JP2003500450A - 陽電子放射断層撮影法のための表皮成長因子受容体に結合する新規化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 次式で表される放射性同位体で標識された化合物であって、 【化１】 式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、水素、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロ、ハロアルキル、カルボキシ、カルボアルコキシおよびそれらの塩からなる群から選択され、かつ、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤはそれぞれ独立して、水素および電子吸引基からなる群から選択され、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤのうちの少なくとも１つは［^１８］フッ素である、化合物。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】発明の背景および概要 本発明は陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）用新規フッ素系生体マーカー、そし
て具体的には表皮成長因子受容体チロシンキナーゼを定量するためのフッ素系生
体マーカーに関する。

【０００２】 ヒトの体内の放射能分布を３次元的に定量することを可能にする核医学画像技
術の１つである陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）は、健康な状態および病理学的
な状態の両者において、生理学的、生化学的および薬理学的機能を分子レベルで
測定するためのますます重要な手段に成りつつある。ＰＥＴは被検者に陽電子を
放射する核種（ラジオトレーサー）、たとえば半減期がそれぞれ２，１０，２０
および１１０分の^１５Ｏ，^１３Ｎ，^１１Ｃおよび^１８Ｆを投与することを要求す
る。

【０００３】 成長因子、識別因子およびホルモンのようなポリペプチドは、細胞内に内在す
るタンパク質チロシンキナーゼ活性を持つ細胞表面受容体に結合し、活性化して
それらの多面的な作用をしばしば媒介する。表皮成長因子受容体−チロシンキナ
ーゼ（ＥＧＦＲ−ＴＫ）は、胸部癌やその他の新生物中に過剰発現される。ＥＧ
ＦＲ−ＴＫに結合する適当なラジオトレーサーは、ＰＥＴのような核医学画像技
術によって、この受容体−キナーゼをマッピングし定量することを可能にするか
もしれない。このことはホルモン療法やその他の化学療法への応答の監視を含め
、この受容体の発現レベルの変化を研究することを可能にし、治療行為の過程の
中でより良い患者の管理と識別をもたらしてくれるかもしれない。

【０００４】 最近、^９９ｍＴｃで標識したアンチＥＧＦＲ抗体が合成され、ヒトに対して生
体分布と線量測定が行われた［１，２］。しかし、この標識された抗体は、他の
タンパク質放射性医薬品と同様、肝臓中に放射能を高レベルで長期間にわった保
持され、そのことが臨床への応用における大きな問題を成している。また、これ
らの研究者は、バックグラウンドの放射能が変動するために、正常な器官中の腫
瘍、特に無気肺と腫瘍との区別ができなかった肺の病変の放射能を正確に定量す
ることは困難であることを見いだした。

【０００５】 ＥＧＦ自身は、核医学画像診断のために、^９９ｍＴｃ［３，４］および^１１１ Ｉｎ［５，６］を含むγ線放射核種および陽電子放射核種^７６Ｂｒ［７，８］で
標識されている。正常ラットにおける後者、［^７６Ｂｒ］ＥＧＦ（マウス）の生
体分布が報告されたが［８］、実験動物およびヒトによる生体での研究でそれ以
外のものは報告されていない。

【０００６】 ４−アニリノキナゾリン類はＥＧＦＲ−ＴＫ上の内部膜ＡＴＰ結合部位に可逆
的に結合することによってＥＧＦＲ−ＴＫ活性を効果的かつ選択的に阻害するこ
とが明らかにされており、このような化合物の原型は小さい分子ＰＤ１５３０３
５［９］およびＡＧ１４７８［１０］（後記表１を参照）。ＭＤＡー４８６細胞
による生体内結合に関する研究を含む、ＰＤ１５３０３５の放射性ヨウ素アナロ
ーグの報告が出されている［１１］。ヒトの神経芽細胞腫異種移植片（ＳＨ−Ｓ
Ｙ５Ｙ）を移植したラットで、６，７−位のメトキシ基を^１１Ｃで標識したＰＤ
１５３０３５が、評価されているが、ブロッキングの研究では比摂取量は決定さ
れなかった［１２］。ＰＤ１５３０３５の７−メトキシ位が特異的に^１１Ｃで標
識され、正常マウスで生体分布実験が行われたが、ＰＤ１５３０３５の酵素ブロ
ック量を投与すると、研究された組織のトレーサー摂取量が増加したため、摂取
特異性を証明することはできなかった［１３］。同じ抄録は、７−（２−フルオ
ロエトキシ）ＰＤ１５３０３５アナローグの^１８Ｆによる標識を報告したが、こ
のトレーサーを使った生物学的な実験は記載されなかった。その上、２−［^１８ Ｆ］フルオロエチル基は、速い速度で［^１８Ｆ］フッ化水素の脱離を受け、相当
するアルケンエーテルを生成するため、骨に高いレベルで^１８Ｆが摂取される可
能性があり、その結果、鮮明な生体画像を得ることが困難になるかもしれない。
また、これらのきわめて強力な（ＩＣ_５０＜３０ｐＭ）阻害剤は、生化学的な変
化よりも、単に流れまたは浸透表面積を測定するのかもしれない［１４］。また
、ＰＤ１５３０３５は４種類の化合物に代謝され、その内の２種類はＥＧＦＲ−
ＴＫ阻害の能力を保持している６−又は７−モノデメチル化誘導体化合物として
同定されている［１５］。このように、前記のように６位または７位のアルコキ
シ基を標識すると、ＥＧＦＲ−ＴＫを結合しない放射性代謝物になるだろう。

【０００７】 ＥＧＦＲ−ＴＫ ＰＥＴトレーサーとしての小さい分子への別のアプローチは
、アニリン環上を^１８Ｆで標識された４−アニリノキナゾリン誘導体である（参
照文献［１６］を参照）。ＰＤ１５３０３５アリールフルオロ誘導体の代謝がＰ
Ｄ１５３０３５自身と同様であると仮定すると、このアプローチで放射能標識を
保持し、ＥＧＦＲ−ＴＫの親和性を保持するはずである。標的に結合する能力を
持った３種類の化合物が血中に存在することは、速度論的な区画モデル化（ｃｏ
ｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌ ｍｏｄｅｌｉｎｇ）を複雑にするが、標的中の放射能
の蓄積の可能性を高めるであろう。^１１Ｃの半減期より５倍長い^１８Ｆの半減期
は、ＰＥＴの測定に対して^１１Ｃよりも広い時間窓を与え、その結果、血中放射
能の消失と、ラジオトレーサーの非特異的な結合の洗い出し（ｗａｓｈｏｕｔ）
の後の画像撮影に有利性を与える可能性がある。ＰＤ１５３０３５の血漿中のレ
ベルは、約３時間後に最大値から最大値の２％まで減少するため、その後の画像
撮影、おそらく１時間またはそれよりもっと後の注入（^１１Ｃではほとんど不可
能）は、ＥＧＦＲ−ＴＫの存在を示すより純粋なシグナルを与える。さらに、ア
ニリン環の標識は、たとえば、骨への非特異的な放射能の摂取が低く、生来代謝
に対して安定なトレーサーとなる。その他の関連する先行技術は米国特許第５，
７１０，１５８号；ＥＰ第５６６２２６Ｂ１号およびＣＡ２，０８６，９６８に
開示されている。

【０００８】 以上述べてきたように、前記の制約を持たない新規なフッ素系ＰＥＴ生体マー
カーに対する必要性は広く認識されており、そうしたマーカーを持つことは非常
な利点となろう。

【０００９】発明の開示 本発明の１つの面によれば、次式で表される化合物

【化５】 （式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に水素、アルキル、ヒドロキシ、アルコ
キシ、ハロ、ハロアルキル、カルボキシ、カルボアルコキシおよびそれらの塩か
ら成る群から選択され；そして、 Ａ，Ｂ，ＣおよびＤはそれぞれ独立に水素および電子吸引基から成る群から選択
され、かつＡ，Ｂ，ＣおよびＤのうちの少なくとも１つは電子吸引基である）が
提供される。

