JP2003513894A - プロドラッグ効力の増強 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、重大な副作用を生じさせることなくプロドラッグの活性を統計学的に有意に増強する方法であって、ポリアニオンをこのプロドラッグとともに投与することを含む方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】発明の背景 発明の属する分野 本発明はプロドラッグの治療的使用に関する。より具体的には、本発明はプロ
ドラッグの効力を増強する方法に関する。

【０００２】関連技術の要旨 多くの潜在的医薬物質が、過剰な毒性または限定されたバイオアベイラビリテ
ィーのせいで治療的に用いることができない。いくつかの例では、これらの限定
要因はこの医薬物質を修飾してプロドラッグを創出することにより軽減できる。
このプロドラッグはその後、身体により医薬的に活性な物質に変換される。

【０００３】 国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９７／１４７５１は、ホスホジエステル結合の非架
橋酸素をカバーするエステルまたはアミド修飾を有するオリゴヌクレオチドプロ
ドラッグの製造を開示している。Kuhn, Oncology, Supplement No. 6, 39-42 (1
998) は、ＣＰＴ−１１（カンプトサル (Camptosar)）が抗新生物プロドラッグ
であり、これは肝臓および他の組織におけるカルボキシルエステラーゼ活性によ
って活性物質ＳＮ−３８に変換されることを開示している。Cerosimo, The Anna
ls of Pharmacotherapy 32: 1324-1333 (1998) は、ＣＰＴ−１１の親化合物、
カンプトセシン（captothecin）は、その深刻な毒性ゆえ医薬品として開発され
得なかったことを教示している。

【０００４】 肝臓および他の組織におけるカルボキシルエステラーゼおよびアミダーゼのお
かげで、付加エステルまたはアミド基を有するプロドラッグの作成能は一般化さ
れた現象である。しかし、これらの化合物は一般に、プロドラッグが迅速に分解
されるせいで親化合物の少なくともいくつかの毒性を保持する。Kuhn 上記は、
ＳＮ−３８（ＣＰＴ−１１の活性代謝産物）が依然として下痢（これは親化合物
、カンプトセシンの限定的毒性である）を生じさせることを開示している。

【０００５】 したがって、プロドラッグを、重大な毒性を回避しつつその効力を最大にする
様式で投与する方法が必要である。理想的には、このような方法は、身体がプロ
ドラッグをプロセッシングする様式に影響するはずであり、したがって広い範囲
のプロドラッグに適用可能であるだろう。

【０００６】発明の簡単な要約 本発明は、プロドラッグをその効力を最大にする様式で投与する方法を提供し
、これにより用いられるべきより低く、少ない毒性の投与を可能にする。本発明
の方法は、身体がプロドラッグを活性化合物にプロセッシングする能力およびプ
ロドラッグまたは活性化合物のいずれかを一掃する能力を調節する種々の機構を
通じて作用し、したがって広い範囲のプロドラッグに適用可能である。

【０００７】 本発明の方法は、プロドラッグ、好ましくはエステルまたはアミドプロドラッ
グ、およびポリアニオン、好ましくはポリサルフェートをともに患者に投与する
ことを含む。好ましいプロドラッグには、抗癌剤、例えばカンプトサルおよびカ
ンプトサルアナログのエステルまたはアミドが含まれるがこれらに限定されない
。好ましいポリアニオンには、ヘパリン、デキストランサルフェート、スラミン
サルフェート、シクロデキストリンサルフェートおよびオリゴヌクレオチド、特
にオリゴヌクレオチドホスホロチオエートまたはホスホロジチオエートが含まれ
るがこれらに限定されない。

【０００８】好ましい態様の詳細な説明 本発明はプロドラッグの治療的使用に関する。より具体的には、本発明はプロ
ドラッグの効力を増強する方法に関する。本明細書中に引用される特許および刊
行物はこの技術分野の知識水準を反映し、引用により本明細書中に包含されるも
のである。これらの参考文献と本明細書の教示内容の任意の矛盾は、後者を選択
することにより解決されるだろう。

【０００９】 本発明は、プロドラッグをその効力を最大にする様式で投与する方法を提供し
、これにより用いられるべきより低く、少ない毒性の投与を可能にする。本発明
の方法は、身体がプロドラッグを活性化合物にプロセッシングする能力およびプ
ロドラッグまたは活性化合物のいずれかを一掃する能力を調節する種々の機構を
通じて作用し、したがって広い範囲のプロドラッグに適用可能である。

