JP2003066035A - 水溶性組織清澄溶液 - Google Patents
水溶性組織清澄溶液Info
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- JP2003066035A JP2003066035A JP2001237278A JP2001237278A JP2003066035A JP 2003066035 A JP2003066035 A JP 2003066035A JP 2001237278 A JP2001237278 A JP 2001237278A JP 2001237278 A JP2001237278 A JP 2001237278A JP 2003066035 A JP2003066035 A JP 2003066035A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 水溶性組織清澄溶液を提供し、これにより生
物組織を完全に透明化し、周知の技術における、更なる
脱水清澄過程を必要とせず、組織を透明とすることがで
きるようにする。 【解決手段】 本発明の水溶性組織清澄溶液は、一つ或
いは複数のジメチルスルホキシド、ジアトリゾエート
酸、エチレンジアミンテトラアセチックアシド、グルカ
ミン、β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホス
フェート、ソジアムジアトリゾエート及びポリオキシア
ルカレンの誘導体を適当な水溶性溶液中に入れ、清澄溶
液を得る。この清澄溶液を利用し生物組織を完全に透明
となす。
物組織を完全に透明化し、周知の技術における、更なる
脱水清澄過程を必要とせず、組織を透明とすることがで
きるようにする。 【解決手段】 本発明の水溶性組織清澄溶液は、一つ或
いは複数のジメチルスルホキシド、ジアトリゾエート
酸、エチレンジアミンテトラアセチックアシド、グルカ
ミン、β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホス
フェート、ソジアムジアトリゾエート及びポリオキシア
ルカレンの誘導体を適当な水溶性溶液中に入れ、清澄溶
液を得る。この清澄溶液を利用し生物組織を完全に透明
となす。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は生物組織分析に用い
られる溶液に係り、特に、生物組織を透明化（ｔｒａｎ
ｓｐａｒｅｎｔ）した水溶性（ａｑｕｅｏｕｓ）清澄溶
液（ｃｌｅａｒｉｎｇ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）の組合せ物
に関する。
られる溶液に係り、特に、生物組織を透明化（ｔｒａｎ
ｓｐａｒｅｎｔ）した水溶性（ａｑｕｅｏｕｓ）清澄溶
液（ｃｌｅａｒｉｎｇ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）の組合せ物
に関する。
【０００２】
【従来の技術】専門に細胞生物、神経生物、分子生物、
生理学、免疫学、信号生物、及び発育生物等の生命科学
領域を研究する時には、生物或いは非生物の平面或いは
立体顕微構造を観察するため、良好な顕微鏡、例えば、
共役焦点レーザー走査顕微鏡を具えて高解析度の画像を
得るほか、特にサンプルの製造、顕微画像の記録及び画
像処理等の要点に注意し、光学を利用し蛍光を発散する
サンプル及び生物の細胞及び組織構造を観察する。その
うち、使用するサンプルを準備する時には、まず処理過
程で、例えば固定（ｆｉｘｅｄ）或いは取り付け（ｍｏ
ｕｎｔｉｎｇ）のステップ上、サンプル全体の三次元構
造の完全性を確認する必要がある。
生理学、免疫学、信号生物、及び発育生物等の生命科学
領域を研究する時には、生物或いは非生物の平面或いは
立体顕微構造を観察するため、良好な顕微鏡、例えば、
共役焦点レーザー走査顕微鏡を具えて高解析度の画像を
得るほか、特にサンプルの製造、顕微画像の記録及び画
像処理等の要点に注意し、光学を利用し蛍光を発散する
サンプル及び生物の細胞及び組織構造を観察する。その
うち、使用するサンプルを準備する時には、まず処理過
程で、例えば固定（ｆｉｘｅｄ）或いは取り付け（ｍｏ
ｕｎｔｉｎｇ）のステップ上、サンプル全体の三次元構
造の完全性を確認する必要がある。
【０００３】一般には、伝統的な透過式の光学顕微鏡
（ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄ
ｌｉｇｈｔ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ）は広く大部分の
生物研究実験に使用され、これにより生物細胞構造を観
察する。生物組織は顕微鏡観察の前に、通常、薄片にス
ライスされ、さらに染色剤で組織切片が染色され、この
染色された組織の内部構造を観察しやすくする。組織の
透明度を増加するため、これらの染色されたサンプルに
準備過程としてまず脱水（ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ）及
び脂抜き（ｌｉｐｉｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ）を行
い、サンプルを清澄とし、例えば、アルコールで脱水
後、キシレン（ｘｙｌｅｎｅ）でパラフィン（ｐａｒａ
ｆｆｉｎ）で清澄し、切片を透明となし、結果として、
染色した内部特徴を明らかにフォーカシング、顕像させ
る。
（ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄ
ｌｉｇｈｔ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ）は広く大部分の
生物研究実験に使用され、これにより生物細胞構造を観
察する。生物組織は顕微鏡観察の前に、通常、薄片にス
ライスされ、さらに染色剤で組織切片が染色され、この
染色された組織の内部構造を観察しやすくする。組織の
透明度を増加するため、これらの染色されたサンプルに
準備過程としてまず脱水（ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ）及
