JP2003514583A - 新規ヒト蛋白質キナーゼおよび蛋白質キナーゼ様酵素 - Google Patents

新規ヒト蛋白質キナーゼおよび蛋白質キナーゼ様酵素

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Abstract

(57)【要約】 本発明は，キナーゼポリペプチド，キナーゼポリペプチドをコードするヌクレオチド配列，ならびに，種々のキナーゼ関連疾病および状態の診断および治療に有用な種々の産物および方法に関する。バイオインフォマティクス戦略を用いて，ＰＴＫおよびＳＴＫの哺乳動物メンバーが同定され，その蛋白質構造が予測された。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 本発明は，米国特許仮出願６０／１９０，１６２；６０／１７４，１８５；６
０／１６８，９９７；６０／１７９，３６４；６０／１８３，１７３；６０／１
７８，０７８；６０／１９３，４０４；６０／１９５，９５３；および６０／１
８７，１５０に基づく優先権を主張する。これらはすべてその全体を本明細書の
一部としてここに引用する。
【０００２】発明の分野 本発明は，キナーゼポリペプチド，キナーゼポリペプチドをコードするヌクレ
オチド配列，ならびに種々のキナーゼ関連疾病および状態の診断および治療に有
用な種々の産物および方法に関する。
【０００３】発明の背景 以下の本発明の背景の記述は，本発明の理解を助けるために提供されるもので
あり，本発明に対する先行技術であるかまたはそれを記載すると認めるものでは
ない。
【０００４】 細胞シグナル伝達は，各種の細胞プロセスを制御する外部刺激を細胞内部にリ
レーするための基本的メカニズムである。シグナル伝達の重要な生物化学メカニ
ズムの一つは蛋白質の可逆的リン酸化であり，これは，その構造と機能を変化さ
せることにより成熟蛋白質の活性を制御することができる。
【０００５】 蛋白質リン酸化は，細胞のシグナル伝達において中枢的役割を果たす。このタ
イプの翻訳後修飾により制御される生物学的機能には以下のものがある：細胞分
裂；分化および死（アポトーシス）；細胞運動性および細胞骨格構造；ＤＮＡ複
製の制御，転写，スプライシングおよび翻訳；小胞体およびゴルジ装置から膜お
よび細胞外空間への蛋白質輸送事象；蛋白質の核移入および移出；代謝反応の制
御等。異常な蛋白質リン酸化は，多くの疾病，例えば癌，ならびに免疫性，神経
性および代謝性疾患の病因に関連していることが広く知られている。
【０００６】 本明細書の全体を通して，キナーゼについては以下の略号を用いる： ＡＳＫ アポトーシスシグナル制御キナーゼ ＣａＭＫ Ｃａ２＋／カルモジュリン依存性蛋白質キナーゼ ＣＣＲＫ 細胞サイクル関連キナーゼ ＣＤＫ サイクリン依存性キナーゼ ＣＫ カゼインキナーゼ ＤＡＰＫ 死亡付随蛋白質キナーゼ ＤＭ 筋緊張性ジストロフィーキナーゼ Ｄｙｒｋ 二重特異性チロシンリン酸化制御キナーゼ ＧＡＫ サイクリンＧ関連キナーゼ ＧＲＫ Ｇ−蛋白質共役レセプター ＧｕＣ グアニル酸シクラーゼ ＨＩＰＫ ホメオドメイン相互作用蛋白質キナーゼ ＩＲＡＫ インターロイキン−１レセプター関連キナーゼ ＭＡＰＫ 有糸分裂促進物質活性化蛋白質キナーゼ ＭＡＳＴ 微小管付随ＳＴＫ ＭＬＣＫ ミオシン軽鎖キナーゼ ＭＬＫ ミックスライニージキナーゼ ＮＩＭＡ ＮｉｍＡ関連蛋白質キナーゼ ＰＫＡ ｃＡＭＰ依存性蛋白質キナーゼ ＲＳＫ リボゾーム蛋白質Ｓ６キナーゼ ＲＴＫ レセプターチロシンキナーゼ ＳＧＫ 血清およびグルココルチコイド制御キナーゼ ＳＴＫ セリントレオニンキナーゼ ＵＬＫ ＵＮＣ−５１様キナーゼ
【０００７】 真核生物において最もよく特徴決定されている蛋白質キナーゼは，最も一般的
なリン酸アクセプターアミノ酸残基である，セリン，トレオニンおよびチロシン
残基のヒドロキシル置換基上で蛋白質をリン酸化する。また，ヒスチジンにおけ
るリン酸化が細菌において見いだされている。リン酸基の存在は，蛋白質の機能
を多くの方法により調節する。一般的なメカニズムには，酵素の活性化または不
活性化につながる触媒特性（ＶｍａｘおよびＫｍ）の変化が含まれる。
【０００８】 ２番目に広く認識されているメカニズムには，蛋白質−蛋白質相互作用の促進
が関与する。この例は，リガンド活性化ＥＧＦレセプターチロシンキナーゼのチ
ロシン自己リン酸化である。この事象により，レセプターのＣ末端細胞内ドメイ
ン上のホスホチロシン残基がアダプター分子Ｇｒｂ２のＳＨ２モチーフに高親和
性結合することが誘発される。次に，Ｇｒｂ２は，そのＳＨ３モチーフを介して
第２のアダプター分子，例えばＳＨＣに結合する。この３成分系複合体の形成は
，ＥＧＦの生物学的効果を担うシグナリング事象を活性化する。最近，セリンお
よびトレオニンのリン酸化事象はまた，ホスホセリンおよびホスホトレオニンが
広範な種類の蛋白質に存在するＷＷモチーフに高親和性結合することにより媒介
される蛋白質−蛋白質相互作用事象を通してその生物学的機能を作用させること
が認識されている（Ｌｕ，Ｐ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃｅ
２８３：１３２５−１３２８）。蛋白質リン酸化の３番目に重要な結果は，基質
の細胞内局在の変化である。例としては，広範な種類の蛋白質の核移入および移
出事象が蛋白質リン酸化により制御されている（Ｄｒｉｅｒ Ｅ．Ａ．ｅｔ ａ
ｌ．（１９９９）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ １３：５５６−５６８）。
【０００９】 蛋白質キナーゼは，真核生物蛋白質の最も大きなファミリーの１つであり，数
百種類のメンバーが知られている。これらの蛋白質は，２５０−３００アミノ酸
のドメインを共有し，これは，さらに共通の触媒コア構造を含む１２個の別々の
サブドメインに分割することができる。最近，これらの保存された蛋白質モチー
フをＰＣＲに基づく方法およびバイオインフォマティクス法を用いて利用して，
既知のキナーゼが著しく拡大した。蛋白質キナーゼの触媒ドメインの配列の多重
アラインメントおよび続くパルシモニー分析により，これらを関連するキナーゼ
のサブファミリーに分割することができる。
【００１０】 キナーゼは，セリンおよびトレオニンのリン酸化に特異的なものと，チロシン
のリン酸化に特異的なものとの２グループに大別される。"二重特異性"キナーゼ
と称されるあるキナーゼは，チロシンならびにセリン／トレオニン残基をリン酸
化することができる。
【００１１】 蛋白質キナーゼはまた，細胞中のその位置によっても特徴づけることができる
。ある種のキナーゼは，外部環境，例えばリガンドの結合に応答してその触媒的
活性を直接変化させることができる，貫膜レセプタータイプ蛋白質である。また
あるものは，貫膜ドメインを有しない非レセプタータイプ蛋白質である。これら
は細胞膜の内表面から核までの種々の細胞コンパートメントにおいて見いだされ
る。
【００１２】 多くのキナーゼは制御カスケードに関与しており，ここで，その基質には活性
がそのリン酸化状態により制御される他のキナーゼが含まれる。最終的に，いく
つかの下流エフェクターの活性は，そのような経路の活性化から生ずるリン酸化
により調節される。最近ＰＣＲに基づくクローニング戦略を用いてこれらのキナ
ーゼの保存蛋白質モチーフが探究され，既知のキナーゼが著しく拡大した。
【００１３】 蛋白質キナーゼの触媒ドメイン中の配列の多重アラインメントおよび続くパル
シモニー分析により，関連するキナーゼをサブファミリーの区別しうる枝，例え
ば，チロシンキナーゼ（ＰＴＫ），二重特異性キナーゼ，およびセリン／トレオ
ニンキナーゼ（ＳＴＫ）に分類することができる。後者のサブファミリーには，
サイクリックヌクレオチド依存性キナーゼ，カルシウム／カルモジュリンキナー
ゼ，サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ），ＭＡＰ−キナーゼ，セリン−トレオ
ニンキナーゼレセプター，およびいくつかのあまりよく明確にされていないいく
つかのサブファミリーが含まれる。
【００１４】 蛋白質キナーゼは，いくつかの主要なグループに分類することができる：ＡＧ
Ｃ，ＣＡＭＫ，カゼインキナーゼ１，ＣＭＧＣ，ＳＴＥ，チロシンキナーゼ，お
よび非典型的キナーゼ（Ｐｌｏｗｍａｎ，ＧＤ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃｅｅｄ
ｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅ
ｎｃｅｓ，ＵＳＡ，Ｖｏｌ．９６，Ｉｓｓｕｅ ２４，１３６０３−１３６１０
，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２３，１９９９；ｗｗｗ．ｋｉｎａｓｅ．ｃｏｍも参照）
。さらに，小さいがなお区別しうる多くのファミリー，例えば，虫特異的または
真菌特異的キナーゼに関連するファミリー，およびいくつかのより小さいファミ
リーを表す"その他"と称されるファミリーがある。各グループ中には，より密接
に関連するキナーゼのいくつかの区別しうるファミリーがある。さらに，"非典
型的"ファミリーは，その触媒ドメインが一般的キナーゼと一次配列ホモロジー
をほとんどまたは全く有しない蛋白質キナーゼを表し，これにはＡ６キナーゼお
よびＰＩ３キナーゼが含まれる。
【００１５】ＡＧＣグループ ＡＧＣキナーゼは，ＡｒｇおよびＬｙｓの近傍に見いだされる残基をリン酸化
する塩基性アミノ酸指向性酵素である。このグループの例は，Ｇ蛋白質共役レセ
プターキナーゼ（ＧＲＫ），サイクリックヌクレオチド依存性キナーゼ（ＰＫＡ
，ＰＫＣ，ＰＫＧ），ＮＤＲまたはＤＢＦ２キナーゼ，リボソームＳ６キナーゼ
，ＡＫＴキナーゼ，筋緊張性ジストロフィーキナーゼ（ＤＭＰＫ），ＭＡＰＫ相
互作用キナーゼ（ＭＮＫ），ＭＡＳＴキナーゼ，および元々線虫においてのみ同
定されているＭｏ３Ｃｌｌ．ｌ＿ｃｅファミリーである。
【００１６】 ＧＲＫは，ヘテロ三量体グアニン蛋白質共役レセプター（ＧＰＣＲ）からのシ
グナリングを制御する。ＧＰＣＲにおける変異は，多くのヒト疾病を引き起こす
。これには，色素性網膜炎，定常的夜盲症，色盲，過度甲状腺腺腫，家族性性的
早熟，家族性低カルシウム尿性高カルシウム血症および新生児重症上皮小体機能
亢進症が含まれる（ＯＭＩＭ，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉ
ｈ．ｇｏｖ／Ｏｍｉ）。ＧＲＫによるＧＰＣＲの制御は，これらの疾病における
ＧＲＫの関与を間接的に示唆する。
【００１７】 ｃＡＭＰ依存性蛋白質キナーゼ（ＰＫＡ）は２つの触媒的（Ｃ）および２つの
制御（Ｒ）サブユニットからなるヘテロ四量体から構成される。ここで，Ｒサブ
ユニットは第２メッセンジャーｃＡＭＰに結合し，このことにより活性なＣサブ
ユニットが複合体から解離する。これらのキナーゼの多くは第２メッセンジャー
，例えばｃＡＭＰに応答して，ホルモンおよび神経伝達物質に対する広範な細胞
性応答が生ずる。
【００１８】 ＡＫＴはホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３−Ｋ）により制御
される哺乳動物プロトオンコプロテインであり，細胞生存シグナルとして機能し
て，アポトーシスから細胞を保護するようである。インスリンレセプター，ＲＡ
Ｓ，ＰＩ３−Ｋ，およびＰＤＫ１はすべてＡＫＴの上流アクチベータとして作用
するが，脂質ホスファターゼＰＴＥＮは，ＰＩ３−Ｋ／ＡＫＴ経路の負のレギュ
レータとして機能する。ＡＫＴ媒介性細胞生存の下流標的には，プロアポトーシ
ス因子ＢＡＤおよびカスパーゼ９，およびフォークヘッドファミリー中の転写因
子，例えば虫のＤＡＦ−１６が含まれる。ＡＫＴはまたインスリンシグナリング
における必須のメディエータであり，これは部分的には，これがＧＳＫ−３を別
の下流標的として使用するためである。
【００１９】 Ｓ６キナーゼは，有糸分裂促進性応答に関与する広範な種類の細胞プロセス，
例えば，蛋白質合成，特定のｍＲＮＡ種の翻訳，およびＧ１期からＳ期への細胞
サイクル進行を制御する。遺伝子は染色体領域１７ｑ２３に位置しており，乳癌
において増幅される（Ｃｏｕｃｈ， ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１
９９９Ａｐｒ １；５９（７）：１４０８−１１）。
【００２０】ＣＡＭＫグループ ＣＡＭＫキナーゼもまた塩基性アミノ酸指向性キナーゼである。これには，Ｃ
ａ２＋／カルモジュリン制御およびＡＭＰ依存性蛋白質キナーゼ（ＡＭＰＫ），
ミオシン軽鎖キナーゼ（ＭＬＣＫ），ＭＡＰキナーゼ活性化蛋白質キナーゼ（Ｍ
ＡＰＫＡＰＫ），チェックポイント２キナーゼ（ＣＨＫ２），死亡付随蛋白質キ
ナーゼ（ＤＡＰＫ），ホスホリラーゼキナーゼ（ＰＨＫ），ＲａｃおよびＲｈｏ
結合トリオキナーゼ，ＣＡＭＫの"ユニーク"ファミリー，およびＥＭＫ関連蛋白
質キナーゼが含まれる。
【００２１】 ＳＴＫのＥＭＫファミリーは，細胞極性，微小管安定性および癌の制御に関与
している。ＥＭＫファミリーの１つのメンバーであるＣ−ＴＡＫ１は，Ｃｄｃ２
５Ｃを活性化し，次にこれがＣｄｃ２を脱リン酸化することにより，有糸分裂に
入ることを制御することが報告されている。ＥＭＫファミリーには，転移腫瘍に
おいて過剰発現することが示されているＭＡＫＶも含まれる（Ｄｏｋｌ．Ａｋａ
ｄ．Ｎａｕｋ ３５４（４），５５４−５５６（１９９７））。
【００２２】ＣＭＧＣグループ ＣＭＧＣキナーゼは，プロリンリッチの状況中に存在する残基をリン酸化する
"プロリン指向性"酵素である。これらには，サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ
），有糸分裂促進物質活性化キナーゼ（ＭＡＰＫ），ＧＳＫ３，ＲＣＫおよびＣ
ＬＫが含まれる。ほとんどのＣＭＧＣキナーゼは，サブドメインＸおよびＸＩ中
に挿入物が存在するため，平均より大きいキナーゼドメインを有する。
【００２３】 ＣＤＫは，細胞分裂の間の有糸分裂の制御に中枢的役割を果たす。細胞分裂の
プロセスは４段階で生ずる：Ｓ期，この時期に染色体が複製する，Ｇ２，有糸分
裂およびＧ１または中間期。有糸分裂の間，複製した染色体は均等に分離するた
め，各娘細胞はゲノムの完全なコピーを受け取ることができる。すべての真核生
物細胞における鍵となる有糸分裂レギュレータは，サイクリンＢにより制御され
るＣＤＫであるＳＴＫｃｄｃ２である。しかし，あるＣＤＫ様キナーゼ，例えば
ＣＤＫ５は，サイクリンと関連しておらず，細胞サイクルにも制御されない。
【００２４】 ＭＡＰＫは，多くの細胞シグナリング経路，例えば，ストレス応答および有糸
分裂促進において中枢的役割を果たす（Ｌｅｗｉｓ，Ｔ．Ｓ．，Ｓｈａｐｉｒｏ
，Ｐ．Ｓ．，ａｎｄ Ａｈｎ，Ｎ．Ｇ．（１９９８）Ａｄｖ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒ
ｅｓ．７４，４９１３９）。ＭＡＰキナーゼは，成長因子，例えばＥＧＦ，およ
びサイトカイン，例えばＴＮＦアルファにより活性化されることができる。ＥＧ
Ｆに応答して，Ｒａｓが活性化され，Ｒａｆｌを膜にリクルートし，ここでＲａ
ｆｌはリン酸化およびコンフォメーション変化を含むメカニズムにより活性化さ
れる（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｄ．Ｋ．，ａｎｄ Ｃｕｔｌｅｒ，Ｒ．Ｅ．（１９９
７）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．９，１７４−１７９）。活性化
ＲａｆｌはＭＥＫ１をリン酸化し，これは次にＥＲＫをリン酸化し，活性化する
。
【００２５】チロシン蛋白質キナーゼグループ チロシンキナーゼグループは，細胞質（例えばｓｒｃ）ならびに貫膜レセプタ
ーチロシンキナーゼ（例えばＥＧＦレセプター）の両方を含む。これらのキナー
ゼは，細胞増殖，分化およびアポトーシスを媒介するシグナル伝達プロセスにお
いて中枢的な役割を果たす。配列の１つである１７００００３０１８１４１２は
，ヒトＲＥＴキナーゼに関連する。ＲＥＴ遺伝子（レセプターチロシンキナーゼ
をコードする）の変異は，遺伝的癌症候群であるＭＥＮ２ＡおよびＭＥＮ２Ｂに
関連づけられている。これらはさらに家族性および散発性の両方の骨髄性甲状腺
癌腫と関連づけられている。キナーゼ活性は，細胞外ドメイン中のシステイン残
基に影響を与え，強力な発癌性につながるミスセンス変異により異常に活性化さ
れることができる（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １９９９Ａｕｇ ２６；１８（３４）：
４８３３−８）。
【００２６】ＳＴＥグループ ＳＴＥファミリーは，ＭＡＰＫの上流に順番に存在する３種類の蛋白質キナー
ゼを表す。このグループには，ＳＴＥ７（ＭＥＫまたはＭＡＰＫＫ）キナーゼ，
ＳＴＥ１１（ＭＥＫＫまたはＭＡＰＫＫＫ）キナーゼおよびＳＴＥ２０（ＭＥＫ
ＫＫ）キナーゼが含まれる。ヒトにおいては，ＳＴＥ１１ファミリーとは遠いホ
モロジーしか有しないいくつかの蛋白質キナーゼファミリーもまたＭＡＰＫＫＫ
のレベルで作用し，これには，ＲＡＦ，ＭＬＫ，ＴＡＫ１，およびＣＯＴが含ま
れる。ＭＡＰＫカスケードの異なるレベルにおける蛋白質キナーゼの機能の間に
クロストークが生ずるため，多数のＳＴＥファミリーキナーゼは上流シグナルの
特異性に対する多大な可能性に変容することができる。
【００２７】 パン酵母からのプロトタイプＳＴＥ２０は，ホルモンレセプターにより制御さ
れ，シグナリングによりＣＤＫ活性の調節を通して細胞サイクル進行に直接影響
を与える。これはまた分枝している経路において細胞骨格および転写プログラム
の変化を調和的に制御する。同様にして，ヒトの相同のキナーゼは，成長の細胞
外制御，細胞接着および移動，および転写プログラムの変化において役割を果た
しているようであり，この３つはすべて腫瘍発生に重要な役割を有する。哺乳動
物ＳＴＥ２０関連蛋白質キナーゼは，成長因子またはサイトカインへの応答，酸
化的に，ＵＶに，または照射に関連したストレス経路，炎症性シグナル（例えば
ＴＮＦα），アポトーシス刺激（例えばＦａｓ），ＴおよびＢ細胞共刺激，細胞
骨格構造の制御，および細胞のトランスフォーメーションにおける関与が示唆さ
れている。典型的には，ＳＴＥ２０関連キナーゼは，ＭＡＰＫカスケードの上流
レギュレータとして働く。例としては，ＨＰＫ１，蛋白質キナーゼ経路を活性化
してストレス活性化蛋白質キナーゼＳＡＰＫ／ＪＮＫにつながるＳＴＥ２０様キ
ナーゼドメインを有する蛋白質−セリン／トレオニンキナーゼ（ＳＴＫ）；ＰＡ
Ｋ１，Ｒａｓ−ＭＡＰＫ経路を介してＲａｃと相互作用して細胞のトランスフォ
ーメーションにおいて役割を果たす上流ＣＤＣ４２結合ドメインを有するＳＴＫ
；および上流レセプターチロシンキナーゼと相互作用して下流ＳＴＥ１１−ファ
ミリーキナーゼと接続するネズミＮＩＫが挙げられる。
【００２８】 ＮＥＫキナーゼは，繊維状真菌Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓにおいて有糸分裂に入る
ために必要なＮＩＭＡと関連している。ｎｉｍＡ遺伝子の変異はこの真菌におい
てｎｉｍ（有糸分裂しない），すなわちＧ２停止表現型を引き起こす（Ｆｒｙ，
Ａ．Ｍ．ａｎｄ Ｎｉｇｇ，Ｅ．Ａ．（１９９５）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏ
ｇｙ ５：１１２２−１１２５）。いくつかの知見は，高等真核生物がＮＩＭＡ
の機能的対応物を有しているかもしれないことを示唆する：（１）ＨｅＬａ細胞
における優性負の発現型のＮＩＭＡはＧ２停止を引き起こす；（２）ＮＩＭＡの
過剰発現は，Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓにおいてのみならず酵母，アフリカツメガエ
ル卵母細胞およびＨｅＬａ細胞においても，クロマチン凝縮を引き起こす（Ｌｕ
，Ｋ．Ｐ．ａｎｄ Ｈｕｎｔｅｒ，Ｔ．（１９９５）Ｐｒｏｇ．Ｃｅｌｌ Ｃｙ
ｃｌｅ Ｒｅｓ．１，１８７−２０５）；（３）ＮＩＭＡは，哺乳動物細胞で発
現したとき，細胞サイクル制御において機能するプロリル−プロリルイソメラー
ゼであるｐｉｎｌと相互作用する（Ｌｕ，Ｋ．Ｐ． ｅｔ ａｌ．（１９９６）
Ｎａｔｕｒｅ ３８０，５４４５４７）；（４）オカダイン酸阻害剤の実験は，
有糸分裂を誘導するｃｄｃ２非依存性メカニズムの存在を示唆する（Ｇｈｏｓｈ
，Ｓ． ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．２４２，１−９
）；および（５）ＮＩＭＡ様キナーゼ（ｆｉｎｌ）がＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ以
外の別の真核生物Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅに存在する（Ｋｒｉ
ｅｎ，Ｍ．Ｊ．Ｅ． ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ．１１１
，９６７−９７６）。４つの哺乳動物ＮＩＭＡ様キナーゼ，ＮＥＫ１，ＮＥＫ２
，ＮＥＫ３およびＮＲＫ２が同定されている。ＮＩＭＡ関連キナーゼは触媒領域
ではＮＩＭＡに対する類似性を有するにもかかわらず，哺乳動物キナーゼは触媒
外領域ではＮＩＭＡとは構造的に異なる。さらに，哺乳動物キナーゼは，Ａｓｐ
ｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｍＡ変異体におけるｎｉｍ表現型を補うことができない
。これらの知見から，以下の３つの可能性が導かれる：１）哺乳動物ＮＩＭＡホ
モログはまだ同定されていない；２）高等真核生物にはＮＩＭＡホモログはない
；３）高等真核生物においては，ＮＩＭＡの生物学的機能は，多数の関連するキ
ナーゼにより行われる。追加の哺乳動物ＮＩＭＡ関連キナーゼおよびＮＥＫ関連
キナーゼの解明および生物学的特性決定が，この疑問の解明を助けるはずである
。
【００２９】カゼインキナーゼ１グループ ＣＫ１ファミリーは，蛋白質キナーゼファミリーの遠い枝である。蛋白質キナ
ーゼサブドメインＶＩＩＩおよびＩＸの顕著な特徴を同定することは困難である
。１またはそれ以上の形が哺乳動物組織および細胞株に偏在的に分布している。
ＣＫ１キナーゼは，細胞質，核，膜結合，および細胞骨格に付随して見いだされ
る。スプライシング変種はその細胞内分布が異なる。
【００３０】"その他"グループ いくつかのファミリーは，"その他"と名付けられる無関係なキナーゼのグルー
プにクラスター化される。これには，ＣＨ(Ｋ１；伸長２因子キナーゼ（ＥＩＦ
Ｋ）；ＭＡＰＫの上流に順番に存在する３種類のキナーゼを表す酵母ステライル
ファミリーキナーゼ（ＳＴＥ）のホモログ；カルシウム−カルモジュリンキナー
ゼキナーゼ（ＣＡＭＫＫ）；二重特異性チロシンキナーゼ（ＤＹＲＫ）；ＩｋＢ
キナーゼ（ＩＫＫ）；インテグリンレセプターキナーゼ（ＩＲＡＫ）；エンドリ
ボヌクレアーゼ付随キナーゼ（ＩＲＥ）；ミックスライニージキナーゼ（ＭＬＫ
）；ＬＩＭ−ドメイン含有キナーゼ（ＬＩＭＫ）；ＭＯＳ；ＰＩＭ；レセプター
相互作用キナーゼ（ＲＩＰ）；ＳＲ−蛋白質特異的キナーゼ（ＳＲＰＫ）；ＲＡ
Ｆ；セリン−トレオニンキナーゼレセプター（ＳＴＫＲ）；ＴＡＫ１；精巣特異
的キナーゼ（ＴＳＫ）；タウズレッド関連キナーゼ（ＴＳＬ）；ＵＮＣ５１−関
連キナーゼ（ＵＮＣ）；ＶＲＫ；ＷＥＥ；有糸分裂キナーゼ（ＢＵＢ１，ＡＵＲ
ＯＲＡ，ＰＬＫ，およびＮＩＭＡ／ＮＥＫ）；虫に対する密接なホモログである
いくつかのファミリー（Ｃ２６Ｃ２．１，ＹＱ０９，ＺＣ５８１．９，ＹＦＬ０
３３ｃ，Ｃ２４Ａ１．３）；ショウジョウバエ（ＳＬＯＢ），または酵母（ＹＤ
ＯＤ＿ｓｐ，ＹＧＲ２６２＿ｓｃ）キナーゼ；および"ユニーク"，すなわち，い
ずれの明確なファミリーにもクラスター化されないものが含まれる。追加のファ
ミリーはあまり明確にされておらず，低級真核生物，例えば酵母または虫におい
て最初に同定された（ＹＮＬ０２０，ＹＰＬ２３６，ＹＱ０９，ＹＷＹ３，ＳＣ
Ｙ１，ＣＯｌＨ６．９，Ｃ２６Ｃ２．１）。
【００３１】 ＲＩＰ２は腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）レセプター複合体に付随するセリン−トレ
オニンキナーゼであり，哺乳動物細胞においてＮＦ−カッパＢの活性化および細
胞死に関与することが示唆されている。最近，ＲＩＰ２がＭＡＰＫ経路を活性化
することが示された（Ｎａｖａｓ， ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．
１９９９ Ｎｏｖ１９；２７４（４７）：３３６８４−３３６９０）。ＲＩＰ２
は，Ｅｌｋｌ転写因子の活性化を誘導することにより，ＡＰ−１および血清応答
要素に制御される発現を活性化する。ＲＩＰ２は，ＥＲＫ２をインビボおよびイ
ンビトロで直接リン酸化し，活性化する。次にＲＩＰ２はＲａｓ活性化Ｒａｆｌ
との相互作用により活性化される。これらの結果は，キナーゼシグナリング経路
の統合された性質を強調する。
【００３２】 タウズレッド（ＴＳＬ）キナーゼは最初に植物Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈ
ａｌｉａｎａで同定された。ＴＳＬは適切な花の発達に必須のセリン／トレオニ
ンキナーゼをコードする。ヒトタウズレッド様キナーゼ（Ｔｌｋｓ）は，細胞−
サイクルにより制御される酵素であり，Ｓ期の間に最大の活性を示す。この制御
された活性は，Ｔｌｋ機能が進行中のＤＮＡ複製と連鎖していることを示唆する
（Ｓｉｌｌｊｅ， ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ １９９９ Ｏｃｔ１５；１８
（２０）：５６９１−５７０２）。
【００３３】非典型的蛋白質キナーゼグループ 蛋白質キナーゼ活性を有する，真核生物蛋白質キナーゼとは構造的に無関係の
ようであるいくつかの蛋白質が存在する。これらには，Ｄｉｃｔｙｏｓｔｅｌｉ
ｕｍミオシン重鎖キナーゼＡ（ＭＨＣＫＡ），Ｐｈｙｓａｒｕｍ ｐｏｌｙｃｅ
ｐｈａｌｕｍアクチンフラグミンキナーゼ，ヒトＡ６ＰＴＫ，ヒトＢＣＲ，ミト
コンドリアピルビン酸デヒドロゲナーゼおよび分枝鎖脂肪酸デヒドロゲナーゼキ
ナーゼ，および原核生物"ヒスチジン"蛋白質キナーゼファミリーが含まれる。粘
菌，虫，およびヒトｅＥＦ−２キナーゼホモログは，すべて蛋白質キナーゼ活性
を有することが示されているが，予測ＧｘＧｘｘＧＡＴＰ結合モチーフの存在を
除き，一般的蛋白質キナーゼとはほとんど似ていない。
【００３４】 いわゆるヒスチジンキナーゼは原核生物において多く存在し，Ｅ．ｃｏｌｉで
は２０を越える標本が存在し，酵母，糸状菌，および植物においても同定されて
いる。これらのキナーゼは，外部刺激に応答して，２成分システムの一部として
作用して，標的蛋白質中のアスパラギン酸のリン酸化を通してＤＮＡ複製，細胞
分裂および分化を制御する。これまで，後生動物においては"ヒスチジン"キナー
ゼは同定されていないが，ミトコンドリアピルビン酸デヒドロゲナーゼ（ＰＤＫ
）および分枝鎖アルファケト酸デヒドロゲナーゼキナーゼ（ＢＣＫＤキナーゼ）
は配列において関連している。ＰＤＫおよびＢＣＫＤキナーゼは解糖，クエン酸
サイクル，および蛋白質栄養不良における蛋白質合成の制御に関与する非典型的
蛋白質キナーゼのユニークファミリーである。これらは構造的には"ヒスチジン"
キナーゼのＧボックス領域を含むＣ末端部分のみを保存している。ＢＣＫＤキナ
ーゼは，ＢＣＫＤ複合体のＥｌａサブユニットをＳｅｒ−２９３でリン酸化し，
これを機能的蛋白質キナーゼとする。真の"ヒスチジン"キナーゼはまだヒトでは
同定されていないが，これらはＰＤＫを含む。
【００３５】 いくつかの他の蛋白質は，蛋白質キナーゼ様ホモロジーを含み，これには，レ
セプターグアニリルシクラーゼ，ジアシルグリセロールキナーゼ，コリン／エタ
ノールアミンキナーゼ，およびＹＬＫ１関連抗生物質耐性キナーゼが含まれる。
これらのファミリーのそれぞれは，我々の低スコアＥ値でのプロファイル検索に
より認識されたが，先験的に蛋白質キナーゼとして機能するとは予測されなかっ
た短いモチーフを含む。それよりも，類似性は，蛋白質進化のモジュール的性質
および多様なリン酸転移酵素におけるＡＴＰ結合の根本的な役割を単に反映して
いるのかもしれない。しかし，ＹＬＫ１ファミリーの細菌ホモログに関する最近
の２つの報告は，アミノグリコシドホスホトランスフェラーゼ（ＡＰＨ）が構造
的および機能的に蛋白質キナーゼに関連することを示唆する。カナマイシン，ゲ
ンタマイシンまたはアミカシンなどのアミノグリコシドに耐性の細菌から４０を
越えるＡＰＨが同定されている。１つのよく特徴決定されたＡＰＨの結晶構造は
，ｃＡＭＰ依存性蛋白質キナーゼ（ＰＫＡ）の触媒ドメインの２葉構造と４０％
を越える構造的同一性を共有し，５本鎖のアンチパラレルベータシートから構成
されるＮ末端ローブおよびすべての蛋白質キナーゼにおいて見いだされるいくつ
かの不変セグメントを含むＣ末端ローブのコアを含むことを明らかにする。ＡＰ
Ｈは通常はベータ鎖１と２との間のループに存在するＧｘＧｘｘＧを欠失してい
るが，ほとんどの蛋白質キナーゼに存在する１２個の厳密に保存された残基の７
個，例えばキナーゼサブドメインＶＩＢ中のＨＧＤｘｘｘＮの特徴的配列を含む
。さらに，ＡＰＨはまた蛋白質−セリン／トレオニンキナーゼ活性を示すことが
明らかにされており，このことは，他のＹＬＫ関連分子が実際に機能的な蛋白質
キナーゼであることを示唆する。
【００３６】 真核生物脂質キナーゼ（ＰＩ３Ｋ，ＰＩ４Ｋ，およびＰＩＰＫ）もまた，蛋白
質キナーゼと類似するいくつかの短いモチーフを含むが，それ以外は最小限の一
次配列類似性しか共有しない。しかし，ここでもまた，ＰＩＰＫＩＩ−ベータの
構造分析は，一般的蛋白質キナーゼと著しく類似した保存されたＡＴＰ結合コア
を明確にする。これらの酵素すべての間で３つの残基が保存されており（ＰＫＡ
配列と比較して），これには，ＡＴＰのガンマリン酸に結合するＬｙｓ−７２，
ＨＲＤＬＫモチーフの一部であるＡｓｐ−１６６および保存されたＭｇ++または
Ｍｎ++結合ＤＦＧモチーフからのＡｓｐ−１８４が含まれる。虫ゲノムは１２個
のホスファチジルイノシトールキナーゼを含み，これには，３個のＰＩ３−キナ
ーゼ，２個のＰＩ４−キナーゼ，３個のＰＩＰ５−キナーゼ，および４個のＰＩ
３−キナーゼ関連キナーゼが含まれる。後者のグループは４個の哺乳動物メンバ
ー（ＤＮＡ−ＰＫ，ＦＲＡＰ／ＴＯＲ，ＡＴＭ，およびＡＴＲ）を有し，これは
，ＤＮＡ障害に応答してゲノム一体性の維持に関与し，真の蛋白質キナーゼ活性
を示すことが示されており，このため他のＰＩ−キナーゼも蛋白質キナーゼとし
て作用する可能性が高い。これらが真の蛋白質キナーゼ活性を有するか否かにか
かわらず，ＰＩ３−キナーゼは，多くの成長因子レセプターの下流での関与およ
びＡＫＴ蛋白質キナーゼにより媒介される細胞生存応答の上流アクチベータとし
ての関与により明らかなように，蛋白質キナーゼシグナリングに密接に関連して
いる。
【００３７】発明の概要 本発明は，部分的には，ゲノム配列決定から同定されたヒト蛋白質キナーゼお
よび蛋白質キナーゼ様酵素に関する。
【００３８】 チロシンおよびセリン／トレオニンキナーゼ（ＰＴＫおよびＳＴＫ）が同定さ
れ，本発明の一部としてその蛋白質配列が予測された。バイオインフォマティク
ス戦略を用いてこれらのファミリーの哺乳動物メンバーが同定された。これらの
キナーゼの部分配列または完全配列が，その分類，予測されたまたは推定された
蛋白質構造とともに本明細書に記載される。
【００３９】 本発明の１つの観点は，配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０，配列番
号６１，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，配列番号
６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配列番号７
１，配列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列番号７６
，配列番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番号８１，
配列番号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号８６，配
列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１，配列
番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，配列番
号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０１，配列
番号１０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番号１０
６，配列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１０，配列
番号１１１，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４に記載さ
れるアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するキナーゼポリ
ペプチドをコードする，同定された，単離された，濃縮されたまたは精製された
核酸分子を特徴とする。
【００４０】 核酸に関して"同定された"との用語は，これまでに知られていない新規蛋白質
キナーゼの部分をコードすると予測されることに基づいて，ゲノム，ＥＳＴ，ま
たはｃＤＮＡ配列データベースから配列が選択されたことを意味する。
【００４１】 核酸に関して"単離された"とは，互いに結合した１０個（好ましくは２１個，
より好ましくは３９個，最も好ましくは７５個）またはそれ以上のヌクレオチド
のポリマーを意味し，天然起源から単離された，またはセンス鎖または相補的な
アンチセンス鎖として合成されるＤＮＡおよびＲＮＡが含まれる。本発明のある
態様においては，より長い核酸が好ましく，例えば，３００，６００，９００，
１２００，１５００，またはそれ以上のヌクレオチドのもの，および／または配
列番号１，配列番号２，配列番号３，配列番号４，配列番号５，配列番号６，配
列番号７，配列番号８，配列番号９，配列番号１０，配列番号１１，配列番号１
２，配列番号１３，配列番号１４，配列番号１５，配列番号１６，配列番号１７
，配列番号１８，配列番号１９，配列番号２０，配列番号２１，配列番号２２，
配列番号２３，配列番号２４，配列番号２５，配列番号２６，配列番号２７，配
列番号２８，配列番号２９，配列番号３０，配列番号３１，配列番号３２，配列
番号３３，配列番号３４，配列番号３５，配列番号３６，配列番号３７，配列番
号３８，配列番号３９，配列番号４０，配列番号４１，配列番号４２，配列番号
４３，配列番号４４，配列番号４５，配列番号４６，配列番号４７，配列番号４
８，配列番号４９，配列番号５０，配列番号５１，配列番号５２，配列番号５３
，配列番号５４，配列番号５５，配列番号５６，および配列番号５７に記載され
る配列からなる群より選択される配列と，少なくとも５０％，６０％，７５％，
８０％，８５％，９０％，９５％または９９％の同一性を有するものが好ましい
。
【００４２】 本発明の単離された核酸は，これが自然には純粋なまたは分離された状態で見
いだされないという点において独特である。"単離された"との用語の使用は，天
然に生ずる配列がその通常の細胞環境（すなわち染色体）から除かれていること
を表す。すなわち，配列は，無細胞溶液中にあってもよく，または異なる細胞環
境に置かれていてもよい。この用語は，この配列が存在する唯一のヌクレオチド
鎖であることを意味するものではなく，天然にこれに付随する非ヌクレオチド物
質を本質的に含まず（少なくとも約９０−９５％純粋），したがって，単離され
た染色体とは区別されることを意味する。
【００４３】 核酸に関連して，"濃縮された"との用語の使用は，特定のＤＮＡまたはＲＮＡ
配列が，目的とする細胞または溶液中に存在する総ＤＮＡまたはＲＮＡ中で，正
常または疾病細胞，またはこの配列が由来する細胞におけるより有意に高い割合
（２−５倍）を占めることを意味する。これは，存在する他のＤＮＡまたはＲＮ
Ａの量の優先的減少，または特定のＤＮＡまたはＲＮＡ配列の量の優先的増加，
またはこれらの２つの組み合わせにより，人が生じさせることができる。しかし
，濃縮されたとは，他のＤＮＡまたはＲＮＡ配列が存在しないことを意味するも
のではなく，単に，目的とする配列の相対的な量が有意に増加されていることを
意味することに注意すべきである。"有意に"との用語は，増加のレベルがそのよ
うな増加を作成した人にとって有用であることを示すために用いられ，一般に，
他の核酸に比べて少なくとも約２倍，より好ましくは少なくとも５−１０倍，ま
たはそれ以上増加していることを意味する。またこの用語は，他の起源からのＤ
ＮＡまたはＲＮＡが存在しないことを意味するものではない。他の起源のＤＮＡ
は，例えば，酵母または細菌ゲノム，またはクローニングベクター，例えばｐＵ
Ｃ１９からのＤＮＡでありうる。この用語は，１つのｍＲＮＡのレベルが他の種
のｍＲＮＡと比較して自然に増加している天然に生ずる事象，例えばウイルス感
染または腫瘍タイプの成長から区別される。すなわち，この用語は，人が所望の
核酸の比率を上昇させることを意図する状況のみをカバーする。
【００４４】 ある目的のためには，ヌクレオチド配列が精製された形であることも有利であ
る。核酸に関して，"精製された"との用語は，絶対的純度（例えば均一な調製物
）を要求するものではない。むしろ，これは配列が天然の環境におけるより比較
的純粋であることを示す（天然のレベルと比較して，このレベルは，例えばｍｇ
／ｍＬで少なくとも２−５倍高い）。ｃＤＮＡライブラリから単離された個々の
クローンは，電気泳動的に均一にまで精製することができる。これらのクローン
から得られた本発明のＤＮＡ分子は，総ＤＮＡからまたは総ＲＮＡから直接得る
ことができる。ｃＤＮＡクローンは天然に生じず，好ましくは部分的に精製した
天然に生ずる物質（メッセンジャーＲＮＡ）の操作により得る。ｍＲＮＡからの
ｃＤＮＡライブラリの構築は，合成物質（ｃＤＮＡ）の作成を含み，純粋な個々
のｃＤＮＡクローンは，ｃＤＮＡライブラリを有する細胞のクローン選択により
合成ライブラリから単離することができる。すなわち，ｍＲＮＡからｃＤＮＡラ
イブラリを構築し，個々のｃＤＮＡクローンを単離することを含む工程により，
天然のメッセンジャーのおよそ１０6倍の精製が得られる。すなわち，少なくと
も１桁，好ましくは２または３桁，より好ましくは４または５桁の精製が明示的
に企図される。
【００４５】 "キナーゼポリペプチド"とは，配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０，
配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，配
列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配列
番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列番
号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番号
８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号８
６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１
，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，
配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０１
，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番
号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１０
，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４に
記載されるアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するポリペ
プチド中の，３２個（好ましくは４０，より好ましくは４５，最も好ましくは５
５個）またはそれ以上の連続するアミノ酸を意味する。ある観点においては，１
００，２００，３００，４００，４５０，５００，５５０，６００，７００，８
００，９００個またはそれ以上のアミノ酸のポリペプチドが好ましい。キナーゼ
ポリペプチドは，ポリペプチドの機能的活性が保持される限り，完全長核酸配列
または完全長核酸配列の任意の部分（例えば，本明細書において定義される"フ
ラグメント"），例えば，触媒ドメイン（本明細書において定義される）または
その一部によりコードされることができる。当業者は，キナーゼまたはキナーゼ
様活性，例えば本明細書において定義される触媒的活性を示すこれらの触媒ドメ
イン，またはその一部を選択することができるであろう。遺伝コードの縮重のた
め，多数の異なる核酸配列が同じアミノ酸配列をコードしうることは当該技術分
野においてよく知られている。同じく，アミノ酸の保存的変更を行って，元の機
能を保持している蛋白質またはポリペプチドを得ることができることも，当該技
術分野においてよく知られている。そのような置換には，アミノ酸を類似の物理
化学的特性を有する残基で置き換えること，例えば，１つの脂肪族残基（Ｉｌｅ
，Ｖａｌ，ＬｅｕまたはＡｌａ）を別のもので，または塩基性残基Ｌｙｓおよび
Ａｒｇ，酸性残基ＧｌｕおよびＡｓｐ，アミド残基ＧｌｎおよびＡｓｎ，ヒドロ
キシル残基ＳｅｒおよびＴｙｒ，または芳香族残基ＰｈｅおよびＴｙｒの間で置
き換えることが含まれる。蛋白質全体にあったとしてもわずかの影響しか与えな
いアミノ酸の交換を作成することに関するさらなる情報は，Ｂｏｗｉｅ ｅｔ
ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９０，２４７，１３０６−１３１０に見いだすこ
とができる（図面および表を含めその全体を本明細書の一部としてここに引用す
る）。すべての場合において，すべての順列がこの開示によりカバーされること
が意図される。
【００４６】 本発明のキナーゼペプチドのアミノ酸配列は，配列番号５８，配列番号５９，
配列番号６０，配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配
列番号６５，配列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列
番号７０，配列番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番
号７５，配列番号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号
８０，配列番号８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８
５，配列番号８６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０
，配列番号９１，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，
配列番号９６，配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，
配列番号１０１，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号
１０５，配列番号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，
配列番号１１０，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番号１１３，および配
列番号１１４に記載されるアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列
，または対応する完全長アミノ酸配列，またはそのフラグメントを有する配列に
実質的に類似するであろう。
【００４７】 配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０，配列番号６１，配列番号６２，
配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，配列番号６６，配列番号６７，配
列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配列番号７１，配列番号７２，配列
番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列番号７６，配列番号７７，配列番
号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番号８１，配列番号８２，配列番号
８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号８６，配列番号８７，配列番号８
８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１，配列番号９２，配列番号９３
，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，配列番号９７，配列番号９８，
配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０１，配列番号１０２，配列番号１
０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番号１０６，配列番号１０７，配
列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１０，配列番号１１１，配列番号１
１２，配列番号１１３，および配列番号１１４に記載される配列からなる群より
選択される配列と実質的に類似する配列は，好ましくは配列と少なくとも９０％
の同一性（より好ましくは少なくとも９５％，最も好ましくは９９−１００％）
を有するであろう。
【００４８】 "同一性"とは，その類似性または関係の尺度である配列の性質を意味する。同
一性は，同一である残基の数を，既知の配列または既知の配列のドメイン中の残
基の総数で割り，１００を乗ずることにより測定する。"ギャップ"とは，アミノ
酸の付加または欠失により生じたアラインメント中の空間である。すなわち，完
全に同一の配列の２つのコピーは１００％の同一性を有するが，より低い程度に
保存され，欠失，付加または置換を含む配列はより低い程度の同一性を有するで
あろう。当業者は，標準的なパラメータを用いて配列の同一性を決定するための
いくつかのコンピュータプログラム，例えば，Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴまたは
ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎｕｃｌｅ
ｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２），ＢＬＡＳＴ（Ａｌｔ
ｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３
−４１０），およびスミス−ウォーターマン（Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ）
（Ｓｍｉｔｈ，ｅｔ ａｌ．（１９８１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４７：１９
５−１９７）が利用可能であることを認識するであろう。好ましくは，これらの
プログラムのデフォルト設定を用いるが，当業者は，これらの設定を変更するこ
とが必要であるか否かを認識しており，どのようにして変更するかがわかる。
【００４９】 "類似性"は，同一の残基の数と保存的に置換された残基の数（Ｂｏｗｉｅ，
ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９９，２４７，１３０６−１３１０を参照（
図面および表を含め，その全体を本明細書の一部としてここに引用する）との合
計を残基とギャップの総数で割り，１００を乗ずることにより測定することがで
きる。
【００５０】 好ましい態様においては，本発明は，以下のヌクレオチド配列を含むキナーゼ
ポリペプチドをコードする，単離された，濃縮されたまたは精製された核酸分子
を特徴とする： （ａ）配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０，配列番号６１，配列番号６
２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，配列番号６６，配列番号６７
，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配列番号７１，配列番号７２，
配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列番号７６，配列番号７７，配
列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番号８１，配列番号８２，配列
番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号８６，配列番号８７，配列番
号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１，配列番号９２，配列番号
９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，配列番号９７，配列番号９
８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０１，配列番号１０２，配列番
号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番号１０６，配列番号１０７
，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１０，配列番号１１１，配列番
号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４に記載されるアミノ酸配列か
らなる群より選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする； （ｂ）（ａ）のヌクレオチド配列の相補体である； （ｃ）（ａ）のヌクレオチド分子に高度にストリンジェントな条件下でハイブリ
ダイズし，かつ天然に生ずるキナーゼポリペプチドをコードする； （ｄ）配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０，配列番号６１，配列番号６
２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，配列番号６６，配列番号６７
，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配列番号７１，配列番号７２，
配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列番号７６，配列番号７７，配
列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番号８１，配列番号８２，配列
番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号８６，配列番号８７，配列番
号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１，配列番号９２，配列番号
９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，配列番号９７，配列番号９
８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０１，配列番号１０２，配列番
号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番号１０６，配列番号１０７
，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１０，配列番号１１１，配列番
号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４に記載されるアミノ酸配列か
らなる群より選択されるアミノ酸配列であって，ただしＮ末端ドメイン，触媒ド
メイン，Ｃ末端触媒ドメイン，Ｃ末端ドメイン，コイルドコイル構造領域，プロ
リンリッチ領域，スペーサー領域，およびＣ末端テールからなる群より選択され
るドメインの全部ではないが１またはそれ以上を欠失しているアミノ酸配列を有
するポリペプチドをコードする；および （ｅ）（ｄ）のヌクレオチド配列の相補体である。
【００５１】 "相補体"との用語は，互いに多くの望ましい相互作用を形成しうる２つのヌク
レオチドを表す。例えば，アデニンはチミンと２つの水素結合を形成することが
できるため，チミンに相補的である。同様に，グアニンとシトシンは３つの水素
結合を形成することができるため，相補的である。あるヌクレオチド配列は，第
１の配列のすべてのヌクレオチドが第２の配列のすべてのヌクレオチドと相補的
である場合，他のヌクレオチド配列の相補体である。
【００５２】 所望の特異性および選択性に応じて，種々の低いまたは高いストリンジェンシ
ーのハイブリダイゼーション条件を用いることができる。これらの条件は，当業
者にはよく知られている。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で
は，高度に相補的な核酸配列のみがハイブリダイズする。好ましくは，そのよう
な条件は，２０個の連続するヌクレオチド中に１または２個のミスマッチを有す
る核酸のハイブリダイゼーションを防止し，より好ましくは，そのような条件は
，５０個の連続するヌクレオチド中に１または２個のミスマッチを有する核酸の
ハイブリダイゼーションを防止し，最も好ましくは，そのような条件は，１００
個の連続するヌクレオチド中に１または２個のミスマッチを有する核酸のハイブ
リダイゼーションを防止する。場合によっては，この条件は，全長配列中に５個
のミスマッチを有する核酸のハイブリダイゼーションを防止する。
【００５３】 ストリンジェントなハイブリダイゼーションアッセイ条件とは，少なくとも以
下の程度にストリンジェントなハイブリダイゼーションアッセイ条件を意味する
：５０％ホルムアミド，５ＸＳＳＣ，５０ｍＭ ＮａＨ2ＰＯ4，ｐＨ６．８，０
．５％ＳＤＳ，０．１ｍｇ／ｍＬ超音波処理サケ精子ＤＮＡ，および５Ｘデンハ
ルト溶液中で４２℃で一夜のハイブリダイゼーション；２ＸＳＳＣ，０．１％Ｓ
ＤＳで４５℃での洗浄；および０．２ＸＳＳＣ，０．１％ＳＤＳで４５℃での洗
浄。いくつかの最もストリンジェントなハイブリダイゼーションアッセイ条件に
おいては，２回目の洗浄は，０．１ＸＳＳＣで７０℃までの温度で行うことがで
きる（Ｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ（１９８７）Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ｐｇ４２１（図面および表を
含めその全体を本明細書の一部としてここに引用する）。しかし，他の用途は，
これらの条件の組の間に入る条件の使用を必要とするかもしれない。所望のハイ
ブリダイゼーションを達成するのに必要な条件を決定する方法は当業者にはよく
知られており，いくつかの因子，例えば，限定されないが，ハイブリダイズすべ
き配列および試験すべき試料に基づく。低いストリンジェンシーの洗浄条件は，
しばしば洗浄工程の間により低い温度，例えば，６５℃，６０℃，５５℃，５０
℃，または４２℃を用いる。
【００５４】 "ドメイン"との用語は，特定の機能を含むポリペプチドの領域を表す。例えば
，シグナル伝達蛋白質のＮ末端またはＣ末端ドメインは，例えば，限定されない
が，シグナル伝達分子を細胞の異なる領域に局在させる分子に結合し，特定の細
胞シグナルを伝播するのに直接関与する他のシグナリング分子に結合する，等の
機能を提供することができる。あるドメインは蛋白質の残部と別々に発現させて
それ自身で機能することができるが，他のドメインはその機能を保持するために
は無傷の蛋白質の一部のままでなければならない。後者は蛋白質の機能的領域と
も称され，これもまたドメインと関連する。
【００５５】 "Ｎ末端ドメイン"との用語は，蛋白質キナーゼの開始メチオニンと触媒的ドメ
インとの間に位置する触媒外領域を表す。Ｎ末端ドメインは，蛋白質配列を非重
複蛋白質データベースに対してスミス−ウォーターマンアラインメントを行い，
触媒的ドメインのＮ末端境界を規定することにより同定することができる。Ｎ末
端ドメインは，その長さに応じて，キナーゼ機能において制御的役割を果たすか
または果たさない。Ｎ末端ドメインが制御的役割を果たすことが知られている蛋
白質キナーゼの例はＰＡＫ６５であり，これはＣｄｃ４２およびｒａｃ結合に用
いられるＣＲＩＢモチーフを含む（Ｂｕｒｂｅｌｏ，Ｐ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．（１
９９５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０，２９０７１−２９０７４）。
【００５６】 "触媒ドメイン"との用語は，典型的に２５−３００アミノ酸の長さであり，高
エネルギーリン酸ドナー分子，例えばＡＴＰまたはＧＴＰからそれ自身へ（自己
リン酸化）または他の蛋白質へ（外因性リン酸化）のリン酸転移反応を担う，蛋
白質キナーゼの領域を表す。蛋白質キナーゼの触媒ドメインは，適切なポリペプ
チドの折り畳みおよび触媒作用を担う高度に保存されたアミノ酸残基を含む１２
個のサブドメインから構成されている。触媒ドメインは，蛋白質配列を非重複蛋
白質データベースに対してスミス−ウォーターマンアラインメントを行うことに
より同定することができる。
【００５７】 本明細書において用いられる場合，"触媒活性"との用語は，キナーゼ触媒ドメ
インが基質をリン酸化する速度を規定する。触媒活性は，例えば，リン酸化され
た生成物に変換される基質の量を時間の関数として決定することにより測定する
ことができる。触媒活性は，時間を一定にして定められた時間の後にリン酸化さ
れた基質の濃度を決定することにより，本発明の方法により測定することができ
る。基質のリン酸化は，蛋白質キナーゼの活性部位において生ずる。活性部位は
，通常は，基質が蛋白質キナーゼに結合し，リン酸化される空洞である。
【００５８】 本明細書において用いられる場合，"基質"との用語は，本発明のキナーゼによ
りリン酸化される分子を表す。キナーゼは，セリン／トレオニンまたはチロシン
アミノ酸で基質をリン酸化する。分子は別の蛋白質またはポリペプチドであって
もよい。
【００５９】 "Ｃ末端ドメイン"との用語は，蛋白質キナーゼの触媒ドメインまたは最後の（
Ｃ末端に最も近い位置の）機能的ドメインとカルボキシ末端アミノ酸残基との間
に位置する領域を表す。"機能的"ドメインとは，他の蛋白質に対するアミノ酸配
列ホモロジーから，または特定の構造的コンフォメーションを与えるであろうア
ミノ酸配列の存在（例えばＮ末端ドメイン）により，制御的または触媒的役割を
果たすであろう，ポリペプチドの任意の領域を意味する。Ｃ末端ドメインは，非
重複蛋白質データベースに対して蛋白質配列のスミス−ウォーターマンアライン
メントを用いて，触媒ドメインまたは任意の機能的なＣ末端の触媒外ドメインの
Ｃ末端境界を規定することにより同定することができる。その長さおよびアミノ
酸組成に依存して，Ｃ末端ドメインは，キナーゼ機能において制御的機能を果た
すかもしれないし果たさないかもしれない。そのＣ末端ドメインが制御的役割を
果たすかもしれない蛋白質キナーゼの例はＰＡＫ３であり，これはそのＣ末端近
くにヘテロ三量体Ｇbサブユニット結合部位を含む（Ｌｅｅｕｗ，Ｔ． ｅｔ
ａｌ．（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ，３９１，１９１−１９５）。本発明のいくつ
かのキナーゼについては，Ｃ末端ドメインはまた触媒ドメインを含むかもしれな
い（上述）。
【００６０】 本明細書において用いる場合，"Ｃ末端テール"との用語は，ホモロジーにより
，その最も近いホモログのＣ末端アミノ酸を越えて伸長または突出している蛋白
質キナーゼのＣ末端ドメインを表す。Ｃ末端テールは，蛋白質配列を非重複蛋白
質データベースに対してスミス−ウォーターマン配列アラインメントを用いるこ
とにより，またはＤＮＡＳｔａｒプログラムＭｅｇａｌｉｇｎを用いる相同な配
列の多重配列アラインメントにより，同定することができる。Ｃ末端テールは，
その長さに依存して，キナーゼ機能において制御的役割を果たすかもしれないし
果たさないかもしれない。
【００６１】 本明細書において用いる場合，"コイルドコイル構造領域"との用語は，コンピ
ュータアルゴリズム，例えばＣＯＩＬＳ（Ｌｕｐａｓ，Ａ．（１９９６）Ｍｅｔ
ｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２６６：５１３−５２５）により推定してコイルド
コイル構造をとる可能性が高いポリペプチド配列を表す。コイルドコイルは，平
行な２または３個の両親媒性α−ヘリックスから形成される。コイルドコイルは
，他のポリペプチドのコイルドコイルドメインと結合してホモ二量体またはヘテ
ロ二量体を生ずることができる（Ｌｕｐａｓ，Ａ．（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ
２５２：１１６２−１１６４）。コイルドコイル依存性オリゴマー化は，蛋白
質機能，例えばセリン／トレオニンキナーゼの触媒活性に必要であることが示さ
れている（Ｒｏｅ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２
７２：５８３８−５８４５）。
【００６２】 本明細書において用いる場合，"プロリンリッチ領域"との用語は，蛋白質キナ
ーゼの，所定のアミノ酸長さにわたるプロリン含量が蛋白質において見いだされ
るこのアミノ酸の平均含量より高い（すなわち，＞１０％）領域を表す。プロリ
ンリッチ領域は，アミノ酸配列を目で調べることにより容易に識別され，標準的
なコンピュータ配列分析プログラム，例えばＤＮＡＳｔａｒプログラムＥｄｉｔ
Ｓｅｑにより定量することができる。プロリンリッチ領域は，制御蛋白質と蛋白
質との相互作用に関与することが示されている。これらの相互作用の中で，本発
明に最も関連性が深いものには，ある種の蛋白質キナーゼ（例えばヒトＰＡＫ１
）およびアダプター分子ＮｃｋのＳＨ３ドメインに見いだされる"ＰｘｘＰ"プロ
リンリッチモチーフが関与する（Ｇａｌｉｓｔｅｏ，Ｍ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．（１
９９６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２０９９７−２１０００）。"Ｐｘ
ｘＰ"プロリンリッチモチーフが関与する他の制御相互作用にはＷＷドメインが
ある（Ｓｕｄｏｌ，Ｍ．（１９９６）Ｐｒｏｇ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｏｌ．Ｂｉ
ｏ．６５：１１３−１３２）。
【００６３】 本明細書において用いる場合，"スペーサー領域"との用語は，予測される機能
的ドメインの間に位置する蛋白質キナーゼの領域を表す。スペーサー領域は，デ
ータベース中の任意のアミノ酸配列に対する検出可能なホモロジーを有しない。
これは，非重複蛋白質データベースに対して蛋白質配列のスミスウォーターマン
アラインメントを用いて，これを挟む機能的ドメインのＣおよびＮ末端境界を規
定することにより同定することができる。スペーサー領域は，蛋白質キナーゼ機
能において基本的な機能を果たすかもしれず果たさないかもしれない。スペーサ
ー領域のキナーゼ機能における制御的役割の先例は，ｓｒｃキナーゼスペーサー
のドメイン間相互作用における役割により提供される（Ｘｕ，Ｗ．ｅｔ ａｌ（
１９９７）Ｎａｔｕｒｅ ３８５：５９５−６０２）。
【００６４】 本明細書において用いる場合，"挿入物"との用語は，密接なホモログ中にはな
い蛋白質キナーゼの一部を表す。挿入物は，エクソンの選択的スプライシングの
産物であるかもしれないしそうではないかもしれない。挿入物は，蛋白質配列の
非重複蛋白質データベースに対するスミス−ウォーターマン配列アラインメント
を用いて，またはＤＮＡＳｔａｒプログラムＭｅｇａｌｉｇｎを用いる相同な配
列の多重配列アラインメントにより，同定することができる。挿入物は，蛋白質
−蛋白質相互作用のための新規な伝達手段を提示することにより，またはそのよ
うな相互作用を妨害することにより，機能的役割を果たすかもしれない。
【００６５】 "シグナル伝達経路"との用語は，細胞外シグナルを細胞膜を通して伝播し，細
胞内シグナルとなる分子を表す。このシグナルは，次に細胞性応答を刺激するこ
とができる。シグナル伝達プロセスに関与するポリペプチド分子は，典型的には
レセプターおよび非レセプター蛋白質チロシンキナーゼ，レセプターおよび非レ
セプター蛋白質ホスファターゼ，ＳＲＣホモロジー２および３ドメイン，ホスホ
チロシン結合蛋白質（ＳＲＣホモロジー２（ＳＨ２）およびホスホチロシン結合
（ＰＴＢおよびＰＨ）ドメイン含有蛋白質），プロリンリッチ結合蛋白質（ＳＨ
３ドメイン含有蛋白質），ＧＴＰａｓｅ，ホスホジエステラーゼ，ホスホリパー
ゼ，プロリルイソメラーゼ，プロテアーゼ，Ｃａ２＋結合蛋白質，ｃＡＭＰ結合
蛋白質，グアニルシクラーゼ，アデニリルシクラーゼ，ＮＯ生成蛋白質，ヌクレ
オチド交換因子および転写因子である。
【００６６】 別の好ましい態様においては，本発明は，キナーゼポリペプチドをコードし，
宿主細胞において転写を開始するのに有効なベクターまたはプロモーターをさら
に含む単離された，濃縮されたまたは精製された核酸分子を特徴とする。本発明
はまた，組換え核酸を特徴とし，これは好ましくは細胞または生物内にある。組
換え核酸は，配列番号１，配列番号２，配列番号３，配列番号４，配列番号５，
配列番号６，配列番号７，配列番号８，配列番号９，配列番号１０，配列番号１
１，配列番号１２，配列番号１３，配列番号１４，配列番号１５，配列番号１６
，配列番号１７，配列番号１８，配列番号１９，配列番号２０，配列番号２１，
配列番号２２，配列番号２３，配列番号２４，配列番号２５，配列番号２６，配
列番号２７，配列番号２８，配列番号２９，配列番号３０，配列番号３１，配列
番号３２，配列番号３３，配列番号３４，配列番号３５，配列番号３６，配列番
号３７，配列番号３８，配列番号３９，配列番号４０，配列番号４１，配列番号
４２，配列番号４３，配列番号４４，配列番号４５，配列番号４６，配列番号４
７，配列番号４８，配列番号４９，配列番号５０，配列番号５１，配列番号５２
，配列番号５３，配列番号５４，配列番号５５，配列番号５６，および配列番号
５７に記載される配列からなる群より選択される配列，またはその機能的誘導体
，および宿主細胞において転写を開始させるのに有効なベクターまたはプロモー
ターを含むことができる。あるいは，組換え核酸は，細胞において機能的な転写
開始領域，キナーゼポリペプチドをコードするＲＮＡ配列に相補的な配列および
細胞において機能的な転写終止領域を含んでいてもよい。特定のベクターおよび
宿主細胞の組み合わせは本明細書において議論される。
【００６７】 "ベクター"との用語は，細胞にトランスフェクトすることができ，細胞ゲノム
中でまたはそれとは独立に複製しうる一本鎖または二本鎖の環状核酸分子を表す
。環状二本鎖核酸分子は，制限酵素で処理することにより切断し，したがって直
鎖状にすることができる。核酸ベクターの分類，制限酵素，および制限酵素によ
り切断されるヌクレオチド配列の知識は，当業者には容易に入手可能である。キ
ナーゼをコードする核酸分子は，ベクターを制限酵素で切断し，２つの断片を一
緒にライゲーションすることにより，ベクター中に挿入することができる。
【００６８】 "トランスフェクトする"との用語は，核酸ベクターまたは他の核酸分子を細胞
性生物中に挿入する多数の方法を規定する。これらの方法には，種々の手法が含
まれ，例えば，細胞を高濃度の塩，電界，界面活性剤，またはＤＭＳＯで処理す
ることにより，細胞の外膜または壁を目的の核酸分子に対して透過性にすること
，または種々のウイルス伝達戦略を用いることが含まれる。
【００６９】 本明細書において用いる場合，"プロモーター"との用語は，遺伝子配列の発現
に必要な核酸配列を表す。プロモーター領域は生物によって様々であるが，種々
の生物について当業者によく知られている。例えば，原核生物においては，プロ
モーター領域は，プロモーター（ＲＮＡ転写の開始を指示する）ならびに，ＲＮ
Ａに転写されたときに合成の開始を合図するＤＮＡ配列の両方を含む。そのよう
な領域は，通常は転写および翻訳の開始に関与する５’非コーディング配列，例
えばＴＡＴＡボックス，キャッピング配列，ＣＡＡＴ配列等を含む。
【００７０】 好ましい態様においては，単離された核酸は，配列番号１，配列番号２，配列
番号３，配列番号４，配列番号５，配列番号６，配列番号７，配列番号８，配列
番号９，配列番号１０，配列番号１１，配列番号１２，配列番号１３，配列番号
１４，配列番号１５，配列番号１６，配列番号１７，配列番号１８，配列番号１
９，配列番号２０，配列番号２１，配列番号２２，配列番号２３，配列番号２４
，配列番号２５，配列番号２６，配列番号２７，配列番号２８，配列番号２９，
配列番号３０，配列番号３１，配列番号３２，配列番号３３，配列番号３４，配
列番号３５，配列番号３６，配列番号３７，配列番号３８，配列番号３９，配列
番号４０，配列番号４１，配列番号４２，配列番号４３，配列番号４４，配列番
号４５，配列番号４６，配列番号４７，配列番号４８，配列番号４９，配列番号
５０，配列番号５１，配列番号５２，配列番号５３，配列番号５４，配列番号５
５，配列番号５６，および配列番号５７に記載される配列からなる群より選択さ
れる核酸配列を含むか，本質的にそれからなるか，それからなり，かつ，配列番
号５８，配列番号５９，配列番号６０，配列番号６１，配列番号６２，配列番号
６３，配列番号６４，配列番号６５，配列番号６６，配列番号６７，配列番号６
８，配列番号６９，配列番号７０，配列番号７１，配列番号７２，配列番号７３
，配列番号７４，配列番号７５，配列番号７６，配列番号７７，配列番号７８，
配列番号７９，配列番号８０，配列番号８１，配列番号８２，配列番号８３，配
列番号８４，配列番号８５，配列番号８６，配列番号８７，配列番号８８，配列
番号８９，配列番号９０，配列番号９１，配列番号９２，配列番号９３，配列番
号９４，配列番号９５，配列番号９６，配列番号９７，配列番号９８，配列番号
９９，配列番号１００，配列番号１０１，配列番号１０２，配列番号１０３，配
列番号１０４，配列番号１０５，配列番号１０６，配列番号１０７，配列番号１
０８，配列番号１０９，配列番号１１０，配列番号１１１，配列番号１１２，配
列番号１１３，および配列番号１１４に記載されるアミノ酸配列からなる群より
選択されるアミノ酸配列，その機能的誘導体，または配列番号５８，配列番号５
９，配列番号６０，配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４
，配列番号６５，配列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，
配列番号７０，配列番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配
列番号７５，配列番号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列
番号８０，配列番号８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番
号８５，配列番号８６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号
９０，配列番号９１，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９
５，配列番号９６，配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１０
０，配列番号１０１，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列
番号１０５，配列番号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０
９，配列番号１１０，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番号１１３，およ
び配列番号１１４に記載されるアミノ酸配列からなる群より選択される少なくと
も３５，４０，４５，５０，６０，７５，１００，２００，または３００個の連
続するアミノ酸をコードする。核酸は，ｃＤＮＡクローニングにより，またはサ
ブトラクティブハイブリダイゼーションにより，天然の起源から単離することが
できる。天然の起源は哺乳動物であることができ，好ましくはヒト，好ましくは
血液，精液または組織であり，核酸はトリエステル法によりまたは自動化ＤＮＡ
合成機を用いることにより合成してもよい。
【００７１】 "哺乳動物"とは，好ましくはマウス，ラット，ウサギ，モルモット，ヒツジ，
およびヤギ等の生物を表し，より好ましくはネコ，イヌ，有尾サル，および無尾
サルを表し，最も好ましくはヒトを表す。
【００７２】 さらに別の好ましい態様においては，核酸は，例えば，追加のポリペプチドの
同定およびクローニングを容易にするためのハイブリダイゼーションプローブを
設計するのに，追加のポリペプチドのクローニングを容易にするためのＰＣＲプ
ローブを設計するのに，ポリペプチド領域に対する抗体を得るために，およびア
ンチセンスオリゴヌクレオチドを設計するのに有用な，保存されたまたは独特の
領域である。
【００７３】 "保存された核酸領域"とは，キナーゼポリペプチドをコードする２つまたはそ
れ以上の核酸に存在する領域を意味し，特定の核酸配列は低いストリンジェンシ
ー条件下でこの領域にハイブリダイズすることができる。キナーゼポリペプチド
をコードする核酸のスクリーニングに適した低ストリンジェンシー条件の例は，
Ｗａｈｌ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．１５２：３９９−４０７（１９
８７）およびＷａｈｌ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．１５２：４１５−
４２３（１９８７）（図面および表を含めその全体を本明細書の一部としてここ
に引用する）に提供される。好ましくは，保存領域は，２０ヌクレオチド中５個
以下で異なり，より好ましくは２０ヌクレオチド中２個，最も好ましくは２０ヌ
クレオチド中１個が異なる。
【００７４】 "独特の核酸領域"とは，キナーゼポリペプチドをコードする核酸中に存在し，
天然に生ずる任意の他のポリペプチドをコードする配列中には存在しない配列を
意味する。そのような領域は，好ましくは３２個（好ましくは４０個，より好ま
しくは４５個，最も好ましくは５５個）またはそれ以上の連続するアミノ酸，例
えば，配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０，配列番号６１，配列番号６
２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，配列番号６６，配列番号６７
，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配列番号７１，配列番号７２，
配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列番号７６，配列番号７７，配
列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番号８１，配列番号８２，配列
番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号８６，配列番号８７，配列番
号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１，配列番号９２，配列番号
９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，配列番号９７，配列番号９
８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０１，配列番号１０２，配列番
号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番号１０６，配列番号１０７
，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１０，配列番号１１１，配列番
号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４に記載されるアミノ酸配列か
らなる群より選択されるアミノ酸配列をコードする。特に，独特の核酸領域は，
好ましくは哺乳動物起源のものである。
【００７５】 本発明の別の観点は，試料において，配列番号５８，配列番号５９，配列番号
６０，配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６
５，配列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０
，配列番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，
配列番号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配
列番号８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列
番号８６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番
号９１，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号
９６，配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号
１０１，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，
配列番号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号
１１０，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列番号１
１４に記載されるアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する
キナーゼポリペプチドをコードする核酸を検出するための核酸プローブを特徴と
する。核酸プローブは，配列番号１，配列番号２，配列番号３，配列番号４，配
列番号５，配列番号６，配列番号７，配列番号８，配列番号９，配列番号１０，
配列番号１１，配列番号１２，配列番号１３，配列番号１４，配列番号１５，配
列番号１６，配列番号１７，配列番号１８，配列番号１９，配列番号２０，配列
番号２１，配列番号２２，配列番号２３，配列番号２４，配列番号２５，配列番
号２６，配列番号２７，配列番号２８，配列番号２９，配列番号３０，配列番号
３１，配列番号３２，配列番号３３，配列番号３４，配列番号３５，配列番号３
６，配列番号３７，配列番号３８，配列番号３９，配列番号４０，配列番号４１
，配列番号４２，配列番号４３，配列番号４４，配列番号４５，配列番号４６，
配列番号４７，配列番号４８，配列番号４９，配列番号５０，配列番号５１，配
列番号５２，配列番号５３，配列番号５４，配列番号５５，配列番号５６，およ
び配列番号５７，またはその機能的誘導体に記載される配列からなる群より選択
される配列にハイブリダイズするであろうヌクレオチド塩基配列を含む。
【００７６】 好ましい態様においては，核酸プローブは，少なくとも１２，３２，７５，９
０，１０５，１２０，１５０，２００，２５０，３００または３５０個の連続す
るアミノ酸をコードする核酸にハイブリダイズし，ここで，核酸配列は，配列番
号１，配列番号２，配列番号３，配列番号４，配列番号５，配列番号６，配列番
号７，配列番号８，配列番号９，配列番号１０，配列番号１１，配列番号１２，
配列番号１３，配列番号１４，配列番号１５，配列番号１６，配列番号１７，配
列番号１８，配列番号１９，配列番号２０，配列番号２１，配列番号２２，配列
番号２３，配列番号２４，配列番号２５，配列番号２６，配列番号２７，配列番
号２８，配列番号２９，配列番号３０，配列番号３１，配列番号３２，配列番号
３３，配列番号３４，配列番号３５，配列番号３６，配列番号３７，配列番号３
８，配列番号３９，配列番号４０，配列番号４１，配列番号４２，配列番号４３
，配列番号４４，配列番号４５，配列番号４６，配列番号４７，配列番号４８，
配列番号４９，配列番号５０，配列番号５１，配列番号５２，配列番号５３，配
列番号５４，配列番号５５，配列番号５６，および配列番号５７，またはその機
能的誘導体からなる群より選択される。
【００７７】 プローブを使用する方法には，ハイブリダイゼーションが生ずるような条件下
で試料を核酸プローブと接触させ，キナーゼＲＮＡに結合したプローブの存在ま
たは量を検出することにより，試料中のキナーゼＲＮＡの存在または量を検出す
ることが含まれる。プローブとキナーゼポリペプチドをコードする核酸配列との
間に形成される核酸デュープレックスを，検出された核酸の配列の同定において
用いることができる（Ｎｅｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｏｎｉｓｏｔｏｐｉｃ
ＤＮＡ Ｐｒｏｂｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，
Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｋｒｉｃｋａ，ｅｄ．，ｐ．２７５，１９９２（図面およ
び表を含めその全体を本明細書の一部としてここに引用する）。そのような方法
を実施するためのキットは，その中に核酸プローブが置かれている容器手段を含
むように構築することができる。
【００７８】 プローブを使用する方法には，これらのプローブを用いて，例えば当該技術分
野において知られる技術を用いて予測されたキナーゼのそれぞれの完全長クロー
ンを得ることも含まれる。これらのクローンは，コードされるキナーゼの触媒的
活性を阻害し，癌，免疫関連疾病および疾患，心臓血管疾病，脳またはニューロ
ン関連疾病，および代謝性疾患の治療において潜在的有用性を有する小分子化合
物をスクリーニングするのに有用であろう。より詳細には，疾患には，組織，血
液，または造血細胞起源の癌，特に乳，結腸，肺，前立腺，子宮頚部，脳，卵巣
，膀胱，または腎臓が関与する癌；中枢神経または末梢神経系疾病および状態，
例えば，片頭痛，痛み，性的機能不全，気分障害，注意障害，認識障害，低血圧
症，および高血圧症；精神病性および神経学的疾患，例えば不安，精神分裂病，
躁うつ病，せん妄，痴呆，重症の精神遅滞および運動異常症，例えばハンチント
ン病またはツレット症候群；神経変性性疾病，例えばアルツハイマー，パーキン
ソン，多発性硬化症，および筋萎縮性側索硬化症；ＨＩＶ１，ＨＩＶ−２または
他のウイルスまたはプリオン体または真菌または細菌生物により引き起こされる
ウイルスまたは非ウイルス感染；代謝性疾患，例えば糖尿病および肥満およびこ
れに関連する症候群，特に，心臓血管疾患，例えば再灌流再狭窄，冠状動脈血栓
症，凝固疾患，制御されない細胞成長疾患，アテローム性動脈硬化症；眼性疾病
，例えば緑内障，網膜症，および黄斑変性；炎症性疾患，例えば慢性関節リウマ
チ，慢性炎症性腸疾病，慢性炎症性骨盤疾病，多発性硬化症，ぜん息，変形性関
節症，乾癬，アテローム性動脈硬化症，鼻炎，自己免疫，および臓器移植拒絶が
含まれる。
【００７９】 別の観点においては，本発明は，配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０
，配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，
配列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配
列番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列
番号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番
号８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号
８６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９
１，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６
，配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０
１，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列
番号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１
０，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４
に記載されるアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するキナ
ーゼポリペプチドをコードする核酸分子を含む組換え細胞または組織を記述する
。そのような細胞においては，核酸は遺伝的制御要素の制御下にあってもよく，
または外来性プロモーターを含む外来性制御要素の制御下にあってもよい。"外
来性"とは，通常はキナーゼポリペプチドのコーディング配列とインビボで転写
的にカップリングしていないプロモーターを意味する。
【００８０】 ポリペプチドは，好ましくは，配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０，
配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，配
列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配列
番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列番
号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番号
８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号８
６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１
，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，
配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０１
，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番
号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１０
，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４に
記載されるアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列によりコードさ
れる蛋白質のフラグメントである。"フラグメント"とは，キナーゼポリペプチド
中に存在するアミノ酸配列を意味する。好ましくは，そのような配列は，配列番
号５８，配列番号５９，配列番号６０，配列番号６１，配列番号６２，配列番号
６３，配列番号６４，配列番号６５，配列番号６６，配列番号６７，配列番号６
８，配列番号６９，配列番号７０，配列番号７１，配列番号７２，配列番号７３
，配列番号７４，配列番号７５，配列番号７６，配列番号７７，配列番号７８，
配列番号７９，配列番号８０，配列番号８１，配列番号８２，配列番号８３，配
列番号８４，配列番号８５，配列番号８６，配列番号８７，配列番号８８，配列
番号８９，配列番号９０，配列番号９１，配列番号９２，配列番号９３，配列番
号９４，配列番号９５，配列番号９６，配列番号９７，配列番号９８，配列番号
９９，配列番号１００，配列番号１０１，配列番号１０２，配列番号１０３，配
列番号１０４，配列番号１０５，配列番号１０６，配列番号１０７，配列番号１
０８，配列番号１０９，配列番号１１０，配列番号１１１，配列番号１１２，配
列番号１１３，および配列番号１１４に記載されるアミノ酸配列からなる群より
選択される配列の，少なくとも３２，４５，５０，６０，１００，２００，また
は３００個の連続するアミノ酸を含む。
【００８１】 別の観点においては，本発明は，配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０
，配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，
配列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配
列番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列
番号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番
号８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号
８６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９
１，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６
，配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０
１，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列
番号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１
０，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４
に記載されるアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する，単
離された，濃縮されたまたは精製されたキナーゼポリペプチドを特徴とする。
【００８２】 ポリペプチドに関して"単離された"とは，互いに結合した６個（好ましくは１
２個，より好ましくは１８個，最も好ましくは２５，３２，４０，または５０個
）またはそれ以上のアミノ酸のポリマーを意味し，天然起源から単離されたポリ
ペプチドまたは合成されたポリペプチドが含まれる。ある種の観点においては，
より長いポリペプチド，例えば，配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０，
配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，配
列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配列
番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列番
号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番号
８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号８
６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１
，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，
配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０１
，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番
号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１０
，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４に
記載されるアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む，１００
，２００，３００，４００，４５０，５００，５５０，６００，７００，８００
，９００個またはそれ以上の連続するアミノ酸を含むものが好ましい。
【００８３】 本発明の単離されたポリペプチドは，天然には純粋なまたは分離された形で見
いだされない点において独特である。"単離された"との用語の使用は，天然に生
ずる配列がその正常な細胞性環境から除かれていることを示す。すなわち，配列
は，無細胞溶液中にあってもよく，異なる細胞性環境に置かれていてもよい。こ
の用語は，その配列が存在する唯一のアミノ酸鎖であることを意味するものでは
なく，配列が天然にこれに付随する非アミノ酸物質を本質的に含まない（少なく
とも約９０−９５％純粋）ことを意味する。
【００８４】 ポリペプチドに関して使用する場合，"濃縮された"との用語は，特定のアミノ
酸配列が，正常または疾病細胞におけるより，または配列が由来する細胞におけ
るより，目的とする細胞または溶液中に存在する総アミノ酸配列の有意に高い割
合（２−５倍）を占めることを意味する。これは，存在する他のアミノ酸配列の
量の優先的減少により，または目的とする特定のアミノ酸配列の量の優先的増加
により，またはこれら２つの組み合わせにより，人が生じさせることができる。
しかし，濃縮されたとは，他のアミノ酸配列が存在しないことを意味するもので
はなく，単に目的とする配列の相対的な量が有意に増加していることを意味する
ことに注意すべきである。本明細書において"有意"にとの用語は，増加のレベル
がそのような増加を作成した人にとって有用であることを示し，一般に，他のア
ミノ酸配列と比較して少なくとも約２倍，より好ましくは少なくとも５−１０倍
，またはそれより多い増加を意味する。この用語はまた，他の起源からのアミノ
酸配列が存在しないことを意味するものではない。アミノ酸配列の他の起源は，
例えば，酵母または細菌のゲノム，またはクローニングベクター，例えばｐＵＣ
１９によりコードされるアミノ酸配列を含みうる。この用語は，人が介在して所
望のアミノ酸配列の比率を増加させる状況のみをカバーすることを意味する。
【００８５】 ある目的のためには，アミノ酸配列が精製された形であることも有利である。
ポリペプチドに関して"精製された"との用語は絶対的純度（例えば均一調製物）
を要求するものではなく，この用語は配列が天然の環境におけるより比較的純粋
であることを示す。天然のレベルと比較して，このレベルは少なくとも２−５倍
高くあるべきである（例えばｍｇ／ｍＬで）。少なくとも１桁の精製，好ましく
は２または３桁，より好ましくは４または５桁の精製が明示的に意図される。物
質は，好ましくは機能的に有意なレベルで夾雑物を含まず，例えば，９０％，９
５％，または９９％純粋である。
【００８６】 好ましい態様においては，キナーゼポリペプチドは，配列番号５８，配列番号
５９，配列番号６０，配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６
４，配列番号６５，配列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９
，配列番号７０，配列番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，
配列番号７５，配列番号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配
列番号８０，配列番号８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列
番号８５，配列番号８６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番
号９０，配列番号９１，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号
９５，配列番号９６，配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１
００，配列番号１０１，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配
列番号１０５，配列番号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１
０９，配列番号１１０，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番号１１３，お
よび配列番号１１４に記載されるアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ
酸配列によりコードされる蛋白質のフラグメントである。好ましくは，キナーゼ
ポリペプチドは，配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０，配列番号６１，
配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，配列番号６６，配
列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配列番号７１，配列
番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列番号７６，配列番
号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番号８１，配列番号
８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号８６，配列番号８
７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１，配列番号９２
，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，配列番号９７，
配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０１，配列番号１０
２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番号１０６，配列
番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１０，配列番号１１
１，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４に記載されるアミ
ノ酸配列，またはその機能的誘導体からなる群より選択される配列の，少なくと
も３２，４５，５０，６０，１００，２００，または３００個の連続するアミノ
酸を含む。
【００８７】 好ましい態様においては，キナーゼポリペプチドは，（ａ）配列番号５８，配
列番号５９，配列番号６０，配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３，配列
番号６４，配列番号６５，配列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番
号６９，配列番号７０，配列番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配列番号
７４，配列番号７５，配列番号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列番号７
９，配列番号８０，配列番号８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番号８４
，配列番号８５，配列番号８６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，
配列番号９０，配列番号９１，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配
列番号９５，配列番号９６，配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列
番号１００，配列番号１０１，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番号１０
４，配列番号１０５，配列番号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８，配列
番号１０９，配列番号１１０，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番号１１
３，および配列番号１１４に記載されるアミノ酸配列からなる群より選択される
アミノ酸配列；および（ｂ）配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０，配列
番号６１，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，配列番
号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配列番号
７１，配列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列番号７
６，配列番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番号８１
，配列番号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号８６，
配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１，配
列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，配列
番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０１，配
列番号１０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番号１
０６，配列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１０，配
列番号１１１，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４に記載
されるアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列であって，ただし，
Ｃ末端触媒ドメイン，Ｎ末端ドメイン，触媒ドメイン，Ｃ末端ドメイン，コイル
ドコイル構造領域，プロリンリッチ領域，スペーサー領域，およびＣ末端テール
からなる群より選択されるドメインの１またはそれ以上が欠失している配列； を有するアミノ酸配列を含む。
【００８８】 ポリペプチドは，当該技術分野においてよく知られる方法により，天然の起源
から単離することができる。天然の起源は哺乳動物であることができ，好ましく
はヒト，血液，精液，または組織であり，またはポリペプチドは自動化ポリペプ
チド合成機を用いて合成してもよい。
【００８９】 ある態様においては，本発明は，（ａ）配列番号５８，配列番号５９，配列番
号６０，配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号
６５，配列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７
０，配列番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５
，配列番号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，
配列番号８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配
列番号８６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列
番号９１，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番
号９６，配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列番
号１０１，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５
，配列番号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番
号１１０，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列番号
１１４に記載されるアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有す
る組換えキナーゼポリペプチドを含む。"組換えキナーゼポリペプチド"とは，そ
の存在位置（例えば，天然に見いだされる物とは異なる細胞または組織に存在）
，純度または構造において天然に生ずるポリペプチドと区別されるように，組換
えＤＮＡ技術により製造されるポリペプチドを意味する。一般に，そのような組
換えポリペプチドは，天然に通常観察される量とは異なる量で細胞中に存在する
であろう。
【００９０】 宿主細胞中で発現させるべきポリペプチドは，異種蛋白質からの領域を含む融
合蛋白質であってもよい。そのような領域を含むことにより，例えば，分泌させ
，安定性を改良し，またはポリペプチドの精製を容易にすることができる。例え
ば，適当なシグナルペプチドをコードする配列を発現ベクター中に組み込むこと
ができる。シグナルペプチド（分泌リーダー）のＤＮＡ配列を，ポリペプチドが
シグナルペプチドを含む融合蛋白質として翻訳されるように，ポリヌクレオチド
配列にインフレームで融合させることができる。意図する宿主細胞において機能
