JP2003012697A - Ｐｅｇイミデート類およびそれらの蛋白質誘導体 - Google Patents

Ｐｅｇイミデート類およびそれらの蛋白質誘導体

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JP2003012697A JP2002151245A JP2002151245A JP2003012697A JP 2003012697 A JP2003012697 A JP 2003012697A JP 2002151245 A JP2002151245 A JP 2002151245A JP 2002151245 A JP2002151245 A JP 2002151245A JP 2003012697 A JP2003012697 A JP 2003012697A
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Abstract

(57)【要約】 【構成】 本発明は、ＰＥＧのイミデート誘導体か、或
は関連した水溶性有機ポリマー類を用いて、遊離アミノ
基（類）を有する蛋白質、ペプチド類および有機化合物
を修飾するための方法および化合物を提供するものであ
る。ＰＥＧの新規イミデート誘導体および他の水溶性ポ
リマー類を提供する。本主題発明の水溶性ポリマー改質
剤には、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリ
コール、ポリオキシエチル化ポリオール、ヘパリン、ヘ
パリンフラグメント、デキストラン、ポリサッカライド
類、ポリアミノ酸、ポリビニルアルコールが含まれ、そ
して他の水溶性有機ポリマー類も含まれる。 【効果】 ＰＥＧ−イミデート類の利点は、蛋白質が有
するアミノ酸基と反応させた時、この得られる誘導体が
正電荷を保持すると共に、水溶性ポリマーのバックボー
ンから正電荷を取り除くことである。水溶性ポリマーの
イミデート類から誘導された興味の持たれるポリペプチ
ド類も提供する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の分野】本発明は、末端イミデート（imidate）
基で修飾した水溶性ポリマー類、および上記分子で修飾
したポリペプチド分子に関する。
【０００２】
【従来技術】蛋白質および他の同様な有機分子は、ポリ
エチレングリコール（ＰＥＧ）の如き水溶性有機ポリマ
ーに連結させることによって化学的に修飾され得る。上
記蛋白質接合体の製造は、該水溶性ポリマー類を取り付
けることで所望の特性をポリペプチド類に与えることが
可能なため、興味の持たれるものである。これらの所望
特性には、水溶液中の上昇した溶解性、貯蔵中の増大し
た安定性、減少した免疫原性、酵素分解に対する上昇し
た耐性、幅広い種類の薬物投与系との適合性、および上
昇したインビボ半減期が含まれる。ＰＥＧもしくは他の
水溶液ポリマー類を用いたポリペプチド類の誘導化によ
ってもたらされる上記特性は、このポリペプチドを体に
注入する治療剤として用いる時、或はこのポリペプチド
を、興味の持たれている化合物の検出および／または定
量アッセイ、通常免疫アッセイで用いる時、特に興味が
持たれている。
【０００３】蛋白質に対する、レポーター基、リガンド
などの付着は、通常、リジン残基側鎖上の第一級アミノ
基を通して進行する。リジン残基に特異的に連成するい
くつかのＰＥＧ誘導体が合成された。典型的には、ＰＥ
Ｇのヒドロキシル末端基を、興味の持たれている蛋白質
にＰＥＧを共有結合的に付着させることの可能な反応性
官能基に変換する。これらのＰＥＧ誘導体には、２（ア
ルコキシポリエチレングリコキシ）−４，６−ジクロロ
トリアジン〔Abuchowski, A.、 Van Es, T.、 Palczuk,
N.C.およびDavis, F.F. (1977) J. Biol. Chem. 252、 3
578-3581〕；２−（アルコキシポリエチレングリコキ
シ）−Ｓ−カルボキサミドメチルジチオカーボネート
〔King, T.P.およびWeiner, C. (1980) Int. J. Peptid
e Protein Res. 16、 147-155〕；２−（アルコキシポリ
エチレングリコキシ）−Ｎ−スクシニミジルスクシネー
ト〔Abuchowski, A.、 Kazo, G.M.、 Verhoest, C.、 Van
Es, T.、 Kafkewitz, D.、 Viau, A.およびDavis, F. (19
84) Cancer Biochem. Biophys.7、 175-186〕；２−（ア
ルコキシポリエチレングリコキシカルボキシイミダゾー
ル〔Beauchamp, C.O.、 Gonias, S.L.、 Menapace, D.P.
およびPizzo, S.V. (1983) Anal. Biochem. 131、 25-3
3〕；２−（アルコキシポリエチレングリコキシ）−
２，４，５−トリクロロベンゼン〔Versonese, F.M.、 L
argajolli, R.、 Boccu, E.、 Benassi, C.A.およびSchia
von, O. (1985) Applied Biochem. Biotech11、 141-15
2〕；２−（アルコキシポリエチレングリコキシ）−４
−ニトロベンゼン〔Versonese, F.M.、 Largajolli, R.、
Boccu, E.、 Benassi, C.A.およびSchiavon, O. (1985)
Applied Biochem. Biotech 11、 141-152〕；２−（ア
ルコキシポリエチレングリコキシ）−２，２，２−トリ
フルオロエタン〔Delgado, C.、Patel, J.N.、 Francis,
G.E.およびFisher, D. (1990) Biotech. Applied Bioch
em. 12、 119-128〕；２−（アルコキシポリエチレンア
ルデヒド〔Andrews, B.A.、 Head, D.M.、 Dunthrone, P.
およびAsenjo, J.A. (1990) Biotech. Tech. 4、49-5
4〕；２−アルコキシポリエチレングリコキシメチルエ
ポキシド〔Andrews,B.A.、 Head, D.M.、 Dunthrone, P.
