JP2003277343A - 新規Ｎ−カルバモイル−α−アミノ酸及びその製造方法 - Google Patents
新規Ｎ−カルバモイル−α−アミノ酸及びその製造方法Info
- Publication number
- JP2003277343A JP2003277343A JP2002077409A JP2002077409A JP2003277343A JP 2003277343 A JP2003277343 A JP 2003277343A JP 2002077409 A JP2002077409 A JP 2002077409A JP 2002077409 A JP2002077409 A JP 2002077409A JP 2003277343 A JP2003277343 A JP 2003277343A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- carbamoyl
- propargylglycine
- derivative
- hydantoinase
- group
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 医薬、農薬、生理活性物質の合成中間体とし
て有用なプロパルギルグリシン誘導体に容易に導くこと
ができる、Ｎ−カルバモイル−α−プロパルギルグリシ
ン誘導体、及び、該化合物を入手容易な原料から簡便な
操作で製造する方法を提供する。 【解決手段】 ５位に置換プロパルギル基を有するヒダ
ントイン誘導体を、ヒダントイナーゼを利用して加水分
解することにより、Ｎ−カルバモイル−α−プロパルギ
ルグリシン誘導体を製造する。
て有用なプロパルギルグリシン誘導体に容易に導くこと
ができる、Ｎ−カルバモイル−α−プロパルギルグリシ
ン誘導体、及び、該化合物を入手容易な原料から簡便な
操作で製造する方法を提供する。 【解決手段】 ５位に置換プロパルギル基を有するヒダ
ントイン誘導体を、ヒダントイナーゼを利用して加水分
解することにより、Ｎ−カルバモイル−α−プロパルギ
ルグリシン誘導体を製造する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規なＮ−カルバ
モイル−α−アミノ酸及びその製造法に関する。より詳
細には、側鎖として置換プロパルギル基をα位に有する
Ｎ−カルバモイル−α−アミノ酸、即ち、下記一般式
（１）
モイル−α−アミノ酸及びその製造法に関する。より詳
細には、側鎖として置換プロパルギル基をα位に有する
Ｎ−カルバモイル−α−アミノ酸、即ち、下記一般式
（１）
【０００２】
【化４】
（式中、Ｒ1は水素原子、置換基を有してもよい炭素数
１〜１０の環状若しくは非環状のアルキル基、又は、置
換基を有してもよい炭素数７〜１０のアラルキル基を表
す。）で表されるＮ−カルバモイル−α−プロパルギル
グリシン誘導体、とりわけ、光学活性Ｎ−カルバモイル
ブチニルグリシン、及び、その製造法に関する。Ｎ−カ
ルバモイル−α−プロパルギルグリシン誘導体は、カル
バモイル基を除去することにより、医薬、農薬の中間体
や生理活性物質などとして有用な、プロパルギルグリシ
ン誘導体に容易に導くことができる。
１〜１０の環状若しくは非環状のアルキル基、又は、置
換基を有してもよい炭素数７〜１０のアラルキル基を表
す。）で表されるＮ−カルバモイル−α−プロパルギル
グリシン誘導体、とりわけ、光学活性Ｎ−カルバモイル
ブチニルグリシン、及び、その製造法に関する。Ｎ−カ
ルバモイル−α−プロパルギルグリシン誘導体は、カル
バモイル基を除去することにより、医薬、農薬の中間体
や生理活性物質などとして有用な、プロパルギルグリシ
ン誘導体に容易に導くことができる。
【０００３】
【従来の技術】これまでに、側鎖として置換基を有して
いても良いフェニル基をα位に有するＮ−カルバモイル
−α−アミノ酸及びその製造方法（特開昭５３−４４６
９０、特開昭５３−６９８８４）や側鎖として置換基を
有しても良いアルキル基または置換基を有していてもよ
いアラルキル基をα位に有するＮ−カルバモイル−α−
アミノ酸及びその製造方法（特開昭５３−９１１８９）
は知られている。しかしながら、前記式（１）で表され
るＮ−カルバモイル−α−プロパルギルグリシン誘導体
及びその製造方法は知られていない。
いても良いフェニル基をα位に有するＮ−カルバモイル
−α−アミノ酸及びその製造方法（特開昭５３−４４６
９０、特開昭５３−６９８８４）や側鎖として置換基を
有しても良いアルキル基または置換基を有していてもよ
いアラルキル基をα位に有するＮ−カルバモイル−α−
アミノ酸及びその製造方法（特開昭５３−９１１８９）
は知られている。しかしながら、前記式（１）で表され
るＮ−カルバモイル−α−プロパルギルグリシン誘導体
及びその製造方法は知られていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、医
薬、農薬の中間体や生理活性物質などとして有用なプロ
パルギルグリシン誘導体に容易に導くことができる、Ｎ
−カルバモイル−α−プロパルギルグリシン誘導体及び
その製造方法を提供することである。
薬、農薬の中間体や生理活性物質などとして有用なプロ
パルギルグリシン誘導体に容易に導くことができる、Ｎ
−カルバモイル−α−プロパルギルグリシン誘導体及び
その製造方法を提供することである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記に鑑
み、特願２００１−３１２２４３記載の方法で入手可能
な５位に置換プロパルギル基を有するヒダントイン誘導
体を、ヒダントイナーゼを用いて酵素的に加水分解する
ことにより、効率良くＮ−カルバモイル−α−プロパル
ギルグリシン誘導体を製造できることを見出し、本発明
を完成するに至った。
み、特願２００１−３１２２４３記載の方法で入手可能
な５位に置換プロパルギル基を有するヒダントイン誘導
体を、ヒダントイナーゼを用いて酵素的に加水分解する
ことにより、効率良くＮ−カルバモイル−α−プロパル
ギルグリシン誘導体を製造できることを見出し、本発明
を完成するに至った。
【０００６】即ち、本発明は、一般式（１）
【０００７】
【化５】
（式中、Ｒ1は水素原子、置換基を有してもよい炭素数
１〜１０の環状若しくは非環状のアルキル基、又は、置
換基を有してもよい炭素数７〜１０のアラルキル基を表
す）で表されるＮ−カルバモイル−α−プロパルギルグ
リシン誘導体を提供するものである。
１〜１０の環状若しくは非環状のアルキル基、又は、置
換基を有してもよい炭素数７〜１０のアラルキル基を表
す）で表されるＮ−カルバモイル−α−プロパルギルグ
リシン誘導体を提供するものである。
【０００８】また、本発明は、一般式（２）
【０００９】
【化６】
（式中、Ｒ1は水素原子、置換基を有してもよい炭素数
１〜１０の環状若しくは非環状のアルキル基、又は、置
換基を有してもよい炭素数７〜１０のアラルキル基を表
す）で表される５−置換ヒダントイン誘導体を、ヒダン
トイナーゼにより加水分解することを特徴とする、一般
式（１）
１〜１０の環状若しくは非環状のアルキル基、又は、置
換基を有してもよい炭素数７〜１０のアラルキル基を表
す）で表される５−置換ヒダントイン誘導体を、ヒダン
トイナーゼにより加水分解することを特徴とする、一般
式（１）
【００１０】
【化７】
（式中、Ｒ1は前記と同じ）で表されるＮ−カルバモイ
ル−α−プロパルギルグリシン誘導体の製造方法であ
る。
ル−α−プロパルギルグリシン誘導体の製造方法であ
る。
【００１１】なお、本発明により提供される、一般式
（１）で表されるＮ−カルバモイル−α−プロパルギル
グリシン誘導体は本発明者らによりプロパルギルグリシ
