KR20090101924A - Ｉｌ―４ 또는 ｉｌ―１３ 관련 섬유증과 관련된 병리증상을 치료하기 위한 방법 및 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 치료 조성물, 제제, 방법 및 장치를 포함하는, 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 섬유증과 관련된 증상 또는 병리증상을 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다.

Description

ＩＬ―４ 또는 ＩＬ―１３ 관련 섬유증과 관련된 병리증상을 치료하기 위한 방법 및 조성물{METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATING IL-4 OR IL-13 RELATED FIBROSIS RELATED PATHOLOGIES}

본 발명은 치료 조성물, 제제, 투여 및 장치를 포함하는, 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 섬유증 관련 병리증상을 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 본 출원은 2006년 12월 15일자로 출원된 US 60/870,105를 참조로서 전체적으로 포함한다.

인터루킨-4는 단핵구, 내피 세포 및 섬유아세포를 포함하는 많은 비-임파성 세포, B 세포 및 T 세포 상에서 복합적인 생물학적 효과를 갖는 비만 세포 및 T 세포로부터 유래된 다면발현성 사이토카인이다. 이는 마우스의 B 세포에 의한 IgG1 및 IgE의 분비 및 인간 B 세포에 의한 IgG4 및 IgE의 분비를 유도한다. IgE 및 경우에 따라 IgG1 및 IgG4의 IL4-의존 생산은 IL4로 유도된 동형 전환(isotype switching)에 기인한다. 인간에서, IL4는 IL13과 이 성질을 공유한다. IL4의 삼차원 구조는 NMR 및 X-선 결정학에 의해 결정되었다. 이는 우세한 소수성 코어를 갖는 촘촘한 구형 구조를 갖는다. 2-가닥의 역평행 β-시트를 포함하는 2개의 오버핸드 연결을 갖는 왼쪽(left-handed) 역평행 번들에서 헬릭스 배열을 갖는 4개의 α-헬릭스 번들이 대부분의 분자를 구성한다. 구조는 GM-CSF, M-CSF 및 IL3과 유사하다.

인터루킨 13(IL-13)은 활성된 T 세포에 의해 분비되고 LPS로 자극된 단핵구에 의한 염증성 사이토카인(IL1, IL6, TNF, IL8)의 생산을 억제한다. 인간 및 마우스 IL13은 인간 B 세포 상에서 CD23의 발현을 유도하고, 항-Ig 또는 CD40 항체와의 조합에서 B 세포 증식을 촉진하며, IgM, IgE 및 IgG4의 분비를 자극한다. IL13은 또한 인간 단핵구의 생존을 연장시키고 MHC 클래스 II 및 CD23의 표면 발현을 증가시키는 것으로 나타났다. 결정 구조는 결정되지 않았으나 이론적 분자 모델은 구축되었다. IL-4, 및 IL-4 또는 IL-13은 그들의 생물학적 기능을 기초로 하여 치료학적으로 중요한 단백질이다. IL-4는 자가면역 질환을 억제가능한것으로 나타났고, IL-4, 및 IL-4 또는 IL-13은 항-종양 면역 반응을 증진시킬 잠재성을 나타내었다. 반면, 두개의 사이토카인은 알러지 질환의 병리학과 관련있으므로, 이들 사이토카인에 대한 길항제는 알러지 및 알러지 천식에 대한 치료적 이익을 제공할 가능성이 있다.

비-인간, 키메라, 다중클론(예를 들어, 항-혈청) 및/또는 단일클론 항체(Mab) 및 단편(예를 들어, 이의 단백질 분해 소화 산물)은 특정 질환의 치료를 시도하는 몇몇 경우에서 연구되는 잠재적 치료제이다. 그러나 비-인간 부분을 포함하는 이러한 항체는 인간에 투여되었을 때, 면역 반응을 도출할 수 있다. 이러한 면역 반응은 순환으로부터 면역 복합체로 매개된 항체를 제거할 수 있고, 치료에 적절하지 않은 반복된 투여를 하여, 환자의 치료적 이점을 감소시키고, Ig 유래 단백질의 재투여를 제한시킬 수 있다. 예를 들어, 비-인간 부분을 함유하는 항체의 반복된 투여는 혈청병 및/또는 아나필락시스(anaphalaxis)를 유도할 수 있다. 이러한 문제점 및 다른 문제점들을 극복하기 위하여, 당업계에 공지된 바와 같이, 키메라화 및 "인간화"를 포함하여, 이러한 항체 및 이의 부분의 면역원성을 감소시키기 위한 많은 접근을 취해왔다. 이들 접근은 감소된 면역원성을 갖는 항체를 생산하였지만, 다른 바람직하지 않은 성질을 갖는다.

따라서, 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 섬유증 관련 병리증상을 치료하기 위한 방법 및 조성물이 요망된다.

발명의 요약

본 발명은 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 섬유증 관련 병리증상을 치료하는데 사용하기 위한 면역글로불린, 수용체 융합 단백질, 이의 절단 산물 및 기타 특정 부분 및 변형체뿐만 아니라 당업계에 공지된 것과 함께, 본원에서 기재하고 부여한 것과 같은, 항-IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 조성물, 코딩 또는 상보 핵산, 벡터, 숙주 세포, 조성물, 제제, 장치, 트랜스제닉 동물, 트랜스제닉 식물, 및 이의 용도 및 제조 방법을 포함하는, 적어도 하나의 분리된 항-IL-4 또는 IL-13 인간 Ig 유래 단백질(Ig 유래 단백질)을 사용하여 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13과 관련된 섬유증 병리증상을 치료하기 위한 방법 및 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 본원에서 기재한 임의의 발명을 제공하고 본원에서 제공된 실시예, 구체예 또는 임의의 특정 설명에 한정되지 않는다.

본 발명은 또한 치료적 유효량으로 투여되는 경우, 세포, 조직, 기관, 동물 또는 환자 및/또는 필요에 따라 당업계에 공지되고/거나 본원에 기술된 바와 같은 많은 다른 증상, 예컨대, 한정하는 것은 아니나, 관련 질환 또는 치료 증상 전, 후, 또는 그 동안에 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 섬유증과 관련된 증상 또는 질환의 징조 또는 증후를 조절, 치료 또는 감소시키기 위한 방법 또는 조성물에서 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질, 특정 부분 또는 변형체를 제공한다. 본 발명에 따라 치료될 수 있는 섬유증과 관련된 증상의 비한정적인 예는 간질성 폐질환, 피부경화증, 간 섬유증, 신장 섬유증, 유육종증, 비후성 반흔, 켈로이드 반흔, 심장 섬유증, 연령 관련 황반 변성 또는 아교질 혈관병을 포함한다.

본 발명은 또한 섬유증과 관련된 증상을 조절하는 유효량의 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 인간 Ig 유래 단백질을 세포, 조직, 기관 또는 동물과 접촉시키거나, 이에 투여하는 것을 포함하는, 세포, 조직, 기관 또는 동물에서 IL-4 또는 IL-13 섬유증과 관련된 증상을 치료하기 위한 적어도 하나의 방법을 제공하고, 여기에서, 임의로 상기 동물은 영장류이고, 임의로 원숭이 또는 인간이다. 상기 방법은 또한 임의로 유효량이 상기 세포, 조직, 기관 또는 동물의 킬로그램 당 0.001-100 mg인 것을 포함할 수 있다. 이러한 방법은 또한 상기 접촉 또는 투여가 정맥내, 근육내, 볼루스, 복강내, 피하, 호흡, 흡입, 비강, 질내, 직장내, 구강내, 설하, 비내, 피하 또는 경피로부터 선택된 적어도 하나의 방법에 의한 것을 포함할 수 있다.

본 발명은 또한 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 인간 Ig 유래 단백질, 및 멸균수, 멸균 완충수로부터 선택되는 적어도 하나 또는 수성 희석제 내에 페놀, m-크레졸, p-크레졸, o-크레졸, 클로로크레졸, 벤질 알코올, 알킬 파라벤, 벤잘코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드, 소듐 디히드로아세테이트 및 티머로살, 또는 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 보존제를 임의로 함유하는 적어도 하나의 제제를 포함하고, 여기에서 IL-4 또는 IL-13 인간 Ig 유래 단백질의 농도는 약 0.1 mg/ml 내지 약 100 mg/ml이고, 추가로 적어도 하나의 등장화제 또는 적어도 하나의 생리적으로 허용되는 완충액을 포함한다.

본 발명은 또한 제 1 컨테이너에서 동결 건조 형태의 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 인간 Ig 유래 단백질 및 적어도 하나의 멸균수, 멸균 완충수, 또는 수성 희석제 내에 페놀, m-크레졸, p-크레졸, o-크레졸, 클로로크레졸, 벤질 알코올, 알킬 파라벤, 벤잘코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드, 소듐 디히드로아세테이트 및 티머로살, 또는 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 보존제를 임의로 포함하는 임의의 제 2 컨테이너를 함유하는 적어도 하나의 제제를 포함하고, 여기에서 또한 IL-4 또는 IL-13 인간 Ig 유래 단백질의 농도는 약 0.1 mg/ml 내지 약 500 mg/ml의 농도로 되게 하고, 추가로 등장화제를 포함하거나, 추가로 생리적으로 허용되는 완충액을 포함한다.

본 발명은 또한 본 발명의 제제를, 이를 요하는 환자에 투여하는 것을 포함하는, 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 매개 증상을 치료하기 위한 적어도 하나의 방법을 제공한다.

상기 Ig 유래 단백질은 IL-4 또는 IL-13이 적어도 하나의 이의 수용체에 결합하는 것을 차단하고 하기 기준의 3 이상, 예컨대, 3, 4, 5, 6 또는 7을 포함하는 항체 및 수용체 융합 단백질을 임의로 포함할 수 있다.

기준

1. 적어도 하나의 인간 야생형(wt) 재조합 또는 정제된 IL-4 또는 IL-13, IL-4 또는 IL-13 수용체 및/또는 다른 특정의 IL-4 또는 IL-13 돌연변이, 예컨대, 한정하는 것은 아니나, 서열 번호 42, 43 또는 44의 1-10, 10-20, 20-30, 30-40, 40-50, 50-60, 60-70, 70-80, 80-90, 90-100, 100-110, 110-120, 120-130, 130-140 및/또는 14-145개중 적어도 하나를 비롯하여, 1-145개의 아미노산으로서, 예를 들어, 한정하는 것은 아니나, 적어도 하나의 Ile48, Val48, Gln90, Glu90, Leu95, Ile95, Leu96, Ile96, Leu99, Ile99, Phe1O3, Tyr1O3, Asn130 및/또는 Gln130에 결합한다(ELISA에서).

2. 재조합 wt 인간 IL13 또는 IL-4 또는 IL-13 수용체에 대한 결합에는 특이적이나, 구조적으로 관련된 사이토카인, 인간 GM-CSF에 대해서는 그렇지 않다(ELISA에서).

3. 바람직하게 ND50 ≤ 1O nM로 인간 IL-4 또는 IL-13 수용체 또는 적절한 동물 IL-4 또는 IL-13 수용체와의 인간 재조합 wt 인간 IL13 상호작용을 억제한다.

4. 네가티브 대조군보다 인간 종양 TF-1 세포의 인간 야생형 인간 IL-4 또는 IL-13 의존 증식을 억제한다.

5. 0.5 nM 이하의 특정 돌연변이 또는 인간 IL13 wt에 대한 겉보기 Kd를 갖는다(BIAcore로 측정).

6. B9 어세이뿐만 아니라 네가티브 대조군보다 신선한 인간 B 세포에서의 인간 IL13 wt 재조합 인간 IL-4 또는 IL-13 의존 시험관 내 IgE 생산을 더욱 억제한다.

7. B9 어세이 및/또는 ELISA로 결정될 수 있는 바와 같이, 재조합 IL-4 또는 IL-13와 유사한 효능으로 네가티브 인간 IL13과 교차 반응한다.

본 발명은 또한 이러한 항-IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질의 조성물, 제제, 방법, 장치 및, 치료적 및 진단적 용도를 포함하는 용도를 제공한다.

본 발명은 또한 하나 이상의 그의 수용체에 결합하는 IL-4 또는 IL-13를 차단함으로써 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 섬유증과 관련된 증상을 치료하기에 적절한 Ig 유래 단백질을 제공한다.

