ES2329542T3 - Bioconjugados de colorante de cianina e indocianina para aplicaciones biomedicas. - Google Patents

Bioconjugados de colorante de cianina e indocianina para aplicaciones biomedicas. Download PDF

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ES2329542T3 ES00926343T ES00926343T ES2329542T3 ES 2329542 T3 ES2329542 T3 ES 2329542T3 ES 00926343 T ES00926343 T ES 00926343T ES 00926343 T ES00926343 T ES 00926343T ES 2329542 T3 ES2329542 T3 ES 2329542T3
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Richard Bradley Dorshow
Joseph Edward Bugaj
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Abstract

Un bioconjugado de colorante de cianina de fórmula **(Ver fórmula)** en donde a y b varían de 0 a 5; W1 y X1 pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan del grupo constituido por -CR10R11, -O-, -NR12, -S-, o -Se; Q1 es un enlace simple o se selecciona del grupo constituido por -O- -S-, -Se-, y -NR13; R1, R10 a R15, y R29-R40 pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan del grupo constituido por hidrógeno, alquilo C1-C10, arilo C1-C10, alcoxilo C1-C10, polialcoxialquilo C1-C10, -CH2(CH2OCH2)c-CH2-OH, polihidroxialquilo C1-C20, polihidroxiarilo C1-C10, aminoalquilo C1-C10, -(CH2)d-CO2H, -(CH2)e-CONH-Bm, -CH2-(CH2OCH2)f- CH2-CONH-Bm, -(CH2)g-NHCO-Bm, -CH2-(CH2OCH2)h-CH2-NHCO-Bm, -(CH2yy-OH o -CH2-(CH2OCH2)zz-CH2- OH; Y1 se selecciona del grupo constituido por (CH2)i-CONH-Bm, -CH2-(CH2OCH2)j-CH2-CONH-Bm, -(CH2)k- NHCO-Bm, -CH2-(CH2OCH2)i-CH2-NHCO-Bm, -(CH2)m-N(R14)-(CH2)n-CONH-Bm, (CH2)aa-N(R29)-(CH2)bb-NHCO- Bm, -(CH2)p-N(R15)-CH2-(CH2OCH2)q-CH2-CONH-Bm, -(CH2)cc-N(R30)-CH2-(CH2OCH2)dd-CH2-NHCO-Bm, -CH2-(CH2OCH2)ee-CH2-N(R31)-(CH2)ff -CONH-Bm, -CH2-(CH2OCH2)gg-CH2-N(R32)-(CH2)hh-NHCO-Bm, -CH2- (CH2OCH2)ii -CH2 -N(R33)-CH2-(CH2OCH2)JJ -CH2 -CONH-Bm o -CH2-(CH2O-CH2)kk -CH2 -N(R34)-CH2-(CH2 OCH2)ll-CH2-NHCO-BM; d, e, g, i, k, m, n, p, aa, bb, cc, ff, hh e yy varían de 1 a 10; c, f, h, j, l, q, dd, ee, gg, ii, jj, kk, ll y zz varían de 1 a 100; Bm es cualquier péptido bioactivo, proteína, célula, oligosacárido, glicopéptido, peptidomimético, fármaco, mimético de fármaco, hormona, agente quelante de metales, complejo metálico radiactivo o no radiactivo, o agente ecogénico; Z1 se selecciona del grupo constituido por -(CH2)r-CO2H, (CH2)r-OH, -(CH2)r-NH2, -CH2-(CH2OCH2)s-CH2-CO2H, -CH2-(CH2OCH2)s-CH2-OH, -CH2-(CH2OCH2)s-CH2-NH2, -(CH2)t- CONH-Dm, -CH2-(CH2OCH2)u -CH2 -CONH-Dm, -(CH2)v -NHCO-Dm, -CH2-(CH2OCH2)o -CH2 -NHCO-Dm, -(CH2)w-N(R14)-(CH2)x-CONH-Dm, -(CH2)mm-N(R35)-(CH2nn-NHCO-Dm, -(CH2)y-N(R15)-CH2-(CH2OCH2)z-CH2- CONH-Dm, -(CH2uu-N(R39)-CH2-(CH2OCH2)vv-CH2-NHCO-Dm, -CH2-(CH2OCH2)ww-CH2-N(R40)-(CH2)xx-CONHDm, -CH2-(CH2OCH2)oo-CH2-N(R36)-(CH2)pp-NHCO-Dm, -CH2-(CH2OCH2)qq-CH2-N(R37)-(CH2)-(CH2OCH2)rr- CH2-CONH-Dm o -CH2-(CH2OCH2)ss-CH2-N(R38)-(CH2)tt-NHCO-Dm; r, t, v, w, x, y, mm, nn, pp, uu y xx varían de 1 a 10, y o, s, u, z, oo, qq, rr, ss, tt, vv y ww varían de 1 a 100; y Dm es cualquier péptido bioactivo, anticuerpo, fragmento de anticuerpo, oligosacárido, fármaco, mimético de fármaco, glicomimético, glicopéptido, peptidomimético, hormona, y análogos; R2 a R9 pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan del grupo constituido por hidrógeno, alquilo C1-C10, arilo C1-C10, hidroxilo, polihidroxialquilo C1-C10, alcoxilo C1-C10, amino, aminoalquilo C1-C10, ciano, nitro, o halógeno.

Description

Bioconjugados de colorante de cianina e indocianina para aplicaciones biomédicas.
Campo de la invención
Esta invención se refiere en general a nuevos bioconjugados de colorantes para uso en diagnosis y terapia. Particularmente, esta invención se refiere a bioconjugados de colorantes de cianina para propósitos ópticos tomográficos, endoscópicos, fotoacústicos, sonofluorescentes, de cirugía guiada asistida por láser, y terapéuticos. De modo más particular, esta invención se refiere al uso de bioconjugados de colorantes de cianina para visualización y detección de tumores.
Antecedentes de la invención
Varios colorantes que absorben y emiten luz en la región visible y del infrarrojo próximo del espectro electromagnético están siendo utilizados actualmente para diversas aplicaciones biomédicas debido a su biocompatibilidad, alta absortividad molar, o altos rendimientos cuánticos de fluorescencia. Esta alta sensibilidad corre parejas con la de la medicina nuclear y permite la visualización de órganos y tejidos sin el efecto negativo de la radiación ionizante. La mayoría de los colorantes carecen de especificidad para órganos o tejidos particulares y, por esta razón, estos colorantes deben fijarse a portadores bioactivos tales como proteínas, péptidos, carbohidratos, y análogos para suministrar los colorantes a regiones específicas del cuerpo. Varios estudios concernientes al uso de colorantes en el infrarrojo próximo y conjugados colorante-biomolécula han sido publicados (Patonay et al.,1991; Slavik, 1994; Brinkley, 1993; Lee y Woo, Patente de EE.UU. No. 5,453,505; Hohenschuh, WO 98/48846; Turner et al., WO 98/22146; Licha et al., WO 96/17628; y Snow et al., WO 98/48838). De particular interés es el direccionamiento de células tumorales con anticuerpos u otros vehículos proteínicos de gran tamaño como vehículos de suministro (Becker, et al., 1999). Un enfoque de este tipo ha sido utilizado ampliamente en aplicaciones de medicina nuclear, y la principal ventaja es la retención de una especificidad de tejido del vehículo dado que el volumen molecular del colorante es sustancialmente menor que el vehículo. Sin embargo, este enfoque presenta algunas limitaciones importantes en el sentido de que la dispersión de los bioconjugados de peso molecular alto a las células tumorales es altamente desfavorable, y se ve complicado adicionalmente por la presión positiva neta en los tumores sólidos (Jain, 1994). Adicionalmente, muchos colorantes en general, y los colorantes de cianina en particular, tienden a formar agregados en medios acuosos que conducen a extinción de la fluorescencia. Por esta razón, hay necesidad de pre- parar conjugados colorante-molécula de peso molecular bajo a fin de mejorar la detección de los tumores, y preparar nuevas composiciones colorantes para preservar la eficiencia de la fluorescencia de las moléculas colorantes.
Las publicaciones y otros materiales utilizados en esta memoria para respaldar los antecedentes de la invención o proporcionar detalles adicionales con respecto a la práctica se agrupan respectivamente por conveniencia en la Lista de Referencias adjunta.
Sumario de la invención
La invención se refiere a bioconjugados de colorantes como se indican en las reivindicaciones adjuntas.
