JP2002538170A

JP2002538170A - 喘息の治療における抗−ＴＮＦα抗体

Info

Publication number: JP2002538170A
Application number: JP2000602303A
Authority: JP
Inventors: トレーシー，ジョージ
Original assignee: Centocor Inc
Current assignee: Janssen Biotech Inc
Priority date: 1999-03-02
Filing date: 2000-03-01
Publication date: 2002-11-12
Also published as: PT1159003E; CA2364026A1; ATE488250T1; JP2011006464A; AU3386100A; CA2364026C; EP1159003A1; US20020119152A1; DK1159003T3; WO2000051637A1; DE60045240D1; EP1159003B1; US20010021381A1; AU756677B2; US20060222646A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、喘息または気道の炎症の治療を必要とする個体の治療において、喘息または気道の炎症の治療に使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。また、発明は、炎症細胞の肺への蓄積の減少を必要としている個体において、炎症細胞の肺への蓄積を減少させるのに使用すための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】関連出願本出願は、１９９９年３月２日に出願した米国特許出願第０９／２６０，９５
３号の継続出願である、１９９９年１２月１７日に出願した米国特許出願第０９
／４６５，６９１号の一部継続出願である。これらの出願の全ての教示は、参照
により本明細書に組み込まれる。

【０００２】発明の背景喘息は、気道の慢性的な炎症性疾患であり、それは通常、ぜん鳴(wheezing)、
無呼吸(breathlessness)、胸部緊張(chest tightness) および咳などの再発性の
症状の発現の形で、特に夜または早朝に現れる。これらの症状の発現は、通常、
一般的だが多様な気道閉塞（airflow obstruction)に関連し、それは、自発的ま
たは治療のいずれかにより、しばしば可逆性である。

【０００３】多くの細胞および細胞成分、特に肥満細胞、好酸球、Ｔリンパ球、マクロファ
ージ、好中球および上皮細胞は、気道の炎症に役割を演じている。炎症は、血漿
の滲出、浮腫、平滑筋肥大、粘液填塞(mucus plugging)および上皮変化と関連し
ている。また、炎症は、種々の刺激に対して存在する気管支過応答(hyperrespon
siveness) の関連する増大を引き起こす。

【０００４】多様な気道閉塞および気管支機能亢進（特異的および非特異的）は、症候性の
喘息における主要な特徴である。気道の炎症は、気道平滑筋の萎縮、微小血管の
破裂および気管支過応答を導く。気道の反応性が高いと、症状はより重く、持続
的になり、肺機能の日中の変動の規模がより大きくなる。気道の炎症が気管支の
反応性に関連しているメカニズムは不明である。最近の研究では、喘息の気道に
おいて増加して発現されている腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）が、おそらく気道の
過応答の増大に関連していることが示されている（Ｓｈａｈら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘ
ｐｅｒ．Ａｌｌｅｒｇｙ，２５：１０３８−１０４４（１９９５））。例えば、
組み換えＴＮＦαのヒツジへの静脈注射により、ヒスタミン誘導性の気道反応性
の顕著な増強が生じた（Ｗｈｅｅｌｅｒら、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，
６８：２５４２−２５４９（１９９０））が、一方、エアゾール化されたＴＮＦ
αにラットを曝すと、気道の過応答が増大し、わずかに気道の炎症を誘導した（
Ｋｉｐｓら、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．，１４５：３３２−３３６
（１９９２））。正常なヒトの被験者において、組み換えＴＮＦαの吸入は気管
支反応性の増大を引き起こした（Ｙａｔｅｓら、Ｔｈｏｒａｘ，４８：１０８０
（１９９３））が、一方、軽度のアレルギー性喘息の気管支の生検の免疫組織化
学的解析では、ＴＮＦα免疫反応性の増大が気道の過応答と相関することが示さ
れた（Ｈｏｓｓｅｌｅｔら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．ＣａｒｅＭ
ｅｄ．，１４９：Ａ９５７（１９９４））。

【０００５】喘息は、非常に一般的である。工業国の人口のほぼ５％がこれに罹患しており
、まだ診断不顕性であり、治療も不十分(undertreated)である。喘息の発生率や
罹患率が上昇しているという証拠がある。これらの傾向は、有効な喘息の治療が
増大しているにも係わらず生じており、現在の喘息の治療方法が不十分なもので
あるかまたは適切に使用されていないことを示している。

【０００６】発明の要約本発明は、喘息に関連した臨床的な徴候および症状が抗−ＴＮＦα抗体を用い
る治療により改善されうるという発見に関する。結果として、本発明は、喘息、
または例えば喘息に関連するもののような気道の炎症の治療を必要とする個体に
おいて、その治療に使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体また
はその抗原結合断片の使用を提供する。また、本発明は、例えば喘息に関連する
もののような炎症細胞の肺への蓄積の減少を必要としている個体においてその蓄
積を減少させるのに使用するための薬剤を製造するための抗−ＴＮＦα抗体また
はその抗原結合断片の使用を提供する。好ましい態様において、抗体は、ｃＡ２
モノクローナル抗体などのキメラ抗体である。

【０００７】また、本発明は、治療上有効量の抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片を
個体に投与する工程を有する、個体において喘息、または例えば喘息に関連する
もののような気道の炎症を治療する方法を提供する。さらに本発明は、例えば喘
息に関連するもののような炎症細胞の肺への蓄積の減少を必要としている個体に
おいて、その蓄積を減少させる方法を提供する。

【０００８】発明の詳細な説明本発明は、喘息に関連する炎症細胞、特に気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）好酸球、
脈管周囲白血球、間質性白血球および胸膜白血球の肺への蓄積が抗−ＴＮＦα抗
体を用いる治療で有意に減少されるという予期しない驚くべき発見に関する。炎
症細胞、特に好酸球による肺への気道浸潤は、喘息に特有の特徴の一つである（
Ｈｏｌｇａｔｅ，Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．，６：１５０７−１５２０（１９
９３））。アレルギー性喘息をもつ患者において行った気管支の生検検査は、好
酸球および活性化されたＴリンパ球の数の増加が気道組織およびＢＡＬにあるこ
とを示す。

【０００９】末梢血およびＢＡＬ液における好酸球数は、気管支過反応の程度および喘息の
重篤度の両方と相関することが示されている（ＣｏｒｒｉｇａｎとＫａｙ，Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｙＴｏｄａｙ，１３：５０１−５０７（１９９２））。好酸球
は、その顆粒中に４つの塩基性タンパク質：主塩基性タンパク質、好酸球由来の
神経毒、好酸球カチオン性タンパク質および好酸球ペルオキシダーゼを蓄積して
いる。これらのタンパク質の放出は、喘息での気道組織の損傷および気管支過応
答の原因であるかもしれない（Ｆｌａｖａｈａｎら、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉ
ｒ．Ｄｉｓ．, １３８：６８５−６８８（１９８８））。

【００１０】Ｔリンパ球は、体液性（ＩｇＥ）免疫応答はもちろん、細胞介在性免疫を活性
化するサイトカインを産生する。アレルギー性喘息は、ＴおよびＢリンパ球で制
御されるＩｇＥ応答に依存し、肥満細胞に結合したＩｇＥ分子と抗原との相互作
用により活性化される。