ン誘導体製造における有用性が確認された新規化合物で
ある。
（１）で表されるＮ−カルバモイル−α−プロパルギル
グリシン誘導体は本発明者らによりプロパルギルグリシ
ン誘導体製造における有用性が確認された新規化合物で
ある。
【００１２】
【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
【００１３】本発明の出発物質である一般式（２）で表
される５−置換ヒダントイン誘導体は以下に示す方法で
容易に取得できる。即ち、特願２００１−３１２２４３
記載のように、アミノマロン酸ジエステルにシアン酸カ
リウムを作用させて製造される入手容易なＮ−カルバモ
イルアミノマロン酸ジエステルを原料として、これを塩
基存在下に環化させ、５−アルコキシカルボニルヒダン
トインと成す。続いてアルキン誘導体と反応させて得た
５−置換ヒダントインをエステル加水分解、続いて脱炭
酸することにより、一般式（２）で表される５−置換ヒ
ダントイン誘導体を取得することができる。
される５−置換ヒダントイン誘導体は以下に示す方法で
容易に取得できる。即ち、特願２００１−３１２２４３
記載のように、アミノマロン酸ジエステルにシアン酸カ
リウムを作用させて製造される入手容易なＮ−カルバモ
イルアミノマロン酸ジエステルを原料として、これを塩
基存在下に環化させ、５−アルコキシカルボニルヒダン
トインと成す。続いてアルキン誘導体と反応させて得た
５−置換ヒダントインをエステル加水分解、続いて脱炭
酸することにより、一般式（２）で表される５−置換ヒ
ダントイン誘導体を取得することができる。
【００１４】前記式（２）において、Ｒ1は水素原子、
置換基を有しても良い炭素数１〜１０の環状若しくは非
環状のアルキル基、又は、置換基を有してもよい炭素数
７〜１０のアラルキル基を表す。置換基としては、反応
に悪影響を与えない限り特に限定されず、例えば、水酸
基、アルコキシ基、アルキルチオ基、ハロゲノ基、ニト
ロ基、アミノ基、シアノ基、カルボキシル基などを挙げ
ることができる。これらは、必要に応じて公知の手段に
より保護された形態であってもよい。なお、上記アルキ
ル基、アラルキル基における炭素数は、置換基中の炭素
を含めない数をさす。
置換基を有しても良い炭素数１〜１０の環状若しくは非
環状のアルキル基、又は、置換基を有してもよい炭素数
７〜１０のアラルキル基を表す。置換基としては、反応
に悪影響を与えない限り特に限定されず、例えば、水酸
基、アルコキシ基、アルキルチオ基、ハロゲノ基、ニト
ロ基、アミノ基、シアノ基、カルボキシル基などを挙げ
ることができる。これらは、必要に応じて公知の手段に
より保護された形態であってもよい。なお、上記アルキ
ル基、アラルキル基における炭素数は、置換基中の炭素
を含めない数をさす。
【００１５】置換基を有してもよい炭素数１〜１０の環
状若しくは非環状のアルキル基としては、特に限定され
ず、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イ
ソプロピル基、シクロプロピル基、ｎ−ブチル基、イソ
ブチル基、ｔ−ブチル基、シクロブチル基、ｎ−ペンチ
ル基、シクロペンチル基、ｎ−ヘキシル基、シクロヘキ
シル基、ｎ−オクチル基、ｎ−デシル基などを挙げるこ
とができる。
状若しくは非環状のアルキル基としては、特に限定され
ず、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イ
ソプロピル基、シクロプロピル基、ｎ−ブチル基、イソ
ブチル基、ｔ−ブチル基、シクロブチル基、ｎ−ペンチ
ル基、シクロペンチル基、ｎ−ヘキシル基、シクロヘキ
シル基、ｎ−オクチル基、ｎ−デシル基などを挙げるこ
とができる。
【００１６】また、置換基を有してもよい炭素数７〜１
０のアラルキル基としては、特に限定されず、例えば、
ベンジル基、ｐ−ヒドロキシベンジル基、ｐ−メトキシ
ベンジル基、ｏ−ヒドロキシベンジル基、ｏ−メトキシ
ベンジル基などを挙げることができる。
０のアラルキル基としては、特に限定されず、例えば、
ベンジル基、ｐ−ヒドロキシベンジル基、ｐ−メトキシ
ベンジル基、ｏ−ヒドロキシベンジル基、ｏ−メトキシ
ベンジル基などを挙げることができる。
【００１７】Ｒ1として、好ましくは水素原子又は置換
基を有してもよい炭素数１〜１０のアルキル基であり、
より好ましくは水素原子又はメチル基である。
基を有してもよい炭素数１〜１０のアルキル基であり、
より好ましくは水素原子又はメチル基である。
【００１８】本発明の第一の態様である前記式（１）で
表されるＮ−カルバモイル−α−プロパルギルグリシン
誘導体は、本発明者らによりプロパルギルグリシン誘導
体製造における有用性が確認された新規化合物である。
前記式（１）におけるＲ1は、前記式（２）で表される
化合物に由来し、既に化合物（２）について説明したも
のと同様である。尚、前記式（１）で表される化合物は
不斉炭素原子を有するが、光学活性体、ラセミ体のいず
れも本発明の範囲に含まれる。医薬、農薬あるいは生理
活性物質の合成中間体としては、光学活性体が好まし
く、Ｄ体がより好ましい。
表されるＮ−カルバモイル−α−プロパルギルグリシン
誘導体は、本発明者らによりプロパルギルグリシン誘導
体製造における有用性が確認された新規化合物である。
前記式（１）におけるＲ1は、前記式（２）で表される
化合物に由来し、既に化合物（２）について説明したも
のと同様である。尚、前記式（１）で表される化合物は
不斉炭素原子を有するが、光学活性体、ラセミ体のいず
れも本発明の範囲に含まれる。医薬、農薬あるいは生理
活性物質の合成中間体としては、光学活性体が好まし
く、Ｄ体がより好ましい。
【００１９】次に本発明の第ニの態様について説明す
る。本態様では、前記式（２）で表される５−置換ヒダ
ントイン誘導体をヒダントイナーゼにより加水分解して
前記式（１）で表されるＮ−カルバモイル−α−プロパ
ルギルグリシン誘導体を製造する。
る。本態様では、前記式（２）で表される５−置換ヒダ
ントイン誘導体をヒダントイナーゼにより加水分解して
前記式（１）で表されるＮ−カルバモイル−α−プロパ
ルギルグリシン誘導体を製造する。
【００２０】ここでヒダントイナーゼとは、５−置換ヒ
ダントイン誘導体を加水分解してＮ−カルバモイル−α
−アミノ酸誘導体を生成する活性を有する酵素である。
前記式（２）で表される５−置換ヒダントイン誘導体を
基質として加水分解できる酵素であれば、動物、植物、
又は、微生物由来のいずれの酵素でも使用できるが、工
業的な利用には微生物由来のものが好ましい。また、Ｄ
体選択的なヒダントイナーゼ、又は、Ｌ体選択的なヒダ
ントイナーゼを用いて、式（１）で表されるＮ−カルバ
モイル−α−プロパルギルグリシン誘導体のＤ体、又
は、Ｌ体を製造することもできる。
ダントイン誘導体を加水分解してＮ−カルバモイル−α
−アミノ酸誘導体を生成する活性を有する酵素である。
前記式（２）で表される５−置換ヒダントイン誘導体を
基質として加水分解できる酵素であれば、動物、植物、
又は、微生物由来のいずれの酵素でも使用できるが、工
業的な利用には微生物由来のものが好ましい。また、Ｄ
体選択的なヒダントイナーゼ、又は、Ｌ体選択的なヒダ
ントイナーゼを用いて、式（１）で表されるＮ−カルバ
モイル−α−プロパルギルグリシン誘導体のＤ体、又
は、Ｌ体を製造することもできる。
【００２１】本発明で用いるＤ体選択的なヒダントイナ
ーゼとしては、当該酵素の生産能力を有する動物、植
物、又は、微生物由来のいずれの酵素でも使用できる
が、工業的な利用には微生物由来のものが好ましい。例
えば、細菌に属する微生物としてはアセトバクター属
（Acetobacter）、アクロモバクター属（Achromobacte
r）、アエロバクター属（Aerobacter）、アグロバクテ