La presente invención se refiere particularmente a bioconjugados de colorantes de cianina de fórmula general I en donde a y b varían de 0 a 5; W^{1} y X^{1} pueden ser
1
iguales o diferentes y se seleccionan del grupo constituido por -CR^{10}R^{11}, -O-, -NR^{12}, -S-, o -Se; Q^{1} es un enlace simple o se selecciona del grupo constituido por -O-, -S-, -Se-, y -NR^{13}; R^{1}, R^{10} a R^{15}, y R^{29}-R^{40} pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan del grupo constituido por hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{10}, arilo C_{1}-C_{10}, alcoxilo C_{1}-C_{10}, polialcoxialquilo C_{1}-C_{10}, -CH_{2}(CH_{2}OCH_{2})_{c}-CH_{2}-OH, polihidroxialquilo C_{1}-C_{20}, polihidroxiarilo C_{1}-C_{10}, aminoalquilo C_{1}-C_{10}, -(CH_{2})_{d}-CO_{2}H, -(CH_{2})_{e}-CONH-Bm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{f}-CH_{2}-CONH-Bm, -(CH_{2})_{g}-NHCO-Bm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{h}-CH_{2}-NHCO-Bm, -(CH_{2})_{yy}-OH o -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{zz}-CH_{2}-OH; Y^{1} se selecciona del grupo constituido por (CH_{2})_{i}-CONH-Bm,
-CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{j}-CH_{2}-CONH-Bm, -(CH_{2})_{k}-NHCO-Bm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{l}-CH_{2}-NHCO-Bm, -(CH_{2})_{m}N(R^{14})-
(CH_{2})_{n}-CONH-Bm, -(CH_{2})_{aa}-N(R^{29})-(CH_{2})_{bb}-NHCO-Bm, -(CH_{2})_{p}N(R^{15})-CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{q}-CH_{2}-CONH-Bm,
-(CH_{2})_{cc}-N(R^{30})-CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{dd}-CH_{2}-NHCO-Bm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{ee}-CH_{2}-N(R^{31})-(CH_{2})_{ff}-CONH-Bm, -CH_{2}-
(CH_{2}OCH_{2})_{gg}-CH_{2}-N(R^{32})-(CH_{2})_{hh}-NHCO-Bm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{ii}-CH_{2}-N(R^{33})-CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{jj}-CH_{2}-CONH-Bm o -CH_{2}-(CH_{2}O-CH_{2})_{kk}-CH_{2}-N(R^{34})-CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{ll}-CH_{2}-NHCO-BM; d, e, g, i, k, m, n, p, aa, bb, cc, ff, hh e yy varían de 1 a 10; c, f, h, j, l, q, dd, ee, gg, ii, jj, kk, ll y zz varían de 1 a 100; Bm es cualquier péptido bioactivo, proteína, célula, oligosacárido, glicopéptido, peptidomimético, fármaco, mimético de fármaco, hormona, agente quelante de metales, complejo metálico radiactivo o no radiactivo, o agente ecogénico; Z^{1} se selecciona del grupo constituido por -(CH_{2})_{r}-CO_{2}H, -(CH_{2})_{r}-OH, -(CH_{2})_{r}-NH_{2}, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{s}-CH_{2}-CO_{2}H, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{s}-CH_{2}-OH, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{s}-CH_{2}-NH_{2}, -(CH_{2})_{t}-CONH-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{u}-CH_{2}-CONH-Dm, -(CH_{2})_{v}-NHCO-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2}Ç)_{o}-CH_{2}-NHCO-Dm, -(CH_{2})_{w}N(R^{14})-(CH_{2})_{x}-CONH-Dm, -(CH_{2})_{mm}-N(R^{35})-(CH_{2})_{nn}-NHCO-Dm, -(CH_{2})_{y}-N(R^{15})-CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{z}-CH_{2}-CONH-Dm, -(CH_{2})_{uu}-N(R^{39})-CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{vv}-CH_{2}-NHCO-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}
OCH_{2})_{ww}-CH_{2}-N(R^{40})-(CH_{2})_{xx}-CONH-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{oo}-CH_{2}-N(R^{36})-(CH_{2})_{pp}-NHCO-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}
OCH_{2})_{qq}-CH_{2}-N(R^{37})-(CH_{2})-(CH_{2}OCH_{2})_{rr}-CH_{2}-CONH-Dm o -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{ss}-CH_{2}-N(R^{38})-(CH_{2})_{tt}-NHCO-Dm; r, t, v, w, x, y, mm, nn, pp, uu y xx varían de 1 a 10, y o, s, u, z, oo, qq, rr, ss, tt, vv y ww varían de 1 a 100; y Dm es cualquier péptido bioactivo, anticuerpo, fragmento de anticuerpo, oligosacárido, fármaco, mimético de fármaco, glicomimético, glicopéptido, peptido-mimético, hormona, y análogos; R^{2} a R^{9} pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan del grupo constituido por hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{10}, arilo C_{1}-C_{10}, hidroxilo, polihidroxialquilo C_{1}-C_{10}, alcoxilo C_{1}-C_{10}, amino, aminoalquilo C_{1}-C_{10}, ciano, nitro, o halógeno.
La presente invención se refiere también a bioconjugados de colorantes de cianina de fórmula general 2 en donde a' y b' se definen de la misma manera que a y b; W^{2} y X^{2} se definen de la misma manera que W^{1} y X^{1}; Q^{2} se define de la misma manera que Q^{1}; R^{16} se define de la misma manera que R^{1}; Y^{2} se define de la misma manera que Y^{1}; Z^{2} se define de la misma manera que Z^{1}; y R^{17} a R^{28} se definen de la misma manera que R^{2}.
Es sabido que los colorantes de cianina forman generalmente agregados en medios acuosos que conducen a extinción de la fluorescencia. Este problema se ve acentuado adicionalmente por la conjugación de grandes colorantes hidrófobos a péptidos de bajo peso molecular. Se ha observado que la adición de un disolvente orgánico biocompatible tal como dimetilsulfóxido al 1-50% (DMSO) a una composición diagnóstica o terapéutica de los compuestos descritos en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 restablecía la fluorescencia por evitación de la agregación y permitía la visualización de tumores.
2
En una realización de la invención, los conjugados colorante-péptido son útiles para aplicaciones ópticas, tomográficas, endoscópicas, fotoacústicas y sonofluorescentes para la detección y el tratamiento de tumores y otras anormalidades.
En otro aspecto de la invención, los conjugados colorante-péptido de la invención son útiles para terapia localizada.
En otro aspecto adicional de la invención, los conjugados colorante-péptido de la invención son útiles para la detección de la presencia de tumores y otras anormalidades por monitorización del perfil de aclaramiento de la sangre de los conjugados.
En una realización adicional de la invención, los conjugados colorante-péptido son útiles para cirugía guiada asistida por láser para la detección de pequeñas micrometástasis de v.g. tumores positivos a la somatostatina subtipo 2 (SST-2) por laparoscopia.
En otro aspecto adicional de la invención, los conjugados colorante-péptido de esta invención son útiles para diagnosis de placas ateroescieróticas y coágulos de sangre.
Breve descripción de las figuras
El archivo de la patente U.S. correspondiente contiene al menos un dibujo realizado en color. Copias de esta patente con los dibujo(s) en color serán proporcionadas por la Oficina de Patentes y Marcas Comerciales de los EE.UU. a solicitud y previo pago de los honorarios pertinentes.
Las Figuras 1A-F representan imágenes obtenidas 2 minutos y 30 minutos después de la inyección de verde de indocianina en ratas con diversos tumores. Las Figuras 1A-B son imágenes de una rata con un tumor de adenocarcinoma pancreático ductal inducido (DSL 6A) obtenidas 2 minutos (Figura 1A) y 30 minutos (Figura 1B) después de la inyección. Las Figuras 1C-D son imágenes de una rata con un tumor de carcinoma prostático inducido (R3327-H) obtenidas 2 minutos (Figura 1C) y 30 minutos (Figura 1D) después de la inyección. Las Figuras 1E-1F son imágenes de una rata con un carcinoma pancreático acinar inducido (CA20948) que expresaba el receptor de SST-2 obtenidas 2 minutos (Figura 1E) y 30 minutos (Figura 1F) después de la inyección.
Las Figuras 2A-B muestran una comparación de la absorción de verde de indocianina y Citato 1 a los 45 minutos después de la inyección en ratas con el acinoma pancreático acinar (CA20948).