およびAsenjo, J.A. (1990) Biotech. Tech.4、 49-54〕
が含まれる。
【０００４】蛋白質の修飾でしばしばアルキルのイミデ
ート類が用いられてきた。〔論評に関しては、Hunter,
M.J.およびLudwig, M.L. (1972) Methods Enzymol. 25、
585-596参照のこと〕。アルキルイミデート類は、特異
的に、アルファおよびイプシロンアミノ基と反応して、
親アミン類よりも強い塩基であるアミジン類を生じる。
この元の蛋白質アミノ基が有する正電荷は保持される
が、この正電荷は数原子だけシフトする。種々の官能基
（フェニル、フェノール系、スルフヒドリル、蛍光、疎
水性、放射標識、スピン標識、光親和性標識など）をイ
ミドエステル類に取り付けることが可能であり、そして
このようにして、これらを蛋白質の中に導入することが
可能である。活性エステル連成もしくは活性カルバメー
ト連成よりもイミドエステルが有利であることは、修飾
すべきリジン基の正電荷が保持されることにある。
【０００５】蛋白質に水溶性ポリマー、特にポリエチレ
ングリコールを連成させることの利点は、充分に示され
ており、そしてこれらの利点には下記のものが含まれ
る。未変性の蛋白質が生理学的ｐＨで不溶であるか或は
部分的にのみ可溶な場合、この生理学的ｐＨで該連成蛋
白質が示す溶解性は未変性蛋白質の溶解性よりも高いこ
と、未変性蛋白質が示す免疫応答を低下させること、薬
学的速度プロファイルが上昇すること、半減期が上昇す
ること、そして生物学的半減期が上昇すること。
【０００６】数多くの蛋白質がＰＥＧで修飾されてき
た。〔論評に関しては、Inada, Y.、 Yoshimoto, T.、 Ma
tsushima, A.およびSaito, Y. (1986) Trends Biotechn
ol. 4:68-73参照のこと〕。以下に挙げるように、この
分野に関する数多くの特許出願も、発行されるか、或は
公開されてきた：米国特許番号4,179,337; 米国特許番
号4,609,546; 米国特許番号4,261,973; 米国特許番号4,
055,635; 米国特許番号3,960,830; 米国特許番号4,415,
665; 米国特許番号4,412,989; 米国特許番号4,002,531;
米国特許番号4,414,147; 米国特許番号3,788,948; 米
国特許番号4,732,863; 米国特許番号4,745,180; EP番号
152,847；1984年1月11日発行のEP番号98,110；JP番号5,
792,435。上記特許および特許公開もまた、他の水溶性
ポリマー蛋白質改質剤の使用を開示しており、そしてこ
れらには、これに限定されるものではないが、ポリプロ
ピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリオキシエチル化ポリ
オール（ＰＯＰ）、ヘパリン、ヘパリンフラグメント、
デキストラン、ポリサッカライド類、プロリンを含むポ
リアミノ酸、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、および
他の水溶性有機ポリマー類が含まれる。
【０００７】水溶性ポリマー類にポリペプチド類を連結
させること、そしてこれらのポリペプチド類を修飾する
度合、に関していくつかの制限が存在している。
【０００８】異なる水溶性ポリマー試薬は、興味の持た
れているポリペプチド類中のアミノ酸残基に連成させる
ための官能基に対して変化する。これ以後用いる言葉
「水溶性ポリマー試薬」は、水溶性ポリマーをポリペプ
チドに連結させるための官能基を持たせるように修飾し
た水溶性ポリマー類を表す。特定の官能基は、水溶性ポ
リマーが特定のアミノ酸残基に連成し得るようにする。
公知の水溶性ポリマー試薬を用いたのでは修飾を受けな
いアミノ酸残基に連成し得る水溶性ポリマー試薬を提供
することは、興味の持たれるものである。以前には連成
させることができなかったアミノ酸残基に連成し得る水
溶性ポリマー試薬を提供することにより、他のアミノ酸
残基の連成では悪影響を受ける蛋白質の生物学的活性に
本質的な悪影響を与えることなく、水溶性ポリマー類を
蛋白質に連成させることが可能になる。
【０００９】水溶性ポリマー類を連成させることによる
ポリペプチド類の修飾に対するもう１つの制限は、連成
反応によって引き起こされる電荷の変化である。アミノ
酸残基に関して、電荷を有していない残基に電荷を導入
するか、或はその逆によって電荷を変化させると、いく
つかの機構によって、蛋白質の生物学的活性が悪影響を
受ける可能性があるが、これらの機構には、三次構造の
崩壊および活性部位の破壊が含まれる。上記電荷の変化
は累加的であるため、電荷を変化させる連成反応は、該
ポリペプチドの機能を本質的に悪化させることのない可
能な誘導化の度合を制限し得る、ことも明らかである。
従って、残基上に存在している電荷を変化させることな
くアミノ酸残基に連成し得る水溶性ポリマー試薬を提供
することも、興味の持たれるものである。
【００１０】
【発明の要約】本発明は、ＰＥＧのイミデート誘導体
か、或は構造的に関連した水溶性有機ポリマー類のイミ
デート誘導体を用いて、遊離アミノ基（類）を有する蛋
白質、ペプチド類および有機化合物を修飾するための方
法および化合物を提供するものである。ＰＥＧの新規イ
ミデート誘導体および他の水溶性ポリマー類を提供す
る。個々のポリペプチド類または同様な有機分子に、１
個以上の水溶性ポリマーイミデートエステル類を連成さ
せることができる。本主題発明の別の観点は、該イミデ
ート水溶性ポリマー誘導体を共有結合的に付着させるこ
とによって修飾した蛋白質を提供することにある。
【００１１】イミデート水溶性ポリマー誘導体の利点
は、蛋白質のアミノ基と反応した時、この得られる蛋白
質誘導体が正電荷を保持していることである。イミデー
ト連成はまた、該水溶性ポリマーバックボーンから正電
荷を取り除き、これによって、この正電荷が、レセプ
タ、標的蛋白質もしくはリガンドとの結合部に近付き易
くなる。従って、水溶性ポリマーイミデート誘導体によ
る蛋白質の修飾により、Ｎ−ヒドロキシスクシニミドエ
ステル類、シアヌール酸クロライドおよび活性カルバメ
ート類の如き連成剤を用いた、通常に使用されているＰ
ＥＧ改質剤で見られるような、正電荷の損失が回避され
得る。
【００１２】本主題発明の水溶性ポリマー試薬には、ポ
リエチレングリコールのホモポリマー類、ポリプロピレ
ングリコールのホモポリマー類、エチレングリコールと
プロピレングリコールとのコポリマー類、のイミデート
類が含まれ、ここで、上記ホモポリマー類およびコポリ
マー類の、１つの末端は、未置換であるか、或はアルキ
ル基、ポリオキシエチル化ポリオール類、ポリビニルア