び脂抜き（ｌｉｐｉｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ）を行
い、サンプルを清澄とし、例えば、アルコールで脱水
後、キシレン（ｘｙｌｅｎｅ）でパラフィン（ｐａｒａ
ｆｆｉｎ）で清澄し、切片を透明となし、結果として、
染色した内部特徴を明らかにフォーカシング、顕像させ
る。
【０００４】しかし、溶剤の抽出は多くの処理時間を必
要とし、通信機常々形態（ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ）上の
萎縮と変形（ｄｉｓｔｏｒｔｉｏｎ）及び蛍光染剤の溶
解を形成し、このため状況によってはこの現象の発生を
防止する必要があった。たとえば、結果を快速判断でき
る冷凍切片法（ｃｒｙｏｓｅｃｔｉｏｎｉｎｇｓ）では
通常、組織切片を通常、直接グリセリンを主とする水溶
性固定液中に固定し、脱水、清澄過程が不要であり、こ
れにより組織の精細な形態の破壊を防止する。このほ
か、蛍光顕微鏡観察は蛍光染剤の溶解がその画像明晰度
を下げる。さらに、周知の生物組織顕微観察は、走査、
画像リフォーム過程で、そのリフォーム厚さが僅かに１
００〜２００μｍしか達成できず、その原因は、組織標
本が十分に透明に清澄されていないためである。
要とし、通信機常々形態（ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ）上の
萎縮と変形（ｄｉｓｔｏｒｔｉｏｎ）及び蛍光染剤の溶
解を形成し、このため状況によってはこの現象の発生を
防止する必要があった。たとえば、結果を快速判断でき
る冷凍切片法（ｃｒｙｏｓｅｃｔｉｏｎｉｎｇｓ）では
通常、組織切片を通常、直接グリセリンを主とする水溶
性固定液中に固定し、脱水、清澄過程が不要であり、こ
れにより組織の精細な形態の破壊を防止する。このほ
か、蛍光顕微鏡観察は蛍光染剤の溶解がその画像明晰度
を下げる。さらに、周知の生物組織顕微観察は、走査、
画像リフォーム過程で、そのリフォーム厚さが僅かに１
００〜２００μｍしか達成できず、その原因は、組織標
本が十分に透明に清澄されていないためである。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】これから、本発明は、
一種の水溶性組織清澄溶液（ａｑｕｅｏｕｓ ｃｌｅａ
ｒｉｎｇ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を提供し、それは組織形
態を破壊せず、且つ脱水不要の条件下で、有効に生物組
織を透明化するものとする。図１から図３に示されるよ
うに、それは厚さが５００μｍの完全な昆虫大脳を解剖
顕微鏡下の画像である。そのうち、図１に示されるの
は、昆虫大脳切片が生理食塩水下で正常な不透明を呈す
る状態を表示し、図２は昆虫大脳が８０％グリセリン塩
混合物中で半透明を呈する画像であり、図３は昆虫大脳
が本発明の清澄溶液中で、完全な透明の目的を達する状
態を示す。これにより有効に周知の欠点を克服する。
一種の水溶性組織清澄溶液（ａｑｕｅｏｕｓ ｃｌｅａ
ｒｉｎｇ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を提供し、それは組織形
態を破壊せず、且つ脱水不要の条件下で、有効に生物組
織を透明化するものとする。図１から図３に示されるよ
うに、それは厚さが５００μｍの完全な昆虫大脳を解剖
顕微鏡下の画像である。そのうち、図１に示されるの
は、昆虫大脳切片が生理食塩水下で正常な不透明を呈す
る状態を表示し、図２は昆虫大脳が８０％グリセリン塩
混合物中で半透明を呈する画像であり、図３は昆虫大脳
が本発明の清澄溶液中で、完全な透明の目的を達する状
態を示す。これにより有効に周知の欠点を克服する。
【０００６】即ち、本発明の主要な目的は、一種の水溶
性組織清澄溶液を提供し、これにより生物組織を完全に
透明化し、周知の技術における、更なる脱水清澄過程を
必要とせず、組織を透明とすることにある。
性組織清澄溶液を提供し、これにより生物組織を完全に
透明化し、周知の技術における、更なる脱水清澄過程を
必要とせず、組織を透明とすることにある。
【０００７】本発明のもう一つの目的は、一種の水溶性
組織清澄溶液を提供し、この水溶性組織清澄溶液で処理
後の生物組織の高い解析度の画像を、蛍光及び非蛍光の
光学顕微鏡で得られるようにすることにある。
組織清澄溶液を提供し、この水溶性組織清澄溶液で処理
後の生物組織の高い解析度の画像を、蛍光及び非蛍光の
光学顕微鏡で得られるようにすることにある。
【０００８】本発明のさらにもう一つの目的は切片を破
壊或いは組織の細部形態を破壊しない条件下で、水溶性
組織清澄溶液を利用して生物組織を完全に透明とするこ
とにある。
壊或いは組織の細部形態を破壊しない条件下で、水溶性
組織清澄溶液を利用して生物組織を完全に透明とするこ
とにある。
【０００９】以上の目的を達成するため、本発明の水溶
性組織清澄溶液は、一つ或いは複数のジメチルスルホキ
シド（ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ）、ジア
トリゾエート酸（ｄｉａｔｒｉｚｏａｔｅ ａｃｉ
ｄ）、エチレンジアミンテトラアセチックアシド（ｅｔ
ｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ
ａｃｉｄ）、グルカミン（ｇｌｕｃａｍｉｎｅ）、β−
ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェート
（β−ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ ａｄｅｎｉｎｅｄｉ
ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、ソジア
ムジアトリゾエート（ｓｏｄｉｕｍ ｄｉａｔｒｉｚｏ
ａｔｅ）及びポリオキシアルカレン（ｐｏｌｙｏｘｙａ
ｌｋａｌｅｎｅ）の誘導体を適当な水溶性溶液中に入
れ、清澄溶液を得る。この清澄溶液を利用し生物組織を
完全に透明となす。
性組織清澄溶液は、一つ或いは複数のジメチルスルホキ
シド（ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ）、ジア
