JP2003500367A - 生物医学的適用のための新規なシアニンおよびインドシアニン染料バイオコンジュゲート - Google Patents

生物医学的適用のための新規なシアニンおよびインドシアニン染料バイオコンジュゲート

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Abstract

(57)【要約】 診断用造影および医療に有用な染料-ペプチドコンジュゲートを開示する。これらの染料-ペプチドコンジュゲートは、様々なビス-およびテトラキス(カルボン酸)相同体を有する数種のシアニン染料を含む。小サイズの化合物は、より大分子量の造影剤と比較して、腫瘍細胞に対する一層良好な送達を可能とする。様々な染料が、350-1300 nmの範囲で有用であるが、その正確な範囲は個々の染料に応じて変わる。ジメチルスルホキシドの使用は、これらの化合物の蛍光の維持に役立つ。本発明の分子は、診断用造影および医療に、腫瘍その他の異常の検出を、そして局部化治療を目的とする内視鏡検査用に、光音響による腫瘍の画像化、検出および治療に、および音響蛍光による腫瘍の画像化、検出および治療に、有用である。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】発明の分野 本発明は、総括的には診断用および治療用の、新規な染料-バイオコンジュゲ
ートに関する。本発明は、とりわけ、新規なバイオ活性分子のシアニン染料バイ
オコンジュゲート組成物、光学的断層撮影、内視鏡検査、光音響術、音響蛍光術
、レーザー補助誘導手術、および諸治療でのこれらのコンジュゲートの部位特異
的送達のための組成物に関する。さらには、本発明は、腫瘍の可視化および検出
のための、シアニン染料バイオコンジュゲートの調製法および使用法に関する。
本発明は、また、生体適合性有機溶媒の使用による蛍光消光の防止法にも関する
。
【０００２】発明の背景 電磁スペクトルの可視部および近赤外領域の光を吸収しそして放射する数種の
染料が、近年、その生体適合性、高モル吸収性、または高蛍光量子収率に起因し
て、様々な生物医学的処置に使用されている。この高感受性は、核医薬のそれと
平行しており、そして電離放射線の悪影響なく、器官および組織の可視化を可能
とする。多くの染料は特定の器官または組織に対する特異性を欠くので、これら
の染料を体内の特定の領域に送達するためには、これらの染料をバイオ活性担体
(タンパク質、ペプチド、炭水化物、およびその類似物など)に付着させておかな
ければならない。近赤外染料および染料-バイオ分子コンジュゲートの使用に対
する幾つかの研究が、発表されている(Patonay et al.,1991; Slavik, 1994 Bri
nkley, 1993; Lee and Woo, 米国特許第5,453,505号; Hohenschuh, WO 98/48846
; Turner et al., WO 98/22146; Licha et al., WO 96/17628;および Snow et a
l., WO 98/48838)。特に興味深いのは、抗体または他の大きなタンパク質担体を
送達媒体として用いる、腫瘍細胞の標的化である(Becker, et al., 1999)。この
ようなアプローチは核医薬の適用で広く用いられており、主な利点は染料の分子
容積が担体よりかなり小さいことにより担体の組織特異性が保持されることであ
る。しかしながら、このアプローチは、腫瘍細胞に対する高分子量バイオコンジ
ュゲートの拡散が極めて悪く、さらに固形腫瘍中の正味陽圧により複雑化すると
いう、幾つかの厳しい制約がある(Jain, 1994)。さらには、多くの染料は一般的
に、そしてシアニン染料は特に、水性媒体中で集合体を形成し、蛍光消光を引き
起こす傾向がある。従って、腫瘍検出を増強するために、低分子量の染料-バイ
オ分子コンジュゲートを調製すること、および染料分子の蛍光効率を維持するた
めの新規な染料組成物を調製することの必要性がある。
【０００３】 本明細書中で、発明の背景を裏付け、または実施に関するさらなる詳細を提供
するために使用した刊行物およびその他の資料は、出典明示により本明細書に組
込まれており、便宜上、添付の参照文献リスト中でグループ分けした。
【０００４】発明の概要 本発明は、特に、一般式１のシアニン染料バイオコンジュゲートを含む、新規
な組成物に関する：
【化３】 式１ 但し、式中、aおよびbは、0ないし5で変化し；Ｗ1およびＸ1は同一または異なり
、-ＣＲ10Ｒ11-、-Ｏ-、-ＮＲ12-、-Ｓ-、および-Ｓe-からなる群から選択され
るものであり;Ｑ1は単結合であるかまたは-Ｏ-、-Ｓ-、-Ｓｅ-、および-ＮＲ13
からなる群から選択されるものであり；Ｒ1、Ｒ10からＲ15、およびＲ29-Ｒ40は
同一であってもまたは異なってもよく、そして水素、Ｃ1-Ｃ10アルキル、Ｃ1-Ｃ 10 アリール、Ｃ1-Ｃ10アルコキシル、Ｃ1-Ｃ10ポリアルコキシアルキル、-ＣＨ2 (ＣＨ2ＯＣＨ2)c-ＣＨ2-ＯＨ、Ｃ1-Ｃ20ポリヒドロキシアルキル、Ｃ1-Ｃ10ポリ
ヒドロキシアリール、Ｃ1-Ｃ10アミノアルキル、-(ＣＨ2)d-ＣＯ2Ｈ、-(ＣＨ2)e -ＣＯＮＨ-Ｂm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)f-ＣＨ2-ＣＯＮＨ-Ｂm、-(ＣＨ2)g-ＮＨ
ＣＯ-Ｂm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)h-ＣＨ2-ＮＨＣＯ-Ｂm、-(ＣＨ2)yy-ＯＨ、お
よび-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)zz-ＣＨ2-ＯＨからなる群から選択されるものであり
；Ｙ1は、-(ＣＨ2)i-ＣＯＮＨ-Ｂm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)j-ＣＨ2-ＣＯＮＨ-
Ｂm、-(ＣＨ2)k-ＮＨＣＯ-Ｂm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)l-ＣＨ2-ＮＨＣＯ-Ｂm、
-(ＣＨ2)m-Ｎ(Ｒ14)-(ＣＨ2)n-ＣＯＮＨ-Ｂm、-(ＣＨ2)aa-Ｎ(Ｒ29)-(ＣＨ2)bb-
ＮＨＣＯ-Ｂm、-(ＣＨ2)p-Ｎ(Ｒ15)-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)q-ＣＨ2-ＣＯＮＨ-Ｂ
m、-(ＣＨ2)cc-Ｎ(Ｒ30)-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)dd-ＣＨ2-ＮＨＣＯ-Ｂm、-ＣＨ2 -(ＣＨ2ＯＣＨ2)ee-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ31)-(ＣＨ2)ff-ＣＯＮＨ-Ｂm、-ＣＨ2-(ＣＨ2Ｏ
ＣＨ2)gg-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ32)-(ＣＨ2)hh-ＮＨＣＯ-Ｂm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)ii-
ＣＨ2-Ｎ(Ｒ33)-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)jj-ＣＨ2-ＣＯＮＨ-Ｂm、および-ＣＨ2-(
ＣＨ2ＯＣＨ2)kk-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ34)-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)ll-ＣＨ2-ＮＨＣＯ-Ｂm
からなる群から選択されるものであり；d、e、g、i、k、m、n、p、aa、bb、cc、
ff、hhおよびyyは、1ないし10で変化し；c、f、h、j、l、q、dd、ee、gg、ii、j
j、kk、llおよびzzは、1ないし100で変化し；Ｂmは任意のバイオ活性ペプチド、
タンパク質、細胞、小糖類、糖ペプチド、擬態ペプチド、薬物、擬態薬物、ホル
モン、金属キレート剤、放射性または非放射性金属錯体、またはエコー発生剤で
あり；Ｚ1は、-(ＣＨ2)r-ＣＯ2Ｈ、-(ＣＨ2)r-ＯＨ、-(ＣＨ2)r-ＮＨ、-ＣＨ2-(
ＣＨ2ＯＣＨ2)s-ＣＨ2-ＣＯ2Ｈ、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)s-ＣＨ2-ＯＨ、-ＣＨ2-
(ＣＨ2ＯＣＨ2)s-ＣＨ2-ＮＨ2、-(ＣＨ2)t-ＣＯＮＨ-Ｄm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ 2 )u-ＣＨ2-ＣＯＮＨ-Ｄm、-(ＣＨ2)v-ＮＨＣＯ-Ｄm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)o-
ＣＨ2-ＮＨＣＯ-Ｄm、-(ＣＨ2)w-Ｎ(Ｒ14)-(ＣＨ2)x-ＣＯＮＨ-Ｄm、-(ＣＨ2)mm -Ｎ(Ｒ35)-(ＣＨ2)nn-ＮＨＣＯ-Ｄm、-(ＣＨ2)y-Ｎ(Ｒ15)-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2 )z-ＣＨ2-ＣＯＮＨ-Ｄm、-(ＣＨ2)uu-Ｎ(Ｒ39)-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)vv-ＣＨ2-
ＮＨＣＯ-Ｄm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)ww-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ40)-(ＣＨ2)xx-ＣＯＮＨ-
Ｄm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)oo-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ36)-(ＣＨ2)pp-ＮＨＣＯ-Ｄm、-Ｃ
Ｈ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)qq-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ37)-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)rr-ＣＨ2-ＣＯＮ
Ｈ-Ｄm、および-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)ss-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ38)-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2 )tt-ＣＨ2-ＮＨＣＯ-Ｄmからなる群から選択されるものであり；r、t、v、w、x
、y、mm、nn、pp、uuおよびxxは、1ないし10で変化し、そしてo、s、u、z、oo、
qq、rr、ss、tt、vvおよびwwは、1ないし100で変化し；Ｄmは、任意のバイオ活
性ペプチド、抗体、抗体フラグメント、小糖類、薬物、擬態薬物、擬態糖、糖ペ
プチド、擬態ペプチド、ホルモン、またはその類似物であり；Ｒ2ないしＲ9 は
同一であってもまたは異なってもよく、そして水素、Ｃ1-Ｃ10アルキル、Ｃ1-Ｃ 10 アリール、ヒドロキシル、Ｃ1-Ｃ10ポリヒドロキシアルキル、Ｃ1-Ｃ10アルコ
キシル、アミノ、Ｃ1-Ｃ10アミノアルキル、シアノ、ニトロ、およびハロゲンか
らなる群から選択されるものである。
【０００５】 本発明は、一般式２のシアニン染料バイオコンジュゲートを含む新規な組成物
にも関する：但し、式中、a'およびb'はaおよびbと同様に定義されるものであり
；Ｗ2およびＸ2はＷ1およびＸ1と同様に定義されるものであり；Ｑ2はＱ1と同様
に定義されるものであり；Ｒ16はＲ1と同様に定義されるものであり；Ｙ2はＹ1
と同様に定義されるものであり；Ｚ2はＺ1と同様に定義されるものであり；Ｒ17 ないしＲ28はＲ2と同様に定義されるものである。
【０００６】 本発明は、蛍光消光の防止方法にも関する。シアニン染料は一般的に水性媒体
中で集合体を形成し、蛍光消光を引き起こすことが知られている。この問題はさ
らに、大きな疎水性染料の小分子ペプチドに対するコンジュゲーションによって