본 발명은 분리, 재조합 및/또는 합성 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체뿐만 아니라 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질을 코딩하는 적어도 하나의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 코딩 핵산 분자 및 조성물을 제공한다. 본 발명의 상기 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체는 치료 조성물, 방법 및 장치를 비롯하여, 특정 전장 Ig 유래 단백질 서열, 이의 도메인, 단편 및 특정 변형체, 및 상기 핵산의 이용 및 제조 방법 및 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 포함한다.

본원에서 이용된 바, "항-IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질", "항-IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 부분", "항-IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 단편", "항-IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 변형체", "IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질", "IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 부분", 또는 "IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 단편" 및/또는 "IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 변형체" 등은 시험관 내, 인 시츄(in situ) 및/또는 바람직하게 생체 내에서 IL-4 또는 IL-13 단백질 활성, 결합 또는 IL-4 또는 IL-13 단백질 수용체의 활성 또는 결합을 감소, 차단, 억제, 폐기 또는 방해하고, 추가로 상기 기준의 적어도 3-7을 포함한다.

예를 들어, 본 발명의 적절한 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질, 특정 부분 또는 변형체는 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 단백질 또는 수용체와 결합할 수 있고 항-IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질, 이의 항원-결합 단편 및, IL-4 또는 IL-13에 특이적으로 결합하는 이의 특정 부분, 변형체 또는 도메인을 포함한다. 적절한 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질, 특정 부분, 또는 변형체는 또한, 예를 들어, 본원에 기술 또는 당업계에 공지된 바와 같이, IL-4 또는 IL-13 단백질 RNA, DNA 또는 단백질 합성, IL-4 또는 IL-13 단백질 방출, IL-4 또는 IL-13 단백질 또는 수용체 신호, 막 IL-4 또는 IL-13 단백질 절단, IL-4 또는 IL-13과 관련된 활성, IL-4 또는 IL-13 단백질 생산 및/또는 합성을 감소, 차단, 폐기, 방해, 예방 및/또는 억제할 수 있다.

본 발명의 방법 및 조성물에서 유용한 항-IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질(또한 항-IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질이라고도 부름)은 바람직하게 저독성을 임의로 갖는 IL-4 또는 IL-13 단백질에 대한 높은 친화도 결합으로 특정지어질 수 있다. 특히, 가변 영역, 불변 영역 및 프레임워크와 같은 각 성분이 각각 및/또는 함께, 임의로 바람직하게는 낮은 면역원성을 갖는 본 발명의 Ig 유래 단백질, 특정 단편 또는 변형체가 본 발명에 유용하다. 본 발명에서 사용될 수 있는 Ig 유래 단백질은 징후의 상당한 감소 및 저독성으로 장기간 동안 환자를 치료하는 그들의 능력에 의해 임의로 특정지어 진다. 저면역원성 및/또는 높은 친화도 뿐만 아니라 다른 적절한 특성이 달성하고자 하는 치료적 결과에 기여할 수 있다. "저면역원성"은 유의적인 HAHA, HACA 또는 HAMA 반응을 치료할 환자의 약 75% 미만, 또는 바람직하게는 약 50% 미만에서 상당히 증가시키거나/시키며 치료할 환자에서 낮은 적정량을 증가시키는 것으로 정의된다(이중 항원 효소 면역분석으로 측정하여 약 300 미만, 바람직하게는 약 100 미만임)(Elliott et al., Lancet 344 : 1125-1127 (1994), 상기 문헌의 각각은 참조로서 전체가 본원에 포함된다).

유용성

본 발명의 분리된 핵산은 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질, 이의 단편 또는 특정 변형체의 생산에 사용될 수 있고, 이는 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 증상의 징후의 조절, 치료, 경감, 발생 방지 도움, 또는 감소를 위하여, 세포, 조직, 기관 또는 동물(포유동물 및 인간 포함)에서 사용될 수 있다.

이러한 방법은 적어도 하나의 항-IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 포함하는 유효량의 조성물 또는 약제학적 조성물을 이러한 조절, 치료, 경감, 예방, 또는 증상, 작용 또는 메카니즘의 감소를 필요로 하는, 세포, 조직, 기관, 동물 또는 환자에 투여하는 것을 포함할 수 있다. 상기 유효량은 본 명세서에 기술되거나 당업계에 공지된 바와 같이 공지의 방법을 이용하여 결정하고 수행하는 바, 약 0.001 내지 500 mg/kg, 또는 단회 또는 다중 투여로 0.01-5000 ㎍/㎖ 혈청 농도를 이루기 위해, 또는 임의의 유효한 범위 또는 본원의 값을 포함할 수 있다.

인용

본 명세서에서 언급된 모든 간행물 또는 특허는 전체가 참조로서 본 명세서에 포함되고, 본 발명 당시의 기술 상태를 보여주거나/주고 본 발명의 설명 및 실현가능성을 제공한다. 간행물은 임의의 과학적 또는 특허 간행물, 또는 모든 기록, 전자적 또는 프린트된 형태를 포함하는 임의의 매체 형태로 이용가능한 임의의 다른 정보를 언급한다. 다음 문헌은 전체가 참조로서 본 명세서에 포함된다: Ausubel, et al., ed., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., NY, NY (1987-2006); Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2^nd Edition, Cold Spring Harbor, NY (1989); Harlow and Lane, Ig derived protein, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY (1989); Colligan, et al., eds., Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, Inc., NY (1994-2006); Colligan et al., Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2006).

본 발명의 Ig 유래 단백질

용어 "Ig 유래 단백질"은 단쇄 Ig 유래 단백질 및 이의 단편을 비롯한 항체, 이의 특정 단편 또는 부분의 구조 및/또는 기능을 모방하는 Ig 유래 단백질의 부분 또는 Ig 유래 단백질 모방체를 비롯한 Ig 유래 단백질, 이의 분해 단편, 특정 부분 및 변형체 및, 치료 단백질, 항체, 및 이의 분해 단편, 특정 부분 및 변형체에 대한 모방체를 포함하는 단백질을 포함하고자 하고, 상기 단백질은 Ig-유래 단백질, 부분 또는 변형체로부터 유도된 항체의 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR)을 임의로 대체하는 적어도 하나의 기능적 IL-4 또는 IL-13 단백질 리간드 결합 영역(LBR)을 포함한다. 일 구체예에서, Ig 유래 단백질은 적어도 하나의 CDR 또는 적어도 하나의 생물학적 활성 표적(예를 들어, IL-4 또는 IL-13 또는 IL-4 또는 IL-13 수용체)과 특이적으로 결합하는 표적 결합 영역을 포함하고 추가로 적어도 하나의 서열 번호 1-41의 적어도 10 내지 384-500개의 아미노산 또는 표 1에서 기술한 바와 같이 상응하는 중쇄 또는 경쇄 아미노산 서열의 적어도 하나의 영역의 적어도 하나의 부분을 포함하며, 참조로서 전체가 본원에 포함되는 2004년 6월 17일자로 출원되고, 추가로 2005년 1월 20일자로 공표된 PCT WO 05/05604의 도 1-41에 기술된 바와 같이, 적어도 하나의 치환, 삽입 또는 결실을 임의로 포함한다. 이러한 IL-4 또는 IL-13 IgG 유래 단백질, 특정 부분 또는 변형체는 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 단백질 길항제, 예컨대, IL-4 또는 IL-13 단백질 항체 또는 수용체 또는 리간드 단백질, 또는 단편 또는 유사체의 구조 및/또는 기능을 모방하는 것을 포함한다. 기능성 단편은 인간 IL-4 또는 IL-13 단백질 또는 이의 단편에 결합하는 항원-결합 단편을 포함한다. 예를 들면, Ig 유래 단백질 단편은 인간 IL-4 또는 IL-13 단백질 또는 이의 단편에 결합할 수 있고, 제한하는 것은 아니지만, Fab(예를 들어, 파파인 분해에 의해), Fab'(예를 들어, 펩신 분해 및 부분적인 환원에 의해) 및 F(ab')₂(예를 들어, 펩신 분해에 의해), facb(예를 들어, 플라스민 분해에 의해), pFc'(예를 들어, 펩신 또는 플라스민 분해에 의해), Fd(예를 들어, 펩신 분해, 부분적인 환원 및 재응집에 의해), Fv 또는 scFv(예를 들어, 분자생물학 기술에 의해) 단편을 포함하고 이는 본 발명에 포함된다(예를 들어 Colligan, Immunology, 상동 참조).

상기 단편은 당업계에 공지되었고/거나 본 명세서에 기술된 바와 같은 효소적 절단, 합성 또는 재조합 기술에 의해 생산될 수 있다. Ig 유래 단백질은 또한 하나 이상의 정지 코돈이 자연 정지 부위의 업스트림에 도입된 Ig 유래 단백질 유전자를 사용하여 다양한 절단(truncated) 형태로 생산될 수 있다. 예를 들면, F(ab')₂ 중쇄 부분을 코딩하는 키메라 유전자는 중쇄의 CH₁ 도메인 및/또는 힌지 영역을 코딩하는 DNA 서열을 포함하도록 조작될 수 있다. Ig 유래 단백질의 다양한 부분은 통상의 기술에 의해 화학적으로 서로 결합하거나 유전공학 기술을 사용하여 인접 단백질로서 제조될 수 있다. 예를 들어, 인간 Ig 유래 단백질 사슬의 가변 및 불변 영역을 코딩하는 핵산은 인접 단백질을 생산하기 위하여 발현될 수 있다. 예를 들어, 단편에 대해서는 Colligan, Immunology, 상동, sections 2.8 및 2.10을, 단쇄 Ig 유래 단백질에 대해서는 Ladner et al., U.S. 특허 번호 4,946,778 및 Bird, R.E. et al., Science, 242: 423-426 (1988)을 참조할 수 있고, 이들 간행물은 각각 참조로서 전체가 본원에 포함된다.

본원에 사용된 바, 용어 "인간 Ig 유래 단백질"은 단백질(예를 들면, CDR, LBR, 프레임워크, C_L, C_H 도메인(예를 들면, C_H1, C_H2, C_H3), 힌지,(V_L, V_H))의 실질적인 모든 부분이 작은 서열의 변화 또는 변형만 있는, 실질적으로 비-면역원성인 Ig 유래 단백질을 의미한다. 이러한 변화 또는 변형은 부가적으로 바람직하게는 비-변형된 인간 Ig 유래 단백질과 비교하여, 인간에서 면역원성을 억제 또는 감소시킨다. 그러므로, 인간 Ig 유래 단백질은 키메라 또는 인간화된 Ig와 구분된다. 인간 Ig 유래 단백질이 기능적으로 재배열된 인간 면역글로불린(예를 들면, 중쇄 및/또는 경쇄) 유전자를 발현할 수 있는 비-인간 동물 또는 진핵 또는 원핵 세포에 의해 생산될 수 있다. 또한, 인간 Ig 유래 단백질이 단쇄 Ig 유래 단백질일 경우, 이는 본래 인간 Ig 유래 단백질 내에서 발견되지 않는 링커 펩티드를 포함할 수 있다. 예를 들면, Fv는 2 내지 약 8개의 글리신 또는 다른 아미노산 잔기와 같은 링커 펩티드를 포함할 수 있고, 이는 중쇄의 가변 영역 및 경쇄의 가변 영역에 연결된다. 이러한 링커 펩티드는 인간 기원인 것으로 간주된다. 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 단백질 리간드 또는 이의 수용체를 포함하는 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질은 적당한 리간드, 예컨대, 분리 및/또는 IL-4 또는 IL-13 단백질, 또는 이의 부분(합성 분자, 예컨대, 합성 펩티드 포함)에 대하여 설계될 수 있다. 이러한 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질의 제조는 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 단백질 또는 이의 부분의 리간드 결합 영역 또는 서열을 확인하고 특정짓기 위한 공지의 기술을 사용하여 수행된다.