【００１０】 第一の側面では、本発明は、重大な副作用を生じさせることなくプロドラッグ
の活性を統計学的に有意に増強する方法であって、ポリアニオンをこのプロドラ
ッグとともに投与することを含む方法を提供する。本明細書中で用いられる「プ
ロドラッグ」とは、開裂可能な結合によって他の部分と共有結合した活性化合物
を含む化合物であり、ここに活性化合物の薬理活性はプロドラッグの薬理活性よ
り大きく、そしてこの活性化合物は開裂可能な結合の開裂により身体内で生産さ
れるものである。「活性化合物」とは、薬理活性を有する分子である。「薬理活
性」とは、１またはそれ以上の疾患または疾患症状の処置において有用な活性で
ある。「部分」とは、化学基または構造である。「開裂可能な結合」とは、身体
内の酵素活性によって開裂可能な共有結合である。用語「重大な副作用を生じさ
せることなく」とは、ポリアニオンの存在下で観察される任意の毒性の徴候また
は症状が、このプロドラッグとポリアニオンの組み合わせが規制認可を得ること
ができない程度に、ポリアニオンの不存在下で観察されるものより大きくないこ
とを意味する。用語「ともに投与」とは、このプロドラッグまたはこのポリアニ
オンのいずれかが他の物質の停止後に継続される処置計画を含むことを意図する
。

【００１１】 好ましいプロドラッグには、活性化合物のアミドおよびエステルが含まれる。
このような活性化合物には、抗癌化学治療剤、抗炎症剤、抗感染剤、抗ウイルス
剤および心臓血管薬物が含まれるがこれらに限定されない。多数のプロドラッグ
が当分野において周知である（例えば Singh et al., J. Sci. Ind. Res. 55:49
7-510 (1996) を参照のこと）。好ましい活性化合物の非限定的な例には、ＳＮ
−３８がある。具体的には、好ましいプロドラッグの非限定的な例には、カンプ
トサル（(７−エチル−１０−(−４−ピペリジノール)−１−ピペリジノカルボ
ニルオキシ−カンプトセシン、(7-ethyl-10-(-4-piperidinol)-1-piperidnocarb
onyloxy-camptothecin；ＣＰＴ−１１）およびカンプトサルアナログおよびフォ
スカルナート（foscarnate）が含まれる。プロドラッグから開裂される部分は、
好ましくは、エステルおよびα−アシルオキシアルキルエステル（カルボキシ官
能基に関して）；アミド、エステル、カルボナートエステル（carbonate sters
）、ホスフェートエステル、エーテルおよびα−アシルオキシアルキルエーテル
（ヒドロキシ官能基に関して）；チオエステル、α−アシルオキシアルキルチオ
エステルおよびジスルフィド（スルフヒドリル官能基に関して）；ケタール、イ
ミン、エノールエステル、オキサゾラジン、およびチアゾリジン（カルボニル官
能基に関して）；アミド、カルバメート、イミン エナミン Ｎ−マンニッヒ塩基
およびＮ−アシルオキシアルコキシカルボニル誘導体（アミノ官能基に関して）
；Ｎ−アシルオキシアルキル誘導体（第４級アミノ官能基に関して）；Ｎ−スル
ホニルイミデート（エステルまたはスルホンアミド官能基に関して）；Ｎ−マン
ニッヒ塩基（ＮＨ−酸性官能基に関して）；およびＮ−アシルオキシアルキル誘
導体（ヘテロサイクリックアミノ官能基に関して）から選択される。

