JP2003510021A - ヒトmdr−1遺伝子における多型および、診断的および治療的適用におけるその使用 - Google Patents
ヒトmdr−1遺伝子における多型および、診断的および治療的適用におけるその使用Info
- Publication number
- JP2003510021A JP2003510021A JP2001513989A JP2001513989A JP2003510021A JP 2003510021 A JP2003510021 A JP 2003510021A JP 2001513989 A JP2001513989 A JP 2001513989A JP 2001513989 A JP2001513989 A JP 2001513989A JP 2003510021 A JP2003510021 A JP 2003510021A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- mdr
- gene
- polynucleotide
- protein
- accession number
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 306
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 title claims abstract description 40
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 title claims description 25
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title claims description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 143
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 108
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 88
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 88
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 88
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 77
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 77
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 72
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 46
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 45
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 45
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 40
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 26
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 23
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims abstract description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 75
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 claims description 67
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 45
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 44
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 42
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 42
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 34
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 32
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 28
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 28
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 25
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 24
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 24
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 23
- 230000036457 multidrug resistance Effects 0.000 claims description 22
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 20
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 18
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 16
- 230000036765 blood level Effects 0.000 claims description 16
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 16
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 14
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 12
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 12
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 12
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 12
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 12
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 claims description 11
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 claims description 11
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 claims description 8
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 6
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 claims description 6
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 6
- 239000001961 anticonvulsive agent Substances 0.000 claims description 5
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 5
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 claims description 4
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 claims description 4
- 229960003965 antiepileptics Drugs 0.000 claims description 4
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 claims description 4
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 claims description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 4
- 239000000411 inducer Substances 0.000 claims description 4
- 230000005257 nucleotidylation Effects 0.000 claims description 4
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 101150084750 1 gene Proteins 0.000 claims description 3
- SGTNSNPWRIOYBX-UHFFFAOYSA-N 2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5-{[2-(3,4-dimethoxyphenyl)ethyl](methyl)amino}-2-(propan-2-yl)pentanenitrile Chemical group C1=C(OC)C(OC)=CC=C1CCN(C)CCCC(C#N)(C(C)C)C1=CC=C(OC)C(OC)=C1 SGTNSNPWRIOYBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 claims description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 claims description 3
- 229960001722 verapamil Drugs 0.000 claims description 3
- 206010013710 Drug interaction Diseases 0.000 claims description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 2
- 230000001773 anti-convulsant effect Effects 0.000 claims description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 claims description 2
- 229940097217 cardiac glycoside Drugs 0.000 claims description 2
- 239000002368 cardiac glycoside Substances 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 claims description 2
- 238000007834 ligase chain reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000003120 macrolide antibiotic agent Substances 0.000 claims description 2
- 229930002534 steroid glycoside Natural products 0.000 claims description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 claims description 2
- SVJMLYUFVDMUHP-MGBGTMOVSA-N (4R)-2,6-dimethyl-4-(3-nitrophenyl)-1,4-dihydropyridine-3,5-dicarboxylic acid O5-[3-(4,4-diphenyl-1-piperidinyl)propyl] ester O3-methyl ester Chemical compound C1([C@H]2C(=C(C)NC(C)=C2C(=O)OC)C(=O)OCCCN2CCC(CC2)(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)=CC=CC([N+]([O-])=O)=C1 SVJMLYUFVDMUHP-MGBGTMOVSA-N 0.000 claims 1
- YJDYDFNKCBANTM-QCWCSKBGSA-N SDZ PSC 833 Chemical compound C\C=C\C[C@@H](C)C(=O)[C@@H]1N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC1=O YJDYDFNKCBANTM-QCWCSKBGSA-N 0.000 claims 1
- 229950002422 dexniguldipine Drugs 0.000 claims 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 claims 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 claims 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 claims 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 claims 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 claims 1
- LPMXVESGRSUGHW-HBYQJFLCSA-N ouabain Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1C[C@@]2(O)CC[C@H]3[C@@]4(O)CC[C@H](C=5COC(=O)C=5)[C@@]4(C)C[C@@H](O)[C@@H]3[C@@]2(CO)[C@H](O)C1 LPMXVESGRSUGHW-HBYQJFLCSA-N 0.000 claims 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 claims 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 claims 1
- 229950010938 valspodar Drugs 0.000 claims 1
- 108010082372 valspodar Proteins 0.000 claims 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 31
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 12
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 abstract description 4
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 37
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 34
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 34
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 27
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 24
- LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N Digoxin Natural products O([C@H]1[C@H](C)O[C@H](O[C@@H]2C[C@@H]3[C@@](C)([C@@H]4[C@H]([C@]5(O)[C@](C)([C@H](O)C4)[C@H](C4=CC(=O)OC4)CC5)CC3)CC2)C[C@@H]1O)[C@H]1O[C@H](C)[C@@H](O[C@H]2O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)C2)[C@@H](O)C1 LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N 0.000 description 23
- LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N digoxin Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@@H]3C[C@@H]4[C@]([C@@H]5[C@H]([C@]6(CC[C@@H]([C@@]6(C)[C@H](O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)C[C@@H]2O)C)C[C@@H]1O LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N 0.000 description 23
- 229960005156 digoxin Drugs 0.000 description 23
- LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N digoxine Natural products C1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(C)OC(OC2C(OC(OC3CC4C(C5C(C6(CCC(C6(C)C(O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)CC2O)C)CC1O LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 22
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 18
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 17
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 16
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 16
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 14
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 11
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 11
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 10
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 10
- CXOFVDLJLONNDW-UHFFFAOYSA-N Phenytoin Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C1(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 CXOFVDLJLONNDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 10
- 229960002036 phenytoin Drugs 0.000 description 10
- JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N rifampicin Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O/C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)\C=C\C=C(C)/C(=O)NC=2C(O)=C3C([O-])=C4C)C)OC)C4=C1C3=C(O)C=2\C=N\N1CC[NH+](C)CC1 JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N 0.000 description 9
- 229960001225 rifampicin Drugs 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 8
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 8
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 7
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 6
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 6
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 6
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 6
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 6
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 5
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 5
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 5
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 5
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 5
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 5
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 5
- 238000013461 design Methods 0.000 description 5
- 238000010363 gene targeting Methods 0.000 description 5
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 5
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 5
- 230000002974 pharmacogenomic effect Effects 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 4
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 4
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 4
- 239000002987 primer (paints) Substances 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 3
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 3
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 3
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 3
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 3
- 210000001842 enterocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 3
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 3
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IZHVBANLECCAGF-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3-(octadecanoyloxy)propyl octadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC IZHVBANLECCAGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 2
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 2
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 2
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 2
- 208000030453 Drug-Related Side Effects and Adverse reaction Diseases 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 2
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000037429 base substitution Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 2
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000011960 computer-aided design Methods 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000001788 mono and diglycerides of fatty acids Substances 0.000 description 2
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 102220240796 rs553605556 Human genes 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- 101150037123 APOE gene Proteins 0.000 description 1
- 102220468397 ATP-dependent translocase ABCB1_N21D_mutation Human genes 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 102100036826 Aldehyde oxidase Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 1
- 244000105975 Antidesma platyphyllum Species 0.000 description 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- 102100029470 Apolipoprotein E Human genes 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 102000002004 Cytochrome P-450 Enzyme System Human genes 0.000 description 1
- 108010015742 Cytochrome P-450 Enzyme System Proteins 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 238000000018 DNA microarray Methods 0.000 description 1
- 206010012335 Dependence Diseases 0.000 description 1
- 240000001879 Digitalis lutea Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 101150094690 GAL1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100028501 Galanin peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 206010071602 Genetic polymorphism Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000928314 Homo sapiens Aldehyde oxidase Proteins 0.000 description 1
- 101000951423 Homo sapiens E3 ubiquitin-protein ligase MGRN1 Proteins 0.000 description 1
- 101100121078 Homo sapiens GAL gene Proteins 0.000 description 1