p40 서브유닛에 대하여 특이적인 인간 Ig 유래 단백질은 적절한 면역원성 항원, 예를 들어, 분리된 IL-4 또는 IL-13 단백질 또는 이의 부분(합성 분자, 예컨대, 합성 펩티드 포함)에 대하여 생성될 수 있다. 면역원성 항원의 제조 및 단일클론 Ig 유래 단백질 생산은 임의의 적절한 기술을 사용하여 수행될 수 있다. 다양한 방법이 기재되어 있다(각각 참조로서 전체가 본원에 포함되는 Kohler et al., Nature, 256: 495- 497 (1975) 및 Eur . J. Immunol. 6: 511-519 (1976); Milstein et al., Nature 266: 550-552 (1977); Koprowski et al., U.S. 미국 특허. 4,172,124; Harlow, E. 및 D. Lane, 1988, Ig derived proteins: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory: Cold Spring Harbor, NY); Current Protocols In Molecular Biology, Vol. 2(예를 들어, Supplement 27, Summer '94), Ausubel, F.M. et al., Eds., (John Wiley & Sons: New York, NY), Chapter 11, (1991-2006) 참조). 일반적으로, 하이브리도마가 적합한 무한증식 세포주(예를 들면, Sp2/0, Sp2/0-AG14, NSO, NS1, NS2, AE-1, L.5, >243, P3X63Ag8.653, Sp2 SA3, Sp2 MAI, Sp2 SS1, Sp2 SA5, U937, MLA 144, ACT IV, MOLT4, DA-1, JURKAT, WEHI, K-562, COS, RAJI, NIH 3T3, HL-60, MLA 144, NAMALWA, NEURO 2A 등과 같으나, 이에 한정되지 않는 골수종 세포주 또는 이형골수종, 이의 융합 생성물, 또는 이로부터 유래된 임의의 세포 또는 융합 세포, 또는 당업계에 공지된 바와 같은 적합한 다른 임의의 세포주(예를 들면, www.atcc.org, www.lifetech. com., 등 참조, 각각은 참조로서 전체가 본원에 포함됨)를 재조합 또는 내인성, 바이러스, 박테리아, 조류, 원핵, 양서류, 곤충, 파충류, 어류, 포유동물, 설치류, 말, 오바인(ovine), 염소, 양(sheep), 영장류, 진핵, 게놈 DNA, cDNA, rDNA, 미토콘드리아 DNA 또는 RNA, 엽록체 DNA 또는 RNA, hnRNA, mRNA, tRNA, 단일, 이중 또는 삼중 가닥, 혼성화 등 또는 이의 임의의 조합 형태로서, 내인성 또는 이종의 핵산으로서, 분리된 또는 클론된 비장 세포 또는 중쇄 또는 경쇄 가변 또는 불변 영역 또는 프레임워크 또는 CDR 서열을 발현하는 임의의 다른 세포와 같으나, 이에 제한되지 않는, Ig 유래 단백질 생산 세포와 융합하여 생산된다. 예를 들어, 전체가 참조로서 본 명세서에 포함된, Ausubel, 상동, 및 Colligan, Immunology, 상동, chapter 2를 참조할 수 있다.

Ig 유래 단백질 생산 세포는 대상 항원으로 면역화된 인간 또는 다른 적합한 동물의 말초 혈액 또는, 바람직하게는 비장 또는 림프절로부터 얻어질 수 있다. 임의의 다른 적합한 숙주 세포는 또한 본 발명의 Ig 유래 단백질, 이의 특정 단편 또는 변형체를 코딩하는 이종 또는 내인성 핵산의 발현에 이용될 수 있다. 융합 세포(하이브리도마) 또는 재조합 세포는 선택적 배양 조건 또는 공지된 다른 적합한 방법을 이용하여 분리될 수 있고, 제한된 희석 또는 세포 선별 또는 다른 공지된 방법으로 클론될 수 있다. 원하는 특이성을 갖는 Ig 유래 단백질을 생산하는 세포는 적합한 분석(예를 들면, ELISA)에 의해 선별될 수 있다.

요구되는 특이성을 갖는 항체를 생산 또는 분리하는 다른 적합한 방법이 이용될 수 있으며, 이는 당업계에 공지되고/거나 본원에 개시된 바와 같이, 인간 항체의 레퍼토리를 생산할 수 있는 트랜스제닉 동물의 면역화에 의존(예를 들면, SCID mice, Nguyen et al., Microbiol. Immunol. 41: 901-907 (1997); Sandhu et al., Crit. Rev. Biotechnol. 16: 95-118 (1996); Eren et al., Immunol. 93: 154-161 (1998), 각각의 전체가 관련 특허 및 출원과 함께 참조로서 포함됨)하거나, 펩티드 또는 단백질 라이브러리로부터 재조합 항체를 선별(예를 들면, 박테리오파지, 리보솜, 올리고뉴클레오티드, RNA, cDNA, 등 디스플레이 라이브러리; 예를 들면, Cambridge Antibody Technologies, Cambridaeshire. UK; MorphoSys, Martinsreid/Planegg, DE; Biovation, Aberdeen, Scotland, UK: BioInvent, Lund, Sweden; Dyax Corp., Enzon, Affymax/Biosite ;Xoma, Berkeley, CA; Ixsys로부터 이용가능함. 참조, 예를 들면, EP 368,684, PCT/GB91/01134; PCT/GB92/01755; PCT/GB92/002240; PCT/GB92/00883; PCT/GB93/00605; US 08/350260 (5/12/94); PCT/GB94/01422; PCT/GB94/02662; PCT/GB97/01835; (CAT/MRC); W090/14443 ;W090/14424; WO90/14430; PCT/US94/1234; W092/18619; W096/07754; (Scripps); WO96/13583; WO97/08320 (MorphoSys); W095/16027 (BioInvent); W088/06630; W090/3809 (Dyax); US 4,704,692 (Enzon); PCT/US91/02989 (Affymax); W089/06283; EP 371 998; EP 550 400; (Xoma); EP 229046; PCT/US91/07149 (Ixsys); 또는 추측상 생성된 펩티드 또는 단백질 - US 5723323, 5763192, 5814476, 5817483, 5824514, 5976862, WO 86/05803, EP 590 689 (Ixsys, 현재 Applied Molecular Evolution (AME), 각각은 전체가 참조로서 본 명세서에 포함됨)하는 방법을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 이러한 기술은 리보솜 디스플레이(Hanes et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94: 4937-4942 (May 1997); Hanes et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95: 14130-14135 (Nov. 1998)); 단일 세포 항체 생산 기술(예를 들면, 선택된 림프구 항체 방법("SLAM") (미국 특허 번호 5,627,052, Wen et al., J. Immunol. 17: 887-892 (1987); Babcook et al., Proc. Natl.Acad. Sci. USA 93: 7843-7848 (1996)); 겔 마이크로드로플렛 및 유세포 분석(Powell et al.,Biotechnol. 8: 333-337 (1990); One Cell Systems, Cambridge, MA; Gray et al., J. Imm. Meth.182: 155-163 (1995); Kenny et al., Bio/Technol. 13: 787-790 (1995)); B-세포 선택 (Steenbakkers et al., Molec. Biol. Reports 19: 125-134 (1994); Jonak et al., Progress Biotech,Vol. 5, In Vitro Immunization in Hybridoma Technology, Borrebaeck, ed., Elsevier Science Publishers B. V., Amsterdam, Netherlands (1988))을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니며, 이들의 각각은 본원에 참조로서 전체가 포함된다.

비-인간 Ig 유래 단백질을 인간화하는 방법이 또한 사용될 수 있고 당업계에 널리 공지되어 있다. 일반적으로, 인간화된 항체는 비-인간 공급원으로부터 도입된 하나 이상의 아미노산 잔기를 갖는다. 이들 비-인간 아미노산 잔기는 종종 "이입" 잔기로 언급되는데, 이들은 "이입" 가변 도메인으로부터 전형적으로 취해진다. 인간화는 Winter와 공동연구자들의 방법(Jones et al., Nature 321 :522 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323 (1988); Verhoeyen et al., Science 239: 1534 (1988), 이들 각각은 전체가 참조로서 본원에 포함된다))에 따라 인간 항체의 상응하는 서열에 대하여 설치류 CDR 또는 CDR 서열을 대체함으로써 기본적으로 수행될 수 있다. 따라서, 이러한 "인간화" Ig 유래 단백질은 키메라 Ig 유래 단백질(Cabilly et al., 상동)이고, 여기에서 손상되지 않은 인간 가변 도메인은 비인간 종으로부터 상응하는 서열에 의해 실질적으로 덜 치환된다. 사실상, 인간화 Ig 유래 단백질은 일부 CDR 잔기 및 가능한한 일부 FR 잔기가 설치류 Ig 유래 단백질의 유사 자리로부터의 잔기에 의해 치환된 전형적인 인간 Ig 유래 단백질이다.

인간화 Ig 유래 단백질을 만드는데 사용되는 인간 가변 도메인, 경쇄 및 중쇄의 선택은 항원성을 감소시키는데 사용될 수 있다. 통칭 "최적 적합(best-fit)" 방법에 따라, 설치류 항체의 가변 도메인의 서열이 공지된 인간 가변-도메인 서열의 전체 라이브러리에 대하여 스크린된다. 이어서 설치류의 서열과 가장 가까운 인간 서열이 인간화 항체에 대한 인간 프레임워크(FR)로서 허용된다(Sims et al., J. Immunol. 151 : 2296 (1993); Chothia 및 Lesk, J. Mol. Biol. 196:901 (1987), 이들 각각은 참조로서 전체가 본원에 포함된다). 다른 방법은 경쇄 또는 중쇄의 특별한 서브그룹의 모든 인간 Ig 유래 단백질의 일치 서열로부터 유래된 특별한 프레임워크를 사용한다. 동일한 프레임워크가 몇몇의 다른 인간화 Ig 유래 단백질에 대하여 사용될 수 있다(Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:4285 (1992); Presta et al., J. Immunol. 151 :2623 (1993), 이들 각각은 참조로서 전체가 본원에 포함된다).

Ig 유래 단백질은 또한 항원에 대한 고친화성의 유지 및 다른 유리한 생물학적 성질을 갖도록 임의로 인간화될 수 있다. 이러한 목적을 달성하기 위하여, 바람직한 방법에 따라, 인간화 Ig 유래 단백질은 부모의 서열 및 인간화 서열의 삼차원 모델을 사용하는 부모 서열 및 다양한 개념의 인간화 산물의 분석 과정에 의해 제조될 수 있다. 삼차원 면역글로불린 모델은 당업자들에게 일반적으로 이용가능하고 친숙한 것이다. 컴퓨터 프로그램은 선택된 후보 면역글로불린 서열의 가능한 삼차원 구조적 구조를 설명 및 디스플레이하는 것이 가능한 것이다. 이들 디스플레이의 점검은 후보 면역글로불린 서열의 기능, 즉, 그의 항원에 결합하는 후보 면역글로불린의 능력에 영향을 미치는 잔기의 분석에서, 잔기의 역할 분석을 허용한다. 이러한 방법으로, FR 잔기는 선별될 수 있고 일치 및 주요 서열로부터 결합되어 원하는 항체 특성, 예컨대, 표적 항원(s)에 대하여 증가된 친화성이 달성되도록 한다. 일반적으로, CDR 잔기는 가장 실질적으로 직접적으로 항원 결합에 영향을 미치는 것과 관련있다.

인간 단일클론 Ig 유래 단백질은 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있다. 인간 단일클론 Ig 유래 단백질의 생산을 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 헤테로골수종 세포주는, 예를 들어, 각각 전체가 참조로서 본원에 포함되는, Kozbor, J. Immunol. 133:3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques 및 Applications, 51-63 페이지(Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); 및 Boerner et al., J. Immunol. 147:86 (1991)에 기술되어 있다.

대안적으로, 파지 디스플레이 기술 및 상술한 바와 같이 비면역화된 기증자로부터의 면역글로불린 가변(V) 도메인 유전자 래퍼토리에서, 시험관 내에서 인간 Ig 유래 단백질 및 항체 단편을 생산하는데 사용될 수 있다. 이 기술의 하나의 비한정적인 예시에 따라, 항체 V 도메인 유전자는 필라멘트성 박테리오파지, 예컨대, M13 또는 fd의 주요 또는 소수의 코팅 단백질 유전자로 프레임 내로 클론되고, 파지 입자의 표면 상에 기능적 항체 단편으로서 디스플레이된다. 필라멘트성 입자는 상기 파지 게놈의 단일 가닥 DNA 카피를 포함하고 있으므로, 항체의 기능적 성질을 기초로 한 선별은 또한 이러한 성질을 나타내는 항체를 코딩하고 있는 유전자를 선별하게 된다. 따라서, 파지는 B-세포의 성질을 일부 모방한다. 파지 디스플레이는 다양한 포맷으로 수행될 수 있다; 이들의 리뷰를 위하여, 예를 들어, 각각의 전체가 참조로서 본원에 포함되는, Johnson et al., Current Opinion in Structural Biology 3:564 (1993)을 참조할 수 있다. V-유전자 단편의 일부 공급원이 파지 디스플레이를 위하여 사용될 수 있다. Clackson 등(Nature 352:624 (1991))은 면역화된 마우스의 비장으로부터 유래된 V 유전자의 작고 랜덤한 결합의 라이브러리로부터 항-옥사졸론 Ig 유래 단백질의 다양한 배열을 분리하였다. 비면역화된 인간 기증자로부터의 V 유전자 래퍼토리는 구축될 수 있고 항원(자기-항원을 포함)의 다양한 배열에 대한 Ig 유래 단백질은 각각의 전체가 참조로서 본원에 포함되는, Marks et al., J. MoI. Biol. 222:581 (1991), 또는 Griffith et al., EMBO J. 12:725 (1993)에 기재된 기술에 따라 기본적으로 분리될 수 있다.