【００１２】 好ましいポリアニオンには、ポリサルフェートおよびオリゴヌクレオチドが含
まれるがこれらに限定されない。好ましいポリサルフェートには、ヘパリン、デ
キストランサルフェート、スラミンサルフェート、シクロデキストリンサルフェ
ートおよびオリゴヌクレオチドホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート
が含まれる。本発明の目的では、用語「オリゴヌクレオチド」には、２またはそ
れ以上のデオキシリボヌクレオチド、または任意の修飾ヌクレオシド、例えば２
'−ハロ−ヌクレオシド、２'−Ｏ−置換リボヌクレオシド、３'−Ｏ−置換ヌク
レオシド、デアザヌクレオシド（deazanucleosides）またはそれらの任意の組み
合わせのポリマーが含まれる。このようなモノマーは、多数の既知のヌクレオシ
ド間結合のいずれかにより互いにカップリングさせることができる。特定の好ま
しい態様では、これらのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル、ホスホトリ
エステル、ホスホロチオエート、またはホスホルアミデート結合またはそれらの
組み合わせであってよい。この結合は任意の構成であり得、これには、５'−３'
、５'−２'、５'−５'、３'−３'、３'−５'、２'−５'またはそれらの任意の組
み合わせが含まれるがこれらに限定されない。用語「オリゴヌクレオチド」はま
た、化学修飾された塩基または糖を有し、ならびに／あるいは付加置換基、例え
ば脂溶性基、コレステロール、葉酸、インターカレート剤、ジアミンおよびアダ
マンタン（これらに限定されない）を有するこのようなポリマーを含む。オリゴ
ヌクレオチドはまた、例えばシクロデキストリンおよび／またはリポソーム中で
製剤化することができる。本発明の目的では、用語「２'−Ｏ−置換」および３'
−Ｏ−置換とはそれぞれ、ペントース部分の２'または３'位がハロゲン（好まし
くはＣｌ、Ｂｒ、またはＦ）、または１−６飽和または不飽和炭素原子を含む−
Ｏ−低級アルキル基、または２−６炭素原子を有する−Ｏ−アリールまたはアリ
ル基（ここにこのようなアルキル、アリールまたはアリル基は、非置換であるか
、あるいは、例えばハロ、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、シアノ、ニトロ、
アシル、アシルオキシ、アルコキシ、カルボキシル、カルボアルコキシル、また
はアミノ基で置換されていてもよい）で置換されていることを意味し；あるいは
このような２'置換はヒドロキシ基（リボヌクレオシドを生じさせる）、アミノ
またはハロ基での置換であってよいが、２'−Ｈ基を用いるものではない。特定
の好ましい態様では、２'−Ｏ−置換リボヌクレオシドは２'−Ｏ−メチルリボヌ
クレオシドおよび２'−Ｏ−メトキシエトキシリボヌクレオシドから選択される
。特定の好ましい態様では、３'−Ｏ−置換リボヌクレオシドは３'−Ｏ−メチル
リボヌクレオシドおよび３'−Ｏ−メトキシエトキシリボヌクレオシドから選択
される。特定の態様では、すべてのヌクレオシドは２'−Ｏ−置換、好ましくは
２'−Ｏ−アルキルであってよい。本発明の方法で用いられるオリゴヌクレオチ
ドはまた、二本鎖オリゴヌクレオチド（ヘアピンオリゴヌクレオチドを含む）な
らびに環状オリゴヌクレオチドを含む。

【００１３】 特定の好ましい態様において、本発明に用いるためのオリゴヌクレオチドは、
内因性または外因性の核酸配列、好ましくは疾患に関与する核酸に対して相補的
であろう。用語「相補的」は、生理的条件下でゲノム領域、遺伝子、またはそれ
らのＲＮＡ転写物に対してハイブリダイズする能力を有することを意味する。こ
のようなハイブリッド形成は、他の様式の水素結合および塩基スタッキングもま
たハイブリッドを形成させることができるが、通常、相補的なストランド間の塩
基に特異的な水素結合によりもたらされ、好ましくはワトソン−クリック型塩基
対またはフーグスティーン型塩基対を形成する。実際に、このようなハイブリッ
ド形成は特定の遺伝子発現を阻害するという観察から推測することができる。改
変されたオリゴヌクレオチド配列が相補的である核酸配列は、改変が求められる
生物学的作用に依存するだろう。特定の特に好ましい態様について、オリゴヌク
レオチドは、ｍｄｍ−２、ＰＫＡ、ＰＫＣ、ｒａｆ−キナーゼ、ｂｃｌ−２、Ｈ
−ｒａｓ、ｃ−ｍｙｃ、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ、ヒストンデアセチラ
ーゼおよびＶＥＧＦから選択される遺伝子に対して相補的である。特定の好まし
い態様について、このようなオリゴヌクレオチドは５'−ＵＧＡＣＡＣＣＴＧＴ
ＴＣＴＣＡＣＵＣＡＣ−３'の配列を有する。しかし、他の好ましい態様におい
て、この配列を有するオリゴヌクレオチドは特に除かれ、そして幾つかの好まし
い態様においては、ｍｄｍ−２遺伝子に対して相補的であるオリゴヌクレオチド
が特に除かれる。特定の態様において、本発明に基づく方法に用いられるオリゴ
ヌクレオチドは、配列に依存しない様式でプロドラッグの活性を増強することが
できるために、アンチセンスオリゴヌクレオチドが特に除かれる。

【００１４】 アンチセンス態様におけるオレゴヌクレオチドは、長さ約１３〜約１００ヌク
レオチドが好ましく、約１５〜約５０がより好ましく、約１５〜約３５が最も好
ましい。非アンチセンス態様におけるオリゴヌクレオチドは、この範囲内であっ
ても良いが、長さ約５〜約１５ヌクレオチドもまた好ましいであろう。好ましく
は、本発明に基づく方法に用いられるオリゴヌクレオチドには、１つまたはそれ
以上の改変されたヌクレオシド間の結合が含まれ、場合によってはデオキシリボ
ヌクレオシド、リボヌクレオシドまたは２'−Ｏ−置換リボヌクレオシドのいず
れか、或いはそれらの任意の組合せが含まれ得る。本発明のこの側面に基づく特
に好ましいアンチセンスオリゴヌクレオチドには、キメラオリゴヌクレオチドお
よびハイブリッドオリゴヌクレオチドを含む、混合型バックボーンオリゴヌクレ
オチドが含まれる。

