KR20110086850A - 종양의 치료에 적합한 올리고뉴클레오티드의 용량 - Google Patents

종양의 치료에 적합한 올리고뉴클레오티드의 용량 Download PDF

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Abstract

본 발명은 종양의 예방 및/또는 치료용 약학적 조성물을 제조하기 위한 TGF-베타 1, -2 및/또는 -3, VEGF, 인터루킨 10, c-jun, c-fos, MIA 및/또는 프로스타글란딘 E2의 mRNA와 교잡하는 8 내지 30개 뉴클레오티드 빌딩 블록을 포함하는 안티센스 올리고뉴클레오티드의 용도에 관한 것으로서, 상기 안티센스 올리고뉴클레오티드는 400 내지 800 ㎎/㎡/치료 사이클의 양으로 정맥내에 투여되기에 적합한다.

Description

종양의 치료에 적합한 올리고뉴클레오티드의 용량{DOSAGE OF OLIGONUCLEOTIDES SUITABLE FOR THE TREATMENT OF TUMORS}
본 발명은 TGF-베타 1, TGF-베타 2, TGF-베타 3, VEGF, 인터루킨(interleukin) 10, c-jun, c-fos, MIA 및/또는 프로스타글란딘(prostaglandin) E2에 의해 매개되는 종양을 예방 및/또는 치료하기 위한 정맥내 투여에 적합한 약학적 조성물을 제조하기 위한 올리고뉴클레오티드의 용도에 관한 것이다.
췌장 암종은 가장 공격적인 인간 종양 중 하나이다. 이것은 거의 한결같이 치명적이며, 서구 세계에서 암-연관성 사망의 주된 원인 중 하나이다. 이것은 여성보다는 남성에서 보다 흔하다. 대부분의 국가에서 발생률은 100,000명 당 8 내지 12 케이스의 범위이며, 최근 몇 년 동안 일본에서 뚜렷하게 증가하고 있다. 임상적 증상의 부재는 대개 상기 질환의 말기에 진단이 되도록 한다. 진단시, 환자의 85%는 국소적으로 진행된 비절제성(non-resectable) 암종이며(Ⅱ 기 또는 Ⅲ 기), 심지어 간이나 폐와 같은 먼 곳의 기관으로 췌장을 벗어나 퍼진 전이성 암종(Ⅳ 기)이다. 대부분의 환자는 전이되려는 종양의 성향과 세포독성 제제 및 방사선치료에 대한 본질적인 저항성에 굴복한다(Van Cutsem et al., 2007). 모든 이용가능한 치료를 받음에도 불구하고 진단 5년 후에는 3% 미만의 환자만이 여전히 생존해 있다. 췌장 암종은 악액질(cachexia), 통증, 폐쇄성 황달(obstructive jaundice) 및 소모병(wasting)과 같은 심각한 임상 증상을 동반하며, 집중적인 보살핌을 필요로 한다.
이용가능한 치료 옵션은 거의 없다. 췌장 암종은 화학치료에 매우 민감하지 않기 때문에, 5-FU(5-fluorouracil), 젬시타빈(gemcitabine) 및 옥살리플라틴(oxaliplatin)과 같은 치료제는 증상을 경감시킬 수는 있지만, 평균 생존율은 단지 6개월이다. 젬시타빈은 금 표준(gold standard) 화학치료법으로 널리 받아들여져 왔으며, 평균 생존율은 약 6개월이고, 약 20%는 1년 생존율을 나타낸다(Burris et al., 1997). 상피 성장 인자 수용체(EGRF)를 표적으로 하는 티로신 키나제 억제제인 에를로티니브(erlotinib)는 최근 젬시타빈 단일치료(monotherapy)와의 조합으로 국소적으로 진행된, 비절제성 또는 전이성 췌장암에 대한 첫번째 라인(first-line)의 치료법으로 승인되었다(Moore et al., 2007).
다른 유형의 암은 멜라닌세포에 의해 형성되는 악성 흑색종이며, 1차적으로 피부에서 발생하며, 몸 전체로 신속하게 전이된다. 우세한 위험 인자는 자외선 손상, 면역억제 및 선천성 모반(congenital levi)이다. 모든 피부암 중에서 가장 치명적인 흑색종의 발생은 최근 몇 년에 걸쳐 급격하게 증가되어 왔으며, 호주 및 뉴질랜드에서 가장 높은 발병률을 나타내었다. 진행된 단계(먼 곳의 전이)에서의 평균 생존율은 영향을 받는 기관의 부위에 따라 7 내지 8개월이며, 5년 생존율은 5% 이하이다(Young et al., 2006). 증가된 레벨의 TGF-베타가 모든 전이된 흑색종 및 깊은 침습성의 원발성 흑색종의 94%에서 발현된다.
원칙적으로, 림프절을 포함하는 모든 흑색종 병변은 외과적으로 제거된다. 방사선치료는 증상을 완화시킨다. 전이가 존재할 때에는 치료 가능성이 거의 없고 생존율의 개선도 없지만, 니트로스우레아(nitrosurea) 또는 다카르바진(dacarbazine)과 같은 (어주번트(adjuvant)) 화학치료가 첫 번째로 선택된다. 반응률은 10 내지 20%로 다소 보통이거나 짧게 생존하며, 반응 기간은 약 3개월이다. 고용량의 인터페론-알파(IFN-알파) 또는 PEG화된 IFN-알파를 면역치료로서 첨가하면 반응율을 개선시키지만, 총 생존율에는 영향을 미치지 않으며, 상당한 부작용을 나타낸다. 유사한 발견이 인터루킨-2(IL-2)를 이용한 치료에서 나타나며, 훨씬 더 독성이 강하다.
결장직장 암종은 이환율 및 사망률의 주된 원인이다. Ⅲ 기 및 Ⅳ 기에 대한 5년 생존율은 각각 67% 및 10%이다(SEER 2004). 결장직장암의 가장 높은 발생률은 북아메리카에서 발견된다. 호주/뉴질랜드, 서구 유럽 및 일본은 남성의 경우 100,000명 당 30.1 내지 49.3명이고, 여성의 경우 36.0명이다.
수술은 결장직장 암종에 대한 1차적인 치료이고, 어주번트 화학치료, 면역치료 또는 방사선치료가 추가될 수 있으며, FOLFOX-요법이 첫번째 라인으로 고려된다. 카페시타빈(capecitabine), 이리노테칸(irinotecan) 및 옥살리플라틴(oxaliplatin)과 같은 제제뿐만 아니라 세툭시맙(cetuximab), 에를로티닙(erlotinib) 및 베바시부맙(bevacizumab)과 같은 표적화 제제의 출현은 결장직장 암종 환자의 치료에 대한 생존율의 연장을 가져왔다. 이러한 신규한 표적화 치료로 처리된 전이된 질환을 갖는 환자는, 비록 설사, 구역질, 출혈 및 블리딩(bleeding), 발진, 알레르기 반응 및 심장의 문제와 함께 수반하는 추가적인 관리 비용과 같은 일부 심각한 부작용이 있지만, 2년에 근접하는 평균 생존율을 기대할 수 있다(Kallinowski 2005). 이러한 진전에도 불구하고, 5년 생존율은 Ⅳ 기 환자에 대해서는 10%로 여전히 매우 낮으며(SEER 프로그램 2004), 더 나은 치료 옵션을 위한 의학적 필요성이 높다. 다수의 진행중인 임상적 시도는 현재의 치료를 최적화하기 위한 목적으로 화학치료와 주로 EGFR 및 VEGF을 표적화하는 표적화 치료의 몇 가지 조합을 테스트하고 있다. 다른 제제로는 비-수용체 티로신 키나제의 활성을 억제하는 것들을 포함하며, 양쪽 접근법은 그 자체로는 충분히 특이적이지 않다.
따라서, 새로운 화합물, 알려진 화합물의 조합 또는 화합물 용량의 변화에 도달할 수도 있는 종양 치료의 개선이 시급하게 요구된다. 약학적 물질의 전체적인 특성은 투여되는 양의 증가에 의해 수반되는 효능의 증가이다. 종양 치료에 사용되는 특정 물질은 투여되는 총량과 종양 성장의 억제 사이에 강한 상관관계를 보여준다.
추가적으로, 세포의 흡수는 올리고뉴클레오티드의 "생체내" 투여의 효능에 대한 제한 인자이며, 종래에는 해당 표적 단백질의 생산을 억제하기 위해 고농도 및 다량의 올리고뉴클레오티드가 투여된다.
그럼에도 불구하고, 종양 전이, 신경 질환 및 면역억제를 앓고 있는 포유동물에 투여될 수 있는 이들 물질의 농도 및 총량의 증가는 심각한 부작용 및 독성의 강한 증가와 연관되기 때문에, 이러한 물질의 임상적 성공은 제한된다.
EP 1 008 649 및 EP 0 695 354는 TGF-베타 1 및/또는 TGF-베타 2의 mRNA와 교잡하는 올리고뉴클레오티드가 약학적 조성물의 제조에 사용될 수 있음을 개시하고 있다. EP 1 089 764는 약학적 조성물을 제조하기 위하여 면역 시스템에 부정적인 영향을 미치는 물질의 억제제와 TGF-베타, VEGF, 인터루킨 10 및 프로스타글란딘 E2 및 이들의 해당 수용체와 교잡하는 올리고뉴클레오티드를 조합하여 사용할 수 있음을 추가로 개시하고 있다. 그러나, 상기 특허들은 올리고뉴클레오티드가 투여될 수 있는 넓은 농도 범위를 제공한다. WO 2006/117400 A2는 암을 예방 및/또는 치료하기 위한 약학적 조성물의 제조에 사용되는 올리고뉴클레오티드의 용량을 특정하며, 상기 올리고뉴클레오티드는 저농도에서 국소 투여에 적합하다.
높은 등급의 신경교종(glioma)에서의 기능과 유사하게, TGF-베타(-1, -2 및/또는 -3)는 각각 췌장 암종(Friess et al., 1993; von Berstorff, et al., 2001), 악성 흑색종(Reed et al., 1994) 및 결장직장 암종의 악성 및 진행에 중심적인 역할을 한다. 최근의 췌장 암종, 악성 흑색종 및 결장직장 암종의 치료에서 성취한 특히 임상적 유용성에서의 제한된 진전으로부터, 연장된 생존의 측면에서 보다 효과적인 치료에 대한 필요성은 명확하다.
이러한 문제에 대한 해결이 이하에 개시되는 본 발명에 의해 제공되며, 본 발명은 TGF-베타 1, -2, -3, VEGF, 인터루킨-10, c-jun, c-fos, MIA 및/또는 프로스타글란딘 E2의 mRNA와 교잡하는 8 내지 30개 뉴클레오티드 빌딩 블록(building block)을 포함하는 종양의 예방 및/또는 치료용 약학적 조성물을 제조하기 위한 올리고뉴클레오티드의 용도에 관한 것으로서, 상기 안티센스 올리고뉴클레오티드는 정맥내, 동맥내, 종양내 또는 피하 투여되기에 적합하다.
