JP2003012516A - 新規なＣａＭＫＫ阻害剤 - Google Patents
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Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】選択的な、カルシウム／カルモジュリン依存性
キナーゼキナーゼ阻害剤を提供する。 【解決手段】 式（１）： 【化１】 ［式中、Ｒ１、またはＲ２は、独立して、水素原子、ハ
ロゲン原子、アルキル基、またはハロアルキル基のいず
れかである。Ｒ３は水素原子、アルキル基、または置換
アルキル基を表す。］で表される、７Ｈ−ベンズイミダ
ゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オ
ン誘導体、またはその薬学上許容される塩を有効成分と
して含有するカルシウム/カルモジュリン依存性キナー
ゼキナーゼ阻害剤。
キナーゼキナーゼ阻害剤を提供する。 【解決手段】 式（１）： 【化１】 ［式中、Ｒ１、またはＲ２は、独立して、水素原子、ハ
ロゲン原子、アルキル基、またはハロアルキル基のいず
れかである。Ｒ３は水素原子、アルキル基、または置換
アルキル基を表す。］で表される、７Ｈ−ベンズイミダ
ゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オ
ン誘導体、またはその薬学上許容される塩を有効成分と
して含有するカルシウム/カルモジュリン依存性キナー
ゼキナーゼ阻害剤。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、カルシウム/カル
モジュリン依存性キナーゼキナーゼ（ＣａＭＫＫ）阻害
剤のハイスループットスクリーニング方法、およびカル
シウム/カルモジュリン依存性キナーゼキナーゼ（Ｃａ
ＭＫＫ）に対して選択的に阻害活性を示す７Ｈ−ベンズ
イミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−
７−オン誘導体に関する。
モジュリン依存性キナーゼキナーゼ（ＣａＭＫＫ）阻害
剤のハイスループットスクリーニング方法、およびカル
シウム/カルモジュリン依存性キナーゼキナーゼ（Ｃａ
ＭＫＫ）に対して選択的に阻害活性を示す７Ｈ−ベンズ
イミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−
７−オン誘導体に関する。
【０００２】
【従来の技術】細胞内カルシウム情報伝達系は、あらゆ
る細胞において細胞運動、分泌反応など、多岐にわたっ
て機能している。細胞内情報伝達系の初期の反応は主
に、遊離細胞内カルシウムが、カルモジュリンなどのカ
ルシウム受容蛋白質へ結合することであると考えられて
おり、これらカルシウム受容蛋白質がキナーゼなどの標
的分子の機能を調節する。カルシウム/カルモジュリン
依存性キナーゼキナーゼ（以下、ＣａＭＫＫと略する）
は、その活性発現にカルシウムイオン、カルモジュリン
を必須とする蛋白質リン酸化酵素であり、大脳、小脳、
膵臓、脾臓などにおいて発現されている。ＣａＭＫＫの
in vitro における基質としては、カルシウム/カルモジ
ュリン依存性キナーゼ Ｉ、およびＩＶ(ＣａＭ-Ｋ
Ｉ、ＩＶ)が挙げられ、これらのキナーゼをリン酸化す
ることにより、活性化すると考えられている。また、ア
ポトーシス促進に関与すると考えられている、ＰＫＢ
（Protein kinase B）を直接リン酸化し活性化すること
が報告されている。その生理的機能としては、既報のin
vitro試験結果から、中枢神経系、免疫系における遺伝
子発現の制御および中枢神経系における細胞死抑制など
が示唆されているが、実際の生体内での機能について
は、未だ不明な点が多い。その理由の一つは、ＣａＭＫ
Ｋの選択的な阻害剤が無かったことである。従って選択
的にＣａＭＫＫを阻害する化合物は、ＣａＭＫＫの細胞
内カルシウム情報伝達機構における役割、およびＣａＭ
ＫＫが関与する生理機能の解明に必須であると考えら
れ、in vitro試験およびin vivo試験にＣａＭＫＫ選択
的な阻害剤を用いることができれば、ＣａＭＫＫの機能
を特定するのが容易になる。また、ＣａＭＫＫ阻害剤の
医薬品としての用途は未だ研究途上にあるが、上述した
ようなＣａＭＫＫの発現器官および示唆されている生理
的機能から考えると、ＣａＭＫＫ阻害剤は、アレルギー
性疾患、炎症性疾患、中枢性疾患等の治療剤として応用
できる。
る細胞において細胞運動、分泌反応など、多岐にわたっ
て機能している。細胞内情報伝達系の初期の反応は主
に、遊離細胞内カルシウムが、カルモジュリンなどのカ
ルシウム受容蛋白質へ結合することであると考えられて
おり、これらカルシウム受容蛋白質がキナーゼなどの標
的分子の機能を調節する。カルシウム/カルモジュリン
依存性キナーゼキナーゼ（以下、ＣａＭＫＫと略する）
は、その活性発現にカルシウムイオン、カルモジュリン
を必須とする蛋白質リン酸化酵素であり、大脳、小脳、
膵臓、脾臓などにおいて発現されている。ＣａＭＫＫの
in vitro における基質としては、カルシウム/カルモジ
ュリン依存性キナーゼ Ｉ、およびＩＶ(ＣａＭ-Ｋ
Ｉ、ＩＶ)が挙げられ、これらのキナーゼをリン酸化す
ることにより、活性化すると考えられている。また、ア
ポトーシス促進に関与すると考えられている、ＰＫＢ
（Protein kinase B）を直接リン酸化し活性化すること
が報告されている。その生理的機能としては、既報のin
vitro試験結果から、中枢神経系、免疫系における遺伝
子発現の制御および中枢神経系における細胞死抑制など
が示唆されているが、実際の生体内での機能について
は、未だ不明な点が多い。その理由の一つは、ＣａＭＫ
Ｋの選択的な阻害剤が無かったことである。従って選択
的にＣａＭＫＫを阻害する化合物は、ＣａＭＫＫの細胞
内カルシウム情報伝達機構における役割、およびＣａＭ
ＫＫが関与する生理機能の解明に必須であると考えら
れ、in vitro試験およびin vivo試験にＣａＭＫＫ選択
的な阻害剤を用いることができれば、ＣａＭＫＫの機能
を特定するのが容易になる。また、ＣａＭＫＫ阻害剤の
医薬品としての用途は未だ研究途上にあるが、上述した
ようなＣａＭＫＫの発現器官および示唆されている生理
的機能から考えると、ＣａＭＫＫ阻害剤は、アレルギー
性疾患、炎症性疾患、中枢性疾患等の治療剤として応用
できる。
【０００３】カルシウム/カルモジュリン依存性キナー
ゼ類の阻害剤としては、中枢神経系初め、広く生体に存
在し、多機能を有する、カルシウム/カルモジュリン依
存性キナーゼＩＩの阻害剤が知られている。具体的に
は、ＫＮ−６２(J. Biol. Chem., 265, 4315-4320(199
0)) 、ＫＮ−９３（Biochem. Biophys. Res. Commun.,1
81, 968-975(1991)）、ペプチド性の化合物(公開特許公
報平１１−１５２２９８)、アラキドン酸、１２−ＨＥ
ＴＥ （Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86, 8550-8554(1
989) などが挙げられる。ＫＮ−６２は、カルシウム/カ
ルモジュリン依存性キナーゼＩＶの阻害剤としても知ら
れている（J. Biol. Chem., 269, 15520-15527(199
4)）。しかし、ＣａＭＫＫを阻害する化合物については
知られていない。
ゼ類の阻害剤としては、中枢神経系初め、広く生体に存
在し、多機能を有する、カルシウム/カルモジュリン依
存性キナーゼＩＩの阻害剤が知られている。具体的に
は、ＫＮ−６２(J. Biol. Chem., 265, 4315-4320(199
0)) 、ＫＮ−９３（Biochem. Biophys. Res. Commun.,1
81, 968-975(1991)）、ペプチド性の化合物(公開特許公
報平１１−１５２２９８)、アラキドン酸、１２−ＨＥ
ＴＥ （Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86, 8550-8554(1
989) などが挙げられる。ＫＮ−６２は、カルシウム/カ
ルモジュリン依存性キナーゼＩＶの阻害剤としても知ら
れている（J. Biol. Chem., 269, 15520-15527(199
4)）。しかし、ＣａＭＫＫを阻害する化合物については
知られていない。
【０００４】ＣａＭＫＫ酵素活性のアッセイ方法につい
ては、徳光らによってジャーナル・オブ・バイオケミス
トリー、２７５巻、２６号、２００９０頁に報告されて
いる方法が挙げられる。ここで用いられている方法は、
リン酸化源として［γ−３ ２Ｐ］−ＡＴＰが用いられて
いる。しかしながら、３２Ｐはエネルギーの高い放射性
同位元素であり、この方法をＣａＭＫＫ阻害活性のハイ
スループットアッセイ系で用いることは位置的に近接す
るサンプル間で相互の放射活性の干渉作用が大き過ぎ、
正確な放射活性測定ができないという点で困難であっ
た。
ては、徳光らによってジャーナル・オブ・バイオケミス
トリー、２７５巻、２６号、２００９０頁に報告されて
いる方法が挙げられる。ここで用いられている方法は、
リン酸化源として［γ−３ ２Ｐ］−ＡＴＰが用いられて
いる。しかしながら、３２Ｐはエネルギーの高い放射性
同位元素であり、この方法をＣａＭＫＫ阻害活性のハイ
スループットアッセイ系で用いることは位置的に近接す
るサンプル間で相互の放射活性の干渉作用が大き過ぎ、
正確な放射活性測定ができないという点で困難であっ
た。
【０００５】一方、本発明の７Ｈ−ベンズイミダゾ−
［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン誘
導体の分野では、多数の化合物が公知であり、多くは染
料または色素、およびその中間体として用いられてい
る。例えば、1,8-ナフトイレンベンズイミダゾール-4
（または5）-カルボン酸は、US2820037や有機合成化学
第20巻第11号1016頁（1962年）に記載されている。しか
し、医薬用途としては、特開平６−２６３７５９に記載
された、抗癌剤として有用な１、８−ナフトイレンベン
ズイミダゾール誘導体、および、US4670442に記載され
た、免疫調節剤として有用な１、８−ナフトイレンベン
ズイミダゾール誘導体が知られているに過ぎない。ま
た、これらの化合物の作用機序については、全く記載さ
れていない。
［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン誘
導体の分野では、多数の化合物が公知であり、多くは染
料または色素、およびその中間体として用いられてい
る。例えば、1,8-ナフトイレンベンズイミダゾール-4
（または5）-カルボン酸は、US2820037や有機合成化学
第20巻第11号1016頁（1962年）に記載されている。しか
し、医薬用途としては、特開平６−２６３７５９に記載
された、抗癌剤として有用な１、８−ナフトイレンベン
ズイミダゾール誘導体、および、US4670442に記載され
た、免疫調節剤として有用な１、８−ナフトイレンベン
ズイミダゾール誘導体が知られているに過ぎない。ま
た、これらの化合物の作用機序については、全く記載さ
れていない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、カル
シウム/カルモジュリン依存性キナーゼキナーゼ（Ｃａ
ＭＫＫ）阻害剤のハイスループットスクリーニング方
法、およびＣａＭＫＫが関与する生理活性を解明するた
めに必須であり、医薬品としても有用な、選択的ＣａＭ
ＫＫ阻害剤を供することにある。
シウム/カルモジュリン依存性キナーゼキナーゼ（Ｃａ
ＭＫＫ）阻害剤のハイスループットスクリーニング方
法、およびＣａＭＫＫが関与する生理活性を解明するた
めに必須であり、医薬品としても有用な、選択的ＣａＭ
ＫＫ阻害剤を供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】発明者らは、鋭意検討し
た結果、［γ−３３Ｐ］−ＡＴＰをリン酸化源として用
いることによって、リン酸化された基質を含む多数の反
応混合物を１枚のフィルターに吸着させても、近接した
反応混合物間の、相互の放射活性の干渉なしに正確な測
定ができることを見出した。また、この方法では使用す
る放射線量を著しく減少させることもできる。これによ
って、一度に多数のサンプルをアッセイするハイスルー
プットスクリーニング系を構築することができた。上記
の方法を用いて、選択的にＣａＭＫＫを阻害する化合物
をスクリーニングした結果、強いＣａＭＫＫ阻害活性を
示す７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄ
ｅ］イソキノリン−７−オン誘導体を見出すに至った。
本発明の７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ
［ｄｅ］イソキノリン−７−オン誘導体またはその塩
は、カルシウム/カルモジュリン依存性キナーゼＩＩに
対する阻害活性は低く、カルシウム/カルモジュリン依
存性キナーゼＩ、ＩＶ、ＭＬＣＫ、プロテインキナーゼ
Ａ、Ｃ、およびp42ＭＡＰキナーゼ等に対してはほとん
ど阻害活性を示さず、極めて選択的にＣａＭＫＫを阻害
することがわかった。このようなプロフィールを有する
化合物はこれまで見出されていなかった。
た結果、［γ−３３Ｐ］−ＡＴＰをリン酸化源として用
いることによって、リン酸化された基質を含む多数の反
応混合物を１枚のフィルターに吸着させても、近接した
反応混合物間の、相互の放射活性の干渉なしに正確な測