【００１５】 本発明の目的について、「混合型バックボーンオリゴヌクレオチド」とは、バ
ックボーン置換基のタイプ、例えば、オリゴヌクレオチドを含む種々のヌクレオ
シド間の糖および／またはヌクレオシド間の結合における差異を１つ以上有する
オリゴヌクレオチドである。

【００１６】 本発明の目的について、「キメラオリゴヌクレオチド」は、ヌクレオシド間の
結合のタイプを１つ以上有するオリゴヌクレオチドを意味する。このようなキメ
ラオリゴヌクレオチドの好ましい側面の１つには、ホスホロチオエート、ホスホ
ジエステルまたはホスホロジチオエート領域を含み、好ましくは約２〜約１２ヌ
クレオチド、および非イオン領域、好ましくはアルキルホスホナートまたはアル
キルホスホノチオエート領域を含む、キメラオリゴヌクレオチドがある。好まし
くは、このようなキメラオリゴヌクレオチドには、ホスホジエステルおよびホス
ホロチオエート結合から選択される、少なくとも３つの連続したヌクレオシド間
の結合、またはそれらの組合せが含まれる。

【００１７】 本発明の目的について、「ハイブリッドオリゴヌクレオチド」は、ヌクレオシ
ドのタイプを１つ以上有するオリゴヌクレオチドを意味する。このようなハイブ
リッドオリゴヌクレオチドの好ましい態様の１つには、リボヌクレオチドまたは
２'−Ｏ−置換リボヌクレオチド領域が含まれ、好ましくは約２〜約１２の２'−
Ｏ−置換ヌクレオチドおよびデオキシリボヌクレオチド領域が含まれる。好まし
くは、このようなハイブリッドオリゴヌクレオチドには、少なくとも３つの連続
したデオキシリボヌクレオシドが含まれ、リボヌクレオシド、２'−Ｏ−置換リ
ボヌクレオシドまたはそれらの組合せが含まれよう。好ましい側面について、デ
オキシヌクレオチド領域は、２'−Ｏ−置換領域がいずれかのサイドにフランキ
ングしている。特に好ましい態様の１つについて、２'−Ｏ−置換領域は２'−Ｏ
−メチル領域であり、４つの２'−Ｏ−メチルヌクレオシドを有することが最も
好ましい。特定の好ましい態様について、オリゴヌクレオチド全体のバックボー
ンは、ホスホロチオエートバックボーンである。特に好ましいハイブリッドオリ
ゴヌクレオチドには、１つまたはそれ以上の２'−Ｏ−メチルリボヌクレオシド
または２'−Ｏ−メトキシエトキシリボヌクレオシドが含まれる。

【００１８】 オリゴヌクレオチド合成は、現在、ごく普通に行なうことができる。Methods
in Molecular Biology, Vol 20: Protocols for Oligonucleotides and Analogs
pp.165-189 (S. Agrawal, Ed., Humana Press, 1993); Oligonucleotides and
Analogues: A Practical Approach, pp.87-108 (F. Eckstein, Ed., 1991);およ
びUhlmann and Peyman, supra. Agrawal and Iyer, Curr. Op. in Biotech. 6:
12(1995);およびAntisense Research and Applications (CrookeおよびLebleu,
Eds., CRC Press, Boca Raton, 1993)を参照のこと。

【００１９】 第２の側面について、本発明は重篤な副作用を生じることなく、統計学上有意
にプロドラッグの活性を強力化するための方法であって、プロドラッグを投与す
る前に、ポリアニオンを投与することを含む方法を提供する。プロドラッグを投
与する前に、ポリアニオンを投与することは、プロドラッグの投与と同時か、あ
るいはその後にポリアニオンを投与した場合より、プロドラッグをさらに強力に
することを意外にも発見した。