的であるシグナルペプチドは，ポリペプチドの細胞外分泌を促進する。好ましく
は，シグナル配列はポリペプチドが細胞から分泌される際にポリペプチドから切
断される。すなわち，キナーゼポリペプチドのＮ末端が運搬ペプチドに融合され
ている好ましい融合蛋白質を作成することができる。
【００９１】 １つの態様においては，ポリペプチドは，ポリペプチドの精製を容易にするた
めに用いられる異種領域を含む融合蛋白質を含む。そのような機能のために用い
られる入手可能なペプチドの多くは，融合蛋白質が結合パートナーに選択的に結
合することを可能とする。好ましい結合パートナーには，プロテインＡのＩｇＧ
結合ドメインの１またはそれ以上が含まれ，融合蛋白質は，ＩｇＧ結合セファロ
ース等のアフィニティークロマトグラフィーにより容易に均一にまで精製される
。あるいは，多くのベクターは，標的蛋白質のＮ末端またはＣ末端で発現される
ことができるヒスチジン残基のストレッチを有するという利点を有しており，し
たがって，金属キレート化クロマトグラフィーにより目的とする蛋白質を回収す
ることができる。蛋白質加水分解酵素，例えばエンテロキナーゼ，ファクターＸ
プロコラゲナーゼまたはトロンビンの認識部位をコードするヌクレオチド配列を
キナーゼポリペプチドの配列のすぐ上流に配置すると，融合蛋白質を切断して成
熟キナーゼポリペプチドを得ることができる。融合蛋白質結合パートナーのさら
なる例には，限定されないが，酵母Ｉ−因子，ｓｆ９昆虫細胞におけるミツバチ
メラチンリーダー，６−Ｈｉｓタグ，チオレドキシンタグ，ヘマグルチニンタグ
，ＧＳＴタグ，およびＯｍｐＡシグナル配列タグが含まれる。当業者には理解さ
れるように，ペプチドを認識しこれに結合する結合パートナーは，任意のイオン
，分子または化合物であることができ，例えば金属イオン（例えば金属アフィニ
ティーカラム），抗体，またはそのフラグメント，およびペプチドに結合する任
意の蛋白質またはペプチド，例えばＦＬＡＧタグが含まれる。
【００９２】 別の観点においては，本発明は，キナーゼポリペプチドまたはキナーゼポリペ
プチドドメインまたはフラグメントに対して特異的結合親和性を有する抗体（例
えば，モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体）を特徴とし，ここで，ポ
リペプチドは，配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０，配列番号６１，配
列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，配列番号６６，配列
番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配列番号７１，配列番
号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列番号７６，配列番号
７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番号８１，配列番号８
２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号８６，配列番号８７
，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１，配列番号９２，
配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，配列番号９７，配
列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０１，配列番号１０２
，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番号１０６，配列番
号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１０，配列番号１１１
，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４に記載されるアミノ
酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する群から選択される。"特
異的結合親和性"とは，抗体が，特定の条件下において，他のポリペプチドに結
合するより高い親和性をもって標的キナーゼポリペプチドに結合することを意味
する。抗体または抗体フラグメントは，他のポリペプチドに結合しうる領域を含
むポリペプチドである。"特異的結合親和性"との用語は，特定の条件下で，他の
ポリペプチドに結合するより高い親和性をもってキナーゼポリペプチドに結合す
る抗体を記述する。抗体を用いて，キナーゼポリペプチドの内因性起源を同定し
て，細胞サイクル制御をモニターすることができ，または，キナーゼポリペプチ
ドの細胞中の免疫局在化に用いることができる。
【００９３】 "ポリクローナル"との用語は，抗原またはその抗原性機能的誘導体で免疫した
動物の血清から誘導される抗体分子の異成分集団である抗体を表す。ポリクロー
ナル抗体の製造のためには，種々の宿主動物に抗原を注射することにより免疫す
ることができる。宿主の種により，種々のアジュバントを用いて免疫学的応答を
増加させることができる。
【００９４】 "モノクローナル抗体"は，特定の抗原に対する抗体の実質的に均一な集団であ
る。モノクローナル抗体は，培養連続細胞株による抗体分子の生成を与える任意
の技術により得ることができる。モノクローナル抗体は，当業者に知られる方法
により得ることができる（Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ２５６：
４９５−４９７，１９７５，および米国特許４，３７６，１１０（これらの両方
は，図面または表を含めその全体を本明細書の一部としてここに引用する））。
【００９５】 "抗体フラグメント"との用語は，特定の分子に対して特異的結合親和性を表示
する抗体の一部，しばしば超可変領域および周囲の重鎖および軽鎖の一部を表す
。超可変領域は，抗体のポリペプチド標的に物理的に結合する部分である。
【００９６】 本発明のキナーゼポリペプチドに対して特異的結合親和性を有する抗体または
抗体フラグメントは，試料をキナーゼ−抗体免疫複合体の形成に適した条件下で
抗体で探索し，キナーゼポリペプチドに結合した抗体の存在および／または量を
検出することにより，試料中のキナーゼポリペプチドの存在および／または量を
検出する方法において用いることができる。そのような方法を実施するための診
断キットは，キナーゼに特異的な抗体または抗体フラグメント，ならびに抗体の
結合パートナーまたは抗体それ自体のコンジュゲートを含むように構築すること
ができる。
【００９７】 本発明のキナーゼポリペプチドに対して特異的結合親和性を有する抗体または
抗体フラグメントは，原核生物または真核生物から単離，濃縮，または精製する
ことができる。当業者に知られる日常的な方法により，原核生物および真核生物
の両方において，抗体または抗体フラグメントを製造することができる。ポリペ
プチド分子である抗体の精製，濃縮および単離は，上に記載される。
【００９８】 本発明のキナーゼポリペプチドに対して特異的結合親和性を有する抗体は，免
疫複合体が形成するような条件下で試料を抗体と接触させ，キナーゼポリペプチ
ドに結合した抗体の存在および／または量を検出することにより，試料中のキナ
ーゼポリペプチドの存在および／または量を検出するための方法において用いる
ことができる。そのような方法を実施するための診断キットは，抗体を含む第１
の容器および抗体の結合パートナーおよび標識（例えば放射性同位体）を含む第
２の容器を含むように構築することができる。診断キットはまた，ＦＤＡに認可
された使用の通知およびその指針を含んでいてもよい。
【００９９】 別の観点においては，本発明は，キナーゼポリペプチドまたはキナーゼポリペ
プチドドメインに対して特異的結合親和性を有する抗体を産生するハイブリドー
マを特徴とし，ここで，ポリペプチドは，配列番号５８，配列番号５９，配列番
号６０，配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号
６５，配列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７
０，配列番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５
，配列番号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，
配列番号８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配
列番号８６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列
番号９１，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番
号９６，配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列番
号１０１，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５
，配列番号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番
号１１０，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列番号
１１４に記載されるアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有す
る群から選択される。"ハイブリドーマ"とは，抗体，例えば本発明のキナーゼに
対する抗体を分泌しうる不死化細胞株を意味する。好ましい態様においては，キ
ナーゼに対する抗体は，本発明のキナーゼポリペプチドに特異的に結合すること
ができるアミノ酸の配列を含む。
【０１００】 別の観点においては，本発明はまた，上述したいずれかの核酸分子によりコー
ドされるポリペプチドに結合する抗体，および負対照抗体を含むキットに関する
。
【０１０１】 "負対照抗体"との用語は，特異的結合親和性を有する抗体と類似の起源に由来
するが，本発明のポリペプチドに対して結合親和性を示さない抗体を表す。
【０１０２】 別の観点においては，本発明は，（ａ）配列番号５８，配列番号５９，配列番
号６０，配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号
６５，配列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７
０，配列番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５
，配列番号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，
配列番号８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配
列番号８６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列
番号９１，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番
号９６，配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列番
号１０１，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５
，配列番号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番
号１１０，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列番号
１１４に記載されるアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有す
る群から選択されるキナーゼポリペプチドに結合することができるキナーゼポリ
ペプチド結合剤を特徴とする。結合剤は，好ましくは，本発明のキナーゼポリペ
プチド上に存在するエピトープを認識する精製された抗体である。他の結合剤に
は，キナーゼポリペプチドに結合する分子およびキナーゼポリペプチドに結合す
る類似の分子が含まれる。そのような結合剤は，キナーゼ結合パートナー活性を
測定するアッセイ，例えばＰＤＧＦＲ活性を測定するアッセイを用いて同定する
ことができる。
【０１０３】 本発明はまた，本発明のキナーゼポリペプチドまたは同等の配列を含むヒト細
胞をスクリーニングする方法を特徴とする。該方法は，当該技術分野において日
常的かつ標準的な技術，例えば本発明のキナーゼの同定のために本明細書におい
て記載される技術（例えば，クローニング，サザンまたはノザンブロット分析，
インシトゥーハイブリダイゼーション，ＰＣＲ増幅等）を用いて，ヒト細胞にお
いて新規ポリペプチドを同定することを含む。
【０１０４】 別の観点においては，本発明は，キナーゼ活性を調節する物質を同定する方法
を特徴とする。該方法は，（ａ）配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０，
配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，配
列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配列
番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列番
号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番号
８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号８
６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１
，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，
配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０１
，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番
号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１０
，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４に
記載されるアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する群から
選択されるキナーゼポリペプチドを試験物質と接触させ；（ｂ）前記ポリペプチ
ドの活性を測定し；そして（ｃ）前記物質が前記ポリペプチドの活性を調節する
か否かを判定する，の各工程を含む。当業者は，本発明のキナーゼポリペプチド
，例えば，触媒ドメインまたはその一部等の完全長配列の一部が，キナーゼ活性
を調節する物質を同定するのに有用であることを理解するであろう。機能的活性
（例えば，本明細書において定義される触媒的活性）を有するキナーゼポリペプ
チドは，キナーゼ活性を調節する物質を同定するのに有用である。
【０１０５】 "調節する"との用語は，化合物が本発明のキナーゼの機能を変化させる能力を
表す。調節剤は，好ましくは，キナーゼに暴露される化合物の濃度に依存して本
発明のキナーゼの活性を活性化するかまたは阻害する。
【０１０６】 "調節する"との用語はまた，キナーゼと天然の結合パートナーとの間に複合体
が形成される確率を増加または減少させることにより，本発明のキナーゼの機能
を変更することを表す。調節剤は，好ましくは，キナーゼと天然の結合パートナ
ーとの間にそのような複合体が形成される確率を増加させ，より好ましくは，キ
ナーゼに暴露される化合物の濃度に依存してキナーゼと天然の結合パートナーと
の間に複合体が形成される確率を増加または減少させ，最も好ましくは，キナー
ゼと天然の結合パートナーとの間に複合体が形成される確率を減少させる。
【０１０７】 "活性化する"との用語は，キナーゼの細胞活性を増加させることを表す。阻害
するとの用語は，キナーゼの細胞活性を減少させることを表す。キナーゼ活性は
，好ましくは，天然の結合パートナーとの相互作用である。
【０１０８】 "複合体"との用語は，互いに結合した少なくとも２つの分子の集合を表す。シ
グナル伝達複合体は，しばしば，互いに結合した少なくとも２つの蛋白質分子を
含む。例えば，蛋白質チロシンレセプター蛋白質キナーゼ，ＧＲＢ２，ＳＯＳ，
ＲＡＦ，およびＲＡＳは，有糸分裂促進リガンドに応答して，集合してシグナル
伝達複合体を形成する。
【０１０９】 "天然の結合パートナー"との用語は，細胞中でキナーゼに結合するポリペプチ
ド，脂質，小分子，または核酸を表す。キナーゼと天然の結合パートナーとの間
の相互作用の変化は，相互作用が形成される確率の増加または減少，またはキナ
ーゼ／天然の結合パートナー複合体の濃度の増加または減少として現れることが
できる。
【０１１０】 本明細書において用いる場合，"接触させる"との用語は，試験化合物を含む溶
液を，本発明の方法の細胞を浸している液体培地と混合することを表す。化合物
を含む溶液はまた，該方法の細胞内への試験化合物の取り込みを容易にする他の
成分，例えばジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含んでいてもよい。試験化合
物を含む溶液は，輸送装置，例えば，ピペットに基づく装置またはシリンジに基
づく装置を用いて，細胞を浸している培地に加えることができる。
【０１１１】 別の観点においては，本発明は，細胞においてキナーゼ活性を調節する物質を
同定する方法を特徴とする。該方法は，（ａ）細胞においてキナーゼポリペプチ
ドを発現させ，ここで，前記ポリペプチドは，配列番号５８，配列番号５９，配
列番号６０，配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列
番号６５，配列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番
号７０，配列番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号
７５，配列番号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８
０，配列番号８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５
，配列番号８６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，
配列番号９１，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配
列番号９６，配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配
列番号１０１，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１
０５，配列番号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配
列番号１１０，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列
番号１１４に記載されるアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を
有する群から選択され；（ｂ）試験物質を前記細胞に加え；そして（ｃ）細胞表
現型または前記ポリペプチドと天然の結合パートナーとの間の相互作用の変化を
モニターする，の各工程を含む。当業者は，本発明のキナーゼポリペプチド，例
えば，触媒ドメインまたはその一部等の完全長配列の一部がキナーゼ活性を調節
する物質を同定するのに有用であることを理解するであろう。機能的活性（例え
ば，本明細書に定義される触媒的活性）を有するキナーゼポリペプチドは，キナ
ーゼ活性を調節する物質を同定するのに有用である。
【０１１２】 本明細書において用いる場合，"発現"との用語は，細胞中でキナーゼ遺伝子を
含む核酸ベクターから本発明のキナーゼが産生されることを表す。本明細書に記
載されるように，核酸ベクターを，当該技術分野においてよく知られる手法を用
いて細胞中にトランスフェクトする。
【０１１３】 本発明の別の観点は，本発明のキナーゼポリペプチドに結合する化合物を同定
する方法に関する。該方法は，キナーゼポリペプチドを化合物と接触させ，化合
物がキナーゼポリペプチドに結合するか否かを判定することを含む。結合は，当
業者によく知られる結合アッセイ，例えば，限定されないが，ゲルシフトアッセ
イ，ウエスタンブロット，放射性標識競合アッセイ，ファージに基づく発現クロ
ーニング，クロマトグラフィーによる共分画，共沈澱，架橋，相互作用トラップ
／ツーハイブリッド分析，サウスウエスタン分析，ＥＬＩＳＡ等により判定する
ことができる。このようなアッセイは，例えば，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃ
ｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９９，Ｊｏｈｎ Ｗ
ｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（その全体を本明細書の一部としてここに引用する）
に記載されている。スクリーニングすべき化合物には，限定されないが，細胞外
，細胞内，生物学的または化学的起源の化合物が含まれる。
【０１１４】 本発明の方法はまた，標識，例えば放射性標識（例えば125Ｉ，35Ｓ，32Ｐ，3 3 Ｐ，3Ｈ），蛍光標識，化学発光標識，酵素標識および免疫学的標識に結合した
化合物を包含する。そのような試験において用いるキナーゼポリペプチドは，溶
液中で遊離であってもよく，固体支持体に結合していてもよく，細胞表面上に存
在してもよく，細胞内に存在してもよく，または細胞の一部に付随していてもよ
い。当業者は，例えば，キナーゼポリペプチドと試験化合物との間の複合体の形
成を測定することができる。あるいは，当業者は，試験化合物により引き起こさ
れる，キナーゼポリペプチドとその基質との間の複合体形成の減少を調べること
ができる。
【０１１５】 他のアッセイを用いて，酵素活性を調べることができる。これには，限定され
ないが，測光法，放射線法，ＨＰＬＣ，電気化学的方法等が含まれ，これは，例
えば，Ｅｎｚｙｍｅ Ａｓｓａｙｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃ
ｈ，ｅｄｓ．Ｒ．Ｅｉｓｅｎｔｈａｌ ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｄａｎｓｏｎ，１９９
２，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ（その全体を本明細書の
一部としてここに引用する）に記載されている。
【０１１６】 本発明の別の観点は，キナーゼポリペプチドを化合物と接触させ，化合物がキ
ナーゼポリペプチドの活性を調節するか否かを判定することを含む，キナーゼポ
リペプチドの活性を調節する（すなわち，増加または減少させる）化合物を同定
する方法に関する。本明細書に記載されるように，本発明のキナーゼポリペプチ
ドには，完全長配列の一部，例えば本明細書において定義される触媒ドメインが
含まれる。場合によっては，本発明のキナーゼポリペプチドは，全触媒ドメイン
より小さいが，なおキナーゼまたはキナーゼ様活性を示す。これらの化合物はま
た，"蛋白質キナーゼの調節剤"と称される。試験化合物の存在下における活性を
，試験化合物の非存在下における活性に対して測定する。試験化合物を含む試料
の活性が試験化合物を含まない試料の活性より高い場合，その化合物は活性を増
加させたのであろう。同様に，試験化合物を含む試料の活性が試験化合物を含ま
ない試料の活性より低い場合，その化合物は活性を阻害したのであろう。
【０１１７】 本発明は，種々の薬剤スクリーニング手法のいずれかにおいてキナーゼポリペ
プチドを用いて化合物をスクリーニングするのに特に有用である。スクリーニン
グすべき化合物には，限定されないが，細胞外，細胞内，生物学的または化学的
起源のものが含まれる。そのような試験において用いるキナーゼポリペプチドは
，任意の形状であることができ，好ましくは，溶液中で遊離しているか，固体支
持体に結合しているか，細胞表面上に存在するか，または細胞内に存在する。当
業者は，例えば，キナーゼポリペプチドと試験化合物の間の複合体の形成を測定
することができる。あるいは，当業者は，試験化合物により引き起こされる，キ
ナーゼポリペプチドとその基質との間の複合体形成の減少を調べることができる
。
【０１１８】 本発明のキナーゼポリペプチドの活性は，例えば，化学的に合成されたペプチ
ドリガンドに結合するかまたはそれにより活性化される能力を調べることにより
決定することができる。あるいは，キナーゼポリペプチドの活性は，カルシウム
等の金属イオン，ホルモン，ケモカイン，神経ペプチド，神経伝達物質，ヌクレ
オチド，脂質，臭気物質，および光子に結合する能力を調べることによりアッセ
イすることができる。すなわち，キナーゼポリペプチドの活性の調節剤は，キナ
ーゼの機能，例えばキナーゼの結合特性またはシグナル伝達等の活性または膜局
在を変化させるであろう。
【０１１９】 本発明の方法の種々の態様においては，アッセイは，酵母成長アッセイ，エク
オリンアッセイ，ルシフェラーゼアッセイ，有糸分裂促進アッセイ，ＭＡＰキナ
ーゼ活性アッセイ，ならびに当該技術分野において一般に知られている結合また
は機能に基づくキナーゼ活性の他のアッセイの形をとることができる。これらの
態様のいくつかにおいては，本発明は，レセプターおよび非レセプター蛋白質チ
ロシンキナーゼ，レセプターおよび非レセプター蛋白質ホスファターゼ，ＳＲＣ
ホモロジー２および３ドメインを含有するポリペプチド，ホスホチロシン結合蛋
白質（ＳＲＣホモロジー２（ＳＨ２）およびホスホチロシン結合（ＰＴＢおよび
ＰＨ）ドメイン含有蛋白質），プロリンリッチ結合蛋白質（ＳＨ３ドメイン含有
蛋白質），ＧＴＰａｓｅｓ，ホスホジエステラーゼ，ホスホリパーゼ，プロリル
イソメラーゼ，プロテアーゼ，Ｃａ２＋結合蛋白質，ｃＡＭＰ結合蛋白質，グア
ニルシクラーゼ，アデニリルシクラーゼ，ＮＯ生成蛋白質，ヌクレオチド交換因
子，および転写因子の任意のものを含む。本発明にしたがうキナーゼの生物学的
活性には，限定されないが，天然のまたは合成のリガンドの結合，ならびに当該
技術分野において知られるキナーゼの機能的活性のいずれかが含まれる。キナー
ゼ活性の非限定的例には，キナーゼ結合相互作用および／またはシグナル伝達に
及ぼす影響を含む種々の形の貫膜シグナリングが含まれる。
【０１２０】 本発明の調節剤は，種々の化学構造を示し，これは一般に，天然のキナーゼリ
ガンドの模倣体，およびキナーゼのペプチドおよび非ペプチドアロステリックエ
フェクターに分類することができる。本発明は適切な調節剤の起源を限定するも
のではなく，これは，天然起源，例えば植物，動物または無機抽出物，または非
天然起源，例えば小分子ライブラリ（コンビナトリアル化学方法により構築した
ライブラリを含む）およびペプチドライブラリから得ることができる。
【０１２１】 キナーゼをコードするｃＤＮＡを薬剤発見において用いることはよく知られて
いる。ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）において１日に数千種類の未
知の化合物を試験することができるアッセイが詳細に提供されている。文献は，
薬剤発見のためにＨＴＳ結合アッセイにおいて放射性標識リガンドを使用する例
を多数記載している（Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃ
ｈ Ｒｅｖｉｅｗｓ，１９９１，１１，１４７−１８４を参照；総説については
，Ｓｗｅｅｔｎａｍ， ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ
，１９９３，５６，４４１−４５５）。結合アッセイＨＴＳのためには，組換え
レセプターが好ましい。これは特異性がより高く（より高い相対純度），大量の
レセプター材料を生成する能力を提供し，広範な種類のフォーマットで用いるこ
とができるためである（Ｈｏｄｇｓｏｎ，Ｂｉｏｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１
９９２，１０，９７３−９８０を参照；その全体を本明細書の一部としてここに
引用する）。
【０１２２】 組換えレセプターの機能的発現には種々の異種システムが利用可能であり，当
業者にはよく知られている。そのようなシステムには，細菌（Ｓｔｒｏｓｂｅｒ
ｇ， ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９９２，１３，９５−９８），酵母（Ｐａｕｓｃｈ，Ｔｒ
ｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９７，１５，４８７−４９
４），何種類かの昆虫細胞（Ｖａｎｄｅｎ Ｂｒｏｅｃｋ，Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｃ
ｙｔｏｌｏｇｙ，１９９６，１６４，１８９−２６８），両生類細胞（Ｊａｙａ
ｗｉｃｋｒｅｍｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂ
ｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９７，８，６２９−６３４）およびいくつかの
哺乳動物細胞株（ＣＨＯ，ＨＥＫ２９３，ＣＯＳ等；Ｇｅｒｈａｒｄｔ， ｅｔ
ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１９９７，３３４，１−２
３を参照）が含まれる。これらの例は他の可能な細胞発現システム，例えば線虫
から得られる細胞株を使用することを排除するものではない（ＰＣＴ出願ＷＯ９
８／３７１７７）。
【０１２３】 発現されたキナーゼを，その規定されたリガンド（この場合にはこれを活性化
する対応するペプチド）とともにＨＴＳ結合アッセイにおいて用いることができ
る。同定されたペプチドは，適当な放射性同位体，例えば，限定されないが，12 5 Ｉ，3Ｈ，35Ｓまたは32Ｐで，当業者によく知られる方法により標識する。ある
いは，ペプチドは，適当な蛍光誘導体を用いてよく知られる方法により標識して
もよい（Ｂａｉｎｄｕｒ， ｅｔ ａｌ．，Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．Ｒｅｓ．，１９
９４，３３，３７３−３９８；Ｒｏｇｅｒｓ，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ
Ｔｏｄａｙ，１９９７，２，１５６−１６０）。組換え蛋白質を発現する細胞株
から作成した膜調節物において，レセプターに特異的に結合する放射活性リガン
ドは，いくつかの標準的な方法の１つ，例えば，レセプター−リガンド複合体を
濾過して結合したリガンドを未結合リガンドから分離する方法において，ＨＴＳ
アッセイにより検出することができる（Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｒ
ｅｖ．，１９９１，１１，１４７−１８４．；Ｓｗｅｅｔｎａｍ， ｅｔ ａｌ
．，Ｊ．Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，１９９３，５６，４４１−４５５
）。別の方法としては，シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）またはそのよ
うな分離を必要としないフラッシュプレート（ＦｌａｓｈＰｌａｔｅ）フォーマ
ットが挙げられる（Ｎａｋａｙａｍａ，Ｃｕｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｄｒｕｇ Ｄ
ｉｓｃ．Ｄｅｖ．，１９９８，１，８５−９１Ｂｏｓｓｅ， ｅｔ ａｌ．，Ｊ
．Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，１９９８，３，２８５−２
９２．）。蛍光リガンドの結合は，例えば，蛍光エネルギー転移（ＦＲＥＴ），
結合したリガンドの直接分光蛍光分析，または蛍光分極等の種々の方法により検
出することができる（Ｒｏｇｅｒｓ，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａ
ｙ，１９９７，２，１５６−１６０；Ｈｉｌｌ，Ｃｕｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｄｒ
ｕｇ Ｄｉｓｃ．Ｄｅｖ．，１９９８，１，９２−９７）。
【０１２４】 キナーゼおよび異種キナーゼポリペプチドの機能的発現に必要な天然の結合パ
ートナーは，宿主細胞の天然の構成物であってもよく，またはよく知られる組換
え技術により導入してもよい。キナーゼポリペプチドは無傷であってもよく，キ
メラであってもよい。キナーゼ活性化により他の天然蛋白質が刺激または阻害さ
れ，これらの事象を測定可能な応答に連結させることができる。
【０１２５】 そのような生物学的応答の例には，限定されないが，以下のものが含まれる：
特別に遺伝子工学処理した酵母細胞において制限栄養の非存在下で生存する能力
（Ｐａｕｓｃｈ，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９７
，１５，４８７−４９４）；蛍光色素により測定される細胞内Ｃａ２＋濃度の変
化（Ｍｕｒｐｈｙ， ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｄｒｕｇ Ｄｉ
ｓｃ．Ｄｅｖ．，１９９８，１，１９２−１９９）。蛍光の変化を用いてリガン
ド誘導性の膜電位または細胞内ｐＨの変化をモニターすることもできる。このよ
うな目的のためにＨＴＳのための自動化システムが記載されている（Ｓｃｈｒｏ
ｅｄｅｒ， ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｃｒｅｅｎｉｎ
ｇ，１９９６，１，７５−８０）。共通のセカンドを測定するためのアッセイも
また利用可能であるが，これらは一般的にはＨＴＳには好ましくない。
【０１２６】 本発明は，キナーゼポリペプチドに結合するリガンドの阻害剤をスクリーニン
グし同定する多数のアッセイを企図する。１つの例においては，キナーゼポリペ
プチドを固定化し，候補調節剤，例えば阻害剤化合物の存在下および非存在下に
おいて，結合パートナーとの相互作用を評価することができる。別の例において
は，キナーゼポリペプチドとその結合パートナーとの間の相互作用は，溶液アッ
セイにおいて，候補阻害剤化合物の存在下および非存在下の両方で評価すること
ができる。いずれのアッセイにおいても，阻害剤はキナーゼポリペプチドとその
天然の結合パートナーとの間の結合を減少させる化合物として同定される。別の
企図されるアッセイには，ＰＣＴ国際公開ＷＯ９５／２０６５２（１９９５年８
月３日公開；図面および表を含め本明細書の一部としてここに引用する）に記載
されるような，トランスフォームしたまたはトランスフェクトした宿主細胞にお
けるポジティブシグナルの検出により蛋白質／蛋白質相互作用の阻害剤を同定す
る，ジハイブリッドアッセイの変種が含まれる。
【０１２７】 本発明により企図される調節剤の候補には，潜在的活性化剤または潜在的阻害
剤のいずれかのライブラリから選択される化合物が含まれる。小分子調節剤の同
定に用いられる多くの多様なライブラリが存在し，これには，例えば，（１）化
学ライブラリ，（２）天然産物ライブラリ，および（３）ランダムペプチド，オ
リゴヌクレオチドまたは有機分子から構成されるコンビナトリアルライブラリが
含まれる。化学ライブラリはランダムな化学構造から構成され，その一部は既知
の化合物の類似体または他の薬剤発見スクリーニングにおいて"ヒット"または"
リード"として同定された化合物の類似体であるが，別のものは天然産物から誘
導され，さらに別のものは，無指向性有機合成化学から生ずる。天然産物ライブ
ラリは，（１）土壌，植物または海洋生物からの培養液の発酵および抽出，また
は（２）植物または海洋生物の抽出，によりスクリーニング用の混合物を作成す
るために用いられる，微生物，動物，植物，または海洋生物の収集物である。天
然産物ライブラリには，ポリケタイド，非リボソームペプチド，およびそれらの
変種（天然に生じない）が含まれる。総説については，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８２
：６３−６８（１９９８）を参照。コンビナトリアルライブラリは，混合物とし
ての多数のペプチド，オリゴヌクレオチド，または有機化合物から構成される。
これらのライブラリは，伝統的自動化合成法，ＰＣＲ，クローニング，または私
有の合成法により比較的容易に製造することができる。特に興味深いものは非ペ
プチドコンビナトリアルライブラリである。さらに興味深い他のライブラリには
，ペプチド，蛋白質，ペプチド模倣物，多重平行合成収集物，リコンビナトリア
ル，およびポリペプチドライブラリが含まれる。コンビナトリアルケミストリお
よびこれから作成されるライブラリの総説については，Ｍｙｅｒｓ，Ｃｕｒｒ．
Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：７０１−７０７（１９９７）を参照。本
明細書に記載される，種々のライブラリを用いる調節剤の同定により，候補物質
である"ヒット"（または"リード"）を改変して，"ヒット"が活性を調節する能力
を最適化することができる。
【０１２８】 本発明により企図される他の候補阻害剤を設計することができ，これには溶解
性型の結合パートナー，ならびにキメラ，または融合蛋白質等の結合パートナー
が含まれる。本明細書において用いる場合，"結合パートナー"は，上述したよう
な天然の結合パートナーならびにキメラポリペプチド，天然のリガンド以外のペ
プチド調節剤，抗体，抗体フラグメント，および同定されたキナーゼ遺伝子の発
現産物に免疫特異的な抗体ドメインを含む改変型化合物を広く包含する。
【０１２９】 キナーゼポリペプチドの特異的ペプチドリガンドを同定するために他のアッセ
イを用いることができ，これには，試験リガンドの標的蛋白質への直接結合の測
定により標的蛋白質のリガンドを同定するアッセイ，ならびにイオンスプレー質
量分析計／ＨＰＬＣ方法を用いてアフィニティー限外濾過により標的蛋白質のリ
ガンドを同定するアッセイ，または他の物理学的および分析的方法が含まれる。
あるいは，そのような結合相互作用は，Ｆｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕ
ｒｅ，３４０：２４５−２４６（１９８９），およびＦｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ
．，ＴｒｅｎｄｓｉｎＧｅｎｅｔｉｃｓ，１０：２８６−２９２（１９９４）（
いずれも本明細書の一部としてここに引用する）に記載される酵母ツーハイブリ
ッド系を用いて間接的に評価することができる。ツーハイブリッド系は２つの蛋
白質またはポリペプチドの間の相互作用を検出するための遺伝子アッセイである
。これを用いて，目的とする既知の蛋白質または線引きされたドメインまたは相
互作用に重要な残基に結合する蛋白質を同定することができる。この方法論の変
形が，ＤＮＡ結合蛋白質をコードする遺伝子のクローニング，蛋白質に結合する
ペプチドの同定，および薬剤のスクリーニング用に開発されている。ツーハイブ
リッド系は，１対の相互作用する蛋白質が転写活性化ドメインをレポーター遺伝
子の上流活性化配列（ＵＡＳ）に結合するＤＮＡ結合ドメインの近くに配置させ
る能力を利用しており，一般に酵母において行われる。アッセイにおいては，（
１）第１の蛋白質に融合されたＤＮＡ結合ドメイン，および（２）第２の蛋白質
に融合された活性化ドメイン，をコードする２つのハイブリッド遺伝子を構築す
ることが必要である。ＤＮＡ結合ドメインは，第１のハイブリッド蛋白質をレポ
ーター遺伝子のＵＡＳにターゲティングする。しかし，ほとんどの蛋白質は活性
化ドメインを有していないため，このＤＮＡ結合ハイブリッド蛋白質はレポータ
ー遺伝子の転写を活性化しない。活性化ドメインを含む第２のハイブリッド蛋白
質は，ＵＡＳに結合しないため，それ自身ではレポーター遺伝子の発現を活性化
しない。しかし，両方のハイブリッド蛋白質が存在する場合には，第１の蛋白質
と第２の蛋白質との非共有結合的相互作用が活性化ドメインをＵＡＳにつなぎ，
レポーター遺伝子の転写を活性化させる。例えば，第１の蛋白質が，他の蛋白質
または核酸と相互作用することが知られているキナーゼ遺伝子産物，またはその
フラグメントである場合，このアッセイを用いて結合相互作用に干渉する薬剤を
検出することができる。異なる試験薬剤を系に添加してレポーター遺伝子の発現
をモニターする。阻害剤が存在すると，レポーターシグナルが発生しない。
【０１３０】 キナーゼポリペプチド遺伝子産物の機能が未知であり，遺伝子産物に結合する
リガンドが知られていない場合においても，酵母ツーハイブリッドアッセイを用
いて遺伝子産物に結合する蛋白質を同定することができる。キナーゼポリペプチ
ドまたはそのフラグメントに結合する蛋白質を同定するアッセイにおいては，キ
ナーゼポリペプチド（またはフラグメント）およびＵＡＳ結合ドメイン（すなわ
ち，第１の蛋白質）の両方をコードする融合ポリヌクレオチドを用いることがで
きる。さらに，それぞれが活性化ドメインに融合された異なる第２の蛋白質をコ
ードする多数のハイブリッド遺伝子を製造し，アッセイにおいてスクリーニング
することができる。典型的には，第２の蛋白質は総ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ
融合ライブラリの１またはそれ以上のメンバーによりコードされ，ここで，それ
ぞれの第２の蛋白質のコーディング領域は活性化ドメインに融合されている。こ
の系は広範な種類の蛋白質に適用することができ，第２の結合蛋白質の同一性ま
たは機能を知ることすら必要ではない。この系は非常に感度が高く，他の方法で
は明らかにされない相互作用を検出することができる。過渡的相互作用であって
も，転写を誘発して安定なｍＲＮＡを生成し，これは繰り返し翻訳されてレポー
ター蛋白質を生成することができる。
【０１３１】 他のアッセイを用いて，標的蛋白質に結合する薬剤を検索してもよい。試験リ
ガンドの標的蛋白質への直接結合を同定する１つのそのようなスクリーニング方
法が，米国特許５，５８５，２７７（本明細書の一部としてここに引用する）に
議論されている。この方法は，蛋白質は一般に折り畳まれた状態と折り畳まれて
いない状態の混合物として存在し，２つの状態の間で継続的に交替しているとい
う原理に基づく。試験リガンドが折り畳まれた形の標的蛋白質に結合する場合（
すなわち，試験リガンドが標的蛋白質のリガンドである場合），リガンドに結合
した標的蛋白質分子は折り畳まれた状態のままである。すなわち，折り畳まれた
標的蛋白質は，標的蛋白質に結合する試験リガンドの存在下で，リガンドの非存
在下におけるよりも多く存在する。リガンドの標的蛋白質への結合は，折り畳ま
れた状態と折り畳まれていない状態の標的蛋白質とを区別する任意の方法により
検出することができる。このアッセイを行うためには，標的蛋白質の機能がわか
っている必要はない。この方法により事実上すべての薬剤，例えば，限定されな
いが，金属，ポリペプチド，蛋白質，脂質，多糖類，ポリヌクレオチドおよび小
有機分子を試験リガンドとして評価することができる。
【０１３２】 標的蛋白質のリガンドを同定する別の方法は，Ｗｉｅｂｏｌｄｔ ｅｔ ａｌ
．，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，６９：１６８３−１６９１（１９９７）（本明細書
の一部としてここに引用する）に記載されている。この手法は，１回に溶液相中
の２０−３０種類の薬剤のコンビナトリアルライブラリを標的蛋白質に対する結
合についてスクリーニングする。簡単な膜洗浄により標的蛋白質に結合する薬剤
を他のライブラリ成分から分離する。次にフィルター上に保持された特定の選択
された分子を標的蛋白質から遊離させ，ＨＰＬＣおよび気体補助エレクトロスプ
レー（イオンスプレー）イオン化質量分析により分析する。この方法は，標的蛋
白質に対して最も高い親和性を有するライブラリ成分を選択し，特に小分子ライ
ブラリについて有用である。
【０１３３】 本発明の好ましい態様においては，キナーゼ活性を調節する化合物をスクリー
ニングする方法は，試験化合物をキナーゼポリペプチドと接触させ，化合物とキ
ナーゼポリペプチドとの間の複合体の存在についてアッセイすることを含む。そ
のようなアッセイにおいては，典型的にはリガンドを標識する。適当にインキュ
ベートした後，遊離のリガンドを結合した形のリガンドから分離する。遊離のま
たは複合体を形成していない標識の量は，特定の化合物がキナーゼポリペプチド
に結合する能力の尺度である。
【０１３４】 本発明の別の態様においては，キナーゼポリペプチドに対して適切な結合親和
性を有する化合物のハイスループットスクリーニングを用いる。簡単には，多数
の様々な小ペプチド試験化合物を固体支持体上で合成する。ペプチド試験化合物
をキナーゼポリペプチドと接触させ，洗浄する。次に，結合したキナーゼポリペ
プチドを当該技術分野においてよく知られる方法により検出する。本発明の精製
ポリペプチドはまた，上述した薬剤スクリーニング手法において用いるために，
直接プレート上にコーティングすることができる。さらに，非中和抗体を用いて
蛋白質を捕獲し，これを固体支持体上に固定化することができる。
【０１３５】 本発明の別の態様は，本発明のポリペプチドに結合しうる中和抗体がポリペプ
チドに対する結合について試験化合物と特異的に競合する，競合スクリーニング
アッセイを用いることを含む。このようにして，抗体を用いて，キナーゼポリペ
プチドと１またはそれ以上の抗原性決定基を共有するペプチドの存在を検出する
ことができる。放射性標識した競合結合実験は，Ａ．Ｈ．Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．
Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐ
ｙ，１９９７，ｖｏｌ．４１，ｎｏ．１０．ｐｐ．２１２７−２１３１に記載さ
れており，この開示はその全体を本明細書の一部としてここに引用する。
【０１３６】 別の観点においては，本発明は，治療を必要とする患者に配列番号５８，配列
番号５９，配列番号６０，配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３，配列番
号６４，配列番号６５，配列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番号
６９，配列番号７０，配列番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配列番号７
４，配列番号７５，配列番号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列番号７９
，配列番号８０，配列番号８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番号８４，
配列番号８５，配列番号８６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，配
列番号９０，配列番号９１，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配列
番号９５，配列番号９６，配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列番
号１００，配列番号１０１，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番号１０４
，配列番号１０５，配列番号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８，配列番
号１０９，配列番号１１０，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番号１１３
，および配列番号１１４に記載されるアミノ酸配列からなる群より選択されるキ
ナーゼポリペプチド，ならびに，その完全長ポリペプチド，または機能的活性（
本明細書において記載される）を保持するこれらの配列のいずれかの一部の活性
を調節する物質を投与することにより疾病を治療する方法を提供する。好ましく
は疾病は，癌，免疫関連疾病および疾患，心臓血管疾病，脳またはニューロン関
連疾病，および代謝性疾患からなる群より選択される。より詳細には，これらの
疾病には，組織，血液，または造血細胞起源の癌，特に，乳，結腸，肺，前立腺
，子宮頚部，脳，卵巣，膀胱，または腎臓が関与する癌；中枢神経または末梢神
経系疾病および状態，例えば，片頭痛，痛み，性的機能不全，気分障害，注意障
害，認識障害，低血圧症，および高血圧症；精神病性および神経学的疾患，例え
ば，不安，精神分裂病，躁うつ病，せん妄，痴呆，重症の精神遅滞および運動異
常症，例えば，ハンチントン病またはツレット症候群；神経変性性疾病，例えば
，アルツハイマー病，パーキンソン病，多発性硬化症，および筋萎縮性側方硬化
症；ＨＩＶ−１，ＨＩＶ−２または他のウイルスまたはプリオン体または真菌ま
たは細菌生物により引き起こされるウイルスまたは非ウイルス感染；代謝性疾患
，例えば糖尿病および肥満，およびこれらに関連する症候群，特に，心臓血管疾
患，例えば，再灌流再狭窄，冠状動脈血栓症，凝固疾患，制御されない細胞成長
疾患，アテローム性動脈硬化症；眼性疾病，例えば緑内障，網膜症，および黄斑
変性；炎症性疾患，例えば，慢性関節リウマチ，慢性炎症性腸疾病，慢性炎症性
骨盤疾病，多発性硬化症，ぜん息，変形性関節症，乾癬，アテローム性動脈硬化
症，鼻炎，自己免疫，および臓器移植拒絶が含まれる。
【０１３７】 好ましい態様においては，本発明は，治療を必要とする患者に，配列番号５８
，配列番号５９，配列番号６０，配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３，
配列番号６４，配列番号６５，配列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配
列番号６９，配列番号７０，配列番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配列
番号７４，配列番号７５，配列番号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列番
号７９，配列番号８０，配列番号８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番号
８４，配列番号８５，配列番号８６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号８
９，配列番号９０，配列番号９１，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９４
，配列番号９５，配列番号９６，配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９，
配列番号１００，配列番号１０１，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番号
１０４，配列番号１０５，配列番号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８，
配列番号１０９，配列番号１１０，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番号
１１３，および配列番号１１４に記載されるアミノ酸配列からなる群より選択さ
れるアミノ酸配列を有するキナーゼポリペプチド，ならびにその完全長ポリペプ
チド，または機能的活性（本明細書において記載される）を保持するこれらの配
列のいずれかの一部の活性を調節する物質を投与することにより，疾病または疾
患を治療または予防する方法を提供する。好ましくは，疾病は，癌，免疫関連疾
病および疾患，心臓血管疾病，脳またはニューロン関連疾病，および代謝性疾患
からなる群より選択される。より詳細には，これらの疾病には，組織，血液，ま
たは造血細胞起源の癌，特に，乳，結腸，肺，前立腺，子宮頚部，脳，卵巣，膀
胱，または腎臓が関与する癌；中枢神経または末梢神経系疾病および状態，例え
ば，片頭痛，痛み，性的機能不全，気分障害，注意障害，認識障害，低血圧症，
および高血圧症；精神病性および神経学的疾患，例えば，不安，精神分裂病；躁
うつ病，せん妄，痴呆，重症の精神遅滞および運動異常症，例えば，ハンチント
ン病，またはツレット症候群；神経変性性疾病，例えばアルツハイマー病，パー
キンソン病，多発性硬化症，および筋萎縮性側方硬化症；ＨＩＶ−１，ＨＩＶ−
２または他のウイルスまたはプリオン体または真菌または細菌生物により引き起
こされるウイルスまたは非ウイルス感染；代謝性疾患，例えば，糖尿病および肥
満，およびこれらに関連する症候群，特に，心臓血管疾患，例えば，再灌流再狭
窄，冠状動脈血栓症，凝固疾患，制御されない細胞成長疾患，アテローム性動脈
硬化症；眼性疾病，例えば，緑内障，網膜症，および黄斑変性；炎症性疾患，例
えば，慢性関節リウマチ，慢性炎症性腸疾病，慢性炎症性骨盤疾病，多発性硬化
症，ぜん息，変形性関節症，乾癬，アテローム性動脈硬化症，鼻炎，自己免疫，
および臓器移植拒絶が含まれる。
【０１３８】 本発明はまた，治療を必要とする患者に，配列番号５８，配列番号５９，配列
番号６０，配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番
号６５，配列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号
７０，配列番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７
５，配列番号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０
，配列番号８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，
配列番号８６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配
列番号９１，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列
番号９６，配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列
番号１０１，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０
５，配列番号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列
番号１１０，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列番
号１１４に記載されるアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有
するキナーゼポリペプチド，ならびにその全長ポリペプチド，または機能的活性
（本明細書に記載される）を保持するこれらの配列のいずれかの一部の活性を調
節する物質を投与することにより，疾病または疾患を治療または予防する方法を
特徴とする。好ましくは，疾病は，癌，免疫関連疾病および疾患，心臓血管疾病
，脳またはニューロン関連疾病，および代謝性疾患からなる群より選択される。
より詳細には，これらの疾病には，組織，血液，または造血細胞起源の癌，特に
乳，結腸，肺，前立腺，子宮頚部，脳，卵巣，膀胱，または腎臓が関与する癌；
中枢神経または末梢神経系疾病および状態，例えば，片頭痛，痛み，性的機能不
全，気分障害，注意障害，認識障害，低血圧症，および高血圧症；精神病性およ
び神経学的疾患，例えば不安，精神分裂病，躁うつ病，せん妄，痴呆，重症の精
神遅滞および運動異常症，例えばハンチントン病またはツレット症候群；神経変
性性疾病，例えばアルツハイマー病，パーキンソン病，多発性硬化症，および筋
萎縮性側方硬化症；ＨＩＶ−１，ＨＩＶ−２または他のウイルスまたはプリオン
体または真菌または細菌生物により引き起こされるウイルスまたは非ウイルス感
染；代謝性疾患，例えば糖尿病および肥満およびこれらに関連する症候群，特に
，心臓血管疾患，例えば再灌流再狭窄，冠状動脈血栓症，凝固疾患，制御されな
い細胞成長疾患，アテローム性動脈硬化症；眼性疾病，例えば緑内障，網膜症，
および黄斑変性；炎症性疾患，例えば慢性関節リウマチ，慢性炎症性腸疾病，慢
性炎症性骨盤疾病，多発性硬化症，ぜん息，変形性関節症，乾癬，アテローム性
動脈硬化症，鼻炎，自己免疫，および臓器移植拒絶が含まれる。
【０１３９】 本発明はまた，配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０，配列番号６１，
配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，配列番号６６，配
列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配列番号７１，配列
番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列番号７６，配列番
号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番号８１，配列番号
８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号８６，配列番号８
７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１，配列番号９２
，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，配列番号９７，
配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０１，配列番号１０
２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番号１０６，配列
番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１０，配列番号１１
１，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４に記載される配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するキナーゼポリペプチド，ならび
にその完全長ポリペプチド，または機能的活性（本明細書に記載される）を保持
するこれらの配列の一部の活性を調節する物質を投与することにより，疾病また
は疾患を治療または予防する方法を特徴とする。好ましくは，疾病は，免疫関連
疾病および疾患，心臓血管疾病，および癌からなる群より選択される。より好ま
しくは，これらの疾病には，組織，血液，または造血細胞起源の癌，特に乳，結
腸，肺，前立腺，子宮頚部，脳，卵巣，膀胱，または腎臓が関与する癌；中枢神
経または末梢神経系疾病および状態，例えば，片頭痛，痛み，性的機能不全，気
分障害，注意障害，認識障害，低血圧症，および高血圧症；精神病性および神経
学的疾患，例えば，不安，精神分裂病，躁うつ病，せん妄，痴呆，重症の精神遅
滞および運動異常症，例えば，ハンチントン病またはツレット症候群；神経変性
性疾病，例えばアルツハイマー病，パーキンソン病，多発性硬化症，および筋萎
縮性側方硬化症；ＨＩＶ−１，ＨＩＶ−２又は他のウイルスまたはプリオン体ま
たは真菌または細菌生物により引き起こされるウイルスまたは非ウイルス感染；
代謝性疾患，例えば糖尿病および肥満およびこれらに関連する症候群，特に，心
臓血管疾患，例えば再灌流再狭窄，冠状動脈血栓症，凝固疾患，制御されない細
胞成長疾患，アテローム性動脈硬化症；眼性疾病，例えば緑内障，網膜症，およ
び黄斑変性；炎症性疾患，例えば慢性関節リウマチ，慢性炎症性腸疾病，慢性炎
症性骨盤疾病，多発性硬化症，ぜん息，変形性関節症，乾癬，アテローム性動脈
硬化症，鼻炎，自己免疫，および臓器移植拒絶が含まれる。最も好ましくは，免
疫関連疾病および疾患は，慢性関節リウマチ，慢性炎症性腸疾病，慢性炎症性骨
盤疾病，多発性硬化症，ぜん息，変形性関節症，乾癬，アテローム性動脈硬化症
，鼻炎，自己免疫，および臓器移植からなる群より選択される。
【０１４０】 キナーゼ関連疾患または疾病の治療に有用な物質は，好ましくは，問題とする
疾病または疾患の治療に対応する活性についての１またはそれ以上のインビトロ
アッセイにおいて陽性の結果を示す（そのようなアッセイの例は，以下のＶＩ節
における参照文献および本明細書の実施例７において提供される）。望ましい活
性についてスクリーニングすることができる物質の例は，以下のＶＩ節に提供さ
れ参照される。キナーゼの活性を調節する物質は，好ましくは，限定されないが
，アンチセンスオリゴヌクレオチドおよび以下のＶＩ節および実施例７において
参照される方法およびスクリーニングにより決定されるような蛋白質キナーゼの
阻害剤を含む。
【０１４１】 "予防する"との用語は，生物が異常な状態に罹患するかこれを発達させる可能
性を減少させることを表す。
【０１４２】 "治療する"との用語は，生物において治療効果を有し，異常な状態を少なくと
も部分的に緩和するかまたは排除することを表す。
【０１４３】 "治療効果"との用語は，異常な状態を引き起こすかまたはこれに寄与する阻害
または活性化率を表す。治療効果は，異常な状態の１またはそれ以上の症状をあ
る程度緩和する。異常な状態の治療に関して，治療効果は，以下の１またはそれ
以上を表すことができる：（ａ）細胞の増殖，成長，および／または分化の増加
；（ｂ）細胞死の阻害（すなわち，遅延または停止）；（ｃ）変性の阻害；（ｄ
）異常な状態に伴う１またはそれ以上の症状のある程度の緩和；および（ｅ）影
響を受けた細胞の集団の機能の増強。異常な状態に対して有効性を示す化合物は
，本明細書に記載されるようにして同定することができる。
【０１４４】 "異常な状態"との用語は，生物の細胞または組織における，その生物における
正常な機能からはずれた機能を表す。異常な状態は，細胞増殖，細胞分化，また
は細胞生存に関連しうる。
【０１４５】 異常な細胞増殖状態には，癌，例えば繊維性およびメサンギウム疾患，異常な
新脈管形成および脈管形成，創傷治癒，乾癬，真性糖尿病，および炎症が含まれ
る。
【０１４６】 異常な分化状態には，限定されないが，神経変性性疾患，遅い創傷治癒速度，
および遅い組織移植治癒速度が含まれる。
【０１４７】 異常な細胞生存状態は，プログラムされた細胞死（アポトーシス）経路が活性
化されているかまたは排除されている状態に関連する。多くの蛋白質キナーゼが
アポトーシス経路に関連している。蛋白質キナーゼのいずれかの機能の異常は，
細胞の不死または未成熟細胞死につながりうる。
【０１４８】 シグナル伝達プロセスにおけるキナーゼポリペプチドの機能に関連して，"異
常な"との用語は，生物において過剰発現または過小発現されているか，その触
媒活性が野生型蛋白質キナーゼ活性より低いかまたは高いように変異しているか
，天然の結合パートナーともはや相互作用できないように変異しているか，別の
蛋白質キナーゼまたは蛋白質ホスファターゼによりもはや修飾されないか，また
は天然の結合パートナーともはや相互作用しない，キナーゼを表す。
【０１４９】 "投与する"との用語は，化合物を生物の細胞または組織内に取り込ませる方法
に関連する。異常な状態は，生物の細胞または組織が生物中または生物外に存在
する場合，予防または治療することができる。生物の外に存在する細胞は，細胞
培養皿中で維持または成長させることができる。生物中に含まれる細胞について
は，当該技術分野には化合物を投与する多くの手法が存在し，例えば，限定され
ないが，経口，非経口，経皮，注入およびエアロゾル外用が含まれる。生物外の
細胞については，当該技術分野には化合物を投与する多数の手法が存在し，例え
ば，限定されないが，細胞マイクロインジェクション手法，トランスフォーメー
ション手法，および担体手法が含まれる。
【０１５０】 異常な状態はまた，シグナル伝達経路に異常を有する一群の細胞を有する生物
に化合物を投与することにより，予防または治療することができる。次に，化合
物の投与が生物機能に及ぼす影響をモニターすることができる。生物は，好まし
くはマウス，ラット，ウサギ，モルモット，またはヤギであり，より好ましくは
有尾サルまたは無尾サルであり，最も好ましくはヒトである。
【０１５１】 別の観点においては，本発明は，疾病または疾患の診断道具として，試料中で
キナーゼポリペプチドを検出する方法を特徴とする。該方法は，（ａ）試料を，
ハイブリダイゼーションアッセイ条件下で，配列番号５８，配列番号５９，配列
番号６０，配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番
号６５，配列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号
７０，配列番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７
５，配列番号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０
，配列番号８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，
配列番号８６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配
列番号９１，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列
番号９６，配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列
番号１０１，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０
５，配列番号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列
番号１１０，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列番
号１１４に記載されるアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有
するキナーゼポリペプチドの核酸標的領域にハイブリダイズする核酸プローブと
接触させ，ここで，前記プローブは，ポリペプチド，そのフラグメントをコード
する核酸配列，および配列およびフラグメントの相補体を含み；そして（ｂ）プ
ローブ：標的領域ハイブリッドの存在または量を疾病の指標として検出する， の各工程を含む。
【０１５２】 本発明の好ましい態様においては，疾病または疾患は，慢性関節リウマチ，動
脈硬化症，自己免疫疾患，臓器移植，心筋梗塞，心筋症，発作，腎不全，酸化的
ストレス関連神経変性性疾患，および癌からなる群より選択される。
【０１５３】 キナーゼ"標的領域"とは，配列番号１，配列番号２，配列番号３，配列番号４
，配列番号５，配列番号６，配列番号７，配列番号８，配列番号９，配列番号１
０，配列番号１１，配列番号１２，配列番号１３，配列番号１４，配列番号１５
，配列番号１６，配列番号１７，配列番号１８，配列番号１９，配列番号２０，
配列番号２１，配列番号２２，配列番号２３，配列番号２４，配列番号２５，配
列番号２６，配列番号２７，配列番号２８，配列番号２９，配列番号３０，配列
番号３１，配列番号３２，配列番号３３，配列番号３４，配列番号３５，配列番
号３６，配列番号３７，配列番号３８，配列番号３９，配列番号４０，配列番号
４１，配列番号４２，配列番号４３，配列番号４４，配列番号４５，配列番号４
６，配列番号４７，配列番号４８，配列番号４９，配列番号５０，配列番号５１
，配列番号５２，配列番号５３，配列番号５４，配列番号５５，配列番号５６，
および配列番号５７に記載される配列からなる群より選択されるヌクレオチド塩
基配列，または核酸プローブが特異的にハイブリダイズするであろう対応する完
全長配列，その機能的誘導体，またはそのフラグメントである。特異的なハイブ
リダイゼーションとは，他の核酸の存在下において，プローブが本発明のキナー
ゼの標的領域にのみ検出可能なようにハイブリダイズすることを示す。推定標的
領域は，当該技術分野においてよく知られる，データベース中の最も近い関連配
列のアラインメントおよび比較からなる方法により同定することができる。
【０１５４】 好ましい態様においては，核酸プローブは，配列番号５８，配列番号５９，配
列番号６０，配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列
番号６５，配列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番
号７０，配列番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号
７５，配列番号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８
０，配列番号８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５
，配列番号８６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，
配列番号９１，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配
列番号９６，配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配
列番号１０１，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１
０５，配列番号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配
列番号１１０，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列
番号１１４に記載されるアミノ酸配列，または対応する完全長アミノ酸配列，本
明細書に記載されるような機能的活性を保持するこれらの配列の任意のものの一
部またはそれらの機能的誘導体からなる群より選択される配列の，少なくとも６
，１２，７５，９０，１０５，１２０，１５０，２００，２５０，３００または
３５０個の連続するアミノ酸をコードするキナーゼ標的領域にハイブリダイズす
る。ハイブリダイゼーション条件は，他の核酸分子の存在下でキナーゼ遺伝子と
のみハイブリダイゼーションが生ずるような条件であるべきである。ストリンジ
ェントなハイブリダイゼーション条件下では，高度に相補的な核酸配列のみがハ
イブリダイズする。好ましくは，そのような条件は，２０個の連続するヌクレオ
チド中に１または２個のミスマッチを有する核酸のハイブリダイゼーションを防
止する。そのような条件は上で定義される。
【０１５５】 試料中のキナーゼ遺伝子の検出により診断することができる疾病には，キナー
ゼ核酸（ＤＮＡおよび／またはＲＮＡ）が正常細胞と比較して増幅されている疾
病が含まれる。"増幅"とは，正常細胞と比較して，細胞中でキナーゼＤＮＡまた
はＲＮＡの数が増加していることを意味する。正常細胞においては，キナーゼは
典型的には１コピーの遺伝子として見いだされる。選択された疾病においては，
キナーゼ遺伝子の染色体位置が増幅されて，遺伝子の多数のコピーまたは増幅が
生ずる。遺伝子増幅は，そのようなキナーゼＲＮＡを増幅させることができ，ま
たはキナーゼＲＮＡはキナーゼＤＮＡの増幅なしに増幅することができる。
【０１５６】 ＲＮＡに関する場合，"増幅"は，細胞においてキナーゼＲＮＡが検出可能なよ
うに存在することでありうる。ある正常細胞においては，ＲＮＡの基底発現がな
いためである。他の正常細胞においては，キナーゼの発現の基底レベルが存在し
，したがってこれらの場合には増幅は基底レベルと比較して少なくとも１−２倍
，好ましくはそれより多い，検出可能な存在の増加を示すキナーゼＲＮＡの増加
である。
【０１５７】 試料中のキナーゼ核酸の検出により診断することができる疾病には，好ましく
は癌が含まれる。本発明の核酸探索方法に適した試験試料には，例えば，細胞ま
たは細胞の核酸抽出物，または体液が含まれる。上述の方法において用いられる
試料は，アッセイフォーマット，検出方法，およびアッセイする組織，細胞また
は抽出物の性質により様々でありうる。細胞の核酸抽出物を調製する方法は当該
技術分野においてよく知られており，用いる方法に適合した試料を得るために容
易に適合させることができる。
【０１５８】 本発明はまた，疾病または疾患の診断道具として，試料中のキナーゼポリペプ
チドを検出する方法を特徴とする。該方法は，（ａ）試料中のキナーゼポリペプ
チドをコードする核酸標的領域を，キナーゼポリペプチド，またはその１または
それ以上フラグメントをコードする対照核酸標的領域と比較し，ここで，キナー
ゼポリペプチドは，配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０，配列番号６１
，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，配列番号６６，
配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配列番号７１，配
列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列番号７６，配列
番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番号８１，配列番
号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号８６，配列番号
８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１，配列番号９
２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，配列番号９７
，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０１，配列番号１
０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番号１０６，配
列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１０，配列番号１
１１，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４に記載される配
列，またはその１またはそれ以上フラグメントからなる群より選択されるアミノ
酸配列を有しており；そして（ｂ）標的領域と対照標的領域との間の配列または
量の相違を疾病または疾患の指標として検出することを含む。好ましくは，疾病
は，癌，免疫関連疾病および疾患，心臓血管疾病，脳またはニューロン関連疾病
，および代謝性疾患からなる群より選択される。より詳細には，これらの疾病に
は，組織，血液，または造血細胞起源の癌，特に乳，結腸，肺，前立腺，子宮頚
部，脳，卵巣，膀胱，または腎臓が関与する癌；中枢神経または末梢神経系疾病
および状態，例えば，片頭痛，痛み，性的機能不全，気分障害，注意障害，認識
障害，低血圧症，および高血圧症；精神病性および神経学的疾患，例えば，不安
，精神分裂病，躁うつ病，せん妄，痴呆，重症の精神遅滞および運動異常症，例
えば，ハンチントン病またはツレット症候群；神経変性性疾病，例えば，アルツ
ハイマー病，パーキンソン病，多発性硬化症，および筋萎縮性側方硬化症；ＨＩ
Ｖ−１，ＨＩＶ−２または他のウイルスまたはプリオン体または真菌または細菌
生物により引き起こされるウイルスまたは非ウイルス感染；代謝性疾患，例えば
糖尿病および肥満，およびこれらに関連する症候群，特に，心臓血管疾患，例え
ば，再灌流再狭窄，冠状動脈血栓症，凝固疾患，制御されない細胞成長疾患，ア
テローム性動脈硬化症；眼性疾病，例えば，緑内障，網膜症，および黄斑変性；
炎症性疾患，例えば，慢性関節リウマチ，慢性炎症性腸疾病，慢性炎症性骨盤疾
病，多発性硬化症，ぜん息，変形性関節症，乾癬，アテローム性動脈硬化症，鼻
炎，自己免疫，および臓器移植拒絶が含まれる。
【０１５９】 本明細書において用いる場合，"比較する"との用語は，試料から単離された核
酸標的領域と対照核酸標的領域との間の不一致を同定することを表す。不一致は
，ヌクレオチド配列における，例えば挿入，欠失，または点突然変異であっても
よく，または所定のヌクレオチド配列の量におけるものであってもよい。配列に
おけるこれらの不一致を判定する方法は当業者にはよく知られている。"対照"核
酸標的領域とは，正常細胞，例えば，先に記載したような疾病を有しない細胞に
おいて見いだされる配列または配列の量を表す。
【０１６０】 上述した本発明の概要は限定的なものではなく，本発明の他の特徴および利点
は，以下の本発明の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかであろう。
【０１６１】図面の簡単な説明 図１Ａ−１ＥＥは，ヒト蛋白質キナーゼのヌクレオチド配列（配列番号１，配
列番号２，配列番号３，配列番号４，配列番号５，配列番号６，配列番号７，配
列番号８，配列番号９，配列番号１０，配列番号１１，配列番号１２，配列番号
１３，配列番号１４，配列番号１５，配列番号１６，配列番号１７，配列番号１
８，配列番号１９，配列番号２０，配列番号２１，配列番号２２，配列番号２３
，配列番号２４，配列番号２５，配列番号２６，配列番号２７，配列番号２８，
配列番号２９，配列番号３０，配列番号３１，配列番号３２，配列番号３３，配
列番号３４，配列番号３５，配列番号３６，配列番号３７，配列番号３８，配列
番号３９，配列番号４０，配列番号４１，配列番号４２，配列番号４３，配列番
号４４，配列番号４５，配列番号４６，配列番号４７，配列番号４８，配列番号
４９，配列番号５０，配列番号５１，配列番号５２，配列番号５３，配列番号５
４，配列番号５５，配列番号５６，および配列番号５７）を５’から３’の方向
で示す。
【０１６２】 図２Ａ−２Ｌは，配列番号１−５７によりコードされるヒト蛋白質キナーゼの
アミノ酸配列（配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０，配列番号６１，配
列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，配列番号６６，配列
番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配列番号７１，配列番
号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列番号７６，配列番号
７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番号８１，配列番号８
２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号８６，配列番号８７
，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１，配列番号９２，
配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，配列番号９７，配
列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０１，配列番号１０２
，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番号１０６，配列番
号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１０，配列番号１１１
，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４）を翻訳の方向で示
す。いくつかの配列はコーディング領域中で推定終止コドンをコードしており，
これは’ｘ’で示される。
【０１６３】発明の詳細な説明 本発明は，とりわけ，ゲノムデータベースにおいて同定された蛋白質キナーゼ
およびキナーゼ様遺伝子，ならびにそれらのフラグメントを提供する。本発明は
，部分的には，キナーゼまたはキナーゼ様活性を有するポリペプチドをコードす
ることができる核酸分子を提供する。以下の表１−８を参照すると，本発明の遺
伝子をより理解することができる。本発明はさらに，多数の異なる態様，例えば
以下に記載される態様を提供する。
【０１６４】核酸 マップされた遺伝子の染色体の位置と癌における関与が示唆されているアンプ
リコンとの関連づけは，文献検索（ＰｕｂＭｅｄｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂ
ｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｅｎｔｒｅｚ／ｑｕｅｒｙ．ｆｃｇｉ），ＯＭＩ
Ｍ検索（ＯｎｌｉｎｅＭｅｎｄｅｌｉａｎＩｎｈｅｒｉｔａｎｃｅｉｎＭａｎ，
ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｏｍｉｍ／ｓｅａ
ｒｃｈｏｍｉｍ．ｈｔｍｌ）およびＫｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．により維
持されている癌アンプリコンの包括的データベース（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ
ａｌ．，ＤＮＡｃｏｐｙｎｕｍｂｅｒａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｉｎｈｕ
ｍａｎｎｅｏｐｌａｓｍｓ．Ｒｅｖｉｅｗｏｆｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｇｅｎｏ
ｍｉｃｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎｓｔｕｄｉｅｓ．ＡｍＪ．Ｐａｔｈｏｌ１５
２：１１０７−１１２３，１９９８．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｈｅｌｓｉｎｋｉ
．ｆｉ／−ｌｅｌｗｗｗ／ＣＭＧ．ｈｔｍｌ）に基づく。マップされた遺伝子の
多くについて，Ｋｎｕｕｔｉｌａからの細胞遺伝学的領域が示されており，続い
て，増幅が報告されている事例の数および調べた事例の総数が示されている。す
なわち，ＳＧＫ１８７については，登録物"非小細胞肺癌（１２ｑ２４．１−２
４．３；２／５０）"は，染色体位置が位置１２ｑ２４．１−２４．３で非小細
胞肺癌と関連づけられており，これはＳＧＫ０８７の位置を包含し，調べた５０
例の試料中の２例で増幅が認められたことを意味する。
【０１６５】 一塩基多型については，ＮＣＢＩで維持されているｄｂＳＮＰ（一塩基多型の
データベース）（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／
ＳＮＰ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ）においてＳＮＰが記録されている場合に，受託
番号（例えば，ＳＧＫ１８７についてはｓｓ１５８１６２４）が与えられる。Ｓ
ＮＰについての受託番号を用いて，このサイトから完全ＳＮＰ含有配列を引き出
すことができる。ｄｂＳＮＰ受託番号を有しない候補ＳＮＰｓは，本明細書の配
列のｃＤＮＡおよびゲノムデータベースに対するＢｌａｓｔｎ出力を調べること
により同定した。これは，例えば，表９および１０に示され，実施例１において
記載される。
【０１６６】核酸プローブ，キナーゼを検出するための方法およびキット 本発明はさらに，核酸プローブおよびその用途を提供する。本発明の核酸プロ
ーブを用いて，通常のハイブリダイゼーション方法により適当な染色体またはｃ
ＤＮＡライブラリを探索して，本発明の他の核酸分子を得ることができる。染色
体ＤＮＡまたはｃＤＮＡライブラリは，当該技術分野において認識されている方
法にしたがって，適当な細胞から調製することができる（"Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ"，第２版．Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｓａｍｂｒｏｏｋ
，Ｆｒｉｔｓｃｈ，＆Ｍａｎｉａｔｉｓ，ｅｄｓ．，１９８９を参照）。
【０１６７】 別の方法においては，目的とするポリペプチドのアミノ酸配列のＮ末端，およ
びＣ末端部分に対応するヌクレオチド配列を有する核酸プローブを得るために化
学合成を行うことができる。合成した核酸プローブを，ポリメラーゼ連鎖反応（
ＰＣＲ）においてプライマーとして使用して，認識されているＰＣＲ手法にした
がって，本質的にＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，"Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ"，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅ
ｓｓ，Ｍｉｃｈａｅｌ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９０にしたがって，適当
な染色体またはｃＤＮＡライブラリを用いて，本発明のフラグメントを得ること
ができる。
【０１６８】 当業者は，本明細書に開示される配列に基づいて，当該技術分野において知ら
れるコンピュータアラインメントおよび配列分析の方法を用いて，そのようなプ
ローブを容易に設計することができる（"Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ
：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ"，１９８９，上掲）。本発明のハ
イブリダイゼーションプローブは，標準的な標識技術，例えば放射性標識，酵素
標識，蛍光標識，ビオチン−アビジン標識，化学発光等を用いる技術により，標
識することができる。ハイブリダイゼーション後，プローブは既知の方法を用い
て可視化することができる。
【０１６９】 本発明の核酸プローブはＲＮＡならびにＤＮＡプローブを含み，そのようなプ
ローブは，例えば当該技術分野において知られる技術を用いて生成される。核酸
プローブは，固体支持体上に固定化してもよい。そのような固体支持体の例とし
ては，限定されないが，プラスチック，例えばポリカーボネート，複合炭水化物
，例えばアガロースおよびセファロース，およびアクリル樹脂，例えばポリアク
リルアミドおよびラテックスビーズが含まれる。核酸プローブをそのような固体
支持体に結合させる技術は当該技術分野においてよく知られている。
【０１７０】 本発明の核酸探索方法に適した試験試料には，例えば，細胞または細胞の核酸
抽出物，または体液が含まれる。上述の方法において用いられる試料は，アッセ
イフォーマット，検出方法，およびアッセイすべき組織，細胞，または抽出物の
性質により様々であろう。細胞の核酸抽出物を調製する方法は当該技術分野にお
いてよく知られており，用いる方法に適合する試料を得るために容易に適合させ
ることができる。
【０１７１】 試料中で本発明の核酸の存在を検出する１つの方法は，（ａ）前記試料をハイ
ブリダイゼーションが生ずるような条件下で上述の核酸プローブと接触させ，そ
して（ｂ）前記核酸分子に結合した前記プローブの存在を検出する，ことを含む
。当業者は，当該技術分野において知られる技術にしたがって，上述のように核
酸プローブを選択するであろう。試験すべき試料には，限定されないが，ヒト組
織のＲＮＡ試料が含まれる。
【０１７２】 試料中で本発明の核酸の存在を検出するためのキットは，その中に上述の核酸
プローブが置かれている少なくとも１つの容器手段を含む。キットはさらに，以
下の１またはそれ以上を含む他の容器を含んでいてもよい：洗浄試薬および結合
した核酸プローブの存在を検出することができる試薬。検出試薬の例としては，
限定されないが，放射性標識プローブ，酵素標識プローブ（西洋ワサビペルオキ
シダーゼ，アルカリホスファターゼ），および親和性標識プローブ（ビオチン，
アビジン，またはストレプトアビジン）が挙げられる。好ましくは，キットはさ
らに使用の指針を含む。
【０１７３】 詳細には，コンパートメント化されたキットには，試薬が別々の容器に入れら
れている任意のキットが含まれる。そのような容器には，小ガラス容器，プラス
チック容器またはプラスチックまたは紙のストリップが含まれる。そのような容
器は，試料および試薬が互いに夾雑しないように，かつ各容器の薬剤または溶液
を定量的様式で１つのコンパートメントから別のコンパートメントに加えること
ができるように，１つのコンパートメントから別のコンパートメントに試薬を有
効に移すことができるものである。そのような容器には，試験試料を入れる容器
，アッセイにおいて用いるプローブまたはプライマーを含有する容器，洗浄試薬
（例えばリン酸緩衝化食塩水，Ｔｒｉｓ緩衝液等）を含有する容器，およびハイ
ブリダイズしたプローブ，結合した抗体，増幅産物等を検出するために用いられ
る試薬を含有する容器が含まれる。当業者は，本発明において記載される核酸プ
ローブを，当該技術分野においてよく知られる確立されたキットフォーマットの
１つに容易に組み込むことができることを容易に認識するであろう。
【０１７４】本発明にしたがうポリペプチドの分類 本発明の多数の蛋白質キナーゼについて，これが属する蛋白質クラスおよびフ
ァミリーの分類，非触媒的蛋白質モチーフの概要，ならびに染色体位置が提供さ
れる。この情報は，各蛋白質についての機能，制御および／または治療的有用性
を決定するのに有用である。染色体領域の増幅を種々の癌と関連づけることがで
きる。本明細書において議論されるアンプリコンについては，情報源はＫｎｕｕ
ｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ（Ｋｎｕｕｔｉｌａ Ｓ，Ｂｊｏｒｋｑｖｉｓｔ Ａ−
Ｍ，Ａｕｔｉｏ Ｋ，Ｔａｒｋｋａｎｅｎ Ｍ，Ｗｏｌｆ Ｍ，Ｍｏｎｎｉ Ｏ
，Ｓｚｙｍａｎｓｋａ Ｊ，Ｌａｒｒａｍｅｎｄｙ ＭＬ，Ｔａｐｐｅｒ Ｊ，
Ｐｅｒｅ Ｈ，Ｅｌ−Ｒｉｆａｉ Ｗ，Ｈｅｍｍｅｒ Ｓ，Ｗａｓｅｎｉｕｓ
Ｖ−Ｍ，Ｖｉｄｇｒｅｎ Ｖ＆Ｚｈｕ Ｙ：ＤＮＡ ｃｏｐｙ ｎｕｍｂｅｒ
ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｎｅｏｐｌａｓｍｓ．Ｒｅ
ｖｉｅｗ ｏｆ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｇｅｎｏｍｉｃ ｈｙｂｒｉｄｉｚ
ａｔｉｏｎ ｓｔｕｄｉｅｓ．Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １５２：１１０７−１
１２３，１９９８．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｈｅｌｓｉｎｋｉ．ｆｉ／〜ｌｇｌ
＿ｗｗｗ／ＣＭＧ．ｈｔｍｌ）であった。
【０１７５】 キナーゼ分類および蛋白質ドメインは，しばしば，経路，細胞での役割，また
は上流または下流の制御のメカニズムを反映する。また，疾病関連性遺伝子は，
しばしば関連する遺伝子のファミリーにおいて生ずる。例えば，キナーゼファミ
リーの１つのメンバーがオンコジンまたは腫瘍サプレッサーとして機能する場合
，または，免疫，神経，心臓血管，または代謝性疾患において破壊されているこ
とが見いだされている場合，他のファミリーメンバーはしばしば関連する役割を
果たすであろう。
【０１７６】 発現分析は，キナーゼを，腫瘍において転写的にアップレギュレートされてい
るもののグループ，および特定の腫瘍タイプ（例えば黒色腫または前立腺）に限
定されているもののグループに系統化する。この分析はまた，細胞サイクル依存
性様式で制御されており，したがって細胞サイクルチェックポイント，進行また
は有糸分裂に入り，進行し，出ること，所管ＤＮＡ修復の維持に関与していると
考えられる遺伝子，または細胞増殖およびゲノム安定性に関与している遺伝子を
同定する。発現データはまた，内皮起源または他の組織において発現しており，
新脈管形成における役割が示唆され，したがって，脈管形成を構成要素とする疾
病，例えば，癌，子宮内膜症，網膜症および変性，および種々の虚血性または血
管性の病状の管理の標的としての意味を有する遺伝子を同定することができる。
細胞生存における蛋白質の役割はまた，外部ストレス，例えば酸化的障害，低酸
素症，シスプラチン等の薬剤，または放射線照射にさらされている細胞における
限定された発現に基づいても示唆される。発現が腫瘍の侵入領域に限定されてい
る場合，または発現が局所または原発性腫瘍と比較して遠位の転移においてのみ
見られる場合，または遺伝子が侵入，移動または運動の培養細胞モデルの間にア
ップレギュレートされる場合，転移に付随する遺伝子が示唆される。
【０１７７】 染色体位置は，腫瘍アンプリコンまたは腫瘍サプレッサー遺伝子座についての
候補標的を同定することができる。有力な腫瘍アンプリコンの概要は文献から入
手可能であり，隣接する領域に位置するキナーゼ遺伝子の増幅されたコピーを含
むことを実験的に確認すべき腫瘍タイプを同定することができる。
【０１７８】 本明細書に記載されるように，本発明のポリペプチドは，例えば，１０個の異
なるグループに分類することができる。これらの異なるグループの生物学的およ
び化学的意味に関連する顕著な特徴は，以下により一般的に記載される。
【０１７９】 本発明のポリペプチドのより詳細な特性決定，例えば潜在的な生物学的および
化学的意味は，例えば実施例２ａおよび２ｂに提供される。
【０１８０】キナーゼ活性を示すポリペプチドの分類 以下の情報については，例えば表１および２も参照されたい。
【０１８１】ＡＧＣグループ ファミリーメンバーは，蛋白質キナーゼのＡＧＣグループに属すると記述され
る。蛋白質キナーゼのＡＧＣグループには，その主要なプロトタイプとして，蛋
白質キナーゼＣ（ＰＫＣ），ｃＡＭＰ依存性蛋白質キナーゼ（ＰＫＡ），Ｇ蛋白
質共役レセプターキナーゼ（ＡＲＫおよびロドプシンキナーゼ（ＧＲＫ１））な
らびにｐ７０Ｓ６ＫおよびＡＫＴが含まれる。
【０１８２】 新規なＡＧＣグループの蛋白質キナーゼの潜在的な生物学的および臨床的関連
性は，実施例２ｅに記載される。新規なＡＧＣグループのキナーゼには，配列番
号５８，配列番号５９，配列番号６０，配列番号６１，配列番号６２，配列番号
６３，および配列番号６４が含まれる。
【０１８３】ＣＡＭＫグループ ファミリーメンバーは，蛋白質キナーゼのＣＡＭＫグループに属すると記述さ
れる。蛋白質キナーゼのＣＡＭＫグループには，その主要なプロトタイプとして
，カルモジュリン依存性蛋白質キナーゼ，伸長因子−２キナーゼ，ホスホリラー
ゼキナーゼおよび蛋白質キナーゼのＳｎｆｌおよびｃＡＭＰ依存性ファミリーが
含まれる。
【０１８４】 新規なＣＡＭＫグループの蛋白質キナーゼの潜在的な生物学的および臨床的関
連性は実施例２ｅに記載される。新規なＣＡＭＫグループの蛋白質キナーゼには
，配列番号６５，配列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，
配列番号７５，配列番号７６，配列番号７７，および配列番号７８が含まれる。
【０１８５】カゼインキナーゼグループ ファミリーメンバーは，蛋白質キナーゼのカゼインキナーゼ（ＣＫＩ）グルー
プに属すると記述される。蛋白質キナーゼのカゼインキナーゼ（ＣＫ）グループ
には，その主要なプロトタイプとして，カゼインキナーゼｌ（ＣＫＩ）およびカ
ゼインキナーゼｌＩ（ＣＫＩＩ）が含まれる。ＣＫＩおよびＣＫＩＩはいずれも
偏在的であり，構成的に活性であり，第２メッセンジャー非依存性キナーゼであ
り，多数のアイソフォームとして存在する高度に保存された酵素である。ＣＫＩ
は，小胞輸送，ＤＮＡ修復，細胞サイクル進行および細胞質分裂において機能す
る（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌ １９９８Ｎｏｖ；１０（１０）：６９９−７１１
）。ＣＫ２は，非神経細胞の細胞サイクル進行において機能する。ＣＫ２はまた
，哺乳動物神経系の正常および疾病状態における多数のシグナリング経路に関与
することが示唆されている（Ｐｒｏｇ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ ２０００Ｆｅｂ；
６０（３）：２１１−４６）。
【０１８６】 新規カゼインキナーゼグループの蛋白質キナーゼの潜在的な生物学的および臨
床的関連性は実施例２ｅに記載される。新規なカゼインキナーゼ蛋白質キナーゼ
には，配列番号７９および配列番号８０が含まれる。
【０１８７】ＣＭＧＣグループ ファミリーメンバーは，蛋白質キナーゼのサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ
）グループに属すると記述される。蛋白質キナーゼのＣＭＧＣグループには，そ
の主要なプロトタイプとして，キナーゼのサイクリン依存性蛋白質キナーゼ，な
らびにＭＡＰＫキナーゼファミリー，ＧＳＫファミリーおよびＣＬＫファミリー
が含まれる。
【０１８８】 新規ＣＭＧＣグループの蛋白質キナーゼの潜在的な生物学的および臨床的関連
性は，実施例２ｅに記載される。新規なＣＭＧＣ蛋白質キナーゼには，配列番号
８１，配列番号８２，および配列番号８３が含まれる。
【０１８９】微生物ＰＫグループ ファミリーメンバーは，蛋白質キナーゼの微生物グループに属すると記述され
る。このグループは，例えば，ＡＢＣ１，ＲＩ０１，ＹＧＲ２６２を含む蛋白質
キナーゼにより定義され，これらはすべて微生物ゲノム配列決定プロジェクトか
ら最初に同定された（Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９９
９Ｎｏｖ２３；９６（２４）：１３６０３−１０）。
【０１９０】 新規微生物グループの蛋白質キナーゼの潜在的な生物学的および臨床的関連性
は，実施例２ｅに記載される。新規な微生物蛋白質キナーゼには，配列番号８４
，配列番号８５，および配列番号８６が含まれる。
【０１９１】"その他"グループ ファミリーメンバーは，蛋白質キナーゼの"その他"グループに属すると記述さ
れる。蛋白質キナーゼのこのグループ中には，隠れマルコフモデル分析により同
定される認識しうる触媒的モチーフを有するが，触媒領域にわたるそのアミノ酸
配列ホモロジーに基づいて他の蛋白質キナーゼとともにクラスター化されないメ
ンバーが含まれる。
【０１９２】 ”その他”グループに属する新規蛋白質キナーゼの潜在的な生物学的および臨
床的関連性は，実施例２ｅに記載される。新規な"その他"蛋白質キナーゼには，
配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１，配
列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，配列
番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，および配列番号１０
１が含まれる。
【０１９３】ＳＴＥグループ ファミリーメンバーは，蛋白質キナーゼのＳＴＥグループに属すると記述され
る。蛋白質キナーゼのＳＴＥグループには，その主要なプロトタイプとして，Ｎ
ＥＫキナーゼ，ならびに不能蛋白質キナーゼのＳＴＥ１１およびＳＴＥ２０ファ
ミリーが含まれる。
【０１９４】 ＳＴＥグループに属する新規蛋白質キナーゼの潜在的生物学的または臨床的関
連性は実施例２ｅに記載される。新規なＳＴＥ蛋白質キナーゼには，配列番号１
０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番号１０６，配
列番号１０７，配列番号１０８，および配列番号１０９が含まれる。
【０１９５】ＴＫグループ ファミリーメンバーは，蛋白質キナーゼのチロシンキナーゼ（ＴＫ）グループ
に属すると記載される。蛋白質キナーゼのＴＫグループには，その主要なプロト
タイプとして，蛋白質キナーゼの細胞質およびレセプターファミリーが含まれる
。
【０１９６】 キナーゼのこのグループの１つのファミリーは"Ｅｐｈ"ファミリーである。Ｅ
ｐｈファミリーは，ヒトゲノムにおける最も大きいレセプターチロシンキナーゼ
のサブファミリーであり，これは，リガンド結合に関与するＮ末端球状ドメイン
，レセプター二量体化に寄与する２つのタイプＩＩＩフィブロネクチン様ドメイ
ン，貫膜ドメイン，および細胞内チロシンキナーゼドメインから構成される，ス
テレオタイプの構造を有する。Ｅｐｈファミリーは２つのサブファミリー：一般
にリガンドのＧＰＩ連結ＥｐｈｒｉｎＡファミリーのメンバーに結合するＥｐｈ
Ａレセプター，および一般にリガンドの貫膜ＥｐｈｒｉｎＢファミリーに結合す
るＥｐｈＢレセプターからなる。配列類似性の比較に基づいて，ＥｐｈＡ９（配
列番号１１０により表されるポリペプチドがこれに属する）は，レセプターのＥ
ｐｈＡサブファミリーのメンバーである。
【０１９７】 レセプターのＥｐｈファミリーの研究は，これらが広範な種類の細胞プロセス
に関与していることを示す。Ｅｐｈレセプターの活性化は細胞内シグナリング，
細胞接着，細胞骨格効果，およびシナプスリモデリングの変化につながりうる。
これらのＥｐｈ依存性細胞効果は，次に，組織機能，例えば，境界形成，パター
ン形成，細胞移動，神経発生，新脈管形成，および長期効力の変化に寄与しうる
。Ｅｐｈファミリーのメンバーとして，ＥｐｈＡ９はこれらの機能の多くにも関
与しているであろうと予測される。
【０１９８】 ＥｐｈＡ９の発現データは，これがヒト中枢神経系，消化系（特に結腸および
直腸）および精巣で最も多く発現されていることを示す。したがって，ＥｐｈＡ
９は，消化管，例えば結腸の秩序および機能に関与しているかもしれず，結腸直
腸腫瘍発生および消化管の他の疾患に寄与している可能性がある。
【０１９９】 神経系において発見されたＥｐｈＡ９は，シナプス発生，神経発達および再生
，軸索生長，およびシナプス伝に関与しているかもしれない。したがって，Ｅｐ
ｈＡ９は，神経の生存および障害後の再生，長期相乗作用および記憶形成，およ
びシナプス伝達の疾患，例えば，てんかん，うつ病，パーキンソン病，およびア
ルツハイマー病において重要であろう。
【０２００】 いくつかのＥｐｈファミリーレセプターは，新脈管形成のいくつかの観点，例
えば，新規血管のリモデリング，分枝，発芽および剪定に重要であることが以前
に示されている。このファミリーの追加のメンバーであるＥｐｈＡ９も，新脈管
形成の観点において重要であるかもしれない。すなわち，ＥｐｈＡ９は，多くの
疾病，例えば固形腫瘍，慢性関節リウマチ，および心臓血管疾病に関連性を有す
るかもしれない。
【０２０１】 ＴＫグループに属する新規蛋白質キナーゼの潜在的な生物学的および臨床的関
連性は，実施例２ｅに記載される。新規なＴＫ蛋白質キナーゼには，配列番号１
００および配列番号１１１が含まれる。
【０２０２】キナーゼ様活性を示すポリペプチドの分類 ２つの新規なファミリーメンバーが，蛋白質キナーゼの蛋白質キナーゼ（ＰＫ
）様インサート"スーパーファミリー"に属すると記載されている。実施例に記載
されるように，蛋白質キナーゼのＰＫ様スーパーファミリーには，ジアシルグリ
セロールキナーゼ（ＤＧＫ）およびグアニル酸シクラーゼ（ＧＣｙｃ）が含まれ
る。
【０２０３】グアニル酸シクラーゼ（ＧＣｙｃ）グループ グアニル酸シクラーゼは，ＧＴＰをｃＧＭＰに変換する偏在的酵素であり，膜
結合アイソフォームおよび可溶性アイソフォームとして存在する。種々の範囲の
アゴニスト，例えば，ペプチドホルモン，細菌毒素ならびに細胞内分子，例えば
カルシウムおよびｃＡＭＰは，グアニル酸シクラーゼの酵素活性を制御する。グ
アニル酸キナーゼの刺激は，多数の下流酵素，例えばｃＧＭＰ依存性蛋白質キナ
ーゼ，ｃＧＭＰ制御ホスホジエステラーゼ，およびサイクリックヌクレオチドゲ
ートイオンチャネルを調節する。グアニル酸シクラーゼによるｃＧＭＰレベルの
調節は，血管平滑筋移動性，腸液および電解質ホメオスタシス，および網膜光変
換の制御に寄与する（Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｖ ２０００Ｓｅｐ；５２（３
）：３７５−４１４）。グアニル酸シクラーゼファミリーの潜在的新規メンバー
として，ＳＧＫ００７およびＳＧＫ０５０が関与するシグナリング経路の破壊は
，病態生理学的に関連するｃＧＭＰホメオスタシスを変更させるかもしれない。
【０２０４】ジアシルグリセロールキナーゼ（ＤＧＫ）グループ ジアシルグリセロールキナーゼは，第２メッセンジャー分子であるジアシルグ
リセロールをリン酸化し，これはホスファチジン酸の形成につながる。９個の哺
乳動物ＤＧＫのアイソザイムが記述されている。ＤＧＫの触媒ドメインは，通常
，蛋白質−蛋白質相互作用ドメイン，例えば，ジンクフィンガー，プレクストリ
ンホモロジードメインおよびアンキリン反復，ならびにカルシウム結合ＥＦハン
ド構造により挟まれている。ＤＧＫは，原形質膜，核および細胞骨格に付随する
ことができる。実験的証拠は，ＤＧＫがアゴニストに応答してその細胞内コンパ
ートメントへまたはそこから移動するという提案を支持する。これらの細胞内局
在において，ＤＧＫは，脂質代謝およびＰＫＣ活性化を調節し，このことにより
細胞サイクルの進行および分化に関連するエフェクター機能を開始させることが
できる（Ｉｎｔ．Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１９９７，（１０
）：１１３９−４３，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９９，２７４（１７）：１
１４４７−５０）。
【０２０５】ＳＧＫ０９３−セリン／トレオニンキナーゼのＷｎｋファミリー Ｗｎｋ３は，セリン／トレオニンキナーゼのサブファミリーのメンバーであり
，記述されているプロトタイプであるラットから単離されたＷｎｋｌを含む。こ
のファミリーは，いくつかの独特の配列の特徴を有するＮ末端触媒ドメインを特
徴とする。最も注目すべきことは，キナーゼサブドメインＩＩの不変のリシンが
システインに変化しており，これは３番目に保存されているサブドメインＩ中の
グリシン残基のリシンへの変化とカップリングしている。得られる酵素はこの同
時スイッチにより触媒的活性を保持しているようである。Ｗｎｋ３はこれらの触
媒的変化の両方を保存しており，したがって，触媒的活性を保持していると推定