際立っている。発明者らは、生体適合性有機溶媒の添加(例えば1-50% ジメチル
スルホキシド(DMSO))が、凝集を防いで蛍光を回復させ、そして腫瘍を可視化で
きることを見出した。
【化４】 式２
【０００７】 本発明のある実施態様では、染料-ペプチドコンジュゲートは、腫瘍その他の
異常の検出および処置のための、光学的断層撮影、内視鏡検査、光音響術および
音響蛍光術などの適用で有用である。
【０００８】 本発明の他の態様では、本発明の染料-ペプチドコンジュゲートは、局部治療
に有用である。
【０００９】 さらに本発明の他の態様では、本発明の染料ペプチドコンジュゲートは、該コ
ンジュゲートの血液クリアランス特性のモニタリングによる、腫瘍その他の異常
の存在の検出に有用である。
【００１０】 本発明のさらなる実施態様では、この染料-ペプチドコンジュゲートは、小ミ
クロ転移、例えばソマトスタチンサブタイプ2(SST-2)陽性、腹腔鏡検査法に基づ
く腫瘍などの検出において、レーザー補助誘導手術に有用である。
【００１１】 さらに本発明の他の態様では、本発明の染料-ペプチドコンジュゲートは、ア
テローム硬化型プラークおよび凝血の診断に有効である。
【００１２】図面の簡単な説明 本特許出願は、カラーで作成した図面を少なくとも１つ含有する。この出願の
カラー図面のコピーは、請求および必要な料金の支払いによって、特許庁から提
供されるであろう。
【００１３】 図１Ａ−Ｆは、様々な腫瘍を有するラットにインドシアニングリーンを注射し
てから2分後および30分後の画像を示す。図１Ａ−Ｂは、誘発的膵管腺癌の腫瘍(
DSL 6A)を有するラットの、注射後2分(図１Ａ)および30分(図１Ｂ)に造影した画
像である。図１Ｃ−Ｄは、誘発的前立腺癌の腫瘍(R3327-H)を有するラットの、
注射後2分(図１Ｃ)および30分(図１Ｄ)に造影した画像である。図１Ｅ−１Ｆは
、SST-2レセプターを発現する誘発的膵臓細葉細胞癌(CA20948)を有するラットの
、注射後2分(図１Ｅ)および30分(図１Ｆ)に造影した画像である。
【００１４】 図２Ａ−Ｂは、注射後45分での、膵臓細葉細胞癌(CA20948)を有するラットの
インドシアニングリーンおよびサイテート(Cytate)1の取り込みの比較を示す。
【００１５】 図３Ａ−Ｂは、膵臓細葉細胞癌(CA20948)を有するラットのサイテート1の注射
後90分(図３Ａ)および19時間(図３Ｂ)の画像を示す。
【００１６】 図４Ａ−Ｂは、サイテート1の注射後22時間(図４Ａ)の膵臓細葉細胞癌(CA2094
8)を有するラットの選択した組織部分、および注射しなかったラット(図４Ｂ)の
同じ組織部分を比較した画像を示す。
【００１７】 図５は、サイテート1の注射後約24時間の、膵臓細葉細胞癌(CA20948)を有する
ラットから取り出した個々の器官の画像である。
【００１８】 図６は、780nmでの励起後、830nmでモニターした正常なラットの血液からの、
サイテート1のクリアランス特性である。
【００１９】 図７は、780nmでの励起後、830nmでモニターしたCA20948腫瘍化ラットの血液
からの、サイテート1のクリアランス特性である。
【００２０】 図８は、780nmでの励起後、830nmでモニターした正常なラットの血液からの、
サイテート2のクリアランス特性である。
【００２１】 図９は、780nmでの励起後、830nmでモニターしたCA20948腫瘍化ラットの血液
からの、サイテート2のクリアランス特性である。
【００２２】 図１０は、780nmでの励起後、830nmでモニターした正常なラットの血液からの
、サイテート4のクリアランス特性である。
【００２３】発明の詳細な説明 本発明の新規なバイオコンジュゲートは、１ないし１０のレセプター標的基を
互いに密接に近接して組み込むことにより、シアニンおよびインドシアニン染料
構造の対称な性質を活用するものであり、協同効果によってレセプター結合を大
きく増強したものである。そこで、１またはそれ以上の標的ドメインを含有する
数種のシアニン染料を調製し、生物活性についてインビボで試験した。
【００２４】 本発明の新規な組成物は、式１および式２の染料-バイオコンジュゲートを含
み、そして先行技術の記載より顕著な利点を提供する。これらは様々な生物医学
的適用、それらは諸器官の断層撮影画像化；諸器官の機能モニタリング；冠動脈
造影法；蛍光内視鏡検査；腫瘍の検出、造影、および治療；レーザー誘導手術、
光音響術および音響蛍光術；および類似方法などを含むが、これらに限定される
ものではない、に適用することができる。前述の生物医学的適用の幾つかを達成
する特定の実施態様を以下に示す。バイオコンジュゲートは、当業者によく知ら
れている、スキーム（１−３）に示す方法で調製することができる。
【００２５】 好ましい実施態様では、本発明によるバイオコンジュゲートは、一般式１を有
するものである。但し、式中、aおよびbが、0ないし3で変化し；Ｑ1が単結合で
あり；Ｒ1ないしＲ9が水素であり；Ｗ1およびＸ1が-ＣＲ10-Ｒ11であり；Ｙ1が
、-(ＣＨ2)i-ＣＯＮＨ-Ｂm、-(ＣＨ2)k-ＮＨＣＯ-Ｂm、または-(ＣＨ2)m-Ｎ(Ｒ1 4 )-(ＣＨ2)n-ＣＯＮＨ-Ｂmであり；Ｚ1は、-(ＣＨ2)r-ＯＨ、-(ＣＨ2)r-ＣＯ2Ｈ
、-(ＣＨ2)r-ＮＨ2、-(ＣＨ2)t-ＣＯＮＨ-Ｄm、-(ＣＨ2)v-ＮＨＣＯ-Ｄm、-(Ｃ
Ｈ2)w-Ｎ(Ｒ14)-(ＣＨ2)x-ＣＯＮＨ-Ｄm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)s-ＣＨ2-ＯＨ
、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)s-ＣＨ2-ＣＯ2Ｈ、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)s-ＣＨ2-Ｎ
Ｈ、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)u-ＣＨ2-ＣＯＮＨ-Ｄm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)o-Ｃ
Ｈ2-ＮＨＣＯ-Ｄm、または-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)ww-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ40)-(ＣＨ2)xx -ＣＯＮＨ-Ｄmであり；そしてＢmが、2-50のモノマーユニットを含有するペプチ
ドまたは小糖類、ソマトスタチン、ボンベシン、ニューロテンシン、コレシスト
キニンおよび血管作用性腸管ポリペプチドから選択される腫瘍特異性バイオ分子
または擬態薬剤である。
【００２６】 他の好ましい実施態様は、本発明によるバイオコンジュゲートは、一般式１を
有するものである。但し、式中、aおよびbが3であり；Ｑ1が単結合であり；Ｒ1
ないしＲ9が水素であり；Ｗ1およびＸ1が-Ｃ(ＣＨ3) 2であり；Ｙ1が-(ＣＨ2)i-
ＣＯＮＨ-Ｂmまたは-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)j-ＣＨ2-ＣＯＮＨ-Ｂmであって、iは
1ないし4で変化し；Ｚ1が、-(ＣＨ2)r-ＣＯ2Ｈ、-(ＣＨ2)t-ＣＯＮＨ-Ｄm、-Ｃ
Ｈ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)s-ＣＨ2-ＣＯ2Ｈ、または-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)u-ＣＨ2-Ｃ
ＯＮＨ-Ｄmであって、rおよびtは1ないし4で変化し；Ｂmが、オクテレート(Octr
eotate)およびその擬態、オクトレオチド誘導体およびその擬態、ボンベシン類
似物、コレシストキニン類似物、およびニューロテンシン類似物からなる群から
選択される腫瘍特異的バイオ分子である。
【００２７】 別の好ましい実施態様では、本発明のバイオコンジュゲートは、一般式２を有
するものである。但し、式中、a'およびb'が0ないし3で変化し；Ｑ2が単結合で
あり；Ｒ16ないしＲ28が水素であり；Ｗ2およびＸ2が-ＣＲ10Ｒ11であり；Ｙ2が
-(ＣＨ2)i-ＣＯＮＨ-Ｂm、-(ＣＨ2)k-ＮＨＣＯ-Ｂm、または-(ＣＨ2)m-Ｎ(Ｒ14)
-(ＣＨ2)n-ＣＯＮＨ-Ｂmであり；Ｚ2が、-(ＣＨ2)r-ＣＯ2Ｈ、-(ＣＨ2)r-ＮＨ2
、-(ＣＨ2)r-ＯＨ、-(ＣＨ2)t-ＣＯＮＨ-Ｄm、-(ＣＨ2)v-ＮＨＣＯ-Ｄm、-(ＣＨ 2 )w-Ｎ(Ｒ14)--(ＣＨ2)x-ＣＯＮＨ-Ｄm、--ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)s-ＣＨ2-ＣＯ2 Ｈ、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)s-ＣＨ2-ＮＨ2、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)s-ＣＨ2-Ｏ
Ｈ、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)u-ＣＨ2-ＣＯＮＨ-Ｄm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)o-Ｃ
Ｈ2-ＮＨＣＯ-Ｄm、または-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)ww-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ40)-(ＣＨ2)xx -ＣＯＮＨ-Ｄmであり；Ｂmは、2-50のモノマーユニットを含有するペプチドおよ
び小糖類からなる群から選択される、腫瘍特異的バイオ分子または擬態薬物であ
る。
【００２８】 別の好ましい実施態様では、本発明のバイオコンジュゲートは、一般式２を有
するものである。但し、式中、a'およびb'が3であり；Ｑ2が単結合であり；Ｒ16 ないしＲ28が水素であり；Ｗ2およびＸ2が-Ｃ(ＣＨ3) 2であり；Ｙ2が-(ＣＨ2)i -ＣＯＮＨ-Ｂmまたは-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)j-ＣＨ2-ＣＯＮＨ-Ｂmであって、i
は1ないし4で変化し；Ｚ2が、-(ＣＨ2)r-ＣＯ2Ｈ、-(ＣＨ2)t-ＣＯＮＨ-Ｄm、-
ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)s-ＣＨ2-ＣＯ2Ｈ、または-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)u-ＣＨ2-
ＣＯＮＨ-Ｄmであって、rおよびtは1ないし4で変化し；Ｂmが、オクトレオテー
ト誘導およびその擬態、オクトレオチド誘導体およびその擬態、ボンベシン類似
物およびその擬態、コレシストキニン類似物およびその擬態、およびニューロテ
ンシン類似物およびその擬態からなる群から選択される、腫瘍特異性バイオ分子
である。
【００２９】 好ましい実施態様では、この方法では、350-1300nmの領域の波長の光を使用す
る。
【００３０】 好ましい実施態様では、治療操作は、ポルフィリンをバイオコンジュゲートへ
結合させ、そしてそれを光力学的治療に使用すること、または特定の波長の光を
本発明のジペプチドコンジュゲートに照射して光力学的治療効果を達成すること
、を含む。
【００３１】 本発明の組成物は、経腸投与用または非経腸投与用診断組成物に製剤化するこ
とができる。これらの組成物は、計画された投与のタイプに適切な常用の医薬担
体および賦形剤と共に、有効量の前記染料を含有する。例えば非経腸製剤は、本
発明の染料の滅菌水性溶液または懸濁液を有利に含有する。非経腸組成物は、直
接、または全身投与用の大容積非経腸組成物と混合して注射することができる。
このような溶液は、医薬的に許容され得る緩衝剤、そして所望により電解質(塩
化ナトリウムなど)を含有することもできる。
【００３２】 経腸投与用の製剤は、当業者によく知られているように、非常に多様であり得
る。一般に、このような製剤は、有効量の前記染料を水性溶液中にまたは懸濁液
中に含む液体である。このような経腸組成物は、所望により、緩衝剤、界面活性
剤、揺変剤、およびそれらの類似物を含むこともできる。経口投与用の組成物は
、香料その他の感覚器官受容性質を高める成分を含有することもできる。
【００３３】 診断組成物は、所望の増大を達成するための有効用量を投与する。このような