トリゾエート酸（ｄｉａｔｒｉｚｏａｔｅ ａｃｉ
ｄ）、エチレンジアミンテトラアセチックアシド（ｅｔ
ｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ
ａｃｉｄ）、グルカミン（ｇｌｕｃａｍｉｎｅ）、β−
ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェート
（β−ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ ａｄｅｎｉｎｅｄｉ
ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、ソジア
ムジアトリゾエート（ｓｏｄｉｕｍ ｄｉａｔｒｉｚｏ
ａｔｅ）及びポリオキシアルカレン（ｐｏｌｙｏｘｙａ
ｌｋａｌｅｎｅ）の誘導体を適当な水溶性溶液中に入
れ、清澄溶液を得る。この清澄溶液を利用し生物組織を
完全に透明となす。
【００１０】
【課題を解決するための手段】請求項１の発明は、生物
組織の透明度を増加するのに用いられる水溶性組織清澄
溶液において、該水溶性組織清澄溶液の組合せ物が、一
つ或いは複数のジメチルスルホキシド、ジアトリゾエー
ト酸、エチレンジアミンテトラアセチックアシド、グル
カミン、β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホ
スフェート、ソジアムジアトリゾエート及びポリオキシ
アルカレンの誘導体を含み、これらを適当な水溶性キャ
リアに入れてなることを特徴とする、水溶性組織清澄溶
液としている。請求項２の発明は、前記生物組織が動物
及び植物細胞を含むことを特徴とする、請求項１に記載
の水溶性組織清澄溶液としている。請求項３の発明は、
前記生物組織が生物器官を含むことを特徴とする、請求
項１に記載の水溶性組織清澄溶液としている。請求項４
の発明は、前記生物組織が生物化合物と生物ドネーショ
ンを含むことを特徴とする、請求項１に記載の水溶性組
織清澄溶液としている。請求項５の発明は、前記水溶性
組織清澄溶液の組合せ物のＰＨ値が５〜１０であること
を特徴とする、請求項１に記載の水溶性組織清澄溶液と
している。請求項６の発明は、前記水溶性組織清澄溶液
が、過量のジアトリゾエート酸ナトリウム及びソジアム
ジアトリゾエートを含むことを特徴とする、請求項１に
記載の水溶性組織清澄溶液としている。請求項７の発明
は、前記水溶性組織清澄溶液が、過量のジメチルスルホ
キシドを含むことを特徴とする、請求項１に記載の水溶
性組織清澄溶液としている。請求項８の発明は、生物組
織透明度増加方法において、生物組織を水溶性組織清澄
溶液で処理後に、清澄且つ透明の生物組織サンプルを得
ることを特徴とする、生物組織透明度増加方法としてい
る。請求項９の発明は、前記サンプルを共役焦点レーザ
ー走査顕微鏡で観察することを特徴とする、請求項８に
記載の生物組織透明度増加方法としている。請求項１０
の発明は、前記サンプルを光学顕微鏡で観察することを
特徴とする、請求項８に記載の生物組織透明度増加方法
としている。請求項１１の発明は、前記サンプルを流量
計数計で観察することを特徴とする、請求項８に記載の
生物組織透明度増加方法としている。請求項１２の発明
は、前記サンプルを人の目或いは解剖顕微鏡で直接観察
することを特徴とする、請求項８に記載の生物組織透明
度増加方法としている。請求項１３の発明は、生物組織
観察方法において、生物組織を水溶性組織清澄溶液で処
理して、清澄で透明な生物組織サンプルを得て、顕微鏡
で該サンプルを観察し、サンプルの内部構造画像を得る
ステップを含む、生物組織観察方法としている。請求項
１４の発明は、前記顕微鏡が共役焦点レーザー走査顕微
鏡とされることを特徴とする、請求項１３に記載の生物
組織観察方法としている。請求項１５の発明は、前記顕
微鏡が光学顕微鏡とされることを特徴とする、請求項１
３に記載の生物組織観察方法としている。請求項１６の
発明は、清澄組合せ物が適当な水溶性のキャリア中に置
かれ、生物組織の透明度を増加するのに用いられること
を特徴とする、水溶性組織清澄溶液としている。請求項
１７の発明は、前記清澄組合せ物が、一つ或いは複数の
ジメチルスルホキシド、ジアトリゾエート酸、エチレン
ジアミンテトラアセチックアシド、グルカミン、β−ニ
コチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェート、ソ
ジアムジアトリゾエート及びポリオキシアルカレンの誘
導体を含むことを特徴とする、請求項１６に記載の水溶
性組織清澄溶液としている。
組織の透明度を増加するのに用いられる水溶性組織清澄
溶液において、該水溶性組織清澄溶液の組合せ物が、一
つ或いは複数のジメチルスルホキシド、ジアトリゾエー
ト酸、エチレンジアミンテトラアセチックアシド、グル
カミン、β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホ
スフェート、ソジアムジアトリゾエート及びポリオキシ
アルカレンの誘導体を含み、これらを適当な水溶性キャ
リアに入れてなることを特徴とする、水溶性組織清澄溶
液としている。請求項２の発明は、前記生物組織が動物
及び植物細胞を含むことを特徴とする、請求項１に記載
の水溶性組織清澄溶液としている。請求項３の発明は、
前記生物組織が生物器官を含むことを特徴とする、請求
項１に記載の水溶性組織清澄溶液としている。請求項４
の発明は、前記生物組織が生物化合物と生物ドネーショ
ンを含むことを特徴とする、請求項１に記載の水溶性組
織清澄溶液としている。請求項５の発明は、前記水溶性
組織清澄溶液の組合せ物のＰＨ値が５〜１０であること
を特徴とする、請求項１に記載の水溶性組織清澄溶液と
している。請求項６の発明は、前記水溶性組織清澄溶液
が、過量のジアトリゾエート酸ナトリウム及びソジアム
ジアトリゾエートを含むことを特徴とする、請求項１に
記載の水溶性組織清澄溶液としている。請求項７の発明
は、前記水溶性組織清澄溶液が、過量のジメチルスルホ
キシドを含むことを特徴とする、請求項１に記載の水溶
性組織清澄溶液としている。請求項８の発明は、生物組
織透明度増加方法において、生物組織を水溶性組織清澄
溶液で処理後に、清澄且つ透明の生物組織サンプルを得