【００２０】 理論による結び付けを望まないが、プロドラッグの強力化（増強）には、１つ
またはそれ以上の以下の機構が含まれると考えられる： 腫瘍組織を含む肝臓および他の組織における、プロドラッグの保持時間を調
節すること、 開裂酵素または他の肝臓の酵素、例えば、カルボキシルエステラーゼ、アミ
ダーゼ、または他のエステラーゼと競合すること、 肝臓由来の輸送因子、例えばＣＰＴ−１１についてのｃＭＯＡＴと競合する
こと、 血清タンパク質の結合に対して競合すること、 内皮細胞壁の結合と競合すること、 共有結合性修飾、例えばグルクロン酸抱合（glucouronidation）に対して競
合すること、 活性代謝物質が血液循環中に連続的に放出されるように、プロドラッグの加
水分解を遅延させること 薬物の活性型を安定化すること、例えばＣＰＴ−１１についてのラクトン形
成。

【００２１】 これらの機構のいずれかは、プロドラッグを投与する前に、ポリアニオンを用
いて系を飽和させることにより利益を得ることができるのだろう。

【００２２】 本発明のこの側面における好ましい態様には、本発明の第１の側面について述
べた種々の態様の全てが含まれ、本発明の第１の側面について記載した定義が含
まれる。

【００２３】 第３の側面について、本発明は重篤な副作用を生じることなく、統計学上有意
にプロドラッグの活性を強力化するための方法であって、プロドラッグと共にポ
リアニオンを共に投与することを含む（ここには、ポリアニオンが存在しない場
合には、治療的に有効ではないであろう量のプロドラッグが存在する）方法を提
供する。本発明のこの側面に基づく方法は、プロドラッグまたは活性化合物が毒
性で、投与が制限される場合に、特に有用である。従って、本発明に基づくこの
方法は、プロドラッグの治療指数を増加させることができる。

【００２４】 本発明のこの側面の好ましい態様には、本発明の第１および第２の側面につい
て述べた種々の態様の全てが含まれ、本発明の第１および第２の側面について記
載した定義が含まれる。

【００２５】 以下の実施例は、本発明の特に好ましい態様をさらに例示するものであって、
本発明の範囲を制限するつもりのものではない。

【００２６】 実施例１ 大腸ガン腫瘍保有マウスの処置 雌性ＮＣｒ−ヌードマウス（６〜８週齢）に水（逆浸透、０．１７％Ｃｌ）お
よびオートクレーブ処理した標準げっ歯類食餌（ＮＩＨ３１、タンパク質１８％
、脂肪５％、繊維５％、灰分８％およびミネラル３％）を自由摂取させた。マイ
クロアイソレーター中で、１２時間照明、２２℃、湿度４０〜６０％で飼育した
。マウスのわき腹に、わき腹のＨＣＴ−１１６ヒト大腸癌腫断片１ｍｍ^３を皮下
移植した。最初は、週に２回腫瘍をモニターし、腫瘍重量がおよそ１００ｍｇに
到達した時点で毎日モニターした。腫瘍が４０〜２２１ｍｇの重量（計算重量）
に到達した時点で、動物を一対組合わせ（ｐａｉｒ−ｍａｔｃｈｅｄ）で種々の
処置群に組分けした。推定腫瘍重量は以下の等式に従い決定した： 腫瘍重量＝（ｗ^２×ｌ）／２： ［式中、ｗ＝ＨＣＴ−１１６腫瘍の幅（ｍｍ）、およびｌ＝ＨＣＴ−１１６腫瘍
の長さ（ｍｍ）］。末端５’位に２個および末端３’位に４個の２’−Ｏ−メチ
ルリボヌクレオシドを有するホスホロチオエートオリゴヌクレオチド（オリゴ１
）または末端５’位および末端３’位に４個の２’−Ｏ−メチルリボヌクレオシ
ドを有するホスホロチオエートオリゴヌクレオチド（オリゴ２）を、標準的な方
法にしたがって調製し、中性緩衝化生理食塩水に溶解した。オリゴ１は以下の配
列：

【数１】 （これはｍｄｍ−２に相補的である） を有し、オリゴ２の配列は以下の通りである：

【数２】 （これはＨＩＶ−１ ｇａｇ遺伝子に相補的である）。カンプトサル（Ｃａｍｐ
ｔｏｓａｒ）はＰｈａｒｍａｃｉａ＆Ｕｐｊｏｈｎから購入した。

【００２７】 １日目に動物を１２グループ（１グループあたり９匹）に組分けした。オリゴ
１またはオリゴ２を、５／２／５／２／５／２／５スケジュール（すなわち、５
日間投薬、２日間休憩の反復）で、１０ｍｇ／ｋｇ投薬で腹腔内投与した。３週
間の間、週に１回、２５または５０ｍｇ／ｋｇの投薬量でカンプトサルを静脈内
投与した。併用療法については、オリゴ１を５または１０ｍｇ／ｋｇでカンプト
サル２５ｍｇ／ｋｇとともに腹腔内投与するか、あるいはオリゴ１を１０ｍｇ／
ｋｇでカンプトサル５０ｍｇ／ｋｇとともに腹腔内投与した。オリゴ２は１０ｍ
ｇ／ｋｇで２５または５０ｍｇ／ｋｇのカンプトサルとともに腹腔内投与した。
５／２／５／２／５／２／５スケジュールで、ビヒクルを用いてコントロール動
物を処置した。研究は５６日目に終了した。

