JP2003267993A - 新規なペンタペプチド、テトラペプチドおよびアンジオテンシン変換酵素阻害剤 - Google Patents
新規なペンタペプチド、テトラペプチドおよびアンジオテンシン変換酵素阻害剤Info
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- JP2003267993A JP2003267993A JP2002115491A JP2002115491A JP2003267993A JP 2003267993 A JP2003267993 A JP 2003267993A JP 2002115491 A JP2002115491 A JP 2002115491A JP 2002115491 A JP2002115491 A JP 2002115491A JP 2003267993 A JP2003267993 A JP 2003267993A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】海苔の蛋白質分解酵素分解液から、アンジオテ
ンシン変換酵素阻害作用を有する新規な３種類の海苔ペ
プチドを提供する。 【構成】海苔をアルギン酸リアーゼ処理し、プロテアー
ゼＳアマノあるいはプロレザーＦＧ−１等で処理し、新
規なアンジオテンシン変換酵素阻害作用を有する３種類
の海苔ペプチドはペンタペプチド；Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｖ
ａｌ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ、テトラペプチド；Ｔｙｒ−Ｐｈ
ｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ及びテトラペプチド；Ａｌａ−Ｖａ
ｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙであり、生体内での血圧降下作用を
有し、毒性も極めて低い。
ンシン変換酵素阻害作用を有する新規な３種類の海苔ペ
プチドを提供する。 【構成】海苔をアルギン酸リアーゼ処理し、プロテアー
ゼＳアマノあるいはプロレザーＦＧ−１等で処理し、新
規なアンジオテンシン変換酵素阻害作用を有する３種類
の海苔ペプチドはペンタペプチド；Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｖ
ａｌ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ、テトラペプチド；Ｔｙｒ−Ｐｈ
ｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ及びテトラペプチド；Ａｌａ−Ｖａ
ｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙであり、生体内での血圧降下作用を
有し、毒性も極めて低い。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、医薬品として有用性を
有する下記アミノ酸の配列のペプチド構造を有する１種
類のペンタペプチド、２種類のテトラペプチド及びそれ
らペプチドを有効成分とするアンジオテンシン変換酵素
阻害剤に関する。 （１）Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ （２）Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ （３）Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ （式中、アミノ酸残基を表す各記号は、アミノ酸化学に
おいて慣用の表示法によるものである。）
有する下記アミノ酸の配列のペプチド構造を有する１種
類のペンタペプチド、２種類のテトラペプチド及びそれ
らペプチドを有効成分とするアンジオテンシン変換酵素
阻害剤に関する。 （１）Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ （２）Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ （３）Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ （式中、アミノ酸残基を表す各記号は、アミノ酸化学に
おいて慣用の表示法によるものである。）
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】近年、
海藻由来の食品たんぱく質の酵素分解中にアンジオテン
シン変換酵素（ＡＣＥ）阻害ペプチド等の血圧降下ペプ
チドが本発明者らによって報告されてきた。すなわち、
海苔たんぱく質由来のＡＣＥ阻害ペプチドとしてＩｌｅ
−Ｔｙｒ；Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ；Ａｌａ−Ｌｙｓ−
Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ；Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ等
「マリンバイオテクノロジー、６巻、１６３頁、１９９
８年」が、ヒジキたんぱく質由来のＡＣＥ阻害ペプチド
としてＧｌｙ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ；Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｔｙ
ｒ；Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ等「日本水産学会
誌、６４巻、８６２頁、１９９８年」が報告されてきて
いる。微藻類由来としては、クロレラ・スピルリナたん
ぱく質由来のＡＣＥ阻害ペプチドとしてＩｌｅ−Ｖａｌ
−Ｖａｌ−Ｇｌｕ；Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ；Ｐｈｅ−
Ａｌａ−Ｌｅｕ，Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ，Ｖａｌ−Ｖ
ａｌ−Ｐｒｏ−Ａｌａ，Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｇｌｕ；Ｉｌ
ｅ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ，Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｐｈｅ
等「マリンバイオテクノロジー、３巻、３０５頁、２０
０１年」が報告されてきている。又、ニンニク抽出物か
らはＳｅｒ−Ｔｙｒ；Ｇｌｙ−Ｔｙｒ；Ｐｈｅ−Ｔｙ
ｒ；Ａｓｎ−Ｔｙｒ；Ｓｅｒ−Ｐｈｅ；Ｇｌｙ−Ｐｈ
ｅ；Ａｓｎ−Ｐｈｅ等「ジャーナル・ニュートリショナ
ル・バイケミストリー、９巻、４１５頁、１９９８年」
が報告されてきている。更には，ワカメたんぱく質由来
のＡＣＥ阻害ペプチドとしてＡｌａ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−
Ｌｙｓ；Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ；Ｌｙｓ−Ｐ
ｈｅ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ；Ｔｙｒ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｌｅ
ｕ等「ジャーナル・ニュートリショナル・バイケミスト
リー、１１巻、４５０頁、２０００年」が報告されてき
ている。ところで、レニン−アンジオテンシン系が生体
の水・電解質及び血液の調節に重要な役割を果たしてい
ることはよく知られている。このレニン−アンジオテン
シン系にはアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）が存在