定ができることを見出した。また、この方法では使用す
る放射線量を著しく減少させることもできる。これによ
って、一度に多数のサンプルをアッセイするハイスルー
プットスクリーニング系を構築することができた。上記
の方法を用いて、選択的にＣａＭＫＫを阻害する化合物
をスクリーニングした結果、強いＣａＭＫＫ阻害活性を
示す７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄ
ｅ］イソキノリン−７−オン誘導体を見出すに至った。
本発明の７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ
［ｄｅ］イソキノリン−７−オン誘導体またはその塩
は、カルシウム/カルモジュリン依存性キナーゼＩＩに
対する阻害活性は低く、カルシウム/カルモジュリン依
存性キナーゼＩ、ＩＶ、ＭＬＣＫ、プロテインキナーゼ
Ａ、Ｃ、およびp42ＭＡＰキナーゼ等に対してはほとん
ど阻害活性を示さず、極めて選択的にＣａＭＫＫを阻害
することがわかった。このようなプロフィールを有する
化合物はこれまで見出されていなかった。
【０００８】すなわち本発明は、［１］式（I）：
【化３】
［式中、Ｒ１、またはＲ２は、独立して、水素原子、ハ
ロゲン原子、アルキル基、またはハロアルキル基のいず
れかである。Ｒ３は水素原子、アルキル基、または置換
アルキル基を表し、ＣＯＯＲ３基はナフタレン環のどの
位置に置換していてもよい。］で表される、７Ｈ−ベン
ズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イソキノリン
−７−オン誘導体、またはその薬学上許容される塩を有
効成分として含有するカルシウム/カルモジュリン依存
性キナーゼキナーゼ阻害剤、［２］Ｒ１およびＲ２が水
素原子である、［１］記載のカルシウム/カルモジュリ
ン依存性キナーゼキナーゼ阻害剤、［３］Ｒ３が水素原
子である、請求項１または２記載のカルシウム/カルモ
ジュリン依存性キナーゼキナーゼ阻害剤、［４］式（I
I）：
ロゲン原子、アルキル基、またはハロアルキル基のいず
れかである。Ｒ３は水素原子、アルキル基、または置換
アルキル基を表し、ＣＯＯＲ３基はナフタレン環のどの
位置に置換していてもよい。］で表される、７Ｈ−ベン
ズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イソキノリン
−７−オン誘導体、またはその薬学上許容される塩を有
効成分として含有するカルシウム/カルモジュリン依存
性キナーゼキナーゼ阻害剤、［２］Ｒ１およびＲ２が水
素原子である、［１］記載のカルシウム/カルモジュリ
ン依存性キナーゼキナーゼ阻害剤、［３］Ｒ３が水素原
子である、請求項１または２記載のカルシウム/カルモ
ジュリン依存性キナーゼキナーゼ阻害剤、［４］式（I
I）：
【化４】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は前記と同義であ
る。）で表される７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］
ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン誘導体、または
その薬学上許容される塩を、有効成分として含有するカ
ルモジュリン依存性キナーゼキナーゼ阻害剤、［５］Ｒ
１およびＲ２が水素原子である、［４］記載のカルシウ
ム/カルモジュリン依存性キナーゼキナーゼ阻害剤、
［６］Ｒ３が水素原子である、［４］または［５］記載
のカルシウム/カルモジュリン依存性キナーゼキナーゼ
阻害剤、［７］式（III）：
る。）で表される７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］
ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン誘導体、または
その薬学上許容される塩を、有効成分として含有するカ
ルモジュリン依存性キナーゼキナーゼ阻害剤、［５］Ｒ
１およびＲ２が水素原子である、［４］記載のカルシウ
ム/カルモジュリン依存性キナーゼキナーゼ阻害剤、
［６］Ｒ３が水素原子である、［４］または［５］記載
のカルシウム/カルモジュリン依存性キナーゼキナーゼ
阻害剤、［７］式（III）：
【化５】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は前記と同義であ
る。）で表される７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］
ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン誘導体、または
その薬学上許容される塩を、有効成分として含有するカ
ルシウム/カルモジュリン依存性キナーゼキナーゼ阻害
剤。［８］Ｒ１およびＲ２が水素原子である、［７］記
載のカルシウム/カルモジュリン依存性キナーゼキナー
ゼ阻害剤、［９］Ｒ３が水素原子である、［７］または
［８］記載のカルシウム/カルモジュリン依存性キナー
ゼキナーゼ阻害剤、［１０］［１］から［９］記載のカ
ルモジュリン依存性キナーゼキナーゼ阻害剤を有効成分
として含有する、ＣａＭＫＫの機能が亢進した病態を改
善する治療剤、［１１］［１］から［９］記載のカルモ
ジュリン依存性キナーゼキナーゼ阻害剤を有効成分とし
て含有する、アレルギー性疾患、炎症性疾患、または中
枢性疾患の治療剤、［１２］［γ−３３Ｐ］−ＡＴＰを
基質のリン酸化源として用いて酵素反応を行い、リン酸
化された基質をフィルターに吸着させてその放射活性を
測定することを特徴とする、カルシウム／カルモジュリ
ン依存性キナーゼキナーゼ（ＣａＭＫＫ）阻害剤のハイ
スループットスクリーニング方法、に関するものであ
る。
る。）で表される７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］
ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン誘導体、または
その薬学上許容される塩を、有効成分として含有するカ
ルシウム/カルモジュリン依存性キナーゼキナーゼ阻害
剤。［８］Ｒ１およびＲ２が水素原子である、［７］記
載のカルシウム/カルモジュリン依存性キナーゼキナー
ゼ阻害剤、［９］Ｒ３が水素原子である、［７］または
［８］記載のカルシウム/カルモジュリン依存性キナー
ゼキナーゼ阻害剤、［１０］［１］から［９］記載のカ
ルモジュリン依存性キナーゼキナーゼ阻害剤を有効成分
として含有する、ＣａＭＫＫの機能が亢進した病態を改
善する治療剤、［１１］［１］から［９］記載のカルモ
ジュリン依存性キナーゼキナーゼ阻害剤を有効成分とし
て含有する、アレルギー性疾患、炎症性疾患、または中
枢性疾患の治療剤、［１２］［γ−３３Ｐ］−ＡＴＰを
基質のリン酸化源として用いて酵素反応を行い、リン酸
化された基質をフィルターに吸着させてその放射活性を
測定することを特徴とする、カルシウム／カルモジュリ
ン依存性キナーゼキナーゼ（ＣａＭＫＫ）阻害剤のハイ
スループットスクリーニング方法、に関するものであ
る。
【０００９】本発明において、ハロゲン原子とは、フッ
素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子を表し、好ま
しくはフッ素原子、または塩素原子である。アルキル基
としては炭素数１から４のアルキル基が挙げられ、具体
的には、メチル、エチル、プロピル、1−メチルエチ
ル、ブチル、1−メチルプロピル、2−メチルプロピル、
２，２−ジメチルエチルなどが挙げられる。ハロアルキ
ル基とは、１から５個のハロゲン原子が結合したアルキ
ル基を表し、好ましくは、１から３個のハロゲン原子が
結合したアルキル基を表す。具体的にはトリフルオロメ
チル、２−トリフルオロエチル、２−クロロエチルなど
が挙げられる。置換アルキル基における置換基として
は、炭素数１から４のアルコキシ基、炭素数１から４の
アルキルカルボニル基、炭素数１から４のアルキルカル
ボニルオキシ基、炭素数１から４のアルコキシカルボニ
ル基、炭素数１から４のアルコキシカルボニルオキシ基
等が挙げられる。式（Ｉ）〜式（III）における、Ｒ１
およびＲ２の好ましい例としては、同一または異なっ
て、水素原子、ハロゲン原子、メチル基、エチル基、ト
リフルオロメチル基などが挙げられる。特に好ましいの
は水素原子である。
素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子を表し、好ま
しくはフッ素原子、または塩素原子である。アルキル基
としては炭素数１から４のアルキル基が挙げられ、具体
的には、メチル、エチル、プロピル、1−メチルエチ
ル、ブチル、1−メチルプロピル、2−メチルプロピル、
２，２−ジメチルエチルなどが挙げられる。ハロアルキ
ル基とは、１から５個のハロゲン原子が結合したアルキ
ル基を表し、好ましくは、１から３個のハロゲン原子が
結合したアルキル基を表す。具体的にはトリフルオロメ
チル、２−トリフルオロエチル、２−クロロエチルなど
が挙げられる。置換アルキル基における置換基として
は、炭素数１から４のアルコキシ基、炭素数１から４の
アルキルカルボニル基、炭素数１から４のアルキルカル
ボニルオキシ基、炭素数１から４のアルコキシカルボニ
ル基、炭素数１から４のアルコキシカルボニルオキシ基
等が挙げられる。式（Ｉ）〜式（III）における、Ｒ１
およびＲ２の好ましい例としては、同一または異なっ
て、水素原子、ハロゲン原子、メチル基、エチル基、ト
リフルオロメチル基などが挙げられる。特に好ましいの
は水素原子である。
【００１０】式（Ｉ）〜式（III）における、Ｒ３の好
ましい例としては、水素原子、メチル基、エチル基、ア
セトキシメチル基、または、ピバロイルオキシメチル基
等が挙げられ、特に好ましいものは水素原子である。本
発明におけるＣａＭＫＫ阻害剤は、好ましくは、式（I
I）で表される化合物、またはその薬学上許容される塩
であり、更に好ましくは、式（IV)：
ましい例としては、水素原子、メチル基、エチル基、ア
セトキシメチル基、または、ピバロイルオキシメチル基
等が挙げられ、特に好ましいものは水素原子である。本
発明におけるＣａＭＫＫ阻害剤は、好ましくは、式（I
I）で表される化合物、またはその薬学上許容される塩
であり、更に好ましくは、式（IV)：
【化６】
で表される化合物、またはその薬学上許容される塩であ
る。
る。
【００１１】本明細書において、式（Ｉ）〜式（IV）で
表される７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ
［ｄｅ］イソキノリン−７−オン誘導体の「薬学上許容
される塩」としては、例えば、塩基性塩の場合、ナトリ
ウム塩、カリウム塩、リチウム塩等のアルカリ金属塩、
カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属
塩、亜鉛塩等の無機金属塩、メチルアミン、ジエチルア
ミン、トリエチルアミン、トリエタノールアミン、トリ
ヒドロキシメチルアミノメタン等の一級、二級、三級の
有機アミン塩、ピリジニウム塩等が挙げられ、酸性塩の
場合、塩酸、硝酸、燐酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水
素酸などの無機酸、並びにメタンスルホン酸、ｐ−トル
エンスルホン酸などの脂肪族、芳香族を含むスルホン酸
類、およびギ酸、酢酸、プロピオン酸、トリフルオロ酢
酸、安息香酸などの脂肪族、芳香族を含むカルボン酸の
ような有機酸との塩を含む。また、本発明には、式
（Ｉ）〜式（IV）で表される７Ｈ−ベンズイミダゾ−
［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン誘
導体またはその塩の水和物、エタノール溶媒和物等の溶
媒和物等も含まれる。
表される７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ
［ｄｅ］イソキノリン−７−オン誘導体の「薬学上許容
される塩」としては、例えば、塩基性塩の場合、ナトリ
ウム塩、カリウム塩、リチウム塩等のアルカリ金属塩、
カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属
塩、亜鉛塩等の無機金属塩、メチルアミン、ジエチルア
ミン、トリエチルアミン、トリエタノールアミン、トリ
ヒドロキシメチルアミノメタン等の一級、二級、三級の
有機アミン塩、ピリジニウム塩等が挙げられ、酸性塩の
場合、塩酸、硝酸、燐酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水
素酸などの無機酸、並びにメタンスルホン酸、ｐ−トル
エンスルホン酸などの脂肪族、芳香族を含むスルホン酸
類、およびギ酸、酢酸、プロピオン酸、トリフルオロ酢
酸、安息香酸などの脂肪族、芳香族を含むカルボン酸の
ような有機酸との塩を含む。また、本発明には、式
（Ｉ）〜式（IV）で表される７Ｈ−ベンズイミダゾ−
［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン誘
導体またはその塩の水和物、エタノール溶媒和物等の溶
媒和物等も含まれる。
【００１２】式（Ｉ）〜式（IV）で表される化合物は、
以下の方法で製造することができる。 製造法１：US2820037に記載された方法などを用いて、
以下の工程で製造することができる。すなわち、［１］
式（１−４）、または式（１−５）で表される化合物の
製造工程