される。ｗｎｋｓの長いＣ末端部分は，多くの蛋白質相互作用ドメイン，例えば
ＳＨ３結合部位およびコイルドコイル領域を有する。
【０２０６】 ｗｎｋファミリーの触媒ドメインは，セリン／トレオニンキナーゼの２つのフ
ァミリー，すなわちＭＥＫＫ様キナーゼおよびＳｔｅ２０様キナーゼに対して最
も高い類似性を示す。これらのファミリーはいずれも，種々のＭＡＰＫシグナリ
ングカスケードにおいて，多くの細胞プロセス，例えば，有糸分裂，分化，細胞
生存およびストレス応答において重要な酵素を制御することができる。Ｓｔｅ２
０キナーゼはまた，ｒａｓ／ｒａｃ／ｒｈｏ／ｃｄｃ４２経路の制御およびその
下流の細胞骨格に及ぼす影響に関与している。
【０２０７】 Ｗｎｋ３は，ヒト腎臓，腎臓癌腫細胞株，前立腺，前立腺細胞株，および前立
腺腫瘍骨転移，結腸直腸組織および腫瘍細胞株，およびヒト白血病細胞において
高い発現を示す。したがって，ｗｎｋ３は，正常のホメオスタシスおよびヒト腎
臓，前立腺，および消化系の機能に関与しているかもしれず，これらの３つの組
織から生ずる腫瘍発生に関与しているかもしれない。ヒト白血病細胞株における
高い発現は，その疾病の発達においても役割を果たしている可能性を示す。
【０２０８】本発明にしたがう治療方法 診断： 本発明は，疾病または疾患の診断道具として，試料中のポリペプチドを検出す
る方法を提供する。該方法は，（ａ）試料を，ハイブリダイゼーションアッセイ
条件下で，配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０，配列番号６１，配列番
号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，配列番号６６，配列番号
６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配列番号７１，配列番号７
２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列番号７６，配列番号７７
，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番号８１，配列番号８２，
配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号８６，配列番号８７，配
列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１，配列番号９２，配列
番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，配列番号９７，配列番
号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０１，配列番号１０２，配
列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番号１０６，配列番号１
０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１０，配列番号１１１，配
列番号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４からなる群より選択され
るポリペプチドの核酸標的領域にハイブリダイズする核酸プローブと接触させ，
前記プローブは，ポリペプチド，そのフラグメント，および配列およびフラグメ
ントの相補体をコードする核酸配列を含み；そして（ｂ）プローブ：標的領域ハ
イブリッドの存在または量を疾病の指標として検出する，の各工程を含む。
【０２０９】 本発明の好ましい態様においては，疾病または疾患は，慢性関節リウマチ，ア
テローム性動脈硬化症，自己免疫疾患，臓器移植，心筋梗塞，心筋症，発作，腎
不全，酸化的ストレス関連神経変性性疾患，代謝性疾患，例えば糖尿病，生殖疾
患，例えば不妊症，および癌からなる群より選択される。
【０２１０】 ハイブリダイゼーション条件は，他の核酸分子の存在下においてその遺伝子と
のみハイブリダイゼーションが生ずるような条件であるべきである。ストリンジ
ェントなハイブリダイゼーション条件下では，高度に相補的な核酸配列のみがハ
イブリダイズする。好ましくは，そのような条件は，２０個の連続するヌクレオ
チド中に１または２個のミスマッチを有する核酸のハイブリダイゼーションを防
止する。そのような条件は上で定義される。
【０２１１】 試料中の遺伝子の検出により診断することができる疾病には，核酸（ＤＮＡお
よび／またはＲＮＡ）が正常細胞と比較して増幅されている疾病が含まれる。"
増幅"とは，正常細胞と比較して，細胞中でＤＮＡまたはＲＮＡの数が増加して
いることを意味する。
【０２１２】 ＲＮＡに関する場合，"増幅"は，細胞においてＲＮＡが検出可能なように存在
することでありうる。ある正常細胞においては，ＲＮＡの基底発現がないためで
ある。他の正常細胞においては，発現の基底レベルが存在し，したがってこれら
の場合には増幅は基底レベルと比較して少なくとも１−２倍，好ましくはそれよ
り多い検出である。
【０２１３】 試料中の核酸の検出により診断することができる疾病には，好ましくは，癌が
含まれる。本発明の核酸探索方法に適した試験試料には，例えば，細胞または細
胞の核酸抽出物，または体液が含まれる。上述の方法において用いられる試料は
，アッセイフォーマット，検出方法，およびアッセイする組織，細胞または抽出
物の性質により様々でありうる。細胞の核酸抽出物を調製する方法は，当該技術
分野においてよく知られており，用いる方法に適合した試料を得るために容易に
適合させることができる。
【０２１４】抗体，ハイブリドーマ，キナーゼの検出のための使用方法およびキット 本発明は，本発明のキナーゼに結合親和性を有する抗体に関する。ポリペプチ
ドは，配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０，配列番号６１，配列番号６
２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，配列番号６６，配列番号６７
，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配列番号７１，配列番号７２，
配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列番号７６，配列番号７７，配
列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番号８１，配列番号８２，配列
番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号８６，配列番号８７，配列番
号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１，配列番号９２，配列番号
９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，配列番号９７，配列番号９
８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０１，配列番号１０２，配列番
号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番号１０６，配列番号１０７
，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１０，配列番号１１１，配列番
号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４に記載されるアミノ酸配列，
またはその機能的誘導体，またはその少なくとも９個の連続するアミノ酸（好ま
しくは，その少なくとも２０，３０，３５，または４０個の連続するアミノ酸）
からなる群より選択されるアミノ酸配列を有することができる。
【０２１５】 本発明はまた，本発明のキナーゼに対して特異的結合親和性を有する抗体に関
する。そのような抗体は，本発明のキナーゼに対するその結合親和性を他のポリ
ペプチドに対する結合親和性と比較することにより単離することができる。本発
明のキナーゼに選択的に結合する抗体を，本発明のキナーゼと他のポリペプチド
とを区別することを必要とする方法において用いるために選択することができる
。そのような方法には，限定されないが，他のポリペプチドを含む組織における
キナーゼ発現の変化の分析が含まれる。
【０２１６】 本発明のキナーゼは，種々の手順および方法，例えば抗体の生成，医薬組成物
の同定，およびＤＮＡ／蛋白質相互作用の研究において用いることができる。
【０２１７】 本発明のキナーゼは，抗体またはハイブリドーマを生成するために用いること
ができる。当業者は，抗体が望まれる場合，そのようなペプチドを本明細書に記
載されるように生成し，免疫原として用いることができることを認識するであろ
う。本発明の抗体には，モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体，ならび
にこれらの抗体のフラグメント，およびヒト化型が含まれる。本発明の抗体のヒ
ト化型は，キメラ化またはＣＤＲグラフティング等の当該技術分野において知ら
れる手法の１つを用いて生成することができる。
【０２１８】 本発明はまた，上述のモノクローナル抗体またはその結合フラグメントを産生
するハイブリドーマに関する。ハイブリドーマは，特定のモノクローナル抗体を
分泌することができる不死化細胞株である。
【０２１９】 一般に，モノクローナル抗体およびハイブリドーマを製造する手法は当該技術
分野においてよく知られている（Ｃａｍｐｂｅｌｌ，"Ｍｏｎｏｌｏｎａｌ Ａ
ｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉ
ｑｕｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂ
ｉｏｌｏｇｙ"，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，
Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ，１９８４；Ｓｔ．Ｇｒ
ｏｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ３５：１−２１
，１９８０）。抗体を生成することが知られている任意の動物（マウス，ウサギ
等）を，選択されたポリペプチドで免疫することができる。免疫の方法は当該技
術分野においてよく知られている。そのような方法には，ポリペプチドの皮下ま
たは腹膜内注射が含まれる。当業者は，免疫に用いるポリペプチドの量は，免疫
する動物，ポリペプチドの抗原性，および注入部位により様々であることを認識
するであろう。
【０２２０】 ポリペプチドは，ペプチドの抗原性を増加させるために，修飾するかまたはア
ジュバント中で投与することができる。ポリペプチドの抗原性を増加させる方法
は当該技術分野においてよく知られている。そのような方法には，抗原を異種蛋
白質（例えばグロブリンまたはβ−ガラクトシダーゼ）とカップリングさせるか
，または免疫の間にアジュバントを含めることが含まれる。
【０２２１】 モノクローナル抗体については，免疫した動物から脾臓細胞を切除し，ミエロ
ーマ細胞，例えばＳＰ２／０−Ａｇｌ４ミエローマ細胞と融合させ，モノクロー
ナル抗体産生ハイブリドーマ細胞とさせる。当該技術分野においてよく知られる
多数の方法の任意のものを用いて，所望の特性を有する抗体を産生するハイブリ
ドーマ細胞を同定することができる。これらには，ハイブリドーマをＥＬＩＳＡ
アッセイ，ウエスタンブロット分析，またはラジオイムノアッセイを用いてスク
リーニングすることが含まれる（Ｌｕｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ
Ｒｅｓ．１７５：１０９−１２４，１９８８）。所望の抗体を分泌するハイブリ
ドーマをクローニングし，当該技術分野において知られる方法を用いてクラスお
よびサブクラスを決定する（Ｃａｍｐｂｅｌｌ，"Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎ
ｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑ
ｕｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉ
ｏｌｏｇｙ"，上掲，１９８４）。
【０２２２】 ポリクローナル抗体については，免疫した動物から抗体を含有する抗血清を単
離し，上述の方法の１つを用いて所望の特異性を有する抗体の存在についてスク
リーニングする。上述の抗体は，検出可能なように標識することができる。抗体
は，放射性同位体，アフィニティー標識（例えばビオチン，アビジン等），酵素
標識（例えば西洋ワサビペルオキシダーゼ，アルカリホスファターゼ等），蛍光
標識（例えばＦＩＴＣまたはローダミン等），常磁性原子等を用いて，検出可能
なように標識することができる。そのような標識を行う方法は当該技術分野にお
いてよく知られている。例えば，Ｓｔｅｍｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｈ
ｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．１８：３１５，１９７０；Ｂａｙｅｒ
ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．６２：３０８−，１９７９；Ｅｎｇｖａｌ
ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０９：１２９−，１９７２；Ｇｏｄｉｎｇ
，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１３：２１５−，１９７６を参照。本発明の
標識された抗体は，インビトロ，インビボ，およびインシトゥーアッセイに用い
て，特定のペプチドを発現する細胞または組織を同定することができる。
【０２２３】 上述の抗体は，固体支持体上に固定化してもよい。そのような固体支持体の例
には，プラスチック，例えばポリカーボネート，複合炭水化物，例えばアガロー
スおよびセファロース，アクリル樹脂，例えばポリアクリルアミドおよびラテッ
クスビーズが含まれる。抗体をそのような固体支持体にカップリングさせる技術
は当該技術分野においてよく知られている（Ｗｅｉｒ ｅｔ ａｌ．，"Ｈａｎ
ｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ"４ｔｈ
Ｅｄ．，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ
ｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ，Ｃｈａｐｔｅｒ １０，１９８６；Ｊａｃ
ｏｂｙ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．３４，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒ
ｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．，１９７４）。本発明の固定化された抗体は，インビトロ，イ
ンビボ，およびインシトゥーアッセイに，ならびに免疫クロマトグラフィーに用
いることができる。
【０２２４】 さらに，当業者は，合理的に設計された抗ペプチドペプチドを生成するために
，現在利用可能な方法，並びに抗体に関して本明細書に記載される技術，方法お
よびキットを容易に適合させて，特定のペプチド配列に結合しうるペプチドを容
易に生成することができる（Ｈｕｒｂｙ ｅｔ ａｌ．，"Ａｐｐｌｉｃａｔｉ
ｏｎ ｏｆ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｐ
ｅｐｔｉｄｅｓ"，Ｉｎ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ａ Ｕｓｅ
ｒ’ｓ Ｇｕｉｄｅ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ，ＮＹ，ｐｐ．２８９−３０７，
１９９２；Ｋａｓｐｃｚａｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２８
：９２３０−９２３８，１９８９）。
【０２２５】 抗ペプチドペプチドは，本発明のキナーゼのペプチド配列中に見いだされる塩
基性アミノ酸残基を，疎水性および非荷電極性基を維持しながら酸性残基で置き
換えることにより生成することができる。例えば，リジン，アルギニン，および
／またはヒスチジン残基をアスパラギン酸またはグルタミン酸で置き換え，およ
びグルタミン酸残基をリジン，アルギニンまたはヒスチジンで置き換える。
【０２２６】 本発明はまた，試料中においてキナーゼポリペプチドを検出する方法を包含す
る。該方法は，（ａ）試料を，免疫複合体が形成するような条件下で上述の抗体
と接触させ，そして（ｂ）ポリペプチドに結合した前記抗体の存在を検出する，
ことを含む。詳細には，該方法は，試験試料を１またはそれ以上の本発明の抗体
とインキュベートし，抗体が試験試料に結合するか否かをアッセイすることを含
む。試料中で本発明のキナーゼのレベルが正常なレベルと比較して変化している
ことは疾病を示すかもしれない。
【０２２７】 抗体を試験試料とインキュベートする条件は様々である。インキュベーション
条件は，アッセイにおいて用いられるフォーマット，用いられる検出方法，およ
びアッセイにおいて用いられる抗体のタイプおよび性質によって異なる。当業者
は，慣用的に入手可能な免疫学的アッセイフォーマット（例えばラジオイムノア
ッセイ，酵素結合イムノソルベントアッセイ，拡散に基づくオクタロニー，また
はロケット免疫蛍光アッセイ）の任意のものを，本発明の抗体を用いるために容
易に適合させることができることを認識するであろう。そのようなアッセイの例
は，Ｃｈａｒｄ（"Ａｎ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｒａｄｉｏｉｍｍ
ｕｎｏａｓｓｙ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ"，Ｅｌｓｅ
ｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，Ｔｈ
ｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ，１９８６），Ｂｕｌｌｏｃｋ ｅｔ ａｌ．（"
Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ"，Ａ
ｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｒｌａｎｄｏ，ＦＬＶｏｌ．１，１９８２；Ｖ
ｏｌ．２，１９８３；Ｖｏｌ．３，１９８５），Ｔｉｊｓｓｅｎ（"Ｐｒａｃｔ
ｉｃｅ ａｎｄ Ｔｈｅｏｒｙ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓｙｓ
：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ"，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈ
ｅｒｌａｎｄｓ，１９８５）に見いだすことができる。
【０２２８】 本発明の免疫学的アッセイ試験試料には，細胞，蛋白質または細胞の膜抽出物
，または体液，例えば血液，血清，血漿または尿が含まれる。上述の方法におい
て用いられる試験試料は，アッセイフォーマット，検出方法の性質およびアッセ
イすべき試料として用いられる組織，細胞または抽出物により様々であろう。蛋
白質抽出物または細胞の膜抽出物を製造する方法は当該技術分野においてよく知
られており，用いるシステムにより試験しうる試料を得るために容易に適合させ
ることができる。
【０２２９】 キットは，先に記載した検出方法を実施するために必要な全ての試薬を含む。
キットは，（ｉ）上述の抗体を含む第１の容器手段，および（ｉｉ）抗体の結合
パートナーと標識を含むコンジュゲートを含む第２の容器手段を含むことができ
る。別の好ましい態様においては，キットは以下の１またはそれ以上を含む１ま
たはそれ以上の他の容器をさらに含む：洗浄試薬および結合した抗体の存在を検
出しうる試薬。
【０２３０】 検出試薬の例には，限定されないが，標識二次抗体が含まれ，あるいは，一次
抗体が標識されている場合には，標識された抗体と反応しうる発色団，酵素，ま
たは抗体結合試薬が含まれる。コンパートメント化キットは核酸プローブキット
について上述したようなものでもよい。当業者は，本発明に記載される抗体を，
当該技術分野においてよく知られる確立されたキットフォーマットの１つに容易
に取り込ませることができることを容易に認識するであろう。
【０２３１】キナーゼと相互作用することができる化合物の単離 本発明はまた，本発明の蛋白質キナーゼに結合しうる化合物を検出する方法に
関する。該方法は，化合物を本発明のキナーゼとともにインキュベートし，キナ
ーゼに結合した化合物の存在を検出することを含む。化合物は，複雑な混合物，
例えば，血清，体液，または細胞抽出物中に存在していてもよい。
【０２３２】 本発明はまた，キナーゼの活性またはキナーゼの結合パートナーの活性のアゴ
ニストまたはアンタゴニストを検出する方法に関する。該方法は，本発明のキナ
ーゼを産生する細胞を化合物の存在下でインキュベートし，キナーゼ活性または
キナーゼ結合パートナーの活性のレベルの変化を検出することを含む。このよう
にして同定される化合物は，化合物の存在を示す活性の変化を生ずるであろう。
化合物は，複雑な混合物，例えば，血清，体液，または細胞抽出物中に存在して
いてもよい。いったん化合物が同定されれば，当該技術分野においてよく知られ
る技術を用いてこれを単離することができる。
【０２３３】ポリペプチド活性の調節： 本発明はさらに，治療を必要とする患者に，配列番号５８，配列番号５９，配
列番号６０，配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列
番号６５，配列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番
号７０，配列番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号
７５，配列番号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８
０，配列番号８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５
，配列番号８６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，
配列番号９１，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配
列番号９６，配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配
列番号１０１，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１
０５，配列番号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配
列番号１１０，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列
番号１１４からなる群より選択されるポリペプチドの活性を調節する物質を投与
することにより，疾病または異常な状態を治療する方法を提供する。好ましくは
，疾病は，慢性関節リウマチ，アテローム性動脈硬化症，自己免疫疾患，臓器移
植，心筋梗塞，心筋症，発作，腎不全，酸化的ストレス関連神経変性性疾患，代
謝性および生殖疾患，および癌からなる群より選択される。
【０２３４】 疾患または疾病の治療に有用な物質は，好ましくは，問題とする疾病または疾
患の治療に対応する活性についての１またはそれ以上のインビトロアッセイにお
いて陽性の結果を示す。ポリペプチドの活性を調節する物質は，好ましくは，限
定されないが，アンチセンスオリゴヌクレオチドおよび蛋白質キナーゼの阻害剤
を含む。
【０２３５】 "予防する"との用語は，生物が異常な状態に罹患するかこれを発達させる可能
性を減少させることを表す。
【０２３６】 "治療する"との用語は，生物において治療効果を有し，異常な状態を少なくと
も部分的に緩和するかまたは排除することを表す。
【０２３７】 "治療効果"との用語は，異常な状態を引き起こすかまたはこれに寄与する阻害
または活性化率を表す。治療効果は，異常な状態の１またはそれ以上の症状をあ
る程度緩和する。異常な状態の治療に関して，治療効果は，以下の１またはそれ
以上を表すことができる：（ａ）細胞の増殖，成長，および／または分化の増加
；（ｂ）細胞死の阻害（すなわち，遅延または停止）；（ｃ）変性の阻害；（ｄ
）異常な状態に伴う１またはそれ以上の症状のある程度の緩和；および（ｅ）影
響を受けた細胞の集団の機能の増強。異常な状態に対して有効性を示す化合物は
，本明細書に記載されるようにして同定することができる。
【０２３８】 "異常な状態"との用語は，生物の細胞または組織における，その生物における
正常な機能からはずれた機能を表す。異常な状態は，細胞増殖，細胞分化，また
は細胞生存に関連しうる。異常な状態にはまた，変則的な細胞サイクル進行，す
なわち有糸分裂および減数分裂を通る正常な細胞サイクル進行が変則的であるこ
とが含まれる。
【０２３９】 異常な細胞増殖状態には，癌，例えば繊維性およびメサンギウム疾患，異常な
新脈管形成および脈管形成，創傷治癒，乾癬，真性糖尿病，および炎症が含まれ
る。
【０２４０】 異常な分化状態には，限定されないが，神経変性性疾患，遅い創傷治癒速度，
および遅い組織移植治癒速度が含まれる。
【０２４１】 異常な細胞生存状態は，プログラムされた細胞死（アポトーシス）経路が活性
化されているかまたは排除されている状態に関連する。多くの蛋白質キナーゼが
アポトーシス経路に関連している。蛋白質キナーゼのいずれかの機能の異常は，
細胞の不死または未成熟細胞死につながりうる。
【０２４２】 シグナル伝達プロセスにおけるキナーゼポリペプチドの機能に関連して，"異
常な"との用語は，生物において過剰発現または過小発現されているか，その触
媒活性が野生型蛋白質キナーゼ活性より低いかまたは高いように変異しているか
，天然の結合パートナーともはや相互作用できないように変異しているか，別の
蛋白質キナーゼまたは蛋白質ホスファターゼによりもはや修飾されないか，また
は天然の結合パートナーともはや相互作用しない，キナーゼを表す。
【０２４３】 "投与する"との用語は，化合物を生物の細胞または組織内に取り込ませる方法
に関連する。異常な状態は，生物の細胞または組織が生物中または生物外に存在
する場合，予防または治療することができる。生物の外に存在する細胞は，細胞
培養皿中で維持または成長させることができる。生物中に含まれる細胞について
は，当該技術分野には化合物を投与する多くの手法が存在し，例えば，限定され
ないが，経口，非経口，経皮，注入およびエアロゾル外用が含まれる。生物外の
細胞については，当該技術分野には化合物を投与する多数の手法が存在し，例え
ば，限定されないが，細胞マイクロインジェクション手法，トランスフォーメー
ション手法，および担体手法が含まれる。
【０２４４】 異常な状態はまた，シグナル伝達経路に異常を有する一群の細胞を有する生物
に化合物を投与することにより，予防または治療することができる。次に，化合
物の投与が生物機能に及ぼす影響をモニターすることができる。生物は，好まし
くはマウス，ラット，ウサギ，モルモット，またはヤギであり，より好ましくは
有尾サルまたは無尾サルであり，最も好ましくはヒトである。
【０２４５】 本発明はまた，哺乳動物において本発明の標的および天然の結合パートナーに
関連する活性をアゴナイズ（促進）するかまたはアンタゴナイズする方法を含む
。該方法は，前記哺乳動物に，上述のポリペプチドの１つに対するアゴニストま
たはアンタゴニストを前記アゴニズムまたはアンタゴニズムを生ずるのに十分な
量で投与することを含む。関連する機能をアゴナイズまたはアンタゴナイズする
のに十分な量のアゴニストまたはアンタゴニストを哺乳動物に投与することを含
む，哺乳動物において，本発明の活性蛋白質のアゴニストまたはアンタゴニスト
を用いて疾病を治療する方法もまた本発明に含まれる。
【０２４６】 疾病の新規な治療を発見することをめざして，生物医学研究者および化学者は
，蛋白質ポリペプチドの機能を阻害する分子を設計し，合成し，試験してきた。
いくつかの小さい有機分子は蛋白質ポリペプチドの機能を調節する化合物の一群
を形成する。蛋白質キナーゼの機能を阻害することが報告されている分子の例と
しては，限定されないが，ビス単環式，二環式または複素環式アリール化合物（
ＰＣＴ ＷＯ９２／２０６４２，１９９２年１１月２６日公開，Ｍａｇｕｉｒｅ
ｅｔ ａｌ．），ビニレン−アザインドール誘導体（ＰＣＴ ＷＯ９４／１４
８０８，１９９４年７月７日公開，Ｂａｌｌｉｎａｒｉ ｅｔ ａｌ．），１−
シクロプロピル−４−ピリジル−キノロン類（米国特許５，３３０，９９２），
スチリル化合物（米国特許５，２１７，９９９），スチリル置換ピリジル化合物
（米国特許５，３０２，６０６），ある種のキナゾリン誘導体（欧州特許出願０
５６６２６６Ａ１），セレオインドール類およびセレニド類（ＰＣＴ ＷＯ９４
／０３４２７，１９９４年２月１７日公開，Ｄｅｎｎｙ ｅｔ ａｌ．），三環
式ポリヒドロキシ化合物（ＰＣＴ ＷＯ９２／２１６６０，１９９２年１２月１
０日公開，Ｄｏｗ），およびベンジルホスホン酸化合物（ＰＣＴ ＷＯ９１／１
５４９５，１９９１年１０月１７日公開，Ｄｏｗ ｅｔ ａｌ）が挙げられる。
【０２４７】 細胞膜を横切ることができ，酸加水分解に耐性の化合物は，患者に経口投与さ
れた後に高度に生物利用性となることができるため，治療剤として利点を有する
可能性がある。しかし，これらの蛋白質キナーゼ阻害剤の多くは，蛋白質キナー
ゼの機能を弱くしか阻害しない。さらに，多くは種々の蛋白質キナーゼを阻害し
，したがって，疾病の治療剤として多くの副作用を引き起こすであろう。
【０２４８】 しかし，ある種のインドリノン化合物は，酸耐性であり膜透過性である有機分
子の一群を形成する。ＷＯ９６／２２９７６（１９９６年８月１日公開，Ｂａｌ
ｌｉｎａｒｉ ｅｔ ａｌ．）は，オキシインドール環に融合したテトラリン，
ナフタレン，キノリン，およびインドール置換基を有する水溶性インドリノン化
合物を記載する。これらの二環式置換基は，さらに，ヒドロキシル化アルキル，
リン酸，およびエーテル成分等の極性成分で置換されている。"Ｉｎｄｏｌｉｎ
ｏｎｅ Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ Ｌｉｂｒａｒｉｅｓ ａｎｄ Ｒｅｌａ
ｔｅｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｔｒｅ
ａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｄｅｓｅａｓｅｓ"と題するＴａｎｇ ｅｔ ａｌ．の米
国特許出願０８／７０２，２３２（１９９６年８月２３日出願；Ｌｙｏｎ＆Ｌｙ
ｏｎ Ｄｏｃｋｅｔ Ｎｏ．２２１／１８７）および"Ｂｅｎｚｙｌｉｄｅｎｅ
−Ｚ−Ｉｎｄｏｌｉｎｅ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍ
ｅｎｔ ｏｆ Ｄｅｓｅａｓｅｓ"と題するＴａｎｇ ｅｔ ａｌの米国特許出
願０８／４８５，３２３（１９９５年６月７日出願；Ｌｙｏｎ＆Ｌｙｏｎ Ｄｏ
ｃｋｅｔ Ｎｏ．２２３／２９８）および国際公開ＷＯ９６／２２９７６（１９
９６年８月１日公開，Ｂａｌｌｉｎａｒｉ ｅｔ ａｌ）（これらはすべて，図
面および表を含めその全体を本明細書の一部としてここに引用する）は，オキシ
インドール環に融合した他の二環式成分ならびに単環式成分を有するインドリノ
ン化合物のインドリノン化学ライブラリを記載する。"Ｉｎｄｏｌｉｎｏｎｅ
Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ Ｌｉｂｒａｒｉｅｓ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ
Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅ
ｎｔ ｏｆ Ｄｅｓｅａｓｅｓ"と題するＴａｎｇ ｅｔ ａｌ．の出願０８／
７０２，２３２（１９９６年８月２３日出願；Ｌｙｏｎ＆Ｌｙｏｎ Ｄｏｃｋｅ
ｔ Ｎｏ．２２１／１８７），"Ｂｅｎｚｙｌｉｄｅｎｅ−Ｚ−Ｉｎｄｏｌｉｎ
ｅ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｄｅｓ
ｅａｓｅｓ"と題するＴａｎｇ ｅｔ ａｌ．の０８／４８５，３２３（１９９
５年６月７日出願；Ｌｙｏｎ＆Ｌｙｏｎ Ｄｏｃｋｅｔ Ｎｏ．２２３／２９８
），およびＷＯ９６／２２９７６（１９９６年８月１日公開，Ｂａｌｌｉｎａｒ
ｉ ｅｔ ａｌ．）は，インドリノンの合成方法，細胞におけるインドリノン化
合物の生物学的活性を試験する方法およびインドリノン誘導体の阻害パターンを
教示する。
【０２４９】 キナーゼ活性を調節することができる物質の他の例には，限定されないが，チ
ロホスチン，キナゾリン，キノキソリン，およびキノリンが含まれる。上述のキ
ナゾリン，チロホスチン，キノリン，およびキノキソリンには，よく知られる化
合物，例えば文献に記載される化合物が含まれる。例えば，キナゾリン類を記載
する代表的刊行物には，Ｂａｒｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，欧州特許公開０５２０７
２２Ａ１；Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，米国特許．４，４４７，６０８；Ｋａｂ
ｂｅ ｅｔ ａｌ．，米国特許．４，７５７，０７２；Ｋａｕｌ ａｎｄ Ｖｏ
ｕｇｉｏｕｋａｓ，米国特許５，３１６，５５３；Ｋｒｅｉｇｈｂａｕｍ ａｎ
ｄ Ｃｏｍｅｒ，米国特許４，３４３，９４０；Ｐｅｇｇ ａｎｄ Ｗａｒｄｌ
ｅｗｏｒｔｈ，欧州特許公開０５６２７３４Ａ１；Ｂａｒｋｅｒ ｅｔ ａｌ．
，（１９９１）Ｐｒｏｃ．ｏｆ Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒ
ｅｓｅａｒｃｈ ３２，３２７；Ｂｅｒｔｉｎｏ，Ｊ．Ｒ．，（１９７９）Ｃａ
ｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３，２９３−３０４；Ｂｅｒｔｉｎｏ，Ｊ．Ｒ．
，（１９７９）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ９（２ ｐａｒｔ１），２９
３−３０４；Ｃｕｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８６）Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅ
ｒ ５３，３６１−３６８；Ｆｅｒｎａｎｄｅｓ ｅｔ ａｌ．，（１９８３）
Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ４３，１１１７−１１２３；Ｆｅｒｒｉｓ
ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４４（２），１７３−１７８；Ｆｒｙｅｔ
ａｌ．，（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ２６５，１０９３−１０９５；Ｊａｃｋ
ｍａｎｅｔ ａｌ．，（１９８１）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５１，５
５７９−５５８６；Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２９（６
），１１１４−１１１８；Ｌｅｅ ａｎｄ Ｓｋｉｂｏ，（１９８７）Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６（２３），７３５５−７３６２；Ｌｅｍｕｓ ｅｔ ａ
ｌ．，（１９８９）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５４，３５１１−３５１８；Ｌｅｙ
ａｎｄ Ｓｅｎｇ，（１９７５）Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ １９７５，４１５−５
２２；Ｍａｘｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅｓ
ｏｎａｎｃｅ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １７，１８９−１９６；Ｍｉｎｉ ｅ
ｔ ａｌ．，（１９８５）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ４５，３２５−３
３０；Ｐｈｉｌｌｉｐｓ ａｎｄ Ｃａｓｔｌｅ，Ｊ．（１９８０）Ｈｅｔｅｒ
ｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍ．１７（１９），１４８９−１５９６；Ｒｅｅｃｅ
ｅｔ ａｌ．，（１９７７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ４７（１１），２
９９６−２９９９；Ｓｃｕｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９８６）Ｃａｎｃｅｒ
Ｉｍｍｕｎｏｌ．ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２３，Ａ６５；Ｓｉｋｏｒ
ａ ｅｔ ａｌ．，（１９８４）Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２３，２８９
−２９５；Ｓｉｋｏｒａ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ
Ｂｉｏｃｈｅｍ．１７２，３４４−３５５（これらすべては，図面を含めその全
体を本明細書の一部としてここに引用する）が含まれる。
【０２５０】 キノキサリン類は，Ｋａｕｌ ａｎｄ Ｖｏｕｇｉｏｕｋａｓ，米国特許５，
３１６，５５３（図面を含めその全体を本明細書の一部としてここに引用する）
に記載される。
【０２５１】 キノリン類は，Ｄｏｌｌｅ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅ
ｍ．３７，２６２７−２６２９；ＭａＧｕｉｒｅ，Ｊ．（１９９４）Ｍｅｄ．Ｃ
ｈｅｍ．３７，２１２９−２１３１；Ｂｕｒｋｅ ｅｔ ａｌ．，（１９９３）
Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３６，４２５−４３２，およびＢｕｒｋｅ ｅｔ ａｌ
．（１９９２）Ｂｉｏ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ
２，１７７１−１７７４（これらすべては，図面を含めその全体を本明細書の一
部としてここに引用する）に記載される。
【０２５２】 チロホスチン類は，Ａｌｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９３）Ｃｌｉｎ．Ｅｘ
ｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９１，１４１−１５６；Ａｎａｆｉ ｅｔ ａｌ．．（１
９９３）Ｂｌｏｏｄ ８２：１２，３５２４−３５２９；Ｂａｋｅｒ ｅｔ ａ
ｌ．，（１９９２）Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｓｃｉ．１０２，５４３−５５５；Ｂｉｌｄ
ｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ａｍｅｒ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｓｏｃ．ｐｐ．
６３６３−６１４３：Ｃ７２１−Ｃ７３０；Ｂｒｕｎｔｏｎｅｔ ａｌ．，（１
９９２）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ Ａｍｅｒ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｓｃｈ．３３，５５８；Ｂｒｙｃｋａｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）
Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９９，２５５−２６１；Ｄｏｎｇ ｅ
ｔ ａｌ．，（１９９３）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ ５３，５
３−６０；Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１
（５），２７１７−２７２４；Ｇａｚｉｔ ｅｔ ａｌ．．（１９８９）Ｊ．Ｍ
ｅｄ．Ｃｈｅｍ．３２，２３４４−２３５２；Ｇａｚｉｔ ｅｔ ａｌ．，（１
９９３）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３６，３５５６−３５６４；Ｋａｕｒ ｅｔ
ａｌ．，（１９９４）Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇｓ ５，２１３−２２
２；Ｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２７５，４１
３−４１８；Ｋｕｏ ｅｔ ａｌ．，（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔｅｒ
ｓ ７４，１９７−２０２；Ｌｅｖｉｔｚｋｉ，Ａ．，（１９９２）Ｔｈｅ Ｆ
ＡＳＥＢ Ｊ．６，３２７５−３２８２；Ｌｙａｌｌ ｅｔ ａｌ．．（１９８
９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４，１４５０３−１４５０９；Ｐｅｔｅｒｓ
ｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９３）Ｔｈｅ Ｐｒｏｓｔａｔｅ ２２，３３５−
３４５；Ｐｉｌｌｅｍｅｒｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅ
ｒ ５０，８０−８５；Ｐｏｓｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９３）Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ４５，６７３−６８３；Ｒｅｎｄｕ ｅ
ｔ ａｌ．，（１９９２）Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ４４（５），
８８１−８８８；Ｓａｕｒｏ ａｎｄ Ｔｈｏｍａｓ，（１９９３）Ｌｉｆｅ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ５３，３７１−３７６；Ｓａｕｒｏ ａｎｄ Ｔｈｏｍａｓ
，（１９９３）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｔｈｅｒ
ａｐｅｕｔｉｃｓ ２６７（３），１１９−１１２５；Ｗｏｌｂｒｉｎｇ ｅｔ
ａｌ．，（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９（３６），２２４７０
−２２４７２；およびＹｏｎｅｄａ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ５１，４４３０−４４３５；（これらはすべて，図面を含め
その全体を本明細書の一部としてここに引用する）に記載される。
【０２５３】 調節剤として用いることができる他の化合物には，オキシインドリノン，例え
ば，米国特許出願０８／７０２，２３２（１９９６年８月２３日出願，図面を含
め本明細書の一部としてここに引用する）に記載されるものが含まれる。
【０２５４】組換えＤＮＡ技術 キナーゼ核酸分子を含むＤＮＡ構築物およびこれらの構築物を含む細胞： 本発明はまた，宿主細胞において転写を開始するのに有効なプロモーターおよ
び上述の核酸分子を５’から３’方向に含む組換えＤＮＡ分子に関する。さらに
，本発明は，ベクターおよび上述の核酸分子を含む組換えＤＮＡ分子に関する。
本発明はまた，細胞において機能的な転写領域，上述のポリペプチドに対応する
アミノ酸配列をコードするＲＮＡ配列に相補的な配列，および前記細胞において
機能的な転写終止領域を含む核酸分子に関する。上述の分子は，単離されたおよ
び／または精製されたＤＮＡ分子でありうる。
【０２５５】 本発明はまた，上述の核酸分子を含み，したがってポリペプチドを発現しうる
細胞または生物に関する。ポリペプチドは，そのポリペプチドを発現するよう変
更されている細胞から精製することができる。細胞が，細胞が通常は産生しない
かまたは細胞が通常はより低いレベルで産生する蛋白質を産生するように遺伝子
操作により作成されている場合，細胞は"所望のポリペプチドを発現するよう変
更されている"と言われる。当業者は，ゲノム，ｃＤＮＡ，または合成配列のい
ずれかを真核生物または原核生物細胞のいずれかに導入して発現させるための方
法を容易に適用することができる。
【０２５６】 核酸分子，例えばＤＮＡは，これが転写および翻訳制御情報を含むヌクレオチ
ド配列を含み，かつそのような配列がポリペプチドをコードするヌクレオチド配
列に"動作可能なように連結されている"場合，ポリペプチドを"発現しうる"と言
われる。動作可能な連結とは，制御ＤＮＡ配列および発現が求められているＤＮ
Ａ配列が，遺伝子配列の発現を可能とするような様式で接続されているような連
結である。遺伝子配列の発現に必要な制御領域の詳細な性質は生物によって異な
るであろうが，これは一般にプロモーター領域を含む。原核生物においては，プ
ロモーター領域は，プロモーター（ＲＮＡ転写の開始を指示する）ならびにＲＮ
Ａに転写されたときに合成の開始を合図するであろうＤＮＡ配列の両方を含む。
そのような領域は，通常は転写および翻訳の開始に関与する５’−非コーディン
グ配列，例えばＴＡＴＡボックス，キャッピング配列，ＣＡＡＴ配列等を含むで
あろう。
【０２５７】 所望の場合には，本発明のキナーゼをコードする配列の３’側の非コーディン
グ領域を上述の方法により得ることができる。この領域は，その転写終止制御配
列，例えば終止およびポリアデニル化のために保持することができる。すなわち
，本発明のキナーゼをコードするＤＮＡ配列に天然に隣接している３’領域を保
持することにより，転写終止シグナルを提供することができる。発現宿主細胞に
おいて転写終止シグナルが十分に機能性でない場合には，宿主細胞において機能
的な３’領域で置き換えることができる。
【０２５８】 ２つのＤＮＡ配列（例えば，プロモーター領域配列および本発明のキナーゼを
コードする配列）は，２つのＤＮＡ配列の連結の性質が，（１）フレームシフト
変異を導入しない，（２）プロモーター領域配列が本発明のキナーゼをコードす
る遺伝子配列の転写を指示する能力を妨害しない，または（３）本発明のキナー
ゼの遺伝子配列がプロモーター領域配列により転写されることを妨害しない場合
，動作可能なように連結されていると言われる。すなわち，プロモーター領域は
，プロモーターがそのＤＮＡ配列の転写を行うことができる場合，ＤＮＡ配列に
動作可能なように連結されているであろう。すなわち，本発明のキナーゼをコー
ドする遺伝子を発現させるためには，適当な宿主により認識される転写および翻
訳シグナルが必要である。
【０２５９】 本発明は，本発明のキナーゼ（またはその機能的誘導体）をコードする遺伝子
を原核生物または真核生物細胞のいずれかにおいて発現させることを包含する。
原核生物宿主は，一般に，組換え蛋白質の製造において非常に有効でありかつ便
利であり，したがって，本発明のキナーゼのための１つの好ましい発現システム
である。原核生物は，しばしばＥ．ｃｏｌｉの種々の株により代表される。しか
し，他の細菌株等の他の微生物株もまた用いることができる。
【０２６０】 原核生物系においては，宿主と適合性のある種に由来する複製部位および制御
配列を含むプラスミドベクターを用いることができる。適当なプラスミドベクタ
ーの例には，ｐＢＲ３２２，ｐＵＣ１１８，ｐＵＣ１１９等が含まれ，適当なフ
ァージまたはバクテリオファージベクターの例には，λｇｔｌ０，λｇｔ１１等
が含まれ，適当なウイルスベクターの例には，ｐＭＡＭ−ｎｅｏ，ｐＫＲＣ等が
含まれる。好ましくは，本発明の選択されたベクターは，選択された宿主細胞に
おいて複製する能力を有する。
【０２６１】 認められている原核生物宿主には，細菌，例えばＥ．ｃｏｌｉ，Ｂａｃｉｌｌ
ｕｓ，Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ，Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ，Ｓａｌｍｏｎｅｌ
ｌａ，Ｓｅｒｒａｔｉａ等が含まれる。しかし，そのような条件下においては，
ポリペプチドはグリコシル化されない。原核生物宿主は発現プラスミド中のレプ
リコンおよび制御配列と適合性でなければならない。
【０２６２】 本発明のキナーゼ（またはその機能的誘導体）を原核生物細胞において発現さ
せるためには，本発明のキナーゼをコードする配列が，機能的原核生物プロモー
ターと動作可能なように連結されていることが必要である。そのようなプロモー
ターは，構成的であってもよく，より好ましくは制御可能（すなわち，誘導可能
または抑制解除可能）である。構成的プロモーターの例には，バクテリオファー
ジλのｉｎｔプロモーター，ｐＢＲ３２２のβ−ラクタマーゼ遺伝子配列のｂｌ
ａプロモーター，およびｐＰＲ３２５のクロラムフェニコールアセチルトランス
フェラーゼ遺伝子配列のｃａｔプロモーター等が含まれる。誘導可能な原核生物
プロモーターの例には，バクテリオファージλの主要右および左プロモーター（
ＰLおよびＰR），Ｅ．ｃｏｌｉのｔｒｐ，ｒｅｃＡ，ｌａｃＺ，ｌａｃＩ，およ
びｇａｌプロモーター，α−アミラーゼ（Ｕｌｍａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１６２：１７６−１８２，１９８５）およびＢ．ｓｕｂｔ
ｉｌｉｓのσ−２８−特異的プロモーター（Ｇｉｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．．Ｇｅ
ｎｅ Ｓｅｑｅｕｃｎｅ ３２：１１−２０，１９８４），Ｂａｃｉｌｌｕｓの
バクテリオファージのプロモーター（Ｇｒｙｃｚａｎ，Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｂａｃｉｌｌｉ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ
ｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，１９８２），およびＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓプロ
モーター（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．２０３：４
６８−４７８，１９８６）が含まれる。原核生物プロモーターは，Ｇｌｉｃｋ（
Ｉｎｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｔ．１：２７７−２８２，１９８７），Ｃｅｎａｔｉ
ｅｍｐｏ（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ ６８：５０５−５１６，１９８６），およびＧ
ｏｔｔｅｓｍａｎ（Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．１８：４１５−４４２，１９
８４）により概説されている。
【０２６３】 原核生物細胞における適切な発現には，遺伝子コーディング配列の上流にリボ
ソーム結合部位の存在が必要である。そのようなリボソーム結合部位は，例えば
，Ｇｏｌｄ ｅｔ ａｌ．（Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３５：３６
５−４０４，１９８１）に記載されている。制御配列，発現ベクター，トランス
フォーメーション方法等の選択は，遺伝子を発現させるために用いられる宿主細
胞のタイプに依存する。本明細書において用いる場合，"細胞"，"細胞株"および
"細胞培養"は互換的に用いることができ，そのような名称はすべて子孫を含む。
すなわち，"トランスフォーマント"または"トランスフォームした細胞"との語句
は，継代の数にかかわらず，初代対象細胞およびここから誘導された培養物を含
む。また，意図的なまたは偶然の変異のために，すべての子孫がＤＮＡ含有物に
おいて精密に同一ではないかもしれないことが理解される。しかし，定義される
ように，変異体子孫は元々のトランスフォームした細胞と同じ機能性を有する。
【０２６４】 本発明の発現システムにおいて用いることができる宿主細胞は，目的とするキ
ナーゼの発現において用いるのに適当である限り，特に限定されない。適当な宿
主はしばしば真核生物細胞を含むことができる。好ましい真核生物宿主には，例
えば，酵母，真菌，昆虫細胞，哺乳動物細胞（インビボまたは組織培養のいずれ
か）が含まれる。宿主として有用でありうる哺乳動物細胞には，ＨｅＬａ細胞，
繊維芽細胞由来の細胞，例えばＶＥＲＯまたはＣＨＯ−Ｋ１，またはリンパ球由
来の細胞，およびこれらの誘導体が含まれる。好ましい哺乳動物宿主細胞には，
ＳＰ２／０およびＪ５５８Ｌ，ならびに神経芽細胞腫細胞株，例えばＩＭＲ３３
２が含まれ，これらは正しい翻訳後プロセシングのよりすぐれた能力を提供する
ことができる。
【０２６５】 さらに，植物細胞もまた宿主として利用可能であり，植物細胞と適合しうる制
御配列，例えばカリフラワーモザイクウイルス３５Ｓおよび１９Ｓ，およびノパ
リンシンターゼプロモーターおよびポリアデニル化シグナル配列が利用可能であ
る。他の好ましい宿主は昆虫細胞，例えば，Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｌａｒｖａ
ｅである。昆虫細胞を宿主として用いる場合，Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａアルコール
デヒドロゲナーゼプロモーターを用いることができる（Ｒｕｂｉｎ，Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２４０：１４５３−１４５９，１９８８）。あるいは，バキュロウイルス
ベクターを，昆虫細胞において本発明のキナーゼを大量に発現するよう遺伝子工
学処理することができる（Ｊａｓｎｙ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１６５３，１
９８７；Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎ
ｇ，Ｖｏｌ．８，Ｐｌｅｎｕｍ，Ｓｅｔｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，ｐｐ
．２７７−２９７，１９８６）。
【０２６６】 酵母がグルコースの豊富な培地中で成長するときに大量に産生される解糖系酵
素をコードする活発に発現されている配列からのプロモーターおよび終止要素を
組み込んだ一連の酵母発現システムの任意のものを用いることができる。既知の
解糖系遺伝子配列はまた，非常に効率的な転写制御シグナルを提供することがで
きる。酵母は，翻訳後修飾を行うこともできる点において，実質的な利点を与え
る。強いプロモーター配列および高コピー数プラスミドを用いる多くの組換えＤ
ＮＡ戦略が存在し，これを酵母において所望の蛋白質を製造するために用いるこ
とができる。酵母はクローン化された哺乳動物遺伝子のリーダー配列を認識して
，リーダー配列を有するペプチド（すなわちプレペプチド）を分泌する。哺乳動
物宿主における本発明のキナーゼの発現にはいくつかの可能なベクター系が利用
可能である。
【０２６７】 宿主の性質に応じて，広範な種類の転写および翻訳制御配列を用いることがで
きる。転写および翻訳制御シグナルは，制御シグナルが高レベルの発現を有する
特定の遺伝子配列に関連しているウイルス起源，例えばアデノウイルス，ウシパ
ピローマウイルス，サイトメガロウイルス，サルウイルス等から誘導することが
できる。あるいは，哺乳動物発現産物，例えばアクチン，コラーゲン，ミオシン
などからのプロモーターを用いることができる。転写開始制御シグナルは，遺伝
子配列の発現を調節することができるように，抑制または活性化を可能とするも
のを選択することができる。興味深いものは，温度を変化させることにより発現
を抑制または開始することができるように温度感受性であるか，化学物質（例え
ば代謝産物）制御を行うことができる制御シグナルである。
【０２６８】 本発明のキナーゼの真核生物宿主における発現には，真核生物制御領域を使用
することが必要である。そのような領域は，一般に，ＲＮＡ合成の開始を指示す
るのに十分なプロモーター領域を含む。好ましい真核生物プロモーターには，例
えば，マウスメタロチオネインＩ遺伝子配列のプロモーター（Ｈａｍｅｒ ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｇｅｎ．１：２７３−２８８，１９８２）；
ヘルペスウイルスのＴＫプロモーター（ＭｃＫｎｉｇｈｔ，Ｃｅｌｌ ３１：３
５５−３６５，１９８２）；ＳＶ４０初期プロモーター（Ｂｅｎｏｉｓｔ ｅｔ
ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）２９０：３０４−３１，１９８１）；
および酵母ｇａｌ４遺伝子配列プロモーター（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．
，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）７９：６９７１−６９７
５，１９８２；Ｓｉｌｖｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）８１：５９５１−５９５５，１９８４）が含まれる。
【０２６９】 真核生物ｍＲＮＡの翻訳は，最初のメチオニンをコードするコドンから開始さ
れる。この理由のため，真核生物プロモーターと，本発明のキナーゼ（またはそ
の機能的誘導体）をコードするＤＮＡ配列との間の連結には，メチオニンをコー
ドしうる介在コドン（すなわちＡＵＧ）が含まれないことを確実にすることが好
ましい。そのようなコドンの存在は，融合蛋白質（ＡＵＧコドンが本発明のキナ
ーゼのコーディング配列と同じリーディングフレームにある場合）またはフレー
ムシフト変異（ＡＵＧコドンが本発明のキナーゼのコーディング配列と同じリー
ディングフレームにない場合）の形成のいずれかをもたらす。
【０２７０】 本発明のキナーゼをコードする核酸分子および動作可能なように連結されたプ
ロモーターは，レシピエントである原核生物または真核生物細胞中に，非複製Ｄ
ＮＡまたはＲＮＡ分子のいずれかとして導入することができ，これは，直線状分
子またはより好ましくは閉環状分子のいずれでもよい。そのような分子は自己複
製することができないため，遺伝子の発現は導入された配列の過渡的発現により
生ずる。あるいは，導入されたＤＮＡ配列が宿主染色体中にインテグレートされ
ることにより永久発現が得られる。
【０２７１】 所望の遺伝子配列を宿主細胞染色体中にインテグレートしうるベクターを用い
ることができる。導入されたＤＮＡをその染色体中に安定にインテグレートして
いる細胞は，発現ベクターを含有する宿主細胞の選択を可能とする１またはそれ
以上のマーカーを導入することにより選択することができる。マーカーは，栄養
要求性宿主に対する栄養，殺生物剤耐性（例えば抗生物質，または重金属，例え
ば銅）等を提供することができる。選択マーカー遺伝子配列は，発現させるべき
ＤＮＡ遺伝子配列に直接連結してもよく，または同じ細胞にコトランスフェクシ
ョンにより導入してもよい。ｍＲＮＡの最適な合成には追加の要素も必要であろ
う。これらの要素には，スプライシングシグナル，ならびに転写プロモーター，
エンハンサー，および終止シグナルが含まれる。そのような要素を組み込んだｃ
ＤＮＡ発現ベクターには，Ｏｋａｙａｍａ（Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：
２８０−２８９，１９８３）により記載されるものが含まれる。
【０２７２】 導入された核酸分子は，レシピエント宿主中で自己複製可能なプラスミドまた
はウイルスベクター中に取り込ませることができる。この目的のために広範な種
類のベクターの任意のものを用いることができる。特定のプラスミドまたはウイ
ルスベクターの選択において重要な因子には，ベクターを含むレシピエント細胞
を認識しベクターを含まないレシピエント細胞から選択することの容易性；特定
の宿主において所望されるベクターのコピー数；およびベクターを異なる種の宿
主細胞間で"シャトル"しうることが望ましいか否かが含まれる。
【０２７３】 好ましい原核生物ベクターには，Ｅ．ｃｏｌｉ中で複製しうるプラスミド（例
えば，ｐＢＲ３２２，ＣｏｌＥｌ，ｐＳＣ１０１，ｐＡＣＹＣ１８４，ΣＶＸ；
"Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕ
ａｌ"，１９８９，上掲）などのプラスミドが含まれる。Ｂａｃｉｌｌｕｓプラ
スミドには，ｐＣ１９４，ｐＣ２２１，ｐＴ１２７等が含まれる（Ｇｒｙｃｚａ
ｎ，Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｂａｃｉｌ
ｌｉ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，ｐｐ．３０７−３２９，１９８２
）。適当なＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓプラスミドには，ｐ１Ｊ１０１（Ｋｅｎｄ
ａｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１６９：４１７７−４１８３
，１９８７），およびＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓバクテリオファージ，例えば(
ΦＣ３１（Ｃｈａｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｉｘｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎ
ａｌ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍｏｎ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃ ｅｔ ａｌｅｓ Ｂｉｏ
ｌｏｇｙ，Ａｋａｄｅｍｉａｉ Ｋａｉｄｏ，Ｂｕｄａｐｅｓｔ，Ｈｕｎｇａｒ
ｙ，ｐｐ．４５−５４，１９８６）が含まれる。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓプラス
ミドはＪｏｈｎ ｅｔ ａｌ．（Ｒｅｖ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．８：６９３−
７０４，１９８６），およびＩｚａｋｉ（Ｊｐｎ．Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．３
３：７２９−７４２，１９７８）により概説されている。
【０２７４】 好ましい真核生物プラスミドには，例えば，ＢＰＶ，ワクチニア，ＳＶ４０，
２−ミクロンサークル等，またはそれらの誘導体が含まれる。そのようなプラス
ミドは当該技術分野においてよく知られている（Ｂｏｔｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ
．，Ｍｉａｍｉ Ｗｎｔｒ．Ｓｙｍｐ．１９：２６５−２７４，１９８２；Ｂｒ
ｏａｃｈ，"Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｙ
ｅａｓｔ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ：Ｌｉｆｅ Ｃｙｃｌｅ ａｎｄ Ｉｎ
ｈｅｒｉｔａｎｃｅ"，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ｐ．４４５−４７０
，１９８１；Ｂｒｏａｃｈ，Ｃｅｌｌ ２８：２０３−２０４，１９８２；Ｂｏ
ｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．１０：
３９−４８，１９８０；Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｃ
ｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｔｒｅａｔｉｓｅ，Ｖｏｌ．３，Ｇｅｎｅ Ｓｅｑ
ｕｅｎｃｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，ｐ
ｐ．５６３−６０８，１９８０）。
【０２７５】 構築物を含有するベクターまたは核酸分子を発現用に用意した後，ＤＮＡ構築
物は，種々の適当な手段，すなわち，トランスフォーメーション，トランスフェ
クション，コンジュゲーション，プロトプラスト融合，エレクトロポレーション
，粒子銃技術，リン酸カルシウム沈澱，直接マイクロインジェクション等により
，適当な宿主細胞中に導入することができる。ベクターを導入した後，レシピエ
ント細胞を，ベクター含有細胞の成長を選択する選択培地中で成長させる。クロ
ーニングされた遺伝子の発現により，本発明のキナーゼまたはそのフラグメント
が産生される。これは，トランスフォームした細胞中でそのまま起こるか，また
はこれらの細胞を分化させるよう誘導した後に起こる（例えば，ブロモデオキシ
ウラシルを神経芽細胞腫等に投与することにより）。本発明のペプチドを形成す
るために，種々のインキュベーション条件を用いることができる。最も好ましい
条件は，生理学的条件を模倣した条件である。
【０２７６】トランスジェニック動物： 本発明に関連するトランスジェニック動物の製造には，種々の方法が利用可能
である。ＤＮＡを受精可能卵の前核に注入した後，雄前核と雌前核を融合させる
か，またはＤＮＡを胚性細胞（例えば，２細胞胚の核）の核に注入した後，細胞
分裂を開始させることができる（Ｂｒｉｎｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：４４３８−４４４２，１９８５）。
本発明の無機イオンレセプターヌクレオチド配列を有するよう改変したウイルス
，特にレトロウイルスを胚に感染させることができる。
【０２７７】 胚の内部細胞塊から誘導され培養中で安定化させた多能性幹細胞を，培養中で
操作して本発明のヌクレオチド配列を取り込ませることができる。トランスジェ
ニック動物は，そのような細胞を胚盤胞中に移植し，これを仮母に移植し，分娩
させることにより製造することができる。トランスジェニック実験に適当な動物
は，標準的な商業的供給源，例えばＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ（Ｗｉｌｍｉｎ
ｇｔｏｎ，ＭＡ），Ｔａｃｏｎｉｃ（Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ，ＮＹ），Ｈａｒｌ
ａｎ Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）等か
ら入手することができる。
【０２７８】 齧歯類胚を操作する方法およびＤＮＡを接合子の前核に注入する方法は，当業
者によく知られている（Ｈｏｇａｎ ｅｔ ａｌ．，上掲）。魚，両生類卵およ
び鳥類のためのマイクロインジェクション法は，Ｈｏｕｄｅｂｉｎｅ ａｎｄ
Ｃｈｏｕｒｒｏｕｔ（Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ ４７：８９７−９０５，１９９
１）に詳述されている。ＤＮＡを動物の組織中に導入する他の方法は，米国特許
，４，９４５，０５０（Ｓａｎｄｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９０年７月３０
日）に記載されている。
【０２７９】 一例にすぎないが，トランスジェニックマウスを製造するためには，雌マウス
を過剰排卵誘発する。雌を雄といっしょに置き，交配した雌をＣＯ2窒息または
頚部脱臼により殺し，切除した卵管から胚を回収する。まわりの丘細胞を除去す
る。次に，前核胚を洗浄し，注入時まで保存する。ランダムな周期の成人雌を精
管切除雄と対にする。レシピエント雌はドナー雌と同じ時に交配させる。次に胚
を外科的に移す。トランスジェニックラットを製造する方法はマウスの場合と類
似する方法である（Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ６３：１０９９−
１１１２，１９９０）。
【０２８０】 胚性幹（ＥＳ）細胞を培養し，次にエレクトロポレーション，リン酸カルシウ
ム／ＤＮＡ沈澱および直接注入等の方法を用いてＤＮＡをＥＳ細胞中に導入する
ことによりトランスジェニック動物を製造する方法もまた当業者によく知られて
いる（Ｔｅｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓ ａｎｄ Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔ
ｅｍ Ｃｅｌｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｅ．Ｊ．Ｒｏｂ
ｅｒｔｓｏｎ，ｅｄ．，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８７）。
【０２８１】 ランダム遺伝子インテグレーションを含む場合には，本発明の配列を含むクロ
ーンを耐性をコードする遺伝子とともにコトランスフェクトすることができる。
あるいは，ネオマイシン耐性をコードする遺伝子を，本発明の配列に物理的に連
結させることができる。所望のクローンのトランスフェクションおよび単離は，
当業者によく知られるいくつかの方法のいずれかを用いて実施することができる
（Ｅ．Ｊ．Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，上掲）。
【０２８２】 ＥＳ細胞中に導入されたＤＮＡ分子はまた，相同組換えのプロセスにより染色
体中にインテグレートされることができる（Ｃａｐｅｃｃｈｉ，Ｓｃｉｅｎｃｅ
２４４：１２８８−１２９２，１９８９）。組換え事象のポジティブ選択（す
なわち，ｎｅｏ耐性）および二重ポジティブ−ネガティブ選択（すなわち，ｎｅ
ｏ耐性およびガンシクロビル耐性）の方法，および続くＰＣＲによる所望のクロ
ーンの同定は，Ｃａｐｅｃｃｈｉ，上掲およびＪｏｙｎｅｒ ｅｔ ａｌ．（Ｎ
ａｔｕｒｅ ３３８：１５３−１５６，１９８９）に記載されており，これらの
教示は，図面を含めその全体を本明細書の一部としてここに引用する。この方法
の最後の段階は，標的とするＥＳ細胞を胚盤胞中に注入し，胚盤胞を擬妊娠雌に
移すことである。得られるキメラ動物を繁殖させ，子孫をサザンブロッティング
により分析して，トランスジンを有する個体を同定する。非齧歯類哺乳動物およ
び他の動物の製造方法は別の者により議論されている（Ｈｏｕｄｅｂｉｎｅ ａ
ｎｄ Ｃｈｏｕｒｒｏｕｔ，上掲；Ｐｕｒｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ ２４４：１２８１−１２８８，１９８９；ａｎｄ Ｓｉｍｍｓ ｅｔ ａｌ
．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６：１７９−１８３，１９８８）。
【０２８３】 すなわち，本発明は，本発明のキナーゼをコードするトランスジンまたはキナ
ーゼの発現に影響する遺伝子を含有するトランスジェニックの非ヒト哺乳動物を
提供する。そのようなトランスジェニックの非ヒト哺乳動物は，キナーゼの導入
の効果を研究するため，またはキナーゼの発現を制御（すなわち，追加の遺伝子
，アンチセンス核酸，またはリボザイムの導入により）するためのインビボ試験
系として特に有用である。
【０２８４】 "トランスジェニック動物"とは，細胞中に人工的に挿入されたＤＮＡを含む細
胞を有する動物である。該ＤＮＡは，その細胞から発生した動物のゲノムの一部
となる。好ましいトランスジェニック動物は，霊長類，マウス，ラット，ウシ，
ブタ，ウマ，ヤギ，ヒツジ，イヌおよびネコである。トランスジェニックＤＮＡ
は，ヒトキナーゼをコードすることができる。動物における自然の発現は，レセ
プターの発現を減少させるのに有効な量のアンチセンスＲＮＡまたはＤＮＡを与
えることにより減少させることができる。
【０２８５】遺伝子治療： 本発明のキナーゼまたはその遺伝子配列は，遺伝子治療においても有用である
（総説としてＭｉｌｌｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ３５７：４５５−４６０，１９９２
）。Ｍｉｌｌｅｒは，進歩により，ポジティブな初期の結果を示したヒト遺伝子
治療に対する実用的なアプローチが得られたと述べている。遺伝子治療の基本的
な科学はＭｕｌｌｉｇａｎ（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６−９３１，１９９
３）に記載されている。
【０２８６】 １つの好ましい態様においては，蛋白質キナーゼのコーディング配列を含む発
現ベクターを細胞に挿入し，細胞をインビトロで成長させ，次にこれを大量に患
者に注入する。別の好ましい態様においては，選択されたプロモーター（例えば
，強いプロモーター）を含むＤＮＡセグメントを，本発明のキナーゼをコードす
る内因性遺伝子を含む細胞中に，プロモーターセグメントが内因性キナーゼ遺伝
子の発現を増強する様式で移送する（例えば，プロモーターセグメントをこれが
内因性キナーゼ遺伝子に直接連結するように細胞内に移送する）。
【０２８７】 遺伝子治療は，腫瘍を標的とするキナーゼｃＤＮＡを含むアデノウイルスの使
用を含むことができる。全身キナーゼは，遺伝子工学処理した細胞の移植，その
ようなキナーゼをコードするウイルスの注入，または裸のＤＮＡの適当な組織へ
の注入により増加する。
【０２８８】 そのような複合体の活性を調節するために，標的細胞集団を，蛋白質複合体の
１またはそれ以上の変更された形の成分を導入することにより改変することがで
きる。例えば，標的細胞中における複合体成分の活性を減少させるか阻害するこ
とにより，そのような状態につながる異常なシグナル伝達事象を減少させ，阻害
し，または逆転させることができる。蛋白質複合体の他の成分と相互作用する能
力を保持しているが，シグナル伝達において機能することができない成分の欠失
またはミスセンス変異体を用いて，異常な，有害なシグナル伝達事象を阻害する
ことができる。
【０２８９】 ウイルス，例えばレトロウイルス，ワクチニアウイルス，アデノウイルス，ア
デノ随伴ウイルス，ヘルペスウイルス，いくつかのＲＮＡウイルス，またはウシ
パピローマウイルスに由来する発現ベクターを用いて，本発明の組換えキナーゼ
をコードするヌクレオチド配列（例えばｃＤＮＡ）を標的細胞集団（例えば腫瘍
細胞）に輸送することができる。当業者によく知られる方法を用いて，コーディ
ング配列を含む組換えウイルスベクターを構築することができる（Ｍａｎｉａｔ
ｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ，Ｎ．Ｙ．，１９８９；Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅ
ｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒ
ｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ
Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，１９８９）。あるいは，蛋白質配列を
コードする組換え核酸分子を裸のＤＮＡとしてまたは再構築系，例えば標的細胞
への輸送のためのリポソームまたは他の脂質系において用いることができる（例
えば，Ｆｅｌｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３７：３８７−８，１
９８９）。ヒト遺伝子治療において用いるための，プラスミドＤＮＡを細胞内に
直接輸送するいくつかの他の方法が存在し，これはプラスミドＤＮＡを蛋白質に
複合体化させることによりＤＮＡを細胞上のレセプターにターゲティングするこ
とを含む（Ｍｉｌｌｅｒ，上掲）。
【０２９０】 最も簡単な形においては，遺伝子輸送は，単にマイクロインジェクション工程
により細胞の核内に最小量のＤＮＡを注入することにより行うことができる（Ｃ
ａｐｅｃｃｈｉ，Ｃｅｌｌ ２２：４７９−８８，１９８０）。組換え遺伝子は
，いったん細胞内に導入されると，転写および翻訳に関する細胞の正常なメカニ
ズムにより認識されることができ，遺伝子産物が発現される。より多数の細胞に
ＤＮＡを導入するための他の方法も試みられている。これらの方法には，ＤＮＡ
をＣａＰＯ4で沈澱させピノサイトーシスにより細胞中に取り込ませるトランス
フェクション（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．７：２
７４５−５２，１９８７）；細胞を高圧パルスに暴露して膜に穴をあけるエレク
トロポレーション（Ｃｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ．１５：１３１１−２６，１９８７）；ＤＮＡを親油性ベヒクル中に封入し，
これを標的細胞と融合させるリポフェクチン／リポソーム融合（Ｆｅｌｇｎｅｒ
ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８４：７４
１３−７４１７，１９８７）；および小さい発射体に結合させたＤＮＡを用いる
粒子衝撃（Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
８７：９５６８−９５７２，１９９０）が含まれる。ＤＮＡを細胞内に導入する
他の方法は，ＤＮＡを化学的に修飾した蛋白質にカップリングさせることである
。
【０２９１】 また，アデノウイルス蛋白質がエンドソームを不安定化させ，ＤＮＡの細胞へ
の取り込みを促進しうることが示されている。アデノウイルスをＤＮＡ複合体を
含む溶液と混合するか，または蛋白質架橋試薬を用いてアデノウイルスに共有結
合したポリリジンにＤＮＡを結合させることにより，組換え遺伝子の取り込みお
よび発現が実質的に改良される（Ｃｕｒｉｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅ
ｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．６：２４７−５２，１９９２）。
【０２９２】 本明細書において用いる場合，"遺伝子輸送"とは，外来核酸分子を細胞中に導
入する工程を意味する。遺伝子輸送は，一般に，遺伝子によりコードされる特定
の産物の発現を可能とするために行われる。産物には，蛋白質，ポリペプチド，
アンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡ，または酵素的に活性なＲＮＡが含まれる。遺
伝子輸送は，培養細胞中で，または動物への直接投与により行うことができる。
一般に，遺伝子輸送には，核酸を非特異的レセプター媒介性相互作用により標的
細胞と接触させ，核酸を膜を通してまたはエンドサイトーシスにより細胞内に取
り込ませ，核酸を原形質膜またはエンドソームから細胞質内に放出させる工程が
含まれる。さらに，発現には，核酸が細胞の核に移動し，転写のための適当な核
因子に結合することが必要である。
【０２９３】 本明細書において用いる場合，"遺伝子治療"とは，遺伝子輸送の１つの形であ
り，本明細書において用いられる遺伝子輸送の定義の中に含まれ，特にインビボ
でまたはインビトロで細胞から治療用産物を発現させるための遺伝子治療を表す
。遺伝子輸送は，細胞でエクスビボで行い，次に患者に移植することにより，ま
たは，核酸または核酸蛋白質複合体を患者に直接投与することにより，行うこと
ができる。
【０２９４】 別の好ましい態様においては，キナーゼポリペプチドをコードする核酸配列を
有するベクターが提供され，ここで，核酸配列は特定の組織においてのみ発現さ
れる。組織特異的遺伝子発現を行う方法は，国際公開ＷＯ９３／０９２３６（１
９９２年１１月３日出願，１９９３年５月１３日公開）に記載される。
【０２９５】 上述したすべてのベクターにおいて，本発明のさらに別の観点は，ベクターに
含まれる核酸配列が，核酸の配列の一部または全てについて，上で定義したよう
な付加，欠失または修飾を含んでいてもよいことである。
【０２９６】 別の好ましい態様においては，遺伝子置換の方法が記載される。本明細書にお
いて用いる場合，"遺伝子置換"とは，インビボで発現しうる核酸配列を動物に供
給し，このことによりその動物に欠失しているかまたは不完全な内因性遺伝子の
機能を提供することを意味する。
【０２９７】医薬処方および投与経路 本明細書に記載される化合物は，それ自体で，または医薬組成物中でヒト患者
に投与することができる。医薬組成物では，組み合わせ療法におけるように，化
合物が他の活性成分と混合されているか，または適当な担体または賦形剤と混合
されている。本発明の化合物の処方および投与の手法は"Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’
ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，"ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈ
ｉｎｇＣｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡの最新版に見いだすことができる。
【０２９８】投与経路： 投与の適当な経路には，例えば，経口，直腸，経粘膜，または腸投与；非経口
輸送，例えば筋肉内，皮下，静脈内，骨髄内注入，ならびに鞘内，直接心室内，
腹膜内，鼻腔内，または眼内注射が含まれる。
【０２９９】 あるいは，化合物を全身ではなく局所的に投与してもよく，これには，例えば
，化合物を，しばしばデポ製剤または徐放製剤として直接固体腫瘍に注射するこ
とが含まれる。
【０３００】 さらに，薬物はターゲティングされたドラッグデリバリーシステムにおいて，
例えば腫瘍特異的抗体により被覆されたリポソーム中で投与してもよい。リポソ
ームは腫瘍にターゲティングされ，選択的に取り込まれるであろう。
【０３０１】組成物／処方： 本発明の医薬組成物は，当該技術分野においてよく知られる方法，例えば，限
定されないが，慣用の混合，溶解，顆粒化，糖衣作成，研和，乳化，カプセル封
入，捕捉，または凍結乾燥により製造することができる。
【０３０２】 すなわち，本発明にしたがって使用するための医薬組成物は，活性化合物を薬
剤として使用することができる製品に加工することを容易にする賦形剤および補
助剤を含む，１またはそれ以上の生理学的に許容しうる担体を用いて，慣用の方
法で製剤することができる。適切な処方は，選択される投与経路に依存する。
【０３０３】 注射用には，本発明の薬剤を水性溶液，好ましくはハンクス溶液，リンゲル溶
液，または生理的食塩緩衝液等の生理学的に適合性の緩衝液中で処方することが
できる。経粘膜投与用には，浸透すべき障壁に適した浸透剤が処方に用いられる
。そのような浸透剤は当該技術分野において一般に知られている。
【０３０４】 経口投与のためには，化合物を当該技術分野においてよく知られる薬学的に許
容しうる担体と混合することにより化合物を容易に処方することができる。その
ような担体は，本発明の化合物を，治療すべき患者による経口摂取のための錠剤
，丸薬，糖衣剤，カプセル，液体，ゲル，シロップ，スラリー，懸濁液等として
処方することを可能とする。適当な担体には，特に，ラクトース，ショ糖，マン
ニトール，またはソルビトール等の糖類；トウモロコシデンプン，小麦デンプン
，米デンプン，およびジャガイモデンプン等のセルロース製品，ゼラチン，トラ
ガカントゴム，メチルセルロース，ヒドロキシプロピルメチルセルロース，カル
ボキシメチルセルロースナトリウム，および／またはポリビニルピロリドン（Ｐ
ＶＰ）等の増量剤などの賦形剤が含まれる。所望の場合には，架橋されたポリビ
ニルピロリドン，寒天，またはアルギン酸またはその塩，例えばアルギン酸ナト
リウム等の崩壊剤を加えてもよい。
【０３０５】 糖衣剤のコアは，適当なコーティングとともに供給される。この目的のために
は，濃縮された糖溶液を用いることができる。これは，アラビアゴム，タルク，
ポリビニルピロリドン，カルボポールゲル，ポリエチレングリコール，および／
または二酸化チタン，ラッカー溶液，および適当な有機溶媒または溶媒混合物を
任意に含むことができる。識別のため，あるいは活性化合物の用量の異なる組合
せを特徴づけるため，染料または色素を錠剤または糖衣剤コーティングに添加し
てもよい。
【０３０６】 経口で使用することができる医薬製剤は，ゼラチンから作成されるプッシュフ
ィットカプセル，ならびにゼラチンおよびグリセロール，ソルビトール等の可塑
剤から作成される密封軟カプセルを含む。プッシュフィットカプセルは，活性成
分を，ラクトース等の増量剤，デンプン等の結合剤，および／またはタルクおよ
びステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤，さらに任意に安定剤との混合物中に含
むことができる。軟カプセルにおいては，活性化合物は脂肪油，流動パラフィン
，または液体ポリエチレングリコール等の適当な液体中に溶解または懸濁するこ
とができる。さらに安定剤を添加してもよい。経口投与用のすべての処方は，そ
のような投与に適当な用量で調製すべきである。
【０３０７】 口内投与のためには，組成物は，慣用的な方法で錠剤またはトローチ剤の形に
することができる。
【０３０８】 吸入による投与用には，本発明に従って用いられる化合物は，噴射剤，例えば
，ジクロロジフルオロメタン，トリクロロフルオロメタン，ジクロロテトラフル
オロエタン，二酸化炭素または他の適当な気体を用いて，加圧されたパックまた
はネブライザーからエアーゾルスプレイの形状で便利に輸送される。加圧された
エアーゾルの場合，用量単位は計量された量を送達するべく備えられたバルブに
より調節することができる。例えば吸入器または注入器において使用するための
ゼラチン製のカプセルおよびカートリッジは，化合物の粉末混合物と，ラクトー
スまたはデンプン等の適当な粉末基剤とを含むよう処方することができる。
【０３０９】 化合物は，例えばボーラス注射または連続注入による非経口投与用に処方する
ことができる。注射用の処方は，単位用量にて，例えばアンプルにて，あるいは
添加された保存料と共に多用量容器中で提供することができる。組成物は油性ま
たは水性のベヒクル中で，懸濁液，溶液，または乳濁液等の形状をとることがで
き，懸濁剤，安定剤および／または分散剤等の製剤物質を含んでいてもよい。
【０３１０】 非経口投与用の薬剤処方は，水溶性の形態の活性化合物の水性溶液を含む。さ
らに，活性化合物の懸濁液は，適当な油性の注入用懸濁液として調製することが
できる。適切な親油性溶媒またはベヒクルには，ゴマ油等の脂肪油，オレイン酸
エチルまたはトリグリセリド等の合成脂肪酸エステル，またはリポソーム等を含
む。水性の注射用懸濁液は，カルボキシメチルセルロースナトリウム，ソルビト
ール，またはデキストラン等の，懸濁液の粘度を増加させる物質を含んでいても
よい。任意に，懸濁液はまた，高度に濃縮された溶液の調製を可能にする，当該
化合物の溶解性を増加させる適当な安定剤または薬剤を含んでいてもよい。
【０３１１】 あるいは，活性成分は粉体の形態であって，使用前に適当なベヒクル，例えば
発熱物質を含まない滅菌水を用いて構成することができる。
【０３１２】 化合物はまた，例えばカカオバターまたは他のグリセリド等の慣用の坐剤基剤
を用いて，坐剤または停留浣腸等の直腸用組成物に処方することができる。
【０３１３】 上述した処方に加えて，化合物はまたデポ製剤として処方することができる。
そのような長時間作用性の処方は，埋込み（例えば皮下または筋肉内への）によ
るか，または筋肉内注射により投与することができる。すなわち，例えば，化合
物は，適当な高分子性または疎水性物質と共に（例えば許容される油剤中の乳濁
液として），イオン交換樹脂と共に，溶けにくい塩等の溶けにくい誘導体として
，処方することができる。
【０３１４】 本発明の化合物のための薬学的担体は，ベンジルアルコール，非極性界面活性
剤，水混和性有機ポリマーおよび水性相を含む共溶媒系であってもよい。共溶媒
系はＶＰＤ共溶媒系であってもよい。ＶＰＤは，３％（ｗ／ｖ）ベンジルアルコ
ール，８％（ｗ／ｖ）非極性界面活性剤ポリソルベート８０，および６５％（ｗ
／ｖ）ポリエチレングリコール３００を純粋エタノール中に作成した溶液である
。ＶＰＤ共溶媒系（ＶＰＤ：Ｄ５Ｗ）は，ＶＰＤを５％デキストロースの水溶液
中に１：１で希釈したものである。この共溶媒系は疎水性化合物をよく溶解し，
それ自体，全身投与に際して低い毒性を示す。本来，共溶媒系の比率は，その溶
解性および毒性特性を破壊することなく相当変化させることができる。さらに，
共溶媒成分の同一性も変化させることができる。例えば，他の低毒性非極性界面
活性剤をポリソルベート８０の代わりに用いることができ，ポリエチレングリコ
ールの分画サイズは様々でありうる。他の生体適合性ポリマー，例えばポリビニ
ルピロリドンをポリエチレングリコールの代わりに用いることができ，他の糖ま
たは多糖類をデキストロースの代わりに用いることができる。
【０３１５】 あるいは，疎水的医薬化合物のための他の輸送系を用いてもよい。リポソーム
および乳剤は，疎水的薬剤のための輸送用ベヒクルまたは担体の例としてよく知
られている。さらに，ある種の有機溶媒，例えばジメチルスルホキシドもまた用
いることができるが，しばしば毒性がより高くなる。さらに，化合物は，持続放
出系，例えば治療薬剤を含む固体疎水性ポリマーの準透過性マトリックスを用い
て輸送することができる。種々の持続放出材料が当業者にはよく知られている。
持続放出カプセルはその化学的性質に応じて，数週間から１００日を越える期間
，化合物を放出する。治療薬剤の化学的性質および生物学的安定性に応じて，さ
らに別の蛋白質安定化戦略を用いてもよい。
【０３１６】 医薬組成物はまた，適当な固体またはゲル相の担体または賦形剤を含んでいて
もよい。そのような担体または賦形剤の例には，限定されないが，炭酸カルシウ
ム，リン酸カルシウム，種々の糖，澱粉，セルロース誘導体，ゼラチン，および
ポリエチレングリコール等の高分子が含まれる。
【０３１７】 本発明のチロシンまたはセリン／トレオニンキナーゼ調節化合物の多くは，薬
学的に適合性のカウンターイオンとの塩として提供される。上で議論したように
，薬学的に適合性の塩は，多くの酸，例えば，限定されないが，塩酸，硫酸，酢
酸，乳酸，酒石酸，リンゴ酸，クエン酸等を用いて形成することができる。塩は
，水性または他のプロトン性溶媒において，対応する遊離塩基の形よりもより溶
解性である傾向にある。
【０３１８】適切な投与計画： 本発明において使用するのに適した医薬組成物には，活性成分がその意図され
る目的を達成するのに有効な量で含まれている組成物が含まれる。より詳細には
，治療上有効量とは，疾病の症状を予防，緩和または改善するのに，または治療
している被験者の生存を長くするのに有効な化合物の量を意味する。本発明の化
合物の治療上有効量の決定は，特に本明細書に提供される詳細な開示に鑑みて，
十分に当業者の能力の範囲内である。
【０３１９】 患者に投与すべき化合物の投与量および生物に化合物を投与するモードを決定
する方法は，米国特許出願０８／７０２，２８２（１９９６年８月２３日出願）
および国際出願ＷＯ９６／２２９７６（１９９６年８月１日公開）（この両方に
ついて，図面および表を含めその全体を本明細書の一部としてここに引用する）
に開示されている。当業者は，そのような記載が本発明に適用可能であり，容易
に適合させることができることを理解するであろう。
【０３２０】 適切な投与量は，種々の因子，例えば，治療する疾病のタイプ，用いられる特
定の組成物および患者のサイズおよび生理学的状態に依存する。本明細書に記載
される化合物についての治療上有効量は，最初は培養細胞および動物モデルから
見積もることができる。例えば，容量は，動物モデルにおいて，培養細胞アッセ
イにおいて決定されたＩＣ50を最初に考慮した循環濃度範囲を達成する用量を処
方することができる。動物モデルのデータを用いて，ヒトにおける有用な用量を
より正確に決定することができる。
【０３２１】 本発明の方法において用いられる任意の化合物について，治療上有効な用量は
，最初は細胞培養アッセイから見積もることができる。例えば，動物モデルにお
いて，培養細胞において決定されたＩＣ50（すなわちチロシンまたはセリン／ト
レオニンキナーゼ活性の最大阻害の半分を達成する試験化合物の濃度）を含む循
環濃度範囲を達成するような用量を処方することができる。そのような情報は，
ヒトまたは他の被験体における有用な用量のさらに正確な決定のために用いるこ
とができる。
【０３２２】 本明細書に記載される化合物の毒性および治療有効性は，培養細胞または実験
動物における標準的な薬理学的方法，例えばＬＤ50（集団の５０％に致死的な用
量）およびＥＤ50（集団の５０％に治療上有効な用量）を決定することにより，
決定することができる。毒性と治療上有効性の用量の比は治療指数であり，ＬＤ 50 とＥＤ50の比率として表すことができる。高い治療指数を示す化合物が好まし
い。これらの培養細胞アッセイおよび動物研究から得られるデータは，ヒトにお
いて用いるための投与量の範囲を定式化するために用いることができる。このよ
うな化合物の投与量は，好ましくは，ＥＤ50を含み毒性がほとんどまたは全くな
い循環濃度の範囲内にある。投与量は，用いる投与形態および用いる投与経路に
より，この範囲内で様々でありうる。正確な処方，投与経路，および投与量は，
個々の医師が，患者の状態を考慮して選択することができる（例えば，Ｆｉｎｇ
ｌ ｅｔ ａｌ．１９７５，"Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａ
ｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ"，Ｃｈ．１，ｐ．１を参照）。
【０３２３】 別の例においては，毒性研究は，血液細胞組成を測定することにより実施する
こともできる。例えば，以下のようにして，適当な動物モデルにおいて毒性研究
を行うことができる１）化合物をマウスに投与し（未処置対照マウスも用いなけ
ればならない）；２）各処置群の１匹のマウスの尾部静脈から定期的に血液試料
を採取し；そして３）試料を，赤血球および白血球数，血液細胞組成物，および
リンパ球対多形核細胞のパーセントについて分析する。各用量計画および対照か
らの結果の比較は，毒性が存在するか否かを示す。
【０３２４】 各毒性研究の終わりに動物を犠牲にすることにより（好ましくは，ｔｈｅ Ａ
ｍｅｒｉｃａｎ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉ
ｏｎ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ Ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ
Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｓｓｏｃ．Ｐａｎｅｌ ｏｎ Ｅ
ｕｔｈａｎａｓｉａ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｖｅｔｅｒｉ
ｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｓｓｏｃ．／２０２：２２９−２４９，１９９３
にしたがって），さらなる研究を実施することができる。次に，各処置群の代表
的動物を，肉眼剖検により転移の直接証拠，異常な不健康，または毒性について
調べることができる。組織の肉眼異常を記録し，組織を組織学的に調べる。体重
または血液成分の減少を引き起こす化合物，および主要な臓器に有害な影響を有
する化合物はあまり好ましくない。一般に，有害な影響が大きければ大きいほど
，化合物はより好ましくない。
【０３２５】 癌の治療においては，疎水性薬剤の予測される１日用量は１−５００ｍｇ／日
，好ましくは，１−２５０ｍｇ／日，最も好ましくは，１−５０ｍｇ／日の範囲
である。薬剤は，活性成分の血漿レベルが治療の有効性を維持するのに十分であ
るかぎり，より少ない頻度で投与することができる。
【０３２６】 血漿レベルは薬剤の有効性を反映するはずである。一般に，化合物が強力であ
ればあるほど，有効性を達成するのに必要な血漿レベルは低い。
【０３２７】 薬剤および代謝産物の血漿半減期および血漿，腫瘍，および主要な臓器におけ
る生物学的分布を決定して，疾患を阻害するのに最も適当な薬剤の選択を容易に
することができる。そのような測定を実施することができる。例えば，薬剤で処
置した動物の血漿についてＨＰＬＣ分析を行い，Ｘ線，ＣＡＴスキャン，および
ＭＲＩ等の検出方法を用いて放射性標識した化合物の位置を決定することができ
る。スクリーニングアッセイにおいて強力な阻害活性を示すが，不十分な薬物動
力学的特性を有する化合物は，化学構造の変更および再試験により最適化するこ
とができる。この点に関しては，優れた薬物動力学的特性を示す化合物をモデル
として用いることができる。
【０３２８】 投与量および間隔は，個々に，活性成分がキナーゼ調節効果を維持するのに十
分な血漿レベル，すなわち最小有効濃度（ＭＥＣ）を与えるよう調節することが
できる。ＭＥＣは，各化合物について異なるが，インビトロのデータ，例えば，
限定されないが，本明細書に記載されるアッセイを用いて，キナーゼの５０−９
０％の阻害を達成するのに必要な濃度から見積もることができる。ＭＥＣを達成
するのに必要な投与量は，個々の特性および投与経路に依存するであろう。しか
し，血漿濃度はＨＰＬＣアッセイまたはバイオアッセイを用いて決定することが
できる。
【０３２９】 投与間隔もまた，ＭＥＣ値を用いて決定することができる。化合物は，１０−
９０％の時間，好ましくは３０−９０％の時間，最も好ましくは５０−９０％の
時間，ＭＥＣより高い血漿レベルを維持する投与計画を用いて投与すべきである
。
【０３３０】 局所投与または選択的取り込みの場合には，薬剤の有効な局所濃度は血漿濃度
とは関係ないであろう。
【０３３１】 投与される特定の組成物の量は，もちろん，治療中の患者，患者の体重，苦痛
の激しさ，投与方法，および担当医師の判断に依存するであろう。
【０３３２】包装： 組成物は，所望の場合には，活性成分を含む１またはそれ以上の単位用量形を
含んでいてもよいパックまたはディスペンサー装置中で提供することができる。
パックは，例えば，ブリスターパックなどの金属またはプラスチック箔を含むこ
とができる。パックまたはディスペンサー装置には，投与の指示が添付されてい
てもよい。パックまたはディスペンサー装置はまた，薬剤の製造，使用，または
販売を規制する政府機関によって規定された形式の，容器に付随した注意書が添
付されていてもよく，その注意書はヒトまたは獣医学的投与用のポリヌクレオチ
ドの形状の当該機関による承認を反映するものである。そのような注意書は，例
えば米国食品医薬品局により処方箋調剤薬として承認されたラベルによるものか
，または承認された製品に差込まれたものでもよい。適合した薬学的担体中に処
方された，本発明の化合物を含む組成物もまた製造され，適当な容器内に配置さ
れ，さらに指示された条件による処置のためにラベルを付すことができる。ラベ
ル上に示される適切な状態としては，腫瘍の治療，新脈管形成の阻害，線維症，
糖尿病等の治療が挙げられる。
【０３３３】機能的誘導体 本発明はまた，本発明のポリペプチドまたは核酸の機能的誘導体を提供する。
"機能的誘導体"は，本発明のポリペプチドまたは核酸の"化学的誘導体"，"フラ
グメント"または"変種"を意味し，これらの用語は以下に定義される。機能的誘
導体は，蛋白質の機能の少なくとも一部，例えば蛋白質に特異的な抗体との反応
性，非触媒ドメインにより媒介される酵素活性または結合活性を保持しており，
これにより本発明にしたがう有用性を有する。遺伝コードの縮重のため，多くの
異なる核酸配列が同じアミノ酸配列をコードすることができることは当該技術分
野においてよく知られている。同じく，アミノ酸を保存的に変更して，元の機能
性的を保持する蛋白質またはポリペプチドを得ることができることも当該技術分
野においてよく知られている。いずれの場合においても，すべての順列が本明細
書の開示によりカバーされることが意図される。
【０３３４】 本明細書に記載される単離された核酸分子の機能的等価物も本発明の範囲内に
含まれる。遺伝コードの縮重のため，あるコドンを同じアミノ酸を規定する他の
コドンで置き換え，同じ蛋白質を生じさせることができる。既知のアミノ酸は，
メチオニンおよびトリプトファンを除き，２以上のコドンによりコードすること
ができるため，核酸配列は実質的に様々でありうる。すなわち，本発明の遺伝子
の一部または全部を合成して，配列番号１，配列番号２，配列番号３，配列番号
４，配列番号５，配列番号６，配列番号７，配列番号８，配列番号９，配列番号
１０，配列番号１１，配列番号１２，配列番号１３，配列番号１４，配列番号１
５，配列番号１６，配列番号１７，配列番号１８，配列番号１９，配列番号２０
，配列番号２１，配列番号２２，配列番号２３，配列番号２４，配列番号２５，
配列番号２６，配列番号２７，配列番号２８，配列番号２９，配列番号３０，配
列番号３１，配列番号３２，配列番号３３，配列番号３４，配列番号３５，配列
番号３６，配列番号３７，配列番号３８，配列番号３９，配列番号４０，配列番
号４１，配列番号４２，配列番号４３，配列番号４４，配列番号４５，配列番号
４６，配列番号４７，配列番号４８，配列番号４９，配列番号５０，配列番号５
１，配列番号５２，配列番号５３，配列番号５４，配列番号５５，配列番号５６
，および配列番号５７に記載される配列からなる群より選択される核酸配列と有
意に異なる核酸配列を得ることができる。しかし，これによりコードされるアミ
ノ酸配列は保存される。さらに，核酸配列は，配列番号１，配列番号２，配列番
号３，配列番号４，配列番号５，配列番号６，配列番号７，配列番号８，配列番
号９，配列番号１０，配列番号１１，配列番号１２，配列番号１３，配列番号１
４，配列番号１５，配列番号１６，配列番号１７，配列番号１８，配列番号１９
，配列番号２０，配列番号２１，配列番号２２，配列番号２３，配列番号２４，
配列番号２５，配列番号２６，配列番号２７，配列番号２８，配列番号２９，配
列番号３０，配列番号３１，配列番号３２，配列番号３３，配列番号３４，配列
番号３５，配列番号３６，配列番号３７，配列番号３８，配列番号３９，配列番
号４０，配列番号４１，配列番号４２，配列番号４３，配列番号４４，配列番号
４５，配列番号４６，配列番号４７，配列番号４８，配列番号４９，配列番号５
０，配列番号５１，配列番号５２，配列番号５３，配列番号５４，配列番号５５
，配列番号５６，および配列番号５７に記載される配列，またはその誘導体．か
らなる群より選択される核酸の式またはその誘導体の５’−末端および／または
３’−末端で少なくとも１つのヌクレオチドを付加，欠失または置換することに
より得られるヌクレオチド配列を含んでいてもよい。その付加，欠失または置換
が，ヌクレオチド配列によりコードされる，配列番号１，配列番号２，配列番号
３，配列番号４，配列番号５，配列番号６，配列番号７，配列番号８，配列番号
９，配列番号１０，配列番号１１，配列番号１２，配列番号１３，配列番号１４
，配列番号１５，配列番号１６，配列番号１７，配列番号１８，配列番号１９，
配列番号２０，配列番号２１，配列番号２２，配列番号２３，配列番号２４，配
列番号２５，配列番号２６，配列番号２７，配列番号２８，配列番号２９，配列
番号３０，配列番号３１，配列番号３２，配列番号３３，配列番号３４，配列番
号３５，配列番号３６，配列番号３７，配列番号３８，配列番号３９，配列番号
４０，配列番号４１，配列番号４２，配列番号４３，配列番号４４，配列番号４
５，配列番号４６，配列番号４７，配列番号４８，配列番号４９，配列番号５０
，配列番号５１，配列番号５２，配列番号５３，配列番号５４，配列番号５５，
配列番号５６，および配列番号５７に記載される配列からなる群より選択される
アミノ酸配列を変更しない限り，任意のヌクレオチドまたはポリヌクレオチドを
このように用いることができる。例えば，本発明は，本発明の核酸配列またはそ
の誘導体の５’−末端に開始コドンとしてＡＴＧを付加することにより，または
本発明のヌクレオチド配列またはその誘導体の３’−末端に終止コドンとしてＴ
ＴＡ，ＴＡＧまたはＴＧＡを付加することにより得られる任意の核酸配列を含む
ことを意図する。さらに，本発明の核酸分子は，必要に応じて，これらの５’−
末端および／または３’−末端に付加された制限エンドヌクレアーゼ認識部位を
有することができる。
【０３３５】 所定の核酸配列のそのような機能的変更により，これに融合した外来核酸配列
によりコードされる異種蛋白質の分泌および／またはプロセシングが促進される
機会が与えられる。したがって，遺伝コードにより許容される本発明のキナーゼ
遺伝子およびそのフラグメントのヌクレオチド配列のすべての変種は本発明に含
まれる。
【０３３６】 さらに，コドンを削除するかまたは１またはそれ以上のコドンを縮重コドン以
外のコドンと置換して，構造的に改変されているが，未改変核酸分子により産生
されるポリペプチドと実質的に同じ有用性または活性を有するポリペプチドを製
造することが可能である。当該技術分野において認識されているように，２つの
ポリペプチドは機能的に同等であり，これらの核酸分子の間の相違が遺伝コード
の縮重に関連しない場合であっても，これらの製造を生じさせる２つの核酸分子
も機能的に同等である。
【０３３７】 複合体の"化学的誘導体"は，通常は蛋白質の一部ではない追加の化学的成分を
含む。蛋白質またはペプチドの共有結合修飾は，本発明の範囲内に含まれる。そ
のような修飾は，以下に記載するように，ペプチドの標的アミノ酸残基を選択さ
れた側鎖または末端残基と反応しうる有機誘導化剤と反応させることにより，分
子中に導入することができる。