동맥내, 종양내, 정맥내 또는 피하 투여되기에 적합한 적어도 하나의 올리고뉴클레오티드를 함유하는 약학적 조성물은 각각 특히 췌장 암종, 악성 흑색종 또는 결장직장 암종의 종양 및 전이의 치료에 효과적이며, 보통의 약물(pharmaceutical)과 비교할 때 생존을 연장시킨다.
본 발명의 약학적 조제물의 제조에 사용되는 적어도 하나의 올리고뉴클레오티드는 약 8 내지 약 30개 뉴클레오티드 빌딩 블록의 길이를 갖고, TGF-베타 1, TGF-베타 2, TGF-베타 3, VEGF, 인터루킨-10, c-jun, c-fos, MIA 및/또는 프로스타글란딘 E2에 의해 조절되는 질환의 예방 및/또는 치료를 위해 투여된다.
특히, 종양의 예방 및/또는 치료용 약학적 조성물의 제조에 사용되는 TGF-베타 1, -2 및/또는 -3의 mRNA와 교잡하는 안티센스 올리고뉴클레오티드는 40 ㎎/㎡/d 내지 190 ㎎/㎡/d의 용량으로 정맥내 투여되기에 적합하다.
놀랍게도, 이미 예를 들면 400 내지 800 ㎎/㎡/치료 사이클 총량의 저용량 및 낮은 총량의 상기 약학적 조성물 및 안티센스 올리고뉴클레오티드는 각각 더 높은 용량 및 총량의 약학적 조성물 및 안티센스 올리고뉴클레오티드보다 더 효과적이다.
각각의 용량은 예를 들면 1일 내지 12주와 같은 상이한 기간의 투여 사이클을 형성하는 하루 이상 동안에 투여하기에 적합하다. 비투여(admination free) 간격은 상기 투여 사이클을 뒤따르며, 상기 간격은 항상 동일한 기간이거나, 투여 사이클 사이에 변한다. 바람직하게는, 상기 약학적 조성물은 7일의 사이클 후 7일의 비처리(treatment free) 기간, 또는 대안적으로 4일의 사이클 후 10일의 비처리 기간으로 투여되기에 적합하다.
뜻밖에도, 이미 7일의 치료 사이클 내의 80 ㎎/㎡/d의 저용량뿐만 아니라 4일의 치료 사이클 내의 140 ㎎/㎡/d 또는 190 ㎎/㎡/d의 저용량이 종양 환자의 생존 연장에서 높은 효능을 보였다.
본 발명의 추가적인 이점은 핵산 표적에 대한 친화도의 향상, 세포 흡수의 향상, 안정성의 향상, 적은 부작용 및 뉴클레아제(nuclease) 존재 하에서의 증가된 안정성이다.
본 발명의 문맥에서 "약"이란 표현은 상기 문맥에서 주어진 절대값으로부터 해당 값의 0 내지 100%, 더욱 바람직하게는 1 내지 80%, 더욱 더 바람직하게는 2 내지 60%, 더욱 바람직하게는 3 내지 40%, 더욱 바람직하게는 4 내지 20%, 더욱 바람직하게는 5 내지 10%의 편차를 포함한다.
본 발명의 문맥에서의 부작용은 약학적 조제물의 투여 후 필연적으로 해당 약학적 조제물의 처리와 인과관계를 갖지는 않는 환자 또는 임상적 연구 대상에서 임의의 뜻밖의 의학적 발생인 것으로 이해된다. 따라서, 부작용은 임의의 부정적이고 의도하지 않은 조짐(비정상적인 실험실적 발견을 포함함), 증상 또는 예컨대 질환의 진행으로 인한 질환일 수 있다.
본 발명에 따른 췌장 또는 결장직장의 종양과 동의어로 사용되는 췌장 또는 결장직장 종양 또는 악성 흑색종은 전이, 췌장, 결장직장 또는 피부 이외의 부분 유래 또는 신체 내의 임의의 다른 종양 유래의 전이를 포함하는 췌장, 결장직장 또는 피부의 임의의 종양이다.
본 발명에 있어서, 종양이란 표현은 인간 또는 동물 신체의 임의의 양성 또는 악성 종양을 포함한다.
본 발명의 문맥에서 교잡이란 수소결합에 의해 적어도 부분적으로 이중 가닥을 형성하는 2개의 뉴클레오티드 사슬을 의미한다. 상기 이중 가닥은 2개의 뉴클레오티드 사슬이 정확한 안티센스 서열을 가질 때 완전하게 생성된다. 그러나, 뉴클레오티드 빌딩 블록으로도 불리는 올리고뉴클레오티즈의 임의의 뉴클레오티드가 다른 뉴클레오티드로 치환된다면, 해당 뉴클레오티드는 변형되거나 심지어 해당 올리고뉴클에오티드의 위치에 스페이서(spacer)가 있을 때, 상기 올리고뉴클레오티드는 여전히 일반적으로 단백질의 mRNA인 표적 분자와 교잡할 수 있고, 이로 인해 상기 단백질의 생성을 억제할 수 있다. 본 발명의 문맥에서 전이란 적어도 하나의 세포가 종양 조직으로부터 분리 또는 떨어져서, 예컨대 림프계, 혈관을 통해 이동하거나 및/또는 포유동물, 바람직하게는 인간의 신체의 다른 부분인 주위 조직을 침범하고, 그곳에서 정착하여 새로운 종양 조직을 형성하는 것을 의미한다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드란 용어는 포유동물에게 투여시 생물학적으로 활성인 대사물 또는 그의 잔기를 제공할 수 있는 임의의 약학적으로 허용가능한 염, 에스테르 또는 임의의 다른 화합물을 포괄한다. 이것은 TGF-베타 1, TGF-베타 2, TGF-베타 3, VEGF, 인터루킨 10, c-jun, c-fos, MIA 및/또는 프로스타글란딘 E2를 코딩하는 하나 이상의 핵산과 상기 화합물의 특이적인 교잡에 의해 완수된다. 올리고뉴클레오티드란 용어는 예를 들면 안티센스 올리고뉴클레오티드, siRNA, miRNA 또는 압타머(aptamer)를 포함한다.
핵산 및 올리고뉴클레오티드란 용어는 본 발명의 문맥에서 동의어로 사용된다.
어떤 구현예에서, 상기 핵산은 안티센스 핵산은 아니며, 이것은 이들이 세포 내에서 상보적인 DNA 또는 RNA 종, 특히 게놈 DNA 또는 RNA 종과 부분적으로 또는 완전히 결합함으로써 기능을 하지는 않으며, 따라서 상기 DNA 또는 RNA 종, 특히 게놈 DNA 또는 RNA 종의 기능을 억제하지는 않는다는 것을 의미한다.
한 구현예에서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 또한 특허 EP 0 695 354 및 EP 1 008 649뿐만 아니라 WO 01/68146, WO 98/33904, WO 99/63975 및 WO 99/63975로 공개된 국제 특허 출원에 개시되어 있는 것과 같은 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
한 바람직한 구현예에서 TGF-베타와 교잡하는 올리고뉴클레오티드는 서열번호 1 내지 서열번호 78 또는 서열번호 79 내지 서열번호 89, 또는 서열번호 90 내지 서열번호 126, 또는 서열번호 127 내지 서열번호 146, 또는 서열번호 147 내지 서열번호 205, 또는 서열번호 206 내지 서열번호 287 또는 서열번호 287 내지 서열번호 325에 따른 적어도 하나의 서열을 포함한다.
올리고뉴클레오티드 또는 핵산은 유사한 기능을 갖는 자연적으로 발생하지 않는 부분을 갖는 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 자연적으로 발생하는 뉴클레오티드뿐만 아니라 자연적으로 발생하지 않는 뉴클레오티드, 변형물 및 스페이서 또한 뉴클레오티드 빌딩 블록으로 나타낸다. 가장 흔한 올리고뉴클레오티드 빌딩 블록은 뉴클레오티드이다. 변형 또는 치환된 뉴클레오티드뿐만 아니라 스페이서 또한 뉴클레오티드 빌딩 블록이란 표현에 포함된다.
상기 변형 또는 치환된 올리고뉴클레오티드는 증가된 세포 흡수, 핵산 표적(예컨대, 단백질)에 대한 증가된 친화도, 변형된 세포내 위치화(localization) 및 뉴클레아제 존재 하에서의 증가된 안정성과 같은 바람직한 특성으로 인하여 종종 자연형보다 더 바람직하다. 본 발명에서 사용되는 것과 같은 올리고뉴클레오티드의 변형은 당, 염기 모이어티(moiety) 및/또는 뉴클레오티드간 결합의 임의의 화학적 변형을 포함한다.
한 구현예에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 내의 뉴클레오티드의 리보오스기의 고리 구조는 상기 고리 구조 내에 N-H, N-R(R은 알킬, 보다 바람직하게는 1 내지 20개 탄소를 갖는 알킬, 더욱 바람직하게는 알킬은 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸이거나, R은 아릴 치환체임), S 및/또는 메틸렌으로 치환된 산소를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 약학적 조제물은 약학적으로 허용가능한 담체 내의 본 발명의 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
한 구현예에서, 공유결합으로 변형된 염기 및/또는 당을 갖는 핵산 또는 올리고뉴클레오티드는 예를 들면 3' 및/또는 2' 위치에서 히드록시기 또는 5' 위치에서 포스페이트기 이외의 저분자량의 유기기와 공유결합으로 부착된 백본(backbone) 당을 갖는 핵산을 포함한다. 따라서, 변형된 핵산은 적어도 하나의 2'-O-치환된 리보오스기를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 목적을 위하여, "2'-치환된"이란 용어는 리보오스 분자의 2'-OH의 치환을 의미한다. 상기 O는 N, S와 치환될 수 있으며, 상기 치환체는 1 내지 20개 탄소를 갖는 알킬, 예컨대 O-알킬, S-알킬, NH-알킬, N-디알킬, O-아릴, S-아릴, NH-아릴, O-아랄킬, S-아랄킬 및 NH-아랄킬을 추가로 포함할 수 있다. 2'-O-알킬기의 바람직한 구현예는 메톡시-, 에톡시-, 프로필옥시-, 이소프로필옥시- 및 메톡시에톡시이다. 뉴클레오티드 빌딩 블록의 추가적인 변형은 US6,143,881, US5,591,721, US5,652,355, US5,962,425, US5,969,116 및 US5,914,396 특허에 개시되어 있다. 다른 바람직한 구현예는 2'-탄소에 결합된 알킬기를 갖는 적어도 하나의 데옥시리보오스를 포함하는 뉴클레오티드 빌딩 블록이다. 상기 알킬은 약 1 내지 약 30개 탄소, 1 내지 약 20개 탄소, 1 내지 약 10개 탄소, 또는 1 내지 약 5개 탄소를 가질 수 있다. 바람직한 알킬기는 에틸-, 프로필-, 이소프로필-, 부틸기이고, 매우 바람직하게는 메틸기이다.