以下の方法で製造することができる。 製造法１：US2820037に記載された方法などを用いて、
以下の工程で製造することができる。すなわち、［１］
式（１−４）、または式（１−５）で表される化合物の
製造工程
【化７】
（式中、Ｒ１およびＲ２は前記と同義である。Ｘは、ニ
トロ基、アミノ基、または保護基で保護されたアミノ基
を表す。） Ｏ−置換アニリン誘導体：式（１−２）と、ブロモナフ
タレン酸無水物：式（１−１）を、必要に応じて酸触媒
の存在下、水中、または酢酸、エタノール、ＤＭＦのよ
うな極性溶媒を用いて、通常０℃〜250℃の範囲で縮合
し、式（１−３）の化合物を製造することができる。Ｘ
がアミノ基である場合、式（１−３）の化合物は、必要
に応じてジシクロヘキシルカルボジイミドなどの脱水縮
合剤の存在下、ＤＭＦなどの不活性溶媒中で縮合反応を
行い、式（１−４）の化合物、および式（１−５）の化
合物へ導くことができる。Ｘが保護基で保護されたアミ
ノ基を表す場合、保護基を脱保護し、アミノ基へと返還
した後縮合反応を行うことができる。また、Ｘがニトロ
基の場合、接触水素化反応、鉄、亜鉛などの金属を用い
た還元反応を用いてアニリン誘導体を合成し、続いて上
述の縮合反応を行うことができる。式（１−４）の化合
物、および式（１−５）の化合物を含む混合物は、その
まま次の反応へ供することも可能であるが、シリカゲル
カラムクロマトグラフィーや、分別再結晶等を用いて、
それぞれの位置異性体を分離精製することも可能であ
る。式（１−４）、および（１−５）の異性体は、各々
公知化合物であり、 １Ｈ−ＮＭＲデータを取得すること
で区別することができる。（Bull.Chem.Soc.Jpn.,74,17
3(2001)）また、式（１−１）の化合物の位置異性体を
原料に用いることにより、上記と同様の方法で、式（１
−４）の化合物の他の異性体を合成することもできる。
トロ基、アミノ基、または保護基で保護されたアミノ基
を表す。） Ｏ−置換アニリン誘導体：式（１−２）と、ブロモナフ
タレン酸無水物：式（１−１）を、必要に応じて酸触媒
の存在下、水中、または酢酸、エタノール、ＤＭＦのよ
うな極性溶媒を用いて、通常０℃〜250℃の範囲で縮合
し、式（１−３）の化合物を製造することができる。Ｘ
がアミノ基である場合、式（１−３）の化合物は、必要
に応じてジシクロヘキシルカルボジイミドなどの脱水縮
合剤の存在下、ＤＭＦなどの不活性溶媒中で縮合反応を
行い、式（１−４）の化合物、および式（１−５）の化
合物へ導くことができる。Ｘが保護基で保護されたアミ
ノ基を表す場合、保護基を脱保護し、アミノ基へと返還
した後縮合反応を行うことができる。また、Ｘがニトロ
基の場合、接触水素化反応、鉄、亜鉛などの金属を用い
た還元反応を用いてアニリン誘導体を合成し、続いて上
述の縮合反応を行うことができる。式（１−４）の化合
物、および式（１−５）の化合物を含む混合物は、その
まま次の反応へ供することも可能であるが、シリカゲル
カラムクロマトグラフィーや、分別再結晶等を用いて、
それぞれの位置異性体を分離精製することも可能であ
る。式（１−４）、および（１−５）の異性体は、各々
公知化合物であり、 １Ｈ−ＮＭＲデータを取得すること
で区別することができる。（Bull.Chem.Soc.Jpn.,74,17
3(2001)）また、式（１−１）の化合物の位置異性体を
原料に用いることにより、上記と同様の方法で、式（１
−４）の化合物の他の異性体を合成することもできる。
【００１３】［２］式（２−２）の化合物の製造工程
【化８】
（式中、Ｒ１およびＲ２は前記と同義である。）
工程１で得られる式（１−４）の化合物、式（１−５）
の化合物、またはそれらの混合物等の、式（２−１）で
表される化合物から、実施例に記載された方法などを用
いて、式（２−２）の化合物を製造することができる。
式（２−２）で表される化合物が位置異性体の混合物で
ある場合は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、分
別再結晶等を用いて位置異性体を分離することもでき
る。
の化合物、またはそれらの混合物等の、式（２−１）で
表される化合物から、実施例に記載された方法などを用
いて、式（２−２）の化合物を製造することができる。
式（２−２）で表される化合物が位置異性体の混合物で
ある場合は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、分
別再結晶等を用いて位置異性体を分離することもでき
る。
【００１４】［３］式（３−１）の化合物の製造工程
【化９】
（式中、Ｒ１およびＲ２は前記と同義である。）
式（２−２）の化合物に対して、水酸化ナトリウム、水
酸化カリウムなどの塩基、あるいは濃塩酸などの酸の存
在下、加水分解反応を行い、式（３−１）で表される本
発明の化合物を製造することができる。上記式（３−
１）で表される化合物が位置異性体の混合物である場合
は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、分別再結晶
等を用いて位置異性体を分離することもできる。式（３
−１）で表される化合物は、公知の方法でエステル化反
応を行い、カルボキシル基をエステルへと変換すること
ができる。該方法については、新実験化学講座（丸善；
第２２巻）等に記載されている。また、前記製造方法で
使用されるアミノ基の保護基としては、当業者が通常使
用する保護基が挙げられ、保護・脱保護の方法等につい
ては、「Protective groups in organic chemistry(第
２版/Greene, T.W., John Wiley & Sons, Inc.)に記載
された方法等が挙げられる。
酸化カリウムなどの塩基、あるいは濃塩酸などの酸の存
在下、加水分解反応を行い、式（３−１）で表される本
発明の化合物を製造することができる。上記式（３−
１）で表される化合物が位置異性体の混合物である場合
は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、分別再結晶
等を用いて位置異性体を分離することもできる。式（３
−１）で表される化合物は、公知の方法でエステル化反
応を行い、カルボキシル基をエステルへと変換すること
ができる。該方法については、新実験化学講座（丸善；
第２２巻）等に記載されている。また、前記製造方法で
使用されるアミノ基の保護基としては、当業者が通常使
用する保護基が挙げられ、保護・脱保護の方法等につい
ては、「Protective groups in organic chemistry(第
２版/Greene, T.W., John Wiley & Sons, Inc.)に記載
された方法等が挙げられる。
【００１５】本発明において、ＣａＭＫＫは、そのホモ
ログ、アイソフォームも含んでいる。例えばラットＣａ
ＭＫＫの配列は、Anderson, K.A. et al. (1998) J. Bi
ol. Chem. 273, 31880-31889 等に記載されているが、
ＣａＭＫＫα、およびＣａＭＫＫβの２種類のアイソフ
ォームが知られている。また、ヒトＣａＭＫＫの配列に
ついても上記文献等に開示されている。
ログ、アイソフォームも含んでいる。例えばラットＣａ
ＭＫＫの配列は、Anderson, K.A. et al. (1998) J. Bi
ol. Chem. 273, 31880-31889 等に記載されているが、
ＣａＭＫＫα、およびＣａＭＫＫβの２種類のアイソフ
ォームが知られている。また、ヒトＣａＭＫＫの配列に
ついても上記文献等に開示されている。
【００１６】本発明におけるハイスループットスクリー
ニング方法とは、１度に多数のサンプルの酵素阻害活性
を評価することができるスクリーニング方法を表し、具
体的には、96穴プレート（具体的には、8.5cm ｘ 12.7c
mの大きさのものなどが汎用されている。）等を用いて
評価する方法等が挙げられる。本発明のハイスループッ
トスクリーニング方法は、以下の工程を含むものであ
る。すなわち、 ［１］96穴Ｖ底プレート等、多数のサンプルを独立した
反応槽にサンプリングできる構造を有するプレートの各
穴に、被検化合物、ＣａＭＫＫ、カルモジュリンキナー
ゼＩなどの基質、カルモジュリン、[γ−３３Ｐ]- ＡＴ
Ｐを添加して、適当な温度、例えば37℃で、約1時間、
リン酸化反応を進行させた後、 ＥＤＴＡ、トリクロロ
酢酸、塩酸などの試薬を用いて反応を停止させる。ここ
で、基質と酵素の相互作用を促進するために、酵素反応
時にコールドのＡＴＰを添加してもよい。また、３３Ｐ
の取り込みを完全に停止させるために、反応停止時にコ
ールドのＡＴＰを添加してもよい。 ［２］各穴の反応液の一部を等量ずつ、シート状のフィ
ルター、好ましくは、リン酸基が導入されたグラスファ
イバーフィルター上の対応する位置に滴下する。このフ
ィルターをリン酸溶液で５回、エタノールで１回洗浄し
て未反応の[γ-３ ３Ｐ]- ＡＴＰを除いた後、乾燥させ
る。 ［３］乾燥後のフィルターにシンチレータ、好ましくは
固形シンチレータシートを重ねて熱融解により浸透さ
せ、再固化後、プレートカウンタで[γ-３３Ｐ]の放射
活性を定量する。 ここでＣａＭＫＫは、本発明明細書の実施例に示す方法
等を用いて調製することができる。本発明の７Ｈ−ベン
ズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イソキノリン
−７−オン誘導体は、前述のように、ＣａＭＫＫに選択
的な唯一の阻害剤であり、ＣａＭＫＫ阻害作用を指標と
した医薬品のスクリーニング等に用いることができる。
例えば、ＣａＭＫＫの機能はそもそも不明であるが、当
該化合物を加えることにより、ＣａＭＫＫの機能を阻害
した細胞培養系を構築することができる。従って、その
ような細胞培養系における生理学的な挙動を調べること
によって、ＣａＭＫＫの機能を推定することができる。
また、本発明の７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベ
ンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン誘導体は、ＣａＭ
ＫＫの機能を指標とする種々のスクリーニング系におい
て、陽性、あるいは陰性の対照化合物として用いること
ができる。また、本発明の７Ｈ−ベンズイミダゾ−
［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン誘
導体は、ＣａＭＫＫの機能亢進が増悪をもたらす疾患の
治療剤として用いることができる。本発明の７Ｈ−ベン
ズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イソキノリン
−７−オン誘導体は、これを医薬として用いるにあた
り、経口的または非経口的（例えば、静脈内、皮下、も
しくは筋肉内注射、局所的、経直腸的、経皮的、または
経鼻的）に投与することができる。経口投与のための形
態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、丸剤、顆粒
剤、散剤、液剤、シロップ剤または懸濁剤などが挙げら
れ、非経口投与のための形態としては、例えば、注射用
水性剤もしくは油性剤、軟膏剤、クリーム剤、ローショ
ン剤、エアロゾル剤、坐剤、貼付剤などが挙げられる。
これらの製剤は、従来公知の技術を用いて調製され、許
容される通常の担体、賦形剤、結合剤、安定剤等を含有
することができる。また、注射剤で用いる場合には許容
される緩衝剤、溶解補助剤、等張剤等を添加することも
できる。本発明の７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］
ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン誘導体またはそ
の医薬上許容される塩の投与量、投与回数は、症状、年
令、体重、投与形態によって異なるが、通常は成人に対
して本発明化合物の有効成分量として、１日あたり約１
〜２０００ｍｇ、好ましくは１０〜５００ｍｇを１回ま
たは数回に分けて投与することができる。
ニング方法とは、１度に多数のサンプルの酵素阻害活性
を評価することができるスクリーニング方法を表し、具
体的には、96穴プレート（具体的には、8.5cm ｘ 12.7c
mの大きさのものなどが汎用されている。）等を用いて
評価する方法等が挙げられる。本発明のハイスループッ
トスクリーニング方法は、以下の工程を含むものであ
る。すなわち、 ［１］96穴Ｖ底プレート等、多数のサンプルを独立した
反応槽にサンプリングできる構造を有するプレートの各
穴に、被検化合物、ＣａＭＫＫ、カルモジュリンキナー
ゼＩなどの基質、カルモジュリン、[γ−３３Ｐ]- ＡＴ
Ｐを添加して、適当な温度、例えば37℃で、約1時間、
リン酸化反応を進行させた後、 ＥＤＴＡ、トリクロロ
酢酸、塩酸などの試薬を用いて反応を停止させる。ここ
で、基質と酵素の相互作用を促進するために、酵素反応
時にコールドのＡＴＰを添加してもよい。また、３３Ｐ
の取り込みを完全に停止させるために、反応停止時にコ
ールドのＡＴＰを添加してもよい。 ［２］各穴の反応液の一部を等量ずつ、シート状のフィ
ルター、好ましくは、リン酸基が導入されたグラスファ
イバーフィルター上の対応する位置に滴下する。このフ
ィルターをリン酸溶液で５回、エタノールで１回洗浄し
て未反応の[γ-３ ３Ｐ]- ＡＴＰを除いた後、乾燥させ
る。 ［３］乾燥後のフィルターにシンチレータ、好ましくは
固形シンチレータシートを重ねて熱融解により浸透さ
せ、再固化後、プレートカウンタで[γ-３３Ｐ]の放射