ることを特徴とする、生物組織透明度増加方法としてい
る。請求項９の発明は、前記サンプルを共役焦点レーザ
ー走査顕微鏡で観察することを特徴とする、請求項８に
記載の生物組織透明度増加方法としている。請求項１０
の発明は、前記サンプルを光学顕微鏡で観察することを
特徴とする、請求項８に記載の生物組織透明度増加方法
としている。請求項１１の発明は、前記サンプルを流量
計数計で観察することを特徴とする、請求項８に記載の
生物組織透明度増加方法としている。請求項１２の発明
は、前記サンプルを人の目或いは解剖顕微鏡で直接観察
することを特徴とする、請求項８に記載の生物組織透明
度増加方法としている。請求項１３の発明は、生物組織
観察方法において、生物組織を水溶性組織清澄溶液で処
理して、清澄で透明な生物組織サンプルを得て、顕微鏡
で該サンプルを観察し、サンプルの内部構造画像を得る
ステップを含む、生物組織観察方法としている。請求項
１４の発明は、前記顕微鏡が共役焦点レーザー走査顕微
鏡とされることを特徴とする、請求項１３に記載の生物
組織観察方法としている。請求項１５の発明は、前記顕
微鏡が光学顕微鏡とされることを特徴とする、請求項１
３に記載の生物組織観察方法としている。請求項１６の
発明は、清澄組合せ物が適当な水溶性のキャリア中に置
かれ、生物組織の透明度を増加するのに用いられること
を特徴とする、水溶性組織清澄溶液としている。請求項
１７の発明は、前記清澄組合せ物が、一つ或いは複数の
ジメチルスルホキシド、ジアトリゾエート酸、エチレン
ジアミンテトラアセチックアシド、グルカミン、β−ニ
コチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェート、ソ
ジアムジアトリゾエート及びポリオキシアルカレンの誘
導体を含むことを特徴とする、請求項１６に記載の水溶
性組織清澄溶液としている。
【００１１】
【発明の実施の形態】本発明の水溶性組織清澄溶液は、
一つ或いは複数のジメチルスルホキシド（ｄｉｍｅｔｈ
ｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ）、ジアトリゾエート酸（ｄ
ｉａｔｒｉｚｏａｔｅ ａｃｉｄ）、エチレンジアミン
テトラアセチックアシド（ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉ
ｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）、グルカミン
（ｇｌｕｃａｍｉｎｅ）、β−ニコチンアミドアデニン
ジヌクレオチドホスフェート（β−ｎｉｃｏｔｉｎａｍ
ｉｄｅ ａｄｅｎｉｎｅ ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐ
ｈｏｓｐｈａｔｅ）、ソジアムジアトリゾエート（ｓｏ
ｄｉｕｍ ｄｉａｔｒｉｚｏａｔｅ）及びポリオキシア
ルカレン（ｐｏｌｙｏｘｙａｌｋａｌｅｎｅ）の誘導体
（商標名はＴｗｅｅｎ ２０であり、乳化剤及び洗剤と
される）、並びに上述の全ての成分を適当な水溶性溶液
中に入れ、清澄溶液を得る。且つこの清澄溶液のＰＨ値
は５〜１０の範囲内である。
一つ或いは複数のジメチルスルホキシド（ｄｉｍｅｔｈ
ｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ）、ジアトリゾエート酸（ｄ
ｉａｔｒｉｚｏａｔｅ ａｃｉｄ）、エチレンジアミン
テトラアセチックアシド（ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉ
ｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）、グルカミン
（ｇｌｕｃａｍｉｎｅ）、β−ニコチンアミドアデニン
ジヌクレオチドホスフェート（β−ｎｉｃｏｔｉｎａｍ
ｉｄｅ ａｄｅｎｉｎｅ ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐ
ｈｏｓｐｈａｔｅ）、ソジアムジアトリゾエート（ｓｏ
ｄｉｕｍ ｄｉａｔｒｉｚｏａｔｅ）及びポリオキシア
ルカレン（ｐｏｌｙｏｘｙａｌｋａｌｅｎｅ）の誘導体
（商標名はＴｗｅｅｎ ２０であり、乳化剤及び洗剤と
される）、並びに上述の全ての成分を適当な水溶性溶液
中に入れ、清澄溶液を得る。且つこの清澄溶液のＰＨ値
は５〜１０の範囲内である。
【００１２】上述の生物組織は動物及び植物細胞、生物
器官、生物化合物及び生物ドネーション等の生物構造と
される。
器官、生物化合物及び生物ドネーション等の生物構造と
される。
【００１３】周知の固定法（ｆｉｘａｔｉｏｎ）によ
り、生物組織を直接本発明の清澄溶液中に浸し、ある潜
伏期が過ぎた後に、良好な透明度（ｔｒａｎｓｐａｒｅ
ｎｃｙ）を有する生物組織を得る。特定の内部構造を観
察する場合は、抗体蛍光染色剤（ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏ
ｒｅｓｃｅｎｃｅ）或いは伝統的な染色剤（ｃｌａｓｓ
ｉｃａｌ ｄｙｅｓ）で染色し、前述の各成分組成の溶
液を利用することにより良好な透明度を得られ、並びに
標定の目標により、染色された構造が十分に良好な画像
及び比較的高い検出感光度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）
を発生する。これにより、光学観察方法（ｏｐｔｉｃａ
ｌ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ）、例えば、
共役焦点顕微鏡（ｃｏｎｆｏｃａｌ ｍｉｃｒｏｓｃｏ
ｐｙ）、蛍光顕微鏡（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｍｉ
ｃｒｏｓｃｏｐｙ）、伝統的な透過式光学顕微鏡（ｌｉ
ｇｈｔ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ）、解剖顕微鏡（ｄｓｓ
ｅｃｔｉｎｇ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ）、流量計数計
（ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ）、分光光度計（ｆｌ
ｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｐｌａｔｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏ
ｎ）及び蛍光チップ検出（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ
ｃｈｉｐ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ）等の方法の応用期間内
に、本発明の水溶性組織清澄溶液の形成する透明度を利
用し、蛍光及び非蛍光細胞構造の観測力及び信号検出能
力を高めることができる。共益焦点顕微鏡は、蛍光標定
の厚片サンプルの焦点外（ｏｕｔ ｏｆｆｏｃｕｓ）背
景蛍光ノイズを除去し、並びに目標物体のＸ、Ｙ、Ｚ軸
の座標を記録し、走査及び分析して３次元空間の立体画
像となす。一般に生物組織は厚さが１００ミクロンで、
ほぼ５〜１０個の細胞厚さであり、通常、蛍光の励起及
び検出を妨害して信号の減弱をもたらす。一方で、一般
に使用される連続したアルコール脱水及びメチル基サリ
チル酸塩浸透の清澄法は、常々、標定の蛍光物が拡散を
発生する。このため、本発明の清澄溶液中のこの蛍光標
定の組織の清澄（ｃｌｅａｒｉｎｇ）及び埋込み（ｅｍ
ｂｅｄｄｉｎｇ）は、大幅にこのような問題を克服す
る。例えば、８０％のグリセリン−塩混合物中に埋込む
時、昆虫触覚葉（ａｎｔｅｎｎａｌ ｌｏｂｅ）内の神
経嗅覚小球はただ共役焦点レーザー走査顕微鏡で表面下
１００ミクロンまでしか観察できない。これは図４に示
されるとおりである。これに対して、このサンプルを本
発明の清澄溶液中で清澄し且つ埋め込む時、表面下２０
０ミクロンの内部構造まで明らかに観察できる。これは
図５に示されるとおりである。さらに、標定生物組織内
構造の親油脂性蛍光染剤、例えば、図４、５でも使用さ
れた、全ての細胞膜染色に使用されるＮＢＤ−セラミド
（ＮＢＤ−ｃｅｒａｍｉｄｅ）は、徐々にグリセリン−
塩混合物中に溶解するが、本発明の清澄溶液中には溶解
しない。以下にいくつかの実施例により本発明を具体的
に説明する。しかし、本発明の請求範囲は以下の実施例
により限定されるわけではない。
り、生物組織を直接本発明の清澄溶液中に浸し、ある潜
伏期が過ぎた後に、良好な透明度（ｔｒａｎｓｐａｒｅ
ｎｃｙ）を有する生物組織を得る。特定の内部構造を観
察する場合は、抗体蛍光染色剤（ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏ
ｒｅｓｃｅｎｃｅ）或いは伝統的な染色剤（ｃｌａｓｓ
ｉｃａｌ ｄｙｅｓ）で染色し、前述の各成分組成の溶
液を利用することにより良好な透明度を得られ、並びに
標定の目標により、染色された構造が十分に良好な画像
及び比較的高い検出感光度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）
を発生する。これにより、光学観察方法（ｏｐｔｉｃａ
ｌ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ）、例えば、
共役焦点顕微鏡（ｃｏｎｆｏｃａｌ ｍｉｃｒｏｓｃｏ
ｐｙ）、蛍光顕微鏡（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｍｉ
ｃｒｏｓｃｏｐｙ）、伝統的な透過式光学顕微鏡（ｌｉ
ｇｈｔ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ）、解剖顕微鏡（ｄｓｓ
ｅｃｔｉｎｇ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ）、流量計数計
（ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ）、分光光度計（ｆｌ
ｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｐｌａｔｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏ
ｎ）及び蛍光チップ検出（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ
ｃｈｉｐ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ）等の方法の応用期間内
に、本発明の水溶性組織清澄溶液の形成する透明度を利
用し、蛍光及び非蛍光細胞構造の観測力及び信号検出能
力を高めることができる。共益焦点顕微鏡は、蛍光標定
の厚片サンプルの焦点外（ｏｕｔ ｏｆｆｏｃｕｓ）背
景蛍光ノイズを除去し、並びに目標物体のＸ、Ｙ、Ｚ軸
の座標を記録し、走査及び分析して３次元空間の立体画
像となす。一般に生物組織は厚さが１００ミクロンで、
ほぼ５〜１０個の細胞厚さであり、通常、蛍光の励起及
び検出を妨害して信号の減弱をもたらす。一方で、一般
に使用される連続したアルコール脱水及びメチル基サリ
チル酸塩浸透の清澄法は、常々、標定の蛍光物が拡散を
発生する。このため、本発明の清澄溶液中のこの蛍光標
定の組織の清澄（ｃｌｅａｒｉｎｇ）及び埋込み（ｅｍ
ｂｅｄｄｉｎｇ）は、大幅にこのような問題を克服す
る。例えば、８０％のグリセリン−塩混合物中に埋込む
時、昆虫触覚葉（ａｎｔｅｎｎａｌ ｌｏｂｅ）内の神
経嗅覚小球はただ共役焦点レーザー走査顕微鏡で表面下
１００ミクロンまでしか観察できない。これは図４に示
されるとおりである。これに対して、このサンプルを本
発明の清澄溶液中で清澄し且つ埋め込む時、表面下２０
０ミクロンの内部構造まで明らかに観察できる。これは
図５に示されるとおりである。さらに、標定生物組織内
構造の親油脂性蛍光染剤、例えば、図４、５でも使用さ
れた、全ての細胞膜染色に使用されるＮＢＤ−セラミド
（ＮＢＤ−ｃｅｒａｍｉｄｅ）は、徐々にグリセリン−
塩混合物中に溶解するが、本発明の清澄溶液中には溶解
しない。以下にいくつかの実施例により本発明を具体的
に説明する。しかし、本発明の請求範囲は以下の実施例
により限定されるわけではない。
【００１４】
【実施例】実施例１：蛍光プローブを利用して厚片組織
顕微画像を表示する。ゴキブリ（Ｄｉｐｌｏｐｔｅｒ
