JP2003516133A - 動物飼料用添加剤 - Google Patents
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Abstract
Description
物体重増加率を改良する添加剤に関する。更に、本発明は、コクシジウム症およ
び/または細菌感染、並びに壊死性腸炎を起こす疾病等の治療および/または予
防に有用な添加剤に関する。
に重要である。これら動物は、飼育中に、アイメリア(Eimeria)、キャ
ンピロバクター(Campylobacter:グラム陰性桿菌)、クロストリ
ジウム(Clostridium)、サルモネラ、E.coli及びリステリア
等の種々の感染性細菌および寄生生物と接触する。
原因となる。コクシジウム症は、アピコンプレサ亜門の原生動物、単細胞寄生生
物により起こされる。家畜に疾病を起こす多くの種は、アイメリア属に属する。
これら寄生生物は、腸上皮内で増殖する。鶏では、アイメリアの7種が、確認さ
れており、この内5種が、病原性を有すると考えられる。具体的には、E.ac
ervulina、E.maxima、E.tenella及びE.brune
ttiが含まれる。
病の症状は、重大感染から微感染まで種々存在する。多くの寄生原生動物と同様
、アイメリアのライフサイクルは、比較的複雑であり、鶏腸内で有性および無性
増殖する。この寄生生物の増殖および発育の工程中に、宿主組織が、破壊され、
コクシジウム症発病で観測される種々の疾病に至る。生産および分泌されるオー
シスト(接合子嚢)は、宿主の外部で更に発育し、他の鶏に感染する。実際、オ
ーシストは、宿主外で長期間生存し、当初の感染宿主を取除いた後も、他の鳥類
に感染可能である。これらオーシストは、ヒト、ペット、昆虫、齧歯類、ダスト
及び他の鳥類等の他の要因により群れ間に広がる。
ロシストは、2つのスポロゾイトを更に含む。これらスポロゾイトは、鶏の消化
管内の機械的および酵素的作用によって放出される。この放出により、スポロゾ
イトは、アイメリア種に応じて、腸または盲腸内の上皮細胞に侵入しえる。 アイメリアの種および菌株間で病原性の差はあるが、感染動物は、血便、高死亡
率、一般的傾眠、るい痩(痩せ細り)、飼料消費の顕著な減少、下痢及び産卵減
少の1つ以上の症状を示す。おそらく、家禽類の不慮の死亡の約6〜10%は、
コクシジウム症が原因と考えられる。更に、準臨床疾病では、飼料転換率(FC
R)を増大させ、飼育効率を減少させる。従って、この疾病の経済的影響は、重
大であり、最も好ましくないものである。
おいて、高水準の衛生および化学殺菌剤の使用に基づく経営戦略を通じて前記疾
病を抑制しようとする試みが行われている。しかしながら、かかる対策により養
鶏舎での当初の感染を低下できるものの、この厳密な衛生状態下においても、な
お、コクシジウム症の発生が見つかっている。また、生ワクチン及び弱毒化ワク
チンの両方が、抑制方法として研究されているが、これらは、比較的高価である
とともに、副作用として、動物の成長率を低下させる傾向がある。
ラムの使用により、ルーティン的に抑制されている。かかるプログラムは、コク
シジウム感染を規制し、準臨床的疾病発病の抑制を試みるものである。この発病
抑制は、通常、群れの生命当初からブロイラー屠殺までの期間において抗コクシ
ジウム剤を飼料に連続混入させることにより、または制御された鶏間引きにより
達成されている。当初の開発時、これら抗コクシジウム剤は、個別に使用された
。この結果、薬剤耐性を有する寄生株が、次々生み出された。現在は、新薬の連
続的導入によって、又は発育期間中(シャトルプログラム)又は頻繁な間隔(ロ
ーテーションプログラム)のいずれかで異なる生化学構造の抗コクシジウム剤を
合理的に使用することを含む薬剤プログラムの使用によって、コクシジウム症の
抑制が試みられている。家禽類における抗コクシジウム剤のルーティン的使用に
も拘わらず、準臨床的コクシジウム症は、なお、家禽農場の大部分で見つかって
いる。
、酵素活性に悪影響を及ぼすことなく細胞の浸透力を増加させ、酵素のイオン性
または温度による不活性を防止する。(Nash等「Aust. J. Pla
nt Physiol」9、47−57(1982);Yancey等「Sci
ence」224、1064−1069(1982);Rudolph等「Ar
chives Biochem. Biophys.」245、134−143