活性を定量する。 ここでＣａＭＫＫは、本発明明細書の実施例に示す方法
等を用いて調製することができる。本発明の７Ｈ−ベン
ズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イソキノリン
−７−オン誘導体は、前述のように、ＣａＭＫＫに選択
的な唯一の阻害剤であり、ＣａＭＫＫ阻害作用を指標と
した医薬品のスクリーニング等に用いることができる。
例えば、ＣａＭＫＫの機能はそもそも不明であるが、当
該化合物を加えることにより、ＣａＭＫＫの機能を阻害
した細胞培養系を構築することができる。従って、その
ような細胞培養系における生理学的な挙動を調べること
によって、ＣａＭＫＫの機能を推定することができる。
また、本発明の７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベ
ンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン誘導体は、ＣａＭ
ＫＫの機能を指標とする種々のスクリーニング系におい
て、陽性、あるいは陰性の対照化合物として用いること
ができる。また、本発明の７Ｈ−ベンズイミダゾ−
［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン誘
導体は、ＣａＭＫＫの機能亢進が増悪をもたらす疾患の
治療剤として用いることができる。本発明の７Ｈ−ベン
ズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イソキノリン
−７−オン誘導体は、これを医薬として用いるにあた
り、経口的または非経口的（例えば、静脈内、皮下、も
しくは筋肉内注射、局所的、経直腸的、経皮的、または
経鼻的）に投与することができる。経口投与のための形
態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、丸剤、顆粒
剤、散剤、液剤、シロップ剤または懸濁剤などが挙げら
れ、非経口投与のための形態としては、例えば、注射用
水性剤もしくは油性剤、軟膏剤、クリーム剤、ローショ
ン剤、エアロゾル剤、坐剤、貼付剤などが挙げられる。
これらの製剤は、従来公知の技術を用いて調製され、許
容される通常の担体、賦形剤、結合剤、安定剤等を含有
することができる。また、注射剤で用いる場合には許容
される緩衝剤、溶解補助剤、等張剤等を添加することも
できる。本発明の７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］
ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン誘導体またはそ
の医薬上許容される塩の投与量、投与回数は、症状、年
令、体重、投与形態によって異なるが、通常は成人に対
して本発明化合物の有効成分量として、１日あたり約１
〜２０００ｍｇ、好ましくは１０〜５００ｍｇを１回ま
たは数回に分けて投与することができる。
【００１７】
【実施例】以下に実施例および参考例を説明するが、本
発明はもとよりこれに限定されるものではない。実施例
では、下記の略号が使用されている。 ＤＭＳＯ ＝ ジメチルスルホキシド ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸 実施例１化合物の合成（混合物） 工程１３−ブロモ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベン
ズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オンおよび４−ブロモ−
７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イ
ソキノリン−７−オンの混合物 ３−ブロモ−１，８−ナフタリンジカルボン酸無水物
（２．７９ｇ）とＯ−フェニレンジアミン（１．１０
ｇ）、酢酸（１５ｍｌ）をＯ−クロロベンゼン（２５ｍ
ｌ）に懸濁させ、１００℃で７時間加熱還流した。反応
液を放冷後、結晶を濾取、減圧乾燥した後、標記化合物
（２．４９ｇ）を得た。１ Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，３００ＭＨｚ）δ：
８．８１（ｍ），８．６７−８．４９（ｍ），８．４４
（ｍ），８．２５（ｍ），８．０４（ｍ），７．８６
（ｍ），７．４９（ｍ）
発明はもとよりこれに限定されるものではない。実施例
では、下記の略号が使用されている。 ＤＭＳＯ ＝ ジメチルスルホキシド ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸 実施例１化合物の合成（混合物） 工程１３−ブロモ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベン
ズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オンおよび４−ブロモ−
７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イ
ソキノリン−７−オンの混合物 ３−ブロモ−１，８−ナフタリンジカルボン酸無水物
（２．７９ｇ）とＯ−フェニレンジアミン（１．１０
ｇ）、酢酸（１５ｍｌ）をＯ−クロロベンゼン（２５ｍ
ｌ）に懸濁させ、１００℃で７時間加熱還流した。反応
液を放冷後、結晶を濾取、減圧乾燥した後、標記化合物
（２．４９ｇ）を得た。１ Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，３００ＭＨｚ）δ：
８．８１（ｍ），８．６７−８．４９（ｍ），８．４４
（ｍ），８．２５（ｍ），８．０４（ｍ），７．８６
（ｍ），７．４９（ｍ）
【００１８】工程２３−シアノ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベン
ズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オンおよび４−シアノ−
７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イ
ソキノリン−７−オンの混合物 ３−ブロモ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベン
ズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オンおよび４−ブロモ−
７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イ
ソキノリン−７−オンの混合物（１．０ｇ）とシアン化
銅（Ｉ）（０．３１ｇ）をピリジン（７．１ｍｌ）に加
え、封管中、１５０℃で１０時間加熱した。反応液を放
冷後、アンモニア水で希釈し沈殿した結晶を濾取した。
濾上物は水で洗液が中性になるまで洗浄し、室温で減圧
乾燥し、標記化合物（１．１３ｇ）を得た。１ Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，３００ＭＨｚ）δ：
８．７８（ｍ），８．６１−８．３７（ｍ），８．１３
（ｍ），７．８９（ｍ），７．５２（ｍ）
ズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オンおよび４−シアノ−
７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イ
ソキノリン−７−オンの混合物 ３−ブロモ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベン
ズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オンおよび４−ブロモ−
７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イ
ソキノリン−７−オンの混合物（１．０ｇ）とシアン化
銅（Ｉ）（０．３１ｇ）をピリジン（７．１ｍｌ）に加
え、封管中、１５０℃で１０時間加熱した。反応液を放
冷後、アンモニア水で希釈し沈殿した結晶を濾取した。
濾上物は水で洗液が中性になるまで洗浄し、室温で減圧
乾燥し、標記化合物（１．１３ｇ）を得た。１ Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，３００ＭＨｚ）δ：
８．７８（ｍ），８．６１−８．３７（ｍ），８．１３
（ｍ），７．８９（ｍ），７．５２（ｍ）
【００１９】工程３３−カルボキシ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］
ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オンおよび４−カル
ボキシ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ
［ｄｅ］イソキノリン−７−オンの混合物 ３−シアノ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベン
ズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オンおよび４−シアノ−
７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イ
ソキノリン−７−オンの混合物（１００ｍｇ）を濃硫酸
（１０ｍｌ）、水（１０ｍｌ）、酢酸（５ｍｌ）に懸濁
させ、１２０℃で５時間加熱した。反応液を放冷後、６
０ｍｌの水に注入し、室温で１時間撹伴した。反応懸濁
液をろ過し、濾上物を室温で減圧乾燥して残渣を得た。
これを２％水酸化ナトリウム水溶液に懸濁し、１００℃
で１時間撹伴した。反応懸濁液をろ過し、濾液を５％塩
酸水でｐＨを３に調整した後、酢酸エチルで抽出し有機
層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥して
減圧濃縮後、標記化合物（８０ｍｇ）を得た。１ Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，３００ＭＨｚ）δ：
９．３１（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），９．０３（ｄ，Ｊ＝
７．５Ｈｚ），８．７２（ｍ），８．３９（ｍ），８．
０４−７．８５（ｍ），７．４８（ｍ）。
ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オンおよび４−カル
ボキシ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ
［ｄｅ］イソキノリン−７−オンの混合物 ３−シアノ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベン
ズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オンおよび４−シアノ−
７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イ
ソキノリン−７−オンの混合物（１００ｍｇ）を濃硫酸
（１０ｍｌ）、水（１０ｍｌ）、酢酸（５ｍｌ）に懸濁
させ、１２０℃で５時間加熱した。反応液を放冷後、６
０ｍｌの水に注入し、室温で１時間撹伴した。反応懸濁
液をろ過し、濾上物を室温で減圧乾燥して残渣を得た。
これを２％水酸化ナトリウム水溶液に懸濁し、１００℃
で１時間撹伴した。反応懸濁液をろ過し、濾液を５％塩
酸水でｐＨを３に調整した後、酢酸エチルで抽出し有機
層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥して
減圧濃縮後、標記化合物（８０ｍｇ）を得た。１ Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，３００ＭＨｚ）δ：
９．３１（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），９．０３（ｄ，Ｊ＝
７．５Ｈｚ），８．７２（ｍ），８．３９（ｍ），８．
０４−７．８５（ｍ），７．４８（ｍ）。
【００２０】実施例２３−カルボキシ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］
ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オンと４−カルボキ
シ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄ
ｅ］イソキノリン−７−オンの分離精製 ３−カルボキシ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］
ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オンおよび４−カル
ボキシ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ
［ｄｅ］イソキノリン−７−オンの混合物（７０μｇ）
をＤＭＳＯ（１滴）アセトニトリル（７滴）に溶解し、
逆相ＨＰＬＣ条件［カラム，Ｃｏｓｍｏｓｉｌ（登録商
標）５Ｃ１８−ＡＲ−ＩＩ（４．６ｍｍ×１５ｃｍ）、
移動相，アセトニトリル：水：ＴＦＡ（４５：５５：
０．０５）］で分取し、保持時間１０．９分の分画と保
持時間１１．７分の分画を得、それぞれを減圧濃縮し、
異性体Ａ（７．５μｇ）、異性体Ｂ（８．１μｇ）を得