リウム属（Agrobacterium）、アルカリゲネス属（Alcal
igenes）、アルスロバクター属（Arthrobacter）、バチ
ルス属（Bacillus）、ブレビバクテリウム属（Brevibac
terium）、コリネバクテリウム属（Corynebacteriu
m）、エンテロバクター属（Enterobacter）、エルウイ
ニア属（Erwinia）、エシエリヒア属（Escherichia）、
クレブシエラ属（Klebsiella）、ミクロバクテリウム属
（Microbacterium）、ミクロコッカス属（Micrococcu
s）、プロタミノバクター属（Protaminobacter）、プロ
テウス属（Proteus）、シュードモナス属（Pseudomona
s）、サルチナ属（Sartina）、セラチア属（Serrati
a）、キサントモナス属（Xanthomonas）、アエロモナス
属（Aeromonas）、フラボバクテリウム属（Flavobacter
ium）、リゾビウム属（Rhizobium）など、放線菌に属す
る微生物としてはアクチノミセス属（Actinomyces）、
ミコバクテリウム属（Mycobacterium）、ノカルデイア
属（Nocardia）、ストレプトミセス属（Streptomyce
s）、アクチノプラネス属（Actinoplanes）、ロドコッ
カス属（Rhodococcus）など、かびに属するものとして
はアスペルギルス属（Aspergillus）、パエシロミセス
属（Paecilomyces）、ペニシリウム属（Penicillium）
など、酵母に属する微生物としてはキャンディダ属（Ca
ndida）、ピヒア属（Phichia）、ロードトルラ属（Rhod
otorula）又はトルロプシス属（Torulopsis）などを挙
げることができる。
ーゼとしては、当該酵素の生産能力を有する動物、植
物、又は、微生物由来のいずれの酵素でも使用できる
が、工業的な利用には微生物由来のものが好ましい。例
えば、細菌に属する微生物としてはアセトバクター属
（Acetobacter）、アクロモバクター属（Achromobacte
r）、アエロバクター属（Aerobacter）、アグロバクテ
リウム属（Agrobacterium）、アルカリゲネス属（Alcal
igenes）、アルスロバクター属（Arthrobacter）、バチ
ルス属（Bacillus）、ブレビバクテリウム属（Brevibac
terium）、コリネバクテリウム属（Corynebacteriu
m）、エンテロバクター属（Enterobacter）、エルウイ
ニア属（Erwinia）、エシエリヒア属（Escherichia）、
クレブシエラ属（Klebsiella）、ミクロバクテリウム属
（Microbacterium）、ミクロコッカス属（Micrococcu
s）、プロタミノバクター属（Protaminobacter）、プロ
テウス属（Proteus）、シュードモナス属（Pseudomona
s）、サルチナ属（Sartina）、セラチア属（Serrati
a）、キサントモナス属（Xanthomonas）、アエロモナス
属（Aeromonas）、フラボバクテリウム属（Flavobacter
ium）、リゾビウム属（Rhizobium）など、放線菌に属す
る微生物としてはアクチノミセス属（Actinomyces）、
ミコバクテリウム属（Mycobacterium）、ノカルデイア
属（Nocardia）、ストレプトミセス属（Streptomyce
s）、アクチノプラネス属（Actinoplanes）、ロドコッ
カス属（Rhodococcus）など、かびに属するものとして
はアスペルギルス属（Aspergillus）、パエシロミセス
属（Paecilomyces）、ペニシリウム属（Penicillium）
など、酵母に属する微生物としてはキャンディダ属（Ca
ndida）、ピヒア属（Phichia）、ロードトルラ属（Rhod
otorula）又はトルロプシス属（Torulopsis）などを挙
げることができる。
【００２２】好ましくは、アグロバクテリウム属（Agro
bacterium）、バチルス属（Bacillus）、シュードモナ
ス属（Pseudomonas）又はリゾビウム属（Rhizobium）に
属する微生物由来の酵素が挙げられる。
bacterium）、バチルス属（Bacillus）、シュードモナ
ス属（Pseudomonas）又はリゾビウム属（Rhizobium）に
属する微生物由来の酵素が挙げられる。
【００２３】さらに好ましくは、アグロバクテリウム・
スピーシーズ（Agrobacterium sp.）ＫＮＫ７１２（Ｆ
ＥＲＭ ＢＰ−１９００）、バチルス・スピーシーズ
（Bacillus sp.）ＫＮＫ２４５（ＦＥＲＭ ＢＰ−４８
６３）、シュードモナス・プチダ（Pseudomonas putid
a）ＩＦＯ１２９９６、シュードモナス・スピーシーズ
（Pseudomonas sp.）ＫＮＫ００３Ａ（ＦＥＲＭ ＢＰ
−３１８１）又はリゾビウム・スピーシーズ（Rhizobiu
m sp.）ＫＮＫ１４１５（ＦＥＲＭ ＢＰ−４４１９）
由来の酵素が挙げられる。
スピーシーズ（Agrobacterium sp.）ＫＮＫ７１２（Ｆ
ＥＲＭ ＢＰ−１９００）、バチルス・スピーシーズ
（Bacillus sp.）ＫＮＫ２４５（ＦＥＲＭ ＢＰ−４８
６３）、シュードモナス・プチダ（Pseudomonas putid
a）ＩＦＯ１２９９６、シュードモナス・スピーシーズ
（Pseudomonas sp.）ＫＮＫ００３Ａ（ＦＥＲＭ ＢＰ
−３１８１）又はリゾビウム・スピーシーズ（Rhizobiu
m sp.）ＫＮＫ１４１５（ＦＥＲＭ ＢＰ−４４１９）
由来の酵素が挙げられる。
【００２４】本発明で用いるＬ体選択的なヒダントイナ
ーゼとしては、前述のＤ体選択的な酵素と同様に、当該
酵素の生産能力を有する動物、植物、微生物由来のもの
が使用できるが、工業的な利用には微生物由来のものが
好ましい。微生物としては、当該酵素の生産能力を有す
る微生物であればいずれも利用できるが、例えば、以下
の公知の、当該酵素の生産能力を有する微生物であるバ
チルス属（Bacillus）、フラボバクテリウム属（Flavob
acterium）、アルスロバクター属（Arthrobacter）、シ
ュードモナス属（Pseudomonas）又はノカルディア属（N
ocardia）に属する微生物を挙げることができる。
ーゼとしては、前述のＤ体選択的な酵素と同様に、当該
酵素の生産能力を有する動物、植物、微生物由来のもの
が使用できるが、工業的な利用には微生物由来のものが
好ましい。微生物としては、当該酵素の生産能力を有す
る微生物であればいずれも利用できるが、例えば、以下
の公知の、当該酵素の生産能力を有する微生物であるバ
チルス属（Bacillus）、フラボバクテリウム属（Flavob
acterium）、アルスロバクター属（Arthrobacter）、シ
ュードモナス属（Pseudomonas）又はノカルディア属（N
ocardia）に属する微生物を挙げることができる。
【００２５】上記微生物は野生株であってもよく、ま
た、変異処理によってヒダントイナーゼ活性が高められ
た変異株であってもよい。さらに、遺伝子組換え等の方
法を用いて、上記微生物由来のヒダントイナーゼを高生
産するように作成された形質転換微生物であってもよ
い。
た、変異処理によってヒダントイナーゼ活性が高められ
た変異株であってもよい。さらに、遺伝子組換え等の方
法を用いて、上記微生物由来のヒダントイナーゼを高生
産するように作成された形質転換微生物であってもよ
い。
【００２６】ヒダントイナーゼを効率良く高生産する形
質転換微生物の作成方法としては、例えばＷＯ９６／２