(1986);McClue及びHanson「Trends in Biot
echnology」8、358−362(1990);Papageorgi
o等「Curr. Res. In Photosynthesis」1、95
7−969(1990)) ある種の生物(及び組織)は、浸透ストレス下に浸
透誘導合成によりベタイン等の内部塩を多量に蓄積することができるが、殆どの
動物は、この能力を欠き、外からの内部塩摂取に依存する。例えば、単離された
サーモン肝臓ミトコンドリアは、浸透ストレスに晒された際、ベタイン摂取の増
加を示すが、合成はできない。(Bjorkoy G.「サーモン(Salmo
salar)及びイガイ中のグリシンベタイン合成」MScthesis、ノ
ルウエーフィシャーズ単科大学、トロムセ大学、94頁)
に開示される。同様の目的にベタイン及びコクシジウム抑制薬の組合わせ使用が
、国際特許出願第WO94/24886号に教示される。ヨーロッパ特許出願第
0,681,787号には、コクシジウム症の治療及び/又は予防に プロテア
ーゼ及び/又はカルボハイドラーゼ等の酵素を使用することが示唆されている。
を含有させることにより、家畜の回腸内の細菌感染を治療することが教示されて
いる。かかる酵素は、飼料の穀物成分中に存在する多糖類を、消化管内に存在す
る宿主良性微生物により食物源として使用されるオリゴ糖に分解する。この増殖
の結果、病原性細菌は、競争排除工程に起因して成長することができない。この
方法は、一般に、食物品質が悪い場合により効果がある。(クラッセン(Cla
ssen)等「Proc. 2nd Eur. Symp. on Feed
Enzymes」1995、65;パック(Pack)及びベッドフォード(B
edford)「Poultry International」1998、4
3)
能を改良するため、ベタイン及び種々の酵素の組合わせ使用が教示されている。
しかしながら、上記従来技術のいずれにも、かかる組合わせを、コクシジウム症
または細菌感染の治療又は予防のため、若しくはコクシジウム症に侵された動物
の成長率を保持するために使用するという示唆はない。
ンズ(Clostridium perfringens)により喚起される壊
死性腸炎である。クロストリジウム感染に先立って、通常、コクシジウム症が起
こる。コクシジウム症は、動物の免疫反応を弱め、その結果、動物は、以降に細
菌感染に晒された場合に感応ができなくなる。しかしながら、ストレス、収容過
多または飽和散乱状態等の他の要因も、寄与する。壊死性腸炎は、通常、動物飼
料に、水溶性亜鉛バシトラシン、バージナマイシン又はペニシリンを添加するこ
とにより治療する。
合わせ化合物を提供することにある。本発明の第二の目的は、コクシジウム症ま
たは壊死性腸炎等の細菌感染の予防および/または治療用薬剤の製造への前記化
合物の使用を提供することにある。本発明の第三の目的は、動物体重増加率を低
下させるアイメリア感染の危険を防止する、動物飼料用の組合わせ添加物を提供
することにある。
特に、アイメリア感染に起因するコクシジウム症の治療および/または予防用薬
剤製造への使用に存する。
細菌感染、例えば、サルモネラ、キャンピロバクター(Campylobact
er:グラム陰性桿菌)又はリステリアに起因する感染の治療および/または予
防用薬剤製造への使用に存する。
特に、ウエルチ菌感染から生じる壊死性腸炎の治療および/または予防用薬剤製
造への使用に存する。
成る、動物飼料用添加剤に存する。
更にキシラナーゼを含む。
単位およびα−アミラーゼ活性単位が記載される。これら活性は、混合酵素また
は液状酵素混合物に関し、以下のように分析する。
性化合物1マイクログラム(ティロシン規定換算)を遊離する酵素量を示す。
ーカーに秤量し、少量(約5ml)の蒸留水で湿潤させる。カゼインを充分に湿
潤させた後、0.2Mリン酸水素ジナトリウム溶液20mlを添加する。得られ
た混合物を、攪拌下に60℃で加熱し、カゼインを溶解して乳白溶液を得る。次
いで、蒸留水60ml及び、必要に応じて、オクチルアルコール(消泡剤:同様
の物質を使用してもよい)1〜2滴を添加する。室温まで冷却した後、0.5M
水酸化ナトリウム及び1M乳酸により 溶液のpH値を7.5に調整する。得ら
れた溶液を、容量測定用フラスコに移し、蒸留水を加えて100mlとする。 基質溶液は、低温室に貯蔵すれば、1週間は使用可能である。
を加えて500mlとする。