- 101000879758 Homo sapiens Sjoegren syndrome nuclear autoantigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000799388 Homo sapiens Thiopurine S-methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 240000007472 Leucaena leucocephala Species 0.000 description 1
- 235000010643 Leucaena leucocephala Nutrition 0.000 description 1
- 108700041567 MDR Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 108091092724 Noncoding DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 238000010357 RNA editing Methods 0.000 description 1
- 230000026279 RNA modification Effects 0.000 description 1
- 239000013614 RNA sample Substances 0.000 description 1
- 102100029683 Ribonuclease T2 Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- 241000607715 Serratia marcescens Species 0.000 description 1
- 102100037330 Sjoegren syndrome nuclear autoantigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 102100034162 Thiopurine S-methyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 241001415771 Torpedinidae Species 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 206010047281 Ventricular arrhythmia Diseases 0.000 description 1
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 238000007844 allele-specific PCR Methods 0.000 description 1
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000003556 anti-epileptic effect Effects 0.000 description 1
- 229940125681 anticonvulsant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 229940034982 antineoplastic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- YTCZZXIRLARSET-VJRSQJMHSA-M beraprost sodium Chemical compound [Na+].O([C@H]1C[C@@H](O)[C@@H]([C@@H]21)/C=C/[C@@H](O)C(C)CC#CC)C1=C2C=CC=C1CCCC([O-])=O YTCZZXIRLARSET-VJRSQJMHSA-M 0.000 description 1
- 235000021028 berry Nutrition 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 208000015114 central nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 238000013098 chemical test method Methods 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002626 clarithromycin Drugs 0.000 description 1
- AGOYDEPGAOXOCK-KCBOHYOISA-N clarithromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@](C)([C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)OC)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AGOYDEPGAOXOCK-KCBOHYOISA-N 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 239000003107 drug analog Substances 0.000 description 1
- 239000003118 drug derivative Substances 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- 230000002183 duodenal effect Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000001037 epileptic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 1
- -1 etc. Proteins 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000004077 genetic alteration Effects 0.000 description 1
- 231100000118 genetic alteration Toxicity 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 1
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 1
- 102000018146 globin Human genes 0.000 description 1
- 108060003196 globin Proteins 0.000 description 1
- 229940074045 glyceryl distearate Drugs 0.000 description 1
- 229940075507 glyceryl monostearate Drugs 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 1
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 235000009424 haa Nutrition 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 102000043343 human MGRN1 Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000013115 immunohistochemical detection Methods 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 229940124589 immunosuppressive drug Drugs 0.000 description 1
- 238000010249 in-situ analysis Methods 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000266 injurious effect Effects 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- TWXDDNPPQUTEOV-FVGYRXGTSA-N methamphetamine hydrochloride Chemical compound Cl.CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 TWXDDNPPQUTEOV-FVGYRXGTSA-N 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 229940126701 oral medication Drugs 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009120 phenotypic response Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 238000004237 preparative chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000014493 regulation of gene expression Effects 0.000 description 1
- 230000024769 regulation of transport Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000007894 restriction fragment length polymorphism technique Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 108090000446 ribonuclease T(2) Proteins 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 150000008143 steroidal glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 108090000195 villin Proteins 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Immunology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
Abstract
Description
異常発現および/または機能の幾つかの形態を伴う重複する臨床特性を、診断お
よび治療する手段および方法に広く関連する。特に、本発明は、例えば標的細胞
による不十分なおよび/または変化した薬物の取りこみに関係する、分子変異体M
DR-1遺伝子のポリヌクレオチド、およびそのようなポリヌクレオチドを含有する
ベクターに関連する。さらに、本発明はそのようなポリヌクレオチドまたはベク
ターを含有する宿主細胞および、変異体MDR-1タンパク質を産生するためのその
使用に関連する。さらに、本発明は変異体MDR-1タンパク質および特異的にその
ようなタンパク質を認識する抗体に関連する。本発明はまた、上述のポリヌクレ
オチドまたはベクターを含有するトランスジェニック非ヒト動物に関連する。加
えて、本発明は、MDR-1遺伝子の多機能に関する疾病の治療のための薬物候補お
よび阻害剤を同定および獲得するための方法、およびそのような疾病の状態の診
断方法に関連する。本発明はさらに、上述の方法によって得られる、上述のポリ
ヌクレオチド、ベクター、タンパク質、抗体および薬物および阻害剤を含む薬学
的組成物および診断的組成物を提供する。組成物は特に、MDR-1遺伝子またはそ
の産物の基質、阻害剤または調節剤である薬物を用いた、様々な疾患の診断およ
び治療に有用である。
る各文書(任意の製造者の仕様書、指示書等を含む)は本明細書において参照と
して組み入れられるが、引用される任意の文書が実際に本発明に関する先行技術
であるということを認めたわけではない。
内および細胞膜から細胞外への異なる物質のエネルギー依存性の輸送である。MD
R-1の正常な生理学的機能は、毒性物質からの細胞の防護である可能性が非常に
高いが、MDR-1輸送体の多くの基質がヒトの疾患の治療のために開発された薬物
であることもまた知られている。このことによって、MDR-1遺伝子産物の発現お
よび機能性の程度は、MDR-1の基質として働く任意の薬物の効果に直接影響を与
える可能性がある。例えば、MDR-1の発現レベル、およびそれゆえに、MDR-1の機
能の程度が癌治療において抗腫瘍薬の効果に直接影響することがよく知られてい
る。事実、「MDR」という遺伝子の名称は多剤耐性を意味し、この遺伝子にコー
ドされるタンパク質が、その全てがMDR-1輸送体の基質である多くの薬物を用い
た治療に対し癌細胞を治療抵抗性にさせるという観察を反映している。
治療効果に直接影響することが可能なある種の癌細胞上のみならず、様々な器官
、例えば結腸および血液脳関門における、異なる非悪性細胞上においても発現す
る。これらの細胞においてもMDR-1は薬物の活性および有効性に影響する可能性
がある。例えば、結腸におけるMDR-1は経口薬物の摂取に引き続く結腸からの薬
物の取りこみの程度を制御または調節できる。血液脳関門におけるMDR-1もまた
、MDR-1基質が脳に取りこまれ得る程度に影響する、またはそれを制御する可能
性がある。ここで、MDR-1活性の上昇は望ましい脳用薬の十分量の脳への取りこ
みを妨げる可能性があり、または逆に、ある種の薬物に対して活性が低下したMD
R-1変異体は、脳における蓄積の異常な増加を導き、望ましくないまたは危険で
さえある薬物の副作用を導く可能性がある。
の因子は、MDR-1の活性である。MDR-1活性は引き続き、(i)細胞内で合成され
るMDR-1タンパク質量を決定するMDR-1遺伝子の発現レベル、および(ii) 合成
されるMDR-1タンパク質の機能性、即ち、どのような効果でどの基質が認識され
細胞外に輸送されるかということに依存性である。
学療法に対する感受性は、MDR発現のアップレギュレーションと逆の相関がある
ためまた、高レベルのMDR-1の発現は癌化学療法の不十分な効果と相関があるた
め、しばしば集中的に分析されてきた。観察されたMDR-1の過剰発現は部分的にM
DR-1遺伝子増幅に起因する可能性があるにも関わらず、これまで決定されていな
い原因も必ず存在しており、それらの間には多分対立遺伝子の相違があるという
ことが知られている。個人のMDR-1遺伝子配列における小さな相違が異なるレベ
ルのMDR-1遺伝子発現の原因である可能性がある。MDR-1遺伝子発現に直接影響す
る配列の相違が存在する可能性のあるヒトゲノムにおける標的領域は、以下のよ
うな遺伝子発現の制御領域であると考えられる:MDR-1のプロモーター領域およ
びエンハンサー領域および、MDR-1 mRNA前駆体のスプライシングの様式または有
効性に影響する領域。加えて、発現レベルはメチル化のような、ゲノムにおける
構造変化、全体的なクロマチンの変化および、MDR-1遺伝子にて直接、またはMDR
-1遺伝子周辺領域にて、MDR-1に連鎖する他の因子に影響される可能性がある。
そのような連鎖因子または配列を直接見出し、遺伝子活性化または抑制のそのメ
カニズムを証明することは非常に難しい。しかし、定義された染色体上のヒトゲ
ノムの線状構造により、発現レベルに影響するMDR-1遺伝子またはその周辺にお
ける、他のこれまで同定されていない変化のためのマーカーとして、それ自体は
遺伝子の発現レベルに直接影響しない、同定された多型を利用する可能性が開か
れる。この効果は連鎖として知られており、定義された対立遺伝子および塩基の
変異は、これらの変化自体がその表現型を引き起こすものではないとしても、重
要な表現型のためのマーカーとしての役割を担うことが可能である。
効果でどの基質が認識され細胞外に輸送されるかということは、MDR-1対立遺伝
子によりコードされるタンパク質のアミノ酸配列により主に決定される。アミノ
酸の変化がタンパク質の機能性を変える可能性があることはよく知られている。
天然に生じる変異の例、即ち、様々な薬物の作用に直接影響を与える異なる対立
遺伝子は、例えば、チトクロームP450多型、またはTPMT、APOE、および様々な他
の遺伝子における多型である。また、例えばp53遺伝子における、腫瘍関連の変
異は、そのような表現型への媒介をすることが知られている。現在までにMDR-1
遺伝子において幾つかの多型のみが説明されており、臨床効果と相関づけられて
いる(Mickley、Blood 91(1998)、1749〜1756)。本分野においては、そのよう
な多型がさらに存在するのかどうか、またその場合、それらは薬物活性および/
または薬物の副作用と関連付けることが可能かどうかという主要な問題が残され
ている。MDR-1遺伝子において人工的に導入した突然変異を用いた試験では、MDR
-1はアミノ酸の置換に対し非常に高い感受性で反応することが明瞭に示された。
タンパク質の変化へと翻訳できる、MDR-1遺伝子における人工的突然変異は、基
質スペクトル、基質輸送の効果、輸送の制御、および特異的な阻害物質を用いた
阻害に対するMDR-1の感受性をも変化させる可能性があることが示された。天然
に生じる突然変異が存在するのであれば、同様の効果をもち得ることは明らかで
ある。しかし、そのような変異がいくつ存在するのか、およびヒトMDR-1遺伝子
においてどの位の頻度およびどの位置で存在するのかは知られていない。
えば疾患、特に癌の化学療法についての感受性の阻害の診断および治療のための
手段および方法は、従来利用可能ではなかったが、やはり非常に望ましい。
提供により達成される。
つこれまで未知の変異および、これらの対立遺伝子の集団分布の知見に基づいて
いる。これらの新規の配列およびMDR-1遺伝子塩基偏向の知識に基づき、診断試
験およびそのような試験のための試薬は、MDR-1遺伝子のホモ接合体およびヘテ
ロ接合体、高頻度対立遺伝子および低頻度対立遺伝子を含む、ヒトにおけるMDR-
1対立遺伝子の特異的な検出および遺伝形質決定のためにデザインされた。その
ような試験を用いたヒトのMDR-1遺伝子の対立遺伝子の状態の決定は、MDR-1遺伝
子産物の基質、阻害剤または調節剤である薬物を用いる多様な疾患の治療に有用
である。
およびそれに関連する態様、例えばベクター、宿主細胞、変異MDR-1タンパク質
およびそれらの産生方法等を提供する。
連する疾病の治療のため、薬物候補およびMDR-1の阻害剤を同定および獲得する
方法、またそのような疾病の状態を診断する方法を提供する。
クター、タンパク質、それに対する抗体、および上述の方法により得られる、薬
物および阻害剤を含む、薬学的組成物および診断的組成物を提供する。
その治療が薬物治療に依存する他の疾患における、遺伝した薬物耐性の診断およ
び治療に有用である。本発明によるMDR-1遺伝子の新規の変異形態は、一定の患
者に対する薬物およびプロドラッグの薬力学的プロフィールの開発の可能性を提
供する。
異なるMDR-1対立遺伝子の区別についての診断試験は、MDR-1遺伝子産物の標的で
あり、ゆえにその細胞の取りこみがMDR-1に依存するような薬物を用いた疾患の
治療法を改善するために、非常に有力な手段を提供する。個々の対立遺伝子MDR-
1 の状態の診断により、例えば、薬物の個別の用法の適用の可能性を開くことに
より、焦点を絞った治療が可能となる。それはまた、治療の結果についての予後
を知る手段としても、即ち、全体的なMDR発現を予後マーカーとして利用するこ
とによる、確かに改善されたアプローチとしても有用である。さらに、MDR-1、
および新規MDR-1変異体を遺伝形質決定するための診断試験は、治療法の確立し
た薬物を改善し、遺伝子型を薬物活性または副作用と関連付けるのに役立つのみ
ではない。これらの試験および配列はまた、個々の型のMDR-1の活性を特異的に
調節する新規阻害剤の開発のための試薬を提供する。個々のMDR-1変異体の特異
的な阻害剤(人工的に作製される)を使用することの実行可能性、およびその治
療的適用の潜在性は、例えば、近年あるモデル系(Moscow J.A.ら, Blood 94(19
99), 52〜61:Dey S.ら, Biochemistry 38(1999), 6630〜6639)において示され
た。
新規の方法を提供する一方、変異体MDR-1遺伝子の発現に起因する、それらの潜
在的な有害効果については回避している。
する: (a)配列番号: のうち任意の1つの核酸配列をもつポリヌクレオチド; (b)配列番号:372、373、374または375のうち任意の1つのアミノ酸配列をもつ
ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド; (c) ポリヌクレオチドが、MDR-1遺伝子(アクセッション番号:AC002457)の1
40837位、141530位、141590位、171466位、171512位もしくは175068位に対応す
る位置に、MDR-1遺伝子(アクセッション番号:M29432またはJ05168)の101位も
しくは308位に対応する位置に、MDR-1遺伝子(アクセッション番号:AC005068)
の83946位に対応する位置に、MDR-1遺伝子(アクセッション番号:AC005068)の
78170位に対応する位置に、MDR-1遺伝子(アクセッション番号:M29445またはJ0
5168)の176位に対応する位置に、MDR-1遺伝子(アクセッション番号:AC002457
)の171456位、171404位もしくは175074位に対応する位置に、MDR-1遺伝子(ア
クセッション番号:AC005068)の77811位に対応する位置に、またはMDR-1遺伝子
(アクセッション番号:M29445またはJ05168)の137位に対応する位置に、ヌク
レオチド置換、ヌクレオチド欠失、ヌクレオチド付加または、ヌクレオチド付加
およびヌクレオチド置換をもつ、分子変異体(molecula variant)である多剤耐
性(MDR)-1ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド; (d)ポリヌクレオチドが、MDR-1遺伝子(アクセッション番号:AC002457)の14
0837位、171512位、171456位、171404位、139119位、139619位、140490位もしく
は171511位に対応する位置に1つのCをもつ、MDR-1遺伝子(アクセッション番号
:AC002457)の141530位、139177位、139479位、140118位、140568位、140727位
もしくは174901位に対応する位置に1つのAをもつ、MDR-1遺伝子(アクセッショ
ン番号:AC002457)の141590位、139015位、140216位、140595位、175142位もし
くは175180位に対応する位置に1つのGをもつ、MDR-1遺伝子(アクセッション番
号:AC002457)の171466位、175068位、175074位、139064位、139276位、140576
位もしくは145984位に対応する位置に1つのTをもつ、MDR-1遺伝子(アクセッシ
ョン番号:M29432またはJ05168)の101位に対応する位置に1つのAをもつ、MDR-1
遺伝子(アクセッション番号:M29432またはJ05168)の308位に対応する位置に1
つのTをもつ、MDR-1遺伝子(アクセッション番号:AC005068)の83946位、78170
位、70237位もしくは70200位に対応する位置に1つのTをもつ、MDR-1遺伝子(ア
クセッション番号:AC005068)の77811位、84032位もしくは73252位に対応する
位置に1つのGをもつ、MDR-1遺伝子(アクセッション番号:AC005068)の84701位
、84074位、84119位、83973位、70371位、70253位、70204位もしくは43162位に
対応する位置に1つのAをもつ、MDR-1遺伝子(アクセッション番号:AC005068)
の43263位に対応する位置に1つのCをもつ、またはMDR-1遺伝子(アクセッション
番号:M29445またはJ05168)の176位もしくは137位に対応する位置に1つのTをも
つ、分子変異体MDR-1ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド; (e)ポリペプチドが、MDR-1ポリペプチド(アクセッション番号:P08183)の21
位、103位または400位におけるアミノ酸置換を含む、分子変異体MDR-1ペプチド
をコードするポリヌクレオチド;および (f)ポリペプチドが、MDR-1ポリペプチド(アクセッション番号:P08183)の21
位におけるNからDへの、103位におけるFからSへの、103位におけるFからLへの、
または、400位におけるSからNへのアミノ酸置換を含む、分子変異体MDR-1ポリペ
プチドをコードするポリヌクレオチド。
たはタンパク質という用語は、該MDR-1遺伝子またはタンパク質が野生型のMDR-1
遺伝子またはタンパク質(MDR-1遺伝子のゲノム配列は、例えば以下に関して記
載される:エキソン1〜7:アクセッション番号AC002457;エキソン8:アクセッ
ション番号M29429、J05168、AC005068;エキソン9:アクセッション番号M29430
、J05168、AC005068;エキソン10:アクセッション番号M29431、J05168、AC0050
68;エキソン11〜13:アクセッション番号M29432、J05168、AC005068;エキソン
14:アクセッション番号M29433、J05168、AC005068;エキソン15:アクセッショ
ン番号M29434、J05168、AC005068; エキソン16:アクセッション番号M29435、J
05168、AC005068;エキソン17:アクセッション番号M29436、J05168、AC005068
;エキソン18:アクセッション番号M29437、J05168、AC005068; エキソン19:
アクセッション番号M29438、J05168、AC005068;エキソン20:アクセッション番
号M29439、J05168、AC005068;エキソン21:アクセッション番号M29440、J05168
、AC005068; エキソン22:アクセッション番号M29441、J05168、AC005068; エ
キソン23:アクセッション番号M29442、J05168、AC005068; エキソン24:アク
セッション番号M29443、J05168、AC005068;エキソン25:アクセッション番号M2
9444、J05168、AC005068;エキソン26:アクセッション番号M29445、J05168、AF
016535、AC005068;エキソン27:アクセッション番号M29446、J05168、AC005068
;エキソン28:アクセッション番号M29447、J05168、AC005068)とは、ヌクレオ
チドの置換、付加および/または欠失により、異なることを意味する。好ましく
は、該ヌクレオチド置換はMDR-1タンパク質のアミノ酸配列における、対応する
変化をもたらす。
レオチドおよびアミノ酸の数のみによってそれぞれ決定されるのではないことを
意味する。欠失、置換の可能性のある、または1つもしくはそれ以上の付加的な
ヌクレオチドを含む可能性のある、本発明による一定のヌクレオチドまたはアミ
ノ酸の位置は、遺伝子またはポリペプチドにおけるどこか他の欠失または付加的
なヌクレオチドもしくはアミノ酸によって変化する可能性がある。ゆえに、本発
明による「対応する位置」のもとでは、ヌクレオチドまたはアミノ酸は示された
数において異なる可能性があるが、なおも同様の近傍ヌクレオチドまたはアミノ
酸を有する可能性があることが理解されるべきである。置換、欠失される、また
は付加的なヌクレオチドまたはアミノ酸を含む可能性のある該ヌクレオチドまた
はアミノ酸は、「対応する位置」という用語にも含有される。ヌクレオチドまた
はアミノ酸は、例えばそれらの近傍のヌクレオチドまたはアミノ酸と共に、遺伝
子発現の制御、対応するRNAの安定性またはRNA エディティングに関係する可能
性のある、また本発明のタンパク質の機能的ドメインまたはモチーフをコードす
る可能性のある、配列を形成し得る。
式および集団分布は、多くの異なる個体から得たヒトMDR-1遺伝子の関連領域の
配列解析により解析された。MDR-1を含む全ての遺伝子の各々の遺伝的性質をも
つ、個体のゲノムDNAが、個々の血液試料から容易に精製できることは既知の事
実である。これらの個々のDNA試料はその後、血液試料を提供した個体に存在す
るMDR-1遺伝子の対立遺伝子の配列組成の解析に使用される。配列解析はMDR-1遺
伝子の関連領域のPCR増幅、それに続くPCR産物の精製、その後の、確立された方
法(ABI ダイターミネーターサイクルシークエンシング)を用いた自動DNA配列
決定により実施した。
を決定し、新規のMDR-1変異体を同定する試みにおいて、考慮しなければならな
かったある重要なパラメータは、各ヒトは各々の常染色体上の遺伝子(二倍性)
の2つの遺伝子コピーを有する(通常、異常な例外は非常に少ない)という事実
である。それにより、ホモ接合配列変異のみならず、ヘテロ接合変異をも明瞭に
同定できるようにするため、配列の評価には非常に慎重を要した。新規MDR-1遺
伝子多型(ホモ接合およびヘテロ接合)の同定および特徴付けにおける異なる段
階の詳細は、下記の実施例1および2にて説明される。
矢印により示される)。突然変異解析の方法は標準プロトコールに従い、実施例
にて詳細に説明される。一般に、表現型スペクトルおよび、MDR-1遺伝子におい
て突然変異をもつ患者における多剤耐性および変化した薬物耐性という、他の形
態と重複する臨床的特徴の評価のため、本発明に従って使用されるそのような方
法は、例えばハプロタイプ解析、単鎖コンフォメーション多型解析(SSCA)、PC
Rおよび直接配列決定を含む;ミックリー(Mickley)(1998)、および本明細書
に引用される文献を参照のこと。多くの患者の徹底的な臨床的特徴付けに基づい
て、表現型は後にこれらの突然変異、また以前に説明された突然変異と関連付け
ることができる。
た薬物が異常な効果をもたらすような、指標となる患者およびその家族の遺伝子
型を正確に特徴付けるために使用することができる。
原因としてますます認識されるようになった。多くの科学発表論文(Meyer, Ann
.Rev.Pharmacol.Toxicol. 37(1997), 269〜296およびWest, J.Clin.Pharmacol.