Las Figuras 3A-B muestran imágenes de ratas con el acinoma pancreático acinar (CA20948) 90 minutos (Figura 3A) y 19 horas (Figura 3B) después de la inyección de Citato 1.
Las Figuras 4A-B muestran imágenes que comparan partes seleccionadas de tejidos de una rata con el carcinoma pancreático acinar (CA20948) 22 horas después de la inyección con Citato 1 (Figura 4A) y las mismas partes de tejidos obtenidas en una rata no inyectada (Figura 4B).
La Figura 5 es una imagen de órganos individuales tomados de una rata con acinoma pancreático acinar (CA20948) aproximadamente 24 horas después de la inyección con Citato 1.
La Figura 6 es el perfil de aclaramiento de Citato 1 de la sangre en una rata normal monitorizada a 830 nm después de excitación a 680 nm.
La Figura 7 es el perfil de aclaramiento de Citato 1 de la sangre de una rata con tumor CA20948 monitorizada a 830 nm después de excitación a 780 nm.
La Figura 8 es el perfil de aclaramiento de Citato 2 de la sangre de una rata normal monitorizada a 830 nm después de excitación a 780 nm.
La Figura 9 es el perfil de aclaramiento de Citato 2 de la sangre de una rata con tumor CA20948 monitorizada a 830 nm después de excitación a 780 nm.
La Figura 10 es el perfil de aclaramiento de Citato 4 de la sangre de una rata normal monitorizada a 830 nm después de excitación a 780 nm.
Descripción detallada de la invención
Los nuevos bioconjugados de la presente invención aprovechan la naturaleza simétrica de las estructuras de los colorantes de cianina e indocianina por incorporación de 1 a 10 grupos de direccionamiento de receptores, en posibilidad estrecha unos a otros de tal modo que la fijación del receptor puede intensificarse notablemente debido a un efecto cooperativo. De acuerdo con ello, varios colorantes de cianina que contienen uno o más dominios de direccionamiento se han preparado y han sido testados in vivo respecto a actividad biológica.
Las composiciones que comprenden bioconjugados de colorantes de fórmula 1 y 2 ofrecen ventajas importantes sobre las descritas actualmente en la técnica. Las mismas son aplicables para diversas aplicaciones biomédicas que incluyen, pero sin carácter limitante, formación de imágenes tomográficas de órganos; monitorización de funciones de órganos; angiografía coronaria; endoscopia de fluorescencia; detección, formación de imágenes, y terapia de tumores; cirugía láser guiada, métodos fotoacústicos y sonofluorescentes; y análogos. Realizaciones específicas para el cumplimiento de algunas de las aplicaciones biomédicas mencionadas anteriormente se dan más adelante. Los bioconjugados se preparan por los métodos bien conocidos en la técnica y se muestran en los esquemas (1-3).
En una realización preferida, los bioconjugados de acuerdo con la presente invención tienen la fórmula general 1 en donde a y b varían de 0 a 3; Q^{1} es un enlace simple; R^{1} a R^{9} son hidrógenos; W^{1} y X^{1} son -CR^{10} R^{11}; Y^{1} es -(CH_{2}), CONH-Bm, -(CH_{2})k-NHCO-Bm, o -(CH_{2})m-N(R^{14})-(CH_{2})_{n}CONH-Bm; Z^{1} es -(CH_{2})_{r}-OH, -(CH_{2})_{r}-CO_{2}H,
-(CH_{2})_{r}-NH_{2}, -(CH_{2})_{t}-CONH-Dm, -(CH_{2})_{v}-NHCO-Dm, -(CH_{2})_{w}N(R^{14})-(CH_{2})_{x}-CONH-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{s}-CH_{2}-OH, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{s}-CH_{2}-CO_{2}H, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{s}-CH_{2}-NH_{2}, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{u}-CH_{2}-CONH-Dm, -CH_{2}-
(CH_{2}OCHI-CH_{2})_{o}-CH_{2}-NHCO-Dm, o -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{ww}-CH_{2}-N(R^{40})-(CH_{2})-CONH-Dm; y Bm es una biomolécula específica de tumor o mimético de fármaco seleccionado del grupo constituido por péptidos u oligosacáridos que contienen 2-50 unidades monómeras y que incluyen somatostatina, bombesina, neurotensina, colecistoquinina y polipéptido vasoactivo intestinal.
En otra realización preferida, los bioconjugados de acuerdo con la presente invención tienen la fórmula general 1 en donde a y b son 3; Q_{1} es un enlace simple; R^{1} a R^{9} son hidrógenos; W^{1} y X^{1} son -C(CH_{3})_{2}; Y^{1} es -(CH_{2})_{i}-CONH-Bm o -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{j}-CH_{2}-CONH-Bm en donde i varía de 1 a 4; y Z^{1} es -(CH_{2})_{r}-CO_{2}H, -(CH_{2})_{t}-CONH-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{s}-CH_{2}-CO_{2}H o -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{u}-CH_{2}-CONH-Dm, en donde r y t varían de 1 a 4; y Bm es una biomolécula específica de tumor seleccionada del grupo constituido por Octreotato y sus miméticos, derivados de Octreotido y sus miméticos, análogos de bombesina, análogos de colecistoquinina, y análogos de neurotensina.
En otra realización preferida, los bioconjugados de acuerdo con la presente invención tienen la fórmula general 2 en donde a' y b' varían de 0 a 3; Q^{2} es un enlace simple; R^{16} a R^{28} son hidrógenos; W^{2} y X^{2} son -CR^{10}R^{11}; Y^{2} es
-(CH_{2})_{j}-CONH-Bm, -(CH_{2})_{k}-NHCO-Bm, o -(CH_{2})_{m}-N(R^{14})-(CH_{2})_{n}-CONH-Bm; Z^{2} es -(CH_{2})_{r}-CO_{2}H, -(CH_{2})_{r}-NH_{2}, -(CH_{2})_{r}-OH, (CH_{2})_{t}-NHCO-Dm, -(CH_{2})_{m}-NHCO-Dm, (CH_{2})_{w}-N(R^{14})-(CH_{2})_{x}-CONH-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{x}-CH_{2}-CO_{2}H, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{s}-CH_{2}-NH_{2}, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{s}-CH_{2}-OH, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{u}-CH_{2}-CONH-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}
OCH_{2})_{v}-CH_{2}-NHCO-Dm, -CH_{2}-(CR_{2}OCH_{2})_{ww}-CH_{2}-N(R^{40})-(CH_{2})_{xx}-CONH-Dm; y Bm es una biomolécula específica de tumor o mimético de fármaco seleccionado del grupo constituido por péptidos y oligosacáridos que contienen 2-50 unidades monómeras.
En otra realización preferida, los bioconjugados de acuerdo con la presente invención tienen la fórmula general 2 en donde a' y b' son 3; Q^{2} es un enlace simple; R^{15} a R^{28} son hidrógenos; W^{2} y X^{2} son -C(CH_{3})_{2}; Y^{2} es -(CH_{2})_{i}-CONH-Bm o -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{j}-CH_{2}-CONH-Bm en donde i varía de 1 a 4; y Z^{2} es -(CH_{2})_{r}CO_{2}H, -(CH_{2})_{t}-CONH-Dm, -CH_{2}(CH_{2}OCH_{3})_{s}-CH_{2}-CO_{2}H o -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{u}-CH_{2}-CONH-Dm, en donde r y t varían de 1 a 4; y Bm es una biomolécula específica de tumor seleccionada del grupo constituido por derivados de Octreotato y sus miméticos, derivados de Octreotido y sus miméticos, análogos de bombesina y sus miméticos, análogos de colecistoquinina y sus miméticos, y análogos de neurotensina y sus miméticos.
En una realización preferida, se utiliza luz de una longitud de onda comprendida en la región de 350-1300 nm.
En una realización preferida, un procedimiento terapéutico comprende unir una porfirina a un bioconjugado y utilizar el mismo para terapia fotodinámica o proyectar luz de una longitud de onda específica sobre el conjugado de dipéptido de esta invención a fin de conseguir un efecto de terapia fotodinámica.
Las composiciones pueden formularse en composiciones de diagnóstico para administración enteral o parenteral. Estas composiciones contienen una cantidad eficaz del colorante junto con vehículos y excipientes farmacéuticos convencionales apropiados para el tipo de administración contemplado. Por ejemplo, las formulaciones parenterales contienen ventajosamente una solución o suspensión acuosa estéril de colorante de acuerdo con esta invención. Las composiciones parenterales pueden inyectarse directamente o mezclarse con un gran volumen de composición parenteral para administración sistémica. Tales soluciones pueden contener también tampones farmacéuticamente aceptables y, opcionalmente, electrólitos tales como cloruro de sodio.