０２７５記載のように、ヒダントイナーゼ活性を示す菌
株からヒダントイナーゼ遺伝子をクローニングした後、
適当なベクターとの組換えプラスミドを作成して、これ
を用いて適当な宿主菌を形質転換することで得られる。
なお、組換えＤＮＡ技術については当該分野において周
知であり、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎ
ｇ ２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎ
ｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓ
ｓ，１９８９）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ
ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （Ｇｒ
ｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅ
ｓ ａｎｄＷｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ）に
記載されている。
質転換微生物の作成方法としては、例えばＷＯ９６／２
０２７５記載のように、ヒダントイナーゼ活性を示す菌
株からヒダントイナーゼ遺伝子をクローニングした後、
適当なベクターとの組換えプラスミドを作成して、これ
を用いて適当な宿主菌を形質転換することで得られる。
なお、組換えＤＮＡ技術については当該分野において周
知であり、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎ
ｇ ２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎ
ｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓ
ｓ，１９８９）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ
ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （Ｇｒ
ｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅ
ｓ ａｎｄＷｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ）に
記載されている。
【００２７】このようにして得られた、ヒダントイナー
ゼを高生産する形質転換微生物としてはＷＯ９６／２０
２７５記載の、バチルス・スピーシーズ（Bacillus s
p.）ＫＮＫ２４５（ＦＥＲＭ ＢＰ−４８６３）由来の
ヒダントイナーゼ遺伝子を含有するエシェリヒア・コリ
（Escherichia coli）ＨＢ１０１ ｐＴＨ１０４（ＦＥ
ＲＭ ＢＰ−４８６４）、アグロバクテリウム・スピー
シーズ（Agrobacteriumsp.）ＫＮＫ７１２（ＦＥＲＭ
ＢＰ−１９００）由来のヒダントイナーゼ遺伝子を含有
するエシェリヒア・コリ（Escherichia coli）ＨＢ１０
１ ｐＡＨ１０４３（ＦＥＲＭ ＢＰ−４８６５）、又
はシュードモナス・スピーシーズ（Pseudomonas sp.）
ＫＮＫ００３Ａ（ＦＥＲＭ ＢＰ−３１８１）由来のヒ
ダントイナーゼ遺伝子を含有するエシェリヒア・コリ
（Escherichia coli）ＨＢ１０１ｐＰＨＤ３０１（ＦＥ
ＲＭ ＢＰ−４８６６）等を挙げることができる。
ゼを高生産する形質転換微生物としてはＷＯ９６／２０
２７５記載の、バチルス・スピーシーズ（Bacillus s
p.）ＫＮＫ２４５（ＦＥＲＭ ＢＰ−４８６３）由来の
ヒダントイナーゼ遺伝子を含有するエシェリヒア・コリ
（Escherichia coli）ＨＢ１０１ ｐＴＨ１０４（ＦＥ
ＲＭ ＢＰ−４８６４）、アグロバクテリウム・スピー
シーズ（Agrobacteriumsp.）ＫＮＫ７１２（ＦＥＲＭ
ＢＰ−１９００）由来のヒダントイナーゼ遺伝子を含有
するエシェリヒア・コリ（Escherichia coli）ＨＢ１０
１ ｐＡＨ１０４３（ＦＥＲＭ ＢＰ−４８６５）、又
はシュードモナス・スピーシーズ（Pseudomonas sp.）
ＫＮＫ００３Ａ（ＦＥＲＭ ＢＰ−３１８１）由来のヒ
ダントイナーゼ遺伝子を含有するエシェリヒア・コリ
（Escherichia coli）ＨＢ１０１ｐＰＨＤ３０１（ＦＥ
ＲＭ ＢＰ−４８６６）等を挙げることができる。
【００２８】前述のヒダントイナーゼ活性を示す微生
物、或いは、上記形質転換微生物によるヒダントイナー
ゼの生産は、例えば、ＷＯ９６／２０２７５に記載され
ているように、通常の栄養培地を用いて培養を行えば良
く、必用に応じて、酵素誘導のための処理を行うことも
できる。酵素の誘導は、例えば、培地にウラシルを添加
して培養することにより行うことができる。
物、或いは、上記形質転換微生物によるヒダントイナー
ゼの生産は、例えば、ＷＯ９６／２０２７５に記載され
ているように、通常の栄養培地を用いて培養を行えば良
く、必用に応じて、酵素誘導のための処理を行うことも
できる。酵素の誘導は、例えば、培地にウラシルを添加
して培養することにより行うことができる。
【００２９】本発明において、上記微生物によって生産
されたヒダントイナーゼは、酵素自体として用いること
ができるほか、本酵素活性を有する微生物若しくはその
処理物としても用いることができる。ここで、微生物の
処理物とは、例えば、粗抽出液、培養菌体凍結乾燥生物
体、アセトン乾燥生物体、またはそれらの菌体の破砕物
を意味する。
されたヒダントイナーゼは、酵素自体として用いること
ができるほか、本酵素活性を有する微生物若しくはその
処理物としても用いることができる。ここで、微生物の
処理物とは、例えば、粗抽出液、培養菌体凍結乾燥生物
体、アセトン乾燥生物体、またはそれらの菌体の破砕物
を意味する。
【００３０】更にそれらは、酵素自体あるいは菌体のま
ま公知の手段で固定化して得た固定化酵素として用いら
れ得る。なお、酵素を固定化して安定化することで、酵
素反応を、より過酷な温度域、高アルカリｐＨ域で行う
ことが可能となり、反応をより効率的に進行させること
ができる。さらに、酵素の反復使用が可能となること、
製造プロセスが簡略化できるなどによる製造コストの低
減等のメリットも期待できる。
ま公知の手段で固定化して得た固定化酵素として用いら
れ得る。なお、酵素を固定化して安定化することで、酵
素反応を、より過酷な温度域、高アルカリｐＨ域で行う
ことが可能となり、反応をより効率的に進行させること
ができる。さらに、酵素の反復使用が可能となること、
製造プロセスが簡略化できるなどによる製造コストの低
減等のメリットも期待できる。
【００３１】固定化は当業者に周知の方法である架橋
法、共有結合法、物理的吸着法、包括法などで行い得
る。酵素の固定化に使用される支持体としては、例え
ば、Duolite A568またはDS17186（ローム・アンド・ハ
ース社：登録商標）などのフェノールホルムアルデヒド
陰イオン交換樹脂、Amberlite IRA935、IRA945、IRA901
（ローム・アンド・ハース社：登録商標）、Lewatit OC
1037（バイエル社：登録商標）、Diaion EX-05（三菱化
学：登録商標）などのポリスチレン樹脂のような各種ア
ミンやアンモニウム塩あるいはジエタノールアミン型の
官能基を持つ各種の陰イオン交換樹脂が適している。そ
の他、DEAE-セルロースなどの支持体も使用することが
できる。
法、共有結合法、物理的吸着法、包括法などで行い得
る。酵素の固定化に使用される支持体としては、例え
ば、Duolite A568またはDS17186（ローム・アンド・ハ