0mlとする。
H3COONa)18.10g及び酢酸(CH3COOH)18.80gを蒸留水
に溶解し、更に蒸留水を加えて1,000mlとする。
する。
00mlとする。
態に保持し、これに平衡カゼイン基質5mlを添加し、攪拌した後、+40℃正
確に30分培養する。次いで、沈殿剤5mlを添加し、攪拌する。正確に30分
培養した後、即座に濾紙(Whatman−1又はMacherey Nage
l640we)を通じて濾過する。
1mlをピペットにて添加する。得られた溶液を、+40℃で30分攪拌培養す
る。室温に冷却して、蒸留水に対する660nmにおける吸光度を測定する。
態に保持し、沈殿剤5mlを添加し、+40℃で正確に30分攪拌培養する。こ
れにカゼイン基質5mlを添加した後、+40℃で正確に30分攪拌培養する。
得られた溶液を、即座に濾紙(Whatman−1又はMacherey Na
gel640we)を通じて濾過する。
要がある。
製し、0.02MNaCl溶液中に溶解した後、0.02MNaCl溶液を加え
て100mlとする。
液を調製する。
試薬1mlをピペットにて添加する。得られた溶液を、+40℃で30分攪拌培
養する。室温に冷却して、蒸留水に対する660nmにおける吸光度を測定する
。 吸光度を関数として、チロシン濃度をプロットする。
度;kは、標準曲線の傾き;Fは、反応希釈係数(=11);Dfは、希釈係数
;tは、反応時間(30分)をそれぞれ示す。
μモル(キシロース規定換算)を遊離する酵素量を示す。
0mlを添加する。得られた液を、マグネチックスターラーにより30分間混合
する。pH5.3の0.05M酢酸ナトリウム緩衝液約40mlを添加する。次
いで、1M酢酸によりpH値を5.3に調整した後、pH5.3の0.05M酢
酸ナトリウム緩衝液を加えて、全量を100mlとする。基質は、使用時に混合
して使用する。
加えて100mlとする。
1,000mlとする。B:氷酢酸3.0gを、蒸留水に溶解し、更に蒸留水を
加えて全量を1,000mlとする。溶液Bを使用して、溶液AのpHを5.3
に調整する。
られた懸濁液に、水酸化ナトリウム溶液(蒸留水300ml中にNaOH32.
0gを溶解した溶液)300mlを攪拌下に連続して徐々に添加する。懸濁液を
、水浴(浴温:+48℃以下)中で攪拌下に溶液が透明になるまで、加熱する。
次いで、酒石酸カリウムナトリウム600gを徐々に添加する。得られた溶液を
、必要に応じて、溶液が透明になるまで、+48℃以下の温度で加熱する。 蒸留水で全量を2,000mlとした後、粗焼結ガラスフィルターを通じて濾過
する。
間安定に保持できる。
℃で平衡させ、これにキシラン基質1mlを添加し、攪拌した後、+50℃正確
に30分培養する。次いで、DNS試薬3mlを添加攪拌し、得られた反応混合
物を正確に5分間煮沸する。反応混合物を、冷水浴で室温に冷却した後、蒸留水
に対する540nmにおける吸光度を測定する。
を添加攪拌する。酵素希釈液(pH5.3の0.05M酢酸ナトリウム緩衝液中
)1mlを添加攪拌する。得られた混合物を正確に5分間煮沸する。反応混合物
を、冷水浴中で室温に冷却した後、蒸留水に対する540nmにおける吸光度を
測定する。
要がある。
準溶液を調製した。標準溶液中のキシロース濃度は、0.05〜0.5mg/m
lの範囲にある必要がある。標準溶液1ml、キシラン基質1ml及びDNS試
薬3mlをピペットにて試験管に取り、正確に5分間攪拌煮沸する。得られた反
応液を、冷水浴中で室温に冷却した後、標準ブランクに対する540nmにおけ
る吸光度を測定する。標準ブランクは、キシロース溶液を、pH5.3の0.0
5M酢酸ナトリウム緩衝液1mlで置換して調製する。その他は、標準ブランク
は、キシロース標準溶液と同様に処理する。
しては、別個の標準曲線を新たに作成する。
度;kは、標準曲線の傾き;C0は、キシロース標準曲線の切片;1000は、
係数(mmol>μmol);Dfは、希釈係数(ml/g);MWxylは、キ
シロース分子量(150.13mg/mmol);tは、反応時間(30分)を
それぞれ示す。
合1μモルを加水分解する触媒量を示す。
タブレット(pharmacia Dignotics社製)を使用する。前記
タブレットは、蒸留水中で、水溶性ブルースターチポリマー、ウシ血清アルブミ
ン及び緩衝液から調製する。
2gを蒸留水で希釈し、容積測定用フラスコに添加した後、更に蒸留水を加えて