【００１０】 好ましい実施例に記載されている別の特徴によれば、ＡおよびＢはそれぞれ塩
素原子、Ｃは水素原子そしてＤはフッ素原子である。

【００１１】 好ましい実施例に記載されているさらに別の特徴によれば、Ａはフッ素原子、
ＢおよびＤはそれぞれ水素原子、そしてＣはＣＦ_３基である。

【００１２】 好ましい実施例に記載されているさらに別の特徴によれば、Ａはフッ素原子、
そしてＢ、ＣおよびＤはそれぞれ水素原子である。

【００１３】 好ましい実施例に記載されているさらに別の特徴によれば、Ｂはフッ素原子、
そしてＡ、ＣおよびＤはそれぞれ水素原子である。

【００１４】 本発明の別の面によれば、表皮成長因子受容体を前記の、そしてさらに以下に
記載される化合物にさらす過程を含む、表皮成長因子受容体のチロシンキナーゼ
活性を阻害する方法が提供される。

【００１５】 本発明のさらに別の面によれば、前記の化合物を患者に投与する過程を含む、
表皮成長因子受容体チロシンキナーゼの活性が損なわれた患者を治療する方法が
提供される。

【００１６】 本発明のさらに別の面によれば、次式で表される放射性同位体で標識された化
合物

【化６】 （式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に水素、アルキル、ヒドロキシ、アルコ
キシ、ハロ、ハロアルキル、カルボキシ、カルボアルコキシおよびそれらの塩か
ら成る群から選択され；そして、 Ａ，Ｂ，ＣおよびＤはそれぞれ独立に水素および電子吸引基から成る群から選択
され、かつＡ，Ｂ，ＣおよびＤのうちの少なくとも１つは［^１８］フッ素である
）が提供される。

【００１７】 後で述べる本発明の好ましい実施例に記載されている別の特徴によれば、Ａお
よびＢはそれぞれ塩素原子、Ｃは水素原子、そしてＤは［^１８］フッ素である。

【００１８】 好ましい実施例に記載されているさらに別の特徴によれば、Ａは［^１８］フッ
素、ＢおよびＤはそれぞれ水素原子、そしてＣはＣＦ_３基である。

【００１９】 好ましい実施例に記載されているさらに別の特徴によれば、Ａは［^１８］フッ
素、そしてＢ、ＣおよびＤはそれぞれ水素原子である。

【００２０】 好ましい実施例に記載されているさらに別の特徴によれば、Ｂは［^１８］フッ
素、そしてＡ、ＣおよびＤはそれぞれ水素原子である。

【００２１】 後で述べる本発明の好ましい実施例に記載されている別の特徴によれば、電子
吸引基はハロゲン、ＳＯ_３Ｈ、ＮＯ_２、ＣＮおよびＣＦ_３から成る群から選択さ
れる。

【００２２】 好ましい実施例に記載されているさらに別の特徴によれば、ハロゲンはヨウ素
、塩素、臭素およびフッ素から成る群から選択される。

【００２３】 本発明のさらに追加される別の面によれば、（ａ）前記の放射能標識化合物を
患者に投与する過程と、体内または身体の一部に存在する前記化合物の分布を監
視するために核画像法を使用する過程とを含む、患者体内の表皮成長因子受容体
レベルを監視するための方法が提供される。

【００２４】 好ましい実施例に記載されているさらに別の特徴によれば、その方法は、陽電
子放射断層撮影法である。

【００２５】 好ましい実施例に記載されているさらに別の特徴によれば、ここに記載されて
いる化合物は、表皮成長因子受容体チロシンキナーゼの活性の阻害に対して０．
１ないし１２０ｎＭのＩＣ_５０値を有する。

【００２６】 本発明のさらに追加される別の面によれば、活性成分として本明細書に記載の
化合物のいずれかと、医薬的に許容される担体とを含む医薬組成物が提供される
。

【００２７】 本発明のさらに追加される別の面によれば、次式で表される化合物を合成する
方法であって

【化７】 （式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に水素、アルキル、ヒドロキシ、アルコ
キシ、ハロ、ハロアルキル、カルボキシ、カルボアルコキシおよびそれらの塩か
ら成る群から選択され；そして、Ａ，Ｂ，ＣおよびＤはそれぞれ独立に水素およ
び電子吸引基から成る群から選択され、かつＡ，Ｂ，ＣおよびＤのうちの少なく
とも１つは電子吸引基である）であった、その方法は、６−Ｒ１，７−Ｒ２で誘
導体化された４−クロロキナゾリンと、前記のＡ，Ｂ，ＣおよびＤで誘導体化さ
れたアニリンとをカップリングさせる過程を含む。

【００２８】 本発明のさらに追加される別の面によれば、次式で表される化合物を合成する
方法であって

【化８】 （式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に水素、アルキル、ヒドロキシ、アルコ
キシ、ハロ、ハロアルキル、カルボキシ、カルボアルコキシおよびそれらの塩か
ら成る群から選択され；そして、Ａ，Ｂ，ＣおよびＤはそれぞれ独立に水素およ
び電子吸引基から成る群から選択され、かつＡ，Ｂ，ＣおよびＤのうちの少なく
とも１つは［^１８］フッ素である）、前記方法は、６−Ｒ１，７−Ｒ２で置換さ
れた４−クロロキナゾリンを、前記のＡ，Ｂ，ＣおよびＤで誘導体化されたアニ
リンとをカップリングさせる過程を含む。

【００２９】 本発明は、ＰＥＴに対する新規の生体マーカーを提供することにより、現時点
で知られている技術水準の欠点にうまく取り組む。

【００３０】図面の簡単な説明 本発明は、単に例として、付属図面を参照してここに記載される： 図１は本発明による４種類のフッ素化化合物（化合物１〜４）と、参照のため
の２種類の化合物に対する自己リン酸化阻止曲線である。

【００３１】発明の実施の形態 本発明は表皮成長因子受容体チロシンキナーゼ阻害剤として使用することがで
きる新規化合物に関する。具体的には、新規化合物は放射能標識された形で、陽
電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）を使って表皮成長因子受容体チロシンキナーゼを
定量するための生体マーカーとして使用することができる。

【００３２】 本発明の原理と操作は、図面と付記した説明を参照することによってより良く
理解することができよう。

【００３３】 本発明の少なくとも１つの実施形態を詳細に説明するに先立ち、本発明はその
応用において、以下の説明に述べられ、あるいは図に説明されている構成要素の
構成と配置の詳細に限定されないことを理解しなければならない。本発明は他の
実施形態を具体化することができ、またはさまざまな方法で実施することができ
る。さらに、本明細使用に使用される表現および用語は、説明を目的とするもの
であり、本発明の範囲を限定するものではないことを理解しなければならない。

【００３４】 本発明の１つの面によれば、次式の化合物

【化９】 （式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に水素、アルキル、ヒドロキシ、アルコ
キシ、ハロ、ハロアルキル、カルボキシ、カルボアルコキシおよびそれらの塩か
ら成る群から選択され；そして、 Ａ，Ｂ，ＣおよびＤはそれぞれ独立に水素および電子吸引基から成る群から選択
され、かつＡ，Ｂ，ＣおよびＤのうちの少なくとも１つは電子吸引基である）が
提供される。