し、アンジオテンシンＩはＡＣＥによってアンジオテン
シンＩＩに変換される。アンジオテンシンＩＩは強力な
昇圧物質で、血管、副腎皮質のみならず中枢神経系なら
びに末梢神経系に働いて血圧上昇を促す。又、ＡＣＥは
生体内降圧物質であるブラジキニンを分解し、不活性化
する作用を有し、昇圧系に関与している。従って、ＡＣ
Ｅの活性を阻害することによって血圧を降下させること
が可能であり、又、そのことは臨床的に高血圧の予防、
治療に有効であると考えられている。この目的のためプ
ロリン誘導体であるカプトリルが合成され、その降圧作
用が確認されて以来、カプトリルの構造研究に基づく種
々のＡＣＥ阻害剤の合成研究が盛んに行われ、最近では
マレイン酸エナラブリルやアラセブリル等の物質が、次
々と臨床の場に供されている。現在、ＡＣＥ阻害剤は本
態性高血圧症、病候性高血圧症を問わず、又、軽症、重
症を問わず、幅広く用いられ、高血圧症の第一次選択の
治療薬中に加えられ、多く優れた点を有することが見出
されている。一方、ＡＣＥ阻害物質の作用機序として
は、アンジオテンシンＩＩの産生抑制によるアルドステ
ロンやバソプレッシンの分泌抑制、又、腎動脈収縮の解
除によるナトリウムや水の排泄促進が考えられている。
更に、ＡＣＥ阻害剤については、それがカリクレン−キ
ニン系の不活性化を抑制し、プロスタグランジン系を賦
活させることにより末梢血管拡張やナトリウム及び水の
排泄を更に促進させると考えられており、心不全の悪循
環を断つ上で合目的な治療薬として期待されている。Ａ
ＣＥ阻害物質としては、上記の合成品の他に天然物又は
天然物由来の物質として蛇毒由来のブラジキニン増強因
子（Ｃ末端がＰｒｏ）［Ｓ．Ｈ．Ｆｅｒｒｅｉａ ｅｔ
ａｌ：Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，９，３５８３（１
９７０）］、ゼラチンのコラゲナーゼ消化物由来、６種
類のペプチド（いずれもＣ末端がＡｌａ−Ｈｙｐ）
［Ｇ．Ｏｓｈｉｍａ ｅｔａｌ：Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉ
ｏｐｈｓ．Ａｃｔａ，５６６，１２８（１９７９）］、
牛カゼインのトリプシン消化物由来のペプチド（Ｃ末端
がＧｌｙ−Ｌｙｓ）［Ｓ．Ｍａｒｕｙａｍａ ｅｔ ａ
ｌ．：Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，４６，１３
９３（１９８３）］等に始まり本発明者等のイワシ筋肉
由来の５種のヘクサペウチド（いずれもＣ末端から２番
目又は３番目がＰｒｏ、Ｎ末端がＬｅｕ）［特許第２０
４６４８３号］、海苔たんぱく質由来のテトラペプチド
（Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｌａ：Ｎ末端；Ａｌａ、
Ｃ末端；Ｐｒｏ）［特許第２６７８１８０号］、海苔た
んぱく質由来のペンタペプチド（Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｔｙ
ｒ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ）及びテトラペプチド（Ｃｙｓ−Ｌ
ｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ）［特開平１０−３６３９１
号］、海苔たんぱく質由来のジペプチド（Ｉｌｅ−Ｔｙ
ｒ）、トリペプチド（Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ、Ｌｅｕ
−Ａｒｇ−Ｔｙ）及びペンタペプチド（Ａｌａ−Ｌｙｓ
−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ）［特開平１０−１７５９９
７号、特開平９−２４６８０７号］、朝鮮人参たんぱく
質由来のペンタペプチド（Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａ
ｌａ−Ｇｌｙ）［特許第２９２０８２９号］、クロレラ
たんぱく質由来のペンタペプチド（Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｌａ）及び３種類のワカメたんぱく質
由来のテトラペプチド（Ｔｙｒ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｌｅ
ｕ，Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ，Ａｌａ−Ｉｌｅ
−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ）［特許第３１０８９２０号］等が挙
げられ、いずれもＡＣＥ阻害剤となり得ることが開示さ
れている。先に述べたように、ＡＣＥ阻害剤としての海
藻たんぱく質由来の血圧降下ペプチドに関する提案は本
発明者らによって多くの提案がなされているが、その中
で海苔ペプチドについて、規則性を持ったアミノ酸配列
を有するペプチドのＡＣＥ阻害作用（試験管内薬理効
果）並びに経口投与による降圧効果（生体内薬理効果）
は不明であり、発見されて以来未だ医薬品としての開発
が進んでいるとの報告はない。
海藻由来の食品たんぱく質の酵素分解中にアンジオテン
シン変換酵素（ＡＣＥ）阻害ペプチド等の血圧降下ペプ
チドが本発明者らによって報告されてきた。すなわち、
海苔たんぱく質由来のＡＣＥ阻害ペプチドとしてＩｌｅ
−Ｔｙｒ；Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ；Ａｌａ−Ｌｙｓ−
Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ；Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ等
「マリンバイオテクノロジー、６巻、１６３頁、１９９
８年」が、ヒジキたんぱく質由来のＡＣＥ阻害ペプチド
としてＧｌｙ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ；Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｔｙ
ｒ；Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ等「日本水産学会
誌、６４巻、８６２頁、１９９８年」が報告されてきて
いる。微藻類由来としては、クロレラ・スピルリナたん
ぱく質由来のＡＣＥ阻害ペプチドとしてＩｌｅ−Ｖａｌ
−Ｖａｌ−Ｇｌｕ；Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ；Ｐｈｅ−
Ａｌａ−Ｌｅｕ，Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ，Ｖａｌ−Ｖ
ａｌ−Ｐｒｏ−Ａｌａ，Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｇｌｕ；Ｉｌ
ｅ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ，Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｐｈｅ
等「マリンバイオテクノロジー、３巻、３０５頁、２０
０１年」が報告されてきている。又、ニンニク抽出物か
らはＳｅｒ−Ｔｙｒ；Ｇｌｙ−Ｔｙｒ；Ｐｈｅ−Ｔｙ
ｒ；Ａｓｎ−Ｔｙｒ；Ｓｅｒ−Ｐｈｅ；Ｇｌｙ−Ｐｈ
ｅ；Ａｓｎ−Ｐｈｅ等「ジャーナル・ニュートリショナ
ル・バイケミストリー、９巻、４１５頁、１９９８年」
が報告されてきている。更には，ワカメたんぱく質由来
のＡＣＥ阻害ペプチドとしてＡｌａ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−
Ｌｙｓ；Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ；Ｌｙｓ−Ｐ