Las formulaciones para administración enteral pueden variar ampliamente, como es bien conocido en la técnica. En general, tales formulaciones son líquidos que incluyen una cantidad eficaz del colorante en una solución o suspensión acuosa. Tales composiciones enterales pueden incluir opcionalmente tampones, agentes tensioactivos, agentes tixotrópicos, y análogos. Las composiciones para administración oral pueden contener también agentes saborizantes y otros ingredientes a fin de intensificar sus cualidades organolépticas.
Las composiciones diagnósticas se administran en dosis eficaces para conseguir la intensificación deseada. Tales dosis pueden variar ampliamente, dependiendo del colorante particular empleado, los órganos o tejidos que son el objeto del procedimiento de formación de imagen, el equipo de formación de imagen que se utilice, y factores análogos.
Las composiciones diagnósticas se utilizan de la manera convencional. Las composiciones pueden administrarse a un paciente, típicamente un animal de sangre caliente, sea sistémica o localmente al órgano o tejido cuya imagen se desea obtener, después de lo cual se somete el paciente al procedimiento de formación de la imagen.
Una combinación de lo anterior representa un enfoque importante para el uso de grupos de direccionamiento de bajo peso molecular a fin de obtener imágenes por los métodos ópticos. La presente invención se detalla adicionalmente en los ejemplos que siguen, que se ofrecen a modo de ilustración y no deben considerarse como limitantes de la invención en modo alguno. Se utilizan métodos estándar bien conocidos en la técnica o las técnicas descritas específicamente a continuación.
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Ejemplo preparativo 1
Síntesis de Colorante de Bisetilcarboximetilindocianina
Una mezcla de 1,1,2-trimetil-[1H]-benz[e]indol (9,1 g, 43,58 mmoles) y ácido 3-bromopropanoico (10,0 g, 65,37 mmoles) en 1,2-diclorobenceno (40 ml) se calentó a 110ºC durante 12 horas. La solución se enfrió a la temperatura ambiente y el residuo rojo obtenido se filtró y se lavó con mezcla acetonitrilo:dietil-éter (1:1). El sólido obtenido se secó a vacío para dar 10 g (64%) de un polvo pardo claro. Una porción de este sólido (6,0 g; 16,56 mmoles), monohidrocloruro de dianil-glutaconaldehído (2,36 g, 8,28 mmoles) y acetato de sodio trihidratado (2,93 g, 21,53 mmoles) en etanol (150 ml) se calentaron a reflujo durante 90 minutos. Después de evaporar el disolvente, se añadieron al residuo 40 ml de HCl acuoso 2N, y la mezcla se centrifugó, después de lo cual se decantó el sobrenadante. Este procedimiento se repitió hasta que el sobrenadante resultó prácticamente incoloro. Se añadieron al residuo sólido aproximadamente 5 ml de mezcla agua:acetonitrilo (3:2) y se liofilizaron para obtener 2 g de copos de color verde oscuro. La pureza del compuesto se estabilizó con espectrometría ^{1}H-NMR y LC de masas.
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Ejemplo 2
Síntesis de Colorante de Bispentilcarboximetilindocianina
(Esquema 1, R_{1}, R_{2} = fenilo condensado; A = CH_{2}, n = 4 y R = R' = CO_{2}H)
Una mezcla de 1,1,2-trimetil-[1H]-benz[e]indol (20 g, 95,6 mmoles) y ácido 6-bromohexanoico (28,1 g, 144,1 mmol) en 1,2-diclorobenceno (250 ml) se calentó a 110ºC durante 12 horas. La solución verde se enfrió a la temperatura ambiente y el precipitado sólido pardo formado se recogió por filtración. Después de lavado del sólido con 1,2-diclorobenceno y dietil-éter, el polvo pardo obtenido (24 g, 64%) se secó a vacío a la temperatura ambiente. Una porción de este sólido (4,0 g; 9,8 mmoles), monohidrocloruro de dianil-glutaconaldehído (1,4 g, 5 mmoles) y acetato de sodio trihidratado (1,8 g, 12,9 mmoles) en etanol (80 ml) se calentaron a reflujo durante 1 hora. Después de evaporar el disolvente, se añadieron al residuo 20 ml de HCl acuoso 2N y la mezcla se centrifugó, después de lo cual se decantó el sobrenadante. Se repitió este procedimiento hasta que el sobrenadante resultó prácticamente incoloro. Se añadieron aproximadamente 5 ml de mezcla agua:acetonitrilo (3:2) al residuo sólido y se liofilizaron para obtener aproximadamente 2 g de escamas de color verde oscuro. La pureza del compuesto se estableció con espectrometría ^{1}H-NMR y LC-masas.
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Ejemplo 3
Síntesis de Colorante de Bisetilcarboximetilindocianina
(Esquema 1, R_{1}, R_{2} = fenilo condensado; A = CH_{2}, n = 1 y R = R' = CO_{2}H)
Este compuesto se preparó como se describe en el Ejemplo 1 excepto que se utilizó como material de partida 1,1,2-trimetilindol.
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Ejemplo 4
Síntesis de Colorante de Bishexaetilenglicolcarboximetilindocianina
(Esquema 1, R_{1}, R_{2} = fenilo condensado; A = CH_{2}OCH_{2}, n = 6 y R = R' = CO_{2}H)
Este compuesto se preparó como se describe en el Ejemplo 1, excepto que se utilizó ácido w-bromohexaoxietilenglicolpropanoico en lugar de ácido bromopropanoico y la reacción se llevó a cabo en 1,2-dimetoxipropano.
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Ejemplo 5
Síntesis de Colorante de Bisetilcarboximetilindocianina
(Esquema 2, R_{1}, R_{2} = fenilo condensado; A = CH_{2}, y n = 1)
Este compuesto se prepara fácilmente como se describe en el Ejemplo 1, excepto que se utiliza 3-bromo-1-(N,N-bis-carboximetil)aminopropano en lugar de ácido bromopropanoico.
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Ejemplo 6
Síntesis de Péptidos
El procedimiento descrito a continuación se refiere a la síntesis de Octreotato. Otros péptidos de esta invención se prepararon por un procedimiento similar con ligeras modificaciones en algunos casos.
Se preparó el octapéptido por una síntesis automática en fase sólida de péptidos de fluorenilmetoxicarbonilo (Fmoc), utilizando un sintetizador comercial de péptidos de Applied Biosystems (modelo 432A SYNERGY Peptide Synthesizer). El primer cartucho de péptido contenía resina Wang cargada previamente con Fmoc-Thr en escala de 25 \mumoles. Los cartuchos sub-siguientes contenían aminoácidos protegidos con Fmoc con grupos protectores de las cadenas laterales para los aminoácidos siguientes: Cys (Acm), Thr (t-Bu), Lys (Boc), Trp (Boc) y Tyr (t-Bu). Los cartuchos de aminoácidos se introdujeron en el sintetizador de péptidos y el producto se sintetizó desde la posición C-terminal a la N-terminal. La reacción de acoplamiento se llevó a cabo con 75 \mumoles de los aminoácidos protegidos en presencia de hexafluorofosfato de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio (HBTU)/N-hidroxibenzotriazol (HOBt). El grupo protector Fmoc se retiró con piperidina al 20% en dimetilformamida. Después que se hubo completado la síntesis, se sometió el grupo tiol a ciclación con trifluoroacetato de talio y el producto se separó por escisión del soporte sólido con una mixtura de escisión que contenía ácido trifluoroacético (85%):agua (5%):fenol (5%):tioanisol (5%) durante 6 horas. El péptido se precipitó con t-butil-metil-éter y se liofilizó con mezcla agua:acetonitrilo (2:3). El péptido se purificó por HPLC y se analizó por LC/MS. La secuencia de aminoácidos de Octreotato es: D-Phe-Cys'-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys'-Thr (SEQ ID NO: I), en donde Cys' indica la presencia de un enlace disulfuro intramolecular entre dos aminoácidos cisteína.
El Octreotido se preparó por el mismo procedimiento: D-Phe-Cys'-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys'-Thr-OH (SEQ ID NO: 2), en donde Cys' indica la presencia de un enlace disulfuro intramolecular entre dos aminoácidos cisteína.