用量は非常に広範に変化し、使用する特定の染料、造影操作の対象とする器官ま
たは組織、使用する造影装置など、によって決まる。
【００３４】 本発明の診断組成物は常法で使用される。この組成物を、患者、典型的には温
血動物に、全身的にまたは造影しようとする器官または組織に局所的に、のいず
れかによっても投与でき、次いで患者を画像化操作にかける。
【００３５】 上記の組合せは、光学的方法によって腫瘍を画像化するための小分子標的化基
の使用に対する重要なアプローチを示す。本発明を、以下の実施例でさらに詳述
するが、それらは例示説明として提供するものであり、いかなる意味においても
限定を意図するものではない。当業者によく知られている標準的方法または以下
に具体的に記載の技術が利用される。
【００３６】実施例 1 ビスエチルカルボキシメチルインドシアニン染料の合成(スキーム１、Ｒ1、Ｒ2= 環縮合フェニル；Ａ=ＣＨ2、n=1、およびＲ=Ｒ'=ＣＯ2Ｈ) 1,2-ジクロロベンゼン(40 mL)中、1,1,2-トリメチル-[1H]-ベンズインドール(
9.1 g, 43.58 mmol)および3-ブロモプロピオン酸(10.0 g, 65.37 mmol)の混合物
を、110℃で12時間加熱した。この溶液を室温まで冷却し、得られた赤色残渣を
濾過し、アセトニトリル:ジエチルエーテル(1:1)混合物で洗浄した。得られた固
体を減圧下で乾燥し、淡褐色粉末 10 g(64%)を得た。エタノール(150 mL)中、こ
の固体の１部(6.0 g; 16.56 mmol)、グルタコンアルデヒドジアニルモノ塩酸塩(
2.36 g, 8.28 mmol)および酢酸ナトリウム三水和物(2.93 g, 21.53 mmol)を90分
間還流した。溶媒を蒸発留去した後、2N HCl水溶液 40 mLを残渣に加え、その混
合物を遠心分離機にかけ、上澄をデカントした。上澄がほぼ無色になるまでこの
手順を繰り返した。水：アセトニトリル(3:2)混合液 約5 mLを固体残渣に加え、
凍結乾燥し、暗緑色フレーク 2 gを得た。化合物の純度を1Ｈ-ＮＭＲおよびＬＣ
-質量分析で確立した。
【００３７】実施例 2 ビスペンチルカルボキシメチルインドシアニン染料の合成(スキーム１、Ｒ1、Ｒ 2=環縮合フェニル；Ａ=ＣＨ2、n=4、およびＲ=Ｒ'=ＣＯ2Ｈ) 1,2-ジクロロベンゼン(250 mL)中、1,1,2-トリメチル-[1H]-ベンズインドール
(20 g, 95.6 mmol)および6-ブロモヘキサン酸(28.1 g, 144.1 mmol)混合物を、1
10℃で12時間加熱した。緑色溶液を室温まで冷却し、形成した褐色固体沈殿を濾
過で集めた。固体を1,2-ジクロロベンゼンおよびジエチルエーテルで洗浄した後
、得られた褐色粉末(24 g, 64%)を減圧下、室温で乾燥した。エタノール(80 mL)
中、この固体の１部(4.0 g; 9.8 mmol)、グルタコンアルデヒドジアニルモノ塩
酸塩(1.4 g, 5 mmol)および酢酸ナトリウム三水和物(1.8 g, 12.9 mmol)を、1時
間還流した。溶媒を蒸発留去した後、2N HCl水溶液 20 mLを残渣に加え、その混
合物を遠心分離機にかけ、上澄をデカントした。この手順を上澄がほぼ無色にな
るまで繰り返した。水：アセトニトリル(3:2)混合液 約5 mLを固体残渣に加え、
凍結乾燥し、暗緑色フレーク 約2 gを得た。化合物の純度を1Ｈ-ＮＭＲおよびＬ
Ｃ-質量分析で確立した。
【００３８】実施例３ ビスエチルカルボキシメチルインドシアニン染料の合成(スキーム１、Ｒ1、Ｒ2= 環縮合フェニル；Ａ=ＣＨ2、n=1およびＲ=Ｒ'=ＣＯ2Ｈ) この化合物を、1,1,2-トリメチルインドールを出発物質として使用する以外は
実施例１に記載のとおりにして調製した。
【００３９】実施例４ ビスヘキサエチレングリコールカルボキシメチルインドシアニン染料(スキーム
１、Ｒ1、Ｒ2=環縮合フェニル；Ａ=ＣＨ2ＯＣＨ2、n=6およびＲ=Ｒ'=ＣＯ2Ｈ) この化合物を、ω-ブロモヘキサオキシエチレングリコールプロピオン酸をブ
ロモプロピオン酸の代わりに使用し、反応を1,2-ジメトキシプロパン中で行なう
以外は実施例１に記載のとおりにして調製した。
【００４０】実施例５ ビスエチルカルボキシメチルインドシアニン染料の合成(スキーム２、Ｒ1、Ｒ2 =環縮合フェニル；Ａ=ＣＨ2、およびn=1) この化合物を、3-ブロモ-1-(N,N-ビス-カルボキシメチル)アミノプロパンをブ
ロモプロピオン酸の代わりに使用する以外は実施例１に記載のとおりにして容易
に調製した。
【００４１】実施例６ ペプチドの合成 以下に記載した手順はオクトレオテートの合成である。本発明の他のペプチド
を、場合により軽微な修飾を加えた同様の手順で調製した。 オクタペプチドを、Applied Biosystems販売のペプチド合成機(Model 432A SY
NERGY Peptide Synthesizer)を使用して、オートメーション化したフルオレニル
メトキシカルボニル(Fmoc)固相ペプチド合成で調製した。第１のペプチドカート
リッジには、Fmoc-Thrを25 μmolスケールであらかじめ保持させたWang樹脂を含
有させておいた。次の各カートリッジには、下記アミノ酸：Cys(Acm)、Thr(t-Bu
)、Lys(Boc)、Trp(Boc)およびTyr(t-Bu)など側鎖保護基をもたせた各Fmoc-保護
アミノ酸を含有させておいた。これらのアミノ酸カートリッジをペプチド合成機
上に装着し、そしてＣ末端位置からＮ末端位置方向へ生成物を合成した。カップ
リング反応を、2-(1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロ
ニウムヘキサフルオロホスフェート(HBTU)/N-ヒドロキシベンゾトリアゾール(HO
Bt)の存在下で、各保護アミノ酸 75 μmolを用いて行なった。Fmoc保護基を、ジ
メチルホルムアミド中20%ピペリジンで除去した。合成が完了したら、トリフル
オロ酢酸タリウムでチオール基を環化し、そして生成物を、トリフルオロ酢酸(8
5%)：水(5%)：フェノール(5%)：チオアニソール(5%)を含有する切断混合物で、6
時間かけて、固体支持体から切り出した。このペプチドをt-ブチルメチルエーテ
ルで沈殿させ、水：アセトニトリル(2:3)混合物を用いて凍結乾燥した。このペ
プチドをHPLCで精製し、そしてLC/MSで分析した。オクトレオテートのアミノ酸
配列は：D-Phe-Cys'-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys'-Thr(配列番号１)であった（但し
、Cys'は２つのシステインアミノ酸間の分子内ジスルフィド結合の存在を示す）
。 オクトレオチド：D-Phe-Cys'-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys'-Thr-OH(配列番号２)を
同様の手順で調製した（但し、Cys'は２つのシステインアミノ酸間の分子内ジス
ルフィド結合の存在を示す）。 ボンベシン類似体を、トリフルオロ酢酸タリウムを用いる環化を必要としない
点を除いて同様の手順で調製した。側鎖脱保護および樹脂からの切り出しを、エ
タンジチオール、チオアニソールおよび水、それぞれ50μL、およびトリフルオ
ロ酢酸 850μLを用いて行なった。２つの類似体：Gly-Ser-Gly-Gln-Trp-Ala-Val
-Gly-His-Leu-Met-NH2(配列番号３)およびGly-Asp-Gly-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-Hi
s-Leu-Met-NH2(配列番号４)を調製した。 コレシストキニンオクタペプチド類似体を、オクトレオテートについて記載(
環化ステップなし)したようにして調製した。３つの類似体：Asp-Tyr-Met-Gly-T
rp-Met-Asp-Phe-NH2(配列番号５)；Asp-Tyr-Ｎle-Gly-Trp-Nle-Asp-Phe-NH2(配
列番号６)；およびD-Asp-Tyr-Ｎle-Gly-Trp-Ｎle-Asp-Phe-NH2(配列番号７)を調
製した(但しNleはノルロイシンである)。 ニューロテンシン類似体:D-Lys-Pro-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu(配列番号８)を
、オクトレオテートについての記載(環化ステップなし)のようにして調製した。
【００４２】実施例７ ペプチド-染料コンジュゲートの合成 下記の方法はオクトレオテートコンジュゲートの合成であるが、同様の手順を
他のペプチド-染料コンジュゲートの合成に使用した。 オクトレオテートを実施例６の記載のように調製したが、このペプチドを固体
支持体から切り出さず、またPheのＮ末端Fmoc基を残しておいた。チオール基を
トリフルオロ酢酸タリウムで環化し、そしてPheを脱保護し、保護されていない
アミンを遊離させた。ビスエチルカルボキシメチルインドシアニン染料(53 mg,
75μmol)を、DMSO中HBTU/HOBtの0.2 M溶液(375μL)およびDMSO中ジイソプロピル
エチルアミンの0.2 M溶液(375μL)からなる活性化試薬と共に加えた。活性化は
約30分で完了し、そして樹脂に結合させてあるペプチド(25μmol)を染料に加え
た。カップリング反応を室温で3時間行った。混合物を濾過し、固体残渣を、DMF
、アセトニトリルおよびTHFで洗浄した。緑色残渣を乾燥した後、このペプチド
を樹脂から切り出し、そして側鎖保護基を、85%トリフルオロ酢酸、5%水、5%チ
オアニソール、および5%フェノールの混合物で除去した。樹脂を濾過し、そして
冷t-ブチルメチルエーテル(MTBE)を使用して、染料-ペプチドコンジュゲートを
沈殿させ、それからアセトニトリル：水(2:3)混合物に溶かして、凍結乾燥した
。この生成物をHPLCで精製し、モノオクトレオテート-ビスエチルカルボキシメ
チルインドシアニン染料(サイテート1, 80%)およびビスオクトレオテート-ビス
エチルカルボキシメチルインドシアニン染料(サイテート2, 20%)を得た。反応時
間を2時間に減らすと、モノオクトレオテートコンジュゲートをビスコンジュゲ
ートに勝ってほぼ単独(>95%)で得ることができる。しかしながら、これは不完全
な反応にもつながり、そして染料コンジュゲートされていないペプチドによって
レセプターが飽和することを防ぐために遊離オクトレオテートを注意深く染料コ
ンジュゲートから分離しなければならない。 オクトレオテート-ビスペンチルカルボキシメチルインドシアニン染料を、上
記に幾らかの修正を加えて調製した。ビスペンチルカルボキシメチルインドシア
ニン染料(60 mg, 75μmol)を、DMSO中0.2 M HBTU/HOBt溶液(400μL)、およびDMS
O中0.2 Mジイソプロピルエチルアミン溶液(400μL)からなる活性化試薬に加えた
。活性化は約30分で完了し、樹脂-結合ペプチド(25μmol)を染料に加えた。この
反応を室温で3時間行った。この混合物を濾過し、そして固体残渣をDMF、アセト
ニトリルおよびTHFで洗浄した。緑色残渣を乾燥した後、このペプチドを樹脂か
ら切り出し、側鎖保護基を85%トリフルオロ酢酸、5%水、5%チオアニソール、お
よび5%フェノールの混合物で除去した。この樹脂を濾過し、冷t-ブチルメチルエ
ーテル(MTBE)を使用して、染料-ペプチドコンジュゲートを沈殿させ、それから
アセトニトリル：水(2:3)混合物に溶かして、凍結乾燥した。この生成物をHPLC
で精製し、オクトレオテート-1,1,2-トリメチル-[1H]-ベンズインドール プロピ
オン酸コンジュゲート(10%)、モノオクトレオテート-ビスペンチルカルボキシメ
チルインドシアニン染料(サイテート3, 60%)およびビスオクトレオテート-ビス
ペンチルカルボキシメチルインドシアニン染料(サイテート4, 30%)を得た。
【００４３】実施例８ ジメチルスルホキシド(DMSO)中でのペプチド-染料コンジュゲートの製剤化 染料-ペプチドコンジュゲートは水にやや溶けにくく、可溶化剤または助溶媒
の添加を必要とする。1-20%水性エタノールをこのコンジュゲートに加えると、
インビトロでは蛍光強度を部分的に消光し、そしてインビボではその蛍光は完全
に消光した(このコンジュゲートはCCDカメラでは検出されたかった)。1-50%のDM