ｐｕｎｃｔａｒａ）の昆虫大脳を、厚さ５００ミクロン
を検証の実例とする。まず、大脳内のニューロピル（ｎ
ｅｕｒｏｐｉｌ）構造及びニューロラルソマタ（ｎｅｕ
ｒｏｎａｌ ｓｏｍａｔａ）を親油脂細胞膜プローブＮ
ＢＤＣ6 −セラミド及びＤＮＡプローブプロピジアムイ
オダイド（ｐｒｏｐｉｄｉｕｍｕ ｉｏｄｉｄｅ）の染
色剤で蛍光染色する。４％のパラホルマルデハイド（ｐ
ａｒａｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ）溶液中で適当に固定
し、大脳内の神経核（ｎｕｃｌｅｉ）は５０μｇ／ｍｌ
のＲＮａｓｅで消化し、並びに生理食塩水（ｐｈｏｓｐ
ｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ；ＰＢＳ）
で調合した２０μｇ／ｍｌのプロピジアムイオダイド
（ｐｒｏｐｉｄｉｕｍｕ ｉｏｄｉｄｅ）で染色標定す
る。続いて、生理食塩水で簡単に洗浄した後、細胞膜を
ジメチルスルホン酸）に０．４５３ｍＭのＮＢＤ Ｃ6
−セラミドで染色する。さらに、該大脳組織を直接本発
明の清澄溶液中に一時間浸し、完全に透明とする。サン
プルがガラス片で押圧されるのを防止するため、サンプ
ルは高度６００μｍのスペーサリング中に置き、その
後、共役焦点レーザー走査顕微鏡で成像する。全体の大
脳内の蛍光構造は直接伝統的な蛍光顕微鏡で観察する
か、或いは共役焦点レーザー走査顕微鏡で顕微立体画像
を形成する。図６は全ての内部ニューロピルを含む三次
元空間のゴキブリ大脳顕微画像であり、それは１６８共
役焦点レーザー走査光学断面のコンピュータ分割画像を
リフォームして形成したものであり、仮に大脳組織にレ
ーザー透過（ｌａｓｅｒ ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ）と
蛍光検出のために十分な透明度がないと、顕微成像はあ
いまいとなるか成像不能となる。全体の標定組織を清澄
し透明とするほか、本発明の清澄溶液はまた冷凍切片及
び振動切片の組織切片中に応用される。
顕微画像を表示する。ゴキブリ（Ｄｉｐｌｏｐｔｅｒ
ｐｕｎｃｔａｒａ）の昆虫大脳を、厚さ５００ミクロン
を検証の実例とする。まず、大脳内のニューロピル（ｎ
ｅｕｒｏｐｉｌ）構造及びニューロラルソマタ（ｎｅｕ
ｒｏｎａｌ ｓｏｍａｔａ）を親油脂細胞膜プローブＮ
ＢＤＣ6 −セラミド及びＤＮＡプローブプロピジアムイ
オダイド（ｐｒｏｐｉｄｉｕｍｕ ｉｏｄｉｄｅ）の染
色剤で蛍光染色する。４％のパラホルマルデハイド（ｐ
ａｒａｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ）溶液中で適当に固定
し、大脳内の神経核（ｎｕｃｌｅｉ）は５０μｇ／ｍｌ
のＲＮａｓｅで消化し、並びに生理食塩水（ｐｈｏｓｐ
ｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ；ＰＢＳ）
で調合した２０μｇ／ｍｌのプロピジアムイオダイド
（ｐｒｏｐｉｄｉｕｍｕ ｉｏｄｉｄｅ）で染色標定す
る。続いて、生理食塩水で簡単に洗浄した後、細胞膜を
ジメチルスルホン酸）に０．４５３ｍＭのＮＢＤ Ｃ6
−セラミドで染色する。さらに、該大脳組織を直接本発
明の清澄溶液中に一時間浸し、完全に透明とする。サン
プルがガラス片で押圧されるのを防止するため、サンプ
ルは高度６００μｍのスペーサリング中に置き、その
後、共役焦点レーザー走査顕微鏡で成像する。全体の大
脳内の蛍光構造は直接伝統的な蛍光顕微鏡で観察する
か、或いは共役焦点レーザー走査顕微鏡で顕微立体画像
を形成する。図６は全ての内部ニューロピルを含む三次
元空間のゴキブリ大脳顕微画像であり、それは１６８共
役焦点レーザー走査光学断面のコンピュータ分割画像を
リフォームして形成したものであり、仮に大脳組織にレ
ーザー透過（ｌａｓｅｒ ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ）と
蛍光検出のために十分な透明度がないと、顕微成像はあ
いまいとなるか成像不能となる。全体の標定組織を清澄
し透明とするほか、本発明の清澄溶液はまた冷凍切片及
び振動切片の組織切片中に応用される。
【００１５】実施例２：非蛍光染料を利用し厚片組織顕
微画像を表示する。一種のコオロギ（Ａｃｈｅｔａ ｄ
ｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）の大脳を検証の実例とする。ま
ず、その大脳を４％のパラホルマルデハイドの生理食塩
水中に入れて２時間かけて冷凍固定し、その後、さら冷
たい生理食塩水で、毎回１０分間かけて三回洗浄する。
この大脳組織を４℃の１％トリトンＸ−１００（Ｔｒｉ
ｔｏｎ Ｘ−１００）を含む生理食塩水中に１６時間浸
漬し、それを完全に浸透させる。さらに生理食塩水で洗
浄した後、ＮＡＤＰＨ−ジアホラーゼ（ＮＡＤＰＨ−ｄ
ｉａｈｏｒａｓｅ）の触媒酵素活性は、該組織を２７℃
下で、１％のトリトンＸ−１００（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−
１００）、１ｍＭのβ−ＮＡＤＰＨ及び０．５ｍＭのＮ
ＢＴの１００μｌの三塩酸（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，５０ｍ
Ｍ，ＰＨ＝７．４）中で２時間作用させる。この化学反
応が青色沈殿物をＮＡＤＰＨ−ジアホラーゼの部分に発
生し、さらに１％のトリトンＸ−１００の三塩酸緩衝液
を利用し連続７２時間組織を洗浄し、厚さが６００μｍ
を越える全体の大脳を直接本発明の清澄溶液中で１時間
作用させ、それを完全に透明となす。大脳サンプルが蓋
で圧迫されるのを防止するため、サンプルは同じ清澄溶
液のスペーサリング中に置き、その後、解剖顕微鏡で組
織を観察し並びに撮影するか、或いはＺｅｉｓｓ Ａｘ
ｉｐｈｏｔ光学顕微鏡で観察する。図７に示されるのは
ＮＡＤＰＨ−ジアホラーゼの高酵素活性が発生した沈殿
部分の蕈状体に表現された状態を示す。この大脳は本発
明の清澄溶液で透明化されているためその内部の蕈状体
が明らかに分かる。本発明の清澄溶液はその他の非蛍光
染料表示の組織切片中、例えば冷凍切片及び振動切片に
応用可能である。
微画像を表示する。一種のコオロギ（Ａｃｈｅｔａ ｄ
ｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）の大脳を検証の実例とする。ま
ず、その大脳を４％のパラホルマルデハイドの生理食塩
水中に入れて２時間かけて冷凍固定し、その後、さら冷
たい生理食塩水で、毎回１０分間かけて三回洗浄する。
この大脳組織を４℃の１％トリトンＸ−１００（Ｔｒｉ
ｔｏｎ Ｘ−１００）を含む生理食塩水中に１６時間浸
漬し、それを完全に浸透させる。さらに生理食塩水で洗
浄した後、ＮＡＤＰＨ−ジアホラーゼ（ＮＡＤＰＨ−ｄ
ｉａｈｏｒａｓｅ）の触媒酵素活性は、該組織を２７℃
下で、１％のトリトンＸ−１００（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−
１００）、１ｍＭのβ−ＮＡＤＰＨ及び０．５ｍＭのＮ
ＢＴの１００μｌの三塩酸（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，５０ｍ
Ｍ，ＰＨ＝７．４）中で２時間作用させる。この化学反
応が青色沈殿物をＮＡＤＰＨ−ジアホラーゼの部分に発
生し、さらに１％のトリトンＸ−１００の三塩酸緩衝液
を利用し連続７２時間組織を洗浄し、厚さが６００μｍ
を越える全体の大脳を直接本発明の清澄溶液中で１時間
作用させ、それを完全に透明となす。大脳サンプルが蓋
で圧迫されるのを防止するため、サンプルは同じ清澄溶
液のスペーサリング中に置き、その後、解剖顕微鏡で組
織を観察し並びに撮影するか、或いはＺｅｉｓｓ Ａｘ
ｉｐｈｏｔ光学顕微鏡で観察する。図７に示されるのは
ＮＡＤＰＨ−ジアホラーゼの高酵素活性が発生した沈殿
部分の蕈状体に表現された状態を示す。この大脳は本発
明の清澄溶液で透明化されているためその内部の蕈状体
が明らかに分かる。本発明の清澄溶液はその他の非蛍光
染料表示の組織切片中、例えば冷凍切片及び振動切片に
応用可能である。
【００１６】実施例３：蛍光或いは非蛍光プローブを利
用して単細胞顕微画像を表示する。スライド上に固定し
た単細胞に対して直接本発明の清澄溶液で清澄及び埋め
込みを行う。この清澄溶液の水溶性特性はその抗体蛍光
染色或いは蛍光染料表示のサンプルを許容する。図８に
示されるのは人体繊維組織母細胞の高解析共役焦点レー
ザー走査顕微鏡による顕微画像であり、高透明度の単細
胞が、有効に顕微画像の解析度と画像検出の効率を高
め、且つ細胞透明度の増進により、蛍光刺激効率及び蛍
光発射検出感光度も相対的に高くなり、このため、蛍光
標定のサンプルの焦点外背景蛍光ノイズが有効に除去さ
れ、これにより画像の明晰度が高くなる。この方法は有
効に自発性蛍光の組織、例えば、緑色蛍光を帯びた蛋白
の突然変異体（ｍｕｔａｎｔｓ）或いは植物組織の観察
に応用される。図９を参照されたい。それは直径が１０
０μｍの花粉粒（ｐｏｌｌｅｎ ｇｒａｉｎ）の三次元
空間顕微リフォーム画像であり、それは５μｍの深さギ
ャップを以て得られる多共役焦点光学断面をリフォーム
形成した表面形態である。
用して単細胞顕微画像を表示する。スライド上に固定し
た単細胞に対して直接本発明の清澄溶液で清澄及び埋め
込みを行う。この清澄溶液の水溶性特性はその抗体蛍光
染色或いは蛍光染料表示のサンプルを許容する。図８に
示されるのは人体繊維組織母細胞の高解析共役焦点レー
ザー走査顕微鏡による顕微画像であり、高透明度の単細
胞が、有効に顕微画像の解析度と画像検出の効率を高
め、且つ細胞透明度の増進により、蛍光刺激効率及び蛍
光発射検出感光度も相対的に高くなり、このため、蛍光
標定のサンプルの焦点外背景蛍光ノイズが有効に除去さ
れ、これにより画像の明晰度が高くなる。この方法は有
効に自発性蛍光の組織、例えば、緑色蛍光を帯びた蛋白
の突然変異体（ｍｕｔａｎｔｓ）或いは植物組織の観察
に応用される。図９を参照されたい。それは直径が１０
０μｍの花粉粒（ｐｏｌｌｅｎ ｇｒａｉｎ）の三次元
空間顕微リフォーム画像であり、それは５μｍの深さギ
ャップを以て得られる多共役焦点光学断面をリフォーム
形成した表面形態である。
【００１７】以上の実施例は本発明の技術思想及び特徴
を説明するためのものであり、その目的は本発明の属す
る技術の分野における通常の知識を有する者が本発明の
内容を十分に理解しそれに基づいて実施ができるように
することにあり、本発明の請求範囲を限定することはな
く、本発明に基づきなしうる細部の修飾或いは改変は、
いずれも本発明の請求範囲に属するものとする。
を説明するためのものであり、その目的は本発明の属す
る技術の分野における通常の知識を有する者が本発明の
内容を十分に理解しそれに基づいて実施ができるように
することにあり、本発明の請求範囲を限定することはな
く、本発明に基づきなしうる細部の修飾或いは改変は、
いずれも本発明の請求範囲に属するものとする。
【００１８】
【発明の効果】本発明の提供する水溶性組織清澄溶液
は、生物組織を完全に透明化し、周知の技術における、
更なる脱水清澄過程を必要とせず、組織を透明とする。
は、生物組織を完全に透明化し、周知の技術における、
更なる脱水清澄過程を必要とせず、組織を透明とする。
【００１９】本発明の提供する水溶性組織清澄溶液は、
この水溶性組織清澄溶液で処理後の生物組織の高い解析
度の画像を、蛍光及び非蛍光の光学顕微鏡で得られるよ
うにする。
この水溶性組織清澄溶液で処理後の生物組織の高い解析
度の画像を、蛍光及び非蛍光の光学顕微鏡で得られるよ
うにする。
【００２０】本発明の水溶性組織清澄溶液は、切片を破
壊或いは組織の細部形態を破壊しない条件下で、生物組
織を完全に透明とする。
壊或いは組織の細部形態を破壊しない条件下で、生物組
織を完全に透明とする。
【図１】昆虫大脳切片が周知の生理食塩水下で正常な不
透明を呈する状態表示図である。
透明を呈する状態表示図である。
【図２】昆虫大脳が周知の８０％グリセリン塩混合物中
で半透明を呈する状態表示図である。
で半透明を呈する状態表示図である。
【図３】昆虫大脳が本発明の清澄溶液中で、完全な透明
の目的を達する状態表示図である。
の目的を達する状態表示図である。
【図４】周知の技術による昆虫触覚葉内の神経嗅覚小球
サンプルを共役焦点レーザー走査顕微鏡で表面下２００
μｍまで観察し、且つ５０μｍ毎の顕微画像連続図であ