자연적 면역 반응에서, 항체 유전자는 높은 비율(체세포 고도 돌연변이)로 돌연변이를 축적한다. 도입된 변화의 일부는 더 높은 친화성을 제공할 것이고, 고-친화성 표면 면역글로불린을 디스플레이하는 B 세포가 우선적으로 복제되고 연속적인 항원 도전 동안 분화된다. 이러한 자연적인 과정은 "사슬 셔플링(chain shuffling)"으로서 공지(Marks et al., Bio/Technol. 10:779 (1992))된 기술을 사용하여 모방될 수 있다. 이 방법에서, 파지 디스플레이에 의해 수득된 "1차" 인간 Ig 유래 단백질의 친화성은 중쇄 및 경쇄 V 영역 유전자를 비면역화된 기증자로부터 수득된 V 도메인 유전자의 자연적으로 발생하는 변형체(래퍼토리)의 래퍼토리로 실질적으로 대체함으로써 증진될 수 있다. 이 기술은 nM 범위에서 친화성을 갖는 Ig 유래 단백질 및 항체 단편의 생산을 가능하게 한다. 매우 큰 파지 항체 래퍼토리를 제조하는 방법은 Waterhouse et al., Nucl. Acids Res. 21 :2265 (1993)에 기재되어 있다. 유전자 치환은 또한 설치류 Ig 유래 단백질로부터 인간 Ig 유래 단백질을 유도하기 위하여 사용될 수 있고, 여기에서, 인간 항체는 출발하는 설치류 항체에 유사한 친화성 및 특이성을 갖는다. "에피토프 각인"으로서도 언급되는 이 방법에 따라, 파지 디스플레이 기술에 의해 수득된 설치류 Ig 유래 단백질의 중쇄 또는 경쇄 V 도메인 유전자는 인간 V 도메인 유전자의 래퍼토리로 대체되어, 설치류-인간 키메라를 생성한다. 항원으로 선별하는 것은 기능적 항원-결합 부위를 재건할 수 있는 즉, 에피토프가 파트너의 선택을 조절(각인)할 수 있는, 인간 가변의 분리를 초래한다. 과정이 설치류 V 도메인의 보존을 대체하기 위하여 반복될 경우, 인간 항체가 수득된다(1993년, 4월 1일자로 출원된, PCT WO 93/06213 참조). CDR 이식에 의한 설치류 Ig 유래 단백질의 통상적인 인간화와는 달리, 이 기술은 완전하게 인간 Ig 유래 단백질을 제공하고, 이는 설치류 기원의 프레임워크 또는 CDR 잔기를 갖고 있지 않다.

양특이적 Ig 유래 단백질은 또한 적어도 두개의 다른 항원에 대하여 결합 특이성을 갖는 단일클론, 바람직하게 인간 또는 인간화, Ig 유래 단백질로 사용될 수 있다. 본 발명의 경우, 결합 특이성의 하나는 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 단백질에 대한 것이고, 다른 하나는 임의의 다른 항원에 대한 것이다. 예를 들어, IL-4 또는 IL-13 단백질 및 적어도 하나의 신경영양 인자, 또는 IL-4 또는 IL-13의 두개의 다른 폴리펩티드 형과 특이적으로 결합하는 양특이적 Ig 유래 단백질은 본 발명의 범위 이내에 있다.

양특이적 Ig 유래 단백질의 제조 방법은 당업계에 공지되어 있다. 전통적으로, 양특이적 Ig 유래 단백질의 재조합 생산은 2개의 중쇄가 서로 다른 특이성을 갖는 두 개의 면역 글로블린 중쇄-경쇄 쌍의 공동-발현에 기초한다(Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983)). 면역글로블린 중쇄 및 경쇄의 무작위 배열로 인해, 이들 하이브리도마(쿼드로마)는 10개의 서로 다른 항체 분자의 잠재적 혼합물을 생산하고, 그 중 단지 하나만이 올바른 양특이적 구조를 갖는다. 올바른 분자의 정제는 보통 친화성 크로마토그래피 단계에 의해 수행되는데 이는 다소 번거롭고, 생성 수율이 낮다. 유사한 절차가 1993년 5월 13일에 발표된 WO 93/08829 및 Traunecker et al., EMBO J. 10:3655 (1991)에 개시되어 있고, 이들은 전체가 참조로서 본 명세서에 포함된다.

상이하고 더욱 바람직한 접근에 따르면, 원하는 결합 특이성(항체-항원 결합 부위)을 갖는 항체-가변 도메인은 면역글로불린 불변-도메인 서열에 융합된다. 바람직하게 융합은 적어도 힌지 부분, 제 2의 중쇄 불변 영역(C.sub.H X), 및 제 3의 중쇄 불변 영역(C.sub.H 3)을 포함하는, 면역글로불린 중쇄 불변 도메인으로 된다. 적어도 하나의 융합에 존재하는 경쇄 결합에 대하여 필요한 부위를 포함하는, 제 1의 중쇄 불변 영역(C.sub.H 1)을 갖는 것이 바람직하다. 면역글로불린 중쇄 융합 및, 원한다면, 면역글로불린 경쇄를 코딩하는 DNA는 분리된 발현 벡터로 삽입되고, 적절한 숙주 기관으로 공동-트랜스팩션된다. 이는 작제에 사용되는 3개의 폴리펩티드 사슬의 동일하지 않은 비율이 최적이 수율을 제공하는 구체예에서 3개의 폴리펩티드 단편의 상호 비율을 조정하는데 우수한 유연성을 제공한다. 그러나, 이는 적어도 2개의 폴리펩티드 사슬이 동일한 비율에서 높은 수득율로 생산되거나 비율이 특히 중요하지 않을 경우, 하나의 발현 벡터에 두개 또는 모든 3개의 폴리펩티드 사슬에 대한 코딩 서열을 삽입하는 것이 가능하다. 이 접근의 바람직한 구체예에서, 양특이적 Ig 유래 단백질은 하나의 팔에서 제 1의 결합 특이성을 갖는 하이브리드 면역글로불린 중쇄 및 다른 하나의 팔에서의 하이브리드 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍(제 2의 결합 특이성을 제공)으로 구성된다. 이 비대칭 구조는 양특이적 분자의 단지 1/2에서 면역글로불린 경쇄의 존재가 분리의 쉬운 방법을 제공하는 것과 같이, 불필요한 면역글로불린 사슬 배합으로부터 원하는 양특이적 화합물의 분리를 용이하게 한다. 양특이적 Ig 유래 단백질을 제조하는 좀더 자세한 설명은, 예를 들어, Suresh et al., Methods in Enzymology 121 :210 (1986)을 참조할 수 있다.

헤테로컨쥬게이트 Ig 유래 단백질이 또한 본 발명의 범위 이내에 있다. 헤테로컨쥬게이트 Ig 유래 단백질은 두개의 공유결합으로 결합된 Ig 유래 단백질로 구성된다. 이러한 Ig 유래 단백질은, 예를 들어, 불필요한 세포에 대하여 면역 시스템 세포를 표적화(U.S. 특허 번호 4,676,980)하고, HIV 감염을 치료(WO 91/00360; WO 92/00373; 및 EP 03089)하는 것으로 제안되었다. 헤테로컨쥬게이트 Ig 유래 단백질은 임의의 편리한 교차-결합 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 적절한 교차-결합제는, 많은 교차-결합 기술과 함께 당업계에 공지되어 있고, 미국 특허 번호 4,676,980에 개시되어 있다.

바람직한 구체예에서, 본 발명의 적어도 하나의 항-IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체는 세포주, 혼합된 세포주, 무한증식 세포 또는 무한증식 세포의 클론 집단에 의해 생산된다. 무한증식 IL-4 또는 IL-13 생산 세포는 적절한 방법, 예를 들어, 인간 Ig 유래 단백질-생산 세포와 헤테로골수종의 융합 또는 엡스테인 바 바이러스의 감염을 통하여 활성화된 인간 B 세포의 무한증식을 사용하여 생산될 수 있다(Niedbala et al., Hybridoma, 17(3):299-304 (1998); Zanella et al., J Immunol Methods, 156(2):205-215 (1992); Gustafsson et al., Hum Ig derived protein Hybridomas, 2(1)26-32 (1991)). 바람직하게, 인간 항-인간 IL-4 또는 IL-13 단백질 또는 단편 또는 특정 부분 또는 변형체는 본원에서 기술되고/되거나 당업계에 공지된 바와 같이, 인간 Ig 유래 단백질의 레퍼토리를 생산할 수 있는 트랜스제닉 동물(예를 들어, 마우스, 랫트, 햄스터, 비-인간 영장류 등)의 면역화에 의해 생성된다. 인간 항-IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질을 생산하는 세포는 적절한 방법, 예컨대, 본원에 기재한 방법을 사용하여 이러한 동물 및 무한증식으로부터 분리될 수 있다.

인간 항원에 결합하는 인간 Ig 유래 단백질의 레퍼토리를 생산할 수 있는 트랜스제닉 마우스를 공지된 방법으로 생산할 수 있다(예를 들어, 한정하는 것은 아니나, Lonberg 등에 의해 출원된 U.S. 특허 번호: 5,770,428, 5,569,825, 5,545,806, 5,625,126, 5,625,825, 5,633,425, 5,661,016 및 5,789,650; Jakobovits et al. WO 98/50433, Jakobovits et al. WO 98/24893, Lonberg et al. WO 98/24884, Lonberg et al. WO 97/13852, Lonberg et al. WO 94/25585, Kucherlapate et al. WO 96/34096, Kucherlapate et al. EP 0463 151 B1, Kucherlapate et al. EP 0710 719 A1, Surani et al. US. Pat. No. 5,545,807, Bruggemann et al. WO 90/04036, Bruggemann et al. EP 0438 474 B1, Lonberg et al. EP 0814 259 A2, Lonberg et al. GB 2 272 440 A, Lonberg et al. Nature 368:856-859 (1994), Taylor et al., Int. Immunol. 6(4)579-591 (1994), Green et al., Nature Genetics 7: 13-21 (1994), Mendez et al., Nature Genetics 15: 146- 156 (1997), Taylor et al., Nucleic Acids Research 20(23):6287-6295 (1992), Tuaillon et al., Proc Natl Acad Sci USA 90(8)3720-3724 (1993), Lonberg et al., Int Rev Immunol 13(l):65-93 (1995) 및 Fishwald et al., Nat Biotechnol 14(7):845-851 (1996), 각각은 참조로서 전체가 본원에 포함된다). 일반적으로, 이들 마우스는 기능적으로 재배열되거나 기능적으로 재배열될 수 있는 적어도 하나의 인간 면역글로불린 좌로부터 유래된 DNA를 포함하는 적어도 하나의 트랜스 유전자를 포함한다. 이러한 마우스의 내재성 면역글로불린 좌는 내재성 유전자에 의해 코딩되는 Ig 유래 단백질을 생산하는 동물의 수용력을 제거하기 위하여 파괴되거나 삭제될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "기능적으로 재배열된"은 V(D)J 재조합이 발생하여 이에 의해 면역글로불린 사슬(예컨대, 중쇄, 경쇄), 또는 이의 임의의 부분을 코딩하는 면역글로불린 유전자가 생산된 면역글로불린 좌 유래의 DNA 세그멘트를 의미한다. 기능적으로 재배열된 면역글로불린 유전자는 예컨대, 뉴클레오티드 서열분석, 유전자 세그멘트 사이의 코딩 조인트에 어닐링할 수 있는 프로브를 이용한 혼성화(예컨대, 서던 블롯팅, 노던 블롯팅) 또는 유전자 세그멘트 사이의 코딩 조인트에 어닐링할 수 있는 프라이머를 이용한 면역글로불린 유전자의 효소적 증폭(예컨대, 폴리머라제 연쇄 반응)과 같은 적합한 방법을 이용해서 직접 또는 간접적으로 확인될 수 있다. 세포가 특정 가변 영역 또는 특정 서열(예컨대, 적어도 하나의 CDR 서열)을 포함하는 가변 영역을 함유하는 Ig 유래 단백질을 생산하는지 여부는 또한 적당한 방법을 이용하여 결정될 수 있다. 일 구체예에서, mRNA는 Ig 유래 단백질-생산 세포(예를 들어, 하이브리도마 또는 재조합 세포 또는 다른 적절한 공급원)로부터 분리될 수 있고 Ig 유래 단백질 또는 이의 특정 부분 또는 변형체를 코딩하는 cDNA를 생산하기 위하여 사용될 수 있다. cDNA는 대상(예를 들어, CDR, 코딩 조인트)의 가변 영역의 부분에 특이적으로 어닐링하는 제 1의 프라이머 및 비-가변 영역 서열(예를 들어, C_H1, V_H)에 특이적으로 어닐링하는 제 2의 프라이머를 사용하여 클론되고 서열분석되거나 증폭(예를 들어, 폴리머라제 연쇄 반응 또는 다른 공지된 적절한 방법)될 수 있다.