【００３５】 上式に合致する数個の化合物を合成した。表皮成長因子受容体チロシンキナー
ゼ活性に関するＩＣ_５０値は０．１〜１２０ｎＭの範囲にあった。それゆえ、本
発明は具体的には、０．１〜１２０ｎＭ、好ましくは０．１〜６０ｎＭ、より好
ましくは０．１〜３０ｎＭ、さらに好ましくは０．１〜１５ｎＭ、そしてさらに
好ましくは０．１〜１０ｎＭ、そしてさらに好ましくは０．１〜５ｎＭ、そして
さらに好ましくは０．１〜１ｎＭ、そしてさらに好ましくは０．１〜０．５ｎＭ
の範囲のＩＣ_５０値、そして最も好ましくは０．３ｎＭ以下のＩＣ_５０値を有す
る化合物に向けられる。

【００３６】 このようにして合成され、以下で化合物４の名称で呼ばれる化合物は、Ａおよ
びＢがそれぞれ塩素原子、Ｃが水素原子、そしてＤがフッ素原子である。表皮成
長因子受容体チロシンキナーゼ活性に対する化合物４のＩＣ_５０値の測定値は、
０．２２±０．１８ｎＭであった。

【００３７】 このようにして合成され、以下で化合物３の名称で呼ばれる別の化合物は、Ａ
がフッ素原子、ＢおよびＤがそれぞれ水素原子、そしてＣがＣＦ_３基である。表
皮成長因子受容体チロシンキナーゼ活性に対する化合物３のＩＣ_５０値の測定値
は、１１６±１４ｎＭであった。

【００３８】 このようにして合成され、以下で化合物２の名称で呼ばれる別の化合物は、Ａ
がフッ素原子、そしてＢ、ＣおよびＤがそれぞれ水素原子である。表皮成長因子
受容体チロシンキナーゼ活性に対する化合物２のＩＣ_５０値の測定値は、１９．
８±８．２ｎＭであった。

【００３９】 このようにして合成され、以下で化合物１の名称で呼ばれる別の化合物は、Ｂ
がフッ素原子、そしてＡ、ＣおよびＤがそれぞれ水素原子である。表皮成長因子
受容体チロシンキナーゼ活性に対する化合物１のＩＣ_５０値の測定値は、７６．
１±３．２ｎＭであった。

【００４０】 化合物１〜４のＲ１およびＲ２はメトキシ基である。しかし、当業者であれば
、水素、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロ、ハロアルキル、カルボキシ
、カルボアルコキシおよびそれらの塩のような他の基を有する化合物は、以下に
記載する手順に従って容易に合成できることを、認めることができよう。

【００４１】 Ｒ１およびＲ２の選択は、化合物の親水性に影響を及ぼし、脂肪中での分布に
影響する。脂肪に吸着される可能性がより低い化合物の方が今のところ好ましい
。一対のヒドロキシル基を有する化合物は疎水性がより小さく、それゆえ脂肪へ
の吸着はより小さくなるものと予想される。

【００４２】 本明細書に記載の化合物は表皮成長因子受容体チロシンキナーゼ活性を阻害す
るために使用することができ、その活性が損なわれている場合は、典型的には自
己リン酸化および活性化をもたらす。そのようなものとして、これらの化合物は
、たとえば過剰発現の結果として表皮成長因子受容体チロシンキナーゼ活性が上
昇することを特徴とする癌または新生物の治療に使用することができる。

【００４３】 本明細書において使用される「治療する（ｔｒｅａｔ）」という用語、または
それと等価な「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、病気の進行
を実質的に阻止すること、遅らせることまたは反転させること、病気の臨床的な
症状を実質的に改善すること、または病気の臨床的な症状の出現を実質的に防止
することを含む。

【００４４】 本発明の別の面によれば、次式で表される放射能標識化合物：

【化１０】 （式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に水素、アルキル、ヒドロキシ、アルコ
キシ、ハロ、ハロアルキル、カルボキシ、カルボアルコキシおよびそれらの塩か
ら成る群から選択され；そして、 Ａ，Ｂ，ＣおよびＤはそれぞれ独立に水素および電子吸引基から成る群から選択
され、かつＡ，Ｂ，ＣおよびＤのうちの少なくとも１つは［^１８］フッ素である
）が提供される。

【００４５】 合成された上記の式に合致する数個の化合物（下記の表１を参照）。

【００４６】 このようにして合成され、以下で［^１８Ｆ］化合物４の名称で呼ばれる化合物
は、ＡおよびＢがそれぞれ塩素原子、Ｃが水素原子、そしてＤが［^１８Ｆ］フッ
素である。

【００４７】 このようにして合成され、以下で［３’^１８Ｆ］化合物３の名称で呼ばれる別
の化合物は、Ａが［^１８］フッ素、ＢおよびＤがそれぞれ水素原子、そしてＣが
ＣＦ_３基である。

【００４８】 このようにして合成され、以下で化合物２の名称で呼ばれる別の化合物は、Ａ
が［^１８Ｆ］フッ素、そしてＢ、ＣおよびＤがそれぞれ水素原子である。

【００４９】 このようにして合成され、以下で［^１８Ｆ］化合物１の名称で呼ばれる別の化
合物は、Ｂが［^１８］フッ素、そしてＡ、ＣおよびＤがそれぞれ水素原子である
。

【００５０】 ここに記載する各化合物において、電子吸引基は、ハロゲン（ヨウ素、塩素、
臭素およびフッ素）、ＳＯ_３Ｈ、ＮＯ_２、ＣＮおよびＣＦ_３であることができる
。電子吸引基の数、種類および位置は、たとえばＩＣ_５０によって決定されるよ
うに、受容体に対する化合物の親和性に影響を及ぼす。

【００５１】 本明細書に記載の放射能標識化合物は、そのいずれかを患者に投与し、体内ま
たはその一部の中の化合物の分布を監視するために核画像法、たとえば陽電子放
射断層撮影法を使用することによって、患者体内の表皮成長因子受容体のレベル
を監視するための方法を実施するために使用することができる。

【００５２】 本明細書に記載の非標識化合物および放射能標識化合物のいずれであっても、
病気の治療または核画像法のために使用することができる医薬組成物に、配合す
ることができる。このような組成物は、活性成分として、本明細書に記載の非標
識化合物または放射能標識化合物のいずれかと、医薬的に許容される単体とを含
む。

【００５３】 このように、病気、障害または医学的状況の治療または予防処置のため、また
は核画像法のために、本発明の化合物を、従来の技術でよく知られている増粘剤
、担体、緩衝剤、希釈剤、表面活性剤、保存剤などを含む医薬組成物に、配合す
ることができる。医薬組成物には、本明細書に記載の化合物に加えて、消炎剤、
抗微生物剤、麻酔薬などの活性成分を１つまたは複数含むことができるが、これ
らに限られるものではない。

【００５４】 医薬組成物は、局部的または全身的な治療か投与かによって、そして治療また
は診断される部位によって、１つまたは複数の方法で投与することができる。投
与は局所（眼、膣、直腸、鼻内）、経口、吸入、非経口、たとえば静脈内への滴
注または腹腔内、皮下、筋肉内または静脈への注射によって行うことができる。

【００５５】 局所投与のための配合物としてはローション、軟膏、ゲル、クリーム、坐薬、
点滴薬、液剤、噴霧剤および散剤をあげることができるが、もちろんこれに限定
されるものではない。通常の医薬担体、水性、粉末または油性の基剤、増粘剤な
どが必要または望ましいことがあるかもしれない。

【００５６】 経口投与のための組成物としては粉末または顆粒、水または非水媒質懸濁液ま
たは溶液、香粉（ｓａｃｈｅｔｓ）、カプセルまたは錠剤をあげることができる
。場合によっては、増粘剤、希釈剤、賦香剤、分散剤、乳化剤または結合剤の使
用が望ましいかもしれない。

【００５７】 非経口投与のための配合物としては、緩衝剤、希釈剤およびその他の適当な添
加物を含んでもよい滅菌水をあげることができるが、もちろんこれに限定される
ものではない。遅い徐放性組成物も治療のために考えられる。

