JP2003238445A - 心肥大のための処置としてのヒストンデアセチラーゼの阻害 - Google Patents
心肥大のための処置としてのヒストンデアセチラーゼの阻害Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 本発明は、心肥大を処置および予防する方法
を提供する。クラスＩＩＨＤＡＣ（クロマチン構造およ
び遺伝子発現の調節に関係があるとして公知である）
は、心肥大に対して有益な効果を有することが示されて
いる。驚くことに、本発明は、ＨＤＡＣインヒビターが
胎児の心臓遺伝子発現を阻害することおよび筋節構築を
妨げることによって心肥大を阻害することを示す。 【解決手段】 病的な心肥大および心不全を処置する方
法であって、この方法は、（ａ）病的な心肥大を有する
患者を同定する工程；および（ｂ）この患者にヒストン
デアセチラーゼインヒビターを投与する工程を包含す
る。
を提供する。クラスＩＩＨＤＡＣ（クロマチン構造およ
び遺伝子発現の調節に関係があるとして公知である）
は、心肥大に対して有益な効果を有することが示されて
いる。驚くことに、本発明は、ＨＤＡＣインヒビターが
胎児の心臓遺伝子発現を阻害することおよび筋節構築を
妨げることによって心肥大を阻害することを示す。 【解決手段】 病的な心肥大および心不全を処置する方
法であって、この方法は、（ａ）病的な心肥大を有する
患者を同定する工程；および（ｂ）この患者にヒストン
デアセチラーゼインヒビターを投与する工程を包含す
る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】（３．発明の詳細な説明）
（発明の背景）政府は、国立衛生研究所からの助成金番
号ＮＩＨ ＲＯ１ ＨＬ６１５４４に従って、本発明の
権利を有する。本発明は、米国仮出願番号６０／３２
５，３１１（２００１年９月２７日出願）および同第６
０／３３４，０４１（２００１年１０月３１日出願）
（これらの内容全体は、無条件で参考として本明細書に
よって援用される）に対する優先権の権利を主張する。
号ＮＩＨ ＲＯ１ ＨＬ６１５４４に従って、本発明の
権利を有する。本発明は、米国仮出願番号６０／３２
５，３１１（２００１年９月２７日出願）および同第６
０／３３４，０４１（２００１年１０月３１日出願）
（これらの内容全体は、無条件で参考として本明細書に
よって援用される）に対する優先権の権利を主張する。
【０００２】（１．発明の分野）本発明は、一般的に、
発生生物学および分子生物学の分野に関する。より詳細
には、本発明は、心筋細胞における遺伝子調節および細
胞生理学に関する。特に、本発明は、心肥大および心不
全を処置するためのＨＤＡＣインヒビターの使用に関す
る。
発生生物学および分子生物学の分野に関する。より詳細
には、本発明は、心筋細胞における遺伝子調節および細
胞生理学に関する。特に、本発明は、心肥大および心不
全を処置するためのＨＤＡＣインヒビターの使用に関す
る。
【０００３】
【従来の技術】（２．関連技術の説明）心臓に課された
増加した仕事量に応答した心肥大は、基本的な適応性機
構である。これは、神経刺激、内分泌刺激または機械的
刺激のいずれかまたはこれらの組み合わせ結果として
の、（細胞数よりもむしろ）細胞サイズおよび細胞質量
における定量的な増加を反映する特殊なプロセスであ
る。高血圧（心肥大に関与する別の因子）は、鬱血性心
不全の頻出する前駆体である。心不全が生じる場合、左
心室は通常、肥大かつ膨張し、そして心収縮機能（例え
ば、駆出率）が減少される。明らかに、心肥大応答は、
複雑な症候群であり、そして心肥大を導く経路の解明
が、種々の刺激から生じる心疾患の処置において有益で
ある。
増加した仕事量に応答した心肥大は、基本的な適応性機
構である。これは、神経刺激、内分泌刺激または機械的
刺激のいずれかまたはこれらの組み合わせ結果として
の、（細胞数よりもむしろ）細胞サイズおよび細胞質量
における定量的な増加を反映する特殊なプロセスであ
る。高血圧（心肥大に関与する別の因子）は、鬱血性心
不全の頻出する前駆体である。心不全が生じる場合、左
心室は通常、肥大かつ膨張し、そして心収縮機能（例え
ば、駆出率）が減少される。明らかに、心肥大応答は、
複雑な症候群であり、そして心肥大を導く経路の解明
が、種々の刺激から生じる心疾患の処置において有益で
ある。
【０００４】転写因子のファミリー（筋細胞増強因子−
２ファミリー（ＭＥＦ２））は、心肥大に関与する。例
えば、種々の刺激が、細胞内カルシウムを上昇させ得、
細胞内シグナル伝達系または細胞内シグナル伝達経路の
カスケード（カルシニューリン、ＣＡＭキナーゼ、ＰＫ
ＣおよびＭＡＰキナーゼを含む）を引き起こす。これら
のシグナルの全ては、ＭＥＦ２を活性化し、そして心肥
大を引き起こす。しかし、種々のシグナル系がどのよう
にその効果をＭＥＦ２にもたらし、そしてその肥大性シ
グナル伝達をどのように調節するかは、未だ完全に理解
されていない。特定のヒストンデアセチラーゼタンパク
質（ＨＤＡＣ ４、ＨＤＡＣ ５、ＨＤＡＣ ７、ＨＤ
ＡＣ ９、およびＨＤＡＣ １０）が、ＭＥＦ２活性の
調節に関与することが知られている。
２ファミリー（ＭＥＦ２））は、心肥大に関与する。例
えば、種々の刺激が、細胞内カルシウムを上昇させ得、
細胞内シグナル伝達系または細胞内シグナル伝達経路の
カスケード（カルシニューリン、ＣＡＭキナーゼ、ＰＫ
ＣおよびＭＡＰキナーゼを含む）を引き起こす。これら
のシグナルの全ては、ＭＥＦ２を活性化し、そして心肥
大を引き起こす。しかし、種々のシグナル系がどのよう
にその効果をＭＥＦ２にもたらし、そしてその肥大性シ
グナル伝達をどのように調節するかは、未だ完全に理解
されていない。特定のヒストンデアセチラーゼタンパク
質（ＨＤＡＣ ４、ＨＤＡＣ ５、ＨＤＡＣ ７、ＨＤ
ＡＣ ９、およびＨＤＡＣ １０）が、ＭＥＦ２活性の
調節に関与することが知られている。
【０００５】１１個の異なるＨＤＡＣが、脊椎動物の生
物からクローン化されている。全てが、触媒領域におい
て相同性を共有する。ヒストンアセチラーゼおよびヒス
トンデアセチラーゼは、遺伝子発現の制御において主要
な役割を果たす。ヒストンアセチラーゼ（通常、アセチ
ルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）と呼ばれる）の活性と
ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）の活性との間の均
衡が、ヒストンアセチル化レベルを決定する。結果とし
て、脱アセチル化クロマチンが一般的に転写的に不活性
であるのに対し、アセチル化されたヒストンは、クロマ
チンの遅延および遺伝子転写の活性化を引き起こす。以
前の報告において、本発明者らの研究室は、ＨＤＡＣ
４およびＨＤＡＣ ５がＭＥＦ２と二量体化し、そして
ＭＥＦ２の転写活性を抑制すること、そしてさらに、こ
の相互作用が、ＨＤＡＣ ４タンパク質およびＨＤＡＣ
５タンパク質のＮ末端の存在を必要とすることを実証
した。ＭｃＫｉｎｓｅｙら（２０００ａ、ｂ）。
物からクローン化されている。全てが、触媒領域におい
て相同性を共有する。ヒストンアセチラーゼおよびヒス
トンデアセチラーゼは、遺伝子発現の制御において主要
な役割を果たす。ヒストンアセチラーゼ（通常、アセチ
ルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）と呼ばれる）の活性と
ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）の活性との間の均
衡が、ヒストンアセチル化レベルを決定する。結果とし
て、脱アセチル化クロマチンが一般的に転写的に不活性
であるのに対し、アセチル化されたヒストンは、クロマ
チンの遅延および遺伝子転写の活性化を引き起こす。以
前の報告において、本発明者らの研究室は、ＨＤＡＣ
４およびＨＤＡＣ ５がＭＥＦ２と二量体化し、そして
ＭＥＦ２の転写活性を抑制すること、そしてさらに、こ
の相互作用が、ＨＤＡＣ ４タンパク質およびＨＤＡＣ
５タンパク質のＮ末端の存在を必要とすることを実証
した。ＭｃＫｉｎｓｅｙら（２０００ａ、ｂ）。
【０００６】別の状況において、近年の研究はまた、癌
生物学におけるＨＤＡＣの重要な役割を強調してきた。
事実、ＨＤＡＣの種々のインヒビターが、癌細胞におい
て細胞分化および／またはアポトーシスを誘導するそれ
らの能力について試験されている。Ｍａｒｋｓら（２０
００）。このようなインヒビターとしては、スベロイル
アニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）（Ｂｕｔｌｅｒ
ら、２０００；Ｍａｒｋｓら、２００１）；ｍ−カルボ
キシ桂皮酸ビス−ヒドロキサミド（Ｃｏｆｆｅｙら、２
００１）；およびピロキサミド（ｐｙｒｏｘａｍｉｄ
ｅ）（Ｂｕｔｌｅｒら、２００１）が挙げられる。これ
らの研究は、以下に示されるように要約されている：
「ヒドロキサム酸ベースのＨＰＣ（特に、ＳＡＨＡおよ
びピロキサミド）が、インビトロおよびインビボにおい
てＨＤＡＣの強力なインヒビターであり、そして形質転
換された細胞の増殖停止、分化またはアポトーシス細胞
死を誘導し．．．［従って］ヒドロキサム酸ベースのＨ
ＰＣのファミリーの間にあるリード化合物であり、そし
て現在第Ｉ相治験中である」、Ｍａｒｋｓら（２００
０）。
生物学におけるＨＤＡＣの重要な役割を強調してきた。
事実、ＨＤＡＣの種々のインヒビターが、癌細胞におい
て細胞分化および／またはアポトーシスを誘導するそれ
らの能力について試験されている。Ｍａｒｋｓら（２０
００）。このようなインヒビターとしては、スベロイル
アニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）（Ｂｕｔｌｅｒ
ら、２０００；Ｍａｒｋｓら、２００１）；ｍ−カルボ
キシ桂皮酸ビス−ヒドロキサミド（Ｃｏｆｆｅｙら、２
００１）；およびピロキサミド（ｐｙｒｏｘａｍｉｄ
ｅ）（Ｂｕｔｌｅｒら、２００１）が挙げられる。これ
らの研究は、以下に示されるように要約されている：
「ヒドロキサム酸ベースのＨＰＣ（特に、ＳＡＨＡおよ
びピロキサミド）が、インビトロおよびインビボにおい
てＨＤＡＣの強力なインヒビターであり、そして形質転
換された細胞の増殖停止、分化またはアポトーシス細胞
死を誘導し．．．［従って］ヒドロキサム酸ベースのＨ
ＰＣのファミリーの間にあるリード化合物であり、そし
て現在第Ｉ相治験中である」、Ｍａｒｋｓら（２００
０）。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】現在までに、筋細胞肥
大に対するＨＤＡＣインヒビターの効果およびストレス
への応答に対するＨＤＡＣインヒビターの効果に関する
報告は、報告されていない。
大に対するＨＤＡＣインヒビターの効果およびストレス
への応答に対するＨＤＡＣインヒビターの効果に関する
報告は、報告されていない。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明は、以下を提供す
る： １． 病的な心肥大および心不全を処置する方法であっ
て、この方法は、以下： （ａ）病的な心肥大を有する患者を同定する工程；およ
び（ｂ）この患者にヒストンデアセチラーゼインヒビタ
ーを投与する工程、を包含する、方法。
る： １． 病的な心肥大および心不全を処置する方法であっ
て、この方法は、以下： （ａ）病的な心肥大を有する患者を同定する工程；およ
び（ｂ）この患者にヒストンデアセチラーゼインヒビタ
ーを投与する工程、を包含する、方法。
【０００９】２． 項目１に記載の方法であって、ここ
で、上記ヒストンデアセチラーゼインヒビターがトリコ
スタチンＡ、トラポキシンＢ、ＭＳ ２７５−２７、ｍ
−カルボキシ桂皮酸ビス−ヒドロキサミド、デプデシ
ン、オキサムフラチン、アピシジン、スベロイルアニリ
ドヒドロキサム酸、スクリプタイド、ピロキサミド、２
−アミノ−８−オキソ−９，１０−エポキシ−デカノイ
ル、３−（４−アロイル−１ Ｈ−ピロール−２−イ
ル）−Ｎ−ヒドロキシ−２−プロペンアミドおよびＦＲ
９０１２２８からなる群より選択される、方法。
で、上記ヒストンデアセチラーゼインヒビターがトリコ
スタチンＡ、トラポキシンＢ、ＭＳ ２７５−２７、ｍ
−カルボキシ桂皮酸ビス−ヒドロキサミド、デプデシ
ン、オキサムフラチン、アピシジン、スベロイルアニリ
ドヒドロキサム酸、スクリプタイド、ピロキサミド、２
−アミノ−８−オキソ−９，１０−エポキシ−デカノイ
ル、３−（４−アロイル−１ Ｈ−ピロール−２−イ
ル）−Ｎ−ヒドロキシ−２−プロペンアミドおよびＦＲ
９０１２２８からなる群より選択される、方法。
【００１０】３． 投与する工程が上記ヒストンデアセ
チラーゼインヒビターの静脈内投与を包含する、項目１
に記載の方法。
チラーゼインヒビターの静脈内投与を包含する、項目１
に記載の方法。
【００１１】４． 投与する工程が経口投与、経皮投
与、徐放性投与、坐剤投与、または舌下投与を包含す
る、項目１に記載の方法。
与、徐放性投与、坐剤投与、または舌下投与を包含す
る、項目１に記載の方法。
【００１２】５． 上記患者に第二の治療的養生を投与
する工程をさらに包含する、項目１に記載の方法。
する工程をさらに包含する、項目１に記載の方法。
【００１３】６． 上記第二の治療的養生がβ遮断剤、
イオントロープ、利尿剤、ＡＣＥ−Ｉ、ＡＩＩアンタゴ
ニスト、およびＣａ＋＋遮断剤からなる群より選択され
る、項目５に記載の方法。
イオントロープ、利尿剤、ＡＣＥ−Ｉ、ＡＩＩアンタゴ
ニスト、およびＣａ＋＋遮断剤からなる群より選択され
る、項目５に記載の方法。
【００１４】７． 上記第二の治療的養生が上記ヒスト
ンデアセチラーゼインヒビターと同時に投与される、項
目５に記載の方法。
ンデアセチラーゼインヒビターと同時に投与される、項
目５に記載の方法。
【００１５】８． 上記第二の治療的養生が上記ヒスト
ンデアセチラーゼインヒビターの前または後のいずれか
で投与される、項目５に記載の方法。
ンデアセチラーゼインヒビターの前または後のいずれか
で投与される、項目５に記載の方法。
【００１６】９． 処置が心肥大の１つ以上の症候を改
善する工程を包含する、項目１に記載の方法。
善する工程を包含する、項目１に記載の方法。
【００１７】１０． 項目９に記載の方法であって、上
記１つ以上の症候が増加した運動能力、増加した血液駆
出量、左心室末端拡張圧、肺毛細管くさび圧、心拍出
量、心臓インデックス、肺動脈圧、左心室末端収縮寸法
および左心室末端拡張寸法、左心室壁ストレスおよび右
心室壁ストレス、壁緊張、生活の質、疾患関連罹患率お
よび疾患関連死亡率を含む、方法。
記１つ以上の症候が増加した運動能力、増加した血液駆
出量、左心室末端拡張圧、肺毛細管くさび圧、心拍出
量、心臓インデックス、肺動脈圧、左心室末端収縮寸法
および左心室末端拡張寸法、左心室壁ストレスおよび右
心室壁ストレス、壁緊張、生活の質、疾患関連罹患率お
よび疾患関連死亡率を含む、方法。
【００１８】１１． 病的な心肥大および心不全を予防
する方法であって、この方法は以下： （ａ）病的な心肥大が発生する危険がある患者を同定す
る工程；および（ｃ）この患者にヒストンデアセチラー
ゼインヒビターを投与する工程、を包含する、方法。
する方法であって、この方法は以下： （ａ）病的な心肥大が発生する危険がある患者を同定す
る工程；および（ｃ）この患者にヒストンデアセチラー
ゼインヒビターを投与する工程、を包含する、方法。
【００１９】１２． 項目１１に記載の方法であって、
ここで、上記ヒストンデアセチラーゼインヒビターがト
リコスタチンＡ、トラポキシンＢ、ＭＳ ２７５−２
７、ｍ−カルボキシ桂皮酸ビス−ヒドロキサミド、デプ
デシン、オキサムフラチン、アピシジン、スベロイルア
ニリドヒドロキサム酸、スクリプタイド、ピロキサミ
ド、２−アミノ−８−オキソ−９，１０−エポキシ−デ
カノイル、３−（４−アロイル−１ Ｈ−ピロール−２
−イル）−Ｎ−ヒドロキシ−２−プロペンアミドおよび
ＦＲ９０１２２８からなる群より選択される、方法。
ここで、上記ヒストンデアセチラーゼインヒビターがト
リコスタチンＡ、トラポキシンＢ、ＭＳ ２７５−２
７、ｍ−カルボキシ桂皮酸ビス−ヒドロキサミド、デプ
デシン、オキサムフラチン、アピシジン、スベロイルア
ニリドヒドロキサム酸、スクリプタイド、ピロキサミ
ド、２−アミノ−８−オキソ−９，１０−エポキシ−デ
カノイル、３−（４−アロイル−１ Ｈ−ピロール−２
−イル）−Ｎ−ヒドロキシ−２−プロペンアミドおよび
ＦＲ９０１２２８からなる群より選択される、方法。
【００２０】１３． 投与する工程が上記ヒストンデア
セチラーゼインヒビターの静脈内投与を包含する、項目
１１に記載の方法。
セチラーゼインヒビターの静脈内投与を包含する、項目
１１に記載の方法。
【００２１】１４． 投与する工程が経口投与、経皮投
与、徐放性投与、坐剤投与、または舌下投与を包含す
る、項目１１に記載の方法。
与、徐放性投与、坐剤投与、または舌下投与を包含す
る、項目１１に記載の方法。
【００２２】１５． 危険にさらされている上記患者が
長期の未制御の高血圧、未修復の弁疾患、慢性アンギナ
および／または最近の心筋梗塞を含むもののうちの１つ
以上を示し得る、項目１１に記載の方法。
長期の未制御の高血圧、未修復の弁疾患、慢性アンギナ
および／または最近の心筋梗塞を含むもののうちの１つ
以上を示し得る、項目１１に記載の方法。
【００２３】１６． 心肥大のインヒビターを同定する
方法であって、この方法は、（ａ）ヒストンデアセチラ
ーゼインヒビターを提供する工程；（ｂ）このヒストン
デアセチラーゼインヒビターで筋細胞を処理する工程；
および（ｃ）１つ以上の心肥大パラメーターの発現を測
定する工程、を包含し、ここで、このヒストンデアセチ
ラーゼインヒビターで処置されていない筋細胞における
１つ以上の心肥大パラメーターと比較した、この１つ以
上の心肥大パラメーターにおける変化が、心肥大のイン
ヒビターとしてこのヒストンデアセチラーゼインヒビタ
ーを同定する、方法。
方法であって、この方法は、（ａ）ヒストンデアセチラ
ーゼインヒビターを提供する工程；（ｂ）このヒストン
デアセチラーゼインヒビターで筋細胞を処理する工程；
および（ｃ）１つ以上の心肥大パラメーターの発現を測
定する工程、を包含し、ここで、このヒストンデアセチ
ラーゼインヒビターで処置されていない筋細胞における
１つ以上の心肥大パラメーターと比較した、この１つ以
上の心肥大パラメーターにおける変化が、心肥大のイン
ヒビターとしてこのヒストンデアセチラーゼインヒビタ
ーを同定する、方法。
【００２４】１７． 上記筋細胞が上記１つ以上の心肥
大パラメーターにおける肥大応答を誘発する刺激に供さ
れる、項目１６に記載の方法。
大パラメーターにおける肥大応答を誘発する刺激に供さ
れる、項目１６に記載の方法。
【００２５】１８． 上記刺激が導入遺伝子の発現であ
る、項目１７に記載の方法。
る、項目１７に記載の方法。
【００２６】１９． 上記刺激が薬物を用いた処置であ
る、項目１７に記載の方法。
る、項目１７に記載の方法。
【００２７】２０． もう１つの心肥大パラメーターが
上記筋細胞における１つ以上の標的遺伝子の発現レベル
を含み、ここでこの１つ以上の標的遺伝子の発現レベル
が心肥大を示す、項目１６に記載の方法。
上記筋細胞における１つ以上の標的遺伝子の発現レベル
を含み、ここでこの１つ以上の標的遺伝子の発現レベル
が心肥大を示す、項目１６に記載の方法。
【００２８】２１． 項目２０に記載の方法であって、
ここで、上記１つ以上の標的遺伝子が、ＡＮＦ、α−Ｍ
ｙＨＣ、β−ＭｙＨＣ、α−骨格アクチン、ＳＥＲＣ
Ａ、シトクロムオキシダーゼサブユニットＶＩＩＩ、マ
ウスＴ−複合体タンパク質、インスリン増殖因子結合タ
ンパク質、τ−微小管結合タンパク質、ユビキチンカル
ボキシル末端ヒドロラーゼ、Ｔｈｙ−１細胞表面糖タン
パク質、またはＭｙＨＣクラスＩ抗原からなる群より選
択される、方法。
ここで、上記１つ以上の標的遺伝子が、ＡＮＦ、α−Ｍ
ｙＨＣ、β−ＭｙＨＣ、α−骨格アクチン、ＳＥＲＣ
Ａ、シトクロムオキシダーゼサブユニットＶＩＩＩ、マ
ウスＴ−複合体タンパク質、インスリン増殖因子結合タ
ンパク質、τ−微小管結合タンパク質、ユビキチンカル
ボキシル末端ヒドロラーゼ、Ｔｈｙ−１細胞表面糖タン
パク質、またはＭｙＨＣクラスＩ抗原からなる群より選
択される、方法。
【００２９】２２． 上記発現レベルが標的遺伝子プロ
モーターに作動可能に連結されたレポータータンパク質
コード領域を使用して測定される、項目２０に記載の方
法。
モーターに作動可能に連結されたレポータータンパク質
コード領域を使用して測定される、項目２０に記載の方
法。
【００３０】２３． 上記レポータータンパク質がルシ
フェラーゼ、β−ｇａｌ、または緑色蛍光タンパク質で
ある、項目２２に記載の方法。
フェラーゼ、β−ｇａｌ、または緑色蛍光タンパク質で
ある、項目２２に記載の方法。
【００３１】２４． 上記発現レベルが、標的ｍＲＮＡ
または増幅された核酸産物への核酸プローブのハイブリ
ダーゼーションを使用して測定される、項目２０に記載
の方法。
または増幅された核酸産物への核酸プローブのハイブリ
ダーゼーションを使用して測定される、項目２０に記載
の方法。
【００３２】２５． 上記１つ以上の心肥大パラメータ
ーが細胞性形態の１つ以上の局面を含む、項目１６に記
載の方法。
ーが細胞性形態の１つ以上の局面を含む、項目１６に記
載の方法。
【００３３】２６． 上記細胞性形態の１つ以上の局面
が筋節アセンブリ、細胞サイズ、または細胞収縮性を含
む、項目２５に記載の方法。
が筋節アセンブリ、細胞サイズ、または細胞収縮性を含
む、項目２５に記載の方法。
【００３４】２７． 上記筋細胞が単離された筋細胞で
ある、項目１６に記載の方法。
ある、項目１６に記載の方法。
【００３５】２８． 上記筋細胞が単離されたインタク
トな組織に含まれる、項目１６の方法。
トな組織に含まれる、項目１６の方法。
【００３６】２９． 上記筋細胞が心筋細胞である、項
目１６に記載の方法。
目１６に記載の方法。
【００３７】３０． 上記心筋細胞がインビボで機能性
のインタクトな心筋に位置する、項目２９に記載の方
法。
のインタクトな心筋に位置する、項目２９に記載の方
法。
【００３８】３１． 上記機能性のインタクトな心筋
が、１つ以上の心肥大パラメーターにおいて肥大応答を
誘発する刺激に供される、項目３０に記載の方法。
が、１つ以上の心肥大パラメーターにおいて肥大応答を
誘発する刺激に供される、項目３０に記載の方法。
【００３９】３２． 上記刺激が大動脈バンディング、
急速な心臓ペーシング、誘導性心筋梗塞、または導入遺
伝子発現である、項目３１に記載の方法。
急速な心臓ペーシング、誘導性心筋梗塞、または導入遺
伝子発現である、項目３１に記載の方法。
【００４０】３３． 上記１つ以上の心肥大パラメータ
ーが右心室駆出率、左心室駆出率、心室壁の厚さ、心臓
重量／体重の比、または心臓重量の標準化測定値を含
む、項目３１に記載の方法。
ーが右心室駆出率、左心室駆出率、心室壁の厚さ、心臓
重量／体重の比、または心臓重量の標準化測定値を含
む、項目３１に記載の方法。
【００４１】３４． 上記１つ以上の心肥大パラメータ
ーが総タンパク質合成を含む、項目１６に記載の方法。
ーが総タンパク質合成を含む、項目１６に記載の方法。
【００４２】３５． 心肥大のインヒビターを同定する
方法であって、この方法は、（ａ）少なくとも１つのク
ラスＩヒストンデアセチラーゼおよび少なくとも１つの
クラスＩＩヒストンデアセチラーゼを提供する工程；
（ｂ）候補インヒビター物質とこのヒストンデアセチラ
ーゼを接触させる工程；ならびに（ｃ）このヒストンデ
アセチラーゼの活性を測定する工程、を包含し、ここ
で、クラスＩＩヒストンデアセチラーゼ活性よりも大き
いクラスＩヒストンデアセチラーゼ活性における減少
が、心肥大のインヒビターとしてこの候補インヒビター
物質を同定する、方法。
方法であって、この方法は、（ａ）少なくとも１つのク
ラスＩヒストンデアセチラーゼおよび少なくとも１つの
クラスＩＩヒストンデアセチラーゼを提供する工程；
（ｂ）候補インヒビター物質とこのヒストンデアセチラ
ーゼを接触させる工程；ならびに（ｃ）このヒストンデ
アセチラーゼの活性を測定する工程、を包含し、ここ
で、クラスＩＩヒストンデアセチラーゼ活性よりも大き
いクラスＩヒストンデアセチラーゼ活性における減少
が、心肥大のインヒビターとしてこの候補インヒビター
物質を同定する、方法。
【００４３】３６． 上記ヒストンデアセチラーゼが全
細胞から精製される、項目３５に記載の方法。
細胞から精製される、項目３５に記載の方法。
【００４４】３７． 上記ヒストンデアセチラーゼがイ
ンタクトな細胞に位置する、項目３５に記載の方法。
ンタクトな細胞に位置する、項目３５に記載の方法。
【００４５】３８． 上記細胞が筋細胞である、項目３
５に記載の方法。
５に記載の方法。
【００４６】３９． 上記筋細胞が心筋細胞である、項
目３８に記載の方法。
目３８に記載の方法。
【００４７】４０． 上記クラスＩヒストンデアセチラ
ーゼがＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３、およびＨ
ＤＡＣ８からなる群より選択される、項目３５に記載の
方法。
ーゼがＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３、およびＨ
ＤＡＣ８からなる群より選択される、項目３５に記載の
方法。
【００４８】４１． 上記クラスＩＩヒストンデアセチ
ラーゼがＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ６、ＨＤＡ
Ｃ７、ＨＤＡＣ９、およびＨＤＡＣ１０からなる群より
選択される、項目３５に記載の方法。
ラーゼがＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ６、ＨＤＡ
Ｃ７、ＨＤＡＣ９、およびＨＤＡＣ１０からなる群より
選択される、項目３５に記載の方法。
【００４９】４２． １つより多いクラスＩヒストンデ
アセチラーゼの上記活性が測定される、項目３５に記載
の方法。
アセチラーゼの上記活性が測定される、項目３５に記載
の方法。
【００５０】４３． １つより多いクラスＩＩヒストン
デアセチラーゼの上記活性が測定される、項目３５に記
載の方法。
デアセチラーゼの上記活性が測定される、項目３５に記
載の方法。
【００５１】４４． １つより多いクラスＩヒストンデ
アセチラーゼの上記活性および１つより多いクラスＩＩ
ヒストンデアセチラーゼのこの活性が測定される、項目
３５に記載の方法。
アセチラーゼの上記活性および１つより多いクラスＩＩ
ヒストンデアセチラーゼのこの活性が測定される、項目
３５に記載の方法。
【００５２】４５． 上記候補インヒビター物質が少な
くとも１つのクラスＩヒストンデアセチラーゼに対して
阻害活性を有し、かつ、少なくとも１つのクラスＩＩヒ
ストンデアセチラーゼに対して活性を有さない、項目３
５に記載の方法。
くとも１つのクラスＩヒストンデアセチラーゼに対して
阻害活性を有し、かつ、少なくとも１つのクラスＩＩヒ
ストンデアセチラーゼに対して活性を有さない、項目３
５に記載の方法。
【００５３】４６． 上記候補インヒビター物質が複数
のクラスＩヒストンデアセチラーゼに対して阻害活性を
有し、かつ、複数のクラスＩＩヒストンデアセチラーゼ
に対して活性を有さない、項目４５に記載の方法。
のクラスＩヒストンデアセチラーゼに対して阻害活性を
有し、かつ、複数のクラスＩＩヒストンデアセチラーゼ
に対して活性を有さない、項目４５に記載の方法。
【００５４】４７． 上記候補インヒビター物質が、少
なくとも１つのクラスＩＩヒストンデアセチラーゼに対
するその阻害活性より少なくとも２倍高い少なくとも１
つのクラスＩヒストンデアセチラーゼに対する阻害活性
を有する、項目３５に記載の方法。
なくとも１つのクラスＩＩヒストンデアセチラーゼに対
するその阻害活性より少なくとも２倍高い少なくとも１
つのクラスＩヒストンデアセチラーゼに対する阻害活性
を有する、項目３５に記載の方法。
【００５５】４８． 上記候補インヒビター物質が、少
なくとも１つのクラスＩＩヒストンデアセチラーゼに対
するその阻害活性より少なくとも５倍より高い少なくと
も１つのクラスＩヒストンデアセチラーゼに対する阻害
活性を有する、項目４７に記載の方法。
なくとも１つのクラスＩＩヒストンデアセチラーゼに対
するその阻害活性より少なくとも５倍より高い少なくと
も１つのクラスＩヒストンデアセチラーゼに対する阻害
活性を有する、項目４７に記載の方法。
【００５６】４９． ＨＤＡＣ活性を測定する工程がヒ
ストンからの標識されたアセチル基の放出を測定する工
程を包含する、項目３５に記載の方法。
ストンからの標識されたアセチル基の放出を測定する工
程を包含する、項目３５に記載の方法。
【００５７】５０． 上記アセチル基が放射性標識、蛍
光標識または発色団で標識される、項目４９に記載の方
法。
光標識または発色団で標識される、項目４９に記載の方
法。
【００５８】
【発明の実施の形態】従って、本発明に従って、病的心
肥大および心不全を処置する方法が提供され、この方法
は、（ａ）心肥大を有する患者を同定する工程；ならび
に（ｂ）この患者にヒストンデアセチラーゼインヒビタ
ーを投与する工程を包含する。投与は、静脈内投与、経
口投与、経皮投与、徐放性投与、坐剤投与、または舌下
投与を含み得る。方法はさらに、第２の治療養生（例え
ば、β遮断剤、イオントロープ（ｉｏｎｔｒｏｐｅ）、
利尿薬、ＡＣＥ−Ｉ、ＡＩＩアンタゴニストまたはＣａ
＋＋遮断剤）を投与する工程を包含し得る。第２の治療
養生は、ヒストンデアセチラーゼインヒビターと同じと
きか、あるいはヒストンデアセチラーゼインヒビターの
前または後のいずれかで投与され得る。処置は、以下に
提供されるような心不全の１つ以上の症状を改善し得
る：増加した運動能力、増加した血液駆出量、左心室末
端拡張圧（ｌｅｆｔ ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｅｎｄ
ｄｉａｓｔｏｌｉｃ ｐｒｅｓｓｕｒｅ）、肺毛細管
くさび圧（ｐｌｕｍｏｎａｒｙ ｃａｐｉｌｌａｒｙ