ルコール、ポリサッカライド類、ポリビニルエチルエー
テル類、およびα，β−ポリ〔（２−ヒドロキシエチ
ル）−ＤＬ−アスパルタミド〕、並びに他の水溶性有機
ポリマー類で置換されている。
【００１３】本主題の水溶性ポリマーイミデート類を用
いた水溶性ポリマー誘導化で興味の持たれているポリペ
プチド類には、ホルモン類、リンフォカイン類、サイト
カイン類、成長因子、酵素、ワクチン抗原、および抗体
が含まれる。エリトロポイエチン（ＥＰＯ）、特にヒト
エリトロポイエチンの水溶性ポリマー誘導体が特に興味
の持たれるものである。
【００１４】本発明の別の観点は、水溶性ポリマーのト
レシル（tresyl）およびスクシニミドエステル類を用い
て誘導したＥＰＯである。
【００１５】
【好適な具体例の説明】本主題発明は、水溶性ポリマー
類、例えばＰＥＧ、即ちポリエチレングリコールなどの
イミデート誘導体である新規ポリペプチド改質剤を提供
するものである。本主題発明の分子は、興味の持たれて
いるポリペプチドに種々の水溶性ポリマー類を共有結合
的に付着させるために用いられ得る。本主題発明の別の
観点は、該試薬分子、即ち主題の水溶性ポリマーイミデ
ート類によって１種以上の水溶性ポリペプチド類に共有
結合し得るように修飾された、ポリペプチド類を提供す
ることにある。
【００１６】一般に、水溶性ポリマー類をポリペプチド
類に連成させるに有効な化合物の式は下記の如くであ
る： （Ｉ）
【００１７】
【化１】 および（ＩＩ）
【００１８】
【化２】 Ｐは、水溶性有機ポリマーを表す。興味の持たれる水溶
性有機ポリマー類は、ポリマーバックボーンに付いてい
るヒドロキシ基を有しており、そしてこれらは公知の水
溶性ポリマー類から選択され、これらには、これに限定
されるものではないが、（ａ）デキストラン、並びに硫
酸デキストラン、Ｐ−アミノ架橋させたデキストリン、
およびカルボキシメチルデキストリンを含むデキストラ
ン誘導体、（ｂ）セルロース、並びにメチルセルロース
およびカルボキシメチルセルロースを含むセルロース誘
導体、（ｃ）澱粉およびデキストリン類、並びに澱粉の
誘導体および加水分解物、（ｄ）ポリエチレングリコー
ル、メトキシポリエチレングリコール、ポリエチレング
リコールのホモポリマー類、ポリプロピレングリコール
のホモポリマー類、エチレングリコールとプロピレング
リコールとのコポリマー類〔ここで、上記ホモポリマー
類およびコポリマー類の、１つの末端は、アルキル基で
置換されているか或は未置換である〕を含むポリアルキ
レングリコールおよびそれらの誘導体、（ｅ）ヘパリン
およびヘパリンのフラグメント、（ｆ）ポリビニルアル
コールおよびポリビニルエチルエーテル類、（ｇ）ポリ
ビニルピロリドン、（ｈ）α，β−ポリ〔（２−ヒドロ
キシエチル）−ＤＬ−アスパルタミド、および（ｉ）ポ
リオキシエチル化ポリオール類が含まれる。好適には、
この水溶性ポリマーＰは、デキストランおよびデキスト
ラン誘導体、デキストリンおよびデキストリン誘導体、
ポリエチレングリコールおよびそれらの誘導体から選択
される。最も好適には、この水溶性ポリマーＰは、ポリ
エチレングリコールおよびそれらの誘導体から選択さ
れ、そしてポリエチレングリコールのモノメチルエーテ
ルが特に好適である（蛋白質間の架橋を回避する目的
で）。本主題発明の水溶性ポリマー試薬で修飾したポリ
ペプチド類を薬剤として用いる場合、ポリマーＰは無毒
であるべきである。
【００１９】式ＩＩにおいて、ｍは約１〜２０の範囲で
あり、１〜１０の範囲が特に好適である。
【００２０】式Ｉを有する分子に加えて、本主題発明は
また、式ＩおよびＩＩを有する分子との反応で修飾され
たポリペプチド類を包含している。
【００２１】式（Ｉ）および（ＩＩ）の水溶性ポリマー
試薬で修飾したポリペプチド類は、それぞれ、式（ＩＩ
Ｉ）および（ＩＶ） （ＩＩＩ）
【００２２】
【化３】 および（ＩＶ）
【００２３】
【化４】 〔式中、Ｐは、上述した如き水溶性ポリマーである〕で
表すことができる。Ｚは、上述した如きポリペプチドを
表し、そしてこれは、少なくとも１個の第一級アミン含
有残基を含んでおり、そしてｎは、１〜ｘの範囲の数を
表し、ここで、ｘは、ポリペプチドＺ中に存在している
リジン残基の数よりも１大きい。式ＩＶにおいて、ｍは
約１〜２０の範囲であり、１〜１０の範囲が特に好適で
ある。リジン残基のイプシロンアミノ基および／または
ポリペプチド上の末端アミノ基に、水溶性ポリマーＰ
を、連成部位で共有結合的に連結させる。ポリペプチド
分子１個当たりｘ個に及ぶ水溶性ポリマー類を連成させ
ることによってポリペプチド類を修飾してもよいが、通
常、与えられたポリペプチドをｘ個未満の水溶性ポリマ
ー分子で改質することが望ましい。最大数の水溶性ポリ
マー類、即ちｘ個の分子でポリペプチドの誘導化を行う
のは望ましくない、と言うのは、ポリペプチド１分子当
たりの水溶性ポリマー類の数を増大させると、その未修
飾ポリペプチドが有する生物学的活性が低下する可能性
があるからである。
【００２４】本主題発明の重要な利点は、ポリペプチド
の生物学的活性が本質的に低下しないか、或はこの生物
学的活性の低下度合を、本主題発明のイミドエステル以
外の化合物を用い同じ水溶性ポリマーをリジン残基に付
着させることによる生物学的活性低下度合よりも低く抑
えながら、ポリペプチド類を修飾することが可能な点で
ある。
【００２５】この言葉「生物学的活性」には、酵素活
性、レセプタ（抗体を含む）への結合能力、リガンドに
結合する能力、免疫応答を誘発する能力などが含まれ
る。
【００２６】この言葉「抗体」は、天然の免疫グロブリ
ン配列を有するポリクローナルおよびモノクローナル両
方の抗体、合成抗体誘導体などを包含することを意図し
たものであり、そして、種々の標識、蛍光、放射能、酵
素、ビオチン／アビジンなどのいずれかに結合させるよ
うに抗体を修飾してもよい。合成抗体誘導体には、天然
の免疫グロブリン配列であるが、変異を受けさせた後、
変化した結合特異性に関して選択したもの、種々の免疫
グロブリン遺伝子由来ポリペプチド類、遺伝的に修飾し
た細菌が産生する典型的な一本鎖、修飾された一定領域
を含むように修飾された抗体などが含まれ、そして抗体
形成の原理を基とした上記合成抗体誘導体に関する論評
が、WinterおよびMilstein、 Nature、 349: 293-299 (19
91)に示されている。
【００２７】本主題発明の利点は、式（Ｉ）および（Ｉ
Ｉ）の化合物で修飾したポリペプチド類が、他のエステ
ル類を用いて水溶性ポリマー類をポリペプチド類に結合
させることによって同じポリペプチドを同じ度合にまで
修飾した時よりも高い度合で、それらの生物学的活性を
維持し得る点である。このような利点は、該イミドエス