또 다른 구현예에서, 변형된 핵산은 리보오스 대신에 아라비노오스와 같은 당을 포함한다. 따라서, 상기 핵산은 백본 조성에서 이질적(heterogeneous)일 수 있으며, 따라서 펩티드-핵산(핵산 염기에 결합된 아미노산 백본을 가짐)과 같이 함께 결합된 폴리머 단위의 임의의 가능한 조합을 함유할 수 있다. 어떤 구현예에서, 상기 핵산은 백본 조성에서 동질적(homogeneous)이다.
상기 핵산의 치환된 퓨린 및 피리미딘은 시토신과 같은 표준 퓨린 및 피리미딘뿐만 아니라 치환된 염기(Wagner et al. 1993)와 같은 염기 유사체(analog)를 포함한다. 퓨린 및 피리미딘은 아데닌, 시토신, 구아닌, 티민, 이노신, 5-메틸시토신, 2-아미노퓨린, 2-아미노-6-클로로퓨린, 2,6-디아미노퓨린, 하이폭산틴(hypoxanthine) 및 다른 자연적으로 발생하거나 자연적으로 발생하지 않는 뉴클레오염기, 치환된 및 치환되지 않은 방향족 모이어티를 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다.
각각의 올리고뉴클레오티드 내의 단일한 뉴클레오티드는 동일한 변형을 함유할 수 있고, 이들 변형의 조합을 함유할 수 있으며, 또는 이들 변형과 포스포디에스테르 결합을 조합할 수 있다. 올리고뉴클레오티드 뉴클레아제에 저항성을 부여하는 방법은 상기 퓨린 또는 피리미딘 염기를 공유결합으로 변형시키는 것을 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다. 예를 들면, 염기는 메틸화, 히드록시메틸화되거나, 달리 치환(예컨대, 글리코실화)되어서, 상기 올리고뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드가 실질적으로 산 및 뉴클레아제에 저항성이 있도록 할 수 있다.
바람직한 구현예에서, 상기 올리고뉴클레오티드의 적어도 한 말단은 바이오틴(biotin), 바이오틴 유사체, 아비딘(avidin) 또는 아비딘 유사체이다. 상기 분자들은 보호된 올리고뉴클레오티드가 붕괴되는 것을 방지할 수 있는 능력을 갖고 있으며, 상기 변형된 핵산을 고형 지지체에 높은 친화도로 부착시키기 위한 수단을 제공한다. 본 발명의 시약을 제조하기 위해 사용될 수 있는 아비딘 및 바이오틴 유도체는 스트렙트아비딘, 숙시닐화된 아비딘, 모노머성 아비딘, 바이오시틴(바이오틴-엡실론-N-라이신), 바이오시틴 히드라지드, 2-이미노바이오틴의 아민 또는 설프히드릴 유도체 및 바이오티닐-엡실론-아미노카프로산 히드라지드를 포함한다. 바이오틴-N-히드록시숙신이미드 에스테르, 바이오티닐-엡실론-아미노카프로산-N-히드록시숙신이미드 에스테르, 설포숙신이미딜 6-(바이오틴 아미도)헥사노에이트, N-히드록시숙신이미드이미노바이오틴, 바이오틴브로모아세틸히드라지드, p-디아조벤조일 바이오시틴 및 3-(N-말레이미도프로피오닐)-바이오시틴과 같은 추가적인 바이오틴 유도체 또한 본 발명의 올리고뉴클레오티드에 대한 말단-차단기로 사용될 수 있다.
다른 바람직한 구현예에서, 상기 올리고뉴클레오티드는 WO 2008/077956 A2에 개시된 바와 같이 상기 올리고뉴클레오티드의 3'- 및/또는 5'말단 및/또는 상기 올리고뉴클레오티드의 임의의 내부 뉴클레오티드에 폴리머, 특히 PEG와 접합된다.
대안적인 구현예에서, 상기 올리고뉴클레오티드는 DNA 또는 RNA 서열과 상호작용하는 압타머 또는 갭머(gapmer)이다.
또 다른 구현예에서, 상기 염기 단위는 적합한 핵산 표적 화합물과 교잡하기 위해 유지된다. 이러한 한 올리고머성 화합물인 뛰어난 교잡 특성을 갖는 것으로 나타나 있는 올리고뉴클레오티드 모방체(mimetic)는 펩티드 핵산(PNA)으로 나타낸다. PNA 화합물에서, 올리고뉴클레오티드의 당-백본은 아미드 함유 백본, 특히 아미노에틸글리신 백본으로 교체된다. 상기 뉴클레오염기는 상기 백본의 아미드 부분의 아자 질소 원자에 직접 또는 간접 결합된다. PNA 화합물의 제조를 개시하고 있는 대표적인 미국 특허는 US5,539,082, US5,714,331 및 US5,719,262를 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다. PNA 화합물에 대한 추가적인 개시는 닐슨 등(Nielsen et al. 1991)에서 발견될 수 있다.
추가적인 백본 변형된 올리고뉴클레오티드는 예를 들면 포스포로티오에이트, 키랄(chiral) 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포로트리에스테르, 아미노알킬-포스포로트리에스테르, 메틸- 및 3'-알킬렌 포스포네이트 및 키랄 포스포네이트를 포함하는 다른 알킬-포스포네이트, 포스피네이트, 3'-아미노포스포라미데이트 및 아미노알킬포스포라미데이트를 포함하는 포스포라미데이트, 티오노포스포라미데이트, 티오노알킬포스포네이트, 티오노알킬포스포트리에스테르 및 정상 3'-5' 결합을 갖는 보라노포스페이트, 이들의 2'-5' 결합된 유사체 및 뒤바뀐 극성을 갖는 것들로서, 뉴클레오시드 단위의 인접한 쌍이 3'-5'에서 5'-3'으로 또는 2'-5'에서 5'-2'으로 결합된 것들을 포함한다. 다양한 염, 혼합된 염 및 자유산 형태 또한 포함될 수 있다. 한 바람직한 구현예는 상기 핵산의 나트륨염이다.
어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오티드의 적어도 하나의 뉴클레오티드는 전술한 바와 같이 상기 변형 중 하나로 변형된다. 상기 변형은 상기 올리고뉴클레오티드를 연속적으로 또는 불규칙하게 커버할 수 있다.
또 다른 구현예에서, 전술한 것과 같은 적어도 2개의 변형이 하나의 올리고뉴클레오티드 내에 조합된다.
다른 구현예에서, 1 내지 약 12개 또는 1 내지 약 8개 또는 1 내지 약 4개 또는 1 내지 약 2개의 올리고뉴클레오티드 및/또는 상기 올리고뉴클레오티드의 3' 및/또는 5' 말단에서의 뉴클레오티드 결합이 전술한 바와 같이 변형된다.
한 구현예에서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 표적, 예컨대 TGF-베타 또는 그 아형(subtype), 보다 바람직하게는 TGF-베타 1, TGF-베타 2 및/또는 TGF-베타 3과 교잡한다. 상기 표적의 mRNA의 안티센스 구조는 PCT/EP2004/053604에 개시되어 있다.
사슬 연장(chain elongation)은 서열목록의 올리고뉴클레오티드 및 상기 표적의 mRNA의 해당 안티센스 구조의 서열의 추가적인 뉴클레오티드를 갖는 다른 올리고뉴클레오티드가 여전히 본 발명의 범위 내임을 의미한다. 한 구현예에서, 상기 추가적인 뉴클레오티드는 mRNA의 코딩 서열에 따르며, 또 다른 구현예에서, 상기 추가적인 뉴클레오티드는 또한 인트론 및 엑손을 포함하는 상기 mRNA의 비코딩 부분으로부터 유래된다. 상기 추가적인 뉴클레오티드는 상기 3' 및/또는 5' 말단의 적어도 하나에 결합되고, 다른 구현예에서는 2' 또는 5' 말단의 적어도 하나에 결합된 약 1 내지 약 10,000개 뉴클레오티드, 약 1 내지 약 5,000개 뉴클레오티드, 약 1 내지 약 3,000개 뉴클레오티드, 약 1 내지 약 1,000개 뉴클레오티드, 약 1 내지 약 500개 뉴클레오티드, 약 1 내지 약 100개 뉴클레오티드, 약 1 내지 약 50개 뉴클레오티드, 약 1 내지 약 25개 뉴클레오티드, 약 1 내지 약 10개 뉴클레오티드, 약 1 내지 약 5개 뉴클레오티드 또는 약 1 내지 약 2개 뉴클레오티드를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 상기 올리고노클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드의 어떤 뉴클레오티드 빌딩 블록은 본 발명에 개시된 바와 같이 스페이서 및/또는 변형물에 의해 변형 또는 치환될 수 있다.
약학적으로 허용가능한 염은 본 발명에서 사용되는 화합물의 생리학적 및 약학적으로 허용가능한 염을 나타내며, 상기 염이 원하지 않는 독성학상(toxicological) 효과 없이 양친(parent) 화합물의 생물학적 활성을 유지하고 있음을 의미한다.
한 구현예에서, 상기 올리고뉴클레오티드 또는 그 활성 유도체는 단일한 가닥의 올리고뉴클레오티드이고, 또 다른 구현예에서 상기 올리고뉴클레오티드는 이중 가닥인데, 이는 상기 올리고뉴클레오티드가 상기 올리고뉴클레오티드의 정확한 안티센스 구조의 약 50% 내지 약 100%를 갖는 두 번째 올리고뉴클레오티드와 완전히 또는 부분적으로 교잡된 것을 의미한다. 그 결과로서 양쪽 올리고뉴클레오티드가 작은 결합 강도로 교잡하는 이중 가닥 또는 중첩된 말단을 갖는 이중 가닥이 될 수 있다. 상기 두 개의 올리고뉴클레오티드는 동일한 길이를 가질 수 있으며, 달리 말하면 이들은 동일한 양의 뉴클레오티드 빌딩 블록을 갖거나, 그 길이가 달라서 한 말단 또는 양쪽 말단에 중첩하는 말단을 가질 수 있다.
본 발명의 문맥에서 상기 발현 스페이서는 명백하게 뉴클레오티드의 유도체 또는 변형물은 아니지만 결과물인 올리고뉴클레오티드가 여전히 그 표적, 예컨대 TGF-베타 1, TGF-베타 2, TGF-베타 3, 프로스타글란딘 E2, c-fos, c-jun, MIA 또는 인터루킨-10의 mRNA와 교잡하도록 하는 방식으로 2개의 뉴클레오티드 빌딩 블록을 연결하는 임의의 뉴클레오티드 빌딩 블록을 포함한다.