Se prepararon análogos de bombesina por el mismo procedimiento excepto que no fue necesaria la ciclación con trifluoroacetato de talio. La desprotección de la cadena lateral y la escisión de la resina se llevaron a cabo con 50 \mul de cada uno de etanoditiol, tioanisol y agua, y 850 \mul de ácido trifluoroacético. Se prepararon dos análogos: Gly-Ser-Gly-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH_{2} (SEQ ID NO: 3) y Gly-Asp-Gly-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH_{2} (SEQ ID NO: 4).
Se prepararon análogos octapeptídicos de colecistoquinina como se describe para Octreotato sin el paso de ciclación. Se prepararon tres análogos: Asp-Tyr-Met-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH_{2} (SEQ ID NO: 5); Asp-Tyr-Nle-Gly-Trp-Nle-Asp-Phe-NH_{2} (SEQ ID NO: 6); y D-Asp-Tyr-Nle-Gly-Trp-Nle-Asp-Phe-NH_{2} (SEQ ID NO: 7) en donde Nle es norleucina.
Se preparó un análogo de neurotensina como se describe para Octreotato sin el paso de ciclación: D-Lys-Pro-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu (SEQ ID NO: 8).
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Ejemplo 7
Síntesis de Conjugados Péptido-Colorante
El método descrito a continuación se refiere a la síntesis de conjugados de Octreotato, pero se utiliza un procedimiento similar para la síntesis de otros conjugados péptido-colorante.
El Octreotato se preparó como se describe en el Ejemplo 6, pero el péptido no se escindió del soporte sólido y se retuvo el grupo N-terminal Fmoc de Phe. Se cicló el grupo tiol con trifluoroacetato de talio y se desprotegió el Phe para liberar la amina libre. Se añadió colorante bisetilcarboximetilindocianina (53 mg, 75 \mumoles) a un reactivo de activación constituido por una solución 0,2 M de HBTU/HOBt en DMSO (375 \mul), y solución 0,2 M de diisopropiletilamina en DMSO (375 \mul). La activación se completó en aproximadamente 30 minutos y se añadió al colorante el péptido fijado a la resina (25 \mumoles). La reacción de acoplamiento se llevó a cabo a la temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla se filtró y el residuo sólido se lavó con DMF, acetonitrilo y THF. Después de secar el residuo verde, el péptido se escindió de la resina y los grupos protectores de las cadenas laterales se eliminaron con una mixtura de 85% de ácido trifluoroacético, 5% agua, 5% tioanisol y 5% fenol. La resina se filtró y se utilizó t-butil-metil-éter (MTBE) frío para precipitar el conjugado colorante-péptido que se disolvió en mezcla acetonitrilo:agua (2:3) y se liofilizó. El producto se purificó por HPLC para dar el colorante monoOctreotato-bisetilcarboximetilindocianina (Citato 1, 80%) y el colorante bisOctreotato-bisetilcarboximetilindocianina (Citato 2, 20%). El conjugado de monoOctreotato puede obtenerse casi exclusivamente (> 95%) referido al bis-conjugado por reducción del tiempo de reacción a 2 horas. Sin embargo, esto conduce también a una reacción incompleta y el Octreotato libre debe separarse cuidadosamente del conjugado de colorante a fin de evitar la saturación de los receptores por el péptido no conjugado al
colorante.
Se preparó el colorante Octreotato-bispentilcarboximetilindocianina como se ha descrito arriba, con algunas modificaciones. Se añadió colorante bispentilcarboximetilindocianina (60 mg, 75 \mumoles) a un reactivo de activación constituido por una solución 0,2 M de HBTU/HOBt en DMSO (400 \mul), y solución 0,2 M de diisopropiletilamina en DMSO (400 \mul). La activación se completó en aproximadamente 30 minutos y se añadió al colorante el péptido fijado a la resina (25 \mumoles). La reacción se llevó a cabo a la temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla se filtró y el residuo sólido se lavó con DMF, acetonitrilo y THF. Después de secar el residuo verde, se escindió el péptido de la resina y los grupos protectores de las cadenas laterales se eliminaron con una mezcla de 85% ácido trifluoroacético, 5% agua, 5% tioanisol y 5% fenol. La resina se filtró y se utilizó t-butil-metil-éter (MTBE) frío para precipitar el conjugado colorante-péptido, que se disolvió en mezcla acetonitrilo:agua (2:3) y se liofilizó. El producto se purificó por HPLC para dar un conjugado Octreotato-ácido 1,1,2-trimetil-[1H]-benz-[e]indol-propanoico (10%), colorante monoOctreotato-bispentilcarboximetilindocianina (Citato 3, 60%) y colorante bisOctreotato-bispentilcarboximetilindocianina
(Citato 4, 30%).
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Ejemplo 8
Formulación de Coniugados Péptido-Colorante en Dimetil-sulfóxido (DMSO)
Los conjugados colorante-péptido son escasamente solubles en agua y requieren la adición de agentes solubilizantes o co-disolventes. La adición de etanol acuoso al 1-20% a los conjugados extinguía parcialmente la intensidad de fluorescencia in vitro y la fluorescencia se extinguió por completo in vivo (el conjugado no era detectado por la cámara CCD). La adición de 1-50% de DMSO restablecía o aumentaba la intensidad de fluorescencia de los conjugados in vitro e in vivo. La fluorescencia del colorante se mantenía intensa durante más de una semana. Las formulaciones de DMSO eran bien toleradas por los animales experimentales utilizados para esta invención.
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Ejemplo 9
(Ilustrativo)
Formación de Imágenes de Adenocarcinoma Pancreático Ductal (DSL 6A) con Verde de Indocianina (ICG)
Se empleó un aparato no invasivo de formación de imágenes por fluorescencia in vivo para evaluar la eficacia de los agentes de contraste desarrollados para la detección de tumores en modelos animales. Se utilizó un diodo láser de LaserMax Inc. de longitud de onda nominal 780 nm y potencia nominal de 40 mW. El detector era una cámara CCD de Princeton Instruments modelo RTE/CCD-1317-K/2, con una lente Rodenstock 10 mm F2 (stock #542.032.002.20) fijada. Se montó una lente de interferencia de 830 nm (CVI Laser Corp., parte #F10-830-4-2) frente a la lente de entrada CCD de tal modo que únicamente se formaba la imagen de la luz fluorescente emitida por el agente de contraste. Típicamente, se tomó una imagen del animal antes de la inyección del agente de contraste. Esta imagen se sustrajo sub-siguientemente (pixel a pixel) de las imágenes posteriores a la inyección. Sin embargo, la sustracción de fondo no se realizó en ningún caso una vez que el animal había sido retirado del área de muestra y se devolvió de nuevo posteriormente para la toma de imágenes varias horas después de la inyección.
Se indujeron tumores DSL 6A en ratas Lewis macho en el área del ijar izquierdo por la introducción de material de un implante sólido (donante) y los tumores eran palpables aproximadamente 14 días. Se anestesiaron los animales con cóctel de rata (xilazina; quetamina; acepromazina 1,5:1,5:0,5) a 0,8 ml/kg por inyección intramuscular. El área del tumor (ijar izquierdo) se afeitó para dejar al descubierto el tumor y el área de la superficie circundante. Se aplicó una mariposa de calibre 21 equipada con una llave y dos jeringuillas que contenían solución salina heparinizada en la vena posterior del rabo de la rata. Se comprobó la permeabilidad de la vena antes de la administración de ICG por medio del aparato de mariposa. Cada animal recibió 500 \mul de una solución de 0,42 mg/ml de ICG en agua. Las imágenes obtenidas 2 y 30 minutos después de la inyección se muestran en las Figuras 1A-B.
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Ejemplo 10
(Ilustrativo)
Formación de Imágenes de Carcinoma de Próstata (R3327-H) con Verde de Indocianina (ICG)
El aparato de formación de imágenes y el procedimiento utilizado se describen en el Ejemplo 9. Se indujeron tumores R3327-H en ratas jóvenes macho Copenhague en el área del ijar izquierdo a partir de un implante sólido. Estos tumores crecían muy lentamente y estaban presentes masas palpables 4-5 meses después del implante. Las imágenes obtenidas 2 y 30 minutos después de la inyección se muestran en las Figuras 1C-D.