ｗｅｄｇｅ ｐｒｅｓｓｕｒｅ）、心拍出量、心臓イン
デックス、肺動脈圧、左心室末端収縮寸法（ｌｅｆｔ
ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｅｎｄ ｓｙｓｔｏｌｉｃ
ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ）および左心室末端拡張寸法（ｌｅ
ｆｔ ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｅｎｄ ｄｉａｓｔｏ
ｌｉｃ ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ）、左心室壁ストレスおよ
び右心室壁ストレス、壁緊張（ｗａｌｌ ｔｅｎｓｉｏ
ｎ）および壁の厚み、生活の質、疾患関連罹患率および
疾患関連死亡率。
肥大および心不全を処置する方法が提供され、この方法
は、（ａ）心肥大を有する患者を同定する工程；ならび
に（ｂ）この患者にヒストンデアセチラーゼインヒビタ
ーを投与する工程を包含する。投与は、静脈内投与、経
口投与、経皮投与、徐放性投与、坐剤投与、または舌下
投与を含み得る。方法はさらに、第２の治療養生（例え
ば、β遮断剤、イオントロープ（ｉｏｎｔｒｏｐｅ）、
利尿薬、ＡＣＥ−Ｉ、ＡＩＩアンタゴニストまたはＣａ
＋＋遮断剤）を投与する工程を包含し得る。第２の治療
養生は、ヒストンデアセチラーゼインヒビターと同じと
きか、あるいはヒストンデアセチラーゼインヒビターの
前または後のいずれかで投与され得る。処置は、以下に
提供されるような心不全の１つ以上の症状を改善し得
る：増加した運動能力、増加した血液駆出量、左心室末
端拡張圧（ｌｅｆｔ ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｅｎｄ
ｄｉａｓｔｏｌｉｃ ｐｒｅｓｓｕｒｅ）、肺毛細管
くさび圧（ｐｌｕｍｏｎａｒｙ ｃａｐｉｌｌａｒｙ
ｗｅｄｇｅ ｐｒｅｓｓｕｒｅ）、心拍出量、心臓イン
デックス、肺動脈圧、左心室末端収縮寸法（ｌｅｆｔ
ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｅｎｄ ｓｙｓｔｏｌｉｃ
ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ）および左心室末端拡張寸法（ｌｅ
ｆｔ ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｅｎｄ ｄｉａｓｔｏ
ｌｉｃ ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ）、左心室壁ストレスおよ
び右心室壁ストレス、壁緊張（ｗａｌｌ ｔｅｎｓｉｏ
ｎ）および壁の厚み、生活の質、疾患関連罹患率および
疾患関連死亡率。
【００５９】なお別の実施形態において、病的心肥大お
よび心不全を予防する方法が提供され、この方法は、以
下（ａ）心肥大を発生する危険性がある患者を同定する
工程；ならびに（ｂ）この患者にヒストンデアセチラー
ゼインヒビターを投与する工程を包含する。投与は、静
脈内投与、経口投与、経皮投与、徐放性投与、坐剤投
与、または舌下投与を含み得る。危険性がある患者は、
長期の未制御の高血圧、未修復の弁疾患、慢性アンギナ
および／または最近の心筋梗塞のうちの１つ以上を示し
得る。
よび心不全を予防する方法が提供され、この方法は、以
下（ａ）心肥大を発生する危険性がある患者を同定する
工程；ならびに（ｂ）この患者にヒストンデアセチラー
ゼインヒビターを投与する工程を包含する。投与は、静
脈内投与、経口投与、経皮投与、徐放性投与、坐剤投
与、または舌下投与を含み得る。危険性がある患者は、
長期の未制御の高血圧、未修復の弁疾患、慢性アンギナ
および／または最近の心筋梗塞のうちの１つ以上を示し
得る。
【００６０】先述の実施形態に従って、ヒストンデアセ
チラーゼインヒビターは、ヒストンデアセチラーゼの活
性における減少をもたらす任意の分子であり得る。これ
は、タンパク質、ペプチド、ＤＮＡ分子（アンチセンス
を含む）、ＲＮＡ分子（ＲＮＡｉおよびアンチセンスを
含む）ならびに低分子を含む。この低分子としては、ト
リコスタチンＡ（ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ Ａ）、ト
ラポキシンＢ（ｔｒａｐｏｘｉｎ Ｂ）、ＭＳ ２７５
−２７、ｍ−カルボキシ桂皮酸ビス−ヒドロキサミド、
デプデシン（ｄｅｐｕｄｅｃｉｎ）、オキサムフラチン
（ｏｘａｍｆｌａｔｉｎ）、アピシジン（ａｐｉｃｉｄ
ｉｎ）、スベロイルアニリドヒドロキサム酸、スクリプ
タイド（Ｓｃｒｉｐｔａｉｄ）、ピロキサミド（ｐｙｒ
ｏｘａｍｉｄｅ）、２−アミノ−８−オキソ−９，１０
−エポキシ−デカノイル、３−（４−アロイル−１ Ｈ
−ピロール−２−イル）−Ｎ−ヒドロキシ−２−プロペ
ンアミドならびにＦＲ９０１２２８が挙げられるが、こ
れらに限定されない。さらに、以下の参考文献が、本発
明に使用するために選択され得るヒストンデアセチラー
ゼインヒビターを記載する：ＡＵ ９，０１３，１０
１；ＡＵ ９，０１３，２０１；ＡＵ ９，０１３，４
０１；ＡＵ ６，７９４，７００；ＥＰ １，２３３，
９５８；ＥＰ １，２０８，０８６；ＥＰ １，１７
４，４３８；ＥＰ１，１７３，５６２；ＥＰ １，１７
０，００８；ＥＰ １，１２３，１１１；ＪＰ ２００
１／３４８３４０；Ｕ．Ｓ． ２００２／１０３１９
２；Ｕ．Ｓ． ２００２／６５２８２；Ｕ．Ｓ． ２０
０２／６１８６０；ＷＯ ０２／５１８４２；ＷＯ ０
２／５０２８５；ＷＯ ０２／４６１４４；ＷＯ ０２
／４６１２９；ＷＯ ０２／３０８７９；ＷＯ ０２／
２６７０３；ＷＯ ０２／２６６９６；ＷＯ ０１／７
０６７５；ＷＯ ０１／４２４３７；ＷＯ ０１／３８
３２２；ＷＯ ０１／１８０４５；ＷＯ ０１／１４５
８１；Ｆｕｒｕｍａｉら（２００２）；Ｈｉｎｎｅｂｕ
ｓｃｈら（２００２）；Ｍａｉら（２００２）；Ｖｉｇ
ｕｓｈｉｎら（２００２）；Ｇｏｔｔｌｉｃｈｅｒら
（２００１）；Ｊｕｎｇ（２００１）；Ｋｏｍａｔｓｕ
ら（２００１）；Ｓｕら（２０００）。
チラーゼインヒビターは、ヒストンデアセチラーゼの活
性における減少をもたらす任意の分子であり得る。これ
は、タンパク質、ペプチド、ＤＮＡ分子（アンチセンス
を含む）、ＲＮＡ分子（ＲＮＡｉおよびアンチセンスを
含む）ならびに低分子を含む。この低分子としては、ト
リコスタチンＡ（ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ Ａ）、ト
ラポキシンＢ（ｔｒａｐｏｘｉｎ Ｂ）、ＭＳ ２７５
−２７、ｍ−カルボキシ桂皮酸ビス−ヒドロキサミド、
デプデシン（ｄｅｐｕｄｅｃｉｎ）、オキサムフラチン
（ｏｘａｍｆｌａｔｉｎ）、アピシジン（ａｐｉｃｉｄ
ｉｎ）、スベロイルアニリドヒドロキサム酸、スクリプ
タイド（Ｓｃｒｉｐｔａｉｄ）、ピロキサミド（ｐｙｒ
ｏｘａｍｉｄｅ）、２−アミノ−８−オキソ−９，１０
−エポキシ−デカノイル、３−（４−アロイル−１ Ｈ
−ピロール−２−イル）−Ｎ−ヒドロキシ−２−プロペ
ンアミドならびにＦＲ９０１２２８が挙げられるが、こ
れらに限定されない。さらに、以下の参考文献が、本発
明に使用するために選択され得るヒストンデアセチラー
ゼインヒビターを記載する：ＡＵ ９，０１３，１０
１；ＡＵ ９，０１３，２０１；ＡＵ ９，０１３，４
０１；ＡＵ ６，７９４，７００；ＥＰ １，２３３，
９５８；ＥＰ １，２０８，０８６；ＥＰ １，１７
４，４３８；ＥＰ１，１７３，５６２；ＥＰ １，１７
０，００８；ＥＰ １，１２３，１１１；ＪＰ ２００
１／３４８３４０；Ｕ．Ｓ． ２００２／１０３１９
２；Ｕ．Ｓ． ２００２／６５２８２；Ｕ．Ｓ． ２０
０２／６１８６０；ＷＯ ０２／５１８４２；ＷＯ ０
２／５０２８５；ＷＯ ０２／４６１４４；ＷＯ ０２
／４６１２９；ＷＯ ０２／３０８７９；ＷＯ ０２／
２６７０３；ＷＯ ０２／２６６９６；ＷＯ ０１／７
０６７５；ＷＯ ０１／４２４３７；ＷＯ ０１／３８
３２２；ＷＯ ０１／１８０４５；ＷＯ ０１／１４５
８１；Ｆｕｒｕｍａｉら（２００２）；Ｈｉｎｎｅｂｕ
ｓｃｈら（２００２）；Ｍａｉら（２００２）；Ｖｉｇ
ｕｓｈｉｎら（２００２）；Ｇｏｔｔｌｉｃｈｅｒら
（２００１）；Ｊｕｎｇ（２００１）；Ｋｏｍａｔｓｕ
ら（２００１）；Ｓｕら（２０００）。
【００６１】なお別の実施形態において、心肥大のイン
ヒビターを同定する方法が提供され、この方法は、以
下：（ａ）ヒストンデアセチラーゼインヒビターを提供
する工程；（ｂ）筋細胞をこのヒストンデアセチラーゼ
インヒビターを用いて処理する工程；および（ｃ）１つ
以上の心肥大パラメーターの発現を測定する工程であっ
て、ここで、ヒストンデアセチラーゼインヒビターで処
理されていない筋細胞における１つ以上の心肥大パラメ
ーターと比較して、１つ以上の心肥大パラメーターにお
ける変更が、心肥大のインヒビターとしてのヒストンデ
アセチラーゼインヒビターを同定する工程を包含する。
筋細胞は、１つ以上の心肥大パラメーターにおいて肥大
応答を誘起する刺激（例えば、導入遺伝子の発現または
薬物を用いた処理）に供され得る。
ヒビターを同定する方法が提供され、この方法は、以
下：（ａ）ヒストンデアセチラーゼインヒビターを提供
する工程；（ｂ）筋細胞をこのヒストンデアセチラーゼ
インヒビターを用いて処理する工程；および（ｃ）１つ
以上の心肥大パラメーターの発現を測定する工程であっ
て、ここで、ヒストンデアセチラーゼインヒビターで処
理されていない筋細胞における１つ以上の心肥大パラメ
ーターと比較して、１つ以上の心肥大パラメーターにお
ける変更が、心肥大のインヒビターとしてのヒストンデ
アセチラーゼインヒビターを同定する工程を包含する。
筋細胞は、１つ以上の心肥大パラメーターにおいて肥大
応答を誘起する刺激（例えば、導入遺伝子の発現または
薬物を用いた処理）に供され得る。
【００６２】１つ以上の心肥大パラメーターは、筋細胞
における１つ以上の標的遺伝子の発現レベルを含み得、
ここで、１つ以上の標的遺伝子の発現レベルが、心肥大
を示す。１つ以上の標的遺伝子は、以下からなる群より
選択され得る：ＡＮＦ、α−ＭｙＨＣ、β−ＭｙＨＣ、
α−骨格アクチン、ＳＥＲＣＡ、シトクロムオキシダー
ゼサブユニットＶＩＩＩ、マウスＴ−複合体タンパク
質、インスリン増殖因子結合タンパク質、τ−微小管結
合タンパク質、ユビキチンカルボキシル末端ヒドロラー
ゼ、Ｔｈｙ−１細胞表面糖タンパク質、またはＭｙＨＣ
クラスＩ抗原。発現レベルは、標的遺伝子プロモータ
ーに作動可能に連結されたレポータータンパク質（例え
ば、ルシフェラーゼタンパク質、β−ｇａｌタンパク
質、または緑色蛍光タンパク質）コード領域を用いて測
定され得る。発現レベルは、標的ｍＲＮＡまたは増幅さ
れた核酸産物に対する核酸プローブのハイブリダイゼー
ションを用いて測定される。
における１つ以上の標的遺伝子の発現レベルを含み得、
ここで、１つ以上の標的遺伝子の発現レベルが、心肥大
を示す。１つ以上の標的遺伝子は、以下からなる群より
選択され得る：ＡＮＦ、α−ＭｙＨＣ、β−ＭｙＨＣ、
α−骨格アクチン、ＳＥＲＣＡ、シトクロムオキシダー
ゼサブユニットＶＩＩＩ、マウスＴ−複合体タンパク
質、インスリン増殖因子結合タンパク質、τ−微小管結
合タンパク質、ユビキチンカルボキシル末端ヒドロラー
ゼ、Ｔｈｙ−１細胞表面糖タンパク質、またはＭｙＨＣ
クラスＩ抗原。発現レベルは、標的遺伝子プロモータ
ーに作動可能に連結されたレポータータンパク質（例え
ば、ルシフェラーゼタンパク質、β−ｇａｌタンパク
質、または緑色蛍光タンパク質）コード領域を用いて測
定され得る。発現レベルは、標的ｍＲＮＡまたは増幅さ
れた核酸産物に対する核酸プローブのハイブリダイゼー
ションを用いて測定される。
【００６３】１つ以上の心肥大パラメーターがまた、細
胞形態（例えば、筋節アセンブリ、細胞サイズ、または
細胞収縮性）の１つ以上の局面を含み得る。筋細胞は、
単離された筋細胞であっても、単離されたインタクトな
組織中に含まれてもよい。筋細胞はまた、心筋細胞であ
り得、そして機能的なインタクトな心筋（例えば、１つ
以上の心肥大パラメーターにおける肥大性応答を誘起す
る刺激に供される機能的なインタクトな心筋）中にイン
ビボで配置され得る。刺激は、大動脈バンディング（ａ
ｏｒｔｉｃ ｂａｎｄｉｎｇ）、急速な心臓ペーシング
（ｒａｐｉｄｃａｒｄｉａｃ ｐａｃｉｎｇ）、誘導性
心筋梗塞または導入遺伝子発現であり得る。１つ以上の
心肥大パラメーターは、右心室駆出率、左心室駆出率、
心室壁の厚み、心臓重量／体重の比、または心臓重量の
標準化測定値を含む。１つ以上の心肥大パラメーター
は、総タンパク質合成もまた含み得る。
胞形態（例えば、筋節アセンブリ、細胞サイズ、または
細胞収縮性）の１つ以上の局面を含み得る。筋細胞は、
単離された筋細胞であっても、単離されたインタクトな
組織中に含まれてもよい。筋細胞はまた、心筋細胞であ
り得、そして機能的なインタクトな心筋（例えば、１つ
以上の心肥大パラメーターにおける肥大性応答を誘起す
る刺激に供される機能的なインタクトな心筋）中にイン
ビボで配置され得る。刺激は、大動脈バンディング（ａ
ｏｒｔｉｃ ｂａｎｄｉｎｇ）、急速な心臓ペーシング
（ｒａｐｉｄｃａｒｄｉａｃ ｐａｃｉｎｇ）、誘導性
心筋梗塞または導入遺伝子発現であり得る。１つ以上の
心肥大パラメーターは、右心室駆出率、左心室駆出率、
心室壁の厚み、心臓重量／体重の比、または心臓重量の
標準化測定値を含む。１つ以上の心肥大パラメーター
は、総タンパク質合成もまた含み得る。
【００６４】なおさらに別の実施形態において、心肥大
のインヒビターを同定する方法が提供され、この方法
は、以下：（ａ）少なくとも１つのクラスＩ ヒストン
デアセチラーゼおよび少なくとも１つのクラスＩＩ ヒ
ストンデアセチラーゼを提供する工程；（ｂ）これらの
ヒストンデアセチラーゼを候補阻害物質と接触させる工
程；ならびに（ｃ）ヒストンデアセチラーゼの活性を測
定する工程であって、ここで、クラスＩＩ ヒストンデ
アセチラーゼ活性よりもはるかに減少したクラスＩ ヒ
ストンデアセチラーゼ活性が、候補インヒビター物質を
心肥大のインヒビターとして同定する工程を包含する。
ヒストンデアセチラーゼは、細胞全体から離れて精製さ
れているものであっても、インタクトな細胞中に位置し
てもよい。細胞は、筋細胞（例えば、心筋細胞）であり
得る。ＨＤＡＣ活性の測定は、ヒストンからの標識され
たアセチル基の放出を測定することを含み得る。この標
識は、放射性標識、蛍光標識または発色団であり得る。
のインヒビターを同定する方法が提供され、この方法
は、以下：（ａ）少なくとも１つのクラスＩ ヒストン
デアセチラーゼおよび少なくとも１つのクラスＩＩ ヒ
ストンデアセチラーゼを提供する工程；（ｂ）これらの
ヒストンデアセチラーゼを候補阻害物質と接触させる工
程；ならびに（ｃ）ヒストンデアセチラーゼの活性を測
定する工程であって、ここで、クラスＩＩ ヒストンデ
アセチラーゼ活性よりもはるかに減少したクラスＩ ヒ
ストンデアセチラーゼ活性が、候補インヒビター物質を
心肥大のインヒビターとして同定する工程を包含する。
ヒストンデアセチラーゼは、細胞全体から離れて精製さ
れているものであっても、インタクトな細胞中に位置し
てもよい。細胞は、筋細胞（例えば、心筋細胞）であり
得る。ＨＤＡＣ活性の測定は、ヒストンからの標識され
たアセチル基の放出を測定することを含み得る。この標
識は、放射性標識、蛍光標識または発色団であり得る。
【００６５】クラスＩ ヒストンデアセチラーゼは、Ｈ
ＤＡＣ １、ＨＤＡＣ ２、ＨＤＡＣ ３、またはＨＤ
ＡＣ ８であり得る。クラスＩＩ ヒストンデアセチラ
ーゼは、ＨＤＡＣ ４、ＨＤＡＣ ５、ＨＤＡＣ ６、
ＨＤＡＣ ７、ＨＤＡＣ ９、またはＨＤＡＣ １０で
あり得る。１個より多くのクラスＩ ヒストンデアセチ
ラーゼの活性が、測定され得る。１個より多くのクラス
ＩＩ ヒストンデアセチラーゼの活性が、測定され得
る。１個より多くのクラスＩ ヒストンデアセチラーゼ
の活性および１個より多くのクラスＩＩ ヒストンデア
セチラーゼの活性が、測定され得る。候補インヒビター
物質は、少なくとも１つのクラスＩ ヒストンデアセチ
ラーゼに対して阻害活性を有し得、そして少なくとも１
つのクラスＩＩ ヒストンデアセチラーゼに対して活性
を有さない。候補インヒビター物質は、複数のクラスＩ
ヒストンデアセチラーゼに対して阻害活性を有し得、
そして複数のクラスＩＩ ヒストンデアセチラーゼに対
して活性を有さない。候補インヒビター物質は、少なく
とも１つのクラスＩＩ ヒストンデアセチラーゼに対す
るその阻害活性よりも少なくとも２倍高い、少なくとも
１つのクラスＩ ヒストンデアセチラーゼに対する阻害
活性を有し得る。候補インヒビター物質は、少なくとも
１つのクラスＩＩ ヒストンデアセチラーゼに対するそ
の阻害活性よりも少なくとも５倍高い、少なくとも１つ
のクラスＩ ヒストンデアセチラーゼに対する阻害活性
を有し得る。
ＤＡＣ １、ＨＤＡＣ ２、ＨＤＡＣ ３、またはＨＤ
ＡＣ ８であり得る。クラスＩＩ ヒストンデアセチラ
ーゼは、ＨＤＡＣ ４、ＨＤＡＣ ５、ＨＤＡＣ ６、
ＨＤＡＣ ７、ＨＤＡＣ ９、またはＨＤＡＣ １０で
あり得る。１個より多くのクラスＩ ヒストンデアセチ
ラーゼの活性が、測定され得る。１個より多くのクラス
ＩＩ ヒストンデアセチラーゼの活性が、測定され得
る。１個より多くのクラスＩ ヒストンデアセチラーゼ
の活性および１個より多くのクラスＩＩ ヒストンデア
セチラーゼの活性が、測定され得る。候補インヒビター
物質は、少なくとも１つのクラスＩ ヒストンデアセチ
ラーゼに対して阻害活性を有し得、そして少なくとも１
つのクラスＩＩ ヒストンデアセチラーゼに対して活性
を有さない。候補インヒビター物質は、複数のクラスＩ
ヒストンデアセチラーゼに対して阻害活性を有し得、
そして複数のクラスＩＩ ヒストンデアセチラーゼに対
して活性を有さない。候補インヒビター物質は、少なく
とも１つのクラスＩＩ ヒストンデアセチラーゼに対す
るその阻害活性よりも少なくとも２倍高い、少なくとも
１つのクラスＩ ヒストンデアセチラーゼに対する阻害
活性を有し得る。候補インヒビター物質は、少なくとも
１つのクラスＩＩ ヒストンデアセチラーゼに対するそ
の阻害活性よりも少なくとも５倍高い、少なくとも１つ
のクラスＩ ヒストンデアセチラーゼに対する阻害活性
を有し得る。
【００６６】（例示的な実施形態の説明）心不全は、世
界中で罹患率および死亡率の主要な原因のうちの１つで
ある。米国単独において、３００万人の人が心筋症を有
しながら現在生存し、そして別の４００，０００人が年
基準で診断されていることが、推定で示されている。拡
張型心筋症（ＤＣＭ）はまた、「うっ血性心筋症」とも
いわれ、このうっ血性心筋症は、心筋症の最も一般的な
形態であり、そして推定１００，０００人の個体当たり
４０人に近い罹患率を有する（Ｄｕｒａｎｄら、１９９
５）。ＤＣＭの他の症例も存在するが、よく知られてい
る拡張型心筋症は、約２０％の「特発性」ＤＣＭを示す
と指摘されている。ＤＣＭ症例の約半分が、特発性であ
り、残りは、既知の疾患プロセスと関連している。例え
ば、重篤な心筋損傷が、癌化学療法に使用される特定の
薬物（例えば、ドキソルビシンおよびダウノルビシン）
から生じ得る。さらに、多くのＤＣＭ患者は、慢性アル
コール中毒である。幸運にも、これらの患者について、
心不全の進行は、疾患経過の初期にアルコール消費を減
らすかまたは止める場合、停止または逆転し得る。産辱
性心筋症は、感染性続発症と関連する疾患なので、ＤＣ
Ｍの別の特発性形態である。要するに、心筋症（ＤＣＭ
を含む）は、重要な公衆衛生の問題である。
界中で罹患率および死亡率の主要な原因のうちの１つで
ある。米国単独において、３００万人の人が心筋症を有
しながら現在生存し、そして別の４００，０００人が年
基準で診断されていることが、推定で示されている。拡
張型心筋症（ＤＣＭ）はまた、「うっ血性心筋症」とも
いわれ、このうっ血性心筋症は、心筋症の最も一般的な
形態であり、そして推定１００，０００人の個体当たり
４０人に近い罹患率を有する（Ｄｕｒａｎｄら、１９９
５）。ＤＣＭの他の症例も存在するが、よく知られてい
る拡張型心筋症は、約２０％の「特発性」ＤＣＭを示す
と指摘されている。ＤＣＭ症例の約半分が、特発性であ
り、残りは、既知の疾患プロセスと関連している。例え
ば、重篤な心筋損傷が、癌化学療法に使用される特定の
薬物（例えば、ドキソルビシンおよびダウノルビシン）
から生じ得る。さらに、多くのＤＣＭ患者は、慢性アル
コール中毒である。幸運にも、これらの患者について、
心不全の進行は、疾患経過の初期にアルコール消費を減
らすかまたは止める場合、停止または逆転し得る。産辱
性心筋症は、感染性続発症と関連する疾患なので、ＤＣ
Ｍの別の特発性形態である。要するに、心筋症（ＤＣＭ
を含む）は、重要な公衆衛生の問題である。
【００６７】心筋症自体は、典型的に、心臓損傷が心不
全を生じるのに十分なほど重篤になるまで、いずれの症
状も生成しないので、心筋症の症状は、心不全と関連す
る症状である。これらの症状としては、短い呼吸、労作
に伴う疲労、呼吸が短くなること無く水平に寝ることが
できないこと（起座呼吸）、発作性夜間呼吸困難、拡大
した心臓の大きさ、および／または下脚の腫脹が挙げら
れる。患者はまた、しばしば、増加した血圧、超過した
（ｅｘｔｒａ）心臓音、心臓雑音、肺および全身性塞
栓、胸の痛み、肺鬱血、ならびに動悸を表す。さらに、
ＤＣＭは、減少した駆出率（すなわち、内因性の収縮性
機能およびリモデリングの両方の測定）を引き起こす。
この疾患はさらに、心室拡張および減少した心筋収縮性
に起因したひどく損傷した収縮性機能によって特徴付け
られ、これは、多くの患者において拡張性心不全を引き
起こす。罹患した心臓はまた、筋細胞／心筋不全の結果
として細胞／チャンバリモデリングを引き起こし、これ
は、「ＤＣＭ表現型」に寄与する。疾患が進行するにつ
れ、症状も同様に進行する。拡張型心筋症を有する患者
はまた、生命を脅かす不整脈（心筋頻拍および心筋細動
を含む）の発生率を大きく増加した。これらの患者にお
いて、失神（めまい感）のエピソードが、突然死の前兆
とみなされる。
全を生じるのに十分なほど重篤になるまで、いずれの症
状も生成しないので、心筋症の症状は、心不全と関連す
る症状である。これらの症状としては、短い呼吸、労作
に伴う疲労、呼吸が短くなること無く水平に寝ることが
できないこと（起座呼吸）、発作性夜間呼吸困難、拡大
した心臓の大きさ、および／または下脚の腫脹が挙げら
れる。患者はまた、しばしば、増加した血圧、超過した
（ｅｘｔｒａ）心臓音、心臓雑音、肺および全身性塞
栓、胸の痛み、肺鬱血、ならびに動悸を表す。さらに、
ＤＣＭは、減少した駆出率（すなわち、内因性の収縮性
機能およびリモデリングの両方の測定）を引き起こす。
この疾患はさらに、心室拡張および減少した心筋収縮性
に起因したひどく損傷した収縮性機能によって特徴付け
られ、これは、多くの患者において拡張性心不全を引き
起こす。罹患した心臓はまた、筋細胞／心筋不全の結果
として細胞／チャンバリモデリングを引き起こし、これ
は、「ＤＣＭ表現型」に寄与する。疾患が進行するにつ
れ、症状も同様に進行する。拡張型心筋症を有する患者
はまた、生命を脅かす不整脈（心筋頻拍および心筋細動
を含む）の発生率を大きく増加した。これらの患者にお
いて、失神（めまい感）のエピソードが、突然死の前兆
とみなされる。
【００６８】拡張型心筋症の診断は、代表的に、拡大し
た心臓チャンバ、特に、拡大した心室の提示に依存す
る。拡大は、一般的に、胸部Ｘ線において観察可能であ
るが、心エコー図を使用してより正確に評価される。Ｄ
ＣＭはしばしば、急性心筋炎、弁心疾患、冠状動脈疾
患、および高血圧性心疾患との識別が困難である。一
旦、拡張型心筋症の診断がなされると、潜在的に可逆的
な原因を同定および処置するため、ならびにさらなる心
臓損傷を回避するためにあらゆる努力がなされる。例え
ば、冠状動脈疾患および弁心臓疾患が、除外されなけれ
ばならない。貧血、異常頻拍、栄養欠乏、アルコール中
毒症、甲状腺疾患および／または他の問題が、取り組ま
れそして制御される必要がある。
た心臓チャンバ、特に、拡大した心室の提示に依存す
る。拡大は、一般的に、胸部Ｘ線において観察可能であ
るが、心エコー図を使用してより正確に評価される。Ｄ
ＣＭはしばしば、急性心筋炎、弁心疾患、冠状動脈疾
患、および高血圧性心疾患との識別が困難である。一
旦、拡張型心筋症の診断がなされると、潜在的に可逆的
な原因を同定および処置するため、ならびにさらなる心
臓損傷を回避するためにあらゆる努力がなされる。例え
ば、冠状動脈疾患および弁心臓疾患が、除外されなけれ
ばならない。貧血、異常頻拍、栄養欠乏、アルコール中
毒症、甲状腺疾患および／または他の問題が、取り組ま
れそして制御される必要がある。
【００６９】心筋症の基底にある原因を同定し、そして
安定化させるための試みの間に、これらの症状を最小化
し、そして欠損している心臓の効率を最適化するため
に、処置が一般的に設定される。投薬は、処置の主要部
のままであるが、一般的に心不全の症例に使用されるも
の以外に、拡張型心筋症の処置のための特別の処置は存
在しない。移植外科手術が、１つの選択である。実に、
拡張型心筋症は、米国における心臓移植に関する最も一
般的な原因と示されている。
安定化させるための試みの間に、これらの症状を最小化
し、そして欠損している心臓の効率を最適化するため
に、処置が一般的に設定される。投薬は、処置の主要部
のままであるが、一般的に心不全の症例に使用されるも
の以外に、拡張型心筋症の処置のための特別の処置は存
在しない。移植外科手術が、１つの選択である。実に、
拡張型心筋症は、米国における心臓移植に関する最も一
般的な原因と示されている。
【００７０】非薬理学的処置が、主に薬理学的処理に対
する補助として使用される。非薬理学的処置の１つの手
段は、食餌中のナトリウムを減少することを含む。さら
に、非薬理学的処理がまた、特定の沈降薬物（陰性の強
心薬（例えば、特定のカルシウムチャネル遮断剤および
不整脈薬様ジソピラミド）、心臓毒性（例えば、アンフ
ェタミン）、および血漿容積エキスパンダー（例えば、
非ステロイド性抗炎症剤およびグルココルチコイド）を
含む）の排除を必要とする。
する補助として使用される。非薬理学的処置の１つの手
段は、食餌中のナトリウムを減少することを含む。さら
に、非薬理学的処理がまた、特定の沈降薬物（陰性の強
心薬（例えば、特定のカルシウムチャネル遮断剤および
不整脈薬様ジソピラミド）、心臓毒性（例えば、アンフ
ェタミン）、および血漿容積エキスパンダー（例えば、
非ステロイド性抗炎症剤およびグルココルチコイド）を
含む）の排除を必要とする。
【００７１】薬理学的薬剤を用いた処理は、心不全の発
現を減少または排除するための主要な機構を表す。利尿
剤は、中間から温和な心不全についての処置の最初の手
順である。不運なことに、一般的に使用される利尿剤
（例えば、サイアザイド）の多くは、多数の有害な影響
を与える。例えば、特定の利尿剤は、血清コレステロー
ルおよびトリグリセリドを増加し得る。さらに、利尿剤
は、一般的に、重篤な心不全に罹患した患者に対して効
果的ではない。
現を減少または排除するための主要な機構を表す。利尿
剤は、中間から温和な心不全についての処置の最初の手
順である。不運なことに、一般的に使用される利尿剤
（例えば、サイアザイド）の多くは、多数の有害な影響
を与える。例えば、特定の利尿剤は、血清コレステロー
ルおよびトリグリセリドを増加し得る。さらに、利尿剤
は、一般的に、重篤な心不全に罹患した患者に対して効
果的ではない。
【００７２】利尿剤が効果的ではない場合、血管拡張薬
が、使用され得る；アンギオテンシン変換酵素（ＡＣ
Ｅ）インヒビター（例えば、エナラプリル（ｅｎａｌｏ
ｐｒｉｌ）およびリジノプリル）は、症候の軽減を提供
するだけではなく、これらはまた、死亡率を減少するこ
とが報告されている（Ｙｏｕｎｇら、１９８９）。しか
し、また、ＡＣＥインヒビターは、有害な影響（これ
は、特定の疾患状態（例えば、腎臓動脈狭窄）を有する
患者に禁忌をもたらす）と関連する。
が、使用され得る；アンギオテンシン変換酵素（ＡＣ
Ｅ）インヒビター（例えば、エナラプリル（ｅｎａｌｏ
ｐｒｉｌ）およびリジノプリル）は、症候の軽減を提供
するだけではなく、これらはまた、死亡率を減少するこ
とが報告されている（Ｙｏｕｎｇら、１９８９）。しか
し、また、ＡＣＥインヒビターは、有害な影響（これ
は、特定の疾患状態（例えば、腎臓動脈狭窄）を有する
患者に禁忌をもたらす）と関連する。
【００７３】同様に、強心薬治療（すなわち、心筋収縮
の力を増加することによって心拍出量を改善する薬物）
がまた、利尿剤が十分な軽減を引き起こさなかった場
合、示され得る。外来患者によって使用される最も一般
的に強心薬は、ジギタリスである。しかし、これは、数
々の有害反応（胃腸問題および中枢神経系機能不全を含
む）と関連する。
の力を増加することによって心拍出量を改善する薬物）
がまた、利尿剤が十分な軽減を引き起こさなかった場
合、示され得る。外来患者によって使用される最も一般
的に強心薬は、ジギタリスである。しかし、これは、数
々の有害反応（胃腸問題および中枢神経系機能不全を含
む）と関連する。
【００７４】従って、現在使用される薬理学的薬剤は、
特定の患者集団において重篤な不足を有する。新規、安
全、かつ有効な薬剤の利用可能性が、現在利用可能な薬
理学的物理療法を使用し得ないかまたはこれらの物理療
法から十分な軽減を受けないかのいずれかである患者に
とって間違いなく有益である。ＤＣＭを有する患者に関
する予後は変動しやすく、そして心室機能不全の程度に
依存し、その大半が、診断の５年以内に死を引き起こ
す。
特定の患者集団において重篤な不足を有する。新規、安
全、かつ有効な薬剤の利用可能性が、現在利用可能な薬
理学的物理療法を使用し得ないかまたはこれらの物理療
法から十分な軽減を受けないかのいずれかである患者に
とって間違いなく有益である。ＤＣＭを有する患者に関
する予後は変動しやすく、そして心室機能不全の程度に
依存し、その大半が、診断の５年以内に死を引き起こ
す。
【００７５】（Ｉ．本発明）本発明者らは、ＭＥＦ２