ｈｅ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ；Ｔｙｒ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｌｅ
ｕ等「ジャーナル・ニュートリショナル・バイケミスト
リー、１１巻、４５０頁、２０００年」が報告されてき
ている。ところで、レニン−アンジオテンシン系が生体
の水・電解質及び血液の調節に重要な役割を果たしてい
ることはよく知られている。このレニン−アンジオテン
シン系にはアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）が存在
し、アンジオテンシンＩはＡＣＥによってアンジオテン
シンＩＩに変換される。アンジオテンシンＩＩは強力な
昇圧物質で、血管、副腎皮質のみならず中枢神経系なら
びに末梢神経系に働いて血圧上昇を促す。又、ＡＣＥは
生体内降圧物質であるブラジキニンを分解し、不活性化
する作用を有し、昇圧系に関与している。従って、ＡＣ
Ｅの活性を阻害することによって血圧を降下させること
が可能であり、又、そのことは臨床的に高血圧の予防、
治療に有効であると考えられている。この目的のためプ
ロリン誘導体であるカプトリルが合成され、その降圧作
用が確認されて以来、カプトリルの構造研究に基づく種
々のＡＣＥ阻害剤の合成研究が盛んに行われ、最近では
マレイン酸エナラブリルやアラセブリル等の物質が、次
々と臨床の場に供されている。現在、ＡＣＥ阻害剤は本
態性高血圧症、病候性高血圧症を問わず、又、軽症、重
症を問わず、幅広く用いられ、高血圧症の第一次選択の
治療薬中に加えられ、多く優れた点を有することが見出
されている。一方、ＡＣＥ阻害物質の作用機序として
は、アンジオテンシンＩＩの産生抑制によるアルドステ
ロンやバソプレッシンの分泌抑制、又、腎動脈収縮の解
除によるナトリウムや水の排泄促進が考えられている。
更に、ＡＣＥ阻害剤については、それがカリクレン−キ
ニン系の不活性化を抑制し、プロスタグランジン系を賦
活させることにより末梢血管拡張やナトリウム及び水の
排泄を更に促進させると考えられており、心不全の悪循
環を断つ上で合目的な治療薬として期待されている。Ａ
ＣＥ阻害物質としては、上記の合成品の他に天然物又は
天然物由来の物質として蛇毒由来のブラジキニン増強因
子（Ｃ末端がＰｒｏ）［Ｓ．Ｈ．Ｆｅｒｒｅｉａ ｅｔ
ａｌ：Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，９，３５８３（１
９７０）］、ゼラチンのコラゲナーゼ消化物由来、６種
類のペプチド（いずれもＣ末端がＡｌａ−Ｈｙｐ）
［Ｇ．Ｏｓｈｉｍａ ｅｔａｌ：Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉ
ｏｐｈｓ．Ａｃｔａ，５６６，１２８（１９７９）］、
牛カゼインのトリプシン消化物由来のペプチド（Ｃ末端
がＧｌｙ−Ｌｙｓ）［Ｓ．Ｍａｒｕｙａｍａ ｅｔ ａ
ｌ．：Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，４６，１３
９３（１９８３）］等に始まり本発明者等のイワシ筋肉
由来の５種のヘクサペウチド（いずれもＣ末端から２番
目又は３番目がＰｒｏ、Ｎ末端がＬｅｕ）［特許第２０
４６４８３号］、海苔たんぱく質由来のテトラペプチド
（Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｌａ：Ｎ末端；Ａｌａ、
Ｃ末端；Ｐｒｏ）［特許第２６７８１８０号］、海苔た
んぱく質由来のペンタペプチド（Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｔｙ
ｒ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ）及びテトラペプチド（Ｃｙｓ−Ｌ
ｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ）［特開平１０−３６３９１
号］、海苔たんぱく質由来のジペプチド（Ｉｌｅ−Ｔｙ
ｒ）、トリペプチド（Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ、Ｌｅｕ
−Ａｒｇ−Ｔｙ）及びペンタペプチド（Ａｌａ−Ｌｙｓ
−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ）［特開平１０−１７５９９
７号、特開平９−２４６８０７号］、朝鮮人参たんぱく
質由来のペンタペプチド（Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａ
ｌａ−Ｇｌｙ）［特許第２９２０８２９号］、クロレラ
たんぱく質由来のペンタペプチド（Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｌａ）及び３種類のワカメたんぱく質
由来のテトラペプチド（Ｔｙｒ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｌｅ
ｕ，Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ，Ａｌａ−Ｉｌｅ
−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ）［特許第３１０８９２０号］等が挙
げられ、いずれもＡＣＥ阻害剤となり得ることが開示さ
れている。先に述べたように、ＡＣＥ阻害剤としての海
藻たんぱく質由来の血圧降下ペプチドに関する提案は本
発明者らによって多くの提案がなされているが、その中
で海苔ペプチドについて、規則性を持ったアミノ酸配列
を有するペプチドのＡＣＥ阻害作用（試験管内薬理効
果）並びに経口投与による降圧効果（生体内薬理効果）
は不明であり、発見されて以来未だ医薬品としての開発
が進んでいるとの報告はない。
【０００３】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、紅藻の海
藻種に属する海苔の蛋白質分解酵素の分解液から薬理作
用を有する物質を検索し、新規な３種類の海苔ペプチド
が強いアンジオテンシン変換酵素阻害作用を有すること
を見出した。そして、これら３種類の海苔ペプチドを医
薬として実用化するための研究を鋭意行った。その結
果、これら３種類の海苔ペプチドが血圧降下作用を有
し、天然物由来のアンジオテンシン変換酵素阻害剤とし
ての有用性を見出した。本発明は係る知見に基づくもの
である。本発明に係る新規な３種類の海苔ペプチドは、
次式（１）、（２）及び（３） （１）Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ （２）Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ （３）Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ の式で示されるＬ体のアミノ酸の配列を有する新規な１
種類のペンタペプチド及び２種類のテトラペプチドであ
り、常温における性状は白色の粉末である。
藻種に属する海苔の蛋白質分解酵素の分解液から薬理作
用を有する物質を検索し、新規な３種類の海苔ペプチド
が強いアンジオテンシン変換酵素阻害作用を有すること
を見出した。そして、これら３種類の海苔ペプチドを医
薬として実用化するための研究を鋭意行った。その結
果、これら３種類の海苔ペプチドが血圧降下作用を有
し、天然物由来のアンジオテンシン変換酵素阻害剤とし
ての有用性を見出した。本発明は係る知見に基づくもの
である。本発明に係る新規な３種類の海苔ペプチドは、
次式（１）、（２）及び（３） （１）Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ （２）Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ （３）Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ の式で示されるＬ体のアミノ酸の配列を有する新規な１