ース社：登録商標）などのフェノールホルムアルデヒド
陰イオン交換樹脂、Amberlite IRA935、IRA945、IRA901
（ローム・アンド・ハース社：登録商標）、Lewatit OC
1037（バイエル社：登録商標）、Diaion EX-05（三菱化
学：登録商標）などのポリスチレン樹脂のような各種ア
ミンやアンモニウム塩あるいはジエタノールアミン型の
官能基を持つ各種の陰イオン交換樹脂が適している。そ
の他、DEAE-セルロースなどの支持体も使用することが
できる。
【００３２】固定化酵素の好適な製造方法としては、例
えば、ＷＯ９６／２０２７５に示す方法で行い得る。す
なわち、ヒダントイナーゼ活性を有する菌株の培養液を
集菌、超音波などにより菌体を破砕後、得られた酵素液
に例えば陰イオン交換樹脂Duolite A−５６８を加えて
攪拌して酵素を吸着させることができる。この酵素を吸
着した樹脂に例えばグルタルアルデヒドなどの架橋試薬
を加えて攪拌することで架橋処理を行い、さらに安定性
を向上させることもできる。これらの処理を行った後に
樹脂を濾集、洗浄して固定化ヒダントイナーゼを得るこ
とができる。
えば、ＷＯ９６／２０２７５に示す方法で行い得る。す
なわち、ヒダントイナーゼ活性を有する菌株の培養液を
集菌、超音波などにより菌体を破砕後、得られた酵素液
に例えば陰イオン交換樹脂Duolite A−５６８を加えて
攪拌して酵素を吸着させることができる。この酵素を吸
着した樹脂に例えばグルタルアルデヒドなどの架橋試薬
を加えて攪拌することで架橋処理を行い、さらに安定性
を向上させることもできる。これらの処理を行った後に
樹脂を濾集、洗浄して固定化ヒダントイナーゼを得るこ
とができる。
【００３３】本発明の酵素反応は以下の方法で行うこと
ができる。基質として前記式（２）で表される５−置換
ヒダントイン誘導体を用い、前述のヒダントイナーゼ存
在下、水性媒体中で反応を行う。基質の仕込み濃度は
０．１％以上、９０％（ｗ／ｖ）以下で溶解または懸濁
した状態で反応を行い、反応温度は１０℃以上、８０℃
以下の適当な温度で調節し、ｐＨ４以上、１０以下に保
ちつつ暫時静置または攪拌すればよい。また、基質を連
続的に添加しうる。反応は、バッチ法または連続方式で
行い得る。本発明の反応は、固定化酵素、膜リアクター
などを利用して行うことも可能である。
ができる。基質として前記式（２）で表される５−置換
ヒダントイン誘導体を用い、前述のヒダントイナーゼ存
在下、水性媒体中で反応を行う。基質の仕込み濃度は
０．１％以上、９０％（ｗ／ｖ）以下で溶解または懸濁
した状態で反応を行い、反応温度は１０℃以上、８０℃
以下の適当な温度で調節し、ｐＨ４以上、１０以下に保
ちつつ暫時静置または攪拌すればよい。また、基質を連
続的に添加しうる。反応は、バッチ法または連続方式で
行い得る。本発明の反応は、固定化酵素、膜リアクター
などを利用して行うことも可能である。
【００３４】水性媒体としては、水、緩衝液、これらに
エタノールのような水溶性有機溶媒を含む水性媒体、あ
るいは、水に溶解しにくい有機溶媒、たとえば、酢酸エ
チル、酢酸ブチル、トルエン、クロロホルム、ｎ−ヘキ
サンなどの有機溶媒を含む水性媒体との２層系などの適
当な溶媒を用いることができる。さらに必用に応じて、
抗酸化剤、界面活性剤、補酵素、金属などを添加するこ
ともできる。
エタノールのような水溶性有機溶媒を含む水性媒体、あ
るいは、水に溶解しにくい有機溶媒、たとえば、酢酸エ
チル、酢酸ブチル、トルエン、クロロホルム、ｎ−ヘキ
サンなどの有機溶媒を含む水性媒体との２層系などの適
当な溶媒を用いることができる。さらに必用に応じて、
抗酸化剤、界面活性剤、補酵素、金属などを添加するこ
ともできる。
【００３５】かくして、前記式（２）で表される５置換
ヒダントインは加水分解され、前記式（１）で表される
Ｎ−カルバモイル−α−プロパルギルグリシン誘導体に
変換される。ヒダントイナーゼとして、前述の立体選択
性のヒダントイナーゼを用いた場合には、光学活性のＮ
−カルバモイル−α−プロパルギルグリシン誘導体を得
ることができる。
ヒダントインは加水分解され、前記式（１）で表される
Ｎ−カルバモイル−α−プロパルギルグリシン誘導体に
変換される。ヒダントイナーゼとして、前述の立体選択
性のヒダントイナーゼを用いた場合には、光学活性のＮ
−カルバモイル−α−プロパルギルグリシン誘導体を得
ることができる。
【００３６】なお、立体選択性のヒダントイナーゼを用
いて光学活性のＮ−カルバモイル−α−プロパルギルグ
リシン誘導体を製造する場合、反応はｐＨ７．５以上、
好ましくは８以上で反応を行うのが良い。前記ｐＨ条件
においては、基質である前記式（２）で表される５置換
ヒダントインが容易にラセミ化するため、５０％を超え
る収率でＮ−カルバモイル−α−プロパルギルグリシン
誘導体を得ることが可能となる。
いて光学活性のＮ−カルバモイル−α−プロパルギルグ
リシン誘導体を製造する場合、反応はｐＨ７．５以上、
好ましくは８以上で反応を行うのが良い。前記ｐＨ条件
においては、基質である前記式（２）で表される５置換
ヒダントインが容易にラセミ化するため、５０％を超え
る収率でＮ−カルバモイル−α−プロパルギルグリシン
誘導体を得ることが可能となる。
【００３７】生成したＮ−カルバモイル−α−プロパル
ギルグリシン誘導体は、反応液のまま、脱カルバモイル
反応に供してもよいし、常套分離方法、例えば抽出、濃
縮、晶析、またはカラムクロマトグラフィーなどの分離
方法やそれらの組み合わせにより分離、精製することが
できる。
ギルグリシン誘導体は、反応液のまま、脱カルバモイル
反応に供してもよいし、常套分離方法、例えば抽出、濃
縮、晶析、またはカラムクロマトグラフィーなどの分離
方法やそれらの組み合わせにより分離、精製することが
できる。
【００３８】以上述べた方法により得られるＮ−カルバ
モイル−α−プロパルギルグリシン誘導体は、化学的
に、若しくは脱カルバモイル活性を有する酵素を用いて
カルバモイル基を除去することにより、容易にプロパル
ギルグリシン誘導体に導くことができる。
モイル−α−プロパルギルグリシン誘導体は、化学的
に、若しくは脱カルバモイル活性を有する酵素を用いて
カルバモイル基を除去することにより、容易にプロパル
ギルグリシン誘導体に導くことができる。
【００３９】
【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳しく
説明するが、本発明はこれら実施例にのみ限定されるも
のではない。
説明するが、本発明はこれら実施例にのみ限定されるも
のではない。
【００４０】（実施例１）固定化ヒダントイナーゼを用
いた５−（２−ブチニル）ヒダントインからのＮ−カル
バモイル−Ｄ−ブチニルグリシンの製造 ＷＯ９６／２０２７５記載の培養方法と固定化酵素の調
製方法に従い、バチルス・スピーシーズ ＫＮＫ２４５
株（ＦＥＲＭ ＢＰ−４８６３）を培養、集菌後、超音
波破砕して得た酵素液に固定化用担体である陰イオン交
換樹脂、Ｄｕｏｌｉｔｅ Ａ−５６８を添加して酵素を
吸着させ、さらにグルタルアルデヒドで架橋処理するこ
とで固定化ヒダントイナーゼを得た。次に、ラセミ体の
５−（２−ブチニル）ヒダントイン１．５ｇに水３０ｍ
ｌと０．５Ｍ硫酸マンガン水溶液０．０６ｍｌを加え１
０ｗｔ％水酸化ナトリウム水溶液によりｐＨ９．５に調
整した溶液に、上記の様にして得られた固定化ヒダント
イナーゼ１．６ｇ（湿重量）を加えて、５５℃、２４時
間攪拌して反応させた。反応中は１０ｗｔ％水酸化ナト
リウム水溶液によりｐＨを９．５に保った。反応終了
後、固定化ヒダントイナーゼをろ別して得られた淡黄色
の反応液に活性炭２００ｍｇを添加、攪拌後、ろ過する
ことで無色透明の溶液を得た。６Ｎ塩酸によりｐＨを