が、そのカルボキシ末端活性化ドメインの３つの保存さ
れた部位のＭＡＰキナーゼリン酸化によって活性化され
ることを以前に示した（Ｋａｔｏｈら、１９９８を参照
のこと）。ＣａＭＫシグナル伝達がまた、クラスＩＩＨ
ＤＡＣ（これは、成体心臓において高レベルで発現さ
れ、ここで、ＭＥＦ２活性化を抑制し得る）をリン酸化
することによってＭＥＦ２を活性化する。リン酸化の
際、これらのＨＤＡＣは、１４−３−３に結合し、そし
てＭＥＦ２から分離し、核への移動およびＭＥＦ−２依
存性転写の活性化を引き起こす。リン酸化され得ないク
ラスＩＩＨＤＡＣの変異体は、ＭＥＦ２から分離し得
ず、そしてＭＥＦ２標的遺伝子の発現を不可逆性にブロ
ックする。
が、そのカルボキシ末端活性化ドメインの３つの保存さ
れた部位のＭＡＰキナーゼリン酸化によって活性化され
ることを以前に示した（Ｋａｔｏｈら、１９９８を参照
のこと）。ＣａＭＫシグナル伝達がまた、クラスＩＩＨ
ＤＡＣ（これは、成体心臓において高レベルで発現さ
れ、ここで、ＭＥＦ２活性化を抑制し得る）をリン酸化
することによってＭＥＦ２を活性化する。リン酸化の
際、これらのＨＤＡＣは、１４−３−３に結合し、そし
てＭＥＦ２から分離し、核への移動およびＭＥＦ−２依
存性転写の活性化を引き起こす。リン酸化され得ないク
ラスＩＩＨＤＡＣの変異体は、ＭＥＦ２から分離し得
ず、そしてＭＥＦ２標的遺伝子の発現を不可逆性にブロ
ックする。
【００７６】ＨＤＡＣ ５のリン酸化不可能な変異体を
コードするアデノウイルスが、多様なシグナル伝達経路
に応答してインビトロで心筋細胞肥大を予防し得ること
がまた、示された（Ｌｕら、２０００を参照のこと）。
これらの知見は、クラスＩＩＨＤＡＣにおけるこれらの
保存された部位のリン酸化が、心肥大の開始に必須な工
程であることを示唆する。これらの知見に基づいて、Ｔ
ＳＡによるＨＤＡＣ活性化の阻害が、肥大性応答遺伝子
の抑制解除に起因して、心肥大の誘導を引き起こすとい
うことを予想し得る。対照的に、本発明者らは、ＴＳＡ
が実際に心肥大を回避することを代わりに見出した。こ
れらの予期せぬ知見は、少なくともいくつかのＨＤＡＣ
が、肥大に必要とされること、およびＨＤＡＣ触媒活性
の阻害が肥大性遺伝子の活性化を回避し得ることを示唆
する。
コードするアデノウイルスが、多様なシグナル伝達経路
に応答してインビトロで心筋細胞肥大を予防し得ること
がまた、示された（Ｌｕら、２０００を参照のこと）。
これらの知見は、クラスＩＩＨＤＡＣにおけるこれらの
保存された部位のリン酸化が、心肥大の開始に必須な工
程であることを示唆する。これらの知見に基づいて、Ｔ
ＳＡによるＨＤＡＣ活性化の阻害が、肥大性応答遺伝子
の抑制解除に起因して、心肥大の誘導を引き起こすとい
うことを予想し得る。対照的に、本発明者らは、ＴＳＡ
が実際に心肥大を回避することを代わりに見出した。こ
れらの予期せぬ知見は、少なくともいくつかのＨＤＡＣ
が、肥大に必要とされること、およびＨＤＡＣ触媒活性
の阻害が肥大性遺伝子の活性化を回避し得ることを示唆
する。
【００７７】どのようにこれらの明らかに矛盾する結果
が説明され得るのか？１つのモデルは、クラスＩＨＤＡ
ＣおよびクラスＩＩＨＤＡＣは、心筋細胞中の遺伝子の
異なるセットを制御し得ることを議論する。このモデル
に従って、クラスＩＩＨＤＡＣは、肥大に必要とされる
転写因子（例えば、ＭＥＦ２）と相互作用し、そしてこ
の転写因子の活性を抑制する。このことは、クラスＩＩ
ＨＤＡＣのリン酸化不可能な変異体が肥大をブロックす
る理由を説明する。対照的に、クラスＩＨＤＡＣ（特
に、ＨＤＡＣ１およびＨＤＡＣ３）が、抗肥大性遺伝子
の発現を抑制することが提案されている。従って、ＴＳ
Ａへの心筋細胞の曝露は、これら抗肥大性遺伝子の抑制
および肥大の遮断を引き起こす。このモデルはまた、こ
のような抗肥大性遺伝子の活性が、クラスＩＩＨＤＡＣ
の活性よりも優勢であることを推定する。なぜなら、こ
れら抗肥大性遺伝子の活性もまた、ＴＳＡによって非常
に抑制されるからであり、これによって、肥大性プログ
ラムが抑制解除されることが予期される。
が説明され得るのか？１つのモデルは、クラスＩＨＤＡ
ＣおよびクラスＩＩＨＤＡＣは、心筋細胞中の遺伝子の
異なるセットを制御し得ることを議論する。このモデル
に従って、クラスＩＩＨＤＡＣは、肥大に必要とされる
転写因子（例えば、ＭＥＦ２）と相互作用し、そしてこ
の転写因子の活性を抑制する。このことは、クラスＩＩ
ＨＤＡＣのリン酸化不可能な変異体が肥大をブロックす
る理由を説明する。対照的に、クラスＩＨＤＡＣ（特
に、ＨＤＡＣ１およびＨＤＡＣ３）が、抗肥大性遺伝子
の発現を抑制することが提案されている。従って、ＴＳ
Ａへの心筋細胞の曝露は、これら抗肥大性遺伝子の抑制
および肥大の遮断を引き起こす。このモデルはまた、こ
のような抗肥大性遺伝子の活性が、クラスＩＩＨＤＡＣ
の活性よりも優勢であることを推定する。なぜなら、こ
れら抗肥大性遺伝子の活性もまた、ＴＳＡによって非常
に抑制されるからであり、これによって、肥大性プログ
ラムが抑制解除されることが予期される。
【００７８】いずれの場合も、そして正確な分子基礎に
もかかわらず、本発明は、驚くべきことにＨＤＡＣイン
ヒビターが心肥大および心不全の処置に有益であること
を示す。
もかかわらず、本発明は、驚くべきことにＨＤＡＣイン
ヒビターが心肥大および心不全の処置に有益であること
を示す。
【００７９】（ＩＩ．ヒストンデアセチラーゼ）ヌクレ
オソーム（クロマチン折り畳みの基本骨格）は、動的な
高分子構造であり、クロマチン溶液コンフォメーション
に影響を与える（ＷｏｒｋｍａｎおよびＫｉｎｇｓｔｏ
ｎ、１９９８）。ヌクレオソームコアは、ヒストンタン
パク質であるＨ２Ａ、ＨＢ、Ｈ３およびＨ４で構成され
る。ヒストンアセチル化は、変更された生物物理学的特
性をふるまうヌクレオソームおよびヌクレオソーム配置
を引き起こす。ヒストンアセチルトランスフェラーゼ
（ＨＡＴ）の活性とデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）の活性
との間の均衡が、ヒストンアセチル化のレベルを決定す
る。脱アセチル化クロマチンが一般的に転写的に不活性
であるのに対し、アセチル化されたヒストンは、クロマ
チンの遅延および遺伝子転写の活性化を引き起こす。
オソーム（クロマチン折り畳みの基本骨格）は、動的な
高分子構造であり、クロマチン溶液コンフォメーション
に影響を与える（ＷｏｒｋｍａｎおよびＫｉｎｇｓｔｏ
ｎ、１９９８）。ヌクレオソームコアは、ヒストンタン
パク質であるＨ２Ａ、ＨＢ、Ｈ３およびＨ４で構成され
る。ヒストンアセチル化は、変更された生物物理学的特
性をふるまうヌクレオソームおよびヌクレオソーム配置
を引き起こす。ヒストンアセチルトランスフェラーゼ
（ＨＡＴ）の活性とデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）の活性
との間の均衡が、ヒストンアセチル化のレベルを決定す
る。脱アセチル化クロマチンが一般的に転写的に不活性
であるのに対し、アセチル化されたヒストンは、クロマ
チンの遅延および遺伝子転写の活性化を引き起こす。
【００８０】１１個の異なるＨＤＡＣが、脊椎動物の生
物からクローン化されている。同定された最初の３つの
ヒトＨＤＡＣは、ＨＤＡＣ １、ＨＤＡＣ ２およびＨ
ＤＡＣ ３（クラスＩヒトＨＤＡＣと称される）、およ
びＨＤＡＣ ８（Ｖａｎ ｄｅｎ Ｗｙｎｇａｅｒｔ
ら、２０００）が、このリストに加えられた。近年、ク
ラスＩＩヒトＨＤＡＣ（ＨＤＡＣ ４、ＨＤＡＣ ５、
ＨＤＡＣ ６、ＨＤＡＣ７、ＨＤＡＣ ９およびＨＤＡ
Ｃ １０）（Ｋａｏら、２０００）が、クローン化さ
れ、そして同定されている（Ｇｒｏｚｉｎｇｅｒら、１
９９９；Ｚｈｏｕら、２００１；Ｔｏｎｇら、２００
２）。さらに、ＨＤＡＣ １１が、同定されたが、クラ
スＩまたはクラスＩＩのいずれかは未だ分類されていな
い（Ｇａｏら、２００２）。全てが、触媒領域中に相同
性を共有する。しかし、ＨＤＡＣ ４、ＨＤＡＣ ５、
ＨＤＡＣ ７、ＨＤＡＣ ９およびＨＤＡＣ １０は、
他のＨＤＡＣに見出されない特有のアミノ末端伸長部を
有する。このアミノ末端領域は、ＭＥＦ２結合ドメイン
を含む。ＨＤＡＣ ４、ＨＤＡＣ ５およびＨＤＡＣ７
は、心臓遺伝子発現の調節に関与することが示され、そ
して特定の実施形態において、ＭＥＦ２転写活性を抑制
することが示されている。クラスＩＩＨＤＡＣがＭＥＦ
２活性を抑制する正確な機構は、完全に理解されていな
い。１つの可能性は、ＭＥＦ２へのＨＤＡＣ結合が、競
合的にかまたはネイティブな転写的に活性であるＭＥＦ
２のコンフォメーションを不安定化することのいずれか
によって、ＭＥＦ２転写活性を阻害するということであ
る。クラスＩＩ ＨＤＡＣが、脱アセチル化を進行させ
るためにヒストンの近位に、ＨＤＡＣを局在または位置
付けるために、ＭＥＦ２との二量体化を必要とする可能
性がまた存在する。
物からクローン化されている。同定された最初の３つの
ヒトＨＤＡＣは、ＨＤＡＣ １、ＨＤＡＣ ２およびＨ
ＤＡＣ ３（クラスＩヒトＨＤＡＣと称される）、およ
びＨＤＡＣ ８（Ｖａｎ ｄｅｎ Ｗｙｎｇａｅｒｔ
ら、２０００）が、このリストに加えられた。近年、ク
ラスＩＩヒトＨＤＡＣ（ＨＤＡＣ ４、ＨＤＡＣ ５、
ＨＤＡＣ ６、ＨＤＡＣ７、ＨＤＡＣ ９およびＨＤＡ
Ｃ １０）（Ｋａｏら、２０００）が、クローン化さ
れ、そして同定されている（Ｇｒｏｚｉｎｇｅｒら、１
９９９；Ｚｈｏｕら、２００１；Ｔｏｎｇら、２００
２）。さらに、ＨＤＡＣ １１が、同定されたが、クラ
スＩまたはクラスＩＩのいずれかは未だ分類されていな
い（Ｇａｏら、２００２）。全てが、触媒領域中に相同
性を共有する。しかし、ＨＤＡＣ ４、ＨＤＡＣ ５、
ＨＤＡＣ ７、ＨＤＡＣ ９およびＨＤＡＣ １０は、
他のＨＤＡＣに見出されない特有のアミノ末端伸長部を
有する。このアミノ末端領域は、ＭＥＦ２結合ドメイン
を含む。ＨＤＡＣ ４、ＨＤＡＣ ５およびＨＤＡＣ７
は、心臓遺伝子発現の調節に関与することが示され、そ
して特定の実施形態において、ＭＥＦ２転写活性を抑制
することが示されている。クラスＩＩＨＤＡＣがＭＥＦ
２活性を抑制する正確な機構は、完全に理解されていな
い。１つの可能性は、ＭＥＦ２へのＨＤＡＣ結合が、競
合的にかまたはネイティブな転写的に活性であるＭＥＦ
２のコンフォメーションを不安定化することのいずれか
によって、ＭＥＦ２転写活性を阻害するということであ
る。クラスＩＩ ＨＤＡＣが、脱アセチル化を進行させ
るためにヒストンの近位に、ＨＤＡＣを局在または位置
付けるために、ＭＥＦ２との二量体化を必要とする可能
性がまた存在する。
【００８１】（ＩＩＩ．デアセチラーゼインヒビター）
ヒストンデアセチラーゼに対する種々のインヒビターが
同定されている。提唱される用途は、広範にわたるが、
主に癌治療に集中している。Ｓａｕｎｄｅｒｓら（１９
９９）；Ｊｕｎｇら（１９９７）；Ｊｕｎｇら（１９９
９）；Ｖｉｇｕｓｈｉｎら（１９９９）；Ｋｉｍら（１
９９９）；Ｋｉｔａｚｏｍｏら（２００１）；Ｖｉｇｕ
ｓｉｎら（２００１）；Ｈｏｆｆｍａｎｎら（２００
１）；Ｋｒａｍｅｒら（２００１）；Ｍａｓｓａら（２
００１）；Ｋｏｍａｔｓｕら（２００１）；Ｈａｎら
（２００１）。このような治療は、固形癌および非ホジ
キンリンパ腫のＮＩＨに支援された第１相治験の対象で
ある。ＨＤＡＣがまた、導入遺伝子の転写を増加し、従
って遺伝子治療に対する可能な補助剤を構成する。Ｙａ
ｍａｎｏら（２０００）；Ｓｕら（２０００）。
ヒストンデアセチラーゼに対する種々のインヒビターが
同定されている。提唱される用途は、広範にわたるが、
主に癌治療に集中している。Ｓａｕｎｄｅｒｓら（１９
９９）；Ｊｕｎｇら（１９９７）；Ｊｕｎｇら（１９９
９）；Ｖｉｇｕｓｈｉｎら（１９９９）；Ｋｉｍら（１
９９９）；Ｋｉｔａｚｏｍｏら（２００１）；Ｖｉｇｕ
ｓｉｎら（２００１）；Ｈｏｆｆｍａｎｎら（２００
１）；Ｋｒａｍｅｒら（２００１）；Ｍａｓｓａら（２
００１）；Ｋｏｍａｔｓｕら（２００１）；Ｈａｎら
（２００１）。このような治療は、固形癌および非ホジ
キンリンパ腫のＮＩＨに支援された第１相治験の対象で
ある。ＨＤＡＣがまた、導入遺伝子の転写を増加し、従
って遺伝子治療に対する可能な補助剤を構成する。Ｙａ
ｍａｎｏら（２０００）；Ｓｕら（２０００）。
【００８２】ＨＤＡＣは、種々の異なる機構（タンパク
質、ペプチド、および核酸（アンチセンス分子およびＲ
ＮＡｉ分子を含む）を介して阻害され得る。クローニン
グ、遺伝子構築物（ウイルスベクターおよび非ウイルス
ベクターを含む）の移入および発現、ならびにリポソー
ムに関する方法が、当業者に広範に知られている。ウイ
ルスベクターとしては、アデノウイルス、アデノ随伴ウ
イルス、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、および
ヘルペスウイルスが挙げられる。
質、ペプチド、および核酸（アンチセンス分子およびＲ
ＮＡｉ分子を含む）を介して阻害され得る。クローニン
グ、遺伝子構築物（ウイルスベクターおよび非ウイルス
ベクターを含む）の移入および発現、ならびにリポソー
ムに関する方法が、当業者に広範に知られている。ウイ
ルスベクターとしては、アデノウイルス、アデノ随伴ウ
イルス、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、および
ヘルペスウイルスが挙げられる。
【００８３】低分子インヒビターがまた、意図される。
おそらく、ＨＤＡＣ機能の最も広範に知られる低分子イ
ンヒビターは、Ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ Ａ（ヒドロ
キサム酸）である。これは、過剰アセチル化を誘導し、
そしてｒａｓトランスフォーメーション細胞の正常形態
への変換を引き起こすこと（Ｔａｕｎｔｏｎら、１９９
６）、そしてマウスモデルにおいて免疫抑制を誘導する
こと（Ｔａｋａｈａｓｈｉら、１９９６）が、示されて
いる。これは、ＢＩＯＭＯＬ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａ
ｂｓ，Ｉｎｃ．，Ｐｌｙｍｏｕｔｈ Ｍｅｅｔｉｎｇ，
ＰＡから市販される。
おそらく、ＨＤＡＣ機能の最も広範に知られる低分子イ
ンヒビターは、Ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ Ａ（ヒドロ
キサム酸）である。これは、過剰アセチル化を誘導し、
そしてｒａｓトランスフォーメーション細胞の正常形態
への変換を引き起こすこと（Ｔａｕｎｔｏｎら、１９９
６）、そしてマウスモデルにおいて免疫抑制を誘導する
こと（Ｔａｋａｈａｓｈｉら、１９９６）が、示されて
いる。これは、ＢＩＯＭＯＬ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａ
ｂｓ，Ｉｎｃ．，Ｐｌｙｍｏｕｔｈ Ｍｅｅｔｉｎｇ，
ＰＡから市販される。
【００８４】本明細書中に参考として援用される以下の
参考文献は、全て、本発明における用途が見出され得る
ＨＤＡＣインヒビターを記載する：ＡＵ ９，０１３，
１０１；ＡＵ ９，０１３，２０１；ＡＵ ９，０１
３，４０１；ＡＵ ６，７９４，７００；ＥＰ １，２
３３，９５８；ＥＰ １，２０８，０８６；ＥＰ １，
１７４，４３８；ＥＰ １，１７３，５６２；ＥＰ
１，１７０，００８；ＥＰ１，１２３，１１１；ＪＰ
２００１／３４８３４０；Ｕ．Ｓ． ２００２／１０３
１９２；Ｕ．Ｓ． ２００２／６５２８２；Ｕ．Ｓ．
２００２／６１８６０；ＷＯ ０２／５１８４２；ＷＯ
０２／５０２８５；ＷＯ ０２／４６１４４；ＷＯ
０２／４６１２９；ＷＯ ０２／３０８７９；ＷＯ ０
２／２６７０３；ＷＯ ０２／２６６９６；ＷＯ ０１
／７０６７５；ＷＯ ０１／４２４３７；ＷＯ ０１／
３８３２２；ＷＯ ０１／１８０４５；ＷＯ ０１／１
４５８１；Ｆｕｒｕｍａｉら（２００２）；Ｈｉｎｎｅ
ｂｕｓｃｈら（２００２）；Ｍａｉら（２００２）；Ｖ
ｉｇｕｓｈｉｎら（２００２）；Ｇｏｔｔｌｉｃｈｅｒ
ら（２００１）；Ｊｕｎｇ（２００１）；Ｋｏｍａｔｓ
ｕら（２００１）；Ｓｕら（２０００）。
参考文献は、全て、本発明における用途が見出され得る
ＨＤＡＣインヒビターを記載する：ＡＵ ９，０１３，
１０１；ＡＵ ９，０１３，２０１；ＡＵ ９，０１
３，４０１；ＡＵ ６，７９４，７００；ＥＰ １，２
３３，９５８；ＥＰ １，２０８，０８６；ＥＰ １，
１７４，４３８；ＥＰ １，１７３，５６２；ＥＰ
１，１７０，００８；ＥＰ１，１２３，１１１；ＪＰ
２００１／３４８３４０；Ｕ．Ｓ． ２００２／１０３
１９２；Ｕ．Ｓ． ２００２／６５２８２；Ｕ．Ｓ．
２００２／６１８６０；ＷＯ ０２／５１８４２；ＷＯ
０２／５０２８５；ＷＯ ０２／４６１４４；ＷＯ
０２／４６１２９；ＷＯ ０２／３０８７９；ＷＯ ０
２／２６７０３；ＷＯ ０２／２６６９６；ＷＯ ０１
／７０６７５；ＷＯ ０１／４２４３７；ＷＯ ０１／
３８３２２；ＷＯ ０１／１８０４５；ＷＯ ０１／１
４５８１；Ｆｕｒｕｍａｉら（２００２）；Ｈｉｎｎｅ
ｂｕｓｃｈら（２００２）；Ｍａｉら（２００２）；Ｖ
ｉｇｕｓｈｉｎら（２００２）；Ｇｏｔｔｌｉｃｈｅｒ
ら（２００１）；Ｊｕｎｇ（２００１）；Ｋｏｍａｔｓ
ｕら（２００１）；Ｓｕら（２０００）。
【００８５】いくつかの特異的なＨＤＡＣインヒビター
の例を表１に示す。
の例を表１に示す。
【００８６】
【表１】
（ＩＶ．心肥大を処置する方法）
（Ａ．治療養生法）本発明の１つの実施形態において、
ＨＤＡＣインヒビターを使用する心肥大の処置のための
方法が、提供される。本願の目的のために、処置は、以
下のような心肥大の１つ以上の症状を減少させる工程を
包含する：減少した運動能力、減少した血液駆出量、増
加した左心室末端拡張圧、増加した肺毛細管くさび圧、
減少した心拍出量、心臓インデックス、増加した肺動脈
圧、増加した左心室末端収縮寸法および左心室末端拡張
寸法、および増加した左心室壁ストレス、壁緊張および
壁の厚み、ならびに右心室についての同様の症状。さら
に、ＨＤＡＣインヒビターの使用は、心肥大およびその
関連する症状が生じるのを回避し得る。
ＨＤＡＣインヒビターを使用する心肥大の処置のための
方法が、提供される。本願の目的のために、処置は、以
下のような心肥大の１つ以上の症状を減少させる工程を
包含する：減少した運動能力、減少した血液駆出量、増
加した左心室末端拡張圧、増加した肺毛細管くさび圧、
減少した心拍出量、心臓インデックス、増加した肺動脈
圧、増加した左心室末端収縮寸法および左心室末端拡張
寸法、および増加した左心室壁ストレス、壁緊張および
壁の厚み、ならびに右心室についての同様の症状。さら
に、ＨＤＡＣインヒビターの使用は、心肥大およびその
関連する症状が生じるのを回避し得る。
【００８７】処置養生法は、臨床状態に依存して変化す
る。しかし、長期の維持が、ほとんどの状況において適
切なようである。間欠的にＨＤＡＣインヒビターを用い
て心肥大を処置すること（例えば、疾患進行の間の短時
間のウィンドウ内で）がまた、望ましくあり得る。現在
のところ、ＨＤＡＣインヒビターについての最適な投薬
量は、有意な毒性が生じる前の最大用量であることが、
試験によって示されている。
る。しかし、長期の維持が、ほとんどの状況において適
切なようである。間欠的にＨＤＡＣインヒビターを用い
て心肥大を処置すること（例えば、疾患進行の間の短時
間のウィンドウ内で）がまた、望ましくあり得る。現在
のところ、ＨＤＡＣインヒビターについての最適な投薬
量は、有意な毒性が生じる前の最大用量であることが、
試験によって示されている。
【００８８】（Ｂ．併用治療）別の実施形態において、
他の治療様式と組み合わせて、ＨＤＡＣ阻害を使用する
ことが考えられている。従って、上記の治療に加えて、
患者により多くの「標準的」薬学的心臓治療をまた提供
し得る。標準的治療の例としては、制限することなく、
いわゆる「β遮断剤」、抗高血圧剤、強心剤、抗血栓
剤、血管拡張薬、ホルモン拮抗薬、イオントロープ（ｉ
ｏｎｔｒｏｐｅ）、利尿薬、エンドセリン拮抗薬、カル
シウムチャネル遮断剤、ホスホジエステラーゼインヒビ
ター、ＡＣＥインヒビター、２型アンギオテンシン拮抗
薬およびサイトカイン遮断剤／インヒビターが挙げられ
る。
他の治療様式と組み合わせて、ＨＤＡＣ阻害を使用する
ことが考えられている。従って、上記の治療に加えて、
患者により多くの「標準的」薬学的心臓治療をまた提供
し得る。標準的治療の例としては、制限することなく、
いわゆる「β遮断剤」、抗高血圧剤、強心剤、抗血栓
剤、血管拡張薬、ホルモン拮抗薬、イオントロープ（ｉ
ｏｎｔｒｏｐｅ）、利尿薬、エンドセリン拮抗薬、カル
シウムチャネル遮断剤、ホスホジエステラーゼインヒビ
ター、ＡＣＥインヒビター、２型アンギオテンシン拮抗
薬およびサイトカイン遮断剤／インヒビターが挙げられ
る。
【００８９】組み合わせは、単一の組成物または両方の
薬剤を含む薬理学的処方物と心臓細胞を接触させること
によってか、２つの別個の組成物または処方物と細胞を
同時に接触させることによって達成され得、ここで、一
方の組成物は、発現構築物を含み、他方は、薬剤を含
む。あるいは、ＨＤＡＣインヒビター治療は、数分〜数
週間の範囲の間隔で他の薬剤の投与に先行し得るかまた
はそれに続き得る。他の薬剤および発現構築物が、細胞
に別々に適用される実施形態において、一般に、有意な
時間が、各送達の時間の間に終了しないように保証し、
その結果、薬剤および発現構築物はなお、細胞に対して
有利に組み合わせた効果を発揮し得る。このような例に
おいて、お互いに約１２〜２４時間以内に、より好まし
くはお互いに約６〜１２時間以内に、最も好ましくは約
１２時間のみの遅延時間を有して、両方の様式を用いて
細胞を接触させることが企図される。いつくかの状況に
おいて、処置のための時間を有意に延長することが所望
であり得るが、ここで、それぞれの投与の間に、数日
（２、３、４、５、６または７）〜数週間（１、２、
３、４、５、６、７または８）が経過する。
薬剤を含む薬理学的処方物と心臓細胞を接触させること
によってか、２つの別個の組成物または処方物と細胞を
同時に接触させることによって達成され得、ここで、一
方の組成物は、発現構築物を含み、他方は、薬剤を含
む。あるいは、ＨＤＡＣインヒビター治療は、数分〜数
週間の範囲の間隔で他の薬剤の投与に先行し得るかまた
はそれに続き得る。他の薬剤および発現構築物が、細胞
に別々に適用される実施形態において、一般に、有意な
時間が、各送達の時間の間に終了しないように保証し、
その結果、薬剤および発現構築物はなお、細胞に対して
有利に組み合わせた効果を発揮し得る。このような例に
おいて、お互いに約１２〜２４時間以内に、より好まし
くはお互いに約６〜１２時間以内に、最も好ましくは約
１２時間のみの遅延時間を有して、両方の様式を用いて
細胞を接触させることが企図される。いつくかの状況に
おいて、処置のための時間を有意に延長することが所望
であり得るが、ここで、それぞれの投与の間に、数日
（２、３、４、５、６または７）〜数週間（１、２、
３、４、５、６、７または８）が経過する。
【００９０】ＨＤＡＣインヒビターまたは他の薬剤のい
ずれかの１つ以上の投与が所望されることはまた、考え
得る。この点において、種々の組成物が、使用され得
る。例示の目的で、ＨＤＡＣインヒビターが「Ａ」であ
り、他の薬剤が「Ｂ」である場合、３回および４回の総
投与に基づいた以下の順列が例示される。
ずれかの１つ以上の投与が所望されることはまた、考え
得る。この点において、種々の組成物が、使用され得
る。例示の目的で、ＨＤＡＣインヒビターが「Ａ」であ
り、他の薬剤が「Ｂ」である場合、３回および４回の総
投与に基づいた以下の順列が例示される。
【００９１】
【化１】
他の組み合わせも同様に意図される。
【００９２】（Ｃ．患者への投与のための薬物処方物お
よび経路）臨床適用が意図される場合、薬学的組成物
は、意図される適用のために適切な形態で調製される。
一般に、これは、発熱物質、ならびにヒトまたは動物に
有害であり得る他の不純物が基本的に含まない組成物を
調製することを伴う。
よび経路）臨床適用が意図される場合、薬学的組成物
は、意図される適用のために適切な形態で調製される。
一般に、これは、発熱物質、ならびにヒトまたは動物に
有害であり得る他の不純物が基本的に含まない組成物を
調製することを伴う。
【００９３】一般に、送達ベクターを安定にし、そして
標的細胞による取り込みを可能にする適切な塩および緩
衝液を使用することが所望される。緩衝液はまた、組換
え細胞が患者に導入される場合に使用され得る。本発明
の水溶性組成物は、薬学的に受容可能なキャリアまたは
水溶性媒体中に溶解または分散された、有効量のベクタ
ーまたは細胞を含む。成句「薬学的に受容可能または薬
理学的に受容可能」は、動物またはヒトに投与される場
合、有害な、アレルギー性の、または他の厄介な反応物
を生成しない分子および組成物をいう。本明細書中で使
用される場合、「薬学的に受容可能なキャリア」は、医
薬品（例えば、ヒトへの投与に適切な医薬品）を処方す
る際の使用のために受容可能な溶媒、緩衝液、溶液、分
散媒体、コーティング、抗生物質および抗菌剤、等張剤
および吸収遅延剤などを含む。薬学的に活性な物質のた
めのこのような媒体および薬剤の使用は、当該分野で周
知である。任意の従来の媒体または薬剤が、本発明の活
性成分と不適合である範囲を除いて、治療組成物におけ
るその使用が、意図される。補助的な活性成分はまた、
これらが組成物のベクターまたは細胞を不活化しない条
件で、組成物に取り込まれ得る。
標的細胞による取り込みを可能にする適切な塩および緩
衝液を使用することが所望される。緩衝液はまた、組換
え細胞が患者に導入される場合に使用され得る。本発明
の水溶性組成物は、薬学的に受容可能なキャリアまたは
水溶性媒体中に溶解または分散された、有効量のベクタ
ーまたは細胞を含む。成句「薬学的に受容可能または薬
理学的に受容可能」は、動物またはヒトに投与される場
合、有害な、アレルギー性の、または他の厄介な反応物
を生成しない分子および組成物をいう。本明細書中で使
用される場合、「薬学的に受容可能なキャリア」は、医
薬品（例えば、ヒトへの投与に適切な医薬品）を処方す
る際の使用のために受容可能な溶媒、緩衝液、溶液、分
散媒体、コーティング、抗生物質および抗菌剤、等張剤
および吸収遅延剤などを含む。薬学的に活性な物質のた
めのこのような媒体および薬剤の使用は、当該分野で周
知である。任意の従来の媒体または薬剤が、本発明の活
性成分と不適合である範囲を除いて、治療組成物におけ
るその使用が、意図される。補助的な活性成分はまた、
これらが組成物のベクターまたは細胞を不活化しない条
件で、組成物に取り込まれ得る。
【００９４】本発明の活性組成物は、伝統的な薬学的調
製物を含み得る。本発明に従うこれらの組成物の投与
は、標的組織がその経路を介して入手可能である限り、
任意の通常の経路を介し得る。これは、経口経路、経鼻
経路、または口腔内経路を含む。あるいは、投与は、経
皮注射、皮下注射、筋肉内注射、腹腔内注射または静脈
内注射による投与であり得る。このような組成物は、上
記のように、薬学的に受容可能な組成物として通常投与
される。
製物を含み得る。本発明に従うこれらの組成物の投与
は、標的組織がその経路を介して入手可能である限り、
任意の通常の経路を介し得る。これは、経口経路、経鼻
経路、または口腔内経路を含む。あるいは、投与は、経
皮注射、皮下注射、筋肉内注射、腹腔内注射または静脈
内注射による投与であり得る。このような組成物は、上
記のように、薬学的に受容可能な組成物として通常投与
される。
【００９５】活性化合物はまた、非経口的または腹腔内
に投与され得る。例示のために、遊離塩基としての活性
化合物または薬理学的に受容可能な塩の溶液が、界面活
性剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース）と適切
に混合した水中で調製され得る。分散剤もまた、グリセ
ロール、液体ポリエチレングリコール、およびその混合
物中で、ならびに油中で調製され得る。貯蔵および使用
の通常の条件下で、これらの調製物は一般に、微生物の
増殖を防ぐための防腐剤を含む。
に投与され得る。例示のために、遊離塩基としての活性
化合物または薬理学的に受容可能な塩の溶液が、界面活
性剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース）と適切
に混合した水中で調製され得る。分散剤もまた、グリセ
ロール、液体ポリエチレングリコール、およびその混合
物中で、ならびに油中で調製され得る。貯蔵および使用
の通常の条件下で、これらの調製物は一般に、微生物の
増殖を防ぐための防腐剤を含む。
【００９６】注射可能な用途に適切な薬学的形態として
は、例えば、滅菌水溶液または分散剤、および滅菌注射
可能な溶液または分散剤の即席の調製のための無菌粉末
が挙げられる。一般に、これらの調製物は、滅菌されて
おり、そして容易な注射可能性が存在する程度に流動性
である。調製物は、製造および貯蔵の条件下で安定であ
るべきであり、そして微生物（例えば、細菌および真
菌）の混入作用に対して保護されるべきである。適切な
溶媒または分散媒体は、例えば、水、エタノール、ポリ
オール（例えば、グリセロール、プロピレングリコー
ル、および液体ポリエチレングリコールなど）、その適
切な混合物、および植物油を含み得る。適切な流動性
は、例えば、コーティング（例えば、レシチン）の使用
によって、分散剤の場合には必要とされる粒子サイズの
維持によって、そして界面活性剤の使用によって、維持
され得る。微生物の作用の防止は、種々の抗菌抗真菌剤
（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、
ソルビン酸、チメロサールなど）によってもたらされ得
る。多数の場合において、等張剤（例えば、糖または塩
化ナトリウム）を含むことが好ましい。注射可能な組成
物の長期の吸収は、吸収を遅延する薬剤（例えば、モノ
ステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）の組成物中
の使用によってもたらされ得る。