유사 단백질 또는 단편에 대한 특이적 결합을 위한 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 스크리닝은 펩티드 디스플레이 라이브러리를 사용하여 편리하게 달성될 수 있다. 이 방법은 소기의 기능 또는 구조를 갖는 각 구축원에 대한 펩티드의 큰 집단의 스크리닝을 수반한다. 펩티드 디스플레이 라이브러리의 Ig 유래 단백질 스크리닝은 당업계에 널리 공지되어 있다. 디스플레이된 펩티드 서열은 3 내지 5000 또는 그 이상의 아미노산 길이, 종종 5-100 아미노산 길이, 종종 약 8 내지 25 아미노산 길이일 수 있다. 펩티드 라이브러리 생성을 위한 직접적 화학 합성 방법에 외에, 몇몇 재조합 DNA 방법이 기술되어 있다. 한 형태는 박테리오파지 또는 세포 표면 상에 펩티드 서열의 디스플레이를 수반한다. 각 박테리오파지 또는 세포는 디스플레이된 특정의 펩티드 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 함유한다. 이러한 방법은 PCT 특허 공개 번호 91/17271, 91/18980, 91/19818, 및 93/08278에 개시되어 있다. 펩티드의 라이브러리를 생성시키기 위한 다른 시스템은 시험관 내 화학적 합성 및 재조합 방법의 양상을 갖는다. PCT 특허 공개 번호 92/05258, 92/14843, 및 96/19256 참조. 또한, U.S. 특허 번호 5,658,754; 및 5,643,768 참조. 펩티드 디스플레이 라이브러리, 벡터 및 스크리닝 키트는 Invitrogen (Carlsbad, CA), 및 Cambridge Ig derived protein Technologies(Cambridgeshire, UK)와 같은 공급자로부터 상업적으로 이용가능하다. 예를 들면, 전체가 참조로서 본 명세서에 포함되는, Enzon에게 양도된 U.S. 특허 번호 4704692, 4939666, 4946778,5260203, 5455030, 5518889, 5534621, 5656730, 5763733, 5767260, 5856456; Dyax에게 양도된 5223409, 5403484, 5571698, 5837500, Affymax에게 양도된 5427908, 5580717; Cambridge Ig derived protein Technologies에게 양도된 5885793; Genentech에게 양도된 5750373, Xoma에게 양도된 5618920, 5595898, 5576195, 5698435, 5693493, 5698417, Colligan, 상동; Ausubel, 상동; 또는 Sambrook, 상동 참조.

본 발명의 Ig 유래 단백질, 특정 부분 및 변형체는 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 코딩하는 핵산을 사용하여 그들의 모유 내에 이러한 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 생성하는 염소, 소, 말, 양 등과 같은 트랜스제닉 포유동물 또는 동물을 제공하도록 제조할 수 있다. 이러한 동물은 공지된 방법을 사용하여 제공될 수 있다. 예를 들면, 비제한적으로, 각각의 전체가 참조로서 본 명세서에 포함된, US 특허 번호 5,827,690; 5,849,992; 4,873,316; 5,849,992; 5,994,616; 5,565,362; 5,304,489 등 참조.

본 발명의 Ig 유래 단백질, 특정 부분 및 변형체는 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 핵산을 코딩하는 변형체를 이용하여 식물 부분 또는 이들로부터 배양된 세포에서 상기 Ig 유래 단백질, 특정 부분 또는 변형체를 생산하는 트랜스제닉 식물 및 배양된 식물 세포(예를 들면, 비제한적으로 담배 및 옥수수)를 제공하도록 추가적으로 제조될 수 있다. 비제한적 예로서, 재조합 단백질을 발현하는 트랜스제닉 담배잎은, 예를 들면, 유도 프로모터를 이용한 대량 재조합 단백질의 제공에 성공적으로 사용되었다. 예를 들면, Cramer et al., Curr. Top. Microbol. Immunol. 240: 95-118 (1999) 및 거기에 언급된 문헌들 참조. 또한, 트랜스제닉 옥수수는 상업적 생산 수준에서, 다른 재조합 시스템으로부터 생산되거나, 천연 소스로부터 정제된 것과 동등한 생물학적 활성을 갖는, 포유동물 단백질을 발현하는데 사용되었다. 예를 들면, Hood et al., Adv. Exp. Med. Biol. 464: 127-147 (1999) 및 거기에 언급된 문헌들 참조. Ig 유래 단백질은 단쇄 Ig 유래 단백질(scFv's)과 같은 Ig 유래 단백질 단편을 포함하고, 담배 종자 및 감자 줄기를 포함하는, 트랜스제닉 식물 종자로부터 대량으로 생산되었다. 예를 들면, Conrad et al., Plant Mol. Biol. 38: 101- 109 (1998) 및 거기에 언급된 문헌 참조. 그러므로, 본 발명의 Ig 유래 단백질, 특정 부분 및 변형체는 공지된 방법에 따라 트랜스제닉 식물을 이용하여 제조될 수도 있다. 또한, 예를 들면, Fischer et al., Biotechnol. Appl. Biochem. 30:99-108 (Oct., 1999), Ma et al., Trends Biotechnol. 13:522-7 (1995); Ma et al., Plant Physiol. 109:341-6 (1995); Whitelam et al., Biochem. Soc. Trans. 22:940-944 (1994); 및 이들에서 언급된 문헌 참조. 상기 문헌의 각각은 참조로서 본 발명에 전체적으로 포함된다.

본 발명의 Ig 유래 단백질은 넓은 범위의 친화도(K_D)로 인간 IL-4 또는 IL-13 단백질 또는 단편에 결합할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 본 발명의 적어도 하나의 인간 항체는 높은 친화도로 인간 IL-4 또는 IL-13 단백질 또는 단편과 임의로 결합할 수 있다. 예를 들어, 인간 항체는 약 10^-9M 또는 그 이하의 K_D, 더욱 바람직하게는 약 0.10-9.99 (또는 어느 범위 또는 값) X 10^-8, 10^-9, 10^-10, 10^-11, 10^-12, 10^-13, 10^-14, 10^-15 또는 어느 범위 또는 본원의 값과 동등하거나 그 이하의 K_D로 인간 IL-4 또는 IL-13 단백질 또는 단편과 결합할 수 있다.

항원에 대한 Ig 유래 단백질의 친화도 또는 결합도는 임의의 적합한 방법을 사용하여 실험적으로 결정될 수 있다(예를 들면, Berzofsky, et al., "Ig derived protein-Antigen Interactions," In Furadamental Immunology, Paul, W. E., Ed., Raven Press: New York, NY(1984); Kuby, Janis Immunology, W. H. Freeman 및 Company: New York, NY (1992); 및 본원에 기술된 방법 참조). 특정 Ig 유래 단백질-항원 상호작용의 친화도는 상이한 조건(예를 들면, 염 농도, pH) 하에서 측정될 경우 변화할 수 있다. 그러므로 친화도 및 기타 항원-결합 파라미터(예를 들면, K_D, K_a, K_d)는 바람직하게 Ig 유래 단백질 및 항원의 표준화된 용액과 본 명세서에 기술된 바와 같이 표준화된 완충액으로 제조된다.

핵산 분자

본 명세서에서 제공된 정보를 이용하여, 본 발명의 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질의 적어도 90-100%를 코딩하는 뉴클레오티드 서열, 이의 특정 단편, 변형체 또는 일치 서열, 또는 적어도 하나의 이들 서열, 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 코딩하는 본 발명의 핵산 분자를 포함하는 보관된 벡터는 당업계에 공지되 바, 또는 본 발명에서 기술된 방법을 이용하여 수득될 수 있다.

본 발명의 핵산 분자는 mRNA, hnRNA. tRNA 또는 임의의 다른 형태의 RNA 형태 또는 클로닝 및 cDNA에 의해 얻어지거나 합성적으로 생산된 게놈 DNA 및 cDNA 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 DNA 형태일 수 있다. DNA는 삼중-가닥, 이중-가닥 또는 단일-가닥, 또는 이들의 임의의 조합일 수 있다. DNA 또는 RNA의 적어도 한 가닥의 임의의 부분은 센스 가닥으로 공지된 코딩 가닥일 수 있고, 안티-센스 가닥으로도 언급된 비-코팅 가닥일 수도 있다.

본 발명의 분리된 핵산 분자는 오픈 리딩 프레임(ORF), 임의로 하나 이상의 인트론, 예를 들어 한정하는 것은 아니나, 적어도 하나의 CDR의 적어도 하나의 특정 부분, 적어도 하나의 중쇄 또는 경쇄의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3로서, 각각 포함하는 핵산 분자; IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체에 대한 코딩 서열을 포함하는 핵산 분자; 및 뉴클레오티드 서열이 상술한 것과는 실질적으로 다르지만, 이것이 유전자 코드의 퇴보에 기인하여 여전히 본원에 기재된 바 및/또는 당업계에 공지된 바 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질을 코딩하는 핵산 분자를 포함한다. 물론, 유전자 코드는 당업계에 공지되어 있다. 따라서, 당업자에게 있어 본 발명의 특정 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 코딩하는 이러한 퇴보 핵산 변형체를 생성하는 것은 루틴한 일일 것이다. 예컨대, Ausubel, et al., 상동을 참조할 수 있고, 이러한 핵산 변형체는 본 발명에 포함된다.

본원에 기재된, IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 코딩하는 핵산을 포함하는 본 발명의 핵산 분자는 이로 제한되는 것은 아니나 그 자체로 Ig 유래 단백질 단편의 아미노산 서열을 코딩하는 것; 전체 Ig 유래 단백질 또는 이의 부분에 대한 코딩 서열; Ig 유래 단백질, 단편 또는 부분에 대한 코딩 서열, 및 이로 제한되는 것은 아니나 전사, 스플라이싱 및 폴리아데닐화 신호(예컨대-리보솜 결합 및 mRNA의 안정성)를 포함하는 mRNA 처리에 작용하는 전사, 비-번역 서열과 같은 비-코딩 5' 및 3'서열을 포함하는 추가의 비-코딩 서열과 함께 적어도 하나의 인트론과 같은 전술한 추가의 코딩 서열의 존재 또는 부재하에 적어도 하나의 신호 리더 또는 융합 펩티드의 코딩 서열과 같은 추가 서열; 추가의 기능을 제공하는, 추가의 아미노산을 코딩하는 추가의 코딩 서열을 포함할 수 있다. 따라서, Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 코딩하는 서열은 Ig 유래 단백질 단편 또는 부분을 포함하는 융합된 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 정제를 촉진시키는 펩티드를 코딩하는 서열과 같은 마커 서열과 융합될 수 있다.

본원에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오티드에 선택적으로 혼성화하는 폴리뉴클레오티드.