【００２８】 結果は、腫瘍増殖遅延（ＴＧＤ）終点法を使用して測定した。各マウスを、そ
れらのＨＣＴ−１１６腫瘍が重量１．５ｇに達した時点で安楽死させた。これは
癌死として採用した。平均生存日数（Ｍｅａｎ Ｄａｙ ｏｆ Ｓｅｒｖｉｖａ
ｌ；ＭＤＳ）は、以下の式の計算上の死亡日に基づき各グループで計算した： 終点までの時間（計算上）＝終点を超えるまでの時間（観察上）− （Ｗｔ_２−終点の重量）／（Ｗｔ_２−Ｗｔ_１）／（Ｄ_２−Ｄ_１） ［式中、終点を超えるまでの時間（観察上）とは、各腫瘍が終点（カットオフ）
重量を超えて増殖するためにかかった（マウスを安楽死させた）日数であり、Ｄ _２ はマウスを安楽死させた日であり、Ｄ_１は腫瘍が終点に到達する前にカリパー
測定した最終日であり、Ｗｔ_２はＤ_２での腫瘍重量（ｍｇ）であり、Ｗｔ_１はＤ _１ での腫瘍重量（ｍｇ）であり、そして終点重量とは用いるモデルに対して予め
決定していた「カットオフ」腫瘍重量である］。統計分析に関しては、不対ｔ検
定およびマン・ホイットニーのＵ検定（それぞれ、平均値および中央値を分析す
る）を用いて、グループ間における生存時間の差異の統計的有意性を決定した。
これらの分析はＰｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ）ｖｅｒｓｉｏｎ３．０を用いて
０．０５のｐ値（両側）で行った。

【００２９】 ９匹のビヒクルコントロールのうち、８匹の腫瘍が２１．５日のＭＤＳ値で１
．５ｇの終点に到達した。１匹の腫瘍は完全に退行しており、これはおそらく腫
瘍取りこみが不充分（ｐｏｏｒ ｔｕｍｏｒ ｔａｋｅ）なためである。カンプ
トサル２５ｍｇ／ｋｇにより３１．１日のＭＤＳ値が生じ、カンプトサル５０ｍ
ｇ／ｋｇにより４２．６日のＭＤＳ値が生じた。オリゴ１またはオリゴ２はいず
れも単独ではＭＤＳの延長を生じなかった。しかしながら、１０ｍｇ／ｋｇオリ
ゴ１を２５ｍｇ／ｋｇカンプトサルとともに投与するとＭＤＳはビヒクルコント
ロールよりも２４．４日延長し、２５ｍｇ／ｋｇカンプトサル単独で処置したマ
ウスよりも１４．８日延長した。これらの延長はそれぞれ統計的に有意である（
ｐ＜０．０００１；不対ｔ検体）。５ｍｇ／ｋｇおよび２５ｍｇ／ｋｇのオリゴ
１で処置したマウスは３７．４日のＭＤＳ値を達成し、これはビヒクルコントロ
ールよりも統計的に有意であり（ｐ＜０．０００５；不対ｔ検体）および２５ｍ
ｇ／ｋｇカンプトサル単独で処置したマウスよりも統計的に有意である（ｐ＜０
．０４６；不対ｔ検体）。１０ｍｇ／ｋｇオリゴ２を２５ｍｇ／ｋｇカンプトサ
ルとともに腹腔内投与することにより３９．７日のＭＤＳ値を生じ、これはビヒ
クルコントロールおよび２５ｍｇ／ｋｇカンプトサール単独で処置したマウスよ
りも統計的に有意であった（ｐ＜０．０００９；不対ｔ検体）。１０ｍｇ／ｋｇ
オリゴ２を５０ｍｇ／ｋｇカンプトサルとともに腹腔内投与することにより４２
．６日のＭＤＳ値を生じ、これは５０ｍｇ／ｋｇカンプトサル単独で処置したマ
ウスよりも統計的に有意な傾向にある（ｐ＜０．０８；不対ｔ検定）。これらの
結果は、オリゴ１およびオリゴ２の両方が、統計的に有意かつ用量依存的な様式
でカンプトサル有効性の活性を強化しうること、ならびにこの効果の少なくとも
一部はオリゴヌクレオチド配列には無関係であることを示唆する。これらの研究
の結果を図１〜４にまとめる。