は、例えば、滅菌水溶液または分散剤、および滅菌注射
可能な溶液または分散剤の即席の調製のための無菌粉末
が挙げられる。一般に、これらの調製物は、滅菌されて
おり、そして容易な注射可能性が存在する程度に流動性
である。調製物は、製造および貯蔵の条件下で安定であ
るべきであり、そして微生物（例えば、細菌および真
菌）の混入作用に対して保護されるべきである。適切な
溶媒または分散媒体は、例えば、水、エタノール、ポリ
オール（例えば、グリセロール、プロピレングリコー
ル、および液体ポリエチレングリコールなど）、その適
切な混合物、および植物油を含み得る。適切な流動性
は、例えば、コーティング（例えば、レシチン）の使用
によって、分散剤の場合には必要とされる粒子サイズの
維持によって、そして界面活性剤の使用によって、維持
され得る。微生物の作用の防止は、種々の抗菌抗真菌剤
（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、
ソルビン酸、チメロサールなど）によってもたらされ得
る。多数の場合において、等張剤（例えば、糖または塩
化ナトリウム）を含むことが好ましい。注射可能な組成
物の長期の吸収は、吸収を遅延する薬剤（例えば、モノ
ステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）の組成物中
の使用によってもたらされ得る。
【００９７】滅菌注射可能な溶液は、ろ過滅菌後に、所
望のように任意の他の成分（例えば、上に列挙されるよ
うな）と共に溶媒中に適切な量で、活性化合物を取り込
むことによって調製され得る。一般に、分散剤は、塩基
性分散媒体および所望の他の成分（例えば、上に列挙さ
れるような）を含む滅菌ビヒクル中に種々の滅菌活性成
分を取り込むことによって調製される。滅菌注射可能な
溶液の調製のための滅菌粉末の場合、調製の好ましい方
法は、以前に滅菌ろ過されたその溶液から活性成分の粉
末および任意のさらなる所望の成分を生じる、真空乾燥
および凍結乾燥技術を含む。
望のように任意の他の成分（例えば、上に列挙されるよ
うな）と共に溶媒中に適切な量で、活性化合物を取り込
むことによって調製され得る。一般に、分散剤は、塩基
性分散媒体および所望の他の成分（例えば、上に列挙さ
れるような）を含む滅菌ビヒクル中に種々の滅菌活性成
分を取り込むことによって調製される。滅菌注射可能な
溶液の調製のための滅菌粉末の場合、調製の好ましい方
法は、以前に滅菌ろ過されたその溶液から活性成分の粉
末および任意のさらなる所望の成分を生じる、真空乾燥
および凍結乾燥技術を含む。
【００９８】経口投与のために、一般に、本発明のポリ
ペプチドは、賦形剤と共に取り込まれ得、そして摂取可
能でない洗口剤および歯磨剤の形態で使用され得る。洗
口剤は、適切な溶媒（例えば、ホウ酸ナトリウム溶液
（Ｄｏｂｅｌｌ溶液））中に必要な量で、活性成分を取
り込んで調製され得る。あるいは、活性成分は、ホウ酸
ナトリウム、グリセリンおよび炭酸水素カリウムを含む
消毒洗浄液に取り込まれ得る。活性成分はまた、ゲル、
ペースト、粉末およびスラリーを含む歯磨剤中で分散さ
れ得る。この活性成分は、水、結合剤、研磨剤、香味
料、発泡剤、および湿潤剤を含み得るペースト状歯磨剤
に、治療有効量で添加され得る。
ペプチドは、賦形剤と共に取り込まれ得、そして摂取可
能でない洗口剤および歯磨剤の形態で使用され得る。洗
口剤は、適切な溶媒（例えば、ホウ酸ナトリウム溶液
（Ｄｏｂｅｌｌ溶液））中に必要な量で、活性成分を取
り込んで調製され得る。あるいは、活性成分は、ホウ酸
ナトリウム、グリセリンおよび炭酸水素カリウムを含む
消毒洗浄液に取り込まれ得る。活性成分はまた、ゲル、
ペースト、粉末およびスラリーを含む歯磨剤中で分散さ
れ得る。この活性成分は、水、結合剤、研磨剤、香味
料、発泡剤、および湿潤剤を含み得るペースト状歯磨剤
に、治療有効量で添加され得る。
【００９９】本発明の組成物は一般に、中性形態または
塩形態で処方され得る。薬学的に受容可能な塩として
は、例えば、無機酸（例えば、塩化水素またはリン酸）
または有機酸（例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、マン
デル酸）などに由来する、酸添加塩（タンパク質の遊離
アミノ基で形成された）が挙げられる。タンパク質の遊
離カルボキシル基で形成された塩はまた、無機塩基（例
えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アン
モニウム、水酸化カルシウム、または水酸化鉄）または
有機塩基（例えば、イソプロピルアミン、トリエチルア
ミン、ヒスチジン、プロカイン）などに由来し得る。
塩形態で処方され得る。薬学的に受容可能な塩として
は、例えば、無機酸（例えば、塩化水素またはリン酸）
または有機酸（例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、マン
デル酸）などに由来する、酸添加塩（タンパク質の遊離
アミノ基で形成された）が挙げられる。タンパク質の遊
離カルボキシル基で形成された塩はまた、無機塩基（例
えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アン
モニウム、水酸化カルシウム、または水酸化鉄）または
有機塩基（例えば、イソプロピルアミン、トリエチルア
ミン、ヒスチジン、プロカイン）などに由来し得る。
【０１００】処方の際に、溶液は、好ましくは、投薬処
方物と適合性の様式で、かつ、それが治療的に有効であ
るような量で、投与される。処方物は、注射可能な溶
液、薬物放出カプセルなどのような種々の投薬形態で容
易に投与され得る。水溶液での経口投与のために、例え
ば、この溶液は一般に適切に緩衝化され、そして液体希
釈液は、例えば、十分な生理食塩水またはグルコースを
用いて最初に等張性にされる。このような適切な水溶液
は、例えば、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与および
腹腔内投与のために使用され得る。好ましくは、特に本
発明の開示を考慮して、当業者に公知であるような滅菌
水性媒体が使用される。例示のために、単回用量は、１
ｍｌの等張性ＮａＣｌ溶液に溶解され得、そして１００
０ｍｌの皮下注入流体に添加されるか、または注入の提
案された部位で注射されるかのいずれかである（例え
ば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ
ｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」第１５版、１０３５−１
０３５頁および１５７０−１５８０頁を参照のこと）。
投薬におけるいくつかの改変が、処置される被験体の状
態に依存して、必然的に生じる。投与を担うヒトは、任
意の事象において、個々の被験体のための適切な用量を
決定する。さらに、ヒトへの投与のために、調製は、生
物製剤基準のＦＤＡ事務所によって必要とされるような
無菌、発熱性（ｐｒｙｒｏｇｅｎｉｃｉｔｙ）、一般的
な安全および純度基準を満たすべきである。
方物と適合性の様式で、かつ、それが治療的に有効であ
るような量で、投与される。処方物は、注射可能な溶
液、薬物放出カプセルなどのような種々の投薬形態で容
易に投与され得る。水溶液での経口投与のために、例え
ば、この溶液は一般に適切に緩衝化され、そして液体希
釈液は、例えば、十分な生理食塩水またはグルコースを
用いて最初に等張性にされる。このような適切な水溶液
は、例えば、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与および
腹腔内投与のために使用され得る。好ましくは、特に本
発明の開示を考慮して、当業者に公知であるような滅菌
水性媒体が使用される。例示のために、単回用量は、１
ｍｌの等張性ＮａＣｌ溶液に溶解され得、そして１００
０ｍｌの皮下注入流体に添加されるか、または注入の提
案された部位で注射されるかのいずれかである（例え
ば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ
ｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」第１５版、１０３５−１
０３５頁および１５７０−１５８０頁を参照のこと）。
投薬におけるいくつかの改変が、処置される被験体の状
態に依存して、必然的に生じる。投与を担うヒトは、任
意の事象において、個々の被験体のための適切な用量を
決定する。さらに、ヒトへの投与のために、調製は、生
物製剤基準のＦＤＡ事務所によって必要とされるような
無菌、発熱性（ｐｒｙｒｏｇｅｎｉｃｉｔｙ）、一般的
な安全および純度基準を満たすべきである。
【０１０１】（Ｖ．スクリーニング方法）本発明はさら
に、心肥大の予防または逆転において有用であるＨＤＡ
Ｃのインヒビターを同定するための方法を包含する。こ
れらのアッセイは、候補物質の大きいライブラリーの無
作為スクリーニングを含み得る；あるいは、これらのア
ッセイは、それらにＨＤＡＣの機能をより阻害させるよ
うである構造的属性に眼を向けて選択された特定のクラ
スの化合物に集中するために使用され得る。
に、心肥大の予防または逆転において有用であるＨＤＡ
Ｃのインヒビターを同定するための方法を包含する。こ
れらのアッセイは、候補物質の大きいライブラリーの無
作為スクリーニングを含み得る；あるいは、これらのア
ッセイは、それらにＨＤＡＣの機能をより阻害させるよ
うである構造的属性に眼を向けて選択された特定のクラ
スの化合物に集中するために使用され得る。
【０１０２】ＨＤＡＣインヒビターを同定するために、
一般的に候補物質の存在下または非存在下においてＨＤ
ＡＣの機能を決定する。例えば、方法は、一般に以下の
工程： （ａ）候補モジュレーターを提供する工程； （ｂ）候補モジュレーターをＨＤＡＣと混合する工程； （ｃ）ＨＤＡＣ活性を測定する工程；および （ｄ）工程（ｃ）における活性を、候補モジュレーター
の非存在下における活性と比較する工程、を包含し、こ
こで、測定された活性の間の差異が、候補化合物が、実
際に、化合物、細胞または動物のモジュレーターである
ことを示す。
一般的に候補物質の存在下または非存在下においてＨＤ
ＡＣの機能を決定する。例えば、方法は、一般に以下の
工程： （ａ）候補モジュレーターを提供する工程； （ｂ）候補モジュレーターをＨＤＡＣと混合する工程； （ｃ）ＨＤＡＣ活性を測定する工程；および （ｄ）工程（ｃ）における活性を、候補モジュレーター
の非存在下における活性と比較する工程、を包含し、こ
こで、測定された活性の間の差異が、候補化合物が、実
際に、化合物、細胞または動物のモジュレーターである
ことを示す。
【０１０３】アッセイはまた、単離された細胞または生
物体中で行なわれ得る。代表的に、ＨＤＡＣ活性は、標
識されたアセチル基を有するヒストンを提供することお
よびヒストン分子から標識の放出を測定することによっ
て測定される。
物体中で行なわれ得る。代表的に、ＨＤＡＣ活性は、標
識されたアセチル基を有するヒストンを提供することお
よびヒストン分子から標識の放出を測定することによっ
て測定される。
【０１０４】もちろん、本発明の全てのスクリーニング
方法は、有効な候補が見出されないかもしれないという
事実に関わらず、それ自体有用であることが理解され
る。本発明は、このような候補をスクリーニングするた
めの方法を提供し、単にこれらを見出する方法を提供す
るのではない。
方法は、有効な候補が見出されないかもしれないという
事実に関わらず、それ自体有用であることが理解され
る。本発明は、このような候補をスクリーニングするた
めの方法を提供し、単にこれらを見出する方法を提供す
るのではない。
【０１０５】（１．モジュレーター）本明細書中で使用
される場合、用語「候補物質」は、ＨＤＡＣ活性を潜在
的に阻害し得る任意の分子をいう。この候補物質は、タ
ンパク質もしくはそのフラグメント、低分子、または核
酸でさえあり得る。このことは、最も有用な薬理学的化
合物が、本明細書中のいずれかに列挙される、公知のＨ
ＤＡＣインヒビターに構造的に関連している化合物であ
る場合に判明し得る。改善した化合物を開発するのを助
けるためのリード化合物を使用することは、「合理的薬
物設計」として公知であり、そして公知のインヒビター
および活性化因子との比較だけでなく、標的分子の構造
に関する推定を含む。
される場合、用語「候補物質」は、ＨＤＡＣ活性を潜在
的に阻害し得る任意の分子をいう。この候補物質は、タ
ンパク質もしくはそのフラグメント、低分子、または核
酸でさえあり得る。このことは、最も有用な薬理学的化
合物が、本明細書中のいずれかに列挙される、公知のＨ
ＤＡＣインヒビターに構造的に関連している化合物であ
る場合に判明し得る。改善した化合物を開発するのを助
けるためのリード化合物を使用することは、「合理的薬
物設計」として公知であり、そして公知のインヒビター
および活性化因子との比較だけでなく、標的分子の構造
に関する推定を含む。
【０１０６】合理的薬物設計の目的は、生物学的に活性
なポリペプチドまたは標的化合物の構造的アナログを生
成することである。このようなアナログを作製すること
によって、天然分子よりもより活性であるか安定してい
る薬物（これは、変更に対して異なる感受性を有する
か、または種々の他の分子の機能に影響し得る）を作る
ことが可能である。他のアプローチにおいて、標的分子
またはそのフラグメントの三次元構造を作製する。これ
は、Ｘ線結晶学、コンピューターモデリング、または両
方のアプローチの組み合わせによって達成され得る。
なポリペプチドまたは標的化合物の構造的アナログを生
成することである。このようなアナログを作製すること
によって、天然分子よりもより活性であるか安定してい
る薬物（これは、変更に対して異なる感受性を有する
か、または種々の他の分子の機能に影響し得る）を作る
ことが可能である。他のアプローチにおいて、標的分子
またはそのフラグメントの三次元構造を作製する。これ
は、Ｘ線結晶学、コンピューターモデリング、または両
方のアプローチの組み合わせによって達成され得る。
【０１０７】標的化合物の活性化因子またはインヒビタ
ーの構造を確認するために、抗体を使用することはまた
可能である。原則として、このアプローチは、引き続く
薬物設計が基づく薬物コア（ｐｈａｒｍａｃｏｒｅ）を
生じる。機能的な薬理学的に活性な抗体に対する抗イデ
ィオタイプ抗体を作製することによってタンパク質結晶
学を迂回することが可能である。鏡像の鏡像として、抗
イディオタイプの結合部位は、本来の抗原のアナログで
あることが予期される。次いで、抗イディオタイプは、
化学的または生物学的に生成されたペプチド群からペプ
チドを同定および単離するために使用され得る。次い
で、選択されたペプチドは、薬物コアとして機能する。
抗イディオタイプは、抗原として抗体を使用して、本明
細書中に記載された抗体を産生するための方法を使用し
て生成される。
ーの構造を確認するために、抗体を使用することはまた
可能である。原則として、このアプローチは、引き続く
薬物設計が基づく薬物コア（ｐｈａｒｍａｃｏｒｅ）を
生じる。機能的な薬理学的に活性な抗体に対する抗イデ
ィオタイプ抗体を作製することによってタンパク質結晶
学を迂回することが可能である。鏡像の鏡像として、抗
イディオタイプの結合部位は、本来の抗原のアナログで
あることが予期される。次いで、抗イディオタイプは、
化学的または生物学的に生成されたペプチド群からペプ
チドを同定および単離するために使用され得る。次い
で、選択されたペプチドは、薬物コアとして機能する。
抗イディオタイプは、抗原として抗体を使用して、本明
細書中に記載された抗体を産生するための方法を使用し
て生成される。
【０１０８】他方、種々の商業的供給源から、有用な化
合物の同定を「力づくで行なう（ｂｒｕｔｅ ｆｏｒｃ
ｅ）」ために有用な薬物のための基本的基準を満たすと
考えられている低分子ライブラリーを簡単に獲得し得
る。このようなライブラリー（コンビナトリアルに作製
されたライブラリー（例えば、ペプチドライブラリー）
を含む）のスクリーニングは、多数の関連（および関連
していない）化合物を活性についてスクリーニングする
たえの迅速かつ効率的な方法である。コンビナトリアル
アプローチはまた、活性であるが、他に所望でない化合
物をモデルとした、第２、第３および第４世代の化合物
の作製によって、潜在的な薬物の迅速な進化に役立つ。
合物の同定を「力づくで行なう（ｂｒｕｔｅ ｆｏｒｃ
ｅ）」ために有用な薬物のための基本的基準を満たすと
考えられている低分子ライブラリーを簡単に獲得し得
る。このようなライブラリー（コンビナトリアルに作製
されたライブラリー（例えば、ペプチドライブラリー）
を含む）のスクリーニングは、多数の関連（および関連
していない）化合物を活性についてスクリーニングする
たえの迅速かつ効率的な方法である。コンビナトリアル
アプローチはまた、活性であるが、他に所望でない化合
物をモデルとした、第２、第３および第４世代の化合物
の作製によって、潜在的な薬物の迅速な進化に役立つ。
【０１０９】候補化合物は、天然に存在する化合物のフ
ラグメントまたは部分を含み得るか、またはさもなけれ
ば不活性である公知の化合物の活性な組み合わせとして
見出され得る。天然供給源（例えば、動物、細菌、真
菌、植物供給源（葉および樹皮を含む））ならびに海の
サンプルから単離された化合物は、潜在的に有用な薬学
的薬剤の存在についての候補としてアッセイされ得る。
スクリーニングされる薬学的薬剤はまた、化学的組成物
または人工化合物に由来し得るかまたはそれらから合成
され得ることが理解される。従って、本発明によって同
定された候補物質は、ペプチド、ポリペプチド、ポリヌ
クレオチド、低分子インヒビター、または公知のインヒ
ビターまたは刺激物質から始まる合理的薬物設計を介し
て設計され得る任意の他の化合物であり得る。
ラグメントまたは部分を含み得るか、またはさもなけれ
ば不活性である公知の化合物の活性な組み合わせとして
見出され得る。天然供給源（例えば、動物、細菌、真
菌、植物供給源（葉および樹皮を含む））ならびに海の
サンプルから単離された化合物は、潜在的に有用な薬学
的薬剤の存在についての候補としてアッセイされ得る。
スクリーニングされる薬学的薬剤はまた、化学的組成物
または人工化合物に由来し得るかまたはそれらから合成
され得ることが理解される。従って、本発明によって同
定された候補物質は、ペプチド、ポリペプチド、ポリヌ
クレオチド、低分子インヒビター、または公知のインヒ
ビターまたは刺激物質から始まる合理的薬物設計を介し
て設計され得る任意の他の化合物であり得る。
【０１１０】他の適切なモジュレーターとしては、アン
チセンス分子、リボザイム、および抗体（単鎖抗体を含
む）が挙げられ、これらの各々は、標的分子に特異的で
ある。このような化合物は、本明細書中の他でより詳細
に記載される。例えば、翻訳または転写開始部位、また
はスプライス接合部に結合されるアンチセンス分子は、
理想的な候補インヒビターである。
チセンス分子、リボザイム、および抗体（単鎖抗体を含
む）が挙げられ、これらの各々は、標的分子に特異的で
ある。このような化合物は、本明細書中の他でより詳細
に記載される。例えば、翻訳または転写開始部位、また
はスプライス接合部に結合されるアンチセンス分子は、
理想的な候補インヒビターである。
【０１１１】最初に同定された化合物を調節することに
加えて、本発明者らはまた、他の立体的に類似した化合
物が、モジュレーターの構造の重要な部分を模倣するよ
うに処方され得ることを意図する。このような化合物
（これらは、ペプチドモジュレーターのペプチド模倣物
を含み得る）は、最初のモジュレーターと同じ様式で使
用され得る。
加えて、本発明者らはまた、他の立体的に類似した化合
物が、モジュレーターの構造の重要な部分を模倣するよ
うに処方され得ることを意図する。このような化合物
（これらは、ペプチドモジュレーターのペプチド模倣物
を含み得る）は、最初のモジュレーターと同じ様式で使
用され得る。
【０１１２】（２．インビトロアッセイ）実行するのに
速く、安価な、そして容易なアッセイは、インビトロア
ッセイである。このようなアッセイ（速くそして多数で
実行され得る）は一般に、単離された分子を使用し、そ
れにより、短い期間で得られ得る情報の量を増加する。
種々の容器（試験管、プレート、シャーレ、およびディ
ップスティックまたはビーズのような他の表面）がアッ
セイを実行するために使用され得る。
速く、安価な、そして容易なアッセイは、インビトロア
ッセイである。このようなアッセイ（速くそして多数で
実行され得る）は一般に、単離された分子を使用し、そ
れにより、短い期間で得られ得る情報の量を増加する。
種々の容器（試験管、プレート、シャーレ、およびディ
ップスティックまたはビーズのような他の表面）がアッ
セイを実行するために使用され得る。
【０１１３】化合物のハイスループットスクリーニング
のための技術は、ＷＯ８４／０３５６４において記載さ
れている。多数の低分子ペプチド試験化合物が、固体基
板（例えば、プラスチックピンまたはいくつかの他の表
面）上で合成される。このようなペプチドは、ＨＤＡＣ
を結合および阻害するそれらの能力について迅速にスク
リーニングされ得る。
のための技術は、ＷＯ８４／０３５６４において記載さ
れている。多数の低分子ペプチド試験化合物が、固体基
板（例えば、プラスチックピンまたはいくつかの他の表
面）上で合成される。このようなペプチドは、ＨＤＡＣ
を結合および阻害するそれらの能力について迅速にスク
リーニングされ得る。
【０１１４】（３．インサイト（ｉｎ ｃｙｔｏ）アッ
セイ）本発明はまた、細胞中のＨＤＡＣを調節するそれ
らの能力について化合物をスクリーニングすることを意
図する。この目的のために特に操作された細胞を含む、
種々の細胞株が、このようなスクリーニングアッセイに
利用され得る。
セイ）本発明はまた、細胞中のＨＤＡＣを調節するそれ
らの能力について化合物をスクリーニングすることを意
図する。この目的のために特に操作された細胞を含む、
種々の細胞株が、このようなスクリーニングアッセイに
利用され得る。
【０１１５】（４．インビトロアッセイ）インビボアッ
セイは、特定の欠損を有するように操作されているトラ
ンスジェニック動物、または生物体内に異なる細胞に到
達しそして影響する候補物質の能力を測定するために使
用され得る輸送マーカーを含む、心臓病の種々の動物モ
デルの使用を含む。これらのサイズ、取り扱いの容易
さ、およびこれらの生理学および遺伝子構成に関する情
報に起因して、マウスは、特にトランスジェニックにつ
いて、好ましい実施形態である。しかし、ラット、ウサ
ギ、ハムスター、モルモット、スナネズミ、マーモッ
ト、ネコ、イヌ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウシ、ウマおよ
びサル（チンパンジー、ギボンおよびヒヒを含む）を含
む他の動物も同様に適切である。インヒビターについて
のアッセイは、これらの種のいずれかに由来する動物モ
デルを使用して行なわれ得る。
セイは、特定の欠損を有するように操作されているトラ
ンスジェニック動物、または生物体内に異なる細胞に到
達しそして影響する候補物質の能力を測定するために使
用され得る輸送マーカーを含む、心臓病の種々の動物モ
デルの使用を含む。これらのサイズ、取り扱いの容易
さ、およびこれらの生理学および遺伝子構成に関する情
報に起因して、マウスは、特にトランスジェニックにつ
いて、好ましい実施形態である。しかし、ラット、ウサ
ギ、ハムスター、モルモット、スナネズミ、マーモッ
ト、ネコ、イヌ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウシ、ウマおよ
びサル（チンパンジー、ギボンおよびヒヒを含む）を含
む他の動物も同様に適切である。インヒビターについて
のアッセイは、これらの種のいずれかに由来する動物モ
デルを使用して行なわれ得る。
【０１１６】試験化合物を用いる動物の処置は、動物へ
の化合物（適切な形態で）の投与を含む。投与は、臨床
目的のために利用され得る任意の経路による。インビボ
で化合物の効果を決定することは、種々の異なる基準を
含み得る。また、毒性および用量応答を測定すること
は、インビトロまたはインサイトアッセイ中でより意味
のある様式で動物中で行なわれ得る。
の化合物（適切な形態で）の投与を含む。投与は、臨床
目的のために利用され得る任意の経路による。インビボ
で化合物の効果を決定することは、種々の異なる基準を
含み得る。また、毒性および用量応答を測定すること
は、インビトロまたはインサイトアッセイ中でより意味
のある様式で動物中で行なわれ得る。
【０１１７】（ＶＩ．定義）本明細書中で使用される場
合、用語「心不全」は、心臓の血液を汲み出す能力を減
少させる任意の状態をいうために広範に使用される。結
果として、うっ血および水腫が、組織において発生す
る。最も頻繁に、心不全は、減少した冠血流より生じる
心筋層の減少した収縮性によって引き起こされる；しか
し、心臓弁に対する損傷、ビタミン不足、および原発性
心筋疾患を含む、多数のほかの因子が、心不全を生じ得
る。心不全の正確な生理学的機構は、完全に理解されて
いないが、心不全は、交感神経、副交感神経、および圧
受容体応答を含む、いくつかの心臓の自律神経特性にお
ける障害に関連すると一般に考えられている。成句「心
不全の発現」は、心不全に関連する実験室知見を含む、
心不全に関連する全ての続発症（例えば、短い呼吸、圧
痕水腫、拡大した過敏な肝臓、うっ積した頚部静脈、肺
ラ音など）を含むように広範に使用される。
合、用語「心不全」は、心臓の血液を汲み出す能力を減
少させる任意の状態をいうために広範に使用される。結
果として、うっ血および水腫が、組織において発生す
る。最も頻繁に、心不全は、減少した冠血流より生じる
心筋層の減少した収縮性によって引き起こされる；しか
し、心臓弁に対する損傷、ビタミン不足、および原発性
心筋疾患を含む、多数のほかの因子が、心不全を生じ得
る。心不全の正確な生理学的機構は、完全に理解されて
いないが、心不全は、交感神経、副交感神経、および圧
受容体応答を含む、いくつかの心臓の自律神経特性にお
ける障害に関連すると一般に考えられている。成句「心
不全の発現」は、心不全に関連する実験室知見を含む、
心不全に関連する全ての続発症（例えば、短い呼吸、圧
痕水腫、拡大した過敏な肝臓、うっ積した頚部静脈、肺
ラ音など）を含むように広範に使用される。
【０１１８】用語「処置」または文法上の等価物は、心
不全（心臓が血液を汲み出す能力）の症状の改善および
／または逆転を含む。心臓の「生理学的機能における改
善」は、本明細書中に記載される任意の測定（例えば、
駆出率、率の減少、左心室内法、心拍数の測定）ならび
に動物の生存に対する任意の効果を使用して評価され得
る。動物モデルの使用において、処置されたトランスジ
ェニック動物および未処理のトランスジェニック動物の
応答を、本明細書中に記載されるアッセイのいずれかを
使用して比較する（さらに、コントロールとしての処理
された動物および未処理の動物を含み得る）。それによ
り、本発明のスクリーニング方法において使用される心
不全に関連する任意のパラメーターにおける改善を引き
起こす化合物は、治療化合物として同定され得る。
不全（心臓が血液を汲み出す能力）の症状の改善および
／または逆転を含む。心臓の「生理学的機能における改
善」は、本明細書中に記載される任意の測定（例えば、
駆出率、率の減少、左心室内法、心拍数の測定）ならび
に動物の生存に対する任意の効果を使用して評価され得
る。動物モデルの使用において、処置されたトランスジ
ェニック動物および未処理のトランスジェニック動物の
応答を、本明細書中に記載されるアッセイのいずれかを
使用して比較する（さらに、コントロールとしての処理
された動物および未処理の動物を含み得る）。それによ
り、本発明のスクリーニング方法において使用される心
不全に関連する任意のパラメーターにおける改善を引き
起こす化合物は、治療化合物として同定され得る。
【０１１９】用語「拡張した心筋症」は、乏しい収縮期
の収縮機能を有する対称的に拡張した左心室の存在によ
って特徴付けられ、さらに右心室を頻繁に含む、心不全
の型をいう。
の収縮機能を有する対称的に拡張した左心室の存在によ
って特徴付けられ、さらに右心室を頻繁に含む、心不全
の型をいう。
【０１２０】用語「化合物」は、身体機能の疾患、疾
病、病気または障害を処置または予防をするために使用
され得る任意の化学的物体、医薬品、薬物などをいう。
化合物は、公知の治療化合物および潜在的な治療化合物
の両方を含む。化合物は、本発明のスクリーニング方法
を使用するスクリーニングによって、治療剤であると決
定され得る。「公知の治療化合物」は、このような治療
において効果的であることが示されている（例えば、動
物試験または以前のヒトへの投与経験を介して）治療化
合物をいう。言い換えると、公知の治療化合物は、心不
全の処置において有効な化合物に制限されない。
病、病気または障害を処置または予防をするために使用
され得る任意の化学的物体、医薬品、薬物などをいう。
化合物は、公知の治療化合物および潜在的な治療化合物
の両方を含む。化合物は、本発明のスクリーニング方法
を使用するスクリーニングによって、治療剤であると決
定され得る。「公知の治療化合物」は、このような治療
において効果的であることが示されている（例えば、動
物試験または以前のヒトへの投与経験を介して）治療化
合物をいう。言い換えると、公知の治療化合物は、心不
全の処置において有効な化合物に制限されない。
【０１２１】本明細書中で使用される場合、用語「アゴ
ニスト」は、「ネイティブな」または「天然の」化合物
の作用を模倣する分子または化合物をいう。アゴニスト
は、コンフォメーション、電荷、または他の特徴に関し
て、これらの天然の化合物に対して相同であり得る。従
って、アゴニストは、細胞表面上で発現されるレセプタ
ーによって認識され得る。この認識は、細胞中で生理学
的および／または生化学的変化を生じ得、その結果、細
胞は、天然化合物が存在するかのように、同じ様式でア
ゴニストの存在に反応する。アゴニストとしては、タン
パク質、核酸、炭水化物、または分子、レセプター、お