본 발명은 본 발명의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 선택적으로 혼성화하는 조건 하에서 혼성화하는 분리된 핵산을 제공한다. 따라서, 본 구체예의 폴리뉴클레오티드는 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산을 분리, 검출 및/또는 정량하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 보관된 라이브러리에서 부분 또는 전장의 클론을 확인, 분리 또는 증폭하는데 사용될 수 있다. 일부 구체예에서, 폴리뉴클레오티드는 게놈 또는 분리된 cDNA 서열이거나 인간 또는 포유류 핵산 라이브러리 유래의 cDNA에 상보적이다.

바람직하게, cDNA 라이브러리는 적어도 80% 전장 서열, 바람직하게 적어도 85% 또는 90% 전장 서열, 및 더욱 바람직하게 적어도 95% 전장 서열을 포함한다. cDNA 라이브러리는 희귀 서열의 재현을 증가시키기 위하여 일반화될 수 있다. 낮은 또는 보통의 엄격한 혼성화 조건은 전형적으로, 그러나 배타적이지 않게, 상보적 서열에 비하여 감소된 서열 상동성을 갖는 서열을 사용한다. 보통 및 높은 엄격한 조건이 보다 높은 상동성의 서열에 대해 임의로 사용될 수 있다. 낮은 엄격한 조건은 약 70% 서열 상동성을 갖는 서열의 선택적 혼성화를 허용하고, 오르토로거스(orthologous) 또는 파라로거스(paralogous) 서열을 동정하는데 사용될 수 있다.

임의로, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 본원에 기재된 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 적어도 한 부분을 코딩할 것이다. 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 본 발명의 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 대한 선택적 혼성화에 사용될 수 있는 핵산 서열을 포함한다. 예컨대, Ausubel, 상동; Colligan, 상동, 참조, 각각은 전체가 본원에 참조로 포함되었다.

핵산의 작제

본 발명의 분리된 핵산은 당업계에 공지된 바와 같이 (a) 재조합 방법, (b) 합성 기술, (c) 정제 기술, 또는 이들의 조합을 이용해서 제조될 수 있다.

상기 핵산은 본 발명의 폴리뉴클레오티드 이외의 서열을 편의상 포함할 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 제한 효소 자리를 포함하는 다중-클로닝 부위가 폴리뉴클레오티드의 분리를 돕기 위해 핵산에 삽입될 수 있다. 또한, 본 발명의 번역된 폴리뉴클레오티드의 분리를 돕기 위해 번역 가능 서열이 삽입될 수 있다. 예를 들어, 헥사-히스티딘 마커 서열은 본 발명의 단백질을 정제하는 편리한 수단을 제공한다. 코딩 서열을 제외한 본 발명의 핵산은 임의로 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 클로닝 및/또는 발현을 위한 벡터, 어댑터, 또는 링커이다.

폴리뉴클레오티드의 분리를 돕도록 클로닝 및/또는 발현 기능을 최적화하거나, 폴리뉴클레오티드를 세포로 도입하는 것을 개선시키기 위하여 추가 서열이 클로닝 및/또는 발현 서열에 부가될 수 있다. 클로닝 벡터, 발현 벡터, 어댑터 및 링커의 이용은 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, Ausubel, 상동; 또는 Sambrook, 상동 참조).

핵산 작제를 위한 재조합 방법.

RNA, cDNA, 게놈 DNA 또는 이의 임의의 조합과 같이, 본 발명의 분리된 핵산 조성물은 당업자에게 공지된 임의의 클로닝 방법을 이용하여 생물원으로부터 수득될 수 있다. 일부 구체예에서, 엄격한 조건 하에서 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 선택적으로 혼성화하는 올리고뉴클레오티드 프로브는 cDNA 또는 게놈 DNA 라이브러리에서 원하는 서열을 확인하는데 사용된다. RNA의 분리 및 cDNA 및 게놈 라이브러리의 작제는 당업자에게 널리 공지되어 있다(예를 들어, Ausubel, 상동; 또는 Sambrook, 상동 참조).

핵산 스크리닝 및 분리 방법

cDNA 또는 게놈 라이브러리는 본원에 개시된 바와 같이, 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 서열에 기초한 프로브를 이용하여 스크리닝될 수 있다. 프로브는 게놈 DNA 또는 cDNA 서열과 혼성화하여, 같거나 다른 생명체 내의 상동 유전자를 분리하는데 이용될 수 있다. 당업자는 다양한 정도의 혼성화 엄격성이 분석에서 사용될 수 있고; 혼성화 또는 세척 배지가 엄격할 수 있음을 이해할 것이다. 혼성화 조건이 더욱 엄격해짐에 따라, 발생되는 듀플렉스(duplex) 형성을 위하여, 프로브와 표적 사이의 상보성 정도도 더 커져야 한다. 엄격성 정도는 온도, 이온 강도, pH 및 포름아미드와 같은 부분 변성 용매의 존재 중 하나 이상에 의하여 제어될 수 있다. 예를 들면, 혼성화 엄격성은 예를 들어, 포름아미드의 농도를 0 내지 50% 범위 내에서 조작하여 반응 용액의 극성을 바꿈으로써 편리하게 변경할 수 있다. 검출가능한 결합에 대해 요구되는 상보성 정도(서열 상동성)는 혼성화 배지 및/또는 세척 배지의 엄격성에 따라 다양할 것이다. 상보성의 정도는 적절하게 100%, 또는 90-100% 또는 본원의 임의의 범위 또는 수치일 것이다. 그러나, 프로브 및 프라이머에서의 약간의 서열 변경은 혼성화 및/또는 세척 배지의 엄격성을 감소시켜 보충될 수 있음을 이해해야 한다.

RNA 또는 DNA의 증폭 방법은 당업계에 널리 공지되어 있고 과도한 실험없이, 본 명세서의 교시사항 및 가이드에 기초하여 본 발명에 따라서 사용될 수 있다.

DNA 또는 RNA 증폭의 공지된 방법은 폴리머라제 연쇄 반응(PCR) 및 관련 증폭 방법(예를 들면, Mullis 등의 미국 특허 번호 제4,683,195호, 제4,683,202호, 제4,800,159호, 제4,965,188호; Tabor 등의 제4,795,699호 및 제4,921,794호; Innis의 제5,142,033호; Wilson 등의 제5,122,464호; Innis의 제5,091,310호; Gyllensten 등의 제5,066,584호; Gelfand 등의 제4,889,818호; Silver 등의 제4,994,370호; Biswas의 제4,766,067호; Ringold의 제4,656,134호 참조) 및 표적 서열에 대해 이중-가닥 DNA합성을 위한 주형으로서 안티-센스 RNA를 사용하는 RNA 매개의 증폭(Malek 등의 미국 특허 번호 제5,130,238호, 상품명 NASBA)을 포함하지만 이에 제한되는 것은 아니며, 문헌의 전체내용이 참조로서 명세서에 포함된다(예를 들면, Ausubel, 상동 ; 또는 Sambrook, 상동. 참조).

예를 들면, 폴리머라제 연쇄 반응(PCR) 기술은 본 발명의 폴리뉴클레오티드 서열 및 게놈 DNA 또는 cDNA 라이브러리로부터의 직접적으로 관련된 유전자를 증폭하는데 사용될 수 있다. PCR 및 다른 시험관 내 증폭 방법은 또한 예를 들면, 발현될 단백질을 코딩하는 핵산 서열을 클로닝하고, 핵산 서열분석 또는 기타 목적을 위하여 샘플 내의 원하는 mRNA의 존재를 검출하기 위한 프로브로서 사용하는 핵산을 제조하는데 유용하다. 시험관 내 증폭 방법을 통한 당업자에게 충분한 기술의 예는 Berger, 상동, Sambrook, 상동, 및 Ausubel, 상동, 뿐만 아니라, Mullis 등의 U.S. 특허 번호 4,683,202 (1987); 및 Innis, et al., PCR Protocols A Guide to Methods and Applications, Eds., Academic Press Inc., San Diego, CA(1990)에서 찾을 수 있다. 게놈의 PCR 증폭을 위한 상업적으로 입수가능한 키트도 당업계에 공지되어 있다. 예를 들면, Advantage-GC Genomic PCR Kit(Clontech) 참조. T4 유전자 32 단백질(Boehringer Mannheim)은 긴 PCR 산물의 수율을 높이는 데 이용될 수 있다.

핵산 작제를 위한 합성 방법

또한, 본 발명의 분리된 핵산은 공지된 방법에 의해 직접적인 화학 합성으로 제조될 수 있다(예컨대, Ausubel, et al., 상동 참조). 화학적 합성은 일반적으로 단일-가닥 올리고뉴클레오티드를 제조하고, 이것은 상보 서열과의 혼성화, 또는 단일 가닥을 주형으로 이용하는 DNA 중합효소와의 중합에 의해 이중-가닥 DNA로 전환될 수 있다. 당업자는 DNA의 화학적 합성이 약 100개 이상의 염기 서열에 한정될 수 있지만, 더 긴 서열이 더 짧은 서열들의 라이게이션에 의해 얻을 수 있다는 것을 인식할 것이다.

재조합 발현 카세트

본 발명은 또한 본 발명의 핵산을 포함하는 재조합 발현 카세트를 제공한다. 본 발명의 핵산 서열, 예컨대, 본 발명의 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 코딩하는 cDNA 또는 게놈 서열은 적어도 하나의 바람직한 숙주 세포로 도입될 수 있는 재조합 발현 카세트를 작제하는데 사용될 수 있다. 재조합 발현 카세트는 전형적으로 의도된 숙주 세포 내에서 폴리뉴클레오티드의 전사를 지시하는 전사 개시 조절 서열에 작동 가능하게 연결된 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함할 것이다. 이종기원 및 비-이종기원(즉, 내인성) 프로모터 둘 모두가 본 발명의 핵산의 발현을 지시하기 위해 사용될 수 있다.

일부 구체예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 발현을 상향 또는 하향 조절하기 위해, 프로모터, 인핸서, 또는 다른 요소로 작용하는 분리된 핵산이 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 비-이종기원 형태의 적절한 위치(업스트림, 다운스트림 또는 인트론 내)에 도입될 수 있다. 예를 들어, 내인성 프로모터는 돌연변이, 결실 및/또는 치환에 의해 생체 내 또는 시험관 내에서 변경될 수 있다.

본 발명의 폴리뉴클레오티드는 센스 또는 안티-센스 기원에서 발현될 수 있다. 센스 또는 안티-센스 기원에서의 유전자 발현의 조절은 관찰 가능한 특성에 직접 영향을 줄 것으로 예상된다.

억제하는 다른 방법은 센스 억제이다. 센스 배향으로 배열된 핵산의 도입은 표적 유전자의 전사를 차단하는 유효한 수단이다.

본 발명의 폴리뉴클레오티드 팬던트 그룹상의 다양한 교차-결합제, 알킬화제 및 래디칼 생성 종류는 핵산을 결합, 표지, 검색 및/또는 절단하는데 사용될 수 있다(Knorre, et al., Biochimie 67:785-789 (1985); Vlassov, et al., Nucleic Acids Res. 14:4065-4076 (1986); Iverson 및 Dervan, J. Am. Chem. Soc. 109:1241-1243 (1987); Meyer, et al., J. Am. Chem. Soc. 111 :8517-8519 (1989); Lee, et al., Biochemistry 27:3197-3203 (1988); Home, et al., J. Am. Chem. Soc. 112:2435-2437 (1990); Webb 및 Matteucci, J. Am. Chem. Soc. 108:2764-2765 (1986); Nucleic Acids Res. 14:7661-7674 (1986); Feteritz, et al., J. Am. Chem. Soc. 113:4000 (1991). 핵산을 결합, 검색, 표지 및/또는 절단하는 다양한 화합물이 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, U.S. 특허 번호 5,543,507; 5,672,593; 5,484,908; 5,256,648; 및 5,681941를 참조할 수 있고, 이들 각각은 전체가 참조로서 본원에 포함된다.

벡터 및 숙주 세포

본 발명은 또한 본 발명의 분리된 핵산 분자를 포함하는 벡터, 재조합 벡터와 유전공학적으로 공학처리된 숙주 세포 및 당업계에 공지된 재조합 기술에 의한 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 생산에 관한 것이다. 예컨대, Sambrook, et al., 상동; Ausubel, et al., 상동을 참조할 수 있고, 이들 각각은 전체가 참조로서 본원에 포함된다.

폴리뉴클레오티드는 숙주 내에서 전파를 위하여 선택가능한 마커를 함유한 벡터에 임의로 결합될 수 있다. 일반적으로, 플라스미드 벡터는 인산 칼슘 침전물같은 침전물 내, 또는 대전된 지질과의 복합체 내에 도입된다. 벡터가 바이러스라면, 적절한 포장 세포주를 이용하여 시험관 내에서 포장된 후, 숙주 세포 내로 형질변환된다.