본 발명의 한 구현예는 종양을 예방 및/또는 치료하기 위한 약학적 조성물을 제조하기 위하여 TGF-베타 1, -2 및/또는 -3의 mRNA와 교잡하는 올리고뉴클레오티드, 바람직하게는 8 내지 30개 뉴클레오티드 빌딩 블록을 포함하는 안티센스 올리고뉴클레오티드의 용도를 나타내며, 상기 안티센스 올리고뉴클레오티드는 바람직하게는 적어도 0.5 내지 40개월, 적어도 1 내지 40개월, 또는 적어도 3 내지 40개월의 생존 연장을 위하여 80 ㎎/㎡/d, 140 ㎎/㎡/d 또는 190 ㎎/㎡/d의 용량으로 정맥내 투여된다.
본 발명의 다른 구현예에서, 상기 올리고뉴클레오티드는 10 ㎎/㎡/d 내지 500 ㎎/㎡/d의 용량, 바람직하게는 40 ㎎/㎡/d 내지 400 ㎎/㎡/d의 용량, 더욱 바람직하게는 40 ㎎/㎡/d 내지 250 ㎎/㎡/d, 80 ㎎/㎡/d 내지 250 ㎎/ ㎡/d, 140 ㎎/㎡/d 내지 250 ㎎/㎡/d, 160 ㎎/㎡/d 내지 250 ㎎/㎡/d, 190 ㎎/㎡/d 내지 250 ㎎/㎡/d, 또는 40 ㎎/㎡/d 내지 190 ㎎/㎡/d, 80 ㎎/㎡/d 내지 190 ㎎/㎡/d, 160 ㎎/㎡/d 내지 190 ㎎/㎡/d, 또는 40 ㎎/㎡/d 내지 160 ㎎/㎡/d, 80 ㎎/㎡/d 내지 160 ㎎/㎡/d의 용량, 또는 보다 더 바람직하게는 40 ㎎/㎡/d 내지 140 ㎎/㎡/d, 80 ㎎/㎡/d 내지 140 ㎎/㎡/d의 용량으로 투여된다. 상기 올리고뉴클레오티드의 가장 바람직한 용량은 20 ㎎/㎡/d, 40 ㎎/㎡/d, 60 ㎎/㎡/d, 80 ㎎/㎡/d, 100 ㎎/㎡/d, 120 ㎎/㎡/d, 140 ㎎/㎡/d, 160 ㎎/㎡/d, 180 ㎎/㎡/d, 190 ㎎/㎡/d, 200 ㎎/㎡/d, 210 ㎎/㎡/d, 220 ㎎/㎡/d, 230 ㎎/㎡/d, 240 ㎎/㎡/d, 250 ㎎/㎡/d, 300 ㎎/㎡/d, 350 ㎎/㎡/d, 400 ㎎/㎡/d, 450 ㎎/㎡/d 또는 500 ㎎/㎡/d이다.
바람직한 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 40 ㎎/㎡/d, 80 ㎎/㎡/d, 140 ㎎/㎡/d, 160 ㎎/㎡/d, 190 ㎎/㎡/d, 240 ㎎/㎡/d, 250 ㎎/㎡/d, 300 ㎎/㎡/d, 330 ㎎/㎡/d 또는 350 ㎎/㎡/d의 용량이다.
본 발명의 다른 구현예에서, 전술한 용량 내의 약학적 조성물 및 안티센스 올리고뉴클레오티드는 각각 췌장 암종, 악성 흑색종, 또는 결장직장 암종과 같은 악성 종양을 앓고 있는 환자의 생존을 적어도 또는 약 0.5 내지 60개월, 0.5 내지 48개월, 0.5 내지 36개월, 0.5 내지 24개월, 0.5 내지 12개월, 0.5 내지 9개월, 0.5 내지 6개월, 또는 1 내지 60개월, 1 내지 48개월, 1 내지 36개월, 1 내지 24개월, 1 내지 12개월, 1 내지 9개월, 1 내지 6개월, 바람직하게는 적어도 또는 약 2 내지 60개월, 2 내지 48개월, 2 내지 36개월, 2 내지 24개월, 2 내지 12개월, 2 내지 9개월, 2 내지 6개월, 더욱 바람직하게는 적어도 또는 약 3 내지 60개월, 3 내지 48개월, 3 내지 36개월, 3 내지 24개월, 3 내지 12개월, 3 내지 9개월, 더욱 더 바람직하게는 적어도 또는 약 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60개월, 가장 바람직하게는 적어도 10년, 15년, 20년, 25년, 30년, 35년, 40년, 45년, 50년, 55년, 60년, 65년, 70년, 75년, 80년, 85년, 90년, 95년 및 100년 동안 연장시킬 수 있다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드는 단일한 가닥이지만, 어떤 구현예에서 상기 단일 가닥 핵산의 적어도 일부는 이중 가닥이다. 이중 가닥 분자는 생체내에서 보다 안정하지만, 단일 가닥 분자는 증가된 활성을 갖는다.
한 구현예에서, 상기 올리고뉴클레오티드는 약 8 내지 약 30개 뉴클레오티드 사이의 길이를 가지며, 표적 TGF-베타 1, TGF-베타 2, TGF-베타 3, VEGF, 인터루킨 10, c-jun, c-fos, MIA 및 프로스타글란딘 E2의 mRNA에 상보적이다. 보다 바람직한 구현예에서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 약 7 내지 약 25개 뉴클레오티드, 또는 약 8 내지 30개 뉴클레오티드, 보다 더 바람직하게는 약 12 내지 18개 뉴클레오티드의 길이를 갖는다. 본 발명에서 사용가능한 올리고뉴클레오티드의 바람직한 구현예는 서열번호 1 내지 78로 서열목록에 나타나 있으며, 더욱 바람직한 구현예는 서열번호 22 내지 48이고, 더욱 더 바람직하게는 서열번호 1 또는 22 또는 58이다. 한 바람직한 구현예에서, 서열번호 22는 각각 6142.4 g의 분자량을 갖는 나트륨염, 또는 올리고뉴클레오티드 당 약 54개의 결정수 분자를 포함하는 7115.3 g의 수화물의 형태로 투여된다.
본 발명에 따라 약학적 조제물에서 사용가능한 다른 올리고뉴클레오티드는 각각 EP 1 089 764, EP 0 695 534, PCT/EP98/00497 및 PCT/EP2005/002101의 서열목록 및 실시예에 개시되어 있는 올리고뉴클레오티드이다.
다른 구현예에서, 약학적 조제물을 제조하기 위한 적어도 하나의 올리고뉴클레오티드는 2개의 뉴클레오티드 빌딩 블록 사이의 적어도 하나의 포스포로티오에이트 결합을 포함한다. 상기 포스포로티오에이트 결합은 상기 결합의 0% 내지 5%, 5% 내지 10%, 10% 내지 15%, 15% 내지 20%, 20% 내지 25%, 25% 내지 30%, 30% 내지 35%, 35% 내지 40%, 40% 내지 45%, 45% 내지 50%, 50% 내지 55%, 55% 내지 60%, 60% 내지 65%, 65% 내지 70%, 70% 내지 75%, 75% 내지 80%, 80% 내지 85%, 85% 내지 90%, 90% 내지 95% 또는 95% 내지 100%를 커버할 수 있다. 상기 포스포로티오에이트 결합은 상기 올리고뉴클레오티드에 걸쳐 규칙적으로 또는 불규칙적으로 산재될 수 있다. 어떤 구현예에서, 상기 포스포로티오에이트는 상기 올리고뉴클레오티드의 3' 및/또는 5' 말단의 하나 또는 모두에 축적된다. 다른 바람직한 구현예는 상기 뉴클레오티드 사이의 모든 결합이 포스포로티오에이트인 올리고뉴클레오티드이다.
한 구현예에서, 상기 올리고뉴클레오티드는 단일 가닥의 올리고뉴클레오티드이다. 단일 가닥은 모든 올리고뉴클레오티드 빌딩 블록이 한 줄이고, 두 번째 올리고뉴클레오티드 또는 안티센스 올리고뉴클레오티드와 교잡하지 않으며, 달리 결합되지 않는다는 것을 의미한다.
바람직한 구현예에서, 상기 약학적 조성물 및 올리고뉴클레오티드는 각각 정맥내 투여되거나, 조직, 종양 또는 체강 내로의 투입(infusion)에 의해 투여된다. 보다 바람직한 구현예에서, 상기 조직은 담관, 방광, 뼈, 골수, 뇌, 유방, 결장, 자궁내막, 상피, 쓸개, 머리, 머리와 목, 심장, 장, 관절, 신장, 후두, 간, 폐, 림프절, 림프관, 근육, 식도, 난소, 췌장, 전립선, 직장, 요관, 요로(urinary duct), 피부 및 그 층들, 비장, 위, 고환, 흉선, 갑상선, 편도 또는 자궁의 군으로부터 선택되거나 및/또는 상기 조직의 해당 종양에 투여된다.
다른 구현예에서, 올리고뉴클레오티드의 약학적 조제물은 담관, 방광, 결장, 쓸개, 관절강, 늑막강, 복강내 공간, 직장, 소화기관, 요로, 방광, 실 공간(ventricular space), 특히 뇌실 공간의 군으로부터 선택되는 체강 내로 투여된다.
본 발명의 또 다른 구현예에서, 적어도 하나의 올리고뉴클레오티드를 포함하는 약학적 조성물은 예를 들면 정맥내로 약 0.01 내지 약 1 ㎖/h, 0.01 내지 약 10 ㎖/h, 약 0.1 ㎖/h 내지 약 1 ㎖/h, 약 0.1 ㎖/h 내지 약 10 ㎖/h, 1 ㎖/h 내지 10 ㎖/h 또는 5 ㎖/h 내지 10 ㎖/h의 유속으로 투여된다. 또한, 바람직하게는 유속은 약 0.2 ㎖/min 내지 약 9 ㎖/min, 0.3 ㎖/h 내지 8 ㎖/h, 0.4 ㎖/h 내지 7 ㎖/h, 0.5 ㎖/h 내지 6 ㎖/h, 0.6 ㎖/h 내지 5 ㎖/h, 0.7 ㎖/h 내지 5 ㎖/h, 0.8 ㎖/h 내지 5 ㎖/h, 0.9 ㎖/h 내지 5 ㎖/h, 더욱 바람직하게는 약 0.1 ㎖/h, 0.2 ㎖/h, 0.25 ㎖/h, 0.3 ㎖/h, 0.4 ㎖/h, 0.5 ㎖/h, 0.6 ㎖/h, 0.7 ㎖/h, 0.8 ㎖/h, 0.9 ㎖/h, 1.0 ㎖/h, 1.1 ㎖/h, 1.2 ㎖/h, 1.3 ㎖/h, 1.4 ㎖/h, 1.5 ㎖/h, 1.6 ㎖/h, 1.7 ㎖/h, 1.8 ㎖/h, 1.9 ㎖/h 또는 2.0 ㎖/h이다.