【０３３８】 システイン残基は，最も一般的にはアルファ−ハロアセテート（および対応す
るアミン），例えばクロロ酢酸またはクロロアセトアミドと反応させて，カルボ
キシメチルまたはカルボキシアミドメチル誘導体を得る。システイン残基は，ブ
ロモトリフルオロアセトン，クロロアセチルホスフェート，Ｎ−アルキルマレイ
ミド，３−ニトロ−２−ピリジルジスルフィド，メチル２−ピリジルジスルフィ
ド，ｐ−クロロ水銀ベンゾエート，２−クロロ水銀−４−ニトロフェノール，ま
たはクロロ７−ニトロベンゾ−２−オキサ−１，３−ジアゾールと反応させるこ
とにより誘導化する。
【０３３９】 ヒスチジン残基は，ｐＨ５．５−７．０でジエチルプロカーボネートと反応さ
せることにより誘導化することができる。これは，この薬剤がヒスチジンの側鎖
に比較的特異的であるためである。臭化パラブロモフェナシルもまた有用である
。反応は，好ましくは，０．１Ｍカコジル酸ナトリウム中でｐＨ６．０で行う。
【０３４０】 リジンおよびアミノ末端残基はコハク酸または他のカルボン酸無水物と反応さ
せる。これらの薬剤による誘導化は，リジン残基の電荷を逆転させる効果を有す
る。１級アミン含有残基を誘導化するための他の適当な試薬には，イミドエステ
ル，例えば，メチルピコリンイミデート；ピリドキサールホスフェート；ピリド
キサール；クロロホウ化水素；トリニトロベンゼンスルホン酸；Ｏ−メチルイソ
ウレア；２，４−ペンタンジオン；およびトランスアミナーゼに触媒されるグリ
オキシレートとの反応が含まれる。
【０３４１】 アルギニン残基は慣用的な試薬の１つまたはいくつかと反応させることにより
修飾する。これには，例えば，フェニルグリオキサール，２，３−ブタンジオン
，１，２−シクロヘキサンジオン，およびニンヒドリンがある。アルギニン残基
の誘導化には，グアニジン官能基の高いｐＫａのため，反応をアルカリ条件中で
行うことが必要である。さらに，これらの試薬はリジンの基ならびにアルギニン
アルファアミノ基とも反応することができる。
【０３４２】 チロシン残基は，芳香族性ジアゾニウム化合物またはテトラニトロメタンと反
応させることにより光学的標識を導入するための修飾のよく知られる標的である
。最も一般的には，Ｎ−アセチルイミダゾールおよびテトラニトロメタンを用い
て，それぞれＯ−アセチルチロシル種および３−ニトロ誘導体を生成する。
【０３４３】 カルボキシル側鎖（アスパラギン酸およびグルタミン酸）は，カルボジイミド
（Ｒ’−Ｎ−Ｃ−Ｎ−Ｒ’），例えば１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリ
ニル（４−エチル）カルボジイミドまたは１−エチル−３−（４−アゾニア−４
，４−ジメチルペンチル）カルボジイミドと反応させることにより，選択的に修
飾する。さらに，アスパラギン酸およびグルタミン酸残基は，アンモニウムイオ
ンと反応させることにより，アスパラギンおよびグルタミン残基に変換する。
【０３４４】 グルタミンおよびアスパラギン残基は，しばしば脱アミド化して，対応するグ
ルタミン酸およびアスパラギン酸残基に変換する。あるいは，これらの残基をよ
り穏和な酸性条件下で脱アミド化する。これらの残基のいずれの形も本発明の範
囲内である。
【０３４５】 二官能性薬剤による誘導化は，例えば，蛋白質の成分ペプチドを互いに，また
は複合体中の他の蛋白質と，または水不溶性支持体マトリクスと，または他の高
分子担体と架橋するのに有用である。一般に用いられる架橋薬剤としては，例え
ば，１，１−ビス（ジアゾアセチル）−２−フェニルエタン，グルタルアルデヒ
ド，Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル，例えば，４−アジドサリチル酸の
エステル，ホモ二官能性イミドエステル（３，３’−ジチオビス（スクシンイミ
ジルプロピオネート）等のジスクシンイミジルエステルを含む），および二官能
性マレイミド，例えばビス−Ｎ−マレイミド−１，８−オクタンが挙げられる。
メチル−３−［ｐ−アジドフェニル）ジチオールプロピオイミデート等の誘導化
薬剤により，光の存在下で架橋を形成しうる光活性化可能な中間体が得られる。
あるいは，反応性の水不溶性マトリクス，例えば臭化シアン活性化炭水化物およ
び米国特許３，９６９，２８７；３，６９１，０１６；４，１９５，１２８；４
，２４７，６４２；４，２２９，５３７；および４，３３０，４４０に記載され
る反応性基質を蛋白質固定化のために用いることができる。
【０３４６】 他の修飾としては，プロリンおよびリジンのヒドロキシル化，セリンまたはト
レオニン残基のヒドロキシル基のリン酸化，リジン，アルギニン，およびヒスチ
ジン側鎖のアルファアミノ基のメチル化（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｔ．Ｅ．，Ｐｒ
ｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅ
ｒｔｉｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，
ｐｐ．７９−８６（１９８３）），Ｎ末端アミンのアセチル化，および場合によ
りＣ末端カルボキシル基のアミド化が挙げられる。
【０３４７】 そのような誘導化された成分は，安定性，溶解性，吸収，生物学的半減期等を
改良することができる。あるいは，これらの成分は，蛋白質複合体の望ましくな
い副作用を排除するかまたは緩和することができる。そのような効果を媒介しう
る成分は，例えば，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ
．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９９０）に開示されている。
【０３４８】 "フラグメント"との用語は，これが由来する全長ポリペプチドより短い長さを
有する蛋白質または複合体のアミノ酸配列に由来するポリペプチドを示すものと
して用いられる。そのようなフラグメントは，例えば，全長蛋白質の蛋白質分解
性切断により製造することができる。好ましくは，フラグメントは，蛋白質をコ
ードするＤＮＡ配列を適当に改変して，Ｃ末端，Ｎ末端，および／または天然配
列中の１またはそれ以上の部位において１またはそれ以上のアミノ酸を除去する
ことにより，組換えにより得る。蛋白質のフラグメントは，本明細書に記載され
るように，シグナル伝達を調節するように作用する物質のスクリーニングに有用
である。そのようなフラグメントは，天然の複合体の１またはそれ以上の特徴的
部分を保持しているであろうことが理解される。そのような保持される特徴の例
としては，触媒的活性；基質特異性；無傷の細胞中における他の分子との相互作
用；制御機能；または天然の複合体またはそのエピトープに対する抗体との結合
が挙げられる。
【０３４９】 本発明の範囲内に入ることが意図される別の機能的誘導体は，天然のポリペプ
チドに対して，１またはそれ以上のアミノ酸を欠失しているか，追加のまたは置
換されたアミノ酸を含む"変種"ポリペプチドである。変種は，蛋白質のＤＮＡコ
ーディング配列を適当に改変して，Ｃ末端，Ｎ末端，および／または天然配列中
の１またはそれ以上の部位において１またはそれ以上のアミノ酸のためのコドン
を付加，除去，および／または改変することにより，天然に生ずる複合体成分か
ら誘導することができる。追加，置換および／または追加アミノ酸を有するその
ような変種は，上述するように，天然の蛋白質の１またはそれ以上の特徴的部分
を保持していることが理解される。
【０３５０】 アミノ酸残基が除去，挿入および／または置換されている蛋白質の機能的誘導
体は，当業者によく知られる標準的な手法を用いて製造することができる。例え
ば，機能的誘導体の改変された成分は，改変されたコード配列を生成するように
，ＤＮＡコード配列中のヌクレオチドを修飾する部位特異的突然変異手法（Ａｄ
ｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８３，ＤＮＡ ２：１８３に例示されている）
を用いて，その後上述したような手法を用いてこの組換えＤＮＡを原核生物また
は真核生物宿主細胞中で発現させることにより，製造することができる。あるい
は，アミノ酸が削除，挿入および／または置換されている蛋白質は，当該技術分
野においてよく知られる方法を用いて，直接化学合成により便利に製造すること
ができる。蛋白質の機能的誘導体は，典型的には天然の蛋白質と同じ質の生物学
的活性を示す。
【０３５１】表およびその記載 表１は，各遺伝子の名前，各遺伝子の分類，配列中のオープンリーディングフ
レームの位置，および対応するペプチドの長さを表す。データは，左から右に，
以下のものを表す："遺伝子名"，"ＩＤ＃ｎａ"，"ＩＤ＃ａａ"，"ＦＬ／Ｃａｔ"
，"スーパーファミリー"，"グループ"，"ファミリー"，"ＮＡ長さ"，"ＯＲＦ開
始"，"ＯＲＦ終了"，"ＯＲＦ長さ"，および"ＡＡ長さ"。"遺伝子名"は，キナー
ゼまたはキナーゼ様酵素をコードする配列に与えられた名前を表す。各遺伝子は
，"ＳＧＫ"名称およびその後の番号により表される。ＳＧＫ名は，通常は，１つ
の連続配列（"コンティグ"）に構築された多数の重複配列を表す。"ＩＤ＃ｎａ"
および"ＩＤ＃ａａ"は，本明細書において各核酸およびアミノ酸配列に与えられ
た同定番号を表す。"ＦＬ／Ｃａｔ"は，遺伝子の長さを表し，ＦＬは全長を，"
Ｃａｔ"は触媒ドメインのみが示されていることを表す。このカラム中の"Ｐａｒ
ｔｉａｌ"とは，配列が部分的蛋白質キナーゼ触媒ドメインをコードすることを
示す。"スーパーファミリー"とは，遺伝子が蛋白質キナーゼまたは蛋白質−キナ
ーゼ様であるか否かを識別する。"グループ"および"ファミリー"は，配列ホモロ
ジーにより定義され，先に確立されている系統発生分析に基づく蛋白質キナーゼ
の分類を表す［Ｈａｒｄｉｅ，Ｇ．ａｎｄ ＨａｎｋｓＳ．Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅ
ｉｎ Ｋｉｎａｓｅ Ｂｏｏｋ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（１９９５）お
よびＨｕｎｔｅｒ Ｔ．ａｎｄ Ｐｌｏｗｍａｎ，Ｇ．Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂ
ｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９７７）２２：１８−２２および
Ｐｌｏｗｍａｎ Ｇ．Ｄ． ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．９６：１３６０３−１３６１０）］。"ＮＡ長さ"は，対応する
核酸配列の長さをヌクレオチドで表す。"ＯＲＦ開始"は，オープンリーディング
フレームの開始ヌクレオチドを表す。"ＯＲＦ終了"は，オープンリーディングフ
レームの終止コドンを除く最後のヌクレオチドを表す。"ＯＲＦ長さ"は，オープ
ンリーディングフレームの長さ（終止コドンを除く）をヌクレオチドで表す。"
ＡＡ長さ"は，対応するヌクレオチド配列においてコードされるペプチドの長さ
をアミノ酸で表す。
【０３５２】 表１−オープンリーディングフレーム
【表１】
【表２】
【表３】
【表４】
【表５】
【表６】
【０３５３】 表２は，本明細書に記載される遺伝子の以下の特徴を示す：染色体位置，一塩
基多型（ＳＮＰｓ），ｄｂＥＳＴにおける表示，および反復領域。示されるデー
タは，左から右に，以下のとおりである："遺伝子名"，"ＩＤ＃ｎａ"，"ＩＤ＃
ａａ"，"ＦＬ／Ｃａｔ"，"スーパーファミリー"，"グループ"，"ファミリー"，"
染色体"，"ＳＮＰｓ"，"ｄｂＥＳＴ＿ヒット"，および"反復"。最初の７つのカ
ラム（すなわち，"遺伝子名"，"ＩＤ＃ｎａ"，"ＩＤ＃ａａ"，"ＦＬ／Ｃａｔ"，
"スーパーファミリー"，"グループ"，"ファミリー"）の内容は，表１について上
述したとおりである。"染色体"は，遺伝子の細胞遺伝学的位置を表す。"ＳＮＰ
ｓ"カラムの情報は，候補一塩基多型（ＳＮＰｓ）の核酸位置および縮重性を示
す。例えば，ＳＧＫ３８６について，"ＳＮＰｓ"カラムは"８３５＝Ｍ"を含み，
これは，位置８３５においてＣおよびＡの両方の例が存在することを示す（Ｍ＝
ＣまたはＡ）。"ｄｂＥＳＴヒット"は，対応する遺伝子に対して少なくとも１０
０ｂｐの１００％同一性を含む，ＥＳＴの公共のデータベース（ｄｂＥＳＴ，ｈ
ｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｂＥＳＴ／ｉｎｄ
ｅｘ．ｈｔｍｌ）中の登録物の受託番号を示す。これらのＥＳＴはｄｂＥＳＴの
ｂｌａｓｔｎにより同定した。"反復"は，複雑性が低く，いくつかの別々の遺伝
子中に存在する約２０ｂｐの長さの短い配列の位置に関する情報を含む。これら
の反復は，ＮＣＢＩ（ｎｒｎａ）の非重複核酸データベースに対するＤＮＡ配列
のｂｌａｓｔｎにより同定した。この反復カラムに含まれるためには，配列は典
型的にはその長さにわたり１００％同一性を有し，典型的には少なくとも５つの
異なる遺伝子中に存在する。
【０３５４】 表２−ＣＨＲ，ＳＮＰｓ，ｄｂＥＳＴ，反復
【表７】
【表８】
【表９】
【表１０】
【表１１】
【表１２】
【０３５５】 表３は，キナーゼ触媒ドメインの程度および境界を示す。カラムの標題は以下
のとおりである："遺伝子名"，"ＩＤ＃ｎａ"，"ＩＤ＃ａａ"，"ＦＬ／Ｃａｔ"，
"プロファイル開始"，"プロファイル終了"，"キナーゼ開始"，"キナーゼ終了"，
および"プロファイル"。最初の７つのカラム（すなわち，"遺伝子名"，"ＩＤ＃
ｎａ"，"ＩＤ＃ａａ"，"ＦＬ／Ｃａｔ"，"スーパーファミリー"，"グループ"，"
ファミリー"）の内容は表１について上述したとおりである。"プロファイル開始
"，"プロファイル終了"，"キナーゼ開始"および"キナーゼ終了"は，隠れマルコ
フモデルを用いて得た触媒的範囲の境界を規定するデータを表す。プロファイル
は完全蛋白質キナーゼ触媒ドメインに対応する２６１アミノ酸の長さを有する。
プロファイルが全長触媒ドメインを認識する蛋白質は，"プロファイル開始"が１
であり，"プロファイル終了"が２６１である。部分的触媒ドメインを有する遺伝
子は，"プロファイル開始"が１より大きく（キナーゼドメインの最初が欠失して
いることを示す），および／または"プロファイル終了"が２６１より小さい（キ
ナーゼドメインのＣ末端が欠失していることを示す）。全体の蛋白質中の触媒ド
メインの境界は，"キナーゼ開始"および"キナーゼ終了"のカラムで示される。"
プロファイル"は，完全（ｃｏｍｐｌｅｔｅ）であるかまたは"Ｓｍｉｔｈ Ｗａ
ｔｅｒｍａｎ"（部分的）であることを示す。キナーゼ触媒ドメインの多重配列
アラインメントから出発して，２つの隠れマルコフモデルを構築した。その一方
は，触媒ドメインに対する部分的マッチを可能とする；これは"ローカル"ＨＭＭ
であり，配列マッチングにおけるスミス・ウォーターマンアラインメントと類似
する。他方の"完全"モデルは，完全触媒ドメインに対するマッチのみを可能とす
る；これは"グローバル"ＨＭＭであり，配列マッチングにおけるＮｅｅｄｌｅｍ
ａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアラインメントと類似する。スミス・ウォーターマンのロー
カルモデルはより特異的であり，キナーゼ触媒ドメインに対するフラグメント的
なマッチを可能とする。一方，グローバルな"完全"モデルはより感度が高く，遠
隔のホモログ同定を可能とする。
【０３５６】 表３−キナーゼドメイン
【表１３】
【表１４】
【表１５】
【表１６】
【表１７】
【表１８】
【０３５７】 表４は，非重複蛋白質配列のＮＣＢＩデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．
ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｅｎｔｒｅｚ／ｐｒｏｔｅｉｎ．ｈｔｍｌ
）に対するアミノ酸配列のスミス・ウォーターマン類似性検索（マトリックス：
Ｐａｍｌ００；ギャップオープン／イクステンションペナルティー１２／２）の
結果を示す。カラム標題は以下のとおりである："遺伝子名"，"ＩＤ＃ｎａ"，"
ＩＤ＃ａａ"，"ＦＬ／Ｃａｔ"，"スーパーファミリー"，"グループ"，"ファミリ
ー"，"Ｐスコア"，"ａａ長さ"，"ａａＩＤマッチ"，"％同一性"，"％類似性"，"
ＡＣＣ＃ｎｒａａマッチ"，および"説明"．最初の８つのカラム（すなわち，"遺
伝子名"，"ＩＤ＃ｎａ"，"ＩＤ＃ａａ"，"ＦＬ／Ｃａｔ"，"一連番号"，"スーパ
ーファミリー"，"グループ"，"ファミリー"）の内容は表１について上述したと
おりである。"Ｐスコア"はスミス・ウォーターマン確率スコアを表す。この数値
はアラインメントが偶然により生ずるおよその確率を表す。すなわち，非常に低
い数値，例えば２．１０Ｅ−６４は，クエリーとデータベース標的との間に非常
に顕著なマッチがあることを示す。"ａａ長さ"は，蛋白質の長さをアミノ酸で表
す。"ａａＩＤマッチ"は，アラインメント中で同一であるアミノ酸の数を示す。
"％同一性"は，アラインメントした領域にわたって同一であるヌクレオチドのパ
ーセントを示す。"％類似性"は，アラインメント全体にわたって類似するアミノ
酸のパーセントを示す。"ＡＣＣ＃ｎｒａａマッチ"は，非重複蛋白質のＮＣＢＩ
データベース中で最も類似する蛋白質の受託番号を示す。"説明"は，非重複蛋白
質ＮＣＢＩデータベース中で最も類似する蛋白質の名前を含む。
【０３５８】 表４−スミス・ウォーターマン
【表１９】
【表２０】
【表２１】
【表２２】
【表２３】
【０３５９】 表５は，蛋白質中のキナーゼ触媒ドメイン以外のドメインを表す。カラム標題
は以下のとおりである："遺伝子名"，"ＩＤ＃ｎａ"，"ＩＤ＃ａａ"，"触媒外ド
メイン（ＡＡ境界）"。触媒外ドメインは，Ｐｆａｍ（多重配列アラインメント
の大収集物）および多くの共通蛋白質ドメインをカバーする隠れマルコフモデル
を用いて，アミノ酸配列の隠れマルコフ検索を実施することにより同定した。Ｐ
ｆａｍのバージョン５．１（Ｓｅｐｔ２０００）は２０１５の蛋白質ファミリー
についてのアラインメントおよびモデルを含む（ｈｔｔｐ：／／ｐｆａｍ．ｗｕ
ｓｔｌ．ｅｄｕ／ｆａｑ．ｓｈｔｍｌ）。ＰＦＡＭアラインメントはｈｔｔｐ：
／／ｐｆａｍ．ｗｕｓｔｌ．ｅｄｕ／ｈｍｍｓｅａｒｃｈ．ｓｈｔｍｌからダウ
ンロードし，ＨＭＭｒ検索はＴｉｍｅｌｏｇｉｃコンピュータを用いて現場で実
施した（ＴｉｍｅＬｏｇｉｃ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｉｎｃｌｉｎｅ Ｖｉ
ｌｌａｇｅ，ＮＶ）。プロファイルを構築するために用いたＰＦＡＭ受託番号，
アミノ酸での長さおよび蛋白質の数は以下に示される。
【０３６０】 ＣＮＨドメイン（ＰｆａｍＰＦ００７８０）は約３００アミノ酸の長さである
。これは，２３のメンバーから構築され，ＮＩＫ１様キナーゼ，マウスシトロン
および酵母ＲＯＭ１およびＲＯＭ２に見いだされる。ＰＫＣ末端ドメイン（ＰＦ
００４３３）は約６６アミノ酸の長さである。これは２３５のメンバーから構築
され，多数の種からの蛋白質キナーゼＣに見いだされる。ホルボルエステル／ジ
アシルグリセロール結合ドメイン（Ｃｌドメイン）（ＰＦ００１３０）は約５０
アミノ酸の長さである。これは２６９のメンバーから構成され，多数の種からの
蛋白質キナーゼＣに見いだされる。Ｇ蛋白質シグナリングドメインのＲＧＳレギ
ュレータ（ＰＦ００６１５）は約１２５アミノ酸の長さである。これは１０３の
メンバーから構築され，ＲＧＳ（Ｇ蛋白質シグナリングのレギュレータ）ファミ
リーメンバーに見いだされ，ヘテロ三量体Ｇ−蛋白質アルファ−サブユニットの
ＧＴＰａｓｅ活性化蛋白質を含む。ＰＤＺドメイン（ＰＦ００５９５）は約８３
アミノ酸の長さである。これは７２１のメンバーから構築され，膜付随蛋白質に
見いだされ，グアニル酸キナーゼのＭＡＧＵＫファミリーのホモログ，いくつか
の蛋白質ホスファターゼおよび蛋白質キナーゼを含む。ＰＤＺドメインはまた，
神経一酸化窒素シンターゼならびにジストロフィン付随蛋白質のサブファミリー
（集合的にシントロフィンとして知られる）にも見いだされる。オクチコサペプ
チドドメイン（ＰＦ００５６４）は約３０アミノ酸の長さである。これはＮＡＤ
ＰＨオキシダーゼサブユニット，ソーティングネキシンおよびＰｔｄＩｎｓ３−
キナーゼを含む４７のメンバーから構築される。このモチーフは，Ｃａ＋＋結合
に関与しているかもしれない。サイクリンドメイン（ＰＦ００１３４）は約２６
７アミノ酸の長さである。これはシクリン，ＴＦＩＩＢおよびＲＢ／ｐｌ０７を
含む２３３のメンバーから構成される。ＲＮＡ認識ドメイン（ＲＲＭ，ＲＢＤ，
またはＲＮＰとしても知られる）（ＰＦ０００７６）は約７１アミノ酸の長さで
ある。これは種々のＲＮＡ結合蛋白質，例えばｈｎＲＮＰ蛋白質，選択的スプラ
イシングの制御における関与が示唆されている蛋白質，および蛋白質成分を含む
，１３３５のメンバーから構築される。このモチーフはまたいくつかの一本鎖Ｄ
ＮＡ結合蛋白質にも見いだされる。ミオシンヘッドドメイン（ＰＦ０００６３）
は約４０９アミノ酸の長さである。これはモーター蛋白質，例えばミオシンを含
む３１０のメンバーから構築される。アンキリンドメイン（ＰＦ０００２３）は
約３３アミノ酸の長さである。これは，構造蛋白質のアンキリンファミリー，Ｃ
ＤＫ阻害剤，例えばｐｌ９ＩＮＫ４ｄ，および他のシグナリング蛋白質，例えば
核因子ＮＦ−カッパ−ｂｐ５０サブユニットおよびＢｃｌ３（ｂ−細胞リンパ腫
３コード蛋白質）等を含む，２２２０のメンバーから構築される。アンキリン反
復は，一般に，ベータ，アルファ，アルファ，ベータの順の二次構造から構成さ
れる。反復は会合して高次構造を形成する。エフィリンレセプターリガンド結合
ドメイン（ＰＦ０１４０４）は約１７１アミノ酸の長さである。これはレセプタ
ーチロシンキナーゼのＥｐｈファミリーを含む５２のメンバーから構築される。
フィブロネクチンタイプＩＩＩドメイン（ＰＦ０００４１）は約８５アミノ酸の
長さである。これは，種々の貫膜および膜付随蛋白質，例えばフィブロネクチン
，サイトカインレセプター，レセプターチロシンキナーゼ，レセプターチロシン
ホスファターゼ等を含む，２４６８のメンバーから構築される。ＳＡＭドメイン
（ステライルアルファモチーフ）（ＰＦ００５３６）は約１１０アミノ酸の長さ
である。これは６４のメンバーから構築される。ＳＡＭドメインは，多様な真核
生物において多数の発生プロセスの制御に関与する，進化的に保存された蛋白質
結合領域である。ＳＡＭドメインは他のＳＡＭドメインとホモおよびヘテロオリ
ゴマー化する能力を通じて蛋白質相互作用モジュールとして機能する可能性があ
る。ＤＡＧジアシルグリセロール（ＤＡＧ）ドメイン（ＰＦ００６０９）は約１
６６アミノ酸の長さである。これは蛋白質キナーゼのジアシルグリセロールキナ
ーゼサブファミリーからの２７のメンバーから構築される。このドメインは，ジ
アシルグリセロール結合におけるアクセサリドメインであると仮定されている。
ＲＯＩ１ドメイン（ＰＦ０１１６３）は約５７０アミノ酸の長さであり，当該技
術分野において一般に知られている（例えば，ｗｗｗ．ｐｆａｍ．ｗｕｓｔｌ．
ｅｄｕを参照）。これは１４のメンバーから構築され，非典型的Ａキナーゼをコ
ードすると考えられる。
【０３６１】 表５−触媒外ドメイン
【表２４】
【０３６２】 表６は，４６９の組織および細胞株に由来するｃＤＮＡのマイクロアレイを用
いて本発明に開示されるキナーゼの遺伝子発現を分析した結果を示す。ｃＤＮＡ
をナイロン上にスポットし，以下の材料および方法に記載されるように，標識キ
ナーゼ遺伝子で探索した。キナーゼプローブは，ゲノムのエクソンからＰＣＲク
ローニングした。データは，左から右に，以下のものを表す："組織"：ｃＤＮＡ
の組織タイプ；"腫瘍ｓｙｍ"は，組織が腫瘍に由来することを示す；"ｓｙｍ"は
，試料を作成するのに用いた５’および３’プライマーが同一であることを表す
；"正常Ｓｙｍ"は，正常組織を用いて，上述したように対称プライマーを用いて
試料を作成したことを示す；"腫瘍ｌｏ"は，原発精腫瘍組織を用いてｃＤＮＡを
作成したことを示す；"腫瘍細胞"は，これらのｃＤＮＡ試料が培養腫瘍細胞から
作成されたことを示す；"正常"はこれらの試料が正常組織または細胞株に由来す
ることを示す；"Ｅｎｄｏｓ"はこれらの試料が内皮関連組織起源に由来すること
を示す；"ｐ５３"は，起源試料におけるｐ５３遺伝子の状態，すなわち，変異体
（ｍｕｔａｎｔ）または野生型（ｗｔ）を示す。次のカラムの配列番号により参
照される各遺伝子について，標準化した発現値が示されている。表６に示される
遺伝子は以下のとおりである：ＳＧＫ１８７（配列番号１）；ＳＧＫ１２４（配
列番号９）；ＳＧＫ３８６（配列番号２１）；ＳＧＫ００３（配列番号２２）；
ＳＧＫ０９３（配列番号３１）；ＳＧＫ０７４（配列番号３２）；およびＳＧＫ
３９６（配列番号４３）。
【０３６３】 表６−組織アレイ
【表２５】
【表２６】
【表２７】
【表２８】
【表２９】
【表３０】
【表３１】
【表３２】
【表３３】
【表３４】
【表３５】
【表３６】
【表３７】
【表３８】
【表３９】
【表４０】
【表４１】
【表４２】
【表４３】
【表４４】
【表４５】
【表４６】
【表４７】
【表４８】
【表４９】
【表５０】
【表５１】
【表５２】
【表５３】
【表５４】
【表５５】
【表５６】
【表５７】
【０３６４】 表７は，本明細書に記載されるキナーゼの２６種類についての４８個のヒトｃ
ＤＮＡ起源のＰＣＲスクリーニングの結果を示す。プラスの記号（＋）は，アガ
ロースゲル上に標的キナーゼについて予測されるサイズのバンドが存在すること
を示す。負の記号（−）は，予測されるサイズのＰＣＲ産物が存在しないことを
示す。この表に示される遺伝子は，配列番号６，配列番号７，配列番号８，配列
番号１０，配列番号１２，配列番号１３，配列番号１４，配列番号１６，配列番
号２２，配列番号２３，配列番号２４，配列番号２６，配列番号２８，配列番号
３１，配列番号３３，配列番号３９，配列番号４０，配列番号４３，配列番号４
５，配列番号４６，配列番号４７，配列番号４８，配列番号４９，配列番号５１
，配列番号５２および配列番号５６である。
【０３６５】 表７ ＰＣＲ発現分析
【表５８】
【表５９】
【０３６６】 表８は，Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｌｏｎｔｅｃｈ．ｃｏ
ｍ／）からの多数組織発現ブロットを本発明の遺伝子の２つ，ＳＧＫ０９３（配
列番号３１）およびＳＧＫ１３８（配列番号５３）で探索した結果を含む。
【０３６７】 表８ Ｃｌｏｎｔｅｃｈ 多組織ブロット
【表６０】
【０３６８】実施例 以下の実施例は限定ではなく，本発明の種々の観点および特徴の代表的なもの
にすぎない。以下の実施例は，本発明にしたがう核酸分子，ならびにこれにより
コードされるポリペプチドの単離および特徴付けを示す。
【０３６９】実施例１：蛋白質キナーゼをコードするゲノムフラグメントの同定および特徴づ け 材料および方法 新規キナーゼは，Ｃｅｌｅｒａヒトゲノム配列データベースから，および公共
のＨｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｐｒｏｊｅｃｔ（ｈｔｔ
ｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）から，７０の哺乳動物
および酵母キナーゼ触媒ドメイン配列で構築した隠れマルコフモデル（ＨＭＭＲ
）を用いて同定した。これらの配列は，２つの配列が５０％以上の配列同一性を
有しないようにキナーゼの広範な収集物から選択した。ゲノムデータベース登録
物は，６つのオープンリーディングフレームに翻訳し，ＨＭＭＲ２．１の現場プ
ログラム可能アレイ（ＦＰＧＡ）加速版を有するＴｉｍｅｌｏｇｉｃ Ｄｅｃｙ
ｐｈｅｒボックスを用いて，モデルに対してこれらを検索した。ＨＭＭＲプロフ
ァイルに対してアラインメントした，予測された蛋白質配列をコードするＤＮＡ
配列を，元のゲノムデータベースから抽出した。次に，核酸配列をＰａｎｇｅａ
Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇツールを用いてクラスター化し，反復登録物を排除した
。次に推定蛋白質キナーゼ配列を一連のクエリーおよびフィルターを通して順番
に走らせて，新規蛋白質キナーゼ配列を同定した。特に，ＨＭＭＲで同定された
配列は，ＢＬＡＳＴＮおよびＢＬＡＳＴＸを用いて，６３４個の既知のヒト蛋白
質キナーゼおよびすべてのその後の新規蛋白質キナーゼ配列をそれが同定される
につれて含有するヌクレオチドおよびアミノ酸レポジトリに対して検索した。出
力はスプレッドシートで表示して，手動検査で既知の遺伝子を排除することを容
易にした。２つのモデル，すなわち，"完全"モデルおよび"部分"またはスミス・
ウォーターマンモデルを開発した。部分モデルを用いて準触媒的キナーゼドメイ
ンを同定し，完全モデルを用いて完全触媒ドメインを同定した。次に選択したヒ
ットをＢＬＡＳＴＮを用いて公共ｎｒｎａおよびＥＳＴデータベースに対してク
エリーを行い，これらが実際にユニークであることを確認した。場合によっては
，新規遺伝子は，先に同定されている齧歯類または脊椎動物蛋白質キナーゼのホ
モログであると判定された。
【０３７０】 部分ＤＮＡ配列の延長による全長オープンリーディングフレームの包含は，い
くつかの方法により行った。表９に示されるｃＤＮＡデータベースを繰り返しｂ
ｌａｓｔｎ検索して，ゲノム配列を延長したｃＤＮＡを見いだした。"Ｌｉｆｅ
ＳｅｑＧｏｌｄ"データベースはＩｎｃｙｔｅ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，Ｉｎｃ（ｈ
ｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｎｃｙｔｅ．ｃｏｍ／）から入手した。ＮＣＢＩデータ
ベースはＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉ
ｈ．ｇｏｖ／）から入手した。すべてのｂｌａｓｔｎ検索は，ヌクレオチドミス
マッチについてのペナルティー３，およびヌクレオチドマッチのリウォード１を
用いて行った。ギャップ付きｂｌａｓｔアルゴリズムは以下に記載されている（
Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓｔｅｐｈｅｎ Ｆ．，Ｔｈｏｍａｓ Ｌ．Ｍａｄｄｅｎ，
Ａｌｅｊａｎｄｒｏ Ａ．Ｓｃｈａｆｆｅｒ，Ｊｉｎｇｈｕｉ Ｚｈａｎｇ，Ｚ
ｈｅｎｇ Ｚｈａｎｇ， Ｗｅｂｂ Ｍｉｌｌｅｒ， ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｊ
． Ｌｉｐｍａｎ （１９９７），"Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ ａｎｄ ＰＳ
Ｉ−ＢＬＡＳＴ：ａ ｎｅｗ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ
ｄａｔａｂａｓｅ ｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒａｍｓ"，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ
ｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２）。
【０３７１】 部分ＤＮＡ配列の伸長による全長オープンリーディングフレームの包含はまた
，ゲノムデータベースの検索の繰り返しにより行った。第１の方法は，スミス−
ウォーターマンアルゴリズムを用いて，最も近い蛋白質ホモログを部分配列に対
して蛋白質−蛋白質検索を行った。標的データベースは，Ｇｅｎｅｓｃａｎおよ
びヒトゲノムプロジェクト（ＨＧＰ）ならびにＣｅｌｅｒａから得られた全ヒト
ゲノム配列のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）予測からなる。検索した
ゲノムデータベースの完全なセットは以下の表１０に示される。潜在的な伸長を
コードするゲノム配列は，ＮＣＢＩ非重複データベースに対するｂｌａｓｔｘ分
析を行ってヒットの新規性を確認することによりさらに評価した。伸長するゲノ
ム配列は，ＤＮＡＳｔａｒのＳｅｑｍａｎプログラムを用いて潜在的イントロン
を削除した後にｃＤＮＡ配列中に組み込んだ。スミス−ウォーターマン検索につ
いて用いたデフォルトのパラメータは以下のとおりである。マトリクス：ｂｌｏ
ｓｕｍ６２；ギャップオープニングペナルティー：１２；ギャップ伸長ペナルテ
ィー：２．Ｇｅｎｅｓｃａｎ予測は，Ｇｅｎｅｓｃａｎプログラムを，Ｃｈｒｉ
ｓ Ｂｕｒｇｅ ａｎｄ Ｓａｍ Ｋａｒｌｉｎ（"Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏ
ｆ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｇｅｎｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ
Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ"，ＪＭＢ（１９９７）２６８（１）：７８−９４）に
詳細が記載されるように用いて行った。ゲノムＤＮＡからのＯＲＦの予測は，標
準的な６フレーム翻訳を用いて行った。
【０３７２】 ゲノム配列からＤＮＡ伸長を規定する別の方法は，Ｇｅｎｅｓｃａｎプログラ
ムを用いてゲノムデータベースを繰り返し検索してエクソンスプライシングを予
測した。次にこれらの予測された遺伝子を，関連するキナーゼに対するホモロジ
ーに基づいてこれらが部分遺伝子の"本物の"伸長であるかを見ることにより評価
した。
【０３７３】 別の方法は，Ｇｅｎｅｗｉｓｅプログラム（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓａｎｇ
ｅｒ．ａｃ．ｕｋ／Ｓｏｆｔｗａｒｅ／Ｗｉｓｅ２／）を使用して，最も近いホ
モログに対するホモロジーまたはＨＭＭに基づいて潜在的ＯＲＦを予測すること
を含む。Ｇｅｎｅｗｉｓｅは，２つの入力，すなわち相同の蛋白質と目的とする
遺伝子を含むゲノムＤＮＡを必要とする。ゲノムＤＮＡはＣｅｌｅｒａおよびヒ
トゲノムプロジェクトのデータベースのｂｌａｓｔｎ検索により同定した。ホモ
ログは，ＮＣＢＩ非重複蛋白質データベース（ＮＲＡＡ）をゲノムデータベース
のＨＭＭ検索から得た予測蛋白質配列でｂｌａｓｔｐ検索することにより同定し
た。Ｇｅｎｅｗｉｓｅは，蛋白質配列をゲノムＤＮＡ配列と比較し，イントロン
およびフレームシフトエラーを得ることができる。
【０３７４】 表９−ｃＤＮＡに基づく配列延長に用いたデータベース
【表６１】
【０３７５】 表１０−ゲノムに基づく配列延長に用いたデータベース
【表６２】
【０３７６】結果 仮出願において遺伝子を延長するのに用いた配列情報源を以下に示す。Ｇｅｎ
ｅｗｉｓｅを用いて延長した遺伝子については，蛋白質ホモログおよびゲノムＤ
ＮＡの受託番号が記載されている（Ｇｅｎｅｗｉｓｅはゲノム配列から標的遺伝
子のコーディング配列を組み立てるためにホモログを用いる）。ホモログのアミ
ノ酸配列は，蛋白質のＮＣＢＩ非重複データベースから得た（ｈｔｔｐ：／／ｗ
ｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｅｎｔｒｅｚ／ｐｒｏｔｅｉｎ．ｈ
ｔｍｌ）。ゲノムＤＮＡは２つの起源，すなわち，ＣｅｌｅｒａおよびＮＣＢＩ
−ＮＲＮＡからのものであり，これは以下に示される。ｃＤＮＡ起源もまた以下
に示される。 略号：ＨＧＰ：ヒトゲノムプロジェクト；ＮＣＢＩ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎ
ｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ．
【０３７７】 ＳＧＫ１８７，配列番号１，配列番号５８をコード 遺伝子名：ＣＲＩＫ Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＡＡＣ７２８２３．１，ＡＡＣ２５４８３．１， ゲノムＤＮＡ起源： Ｃｅｌｅｒａ １８１００００００９９４９２８；１７０００１４０６３５２５
７ ＮＣＢＩ ＡＣ００２５６３．１，ＢＡＣクローン２７７Ｆ１０，ＡＣ００４８
１３
【０３７８】 ＳＧＫ０６４，配列番号２，配列番号５９をコード 遺伝子名：ＧＲＫ７Ｇ蛋白質共役レセプターキナーゼ， Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＡＡＣ９５００，ｇｉ＿４００１８２６ ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ，９００００６２６３１６４９７，公共ｈｇｐ
コンティグｇｉ１８１３９７１６ Ｃｅｌｅｒａ １１０００２８４００９８２６，１７００００６２６９６６６２
Ｉｎｃｙｔｅ ｃＤＮＡ：７４７７２０４ＣＢ１（９９％同一） ホモログと比較すると，ＣｅｌｅｒａのｇｅｎｅｗｉｓｅはＮ末端のみを予測し
た；ｈｇｐコンティグはフェーズｌであり，したがって，無秩序な断片から構成
される。このｇｅｎｅｗｉｓｅは，２つの予測を有した。その２番目は予測をホ
モログの末端まで延長した。ＣｅｌｅｒａコンティグのＧｅｎｓｃａｎ予測に基
づいて，１つののＡＡ（Ｍ）を最初に追加した。
【０３７９】 ＳＧＫ４０９（配列番号３，配列番号６０をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＮＰ０３２６６７，ＢＡＡ７６８１７ ＦＬｖは，ＳＧＫ４０９（５’末端のヌクレオチド２１９３まで）およびＫＩＡ
Ａ０３０３（３’末端の２１９４から７７８５０まで）のコンティグから予測し
た
【０３８０】 ＳＧＫ０２１（配列番号４，配列番号６１をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＣＡＢ７６５６６，ＢＡＡ９５０２７，ＣＡＢ７６
４７１，ＮＰ＿０６０８７１ ゲノムＤＮＡ起源： Ｃｅｌｅｒａ １１０００２８３９９１９７０，１７００００２８１８１１５３
，１７００００７７７５８３６６，１７３００００１９６３３０５３，１７３０
０００１９３９４６１０；Ｉｎｃｙｔｅ ｃＤＮＡ：１１１００３７．１ 注：ＥＳＴで配列の一部を確認したが，本質的にこれはｇｕｉ７１６１８６４を
用いる９００００６４１０９２６７９のｇｅｎｅｗｉｓｅ予測である。
【０３８１】 ＳＧＫ４１０（配列番号５，配列番号６２をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＮＰ＿００２７３１（ＰＫＣ，ｉｏｔａ＿ｈ） ゲノムＤＮＡ起源：ＡＬ１３３２８０．１２ 注：ＦＬはＮＰ＿００２７３１．１を用いるＨＧＰコンティグＡＬ１３３２８０
．１２からのＧｅｎｅｗｉｓｅ予測
【０３８２】 ＳＧＫ０６９（配列番号６，配列番号６３をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＢＡＡ３６３６２ ゲノムＤＮＡ起源：ＨＧＰ＿７１９１０３３＿７，１１０００２８４１５５３３
０ Ｃｅｌｅｒａ：９００００６４１７２６６３２
【０３８３】 ＳＧＫ１１０（配列番号７，配列番号６４をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＢＡＡ３６３６２ ゲノム起源：ＨＧＰ＿７１９１０３３＿７ Ｃｅｌｅｒａ：１１０００２８３３３８９６６，１７０００１４０２５８１０５
，１７００００７７６０７６９３，１１０００２８３３３８９６６および１７０
０００７７６０７６９３
【０３８４】 ＳＧＫ０５３，配列番号８，配列番号６５をコード） 遺伝子名：ＣＫＬｉＫ Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：Ｑ６３４５０，ＮＭ＿０２０３９７．１ ゲノムＤＮＡ起源：１７００００３５７９０２８４ ｃＤＮＡはｄｂＥＳＴより：ＢＥ２６６９５５，ＡＩ９２３７０４，ＡＷ５０１
０４７
【０３８５】 ＳＧＫ１２４（配列番号９，配列番号６６をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ｇｕｉ４８２７１５９ ゲノムＤＮＡ起源：９００００６４１８３２４２７ Ｃｅｌｅｒａ：１７００００４７８９１８９９， ＮＣＢＩ：ｄＪ１１０３Ｇ７．３ ｃＤＮＡ：Ｉｎｃｙｔｅ ３２８２２５．１３
【０３８６】 ＳＧＫ２５４（配列番号１０，配列番号６７をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＡＡＢ４６９１０ ゲノムＤＮＡ起源：１７００００９１５３３７４３，ＡＣ００５９４０
【０３８７】 ＳＧＫ２９７，配列番号１１，配列番号６８をコード） 遺伝子名：ＣａＭＫＩｂ２＿ｈ ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ １７０００１４０６１４４８２＿２，１７０
００１１３１２２５４０ ｃＤＮＡ起源：Ｉｎｃｙｔｅ ８２７４３１ＣＢ１；ｄｂＥＳＴＲ８７８３９
【０３８８】 ＳＧＫ４１１（配列番号１２，配列番号６９をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＡＡＤ２０４４２ ゲノムＤＮＡ起源：ＨＧＰ２８２８７６５＿１＿３ ｃＤＮＡ起源：ＮＣＢＩＡＦ０７１５６９
【０３８９】 ＳＧＫ０２７（配列番号１３，配列番号７０をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＡＡＦ６９８０１，ＡＡＡ９７４３７ ＦＬは脂肪および脳からクローニング ゲノムＤＮＡ起源： Ｃｅｌｅｒａ １７００００５７４４３７９１，１７００００２９８６８６５４
，ＣＡ＿２ＧＳ＿Ｎ１０６００００１１３５１１６７＿１ ＣＡ２＿ＧＳ＿Ｎ１０６００００１１３５１１６７＿１，１７００００５７４４
３７９１，Ｎ末端ｃＤＮＡ：Ｉｎｃｙｔｅ ３２１０７４．１ ＳＧＫ０２７は，ヒト脳および肥満細胞ライブラリから全長遺伝子としてクロー
ニングされている。
【０３９０】 ＳＧＫ０４６ｂ（配列番号１４，配列番号７１をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＡＡＣ３３４８７，ＡＡＦ６９８０１ ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ １１０００２８３３７６０５７，１１０００
２８３３７６０５７
【０３９１】 ＳＧＫ０４６ｃ（配列番号１５，配列番号７２をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＡＡＣ３３４８７ＡＡＦ６９８０１ ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ １１０００２８４２５３０８７，１１０００
２８４２５３０８７
【０３９２】 ＳＧＫ０８９（配列番号１６，配列番号７３をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＡＡＦ６４４５５，ＡＡＡ９７４３７ ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ １１０００２８３９８６５８６ ｃＤＮＡ起源：ＮＣＢＩＡＫ０２４１１０
【０３９３】 ＳＧＫ１３３，配列番号１７，配列番号７４をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＣＡＡ０７１９６ ゲノムＤＮＡ起源：１７００００７５９２９１１１，１７００００４８１３３０
１９，１７００００７６０９６６３６，１０１７０００１４０４８４６９６ｃＤ
ＮＡ起源：ＮＣＢＩＮ８３９６５；Ｉｎｃｙｔｅ：９９９６１８，７４７７４８
６ＣＢ１，９８４０１１．１
【０３９４】 ＳＧＫ００４（配列番号１８，配列番号７５をコード Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ｇｉ｜９９７８８９１ 遺伝子名：ＭＳＫ，ＳＩＫ（ＡＢ０２０４８０，塩誘導可能蛋白質キナーゼ），
ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ １７００００８４５７４２７８，１７０００
０４８６０４３７６，７８０００００６７０６９４１
【０３９５】 ＳＧＫ００６（配列番号１９，配列番号７６をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＮＰ−０５６５７０，ｇｉ｜７６５７２１６． ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ １１０００２８３９１３２５２，７８０００
００５６９１２３４
【０３９６】 ＳＧＫ１８０，配列番号２０，配列番号７７をコード） 遺伝子名：ＳＮＲＫｈ Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ｇｉ｜７３０３２１１ ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ １７００００５７５７７７８５，１８１００
０００１００６２１５ ｃＤＮＡ起源：ＮＣＢＩＡＦ２２６０４４，ＡＫ０００２３１（Ｎ末端），Ｄ４
３６３６ＫＩＡＡ００９６（Ｃ末端）
【０３９７】 ＳＧＫ３８６，配列番号２１，配列番号７８をコード） 遺伝子名：ＭＬＣＫｓｈ ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ １７０００１４０２４９７４９＿２，１７０
００１４０４３８２６５ ＨＧＰ：７２４２４４３＿３，ＡＬ１６０１７５，ＡＬ１６０１７５．５
【０３９８】 ＳＧＫ００３（配列番号２２，配列番号７９をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：Ｐ７００６５，ｇｉ｜６１６６２３６ ゲノムＤＮＡ起源： Ｃｅｌｅｒａ １７００００８３９５６３９０，１７００００６２６１３３８６
，１７００００３６８９０４８０，７８０００００６３０６６１７０，７８００
０００６３０６１７０ ＦＬは，Ｃｅｌｅｒａ配列からＣＫＩアルファＰ７００６５をモデルとして用い
てｇｅｎｅｗｉｓｅ予測した；ＳＧＫ００３のアミノ酸配列とＣＫＩアルファｈ
ＮＰ００１８８３．２およびＣＫＩ，ｅｐｓｉｌｏｎ＿ｈＡ５７０１１の対の比
較に基づいて，配列ｇａｔａａｃｔａａを１００６−１０１４に付加することに
より手動で補正した。ＳＧＫ００３のＣ末端は，ＨＧＰＡＬ３９１３８３．４を
用いて確認した。Ｇｅｎｓｃａｎは，同じコンティグからｇｅｎｅｗｉｓｅ予測
の末端の後に２つの停止アミノ酸を有する類似の蛋白質を予測した。したがって
，これらの２つのアミノ酸（ＤＮ）をｇｅｎｅｗｉｓｅ予測に付加し，これは最
も近い公共ホモログと同じ長さとなった。
【０３９９】 ＳＧＫ０６６（配列番号２３，配列番号８０をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：Ｔ４２２６０ ゲノムＤＮＡ起源：１１０００２８３２９６３４９ ｃＤＮＡ起源：ｄｂＥＳＴＡＡ２３４４５１
【０４００】 ＳＧＫ０４１（配列番号２４，配列番号８１をコード） 遺伝子名：ＮＫＩＡＭＲＥ ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ １７００００６２７４３９０７，１７０００
０７６００２１０６，１７００００４８１５２３４７，１７００００９１６３５
２６０ ｃＤＮＡ起源：ＡＦ１３０３７２ Ｇｅｎｅｗｉｓｅは，Ｃｅｌｅｒａコンティグ３００７０２６６８について蛋白
質ホモログｇｉ｜４５０５５６９，ｇｉ｜７００１３７４，およびｇｉ｜７７０
６０５９を用いて行った。ＧｅｎｓｃａｎはＣ末端への延長を予測し，これはホ
モロジーをさらにラットホモログに拡張した。ｇｅｎｅｗｉｓｅ予測の最後の４
アミノ酸はｇｅｎｓｃａｎ予測と一致せず，これを除いた。Ｇｅｎｓｃａｎ予測
はＮＣＢＩＥＳＴｓ：ｇｉ｜ｌ０８２３３２９，ｇｉ｜２９６３７５０，ｇｉ｜
５１１１７２０により支持される。ｇｅｎｓｃａｎを用いると同じ点ですべての
ホモロジーが失われ，この点ではｇｅｎｓｃａｎ予測が正しくないと考えられる
。遺伝子のＣ末端はこれらのＥＳＴ配列をＣｅｌｅｒａゲノム配列とともに用い
て予測し，オープンリーディングフレームを最初に確認された停止まで延長した
。Ｇｅｎｅｗｉｓｅは，この遺伝子が以下の１２個のエクソンを有することを示
す（座標は予測ｃＤＮＡより；キナーゼドメインは４−２８６である）１−１６
５，１６６−３６０，３６１−５３９，５４０−６５２，６５３−７９２，７９
３−８８１，８８２−１０３５，１０３６−１３６４，１３６５−１４５８，１
４５９１６２１，１６２２−１７１９，１７２０−１７７３。多くのＥＳＴｓが
遺伝子とアライメントしたが，１またはそれ以上のエクソンを欠失しており，こ
の遺伝子３９４３５６１Ｔ８において高い程度の選択的スプライシングが生じ，
３９４３５６１Ｆ８はエクソン７と８の間のイントロンを読み通すことを示す。
これはフレームをシフトさせて，終止コドンをコードするため機能的ではなさそ
うであるが，切断型蛋白質が生ずるであろう。 公共ＥＳＴｇｉ｜２８４９３５９はエクソン３を欠失 ＩｎｃｙｔｅＥＳＴ ６５５３７１４Ｈ１はエクソン５を欠失 ＩｎｃｙｔｅＥＳＴ ６４４２７６３Ｈ１はエクソン６を欠失 ＩｎｃｙｔｅＥＳＴ ９１８０５９Ｒ１はエクソン７を欠失 ＩｎｃｙｔｅＥＳＴ １４３６８０５Ｆ１，１４３６８０５Ｈ１，１４３６８０
５Ｆ６，１４３６８０５Ｆ１および１４３６８０５Ｈ１，および公共ＥＳＴｓｇ
ｉ｜６７７０４１およびｇｉ｜７７６２７９はエクソン５および６を欠失 公共ＥＳＴｇｉ｜ｌ５２１２３７は５−７を欠失 ＩｎｃｙｔｅＥＳＴ６８５９１７９Ｈ１および公共ＥＳＴｇｉ｜５３６８４７６
はエクソン６および７を欠失 公共ＥＳＴｇｉ｜４９８８７９０はエクソン６−９を欠失 公共ＥＳＴｇｉ｜２９６３７５０はエクソン７および８を欠失 この遺伝子の公共ＮＫＩＡＭＲＥ配列および多くのＥＳＴはエクソン８の末端を
イントロン８中まで読み通し，より短い蛋白質型を生ずる。ＩｎｃｙｔｅＥＳＴ
２４９４３０１Ｆ６および２４９４３０１Ｈ１はエクソン４からイントロン４
中に，エクソン５でスプライスアウトされるまで続き，したがって蛋白質１中に
追加の配列を導入する。
【化１】
【０４０１】 ＳＧＫ１１２（配列番号２５，配列番号８２をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：Ｓ２２７４５，ｇｉ＿１０７６５５ ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ １７００００３５９１５０８７，３００９６
０７８２ ｃＤＮＡ起源：Ｉｎｃｙｔｅ １６９８３８１ＣＢ１ ｉｎｃｙｔｅＥＳＴ１６９８３８１ＣＢ１の比較によりＣ末端を延長し，ｆｕｒ
ｔｌのｇｅｎｅｗｉｓｅで確認した。以下のＥＳＴｓを加えることによりコンテ
ィグを組立て，延長した：１６９８３８１ＣＢ１，０５８２９８．１，５３１４
９１０Ｈ１，１６９８３８１Ｔ６，１６９８３８１Ｆ６，および２５３９２４６
。コンティグはＣｅｌｅｒａコンティグ１７３００００２２３６６１７３，１７
３００００２２３６６１７６，１７３００００２２３６６１７４，および３００
９６８７８２中のゲノム配列との比較により確認した。
【０４０２】 ＳＧＫ０３８（配列番号２６，配列番号８３をコード） 遺伝子名：ＥＲＫ７ Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＡＡＤ１２７１９ ゲノムＤＮＡ起源：１７００００３０２７８３９１，１７００００５７８８２０
５１，１７００００８４２０４７４４，１１０００２８３８８６８６９ ｃＤＮＡ起源：Ｉｎｃｙｔｅ ２５３１３２．４８は開始Ｍｅｔを与える；Ｉｎ
ｃｙｔｅ ２６１３９８１Ｆ６は停止を与える。１４２００００１６４０４８５
４およびｇｉ４２２０８８８を用いてＧｅｎｅｗｉｓｅを行った。ＮＣＢＩ Ｅ
ＳＴ ｇｉ｜９５１０３３５と比較して，末端に３アミノ酸を付加して停止とし
，ｉｎｃｙｔｅＥＳＴにより短いＮ末端の延長を加えた。内部配列"ＤＭＧＦＬ
ＬＡＰＰＴＨＴＰＶＦＬＳＬＱ"はｇｅｎｅｗｉｓｅにより予測されず，別のＥ
ＳＴ（ｉｎｃｙｔｅ２５３１３２．５０）に見いだされない。これは選択的スプ
ライシング型のようである。
【０４０３】 ＳＧＫ１５８（配列番号２７，配列番号８４をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：Ｑ６０９３６Ｑ９２３３８ ＣＤＮＡ起源：Ｉｎｃｙ４０６０５７＿１９ ｈｇｐコンティグｇｉ｜９７９７０５６および，ホモログｇｉ｜３０２５２１５
，ｇｉ｜７２９２８１５を用いてＧｅｎｅｗｉｓｅを行った。結果は，ヒトおよ
びマウスからの多数の仮定蛋白質と部分的に同一である。ＩｎｃｙｔｅＥＳＴ４
０６０５７．１９により全長配列を延長し確認した。
【０４０４】 ＳＧＫ４２９（配列番号２８，配列番号８５をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＣＡＢ７６０３９ ゲノムＤＮＡ起源：ＨＧＰ５００１５４９３； ｃＤＮＡ起源：Ｉｎｃｙｔｅ ０５２５６０．１ 注：９００００６４２６１１９５７およびホモログｇｉ｜５４４１９４７，ｇｉ
｜７１０６０６８，ｇｉｌ｜７３３１８０２を用いるＧｅｎｅｗｉｓｅ。予測は
，ＮＣＢＩＥＳＴ：ｇｉＩＩ０３２６３１７，ｇｉｌｌ０１５９４５１，ｇｉ｜
８２７８２２７，ｇｉ｜９０９６６６４，ｇｉ｜９０９６２０７，ｇｉ｜５７０
６７９，ｇｉｌｌ０２２３９０３により延長し確認した。
【０４０５】 ＳＧＫ１５２（配列番号２９，配列番号８６をコード） 遺伝子名：ＳＵＤＤ ゲノムＤＮＡ起源：１１０００２５８２４９２９５ ９００００６４１２８７３５３およびｇｉ｜７２９５６５９を用いるＧｅｎｅｗ
ｉｓｅ，ＮＣＢＩＥＳＴ：ｇｉｌｌ０９５２２４５，ｇｉｌｌ０９９１５１Ｃｇ
ｉｌｌＯ９９８０１２，ｇｉ｜９８９２２１７，ｇｉ｜９７７２９０５を用いて
延長。
【０４０６】 ＳＧＫ０７７（配列番号３０，配列番号８７をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＮＰ０３４４８３，ｇｉ７１０６３２９ ゲノムＤＮＡ起源：ＨＧＰＢＡＣＡＦ１６８７８７；Ｃｅｌｅｒａ １１０００
２８３６７２０１２，６６００００２６７５６４１８１７００００５７５５２３
０３ ＣＤＮＡ起源：Ｉｎｃｙｔｅ ０６８０７２．１ 注：ＥＳＴデータベースに対して調べると，ｇｅｎｅｗｉｓｅ予測の短いストレ
ッチはいくつかのＥＳＴ（ｉｎｃｙｔｅテンプレート０６８０７２．１，ＬＧｆ
ｌ３８７３８２ＣＢ１およびＬＧｆｌｆｔ配列３８７３８２ＣＢ１）とマッチし
ないことが示された。エクソンの中程に多型が存在する。多型変種は以下の領域
において異なっている。
【化２】
【０４０７】 ＳＧＫ０９３，Ｗｎｋ３（配列番号３１，配列番号８８をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＡＡＦ７４２５８ ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ １１０００２８４０６３４４１，１１０００
２８４２６６１８０；ＨＧＰＣＡ２ＧＳＮ１１１０００００４３１１３５１２ 注：Ｃｅｌｅｒａ ９６０００００１６８０８４３からのＧｅｎｓｃａｎ予測か
らのＦＬｖ；ＨＭＭ予測に適合せず，ＮＥＫ７と整列しないアミノ酸配列"ＨＲ
ＬＧＥＣＷＱＫＭＲＲＲＱＱＧＡＡＧＧＮＦＰＶＧＧＳＦＰＥＤＶＳＰＨＱＤＳ
ＧＹＡＰＳＰＲ"を欠失させることにより手動で補正した。Ｇｅｎｓｃａｎ予測
は，多数の重複するｃＤＮＡ配列（Ｉｎｃｙｔｅ ８０３６９２３Ｊ１，ｃｌｕ
ｓｔｅｒ７７０５６１Ｉｎｃ，ＮＣＩＣＧＡＰＥＳＴＢＦ０００３６９．１，Ｉ
ｎｃｙｔｅ ７９３４５９０Ｈ１，Ｉｎｃｙｔｅ ６０４８７８Ｆ６およびｃｌ
ｕｓｔｅｒ８０６４０１＿１）により指示された。翻訳された配列をＣｅｌｅｒ
ａＡｓｓｅｍｂｌｙリリース３からの遺伝子予測のＧｅｎｓｃａｎデータベース
と比較し，コンティグ９６０００００１６８０８４３からの予測コーディング配
列とマッチすることが判明した。予測構造をこのファミリーの他のメンバーと比
較すると，推定触媒ドメイン中の予測アミノ酸２５３−２９７が欠失している。
ＥＳＴ配列７４５９０１４Ｈ１，２６８３０９３Ｆ６，１００１７５７．２，お
よび６７８９８１３Ｆ８を用いて上流配列を確認し延長した。ＥＳＴ１００１７
５７．２および６７８９８１３Ｆ８に基づいて，合計１７７ヌクレオチドを有す
る２つの追加のエクソンをアミノ酸位置６５５（元のＧｅｎｓｃａｎ予測）に加
えた。元の予測のアミノ酸７３９と７７０との間の配列を，ＥＳＴ６６２２８２
５Ｊ１，７１５３８５，７６０５０３４Ｊ１，１９７３３８Ｈ１，７６０９９０
５Ｈ１，７６１３５６４Ｈ１，３７３４２９４Ｆ６，および５２９０８１６Ｔ６
に基づいて，６９７ヌクレオチドの部分で置き換えた。残りの配列は，ＥＳＴ４
７５２７６．９，３０３８３９１Ｈ１，および２９６３９５９を加えることによ
り確認し延長した。
【０４０８】 ＳＧＫ０７４（配列番号３２，配列番号８９をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＮＰ＿０３４５６２ ゲノムＤＮＡ起源： Ｃｅｌｅｒａ １１０００２８３４７６６９９，１７０００１１３５６７３９１
； ＨＧＰ６７５８８６０１５
【０４０９】 ＳＧＫ０８７（配列番号３３，配列番号９０をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＡＡＤ４７２９０，Ｎｕ００３５７４，ｇｉ＿４５
０３４２７，ｇｉ＿５７０２３８６ ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ ８２００００１１５８２４３９，Ｃｅｌｅｒ
ａ １１０００２８３９１４９１９，１７００００３６１７１９９６， ＨＧＰＢＡＣＡＣ００５８３２
【０４１０】 ＳＧＫ２９５，ＫＩＳ（配列番号３４，配列番号９１をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＮＰ０５８９８９（ＫＩＳｒ），Ｘ９８３７４ ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ １７０００１１３０７９８８３
【０４１１】 ＳＧＫ４１９（配列番号３５，配列番号９２をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＣＡＢ７０８６３，Ｎｕ０５５７２６ ゲノムＤＮＡ起源：ＨＧＰ１ＤＫＦＺｐ４３４Ｐ０１１６ｈ ＣＤＮＡ起源：ＮＭ０１７５９３ 注：コンティグは９２０００００５０５８１０１であり，ｇｅｎｅｗｉｓｅテン
プレートはｇｉ＿６８０７７８１である。
【０４１２】 ＳＧＫ１２５，ＭＹ０３Ａ（配列番号３６，配列番号９３をコード） 遺伝子名：ＭＹ０３Ａ ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ １７００００４７９１２９０３，１１０００
５０２３２２２９４，１７００００７８０９０９１０，１７００００７７９５８
３５１，３９００００２６２２２９２５， ｃＤＮＡ起源：Ｎｏｍ０１７４３３．１
【０４１３】 ＳＧＫ４４５（配列番号３７，配列番号９４をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＮＰ−０５５０７９ ゲノムＤＮＡ起源： Ｃｅｌｅｒａ：５９００００２８９９３０４０，４０００００１８０３３８２，
ＮＣＢＩ：５４２０６２８
【０４１４】 ＳＧＫ１２７（配列番号３８，配列番号９５をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：Ｎｕ０３８５９９ ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ １７００００８４３２３３０４，１７０００
０４７９５７９４０，１７０００１４００２１６８７，９６０００００１２１７
８３２＿１，１７００００６２８０４８４３ ｃＤＮＡ起源：Ｉｎｃｙｔｅ １０４１９２３．１，７４７４６０４ＣＢ１ Ｃｅｌｅｒａコンティグおよびホモログ９００００６４２６５８２０７およびホ
モログｇｉ｜７３０５２１５を用いるＧｅｎｅｗｉｓｅにより部分予測を得た。
ホモログのマッチしていない部分と類似する領域は，９００００６４２６５８１
２５からの同じホモログを用いて生成することができる。ＩｎｃｙｔｅＥＳＴ７
４７４６０４ＣＢ１は完全クローンであることが確認された。
【０４１５】 ＳＧＫ００９，ＡＮＫＲＤ３（配列番号３９，配列番号９６をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ｇｉ＿７７６８７３６，ｇｉ＿７７６８７３６ ゲノムＤＮＡ起源：ＡＰ００１７４３（ホモサピエンスゲノム，染色体２１ｑ）
，ＡＰ００１７４３．１，コンティグ７８０００００６８２２４３１ スプライシング変種
【化３】
【０４１６】 ＳＧＫ４２１（配列番号４０，配列番号９７をコード） 遺伝子名：ＳＴＫ２２Ａ，ＴＳＫ１ Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＮＰ０３３４６１ ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ ４０００００１８０３６２２；
【０４１７】 ＳＧＫ０４７（配列番号４１，配列番号９８をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：Ｎｕ００４３２０ ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ １１０００２５８２６２３７４
【０４１８】 ＳＧＫ１９６（配列番号４２，配列番号９９をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：Ｔ０１２８９，ＡＡ２１０４５１ ゲノムＤＮＡ起源：１７００００６２５３７８２５ ｃＤＮＡ起源：ＡＫ０２７００９．１
【０４１９】 ＳＧＫ３９６（配列番号４３，配列番号１００をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＣＡＢ９０４１０，ＣＡＡ１１１５２ ゲノムＤＮＡ起源： ＨＧＰ：５６３００５９＿１＿４，ＡＬ０４８８５８，ＨＧＰ＿１５６３００５
９＿１４ Ｃｅｌｅｒａ：１７００００９１６１８９０９，１７３００００１３９７８０５
８
【０４２０】 ＳＧＫ２７９，配列番号４４，配列番号１０１をコード） 遺伝子名：ＰＫＮ Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＢＡＡ３６３６２，Ｓ７１８８７ ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ １１０００５０８２３４５０４，１７０００
０９１４３９２５６，１７００００９７２５９７４２，１７００００８４１５４
７７７ ＣＤＮＡ起源：Ｉｎｃｙｔｅ ７３１２５４３ＣＢ１
【０４２１】 ＳＧＫ０３７，配列番号４５，配列番号１０２をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：Ｐ５１９５６，Ｐ５１９５４ ゲノムＤＮＡ起源：１７００００３６０４８９８７，１７００００３０２６５６
５８，１７００００６２６８０９６４． 注：ＦＬバーチャルはＣｅｌｅｒａアセンブリ１７３００００３６２７４８３８
のｇｅｎｅｗｉｓｅ／Ｇｅｎｓｃａｎからであり；"ＭＤＫ"はＨＧＰ６９９６１
７１（位置１４４５３６−１１４５４４）から開始する。Ｃ末端は，Ｃｅｌｅｒ
ａアセンブリ１７３００００３６２７４８３８のＧｅｎｓｃａｎから予測した。
【０４２２】 ＳＧＫ０６０（配列番号４６，配列番号１０３をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＮＰ０３５９７９，ｇｉ６７５４８２２ ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ １７００００３６８９７１４２，８４０００
００６８３７２１０ Ｇｅｎｅｗｉｓｅは短い予測を与え，これをＥＳＴ：ＮＣＢＩｇｉ｜９３３４０
３７，ｇｉｌｌ６９０６３２，ｇｉｌｌ４７１８４２，ｇｉ｜４１９６７９１，
ｇｉ｜８１４９５７０およびＩｎｃｙｔｅ配列７４７７５８５ＣＢ１を用いて延
長した。Ｉｎｃｙｔｅ配列２８１１５４．４は，選択的スプライシング型を示し
ており，これは予測ｃＤＮＡの６４８−９６２の配列から，"ＳＬＡＣＩＬＹＥ
ＭＣＣＭＮＨＡＦＡＧＳＮＦＬＳＩＶＬＫＩＶＥＧＤＴＰＳＬＰＥＲＹＰＫＥＬ
ＮＡＩＭＥＳＭＬＮＫＮＰＳＬＲＰＳＡＩＥＩＬＫＩＰＹＬＤＥＱＬＱＮＬＭＣ
ＲＹＳＥＭＴＬＥＤＫＮＬＤＣＱＫＥＡＡＨＩＩＮＡＭ"を欠失している。
【０４２３】 ＳＧＫ０８０（配列番号４７，配列番号１０４をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：Ｎｕ００２４８８ ゲノムＤＮＡ起源： Ｃｅｌｅｒａ：１７００００４８１１９００６，１１０００２８３８６６２２９
，１７００００８４０３７７０５，１７００００８４４７８３８２，１７０００
０８４５６４９４１，１７００００９６８４０５８４，１７００００６２６５３
５５０，１７０００１１２９４５６９０， ＨＧＰ：ＢＡＣＡＰ０００５３２＝ゲノムＤＮＡ，染色体２２ｑｌ１．２，ネコ
眼症候群領域
【０４２４】 ＳＧＫ００２（配列番号４８，配列番号１０５をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：Ｐ３６５０７ ゲノムＤＮＡ起源：１１０００５０１６９１０９２， 注：ＭＰＫ２ｈＰ３６５０７をテンプレートとして用いるＨＧＰＡＣ０１８６３
９．８からのＧｅｎｅｗｉｓｅ予測からのＦＬ
【０４２５】 ＳＧＫ０５８（配列番号４９，配列番号１０６をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：Ａ４８０８４，ＡＡＣ９７１１４ ゲノムＤＮＡ起源： Ｃｅｌｅｒａ １７００００３６２２５３７１，１１１０００００４３０４４４
０ ＨＧＰ：ＡＫ０２６７２７．１ ｃＤＮＡ起源：Ｉｎｃｙｔｅ ２１７３０１．４
【０４２６】 ＳＧＫ１０３（配列番号５０，配列番号１０７をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＣＡＡ３９２８５，ＡＡＡ２８５５２ ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ １１０００２８４２７２５５７
【０４２７】 ＳＧＫ０３５（配列番号５１，配列番号１０８をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：Ｑ１３１７７ ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ １７００００３０１６９９０５，３９０００
０２５５８６６９３，３９００００２５６８０５９５，９２０００００３８４２
６６３ ＨＧＰ：ｇｉ３０４１７１２
【０４２８】 ＳＧＫ０７５（配列番号５２，配列番号１０９をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：ＮＰ０５９１２９Ｐ５０５２７ ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ １１０００２８３４９２２４９，１１０００
２８４４５３７５２，３９００００２５９９４８２４，１７０００１１３８０２
８８３ 注：ｇｉ−１０４４０８８８および３０１２６６６２４によりＧｅｎｅｗｉｓｅ
，および３３４０００００９８３６７６８をｇｉ−１０４４０８８８およびＮＣ
ＢＩＥＳＴｇｉ｜８３６２４３５とともに用い，次に３０１２６６６２４で混成
予測をテンプレートとして用いてＧｅｎｅｗｉｓｅを行った。ｉｎｃｙｔｅＥＳ
Ｔは太字の配列を欠失している。ｂｐ９３３配列の後に挿入されている以下の配
列について選択的スプライシングが認められる：ｃｃｃｔａｔｇｃｔｇａａｃａ
ｇａｇｇｇａｃｔａｃａａａｇｇｃａａａｔｃａｇａｔｇｃａｇｔｔｃｃｔｇａ
ｔａａａｇａｇｃｔａａｔａｇｔｃｔｇｇ。この挿入物は同じリーディングフレ
ームを維持し，以下のペプチド配列を挿入する：ＰＹＡＥＱＲＤＹＫＧＫＳＤＡ
ＶＰＤＫＥＬＩＶＷ。この挿入物はアミノ酸３１１の後に生ずる（すなわち，以
下の配列のＲの後：ＫＨＱＮＰＶＡＫＴＲ［ＰＹＡＥＱＲＤＹＫＧＫＳＤＡＶＰ
ＤＫＥＬＩＶＷ］）。
【０４２９】 ＳＧＫ１８８，（配列番号５３，配列番号１１０をコード） 遺伝子名：ＥｐｈＡ９ ゲノムＤＮＡ起源：１７００００５７７３９１６．１，１７００００６５０４１
９６９，１７００００６２７９８３７７；ｃＤＮＡ起源：Ｉｎｃｙｔｅ ７４７
４７２１ＣＢ１
【０４３０】 ＳＧＫ０４０（配列番号５４，配列番号１１１をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：Ｐ４１２４３，Ｔ３３４７５，ｇｉ７２９８９０お
よびｇｕｉ７５０８５６１ ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ １１０００２５７９１２８９７；ＨＧＰ１１
０００２５７９１２８９７，コンティグ１７３００００１９３９９０４１． Ｇｅｎｅｗｉｓｅ予測をＥＳＴｓにより延長し，オープンリーディングフレーム
を同定した。ＥＳＴｓ：ＮＣ配列ｇｉｌｌ０７２２５１９，ｇｉｌｌ９２０４３
８，ｇｉｌｌ９２７８１０，ｇｉ｜８６５６９８２，ｇｉ｜４６０９３９６，ｇ
ｉ｜６０８７５７５およびＩｎｃｙｔｅ配列２１５２１７．８，２１５２１７．
７，１２４２４９１ＣＢ１
【０４３１】 ＳＧＫ３９０（配列番号５５，配列番号１１２をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：Ｑ６４３９８ ゲノムＤＮＡ起源：１７００００７７９２５５０９，１７００００７７８６１４
１４ ＣＤＮＡ起源：７４７４６３７ＣＢ１
【０４３２】 ＳＧＫ００７（配列番号５６，配列番号１１３をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：Ｔ４２２６０ ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ １７０００１１３２２７２４９
【０４３３】 ＳＧＫ０５０（配列番号５７，配列番号１１４をコード） Ｇｅｎｅｗｉｓｅホモログ：Ｐ１６０６７ ゲノムＤＮＡ起源：Ｃｅｌｅｒａ １７００００３５７６７５５８
【０４３４】 ＳＧＫ１８７，ＣＲＩＫ（配列番号１，配列番号５８をコード）は６１５９ヌ
クレオチドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位
置６１５９で終了し，６１５９ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白
質は２０５３アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンか
ら終止コドンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群
／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＡＧＣ，ＤＭＰＫ。この遺伝子は染色体位置
１２ｑ２４．２３にマップされる。この染色体位置の増幅は以下のヒト疾病に関
連づけられている：非小細胞肺癌（１２ｑ２４．１−２４．３；２／５０）（Ｋ
ｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。この遺伝子は以下の位置において一塩基多
型候補を含む：２８７４＝Ｒ（ｓｓ１３３７３４０）；２８８３＝Ｙ（ｒｓ９０
４６５５）；３３２７＝Ｒ（ｓｓ１５８１６２４）。公共ドメインにおけるこの
遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：ＢＥ９０９４８６，ＢＥ８７５２９７，
ＡＷ６０５３５０。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置において反復配列を有
する：なし。
【０４３５】 ＳＧＫ０６４，ＧＲＫ７（配列番号２，配列番号５９をコード）は１６６２ヌ
クレオチドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位
置１６５９で終了し，１６５９ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白
質は５５３アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンから
終止コドンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／
ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＡＧＣ，ＧＲＫ。この遺伝子は染色体位置３ｑ
２４にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている：
頭頚部の扁平上皮癌（３／３０）および子宮頸癌（３／１０），（Ｋｎｕｕｔｉ
ｌａ， ｅｔ ａｌ．），アッシャー症候群（ＯＭＩＭ，２７６９０２ＵＳＨＥ
Ｒ症候群，ＴＹＰＥＩＩＩ；ＵＳＨ３）。この遺伝子は以下の位置において一塩
基多型候補を含む：９６５＝Ｋ；１３１８＝Ｒ。公共ドメインにおけるこの遺伝
子のＥＳＴは以下のとおりである：なし。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置
において反復配列を有する：２９５−３１４。
【０４３６】 ＳＧＫ４０９，ＫＩＡＡ０３０３（配列番号３，配列番号６０をコード）は７
７８５ヌクレオチドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開
始し，位置７５６９で終了し，７５６９ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。
予測蛋白質は２５２３アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチ
オニンから終止コドンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミ
リー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＡＧＣ，ＭＡＳＴ。この遺伝子は染
色体位置５ｑｌ２．１にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連
づけられている：精巣の癌（１５ｑｌ５−ｑｔｅｒ；２／１１）（Ｋｎｕｕｔｉ
ｌａ， ｅｔ ａｌ．）。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含
む：６２８２＝Ｍ；６３２７＝Ｍ。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは
以下のとおりである：ＢＥ５１５３２６，ＢＥ２６７２９４，ＡＡ９２６６４２
。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置において反復配列を有する：２３５５−
２３７５。
【０４３７】 ＳＧＫ０２１（配列番号４，配列番号６１をコード）は９８１ヌクレオチドの
長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置９８１で終
了し，９８１ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は３２７アミノ
酸の長さである。この配列は新規キナーゼの全触媒領域を含む。これは以下のよ
うに分類される（スーパーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，Ａ
ＧＣ，Ｍｏ３Ｃｌｌ．ｌ＿ｃｅ。この遺伝子は染色体位置５ｑ３１．２にマップ
される。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている：軟骨肉腫（２
／４５），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。この遺伝子は以下の位置に
おいて一塩基多型候補を含む：９＝Ｓ；９７＝Ｒ。公共ドメインにおけるこの遺
伝子のＥＳＴは以下のとおりである：なし。この遺伝子は以下のヌクレオチド位
置において反復配列を有する：なし。
【０４３８】 ＳＧＫ４１０（配列番号５，配列番号６２をコード）は２２６０ヌクレオチド
の長さである。オープンリーディングフレームは位置７２で開始し，位置１９６
４で終了し，１８９３ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は６３
１アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンから終止コド
ンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリ
ー）：蛋白質キナーゼ，ＡＧＣ，ＰＫＣ。この遺伝子は染色体位置Ｘｑ２３にマ
ップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている：前立腺の
癌（Ｘｑ２３−ｑｔｅｒ；１／９），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。
この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：検出されず。公共ドメ
インにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：なし。この遺伝子は以
下のヌクレオチド位置において反復配列を有する：なし。
【０４３９】 ＳＧＫ０６９（配列番号６，配列番号６３をコード）は１７１６ヌクレオチド
の長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置１７１６
で終了し，１７１６ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は５７２
アミノ酸の長さである。この配列は新規キナーゼの全触媒領域を含む。これは以
下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナー
ゼ，ＡＧＣ，ユニーク。この遺伝子は染色体位置１９ｐｌ１−ｐｌ３にマップさ
れる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている：小細胞肺癌（１
９ｐｌ２，２／２２）（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。この遺伝子は以
下の位置において一塩基多型候補を含む：１１８０＝Ｓ（ｓｓ１３１７６２９）
；２１０＝Ｙ（ｓｓ１６８８８１３）。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳ
Ｔは以下のとおりである：なし。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置において
反復配列を有する：１６５６−１６７８。
【０４４０】 ＳＧＫ１１０（配列番号７，配列番号６４をコード）は１１１９ヌクレオチド
の長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置１１１９
で終了し，１１１９ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は３７３
アミノ酸の長さである。この配列は部分的キナーゼ触媒ドメインである。これは
以下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナ
ーゼ，ＡＧＣ，ユニーク。この遺伝子は染色体位置１９ｑｌ３．４にマップされ
る。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている：乳の癌（１９ｑｌ
３．１−ｑｔｅｒ；１／３３），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。この
遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：５９７＝Ｒ（ｒｓ６５４４
３９）；２５２＝Ｙ（ｓｓ６６１４０６）。公共ドメインにおけるこの遺伝子の
ＥＳＴは以下のとおりである：なし。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置にお
いて反復配列を有する：なし。
【０４４１】 ＳＧＫ０５３，ＣＫＬｉＫ（配列番号８，配列番号６５をコード）は１０７４
ヌクレオチドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，
位置１０７１で終了し，１０７１ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋
白質は３５７アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンか
ら終止コドンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群
／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＡＭＫ，ＡＭＰＫ。この遺伝子は染色体位
置１０ｐｌ４にマップされる。この染色体位置は不整脈惹起性右心室形成異常（
ＯＭＩＭ，６０４４０１ＡＲＲＨＹＴＨＭＯＧＥＮＩＣＲＩＧＨＴＶＥＮＴＲＩ
ＣＵＬＡＲＤＹＳＰＬＡＳＩＡ，ＦＡＭＩＬＩＡＬ）に関連づけられている。こ
の遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：６０５＝Ｙ；５０９＝Ｍ
。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：ＢＥ２６６
９５５，ＡＩ９２３７０４，ＡＷ５０１０４７。この遺伝子は以下のヌクレオチ
ド位置において反復配列を有する：４１９−４４０。
【０４４２】 ＳＧＫ１２４（配列番号９，配列番号６６をコード）は１０７７ヌクレオチド
の長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置１０７４
で終了し，１０７４ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は３５８
アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンから終止コドン
まで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリー
）：蛋白質キナーゼ，ＣＡＭＫ，ＡＭＰＫ。この遺伝子は染色体位置２０ｐｌ２
．２−ｐｌ３にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられ
ている：胃食道接合部の癌（２０ｐｌ２；３／２８），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ，
ｅｔ ａｌ．）；左心室の家族性非コンパクション（ＯＭＩＭ，６０４１６９Ｎ
ＯＮＣＯＭＰＡＣＴＩＯＮ ＯＦ ＬＥＦＴ ＶＥＮＴＲＩＣＵＬＡＲ ＭＹＯ
ＣＡＲＤＩＵＭ，ＦＡＭＩＬＩＡＬ ＩＳＯＬＡＴＥＤ，ＡＵＴＯＳＯＭＡＬ
ＤＯＭＩＮＡＮＴ，２０ｐｌ３）。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型
候補を含む：１８８＝Ｓ；３３３＝Ｙ。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳ
Ｔは以下のとおりである：ＢＦ０２６１４５，ＢＥ２９８８９３。この遺伝子は
以下のヌクレオチド位置において反復配列を有する：なし。
【０４４３】 ＳＧＫ２５４，ＣＡＭＫＫａ（配列番号１０，配列番号６７をコード）は１５
４２ヌクレオチドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始
し，位置１５３９で終了し，１５３９ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予
測蛋白質は５１３アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニ
ンから終止コドンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー
／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＡＭＫ，ＣＡＭＫ。この遺伝子は染色
体位置１７ｐｌ３．３にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連
づけられている：頚癌で喪失（ｌｏｓｓ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ，
Ｌａｚｏ，Ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｃｅｒｖｉ
ｃａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ．１９９９，Ａｕｇ；８
０（１２）：２００８−１８．Ｒｅｖｉｅｗ）。この遺伝子は以下の位置におい
て一塩基多型候補を含む：５５５＝Ｒ（ｓｓ８４２６５）；１１４８＝Ｒ。公共
ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：ＢＥ７８３１４９
。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置において反復配列を有する：なし。
【０４４４】 ＳＧＫ２９７，ＣａＭＫＩｂ２（配列番号１１，配列番号６８をコード）は１
０３２ヌクレオチドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開
始し，位置１０２９で終了し，１０２９ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。
予測蛋白質は３４３アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオ
ニンから終止コドンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリ
ー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＡＭＫ，ＣＡＭＫ。この遺伝子は染
色体位置Ｘｑ２８にマップされる。この染色体位置の転座は以下のヒト疾病に関
連づけられている：ヒトＴ細胞プロリンパ球性白血病（Ｌａｉｎｅ， ｅｔ ａ
ｌ．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ．２０００Ａｕｇ；６（２）：３９５−４０７）；精神遅
滞（ｅ．ｇ．，Ｒｕｓｓｏ， ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｍｅｄ Ｇｅｎｅｔ．
２０００Ｏｃｔ２３；９４（５）：３７６−８２）。また外套細胞リンパ腫に関
連づけられている（Ｘｑ２６−ｑ２８，５／５０）．（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅ
ｔ ａｌ．）。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：７７＝
Ｋ。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：ＡＩ６９
６１２３，ＡＩ１４１６５７。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置において反
復配列を有する：なし。
【０４４５】 ＳＧＫ４１１，ＣａＭＫＩＩデルタ２（配列番号１２，配列番号６９をコード
）は１５００ヌクレオチドの長さである。オープンリーディングフレームは位置
１で開始し，位置１４９７で終了し，１４９７ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与
える。予測蛋白質は４９９アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始
メチオニンから終止コドンまで）。これは以下のように分類される（スーパーフ
ァミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＡＭＫ，ＣＡＭＫ。この遺伝
子は染色体位置４ｑ２５にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関
連づけられている：発達性緑内障（リーゲル症候群，虹彩発育不全，および虹彩
角発育不全；Ｃｒａｉｇ， ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｏｐｈｔｈａｌ
ｍｏｌ．１９９９Ａｐｒ；１０（２）：１２６−３４）。この遺伝子は以下の位
置において一塩基多型候補を含む：１５＝Ｍ；１３８７＝Ｓ（ｓｓ１５３１０９
１）。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：ＡＷ５
０２２４８，ＡＷ５０４９８１，ＡＡ３１６０３８。この遺伝子は以下のヌクレ
オチド位置において反復配列を有する：なし。
【０４４６】 ＳＧＫ０２７（配列番号１３，配列番号７０をコード）は１３１１ヌクレオチ
ドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置１３０
８で終了し，１３０８ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は４３
６アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンから終止コド
ンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリ
ー）：蛋白質キナーゼ，ＣＡＭＫ，ＥＭＫ。この遺伝子は染色体位置５ｑｌｌ−
ｑｌｌ．ｌにマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられて
いる：骨の悪性線維性組織球腫（１／２６）（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ
．）。またＢ−細胞非ホジキンリンパ腫と関連づけられている（Ｗｌｏｄａｒｓ
ｋａ， ｅｔ ａｌ．Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ Ｃｅｌｌ Ｇｅｎｅｔ．１９９４；
６５（３）：１７９−８３）。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補
を含む：４５＝Ｙ。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりで
ある：ＢＥ５５１９２６，ＡＩ６０９７５１，ＡＷ１３８６５３。この遺伝子は
以下のヌクレオチド位置において反復配列を有する：なし。
【０４４７】 ＳＧＫ０４６ｂ（配列番号１４，配列番号７１）は２２５ヌクレオチドの長さ
である。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置２２５で終了し
，２２５ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は７５アミノ酸の長
さである。この配列は部分的キナーゼ触媒ドメインである。これは以下のように
分類される（スーパーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＡＭ
Ｋ，ＥＭＫ。この遺伝子は染色体位置３ｐ２４．１にマップされる。この染色体
位置は以下のヒト疾病と関連づけられている：軟部組織の悪性線維性組織球腫（
３ｐ２４−ｐ２６，２／３０）（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。この遺
伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：検出されず。公共ドメインに
おけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：なし。この遺伝子は以下のヌ
クレオチド位置において反復配列を有する：なし。
【０４４８】 ＳＧＫ０４６ｃ（配列番号１５，配列番号７２をコード）は１１７ヌクレオチ
ドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置１１７
で終了し，１１７ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は３９アミ
ノ酸の長さである。この配列は部分的キナーゼ触媒ドメインである。これは以下
のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ
，ＣＡＭＫ，ＥＭＫ。この遺伝子は染色体位置３ｐ２４．１にマップされる。こ
の染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている：軟部組織の悪性線維性組
織球腫（３ｐ２４−ｐ２６，２／３０）（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）
。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：検出されず。公共ド
メインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：なし。この遺伝子は
以下のヌクレオチド位置において反復配列を有する：なし。
【０４４９】 ＳＧＫ０８９（配列番号１６，配列番号７３をコード）は２５２ヌクレオチド
の長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置２５２で
終了し，２５２ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は８４アミノ
酸の長さである。この配列は部分的キナーゼ触媒ドメインである。これは以下の
ように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，
ＣＡＭＫ，ＥＭＫ。この遺伝子は染色体位置３ｐ２５．３にマップされる。この
染色体位置はヒト疾病とは関連づけられていない。この遺伝子は以下の位置にお
いて一塩基多型候補を含む：検出されず。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥ
ＳＴは以下のとおりである：なし。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置におい
て反復配列を有する：なし。
【０４５０】 ＳＧＫ１３３（配列番号１７，配列番号７４をコード）は２３８５ヌクレオチ
ドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置２３８
２で終了し，２３８２ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は７９
４アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンから終止コド
ンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリ
ー）：蛋白質キナーゼ，ＣＡＭＫ，ＥＭＫ。この遺伝子は染色体位置７ｐｌ１．
２−ｐ２１にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられて
いる：骨の悪性線維性組織球腫（１／２６），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａ
ｌ．）。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：２００３＝Ｓ
；１６７３＝Ｓ。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりであ
る：ＢＥ２２２９４１。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置において反復配列
を有する：なし。
【０４５１】 ＳＧＫ００４，ＭＳＫ（配列番号１８，配列番号７５をコード）は２３６１ヌ
クレオチドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位
置２３５８で終了し，２３５８ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白
質は７８６アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンから
終止コドンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／
ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＡＭＫ，ＥＭＫ−１。この遺伝子は染色体位
置２１ｑ２２．３にマップされる。重症眼性変質および後部脳ヘルニア（コブラ
ック症候群）を引き起こす遺伝子が２１ｑ２２３にマップされている（Ｓｅｒｔ
ｉｅ， ｅｔ ａｌ，Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ １９９６Ｊｕｎ；５（６）
：８４３−７）。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：１８
５３＝Ｙ（ｓｓ５７１２３９）。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以
下のとおりである：ＡＷ５０３５００。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置に
おいて反復配列を有する：なし。
【０４５２】 ＳＧＫ００６（配列番号１９，配列番号７６をコード）は７８９ヌクレオチド
の長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置７８９で
終了し，７８９ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は２６３アミ
ノ酸の長さである。この配列は新規キナーゼの全触媒領域を含む。これは以下の
ように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，
ＣＡＭＫ，ＥＭＫ−１。この遺伝子は染色体位置１６ｑｌ６．１にマップされる
。この染色体位置はヒト疾病とは関連づけられていない。この遺伝子は以下の位
置において一塩基多型候補を含む：４＝Ｓ（ｓｓ１６０９８５２）。公共ドメイ
ンにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：なし。この遺伝子は以下
のヌクレオチド位置において反復配列を有する：なし。
【０４５３】 ＳＧＫ１８０，ＳＮＲＫ（配列番号２０，配列番号７７をコード）は２２９８
ヌクレオチドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，
位置２２９５で終了し，２２９５ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋
白質は７６５アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンか
ら終止コドンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群
／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＡＭＫ，ＥＭＫ−１。この遺伝子は染色体
位置３ｐ２１．３１にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づ
けられている：膀胱の癌（１／１４），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）
。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：１８１７＝Ｓ。公共
ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：ＡＡ４４７８１２
，ＡＩ３７９９５４，ＡＡ１９９６３９。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置
において反復配列を有する：１３３２−１３５３。
【０４５４】 ＳＧＫ３８６，ＭＬＣＫｓ（配列番号２１，配列番号７８をコード）は１８３
６ヌクレオチドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し
，位置１８３６で終了し，１８３６ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測
蛋白質は６１２アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニン
から終止コドンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／
群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＡＭＫ，ＭＬＣＫ。この遺伝子は染色体
位置２０ｑｌ１．１にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づ
けられている：乳頭状腎臓細胞癌腫（Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ．１９９９Ｍａｒ；
７９（３）：３１１−６）。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を
含む：８３５＝Ｍ。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりで
ある：ＡＡ１９７０７２，Ｒ０２８２４。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置
において反復配列を有する：なし。
【０４５５】 ＳＧＫ００３（配列番号２２，配列番号７９をコード）は１０１４ヌクレオチ
ドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置１０１
４で終了し，１０１４ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は３３
７アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンから終止コド
ンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリ
ー）：蛋白質キナーゼ，ＣＫＩ，ＣＫＩ。この遺伝子は染色体位置１３ｑｌ４．
１１にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている：
ファローピウス管癌（１３ｑｌ４−ｑｔｅｒ；１／１２）（Ｋｎｕｕｔｉｌａ，
ｅｔ ａｌ．）。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：検
出されず。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：な
し。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置において反復配列を有する：なし。
【０４５６】 ＳＧＫ０６６（配列番号２３，配列番号８０をコード）は１２００ヌクレオチ
ドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置１２０
０で終了し，１２００ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は４０
０アミノ酸の長さである。この配列は新規キナーゼの全触媒領域を含む。これは
以下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナ
ーゼ，ＣＫＩ，ＣＫＩ。この遺伝子は染色体位置１５ｑｌ５にマップされる。こ
の染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている：精巣の癌（２／１１），
（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。この遺伝子は以下の位置において一塩
基多型候補を含む：検出されず。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以
下のとおりである：ＡＡ２３４４５１。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置に
おいて反復配列を有する：４８６−５０４。
【０４５７】 ＳＧＫ０４１，ＮＫＩＡＭＲＥ（配列番号２４，配列番号８１をコード）は１
７７３ヌクレオチドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開
始し，位置１７７３で終了し，１７７３ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。
予測蛋白質は５９１アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオ
ニンから終止コドンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリ
ー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＭＧＣ，ＣＤＫ。この遺伝子は染色
体位置５ｑ３１．１にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づ
けられている：消化管の癌（５ｑ３１−ｑｔｅｒ），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅ
ｔ ａｌ．）。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：１０３
３＝Ｒ；１２８４＝Ｒ；１１８１＝Ｙ。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳ
Ｔは以下のとおりである：ＡＩ６８４６２５，ＡＩ６９４３５２，ＡＩ９１２５
４７。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置において反復配列を有する：なし。
【０４５８】 ＳＧＫ１１２（配列番号２５，配列番号８２をコード）は１０８３ヌクレオチ
ドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置１０８
０で終了し，１０８０ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は３６
０アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンから終止コド
ンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリ
ー）：蛋白質キナーゼ，ＣＭＧＣ，ＣＤＫ。この遺伝子は染色体位置ＣＨＲ２に
マップされる。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：検出さ
れず。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：ＡＡ６
２６８５９。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置において反復配列を有する：
なし。
【０４５９】 ＳＧＫ０３８，ＥＲＫ７（配列番号２６，配列番号８３をコード）は１６７７
ヌクレオチドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，
位置１６７４で終了し，１６７４ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋
白質は５５８アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンか
ら終止コドンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群
／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＭＧＣ，ＭＡＰＫ。この遺伝子の染色体位
置のマップは不明である。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含
む：検出されず。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりであ
る：ＢＥ４６４５６０，ＡＩ０４９６６７。この遺伝子は以下のヌクレオチド位
置において反復配列を有する：５０８−５２８。
【０４６０】 ＳＧＫ１５８（配列番号２７，配列番号８４をコード）は２２５６ヌクレオチ
ドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置２２５
３で終了し，２２５３ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は７５
１アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンから終止コド
ンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリ
ー）：蛋白質キナーゼ，細菌ＰＫ，ＡＢＣ１。この遺伝子は染色体位置ｌｑ４２
．１１−４２．２にマップされる。この染色体位置はヒト疾病とは関連づけられ
ていない。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：１７５２＝
Ｙ（ｓｓ１５２９３３６）。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下の
とおりである：ＢＥ７９７０６０，ＡＷ００６９７１，ＡＩ８１９４１１。この
遺伝子は以下のヌクレオチド位置において反復配列を有する：１２４６−１２６
５。
【０４６１】 ＳＧＫ４２９（配列番号２８，配列番号８５をコード）は１８８１ヌクレオチ
ドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置１８７
８で終了し，１８７８ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は６２
６アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンから終止コド
ンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリ
ー）：蛋白質キナーゼ，細菌ＰＫ，ＡＢＣ１。この遺伝子は染色体位置７ｑ３４
−３５にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている
：難聴（Ｍｕｓｔａｐｈａ， ｅｔ ａｌ．ＥｕｒＪ．ＨｕｍＧｅｎｅｔ．１９
９８Ｍａｙ−Ｊｕｎ；６（３）：２４５−５０）。この遺伝子は以下の位置にお
いて一塩基多型候補を含む：１９６＝Ｒ；９１９＝Ｙ（ｓｓ１５４９８３５）；
１８６５＝Ｙ（ｓｓ１５１７７４９）。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳ
Ｔは以下のとおりである：ＢＥ８７７５４１，ＢＥ７４５４５９，ＢＥ２５９１
２４。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置において反復配列を有する：１６３
０−１６５１。
【０４６２】 ＳＧＫ１５２，ＳＵＤＤ（配列番号２９，配列番号８６をコード）は１５６０
ヌクレオチドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，
位置１５５７で終了し，１５５７ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋
白質は５１９アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンか
ら終止コドンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群
／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，細菌ＰＫ，ＲＩ０１。この遺伝子は染色体位
置１８ｐｌ１．１にマップされる。この染色体位置はヒト疾病とは関連づけられ
ていない。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：９７２＝Ｍ
公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：ＢＥ６２１２
７７，ＡＡ４５２７０６この遺伝子は以下のヌクレオチド位置において反復配列
を有する：なし。
【０４６３】 ＳＧＫ０７７（配列番号３０，配列番号８７をコード）は２３９７ヌクレオチ
ドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置２３９
４で終了し，２３９４ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は７９
８アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンから終止コド
ンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリ
ー）：蛋白質キナーゼ，その他，Ｃ２６Ｃ２ｃｅ。この遺伝子は染色体位置１７
ｐｌ３．３にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられて
いる：頚癌で喪失（ｌｏｓｓ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ，Ｌａｚｏ，
Ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃ
ａｒｃｉｎｏｍａ．Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ．１９９９Ａｕｇ；８０（１２）：
２００８−１８．Ｒｅｖｉｅｗ）。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型
候補を含む：３９０＝Ｙｓｓ１６５８８８５）；６１１＝Ｒ（ｓｓ１６２９７６
０）；９８５＝Ｙ（ｓｓ１６２９７５９）。公共ドメインにおけるこの遺伝子の
ＥＳＴは以下のとおりである：ＡＡ５０４５６３，ＡＷ７５２３３７。この遺伝
子は以下のヌクレオチド位置において反復配列を有する：なし。
【０４６４】 ＳＧＫ０９３，Ｗｎｋ３（配列番号３１，配列番号８８をコード）は４５４２
ヌクレオチドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，
位置４５３９で終了し，４５３９ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋
白質は１５１３アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニン
から終止コドンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／
群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，その他，Ｃ２６Ｃ２ｃｅ。この遺伝子は染
色体位置１７ｑ２１．１−２にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病
と関連づけられている：卵巣の癌（１７ｑ２１−ｑｔｅｒ，３／４７），（Ｋｎ
ｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型
候補を含む：３２７９＝Ｋ；４０７８＝Ｍ。公共ドメインにおけるこの遺伝子の
ＥＳＴは以下のとおりである：ＢＦ０００３６９，ＡＩ６５０７８６，ＡＡ８７
２５８６。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置において反復配列を有する：な
し。
【０４６５】 ＳＧＫ０７４（配列番号３２，配列番号８９をコード）は１０６５ヌクレオチ
ドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置１０６
５で終了し，１０６５ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は３５
５アミノ酸の長さである。この配列は新規キナーゼの全触媒領域を含む。これは
以下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナ
ーゼ，その他，ＤＹＲＫ。この遺伝子は染色体位置１９ｐｌ２−１９ｑｌ３にマ
ップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている：小細胞肺
癌（２／２２），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。この遺伝子は以下の
位置において一塩基多型候補を含む：検出されず。公共ドメインにおけるこの遺
伝子のＥＳＴは以下のとおりである：なし。この遺伝子は以下のヌクレオチド位
置において反復配列を有する：なし。
【０４６６】 ＳＧＫ０８７（配列番号３３，配列番号９０をコード）は１８８７ヌクレオチ
ドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置１８８
４で終了し，１８８４ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は６２
８アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンから終止コド
ンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリ
ー）：蛋白質キナーゼ，その他，ＤＹＲＫ。この遺伝子は染色体位置１２ｐｌ３
．３にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている：
高血圧症（Ｄｉｓｓｅ−Ｎｉｃｏｄｅｍｅ， ｅｔ ａｌ．Ａｍ Ｊ Ｈｕｍ
Ｇｅｎｅｔ．２０００Ａｕｇ；６７（２）：３０２−１０）。この遺伝子は以下
の位置において一塩基多型候補を含む：２６９＝Ｒ（ｓｓ８８１３６）。公共ド
メインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：ＢＥ２４３９９５。
この遺伝子は以下のヌクレオチド位置において反復配列を有する：１２６４−１
２８３。
【０４６７】 ＳＧＫ２９５，ＫＩＳ（配列番号３４，配列番号９１をコード）は１２６０ヌ
クレオチドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位
置１２５７で終了し，１２５７ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白
質は４１９アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンから
終止コドンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／
ファミリー）：蛋白質キナーゼ，その他，ＤＹＲＫ。この遺伝子は染色体位置ｌ
ｑ２３．３にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられて
いる：血液新生物（１ｌｑ２３−ｑｔｅｒ；１／１），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ，
ｅｔ ａｌ．）。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：３５
５＝Ｗ。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：ＢＥ
８９５１１９，ＡＩ２２１２３４，ＢＥ１４５６０７。この遺伝子は以下のヌク
レオチド位置において反復配列を有する：なし。
【０４６８】 ＳＧＫ４１９（配列番号３５，配列番号９２をコード）は１９８６ヌクレオチ
ドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置１９８
３で終了し，１９８３ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は６６
１アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンから終止コド
ンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリ
ー）：蛋白質キナーゼ，その他，ＮＡＫ。この遺伝子は染色体位置４ｑ２４にマ
ップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている：軟部組織
の悪性線維性組織球腫（１４ｑ２４−ｑ３１；１／５８），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ
， ｅｔ ａｌ．）。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおり
である：ＡＩ７３５３９１，ＡＷ９６７３３９，ＡＡ７０３５１７。この遺伝子
は以下のヌクレオチド位置において反復配列を有する：なし。
【０４６９】 ＳＧＫ１２５，ＭＹ０３Ａ（配列番号３６，配列番号９３をコード）は４８４
８ヌクレオチドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し
，位置４８４５で終了し，４８４５ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測
蛋白質は１６１５アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニ
ンから終止コドンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー
／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，その他，ＮｉｎａＣ。この遺伝子は染色
体位置１０ｐｌ２．３２にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関
連づけられている：外套細胞リンパ腫（１０ｐｌ２−ｐｌ３；２／４５），（Ｋ
ｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。この遺伝子は以下の位置において一塩基多
型候補を含む：３１４５＝Ｙ；３２０４＝Ｙ。公共ドメインにおけるこの遺伝子
のＥＳＴは以下のとおりである：ＡＷ１９６３７３，ＡＡ４７６６９７。この遺
伝子は以下のヌクレオチド位置において反復配列を有する：なし。
【０４７０】 ＳＧＫ４４５（配列番号３７，配列番号９４をコード）は２０４ヌクレオチド
の長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置２０４で
終了し，２０４ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は６８アミノ
酸の長さである。この配列は部分的キナーゼ触媒ドメインである。これは以下の
ように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，
その他，ＰＬＫ。この遺伝子の染色体位置のマップは不明である（Ｋｎｕｕｔｉ
ｌａ， ｅｔ ａｌ．）。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含
む：検出されず。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりであ
る：なし。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置において反復配列を有する：１
８３−２００。
【０４７１】 ＳＧＫ１２７（配列番号３８，配列番号９５をコード）は２８３８ヌクレオチ
ドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置２８３
５で終了し，２８３５ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は９４
５アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンから終止コド
ンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリ
ー）：蛋白質キナーゼ，その他，ＲＡＦ。この遺伝子は染色体位置１２ｑ２４．
２１にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている：
呼吸管および女性生殖器の癌（１２ｑ２４．２）．（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ
ａｌ．）。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：５０１＝
Ｓ（ｓｓ２００５７８６）。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下の
とおりである：なし。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置において反復配列を
有する：なし。
【０４７２】 ＳＧＫ００９，ＡＮＫＲＤ３（配列番号３９，配列番号９６をコード）は２４
９９ヌクレオチドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始
し，位置２４９６で終了し，２４９６ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予
測蛋白質は８３２アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニ
ンから終止コドンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー
／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，その他，ＲＩＰ。この遺伝子は染色体位
置２１ｑ２２．３にマップされる。重症眼性変質および後部脳ヘルニア（コブラ
ック症候群）を引き起こす遺伝子は２１ｑ２２３にマップされている（Ｓｅｒｔ
ｉｅ， ｅｔ ａｌ，Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ １９９６Ｊｕｎ；５（６）
：８４３−７）（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。この遺伝子は以下の位
置において一塩基多型候補を含む：検出されず。公共ドメインにおけるこの遺伝
子のＥＳＴは以下のとおりである：なし。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置
において反復配列を有する：４２７−４５２。
【０４７３】 ＳＧＫ４２１，ＳＴＫ２２Ａ，ＴＳＫ１（配列番号４０，配列番号９７をコー
ド）は１１０４ヌクレオチドの長さである。オープンリーディングフレームは位
置１で開始し，位置１１０１で終了し，１１０１ヌクレオチドの長さのＯＲＦを
与える。予測蛋白質は３６７アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開
始メチオニンから終止コドンまで）。これは以下のように分類される（スーパー
ファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，その他，ＳＴＫ２２Ａ。この
遺伝子は染色体位置５ｑ３１．１にマップされる。この染色体位置は以下のヒト
疾病と関連づけられている：軟骨肉腫（５ｑ３１−ｑ３２；２／４５），（Ｋｎ
ｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型
候補を含む：５１０＝Ｍ（ｓｓ２０５５１２６）；２７９＝Ｒ（ｓｓ２０５５１
２５）。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：なし
。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置において反復配列を有する：なし。
【０４７４】 ＳＧＫ０４７（配列番号４１，配列番号９８をコード）は９３ヌクレオチドの
長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置９３で終了
し，９３ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は３１アミノ酸の長
さである。この配列は部分的キナーゼ触媒ドメインである。これは以下のように
分類される（スーパーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，その他
，ＳＴＫＲ。この遺伝子は染色体位置１Ｏｐ１１．２１にマップされる。この染
色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている：頭頚部の扁平上皮癌（ｌＯｐ
ｌｌ−ｐｌ３；１／３０），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。この遺伝
子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：検出されず。公共ドメインにお
けるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：なし。この遺伝子は以下のヌク
レオチド位置において反復配列を有する：なし。
【０４７５】 ＳＧＫ１９６（配列番号４２，配列番号９９をコード）は１０５３ヌクレオチ
ドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置１０５
０で終了し，１０５０ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は３５
０アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンから終止コド
ンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリ
ー）：蛋白質キナーゼ，その他，ユニーク。この遺伝子の染色体位置のマップは
不明である。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：９９＝Ｒ
。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：なし。この
遺伝子は以下のヌクレオチド位置において反復配列を有する：なし。
【０４７６】 ＳＧＫ３９６（配列番号４３，配列番号１００をコード）は，１４１９ヌクレ
オチドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置１
４１６で終了し，１４１６ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は
４７２アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンから終止
コドンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファ
ミリー）：蛋白質キナーゼ，その他，ユニーク。この遺伝子の染色体位置のマッ
プは不明である。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：検出
されず。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：ＡＬ
０４８８５７，ＡＬ０４８８５８，Ｔ０９０６８。この遺伝子は以下のヌクレオ
チド位置において反復配列を有する：なし。
【０４７７】 ＳＧＫ２７９，ＰＫＮ（配列番号４４，配列番号１０１をコード）は１２７５
ヌクレオチドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，
位置１２７２で終了し，１２７２ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋
白質は４２４アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンか
ら終止コドンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群
／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，その他，ＹＷＹ３＿ｃｅ。この遺伝子は染色
体位置１６ｑ２２．３にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連
づけられている：胃の広汎性大細胞型リンパ腫（１６ｑ２２−ｔｅｒ；１／７）
，（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。この遺伝子は以下の位置において一
塩基多型候補を含む：６６５＝Ｙ。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは
以下のとおりである：なし。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置において反復
配列を有する：なし。
【０４７８】 ＳＧＫ０３７（配列番号４５，配列番号１０２をコード）は１９４７ヌクレオ
チドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置１９
４７で終了し，１９４７ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は６
４９アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンから終止コ
ドンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミ
リー）：蛋白質キナーゼ，ＳＴＥ，ＮＥＫ。この遺伝子は染色体位置１３ｑｌ４
．１２にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている
：ファローピウス管癌（１３ｑｌ４−ｑｔｅｒ；１／１２）（Ｋｎｕｕｔｉｌａ
， ｅｔ ａｌ．）。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：
検出されず。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：
ＡＡ３９３１０８。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置において反復配列を有
する：８８６−９１２。
【０４７９】 ＳＧＫ０６０（配列番号４６，配列番号１０３をコード）は１９３８ヌクレオ
チドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置１９
３５で終了し１９３５ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は６４
５アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンから終止コド
ンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリ
ー）：蛋白質キナーゼ，ＳＴＥ，ＮＥＫ。この遺伝子は染色体位置３ｑ２２．１
にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている：外套
細胞リンパ腫（１３ｑ２２−ｑ３２；３／７２），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ
ａｌ．）。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：１４６３
＝Ｗ。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：ＢＥ３
８８６７２，ＡＡ４１２１１４。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置において
反復配列を有する：４６５−４８８；１４６８−１４８７。
【０４８０】 ＳＧＫ０８０（配列番号４７，配列番号１０４をコード）は１３３８ヌクレオ
チドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置１３
３８で終了し，１３３８ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は４
４６アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンから終止コ
ドンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミ
リー）：蛋白質キナーゼ，ＳＴＥ，ＮＥＫ。この遺伝子は染色体位置２２ｑｌ１
．２にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている：
非小細胞肺癌（１／５０），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。この遺伝
子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：１１５９＝Ｒ（ｓｓ１３６７６
７１）；４２２＝Ｒ（ｓｓ１８５５００９）。公共ドメインにおけるこの遺伝子
のＥＳＴは以下のとおりである：なし。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置に
おいて反復配列を有する：なし。
【０４８１】 ＳＧＫ００２（配列番号４８，配列番号１０５をコード）は１８２９ヌクレオ
チドの長さである。オープンリーディングフレームは位置３２７で開始し，位置
１５２３で終了し，１１９７ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質
は３９９アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンから終
止コドンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／フ
ァミリー）：蛋白質キナーゼ，ＳＴＥ，ＳＴＥ１１。この遺伝子は染色体位置７
ｑ３２．２にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられて
いる：非小細胞肺癌７ｑ３２−ｑ３５；１／５０），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅ
ｔ ａｌ．）。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：１１６
５＝Ｒ；９８３＝Ｍ。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおり
である：なし。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置において反復配列を有する
：なし。
【０４８２】 ＳＧＫ０５８（配列番号４９，配列番号１０６をコード）は８３４ヌクレオチ
ドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置８３４
で終了し，８３４ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は２７８ア
ミノ酸の長さである。この配列は新規キナーゼの全触媒領域を含む。これは以下
のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ
，ＳＴＥ，ＳＴＥ１１。この遺伝子は染色体位置２ｑ２１．２にマップされる。
この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている：膀胱癌腫（１２ｑ２１
−ｑ２４；１／１６），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。この遺伝子は
以下の位置において一塩基多型候補を含む：検出されず。公共ドメインにおける
この遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：なし。この遺伝子は以下のヌクレオ
チド位置において反復配列を有する：７３３−７５１。
【０４８３】 ＳＧＫ１０３（配列番号５０，配列番号１０７をコード）は８４ヌクレオチド
の長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置８４で終
了し，８４ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は２８アミノ酸の
長さである。この配列は部分的キナーゼ触媒ドメインである。これは以下のよう
に分類される（スーパーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＳＴ
Ｅ，ＳＴＥ１１。この遺伝子は染色体位置５ｐｌ４．３にマップされる。この染
色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている：軟部組織の悪性線維性組織球
腫（６／８８），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。この遺伝子は以下の
位置において一塩基多型候補を含む：検出されず。公共ドメインにおけるこの遺
伝子のＥＳＴは以下のとおりである：なし。この遺伝子は以下のヌクレオチド位
置において反復配列を有する：なし。
【０４８４】 ＳＧＫ０３５（配列番号５１，配列番号１０８をコード）は１０４４ヌクレオ
チドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置１０
４４で終了し，１０４４ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は３
４８アミノ酸の長さである。この配列は部分的キナーゼ触媒ドメインである。こ
れは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質
キナーゼ，ＳＴＥ，ＳＴＥ２０。この遺伝子は染色体位置ＣＨＲ１５にマップさ
れる。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：２２７３＝Ｙ。
公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：なし。この遺
伝子は以下のヌクレオチド位置において反復配列を有する：１３３−１５１；６
９５−７１３。
【０４８５】 ＳＧＫ０７５（配列番号５２，配列番号１０９をコード）は３３１８ヌクレオ
チドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置３３
１８で終了し，３３１８ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は１
１０６アミノ酸の長さである。この配列は新規キナーゼの全触媒領域を含む。こ
れは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質
キナーゼ，ＳＴＥ，ＳＴＥ２０。この遺伝子は染色体位置２ｑ３１．１にマップ
される。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている：頭頚部の扁平
上皮癌（２ｑ３１−ｑ３３；３／３０），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．
）。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：８８９＝Ｒ。公共
ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：なし。この遺伝子
は以下のヌクレオチド位置において反復配列を有する：なし。
【０４８６】 ＳＧＫ１８８，ＥｐｈＡ９（配列番号５３，配列番号１１０をコード）は３１
１２ヌクレオチドの長さである。オープンリーディングフレームは位置７４で開
始し，位置３１００で終了し，３０２７ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。
予測蛋白質は１００９アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチ
オニンから終止コドンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミ
リー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＴＫ，ＲＴＫ−１１。この遺伝子は
染色体位置ｌｐ３４．１−３４．３にマップされる。この染色体位置は以下のヒ
ト疾病と関連づけられている：精巣の癌（ｌｐ３４−ｐｔｅｒ；１／１１），（
Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。この遺伝子は以下の位置において一塩基
多型候補を含む：２１０４＝Ｙ（ｓｓ１９８６１２０）；２３１９＝Ｒ。公共ド
メインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：なし。この遺伝子は
以下のヌクレオチド位置において反復配列を有する：なし。
【０４８７】 ＳＧＫ０４０（配列番号５４，配列番号１１１をコード）は２７３０ヌクレオ
チドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置２７
２７で終了し，２７２７ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は９
０９アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンから終止コ
ドンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミ
リー）：蛋白質キナーゼ，ＴＫ，ユニーク。この遺伝子は染色体位置１２ｑｌ２
にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている：広汎
性大細胞型リンパ腫（２／６６），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。こ
の遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：１８６９＝Ｒ，１００４
＝Ｙ。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：ＢＥ１
７７８３０，ＡＦ１１４０６８，ＡＡ２８３６０８。この遺伝子は以下のヌクレ
オチド位置において反復配列を有する：４６０−４７９。
【０４８８】 ＳＧＫ３９０（配列番号５５，配列番号１１２をコード）は３４９５ヌクレオ
チドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置３４
９２で終了し，３４９２ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は１
１６４アミノ酸の長さである。この配列は全長である（開始メチオニンから終止
コドンまで）。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファ
ミリー）：蛋白質キナーゼ様，ＤＡＧｋｉｎ，ＤＡＧｋｉｎ。この遺伝子は染色
体位置１３ｑｌ４．２にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連
づけられている：ファローピウス管癌（１３ｑｌ４ｑｔｅｒ；１／１２）（Ｋｎ
ｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型
候補を含む：１３１４＝Ｒ。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下の
とおりである：ＢＥ７１５９６７，ＡＩ３３３５６５，ＡＷ０５２０３２。この
遺伝子は以下のヌクレオチド位置において反復配列を有する：なし。
【０４８９】 ＳＧＫ００７（配列番号５６，配列番号１１３をコード）は，２６５２ヌクレ
オチドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置２
６５２で終了し，２６５２ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は
８８４アミノ酸の長さである。この配列は新規キナーゼの全触媒領域を含む。こ
れは以下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質
キナーゼ様，ＧＣｙｃ，ＧＣｙｃ。この遺伝子は染色体位置１０ｑ２６．１１に
マップされる。この染色体位置はヒト疾病とは関連づけられていない（Ｋｎｕｕ
ｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補
を含む：検出されず。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおり
である：なし。この遺伝子は以下のヌクレオチド位置において反復配列を有する
：なし。
【０４９０】 ＳＧＫ０５０（配列番号５７，配列番号１１４をコード）は，１４４ヌクレオ
チドの長さである。オープンリーディングフレームは位置１で開始し，位置１４
４で終了し，１４４ヌクレオチドの長さのＯＲＦを与える。予測蛋白質は４８ア
ミノ酸の長さである。この配列は部分的キナーゼ触媒ドメインである。これは以
下のように分類される（スーパーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナー
ゼ様，ＧＣｙｃ，ＧＣｙｃ。この遺伝子は染色体位置９ｐｌ３．１−ｐｌ３．２
にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている：非小
細胞肺癌（１／５０）および精巣癌（４／１１）（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ
ａｌ．）。この遺伝子は以下の位置において一塩基多型候補を含む：検出されず
。公共ドメインにおけるこの遺伝子のＥＳＴは以下のとおりである：なし。この
遺伝子は以下のヌクレオチド位置において反復配列を有する：なし。
【０４９１】実施例２ａ：プローブの生成 プローブとして用いるためにゲノムフラグメントをＰＣＲクローニングした。
エクソンフラグメントは，ゲノムＤＮＡ起源（ＨＵＶＥＣまたはＨＭＥＣ）から
ＰＣＲ方法論によりクローニングした。オリゴについて用いたアニーリング温度
は，５０μｌ反応中で６８℃であった。５μｌのアリコートをアガロースゲル電
気泳動により分析して，正しいサイズのフラグメントが得られたことを確認した
。正しいサイズのフラグメントをアガロースゲルから切り出し，遺伝子を精製し
，ｐＣＲＴＯＰ０４ベクター（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）中にサブクローニングし
た。これらのライゲーションしたプラスミドをＥ．ｃｏｌｉ細菌（ＴＯＰ１０株
／Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）にトランスフォームし，アンピシリン抗生物質耐性を
用いて選択した。得られたコロニーは，１つの構築物につき４つを，アンピシリ
ンを含む培地中で成長させ，プラスミドＤＮＡを精製した。制限酵素消化分析を
行って，正しいＤＮＡ挿入物を確認した。Ｔ７およびＴ３プライマーを用いて，
正しいサイズのフラグメントを含むプラスミドの配列を確認した。ブロット用に
プローブとして用いるべきＤＮＡフラグメントは，制限酵素で消化し，これらの
フラグメントを精製することにより生成した。これらのフラグメントを，Ｂｏｅ
ｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍランダムヘキサマー標識キットを用いてアル
ファ−３２ＰｄＣＴＰを取り込ませることにより放射性標識した。放射性同位体
を取り込ませることにより，５Ｘ１０7−２Ｘ１０8ｃｐｍ／１００ｎｇのＤＮＡ
フラグメントを有するプローブを得た。フラグメントをクローニングするために
用いたＰＣＲプライマーは以下のとおりである： ＳＧＫ００３．５’ ＧＡＣＧＴＴＴＡＴＣＴＧＧＧＣＡＴＣＡＣＣＡＣＣ ＳＧＫ００３．３’ ＴＣＧＧＡＣＡＧＴＧＣＣＡＡＴＧＡＧＧＴＧＴＴＴ ＳＧＫ０７４．５’ ＧＴＧＡＴＴＧＡＣＴＴＣＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＧＣ ＳＧＫ０７４．３’ ＣＴＴＴＴＣＣＣＴＴＡＣＣＴＴＣＧＴＣＴＣＧＧＣＣＡ
Ｇ ＳＧＫ０７７．５’ ＣＣＧＧＧＡＣＣＴＧＧＧＡＧＣＣＧＧＣＴＴＴＴＣ ＳＧＫ０７７．３’ ＧＣＴＣＧＧＧＡＣＧＧＣＴＧＡＧＧＣＴＧＣＡＡＣ ＳＧＫ１２４．５’ ＡＡＧＡＡＧＣＴＧＧＴＧＣＴＧＧＡＧＡＡＧＣＴＧ ＳＧＫ１２４．３’ ＡＡＣＣＡＣＴＴＣＴＣＴＧＴＣＴＣＣＣＴＣＣＴＣ ＳＧＫ１８７．５’ ＴＣＣＧＡＣＡＣＣＡＴＡＡＣＴＧＡＧＴＴＡＣＡＧ ＳＧＫ１８７．３’ ＣＴＧＣＴＣＣＴＧＧＧＣＣＡＡＴＡＡＡＧＣ ＳＧＫ３８６．５’ ＣＣＴＧＡＴＧＧＧＴＧＴＣＴＣＡＣＣＴＣＣＴＣＴ ＳＧＫ３８６．３’ ＧＧＡＧＡＴＧＡＴＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＴＧＧＧ ＳＧＫ３９６．５’ ＴＴＧＧＡＧＧＧＣＴＣＡＧＡＡＧＡＧＧＡＣ ＳＧＫ３９６．３’ ＡＡＣＡＡＧＴＣＣＣＴＣＡＴＣＴＣＣＡＧＧＴＧＡ
【０４９２】実施例２ｂ：本発明のポリペプチドの発現分析 選択された遺伝子についての遺伝子発現パターンを，以下の４つの手法を用い
て研究した：１）Ｓｕｇｅｎで開発した組織マイクロアレイ，４５０以上の組織
を含み，標識遺伝子で探索する；２）４８のヒト組織のＰＣＲスクリーニング（
この手法では組織間の定量的発現レベルは得られないが，ＰＣＲにより検出可能
なレベルで遺伝子を発現する組織ならびに遺伝子をそのようなレベルで発現しな
い組織を同定することができる），３）Ｃｌｏｎｔｅｃｈからの市販の組織アレ
イ，標識遺伝子で探索する，および４）１つの遺伝子（ＳＧＫ０９３）について
，ノザンブロッティングによる分析。
【０４９３】 １）組織アレイ ４５０以上の組織または細胞株起源に由来する"ｃＤＮＡライブラリ"をナイロ
ン膜に固定化し，目的とする遺伝子に由来する３２Ｐ−標識ｃＤＮＡフラグメン
トで探索した。ｃＤＮＡを作成するためには，総ＲＮＡまたはｍＲＮＡを逆転写
反応においてテンプレートとして用いて，両端に特定の配列でタグ付けされた一
本鎖ｃＤＮＡ（ｓｓｃＤＮＡ）を生成した。特定の配列（ＣＤＳ：ＡＡＧＣＡＧ
ＴＧＧＴＡＡＣＡＡＣＧＣＡＧＡＧＴＡＣＴ30ＶＮ（Ｖ＝Ａ，Ｇ，ＣＮ＝Ａ，Ｇ
，Ｃ，Ｔ））を含むオリゴｄＴプライマーは，ｍＲＮＡの３’末端のポリＡトラ
ックにアニーリングし，リバーストランスクリプターゼ（ＭＭＬＶ Ｒｎａｓｅ
Ｈ-）はＲＮＡ鎖の末端に到達するまでアンチセンス鎖を転写し，ここで追加の
Ｃ残基を付加する。３つのＧで終わるプライマー（ＳＭＩＩ：ＡＡＧＣＡＧＴＧ
ＧＴＡＡＣＡＡＣＧＣＡＧＡＧＴＡＣＧＣＧＧＧまたはＭＬ２Ｇ：ＡＡＧＴＧＧ
ＣＡＡＣＡＧＡＧＡＴＡＡＣＧＣＧＴＡＣＧＣＧＧＧ）を加えると，これは付加
されたＣにアニーリングし，ＭＭＬＶはプライマー配列の残りをテンプレートと
して認識して転写を続ける。その結果，合成されたｃＤＮＡは５’末端および３
’末端の両方に特定の配列タグを含む。５’末端および３’末端を同じ配列（Ｃ
ＤＳおよびＳＭＩＩ）でタグ付けした場合，これは"対称"と称される。５’末端
を３’末端とは異なる配列（ＣＤＳおよびＭＬ２Ｇ）でタグ付けした場合，これ
は"非対称"と称される。次に，付加された配列タグにアニーリングする３’ＰＣ
ＲおよびＭＬ２プライマー（３’ＰＣＲ：ＡＡＧＣＡＧＴＧＧＴＡＡＣＡＡＣＧ
ＣＡＧＡＧＴおよびＭＬ２：ＡＡＧＴＧＧＣＡＡＣＡＧＡＧＡＴＡＡＣＧＣＧＴ
）を用いて，ＰＣＲ増幅により二本鎖"ｃＤＮＡライブラリ"を生成した。
【０４９４】 増幅させた"ｃＤＮＡライブラリ"を３８４ピンレプリケータを用いて手動でナ
イロン膜上に配列させた。ＤＮＡをアルカリ処理により変性させ，中和し，ＵＶ
光で架橋させた。アレイをＥｘｐｒｅｓｓ Ｈｙｂ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）でプレ
ハイブリダイズさせ，目的とする遺伝子に対応するｃＤＮＡフラグメントのラン
ダムヘキサマープライミングにより生成した32Ｐ標識プローブを用いてハイブリ
ダイズさせた。洗浄した後，ブロットをホスファーイメージングカセットに露光
し，シグナルの強度を定量した。アレイ上のＤＮＡの量もまた，非変性または変
性アレイをそれぞれＳｙｂｅｒ Ｇｒｅｅｎ ＩまたはＳｙｂｅｒ Ｇｒｅｅｎ
ＩＩで２分間処理することにより定量した（１：１００，０００，５０ｍＭＴ
ｒｉｓ，ｐＨ８．０中）。５０ｍＭ Ｔｒｉｓ，ｐＨ８．０で洗浄した後，ホス
ファーイメージャー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓ）で蛍光放出を検
出し定量した。整列させたＤＮＡの量を用いてハイブリダイゼーションシグナル
を標準化し，補正値を表６に示す。
【０４９５】細胞の処理 いくつかの細胞株を化合物で処理して，遺伝子発現に及ぼすその影響を評価し
た。８種類の処置を行った１）対照，２）低血清，３）２００μＭ ミモシン，
４）３ｍＭ ＨＵ，５）２μＭ ＡＵＲ２阻害剤，６）１０μＭシスプラチン，
７）４００ｎｇ／ｍｌノコダゾール−２４時間，および８）４００ｎｇ／ｍｌノ
コダゾール−４８時間。処置した細胞株は，細胞株名および１から８の番号によ
り示される。
【０４９６】実施例２ｃ：予測蛋白質 ＳＧＫ１８７，ＣＲＩＫ（配列番号１，配列番号５８をコード）は２０５３ア
ミノ酸の長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパー
ファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＡＧＣ，ＤＭＰＫ。この蛋白
質のキナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の２
６１アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。
コードされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸９８からアミノ酸３
６１である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータ
ベースのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝
０；同一のアミノ酸の数＝１９７０；パーセント同一性＝９６％；パーセント類
似性＝９８％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＡＡＣ７２８２３
．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：Ｒｈ
ｏ／ｒａｃ相互作用シトロンキナーゼ［Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ］。この蛋白
質中で同定されたキナーゼ触媒ドメイン以外のドメイン，およびそのアミノ酸位
置：ＣＮＨドメイン（１６２０−１９１７）；ＰＨ１４７２−１５９１；蛋白質
キナーゼＣ末端ドメイン（３６２−３９１）；ホルボルエステル／ジアシルグリ
セロール結合ドメイン（Ｃ１ドメイン）（１３９１−１４３９）。
【０４９７】 ＳＧＫ０６４，ＧＲＫ７（配列番号２，配列番号５９をコード）は５５３アミ
ノ酸の長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーフ
ァミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＡＧＣ，ＧＲＫ，。この蛋白質
のキナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の２６
１アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コ
ードされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸１９１からアミノ酸４
５４である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータ
ベースのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝
０；同一のアミノ酸の数＝４６６；パーセント同一性＝８４％；パーセント類似
性＝９１％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＡＡＣ９５００１．
１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：Ｇ蛋白
質共役レセプターキナーゼＧＲＫ７［Ｓｐｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ｔｒｉｄｅｃ
ｅｍｌｉｎｅａｔｕｓ］。この蛋白質中で同定されたキナーゼ触媒ドメイン以外
のドメイン：ＲＧＳ（５５−１７６）。
【０４９８】 ＳＧＫ４０９，ＫＩＡＡ０３０３（配列番号３，配列番号６０をコード）は２
５２３アミノ酸の長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（
スーパーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＡＧＣ，ＭＡＳＴ。
この蛋白質のキナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２
６１の２６１アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一
致する。コードされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸４７０から
アミノ酸７４３である（ＰＦＡＭプロファイル）。この蛋白質配列を用いるアミ
ノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベースのスミス・ウォーターマン検索から
，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝０；同一のアミノ酸の数＝２１３７；パー
セント同一性＝１００％；パーセント類似性＝１００％；ＮＲＡＡ中の最も類似
する登録物の受託番号はＢＡＡ２０７６２．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似す
る蛋白質の名前または記述および種：ＫＩＡＡ０３０３［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅ
ｎｓ］。この蛋白質中で同定されたキナーゼ触媒ドメイン以外のドメイン：ＰＤ
Ｚドメイン（１０２０−１１４８）。
【０４９９】 ＳＧＫ０２１（配列番号４，配列番号６１をコード）は３２７アミノ酸の長さ
の蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／
群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＡＧＣ，Ｍｏ３Ｃ１１．１＿ｃｅ。この蛋
白質のキナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の
２６１アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する
。コードされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸２３からアミノ酸
２６３である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデー
タベースのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア
＝６．００Ｅ−１３８；同一のアミノ酸の数＝２０３；パーセント同一性＝７７
％；パーセント類似性＝８４％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号は
ＣＡＢ７６５６６．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記
述および種：セリン／トレオニン蛋白質キナーゼ［Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ］
。
【０５００】 ＳＧＫ４１０（配列番号５，配列番号６２をコード）は６３１アミノ酸の長さ
の蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／
群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＡＧＣ，ＰＫＣ。この蛋白質のキナーゼド
メインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の２６１アミノ酸の
全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コードされる蛋
白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸２８９からアミノ酸５５７である。
この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベースのスミ
ス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝０；同一のア
ミノ酸の数＝５５５；パーセント同一性＝９５％；パーセント類似性＝９６％；
ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＮＰ００２７３１．１である；Ｎ
ＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：蛋白質キナーゼＣ，
イオタ［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。この蛋白質中で同定されたキナーゼ触媒
ドメイン以外のドメイン：蛋白質キナーゼＣ末端ドメイン（５５８−６２４）；
ホルボルエステル／ジアシルグリセロール結合ドメイン（Ｃ１ドメイン）（１７
６−２２５）；オクチコサペプチド反復（１００−１２９）。
【０５０１】 ＳＧＫ０６９（配列番号６，配列番号６３をコード）は５７２アミノ酸の長さ
の蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／
群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＡＧＣ，ユニーク。この蛋白質のキナーゼ
ドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の２６１アミノ酸
の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コードされる
蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸１５８からアミノ酸４２１である
。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベースのス
ミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝２．１０Ｅ
−６４；同一のアミノ酸の数＝１１６；パーセント同一性＝４２％；パーセント
類似性＝５８％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＢＡＡ３６３６
２．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：セ
リン／トレオニン蛋白質キナーゼ［Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ］。
【０５０２】 ＳＧＫ１１０（配列番号７，配列番号６４をコード）は３７３アミノ酸の長さ
の蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／
群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＡＧＣ，ユニーク。この蛋白質のキナーゼ
ドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の２６１アミノ酸
の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コードされる
蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸６８からアミノ酸３２９である。
この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベースのスミ
ス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝１．１０Ｅ−
６５；同一のアミノ酸の数＝１１２；パーセント同一性＝４０％；パーセント類
似性＝５８％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＳ７１８８７であ
る；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：ｐｋ９．７原
腸胚特異的ＰＫ［Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓ］。
【０５０３】 ＳＧＫ０５３，ＣＫＬｉＫ（配列番号８，配列番号６５をコード）は３５７ア
ミノ酸の長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパー
ファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＡＭＫ，ＡＭＰＫ。この蛋
白質のキナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の
２６１アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する
。コードされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸２３からアミノ酸
２７９である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデー
タベースのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア
＝１．６０Ｅ−２４５；同一のアミノ酸の数＝３５７；パーセント同一性＝１０
０％；パーセント類似性＝１００％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番
号はＮＰ０６５１３０．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前また
は記述および種：ＣａｍＫＩ様蛋白質キナーゼ［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。
【０５０４】 ＳＧＫ１２４（配列番号９，配列番号６６をコード）は３５８アミノ酸の長さ
の蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／
群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＡＭＫ，ＡＭＰＫ。この蛋白質のキナー
ゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の２６１アミノ
酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コードされ
る蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸７３からアミノ酸３１５である
。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベースのス
ミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝５．１０Ｅ
−２５２；同一のアミノ酸の数＝３５８；パーセント同一性＝１００％；パーセ
ント類似性＝１００％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＣＡＢ８
１６３４．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および
種：新規蛋白質キナーゼ［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。
【０５０５】 ＳＧＫ２５４，ＣＡＭＫＫａ（配列番号１０，配列番号６７をコード）は５１
３アミノ酸の長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スー
パーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＡＭＫ，ＣＡＭＫ。こ
の蛋白質のキナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６
１の２６１アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致
する。コードされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸１２８からア
ミノ酸４１７である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共
のデータベースのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐ
スコア＝２．０ｅ−３２３；同一のアミノ酸の数＝４７０；パーセント同一性＝
９１％；パーセント類似性＝９４％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番
号はＡ５７１５６である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述お
よび種：Ｃａ２＋／カルモジュリン−ｄｅｐ．ＰＫＩＶ［Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒ
ｖｅｇｉｃｕｓ］。
【０５０６】 ＳＧＫ２９７，ＣａＭＫＩｂ２（配列番号１１，配列番号６８をコード）は３
４３アミノ酸の長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（ス
ーパーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＡＭＫ，ＣＡＭＫ。
この蛋白質のキナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２
６１の２６１アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一
致する。コードされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸１５からア
ミノ酸２７０である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共
のデータベースのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐ
スコア＝１．４０Ｅ−２３６；同一のアミノ酸の数＝３４１；パーセント同一性
＝９９％；パーセント類似性＝１００％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受
託番号はＡＡＦ７４５０９．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前
または記述および種：Ｃａ２＋／カルモジュリン依存性蛋白質キナーゼＩ［Ｈｏ
ｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。
【０５０７】 ＳＧＫ４１１，ＣａＭＫＩＩデルタ２（配列番号１２，配列番号６９をコード
）は４９９アミノ酸の長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類され
る（スーパーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＡＭＫ，ＣＡ
ＭＫ。この蛋白質のキナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル
位置２６１の２６１アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイ
ルと一致する。コードされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸１４
からアミノ酸２７２である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）
の公共のデータベースのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られ
た：Ｐスコア＝０；同一のアミノ酸の数＝４９９；パーセント同一性＝１００％
；パーセント類似性＝１００％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号は
ＡＡＤ２０４４２．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記
述および種：多機能性ＣＡＭＫＩＩデルタ２［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。
【０５０８】 ＳＧＫ０２７（配列番号１３，配列番号７０をコード）は４３６アミノ酸の長
さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー
／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＡＭＫ，ＥＭＫ。この蛋白質のキナー
ゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の２６１アミノ
酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コードされ
る蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸７４からアミノ酸３２５である
。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベースのス
ミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝７．７０Ｅ
−１０１；同一のアミノ酸の数＝１４７；パーセント同一性＝５６％；パーセン
ト類似性＝７６％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＴ２２４２７
である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：Ｆ４９Ｃ
５．４−［Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ］。
【０５０９】 ＳＧＫ０４６ｂ（配列番号１４，配列番号７１をコード）は７５アミノ酸の長
さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー
／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＡＭＫ，ＥＭＫ。この蛋白質のキナー
ゼドメインは，プロファイル位置９８からプロファイル位置１７５の２６１アミ
ノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コードさ
れる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸１からアミノ酸７５である。
この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベースのスミ
ス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝１．４０Ｅ−
１４；同一のアミノ酸の数＝３５；パーセント同一性＝４７％；パーセント類似
性＝６１％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＡＡＣ３３４８７．
１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：Ｒ３１
２３７＿１，部分的ＣＤＳ［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。
【０５１０】 ＳＧＫ０４６ｃ（配列番号１５，配列番号７２をコード）は３９アミノ酸の長
さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー
／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＡＭＫ，ＥＭＫ。この蛋白質のキナー
ゼドメインは，プロファイル位置１０６からプロファイル位置１４４の２６１ア
ミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コード
される蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸１からアミノ酸３９である
。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベースのス
ミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝６．４０Ｅ
−０７；同一のアミノ酸の数＝２１；パーセント同一性＝５４％；パーセント類
似性＝６７％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＡＡＣ３３４８７
．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：Ｒ３
１２３７＿１，部分的ＣＤＳ［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。
【０５１１】 ＳＧＫ０８９（配列番号１６，配列番号７３をコード）は８４アミノ酸の長さ
の蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／
群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＡＭＫ，ＥＭＫ。この蛋白質のキナーゼ
ドメインは，プロファイル位置１３０からプロファイル位置２１６の２６１アミ
ノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コードさ
れる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸１からアミノ酸８４である。
この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベースのスミ
ス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝２．４０Ｅ−
１９；同一のアミノ酸の数＝３９；パーセント同一性＝４６％；パーセント類似
性＝７１％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＡＡＡ９７４３７．
１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：セリン
／トレオニンキナーゼ［Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ］。
【０５１２】 ＳＧＫ１３３（配列番号１７，配列番号７４をコード）は７９４アミノ酸の長
さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー
／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＡＭＫ，ＥＭＫ。この蛋白質のキナー
ゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の２６１アミノ
酸の全長キナーゼドメインについての隠れマルコフプロファイルとマッチする。
コードされる蛋白質中のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸５０からアミノ酸
３０１である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデー
タベースのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア
＝８．２ｅ−３１８；同一のアミノ酸の数＝４８１；パーセント同一性＝７５％
；パーセント類似性＝８３％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＣ
ＡＡ０７１９６．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述
および種：推定セリン／トレオニン蛋白質キナーゼ［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
］。
【０５１３】 ＳＧＫ００４，ＭＳＫ（配列番号１８，配列番号７５をコード）は７８６アミ
ノ酸の長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーフ
ァミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＡＭＫ，ＥＭＫ−１。この蛋
白質のキナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の
２６１アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する
。コードされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸２７からアミノ酸
２８１である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデー
タベースのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア
＝０；同一のアミノ酸の数＝７８４；パーセント同一性＝１００％；パーセント
類似性＝１００％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＰ５７０５９
である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：ＳＮＦ１
ＬＫ［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。
【０５１４】 ＳＧＫ００６（配列番号１９，配列番号７６をコード）は２６２アミノ酸の長
さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー
／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＡＭＫ，ＥＭＫ−１。この蛋白質のキ
ナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の２６１ア
ミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コード
される蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸２５からアミノ酸２６１で
ある。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベース
のスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝１．５
０Ｅ−６２；同一のアミノ酸の数＝１２１；パーセント同一性＝４５％；パーセ
ント類似性＝６６％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＮＰ＿０５
６５７０．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および
種：ホルモンによりアップレギュレートされるＮｅｕ関連キナーゼ［Ｍｕｓ ｍ
ｕｓｃｕｌｕｓ］。
【０５１５】 ＳＧＫ１８０，ＳＮＲＫ（配列番号２０，配列番号７７をコード）は７６５ア
ミノ酸の長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパー
ファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＡＭＫ，ＥＭＫ−１。この
蛋白質のキナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１
の２６１アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致す
る。コードされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置はアミノ酸１６からアミノ酸
２６９である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデー
タベースのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア
＝０；同一のアミノ酸の数＝７５７；パーセント同一性＝９９％；パーセント類
似性＝９９％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＡＡＦ８６９４４
．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：ＨＳ
ＮＦＲＫ［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。
【０５１６】 ＳＧＫ３８６，ＭＬＣＫｓ（配列番号２１，配列番号７８をコード）は６１２
アミノ酸の長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパ
ーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＡＭＫ，ＭＬＣＫ。この
蛋白質のキナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１
の２６１アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致す
る。コードされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸３０１からアミ
ノ酸５５６である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共の
データベースのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐス
コア＝０；同一のアミノ酸の数＝５９６；パーセント同一性＝９７％；パーセン
ト類似性＝９７％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＣＡＣ１００
０６．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：
ＭＹＬＫ（ミオシン，軽ポリペプチドキナーゼ）［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］
。
【０５１７】 ＳＧＫ００３（配列番号２２，配列番号７９をコード）は３３７アミノ酸の長
さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー
／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＫＩ，ＣＫＩ。この蛋白質のキナーゼ
ドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の２６１アミノ酸
の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コードされる
蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸１７からアミノ酸２９９である。
この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベースのスミ
ス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝１．４０Ｅ−
２１５；同一のアミノ酸の数＝３０４；パーセント同一性＝９１％；パーセント
類似性＝９５％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＮｕ００１８８
３．２である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：カ
ゼインキナーゼ１，アルファ１［［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。
【０５１８】 ＳＧＫ０６６（配列番号２３，配列番号８０をコード）は４００アミノ酸の長
さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー
／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＫＩ，ＣＫＩ。この蛋白質のキナーゼ
ドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の２６１アミノ酸
の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コードされる
蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸２１からアミノ酸２８１である。
この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベースのスミ
ス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝５．４０Ｅ−
１０６；同一のアミノ酸の数＝１６６；パーセント同一性＝５３％；パーセント
類似性＝６８％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＴ２４２６２で
ある；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：Ｒ９０．１
［Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ］。
【０５１９】 ＳＧＫ０４１，ＮＫＩＡＭＲＥ（配列番号２４，配列番号８１をコード）は５
９１アミノ酸の長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（ス
ーパーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＭＧＣ，ＣＤＫ。こ
の蛋白質のキナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６
１の２６１アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致
する。コードされる蛋白質中のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸４からアミ
ノ酸２８６である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共の
データベースのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐス
コア＝１．０ｅ−３１９；同一のアミノ酸の数＝４５４；パーセント同一性＝９
９％；パーセント類似性＝１００％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番
号はＮＰ０５７５９２．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前また
は記述および種：ＮＫＩＡＭＲＥ［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。
【０５２０】 ＳＧＫ１１２（配列番号２５，配列番号８２をコード）は３６０アミノ酸の長
さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー
／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＭＧＣ，ＣＤＫ。この蛋白質のキナー
ゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の２６１アミノ
酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コードされ
る蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸４からアミノ酸３０４である。
この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベースのスミ
ス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝８．７０Ｅ−
１５１；同一のアミノ酸の数＝２２４；パーセント同一性＝６１％；パーセント
類似性＝７４％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＮＰ−００４１
８７．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：
ＣＤＣ２−関連キナーゼ［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。
【０５２１】 ＳＧＫ０３８，ＥＲＫ７（配列番号２６，配列番号８３をコード）は３７１ア
ミノ酸の長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパー
ファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＣＭＧＣ，ＭＡＰＫ。この蛋
白質のキナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の
２６１アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する
。コードされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸１３からアミノ酸
３２３である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデー
タベースのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア
＝１．８０Ｅ−１０５；同一のアミノ酸の数＝１６７；パーセント同一性＝５９
％；パーセント類似性＝７２％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号は
Ｐ５１９５４である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および
種：ＮＥＫ１（ＮＩＭＡ−ＲＥＬＡＴＥＤ ＰＲＯＴＥＩＮ ＫＩＮＡＳＥ１）
［Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ］。
【０５２２】 ＳＧＫ１５８（配列番号２７，配列番号８４をコード）は７５１アミノ酸の長
さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー
／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，微生物ＰＫ，ＡＢＣ１。この蛋白質のキ
ナーゼドメインは，プロファイル位置２５３からプロファイル位置２６１の２６
１アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コ
ードされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸５２２からアミノ酸５
３２である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータ
ベースのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝
３．３０Ｅ−２５７；同一のアミノ酸の数＝３６８；パーセント同一性＝１００
％；パーセント類似性＝１００％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号
はＮＰ＿０６４６３２．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前また
は記述および種：仮定蛋白質［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。
【０５２３】 ＳＧＫ４２９（配列番号２８，配列番号８５をコード）は６２６アミノ酸の長
さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー
／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，微生物ＰＫ，ＡＢＣ１。この蛋白質のキ
ナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置３４の２６１アミ
ノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コードさ
れる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸２００からアミノ酸３１５で
ある。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベース
のスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝６．０
０Ｅ−１２２；同一のアミノ酸の数＝１９１；パーセント同一性＝１００％；パ
ーセント類似性＝１００％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＡＡ
Ｄ４３１９２．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述お
よび種：推定ヒト蛋白質［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。
【０５２４】 ＳＧＫ１５２，ＳＵＤＤ（配列番号２９，配列番号８６をコード）は５１９ア
ミノ酸の長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパー
ファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，微生物ＰＫ，ＲＩ０１。この
蛋白質のキナーゼドメインは，プロファイル位置２５１からプロファイル位置２
６１の２６１アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一
致する。コードされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸３４７から
アミノ酸３５８である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公
共のデータベースのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：
Ｐスコア＝０；同一のアミノ酸の数＝５１９；パーセント同一性＝１００％；パ
ーセント類似性＝１００％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＮＰ
＿００３８２２．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述
および種：ｓｕｄＤ（ｂｉｍＤ６のサプレッサー，Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎ
ｉｄｕｌａｎｓ）ホモログ［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。
【０５２５】 ＳＧＫ０７７（配列番号３０，配列番号８７をコード）は７９８アミノ酸の長
さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー
／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，その他，Ｃ２６Ｃ２＿ｃｅ。この蛋白質
のキナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置３２の２６１
アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コー
ドされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸４８４からアミノ酸５１
３である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベ
ースのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝８
．５０Ｅ−３０６；同一のアミノ酸の数＝４９２；パーセント同一性＝６２％；
パーセント類似性＝７３％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＢＡ
Ｂ００６４０．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述お
よび種：ハプシン［Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ］。
【０５２６】 ＳＧＫ０９３，Ｗｎｋ３（配列番号３１，配列番号８８をコード）は１５１３
アミノ酸の長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパ
ーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，その他，Ｃ２６Ｃ２＿ｃｅ
。この蛋白質のキナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置
２６１の２６１アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと
一致する。コードされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸１６２か
らアミノ酸４２０である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の
公共のデータベースのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた
：Ｐスコア＝２．１０Ｅ−２０３；同一のアミノ酸の数＝３２１；パーセント同
一性＝６０％；パーセント類似性＝７３％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の
受託番号はＡＡＦ３１４８３．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名
前または記述および種：キナーゼ不全蛋白質ＫＤＰ［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
］．この蛋白質中で同定されたキナーゼ触媒ドメイン以外のドメイン：サイクリ
ン（アミノ酸１３７３−１４１０）。
【０５２７】 ＳＧＫ０７４（配列番号３２，配列番号８９をコード）は３５５アミノ酸の長
さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー
／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，その他，ＤＹＲＫ。この蛋白質のキナー
ゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の２６１アミノ
酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コードされ
る蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸６からアミノ酸３４２である。
この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベースのスミ
ス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝２．００Ｅ−
１０７；同一のアミノ酸の数＝１７６；パーセント同一性＝５０％；パーセント
類似性＝６７％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＡＡＤ４１５９
３．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：Ｍ
ｙａｋ−Ｓ［Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ］。
【０５２８】 ＳＧＫ０８７（配列番号３３，配列番号９０をコード）は６２８アミノ酸の長
さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー
／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，その他，ＤＹＲＫ。この蛋白質のキナー
ゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の２６１アミノ
酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コードされ
る蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸２１３からアミノ酸５０９であ
る。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベースの
スミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝６．２０
Ｅ−１８３；同一のアミノ酸の数＝２６７；パーセント同一性＝１００％；パー
セント類似性＝１００％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＡＡＦ
９１３９３．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述およ
び種：ＤＹＲＫ４［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。
【０５２９】 ＳＧＫ２９５，ＫＩＳ（配列番号３４，配列番号９１をコード）は４１９アミ
ノ酸の長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーフ
ァミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，その他，ＤＹＲＫ。この蛋白質
のキナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２００の２６
１アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コ
ードされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸２３からアミノ酸２３
８である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベ
ースのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝１
．ｌＯＥ−２９２；同一のアミノ酸の数＝４１５；パーセント同一性＝９９％；
パーセント類似性＝１００％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＮ
Ｐ＿０５８９８９．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記
述および種：スタスミンと相互作用するキナーゼ［Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇ
ｉｃｕｓ］。この蛋白質中で同定されたキナーゼ触媒ドメイン以外のドメイン：
ＲＮＡ認識モチーフ（３４５−４０１）。
【０５３０】 ＳＧＫ４１９（配列番号３５，配列番号９２をコード）は６６１アミノ酸の長
さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー
／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，その他，ＮＡＫ。この蛋白質のキナーゼ
ドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の２６１アミノ酸
の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コードされる
蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸５１からアミノ酸３４１である。
この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベースのスミ
ス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝５．００Ｅ−
２５２；同一のアミノ酸の数＝３５５；パーセント同一性＝１００％；パーセン
ト類似性＝１００％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＣＡＢ７０
８６３．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種
：仮定蛋白質［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。
【０５３１】 ＳＧＫ１２５，ＭＹ０３Ａ（配列番号３６，配列番号９３をコード）は１６１
５アミノ酸の長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スー
パーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，その他，ＮｉｎａＣ。こ
の蛋白質のキナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６
１の２６１アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致
する。コードされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸２１からアミ
ノ酸２８７である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共の
データベースのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐス
コア＝０；同一のアミノ酸の数＝１６１５；パーセント同一性＝１００％；パー
セント類似性＝１００％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＮＰ＿
０５９１２９．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述お
よび種：ミオシンＩＩＩＡ［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。この蛋白質中で同定
されたキナーゼ触媒ドメイン以外のドメイン：ミオシンヘッド（３４０−１０４
０）；ＩＱ，（３ドメイン，１０５５−１３６６）。
【０５３２】 ＳＧＫ４４５（配列番号３７，配列番号９４をコード）は６８アミノ酸の長さ
の蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／
群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，その他，ＰＬＫ。この蛋白質のキナーゼド
メインは，プロファイル位置１からプロファイル位置７１の２６１アミノ酸の全
長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コードされる蛋白
質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸１からアミノ酸６８である。この蛋白
質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベースのスミス・ウォ
ーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝９．９０Ｅ−２５；同
一のアミノ酸の数＝４７；パーセント同一性＝６５％；パーセント類似性＝８１
％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＡＡＣ３７６４９．１である
；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：ＳＴＫ［Ｍｕｓ
ｍｕｓｃｕｌｕｓ］。
【０５３３】 ＳＧＫ１２７（配列番号３８，配列番号９５をコード）は９４５アミノ酸の長
さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー
／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，その他，ＲＡＦ。この蛋白質のキナーゼ
ドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の２６１アミノ酸
の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コードされる
蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸６６１からアミノ酸９２２である
。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベースのス
ミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝８．６０Ｅ
−２５４；同一のアミノ酸の数＝４４６；パーセント同一性＝４７％；パーセン
ト類似性＝６１％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＮＰ＿０３８
５９９．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種
：ｒａｓのキナーゼサプレッサー［Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ］。この蛋白質中
で同定されたキナーゼ触媒ドメイン以外のドメイン：ホルボルエステル／ジアシ
ルグリセロール結合ドメイン（Ｃ１ドメイン）（４０８−４５１）。
【０５３４】 ＳＧＫ００９，ＡＮＫＲＤ３（配列番号３９，配列番号９６をコード）は８３
２アミノ酸の長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スー
パーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，その他，ＲＩＰ。この蛋
白質のキナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の
２６１アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する
。コードされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸２２からアミノ酸
２７６である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデー
タベースのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア
＝０；同一のアミノ酸の数＝７８４；パーセント同一性＝１００％；パーセント
類似性＝１００％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＮＰ＿０６５
６９０．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種
：アンキリン反復ドメイン３［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。この蛋白質中で同
定されたキナーゼ触媒ドメイン以外のドメイン："アンキリン（１０ドメイン：
４３７−４６９，４７０−５０２，５０３−５３５，５３６−５６８，５６９−
６０２，６０２−６３５，６３６−６６８，６６９−７０１，７０２−７３０，
７３８−７７０）"。
【０５３５】 ＳＧＫ４２１，ＳＴＫ２２Ａ，ＴＳＫ１（配列番号４０，配列番号９７をコー
ド）は３６７アミノ酸の長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類さ
れる（スーパーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，その他，ＳＴ
Ｋ２２Ａ．この蛋白質のキナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファ
イル位置２６１の２６１アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロフ
ァイルと一致する。コードされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸
１２からアミノ酸２７２である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡ
Ａ）の公共のデータベースのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得
られた：Ｐスコア＝６．４０Ｅ−２０９；同一のアミノ酸の数＝３０７；パーセ
ント同一性＝８４％；パーセント類似性＝９０％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登
録物の受託番号はＮＰ＿０３３４６１．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋
白質の名前または記述および種：ＳＴＫ２２Ａ（精子完成関連）［Ｍｕｓ ｍｕ
ｓｃｕｌｕｓ］。
【０５３６】 ＳＧＫ０４７（配列番号４１，配列番号９８をコード）は３１アミノ酸の長さ
の蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー／
群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，その他，ＳＴＫＲ。この蛋白質のキナーゼ
ドメインは，プロファイル位置２３２からプロファイル位置２６１の２６１アミ
ノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コードさ
れる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸１からアミノ酸３１である。
この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベースのスミ
ス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝０．２６５４
６６；同一のアミノ酸の数＝１１；パーセント同一性＝４６％；パーセント類似
性＝６７％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＮＰ＿００４３２０
．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：骨形
態形成蛋白質レセプター，タイプＩＡ［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。
【０５３７】 ＳＧＫ１９６（配列番号４２，配列番号９９をコード）は３５０アミノ酸の長
さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー
／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，その他，ユニーク。この蛋白質のキナー
ゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置８８の２６１アミノ酸
の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コードされる
蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸８１からアミノ酸１６０である。
この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベースのスミ
ス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝２．７０Ｅ−
２４８；同一のアミノ酸の数＝３５０；パーセント同一性＝１００％；パーセン
ト類似性＝１００％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＢＡＢ１５
６２３．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種
：未命名蛋白質産物［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。
【０５３８】 ＳＧＫ３９６（配列番号４３，配列番号１００をコード）は４７２アミノ酸の
長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリ
ー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，その他，ユニーク。この蛋白質のキナ
ーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の２６１アミ
ノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コードさ
れる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸１８６からアミノ酸４２５で
ある。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベース
のスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝３．０
０Ｅ−０９；同一のアミノ酸の数＝３４；パーセント同一性＝２８％；パーセン
ト類似性＝５０％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＢＡＢ１１５
７０．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：
レセプター様蛋白質キナーゼ［Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ］。
【０５３９】 ＳＧＫ２７９，ＰＫＮ（配列番号４４，配列番号１０１をコード）は４２４ア
ミノ酸の長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパー
ファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，その他，ＹＷＹ３＿ｃｅ。こ
の蛋白質のキナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６
１の２６１アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致
する。コードされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸５３からアミ
ノ酸３１３である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共の
データベースのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐス
コア＝４．１０Ｅ−２７６；同一のアミノ酸の数＝４００；パーセント同一性＝
９４％；パーセント類似性＝９５％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番
号はＢＡＡ３６３６２．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前また
は記述および種：セリン／トレオニン蛋白質キナーゼ［Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖ
ｅｇｉｃｕｓ］。
【０５４０】 ＳＧＫ０３７（配列番号４５，配列番号１０２をコード）は６４９アミノ酸の
長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリ
ー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＳＴＥ，ＮＥＫ。この蛋白質のキナー
ゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の２６１アミノ
酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コードされ
る蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸４からアミノ酸２５９である。
この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベースのスミ
ス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝４．１０Ｅ−
５６；同一のアミノ酸の数＝１７６；パーセント同一性＝６５％；パーセント類
似性＝８３％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＰ５１９５４であ
る；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：ＮＥＫ１［Ｍ
ｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ］。
【０５４１】 ＳＧＫ０６０（配列番号４６，配列番号１０３をコード）は６４５アミノ酸の
長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリ
ー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＳＴＥ，ＮＥＫ。この蛋白質のキナー
ゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の２６１アミノ
酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コードされ
る蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸２９からアミノ酸２８７である
。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベースのス
ミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝１．３ｅ−
３２２；同一のアミノ酸の数＝４６３；パーセント同一性＝１００％；パーセン
ト類似性＝１００％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＢＡＢ１５
６７２．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種
：未命名蛋白質産物［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。
【０５４２】 ＳＧＫ０８０（配列番号４７，配列番号１０４をコード）は４４６アミノ酸の
長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリ
ー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＳＴＥ，ＮＥＫ。この蛋白質のキナー
ゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の２６１アミノ
酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コードされ
る蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸８からアミノ酸２６９である。
この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベースのスミ
ス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝３．８０Ｅ−
２６６；同一のアミノ酸の数＝４０４；パーセント同一性＝９０％；パーセント
類似性＝９３％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＮＰ＿００２４
８８．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：
ＮＩＭＡ（ｎｅｖｅｒ ｉｎ ｍｉｔｏｓｉｓ ｇｅｎｅ ａ）関連キナーゼ［
Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。
【０５４３】 ＳＧＫ００２（配列番号４８，配列番号１０５をコード）は３９９アミノ酸の
長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリ
ー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＳＴＥ，ＳＴＥ１１。この蛋白質のキ
ナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の２６１ア
ミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コード
される蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸７１からアミノ酸３６８で
ある。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベース
のスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝３．１
０Ｅ−２４８；同一のアミノ酸の数＝３６９；パーセント同一性＝９２％；パー
セント類似性＝９４％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＰ３６５
０７である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：ＭＥ
Ｋ２［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。
【０５４４】 ＳＧＫ０５８（配列番号４９，配列番号１０６をコード）は２７８アミノ酸の
長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリ
ー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＳＴＥ，ＳＴＥ１１。この蛋白質のキ
ナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の２６１ア
ミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コード
される蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸１１からアミノ酸２７４で
ある。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベース
のスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝３．０
０Ｅ−１１６；同一のアミノ酸の数＝１６７；パーセント同一性＝９９％；パー
セント類似性＝９９％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＢＡＢ１
５５３８．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および
種：未命名蛋白質産物［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。
【０５４５】 ＳＧＫ１０３（配列番号５０，配列番号１０７をコード）は２８アミノ酸の長
さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー
／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＳＴＥ，ＳＴＥ１１。この蛋白質のキナ
ーゼドメインは，プロファイル位置１２５からプロファイル位置１４８の２６１
アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コー
ドされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸１からアミノ酸２４であ
る。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベースの
スミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝０．００
８９４２；同一のアミノ酸の数＝１６；パーセント同一性＝５７％；パーセント
類似性＝６８％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＣＡＡ３９２８
５．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：Ｆ
ｕｓｅｄ［Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ］。
【０５４６】 ＳＧＫ０３５（配列番号５１，配列番号１０８をコード）は３４８アミノ酸の
長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリ
ー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＳＴＥ，ＳＴＥ２０。この蛋白質のキ
ナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の２６１ア
ミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コード
される蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸７３からアミノ酸３２４で
ある。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベース
のスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝７．６
０Ｅ−２１２；同一のアミノ酸の数＝３１８；パーセント同一性＝９２％；パー
セント類似性＝９５％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＱ１３１
７７である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：ＰＡ
Ｋ−２［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。
【０５４７】 ＳＧＫ０７５（配列番号５２，配列番号１０９をコード）は１１０６アミノ酸
の長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミ
リー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＳＴＥ，ＳＴＥ２０。この蛋白質の
キナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の２６１
アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コー
ドされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸１５からアミノ酸２８１
である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベー
スのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝４．
００Ｅ−１５８；同一のアミノ酸の数＝２２７；パーセント同一性＝６７％；パ
ーセント類似性＝８０％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＮＰ＿
０５９１２９．１である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述お
よび種：ミオシンＩＩＩＡ［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。
【０５４８】 ＳＧＫ１８８，ＥｐｈＡ９（配列番号５３，配列番号１１０をコード）は１０
０９アミノ酸の長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（ス
ーパーファミリー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＴＫ，ＲＴＫ−１１。
この蛋白質のキナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２
６１の２６１アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一
致する。コードされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸６４５から
アミノ酸８９９である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公
共のデータベースのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：
Ｐスコア＝０；同一のアミノ酸の数＝５３８；パーセント同一性＝５４％；パー
セント類似性＝７１％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＱ６１７
７２である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：エフ
ィリンタイプ−Ａレセプター７［Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ］。この蛋白質中で
同定されたキナーゼ触媒ドメイン以外のドメイン："エフィリンレセプターリガ
ンド結合ドメイン（３５−２１１）；フィブロネクチンタイプＩＩＩドメイン（
２ドメイン：３３９−４３６＆４５４−５３７）；ＳＡＭドメイン（ステライル
アルファモチーフ）（９３１−９９６）"。
【０５４９】 ＳＧＫ０４０（配列番号５４，配列番号１１１をコード）は９０９アミノ酸の
長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリ
ー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ，ＴＫ，ユニーク。この蛋白質のキナー
ゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置２６１の２６１アミノ
酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コードされ
る蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸３９４からアミノ酸６４６であ
る。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベースの
スミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝４．５０
Ｅ−２６；同一のアミノ酸の数＝７６；パーセント同一性＝３０％；パーセント
類似性＝５２％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＰ４１２４３で
ある；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：ＢＡＴＫ［
Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ］。
【０５５０】 ＳＧＫ３９０（配列番号５５，配列番号１１２をコード）は１１６４アミノ酸
の長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミ
リー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ様，ＤＡＧｋｉｎ，ＤＡＧｋｉｎ。こ
の蛋白質のキナーゼドメインは，プロファイル位置１からプロファイル位置１３
の２６１アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致す
る。コードされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸３８３からアミ
ノ酸３９５である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共の
データベースのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐス
コア＝０；同一のアミノ酸の数＝１０６３；パーセント同一性＝９１％；パーセ
ント類似性＝９４％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＱ６４３９
８である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：ジアシ
ルグリセロールキナーゼイータ［Ｍｅｓｏｃｒｉｃｅｔｕｓ ａｕｒａｔｕｓ］
。この蛋白質中で同定されたキナーゼ触媒ドメイン以外のドメイン："ジアシル
グリセロールキナーゼ触媒ドメイン（３３２−４５７）；ＤＡＧＰＥ−結合（１
７６−２２５＆２４８−２９８）；ＰＨドメイン（６６−１５８）ジアシルグリ
セロールキナーゼアクセサリドメイン（７７０−９２７）"。
【０５５１】 ＳＧＫ００７（配列番号５６，配列番号１１３をコード）は８８４アミノ酸の
長さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリ
ー／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ様，ＧＣｙｃ，ＧＣｙｃ。この蛋白質の
キナーゼドメインは，プロファイル位置１６６からプロファイル位置２６１の２
６１アミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。
コードされる蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，はアミノ酸６１３からアミノ
酸７１６である。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデ
ータベースのスミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコ
ア＝５．２０Ｅ−２６５；同一のアミノ酸の数＝４９９；パーセント同一性＝５
１％；パーセント類似性＝６２％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号
はＴ４２２６０である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述およ
び種：グアニル酸シクラーゼ［Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ］。
【０５５２】 ＳＧＫ０５０（配列番号５７，配列番号１１４をコード）は４８アミノ酸の長
さの蛋白質をコードする。これは以下のように分類される（スーパーファミリー
／群／ファミリー）：蛋白質キナーゼ様，ＧＣｙｃ，ＧＣｙｃ。この蛋白質のキ
ナーゼドメインは，プロファイル位置５１からプロファイル位置８９の２６１ア
ミノ酸の全長キナーゼドメインの隠れマルコフプロファイルと一致する。コード
される蛋白質のキナーゼ触媒領域の位置は，アミノ酸１からアミノ酸３７である
。この蛋白質配列を用いるアミノ酸配列（ＮＲＡＡ）の公共のデータベースのス
ミス・ウォーターマン検索から，以下の結果が得られた：Ｐスコア＝１．３０Ｅ
−１０；同一のアミノ酸の数＝４８；パーセント同一性＝２３％；パーセント類
似性＝４８％；ＮＲＡＡ中の最も類似する登録物の受託番号はＮＰ＿００３９８
６．２である；ＮＲＡＡ中の最も類似する蛋白質の名前または記述および種：ナ
トリウム尿排泄亢進ペプチドレセプターＢ前駆体，アイソフォームｂ［Ｈｏｍｏ
ｓａｐｉｅｎｓ］。
【０５５３】結果 本明細書に記載される蛋白質キナーゼのマイクロアレイ発現分析の結果は，例
えば，表６および７に示される。表６においては，データは，左から右に以下の
ものを表す："組織"：ｃＤＮＡの組織タイプ；"腫瘍ｓｙｍ"は，組織が腫瘍に由
来することを表す；"ｓｙｍ"は，試料を作成するのに用いた５’および３’プラ
イマーが同じであることを表す；"正常Ｓｙｍ"は，正常組織を用いて上述の対称
プライマーで試料を作成したことを表す；"腫瘍ｌｏ"は原発性腫瘍組織を用いて
ＴｈｃＤＮＡを作成したことを表す；"腫瘍細胞"は，これらのｃＤＮＡ試料が培
養腫瘍細胞から作成されたことを表す；"正常"は，これらの試料が正常組織また
は細胞株に由来することを表す；"Ｅｎｄｏｓ"は，これらの試料が内皮関連組織
起源に由来することを表す；"ｐ５３"は起源試料におけるｐ５３遺伝子の状態が
変異体（ｍｕｔａｎｔ）または野生型（ｗｔ）であることを表す。各遺伝子につ
いて標準化した発現値は，次のカラムに記載されるその配列番号を参照して示さ
れる。
【０５５４】 組織アレイにおいて示される遺伝子は，表６において示されるように，以下の
ものである：ＳＧＫ１８７（配列番号１）；ＳＧＫ１２４（配列番号９）；ＳＧ
Ｋ３８６（配列番号２１）；ＳＧＫ００３（配列番号２２）；ＳＧＫ０７７（配
列番号３０）；ＳＧＫ０９３（配列番号３１）；ＳＧＫ０７４（配列番号３２）
；およびＳＧＫ３９６（配列番号４３）。
【０５５５】 ＳＧＫ１８７は，以下の組織中で最も高く発現される：心臓，ＳＡ−ＯＳ細胞
，ＰｒｏｓｔａｔｅＴｕｍｏｒ＿１３，胎児肝臓，Ｃ３３Ａ，Ｐｒｏｓｔａｔｅ
Ｔｕｍｏｒ１０。この発現パターンは，このキナーゼが心臓に関連する病理，お
よび／または前立腺癌において役割を果たしているかもしれないことを示唆する
。
【０５５６】 ＳＧＫ０７４は以下の組織において最も高く発現される：ＯＶＣＡＲ−４−２
，ＨＣＴ−１１６−１，ＯＶＣＡＲ−５−７，ＰｒｏｓｔａｔｅＴｕｍｏｒ−０
９，ＰｒｏｓｔａｔｅＴｕｍｏｒ−０８，Ｕ２０Ｓ−１，副腎−ｈ，Ｐｒｏｓｔ
ａｔｅＴｕｍｏｒ−１８，ＨＴ２９−５，ＳＷ４８０−３。この発現パターンは
，この遺伝子の発現が卵巣癌，前立腺癌，結腸癌，および他の形の新形成に関連
しているかもしれないことを示唆する。
【０５５７】 Ｓｇｋ０９３は，以下の組織において最も高く発現される：胎児腎臓，腎臓，
前立腺腫瘍，胎児肝臓，Ｃａｋｉ−１，Ｕ２０Ｓ−６，ＡＣＨＮ，正常前立腺。
この発現パターンは，この遺伝子が前立腺，腎臓および／または肝臓の疾病に関
与しているかもしれないことを示唆する。
【０５５８】 ＳＧＫ３９６は，以下の組織において最も高く発現される：小脳，Ｐｒｏｓｔ
ａｔｅＴｕｍｏｒｌ８，胎児脳，胸腺−ｈ，およびリンパ節。この発現パターン
は，この遺伝子が造血細胞疾病，前立腺癌，または小脳が関与するＣＮＳ異常に
関与しているかもしれないことを示唆する。
【０５５９】 組織アレイのデータから遺伝子発現パターンの統計学的分析を行った。８種類
のキナーゼについてのこの組織アレイのデータを異なる組織タイプにわたって，
レンジ規格化を用いて統計学的分析用に規格化した。規格化は，測定値を一般的
スケールに変換する。我々は各変数の最も小さい値を各値から引いてそのレンジ
で割るレンジ標準化を用いた。新たなスケールは０で始まり，１．０で終わる。
標準化したデータについて以下の統計学的方法を実行した：記述的統計の生成，
グラフによる可視化，階層的およびｋ平均クラスター分析，および分散分析（Ａ
ＮＯＶＡ）を用いる群間の比較。特定の組織タイプについて正常および腫瘍組織
の両方のデータが存在する場合，そのような群は差異について直接比較した。す
べての統計学的分析は，対称および非対称組織アレイ実験室方法について別々に
行った（過去のデータを用いる経験から，遺伝子発現は用いた方法に依存するこ
とがわかっている）。すべての統計学的分析はＳＹＳＴＡＴ９．０１（著作権＠
１９９９，ＳＰＳＳ，Ｉｎｃ．）を用いて行った。
【０５６０】結果の概要： １．ＳＧＫ１８７（ＮＡ＃１） （対称データ） ・ヒト心臓，胎児肝臓，および胸腺の正常組織において最も高い発現。 ・以下の腫瘍タイプにおいて次に高い発現：卵巣，腎臓，肺，黒色腫，結腸，神
経。 ・以下の組織タイプの腫瘍で発現されるが正常組織では発現されない：肺，前立
腺，腎臓。 ・腫瘍対正常結腸組織で１．４倍高い発現。 ・ｋ平均クラスターは腎臓腫瘍および卵巣腺癌におけるこのキナーゼの関連性を
示す。
【０５６１】 （非対称データ） ・以下の組織タイプに関連する腫瘍で最も高い発現：神経，内皮（ｅｎｄｏ），
卵巣，乳，および結腸。 ・乳，結腸，および腎臓組織の腫瘍で発現されるが正常試料では発現されない。
・以下の組織において過剰発現（腫瘍対正常）：神経（３．４ｘ）および膵臓（
３．５ｘ）。 ・以下の組織において過小発現（腫瘍対正常）：肺（２．０ｘ）および前立腺（
４．１ｘ）。 ・このキナーゼについての単集合および腫瘍関連小クラスター（ｋ平均）は，神
経−転移試料単独によりおよび内皮，神経，および卵巣腫瘍と関連して形成され
た。
【０５６２】 ２．ＳＧＫ１２４（ＮＡ＃９） （対称データ） ・白血病で最も高い発現。 ・以下の組織において次に高い発現：（１）正常：ヒトケラチノサイト，肝臓，
下垂体，胎児肝臓，リンパ節，骨髄，および胎児肺；および（２）腫瘍：黒色腫
，腎臓，神経，肺，卵巣，結腸，および乳。 ・乳組織の腫瘍で発現されるが正常試料では発現されない。 ・以下の組織において過剰発現（腫瘍対正常）：結腸（１．５ｘ）および腎臓（
５．５ｘ）。 ・以下の組織において過小発現（腫瘍対正常）：肺（２．８ｘ）および神経（３
．２ｘ）；精巣の正常試料で発現されるが腫瘍試料では発現されない。 ・白血病試料および黒色腫試料はこのキナーゼについてそれぞれ単集合クラスタ
ー（ｋ平均）を形成する。
【０５６３】 （非対称データ） ・以下の組織タイプに関連する腫瘍において最も高い発現：神経，内皮，卵巣，
乳，結腸，腎臓，および肺。 ・乳および結腸組織の腫瘍で発現されるが正常試料では発現されない。 ・以下の組織において過剰発現（腫瘍対正常）：神経（４．０ｘ）および前立腺
（２．２ｘ）。 ・以下の組織において過小発現（腫瘍対正常）：内皮（２．０ｘ）および膵臓（
５．３ｘ）。 ・このキナーゼについての単集合クラスター（ｋ平均）は，骨腫瘍試料（ｈ−骨
原性）および神経（転移）試料により形成された。他の独特の腫瘍関連クラスタ
ーには，子宮頚部腫瘍および神経−転移，結腸および肺腫瘍に伴うもの，および
副腎と転移腫瘍試料との関連性が含まれる。
【０５６４】 ３．ＳＧＫ３８６（ＮＡ＃２１） （対称データ） ・結腸腫瘍試料においてのみ発現される。他のすべての試料において発現されな
い。
【０５６５】 （非対称データ） ・以下の組織タイプに関連する腫瘍で最も高い発現：前立腺転移試料，内皮，肺
，卵巣，乳，および結腸。 ・乳，結腸，内皮，および神経の腫瘍で発現されるが正常試料では発現されない
。 ・このキナーゼについての単集合および腫瘍関連小クラスター（ｋ平均）は，転
移試料，原発性前立腺および神経により形成された。
【０５６６】 ４．ＳＧＫ００３（ＮＡ＃２２） （対称データ） ・結腸および乳の腫瘍で最も高い発現。また，副腎の正常組織で高い発現。 ・以下の組織において過剰発現（腫瘍対正常）：結腸（２．７ｘ），乳（４．５
ｘ），および精巣（４．６ｘ）。 ・以下の組織において過小発現（腫瘍対正常）：肺（２．１ｘ），神経（２．８
ｘ），前立腺（ｌ０．ｌｘ），および腎臓（３．６ｘ）。 ・結腸腺癌試料はこのキナーゼについて単集合クラスター（ｋ平均）を形成する
。乳腫瘍試料は副腎と関連する別のクラスターを形成する。いずれもこのキナー
ゼの高発現体である。
【０５６７】 （非対称データ） ・以下の組織タイプに関連する腫瘍において最も高い発現：結腸，肺，転移−前
立腺，卵巣，および骨。 ・乳の腫瘍で発現されるが正常試料では発現されない。 ・以下の組織で過剰発現（腫瘍対正常）：結腸（８８７ｘ），内皮（７３ｘ），
神経（７５ｘ），および腎臓（１５ｘ）。 ・過小発現（腫瘍対正常）なし。 ・このキナーゼについての単集合および腫瘍関連小クラスター（ｋ平均）は，前
立腺転移試料により結腸および肺腫瘍に対して形成された。
【０５６８】 ５．ＳＧＫ０７７（ＮＡ＃３０） （対称データ） ・ヒト肺，小脳，下垂体，リンパ節，胎児脳，胸腺，膵臓，および胎盤の正常試
料で最も高い発現。また，以下の腫瘍タイプで比較的高い発現：神経，乳，腎臓
，結腸，および黒色腫。 ・以下の組織において過剰発現（腫瘍対正常）：前立腺（６．３ｘ）および乳（
３．７ｘ）。 ・以下の組織において過小発現（腫瘍対正常）：結腸（１．７ｘ），肺（２２．
９ｘ），神経（３．７ｘ）。
【０５６９】 （非対称データ） ・転移−前立腺試料，正常ヒト胃，および内皮，結腸，神経，肺，および卵巣の
腫瘍試料で最も高い発現。 ・神経組織（６．９ｘ）で過剰発現（腫瘍対正常）。 ・以下の組織タイプにおいて過小発現（腫瘍対正常）：内皮（２．０ｘ），肺（
３．１ｘ），膵臓（３．７ｘ），および前立腺（４．０ｘ）。 ・ほとんどのｋ平均クラスターはＨＵＶＥＣ正常試料により形成され，そのいく
つかは腫瘍試料と関連していた。
【０５７０】 ６．ＳＧＫ０９３（ＮＡ＃３１） （対称データ） ・正常ヒト成人および胎児腎臓，胎児肝臓，および腎臓および肺の腫瘍試料で最
も高い発現。 ・前立腺組織の腫瘍で発現されるが正常試料では発現されない。 ・乳組織（１．４ｘ）で過剰発現（腫瘍対正常）。 ・以下の組織において過小発現（腫瘍対正常）：結腸（２．０ｘ），肺（１．９
ｘ），神経（２．２ｘ），および腎臓（１５．９ｘ）。 ・明らかなｋ平均クラスターが，以下の単集合または群集について観察された：
腎臓明細胞癌腫（単集合），腎臓腫瘍（単集合），および胎児肺と肺癌腫および
肺腺癌（群集）。
【０５７１】 （非対称データ） ・転移試料および骨，腎臓，卵巣，および肺の他の腫瘍で最も高い発現。 ・結腸および腎臓組織の腫瘍で発現されるが正常試料では発現されない。 ・乳（２．３ｘ）および肺（１．７ｘ）で過剰発現（腫瘍対正常）。 ・以下の組織タイプにおいて過小発現（腫瘍対正常）：内皮（４．０ｘ），神経
（２．２ｘ），および前立腺（１２４ｘ）。 ・単集合または非常に小さいｋ平均クラスターが転移試料について形成され，お
よび１つのクラスターが肺腺癌により卵巣癌と関連して形成された。
【０５７２】 ７．ＳＧＫ０７４（ＮＡ＃３２） （対称データ） ・正常副腎および結腸および乳の腫瘍試料で最も高い発現。 ・以下の組織において過剰発現（腫瘍対正常）：結腸（１．４ｘ），前立腺（１
．９ｘ），および乳（２．３ｘ）。 ・以下の組織において過小発現（腫瘍対正常）：肺（２．１ｘ），神経（２．６
ｘ），腎臓（３．２ｘ），および精巣（２．１ｘ）。 ・明らかなｋ平均クラスターが以下の単集合について観察された：結腸腺癌およ
び乳腺癌。
【０５７３】 （非対称データ） ・卵巣，結腸，前立腺，骨，肺，神経，子宮頚部，乳，および内皮の転移試料を
含む広範な腫瘍で最も高い発現。 ・一般に，広範な組織の腫瘍において正常試料と比較して非常に高い発現。以下
の組織タイプにおいて過剰発現（腫瘍対正常）：乳（６．１ｘ），結腸（１６．
９ｘ），内皮（５．７ｘ），神経（９．１ｘ），および膵臓（１．８ｘ）。 ・以下の組織タイプにおいて過小発現（腫瘍対正常）：肺（１．５ｘ），前立腺
（１．７ｘ），および腎臓（２．７ｘ）。 ・単集合または非常に小さいｋ平均クラスターが卵巣腫瘍および転移試料により
互いに関連して，および他の腫瘍タイプと関連して形成された。
【０５７４】 ８．ＳＧＫ３９６（ＮＡ＃４３） （対称データ） ・以下の正常組織において最も高い発現：小脳，胎児脳，胸腺，リンパ節，下垂
体，胎児肺，および胎児腎臓。肺腫瘍試料および他の腫瘍試料の宿主においても
非常に高い発現：黒色腫，腎臓，卵巣，白血病，神経，乳，および前立腺。 ・前立腺および乳の腫瘍で発現されるが正常試料では発現されない。 ・精巣（１．５ｘ）で過剰発現（腫瘍対正常）。 ・以下の組織において過小発現（腫瘍対正常）：結腸（１．５ｘ），肺（１．５
ｘ），神経（８．１ｘ），および腎臓（３．９ｘ）。 ・２つの癌に支配的なｋ平均クラスターが観察され，これは広範な腫瘍タイプを
示した。
【０５７５】 （非対称データ） ・前立腺および神経転移試料，および骨，卵巣，内皮，乳，結腸，および肺の腫
瘍を含む非常に多くの腫瘍で最も高い発現。 ・以下の組織タイプにおいて過剰発現（腫瘍対正常）：結腸（６．３ｘ）および
神経（４．０ｘ）。 ・以下の組織タイプにおいて過小発現（腫瘍対正常）：内皮（１．５ｘ），肺（
１．７ｘ），膵臓（１．７ｘ），前立腺（４．２ｘ），および腎臓（１．７ｘ）
。 ・異なる組織タイプからの異なる転移試料において，他の腫瘍タイプと関連して
，単集合または非常に小さいｋ平均クラスターが形成された。
【０５７６】ＰＣＲスクリーニング： ｄｓｃＤＮＡテンプレートからのＰＣＲによる発現起源についてのスクリーニン
グ ｄｓｃＤＮＡテンプレートの調製 ｄｓｃＤＮＡテンプレートは，組織アレイ遺伝子発現プロトコルの材料および
方法に詳細に記載されるように作成した対称タグ付けリバーストランスクリプタ
ーゼのｓｓｃＤＮＡ産物のＰＣＲ増幅により調製した。増幅した組織起源は，例
えば表７に示される。増幅条件は以下のとおりであった：２００μｌのＰＣＲ反
応につき，１００μｌのＰｒｅｍｉｘＴａＫａＲａＥｘＴａｑ，２０．０μｌの
ｐｗｏＤＮＡポリメラーゼ（１／１０希釈，以下のように作成：１μｌ ｐｗｏ
（５ユニット／μｌ），１μｌ １０ｘＰＣＲ緩衝液（２０ｍＭＭｇＳＯ４，８
μｌ水），４．０μｌのｓｓｃＤＮＡテンプレート（リバーストランスクリプタ
ーゼ生成物），８．０μｌの１０ｐｍｏｌｅｓ／μｌ（１０μＭ）プライマー（
ＡＡＧＣＡＧＴＧＧＴＡＡＣＡＡＣＧＣＡＧＡＧＴ）（１．０μＭ最終濃度）お
よび６８．０μｌのＨ２Ｏを加えた。反応は以下の方法にしたがって増幅した：
高温で開始（９５℃，１分間），９５℃で１分間，２４サイクル，９５℃で２０
秒間，６５℃で３０秒間，６８℃で６分間，６８℃で１０分間，１サイクルおよ
び以後４℃。ＰＣＲ反応の後，５−１０μｌの生成物を１ｋｂラダーサイズ標準
とともにアガロースゲルに負荷して，生成物の収率と均一性を評価した。
【０５７７】起源の同定 以下は表７に関連する。４８の起源から各５μｌをテンプレートとして用い，
その発現パターンを決定すべき遺伝子のヌクレオチド配列から設計したプライマ
ーを用いた。ＰＣＲ条件はｄｓｃＤＮＡテンプレートを作成するのに用いた条件
と同じであったが，ただし以下の改変を加えた：ＰＣＲ反応は１００μｌから２
０μｌにスケールダウンした；ｐｗｏを省略した；５μｌのテンプレートを用い
た。サイクル条件はｄｓｃＤＮＡテンプレートを作成するのに用いた条件と同じ
であったが，ただし，プロトコル中で２４サイクルではなく３５サイクルを用い
た。これらの増幅において用いたプライマーは以下に示される。
【０５７８】 ＳＧＫ０６９（配列番号６）は，以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用い
て４８ｃＤＮＡパネル起源から増幅した：５’プライマー：ＧＧＡＣＡＴＧＡＴ
ＧＡＣＧＣＴＧＡＧＴＧＣＴＣＡＧ；３’プライマー：ＧＴＧＣＴＣＣＣＴＧＡ
ＴＧＧＣＧＡＴＣＡＣＡＧＣＧ．プライマー配列は配列番号６の部分長または完
全長版から設計した。
【０５７９】 ＳＧＫ１１０（配列番号７）は，以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用い
て４８ｃＤＮＡパネル起源から増幅した：５’プライマー：ＣＴＣＣＴＧＴＣＴ
ＴＣＴＴＧＡＣＣＴＣＡＧＧＧＣ；３’プライマー：ＣＡＧＧＴＣＣＡＧＡＡＧ
ＣＣＣＣＴＧＧＡＧＣ．プライマー配列は配列番号７の部分長または完全長版か
ら設計した。
【０５８０】 ＳＧＫ０５３（配列番号８）は，以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用い
て４８ｃＤＮＡパネル起源から増幅した：５’プライマー：ＣＣＧＡＡＡＡＴＣ
ＴＣＴＴＧＴＡＣＴＡＣＡＧＴＣ；３’プライマー：ＣＡＴＡＧＣＣＴＧＧＡＧ
ＴＴＣＣＡＣＡＧＧＣＡＧ．プライマー配列は配列番号８の部分長または完全長
版から設計した。
【０５８１】 ＳＧＫ２５４（配列番号１０）は，以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用
いて４８ｃＤＮＡパネル起源から増幅した：５’プライマー：ＧＡＧＣＣＴＡＣ
ＴＡＧＡＡＡＣＧＧＴＧＴＧＧＡＣＣ；３’プライマー：ＣＴＴＣＡＣＣＡＡＡ
ＣＣＣＴＴＣＴＴＴＣＡＣＣＡＧ．プライマー配列は配列番号１０の部分長また
は完全長版から設計した。
【０５８２】 ＳＧＫ４１１（配列番号１２）は，以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用
いて４８ｃＤＮＡパネル起源から増幅した：５’プライマー：ＡＡＡＧＧＣＣＣ
ＡＧＡＧＧＧＧＡＣＡＧＡＣＧＴＧＧ；３’プライマー：ＣＣＴＣＡＡＴＴＧＴ
ＴＧＴＡＴＴＴＧＡＡＣＴＣＴＣ．プライマー配列は配列番号１２の部分長また
は完全長版から設計した。
【０５８３】 ＳＧＫ０２７（配列番号１３）は，以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用
いて４８ｃＤＮＡパネル起源から増幅した：５’プライマー：ＧＡＡＡＡＧＧＴ
ＧＧＣＣＡＴＴＡＡＧＡＴＣＣＴＧＧ；３’プライマー：ＣＡＴＣＣＡＴＴＣＡ
ＴＣＡＴＴＣＡＴＧＡＴＧＣＡＧ．プライマー配列は配列番号１３の部分長また
は完全長版から設計した。
【０５８４】 ＳＧＫ０４６ｂ（配列番号１４）は，以下のオリゴヌクレオチドプライマーを
用いて４８ｃＤＮＡパネル起源から増幅した：５’プライマー：ＧＡＡＧＡＧＧ
ＡＧＧＡＧＧＣＣＣＡＧＡＣＣＡＴＧ；３’プライマー：ＧＧＡＡＧＡＧＴＴＣ
ＴＧＴＧＧＣＣＡＣＡＴＡＧＧ．プライマー配列は配列番号１４の部分長または
完全長版から設計した。
【０５８５】 ＳＧＫ０８９（配列番号１６）は，以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用
いて４８ｃＤＮＡパネル起源から増幅した：５’プライマー：ＣＴＴＣＴＴＴＧ
ＡＣＡＡＡＧＡＡＣＧＴＡＡＣＡＴＣ；３’プライマー：ＣＡＧＴＡＴＡＴＣＣ
ＴＴＡＣＡＧＴＴＣＴＧＣＴＣ．プライマー配列は配列番号１６の部分長または
完全長版から設計した。
【０５８６】 ＳＧＫ００３（配列番号２２）は，以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用
いて４８ｃＤＮＡパネル起源から増幅した：５’プライマー：ＣＡＡＣＡＧＣＧ
ＧＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＧＡＡＣＴＣ．３’プライマー：ＴＧＣＣＴＧＴＣＴＧ
ＧＧＴＴＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧ．プライマー配列は配列番号２２の部分長また
は完全長版から設計した。
【０５８７】 ＳＧＫ０６６（配列番号２３）は，以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用
いて４８ｃＤＮＡパネル起源から増幅した：５’プライマー：ＧＴＣＣＣＧＡＱ
ＧＣＡＣＡＴＴＣＡＣＣＡＴＴＡＧ．３’プライマー：ＧＡＴＧＴＣＴＣＧＡＴ
ＧＣＡＡＧＡＡＴＣＣＣＡＣ．プライマー配列は配列番号２３の部分長または完
全長版から設計した。
【０５８８】 ＳＧＫ０４１（配列番号２４）は，以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用
いて４８ｃＤＮＡパネル起源から増幅した：５’プライマー：ＧＡＧＡＴＧＴＡ
ＴＧＡＡＡＣＣＣＴＴＧＧＡＡＡＡＧ．３’プライマー：ＣＡＴＡＣＡＧＡＣＡ
ＣＴＡＴＧＡＡＣＡＣＧＡＴＴＣ．プライマー配列は配列番号２４の部分長また
は完全長版から設計した。
【０５８９】 ＳＧＫ０３８（配列番号２６）は，以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用
いて４８ｃＤＮＡパネル起源から増幅した：５’プライマー：ＧＣＣＴＡＴＧＧ
ＣＡＴＴＧＴＧＴＧＧＡＡＧＧＣＡＧ．３’プライマー：ＣＡＧＣＡＧＧＧＧＣ
ＡＧＧＴＧＧＣＣＣＡＧＴＧＣＣ．プライマー配列は配列番号２６の部分長また
は完全長版から設計した。
【０５９０】 ＳＧＫ４２９（配列番号２８）は，以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用
いて４８ｃＤＮＡパネル起源から増幅した：５’プライマー：ＧＴＴＴＣＧＧＴ
ＴＴＣＡＣＣＧＣＡＧＣＣＴＣＧＣＣ．３’プライマー：ＴＧＧＡＧＡＡＧＧＡ
ＡＡＧＡＡＴＧＧＧＡＧＡＡＡＣ．プライマー配列は配列番号２８の部分長また
は完全長版から設計した。
【０５９１】 ＳＧＫ０９３（配列番号３１）は，以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用
いて４８ｃＤＮＡパネル起源から増幅した：５’プライマー：ＧＡＡＡＡＧＧＡ
ＧＧＡＣＡＴＧＧＡＧＡＣＣＣＡＧＧ．３’プライマー：ＣＴＴＴＡＣＧＣＡＧ
ＣＴＴＣＴＣＡＣＧＣＴＴＴＣＧ．プライマー配列は配列番号３１の部分長また
は完全長版から設計した。
【０５９２】 ＳＧＫ０８７（配列番号３３）は，以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用
いて４８ｃＤＮＡパネル起源から増幅した：５’プライマー：ＣＣＴＡＡＡＧＣ
ＴＴＴＴＴＡＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＧ３’プライマー：ＣＴＧＡＴＧＡＡＴＣＣ
ＡＡＧＣＡＴＧＣＴＴＧＡＧＧ．プライマー配列は配列番号３３の部分長または
完全長版から設計した。
【０５９３】 ＳＧＫ００９（配列番号３９）は，以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用
いて４８ｃＤＮＡパネル起源から増幅した：５’プライマー：ＧＡＴＴＴＴＧＧ
ＴＣＴＧＧＣＣＡＡＧＴＧＣＡＡＣＧ．３’プライマー：ＧＴＡＴＡＣＡＴＣＧ
ＴＧＣＴＴＧＧＴＧＴＣＧＡＡＧ．プライマー配列は配列番号３９の部分長また
は完全長版から設計した。
【０５９４】 ＳＧＫ４２１（配列番号４０）は，以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用
いて４８ｃＤＮＡパネル起源から増幅した：５’プライマー：ＡＧＧＧＣＴＣＣ
ＴＡＴＧＣＡＡＡＡＧＴＡＡＡＡＴＣ．３’プライマー：ＣＣＡＧＣＡＧＴＧＧ
ＣＴＧＡＧＧＡＴＣＴＣＧ．プライマー配列は配列番号４０の部分長または完全
長版から設計した。
【０５９５】 ＳＧＫ３９６（配列番号４３）は，以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用
いて４８ｃＤＮＡパネル起源から増幅した：５’プライマー：ＧＧＡＡＣＧＡＧ
ＡＴＣＴＴＣＴＴＧＡＴＧＣＴＧＡＧ．３’プライマー：ＧＧＡＡＧＧＧＣＴＧ
ＣＴＧＣＧＡＡＧＣＴＴＴＣＴＧ．プライマー配列は配列番号４３の部分長また
は完全長版から設計した。
【０５９６】 ＳＧＫ０３７（配列番号４５）は，以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用
いて４８ｃＤＮＡパネル起源から増幅した：５’プライマー：ＧＡＡＴＧＧＣＡ
ＧＧＣＴＧＴＴＴＡＴＴＧＴＡＡＴＧ．３’プライマー：ＧＧＧＡＡＴＡＡＧＡ
ＴＴＣＴＣＴＡＡＡＡＡＧＧＧＣ．プライマー配列は配列番号４５の部分長また
は完全長版から設計した。
【０５９７】 ＳＧＫ０６０（配列番号４６）は，以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用
いて４８ｃＤＮＡパネル起源から増幅した：５’プライマー：ＣＡＧＣＴＡＡＧ
ＴＧＴＧＴＧＡＧＴＧＧＡＴＣＡＡＣ；３’プライマー：ＣＣＡＴＣＧＴＧＡＴ
ＣＡＧＣＡＡＣＴＧＣＴＣＴＴＣ．プライマー配列は配列番号４６の部分長また
は完全長版から設計した。
【０５９８】 ＳＧＫ０８０（配列番号４７）は，以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用
いて４８ｃＤＮＡパネル起源から増幅した：５’プライマー：ＣＴＧＡＧＡＡＣ
ＴＡＴＧＡＡＧＴＧＴＴＧＴＡＣＡＣ．３’プライマー：ＣＣＡＧＧＡＴＣＴＧ
ＴＣＴＧＣＴＴＴＴＴＡＧＴＴＧ．プライマー配列は配列番号４７の部分長また
は完全長版から設計した。
【０５９９】 ＳＧＫ００２（配列番号４８）は，以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用
いて４８ｃＤＮＡパネル起源から増幅した：５’プライマー：ＧＣＣＧＧＣＧＣ
ＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＣＣＣＴＡＣＣ．３’プライマー：ＣＴＣＡＣＴＧＡＧＣ
ＡＴＣＴＴＴＡＧＧＴＣＣＧＣＣ．プライマー配列は配列番号４８の部分長また
は完全長版から設計した。
【０６００】 ＳＧＫ０５８（配列番号４９）は，以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用
いて４８ｃＤＮＡパネル起源から増幅した：５’プライマー：ＣＣＴＡＴＣＣＴ
ＡＴＧＧＡＣＣＡＡＧＧＧＴＧＡＧ．３’プライマー：ＧＴＧＣＴＣＣＧＡＴＧ
ＴＡＡＡＡＣＡＴＧＧＣＧＧ．プライマー配列は配列番号４９の部分長または完
全長版から設計した。
【０６０１】 ＳＧＫ０３５（配列番号５１）は，以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用
いて４８ｃＤＮＡパネル起源から増幅した：５’プライマー：ＧＡＴＧＡＴＧＡ
ＡＧＡＧＡＣＴＧＣＣＣＴＣＣＣ．３’プライマー：ＣＡＴＴＧＣＴＴＣＴＴＴ
ＡＧＣＴＧＣＣＡＴＧＡＴＣ．プライマー配列は配列番号５１の部分長または完
全長版から設計した。
【０６０２】 ＳＧＫ０７５（配列番号５２）は，以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用
いて４８ｃＤＮＡパネル起源から増幅した：５’プライマー：ＧＡＴＧＣＣＡＴ
ＧＣＡＧＧＧＣＣＴＴＣＡＧＣ．３’プライマー：ＣＡＡＡＧＴＣＡＡＣＧＡＧ
ＣＴＴＡＡＣＴＣＣＴＣ．プライマー配列は配列番号５２の部分長または完全長
版から設計した。
【０６０３】多数組織発現ブロット（ＭＴＥ） ＭＴＥ（多数組織発現）ブロットは，Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｉｅｓ，Ｉｎｃ．から入手した。これらのブロットは，正常ヒト組織およびヒト
細胞株に由来する８４個の整列したｃＤＮＡ試料および対照を含んでいた。発現
ブロットを０．１ｍｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡを含むＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂ
ハイブリダイゼーション溶液（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）
で６５℃で２時間プレハイブリダイズさせた。放射性ＤＮＡプローブは，ランダ
ムプライミングＤＮＡ標識キット（Ｒｏｃｈｅ）を用いて調製した。
【０６０４】 ＳＧＫ０９３（Ｗｎｋ３）用のＤＮＡプローブの作成：Ｗｎｋ３の５３８塩基
対フラグメントを増幅する２つの合成オリゴヌクレオチドを設計した。
【０６０５】 上流オリゴヌクレオチドは以下の配列を有する：５’ＣＣＧＣＣＡＣＧＣＣＡ
ＧＣＴＡＣＴＣＡＴＣＴＡＣ３’ 下流オリゴヌクレオチドは以下の配列を有する：５’ＴＣＴＣＴＴＣＡＡＣＡＧ
ＧＧＴＣＴＣＣＡＣＴＣＧ３’ ヒト精巣ｃＤＮＡライブラリから予測されたサイズのフラグメントをポリメラー
ゼ連鎖反応により増幅し，ＤＮＡ配列決定により配列を確認した。
【０６０６】 ＳＧＫ１８８（ＥｐｈＡ９）用のＤＮＡプローブの作成：ＥｐｈＡ９の３８７
塩基対フラグメントを増幅する２つの合成オリゴヌクレオチドを設計した。上流
オリゴヌクレオチドは以下の配列を有する： ５’ＴＴＣＴＣＣＣＡＧＡＴＣＣＡＣＡＧＣ３’ 下流オリゴヌクレオチドは以下の配列を有する： ５’ＡＣＣＧＧＡＧＴＣＣＴＧＣＣＴＴＧＧＡＡＧ３’ ヒト精巣ｃＤＮＡライブラリから予測されたサイズのフラグメントをポリメラー
ゼ連鎖反応により増幅し，ＤＮＡ配列決定により配列を確認した。精製したＤＮ
Ａフラグメント（１００ｎｇ）をキットプロトコルを用いて２５０μＣｉの３２
Ｐ−標識ｄＣＴＰで４５分間標識した。取り込まれなかったヌクレオチドは，ス
ピンカラム（ＰｒｏｂｅＱｕａｎｔＧ５０マイクロカラム，Ａｍｅｒｓｈａｍ
Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｉｎｃ．）を用いて除去した。プローブを３分間煮沸する
ことにより変性させた後，プレハイブリダイゼーション溶液に加え，ブロットを
６５℃で２０時間ハイブリダイズさせた。次にブロットを１５ｍＭＮａＣｌ，１
．５ｍＭクエン酸ナトリウム，０．１％ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を含
む溶液中で６５℃で４回，それぞれ１５分間洗浄し，定量用にホスホイメージャ
ースクリーンに露光した。
【０６０７】ノザンブロット（ＳＧＫ１８８） ノザンブロットの材料および方法 ノザンブロットはＣｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．か
ら入手した。このブロットは，ヒト組織からの１２種類のポリＡ＋ＲＮＡ試料を
次の順番で含んでいた：全脳，心臓，骨格筋，結腸，胸腺，脾臓，腎臓，肝臓，
小腸，胎盤，肺，末梢血白血球。発現ブロットを０．１ｍｇ／ｍｌ変性サケ精子
ＤＮＡを含むＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂハイブリダイゼーション溶液（Ｃｌｏｎｔｅ
ｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）で６５℃で２時間プレハイブリダイズさせた
。放射性ＤＮＡプローブは，Ｒａｎｄｏｍ Ｐｒｉｍｉｎｇ ＤＮＡ標識キット
（Ｒｏｃｈｅ）を用いて調製した。キットプロトコルを用いて精製ＤＮＡフラグ
メント（１００ｎｇ）を２５０μＣｉの３２Ｐ−標識ｄＣＴＰで４５分間標識し
た。取り込まれなかったヌクレオチドはスピンカラム（ＰｒｏｂｅＱｕａｎｔＧ
５０マイクロカラム，Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｉｎｃ．）を用
いて除去した。プローブを３分間煮沸することにより変性した後，プレハイブリ
ダイゼーション溶液に加え，ブロットを６５℃で２０時間ハイブリダイズさせた
。次にブロットを１５ｍＭＮａＣｌ，１．５ｍＭクエン酸ナトリウム，０．１％
ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を含む溶液中で６５℃で各１５分間，４回洗
浄し，ホスホイメージャースクリーンに露光した。
【０６０８】 ノザンブロットの分析は，ＳＧＫ１８８がヒト脳および結腸で発現されている
ことを示す。約４．４ｋｂおよび６ｋｂのサイズの２つの転写産物が検出された
。
【０６０９】実施例２ｅ：キナーゼ活性を示すポリペプチドの規定グループへの分類 ＡＧＣグループ 新規ＡＧＣグループ蛋白質キナーゼの可能性のある生物学的および臨床的関係
を以下に記載する。ＳＧＫ１８７（配列番号５８）はそのプロトタイプである筋
緊張性ジストロフィー蛋白質キナーゼ（ＤＭＰＫ）として示される新規ＤＭＰＫ
ファミリーメンバーである。本出願の最初の出願時から，ヒトＳＧＫ１８７のネ
ズミオルトログは，公共のデータベースにおいてＣｒｉｋ（ＡＦ０８６８２４）
をコードする完全長遺伝子として見られた（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３（
４５），２９７０６−２９７１１（１９９８））。ＳＧＫ１８７（配列番号）に
ついて予測されたアミノ酸配列のモチーフ分析は，４つの触媒外的Ｃ末端ドメイ
ン：ＣＮＨ，プレクストリンホモロジー（ＰＨ）ドメイン，蛋白質キナーゼＣ末
端ドメインおよびホルボルエステル／ジアシルグリセロール結合（Ｃ１）ドメイ
ンの存在を示した。ネズミＣｒｉｋは２つの異なるアイソフォームとして形成さ
れる。長い２４０−ｋＤａ蛋白質は，キナーゼドメインの後にシトロンの配列，
ＣＮＨ，ＰＨおよびＣ１ドメインを含むＲｈｏ／Ｒａｃ−結合蛋白質が続く。第
２の形のＣｒｉｋはシトロン配列を欠失した短い５４−ｋＤａ蛋白質（ＣＲＩＫ
−短キナーゼ（ＳＫ））である。ケラチノサイトにおいては，完全長ＣＲＩＫは
小体細胞質構造内に局在し，アクチンをこれらの構造中にリクルートするが，Ｃ
ＲＩＫ−ＳＫはそうではない。偏在的に発現されるＲｈｏ関連キナーゼＲＯＣＫ
ＩおよびＩＩキナーゼと同様に，Ｃｒｉｋは，より組織制限的様式ではあるが，
アクチン細胞骨格の動力学に関与しているかもしれない。
【０６１０】 ＳＧＫ０６４（配列番号５９）は，そのプロトタイプとしてＧ蛋白質共役レセ
プターキナーゼ（すなわちベータＡＲＫ１）として挙げられる新規なＧＲＫファ
ミリーメンバーである。ＳＧＫ０６４のドメイン分析により，ＲＧＳドメインの
存在が明らかになった。ＲＧＳ（Ｇ蛋白質シグナリングのレギュレータ）ドメイ
ン（ＰＦ００６１５）は約１２５アミノ酸の長さであり，ヘテロ３量体Ｇ−蛋白
質アルファ−サブユニットのＧＴＰａｓｅ活性化蛋白質を含むファミリーメンバ
ー中に見いだされる。
【０６１１】 Ｇ蛋白質共役レセプターキナーゼは，心筋機能の重要なレギュレータであるベ
ータ−アドレナリン作動性シグナリングカスケードにおいて機能する。いくつか
の心臓血管疾病，例えばうっ血性心不全は，この経路における変化を示す（Ｐｒ
ｏｃ Ａｓｓｏｃ Ａｍ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ １９９９Ｓｅｐ−Ｏｃｔ；ｌ
１１（５）：３９９−４０５）。ＳＧＫ０６４の予測オープンリーディングフレ
ームは，Ｓｐｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ｔｒｉｄｅｃｅｍｌｉｎｅａｔｕｓ（ジリ
ス）から単離されたＧＲＫ７と８４％の同一性を有する。この観察から，ＳＧＫ
０６４は，Ｓｐｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ｔｒｉｄｅｃｅｍｌｉｎｅａｔｕｓＧＲ
Ｋ７のヒトオルトログまたは非常に近いホモログであるかもしれない。ＧＲＫ７
は，視覚系の網膜錐体および光感受性外向突起におけるシグナル伝達に重要な役
割を果たすかもしれない。哺乳動物網膜の光感受性外向突起細胞における脱感作
は，光活性化されたロドプシンがＧ蛋白質共役レセプターキナーゼ（ＧＲＫ）ま
たはＧＲＫ１によりリン酸化されるときに開始する。ＧＲＫ１と同様に，ＧＲＫ
７は哺乳動物のシグナル光伝達プロセスにおけるオプシンキナーゼとして機能す
るかもしれない。
【０６１２】 ＳＧＫ４０９（配列番号６０）は，そのプロトタイプである微小管付随精巣特
異的セリン／トレオニン蛋白質（ＭＡＳＴ２０５）として示される新規なＭＡＳ
Ｔファミリーメンバーである。ＳＧＫ４０９のドメイン分析は，ＰＤＺドメイン
の存在を明らかにした。ＰＤＺドメイン（約８３アミノ酸の長さ）は，グアニル
酸キナーゼのＭＡＧＵＫファミリー，いくつかの蛋白質ホスファターゼおよび蛋
白質キナーゼのホモログを含む膜付随蛋白質に見いだされる。ＰＤＺドメインは
また，神経一酸化窒素シンターゼならびにジストロフィン付随蛋白質（集合的に
シントロフィンとして知られる）のサブファミリーにおいても見いだされる。Ｓ
ＧＫ４０９は，哺乳動物精子完成における関与が示唆されている蛋白質であるネ
ズミＭＡＳＴ２０５と６０％の同一性を有する（１３５１アミノ酸にわたり）（
Ｂｉｏｌ Ｒｅｐｒｏｄ．１９９６Ｎｏｖ；５５（５）：１０３９−４４）。Ｍ
ＡＳＴ２０５および関連するＳＡＳＴ（シントロフィン付随セリン／トレオニン
キナーゼ）は，ＰＤＺ−ＰＤＺドメイン相互作用を介してベータ２−シントロフ
ィンと会合する。ＭＡＳＴ２０５はベータ２−シントロフィンおよびウトロフィ
ンとともに神経筋接合部に局在する（Ｎａｔ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ １９９９Ｊｕ
ｌ；２（７）：６１１−７）。ＭＡＳＴ２０５およびＳＡＳＴと同様に，ＳＧＫ
４０９は，ジストロフィン／ウトロフィンネットワークをシントロフィンを介し
て微小管に連結させることにより，神経筋接合部において本質的な役割を果たし
ているかもしれない。
【０６１３】 ＳＧＫ０２１（配列番号６１）は，ｃ．ｅｌｅｇａｎｓＭｏ３Ｃｌ１仮定オー
プンリーディングフレームの後に命名されたＭｏ３Ｃｌ１．１＿ｃｅファミリー
メンバーの新規なメンバーである。１つのＭｏ３Ｃｌ１．１ファミリーメンバー
であるＴａｎｋ結合キナーゼ（ＴＢＫ１）は，そのシグナリング特性に関して研
究されている。ＴＢＫ１はアダプター分子ＴＲＡＦ２およびＴＡＮＫとの相互作
用の後にＮｆｋＢ経路を活性化することができるＩＫＫ関連キナーゼである（Ｅ
ＭＢＯ Ｊ １９９９Ｄｅｃ１；１８（２３）：６６９４−７０４）。ＳＧＫ０
２１はＴＢＫ１と共通のシグナリング特性を有しているかもしれない。
【０６１４】 ＳＧＫ４１０（配列番号６２）は，ＰＫＣイオータと最も近い新規ＰＫＣファ
ミリーメンバーである（５８７アミノ酸にわたり９５％同一性）。ＰＫＣイオー
タは，白血病細胞を薬剤誘導性アポトーシスに対して保護するため，癌細胞生存
経路において機能することが示唆されてきた（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ １９９
７Ｏｃｔ３１；２７２（４４）：２７５２１−４，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ １
９９９Ｆｅｂ１２；２７４（７）：３９２７−３０。ＳＧＫ４１０とＰＫＣイオ
ータとの間の高度のホモロジーのため，ＳＧＫ４１０は癌における細胞生存経路
において機能すると考えられる。
【０６１５】 ＳＧＫ０６９（配列番号６３）およびＳＧＫ１１０（配列番号６４）は，他の
ＡＧＣキナーゼとクラスター化されない新規ＡＧＣグループメンバーであり，し
たがって，ユニークファミリーメンバーと称される。ＳＧＫ０６９およびＳＧＫ
１１０は，その最も近いキナーゼに対してホモロジーが低い（４２および４０％
）ため，これらの新規ＡＧＣグループキナーゼの潜在的シグナリング特性に関し
てホモロジーに基づく推論をすることができない。ＳＧＫ０６９の４８組織のＰ
ＣＲに基づく発現パターンは，これが正常（骨格筋に限られる）および腫瘍組織
（腎臓癌腫）の両方に制限されていることを示した。ＰＣＲに基づくＳＧＫ１１
０の同じ発現パネルは，この遺伝子が胎盤，脾臓，甲状腺，子宮および肺で発現
されていることを示す。ＳＧＫ１１０はまた多数の癌細胞株においても発現され
ている（例えば表７を参照）。
【０６１６】ＣＡＭＫグループ 新規ＣＡＭＫグループ蛋白質キナーゼの可能性のある生物学的および臨床的関
連性を以下に記載する。ＳＧＫ０５３（配列番号６５）およびＳＧＫ１２４（配
列番号６６）は，ＣＡＭＫグループの新規ＡＭＰＫファミリーメンバーである。
本出願の最初の出願時から，ヒトＳＧＫ０５３の完全長版は公共のデータベース
にＣａｍＫＩ様蛋白質キナーゼ（ＣａＭＫＩ）（ＮＰ＿０６５１３０．１）とし
て見られた。ＣａＭＫＩは顆粒球で発現されるカルシウム−カルモジュリン依存
性キナーゼであり，その転写はＣＤ３４（＋）幹細胞の好中球分化の間にアップ
レギュレートされる。ＣａＭＫＩの活性化は，細胞外シグナル関連キナーゼ（Ｅ
ＲＫ），有糸分裂促進物質活性化蛋白質（ＭＡＰ）キナーゼ活性およびＣＲＥ結
合蛋白質（ＣＲＥＢ）転写活性を誘導する（Ｂｌｏｏｄ．２０００；９６：３２
１５−３２２３）。本出願の最初の出願時から，ヒトＳＧＫ１２４の完全長版は
公共のデータベース（ＣＡＢ８１６３４．１）において機能未知の仮定蛋白質と
して見られた。
【０６１７】 ＳＧＫ２５４（配列番号６７），ＳＧＫ２９７（配列番号６８）およびＳＧＫ
４１１（配列番号６９）は，ＣＡＭＫグループの新規ＣＡＭＫファミリーメンバ
ーである。ＳＧＫ２５４は，ラットＣａ２＋／カルモジュリン依存性ＰＫＩＶ（
ＣａＭ−キナーゼＩＶ）のヒトオルトログまたは非常に近いホモログでありそう
である（９１％，５０５アミノ酸）。ＣａＭ−キナーゼＩＶは，中枢神経および
免疫系において，特定の転写因子のリン酸化を介してＣａ（２＋）依存性制御を
媒介する。ＣａＭ−キナーゼＩおよびＩＶは，上流のＣａＭ−キナーゼキナーゼ
により活性化されるが，ＣａＭ−キナーゼＩＩは活性化されない（Ｊ Ｂｉｏｌ
Ｃｈｅｍ １９９５Ａｕｇ１８；２７０（３３）：１９３２０−４）。本出願
の最初の出願時から，ヒトＳＧＫ２９７およびＳＧＫ４１１の完全長版は，公共
のデータベースにおいて，それぞれＣａ２＋／カルモジュリン依存性蛋白質キナ
ーゼＩ（ＣａｍＫＩ）様蛋白質キナーゼ（ＣａＭＫＩ（ＡＡＦ７４５０９．１）
および多機能性ＣＡＭＫＩＩデルタ（ＡＡＤ２０４４２．１）として見られた。
ＳＧＫ２９７は，Ｘｑ２８のゲノム配列から仮想ＯＲＦとして同定された（Ｇｅ
ｎｏｍｉｃｓ １９９７Ａｕｇ１５；４４（１）：８−１４）。ヒトＳＧＫ２９
７の推定ラットオルトログであるラットＣａ２＋／カルモジュリン（ＣａＭ）依
存性蛋白質キナーゼＩは，少なくとも３つのスプライシングアイソフォームとし
て存在する（ＣａＭキナーゼ，ＩベータおよびＩガンマ）。このことは，神経系
におけるＣａ２＋／カルモジュリン依存性シグナリングの別の意味を提供する（
Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ １９９７Ｄｅｃ１９；２７２（５１）：３２７０４−
８）。ＳＧＫ４１１は心臓疾患における関与が示唆されているキナーゼである多
機能性ＣＡＭＫＩＩデルタ２をコードする（Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ １９９９Ａｐｒ
２；８４（６）：７１３−２１）。
【０６１８】 ＳＧＫ００４（配列番号７５），ＳＧＫ００６（配列番号７６）およびＳＧＫ
１８０（配列番号７７）は，ＥＭＫ−１キナーゼのＳＮＦ１サブファミリーに属
する新規ＣＡＭＫグループメンバーである。ＳＧＫ３８６（配列番号７８）はＭ
ＬＣＫファミリーに属する新規ＣＡＭＫグループメンバーである。
【０６１９】 本出願の最初の出願時から，ＳＧＫ００４およびＳＧＫ１８０は，公共のデー
タベースにおいて，それぞれＳＮＦ１ＬＫ（Ｐ５７０５９）およびＨＳＮＦＲＫ
（ＡＡＦ８６９４４．１）をコードする完全長遺伝子として見られた。ＳＧＫ０
０６は，ヒト染色体２１の全配列から予測される仮定蛋白質であるマウスホルモ
ンアップレギュレートＮｅｕ付随キナーゼ（ＨｕｎｋｏｒＭＡＫ−Ｖ）（ＮＰ＿
０５６５７０．１）に対して，１２１アミノ酸にわたり４６％の同一性を有する
（Ｎａｔｕｒｅ ４０５（６７８４），３１１−３１９（２０００））。ＳＧＫ
００４，ＳＧＫ００６およびＳＧＫ１８０はヒトＨｕｎｋ（ＮＰ０５６５７０）
に対してホモロジーを示す。これらの３つのキナーゼはまた，ラット塩誘導性キ
ナーゼ（ＳＩＫ，ＫＩＤ２蛋白質としても知られる）（ＮＰ＿０６７７２５．１
），マウス心筋ＳＮＦｌ様キナーゼ（ＭＳＫ）（ＮＰ＿０３４９６１．１）およ
びトリＱｉｋ（ｑｉｎ誘導性キナーゼ）（ＡＡＦ２８３５１）に対して有意なホ
モロジーを示す。ＳＮＦ１蛋白質キナーゼは，酵母から植物および哺乳動物まで
，ストレス応答経路において中心的な役割を果たす（Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ １９９８；６７：８２１−５５）。偏在的に発現されるＱｉｋ蛋白質
は発癌性において役割を果たすかもしれず（ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅ
ｓＣｏｍｍｕｎ２０００Ｓｅｐ２４；２７６（２）：５６４−７０Ｚ），Ｈｕｎ
ｋ（ＭＡＫ−Ｖ）は，妊娠および乳癌の発癌において役割を有するかもしれない
（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ２０００Ｏｃｔ；１２７（２０）：４４９３−５０
９）。ＳＧＫ００４，ＳＧＫ００６およびＳＧＫ１８０は，細胞性ストレスに応
答して役割を果たすかもしれない。これらの新規キナーゼのいずれかが関与する
シグナリング経路を破壊すると，癌または他の疾病状態が誘発されるかもしれな
い。
【０６２０】 ＳＧＫ３８６（配列番号７８）は，本明細書において示される別のＣＡＭＫグ
ループメンバーである。本出願の最初の出願時から，ＳＧＫ３８６は，公共のデ
ータベースにおいて，ミオシン，軽鎖ポリペプチドキナーゼ（ＭＬＣＫ）（ＣＡ
Ｃ１０００６．１）をコードする完全長遺伝子として見られた。ＭＬＣＫは，平
滑筋ならびに非平滑筋脊椎細胞の両方においてアクトミオシン繊維の収縮の制御
を担う。ＭＬＣＫは，蛋白質リン酸化によりミオシンＩＩモーター活性を調節し
このことにより細胞質分裂を誘発する能力を通じて，細胞成長の制御に関与する
ことが示唆されている（Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ２０００Ｏｃｔ３０；１５１
（３）：６９７−７０８）。ＳＧＫ３８６シグナリングを破壊すると，癌または
他の疾病状態が誘発されるかもしれない。
【０６２１】カゼインキナーゼグループ ＳＧＫ００３（配列番号７９）およびＳＧＫ００６（配列番号８０）は，ＣＫ
Ｉファミリーに属する新規カゼインキナーゼである。ＳＧＫ００３は，カゼイン
キナーゼＩ，アルファ１と３０４アミノ酸にわたり９１％の同一性を有する。Ｓ
ＧＫ００３とＣＫＩ，アルファとの間の高い配列ホモロジーは，これらの２つの
キナーゼが小胞輸送，ＤＮＡ修復，細胞サイクル進行または細胞質分裂に関連す
るプロセスにおいて重複する機能を有するかもしれないことを示唆する。特筆す
べきことは，組織アレイおよびＰＣＲに基づく発現研究の両方から決定されたよ
うに，腫瘍対正常組織起源においてＳＧＫ００３の上昇した発現レベルが観察さ
れたことである。ＳＧＫ００３は，以下の正常起源において発現されることが見
いだされている：脊髄，子宮，胎児脳，胎児腎臓，胎児肺および副腎。ＳＧＫ０
０３は，以下の組織に関連する腫瘍で過剰発現されていた：結腸，肺，前立腺，
卵巣，骨，乳および脳（神経膠芽細胞腫）。したがって，ＳＧＫ００３は，腫瘍
学における治療的介在の潜在的標的であるかもしれない。本明細書に記載される
第２の新規ＣＫＩファミリーメンバーであるＳＧＫ００６は，ｃ．ｅｌｅｇａｎ
ｓからの仮定オープンリーディングフレームＲ９０．１と１６６アミノ酸にわた
り５３％の同一性を有する。
【０６２２】ＣＭＧＣキナーゼグループ ＳＧＫ０４１（配列番号８１）およびＳＧＫ１１２（配列番号８２）は，ＣＤ
Ｋファミリーに属する新規ＣＭＧＣ蛋白質キナーゼである。本出願の最初の出願
時から，ＳＧＫ０４１は，公共のデータベースにＮｋｉａｍｒｅをコードする完
全長遺伝子（ＮＰ＿０５７５９２．１）として見られた。Ｎｋｉａｍｒｅはラッ
ト蛋白質Ｎｋｉａｔｒｅのヒトオルトログまたは非常に近いホモログである。Ｎ
ｋｉａｍｒｅは，１８の白血病試料中９個で両方のアレルで欠失していることが
見いだされ，蛍光インシトゥー染色体ハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）によ
り染色体バンド５ｑ３１の異常が示されている（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １９９
９Ａｕｇ１５；５９（１６）：４０６９−７４）。ＳＧＫ０４１は正常な造血に
必要な腫瘍サプレッサー活性を有しているのかもしれない。ＳＧＫ０４１の欠失
および／またはそのシグナリング経路の脱制御は，ヒト急性白血病および骨髄形
成異常の病因に関与しているかもしれない（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １９９９Ａ
ｕｇ１５；５９（１６）：４０６９−７４）。本発明の第２の新規ＣＤＫファミ
リーメンバーであるＳＧＫ１１２は，その機能は未知であるヒトＣＤＣ２関連キ
ナーゼ（ＣＣＲＫ）と６１％相関する。サイクリン依存性キナーゼ２（Ｃｄｋ２
）との配列類似性（４８０アミノ酸にわたり４４％のアミノ酸同一性）に基づい
て，ＳＧＫ１１２はＣｄｋ２が果たす機能と似た細胞サイクル制御機能を有する
かもしれない。Ｃｄｋ２は，非小細胞肺癌腫の病因への関与が示唆されている（
Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ ２０００Ｏｃｔ；ｌ１（１０）：５０
７−１５）。ＳＧＫ１１２シグナリングの破壊もまた，癌または他の疾病状態の
誘発に関与しているかもしれない。
【０６２３】 ＳＧＫ０３８（配列番号８３）は，ラットＥＲＫ７（Ｐ４２５２５）のヒトオ
ルトログまたは非常に近いホモログであるようである。ＥＲＫ７は，細胞成長を
阻害することができる，核に局在する構成的に活性なＭＡＰキナーゼである。他
のＭＡＰキナーゼにおいて見いだされる規範的なＴＥＹ触媒的モチーフの存在に
もかかわらず，ＥＲＫ７は，通常はＭＡＰキナーゼ経路を活性化させる有糸分裂
の促進を担っていない。ＥＲＫ７のキナーゼ活性，成長阻害および核局在の特性
は，無傷のＣ末端触媒外領域の存在に依存している（Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ
ｌ １９９９Ｆｅｂ；１９（２）：１３０１−１２）。ＥＲＫ７のＣ末端は，そ
のＣ末端領域を介して細胞内塩素イオン（ＣＬＩＣ３）に結合することが示され
ている（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ １９９９Ｊａｎ１５；２７４（３）：１６２
１−７）。ＳＧＫ０３８シグナリングの破壊もまた，癌または他の疾病状態の誘
発に関与しているかもしれない。
【０６２４】微生物ＰＫグループ ＳＧＫ１５８（配列番号８４）およびＳＧＫ４２９（配列番号８５）は，哺乳
動物細菌様キナーゼのＡＴＰ結合カセットトランスポーター（ＡＢＣ）ファミリ
ーの新規メンバーである。本出願の最初の出願時から，ＳＧＫ１５８およびＳＧ
Ｋ４２９は，公共のデータベースにおいてゲノム配列から予測された２つの仮定
蛋白質（それぞれＮＰ＿０６４６３２およびＡＡＤ４３１９２．１）をコードす
る完全長遺伝子として見られた。１つの哺乳動物ＡＢＣ蛋白質であるＡＢＣ１は
，その生理学的役割について研究されている。ＡＢＣ１はアポトーシスを生じて
いるマクロファージによる細胞の包み込みに必要である。哺乳動物蛋白質のＡＢ
Ｃ１ファミリーの他のメンバーには，嚢胞性線維症貫膜コンダクタンス（ＣＦＴ
Ｒ）レギュレータおよびＰ糖蛋白質が含まれる。ＣＦＴＲおよびＰ糖蛋白質と同
様に，ＡＢＣ１はアニオントランスポーターである。微生物においては，ＡＢＣ
トランスポーターは多剤耐性において重要な役割を果たす（Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １９９８Ｊｕｎ１０；１３６５（１−２）：３１−６
）。ＳＧＫ１５８およびＳＧＫ４２９は，他のＡＢＣ蛋白質と同様に薬剤耐性の
メカニズムにおいて機能を有するかもしれない。
【０６２５】 ＳＧＫ１５２（配列番号８６）は，第３の新規細菌様キナーゼであり，Ｒ１０
１ファミリーに属する。本出願の最初の出願時から，ＳＧＫ１５２は公共のデー
タベースにおいて，Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓのｓｕｄＤ（ｂ
ｉｍＤ６のサプレッサー）（ＮＰ＿００３８２２．１）のヒトホモログをコード
する完全長遺伝子として見られた。ｓｕｄＤは酵母から哺乳動物まで保存されて
おり，染色体凝縮および分離に関連する細胞サイクル制御において鍵となる機能
を果たすようである（Ｇｅｎｅ １９９８Ｍａｙ１２；２１１（２）：３２３−
９）。ＳＧＫ１５２シグナリングの破壊は，癌または他の疾病状態の誘発に関与
するかもしれない。
【０６２６】"その他"グループ ＳＧＫ０７７（配列番号８７）は，新規Ｃ２６Ｃ２ファミリーメンバーであり
，ネズミハプシン（ＢＡＢ００６４０．１）と最も近い（４９２アミノ酸にわた
り６２％のアミノ酸同一性）。ＳＧＫ０７７およびハプシンは両方とも，隠れマ
ルコフモデル分析から予測して，これらの蛋白質がキナーゼとして作用すること
を示唆するモチーフを有する。ハプシンの生物学的機能は不明である。
【０６２７】 ＳＧＫ０９３（Ｗｎｋ３）（配列番号８８）は，新規Ｃ２６Ｃ２ファミリーメ
ンバーであり，キナーゼ欠陥蛋白質（ＫＤＰ）（ＡＡＦ３１４８３．１）に最も
近い（３２１アミノ酸にわたり６０％のアミノ酸同一性）。Ｗｎｋ３は，記載さ
れるプロトタイプであるラットから単離されたＷｎｋｌを含むセリン／トレオニ
ンキナーゼのサブファミリーのメンバーである（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２０
００Ｊｕｎ２；２７５（２２）：１６７９５−８０１）。このファミリーは，い
くつかのユニークな配列の特徴を有するＮ末端触媒ドメインにより特徴づけられ
，最も顕著な特徴は，サブドメインＩ中の３番目に保存されたグリシン残基のリ
シンへの変化とカップリングした，キナーゼサブドメインＩＩ中の不変のリシン
のシステインへの変化である。得られる酵素は，この同時スイッチのため触媒的
活性を維持しているようである。Ｗｎｋ３はこれらの触媒的変化の両方を保存し
ており，したがって触媒的活性を保持していると予測される。Ｗｎｋｓの長いＣ
末端部分は，多くの蛋白質相互作用ドメイン，例えばＳＨ３結合部位およびコイ
ルドコイル領域を含む。
【０６２８】 Ｗｎｋファミリー触媒ドメインは，セリン／トレオニンキナーゼの２つのファ
ミリー，すなわち，ＭＥＫＫ様キナーゼおよびＳｔｅ２０様キナーゼに対して最
も高い類似性を示す。これらのファミリーは両方とも，多くの細胞プロセス，例
えば有糸分裂促進，分化，細胞生存およびストレス応答に重要な種々のＭＡＰＫ
シグナリングカスケード中の酵素を制御することができる。Ｓｔｅ２０キナーゼ
はまた，ｒａｓ／ｒａｃ／ｒｈｏ／ｃｄｃ４２経路および細胞骨格に及ぼす続く
下流の効果の制御に関与している。Ｗｎｋ３は，ヒト腎臓，腎臓癌腫細胞株，前
立腺，前立腺細胞株，および前立腺腫瘍骨転移，結腸直腸組織および腫瘍細胞株
，およびヒト白血病細胞において高い発現を示す。したがって，Ｗｎｋ３は，正
常なホメオスタシスおよびヒト腎臓，前立腺，および消化系の機能に関与してい
るかもしれず，これらの３つの組織から生ずる腫瘍発生に関与しているかもしれ
ない。ヒト白血病細胞株における高い発現は，この疾病の発達にも役割を果たし
ている可能性があることを示す。
【０６２９】 部分ＳＧＫ０７４（配列番号８９）は，新規Ｄｙｒｋファミリーメンバーであ
り，ネズミＭｙａｋ蛋白質キナーゼ（ＡＡＤ４１５９３．１）と最も近く，１７
６アミノ酸にわたり５０％のアミノ酸配列同一性を有する。ネズミＭｙａｋは，
酵母キナーゼＹａｋｌのホモログである。関連する遺伝子のＹａｋｌファミリー
には，ショウジョウバエ（Ｍｎｂ）およびヒトミニブレイン（Ｄｙｒｋｌａ）お
よびラットステロイドホルモンレセプター相互作用蛋白質ＡＮＰＫが含まれる。
Ｍｙａｋは，核局在シグナルおよびその触媒ドメインを挟むＰＥＳＴモチーフを
特徴とする（Ｍｏｌ Ｒｅｐｒｏｄ Ｄｅｖ ２０００Ａｐｒ；５５（４）：３
７２−８）。ＳＧＫ０７４は，ステロイド応答性蛋白質キナーゼの追加のメンバ
ーであるかもしれない。
【０６３０】 ＳＧＫ０８７（配列番号９０）およびＳＧＫ２９５，Ｋｉｓ，Ｐ−ＣＩＰ２（
配列番号９１）は，本発明における２つの追加のＤｙｒｋファミリーメンバーで
ある。本出願の最初の出願時から，ＳＧＫ０８７およびＳＧＫ２９５は公共のデ
ータベースにおいて完全長遺伝子Ｄｙｒｋ４（ＡＡＦ９１３９３．１）（ゲノム
配列から予測）およびラットＫｉｓ蛋白質キナーゼ（スタスミンと相互作用する
キナーゼ（Ｐ−ＣＩＰ２）（ＮＰ＿０５８９８９．１）として見られた。Ｄｙｒ
ｋは蛋白質キナーゼのヒトＤｙｒｋファミリーの第４のメンバーである。他の３
つはＤｙｒｋｌ（ヒトミニブレイン），Ｄｙｒｋ２およびＤｙｒｋ３である。Ｄ
ｙｒｋの機能的役割は現在不明である。Ｐ−ＣＩＰ２は，ニューロンおよび内分
泌細胞の分泌経路における鍵となる要素であるペプチジルグリシンアルファアミ
ド化モノオキシゲナーゼ（ＰＡＭ）のサイトゾルＣＯＯＨ−末端ドメイン（ＣＤ
）の相互作用蛋白質であることが見いだされている（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ
１９９６Ｎｏｖ８；２７１（４５）：２８６３６−４０）。
【０６３１】 ＳＧＫ４１９（配列番号９２）は，”その他”グループ中の新規ＮＡＫファミ
リーメンバーである。本出願の最初の出願時から，ＳＧＫ０４１９は，公共のデ
ータベースにおいて，ヒトゲノム配列決定から予測される仮定蛋白質ＣＡＢ７０
８６３．１をコードする完全長遺伝子として見られた。ＳＧＫ４１９は，ショウ
ジョウバエＮｕｍｂ付随キナーゼ（ＮＡＫ）と密接に関連する（２９４アミノ酸
にわたり６５％の配列同一性）。ショウジョウバエにおいては，ＮＡＫは，膜付
随蛋白質Ｎｕｍｂとの相互作用を通じて，非対称細胞分裂の間に細胞の運命の決
定に関与する（Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １９９８Ｊａｎ；１８（１）：５
９８−６０７）。ＳＧＫ４１９は，細胞分化および増殖に関連するプロセスにお
いてＮＡＫと同様の役割を果たすかもしれない。
【０６３２】 ＳＧＫ１２５，Ｍｙｏ３Ａ（配列番号９３）は，”その他”グループ中の新規
ＮｉｎａＣファミリーキナーゼである。本出願の最初の出願時から，ＳＧＫ１２
５は公共のデータベースにおいてＭｙｏＩＩＩＡ（ＮＰ＿０５９１２９）をコー
ドする完全長遺伝子として見られた。ＳＧＫ１２５は，別のクラスＩＩＩミオシ
ンであるショウジョウバエＮｉｎａｃと１１５５アミノ酸にわたり３４％の配列
同一性を示す。ショウジョウバエＮｉｎａＣと同様に，Ｍｙｏ３Ａは，ミオシン
ヘッドドメインならびに３つのカルモジュリン結合（ＩＱ）ドメインを示す。Ｎ
ｉｎａｃは，光レセプター光シグナル伝達プロセスにおいて鍵となる役割を果た
す（Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙ Ａｃｔａ ２０００Ｍａｒ１７；１４９６
（１）：５２−９）。ＳＧＫ１２５は，哺乳動物の光伝達において役割を有する
Ｎｉｎａｃの機能的対応物であるかもしれない。
【０６３３】 部分ＳＧＫ４４５（配列番号９４）は，”その他”グループ中の新規ポロキナ
ーゼ（ＰＬＫ）ファミリーキナーゼである。ＳＧＫ４４５はネズミＳａｋ（ＡＡ
Ｃ３７６４９．１），ショウジョウバエポロ様キナーゼと最も近く，４７アミノ
酸にわたり６５％の配列同一性を有する。ＳＧＫ４４５のＳａｋに対する高いホ
モロジーは，ＳＧＫ４４５がネズミキナーゼのヒトオルトログであるかもしれな
いことを示唆する。Ｓａｋ発現は有糸分裂および減数分裂のプロセスと関連する
。ショウジョウバエおよび哺乳動物型のＰＬＫは，細胞サイクル進行において鍵
となる役割を果たすことが示されている（Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉ
ｏｌ １９９８Ｄｅｃ；１０（６）：７７６−８３）。ＳＧＫ４４５は，Ｓａｋ
およびＰＬＫと同様に，細胞増殖の間に類似の役割を果たすかもしれない。
【０６３４】 ＳＧＫ１２７（配列番号９５）は，”その他”グループ中の新規ＲＡＦファミ
リーキナーゼである。ＳＧＫ１２７はＫＳＲ（Ｒａｓのキナーゼサプレッサー）
ＮＰ＿０３８５９９．１と最も近く，４４６アミノ酸にわたり４７％の配列同一
性を有する。ＫＳＲは，多数のレセプターチロシンキナーゼ活性化経路において
Ｒａｓ媒介性シグナル伝達において機能することが示されている。したがって，
ＳＧＫ１２７は細胞成長制御に関与しているかもしれない。ＳＧＫ１２７シグナ
リングの破壊は，癌または他の疾病状態の誘発に関与するかもしれない。
【０６３５】 ＳＧＫ００９，Ａｎｋｒｄ３（配列番号９６）は，”その他”グループ中の新
規ＲＩＰファミリーキナーゼである。本出願の最初の出願時から，ＳＧＫ００９
は公共のデータベースにおいて染色体２１のヒトゲノム配列から予測されるＡｎ
ｋｒｄ３（ＮＰ＿０６５６９０．１）をコードする完全長遺伝子として見られた
（Ｎａｔｕｒｅ ２０００Ｍａｙ１８；４０５（６７８４）：３１１）。ＳＧＫ
００９は，１０個の触媒外Ｃ末端アンキリンドメインを特徴とする。Ａｎｋｒｄ
３の生物学的機能は不明である。ＳＧＫ００９（Ａｎｋｒｄ３）における多数の
アンキリンドメインの存在は，この蛋白質がインテグリン様キナーゼにおいて見
られるものと似た重要な足場的役割を果たすことを示唆する（Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏ
ｌ Ｍｅｄ １９９９Ｊｕｎ；３（６）：５６３−７２）。このような足場的キ
ナーゼは，正常のならびに腫瘍細胞の増殖において重要なインテグリン−，成長
因子−およびＷｎｔシグナリング経路に関与する。
【０６３６】 ＳＧＫ４２１，ＳＴＫ２２Ａ，ＴＳＫ１（配列番号９７）は，”その他”グル
ープに含まれる新規ＳＴＫ２２Ａファミリーキナーゼである。本出願の最初の出
願時から，ＳＧＫ４２１に対応する核酸配列はゲノム配列からの公共のデータベ
ースにおいて見られた（ＡＣ００８４７６）。配列ホモロジーに基づき，ＳＧＫ
４２１は，ネズミキナーゼＳＴＫ２２Ａ（ＮＰ＿０３３４６１．１）のヒトオル
トログであるようである。ＴＳＫ１はヒト染色体２２ｑｌ１のディジョージ（Ｄ
ｉＧｅｏｒｇｅ）臨界領域（ＤＧＣＲ）にマップされ，マウスゲノム（染色体１
６）においてＳＴＫ２２Ａ遺伝子のシンテニーである。ディジョージ症候群を有
する患者は口蓋帆心臓顔面または円錐体幹顔面奇形を有する（Ｊ Ｏｔｏｌａｒ
ｙｎｇｏｌ ２０００Ｓｅｐ−Ｏｃｔ；２１（５）：３２６−３０）。ＳＧＫ４
２１はディジョージ症候群の病因に関与しているかもしれない。
【０６３７】 部分ＳＧＫ０４７（配列番号９８）は，”その他”グループ中の新規ＳＴＫＲ
ファミリーキナーゼである。ＳＧＫ０４７は，骨形態形成蛋白質（ＢＭＰ）レセ
プター，タイプＩＡ（ＮＰ＿００４３２０．１）と最も近く，１１アミノ酸にわ
たり４６％の配列同一性を有する。完全長形のＳＧＫ０４７は新規骨形態形成蛋
白質レセプターをコードする可能性がある。ＢＭＰレセプターは胚発生において
鍵となる役割を果たす（Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．２０００Ｊｕｎ
；５７（６）：９４３−５６．）。
【０６３８】 ＳＧＫ１９６（配列番号９９）は，”その他”グループ中の新規ユニークファ
ミリーキナーゼである。本出願の最初の出願時から，ＳＧＫ１９６は公共のデー
タベースに仮定ＯＲＦであるＢＡＢ１５６２３．１をコードする完全長遺伝子と
して見られた。ＳＧＫ１９６は，Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａか
らの多数の蛋白質キナーゼと最も近く，１５３アミノ酸にわたり２８％の配列同
一性を有する。植物キナーゼの機能は不明である。
【０６３９】 ＳＧＫ３９６（配列番号１００）は，”その他”グループ中の新規ユニークフ
ァミリーキナーゼである。ＳＧＫ３９６はＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉ
ａｎａキナーゼ（ＢＡＢ１１５７０．１）と最も近く，３４アミノ酸にわたり，
２８％のアミノ酸配列同一性を有する。植物キナーゼの機能は不明である。
【０６４０】 ＳＧＫ２７９，ＰＫＮ（配列番号１０１）は，”その他”グループ中の新規Ｙ
ＷＹ３＿ｃｅファミリーキナーゼである。ＳＧＫ２７９は，ＢＡＡ３６３６２．
１によりコードされるラットキナーゼと最も近く，４００アミノ酸にわたり９４
％の配列同一性を有する。ラットキナーゼの機能は不明である。
【０６４１】ＳＴＥグループ ＳＧＫ０３７（配列番号１０２），ＳＧＫ０６０（配列番号１０３）およびＳ
ＧＫ０８０（配列番号１０４）は，ＳＴＥグループの３つの新規ＮＥＫファミリ
ーメンバーである。ＳＧＫ０３７はＮＥＫ１と最も近く，１７６アミノ酸にわた
り６５％の配列同一性を有する。本出願の最初の出願時から，ＳＧＫ０６０は，
公共のデータベースにおいて，仮定蛋白質である仮想ＢＡＢ１５６７２．１をコ
ードする完全長遺伝子として見られた。ＳＧＫ０８０はＮＲＫ（ＮＰ＿００２４
８８．１）と最も近く，４０４アミノ酸にわたり９０％の配列同一性を有する。
ＮＥＫファミリーキナーゼ，例えばＮＥＫ１およびＮＲＫは，Ａｓｐｅｒｇｉｌ
ｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓからの有糸分裂レギュレータＮｉｍＡに関連する。Ｓ
ＧＫ０３７，ＳＧＫ０６０およびＳＧＫ０８０が種々のＮＥＫファミリーメンバ
ーとホモロジーを有するため，これらの新規キナーゼは細胞サイクルの制御に関
与しているかもしれない。ＳＧＫ０３７，ＳＧＫ０６０およびＳＧＫ０８０が関
与するシグナリング経路の破壊は，癌または他の疾病と関連するかもしれない。
【０６４２】 ＳＧＫ００２（配列番号１０５），ＳＧＫ０５８（配列番号１０６）およびＳ
ＧＫ１０３（配列番号１０７）は，ＳＴＥグループの３つの新規ＳＴＥ１１ファ
ミリーメンバーである。ＳＧＫ００２（配列番号１０５）はＭＥＫ２（Ｐ３６５
０７）と最も近く，３６９アミノ酸にわたり９２％の配列同一性を有する。第２
のＭＥＫ様キナーゼはＳＧＫ０５８により表される。本出願の最初の出願時から
，ＳＧＫ０５８は，公共のデータベースにおいて仮定蛋白質ＢＡＢ１５５３８．
１をコードする完全長遺伝子として見られた。ＳＧＫ００２とＭＥＫ２，ＳＧＫ
００２の間の類似性が高いため，これらはＭＡＰキナーゼ経路制御に関与するか
もしれない。
【０６４３】 部分ＳＧＫ１０３（配列番号１０７）は，本明細書の第３のＳＴＥ１１ファミ
リーキナーゼである。ＳＧＫ１０３はショウジョウバエのｆｕｓｅｄ（ＣＡＡ３
９２８５．１）に最も近く，１６アミノ酸にわたり５７％の配列ホモロジーを有
する。
【０６４４】 ＳＧＫ０３５（配列番号１０８）およびＳＧＫ０７５（配列番号１０９）は，
ＳＴＥグループの２つの新規ＳＴＥ２０ファミリーメンバーである。ＳＧＫ０３
５はＰＡＫ２Ｑ１３１７７と３１８アミノ酸にわたり９２％の同一性を示す。Ｓ
ＧＫ０７５は，ミオシンＩＩＩＡと２２７アミノ酸にわたり６７％の同一性を示
す。蛋白質キナーゼのＳＴＥ２０ファミリーは，細胞増殖，生存，分化および細
胞ストレスに対する応答，ＳＧＫ０３５およびＳＧＫ０７５により表されるポリ
ペプチドのすべての潜在的機能において重要な多数のシグナル伝達経路の鍵とな
る膜隣接レギュレータである。
【０６４５】ＴＫグループ ＳＧＫ１８８（配列番号１１０）は，ＥｐｈＡ９ファミリーに属する新規レセ
プターチロシンキナーゼである。Ｅｐｈファミリーはヒトゲノムにおけるレセプ
ターチロシンキナーゼの最も大きいサブファミリーである。このファミリーは，
リガンド結合に関与するＮ末端の球状のドメイン，レセプター二量体化に寄与す
る２つのタイプＩＩＩフィブロネクチン様ドメイン，貫膜ドメイン，および細胞
内チロシンキナーゼドメインから構成されるステレオタイプの構造を有する。
【０６４６】 ＳＧＫ０４０（配列番号５４）は，チロシンキナーゼグループの第２の新規メ
ンバーであり，他のチロシンキナーゼファミリーメンバーとクラスター化できな
いため，ユニークファミリーに属する。ＳＧＫ０４０はラット細胞質チロシンキ
ナーゼ（ＣＴＫ）ＢＡＴＫ（Ｐ４１２４３）と，７６アミノ酸にわたり３０％の
配列同一性を示す。シグナル伝達におけるＣＴＫの枢要の役割のため（Ｉｎｔ
Ｊ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．２０００Ｊｕｎ；５（６）：５８３−９０，Ｃｕｒｒ Ｐ
ｈａｒｍ Ｄｅｓ．２０００Ｍａｒ；６（４）：３６１−７８），ＳＧＫ０４０
シグナリングの破壊は癌または他の疾病状態の誘発に関与するかもしれない。
【０６４７】実施例２ｆ：キナーゼ様活性を示すポリペプチドの規定されたグループ中での分 類 ＤＡＧキナーゼグループ ＳＧＫ３９０（配列番号１１２）は，キナーゼのＤＡＧファミリーの新規ファ
ミリーメンバーである。本出願の最初の出願時から，ヒトＳＧＫ３９０の，Ｍｅ
ｓｏｃｒｉｃｅｔｕｓ ａｕｒａｔｕｓ（ハムスター）からの潜在的オルトログ
または非常に近いホモログは，公共のデータベースにおいて，ジアシルグリセロ
ールキナーゼイータ（ＤＡＧキナーゼイータ）をコードする完全長遺伝子（ＮＰ