37(1997), 635〜648)は、ある種の薬物は、ある患者においては他の患者におい
てよりも、より良く作用する、または非常に毒性が高いことすらあること、また
薬物に対する患者の反応におけるこれらの変異は分子的基盤に関連する可能性が
あることを明らかに示している。この「ゲノム薬理学」の概念は、患者の薬物へ
の反応と遺伝的プロフィールとの間の相関に焦点を向けている(Marshall, Natu
re Biotechnology, 15(1997), 954〜957;Marshall, Nature Biotechnology, 15
(1997), 1249〜1252)。
特定の薬物に対して副作用なく反応できる患者の同定および選択に有用な手段と
して提案されてきた。この同定/選択は、例えば患者の血中の白血球からのDNAを
遺伝形質決定することによる、遺伝的多型の分子診断および疾患の特徴付けに基
づくことができる(Bertz, Clin.Pharmacokinet. 32(1997), 210〜256;Engel,
J.Chromatogra.B.Biomed.Appl.678(1996), 93〜103)。米国の民間健康保険医療
団体、および多くの欧州諸国の政府公衆衛生局のような健康管理創設者のために
は、このゲノム薬理学的アプローチにより、健康管理を改善すること、および、
不必要な薬物、有効性のない薬物、および副作用のある薬物に対し巨額の費用が
かかるため、経費削減することの、双方の前進を示すことが可能である。
の欠失、挿入、および特に置換に帰結する。野生型遺伝子または他の突然変異形
態におけるそのような突然変異を遺伝学的に操作することは当然ながら可能であ
る。MDR-1遺伝子のDNA配列におけるそのような改変の導入法は、当業者にはよく
知られている;例えばサムブルック、分子クローニング実験マニュアル(Sambro
ok, Molecular Cloning A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory
(1989) N.Y.)を参照のこと。
号:85、97、106または274によりコードされるアミノ酸配列の一つ又は複数のエ
ピトープを含む、変異体MDR-1タンパク質またはその断片をコードする。
ーネットから得られるBRASMOLのようなコンピュータープログラムが使用できる
。さらに、他の適切なコンピュータープログラムを用いて、構造モチーフの折り
たたまれ方のシミュレーションおよびコンピューターによる再設計を行うことが
できる(Olszewski, Proteins 25(1996), 286〜299;Hoffman, Comput.Appl.Bio
sci. 11(1995), 675〜679)。コンピューターは詳細なタンパク質モデルの構造
解析およびエネルギー解析に使用できる(Monge, J.Mol.Biol. 247(1995), 995
〜1012;Renouf, Adv.Exp.Med.Biol. 376(1995), 37〜45)。これらの解析は、
薬物の結合および/または輸送に対する、特定の突然変異の影響の決定に使用で
きる。
における上記アミノ酸の欠失、付加または置換は、一つ又は複数のヌクレオチド
の置換、挿入または欠失、またはそれらの任意の組み合わせによるものである。
好ましくは、該ヌクレオチド置換、挿入または欠失は、MDR-1遺伝子のエキソン2
におけるAsn21からAsp、エキソン5におけるPhe103からSerまたはLeu、および/ま
たはエキソン11におけるSer400からAsnというアミノ酸の置換に帰結する。
;例えば、ミックリー(Mickley)(1998)のような、本明細書の上記にて特定
されるものの他に、少なくとも1つのヌクレオチドおよび任意にアミノ酸の欠失
、付加および/または置換を含み得る。本発明のこの態様は、遺伝子のそのよう
な突然変異形態、または上述のタンパク質により模倣され得る同様の突然変異形
態をもつ患者における、薬物の薬理学的プロフィールに対する、MDR-1遺伝子に
おける突然変異の相乗効果の研究を可能にする。相乗効果の解析により、癌のあ
る形態の多剤耐性表現型の発現についてより深い洞察が提供されることが期待さ
れる。より深い洞察から、癌に関連する診断的組成物および薬学的組成物の開発
は大いに恩恵を受けると考えられる。
/または置換が、対応する野生型遺伝子と比較して、変異体MDR-1遺伝子の変化し
た発現をもたらすような、分子変異体MDR-1遺伝子のポリヌクレオチドに関連す
る。
成によって産生されたDNAもしくはRNA、またはこれらのうち任意のヌクレオチド
を単独でもしくは組合せで含む、組換えにより産生したキメラ核酸分子が可能で
ある。好ましくは該ポリヌクレオチドは、本発明のポリヌクレオチドを含む、遺
伝学的な操作に従来使用されるベクター、特にプラスミド、コスミド、ウイルス
およびバクテリオファージの一部である。そのようなベクターはさらに、適した
宿主細胞および適切な条件下において該ベクターを選択させるマーカー遺伝子の
ような遺伝子を含む可能性がある。
は、原核細胞または真核細胞における発現をさせる発現制御配列に、有効に連結
される。ポリヌクレオチドの発現はポリヌクレオチドの転写、好ましくは翻訳可
能なmRNAへの転写を含む。真核細胞、好ましくは哺乳動物細胞における発現を保
証する制御因子は、当業者によく知られている。それらは通常、転写開始を保証
する制御配列、および任意に、転写終結および転写の安定化を保証するポリAシ
グナルを含む。付加的な制御因子は転写エンハンサーおよび翻訳エンハンサーを
含み得る。原核宿主細胞における発現を許容する可能な制御因子は、例えば、大
腸菌におけるlac、trpまたはtacプロモーターを含み、真核宿主細胞における発
現を許容する制御因子の例は、酵母におけるAOX1またはGAL1プロモーター、また
はCMV、SV40、RSVプロモーター(ラウス肉腫ウイルス)、CMVエンハンサー、SV4
0エンハンサー、または哺乳動物細胞および他の動物細胞におけるグロビンイン
トロンである。転写開始を担う因子に加えて、そのような制御因子は、ポリヌク
レオチドの下流に、SV40ポリA部位またはtkポリA部位のような転写終結シグナル
をも含み得る。この状況において、Okayama-Berg cDNA発現ベクターpcDV1(Phar
macia)、pCDM8、pRc/CMV、pcDNA1、pcDNA3(In-vitrogene)、pSPORT1(GIBCO
BRL)のような、適切な発現ベクターが、当技術分野において既知である。好ま
しくは、該ベクターは発現ベクターおよび/または遺伝子転移ベクターもしくは
ターゲティングベクターである。レトロウイルス、ワクシニアウイルス、アデノ
関連ウイルス、ヘルペスウイルス、またはウシパピローマウイルスのようなウイ
ルスに由来する発現ベクターは、本発明のポリヌクレオチドまたはベクターの標
的細胞集団への導入に使用できる。組換えウイルスベクターを構築するため、当
業者に既知の方法が使用できる;例えば、サムブルック(Sambrook)、「分子ク
ローニング実験マニュアル(Molecular Cloning A Laboratory Manual)」Cold
Spring Harbor Laboratory(1989) N.Y.および、オースベル(Ausubel)、「分子
生物学における最新プロトコール(Current Protocols in Molecular Biology)
」Green Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Y.(1994)に説明さ
れる技術を参照のこと。または、本発明のポリヌクレオチドおよびベクターは、
標的細胞への運搬のためリポソームへ再構成することができる。
した宿主細胞に関連する。宿主細胞は原核細胞または真核細胞が可能である;上
記を参照のこと。宿主細胞において存在する本発明のポリヌクレオチドまたはベ
クターを、宿主細胞のゲノムへ組み込むか、または染色体外に維持することがで
きる。この点において、本発明の組換えDNA分子を「遺伝子ターゲティング」お
よび/または「遺伝子置換」のために、突然変異遺伝子の回復または、相同組換
えを介した突然変異遺伝子の作製のために使用できることもまた理解される;例
えばモウリック(Mouellic, Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 87(1990), 4712〜4716)
;ジョイナー(Joyner)、「遺伝子ターゲティング、実践アプローチ(Gene Tar
geting, A Practical Approach)」Oxford University Pressを参照のこと。
のような、任意の原核細胞または真核細胞が可能である。好ましい真菌類細胞は
、例えば、サッカロミセス属の細胞、特にS.cerevisiae種の細胞である。「原核
」という用語は、変異体MDR-1タンパク質またはその断片の発現のために、ポリ
ヌクレオチドを用いて形質転換またはトランスフェクションできる全てのバクテ
リアを含むことを意味する。原核宿主はグラム陰性バクテリアおよびグラム陽性
バクテリア、例えば大腸菌、チフス菌(S.typhimurium)、セラチアマルセッセ
ンス(Serratia marcescens)および枯草菌(Bacillus subtilis)等を含み得る
。MDR-1変異タンパク質の突然変異形態をコードするポリヌクレオチドを、当業
者に一般に知られた任意の技術を用いた宿主の形質転換またはトランスフェクシ
ョンに使用できる。融合した、使用可能なように連結した遺伝子を調製する方法
、およびそれらをバクテリア細胞または動物細胞において発現する方法は当技術
分野にて既知である(Sambrook、上記)。そこで説明される遺伝的構築物および
方法は、例えば原核細胞宿主における変異体MDR-1タンパク質の発現に利用でき
る。一般に、挿入されたポリヌクレオチドの十分な転写を容易にする、プロモー
ター配列を含む発現ベクターが、宿主に関連して使用される。発現ベクターは概
して、複製起点、プロモーターおよびターミネーター、および形質転換した細胞
の表現型による選抜を提供できる特定の遺伝子を含む。最適な細胞成長を達成す
るため、形質転換した原核宿主は培養槽において増殖でき、当技術分野にて既知
の技術に従って培養できる。本発明のタンパク質はその後、成長培地、細胞抽出
物、または細胞膜分画から単離できる。微生物を用いてまたは別の方法で発現し
た本発明のポリペプチドの単離および精製は、例えば、モノクローナル抗体また
はポリクローナル抗体の使用に関わるもののような、分離用クロマトグラフィー
および免疫学的分離等の、任意の従来法によって行うことが可能である。
質を発現させるような条件下での宿主細胞の培養、および産生されたタンパク質
または断片の培養からの回収を含む、変異体MDR-1タンパク質およびその断片を
産生する方法に関連する。
用いて遺伝学的に操作した細胞を含む、変異体MDR-1遺伝子を発現できる細胞を
産生する方法に関連する。本発明の方法によって得られる細胞は、例えばD.L.ス
ペクター(Spector)、R.D.ゴールドマン(Goldman)、L.A.リーンワンド(Lein
wand)の「細胞、実験マニュアル(Cells, a Lab manual)」CSH Press 1998に
説明される方法に従って薬物を試験するために使用できる。さらに、既知の薬物
およびその未知の誘導体を、MDR-1遺伝子の突然変異によって生じる薬物輸送欠
損を相補する能力について研究するために、この細胞を使用できる。これらの態
様については、宿主細胞は好ましくは野生型対立遺伝子を、好ましくはMDR-1遺
伝子の両方の対立遺伝子を欠いており、および/または、少なくとも1つのその突
然変異したものを有している。または、正常な対立遺伝子を超えた突然変異対立
遺伝子の強度の過剰発現、および正常な対立遺伝子を同様のレベルで過剰発現す
る組換え細胞系列との比較は、スクリーニング系および解析系として使用できる
。上記に説明する方法によって得られる細胞は、本明細書の以下に言及するスク
リーニング法のために使用することもできる。
の方法により得られる、または上述の方法によって産生される細胞からの、変異
体MDR-1タンパク質またはその断片に関連する。この状況において、本発明によ
る変異体MDR-1タンパク質は、当技術分野において既知の従来法によってさらに
改変され得ることもまた理解される。本発明による変異体MDR-1タンパク質の提
供により、それらの生物学的活性またはその阻害、即ちそれらの薬物輸送活性に
関連する部分を決定することもまた可能である。
体に関連する。好都合にも、この抗体は上記に定義される一つ又は複数のアミノ
酸置換を含むエピトープを特異的に認識する。
パク質またはそれに由来する(合成による)断片を抗原として用いた既知の方法
により調製できる。例えば、コフラー(Kohler)およびミルシュタイン(Milste
in)、Nature 256(1975), 495にて、またガルフル(Galfre)、Meth.Enzymol. 7
3(1981), 3にて最初に説明された、免疫化した哺乳動物に由来する脾臓細胞とマ
ウス骨髄腫細胞との融合を含む技術により、モノクローナル抗体が調製できる。
抗体はモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体または合成抗体、またFab、Fv
、またはscFv断片等のような抗体断片が可能である。さらに、前記のポリペプチ
ドに対する抗体またはその断片は、例えば、ハーロウ(Harlow)およびレーン(
Lane)の「抗体、実験マニュアル(Antibodies, A Laboratory Manual)」,CHS
Press, Cold Spring Harbor, 1988にて説明される方法の使用により得られる。
これらの抗体は例えば、本発明の変異体MDR-1タンパク質の免疫沈降法および免
疫学的局在決定に、また例えば組換え生物における、そのような変異体MDR-1タ
ンパク質の存在のモニタリングに、および本発明によるタンパク質と相互作用す
る化合物の同定に使用できる。例えば、BIAコアシステムにて利用されるような
表面プラズモン共鳴は、本発明のタンパク質のエピトープに結合するファージ抗
体の効率を増加するために用いることができる(Schier, Human Antibodies Hyb
ridomas 7(1996), 97〜105;Malmborg, J.Immunol.Methods 183(1995), 7〜13)
。
表すまたは含む、ゆえに、上述のヌクレオチド置換、欠失および付加により特定
される、対応する野生型MDR-1遺伝子のヌクレオチド配列と比較して、少なくと
も1つのヌクレオチドの相違を含む核酸分子に関連する。デオキシリボ核酸また
はリボ核酸のいずれかがそのような分子でありうる。そのような分子は例えば、
アンチセンスRNAを含む。これらの分子はさらに、転写されたときに、本発明に
よるポリヌクレオチドの転写産物を特異的に切断するリボザイムを産生するよう
な、リボザイムをコードする配列に連結することが可能である。
うなベクターの例は上記にて説明される。好ましくは、ベクター中に存在する核
酸分子は、原核宿主細胞または真核宿主細胞において発現させる制御因子に操作
的に連結される;上記を参照のこと。
細胞への本発明のポリヌクレオチドまたはベクターの導入を含む、トランスジェ
ニック非ヒト動物、好ましくはトランスジェニックマウスの産生方法に関連する
。非ヒト動物は以下に説明される本発明の方法に従って使用でき、非トランスジ
ェニック健常動物であること、または疾病、好ましくはMDR-1遺伝子における少
なくとも1つの突然変異によって生じる疾病を有することが可能である。そのよ
うなトランスジェニック動物は、それらのタンパク質または少なくともそれらの
機能的ドメインは高等真核生物種間、特に哺乳動物間においては保存されている
ため、例えば上述の変異体MDR-1タンパク質の変異形態に関連する、薬物の薬理
学的研究に非常に適している。トランスジェニック胚の産生およびそれらのスク
リーニングは、例えばA.L.ジョイナー(Joyner)編、「遺伝子ターゲティング、
実践アプローチ(Gene Targeting, A Practical Approach)」(1993), Oxford U
niversity Pressにて説明されるように実施できる。胚のDNAは例えば適切なプロ
ーブを用いたサザンブロット法を使用して解析できる。
の方法により得られる、好ましくは該ポリヌクレオチドまたはベクターが安定し
て上記非ヒト動物のゲノムに組み込まれる、好ましくは該ポリヌクレオチドまた
はベクターの存在が本発明の変異体MDR-1タンパク質の発現を導くような、トラ
ンスジェニックマウス、ラット、ハムスター、イヌ、サル、ウサギ、ブタ、線虫
およびシビレエイ等の魚類のようなトランスジェニック非ヒト動物にも関連する
。この動物は、変異体MDR-1遺伝子の同じまたは異なるポリヌクレオチドの1つ
またはそれ以上のコピーをもち得る。この動物は、多剤耐性のための研究モデル
としての有益性を含む、多大な有益性をもち、ゆえに、細胞内の薬物貯留の欠損
または不全によって生じる疾患の療法、治療等の開発において新規のかつ価値の
ある動物を与える。したがって、この場合は、哺乳動物は好ましくはマウスまた
はラットのような実験動物である。
つのMDR-1遺伝子の不活性化野生型対立遺伝子を含む。この態様は、例えばMDR-1
タンパク質の様々な変異形態の相互作用の研究を可能にする。トランスジェニッ
ク動物の成長および/または一生のある段階において、MDR-1遺伝子の発現または
機能を不活性化することが望ましい可能性もある。例えば、MDR-1遺伝子のRNA転
写産物に対する例えばアンチセンスまたはリボザイムの発現を促進させる、組織
特異的な、発生上の、および/または細胞制御された、および/または誘導可能な
プロモーターの使用により、これが達成されうる。同様に上記も参照のこと。適
切な誘導可能な系は、例えば、ゴッセン(Gossen)およびビュヤード(Bujard)
Proc.Natl.Acad.Sci. 89 USA(1992), 5547〜5551、およびゴッセン(Gossen)ら