テル類で修飾したリジン残基上に正電荷が保持されてい
ると共に、該可溶ポリマーバックボーンから正電荷が取
り除かれたことの結果である。従って、本主題発明は、
この修飾に関連した生物学的活性損失を最小限にしなが
ら、水溶性ポリマー類を連結させることに伴う利点を有
する改質ポリペプチド類を提供することである。その結
果として、水溶性ポリマー類を用いて低い度合の誘導化
を行ったポリペプチド類と同じレベルの生物学的活性を
有していると共に、水溶性ポリマー類を用いた高度の誘
導化を行うことで、このより高い度合の誘導化に関連し
た利点を有している、ポリペプチド類を作り出すことが
可能になる。
【００２８】水溶性ポリマー類を蛋白質に連成させるた
めの他の方法、例えば活性を示すカルバメート類の使用
に比べた時の、本主題発明が有する追加的利点は、上記
活性エステル類は、第一級アミン類以外の求核物質、例
えば蛋白質上のヒドロキシル基、フェノール系基、およ
びスルフヒドリル基などと反応することにある。本主題
発明で、選択的に該イミデート類がリジン残基の第一級
アミノ基と反応する点で、上記交差反応性に関する問題
を回避することが可能である。
【００２９】該ポリマーＰは、種々の量の、多数の同一
単位を含んでいるため、Ｐの分子量がかなり変化し得る
ことは理解されるであろう。更に、Ｐが一定の分子量を
有すると述べられている場合、この分子量はおおよそで
あり、そしてこれは、この分子中に存在しているサブユ
ニットの数に関して互いに異なる分子Ｐの集団が有する
平均分子量を反映している。一般に、Ｐの分子量は約２
００〜２００，０００であり、好適には７００〜３０，
０００の範囲である。Ｐに関する適切な分子量は、式
（Ｉ）および（ＩＩ）の分子をポリペプチドに連成させ
る場合、改質すべき特定の蛋白質に従って変化する。
【００３０】本主題発明の水溶性ポリマー試薬を用い
て、ＮＨ2末端アミノ酸上に、そしてポリペプチド内の
リジン残基が有するイプシロンアミン上に、第一級アミ
ンを含んでいる種々のポリペプチド類もしくは同様な分
子を修飾することができる。興味の持たれるポリペプチ
ド類には、モノクローナルおよびポリクローナル抗体；
Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦを含むサイトカイン類；リン
フォカイン類、ＩＬ−２、ＩＬ−３、成長因子（ＰＤＧ
Ｆ、ＥＧＦを含む）；ｈＧＨ、エリトロポイエチンを含
むペプチドホルモン類；ファクターＶＩＩＩを含む血液
凝固因子；免疫原；酵素；酵素阻害因子；リガンドなど
が含まれる。興味の持たれるポリペプチド類は、それら
の天然源または遺伝工学細胞から単離されるか、或は種
々のインビトロ合成方法で作り出されてもよい。
【００３１】本主題発明の水溶性ポリマー試薬を用いて
大部分のポリペプチドを修飾することが可能であるが、
（１）薬剤として用いるためのポリペプチド類、および
（２）アッセイで用いるためのポリペプチド類、を修飾
することが特に興味の持たれるものである。アッセイで
用いるためのポリペプチドには、特異的に結合する蛋白
質、特異的に結合する蛋白質によって認識されるポリペ
プチド類、並びに酵素が含まれる。特異的に結合する蛋
白質は、抗体、ホルモンレセプタ、レクチン類などを意
図している。
【００３２】式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物に関する
異なる具体例との反応によって、１種以上の異なる水溶
性ポリマーを用いた個々のポリペプチド分子の誘導化を
行ってもよい。ｎ個以下の水溶性ポリマー〔ここで、ｎ
は、ポリペプチド上の遊離第一級アミンの数であり、そ
してこの第一級アミンは、リジンおよびアミノ末端から
のものである〕で個々のポリペプチド類を修飾してもよ
い。
【００３３】ここに記述する巨大分子のいずれか、例え
ばポリペプチド類、水溶性ポリマー類およびそれらの誘
導体、の塩類は、種々のｐＨの水溶液中に上記分子が存
在している（またはそれから単離される）時、自然と存
在している。ペプチド類および指示した生物学的活性を
示す他の巨大分子全ての塩類は、本発明の範囲内に入る
と考えられる。その例には、カルボン酸残基のアルカ
リ、アルカリ土類および他の金属の塩類、アミノ残基の
酸（例えばＨＣｌ）付加塩、並びに同一分子内のカルボ
ン酸とアミノ残基との反応によって生じる両性イオンが
含まれる。
【００３４】キットの形態で式（Ｉ）および（ＩＩ）の
水溶性ポリマー試薬を供給し、その結果として、興味の
持たれているポリペプチド類の便利で再現性を示す誘導
化を提供する、こともまた興味の持たれるものである。
興味の持たれるキットには、式（Ｉ）および（ＩＩ）の
水溶性ポリマー試薬、緩衝液、反応指示化合物、説明
書、例えばBradfordアッセイなどのための蛋白質濃度測
定試薬、が入っている溶液が備わっていてもよい。好適
には、予め測定した量で試薬溶液を供給する。
【００３５】
【水溶性ポリマーイミデート類の合成】ＰＥＧ−イミデ
ート類の合成にはいくつかの方法が存在している。ＰＥ
Ｇイミデート類の合成で用いられている方法を同様に、
他の水溶性ポリマーイミデート類の合成で用いることが
できる。
【００３６】式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物を合成す
るための好適な方法は、ＰＥＧアルコールを、適当な求
核剤と反応し得る活性化アルコールに変換して、ＰＥＧ
−ニトリルを生じさせることを伴うものである。このＰ
ＥＧ−ニトリルを次にＰＥＧ−イミデートに変換する。
活性化されたＰＥＧ−アルコール類には、塩化物、臭化
物、トレシル、トシルなどが含まれる。この活性化ＰＥ
Ｇ−アルコールの合成に関する参考例には、Furukawa,
S.、 Katayama, N.、 Iizuka, T.、 Urabe, I.およびOkad
a, H. (1980) FEBS Lett.: 121、 239-242; Mutter, M.
(1978) Tetrahedron Lett. 2839-2842; Harris, J.M.、
Yalpani, M.、 Van Alstine, J.M.、 Struck, E.C.、 Cas
e, M.G.、 Paley, M.S.およびBrooks, D.E. (1984) J. P
olym. Sci. Polym. Chem. Ed. 22、 341-352; Zalipsky,
S.、 Gilon, C.およびZilkha, A.(1983) Eur. Polym.
J. 19: 1177-1183; Buckmann, A.F.、 Kula, M.R.、 Wich
mann, R.およびWandrey, C. (1981) J. Appl. Biochem.