DNA 삽입물은 적당한 프로모터에 작동가능하게 연결되어야 한다. 발현 작제물은 전사 개시, 정지 및 전사 영역에서 번역을 위한 리보솜 결합 부위를 위한 부위를 추가로 함유할 것이다. 작제물에 의해 발현된 성숙 전사물의 코딩 부분은 바람직하게는 시작에 위치한 번역 개시 코돈 및 번역되는 mRNA의 끝에 적절히 위치한 정지 코돈(예컨대, UAA, UGA 또는 UAG)을 포함할 것이고, UAA 및 UAG가 포유동물 또는 진핵 세포 발현에 대해 바람직하다.

발현 벡터는 바람직하지만 임의로 적어도 하나의 선택 마커를 포함할 것이다. 이러한 마커는, 예컨대, 이로 제한되는 것은 아니나, 메토트렉세이트(methotrexate; MTX), 디하이드로폴레이트 환원효소(dihydrofolate reductase; DHFR, 미국 특허 번호 제 4,399,216호; 제 4,634,665호; 제 4,656,134호; 제 4,956,288호; 제 5,149,636호; 제 5,179,017호, 암피실린, 네오마이신(G418), 마이코페놀산, 또는 진핵 세포 배양에 대한 저항성이 있는 글루타민합성효소; GS, 미국 특허 번호 제 5,122,464호; 제 5,770,359호; 제 5,827,739호), 및 E. coli 및 다른 박테리아 또는 원핵생물 배양에 대한 테트라사이클린 또는 암피실린 내성 유전자를 포함한다(상기 특허는 참조로 본 명세서에 전체적으로 포함된다). 상술한 숙주 세포를 위한 적절한 배양 배지 및 조건은 당업계에 알려져 있다. 적합한 벡터는 당업자에게 자명할 것이다. 벡터 작제물의 숙주 세포로의 도입은 칼슘 포스페이트 트랜스펙션, DEAE-덱스트란 매개 트랜스펙션, 양이온 지질-매개 트랜스펙션, 일렉트로포레이션, 형질도입, 감염 또는 다른 공지 방법의 의해 달성할 수 있다. 이런 방법은 Sambrook, 상동, Chapters 1-4 및 16-18; Ausubel, 상동, Chapters 1, 9, 13, 15, 16과 같이 당업계에 알려져 있다.

본 발명의 적어도 하나의 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체는 융합 단백질과 같은 변형된 형태로 발현될 수 있고, 분비 신호뿐만 아니라 추가의 이종기원 기능 영역을 포함할 수 있다. 예컨대, 추가적 아미노산 영역, 특히, 대전된 아미노산이 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 N-말단에 부가되어, 정제 과정, 또는 그 뒤의 취급 및 저장 중에 숙주 세포 내 안정성 및 지속성을 개선시킬 수 있다. 또한, 펩티드 모이어티가 본 발명의 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체에 부가되어, 정제를 촉진시킬 수 있다. 이런 영역은 Ig 유래 단백질 또는 적어도 하나의 이의 단편의 최종 제조 전에 제거될 수 있다. 이러한 방법은 Sambrook, 상동, Chapters 17.29-17.42 및 18.1-18.74; Ausubel, 상동, Chapters 16, 17 및 18과 같은 많은 표준 실험 메뉴얼에 기재되어 있다.

당업자는 본 발명의 단백질을 코딩하는 핵산을 발현시키기 위해 이용 가능한 수많은 발현 시스템에 대해 알고 있을 것이다.

택일적으로, 본 발명의 핵산은 본 발명의 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 코딩하는 내인성 DNA를 함유한 숙주 세포 내에서 턴온(조작에 의해)에 의해 숙주 세포 내에서 발현될 수 있다. 이러한 방법은 예를 들면, 전체가 참조로서 본 명세서에 포함된 US 특허 번호 5,580,734, 5,641,670, 5,733,746, 및 5,733,761과 같이 업계에 널리 공지되어 있다.

Ig 유래 단백질, 이의 특정 부분 또는 변형체의 생산에 유용한 예시적인 세포 배양은 포유동물 세포이다. 포유동물 세포 시스템은 포유동물 세포 현탁액 또는 생물반응기가 또한 사용될 수 있지만 종종 세포의 단층 형태일 것이다. 온전한 글리코실화 단백질을 발현시킬 수 있는 다수의 적합한 숙주 세포주가 당업계에 개발되어 있고, 이러한 것은 COS-1(예컨대, ATCC CRL 1650), COS-7(예컨대, ATCC CRL-1651), HEK293, BHK21(예컨대, ATCC CRL-10), CHO(예컨대, ATCC CRL 1610, DG-44) 및 BSC-1(예컨대, ATCC CRL-26) 세포주, Cos-7 세포, CHO세포, hepG2 세포, P3X63Ag8.653, SP2/0-Ag14, 293 세포, HeLa 세포 등을 포함하고, 예컨대, American Type Culture Collection, Manassas, Va로부터 용이하게 입수할 수 있다. 바람직한 숙주 세포는 골수종 및 림프종 세포와 같은 림프종 유래 세포를 포함한다. 특히 바람직한 숙주 세포는 P3X63Ag8.653 세포(ATCC 수탁 번호 CRL-1580) 및 SP2/0-Ag14 세포(ATCC 수탁 번호 CRL-1851)이다. 특히 바람직한 구체예에서, 재조합 세포는 P3X63Ab8.653 또는 SP2/0-Ag14 세포이다.

이들 세포를 위한 발현 벡터는 이로 제한되는 것은 아니나 복제 기원; 프로모터[예컨대, 후기 또는 초기 SV40 프로모터, CMV 프로모터(미국 특허 번호 제 5,168,062호; 제 5,385,839호), HSV tk 프로모터, PGK(phosphoglycerate kinase, 포스포글리세레이트 키나아제) 프로모터, EF-1 알파 프로모터(미국 특허 번호 제 5,266,491호)], 적어도 하나의 인간 면역글로불린 프로모터; 인핸서, 및/또는 리보솜 결합 부위, RNA 스플라이싱 부위, 폴리아데닐화 부위(예컨대, SV40 large T Ag 폴리 부가 부위)와 같은 처리 정보 부위, 및 전사 정지 서열과 같은 발현 조절 서열 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 예컨대, Ausubel et al., 상동; Sambrook, et al., 상동을 참조. 본 발명의 핵산 또는 단백질을 생산하는데 유용한 다른 세포는 공지되거나/되었고, 예컨대, American Type Culture Collection Catalogue of Cell Lines and Hybridomas(www.atcc.org) 또는 다른 공지 또는 시판원으로부터 입수할 수 있다.

진핵 숙주 세포를 사용하는 경우, 폴리아데닐화 또는 전사 정지 서열이 전형적으로 벡터에 도입된다. 정지 서열의 예는 소 성장 호르몬 유전자 유래의 폴리아데닐화 서열이다. 전사물을 정확히 스플라이싱하기 위한 서열이 또한 포함될 수 있다. 스플라이싱 서열의 예는 SV40(Sprague, et al., J. Virol. 45: 773-781(1983)) 유래의 VP1 인트론이다. 추가적으로, 숙주 세포에서 복제를 조절하는 유전자 서열이 당업계에 공지된 바에 따라 벡터에 도입될 수 있다

Ig 유래 단백질 또는 이의 특정 부분 또는 변형체의 정제

IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체는 이로 제한되는 것은 아니나 단백질 A 정제, 암모늄 설페이트 또는 에탄올 침전, 산 추출, 음이온 또는 양이온 교환 크로마토그래피, 포스포셀룰로오스 크로마토그래피, 소수성 상호 작용 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피, 하이드록실아파타이트 크로마토그래피 및 렉틴 크로마토그래피를 포함하는 공지 방법에 의해 재조합 세포 배양물로부터 회수 및 정제될 수 있다. 고성능 액체 크로마토그래피("HPLC")가 또한 정제에 사용될 수 있다. 예컨대, Colligan, Current Protocols in Immunology, 또는 Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2003), 예를 들어, Chapters 1, 4, 6, 8, 9, 10을 참조할 수 있고, 전체는 각각 본 명세서에 참조로서 포함된다.

본 발명의 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체는 자연적으로 정제된 산물, 화학 합성 방법에 의한 산물, 및 예컨대, 효모, 고등 식물, 곤충 및 포유동물 세포를 포함하는 진핵 숙주로부터 재조합 기술에 의해 제조된 산물을 포함한다. 재조합 제조 방법에 사용되는 숙주에 따라, 본 발명의 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체는 글리코실화되거나 비-글리코실화될 수 있지만, 글리코실화되는 것이 바람직하다. 이러한 방법은 Sambrook, 상동, Sections 17.37-17. 42; Ausubel, 상동, Chapters 10, 12 ,13 ,16, 18 및 20, Colligan, Protein Science, 상동, Chapters 12-14과 같은 많은 표준 실험 메뉴얼에 기재되어 있고, 전체 내용이 본 명세서에 참조로서 포함된다.

IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질, 단편 및/또는 변형체

본 발명의 분리된 Ig 유래 단백질은 보다 자세히 논의될 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 어느 하나에 의해 코딩되는 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체, 또는 어느 분리된 또는 제조된 Ig 유래 단백질 또는 이의 특정 부분 또는 변형체를 포함한다.

바람직하게, 인간 Ig 유래 단백질 또는 항원-결합 단편은 인간 IL-4 또는 IL-13 단백질 또는 단편에 결합하고, 이에 의해 실질적으로 단백질의 생물학적 활성을 중화시킨다. Ig 유래 단백질, 또는 이의 특정 부분 또는 변형체는, 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 단백질 또는 단편의 적어도 하나의 생물학적 활성을 부분적으로 또는 상당히 실질적으로 중화시키고, 단백질 또는 단편에 결합하여 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 수용체에 대한 결합 또는 기타 IL-4 또는 IL-13-의존적 또는 매개된 기작을 통한 활성을 저해할 수 있다. 본 명세서에서 사용된 용어 "중화 Ig 유래 단백질"은 약 20-120%, 바람직하게는 적어도 약 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100% 이상 시험에 의존적으로 인간 p40 또는 p19 단백질 또는 단편 관련-의존 활성을 저해할 수 있는 Ig 유래 단백질을 언급한다. 인간 IL-4 또는 IL-13 관련-의존 활성을 저해하는 항-인간 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 수용력은 본 명세서에 기술되고/되거나 당업계에 널리 공지되어 있는 바와 같이 적어도 하나의 적절한 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 단백질 분석에 의해 바람직하게 평가된다. 본 발명의 인간 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체는 임의의 클래스(IgG, IgA, IgM, IgE, IgD 등) 또는 하위클래스(예를 들어, IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 등) 또는 동형일 수 있고 카파 또는 람다 경쇄를 포함할 수 있다. 일 구체예에서, 인간 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체는 IgG 중쇄 또는 정의된 단편, 예를 들면, 적어도 하나의 동형, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4를 포함한다. 이 타입의 Ig 유래 단백질은 본 발명에서 개시된 대로 및/또는 당업계에 공지된 대로, 적어도 하나의 인간 경쇄(예를 들면, IgG, IgA, 및 IgM(예를 들어, γ1, γ2, γ3, γ4)) 트랜스유전자를 포함하는, 트랜스제닉 마우스 또는 다른 트랜스제닉 비-인간 포유동물을 이용하여 제조될 수 있다. 또다른 구체예에서, 항-인간 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 이의 특정 부분 또는 변형체는 IgG1 중쇄 및 IgG1 경쇄를 포함한다.

본 발명의 적어도 하나의 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체는 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 단백질, 서브유닛, 단편, 부분 또는 이들의 조합에 대해 특이적인 적어도 하나의 특정 에피토프에 결합한다. 적어도 하나의 에피토프는 단백질의 적어도 하나의 부분을 포함하는 적어도 하나의 Ig 유래 단백질 결합 영역을 포함하고, 에피토프는 바람직하게는 적어도 하나의 세포외, 가용, 친수성, 외부 또는 상기 단백질의 세포기질 부분으로 구성된다. 비한정적인 예시로서, (a) IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체는 특이적으로 인간 IL-4 또는 IL-13의 적어도 하나의 서브유닛으로부터 구성된 그룹으로부터 선택된, 적어도 1-3개를 전체 아미노산 서열로 포함하는 적어도 하나의 에피토프와 결합한다. 적어도 하나의 특정 에피토프는 인간 IL-4 또는 IL-13의 서브유닛의 적어도 하나의 아미노산의 임의의 배합, 예컨대, 한정하는 것은 아니나, 서열 번호 42, 43 또는 44의 1-10, 10- 20, 20-30, 30-40, 40-50, 50-60, 60-70, 70-80, 80-90, 90-100, 100-110, 110-120, 120-130, 130-140, 140-145의 적어도 하나의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14개의 아미노산을 포함할 수 있다.