SOを添加すると、インビトロおよびインビボでのコンジュゲート蛍光強度が回復
するかまたは増強された。この染料蛍光は、１週間以上、極めて強く持続した。
DMSO製剤は、本発明で使用した実験動物で十分に許容された。
【００４４】実施例９ インドシアニングリーン(ICG)を用いる膵管腺癌(DSL 6A)の造影 非侵襲的インビボ蛍光造影装置を使用して、腫瘍検出用に開発された造影剤の
有効性を動物モデルで評価した。公称波長780 nmおよび公称電力 40 mWのLaserM
ax Inc.の半導体レーザーを使用した。検出器は、Rodenstock 10 mm F2 レンズ(
ストック#542.032.002.20)を取りつけたPrinceton Instruments model RTE/CCD-
1317-K/2 CCDカメラであった。830 nm 干渉レンズ(CVI Laser Corp., part # F1
0-830-4-2)をCCD入力レンズの前に備え付けて、造影剤から放たれる蛍光ライト
のみを画像化した。一般的に、造影剤注射前に動物の画像を撮影した。次いで、
この画像を注射後の画像から控除した(ピクセルごとに)。しかしながら、一旦動
物がサンプル範囲から移動した場合は、バックグラウンド控除は決して行なわず
、しばらくたった後に、注射後数時間の画像を撮影する目的で戻した。 DSL 6A 腫瘍が、雄ルイスラットにおいて、固体(提供者)インプラント由来の
物質の導入により左側腹部範囲で誘発され、そしてその腫瘍はおよそ14日で触知
可能になった。動物にラット反応混液(キシラジン；ケタミン；アセプロマジン
1.5：1.5：0.5)0.8 mL/kgを用いて、筋肉内注射で麻酔をかけた。腫瘍の範囲(左
側腹部)を薄く切り、腫瘍および周囲の表面部分を曝露した。１つの栓およびヘ
パリン添加食塩水を含有する２つのシリンジを備えたA 21 ゲージバタフライを
、ラットの後方尾静脈中に入れた。ICGの投与前に静脈の開放度をバタフライ装
置でチェックした。各動物に、0.42 mg/mL ICG水溶液 500μLを与えた。注射後2
分および30分に得られた画像を図１Ａ−Ｂに示した。
【００４５】実施例１０ インドシアニングリーン(ICG)を用いる前立腺癌種(R3327-H)の造影 実施例９に記載した画像化装置および手順を使用した。R3327-H腫瘍が、若年
雄コペンハーゲンラットにおいて、固体インプラント由来の左側腹部範囲で誘発
された。これらの腫瘍は非常に成長が遅く、インプラント後4-5ヶ月で明白な咀
嚼筋が存在した。注射後2分および30分で得られた画像を、図１Ｃ−Ｄに示す。
【００４６】実施例１１ インドシアニングリーン(ICG)を用いる、ラット膵臓細葉細胞癌(CA20948)の造影 実施例９に記載した画像化装置および手順を使用した。SST-2レセプター(CA20
948)を発現するラット膵臓細葉細胞癌が、固体インプラント技術によって、左側
腹部範囲で誘発され、そしてインプラント後９日で明白な咀嚼筋が検出された。
注射後2分および30分で得られた画像を、図１Ｅ−Ｆに示す。
【００４７】実施例１２ Cytate1を有する細葉細胞癌(CA20948)の画像 使用した画像化装置および手順は、各動物に、水中25%ジメチルスルホキシド
の1.0 mg/mL サイテート1溶液 500μLを与えたことを除いて実施例９に記載され
たものである。SST-2レセプター(CA20948)を発現するラット膵臓細葉細胞癌が、
固体インプラント技術によって、左側腹部範囲で誘発され、そしてインプラント
後24日で明白な咀嚼筋が検出された。注射後の様々な時間の画像を取得した。腫
瘍中への取り込みは2分においてみられたが、約5分までは最大でなかった。図２
Ａ−Ｂは、CA20948腫瘍細胞株を有するラットでの45分におけるICGおよびサイテ
ート1の取り込みの比較を示す。45分までに、ICGはほぼクリアーになったが(図
２Ａ)、一方サイテート1は未だ十分強度が強かった(図２Ｂ)。この染料蛍光は、
腫瘍中で注射後数時間強度を保持した。
【００４８】実施例１３ ラット膵臓細葉細胞癌(CA20948)サイテート1による造影（ICGによる造影と比較
） インドシアニングリーン(ICG)を使用し、CCDカメラ装置を用いて３種の異なる
腫瘍株を光学的に画像化した。これらの株の２つ、DSL 6/A (膵臓)およびダンニ
ングR3327-H(前立腺)は、この試薬の腫瘍中への時間をかけたゆっくりしたゆき
わたりを示し、そしてそれぞれで適切な画像が得られた。第３の株、CA20948 (
膵臓)は、注射後30分後に消える、ほんの僅かであるが一時的ゆきわたりを示し
た。これは、他の２つの腫瘍株と比較して、ICGがこの株に対して非特異的局在
性がないことを示しており、この型の腫瘍の血管構造が大いに異なることを提唱
している(図１Ａ−Ｆ参照)。この最初の２種の腫瘍株(DSL 6/AおよびR3327-H)は
、CA20948(ソマトスタチン(SST-2)レセプターが豊富に含まれてもいる)ほど高度
に血管が新生していない。従って、この腫瘍モデルにおける染料の検出および保
持は、レセプター介在特異性の重要な指針である。 オクトレオテート はソマトスタチン(SST-2)レセプターを標的とすることが知
られているので、シアノオクトレオテート(サイテート1およびサイテート2)を調
製した。サイテート1をCA20948ルイスラットモデルで評価した。CCDカメラ装置
を使用し、この染料の強局在化が注射後90分に腫瘍中でみられた(図３Ａ)。注射
後19時間において、動物を再び造影し(図３Ｂ)、この腫瘍株に存在するSST-2レ
セプターに対するこの試薬の特異性を示す腫瘍視覚化が容易に得られた。対照と
して、器官を再び造影し(図４Ａ)、そしてその画像を、注射していないラットの
同じ組織(図4B)と比較した。 個々の器官を取り除き、そして造影した。この物質の高度な取り込みが、膵臓
、副腎および腫瘍組織でみられたが、しかし心臓、筋肉、脾臓および肝臓ではか
なり低い取り込みを示した(図５)。これは、同じモデル系において、放射標識し
たオクトレオテートと非常にうまく関連している(de Jong et al., 1998参照)。
【００４９】実施例１４ ペプチド-染料コンジュゲートの血液クリアランス特性のモニター 染料発色団の励起用の適切な波長のレーザーを光ファイバーバングルの一端に
照射し、そしてもう一端をラットの耳から数ミリに位置を合わせた。第２の光フ
ァイバーバングルも同じ耳の近くに位置を合わせ(放たれた蛍光ライトを検出す
る目的で)、そしてもう一端はデータ収集のために光学装置および電子装置中へ
向けた。収集光学装置系列内の干渉フィルター(IF)を使用して、染料発色団用に
放たれた蛍光ライトの適切な波長の選別をした。 ＳＤラットまたはフィッシャー344ラットをこれらの研究に使用した。動物に
、ウレタンを1.35 g/kg体重の投与量で腹腔内注射で投与して、麻酔した。動物
が所望水準の麻酔に達したとき、12"チューブを有する21ゲージバタフライを各
動物の側尾静脈に配置し、ヘパリン添加した食塩水を流した。動物を加熱パット
の上に置き、研究全期間中暖かく保った。左耳の突出部をガラス顕微鏡スライド
に貼って、動きと振動を減少させた。 光ファイバーから送達される入射レーザー光線を、固定した耳に集中させた。
それからデータ取得を行ない、そして蛍光のバックグラウンドリーディングを試
験試薬の投与前に取得した。Cytates 1または2について、ペプチド-染料コンジ
ュゲートを、側尾静脈でのボラス注射で、一般的に0.5から2.0 mLで動物に投与
した。蛍光シグナルはピーク値まで急速に増加した。それから、シグナルを、血
流から除いたコンジュゲートと同様に、時間関数で減衰させた。 この手順を、健常なラットおよび腫瘍化したラットで、数種の染料-ペプチド
コンジュゲートを用いて繰返し、そして代表的な特性を図６ないし１０に示した
。
【００５０】 本発明は、本発明の好ましい実施態様の詳細を参照して開示しているが、これ
らの開示は、限定する意味ではなく、例示説明を意図したものであると理解され
るべきであり、本発明の精神および添付の請求項の範囲内での改変は当業者には
容易に予想される。
【００５１】参照文献 Becker A, Licha K, Kress M and Riefke B (1999). "Transferrin Mediated Tu
mor Delivery of Contrast Media for Optical Imaging and Magnetic Resonanc
e Imaging", Biomedical Optics meeting, January 23-29, 1999, San Jose, CA Brinkley M (1993). "A Brief Survey of Methods for Preparing Protein Conj
ugates with Dyes, Haptens, and Cross-Linking Reagents", Perspectives in
Bioconjugate Chemistry (Ed. Claude Meares, ACS Publication, Washington,
D.C.), pp. 59-70. de Jong M, et al. (1998). Cancer Res. 58:437-441. Jain RK (1994). "Barriers to Drug Delivery in Solid Tumors", Scientific
American 271:58-65. Patonay G and Antoine MD (1991). "Near-Infrared Fluorogenic Labels: New
Approach to an Old Problem", Analytical Chemistry, 63:321A-327A and refe
rences therein. Slavik J (1994). Fluorescent Probes in Cellular and Molecular Biology (C
RC Press, Inc.).特許および公開特許出願 Lee LG and Woo SL. "N-Heteroaromatic ion and iminium ion substituted cya
nine dyes for use as fluorescence labels", 平国特許第5,453,505号 Hohenschuh E, et al. "Light imaging contrast agents", WO 98/48846. Turner J, et al. "Optical diagnostic agents for diagnosis of neurodegene
rative diseases by means of near infra-red radiation (NIR radiation)", W
O 98/22146. Licha K, et al. "In-vivo diagnostic process by near infrared radiation",
WO 96/17628. Snow RA, et al., "Compounds", WO 98/48838.
【配列表】
【図面の簡単な説明】
【図１】 様々な腫瘍を有するラットにインドシアニングリーンを注射して
から2分後および30分後の画像を示す。
【図２】 注射後45分での、膵臓細葉細胞癌(CA20948)を有するラットのイ
ンドシアニングリーンおよびサイテート(Cytate)1の取り込みの比較を示す。
【図３】 膵臓細葉細胞癌(CA20948)を有するラットのサイテート1の注射後
90分(図３Ａ)および19時間(図３Ｂ)の画像を示す。
【図４】 サイテート1の注射後22時間(図４Ａ)の膵臓細葉細胞癌(CA20948)
を有するラットの選択した組織部分、および注射しなかったラット(図４Ｂ)の同
じ組織部分を比較した画像を示す。
【図５】 サイテート1の注射後約24時間の、膵臓細葉細胞癌(CA20948)を有
するラットから取り出した個々の器官の画像である。
【図６】 780nmでの励起後、830nmでモニターした正常なラットの血液から
の、サイテート1のクリアランス特性である。
【図７】 780nmでの励起後、830nmでモニターしたCA20948腫瘍化ラットの
血液からの、サイテート1のクリアランス特性である。
【図８】 780nmでの励起後、830nmでモニターした正常なラットの血液から
の、サイテート2のクリアランス特性である。