한 구현예에서, 상기 약학적 조성물은 주사기와 같은 적용 시스템(application system)을 이용하여 투여되기에 적합하다. 바람직한 적용 시스템은 유연한 튜브가 포트 시스템에 연결되어 있는 휴대용 펌프를 포함한다. 상기 포트 시스템은 투입 카테터에 연결된다. 본 발명에 이용가능한 적용 시스템은 예를 들면 국제 특허 출원 PCT/EP2004/004211에 개시되어 있다.
바람직하게는, 예를 들면 정맥내 투여되는 약학적 조성물 및 올리고뉴클레오티드의 하루 당 총 부피는 각각 약 1 ㎖/d 내지 약 500 ㎖/d, 약 2 ㎖/d 내지 약 250 ㎖/d, 보다 바람직하게는 약 5 ㎖/d 내지 약 200 ㎖/d, 보다 더 바람직하게는 약 7 ㎖/d 내지 약 150 ㎖/d, 보다 더 바람직하게는 약 10 ㎖/d 내지 약 100 ㎖/d, 보다 더 바람직하게는 약 15 ㎖/d 내지 약 50 ㎖/d, 가장 바람직하게는 약 20 ㎖/d 또는 약 50 ㎖/d의 범위이다.
한 구현예에서, 상기 약학적 조성물 및 올리고뉴클레오티드는 각각 예를 들면 정맥내 또는 종양, 조직 또는 체강 내에 1 내지 100 사이클, 1 내지 50 사이클, 1 내지 25 사이클, 1 내지 20 사이클, 1 내지 15 사이클, 1 내지 10 사이클, 바람직하게는 2 내지 10 사이클, 2 내지 8 사이클, 2 내지 6 사이클, 또는 2 내지 4 사이클, 보다 바람직하게는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25 사이클로 투여되기에 적합하고, 하루 이상 투여되며, 각각의 사이클의 기간은 동일하거나 변한다.
바람직한 구현예에서, 상기 약학적 조성물 및 안티센스 올리고뉴클레오티드는 각각 적어도 또는 약 5시간, 10시간, 15시간, 20시간, 24시간, 36시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주 또는 12주 투여되었다. 보다 바람직하게는, 상기 약학적 조성물 및 안티센스 올리고뉴클레오티드는 각각 한 치료 사이클로 적어도 또는 약 5시간, 10시간, 15시간, 20시간, 1일, 36시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 3주, 4주, 5주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주 또는 12주 투여되었고, 상기 약학적 조성물 및 안티센스 올리고뉴클레오티드는 각각 매일, 매 2일, 매 3일, 매 4일, 매 5일, 매 6일, 매 7일, 매주, 매 2주, 매 3주, 매 4주, 매 5주, 매 6주, 매 7주, 매 8주, 매 9주, 매 10주, 매 11주 또는 매 12주에 투여되기에 적합하다.
바람직한 구현예에서, 한 치료 사이클과 다른 사이클 사이의 간격은 적어도 또는 약 5시간, 10시간, 15시간, 20시간, 24시간, 36시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 3주, 4주, 5주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주 또는 12주이며, 상기 치료 사이클 사이의 시간 간격은 동일하거나 변한다. 상기 투여 사이클 사이의 시간 간격 동안에, 약학적 조성물 및 안티센스 올리고뉴클레오티드는 각각 투여되지 않는다. 다른 한편으로, 상기 투여 사이클 사이의 시간 간격 동안에, 예를 들면 5-플루오로우라실, BCNU 또는 빈카 알칼로이드(vinca alkaloid)와 같은 화학치료제와 같은 다른 화합물이 투여된다.
한 구현예에서, 동일한 총량의 올리고뉴클레오티드가 투여된다면, 대상의 세포 또는 혈장 내에 투여된 올리고뉴클레오티드의 생체이용성은 뜻밖에도 치료 사이클 기간의 감소에 따라 증가한다. 환자의 세포 또는 혈장 내의 올리고뉴클레오티드의 농도는 치료 사이클의 기간과 무관하게 투여되는 올리고뉴클레오티드의 용량 증가와 함께 증가한다(도 3 및 도 4). Cmax는 매질(medium) 내의 물질의 최대 농도로 정의되며, 도 3 및 도 4에 안티센스 올리고뉴클레오티드, 특히 대상의 혈장 내의 TGF-베타 2 안티센스 올리고뉴클레오티드의 최대 농도가 나타나 있다.
상기 바람직한 구현예에서, 올리고 뉴클레오티드의 용량이 증가되면, 대상의 세포 또는 혈장 내의 상기 올리고뉴클레오티드의 생체이용성이 증가되며, 치료 사이클의 기간이 감소되면 동일한 총량의 올리고뉴클레오티드는 더 높은 생체이용성을 나타낸다(도 5 및 도 6). 생체이용성은 치료학적으로 활성인 약물, 예를 들면 체순환(systemic circulation)에 도달하여 작용 부위에서 이용가능한 안티센스 올리고뉴클레오티드의 정도의 측정값이다. 생체이용성은 소정의 기간, 예컨대 실시예 6에서는 4일 또는 7일 내에 혈장 농도의 곡선 아래의 면적으로 정의되는 AUC(area under the curve)에 의해 분석된다.
가장 바람직한 구현예에서, 예를 들면 생리학적(=등장성) 용액 내에 용해되어 있는 안티센스 올리고뉴클레오티드는 적어도 또는 약 1 또는 2 내지 50 사이클, 1 또는 2 내지 40 사이클, 1 또는 2 내지 30 사이클, 1 또는 2 내지 20 사이클, 1 또는 2 내지 10 사이클, 1 또는 2 내지 8 사이클, 1 또는 2 내지 6 사이클, 1 또는 2 내지 4 사이클, 1 또는 2 사이클로 투여되며, 한 사이클은 4일로 이루어지고 사이클 사이의 시간 간격은 10일이며, 또는 한 사이클은 4일로 이루어지고 사이클 사이의 시간 간격은 7일이며, 또는 한 사이클은 10일로 이루어지고 사이클 사이의 시간 간격은 4일이며, 또는 한 사이클은 7일로 이루어지고 사이클 사이의 시간 간격은 7일이며, 또는 한 사이클은 7일로 이루어지고 사이클 사이의 시간 간격은 10일이며, 또는 한 사이클은 10일로 이루어지고 사이클 사이의 시간 간격은 7일이며, 상기 종양은 바람직하게는 췌장 암종, 악성 흑색종 또는 결장직장 암종이다.
상기 약학적 조성물 및 안티센스 올리고뉴클레오티드는 각각 적어도 또는 약 150 내지 5,000 ㎎/㎡/사이클, 150 내지 4,500 ㎎/㎡/사이클, 150 내지 4,000 ㎎/㎡/사이클, 150 내지 3,500 ㎎/㎡/사이클, 150 내지 3,000 ㎎/㎡/사이클, 150 내지 2,500 ㎎/㎡/사이클, 150 내지 2,000 ㎎/㎡/사이클, 150 내지 1,500 ㎎/㎡/사이클, 150 내지 1,000 ㎎/㎡/사이클, 150 내지 500 ㎎/㎡/사이클 또는 150 내지 250 ㎎/㎡/사이클, 보다 바람직하게는 적어도 또는 약 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 또는 1,000 ㎎/㎡/사이클, 및 가장 바람직하게는 적어도 또는 약 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580 또는 590 ㎎/㎡/사이클의 총량으로 투여된다.
본 발명의 가장 놀라운 점은 각각 상기 안티센스 올리고뉴클레오티드의 가장 높은 용량 및 양이 최고의 효과를 보이거나 치료 효과가 안티센스 올리고뉴클레오티드의 증가된 용량에 따라 증가하는 것이 아니라, 예를 들면 560 ㎎/㎡/사이클의 낮은 양이 종양의 치료에서 최고의 효과를 제공한다는 점이다(본 발명의 실시예 참조).
상기 약학적 조성물 및 안티센스 올리고뉴클레오티드는 각각 첫 번째 라인의 치료(즉, 선행하는 종량 치료가 없음), 두 번째 라인의 치료(즉, 선행하는 한 번의 종양 치료가 있음), 세 번째 라인의 치료(즉, 선행하는 두 번의 종양 치료가 있음), 네 번째 라인의 치료(즉, 선행하는 세 번의 종양 치료가 있음), 또는 적어도 선행하는 네 번의 종양 치료가 있는 적어도 다섯 번째 라인의 치료로 사용되며, 상기 선행하는 종양 치료는 예를 들면 화학치료 또는 방사선치료이다.
또 다른 구현예에서, 상기 약학적 조성물은 적어도 하나의 올리고뉴클레오티드와 추가적인 적어도 하나의 추가 어주번트 치료를 포함한다. 면역자극제로도 나타내는 어주번트에 대한 보다 상세한 내용에 대해서는 EP 1 089 764를 참조. 바람직한 구현예에서, 상기 어주번트는 CpG-모티브(motive)를 포함하는 올리고뉴클레오티드이다. CpG 모티브에 대한 추가적인 상세한 내용은 Krieg 2002를 참조.
본 발명의 약학적 조성물의 바람직한 구현예는 포유동물에서 사용되며, 상기 포유동물의 바람직한 구현예는 인간이다. 인간의 치료에 유용하지만, 본 발명은 또한 포유동물, 설치류 등을 포함하는 척추동물, 외래 애완동물(exotic animal) 및 농장 동물을 포함하는 다른 대상에도 유용하다. 포유동물은 인간, 말, 개, 돼지, 고양이 또는 영장류(예를 들면, 원숭이, 침팬지 또는 여우원숭이)를 포함한다. 설치류는 래트, 마우스, 다람쥐 또는 기니피그를 포함한다.
약학적 조성물은 상기 올리고뉴클레오티드를 적어도 또는 약 1 mM 내지 약 25 M, 1 mM 내지 약 20 M, 1 mM 내지 약 10 M, 1 mM 내지 약 5 M, 1 mM 내지 약 1 M의 농도로 함유하는 유체 약학적 조성물을 포함한다. 다른 바람직한 구현예에서, 상기 약학적 조성물은 상기 올리고뉴클레오티드를 적어도 또는 약 10 mM, 20 mM, 30 mM, 40 mM, 50 mM, 60 mM, 70 mM, 80 mM, 90 mM 또는 100 mM 내지 약 150 mM, 200 mM, 250 mM, 300 mM, 350 mM, 400 mM, 450 mM, 500 mM, 550 mM, 600 mM, 650 mM, 700 mM, 750 mM, 800 mM, 850 mM, 900 mM, 950 mM, 1 M, 2, M, 3 M, 4 M, 5 M, 6 M, 7 M, 8 M, 9 M, 10 M, 11 M, 12 M, 13 M, 14 M, 15 M, 16 M, 17 M, 18 M, 19 M 또는 20 M의 농도로 함유한다.