3: 301-315; Buckmann, A.F.、 Morr, M.およびJohanss
on, G. (1981) Makromol. Chem. 82: 1379-1384が含ま
れる。
【００３７】
【化５】
【００３８】式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物を用いて
ポリペプチド類もしくは蛋白質を修飾する好適な方法
は、第一級アミンが入っておらずそして好適にはｐＨが
９〜９．５の塩基性緩衝液の中にポリペプチドもしくは
蛋白質を入れることを伴う。所望度合の修飾に応じて、
式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物を単一添加もしくは多
数回添加として加える。
【００３９】本発明を記述してきたが、本主題発明を説
明する目的で以下の実施例を示し、制限するものではな
い。
【００４０】
【実施例】Ｉ． ＰＥＧ−イミデート類の合成 乾燥ジクロロメタン０．５ｍＬにＰＥＧ−ＣＮもしくは
ＰＥＧ−ＮＨ−（ＣＨ 2）5−ＣＮ（０．５ｇ）を溶解し
た。−２０℃の氷浴の中に乾燥メタノール（５ｍＬ）を
入れた後、このメタノールに約２ｍＬのＨＣｌを導入し
て液化した。このＭｅＯＨ／ＨＣｌに上記ＰＥＧ−ＮＨ
−（ＣＨ2）5−ＣＮ溶液を加えた。この反応を−２０℃
で５時間進行させ、そしてその後、この反応混合物を冷
凍庫の中に一晩入れた。乾燥エーテルを添加すること
で、この反応混合物からＰＥＧ−イミデートを沈澱させ
た。この生成物のＩＲは、１６５０に特徴的なイミデー
ト帯を示していた。
【００４１】本出願中の実施例全てで用いる省略形「Ｐ
ＥＧ」は、ポリエチレングリコールのモノメチルエーテ
ルを表している。 ＩＩ． ＰＥＧ−ニトリルの合成 高真空オーブン中８５℃で約５時間ＰＥＧ−ＯＨを乾燥
した。冷却後、１５ｇのＰＥＧ−ＯＨ（ＭＷ＝５００
０）を５０ｍＬのジクロロメタンに溶解した。トリエチ
ルアミン（６．２０ｍＬ）に続いて１１．４ｇの４−ト
ルエンスルホニルクロライドを加えた。（二者択一的
に、２，２，２−トリフルオロエタンスルホニルクロラ
イドを用いることでトレシル−ＰＥＧを生じさせること
も可能である）。この混合物を一晩還流させた。エーテ
ルを用いて繰り返しジクロロメタンから沈澱させること
で、所望の生成物であるＰＥＧ−ＯＴｓが得られた。収
量１４ｇ。分析：Ｓに関する計算値０．６３、Ｓに関す
る測定値０．５８。
【００４２】１．３８ｇ（１３ミリモル）のＮａ2ＣＯ3
および０．５１ｇ（４．６ミリモル）の６−アミノカプ
ロニトリルと一緒にＰＥＧ−ＯＴｓ（５ｇ、１ミリモ
ル）を乾燥テトラヒドロフラン６５ｍＬの中に入れた。
この混合物を還流に３日間加熱した。この混合物を冷却
した後、濾過した。沈澱物をジクロロメタンに溶解した
後、濾過した。この濾液にエーテルを加えることで、生
成物を沈澱させた。この沈澱段階を繰り返した。ＬＨ−
２Ｏカラムを用いたゲル濾過を用い、ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ
で溶離させることにより、更に一層の精製を行った。興
味の持たれている材料であるＰＥＧ−ＮＨ−（ＣＨ2）5
−ＣＮを集め、「乾燥」ジクロロメタンの中に取り上げ
た後、エーテルを添加することで沈澱させた。収量４．
０６ｇ。分析：Ｎに関する計算値０．５５、Ｎに関する
測定値０．４１。
【００４３】シアン化物に置き換えることでＰＥＧ−Ｃ
ｌからＰＥＧニトリルを製造することもできる。この場
合、イミデートとＰＥＧとの間のリンカーは存在してい
ない。
【００４４】
【化６】
【００４５】高真空オーブン中８５℃で約５時間ＰＥＧ
−ＯＨを乾燥した。冷却後、１０ｇ（５ミリモル）のＰ
ＥＧ−ＯＨ（ＭＷ＝２０００）を４０ｍＬの乾燥トルエ
ンの中に入れ、続いて０．７ｍＬ（５ミリモル）のトリ
エチルアミンを加えた。塩化チオニル（１．１ｍＬ、５
ミリモル）を、１時間かけてゆっくりと加えた。この溶
液を４時間還流させ、その後、この溶液を室温で一晩撹
拌した。この溶液を加熱した後、濾過した。この濾液を
濃縮乾固した。この残渣を水に溶解した後、活性炭素で
処理した。この炭素を濾別しそして濾液を濃縮した後、
この残渣をジクロロメタン中に取り上げ、そしてエーテ
ルで処理した。この沈澱物を集めた。収量８．３ｇ。Ｌ
Ｈ−２Ｏを用いたゲル濾過クロマトグラフィーを用い、
ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ（５：１）で溶離させることにより、
更に一層の精製を行った。この生成物のＩＲは、６６８
に塩化物の帯を示していた。分析：Ｃｌに関する計算値
１．７６、Ｃｌに関する測定値１．５５。
【００４６】１ｇ（０．５ミリモル）のＰＥＧ−Ｃｌ
（ＭＷ＝２０００）とＮａＣＮ（０．２１ｇ、４．２ミ
リモル）を６．６ｍＬの乾燥ジメチルスルホキサイドに
加えた。この混合物を１００℃で７０分間加熱した。冷
却した後、この溶液を濾過し、そして濾液を濃縮した。
この残渣を、ＬＨ−２Ｏカラムを用いたゲル濾過を用
い、ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ（５：１）で溶離させた。ＰＥＧ
−ＣＮの収量０．８４ｇ。ＩＲは塩化物の帯を示してい
なかった。分析：Ｎに関する計算値０．６９、Ｎに関す
る測定値０．３５。
【００４７】ＩＩＩ． ＯＫＴ３の標識化（イミデート
方法） ＯＫＴ３は、ヒトＴ細胞抗原レセプタに関連した２０，
０００ダルトンの蛋白質と反応するＩｇＧ2aネズミモノ
クローナル抗体である。ｐＨが９．２の０．１Ｍホウ酸
塩緩衝液４ｍＬの中に４ｍｇのＯＫＴ３を入れた。この
反応体に添加するＰＥＧイミデート量を、所望の修飾度
に比例して変化させた。通常１５ｍｇ添加し、そして２
時間後、望まれるならば更に１５ｍｇのＰＥＧ−イミデ
ートを加えた。室温で４時間後、反応混合物を冷室中に
一晩置いた。疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩ
Ｃ）によるか、或は３０，０００ＭＷカットオフ膜を用
いた洗浄／濃縮を繰り返すことにより、未反応のＰＥＧ
からＰＥＧ−ＯＫＴ３を分離した。ZorbaxTM GF-450ま
たはZorbaxTM GF-250カラムを用いたＨＰＬＣゲル濾過
で、置換度を測定した。遊離アミノ基の測定では、Stoc
ks, S.J.、 Jones, A.J.M.、 Ramey, C.W.およびBrooks,
D.E. (1986) Anal. Biochem. 154: 232-234の蛍光分析
方法を用いた。
【００４８】ＩＶ． ＯＫＴ３の標識化（Ｎ−ヒドロキ
シスクシニミドエステル方法） ＰＥＧ−イミデートの代わりにＰＥＧ−Ｎ−ヒドロキシ
スクシニミドを用いる以外は、ＰＥＧ−イミデートに関
して上述したのと同じ操作に従った。
【００４９】Ｖ． 標識したＯＫＴ３の生物学的活性 ＯＫＴ３分子の生物学的活性に関して、ＰＥＧ−イミデ
ートで改質したものとＰＥＧ−Ｎ−ヒドロキシスクシニ
ミドで改質したものとを比較した。ＯＫＴ３は有効な分
裂促進性を有している〔Van Wauwe, J.P.、 De Mey, J.