よび／もしくは目的の経路と相互作用する任意の他の分
子が挙げられ得る。
ニスト」は、「ネイティブな」または「天然の」化合物
の作用を模倣する分子または化合物をいう。アゴニスト
は、コンフォメーション、電荷、または他の特徴に関し
て、これらの天然の化合物に対して相同であり得る。従
って、アゴニストは、細胞表面上で発現されるレセプタ
ーによって認識され得る。この認識は、細胞中で生理学
的および／または生化学的変化を生じ得、その結果、細
胞は、天然化合物が存在するかのように、同じ様式でア
ゴニストの存在に反応する。アゴニストとしては、タン
パク質、核酸、炭水化物、または分子、レセプター、お
よび／もしくは目的の経路と相互作用する任意の他の分
子が挙げられ得る。
【０１２２】本明細書中で使用される場合、用語「心肥
大」は、成体心筋細胞が、肥大増殖を介するストレスに
応答するプロセスをいう。このような増殖は、細胞分裂
なしで増加する細胞のサイズ、力の生成を最大化するた
めに細胞中でさらなる筋節を構築すること、および致死
的な心臓遺伝子プログラムの活性化によって特徴付けら
れる。心肥大はしばしば、増加した罹患率および死亡率
の危険性に関連し、従って、心肥大の分子機構を理解す
ることを目的とする研究は、ヒトの健康に対する重要な
影響を与え得る。
大」は、成体心筋細胞が、肥大増殖を介するストレスに
応答するプロセスをいう。このような増殖は、細胞分裂
なしで増加する細胞のサイズ、力の生成を最大化するた
めに細胞中でさらなる筋節を構築すること、および致死
的な心臓遺伝子プログラムの活性化によって特徴付けら
れる。心肥大はしばしば、増加した罹患率および死亡率
の危険性に関連し、従って、心肥大の分子機構を理解す
ることを目的とする研究は、ヒトの健康に対する重要な
影響を与え得る。
【０１２３】本明細書中で使用される場合、用語「アン
タゴニスト」および「インヒビター」は、心肥大に関連
し得る細胞性因子の作用を阻害する分子または化合物を
いう。アンタゴニストは、コンフォメーション、電荷ま
たは他の特徴に関して、これらの天然の化合物に相同で
あってもよいし、そうでなくてもよい。従って、アンタ
ゴニストは、アゴニストによって認識される同じかまた
は異なるレセプターによって認識され得る。アンタゴニ
ストは、アゴニストの作用を防止するアロステリックな
効果を有し得る。あるいは、アンタゴニストは、アゴニ
ストの機能を防止し得る。アゴニストとは対照的に、拮
抗化合物は、細胞内で生理学的および／または生物学的
変化を生じないので、その結果、細胞は、細胞性因子が
存在するかのように、同じ様式でアンタゴニストの存在
に反応する。アンタゴニストおよびインヒビターとして
は、タンパク質、核酸、炭水化物、またはレセプター、
分子、および／もしくは目的の経路と相互作用する任意
の他の分子が挙げられ得る。
タゴニスト」および「インヒビター」は、心肥大に関連
し得る細胞性因子の作用を阻害する分子または化合物を
いう。アンタゴニストは、コンフォメーション、電荷ま
たは他の特徴に関して、これらの天然の化合物に相同で
あってもよいし、そうでなくてもよい。従って、アンタ
ゴニストは、アゴニストによって認識される同じかまた
は異なるレセプターによって認識され得る。アンタゴニ
ストは、アゴニストの作用を防止するアロステリックな
効果を有し得る。あるいは、アンタゴニストは、アゴニ
ストの機能を防止し得る。アゴニストとは対照的に、拮
抗化合物は、細胞内で生理学的および／または生物学的
変化を生じないので、その結果、細胞は、細胞性因子が
存在するかのように、同じ様式でアンタゴニストの存在
に反応する。アンタゴニストおよびインヒビターとして
は、タンパク質、核酸、炭水化物、またはレセプター、
分子、および／もしくは目的の経路と相互作用する任意
の他の分子が挙げられ得る。
【０１２４】本明細書中で使用される場合、用語「調節
する」は、生物学的活性における変化または変更をい
う。調節は、タンパク質活性における増加または減少、
結合特徴における変化、または目的のタンパク質または
他の構造の活性に関連した生物学的、機能的、または免
疫学的特性における任意の他の変化であり得る。用語
「モジュレーター」は、上記のように、生物学的活性を
変化または変更し得る任意の分子または化合物をいう。
する」は、生物学的活性における変化または変更をい
う。調節は、タンパク質活性における増加または減少、
結合特徴における変化、または目的のタンパク質または
他の構造の活性に関連した生物学的、機能的、または免
疫学的特性における任意の他の変化であり得る。用語
「モジュレーター」は、上記のように、生物学的活性を
変化または変更し得る任意の分子または化合物をいう。
【０１２５】用語「β−アドレナリン作用性レセプター
アンタゴニスト」は、β型のアドレナリンレセプター
（すなわち、カテコールアミン（特に、ノルエピネフリ
ン）に応答するアドレナリン系のレセプター）を部分的
にかまたは完全にかのいずれかでブロックし得る化学的
化合物または化学的物体をいう。いくつかのβ−アドレ
ナリン作用性レセプターアンタゴニストは、１つのレセ
プターサブタイプ（一般にβ１）にある程度の特異性を
示す；このようなアンタゴニストは、「β１特異的アド
レナリン作用性レセプターアンタゴニスト」および「β
２特異的アドレナリン作用性レセプターアンタゴニス
ト」と呼ばれる。用語「β−アドレナリン作用性レセプ
ターアンタゴニスト」は、選択的アンタゴニストおよび
非選択的アンタゴニストである化学的化合物をいう。β
−アドレナリン作用性アンタゴニストの例としては、ア
セプトロール、アテノロール、ブトキサミン、カルテオ
ロール、エスモロール、ラベタロール、メトプロロー
ル、ナドロール、ペンブトロール、プロパノロール、お
よびチモロールが挙げられるがこれらに限定されない。
公知のβ−アドレナリン作用性レセプターアンタゴニス
トの誘導体の使用は、本発明の方法によって包含され
る。確かに、β−アドレナリン作用性レセプターアンタ
ゴニストとして機能的に挙動する任意の化合物は、本発
明の方法によって包含される。
アンタゴニスト」は、β型のアドレナリンレセプター
（すなわち、カテコールアミン（特に、ノルエピネフリ
ン）に応答するアドレナリン系のレセプター）を部分的
にかまたは完全にかのいずれかでブロックし得る化学的
化合物または化学的物体をいう。いくつかのβ−アドレ
ナリン作用性レセプターアンタゴニストは、１つのレセ
プターサブタイプ（一般にβ１）にある程度の特異性を
示す；このようなアンタゴニストは、「β１特異的アド
レナリン作用性レセプターアンタゴニスト」および「β
２特異的アドレナリン作用性レセプターアンタゴニス
ト」と呼ばれる。用語「β−アドレナリン作用性レセプ
ターアンタゴニスト」は、選択的アンタゴニストおよび
非選択的アンタゴニストである化学的化合物をいう。β
−アドレナリン作用性アンタゴニストの例としては、ア
セプトロール、アテノロール、ブトキサミン、カルテオ
ロール、エスモロール、ラベタロール、メトプロロー
ル、ナドロール、ペンブトロール、プロパノロール、お
よびチモロールが挙げられるがこれらに限定されない。
公知のβ−アドレナリン作用性レセプターアンタゴニス
トの誘導体の使用は、本発明の方法によって包含され
る。確かに、β−アドレナリン作用性レセプターアンタ
ゴニストとして機能的に挙動する任意の化合物は、本発
明の方法によって包含される。
【０１２６】用語「アンギオテンシン変換酵素インヒビ
ター」または「ＡＣＥインヒビター」は、レンニン−ア
ンギオテンシン系において、比較的不活性なアンギオテ
ンシンＩの活性なアンギオテンシンＩＩへの変換に関与
する酵素を部分的または完全に阻害し得る化学的化合物
または化学的物体をいう。さらに、ＡＣＥインヒビター
は同時に、ブラジキニン（これは、ＡＣＥインヒビター
の抗高血圧効果を有意に強化するようである）の分解を
阻害する。ＡＣＥインヒビターの例としては、べナゼプ
リル、カプトプリル、エナラプリル、ホシノプリル、リ
シノプリル、キアプリル（ｑｕｉａｐｒｉｌ）およびラ
ミプリルが挙げられるがこれらに限定されない。公知の
ＡＣＥインヒビターの誘導体の使用は、本発明の方法に
よって含まれる。確かに、任意の化合物（これは、ＡＣ
Ｅインヒビターとして機能的に挙動する）は、本発明の
方法によって包含される。
ター」または「ＡＣＥインヒビター」は、レンニン−ア
ンギオテンシン系において、比較的不活性なアンギオテ
ンシンＩの活性なアンギオテンシンＩＩへの変換に関与
する酵素を部分的または完全に阻害し得る化学的化合物
または化学的物体をいう。さらに、ＡＣＥインヒビター
は同時に、ブラジキニン（これは、ＡＣＥインヒビター
の抗高血圧効果を有意に強化するようである）の分解を
阻害する。ＡＣＥインヒビターの例としては、べナゼプ
リル、カプトプリル、エナラプリル、ホシノプリル、リ
シノプリル、キアプリル（ｑｕｉａｐｒｉｌ）およびラ
ミプリルが挙げられるがこれらに限定されない。公知の
ＡＣＥインヒビターの誘導体の使用は、本発明の方法に
よって含まれる。確かに、任意の化合物（これは、ＡＣ
Ｅインヒビターとして機能的に挙動する）は、本発明の
方法によって包含される。
【０１２７】本明細書中で示されるように、用語「遺伝
子型」は、生物体の実際の遺伝子構成をいい、一方、
「表現型」は、個体によって示される物理的形質をい
う。さらに、「表現型」は、ゲノムの選択的発現の結果
である（すなわち、これは、細胞履歴の発現およびその
細胞外環境に対する応答である）。確かに、ヒトゲノム
は、推定３０，０００〜３５，０００個の遺伝子を含
む。各細胞型において、これらの遺伝子の少数（すなわ
ち、１０〜１５％）の割合のみが発現される。
子型」は、生物体の実際の遺伝子構成をいい、一方、
「表現型」は、個体によって示される物理的形質をい
う。さらに、「表現型」は、ゲノムの選択的発現の結果
である（すなわち、これは、細胞履歴の発現およびその
細胞外環境に対する応答である）。確かに、ヒトゲノム
は、推定３０，０００〜３５，０００個の遺伝子を含
む。各細胞型において、これらの遺伝子の少数（すなわ
ち、１０〜１５％）の割合のみが発現される。
【０１２８】
【実施例】（ＶＩＩ．実施例）以下の実施例は、本発明
の種々の局面をさらに例示するために含まれる。以下の
実施例に開示される技術は、発明者らによって発見され
た技術および／または組成物が本発明の実施において十
分に機能することを示し、従って、その実行のための好
ましい様式を構成すると考えられ得ることが当業者によ
って理解されるべきである。しかし、当業者は、本発明
の開示を考慮して、多数の改変が開示された特定の実施
形態においてなされ得、そしてなお本発明の精神および
範囲から逸脱することなく同様または類似の結果を得る
ことを理解するべきである。
の種々の局面をさらに例示するために含まれる。以下の
実施例に開示される技術は、発明者らによって発見され
た技術および／または組成物が本発明の実施において十
分に機能することを示し、従って、その実行のための好
ましい様式を構成すると考えられ得ることが当業者によ
って理解されるべきである。しかし、当業者は、本発明
の開示を考慮して、多数の改変が開示された特定の実施
形態においてなされ得、そしてなお本発明の精神および
範囲から逸脱することなく同様または類似の結果を得る
ことを理解するべきである。
【０１２９】（実施例１）
（材料および方法）
（細胞培養）１日齢のラット由来の心室筋細胞を、５％
ウシ血清を含むＭＥＭ中に低密度でプレートし、そして
無血清ＭＥＭ中で研究した。培養物を、ＰＥ（＃Ｐ６１
２６、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏｒｐ．，Ｓ
ｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、ＩＬ−１（＃５０１−ＲＬ，
Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，Ｍ
Ｎ）、ＴＳＡ（＃ＧＲ−３０９，ＢＩＯＭＯＬ Ｒｅｓ
ｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｐ
ｌｙｍｏｕｔｈ Ｍｅｅｔｉｎｇ，ＰＡ）またはそれら
のビヒクル（ＰＥについてはアスコルビン酸；ＩＬ−１
についてはウシ血清アルブミン；ＴＳＡについてはジメ
チルスルホキシド）で処理した。
ウシ血清を含むＭＥＭ中に低密度でプレートし、そして
無血清ＭＥＭ中で研究した。培養物を、ＰＥ（＃Ｐ６１
２６、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏｒｐ．，Ｓ
ｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、ＩＬ−１（＃５０１−ＲＬ，
Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，Ｍ
Ｎ）、ＴＳＡ（＃ＧＲ−３０９，ＢＩＯＭＯＬ Ｒｅｓ
ｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｐ
ｌｙｍｏｕｔｈ Ｍｅｅｔｉｎｇ，ＰＡ）またはそれら
のビヒクル（ＰＥについてはアスコルビン酸；ＩＬ−１
についてはウシ血清アルブミン；ＴＳＡについてはジメ
チルスルホキシド）で処理した。
【０１３０】（アセチル化リジン残基の検出）総細胞抽
出物を、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ（Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）からの抗体（アセチ
ル化リジン抗体：＃９４４１、リジン９におけるアセチ
ル化ヒストンＨ３抗体：＃９６７１、リジン２３におけ
るアセチル化ヒストンＨ３抗体：＃９６７４、ヒストン
Ｈ３抗体：＃９７１２）を使用するウェスタンブロット
分析に供した。アセチル化ヒストンＨ３の核局在化を、
同じ抗体を使用する免疫染色によって試験した。
出物を、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ（Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）からの抗体（アセチ
ル化リジン抗体：＃９４４１、リジン９におけるアセチ
ル化ヒストンＨ３抗体：＃９６７１、リジン２３におけ
るアセチル化ヒストンＨ３抗体：＃９６７４、ヒストン
Ｈ３抗体：＃９７１２）を使用するウェスタンブロット
分析に供した。アセチル化ヒストンＨ３の核局在化を、
同じ抗体を使用する免疫染色によって試験した。
【０１３１】（筋細胞肥大および筋細胞特異的ｍＲＮＡ
発現の定量）培養した筋細胞の増殖を、１４Ｃ−フェニ
ルアラニンと共に連続的にインキュベートした後、放射
性標識されたタンパク質の含有量を定量した。筋細胞遺
伝子プログラムの評価のために、総ＲＮＡを、ＴＲＩＺ
ｏｌ（ＧＩＢＣＯ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，Ｃａｌｆｏｒｎ
ｉａ）を用いて細胞から抽出して、そしてＳＥＲＣＡ、
α−／β−ＭｙＨＣ、ＡＮＰ、ＢＮＰ、および心臓のα
−アクチンについてのプローブを用いてＲＮａｓｅ保護
アッセイにおいて使用した。全てのサンプルはまた、Ｒ
ＮＡローディングのための中間コントロールとして、グ
ルセルアルデヒドリン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤ
Ｈ）を含んだ。
発現の定量）培養した筋細胞の増殖を、１４Ｃ−フェニ
ルアラニンと共に連続的にインキュベートした後、放射
性標識されたタンパク質の含有量を定量した。筋細胞遺
伝子プログラムの評価のために、総ＲＮＡを、ＴＲＩＺ
ｏｌ（ＧＩＢＣＯ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，Ｃａｌｆｏｒｎ
ｉａ）を用いて細胞から抽出して、そしてＳＥＲＣＡ、
α−／β−ＭｙＨＣ、ＡＮＰ、ＢＮＰ、および心臓のα
−アクチンについてのプローブを用いてＲＮａｓｅ保護
アッセイにおいて使用した。全てのサンプルはまた、Ｒ
ＮＡローディングのための中間コントロールとして、グ
ルセルアルデヒドリン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤ
Ｈ）を含んだ。
【０１３２】（トランスフェクション）筋細胞を、ＨＤ
ＡＣ１、４、５についてのサイトメガロウイルスプロモ
ーター駆動Ｆｌａｇタグ化発現ベクター、およびクロラ
ムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）
遺伝子の発現７を駆動するＳＥＲＣＡ（３５００ｂ
ｐ）、αＭｙＨＣ（２９００ｂｐ）、またはβＭｙＨＣ
（３３００ｂｐ）についてのラットプロモーターを保有
するレポータープラスミドを用いるリン酸カルシウム同
時沈澱を使用して、トランスフェクトした。レポーター
発現を、ＳＥＡＰ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｃｅｓ Ｃｌ
ｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）を用いるト
ランスフェクション効率についての補正を用いて、以前
に記載されるように、４８時間後に評価した。ＨＤＡＣ
の過剰発現を、抗Ｆｌａｇ Ｍ２抗体（Ｓｉｇｍａ−Ａ
ｌｄｒｉｃｈ Ｃｏｒｐ．Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を
使用するウェスタンブロット分析によって確認した。
ＡＣ１、４、５についてのサイトメガロウイルスプロモ
ーター駆動Ｆｌａｇタグ化発現ベクター、およびクロラ
ムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）
遺伝子の発現７を駆動するＳＥＲＣＡ（３５００ｂ
ｐ）、αＭｙＨＣ（２９００ｂｐ）、またはβＭｙＨＣ
（３３００ｂｐ）についてのラットプロモーターを保有
するレポータープラスミドを用いるリン酸カルシウム同
時沈澱を使用して、トランスフェクトした。レポーター
発現を、ＳＥＡＰ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｃｅｓ Ｃｌ
ｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）を用いるト
ランスフェクション効率についての補正を用いて、以前
に記載されるように、４８時間後に評価した。ＨＤＡＣ
の過剰発現を、抗Ｆｌａｇ Ｍ２抗体（Ｓｉｇｍａ−Ａ
ｌｄｒｉｃｈ Ｃｏｒｐ．Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を
使用するウェスタンブロット分析によって確認した。
【０１３３】（結果）
（ＴＳＡは心筋細胞におけるタンパク質アセチル化を増
加する）ＴＳＡは、タンパク質アセチル化における全体
の増加を生じるはずであると考えていたので、最初の実
験は、ＴＳＡが心筋細胞におけるＨＤＡＣ活性を阻害し
得ることを確認することに指向した。アセチル化の程度
を、アセチル化リジン残基に特異的な抗体を使用して決
定した。発明者らは、ウェスタンブロットおよび細胞免
疫蛍光分析の両方によって、２４時間のＴＳＡへの曝露
が、多数のタンパク質において、そして特にヒストンＨ
３において、アセチル化リジン残基を効果的に増加した
ことを示した。
加する）ＴＳＡは、タンパク質アセチル化における全体
の増加を生じるはずであると考えていたので、最初の実
験は、ＴＳＡが心筋細胞におけるＨＤＡＣ活性を阻害し
得ることを確認することに指向した。アセチル化の程度
を、アセチル化リジン残基に特異的な抗体を使用して決
定した。発明者らは、ウェスタンブロットおよび細胞免
疫蛍光分析の両方によって、２４時間のＴＳＡへの曝露
が、多数のタンパク質において、そして特にヒストンＨ
３において、アセチル化リジン残基を効果的に増加した
ことを示した。
【０１３４】（ＴＳＡはアゴニスト誘導性増殖を増強す
るが、肥大関連遺伝子の抑制を逆転する）ＴＳＡ自体
は、筋細胞増殖に影響を与えないが、発明者らは、ＴＳ
ＡがＰＥおよびＩＬ−１の両方に対する個々の肥大応答
を増強することを見出した。両方の肥大刺激は、ＳＥＲ
ＣＡ（図１Ａ）およびαＭｙＨＣ（図１Ｂ）発現を下方
制御し、そして両方のアゴニストに対する組み合わせた
曝露は、さらなる抑制を生じた。対照的に、ＴＳＡは、
ＳＥＲＣＡ２ａおよびαＭｙＨＣ ｍＲＮＡの両方の基
底発現を増加させた。ＴＳＡの前処理はまた、両方の肥
大刺激によるＳＥＲＣＡ発現の抑制における実質的な逆
転を生じた。明らかに、ＴＳＡは、αＭｙＨＣ発現に対
するＰＥの効果のほぼ完全な逆転を生じたが、この効果
は、ＩＬ−１処理（または同時処理）細胞の場合におい
て、より顕著ではなかった。発明者らは以前に、ＰＥお
よびＩＬ−１を用いた心筋細胞の同時処理が、通常のα
ＭｙＨＣ発現のＰＥ誘導をほぼ５０％抑制することを示
した。ＴＳＡは、この遺伝子の基底発現またはＰＥ誘導
のいずれに対しても影響を与えなかったが、ＩＬ−１単
独の存在下でαＭｙＨＣ発現を増加し、そしてＰＥ／Ｉ
Ｌ−１同時処理細胞においてＩＬ−１の効果を逆転し
た。同様の逆転がまた、ｓＡＣＴ遺伝子で見られた（Ｗ
ａｎｇおよびＬｏｎｇ、未公開データ）。明らかに、Ｔ
ＳＡは、任意の肥大処理条件下で、心臓のα−アクチ
ン、ＡＮＰ、ＢＮＰの遺伝子発現に影響を与えなかった
（データは示されていない）。
るが、肥大関連遺伝子の抑制を逆転する）ＴＳＡ自体
は、筋細胞増殖に影響を与えないが、発明者らは、ＴＳ
ＡがＰＥおよびＩＬ−１の両方に対する個々の肥大応答
を増強することを見出した。両方の肥大刺激は、ＳＥＲ
ＣＡ（図１Ａ）およびαＭｙＨＣ（図１Ｂ）発現を下方
制御し、そして両方のアゴニストに対する組み合わせた
曝露は、さらなる抑制を生じた。対照的に、ＴＳＡは、
ＳＥＲＣＡ２ａおよびαＭｙＨＣ ｍＲＮＡの両方の基
底発現を増加させた。ＴＳＡの前処理はまた、両方の肥
大刺激によるＳＥＲＣＡ発現の抑制における実質的な逆
転を生じた。明らかに、ＴＳＡは、αＭｙＨＣ発現に対
するＰＥの効果のほぼ完全な逆転を生じたが、この効果
は、ＩＬ−１処理（または同時処理）細胞の場合におい
て、より顕著ではなかった。発明者らは以前に、ＰＥお
よびＩＬ−１を用いた心筋細胞の同時処理が、通常のα
ＭｙＨＣ発現のＰＥ誘導をほぼ５０％抑制することを示
した。ＴＳＡは、この遺伝子の基底発現またはＰＥ誘導
のいずれに対しても影響を与えなかったが、ＩＬ−１単
独の存在下でαＭｙＨＣ発現を増加し、そしてＰＥ／Ｉ
Ｌ−１同時処理細胞においてＩＬ−１の効果を逆転し
た。同様の逆転がまた、ｓＡＣＴ遺伝子で見られた（Ｗ
ａｎｇおよびＬｏｎｇ、未公開データ）。明らかに、Ｔ
ＳＡは、任意の肥大処理条件下で、心臓のα−アクチ
ン、ＡＮＰ、ＢＮＰの遺伝子発現に影響を与えなかった
（データは示されていない）。
【０１３５】（ＨＤＡＣの過剰発現は、筋細胞特異的遺
伝子のプロモーター活性を抑制した）これらの標的遺伝
子についてのｍＲＮＡ発現の研究と一致して、ＴＳＡは
また、ＳＥＲＣＡ２（図２Ａ）およびαＭｙＨＣ（図２
Ｂ）遺伝子の両方の基底プロモーター活性を増加した
が、βＭｙＨＣ（図２Ｃ）の活性は増加しなかった。さ
らに、ＨＤＡＣ１または４についての発現ベクターを有
するこれらの構築物の同時発現はまた、ＳＥＲＣＡ（図
２Ａ）およびαＭｙＨＣ（図２Ｄ）遺伝子の両方のプロ
モーター活性を減少した。しかし、対照的に、ＨＤＡＣ
５は、他のアイソフォームの発現レベルと同様の発現レ
ベルにも関わらず、いずれの遺伝子のプロモーター活性
をも阻害することに失敗した（データは示されていな
い）。明らかに、３つ全てのＨＤＡＣ構築物は、αＭｙ
ＨＣプロモーター活性（図２Ｄ）におけるＰＥ誘導性の
増加を減弱し得た。
伝子のプロモーター活性を抑制した）これらの標的遺伝
子についてのｍＲＮＡ発現の研究と一致して、ＴＳＡは
また、ＳＥＲＣＡ２（図２Ａ）およびαＭｙＨＣ（図２
Ｂ）遺伝子の両方の基底プロモーター活性を増加した
が、βＭｙＨＣ（図２Ｃ）の活性は増加しなかった。さ
らに、ＨＤＡＣ１または４についての発現ベクターを有
するこれらの構築物の同時発現はまた、ＳＥＲＣＡ（図
２Ａ）およびαＭｙＨＣ（図２Ｄ）遺伝子の両方のプロ
モーター活性を減少した。しかし、対照的に、ＨＤＡＣ
５は、他のアイソフォームの発現レベルと同様の発現レ
ベルにも関わらず、いずれの遺伝子のプロモーター活性
をも阻害することに失敗した（データは示されていな
い）。明らかに、３つ全てのＨＤＡＣ構築物は、αＭｙ
ＨＣプロモーター活性（図２Ｄ）におけるＰＥ誘導性の
増加を減弱し得た。
【０１３６】（実施例２）
（材料および方法）
（心筋細胞単離）心臓を、妊娠１５日目の雌性Ｓｐｒａ
ｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｈａｒｌａｎ，Ｈｏｕｓ
ｔｏｎ，ＴＸ）から回収した。リン酸緩衝化生理食塩水
中で刻んだ後、心筋細胞を、０．１％（ｗ／ｖ）Ｐａｎ
ｃｒｅａｔｉｎ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍ
Ｏ）溶液の連続消化画分から単離した。画分を回収し：
プレート培地に再懸濁し；プールし；次いで心筋細胞集
団から線維芽細胞を分離するために２時間プレートし
た。懸濁細胞を、再び回収し、そしてトランスフェクシ
ョンおよび免疫蛍光実験のために１×１０６細胞／ウェ
ルで６ウェルシャーレ中にプレートし、そしてＲＮＡ分
析のために１０ｃｍシャーレ中で２×１０６細胞をプレ
ートした。
ｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｈａｒｌａｎ，Ｈｏｕｓ
ｔｏｎ，ＴＸ）から回収した。リン酸緩衝化生理食塩水
中で刻んだ後、心筋細胞を、０．１％（ｗ／ｖ）Ｐａｎ
ｃｒｅａｔｉｎ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍ
Ｏ）溶液の連続消化画分から単離した。画分を回収し：
プレート培地に再懸濁し；プールし；次いで心筋細胞集
団から線維芽細胞を分離するために２時間プレートし
た。懸濁細胞を、再び回収し、そしてトランスフェクシ
ョンおよび免疫蛍光実験のために１×１０６細胞／ウェ
ルで６ウェルシャーレ中にプレートし、そしてＲＮＡ分
析のために１０ｃｍシャーレ中で２×１０６細胞をプレ
ートした。
【０１３７】（転写アッセイ）プレーティングの２４時
間後、細胞を、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ Ｐｌｕｓ
試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，Ｃ
Ａ）を使用して、総量１μｇ／ｍｌで５時間トランスフ
ェクトした。トランスフェクトした細胞をインキュベー
トし、次いで、さらに２４時間処理した。細胞を、溶解
し、そしてそれらの溶解物を、Ｌｕｃｙｓｏｆｔ２照度
計（Ｒｏｓｙｓ Ａｎｔｈｏｓ，ＮｅｗＣａｓｔｌｅ，
ＤＥ）を使用して、蛍光についてＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ
Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄ
ｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いてアッセイした。
間後、細胞を、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ Ｐｌｕｓ
試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，Ｃ
Ａ）を使用して、総量１μｇ／ｍｌで５時間トランスフ
ェクトした。トランスフェクトした細胞をインキュベー
トし、次いで、さらに２４時間処理した。細胞を、溶解
し、そしてそれらの溶解物を、Ｌｕｃｙｓｏｆｔ２照度
計（Ｒｏｓｙｓ Ａｎｔｈｏｓ，ＮｅｗＣａｓｔｌｅ，
ＤＥ）を使用して、蛍光についてＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ
Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄ
ｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いてアッセイした。
【０１３８】（化学発光）新生児心筋細胞を、９６ウェ
ルプレートに播種して、そして７２時間処理した。細胞
を、１×ＰＢＳ中で２回洗浄し、４％パラホルムアルデ
ヒド／１×ＰＢＳ中で固定し、そして０．１％ Ｔｒｉ
ｔｏｎ−Ｘ１００を用いて浸透させた。ブロッキング
後、細胞を１０μｇ／ｍｌモノクローナル抗ＡＮＦ抗体
（Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ）と共に１時間インキュベートし
た。ウェルを、１％ＢＳＡ／１×ＰＢＳで２回洗浄し、
次いで１×ＰＢＳ／１％ＢＳＡ中１：１０００でヤギ抗
マウスＩｇＧ−Ｆｃ−ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂ
ｓ，ｌｏｃａｔｉｏｎ）と共に１時間インキュベートし
た。細胞を、１％ＢＳＡ／１×ＰＢＳで２回洗浄し、１
×ＰＢＳで２回洗浄し、次いでブロットし、乾燥した。
Ｌｕｍｉｎｏｌ（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉ
Ｌ）を添加し、そして化学発光を、ＦｕｓｉｏｎＰｌａ
ｔｅ Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ／Ｐａ
ｃｋａｒｄ）で検出した。
ルプレートに播種して、そして７２時間処理した。細胞
を、１×ＰＢＳ中で２回洗浄し、４％パラホルムアルデ
ヒド／１×ＰＢＳ中で固定し、そして０．１％ Ｔｒｉ
ｔｏｎ−Ｘ１００を用いて浸透させた。ブロッキング
後、細胞を１０μｇ／ｍｌモノクローナル抗ＡＮＦ抗体
（Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ）と共に１時間インキュベートし