【００５８】 核画像化のための投与量は化合物の受容体に対する親和性、使用される同位体
および標識の比活性に依存する。当業者であれば、核画像化のための適正量およ
び投与方法を容易に決定することができる。

【００５９】 治療のための投与は治療すべき状態の重篤度と応答性に依存するが、数日から
数か月、または治癒または病気の軽快が達成されるまで続く治療過程に合わせて
、１日当たり１回または複数回行われる。当業者であれば最適投与量、投与およ
びくり返し率を容易に決めることができる。

【００６０】 本発明の追加的な目的、利点および新規な特徴は、次にあげる限定されないこ
とを意図される実施例を精査すれば、通常の当業者にとって明らかに成るであろ
う。加えて、上で説明し特許請求の範囲に記載された本発明の様々な例及び側面
の各々は次の実施例において実験的サポートを見出せる。

【００６１】 実施例 次にあげる実施例を参照しながら、前記の説明と合わせて本発明を説明するが
、もちろんそれは本発明の範囲を限定するものではない。

【００６２】 材料および実験方法 ４−アミノ−６，７−ジメトキシキナゾリン（ＡＧ １４７７）［１８］およ
び３−フルオロ−５−トリフルオロメチルアニリン［１７］は文献記載の方法に
よって合成した。他のすべての薬品はシグマ・ケミカル社（セントルイス、ミズ
ーリ州）、フィッシャー・サイエンテイフィック社（ピッツバーグ、ペンシルバ
ニア州）、アルドリッチ社（ミルウォーキ、ウィスコンシン州）またはカルロ・
エルバ社から購入した。ＤＭＳＯ以外の薬品は入手したものをそのまま使用した
。ＤＭＳＯは使用前に活性なモレキュラーシーブ上で少なくとも１日保存した。
加熱には５００Ｗ（最大出力）の通常の電子レンジ（ＢＲ ７４０ＸＬ、Ｂｒｏ
ｔｈｅｒ）を使用した。質量分析には、ハダッサ・ヘブライ大学の質量分析施設
のＬＫＢ ２０９１型ガスクロマトグラフ−質量分析計を使用してＥＩモードで
測定した。^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、テトラメチルシランを内部標準として、
ブルーカ ＡＭＸ ４００ＭＨｚで測定した。元素分析はヘブライ大学微量分析
実験室で行った。

【００６３】 ［^１８Ｆ］フッ化物イオンは、ハダッサ・ヘブライ大学のＩＢＡ １８／９サ
イクロトロン（ベルギー）を使用し、〜３５０μｌの［^１８Ｏ］濃縮水（同位体
純度９７％、ローテム、イスラエル）を標的として、^１８Ｏ（ｐ，ｎ）^１８Ｆ核
反応によって合成した。反応性有機［^１８Ｆ］フッ化物イオンは、１０〜５０μ
Ｌの照射した標的水を水−アセトニトリル中のＫｒｙｐｔｏｆｉｘ（登録商標）
２．２．２（１０ｍｇ，２７μｌ）およびＫ_２ＣＯ_３（１ｍｇ）に加えて調製し
た。アセトニトリル中の水分は窒素気流下に加熱して共沸除去した。つづいて、
放射能標識に使用するために、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（登録商標）２．２．２−［ ^１８ Ｆ］フッ化カリウムを３００μＬの無水ＤＭＳＯに溶解した。

【００６４】 ＨＰＬＣは、Ｖａｒｉａｎ ９０１２Ｑポンプ、Ｖａｒｉａｎ ９０５０波長
可変ＵＶ検出器（使用波長２５４ｎｍ）およびＮａＩ結晶搭載のＢｉｏｓｃａｎ フローカウント放射能検出器を使って行った。標識化合物はシリカカラム（５
μｍ、２５０×１０ｍｍ，Ｐｒｉｍｅｓｐｈｅｒｅ、フェノメネクス社）と次に
あげる移動相系を使用する順相クロマトグラフィによって精製した： ヘキサン
−ジクロロメタン−メタノール，５０：４８：２；１０分後に３５：６０：５ま
で３０分間でグラジエント；５ｍＬ／分。溶出したフラクション（２．５ｍＬ）
はフラクションコレクター（ＦＣ２０５、Ｇｉｌｓｏｎ社）で集めた。配合され
たラジオトレーサーは、Ｃ１８カラム（５μｍ、２５０×４．６ｍｍ，Ｅｃｏｎ
ｏｓｉｌ，Ａｌｌｔｅｃｈ社）と次にあげる移動相を使用する逆相系で分析した
：水−メタノール、２０：８０；１ｍｌ／分。

【００６５】 ラジオトレーサーの配合は次のようにして行った：選択された半分取フラクシ
ョンをガラス製フラスコに移し、溶液を真空で濃縮し乾固させた。残留物を０．
５ｍｌのエタノールと０．５ｍｌの等張食塩水に溶解した。溶液をエタノールで
湿らせたＭｉｌｌｅｘ−ＦＧフィルター（０．２μｍ、ミリポア社）で濾過し、
さらに４ｍｌの食塩水でフラスコを洗浄し濾過して、５ｍｌの１０％エタノール
、９０％食塩水配合物を得た。

【００６６】 ４−［（４−フルオロフェニル）アミノ］−６，７−ジメトキシキナゾリン（
化合物１）の合成： ４−クロロ−６，７−ジメトキシキナゾリン（５０ ｍｇ，０．２２ ｍｍｏｌ
）および４−フルオロアニリン（２１μＬ，０．２２ ｍｍｏｌ）を乾燥した２
口フラスコに入れ、冷却器を調整した。ＤＭＦ（６ｍＬ）を加え、混合物を１３
０゜Ｃに３０分加熱した。冷却した後、沈殿を濾過しエタノールで洗い、真空乾
燥機（５０゜Ｃ）で乾燥した。生成物を塩酸塩として収率９４％（７０ｍｇ）で
得た。^１Ｈ ＮＭＲ［（（ＣＤ_３）_２ＳＯ）δ９．４７（ｓ，１Ｈ），８．４２
（ｓ，１Ｈ），７．８（ｓ，１Ｈ），７．７７（ｍ，２Ｈ），７．２３（ｍ，２
Ｈ），７．１７（ｓ，１Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ）。 ＭＳ，ｍ／ｅ：３００（Ｍ^＋），２９９［（Ｍ−Ｈ）^＋］。元素分析：Ｃ_１６ Ｈ_１５ＦＣｌＮ_３Ｏ_２としての計算値：Ｃ，５７．１４；Ｈ，４．４６；Ｎ，１
２．５０。測定値：Ｃ，５７．１６；Ｈ，４．４９；Ｎ，１２．３８。

【００６７】 ４−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−６，７−ジメトキシキナゾリン（
化合物２）の合成： 化合物と同じ方法を使用し、４−クロロ−６，７−ジメトキシキナゾリン（１１
３ ｍｇ，０．５ ｍｍｏｌ）および３−フルオロアニリン（４８μＬ，０．５ ｍｍｏｌ）から化合物２を塩酸塩として９８％収率（１６６ ｍｇ）で得た。 ^１ Ｈ ＮＭＲ［（（ＣＤ_３）_２ＳＯ）δ１１．５９（ｓ，１Ｈ），８．８５（ｓ
，１Ｈ），８．４３（ｓ，１Ｈ），７．７（ｍ，１Ｈ），７．６（ｍ，１Ｈ），
７．５（ｍ，１Ｈ），７．４（ｓ，１Ｈ），７．１（ｓ，１Ｈ），４．１（ｓ，
３Ｈ），３．９６（ｓ，３Ｈ）。 ＭＳ，ｍ／ｅ：３００（Ｍ^＋），２９９［（
Ｍ−Ｈ）^＋］。元素分析：Ｃ_１６Ｈ_１５ＦＣｌＮ_３Ｏ_２としての計算値：Ｃ，５
７．１４；Ｈ，４．４６；Ｎ，１２．５０。測定値：Ｃ，５７．０９；Ｈ，４．
５３；Ｎ，１２．４９。