R.およびGoossens, J.G. (1980) J. Immunol. 124、 270
8-2713〕。生物学的活性に対するＰＥＧ修飾の効果を測
定し、そして生物学的活性に関して、ＰＥＧを該抗体に
連成させるための２つの異なる方法を比較する目的で、
分裂促進因子アッセイを行った。このアッセイは、ヒト
末梢Ｔリンパ球を単離した後、異なる濃度のＯＫＴ３お
よびＰＥＧ−ＯＫＴ３と一緒に４日間、上記細胞を２ｘ
１０6個細胞／ｍＬで培養することから成る。次に、こ
の細胞培養物に、トリチウム原子を含んでいるチミジン
を加える。一晩培養した後、これらの細胞を収穫し、そ
してその数を数える。
【００５０】
【表１】 ＊ 分析用ＨＰＬＣゲル濾過／遊離アミン分析からの見
積もり。 ＊＊ ここで、Ｉｍ−５はイミデート連成ＰＥＧ５００
０であり、ＮＨＳ−５はＮ−ヒドロキシスクシニミド連
成ＰＥＧ５０００であり、Ｉｍ−２はイミデート連成Ｐ
ＥＧ２０００であり、そしてＮＨＳ−２はＮ−ヒドロキ
シスクシニミド連成ＰＥＧ２０００である。
【００５１】ＯＴＫ３に連成させたイミデート−ＰＥＧ
とＯＴＫ３に連成させたＮ−ヒドロキシスクシニミド−
ＰＥＧとの間の、分裂促進活性に関する差を表Ｉに示
す。中間程度から高レベルの修飾、即ち３０〜７０９０
の修飾において、イミデート−ＰＥＧで修飾したＯＴＫ
３に関連した分裂促進活性は、スクシニミド−ＰＥＧ修
飾ＯＴＫ３よりもかなり高い。従って、分子量が２００
０と５０００のＰＥＧで示されているように、イミデー
ト−ＰＥＧ連成で示される修飾時の正電荷保持により、
従来用いられていたスクシニミド−ＰＥＧ（これは、修
飾したとき電荷を保持しない）よりも良好な生物学的活
性の維持がもたらされる。
【００５２】ＶＩ． ＰＥＧ−エリトロポイエチン 組換え型的に製造したヒトエリトロポイエチン（ＥＰ
Ｏ）を、イミデート−ＰＥＧ、スクシニミド−ＰＥＧお
よびトレシル−ＰＥＧで修飾した。イミデート−ＰＥＧ
およびスクシニミド−ＰＥＧを用いた修飾を、ｐＨ８．
２もしくは９．３で行った。トレシル−ＰＥＧを用いた
修飾を、ｐＨ７．５、８．２または９．３のどれかで行
った。
【００５３】典型的な実験において、０．８ｍＬの、
０．０５Ｍの燐酸塩緩衝液／０．５ＭのＮａＣｌ、ｐＨ
７．５の中か、或は０．８ｍＬの０．１Ｍホウ酸塩緩衝
液ｐＨ９．３の中に、ＥＰＯ（０．５ｍｇ）を入れた。
いくつかの実験で、これらの緩衝液に０．１％のＳＤＳ
を含有させた。このＥＰＯ溶液に、適当な活性基を有す
るＰＥＧを１０ｍｇ加えた。この反応を約２時間進行さ
せ、その後、ＥＰＯに対する修飾度を上昇させる必要が
ある場合、同様に活性化したＰＥＧを更に添加した。Zo
rbaxTM GF-250カラムを用いたＨＰＬＣゲル濾過を用
い、０．１Ｍの燐酸塩緩衝液ｐＨ７で溶離させることに
より、ＰＥＧ−ＥＰＯ誘導体を分析した。
【００５４】ＰＥＧ−２０００（分子量が２０００のＰ
ＥＧ）を用いることにより、分析用ＨＰＬＣで単一の主
要蛋白質ピークを検出することが可能である、ことが見
いだされた。これらの異なる３種のリンカーと一緒にＰ
ＥＧ−５０００を用いると、有意量の未反応ＥＰＯが残
存し、そして修飾されたＥＰＯを示す２つの主要ピーク
が検出された。従って、ＰＥＧ−２０００を用いると、
ＰＥＧ−５０００を用いた時よりも奇麗な反応生成物が
得られた。
【００５５】Sephacryls-200-HRカラム（１ｍｍｘ４５
ｍｍ）使用ゲル濾過を用い、燐酸塩緩衝液（少量のアジ
ドが入っている）で溶離させることにより、該ＥＰＯ−
ＰＥＧ誘導体を精製した。
【００５６】ＥＰＯレセプタを発現するネズミ細胞系を
用いて、上記ＰＥＧ−ＥＰＯ誘導体に関する生物学的活
性を分析した。この細胞系は、成長に関してＥＰＯに依
存している。このアッセイは下記の通りである。ＥＰＯ
の存在無しで２４時間、細胞（１０6個／ｍＬ）を増殖
させ、その後、ＥＰＯもしくはＰＥＧ−ＥＰＯのどちら
かを加える。これらの細胞を４２時間培養した後、これ
らの細胞に、トリチウム原子を含んでいるチミジンを加
える。６時間後、これらの細胞を収穫し、そしてその数
を数える。増大したチミジン吸収によって、細胞の増殖
を測定する。表ＩＩにその結果を示す。
【００５７】
【表２】 ＊ ここで、Ｉｍ＝イミデート、Ｔｒｓ＝トレシル、Ｎ
ＨＳ＝スクシニミド（でＰＥＧを活性化） ＊＊ ここで、＃ＰＥＧは、ＥＰＯの単一分子に結合し
たＰＥＧ（分子量２０００）分子の平均数である。 ＊＊＊ ここで、活性は、ＥＰＯが１００％の活性を示
すことを基にして、最大の細胞増殖か或はその半分を与
えるに必要なＥＰＯもしくはＰＥＧ−ＥＰＯ量である。
【００５８】
【表３】 ＊ ここで、Ｉｍ＝イミデート、Ｔｒｓ＝トレシル、Ｎ
ＨＳ＝スクシニミド（でＰＥＧを活性化） ＊＊ ここで、＃ＰＥＧは、ＥＰＯの単一分子に結合し
たＰＥＧ（分子量５０００）分子の平均数である。 ＊＊＊ ここで、活性は、ＥＰＯが１００％の活性を示
すことを基にして、最大の細胞増殖か或はその半分を与
えるに必要なＥＰＯもしくはＰＥＧ−ＥＰＯ量である。
【００５９】表ＩＩおよびＩＩＩに示されているよう
に、５個または８個のＰＥＧを結合させたイミデート−
ＰＥＧは、トレシルもしくはスクシニミド基で活性化し
たＰＥＧよりもかなり高い活性を示している。該イミデ
ート−ＰＥＧがその相対物よりも高い生物活性を示すこ
とに関する可能な説明は、修飾したときそれが正電荷を
保持していることである。また可能性のある重要性は、
ＰＥＧのバックボーンから正電荷が若干取り除かれ、そ
れによって、ＰＥＧで保護されている時とは異なり、該
レセプタとの相互作用を生じ易くなることである。
【００６０】ＰＥＧで修飾したアルカリ性ホスファター
ゼが示す酵素活性に対して、４つの異なるＰＥＧ連成化
学品（トレシル、スクシニミジルスクシネート、シアヌ
ール酸クロライド、およびカルボニルジイミダゾール）
を比較した試験において、修飾を行った時、スクシニミ
ジルスクシネートが最も高い活性を示す酵素を与えるこ
とが見いだされた〔Yoshinga, K.およびHarris, J.M.