た。
ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オンと４−カルボキ
シ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄ
ｅ］イソキノリン−７−オンの分離精製 ３−カルボキシ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］
ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オンおよび４−カル
ボキシ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ
［ｄｅ］イソキノリン−７−オンの混合物（７０μｇ）
をＤＭＳＯ（１滴）アセトニトリル（７滴）に溶解し、
逆相ＨＰＬＣ条件［カラム，Ｃｏｓｍｏｓｉｌ（登録商
標）５Ｃ１８−ＡＲ−ＩＩ（４．６ｍｍ×１５ｃｍ）、
移動相，アセトニトリル：水：ＴＦＡ（４５：５５：
０．０５）］で分取し、保持時間１０．９分の分画と保
持時間１１．７分の分画を得、それぞれを減圧濃縮し、
異性体Ａ（７．５μｇ）、異性体Ｂ（８．１μｇ）を得
た。
【００２１】実施例３ＣａＭＫＫの調製
ラットCaMKKα（配列は以下の文献に記載。Tokumitsu,
h. et al. (1995) J. Biol. Chem. 270, 19320-19324)
は大腸菌(BL21)を用いて以下の条件で発現および精製
した。100μg/ml Ampicillin を含むLB-培地において培
養し600 nmの吸光度が1.2 となった時点において0.1mM
IPTG（終濃度）を加えさらに12-16時間培養した。その
後大腸菌を回収し、超音波破砕した後、その上清をMono
Qカラムに供しNaCl濃度勾配により溶出した。本方法に
より粗精製し、純度約９０％の目的とする酵素を得た。
完全精製標品はCaM-セファロースカラムを用いて2mM EG
TAを含む溶出液にて溶出することにより純度約９５％以
上の目的とする酵素を得た。酵素標品は50mM HEPES pH
7.5, 0.5mM EDTA, 0.5mM EGTA, 1mM DTT, 0.1mM PMSF,4
0% グリセロール, 10% エチレングリコールに溶解して-
30度に保存した。ラットＣａＭＫＫβは、文献（Tokumi
tsu, H. et al.（2001）, Bio-chemistry 40, 13925-13
932）記載の方法で調製した。
h. et al. (1995) J. Biol. Chem. 270, 19320-19324)
は大腸菌(BL21)を用いて以下の条件で発現および精製
した。100μg/ml Ampicillin を含むLB-培地において培
養し600 nmの吸光度が1.2 となった時点において0.1mM
IPTG（終濃度）を加えさらに12-16時間培養した。その
後大腸菌を回収し、超音波破砕した後、その上清をMono
Qカラムに供しNaCl濃度勾配により溶出した。本方法に
より粗精製し、純度約９０％の目的とする酵素を得た。
完全精製標品はCaM-セファロースカラムを用いて2mM EG
TAを含む溶出液にて溶出することにより純度約９５％以
上の目的とする酵素を得た。酵素標品は50mM HEPES pH
7.5, 0.5mM EDTA, 0.5mM EGTA, 1mM DTT, 0.1mM PMSF,4
0% グリセロール, 10% エチレングリコールに溶解して-
30度に保存した。ラットＣａＭＫＫβは、文献（Tokumi
tsu, H. et al.（2001）, Bio-chemistry 40, 13925-13
932）記載の方法で調製した。
【００２２】実施例４ＣａＭ−ＫＩの調製
GST-CaMK-Ｉ(K49E) およびGST-CaM-KI(1-293, K49E)は
大腸菌(JM109)を用いて以下の条件で発現および精製し
た。100μg/ml Ampicillin を含むLB-培地において培養
し600 nmの吸光度が1.2 となった時点において1mM IPTG
（終濃度）を加えさらに12-16時間培養した。その後大
腸菌を回収し、0.1 mM PMSFを含むPBSに溶かし、超音波
破砕した後、その上清をグルタチオンセファロースに供
した。グルタチオンセファロースを0.1 mM PMSFを含むP
BSにより洗浄し、10 mM グルタチオンを含む50 mM Tris
pH 8.0 溶液にてGST-融合タンパク質を溶出した。本方
法により純度約９０％の目的とする酵素を得た。精製標
品は50mM HEPES pH7.5, 0.5mM EDTA, 0.5mM EGTA, 1mM
DTT, 0.1mM PMSF,40% グリセロール, 10% エチレングリ
コールに溶解して-30度に保存した。
大腸菌(JM109)を用いて以下の条件で発現および精製し
た。100μg/ml Ampicillin を含むLB-培地において培養
し600 nmの吸光度が1.2 となった時点において1mM IPTG
（終濃度）を加えさらに12-16時間培養した。その後大
腸菌を回収し、0.1 mM PMSFを含むPBSに溶かし、超音波
破砕した後、その上清をグルタチオンセファロースに供
した。グルタチオンセファロースを0.1 mM PMSFを含むP
BSにより洗浄し、10 mM グルタチオンを含む50 mM Tris
pH 8.0 溶液にてGST-融合タンパク質を溶出した。本方
法により純度約９０％の目的とする酵素を得た。精製標
品は50mM HEPES pH7.5, 0.5mM EDTA, 0.5mM EGTA, 1mM
DTT, 0.1mM PMSF,40% グリセロール, 10% エチレングリ
コールに溶解して-30度に保存した。
【００２３】実施例５ＣａＭＫＫ阻害作用の測定（ハイスループットスクリー
ニング） CaMKK（ここではCaMKKαを用いた。）の活性測定は、
[γ-33P]-ATPとCaM-KIを基質とし、CaMKKによるリン酸
化反応でCaM-KIに導入された[γ-33P]の放射活性を測定
することで定量した。以下のアッセイにおいて、各試薬
は、緩衝液（10mM Mg(Ac)2、0.1mM CaCl2、1mM DTTを含
む50mM HEPES(pH7.5)）に溶解し、使用した。被検化合
物は、粉末をDMSOに溶解した後、緩衝液で必要濃度に希
釈して使用した。96穴Ｖ底プレートの各穴に、種々の濃
度の被検化合物溶液10μl、CaMKK、CaMK-Ｉ、カルモジ
ュリンを含む溶液10μl、[γ-33P]-ATP、cold ATPを含
む溶液10μlを順に添加して、反応を開始させた（反応
液総量30μｌ中の各試薬濃度は、CaMKK：CaMKKストック
液20μｌ/ml、CaM-KI：67μg/ml、カルモジュリン：1μ
Ｍ、[γ-33P]-ATP ：6.7μCi/ml(2.2〜6.7nM)、Cold A
TP：0.3μＭ)。37℃で1時間、リン酸化反応を進行させ
た後、 100mM EDTA、10mM ATPを含む50mM HEPES(pH7.5)
を5μｌずつ加えて反応を停止させた。反応停止後、反
応液を15μｌずつ、シート状のグラスファイバーフィル
ター（Wallac、filtermat P30）の各穴に対応する位置
に滴下、浸透させた。このフィルターを150mMリン酸溶
液で５回、エタノールで１回洗浄して未反応の[γ-33P]
-ATPを除いた後、乾燥させた。乾燥後のフィルターに固
形シンチレータシートを重ねて熱融解により浸透させ、
再固化後、フィルターに補足されたCaM-KIに導入されて
いる[γ-33P]の放射活性をプレート用カウンタで測定、
定量した。被験化合物の阻害率は、以下の式により算出
した。 阻害率(%)＝100×(A−B)/(A−C) A：CaMKK添加、被検化合物非添加の場合の放射活性カウ
ント B：CaMKK添加、被検化合物添加の場合の放射活性カウン
ト C：CaMKK非添加、被検化合物非添加の場合の放射活性カ
ウント（バックグランド） 1化合物につき４〜５種類の濃度で求めた阻害率を解析
して、IC50値を算出した。尚、各濃度においては、Ｎ＝
３で測定し、平均値を求めた。実施例１、および実施例
２（異性体B）についてIC50値を測定した結果を表１に
示す。
ニング） CaMKK（ここではCaMKKαを用いた。）の活性測定は、
[γ-33P]-ATPとCaM-KIを基質とし、CaMKKによるリン酸
化反応でCaM-KIに導入された[γ-33P]の放射活性を測定
することで定量した。以下のアッセイにおいて、各試薬
は、緩衝液（10mM Mg(Ac)2、0.1mM CaCl2、1mM DTTを含
む50mM HEPES(pH7.5)）に溶解し、使用した。被検化合
物は、粉末をDMSOに溶解した後、緩衝液で必要濃度に希
釈して使用した。96穴Ｖ底プレートの各穴に、種々の濃
度の被検化合物溶液10μl、CaMKK、CaMK-Ｉ、カルモジ
ュリンを含む溶液10μl、[γ-33P]-ATP、cold ATPを含
む溶液10μlを順に添加して、反応を開始させた（反応
液総量30μｌ中の各試薬濃度は、CaMKK：CaMKKストック
液20μｌ/ml、CaM-KI：67μg/ml、カルモジュリン：1μ
Ｍ、[γ-33P]-ATP ：6.7μCi/ml(2.2〜6.7nM)、Cold A
TP：0.3μＭ)。37℃で1時間、リン酸化反応を進行させ
た後、 100mM EDTA、10mM ATPを含む50mM HEPES(pH7.5)
を5μｌずつ加えて反応を停止させた。反応停止後、反
応液を15μｌずつ、シート状のグラスファイバーフィル
ター（Wallac、filtermat P30）の各穴に対応する位置
に滴下、浸透させた。このフィルターを150mMリン酸溶
液で５回、エタノールで１回洗浄して未反応の[γ-33P]
-ATPを除いた後、乾燥させた。乾燥後のフィルターに固
形シンチレータシートを重ねて熱融解により浸透させ、
再固化後、フィルターに補足されたCaM-KIに導入されて
いる[γ-33P]の放射活性をプレート用カウンタで測定、
定量した。被験化合物の阻害率は、以下の式により算出
した。 阻害率(%)＝100×(A−B)/(A−C) A：CaMKK添加、被検化合物非添加の場合の放射活性カウ
ント B：CaMKK添加、被検化合物添加の場合の放射活性カウン
ト C：CaMKK非添加、被検化合物非添加の場合の放射活性カ
ウント（バックグランド） 1化合物につき４〜５種類の濃度で求めた阻害率を解析
して、IC50値を算出した。尚、各濃度においては、Ｎ＝
３で測定し、平均値を求めた。実施例１、および実施例
２（異性体B）についてIC50値を測定した結果を表１に
示す。
【表１】
【００２４】実施例６３−ブロモ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベン
ズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オンおよび４−ブロモ−
７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イ
ソキノリン−７−オンの合成 Bull.Chem.Soc.Jpn. 74, 173 (2001)に記載された方法
を参考に合成した。４−ブロモ−１，８−ナフチル酸無
水物（７６．３ｇ）の酢酸（３００ｍｌ）中に室温下で
Ｏ−フェニレンジアミン（３０．１５ｇ）およびクロロ
ベンゼン（６００ｍｌ）を加えた後、５時間還流撹拌を
した。反応液を１０−１５℃に冷却し、結晶を濾取し、
３−ブロモ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベン
ズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オンおよび４−ブロモ−
７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イ
ソキノリン−７−オンの混合物（一番晶：８０．２ｇ，
二番晶：１１．１ｇ）を得た。一番晶およびほぼ同一組
成の結晶（１０３．９９ｇ）を数バッチに分けてクロロ
ホルムで再結晶を繰り返し、４−ブロモ−７Ｈ−ベンズ
イミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−
７−オン（１４．９９ｇ）を得た。二番晶およびほぼ同
一組成の結晶（３３．７５ｇ）をあわせて数バッチに分
けてクロロホルムを用いてカラムクロマト精製を繰り返
し、３−ブロモ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］
ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン（１．１６ｇ）
を得た。それぞれの異性体の構造は、１H-NMRデータを
取得し、上記文献記載のデータと比較することで確認し
た。
ズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オンおよび４−ブロモ−
７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イ
ソキノリン−７−オンの合成 Bull.Chem.Soc.Jpn. 74, 173 (2001)に記載された方法
を参考に合成した。４−ブロモ−１，８−ナフチル酸無
水物（７６．３ｇ）の酢酸（３００ｍｌ）中に室温下で
Ｏ−フェニレンジアミン（３０．１５ｇ）およびクロロ
ベンゼン（６００ｍｌ）を加えた後、５時間還流撹拌を
した。反応液を１０−１５℃に冷却し、結晶を濾取し、
３−ブロモ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベン
ズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オンおよび４−ブロモ−
７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イ
ソキノリン−７−オンの混合物（一番晶：８０．２ｇ，
二番晶：１１．１ｇ）を得た。一番晶およびほぼ同一組
成の結晶（１０３．９９ｇ）を数バッチに分けてクロロ
ホルムで再結晶を繰り返し、４−ブロモ−７Ｈ−ベンズ
イミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−
７−オン（１４．９９ｇ）を得た。二番晶およびほぼ同
一組成の結晶（３３．７５ｇ）をあわせて数バッチに分
けてクロロホルムを用いてカラムクロマト精製を繰り返
し、３−ブロモ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］
ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン（１．１６ｇ）
を得た。それぞれの異性体の構造は、１H-NMRデータを
取得し、上記文献記載のデータと比較することで確認し
た。
【００２５】実施例７化合物の合成（異性体）
工程１３−シアノ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベン
ズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン
ズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン
【化１０】
実施例６で得た３−ブロモ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−
［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン
（１．１３ｇ）とシアン化銅（Ｉ）（０．４７ｇ）をピ
リジン（１０ｍｌ）に加え、封管中、１５０℃で２０時
間加熱した。反応液を放冷後、アンモニア水で希釈し沈
殿した結晶を濾取した。濾上物は水で洗液が中性になる
まで洗浄し、室温で減圧乾燥し、標記化合物を３−ブロ
モ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄ
ｅ］イソキノリン−７−オンとの混合物として得た。収
量０．４５ｇ。ＨＰＬＣ面百値 ８３．５％（３−シア
ノ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄ
ｅ］イソキノリン−７−オン）。１ Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，３００ＭＨｚ）δ：
８．８４−８．８０（２Ｈ,ｍ），８．６２（１Ｈ，ｄ
ｄ,Ｊ＝８．０，１．０Ｈｚ），８．５１（１Ｈ,ｄ,Ｊ
＝７．５Ｈｚ），８．４６−８．４３（１Ｈ，ｍ），
８．１８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５，１．０Ｈｚ），７．
９４（１Ｈ，ｍ），７．５４（２Ｈ，ｍ） 工程２３−カルボキシ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］
ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン
［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン
（１．１３ｇ）とシアン化銅（Ｉ）（０．４７ｇ）をピ
リジン（１０ｍｌ）に加え、封管中、１５０℃で２０時
間加熱した。反応液を放冷後、アンモニア水で希釈し沈
殿した結晶を濾取した。濾上物は水で洗液が中性になる
まで洗浄し、室温で減圧乾燥し、標記化合物を３−ブロ
モ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄ
ｅ］イソキノリン−７−オンとの混合物として得た。収
量０．４５ｇ。ＨＰＬＣ面百値 ８３．５％（３−シア
ノ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄ
ｅ］イソキノリン−７−オン）。１ Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，３００ＭＨｚ）δ：
８．８４−８．８０（２Ｈ,ｍ），８．６２（１Ｈ，ｄ
ｄ,Ｊ＝８．０，１．０Ｈｚ），８．５１（１Ｈ,ｄ,Ｊ
＝７．５Ｈｚ），８．４６−８．４３（１Ｈ，ｍ），
８．１８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５，１．０Ｈｚ），７．
９４（１Ｈ，ｍ），７．５４（２Ｈ，ｍ） 工程２３−カルボキシ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］
ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン
【化１１】
３−シアノ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベン
ズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン（０．４５ｇ）を濃
硫酸（５ｍｌ）、水（５ｍｌ）、酢酸（２．５ｍｌ）に
懸濁させ、３時間加熱還流した。反応液を放冷後、２７
０ｍｌの水に注入し、反応懸濁液をろ取して残渣を得
た。これを２％水酸化ナトリウム水溶液に加熱溶解して
不溶物を吸引ろ過により除いた。濾液を５％塩酸水でｐ
Ｈを２に調整した後、析出した結晶をろ取した。得られ
た粗結晶を酢酸で再結晶し、標記化合物（０．３６ｇ）
を得た。本化合物は、実施例２の異性体ＢとＨＰＬＣ溶
出時間保持時間が完全に一致した。本化合物は、１モル
の酢酸を含む。１ Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，３００ＭＨｚ）δ：
９．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），８．８４−
８．７６（２Ｈ，ｍ），８．４５（２Ｈ，ｍ），８．０
６（１Ｈ，ｍ），７．９２（１Ｈ，ｍ），７．５４（２
Ｈ，ｍ），１．９１（３Ｈ，ｓ）
ズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン（０．４５ｇ）を濃
硫酸（５ｍｌ）、水（５ｍｌ）、酢酸（２．５ｍｌ）に
懸濁させ、３時間加熱還流した。反応液を放冷後、２７
０ｍｌの水に注入し、反応懸濁液をろ取して残渣を得
た。これを２％水酸化ナトリウム水溶液に加熱溶解して
不溶物を吸引ろ過により除いた。濾液を５％塩酸水でｐ
Ｈを２に調整した後、析出した結晶をろ取した。得られ
た粗結晶を酢酸で再結晶し、標記化合物（０．３６ｇ）
を得た。本化合物は、実施例２の異性体ＢとＨＰＬＣ溶
出時間保持時間が完全に一致した。本化合物は、１モル
の酢酸を含む。１ Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，３００ＭＨｚ）δ：
９．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），８．８４−
８．７６（２Ｈ，ｍ），８．４５（２Ｈ，ｍ），８．０
６（１Ｈ，ｍ），７．９２（１Ｈ，ｍ），７．５４（２
Ｈ，ｍ），１．９１（３Ｈ，ｓ）
【００２６】実施例８化合物の合成（異性体）
工程１４−シアノ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベン
ズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン
ズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン
【化１２】
実施例６で得た４−ブロモ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−
［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン
（６．９０ｇ）とシアン化銅（Ｉ）（２．１８ｇ）をピ
リジン（４０ｍｌ）に加え、封管中、１５０℃で２０時
間加熱した。反応液を放冷後、アンモニア水で希釈し沈
殿した結晶を濾取した。濾上物は水で洗液が中性になる
まで洗浄し、室温で減圧乾燥し、粗シアノ体（４．６０
ｇ）を得た。粗シアノ体（０．８ｇ）をカラムクロマト
グラフィーで分離精製し、精シアノ体０．５７ｇを得
た。１ Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，３００ＭＨｚ）δ：
８．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），８．７６（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），８．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
７．５Ｈｚ），８．４８（１Ｈ，ｄ、Ｊ＝８．０Ｈ
ｚ），８．４３（１Ｈ，ｍ），８．１６（１Ｈ，ｍ），
７．９０（１Ｈ，ｍ），７．５４（２Ｈ，ｍ） 工程２４−カルボキシ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］
ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン
［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン
（６．９０ｇ）とシアン化銅（Ｉ）（２．１８ｇ）をピ
リジン（４０ｍｌ）に加え、封管中、１５０℃で２０時
間加熱した。反応液を放冷後、アンモニア水で希釈し沈
殿した結晶を濾取した。濾上物は水で洗液が中性になる
まで洗浄し、室温で減圧乾燥し、粗シアノ体（４．６０
ｇ）を得た。粗シアノ体（０．８ｇ）をカラムクロマト
グラフィーで分離精製し、精シアノ体０．５７ｇを得
た。１ Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，３００ＭＨｚ）δ：
８．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），８．７６（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），８．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
７．５Ｈｚ），８．４８（１Ｈ，ｄ、Ｊ＝８．０Ｈ
ｚ），８．４３（１Ｈ，ｍ），８．１６（１Ｈ，ｍ），
７．９０（１Ｈ，ｍ），７．５４（２Ｈ，ｍ） 工程２４−カルボキシ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］
ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン
【化１３】
４−シアノ−７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］ベン
ズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン（９９２ｍｇ）を濃
硫酸（１０ｍｌ）、水（１０ｍｌ）、酢酸（５ｍｌ）に
懸濁させ、１時間加熱還流した。反応液を放冷後、６０
０ｍｌの水に注入してろ過し、濾上物を室温で減圧乾燥
して残渣を得た。これを２％水酸化ナトリウム水溶液に
溶解し、１時間加熱還流した。反応懸濁液をろ過し、濾
液を５％塩酸水でｐＨを３に調整した後、析出した結晶
をろ取し、酢酸で再結晶した後、標記化合物（１７９ｍ
ｇ）を得た。本化合物は、実施例２の異性体ＡとＨＰＬ
Ｃ保持時間が完全に一致した。１ Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，３００ＭＨｚ）δ：
９．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），８．８２（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），８．７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
７．５Ｈｚ），８．４６−８．３９（２Ｈ，ｍ），８．
０１（１Ｈ，ｍ），７．９０（１Ｈ，ｍ），７．５１
（２Ｈ，ｍ）
ズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン（９９２ｍｇ）を濃
硫酸（１０ｍｌ）、水（１０ｍｌ）、酢酸（５ｍｌ）に
懸濁させ、１時間加熱還流した。反応液を放冷後、６０
０ｍｌの水に注入してろ過し、濾上物を室温で減圧乾燥
して残渣を得た。これを２％水酸化ナトリウム水溶液に
溶解し、１時間加熱還流した。反応懸濁液をろ過し、濾
液を５％塩酸水でｐＨを３に調整した後、析出した結晶
をろ取し、酢酸で再結晶した後、標記化合物（１７９ｍ
ｇ）を得た。本化合物は、実施例２の異性体ＡとＨＰＬ
Ｃ保持時間が完全に一致した。１ Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，３００ＭＨｚ）δ：