１．１に下げた溶液を減圧濃縮晶析、濾集、乾燥し、白
色のカルバモイルブチニルグリシン粗結晶を１．４８ｇ
取得した。この粗結晶１ｇを水２０ｍｌに溶解し、ｐＨ
４．３で濃縮晶析、濾集、乾燥することで、白色のＮ−
カルバモイルブチニルグリシン結晶を５１６ｍｇ取得し
た（ヒダントイン誘導体からの収率３０．８％）。この
ようにして得られたＮ−カルバモイルブチニルグリシン
を、カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ ５Ｃ８−ＭＳ、移動
相：アセトニトリル／１０ｍＭリン酸二水素カリウム水
溶液＝５／９５、流速：０．８ｍｌ／ｍｉｎ、検出波
長：２１０ｎｍ、カラム温度：４０℃の条件でＨＰＬＣ
分析すると、溶出時間５．５分であり、純度は面積比で
９９．７％であった。また、1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨ
ｚ、Ｄ2Ｏ）分析を行うと、δ１．７６〜１．７７
（ｔ、Ｊ＝２．４４Ｈｚ、３Ｈ）、２．５８〜２．６１
（ｍ、２Ｈ）、４．１１〜４．１３（ｔ、Ｊ＝５．３
７、１Ｈ）であり、比旋光度は、［α］D 20＝−１５．
４°（ｃ１．０、０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液）で
あった。さらに、得られたＮ−カルバモイルブチニルグ
リシンの光学純度と絶対配置を以下の方法により決定し
たところ、９９．９％ｅ．ｅ．でＤ体であった。
いた５−（２−ブチニル）ヒダントインからのＮ−カル
バモイル−Ｄ−ブチニルグリシンの製造 ＷＯ９６／２０２７５記載の培養方法と固定化酵素の調
製方法に従い、バチルス・スピーシーズ ＫＮＫ２４５
株（ＦＥＲＭ ＢＰ−４８６３）を培養、集菌後、超音
波破砕して得た酵素液に固定化用担体である陰イオン交
換樹脂、Ｄｕｏｌｉｔｅ Ａ−５６８を添加して酵素を
吸着させ、さらにグルタルアルデヒドで架橋処理するこ
とで固定化ヒダントイナーゼを得た。次に、ラセミ体の
５−（２−ブチニル）ヒダントイン１．５ｇに水３０ｍ
ｌと０．５Ｍ硫酸マンガン水溶液０．０６ｍｌを加え１
０ｗｔ％水酸化ナトリウム水溶液によりｐＨ９．５に調
整した溶液に、上記の様にして得られた固定化ヒダント
イナーゼ１．６ｇ（湿重量）を加えて、５５℃、２４時
間攪拌して反応させた。反応中は１０ｗｔ％水酸化ナト
リウム水溶液によりｐＨを９．５に保った。反応終了
後、固定化ヒダントイナーゼをろ別して得られた淡黄色
の反応液に活性炭２００ｍｇを添加、攪拌後、ろ過する
ことで無色透明の溶液を得た。６Ｎ塩酸によりｐＨを
１．１に下げた溶液を減圧濃縮晶析、濾集、乾燥し、白
色のカルバモイルブチニルグリシン粗結晶を１．４８ｇ
取得した。この粗結晶１ｇを水２０ｍｌに溶解し、ｐＨ
４．３で濃縮晶析、濾集、乾燥することで、白色のＮ−
カルバモイルブチニルグリシン結晶を５１６ｍｇ取得し
た（ヒダントイン誘導体からの収率３０．８％）。この
ようにして得られたＮ−カルバモイルブチニルグリシン
を、カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ ５Ｃ８−ＭＳ、移動
相：アセトニトリル／１０ｍＭリン酸二水素カリウム水
溶液＝５／９５、流速：０．８ｍｌ／ｍｉｎ、検出波
長：２１０ｎｍ、カラム温度：４０℃の条件でＨＰＬＣ
分析すると、溶出時間５．５分であり、純度は面積比で
９９．７％であった。また、1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨ
ｚ、Ｄ2Ｏ）分析を行うと、δ１．７６〜１．７７
（ｔ、Ｊ＝２．４４Ｈｚ、３Ｈ）、２．５８〜２．６１
（ｍ、２Ｈ）、４．１１〜４．１３（ｔ、Ｊ＝５．３
７、１Ｈ）であり、比旋光度は、［α］D 20＝−１５．
４°（ｃ１．０、０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液）で
あった。さらに、得られたＮ−カルバモイルブチニルグ
リシンの光学純度と絶対配置を以下の方法により決定し
たところ、９９．９％ｅ．ｅ．でＤ体であった。
【００４１】光学純度の決定は、得られたＮ−カルバモ
イルブチニルグリシンを硫酸酸性下、１０ｗｔ％亜硝酸
ナトリウム水溶液を１．１当量加え１時間室温で反応さ
せて脱カルバモイル化してブチニルグリシンに誘導して
ＨＰＬＣ分析（キラルカラム：ＣＲＯＷＮＰＡＫ ＣＲ
（＋）、移動相：過塩素酸水溶液（ｐＨ１．５）、流
速：０．３ｍｌ／ｍｉｎ、検出波長：２１０ｎｍ、カラ
ム温度：０℃）することで行った。
イルブチニルグリシンを硫酸酸性下、１０ｗｔ％亜硝酸
ナトリウム水溶液を１．１当量加え１時間室温で反応さ
せて脱カルバモイル化してブチニルグリシンに誘導して
ＨＰＬＣ分析（キラルカラム：ＣＲＯＷＮＰＡＫ ＣＲ
（＋）、移動相：過塩素酸水溶液（ｐＨ１．５）、流
速：０．３ｍｌ／ｍｉｎ、検出波長：２１０ｎｍ、カラ
ム温度：０℃）することで行った。
【００４２】また、絶対配置決定には、まず、ラセミ体
の５−（２−ブチニル）ヒダントインを上記ヒダントイ
ナーゼで加水分解、Ｄ体特異的デカルバモイラーゼ（Ｗ
Ｏ９２／１０５７９を参照）で脱カルバモイル化後、晶
析してＤ−ブチニルグリシン標品を取得し、この比旋光
度を測定して、文献値（ Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ、１９７２、１１、３３２７−３３２９を参照）より
Ｄ体であることを確認した。次に、取得したＮ−カルバ
モイルブチニルグリシンを前述の光学純度決定法により
ブチニルグリシンに誘導、ＨＰＬＣ分析したところ、Ｄ
−ブチニルグリシン標品と溶出時間が一致した。
の５−（２−ブチニル）ヒダントインを上記ヒダントイ
ナーゼで加水分解、Ｄ体特異的デカルバモイラーゼ（Ｗ
Ｏ９２／１０５７９を参照）で脱カルバモイル化後、晶
析してＤ−ブチニルグリシン標品を取得し、この比旋光
度を測定して、文献値（ Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ、１９７２、１１、３３２７−３３２９を参照）より
Ｄ体であることを確認した。次に、取得したＮ−カルバ
モイルブチニルグリシンを前述の光学純度決定法により
ブチニルグリシンに誘導、ＨＰＬＣ分析したところ、Ｄ
−ブチニルグリシン標品と溶出時間が一致した。
【００４３】（実施例２）シュードモナス属細菌を用い
た５−（２−ブチニル）ヒダントインからのＮ−カルバ
モイル−Ｄ−ブチニルグリシンの製造 シュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐ
ｕｔｉｄａ）ＩＦＯ１２９９６を固体培地（１０ｇ／ｌ
ポリペプトン、２ｇ／ｌ イーストエキス、１ｇ／ｌ
硫酸マグネシウム七水和物、１５ｇ／ｌ 寒天、ｐＨ
７．０）で３０℃にて２４時間培養した。この菌体一白
金耳を、５００ｍｌ容坂口フラスコ中、１２０℃で１５
分間殺菌した１００ｍｌ液体培地（２０ｇ／ｌ 肉エキ
ス、６ｇ／ｌ グリセロール、１ｇ／ｌ ウラシル、２
ｇ／ｌ リン酸二水素カリウム、１ｇ／ｌ 硫酸マグネ
シウム七水和物、４０ｍｇ／ｌ 塩化カルシウム二水和
物、２０ｍｇ／ｌ 硫酸第一鉄七水和物、２０ｍｇ／ｌ
硫酸マンガン四〜六水和物、２０ｍｇ／ｌ 硫酸銅五
水和物、ｐＨ５．５）に植菌し、３０℃にて２４時間振
とう培養した。この培養液９ｍｌから遠心分離により得
られた菌体を１．５ｍｌの０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ
８．７）に懸濁し、ラセミ体の５−（２−ブチニル）ヒ
ダントイン１５ｍｇと０．５Ｍ硫酸マンガン水溶液０．
００３ｍｌを添加後、１０Ｎ水酸化ナトリウム水溶液に