【００６８】 ４−［（３−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）アミノ］−６，７
−ジメトキシキナゾリン（化合物３）の合成： ４−クロロ−６，７−ジメトキシキナゾリン（１１３．５ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ
）および３−フルオロ−５−トリフルオロアニリン［１７］（９３ｍｇ，０．５
２ｍｍｏｌ）を乾燥した２口フラスコに入れ、冷却器を調整した。エタノール（
８ｍＬ）を加え、混合物を６０分間還流させた。冷却した後、沈殿を濾過しエタ
ノールで洗い、真空乾燥機（５０゜Ｃ）で乾燥した。生成物を塩酸塩として収率
７８％（１５９．５ｍｇ）で得た。^１Ｈ ＮＭＲ［（（ＣＤ_３）_２ＳＯ）δ８．
７１（ｓ，１Ｈ），８．０９（ｍ，１Ｈ），７．６４（ｓ，１Ｈ），７．３（ｂ
ｓ，１Ｈ），７．１（ｍ，１Ｈ），７．０（ｍ，１Ｈ），４．０５（ｓ，３Ｈ）
，３．９０（ｓ，３Ｈ）。 ＭＳ，／ｅ：３６８（Ｍ^＋）。元素分析：Ｃ_１７Ｈ _１４ Ｆ_４ＣｌＮ_３Ｏ_２としての計算値：Ｃ，５０．４９；Ｈ，３．４６；Ｎ，１
０．３９。測定値：Ｃ，５０．４７；Ｈ，３．５９；Ｎ，１０．３４。

【００６９】 ３，４−ジクロロ−６−フルオロアニリン（化合物８）の合成： ９：１エタノール−水（７ｍＬ）中の３，４−ジクロロ−６−フルオロニトロベ
ンゼン（化合物９，４７４ｍｇ）を５００μＬの水和ヒドラジンと、７ｍＬのエ
タノール−水９：１に入れた６０ ｍｇのラネー（登録商標）ニッケルとの還流
混合物に滴下した。滴下終了後、さらに２５分間還流を続けた。室温まで冷却し
た後、混合物を濾過し、溶媒を蒸発させた。シリカのフレッシュクロマトグラフ
ィで精製し、１９２．５ ｍｇの純粋な化合物８を得た。^１Ｈ ＮＭＲ［（（Ｃ
ＤＣｌ_３）δ７．１（ｄ，Ｊ＝１１ Ｈｚ，１Ｈ），６．８（ｄ，Ｊ＝１１ Ｈ
ｚ，１Ｈ）。 ＭＳ，ｍ／ｅ：１７９（［Ｍ−Ｈ］^＋）。

【００７０】 ４−［（３，４−ジクロロ−６−フルオロフェニル）アミノ］−６，７−ジメ
トキシキナゾリン（化合物４）の合成： ４−クロロ−６，７−ジメトキシキナゾリン（１２８．３ｍｇ，０．５６ｍｍｏ
ｌ）および３，４−ジクロロ−６−フルオロアニリン（化合物８，８８．５ ｍ
ｇ，０．４９ ｍｍｏｌ）を乾燥した２口フラスコに入れ、冷却器を調整した。
イソプロピルアルコール（６ｍＬ）を加え、混合物を８５゜Ｃに加熱し、５μＬ
の濃ＨＣＬで処理した。３０分間還流を続けた。冷却した後、沈殿を濾過しエタ
ノールで洗い、真空乾燥機（５０゜Ｃ）で乾燥した。生成物を塩酸塩として収率
８４％（１６７．５ ｍｇ）で得た。^１Ｈ ＮＭＲ［（ＣＤＣｌ_３）δ８．９１
（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），８．７（ｓ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ
，１Ｈ），７．２８（ｓ，１Ｈ），６．９（ｓ，１Ｈ），４．０４（ｓ，３Ｈ）
，４．０２（ｓ，３Ｈ）。 ＭＳ，ｍ／ｅ：３６９（Ｍ^＋）。元素分析：Ｃ_１６ Ｈ_１３ＦＣｌ_３Ｎ_３Ｏ_２としての計算値：Ｃ，４７．４；Ｈ，３．２１；Ｎ，１
０．４。測定値：Ｃ，４７．６５；Ｈ，３．２１；Ｎ，１０．０８。

【００７１】 自己リン酸化の実験： ＥＧＦＲ−ＴＫ源：ＥＧＦＲ−ＴＫ源として、Ａ４３１ヒト類表皮癌細胞のリ
ゼイトを使用した。１０％ウシ胎児血清および抗生物質（ペニシリンおよびスト
レプトマイシン）を含むＤＭＥＭ中でＡ４３１細胞を増殖させた。数日後に３７
゜ＣでＰＢＳ／１ｍＭ ＥＤＴＡ緩衝液と１時間インキュベートすることにより
細胞をフラスコから取り出した。細胞懸濁液を遠心分離（室温で６００ｇ×５分
間）にかけて得られたペレットを再度溶解緩衝液（０．０２Ｍ Ｈｅｐｅｓ ｐ
Ｈ７．４、０．１２５Ｍ ＮａＣｌ，１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００，１０％グ
リセロール）に懸濁させ、１０分間氷中に放置した。さらに遠心分離（４゜Ｃで
１０，０００ｒｐｍ×１０分間）にかけて細胞リゼイトを得た。上清を集め、ア
リコート量に分け、−７０゜Ｃで凍結させた。

【００７２】 ＥＬＩＳＡ検定：ＥＧＦＲ−ＴＫ自己リン酸化のＩＣ５０値はＥＬＩＳＡ検定
法によって決定した。次に述べるインキュベーション操作はすべて室温で連続的
に振とうしながら行った。各段階を終えるたびにプレートを水（５×）およびＴ
ＢＳＴ緩衝液（１×）で洗った。各ウェルの最終体積は１５０μｌとした。コー
ニング製９６穴ＥＬＩＳＡプレートは、ＰＢＳ（ｐＨ８．２）で希釈したモノク
ロナルアンチＥＧＦＲ抗体ｍ１０８（Ｓｕｇｅｎ Ｉｎｃ．）で被覆し、４゜Ｃ
で一晩保存した。

【００７３】 結合しなかったｍ１０８を取り除いた後、プレートを洗い、それからブロック
（２５分）するために５％ミルク（１％脂肪）を含むＰＢＳを加えた。１アリコ
ートのＡ４３１細胞リゼイトを解凍し、プレートに加えた。Ａ４３１細胞リゼイ
ト中のｍ１０８の量とＥＧＦＲ−ＴＫの量の最適比率を決定するため、阻害剤な
しで行った前の試験によって、リゼイトの量を決定した。

【００７４】 ２５分後に、各阻害剤について７種類の異なる濃度を加え、各ケースに対して
１つのウェルを対照用として残した。すべての阻害剤はＴＢＳ／ＤＭＳＯで希釈
し、各ウェルの最終濃度は（対象も含め）０．０５％とした。

【００７５】 ２５分後に、プレートを洗わないで、各ウェルにＡＴＰ／ＭｎＣｌ_２溶液を加
えた。最終濃度は３μＭ ＡＴＰ／５ｍＭ ＭｎＣｌ_２とした。この段階の温度
は２６゜Ｃに保ち、プレートは常に振とうした。ＡＴＰ／ＭｎＣｌ_２とのインキ
ュベーションは５分間行った。