全量を1000mlとする。
後、更に蒸留水を加えて全量を1,000mlとする。
て試験管に取り、+37℃で5分間平衡さる。この溶液に、ペンチにより、基質
タブレットを添加し、10秒間よく混合する。得られた混合物を+37℃で正確
に15分間培養する。反応時間の計測は、タブレットの添加から開始する。次い
で、0.5MNaOH溶液1.0mlを添加し、よく攪拌する。得られた反応液
を、濾過するか又は3500rpmで10分間遠心分離した後、試薬ブランクに
対する620nmにおける吸光度を測定する。
より、基質タブレットを添加し、10秒間よく混合する。得られた混合物を+3
7℃で正確に15分間培養する。次いで、0.5MNaOH溶液1.0mlを添
加し、よく攪拌する。得られた反応液は、濾過するか又は3500rpmで10
分間遠心分離する。
ラーゼ活性は、タブレットキットに同封された一覧表から読み取る。各タブレッ
トバッチには、検量表が添付されている。
α−アミラーゼ活性値(U/l);Dfは、希釈係数(ml/g);1000は
、(リットルをmlに換算するための)係数をそれぞれ示す。
動物畜産学の当業者の一般的知識を構成する種々の方法論が参照される。かかる
公知の方法論を記載した刊行物および他の資料としては以下のものが挙げられる
。
eterinary Manual)」第6版、フレザー(Fraser)他編
(1986);「食料および薬剤局(FDA)1994、飼料添加剤解説」米国
食料および薬剤局、1994;「獣医学研究および開発、パート6:抗コクシジ
ウム」ロイド・エバンス(Lloyd−Evans,L.P.M.)編、PJB
パブリケーション社;「家禽類の疾病」カルネック(B.W.Calnek)編
、アイオワ州立大学プレス、アメス、アイオワ、1991等に記載される。
家禽類」;「飼料および栄養摂取」第2版、AVIパブリッシング社、ウエスト
ポート、コネチカット(1980)等に記載される。
s)薬剤科学」第18版、ジェナロー(A.R.Gennaro)編、マック・
パブリッシング社、イーストン、ペンシルバニア(1990)等に記載される。
上記したように、本発明によれば、プロテアーゼ及び第4級アミンカルボン酸内
部塩の、コクシジウム症、細菌感染または特にウエルチ菌感染から生じる壊死性
腸炎の治療および/または予防用薬剤製造への使用が提供される。ベタイン及び
プロテアーゼの組合わせを含む飼料を使用した場合の利点としては、ルーチン的
に飼料に添加されている抗菌剤の含量を減少させることができるか、または場合
によっては、完全に省略することができる。かかる抗菌剤の使用が禁止されてい
る地域では、本発明は、細菌症の抑制に新たなアプローチを提供するものである
。
前に動物食における抗生物質の使用を中止する必要があった。これによって、か
かる薬剤を比較的に非含有である食肉を提供するとともに、当該食肉を、ヒトの
消費に適合させていた。これと対照的に、動物食から抗生物質が完全に省略され
た場合、本発明で達成されたように、動物は、使用中止期間経過後でなくとも、
如何なる年齢でも屠殺可能となる。これによって、農業従事者に柔軟性を持たせ
るとともに、動物が屠殺直前に感染する危険を取除くことができる。更に、確実
に、抗生物質を非含有な食肉および鶏卵の生産が保証される。かかる保証の無い
製品に比して、上記の食肉および鶏卵は、市場的に有利である。
飼料から取除くことによって、細菌の耐抗生物質株の淘汰性を低下させることが
できる。従って、より抗生物質の利きやすい菌株が、動物の消化管に存在するた
め、同様のヒト条件で抗生物質を使用する場合、細菌致死効果をより確実に得る
ことができる。
な異なる化合物を混合して簡単に製造することができる。得られる添加剤は、次
いで、直接飼料と混合するか、又はより従来的には、製粉コムギ、トウモロコシ
又は大豆粉等の穀物系キャリアー物質上に含浸させる。かかる含浸キャリアーは
、また、本発明の第4の要旨に従った飼料添加剤を構成する。
剤、ミネラル飼料添加剤またはアミノ酸飼料添加剤等の他の飼料添加剤の1種以
上と混合されてもよい。得られた、幾つかの異なるタイプの成分を含む飼料添加
剤は、次いで、適当な量で、飼料と混合される。また、上記飼料添加剤は、動物
が摂取する第2の(異なる)飼料または飲料水中に添加することにより、動物食
中に含有させることができる。従って、本発明の添加剤を、通常の穀物系動物主
飼料に含有させることは、特に好ましい実施形態ではあるが、必ずしも必須では