よりｐＨを９．０付近に保ちつつ、４０℃で２４時間攪
拌して反応させた。反応液を実施例１と同様のＨＰＬＣ
分析条件で定量したところ、６．３ｍｇ／ｍｌのＮ−カ
ルバモイルブチニルグリシンの生成が認められた（変換
率５５％）。その光学純度を実施例１と同様の方法で確
認したところ、８８．９％ｅ．ｅ．でＤ体であった。
た５−（２−ブチニル）ヒダントインからのＮ−カルバ
モイル−Ｄ−ブチニルグリシンの製造 シュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐ
ｕｔｉｄａ）ＩＦＯ１２９９６を固体培地（１０ｇ／ｌ
ポリペプトン、２ｇ／ｌ イーストエキス、１ｇ／ｌ
硫酸マグネシウム七水和物、１５ｇ／ｌ 寒天、ｐＨ
７．０）で３０℃にて２４時間培養した。この菌体一白
金耳を、５００ｍｌ容坂口フラスコ中、１２０℃で１５
分間殺菌した１００ｍｌ液体培地（２０ｇ／ｌ 肉エキ
ス、６ｇ／ｌ グリセロール、１ｇ／ｌ ウラシル、２
ｇ／ｌ リン酸二水素カリウム、１ｇ／ｌ 硫酸マグネ
シウム七水和物、４０ｍｇ／ｌ 塩化カルシウム二水和
物、２０ｍｇ／ｌ 硫酸第一鉄七水和物、２０ｍｇ／ｌ
硫酸マンガン四〜六水和物、２０ｍｇ／ｌ 硫酸銅五
水和物、ｐＨ５．５）に植菌し、３０℃にて２４時間振
とう培養した。この培養液９ｍｌから遠心分離により得
られた菌体を１．５ｍｌの０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ
８．７）に懸濁し、ラセミ体の５−（２−ブチニル）ヒ
ダントイン１５ｍｇと０．５Ｍ硫酸マンガン水溶液０．
００３ｍｌを添加後、１０Ｎ水酸化ナトリウム水溶液に
よりｐＨを９．０付近に保ちつつ、４０℃で２４時間攪
拌して反応させた。反応液を実施例１と同様のＨＰＬＣ
分析条件で定量したところ、６．３ｍｇ／ｍｌのＮ−カ
ルバモイルブチニルグリシンの生成が認められた（変換
率５５％）。その光学純度を実施例１と同様の方法で確
認したところ、８８．９％ｅ．ｅ．でＤ体であった。
【００４４】（実施例３）アグロバクテリウム属細菌を
用いた５−（２−ブチニル）ヒダントインからのＮ−カ
ルバモイル−Ｄ−ブチニルグリシンの製造 アグロバクテリウム・スピーシーズ ＫＮＫ７１２株
（ＦＥＲＭ ＢＰ−１９００）を固体培地（１０ｇ／ｌ
ポリペプトン、１０ｇ／ｌ 肉エキス、５ｇ／ｌ イ
ーストエキス、３ｇ／ｌ ＮａＣｌ、１５ｇ／ｌ 寒
天、ｐＨ７．０）で３０℃にて４８時間培養した。この
菌体一白金耳を、５００ｍｌ容坂口フラスコ中、１２０
℃で１５分間殺菌した５０ｍｌ液体培地（１０ｇ／ｌ
ポリペプトン、１０ｇ／ｌ 肉エキス、５ｇ／ｌ イー
ストエキス、３ｇ／ｌ ＮａＣｌ、ｐＨ７．０）へ植菌
し、３０℃にて２４時間振とう培養した。この培養液９
ｍｌから遠心分離により得られた菌体を１．５ｍｌの
０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ８．７）に懸濁し、ラセミ体
の５−（２−ブチニル）ヒダントイン１５ｍｇと０．５
Ｍ硫酸マンガン水溶液０．００３ｍｌを添加後、１０Ｎ
水酸化ナトリウム水溶液によりｐＨを９．０付近に保ち
つつ、４０℃で２４時間攪拌して反応させた。
用いた５−（２−ブチニル）ヒダントインからのＮ−カ
ルバモイル−Ｄ−ブチニルグリシンの製造 アグロバクテリウム・スピーシーズ ＫＮＫ７１２株
（ＦＥＲＭ ＢＰ−１９００）を固体培地（１０ｇ／ｌ
ポリペプトン、１０ｇ／ｌ 肉エキス、５ｇ／ｌ イ
ーストエキス、３ｇ／ｌ ＮａＣｌ、１５ｇ／ｌ 寒
天、ｐＨ７．０）で３０℃にて４８時間培養した。この
菌体一白金耳を、５００ｍｌ容坂口フラスコ中、１２０
℃で１５分間殺菌した５０ｍｌ液体培地（１０ｇ／ｌ
ポリペプトン、１０ｇ／ｌ 肉エキス、５ｇ／ｌ イー
ストエキス、３ｇ／ｌ ＮａＣｌ、ｐＨ７．０）へ植菌
し、３０℃にて２４時間振とう培養した。この培養液９
ｍｌから遠心分離により得られた菌体を１．５ｍｌの
０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ８．７）に懸濁し、ラセミ体
の５−（２−ブチニル）ヒダントイン１５ｍｇと０．５
Ｍ硫酸マンガン水溶液０．００３ｍｌを添加後、１０Ｎ
水酸化ナトリウム水溶液によりｐＨを９．０付近に保ち
つつ、４０℃で２４時間攪拌して反応させた。
【００４５】反応液を実施例１と同様のＨＰＬＣ分析条
件で定量したところ、４．５ｍｇ／ｍｌのＮ−カルバモ
イルブチニルグリシンの生成が認められた（変換率４０
％）。その光学純度を実施例１と同様の方法で確認した
ところ、８８．２％ｅ．ｅ．でＤ体あった。
件で定量したところ、４．５ｍｇ／ｍｌのＮ−カルバモ
イルブチニルグリシンの生成が認められた（変換率４０
％）。その光学純度を実施例１と同様の方法で確認した
ところ、８８．２％ｅ．ｅ．でＤ体あった。
【００４６】（実施例４）バチルス属細菌を用いた５−
（２−ブチニル）ヒダントインからのＮ−カルバモイル
−Ｄ−ブチニルグリシンの製造 バチルス・スピーシーズ ＫＮＫ２４５株（ＦＥＲＭ
ＢＰ−４８６３）の乾燥保存菌体を、５００ｍｌ容坂口
フラスコ中、１２０℃で１５分間殺菌した１００ｍｌ液
体培地（１０ｇ／ｌ ポリペプトン、１０ｇ／ｌ 肉エ
キス、５ｇ／ｌイーストエキス、ｐＨ７．５）に植菌
し、４５℃にて１５時間振とう培養した。この培養液２
ｍｌを、上記培地成分に更に１ｇ／ｌ ウラシル、２
０ｍｇ／ｌ 塩化マンガンを加えた培地に植菌し、４
５℃にて２４時間振とう培養した。この培養液９ｍｌか
ら遠心分離により得られた菌体を１．５ｍｌの０．１Ｍ
炭酸緩衝液（ｐＨ８．７）に懸濁し、ラセミ体の５−
（２−ブチニル）ヒダントイン１５ｍｇと０．５Ｍ硫酸
マンガン水溶液０．００３ｍｌを添加後、１０Ｎ水酸化
ナトリウム水溶液によりｐＨを９．０付近に保ちつつ、
４０℃で２４時間攪拌して反応させた。反応液を実施例
１と同様のＨＰＬＣ分析条件で定量したところ、６．５
ｍｇ／ｍｌのＮ−カルバモイルブチニルグリシンの生成
が認められた（変換率５８％）。その光学純度を実施例
１と同様の方法で確認すると、７９．１％ｅ．ｅ．でＤ
体であった。
（２−ブチニル）ヒダントインからのＮ−カルバモイル
−Ｄ−ブチニルグリシンの製造 バチルス・スピーシーズ ＫＮＫ２４５株（ＦＥＲＭ
ＢＰ−４８６３）の乾燥保存菌体を、５００ｍｌ容坂口
フラスコ中、１２０℃で１５分間殺菌した１００ｍｌ液
体培地（１０ｇ／ｌ ポリペプトン、１０ｇ／ｌ 肉エ
キス、５ｇ／ｌイーストエキス、ｐＨ７．５）に植菌
し、４５℃にて１５時間振とう培養した。この培養液２
ｍｌを、上記培地成分に更に１ｇ／ｌ ウラシル、２
０ｍｇ／ｌ 塩化マンガンを加えた培地に植菌し、４
５℃にて２４時間振とう培養した。この培養液９ｍｌか
ら遠心分離により得られた菌体を１．５ｍｌの０．１Ｍ
炭酸緩衝液（ｐＨ８．７）に懸濁し、ラセミ体の５−
（２−ブチニル）ヒダントイン１５ｍｇと０．５Ｍ硫酸
マンガン水溶液０．００３ｍｌを添加後、１０Ｎ水酸化
ナトリウム水溶液によりｐＨを９．０付近に保ちつつ、
４０℃で２４時間攪拌して反応させた。反応液を実施例
１と同様のＨＰＬＣ分析条件で定量したところ、６．５
ｍｇ／ｍｌのＮ−カルバモイルブチニルグリシンの生成
が認められた（変換率５８％）。その光学純度を実施例
１と同様の方法で確認すると、７９．１％ｅ．ｅ．でＤ
体であった。
【００４７】
【発明の効果】本発明は、上述の構成からなるので、入
手容易な５−置換ヒダントイン誘導体から、医薬、農薬
の中間体や生理活性物質などとして有用なプロパルギル
グリシン誘導体の合成中間体であるＮ−カルバモイル−
α−プロパルギルグリシン誘導体を工業的に有利に提供
できる。
手容易な５−置換ヒダントイン誘導体から、医薬、農薬
の中間体や生理活性物質などとして有用なプロパルギル