J. Bioact. CompatiblePolym. 4: 17-24 (1989)〕。Ｐ
ＥＧを用いたアスパラギナーゼの修飾でもまた、連成さ
せた時、スクシニミジルスクシネートが酵素を不活性に
する度合は、ＰＥＧ−シアヌール酸クロライドのそれよ
りも有意に低いことが示された〔Abuchowski, A.、 Kaz
o, G.M.、 Verhoest, C.R.、 Es. T.V.、 Kafkewitz, D.、
Nucci M.L.、 Viau, A.T.およびDavis, F.F. Cancer Bio
chem. Biophys. 7: 175-186 (1984)〕。このＥＰＯおよ
びＯＫＴ３試験の両方において、該イミデート連成化学
品は、スクシニミジルスクシネート連成化学品よりも良
好であり、従って、ここに教示するＰＥＧ誘導体は、以
前に送り出された最良の連成用ＰＥＧ化学品よりも優れ
ていることを示している。
【００６１】該スクシニミド−ＰＥＧおよびトレシル−
ＰＥＧエステルを用いて製造したＥＰＯ誘導体が示す活
性に関する表ＩＩおよびＩＩＩの結果は、興味の持たれ
るものである。このトレシル−ＰＥＧおよびスクシニミ
ド−ＰＥＧのＥＰＯ誘導体は、匹敵するイミデート−Ｐ
ＥＧのＥＰＯ誘導体よりも低い活性を示してはいるが、
このトレシルおよびスクシニミド−ＰＥＧ誘導体は、リ
ジン残基に連成させた結果として正電荷の損失が生じて
いるＥＰＯ−ＰＥＧ誘導体（該トレシル−ＰＥＧは第二
級アミンを生じ、そして該スクシニミド−ＰＥＧはアミ
ド結合を生じる）に関して予測されたよりも高い活性を
示している。従って、水溶性ポリマー類（水溶性ポリマ
ー類は、化合物（Ｉ）中のＰと同様に定義される）のト
レシルもしくはスクシニミドエステルを用いてＥＰＯ
（天然源から単離されたか、遺伝工学細胞から得られる
か、或は種々のインビトロ方法で合成された、ヒトもし
くはヒト以外の）の誘導化を行うことも興味の持たれる
ものである。
【００６２】本分野の技術者が本発明を実施するには前
述した明細で充分であると考えられる。実際、薬学的調
合物の分野およびそれに関連した分野の技術者にとって
明らかな、本発明を実施するための上記様式に関する種
々の修飾形は、請求の範囲内に入ると解釈される。
【００６３】本発明の特徴および態様は以下のとおりで
ある。 １． 式
【００６４】
【化７】 〔式中、Ｐは水溶性ポリマーである〕に従う化合物。 ２． 上記ポリマーが、ポリエチレングリコールのホモ
ポリマー類、ポリプロピレングリコールのホモポリマー
類、エチレングリコールとプロピレングリコールとのコ
ポリマー類から成る群から選択され、ここで、上記ホモ
ポリマー類およびコポリマー類の１つの末端が、未置換
であるか、或はアルキル基、ポリオキシエチル化ポリオ
ール類、ポリビニルアルコール、ポリサッカライド類、
ポリビニルエチルエーテル類、およびα，β−ポリ
〔（２−ヒドロキシエチル）−ＤＬ−アスパルタミド〕
で置換されている第１項記載の化合物。 ３． 上記水溶性ポリマーがポリエチレングリコールで
ある第２項記載の化合物。 ４． 第１項記載の化合物とポリペプチドとを反応させ
る段階を含む、少なくとも１種の水溶性ポリマーをポリ
ペプチドに共有結合させる方法。 ５． 上記ポリペプチドが、ホルモン類、リンフォカイ
ン類、サイトカイン類、成長因子、酵素、ワクチン抗
原、および抗体から成る群から選択される第４項記載の
方法。 ６． 上記ポリペプチドが抗体であり、そして上記方法
が、上記反応段階に先立つ、上記抗体上の結合部位に対
して特異的に結合し得る化合物と上記抗体とを一緒にす
る段階を更に含む第４項記載の方法。 ７． 上記ポリペプチドが酵素であり、そして上記方法
が、上記反応段階に先立つ、上記酵素用基質と上記ポリ
ペプチドとを混合する段階を更に含む第４項記載の方
法。 ８． 第４項の方法で修飾したポリペプチド。 ９． 第８項記載のポリペプチドと薬学的に許容される
担体とを含む組成物。 １０． 式
【００６５】
【化８】 〔式中、ｎは１〜ｘであり、ｘはＺ中のリジン残基の数
よりも１大きく、Ｐは水溶性ポリマーであり、そしてＺ
はポリペプチドである〕に従う化合物であり、ここでＺ
が、Ｚ中のリジン残基を通してこの化合物の非ポリペプ
チド部分に共有結合している化合物。 １１． 上記ポリマーが、ポリエチレングリコールのホ
モポリマー類、ポリプロピレングリコールのホモポリマ
ー類、エチレングリコールとプロピレングリコールとの
コポリマー類から成る群から選択され、ここで、上記ホ
モポリマー類およびコポリマー類の１つの末端が、未置
換であるか、或はアルキル基、ポリオキシエチル化ポリ
オール類、ポリビニルアルコール、ポリサッカライド
類、ポリビニルエチルエーテル類、およびα，β−ポリ
〔（２−ヒドロキシエチル）−ＤＬ−アスパルタミド〕
で置換されている第１０項記載の化合物。 １２． 上記ポリペプチドが、ホルモン類、リンフォカ
イン類、サイトカイン類、成長因子、酵素、ワクチン抗
原、および抗体から成る群から選択される第１１項記載
の化合物。 １３． 上記ポリペプチドが抗体である第１２項記載の
化合物。 １４． 上記ポリペプチドがエリトロポイエチンである
第１２項記載の化合物。 １５． 第１２項記載のポリペプチドと薬学的に許容さ
れる担体とを含む組成物。 １６． 式
【００６６】
【化９】 〔式中、Ｐは水溶性ポリマーであり、そしてｍは１〜２
０である〕に従う化合物。 １７． 上記ポリマーが、ポリエチレングリコールのホ
モポリマー類、ポリプロピレングリコールのホモポリマ
ー類、エチレングリコールとプロピレングリコールとの
コポリマー類から成る群から選択され、ここで、上記ホ
モポリマー類およびコポリマー類の１つの末端が、未置
換であるか、或はアルキル基、ポリオキシエチル化ポリ
オール類、ポリビニルアルコール、ポリサッカライド
類、ポリビニルエチルエーテル類、およびα，β−ポリ
〔（２−ヒドロキシエチル）−ＤＬ−アスパルタミド〕
で置換されている第１６項記載の化合物。 １８． 上記水溶性ポリマーがポリエチレングリコール
である第１７項記載の化合物。 １９． 第１６項記載の化合物とポリペプチドとを反応
させる段階を含む、少なくとも１種の水溶性ポリマーを
ポリペプチドに共有結合させる方法。 ２０． 上記ポリペプチドが、ホルモン類、リンフォカ
イン類、サイトカイン類、成長因子、酵素、ワクチン抗
原、および抗体から成る群から選択される第１９項記載
の方法。 ２１． 上記ポリペプチドが抗体であり、そして上記方
法が、上記反応段階に先立つ、上記抗体上の結合部位に
対して特異的に結合し得る化合物と上記抗体とを一緒に
する段階を更に含む第１９項記載の方法。 ２２． 上記ポリペプチドが酵素であり、そして上記方
法が、上記反応段階に先立つ、上記酵素用基質と上記ポ
