後、室温で一晩放置する。室温で２４時間後、フラスコを反転さ
せ、組織塊をフラスコの底に固定させたままにし、そして新鮮な培地（例えば、
１０％ＦＢＳ、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含有するＨａｍのＦ１２
培地）を添加する。次に、フラスコを３７℃で約１週間インキュベートする。
【０６５１】
この時点で、新鮮な培地を添加し、次いで数日ごとに取り換える。さらに二週
間培養した後に、単層の線維芽細胞が出現する。この単層をトリプシン処理し、
さらに大きなフラスコにスケールアップする。
間培養した後に、単層の線維芽細胞が出現する。この単層をトリプシン処理し、
さらに大きなフラスコにスケールアップする。
【０６５２】
モロニーマウス肉腫ウイルスの長末端反復が隣接するｐＭＶ−７（Ｋｉｒｓｃ
ｈｍｅｉｅｒ，Ｐ．Ｔ．ら、ＤＮＡ，７：２１９−２５（１９８８））をＥｃｏ
ＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化した後、仔ウシ腸ホスファターゼで処理する。
線状ベクターをアガロースゲル上で分画し、そしてガラスビーズを使用して精製
する。
ｈｍｅｉｅｒ，Ｐ．Ｔ．ら、ＤＮＡ，７：２１９−２５（１９８８））をＥｃｏ
ＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化した後、仔ウシ腸ホスファターゼで処理する。
線状ベクターをアガロースゲル上で分画し、そしてガラスビーズを使用して精製
する。
【０６５３】
本発明のポリペプチドをコードするｃＤＮＡを、必要な場合、プライマーを用
いそして適切な制限部位および開始／終止コドンを有する、実施例１に記載のそ
れぞれ５’ 末端配列および３’末端配列に対応するＰＣＲプライマーを使用し
て増幅し得る。好ましくは、この５’プライマーはＥｃｏＲＩ部位を含み、そし
てこの３’プライマーはＨｉｎｄＩＩＩ部位を含む。等量の、モロニーマウス肉
腫ウイルスの線状骨格および増幅したＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩフラグメ
ントを、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼの存在下で一緒に加える。得られた混合物を、こ
の２つのフラグメントを連結するのに適した条件下で維持する。次に、連結混合
物を使用し、細菌ＨＢ１０１を形質転換する。次に、それを、カナマイシンを含
む寒天上にプレーティングし、ベクターが正確に挿入された目的の遺伝子を有す
ることを確認する。
いそして適切な制限部位および開始／終止コドンを有する、実施例１に記載のそ
れぞれ５’ 末端配列および３’末端配列に対応するＰＣＲプライマーを使用し
て増幅し得る。好ましくは、この５’プライマーはＥｃｏＲＩ部位を含み、そし
てこの３’プライマーはＨｉｎｄＩＩＩ部位を含む。等量の、モロニーマウス肉
腫ウイルスの線状骨格および増幅したＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩフラグメ
ントを、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼの存在下で一緒に加える。得られた混合物を、こ
の２つのフラグメントを連結するのに適した条件下で維持する。次に、連結混合
物を使用し、細菌ＨＢ１０１を形質転換する。次に、それを、カナマイシンを含
む寒天上にプレーティングし、ベクターが正確に挿入された目的の遺伝子を有す
ることを確認する。
【０６５４】
アンホトロピックｐＡ３１７またはＧＰ＋ａｍ１２パッケージング細胞を、１
０％仔ウシ血清（ＣＳ）、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含むダルベッ
コ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、組織培養でコンフルエントな密度まで増殖
させる。次に、その目的の遺伝子を含むＭＳＶベクターを培地に加え、そしてパ
ッケージング細胞をこのベクターで形質導入する。このとき、このパッケージン
グ細胞は、その遺伝子を含む感染性ウイルス粒子を産生する（ここで、このパッ
ケージング細胞をプロデューサー細胞という）。
０％仔ウシ血清（ＣＳ）、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含むダルベッ
コ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、組織培養でコンフルエントな密度まで増殖
させる。次に、その目的の遺伝子を含むＭＳＶベクターを培地に加え、そしてパ
ッケージング細胞をこのベクターで形質導入する。このとき、このパッケージン
グ細胞は、その遺伝子を含む感染性ウイルス粒子を産生する（ここで、このパッ
ケージング細胞をプロデューサー細胞という）。
【０６５５】
形質導入されたプロデューサー細胞に新鮮な培地を添加し、次いでこの培地を
１０ｃｍプレートのコンフルエントなプロデューサー細胞から採取する。感染性
ウイルス粒子を含む使用済み培地を、ミリポアーフィルターを通して濾過し、は
がれたプロデューサー細胞を除去した後、この培地を使用して、線維芽細胞を感
染させる。線維芽細胞のサブコンフルエントなプレートから培地を除去し、そし
てプロデューサー細胞からの培地で速やかに置き換える。この培地を除去し、そ
して新鮮な培地と置き換える。ウイルスの力価が高ければ、実質的にすべての線
維芽細胞が感染され、選択は必要ではない。力価が非常に低ければ、ｎｅｏまた
はｈｉｓのような選択マーカーを有するレトロウイルスベクターを使用すること
が必要である。一旦、線維芽細胞が効率的に感染したなら、その線維芽細胞を分
析し、タンパク質が産生されているか否かを決定する。
１０ｃｍプレートのコンフルエントなプロデューサー細胞から採取する。感染性
ウイルス粒子を含む使用済み培地を、ミリポアーフィルターを通して濾過し、は
がれたプロデューサー細胞を除去した後、この培地を使用して、線維芽細胞を感
染させる。線維芽細胞のサブコンフルエントなプレートから培地を除去し、そし
てプロデューサー細胞からの培地で速やかに置き換える。この培地を除去し、そ
して新鮮な培地と置き換える。ウイルスの力価が高ければ、実質的にすべての線
維芽細胞が感染され、選択は必要ではない。力価が非常に低ければ、ｎｅｏまた
はｈｉｓのような選択マーカーを有するレトロウイルスベクターを使用すること
が必要である。一旦、線維芽細胞が効率的に感染したなら、その線維芽細胞を分
析し、タンパク質が産生されているか否かを決定する。
【０６５６】
次に、操作された線維芽細胞を、単独で、またはサイトデックス３マイクロキ
ャリアビーズ上でコンフルエントに増殖させた後のいずれかで、宿主に移植する
。
ャリアビーズ上でコンフルエントに増殖させた後のいずれかで、宿主に移植する
。
【０６５７】
（実施例１４：内因性ＡＢＣトランスポート遺伝子を使用する遺伝子治療）
本発明に従う遺伝子治療の別の方法は、内因性ＡＢＣトランスポート遺伝子配
列を、例えば、米国特許番号５，６４１，６７０（１９９７年６月２４日発行）
；国際公開番号ＷＯ ９６／２９４１１（１９９６年９月２６日公開）；国際公
開番号ＷＯ ９４／１２６５０（１９９４年８月４日公開）；Ｋｏｌｌｅｒら、
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：８９３２〜８９３５（
１９８９）；およびＺｉｊｌｓｔｒａら、Ｎａｔｕｒｅ，３４２：４３５〜４３
８（１９８９）に記載されるように、相同組換えを介してプロモーターに作動可
能に結合する工程を包含する。この方法は、その標的細胞中に存在するが、その
細胞中では発現されないかまたは所望されるよりも低いレベルで発現される、遺
伝子の活性化を包含する。
列を、例えば、米国特許番号５，６４１，６７０（１９９７年６月２４日発行）
；国際公開番号ＷＯ ９６／２９４１１（１９９６年９月２６日公開）；国際公
開番号ＷＯ ９４／１２６５０（１９９４年８月４日公開）；Ｋｏｌｌｅｒら、
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：８９３２〜８９３５（
１９８９）；およびＺｉｊｌｓｔｒａら、Ｎａｔｕｒｅ，３４２：４３５〜４３
８（１９８９）に記載されるように、相同組換えを介してプロモーターに作動可
能に結合する工程を包含する。この方法は、その標的細胞中に存在するが、その
細胞中では発現されないかまたは所望されるよりも低いレベルで発現される、遺
伝子の活性化を包含する。
【０６５８】
プロモーターおよび標的化配列を含むポリヌクレオチド構築物を作製する。こ
の標的配列は、プロモーターに隣接する、内因性ＡＢＣトランスポート遺伝子の
５’非コード配列に相同である。この標的化配列は、ＡＢＣトランスポート遺伝
子の５’末端に十分に近く、その結果、このプロモーターは、相同組換えの際に
この内因性配列に作動可能に連結される。このプロモーターおよび標的化配列を
、ＰＣＲを使用して増幅し得る。好ましくは、この増幅したプロモーターは、５
’末端および３’末端上に異なる制限酵素部位を含む。好ましくは、第１の標的
化配列の３’末端は、増幅したプロモーターの５’末端と同じ制限酵素部位を含
み、そして第２の標的化配列の５’末端は、増幅したプロモーターの３’末端と
同じ制限部位を含む。
の標的配列は、プロモーターに隣接する、内因性ＡＢＣトランスポート遺伝子の
５’非コード配列に相同である。この標的化配列は、ＡＢＣトランスポート遺伝
子の５’末端に十分に近く、その結果、このプロモーターは、相同組換えの際に
この内因性配列に作動可能に連結される。このプロモーターおよび標的化配列を
、ＰＣＲを使用して増幅し得る。好ましくは、この増幅したプロモーターは、５
’末端および３’末端上に異なる制限酵素部位を含む。好ましくは、第１の標的
化配列の３’末端は、増幅したプロモーターの５’末端と同じ制限酵素部位を含
み、そして第２の標的化配列の５’末端は、増幅したプロモーターの３’末端と
同じ制限部位を含む。
【０６５９】
この増幅したプロモーターおよび増幅した標的化配列を、適切な制限酵素で消
化し、続いてウシ腸ホスファターゼで処理する。消化したプロモーターおよび消
化した標的化配列を、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼの存在下でともに加える。生じた混
合物を、これら２つのフラグメントの連結に適切な条件下で維持する。この構築
物をアガロースゲル上でサイズ分画し、次いでフェノール抽出およびエタノール
沈殿により精製する。
化し、続いてウシ腸ホスファターゼで処理する。消化したプロモーターおよび消
化した標的化配列を、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼの存在下でともに加える。生じた混
合物を、これら２つのフラグメントの連結に適切な条件下で維持する。この構築
物をアガロースゲル上でサイズ分画し、次いでフェノール抽出およびエタノール
沈殿により精製する。
【０６６０】
この実施例において、このポリヌクレオチド構築物を、エレクトロポレーショ
ンを介して裸のポリヌクレオチドとして投与する。しかし、このポリヌクレオチ
ド構築物はまた、トランスフェクション促進剤（例えば、リポソーム、ウイルス
配列、ウイルス粒子、沈殿剤など）とともに投与され得る。送達のこのような方
法は、当該分野で公知である。
ンを介して裸のポリヌクレオチドとして投与する。しかし、このポリヌクレオチ
ド構築物はまた、トランスフェクション促進剤（例えば、リポソーム、ウイルス
配列、ウイルス粒子、沈殿剤など）とともに投与され得る。送達のこのような方
法は、当該分野で公知である。
【０６６１】
一旦、細胞をトランスフェクトすると、相同組換えが生じて、このプロモータ
ーがこの内因性ＡＢＣトランスポート遺伝子配列に作動可能に連結される。これ
は、この細胞中におけるＡＢＣトランスポートの発現を生じる。発現は、免疫学
的染色または当該分野で公知の他の任意の方法により、検出され得る。
ーがこの内因性ＡＢＣトランスポート遺伝子配列に作動可能に連結される。これ
は、この細胞中におけるＡＢＣトランスポートの発現を生じる。発現は、免疫学
的染色または当該分野で公知の他の任意の方法により、検出され得る。
【０６６２】
線維芽細胞を、皮膚生検により被験者から得る。得られた組織を、ＤＭＥＭ＋
１０％ウシ胎仔血清中に配置する。対数増殖期または定常期初期の線維芽細胞を
、トリプシン処理し、そしてプラスチックの表面から栄養培地でリンスする。細
胞懸濁液のアリコートを、計数のために取り出し、そして残りの細胞を遠心分離
に供する。上清を吸引し、そしてペレットを５ｍｌのエレクトロポレーション緩