, Trends Biotech. 12(1994), 58〜62によって説明されたような、テトラサイク
リン制御の遺伝子発現である。同様に、変異体MDR-1遺伝子の発現は、そのよう
な制御因子により制御できる。
い、インビボまたはインビトロにおいて、患者のMDR-1遺伝子における特定の突
然変異および影響を受けた表現型に関して、薬物の効能についての研究を行うこ
とが現在可能である。さらに、本発明の変異体MDR-1タンパク質は、薬物の薬理
学的プロフィールの決定に、および、例えば癌の治療についてより有効性の高い
可能性のあるさらなる薬物の同定および調製に、特に上述のもののような、各々
の突然変異によって生じるある種の表現型の改善に使用できる。
型と共分離するMDR-1遺伝子の変異形態の多型を考慮した、化学療法が効果的な
疾患の治療のための、薬物/プロドラッグの選択および薬学的組成物の製剤に関
わる。これにより、例えば、患者の一部におけるそれらの副作用および/または
、疾患の同じまたは異なる表現型に関するそれらの不確実な薬理学的プロフィー
ルによって、例えば癌には適当ではないと従来考えられていた安全かつ安価な薬
物の適用がなされる。本明細書にて説明される方法および手段は、例えば推奨用
量の改善に使用でき、また考慮される患者群に依存する必要投与量の調整を処方
者に予想させる。
の遺伝子産物の分子変異の活性を調節できるMDR-1阻害剤を同定および獲得する
方法に関連する: (a)変異体MDR-1タンパク質または本発明のポリヌクレオチドを含む分子変異体
MDR-1遺伝子を発現する細胞を、薬物輸送に応答して検出可能なシグナルを提供
できる成分の存在下において、MDR-1媒介性薬物輸送をさせる条件下でスクリー
ニングされる化合物と接触させる段階;および (b)シグナルの存在または増加が推定上の阻害剤について示唆するような、シ
グナルの有無、または薬物輸送により生み出されたシグナルの増加を検出する段
階。
り得るまたはなり得ない、複数の物質を含む。
るが、また、例えば植物、動物または微生物由来の、例えば細胞抽出物のような
試料にも含まれ得る。さらに、該化合物は当技術分野において既知の可能性があ
るが、各々阻害剤として有用であることは従来知られていない可能性がある。複
数の化合物を、例えば培養培地に加えることができ、または本発明の細胞もしく
は非ヒト動物に注射することができる。
含むと同定された元の当該試料から化合物を単離すること、または、例えば複数
の異なる化合物を含む場合、試料当たりの異なる物質数を減少するために、元の
試料をさらに小分別し、元の試料の小分別を用いた方法を繰り返すことのいずれ
かが可能である。その後、例えば本明細書または文献(Spectorら, 「細胞マニ
ュアル(Cells manual)」;上記を参照のこと)にて説明される方法により、該
試料または化合物が望ましい特性を示すかどうかを決定することができる。試料
の複雑性によって、上述の段階を数回、好ましくは本発明の方法に従って同定さ
れた試料が限られた数のまたは唯一の物質のみを含むまで、実施することができ
る。好ましくは上記試料は、同様の化学的および/または物理的特性の物質を含
み、最も好ましくは該物質は同一である。本発明の方法は、例えば先行技術にお
いて説明される他の細胞に基づいたアッセイ法に従って、または本明細書にて説
明される方法の使用および改変により、当業者により容易に実施およびデザイン
できる。さらに、本発明の方法を実施するために、例えば必要に応じてある種の
化合物をMDR-1タンパク質の基質となる前駆体に引き続き転換する酵素のように
、さらなるどの化合物および/またはどの酵素が使用できるかということを、当
業者は容易に認識すると考えられる。本発明の方法のそのような適用は十分当業
者の技術内にあり、不適当な実験を用いずに実施できるものである。
有機化合物、リガンド、ペプチド模倣物、PNAなどを含む。化合物は、ベラパミ
ルまたはシクロスポリンのような既知の薬物の機能的誘導体または類似体である
ことも可能である。化学的誘導体および類似体の調製方法は当業者には既知であ
り、例えばベイルステイン(Beilstein)、「有機化学ハンドブック(Handbook
of Organic Chemistry)」Springer edition New York Inc., 175 Fifth Avenue
, New York, N.Y. 10010 U.S.A.、および「有機合成(Organic Synthesis)」ウ
ィリー(Wiley)New York, USAにて説明されている。さらに、誘導体および類似
体を、当技術分野において既知の、または説明されたような方法に従い、その効
果について試験することができる。さらに、例えば、以下に説明される方法に従
い、ペプチド模倣物および/または適切な薬物誘導体および類似体のコンピュー
ター支援のデザインが使用できる。そのような類似体は、基礎として既知のMDR
基質および/または阻害剤および/または調節剤の構造を有する分子を含む;以下
を参照のこと。
発明のMDR-1タンパク質の相互作用部位の同定のために、適切なコンピューター
プログラムを使用できる(Fassina, Immunomethods 5 (1994), 114〜120)。タ
ンパク質およびペプチドのコンピューター支援の設計のための、さらなる適切な
コンピューターシステムは、例えばベリー(Berry)、Biochem.Soc.Trans. 22(1
994), 1033〜1036;ウォダック(Wodak)、Ann.N.Y.Acad.Sci. 501(1987), 1〜1
3);パド(Pado)、Biochemistry 25(1986), 5987〜5991のような、先行技術に
説明されている。上述のコンピューター解析から得られる結果は、例えば既知の
阻害剤の最適化のために、本発明の方法と組合わせて使用できる。適切なペプチ
ド模倣物および他の阻害剤もまた、例えば本明細書にて説明される方法に従う、
連続した化学的改変およびその結果生じた化合物の試験によって、ペプチド模倣
物コンビナトリアルライブラリを合成することにより同定できる。ペプチド模倣
物コンビナトリアルライブラリの作製および使用の方法は、例えばオストレシュ
(Ostresh)、Methods in Enzymology 267(1996), 220〜234、およびドーナー(
Dorner)、Bioorg.Med.Chem.4(1996), 709〜715のような先行技術にて説明され
る。さらに、本発明の阻害剤およびMDR-1タンパク質の三次元および/または結晶
構造は、ペプチド模倣物薬物の設計に使用できる(Rose, Biochemistry 35(1996
), 12933〜12944;Rutenber, Bioorg.Med.Chem. 4(1996), 1545〜1558)。
に帰結する、MDR-1遺伝子の多機能により化学療法が複雑化する癌のような、疾
患の特殊な形態の治療のために、特定の投与量において使用できる化合物を同定
および獲得する方法を提供する。
発明の方法によって得られる細胞である、または上述のトランスジェニック非ヒ
ト動物に含まれるものである。
遺伝子産物の分子変異の活性を調節できるMDR-1阻害剤の同定および獲得の方法
に関する: (a)本発明の変異体MDR-1タンパク質を、MDR-1タンパク質により結合されるこ
とが知られる第一の分子に接触させ、該タンパク質および該第一の分子の第一の
複合体を形成する段階; (b)該第一の複合体をスクリーニングされる化合物と接触させる段階;および (c)該化合物が該第一の分子を該第一化合物から置換するかどうかを測定する
段階。
記阻害剤候補との第二の複合体の形成の測定を含む。好ましくは、該測定段階は
該タンパク質に結合しない上記第一の分子の量の測定を含む。
ルスポダル、シクロスポリンAまたはデクスニグルジピンである。さらに、本発
明の方法において該第一の分子は、例えば放射線標識または蛍光標識を用いて標
識されることが好ましい。
伝子の存在に関連する疾病、またはそのような疾病への感受性の診断方法に関連
する: (a)被験者からの試料における本発明のポリヌクレオチドの存在を決定する段
階;および/または (b)例えば本発明の抗体を用いて、MDR-1タンパク質の変異形態の存在を決定す
る段階。
する方法は、例えばサザンブロット法またはノーザンブロット法またはインサイ
チュー解析の形態において、本発明のポリヌクレオチドまたは核酸分子の使用に
より達成され得る。上記核酸配列はいずれかの遺伝子のコード領域または非コー
ド領域、例えばイントロンにハイブリダイズできる。本発明の方法において相補
的配列が使用される場合、該核酸分子はノーザンブロット法において再度使用で
きる。さらに該試験は、例えば遺伝子の転写の実際の遮断と共に行うことができ
、ゆえに治療上の関連性をもつことが期待される。さらに、プライマーまたはオ
リゴヌクレオチドも上述のMDR-1遺伝子または対応するmRNAの1つへのハイブリダ
イゼーションに使用できる。ハイブリダイゼーションに使用される核酸は、当然
、例えば放射性マーカーまたは他のマーカーを取りこむまたは付着することによ
り好都合に標識され得る。そのようなマーカーは当技術分野において既知である
。核酸分子の標識は従来法により達成できる。さらに、変異体MDR-1遺伝子の存
在または発現は、対応する核酸配列のいずれかに特異的にハイブリダイズするプ
ライマー対の使用により、および標準的な手順に従ったPCR反応の実行により試
験できる。上述のプローブまたはプライマーの特異的なハイブリダイゼーション
は、好ましくはストリンジェントハイブリダイゼーション条件にて生じる。「ス
トリンジェントハイブリダイゼーション条件」という用語は当技術分野にてよく
知られている;例えばサムブルック(Sambrook)ら、「分子クローニング、実験
マニュアル(Molecular Cloning, A Laboratory Manual)」第2版, CHS Press,
Cold Spring Harbor , 1989;「核酸ハイブリダイゼーション、実践アプローチ
(Nucleic Acid Hybridisation, A Practical Approach)」ハムス(Hames)お
よびヒギンズ(Higgins)編, IRL Press, Oxford, 1985を参照のこと。さらに、
被験者から得られたmRNA、cRNA、cDNAまたはゲノムDNAは、MDR-1遺伝子の突然変
異特有のフィンガープリントとなり得る突然変異を同定するために配列決定でき
る。本発明はさらに、被験者から得られたDNAまたはRNAのRFLPによってそのよう
なフィンガープリントを検出できる可能性があり、当技術分野において既知の方
法を用いる分析に先立って、DNAまたはRNAを任意に増幅できるような方法を含む
。RNAフィンガープリントは、例えば、適切なRNA酵素、例えばリボヌクレアーゼ
T1、またはリボヌクレアーゼT2などまたはリボザイムを用いて被験者から得られ
たRNA試料を切断すること、および、例えば上述のように、RNA断片の電気泳動に
よる分離および検出を行うことにより実行できる。
もなく、当業者により容易に案出できる;例えば実施例を参照のこと。本発明の
付加的な態様は、本発明の抗体またはその断片の使用により上記決定が達成され
るような方法に関連する。本発明の方法にて使用される抗体は、ヒスチジンフラ
ッグまたはビオチン分子のような、検出可能なタグを用いて標識することができ
る。
応、制限酵素切断、直接配列決定、核酸増幅技術、ハイブリダイゼーション技術
または免疫測定法(Sambrookら、上記引用文中「CSHクローニング(CSH cloning
)」、HarlowおよびLane 上記引用文中「CSH抗体(CSH antibodies)」を含む。
1遺伝子における上記変異をなくすまたは軽減するため、被験者への薬物の投与
を含むさらなる段階は、MDR-1遺伝子により生じる表現型反応による臨床徴候の
発症以前に、所定の疾患の治療を成立させる。
ルビシン、パクリタキセル(タキソール)および他のMDR基質のような化学療法
薬である。アンブドカー(Ambudkar SV)ら、Annu.Rev.Pharmacol. Toxicol. 39
(1999), 361〜398。
1遺伝子とは、コードされるタンパク質が野生型MDR-1タンパク質の一次構造コン
フォメーションの一部または全部をもつ、即ち膜を通した薬物輸送を仲介する生
物学的特性を有するような遺伝子を意味する。本発明のこの態様は、特にヒトに
おける、癌、炎症疾患、ニューロン疾患、CNS(中枢神経系)疾患または循環器
病の治療に適している。変異体MDR-1遺伝子の発現の検出は、該発現が疾患の対
応する表現型の発生または維持と相関するという結論を成立させると考えられる
。したがって、発現レベルを低レベルにまで下げるため、またはそれをなくすた
め、ある段階が適用される。これは、例えば、リボザイム、アンチセンス核酸分
子、細胞内抗体または上述の、これらのMDR-1タンパク質の変異形態に対する阻
害剤の使用によるような、生物学的方法による、突然変異遺伝子の発現の少なく
とも部分的な除去により行うことができる。さらに、対応する突然変異タンパク
質および遺伝子の発現レベルを下げる製剤が開発できる。
(b)において同定される化合物またはその誘導体または類似体を、薬学的に許
容される形態に合成および/または製剤化するような、薬学的組成物を産生する
方法に関連する。本発明の方法に従って同定される治療に有用な化合物は、上記
にて議論されるように製剤、および患者への投与をすることができる。当業者に
より適切であると決定される使用および治療用量については以下を参照のこと。
またはプロドラッグの治療的適用に適した形態での製剤および、本発明の方法に
おいて診断された被験者における疾病の予防または改善の方法に関連する。
のいずれかにより排除されるために、一つ又は複数の活性または不活性代謝産物
へ代謝される(Meyer, J. Pharmacokinet.Biopharm. 24(1996), 449〜459)。ゆ
えに、本発明の方法に従って同定および獲得された実際の化合物または阻害剤を
使用する以外に、患者において活性型に転換される、対応するプロドラッグとし
ての製剤を用いることができる。プロドラッグおよび薬物の投与についてとられ
る可能性のある予防手段は、文献にて説明される;概観については、オザマ(Oz
ama)、J.Toxicol.Sci. 21(1996), 323〜329)を参照のこと。
細書上文にて定義されるような薬物の誘導体である。
り同定または獲得される阻害剤に関連する。好ましくは、阻害剤は本発明の変異
体MDR-1タンパク質に特異的に結合する。本発明の抗体、核酸分子および阻害剤
は好ましくは、天然のリガンドまたは本発明のMDR-1タンパク質の結合パートナ
ーの結合特異性と少なくとも実質的に同一の特異性を有する。抗体または阻害剤
は、本発明のMDR-1タンパク質に対し、少なくとも105 M-1の、好ましくは107 M- 1 より高い、および好都合には、MDR-1活性が抑制されるべき場合は1010 M-1まで
の結合親和性をもち得る。したがって、好ましい態様においては、本発明の抑制
抗体または阻害剤は、少なくとも約10-7 Mの、好ましくは少なくとも約10-9 Mの
、および最も好ましくは少なくとも約10-11 Mまでの親和性をもつ。
は対応する個々のMDR-1対立遺伝子の遺伝形質決定のための、オリゴヌクレオチ
ドまたはポリヌクレオチドの使用に関連する。好ましくは、該オリゴヌクレオチ
ドまたはポリヌクレオチドは、以前に説明された本発明のポリヌクレオチドまた
は核酸分子である。
長〜100ヌクレオチド長、より好ましくは15ヌクレオチド長〜50ヌクレオチド長
であり、配列番号:1〜179、またはプロモーターの野生型(「wt」)または突然
変異(「mut」)配列、または表8に表されるMDR-1遺伝子のエキソン、またはこ
れらの任意の1つの相補的配列の、任意の1つのヌクレオチド配列を含む。
リゴヌクレオチドを含むプライマーまたはプローブに関連する。この状況におい
て、「〜を含む」という用語は、上述の、および本発明のプライマーまたはプロ
ーブのために使用されるヌクレオチド配列が、その5'末端および/または3'末端
にすぐ隣接したMDR-1遺伝子のさらなるヌクレオチド配列を全くもたないことを
意味する。しかし、標識のような他の部分、例えばビオチン分子、ヒスチジンフ
ラッグ、抗体断片、金コロイド等、またMDR-1遺伝子に対応しないヌクレオチド
配列は、本発明のプライマーおよびプローブ中に存在できる。さらに、上述の特
定のヌクレオチド配列を使用すること、およびそれらを、これらの付加的なヌク
レオチド配列が核酸以外の部分と共に散在させられるような、または核酸がMDR-
1遺伝子のヌクレオチド配列に対応しないような、MDR-1遺伝子に由来する他のヌ
クレオチド配列と組合せることも、また可能である。
クレオチドを含む分子変異体MDR-1遺伝子の発現、および/または本発明のポリヌ
クレオチドを含むMDR-1対立遺伝子の識別のため、MDR-1遺伝子の遺伝子産物に特
異的に結合できる抗体または物質の使用に関連する。
たは阻害剤、および薬学的に許容される担体を任意に含む薬学的組成物に関連す
る。例えば、阻害剤または薬学的に許容されるその塩類を含む、これらの薬学的
組成物は、薬物投与に従来使用される任意の経路、例えば経口、局所的、腸管外
、または吸入により、好都合に投与できる。許容できる塩類はアセテート、メチ
ルエステル、HCl、スルフェート、および塩化物などを含む。化合物は、従来の
手順に従い、薬物を標準の薬学的担体と組合せることにより調製される従来的な
剤形にて投与できる。これらの手順は、望ましい調製物に適切な、成分の混合、
顆粒化および圧縮または溶解に関わり得る。薬学的に許容される担体または希釈
剤の形態および特性は、組合せられる活性成分の量、投与経路、および他の既知
の変数により決定されることは理解されると考えられる。担体は製剤の他の成分
と適合性があるという意味で、「許容される」ものでなければならず、そのレシ
ピエントに対し有害であってはならない。使用される薬学的担体は、例えば、固