【００７６】 次に、リン酸化を停止させるため、ＥＤＴＡを加え（ｐＨ８、各ウェルの最終濃
度は２０ｍＭ）、１分後にすべてのプレートを洗った。

【００７７】 それから、ポリクロナル抗ホスホチロシン血清（Ｓｕｇｅｎ Ｉｎｃ．）を加え
た（抗体を５％ミルクを含むＴＢＳＴで希釈）。４５分間インキュベートした。

【００７８】 ＥＧＦＲ−ＴＫ中のホスホチロシンを呈色によって検出するため、ＴＡＧＯ
抗ウサギペルオキシダーゼ共役抗体（Ｓｕｇｅｎ Ｉｎｃ．）をＴＢＳＴ／５％
ミルク溶液中に加えた（４５分）。

【００７９】 洗浄した後、クエン酸塩−リン酸塩緩衝液中のＡＢＳＴ／Ｈ_２Ｏ_２を加えて呈
色反応を行った。５〜１０分したら、プレートをＤｙｎａｙｔｅｃ ＭＲ ５０
００ ＥＬＩＳＡ読み取り装置にかけ、４０５ｎｍで測定した。

【００８０】 データの解析は「Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ（回帰分析）」ソフトウェアを使って
行った。

【００８１】 基本溶液中のｍ１０８の正確な濃度も細胞リゼイト中のＥＧＦＲ−ＴＫ濃度も
不明であったので、ｍ１０８基本溶液とリゼイトの最適希釈率を決定する実験を
行った。ｍ１０８基本液（約０．２〜０．５μｇ／μｌ）はＰＢＳで１：４００
，１：６００，１：８００および１：１０００に希釈し、Ａ４３１細胞リゼイト
は１：２，１：４，１：６，１：８および１：１０に希釈した。実験の終わりに
選んだ対照群（ｍ１０８とリゼイトの希釈率を同じにし、リン酸化のためのＡＴ
Ｐを加えないで行った）の光学密度が約１．２〜１．４および０．０９〜０．１
を示す希釈率をｍ１０８とＡ４３１細胞リゼイトの希釈率とした。

【００８２】 ４−［（４−［^１８Ｆ］フルオロフェニル）アミノ］−６，７−ジメトキシキ
ナゾリン（［^１８Ｆ］化合物１）の合成： 前記のＫｒｙｐｔｏｆｉｘ（登録商標）２．２．２−［^１８Ｆ］フッ化カリウム
−ＤＭＳＯ溶液をねじ蓋式試験管（８ｍｌ、Ｃｏｒｎｉｎｇ）中の２〜３ ｍｇ
の１，４−ジニトロベンゼンに加えた。試験管に蓋をして振り混ぜマイクロ波で
３．５分間加熱した。環境温度の水浴で冷却した後、バイアルの内容物を１０ｍ
Ｌの水で希釈し、活性化（エタノール）させ、平衡化（水）させたＣ１８ Ｓｅ
ｐ−Ｐａｋ（ｃｌａｓｓｉｃ，ｓｈｏｒｔ ｂｏｄｙタイプ、ウォーターズ製）
に注入した。カートリッジを水（１０ｍＬ）で洗浄し、所望の中間体４−［^１８ Ｆ］−フルオロ−１−ニトロベンゼンをエタノール（２ｍＬ）で溶出させガラス
製小試験管に集めた。ガラス製の平底バイアル（２５ｍＬ）に、少数個のホウケ
イ酸ガラス球、１００μｌの４：１エタノール−水、２５０μＬのラネー（登録
商標）ニッケル・スラリーおよび６０μＬのヒドラジン一水和物を順次加えて、
還元反応器を準備した。セプタムを備えたねじ蓋をした後（径の大きな針で大気
に開放）、バイアルを振とうし、４０゜Ｃの加熱ブロック内に置いた。４−［^１
８Ｆ］−フルオロ−１−ニトロベンゼンのエタノール溶液を０．５ｍＬの水で希
釈し、徐々に還元反応器に加えた。５分後に反応器を環境温度の水浴中で冷やし
、それからバイアル内容物を０．４５μｍのフィルター（Ｐｕｒａｄｉｓｃ、ポ
リプロピレン製、ワットマン社）で別の２５ｍＬ平底バイアルに濾過した。濾液
に８ｍＬの水と１０ｍＬのエーテルを加え、蓋をしたのち、数回反転をくり返し
て混合し、還元生成物である４−［^１８Ｆ］フルオロアニリンをエーテル層に抽
出した。８ｍＬのねじ蓋式試験管に４〜５ｍｇのＡＧ１４７７と３００μＬの２
−プロパノールを入れた。放射性アニリンのエーテル溶液をＭｇＳＯ_４（２ｇ）
および新しい０．４５μｍフィルターを通して試験管に加えた。環境温度の水浴
で試験管を温めながらヘリウム雰囲気下でエーテルを除いた。濃塩酸（１μｌ）
を加え、それからねじ蓋試験管を１１０゜Ｃの油浴で１５分間加熱した。環境温
度の水浴で試験管を冷却した後、５０μＬの５Ｍ水酸化ナトリウム溶液を加えて
酸を中和し、塩基を遊離させた。ジクロロメタン（０．３ｍＬ）およびヘキサン
（０．３ｍＬ）を試験管に加え、０．２μｍのフィルター（Ａｃｒｏｄｉｓｃ、
ナイロン製、ゲルマン社）で溶液を濾過し、前記の半分取用順相ＨＰＬＣシステ
ムに注入した。［^１８Ｆ］化合物１はｔ_Ｒ＝３３．７分で溶出し、［^１８Ｆ］フ
ッ化カリウムから１１％の収率記述のように配合された。次に、この配合物を逆
相ＨＰＬＣ（ｔ_Ｒ＝８．７６分；化学的純度＝８９％；放射化学純度＞９５％）
で分析した。配合状態で［^１８Ｆ］化合物１の比放射能は３６３Ｃｉ／ｍｍｏｌ
（１３ＧＢｑ／μｍｏｌ）であった。

【００８３】 ４−［（３−［^１８Ｆ］フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）アミノ
］−６，７−ジメトキシキナゾリン（［３’−^１８Ｆ］化合物３）の合成： 一般的な手順は、以下の点を除いて、［^１８Ｆ］化合物１の合成に使用したもの
と同様であった：１，４−ジニトロベンゼンの代わりに２〜３ｍｇの３，５−ジ
ニトロベンゾトリフルオリドを［^１８Ｆ］フッ化物イオンと反応させ、３−［^{１ ８} Ｆ］フルオロ−５−ニトロベンゾトリフルオリドを得た。還元工程のあとに続
く液液抽出に代わって第２のＣ１８ Ｓｅｐ−Ｐａｋによる抽出を使用し、３−
［^１８Ｆ］フルオロ−５−トリフルオロメチルアニリンの抽出には２ ｍｌのエ
ーテルを使用した。順相の半分取用ＨＰＬＣ（ｔ_Ｒ＝３６．４分）によって（［
３’−^１８Ｆ］化合物３）を得た。配合された（［３’−^１８Ｆ］化合物３）（
通算収率７％）は逆相ＨＰＬＣで分析した（ｔ_Ｒ＝１１．６分）。配合状態での
放射化学純度＞９５％；化学的純度＞９５％；比放射能は４６０Ｃｉ／ｍｍｏｌ
（１７ＧＢｑ／μｍｏｌ）であった。

【００８４】 ４−［（３，４−ジクロロ−６−［^１８Ｆ］フルオロフェニル）アミノ］−６
，７−ジメトキシキナゾリン（［^１８Ｆ］化合物４）の合成： 一般的な手順は、以下の点を除いて、［^１８Ｆ］化合物３の合成に使用したもの
と同様であった：３，５−ジニトベンゾトリフルオリドの代わりに２〜３ｍｇの
１，２−ジクロロ−４，５−ジニトロベンゼンを［^１８Ｆ］フッ化物イオンと反
応させ、１，−ジクロロ−４−［^１８Ｆ］フルオロ−５−ニトロベンゼンを得た
。順相の半分取用ＨＰＬＣ（ｔ_Ｒ＝３１．７分）によって（［^１８Ｆ］化合物４
）を得た。配合された（［^１８Ｆ］化合物４）（通算収率４％）は逆相ＨＰＬＣ
で分析した（ｔ_Ｒ＝９．１分）。放射化学純度＞９５％、化学的純度〜９０％お
よび比放射能は４３０Ｃｉ／ｍｍｏｌ（１６ＧＢｑ／μｍｏｌ）であった。