상기 약학적 조성물은 버퍼, 희석제 및 침투 증강제(penetration enhancer), 허용가능한 담체 또는 부형제와 같지만 이에 한정되지는 않는 다른 적합한 첨가제를 함유할 수도 있는 멸균된 수용액을 포함할 수 있다. 약학적 조성물이란 용어는 상기 조성물의 액체 또는 물질이 정제되고 및/또는 약학적으로 허용가능한 담체와 조합된 것을 의미한다.
약학적으로 허용가능한 담체란 용어는 인간 또는 다른 포유동물에 투여하기에 적합한 하나 이상의 호환성 액체 충진제, 희석제 또는 캡슐화 물질을 의미한다. "담체"란 용어는 상기 활성 성분과 조합하여 그 적용을 촉진시키는 천연 또는 합성의 유기 또는 무기 성분을 나타낸다. 상기 약학적 조성물의 성분은 원하는 약학적 효능에 부정적인 영향을 미치지 않으면서 본 발명의 올리고뉴클레오티드와 조합될 수 있다. 이러한 담체는 본 발명의 올리고뉴클레오티드가 액체, 겔, 시럽, 슬러리, 서스펜션 또는 에멀전으로 제형화되도록 한다.
전술한 바와 같이, 상기 약학적 조성물은 또한 마이크로캡슐, 나노캡슐, 마이크로- 및 나노스피어(nanosphere) 및 서스펜션, 올리고뉴클레오티드의 방출을 연장시키는 미세 금 입자 또는 조제물 상에 코팅된 올리고뉴클레오티드를 포함할 수 있으며, 상기 조제물 내에는 부형제 및 첨가제 및/또는 붕괴제(disintegrant), 결합제, 코팅화제, 팽창제, 윤활제 또는 용해제와 같은 보조제가 관례적으로 사용된다. 위, 장, 결장 또는 직장 내로의 투입을 위하여, 예를 들면 관장이 유용하다. 본 발명의 방법으로 약물을 운반하는 간략한 리뷰를 위해서는 Langer (1990) 참조.
또 다른 구현예에서, 상기 화합물의 서스펜션이 적절한 오일성 투입물로서 조제된다. 적합한 친유성 용매 또는 비히클(vehicle)은 참기름 또는 에틸 올레에이트 또는 트리글리세라이드와 같은 합성 지방산 에스테르 또는 리포좀과 같은 지방 오일을 포함한다. 수성 투입 서스펜션은 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 솔비톨 또는 덱스트란과 같이 상기 서스펜션의 점도를 증가시키는 물질을 포함한다. 선택적으로, 상기 서스펜션은 또한 상기 화합물의 용해도를 증가시켜 매우 농축된 용액을 제조하도록 하는 적합한 안정화제 또는 제제를 함유할 수 있다.
또 다른 구현예에서, 상기 올리고뉴클레오티드는 사용하기 전에 예컨대 멸균된 발열원-부재수와 같은 적합한 비히클을 이용하여 재구성하기 위한 분말 형태일 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 올리고뉴클레오티드는 등장 용액을 이용하여 재구성된다. 등장 용액은 신체의 삼투압만큼 높은 삼투압을 갖는 임의의 수용액이다. 염, 당 등의 용액이 흔히 사용된다. 바람직한 구현예에서, 상기 등장 용액은 0.9% 염화나트륨 용액이거나 링거-락테이트 용액(예컨대, DAB7)이다.
또 다른 구현예에서, 예컨대 올리고뉴클레오티드와 같은 상기 활성 화합물은 사용하기 전에 예컨대 멸균된 발열원-부재수와 같은 적합한 비히클로 희석하기 위한 농축물의 형태일 수 있다. 또 다른 구현예에서, 상기 화합물은 예컨대 코코아 버터 또는 다른 글리세라이드와 같은 종래의 좌약 베이스를 함유하는 좌약 또는 정체 관장 또는 정제와 같은 직장 또는 질 조성물로 제형화된다.
또 다른 구현예에서, 상기 화합물은 저장 조제물로 제형화된다. 한 구현예에서, 이러한 길게 작용하는 조제물은 적합한 폴리머성 또는 소수성 물질(예를 들면 허용가능한 오일 내의 에멀전) 또는 이온 교환 수지를 이용하거나, 매우 천천히 녹는 염(aparingly slow soluble salt)과 같이 매우 천천히 녹는 유도체로서 제형화된다.
다른 구현예에서, 운반 시스템은 시간-방출, 지연된 방출 또는 지속된 방출 운반 시스템을 포함한다. 이러한 시스템은 상기 화합물의 반복 투여를 방지해서 대상 및 의사에게 편의성을 증가시킬 수 있다. 많은 유형의 방출 운반 시스템이 이용가능하며, 본 기술분야의 숙련자에게 알려져 있다.
한 구현예에서, 상기 운반 시스템은 폴리(락타이드-글리콜라이드), 코폴리옥살레이트, 폴리카프로락톤, 폴리에스테르아미드, 폴리오르토에스테르, 폴리히드록시부티르산 및 폴리안하이드라이드, 보다 바람직하게는 분자량 20,000 Da 이상의 폴리안하이드라이드와 같은 폴리머 기반의 시스템을 포함한다. 한 바람직한 구현예에서, 상기 폴리안하이드라이드는 고분자량의 디카르본산의 중축합물이다. 보다 상세한 것은 EP 0 260 415를 참조. 약물을 함유하는 전술한 폴리머의 미세캡슐은 예를 들면 US5,075,109에 개시되어 있다.
다른 구현예에서, 올리고뉴클레오티드 흡수의 개선은 리포좀(중성, 양이온성, 면역리포좀), 마이크로- 및 나노입자, 폴리머 또는 담체에 공유결합으로 부착시키는 것을 포함하는 상이한 벡터화 시스템을 이용하여 달성된다(Lefebure et al., 1995). 또한, 지질-매개성 트랜스펙션(transfection)이 올리고뉴클레오티드를 운반하기 위해 사용되어 왔다(Wang and Martini, 1996). 다른 구현예에서, 상기 운반 시스템은 예를 들면 콜레스테롤과 같은 스테롤, 콜레스테롤 에스테르 및 지방산 또는 모노-, 디- 및 트리글리세라이드와 같은 중성 지방을 포함하는 지질인 비-폴리머 시스템, 히드로겔 방출 시스템, 실라스틱(silastic) 시스템, 펩티드 기반의 시스템 등을 포함한다.
특정한 예는 (a) 본 발명의 제제가 US4,452,775, US4,675,189 및 US5,736,152에 개시되어 있는 것과 같은 매트릭스 형태 내에 함유되는 에로시오날(erosional) 시스템 및 (b) 활성 성분이 US3,854,480, US5,133,974 및 US5,407,686에 개시되어 있는 것과 같은 폴리머로부터 조절된 속도로 침투하는 확산 시스템을 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다.
또 다른 구현예에서, 상기 올리고뉴클레오티드는 천천히 분해되는 변형된 콜라겐 섬유로 이루어진 시판되는 제품인 GELFOAM®을 이용하여 제형화된다.
한 구현예에서, 상기 약학적 조성물은 또한 적합한 고형 또는 겔상의 담체 또는 부형제를 포함한다. 이러한 담체 또는 부형제의 예는 칼슘 카보네이트, 칼슘 포스페이트, 다양한 당, 전분, 셀룰로오스 유도체, 젤라틴 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 폴리머를 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다.
한 구현예에서, 상기 올리고뉴클레오티드는 그대로(neat) 또는 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 투여된다. 상기 염은 약학적으로 허용가능해야 하지만, 약학적으로 허용가능하지 않은 염도 그 약학적으로 허용가능한 염을 제조하기 위하여 편리하게 사용될 수 있다. 이러한 염은 하기 산으로부터 제조된 것들을 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다: 염산, 붕산, 황산, 질산, 인산, 말레산, 아세트산, 살리실산, p-톨루엔 설폰산, 타르타르산, 시트르산, 메탄 설폰산, 포름산, 말론산, 숙신산, 나프탈렌-2-설폰산 및 벤젠 설폰산. 또한, 이러한 염은 카르복시산 기의 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염과 같은 알칼리 금속 또는 알칼리 토류 염으로 제조될 수 있다.
다른 구현예에서, 상기 약학적 조성물은 적어도 하나의 버퍼 및/또는 적어도 하나의 보존제를 추가로 포함한다. 한 구현예에서, 적합한 버퍼화 제제는 아세트산 및 염(예컨대, 1-2% w/v), 시트르산 및 염(예컨대, 1-3% w/v), 붕산 및 염(예컨대, 0.5-2.5% w/v) 및 인산 및 염(예컨대, 0.8-2% w/v)을 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다. 적합한 보존제는 벤즈알코늄 클로라이드(예컨대, 0.003-0.03% w/v), 클로로부탄올(예컨대, 0.3-0.9% w/v), 파라벤(paraben)(예컨대, 0.01-0.25% w/v) 및 티오머살(thiomersal)(예컨대, 0.004-0.02% w/v)을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 상기 약학적 조성물은 또한 영양적인 운반(alimentary delivery)을 향상시키기 위한 침투 증강제를 포함한다. 침투 증강제는 5개의 넓은 카테고리, 즉 지방산, 담즙염, 킬레이트화제, 계면활성제 및 비-계면활성제 중 하나에 속하는 것으로 분류될 수 있다(Lee et al., 1991; Muranishi, 1990). 하나 이상의 이들 넓은 카테고리 유래의 하나 이상의 침투 증강제가 포함될 수 있다.
침투 증강제로 작용하는 다양한 지방산 및 그 유도체는 예를 들면 올레산, 라우르산, 카프르산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아르산, 리놀레산, 리놀렌산, 디카프레이트, 트리카프레이트, 레시놀레이트, 모노올레인(1-모노올레오일-rac-글리세롤), 디라우린, 카프릴산, 아라이키돈산, 글리세릴 1-모노카프레이트, 1-도데실아자시클로헵탄-2-온, 아크릴카르니틴, 아크릴콜린, 모노- 및 디-글리세라이드 및 그의 생리학적으로 허용가능한 염(즉, 올레에이트, 라우레이트, 카프레이트, 미리스테이트, 팔미테이트, 스테아레이트, 리놀레이트 등)을 포함한다(Lee et al., 1991; Muranishi, 1990; El-Hariri et al., 1992). 제공되는 어떤 바람직한 지방산의 예는 예를 들면 0.5 내지 5%의 농도로 단독으로 또는 조합되어 사용되는 나트륨 카프레이트 및 나트륨 라우레이트이다.