ない。
て調合することもできる。前記予備混合物は、飼料製造前、飼料製造中、又は使
用に供する前の飼料の最終段階で、原料に添加することができる。また、内部塩
およびプロテアーゼの組合わせを、ペレット又はマッシュ形状に予備成形された
飼料物質に直接添加することができる。
くとも25重量%、好ましくは少なくとも35重量%の割合で含有する。穀類と
しては、コムギ、トウモロコシ、ライムギ、オオムギ、オートムギ、トリチケー
ル(triticale)、イネ及びモロコシの1種以上を使用することができる。これ
らの中で、特に好ましい穀類としては、コムギ又はトウモロコシが挙げられる。
穀類が、トウモロコシの場合、添加剤または薬剤は、好ましくは、更にα−アミ
ラーゼを含む。
肉粉または野菜等から誘導される追加のタンパク源を含有させる必要がある。こ
れら追加のタンパク源は、動物飼料に対し50重量%以下の割合で含有される。
植物タンパク源としては、脂肪分の豊富なダイズ、アブラナ、キャノーラ、大豆
粉、アブラナ粉およびキャノーラ粉の少なくとも1種が含有される。
基、より好ましくは炭素数1〜6のアルキル基、最も好ましくは全てがメチル基
であり;結合基−L−は、アルコキシアルキル又はアルキレン等の有機結合基、
好ましくはC1−C6アルキレン、最も好ましくはメチレンを示す。)第4級アミ
ンカルボン酸内部塩の具体例としては、ベタイン(Me3N+CH2COO-)、M
e3N+−CHMeCOO-、Et3N+CH3COO-、Me3EtN+CH2COO-
、Me3N+CH2CH2COO-、Me3N+CH2OCH2COO-及びMe3N+C(
CHMe3)HCOO-が挙げられる。好ましい内部塩としては、商品名「Bet
afin(登録商標)」の下にフィンフィーズ社から市販されるベタインが挙げ
られる。
.1〜10g/kg、最も好ましくは0.5〜2g/kgの割合で、飼料中に含
有される。
活性を有するバシラス・サブティリス(Bacillus subtilis)
から誘導されるサブチリシンの使用が好ましい。かかるサブチリシンは、例えば
、米国特許第4,760,025号に記載される。プロテアーゼは、飼料1kg
当たり100U〜100,000U、好ましくは500U〜10,000Uに相
当するプロテアーゼ活性を示す量で、飼料中に含有される。好適なプロテアーゼ
としては、これに限定しないが、Novo NEUTRASE(商標)(Nov
o Nordisk社)、PURAFECT(商標)(Genencor In
ternational社)、SAVINASE(商標)(Novo Nord
isk社)、MAXACAL(商標)(Gist−Brocades社)、DU
RAZYM(商標)(Novo Nordisk社)及びMAXAPEM(商標
)(Gist−Brocades社)等の市販プロテアーゼが挙げられる。
ゼを含む。キシラナーゼは、トリコデルマ(Trichoderma)、アスペ
ルギラス(Aspergillus)、ヒューミコーラ(Humicola)、
ネオカリマスチス(Neocallimastix)又はサーモマイセス(Th
ermomyces)等の菌類から誘導することができる。好ましいキシラナー
ゼとしては、国際公開公報第WO92/06209号の実施例22に記載される
トリコデルマ・ロンギブラチアタム(Trichoderma longibr
achiatum)から得られる低pIキシラナーゼ及び/又は高pIキシラナ
ーゼが、挙げられる。キシラナーゼは、また、バシラス(Bacillus)、
ストレプトマイシス(Streptomyces)、マイクロテトラスポーラ(
Microtetraspora)、クロストリジウム(Clostridiu
m)又はルミノコッカス(Ruminococcus)等の細菌類から得ること
ができる。また、キシラナーゼは、宿主細菌または菌株内の適当な遺伝子の混入
等の遺伝子操作を行った宿主から得ることもできる。キシラナーゼ活性は、約3
,000Uが好ましい。トリコデルマ・ロンギブラチアタム(Trichode
rma longibrachiatum)から得られる3,000U/gの最
小活性を有するキシラナーゼは、「AVIZYME(登録商標)」の商品名でフ
ィンフィーズ・インターナショナル社から市販されている。キシラナーゼは、飼
料1kg当たり100U〜100,000U、好ましくは200U〜1,000
Uに相当するキシラナーゼ活性を示す量で、飼料中に含有される。