体または液体のいずれかが可能である。固体担体の例は、ラクトース、カオリン
、ショ糖、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシア、ステアリン酸マグネ
シウム、およびステアリン酸などが可能である。液体担体の例は、生理的リン酸
緩衝液、シロップ、ピーナッツオイルおよびオリーブオイルのようなオイル、水
、エマルジョン、様々な種類の湿潤剤、および滅菌溶液などである。同様に、担
体または希釈剤は、モノステアリン酸グリセリンまたはジステアリン酸グリセリ
ンのような、当技術分野において既知の遅効性物質を、単独で、またはワックス
と共に含み得る。
か一つの方法に従う。医学分野においてよく知られるように、ある患者のための
用量は、患者のサイズ、体表面積、年齢、投与される特定の化合物、性別、投与
の時間および経路、一般健康状態、ならびに同時に投与される他の薬物を含む、
多くの因子に依存する。進行を定期的な評価によりモニタリングできる。
ハイブリダイズするアンチセンスオリゴヌクレオチドを含むような、または突然
変異体MDR-1タンパク質を特異的に認識するが、機能的な野生型は認識しないも
しくは実質的に認識しない抗体を含むような、薬学的組成物の使用は、細胞にお
ける突然変異型の濃度を減少させるべきである場合に考えられる。
れるべき患者を決定することができる。誤った薬物が誤った患者に対して誤った
投与量で処方されることを回避するような情報と共に、考慮される患者群に依存
する投与量の調整を処方者に予想させるように、推奨用量は製品のラベルにて示
される。
細胞、変異体MDR-1タンパク質、抗体、阻害剤、核酸分子または対応するベクタ
ーのうちいずれか一つ、および適した検出方法を任意に含む、診断的組成物また
は診断キットに関連する。本発明のキットは、選択マーカーならびに、トランス
ジェニック細胞およびトランスジェニック動物の作製に適した選択培地の成分の
ような材料を更に含み得る。本発明のキットを本発明の方法の実施のために好都
合に使用でき、特に、例えば診断分野のような様々な適用において、または研究
手段として、使用できる。本発明のキットの一部はバイアルに個包装でき、また
は容器もしくは複数容器単位中にて組合せることができる。キットの製造は好ま
しくは、当業者に既知の標準の手順に従う。キットまたは診断的組成物は、例え
ば放射性免疫測定法もしくは酵素免疫測定法のような免疫測定法、または好まし
くは、本明細書上記および実施例にて説明されるような核酸ハイブリダイゼーシ
ョンおよび/または核酸増幅技術を使用する、上述の本発明の方法のいずれか一
つに従い、MDR-1遺伝子の突然変異形態の発現の検出法に使用できる。
化させる。例えば、ある変異体MDR-1タンパク質は、薬物輸送の促進能力を大き
く低下させる三次構造を有する。突然変異タンパク質の正常な、または制御され
たコンフォメーションを回復することは、困難ではあるが、これらの分子欠損を
修正するのに非常に的確かつ特異的な方法である。ゆえに薬理学的操作において
は、タンパク質の野生型のコンフォメーションの回復を目指すことができる。そ
のため、本発明のポリヌクレオチドおよびコードされるタンパク質は、MDR-1遺
伝子またはタンパク質の野生型の機能を活性化できる分子を設計および/または
同定するために使用することもできる。
病の治療または予防のための、薬学的組成物の調製のための薬物またはプロドラ
ッグの使用に関連する。
または遅延する薬学的組成物を調製するための、機能的および発現可能な野生型
MDR-1タンパク質をコードする核酸配列の有効用量の使用に関連する。機能的お
よび発現可能なMDR-1タンパク質をコードする遺伝子は細胞に導入され、関心対
象のタンパク質が産生されうる。エクスビボ法またはインビボ法における治療遺
伝子の細胞への導入に基づく遺伝子治療は、遺伝子転移の最も重要な適用の1つ
である。インビトロまたはインビボの遺伝子治療に適したベクターおよび方法は
、文献にて説明されており、当業者には既知である;例えば、ジョルダーノ(Gi
ordano), Nature Medicine 2(1996), 534〜539;シェイパー(Schaper), Circ
.Res.79(1996), 911〜919;アンダーソン(Anderson), Science 256(1992), 80
8〜813;イスナー(Isner), Lancet 348(1996), 370〜374;ムルホーサー(Muh
lhauser), Circ.Res.77(1995), 1077〜1086;ワン(Wang), Nature Medicine
2(1996), 714〜716;国際公開公報第94/29469号; 国際公開公報第97/00957号ま
たはシェイパー(Schaper), Current Opinion in Biotechnology 7(1996), 635
〜640、およびそこに引用される文献を参照のこと。遺伝子は細胞への直接導入
、またはリポソームもしくはウイルスベクター(例えばアデノウイルス、レトロ
ウイルス)を介した細胞への導入のために設計できる。好ましくは、該細胞は生
殖系列細胞、胚細胞、または卵細胞もしくはそれらに由来するものであり、最も
好ましくは、該細胞は幹細胞である。
ンパク質を発現および/またはターゲティングさせる制御因子に核酸配列が操作
的に連結されることが好ましい。本発明に従って使用できる、適した遺伝子導入
系は、リポソーム、受容体介在の導入系、裸のDNA、ならびにヘルペスウイルス
、レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ関連ウイルス、その他のウイ
ルスベクターを含み得る。遺伝子治療のための、身体の特定部位への核酸の導入
は、ウイリアムス(Williams)(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88(1991), 2726〜272
9)により説明されたようなバイオリスティック導入系を使用して達成すること
もできる。組換えDNAにより細胞をトランスフェクションする標準法は、分子生
物学の当業者には既知である。例えば、国際公開公報第94/29469号;上記も参照
のこと。遺伝子治療は、本発明の組換えDNA分子もしくはベクターの患者への直
接投与により、または本発明のポリヌクレオチドもしくはベクターによりエクス
ビボで細胞をトランスフェクションすることにより、およびトランスフェクショ
ンされた細胞を患者に注入することにより実施できる。
ロン疾患、CNS疾患または循環器病である。
R-1遺伝子のエキソン26における単一ヌクレオチド多型(SNP) C3435Tは、薬物
の安全性および効能の改善のため、即ち、副作用および薬物相互作用を予測およ
び予防するため、ならびに患者の服薬遵守を増加させるため、多様なMDR-1基質
および誘導物質の血中濃度の予測を可能にする薬理遺伝学的因子として有用であ
る。そのような基質および誘導物質は、例えば、フェニトインのような抗けいれ
ん薬/抗てんかん薬;ジゴキシンのような強心配糖体;シクロスポリンAおよびFK
506のような免疫抑制薬;クラリスロマイシンおよびエリスロマイシンのような
マクロライド系抗生物質;およびリファンピン(Rifampin)のような大環状抗生
物質である。ゆえに、本発明は上述のSNPの上記に従った薬理遺伝学的因子とし
ての使用にも関連する。好ましくは多型は、単独または上述のような任意の他の
SNPと組み合わせた、MDR-1エキソン26(C3435T)SNPである。
および手段のさらなる適用は、例えば、そこで説明される法医学、親子鑑定、表
現型形質と多型との相関、表現型形質の遺伝子地図作製等の方法および手段が本
発明に従って等しく適用できる、米国特許第A-5,856,104号にて説明されるよう
な先行技術に見出すことができる。
は明らかであり、含まれる。本発明に従って使用される方法、用途および化合物
のいずれか一つに関わるさらなる文献は、例えば電子デバイスを用いて公共のラ
イブラリから検索できる。例えば、http://www.ncbi.nlm.nih.gov/PubMed/medli
ne.html.のような、インターネット上で利用可能な公共データベース「Medline
」が使用できる。さらなるデータベースおよびアドレス、例えばhttp://www.ncb
i.nlm.nih.gov/、http://www.infobiogen.fr/、http://www.fmi.ch/biology/res
earch_tools.html、http://www.tigr.org./が当業者に知られており、また例え
ばhttp://www.lycos.com.を使用して得ることもできる。バイオテクノロジーに
おける特許情報の概観ならびに、遡及的探索および最新の知見の認識に有用な特
許の関連情報源の通覧は、バークス(Berks),TIBTECH 12(1994), 352〜364によ
り与えられている。
R-1遺伝子に関連するまたは依存することが知られていない、あらゆる種類の疾
患の診断および治療に使用できる。本発明の組成物、方法および使用は、ヒトに
おいて望ましく使用することができるが一方、本明細書にて説明される方法およ
び使用には動物の治療もまた含まれる。
の生物学的実施例に関して、本発明を説明する。
離するためのQiagen社のキット)により得られた。試験された全ての個体(ベル
リンChariteeの薬理学部からのボランティア)からの血液を、あらゆる法的、倫
理的および医学的および、ドイツ、ベルリンのチャリティークリニカム(Charit
ee Clinicum)の手続き上の要件を考慮して得た。
反応(PCR)によって得るため、特異的なオリゴヌクレオチドプライマーを各断
片について2つ適用した。これらの特異的なオリゴヌクレオチドプライマーは、M
DR-1遺伝子の様々なエキソンの上流および下流の配列に結合するように設計され
た。その結果生じるDNA断片は、エキソン-イントロンの境界において、エキソン
配列のみならず、あるイントロン配列をもコードするものであった。エキソン近
傍のそのようなイントロン配列は、「スプライシング」として知られる過程であ
る、正しいプロセシングおよび、それに続くタンパク質をコードするmRNAの発現
に重要であることが知られている。オリゴヌクレオチドプライマー対は、ヒトMD
R-1遺伝子の28エキソン各々について最適化され、合成され、およびアフィニテ
ィークロマトグラフィー(OPC cartridges)により精製された。各プライマーの
配列は表1に列挙される。
ーおよびエンハンサー領域を含む断片の各々について最適化された条件下にて実
施した。PCRは25μlの反応容量で全てのエキソンについて実施した。50 ngのDNA
鋳型を1.5 mMのMgCl2(Qiagen, Hilden)、50 μMのdNTP(Qiagen, Hilden)、2
5 pMolの各プライマー(Metabion, Munich)および0.625 UのTaqポリメラーゼ(
Qiagen, Hilden)を含む、標準PCR緩衝液に加えた。全てのPCRは、パーキンエル
マー サーモサイクラー(モデル9700)にて実施し、94℃で2分間の最初の変性段
階、そして、94℃で45秒間の変性、プライマーの融解温度(PCR条件:A〜H)に
依存する45秒間のプライマーアニーリング、および72℃で45秒間からなる増幅サ
イクルを36回行い、続いて72℃で5分間の最終伸長を行った。個々のPCR条件A〜H
については、以下のアニーリング温度を適用した:A:53℃;B:56℃;C:55℃
;D:57.5℃;E:58℃;F:59℃;G:54℃;H:60℃。
いて実施した。1.5 mM のMgCl2(Qiagen, Hilden)、200μMのdNTP(Qiagen, Hi
lden)、30 pMolの各プライマー(Metabion, Munich;例外:エンハンサー断片1
については20 pMol)および1 UのTaqポリメラーゼ(Qiagen, Hilden)を含む標
準PCR緩衝液に、50 ngのDNA鋳型(例外:プロモーター断片1〜3については100 n
g)を加えた。全てのPCRはパーキンエルマー サーモサイクラー(モデル9700)
にて実施し、94℃で3分間の最初の変性段階、その後94℃で30秒間の変性、プラ
イマーの融解温度(PCR条件:AおよびB)に依存する30秒間のプライマーアニー
リングおよび72℃で30秒間からなる増幅サイクルを異なる回数(プロモーター断
片2+4およびエンハンサー断片1については30サイクル;プロモーター断片3につ
いては31サイクル;プロモーター断片1およびエンハンサー断片2については32サ
イクル)行い、続いて72℃で2分間の最後の伸長反応を行った。個々のPCR条件A
およびBについて、以下のアニーリング温度を適用した:A:58℃;B:56℃。
に列挙する。個々の遺伝子型のさらなる解析に使用された、結果として得られた
MDR-1遺伝子断片の例を表1に示す。
性のある、取りこまれなかったヌクレオチドおよび緩衝液成分を除去するため、
ヒトMDR-1遺伝子の特異的な部分、エキソン配列、およびエキソン-イントロンの
境界にある幾つかのイントロン配列を含む、限定されたDNA断片を処理した。こ
の精製のため、標準イオン交換クロマトグラフィー技術を使用した(PCR断片精
製のためのQiagen社のキット)。全ての断片について、直接DNA配列決定による
解析に適した、十分な収量の精製した断片が得られた。個々のMDR-1遺伝子型の
直接DNA配列決定による解析に使用された、精製されたMDR-1遺伝子断片の例を、
表1に示す。
-1遺伝子の関連領域のPCR増幅を実施し(表1を参照のこと)、続いて精製したPC
R産物を確立された手法(ABI ダイターミネーターサイクルシークエンシング)
を用いて配列決定した。このアプローチを用いるにあたり、考慮する必要のあっ
た非常に重要なパラメータは、健常な各ヒト個体は2つのMDR-1遺伝子コピーをも
つということであった。この二倍性(常染色体遺伝子の、およびMDR-1が常染色
体にコードされる)により、ホモ接合体配列変異のみならず、ヘテロ接合体変異
をも明瞭に同定するためには、配列の評価には大いに注意を払わなければならな
かった。そのため、唯一の決定された配列には頼らず、相対する両方のDNA鎖を
配列決定することにより、各個体に由来する限定された各MDR-1遺伝子断片から
、常に少なくとも2つの配列を得た。
NAから、ヒトMDR-1遺伝子の全てのエキソンを含む関連領域の配列解析を実施し
た。この数の個体試料はその後、その幾つかが127個体から解析された、選択さ
れたMDR-1遺伝子断片のために拡大して解析された。配列は、この全ての操作に
おいて「野生型」配列とみなされる、公表されたMDR-1配列から逸脱したDNA配列
の発生について、手作業で調査した。集団遺伝学により、定義された遺伝子(ハ
ーディ・ワインベルグの式、 pe2 + 2pq + qe2 =1)のホモ接合体対立遺伝子対
ヘテロ接合体対立遺伝子の、推定頻度の計算が可能であるため、実験から得られ
る知見を用いて、ホモ接合体対立遺伝子対ヘテロ接合体対立遺伝子の(その式を
用いて)予測される分布および偏差を確認することもまた可能である。これは、
内部対照および、検出される配列偏差が実際に新規の対立遺伝子を示すことの確
証として役立つ。
て実験的に確証された。エキソン5、6、12ならびに17(エキソン5については配
列番号:91、154および160)、(エキソン6については配列番号:101および166
)、(エキソン12については配列番号:116)ならびに(エキソン17については
配列番号:119および172)に近接するイントロン配列において8つの多型が現れ
る。コード領域においては7つの多型が認められ、エキソン2および26においては
2つ、エキソン5、11および12においては1つずつ、ならびに非コード領域エキソ
ン1においては1つ(各々、配列番号:79および85(エキソン2について)、122およ
び178(エキソン26について)、97(エキソン5について)、106(エキソン11について
)、112(エキソン12について)、ならびに73(エキソン1について))であった。3
つの変異により、MDR-1タンパク質のアミノ酸配列(各々、配列番号:85(N21Dに
ついて)、97(F103Sについて)および106(S400Nについて))に変化が生じた。それ
らの変化はMDRタンパク質を変化させる。ATG翻訳開始コドン(配列番号:79)直
前には、タンパク質を変化させない変化が存在する。この位置が、翻訳の効果を
制御することによるタンパク質の発現レベルについて、非常に重要であることは
よく知られている。さらなる多型はMDR-1のアミノ酸組成を変化させないが、そ
れにもかかわらずこれらの各変異は新規MDR-1対立遺伝子を定義するため、MDR-1
遺伝形質決定において有用な手段である。異なる個体間においてMDR-1の発現が
大きく異なることは既知であり、発現レベルにおけるこの可変性について説明す
る可能性が非常に高いものは、MDR-1遺伝子の正に内部および周辺の領域におけ
る対立遺伝子の相違である。従って、全ての新規のおよび限定されたMDR-1対立
遺伝子は、患者におけるMDR-1遺伝子状態を決定するマーカーとして役立つ。疾
患の診断および治療のための、このMDR-1遺伝形質決定の重要性は、当分野にお
ける専門家によく知られており、上記の導入章においてもまた詳細を説明されて
いる。
および更に詳細な記述ならびに集団内の対立遺伝子における、ホモ接合体対ヘテ
ロ接合体の分布は、表2に記載する。変異対立遺伝子のホモ接合体の予測される
頻度を、ハーディ・ワインベルグの分布に基づいて計測した。配列における逸脱
した塩基は太字および下線により示す。図2は、ホモ接合体またはヘテロ接合体
の個体から得た DNA試料における新規変異体の発見および出現の例を示す。
伝子の区別のための試薬に反映されうるという原則を利用する。これらの試薬は
診断試験の開発に必要な重要要素を提供する。そのような試薬の例は、新たに同
定された塩基置換によって野生型MDR-1配列から逸脱するオリゴヌクレオチドを
含むが、それに制限するものではない。しばしば、個々のMDR-1遺伝子状態の決