衝液（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．３、１３７ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ Ｋ
Ｃｌ、０．７ｍＭ Ｎａ2ＨＰＯ4、６ｍＭデキストロース）に再懸濁する。この
細胞を再遠心分離し、上清を吸引し、そして細胞をアセチル化ウシ血清アルブミ
ン１ｍｇ／ｍｌを含むエレクトロポレーション緩衝液に再懸濁する。この最終細
胞懸濁物は、約３×１０6細胞／ｍｌを含む。エレクトロポレーションを、再懸
濁直後に実施すべきである。
１０％ウシ胎仔血清中に配置する。対数増殖期または定常期初期の線維芽細胞を
、トリプシン処理し、そしてプラスチックの表面から栄養培地でリンスする。細
胞懸濁液のアリコートを、計数のために取り出し、そして残りの細胞を遠心分離
に供する。上清を吸引し、そしてペレットを５ｍｌのエレクトロポレーション緩
衝液（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．３、１３７ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ Ｋ
Ｃｌ、０．７ｍＭ Ｎａ2ＨＰＯ4、６ｍＭデキストロース）に再懸濁する。この
細胞を再遠心分離し、上清を吸引し、そして細胞をアセチル化ウシ血清アルブミ
ン１ｍｇ／ｍｌを含むエレクトロポレーション緩衝液に再懸濁する。この最終細
胞懸濁物は、約３×１０6細胞／ｍｌを含む。エレクトロポレーションを、再懸
濁直後に実施すべきである。
【０６６３】
プラスミドＤＮＡを、標準的技術に従って調製する。例えば、ＡＢＣトランス
ポート遺伝子座に標的化するためのプラスミドを構築するために、プラスミドｐ
ＵＣ１８（ＭＢＩ Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ、Ａｍｈｅｒｓｔ、ＮＹ）をＨｉｎｄＩ
ＩＩで消化する。ＣＭＶプロモーターを、５’末端にＸｂａＩ部位および３’末
端にＢａｍＨＩ部位を備えてＰＣＲにより増幅する。２つのＡＢＣトランスポー
ト非コード遺伝子配列をＰＣＲを介して増幅する：一方のＡＢＣトランスポート
非コード配列（ＡＢＣトランスポートフラグメント１）を、５’末端にＨｉｎｄ
ＩＩＩ部位および３’末端にＸｂａ部位を備えて増幅する；他方のＡＢＣトラン
スポート非コード配列（ＡＢＣトランスポートフラグメント２）を、５’末端に
ＢａｍＨＩ部位および３’末端にＨｉｎｄＩＩＩ部位を備えて増幅する。このＣ
ＭＶプロモーターおよびＡＢＣトランスポートフラグメントを、適切な酵素（Ｃ
ＭＶプロモーター−ＸｂａＩおよびＢａｍＨＩ；ＡＢＣトランスポートフラグメ
ント１−ＸｂａＩ；ＡＢＣトランスポートフラグメント２−ＢａｍＨＩ）で消化
し、そしてともに連結する。生じた連結生成物をＨｉｎｄＩＩＩで消化し、そし
てＨｉｎｄＩＩＩで消化したｐＵＣ１８プラスミドと連結する。
ポート遺伝子座に標的化するためのプラスミドを構築するために、プラスミドｐ
ＵＣ１８（ＭＢＩ Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ、Ａｍｈｅｒｓｔ、ＮＹ）をＨｉｎｄＩ
ＩＩで消化する。ＣＭＶプロモーターを、５’末端にＸｂａＩ部位および３’末
端にＢａｍＨＩ部位を備えてＰＣＲにより増幅する。２つのＡＢＣトランスポー
ト非コード遺伝子配列をＰＣＲを介して増幅する：一方のＡＢＣトランスポート
非コード配列（ＡＢＣトランスポートフラグメント１）を、５’末端にＨｉｎｄ
ＩＩＩ部位および３’末端にＸｂａ部位を備えて増幅する；他方のＡＢＣトラン
スポート非コード配列（ＡＢＣトランスポートフラグメント２）を、５’末端に
ＢａｍＨＩ部位および３’末端にＨｉｎｄＩＩＩ部位を備えて増幅する。このＣ
ＭＶプロモーターおよびＡＢＣトランスポートフラグメントを、適切な酵素（Ｃ
ＭＶプロモーター−ＸｂａＩおよびＢａｍＨＩ；ＡＢＣトランスポートフラグメ
ント１−ＸｂａＩ；ＡＢＣトランスポートフラグメント２−ＢａｍＨＩ）で消化
し、そしてともに連結する。生じた連結生成物をＨｉｎｄＩＩＩで消化し、そし
てＨｉｎｄＩＩＩで消化したｐＵＣ１８プラスミドと連結する。
【０６６４】
プラスミドＤＮＡを、０．４ｃｍの電極ギャップを備える滅菌キュベット（Ｂ
ｉｏ−Ｒａｄ）に添加する。最終ＤＮＡ濃度は、一般的に、少なくとも１２０μ
ｇ／ｍｌである。次いで、この細胞懸濁液の０．５ｍｌ（約１．５×１０6細胞
を含む）をこのキュベットに添加し、そしてこの細胞懸濁液およびＤＮＡ溶液を
、穏やかに混合する。エレクトロポレーションを、Ｇｅｎｅ−Ｐｕｌｓｅｒ装置
（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いて実施する。キャパシタンスおよび電圧を、それぞれ
、９６０μＦおよび２５０〜３００Ｖに設定する。電圧が増加すると、細胞の生
存が減少するが、導入されたＤＮＡをそのゲノム中に安定に組込む生存細胞の割
合が劇的に増加する。これらのパラメーターを与えると、パルス時間約１４〜２
０ｍＳｅｃが観察されるはずである。
ｉｏ−Ｒａｄ）に添加する。最終ＤＮＡ濃度は、一般的に、少なくとも１２０μ
ｇ／ｍｌである。次いで、この細胞懸濁液の０．５ｍｌ（約１．５×１０6細胞
を含む）をこのキュベットに添加し、そしてこの細胞懸濁液およびＤＮＡ溶液を
、穏やかに混合する。エレクトロポレーションを、Ｇｅｎｅ−Ｐｕｌｓｅｒ装置
（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いて実施する。キャパシタンスおよび電圧を、それぞれ
、９６０μＦおよび２５０〜３００Ｖに設定する。電圧が増加すると、細胞の生
存が減少するが、導入されたＤＮＡをそのゲノム中に安定に組込む生存細胞の割
合が劇的に増加する。これらのパラメーターを与えると、パルス時間約１４〜２
０ｍＳｅｃが観察されるはずである。
【０６６５】
エレクトロポレーションした細胞を、室温で約５分間維持し、次いで、このキ
ュベットの中身を、滅菌した移動ピペットを用いて穏やかに取り出す。この細胞
を、１０ｃｍのディッシュ中の、予め温めた栄養培地（１５％ウシ血清を含むＤ
ＭＥＭ）１０ｍｌに直接加え、そして３７℃でインキュベートする。翌日、この
培地を吸引し、そして１０ｍｌの新鮮な培地で置換し、そしてさらに１６〜２４
時間インキュベートする。
ュベットの中身を、滅菌した移動ピペットを用いて穏やかに取り出す。この細胞
を、１０ｃｍのディッシュ中の、予め温めた栄養培地（１５％ウシ血清を含むＤ
ＭＥＭ）１０ｍｌに直接加え、そして３７℃でインキュベートする。翌日、この
培地を吸引し、そして１０ｍｌの新鮮な培地で置換し、そしてさらに１６〜２４
時間インキュベートする。
【０６６６】
次いで、操作された線維芽細胞を、宿主中に、単独か、またはサイトデックス
（ｃｙｔｏｄｅｘ）３マイクロキャリア（ｍｉｃｒｏｃａｒｒｉｅｒ）ビーズ上
でコンフルエントになるまで増殖させた後かのいずれかで、注入する。ここで、
この線維芽細胞は、タンパク質産物を生成する。次いで、この線維芽細胞を、上
記のような患者に導入し得る。
（ｃｙｔｏｄｅｘ）３マイクロキャリア（ｍｉｃｒｏｃａｒｒｉｅｒ）ビーズ上
でコンフルエントになるまで増殖させた後かのいずれかで、注入する。ここで、
この線維芽細胞は、タンパク質産物を生成する。次いで、この線維芽細胞を、上
記のような患者に導入し得る。
【０６６７】
（実施例１５：遺伝子治療を使用する処置方法−インビボ）
本発明の別の局面は、障害、疾患、および状態を処置するためにインビボ遺伝
子治療方法を使用することである。この遺伝子治療法は、ＡＢＣトランスポート
ポリペプチドの発現を増大または減少させるための、動物への裸の核酸（ＤＮＡ
、ＲＮＡ、およびアンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡ）ＡＢＣトランスポート配列
の導入に関する。ＡＢＣトランスポートポリヌクレオチドは、プロモーター、ま
たは標的組織によるＡＢＣトランスポートポリペプチドの発現に必要な任意の他
の遺伝子エレメントに、作動可能に連結され得る。このような遺伝子治療および
送達の技術および方法は、当該分野で公知であり、例えば、ＷＯ９０／１１０９
２、ＷＯ９８／１１７７９；米国特許第５６９３６２２号、同第５７０５１５１
号、同第５５８０８５９号；Ｔａｂａｔａら、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．
３５（３）：４７０−４７９（１９９７）；Ｃｈａｏら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．
Ｒｅｓ．３５（６）：５１７−５２２（１９９７）；Ｗｏｌｆｆ、Ｎｅｕｒｏｍ
ｕｓｃｕｌ．Ｄｉｓｏｒｄ．７（５）：３１４−３１８（１９９７）、Ｓｃｈｗ
ａｒｔｚら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ． ３（５）：４０５−４１１（１９９６）；
Ｔｓｕｒｕｍｉ Ｙら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ９４（１２）：３２８１−３
２９０（１９９６）（本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。
子治療方法を使用することである。この遺伝子治療法は、ＡＢＣトランスポート
ポリペプチドの発現を増大または減少させるための、動物への裸の核酸（ＤＮＡ
、ＲＮＡ、およびアンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡ）ＡＢＣトランスポート配列
の導入に関する。ＡＢＣトランスポートポリヌクレオチドは、プロモーター、ま
たは標的組織によるＡＢＣトランスポートポリペプチドの発現に必要な任意の他
の遺伝子エレメントに、作動可能に連結され得る。このような遺伝子治療および
送達の技術および方法は、当該分野で公知であり、例えば、ＷＯ９０／１１０９
２、ＷＯ９８／１１７７９；米国特許第５６９３６２２号、同第５７０５１５１
号、同第５５８０８５９号；Ｔａｂａｔａら、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．
３５（３）：４７０−４７９（１９９７）；Ｃｈａｏら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．
Ｒｅｓ．３５（６）：５１７−５２２（１９９７）；Ｗｏｌｆｆ、Ｎｅｕｒｏｍ
ｕｓｃｕｌ．Ｄｉｓｏｒｄ．７（５）：３１４−３１８（１９９７）、Ｓｃｈｗ
ａｒｔｚら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ． ３（５）：４０５−４１１（１９９６）；
Ｔｓｕｒｕｍｉ Ｙら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ９４（１２）：３２８１−３
２９０（１９９６）（本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。
【０６６８】
ＡＢＣトランスポートポリヌクレオチド構築物は、注入可能な物質を動物の細
胞に送達する任意の方法（例えば、組織（心臓、筋肉、皮膚、肺、肝臓、腸など
）の間隙空間への注入）によって送達され得る。ＡＢＣトランスポートポリヌク
レオチド構築物は、薬学的に受容可能な液体または水性キャリア中で送達され得
る。
胞に送達する任意の方法（例えば、組織（心臓、筋肉、皮膚、肺、肝臓、腸など
）の間隙空間への注入）によって送達され得る。ＡＢＣトランスポートポリヌク
レオチド構築物は、薬学的に受容可能な液体または水性キャリア中で送達され得
る。
【０６６９】
用語「裸の」ポリヌクレオチド、ＤＮＡまたはＲＮＡは、細胞への侵入を補助
、促進、または容易にするように作用するいかなる送達ビヒクル（ウイルス配列
、ウイルス粒子、リポソーム処方物、リポフェクチン、または沈澱剤などを含む
）も含まない配列をいう。しかし、ＡＢＣトランスポートポリヌクレオチドはま
た、当業者に周知の方法によって調製され得るリポソーム処方物（例えば、Ｆｅ
ｌｇｎｅｒら（１９９５）Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７７２：１２６−
１３９（１９９５）およびＡｂｄａｌｌａｈらＢｉｏｌ．Ｃｅｌｌ ８５（１）
：１−７（１９９５）で教示されたもの）中で送達され得る。
、促進、または容易にするように作用するいかなる送達ビヒクル（ウイルス配列
、ウイルス粒子、リポソーム処方物、リポフェクチン、または沈澱剤などを含む
）も含まない配列をいう。しかし、ＡＢＣトランスポートポリヌクレオチドはま
た、当業者に周知の方法によって調製され得るリポソーム処方物（例えば、Ｆｅ
ｌｇｎｅｒら（１９９５）Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７７２：１２６−