【図９】 780nmでの励起後、830nmでモニターしたCA20948腫瘍化ラットの
血液からの、サイテート2のクリアランス特性である。
【図１０】 780nmでの励起後、830nmでモニターした正常なラットの血液か
らの、サイテート4のクリアランス特性である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，Ｊ Ｐ (72)発明者 ジョゼフ・エドワード・ブガジュ アメリカ合衆国63303ミズーリ州セント・ チャールズ、ケッタリング・ドライブ2916 番 (72)発明者 ラガバン・ラジャゴパラン アメリカ合衆国63043ミズーリ州メリーラ ンド・ハイツ、ビンソン・コート13031番 Ｆターム(参考） 2G045 AA25 AA29 CB26 FA11 FA16 FA19 FB07 FB12 GC15 JA04 2G054 AA08 AB05 BB08 CE02 EA03 EA04 EA05 GA04 GA05 GB04 JA02 4C085 HH11 HH13 JJ02 KB82 LL07 LL18

Claims (32)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 式 【化１】 のシアニン染料バイオコンジュゲートを含む組成物。 但し、式中、aおよびbは、0ないし5で変化し；Ｗ1およびＸ1は同一または異なり
    、-ＣＲ10Ｒ11-、-Ｏ-、-ＮＲ12-、-Ｓ-、および-Ｓe-からなる群から選択され
    るものであり;Ｑ1は単結合であるかまたは-Ｏ-、-Ｓ-、-Ｓｅ-、および-ＮＲ13-
    からなる群から選択されるものであり；Ｒ1、Ｒ10からＲ15、およびＲ29-Ｒ40は
    同一であってもまたは異なってもよく、そして水素、Ｃ1-Ｃ10アルキル、Ｃ1-Ｃ 10 アリール、Ｃ1-Ｃ10アルコキシル、Ｃ1-Ｃ10ポリアルコキシアルキル、-ＣＨ2 (ＣＨ2ＯＣＨ2)c-ＣＨ2-ＯＨ、Ｃ1-Ｃ20ポリヒドロキシアルキル、Ｃ1-Ｃ10ポリ
    ヒドロキシアリール、Ｃ1-Ｃ10アミノアルキル、-(ＣＨ2)d-ＣＯ2Ｈ、-(ＣＨ2)e -ＣＯＮＨ-Ｂm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)f-ＣＨ2-ＣＯＮＨ-Ｂm、-(ＣＨ2)g-ＮＨ
    ＣＯ-Ｂm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)h-ＣＨ2-ＮＨＣＯ-Ｂm、-(ＣＨ2)yy-ＯＨ、お
    よび-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)zz-ＣＨ2-ＯＨからなる群から選択されるものであり
    ；Ｙ1は、-(ＣＨ2)i-ＣＯＮＨ-Ｂm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)j-ＣＨ2-ＣＯＮＨ-
    Ｂm、-(ＣＨ2)k-ＮＨＣＯ-Ｂm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)l-ＣＨ2-ＮＨＣＯ-Ｂm、
    -(ＣＨ2)m-Ｎ(Ｒ14)-(ＣＨ2)n-ＣＯＮＨ-Ｂm、-(ＣＨ2)aa-Ｎ(Ｒ29)-(ＣＨ2)bb-
    ＮＨＣＯ-Ｂm、-(ＣＨ2)p-Ｎ(Ｒ15)-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)q-ＣＨ2-ＣＯＮＨ-Ｂ
    m、-(ＣＨ2)cc-Ｎ(Ｒ30)-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)dd-ＣＨ2-ＮＨＣＯ-Ｂm、-ＣＨ2 -(ＣＨ2ＯＣＨ2)ee-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ31)-(ＣＨ2)ff-ＣＯＮＨ-Ｂm、-ＣＨ2-(ＣＨ2Ｏ
    ＣＨ2)gg-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ32)-(ＣＨ2)hh-ＮＨＣＯ-Ｂm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)ii-
    ＣＨ2-Ｎ(Ｒ33)-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)jj-ＣＨ2-ＣＯＮＨ-Ｂm、および-ＣＨ2-(
    ＣＨ2ＯＣＨ2)kk-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ34)-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)ll-ＣＨ2-ＮＨＣＯ-Ｂm
    からなる群から選択されるものであり；d、e、g、i、k、m、n、p、aa、bb、cc、
    ff、hhおよびyyは、1ないし10で変化し；c、f、h、j、l、q、dd、ee、gg、ii、j
    j、kk、llおよびzzは、1ないし100で変化し；Ｂmは任意のバイオ活性ペプチド、
    タンパク質、細胞、小糖類、糖ペプチド、擬態ペプチド、薬物、擬態薬物、ホル
    モン、金属キレート剤、放射性または非放射性金属錯体、またはエコー発生剤で
    あり；Ｚ1は、-(ＣＨ2)r-ＣＯ2Ｈ、-(ＣＨ2)r-ＯＨ、-(ＣＨ2)r-ＮＨ、-ＣＨ2-(
    ＣＨ2ＯＣＨ2)s-ＣＨ2-ＣＯ2Ｈ、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)s-ＣＨ2-ＯＨ、-ＣＨ2-
    (ＣＨ2ＯＣＨ2)s-ＣＨ2-ＮＨ2、-(ＣＨ2)t-ＣＯＮＨ-Ｄm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ 2 )u-ＣＨ2-ＣＯＮＨ-Ｄm、-(ＣＨ2)v-ＮＨＣＯ-Ｄm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)o-
    ＣＨ2-ＮＨＣＯ-Ｄm、-(ＣＨ2)w-Ｎ(Ｒ14)-(ＣＨ2)x-ＣＯＮＨ-Ｄm、-(ＣＨ2)mm -Ｎ(Ｒ35)-(ＣＨ2)nn-ＮＨＣＯ-Ｄm、-(ＣＨ2)y-Ｎ(Ｒ15)-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2 )z-ＣＨ2-ＣＯＮＨ-Ｄm、-(ＣＨ2)uu-Ｎ(Ｒ39)-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)vv-ＣＨ2-
    ＮＨＣＯ-Ｄm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)ww-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ40)-(ＣＨ2)xx-ＣＯＮＨ-
    Ｄm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)oo-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ36)-(ＣＨ2)pp-ＮＨＣＯ-Ｄm、-Ｃ
    Ｈ2 -(ＣＨ2ＯＣＨ2)qq-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ37)-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)rr-ＣＨ2-ＣＯＮ
    Ｈ-Ｄm、および-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)ss-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ38)-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2 )tt-ＣＨ2-ＮＨＣＯ-Ｄmからなる群から選択されるものであり；r、t、v、w、x
    、y、mm、nn、pp、uuおよびxxは、1ないし10で変化し、そしてo、s、u、z、oo、
    qq、rr、ss、tt、vvおよびwwは、1ないし100で変化し；Ｄmは、任意のバイオ活
    性ペプチド、抗体、抗体フラグメント、小糖類、薬物、擬態薬物、擬態糖、糖ペ
    プチド、擬態ペプチド、ホルモン、またはその類似物であり；Ｒ2ないしＲ9 は
    同一であってもまたは異なってもよく、そして水素、Ｃ1-Ｃ10アルキル、Ｃ1-Ｃ 10 アリール、ヒドロキシル、Ｃ1-Ｃ10ポリヒドロキシアルキル、Ｃ1-Ｃ10アルコ
    キシル、アミノ、Ｃ1-Ｃ10アミノアルキル、シアノ、ニトロ、およびハロゲンか
    らなる群から選択されるものである。
  2. 【請求項２】 aおよびbが、0ないし3で変化し；Ｑ1が単結合であり；Ｒ1な
    いしＲ9が水素であり；Ｗ1およびＸ1が-ＣＲ10-Ｒ11であり；Ｙ1が、-(ＣＨ2)i-
    ＣＯＮＨ-Ｂm、-(ＣＨ2)k-ＮＨＣＯ-Ｂm、または-(ＣＨ2)m-Ｎ(Ｒ14)-(ＣＨ2)n-
    ＣＯＮＨ-Ｂmであり；Ｚ1が、-(ＣＨ2)r-ＯＨ、-(ＣＨ2)r-ＣＯ2Ｈ、-(ＣＨ2)r-
    ＮＨ2、-(ＣＨ2)t-ＣＯＮＨ-Ｄm、-(ＣＨ2)v-ＮＨＣＯ-Ｄm、-(ＣＨ2)w-Ｎ(Ｒ14 )-(ＣＨ2)x-ＣＯＮＨ-Ｄm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)s-ＣＨ2-ＯＨ、-ＣＨ2-(ＣＨ 2 ＯＣＨ2)s-ＣＨ2-ＣＯ2Ｈ、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)s-ＣＨ2-ＮＨ、-ＣＨ2-(Ｃ
    Ｈ2ＯＣＨ2)u-ＣＨ2-ＣＯＮＨ-Ｄm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)o-ＣＨ2-ＮＨＣＯ-
    Ｄm、または-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)ww-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ40)-(ＣＨ2)xx-ＣＯＮＨ-Ｄm
    であり；そしてＢmが、2-50のモノマーユニットを含有するペプチドまたは小糖
    類、ソマトスタチン、ボンベシン、ニューロテンシン、コレシストキニンおよび
    血管作用性腸管ポリペプチドから選択される腫瘍特異性バイオ分子または擬態薬
    剤である；請求項１に記載の組成物。
  3. 【請求項３】 aおよびbが3であり；Ｑ1が単結合であり；Ｒ1ないしＲ9が水
    素であり；Ｗ1およびＸ1が-Ｃ(ＣＨ3) 2であり；Ｙ1が-(ＣＨ2)i-ＣＯＮＨ-Ｂm
    または-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)j-ＣＨ2-ＣＯＮＨ-Ｂmであって、iは1ないし4で変
    化し；Ｚ1が-(ＣＨ2)r-ＣＯ2Ｈ、-(ＣＨ2)t-ＣＯＮＨ-Ｄm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣ
    Ｈ2)s-ＣＨ2-ＣＯ2Ｈ、または-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)u-ＣＨ2-ＣＯＮＨ-Ｄmであ
    って、rおよびtは1ないし4で変化し；Ｂmが、オクトレオテート(octreotate)お
    よびオクトレオチドからなる群から選択される腫瘍特異性バイオ分子である、請
    求項１に記載の組成物。
  4. 【請求項４】 請求項１の組成物の有効量を個体に投与することを含む、診
    断または治療操作の実施方法。
  5. 【請求項５】 請求項２の組成物の有効量を個体に投与することを含む、診
    断または治療操作の実施方法。
  6. 【請求項６】 請求項３の組成物の有効量を個体に投与することを含む、診
    断または治療操作の実施方法。
  7. 【請求項７】 該操作が、350-1300nmの領域の波長の光を利用するものであ
    る、請求項４ないし請求項６のいずれかに記載の方法。
  8. 【請求項８】 該診断操作が、光学的断層撮影である、請求項４ないし請求
    項６のいずれかに記載の方法。
  9. 【請求項９】 該診断操作が、蛍光内視鏡検査である、請求項４ないし請求