【００１１】本明細書に記載の結果は、抗−ＴＮＦα抗体を用いる治療が喘息または気道の
炎症を治療するのに有益であることを示す。本明細書の結果は、喘息に関連した
臨床的な徴候および症状が抗−ＴＮＦα抗体を用いる治療により改善することが
できること示す。結果として、本発明は、個体へ抗−ＴＮＦα抗体または抗−Ｔ
ＮＦα抗体の抗原結合断片を投与する工程を含む、個体の喘息または気道の炎症
の治療方法を提供する。特定の態様において、本発明は、喘息に関連した気道の
炎症を治療する方法を提供する。また、本発明は、炎症細胞の肺への蓄積を減少
することが必要な個体において炎症細胞の肺への蓄積を減少する方法を提供する
。特定の態様において、本発明は、喘息に関連した炎症細胞の肺への蓄積を減少
する方法を提供する。本明細書で用いるように、症状とは自覚的な感情をいう。
例えば、症状には、患者が無呼吸、胸部緊張、不眠症を訴える場合が含まれる。
本明細書で用いるように、症候とは客観的に観察されるものをいう。例えば、症
候には、肺検査および他の研究室での試験の結果が含まれる。

【００１２】腫瘍壊死因子α ＴＮＦαは、１７ｋＤのタンパク質サブユニットの可溶性ホモ三量体である（
Ｓｍｉｔｈら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６２：６９５１−６９５４（１９
８７））。膜に結合した２６ｋＤの前駆体型ＴＮＦαも存在する（Ｋｒｉｅｇｌ
ｅｒら、Ｃｅｌｌ，５３：４５−５３（１９８８））。ＴＮＦαの総説について
は、Ｂｅｕｔｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，３２０（６０６３）：５８４−５８８（
１９８６）；Ｏｌｄ, Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３０：６３０−６３２（１９８６）；
およびＬｅら、Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．，５６：２３４（１９８７）を参照のこ
と。

【００１３】ＴＮＦαは、単球およびマクロファージ、リンパ球、特にＴ細胞系統の細胞（
Ｖａｓｓａｌｌｉ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１０：４１１−４５
２（１９９２））、好中球（Ｄｕｂｒａｖｅｃら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：６７５８−６７６１（１９９０））、上皮細胞（Ｏ
ｈｋａｗａｒａら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，７：９８
５−３９２（１９９２））および肥満細胞（Ｓｈａｈら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐｅｒ
．Ａｌｌｅｒｇｙ，２５：１０３８−１０４４（１９９５）；Ｇｏｒｄｏｎら、
Ｎａｔｕｒｅ，３４６：２７４−２７６（１９９０）；Ｇｏｒｄｏｎら、Ｊ．Ｅ
ｘｐ．Ｍｅｄ．，１７４：１０３−１０７（１９９１）；Ｂｒａｄｄｉｎｇら、
Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１０：４７１−４８
０（１９９４）；Ｗａｌｓｈら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ，８８：４２２０−４２２４（１９９１）；Ｂｅｎｙｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．，１４７：２２５３−２２５８（１９９１）；およびＯｈｋａｗａｒａら
、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，７：９８５−３９２（１９
９２））を含む、様々な細胞により産生される。好酸球もまた、ＴＮＦαの供給
源として提案されている（Ｃｏｓｔａら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９１
：２６７３−２６８４（１９９３））。

【００１４】抗−ＴＮＦα抗体本明細書で用いるように、抗−腫瘍壊死因子α抗体は、インビボでＴＮＦα活
性を低減、ブロック、阻害、排除または妨害する。好ましい態様において、抗体
は特異的に抗原に結合する。前記抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナル
であってもよく、抗体という用語は、ポリクローナル抗体およびモノクローナル
抗体の両方を包含することが意図される。ポリクローナルおよびモノクローナル
という用語は、抗体調製物の均質性の程度をいい、特定の生産方法に限定するこ
とを意図するものではない。一本鎖抗体、およびキメラの、ヒト化されたまたは
霊長類化された(primatized)（骨格変化を有するまたは有しないＣＤＲ移植した
(grafted) 抗体）、あるいはベニア化(veneered)抗体、加えて異なる種由来の部
分を含むキメラの、ＣＤＲ移植したまたはベニア化一本鎖抗体なども、本発明お
よび「抗体」という用語に包含される。

【００１５】特定の態様において、抗−ＴＮＦα抗体は、キメラ抗体である。好ましい態様
において、抗−ＴＮＦα抗体は、キメラモノクローナル抗体ｃＡ２（もしくはそ
の抗原結合断片）またはマウスモノクローナル抗体Ａ２（もしくはその抗原結合
断片）であるか、キメラ抗体ｃＡ２、マウスモノクローナル抗体Ａ２、またはそ
れらの抗原結合断片のものと類似のエピトープ特異性を有し、キメラ抗体ｃＡ２
またはマウスモノクローナル抗体Ａ２、またはそれらの抗原結合断片により結合
されるものと同一のもしくは機能的に同等のヒトＴＮＦαのエピトープと反応す
る抗体または抗原結合断片が含まれる。キメラ抗体ｃＡ２またはマウスモノクロ
ーナル抗体Ａ２のものと類似したエピトープ特異性を有する抗体には、キメラ抗
体ｃＡ２またはマウスモノクローナル抗体Ａ２（もしくはそれらの抗原結合断片
）と、ヒトＴＮＦαへの結合について競合することができる抗体が含まれる。か
かる抗体または断片は、前記のようにして得ることができる。また、キメラ抗体
ｃＡ２、マウスモノクローナル抗体Ａ２およびこれらの抗体を得る方法は、Ｌｅ
ら、米国特許第５，６５６，２７２号；Ｌｅら、米国特許第５，６９８，１９５
号；米国特許出願第０８／１９２，０９３号（１９９４年２月４日出願）；米国
特許第５，９１９，４５２号；Ｌｅ，Ｊ．ら、国際公開第ＷＯ９２／１６５５３
号パンフレット（１９９２年１０月１日公開）；Ｋｎｉｇｈｔ，Ｄ．Ｍ．ら、Ｍ
ｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３０：１４４３−１４５３（１９９３）；およびＳｉ
ｅｇｅｌ，Ｓ．Ａ．ら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，７（１）：１５−２５（１９９５）
に記載されており、これらの各参考文献は、参照によりそのまま本明細書に組み
込まれる。また、キメラ抗体ｃＡ２は、インフリキシマブ（ｉｎｆｌｉｘｉｍａ
ｂ）およびＲＥＭＩＣＡＤＥとして知られている。

【００１６】キメラ抗体ｃＡ２は、Ａ２と表される、高親和性の中和マウス抗−ヒトＴＮＦ
α ＩｇＧ１抗体の抗原結合可変領域とヒトＩｇＧ１、κ免疫グロブリンの定常
領域とからなる。ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域は、同種異系抗体のエフェクター機能
を向上させ、循環している血清の半減期を増大させ、抗体の免疫原性を低減する
。キメラ抗体ｃＡ２の結合活性とエピトープ特異性は、マウス抗体Ａ２の可変領
域に由来する。特定の態様おいて、マウス抗体Ａ２の可変領域をコードする核酸
の好ましい供給源は、Ａ２ハイブリドーマ細胞株である。