１３９（１９９５）およびＡｂｄａｌｌａｈらＢｉｏｌ．Ｃｅｌｌ ８５（１）
：１−７（１９９５）で教示されたもの）中で送達され得る。
【０６７０】
この遺伝子治療方法において使用されるＡＢＣトランスポートポリヌクレオチ
ドベクター構築物は、好ましくは、宿主ゲノムに組み込まれず、複製を可能にす
る配列も含まない構築物である。当業者に公知の任意の強力なプロモーターが、
ＤＮＡの発現を駆動するために用いられ得る。他の遺伝子治療技術とは異なり、
裸の核酸配列を標的細胞に導入する１つの主要な利点は、その細胞におけるポリ
ヌクレオチド合成の一過性の性質である。研究によって、非複製ＤＮＡ配列が細
胞に導入されて、６ヶ月までの間の期間、所望のポリペプチドの産生を提供し得
ることが示された。
ドベクター構築物は、好ましくは、宿主ゲノムに組み込まれず、複製を可能にす
る配列も含まない構築物である。当業者に公知の任意の強力なプロモーターが、
ＤＮＡの発現を駆動するために用いられ得る。他の遺伝子治療技術とは異なり、
裸の核酸配列を標的細胞に導入する１つの主要な利点は、その細胞におけるポリ
ヌクレオチド合成の一過性の性質である。研究によって、非複製ＤＮＡ配列が細
胞に導入されて、６ヶ月までの間の期間、所望のポリペプチドの産生を提供し得
ることが示された。
【０６７１】
このポリヌクレオチド構築物は、動物内の組織（筋肉、皮膚、脳、肺、肝臓、
脾臓、骨髄、胸腺、心臓、リンパ、血液、骨、軟骨、膵臓、腎臓、胆嚢、胃、腸
、精巣、卵巣、子宮、直腸、神経系、眼、腺、および結合組織を包含する）の間
隙空間に送達され得る。この組織の間隙空間は、細胞間液、ムコ多糖基質（器官
組織の細網線維、血管または腔（ｃｈａｍｂｅｒ）の壁における弾性線維、線維
性組織のコラーゲン線維に間にある）、あるいは結合組織鞘性筋肉細胞内または
骨の裂孔中の同じ基質を包含する。これは、同様に、循環の血漿およびリンパチ
ャンネルのリンパ液により占められた空間である。筋肉組織の間隙空間への送達
は、以下に考察する理由のために好ましい。それらは、これらの細胞を含む組織
への注入によって、好都合に送達され得る。それらは、好ましくは、分化した持
続性の非分裂細胞に送達され、そしてその細胞において発現されるが、送達およ
び発現は、非分化細胞または完全には分化していない細胞（例えば、血液の幹細
胞または皮膚線維芽細胞）において達成され得る。インビボで、筋肉細胞は、ポ
リヌクレオチドを取り込み、そして発現するそれらの能力において、特に適格で
ある。
脾臓、骨髄、胸腺、心臓、リンパ、血液、骨、軟骨、膵臓、腎臓、胆嚢、胃、腸
、精巣、卵巣、子宮、直腸、神経系、眼、腺、および結合組織を包含する）の間
隙空間に送達され得る。この組織の間隙空間は、細胞間液、ムコ多糖基質（器官
組織の細網線維、血管または腔（ｃｈａｍｂｅｒ）の壁における弾性線維、線維
性組織のコラーゲン線維に間にある）、あるいは結合組織鞘性筋肉細胞内または
骨の裂孔中の同じ基質を包含する。これは、同様に、循環の血漿およびリンパチ
ャンネルのリンパ液により占められた空間である。筋肉組織の間隙空間への送達
は、以下に考察する理由のために好ましい。それらは、これらの細胞を含む組織
への注入によって、好都合に送達され得る。それらは、好ましくは、分化した持
続性の非分裂細胞に送達され、そしてその細胞において発現されるが、送達およ
び発現は、非分化細胞または完全には分化していない細胞（例えば、血液の幹細
胞または皮膚線維芽細胞）において達成され得る。インビボで、筋肉細胞は、ポ
リヌクレオチドを取り込み、そして発現するそれらの能力において、特に適格で
ある。
【０６７２】
裸のＡＢＣトランスポートポリヌクレオチド注入のために、ＤＮＡまたはＲＮ
Ａの有効投薬量は、約０．０５ｇ／ｋｇ体重から約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲に
ある。好ましくは、この投薬量は、約０．００５ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋ
ｇであり、そしてより好ましくは、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇで
ある。もちろん、当業者が認識するように、この投薬量は、注入の組織部位に従
って変化する。核酸配列の適切かつ有効な投薬量は、当業者によって容易に決定
され得、そして処置される状態および投与経路に依存し得る。好ましい投与経路
は、組織の間隙空間への非経口注入経路によってである。しかし、他の非経口経
路もまた用いられ得、これには、例えば、特に肺または気管支組織、咽喉、また
は鼻の粘膜への送達のためのエアロゾル処方物の吸入が挙げられる。さらに、裸
のＡＢＣトランスポートポリヌクレオチド構築物が、血管形成術の間に、この手
順において用いられるカテーテルによって動脈に送達され得る。
Ａの有効投薬量は、約０．０５ｇ／ｋｇ体重から約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲に
ある。好ましくは、この投薬量は、約０．００５ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋ
ｇであり、そしてより好ましくは、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇで
ある。もちろん、当業者が認識するように、この投薬量は、注入の組織部位に従
って変化する。核酸配列の適切かつ有効な投薬量は、当業者によって容易に決定
され得、そして処置される状態および投与経路に依存し得る。好ましい投与経路
は、組織の間隙空間への非経口注入経路によってである。しかし、他の非経口経
路もまた用いられ得、これには、例えば、特に肺または気管支組織、咽喉、また
は鼻の粘膜への送達のためのエアロゾル処方物の吸入が挙げられる。さらに、裸
のＡＢＣトランスポートポリヌクレオチド構築物が、血管形成術の間に、この手
順において用いられるカテーテルによって動脈に送達され得る。
【０６７３】
インビボでの筋肉における注入ＡＢＣトランスポートポリヌクレオチドの用量
応答効果を、以下のようにして決定する。ＡＢＣトランスポートポリペプチドを
コードするｍＲＮＡの生成のための適切なＡＢＣトランスポート鋳型ＤＮＡを、
標準的な組換えＤＮＡ方法論に従って調製する。ＡＢＣトランスポート鋳型ＤＮ
Ａ（これは環状または線状のいずれかであり得る）を裸のＤＮＡとして使用する
か、またはリポソームと複合体化するかのいずれかである。次いで、マウスの四
頭筋に、種々の量の鋳型ＤＮＡを注入する。
応答効果を、以下のようにして決定する。ＡＢＣトランスポートポリペプチドを
コードするｍＲＮＡの生成のための適切なＡＢＣトランスポート鋳型ＤＮＡを、
標準的な組換えＤＮＡ方法論に従って調製する。ＡＢＣトランスポート鋳型ＤＮ
Ａ（これは環状または線状のいずれかであり得る）を裸のＤＮＡとして使用する
か、またはリポソームと複合体化するかのいずれかである。次いで、マウスの四
頭筋に、種々の量の鋳型ＤＮＡを注入する。
【０６７４】
５〜６週齢の雌性および雄性のＢａｌｂ／Ｃマウスに、０．３ｍｌの２．５％
Ａｖｅｒｔｉｎを腹腔内注射することにより麻酔する。１．５ｃｍの切開を大腿
前部で行い、そして四頭筋を直接可視化する。ＡＢＣトランスポート鋳型ＤＮＡ
を、０．１ｍｌのキャリアに入れて、１ｃｃ注射器で２７ゲージ針を通して１分
間にわたって、筋肉の遠位挿入部位から約０．５ｃｍのところで膝に、約０．２
ｃｍの深さで注入する。縫合を、将来の位置決定のために注入部位の上で行い、
そしてその皮膚をステンレス鋼クリップで閉じる。
Ａｖｅｒｔｉｎを腹腔内注射することにより麻酔する。１．５ｃｍの切開を大腿
前部で行い、そして四頭筋を直接可視化する。ＡＢＣトランスポート鋳型ＤＮＡ
を、０．１ｍｌのキャリアに入れて、１ｃｃ注射器で２７ゲージ針を通して１分
間にわたって、筋肉の遠位挿入部位から約０．５ｃｍのところで膝に、約０．２
ｃｍの深さで注入する。縫合を、将来の位置決定のために注入部位の上で行い、
そしてその皮膚をステンレス鋼クリップで閉じる。
【０６７５】
適切なインキュベーション時間（例えば、７日）後、筋肉抽出物を、四頭全体
を切り出すことによって調製する。個々の四頭筋の５枚毎の１５μｍ切片を、Ａ
ＢＣトランスポートタンパク質発現について組織化学的に染色する。ＡＢＣトラ
ンスポートタンパク質発現についてのタイムコースを、異なるマウスからの四頭
を異なる時間で採取すること以外は、同様な様式で行い得る。注入後の筋肉中の
ＡＢＣトランスポートＤＮＡの持続性を、注入したマウスおよびコントロールマ
ウスからの全細胞性ＤＮＡおよびＨＩＲＴ上清を調製した後、サザンブロット分
析によって決定し得る。マウスにおける上記実験の結果を、裸のＡＢＣトランス
ポートＤＮＡを用いて、ヒトおよび他の動物において適切な投薬量および他の処
置パラメーターを外挿するために使用し得る。
を切り出すことによって調製する。個々の四頭筋の５枚毎の１５μｍ切片を、Ａ
ＢＣトランスポートタンパク質発現について組織化学的に染色する。ＡＢＣトラ
ンスポートタンパク質発現についてのタイムコースを、異なるマウスからの四頭
を異なる時間で採取すること以外は、同様な様式で行い得る。注入後の筋肉中の
ＡＢＣトランスポートＤＮＡの持続性を、注入したマウスおよびコントロールマ
ウスからの全細胞性ＤＮＡおよびＨＩＲＴ上清を調製した後、サザンブロット分
析によって決定し得る。マウスにおける上記実験の結果を、裸のＡＢＣトランス
ポートＤＮＡを用いて、ヒトおよび他の動物において適切な投薬量および他の処
置パラメーターを外挿するために使用し得る。
【０６７６】
（実施例１６：抗体の産生）
（（ａ）ハイブリドーマ技術）
本発明の抗体は、種々の方法によって調製され得る。（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒ
ｏｔｏｃｏｌｓ，第２章を参照のこと）。このような方法の１つの例として、Ａ
ＢＣトランスポートポリペプチドを発現する細胞は、ポリクローナル抗体を含む
血清の産生を誘導するために動物に投与される。好ましい方法において、ＡＢＣ
トランスポートポリペプチドの調製物が調製され、そして精製されて、天然の夾
雑物を実質的に含まないようにされる。次いで、より大きな比活性のポリクロー
ナル抗血清を生成するために、このような調製物は、動物に導入される。
ｏｔｏｃｏｌｓ，第２章を参照のこと）。このような方法の１つの例として、Ａ
ＢＣトランスポートポリペプチドを発現する細胞は、ポリクローナル抗体を含む
血清の産生を誘導するために動物に投与される。好ましい方法において、ＡＢＣ
トランスポートポリペプチドの調製物が調製され、そして精製されて、天然の夾
雑物を実質的に含まないようにされる。次いで、より大きな比活性のポリクロー
ナル抗血清を生成するために、このような調製物は、動物に導入される。
【０６７７】
ＡＢＣトランスポートポリペプチドに特異的なモノクローナル抗体は、ハイブ
リドーマ技術を使用して調製される（Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ２５６：
４９５（１９７５）；Ｋｏｈｌｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１
１（１９７６）；Ｋｏｈｌｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：２９２（
１９７６）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄ
ｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ
．Ｙ．、５６３−６８１頁（１９８１））。一般に、動物（好ましくはマウス）
は、ＡＢＣトランスポートポリペプチドで、またはより好ましくは分泌ＡＢＣト
ランスポートポリペプチド発現細胞で免疫される。このようなポリペプチド発現
細胞は、任意の適切な組織培養培地において培養される；好ましくは１０％ウシ
胎仔血清（約５６℃で非働化した）を補充し、そして約１０ｇ／ｌの非必須アミ
ノ酸、約１，０００Ｕ／ｍｌのペニシリン、および約１００μｇ／ｍｌのストレ
プトマイシンを補充したＥａｒｌｅ改変イーグル培地において培養される。
リドーマ技術を使用して調製される（Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ２５６：
４９５（１９７５）；Ｋｏｈｌｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１
１（１９７６）；Ｋｏｈｌｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：２９２（