【００８５】 実験結果 ^１８ Ｆ標識ＥＤＦＲ−ＴＫ ＰＥＴトレーサーを求めて、４種類の化合物１
〜４をこの後の^１８Ｆ放射能標識のための候補物質として合成した（表１）。

【００８６】

【表１】 ＊ 表に示した数値はすべて同一の方法で決定され、平均値±ＳＥＭで表してあ
る。かっこ内の数字は分析のくり返し回数である。

【００８７】 ４種類の化合物はすべて４−クロロ−６，７−ジメトキシキナゾリンと対応す
るアニリン誘導体とをＤＭＦ、ＥｔＯＨまたは酸性ｉＰｒＯＨ中でカップリング
させて合成した（反応式１）。

【化１１】

【００８８】 ３０〜６０分間還流させたのち、最終生成物は塩酸塩として約８０〜９０％の
収率で得られた。化合物３の場合は、ジニトロ誘導体（化合物６）と、フッ化カ
リウムおよびＫｒｙｐｔｏｆｉｘ（登録商標）２．２．２相間移動触媒とを、Ｄ
ＭＳＯ中で反応させて最初に３−フルオロ−５−トリフルオロメチル−ニトロベ
ンベンゼン（化合物５）を合成した（反応式２）［１７］。

【化１２】 次に、シントン（化合物５）をヒドラジン水和物とラネー（登録商標）ニッケル
のエタノール溶液で還元し、７０％収率で３−フルオロ−５−トリフルオロメチ
ル−アニリン（化合物７）を得た（反応式３）［１７］。

【化１３】

【００８９】 ３’−塩素を含むＡＧ１４７８の阻害活性が高いことと、放射性同位体合成に
使用される出発物質、１，２−ジクロロ−４，５−ジニトロベンゼンの分子構造
が対称的で、^１８Ｆの組み込みを容易にすると考えられることから、化合物４が
選択された。アニリン誘導体（化合物８）は対応するニトロベンゼン（化合物９
）から、前記（反応式３）と同じ条件で還元して得られた。

【００９０】 ＰＥＴトレーサーとしての有効性を決定するため、４種類のフッ素化合物につ
いて、ＥＧＦＲ−ＴＫ自己リン酸化ＩＣ_５０値を測定した。その方法には抗ＥＧ
ＦＲ抗体に基づくＥＬＩＳＡ検定法を使用した。阻害曲線の例を図１に、また結
果を表１に示す。化合物１の場合、アニリン環のパラ位をフッ素原子で置換した
結果、活性は中程度（ＰＤ１５３０３５またはＡＧ１４７８と比較して）のＩＣ _５０ ＝７６ｎＭであった。フッ素原子をメタ位に導入すると、生物活性は強くな
り、化合物２の場合ＩＣ_５０＝１９．８ｎＭの値が測定された。しかしこの値は
、塩素または臭素のようなより重いハロゲンがアニリン環のメタ位に結合したＡ
Ｇ１４７８およびＰＤ１５３０３５より２桁大きかった。生物活性な化合物のア
リール基部分にトリフルオロメチル基を導入すると多くの場合生物活性が強まる
ことが知られている。しかし、今回の研究で取り上げた、メタ位のフッ素に加え
て、５位にトリフルオロメチル基を含む化合物３に対して測定したＩＣ_５０値は
、化合物２（１１６ｎＭ）と比べて大きくなった。自己リン酸化のＩＣ_５０値か
ら見た場合、化合物４はＩＣ_５０＝０．２２ｎＭの最も強力な阻害物質であるこ
とがわかった。このことは、メタ位に塩素原子が存在することが重要であること
を反映している。パラ位に塩素原子、６位にフッ素を導入した場合、化合物４の
効力に貢献し、そのＩＣ_５０値はＡＧ１４７８のＩＣ_５０値より小さい。

【００９１】 化合物１，２，３および４は、それぞれ非標識化合物を作るために使用した同
じ合成戦略による反応式４に従って合成した。

【化１４】

【００９２】 アリールジニトロ誘導体をＤＭＳＯ中で有機［^１８Ｆ］フッ化物と反応させる
と対応するアリール［^１８Ｆ］フルオロニトロ誘導体が３０％（化合物２）また
は６０〜８０％（化合物１および３〜４）の推定収率で生成した。反応混合物の
加熱には一般的な電子レンジを使用した。Ｃ１８固相抽出操作に続いてニトロ残
留物をラネー（登録商標）ニッケルで４０゜Ｃでアミノ残留物に還元した。中庸
の温度と短い反応時間（５分）が重要で、それより高い温度および長い時間は明
らかにラネー（登録商標）ニッケル上で［^１８Ｆ］フルオロアニリンの還元の行
き過ぎと放射能の低下を招いた。生成した［^１８Ｆ］フルオロアニリンは濾過と
、Ｃ１８固相抽出または液液抽出のいずれかで単離した（化合物１および３〜４
の収率は、平均して約７５％、化合物２の収率はそれより低かった）。最終混合
物は、４−クロロ−６，７−ジメトキシキナゾリンのｉＰｒＯＨ溶液に放射能標
識アニリンの乾燥エーテル溶液を加えて調製した。室温でヘリウムガスを流しな
がらエーテルを蒸発させ除去した。エーテルと放射能標識アニリンの溶液だけを
、真空（回転式蒸発器を使用）またはヘリウムガスを流しながら、加熱してまた
は加熱しないで蒸発させようとすると、放射能標識アニリンは、かなりの量、ま
たは全量がエーテルと一緒に蒸発してしまった。したがって、エーテルを蒸発さ
せる時にはｉＰｒＯＨを存在させておくことが不可欠であった。反応混合物を酸
性にしたあと、反応は最終標識トレーサーである［^１８Ｆ］化合物１、［^１８Ｆ
］化合物２、［３’−^１８Ｆ］化合物３および［^１８Ｆ］化合物４に向かって進
行し、放射性崩壊に対する補正を加えない通算収率（［^１８Ｆ］フッ化カリウム
から、最終配合生成物に対して計算）は、化合物２に対して約１％、化合物１お
よび３〜４に対して４〜１２％であった。放射性核種生成の全過程は〜１２０〜
１５０分以内に終了した。いずれのケースでも生成物は放射化学的に純粋であっ
た。ＨＰＬＣにより２５４ｎｍで測定した各配合物の化学純度は、８９ないし＞
９５％の高い値を示した。配合状態で測定した比放射能は３６３〜４６０ Ｃｉ
／ｍｍｏｌ（１３〜１７ ＧＢｑ／ｍｏｌ）であった。

【００９３】 以上述べてきたように含フッ素ＥＦＧＲ−ＴＫ ＡＴＰ部位阻害剤合成法を開
発した。３種類の化合物は中程度の効力を有し、残りの１種、化合物４は効力の
非常に高いＥＧＦＲ−ＴＫ自己リン酸化阻害剤であった。さらに生物用トレーサ
ーとして使用するため、効力の高い化合物４を含め、４種類の化合物を妥当な収
率で^１８Ｆで放射能標識することができた。したがって、これらの化合物は、ｉ
ｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏでＥＧＦＲ−ＴＫの発現およびＡＴＰ結合
部位の占有率（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ ｏｃｃｕｐａｎｃｙ）の違いを測定する
ために使用することができるし、たとえばＰＥＴとして、癌の診断、進行度の判
定および治療プロトコルの選択、たとえばどの患者が、抗ＥＧＦ抗体、ＥＧＦ指
向融合トキシンまたはＥＧＦＲ−ＴＫ阻害剤に基づく治療法のようなＥＧＦ指向
治療法の恩恵を受けるかを予想するのに使用することもできる。