【００１７】キメラＡ２（ｃＡ２）は、投与量に依存して、天然のヒトＴＮＦαおよび組み
換えヒトＴＮＦαの両方の細胞毒性効果を中和する。キメラ抗体ｃＡ２および組
み換えヒトＴＮＦαの結合アッセイから、キメラ抗体ｃＡ２のアフィニティー定
数を１．０４×１０¹⁰Ｍ^-1と計算した。競合阻害により、モノクローナル抗体の
特異性およびアフィニティーを決定するのに好ましい方法は、Ｈａｒｌｏｗら、
Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ
ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ
ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９８８；Ｃｏｌｌｉｇａｎ
ら編、ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇ
ｒｅｅｎｅＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＡｓｓｏｃ．ａｎｄＷｉｌｅｙＩｎｔ
ｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，ＮｅｗＹｏｒｋ，（１９９２，１９９３）；Ｋｏｚｂｏ
ｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，４：７２−７９（１９８３）；Ａｕｓｕｂ
ｅｌら編、ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ，ＷｉｌｅｙＩｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，ＮｅｗＹｏｒｋ（
１９８７，１９９２，１９９３）；およびＭｕｌｌｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ
ｏｌ．，９２：５８９−６０１（１９８３）に見ることができ、これらの参考文
献は、参照によりそのまま本明細書に組み込まれる。

【００１８】特定の態様において、キメラ抗体ｃＡ２は、ｃ１６８Ａと表される細胞株によ
り産生され、マウスモノクローナル抗体Ａ２は、ｃ１３４Ａと表される細胞株に
より産生される。

【００１９】抗−ＴＮＦα抗体（またはその抗原結合断片）のさらなる例としては、当該技
術分野において記載されている（例えば、米国特許第５，２３１，０２４号；Ｍ
ｏｅｌｌｅｒ，Ａら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，２（３）：１６２−１６９（１９９０
）；米国特許出願第０７／９４３，８５２号（１９９２年９月１１日出願）；Ｒ
ａｔｈｊｅｎら、国際公開第ＷＯ９１／０２０７８号パンフレット（１９９１年
２月２１日公開）；Ｒｕｂｉｎら、欧州特許公開公報第０２１８８６８号（
１９８７年４月２２日公開）；Ｙｏｎｅら、欧州特許公開公報第０２８８０
８８号（１９８８年１０月２６日）；Ｌｉａｎｇら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐ
ｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，１３７：８４７−８５４（１９８６）；Ｍｅａｇ
ｅｒら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，６：３０５−３１１（１９８７）；Ｆｅｎｄｌｙ
ら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，６：３５９−３６９（１９８７）；Ｂｒｉｎｇｍａｎ
ら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，６：４８９−５０７（１９８７）；およびＨｉｒａｉ
ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．，９６：５７−６２（１９８７）を参照の
こと、これらの参考文献は参照によりそのまま本明細書に組み込まれる）。

【００２０】適切な抗体が入手可能であるか、単離および／または組換え抗原またはその部
分（合成ペプチド等の合成分子を含む）等の適切な免疫原、または組換え抗原を
発現する宿主細胞で生じうる。さらに、トランスフェクトされた細胞等の組換え
抗原を発現する細胞が、免疫原としてまたはレセプターに結合する抗体のスクリ
ーンで使用されうる（例えば、Ｃｈｕｎｔｈａｒａｐａｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．，１５２：１７８３−１７８９（１９９４）；およびＣｈｕｎｔｈａｒａｐ
ａｉら、米国特許第５，４４０，０２１号明細書を参照のこと）。

【００２１】免疫する抗原の調製、ならびにポリクローナルおよびモノクローナル抗体産生
はいずれもの適切な技術を用いて行なわれうる。種々の方法が記載されている（
例えば、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５−４９７（１９７５）
およびＥｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、６：５１１−５１９（１９７６）；Ｍｉ
ｌｓｔｅｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ、２６６：５５０−５５２（１９７７）；Ｋｏｐ
ｒｏｗｓｋｉら、米国特許番号第４，１７２，１２４号明細書；Ｈａｒｌｏｗ，
Ｅ．およびＤ．Ｌａｎｅ、１９８８、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａ
ｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ：ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ、ＮＹ）；およびＣｕｒ
ｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓＩｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ、
第２巻（補遺２７、’９４年夏）、Ａｕｓｕｂｅｌら、編、（ＪｏｈｎＷｉｌ
ｅｙ＆Ｓｏｎｓ：ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹ）、１１章（１９９１）を参照の
こと。）一般に、適切な不死細胞株（例えば、ＳＰ２／0 等の骨髄腫細胞株）を
抗体産生細胞と融合することにより、ハイブリドーマが産生されうる。抗体産生
細胞は、好ましくは、脾臓またはリンパ節のものであり、対象の抗原で免疫化し
た動物から得られうる。融合細胞（ハイブリドーマ）は、選択培地条件を使用し
て単離され、限界希釈によりクローン化されうる。所望の特異性をもつ抗体を産
生する細胞が、適切なアッセイにより選択されうる（例えば、ＥＬＩＳＡ）。

【００２２】ヒト抗体を含む、必要な特異性を有する抗体を産生または単離する他の適切な
方法が使用されうる。例えばその方法は、例えばファージディスプレイ技術等に
より組換え抗体またはその部分がライブラリーから選択される方法を（例えば、
Ｗｉｎｔｅｒｓら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２：４３３−４５
５（１９９４）；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、国際公開第９３／０６２１３号パン
フレット；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、米国特許第５，５６５，３３２号明細書；
１９９４年６月２３日に公開された国際公開第９４／１３８０４号パンフレット
；Ｋｒｅｂｂｅｒら、米国特許第５，５１４，５４８号明細書；およびＤｏｗｅ
ｒら、米国特許第５，４２７，９０８号明細書を参照のこと）、またはそれはヒ
ト抗体の十分なレパートリーを産生可能なトランスジェニック動物（例えば、マ
ウス）の免疫化に依存する方法（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：２５５１−２５５５（１９９３）
；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３６２：２５５−２５８（１９９３
）；Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉら、欧州特許第ＥＰ０４６３１５１Ｂ１
；Ｌｏｎｂｅｒｇら、米国特許第５，５６９，８２５号明細書；Ｌｏｎｂｅｒｇ
ら、米国特許第５，５４５，８０６号明細書；およびＳｕｒａｎｉら、米国特許
第５，５４５，８０７号明細書を参照のこと。）を含む。