【００３０】 オリゴ１によるカンプトサルの効力強化の、オリゴ２によるカンプトサル効力
強化に対する比較は、オリゴ１に有利な統計的な有意差が存在することを示す（
ｐ＜０．００７４；不対ｔ検定）。この差異は、ｍｄｍ−１オンコジーンの発現
に対する、ｍｄｍ−１オンコジーンに対して相補的なオリゴ１のアンチセンス効
果から生じているかもしれない。

【００３１】 実施例２ 膵臓ガン腫瘍保有マウスの処置 オリゴ１およびオリゴ２の間の差異がオリゴ１のアンチセンス効果から生じる
かどうかを試験するために、類似の研究を膵臓ガン（Ｐａｎｃ１腫瘍）に対する
マウスモデルで行った。Ｐａｎｃ１腫瘍は変異型（非機能型）ｐ５３遺伝子を有
する。ｍｄｍ−１に対するアンチセンス効果は主にｐ５３発現のアップレギュレ
ーションにより機能すると考えられているので、オリゴ１はこのモデルに対して
アンチセンス特異的な効果を生じないはずである。しかしながら、ｐ５３変異型
細胞株においてｍｄｍ−２標的型オリゴヌクレオチドがｐ５３とは独立した機構
により機能し得ることは可能である。

【００３２】 Ｐａｎｃ−１腫瘍を用いたこと、各１０匹４グループのマウスを使用したこと
、および下記のオリゴ１およびオリゴ２を２０ｍｇ／ｋｇの投薬量で与えたこと
を除いて、実施例１に記載のように、実験を行った。カンプトサルは１００ｍｇ
／ｋｇで与え、腫瘍「カットオフ」は１．２ｇであり、実験は６７日目に終了し
た：

【数３】 （式中、末端５’位に２個の２’−Ｏ−メチルリボヌクレオシドおよび末端３’
位に４個の２’−Ｏ−メチルリボヌクレオシドを有する）。

【００３３】 オリゴ１およびオリゴ２は、両方とも統計的に有意なカンプトサル効力の強化
を示した（ｐ＜０．０５、不対ｔ検定）。オリゴ１およびオリゴ２の強化効果は
、互いに比較すると、統計的には区別できなかった。これらの結果は、オリゴヌ
クレオチドが、オリゴヌクレオチドの配列とは無関係にカンプトサルに対して統
計的に有意な強化効果を生じることを示す。さらに、これらの研究においては、
カンプトサル単独での処置は、ビヒクルでの処置よりも統計的に有意に良好なも
のではなかった。それゆえ、これらの結果はオリゴヌクレオチドがカンプトサル
の有効性を強化し得、その結果としてさもなくば治療的用量未満のカンプトサル
が治療的に有効になることを示す。

【００３４】 実施例３ オリゴヌクレオチド投与のタイミングおよび経路の影響 オリゴヌクレオチドは１日目に最初に投与するが、カンプトサルは３日目まで
は投与しなかったこと以外は、実施例１の実験を反復した。驚くべきことに、こ
の投与スケジュールはやはりなお有効であった（図５を参照のこと）。また、オ
リゴヌクレオチドを経口投与すること以外は、実施例１の実験を繰り返した。こ
の投与経路は等しく有効であった（図６を参照のこと）。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１はオリゴ１を用いるＨＣＴ１１６実験でのマウスに関する生
存時間を示す。

【図２】 図２はオリゴ２を用いるＨＣＴ１１６実験でのマウスに関する生
存時間を示す。

【図３】 図３はオリゴ１を用いるＨＣＴ１１６実験でのマウスに関する K
aplan-Meier 生存プロットを示す。

【図４】 図４はオリゴ２を用いるＨＣＴ１１６実験でのマウスに関する K
aplan-Meier 生存プロットを示す。

【図５】 図５はマウスの生存時間に対するオリゴヌクレオチド投与時間の
効果を示す。

【図６】 図６はマウスの生存時間に反映されるオリゴヌクレオチド経口投
与の効力を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 35/00 43/00 １２１ 43/00 １２１ １２３ １２３ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ， ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4C084 AA19 NA05 NA06 ZB261 ZB262 ZC752 4C086 AA01 AA02 CB22 EA16 EA26 EA27 MA02 MA04 NA05 NA06 NA07 ZB26 ZC75