【００９４】 本発明は具体的な実施例をまじえて説明してあるが、もちろん当業者にとって
、本発明の範囲から逸脱することなく多くの代替や改変が可能であることは言う
までもない。したがって、本発明は付属する特許請求の範囲と精神の中におさま
るあらゆるそのような代替および改変を包含する。

【参考文献】

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は本発明による４種類のフッ素化化合物（化合物１〜４）と、参照のため
の２種類の化合物に対する自己リン酸化阻止曲線である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ， ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，Ｃ Ｎ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ， ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，Ｋ Ｒ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ， ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，Ｓ Ｉ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (71)出願人 イッサム リサーチ ディベロップメント カンパニー オブ ザ ヘブリュー ユ ニバーシティ オブ エルサレム イスラエル，92182 エルサレム，ヤボチ ンスキー ストリート 46 (72)発明者 ミシャニ， イヤル イスラエル， 90805 メヴァセレト ジ オン， ハギルボア ストリート 11 (72)発明者 ボナセラ， トマス イスラエル， 91120 イェルサレム， パインズ ストリート 11／５ (72)発明者 オルトゥ， ジュゼピナ イスラエル， 91120 イェルサレム， パインズ ストリート 11／５ (72)発明者 ロゼン， ユリア イスラエル， 97350 イェルサレム， ネエヴェ−ヤコブ 412／25 (72)発明者 ガゼィト， アヴィヴ イスラエル， 96190 イェルサレム， ノフ ハイム 14 (72)発明者 レヴィツキ， アレグザンダー イスラエル， 93714 イェルサレム， ブルラ ストリート 11 Ｆターム(参考） 4C085 HH03 KA29 KB20 KB56 LL18 4C086 AA01 AA02 AA03 AA04 BC46 MA01 MA04 NA14 ZB26 ZC20

Claims (23)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 次式で表される化合物であって、 【化１】 式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、水素、アルキル、ヒドロキシ、アル
   コキシ、ハロ、ハロアルキル、カルボキシ、カルボアルコキシおよびそれらの塩
   からなる群から選択され、かつ、 Ａ、Ｂ、ＣおよびＤはそれぞれ独立して、水素および電子吸引基からなる群から
   選択され、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤのうちの少なくとも１つは電子吸引基である、化
   合物。
2. 【請求項２】 前記電子吸引基はハロゲン、ＮＨ_２、ＳＯ_３Ｈ、ＮＯ_２、Ｃ
   ＮおよびＣＦ_３からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
3. 【請求項３】 前記ハロゲンはヨウ素、塩素、臭素およびフッ素からなる群
   から選択される、請求項２に記載の化合物。
4. 【請求項４】 ＡおよびＢはそれぞれ塩素原子であり、Ｃは水素原子であり
   、かつＤはフッ素原子である、請求項１に記載の化合物。
5. 【請求項５】 Ａはフッ素原子であり、ＢおよびＤはそれぞれ水素原子であ
   り、かつＣはＣＦ_３基である、請求項１に記載の化合物。
6. 【請求項６】 Ａはフッ素原子であり、Ｂ、ＣおよびＤはそれぞれ水素原子
   である、請求項１に記載の化合物。
7. 【請求項７】 Ｂはフッ素原子であり、Ａ、ＣおよびＤはそれぞれ水素原子
   である、請求項１に記載の化合物。
8. 【請求項８】 表皮成長因子受容体のチロシンキナーゼの活性の阻害に対す
   るＩＣ_５０値が０．１乃至１２０ｎＭである、請求項１に記載の化合物。
9. 【請求項９】 活性成分として、請求項１に記載の化合物および医薬的に許
   容される担体を含む、医薬組成物。
10. 【請求項１０】 前記表皮成長因子受容体を請求項１に記載の化合物にさら
    すステップを含む、表皮成長因子受容体のチロシンキナーゼ活性を阻害する方法
    。
11. 【請求項１１】 請求項１に記載の化合物を患者に投与するステップを含む
    、表皮成長因子受容体チロシンキナーゼの活性が損なわれた患者を治療する方法
    。
12. 【請求項１２】 次式で表される放射性同位体で標識された化合物であって
    、 【化２】 式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、水素、アルキル、ヒドロキシ、アル
    コキシ、ハロ、ハロアルキル、カルボキシ、カルボアルコキシおよびそれらの塩
    からなる群から選択され、かつ、 Ａ、Ｂ、ＣおよびＤはそれぞれ独立して、水素および電子吸引基からなる群から
    選択され、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤのうちの少なくとも１つは［^１８］フッ素である
    、化合物。
13. 【請求項１３】 前記電子吸引基はハロゲン、ＳＯ_３Ｈ、ＮＯ_２、ＣＮおよ
    びＣＦ_３からなる群から選択される、請求項１２に記載の化合物。
14. 【請求項１４】 前記ハロゲンはヨウ素、塩素、臭素およびフッ素からなる
    群から選択される、請求項１３に記載の化合物。
15. 【請求項１５】 ＡおよびＢはそれぞれ塩素原子であり、Ｃは水素原子であ
    り、かつＤは前記［^１８］フッ素原子である、請求項１２に記載の化合物。
16. 【請求項１６】 Ａは前記［^１８］フッ素であり、ＢおよびＤはそれぞれ水
    素原子であり、かつＣはＣＦ_３基である、請求項１２に記載の化合物。
17. 【請求項１７】 Ａは前記［^１８］フッ素であり、Ｂ、ＣおよびＤはそれぞ
    れ水素原子である、請求項１２に記載の化合物。
18. 【請求項１８】 Ｂは前記［^１８］フッ素であり、Ａ、ＣおよびＤはそれぞ
    れ水素原子である、請求項１２に記載の化合物。
19. 【請求項１９】 表皮成長因子受容体のチロシンキナーゼの活性の阻害に対
    するＩＣ_５０値が０．１乃至１２０ｎＭである、請求項１２に記載の化合物。
20. 【請求項２０】 活性成分として請求項１２に記載の化合物および医薬的に
    許容される担体を含む、医薬組成物。
21. 【請求項２１】 （ａ）請求項１２に記載の化合物を患者に投与するステッ
    プと、 （ｂ）体内または身体の一部内への化合物の分布を監視するために陽電子放射断
    層撮影法を使用するステップとを含む、 患者体内の表皮成長因子受容体レベルを監視する方法。
22. 【請求項２２】 次一般式で表される化合物を合成する方法であって、 【化３】 式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、水素、アルキル、ヒドロキシ、アル
    コキシ、ハロ、ハロアルキル、カルボキシ、カルボアルコキシおよびそれらの塩
    からなる群から選択され、かつ、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤはそれぞれ独立して、水素
    および電子吸引基からなる群から選択され、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤのうちの少なく
    とも１つは電子吸引基であり、６−Ｒ１，７−Ｒ２で誘導体化された４−クロロ
    キナゾリンを、前記Ａ、Ｂ、ＣおよびＤで誘導体化されたアニリンとカップリン
    グさせるステップを含む方法。
23. 【請求項２３】次式で表される化合物を合成する方法であって、 【化４】 式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、水素、アルキル、ヒドロキシ、アル
    コキシ、ハロ、ハロアルキル、カルボキシ、カルボアルコキシおよびそれらの塩
    からなる群から選択され、かつ、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤはそれぞれ独立して、水素
    および電子吸引基からなる群から選択され、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤのうちの少なく
    とも１つは［^１８］フッ素であり、６−Ｒ１，７−Ｒ２で置換された４−クロロ
    キナゾリンを、前記Ａ、Ｂ、ＣおよびＤで誘導体化されたアニリンとカップリン
    グさせるステップを含む方法。