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Ejemplo 11
(Ilustrativo)
Formación de Imágenes de Carcinoma Pancreático Acinar de Rata (CA20948) con Verde de Indocianina (ICG)
El aparato de formación de imágenes y el procedimiento utilizado se describen en el Ejemplo 9. Se indujeron carcinomas pancreáticos acinares de rata que expresaban el receptor de SST-2 (CA20948) por técnica de implante sólido en el área del ijar izquierdo y se detectaron masas palpables 9 días después del implante. Las imágenes obtenidas 2 y 10 minutos después de la inyección se muestran en las Figuras 1E-F.
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Ejemplo 12
Formación de Imágenes de Carcinoma Pancreático Acinar de Rata (CA20948) con Citato 1
El aparato de formación de imágenes y el procedimiento utilizado se describen en el Ejemplo 9, excepto que cada animal recibió 500 \mul de una solución de 1,0 mg/ml de solución de Citato 1 de 25% dimetilsulfóxido en agua. Se indujeron carcinomas pancreáticos acinares de rata que expresaban el receptor de SST-2 (CA20948) por técnica de implante sólido en el área del ijar izquierdo y se detectaron masas palpables 24 días después del implante. Las imágenes se obtuvieron en diversos momentos después de la inyección. La absorción en el tumor se observó a los 2 minutos, pero no alcanzó el máximo hasta aproximadamente 5 minutos. Las Figuras 2A-B muestran una comparación de la absorción de ICG y Citato 1 a los 45 minutos en las ratas con la línea de células tumorales CA20948. A los 45 minutos, el ICG se había aclarado en su mayor parte (Figura 2A), mientras que el Citato 1 es todavía muy intenso (Figura 2B). Esta fluorescencia del colorante se mantenía intensa en el tumor durante varias horas después de la inyección.
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Ejemplo 13
Formación de Imágenes de Carcinoma Pancreático Acinar de Rata (CA20948) con Citato 1, Comparada con la Formación de Imágenes con ICG
Utilizando verde de indocianina (ICG), se obtuvieron ópticamente imágenes de tres líneas tumorales diferentes utilizando un aparato con cámara CCD. Dos de las líneas, DSL 6/A (pancreática) y Dunning R3327-H (prostática) indicaban perfusión lenta del agente en el tumor a lo largo del tiempo, y se obtuvieron imágenes razonables para cada una. La tercera línea (CA20948) (pancreática) indicaba sólo una perfusión ligera pero transitoria que desaparecía al cabo de sólo 30 minutos después de la inyección. Esto indica la ausencia de localización inespecífica de ICG en esta línea comparada con las otras dos líneas tumorales, lo que sugiere una arquitectura vascular muy diferente para este tipo de tumor (véanse las Figuras 1A-F). Las dos primeras líneas tumorales (DSL 6/A y R3327-H) no están tan intensamente vascularizadas como CA20948, que es rica también en receptores de somatostatina (SST-2). Por consiguiente, la detección y retención de un colorante de este modelo de tumor es un índice importante de la especificidad mediada por el receptor.
Se sabe que Octreotato direcciona los receptores de somatostatina (SST-2); por esta razón, se prepararon ciano-Octreotatos (Citato 1 y Citato 2). El Citato 1 se evaluó en el modelo CA20948 de la rata Lewis. Utilizando el aparato provisto de la cámara CCD, se observó una localización intensa de este colorante en el tumor 90 minutos después de la inyección (Figura 3A). A las 19 horas de la inyección, se obtuvieron de nuevo imágenes del animal (Figura 3B) y se visualizó fácilmente el tumor, demostrando la especificidad de este agente para los receptores de SST-2 presentes en esta línea de tumor. Como control, se obtuvieron de nuevo imágenes de los órganos (Figura 4A) y se comparó la imagen con la de los mismos tejidos en la rata no inyectada (Figura 4B).
Se extirparon los órganos individuales y se obtuvieron imágenes de los mismos. Se observó una fuerte absorción del material en el páncreas, las glándulas suprarrenales y el tejido tumoral, mientras que corazón, músculos, bazo e hígado mostraban una absorción significativamente menor (Figura 5). Esto está muy bien correlacionado con el Octreotato radiomarcado en el mismo sistema modelo (véase de Jong et al., 1998).
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Ejemplo 14
Monitorización del Perfil de Aclaramiento de la Sangre de los Conjugados Péptido-Colorante
Se dirigió un láser de longitud de onda apropiada para excitación del cromóforo del colorante en un extremo de un haz de fibra óptica, y se posicionó el otro extremo a una distancia de unos cuantos milímetros de la oreja de una rata. Se posicionó también un segundo haz de fibra óptica cerca de la misma oreja para detectar la luz fluorescente emitida y se dirigió el otro extremo al equipo óptico y electrónico para recogida de los datos. Se utilizó un filtro de interferencia (IF) en el tren óptico de recogida para seleccionar la luz fluorescente emitida de la longitud de onda apropiada para el cromóforo del colorante.
Se utilizaron en estos estudios 344 ratas Sprague-Dawley o Fischer. Los animales se anestesiaron con uretano administrado por inyección intraperitoneal a una dosis de 1,35 g/kg de peso corporal. Después que los animales hubieron alcanzado el nivel de anestesia deseado, se aplicó una mariposa de calibre 21 con tubo de 12'' (30 cm) en la vena lateral del rabo de cada animal, y se lavó concienzudamente con solución salina heparinizada. Los animales se colocaron sobre una almohadilla de calentamiento y se mantuvieron calientes a todo lo largo del estudio. El lóbulo de la oreja izquierda se fijó a un portaobjetos de vidrio de microscopio para reducir el movimiento y la vibración.
La luz láser incidente procedente de la fibra óptica se centró sobre la oreja fijada. Se inició luego la adquisición de los datos, y se obtuvo una lectura de fluorescencia de ruido de fondo antes de la administración del agente de test. Para los Citatos 1 ó 2, se administró el conjugado péptido-colorante al animal por una inyección de bolus en la vena lateral del rabo, típicamente de 0,5 a 2,0 ml. La señal de fluorescencia aumentó rápidamente hasta un valor pico. La señal disminuyó luego en función del tiempo a medida que el conjugado se aclaraba del torrente sanguíneo.
Se repitió este procedimiento con varios conjugados colorante-péptido en ratas normales y portadoras de tumor y se muestran perfiles representativos en las Figuras 6 a 10.
Si bien la invención se ha descrito con referencia a los detalles de realizaciones preferidas de la invención, debe entenderse que la descripción se ha dado con carácter ilustrativo y no en sentido limitante, considerándose que serán ideadas fácilmente modificaciones de la misma por los expertos en la técnica, dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas.
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Lista de referencias
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<110> Achilefu, Samuel
\hskip1cm
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\hskip1cm
Bugaj, Joseph E. 
\hskip1cm
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\hskip1cm
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<120> NUEVOS BIOCONJUGADOS DE COLORANTES DE CIANINA E INDOCIANINA PARA APLICACIONES BIOMÉDICAS
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<130> 1668-286-PCT
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<140> No asignado todavía
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<141> 2000-04-26
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<150> U.S. 60/135,060
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<151> 1999-05-20
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<150> U.S. 09/325,769
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<151> 1999-06-04
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<160> 8
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<170> PatentIn ver. 2.0
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<210> 1
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<211> 8
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<212> PRT
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<213> Secuencia Artificial
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<220>
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<221> SITIO
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<222> (1)
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<223> Este es D-fenilalanina.
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<220>
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<221> DISULFURO
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<222> (2)..(7)
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<220>
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<221> SITIO
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<222> (4)
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<223> Éste es D-triptófano.
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<220>
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<223> Descripción de la Secuencia Artificial: Octreotato.
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<400> 1
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3 
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<210> 2
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<211> 8
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<212> PRT
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<213> Secuencia Artificial
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<220>
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<221> SITIO
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Este es D-fenilalanina.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> DISULFURO
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (2)..(7)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> SITIO
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (4)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Éste es D-triptófano.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> SITIO
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (8)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Este residuo C-terminal ha sufrido reducción del COOH terminal a CH_{2}OH.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia Artificial: Octreotido.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\hskip1cm
4 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> SITIO
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (11)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Este aminoácido C-terminal finaliza con una amida.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia Artificial: Análogo de bombesina.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\hskip1cm
5 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> SITIO
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (11)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Este residuo C-terminal finaliza con una amida.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia Artificial: Análogo de bombesina.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\hskip1cm
6 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> SITIO
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (8)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Este residuo C-terminal finaliza con una amida.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia Artificial: Análogo de colecistoquinina.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\hskip1cm
7 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> MOD_RES
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (3)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Nle
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> MOD_RES
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (6)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Nle
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> SITIO
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (8)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Este residuo C-terminal finaliza con una amida.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia Artificial: Análogo de colecistoquinina.