    項６のいずれかに記載の方法。
  10. 【請求項１０】 さらに該バイオコンジュゲートの血液クリアランス特性を
    、350-1300nmの領域の波長の光を利用する蛍光、光吸収または光散乱により、侵
    襲的にまたは非侵襲的にモニターすることを含む、請求項４ないし請求項６のい
    ずれかに記載の方法。
  11. 【請求項１１】 さらに、光吸収、光散乱、光音響、または音響蛍光技術か
    ら選択される造影または治療の段階を含む、請求項４ないし請求項６のいずれか
    に記載の方法。
  12. 【請求項１２】 該操作が、アテローム硬化型プラークまたは凝血の診断を
    含む、請求項４ないし請求項６のいずれかに記載の方法。
  13. 【請求項１３】 該操作が、局部治療の施用を含む、請求項４ないし請求項
    ６のいずれかに記載の方法。
  14. 【請求項１４】 該治療操作が、光力学的治療を含む、請求項４ないし請求
    項６のいずれかに記載の方法。
  15. 【請求項１５】 該治療操作が、小ミクロ転移の検出用のレーザー補助誘導
    手術(laser assisted guided surgery・LAGS)を含む、請求項４ないし請求項６
    のいずれかに記載の方法。
  16. 【請求項１６】 一般式 【化２】 のインドシアニン染料バイオコンジュゲートを含む組成物。 但し、式中、a'およびb'は、0ないし5で変化し；Ｗ2およびＸ2は同一または異な
    り、-ＣＲ10Ｒ11-、-Ｏ-、-ＮＲ12-、-Ｓ-、および-Ｓe-からなる群から選択さ
    れるものであり;Ｑ2は単結合であるかまたは-Ｏ-、-Ｓ-、-Ｓｅ-、および-ＮＲ1 3 -からなる群から選択されるものであり；Ｒ16、Ｒ10からＲ15、およびＲ29-Ｒ4 0 は同一であってもまたは異なってもよく、そして水素、Ｃ1-Ｃ10アルキル、Ｃ1 -Ｃ10アリール、Ｃ1-Ｃ10アルコキシル、Ｃ1-Ｃ10ポリアルコキシアルキル、-Ｃ
    Ｈ2(ＣＨ2ＯＣＨ2)c-ＣＨ2-ＯＨ、Ｃ1-Ｃ20ポリヒドロキシアルキル、Ｃ1-Ｃ10
    ポリヒドロキシアリール、Ｃ1-Ｃ10アミノアルキル、-(ＣＨ2)d-ＣＯ2Ｈ、-(Ｃ
    Ｈ2)e-ＣＯＮＨ-Ｂm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)f-ＣＨ2-ＣＯＮＨ-Ｂm、-(ＣＨ2)g -ＮＨＣＯ-Ｂm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)h-ＣＨ2-ＮＨＣＯ-Ｂm、-(ＣＨ2)yy-Ｏ
    Ｈ、および-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)zz-ＣＨ2-ＯＨからなる群から選択されるもの
    であり；Ｙ2は、-(ＣＨ2)i-ＣＯＮＨ-Ｂm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)j-ＣＨ2-ＣＯ
    ＮＨ-Ｂm、-(ＣＨ2)k-ＮＨＣＯ-Ｂm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)l-ＣＨ2-ＮＨＣＯ-
    Ｂm、-(ＣＨ2)m-Ｎ(Ｒ14)-(ＣＨ2)n-ＣＯＮＨ-Ｂm、-(ＣＨ2)aa-Ｎ(Ｒ29)-(ＣＨ 2 )bb-ＮＨＣＯ-Ｂm、-(ＣＨ2)p-Ｎ(Ｒ15)-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)q-ＣＨ2-ＣＯＮ
    Ｈ-Ｂm、-(ＣＨ2)cc-Ｎ(Ｒ30)-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)dd-ＣＨ2-ＮＨＣＯ-Ｂm、-
    ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)ee-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ31)-(ＣＨ2)ff-ＣＯＮＨ-Ｂm、-ＣＨ2-(Ｃ
    Ｈ2ＯＣＨ2)gg-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ32)-(ＣＨ2)hh-ＮＨＣＯ-Ｂm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ 2 )ii-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ33)-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)jj-ＣＨ2-ＣＯＮＨ-Ｂm、および-Ｃ
    Ｈ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)kk-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ34)-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)ll-ＣＨ2-ＮＨＣ
    Ｏ-Ｂmからなる群から選択されるものであり；d、e、g、i、k、m、n、p、aa、bb
    、cc、ff、hhおよびyyは、1ないし10で変化し；c、f、h、j、l、q、dd、ee、gg
    、ii、jj、kk、llおよびzzは、1ないし100で変化し；Ｂmは任意のバイオ活性ペ
    プチド、タンパク質、細胞、小糖類、糖ペプチド、擬態ペプチド、薬物、擬態薬
    物、ホルモン、金属キレート剤、放射性または非放射性金属錯体、またはエコー
    発生剤であり；Ｚ2は、-(ＣＨ2)r-ＣＯ2Ｈ、-(ＣＨ2)r-ＯＨ、-(ＣＨ2)r-ＮＨ、
    -ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)s-ＣＨ2-ＣＯ2Ｈ、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)s-ＣＨ2-ＯＨ
    、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)s-ＣＨ2-ＮＨ2、-(ＣＨ2)t-ＣＯＮＨ-Ｄm、-ＣＨ2-(Ｃ
    Ｈ2ＯＣＨ2)u-ＣＨ2-ＣＯＮＨ-Ｄm、-(ＣＨ2)v-ＮＨＣＯ-Ｄm、-ＣＨ2-(ＣＨ2Ｏ
    ＣＨ2)o-ＣＨ2-ＮＨＣＯ-Ｄm、-(ＣＨ2)w-Ｎ(Ｒ14)-(ＣＨ2)x-ＣＯＮＨ-Ｄm、-(
    ＣＨ2)mm-Ｎ(Ｒ35)-(ＣＨ2)nn-ＮＨＣＯ-Ｄm、-(ＣＨ2)y-Ｎ(Ｒ15)-ＣＨ2-(ＣＨ 2 ＯＣＨ2)z-ＣＨ2-ＣＯＮＨ-Ｄm、-(ＣＨ2)uu-Ｎ(Ｒ39)-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)v v -ＣＨ2-ＮＨＣＯ-Ｄm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)ww-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ40)-(ＣＨ2)xx-
    ＣＯＮＨ-Ｄm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)oo-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ36)-(ＣＨ2)pp-ＮＨＣＯ-
    Ｄm、-ＣＨ2 -(ＣＨ2ＯＣＨ2)qq-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ37)-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)rr-ＣＨ 2 -ＣＯＮＨ-Ｄm、および-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)ss-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ38)-ＣＨ2-(ＣＨ 2 ＯＣＨ2)tt-ＣＨ2-ＮＨＣＯ-Ｄmからなる群から選択されるものであり；r、t、
    v、w、x、y、mm、nn、pp、uuおよびxxは、1ないし10で変化し、そしてo、s、u、
    z、oo、qq、rr、ss、tt、vvおよびwwは、1ないし100で変化し；Ｄmは、任意のバ
    イオ活性ペプチド、抗体、抗体フラグメント、小糖類、薬物、擬態薬物、擬態糖
    、糖ペプチド、擬態ペプチド、ホルモン、またはその類似物であり；Ｒ17ないし
    Ｒ29 は同一であってもまたは異なってもよく、そして水素、Ｃ1-Ｃ10アルキル
    、Ｃ1-Ｃ10アリール、ヒドロキシル、Ｃ1-Ｃ10ポリヒドロキシアルキル、Ｃ1-Ｃ 10 アルコキシル、アミノ、Ｃ1-Ｃ10アミノアルキル、シアノ、ニトロ、およびハ
    ロゲンからなる群から選択されるものである。
  17. 【請求項１７】 a'およびb'が、0ないし3で変化し；Ｑ2が単結合であり；
    Ｒ16ないしＲ28が水素であり；Ｗ2およびＸ2が-ＣＲ10-Ｒ11であり；Ｙ2が、-(
    ＣＨ2)i-ＣＯＮＨ-Ｂm、-(ＣＨ2)k-ＮＨＣＯ-Ｂm、または-(ＣＨ2)m-Ｎ(Ｒ14)-(
    ＣＨ2)n-ＣＯＮＨ-Ｂmであり；Ｚ2が、-(ＣＨ2)r-ＣＯ2Ｈ、-(ＣＨ2)r-ＮＨ2、-
    (ＣＨ2)r-ＯＨ、-(ＣＨ2)t-ＣＯＮＨ-Ｄm、-(ＣＨ2)v-ＮＨＣＯ-Ｄm、-(ＣＨ2)w -Ｎ(Ｒ14)-(ＣＨ2)x-ＣＯＮＨ-Ｄm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)s-ＣＨ2-ＣＯ2Ｈ、-
    ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)s-ＣＨ2-ＮＨ、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)s-ＣＨ2-ＯＨ、-Ｃ
    Ｈ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)u-ＣＨ2-ＣＯＮＨ-Ｄm、-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)o-ＣＨ2-Ｎ
    ＨＣＯ-Ｄm、または-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)ww-ＣＨ2-Ｎ(Ｒ40)-(ＣＨ2)xx-ＣＯ
    ＮＨ-Ｄmであり；そしてＢmが、2-50のモノマーユニットを含有するペプチドお
    よび小糖類からなる群から選択される腫瘍特異性バイオ分子または擬態薬剤であ
    る；請求項１６に記載の組成物。
  18. 【請求項１８】 a'およびb'が3であり；Ｑ2が単結合であり；Ｒ16ないしＲ 28 が水素であり；Ｗ2およびＸ2が-Ｃ(ＣＨ3) 2であり；Ｙ2が-(ＣＨ2)i-ＣＯＮ
    Ｈ-Ｂmまたは-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)j-ＣＨ2-ＣＯＮＨ-Ｂmであって、iは1ない
    し4で変化し；Ｚ2が、-(ＣＨ2)r-ＣＯ2Ｈ、-(ＣＨ2)t-ＣＯＮＨ-Ｄm、-ＣＨ2-(
    ＣＨ2ＯＣＨ2)s-ＣＨ2-ＣＯ2Ｈ、または-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)u-ＣＨ2-ＣＯＮ
    Ｈ-Ｄmであって、但しrおよびtは1ないし4で変化し；Ｂmが、オクトレオテート(
    octreotate)およびオクトレオチドからなる群から選択される腫瘍特異性バイオ
    分子である、請求項１６に記載の組成物。
  19. 【請求項１９】 請求項１６の組成物の有効量を個体に投与することを含む
    、診断または治療操作の実施方法。
  20. 【請求項２０】 請求項１７の組成物の有効量を個体に投与することを含む
    、診断または治療操作の実施方法。
  21. 【請求項２１】 請求項１８の組成物の有効量を個体に投与することを含む
    、診断または治療操作の実施方法。
  22. 【請求項２２】 該操作が、350-1300nmの領域の波長の光を利用するもので
    ある、請求項１９ないし請求項２１のいずれかに記載の方法。
  23. 【請求項２３】 該診断操作が、光学的断層撮影である、請求項１９ないし