り、その明晰度は僅かに約１００μｍである。
サンプルを共役焦点レーザー走査顕微鏡で表面下２００
μｍまで観察し、且つ５０μｍ毎の顕微画像連続図であ
り、その明晰度は僅かに約１００μｍである。
【図５】図４と同じサンプルを本発明の清澄溶液で清澄
且つ埋め込み、表面下２００μｍの内部構造を明らかに
観察した顕微画像である。
且つ埋め込み、表面下２００μｍの内部構造を明らかに
観察した顕微画像である。
【図６】ゴキブリ大脳の共役焦点レーザー走査顕微画像
の三次元空間リフォーム図である。
の三次元空間リフォーム図である。
【図７】ゴキブリ大脳を本発明の清澄溶液を利用して透
明とした後に、一般の透過式光学顕微鏡で観察した、そ
の内部のマッシュルーム状形態の顕微画像である。
明とした後に、一般の透過式光学顕微鏡で観察した、そ
の内部のマッシュルーム状形態の顕微画像である。
【図８】人体繊維組織母細胞の高解析共役焦点レーザー
走査顕微鏡による顕微画像である。
走査顕微鏡による顕微画像である。
【図９】直径１００μｍの花粉粒の共役焦点レーザー走
査三次元空間顕微リフォーム画像であり、各個の構造か
ら表面の距離は色勾配表示されている。
査三次元空間顕微リフォーム画像であり、各個の構造か
ら表面の距離は色勾配表示されている。
Claims (17)
- 【請求項１】 生物組織の透明度を増加するのに用いら
れる水溶性組織清澄溶液において、該水溶性組織清澄溶
液の組合せ物が、一つ或いは複数のジメチルスルホキシ
ド、ジアトリゾエート酸、エチレンジアミンテトラアセ
チックアシド、グルカミン、β−ニコチンアミドアデニ
ンジヌクレオチドホスフェート、ソジアムジアトリゾエ
ート及びポリオキシアルカレンの誘導体を含み、これら
を適当な水溶性キャリアに入れてなることを特徴とす
る、水溶性組織清澄溶液。 - 【請求項２】 前記生物組織が動物及び植物細胞を含む
ことを特徴とする、請求項１に記載の水溶性組織清澄溶
液。 - 【請求項３】 前記生物組織が生物器官を含むことを特
徴とする、請求項１に記載の水溶性組織清澄溶液。 - 【請求項４】 前記生物組織が生物化合物と生物ドネー
ションを含むことを特徴とする、請求項１に記載の水溶
性組織清澄溶液。 - 【請求項５】 前記水溶性組織清澄溶液の組合せ物のＰ
Ｈ値が５〜１０であることを特徴とする、請求項１に記
載の水溶性組織清澄溶液。 - 【請求項６】 前記水溶性組織清澄溶液が、過量のジア
トリゾエート酸ナトリウム及びソジアムジアトリゾエー
トを含むことを特徴とする、請求項１に記載の水溶性組
織清澄溶液。 - 【請求項７】 前記水溶性組織清澄溶液が、過量のジメ
チルスルホキシドを含むことを特徴とする、請求項１に
記載の水溶性組織清澄溶液。 - 【請求項８】 生物組織透明度増加方法において、生物
組織を水溶性組織清澄溶液で処理後に、清澄且つ透明の
生物組織サンプルを得ることを特徴とする、生物組織透
明度増加方法。 - 【請求項９】 前記サンプルを共役焦点レーザー走査顕
微鏡で観察することを特徴とする、請求項８に記載の生
物組織透明度増加方法。 - 【請求項１０】 前記サンプルを光学顕微鏡で観察する
ことを特徴とする、請求項８に記載の生物組織透明度増
加方法。 - 【請求項１１】 前記サンプルを流量計数計で観察する
ことを特徴とする、請求項８に記載の生物組織透明度増
加方法。 - 【請求項１２】 前記サンプルを人の目或いは解剖顕微
鏡で直接観察することを特徴とする、請求項８に記載の
生物組織透明度増加方法。 - 【請求項１３】 生物組織観察方法において、生物組織
を水溶性組織清澄溶液で処理して、清澄で透明な生物組
織サンプルを得て、顕微鏡で該サンプルを観察し、サン
プルの内部構造画像を得るステップを含む、生物組織観
察方法。 - 【請求項１４】 前記顕微鏡が共役焦点レーザー走査顕
微鏡とされることを特徴とする、請求項１３に記載の生
物組織観察方法。 - 【請求項１５】 前記顕微鏡が光学顕微鏡とされること
を特徴とする、請求項１３に記載の生物組織観察方法。 - 【請求項１６】 清澄組合せ物が適当な水溶性のキャリ
ア中に置かれ、生物組織の透明度を増加するのに用いら
れることを特徴とする、水溶性組織清澄溶液。 - 【請求項１７】 前記清澄組合せ物が、一つ或いは複数
のジメチルスルホキシド、ジアトリゾエート酸、エチレ
ンジアミンテトラアセチックアシド、グルカミン、β−
ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェート、
ソジアムジアトリゾエート及びポリオキシアルカレンの
誘導体を含むことを特徴とする、請求項１６に記載の水
溶性組織清澄溶液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001237278A JP2003066035A (ja) | 2001-08-06 | 2001-08-06 | 水溶性組織清澄溶液 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001237278A JP2003066035A (ja) | 2001-08-06 | 2001-08-06 | 水溶性組織清澄溶液 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003066035A true JP2003066035A (ja) | 2003-03-05 |
Family
ID=19068386
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001237278A Pending JP2003066035A (ja) | 2001-08-06 | 2001-08-06 | 水溶性組織清澄溶液 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2003066035A (ja) |
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-
2001
- 2001-08-06 JP JP2001237278A patent/JP2003066035A/ja active Pending
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