定のための診断試験の原則は、様々なMDR-1対立遺伝子に対する、そのような試
薬のハイブリダイゼーション効率における相違を含むが、制限するものではない
。加えて、例えばリガーゼまたはポリメラーゼまたは制限酵素のような酵素反応
における、そのような試薬の有効性の相違が、または酵素反応における異なる基
質としての有効性の相違が適用されうきる。これらの試験の原則は当分野におけ
る専門家にはよく知られている。その例はPCR法およびLCR法、チップハイブリダ
イゼーションまたはMALDITOF解析である。そのような技術は先行技術、例えばPC
R法:ニュートン(Newton)(1994)、「PCR(PCR)」, BIOS Scientific Publi
shers, Oxford;LCR法:シャイマー(Shimer), 「リガーゼ連鎖反応(Ligase c
hain reaction.)」Methods Mol.Biol. 46(1995), 269〜278;チップハイブリダ
イゼーション:ラムセー(Ramsay)「DNAチップ:先端技術(DNA chip:State-of
-the art)」Nature Biotechnology 16(1998), 40〜44;およびMALDI-TOF解析:
ロス(Ross)「MALDI-TOF質量分析による高度多発性遺伝形質決定(High level
multiplex genotyping by MALDI-TOF mass spectrometry)」Nature Biotechnol
ogy 16(1998), 1347〜1351に記載されている。他の試験原則は、翻訳され発現し
たタンパク質としてMDR-1変異体を特異的に認識する試薬の適用に基づく。例と
しては、対立遺伝子特異的な抗体、ペプチド、基質類似体、阻害剤、または新し
いMDR-1対立遺伝子によりコードされる様々なMDR-1タンパク質形態に結合する(
およびある例においてはその作用を改変もする)他の物質がある。本適用におい
て定義される、新規のヌクレオチド置換に由来する試薬を用いた診断試験の原則
を表すために本明細書に示す実施例は、PCR法に基づく。記載した特異的試薬の
適用、他の任意の方法もまた、MDR-1対立遺伝子の識別に役立つことが明らかで
ある。
された試薬(プライマーの組合せ)を用いたポリメラーゼ連鎖反応の適用により
、対立遺伝子を識別する、当分野における専門家によく知られた技術である。そ
のような試験の主要な構成要素、およびそのような試験の特異性を提供する唯一
の試薬は、異なる対立遺伝子を特異的に識別する配列を含むように設計されたオ
リゴヌクレオチドである。
ーション効率によって、および酵素反応(本実施例における酵素は熱安定性ポリ
メラーゼである)のための基質としてはたらくそれらの様々な能力によって、異
なるMDR-1対立遺伝子を識別できる、特異的なオリゴヌクレオチドが設計された
。特異的に設計され、かつ個々のヒトにおいて新しく定義されたmdr-1対立遺伝
子の有無を検出できる試薬は、新しい各対立遺伝子についての特異的なプライマ
ーの組合せとして表3に列挙されている。これらの試薬の設計は、実施例2におい
て示され、表2および図2に列挙される、ヒトMDR-1遺伝子において新しく発見さ
れたヌクレオチド配列および塩基置換に基づく。特異的な試薬の設計に加え、ポ
リメラーゼ連鎖反応の原則に基づく診断試験は、条件の最適化、即ち、最適化し
たPCR条件を必要とする。この場合においては、試験の結果は、試験可能な成分
(鋳型)として個々のヒトから得たゲノムDNAを使用して得られる、特異的DNA断
片の有無として与えられる。個体の血液からのゲノムDNAの調製は実施例1に記載
される。
dNTP(Qiagen, Hilden)、1×Q溶液(Qiagen, Hilden)、20 pMolの各プライマ
ー(Metabion, Munich; 特異的wtプライマー+共通プライマーおよび特異的mutプ
ライマー+共通プライマー)ならびに1 UのTaqポリメラーゼ(Qiagen, Hilden)
を含む標準PCR緩衝液(Qiagen, Hilden)に50 ngのDNA鋳型を加えた。全てのPCR
はパーキンエルマー サーモサイクラー(モデル9700)にて実施し、95℃で3分間
の最初の変性段階、その後94℃で30秒間の変性、プライマーの融解温度(PCR条
件:A〜E)に依存する30秒間のプライマーアニーリング、および72℃で30秒間か
らなる増幅サイクルを30回行い、続いて72℃で8分間の最後の伸長を行った。個
々のPCR条件A〜Eで、以下のアニーリング温度を適用した:A:54℃;B:58℃;C
:50℃;D:61℃;E:53℃。
示す。本アッセイにおける特異的なDNA断片の有無は、試験された対立遺伝子の
有無を意味する。
に示す。これらの例(表3、図3)から、これらの試験がヒトにおいて解析された
MDR-1対立遺伝子の存在の識別に適していることは明らかである。MDR-1対立遺伝
子のヘテロ接合体だけでなく、ホモ接合体、低頻度だけでなく高頻度のMDR-1対
立遺伝子を検出できる。これらの試験の特異性は、適用される特異的なオリゴヌ
クレオチド試薬にのみ起因し、完全に依存する。これらの試薬の設計は引き続い
て、実施例2および表2にて示す、発見したMDR-1変異体および新規対立遺伝子の
配列情報に依存した。
MDR-1多型の診断および相関 ヒトにおける臨床関連表現型とMDR-1多型の潜在的な直接相関を同定するため
、シュトゥットゥガルトのマルガリート・フィッシャー-ボッシュ博士臨床薬理
学研究所(Dr. Margarete Fischer-Bosch-Institut for Clinical Pharmacology
)における研究からの発端者について、実施例2〜4に記載したようなMDR-1多型
の決定を行った。これらの患者の結腸および肝臓におけるMDR-1の発現レベルも
また、MDR-1タンパク質の確立された免疫組織化学検出法により推定された。発
端者集団において、結腸におけるMDR-1の発現レベルの測定に加え、リファンピ
シンによる遺伝子の誘導を行った際のMDR-1の測定を実施した。また、非誘導お
よびリファンピシン誘導の条件下におけるMDR-1のインビボ活性を、既知のMDR-1
の基質であり、さらにその血中濃度は結腸におけるMDR-1活性に依存する、経口
投与したジゴキシン(1 mg)の血中濃度の測定により決定した。
集団におけるMDR-1多型検出解析からの結果は、ある種の多型をもつMDR-1遺伝子
の発現とMDR-1のインビボ活性との間の相関を示す。
の位置176におけるT/C多型は、MDR-1の発現レベルと相関する。この位置におけ
るT対立遺伝子の存在は、対応するホモ接合体C対立遺伝子のみをもつ試料と比較
して、より低いMDR-1発現レベルを示す。C対立遺伝子集団のリファンピシン誘導
のMDR-1レベルの平均は、T集団のものに比べはるかに高かった(924対587の相対
単位)。それと全く一致して、T対立遺伝子についてのホモ接合体の発端者では
、非誘導MDR-1レベルおよび誘導MDR-1レベルは検出可能な最低量であった一方、
C対立遺伝子についてのホモ接合体の発端者では、試験された全ての発端者の中
で最高レベルを示した。これらの個体間の、誘導されたMDR-1発現レベルの差異
は9倍であった。
の測定結果を示す。これは既知のMDR-1基質であり、その血中濃度は結腸におけ
るMDR-1活性に依存する、経口投与されたジゴキシンの血中濃度の測定により行
われた。エキソン26 T/Cにおけるアクセッション番号M29445/J05168の位置176に
おける多型はMDR-1の発現レベルと相関するという観察と一致して、更にインビ
ボにおけるMDR-1タンパク質の活性を反映する、ジゴキシン血中濃度とこの多型
との相関が認められた。T対立遺伝子(より弱いMDR-1発現と相関する、表4を参
照のこと)をもつ発端者は、対応するホモ接合体C対立遺伝子のみをもつ試料と
比較して、血中のより高いレベルジゴキシンを含む。その理由は、結腸から血液
へのジゴキシンのようなMDR-1基質の取りこみは、MDR-1発現量が低いヒトにおい
てより有効であると考えられることである。これは結腸におけるMDR-1の機能、
即ち取りこむ細胞から結腸の管腔への基質の再輸送および排出と完全に一致する
。C対立遺伝子集団の、非誘導ジゴキシンおよびリファンピシン誘導ジゴキシン
の血中濃度の平均(MDR-1活性に逆相関する)は、一貫してT集団のものよりも低
い(63.9対44.9および45対28.6 Dig AUC誘導)。それと全く一致して、ホモ接合
体T対立遺伝子をもつ発端者は、リファンピシン誘導後、検出可能なジゴキシン
の最高血中濃度を示し(57.3 Dig AUC)、C対立遺伝子についてホモ接合体をも
つ発端者は全ての発端者のうち最低レベルを示した(12.3 Dig AUC)。これらの
個体間のジゴキシン血中濃度の差異は4倍以上であった。
関する本発明者らの解析結果は、さらにシュトゥットゥガルトのマルガリート・
フィッシャー-ボッシュ博士臨床薬理学研究所(Dr. Margarete Fischer-Bosch-I
nstitut for Clinical Pharmacology)からの様々な患者のMDR-1発現およびMDR-
1遺伝形質決定の解析によって確証される。様々な患者の組織試料、特に結腸お
よび肝臓について、免疫組織学的手法を実施し、それらを互いに比較し、これら
の試料間のMDR-タンパク質の相対比較をした。各一連の実験中に、患者の試料を
それらのMDR-1染色強度に従って、即ち、第一等級が最高のMDR-1強度、および最
終等級が最低のMDR-1強度と等しくなるように等級付けした。
ション番号M29445/J05168の176位の多型のT対立遺伝子がこの位置にホモ接合体C
対立遺伝子をもつ患者と比較した場合、MDR-1遺伝子のより低い発現量と相関す
ることを示す。この解析において、2つの他の多型がMDR-1発現とある相関を示し
た:AC002457(イントロン4)の位置171466におけるホモ接合体T遺伝子型は、高
い発現量と相関する可能性があり、エキソン11(M29432/J05168)の101位におけ
る多型(GA)は低い発現量と相関する可能性がある。
表現型の相関の確証 前述の実施例にて記載され、ここではMDR-1エキソン26 SNP C3435Tと呼ばれる
、(その配列においては、ATG開始コドンの最初の塩基を1として、MDR-1 cDNAGe
nBankアクセッション番号AF016535、コドンTTCエキソン10、F335に対応する部位
が欠失している)、アクセッション番号M29445/J05168の位置176における一塩基
多型(SNP)T/Cの、腸管MDR-1発現レベル(実施例5において示される最初の結果
)との相関をさらに確証するため、シュトゥットゥガルトのマルガリート・フィ
ッシャー-ボッシュ博士臨床薬理学研究所(Dr. Margarete Fischer-Bosch-Insti
tut for Clinical Pharmacology)における、さらなる実験研究の付加的なボラ
ンティアについて解析した。これらのボランティアおよび患者の腸管におけるMD
R-1の発現レベルを、生検および十二指腸の腸細胞調製物の定量免疫組織化学法
およびウェスタンブロット法により測定した。この解析が腸細胞における特異的
PGPの発現を反映することを保証するため、腸細胞にて発現される付加的なマー
カータンパク質、ビリンを同時に解析した。この解析の結果は図4に示す。C/C遺
伝子型と比較して、T/T遺伝子型は著しく低いMDR-1発現レベルと関連する。C/T
遺伝子型をもつ個体は中間の表現型を示す。
けるため、経口投与後のジゴキシンの血中濃度を報告する(リファンピシン誘導
およびPGPタンパク質測定はしない、Johneら(1999), Clin.Pharmacol. Thr. 66,
338〜345)、ベルリンのCharite大学医学センターにおける他の臨床研究の更な
るボランティアを、そのエキソン26におけるMDR-1遺伝子型について調べた。こ
の研究において、ジゴキシンの定常状態における最大血漿濃度(Cmax)を調べた
。この薬物動態パラメータは特に、異なる群間におけるジゴキシン吸収の相違を
示す。図5は、エキソン26にT/T対立遺伝子をホモ接合性にもつ7例のボランティ
ア、およびホモ接合性のC/C遺伝子型をもつ7例のボランティアのジゴキシンCmax の比較を示す。T対立遺伝子についてホモ接合性であるボランティアは、C/C遺伝
子型をもつボランティアと比較して著しく高レベルのジゴキシンを示す。群間の
ジゴキシンCmaxにおける38%の平均差は統計的に有意であり(p=0.006、マン・
ホイットニーのU 2試料検定)、この多型のジゴキシン薬物動態に対する影響を
反映する。
ンブロット法により決定した。箱型図は、関連エキソン26 SNPにおけるMDR-1遺
伝子型に従って集められたMDR-1発現の分布を示す。遺伝子型-表現型の相関には
p=0.056(N=21)の有意差がある。
中濃度を報告する(Johneら(1999), Clin.Pharmacol. Thr. 66, 338〜345))臨
床研究に参加した、14例の健常ボランティアについて解析した。T/T遺伝子型ま
たはC/C遺伝子型のいずれかをもつ、7例の健常ボランティアからなる2群間のジ
ゴキシンの最大濃度(Cmax)の比較において、統計的に有意な差(p=0.006;マ
ン・ホイットニーのU 2試料検定)が認められた。Cmaxにおける38%の平均差は
、経口投与後のジゴキシンの吸収における遺伝子型の重要性を反映する可能性が
ある。ジゴキシンは定常状態で0.25 mgが投与された。
同定 ヒトMDR-1遺伝子におけるSNPについての大規模な探索により、異なる新規MDR-
1多型に加えて、表8に列挙するMDR-1遺伝子における多くの新しい多型が明らか
になった。新しい試験においては、個体試料数はMDR-1プロモーター断片だけで
なく全てのMDR-1エキソンについて拡大し、そのうち幾つかは236個体から解析さ
れた。
子の領域における他のより低頻度の多型もまた、発現に対してある種の影響を及
ぼす可能性がある。例えば、プロモーターの多型およびタンパク質を変化させる
SNPは、MDR-1の発現および活性に対し付加的な影響を及ぼす可能性が非常に高い
。さらに全てのこれらの新規多型は、正確な個々のMDR-1遺伝子型、即ち、個体
に特有の可能性がある対立遺伝子組成物を作製するために利用でき、ゆえに個体
のMDR-1依存性の薬物反応を予測するのに非常に有用である。
子型の説明はより完全になり、従ってより有用なものとなる。これら32の新しい
MDR-1多型の同定は、薬物療法の結果および副作用を予測する、多くの異なるMDR
-1遺伝子型を確立するという目的の達成に向けた、さらなる重要な段階である。
因子としての、MDR-1エキソン26(C3435T)多型の決定 抗けいれん薬のフェニトインは、てんかん、心室性不整脈の急性および慢性の
抑制ならびにジギタリス中毒の治療において一般に使用される。非直線性薬物動
態(即ち、用量の上昇に反応する血漿中濃度の過度な上昇)と共に、多くの重篤
な副作用を伴う狭い治療域により、フェニトイン療法は、治療結果を改善し副作
用を予防するために非常に望ましい、所与の投与量から血漿中濃度を予測するた
めの、興味深くかつ適したパラメータとなる。
おり(Mamiyaら, 1998, Epilepsia Dec; 39(12):1317〜23)、2C9の欠失は副作
用または薬物の無効化をもたらす可能性のある血中濃度濃度の以上を引き起こし
うることが示されている(Aynaciogluら, 1999, Br J Clin Pharmacol. Sep;48(
3):409〜15)。しかし、2C9遺伝形質決定により、所与の投与量から正確な血中
濃度は予測されないこともまた明らかである。2C9遺伝形質の個体においてでさ
え、個々の酵素遺伝子型を補われることにより、血中濃度は著しく変動する。
に対して明確な役割を担い、またこのSNPについてのMDR-1遺伝形質決定により、
フェニトイン投与量、遺伝子型および血中濃度の間により正確な相関が成立する
ことを示す。
示す2C9/C19低代謝群において、血中濃度の変異はMDR-1遺伝子型によって説明で
きる。ここでMDR-1遺伝形質決定により、異常に高いフェニトイン血中濃度を示
す危険率の高い患者の亜群:MDR-1 T/T遺伝子型をもつ低代謝群を同定できる。
これらの患者では薬物の有害作用に関連する過剰投与に遭遇するリスクが高い。
例えば、フェニトインを投与された100例の患者群内においては、低いPGPをもつ
(T/T)遺伝子型の2C9欠損患者は、「健常な」集団と比較して約2倍増加した、
最高血中濃度を示した。Cyp 2C9遺伝子型およびフェニトイン血漿中濃度の間の
相関は統計的に有意であるが、有意差は共分散分析(p< 0.001、ANCOVA)として
MDR-1 T/T遺伝子型を考慮することにより増加する。
段階前(A)および後(B)の、MDR-1 PCR断片のアガロース(Appli Chem, Darms
tadt)ゲル電気泳動(1.5% アガロースゲル)。M:分子量マーカー、1〜28:こ
れらのエキソンに近接する関連配列を含む、ヒトMDR-1 遺伝子のエキソン1〜28
の配列を含むPCR断片。
これらのエキソンに近接する関連配列を含む、ヒトMDR-1 遺伝子のエキソン1〜2
8の配列を含むPCR断片の配列は、ABI ダイターミネーター技術を用いた自動配列
決定法により決定された。公表されたMDR-1配列からのホモ接合体およびヘテロ
接合体の偏向は、DNA配列プロフィールにおいて直接検出できる。
す。対立遺伝子に特異的なエキソン2(261 bp)およびエキソン5(180 bp)のPC
R断片のアガロース(Appli Chem, Darmstadt)ゲル電気泳動(1.5% アガロース
ゲル)。
Claims (45)
- 【請求項1】 以下からなる群より選択されるポリヌクレオチド: (a)配列番号: のうち任意の1つの核酸配列をもつポリヌクレオチド; (b)配列番号:372、373、374または375のうち任意の1つのアミノ酸配列をもつ
ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド; (c) ポリヌクレオチドが、MDR-1遺伝子(アクセッション番号:AC002457)の1
40837位、141530位、141590位、171466位、171512位もしくは175068位に対応す
る位置に、MDR-1遺伝子(アクセッション番号:M29432またはJ05168)の101位も
しくは308位に対応する位置に、MDR-1遺伝子(アクセッション番号:AC005068)
の83946位に対応する位置に、MDR-1遺伝子(アクセッション番号:AC005068)の
78170位に対応する位置に、MDR-1遺伝子(アクセッション番号:M29445またはJ0
5168)の176位に対応する位置に、MDR-1遺伝子(アクセッション番号:AC002457
)の171456位、171404位もしくは175074位に対応する位置に、MDR-1遺伝子(ア
クセッション番号:AC005068)の77811位に対応する位置に、またはMDR-1遺伝子
(アクセッション番号:M29445またはJ05168)の137位に対応する位置に、ヌク
レオチド置換、ヌクレオチド欠失、ヌクレオチド付加または、ヌクレオチド付加
およびヌクレオチド置換をもつ、分子変異体(molecula variant)である多剤耐
性(MDR)-1ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド; (d)ポリヌクレオチドが、MDR-1遺伝子(アクセッション番号:AC002457)の14
0837位、171512位、171456位、171404位、139119位、139619位、140490位もしく
は171511位に対応する位置に1つのCをもつ、MDR-1遺伝子(アクセッション番号
:AC002457)の141530位、139177位、139479位、140118位、140568位、140727位
もしくは174901位に対応する位置に1つのAをもつ、MDR-1遺伝子(アクセッショ
ン番号:AC002457)の141590位、139015位、140216位、140595位、175142位もし
くは175180位に対応する位置に1つのGをもつ、MDR-1遺伝子(アクセッション番
号:AC002457)の171466位、175068位、175074位、139064位、139276位、140576
位もしくは145984位に対応する位置に1つのTをもつ、MDR-1遺伝子(アクセッシ
ョン番号:M29432またはJ05168)の101位に対応する位置に1つのAをもつ、MDR-1
遺伝子(アクセッション番号:M29432またはJ05168)の308位に対応する位置に1
つのTをもつ、MDR-1遺伝子(アクセッション番号:AC005068)の83946位、78170
位、70237位もしくは70200位に対応する位置に1つのTをもつ、MDR-1遺伝子(ア
クセッション番号:AC005068)の77811位、84032位もしくは73252位に対応する
位置に1つのGをもつ、MDR-1遺伝子(アクセッション番号:AC005068)の84701位
、84074位、84119位、83973位、70371位、70253位、70204位もしくは43162位に
対応する位置に1つのAをもつ、MDR-1遺伝子(アクセッション番号:AC005068)
の43263位に対応する位置に1つのCをもつ、またはMDR-1遺伝子(アクセッション
番号:M29445またはJ05168)の176位もしくは137位に対応する位置に1つのTをも
つ、分子変異体MDR-1ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド; (e)ポリペプチドが、MDR-1ポリペプチド(アクセッション番号:P08183)の21
位、103位または400位におけるアミノ酸置換を含む、分子変異体MDR-1ペプチド
をコードするポリヌクレオチド;および (f)ポリペプチドが、MDR-1ポリペプチド(アクセッション番号:P08183)の21
位におけるNからDへの、103位におけるFからSへの、103位におけるFからLへの、
または、400位におけるSからNへのアミノ酸置換を含む、分子変異体MDR-1ポリペ
プチドをコードするポリヌクレオチド。 - 【請求項2】 ヌクレオチドの欠失、付加および/または置換が、対応する
野生型遺伝子と比較して、変異体MDR-1遺伝子の発現の変化をもたらす、請求項1
記載のポリヌクレオチド。 - 【請求項3】 請求項1または2記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
- 【請求項4】 ポリヌクレオチドが、原核細胞または真核細胞における発現
を可能にする発現制御配列に有効に(operatively)連結される、請求項3記載の
ベクター。 - 【請求項5】 請求項1もしくは2記載のポリヌクレオチドまたは請求項3も
しくは4記載のベクターを用いて遺伝学的に操作された宿主細胞。 - 【請求項6】 分子変異体MDR-1タンパク質またはその断片を産生する方法
であり、以下の段階を含む方法: (a)請求項5記載の宿主細胞を培養する段階;および (b)該タンパク質または断片を培養物から回収する段階。 - 【請求項7】 請求項1もしくは2記載のポリヌクレオチドまたは請求項3も
しくは4記載のベクターを用いて細胞を遺伝学的に操作する段階を含む、分子変
異体MDR-1遺伝子を発現できる細胞を産生する方法。 - 【請求項8】 請求項1または2記載のポリヌクレオチドにコードされる、ま
たは請求項6記載の方法により、もしくは請求項7記載の方法により産生される細
胞から得られる、MDR-1タンパク質またはその断片。 - 【請求項9】 請求項8記載のタンパク質に特異的に結合する抗体。
- 【請求項10】 請求項1または2において定義されるような、一つ又は複数
のアミノ酸置換を含むエピトープを特異的に認識する、請求項9記載の抗体。 - 【請求項11】 請求項1または2記載のポリヌクレオチドに相補的な核酸分
子。 - 【請求項12】 請求項1または2記載のポリヌクレオチドを特異的に認識お
よび切断できる核酸分子。 - 【請求項13】 請求項11または12記載の核酸分子を含むベクター。
- 【請求項14】 少なくとも1つの、請求項1もしくは2記載のポリヌクレオ
チドまたは請求項3もしくは4記載のベクターを含む、トランスジェニック非ヒト
動物。 - 【請求項15】 少なくとも1つの、MDR-1遺伝子の不活性化された野生型対
立遺伝子をさらに含む、請求項14記載のトランスジェニック非ヒト動物。 - 【請求項16】 マウスまたはラットである、請求項14または15記載のトラ
ンスジェニック非ヒト動物。 - 【請求項17】 MDR-1遺伝子の分子変異体またはその遺伝子産物の活性を
改変できる、MDR-1阻害剤を同定および獲得する方法であり、以下の段階を含む
方法: (a)請求項8記載のタンパク質、または請求項1もしくは2記載のポリヌクレオチ
ドを含む分子変異体MDR-1遺伝子を発現する細胞を、薬剤輸送に応答して検出可
能なシグナルを提供できる成分の存在下において、MDR-1媒介性薬物輸送を可能
にする条件下でスクリーニングされる化合物と接触させる段階;および (b)シグナルの存在または増加が推定上の阻害剤を示唆するような、シグナル
の有無、または薬物輸送によって生じるシグナルの増加を検出する段階。 - 【請求項18】 細胞が、請求項7記載の方法によって得られる、または請
求項14から16のいずれか一項記載のトランスジェニック非ヒト動物に含まれる、
請求項5記載の細胞である、請求項17記載の方法。 - 【請求項19】 MDR-1遺伝子の分子変異体またはその遺伝子産物の活性を
改変できるMDR-1阻害剤を同定および獲得する方法であり、以下の段階を含む方
法: (a)タンパク質と第一の分子との第一の複合体を形成するためにMDR-1タンパク
質に結合することが知られている第一の分子と、請求項8記載のタンパク質を接
触させる段階; (b)該第一の複合体を、スクリーニングされる化合物と接触させる段階;およ
び (c)該化合物が、該第一の分子を該第一の複合体から置換するかどうかを測定
する段階。 - 【請求項20】 測定段階がタンパク質および化合物の第二の複合体の形成
を測定する段階を含む、請求項19記載の方法。 - 【請求項21】 測定段階がタンパク質に結合しない第一の分子の量を測定
する段階を含む、請求項19または20記載の方法。 - 【請求項22】 第一の分子がベラパミル、バルスポダル(Valspodar)、
シクロスポリンAまたはデクスニグルジピン(dexniguldipine)である、請求項1
9から21のいずれか一項記載の方法。 - 【請求項23】 第一の分子が標識される、請求項19から22のいずれか一項
記載の方法。 - 【請求項24】 MDR-1遺伝子の分子変異体の存在に関連する疾病、または
そのような疾病への感受性を診断する方法であり、以下の段階を含む方法: (a)被験者からの試料における請求項1または2記載のポリヌクレオチドの存在
を判定する段階;および/または (b)請求項8記載のタンパク質の存在を判定する段階。 - 【請求項25】 疾病が癌である、請求項24記載の方法。
- 【請求項26】 PCR、リガーゼ連鎖反応、制限酵素消化、直接配列決定、
核酸増幅技術、ハイブリダイゼーション技術または免疫学的検定法を含む、請求
項24または25記載の方法。 - 【請求項27】 疾病を止めるまたは緩和するために被験者に医薬品を投与
する段階をさらに含む、請求項24から26のいずれか一項記載の方法。 - 【請求項28】 (i)機能的および発現可能な野生型MDR-1遺伝子;または (ii)請求項11もしくは12記載の核酸分子、または請求項13記載のベクター を細胞に導入する段階をさらに含む、請求項24から27のいずれか一項記載の方法
。 - 【請求項29】 請求項17から23のいずれか一項記載の方法の段階;ならび
に (c)段階(b)において同定および獲得される化合物またはその誘導体を、薬学
的に許容される形態に合成するおよび/または製剤化する段階 を含む、薬学的組成物を産生する方法。 - 【請求項30】 薬物またはプロドラッグを治療的適用に適した形態に製剤
化する段階、および請求項24または25記載の方法において診断された被験者の疾
病を予防または改善する段階を含む、薬学的組成物を調製する方法。 - 【請求項31】 化合物薬物またはプロドラッグが、請求項27に定義された
ような医薬品の誘導体である、請求項29または30記載の方法。 - 【請求項32】 請求項17から23のいずれか一項記載の方法により同定され
る、または得られる阻害剤。 - 【請求項33】 請求項8記載のタンパク質に特異的に結合する請求項32記
載の阻害剤。 - 【請求項34】 請求項1もしくは2記載のポリヌクレオチドの検出のための
、および/または個々のMDR-1対立遺伝子の遺伝形質決定(genotyping)のための
、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの使用。 - 【請求項35】 ポリヌクレオチドが請求項1もしくは2記載のポリヌクレオ
チドである、または請求項11もしくは12記載の核酸分子である、請求項34記載の
使用。 - 【請求項36】 オリゴヌクレオチドが約15ヌクレオチド長〜50ヌクレオチ
ド長であり、かつ配列番号:1〜179、または、表8に示されるMDR-1遺伝子のプロ
モーターもしくはエキソンの野生型(「wt」)配列、もしくは変異型(「mut」
)配列、またはこれらの任意の1つの相補的配列のうち、任意の1つのヌクレオチ
ド配列を含む、請求項34記載の使用。 - 【請求項37】 請求項36において定義されたオリゴヌクレオチドからなる
プライマーまたはプローブ。 - 【請求項38】 請求項8記載のタンパク質の検出、請求項1もしくは2記載
のポリヌクレオチドを含む分子変異体MDR-1遺伝子の発現の検出、および/または
請求項1もしくは2記載のポリヌクレオチドを含むMDR-1対立遺伝子を識別するた
めの、MDR-1遺伝子の遺伝子産物に特異的に結合できる抗体または物質の使用。 - 【請求項39】 請求項1または2記載のポリヌクレオチド、請求項3または4
記載のベクター、請求項5記載の宿主細胞もしくは請求項7記載の方法により得ら
れる宿主細胞、請求項8記載のタンパク質、請求項9もしくは10記載の抗体、請求
項11もしくは12記載の核酸分子、請求項13記載のベクター、請求項32記載の阻害
剤または、請求項37記載のプライマーもしくはプローブを含む組成物。 - 【請求項40】 診断的組成物または薬学的組成物である、請求項39記載の
組成物。 - 【請求項41】 請求項1または2記載のポリヌクレオチドをゲノム内に含む
、被験者の疾病の治療または予防のための薬学的組成物を調製するための、有効
な投与量の薬物またはプロドラッグの使用。 - 【請求項42】 疾病が癌または、ニューロン、CNS(中枢神経系)もしく
は心臓血管の疾患である、請求項41記載の使用。 - 【請求項43】 副作用および薬物相互作用を予測および予防するために、
ならびに/または、患者の服薬遵守(compliance)を向上させるために、MDR-1基
質の血中濃度の予測のための薬理的因子としての、ならびに/または、薬物の安
全性および有効性の改善のための誘導物質としての、MDR-1遺伝子の単一ヌクレ
オチド多型(SNP)の使用。 - 【請求項44】 基質および/または誘導物質が、抗けいれん薬/抗てんかん
薬、強心配糖体、免疫抑制薬、マクロライド系抗生物質、または大環状(macroc
yclic)抗生物質から選択される、請求項43記載の使用。 - 【請求項45】 SNPがMDR-1エキソン26(C3435T)SNPである、請求項43ま
たは44記載の使用。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP99114938 | 1999-07-30 | ||
EP99114938.6 | 1999-07-30 | ||
EP00103361.2 | 2000-02-22 | ||
EP00103361 | 2000-02-22 | ||
PCT/EP2000/007314 WO2001009183A2 (en) | 1999-07-30 | 2000-07-28 | Polymorphisms in the human mdr-1 gene and applications thereof |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011011834A Division JP2011142909A (ja) | 1999-07-30 | 2011-01-24 | ヒトmdr−1遺伝子における多型および、診断的および治療的適用におけるその使用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2003510021A true JP2003510021A (ja) | 2003-03-18 |
Family
ID=26070560
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2001513989A Pending JP2003510021A (ja) | 1999-07-30 | 2000-07-28 | ヒトmdr−1遺伝子における多型および、診断的および治療的適用におけるその使用 |
JP2011011834A Pending JP2011142909A (ja) | 1999-07-30 | 2011-01-24 | ヒトmdr−1遺伝子における多型および、診断的および治療的適用におけるその使用 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011011834A Pending JP2011142909A (ja) | 1999-07-30 | 2011-01-24 | ヒトmdr−1遺伝子における多型および、診断的および治療的適用におけるその使用 |
Country Status (20)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20050227249A1 (ja) |
EP (1) | EP1232260B1 (ja) |
JP (2) | JP2003510021A (ja) |
KR (1) | KR100814188B1 (ja) |
AT (1) | ATE373710T1 (ja) |
AU (1) | AU1131901A (ja) |
BG (1) | BG65988B1 (ja) |
CA (2) | CA2697207A1 (ja) |
CZ (1) | CZ2002329A3 (ja) |
DE (1) | DE60036487T2 (ja) |
DK (1) | DK1232260T3 (ja) |
EE (1) | EE200200049A (ja) |
ES (1) | ES2292481T3 (ja) |
HR (1) | HRP20020093B1 (ja) |
HU (1) | HUP0201997A3 (ja) |
MX (1) | MXPA02001094A (ja) |
NO (2) | NO330680B1 (ja) |
PL (1) | PL354034A1 (ja) |
SK (1) | SK1502002A3 (ja) |
WO (1) | WO2001009183A2 (ja) |
Families Citing this family (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2430269A1 (en) * | 2000-11-29 | 2002-06-06 | Epidauros Biotechnologie Ag | Methods for diagnosing individuals with an increased risk to develop a deficiency based on mdr1 gene polymorphism |