＿０５７５９２．１）として見られた。ＳＧＫ３９０は，そのハムスター対応物
と同様に，プロファイル分析から明確にされた多数の触媒外ドメインを含む。こ
れには，例えば，ジアシルグリセロール／ホルボルエステル結合ドメイン，プレ
クストリンドメインおよびジアシルグリセロールキナーゼアクセサリードメイン
が含まれる。ハムスターＤＡＧキナーゼイータは，より限定された組織分布パタ
ーンを示す他のＤＡＧキナーゼと比較して，広い組織分布を有することが示され
ている。ＤＡＧキナーゼは，セカンドメッセンジャーＤＡＧの濃度の制御に鍵と
なる役割を果たすことが示されている（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ １９９６Ａｕ
ｇ１６；２７１（３３）：１９７８１−８）。ＤＡＧレベルの制御におけるＳＧ
Ｋ３９０の潜在的役割のため，このキナーゼが関与しているシグナリング経路の
破壊は，癌または他の疾病状態を誘発するかもしれない。
【０６４８】グアニル酸シクラーゼ（ＧＣｙｃ）グループ ＳＧＫ００７（配列番号１１３）およびＳＧＫ０５０（配列番号１１４）は，
蛋白質キナーゼ様分子のグアニル酸シクラーゼファミリーの新規メンバーである
。ＳＧＫ００７は，ラットグアニル酸シクラーゼと４９９アミノ酸にわたり５９
％の同一性を有する。したがって，ＳＧＫ００７は，ヒトホモログまたはラット
蛋白質の近いホモログである。部分ＳＧＫ０５０ポリペプチドは，ナトリウム尿
排泄亢進ペプチドレセプターＢ前駆体のアイソフォームｂ（ＮＰ＿００３９８６
．２）と２３アミノ酸にわたり４８％の同一性を有する。同様のホモロジーは，
ＳＧＫ０５０と多くの種のグアニル酸シクラーゼとの間にも見いだされる。
【０６４９】実施例３：哺乳動物蛋白質キナーゼをコードするｃＤＮＡの単離 材料および方法 新規クローンの同定 総ＲＮＡは，原発性腫瘍，正常および腫瘍細胞株，正常ヒト組織，およびソー
トしたヒト造血細胞細胞からＣｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉおよびＳａｃｃｈｉ（Ｐ．
Ｃｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉ ａｎｄ Ｎ．Ｓａｃｃｈｉ，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．１６２，１５６（１９８７））のグアニジン塩／フェノール抽出プロトコル
を用いて単離する。これらのＲＮＡを用いて，Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ Ｐｒｅ
Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ，Ｇａｉｔ
ｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ；Ｇｅｒａｒｄ，ＧＦ ｅｔ ａｌ．（１９８９），Ｆ
ＯＣＵＳ １１，６６）を用いて，製造元により推奨される条件で一本鎖ｃＤＮ
Ａを生成する。典型的な反応においては，６０μｌの反応容量中で１０μｇの総
ＲＮＡおよび１．５μｇのオリゴ（ｄＴ）12-18を用いる。生成物をＲＮａｓｅ
Ｈで処理し，Ｈ2Ｏで１００μｌに希釈する。続くＰＣＲ増幅のためには，１−
４μｌのこのｓｓｃＤＮＡを各反応において用いる。
【０６５０】 縮重オリゴヌクレオチドは，Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ３９４
８ＤＮＡ合成機で確立されたホスホルアミダイト化学を用いて合成し，エタノー
ルで沈澱させ，精製せずにＰＣＲ用に用いる。これらのプライマーは，いくつか
の蛋白質キナーゼの触媒ドメイン中の保存モチーフのセンスおよびアンチセンス
鎖に由来する。縮重ヌクレオチド残基の表示は以下のとおりである：Ｎ＝Ａ，Ｃ
，Ｇ，またはＴ；Ｒ＝ＡまたはＧ；Ｙ＝ＣまたはＴ；Ｈ＝Ａ，ＣまたはＴ，Ｇで
はない；Ｄ＝Ａ，ＧまたはＴ，Ｃではない；Ｓ＝ＣまたはＧ；およびＷ＝Ａまた
はＴ。
【０６５１】 ＰＣＲ反応は，多数の一本鎖ｃＤＮＡに適用される縮重プライマーを用いて行
う。プライマーをそれぞれ最終濃度５μＭで，１０ｍＭ ＴｒｉｓＨＣｌ，ｐＨ
８．３，５０ｍＭ ＫＣｌ，１．５ｍＭ ＭｇＣｌ2，各２００μＭデオキシヌ
クレオシド三リン酸，０．００１％ゼラチン，１．５Ｕ ＡｍｐｌｉＴａｑ Ｄ
ＮＡポリメラーゼ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ／Ｃｅｔｕｓ），および１−４μ
ｇのｃＤＮＡを含む混合物に加える。９５℃で３分間変性させた後，サイクルの
条件は，９４℃で３０秒間，５０℃で１分間，および７２℃で１分４５秒間を３
５サイクルである。３００−３５０ｂｐの間に移動したＰＣＲフラグメントをＧ
ｅｎｅＣｌｅａｎキット（Ｂｉｏ１０１）を用いて２％アガロースゲルから単離
し，製造元のプロトコルにしたがってｐＣＲＩＩベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅ
ｎ Ｃｏｒｐ．Ｕ．Ｓ．Ａ．）中にＴ−Ａクローニングする。
【０６５２】 Ｑｉａｇｅｎカラムを用いるミニプラスミドＤＮＡ調製用にコロニーを選択し
，サイクルシークエンシング染料ターミネータキットおよびＡｍｐｌｉＴａｑＤ
ＮＡポリメラーゼ，ＦＳ（ＡＢＩ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を用いてプ
ラスミドＤＮＡを配列決定する。配列決定反応生成物はＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ ３
７７ ＤＮＡシークエンサーにかけ，ＢＬＡＳＴアラインメントアルゴリズム（
Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ． ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：
４０３−１０）を用いて分析する。
【０６５３】 追加のＰＣＲ戦略を用いて，正確なまたはほぼ正確なオリゴヌクレオチドプラ
イマーを用いて種々のＰＣＲフラグメントまたはＥＳＴを接続する。ＰＣＲ条件
は上述したとおりであるが，ただし，アニーリング温度は，式：Ｔｍ＝４（Ｇ＋
Ｃ）＋２（Ａ＋Ｔ）を用いて各オリゴ対について計算する。
【０６５４】ｃＤＮＡクローンの単離： ヒトｃＤＮＡライブラリをキナーゼ関連遺伝子に対応するＰＣＲまたはＥＳＴ
フラグメントで探索する。プローブをランダムプライミングにより32Ｐで標識し
，ライブラリスクリーニングの標準的手法にしたがって，２ｘ１０6ｃｐｍ／ｍ
Ｌで用いる。プレハイブリダイゼーション（３時間）およびハイブリダイゼーシ
ョン（一夜）は，５ＸＳＳＣ，５Ｘデンハルト溶液，２．５％硫酸デキストラン
，５０ｍＭＮａ2ＰＯ4／ＮａＨＰＯ4，ｐＨ７．０，５０％ホルムアミド，１０
０ｍｇ／ｍＬ変性サケ精子ＤＮＡ中で４２℃で行う。ストリンジェントな洗浄は
，６５℃で，０．１ＸＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳ中で行う。ＤＮＡ配列決定は
，サイクルシークエンシング染料ターミネータキットを用い，ＡｍｐｌｉＴａｑ
ＤＮＡポリメラーゼＦＳ（ＡＢＩ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を用いて両
方の鎖について行う。配列決定反応生成物をＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ ３７７ ＤＮ
Ａシークエンサーにかける。
【０６５５】実施例４：ヒト蛋白質キナーゼの発現分析 材料および方法 ノザンブロット分析 ノザンブロットは，ヒト成人組織（例えば，胸腺，肺，十二指腸，結腸，精巣
，脳，小脳，皮質，唾液腺，肝臓，膵臓，腎臓，脾臓，胃，子宮，前立腺，骨格
筋，胎盤，乳腺，膀胱，リンパ節，脂肪組織），および２つのヒト胎児正常組織
（胎児肝臓，胎児脳）からの６０種類のヒト腫瘍細胞株（例えば，ＨＯＰ−９２
，ＥＫＶＸ，ＮＣＩ−Ｈ２３，ＮＣＩ−Ｈ２２６，ＮＣＩ−Ｈ３２２Ｍ，ＮＣＩ
−Ｈ４６０，ＮＣＩ−Ｈ５２２，Ａ５４９，ＨＯＰ−６２，ＯＶＣＡＲ−３，Ｏ
ＶＣＡＲ−４，ＯＶＣＡＲ−５，ＯＶＣＡＲ−８，ＩＧＲＯＶ１，ＳＫ−ＯＶ−
３，ＳＮＢ−１９，ＳＮＢ−７５，Ｕ２５１，ＳＦ−２６８，ＳＦ−２９５，Ｓ
Ｆ−５３９，ＣＣＲＦ−ＣＥＭ，Ｋ−５６２，ＭＯＬＴ−４，ＨＬ−６０，ＲＰ
ＭＩ８２２６，ＳＲ，ＤＵ−１４５，ＰＣ−３，ＨＴ−２９，ＨＣＣ−２９９８
，ＨＣＴ−１１６，ＳＷ６２０，Ｃｏｌｏ２０５，ＨＴＣ１５，ＫＭ−１２，Ｕ
Ｏ−３１，ＳＮ１２Ｃ，Ａ４９８，ＣａＫｉｌ，ＲＸＦ−３９３，ＡＣＨＮ，７
８６−０，ＴＫ−１０，ＬＯＸＩＭＶＩ，Ｍａｌｍｅ−３Ｍ，ＳＫ−ＭＥＬ−２
，ＳＫ−ＭＥＬ−５，ＳＫ−ＭＥＬ−２８，ＵＡＣＣ−６２，ＵＡＣＣ−２５７
，Ｍ１４，ＭＣＦ−７，ＭＣＦ−７／ＡＤＲＲＥＳ，Ｈｓ５７８Ｔ，ＭＤＡ−Ｍ
Ｂ−２３１，ＭＤＡ−ＭＢ−４３５，ＭＤＡ−Ｎ，ＢＴ−５４９，Ｔ４７Ｄ）か
ら単離した１０μｇの総ＲＮＡを変性ホルムアルデヒド１．２％アガロースゲル
に流し，ナイロン膜に移すことにより調製する。
【０６５６】 フィルターを，キナーゼ遺伝子のいくつかの挿入物から合成したランダムプラ
イミング［α32Ｐ］ｄＣＴＰ標識プローブでハイブリダイズさせる。ハイブリダ
イゼーションは，６ＸＳＳＣ，０．１％ＳＤＳ，１Ｘデンハルト溶液，１００μ
ｇ／ｍＬの変性ニシン精子ＤＮＡ中で，１−２ｘ１０6ｃｐｍ／ｍＬの32Ｐ標識
ＤＮＡプローブで４２℃で一夜行う。フィルターを０．１ＸＳＳＣ／０．１％Ｓ
ＤＳ中で６５℃で洗浄し，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓホスファーイ
メージャーで露光する。
【０６５７】定量的ＰＣＲ分析 種々の正常ヒト組織および細胞株からＲＮＡを単離する。一本鎖ｃＤＮＡは，
１０μｇの上述した各ＲＮＡからＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ Ｐｒｅａｍｐｌｉｆ
ｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）を用いて合成する。次に
，これらの一本鎖テンプレートを各クローンに特異的なプライマーとともに２５
サイクルのＰＣＲ反応において用いる。反応生成物を２％アガロースゲルで電気
泳動し，エチジウムブロマイドにより染色し，ＵＶ光ボックスで写真を撮る。各
試料についてＳＴＫ特異的バンドの相対的強度を評価する。
【０６５８】ＤＮＡアレイに基づく発現分析 プラスミドＤＮＡアレイブロットは，０．５μｇの各キナーゼの変性プラスミ
ドをナイロン膜に付加することにより調製する。［γ32Ｐ］ｄＣＴＰ標識一本鎖
ＤＮＡプローブは，いくつかのヒト免疫組織起源または腫瘍細胞（例えば，胸腺
，樹状細胞，肥満細胞，単球，Ｂ細胞（初代，Ｊｕｒｋａｔ，ＲＰＭＩ８２２６
，ＳＲ），Ｔ細胞（ＣＤ８／ＣＤ４＋，ＴＨ１，ＴＨ２，ＣＥＭ，ＭＯＬＴ４）
，Ｋ５６２（巨核球）から単離された総ＲＮＡから合成する。ハイブリダイゼー
ションは，４２℃で１６時間，６ＸＳＳＣ，０．１％ＳＤＳ，１Ｘデンハルト溶
液，１００μｇ／ｍＬ変性ニシン精子ＤＮＡ中で，１０6ｃｐｍ／ｍＬの［γ32
Ｐ］ｄＣＴＰ標識一本鎖プローブを用いて行う。フィルターを０．１ＸＳＳＣ／
０．１％ＳＤＳで６５℃で洗浄し，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓホス
ファーイメージャーで定量的分析を行う。
【０６５９】実施例５：蛋白質キナーゼ遺伝子発現 ベクターの構築 材料および方法 発現ベクターの構築 ヒトｃＤＮＡのいくつかから発現構築物を作成する：ａ）ｐＣＤＮＡ発現ベク
ター中の完全長クローン；ｂ）ＧＳＴ発現カセットのＣ末端に融合させた新規キ
ナーゼの触媒ドメインを含むＧＳＴ融合構築物；およびｃ）ｐＣＤＮＡベクター
中に挿入されたキナーゼドメイン中の予測ＡＴＰ結合部位にＬｙｓからＡｌａ（
ＫからＡ）変異を含む完全長クローン。
【０６６０】 キナーゼの"ＫからＡ"変異体は優性負の構築物として機能するかもしれず，こ
れらの新規ＳＴＫの機能を解明するために用いられる。
【０６６１】実施例６：蛋白質キナーゼに対する特異的免疫試薬の作成 材料および方法 単離されたキナーゼポリペプチドに対応するＫＬＨ−またはＭＡＰ−コンジュ
ゲート化合成ペプチドに対する特異的免疫試薬をウサギで生成させる。Ｃ末端ペ
プチドをグルタルアルデヒドでＫＬＨとコンジュゲートさせ，遊離Ｃ末端を残し
た。内部ペプチドは，ブロックされたＮ末端を用いてＭＡＰ−コンジュゲートさ
せた。追加の免疫試薬はまた，細菌で発現させた各新規ＰＴＫまたはＳＴＫの細
胞質ドメインを含むＧＳＴ融合蛋白質でウサギを免疫することにより生成するこ
とができる。内因性起源について試験する前に，最初に，種々の免疫血清を，組
換え蛋白質に対する反応性および選択性について試験する。
【０６６２】ウエスタンブロット ＳＤＳ ＰＡＧＥ上の蛋白質をイモビロン膜に移す。洗浄緩衝液はＰＢＳＴ（
標準的リン酸緩衝化食塩水，ｐＨ７．４＋０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）で
ある。ブロッキングおよび抗体インキュベーション緩衝液はＰＢＳＴ＋５％ミル
クである。抗体希釈は１：１０００から１：２０００の範囲である。
【０６６３】実施例７：蛋白質キナーゼの組換え発現および生物学的アッセイ 材料および方法 哺乳動物細胞におけるキナーゼの過渡的発現 キナーゼ構築物を含むｐｃＤＮＡ発現プラスミド（１０μｇＤＮＡ／１００ｍ
ｍプレート）をリポフェクタミン（ＧｉｂｃｏＢＲＬ）とともに２９３細胞中に
導入する。７２時間後，細胞を０．５ｍＬの可溶化緩衝液（２０ｍＭＨＥＰＥＳ
，ｐＨ７．３５，１５０ｍＭ ＮａＣｌ，１０％グリセロール，１％Ｔｒｉｔｏ
ｎＸ−１００，１．５ｍＭ ＭｇＣｌ2，１ｍＭ ＥＧＴＡ，２ｍＭフッ化フェ
ニルメチルスルホニル，１μｇ／ｍＬアプロチニン）中に回収する。試料アリコ
ートを６％アクリルアミド／０．５％ビスアクリルアミドゲルのＳＤＳポリアク
リルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）で分離し，電気泳動的にニトロセルロース
に移す。非特異的結合は，ブロットをＢｌｏｔｔｏ（５％ｗ／ｖ無脂乾燥ミルク
および０．２％ｖ／ｖ Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ−４０（Ｓｉｇｍａ）を含有するリ
ン酸緩衝化食塩水）中でプレインキュベートすることによりブロックし，種々の
抗ペプチドまたは抗ＧＳＴ融合蛋白質特異的抗血清を用いて組換え蛋白質を検出
する。
【０６６４】インビトロキナーゼアッセイ キナーゼ発現構築物でトランスフェクトした３日後，１０ｃｍプレートの２９
３細胞をＰＢＳで洗浄し，氷上でホスファターゼ阻害剤を含む２ｍＬのＰＢＳＴ
ＤＳで溶解する（１０ｍＭ ＮａＨＰＯ4，ｐＨ７．２５，１５０ｍＭ ＮａＣ
ｌ，１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００，０．５％デオキシコール酸，０．１％ＳＤＳ
，０．２％アジ化ナトリウム，１ｍＭ ＮａＦ，１ｍＭ ＥＧＴＡ，４ｍＭオル
トバナジン酸ナトリウム，１％アプロチニン，５μｇ／ｍＬロイペプチン）。細
胞断片を遠心分離（１２０００ｘｇ，１５分間，４℃）により除去し，溶解物を
プロテインＡセファロースの１：１スラリー５０μｌとともにそれぞれ１時間２
回インキュベートすることにより前精製する。０．５ｍＬの精製上清を，１０μ
ｌのプロテインＡ精製キナーゼ特異的抗血清（ＧＳＴ融合蛋白質または抗ペプチ
ド抗血清から生成）プラス５０μｌのプロテインＡ−セファロースの１：１スラ
リーで，４℃で２時間インキュベートする。
【０６６５】 次にビーズをＰＢＳＴＤＳ中で２回，ＨＮＴＧ（２０ｍＭＨＥＰＥＳ，ｐＨ７
．５／１５０ｍＭ ＮａＣｌ，０，１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００，１０％グリセ
ロール）中で２回洗浄する。
【０６６６】 セファロースビーズ上の免疫精製キナーゼを２０μｌのＨＮＴＧ＋３０ｍＭ
ＭｇＣｌ2，１０ｍＭ ＭｎＣｌ2，および２０μＣｉ［α32Ｐ］ＡＴＰ（３００
０Ｃｉ／ｍｍｏｌ）中に再懸濁する。キナーゼ反応は室温で３０分間実施し，５
０ｍＭ ＥＤＴＡを補充したＨＮＴＧを加えることにより停止させる。試料をＨ
ＮＴＧ中で６回洗浄し，ＳＤＳ試料緩衝液中で５分間煮沸し，６％ＳＤＳ−ＰＡ
ＧＥおよび続くオートラジオグラフィーにより分析する。リン酸化アミノ酸の分
析は，ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルから切り出した32Ｐ−標識バンドの標準的２Ｄ法に
より行う。細菌で発現させたキナーゼのＧＳＴ融合構築物についても同様のアッ
セイを行う。
【０６６７】実施例８ａ：蛋白質キナーゼの染色体位置 材料および方法 いくつかの情報源を用いて，本明細書に記載される遺伝子のそれぞれの染色体
上の位置に関する情報を得た。最初に，これらのコンティグの細胞遺伝学マップ
位置をそのＧｅｎｂａｎｋの記録の表題またはテキストから見いだすか，または
ＮＣＢＩヒトゲノムマップビュワーにより調査した（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎ
ｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／Ｅｎｔｒｅｚ／ｈｕｍ＿ｓ
ｒｃｈ？）。あるいは，核酸配列の受託番号を用いてＵｎｉｇｅｎｅデータベー
スを検索した。Ｕｎｉｇｅｎｅサーチエンジンを含むサイトは，ｈｔｔｐ：／／
ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＵｎｉＧｅｎｅ／Ｈｓ．Ｈｏｍｅ
．ｈｔｍｌである。Ｕｎｉｇｅｎｅデータベース中のマップ位置の情報は，いく
つかの情報源，例えば，ｔｈｅ Ｏｎｌｉｎｅ Ｍｅｎｄｅｌｉａｎ Ｉｎｈｅ
ｒｉｔａｎｃｅ ｉｎ Ｍａｎ（ＯＭＩＭ，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．
ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｏｍｉｍ／ｓｅａｒｃｈｏｍｉｍ．ｈｔｍｌ），Ｔｈ
ｅ Ｇｅｎｏｍｅ Ｄａｔａｂａｓｅ（ｈｔｔｐ：／／ｇｄｂ．ｉｎｆｏｂｉｏ
ｇｅｎ．ｆｒ／ｇｄｂ／ｓｉｍｐｌｅＳｅａｒｃｈ．ｈｔｍｌ），およびｔｈｅ
Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｈｕｍａｎ ｐｈｙｓｉｃａｌ
ｍａｐ（ｈｔｔｐ：／／ｃａｒｂｏｎ．ｗｉ．ｍｉｔ．ｅｄｕ：８０００／ｃｇ
ｉ−ｂｉｎ／ｃｏｎｔｉｇ／ｓｔｓ＿ｉｎｆｏ？ｄａｔａｂａｓｅ＝ｒｅｌｅａ
ｓｅ）から得た。
【０６６８】 これらの方法のいずれかにより細胞遺伝学的領域を同定した後，ＯＭＩＭを細
胞遺伝学的位置で検索することにより，疾病との関連を確立する。ＯＭＩＭは，
疾病により系統づけられた細胞遺伝学的マップ位置の検索可能なカタログを維持
する。また，細胞遺伝学的領域についての入手可能な文献の徹底的な検索は，Ｍ
ｅｄｌｉｎｅ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｐ
ｕｂＭｅｄ／ｍｅｄｌｉｎｅ．ｈｔｍｌ）を用いて行う。マップされた部位とヒ
ト癌において見いだされる染色体異常との関連についての参考文献は，Ｋｎｕｕ
ｔｉｌａ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ，１９９８，１５２：１１０
７−１１２３に見いだすことができる。
【０６６９】結果 マップされた遺伝子の染色体領域は以下に示される。染色体位置は，多くのヒ
ト疾病，例えば癌の遺伝的情報を追跡するｔｈｅ Ｏｎｌｉｎｅ Ｍｅｎｄｅｌ
ｉａｎ Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ ｉｎ Ｍａｎデータベース（ＯＭＩＭ，ｈｔ
ｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｈｔｂｉｎ−ｐｏｓｔ
Ｏｍｉｍ）を用いてクロスチェックした。マップされた部位とヒト癌に見いださ
れる染色体異常との関連についての参考文献は，Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａ
ｌ．，ＡｍＪ．Ｐａｔｈｏｌ，１９９８，１５２：１１０７−１１２３に見いだ
すことができる。マップされた位置についての第３の情報源は，マップされた位
置とヒト疾病との関連性を記載する，公表された文献（ＮＣＢＩ，ｈｔｔｐ：／
／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｅｎｔｒｅｚ／ｑｕｅｒｙ．ｆ
ｃｇｉ）の検索であった。
【０６７０】 ＳＧＫ１８７，ＣＲＩＫ（配列番号１，配列番号５８をコード）は染色体位置
１２ｑ２４．２３にマップされる。この染色体位置の増幅は非小細胞肺癌と関連
づけられている（１２ｑ２４．１−２４．３；２／５０）（Ｋｎｕｕｔｉｌａ，
ｅｔ ａｌ．）。
【０６７１】 ＳＧＫ０６４，ＧＲＫ７（配列番号２，配列番号５９をコード）は染色体位置
３ｑ２４にマップされる。この染色体位置は，頭頚部の扁平上皮癌（３／３０）
および子宮頸癌（３／１０）（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）；アッシャ
ー症候群（ＯＭＩＭ，２７６９０２ ＵＳＨＥＲ ＳＹＮＤＲＯＭＥ，ＴＹＰＥ ＩＩＩ；ＵＳＨ３）と関連づけられている。
【０６７２】 ＳＧＫ４０９，ＫＩＡＡ０３０３（配列番号３，配列番号６０をコード）は染
色体位置５ｑ１２．１にマップされる。この染色体位置は精巣の癌に関連づけら
れている（１５ｑｌ５−ｑｔｅｒ；２／１１）（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａ
ｌ．）。
【０６７３】 ＳＧＫ０２１（配列番号４，配列番号６１をコード）は染色体位置５ｑ３１．
２にマップされる。この染色体位置は軟骨肉腫に関連づけられている（２／４５
），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。
【０６７４】 ＳＧＫ４１０（配列番号５，配列番号６２をコード）は染色体位置Ｘｑ２３に
マップされる。この染色体位置は前立腺の癌（Ｘｑ２３−ｑｔｅｒ；１／９），
（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．），および伴性精神遅滞（ＯＭＩＭ，３０
００４６ ＭＥＮＴＡＬ ＲＥＴＡＲＤＡＴＩＯＮ，Ｘ−ＬＩＮＫＥＤ ＮＯＮ
ＳＰＥＣＩＦＩＣ，２３；ＭＲＸ２３）に関連づけられている。
【０６７５】 ＳＧＫ０６９（配列番号６，配列番号６３をコード）は染色体位置１９ｐｌｌ
−ｐｌ３にマップされる。この染色体位置は小細胞肺癌に関連づけられている（
１９ｐｌ２，２／２２），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。
【０６７６】 ＳＧＫ１１０（配列番号７，配列番号６４をコード）は染色体位置１９ｑｌ３
．４にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている：
乳の癌（１９ｑｌ３．１−ｑｔｅｒ；１／３３），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。
【０６７７】 ＳＧＫ０５３，ＣＫＬｉＫ（配列番号８，配列番号６５をコード）は染色体位
置１０ｐｌ４にマップされる。この染色体位置は家族性不整脈惹起性右心室形成
異常に関連づけられている（ＯＭＩＭ，６０４４０１ ＡＲＲＨＹＴＨＭＯＧＥ
ＮＩＣ ＲＩＧＨＴ ＶＥＮＴＲＩＣＵＬＡＲ ＤＹＳＰＬＡＳＩＡ，ＦＡＭＩ
ＬＩＡＬ）。
【０６７８】 ＳＧＫ１２４（配列番号９，配列番号６６をコード）は染色体位置２０ｐｌ２
．２−ｐｌ３にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられ
ている：胃食道接合部の癌（２０ｐｌ２；３／２８），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ，
ｅｔ ａｌ．），左心室の家族性非コンパクション（ＯＭＩＭ，６０４１６９
ＮＯＮＣＯＭＰＡＣＴＩＯＮ ＯＦ ＬＥＦＴ ＶＥＮＴＲＩＣＵＬＡＲ ＭＹ
ＯＣＡＲＤＩＵＭ，ＦＡＭＩＬＩＡＬ ＩＳＯＬＡＴＥＤ，ＡＵＴＯＳＯＭＡＬ
ＤＯＭＩＮＡＮＴ）。
【０６７９】 ＳＧＫ２５４，ＣＡＭＫＫａ（配列番号１０，配列番号６７をコード）は染色
体位置１７ｐｌ３．３にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連
づけられている：頚癌において喪失（ｌｏｓｓ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉ
ｔｙ，［Ｌａｚｏ，Ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｃ
ｅｒｖｉｃａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ．１９９９Ａｕ
ｇ；８０（１２）：２００８−１８．Ｒｅｖｉｅｗ］。
【０６８０】 ＳＧＫ２９７，ＣａＭＫＩｂ２（配列番号１１，配列番号６８をコード）は染
色体位置Ｘｑ２８にマップされる。この染色体位置を含む転座は以下のヒト疾病
と関連づけられている：Ｔ細胞プロリンパ球性白血病（Ｌａｉｎｅ， ｅｔ ａ
ｌ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．２０００Ａｕｇ；６（２）：３９５−４０７）；精神遅
滞（ｅ．ｇ．，Ｒｕｓｓｏ， ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｍｅｄ Ｇｅｎｅｔ．
２０００，Ｏｃｔ２３；９４（５）：３７６−８２）。また外套細胞リンパ腫と
関連づけられている（Ｘｑ２６−ｑ２８，５／５０）．（Ｋｎｕｕｔｉｌａ，
ｅｔ ａｌ．）。
【０６８１】 ＳＧＫ４１１，ＣａＭＫＩＩデルタ２（配列番号１２，配列番号６９をコード
）は染色体位置４ｑ２５にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関
連づけられている：発達性緑内障（リーゲル症候群，虹彩発育不全，および虹彩
角発育不全；Ｃｒａｉｇ， ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｏｐｈｔｈａｌ
ｍｏｌ．１９９９Ａｐｒ；１０（２）：１２６−３４）。
【０６８２】 ＳＧＫ０２７（配列番号１３，配列番号７０をコード）は染色体位置５ｑｌｌ
−ｑｌｌ．ｌにマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられ
ている：骨の悪性線維性組織球腫（１／２６）（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａ
ｌ．）。またＢ−細胞非ホジキンリンパ腫と関連づけられている（Ｗｌｏｄａｒ
ｓｋａ， ｅｔ ａｌ．Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ Ｃｅｌｌ Ｇｅｎｅｔ．１９９４
；６５（３）：１７９−８３）。
【０６８３】 ＳＧＫ０４６ｂ（配列番号１４，配列番号７１をコード）は染色体位置３ｐ２
４．１にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている
：軟部組織の悪性線維性組織球腫（３ｐ２４−ｐ２６，２／３０）（Ｋｎｕｕｔ
ｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。
【０６８４】 ＳＧＫ０４６ｃ（配列番号１５，配列番号７２をコード）は染色体位置３ｐ２
４．１にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている
：軟部組織の悪性線維性組織球腫（３ｐ２４−ｐ２６，２／３０）（Ｋｎｕｕｔ
ｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。
【０６８５】 ＳＧＫ０８９（配列番号１６，配列番号７３をコード）は染色体位置３ｐ２５
．３にマップされる。この染色体位置はヒト疾病とは関連づけられていない。
【０６８６】 ＳＧＫ１３３（配列番号１７，配列番号７４をコード）は染色体位置７ｐｌ１
．２−ｐ２１にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられ
ている：骨の悪性線維性組織球腫（１／２６），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ
ａｌ．）。
【０６８７】 ＳＧＫ００４，ＭＳＫ（配列番号１８，配列番号７５をコード）は染色体位置
２１ｑ２２．３にマップされる。重症眼性変質および後部脳ヘルニア（コブラッ
ク症候群）を引き起こす遺伝子は２１ｑ２２３にマップされている（Ｓｅｒｔｉ
ｅ， ｅｔ ａｌ，Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ １９９６Ｊｕｎ；５（６）：
８４３−７）。
【０６８８】 ＳＧＫ００６（配列番号１９，配列番号７６をコード）は染色体位置１６ｑｌ
６．１にマップされる。この染色体位置はヒト疾病とは関連づけられていない。
【０６８９】 ＳＧＫ１８０，ＳＮＲＫ（配列番号２０，配列番号７７をコード）は染色体位
置３ｐ２１．３１にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけ
られている：膀胱の癌（１／１４），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。
【０６９０】 ＳＧＫ３８６，ＭＬＣＫｓ（配列番号２１，配列番号７８をコード）は染色体
位置２０ｑｌ１．１にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づ
けられている：腎臓乳頭状細胞癌腫．（Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ．１９９９Ｍａｒ
；７９（３）：３１１−６）。
【０６９１】 ＳＧＫ００３（配列番号２２，配列番号７９をコード）は染色体位置１３ｑｌ
４．１１にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられてい
る：ファローピウス管癌（１３ｑｌ４−ｑｔｅｒ；１／１２）（Ｋｎｕｕｔｉｌ
ａ， ｅｔ ａｌ．）。
【０６９２】 ＳＧＫ０６６（配列番号２３，配列番号８０をコード）は染色体位置１５ｑｌ
５にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている：精
巣の癌（２／１１），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。
【０６９３】 ＳＧＫ０４１，ＮＫＩＡＭＲＥ（配列番号２４，配列番号８１をコード）は染
色体位置５ｑ３１．１にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連
づけられている：消化管の癌（５ｑ３１−ｑｔｅｒ），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ，
ｅｔ ａｌ．）。
【０６９４】 ＳＧＫ１１２（配列番号２５，配列番号８２をコード）は染色体位置ＣＨＲ２
にマップされる。
【０６９５】 ＳＧＫ０３８，ＥＲＫ７（配列番号２６，配列番号８３をコード）の染色体位
置のマップは不明である。
【０６９６】 ＳＧＫ１５８（配列番号２７，配列番号８４をコード）は染色体位置１ｑ４２
．１１−４２．２にマップされる。この染色体位置はヒト疾病とは関連づけられ
ていない。
【０６９７】 ＳＧＫ４２９（配列番号２８，配列番号８５をコード）は染色体位置７ｑ３４
−３５にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている
：難聴（Ｍｕｓｔａｐｈａ， ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ Ｊ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ．
１９９８Ｍａｙ−Ｊｕｎ；６（３）：２４５−５０）。
【０６９８】 ＳＧＫ１５２，ＳＵＤＤ（配列番号２９，配列番号８６をコード）は染色体位
置１８ｐ１１．１にマップされる。この染色体位置はヒト疾病とは関連づけられ
ていない。
【０６９９】 ＳＧＫ０７７（配列番号３０，配列番号８７をコード）は染色体位置１７ｐｌ
３．３にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている
：頚癌で喪失（ｌｏｓｓ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ，Ｌａｚｏ，Ｔｈ
ｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｒ
ｃｉｎｏｍａ．Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ．１９９９Ａｕｇ；８０（１２）：２０
０８−１８．Ｒｅｖｉｅｗ）。
【０７００】 ＳＧＫ０９３，Ｗｎｋ３（配列番号３１，配列番号８８をコード）は染色体位
置１７ｑ２１．１−２にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連
づけられている：卵巣の癌（１７ｑ２１−ｑｔｅｒ，３／４７），（Ｋｎｕｕｔ
ｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。
【０７０１】 ＳＧＫ０７４（配列番号３２，配列番号８９をコード）は染色体位置１９ｐｌ
２−１９ｑｌ３にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけら
れている：小細胞肺癌（２／２２），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。
【０７０２】 ＳＧＫ０８７（配列番号３３，配列番号９０をコード）は染色体位置１２ｐｌ
３．３にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている
：高血圧症（Ｄｉｓｓｅ−Ｎｉｃｏｄｅｍｅ， ｅｔ ａｌ．Ａｍ Ｊ Ｈｕｍ
Ｇｅｎｅｔ．２０００Ａｕｇ；６７（２）：３０２−１０）。
【０７０３】 ＳＧＫ２９５，ＫＩＳ（配列番号３４，配列番号９１をコード）は染色体位置
ｌｑ２３．３にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられ
ている：血液新生物（１ｌｑ２３−ｑｔｅｒ；１／１），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ，
ｅｔ ａｌ．）。
【０７０４】 ＳＧＫ４１９（配列番号３５，配列番号９２をコード）は染色体位置４ｑ２４
にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている：軟部
組織の悪性線維性組織球腫（１４ｑ２４−ｑ３１；１／５８），（Ｋｎｕｕｔｉ
ｌａ， ｅｔ ａｌ．）。
【０７０５】 ＳＧＫ１２５，ＭＹ０３Ａ（配列番号３６，配列番号９３をコード）は染色体
位置１０ｐｌ２．３２にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連
づけられている：外套細胞リンパ腫（１０ｐｌ２−ｐｌ３；２／４５），（Ｋｎ
ｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。
【０７０６】 ＳＧＫ４４５（配列番号３７，配列番号９４をコード）の染色体位置のマップ
は不明である（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。
【０７０７】 ＳＧＫ１２７（配列番号３８，配列番号９５をコード）は染色体位置１２ｑ２
４．２１にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられてい
る：呼吸管および女性生殖器の癌（１２ｑ２４．２）．（Ｋｎｕｕｔｉｌａ，
ｅｔ ａｌ．）。
【０７０８】 ＳＧＫ００９，ＡＮＫＲＤ３（配列番号３９，配列番号９６をコード）は染色
体位置２１ｑ２２．３にマップされる。重症眼性変質および後部脳ヘルニア（コ
ブラック症候群）を引き起こす遺伝子が２１ｑ２２．３にマップされている（Ｓ
ｅｒｔｉｅ， ｅｔ ａｌ，Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ １９９６，Ｊｕｎ；
５（６）：８４３−７）（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。
【０７０９】 ＳＧＫ４２１，ＳＴＫ２２Ａ，ＴＳＫ１（配列番号４０，配列番号９７をコー
ド）は染色体位置５ｑ３１．１にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾
病と関連づけられている：軟骨肉腫（５ｑ３１−ｑ３２；２／４５），（Ｋｎｕ
ｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。
【０７１０】 ＳＧＫ０４７（配列番号４１，配列番号９８をコード）は染色体位置１０ｐｌ
Ｉ．２１にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられてい
る：頭頚部扁平上皮癌（１０ｐｌｌ−ｐｌ３；１／３０），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ
， ｅｔ ａｌ．）。
【０７１１】 ＳＧＫ１９６（配列番号４２，配列番号９９をコード）の染色体位置のマップ
は不明である。
【０７１２】 ＳＧＫ３９６（配列番号４３，配列番号１００をコード）の染色体位置のマッ
プは不明である。
【０７１３】 ＳＧＫ２７９，ＰＫＮ（配列番号４４，配列番号１０１をコード）は染色体位
置１６ｑ２２．３にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけ
られている：胃の広汎性大細胞型リンパ腫（１６ｑ２２−ｔｅｒ；１／７），（
Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。
【０７１４】 ＳＧＫ０３７（配列番号４５，配列番号１０２をコード）は染色体位置１３ｑ
ｌ４．１２にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられて
いる：ファローピウス管癌（１３ｑｌ４−ｑｔｅｒ；１／１２）（Ｋｎｕｕｔｉ
ｌａ， ｅｔ ａｌ．）。
【０７１５】 ＳＧＫ０６０（配列番号４６，配列番号１０３をコード）は染色体位置３ｑ２
２．１にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている
：外套細胞リンパ腫（１３ｑ２２−ｑ３２；３／７２），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ，
ｅｔ ａｌ．）。
【０７１６】 ＳＧＫ０８０（配列番号４７，配列番号１０４をコード）は染色体位置２２ｑ
ｌ１．２にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられてい
る：非小細胞肺癌（１／５０），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。
【０７１７】 ＳＧＫ００２（配列番号４８，配列番号１０５をコード）は染色体位置７ｑ３
２．２にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている
：非小細胞肺癌７ｑ３２−ｑ３５；１／５０），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ
ａｌ．）。
【０７１８】 ＳＧＫ０５８（配列番号４９，配列番号１０６をコード）は染色体位置２ｑ２
１．２にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている
：膀胱癌腫（１２ｑ２１−ｑ２４；１／１６），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ
ａｌ．）。
【０７１９】 ＳＧＫ１０３（配列番号５０，配列番号１０７をコード）は染色体位置５ｐｌ
４．３にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている
：軟部組織の悪性線維性組織球腫（６／８８），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ
ａｌ．）。
【０７２０】 ＳＧＫ０３５（配列番号５１，配列番号１０８をコード）は染色体位置ＣＨＲ
１５にマップされる。
【０７２１】 ＳＧＫ０７５（配列番号５２，配列番号１０９をコード）は染色体位置２ｑ３
１．１にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている
：頭頚部の扁平上皮癌（２ｑ３１−ｑ３３；３／３０），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ，
ｅｔ ａｌ．）。
【０７２２】 ＳＧＫ１８８，ＥｐｈＡ９（配列番号５３，配列番号１１０をコード）は染色
体位置ｌｐ３４．１−３４．３にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾
病と関連づけられている：精巣の癌（ｌｐ３４−ｐｔｅｒ；１／１１），（Ｋｎ
ｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。
【０７２３】 ＳＧＫ０４０（配列番号５４，配列番号１１１をコード）は染色体位置１２ｑ
ｌ２にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられている：
広汎性大細胞型リンパ腫（２／６６），（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）
。
【０７２４】 ＳＧＫ３９０（配列番号５５，配列番号１１２をコード）は染色体位置１３ｑ
ｌ４．２にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づけられてい
る：ファローピウス管癌（１３ｑｌ４−ｑｔｅｒ；１／１２）（Ｋｎｕｕｔｉｌ
ａ， ｅｔ ａｌ．）。
【０７２５】 ＳＧＫ００７（配列番号５６，配列番号１１３をコード）は染色体位置１０ｑ
２６．１１にマップされる。この染色体位置はヒト疾病とは関連づけられていな
い（Ｋｎｕｕｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。
【０７２６】 ＳＧＫ０５０（配列番号５７，配列番号１１４をコード）は染色体位置９ｐｌ
３．１−ｐｌ３．２にマップされる。この染色体位置は以下のヒト疾病と関連づ
けられている：非小細胞肺癌（１／５０）および精巣癌（４／１１）（Ｋｎｕｕ
ｔｉｌａ， ｅｔ ａｌ．）。
【０７２７】実施例８ｂ：一塩基多型（ＳＮＰｓ）候補 材料および方法 ヒトＤＮＡにおける最も一般的な変種は一塩基多型（ＳＮＰｓ）であり，これ
は，約１００−３００塩基に１回生ずる。ＳＮＰｓは大規模の関連遺伝学研究を
容易にすると予測されているため，最近，ＳＮＰの発見および検出に多大な興味
がもたれている。本明細書に記載される遺伝子の候補ＳＮＰｓは，核酸配列を公
共のデータベースに記録されているＳＮＰｓを含む配列に対してｂｌａｓｔｎ検
索することにより同定した（ｄｂＳＮＰ：配列ファイルは，ｆｔｐ：／／ｎｃｂ
ｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＳＮＰ／ｈｕｍａｎ／ｒｓ−ｆａｓｔａ／および
ｆｔｐ：／／ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＳＮＰ／ｈｕｍａｎ／ｓｓ−
ｆａｓｔａ／からダウンロードし，これを用いてｂｌａｓｔデータベースを作成
した）。ＳＮＰ含有配列についてｄｂＳＮＰ受託番号が与えられている。ＳＮＰ
ｓはまた，発現遺伝子（ｄｂＥＳＴ，ＮＲＮＡ）およびゲノム配列（すなわちＮ
ＲＮＡ）のいくつかのデータベースを一塩基対ミスマッチについて比較すること
により同定した。結果は，表２の"ＳＮＰｓ"のカラムに示される。これらは候補
ＳＮＰｓである。ヒト集団におけるこれらの実際の頻度は決定していない。以下
のコードはそれぞれのＤＮＡ配列を表す： Ｇ＝グアノシン Ａ＝アデノシン Ｔ＝チミジン Ｃ＝シチジン Ｒ＝ＧまたはＡ，（プリン） Ｙ＝ＣまたはＴ，（ピリミジン） Ｋ＝ＧまたはＴ，（ケト） Ｗ＝ＡまたはＴ，（弱）（２つの水素結合） Ｓ＝ＣまたはＧ，（強）（３つの水素結合） Ｍ＝ＡまたはＣ，（アミノ） Ｂ＝Ｃ，ＧまたはＴ（すなわち，Ａ以外） Ｄ＝Ａ，ＧまたはＴ（すなわち，Ｃ以外） Ｈ＝Ａ，ＣまたはＴ（すなわち，Ｇ以外） Ｖ＝Ａ，ＣまたはＧ（すなわち，Ｔ以外） Ｎ＝Ａ，Ｃ，ＧまたはＴ，（任意） Ｘ＝Ａ，Ｃ，ＧまたはＴ 相補的ＤＮＡ鎖 ＧＡＴＣＲＹＷＳＫＭＢＶＤＨＮＸ ＣＴＡＧＹＲＳＷＭＫＶＢＨＤＮＸ
【０７２８】 例えば，２つのバージョンの遺伝子が存在し，一方は所定の位置に"Ｃ"を有し
，他方は同じ位置に"Ｔ”を有する場合，その位置はＹと表され，これはＣまた
はＴを意味する。表２においては，ＳＧＫ００２についてＳＮＰのカラムには"
１１６５＝Ｒ"と記載されており，これは，位置１１６５において多型が存在す
ることを意味する。この位置は，場合によりＧを，場合によりＡを含む（ＲはＡ
またはＧを表す）。ＳＮＰｓは，遺伝子に付随する遺伝性の特徴を同定するため
に重要であろう。
【０７２９】結果 ＳＧＫ１８７，ＣＲＩＫ（配列番号１，配列番号５８をコードする）は，以下
の位置に一塩基多型の候補を含む：２８７４＝Ｒ（ｓｓ１３３７３４０）；２８
８３＝Ｙ（ｒｓ９０４６５５）；３３２７＝Ｒ（ｓｓ１５８１６２４）。ＳＮＰ
ｓの前の配列は次のとおりである：３３２７＝Ｒ（ｇｇｇｔｔｃｇａｇａｇｃｔ
ｇｃａｇａｇＲ）ｄｂＳＮＰｓｓ１５８１６２４；２８８３＝Ｙ（ａｇａｇａｃ
ｃａｃａｇｃａｇａａｇｃＹ）ｄｂＳＮＰｒｓ９０４６５５；２８７４＝Ｒ（ｇ
ｃｔｇｇａａｇａｇａｃｃａｃＲ）ｄｂＳＮＰｓｓ１３３７３４０）。
【０７３０】 ＳＧＫ０６４，ＧＲＫ７（配列番号２，配列番号５９をコードする）は，以下
の位置に一塩基多型の候補を含む：９６５＝Ｋ；１３１８＝Ｒ。ＳＮＰｓの前の
配列は次のとおりである：９６５＝Ｋ（ｃａｔｇａａｇｃｃｔｇａｇａａｔｇＫ
）；１３１８＝Ｒ（ａｇａａａｃｃａｇａｇｃａａｃｇｃｔｔａＲ）。
【０７３１】 ＳＧＫ４０９，ＫＩＡＡ０３０３（配列番号３，配列番号６０をコードする）
は，以下の位置に一塩基多型の候補を含む：６２８２＝Ｍ；６３２７＝Ｍ。ＳＮ
Ｐｓの前の配列は次のとおりである：６３２７＝Ｍ（ｃｃｃｔｃｃａａａｇａｃ
ｔａａｇｃａｃｃｃｃｇａＭ）；６２８２＝Ｍ（ｃａｃａｇｔｇａａａｇｃａｇ
ｃａｇｃｃａｃａａｇｃｃＭ）。
【０７３２】 ＳＧＫ０２１（配列番号４，配列番号６１をコードする）は，以下の位置に一
塩基多型の候補を含む：９＝Ｓ；９７＝Ｒ。ＳＮＰｓの前の配列は次のとおりで
ある：９＝Ｓ（ａｔｇｇｇａｇｃＳ）；９７＝Ｒ（ａｇｃｃａｔｔｇｇｇａａａ
ｇｇｃＲ）。
【０７３３】 ＳＧＫ４１０（配列番号５，配列番号６２をコードする）は，以下の位置に一
塩基多型の候補を含む：検出されず。
【０７３４】 ＳＧＫ０６９（配列番号６，配列番号６３をコードする）は，以下の位置に一
塩基多型の候補を含む：１１８０＝Ｓ（ｓｓ１３１７６２９）；２１０＝Ｙ（ｓ
ｓ１６８８８１３）。ＳＮＰｓの前の配列は次のとおりである：１１８０＝Ｓ（
ｃｔｇｇｔｔｃｇｇｃｃｔｇｇｃｃＳ）ｄｂＳＮＰｓｓ１３１７６２９；２１０
＝Ｙ（ｔｇｃａｇｇａｃｇｇｇｇａＹ）ｄｂＳＮＰｓｓ１６８８８１３。
【０７３５】 ＳＧＫ１１０（配列番号７，配列番号６４をコードする）は，以下の位置に一
塩基多型の候補を含む：５９７＝Ｒ（ｒｓ６５４４３９）；２５２＝Ｙ（ｓｓ６
６１４０６）。ＳＮＰｓの前の配列は次のとおりである：５９７＝Ｒ（ａａｃｇ
ｔｇｃｔｇｇｔｃｔｔｃｇａｃｃｃＲ）ｄｂＳＮＰｒｓ６５４４３９；２５２＝
Ｙ（ｃｃｇｃｇｔｇｃｔｃｃｔＹ）ｄｂＳＮＰｓｓ６６１４０６。
【０７３６】 ＳＧＫ０５３，ＣＫＬｉＫ（配列番号８，配列番号６５をコードする）は，以
下の位置に一塩基多型の候補を含む：６０５＝Ｙ；５０９＝Ｍ。ＳＮＰｓの前の
配列は次のとおりである：６０５＝Ｙ（ａａｃｃｔｔａｃａｇｃａａａｇｃｃｇ
Ｙ）；５０９＝Ｍ（ａｔｃａｇｔｇａｃｔｔｔｇｇａｔｔｇｔｃａａＭ）。
【０７３７】 ＳＧＫ１２４（配列番号９，配列番号６６をコードする）は，以下の位置に一
塩基多型の候補を含む：１８８＝Ｓ；３３３＝Ｙ。ＳＮＰｓの前の配列は次のと
おりである：１８８＝Ｓ（ｔｃｃａｇａｔｃｇｔｇｃａａｃｔｇｃｔｇｔｇｇＳ
）；３３３＝Ｙ（ｔｇｇｃｃｇｔｇｃｔｇｇａｇｃｃｃｔａＹ）。
【０７３８】 ＳＧＫ２５４，ＣＡＭＫＫａ（配列番号１０，配列番号６７をコードする）は
，以下の位置に一塩基多型の候補を含む：５５５＝Ｒ（ｓｓ８４２６５）；１１
４８＝Ｒ。ＳＮＰｓの前の配列は次のとおりである：５５５＝Ｒ（ｇｔｃｇｃｃ
ｃｔｃｃｃｃｃＲ）ｄｂＳＮＰｓｓ８４２６５；１１４８＝Ｒ（ｔｇｇｔｇｔｔ
ｔｃｃｔｇａｇｇＲ）。
【０７３９】 ＳＧＫ２９７，ＣａＭＫＩｂ２（配列番号１１，配列番号６８をコードする）
は，以下の位置に一塩基多型の候補を含む：７７＝Ｋ。ＳＮＰｓの前の配列は次
のとおりである：７７＝Ｋ（ｇｇｃｔｃｇｇｃｔｃｇｇｇｔｇｃｃｔＫ）。
【０７４０】 ＳＧＫ４１１，ＣａＭＫＩＩデルタ２（配列番号１２，配列番号６９をコード
する）は，以下の位置に一塩基多型の候補を含む：１５＝Ｍ；１３８７＝Ｓ（ｓ
ｓ１５３１０９１）。ＳＮＰｓの前の配列は次のとおりである：１５＝Ｍ；ａｔ
ｇｇｃｔｔｃｇａｃｃａｃＭ；１３８７＝Ｓ（ｃｃｇｇｇａｔｇｇａａａｇｔｇ
ｇＳ）ｄｂＳＮＰｓｓ１５３１０９１。
【０７４１】 ＳＧＫ０２７（配列番号１３，配列番号７０をコードする）は，以下の位置に
一塩基多型の候補を含む：４５＝Ｙ。ＳＮＰｓの前の配列は次のとおりである：
４５＝Ｙ（ｔｇａａｔｇｇａｇｇｔｇｇｃｃｔｇｇｔｇａａｃｃｃｃｃａＹ）。
【０７４２】 ＳＧＫ０４６ｂ（配列番号１４，配列番号７１をコードする）は，以下の位置
に一塩基多型の候補を含む：検出されず。
【０７４３】 ＳＧＫ０４６ｃ（配列番号１５，配列番号７２をコードする）は，以下の位置
に一塩基多型の候補を含む：検出されず。
【０７４４】 ＳＧＫ０８９（配列番号１６，配列番号７３をコードする）は，以下の位置に
一塩基多型の候補を含む：検出されず。
【０７４５】 ＳＧＫ１３３（配列番号１７，配列番号７４をコードする）は，以下の位置に
一塩基多型の候補を含む：２００３＝Ｓ；１６７３＝Ｓ。ＳＮＰｓの前の配列は
次のとおりである：２００３＝Ｓ（ｇｃｔｔｃａｇｇｇｃｃｇａｇｔａｃａａｇ
ｇｃｃａｇｔｇＳ）；１６７３＝Ｓ（ｃａｃｃｃｃｃｃａｇｃｃｃｃｇｇｃｇＳ
）。
【０７４６】 ＳＧＫ００４，ＭＳＫ（配列番号１８，配列番号７５をコードする）は，以下
の位置に一塩基多型の候補を含む：１８５３＝Ｙ（ｓｓ５７１２３９）。ＳＮＰ
ｓの前の配列は次のとおりである：１８５３＝Ｙ（ａｇｇｔｇｔｇｃｃａｇｇｃ
ｃｃｃＹ）ｄｂＳＮＰｓｓ５７１２３９。
【０７４７】 ＳＧＫ００６（配列番号１９，配列番号７６をコードする）は，以下の位置に
一塩基多型の候補を含む：４＝Ｓ（ｓｓ１６０９８５２）。ＳＮＰｓの前の配列
は次のとおりである：４＝Ｓ（Ｓｃｔｃｔｇｔａｔｔｔｃａｇｇａａｇｃｔｃｔ
）ｄｂＳＮＰｓｓ１６０９８５２。
【０７４８】 ＳＧＫ１８０，ＳＮＲＫ（配列番号２０，配列番号７７をコードする）は，以
下の位置に一塩基多型の候補を含む：１８１７＝Ｓ。ＳＮＰｓの前の配列は次の
とおりである：１８１７＝Ｓ（ａｇｃｃｃｃａｇｔｇａｇａａｃａａｔｇｃｔｇ
ｇｔｇｇｇｇＳ）。
【０７４９】 ＳＧＫ３８６，ＭＬＣＫｓ（配列番号２１，配列番号７８をコードする）は，
以下の位置に一塩基多型の候補を含む：８３５＝Ｍ。ＳＮＰｓの前の配列は次の
とおりである：８３５＝Ｍ（ｔｔｔｔｇｇａｔｇａｔｔｇｃｃｃｇｃｃａＭ）。
【０７５０】 ＳＧＫ００３（配列番号２２，配列番号７９をコードする）は，以下の位置に
一塩基多型の候補を含む：検出されず。
【０７５１】 ＳＧＫ０６６（配列番号２３，配列番号８０をコードする）は，以下の位置に
一塩基多型の候補を含む：検出されず。
【０７５２】 ＳＧＫ０４１，ＮＫＩＡＭＲＥ（配列番号２４，配列番号８１をコードする）
は，以下の位置に一塩基多型の候補を含む：１０３３＝Ｒ；１２８４＝Ｒ；１１
８１＝Ｙ。ＳＮＰｓの前の配列は次のとおりである：１０３３＝Ｒ（ｃｔａａｇ
ｔａｇｔｔｃａｇｔｔｔｔｇｇｇａＲ）；１２８４＝Ｒ（ｔｃｃａｃａｔｔｇｃ
ｇｇａｇｇｔｔｃｔｇｔＲ）；１１８１＝Ｙ（ｇｃａａａｔｇａａａａｔｇｔｔ
ｃａｔｃｃｔａＹ）。
【０７５３】 ＳＧＫ１１２（配列番号２５，配列番号８２をコードする）は，以下の位置に
一塩基多型の候補を含む：検出されず。
【０７５４】 ＳＧＫ０３８，ＥＲＫ７（配列番号２６，配列番号８３をコードする）は，以
下の位置に一塩基多型の候補を含む：検出されず。
【０７５５】 ＳＧＫ１５８（配列番号２７，配列番号８４をコードする）は，以下の位置に
一塩基多型の候補を含む：１７５２＝Ｙ（ｓｓ１５２９３３６）。ＳＮＰｓの前
の配列は次のとおりである：１７５２＝Ｙ（ａｔｃｃｔｇｇｔｔｃｔｇｔｇｃｃ
ｔｇａｇｇｇａｇｃｔｇｔｔＹ）ｄｂＳＮＰｓｓ１５２９３３６。
【０７５６】 ＳＧＫ４２９（配列番号２８，配列番号８５をコードする）は，以下の位置に
一塩基多型の候補を含む：１９６＝Ｒ；９１９＝Ｙ（ｓｓ１５４９８３５）；１
８６５＝Ｙ（ｓｓｌ５１７７４９）。ＳＮＰｓの前の配列は次のとおりである：
１９６＝Ｒ（ｃｃｃｃｔｇａｃｇｔｔｃｔｇＲ）；９１９＝Ｙ（ａｇｇｃｃａｃ
ｃａａｃｃｔｃａｔｃＹ）ｄｂＳＮＰｓｓ１５４９８３５；１８６５＝Ｙ（ＣＣ
ＴＣＣＴＣＡＣＧＧＧＣＣＹ）ｄｂＳＮＰｓｓｌ５１７７４９。
【０７５７】 ＳＧＫ１５２，ＳＵＤＤ（配列番号２９，配列番号８６をコードする）は，以
下の位置に一塩基多型の候補を含む：９７２＝Ｍ。ＳＮＰｓの前の配列は次のと
おりである：９７２＝Ｍ（ＡＡＡＣＴＡＡＡＴＣＣＡＣＧＴＡＡＧＡＴＣＭ）。
【０７５８】 ＳＧＫ０７７（配列番号３０，配列番号８７をコードする）は，以下の位置に
一塩基多型の候補を含む：３９０＝Ｙ（ｓｓ１６５８８８５）；６１１＝Ｒ（ｓ
ｓ１６２９７６０）；９８５＝Ｙ（ｓｓ１６２９７５９）。ＳＮＰｓの前の配列
は次のとおりである：３９０＝Ｙ（ａｇｃａｃａｃｃｃｔｇＹ）ｄｂＳＮＰｓｓ
１６５８８８５；６１１＝Ｒ（ｃａｇｃｃｇｔｃｃｃｇａｇｃｇＲ）ｄｂＳＮＰ
ｓｓ１６２９７６０；９８５＝Ｙ（ｔｔｇｔｇｃｃａａｇｇｇｇａａＹ）ｄｂＳ
ＮＰｓｓ１６２９７５９。
【０７５９】 ＳＧＫ０９３，Ｗｎｋ３（配列番号３１，配列番号８８をコードする）は，以
下の位置に一塩基多型の候補を含む：３２７９＝Ｋ；４０７８＝Ｍ。ＳＮＰｓの
前の配列は次のとおりである：３２７９＝Ｋ（ｇｃｃｃｃｃａａｃｃｃｃｔｇａ
ｇｃｃａＫ）；４０７８＝Ｍ（ｃａａａａｔａａｔｃａｇｃａａｃａｔｔＭ）。
【０７６０】 ＳＧＫ０７４（配列番号３２，配列番号８９をコードする）は，以下の位置に
一塩基多型の候補を含む：検出されず。
【０７６１】 ＳＧＫ０８７（配列番号３３，配列番号９０をコードする）は，以下の位置に
一塩基多型の候補を含む：２６９＝Ｒ（ｓｓ８８１３６）。ＳＮＰｓの前の配列
は次のとおりである：２６９＝Ｒ（ａｃｔｔｃａｃｇａｇｃａｇｔｃａｇｇｃＲ
）ｄｂＳＮＰｓｓ８８１３６。
【０７６２】 ＳＧＫ２９５，ＫＩＳ（配列番号３４，配列番号９１をコードする）は，以下
の位置に一塩基多型の候補を含む：３５５＝Ｗ。ＳＮＰｓの前の配列は次のとお
りである：３５５＝Ｗ（ｃｔｇｇａｔｇｔｃａｇｔｇｔｔＷ）。
【０７６３】 ＳＧＫ４１９（配列番号３５，配列番号９２をコードする）は，以下の位置に
一塩基多型の候補を含む：なし。
【０７６４】 ＳＧＫ１２５，ＭＹ０３Ａ（配列番号３６，配列番号９３をコードする）は，
以下の位置に一塩基多型の候補を含む：３１４５＝Ｙ；３２０４＝Ｙ。ＳＮＰｓ
の前の配列は次のとおりである：３１４５＝Ｙ（ａｔｔａｔｃａｃｇｔｇｇａｇ
ｃａｇｔｔａａａｔＹ）；３２０４＝Ｙ（ｇａｔｔｃａａｇｃｔｔｇｔｇｔｃａ
ｇａｇｃａｔｔＹ）。
【０７６５】 ＳＧＫ４４５（配列番号３７，配列番号９４をコードする）は，以下の位置に
一塩基多型の候補を含む：検出されず。
【０７６６】 ＳＧＫ１２７（配列番号３８，配列番号９５をコードする）は，以下の位置に
一塩基多型の候補を含む：５０１＝Ｓ（ｓｓ２００５７８６）。ＳＮＰｓの前の
配列は次のとおりである：５０１＝Ｓ（ｔｃｃａｇｔｇｇｃｃｃａｃＳ）ｄｂＳ
ＮＰｓｓ２００５７８６。
【０７６７】 ＳＧＫ００９，ＡＮＫＲＤ３（配列番号３９，配列番号９６をコードする）は
，以下の位置に一塩基多型の候補を含む：検出されず。
【０７６８】 ＳＧＫ４２１，ＳＴＫ２２Ａ，ＴＳＫ１（配列番号４０，配列番号９７をコー
ドする）は，以下の位置に一塩基多型の候補を含む：５１０＝Ｍ（ｓｓ２０５５
１２６）；２７９＝Ｒ（ｓｓ２０５５１２５）。ＳＮＰｓの前の配列は次のとお
りである：５１０＝Ｍ（ＡＣＡＧＴＧＧＴＣＧＡＡＴＧＧＣＭ）ｄｂＳＮＰｓｓ
２０５５１２６；２７９＝Ｒ（ｇｔｃａｔｇｇａｇｃｔｃｇｃＲ）ｄｂＳＮＰｓ
ｓ２０５５１２５。
【０７６９】 ＳＧＫ０４７（配列番号４１，配列番号９８をコードする）は，以下の位置に
一塩基多型の候補を含む：検出されず。
【０７７０】 ＳＧＫ１９６（配列番号４２，配列番号９９をコードする）は，以下の位置に
一塩基多型の候補を含む：９９＝Ｒ。ＳＮＰｓの前の配列は次のとおりである：
９９＝Ｒ（ｃｔｇｃｔｇａｔｃａｔｇｇｃｃｃｔｇａｔｇａａｔａｃｔｃｔＲ）
。
【０７７１】 ＳＧＫ３９６（配列番号４３，配列番号１００をコードする）は，以下の位置
に一塩基多型の候補を含む：検出されず。
【０７７２】 ＳＧＫ２７９，ＰＫＮ（配列番号４４，配列番号１０１をコードする）は，以
下の位置に一塩基多型の候補を含む：６６５＝Ｙ。ＳＮＰｓの前の配列は次のと
おりである：６６５＝Ｙ（ＣＣＴＧＡＧＧＴＧＴＧＣＣＡＧＧＹ）。
【０７７３】 ＳＧＫ０３７（配列番号４５，配列番号１０２をコードする）は，以下の位置
に一塩基多型の候補を含む：検出されず。
【０７７４】 ＳＧＫ０６０（配列番号４６，配列番号１０３をコードする）は，以下の位置
に一塩基多型の候補を含む：１４６３＝Ｗ。ＳＮＰｓの前の配列は次のとおりで
ある：１４６３＝Ｗ（ｔｇａｔｇｃａｔｔｔｇａｔｔｃｃｔａｔｔｇｔｇＷ）。
【０７７５】 ＳＧＫ０８０（配列番号４７，配列番号１０４をコードする）は，以下の位置
に一塩基多型の候補を含む：１１５９＝Ｒ（ｓｓ１３６７６７１）；４２２＝Ｒ
（ｓｓ１８５５００９）。ＳＮＰｓの前の配列は次のとおりである：１１５９＝
Ｒ（ａａｇｔｔｃａｔｔｔｃａｇｔｇｇＲ）ｄｂＳＮＰｓｓ１３６７６７１；４
２２＝Ｒ（ｔａｃｔｇｔａｇｔｇｃｇｔｃｇｇｇＲ）ｄｂＳＮＰｓｓ１８５５０
０９。
【０７７６】 ＳＧＫ００２（配列番号４８，配列番号１０５をコードする）は，以下の位置
に一塩基多型の候補を含む：１１６５＝Ｒ；９８３＝Ｍ。ＳＮＰｓの前の配列は
次のとおりである：１１６５＝Ｒ（ｔｇｇａｇｇｃｃａｔｃｔｔｔｇｇｃｃＲ）
；９８３＝Ｍ，１７５３＝Ｒ，（ＧＧＧＧＴＧＡＧＣＧＧＣＣＡＧＣＴＣＡＴＭ
）；４４３＝Ｋ，（ＡＣＣＴＧＧＴＧＧＡＣＣＴＧＣＡＧＡＡＫ）；１２４５＝
Ｙ（ＧＣＧＣＣＣＣＡＡＣＡＧＣＧＧＴＹ）；１２６１＝Ｋ（ＧＧＧＡＴＧＧＡ
ＣＡＧＣＣＫ），１７５３＝Ｒ（ｔｇｇｔｃｃｃｔｇｃｃｇｇｃｇｔｇｃｃｔｃ
ｔＲ）。
【０７７７】 ＳＧＫ０５８（配列番号４９，配列番号１０６をコードする）は，以下の位置
に一塩基多型の候補を含む：検出されず。
【０７７８】 ＳＧＫ１０３（配列番号５０，配列番号１０７をコードする）は，以下の位置
に一塩基多型の候補を含む：検出されず。
【０７７９】 ＳＧＫ０３５（配列番号５１，配列番号１０８をコードする）は，以下の位置
に一塩基多型の候補を含む：２２７３＝Ｙ。ＳＮＰｓの前の配列は次のとおりで
ある：２７３＝Ｙ（ｃａｇｔｔｔｔｃａｃｔｇｃｔａｃＹ）。
【０７８０】 ＳＧＫ０７５（配列番号５２，配列番号１０９をコードする）は，以下の位置
に一塩基多型の候補を含む：８８９＝Ｒ。ＳＮＰｓの前の配列は次のとおりであ
る：８８９＝Ｒ（ｔｔｔｃｔｇｃａａａａａｃａｇｃｔｇｇｃｃＲ）。
【０７８１】 ＳＧＫ１８８，ＥｐｈＡ９（配列番号５３，配列番号１１０をコードする）は
，以下の位置に一塩基多型の候補を含む：２１０４＝Ｙ（ｓｓ１９８６１２０）
；２３１９＝Ｒ。ＳＮＰｓの前の配列は次のとおりである：２３１９＝Ｒ（ｇｔ
ｇｇｃｔｇｇｇｃａａｃｔｇａｔｇｇＲ）；２１０４＝Ｙ（ｇｔａｇｃｃｇｔｇ
ｃａＹ）ｄｂＳＮＰｓｓ１９８６１２０。
【０７８２】 ＳＧＫ０４０（配列番号５４，配列番号１１１をコードする）は，以下の位置
に一塩基多型の候補を含む：１８６９＝Ｒ，１００４＝Ｙ。ＳＮＰｓの前の配列
は次のとおりである：１８６９＝Ｒ（ｇｇｔｔｇｔｇｃｃｃｃａｔｇｇｃｃｔａ
ｔｇｇｔｔｇａＲ）；１００４＝Ｙ（ｇａｃｔｔｇａｔｔｔｔｇｇｃｔｇａｃｃ
Ｙ）。
【０７８３】 ＳＧＫ３９０（配列番号５５，配列番号１１２をコードする）は，以下の位置
に一塩基多型の候補を含む：１３１４＝Ｒ。ＳＮＰｓの前の配列は次のとおりで
ある：１３１４＝Ｒ（ｇｇｇａｇｇｔｔｃａｔａｔｇａｃｇａｔｇａｃａｃｃｃ
ａＲ）。
【０７８４】 ＳＧＫ００７（配列番号５６，配列番号１１３をコードする）は，以下の位置
に一塩基多型の候補を含む：検出されず。
【０７８５】 ＳＧＫ０５０（配列番号５７，配列番号１１４をコードする）は，以下の位置
に一塩基多型の候補を含む：検出されず。
【０７８６】実施例９：サザンブロッティングによる遺伝子増幅の証明 材料および方法 ナイロン膜はＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍから購入する。変性溶
液は，０．４ＭＮａＯＨおよび０．６Ｍ ＮａＣｌを含む。中和溶液は，０．５
ＭＴｒｉｓ−ＨＣＬ，ｐＨ７．５および１．５ＭＮａＣｌを含む。ハイブリダイ
ゼーション溶液は，５０％ホルムアミド，６ＸＳＳＰＥ，２．５Ｘデンハルト溶
液，０．２ｍｇ／ｍＬ変性サケＤＮＡ，０．１ｍｇ／ｍＬ酵母ｔＲＮＡ，および
０．２％ドデシル硫酸ナトリウムを含む。制限酵素はＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍ
ａｎｎｈｅｉｍから購入する。放射性標識プローブは，Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅの
Ｐｒｉｍｅ−ｉｔＩＩキットを用いて調製する。プローブテンプレートに用いる
ベータアクチンＤＮＡフラグメントはＣｌｏｎｔｅｃｈから購入する。
【０７８７】 種々の腫瘍細胞株（例えば，ＭＣＦ−７，ＭＤＡ−ＭＢ２３１，Ｃａｌｕ−６
，Ａ５４９，ＨＣＴ−１５，ＨＴ−２９，Ｃｏｌｏ２０５，ＬＳ−１８０，ＤＬ
Ｄ−１，ＨＣＴ−１１６，ＰＣ３，ＣＡＰＡＮ−２，ＭＩＡ−ＰａＣａ−２，Ｐ
ＡＮＣ−１，ＡｓＰｃ−１，ＢｘＰＣ−３，ＯＶＣＡＲ−３，ＳＫＯＶ３，ＳＷ
６２６およびＰＡ−１），および２つの正常細胞株から，ゲノムＤＮＡを単離す
る。
【０７８８】 各ゲノムＤＮＡ試料の１０μｇのアリコートをＥｃｏＲＩ制限酵素で消化し，
別の１０μｇの試料をＨｉｎｄＩＩＩ制限酵素で消化する。制限酵素消化したＤ
ＮＡ試料を０．７％アガロースゲルに負荷し，電気泳動分離した後，標準的方法
によりＤＮＡをナイロン膜にキャピラリー移動させる（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．
ｅｔ ａｌ（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ）。
【０７８９】実施例１０：ファージディスプレイによる蛋白質−蛋白質相互作用の検出 材料および方法 ファージディスプレイは，所望のおとりに対する親和性に基づいて分子相互作
用を単離する方法を提供する。ファージ被覆蛋白質への融合としてクローニング
されたｃＤＮＡフラグメントは，ファージの表面にディスプレイされる。おとり
と相互作用するファージをアフィニティー精製により濃縮し，個々のクローンか
らの挿入ＤＮＡを分析する。
【０７９０】Ｔ７ファージディスプレイライブラリ すべてのライブラリは，Ｔ７Ｓｅｌｅｃｔｌ−ｌｂベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ
）中で，製造元の指針にしたがって構築した。
【０７９１】おとりの提示 おとりとして用いるべき蛋白質ドメインは，ＧＳＴへのＣ末端融合体として作
成し，Ｅ．ｃｏｌｉで発現させる。ペプチドは化学的に合成し，長鎖スペーサー
ビオチン試薬を用いてＮ末端でビオチン化する。
【０７９２】選択 ＰａｎＭｉｘおよびＥ．ｃｏｌｉ阻害剤カクテル（ＳｉｇｍａＰ−８４６５）
を補充した，新たに調製したライブラリ（１０ｌ−１０１２ｐｆｕ）のアリコー
トを，固定化したおとりとともに室温で１−２時間インキュベートする。未結合
ファージを洗浄緩衝液でよく洗浄する（少なくとも４回）。３−４ラウンドの選
択の後，結合したファージを１００μｌの１％ＳＤＳ中に溶出し，アガロースプ
レートに播種して，単一プラークを得る。
【０７９３】挿入ＤＮＡの同定 個別のプラークを２５μｌの１０ｍＭＥＤＴＡ中に取り出し，７０℃で１０分
間加熱することによりファージを破壊する。２μｌの破壊ファージを５０μｌの
ＰＣＲ反応混合物に加える。３５ラウンドの熱サイクル（９４℃，５０秒間；５
０℃，１分間；７２℃，１分間）により挿入ＤＮＡを増幅する。
【０７９４】緩衝液の組成 １０ｘＰａｎＭｉｘ ５％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ １０％無脂乾燥乳（Ｃａｒｎａｔｉｏｎ） １０ｍＭＥＧＴＡ ２５０ｍＭＮａＦ ２５０μｇ／ｍＬヘパリン（ｓｉｇｍａ） ２５０μｇ／ｍＬ，剪断し，沸騰させたサケ精子ＤＮＡ（ｓｉｇｍａ） ０．０５％アジ化ナトリウム ＰＢＳ中で調製する。
【０７９５】洗浄緩衝液 ＰＢＳ，以下のもので補充： ０．５％ＮＰ−４０ ２５μｇ／ｍＬヘパリン ＰＣＲ反応混合物 １．０ｍＬ １０ｘＰＣＲ緩衝液（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ，１５ｍＭＭｇを
含む） 各０．２ｍＬのｄＮＴＰｓ（１０ｍＭ保存液） ０．１ｍＬ Ｔ７ＵＰプライマー（１５ｐｍｏｌ／Ｌ）ＧＧＡＧＣＴＧＴＣＧＴ
ＡＴＴＣＣＡＧＴＣ ０．１ｍＬ Ｔ７ＤＮプライマー（１５ｐｍｏｌ／Ｌ）ＡＡＣＣＣＣＴＣＡＡＧ
ＡＣＣＣＧＴＴＴＡＧ ０．２ｍＬ ２５ｍＭＭｇＣｌ２またはＭｇＳＯ４，ＥＤＴＡ補償用 蒸留水で１０ｍＬとする 反応液５０μｌあたり１ユニットのＴａｑポリメラーゼを加える ライブラリ：Ｔ７Ｓｅｌｅｃｔｌ−Ｈ４４１
【０７９６】実施例１１：ＦＬＫ−１ ＥＬＩＳＡアッセイを実施して，ＦＬＫ−１レセプターのキナーゼ活性，より
詳細にはＦＬＫ−１レセプター上のＴＫ活性の阻害または活性化を測定した。詳
細には，以下のアッセイを実施して，Ｆｌｋ−１を発現するように遺伝子工学処
理された細胞において，ＦＬＫ−１レセプターのキナーゼ活性を測定した。
【０７９７】材料および方法 以下の試薬および供給物を用いた。 １． Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ
Ｎｏ．２５８０５−９６）； ２． Ｃａｐｐｅｌヤギ抗ウサギＩｇＧ（カタログＮｏ．５５６４１）； ３． ＰＢＳ（ＧｉｂｃｏカタログＮｏ．４５０−１３００ＥＢ）； ４． ＴＢＳＷ緩衝液（５０ｍＭＴｒｉｓ（ｐＨ７．２），１５０ｍＭＮａＣｌ
および０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０）； ５． エタノールアミン保存液（１０％エタノールアミン（ｐＨ７．０），４℃
で保存）； ６． ＨＮＴＧ緩衝液（２０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５），１５０ｍＭ
ＮａＣｌ，０．２％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００，および１０％グリセロール）； ７． ＥＤＴＡ（０．５Ｍ（ｐＨ７．０）１００Ｘ保存液として）； ８． オルトバナジウム酸ナトリウム（０．５Ｍ，１００Ｘ保存液として）； ９． ピロリン酸ナトリウム（０．２Ｍ，１００Ｘ保存液として）； １０． ＮＵＮＣ９６ウエルＶ底ポリプロピレンプレート（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓ
ｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログＮｏ．ＡＳ−７２０９２）； １１． ＮＩＨ３Ｔ３ Ｃ７＃３細胞（ＦＬＫ−１発現細胞）； １２． ＤＭＥＭ，１Ｘ高グルコースＬ−グルタミン含有（カタログＮｏ．１１
９６５−０５０）； １３． ＦＢＳ，Ｇｉｂｃｏ（カタログＮｏ．１６０００−０２８）； １４． Ｌ−グルタミン，Ｇｉｂｃｏ（カタログＮｏ．２５０３０−０１６）；
１５． ＶＥＧＦ，ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，Ｉｎｃ．（カタログＮｏ．１００−２
０）Ｍｉｌｌｉ−ＱｄＨ2Ｏ中１μｇ／１００μｌ保存液として保持し，−２０
℃で保存； １６． アフィニティー精製抗ＦＬＫ−１抗血清； １７． ホスホチロシン特異的ＵＢ４０モノクローナル抗体（Ｆｅｎｄｌｅｙ，
ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５０：１５５０−
１５５８を参照）； １８． ＥＩＡ等級ヤギ抗マウスＩｇＧ−ＰＯＤ（ＢｉｏＲａｄカタログＮｏ．
１７２−１０１１）； １９． ２，２−アジノ−ビス（３−エチルベンズチアゾリン−６−硫酸（ＡＢ
ＴＳ）溶液（１００ｍＭクエン酸（無水），２５０ｍＭＮａ2ＨＰＯ4（ｐＨ４．
０），０．５ｍｇ／ｍｌＡＢＴＳ（ＳｉｇｍａカタログＮｏ．Ａ−１８８８））
，溶液は，使用まで暗所で４℃で保存しなければならない； ２０． Ｈ2Ｏ2（３０％溶液）（ＦｉｓｈｅｒカタログＮｏ．Ｈ３２５）； ２１． ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2（１５ｍｌＡＢＴＳ溶液，２μｌＨ2Ｏ2）使用の５分
間に調製，室温に保持； ２２． ０．２ＭＨＣｌ保存液，Ｈ2Ｏ中； ２３． ジメチルスルホキシド（１００％）（ＳｉｇｍａカタログＮｏ．Ｄ−８
４１８）；および ２４． トリプシン−ＥＤＴＡ（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬカタログＮｏ．２５２００
−０４９）
【０７９８】プロトコル 以下のプロトコルを用いてアッセイを実施した： １． Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートを，ウエルあたり１．０μ
ｇの，０．１ＭＮａ2ＣＯ3（ｐＨ９．６）中Ｃａｐｐｅｌ抗ウサギＩｇＧ抗体，
でコーティングする。最終容量をウエルあたり１５０μｌとする。プレートを４
℃で一夜コーティングする。プレートは，４℃で保存したとき，２週間まで保存
することができる。 ２． 細胞を適当な培養皿中で成長培地（ＤＭＥＭ，２．０ｍＭＬ−グルタミン
，１０％ＦＢＳを補充）中で，コンフルエントとなるまで３７℃，５％ＣＯ2で
成長させる。 ３． トリプシン処理により細胞を回収し，Ｃｏｒｎｉｎｇ２５８５０ポリスチ
レン９６ウエル丸底細胞プレートに，２００μｌの成長培地中２５，０００細胞
／ウエルで播種する。 ４． 細胞を３７℃，５％ＣＯ2で少なくとも１日成長させる。 ５． 細胞をＤ−ＰＢＳ １Ｘで洗浄する。 ６． ２００μｌ／ウエルの飢餓培地（ＤＭＥＭ，２．０ｍＭ ｌ−グルタミン
，０．１％ＦＢＳ）を加える。３７℃，５％ＣＯ2で一夜インキュベートする。
７． 化合物をポリプロピレン９６ウエルプレート中で飢餓培地を用いて１：２
０に希釈する。対照ウエルで使用するために，ジメチルスルホキシドを１：２０
に希釈する。 ８． ９６ウエル細胞培養プレートから飢餓培地を除去し，１６２μｌの新たに
調製した飢餓培地を各ウエルに加える。 ９． １：２０に希釈された化合物希釈物１８μｌ（工程７より）を各ウエルに
加え，１：２０ジメチルスルホキシド希釈物を対照ウエルに加え（＋／−ＶＥＧ
Ｆ），細胞刺激の後，１：２００の最終希釈とする。最終ジメチルスルホキシド
は０．５％である。プレートを３７℃，５％ＣＯ2で２時間インキュベートする
。 １０． プレートを逆さにして液体を除去することにより，未結合抗体をＥＬＩ
ＳＡプレートから除去する。ＴＢＳＷ＋０．５％エタノールアミン，ｐＨ７．０
で３回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて，過剰の液体およ
び気泡を除去する。 １１． ウエルあたり１５０μｌのＴＢＳＷ＋０．５％エタノールアミン，ｐＨ
７．０でプレートをブロッキングする。プレートをマイクロタイタープレート振
盪器で振盪しながら，３０分間インキュベートする。 １２． プレートを工程１０で記載したように３回洗浄する。 １３． ０．５μｇ／ウエルのアフィニティー精製抗ＦＬＵ−１ポリクローナル
ウサギ抗血清を加える。ＴＢＳＷ＋０．５％エタノールアミンｐＨ７．０で最終
容量を１５０μｌ／ウエルとする。プレートを振盪しながら３０分間インキュベ
ートする。 １４． 細胞に１８０μｌの飢餓培地を加え，２０μｌ／ウエルの１０．０ｍＭ
オルトバナジウム酸ナトリウムおよび５００ｎｇ／ｍｌＶＥＧＦ（最終濃度；ウ
エルあたり１．０ｍＭオルトバナジウム酸ナトリウムおよび５０ｎｇ／ｍｌＶＥ
ＧＦ）で３７℃，５％ＣＯ2で８分間細胞を刺激する。陰性対照ウエルには飢餓
培地のみを加える。 １５． ８分後，培地を細胞から除去し，２００μｌ／ウエルのＰＢＳで１回洗
浄しなければならない。 １６． １５０μｌ／ウエルのＨＮＴＧ中で室温で５分間振盪しながら細胞を溶
解させる。ＨＮＴＧ配合物はオルトバナジウム酸ナトリウム，ピロリン酸ナトリ
ウムおよびＥＤＴＡを含む。 １７． ＥＬＩＳＡプレートを工程１０に記載したように３回洗浄する。 １８． 細胞溶解物を細胞プレートからＥＬＩＳＡプレートに移し，振盪しなが
ら２時間インキュベートする。細胞溶解物を移すには，ウエルを掻きながらピペ
ットアップおよびダウンを行う。 １９． プレートを工程１０に記載したように３回洗浄する。 ２０． ＥＬＩＳＡプレートを０．０２μｇ／ウエルのＴＢＳＷ＋０５％エタノ
ールアミン中のＵＢ４０とともにインキュベートする。最終容量を１５０μｌ／
ウエルとする。振盪しながら３０分間インキュベートする。 ２１． プレートを工程１０に記載したように３回洗浄する。 ２２． ＥＬＩＳＡプレートを，ＴＢＳＷ＋０．５％エタノールアミン，ｐＨ７
．０中で１：１０，０００に希釈したＥＩＡ等級ヤギ抗マウスＩｇＧコンジュゲ
ート西洋ワサビペルオキシダーゼとともにインキュベートする。最終容量を１５
０μｌ／ウエルとする。振盪しながら３０分間インキュベートする。 ２３． 工程１０で記載したようにプレートを洗浄する。 ２４． １００μｌのＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液をウエルに加える。振盪しながら１
０分間インキュベートする。 ２５． １００μｌの０．２ＭＨＣｌを０．１ＭＨＣｌ最終濃度となるように加
えて，発色反応を停止する。室温で１分間振盪する。ゆっくりした空気の流れで
気泡を除去し，ＥＬＩＳＡプレートをＥＬＩＳＡプレートリーダーで４１０ｎｍ
で読む。
【０７９９】実施例１２：ＨＥＲ−２ ＥＬＩＳＡ アッセイ１ 全細胞におけるＥＧＦレセプター−ＨＥＲ２キメラレセプターアッセイ ＥＧＦＲ−ＮＩＨ３Ｔ３全細胞中のＨＥＲ２キナーゼ活性を以下に記載するよ
うにして測定した。
【０８００】材料および試薬 以下の材料および試薬を用いてアッセイを実施した： １． ＥＧＦ：保存液濃度：１６．５ＩＬＭ；ＥＧＦ２０１，ＴＯＹＯＢＯ，Ｃ
ｏ．，Ｌｔｄ．Ｊａｐａｎ ２． ０５−１０１（ＵＢＩ）（ＥＧＦＲ細胞外ドメインを認識するモノクロー
ナル抗体） ３． 抗ホスホチロシン抗体（抗Ｐｔｙｒ）（ポリクローナル）（Ｆｅｎｄｌｅ
ｙ，ｅｔ ａｌ．，（上掲）を参照） ５． 検出抗体：ヤギ抗ウサギｌｇＧ西洋ワサビペルオキシダーゼコンジュゲー
ト，ＴＡＧＯ，Ｉｎｃ．，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ ６． ＴＢＳＴ緩衝液： Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．２ ５０ｍＭ ＮａＣｌ １５０ｍＭ ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ ０．１ ６． ＨＮＴＧ ５Ｘ保存液： ＨＥＰＥＳ ０．１Ｍ ＮａＣｌ ０．７５Ｍ グリセロール ５０％ ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ １．０％ ７． ＡＢＴＳ保存液： クエン酸 １００ｍＭ Ｎａ2ＨＰＯ4 ２５０ｍＭ ＨＣｌ（濃） ０．５ｍＭ ＡＢＴＳ* ０．５ｍｇ／ｍｌ ＊（２，２'−アジノビス（３−エチルベンズチアゾリンスルホン酸）） 溶液は使用するまで暗所で４℃で保存する。 ８． 試薬保存液： ＥＤＴＡ １００ｍＭ ｐＨ７．０ Ｎａ3ＶＯ4 ０．５Ｍ Ｎａ4（Ｐ2Ｏ7） ０．２Ｍ
【０８０１】プロトコル 以下のプロトコルを用いた：Ａ．ＥＬＩＳＡプレートのプレコート １． ＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，９６ウエル，Ｃａｔ．＃２５８０
５−９６）をウエルあたりＰＢＳ中０．５μｇの０５−１０１抗体で１００μｌ
の最終容量／ウエルでコーティングし，４℃で一夜保存する。コーティングした
プレートは４℃で保存した場合，１０日間まで良好である。 ２． 使用の日，コーティング緩衝液を除去し，１００μｌのブロッキング緩衝
液（ＰＢＳ中５％Ｃａｒｎａｔｉｏｎインスタント脱脂乾燥ミルク）で置き換え
る。プレートを室温で（約２３℃から２５℃）振盪しながら３０分間インキュベ
ートする。使用の直前に，ブロッキング緩衝液を除去し，プレートをＴＢＳＴ緩
衝液で４回洗浄する。
【０８０２】Ｂ．細胞播種 １． このアッセイには，ＥＧＦＲ細胞外ドメインおよび細胞内ＨＥＲ2キナー
ゼドメインを含有するキメラレセプターを過剰発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞株を用
いることができる。 ２． ８０−９０％コンフルエントの培養皿を実験用に選択する。細胞をトリプ
シン処理し，１０％ウシ胎児血清を加えることにより反応を停止させる。細胞を
ＤＭＥＭ培地（１０％ＣＳ ＤＭＥＭ培地）中に懸濁し，１５００ｒｐｍで室温
で５分間１回遠心分離する。 ３． 細胞を播種培地（ＤＭＥＭ，０．５％ウシ血清）に再懸濁し，トリパンブ
ルーを用いて細胞を計数する。９０％より高い生存性が許容される。細胞をＤＭ
ＥＭ培地（０．５％ウシ血清）中で，ウエルあたり１０，０００細胞の密度で，
ウエルあたり１００μｌで，９６ウエルマイクロタイタープレートに播種する。
播種した細胞を５％ＣＯ2中で３７℃で約４０時間インキュベートする。
【０８０３】Ｃ．アッセイ方法 １． 播種した細胞を，倒立顕微鏡を用いてコンタミネーションについて検査す
る。薬剤保存液（ＤＭＳＯ中１０ｍｇ／ｍｌ）をＤＭＥＭ培地で１：１０に希釈
し，次に５μｌを，最終薬剤希釈１：２００および最終ＤＭＳＯ濃度１％となる
ように，ＴＢＳＴウエルに移す。対照ウエルにはＤＭＳＯのみを加える。５％Ｃ
Ｏ2中で３７℃で２時間インキュベートする。 ２． ＥＧＦリガンドの調製：保存液ＥＧＦを，１０μｌ希釈ＥＧＦ（１：１２
希釈）を移したときに１００ｎＭの最終濃度が得られるように，ＤＭＥＭ中で希
釈する。 ３． ウエルあたり１００μｌに十分なように新たにＨＮＴＧ*を調製し，氷上
に置く。 ＨＮＴＧ*（１０ｍｌ）： ＨＮＴＧ保存液 ２．０ｍｌ ｍｉｌｌｉ−ＱＨ2Ｏ ７．３ｍｌ ＥＤＴＡ，１００ｍＭ，ｐＨ７．０ ０．５ｍｌ Ｎａ3ＶＯ4，０．５Ｍ ０．１ｍｌ Ｎａ4（Ｐ2Ｏ7），０．２Ｍ ０．１ｍｌ ４． 薬剤とともに１２０分間インキュベーションした後，調製したＳＧＦリガ
ンドを，ウエルあたり１０μｌ，最終濃度１００ｎＭとなるように細胞に加える
。対照ウエルにはＤＭＥＭのみを加える。室温で５分間振盪しながらインキュベ
ートする。 ５． 薬剤，ＥＧＦ，およびＤＭＥＭを除去する。細胞をＰＢＳで２回洗浄する
。ウエルあたり１００μｌのＨＮＴＧ*を細胞に移す。氷上に５分間放置する。
この間に，ブロッキング緩衝液を他のＥＬＩＳＡプレートから除去し，上述した
ようにＴＢＳＴで洗浄する。 ６． マイクロピペッターにぴったりと固定したピペットチップを用いて，細胞
をプレートからはがし，ＨＮＴＧ*溶解緩衝液を繰り返し吸引および分配するこ
とにより，細胞物質をホモジナイズする。コーティングし，ブロッキングし，洗
浄したＥＬＩＳＡプレートに溶解物を移す。振盪しながら室温で１時間インキュ
ベートする。 ７． 溶解物を除去し，ＴＢＳＴで４回洗浄する。新たに希釈した抗Ｐｔｙｒ抗
体をウエルあたり１００μｌでＥＬＩＳＡプレートに移す。抗Ｐｔｙｒ抗血清（
ＴＢＳＴ中１：３０００希釈）の存在下で，振盪しながら室温で３０分間インキ
ュベートする。 ８． 抗Ｐｔｙｒ抗体を除去し，ＴＢＳＴで４回洗浄する。新たに希釈したＴＡ
ＧＯ抗ウサギＩｇＧ抗体をＥＬＩＳＡプレートにウエルあたり１００μｌで移す
。振盪しながら室温で３０分間インキュベートする（抗ウサギＩｇＧ抗体：ＴＢ
ＳＴ中１：３０００希釈）。 ９． ＴＡＧＯ検出抗体を除去し，ＴＢＳＴで４回洗浄する。新たに調製したＡ
ＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液をウエルあたり１００μｌでＥＬＩＳＡプレートに移す。振
盪しながら室温で２０分間インキュベートする（ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液：１０ｍ
ｌＡＢＴＳ保存液中１．０μｌの３０％Ｈ2Ｏ2）。 １０． ５０μｌの５Ｎ Ｈ2ＳＯ4を加えることにより反応を停止し（任意），
４１０ｎｍでＯ．Ｄ．を測定する。 １１． 最大ホスホチロシンシグナルは，陰性対照の値を陽性対照の値から差し
引くことにより決定する。次に，抽出物含有ウエルについて，陰性対照を差し引
いた後にホスホチロシン含有量のパーセント阻害を計算する。
【０８０４】実施例１３：ＰＤＧＦ−Ｒ ＥＬＩＳＡ すべての細胞培養培地，グルタミンおよびウシ胎児血清は，特に記載しないか
ぎり，Ｇｉｂｃｏ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌ
ａｎｄ，ＮＹ）から購入した。すべての細胞は，９０−９５％空気および５−１
０％ＣＯ2の湿潤雰囲気下で３７℃で成長させた。すべての細胞株は，日常的に
１週間に２回サブカルチャーし，Ｍｙｃｏｔｅｃｔ法（Ｇｉｂｃｏ）によりマイ
コプラズマがないことを確認した。 ＥＬＩＳＡアッセイのためには，細胞（Ｕ１２４２，Ｊｏｓｅｐｈ Ｓｃｈｌ
ｅｓｓｉｎｇｅｒ，ＮＹＵから入手）を成長培地（ＭＥＭ，１０％ＦＢＳ，ＮＥ
ＡＡ，１ｍＭ ＮａＰｙｒおよび２ｍＭＧＬＮ含有）で８０−９０％コンフルエ
ントまで成長させ，９６ウエル組織培養プレートに０．５％血清中で，ウエルあ
たり２５，０００−３０，０００細胞を播種した。０．５％血清含有培地で一夜
インキュベーションした後，細胞を無血清培地に移し，５％ＣＯ2，３７℃イン
キュベーター中で試験化合物で２時間処理した。次に細胞をリガンドで５−１０
分間刺激し，ＨＮＴＧ（２０ｍＭＨｅｐｅｓ，１５０ｍＭＮａＣｌ，１０％グリ
セロール，５ｍＭＥＤＴＡ，５ｍＭＮａ3ＶＯ4，０．２％ＴｒｉｔｏｎＸ−１０
０，および２ｍＭＮａＰｙｒ）で溶解した。細胞溶解物（ＰＢＳ中０．５ｍｇ／
ウエル）をレセプター特異的抗体であらかじめ被覆し，ＴＢＳＴ（５０ｍＭＴｒ
ｉｓ−ＨＣｌｐＨ７．２，１５０ｍＭＮａＣｌおよび０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−
１００）中５％ミルクで室温で３０分間ブロッキングしたＥＬＩＳＡプレートに
移した。溶解物を振盪しながら室温で１時間インキュベートした。プレートをＴ
ＢＳＴで４回洗浄し，次にポリクローナル抗ホスホチロシン抗体とともに室温で
３０分間インキュベートした。プレートをＴＢＳＴで４回すすぐことにより過剰
の抗ホスホチロシン抗体を除去した。ＥＬＩＳＡプレートにヤギ抗ウサギＩｇＧ
抗体を室温で３０分間加え，次にＴＢＳＴでさらに４回すすいだ。ＡＢＴＳ（１
００ｍＭクエン酸，２５０ｍＭＮａ2ＨＰＯ4および０．５ｍｇ／ｍＬ２，２'−
アジノ−ビス（３−エチルベンズチアゾリン−６−硫酸）），およびＨ2Ｏ2（１
．２ｍＬ３０％Ｈ2Ｏ2を１０ｍｌＡＢＴＳに加える）をＥＬＩＳＡプレートに加
えて発色を開始させた。ＡＢＴＳ添加の約１５から３０分後，４１０ｎｍおよび
６３０ｎｍの参照波長における吸光度を記録した。
【０８０５】実施例１４：ＩＧＦ−ＩレセプターＥＬＩＳＡ 以下のプロトコルを用いて，ＩＧＦ−Ｉレセプター上のホスホチロシンレベル
を測定することができ，これはＩＧＦ−Ｉレセプターチロシンキナーゼ活性を示
す。材料および試薬 以下の材料および試薬を用いた： １． このアッセイにおいて用いる細胞株は，ＩＧＦ−１レセプターを過剰発現
するように遺伝子工学処理された細胞株３Ｔ３／ＩＧＦ−１Ｒである。 ２． ＮＩＨ３Ｔ３／ＩＧＦ−１Ｒを，５％ＣＯ2，３７℃のインキュベーター
で成長させる。成長培地はＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ（熱不活性化）＋２ｍＭＬ−
グルタミンである。 ３． アフィニティー精製抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体１７−６９ ４． Ｄ−ＰＢＳ： ＫＨ2ＰＯ4 ０．２０ｇ／ｌ Ｋ2ＨＰＯ4 ２．１６ｇ／ｌ ＫＣｌ ０．２０ｇ／ｌ ＮａＣｌ ８．００ｇ／ｌ（ｐＨ７．２） ５． ブロッキング緩衝液：ＴＢＳＴプラス５％ミルク（Ｃａｒｎａｔｉｏｎイ
ンスタント脱脂乾燥ミルク） ６． ＴＢＳＴ緩衝液： Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ５０ｍＭ ＮａＣｌ １５０ｍＭ（ｐＨ７．２／ＨＣｌ １０Ｎ） ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ ０．１％ ＴＢＳ（１０Ｘ）の保存溶液を調製し，希釈の間に緩衝液にＴｒｉｔｏｎＸ−１
００を加える。 ７． ＨＮＴＧ緩衝液： ＨＥＰＥＳ ２０ｍＭ ＮａＣｌ １５０ｍＭ（ｐＨ７．２／ＨＣｌ １Ｎ） グリセロール １０％ ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ ０．２％ 保存溶液（５Ｘ）を調製し，４℃で保存する。 ８． ＥＤＴＡ／ＨＣｌ：０．５ＭｐＨ７．０（ＮａＯＨ），１００Ｘ保存液と
して ９． Ｎａ3ＶＯ4：１００Ｘ保存液として０．５Ｍ，アリコートは−８０℃で保
存する。 １０． Ｎａ4Ｐ2Ｏ7：１００Ｘ保存液として０．２Ｍ １１． インスリン様成長因子−１，Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｃａｔ＃Ｇ５１１１） １２．ウサギポリクローナル抗ホスホチロシン抗血清 １３． ヤギ抗ウサギＩｇＧ，ＰＯＤコンジュゲート（検出抗体），Ｔａｇｏ（
Ｃａｔ．Ｎｏ．４５２０，ＬｏｔＮｏ．１８０２）：Ｔａｇｏ，Ｉｎｃ．，Ｂｕ
ｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ １４． ＡＢＴＳ（２，２'−アジノビス（３−エチルベンズチアゾリン硫酸）
）溶液： クエン酸 １００ｍＭ Ｎａ2ＨＰＯ4 ２５０ｍＭ（ｐＨ４．０／１ＮＨＣｌ） ＡＢＴＳ ０．５ｍｇ／ｍｌ ＡＢＴＳ溶液は暗所で４℃で保存しなければならない。溶液は緑色に変色したと
きは廃棄しなければならない。 １５． 過酸化水素：３０％溶液を暗所で４℃で保存する。
【０８０６】プロトコル 以下のすべての工程は，特に記載しないかぎり，室温で実施する。すべてのＥ
ＬＩＳＡプレート洗浄は，プレートを水道水で３回すすぎ，ＴＢＳＴで１回すす
ぐことにより実施する。プレートを軽くたたいてペーパータオルで乾燥させる。
Ａ．細胞播種： １． 組織培養皿（Ｃｏｒｎｉｎｇ２５０２０−１００）で８０−９０％コンフ
ルエントまで成長させた細胞を，トリプシン−ＥＤＴＡ（０．２５％，０．５ｍ
ｌ／Ｄ−１００，ＧＩＢＣＯ）で回収する。 ２． 細胞を新鮮なＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ＋２ｍＭＬ−グルタミン中に再懸濁
し，９６ウエル組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，２５８０６−９６）に２０
，０００細胞／ウエル（１００μｌ／ウエル）で移す。１日インキュベートし，
次に培地を無血清培地（９０／μｌ）で置き換え，５％ＣＯ2，３７℃で一夜イ
ンキュベートする。
【０８０７】Ｂ．ＥＬＩＳＡプレートコーティングおよびブロッキング ： １． ＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ２５８０５−９６）を，１００μｌ
ＰＢＳ中の抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体で０．５μｇ／ウエルで少なくとも２時間コーテ
ィングする。 ２． コーティング溶液を除去し，１００μｌのブロッキング緩衝液で置き換え
，３０分間振盪する。ブロッキング緩衝液を除去し，溶解物を加える直前にプレ
ートを洗浄する。
【０８０８】Ｃ．アッセイ方法 ： １． 薬剤は，無血清条件で試験する。 ２． 薬剤保存液（１００％ＤＭＳＯ中）を９６ウエルポリプロピレンプレート
中でＤＭＥＭで１：１０に希釈し，１０μｌ／ウエルのこの溶液を細胞に移して
，最終薬剤希釈１：１００，最終ＤＭＳＯ濃度１．０％とする。細胞を５％ＣＯ 2 中で３７℃で２時間インキュベートする。 ３． 新鮮な細胞溶解緩衝液（ＨＮＴＧ＊）を調製する。 ＨＮＴＧ ２ｍｌ ＥＤＴＡ ０．１ｍｌ Ｎａ3ＶＯ4 ０．１ｍｌ Ｎａ4（Ｐ2Ｏ7） ０．１ｍｌ Ｈ2Ｏ ７．３ｍｌ ４． 薬剤を２時間インキュベートした後，１０μｌ／ウエルのＰＢＳ中２００
ｎＭＩＧＦ−１リガンドを細胞に移し（最終濃度２０ｎＭ），５％ＣＯ2で３７
℃で１０分間インキュベートする。 ５． 培地を除去し，１００μｌ／ウエルのＨＮＴＧ＊を加え，１０分間振盪す
る。細胞を顕微鏡下で観察して，これらが適切に溶解したか否かを見る。 ６． １２チャネルピペットを用いて細胞をプレートから掻き取り，吸引と分配
を繰り返すことにより溶解物をホモジナイズする。すべての溶解物を抗体コーテ
ィングＥＬＩＳＡプレートに移し，１時間振盪する。 ７． 溶解物を除去し，プレートを洗浄し，抗ｐＴｙｒ（ＴＢＳＴ中１：３，０
００）を１００μｌ／ウエルで移し，３０分間振盪する。 ８． 抗ｐＴｙｒを除去し，プレートを洗浄し，ＴＡＧＯ（ＴＢＳＴ中１：３，
０００）を１００μｌ／ウエルで移し，３０分間振盪する。 ９． 検出抗体を除去し，プレートを洗浄し，新鮮なＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2（１．２
μｌＨ2Ｏ2を１０ｍｌＡＢＴＳに加える）を１００μｌ／ウエルでプレートに移
して，発色を開始させる。 １０． ＤｙｎａｔｅｃＭＲ50００で参照波長６３０ｎｍで４１０ｎｍのＯＤを
測定する。
【０８０９】実施例１５：ＥＧＦレセプターＥＬＩＳＡ ヒトＥＧＦ−Ｒを発現するよう遺伝子工学処理された細胞中のＥＧＦレセプタ
ーキナーゼ活性を以下に記載するように測定した。材料および試薬 以下の材料および試薬を用いた： １． ＥＧＦリガンド：保存液濃度＝１６．５μＭ；ＥＧＦ２０１，ＴＯＹＯＢ
Ｏ，Ｃｏ．，Ｌｔｄ．Ｊａｐａｎ ２． ０５−１０１（ＵＢＩ）（ＥＧＦＲ細胞外ドメインを認識するモノクロー
ナル抗体） ３． 抗ホスホチロシン抗体（抗Ｐｔｙｒ）（ポリクローナル） ４． 検出抗体：ヤギ抗ウサギｌｇＧ西洋ワサビペルオキシダーゼコンジュゲー
ト，ＴＡＧＯ，Ｉｎｃ．，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ ５． ＴＢＳＴ緩衝液： Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７ ５０ｍＭ ＮａＣｌ １５０ｍＭ ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ ０．１ ６． ＨＮＴＧ ５Ｘ保存液： ＨＥＰＥＳ ０．１Ｍ ＮａＣｌ ０．７５Ｍ グリセロール ５０ ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ １．０％ ７． ＡＢＴＳ保存液： クエン酸 １００ｍＭ ＮａＶＯ4 ２５０ｍＭ ＨＣｌ（濃） ４．０ｐＨ ＡＢＴＳ* ０．５ｍｇ／ｍｌ 溶液は使用するまで暗所で４℃で保存する。 ８． 試薬保存液： ＥＤＴＡ １００ｍＭ ｐＨ７．０ Ｎａ3ＶＯ4 ０．５Ｍ Ｎａ4（Ｐ2０7） ０．２Ｍ
【０８１０】プロトコル 以下のプロトコルを用いた：Ａ．ＥＬＩＳＡプレートのプレコート １． ＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，９６ウエル，Ｃａｔ．＃２５８０
５−９６）をウエルあたりＰＢＳ中０．５μｇ，１５０μｌ最終容量／ウエルの
０５−１０１抗体でコーティングし，４℃で一夜保存する。コーティングしたプ
レートは４℃で保存した場合１０日間まで良好に使用しうる。 ２． 使用の日，コーティング緩衝液を除去し，ブロッキング緩衝液（ＰＢＳ中
５％Ｃａｒｎａｔｉｏｎインスタント脱脂乾燥ミルク）で置き換える。プレート
を振盪しながら室温（約２３℃−２５℃）で３０分間インキュベートする。使用
の直前に，ブロッキング緩衝液を除去し，プレートをＴＢＳＴ緩衝液で４回洗浄
する。
【０８１１】Ｂ．細胞播種 １． このアッセイにはＮＩＨ３Ｔ３／Ｃ７細胞株（Ｈｏｎｅｇｇｅｒ，ｅｔ
ａｌ．，Ｃｅｌｌ５１：１９９−２０９，１９８７）を用いることができる。 ２． ８０−９０％コンフルエントの皿を実験用に選択する。細胞をトリプシン
処理し，１０％ＣＳ ＤＭＥＭ培地を加えることにより反応を停止させる。細胞
をＤＭＥＭ培地（１０％ＣＳ ＤＭＥＭ培地）中に懸濁し，１０００ｒｐｍで室
温で５分間，１回遠心分離する。 ３． 細胞を播種培地（ＤＭＥＭ，０．５％ウシ血清）に再懸濁し，トリパンブ
ルーを用いて細胞を計数する。９０％を越える生存率が許容範囲である。細胞を
９６ウエルマイクロタイタープレート上で，ＤＭＥＭ培地（０．５％ウシ血清）
中に，ウエルあたり１０，０００細胞の密度でウエルあたり１００μｌで播種す
る。播種した細胞を５％ＣＯ2，３７℃で約４０時間インキュベートする。
【０８１２】Ｃ．アッセイ方法 １． 倒立顕微鏡を用いて，播種した細胞のコンタミネーションを調べる。試験
化合物保存液（ＤＭＳＯ中１０ｍｇ／ｍｌ）をＤＭＥＭ培地中で１：１０に希釈
し，次に５μｌを試験ウエルに移して，１：２００の最終薬剤希釈および１％の
最終ＤＭＳＯ濃度とする。対照ウエルにはＤＭＳＯのみを加える。５％ＣＯ2，
３７℃で１時間インキュベートする。 ２． ＥＧＦリガンドの調製：保存液ＥＧＦを，１０μｌの希釈ＥＧＦ（１：１
２希釈）を移したときに２５ｎＭの最終濃度が得られるように，ＤＭＥＭ中で希
釈する。 ３． ウエルあたり１００μｌに十分なように新鮮なＨＮＴＧ*１０ｍｌを調製
する。ＨＮＴＧ＊は以下のものを含む：ＨＮＴＧ保存液（２．０ｍｌ），ｍｉｌ
ｌｉ−ＱＨ2Ｏ（７．３ｍｌ），ＥＤＴＡ，１００ｍＭ，ｐＨ７．０（０．５ｍ
ｌ），Ｎａ3ＶＯ4０．５Ｍ（０．１ｍｌ）およびＮａ4（Ｐ2Ｏ7），０．２Ｍ（
０．１ｍｌ） ４． 氷上に置く。 ５． 薬剤とともに２時間インキュベーションした後，調製したＥＧＦリガンド
を，ウエルあたり１０μｌで，２５ｎＭの最終濃度となるように細胞に加える。
対照ウエルにはＤＭＥＭのみを加える。振盪しながら室温で５分間インキュベー
トする。 ６． 試験化合物，ＥＧＦおよびＤＭＥＭを除去する。細胞をＰＢＳで２回洗浄
する。ＨＮＴＧ*をウエルあたり１００μｌで細胞に移す。氷上に５分間置く。
その間に，他のＥＬＩＳＡプレートからブロッキング緩衝液を除去し，上述した
ようにＴＢＳＴで洗浄する。 ７． マイクロピペッターにぴったりと固定したピペットチップを用いて，細胞
をプレートからはがし，ＨＮＴＧ*溶解緩衝液を繰り返し吸引および分配するこ
とにより，細胞物質をホモジナイズする。コーティングし，ブロッキングし，洗
浄したＥＬＩＳＡプレートに溶解物を移す。振盪しながら室温で１時間インキュ
ベートする。 ８． 溶解物を除去し，ＴＢＳＴで４回洗浄する。新たに希釈した抗Ｐｔｙｒ抗
体をウエルあたり１００μｌでＥＬＩＳＡプレートに移す。抗Ｐｔｙｒ抗血清（
ＴＢＳＴ中１：３０００希釈）の存在下で，振盪しながら室温で３０分間インキ
ュベートする。 ９． 抗Ｐｔｙｒ抗体を除去し，ＴＢＳＴで４回洗浄する。新たに希釈したＴＡ
ＧＯ３０抗ウサギＩｇＧ抗体をＥＬＩＳＡプレートにウエルあたり１００μｌで
移す。振盪しながら室温で３０分間インキュベートする（抗ウサギＩｇＧ抗体：
ＴＢＳＴ中１：３０００希釈）。 １０． 検出抗体を除去し，ＴＢＳＴで４回洗浄する。新たに調製したＡＢＴＳ
／Ｈ2Ｏ2溶液をウエルあたり１００μｌでＥＬＩＳＡプレートに移す。室温で２
０分間インキュベートする（ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液：１０ｍｌＡＢＴＳ保存液中
１．２μｌの３０％Ｈ2Ｏ2）。 １１． ５０μｌの５ＮＨ2ＳＯ4を加えることにより反応を停止し（任意），４
１０ｎｍでＯ．Ｄ．を測定する。 １２． 最大ホスホチロシンシグナルは，陰性対照の値を陽性対照の値から差し
引くことにより決定する。次に，陰性対照を差し引いた後，抽出物含有ウエルに
ついてのホスホチロシン含有量のパーセント阻害を計算する。
【０８１３】実施例１６：Ｍｅｔ自己リン酸化アッセイ−ＥＬＩＳＡ このアッセイは，Ｍｅｔレセプター上のＭｅｔ蛋白質チロシンキナーゼレベル
を分析することにより，Ｍｅｔチロシンキナーゼ活性を決定する材料および試薬 以下の材料および試薬を用いた： １． ＨＮＴＧ（５Ｘ保存溶液）：２３．８３ｇＨＥＰＥＳおよび４３．８３ｇ
ＮａＣｌを約３５０ｍｌｄＨ2Ｏに溶解する。ＨＣｌまたはＮａＯＨでｐＨを７
．２に調節し，５００ｍｌグリセロールおよび１０ｍｌＴｒｉｔｏｎＸ−１００
を加え，混合し，ｄＨ2Ｏを加えて総容量を１Ｌとする。１Ｘ作業溶液１Ｌを作
成するためには，２００ｍｌの５Ｘ保存溶液を８００ｍｌｄＨ2Ｏに加え，必要
に応じてｐＨを調べて調節し，４℃で保存する。 ２． ＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝化食塩水），Ｇｉｂｃｏ Ｃａｔ．＃４５
０−１３００ＥＢ（１Ｘ溶液） ３． ブロッキング緩衝液：５００ｍｌｄＨ2Ｏ中に，１００ｇＢＳＡ，１２．
１ｇＴｒｉｓ−ｐＨ７．５，５８．４４ｇＮａＣｌおよび１０ｍｌＴｗｅｅｎ−
２０を加え，希釈して総容量１Ｌとする。 ４． キナーゼ緩衝液：５００ｍｌｄＨ2Ｏに，１２．１ｇＴＲＩＳ（ｐＨ７．
２），５８．４ｇＮａＣｌ，４０．７ｇＭｇＣｌ2および１．９ｇＥＧＴＡを加
え，ｄＨ2Ｏで総容量１Ｌとする。 ５． ＰＭＳＦ（フッ化フェニルメチルスルホニル），Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ．＃
Ｐ−７６２６，４３５．５ｍｇに１００％エタノールを総容量２５ｍｌとなるよ
うに加え，ボルテックスする。 ６． ＡＴＰ（細菌起源），Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ．＃Ａ−７６９９，粉末を−２
０℃で保存する；作業溶液を作成するためには，３．３１ｍｇを１ｍｌｄＨ2Ｏ
中に溶解する。 ７． ＲＣ−２０Ｈ ＨＲＰＯコンジュゲート化抗ホスホチロシン，Ｔｒａｎｓ
ｄｕｃｔｉｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｃａｔ．＃Ｅ１２０Ｈ ８． Ｐｉｅｒｃｅ １−Ｓｔｅｐ（商標）Ｔｕｒｂｏ−ＴＭＢ−ＥＬＩＳＡ（
３，３'，５，５'−テトラメチルベンジジン），Ｐｉｅｒｃｅ Ｃａｔ．＃３４
０２２ ９． Ｈ2ＳＯ4，濃硫酸１ｍｌ（１８Ｎ）を３５ｍｌｄＨ2Ｏに加える。 １０． ＴＲＩＳ ＨＣＬ，Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃ＢＰ１５２−５；材料
１２１．１４ｇに６００ｍｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏを加え，ＨＣｌでｐＨを７
．５（または７．２）に調節し，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで容量を１Ｌとする。 １１． ＮａＣｌ，Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｓ２７１−１０，５Ｍ溶液を作
成する。 １２． Ｔｗｅｅｎ−２０，Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｓ３３７−５００ １３． Ｎａ3ＶＯ4，Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｓ４５４−５０，材料１．８
ｇに８０ｍｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏを加え，ＨＣｌまたはＮａＯＨでｐＨを１
０．０に調節し，電子レンジで沸騰させ，冷却し，ｐＨを調べ，ｐＨが１０．０
で安定となるまでこの工程を繰り返し，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏを加えて総容量１
００ｍｌとし，１ｍｌアリコートを作成し，−８０℃で保存する。 １４． ＭｇＣｌ2，Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｍ３３−５００，１Ｍ溶液を
作成する。 １５． ＨＥＰＥＳ，Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃ＢＰ３１０−５００，２００
ｍｌＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに，材料５９．６ｇを加え，ｐＨを７．５に調節し，
総容量２５０ｍｌとし，濾過滅菌する。 １６． アルブミン，ウシ（ＢＳＡ），Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ．＃Ａ−４５０３，
材料３０ｇに滅菌蒸留水を加えて総容量３００ｍｌとし，４℃で保存する。 １７． ＴＢＳＴ緩衝液：１Ｌの目盛り付きシリンダー中の約９００ｍｌのｄＨ 2 Ｏに６．０５７ｇＴＲＩＳおよび８．７６６ｇＮａＣｌを加え，溶解したとき
，ＨＣｌでｐＨを７．２に調節し，１．０ｍｌＴｒｉｔｏｎＸ−１００を加え，
ｄＨ2Ｏで総容量１Ｌとする。 １８． ヤギアフィニティー精製抗体ウサギＩｇＧ（全分子），Ｃａｐｐｅｌ
Ｃａｔ．＃５５６４１ １９． 抗ｈ−Ｍｅｔ（Ｃ−２８）ウサギポリクローナルＩｇＧ抗体，Ｓａｎｔ
ａ Ｃｒｕｚ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃａｔ．＃ＳＣ−１６１ ２０． 過渡的にトランスフェクションされたＥＧＦＲ／Ｍｅｔキメラ細胞（Ｅ
ＭＲ）（Ｋｏｍａｄａ，ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，８：２３８１−２３
９０（１９９３） ２１． 炭酸ナトリウム緩衝液，（Ｎａ2ＣＯ4，Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｓ
４９５）：材料１０．６ｇに８００ｍｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏを加え，溶解し
たとき，ＮａＯＨでｐＨを９．６に調節し，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量１Ｌ
とし，濾過し，４℃で保存する。
【０８１４】方法 以下の工程は，特に記載のない限り，全て室温で実施する。ＥＬＩＳＡプレー
ト洗浄は全てＴＢＳＴで４回すすぐことにより行う。Ａ．ＥＭＲ溶解 この方法は，レセプター捕捉の開始の前夜または直前に実施することができる
。 １． 溶解物を３７℃の水浴中で渦巻き動作により最後の結晶が消失するまで急
速に溶解する。 ２． 細胞ペレットを１ｍＭＰＭＳＦを含有する１Ｘ ＨＮＴＧ中で溶解する。
１５ｃｍ皿の細胞あたり３ｍｌのＨＮＴＧを用いる。計算したＨＮＴＧ容量の１
／２を加え，管を１分間ボルテックスし，残量のＨＮＴＧを加え，さらに１分間
ボルテックスする。 ３． 管の釣り合いをとり，１０，０００ｘｇ，１０分間，４℃で遠心分離する
。 ４． 上清をプールし，アリコートを除去して蛋白質測定を行う。 ５． プールしたサンプルをドライアイス／エタノール浴中で急速凍結する。こ
の工程は，溶解物を一夜保存するか蛋白質測定後に直ちに使用するかにかかわら
ず実施する。 ６． 標準的ビシンコニン酸（ＢＣＡ）法を用いて蛋白質測定を実施する（ＢＣ
Ａアッセイ試薬キット，Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃａｔ．＃２３２２
５）。
【０８１５】Ｂ．ＥＬＩＳＡ法 １． Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートを，総ウエル容量５０μｌ
，ウエルあたり５μｇの炭酸塩緩衝液中のヤギ抗ウサギ抗体でコーティングする
。４℃で一夜保存する。 ２． プレートを逆さにして液体を除去することにより，未結合ヤギ抗ウサギ抗
体を除去する。 ３． １５０μｌのブロッキング緩衝液を各ウエルに加える。振盪しながら３０
分間インキュベートする。 ４． ＴＢＳＴで４回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて過
剰の液体および気泡を除去する。 ５． ウエル総容量１００μｌに対して，ＴＢＳＴ中で希釈したウサギ抗Ｍｅｔ
抗体をウエルあたり１μｇ加える。 ６． 溶解物をＨＮＴＧで希釈する（９０μｇ溶解物／１００μｌ）。 ７． 希釈した溶解物１００μｌを各ウエルに加える。６０分間振盪する。 ８． ＴＢＳＴで４回洗浄する。ペーパータオル上で軽くたたいて過剰の液体お
よび気泡を除去する。 ９． ウエルあたり５０μｌの１Ｘ溶解物緩衝液を加える。 １０． 化合物／抽出物をポリプロピレン９６ウエルプレート中で１Ｘキナーゼ
緩衝液中で１：１０に希釈する。 １１． 希釈した化合物５．５μｌをＥＬＩＳＡプレートウエルに移す。振盪し