リペプチドとを混合する段階を更に含む第１９項記載の
方法。 ２３． 第１９項の方法で修飾したポリペプチド。 ２４． 第２３項記載のポリペプチドと薬学的に許容さ
れる担体とを含む組成物。 ２５． 式
【００６７】
【化１０】 〔式中、ｍは１〜２０であり、ｎは１〜ｘであり、ｘは
Ｚ中のリジン残基の数よりも１大きく、Ｐは水溶性ポリ
マーであり、そしてＺはポリペプチドである〕に従う化
合物であり、ここでＺが、Ｚ中のリジン残基を通してこ
の化合物の非ポリペプチド部分に共有結合している化合
物。 ２６． 上記ポリマーが、ポリエチレングリコールのホ
モポリマー類、ポリプロピレングリコールのホモポリマ
ー類、エチレングリコールとプロピレングリコールとの
コポリマー類から成る群から選択され、ここで、上記ホ
モポリマー類およびコポリマー類の１つの末端が、未置
換であるか、或はアルキル基、ポリオキシエチル化ポリ
オール類、ポリビニルアルコール、ポリサッカライド
類、ポリビニルエチルエーテル類、およびα，β−ポリ
〔（２−ヒドロキシエチル）−ＤＬ−アスパルタミド〕
で置換されている第２５項記載の化合物。 ２７． 上記ポリペプチドが、ホルモン類、リンフォカ
イン類、サイトカイン類、成長因子、酵素、ワクチン抗
原、および抗体から成る群から選択される第２６項記載
の化合物。 ２８． 上記ポリペプチドが抗体である第２７項記載の
化合物。 ２９． 上記ポリペプチドがエリトロポイエチンである
第２７項記載の化合物。 ３０． 第２５項記載のポリペプチドと薬学的に許容さ
れる担体とを含む組成物。 ３１． 式 （Ｖ） Ｐ−ＮＨ−（ＣＨ2）n−ＣＮ 〔式中、Ｐは水溶性ポリマーであり、そしてｎ＝１〜２
０である〕に従う化合物。 ３２． 上記ポリマーが、ポリエチレングリコールのホ
モポリマー類、ポリプロピレングリコールのホモポリマ
ー類、エチレングリコールとプロピレングリコールとの
コポリマー類から成る群から選択され、ここで、上記ホ
モポリマー類およびコポリマー類の１つの末端が、未置
換であるか、或はアルキル基、ポリオキシエチル化ポリ
オール類、ポリビニルアルコール、ポリサッカライド
類、ポリビニルエチルエーテル類、およびα，β−ポリ
〔（２−ヒドロキシエチル）−ＤＬ−アスパルタミド〕
で置換されている第３１項記載の化合物。 ３３． 上記水溶性ポリマーがポリエチレングリコール
である第３２項記載の化合物。 ３４． 少なくとも１種のトレシル水溶性ポリマーエス
テルで修飾されており、ここで、上記水溶性ポリマー
が、ポリエチレングリコールのホモポリマー類、ポリプ
ロピレングリコールのホモポリマー類、エチレングリコ
ールとプロピレングリコールとのコポリマー類から成る
群から選択され、そしてここで、上記ホモポリマー類お
よびコポリマー類の１つの末端が、未置換であるか、或
はアルキル基、ポリオキシエチル化ポリオール類、ポリ
ビニルアルコール、ポリサッカライド類、ポリビニルエ
チルエーテル類、およびα，β−ポリ〔（２−ヒドロキ
シエチル）−ＤＬ−アスパルタミド〕で置換されている
エリトロポイエチン分子。 ３５． 上記水溶性ポリマーがポリエチレングリコール
である第３４項記載のエリトロポイエチン分子。 ３６． 少なくとも１種のスクシニミド水溶性ポリマー
エステルで修飾されており、ここで、上記水溶性ポリマ
ーが、ポリエチレングリコールのホモポリマー類、ポリ
プロピレングリコールのホモポリマー類、エチレングリ
コールとプロピレングリコールとのコポリマー類から成
る群から選択され、そしてここで、上記ホモポリマー類
およびコポリマー類の１つの末端が、未置換であるか、
或はアルキル基、ポリオキシエチル化ポリオール類、ポ
リビニルアルコール、ポリサッカライド類、ポリビニル
エチルエーテル類、およびα，β−ポリ〔（２−ヒドロ
キシエチル）−ＤＬ−アスパルタミド〕で置換されてい
るエリトロポイエチン分子。 ３７． 上記水溶性ポリマーがポリエチレングリコール
である第３６項記載のエリトロポイエチン分子。
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 43/00 １１１ Ｃ０８Ｈ 1/00 Ｃ０８Ｈ 1/00 Ａ６１Ｋ 37/02 (72)発明者 デイビツド・イー・ライト アメリカ合衆国カリフオルニア州92131サ ンデイエゴ・アシユラープレイス10827 Ｆターム(参考） 4C076 AA95 CC14 CC41 CC42 DD39 EE02 EE06 EE13 EE23 EE30 EE41 EE49 EE59 FF15 FF33 FF34 FF63 FF66 FF67 FF68 GG46 4C084 AA07 BA44 CA18 DC50 NA02 NA03 NA06 NA10 NA11 NA12 NA13 ZA511 ZC022 ZC412 4H045 AA10 BA09 BA10 BA53 BA56 BA57 BA62 CA40 DA13 DA76 DA89 EA20 FA10 GA25 HA31

Claims (2)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 少なくとも１種のトレシル水溶性ポリマ
    ーエステルで修飾されており、ここで、上記水溶性ポリ
    マーが、ポリエチレングリコールのホモポリマー類、ポ
    リプロピレングリコールのホモポリマー類、エチレング
    リコールとプロピレングリコールとのコポリマー類から
    成る群から選択され、そしてここで、上記ホモポリマー
    類およびコポリマー類の１つの末端が、未置換である
    か、或はアルキル基、ポリオキシエチル化ポリオール
    類、ポリビニルアルコール、ポリサッカライド類、ポリ
    ビニルエチルエーテル類、およびα，β−ポリ〔（２−
    ヒドロキシエチル）−ＤＬ−アスパルタミド〕で置換さ
    れているエリトロポイエチン分子。
  2. 【請求項２】 少なくとも１種のスクシニミド水溶性ポ
    リマーエステルで修飾されており、ここで、上記水溶性
    ポリマーが、ポリエチレングリコールのホモポリマー
    類、ポリプロピレングリコールのホモポリマー類、エチ
    レングリコールとプロピレングリコールとのコポリマー
    類から成る群から選択され、そしてここで、上記ホモポ
    リマー類およびコポリマー類の１つの末端が、未置換で
    あるか、或はアルキル基、ポリオキシエチル化ポリオー
    ル類、ポリビニルアルコール、ポリサッカライド類、ポ
    リビニルエチルエーテル類、およびα，β−ポリ〔（２
    −ヒドロキシエチル）−ＤＬ−アスパルタミド〕で置換
    されているエリトロポイエチン分子。
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