種類のペンタペプチド及び２種類のテトラペプチドであ
り、常温における性状は白色の粉末である。
【０００４】前記の３種類の海苔ペプチドは、化学的に
合成する方法または海苔の蛋白質分解酵素の分解液から
分離精製する方法を挙げることができる。本発明に係る
これら海苔ペプチドを化学的に合成する場合には、液相
法または固相法等の通常のペプチド合成方法によって行
うことができるが、好ましくは、固相法によってポリマ
ー性の固相支持体へ前記ペプチドのＣ末端（カルボキシ
ル末端側）からそのアミノ酸残基に対応したＬ体のアミ
ノ酸を順次ペプチド結合によって結合して行くのが良
い。そして、そのようにして得られた合成ペプチドは、
トリフルオロメタンスルホン酸、フッ化水素等を用いて
ポロマー性の固相支持体から切断した後、アミノ酸側鎖
の保護基を除去し、逆相系のカラムを用いた高速液体ク
ロマトグラフィー（以下、ＨＰＬＣと略記する）などを
用いた通常の方法で精製することができる。
合成する方法または海苔の蛋白質分解酵素の分解液から
分離精製する方法を挙げることができる。本発明に係る
これら海苔ペプチドを化学的に合成する場合には、液相
法または固相法等の通常のペプチド合成方法によって行
うことができるが、好ましくは、固相法によってポリマ
ー性の固相支持体へ前記ペプチドのＣ末端（カルボキシ
ル末端側）からそのアミノ酸残基に対応したＬ体のアミ
ノ酸を順次ペプチド結合によって結合して行くのが良
い。そして、そのようにして得られた合成ペプチドは、
トリフルオロメタンスルホン酸、フッ化水素等を用いて
ポロマー性の固相支持体から切断した後、アミノ酸側鎖
の保護基を除去し、逆相系のカラムを用いた高速液体ク
ロマトグラフィー（以下、ＨＰＬＣと略記する）などを
用いた通常の方法で精製することができる。
【０００５】上記したように、本発明に係る新規な３種
類の海苔ペプチドは、海苔の蛋白質分解酵素の分解液か
ら分離精製することができるが、その場合には、例えば
以下のようにして行うことができる。これら新規な海苔
ペプチドを含有している海苔のタンパク質部分を用いて
加水分解する。加水分解は常法に従って行う。例えば、
プロテアーゼ等のタンパク質分解酵素で加水分解する場
合は、海苔を必要とあれば更に加水分解した後、酵素の
至適温度まで加温しｐＨを至適値に調整し酵素を加えて
インキュベートする。次いで必要に応じ中和した後、酵
素を失活させて加水分解液を得る。その加水分解物を濾
紙及び／又はセライト等を用いて濾過することによって
不溶性成分を除去し、その得られた濾液をセロファンな
どの半透膜を用いて適当な溶媒（例えば、水、トリス−
塩酸緩衝液、リン酸緩衝液の中性の緩衝液等）中で十分
に透析し、その濾液中の成分で半透膜を通過した成分を
含む溶液を強酸性陽イオン交換樹脂（例えば、ダウケミ
カル社製のＤｏｗｅｘ ５０Ｗ等）にかけ、その吸着溶
出画分からアンジオテンシン変換酵素（以下、ＡＣＥと
略記する）阻害活性を有する成分を含有する画分を得、
得られたＡＣＥ阻害活性画分をゲル濾過（例えば、ファ
ルマシア社製のＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５等）によって
分画し、得られたＡＣＥ阻害活性画分を陽イオン交換ゲ
ル濾過（例えば、ファルマシア社製のＳＰ−Ｓｅｐｈａ
ｄｅｘ Ｃ−２５等）によって分画し、最終的に得られ
たＡＣＥ阻害活性画分を更に逆相ＨＰＬＣによって分画
する。
類の海苔ペプチドは、海苔の蛋白質分解酵素の分解液か
ら分離精製することができるが、その場合には、例えば
以下のようにして行うことができる。これら新規な海苔
ペプチドを含有している海苔のタンパク質部分を用いて
加水分解する。加水分解は常法に従って行う。例えば、
プロテアーゼ等のタンパク質分解酵素で加水分解する場
合は、海苔を必要とあれば更に加水分解した後、酵素の
至適温度まで加温しｐＨを至適値に調整し酵素を加えて
インキュベートする。次いで必要に応じ中和した後、酵
素を失活させて加水分解液を得る。その加水分解物を濾
紙及び／又はセライト等を用いて濾過することによって
不溶性成分を除去し、その得られた濾液をセロファンな
どの半透膜を用いて適当な溶媒（例えば、水、トリス−
塩酸緩衝液、リン酸緩衝液の中性の緩衝液等）中で十分
に透析し、その濾液中の成分で半透膜を通過した成分を
含む溶液を強酸性陽イオン交換樹脂（例えば、ダウケミ
カル社製のＤｏｗｅｘ ５０Ｗ等）にかけ、その吸着溶
出画分からアンジオテンシン変換酵素（以下、ＡＣＥと
略記する）阻害活性を有する成分を含有する画分を得、
得られたＡＣＥ阻害活性画分をゲル濾過（例えば、ファ
ルマシア社製のＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５等）によって
分画し、得られたＡＣＥ阻害活性画分を陽イオン交換ゲ
ル濾過（例えば、ファルマシア社製のＳＰ−Ｓｅｐｈａ
ｄｅｘ Ｃ−２５等）によって分画し、最終的に得られ
たＡＣＥ阻害活性画分を更に逆相ＨＰＬＣによって分画
する。
【０００６】本発明に係る新規な３種類の海苔ペプチド
の製法において用いる紅藻類としては、本発明の目的を
達成できる限りいかなる紅藻類を用いても良いが、好ま
しくは海苔を用いるのが良い。以上のようにして得られ
たこれら新規な海苔ペプチドは、静脈内へ繰り返し投与
を行った場合、抗体産生を惹起せず、アナフィラキシー
ショックを起こさせない。又、これら新規な海苔ペプチ
ドはＬ−アミノ酸のみの配列構造からなり、投与後、生
体内のプロテアーゼにより徐々に分解される為、毒性は
極めて低く、安全性は極めて高い（ＬＤ５０＞５０００
ｍｇ／ｋｇ；ラット経口投与）。これら新規な海苔ペプ
チドは、通常用いられる賦形剤等の添加物を用いて注射
剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等に調製すること
ができる。投与方法としては、通常は、ＡＣＥを有して
いる哺乳類（例えば、ヒト、イヌ、ラット等）に注射す
ること、あるいは経口投与することがあげられる。投与
量は、例えば、動物体１ｋｇ当りこの海苔ペプチドを
０．０１〜１０ｍｇの量である。投与回数は、通常１日
１〜４回程度であるが、投与経路によって、適宜、調製
することができる。
の製法において用いる紅藻類としては、本発明の目的を
達成できる限りいかなる紅藻類を用いても良いが、好ま
しくは海苔を用いるのが良い。以上のようにして得られ
たこれら新規な海苔ペプチドは、静脈内へ繰り返し投与
を行った場合、抗体産生を惹起せず、アナフィラキシー
ショックを起こさせない。又、これら新規な海苔ペプチ
ドはＬ−アミノ酸のみの配列構造からなり、投与後、生
体内のプロテアーゼにより徐々に分解される為、毒性は
極めて低く、安全性は極めて高い（ＬＤ５０＞５０００
ｍｇ／ｋｇ；ラット経口投与）。これら新規な海苔ペプ
チドは、通常用いられる賦形剤等の添加物を用いて注射
剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等に調製すること
ができる。投与方法としては、通常は、ＡＣＥを有して
いる哺乳類（例えば、ヒト、イヌ、ラット等）に注射す
ること、あるいは経口投与することがあげられる。投与
量は、例えば、動物体１ｋｇ当りこの海苔ペプチドを
０．０１〜１０ｍｇの量である。投与回数は、通常１日
１〜４回程度であるが、投与経路によって、適宜、調製
することができる。
【０００７】上記の各種製剤において用いられる賦形
剤、結合剤、潤沢剤の種類は、特に限定されず、通常の
注射剤、散剤、顆粒剤、錠剤あるいはカプセル剤に用い
られるものを使用することができる。錠剤、カプセル
剤、顆粒剤、散剤に用いる添加物としては、下記のもの
をあげることができる。賦形剤としては、結晶セルロー
ス等の糖類、マンニトール等の糖アルコール類、デンプ
ン類、無水リン酸カルシウム等；結合剤としては澱粉
類、ヒドロキシプロピルメチルセルローズ等；崩壊剤と
してはカルボキシメチルセルロース及びそのカリウム塩