ながら室温で２０分間インキュベートする。 １２． ウエルあたり５．５μｌの６０μＭＡＴＰ溶液を加える。陰性対照には
ＡＴＰを加えない。振盪しながら９０分間インキュベートする。 １３． ＴＢＳＴで４回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて
過剰の液体および気泡を除去する。 １４． ウエルあたり１００μｌのＲＣ２０（ブロッキング緩衝液中１：３００
０希釈）を加える。振盪しながら３０分間インキュベートする。 １５． ＴＢＳＴで４回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて
過剰の液体および気泡を除去する。 １６． ウエルあたり１００μｌのＴｕｒｂｏ−ＴＭＢを加える。振盪しながら
３０−６０分間インキュベートする。 １７． ウエルあたり１００μｌの１ＭＨ2ＳＯ4を加えて反応を停止させる。 １８． Ｄｙｎａｔｅｃｈ ＭＲ70００ ＥＬＩＳＡリーダーでアッセイを読む
。試験フィルター＝４５０ｎｍ，参照フィルター＝４１０ｎｍ。
【０８１６】実施例１７：生化学的ｓｒｃアッセイ−ＥＬＩＳＡ このアッセイを用いて，ビオチニル化ペプチドのリン酸化を読出しとして測定
することにより，ｓｒｃ蛋白質キナーゼ活性を決定する。材料および試薬： 以下の材料および試薬を用いた： １． ｓｒｃでトランスフォームした酵母（Ｓｕｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｒｅｄｗｏ
ｏｄＣｉｔｙ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ） ２． 細胞溶解物：ｓｒｃを発現する酵母細胞をペレット化し，水で１回洗浄し
，再びペレット化して，使用するまで−８０℃で保存する。 ３． Ｎ末端ビオチニル化ＥＥＥＹＥＥＹＥＥＥＹＥＥＥＹＥＥＥＹは，当業者
に周知の標準的な方法により調製する。 ４． ＤＭＳＯ：Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ ５． ９６ウエルＥＬＩＳＡプレート：Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥａｓｙ Ｗ
ａｓｈ，改変平底プレート，Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃａｔ．＃２５８０５−９６ ６． ＮＵＮＣ９６ウエルＶ−底ポリプロピレンプレート，化合物の希釈用：Ａ
ｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃａｔ．＃Ａ−７２０９２ ７． Ｖｅｃａｓｔａｉｎ ＥＬＩＴＥ ＡＢＣ試薬：Ｖｅｃｔｏｒ，Ｂｕｒｌ
ｉｎｇａｍｅ，ＣＡ ８． 抗ｓｒｃ（３２７）ｍａｂ：Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
Ｐｏｍｂｅを用いて組換えＳｒｃを発現させる（Ｓｕｐｅｒｔｉ−Ｆｕｒｇａ，
ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，１２：２６２５−２６３４；Ｓｕｐｅｒｔｉ−
Ｆｕｒｇａ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１４：６００−
６０５）。Ｓ．Ｐｏｍｂｅ ＳＰ２００株（ｈ−ｓ ｌｅｕｌ．３２ ｕｒａ４
ａｄｅ２１０）を記載されたように増殖させ，酢酸リチウム法（Ｓｕｐｅｒｔ
ｉ−Ｆｕｒｇａ，（上掲））によりｐＲＳＰ発現プラスミドでトランスフォーム
する。細胞は１μＭチアミンの存在下で増殖させてｎｍｔｌプロモーターの発現
を抑制するか，またはチアミンの非存在下で増殖させて発現を誘導する。 ９． モノクローナル抗ホスホチロシン，ＵＢＩ０５−３２１（代わりにＵＢ４
０を用いることができる） １０． Ｔｕｒｂｏ ＴＭＢ−ＥＬＩＳＡペルオキシダーゼ基質：Ｐｉｅｒｃｅ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ
【０８１７】緩衝溶液： １． ＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝化食塩水）：ＧＩＢＣＯ ＰＢＳ，ＧＩＢ
ＣＯ Ｃａｔ．＃４５０−１３００ＥＢ ２． ブロッキング緩衝液：５％無脂乳（Ｃａｒｎａｔｉｏｎ），ＰＢＳ中 ３． 炭酸塩緩衝液：Ｎａ2ＣＯ4，Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ｃａｔ．＃Ｓ４９５，１０
０ｍＭ保存溶液を作成する。 ４． キナーゼ緩衝液：１．０ｍｌ（１Ｍ保存溶液から）ＭｇＣｌ2；０．２ｍ
ｌ（１Ｍ保存溶液から）ＭｎＣｌ2；０．２ｍｌ（１Ｍ保存溶液から）ＤＴＴ；
５．０ｍｌ（１Ｍ保存溶液から）ＨＥＰＥＳ；０．１ｍｌＴＸ−１００；Ｍｉｌ
ｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量１０ｍｌとする。 ５． 溶解緩衝液：５．０ＨＥＰＥＳ（１Ｍ保存溶液から）；２．７４ｍｌＮａ
Ｃｌ（５Ｍ保存溶液から）；１０ｍｌグリセロール；１．０ｍｌＴＸ−１００；
０．４ｍｌＥＤＴＡ（１００ｍＭ保存溶液から）；１．０ｍｌＰＭＳＦ（１００
ｍＭ保存溶液から）；０．１ｍｌＮａ3ＶＯ4（０．１Ｍ保存溶液から）；Ｍｉｌ
ｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量１００ｍｌとする。 ６． ＡＴＰ：Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ．＃Ａ−７６９９，１０ｍＭ保存溶液（５．
５１ｍｇ／ｍｌ）を作成する。 ７． ＴＲＩＳ−ＨＣｌ：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃ＢＰ１５２−５，６００
ｍｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに１２１．１４ｇの物質を加え，ＨＣｌでｐＨを７
．５に調節し，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量１Ｌとする。 ８． ＮａＣｌ：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｓ２７１−１０，ＭｉｌｌｉＱ
Ｈ2Ｏで５Ｍ保存溶液を作成する。 ９． Ｎａ3ＶＯ4：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｓ４５４−５０；８０ｍｌのＭ
ｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに，１．８ｇの物質を加える；ＨＣｌまたはＮａＯＨでｐＨ
を１０．０に調節する；電子レンジ中で沸騰させる；冷却する；ｐＨを調べ，加
熱／冷却サイクルの後にｐＨが安定に維持されるまでｐＨ調節を繰り返す；Ｍｉ
ｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量１００ｍｌとする；１ｍｌのアリコートを作成し，−
８０℃で保存する。 １０． ＭｇＣｌ2：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｍ３３−５００，Ｍｉｌｌｉ
Ｑ Ｈ2Ｏで１Ｍ保存溶液を作成する。 １１． ＨＥＰＥＳ：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃ＢＰ３１０−５００；２００
ｍｌＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに，５９．６ｇの物質を加え，ｐＨを７．５に調節し
，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量２５０ｍｌとし，濾過滅菌する（１Ｍ保存溶液
）。 １２． ＴＢＳＴ緩衝液：ＴＢＳＴ緩衝液：９００ｍｌのｄＨ2Ｏに，６．０５
７ｇＴＲＩＳおよび８．７６６ｇＮａＣｌを加える；ＨＣｌでｐＨを７．２に調
節し，１．０ｍｌＴｒｉｔｏｎ−Ｘ10０を加える；ｄＨ2Ｏで総容量１Ｌとする
。 １３． ＭｎＣｌ2：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｍ８７−１００，Ｍｉｌｌｉ
Ｑ Ｈ2Ｏで１Ｍ保存溶液とする。 １４． ＤＴＴ：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃ＢＰ１７２−５ １５． ＴＢＳ（ＴＲＩＳ緩衝化食塩水）：９００ｍｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏ
に，６．０５７ｇＴＲＩＳおよび８．７７７ｇＮａＣｌを加える；ＭｉｌｌｉＱ
Ｈ2Ｏで総容量を１Ｌとする。 １６． キナーゼ反応混合物：アッセイプレート（１００ウエル）１枚あたりの
量：１．０ｍｌキナーゼ緩衝液，２００μｇＧＳＴ−ζ，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏ
で最終容量８．０ｍｌとする。 １７． ビオチン標識ＥＥＥＹＥＥＹＥＥＥＹＥＥＥＹＥＥＥＹ：水中のペプチ
ド保存溶液（１ｍＭ，２．９８ｍｇ／ｍｌ）を使用の直前に新たに作成する。 １８． Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ ＥＬＩＴＥ ＡＢＣ試薬：１４ｍｌの作業用試
薬を調製するためには，１滴の試薬Ａを１５ｍｌＴＢＳＴに加え，管を数回逆さ
にして混合する。次に１滴の試薬Ｂを加える。管を室温で環状振盪器に入れ，３
０分間混合する。
【０８１８】プロトコル Ａ．ｓｒｃでコーティングしたＥＬＩＳＡプレートの調製 １． ＥＬＩＳＡプレートを１００μｌの炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．６）
中の０．５μｇ／ウエルの抗ｓｒｃモノクローナル抗体で，４℃で一夜コーティ
ングする。 ２． ウエルをＰＢＳで１回洗浄する。 ３． プレートをＰＢＳ中５％ミルク０．１５ｍｌで，室温で３０分間ブロッキ
ングする。 ４． プレートをＰＢＳで５回洗浄する。 ５． 溶解緩衝液中で希釈した，ｓｒｃでトランスフォームした酵母の溶解物を
１０μｇ／ウエルで加える（ウエルあたり総容量０．１ｍｌ）。（溶解物の量は
，バッチにより異なるであろう）。プレートを室温で２０分間振盪する。Ｂ．ホスホチロシン抗体でコーティングしたＥＬＩＳＡプレートの調製 １． ４Ｇ１０プレート：１００μｌＰＢＳ中の０．５μｇ／ウエルの４Ｇ１０
で４℃で一夜コーティングし，１５０μｌのＰＢＳ中５％ミルクで室温で３０分
間ブロッキングする。Ｃ．キナーゼアッセイ法 １． 未結合蛋白質をプレートから除去し，プレートをＰＢＳで５回洗浄する。
２． ウエルあたり０．０８ｍｌのキナーゼ反応混合物（ウエルあたり１０μｌ
の１０Ｘキナーゼ緩衝液および１０μＭ（最終濃度）のビオチン−ＥＥＥＹＥＥ
ＹＥＥＥＹＥＥＥＹＥＥＥＹ，水中に希釈）を加える。 ３． １０％ＤＭＳＯを含有する水中に希釈した１０μｌの化合物を加え，室温
で１５分間プレインキュベートする。 ４． １０μｌ／ウエルの水中０．０５ｍＭＡＴＰ（最終５μＭＡＴＰ）を加え
ることにより，キナーゼ反応を開始させる。 ５． ＥＬＩＳＡプレートを室温で１５分間振盪する。 ６． ウエルあたり１０μｌの０．５ＭＥＤＴＡを加えることによりキナーゼ反
応を停止させる。 ７． ９０μｌの上清を，ブロッキングした４Ｇ１０コーティングＥＬＩＳＡプ
レートに移す。 ８． 振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。 ９． プレートをＴＢＳＴで５回洗浄する。 １０． Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ ＥＬＩＴＥ ＡＢＣ試薬（１００μｌ／ウエル
）とともに室温で３０分間インキュベートする。 １１． ウエルをＴＢＳＴで５回洗浄する。 １２． Ｔｕｒｂｏ ＴＭＢで発色させる。
【０８１９】実施例１８：生化学的ｌｃｋアッセイ−ＥＬＩＳＡ このアッセイを用いて，ＧＳＴ−ζのリン酸化を読出しとして測定することに
より，ｌｃｋ蛋白質キナーゼ活性を決定する。材料および試薬： 以下の材料および試薬を用いた： １． ｌｃｋでトランスフォームした酵母：Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙ
ｃｅｓ Ｐｏｍｂｅを用いて組換えＬｃｋを発現させる（Ｓｕｐｅｒｔｉ−Ｆｕ
ｒｇａ，ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１２：２６２５−２６３４；Ｓｕｐｅｒ
ｔｉ−Ｆｕｒｇａ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，１４：６
００−６０５）。Ｓ．Ｐｏｍｂｅ ＳＰ２００株（ｈ−ｓ ｌｅｕｌ．３２ ｕ
ｒａ４ ａｄｅ２１０）を記載されたように増殖させ，ｐＲＳＰ発現プラスミド
で酢酸リチウム法によりトランスフォームする（Ｓｕｐｅｒｔｉ−Ｆｕｒｇａ，
（上掲））。細胞を１μＭチアミンの存在下で増殖させ，発現を誘導する。 ２． 細胞溶解物：ｌｃｋを発現する酵母細胞をペレット化し，水で１回洗浄し
，再ペレット化し，使用するまで−８０℃で凍結保存する。 ３． ＧＳＴ−ζ：細菌中で発現させるためのＧＳＴ−ζ融合蛋白質をコードす
るＤＮＡは，Ｈｏｗａｒｄ Ｈｕｇｈｅｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔ
ｅ，ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｓａｎ Ｆ
ｒａｎｃｉｓｃｏのＡｒｔｈｕｒ Ｗｅｉｓｓから入手する。トランスフォーム
した細菌を振盪しながら２５℃で一夜増殖させる。ＧＳＴ−ζは，グルタチオン
アフィニティークロマトグラフィー（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ａｌａｍｅｄａ，Ｃ
Ａ）により精製する。 ４． ＤＭＳＯ：Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ ５． ９６ウエルＥＬＩＳＡプレート：Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥａｓｙ Ｗ
ａｓｈ，改変平底プレート，Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃａｔ．＃２５８０５−９６ ６． ＮＵＮＣ９６ウエルＶ−底ポリプロピレンプレート，化合物希釈用：Ａｐ
ｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃａｔ．＃ＡＳ−７２０９２ ７． 精製ウサギ抗ＧＳＴ抗血清：Ａｍｒａｄ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ａｕ
ｓｔｒａｌｉａ）Ｃａｔ．＃９０００１６０５ ８． ヤギ抗ウサギ−ＩｇＧ−ＨＲＰ：Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｃａｔ．＃Ｖ０１０
３０１ ９． ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）：Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ Ｃａｔ．＃
５２１５−００５−００３ １０． 抗Ｌｃｋ（３Ａ５）モノクローナル抗体：Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉ
ｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣａｔ＃ｓｃ−４３３ １１． 抗ホスホチロシンモノクローナル抗体ＵＢＩ０５−３２１（代わりにＵ
Ｂ４０を用いてもよい）
【０８２０】緩衝溶液： １． ＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝化食塩水）１Ｘ溶液：ＧＩＢＣＯＰＢＳ，
ＧＩＢＣＯ Ｃａｔ．＃４５０−１３００ＥＢ ２． ブロッキング緩衝液：１００ｇＢＳＡ，１２．１ｇＴＲＩＳ−ｐＨ７．５
，５８．４４ｇＮａＣｌ，１０ｍｌＴｗｅｅｎ−２０，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで
総容量１Ｌとする。 ３． 炭酸緩衝液：Ｎａ2ＣＯ4，Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ｃａｔ．＃Ｓ４９５；Ｍｉｌ
ｌｉＱ Ｈ2Ｏで１００ｍＭ溶液とする。 ４． キナーゼ緩衝液：１．０ｍｌ（１Ｍ保存溶液より）ＭｇＣｌ2；０．２ｍ
ｌ（１Ｍ保存溶液より）ＭｎＣｌ2；０．２ｍｌ（１Ｍ保存溶液より）ＤＴＴ；
５．０ｍｌ（１Ｍ保存溶液より）ＨＥＰＥＳ；０．１ｍｌＴＸ−１００；Ｍｉｌ
ｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量１０ｍｌとする。 ５． 溶解緩衝液：５．０ＨＥＰＥＳ（１Ｍ保存溶液より）；２．７４ｍｌＮａ
Ｃｌ（５Ｍ保存溶液より）；１０ｍｌグリセロール；１．０ｍｌＴＸ−１００；
０．４ｍｌＥＤＴＡ（１００ｍＭ保存溶液より）；１．０ｍｌＰＭＳＦ（１００
ｍＭ保存溶液より）；０．１ｍｌＮａ3ＶＯ4（０．１Ｍ保存溶液より）；Ｍｉｌ
ｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量１００ｍｌとする。 ６． ＡＴＰ：Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ．＃Ａ−７６９９，１０ｍＭ保存溶液（５．
５１ｍｇ／ｍｌ）を作成する。 ７． ＴＲＩＳ−ＨＣｌ：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃ＢＰ１５２−５，６００
ｍｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに，１２１．１４ｇの物質を加え，ＨＣｌでｐＨを
７．５に調節し，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量１Ｌとする。 ８． ＮａＣｌ：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｓ２７１−１０，ＭｉｌｌｉＱ
Ｈ2Ｏで５Ｍ保存溶液を作成する。 ９． Ｎａ3ＶＯ4：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｓ４５４−５０；８０ｍｌのＭ
ｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに，１．８ｇの物質を加える；ＨＣｌまたはＮａＯＨでｐＨ
を１０．０に調節する；電子レンジ中で沸騰させる；冷却する；ｐＨを調べ，加
熱／冷却サイクルの後にｐＨが安定となるまでｐＨ調節を繰り返す；Ｍｉｌｌｉ
Ｑ Ｈ2Ｏで総容量１００ｍｌとする；１ｍｌのアリコートを作成し，−８０℃
で保存する。 １０． ＭｇＣｌ2：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｍ３３−５００，Ｍｉｌｌｉ
Ｑ Ｈ2Ｏで１Ｍ保存溶液を作成する。 １１． ＨＥＰＥＳ：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃ＢＰ３１０−５００；２００
ｍｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに，５９．６ｇの物質を加え，ｐＨを７．５に調節
し，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量２５０ｍｌとし，濾過滅菌する（１Ｍ保存溶
液）。 １２． アルブミン，ウシ（ＢＳＡ），Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ．＃Ａ４５０３；１
５０ｍｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに，３０ｇの物質を加え，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏ
で総容量３００ｍｌとし，０．２２μｍフィルターを通して濾過し，４℃で保存
する。 １３． ＴＢＳＴ緩衝液：９００ｍｌのｄＨ2Ｏに，６．０５７ｇＴＲＩＳおよ
び８．７６６ｇＮａＣｌを加える；ＨＣｌでｐＨを７．２に調節する；１．０ｍ
ｌＴｒｉｔｏｎ−Ｘ10０を加える；ｄＨ2Ｏで総容量１Ｌとする。 １４． ＭｎＣｌ2：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｍ８７−１００，Ｍｉｌｌｉ
Ｑ Ｈ2Ｏで１Ｍ保存溶液を作成する。 １５． ＤＴＴ；Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃ＢＰ１７２−５ １６． ＴＢＳ（ＴＲＩＳ緩衝化食塩水）：９００ｍｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏ
に，６．０５７ｇＴＲＩＳおよび８．７７７ｇＮａＣｌを加える；ＭｉｌｌｉＱ
Ｈ2Ｏで総容量１Ｌとする。 １７． キナーゼ反応混合物：アッセイプレート（１００ウエル）１枚あたりの
量：１．０ｍｌキナーゼ緩衝液，２００μｇＧＳＴ−ζ，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏ
で最終容量８．０ｍｌとする。
【０８２１】方法： Ａ．ＬｃｋでコーティングしたＥＬＩＳＡプレートの調製 １． １００μｌの炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．６）中のヤギ抗マウスＩｇ
Ｇ２．０μｇ／ウエルで，４℃で一夜コーティングする。 ２． ウエルをＰＢＳで１回洗浄する。 ３． プレートを０．１５ｍｌのブロッキング緩衝液で室温で３０分間ブロッキ
ングする。 ４． プレートをＰＢＳで５回洗浄する。 ５． ０．１ｍｌＰＢＳ中の抗ｌｃｋ（モノクローナル抗体３Ａ５）を０．５μ
ｇ／ウエルで室温で１−２時間加える。 ６． プレートをＰＢＳで５回洗浄する。 ７． 溶解緩衝液中に希釈した，ｌｃｋでトランスフォームした酵母の溶解物を
２０μｇ／ウエルで加える（ウエルあたり総容量０．１ｍｌ）。プレートを４℃
で一夜振盪して活性の喪失を防止する。Ｂ．ホスホチロシン抗体でコーティングしたＥＬＩＳＡプレートの調製 １． ＵＢ４０プレート：１００μｌＰＢＳ中の１．０μｇ／ウエルＵＢ４０を
４℃で一夜加え，１５０μｌのブロッキング緩衝液で少なくとも１時間ブロッキ
ングする。Ｃ．キナーゼアッセイ法 １． 未結合蛋白質をプレートから除去し，プレートをＰＢＳで５回洗浄する。
２． ウエルあたり０．０８ｍｌのキナーゼ反応混合物（ウエルあたり，水で希
釈した１０μｌの１０Ｘキナーゼ緩衝液および２μｇＧＳＴ−ζを含む）を加え
る。 ３． １０％ＤＭＳＯを含有する水中で希釈した化合物１０μｌを加え，室温で
１５分間プレインキュベートする。 ４． 水中０．１ｍＭＡＴＰ（最終濃度１０μＭＡＴＰ）を１０μｌ／ウエルで
加えることによりキナーゼ反応を開始させる。 ５． ＥＬＩＳＡプレートを室温で６０分間振盪する。 ６． ウエルあたり１０μｌの０．５ＭＥＤＴＡを加えることによりキナーゼ反
応を停止させる。 ７． ９０μｌの上清を，上述のＢ節からのブロッキングした４Ｇ１０コーティ
ングＥＬＩＳＡプレートに移す。 ８． 振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。 ９． プレートをＴＢＳＴで５回洗浄する。 １０． １００μｌＴＢＳＴ中１：５０００に希釈したウサギ抗ＧＳＴ抗体とと
もに室温で３０分間インキュベートする。 １１． ウエルをＴＢＳＴで５回洗浄する。 １２． １００μｌのＴＢＳＴ中１：２０，０００に希釈したヤギ抗ウサギ−Ｉ
ｇＧ−ＨＲＰとともに室温で３０分間インキュベートする。 １３． ウエルをＴＢＳＴで５回洗浄する。 １４． ＴｕｒｂｏＴＭＢで発色させる。
【０８２２】実施例１９：生化学的ｃ−ｋｉｔアッセイ−ＥＬＩＳＡ Ａ．材料および試薬 １）ＨＮＴＧ：５Ｘ保存濃度：１００ｍＭ ＨＥＰＥＳｐＨ７．２，７５０ｍＭ
ＮａＣｌ，５０％グリセロール，２．５％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００． ２）ＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝化食塩水）：Ｇｉｂｃｏカタログ＃４５０−
１３００ＥＢ ３）１Ｘブロッキング緩衝液：１０ｍＭ ＴＲＩＳ−ｐＨ７．５，１％ＢＳＡ，
１００ｍＭ ＮａＣｌ，０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ ４）１Ｘキナーゼ緩衝液：２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ，１００ｍＭ ＮａＣｌ，１０
ｍＭ ＭｇＣｌ２，６ｍＭ ＭｎＣｌ２ ５）ＰＭＳＦ保存溶液＝１００ｍＭ（Ｓｉｇｍａカタログ＃Ｐ−７６２６） ６）１０ｍＭＡＴＰ（細菌起源）ＳｉｇｍａＡ−７６９９，５ｇ． ７）ＵＢ４０抗ホスホチロシンｍＡｂ（Ｔｅｒｒａｎｃｅ，Ｓｕｇｅｎから入手
可能） ８）ＨＲＰコンジュゲート化ヒツジ抗マウスＩｇＧ．（Ａｍｅｒｓｈａｍ ＮＡ
９３１） ９）ＡＢＴＳ（５Ｐｒｉｍｅ−３Ｐｒｉｍｅ７−５７９８４４） １０）ＴＲＩＳＨＣＬ：Ｆｉｓｈｅｒ ＢＰ１５２−５ １１）ＮａＣｌ：Ｆｉｓｈｅｒ Ｓ２７１−１０ １２）ＴｒｉｔｏｎＸ−１００：Ｆｉｓｈｅｒ ＢＰ１５１−１００ １３）Ｎａ3ＶＯ4：Ｆｉｓｈｅｒ Ｓ４５４−５０ １４）ＭｇＣｌ2：Ｆｉｓｈｅｒ Ｍ３３−５００ １５）ＭｎＣｌ2：Ｆｉｓｈｅｒ Ｍ８７−５００ １６）ＨＥＰＥＳ：Ｆｉｓｈｅｒ ＢＰ３１０−５００ １７）アルブミン，ウシ（ＢＳＡ）：ＳｉｇｍａＡ−８５５１ １８）ＴＢＳＴ緩衝液：５０ｍＭ ＴｒｉｓｐＨ７．２，１５０ｍＭ ＮａＣｌ
，０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００ １９）ヤギアフィニティー精製抗体ラビットＩｇＧ（全分子）：Ｃａｐｐｅｌ
５５６４１． ２０）抗ｋｉｔ（Ｃ−２０）ウサギポリクローナルＩｇＧ抗体：Ｓａｎｔａ Ｃ
ｒｕｚｓｃ−１６８ ２１）ｋｉｔ／ＣＨＯ細胞：ＧｙｒＢ／ｋｉｔを安定に発現するＣＨＯ細胞，１
ｍｇ／ｍｌのＧ４１８を補充した標準的ＣＨＯ培地で成長させる ２２）インドリノン化合物：インドリノン化合物は，以下の出願に記載されるよ
うに合成した：ＰＣＴ／ＵＳ９９／０６４６８（１９９９年３月２６日出願，Ｆ
ｏｎｇ， ｅｔ ａｌ．，表題”ＭＥＴＨＯＤＳ ＯＦ ＭＯＤＵＬＡＴＩＮＧ
ＴＹＲＯＳＩＮＥ ＰＲＯＴＥＩＮ ＫＩＮＡＳＥ”（Ｌｙｏｎ＆Ｌｙｏｎ書
類番号２３１／２５０ＰＣＴ，図面を含めその全体を本明細書の一部としてここ
に引用する）。
【０８２３】Ｂ．方法 以下の全ての工程は特に示さない限り室温で行う。すべてのＥＬＩＳＡプレー
ト洗浄はＴＢＳＴで４回すすぐことにより行う。ｋｉｔ細胞溶解 この方法は，レセプター捕捉の開始の１時間前に行う。 １）９５％以上コンフルエントの１５ｃｍ皿をＰＢＳで洗浄し，可能な限り吸引
する。 ２）１５ｃｍ皿１枚あたり１ｍＭＰＭＳＦを含む３ｍｌの１ｘＨＮＴＧで細胞を
溶解する。細胞をプレートから掻き取り，５０ｍｌ遠心管に移す。 ３）上清をプールし，氷上に１時間，時々ボルテックスしながら放置する。これ
を行わないと，バックグラウンドが増加する（約３倍高くなる）。 ４）管を平衡させ，１０，０００ｘｇで１０分間，４℃で遠心分離する。蛋白質
測定のためにアリコートを取り出す。 ５）蛋白質測定用ＳＯＰにしたがって，ビシンコニン酸（ＢＣＡ）法を用いて蛋
白質測定を行うＥＬＩＳＡ法 １）Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートをウエルあたり２μｇのＰＢ
Ｓ中のヤギ抗ウサギ抗体でウエル総容量１００μｌで被覆する。４℃で一夜保存
する。 ２）プレートを逆さにして液体を除去することにより未結合ヤギ抗ウサギ抗体を
除去する。 ３）１００μｌのブロッキング緩衝液を各ウエルに加える。室温で６０分間振盪
する。 ４）ＴＢＳＴで４回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて過剰
の液体および泡を除去する。 ５）ウエルあたり０．２μｇのＴＢＳＴ中に希釈したウサギ抗−ｋｉｔ抗体を加
え，ウエルの総容量を１００μｌとする。室温で６０分間振盪する。 ６）溶解物をＨＮＴＧで希釈する（１８０μｇの溶解物／１００μｌ）。 ７）１００μｌの希釈溶解物を各ウエルに加える。室温で６０分間振盪する。 ８）ＴＢＳＴで４回洗浄する。プレートをペーパータオルの上で軽くたたいて過
剰の液体および泡を除去する。 ９）化合物／抽出物（または記載される他のもの）をポリプロピレン９６ウエル
プレート中で１ｘキナーゼ緩衝液および５μｌのＡＴＰ中で希釈する。 １０）１００μｌの希釈薬剤をＥＬＩＳＡプレートのウエルに移す。振盪しなが
ら室温で６０分間インキュベートする。 １１）１０μｌの０．５ＭＥＤＴＡを加えて反応を停止させる。この段階でプレ
ートはある程度の時間安定である。 １２）ＴＢＳＴで４回洗浄する。プレートをペーパータオルの上で軽くたたいて
過剰の液体および泡を除去する。 １３）ウエルあたり１００μｌのＵＢ４０（ＴＢＳＴ中１：２０００希釈）を加
える。振盪しながら室温で６０分間インキュベートする。 １４）ＴＢＳＴで４回洗浄する。プレートをペーパータオルの上で軽くたたいて
過剰の液体および泡を除去する。 １５）ウエルあたり１００μｌのヒツジ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ（ＴＢＳＴ中１
：５０００希釈）を加える。振盪しながら室温で６０分間インキュベートする。 １６）ＴＢＳＴで４回洗浄する。プレートをペーパータオルの上で軽くたたいて
過剰の液体および泡を除去する。 １７）ウエルあたり１００μｌのＡＢＴＳを加える。振盪しながら１５−３０分
間インキュベートする。 １８）ＤｙｎａｔｅｃｈＭＲ７０００ＥＬＩＳＡリーダーでアッセイを読む。試
験フィルター＝４１０ｎｍ，参照フィルター＝６３０ｎｍ。
【０８２４】実施例２０：ＲＡＦのリン酸化機能を測定するアッセイ 以下のアッセイは，ＲＡＦにより触媒される，その標的蛋白質ＭＥＫならびに
ＭＥＫの標的であるＭＡＰＫのリン酸化の量を測定する。ＲＡＦ遺伝子配列は，
Ｂｏｎｎｅｒら（１９８５，Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：１４００−
１４０７）に記載されており，多くの遺伝子配列データバンクにおいて容易にア
クセス可能である。核酸ベクターの構築および本発明のこの部分において用いら
れる細胞株は，Ｍｏｒｒｉｓｏｎら（１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ
．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：８８５５−８８５９）にすべて記載されている。材料および試薬 １． Ｓｆ９（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞；ＧＩＢＣ
Ｏ−ＢＲＬ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ ２． ＲＩＰＡ緩衝液：２０ｍＭＴｒｉｓ／ＨＣ１ｐＨ７．４，１３７ｍＭＮａ
Ｃｌ，１０％グリセロール，１ｍＭＰＭＳＦ，５ｍｇ／Ｌアプロテニン，０．５
％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００； ３． チオレドキシン−ＭＥＫ融合蛋白質（Ｔ−ＭＥＫ）：Ｔ−ＭＥＫ 発現およびアフィニティークロマトグラフィーによる精製は，製造元の方法に従
って実施する。カタログ＃Ｋ３５０−０１およびＲ35０−４０，Ｉｎｖｉｔｒｏ
ｇｅｎＣｏｒｐ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ ４． Ｈｉｓ−ＭＡＰＫ（ＥＲＫ２）；Ｈｉｓ−タグＭＡＰＫは，Ｈｉｓ−ＭＡ
ＰＫをコードするｐＵＣ１８ベクターによりトランスフォームしたＸＬ１ Ｂｌ
ｕｅ細胞中で発現させる。Ｈｉｓ−ＭＡＰＫはＮｉ−アフィニティークロマトグ
ラフィーにより精製する。Ｃａｔ＃２７−４９４９−０１，Ｐｈａｒｍａｃｉａ
，Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ，本明細書に記載されたとおり。 ５． ヤギ抗マウスＩｇＧ：Ｊａｃｋｓｏｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｅ
ｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ．カタログ，＃５１５−００６−００８，Ｌｏｔ＃２８
５６３ ６． ＲＡＦ−１蛋白質キナーゼ特異的抗体：ＵＲＰ２６５３，ＵＢＩ ７． コーティング緩衝液：ＰＢＳ；リン酸緩衝化食塩水，ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ
，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ ８． 洗浄緩衝液：ＴＢＳＴ−５０ｍＭＴｒｉｓ／ＨＣＬｐＨ７．２，１５０ｍ
ＭＮａＣｌ，０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ ９． ブロッキング緩衝液：ＴＢＳＴ，０．１％エタノールアミンｐＨ７．４ １０． ＤＭＳＯ，Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ １１． キナーゼ緩衝液（ＫＢ）：２０ｍＭＨＥＰＥＳ／ＨＣｌ（ｐＨ７．２）
，１５０ｍＭＮａＣｌ，０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００，１ｍＭＰＭＳＦ，５
ｍｇ／Ｌアプロテニン，７５ｍＭオルトバナジウム酸ナトリウム，０．５ＭＭＤ
ＴＴおよび１０ｍＭＭｇＣｌ2 １２． ＡＴＰ混合物：ｌ００ｍＭＭｇＣｌ2，３００ｍＭＡＴＰ，１０ｍＣｉ
γ33ＰＡＴＰ（ＤｕＰｏｎｔ−ＮＥＮ）／ｍＬ １３ 停止溶液：１％リン酸；Ｆｉｓｈｅｒ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ １４． Ｗａｌｌａｃリン酸セルロースフィルターマット；Ｗａｌｌａｃ，Ｔｕ
ｒｋｕ，Ｆｉｎｎｌａｎｄ １５． フィルター洗浄溶液：１％リン酸，Ｆｉｓｈｅｒ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇ
ｈ，ＰＡ １６． Ｔｏｍｔｅｃプレート回収機，Ｗａｌｌａｃ，Ｔｕｒｋｕ，Ｆｉｎｎｌ
ａｎｄ １７． Ｗａｌｌａｃベータプレートリーダー＃１２０５，Ｗａｌｌａｃ，Ｔｕ
ｒｋｕ，Ｆｉｎｎｌａｎｄ １８． 化合物用に，ＮＵＮＣ９６ウエルＶ底ポリプロピレンプレート，Ａｐｐ
ｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ＃ＡＳ−７２０９２
【０８２５】プロトコル 以下のすべての工程は，特に指示しないかぎり，室温で実施した。 １． ＥＬＩＳＡプレートコーティング：ＥＬＩＳＡウエルを１００ｍｌのヤギ
抗マウスアフィニティー精製抗血清（１ｍｇ／ｌ００ｍＬコーティング緩衝液）
で４℃で一夜コーティングする。ＥＬＩＳＡプレートは，４℃で保存したとき，
２週間使用することができる。 ２． プレートを逆さにして液体を除去する。１００ｍＬのブロッキング溶液を
加え，３０分間インキュベートする。 ３． ブロッキング溶液を除去し，洗浄緩衝液で４回洗浄する。プレートをペー
パータオル上で軽くたたいて過剰の液体を除去する。 ４． 各ウエルに１ｍｇのＲＡＦ−１特異的抗体を加え，１時間インキュベート
する。工程３に記載したように洗浄する。 ５． ＲＡＳ／ＲＡＦで感染させたＳｆ９細胞からの溶解物を解凍し，ＴＢＳＴ
で１０ｍｇ／１００ｍＬに希釈する。１０ｍｇの希釈溶解物をウエルに加え，１
時間インキュベートする。インキュベーションの間，プレートを振盪する。陰性
対照には溶解物を加えない。各ウイルスにつきＭＯＩ５で細胞を組換えバキュロ
ウイルスで感染させた後，ＲＡＳ／ＲＡＦで感染させたＳｆ９昆虫細胞からの溶
解物を調製し，４８時間後に回収する。細胞をＰＢＳで１回洗浄し，ＲＩＰＡ緩
衝液中で溶解する。不溶物質を遠心分離（５分間，１００００ｘｇ）により除去
する。溶解物のアリコートをドライアイス／エタノール中で凍結し，使用まで−
８０℃で保存する。 ６． 非結合物質を除去し，上に簡単に述べたように洗浄する（工程３）。 ７． ウエルあたり２ｍｇのＴ−ＭＥＫおよび２ｍｇのＨｉｓ−ＭＡＥＰＫを加
え，キナーゼ緩衝液で容量を４０ｍＬに調節する。細胞抽出物からＴ−ＭＥＫお
よびＭＡＰＫを精製する方法は，本明細書の実施例に記載される。 ８． 化合物（保存溶液１０ｍｇ／ｍＬＤＭＳＯ）または抽出物をＴＢＳＴプラ
ス１％ＤＭＳＯ中であらかじめ２０倍に希釈する。５ｍＬのあらかじめ希釈した
化合物／抽出物を工程６に記載したウエルに加える。２０分間インキュベートす
る。対照には薬剤を加えない。 ９． ５ｍＬＡＴＰミックスを加えることによりキナーゼ反応を開始する。イン
キュベーションの間，ＥＬＩＳＡプレート振盪器でプレートを振盪する。 １０． ６０分後，３０ｍＬの停止溶液を各ウエルに加えることによりキナーゼ
反応を停止する。 １１． ホスホセルロースマットおよびＥＬＩＳＡプレートをＴｏｍｔｅｃプレ
ート回収機中に置く。フィルターを回収し，フィルター洗浄溶液で製造元の推奨
にしたがってこれを洗浄する。フィルターマットを乾燥する。フィルターマット
を密封し，ケース中に置く。ケースを放射活性検出装置に入れ，フィルターマッ
ト上の放射活性リンを定量する。 あるいは，アッセイプレートの個々のウエルからの４０ｍＬのアリコートを，
ホスホセルロースフィルターマットの対応する位置に移すことができる。フィル
ターを風乾した後，フィルターをトレイ中に置く。トレイを穏やかにロックし，
洗浄溶液を１５分間ごとに１時間交換する。フィルターマットを風乾する。フィ
ルターマットを密封し，サンプル中の放射活性リンを測定するのに適当なケース
中に入れる。ケースを検出装置に入れ，フィルターマット上の放射活性リンを定
量する。
【０８２６】実施例２１：ＣＤＫ２／サイクリンＡ−阻害アッセイ このアッセイは，外部基質中のＣＤＫ２の蛋白質キナーゼ活性を測定する。材料および試薬： １． 緩衝液Ａ（８０ｍＭＴｒｉｓ（ｐＨ７．２），４０ｍＭＭｇＣｌ2）：４
．８４ｇＴｒｉｓ（Ｆ．Ｗ．＝１２１．１ｇ／ｍｏｌ），４．０７ｇＭｇＣｌ2
（Ｆ．Ｗ．＝２０３．３１ｇ／ｍｏｌ），５００ｍｌＨ2Ｏ中に溶解。ＨＣｌで
ｐＨを７．２に調節する。 ２． ヒストンＨ１溶液（０．４５ｍｇ／ｍｌヒストンＨ１および２０ｍＭＨＥ
ＰＥＳ（ｐＨ７．２）：１１．１１１ｍｌの２０ｍＭＨＥＰＥＳｐＨ７．２（４
７７ｍｇＨＥＰＥＳ（Ｆ．Ｗ．＝２３８．３ｇ／ｍｏｌ））中の５ｍｇヒストン
Ｈ１（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ），１００ｍｌｄｄＨ2Ｏ中に
溶解する。１ｍｌアリコートとして−８０℃で保存する。 ３． ＡＴＰ溶液（６０μＭＡＴＰ，３００μｇ／ｍｌＢＳＡ，３ｍＭＤＴＴ）
：１２０μｌの１０ｍＭＡＴＰ，６００μｌの１０ｍｇ／ｍｌＢＳＡで２０ｍｌ
とし，１ｍｌアリコートとして−８０℃で保存する。 ４． ＣＤＫ２溶液：ｃｄｋ２／サイクリンＡ，１０ｍＭＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．
２，２５ｍＭＮａＣｌ，０．５ｍＭＤＴＴ，１０％グリセロール中。９μｌアリ
コートとして−８０℃で保存する。
【０８２７】アッセイの説明 １． 阻害剤の溶液を，ｄｄＨ2Ｏ／１５％ＤＭＳＯ（ｖ／ｖ）で所望の最終ア
ッセイ濃度の３倍で調製する。 ２． ２０μｌの阻害剤をポリプロピレンの９６ウエルプレートのウエルに加え
る（または陽性および陰性対照については２０μｌの１５％ＤＭＳＯ）。 ３． ヒストンＨ１溶液（１ｍｌ／プレート），ＡＴＰ溶液（１ｍｌ／プレート
プラス陰性対照について１アリコート），およびＣＤＫ２溶液（９μｌ／プレー
ト）を解凍する。ＣＤＫ２は使用まで氷上に保存する。ＣＤＫ２溶液を適当にア
リコートに分けて，凍結解凍サイクルの繰り返しを避ける。 ４． ９μｌＣＤＫ２溶液を２．１ｍｌ緩衝液Ａ（プレートあたり）で希釈し，
混合し，２０μｌを各ウエルに加える。 ５． １ｍｌヒストンＨ１溶液を１ｍｌＡＴＰ溶液（プレートあたり）と混合し
て，１０ｍｌねじ蓋管に入れる。γ33Ｐ ＡＴＰを０．１５μＣｉ／２０μｌ（
アッセイ中，０．１５μＣｉ／ウエル）の濃度となるよう加える。ＢＳＡの泡を
避けるよう注意深く混合する。２０μｌを適当なウエルに加える。プレートをプ
レート振盪器上で混合する。陰性対照については，等量の２０ｍＭＨＥＰＥＳ（
ｐＨ７．２）とＡＴＰ溶液とを混合し，γ33Ｐ ＡＴＰを０．１５μＣｉ／２０
μｌ溶液の濃度となるように加える。２０μｌを適当なウエルに加える。 ６． 反応を６０分間進行させる。 ７． ３５μｌの１０％ＴＣＡを各ウエルに加える。プレートをプレート振盪器
上で混合する。 ８． ４０μｌの各サンプルをＰ３０フィルターマットの升目上にスポットする
。マットを乾燥させる（約１０−２０分間）。 ９． フィルターマットを２５０ｍｌの１％リン酸（ｄｄＨ2Ｏ １ｌあたり１
０ｍｌリン酸）で４Ｘ10分間洗浄する。 １０． フィルターマットをベータプレートリーダーで計数する。 細胞／生物学的アッセイ
【０８２８】実施例２２：ＰＤＧＦ−誘導性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ 材料および試薬 ： １． ＰＤＧＦ：ヒトＰＤＧＦ Ｂ／Ｂ；１２７６−９５６，Ｂｏｅｈｒｉｎｇ
ｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ ２． ＢｒｄＵ標識試薬：１０ｍＭ，ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中，Ｃａｔ．Ｎｏ．
１６４７２２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ ３． ＦｉｘＤｅｎａｔ：固定溶液（即使用可），Ｃａｔ．Ｎｏ．１６４７２２
９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ ４． 抗ＢｒｄＵ−ＰＯＤ：ペルオキシダーゼとコンジュゲート化したマウスモ
ノクローナル抗体，Ｃａｔ．Ｎｏ．１６４７２２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍ
ａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ ５． ＴＭＢ基質溶液：テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ），即使用可，Ｃａｔ
．Ｎｏ．１６４７２２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍ
ａｎｙ ６． ＰＢＳ洗浄溶液：１ＸＰＢＳ，ｐＨ７．４（Ｓｕｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｒｅ
ｄｗｏｏｄ Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ） ７． アルブミン，ウシ（ＢＳＡ）：画分Ｖ粉末；Ａ−８５５１，Ｓｉｇｍａ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，ＵＳＡ ８．ヒトＰＤＧＦ−Ｒを発現するよう遺伝子工学処理された３Ｔ３細胞株
【０８２９】プロトコル １． 細胞をＤＭＥＭ，１０％ＣＳ，２ｍＭＧｌｎ中で，９６ウエルプレートに
８０００細胞／ウエルで播種する。細胞を５％ＣＯ2中で３７℃で一夜インキュ
ベートする。 ２． ２４時間後，細胞をＰＢＳで洗浄し，次に無血清培地（０％ＣＳ ＤＭＥ
Ｍ，０．１％ＢＳＡ）中で２４時間血清飢餓とする。 ３． 第３日に，リガンド（ＰＤＧＦ，３．８ｎＭ，ＤＭＥＭ，０．１％ＢＳＡ
中で調製）および試験化合物を細胞に同時に加える。陰性対照ウエルには，無血
清ＤＭＥＭおよび０．１％ＢＳＡのみを加える；陽性対照細胞には，リガンド（
ＰＤＧＦ）を加えるが試験化合物を加えない。試験化合物は，９６ウエルプレー
ト中で無血清ＤＭＥＭ中でリガンドとともに調製し，連続希釈して７種類の試験
濃度とする。 ４． リガンド活性化の２０時間後，希釈ＢｒｄＵ標識試薬（ＤＭＥＭ，０．１
％ＢＳＡ中１：１００）を加え，細胞をＢｒｄＵ（最終濃度＝１０μＭ）ととも
に１．５時間インキュベートする。 ５． 標識試薬とともにインキュベーションした後，デカントし，逆さにしたプ
レートをペーパータオル上で軽くたたくことにより，培地を除去する。ＦｉｘＤ
ｅｎａｔ溶液を加え（５０μｌ／ウエル），プレートをプレート振盪器上で室温
で４５分間インキュベートする。 ６． デカントし，逆さにしたプレートをペーパータオル上で軽くたたくことに
より，ＦｉｘＤｅｎａｔ溶液をよく除去する。ブロッキング溶液としてミルクを
加え（ＰＢＳ中５％脱水ミルク，２００μｌ／ウエル），プレートをプレート振
盪器上で室温で３０分間インキュベートする。 ７． デカントによりブロッキング溶液を除去し，ウエルをＰＢＳで１回洗浄す
る。抗ＢｒｄＵ−ＰＯＤ溶液（ＰＢＳ，１％ＢＳＡ中１：１００希釈）を加え（
１００μｌ／ウエル），プレートをプレート振盪器上で室温で９０分間インキュ
ベートする。 ８． デカントし，ウエルをＰＢＳで５回すすぐことにより抗体コンジュゲート
をよく除去し，プレートを逆さにしてペーパータオル上で軽くたたくことにより
乾燥させる。 ９． ＴＭＢ基質溶液を加え（１００μｌ／ウエル），プレート振盪器で室温で
２０分間，発色が光度計による検出に十分となるまでインキュベートする。 １０． サンプルの吸光度は，Ｄｙｎａｔｅｃｈ ＥＬＩＳＡプレートリーダー
で４１０ｎｍで測定する（参照波長として４９０ｎｍで読みとるフィルターを用
いる"二波長"モード）。
【０８３０】実施例２３：ＥＧＦ−誘導性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ 材料および試薬 １． ＥＧＦ：マウスＥＧＦ，２０１；Ｔｏｙｏｂｏ，Ｃｏ．，Ｌｔｄ．Ｊａｐ
ａｎ ２． ＢｒｄＵ標識試薬：１０ｍＭ，ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中，Ｃａｔ．Ｎｏ．
１６４７２２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ ３． ＦｉｘＤｅｎａｔ：固定溶液（即使用可），Ｃａｔ．Ｎｏ．１６４７２２
９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ ４． 抗ＢｒｄＵ−ＰＯＤ：ペルオキシダーゼとコンジュゲート化したマウスモ
ノクローナル抗体，Ｃａｔ．Ｎｏ．１６４７２２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍ
ａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ ５． ＴＭＢ基質溶液：テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ），即使用可，Ｃａｔ
．Ｎｏ．１６４７２２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍ
ａｎｙ ６． ＰＢＳ洗浄溶液：１ＸＰＢＳ，ｐＨ７．４（Ｓｕｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｒｅ
ｄｗｏｏｄＣｉｔｙ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ） ７． アルブミン，ウシ（ＢＳＡ）：画分Ｖ粉末；Ａ−８５５１，Ｓｉｇｍａ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，ＵＳＡ ８． ヒトＥＧＦ−Ｒを発現するよう遺伝子工学処理された３Ｔ３細胞株
【０８３１】プロトコル １． 細胞をＤＭＥＭ中１０％ＣＳ，２ｍＭＧｌｎで，９６ウエルプレート中で
８０００細胞／ウエルで播種する。細胞を５％ＣＯ2中で３７℃で一夜インキュ
ベートする。 ２． ２４時間後，細胞をＰＢＳで洗浄し，次に無血清培地（０％ＣＳ ＤＭＥ
Ｍ，０．１％ＢＳＡ）中で２４時間血清飢餓とする。 ３． 第３日に，リガンド（ＥＧＦ，２ｎＭ，ＤＭＥＭ，０．１％ＢＳＡ中で調
製）および試験化合物を細胞に同時に加える。陰性対照ウエルには０．１％ＢＳ
Ａを含む無血清ＤＭＥＭのみを加える。陽性対照細胞には，リガンド（ＥＧＦ）
を加えるが試験化合物を加えない。試験化合物は，９６ウエルプレート中で，無
血清ＤＭＥＭ中でリガンドとともに調製し，連続希釈して７種類の試験濃度とす
る。 ４． リガンド活性化の２０時間後，希釈したＢｒｄＵ標識試薬（ＤＭＥＭ中１
：１００，０．１％ＢＳＡ）を加え，細胞をＢｒｄＵ（最終濃度＝１０μＭ）と
ともに１．５時間インキュベートする。 ５． 標識試薬とともにインキュベートした後，デカントして逆さにしたプレー
トをペーパータオル上で軽くたたくことにより培地を除去する。ＦｉｘＤｅｎａ
ｔ溶液を加え（５０μｌ／ウエル），プレートをプレート振盪器で室温で４５分
間インキュベートする。 ６． デカントして逆さにしたプレートをペーパータオル上で軽くたたくことに
よりＦｉｘＤｅｎａｔ溶液をよく除去する。ブロッキング溶液としてミルクを加
え（ＰＢＳ中５％脱水ミルク，２００μｌ／ウエル），プレートをプレート振盪
器で室温で３０分間インキュベートする。 ７． デカントによりブロッキング溶液を除去し，ウエルをＰＢＳで１回洗浄す
る。抗ＢｒｄＵ−ＰＯＤ溶液（ＰＢＳ中１：１００希釈，１％ＢＳＡ）を加え（
１００μｌ／ウエル），プレートをプレート振盪器で室温で９０分間インキュベ
ートする。 ８． デカントし，ウエルをＰＢＳで５回すすぐことにより抗体コンジュゲート
をよく除去し，プレートを逆さにしてペーパータオル上で軽くたたくことにより
乾燥させる。 ９． ＴＭＢ基質溶液を加え（１００μｌ／ウエル），プレート振盪器で室温で
２０分間，発色が高度計検出に十分となるまでインキュベートする。 １０． サンプルの吸光度は，Ｄｙｎａｔｅｃｈ ＥＬＩＳＡプレートリーダー
で，４１０ｎｍ（参照波長として４９０ｎｍを読むフィルターを用いる"二波長"
モード”で）測定する。
【０８３２】実施例２４：ＥＧＦ誘導性ＨＥＲ２推進ＢｒｄＵ取り込み 材料および試薬 ： １． ＥＧＦ：マウスＥＧＦ，２０１；Ｔｏｙｏｂｏ，Ｃｏ．，Ｌｔｄ．Ｊａｐ
ａｎ ２．ＢｒｄＵ標識試薬：１０ｍＭ，ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中，Ｃａｔ．Ｎｏ．１
６４７２２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ ３． ＦｉｘＤｅｎａｔ：固定溶液（即使用可），Ｃａｔ．Ｎｏ．１６４７２２
９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ ４． 抗ＢｒｄＵ−ＰＯＤ：ペルオキシダーゼとコンジュゲート化したマウスモ
ノクローナル抗体，Ｃａｔ．Ｎｏ．１６４７２２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍ
ａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ ５． ＴＭＢ基質溶液：テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ），即使用可，Ｃａｔ
．Ｎｏ．１６４７２２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍ
ａｎｙ ６． ＰＢＳ洗浄溶液：１ＸＰＢＳ，ｐＨ７．４，自社製。 ７． アルブミン，ウシ（ＢＳＡ）：画分Ｖ粉末；Ａ−８５５１，Ｓｉｇｍａ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，ＵＳＡ ８． ＥＧＦ−Ｒの細胞外ドメインおよびＨｅｒ２の細胞内ドメインを有するキ
メラレセプターを発現するよう遺伝子工学処理された３Ｔ３細胞株
【０８３３】プロトコル ： １． 細胞をＤＭＥＭ，１０％ＣＳ，２ｍＭＧｌｎ中で９６−ウエルプレートに
８０００細胞／ウエルで播種する。細胞を３７℃で５％ＣＯ2中で一夜インキュ
ベートする。 ２． ２４時間後，細胞をＰＢＳで洗浄し，次に無血清培地（０％ＣＳ ＤＭＥ
Ｍ，０．１％ＢＳＡを含む）中で２４時間血清飢餓とする。 ３． 第３日に，リガンド（ＥＧＦ＝２ｎＭ，０．１％ＢＳＡを含むＤＭＥＭ中
で調製）および試験化合物を細胞に同時に加える。陰性対照ウエルには無血清Ｄ
ＭＥＭ，０．１％ＢＳＡのみを加える；陽性対照細胞にはリガンド（ＥＧＦ）を
加えるが試験化合物は加えない。試験化合物は，無血清ＤＭＥＭ中でリガンドと
ともに９６ウエルプレート中で調製し，連続希釈して７種類の試験濃度とする。
４． リガンド活性化の２０時間後，希釈ＢｒｄＵ標識試薬（ＤＭＥＭ中１：１
００，０．１％ＢＳＡ）を加え，細胞をＢｒｄＵ（最終濃度＝１０μＭ）ととも
に１．５時間インキュベートする。 ５． 標識試薬とともにインキュベートした後，デカントして逆さにしたプレー
トをペーパータオル上で軽くたたくことにより培地を除去する。ＦｉｘＤｅｎａ
ｔ溶液を加え（５０μｌ／ウエル），プレートを室温でプレート振盪器で４５分
間インキュベートする。 ６． デカントし，逆さにしたプレートをペーパータオル上で軽くたたくことに
より，ＦｉｘＤｅｎａｔ溶液をよく除去する。ブロッキング溶液としてミルクを
加え（ＰＢＳ中５％脱水ミルク，２００μｌ／ウエル），プレートをプレート振
盪器上で室温で３０分間インキュベートする。 ７． デカントによりブロッキング溶液を除去し，ウエルをＰＢＳで１回洗浄す
る。抗ＢｒｄＵ−ＰＯＤ溶液（ＰＢＳ，１％ＢＳＡ中１：１００希釈）を加え（
１００μｌ／ウエル），プレートをプレート振盪器上で９０分間室温でインキュ
ベートする。 ８． デカントし，ウエルをＰＢＳで５回すすぐことにより抗体コンジュゲート
をよく除去し，プレートを逆さにしてペーパータオル上で軽くたたくことにより
乾燥させる。 ９． ＴＭＢ基質溶液を加え（１００μｌ／ウエル），プレート振盪器で室温で
２０分間，発色が光度計検出に十分となるまでインキュベートする。 １０． サンプルの吸光度を，Ｄｙｎａｔｅｃｈ ＥＬＩＳＡプレートリーダー
で，４１０ｎｍで（参照波長として４９０ｎｍで読むフィルターを用いる"二波
長"モードで）測定する。
【０８３４】実施例２５：ＩＧＦｌ−誘導性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ 材料および試薬 ： １． ＩＧＦ１リガンド：ヒト，組換え；Ｇ５１１，Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ
，ＵＳＡ ２． ＢｒｄＵ標識試薬：１０ｍＭ，ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中，Ｃａｔ．Ｎｏ．
１６４７２２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ ３． ＦｉｘＤｅｎａｔ：固定溶液（即使用可），Ｃａｔ．Ｎｏ．１６４７２２
９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ ４． 抗ＢｒｄＵ−ＰＯＤ：ペルオキシダーゼとコンジュゲート化したマウスモ
ノクローナル抗体，Ｃａｔ．Ｎｏ．１６４７２２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍ
ａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ ５． ＴＭＢ基質溶液：テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ），即使用可，Ｃａｔ
．Ｎｏ．１６４７２２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍ
ａｎｙ ６． ＰＢＳ洗浄溶液：１ＸＰＢＳ，ｐＨ７．４（Ｓｕｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｒｅ
ｄｗｏｏｄ Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ） ７． アルブミン，ウシ（ＢＳＡ）：画分Ｖ粉末；Ａ−８５５１，Ｓｉｇｍａ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，ＵＳＡ ８． ヒトＩＧＦ−１レセプターを発現するよう遺伝子工学処理された３Ｔ３細
胞株
【０８３５】プロトコル ： １． 細胞をＤＭＥＭ，１０％ＣＳ，２ｍＭＧｌｎ中で９６−ウエルプレートに
８０００細胞／ウエルで播種する。細胞を５％ＣＯ2中，３７℃で一夜インキュ
ベートする。 ２． ２４時間後，細胞をＰＢＳで洗浄し，次に無血清培地（０％ＣＳ ＤＭＥ
Ｍ，０．１％ＢＳＡ）中で２４時間血清飢餓とする ３． 第３日に，リガンド（ＩＧＦ１＝３．３ｎＭ，０．１％ＢＳＡを含むＤＭ
ＥＭ中で調製）および試験化合物を細胞に同時に加える。陰性対照ウエルには０
．１％ＢＳＡを含む無血清ＤＭＥＭのみを加える。陽性対照細胞にはリガンド（
ＩＧＦ１）を加えるが試験化合物を加えない。試験化合物は，９６ウエルプレー
トで無血清ＤＭＥＭ中でリガンドとともに調製し，連続希釈して７種類の試験濃
度とする。 ４． リガンド活性化の１６時間後，希釈ＢｒｄＵ標識試薬（ＤＭＥＭ，０．１
％ＢＳＡ中１：１００）を加え，細胞をＢｒｄＵ（最終濃度＝１０μＭ）ととも
に１．５時間インキュベートする。 ５． 標識試薬とともにインキュベーションした後，デカントし，逆さにしたプ
レートをペーパータオル上で軽くたたくことにより培地を除去する。ＦｉｘＤｅ
ｎａｔ溶液を加え（５０μｌ／ウエル），プレートをプレート振盪器上で室温で
４５分間インキュベートする。 ６． デカントし，逆さにしたプレートをペーパータオル上で軽くたたくことに
よりＦｉｘＤｅｎａｔ溶液をよく除去する。ブロッキング溶液としてミルクを加
え（ＰＢＳ中５％脱水ミルク，２００μｌ／ウエル），プレートをプレート振盪
器上で室温で３０分間インキュベートする。 ７． ブロッキング溶液をデカントにより除去し，ウエルをＰＢＳで１回洗浄す
る。抗ＢｒｄＵ−ＰＯＤ溶液（ＰＢＳ，１％ＢＳＡ中１：１００希釈）を加え（
１００μｌ／ウエル），プレートをプレート振盪器上で室温で９０分間インキュ
ベートする。 ８． デカントし，ウエルをＰＢＳで５回すすぐことにより抗体コンジュゲート
をよく除去し，プレートを逆さにしペーパータオル上で軽くたたくことにより乾
燥する。 ９． ＴＭＢ基質溶液を加え（１００μｌ／ウエル），プレート振盪器上で室温
で２０分間，発色が光度計検出に十分となるまでインキュベートする。 １０． サンプルの吸光度は，Ｄｙｎａｔｅｃｈ ＥＬＩＳＡプレートリーダー
で，４１０ｎｍ（参照波長として４９０ｎｍで読むフィルターを用いる"二波長"
モード）で測定する。
【０８３６】実施例２６：ＨＵＶ−ＥＣ−Ｃアッセイ また，以下のプロトコルを用いて，ＰＤＧＦ−Ｒ，ＦＧＦ−Ｒ，ＶＥＧＦ，ａ
ＦＧＦまたはＦｌｋ−１／ＫＤＲ（これらはすべてＨＵＶ−ＥＣ細胞により天然
に発現されている）に対する化合物の活性を測定することができる。第０日 １． ＨＵＶ−ＥＣ−Ｃ細胞（ヒト臍静脈内皮細胞，（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙ
ｐｅ Ｃｕｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ；カタログＮｏ．１７３０ＣＲＬ）
を洗浄し，トリプシン処理する。ダルベッコリン酸緩衝化食塩水（Ｄ−ＰＢＳ；
Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ；カタログＮｏ．１４１９０−０２９から入手）で２回，約
１ｍｌ／１０ｃｍ2組織培養フラスコで洗浄する。非酵素細胞解離溶液（Ｓｉｇ
ｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ；カタログＮｏ．Ｃ−１５４４）中で
０．０５％トリプシン−ＥＤＴＡでトリプシン処理する。０．０５％トリプシン
は，０．２５％トリプシン／１ｍＭＥＤＴＡ（Ｇｉｂｃｏ；カタログＮｏ．２５
２００−０４９）を細胞解離溶液中で希釈することにより作成する。約１ｍｌ／
２５−３０ｃｍ2組織培養フラスコで３７℃で約５分間トリプシン処理する。細
胞をフラスコからはがした後，等量のアッセイ培地を加え，５０ｍｌ滅菌遠心分
離管（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；カタログＮｏ．０５−５３９−６
）に移す。 ２． ５０ｍｌ滅菌遠心分離管中にアッセイ培地を加えることにより，細胞を約
３５ｍｌのアッセイ培地で洗浄し，約２００ｇで１０分間遠心分離し，上清を吸
引し，３５ｍｌのＤ−ＰＢＳに再懸濁する。Ｄ−ＰＢＳでさらに２回洗浄し，細
胞を約１ｍｌ／組織培養フラスコ１５ｃｍ2のアッセイ培地に再懸濁する。アッ
セイ培地は，Ｆ１２Ｋ培地（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ；カタログＮｏ．２１１２７−
０１４）＋０．５％熱不活性化ウシ胎児血清からなる。Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｕ
ｎｔｅｒ（商標）（Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．）で細
胞を計数し，アッセイ培地を細胞に加えて０．８−１．０ｘ１０5細胞／ｍｌの
濃度とする。 ３． 細胞を９６ウエル平底プレートに１００μｌ／ウエルまたは０．８−１．
０ｘ１０4細胞／ウエルで加える；３７℃，５％ＣＯ2で約２４時間インキュベー
トする。
【０８３７】第１日 １． 試験化合物の２倍滴定を別々の９６ウエルプレート中に作成する。一般に
，５０μＭから０μＭまで。上述の第０日，工程２と同じアッセイ培地を用いる
。滴定は，９０μｌ／ウエルの試験化合物を２００μＭ（４Ｘ最終ウエル濃度）
で特定のプレートカラムの最上のウエルに加えることにより行う。試験化合物保
存液濃度は通常ＤＭＳＯ中２０ｍＭであるため，２００μＭの薬剤濃度は２％Ｄ
ＭＳＯを含む。 したがって，ＤＭＳＯ濃度を一定に保持しながら薬剤を希釈するために，アッ
セイ培地中（Ｆ１２Ｋ＋０．５％ウシ胎児血清）２％ＤＭＳＯとした希釈剤を，
試験化合物滴定の希釈剤として用いる。この希釈物をカラム中の残りのウエルに
６０μｌ／ウエルで加える。カラムの最上ウエル中の１２０μｌの２００μＭ試
験化合物希釈物から６０μｌを採取し，カラムの第２のウエル中の６０μｌと混
合する。このウエルから６０μｌを採取し，カラム中の第３のウエル中の６０μ
ｌと混合し，２倍滴定が完了するまでこれを続ける。最後から２番目のウエルが
混合されたとき，このウエル中の１２０μｌの６０μｌを採取し，これを廃棄す
る。最後のウエルには薬剤非含有対照として６０μｌのＤＭＳＯ／培地希釈物を
加える。以下のアッセイの，滴定する試験化合物の三重のウエルに十分な９つの
カラムを作成する：（１）ＶＥＧＦ（Ｐｅｐｒｏ Ｔｅｃｈ Ｉｎｃ．，から入
手，カタログＮｏ．１００−２００，（２）内皮細胞成長因子（ＥＣＧＦ）（酸
性繊維芽細胞成長因子またはａＦＧＦとしても知られる）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅ
ｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａから入手，カタログＮｏ．１４３
９６００）；または（３）ヒトＰＤＧＦ Ｂ／Ｂ（１２７６−９５６，Ｂｏｅｈ
ｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）およびアッセイ培地対照。
ＥＣＧＦはヘパリンナトリウムを有する調製物として得た。 ２． ５０μｌ／ウエルの試験化合物希釈物を，第０日からのＨＵＶ−ＥＣ−Ｃ
細胞０．８−１．０ｘ１０4細胞／１００μｌ／ウエルを含む９６ウエルアッセ
イプレートに移し，３７oＣ，５％ＣＯ2で約２時間インキュベートする。 ３． 三重に，８０μｇ／ｍｌＶＥＧＦ，２０ｎｇ／ｍｌＥＣＧＦ，または各試
験化合物の条件に対する培地対照を５０μｌ／ウエルで加える。試験化合物につ
いては，成長因子濃度は所望の最終濃度の４倍である。第０日，工程２からのア
ッセイ培地を用いて，成長因子の濃度を調節する。３７℃，５％ＣＯ2で約２４
時間インキュベートする。各ウエルに５０μｌの試験化合物希釈物，５０μｌの
成長因子または培地，および１００μｌの細胞を加え，総量２００μｌ／ウエル
とする。すなわち，すべてをウエルに加えたとき，４倍濃度の試験化合物および
成長因子は１倍となる。
【０８３８】第２日 １． 3Ｈ−チミジン（Ａｍｅｒｓｈａｍ；カタログＮｏ．ＴＲＫ−６８６）を
１μＣｉ／ウエル（ＲＰＭＩ培地＋１０％熱不活性化ウシ胎児血清中で調製した
１００μＣｉ／ｍｌ溶液を１０μｌ／ウエル）で加え，３７℃，５％ＣＯ2で約
２４時間インキュベートする。ＲＰＭＩはＧｉｂｃｏ ＢＲＬから入手する，カ
タログＮｏ．１１８７５−０５１第３日 １． プレートを−２０℃で一夜凍結する。第４日 １． プレートを融解し，９６ウエルプレート回収器（Ｔｏｍｔｅｃ Ｈａｒｖ
ｅｓｔｅｒ９６（登録商標））でフィルターマット（Ｗａｌｌａｃ；カタログＮ
ｏ．１２０５−４０１）上に回収する；Ｗａｌｌａｃ Ｂｅｔａｐｌａｔｅ（商
標）液体シンチレーション計数機で計数する。
【０８３９】結論 当業者は，本発明は，その目的を実施し，記載される結果および利点，ならび
に本明細書に固有のものを得るのによく適合していることを容易に理解するであ
ろう。本明細書に記載される分子複合体および方法，手順，処理，分子，特定の
化合物は，現在のところ好ましい態様の代表的なものであり，例示的なものであ
って，本発明の範囲を限定することを意図するものではない。当業者は，本発明
の範囲および精神から逸脱することなく，本明細書に開示される本発明に対して
置換基の変更および改変をなすことができることを容易に理解するであろう。
【０８４０】 本明細書において言及されるすべての特許および刊行物は，本発明の属する技
術分野の技術者のレベルを示す。すべての特許および刊行物は，それぞれの刊行
物が特定的に個々に本明細書の一部としてここに引用されることと同じ程度に，
本明細書の一部として引用される。
【０８４１】 本明細書に例示的に記載されている発明は，本明細書に特定的に開示されてい
ない任意の要素または限定なしでも適切に実施することができる。すなわち，例
えば，本明細書における各例において，"・・・を含む"，"・・・から本質的に
なる"および"・・・からなる"との用語は，他の２つのいずれかと置き換えるこ
とができる。本明細書において用いた用語および表現は，説明の用語として用い
るものであり，限定ではない。そのような用語および表現の使用においては，示
されかつ記載されている特徴またはその一部の等価物を排除することを意図する
ものではなく，特許請求の範囲に記載される本発明の範囲中で種々の変更が可能
であることが理解される。すなわち，好ましい態様および任意の特徴により本発
明を特定的に開示してきたが，当業者には本明細書に記載される概念の変更およ
び変種が可能であり，そのような変更および変種も特許請求の範囲に定義される
本発明の範囲内であると考えられることが理解されるべきである。
【０８４２】 さらに，発明の特徴および局面がマーカッシュグループの用語で記載されてい
る場合，当業者は，本発明が，マーカッシュグループのメンバーの個々のメンバ
ーまたはサブグループに関してもまた記載されていることを認識するであろう。
例えば，Ｘが，臭素，塩素およびヨウ素からなる群より選択されるとして記載さ
れている場合，Ｘが臭素である特許請求の範囲およびＸが臭素および塩素である
特許請求の範囲も完全に記載されている。
【０８４３】 遺伝コードの縮重の観点から，核酸の他の組み合わせもまた本明細書のペプチ
ドおよび蛋白質をコードする。例えば，ＧＣＴ，ＧＣＣ，ＧＣＡ，ＧＣＧの４つ
の核酸配列はすべてアミノ酸アラニンをコードする。したがって，あるアミノ酸
について平均で３つのコドンが存在し，１００アミノ酸の長さのポリペプチドは
平均で３１００，もしくは５ｘ１０47種類の核酸配列によりコードされるであろ
う。すなわち，日常的な方法を用いて過度の実験なしに，核酸配列を改変して第
１の核酸配列によりコードされるものと同じポリペプチドをコードする第２の核
酸配列を形成することができる。すなわち，特許請求の範囲に記載されるペプチ
ドおよび蛋白質をコードするすべての可能な核酸もまた，コドン使用，特にヒト
において好ましいものを完全に考慮してこれらがすべて書き出されているように
，本明細書に完全に記載されている。さらに，ポリペプチドの有意な活性が変更
しない配列の領域内において，ポリペプチドのアミノ酸配列，またはそのような
ポリペプチドをコードする対応する核酸配列の変更が生ずるよう設計しまたは選
択することができる。例えば，ポリペプチドの活性部位と離れたβターン中で，
アミノ酸変化を生じさせることができる。また，欠失（例えば活性部位に影響を
与えないポリペプチドのセグメントまたはそのようなポリペプチドをコードする
対応する核酸配列を除去する）および付加（例えば，活性部位の機能に影響を与
えずに，ポリペプチド配列により多くのアミノ酸を付加する，例えばＧＳＴ融合
蛋白質を形成する，または活性部位の機能に影響を与えずにそのようなポリペプ
チドをコードする対応する核酸配列に付加する）もまた本発明の範囲内である。
ポリペプチドに対するそのような変更は，当業者が日常的な方法を用いて過度の
実験なしに行うことができる。すなわち，本発明のペプチドまたは蛋白質の有意
な活性に影響を与えないと容易に決定することができるすべての可能な核酸およ
び／またはアミノ酸配列もまた本明細書に完全に記載されている。
【０８４４】 本明細書においては，本発明を広くかつ一般的に記載している。一般的開示に
含まれるより狭い種および亜属のそれぞれのグループもまた本発明の一部を形成
する。これには，除かれたものが具体的に記載されているか否かにかかわらず，
属から任意の主題を除く「ただし・・・」またはネガティブ限定を含む発明の一
般的記載が含まれる。
【０８４５】 他の態様は特許請求の範囲の範囲内である。
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は，ヒト蛋白質キナーゼのヌクレオチド配列を５’から３’
の方向で示す。
【図２】 図２は，配列番号１−５７によりコードされるヒト蛋白質キナー
ゼのアミノ酸配列を翻訳の方向で示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 15/10 Ａ６１Ｐ 25/00 ４Ｈ０４５ 21/00 25/04 25/00 25/06 25/04 25/14 25/06 25/16 25/14 25/18 25/16 25/28 25/18 27/02 25/28 31/00 27/02 31/04 31/00 31/10 31/04 31/12 31/10 35/00 31/12 37/00 35/00 37/02 37/00 43/00 １１１ 37/02 Ｃ０７Ｋ 16/40 43/00 １１１ Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ０７Ｋ 16/40 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 9/12 1/21 9/99 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/48 Ｚ 9/12 1/68 Ａ 9/99 Ｃ１２Ｒ 1:91 Ｃ１２Ｑ 1/48 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 1/68 5/00 Ａ //(Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｂ Ｃ１２Ｒ 1:91） Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ， ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 プラウマン，グレゴリー・ディー アメリカ合衆国 94070 カリフォルニア 州 サン カルロス，ワインディング ウ ェイ 35 (72)発明者 ホワイト，デイビッド アメリカ合衆国 94002 カリフォルニア 州 ベルモント，バークレイ ウェイ 2623 (72)発明者 マニング，ジェラルド アメリカ合衆国 94025 カリフォルニア 州 メンロ パーク，フレモント ストリ ート 844 (72)発明者 シュダーサナム，スーチャ アメリカ合衆国 94904 カリフォルニア 州 グリーンブレー，コルテ パレンシオ 20 (72)発明者 マルティネス，リカルド アメリカ合衆国 94404 カリフォルニア 州 フォスター シティ，カルティエ レ ーン 984 (72)発明者 フラナガン，ピーター アメリカ合衆国 94132 カリフォルニア 州 サン フランシスコ，ハートフォード ３，225 (72)発明者 クローリー，ダグラス アメリカ合衆国 94131 カリフォルニア 州 サン フランシスコ，ミッドクレスト ウェイ 164 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 BA10 CA04 CA06 DA02 DA05 DA06 DA11 DA12 EA02 EA04 GA11 HA12 HA15 4B050 CC03 DD07 LL01 LL03 4B063 QA19 QA20 QQ08 QQ27 QQ43 QR08 QR42 QR56 QR66 QS02 QS25 QS34 QX02 4B065 AA01X AA57X AA72X AA90X AB01 BA02 CA29 CA44 CA46 4C084 AA02 BA01 BA08 BA19 BA20 BA22 BA23 CA59 CA62 NA14 ZA022 ZA082 ZA152 ZA162 ZA182 ZA202 ZA222 ZA332 ZA362 ZA432 ZA512 ZA812 ZA942 ZB072 ZB262 ZB332 ZB352 ZC202 ZC212 4H045 AA11 AA30 CA40 DA75 EA20 EA50 FA72

Claims (28)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 キナーゼポリペプチドをコードする単離され，濃縮され，
    または精製された核酸分子であって，（ａ）配列番号５８，配列番号５９，配列
    番号６０，配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番
    号６５，配列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号
    ７０，配列番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７
    ５，配列番号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０
    ，配列番号８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，
    配列番号８６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配
    列番号９１，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列
    番号９６，配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列
    番号１０１，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０
    ５，配列番号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列
    番号１１０，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列番
    号１１４に記載されるアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有
    するポリペプチドをコードする； （ｂ）（ａ）のヌクレオチド配列の相補体である； （ｃ）ストリンジェントな条件下で（ａ）のヌクレオチド分子にハイブリダイズ
    し，かつ天然に生ずるキナーゼポリペプチドをコードする； （ｄ）配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０，配列番号６１，配列番号６
    ２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，配列番号６６，配列番号６７
    ，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配列番号７１，配列番号７２，
    配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列番号７６，配列番号７７，配
    列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番号８１，配列番号８２，配列
    番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号８６，配列番号８７，配列番
    号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１，配列番号９２，配列番号
    ９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，配列番号９７，配列番号９
    ８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０１，配列番号１０２，配列番
    号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番号１０６，配列番号１０７
    ，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１０，配列番号１１１，配列番
    号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４に記載されるアミノ酸配列か
    らなる群より選択されるアミノ酸配列であって，ただし，Ｎ末端ドメイン，Ｃ末
    端触媒ドメイン，触媒ドメイン，Ｃ末端ドメイン，コイルドコイル構造領域，プ
    ロリンリッチ領域，スペーサー領域およびＣ末端テールの全部ではないが１また
    はそれ以上を欠失しているアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする；ま
    たは （ｅ）（ｄ）のヌクレオチド配列の相補体である のヌクレオチド配列を含むことを特徴とする核酸分子。
  2. 【請求項２】 宿主細胞において転写を開始させるのに有効なベクターまた
    はプロモーターをさらに含む，請求項１記載の核酸分子。
  3. 【請求項３】 前記核酸分子が，哺乳動物から単離され，濃縮され，または
    精製されたものである，請求項１記載の核酸分子。
  4. 【請求項４】 前記哺乳動物がヒトである，請求項３記載の核酸分子。
  5. 【請求項５】 試料においてキナーゼポリペプチドをコードする核酸を検出
    するために用いられ，前記キナーゼポリペプチドが，配列番号５８，配列番号５
    ９，配列番号６０，配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４
    ，配列番号６５，配列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，
    配列番号７０，配列番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配
    列番号７５，配列番号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列
    番号８０，配列番号８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番
    号８５，配列番号８６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号
    ９０，配列番号９１，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９
    ５，配列番号９６，配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１０
    ０，配列番号１０１，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列
    番号１０５，配列番号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０
    ９，配列番号１１０，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番号１１３，およ
    び配列番号１１４に記載されるアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸
    配列を有するキナーゼポリペプチドからなる群より選択されることを特徴とする
    ，請求項１記載の核酸プローブ。
  6. 【請求項６】 配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０，配列番号６１
    ，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，配列番号６６，
    配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配列番号７１，配
    列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列番号７６，配列
    番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番号８１，配列番
    号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号８６，配列番号
    ８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１，配列番号９
    ２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，配列番号９７
    ，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０１，配列番号１
    ０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番号１０６，配
    列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１０，配列番号１
    １１，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４に記載されるア
    ミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するキナーゼポリペプチ
    ドをコードする請求項１記載の核酸分子を含む組換え細胞。
  7. 【請求項７】 単離され，濃縮され，または精製されたキナーゼポリペプチ
    ドであって，前記ポリペプチドは， （ａ）それぞれ，配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０，配列番号６１，
    配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，配列番号６６，配
    列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配列番号７１，配列
    番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列番号７６，配列番
    号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番号８１，配列番号
    ８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号８６，配列番号８
    ７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１，配列番号９２
    ，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，配列番号９７，
    配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０１，配列番号１０
    ２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番号１０６，配列
    番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１０，配列番号１１
    １，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４に記載されるアミ
    ノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列； （ｂ）それぞれ配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０，配列番号６１，配
    列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，配列番号６６，配列
    番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配列番号７１，配列番
    号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列番号７６，配列番号
    ７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番号８１，配列番号８
    ２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号８６，配列番号８７
    ，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１，配列番号９２，
    配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，配列番号９７，配
    列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０１，配列番号１０２
    ，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番号１０６，配列番
    号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１０，配列番号１１１
    ，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４に記載されるアミノ
    酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列であって，ただし，Ｎ末端ドメイ
    ン，Ｃ末端触媒ドメイン，触媒ドメイン，Ｃ末端ドメイン，コイルドコイル構造
    領域，プロリンリッチ領域，スペーサー領域，およびＣ末端テールからなる群よ
    り選択されるドメインの全部ではないが１またはそれ以上を欠失しているアミノ
    酸配列， を有するアミノ酸配列を含むことを特徴とするポリペプチド。
  8. 【請求項８】 前記ポリペプチドが哺乳動物から単離され，精製され，また
    は濃縮されたものである，請求項７記載のキナーゼポリペプチド。
  9. 【請求項９】 前記哺乳動物がヒトである，請求項８記載のキナーゼポリペ
    プチド。
  10. 【請求項１０】 キナーゼポリペプチドまたは前記ポリペプチドのドメイン
    に対する特異的結合親和性を有する抗体または抗体フラグメントであって，前記
    ポリペプチドは，配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０，配列番号６１，
    配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，配列番号６６，配
    列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配列番号７１，配列
    番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列番号７６，配列番
    号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番号８１，配列番号
    ８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号８６，配列番号８
    ７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１，配列番号９２
    ，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，配列番号９７，
    配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０１，配列番号１０
    ２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番号１０６，配列
    番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１０，配列番号１１
    １，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４に記載されるアミ
    ノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するキナーゼポリペプチド
    であることを特徴とする抗体または抗体フラグメント。
  11. 【請求項１１】 配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０，配列番号６
    １，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，配列番号６６
    ，配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配列番号７１，
    配列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列番号７６，配
    列番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番号８１，配列
    番号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号８６，配列番
    号８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１，配列番号
    ９２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，配列番号９
    ７，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０１，配列番号
    １０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番号１０６，
    配列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１０，配列番号
    １１１，配列番号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４に記載される
    アミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するキナーゼポリペプ
    チドに対する特異的結合親和性を有する抗体を産生するハイブリドーマ。
  12. 【請求項１２】 請求項７または８記載のポリペプチドに結合する抗体およ
    び負対照抗体を含むキット。
  13. 【請求項１３】 キナーゼポリペプチドの活性を調節する物質を同定する方
    法であって， （ａ）配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０，配列番号６１，配列番号６
    ２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，配列番号６６，配列番号６７
    ，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配列番号７１，配列番号７２，
    配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列番号７６，配列番号７７，配
    列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番号８１，配列番号８２，配列
    番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号８６，配列番号８７，配列番
    号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１，配列番号９２，配列番号
    ９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，配列番号９７，配列番号９
    ８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０１，配列番号１０２，配列番
    号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番号１０６，配列番号１０７
    ，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１０，配列番号１１１，配列番
    号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４に記載されるアミノ酸配列か
    らなる群より選択されるアミノ酸配列を有するキナーゼポリペプチドを試験物質
    と接触させ； （ｂ）前記ポリペプチドの活性を測定し；そして （ｃ）前記物質が前記ポリペプチドの活性を調節するか否かを判定する の各工程を含む方法。
  14. 【請求項１４】 細胞においてキナーゼポリペプチドの活性を調節する物質
    を同定する方法であって， （ａ）配列番号５８，配列番号５９，配列番号６０，配列番号６１，配列番号６
    ２，配列番号６３，配列番号６４，配列番号６５，配列番号６６，配列番号６７
    ，配列番号６８，配列番号６９，配列番号７０，配列番号７１，配列番号７２，
    配列番号７３，配列番号７４，配列番号７５，配列番号７６，配列番号７７，配
    列番号７８，配列番号７９，配列番号８０，配列番号８１，配列番号８２，配列
    番号８３，配列番号８４，配列番号８５，配列番号８６，配列番号８７，配列番
    号８８，配列番号８９，配列番号９０，配列番号９１，配列番号９２，配列番号
    ９３，配列番号９４，配列番号９５，配列番号９６，配列番号９７，配列番号９
    ８，配列番号９９，配列番号１００，配列番号１０１，配列番号１０２，配列番
    号１０３，配列番号１０４，配列番号１０５，配列番号１０６，配列番号１０７
    ，配列番号１０８，配列番号１０９，配列番号１１０，配列番号１１１，配列番
    号１１２，配列番号１１３，および配列番号１１４に記載されるアミノ酸配列か
    らなる群より選択されるアミノ酸配列を有するキナーゼポリペプチドを発現させ
    ； （ｂ）試験物質を前記細胞に加え；そして （ｃ）細胞表現型または前記ポリペプチドと天然の結合パートナーとの間の相互
    作用の変化をモニターする の各工程を含む方法。
  15. 【請求項１５】 治療を必要とする患者に，配列番号５８，配列番号５９，
    配列番号６０，配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３，配列番号６４，配
    列番号６５，配列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列番号６９，配列
    番号７０，配列番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配列番号７４，配列番
    号７５，配列番号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列番号７９，配列番号
    ８０，配列番号８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番号８４，配列番号８
    ５，配列番号８６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９，配列番号９０
    ，配列番号９１，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，配列番号９５，
    配列番号９６，配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配列番号１００，
    配列番号１０１，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番号１０４，配列番号
    １０５，配列番号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８，配列番号１０９，
    配列番号１１０，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番号１１３，および配
    列番号１１４に記載されるアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列
    を有する，キナーゼの活性を調節する物質を投与することにより，疾病または疾
    患を治療する方法。
  16. 【請求項１６】 前記疾病または疾患が，癌，免疫関連疾病および疾患，心
    臓血管疾病，脳またはニューロン関連疾病，および代謝性疾患からなる群より選
    択される，請求項１５記載の方法。
  17. 【請求項１７】 前記疾病または疾患が，組織の癌；血液起源の癌；中枢神
    経系の疾病；末梢神経系の疾病；アルツハイマー病；パーキンソン病；多発性硬
    化症；筋萎縮性側索硬化症；ウイルス感染；プリオンにより引き起こされる感染
    ；細菌により引き起こされる感染；真菌により引き起こされる感染；および眼性
    疾病からなる群より選択される，請求項１５記載の方法。
  18. 【請求項１８】 前記疾病または疾患が，片頭痛；痛み；性的機能不全；気
    分障害；注意障害；認識障害；低血圧症；高血圧症；精神病性疾患；神経学的疾
    患；運動異常症；代謝性疾患；および臓器移植拒絶からなる群より選択される，
    請求項１５記載の方法。
  19. 【請求項１９】 前記物質がインビトロでキナーゼ活性を調節する，請求項
    １５記載の方法。
  20. 【請求項２０】 前記物質がキナーゼ阻害剤である，請求項１９記載の方法
    。
  21. 【請求項２１】 疾病または疾患の診断道具として試料中でキナーゼポリペ
    プチドを検出する方法であって， （ａ）前記試料を，ハイブリダイゼーションアッセイ条件下で，配列番号５８，
    配列番号５９，配列番号６０，配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３，配
    列番号６４，配列番号６５，配列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，配列
    番号６９，配列番号７０，配列番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配列番
    号７４，配列番号７５，配列番号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列番号
    ７９，配列番号８０，配列番号８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番号８
    ４，配列番号８５，配列番号８６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号８９
    ，配列番号９０，配列番号９１，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９４，
    配列番号９５，配列番号９６，配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９，配
    列番号１００，配列番号１０１，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番号１
    ０４，配列番号１０５，配列番号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８，配
    列番号１０９，配列番号１１０，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番号１
    １３，および配列番号１１４に記載されるアミノ酸配列からなる群より選択され
    るアミノ酸配列を有するキナーゼポリペプチドの核酸標的領域にハイブリダイズ
    する核酸プローブと接触させ，前記プローブは，前記ポリペプチド，そのフラグ
    メント，または前記配列およびフラグメントの相補体をコードする核酸配列を含
    み；そして （ｂ）前記疾病の指標としてプローブ：標的領域ハイブリッドの存在または量を
    検出する の各工程を含む方法。
  22. 【請求項２２】 前記疾病または疾患が，癌，免疫関連疾病および疾患，心
    臓血管疾病，脳またはニューロン関連疾病，および代謝性疾患からなる群より選
    択される，請求項２１記載の方法。
  23. 【請求項２３】 前記疾病または疾患が，組織の癌；血液起源の癌；中枢神
    経系の疾病；末梢神経系の疾病；アルツハイマー病；パーキンソン病；多発性硬
    化症；筋萎縮性側索硬化症；ウイルス感染；プリオンにより引き起こされる感染
    ；細菌により引き起こされる感染；真菌により引き起こされる感染；および眼性
    疾病からなる群より選択される，請求項２１記載の方法。
  24. 【請求項２４】 前記疾病または疾患が，片頭痛，痛み；性的機能不全；気
    分障害；注意障害；認識障害；低血圧症；高血圧症；精神病性疾患；神経学的疾
    患；運動異常症；代謝性疾患；および臓器移植拒絶からなる群より選択される，
    請求項２１記載の方法。
  25. 【請求項２５】 疾病または疾患の診断道具として試料中のキナーゼポリペ
    プチドを検出する方法であって， （ａ）試料中の前記キナーゼポリペプチドをコードする核酸標的領域を，前記キ
    ナーゼポリペプチド，またはその１またはそれ以上のフラグメントをコードする
    対照核酸標的領域と比較し，ここで，前記キナーゼポリペプチドは，配列番号５
    ８，配列番号５９，配列番号６０，配列番号６１，配列番号６２，配列番号６３
    ，配列番号６４，配列番号６５，配列番号６６，配列番号６７，配列番号６８，
    配列番号６９，配列番号７０，配列番号７１，配列番号７２，配列番号７３，配
    列番号７４，配列番号７５，配列番号７６，配列番号７７，配列番号７８，配列
    番号７９，配列番号８０，配列番号８１，配列番号８２，配列番号８３，配列番
    号８４，配列番号８５，配列番号８６，配列番号８７，配列番号８８，配列番号
    ８９，配列番号９０，配列番号９１，配列番号９２，配列番号９３，配列番号９
    ４，配列番号９５，配列番号９６，配列番号９７，配列番号９８，配列番号９９
    ，配列番号１００，配列番号１０１，配列番号１０２，配列番号１０３，配列番
    号１０４，配列番号１０５，配列番号１０６，配列番号１０７，配列番号１０８
    ，配列番号１０９，配列番号１１０，配列番号１１１，配列番号１１２，配列番
    号１１３，および配列番号１１４に記載されるアミノ酸配列からなる群より選択
    されるアミノ酸配列，またはその１またはそれ以上のフラグメントを有しており
    ；そして （ｂ）前記疾病または疾患の指標として前記標的領域と前記対照標的領域との間
    の配列または量の相違を検出する， の各工程を含む方法。
  26. 【請求項２６】 前記疾病または疾患が，癌，免疫関連疾病および疾患，心
    臓血管疾病，脳またはニューロン関連疾病，および代謝性疾患からなる群より選
    択される，請求項２５記載の方法。
  27. 【請求項２７】 前記疾病または疾患が，組織の癌；血液起源の癌；中枢神
    経系の疾病；末梢神経系の疾病；アルツハイマー病；パーキンソン病；多発性硬
    化症；筋萎縮性側索硬化症；ウイルス感染；プリオンにより引き起こされる感染
    ；細菌により引き起こされる感染；真菌により引き起こされる感染；および眼性
    疾病からなる群より選択される，請求項２５記載の方法。
  28. 【請求項２８】 前記疾病または疾患が，片頭痛，痛み；性的機能不全；気
    分障害；注意障害；認識障害；低血圧症；高血圧症；精神病性疾患；神経学的疾
    患；運動異常症；代謝性疾患；および臓器移植拒絶からなる群より選択される，
    請求項２５記載の方法。
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