薬剤または添加剤中には、更に、α−アミラーゼが、含有されていてもよい。本
発明では如何なる形態のα−アミラーゼも使用できるが、好ましくは、バシラス
・サブチリス(Bacillus subtilis)から得られる4,000
U/gの最小活性を有するα−アミラーゼが使用される。かかるバシラス・サブ
チリス(Bacillus subtilis)から得られる4,000U/g
の最小活性を有するα−アミラーゼは、「AVIZYME(登録商標)」の商品
名でフィンフィーズ・インターナショナル社から市販されている。α−アミラー
ゼは、飼料1kg当たり10U〜100,000U、好ましくは100U〜4,
000Uに相当するα−アミラーゼ活性を示す量で、飼料中に含有される。
用前に混合されても、又飼料に別々に添加されてもよい。プロテアーゼ、キシラ
ナーゼ及びα−アミラーゼの組合わせは、「AVIZYME(登録商標)151
0」の商品名でフィンフィード・インターナショナル社から市販されている。こ
れら酵素の別の組合わせは、「AVIZYME(登録商標)1500」の商品名
で乾燥予備混合物の形態のものが市販されている。なお、プロテアーゼを他のタ
ンパクと一緒に長期間保存すると、後者の変質を生じるため、一般には、このよ
うな保存は避けるべきである。
び放牧家畜に使用するのが好ましい。本発明が特に好ましく適用される動物とし
ては、鶏、七面鳥、アヒル、ガチョウ等の家禽類、ウシ、ウマ、ヒツジ等の反芻
動物、ブタ等のイノシシ類、ラビット等の齧歯類および魚類が挙げられる。本発
明は、特に、ブロイラー鶏に有用である。
メリア種、例えば、アイメリア種に属するネカトリクス(necatrix)、
ガロパルボニス(galloparvonis)、メラグリミチス(melea
grimitis)、イノキュア(innocua)、メラグリヂス(mele
agridis)、サブロチュンダ(subrotunda)、ディスパーサ(
dispersa)、トランカタ(truncata)、アセルブリナ(ace
rvulina)、ブルネティ(brunetti)、マクシマ(maxima
)、ミチス(mitis)、プラコックス(praecox)及びテネラ(te
nella)等の病原体に起因する影響を軽減するように処方することができる
。より好ましくは、本添加剤は、アイメリア感染動物の体重回復増加を促進させ
る。
ア種に属するE.アセルブリナ(E.acervulina)、E.ブルネティ
(E.brunetti)、E.マクシマ(E.maxima)、E.ミチス(
E.mitis)、E.ネカトリクス(E.necatrix)、E.プラコッ
クス(E.praecox)及びE.テネラ(E.tenella)等の感染に
起因する家禽類の悪影響を軽減するように処方することができる。
(zuernii)、ボビス(bovis:スミシィ(smithii))、エ
リプソイドリス(ellipsoidlis)等に感染したウシに誘起される悪
影響を軽減するように処方することができる。
rloingi A:オビナ(ovina))、ウェイブリッジエンシス(we
ybridgensis:アルロンギス B(arlongis B))、クラ
ンダリス(crandalis)、アサタ(ahsata)、オビノイダリス(
ovinoidalis)、ギルルーシ(gilruthi)等に感染したヒツ
ジに誘起される悪影響を軽減するように処方することができる。
イメリア種に属するアルロインギ(arloingi)、ファウレイ(faur
ei)、カプロイナ(caproina)、ニナコールヤキモバ(ninako
hlyakinovae)、クリステンセニ(christenseni)等に
よるイミュニゼーション状態のヤギに誘起される悪影響を軽減するように処方す
ることができる。
イメリア種に属するデブリーキ(debliecki)、スカブラ(scabr
a)、ペニニュータ(penninuta)等によるイミュニゼーション状態の
ブタに誘起される悪影響、並びにイソスポラ(Isospora)種、例えば、
イソスポラ・スイス(Isospora suis)によって誘起される悪影響
を軽減するように処方することができる。
ium)、サルモネラ、キャンピロバクター(Campylobacter:グ
ラム陰性桿菌)、E.coli及びリステリア(listeria)、特に、ウ
ェルチ菌(Clostridium perfringens)、サルモネラ・
エンテリティディス(Salmonella enteritidis)及びキ