類；潤滑剤としてはステアリン酸及びその塩類、タル
ク、ワックス類を挙げることができる。又、製剤の調整
にあたっては必要に応じメントール、クエン酸及びその
塩類、香料等の矯臭剤を用いることができる。注射用の
無菌組成物は、常法により、本発明に係る新規な海苔ペ
プチドを、注射用水、生理食塩水及びキシリトールやマ
ンニトール等の糖アルコール注射液、プロピレングリコ
ールやポリエチレングリコール等のグリコールに溶解ま
たは懸濁させて注射剤とすることができる。この際、緩
衝液、防腐剤、酸化防止剤等を必要に応じて添加するこ
とができる。本発明に係る新規な３種類の海苔ペプチド
を含有する製剤は凍結乾燥品又は乾燥粉末の形とし、用
時、通常の溶解剤、例えば水又は生理食塩液に溶解して
用いることもできる。
剤、結合剤、潤沢剤の種類は、特に限定されず、通常の
注射剤、散剤、顆粒剤、錠剤あるいはカプセル剤に用い
られるものを使用することができる。錠剤、カプセル
剤、顆粒剤、散剤に用いる添加物としては、下記のもの
をあげることができる。賦形剤としては、結晶セルロー
ス等の糖類、マンニトール等の糖アルコール類、デンプ
ン類、無水リン酸カルシウム等；結合剤としては澱粉
類、ヒドロキシプロピルメチルセルローズ等；崩壊剤と
してはカルボキシメチルセルロース及びそのカリウム塩
類；潤滑剤としてはステアリン酸及びその塩類、タル
ク、ワックス類を挙げることができる。又、製剤の調整
にあたっては必要に応じメントール、クエン酸及びその
塩類、香料等の矯臭剤を用いることができる。注射用の
無菌組成物は、常法により、本発明に係る新規な海苔ペ
プチドを、注射用水、生理食塩水及びキシリトールやマ
ンニトール等の糖アルコール注射液、プロピレングリコ
ールやポリエチレングリコール等のグリコールに溶解ま
たは懸濁させて注射剤とすることができる。この際、緩
衝液、防腐剤、酸化防止剤等を必要に応じて添加するこ
とができる。本発明に係る新規な３種類の海苔ペプチド
を含有する製剤は凍結乾燥品又は乾燥粉末の形とし、用
時、通常の溶解剤、例えば水又は生理食塩液に溶解して
用いることもできる。
【０００８】本発明に係る新規な３種類の海苔ペプチド
は優れたアンジオテンシン変換酵素阻害作用を有し、血
圧降下作用、ブラジキニン不活化抑制作用を示す。従っ
て、本態性高血圧、腎性高血圧、副腎性高血圧等の高血
圧症の予防、治療剤、これらうっ血性心不全に対する臓
器循環の正常化と長期予後の改善（延命効果）作用を有
し、心不全の治療剤として有用である。
は優れたアンジオテンシン変換酵素阻害作用を有し、血
圧降下作用、ブラジキニン不活化抑制作用を示す。従っ
て、本態性高血圧、腎性高血圧、副腎性高血圧等の高血
圧症の予防、治療剤、これらうっ血性心不全に対する臓
器循環の正常化と長期予後の改善（延命効果）作用を有
し、心不全の治療剤として有用である。
【０００９】
【実施例】以下に実施例として、製造例および試験例を
記載し、本発明を更に詳細に説明する。 製造例１ 天然産海苔５００ｇを十分洗浄してた後、細かく刻み、
０．５Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．９）２０Ｌを加え
攪拌（３７℃、３６時間）、すなわちアルギン酸リアー
ゼを十分働かせた後、グラスフィルター（Ｇ−３）で吸
引ろ過した。ろ過したペースト液を廃棄し、得られた沈
殿物に脱イオン水を加えてホモジナイズ後、凍結乾燥し
て海苔由来のたんぱく質とした。海苔由来のたんぱく質
粉末１０ｇに脱イオン水２５０ｍＬを加えて作成したた
んぱく質液に、天野製薬製プロテアーゼＳアマノあるい
はプロレザーＦＧ−１各々３００ｍｇ添加後、プロテア
ーゼＳアマノ添加たんぱく質液のｐＨを８．０に、又、
プロレザーＦＧ−１添加たんぱく質液のｐＨを１０．０
に調整後、６５℃で５時間撹拌しながら酵素分解を行っ
た。分解反応液を直ちに限外濾過膜（アミコン社製、Ｙ
Ｍ１０型；分画分子量約１万）に通過させた通過液を、
Ｄｏｗｅｘ５０Ｗ×４［Ｈ＋］カラム（φ４．０×５５
ｃｍ）に加えた。そのカラムを脱イオン水で十分洗滌し
た後、２規定のアンモニウム水２Ｌを用いて溶出した。
減圧濃縮によりアンモニアを除去した後、濃縮液を予め
脱イオン水で緩衝化したＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５（φ
１．６×１１３ｃｍ）に負荷し、流速１２ｍＬ／ｈｒ、
各分画量５．７ｍＬでゲル濾過を行った。ゲル濾過クロ
マトグラフィー後、ＡＣＥ阻害活性の高い画分を集め減
圧濃縮後、予め、脱イオン水で緩衝化したＳＰ−Ｓｅｐ
ｈａｄｅｘＣ−２５［Ｈ＋］カラム（φ１．８×４０ｃ
ｍ）に負荷し、脱イオン水５００ｍＬから１．５％塩化
ナトリウム５００ｍιの濃度勾配法を行い、流速７０ｍ
Ｌ／ｈｒ、各分画量１０ｍＬでクロマトグラフィーを行
った。クロマトグラフィー後、ＡＣＥ阻害活性の高かっ
た画分を集めて凍結乾燥して精製ペプチド粉末を得た。
この精製ペプチド粉末２０ｍｇを６０μＬの脱イオン水
に溶解した後、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ
ＬＣ）を行った。カラムとしては野村化学社製Ｄｅｖｅ
ｌｏｓｉｌ ＯＤＳ−５（４．５ｍｍＩＤ×２５ｃｍ
Ｌ）を使用し、移動相としては０．０５％トリフルオロ
酢酸（以下、ＴＦＡと略記する。）から２５％アセトニ
トリル／０．０５％ＴＦＡの濃度勾配法を行い、流速
１．２ｍＬ／ｍｉｎ、検出波長２１８ｎｍでＨＰＬＣを
行い、プロテアーゼＳアマノ添加たんぱく質液由来のペ
プチドフラグメントとして溶出時間（１）；１６．３
分、（２）；２６．７分及び（３）；４５．７分に、
又、プロレザーＦＧ−１添加たんぱく質液由来のペプチ
ドフラグメントとして溶出時間（１）；１９分、
（２）；３０．２分及び（３）；５１．６分に、各々Ａ
ＣＥ阻害活性の高い３個のペプチドフラグメントを得
た。このようにして得られたＡＣＥ阻害作用を有する３
個のペプチドフラグメントのアミノ酸配列は、アプライ
ドバイオシステム（ＡＢＩ）社製のプロテインシークエ
ンサー４７７Ａ型を用いて決定された。その結果、次式
（１）、（２）及び（３） （１）Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ （２）Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ （３）Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ で示されるＬ体のアミノ酸からなるの配列を有する新規
な１種類のペンタペプチド及び２種類のテトラペプチド
であることが確認された。尚、本発明に係る新規な３種
類の海苔ペプチドをＡＣＥ阻害剤として、例えば錠剤に
製剤する場合には、常法に従って、例えば次のように処
理すればよい：海苔ペプチド１３ｇ、乳糖７７ｇ、
コーンスターチ３４ｇ、ステアリン酸マグネシウム
１．１ｇを原料とし、先ず、及び２０ｇのコーンス
ターチを混和し、１３ｇのコーンスターチから作ったペ
ーストとともに顆粒化し、この顆粒に９ｇのコーンスタ
ーチととを加え、得られた混合物を圧縮錠剤機で打錠
し、錠剤１０００個を製造する。
記載し、本発明を更に詳細に説明する。 製造例１ 天然産海苔５００ｇを十分洗浄してた後、細かく刻み、
０．５Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．９）２０Ｌを加え
攪拌（３７℃、３６時間）、すなわちアルギン酸リアー
ゼを十分働かせた後、グラスフィルター（Ｇ−３）で吸
引ろ過した。ろ過したペースト液を廃棄し、得られた沈
殿物に脱イオン水を加えてホモジナイズ後、凍結乾燥し
て海苔由来のたんぱく質とした。海苔由来のたんぱく質
粉末１０ｇに脱イオン水２５０ｍＬを加えて作成したた
んぱく質液に、天野製薬製プロテアーゼＳアマノあるい
はプロレザーＦＧ−１各々３００ｍｇ添加後、プロテア
ーゼＳアマノ添加たんぱく質液のｐＨを８．０に、又、
プロレザーＦＧ−１添加たんぱく質液のｐＨを１０．０
に調整後、６５℃で５時間撹拌しながら酵素分解を行っ