AU2001231550A1 (en) * | 2000-11-29 | 2002-06-11 | Epidauros Biotechnologie Ag | Use of mdr-1 inducers for treating or preventing diseases |
ATE449184T1 (de) | 2001-01-12 | 2009-12-15 | Univ Washington | Mdr1-varianten und verfahren zu ihrer verwendung |
WO2003025174A2 (en) * | 2001-09-06 | 2003-03-27 | Bayer Healthcare Ag | Regulation of human mrp1-like protein |
EP1340818A1 (en) * | 2002-02-27 | 2003-09-03 | Epigenomics AG | Method and nucleic acids for the analysis of a colon cell proliferative disorder |
AU2003280867A1 (en) * | 2002-11-04 | 2004-06-07 | Charite-Universitatsme Dizin Berlin | Specific haplotypes of the mdr1 gene and their use in diagnosis and therapy |
DK1756310T3 (da) * | 2004-05-12 | 2013-03-18 | Max Planck Gesellschaft | Fremgangsmåde til at påvise polymorfi i ABCB1-genet associeret med mangel af respons for et CNS-aktivt lægemiddel samt lægemiddel omfattende en ABCB1-inhibitor til anvendelse i behandlingen af CNS-relaterede sygdomme |
WO2006133841A1 (en) * | 2005-06-13 | 2006-12-21 | F. Hoffmann-La Roche Ag | MDRl SNP IN ACUTE RETECTION |
WO2006133842A1 (en) * | 2005-06-13 | 2006-12-21 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Impdh2 snp associated with acute rejection |
US20090286234A1 (en) * | 2005-06-13 | 2009-11-19 | Laurent Essioux | Il10 snp associated with acute rejection |
EP1957673A2 (en) * | 2005-11-10 | 2008-08-20 | Government of the United States of America, Represented by the Secretary, Department of Health and Human Services | Materials and methods for abcb1 polymorphic variant screening, diagnosis, and treatment |
EP2520670B1 (en) | 2007-06-12 | 2014-02-26 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | New polymorphisms in ABCB1 associated with a lack of clinical response to medicaments |
KR101033840B1 (ko) * | 2011-03-08 | 2011-05-16 | (주)제일엔지니어링건축사사무소 | 공동주택용 입상관 연결구조 |
CA3067642A1 (en) * | 2017-06-19 | 2018-12-27 | Jungla Llc | Interpretation of genetic and genomic variants via an integrated computational and experimental deep mutational learning framework |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH02100680A (ja) * | 1988-10-05 | 1990-04-12 | Suntory Ltd | ヒト正常細胞由来mdr関連遺伝子 |
US5830697A (en) * | 1997-01-21 | 1998-11-03 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | P-glycoprotein mutant resistant to cyclosporin modulation |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4683202A (en) * | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
CA1284931C (en) * | 1986-03-13 | 1991-06-18 | Henry A. Erlich | Process for detecting specific nucleotide variations and genetic polymorphisms present in nucleic acids |
US5206352A (en) * | 1986-03-28 | 1993-04-27 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Compositions for clones containing DNA sequences associated with multidrug resistance in human cells |
US5928637A (en) * | 1987-06-16 | 1999-07-27 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Methods of inducing multidrug resistance using human MDR1 cDNA |
US5851819A (en) * | 1987-06-16 | 1998-12-22 | National Institutes Of Health | Vectors carrying MDR1 cDNA which confer multidrug resistance on transduced cells |
US5399483A (en) * | 1989-03-30 | 1995-03-21 | Suntory Limited | Expression of MDR-related gene in yeast cell |
US5856104A (en) * | 1996-10-28 | 1999-01-05 | Affymetrix, Inc. | Polymorphisms in the glucose-6 phosphate dehydrogenase locus |
-
2000
- 2000-07-28 PL PL00354034A patent/PL354034A1/xx unknown
- 2000-07-28 MX MXPA02001094A patent/MXPA02001094A/es active IP Right Grant
- 2000-07-28 AT AT00972654T patent/ATE373710T1/de active
- 2000-07-28 CA CA2697207A patent/CA2697207A1/en not_active Abandoned
- 2000-07-28 DK DK00972654T patent/DK1232260T3/da active
- 2000-07-28 KR KR1020027001248A patent/KR100814188B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-07-28 JP JP2001513989A patent/JP2003510021A/ja active Pending
- 2000-07-28 WO PCT/EP2000/007314 patent/WO2001009183A2/en active IP Right Grant
- 2000-07-28 EE EEP200200049A patent/EE200200049A/xx unknown
- 2000-07-28 AU AU11319/01A patent/AU1131901A/en not_active Abandoned
- 2000-07-28 SK SK150-2002A patent/SK1502002A3/sk unknown
- 2000-07-28 ES ES00972654T patent/ES2292481T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-28 HU HU0201997A patent/HUP0201997A3/hu unknown
- 2000-07-28 CZ CZ2002329A patent/CZ2002329A3/cs unknown
- 2000-07-28 EP EP00972654A patent/EP1232260B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-28 DE DE60036487T patent/DE60036487T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-28 CA CA2376666A patent/CA2376666C/en not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-01-29 BG BG106362A patent/BG65988B1/bg unknown
- 2002-01-29 NO NO20020470A patent/NO330680B1/no not_active IP Right Cessation
- 2002-01-30 HR HR20020093A patent/HRP20020093B1/xx not_active IP Right Cessation
-
2004
- 2004-10-14 US US10/965,348 patent/US20050227249A1/en not_active Abandoned
-
2010
- 2010-06-02 NO NO20100798A patent/NO20100798L/no unknown
-
2011
- 2011-01-24 JP JP2011011834A patent/JP2011142909A/ja active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH02100680A (ja) * | 1988-10-05 | 1990-04-12 | Suntory Ltd | ヒト正常細胞由来mdr関連遺伝子 |
US5830697A (en) * | 1997-01-21 | 1998-11-03 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | P-glycoprotein mutant resistant to cyclosporin modulation |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CZ2002329A3 (cs) | 2002-07-17 |
WO2001009183A2 (en) | 2001-02-08 |
HUP0201997A2 (en) | 2002-09-28 |
DE60036487D1 (de) | 2007-10-31 |
EP1232260A2 (en) | 2002-08-21 |
CA2697207A1 (en) | 2001-02-08 |
DK1232260T3 (da) | 2008-02-04 |
KR20020059347A (ko) | 2002-07-12 |
NO330680B1 (no) | 2011-06-06 |
AU1131901A (en) | 2001-02-19 |
HRP20020093A2 (en) | 2004-06-30 |
WO2001009183A3 (en) | 2002-03-28 |
EP1232260B1 (en) | 2007-09-19 |
ATE373710T1 (de) | 2007-10-15 |
HRP20020093B1 (en) | 2011-02-28 |
SK1502002A3 (en) | 2002-07-02 |
NO20100798L (no) | 2002-03-26 |
PL354034A1 (en) | 2003-12-15 |
JP2011142909A (ja) | 2011-07-28 |
US20050227249A1 (en) | 2005-10-13 |
CA2376666A1 (en) | 2001-02-08 |
BG106362A (bg) | 2002-09-30 |
NO20020470D0 (no) | 2002-01-29 |
CA2376666C (en) | 2010-05-25 |
NO20020470L (no) | 2002-03-26 |
EE200200049A (et) | 2003-04-15 |
DE60036487T2 (de) | 2008-06-19 |
BG65988B1 (bg) | 2010-08-31 |
HUP0201997A3 (en) | 2005-01-28 |
ES2292481T3 (es) | 2008-03-16 |
MXPA02001094A (es) | 2003-07-21 |
KR100814188B1 (ko) | 2008-03-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2011142909A (ja) | ヒトmdr−1遺伝子における多型および、診断的および治療的適用におけるその使用 | |
US11473143B2 (en) | Gene and mutations thereof associated with seizure and movement disorders | |
US7655771B1 (en) | Polymorphisms in the human cyp3a4 and cyp3a7 genes and their use in diagnostic and therapeutic applications | |
US20110131671A1 (en) | Polymorphisms in the human gene for cytochrome p450 polypeptide 2c8 and their use in diagnostic and therapeutic applications | |
US10538811B2 (en) | Homeobox gene | |
US7388093B2 (en) | Gene for identifying individuals with familial dysautonomia | |
KR101170651B1 (ko) | 알츠하이머 병의 진단 및 예측 방법 | |
US20060078879A1 (en) | Polymorphisms in the human gene for tpmt and their use in diagnostic and therapeutic applications | |
WO2004111272A2 (en) | Polymorphism in the human nbs1 gene useful in diagnostic of inherited predisposition to cancer | |
EP2319866A2 (en) | Polymorphisms in the human genes for OCT1 and their use in diagnostic and therapeutic applications |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20070727 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20090302 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100722 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20101019 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20101026 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20101110 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20101110 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110124 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20111024 |