ャンピロバクター・ジェジュニ(Campylobacter jejuni)
等の細菌に感染した家禽類に誘起される悪影響を軽減するように処方することが
できる。ウェルチ菌(Clostridium perfringens)は、
壊死性腸炎の主原因の一つであるため、本発明の栄養添加剤は、従って、壊死性
腸炎の治療および/または予防用薬剤調製に使用することができる。
。ポリエステル、ポリアミノ酸、ポリピロリドン、エチレン酢酸ビニル、メチル
セルロース、カルボキシメチルセルロース、プロタミンサルフェート等の適当な
マクロ分子を選択し、かつこれらを確かな手順にしたがって組み合わせることに
よって、薬剤の制御放出が可能となる。また、内部塩およびプロテアーゼの作用
期間は、これら薬剤を、ポリエステル、ポリアミノ酸、ハイドロゲル、ポリ乳酸
またはエチレン酢酸ビニル共重合体等のポリマー粉末に包含させることによって
制御できる。別の方法としては、内部塩およびプロテアーゼを、マイクロカプセ
ル内に封入してもよい。上記マイクロカプセルの製造および使用に関する種々の
材料および方法は、「レミントン(Remington’s)薬剤科学」第16
版、オスロー(A.Oslow)編、マック・パブリッシング社、イーストン、
ペンシルバニア(1980)に記載される。
形態に加えて、本発明の更なる実施形態では、内部塩およびプロテアーゼを含有
する他の組成物を、ワクチン、栄養分または医薬を含む所望の組成物と共に、投
与することもできる。
の効果、並びにアイメリア感染の治療用薬剤の製造に適用した場合を示す。
のグループに分けた。飼料投与を0日目より開始し、14日目にアイメリア・マ
クシマ(Eimeria maxima)の投与を行った。かかる投与は、アイ
メリア・アサービュリナ(E.acervulina)及びアイメリア・マクシマ
(E.maxima)のオーシストを水道水2ml中に溶かし込んで、ひな鳥の
ソノウに接種した。一羽当たりの投与量は、アイメリア・アサービュリナ(E.
acervulina)100,000オーシスト及びアイメリア・マクシマ(
E.maxima)50,000オーシストであった。これら2種のアイメリア
種は、空間的に腸内で分離される。即ち、アイメリア・アサービュリナ(E.a
cervulina)は、十二指腸及び空腸前部に感染し、一方アイメリア・マ
クシマ(E.maxima)は、小腸中央部、つまり空腸末端から回腸中央まで
の部分を好む。被験鳥を、ケージで0〜14日間、木くずを敷いた開放オリで1
4〜21日間保持した。
であった。飼料は、直径約5mmの脆い小ペレットにコールドプレスした。開始
飼料は、0〜14日で使用され、仕上げ飼料は、14〜21日で使用された。添
加剤を、飼料ペレットに噴霧した。具体的には、ベタイン水溶液を、飼料1kg
当たり1gの投与量で、及びキシラナーゼ300U/g、プロテアーゼ4,00
0U/g及びα−アミラーゼ400U/gから成る、「AVIZYME(登録商
標)1510」(フィンフィード・インターナショナル社製)の水溶液を、飼料
1kg当たり1gの投与量で、飼料に添加した。 使用した飼料組成を、以下の表に示す。
ima)の投与直前に測定した。表4に示すように、ベタイン及びプロテアーゼ
の組合わせ使用は、これら化合物を個別に飼料に添加した場合に比して、大きな
体重増加を示すことが判る。
。結果を、表5に要約する。グループDでは、ベタイン又はプロテアーゼのいず
れかを添加した飼料を使用したグループB及びCに比して、体重の改善が見られ
た。また、これら2成分の組合わせによって、個々の成分の効果の合計よりも大
きな向上が見られた。
プロテアーゼの組合わせの活性を検証する。使用飼料は、実施例1に記載の仕上
げ飼料と同一である。
。グループEには、アイメリア・マクシマ(Eimeria maxima)を
投与し、グループFは、ウェルチ菌を投与し、グループGは、アイメリア・マク
シマ(Eimeria maxima)とウェルチ菌を同時投与した。ウェルチ
菌α−トキシン遺伝子が、以下のように全体微生物DNAから検出された。ウェ
ルチ菌α−トキシン遺伝子の公知のヌクレオシド配列に従って形成されたプライ
マーを使用して、盲腸の全体微生物DNAを、ポリマラーゼ連鎖反応(PCR)
させた。α−トキシンプライマーの配列およびPCR反応の実施条件は、ソンガ
ー(Songer)及びデ・ミーア(de Meer)著「Am.J.Vet.