１９７６）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄ
ｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ
．Ｙ．、５６３−６８１頁（１９８１））。一般に、動物（好ましくはマウス）
は、ＡＢＣトランスポートポリペプチドで、またはより好ましくは分泌ＡＢＣト
ランスポートポリペプチド発現細胞で免疫される。このようなポリペプチド発現
細胞は、任意の適切な組織培養培地において培養される；好ましくは１０％ウシ
胎仔血清（約５６℃で非働化した）を補充し、そして約１０ｇ／ｌの非必須アミ
ノ酸、約１，０００Ｕ／ｍｌのペニシリン、および約１００μｇ／ｍｌのストレ
プトマイシンを補充したＥａｒｌｅ改変イーグル培地において培養される。
【０６７８】
このようなマウスの脾細胞は抽出され、そして適切な骨髄腫細胞株と融合され
る。任意の適切な骨髄腫細胞株は、本発明に従って用いられ得る；しかし、ＡＴ
ＣＣから入手可能な親骨髄腫細胞株（ＳＰ２Ｏ）を用いることが好ましい。融合
後、得られるハイブリドーマ細胞を、ＨＡＴ培地において選択的に維持し、次い
でＷａｎｄｓら（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ８０：２２５−２３２（
１９８１））により記載されるように限界希釈によってクローニングする。次い
で、このような選択を通して得られるハイブリドーマ細胞を、ＡＢＣトランスポ
ートポリペプチドに結合し得る抗体を分泌するクローンを同定するためにアッセ
イする。
る。任意の適切な骨髄腫細胞株は、本発明に従って用いられ得る；しかし、ＡＴ
ＣＣから入手可能な親骨髄腫細胞株（ＳＰ２Ｏ）を用いることが好ましい。融合
後、得られるハイブリドーマ細胞を、ＨＡＴ培地において選択的に維持し、次い
でＷａｎｄｓら（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ８０：２２５−２３２（
１９８１））により記載されるように限界希釈によってクローニングする。次い
で、このような選択を通して得られるハイブリドーマ細胞を、ＡＢＣトランスポ
ートポリペプチドに結合し得る抗体を分泌するクローンを同定するためにアッセ
イする。
【０６７９】
あるいは、ＡＢＣトランスポートポリペプチドに結合し得るさらなる抗体を、
抗イディオタイプ抗体を使用して２段階工程の手順において生成し得る。このよ
うな方法は、抗体それ自体が抗原であり、それゆえ第二の抗体に結合する抗体を
得ることが可能であるという事実を利用する。この方法に従って、タンパク質特
異的抗体を使用して、動物（好ましくは、マウス）を免疫する。次いで、このよ
うな動物の脾細胞を使用して、ハイブリドーマ細胞を産生する。そして、このハ
イブリドーマ細胞を、抗体のＡＢＣトランスポートタンパク質に特異的な抗体に
結合する能力がＡＢＣトランスポートポリペプチドによってブロックされ得る抗
体を産生するクローンを同定するためにスクリーニングする。このような抗体は
、ＡＢＣトランスポートタンパク質に特異的な抗体に対する抗イディオタイプ抗
体を含み、そして動物を免疫してさらなるＡＢＣトランスポートタンパク質に特
異的な抗体の形成を誘導するために使用される。
抗イディオタイプ抗体を使用して２段階工程の手順において生成し得る。このよ
うな方法は、抗体それ自体が抗原であり、それゆえ第二の抗体に結合する抗体を
得ることが可能であるという事実を利用する。この方法に従って、タンパク質特
異的抗体を使用して、動物（好ましくは、マウス）を免疫する。次いで、このよ
うな動物の脾細胞を使用して、ハイブリドーマ細胞を産生する。そして、このハ
イブリドーマ細胞を、抗体のＡＢＣトランスポートタンパク質に特異的な抗体に
結合する能力がＡＢＣトランスポートポリペプチドによってブロックされ得る抗
体を産生するクローンを同定するためにスクリーニングする。このような抗体は
、ＡＢＣトランスポートタンパク質に特異的な抗体に対する抗イディオタイプ抗
体を含み、そして動物を免疫してさらなるＡＢＣトランスポートタンパク質に特
異的な抗体の形成を誘導するために使用される。
【０６８０】
ヒトにおける抗体のインビボ使用のために、抗体は、「ヒト化」される。この
ような抗体は、上記のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞に由来
する遺伝的構築物を使用することによって産生され得る。キメラ抗体およびヒト
化抗体を産生するための方法は、当該分野で公知であり、そして本明細書中に考
察される。（総説については、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１
２０２（１９８５）；Ｏｉら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４（１９
８６）；Ｃａｂｉｌｌｙら、米国特許第４，８１６，５６７号；Ｔａｎｉｇｕｃ
ｈｉら、ＥＰ １７１４９６；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、ＥＰ １７３４９４；Ｎｅ
ｕｂｅｒｇｅｒら、ＷＯ ８６０１５３３；Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、ＷＯ ８７０
２６７１；Ｂｏｕｌｉａｎｎｅら、Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６４３（１９８４）
；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３１４：２６８（１９８５）を参照の
こと）。
ような抗体は、上記のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞に由来
する遺伝的構築物を使用することによって産生され得る。キメラ抗体およびヒト
化抗体を産生するための方法は、当該分野で公知であり、そして本明細書中に考
察される。（総説については、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１
２０２（１９８５）；Ｏｉら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４（１９
８６）；Ｃａｂｉｌｌｙら、米国特許第４，８１６，５６７号；Ｔａｎｉｇｕｃ
ｈｉら、ＥＰ １７１４９６；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、ＥＰ １７３４９４；Ｎｅ
ｕｂｅｒｇｅｒら、ＷＯ ８６０１５３３；Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、ＷＯ ８７０
２６７１；Ｂｏｕｌｉａｎｎｅら、Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６４３（１９８４）
；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３１４：２６８（１９８５）を参照の
こと）。
【０６８１】
（（ｂ）ｓｃＦｖｓのライブラリーからのＡＢＣトランスポートポリペプチド
に対して指向される抗体フラグメントの単離） ヒトＰＢＬから単離した天然に存在するＶ遺伝子を、ドナーが曝され得たかま
たは曝され得なかったＡＢＣトランスポートポリペプチドに対する反応性を含む
抗体フラグメントのライブラリーに構築する（例えば、米国特許第５，８８５，
７９３号（その全体が参考として本明細書に援用される）を参照のこと）。
に対して指向される抗体フラグメントの単離） ヒトＰＢＬから単離した天然に存在するＶ遺伝子を、ドナーが曝され得たかま
たは曝され得なかったＡＢＣトランスポートポリペプチドに対する反応性を含む
抗体フラグメントのライブラリーに構築する（例えば、米国特許第５，８８５，
７９３号（その全体が参考として本明細書に援用される）を参照のこと）。
【０６８２】
（ライブラリーのレスキュー）
ＰＣＴ公開ＷＯ ９２／０１０４７に記載のように、ヒトＰＢＬのＲＮＡから
ｓｃＦｖｓのライブラリーを構築する。抗体フラグメントを提示するファージを
レスキューするため、ファージミドを保有する約１０9個のＥ．ｃｏｌｉを用い
て、５０ｍｌの２×ＴＹ（１％グルコースおよび１００μｇ／ｍｌのアンピシリ
ンを含有する）（２×ＴＹ−ＡＭＰ−ＧＬＵ）を接種し、そして振盪しながら０
．８のＯ．Ｄ．まで増殖させる。この培養物の５ｍｌを用いて５０ｍｌの２×Ｔ
Ｙ−ＡＭＰ−ＧＬＵに接種し、２×１０８ＴＵのΔ遺伝子３ヘルパー（Ｍ１３Δ
遺伝子ＩＩＩ、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０１０４７を参照のこと）を添加し、そし
て培養物を振盪なしで３７℃で４５分間インキュベートし、次いで振盪しながら
３７℃で４５分間インキュベートする。この培養物を１０分間４０００ｒ．ｐ．
ｍ．で遠心分離し、そしてペレットを２リットルの２×ＴＹ（１００μｇ／ｍｌ
アンピシリンおよび５０μｇ／ｍｌカナマイシンを含有する）中に再懸濁し、そ
して一晩増殖させる。ファージをＰＣＴ公開ＷＯ９２／０１０４７に記載のよう
に調製する。
ｓｃＦｖｓのライブラリーを構築する。抗体フラグメントを提示するファージを
レスキューするため、ファージミドを保有する約１０9個のＥ．ｃｏｌｉを用い
て、５０ｍｌの２×ＴＹ（１％グルコースおよび１００μｇ／ｍｌのアンピシリ
ンを含有する）（２×ＴＹ−ＡＭＰ−ＧＬＵ）を接種し、そして振盪しながら０
．８のＯ．Ｄ．まで増殖させる。この培養物の５ｍｌを用いて５０ｍｌの２×Ｔ
Ｙ−ＡＭＰ−ＧＬＵに接種し、２×１０８ＴＵのΔ遺伝子３ヘルパー（Ｍ１３Δ
遺伝子ＩＩＩ、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０１０４７を参照のこと）を添加し、そし
て培養物を振盪なしで３７℃で４５分間インキュベートし、次いで振盪しながら
３７℃で４５分間インキュベートする。この培養物を１０分間４０００ｒ．ｐ．
ｍ．で遠心分離し、そしてペレットを２リットルの２×ＴＹ（１００μｇ／ｍｌ
アンピシリンおよび５０μｇ／ｍｌカナマイシンを含有する）中に再懸濁し、そ
して一晩増殖させる。ファージをＰＣＴ公開ＷＯ９２／０１０４７に記載のよう
に調製する。
【０６８３】
Ｍ１３Δ遺伝子ＩＩＩを以下のように調製する：Ｍ１３Δ遺伝子ＩＩＩヘルパ
ーファージは、遺伝子ＩＩＩタンパク質をコードしない。それゆえ、抗体フラグ
メントを提示するファージ（ファージミド）は、抗原に対するより大きい結合ア
ビディティ（ａｖｉｄｉｔｙ）を有する。ファージ形態形成の間、野生型遺伝子
ＩＩＩタンパク質を供給するｐＵＣ１９誘導体を保有する細胞においてヘルパー
ファージを増殖させることにより、感染性Ｍ１３Δ遺伝子ＩＩＩ粒子を作製する
。培養物を振盪なしで３７℃で１時間インキュベートし、次いで振盪しながら３
７℃でさらに１時間インキュベートする。細胞を遠心沈殿（ＩＥＣ−Ｃｅｎｔｒ
ａ ８，４００ｒ．ｐ．ｍ．／分で１０分間）し、１００μｇ／ｍｌのアンピシ
リンおよび２５μｇ／ｍｌのカナマイシンを含有する２×ＴＹブロス（２×ＴＹ
−ＡＭＰ−ＫＡＮ）３００ｍｌ中で再懸濁し、そして３７℃で振盪しながら一晩
増殖させた。ファージ粒子を、２回のＰＥＧ沈殿（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９９
０）により培養培地から精製および濃縮し、２ｍｌ ＰＢＳに再懸濁し、そして
０．４５μｍのフィルター（Ｍｉｎｉｓａｒｔ ＮＭＬ；Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）
を通過させ、約１０１３形質導入単位／ｍｌ（アンピシリン耐性クローン）の最
終濃度を得る。
ーファージは、遺伝子ＩＩＩタンパク質をコードしない。それゆえ、抗体フラグ
メントを提示するファージ（ファージミド）は、抗原に対するより大きい結合ア
ビディティ（ａｖｉｄｉｔｙ）を有する。ファージ形態形成の間、野生型遺伝子
ＩＩＩタンパク質を供給するｐＵＣ１９誘導体を保有する細胞においてヘルパー
ファージを増殖させることにより、感染性Ｍ１３Δ遺伝子ＩＩＩ粒子を作製する
。培養物を振盪なしで３７℃で１時間インキュベートし、次いで振盪しながら３
７℃でさらに１時間インキュベートする。細胞を遠心沈殿（ＩＥＣ−Ｃｅｎｔｒ
ａ ８，４００ｒ．ｐ．ｍ．／分で１０分間）し、１００μｇ／ｍｌのアンピシ
リンおよび２５μｇ／ｍｌのカナマイシンを含有する２×ＴＹブロス（２×ＴＹ
−ＡＭＰ−ＫＡＮ）３００ｍｌ中で再懸濁し、そして３７℃で振盪しながら一晩
増殖させた。ファージ粒子を、２回のＰＥＧ沈殿（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９９