【００２３】一本鎖抗体、キメラ、ヒト化もしくは霊長類化（ＣＤＲ移植抗体、骨格変化有
りまたは無し）、またはベニア化抗体、ならびに異なる種に由来する部分を含有
するキメラ、ＣＤＲ移植またはベニア化一本鎖抗体の種々の部分が、通常の技術
により共に化学的に結合され得、または遺伝子工学技術を用いて連続したタンパ
ク質として調製されうる。例えば、キメラまたはヒト化鎖をコードする核酸が、
連続したタンパク質を産生するために発現されうる。例えば、Ｃａｂｉｌｌｙら
、米国特許番号第４，８１６，５６７号明細書；Ｃａｂｉｌｌｙら、欧州特許番
号第０，１２５，０２３Ｂ１号明細書；Ｂｏｓｓら、米国特許番号第４，８１
６，３９７号明細書；Ｂｏｓｓら、欧州特許番号第０，１２０，６９４Ｂ１号
明細書；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．Ｓ．ら、国際公開第８６／０１５３３号パン
フレット；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．Ｓ．ら、欧州特許番号第０，１９４，２７
６Ｂ１号明細書；Ｗｉｎｔｅｒ、米国特許番号第５，２２５，５３９号明細書
；Ｗｉｎｔｅｒ、欧州特許番号第０，２３９，４００Ｂ１号明細書；Ｑｕｅｅ
ｎら、米国特許番号第５，５８５，０８９号明細書；Ｑｕｅｅｎら、欧州特許番
号第０，４５１，２１６Ｂ１号明細書；Ａｄａｉｒら、１９９１年７月１１日
に公開された国際公開第９１／０９９６７号パンフレット；Ａｄａｉｒら、欧州
特許番号第０，４６０，１６７Ｂ１号明細書；およびＰａｄｌａｎ，Ｅ．Ａ．
ら、欧州特許番号第０，５１９，５９６Ａ１号明細書を参照のこと。霊長類化
抗体に関してはＮｅｗｍａｎ，Ｒ．ら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：１
４５５−１４６０（１９９２）、一本鎖抗体に関しては、Ｈｕｓｔｏｎら、米国
特許第５，０９１，５１３号明細書；Ｈｕｓｔｏｎら、米国特許第５，１３２，
４０５号明細書；Ｌａｄｎｅｒら、米国特許第４，９４６，７７８号明細書およ
びＢｉｒｄ，Ｒ．Ｅ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２：４２３−４２６（１９８８
））もまた参照のこと。

【００２４】さらに、キメラ、ヒト化、霊長類化、ベニア化または一本鎖抗体等の断片を含
む抗体の抗原結合断片もまた、産生されうる。例えば、抗原結合断片としては、
限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）₂断片が挙げら
れる。抗原結合断片は、例えば、酵素開裂または組換え技術により産生されうる
。例えば、パパインまたはペプシン開裂は、それぞれＦａｂまたはＦ（ａｂ’） ₂ 断片を生じうる。抗体はまた、１つまたはそれ以上の終止コドンが天然の終止
部位の上流に導入される抗体遺伝子を用いる種々の切形型で産生されうる。例え
ば、Ｆ（ａｂ’）₂重鎖部分をコードするキメラ遺伝子が、重鎖のＣＨ₁領域お
よびヒンジドメインをコードするＤＮＡ配列を含むように設計されうる。

【００２５】本発明の使用に適切な抗−ＴＮＦα抗体は、ＴＮＦαに対する高親和性結合お
よび低毒性（ヒト抗−マウス抗体（ＨＡＭＡ）および／またはヒト抗−キメラ抗
体（ＨＡＣＡ）応答を含む）により特徴付けられる。可変領域、定常領域および
骨格等の個々の成分が個々におよび／または集合的に低免疫原性を保有する抗体
は、本発明の使用に適切である。本発明に使用されうる抗体は、症状の優れた緩
和および低毒性に対する効果をもって長期間患者を治療する能力によって特徴付
けられる。低免疫原性および／または高親和性、ならびに他の規定されていない
特性が、達成される治療結果に寄与されうる。「低い免疫原性」とは、治療され
た患者の約７５％未満、または好ましくは約５０％未満で有意のＨＡＣＡまたは
ＨＡＭＡ応答が生じるおよび／または治療された患者において低い力価を生じる
こと（２重抗原酵素免疫アッセイで測定された約３００未満、好ましくは約１０
０未満）として本明細書で規定される（例えば、参照により本明細書に取り込ま
れる、Ｅｌｌｉｏｔｔら、Ｌａｎｃｅｔ３４４：１１２５−１１２７（１９９
４）を参照のこと）。

【００２６】本明細書で使用されるように、「抗原結合領域」という用語は、抗原と相互作
用し、抗体にその特異性および抗原に対する親和性を与えるアミノ酸残基を含む
抗体分子の部分をいう。抗原結合領域は、抗原結合残基の正しい構造を維持する
のに必要な「骨格」アミノ酸残基を含む。

【００２７】抗原という用語は、抗体により結合可能な分子または分子の部分をいい、それ
はさらに動物に導入してその抗原のエピトープに選択的に結合可能な抗体を産生
することができる。抗原は、１つまたは１つより多いエピトープを有しうる。

【００２８】エピトープという用語は、１つ以上の抗体の抗原結合領域で、抗体により認識
され結合されうる抗原の部分をいうことを意味する。エピトープは通常、アミノ
酸または糖側鎖等の分子の化学的に活性な表面群からなり、特異的な三次元構造
特性ならびに特異的な電荷特性を有する。「阻害および／または中和エピトープ
」とは、抗体が結合した時、インビボまたはインビトロで、より好ましくはイン
ビボでエピトープを含む分子の生物学的活性の損失を生じるエピトープを意味し
、それにはＴＮＦαレセプターへのＴＮＦαの結合が含まれる。

【００２９】投与抗−ＴＮＦα抗体は種々の方法で患者に投与されうる。好ましい態様において
、抗−ＴＮＦα抗体は吸入により（例えば、吸入剤またはスプレーでまたは噴霧
ミストとして）投与される。他の投与経路には、鼻腔内、経口、点滴および／ま
たはボーラス注射を含む静脈内、皮内、経皮（例えば、遅放性ポリマーで）、筋
内、腹膜内、皮下、局所、硬膜外、頬等の経路が含まれる。他の適切な投与経路
を使用して、例えば、上皮または粘膜皮膚内層を通して吸収を達成することもで
きる。抗体はまた、遺伝子療法により投与され得、そこでは、例えば、インビボ
の治療レベルで特定のタンパク質またはペプチドを発現および分泌されるベクタ
ーを介して、特定の治療タンパク質またはペプチドをコードするＤＮＡ分子が患
者に投与される。さらに、抗−ＴＮＦα抗体は、薬理学上許容されうる界面活性
剤（例えば、グリセリド）、賦形剤（例えば、ラクトース）、担体、希釈剤およ
びビヒクル等の生物学的に活性な薬剤の他の成分と共に投与されうる。所望であ
れば、一定の甘味剤、香味剤および／または着色剤もまた添加されうる。

【００３０】抗−ＴＮＦα抗体が、他の治療上の摂生または薬剤（例えば、多数の薬物摂生
）の前に、それと同時に、またはそれに続けて、予防または治療的に個体に投与
されうる。他の治療剤と同時に投与される抗−ＴＮＦα抗体は、同一または異な
る組成で投与されうる。

【００３１】抗−ＴＮＦα抗体は、薬理学上許容しうる非経口ビヒクルに関連して溶液、懸
濁液、乳濁液または凍結乾燥粉体として調剤されうる。かかるビヒクルの例には
、水、生理食塩水、リンガー溶液、ブドウ糖溶液、および５％ヒト血清アルブミ
ンである。リポソームおよび固定油等の非水性ビヒクルもまた、使用されうる。
ビヒクルまたは凍結乾燥粉体は、等張性を維持する添加剤（例えば、塩化ナトリ
ウム、マンニトール）および化学安定性を維持する添加剤（例えば、緩衝液およ
び保存料）を含みうる。調剤は、通常使用される技術により滅菌されうる。好ま
しい態様において、抗−ＴＮＦα抗体は、鼻腔内経路（吸入による）を介して投
与される。適切な薬剤の担体は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕ
ｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓに記載されている。