た。分解反応液を直ちに限外濾過膜（アミコン社製、Ｙ
Ｍ１０型；分画分子量約１万）に通過させた通過液を、
Ｄｏｗｅｘ５０Ｗ×４［Ｈ＋］カラム（φ４．０×５５
ｃｍ）に加えた。そのカラムを脱イオン水で十分洗滌し
た後、２規定のアンモニウム水２Ｌを用いて溶出した。
減圧濃縮によりアンモニアを除去した後、濃縮液を予め
脱イオン水で緩衝化したＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５（φ
１．６×１１３ｃｍ）に負荷し、流速１２ｍＬ／ｈｒ、
各分画量５．７ｍＬでゲル濾過を行った。ゲル濾過クロ
マトグラフィー後、ＡＣＥ阻害活性の高い画分を集め減
圧濃縮後、予め、脱イオン水で緩衝化したＳＰ−Ｓｅｐ
ｈａｄｅｘＣ−２５［Ｈ＋］カラム（φ１．８×４０ｃ
ｍ）に負荷し、脱イオン水５００ｍＬから１．５％塩化
ナトリウム５００ｍιの濃度勾配法を行い、流速７０ｍ
Ｌ／ｈｒ、各分画量１０ｍＬでクロマトグラフィーを行
った。クロマトグラフィー後、ＡＣＥ阻害活性の高かっ
た画分を集めて凍結乾燥して精製ペプチド粉末を得た。
この精製ペプチド粉末２０ｍｇを６０μＬの脱イオン水
に溶解した後、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ
ＬＣ）を行った。カラムとしては野村化学社製Ｄｅｖｅ
ｌｏｓｉｌ ＯＤＳ−５（４．５ｍｍＩＤ×２５ｃｍ
Ｌ）を使用し、移動相としては０．０５％トリフルオロ
酢酸（以下、ＴＦＡと略記する。）から２５％アセトニ
トリル／０．０５％ＴＦＡの濃度勾配法を行い、流速
１．２ｍＬ／ｍｉｎ、検出波長２１８ｎｍでＨＰＬＣを
行い、プロテアーゼＳアマノ添加たんぱく質液由来のペ
プチドフラグメントとして溶出時間（１）；１６．３
分、（２）；２６．７分及び（３）；４５．７分に、
又、プロレザーＦＧ−１添加たんぱく質液由来のペプチ
ドフラグメントとして溶出時間（１）；１９分、
（２）；３０．２分及び（３）；５１．６分に、各々Ａ
ＣＥ阻害活性の高い３個のペプチドフラグメントを得
た。このようにして得られたＡＣＥ阻害作用を有する３
個のペプチドフラグメントのアミノ酸配列は、アプライ
ドバイオシステム（ＡＢＩ）社製のプロテインシークエ
ンサー４７７Ａ型を用いて決定された。その結果、次式
（１）、（２）及び（３） （１）Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ （２）Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ （３）Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ で示されるＬ体のアミノ酸からなるの配列を有する新規
な１種類のペンタペプチド及び２種類のテトラペプチド
であることが確認された。尚、本発明に係る新規な３種
類の海苔ペプチドをＡＣＥ阻害剤として、例えば錠剤に
製剤する場合には、常法に従って、例えば次のように処
理すればよい：海苔ペプチド１３ｇ、乳糖７７ｇ、
コーンスターチ３４ｇ、ステアリン酸マグネシウム
１．１ｇを原料とし、先ず、及び２０ｇのコーンス
ターチを混和し、１３ｇのコーンスターチから作ったペ
ーストとともに顆粒化し、この顆粒に９ｇのコーンスタ
ーチととを加え、得られた混合物を圧縮錠剤機で打錠
し、錠剤１０００個を製造する。
【００１０】製造例２本例は、合成法による製造例であ
る。 Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ジペプチドを合
成した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン
共重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹
脂を使用した。まず、当該ジペプチドのアミノ酸配列に
従って、常法どおり、そのＣ末端側のチロシンからクロ
ロメチル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この
時のアミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−
Ｂｏｃと略記する。）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ
酸を使用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチ
オールとチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温
で１０分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、
更に１０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタ
ンスルホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無
水エーテルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、そ
の沈澱物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾
燥した。このようにして得られた未精製の合成ペプチド
は蒸留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラム
Ｃ１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移
動相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）
０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、
（Ａ）液が４３分間で７８％→３９％の濃度勾配法によ
り流速１．３ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行っ
た。紫外部波長２１８ｎｍで検出し、最大の吸収を示し
た溶出画分を分取し、これを凍結乾燥することによって
目的とする合成ペンタペプチドを得た。
る。 Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ジペプチドを合
成した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン
共重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹
脂を使用した。まず、当該ジペプチドのアミノ酸配列に
従って、常法どおり、そのＣ末端側のチロシンからクロ
ロメチル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この
時のアミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−
Ｂｏｃと略記する。）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ
酸を使用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチ
オールとチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温
で１０分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、
更に１０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタ
ンスルホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無
水エーテルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、そ