た。ウェルを、１％ＢＳＡ／１×ＰＢＳで２回洗浄し、
次いで１×ＰＢＳ／１％ＢＳＡ中１：１０００でヤギ抗
マウスＩｇＧ−Ｆｃ−ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂ
ｓ，ｌｏｃａｔｉｏｎ）と共に１時間インキュベートし
た。細胞を、１％ＢＳＡ／１×ＰＢＳで２回洗浄し、１
×ＰＢＳで２回洗浄し、次いでブロットし、乾燥した。
Ｌｕｍｉｎｏｌ（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉ
Ｌ）を添加し、そして化学発光を、ＦｕｓｉｏｎＰｌａ
ｔｅ Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ／Ｐａ
ｃｋａｒｄ）で検出した。
【０１３９】（ドットブロット分析）総ＲＮＡを、未処
理、フェニレフリン処理、ＴＳＡ処理、またはフェニレ
フリンおよびＴＳＡの同時処理のいずれかの心筋細胞か
ら単離した。１マイクログラムのＲＮＡを、Ｎｉｔｒｏ
ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅ
ｓ，ＣＡ）にブロットし、そして末端標識オリゴで５０
℃で１４時間ハイブリダイズした。
理、フェニレフリン処理、ＴＳＡ処理、またはフェニレ
フリンおよびＴＳＡの同時処理のいずれかの心筋細胞か
ら単離した。１マイクログラムのＲＮＡを、Ｎｉｔｒｏ
ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅ
ｓ，ＣＡ）にブロットし、そして末端標識オリゴで５０
℃で１４時間ハイブリダイズした。
【０１４０】
【化２】
ブロットを、２×ＳＳＣ／０．５％ＳＤＳ溶液中で２回
洗浄し、フィルム（Ｋｏｄａｋ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，
ＮＹ）またはｐｈｏｓｐｈｏｉｍａｇｅｒ（Ａｍｅｒｓ
ｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，
ＣＡ）に露光した。プローブのハイブリダイゼーション
強度を、ＩｍａｇｅＱｕａｎｔ（著作権）（Ａｍｅｒｓ
ｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，
ＣＡ）を用いて測定した。
洗浄し、フィルム（Ｋｏｄａｋ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，
ＮＹ）またはｐｈｏｓｐｈｏｉｍａｇｅｒ（Ａｍｅｒｓ
ｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，
ＣＡ）に露光した。プローブのハイブリダイゼーション
強度を、ＩｍａｇｅＱｕａｎｔ（著作権）（Ａｍｅｒｓ
ｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，
ＣＡ）を用いて測定した。
【０１４１】（免疫染色）ガラスカバーガラスを、１×
ＰＢＳ（４０μｇ／ｍｌ）中でラミニンを溶解すること
によって、カバーガラスを溶液中に浸漬することによっ
て、そしてそれらを風乾することによって、ラミニン
（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）で
コーティングした。細胞を、２４時間処理し、洗浄し、
３．７％ホルムアミドで１０分間固定し、１×ＰＢＳで
洗浄し、そして３％ＢＳＡおよび０．１％ＮＰ−４０
（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を含む１×Ｐ
ＢＳで浸漬した。一次抗体を、３％ＢＳＡおよび０．１
％ＮＰ−４０を含む１×ＰＢＳ中で３０分間置き、次い
で１×ＰＢＳ中で３回洗浄した。二次ＦＩＴＣ抗体また
はＴＲＩＴＣ抗体（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）を、
一次抗体と同じ緩衝溶液中でインキュベートし（１：２
００）、次いで１×ＰＢＳで洗浄し、カバーし引き続き
可視化した。イメージを、デジタルカメラ（Ｈａｍａｍ
ａｔｓｕ Ｐｈｏｔｏｎｉｃｓ，Ｈａｍａｍａｔｓｕ
Ｃｉｔｙ，Ｊａｐａｎ）を使用して取り込んだ。
ＰＢＳ（４０μｇ／ｍｌ）中でラミニンを溶解すること
によって、カバーガラスを溶液中に浸漬することによっ
て、そしてそれらを風乾することによって、ラミニン
（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）で
コーティングした。細胞を、２４時間処理し、洗浄し、
３．７％ホルムアミドで１０分間固定し、１×ＰＢＳで
洗浄し、そして３％ＢＳＡおよび０．１％ＮＰ−４０
（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を含む１×Ｐ
ＢＳで浸漬した。一次抗体を、３％ＢＳＡおよび０．１
％ＮＰ−４０を含む１×ＰＢＳ中で３０分間置き、次い
で１×ＰＢＳ中で３回洗浄した。二次ＦＩＴＣ抗体また
はＴＲＩＴＣ抗体（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）を、
一次抗体と同じ緩衝溶液中でインキュベートし（１：２
００）、次いで１×ＰＢＳで洗浄し、カバーし引き続き
可視化した。イメージを、デジタルカメラ（Ｈａｍａｍ
ａｔｓｕ Ｐｈｏｔｏｎｉｃｓ，Ｈａｍａｍａｔｓｕ
Ｃｉｔｙ，Ｊａｐａｎ）を使用して取り込んだ。
【０１４２】（タンパク質合成）心筋細胞を、処理した
ＲＰＭＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｋｓｂａ
ｄ，ＣＡ）中で（１．０μＣｉ／ｍｌ；１７２Ｃｉ／ｍ
ｍｏｌ ｓｐ．活性）トリチウム化ロイシン（ＩＣＮ
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｉｒｖｉｎｅ，
ＣＡ）と共にインキュベートした。６時間のインキュベ
ーション後、細胞を、１×ＰＢＳで２回洗浄し、次いで
氷上で３０分間、１０％ＴＣＡ中でインキュベートし
た。その後、細胞を、５％ＴＣＡで２回洗浄し、水で１
回洗浄し、次いで０．２５ ＮａＯＨ中で溶解した。溶
解物を、シンチレーションカウンター（Ｂｅｃｋｍａ
ｎ，Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，ＣＡ）によってシンチレーシ
ョン液の６分の１容量で測定した。
ＲＰＭＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｋｓｂａ
ｄ，ＣＡ）中で（１．０μＣｉ／ｍｌ；１７２Ｃｉ／ｍ
ｍｏｌ ｓｐ．活性）トリチウム化ロイシン（ＩＣＮ
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｉｒｖｉｎｅ，
ＣＡ）と共にインキュベートした。６時間のインキュベ
ーション後、細胞を、１×ＰＢＳで２回洗浄し、次いで
氷上で３０分間、１０％ＴＣＡ中でインキュベートし
た。その後、細胞を、５％ＴＣＡで２回洗浄し、水で１
回洗浄し、次いで０．２５ ＮａＯＨ中で溶解した。溶
解物を、シンチレーションカウンター（Ｂｅｃｋｍａ
ｎ，Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，ＣＡ）によってシンチレーシ
ョン液の６分の１容量で測定した。
【０１４３】（Ｓ６リボソームプロトコル）ブロッキン
グ後、細胞を、５０μｇ／ｍｌ抗Ｓ６タンパク質（Ｃｅ
ｌｌ Ｓｉｎｇａｌｉｎｇ，ｌｏｃａｔｉｏｎ）を含む
１％ＢＳＡ／１×ＰＢＳ中で、１時間インキュベートし
た。洗浄後、細胞を、１：４００の希釈率で、ＩｇＧ−
ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ，ｌｏｃａｔｉｏ
ｎ）と共にインキュベートした。次いで、細胞を、１％
ＢＳＡ／１×ＰＢＳ中で２回洗浄し、１×ＰＢＳ中で洗
浄し、次いでブロットし、乾燥した。Ｌｕｍｉｎｏｌ
（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を添加し、
そして化学発光を、Ｆｕｓｉｏｎ Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅ
ｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ／Ｐａｃｋａｒｄ）で検出した。
グ後、細胞を、５０μｇ／ｍｌ抗Ｓ６タンパク質（Ｃｅ
ｌｌ Ｓｉｎｇａｌｉｎｇ，ｌｏｃａｔｉｏｎ）を含む
１％ＢＳＡ／１×ＰＢＳ中で、１時間インキュベートし
た。洗浄後、細胞を、１：４００の希釈率で、ＩｇＧ−
ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ，ｌｏｃａｔｉｏ
ｎ）と共にインキュベートした。次いで、細胞を、１％
ＢＳＡ／１×ＰＢＳ中で２回洗浄し、１×ＰＢＳ中で洗
浄し、次いでブロットし、乾燥した。Ｌｕｍｉｎｏｌ
（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を添加し、
そして化学発光を、Ｆｕｓｉｏｎ Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅ
ｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ／Ｐａｃｋａｒｄ）で検出した。
【０１４４】（遺伝子チップおよび分析）ＲＮＡを、未
処理、フェニレフリン処理、ＴＳＡ処理、およびフェニ
レフリン／ＴＳＡ同時処理ラット新生児心筋細胞から、
Ｔｒｉｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａ
ｄ，ＣＡ）を使用して単離した。ＲＮＡを、調製し、そ
してＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘプロトコルに従って、Ｕ３４
Ａチップ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎｔ
ａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）上でハイブリダイズした。ハイ
ブリダイゼーションの強度を、Ｍｉｃｏｒｏ Ａｒｒａ
ｙ Ｓｕｉｔｅ ５．０（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ，Ｉｎ
ｃ．，Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）によって検出
し、そして遺伝子発現における変化を決定し、そしてＭ
ｉｃｏｒｏ Ａｒｒａｙ Ｓｕｉｔｅ ５．０（Ａｆｆ
ｙｍｅｔｒｉｘ，Ｉｎｃ．，ＳａｎｔａＣｌａｒａ，Ｃ
Ａ）によって分析した。
処理、フェニレフリン処理、ＴＳＡ処理、およびフェニ
レフリン／ＴＳＡ同時処理ラット新生児心筋細胞から、
Ｔｒｉｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａ
ｄ，ＣＡ）を使用して単離した。ＲＮＡを、調製し、そ
してＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘプロトコルに従って、Ｕ３４
Ａチップ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎｔ
ａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）上でハイブリダイズした。ハイ
ブリダイゼーションの強度を、Ｍｉｃｏｒｏ Ａｒｒａ
ｙ Ｓｕｉｔｅ ５．０（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ，Ｉｎ
ｃ．，Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）によって検出
し、そして遺伝子発現における変化を決定し、そしてＭ
ｉｃｏｒｏ Ａｒｒａｙ Ｓｕｉｔｅ ５．０（Ａｆｆ
ｙｍｅｔｒｉｘ，Ｉｎｃ．，ＳａｎｔａＣｌａｒａ，Ｃ
Ａ）によって分析した。
【０１４５】（結果）ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡ
Ｃ）が遺伝子発現を調節するので、本発明者らは、ＨＤ
ＡＣ阻害が、心肥大と関連した遺伝子の発現を変化させ
るか否かを分析した。心房性ナトリウム利尿因子（ＡＮ
Ｆ）はこのような遺伝子の１つであり、そしてその発現
は、肥大アゴニストの存在下で増大する。ＨＤＡＣ阻害
がＡＮＦ遺伝子活性化に影響するか否かを決定するため
に、トランスフェクション実験をＡＮＦプロモーターを
用いて実施し、そしてトランスフェクトされた心筋細胞
をフェニレフリンおよびいくつかのＨＤＡＣインヒビタ
ーで処理した。トリコスタチン（ＴＳＡ）、酪酸ナトリ
ウム（ＮａＢｕｔ）またはＨＣ毒素（ＨＣ）での心筋細
胞の処理は、ＡＮＦプロモーターを活性化しなかった。
しかし、ＨＤＡＣインヒビターは、フェニレフリン処理
によるプロモーターの活性化を完全にブロックした（図
３Ａ）。この効果は特異的であった。なぜなら、各ＨＤ
ＡＣインヒビターを単独でまたはフェニレフリンと一緒
にかのいずれかで処理した心筋細胞は、ＣＭＶ−Ｌａｃ
Ｚレポーターの転写活性を増大したからである（図３
Ｂ）。このことは、これらの薬理学的薬剤の作用が、Ａ
ＮＦの転写制御に特異的であって、一般的な転写阻害に
由来しなかったことを示す。
Ｃ）が遺伝子発現を調節するので、本発明者らは、ＨＤ
ＡＣ阻害が、心肥大と関連した遺伝子の発現を変化させ
るか否かを分析した。心房性ナトリウム利尿因子（ＡＮ
Ｆ）はこのような遺伝子の１つであり、そしてその発現
は、肥大アゴニストの存在下で増大する。ＨＤＡＣ阻害
がＡＮＦ遺伝子活性化に影響するか否かを決定するため
に、トランスフェクション実験をＡＮＦプロモーターを
用いて実施し、そしてトランスフェクトされた心筋細胞
をフェニレフリンおよびいくつかのＨＤＡＣインヒビタ
ーで処理した。トリコスタチン（ＴＳＡ）、酪酸ナトリ
ウム（ＮａＢｕｔ）またはＨＣ毒素（ＨＣ）での心筋細
胞の処理は、ＡＮＦプロモーターを活性化しなかった。
しかし、ＨＤＡＣインヒビターは、フェニレフリン処理
によるプロモーターの活性化を完全にブロックした（図
３Ａ）。この効果は特異的であった。なぜなら、各ＨＤ
ＡＣインヒビターを単独でまたはフェニレフリンと一緒
にかのいずれかで処理した心筋細胞は、ＣＭＶ−Ｌａｃ
Ｚレポーターの転写活性を増大したからである（図３
Ｂ）。このことは、これらの薬理学的薬剤の作用が、Ａ
ＮＦの転写制御に特異的であって、一般的な転写阻害に
由来しなかったことを示す。
【０１４６】発明者らは、次いで、ＴＳＡおよび酪酸ナ
トリウムの用量の増加が、培養心筋細胞に対して細胞傷
害性であるか否かを調べた。細胞死亡率を決定するため
に、心筋細胞から培養培地へのアデニル酸キナーゼの放
出をアッセイした。このアッセイは、細胞膜の完全性に
ついて公知の測定である：膜は、細胞が死亡する際に透
過性になり、これら細胞にアデニル酸キナーゼを放出さ
せる。ＴＳＡ（１００ｎＭまで）および酪酸ナトリウム
（２５ｎＭまで）の用量の増加は、培養培地においてア
デニル酸キナーゼを増大させるようにほとんど働かなか
った。このことは、ＴＳＡおよび酪酸ナトリウムによっ
て細胞死の増大がなかったことを示す（図３Ｃおよび３
Ｄ）。単一時点実験において８５ｎＭ ＴＳＡまたは５
ｍＭ酪酸ナトリウムを用いたところ、この結果は、ＡＮ
Ｆ転写の不活性化がＨＤＡＣ阻害の直接的な効果であっ
て、ＨＤＡＣインヒビターによる細胞傷害性の間接的な
結果ではないことを示す。
トリウムの用量の増加が、培養心筋細胞に対して細胞傷
害性であるか否かを調べた。細胞死亡率を決定するため
に、心筋細胞から培養培地へのアデニル酸キナーゼの放
出をアッセイした。このアッセイは、細胞膜の完全性に
ついて公知の測定である：膜は、細胞が死亡する際に透
過性になり、これら細胞にアデニル酸キナーゼを放出さ
せる。ＴＳＡ（１００ｎＭまで）および酪酸ナトリウム
（２５ｎＭまで）の用量の増加は、培養培地においてア
デニル酸キナーゼを増大させるようにほとんど働かなか
った。このことは、ＴＳＡおよび酪酸ナトリウムによっ
て細胞死の増大がなかったことを示す（図３Ｃおよび３
Ｄ）。単一時点実験において８５ｎＭ ＴＳＡまたは５
ｍＭ酪酸ナトリウムを用いたところ、この結果は、ＡＮ
Ｆ転写の不活性化がＨＤＡＣ阻害の直接的な効果であっ
て、ＨＤＡＣインヒビターによる細胞傷害性の間接的な
結果ではないことを示す。
【０１４７】内因性遺伝子発現がトランスフェクション
の結果と対応するか否かを決定するために、本発明者ら
は、種々の処理条件下で心筋細胞からのＡＮＦの内因性
ＲＮＡレベルを見た。フェニレフリン処理心筋細胞のＲ
ＮＡドットブロット分析は、フェニレフリン処理に応じ
て、ＡＮＦ発現において、およそ３倍の増加を示した。
しかし、異なるＨＤＡＣインヒビター（ＴＳＡ、ＮａＢ
ｕｔ、またはＨＣ毒素）でのフェニレフリン処理細胞の
同時処理は、以前に述べたトランスフェクション結果と
一致して、フェニレフリン誘導ＡＮＦ応答を妨害した
（図４Ａ）。
の結果と対応するか否かを決定するために、本発明者ら
は、種々の処理条件下で心筋細胞からのＡＮＦの内因性
ＲＮＡレベルを見た。フェニレフリン処理心筋細胞のＲ
ＮＡドットブロット分析は、フェニレフリン処理に応じ
て、ＡＮＦ発現において、およそ３倍の増加を示した。
しかし、異なるＨＤＡＣインヒビター（ＴＳＡ、ＮａＢ
ｕｔ、またはＨＣ毒素）でのフェニレフリン処理細胞の
同時処理は、以前に述べたトランスフェクション結果と
一致して、フェニレフリン誘導ＡＮＦ応答を妨害した
（図４Ａ）。
【０１４８】先のデータは、低用量のＴＳＡが、ＡＮＦ
遺伝子座のアセチル化により、および転写リプレッサー
（ＮＲＳＥ）の不活性化によりＡＮＦ発現を誘導し得る
ことを示した。ＨＤＡＣインヒビターの用量依存性効果
があるか否かに取り組むために、発明者らは、肥大刺激
因子である血清（ＦＢＳ）、フェニレフリン（ＰＥ）ま
たはエンドテリン−１（ＥＴ−１）の不在または存在下
でＴＳＡ（図４Ｂ）および酪酸ナトリウム（図４Ｃ）の
濃度を増加させながら一次心筋細胞を処理した後のＡＮ
Ｆ発現を調べた。酪酸ナトリウムの非常に低い用量
（０．２ｎＭ）では（図４Ｃ）、発明者らは、ＡＮＦ発
現において、２倍近くの増加を観察した。ＴＳＡでは、
限界的な増加しかなかった（図４Ｂ）。しかし、他のす
べての濃度でのＨＤＡＣインヒビターは、ＡＮＦ産生を
誘導せず、そして濃度を増加させるにつれて、それら
は、増殖刺激因子であるＦＢＳ、ＰＥ、およびＥＴ−１
での培養心筋細胞の処理後に通常観察されるＡＮＦ発現
の誘導に対抗した（図４Ｂおよび４Ｃ）。各増殖刺激因
子の肥大応答を阻害した最小濃度は、４０ｎＭ ＴＳＡ
および５ｍＭ酪酸ナトリウムであった。これらは、トラ
ンスフェクションおよびドットブロット実験において観
察される転写におけるＡＮＦの３〜４倍の減少を模倣し
た。これらの用量は、細胞傷害性の閾値を十分に下回っ
た。
遺伝子座のアセチル化により、および転写リプレッサー
（ＮＲＳＥ）の不活性化によりＡＮＦ発現を誘導し得る
ことを示した。ＨＤＡＣインヒビターの用量依存性効果
があるか否かに取り組むために、発明者らは、肥大刺激
因子である血清（ＦＢＳ）、フェニレフリン（ＰＥ）ま
たはエンドテリン−１（ＥＴ−１）の不在または存在下
でＴＳＡ（図４Ｂ）および酪酸ナトリウム（図４Ｃ）の
濃度を増加させながら一次心筋細胞を処理した後のＡＮ
Ｆ発現を調べた。酪酸ナトリウムの非常に低い用量
（０．２ｎＭ）では（図４Ｃ）、発明者らは、ＡＮＦ発
現において、２倍近くの増加を観察した。ＴＳＡでは、
限界的な増加しかなかった（図４Ｂ）。しかし、他のす
べての濃度でのＨＤＡＣインヒビターは、ＡＮＦ産生を
誘導せず、そして濃度を増加させるにつれて、それら
は、増殖刺激因子であるＦＢＳ、ＰＥ、およびＥＴ−１
での培養心筋細胞の処理後に通常観察されるＡＮＦ発現
の誘導に対抗した（図４Ｂおよび４Ｃ）。各増殖刺激因
子の肥大応答を阻害した最小濃度は、４０ｎＭ ＴＳＡ
および５ｍＭ酪酸ナトリウムであった。これらは、トラ
ンスフェクションおよびドットブロット実験において観
察される転写におけるＡＮＦの３〜４倍の減少を模倣し
た。これらの用量は、細胞傷害性の閾値を十分に下回っ
た。
【０１４９】心肥大は、ＡＮＦに加えて胎児遺伝子の再
プログラミングに関連する。本発明者らは、胎児遺伝子
カスケードの他のメンバーがＴＳＡの処理によって影響
されるか否かを決定することを望んだ。ＡＮＦに加え
て、α−ｓｋ発現およびβＭｙＨＣの倍数変化の定量的
分析は、ＨＤＡＣ阻害が肥大刺激因子フェニレフリンに
より活性化された他の遺伝子の抑制を生じることを示し
た（図５ＡおよびＢ）。さらに、胎児ミオシン鎖イソ型
（βＭｙＨＣ）イソ型のダウンレギュレートに加えて、
心筋細胞のＴＳＡ処理は、αＭｙＨＣ（肥大心筋細胞に
おいて通常減少する成体ミオシン重鎖イソ型）の発現を
誘導した（図５Ｂ）。これらのデータをまとめると、Ｈ
ＤＡＣ阻害が、心筋細胞肥大と関連した遺伝子カスケー
ドの転写再プログラミングを抑制することが示される。
プログラミングに関連する。本発明者らは、胎児遺伝子
カスケードの他のメンバーがＴＳＡの処理によって影響
されるか否かを決定することを望んだ。ＡＮＦに加え
て、α−ｓｋ発現およびβＭｙＨＣの倍数変化の定量的
分析は、ＨＤＡＣ阻害が肥大刺激因子フェニレフリンに
より活性化された他の遺伝子の抑制を生じることを示し
た（図５ＡおよびＢ）。さらに、胎児ミオシン鎖イソ型
（βＭｙＨＣ）イソ型のダウンレギュレートに加えて、
心筋細胞のＴＳＡ処理は、αＭｙＨＣ（肥大心筋細胞に
おいて通常減少する成体ミオシン重鎖イソ型）の発現を
誘導した（図５Ｂ）。これらのデータをまとめると、Ｈ
ＤＡＣ阻害が、心筋細胞肥大と関連した遺伝子カスケー
ドの転写再プログラミングを抑制することが示される。
【０１５０】ＡＮＦタンパク質についての染色は、フェ
ニレフリンまたは血清で処理した心筋細胞が、未刺激細
胞に比較して、ＡＮＦタンパク質の核周囲蓄積を誘導す
ることを示した（データは示さず）。ＴＳＡで処理した
心筋細胞にはＡＮＦタンパク質の蓄積がなく、フェニレ
フリンまたは血清のいずれかで処理した心筋細胞へのＴ
ＳＡの添加は、ＡＮＦタンパク質の蓄積を劇的に減少し
た。α−アクチニン（ａｃｔｉｎｉｎ）についての免疫
細胞化学染色は、ＨＤＡＣ阻害が、筋節の再構築（心筋
細胞肥大と関連した別の現象）を拮抗することを示し
た。未刺激の心筋細胞は無定形の形状を維持し、筋節の
見かけ上の構造的構築（α−アクチニン）を生じなかっ
た。肥大アゴニストであるフェニレフリン、血清、およ
びＥＴ−１は、高次の細胞骨格構造の一部として筋節の
構築を強力に刺激した。興味深いことに、ＴＳＡは、心
筋細胞形態学に影響を及ぼした。ＴＳＡ処理細胞は大き
さを変えなかったが、それらは、細胞の本体部から細く
伸長していくことにより「星をちりばめた（ｓｔａｒｒ
ｅｄ）」外見を獲得する傾向にあった。しかし、それら
には筋節の構築がなかった。ＴＳＡ処理の効果は、増殖
刺激因子の存在下で、より劇的であった。なぜなら、こ
れは、フェニレフリン、血清、またはＥＴ−１により通
常誘導される肥大形態学に影響したからである。ＴＳＡ
処理心筋細胞には、完全に構築された筋節はなかった。
ニレフリンまたは血清で処理した心筋細胞が、未刺激細
胞に比較して、ＡＮＦタンパク質の核周囲蓄積を誘導す
ることを示した（データは示さず）。ＴＳＡで処理した
心筋細胞にはＡＮＦタンパク質の蓄積がなく、フェニレ
フリンまたは血清のいずれかで処理した心筋細胞へのＴ
ＳＡの添加は、ＡＮＦタンパク質の蓄積を劇的に減少し
た。α−アクチニン（ａｃｔｉｎｉｎ）についての免疫
細胞化学染色は、ＨＤＡＣ阻害が、筋節の再構築（心筋
細胞肥大と関連した別の現象）を拮抗することを示し
た。未刺激の心筋細胞は無定形の形状を維持し、筋節の
見かけ上の構造的構築（α−アクチニン）を生じなかっ
た。肥大アゴニストであるフェニレフリン、血清、およ
びＥＴ−１は、高次の細胞骨格構造の一部として筋節の
構築を強力に刺激した。興味深いことに、ＴＳＡは、心
筋細胞形態学に影響を及ぼした。ＴＳＡ処理細胞は大き
さを変えなかったが、それらは、細胞の本体部から細く
伸長していくことにより「星をちりばめた（ｓｔａｒｒ
ｅｄ）」外見を獲得する傾向にあった。しかし、それら
には筋節の構築がなかった。ＴＳＡ処理の効果は、増殖
刺激因子の存在下で、より劇的であった。なぜなら、こ
れは、フェニレフリン、血清、またはＥＴ−１により通
常誘導される肥大形態学に影響したからである。ＴＳＡ
処理心筋細胞には、完全に構築された筋節はなかった。
【０１５１】本発明者らは、次いで、タンパク質合成の
変化についてアッセイし、そしてリボソームサブユニッ
トＳ６のタンパク質含有量の蓄積を測定することによ
り、ＴＳＡが、肥大応答と通常関連するタンパク質合成
の増加を拮抗したか否かを決定した。フェニレフリン
は、刺激６時間後に心筋細胞におけるタンパク質合成を
２倍高めた。しかし、ＨＤＡＣインヒビターであるＴＳ
Ａおよび酪酸ナトリウムとのフェニレフリンとの同時培
養は、フェニレフリンで通常誘導されるタンパク質合成
の刺激に対してほとんど効果がなかった（図６）。けれ
ども、同時処理の２４時間後まで、ＨＤＡＣインヒビタ
ーは、用量依存性様式でＰＥまたは血清により通常誘導
されるタンパク質合成を拮抗した（図６）。このこと
は、ＨＤＡＣ阻害による筋節の構築の妨害が、転写調節
に特異的な効果であることを示唆する。
変化についてアッセイし、そしてリボソームサブユニッ
トＳ６のタンパク質含有量の蓄積を測定することによ
り、ＴＳＡが、肥大応答と通常関連するタンパク質合成
の増加を拮抗したか否かを決定した。フェニレフリン
は、刺激６時間後に心筋細胞におけるタンパク質合成を
２倍高めた。しかし、ＨＤＡＣインヒビターであるＴＳ
Ａおよび酪酸ナトリウムとのフェニレフリンとの同時培
養は、フェニレフリンで通常誘導されるタンパク質合成
の刺激に対してほとんど効果がなかった（図６）。けれ
ども、同時処理の２４時間後まで、ＨＤＡＣインヒビタ
ーは、用量依存性様式でＰＥまたは血清により通常誘導
されるタンパク質合成を拮抗した（図６）。このこと
は、ＨＤＡＣ阻害による筋節の構築の妨害が、転写調節
に特異的な効果であることを示唆する。
【０１５２】以前の研究は、酵母のＴＳＡ処理が、遺伝
子のサブセットにおいてのみ遺伝子発現の変化を生じる
ことを示した。このことが心筋細胞についても当てはま
るのであれば、限定された数の遺伝子が、肥大表現型の
抑制の原因となると考えられる。これらの遺伝子を同定
するために、発明者らは、遺伝子チップアレイによりお
よそ８０００の遺伝子の発現をアッセイした。フェニレ
フリン処理細胞とフェニレフリン／ＴＳＡ処理細胞との
遺伝子変化の間の発現のアッセイの続くグラフ分析は、
大多数の遺伝子が線状に群がることを明らかにした。フ
ェニレフリン処理細胞由来のＲＮＡとハイブリダイズし
たチップと、フェニレフリン／ＴＳＡ処理細胞由来のＲ
ＮＡとハイブリダイズしたチップとの間で、大多数の転
写物は、比較的変化がなかった（遺伝子発現の変化は３
倍未満であった）。このことは、ＴＳＡ処理によるフェ
ニレフリン誘導心筋細胞増殖の抑制を担う遺伝子の相対
数が低いことを示唆する。
子のサブセットにおいてのみ遺伝子発現の変化を生じる
ことを示した。このことが心筋細胞についても当てはま
るのであれば、限定された数の遺伝子が、肥大表現型の
抑制の原因となると考えられる。これらの遺伝子を同定
するために、発明者らは、遺伝子チップアレイによりお
よそ８０００の遺伝子の発現をアッセイした。フェニレ
フリン処理細胞とフェニレフリン／ＴＳＡ処理細胞との
遺伝子変化の間の発現のアッセイの続くグラフ分析は、
大多数の遺伝子が線状に群がることを明らかにした。フ
ェニレフリン処理細胞由来のＲＮＡとハイブリダイズし
たチップと、フェニレフリン／ＴＳＡ処理細胞由来のＲ
ＮＡとハイブリダイズしたチップとの間で、大多数の転
写物は、比較的変化がなかった（遺伝子発現の変化は３
倍未満であった）。このことは、ＴＳＡ処理によるフェ
ニレフリン誘導心筋細胞増殖の抑制を担う遺伝子の相対
数が低いことを示唆する。
【０１５３】フェニレフリン、ＴＳＡまたはそれらの組
み合わせにより発現レベルが変化した少ない数の遺伝子
から、発明者らは、フェニレフリン処理群とＴＳＡ処理
群（フェニレフリン／ＴＳＡおよびＴＳＡ）との間で一
貫して２倍以上の差異を有した７つの遺伝子を同定し
た。３つの遺伝子は、フェニレフリン処理によってアッ
プレギュレートされ、そしてＴＳＡ（シトクロムオキシ
ダーゼサブユニットＶＩＩＩ、マウスＴ複合タンパク
質、およびインスリン増殖因子結合タンパク質−３）に
よってダウンレギュレートされた（図７Ａ）。フェニレ
フリンによってダウンレギュレートされ、そしてＴＳＡ
によってアップレギュレートされた４つの遺伝子は、大
きなτ微小管関連タンパク質、ユビキチンカルボキシル
末端ヒドロラーゼ、Ｔｈｙ−１細胞表面糖タンパク質、
およびＭｙＨＣクラスＩ抗原であった（図７Ｂ）。ノー
ザン分析により、遺伝子チップアレイの発現結果が確認
された（データは示さず）。
み合わせにより発現レベルが変化した少ない数の遺伝子
から、発明者らは、フェニレフリン処理群とＴＳＡ処理
群（フェニレフリン／ＴＳＡおよびＴＳＡ）との間で一
貫して２倍以上の差異を有した７つの遺伝子を同定し
た。３つの遺伝子は、フェニレフリン処理によってアッ
プレギュレートされ、そしてＴＳＡ（シトクロムオキシ
ダーゼサブユニットＶＩＩＩ、マウスＴ複合タンパク
質、およびインスリン増殖因子結合タンパク質−３）に
よってダウンレギュレートされた（図７Ａ）。フェニレ
フリンによってダウンレギュレートされ、そしてＴＳＡ
によってアップレギュレートされた４つの遺伝子は、大
きなτ微小管関連タンパク質、ユビキチンカルボキシル
末端ヒドロラーゼ、Ｔｈｙ−１細胞表面糖タンパク質、
およびＭｙＨＣクラスＩ抗原であった（図７Ｂ）。ノー
ザン分析により、遺伝子チップアレイの発現結果が確認
された（データは示さず）。
【０１５４】本明細書中に開示し、そして請求した全て