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
8 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> SITIO
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Éste es ácido D-aspártico.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> MOD_RES
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (3)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Nle
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> MOD_RES
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (6)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Nle
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> SITIO
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (8)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Este residuo C-terminal finaliza con una amida.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia Artificial: Análogo de colecistoquinina.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
9 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> SITIO
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (I)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Este es D-lisina.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia Artificial: Análogo de neurotensina.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 8
\hskip1cm
10

Claims (18)

1. Un bioconjugado de colorante de cianina de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
11 
\vskip1.000000\baselineskip
en donde a y b varían de 0 a 5; W^{1} y X^{1} pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan del grupo constituido por -CR^{10}R^{11}, -O-, -NR^{12}, -S-, o -Se; Q^{1} es un enlace simple o se selecciona del grupo constituido por -O- -S-, -Se-, y -NR^{13}; R^{1}, R^{10} a R^{15}, y R^{29}-R^{40} pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan del grupo constituido por hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{10}, arilo C_{1}-C_{10}, alcoxilo C_{1}-C_{10}, polialcoxialquilo C_{1}-C_{10}, -CH_{2}(CH_{2}OCH_{2})_{c}-CH_{2}-OH, polihidroxialquilo C_{1}-C_{20}, polihidroxiarilo C_{1}-C_{10}, aminoalquilo C_{1}-C_{10}, -(CH_{2})_{d}-CO_{2}H, -(CH_{2})_{e}-CONH-Bm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{f}-CH_{2}-CONH-Bm, -(CH_{2})_{g}-NHCO-Bm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{h}-CH_{2}-NHCO-Bm, -(CH_{2}_{yy}-OH o -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{zz}-CH_{2}-OH; Y^{1} se selecciona del grupo constituido por (CH_{2})_{i}-CONH-Bm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{j}-CH_{2}-CONH-Bm, -(CH_{2})_{k}-NHCO-Bm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{i}-CH_{2}-NHCO-Bm, -(CH_{2})_{m}-N(R^{14})-(CH_{2})_{n}-CONH-Bm, (CH_{2})_{aa}-N(R^{29})-(CH_{2})_{bb}-NHCO-Bm, -(CH_{2})_{p}-N(R^{15})-CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{q}-CH_{2}-CONH-Bm, -(CH_{2})_{cc}-N(R^{30})-CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{dd}-CH_{2}-NHCO-Bm,
-CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{ee}-CH_{2}-N(R^{31})-(CH_{2})_{ff}-CONH-Bm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{gg}-CH_{2}-N(R^{32})-(CH_{2})_{hh}-NHCO-Bm, -CH_{2}-
(CH_{2}OCH_{2})_{ii}-CH_{2}-N(R^{33})-CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{JJ}-CH_{2}-CONH-Bm o -CH_{2}-(CH_{2}O-CH_{2})_{kk}-CH_{2}-N(R^{34})-CH_{2}-(CH_{2}
OCH_{2})_{ll}-CH_{2}-NHCO-BM; d, e, g, i, k, m, n, p, aa, bb, cc, ff, hh e yy varían de 1 a 10; c, f, h, j, l, q, dd, ee, gg, ii, jj, kk, ll y zz varían de 1 a 100; Bm es cualquier péptido bioactivo, proteína, célula, oligosacárido, glicopéptido, peptidomimético, fármaco, mimético de fármaco, hormona, agente quelante de metales, complejo metálico radiactivo o no radiactivo, o agente ecogénico; Z^{1} se selecciona del grupo constituido por -(CH_{2})_{r}-CO_{2}H, (CH_{2})_{r}-OH,
-(CH_{2})_{r}-NH_{2}, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{s}-CH_{2}-CO_{2}H, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{s}-CH_{2}-OH, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{s}-CH_{2}-NH_{2}, -(CH_{2})_{t}-CONH-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{u}-CH_{2}-CONH-Dm, -(CH_{2})_{v}-NHCO-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{o}-CH_{2}-NHCO-Dm,
-(CH_{2})_{w}-N(R^{14})-(CH_{2})_{x}-CONH-Dm, -(CH_{2})_{mm}-N(R^{35})-(CH_{2}_{nn}-NHCO-Dm, -(CH_{2})_{y}-N(R^{15})-CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{z}-CH_{2}-CONH-Dm, -(CH_{2}_{uu}-N(R^{39})-CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{vv}-CH_{2}-NHCO-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{ww}-CH_{2}-N(R^{40})-(CH_{2})_{xx}-CONH-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{oo}-CH_{2}-N(R^{36})-(CH_{2})_{pp}-NHCO-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{qq}-CH_{2}-N(R^{37})-(CH_{2})-(CH_{2}OCH_{2})_{rr}-
CH_{2}-CONH-Dm o -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{ss}-CH_{2}-N(R^{38})-(CH_{2})_{tt}-NHCO-Dm; r, t, v, w, x, y, mm, nn, pp, uu y xx varían de 1 a 10, y o, s, u, z, oo, qq, rr, ss, tt, vv y ww varían de 1 a 100; y Dm es cualquier péptido bioactivo, anticuerpo, fragmento de anticuerpo, oligosacárido, fármaco, mimético de fármaco, glicomimético, glicopéptido, peptidomimético, hormona, y análogos; R^{2} a R^{9} pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan del grupo constituido por hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{10}, arilo C_{1}-C_{10}, hidroxilo, polihidroxialquilo C_{1}-C_{10}, alcoxilo C_{1}-C_{10}, amino, aminoalquilo C_{1}-C_{10}, ciano, nitro, o halógeno.
2. El bioconjugado de la reivindicación 1 en donde a y b varían de 0 a 3; Q^{1} es un enlace simple; R^{1} a R^{9} son hidrógenos; W^{1} y X^{1} son -CR^{10} R^{11}; Y^{1} es -(CH_{2})_{j}-CONH-Bm, -(CH_{2})_{k}-NHCO-Bm, o -(CH_{2})_{m}-N(R^{14})-(CH_{2})_{n}-CONH-Bm; Z^{1} es -(CH_{2})_{r}-OH, -(CH_{2})_{r}-CO_{2}H, -(CH_{2})_{r}-NH_{2}, -(CH_{2})_{t}-CONH-Dm, -(CH_{2})_{v}-NHCO-Dm, -(CH_{2})_{w}-N(R^{14})-(CH_{2})_{x}-CONH-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{s}-CH_{2}-OH, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{s}-CH_{2}-CO_{2}H, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{s}-CH_{2}-NH_{2}, -CH_{2}-(CH_{2}
OCH_{2})_{u}-CH_{2}-CONH-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}OCHI-CH_{2})_{o}-CH_{2}-NHCO-Dm, o -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{ww}-CH_{2}-N(R^{40})-(CH_{2})_{xx}-
CONH-Dm; y Bm es una biomolécula específica de tumor o un mimético de fármaco seleccionado de péptidos u oligosacáridos que contienen 2-50 unidades monómeras, somatostatina, bombesina, neurotensina, colecistoquinina y polipéptido vasoactivo intestinal.
3. El bioconjugado de la reivindicación 1 en donde a y b son 3; Q^{1} es un enlace simple; R^{1} a R^{9} son hidrógenos; W^{1} y X^{1} son -C(CH_{3})_{2}; Y^{1} es -(CH_{2})_{i}-CONH-Bm o -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{j}-CH_{2}-CONH-Bm en donde i varía de 1 a 4; y Z^{1} es -(CH_{2})_{r}-CO_{2}H, -(CH_{2})_{t}-CONH-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})SCH_{2}-CO_{2}H o -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{u}-CH_{2}-CONH-Dm, en donde r y t varían de l a 4; y Bm es una biomolécula específica de tumor seleccionada del grupo constituido por Octreotato y Octreotido.