【００３２】抗−ＴＮＦα抗体または抗原結合断片の「治療上有効量」は、個体に投与され
ると治療効力が十分な抗−ＴＮＦα抗体または抗原結合断片の量または投与量と
して、本明細書で規定される（例えば、喘息または気道の炎症に関連する症状ま
たは徴候、あるいは症状および徴候の両方を有意に低減または除去するのに十分
な量）。個体に投与される投薬は、特定の抗−ＴＮＦα抗体の薬理的特性、投与
の様式および経路；大きさ、年齢、性別、健康、体重および受容者の食物；治療
される疾患または障害の症状の性質および程度、同時治療の種類、治療頻度およ
び所望の効果を含む因子の変化により変化する。

【００３３】治療上有効量は、単回でまたは分割投与（例えば、数日間、数週間、数カ月の
間隔があけられた投与系列）で投与され得、あるいは症状の性質および程度、同
時治療の種類および所望の効果等の因子に依存する、徐放形態で投与されうる。
他の治療上の摂生または薬剤が、本発明に関連して使用されうる。確立された投
薬範囲の調節および操作は当業者の能力内で十分である。

【００３４】一度治療上有効量が投与されると、維持量の抗−ＴＮＦα抗体が個体に投与さ
れうる。維持量は、治療上有効な投与量により得られる症状および／または徴候
の低減または除去を維持するのに必要な抗−ＴＮＦα抗体の量である。単回また
は数日間または数週間の間隔があけられた投与系列（分割投与）の形態で、維持
量が投与されうる。

【００３５】２回目またはそれに続く投与が、初期または前に個体に投与された投与量と同
一、それ未満またはそれより多い投薬で投与されうる。２回目またはそれに続く
投与は、疾患もしくは疾患の症状の再発（relapse ）または拡大（flare-up）の
間またはその直前が好ましい。例えば、２回目またはそれに続く投与が、前の投
与から約１日〜３０週間の間に与えられうる。２回、３回、４回またはそれ以上
の全投与が、必要な場合には個体に送達されうる。

【００３６】内部投与に適切な投薬形態（組成物）は、１ユニット当たり約０．１ミリグラ
ム〜約５００ミリグラムの活性成分を一般的に含む。これらの製薬組成物におい
て、活性成分は、組成物の全量に基づいて約０．５〜９５重量％の量で通常存在
する。

【００３７】ここで本発明を以下の実施例により説明するが、いかなる限定をも意図するも
のではない。

【００３８】実施例実施例１アレルギー性喘息に対するマウスモデルにおけるモノクローナル抗−
ＴＮＦα抗体の効果マウスは、肺の薬理学研究で使用される標準種である。本明細書に記載される
実験で使用されるアレルギー性喘息に対するマウスモデルは、その表現型特性に
おいてヒト喘息によく似ている。特に、両方の疾患は気管支周囲の炎症細胞浸潤
、特に肺への好酸球の流入により特徴付けられる。したがって、マウスモデルが
、ヒト疾患に対する良好な近似として役に立つ。

【００３９】抗−ＴＮＦα抗体抗−ＴＮＦα抗体ｃＶ１ｑｍｕＧ２ａが、セントコア社（Ｃｅｎｔｏｃｏｒ
，Ｉｎｃ．）（Ｍａｌｖｅｒｎ，ＭＡ）により構築された。ラット抗−マウスＴ
ＮＦα抗体Ｖ１ｑを分泌するハイブリドーマ細胞を、ドイツ、ハイデルベルグの
ドイツガン研究センター（ＧｅｒｍａｎＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈＣ
ｅｎｔｅｒ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）のペーター・クラマー（
ＰｅｔｅｒＫｒａｍｍｅｒ）から得た（Ｅｃｈｔｅｎａｃｈｅｒら，Ｊ．Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．１４５：３７６２−３７６６（１９９０））。Ｖ１ｑ抗体の重鎖お
よび軽鎖の可変領域をコードする遺伝子をクローン化した。クローン化した重鎖
を、４つの異なる遺伝子発現ベクターに挿入し、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ３、
マウスＩｇＧ１またはマウスＩｇＧ２ａ定常領域のいずれかでｃＶ１ｑ重鎖をコ
ードした。Ｖ１ｑ軽鎖遺伝子を他の発現ベクターに挿入し、ヒトκまたはマウス
κ軽鎖定常領域のいずれかをコードした。

【００４０】ＳＰ２／０骨髄種細胞を異なる重鎖および軽鎖遺伝子構築物にトランスフェク
トした。標準ＥＬＩＳＡアッセイを使用してヒトまたはマウスＩｇＧに対する細
胞上清をアッセイすることにより、キメラＶ１ｑ（ｃＶ１ｑ）抗体を産生する細
胞クローンを同定した。高産生クローンをサブクローン化して均一の細胞株を得
た。マウスＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａバージョンを、それぞれＣ２５７Ａおよび
Ｃ２５８と呼ぶ。タンパク質Ａクロマトグラフィーにより、ｃＶ１ｑ抗体を細胞
上清から精製した。

【００４１】溶解性マウスＴＮＦαに対する親和性を測定し、ＷＥＨＩ細胞をマウスＴＮＦ
αの細胞毒性から保護する能力を試験し、マウスリンフォトキシンを中和または
結合する能力を検査し、組換え膜貫通マウスＴＮＦαを発現する細胞の補体−媒
介溶菌を誘発するマウスＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａバージョンの能力を比較し、
ならびに致死性投与量のＬＰＳ（内毒素）からマウスを保護するヒトＩｇＧ１バ
ージョンの能力を検査することにより、ｃＶ１ｑ抗体を特徴付ける。ｃＶ１ｑは
、マウスＴＮＦ（ｍｕＴＮＦ）に高親和性で結合し、ＷＥＨＩ細胞の細胞毒性ア
ッセイでｍｕＴＮＦを中和し、膜貫通ｍｕＴＮＦを発現する細胞のイソタイプ−
依存様式の補体−媒介細胞毒性を誘発する。さらに、ｃＶ１ｑは、マウスリンフ
ォトキシン細胞毒性活性を中和しなかった。ｃＶ１ｑ抗体のマウスＩｇＧ２ａバ
ージョンを以下の実験手順で使用し、本明細書でｃＶ１ｑｍｕＧ２ａ抗体と呼
ぶ。

【００４２】実験手法７週齢の雌Ｂａｌｂ／ＣＪマウス５０匹（体重１５〜２３ｇ）を、０．２ｍｌ
の滅菌生理食塩水中１．６ｍｇの水酸化アルミニウムゲル懸濁液（Intergen, In
c., Purchase, NY）に混合した１０μｇの卵アルブミン（ＯＡ；Sigma Chemical
Co., St. Louis, MO ）を、０、７および１４日目に腹腔内注射することにより
免疫感作した。この懸濁液は、各マウスに腹腔内注射する１時間前に調製した。

【００４３】免疫感作したマウス５０匹を５群（１０マウス／群）に分け、以下のように処
理した：

【００４４】

【００４５】２１日目にエーロゾル化ＯＡ（滅菌生理食塩水中５％ｗ／ｖ（Baxter, Inc.,
Chicago, IL ））に２０分間曝露することにより、マウスをＯＡで攻撃した。エ
ーロゾルをＰＡＲＩ−Ｍａｓｔｅｒ噴霧器（PARI-Respiratory, Richmond, VA）
により作製した。その噴出口を、動物を入れた小さなＰｌｅｘｉｇｌａｓ（登録
商標）チャンバー（Pena-Plas, Jessup, PA ）に連結した。