담즙의 생리학적 역할은 지질 및 지용성 비타민의 분산 및 흡수를 촉진하는 것을 포함한다(Brunton, 1996). 다양한 천연 담즙염 및 그의 합성 유도체는 침투 증강제로 작용한다. 따라서, "담즙염"이란 용어는 임의의 자연 발생형 담즙 성분뿐만 아니라 임의의 그의 합성 유도체를 포함한다. 바람직하게 제공되는 담즙염은 예를 들면 0.5 내지 2%의 농도로 사용되는 케노데옥시콜산(chenodeoxycholic acid, CDCA)(Sigma Chemical Company, St. Louis, Mo.)이다.
하나 이상의 침투 증강제를 포함하는 복합 제형이 사용될 수 있다. 예를 들면, 담즙염은 복합 제형을 제조하기 위하여 지방산과 조합으로 사용될 수 있다. 바람직한 조합은 나트륨 카프레이트 또는 나트륨 라우레이트(예컨대, 0.5 내지 5%)와 조합된 CDCA를 포함한다.
한 구현예에서, 디나트륨 에틸렌디아민테트라아세테이트(EDTA), 시트르산, 살리실레이트(예컨대, 나트륨 살리실레이트, 5-메톡시살리실레이트 및 호모바닐레이트), 콜라겐의 N-아실 유도체, 라우레스(laureth)-9 및 베타-디케톤(에나민)의 N-아미노 아실 유도체를 포함하지만 이에 한정되지는 않는 킬레이트화제가 추가로 사용될 수 있다(Lee et al., 1991; Muranishi, 1990; Buur et al., 1990). 킬레이트화제는 또한 DNase 억제제로 작용하는 추가적인 이점을 갖는다.
또 다른 구현예에서, 계면활성제가 추가로 사용된다. 계면활성제는 예를 들면 나트륨 라우릴 설페이트, 폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에테르 및 폴리옥시에틸렌-20-세틸 에테르(Lee et al., 1991) 및 FC-43과 같은 퍼플루오로케미컬 에멀전(Takahashi et al., 1988)을 포함한다.
비-계면활성제는 예를 들면 불포화 환형 우레아, 1-알킬- 및 1-알케닐아자시클로-알카논 유도체(Lee et al., 1991) 및 디클로페낙 나트륨, 인도메타신 및 페닐부타존과 같은 비-스테로이드성 항염증제(Yamashita et al., 1987)를 포함한다.
한 구현예에서, 본 발명의 약학적 조성물은 약학적 조성물에서 흔히 발견되는 다른 부가 성분을 이미-확립되어 있는 사용 레벨로 추가로 함유한다. 따라서, 예를 들면, 상기 성분은 예컨대 진양약(antiprutitic), 수렴제(astringent), 국소 마취제 또는 항염증제와 같은 호환되는 약학적 활성 물질을 추가로 함유하거나, 염료, 향미제, 보존제, 항산화제, 불투명화제(opacifier), 증점제 및 안정화제와 같이 본 발명의 조성물을 다양한 제형으로 물리적으로 제형화하는데 유용한 물질을 추가로 함유할 수 있다. 그러나, 이러한 물질들은 첨가시에 본 발명의 조성물의 성분의 생물학적 활성을 지나치게 간섭하지 말아야 한다.
도 1a 내지 도 1d는 TGF-베타 1(서열번호 1 내지 서열번호 21), TGF-베타 2(서열번호 22 내지 서열번호 48), TGF-베타 3(서열번호 49 내지 서열번호 77), 프로스타글란딘 E2(서열번호 78 내지 서열번호 89), VEGF(서열번호 90 내지 서열번호 126), 인터루킨-10(서열번호 127 내지 서열번호 146), c-jun(서열번호 147 내지 서열번호 205), c-fos(서열번호 206 내지 서열번호 287) 및/또는 MIA(서열번호 288 내지 서열번호 325)와 교잡하는 올리고뉴클레오티드의 바람직한 서열을 나타낸다.
도 2는 서열번호 22의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함하는 약학적 조성물을 7일 동안 40 ㎎/㎡/d, 80 ㎎/㎡/d, 160 ㎎/㎡/d 또는 240 ㎎/㎡/d의 용량으로 투여(1 사이클)한 후 7일의 비처리 기간을 갖는 환자의 4개의 코호트(cohort)를 포함하는 첫 번째 치료 스케줄 및 서열번호 22의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함하는 약학적 조성물을 4일 동안 140 ㎎/㎡/d, 190 ㎎/㎡/d, 250 ㎎/㎡/d 또는 330 ㎎/㎡/d의 용량으로 투여한 후 10일의 비처리 기간을 갖는 두 번째 치료 스케줄을 보여준다.
도 3은 동일한 용량(㎎/㎡)의 올리고뉴클레오티드를 7일 동안 두 사이클을 받은 환자의 혈장에서의 Cmax의 용량 의존성을 나타낸다. 상기 환자는 상기 치료 사이클 사이에 7일 동안 치료되지 않았다. 상이한 환자들은 상이한 용량의 안티센스 올리고뉴클레오티드로 처리되었다. 검은색 칼럼은 첫 번째 치료 사이클의 결과를 보여주고, 회색 칼럼은 두 번째 치료 사이클의 결과를 보여준다.
도 4는 동일한 용량(㎎/㎡)의 올리고뉴클레오티드를 4일 동안 두 사이클을 받은 환자의 혈장에서의 Cmax의 용량 의존성을 나타낸다. 상기 환자는 상기 치료 사이클 사이에 10일 동안 치료되지 않았다. 상이한 환자들은 상이한 용량의 안티센스 올리고뉴클레오티드로 처리되었다. 검은색 칼럼은 첫 번째 치료 사이클의 결과를 보여주고, 회색 칼럼은 두 번째 치료 사이클의 결과를 보여준다.
도 5는 동일한 용량(㎎/㎡)의 올리고뉴클레오티드를 7일 동안 두 사이클을 받은 환자의 혈장에서의 AUC의 용량 의존성을 설명한다. 상기 환자는 상기 치료 사이클 사이에 7일 동안 치료되지 않았다. 상이한 환자들은 상이한 용량의 안티센스 올리고뉴클레오티드로 처리되었다. 검은색 칼럼은 첫 번째 치료 사이클의 결과를 보여주고, 회색 칼럼은 두 번째 치료 사이클의 결과를 보여준다.
도 6은 동일한 용량(㎎/㎡)의 올리고뉴클레오티드를 4일 동안 두 사이클을 받은 환자의 혈장에서의 AUC의 용량 의존성을 나타낸다. 상기 환자는 상기 치료 사이클 사이에 10일 동안 치료되지 않았다. 상이한 환자들은 상이한 용량의 안티센스 올리고뉴클레오티드로 처리되었다. 검은색 칼럼은 첫 번째 치료 사이클의 결과를 보여주고, 회색 칼럼은 두 번째 치료 사이클의 결과를 보여준다.
하기 실시예에서, 환자에서의 전신 독성 연구뿐만 아니라 임상적 연구의 결과가 기록되어 있다. 이들 모든 연구는 현재의 임상시험 실시기준(Good clinical Practice, GCP)의 지침에 따라 수행되었으며, 지역 윤리 위원회에 의해 승인되었다. 아울러, 환자 연구는 인체 실험에 대한 현재의 헬싱키 국제 선언을 준수하였다.
하기 실시예는 본 발명의 특정한 구현예를 나타낸다; 그러나, 본 발명은 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1
췌장 암종에 대한 7일 치료 사이클에서의 안티센스 올리고뉴클레오티드의 영향
서열번호 22의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함하는 약학적 조성물을 진행된 췌장 암종을 앓고 있는 환자에게 제2, 제3 또는 제4 라인 처리로서 정맥내 투여하였다. 즉, 상기 환자들은 한 번, 두 번 또는 세 번의 다른 종양 치료로 전처리되어 왔다. 휴대용 펌프를 사용하여 상기 약학적 조성물 및 서열번호 22의 안티센스 뉴클레오티드를 미리 이식된 포트 접근 시스템을 통해 0.8 ㎖/h의 투입 속도로 각각 정맥내 투입하였다. 다른 한편으로, 상기 약학적 조성물 및 서열번호 22의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 주사기를 이용하여 각각 정맥내 투여하였다.
서열번호 22의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함하는 약학적 조성물을 1 내지 10 치료 사이클로 정맥내 투여하였으며, 한 사이클은 7일의 처리와 이후의 7일의 비처리 간격으로 이루어져 있다.
17명의 환자를 치료 스케줄, 즉 서열번호 22의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함하는 약학적 조성물을 7일 연속 정맥내 투입한 후 7일의 비처리 간격 갖는 치료 스케줄에 따라 처리하였다. 상기 환자들은 용량이 증가되는 4개의 연속적인 코호트로 등록하였다.
코호트 1: 4명의 환자가 40 ㎎/㎡/d(즉, 280 ㎎/㎡/사이클)를 받음.
코호트 2: 3명의 환자가 80 ㎎/㎡/d(즉, 560 ㎎/㎡/사이클)를 받음.
코호트 3: 6명의 환자가 160 ㎎/㎡/d(즉, 1,120 ㎎/㎡/사이클)를 받음.
코호트 4: 4명의 환자가 240 ㎎/㎡/d(즉, 1,680 ㎎/㎡/사이클)를 받음.
표 1의 결과는 7일 치료 사이클에서의 80 ㎎/㎡/d, 즉 총량 560 ㎎/㎡/사이클의 안티센스 올리고뉴클레오티드가 뜻밖에도 환자의 생존율을 13.8개월 연장시켜 가장 효과가 좋다는 것을 보여준다. 이와 대조적으로, 160 ㎎/㎡/d 또는 240 ㎎/㎡/d의 용량은 40 ㎎/㎡/d의 효과에 필적하는 낮은 효과를 보여준다.
7일 연속 투입, 매 2주
40 ㎎/㎡/d 80 ㎎/㎡/d 160 ㎎/㎡/d 240 ㎎/㎡/d
N 4 3 6 4
안티센스 올리고뉴클레오티드의 ㎎/㎡/사이클 280 560 1,120 1,680
사건(사망)의 수 4(100.0%) 2(66.7%) 6(100.0%) 4(100.0%)
평균[일] 209 421 86 198
(95% CI) (33.0∼337.0) (139.0∼*) (65.0∼120.0) (56.0∼280.0)
평균[주] 29.9 60.1 12.3 28.2
평균[월] 6.9 13.8 2.8 6.5
*80 ㎎/㎡/d에 대한 95% CI의 상한은 한명의 환자가 여전히 생존해 있기 때문에 지금은 나타낼 수 없음.
실시예 2
췌장 암종에 대한 4일 치료 사이클에서의 안티센스 올리고뉴클레오티드의 영향
다른 실험에서, 서열번호 22의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함하는 약학적 조성물을 1 내지 10 치료 사이클로 정맥내 투여하였으며, 한 사이클은 4일의 처리와 이후의 10일의 비처리 간격으로 이루어져 있다.
16명의 환자를 서열번호 22를 증가되는 용량으로 처리하는 4개의 연속적인 코호트로 등록하였다.