０）により培養培地から精製および濃縮し、２ｍｌ ＰＢＳに再懸濁し、そして
０．４５μｍのフィルター（Ｍｉｎｉｓａｒｔ ＮＭＬ；Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）
を通過させ、約１０１３形質導入単位／ｍｌ（アンピシリン耐性クローン）の最
終濃度を得る。
【０６８４】
（ライブラリーのパニング）
Ｉｍｍｕｎｏｔｕｂｅｓ（Ｎｕｎｃ）を、本発明のポリペプチドの１００μｇ
／ｍｌまたは１０μｇ／ｍｌのいずれかの４ｍｌを用いてＰＢＳ中で一晩被膜す
る。チューブを２％Ｍａｒｖｅｌ−ＰＢＳを用いて３７℃で２時間ブロックし、
次いでＰＢＳ中で３回洗浄する。約１０１３ＴＵのファージをチューブに適用し
、そして、回転盤上で上下にタンブリングしながら室温で３０分間インキュベー
トし、次いでさらに１．５時間静置しておく。チューブをＰＢＳ０．１％Ｔｗｅ
ｅｎ−２０で１０回、そしてＰＢＳで１０回洗浄する。１ｍｌの１００ｍＭトリ
エチルアミンを添加し、そして回転盤上で１５分間上下に回転させることにより
ファージを溶出し、その後この溶液を０．５ｍｌの１．０Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ
，ｐＨ７．４で直ちに中和する。次いで、溶出したファージを細菌とともに３７
℃で３０分間インキュベートすることにより、ファージを用いて、１０ｍｌの対
数増殖中期のＥ．ｃｏｌｉ ＴＧ１に感染させる。次いで、Ｅ．ｃｏｌｉを１％
グルコースおよび１００μｇ／ｍｌアンピシリンを含有するＴＹＥプレート上に
プレートする。次いで、得られる細菌ライブラリーを、上記のようにΔ遺伝子３
ヘルパーファージでレスキューし、次の回の選択のためのファージを調製する。
次いで、このプロセスを、アフィニティー精製の全４回について反復し、３回目
および４回目にはチューブ洗浄をＰＢＳ、０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０で２０倍、
そしてＰＢＳで２０倍に増加する。
／ｍｌまたは１０μｇ／ｍｌのいずれかの４ｍｌを用いてＰＢＳ中で一晩被膜す
る。チューブを２％Ｍａｒｖｅｌ−ＰＢＳを用いて３７℃で２時間ブロックし、
次いでＰＢＳ中で３回洗浄する。約１０１３ＴＵのファージをチューブに適用し
、そして、回転盤上で上下にタンブリングしながら室温で３０分間インキュベー
トし、次いでさらに１．５時間静置しておく。チューブをＰＢＳ０．１％Ｔｗｅ
ｅｎ−２０で１０回、そしてＰＢＳで１０回洗浄する。１ｍｌの１００ｍＭトリ
エチルアミンを添加し、そして回転盤上で１５分間上下に回転させることにより
ファージを溶出し、その後この溶液を０．５ｍｌの１．０Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ
，ｐＨ７．４で直ちに中和する。次いで、溶出したファージを細菌とともに３７
℃で３０分間インキュベートすることにより、ファージを用いて、１０ｍｌの対
数増殖中期のＥ．ｃｏｌｉ ＴＧ１に感染させる。次いで、Ｅ．ｃｏｌｉを１％
グルコースおよび１００μｇ／ｍｌアンピシリンを含有するＴＹＥプレート上に
プレートする。次いで、得られる細菌ライブラリーを、上記のようにΔ遺伝子３
ヘルパーファージでレスキューし、次の回の選択のためのファージを調製する。
次いで、このプロセスを、アフィニティー精製の全４回について反復し、３回目
および４回目にはチューブ洗浄をＰＢＳ、０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０で２０倍、
そしてＰＢＳで２０倍に増加する。
【０６８５】
（結合剤の特徴付け）
第３回目および４回目の選択から溶出したファージを用いて、Ｅ．ｃｏｌｉ
ＨＢ ２１５１を感染させ、そして可溶性ｓｃＦｖをアッセイのために単一コロ
ニーから生成する（Ｍａｒｋｓら、１９９１）。５０ｍＭ炭酸水素塩、ｐＨ９．
６中の本発明のポリペプチドの１０ｐｇ／ｍｌのいずれかで被膜したマイクロタ
イタープレートを用いてＥＬＩＳＡを実行する。ＥＬＩＳＡ中の陽性クローンを
ＰＣＲフィンガープリンティング（例えば、ＰＣＴ公報ＷＯ９２／０１０４７を
参照のこと）、次に配列決定することによりさらに特徴付ける。これらのＥＬＩ
ＳＡ陽性クローンはまた、当該分野において公知の技術（例えば、エピトープマ
ッピング、結合親和性、レセプターシグナル形質導入、抗体／抗原結合をブロッ
クするかまたは競合的に阻害する能力、および競合的アゴニスト活性または競合
的アンタゴニスト活性など）によりさらに特徴付けられ得る。
ＨＢ ２１５１を感染させ、そして可溶性ｓｃＦｖをアッセイのために単一コロ
ニーから生成する（Ｍａｒｋｓら、１９９１）。５０ｍＭ炭酸水素塩、ｐＨ９．
６中の本発明のポリペプチドの１０ｐｇ／ｍｌのいずれかで被膜したマイクロタ
イタープレートを用いてＥＬＩＳＡを実行する。ＥＬＩＳＡ中の陽性クローンを
ＰＣＲフィンガープリンティング（例えば、ＰＣＴ公報ＷＯ９２／０１０４７を
参照のこと）、次に配列決定することによりさらに特徴付ける。これらのＥＬＩ
ＳＡ陽性クローンはまた、当該分野において公知の技術（例えば、エピトープマ
ッピング、結合親和性、レセプターシグナル形質導入、抗体／抗原結合をブロッ
クするかまたは競合的に阻害する能力、および競合的アゴニスト活性または競合
的アンタゴニスト活性など）によりさらに特徴付けられ得る。
【０６８６】
（実施例１７ ＡＴＰ結合アッセイ）
本発明のＡＢＣトランスポートタンパク質のＡＴＰ結合活性を、米国特許第５
，８５８，７１９号（その全体が参考として本明細書において援用される）に記
載のＡＴＰ結合アッセイを用いて検出し得る。簡略には、本発明のＡＢＣトラン
スポートタンパク質に対するＡＴＰ結合は、競合アッセイにおいて、８−アジド
−ＡＴＰを用いた光親和性標識を介して測定される。本発明のＡＢＣトランスポ
ートタンパク質の１ｍｇ／ｍｌを含有する反応混合物を、４℃で１０分間、種々
の濃度のＡＴＰ、または非加水分解性ＡＴＰアナログであるアデニル−５’−イ
ミドジホスフェートとともにインキュベートする。８−アジド−ＡＴＰ（Ｓｉｇ
ｍａ Ｃｈｅｍ．Ｃｏｒｐ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）および８−アジド−Ａ
ＴＰ（ −３２Ｐ−ＡＴＰ）（５ｍＣｉ／μｍｏｌ，ＩＣＮ，Ｉｒｖｉｎｅ Ｃ
Ａ）の混合物を、最終濃度１００μＭまで添加し、そして０．５ｍｌのアリコー
トを氷上の磁器スポットプレートのウェルに入れた。このプレートを１分の冷却
間隔を用いて、２回、１分間隔で、プレートから２．５ｃｍの距離で短波２５４
ｎｍのＵＶランプを用いて照射する。最終濃度２ｍＭまでジチオスレイトールを
添加して、この反応を停止する。このインキュベーションをＳＤＳ−ＰＡＧＥ電
気泳動に供し、乾燥し、そしてオートラジオグラフにする。本発明の特定のＡＢ
Ｃトランスポートタンパク質に対するタンパク質バンドを、切り出し、そして放
射能を定量する。ＡＴＰまたはアデニル−５’−イミドジフォスフェートの増加
を伴う放射能の低下により、ＡＢＣトランスポートタンパク質に対するＡＴＰ親
和性の測定が提供される。
，８５８，７１９号（その全体が参考として本明細書において援用される）に記
載のＡＴＰ結合アッセイを用いて検出し得る。簡略には、本発明のＡＢＣトラン
スポートタンパク質に対するＡＴＰ結合は、競合アッセイにおいて、８−アジド
−ＡＴＰを用いた光親和性標識を介して測定される。本発明のＡＢＣトランスポ
ートタンパク質の１ｍｇ／ｍｌを含有する反応混合物を、４℃で１０分間、種々
の濃度のＡＴＰ、または非加水分解性ＡＴＰアナログであるアデニル−５’−イ
ミドジホスフェートとともにインキュベートする。８−アジド−ＡＴＰ（Ｓｉｇ
ｍａ Ｃｈｅｍ．Ｃｏｒｐ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）および８−アジド−Ａ
ＴＰ（ −３２Ｐ−ＡＴＰ）（５ｍＣｉ／μｍｏｌ，ＩＣＮ，Ｉｒｖｉｎｅ Ｃ
Ａ）の混合物を、最終濃度１００μＭまで添加し、そして０．５ｍｌのアリコー
トを氷上の磁器スポットプレートのウェルに入れた。このプレートを１分の冷却
間隔を用いて、２回、１分間隔で、プレートから２．５ｃｍの距離で短波２５４
ｎｍのＵＶランプを用いて照射する。最終濃度２ｍＭまでジチオスレイトールを
添加して、この反応を停止する。このインキュベーションをＳＤＳ−ＰＡＧＥ電
気泳動に供し、乾燥し、そしてオートラジオグラフにする。本発明の特定のＡＢ
Ｃトランスポートタンパク質に対するタンパク質バンドを、切り出し、そして放
射能を定量する。ＡＴＰまたはアデニル−５’−イミドジフォスフェートの増加
を伴う放射能の低下により、ＡＢＣトランスポートタンパク質に対するＡＴＰ親
和性の測定が提供される。
【０６８７】
（実施例１８ 低分子スクリーニング）
本発明は、任意の種々の薬物スクリーニング技術において、本発明のＡＢＣト
ランスポートポリペプチド、またはその結合フラグメントを用いることにより、
治療用化合物をスクリーニングするために特に有用である。このような試験にお
いて使用されるポリペプチドまたはフラグメントは、固体支持体に結合され得る
か、細胞表面に発現されるか、溶液中で遊離であるか、または細胞内に配置され
る。薬物スクリーニングの１つの方法は、ポリペプチドまたはフラグメントを発
現する組換え核酸で安定に形質転換されている真核生物または原核生物の宿主細
胞を利用する。薬物は、競合的結合アッセイにおいて、このような形質転換細胞
に対してスクリーニングされる。当業者は、例えば、試験されている薬剤と、本
発明のＡＢＣトランスポートポリペプチドとの間の複合体の形成を測定し得る。
ランスポートポリペプチド、またはその結合フラグメントを用いることにより、
治療用化合物をスクリーニングするために特に有用である。このような試験にお
いて使用されるポリペプチドまたはフラグメントは、固体支持体に結合され得る
か、細胞表面に発現されるか、溶液中で遊離であるか、または細胞内に配置され
る。薬物スクリーニングの１つの方法は、ポリペプチドまたはフラグメントを発
現する組換え核酸で安定に形質転換されている真核生物または原核生物の宿主細
胞を利用する。薬物は、競合的結合アッセイにおいて、このような形質転換細胞
に対してスクリーニングされる。当業者は、例えば、試験されている薬剤と、本
発明のＡＢＣトランスポートポリペプチドとの間の複合体の形成を測定し得る。
【０６８８】
従って、本発明は、本発明のＡＢＣトランスポートポリペプチドにより媒介さ
れる活性に影響する薬物または任意の他の因子についてスクリーニングする方法
を提供する。これらの方法は、当該分野で周知の方法によって、このような因子
を本発明のＡＢＣトランスポートポリペプチドまたはそのフラグメントと接触さ
せる工程、ならびにこの因子とＡＢＣトランスポートポリペプチドまたはそのフ
ラグメントとの間の複合体の存在をアッセイする工程を包含する。このような競
合結合アッセイにおいて、スクリーニングする因子は、代表的には標識される。
インキュベーション後、遊離の因子を結合形態で存在するものから分離する。そ
して遊離または非複合標識の量は、特定の因子が本発明のＡＢＣトランスポート
ポリペプチドに結合する能力の指標である。
れる活性に影響する薬物または任意の他の因子についてスクリーニングする方法
を提供する。これらの方法は、当該分野で周知の方法によって、このような因子
を本発明のＡＢＣトランスポートポリペプチドまたはそのフラグメントと接触さ
せる工程、ならびにこの因子とＡＢＣトランスポートポリペプチドまたはそのフ
ラグメントとの間の複合体の存在をアッセイする工程を包含する。このような競
合結合アッセイにおいて、スクリーニングする因子は、代表的には標識される。
インキュベーション後、遊離の因子を結合形態で存在するものから分離する。そ
して遊離または非複合標識の量は、特定の因子が本発明のＡＢＣトランスポート
ポリペプチドに結合する能力の指標である。
【０６８９】
薬物スクリーニングの別の技術は、本発明のＡＢＣトランスポートポリペプチ
ドに対して適切な結合親和性を有する化合物についてのハイスループットスクリ
ーニングを提供する。そしてこの技術は、１９８４年９月１３日公開の欧州特許
出願８４／０３５６４（本明細書においてその全体が参考として援用される）に
詳細に記載されている。簡略に述べれば、多数の異なる低分子試験化合物が、固
体基板（例えば、プラスチックピンまたはなんらかの他の表面）上で合成される
。この試験化合物は、本発明のＡＢＣトランスポートポリペプチドと反応され、
そして洗浄される。次いで、結合したＡＢＣトランスポートポリペプチドは、当
該分野で周知の方法により検出される。精製したＡＢＣトランスポートポリペプ
チドは、前述の薬物スクリーニング技術における使用のためにプレート上に直接
被覆される。さらに、非中和抗体は、ペプチドを捕獲し、そしてペプチドを固体
支持体上に固定するために用いられ得る。