【００４６】２４日目、ＯＡまたは生理食塩水のエーロゾル曝露の７２時間後、動物を眼窩
後から（retroorbitally）採血し、全血清ＩｇＥ解析のために血清を回収し、凍
結した。採血後、ウレタン（０．２ｇ／ｋｇ）で動物を麻酔し、気管支肺胞洗浄
（ＢＡＬ）を行った。簡単には、気管を露出し、カニューレを挿入した。Ｃａ²⁺ およびＭｇ²⁺を含有せず０．１％ＥＤＴＡを含有する、２×０．５ｍｌの滅菌ハ
ンクス緩衝塩溶液（ＨＢＳＳ；Gibco, Grand Island, NY ）で肺を洗浄した。穏
やかに吸引することにより洗浄液を３０秒後に回収し、動物ごとにプールした。
試料を２０００ｒｐｍで１５分間５℃で遠心分離した。Ｃａ²⁺およびＭｇ²⁺を含
有せず０．１％ＥＤＴＡを含有する１ｍｌのＨＢＳＳで個々のペレットを再形成
（reconstitute）した。ＢＡＬ全細胞数および白血球分画（好酸球）数を、Ｔｅ
ｃｈｎｉｃｏｎＨ１（Roche Diagnostics, Switzerland）およびサイトスライ
ド（cytoslide ）のそれぞれを用いて測定した。

【００４７】血清を各試料から分離し、ＥＬＩＳＡアッセイによりＩｇＥ抗体についてアッ
セイした。簡単には、マイクロタイタープレートを１００μｌのモノクローナル
ラット抗マウスＩｇＥ抗体でコートし、１時間（±１５分）、３７℃（±２°）
で、および一晩４℃（±２°）でインキュベートした。プレートを３００μｌの
１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）で１時間（±１５分）、３７℃（±２°）で
ブロックした。プレートを５回洗浄した。リン酸緩衝生理食塩水＋０．０５％
Ｔｗｅｅｎ−２０中の１％ＢＳＡ（ＰＢＳＴ）で、被検血清を１：３、１：６、
１：１２および１：２４に希釈した。希釈した血清１００μｌを１組の(duplica
te) ウェルに添加し、１．５時間（±１５分）、３７℃（±２°）でインキュベ
ートした。プレート周囲の外側ウェルは、周辺(perimeter) 効果を回避するため
使用しなかった。１００μｌのウサギ抗マウスＩｇＥを各ウェルに加え、プレー
トを１．５時間（±１５分）、３７℃（±２°）でインキュベートした。１００
μｌのビオチン化ヤギ抗ウサギＩｇＥを各ウェルに加え、プレートを１．５時間
（±１５分）、３７℃（±２°）でインキュベートした。ストレプトアビジンと
結合したホースラディッシュペルオキシダーゼ（１００μｌ）を各ウェルに加え
、プレートを１５分間（±２分）、３７℃（±２°）でインキュベートした。各
インキュベーションの間に、プレートをＰＢＳＴで５回洗浄した。ＴＭＢペルオ
キシダーゼ基質（１００μｌ）を各ウェルに加え、３７℃（±２°）でインキュ
ベートした。１００μｌの１Ｍリン酸を各ウェルに加え、反応を終了させた。Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｓｅｓＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社（Sunnyvale, C
A ）のＵＶＭａｘＭｉｃｒｏｐｌａｔｅリーダーを用い、４５０ｎｍでの吸光
度を読みとった。モノクローナルマウスＩｇＥ抗ＤＮＰ（ＳＰＥ−７）（Sigma
Chemical Co., St. Louis, MO ）を用いた標準曲線の作成をアッセイと共に行っ
た。

【００４８】種々の処理群由来の全細胞、好酸球および血清ＩｇＥレベルを、ＡＮＯＶＡを
用い、続いて多重比較検定（Zar, J.H., Biostatistical Analysis, Prentice H
all: Englewood, NJ, p.185 (1984)）により比較した。

【００４９】全細胞、好酸球および血清ＩｇＥ種々の処理群由来のＢＡＬ全細胞、好酸球および血清ＩｇＥレベルを表１に示
す。

【００５０】

【表１】

【００５１】図１に示すように、免疫感作したマウスへの２０分間のＯＡ（５％）曝露は、
生理食塩水で攻撃したマウスと比べ、ＢＡＬ全細胞の約２倍の増加を生じた。気
管支肺胞洗浄好酸球は、生理食塩水で攻撃したマウスで実質的に０から、ＯＡ攻
撃７２時間後で０．４２±０．１１×１０⁶に増加した（図１）。ＯＡ攻撃７２
時間後のＢＡＬ全細胞の増加は、主に好酸球の増加に起因した（図２）。図３に
示すように、全血清ＩｇＥレベルは、生理食塩水で攻撃した免疫感作マウスと比
べ、免疫感作したマウスの抗原攻撃後で５６％増加した。

【００５２】ＯＡ攻撃の１時間前およびＯＡ攻撃の２４〜４８時間後に陽性対照デキサメタ
ゾン（１ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、ステロイド系抗炎症性）を投与すると、全細胞
および好酸球の抗原誘導性の増加が、ビヒクル処理群と比べてそれぞれ３６％お
よび６９％阻害された（図１）。デキサメタゾンはまた、ビヒクル処理群と比べ
て全血清ＩｇＥレベルの３０％低下を生じた（図３）。

【００５３】抗ＴＮＦαモノクローナル抗体であるｃＶ１ｑｍｕＧ２ａ抗体を、１ｍｇ／
ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇで、抗原攻撃（ＯＡ攻撃）の１時間前ならびに抗原攻
撃の２４時間後および４８時間後に静脈内投与すると、ビヒクル処理群と比べ、
全細胞においてそれぞれ１８％および３７％の減少を生じた（図１）（１０ｍｇ
／ｋｇの抗ＴＮＦα処理群において０．５２±０．０９×１０⁶／ｍｌに対して
ビヒクル処理群において０．８３±０．１８×１０⁶／ｍｌ、有意差なし（ＮＳ
））。また、ｃＶ１ｑｍｕＧ２ａ抗体の投与を、１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ
／ｋｇで行なうと、ＢＡＬ好酸球における抗原誘導性（ＯＡ誘導性）の増加は、
ビヒクル処理動物と比べてそれぞれ６７％および７９％阻害された（図１）（１
０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＮＦα処理群において０．０９±０．０４×１０⁶／ｍｌに
対してビヒクル処理群において０．４２±０．１１×１０⁶／ｍｌ、ｐ＜０．０
５）。これらの結果は、抗ＴＮＦα抗体が、免疫感作したマウスにおける抗原誘
導性の肺での炎症細胞蓄積を調節することを示す。

【００５４】要約すると、ｃＶ１ｑｍｕＧ２ａ抗体を、１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋ
ｇで、ＯＡ攻撃の１時間前およびＯＡ攻撃の２４〜４８時間後に静脈内投与する
と、ビヒクル処理動物と比べ、それぞれ６７％および７９％のＢＡＬ好酸球の減
少を生じた。したがって、抗ＴＮＦα抗体での処理は、ＢＡＬにおける全細胞お
よび好酸球の数の有意な減少をもたらした。