코호트 A1: 5명의 환자가 140 ㎎/㎡/d(즉, 560 ㎎/㎡/사이클)를 받음.
코호트 A2: 3명의 환자가 190 ㎎/㎡/d(즉, 760 ㎎/㎡/사이클)를 받음.
코호트 A3: 5명의 환자가 250 ㎎/㎡/d(즉, 1,000 ㎎/㎡/사이클)를 받음.
코호트 A4: 3명의 환자가 330 ㎎/㎡/d(즉, 1,320 ㎎/㎡/사이클)를 받음.
코호트 A1의 환자 1은 65세의 남성으로서, 치료 개시 5.5개월 후에 사망하였고, 환자 2는 50세의 여성으로서, 치료 개시 15.6개월 후에 사망하였으며, 환자 3은 44세의 남성으로서, 치료 개시 4.9개월 후에 사망하였고, 환자 5는 63세의 여성으로서 치료 개시 13.4개월 후에 사망하였다. 코호트 A1의 환자 4는 치료 개시 14.8개월 후에도 여전히 생존해 있다.
코호트 A2의 결과는 5.5 및 9.3개월 사이의 낮은 평균 총 생존율을 나타낸다. 53세의 여성인 환자 1은 치료 개시 3개월 후에 사망하였고, 63세 남성인 환자 2는 치료 개시 9.3개월 후에 사망하였다; 환자 3은 치료 5.5개월 후에도 여전히 생존해 있다.
상이한 코호트의 결과는 표 2에 나타나 있으며, 4일 치료 사이클의 140 ㎎/㎡/d 용량, 즉 서열번호 22의 안티센스 올리고뉴클레오티드의 560 ㎎/㎡/사이클의 총량에서 생존율과 관련하여 높은 효능을 보여준다. 상기 용량은 13.4개월이라는 예기치 않은 생존율의 연장을 이끈다. 4일 치료 사이클에서의 140 ㎎/㎡/d의 용량은 7일 치료 사이클에서의 80 ㎎/㎡/d의 생존율에 필적하는 생존율의 증가를 이끌었다.
4일 연속 투입 후 10일의 비처리 간격
140 ㎎/㎡/d 190 ㎎/㎡/d 250 ㎎/㎡/d 330 ㎎/㎡/d
N 5 3 5 3
안티센스 올리고뉴클레오티드의 ㎎/㎡/사이클 560 760 1,000 1,320
사건(사망)의 수 4(80.0%) 3(100.0%) 4(80.0%) 2(66.7%)
평균[일] 409 284 298 92
(95% CI) (150.0∼*) (91.0∼346) (84∼*) (74∼*)
평균[주] 58.4 40.6 42.6 13.1
평균[월] 13.4 9.3 9.8 3.0
*95% CI의 상한은 한명의 환자가 여전히 생존해 있기 때문에 나타낼 수 없음.
실시예 3
췌장 암종을 치료하기 위한 약학적 조성물의 제조를 위한 안티센스 올리고뉴클레오티드의 성공적인 사용
당뇨병, 동맥 고혈압, 림프 부종, 왼쪽 고환의 기형종(teratoma)을 포함하는 병력을 갖는 54세 남성 환자는 췌장암 AJCC(American Joint Committee on Cancer) 1 기로 진단되었다. 조직검사는 관의 등급 2 선암종을 보여주었다. 상기 환자는 즉시 외과적으로 종양을 절제하였고(Whipple's procedure, resection grade R0), 3번의 화학치료 요법(5-플루오로우라실, 루코보린 및 젬시타빈을 함유함)을 받았다.
전이성 췌장 암종에 기반하는 전이성 간 전이로 종양이 재발한 후, 상기 환자는 서열번호 22의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함하는 약학적 조성물로 7일에 걸쳐서 한 사이클의 처리를 나타내는 80 ㎎/㎡/d의 용량으로 총량 560 ㎎/㎡/사이클로 치료하였다. 상기 환자는 7일 처리 기간의 7 사이클을 수행하였으며, 모든 사이클은 7일의 비처리 기간 후에 진행하였다.
동정된 간 전이는 치료 개시로부터 8주 내에 줄어들었고, 치료 시작으로부터 16주 내에 완전히 사라졌다. 2009년 2월까지, 서열번호 22의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함하는 약학적 조성물로 치료를 개시한 후 45.6개월 동안 주기적인 간격으로 수행된 복부 CT 상에서 원발성 종양의 재발이나 어떠한 새로운 전이도 관찰되지 않았다. 상기 환자는 서열번호 22의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함하는 약학적 조성물을 이용한 치료가 완료된 후 어떠한 항암 치료도 받지 않았다. 상기 약학적 조성물을 이용한 치료 개시 45.6개월 후인 2009년 2월에 수행되었던 이용가능한 마지막 대조군 CT는 완전한 반응을 확증하였다.
실시예 4
췌장 암종 , 악성 흑색종 및 결장직장 암종에서의 평균 생존
진행된 췌장 암종을 앓고 있는 11명, 진행된 악성 흑색종을 앓고 있는 2명 및 진행된 결장직장 암종을 앓고 있는 4명의 환자를 서열번호 22의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함하는 약학적 조성물을 이용하여 7일 동안 80 ㎎/㎡/d의 용량(한 사이클) 후 7일의 비처리 기간 또는 4일 동안 140 ㎎/㎡/d의 용량(한 사이클) 후 10일의 비처리 기간으로 처리하였다. 상기 환자들은 1 내지 10 사이클 동안 처리하였다.
표 3은 평균 생존을 주 및 월로 보여주며, 80 ㎎/㎡/d 용량의 서열번호 22의 안티센스 올리고뉴클레오티드가 암의 종류와 무관하게 환자의 생존을 증가시켰음을 나타낸다.
췌장 암종
(Ⅳa/Ⅳb 기)		 악성 흑색종
(Ⅲ/Ⅳ 기)		 결장직장 암종
(Ⅲ/Ⅳ 기)
환자의 수 23 5 5
사건(사망)의 수 21(91.3%) 3(60%) 5(100%)
평균 생존한 주[월] 29.6(6.8) 49.4(11.4) 17.9(4.1)
실시예 7
혈장 내 C max 의 용량 의존성
입증된 모세 겔 전기영동법을 이용하여 용량 의존성을 측정하였다. 실시예 1(코호트 A1 내지 A4) 및 실시예 2(코호트 A1 내지 A4)에서 언급된 환자의 혈장 샘플을 서열번호 22의 안티센스 올리고뉴클레오티드의 농도에 관하여 조사하였으며(도 3 및 도 4), 상기 안티센스 올리고뉴클레오티드는 전술한 용량으로 7일 또는 4일 동안 투여되었다. 서열번호 22의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 80 ㎎/㎡/d의 용량으로 7일 동안(도 3) 또는 140 ㎎/㎡/d의 용량으로 4일 동안(도 4) 투여하면 투여된 안티센스 올리고뉴클레오티드의 총량이 모두 560 ㎎/㎡/d로 되었다. 그러나, 놀랍게도 4일 동안(도 4) 안티센스 올리고뉴클레오티드를 투여하면 7일 동안(도 3) 투여한 것보다 더 높은 Cmax를 나타내었다.
실시예 8
혈장 내 AUC 0 -t last 의 용량 의존성
입증된 모세 겔 전기영동법을 이용하여 용량 의존성을 측정하였고, 이어서 입증된 WinNonlin 약동학적 소프트웨어(version 3.2, Pharsight Corp., Mountain View, California, USA)를 이용하여 약동학적 분석을 수행하였다. 실시예 1 및 실시예 2의 환자의 혈장 샘플을 7일 또는 4일 동안 투여된 상이한 용량의 서열번호 22의 안티센스 올리고뉴클레오티드의 AUC0 -t last에 대해 추가로 조사하였다(도 5 및 도 6). 그 결과는 80 ㎎/㎡/d로 7일 동안 투여하거나 140 ㎎/㎡/d로 4일 동안 투여하면 안티센스 올리고뉴클레오티드의 총량이 모두 560 ㎎/㎡/d로 되지만, 놀랍게도 4일 동안(도 5) 투여하면 7일 동안(도 6) 투여한 것보다 더 높은 AUC, 즉 혈장 내에서 안티센스 올리고뉴클레오티드의 더 높은 생체이용성을 나타내었다.
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Claims (12)

  1. 종양 성장 인자 TGF-베타 2, -1 및/또는 -3의 mRNA와 교잡하는 8 내지 30개 뉴클레오티드 빌딩 블록을 포함하는 종양의 예방 및/또는 치료용 약학적 조성물을 제조하기 위한 안티센스 올리고뉴클레오티드의 용도로서, 상기 안티센스 올리고뉴클레오티드는 400 내지 800 ㎎/㎡/치료 사이클의 양으로 정맥내에 투여되는 용도.
  2. 청구항 1에 있어서,
    상기 안티센스 올리고뉴클레오티드는 560 내지 760 ㎎/㎡/치료 사이클의 양으로 정맥내에 투여되는 용도.
  3. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 안티센스 올리고뉴클레오티드는 서열번호 22, 서열번호 1 및 서열번호 58로 이루어진 군으로부터 선택되는 용도.
  4. 청구항 1 내지 청구항 3 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 종양은 췌장 암종, 악성 흑색종 및 결장직장 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 용도.
  5. 청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 안티센스 올리고뉴클레오티드는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15 사이클로 투여되는 용도.
  6. 청구항 5에 있어서,
    상기 안티센스 올리고뉴클레오티드는 사이클 당 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일 또는 15일로 투여되는 용도.
  7. 청구항 6에 있어서,
    상기 안티센스 올리고뉴클레오티드는 연속적인 일수로 투여되는 용도.
  8. 청구항 5 내지 청구항 7 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 사이클 사이의 시간 간격은 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일 또는 15일인 용도.
  9. 청구항 1 내지 청구항 8 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 안티센스 올리고뉴클레오티드는 1 내지 10 사이클로 투여되는 용도.
  10. 청구항 1 내지 청구항 9 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 치료 사이클은 7일 동안 80 ㎎/㎡/d로 투여한 후 7일의 비처리 간격을 갖거나, 4일 동안 140 ㎎/㎡/d 또는 190 ㎎/㎡/d로 투여한 후 10일의 비처리 간격을 갖는 것을 포함하는 용도.
  11. 청구항 10에 있어서,
    상기 4일 치료 사이클에 대한 AUC는 7일 치료 사이클보다 더 높은 용도.
  12. 종양 성장 인자 TGF-베타 2, -1 및/또는 -3의 mRNA와 교잡하는 8 내지 30개 뉴클레오티드 빌딩 블록을 포함하는 종양의 예방 및/또는 치료용 안티센스 올리고뉴클레오티드로서, 상기 안티센스 올리고뉴클레오티드는 400 내지 800 ㎎/㎡/치료 사이클의 양으로 정맥내에 투여되기에 적합한 안티센스 올리고뉴클레오티드.
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