の組成物および方法は、本開示を考慮して過度の実験を
行うことなく製造され、そして実行され得る。本発明の
組成物および方法は、好ましい実施形態によって記載し
たが、これら組成物および方法に、ならびに本明細書中
に記載の方法の工程、および工程の順序において、本発
明の概念、精神、および範囲から逸脱することなく、変
更が適用され得ること、は、当業者に明らかである。よ
り詳細には、同じまたは類似の結果が達成されれば、本
明細書中に記載の薬剤の代わりに、化学的および生理学
的に関連する特定の薬剤を用いてもよいことは明らかで
ある。当業者に明らかなこのような類似の全ての置換お
よび改変が、付随の特許請求の範囲によって定義される
ような本発明の精神、範囲および概念内にあるとみなさ
れる。
の組成物および方法は、本開示を考慮して過度の実験を
行うことなく製造され、そして実行され得る。本発明の
組成物および方法は、好ましい実施形態によって記載し
たが、これら組成物および方法に、ならびに本明細書中
に記載の方法の工程、および工程の順序において、本発
明の概念、精神、および範囲から逸脱することなく、変
更が適用され得ること、は、当業者に明らかである。よ
り詳細には、同じまたは類似の結果が達成されれば、本
明細書中に記載の薬剤の代わりに、化学的および生理学
的に関連する特定の薬剤を用いてもよいことは明らかで
ある。当業者に明らかなこのような類似の全ての置換お
よび改変が、付随の特許請求の範囲によって定義される
ような本発明の精神、範囲および概念内にあるとみなさ
れる。
【０１５５】（ＸＩ．参考文献）以下の参考文献は、そ
れらが本明細書の記載を補充して典型的な手順または他
の詳細を提供する程度に、本明細書中に参考として詳細
に援用される：
れらが本明細書の記載を補充して典型的な手順または他
の詳細を提供する程度に、本明細書中に参考として詳細
に援用される：
【０１５６】
【表２】
【０１５７】
【発明の効果】結論として、本発明は、心肥大を処置す
る方法および予防する方法を提供する。クラスＩＩ Ｈ
ＤＡＣ（クロマチン構造および遺伝子発現の調節に関与
することが知られている）が心肥大に対して有益な効果
を有することが示されている。驚くべきことに、本発明
は、ＨＤＡＣインヒビターが、胎児心臓遺伝子発現を阻
害し、そして筋節の構築を妨害することにより、心肥大
を阻害することを実証する。
る方法および予防する方法を提供する。クラスＩＩ Ｈ
ＤＡＣ（クロマチン構造および遺伝子発現の調節に関与
することが知られている）が心肥大に対して有益な効果
を有することが示されている。驚くべきことに、本発明
は、ＨＤＡＣインヒビターが、胎児心臓遺伝子発現を阻
害し、そして筋節の構築を妨害することにより、心肥大
を阻害することを実証する。
【０１５８】
【０１５９】
【表３】
以下の図面は、本明細書の一部をなし、そして本発明の
特定の局面をさらに実証するために含まれる。本発明
は、本明細書中に示した具体的な実施形態の詳細な説明
と合わせて、これらの図面の１つ以上を参照することに
より、より良く理解され得る。
特定の局面をさらに実証するために含まれる。本発明
は、本明細書中に示した具体的な実施形態の詳細な説明
と合わせて、これらの図面の１つ以上を参照することに
より、より良く理解され得る。
【図１】図１Ａ−Ｃ。ＴＳＡは、アゴニスト誘導遺伝子
抑制を変化させる。培養心筋細胞をＰＥ（２０μｍｏｌ
／Ｌ）またはＩＬ−１（１ｎｇ／ｍＬ）で４８時間処理
した。ＴＳＡ（３０ｎｍｏｌ／Ｌ）を、ＰＥまたはＩＬ
−１での処理の３０分前に添加した。筋細胞特異的ｍＲ
ＮＡ発現（ＳＥＲＣＡ２ａ（図１Ａ）、αＭｙＨＣ（図
１Ｂ）、βＭｙＨＣ（図１Ｃ））を、ＲＮａｓｅ保護ア
ッセイによって５μｇ総ＲＮＡにおいてアッセイした。
平均データは、４つの培養物由来であり、ＧＡＰＤＨシ
グナルに対する正規化後のコントロールの％として表
す。
抑制を変化させる。培養心筋細胞をＰＥ（２０μｍｏｌ
／Ｌ）またはＩＬ−１（１ｎｇ／ｍＬ）で４８時間処理
した。ＴＳＡ（３０ｎｍｏｌ／Ｌ）を、ＰＥまたはＩＬ
−１での処理の３０分前に添加した。筋細胞特異的ｍＲ
ＮＡ発現（ＳＥＲＣＡ２ａ（図１Ａ）、αＭｙＨＣ（図
１Ｂ）、βＭｙＨＣ（図１Ｃ））を、ＲＮａｓｅ保護ア
ッセイによって５μｇ総ＲＮＡにおいてアッセイした。
平均データは、４つの培養物由来であり、ＧＡＰＤＨシ
グナルに対する正規化後のコントロールの％として表
す。
【図２】図２Ａ−Ｄ。ＨＤＡＣの過剰発現は、筋特異的
プロモーターを抑制する。培養筋細胞を７２時間、Ｆｌ
ａｇタグ化ＨＤＡＣ１，４，５についての発現ベクター
（約３×１０５細胞当たり２μｇ）（またはそのバック
ボーンベクター）、およびＳＥＲＣＡ遺伝子（図２
Ａ）、αＭｙＨＣ遺伝子（図２Ｂ）、βＭｙＨＣ遺伝子
（図２Ｃおよび２Ｄ）についてのＣＡＴレポーター（５
μｇ）構築物、加えてＳＶ４０駆動分泌アルカリホスフ
ァターゼ（ＳＥＡＰ １μｇ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）でト
ランスフェクトした。ＴＳＡを３０ｎｍｏｌ／Ｌで使用
し、トランスフェクションのちょうど後に添加した。Ｐ
Ｅ２２（２０μｍｏｌ／Ｌ）を２４時間後に添加し、Ｃ
ＡＴアッセイをさらに４８時間後に実施した。平均デー
タは、ｎ＝３の異なる培養物由来であり、培地中のＳＥ
ＡＰ活性に対する正規化後のｐＣＭＶの％として表す。
ＨＤＡＣの過剰発現は、Ｆｌａｇについてのウェスタン
ブロットによって確認した。
プロモーターを抑制する。培養筋細胞を７２時間、Ｆｌ
ａｇタグ化ＨＤＡＣ１，４，５についての発現ベクター
（約３×１０５細胞当たり２μｇ）（またはそのバック
ボーンベクター）、およびＳＥＲＣＡ遺伝子（図２
Ａ）、αＭｙＨＣ遺伝子（図２Ｂ）、βＭｙＨＣ遺伝子
（図２Ｃおよび２Ｄ）についてのＣＡＴレポーター（５
μｇ）構築物、加えてＳＶ４０駆動分泌アルカリホスフ
ァターゼ（ＳＥＡＰ １μｇ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）でト
ランスフェクトした。ＴＳＡを３０ｎｍｏｌ／Ｌで使用
し、トランスフェクションのちょうど後に添加した。Ｐ
Ｅ２２（２０μｍｏｌ／Ｌ）を２４時間後に添加し、Ｃ
ＡＴアッセイをさらに４８時間後に実施した。平均デー
タは、ｎ＝３の異なる培養物由来であり、培地中のＳＥ
ＡＰ活性に対する正規化後のｐＣＭＶの％として表す。
ＨＤＡＣの過剰発現は、Ｆｌａｇについてのウェスタン
ブロットによって確認した。
【図３Ａ】図３Ａ−Ｄ。ＨＤＡＣインヒビターは、細胞
傷害性を生じることなくフェニレフリンによるＡＮＦレ
ポーターの活性化をブロックする。新生児ラット心筋細
胞を、全体で１μｇのマウス３ｋｂ ＡＮＦプロモータ
ーフラグメントおよびＣＭＶ−ＬａｃＺプラスミドで同
時トランスフェクトした。（図３Ａ）ＡＮＦプロモータ
ーは、未刺激心筋細胞において最小限に活性である。Ｈ
ＤＡＣインヒビターの添加は、ＡＮＦプロモーター活性
を誘導しない。フェニレフリン（ｐｈｅｎｙｌｐｈｒｉ
ｎｅ）の添加は、ＡＮＦプロモーターを活性化したが、
フェニレフリンおよびＨＤＡＣインヒビター（ＴＳＡ
（８５ｎＭ）、ＮａＢｕｔ（５ｍＭ）、またはＨＣ毒素
（５ｎｇ／ｍｌ））での心筋細胞の同時処理は、フェニ
レフリン（ｐｈｅｎｙｌｐｈｒｉｎｅ）（１００μＭ）
によるＡＮＦプロモーターの活性化を妨害した。（図３
Ｂ）構成的プロモーターＣＭＶによるＬａｃＺ発現。Ｈ
ＤＡＣインヒビターでの処理は、フェニレフリン同時処
理あり、およびなしでＣＭＶ活性を増強した。（図３Ｃ
および３Ｄ）グラフは、アデニル酸キナーゼ活性の測定
値が、肥大刺激因子ＦＢＳ、ＰＥ、またはＥＴ−１の不
在または存在下での心筋細胞の培養のＸ時間後の培地に
おいて不変であることを示す。
傷害性を生じることなくフェニレフリンによるＡＮＦレ
ポーターの活性化をブロックする。新生児ラット心筋細
胞を、全体で１μｇのマウス３ｋｂ ＡＮＦプロモータ
ーフラグメントおよびＣＭＶ−ＬａｃＺプラスミドで同
時トランスフェクトした。（図３Ａ）ＡＮＦプロモータ
ーは、未刺激心筋細胞において最小限に活性である。Ｈ
ＤＡＣインヒビターの添加は、ＡＮＦプロモーター活性
を誘導しない。フェニレフリン（ｐｈｅｎｙｌｐｈｒｉ
ｎｅ）の添加は、ＡＮＦプロモーターを活性化したが、
フェニレフリンおよびＨＤＡＣインヒビター（ＴＳＡ
（８５ｎＭ）、ＮａＢｕｔ（５ｍＭ）、またはＨＣ毒素
（５ｎｇ／ｍｌ））での心筋細胞の同時処理は、フェニ
レフリン（ｐｈｅｎｙｌｐｈｒｉｎｅ）（１００μＭ）
によるＡＮＦプロモーターの活性化を妨害した。（図３
Ｂ）構成的プロモーターＣＭＶによるＬａｃＺ発現。Ｈ
ＤＡＣインヒビターでの処理は、フェニレフリン同時処
理あり、およびなしでＣＭＶ活性を増強した。（図３Ｃ
および３Ｄ）グラフは、アデニル酸キナーゼ活性の測定
値が、肥大刺激因子ＦＢＳ、ＰＥ、またはＥＴ−１の不
在または存在下での心筋細胞の培養のＸ時間後の培地に
おいて不変であることを示す。
【図３Ｂ】図３Ａ−Ｄ。ＨＤＡＣインヒビターは、細胞
傷害性を生じることなくフェニレフリンによるＡＮＦレ
ポーターの活性化をブロックする。新生児ラット心筋細
胞を、全体で１μｇのマウス３ｋｂ ＡＮＦプロモータ
ーフラグメントおよびＣＭＶ−ＬａｃＺプラスミドで同
時トランスフェクトした。（図３Ａ）ＡＮＦプロモータ
ーは、未刺激心筋細胞において最小限に活性である。Ｈ
ＤＡＣインヒビターの添加は、ＡＮＦプロモーター活性
を誘導しない。フェニレフリン（ｐｈｅｎｙｌｐｈｒｉ
ｎｅ）の添加は、ＡＮＦプロモーターを活性化したが、
フェニレフリンおよびＨＤＡＣインヒビター（ＴＳＡ
（８５ｎＭ）、ＮａＢｕｔ（５ｍＭ）、またはＨＣ毒素
（５ｎｇ／ｍｌ））での心筋細胞の同時処理は、フェニ
レフリン（ｐｈｅｎｙｌｐｈｒｉｎｅ）（１００μＭ）
によるＡＮＦプロモーターの活性化を妨害した。（図３
Ｂ）構成的プロモーターＣＭＶによるＬａｃＺ発現。Ｈ
ＤＡＣインヒビターでの処理は、フェニレフリン同時処
理あり、およびなしでＣＭＶ活性を増強した。（図３Ｃ
および３Ｄ）グラフは、アデニル酸キナーゼ活性の測定
値が、肥大刺激因子ＦＢＳ、ＰＥ、またはＥＴ−１の不
在または存在下での心筋細胞の培養のＸ時間後の培地に
おいて不変であることを示す。
傷害性を生じることなくフェニレフリンによるＡＮＦレ
ポーターの活性化をブロックする。新生児ラット心筋細
胞を、全体で１μｇのマウス３ｋｂ ＡＮＦプロモータ
ーフラグメントおよびＣＭＶ−ＬａｃＺプラスミドで同
時トランスフェクトした。（図３Ａ）ＡＮＦプロモータ
ーは、未刺激心筋細胞において最小限に活性である。Ｈ
ＤＡＣインヒビターの添加は、ＡＮＦプロモーター活性
を誘導しない。フェニレフリン（ｐｈｅｎｙｌｐｈｒｉ
ｎｅ）の添加は、ＡＮＦプロモーターを活性化したが、
フェニレフリンおよびＨＤＡＣインヒビター（ＴＳＡ
（８５ｎＭ）、ＮａＢｕｔ（５ｍＭ）、またはＨＣ毒素
（５ｎｇ／ｍｌ））での心筋細胞の同時処理は、フェニ
レフリン（ｐｈｅｎｙｌｐｈｒｉｎｅ）（１００μＭ）
によるＡＮＦプロモーターの活性化を妨害した。（図３
Ｂ）構成的プロモーターＣＭＶによるＬａｃＺ発現。Ｈ
ＤＡＣインヒビターでの処理は、フェニレフリン同時処
理あり、およびなしでＣＭＶ活性を増強した。（図３Ｃ
および３Ｄ）グラフは、アデニル酸キナーゼ活性の測定
値が、肥大刺激因子ＦＢＳ、ＰＥ、またはＥＴ−１の不
在または存在下での心筋細胞の培養のＸ時間後の培地に
おいて不変であることを示す。
【図３Ｃ】図３Ａ−Ｄ。ＨＤＡＣインヒビターは、細胞
傷害性を生じることなくフェニレフリンによるＡＮＦレ
ポーターの活性化をブロックする。新生児ラット心筋細
胞を、全体で１μｇのマウス３ｋｂ ＡＮＦプロモータ
ーフラグメントおよびＣＭＶ−ＬａｃＺプラスミドで同
時トランスフェクトした。（図３Ａ）ＡＮＦプロモータ
ーは、未刺激心筋細胞において最小限に活性である。Ｈ
ＤＡＣインヒビターの添加は、ＡＮＦプロモーター活性
を誘導しない。フェニレフリン（ｐｈｅｎｙｌｐｈｒｉ
ｎｅ）の添加は、ＡＮＦプロモーターを活性化したが、
フェニレフリンおよびＨＤＡＣインヒビター（ＴＳＡ
（８５ｎＭ）、ＮａＢｕｔ（５ｍＭ）、またはＨＣ毒素
（５ｎｇ／ｍｌ））での心筋細胞の同時処理は、フェニ
レフリン（ｐｈｅｎｙｌｐｈｒｉｎｅ）（１００μＭ）
によるＡＮＦプロモーターの活性化を妨害した。（図３
Ｂ）構成的プロモーターＣＭＶによるＬａｃＺ発現。Ｈ
ＤＡＣインヒビターでの処理は、フェニレフリン同時処
理あり、およびなしでＣＭＶ活性を増強した。（図３Ｃ
および３Ｄ）グラフは、アデニル酸キナーゼ活性の測定
値が、肥大刺激因子ＦＢＳ、ＰＥ、またはＥＴ−１の不
在または存在下での心筋細胞の培養のＸ時間後の培地に
おいて不変であることを示す。
傷害性を生じることなくフェニレフリンによるＡＮＦレ
ポーターの活性化をブロックする。新生児ラット心筋細
胞を、全体で１μｇのマウス３ｋｂ ＡＮＦプロモータ
ーフラグメントおよびＣＭＶ−ＬａｃＺプラスミドで同
時トランスフェクトした。（図３Ａ）ＡＮＦプロモータ
ーは、未刺激心筋細胞において最小限に活性である。Ｈ
ＤＡＣインヒビターの添加は、ＡＮＦプロモーター活性
を誘導しない。フェニレフリン（ｐｈｅｎｙｌｐｈｒｉ
ｎｅ）の添加は、ＡＮＦプロモーターを活性化したが、
フェニレフリンおよびＨＤＡＣインヒビター（ＴＳＡ
（８５ｎＭ）、ＮａＢｕｔ（５ｍＭ）、またはＨＣ毒素
（５ｎｇ／ｍｌ））での心筋細胞の同時処理は、フェニ
レフリン（ｐｈｅｎｙｌｐｈｒｉｎｅ）（１００μＭ）
によるＡＮＦプロモーターの活性化を妨害した。（図３
Ｂ）構成的プロモーターＣＭＶによるＬａｃＺ発現。Ｈ
ＤＡＣインヒビターでの処理は、フェニレフリン同時処
理あり、およびなしでＣＭＶ活性を増強した。（図３Ｃ
および３Ｄ）グラフは、アデニル酸キナーゼ活性の測定
値が、肥大刺激因子ＦＢＳ、ＰＥ、またはＥＴ−１の不
在または存在下での心筋細胞の培養のＸ時間後の培地に
おいて不変であることを示す。
【図３Ｄ】図３Ａ−Ｄ。ＨＤＡＣインヒビターは、細胞
傷害性を生じることなくフェニレフリンによるＡＮＦレ
ポーターの活性化をブロックする。新生児ラット心筋細
胞を、全体で１μｇのマウス３ｋｂ ＡＮＦプロモータ
ーフラグメントおよびＣＭＶ−ＬａｃＺプラスミドで同
時トランスフェクトした。（図３Ａ）ＡＮＦプロモータ
ーは、未刺激心筋細胞において最小限に活性である。Ｈ
ＤＡＣインヒビターの添加は、ＡＮＦプロモーター活性
を誘導しない。フェニレフリン（ｐｈｅｎｙｌｐｈｒｉ
ｎｅ）の添加は、ＡＮＦプロモーターを活性化したが、
フェニレフリンおよびＨＤＡＣインヒビター（ＴＳＡ
（８５ｎＭ）、ＮａＢｕｔ（５ｍＭ）、またはＨＣ毒素
（５ｎｇ／ｍｌ））での心筋細胞の同時処理は、フェニ
レフリン（ｐｈｅｎｙｌｐｈｒｉｎｅ）（１００μＭ）
によるＡＮＦプロモーターの活性化を妨害した。（図３
Ｂ）構成的プロモーターＣＭＶによるＬａｃＺ発現。Ｈ
ＤＡＣインヒビターでの処理は、フェニレフリン同時処
理あり、およびなしでＣＭＶ活性を増強した。（図３Ｃ
および３Ｄ）グラフは、アデニル酸キナーゼ活性の測定
値が、肥大刺激因子ＦＢＳ、ＰＥ、またはＥＴ−１の不
在または存在下での心筋細胞の培養のＸ時間後の培地に
おいて不変であることを示す。
傷害性を生じることなくフェニレフリンによるＡＮＦレ
ポーターの活性化をブロックする。新生児ラット心筋細
胞を、全体で１μｇのマウス３ｋｂ ＡＮＦプロモータ
ーフラグメントおよびＣＭＶ−ＬａｃＺプラスミドで同
時トランスフェクトした。（図３Ａ）ＡＮＦプロモータ
ーは、未刺激心筋細胞において最小限に活性である。Ｈ
ＤＡＣインヒビターの添加は、ＡＮＦプロモーター活性
を誘導しない。フェニレフリン（ｐｈｅｎｙｌｐｈｒｉ
ｎｅ）の添加は、ＡＮＦプロモーターを活性化したが、
フェニレフリンおよびＨＤＡＣインヒビター（ＴＳＡ
（８５ｎＭ）、ＮａＢｕｔ（５ｍＭ）、またはＨＣ毒素
（５ｎｇ／ｍｌ））での心筋細胞の同時処理は、フェニ
レフリン（ｐｈｅｎｙｌｐｈｒｉｎｅ）（１００μＭ）
によるＡＮＦプロモーターの活性化を妨害した。（図３
Ｂ）構成的プロモーターＣＭＶによるＬａｃＺ発現。Ｈ
ＤＡＣインヒビターでの処理は、フェニレフリン同時処
理あり、およびなしでＣＭＶ活性を増強した。（図３Ｃ
および３Ｄ）グラフは、アデニル酸キナーゼ活性の測定
値が、肥大刺激因子ＦＢＳ、ＰＥ、またはＥＴ−１の不
在または存在下での心筋細胞の培養のＸ時間後の培地に
おいて不変であることを示す。
【図４Ａ】図４Ａ−Ｃ。ＨＤＡＣインヒビターは、肥大
アゴニストにより通常誘導される内因性ＡＮＦ発現を妨
害する。（図４Ａ）グラフは、いくつかのドットブロッ
ト実験（ｎ＝４）の要約を示す。トランスフェクション
実験におけるように、フェニレフリン（１００μＭ）
は、ＡＮＦ発現を３倍以上誘導する。ＨＤＡＣインヒビ
ター（ＴＳＡ ８５ｎＭ；酪酸ナトリウム、５ｍＭ；Ｈ
Ｃ毒素５ｎｇ．ｍｌ）での処理は、ＡＮＦメッセージの
蓄積をブロックする。（図４Ｂおよび４Ｃ）グラフは、
肥大刺激因子ＦＢＳ、ＰＥ、またはＥＴ−１と同時培養
する場合のＨＤＡＣインヒビターＴＳＡ（図４Ｂ）およ
び酪酸ナトリウム（図４Ｃ）の濃度の増大に伴う培養培
地におけるＡＮＦの化学発光検出の減少を示す。
アゴニストにより通常誘導される内因性ＡＮＦ発現を妨
害する。（図４Ａ）グラフは、いくつかのドットブロッ
ト実験（ｎ＝４）の要約を示す。トランスフェクション
実験におけるように、フェニレフリン（１００μＭ）
は、ＡＮＦ発現を３倍以上誘導する。ＨＤＡＣインヒビ
ター（ＴＳＡ ８５ｎＭ；酪酸ナトリウム、５ｍＭ；Ｈ
Ｃ毒素５ｎｇ．ｍｌ）での処理は、ＡＮＦメッセージの
蓄積をブロックする。（図４Ｂおよび４Ｃ）グラフは、
肥大刺激因子ＦＢＳ、ＰＥ、またはＥＴ−１と同時培養
する場合のＨＤＡＣインヒビターＴＳＡ（図４Ｂ）およ
び酪酸ナトリウム（図４Ｃ）の濃度の増大に伴う培養培
地におけるＡＮＦの化学発光検出の減少を示す。
【図４Ｂ】図４Ａ−Ｃ。ＨＤＡＣインヒビターは、肥大
アゴニストにより通常誘導される内因性ＡＮＦ発現を妨
害する。（図４Ａ）グラフは、いくつかのドットブロッ
ト実験（ｎ＝４）の要約を示す。トランスフェクション
実験におけるように、フェニレフリン（１００μＭ）
は、ＡＮＦ発現を３倍以上誘導する。ＨＤＡＣインヒビ
ター（ＴＳＡ ８５ｎＭ；酪酸ナトリウム、５ｍＭ；Ｈ
Ｃ毒素５ｎｇ．ｍｌ）での処理は、ＡＮＦメッセージの
蓄積をブロックする。（図４Ｂおよび４Ｃ）グラフは、
肥大刺激因子ＦＢＳ、ＰＥ、またはＥＴ−１と同時培養
する場合のＨＤＡＣインヒビターＴＳＡ（図４Ｂ）およ
び酪酸ナトリウム（図４Ｃ）の濃度の増大に伴う培養培
地におけるＡＮＦの化学発光検出の減少を示す。
アゴニストにより通常誘導される内因性ＡＮＦ発現を妨
害する。（図４Ａ）グラフは、いくつかのドットブロッ
ト実験（ｎ＝４）の要約を示す。トランスフェクション
実験におけるように、フェニレフリン（１００μＭ）
は、ＡＮＦ発現を３倍以上誘導する。ＨＤＡＣインヒビ
ター（ＴＳＡ ８５ｎＭ；酪酸ナトリウム、５ｍＭ；Ｈ
Ｃ毒素５ｎｇ．ｍｌ）での処理は、ＡＮＦメッセージの
蓄積をブロックする。（図４Ｂおよび４Ｃ）グラフは、
肥大刺激因子ＦＢＳ、ＰＥ、またはＥＴ−１と同時培養
する場合のＨＤＡＣインヒビターＴＳＡ（図４Ｂ）およ
び酪酸ナトリウム（図４Ｃ）の濃度の増大に伴う培養培
地におけるＡＮＦの化学発光検出の減少を示す。
【図４Ｃ】図４Ａ−Ｃ。ＨＤＡＣインヒビターは、肥大
アゴニストにより通常誘導される内因性ＡＮＦ発現を妨
害する。（図４Ａ）グラフは、いくつかのドットブロッ
ト実験（ｎ＝４）の要約を示す。トランスフェクション
実験におけるように、フェニレフリン（１００μＭ）
は、ＡＮＦ発現を３倍以上誘導する。ＨＤＡＣインヒビ
ター（ＴＳＡ ８５ｎＭ；酪酸ナトリウム、５ｍＭ；Ｈ
Ｃ毒素５ｎｇ．ｍｌ）での処理は、ＡＮＦメッセージの
蓄積をブロックする。（図４Ｂおよび４Ｃ）グラフは、
肥大刺激因子ＦＢＳ、ＰＥ、またはＥＴ−１と同時培養
する場合のＨＤＡＣインヒビターＴＳＡ（図４Ｂ）およ
び酪酸ナトリウム（図４Ｃ）の濃度の増大に伴う培養培
地におけるＡＮＦの化学発光検出の減少を示す。
アゴニストにより通常誘導される内因性ＡＮＦ発現を妨
害する。（図４Ａ）グラフは、いくつかのドットブロッ
ト実験（ｎ＝４）の要約を示す。トランスフェクション
実験におけるように、フェニレフリン（１００μＭ）
は、ＡＮＦ発現を３倍以上誘導する。ＨＤＡＣインヒビ
ター（ＴＳＡ ８５ｎＭ；酪酸ナトリウム、５ｍＭ；Ｈ
Ｃ毒素５ｎｇ．ｍｌ）での処理は、ＡＮＦメッセージの
蓄積をブロックする。（図４Ｂおよび４Ｃ）グラフは、
肥大刺激因子ＦＢＳ、ＰＥ、またはＥＴ−１と同時培養
する場合のＨＤＡＣインヒビターＴＳＡ（図４Ｂ）およ
び酪酸ナトリウム（図４Ｃ）の濃度の増大に伴う培養培
地におけるＡＮＦの化学発光検出の減少を示す。
【図５】図５Ａ−Ｂ。ＨＤＡＣインヒビターでの心筋細
胞の処理は、心筋細胞肥大と関連した胎児遺伝子プログ
ラムをブロックする。（図５Ａ）グラフは、フェニレフ
リンによるαＳＫ−アクチン発現の倍数変化、およびＴ
ＳＡ処理サンプルにおける遺伝子活性化の欠如を示す。
（図５Ｂ）グラフは、αＭｙＨＣおよびβＭｙＨＣ Ｒ
ＮＡ発現の倍数変化を示す。フェニレフリン処理は、心
筋細胞におけるβＭｙＨＣ発現（胎児遺伝子）の活性化
を誘導する。一方、フェニレフリン単独では、αＭｙＨ
Ｃ遺伝子（成体イソ型）を活性化しない。ＴＳＡでの処
理は、βＭｙＨＣの活性化を妨害するが、αＭｙＨＣの
発現を刺激した。グラフは、３つ以上の独立した実験を
表す。
胞の処理は、心筋細胞肥大と関連した胎児遺伝子プログ
ラムをブロックする。（図５Ａ）グラフは、フェニレフ
リンによるαＳＫ−アクチン発現の倍数変化、およびＴ
ＳＡ処理サンプルにおける遺伝子活性化の欠如を示す。
（図５Ｂ）グラフは、αＭｙＨＣおよびβＭｙＨＣ Ｒ
ＮＡ発現の倍数変化を示す。フェニレフリン処理は、心
筋細胞におけるβＭｙＨＣ発現（胎児遺伝子）の活性化
を誘導する。一方、フェニレフリン単独では、αＭｙＨ
Ｃ遺伝子（成体イソ型）を活性化しない。ＴＳＡでの処
理は、βＭｙＨＣの活性化を妨害するが、αＭｙＨＣの
発現を刺激した。グラフは、３つ以上の独立した実験を
表す。
【図６】図６。筋節の再構築およびタンパク質合成に対
するＴＳＡ処理の効果。心筋細胞におけるＳ６リボソー
ムタンパク質の測定値のグラフは、フェニレフリンおよ
び血清が、心筋細胞におけるタンパク質合成を増大する
ことを示す。ＴＳＡでの心筋細胞の処理は、６時間後に
この増大を変化させない（左側のグラフ）。右側のグラ
フは、ＰＥおよび濃度を増加させたＴＳＡでの、または
血清および濃度を増加させたＴＳＡでの２４時間同時処
理の後の心筋細胞におけるＳ６リボソームタンパク質の
含有量を示す。
するＴＳＡ処理の効果。心筋細胞におけるＳ６リボソー
ムタンパク質の測定値のグラフは、フェニレフリンおよ
び血清が、心筋細胞におけるタンパク質合成を増大する
ことを示す。ＴＳＡでの心筋細胞の処理は、６時間後に
この増大を変化させない（左側のグラフ）。右側のグラ
フは、ＰＥおよび濃度を増加させたＴＳＡでの、または
血清および濃度を増加させたＴＳＡでの２４時間同時処
理の後の心筋細胞におけるＳ６リボソームタンパク質の
含有量を示す。
【図７】図７Ａ−Ｂ。ＴＳＡは、心筋細胞分化に関与す
る遺伝子の活性化を誘導する。（図７Ａ）３つの遺伝子
が、フェニレフリンによりアップレギュレートされ、そ
してＴＳＡによりダウンレギュレートされた。（図７
Ｂ）４つの遺伝子がフェニレフリンにより不活性化さ
れ、そしてＴＳＡにより活性化された（１つのフェニレ
フリンチップ、２つのフェニレフリン／ＴＳＡチップ、
および１つのＴＳＡチップからの結果）。
る遺伝子の活性化を誘導する。（図７Ａ）３つの遺伝子
が、フェニレフリンによりアップレギュレートされ、そ
してＴＳＡによりダウンレギュレートされた。（図７
Ｂ）４つの遺伝子がフェニレフリンにより不活性化さ
れ、そしてＴＳＡにより活性化された（１つのフェニレ
フリンチップ、２つのフェニレフリン／ＴＳＡチップ、
および１つのＴＳＡチップからの結果）。
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フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ａ６１Ｋ 31/336 Ａ６１Ｋ 31/336
31/40 31/40
31/4402 31/4402
31/473 31/473
38/00 45/06
45/06 Ａ６１Ｐ 9/00
Ａ６１Ｐ 9/00 9/04
9/04 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ
Ｇ０１Ｎ 33/15 33/50 Ｚ
33/50 Ａ６１Ｋ 37/02
(71)出願人 502352678
ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシ
ティ オブ コロラド， ア ボディー
コーポレイト
ＴＨＥ ＲＥＧＥＮＴＳ ＯＦ ＴＨＥ
ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＣＯＬＯＲ
ＡＤＯ， Ａ ＢＯＤＹ ＣＯＲＰＯＲＡ
ＴＥ
アメリカ合衆国 コロラド 80309， ボ
ールダー， ３ シス， リージェンツ
アドミニストレイティブ センター 201
201 Ｒｅｇｅｎｔｓ Ａｄｍｉｎｉｓｔ
ｒａｔｉｖｅ Ｃｅｎｔｅｒ， ３ Ｓｙ
ｓ， Ｂｏｕｌｄｅｒ， ＣＯ 80309,
Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａ
ｍｅｒｉｃａ
(72)発明者 エリック エヌ． オルソン
アメリカ合衆国 テキサス 75225， ダ
ラス， サウスウエスタン ブールバード
3219
(72)発明者 ティモシー エイ． マッキンジー
アメリカ合衆国 テキサス 75220， ダ
ラス， クローバー レーン 3884
(72)発明者 マイケル アール． ブリストウ
アメリカ合衆国 コロラド 80110， チ
ェリー ヒルズ ビレッジ， ブラックマ
ー ロード ５
(72)発明者 カーリン ロング
アメリカ合衆国 コロラド 80204， デ
ンバー， ロカスト ストリート 1745
Ｆターム(参考） 2G045 AA40 BA11 BB50 DA36 FB03
4C084 AA17 AA20 MA02 MA52 MA56
MA57 MA60 MA63 NA14 ZA36
4C086 AA01 AA02 BC05 GA02 GA07
MA52 MA56 MA60 MA63 NA14
ZA36
4C206 AA01 AA02 HA01 MA01 MA04
MA72 MA76 MA80 MA83 NA14
ZA36
Claims (50)
- 【請求項１】 病的な心肥大および心不全を処置する方
法であって、該方法は、以下： （ａ）病的な心肥大を有する患者を同定する工程；およ
び（ｂ）該患者にヒストンデアセチラーゼインヒビター
を投与する工程、を包含する、方法。 - 【請求項２】 請求項１に記載の方法であって、ここ
で、前記ヒストンデアセチラーゼインヒビターがトリコ
スタチンＡ、トラポキシンＢ、ＭＳ ２７５−２７、ｍ
−カルボキシ桂皮酸ビス−ヒドロキサミド、デプデシ
ン、オキサムフラチン、アピシジン、スベロイルアニリ
ドヒドロキサム酸、スクリプタイド、ピロキサミド、２
−アミノ−８−オキソ−９，１０−エポキシ−デカノイ
ル、３−（４−アロイル−１ Ｈ−ピロール−２−イ
ル）−Ｎ−ヒドロキシ−２−プロペンアミドおよびＦＲ
９０１２２８からなる群より選択される、方法。 - 【請求項３】 投与する工程が前記ヒストンデアセチラ
ーゼインヒビターの静脈内投与を包含する、請求項１に
記載の方法。 - 【請求項４】 投与する工程が経口投与、経皮投与、徐
放性投与、坐剤投与、または舌下投与を包含する、請求
項１に記載の方法。 - 【請求項５】 前記患者に第二の治療的養生を投与する
工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。 - 【請求項６】 前記第二の治療的養生がβ遮断剤、イオ
ントロープ、利尿剤、ＡＣＥ−Ｉ、ＡＩＩアンタゴニス
ト、およびＣａ＋＋遮断剤からなる群より選択される、
請求項５に記載の方法。 - 【請求項７】 前記第二の治療的養生が前記ヒストンデ
アセチラーゼインヒビターと同時に投与される、請求項
５に記載の方法。 - 【請求項８】 前記第二の治療的養生が前記ヒストンデ
アセチラーゼインヒビターの前または後のいずれかで投
与される、請求項５に記載の方法。 - 【請求項９】 処置が心肥大の１つ以上の症候を改善す
る工程を包含する、請求項１に記載の方法。 - 【請求項１０】 請求項９に記載の方法であって、前記
１つ以上の症候が増加した運動能力、増加した血液駆出
量、左心室末端拡張圧、肺毛細管くさび圧、心拍出量、
心臓インデックス、肺動脈圧、左心室末端収縮寸法およ
び左心室末端拡張寸法、左心室壁ストレスおよび右心室
壁ストレス、壁緊張、生活の質、疾患関連罹患率および
疾患関連死亡率を含む、方法。 - 【請求項１１】 病的な心肥大および心不全を予防する
方法であって、該方法は以下： （ａ）病的な心肥大が発生する危険がある患者を同定す
る工程；および（ｂ）該患者にヒストンデアセチラーゼ
インヒビターを投与する工程、を包含する、方法。 - 【請求項１２】 請求項１１に記載の方法であって、こ
こで、前記ヒストンデアセチラーゼインヒビターがトリ
コスタチンＡ、トラポキシンＢ、ＭＳ ２７５−２７、
ｍ−カルボキシ桂皮酸ビス−ヒドロキサミド、デプデシ
ン、オキサムフラチン、アピシジン、スベロイルアニリ
ドヒドロキサム酸、スクリプタイド、ピロキサミド、２
−アミノ−８−オキソ−９，１０−エポキシ−デカノイ
ル、３−（４−アロイル−１ Ｈ−ピロール−２−イ
ル）−Ｎ−ヒドロキシ−２−プロペンアミドおよびＦＲ
９０１２２８からなる群より選択される、方法。 - 【請求項１３】 投与する工程が前記ヒストンデアセチ
ラーゼインヒビターの静脈内投与を包含する、請求項１
１に記載の方法。 - 【請求項１４】 投与する工程が経口投与、経皮投与、
徐放性投与、坐剤投与、または舌下投与を包含する、請
求項１１に記載の方法。 - 【請求項１５】 危険にさらされている前記患者が長期
の未制御の高血圧、未修復の弁疾患、慢性アンギナおよ
び／または最近の心筋梗塞を含むもののうちの１つ以上