【００５５】薬物動態学血清試料中におけるｃＶ１ｑ抗体濃度を、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）によ
り解析した。簡単には、ｃＶ１ｑ抗体に特異的なモノクローナル抗イディオタイ
プ抗体（Lot SM970109；Centocor, Inc., Malvern, PA ）を９６穴マイクロタイ
タープレートにコートした。次いで、プレートを洗浄し、１％ウシ血清アルブミ
ン（ＢＳＡ）／リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）溶液でブロックし、非特異的結
合を抑制した。このブロッキング溶液を除去した。ｃＶ１ｑｍｕＧ２ａ抗体標
準および希釈被検試料をプレートに加え、２時間インキュベートした。プレート
を洗浄し、異なる抗ｃＶ１ｑモノクローナル抗体のビオチン化体をすべてのウェ
ルに加え、２時間インキュベートした。プレートを洗浄し、第３のインキュベー
ション期間の際は、ホースラディッシュペルオキシダーゼ−ストレプトアビジン
コンジュゲートとともにインキュベートした。最後の酵素的発色工程を、基質と
してｏ−フェニレンジアミン（Sigma Chemical Co., St. Louis, MO ）を用いて
行なった。４Ｎ硫酸の添加により発色を止め、マイクロタイタープレート分光光
度計を用いて４９０ｎｍで吸光度を読み取った。ｃＶ１ｑ抗体標準濃度およびそ
れに対応する光学濃度値を用い、コンピュータ処理による、４変数方程式に対す
る最小二乗法フィットにより標準曲線を作成した。次いで、試料ｃＶ１ｑ抗体濃
度を、標準曲線および該試料に対する血清希釈率を用いて決定した。

【００５６】結果１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇのｃＶ１ｑ抗体で処理したマウス由来の血
清試料およびＢＡＬ試料中のｃＶ１ｑ抗体濃度を、それぞれ表２の上側および下
側に示す。

【００５７】

【表２】

【００５８】ビヒクル対照群（ｎ＝１０）由来の血清試料および気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）
試料は、検出可能なレベルのｃＶ１ｑｍｕＧ２ａ（ｃＶ１ｑ）抗体を有しなか
った（＜０．０４μｇ／ｍｌ）。１ｍｇ／ｋｇでのｃＶ１ｑ抗体の反復（ｎ＝３
）静脈投与後、これらの抗体処理マウス（ｎ＝１０）由来の血清試料は、ｃＶ１
ｑ抗体濃度の平均±標準偏差が２７．１±５．０６μｇ／ｍｌであり；これらの
マウス由来のＢＡＬ試料は、０．０６７±０．０３５μｇ／ｍｌの平均ｃＶ１ｑ
抗体濃度を有した。１０ｍｇ／ｋｇの抗体の反復（ｎ＝３）静脈投与後の平均血
清ｃＶ１ｑ抗体濃度（ｎ＝９）は３０２±４０．８μｇ／ｍｌであり；これらの
マウス由来のＢＡＬ試料の平均ｃＶ１ｑ抗体濃度は０．５５±０．４８μｇ／ｍ
ｌであった。

【００５９】血清試料およびＢＡＬマウス試料由来のｃＶ１ｑ抗体の測定された濃度により
、抗ＴＮＦα抗体での用量依存性処理、および静脈投与後のＢＡＬにおいて抗体
が検出可能であることが確認される。

【００６０】実施例２マウスにおける抗原誘導性の肺での炎症細胞蓄積：組織病理学的評価免疫感作した雌Ｂａｌｂ／ＣＪマウスの肺において組織病理学的評価を行なっ
た。

【００６１】実験手法数週齢の雌Ｂａｌｂ／ＣＪマウス２０匹を、０．２ｍｌの滅菌生理食塩水中１
．６ｍｇの水酸化アルミニウムゲル懸濁液（Intergen, Inc., Purchase, NY）に
混合した１０μｇのＯＡ（Sigma Chemical Co., St. Louis, MO ）を、０、７お
よび１４日目に腹腔内注射することにより免疫感作した。この懸濁液は、各マウ
スに腹腔内注射する１時間前に調製した。

【００６２】免疫感作したマウス２０匹を２群（１０マウス／群）に分けた。一方のマウス
群には、ＯＡ攻撃の１時間前ならびにＯＡ攻撃の２４時間後および４８時間後に
、１０ｍｇ／ｋｇのｃＶ１ｑｍｕＧ２ａ抗体（グループ２）を静脈内投与した
。他方のマウス群には、ＯＡ攻撃の１時間前ならびにＯＡ攻撃の２４時間後およ
び４８時間後に、１０ｍｇ／ｋｇのダルベッコＰＢＳ（Centocor, Inc., Malver
n, PA ）（ビヒクル）（グループ１）を静脈内投与した。２１日目に、エーロゾ
ル化したもの（滅菌生理食塩水中５％ｗ／ｖ（Baxter, Inc., Chicago, IL ））
に２０分間曝露することにより、マウスをＯＡ（抗原）で攻撃した。エーロゾル
をＰＡＲＩ−Ｍａｓｔｅｒ噴霧器（PARI-Respiratory, Richmond, VA）により作
製した。その噴出口を、動物を入れた小さなＰｌｅｘｉｇｌａｓ（登録商標）チ
ャンバー（Pena-Plas, Jessup, PA ）に連結した。

【００６３】抗原攻撃の７２時間後、マウスを屠殺し、肺を取り出して１０％中性緩衝ホル
マリン（ＮＢＦ；Sigma Chemical Co., St. Louis, MO ）で満たした。次いで、
肺をパラフィンに包埋し、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。鏡検での
変化を、変化の重度に応じて、１〜４段階（最小、微小／軽度、中等度および顕
著／重度）で評価した。

【００６４】結果評価できなかった鏡検での変化は存在した(Present) （Ｐ）で示した。すべて
の鏡検所見を表３に示す。

【００６５】

【表３】

【００６６】両被検群の個々のマウスの肺の３つの領域において、炎症細胞蓄積が存在し、
それを数えた。白血球蓄積を、気管支領域の脈管周辺の脈管周囲組織、肺胞領域
の間質組織および胸膜／胸膜下組織において評価した。両群の数匹のマウスは、
気管支領域の脈管周辺に脈管周囲水腫を有した。両群の個々のマウスは、間質組
織の毛細脈管においてエオシン好性フィブリン様沈着物を有した。グループ２の
６番および１０番のマウスは、気管支周囲のリンパ節において、それぞれ中等度
および重度のエオシン染色性マクロファージの蓄積を有した。グループ２の１０
番のマウスはまた、胸膜組織および炎症細胞が混在した気管支周囲組織において
、エオシン染色性マクロファージの重度の蓄積を有した。

【００６７】グループとしてグループ１（ビヒクル処理マウス）と比較すると、組織病理学
的解析では、グループ２のマウス（ｃＶ１ｑ処理マウス）において、脈管周囲白
血球、間質白血球および胸膜白血球の数の有意な低下が示された。これらの結果
は、抗ＴＮＦα抗体が、免疫感作したマウスにおける抗原誘導性の肺での炎症細
胞蓄積を調節することを示す。