９．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），８．８２（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），８．７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
７．５Ｈｚ），８．４６−８．３９（２Ｈ，ｍ），８．
０１（１Ｈ，ｍ），７．９０（１Ｈ，ｍ），７．５１
（２Ｈ，ｍ）
【００２７】実施例９
実施例５と同様の方法で、実施例７の化合物および実施
例８の化合物のＣａＭＫＫ阻害活性を測定した。結果を
表２に示した。
例８の化合物のＣａＭＫＫ阻害活性を測定した。結果を
表２に示した。
【表２】
【００２８】実施例１０ＣａＭＫＫ特異性の測定
以下の方法で、各種CaMKK（ここではCaMKKαを用い
た。）に対する阻害作用を測定した。CaMKK(0.28 μg/m
l)の活性測定は、100 μM[γ-32P]-ATPと100 μg GST-C
aM-KI (1-293, K49E)を基質とし、CaMKKによるリン酸化
反応でGST-CaM-KIに導入された[γ-32P]の放射活性を測
定することで定量した。反応溶液は10mM Mg(Ac)2、1mM
CaCl2、1mMジチオトレイトール, 3 μM カルモデュリン
を含む50mM HEPES(pH7.5)）使用し、反応時間は5 分間
である。被験化合物（実施例１の化合物）は、粉末をDM
SOに溶解した後、DMSOで必要濃度に希釈して終濃度４％
DMSO存在下の条件でCaMKKの活性を測定した。反応は２
５μl反応溶液のうち15μlをP-81 Phosphocellurose フ
ィルターにスポットすることにより終了させ、75 mM リ
ン酸溶液にて十分に洗浄し、遊離の[γ-32P]-ATPを除去
後乾燥させ放射活性をシンチレーションカウンターによ
り測定し、CaM-KK活性とした。
た。）に対する阻害作用を測定した。CaMKK(0.28 μg/m
l)の活性測定は、100 μM[γ-32P]-ATPと100 μg GST-C
aM-KI (1-293, K49E)を基質とし、CaMKKによるリン酸化
反応でGST-CaM-KIに導入された[γ-32P]の放射活性を測
定することで定量した。反応溶液は10mM Mg(Ac)2、1mM
CaCl2、1mMジチオトレイトール, 3 μM カルモデュリン
を含む50mM HEPES(pH7.5)）使用し、反応時間は5 分間
である。被験化合物（実施例１の化合物）は、粉末をDM
SOに溶解した後、DMSOで必要濃度に希釈して終濃度４％
DMSO存在下の条件でCaMKKの活性を測定した。反応は２
５μl反応溶液のうち15μlをP-81 Phosphocellurose フ
ィルターにスポットすることにより終了させ、75 mM リ
ン酸溶液にて十分に洗浄し、遊離の[γ-32P]-ATPを除去
後乾燥させ放射活性をシンチレーションカウンターによ
り測定し、CaM-KK活性とした。
【００２９】CaM-KI, CaM-KII, CaM-KIV 活性測定法
CaM-KI(2.5 μg/ml), CaM-KII(0.75 μg/ml), CaM-KIV
(0.57 μM) 活性測定は100 μM[γ-32P]-ATPと40 μM s
yntide-2を基質とし、それぞれのＣａＭ依存性キナーゼ
によるリン酸化反応でsyntide-2に導入された[γ-32P]
の放射活性を測定することで定量した。反応溶液は10mM
Mg(Ac)2、1mM CaCl2、1mM DTT, 3 μM カルモデュリン
を含む50mM HEPES(pH7.5)）使用し反応時間は5 分間で
ある。被験化合物（実施例１の化合物）は、粉末をDMSO
に溶解した後、DMSOで必要濃度に希釈して終濃度４％DM
SO存在下の条件（CaM-KK 活性測定と同条件）でCaM-KI,
CaM-KII, CaM-KIVの活性を測定した。反応は２５μl反
応溶液のうち1５μlをP-81 Phosphocellurose フィルタ
ーにスポットすることにより終了させ、75 mM リン酸溶
液にて十分に洗浄し、遊離の[γ-32P]-ATPを除去後乾燥
させ放射活性をシンチレーションカウンターにより測定
し、CaM-KI, CaM-KII, CaM-KIV 活性とした。結果を表
３に示した。
(0.57 μM) 活性測定は100 μM[γ-32P]-ATPと40 μM s
yntide-2を基質とし、それぞれのＣａＭ依存性キナーゼ
によるリン酸化反応でsyntide-2に導入された[γ-32P]
の放射活性を測定することで定量した。反応溶液は10mM
Mg(Ac)2、1mM CaCl2、1mM DTT, 3 μM カルモデュリン
を含む50mM HEPES(pH7.5)）使用し反応時間は5 分間で
ある。被験化合物（実施例１の化合物）は、粉末をDMSO
に溶解した後、DMSOで必要濃度に希釈して終濃度４％DM
SO存在下の条件（CaM-KK 活性測定と同条件）でCaM-KI,
CaM-KII, CaM-KIVの活性を測定した。反応は２５μl反
応溶液のうち1５μlをP-81 Phosphocellurose フィルタ
ーにスポットすることにより終了させ、75 mM リン酸溶
液にて十分に洗浄し、遊離の[γ-32P]-ATPを除去後乾燥
させ放射活性をシンチレーションカウンターにより測定
し、CaM-KI, CaM-KII, CaM-KIV 活性とした。結果を表
３に示した。
【表３】
【００３０】実施例１１CaMKK（CaMKKα、β）の阻害活性
精製したリコンビナントCaM-KKα(0.3μg/ml)およびCaM
-KKβ（0.5μg/ml）と、10または100μgのGST-CaM-K I
（1-293, K49E）を、30℃で5分間、50mM HEPES(pH 7.
5)、10 mM Mg(Ac)2、1 mM DTT、50または100μM [γ-32
P]ATPを含む溶液(25μl)中で、1mM CaCl2/2または3μM
カルモジュリン（CaM）の存在下、種々の濃度の、実施
例7の化合物（最終濃度：0-10μg/ml 4%DMSO溶液）と
共にインキュベートした。酵素反応は、[γ-32P]ATP を
加えることによって開始し、ホスホセルロース紙（What
man P-81）上に 15μlをスポットすることによって終
了させ、これを75mM リン酸で数回洗浄した。GST-CaM-K
I (1-293, K49E)への取り込みは、フィルターの液体シ
ンチレーションカウントを測定することによって定量し
た。結果を表４に示した。
-KKβ（0.5μg/ml）と、10または100μgのGST-CaM-K I
（1-293, K49E）を、30℃で5分間、50mM HEPES(pH 7.
5)、10 mM Mg(Ac)2、1 mM DTT、50または100μM [γ-32
P]ATPを含む溶液(25μl)中で、1mM CaCl2/2または3μM
カルモジュリン（CaM）の存在下、種々の濃度の、実施
例7の化合物（最終濃度：0-10μg/ml 4%DMSO溶液）と
共にインキュベートした。酵素反応は、[γ-32P]ATP を
加えることによって開始し、ホスホセルロース紙（What
man P-81）上に 15μlをスポットすることによって終
了させ、これを75mM リン酸で数回洗浄した。GST-CaM-K
I (1-293, K49E)への取り込みは、フィルターの液体シ
ンチレーションカウントを測定することによって定量し
た。結果を表４に示した。
【００３１】CaMK I、II、IV、およびMLCKに対する阻害
効果 CaMK Iは、実施例１０と同様に調製した。CaMIIは文献
（Tokumitsu et al. （1990）J. Biol. Chem. 265, 431
5-4320）に記載の方法で調製した。CaMIVは文献（ Bric
key, D.A., et al.（1990）Biochem. Biophys. Res. Co
mmun. 173, 578-584）に記載の方法で調製した。CaM-K
I(2.5μg/ml)、CaM-K II(0.75μg/ml)、CaM-K IV（９μ
g／ml）、またはMLCK（広島大学、Dr. Hiroshi Hosoya
より分与,0.6μg/ml）と、40μM Syntide-2（MLCKにつ
いては、50μM MLCペプチド）を、30℃で5分間、50mM
HEPES (pH 7.5)、10 mM Mg(Ac)2、1 mM DTT、50または1
00μM [γ-32P]ATPを含む溶液(25μl)中で、1mM CaCl2/
2または3μM カルモジュリン（CaM）の存在下、種々の
濃度の実施例７の化合物（最終濃度：0-10μg/ml 4%DM
SO溶液）と共にインキュベートした。プロテインキナー
ゼ活性は、実施例１０に記載されたホスホセルロースフ
ィルター法で測定した。
効果 CaMK Iは、実施例１０と同様に調製した。CaMIIは文献
（Tokumitsu et al. （1990）J. Biol. Chem. 265, 431
5-4320）に記載の方法で調製した。CaMIVは文献（ Bric
key, D.A., et al.（1990）Biochem. Biophys. Res. Co
mmun. 173, 578-584）に記載の方法で調製した。CaM-K
I(2.5μg/ml)、CaM-K II(0.75μg/ml)、CaM-K IV（９μ
g／ml）、またはMLCK（広島大学、Dr. Hiroshi Hosoya
より分与,0.6μg/ml）と、40μM Syntide-2（MLCKにつ
いては、50μM MLCペプチド）を、30℃で5分間、50mM
HEPES (pH 7.5)、10 mM Mg(Ac)2、1 mM DTT、50または1
00μM [γ-32P]ATPを含む溶液(25μl)中で、1mM CaCl2/
2または3μM カルモジュリン（CaM）の存在下、種々の
濃度の実施例７の化合物（最終濃度：0-10μg/ml 4%DM
SO溶液）と共にインキュベートした。プロテインキナー
ゼ活性は、実施例１０に記載されたホスホセルロースフ
ィルター法で測定した。
【００３２】PKA、PKC、およびp42MAPキナーゼに対する
阻害効果 PKA(Promega、8μg/ml)、PKC(Promega、25ng/ml)、また
はp42MAPキナーゼ（upstate biotechnology、2μg/ml）
を、それぞれ100μM Kemptamide（PKA基質）、100μM
Neurograninペプチド（PKC基質；プロメガ製）、また
は0.4mg/ml Myelin basic protein（p42 MAPキナー
ゼ基質）と、30℃で5分間、50mM HEPES(pH 7.5)、10 mM
Mg(Ac)2、1 mM DTT、50μM [γ-32P]ATP (4500cpm/pmo
l)を含む溶液(25μl)中で、1mM CaCl2/0.4μg/ml ホス
ファチジルセリンおよび0.1mg/ml BSAの存在下（PK
C）、あるいは非存在下（PKAおよびp42MAPキナーゼ）
に、種々の濃度の実施例７の化合物（最終濃度：0-10μ
g/ml 4%DMSO溶液）と共にインキュベートした。プロテ
インキナーゼ活性は、実施例１０に記載されたホスホセ
ルロースフィルター法で測定した。結果を表４に示し
た。
阻害効果 PKA(Promega、8μg/ml)、PKC(Promega、25ng/ml)、また
はp42MAPキナーゼ（upstate biotechnology、2μg/ml）
を、それぞれ100μM Kemptamide（PKA基質）、100μM
Neurograninペプチド（PKC基質；プロメガ製）、また
は0.4mg/ml Myelin basic protein（p42 MAPキナー
ゼ基質）と、30℃で5分間、50mM HEPES(pH 7.5)、10 mM
Mg(Ac)2、1 mM DTT、50μM [γ-32P]ATP (4500cpm/pmo
l)を含む溶液(25μl)中で、1mM CaCl2/0.4μg/ml ホス
ファチジルセリンおよび0.1mg/ml BSAの存在下（PK
C）、あるいは非存在下（PKAおよびp42MAPキナーゼ）
に、種々の濃度の実施例７の化合物（最終濃度：0-10μ
g/ml 4%DMSO溶液）と共にインキュベートした。プロテ
インキナーゼ活性は、実施例１０に記載されたホスホセ
ルロースフィルター法で測定した。結果を表４に示し
た。
【表４】
【００３３】実施例１２ヒト神経芽細胞腫における内因性CaMKKに対する阻害効
果 Ca2+/CaM-非依存型CaMK-IV（305HMDT-DEDD）、機能不全
変異型CaMK-IV（305HMDT-DEDD、K71E）、恒常的活性型C
aM-KK（1-434）のcDNAを含むリコンビナントアデノウイ
ルスは以下のように調製した。すなわち、pME18sプラス
ミド中のcDNAを制限酵素で切り出し、末端を平滑化して
ｐShuttle（Clontech）中に組み込んだ。Adeno-X発現シ
ステム（Clontech）を用いて添付のプロトコールに従
い、HEK293細胞よりリコンビナントウイルスが得られ
た。６穴培養プレートに播種してコンフルエントになっ
たSY5Y細胞に、上記のように得られたリコンビナントウ
イルスを種々の組み合わせで、37℃１時間、10プラーク
形成単位／Cellの感染多重度（M.O.I.）で感染させた。
感染後、ウイルスは吸引除去し、細胞は更に10%FBSを含
むRPMI培地で12時間培養した。その後細胞を6時間、種
々の濃度の実施例７の化合物（最終濃度：0-10μg/ml
0.5%DMSO溶液）の存在あるいは非存在下に無血清状態で
培養した。細胞を1μM イオノマイシン存在下あるいは
非存在下で10分間刺激した後、溶解し、抽出物をSDS-7.