ドに対して適切な結合親和性を有する化合物についてのハイスループットスクリ
ーニングを提供する。そしてこの技術は、１９８４年９月１３日公開の欧州特許
出願８４／０３５６４（本明細書においてその全体が参考として援用される）に
詳細に記載されている。簡略に述べれば、多数の異なる低分子試験化合物が、固
体基板（例えば、プラスチックピンまたはなんらかの他の表面）上で合成される
。この試験化合物は、本発明のＡＢＣトランスポートポリペプチドと反応され、
そして洗浄される。次いで、結合したＡＢＣトランスポートポリペプチドは、当
該分野で周知の方法により検出される。精製したＡＢＣトランスポートポリペプ
チドは、前述の薬物スクリーニング技術における使用のためにプレート上に直接
被覆される。さらに、非中和抗体は、ペプチドを捕獲し、そしてペプチドを固体
支持体上に固定するために用いられ得る。
【０６９０】
本発明はまた、競合的薬物スクリーニングアッセイの使用を意図する。このア
ッセイでは、本発明のＡＢＣトランスポートポリペプチドに結合し得る中和抗体
が、ＡＢＣトランスポートポリペプチドまたはそのフラグメントへの結合につい
て試験化合物と特異的に競合する。この様式では、この抗体は、ＡＢＣトランス
ポートポリペプチドと１つ以上の抗原性エピトープを共有する任意のペプチドの
存在を検出するために用いられる。
ッセイでは、本発明のＡＢＣトランスポートポリペプチドに結合し得る中和抗体
が、ＡＢＣトランスポートポリペプチドまたはそのフラグメントへの結合につい
て試験化合物と特異的に競合する。この様式では、この抗体は、ＡＢＣトランス
ポートポリペプチドと１つ以上の抗原性エピトープを共有する任意のペプチドの
存在を検出するために用いられる。
【０６９１】
本発明のＡＢＣトランスポートは、米国仮出願番号６０／１４５，２１５号；
６０／１４９，４４５号および６０／１６４，７３０号（本明細書においてその
全体が参考として援用される）において開示されている。
６０／１４９，４４５号および６０／１６４，７３０号（本明細書においてその
全体が参考として援用される）において開示されている。
【０６９２】
本発明を、前述の説明および実施例に詳細に記載された以外の方法で実施し得
ることは、明らかである。本発明の多数の改変およびバリエーションが、上記の
教示を考慮して可能であり、従って、このような多数の改変およびバリエーショ
ンは、添付の特許請求の範囲の範囲内にある。
ることは、明らかである。本発明の多数の改変およびバリエーションが、上記の
教示を考慮して可能であり、従って、このような多数の改変およびバリエーショ
ンは、添付の特許請求の範囲の範囲内にある。
【０６９３】
発明の背景、詳細な説明および実施例において引用された各文書の全開示（特
許、特許出願、学術文献、要約、実験マニュアル、書籍または他の開示を含む）
は、本明細書中に参考として援用される。さらに、本明細書にとともに提出され
た配列表のハードコピーおよび対応するコンピュ−ター読み出し形態は、両方と
も本明細書中にその全体が参考として援用される。
許、特許出願、学術文献、要約、実験マニュアル、書籍または他の開示を含む）
は、本明細書中に参考として援用される。さらに、本明細書にとともに提出され
た配列表のハードコピーおよび対応するコンピュ−ター読み出し形態は、両方と
も本明細書中にその全体が参考として援用される。
【０６９４】
【表３】
ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−４０３
（カナダ）
出願人は、出願に基づきカナダ国特許が発行されるか、あるいは同出願が拒絶
または放棄されて回復され得なくなるかもしくは取り下げられるまでは、特許庁
長官（Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎｅｒ ｏｆ Ｐａｔｅｎｔｓ）が、長官により指名
された独立の専門家に対してのみ出願中で言及された寄託済みの生物学的材料の
サンプルの供与を許可する旨を請求し、出願人は、国際出願の公表のための規則
上の準備が完了する前に、書面によりその旨を国際事務局に告知しなければなら
ない。
または放棄されて回復され得なくなるかもしくは取り下げられるまでは、特許庁
長官（Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎｅｒ ｏｆ Ｐａｔｅｎｔｓ）が、長官により指名
された独立の専門家に対してのみ出願中で言及された寄託済みの生物学的材料の
サンプルの供与を許可する旨を請求し、出願人は、国際出願の公表のための規則
上の準備が完了する前に、書面によりその旨を国際事務局に告知しなければなら
ない。
【０６９５】
（ノルウェー）
出願人はここにおいて、出願が（ノルウェー特許庁により）公開に付されるか
あるいは公開を経ずにノルウェー特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの
供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は
、ノルウェー特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能
にされる時点以前に、出願人によりノルウェー特許庁に対してなされるものとす
る。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供
与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家
は、ノルウェー特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ ｏｆ
ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、
個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
あるいは公開を経ずにノルウェー特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの
供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は
、ノルウェー特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能
にされる時点以前に、出願人によりノルウェー特許庁に対してなされるものとす
る。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供
与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家
は、ノルウェー特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ ｏｆ
ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、
個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０６９６】
（オーストラリア）
出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は、特許の付与前において、
あるいは出願の放棄（ｌａｐｓｉｎｇ）、拒絶あるいは取り下げ前において、発
明に対し利害関係を有さない当業者である対象者（ｓｋｉｌｌｅｄ ａｄｄｒｅ
ｓｓｅｅ）に対してのみ行われる旨を、告知するものである（オーストラリア国
特許法第３．２５（３）号規定）。
あるいは出願の放棄（ｌａｐｓｉｎｇ）、拒絶あるいは取り下げ前において、発
明に対し利害関係を有さない当業者である対象者（ｓｋｉｌｌｅｄ ａｄｄｒｅ
ｓｓｅｅ）に対してのみ行われる旨を、告知するものである（オーストラリア国
特許法第３．２５（３）号規定）。
【０６９７】
（フィンランド）
出願人はここにおいて、出願が（特許および統制委員会（Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ｂｏａｒｄ ｏｆ Ｐａｔｅｎｔｓ ａｎｄ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）により
）公開に付されるかあるいは公開を経ずに国立特許および法規委員会による決定
を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を
、請求する。
Ｂｏａｒｄ ｏｆ Ｐａｔｅｎｔｓ ａｎｄ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）により
）公開に付されるかあるいは公開を経ずに国立特許および法規委員会による決定
を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を
、請求する。
【０６９８】
（英国）
出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は専門家に対してのみ利用可
能にされる旨を、請求する。この旨の請求は、出願の国際公表のための規則上の
準備が完了する前に、出願人により国際事務局に対してなされなければならない
。
能にされる旨を、請求する。この旨の請求は、出願の国際公表のための規則上の
準備が完了する前に、出願人により国際事務局に対してなされなければならない
。
【０６９９】
（デンマーク）
出願人はここにおいて、出願が（デンマーク特許庁により）公開に付されるか
あるいは公開を経ずにデンマーク特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの
供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は
、デンマーク特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能
にされる時点以前に、出願人によりデンマーク特許庁に対してなされるものとす
る。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供
与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家
は、デンマーク特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ ｏｆ
ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、
個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
あるいは公開を経ずにデンマーク特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの
供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は
、デンマーク特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能
にされる時点以前に、出願人によりデンマーク特許庁に対してなされるものとす
る。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供
与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家
は、デンマーク特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ ｏｆ
ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、
個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７００】
（スウェーデン）
出願人はここにおいて、出願が（スウェーデン特許庁により）公開に付される
かあるいは公開を経ずにスウェーデン特許庁による決定を受けるまでは、サンプ
ルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請
求は、優先日から１６ヶ月が経過するよりも前に、出願人により国際事務局に対
してなされるものとする（好ましくはＰＣＴ Ａｐｐｌｉｃａｎｔ’ｓ Ｇｕｉ
ｄｅのＶｏｌｕｍｅ Ｉのａｎｎｅｘ Ｚに記載された書式ＰＣＴ／ＲＯ／１３
４による）。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサン
プルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする
。専門家は、スウェーデン特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓ
ｔ ｏｆ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、
あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
かあるいは公開を経ずにスウェーデン特許庁による決定を受けるまでは、サンプ
ルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請
求は、優先日から１６ヶ月が経過するよりも前に、出願人により国際事務局に対
してなされるものとする（好ましくはＰＣＴ Ａｐｐｌｉｃａｎｔ’ｓ Ｇｕｉ
ｄｅのＶｏｌｕｍｅ Ｉのａｎｎｅｘ Ｚに記載された書式ＰＣＴ／ＲＯ／１３
４による）。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサン
プルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする
。専門家は、スウェーデン特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓ
ｔ ｏｆ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、
あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７０１】
（オランダ）
出願人はここにおいて、オランダ特許の発行日まで、あるいは出願が拒絶、取
り下げあるいは放棄（ｌａｐｓｅｄ）される日までは、特許法３１Ｆ（１）の規
定に基づき、微生物は専門家へのサンプル供与の形でのみ行われる旨を、請求す
る。この旨の請求は、オランダ王国特許法の第２２Ｃ条または第２５条に基づき
出願が公に利用可能にされる日のうちいずれか早い方の日付よりも前に、出願人
によりオランダ工業所有権局に対して提出されるものとする。
り下げあるいは放棄（ｌａｐｓｅｄ）される日までは、特許法３１Ｆ（１）の規
定に基づき、微生物は専門家へのサンプル供与の形でのみ行われる旨を、請求す
る。この旨の請求は、オランダ王国特許法の第２２Ｃ条または第２５条に基づき
出願が公に利用可能にされる日のうちいずれか早い方の日付よりも前に、出願人
によりオランダ工業所有権局に対して提出されるものとする。
【０７０２】
【表４】
ＡＴＣＣ寄託番号：ＰＴＡ−９２８
（カナダ）
出願人は、出願に基づきカナダ国特許が発行されるか、あるいは同出願が拒絶
または放棄されて回復され得なくなるかもしくは取り下げられるまでは、特許庁
長官（Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎｅｒ ｏｆ Ｐａｔｅｎｔｓ）が、長官により指名
された独立の専門家に対してのみ出願中で言及された寄託済みの生物学的材料の
サンプルの供与を許可する旨を請求し、出願人は、国際出願の公表のための規則
上の準備が完了する前に、書面によりその旨を国際事務局に告知しなければなら
ない。
または放棄されて回復され得なくなるかもしくは取り下げられるまでは、特許庁
長官（Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎｅｒ ｏｆ Ｐａｔｅｎｔｓ）が、長官により指名
された独立の専門家に対してのみ出願中で言及された寄託済みの生物学的材料の
サンプルの供与を許可する旨を請求し、出願人は、国際出願の公表のための規則
上の準備が完了する前に、書面によりその旨を国際事務局に告知しなければなら
ない。
【０７０３】
（ノルウェー）
出願人はここにおいて、出願が（ノルウェー特許庁により）公開に付されるか
あるいは公開を経ずにノルウェー特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの
供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は
、ノルウェー特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能
にされる時点以前に、出願人によりノルウェー特許庁に対してなされるものとす
る。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供
与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家
は、ノルウェー特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ ｏｆ
ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、
個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
あるいは公開を経ずにノルウェー特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの
供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は
、ノルウェー特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能
にされる時点以前に、出願人によりノルウェー特許庁に対してなされるものとす
る。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供
与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家
は、ノルウェー特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ ｏｆ
ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、
個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７０４】
（オーストラリア）
出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は、特許の付与前において、
あるいは出願の放棄（ｌａｐｓｉｎｇ）、拒絶あるいは取り下げ前において、発
明に対し利害関係を有さない当業者である対象者（ｓｋｉｌｌｅｄ ａｄｄｒｅ
ｓｓｅｅ）に対してのみ行われる旨を、告知するものである（オーストラリア国
特許法第３．２５（３）号規定）。
あるいは出願の放棄（ｌａｐｓｉｎｇ）、拒絶あるいは取り下げ前において、発
明に対し利害関係を有さない当業者である対象者（ｓｋｉｌｌｅｄ ａｄｄｒｅ
ｓｓｅｅ）に対してのみ行われる旨を、告知するものである（オーストラリア国
特許法第３．２５（３）号規定）。
【０７０５】
（フィンランド）
出願人はここにおいて、出願が（特許および統制委員会（Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ｂｏａｒｄ ｏｆ Ｐａｔｅｎｔｓ ａｎｄ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）により
）公開に付されるかあるいは公開を経ずに国立特許および法規委員会による決定
を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を
、請求する。
Ｂｏａｒｄ ｏｆ Ｐａｔｅｎｔｓ ａｎｄ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）により
）公開に付されるかあるいは公開を経ずに国立特許および法規委員会による決定
を受けるまでは、サンプルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を
、請求する。
【０７０６】
（英国）
出願人はここにおいて、微生物のサンプルの供与は専門家に対してのみ利用可
能にされる旨を、請求する。この旨の請求は、出願の国際公表のための規則上の
準備が完了する前に、出願人により国際事務局に対してなされなければならない
。
能にされる旨を、請求する。この旨の請求は、出願の国際公表のための規則上の
準備が完了する前に、出願人により国際事務局に対してなされなければならない
。
【０７０７】
（デンマーク）
出願人はここにおいて、出願が（デンマーク特許庁により）公開に付されるか
あるいは公開を経ずにデンマーク特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの
供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は
、デンマーク特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能
にされる時点以前に、出願人によりデンマーク特許庁に対してなされるものとす
る。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供
与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家
は、デンマーク特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ ｏｆ
ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、
個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
あるいは公開を経ずにデンマーク特許庁による決定を受けるまでは、サンプルの
供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請求は
、デンマーク特許法第２２条および第３３条（３）に基づき出願が公に利用可能
にされる時点以前に、出願人によりデンマーク特許庁に対してなされるものとす
る。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサンプルの供
与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする。専門家
は、デンマーク特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓｔ ｏｆ
ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、あるいは、
個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７０８】
（スウェーデン）
出願人はここにおいて、出願が（スウェーデン特許庁により）公開に付される
かあるいは公開を経ずにスウェーデン特許庁による決定を受けるまでは、サンプ
ルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請
求は、優先日から１６ヶ月が経過するよりも前に、出願人により国際事務局に対
してなされるものとする（好ましくはＰＣＴ Ａｐｐｌｉｃａｎｔ’ｓ Ｇｕｉ
ｄｅのＶｏｌｕｍｅ Ｉのａｎｎｅｘ Ｚに記載された書式ＰＣＴ／ＲＯ／１３
４による）。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサン
プルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする
。専門家は、スウェーデン特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓ
ｔ ｏｆ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、
あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
かあるいは公開を経ずにスウェーデン特許庁による決定を受けるまでは、サンプ
ルの供与は当該技術の専門家に対してのみ行われる旨を、請求する。この旨の請
求は、優先日から１６ヶ月が経過するよりも前に、出願人により国際事務局に対
してなされるものとする（好ましくはＰＣＴ Ａｐｐｌｉｃａｎｔ’ｓ Ｇｕｉ
ｄｅのＶｏｌｕｍｅ Ｉのａｎｎｅｘ Ｚに記載された書式ＰＣＴ／ＲＯ／１３
４による）。そのような請求が出願人によりなされた場合は、第三者によるサン
プルの供与のいかなる請求においても、利用される専門家を表示するものとする
。専門家は、スウェーデン特許庁により作成された公認専門家のリスト（ｌｉｓ
ｔ ｏｆ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｔｓ）に記載された任意の者か、
あるいは、個々の場合において出願人により承認された任意の者であり得る。
【０７０９】
（オランダ）
出願人はここにおいて、オランダ特許の発行日まで、あるいは出願が拒絶、取
り下げあるいは放棄（ｌａｐｓｅｄ）される日までは、特許法３１Ｆ（１）の規