Claims (27)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 重大な副作用を生じさせることなくプロドラッグの活性を統
   計学的に有意に増強する方法であって、２個の５'および４個の３'２'−Ｏ−メ
   チルリボヌクレオシドを有し、配列５'−ＵＧＡＣＡＣＣＴＧＴＴＣＴＣＡＣＵ
   ＣＡＣ−３'を有するオリゴヌクレオチドではないポリアニオンをこのプロドラ
   ッグとともに投与することを含む方法。
2. 【請求項２】 プロドラッグが活性化合物のエステルまたはアミドである、
   請求項１に記載の方法。
3. 【請求項３】 活性化合物が抗癌剤である、請求項２に記載の方法。
4. 【請求項４】 抗癌剤がＳＮ−３８である、請求項３に記載の方法。
5. 【請求項５】 プロドラッグがカンプトサルである、請求項４に記載の方法
   。
6. 【請求項６】 ポリアニオンがポリサルフェートおよびオリゴヌクレオチド
   から選択される、請求項１−５のいずれかに記載の方法。
7. 【請求項７】 ポリサルフェートがヘパリン、デキストランサルフェート、
   スラミンサルフェート、シクロデキストリンサルフェートおよびオリゴヌクレオ
   チドホスホロチオエートまたはホスホロジチオエートから選択される、請求項６
   に記載の方法。
8. 【請求項８】 オリゴヌクレオチドが２'−Ｏ−置換リボヌクレオシドを含
   む、請求項７に記載の方法。
9. 【請求項９】 ２'−Ｏ−置換リボヌクレオシドが２'−Ｏ−メチルリボヌク
   レオシドおよび２'−Ｏ−メトキシエトキシリボヌクレオシドから選択される、
   請求項８に記載の方法。
10. 【請求項１０】 重大な副作用を生じさせることなくプロドラッグの活性を
    統計学的に有意に増強する方法であって、ポリアニオンをこのプロドラッグとと
    もに投与し、ここにこのポリアニオンはこのプロドラッグより前に投与すること
    を含む方法。
11. 【請求項１１】 プロドラッグが活性化合物のエステルまたはアミドである
    、請求項１０に記載の方法。
12. 【請求項１２】 活性化合物が抗癌剤である、請求項１１に記載の方法。
13. 【請求項１３】 抗癌剤がＳＮ−３８である、請求項１２に記載の方法。
14. 【請求項１４】 プロドラッグがカンプトサルである、請求項１３に記載の
    方法。
15. 【請求項１５】 ポリアニオンがポリサルフェートおよびオリゴヌクレオチ
    ドから選択される、請求項１０−１４のいずれかに記載の方法。
16. 【請求項１６】 ポリサルフェートがヘパリン、デキストランサルフェート
    、スラミンサルフェート、シクロデキストリンサルフェートおよびオリゴヌクレ
    オチドホスホロチオエートまたはホスホロジチオエートから選択される、請求項
    １５に記載の方法。
17. 【請求項１７】 オリゴヌクレオチドが２'−Ｏ−置換リボヌクレオシドを
    含む、請求項１５に記載の方法。
18. 【請求項１８】 ２'−Ｏ−置換リボヌクレオシドが２'−Ｏ−メチルリボヌ
    クレオシドおよび２'−Ｏ−メトキシエトキシリボヌクレオシドから選択される
    、請求項１７に記載の方法。
19. 【請求項１９】 重大な副作用を生じさせることなくプロドラッグの活性を
    統計学的に有意に増強する方法であって、ポリアニオンをこのプロドラッグとと
    もに投与し、ここにこのプロドラッグがこのポリアニオンの不存在下で治療的に
    有効ではないであろう量で存在することを含む方法。
20. 【請求項２０】 プロドラッグが活性化合物のエステルまたはアミドである
    、請求項１９に記載の方法。
21. 【請求項２１】 活性化合物が抗癌剤である、請求項２０に記載の方法。
22. 【請求項２２】 抗癌剤がＳＮ−３８である、請求項２１に記載の方法。
23. 【請求項２３】 プロドラッグがカンプトサルである、請求項２２に記載の
    方法。
24. 【請求項２４】 ポリアニオンがポリサルフェートおよびオリゴヌクレオチ
    ドから選択される、請求項１９−２３のいずれかに記載の方法。
25. 【請求項２５】 ポリサルフェートがヘパリン、デキストランサルフェート
    、スラミンサルフェート、シクロデキストリンサルフェートおよびオリゴヌクレ
    オチドホスホロチオエートまたはホスホロジチオエートから選択される、請求項
    ２４に記載の方法。
26. 【請求項２６】 オリゴヌクレオチドが２'−Ｏ−置換リボヌクレオシドを
    含む、請求項２５に記載の方法。
27. 【請求項２７】 ２'−Ｏ−置換リボヌクレオシドが２'−Ｏ−メチルリボヌ
    クレオシドおよび２'−Ｏ−メトキシエトキシリボヌクレオシドから選択される
    、請求項２６に記載の方法。