の沈澱物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾
燥した。このようにして得られた未精製の合成ペプチド
は蒸留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラム
Ｃ１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移
動相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）
０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、
（Ａ）液が４３分間で７８％→３９％の濃度勾配法によ
り流速１．３ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行っ
た。紫外部波長２１８ｎｍで検出し、最大の吸収を示し
た溶出画分を分取し、これを凍結乾燥することによって
目的とする合成ペンタペプチドを得た。
【００１１】この合成ペンタペプチドをマススペクトル
により分析した結果、アミノ酸配列及びアミノ酸組成が
前記で示したアミノ酸配列構造を有するペンタペプチド
であることが確認された。このマススペクトルとアミノ
酸分析の結果は表１に示す通りである。 Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のロイシンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が４８分間で７７％→３２％の濃度勾配法により流速
１．７ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２２１ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成テトラペプチドを得た。
により分析した結果、アミノ酸配列及びアミノ酸組成が
前記で示したアミノ酸配列構造を有するペンタペプチド
であることが確認された。このマススペクトルとアミノ
酸分析の結果は表１に示す通りである。 Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のロイシンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が４８分間で７７％→３２％の濃度勾配法により流速
１．７ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２２１ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成テトラペプチドを得た。
【００１２】この合成テトラペプチドをマススペクトル
により分析した結果、アミノ酸配列及びアミノ酸組成が
前記で示したアミノ酸配列構造を有するテトラペプチド
であることが確認された。このマススペクトルとアミノ
酸分析の結果は表１に示す通りである。 Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のグリシンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が４８分間で７７％→３２％の濃度勾配法により流速
１．７ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２２１ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成テトラペプチドを得た。この合成テトラペプチ
ドをマススペクトルにより分析した結果、アミノ酸配列
及びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有
するテトラペプチドであることが確認された。このマス
スペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。このような合成によって得られた本発明に係る新規
な３種類の海苔ペプチドは、以下に示す試験によって薬
理効果が確認された。
により分析した結果、アミノ酸配列及びアミノ酸組成が
前記で示したアミノ酸配列構造を有するテトラペプチド
であることが確認された。このマススペクトルとアミノ
酸分析の結果は表１に示す通りである。 Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のグリシンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が４８分間で７７％→３２％の濃度勾配法により流速
１．７ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２２１ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成テトラペプチドを得た。この合成テトラペプチ
ドをマススペクトルにより分析した結果、アミノ酸配列
及びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有
するテトラペプチドであることが確認された。このマス
スペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。このような合成によって得られた本発明に係る新規
な３種類の海苔ペプチドは、以下に示す試験によって薬
理効果が確認された。
【００１３】試験例１
（アンジオテンシン変換酵素阻害活性測定法）ＡＣＥ
（シグマ社製、酵素番号ＥＣ３．４．１５．１）２．５
ｍＵ、合成基質Ｈｉｐｐｕｒｙｌ−Ｌ−ｈｉｓｔｉｄｙ
ｌ−Ｌ−ｌｅｕｃｉｎｅ（ペプチド研究所製）１２．５
ｍＭを用いＬｉｅｂｅｒｍａｎの測定法を改良した山本
等の方法［日胸疾会誌，１８巻，２９７−３０２頁（１
９８９年）］に準じて測定した。すなわち、生成した馬
尿酸を酢酸エチルにて抽出し２２５ｎｍの吸光度で測定
した。被検液での吸光度をＥｓ、被検液の代わりに緩衝
液を加えた時の値をＥｃ、予め反応停止液を加えて反応
させた時の値をＥｂとして次式から阻害率を求めた。 阻害率（％）＝（Ｅｃ−Ｅｓ）／（Ｅｃ−Ｅｂ）× １
００ ＡＣＥ阻害剤の阻害活性ＩＣ５０値は、ＡＣＥの酵素活
性を５０％（阻害率）阻害するために必要な試料の濃度
（Ｍ）で示した。本発明に係る新規な３種類の海苔ペプ
チドの牛肺血清アンジオテンシン変換酵素に対する阻害
活性（ＩＣ５０値）は表１に示す通りである。
（シグマ社製、酵素番号ＥＣ３．４．１５．１）２．５
ｍＵ、合成基質Ｈｉｐｐｕｒｙｌ−Ｌ−ｈｉｓｔｉｄｙ
ｌ−Ｌ−ｌｅｕｃｉｎｅ（ペプチド研究所製）１２．５
ｍＭを用いＬｉｅｂｅｒｍａｎの測定法を改良した山本
等の方法［日胸疾会誌，１８巻，２９７−３０２頁（１
９８９年）］に準じて測定した。すなわち、生成した馬
尿酸を酢酸エチルにて抽出し２２５ｎｍの吸光度で測定
した。被検液での吸光度をＥｓ、被検液の代わりに緩衝
液を加えた時の値をＥｃ、予め反応停止液を加えて反応
させた時の値をＥｂとして次式から阻害率を求めた。 阻害率（％）＝（Ｅｃ−Ｅｓ）／（Ｅｃ−Ｅｂ）× １
００ ＡＣＥ阻害剤の阻害活性ＩＣ５０値は、ＡＣＥの酵素活
性を５０％（阻害率）阻害するために必要な試料の濃度
（Ｍ）で示した。本発明に係る新規な３種類の海苔ペプ
チドの牛肺血清アンジオテンシン変換酵素に対する阻害
活性（ＩＣ５０値）は表１に示す通りである。
【００１４】試験例２
（高血圧自然発症ラットへ投与時の降圧効果）実験動物
は日本チャールズ・リバー社より１５週齢雄性高血圧自
然発症ラット（以下、ＳＨＲと略記する。）を購入し、
１週間の予備飼育後、収縮期血圧が１６０ｍｍＨｇ以上
（体重２８０〜３３０ｇ）の動物６匹１群として用い
た。ラットは、室温２３±２℃、湿度５５±１０％およ
び１２時間明暗（午前６時〜午後６時点灯）に調整され
た飼育室でステンレスワイヤー製ラット用個別ゲージに
１匹ずつ収容し飼育した。飼料はオリエンタル酵母社製
ＭＦ粉末飼料を、飲水は自家揚水（水道水質基準適合）
をそれぞれ自由に摂取させた。血圧は非観血的尾動脈血