    請求項２１のいずれかに記載の方法。
  24. 【請求項２４】 該診断操作が、蛍光内視鏡検査である、請求項１９ないし
    請求項２１のいずれかに記載の方法。
  25. 【請求項２５】 さらに該バイオコンジュゲートの血液クリアランス特性を
    、350-1300nmの領域の波長の光を利用する蛍光、光吸収または光散乱により、侵
    襲的にまたは非侵襲的にモニターすることを含む、請求項１９ないし請求項２１
    のいずれかに記載の方法。
  26. 【請求項２６】 さらに、光吸収、光散乱、光音響、または音響蛍光技術か
    ら選択される造影または治療の段階を含む、請求項１９ないし請求項２１のいず
    れかに記載の方法。
  27. 【請求項２７】 該操作が、アテローム硬化型プラークまたは凝血の診断を
    含む、請求項１９ないし請求項２１のいずれかに記載の方法。
  28. 【請求項２８】 該操作が、局部治療の施用を含む、請求項１９ないし請求
    項２１のいずれかに記載の方法。
  29. 【請求項２９】 該治療操作が、光力学的治療を含む、請求項１９ないし請
    求項２１のいずれかに記載の方法。
  30. 【請求項３０】 該治療操作が、小ミクロ転移の検出用のレーザー補助誘導
    手術(laser assisted guided surgery・LAGS)を含む、請求項１９ないし請求項
    ２１のいずれかに記載の方法。
  31. 【請求項３１】 生体適合性有機溶媒1ないし50％を、染料分子の診断用ま
    たは治療用組成物に加えることを含む、インビボまたはインビトロの蛍光消光の
    防止方法。
  32. 【請求項３２】 該染料分子が、ジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)1ないし5
    0％を含む媒体に溶解している、請求項３１に記載の方法。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005524090A (ja) * 2002-04-29 2005-08-11 アマシャム・バイオサイエンス・コーポレイション 生物学的試料のための光線画像分析
WO2011043061A1 (ja) 2009-10-05 2011-04-14 キヤノン株式会社 光音響イメージング用造影剤、及び、それを用いた光音響イメージング方法
WO2013035750A1 (ja) * 2011-09-05 2013-03-14 Maeda Hiroshi 高分子型蛍光分子プローブ
KR101440109B1 (ko) 2013-01-29 2014-09-12 부경대학교 산학협력단 위장관암의 림프절 전이 검출용 광음향 단층촬영 시스템
JP2016506420A (ja) * 2012-10-24 2016-03-03 ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニーＢｅｃｔｏｎ， Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ ヒドロキサメート置換アザインドリン−シアニン染料およびそのバイオ複合体

Families Citing this family (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7175953B2 (en) * 1999-04-09 2007-02-13 Institute Fuer Diagnostik Forschung Short-warp peptide-dye conjugate as contrast agent for optical diagnostic
US6630570B1 (en) * 1999-04-09 2003-10-07 Insitut für Diagnostikforschung GmbH Short-chain peptide-dye conjugates as contrast media for optical diagnosis
US20050182434A1 (en) * 2000-08-11 2005-08-18 National Research Council Of Canada Method and apparatus for performing intra-operative angiography
US7351807B2 (en) * 2000-01-18 2008-04-01 Mallinckrodt Inc. Cyanine-sulfenates for dual phototherapy
US6190641B1 (en) * 2000-01-18 2001-02-20 Mallinckrodt Inc. Indocyanine dyes
US7230088B2 (en) * 2001-07-03 2007-06-12 Mallinckrodt, Inc. Compounds for dual photodiagnosis and therapy
US6180085B1 (en) * 2000-01-18 2001-01-30 Mallinckrodt Inc. Dyes
US7790144B2 (en) * 2000-01-18 2010-09-07 Mallinckrodt Inc. Receptor-avid exogenous optical contrast and therapeutic agents
US20030017164A1 (en) * 2001-07-03 2003-01-23 Mallinckrodt Inc. Dye-azide compounds for dual phototherapy
US7556797B2 (en) * 2000-10-16 2009-07-07 Mallinckrodt Inc. Minimally invasive physiological function monitoring agents
US6673334B1 (en) * 2000-10-16 2004-01-06 Mallinkcrodt, Inc. Light sensitive compounds for instant determination of organ function
US6838074B2 (en) 2001-08-08 2005-01-04 Bristol-Myers Squibb Company Simultaneous imaging of cardiac perfusion and a vitronectin receptor targeted imaging agent
US20030105300A1 (en) * 2001-10-17 2003-06-05 Mallinckrodt Inc. Tumor targeted photodiagnostic-phototherapeutic agents
IL148921A0 (en) * 2002-03-26 2002-09-12 Peptor Ltd Photo active backbone cyclized somatostatin analogs for optical imaging and photodynamic therapy
US20040022731A1 (en) * 2002-04-26 2004-02-05 Alexei Bogdanov In vivo imaging of apoptosis
JP2004163413A (ja) * 2002-08-28 2004-06-10 Carl-Zeiss-Stiftung Trading As Carl Zeiss 顕微鏡システムおよび顕微鏡検査方法
US7303741B2 (en) * 2002-09-23 2007-12-04 General Electric Company Systems and methods for high-resolution in vivo imaging of biochemical activity in a living organism
US7226577B2 (en) 2003-01-13 2007-06-05 Bracco Imaging, S. P. A. Gastrin releasing peptide compounds
DE10302787A1 (de) * 2003-01-24 2004-08-12 Schering Ag Hydrophile, Thiol-reaktive Cyaninfarbstoffe und deren Konjugate mit Biomolekülen für die Fluoreszenzdiagnostik
JP2006522102A (ja) * 2003-03-10 2006-09-28 エムピーエイ・テクノロジーズ・インコーポレイテッド 光診断法および光線力学的療法の両方のためのターゲット剤
US7850946B2 (en) * 2003-05-31 2010-12-14 Washington University In St. Louis Macrocyclic cyanine and indocyanine bioconjugates provide improved biomedical applications
NO20035682D0 (no) * 2003-12-18 2003-12-18 Amersham Health As Optisk avbildning av ösofagkreft og Barretts ösofag
NO20035683D0 (no) * 2003-12-18 2003-12-18 Amersham Health As Optisk avbildning av prostatakreft
NO20035681D0 (no) * 2003-12-18 2003-12-18 Amersham Health As Optisk avbildning av lungekreft
DE102004022628A1 (de) * 2004-05-07 2005-12-15 Sensient Imaging Technologies Gmbh FRET-Bioassay
US20050272967A1 (en) * 2004-05-18 2005-12-08 Siemens Aktiengesellschaft Biomolecular contrast agents with multiple signal variance for therapy planning and control in radiation therapy with proton or ion beams
US7585492B2 (en) * 2004-05-18 2009-09-08 Siemens Aktiengesellschaft Biomolecular contrast agents for therapy success and dose monitoring in radiation therapy with proton or ion beams
US20050259779A1 (en) * 2004-05-18 2005-11-24 Siemens Aktiengesellschaft Biomolecular contrast agents for therapy optimization in radiation therapy with proton or ion beams
US20060239916A1 (en) * 2005-01-07 2006-10-26 Kai Licha Use of cyanine dyes for the diagnosis of proliferative diseases
US20070122344A1 (en) 2005-09-02 2007-05-31 University Of Rochester Medical Center Office Of Technology Transfer Intraoperative determination of nerve location
US20080161744A1 (en) 2006-09-07 2008-07-03 University Of Rochester Medical Center Pre-And Intra-Operative Localization of Penile Sentinel Nodes