Res.」1997年6月;58(7)、702〜705頁に記載される。
性ウェルチ菌α−トキシン遺伝子が存在することを示す。レーン2及び4におけ
る強い帯域の欠如により、アイメリア投与が、ウェルチ菌感染の必須前提条件で
あることが判る。何かの理論を持ち出すまでもなく、アイメリア投与は、腸内の
プロテアーゼの通常レベルを低下させ、腸上部域での栄養分摂取を減少させ、こ
の結果盲腸内でのタンパクレベルを増加(ウェルチ菌に好適な成長条件)させる
ことが分かる。更に重要な点は、宿主動物の免疫系に対するアイメリア投与の効
果である。免疫系が、既にアイメリア投与により先に占有されている場合は、ウ
ェルチ菌投与に対する免疫応答が弱まる傾向がある。
帯域が、プロテアーゼのみの処理(レーン6)では観測されるが、ベタイン及び
プロテアーゼを組合わせ使用した場合(レーン7)では観測されないことが分か
る。更に、ベタインはウェルチ菌投与に対し有効でないことが、一般共通知識と
なっている。従って、ベタイン及びプロテアーゼの組合わせは、ウェルチ菌感染
に対し有効であるが、他方ベタイン又はプロテアーゼのいずれか一方を個別に使
用した場合は、ウェルチ菌感染を効果的に抑制できない。
テアーゼの組合わせを含有させた場合の効果を示すグラフ
ーゼ、及びベタイン及びプロテアーゼの組合わせを含有させた場合の効果を示す
グラフ
エルチ菌トキシン遺伝子の存在を示すゲルクロマトグラム
Claims (19)
- 【請求項1】 プロテアーゼ及び第4級アミンカルボン酸内部塩の、コクシ
ジウム症の治療および/または予防用薬剤製造への使用。 - 【請求項2】 プロテアーゼ及び第4級アミンカルボン酸内部塩の、動物ア
イメリア感染治療用薬剤の製造への使用。 - 【請求項3】 プロテアーゼ及び第4級アミンカルボン酸内部塩の、アイメ
リア感染動物における体重増加促進用の飼料添加物としての使用。 - 【請求項4】 プロテアーゼ及び第4級アミンカルボン酸内部塩の、細菌感
染の治療および/または予防用薬剤製造への使用。 - 【請求項5】 前記細菌感染が、サルモネラ、キャンピロバクター(Cam
pylobacter:グラム陰性桿菌)、E.coli及びリステリアに起因
する請求項4に記載の使用。 - 【請求項6】 プロテアーゼ及び第4級アミンカルボン酸内部塩の、特に、
ウエルチ菌感染から生じる壊死性腸炎の治療および/または予防用薬剤製造への
使用。 - 【請求項7】 内部塩がベタインである前記請求項のいずれかに記載の使用
。 - 【請求項8】 薬剤が更にキシラナーゼを含む前記請求項の何れかに記載の
使用。 - 【請求項9】 薬剤が更にα−アミラーゼを含む前記請求項の何れかに記載
の使用。 - 【請求項10】 薬剤が動物飼料である前記請求項の何れかに記載の使用。
- 【請求項11】 飼料の内部塩含有量が、飼料1kg当たり0.01〜20
gである請求項10に記載の使用。 - 【請求項12】 飼料中のプロテアーゼ含量が、飼料1kg当たり100〜
100,000Uのプロテアーゼ活性に相当する請求項10又は11に記載の使
用。 - 【請求項13】 飼料中のキシラーゼ含量が、飼料1kg当たり100〜1
00,000Uのキシラーゼ活性に相当する、請求項8に従属する場合の請求項
10〜12のいずれかに記載の使用。 - 【請求項14】 飼料中のα−アミラーゼ含量が、飼料1kg当たり10〜
100,000Uのα−アミラーゼ活性に相当する、請求項9に従属する場合の
請求項10〜13のいずれかに記載の使用。 - 【請求項15】 プロテアーゼ及び第4級アミンカルボン酸内部塩から成る
動物飼料用添加剤。 - 【請求項16】 内部塩がベタインである請求項15に記載の動物飼料用添
加剤。 - 【請求項17】 更にキシラナーゼを含む請求項15又は16に記載の動物
飼料用添加剤。 - 【請求項18】 更にα−アミラーゼを含む請求項15〜17の何れかに記
載の動物飼料用添加剤。 - 【請求項19】 請求項15〜18の何れかに記載の動物飼料用添加剤と少
なくとも25重量%の穀類とから成る動物飼料。
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