グリシン誘導体の合成中間体であるＮ−カルバモイル−
α−プロパルギルグリシン誘導体を工業的に有利に提供
できる。
Claims (10)
- 【請求項１】下記式（１） 【化１】 （式中、Ｒ1は水素原子、置換基を有してもよい炭素数
１〜１０の環状若しくは非環状のアルキル基、若しくは
置換基を有してもよい炭素数７〜１０のアラルキル基を
表す。）で表されるＮ−カルバモイル−α−プロパルギ
ルグリシン誘導体。 - 【請求項２】光学活性体である請求項１記載のＮ−カル
バモイル−α−プロパルギルグリシン誘導体。 - 【請求項３】Ｄ体である請求項１記載のＮ−カルバモイ
ル−α−プロパルギルグリシン誘導体。 - 【請求項４】Ｒ1が水素原子又はメチル基である請求項
１から３のいずれかに記載のＮ−カルバモイル−α−プ
ロパルギルグリシン誘導体。 - 【請求項５】下記式（２） 【化２】 （式中、Ｒ1は水素原子、置換基を有してもよい炭素数
１〜１０の環状若しくは非環状のアルキル基、若しくは
置換基を有してもよい炭素数７〜１０のアラルキル基を
表す。）で表される５−置換ヒダントイン誘導体を、ヒ
ダントイナーゼにより加水分解することを特徴とする、
下記式（１） 【化３】 （式中、Ｒ1は前記と同じ）で表されるＮ−カルバモイ
ル−α−プロパルギルグリシン誘導体の製造方法。 - 【請求項６】Ｄ体のＮ−カルバモイル−α−プロパルギ
ルグリシン誘導体を製造する請求項５記載の製造方法。 - 【請求項７】ヒダントイナーゼが、アグロバクテリウム
属（Agrobacterium）、バチルス属（Bacillus）又はシ
ュードモナス属（Pseudomonas）に属する微生物由来で
ある請求項５又は６記載の製造方法。 - 【請求項８】ヒダントイナーゼが、アグロバクテリウム
・スピーシーズ（Agrobacterium sp.）ＫＮＫ７１２
（ＦＥＲＭ ＢＰ−１９００）、バチルス・スピーシー
ズ（Bacillus sp.）ＫＮＫ２４５（ＦＥＲＭ ＢＰ−４
８６３）又はシュードモナス・プチダ（Pseudomonas pu
tida）ＩＦＯ１２９９６由来である請求項５又は６記載
の製造方法。 - 【請求項９】ヒダントイナーゼを固定化酵素として使用
することを特徴とする請求項５又は６記載の製造方法。 - 【請求項１０】Ｒ1が水素原子又はメチル基である請求
項５から９のいずれかに記載の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002077409A JP2003277343A (ja) | 2002-03-20 | 2002-03-20 | 新規Ｎ−カルバモイル−α−アミノ酸及びその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002077409A JP2003277343A (ja) | 2002-03-20 | 2002-03-20 | 新規Ｎ−カルバモイル−α−アミノ酸及びその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003277343A true JP2003277343A (ja) | 2003-10-02 |
Family
ID=29227966
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002077409A Pending JP2003277343A (ja) | 2002-03-20 | 2002-03-20 | 新規Ｎ−カルバモイル−α−アミノ酸及びその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2003277343A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006103995A1 (ja) * | 2005-03-25 | 2006-10-05 | Kaneka Corporation | 光学活性α－アミノ酸誘導体の製造方法 |
-
2002
- 2002-03-20 JP JP2002077409A patent/JP2003277343A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006103995A1 (ja) * | 2005-03-25 | 2006-10-05 | Kaneka Corporation | 光学活性α－アミノ酸誘導体の製造方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5096435B2 (ja) | 光学活性α−メチルシステイン誘導体の製造方法 | |
| US4668625A (en) | Process for preparing peptides | |
| JPH0411194B2 (ja) | ||
| WO2007026860A1 (ja) | 光学活性α－ヒドロキシカルボン酸の製造方法 | |
| JP2003277343A (ja) | 新規Ｎ−カルバモイル−α−アミノ酸及びその製造方法 | |
| JPH01320991A (ja) | Ｄ−ホモフエニルアラニン類の製造方法 | |
| JPH10286098A (ja) | Ｄ−アミノ酸の製造方法、ならびにアミンの製造方法 | |
| JPH06141888A (ja) | Ｄ−マンデル酸の製法 | |
| JP2007185132A (ja) | α−アミノ酸−ω−アミド化合物の製造方法 | |
| Yamada | Screening of novel enzymes for the production of useful compounds | |
| JPS61274690A (ja) | Ｄ−α−アミノ酸の製造方法 | |
| JP2674078B2 (ja) | Ｄ−α−アミノ酸の製造法 | |
| WO2011118450A1 (ja) | 光学活性ｎ－メチルアミノ酸及び光学活性ｎ－メチルアミノ酸アミドの製造方法 | |
| JP2924679B2 (ja) | Ｄ−リジンの製法 | |
| JP2001046076A (ja) | （ｒ）−２−アミノ−１−フェニルエタノールまたはそのハロゲン置換体の製造方法 | |
| JP2674076B2 (ja) | Ｄ−α−アミノ酸の製造方法 | |
| JP3224654B2 (ja) | 光学活性なα−ヒドロキシカルボン酸およびα−ヒドロキシアミドの製造法 | |
| JP2002034593A (ja) | 光学活性α−アミノ酸の製造方法 | |
| WO2004063385A1 (ja) | 光学活性α−メチルシステイン誘導体の製造方法 | |
| US20060166337A1 (en) | Process for producing optically active erythro 3-cyclohexylserines | |
| JPS6125359B2 (ja) | ||
| JP2899071B2 (ja) | Ｌ―α―アラニンの製造法 | |
| WO1995023869A1 (fr) | Procede de fabrication de (r)-2amino-1-phenylethanol ou de ses derives halogenes, procede de fabrication de phenylserine a activite optique ou de ses derives halogenes et nouveau compose de 3-(3-chlorophenyl)serine | |
| JPH04341195A (ja) | 光学活性マンデル酸の製法 | |
| JP3960667B2 (ja) | β−カルバモイルイソ酪酸類及びその製造方法 |