\newpage
4. Un bioconjugado de indocianina de la fórmula general
12
en donde a' y b' varían de 0 a 5; W^{2} y X^{2} pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan del grupo constituido por
-CR^{10}R^{11}, -O-, -NR^{12}, -S-, o -Se; Q^{2} es un enlace simple o se selecciona del grupo constituido por
-O-, -S-, -Se-, y -NR^{13}; R^{16}, R^{10} a R^{15}, y R^{29}-R^{40} pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan del grupo constituido por hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{10}, arilo C_{1}-C_{10}, alcoxilo C_{1}-C_{10}, polialcoxialquilo C_{1}-C_{10}, -CH_{2}(CH_{2}OCH_{2})_{c}-CH_{2}-OH, polihidroxialquilo C_{1}-C_{20}, polihidroxiarilo C_{1}-C_{10}, aminoalquilo C_{1}-C_{10}, -(CH_{2})_{d}-CO_{2}H, -(CH_{2})_{e}-CONH-Bm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{f}-CH_{2}-CONH-Bm, -(CH_{2})_{g}-NHCO-Bm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{h}-CH_{2}-NHCO-Bm, -(CH_{2})_{yy}-OH o -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2}_{zz}-CH_{2}-OH; Y^{2} se selecciona del grupo constituido por (CH_{2})_{i}-CONH-Bm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{j}-CH_{2}-CONH-Bm, -(CH_{2})_{k}-NHCO-Bm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{l}-CH_{2}-NHCO-Bm, -(CH_{2})_{m}-N(R^{14})-(CH_{2})_{n}-CONH-Bm, (CH_{2})_{aa}-N(R^{29})-(CH_{2})_{bb}-NHCO-Bm, -(CH_{2})_{p}-N(R^{15})-CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{q}-CH_{2}-CONH-Bm, -(CH_{2})_{cc}-N(R^{30})-CH_{2}-(CH_{2}
OCH_{2})_{dd}-CH_{2}-NHCO-Bm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{ee}-CH_{2}-N(R^{31})-(CH_{2})_{ff}-CONH-Bm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{gg}-CH_{2}-N(R^{32})-
(CH_{2})_{hh}-NHCO-Bm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{ii}-CH_{2}-N(R^{33})-CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{jj}-CH_{2}-CONH-Bm o -CH_{2}-(CH_{2}O-CH_{2})_{kk}-
CH_{2}-N(R^{34})-CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{ll}-CH_{2}-NHCO-BM; d, e, g, i, k, m, n, p, aa, bb, cc, ff, hh e yy varían de 1 a 10; c, f, h, j, l, q, dd, ee, gg, ii, jj, kk, ll y zz varían de 1 a 100; Bm es cualquier péptido bioactivo, proteína, célula, oligosacárido, glicopéptido, peptidomimético, fármaco, mimético de fármaco, hormona, agente quelante de metales, complejo metálico radiactivo o no radiactivo, o agente ecogénico; Z^{2} se selecciona del grupo constituido por -(CH_{2})_{r}-CO_{2}H, (CH_{2})_{r}-OH,
-(CH_{2})_{r}-NH_{2}, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{s}-CH_{2}-CO_{2}H, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{s}-CH_{2}-OH, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{s}-CH_{2}-NH_{2}, -(CH_{2})_{r}-
CONH-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{u}-CH_{2}-CONH-Dm, -(CH_{2})_{v}-NHCO-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{o}-CH_{2}-NHCO-Dm,
-(CH_{2})_{w}-N(R^{14})-(CH_{2})_{x}-CONH-Dm, -(CH_{2})_{mm}-N(R^{35})-(CH_{2})_{nn}-NHCO-Dm, -(CH_{2})_{y}-N(R^{15})-CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{z}-CH_{2}-CONH-Dm, -(CH_{2})_{uu}-N(R^{39})-CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{vv}-CH_{2}-NHCO-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{ww}-CH_{2}-N(R^{40})-(CH_{2})_{xx}-
CONH-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{oo}-CH_{2}-N(R^{36})-(CH_{2})_{pp}-NHCO-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{qq}-CH_{2}-N(R^{37})-(CH_{2})-(CH_{2}
OCH_{2})_{rr}-CH_{2}-CONH-Dm o -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{ss}CH_{2}-N(R^{38})-(CH_{2})_{tt}-NHCO-Dm; r, t, v, w, x, y, mm, nn, pp, uu y xx varían de 1 a 10, y o, s, u, z, oo, qq, rr, ss, tt, w y ww varían de 1 a 100; y Dm es cualquier péptido bioactivo, anticuerpo, fragmento de anticuerpo, oligosacárido, fármaco, mimético de fármaco, glicomimético, glicopéptido, peptidomimético, hormona, y análogos; R^{17} a R^{28} pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan del grupo constituido por hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{10}, arilo C_{1}-C_{10}, hidroxilo, polihidroxialquilo C_{1}-C_{10}, alcoxilo C_{1}-C_{10}, amino, aminoalquilo C_{1}-C_{10}, ciano, nitro, o halógeno.
5. El bioconjugado de la reivindicación 4 en donde a' y b' varían de 0 a 3; Q^{2} es un enlace simple; R^{16} a R^{28} son hidrógenos; W^{2} y X^{2} son -CR^{10}R^{11}; Y^{2} es -(CH_{2})_{j}-CONH-Bm, -(CH_{2})_{k}-NHCO-Bm, o -(CH_{2})_{m}-N(R^{14})-
(CH_{2})_{n}-CONH-Bm; Z^{2} es -(CH_{2})_{r}-CO_{2}H, -(CH_{2})_{r}-NH_{2}, -(CH_{2})_{r}-OH, -(CH_{2})_{t}-CONH-Dm, -(CH_{2})_{v}-NHCO-Dm,
-(CH_{2})_{w}-N(R^{14})-(CH_{2})_{x}-CONH-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{s}-CH_{2}-CO_{2}H, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{s}-CH_{2}-NH_{2}, -CH_{2}-(CH_{2}
OCH_{2})_{s}-CH_{2}-OH, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{u}-CH_{2}-CONH-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}OCHI-CH_{2})_{o}-CH_{2}-NHCO-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}
OCH_{2})_{ww}-CH_{2}-N(R^{40})-(CH_{2})_{xx}-CONH-Dm; y Bm es una biomolécula específica de tumor o un mimético de fármaco seleccionado de péptidos u oligosacáridos que contienen 2-50 unidades monómeras.
6. El bioconjugado de la reivindicación 4 en donde a' y b' son 3; Q^{2} es un enlace simple; R^{16} a R^{28} son hidrógenos; W^{2} y X^{2} son -C(CH_{3})_{2}; Y^{2} es -(CH_{2})_{i}-CONH-Bm o -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{3}-CH_{2}-CONH-Bm en donde i varía de 1 a 4; y Z^{2} es -(CH_{2})_{r}-CO_{2}H, -C(CH_{2})_{t}-CONH-Dm, -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{s}-CH_{2}-CO_{2}H o -CH_{2}-(CH_{2}OCH_{2})_{u}-CH_{2}-CONH-Dm, en donde r y t varían de 1 a 4; y Bm es una biomolécula específica de tumor seleccionada del grupo constituido por Octreotato y Octreotido.
7. Un bioconjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 para uso en un procedimiento diagnóstico o terapéutico.
8. Uso de un bioconjugado como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en la fabricación de un reactivo diagnóstico o un medicamento.
9. Uso de acuerdo con la reivindicación 8, en el cual el reactivo diagnóstico es para uso en un procedimiento que utiliza luz de longitud de onda en la región de 350-1300 nm.
10. Uso de acuerdo con la reivindicación 8, en el cual el reactivo diagnóstico es para uso en tomografía óptica.
11. Uso de acuerdo con la reivindicación 8, en el cual el reactivo diagnóstico es para uso en endoscopia de fluorescencia.
12. Uso de acuerdo con la reivindicación 8, en el cual el reactivo diagnóstico es para uso en monitorización de un perfil de aclaramiento de la sangre.
13. Uso de acuerdo con la reivindicación 8, en el cual el reactivo diagnóstico es para uso en formación de imágenes o terapia por absorción, dispersión de la luz, fotoacústica o por sonofluorescencia.
14. Uso de acuerdo con la reivindicación 8, en el cual el reactivo diagnóstico es para diagnosticar placas ateroescleróticas o coágulos de sangre.
15. Uso de acuerdo con la reivindicación 8, en el cual el medicamento es para administración de terapia localizada.
16. Uso de acuerdo con la reivindicación 8, en el cual el reactivo diagnóstico es para uso en terapia fotodinámica.
17. Uso de acuerdo con la reivindicación 8, en el cual el reactivo diagnóstico es para uso en cirugía guiada asistida por láser (LAGS) para detección de pequeñas micrometástasis.
18. Un bioconjugado de acuerdo con la reivindicación 7, en el cual el procedimiento tiene una cualquiera de las características de las reivindicaciones 9 a 17.
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