を示し得る、請求項１１に記載の方法。 - 【請求項１６】 心肥大のインヒビターを同定する方法
であって、該方法は、 （ａ）ヒストンデアセチラーゼインヒビターを提供する
工程； （ｂ）該ヒストンデアセチラーゼインヒビターで筋細胞
を処理する工程；および （ｃ）１つ以上の心肥大パラメーターの発現を測定する
工程、を包含し、 ここで、該ヒストンデアセチラーゼインヒビターで処置
されていない筋細胞における１つ以上の心肥大パラメー
ターと比較した、該１つ以上の心肥大パラメーターにお
ける変化が、心肥大のインヒビターとして該ヒストンデ
アセチラーゼインヒビターを同定する、方法。 - 【請求項１７】 前記筋細胞が前記１つ以上の心肥大パ
ラメーターにおける肥大応答を誘発する刺激に供され
る、請求項１６に記載の方法。 - 【請求項１８】 前記刺激が導入遺伝子の発現である、
請求項１７に記載の方法。 - 【請求項１９】 前記刺激が薬物を用いた処置である、
請求項１７に記載の方法。 - 【請求項２０】 もう１つの心肥大パラメーターが前記
筋細胞における１つ以上の標的遺伝子の発現レベルを含
み、ここで該１つ以上の標的遺伝子の発現レベルが心肥
大を示す、請求項１６に記載の方法。 - 【請求項２１】 請求項２０に記載の方法であって、こ
こで、前記１つ以上の標的遺伝子が、ＡＮＦ、α−Ｍｙ
ＨＣ、β−ＭｙＨＣ、α−骨格アクチン、ＳＥＲＣＡ、
シトクロムオキシダーゼサブユニットＶＩＩＩ、マウス
Ｔ−複合体タンパク質、インスリン増殖因子結合タンパ
ク質、τ−微小管結合タンパク質、ユビキチンカルボキ
シル末端ヒドロラーゼ、Ｔｈｙ−１細胞表面糖タンパク
質、またはＭｙＨＣクラスＩ抗原からなる群より選択さ
れる、方法。 - 【請求項２２】 前記発現レベルが標的遺伝子プロモー
ターに作動可能に連結されたレポータータンパク質コー
ド領域を使用して測定される、請求項２０に記載の方
法。 - 【請求項２３】 前記レポータータンパク質がルシフェ
ラーゼ、β−ｇａｌ、または緑色蛍光タンパク質であ
る、請求項２２に記載の方法。 - 【請求項２４】 前記発現レベルが、標的ｍＲＮＡまた
は増幅された核酸産物への核酸プローブのハイブリダー
ゼーションを使用して測定される、請求項２０に記載の
方法。 - 【請求項２５】 前記１つ以上の心肥大パラメーターが
細胞性形態の１つ以上の局面を含む、請求項１６に記載
の方法。 - 【請求項２６】 前記細胞性形態の１つ以上の局面が筋
節アセンブリ、細胞サイズ、または細胞収縮性を含む、
請求項２５に記載の方法。 - 【請求項２７】 前記筋細胞が単離された筋細胞であ
る、請求項１６に記載の方法。 - 【請求項２８】 前記筋細胞が単離されたインタクトな
組織に含まれる、請求項１６の方法。 - 【請求項２９】 前記筋細胞が心筋細胞である、請求項
１６に記載の方法。 - 【請求項３０】 前記心筋細胞がインビボで機能性のイ
ンタクトな心筋に位置する、請求項２９に記載の方法。 - 【請求項３１】 前記機能性のインタクトな心筋が、１
つ以上の心肥大パラメーターにおいて肥大応答を誘発す
る刺激に供される、請求項３０に記載の方法。 - 【請求項３２】 前記刺激が大動脈バンディング、急速
な心臓ペーシング、誘導性心筋梗塞、または導入遺伝子
発現である、請求項３１に記載の方法。 - 【請求項３３】 前記１つ以上の心肥大パラメーターが
右心室駆出率、左心室駆出率、心室壁の厚さ、心臓重量
／体重の比、または心臓重量の標準化測定値を含む、請
求項３１に記載の方法。 - 【請求項３４】 前記１つ以上の心肥大パラメーターが
総タンパク質合成を含む、請求項１６に記載の方法。 - 【請求項３５】 心肥大のインヒビターを同定する方法
であって、該方法は、 （ａ）少なくとも１つのクラスＩヒストンデアセチラー
ゼおよび少なくとも１つのクラスＩＩヒストンデアセチ
ラーゼを提供する工程； （ｂ）候補インヒビター物質と該ヒストンデアセチラー
ゼを接触させる工程；ならびに （ｃ）該ヒストンデアセチラーゼの活性を測定する工
程、を包含し、 ここで、クラスＩＩヒストンデアセチラーゼ活性よりも
大きいクラスＩヒストンデアセチラーゼ活性における減
少が、心肥大のインヒビターとして該候補インヒビター
物質を同定する、方法。 - 【請求項３６】 前記ヒストンデアセチラーゼが全細胞
から精製される、請求項３５に記載の方法。 - 【請求項３７】 前記ヒストンデアセチラーゼがインタ
クトな細胞に位置する、請求項３５に記載の方法。 - 【請求項３８】 前記細胞が筋細胞である、請求項３５
に記載の方法。 - 【請求項３９】 前記筋細胞が心筋細胞である、請求項
３８に記載の方法。 - 【請求項４０】 前記クラスＩヒストンデアセチラーゼ
がＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３、およびＨＤＡ
Ｃ８からなる群より選択される、請求項３５に記載の方
法。 - 【請求項４１】 前記クラスＩＩヒストンデアセチラー
ゼがＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ６、ＨＤＡＣ
７、ＨＤＡＣ９、およびＨＤＡＣ１０からなる群より選
択される、請求項３５に記載の方法。 - 【請求項４２】 １つより多いクラスＩヒストンデアセ
チラーゼの前記活性が測定される、請求項３５に記載の
方法。 - 【請求項４３】 １つより多いクラスＩＩヒストンデア
セチラーゼの前記活性が測定される、請求項３５に記載
の方法。 - 【請求項４４】 １つより多いクラスＩヒストンデアセ
チラーゼの前記活性および１つより多いクラスＩＩヒス
トンデアセチラーゼの該活性が測定される、請求項３５
に記載の方法。 - 【請求項４５】 前記候補インヒビター物質が少なくと
も１つのクラスＩヒストンデアセチラーゼに対して阻害
活性を有し、かつ、少なくとも１つのクラスＩＩヒスト
ンデアセチラーゼに対して活性を有さない、請求項３５
に記載の方法。 - 【請求項４６】 前記候補インヒビター物質が複数のク
ラスＩヒストンデアセチラーゼに対して阻害活性を有
し、かつ、複数のクラスＩＩヒストンデアセチラーゼに
対して活性を有さない、請求項４５に記載の方法。 - 【請求項４７】 前記候補インヒビター物質が、少なく
とも１つのクラスＩＩヒストンデアセチラーゼに対する
その阻害活性より少なくとも２倍より高い少なくとも１
つのクラスＩヒストンデアセチラーゼに対する阻害活性
を有する、請求項３５に記載の方法。 - 【請求項４８】 前記候補インヒビター物質が、少なく
とも１つのクラスＩＩヒストンデアセチラーゼに対する
その阻害活性より少なくとも５倍より高い少なくとも１
つのクラスＩヒストンデアセチラーゼに対する阻害活性
を有する、請求項４７に記載の方法。 - 【請求項４９】 ＨＤＡＣ活性を測定する工程がヒスト
ンからの標識されたアセチル基の放出を測定する工程を
包含する、請求項３５に記載の方法。 - 【請求項５０】 前記アセチル基が放射性標識、蛍光標
識または発色団で標識される、請求項４９に記載の方
法。
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| US7375228B2 (en) * | 2003-03-17 | 2008-05-20 | Takeda San Diego, Inc. | Histone deacetylase inhibitors |
| CA2526423A1 (en) * | 2003-05-21 | 2004-12-29 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Inhibition of protein kinase c-mu (pkd) as a treatment for cardiac hypertrophy and heart failure |
| CN1964714B (zh) * | 2003-08-29 | 2011-09-28 | Hdac默克研究有限责任公司 | 辛二酰苯胺异羟肟酸和吉西他滨在制备用于治疗癌症的药物中的用途 |
| WO2005066151A2 (en) * | 2003-12-19 | 2005-07-21 | Takeda San Diego, Inc. | Histone deacetylase inhibitors |
| US20050159470A1 (en) * | 2003-12-19 | 2005-07-21 | Syrrx, Inc. | Histone deacetylase inhibitors |
| CA2555632A1 (en) * | 2004-02-02 | 2005-08-18 | Myogen, Inc. | Inhibition of protein kinase c-related kinase (prk) as a treatment for cardiac hypertrophy and heart failure |
| US20050197336A1 (en) * | 2004-03-08 | 2005-09-08 | Miikana Therapeutics Corporation | Inhibitors of histone deacetylase |
| US7345043B2 (en) * | 2004-04-01 | 2008-03-18 | Miikana Therapeutics | Inhibitors of histone deacetylase |
| CA2561954A1 (en) * | 2004-04-05 | 2005-10-20 | Myogen, Inc. | Inhibition of nuclear export as a treatment for cardiac hypertrophy and heart failure |
| JP5074921B2 (ja) | 2004-04-07 | 2012-11-14 | アキシオジェネシス エージー | 非侵襲性生体外機能組織検定システム |
| ES2354997T3 (es) | 2004-05-11 | 2011-03-21 | Axiogenesis Ag | Ensayo para el descubrimiento de fármacos basado en células diferenciadas in vitro. |
| FI20040675A0 (fi) * | 2004-05-12 | 2004-05-12 | Orion Corp | Menetelmä sydämen hypertrofian hoitoon ja estoon |
| US20060110390A1 (en) * | 2004-08-25 | 2006-05-25 | Myogen, Inc. | Inhibition of Ku as a treatment for cardiovascular diseases |
| WO2006060382A2 (en) * | 2004-11-30 | 2006-06-08 | Trustees Of The University Of Pennsylvania | Use of hdac and/or dnmt inhibitors for treatment of ischemic injury |
| JP2008524246A (ja) * | 2004-12-16 | 2008-07-10 | タケダ サン ディエゴ インコーポレイテッド | ヒストンデアセチラーゼ阻害剤 |
| US7772245B2 (en) | 2005-02-14 | 2010-08-10 | Miikana Therapeutics, Inc. | Inhibitors of histone deacetylase |
| US20100087328A1 (en) * | 2005-03-01 | 2010-04-08 | The Regents Of The University Of Michigan | Brm expression and related diagnostics |
| US7604939B2 (en) * | 2005-03-01 | 2009-10-20 | The Regents Of The University Of Michigan | Methods of identifying active BRM expression-promoting HDAC inhibitors |
| JP2008540574A (ja) * | 2005-05-11 | 2008-11-20 | タケダ サン ディエゴ インコーポレイテッド | ヒストンデアセチラーゼ阻害剤 |
| WO2007011757A1 (en) * | 2005-07-14 | 2007-01-25 | Myogen, Inc. | Use of inhibitors of the ubiquitin proteasome pathway for increasing contractility of the heart |
| CN101263121A (zh) * | 2005-07-14 | 2008-09-10 | 塔克达圣地亚哥公司 | 组蛋白脱乙酰基酶抑制剂 |
| CN101282718A (zh) * | 2005-08-10 | 2008-10-08 | 诺瓦提斯公司 | 脱乙酰酶抑制剂的使用方法 |
| EP1965824A4 (en) * | 2005-11-18 | 2011-10-19 | Gloucester Pharmaceuticals Inc | METABOLITENE DERIVATIVES OF HDAC INHIBITOR FK228 |
| EP1962888A2 (en) * | 2005-11-18 | 2008-09-03 | Myogen, Inc. | Uses for camkii and hdacs in the treatment of heart conditions |
| US20070207950A1 (en) * | 2005-12-21 | 2007-09-06 | Duke University | Methods and compositions for regulating HDAC6 activity |
| JP2009525955A (ja) * | 2006-01-13 | 2009-07-16 | タケダ サン ディエゴ インコーポレイテッド | ヒストンデアセチラーゼ阻害剤 |
| CA2647359A1 (en) * | 2006-03-29 | 2007-11-08 | Edward Via Virginia College Of Osteopathic Medicine | Tumor cell differentiation agents as chemical inhibitors and treatments for intracellular parasites |
| AU2007234380A1 (en) * | 2006-04-06 | 2007-10-11 | Novartis Ag | Combination of organic compounds |
| EP2010476A4 (en) | 2006-04-13 | 2011-01-26 | Univ Wake Forest Health Sciences | NITROXYL DISPENSERS FROM C-NITROSO COMPOUNDS |
| US20100137239A1 (en) * | 2006-04-24 | 2010-06-03 | Gloucester Pharmaceuticals | Gemcitabine combination therapy |
| WO2007146730A2 (en) | 2006-06-08 | 2007-12-21 | Gloucester Pharmaceuticals | Deacetylase inhibitor therapy |
| CN101801994A (zh) * | 2006-12-29 | 2010-08-11 | 格洛斯特制药公司 | 制备Romidepsin |
| BRPI0720734A2 (pt) * | 2006-12-29 | 2014-01-07 | Gloucester Pharmaceuticals Inc | Preparação da romidepsina |
| WO2008140708A1 (en) * | 2007-05-09 | 2008-11-20 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Use of hdac inhibitors for treatment of cardiac rhythm disorders |
| US7737175B2 (en) * | 2007-06-01 | 2010-06-15 | Duke University | Methods and compositions for regulating HDAC4 activity |
| WO2009048540A1 (en) * | 2007-10-05 | 2009-04-16 | U.S. Department Of Veterans Affairs Office Of General Counsel - Psg Iv (024) | Method and composition for treating heart failure |
| WO2009089598A2 (en) * | 2008-01-18 | 2009-07-23 | Katholieke Universiteit Leuven | Msmb-gene methylation based diagnosis, staging and prognosis of prostate cancer |
| US20100212036A1 (en) * | 2008-09-30 | 2010-08-19 | Olson Eric N | Selective inhibition of histone deacetylases 1 and 2 as a treatment for cardiac hypertrophy |
| WO2011032088A1 (en) | 2009-09-11 | 2011-03-17 | Arca Biopharma, Inc. | Polymorphisms in the pde3a gene |
| US20120190817A2 (en) | 2010-07-12 | 2012-07-26 | Celgene Corporation | Romidepsin solid forms and uses thereof |
| US8859502B2 (en) | 2010-09-13 | 2014-10-14 | Celgene Corporation | Therapy for MLL-rearranged leukemia |
| EP2627316B1 (en) | 2010-10-13 | 2019-03-27 | Medivir AB | Pharmaceutical formulation for histone deacetylase inhibitors |
| AU2013202506B2 (en) | 2012-09-07 | 2015-06-18 | Celgene Corporation | Resistance biomarkers for hdac inhibitors |
| AU2013202507B9 (en) | 2012-11-14 | 2015-08-13 | Celgene Corporation | Inhibition of drug resistant cancer cells |
| NZ630311A (en) | 2013-12-27 | 2016-03-31 | Celgene Corp | Romidepsin formulations and uses thereof |
| TWI808055B (zh) | 2016-05-11 | 2023-07-11 | 美商滬亞生物國際有限公司 | Hdac 抑制劑與 pd-1 抑制劑之組合治療 |
| TWI794171B (zh) | 2016-05-11 | 2023-03-01 | 美商滬亞生物國際有限公司 | Ｈｄａｃ抑制劑與ｐｄ-ｌ１抑制劑之組合治療 |
| CN114980887A (zh) | 2019-12-20 | 2022-08-30 | 特纳亚治疗股份有限公司 | 氟代烷基-噁二唑及其用途 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001014581A2 (en) * | 1999-08-20 | 2001-03-01 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Hdac4 and hdac5 in the regulation of cardiac gene expression |
Family Cites Families (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5534615A (en) * | 1994-04-25 | 1996-07-09 | Genentech, Inc. | Cardiac hypertrophy factor and uses therefor |
| US5968981A (en) * | 1995-07-28 | 1999-10-19 | The Regents Of The University Of California | Retinoid suppression of ventricular muscle cell hypertrophy |
| DE69920247T2 (de) | 1998-10-19 | 2005-09-29 | Methylgene, Inc., Saint-Laurent | Veränderung der dns methyltransferase durch kombinationstherapie |
| JP4269041B2 (ja) | 1999-03-02 | 2009-05-27 | 国立大学法人九州工業大学 | 新規な環状テトラペプチド誘導体とその医薬用途 |
| JP2003500052A (ja) | 1999-05-03 | 2003-01-07 | メチルジーン インコーポレイテッド | ヒストン脱アセチル酵素の抑制 |
| JP2001081031A (ja) | 1999-08-30 | 2001-03-27 | Schering Ag | 溶解性および経口吸収性を改善したベンズアミド誘導体含有製剤 |
| AU7108400A (en) * | 1999-09-03 | 2001-04-10 | Salk Institute For Biological Studies, The | Modulation of gene expression by modulating histone acetylation |
| JP2003508501A (ja) | 1999-09-07 | 2003-03-04 | コンジュケム，インコーポレーテッド | 生物学的結合のための肺送達 |
| EP1212357B1 (en) | 1999-09-08 | 2007-05-02 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Crystal structure of a deacetylase and inhibitors thereof |
| WO2001038322A1 (en) | 1999-11-23 | 2001-05-31 | Methylgene, Inc. | Inhibitors of histone deacetylase |
| ES2260080T3 (es) | 1999-12-08 | 2006-11-01 | Axys Pharmaceuticals, Inc. | Proteinas histono deacetilasa-8, acidos nucleicos y procedimiento de utilizacion. |
| AU2001248701A1 (en) | 2000-03-24 | 2001-10-03 | Methylgene, Inc. | Inhibitors of histone deacetylase |
| AU2001298014A1 (en) | 2000-03-24 | 2003-01-29 | Methylgene, Inc. | Inhibition of specific histone deacetylase isoforms |
| JP2001348340A (ja) | 2000-06-07 | 2001-12-18 | Yamanouchi Pharmaceut Co Ltd | ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤 |
| EP1170008A1 (en) | 2000-07-07 | 2002-01-09 | Chemotherapeutisches Forschungsinstitut Georg-Speyer-Haus | Valproic acid and derivatives thereof as histone deacetylase inhibitors |
| AU2001290131B2 (en) | 2000-09-29 | 2007-11-15 | Topotarget Uk Limited | Carbamic acid compounds comprising a sulfonamide linkage as HDAC inhibitors |
| GB0023983D0 (en) | 2000-09-29 | 2000-11-15 | Prolifix Ltd | Therapeutic compounds |
| EP1598067B1 (en) | 2000-09-29 | 2009-05-06 | TopoTarget UK Limited | Carbamic acid compounds comprising an amide linkage for the treatment of malaria |
| US20020103192A1 (en) | 2000-10-26 | 2002-08-01 | Curtin Michael L. | Inhibitors of histone deacetylase |
| AR035659A1 (es) | 2000-12-07 | 2004-06-23 | Hoffmann La Roche | Hidroxiamidas de acido (1-oxo-1,2,3,4-tetrahidro-naftalen-2-il)-alcanoico, proceso para la manufactura de estos compuestos, composiciones farmaceuticas que contienen dichos compuestos y los usos de los mismos |
| EP1346052A2 (en) | 2000-12-20 | 2003-09-24 | Novartis AG | Histone deacetylase-related gene and protein |
| AR035513A1 (es) | 2000-12-23 | 2004-06-02 | Hoffmann La Roche | Derivados de tetrahidropiridina, proceso para prepararlos, composiciones farmaceuticas que los contienen, y uso de dichos compuestos en la preparacion de medicamentos |
| US6706686B2 (en) * | 2001-09-27 | 2004-03-16 | The Regents Of The University Of Colorado | Inhibition of histone deacetylase as a treatment for cardiac hypertrophy |
-
2002
- 2002-09-26 US US10/256,221 patent/US6706686B2/en not_active Expired - Fee Related
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2004
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-
2005
- 2005-07-26 US US11/190,074 patent/US20060025333A1/en not_active Abandoned
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2009
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Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001014581A2 (en) * | 1999-08-20 | 2001-03-01 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Hdac4 and hdac5 in the regulation of cardiac gene expression |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE287731T1 (de) | 2005-02-15 |
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| US6706686B2 (en) | 2004-03-16 |
| DE60202727D1 (de) | 2005-03-03 |
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