定に基づき、微生物は専門家へのサンプル供与の形でのみ行われる旨を、請求す
る。この旨の請求は、オランダ王国特許法の第２２Ｃ条または第２５条に基づき
出願が公に利用可能にされる日のうちいずれか早い方の日付よりも前に、出願人
によりオランダ工業所有権局に対して提出されるものとする。
り下げあるいは放棄（ｌａｐｓｅｄ）される日までは、特許法３１Ｆ（１）の規
定に基づき、微生物は専門家へのサンプル供与の形でのみ行われる旨を、請求す
る。この旨の請求は、オランダ王国特許法の第２２Ｃ条または第２５条に基づき
出願が公に利用可能にされる日のうちいずれか早い方の日付よりも前に、出願人
によりオランダ工業所有権局に対して提出されるものとする。
【配列表】
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ａ６１Ｐ 7/04 Ａ６１Ｐ 9/00 ４Ｃ０８４
7/06 11/06 ４Ｃ０８５
9/00 13/12 ４Ｃ０８７
11/06 25/00 ４Ｈ０４５
13/12 27/02
25/00 29/00
27/02 １０１
29/00 31/12
１０１ 31/18
31/12 37/00
31/18 37/02
37/00 Ｃ０７Ｋ 14/47
37/02 16/18
Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ１２Ｎ 1/15
16/18 1/19
Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21
1/19 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ
1/21 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ
5/10 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ
Ｃ１２Ｐ 21/02 33/50 Ｚ
Ｃ１２Ｑ 1/68 33/53 Ｄ
Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｍ
33/50 33/566
33/53 Ａ６１Ｋ 35/76
39/395 Ｄ
33/566 Ｎ
// Ａ６１Ｋ 35/76 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ
39/395 5/00 Ａ
Ａ６１Ｋ 37/02
(31)優先権主張番号 ６０／１６４，７３０
(32)優先日 平成11年11月12日(1999．11．12)
(33)優先権主張国 米国（ＵＳ）
(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，
ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ
Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ
，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，
ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ
Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ
，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，
ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，
ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，Ｃ
Ｎ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ
，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，
ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，Ｋ
Ｒ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ
，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，
ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，Ｓ
Ｉ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ
，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ
(72)発明者 ルーベン， スティーブン エム．
アメリカ合衆国 メリーランド 20832，
オルネイ， ヘリテイジ ヒルズ ドラ
イブ 18528
(72)発明者 ニ， ジアン
アメリカ合衆国 メリーランド 20853，
ロックビル， マナーフィールド ロー
ド 5502
(72)発明者 ムーア， ポール イー．
アメリカ合衆国 メリーランド 20874，
ジャーマンタウン， レザーバーク ド
ライブ 19005
Ｆターム(参考） 2G045 AA40 DA35 DA36 FB02
4B024 AA01 AA11 BA80 CA04 CA07
CA09 CA20 DA02 DA06 EA02
EA04 GA11 GA13 GA18 GA19
GA27 HA03 HA13 HA14 HA17
4B063 QA01 QA05 QA13 QA17 QA19
QQ21 QQ41 QQ43 QQ53 QQ61
QQ89 QR08 QR32 QR35 QR40
QR42 QR56 QR62 QR77 QR80
QS16 QS25 QS34 QX02 QX10
4B064 AG01 CA02 CA10 CA19 CC01
CC24 CE12 DA01 DA13
4B065 AA26X AA58X AA72X AA90X
AA93Y AB01 AC14 BA02
BA05 BA25 BD14 CA24 CA44
CA46
4C084 AA02 AA03 AA06 AA07 AA13
BA01 BA02 CA53 NA14 ZA022
ZA332 ZA362 ZA532 ZA552
ZA592 ZA812 ZB072 ZB112
ZB132 ZB152 ZB332 ZC212
ZC352 ZC552
4C085 AA13 AA14 CC23 DD62
4C087 AA01 AA02 AA03 BC83 CA12
NA14 ZA33 ZA36 ZA51 ZA53
ZA55 ZA59 ZA81 ZB07 ZB11
ZB13 ZB15 ZB33 ZC21 ZC35
ZC55
4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10
BA41 CA40 DA75 EA20 EA50
FA71 FA74 GA15 GA26
Claims (21)
- 【請求項１】 単離された核酸分子であって、以下： （ａ）配列番号Ｘに示されるポリヌクレオチド、またはＡＴＣＣ受託番号Ｚに
含まれるｃＤＮＡによってコードされるポリヌクレオチド； （ｂ）配列番号Ｙの生物学的に活性なポリペプチドフラグメント、またはＡＴ
ＣＣ受託番号Ｚに含まれるｃＤＮＡ配列によってコードされる生物学的に活性な
ポリペプチドフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド； （ｃ）配列番号Ｙのポリペプチドエピトープ、またはＡＴＣＣ受託番号Ｚに含
まれるｃＤＮＡ配列によってコードされるポリペプチドエピトープをコードする
、ポリヌクレオチド； （ｄ）（ａ）〜（ｃ）において特定されるポリヌクレオチドのいずれか１つに
ストリンジェント条件下でハイブリダイズし得るポリヌクレオチドであって、こ
こで、該ポリヌクレオチドは、Ａ残基のみまたはＴ残基のみのヌクレオチド配列
を有する核酸分子に、ストリンジェント条件下でハイブリダイズしない、ポリヌ
クレオチド、 からなる群より選択されるポリヌクレオチドを含む、単離された核酸分子。 - 【請求項２】 前記ポリヌクレオチドが、可溶性ポリペプチドをコードする
ヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載の単離された核酸分子。 - 【請求項３】 前記ポリヌクレオチドが、配列番号Ｙとして同定される配列
をコードするヌクレオチド配列、またはＡＴＣＣ受託番号Ｚに含まれるｃＤＮＡ
配列によってコードされるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、
請求項１に記載の単離された核酸分子。 - 【請求項４】 前記ポリヌクレオチドが、配列番号Ｘの全体のヌクレオチド
配列、またはＡＴＣＣ受託番号Ｚに含まれるｃＤＮＡを含む、請求項１に記載の
単離された核酸分子。 - 【請求項５】 前記ポリヌクレオチドがＤＮＡである、請求項２に記載の単
離された核酸分子。 - 【請求項６】 前記ポリヌクレオチドがＲＮＡである、請求項３に記載の単
離された核酸分子。 - 【請求項７】 請求項１に記載の単離された核酸分子を含む、ベクター。
- 【請求項８】 請求項７に記載のベクターを含む、宿主細胞。
- 【請求項９】 遺伝子発現を制御する異種調節エレメントに作動可能に連結
されている請求項１に記載の核酸分子を含む、組換え宿主細胞。 - 【請求項１０】 請求項９に記載の宿主細胞からコードされたポリペプチド
を発現する工程、および該ポリペプチドを回収する工程を包含する、ポリペプチ
ドの産生方法。 - 【請求項１１】 単離されたポリペプチドであって、以下： （ａ）配列番号Ｙに示されるポリペプチド、またはｃＤＮＡによってコードさ
れるポリペプチド； （ｂ）配列番号Ｙのポリペプチドフラグメント、またはｃＤＮＡによってコー
ドされるポリペプチド； （ｃ）配列番号Ｙのポリペプチドエピトープ、またはｃＤＮＡによってコード
されるポリペプチド；および （ｄ）配列番号Ｙの改変体、 からなる群より選択される配列に少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、
単離されたポリペプチド。 - 【請求項１２】 配列番号Ｙを有するポリペプチドを含む、請求項１１に記
載の単離されたポリペプチド。 - 【請求項１３】 請求項１１に記載の単離されたポリペプチドに特異的に結
合する、単離された抗体。 - 【請求項１４】 請求項１１に記載の単離されたポリペプチドを発現する、
組換え宿主細胞。 - 【請求項１５】 単離されたポリペプチドを作製する方法であって、以下： （ａ）該ポリペプチドが発現されるような条件下で、請求項１４に記載の組換
え宿主細胞を培養する工程；および （ｂ）該ポリペプチドを回収する工程、 を包含する、方法。 - 【請求項１６】 請求項１５に記載の方法によって産生される、ポリペプチ
ド。 - 【請求項１７】 医学的状態を予防、処置、または緩和する方法であって、
請求項１１に記載のポリペプチドまたは請求項１に記載のポリヌクレオチドの治
療有効量を、哺乳動物被験体に投与する工程を包含する、方法。 - 【請求項１８】 被験体における病理学的状態、または病理学的状態に対す
る感受性を診断する方法であって、以下： （ａ）請求項１に記載のポリヌクレオチドにおける変異の存在または非存在を
決定する工程；および （ｂ）該変異の存在または非存在に基づいて病理学的状態、または病理学的状
態に対する感受性を診断する工程、 を包含する、方法。 - 【請求項１９】 被験体において病理学的状態、または病理学的状態に対す
る感受性を診断する方法であって、以下： （ａ）生物学的サンプルにおける請求項１１に記載のポリペプチドの発現の存
在または量を決定する工程；および （ｂ）該ポリペプチドの発現の存在または量に基づいて病理学的状態、または
病理学的状態に対する感受性を診断する工程、 を包含する、方法。 - 【請求項２０】 請求項１１に記載のポリペプチドに対する結合パートナー
を同定する方法であって、以下： （ａ）請求項１１に記載のポリペプチドを結合パートナーと接触させる工程；
および （ｂ）該結合パートナーが該ポリペプチドの活性をもたらすか否かを決定する
工程、 を包含する、方法。 - 【請求項２１】 請求項１１に記載のポリペプチドの活性を改変する分子を
スクリーニングする方法であって、以下： （ａ）該ポリペプチドを、アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有する
と疑われる化合物と接触させる工程；および （ａ）該ポリペプチドの活性をアッセイする工程； を包含する、方法。
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