【００６８】実施例３：ステロイド耐性喘息のインフリキシマブ（Infliximab）治療軽度の慢性閉塞性肺疾患および重度のステロイド依存性喘息を有する５３歳の
高齢女性（Ｎ．Ｌ．）は、４０ｍｇの経口プレドニゾン、ステロイド吸入、イプ
ラトロピウム吸入、アルブテロール吸入、サルメテロール（salmeterol）吸入、
経口テオフィリンおよびジレウトン（zileuton）による集中治療にもかかわらず
、数週間にわたって喘息悪化を呈した。この内容はあるが効果のなかったプログ
ラムによる副作用は、体重増加、皮膚の薄層化および挫傷を含んだ。

【００６９】インフリキシマブでの治療は表４に従って実施した。

【００７０】

【表４】

【００７１】患者は、治療期間において、４回の注入で合計１，２００ｍｇのインフリキシ
マブを投与された。

【００７２】結果喘息症状の低減、夜間の目覚めの停止、ステロイド使用の低減および吸入治療
依存の低減が認められた。この改善は、インフリキシマブ治療の２４時間以内に
始まった。それを、表５の患者のダイアリーカードに記録する。

【００７３】

【表５】

【００７４】最大流量スコア（peak flow score ）は、呼吸試験で測定したときの、患者に
ついて記録された最大空気流速度である。前処理の最大流量スコアが１６０〜２
００ｍｌ／分であることとは対照的に、インフリキシマブ治療日程では、３４０
〜４００ｍｌ／分のピークが記録された。低いスコアよりも、高い最大流量スコ
アの方がよい。

【００７５】インフリキシマブ治療の間、アルブテロール吸入は必要でなかった。また、ス
テロイドの使用は、１日おきに１０ｍｇに低下した。

【００７６】患者の生活の質は、インフリキシマブの投与を受けると大きく改善された。例
えば、患者の生体反応（life response ）を比較すると、患者の喘息は良好に制
御された状態となり、インフリキシマブ治療の第２日目以降、夜間の目覚めが消
失した。

【００７７】表６は、肺機能検査における客観的な改善を示す。

【００７８】

【表６】

【００７９】努力肺活量（Forced voluntary capacity ）（ＦＶＣ）は、呼気流量の測定値
である。１秒間における努力呼気肺活量（ＦＥＶ₁）は、１秒間に患者が吐き出
すことができる空気の最大量である。努力呼気流量（ＦＥＦ２５〜７５）は、１
秒の第１四半期と第３四半期の間の流速測定値である。低値よりも高値の方がよ
い。観察されたＦＥＶ₁値は、約２年の治療の間で該患者について記録された最
大値であった。

【００８０】この５３歳の高齢女性患者は、インフリキシマブ治療の間、治療耐性喘息の兆
候および症状の両方において迅速かつ継続的な改善を有した。インフリキシマブ
治療は、耐性の低い治療または有効でない治療の必要性を低減または削減した。

【００８１】本発明をその好ましい態様を参照して具体的に示し記載したが、当業者は、添
付の請求の範囲により規定される本発明の趣旨および範囲を逸脱することなく本
発明において形態および詳細の種々の変更を行いうることを理解するだろう。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、卵白アルブミン（ＯＡ；５％で２０分）または生理食塩水（ｎ＝１０
）攻撃の７２時間後であって、（１）ビヒクル（ＰＢＳ、ｎ＝１０）、（２）ｃ
Ｖ１ｑｍｕＧ２ａ抗体（１ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝１０）または（３）ｃＶ１ｑｍｕＧ
２ａ抗体（１０ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝９）のいずれかを用いるＯＡ攻撃の１時間前、
２４および４８時間後に静脈内処理された感作マウスにおける気管支肺胞洗浄（
ＢＡＬ）液の炎症細胞の蓄積（全蓄積および好酸球の蓄積）を示す棒グラフであ
る。さらに１０匹のマウスの群を、デキサメタゾン１ｍｇ／ｋｇを用いたＯＡ攻
撃の１時間前、２４および４８時間後に腹腔内処理した。＊は、ビヒクル処理し
た群と比較して統計学的に有意な（ｐ＜０．０５）差を示す。

【図２】図２は、ＯＡ（５％で２０分）または生理食塩水（ｎ＝１０）攻撃の７２時間
後であって、（１）ビヒクル（ＰＢＳ、ｎ＝１０）、（２）ｃＶ１ｑｍｕＧ２ａ
抗体（１ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝１０）または（３）ｃＶ１ｑｍｕＧ２ａ抗体（１０ｍ
ｇ／ｋｇ、ｎ＝９）のいずれかを用いるＯＡ攻撃の１時間前、２４および４８時
間後に静脈内処理された感作マウスにおけるＢＡＬ液の好酸球の蓄積を示す棒グ
ラフである。さらに１０匹のマウスの群を、デキサメタゾン１ｍｇ／ｋｇを用い
たＯＡ攻撃の１時間前、２４および４８時間後に腹腔内処理した。値は、全細胞
％の平均±ＳＥＭとして示す。＊は、ビヒクル処理した群と比較して統計学的に
有意な（ｐ＜０．０５）差を示す。

【図３】図３は、ＯＡ（５％で２０分）または生理食塩水（ｎ＝１０）攻撃の７２時間
後であって、（１）ビヒクル（ＰＢＳ、ｎ＝１０）、（２）ｃＶ１ｑｍｕＧ２ａ
抗体（１ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝１０）または（３）ｃＶ１ｑｍｕＧ２ａ抗体（１０ｍ
ｇ／ｋｇ、ｎ＝９）のいずれかを用いるＯＡ攻撃の１時間前、２４および４８時
間後に静脈内処理された感作マウスにおける全血清ＩｇＥを示す棒グラフである
。さらに１０匹のマウスの群を、デキサメタゾン１ｍｇ／ｋｇを用いたＯＡ攻撃
の１時間前、２４および４８時間後に腹腔内処理した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＪＰ，ＵＳ (72)発明者トレーシー，ジョージアメリカ合衆国ペンシルバニア 19335 ダウニングタウン，チェシアドライブ 518 Ｆターム(参考） 4C085 AA13 AA14 AA16 BB01 CC02 CC05 DD23 DD32 EE01 FF02 GG06

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】喘息または気道の炎症の治療を必要とする個体の治療におい
て、喘息または気道の炎症の治療に使用するための薬剤を製造するための抗−Ｔ
ＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用。
【請求項２】炎症細胞の肺への蓄積の減少を必要としている個体において
炎症細胞の肺への蓄積を減少させるのに使用するための薬剤を製造するための抗
−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片の使用。
【請求項３】抗体がキメラ抗体である請求項１または２記載の使用。
【請求項４】キメラ抗体がｃＡ２モノクローナル抗体へのＴＮＦαの結合
を競合的に阻害する、請求項３記載の使用。
【請求項５】キメラ抗体がｃＡ２モノクローナル抗体である請求項３記載
の使用。
【請求項６】治療上有効量の抗−ＴＮＦα抗体またはその抗原結合断片を
個体に投与する工程を含む、個体における喘息の治療方法。
【請求項７】抗体がキメラ抗体である請求項６記載の方法。
【請求項８】キメラ抗体がｃＡ２モノクローナル抗体へのＴＮＦαの結合
を競合的に阻害する、請求項７記載の方法。
【請求項９】キメラ抗体がｃＡ２モノクローナル抗体である請求項７記載
の方法。