圧測定装置（理研開発社製、ＰＳ−１００型）を用いｔ
ａｉｌ−ｃｕｆｆ法により、投与前、投与後６時間後の
ＳＨＲ尾動脈の収縮期血圧（ｍｍＨｇ）の測定を各５回
づつ行い、得られた測定値の最高値と最低値を棄却し、
３回の平均値をもって各時間の測定値とした。本発明に
係る新規な３種類の海苔ペプチド各々４０ｍｇ／ｋｇを
ＳＨＲに経口投与した時の収縮期血圧値（ｍｍＨｇ）へ
の作用についての結果は、表２に示す通りである。 以上の試験の結果、本発明に係る３種類の新規な海苔ペ
プチドは、アンジオテンシン変換酵素阻害活性を有し、
ｉｎ ｖｉｖｏ（生体内）においても有意な血圧降下作
用を示すことが確認された。従って、本発明に係る３種
類の新規な海苔ペプチドは高血圧症の治療又は予防薬と
して有用である。尚、本発明に係る新規な３種類の海苔
ペプチド、すなわち１種類のペンタペプチド及び２種類
のテトラペプチドは、構造的にそのアミノ酸配列を部分
構造とするペプチドにおいて、構造中に採用することも
できる。
は日本チャールズ・リバー社より１５週齢雄性高血圧自
然発症ラット（以下、ＳＨＲと略記する。）を購入し、
１週間の予備飼育後、収縮期血圧が１６０ｍｍＨｇ以上
（体重２８０〜３３０ｇ）の動物６匹１群として用い
た。ラットは、室温２３±２℃、湿度５５±１０％およ
び１２時間明暗（午前６時〜午後６時点灯）に調整され
た飼育室でステンレスワイヤー製ラット用個別ゲージに
１匹ずつ収容し飼育した。飼料はオリエンタル酵母社製
ＭＦ粉末飼料を、飲水は自家揚水（水道水質基準適合）
をそれぞれ自由に摂取させた。血圧は非観血的尾動脈血
圧測定装置（理研開発社製、ＰＳ−１００型）を用いｔ
ａｉｌ−ｃｕｆｆ法により、投与前、投与後６時間後の
ＳＨＲ尾動脈の収縮期血圧（ｍｍＨｇ）の測定を各５回
づつ行い、得られた測定値の最高値と最低値を棄却し、
３回の平均値をもって各時間の測定値とした。本発明に
係る新規な３種類の海苔ペプチド各々４０ｍｇ／ｋｇを
ＳＨＲに経口投与した時の収縮期血圧値（ｍｍＨｇ）へ
の作用についての結果は、表２に示す通りである。 以上の試験の結果、本発明に係る３種類の新規な海苔ペ
プチドは、アンジオテンシン変換酵素阻害活性を有し、
ｉｎ ｖｉｖｏ（生体内）においても有意な血圧降下作
用を示すことが確認された。従って、本発明に係る３種
類の新規な海苔ペプチドは高血圧症の治療又は予防薬と
して有用である。尚、本発明に係る新規な３種類の海苔
ペプチド、すなわち１種類のペンタペプチド及び２種類
のテトラペプチドは、構造的にそのアミノ酸配列を部分
構造とするペプチドにおいて、構造中に採用することも
できる。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ａ６１Ｐ 43/00 １１５ Ａ６１Ｐ 43/00 １１６
１１６ Ｃ０７Ｋ 5/107
Ｃ０７Ｋ 5/107 7/06
7/06 Ｃ１２Ｎ 9/99
Ｃ１２Ｎ 9/99 Ａ６１Ｋ 37/64
Ｆターム(参考） 4C084 AA02 AA07 BA01 BA08 BA16
BA23 CA07 CA59 DC40 NA14
ZA361 ZA421 ZC162 ZC172
ZC202 ZC412
4H045 AA10 AA20 AA30 BA13 CA30
DA57 EA20 FA70 GA22 GA23
Claims (6)
- 【請求項１】 次式；Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｓｅ
ｒ−Ｔｙｒ で示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペプチド構造を
有する新規なペンタペプチド。 - 【請求項２】 次式；Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｓｅ
ｒ−Ｔｙｒ で示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペプチド構造を
有する新規なペンタペプチドを有効成分として含有する
ことを特徴とするアンジオテンシン変換酵素阻害剤。 - 【請求項３】 次式；Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅ
ｕ で示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペプチド構造を
有する新規なテトラペプチド。 - 【請求項４】 次式；Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅ
ｕ で示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペプチド構造を
有する新規なテトラペプチドを有効成分として含有する
ことを特徴とするアンジオテンシン変換酵素阻害剤。 - 【請求項５】 次式；Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌ
ｙ で示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペプチド構造を
有する新規なテトラペプチド。 - 【請求項６】 次式；Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌ
ｙ で示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペプチド構造を
有する新規なテトラペプチドを有効成分として含有する
ことを特徴とするアンジオテンシン変換酵素阻害剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002115491A JP2003267993A (ja) | 2002-03-13 | 2002-03-13 | 新規なペンタペプチド、テトラペプチドおよびアンジオテンシン変換酵素阻害剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002115491A JP2003267993A (ja) | 2002-03-13 | 2002-03-13 | 新規なペンタペプチド、テトラペプチドおよびアンジオテンシン変換酵素阻害剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003267993A true JP2003267993A (ja) | 2003-09-25 |
Family
ID=29207697
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002115491A Pending JP2003267993A (ja) | 2002-03-13 | 2002-03-13 | 新規なペンタペプチド、テトラペプチドおよびアンジオテンシン変換酵素阻害剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2003267993A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108484723A (zh) * | 2018-01-19 | 2018-09-04 | 宁波大学 | 浒苔来源的血管紧张素转化酶抑制肽及其制备方法和应用 |
-
2002
- 2002-03-13 JP JP2002115491A patent/JP2003267993A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108484723A (zh) * | 2018-01-19 | 2018-09-04 | 宁波大学 | 浒苔来源的血管紧张素转化酶抑制肽及其制备方法和应用 |
| CN108484723B (zh) * | 2018-01-19 | 2021-06-11 | 宁波大学 | 浒苔来源的血管紧张素转化酶抑制肽及其制备方法和应用 |
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