5% PAGEに供した。これに抗CaM-K IV抗体（1:2000、Tra
nsduction Lab.）または抗phosphoThr286CaM-KII抗体
（熊本大 Dr.Koji Fukunagaより供与）を用いてウエス
タン・ブロッティングを行った。フィルム上のCaM-K IV
の免疫反応性バンドをデンシトメーターでスキャンして
数値化し、化合物１がCaM-K IVの活性型形成に及ぼす効
果を定量した。結果を図１に示した。この結果から、実
施例７の化合物は細胞膜透過性を有し、ヒト神経芽細胞
腫の細胞内で内因性CaM-KKに対しても阻害作用を示すこ
とがわかる。
果 Ca2+/CaM-非依存型CaMK-IV（305HMDT-DEDD）、機能不全
変異型CaMK-IV（305HMDT-DEDD、K71E）、恒常的活性型C
aM-KK（1-434）のcDNAを含むリコンビナントアデノウイ
ルスは以下のように調製した。すなわち、pME18sプラス
ミド中のcDNAを制限酵素で切り出し、末端を平滑化して
ｐShuttle（Clontech）中に組み込んだ。Adeno-X発現シ
ステム（Clontech）を用いて添付のプロトコールに従
い、HEK293細胞よりリコンビナントウイルスが得られ
た。６穴培養プレートに播種してコンフルエントになっ
たSY5Y細胞に、上記のように得られたリコンビナントウ
イルスを種々の組み合わせで、37℃１時間、10プラーク
形成単位／Cellの感染多重度（M.O.I.）で感染させた。
感染後、ウイルスは吸引除去し、細胞は更に10%FBSを含
むRPMI培地で12時間培養した。その後細胞を6時間、種
々の濃度の実施例７の化合物（最終濃度：0-10μg/ml
0.5%DMSO溶液）の存在あるいは非存在下に無血清状態で
培養した。細胞を1μM イオノマイシン存在下あるいは
非存在下で10分間刺激した後、溶解し、抽出物をSDS-7.
5% PAGEに供した。これに抗CaM-K IV抗体（1:2000、Tra
nsduction Lab.）または抗phosphoThr286CaM-KII抗体
（熊本大 Dr.Koji Fukunagaより供与）を用いてウエス
タン・ブロッティングを行った。フィルム上のCaM-K IV
の免疫反応性バンドをデンシトメーターでスキャンして
数値化し、化合物１がCaM-K IVの活性型形成に及ぼす効
果を定量した。結果を図１に示した。この結果から、実
施例７の化合物は細胞膜透過性を有し、ヒト神経芽細胞
腫の細胞内で内因性CaM-KKに対しても阻害作用を示すこ
とがわかる。
【００３４】
【発明の効果】本発明の７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，
１ａ］ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン誘導体ま
たはその塩は、その高い選択性のために、ＣａＭＫＫの
生理作用を解明するために有用である。更に、本発明の
化合物は、高い選択性を示すため、生体内で重要な役割
を果たしている他の種類のカルシウム/カルモジュリン
依存性キナーゼ類を阻害することがない。従ってＣａＭ
ＫＫ由来の病態のみを改善する薬剤の有効成分となり得
る。上記のように本発明により、選択的なカルシウム／
カルモジュリン依存性キナーゼキナーゼの阻害剤を提供
することが可能になった。
１ａ］ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン誘導体ま
たはその塩は、その高い選択性のために、ＣａＭＫＫの
生理作用を解明するために有用である。更に、本発明の
化合物は、高い選択性を示すため、生体内で重要な役割
を果たしている他の種類のカルシウム/カルモジュリン
依存性キナーゼ類を阻害することがない。従ってＣａＭ
ＫＫ由来の病態のみを改善する薬剤の有効成分となり得
る。上記のように本発明により、選択的なカルシウム／
カルモジュリン依存性キナーゼキナーゼの阻害剤を提供
することが可能になった。
【００３５】
【図１】 Aは、遺伝子組み込みでヒト神経芽細胞腫内
に発現させたCa2+/CaM-非依存型CaM-KIVが、細胞内でCa
M-KKにより確かに活性型になる（リン酸化される）こと
を示す。Bは、ヒト神経芽細胞腫において遺伝子組み込
みにより発現されたCa2+/CaM-非依存型CaM-KIVが内因性
CaM-KKにより活性化（リン酸化）され、実施例７の化合
物がそれを濃度依存的に阻害していることを示す。C
は、CaM-KIIのリン酸化に対しては、実施例７の化合物
の阻害作用が弱く、その阻害作用がCaMKK特異的である
ことを示す。
に発現させたCa2+/CaM-非依存型CaM-KIVが、細胞内でCa
M-KKにより確かに活性型になる（リン酸化される）こと
を示す。Bは、ヒト神経芽細胞腫において遺伝子組み込
みにより発現されたCa2+/CaM-非依存型CaM-KIVが内因性
CaM-KKにより活性化（リン酸化）され、実施例７の化合
物がそれを濃度依存的に阻害していることを示す。C
は、CaM-KIIのリン酸化に対しては、実施例７の化合物
の阻害作用が弱く、その阻害作用がCaMKK特異的である
ことを示す。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ｃ０７Ｄ 471/06 Ｃ０７Ｄ 471/06
Ｃ１２Ｎ 9/99 Ｃ１２Ｎ 9/99
// Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ
33/50 33/50 Ｚ
(72)発明者 村松 正明
東京都練馬区向山３−15−13
(72)発明者 増保 安彦
千葉県木更津市矢那1532番地の３ 株式会
社ヘリックス研究所内
(72)発明者 池田 雅彦
兵庫県宝塚市高司４丁目２番１号 住友製
薬株式会社内
(72)発明者 近江 直子
兵庫県宝塚市高司４丁目２番１号 住友製
薬株式会社内
(72)発明者 西中 重行
千葉県舟橋市印内町668−１ ファミール
西船橋６番館1007
(72)発明者 青木 幹雄
大阪市此花区春日出中３丁目１番98号 住
友製薬株式会社内
Ｆターム(参考） 2G045 AA40 BA11 DA80 FA40 FB08
4C065 AA03 AA18 BB06 CC09 DD02
EE02 HH01 KK01 LL01 PP03
4C086 AA01 AA02 CB05 MA01 MA04
NA14 ZA02 ZB11 ZB13 ZC02
ZC20
Claims (7)
- 【請求項１】式（Ｉ）： 【化１】 ［式中、Ｒ１、およびＲ２は、独立して、水素原子、ハ
ロゲン原子、アルキル基、またはハロアルキル基のいず
れかである。Ｒ３は水素原子、アルキル基、または置換
アルキル基を表し、ＣＯＯＲ３基はナフタレン環のどの
位置に置換していてもよい。］で表される、７Ｈ−ベン
ズイミダゾ−［２，１ａ］ベンズ［ｄｅ］イソキノリン
−７−オン誘導体、またはその薬学上許容される塩を有
効成分として含有するカルシウム/カルモジュリン依存
性キナーゼキナーゼ阻害剤。 - 【請求項２】Ｒ１およびＲ２が水素原子である、請求項
１記載のカルシウム/カルモジュリン依存性キナーゼキ
ナーゼ阻害剤。 - 【請求項３】Ｒ３が水素原子である、請求項１または２
記載のカルシウム/カルモジュリン依存性キナーゼキナ
ーゼ阻害剤。 - 【請求項４】式（II）： 【化２】 ［式中、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、式（I)と同義であ
る。］で表される７Ｈ−ベンズイミダゾ−［２，１ａ］
ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−７−オン誘導体、または
その薬学上許容される塩を、有効成分として含有するカ
ルシウム/カルモジュリン依存性キナーゼキナーゼ阻害
剤。 - 【請求項５】Ｒ１およびＲ２が水素原子である、請求項
３記載のカルシウム/カルモジュリン依存性キナーゼキ
ナーゼ阻害剤。 - 【請求項６】Ｒ３が水素原子である、請求項３または４
記載のカルシウム/カルモジュリン依存性キナーゼキナ
ーゼ阻害剤。 - 【請求項７】［γ−３３Ｐ］−ＡＴＰを基質のリン酸化
源として用いて酵素反応を行い、リン酸化された基質を
フィルターに吸着させてその放射活性を測定することを
特徴とする、カルシウム／カルモジュリン依存性キナー
ゼキナーゼ（ＣａＭＫＫ）阻害剤のハイスループットス
クリーニング方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001391481A JP4153693B2 (ja) | 2001-04-25 | 2001-12-25 | 新規なＣａＭＫＫ阻害剤 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001127524 | 2001-04-25 | ||
| JP2001-127524 | 2001-04-25 | ||
| JP2001391481A JP4153693B2 (ja) | 2001-04-25 | 2001-12-25 | 新規なＣａＭＫＫ阻害剤 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003012516A true JP2003012516A (ja) | 2003-01-15 |
| JP2003012516A5 JP2003012516A5 (ja) | 2005-07-14 |
| JP4153693B2 JP4153693B2 (ja) | 2008-09-24 |
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ID=26614177
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
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|---|---|
| JP (1) | JP4153693B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8207185B2 (en) | 2006-10-12 | 2012-06-26 | Duke University | CaMKKβ as a target for treating obesity |
| JP2016534100A (ja) * | 2013-08-05 | 2016-11-04 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピアＢａｓｆ Ｓｅ | シアノ化されたナフタレンベンゾイミダゾール化合物 |
| US9999620B2 (en) | 2010-08-16 | 2018-06-19 | Duke University | CaMKK-β as a target for treating cancer |
| CN112654353A (zh) * | 2018-08-20 | 2021-04-13 | 杜克大学 | 用于治疗眼部疾病的方法和药物成分 |
-
2001
- 2001-12-25 JP JP2001391481A patent/JP4153693B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| KR20210059011A (ko) * | 2013-08-05 | 2021-05-24 | 바스프 에스이 | 시안화 나프탈렌벤즈이미다졸 화합물 |
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