GB0714202D0 (en) * 2007-07-20 2007-08-29 Ge Healthcare Bio Sciences Ab Isoelectric point markers
US8406860B2 (en) 2008-01-25 2013-03-26 Novadaq Technologies Inc. Method for evaluating blush in myocardial tissue
US20090214436A1 (en) 2008-02-18 2009-08-27 Washington University Dichromic fluorescent compounds
EP2100621A1 (en) 2008-03-10 2009-09-16 mivenion GmbH Polyether polyol dendron conjugates with effector molecules for biological targeting
US10219742B2 (en) 2008-04-14 2019-03-05 Novadaq Technologies ULC Locating and analyzing perforator flaps for plastic and reconstructive surgery
ES2671710T3 (es) 2008-05-02 2018-06-08 Novadaq Technologies ULC Métodos para la producción y uso de eritrocitos cargados con sustancias para la observación y el tratamiento de la hemodinámica microvascular
WO2010129258A2 (en) 2009-04-27 2010-11-11 Mallinckrodt Inc. Tissue sealant compositions, vascular closure devices, and uses thereof
US10492671B2 (en) 2009-05-08 2019-12-03 Novadaq Technologies ULC Near infra red fluorescence imaging for visualization of blood vessels during endoscopic harvest
WO2012054784A1 (en) 2010-10-20 2012-04-26 Li-Cor, Inc. Fluorescent imaging with substituted cyanine dyes
EP2686385B1 (en) 2011-03-15 2019-01-16 Ramot at Tel Aviv University, Ltd. Activatable fluorogenic compounds and uses thereof as near infrared probes
US10230943B2 (en) 2012-01-23 2019-03-12 Washington University Goggle imaging systems and methods
CA2914778A1 (en) 2012-06-21 2013-12-27 Novadaq Technologies Inc. Quantification and analysis of angiography and perfusion
CA2963987A1 (en) 2014-09-29 2016-04-07 Novadaq Technologies Inc. Imaging a target fluorophore in a biological material in the presence of autofluorescence
KR102012880B1 (ko) 2014-10-09 2019-08-22 노바다크 테크놀러지즈 유엘씨 형광-조정 광전용적맥파 측정기를 사용한 조직 내의 절대적인 혈류의 정량화
WO2016179350A1 (en) 2015-05-06 2016-11-10 Washington University Compounds having rd targeting motifs and methods of use thereof
US11140305B2 (en) 2017-02-10 2021-10-05 Stryker European Operations Limited Open-field handheld fluorescence imaging systems and methods
WO2021119423A1 (en) 2019-12-13 2021-06-17 Washington University Near infrared fluorescent dyes, formulations and related methods
WO2023227601A1 (en) 2022-05-23 2023-11-30 Helmholtz Zentrum München - Deutsches Forschungszentrum für Gesundheit und Umwelt (GmbH) Near-infrared fluorescent heptamethine dye conjugates with favorable bleaching properties

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5745457A (en) * 1980-09-02 1982-03-15 Fuji Photo Film Co Ltd Microimmunological measuring method
JPH05333026A (ja) * 1992-05-29 1993-12-17 Ibiden Co Ltd 免疫測定用標識試薬
JPH06118081A (ja) * 1992-10-06 1994-04-28 Ibiden Co Ltd 蛍光標識試薬および蛍光免疫測定法
WO1997026920A2 (de) * 1996-01-23 1997-07-31 Deutsches Krebsforschungszentrum Konjugat zur unterscheidung von krankhaftem und gesundem gewebe

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5453505A (en) 1994-06-30 1995-09-26 Biometric Imaging, Inc. N-heteroaromatic ion and iminium ion substituted cyanine dyes for use as fluorescence labels
DE4445065A1 (de) 1994-12-07 1996-06-13 Diagnostikforschung Inst Verfahren zur In-vivo-Diagnostik mittels NIR-Strahlung
US5962424A (en) * 1995-02-21 1999-10-05 Arch Development Corporation Methods and compositions for targeting selectins
WO1997033620A2 (de) * 1996-03-15 1997-09-18 Pulsion Verw. Gmbh & Co. Medical Systems Kg Verbindungen zur behandlung von tumoren
DE19649971A1 (de) * 1996-11-19 1998-05-28 Diagnostikforschung Inst Optische Diagnostika zur Diagnostik neurodegenerativer Krankheiten mittels Nahinfrarot-Strahlung (NIR-Strahlung)
JP2001526650A (ja) 1997-04-29 2001-12-18 ニユコメド・イメージング・アクシエセルカペト 光画像造影剤
EP0979103B1 (en) 1997-04-29 2004-01-02 Amersham Health AS Light imaging contrast agents
EP2283872A3 (en) * 1998-04-03 2011-02-23 Mallinckrodt Inc. Non-covalent bioconjugates useful for diagnosis and therapy
AU2412800A (en) * 1999-01-15 2000-08-01 Light Sciences Corporation Noninvasive vascular therapy
US6602274B1 (en) * 1999-01-15 2003-08-05 Light Sciences Corporation Targeted transcutaneous cancer therapy
JP2002534483A (ja) * 1999-01-15 2002-10-15 ライト サイエンシーズ コーポレイション 代謝性骨障害または骨転移のための治療的組成物

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5745457A (en) * 1980-09-02 1982-03-15 Fuji Photo Film Co Ltd Microimmunological measuring method
JPH05333026A (ja) * 1992-05-29 1993-12-17 Ibiden Co Ltd 免疫測定用標識試薬
JPH06118081A (ja) * 1992-10-06 1994-04-28 Ibiden Co Ltd 蛍光標識試薬および蛍光免疫測定法
WO1997026920A2 (de) * 1996-01-23 1997-07-31 Deutsches Krebsforschungszentrum Konjugat zur unterscheidung von krankhaftem und gesundem gewebe

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005524090A (ja) * 2002-04-29 2005-08-11 アマシャム・バイオサイエンス・コーポレイション 生物学的試料のための光線画像分析
WO2011043061A1 (ja) 2009-10-05 2011-04-14 キヤノン株式会社 光音響イメージング用造影剤、及び、それを用いた光音響イメージング方法
WO2013035750A1 (ja) * 2011-09-05 2013-03-14 Maeda Hiroshi 高分子型蛍光分子プローブ
JPWO2013035750A1 (ja) * 2011-09-05 2015-03-23 前田　浩 高分子型蛍光分子プローブ
JP2016128487A (ja) * 2011-09-05 2016-07-14 一般財団法人バイオダイナミックス研究所 高分子型蛍光分子プローブ
US9636426B2 (en) 2011-09-05 2017-05-02 Hiroshi Maeda Polymer-type fluorescent molecule probe
US10946109B2 (en) 2011-09-05 2021-03-16 Hiroshi Maeda Polymer-type fluorescent molecule probe
JP2016506420A (ja) * 2012-10-24 2016-03-03 ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニーＢｅｃｔｏｎ， Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ ヒドロキサメート置換アザインドリン−シアニン染料およびそのバイオ複合体
KR101440109B1 (ko) 2013-01-29 2014-09-12 부경대학교 산학협력단 위장관암의 림프절 전이 검출용 광음향 단층촬영 시스템

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