일반적으로, 본 발명의 인간 Ig 유래 단백질 또는 항원-결합 단편은 적어도 하나의 중쇄 가변 영역의 적어도 하나의 인간 상보성 결정 영역(CDR1, CDR2 및 CDR3) 또는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역의 변형체를 포함하는 항원-결합 영역을 포함할 것이다. 비한정적인 예로서, Ig 유래 단백질 또는 항원-결합 부분 또는 변형체는 적어도 하나의 중쇄 CDR3 및/또는 경쇄 CDR3을 포함할 수 있다. 특정 구체예에서, Ig 유래 단백질 또는 항원-결합 단편은 상응하는 CDR 1, 2 및/또는 3의 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 중쇄 CDR(즉, CDR1, CDR2 및/또는 CDR3)의 적어도 일부분을 포함하는 항원-결합 영역을 가질 수 있다. 다른 특정 구체예에서, Ig 유래 단백질 또는 항원 결합 부분 또는 변형체는 상응하는 CDR1, 2 및/또는 3의 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 경쇄 CDR(예를 들어, CDR1, CDR2 및/또는 CDR3)의 적어도 한부분을 포함하는 항원-결합 영역을 가질 수 있다. 이러한 Ig 유래 단백질은 통상의 기술을 사용하여 Ig 유래 단백질의 다양한 부분(예: CDR, 프레임워크)을 함께 화학적으로 연결시키거나, 재조합 DNA 기술의 통상의 방법을 사용하여 Ig 유래 단백질을 코딩하는 (하나 이상의) 핵산 분자를 제조하고 발현시키거나 다른 적절한 방법을 사용하여 제조할 수 있다.

항-IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질은 정의된 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다. 예를 들면, 바람직한 구체예에서, 항-IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질은 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및/또는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함한다. 인간 IL-4 또는 IL-13 단백질 또는 단편에 결합하고, 정의된 중쇄 또는 경쇄 가변 영역을 포함하는 인간 Ig 유래 단백질은 적절한 방법, 예로서 파지 디스플레이(Katsube, Y., et al., Int JMol. Med, 1 (5) : 863-868 (1998)) 또는 당업계에 공지되었고/거나 본 명세서에 기재된 트랜스제닉 동물을 사용하는 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들면, 기능적으로 재배열된 인간 면역글로불린 중쇄 트랜스유전자 및 기능적으로 재배열될 수 있는 인간 면역글로불린 경쇄 좌로부터의 DNA를 포함하는 트랜스유전자를 포함하는 트랜스제닉 마우스를 인간 IL-4 또는 IL-13 단백질 또는 이의 단편으로 면역화하여, Ig 유래 단백질의 생산을 유도할 수 있다. 원하는 경우, Ig 유래 단백질 생산 세포가 분리될 수 있고, 하이브리도마 또는 다른 무한증식 Ig 유래 단백질-생산 세포는 본 명세서에 기재된 바와 같고/거나 당업계에 공지된 바와 같이 제조될 수 있다. 택일적으로, Ig 유래 단백질, 특정 부분 또는 변형체는 적절한 숙주 세포에서 코딩 핵산 또는 이의 부분을 사용하여 발현시킬 수 있다.

본 발명은 또한 본 명세서에 기재된 아미노산 서열과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 Ig 유래 단백질, 항원-결합 단편, 면역글로불린 사슬 및 CDR에 관한 것이다. 바람직하게 상기 Ig 유래 단백질 또는 항원-결합 단편 및 상기 사슬 또는 CDR을 포함하는 Ig 유래 단백질은 높은 친화도(예를 들어, 약 10^-9 M 또는 그 미만의 K_D)로 인간 IL-4 또는 IL-13 단백질 또는 단편에 결합할 수 있다. 본 명세서에 기재된 서열과 실질적으로 동일한 아미노산 서열은 보존적 아미노산 치환, 및 아미노산 결실 및/또는 삽입을 포함하는 서열을 포함한다. 보존적 아미노산 치환은 첫 번째 아미노산의 것과 유사한 화학적 및/또는 물리적 성질(예: 전하, 구조, 극성, 소수성/친수성)을 갖는 두 번째 아미노산에 의한 첫 번째 아미노산의 대체를 언급한다. 보존적 치환은 하나의 아미노산을 하기 군내 또다른 것으로 대체하는 것을 포함한다: 라이신(K), 아르기닌(R) 및 히스티딘(H); 아스파르테이트(D) 및 글루타메이트(E); 아스파라긴(N), 글루타민(Q), 세린(S), 트레오닌(T), 티로신(Y), K, R, H, D 및 E; 알라닌(A), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 프롤린(P), 페닐알라닌(F), 트립토판(W), 메티오닌(M), 시스테인(C) 및 글리신(G); F, W 및 Y; C, S 및 T.

아미노산 코드

본 발명의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 구성하는 아미노산은 종종 약칭된다. 아미노산 명칭은 본 기술에서 잘 이해되듯이 아미노산을 그의 단일 문자 코드, 그의 세 문자 코드, 명칭, 또는 3개의 뉴클레오티드 코돈(들)에 의해 표시될 수 있다(Alberts, B., et al., Molecular Biology of The Cell, Third Ed., Garland Publishing, Inc., New York, 1994 참조).

단일 문자 코드	세 문자 코드	명칭	3개의 뉴클레오티드 코돈(들)
A	Ala	알라닌	GCA, GCC, GCG, GCU
C	Cys	시스테인	UGC, UGU
D	Asp	아스파르트산	GAC, GAU
E	Glu	글루탐산	GAA, GAG
F	Phe	페닐알라닌	UUC, UUU
G	Gly	글리신	GGA, GGC, GGG, GGU
H	His	히스티딘	CAC, CAU
I	Ile	이소류신	AUA, AUC, AUU
K	Lys	라이신	AAA, AAG
L	Leu	류신	UUA, UUG, CUA, CUC, CUG, CUU
M	Met	메티오닌	AUG
N	Asn	아스파라긴	AAC, AAU
P	Pro	프롤린	CCA, CCC, CCG, CCU
Q	Gln	글루타민	CAA, CAG
R	Arg	아르기닌	AGA, AGG, CGA, CGC, CGG, CGU
S	Ser	세린	AGC, AGU, UCA, UCC, UCG, UCU
T	Thr	트레오닌	ACA, ACC, ACG, ACU
V	Val	발린	GUA, GUC, GUG, GUU
W	Trp	트립토판	UGG
Y	Tyr	티로신	UAC, UAU

본 발명의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체는 본 명세서에 구체화된 것과 같이 자연 돌연변이 또는 인간 조작으로부터의 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 첨가를 포함할 수 있다.

물론, 당업자에 의한 아미노산 치환의 수는 상기 기재된 것을 포함하는 다수의 인자에 의존한다. 일반적으로 말하면, 임의의 주어진 IL-4 또는 IL-13 폴리펩티드에 대한 아미노산 치환, 삽입 또는 결실의 수는 본 명세서에 구체화된 바와 같이, 40, 30, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 정도 일 수 있으며, 이를테면 1-30 또는 임의의 범위 또는 이의 수치일 것이다.

기능상 필수적인 본 발명의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 내 아미노산은 당업계에 공지된 방법, 예로서, 부위-지정 돌연변이(site-directed mutageneis) 또는 알라닌-스캐닝 돌연변이(예를 들어, Ausubel, 상동, Chapters 8,15; Cunningham and Wells, Science 244: 1081-1085 (1989))에 의해 확인될 수 있다. 후자의 방법은 분자내 모든 잔기마다 단일 알라닌 돌연변이를 도입한다. 이어서 생성된 돌연변이 분자를 생물학적 활성, 예로서 제한하는 것은 아니지만 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 중화 활성에 대하여 검사한다. Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 결합에 중요한 부위는 구조 분석, 예로서 결정화, 핵자기공명 또는 광친화성 표식법(Smith, et al., J. Mol. Biol. 224: 899-904 (1992) 및 de Vos, et al., Science 255 : 306-312 (1992))에 의해 확인할 수 있다.

본 발명의 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체, 또는 이의 특정 변형체는 본 발명의 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체로부터의 인접한 아미노산 잔기의 임의의 수를 포함할 수 있고, 여기에서 수는 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 내에 인접하는 잔기 수의 10-100%로 구성된 정수 군으로부터 선택된다. 임의로 인접하는 아미노산의 이 하위서열은 적어도 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250개 이상의 아미노산 길이 또는 임의의 범위 또는 그 수치이다. 추가로 상기 하위서열의 수는 1 내지 20, 예로서 적어도 2, 3, 4, 또는 5로 이루어진 군으로부터 선택되는 임의의 정수일 수 있다.

숙련자가 이해하듯이, 본 발명은 본 발명의 적어도 하나의 생물학적으로 활성인 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 포함한다. 생물학적으로 활성인 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체는 본래의(비-합성), 내인성이거나 관련되고 공지된 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 것과 적어도 20%, 30%, 또는 40%, 및 바람직하게 적어도 50%, 60%, 또는 70%, 및 가장 바람직하게 적어도 80%, 90%, 또는 95%-1000% 또는 그 이상으로 특이 활성을 갖는다. 효소 활성 및 기질 특이성의 측정을 정량하고 분석하는 방법은 당업자에게 잘 공지되어 있다.

또다른 일면으로 본 발명은 본 명세서에 기재된 바와 같이 유기 부위의 공유결합에 의해 변형된 인간 Ig 유래 단백질 및 항원-결합 단편에 관한 것이다. 상기 변형으로 개선된 약동학적 특성(예: 생체 내 혈청 반감기 증가)을 갖는 Ig 유래 단백질 또는 항원-결합 단편을 생산할 수 있다. 유기 부위는 선형 또는 분지형 친수성 폴리머 군, 지방산 군 또는 지방산 에스테르 군일 수 있다. 특정 일면에서, 친수성 폴리머 군 약 800 내지 약 120,000 달톤의 분자량을 가질 수 있고 폴리 알칸 글리콜(예: 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리프로필렌 글리콜(PPG)), 카보하이드레이트 폴리머, 아미노산 폴리머 또는 폴리비닐 피롤리돈일 수 있고, 지방산 또는 지방산 에스테르 군은 약 8 내지 약 40개의 탄소 원자를 포함할 수 있다.

본 발명의 변형된 Ig 유래 단백질 및 항원-결합 단편은 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체에 직접 또는 간접적으로 공유결합된 하나 이상의 유기 부위를 포함할 수 있다. 본 발명의 Ig 유래 단백질 또는 항원-결합 단편에 결합하는 각각의 유기 부위는 독립적으로 친수성 폴리머 군, 지방산 군 또는 지방산 에스테르 군일 수 있다. 본 명세서에서 사용된 용어 "지방산"은 모노-카복실산 및 디-카복실산을 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 용어로서 "친수성 폴리머 군"은 옥탄에서보다 수중에서 더욱 가용성인 유기 폴리머를 언급한다. 예를 들면, 폴리라이신은 옥탄에서보다 수중에서 더욱 가용성이다. 따라서, 폴리라이신의 공유결합에 의해 변형된 Ig 유래 단백질이 본 발명에 포함된다. 본 발명의 Ig 유래 단백질을 변형시키기에 적절한 친수성 폴리머는 선형 또는 분지형일 수 있고, 예를 들면, 폴리알칸 글리콜(예를 들어, PEG, 모노메톡시-폴리에틸렌 글리콜(mPEG), PPG 등), 탄수화물(예를 들어, 덱스트란, 셀룰로스, 올리고사카라이드, 폴리사카라이드 등), 친수성 아미노산의 폴리머(예: 폴리라이신, 폴리아르기닌, 폴리아스파르테이트 등), 폴리알칸 옥사이드(예: 폴리에틸렌옥사이드, 폴리프로필렌 옥사이드 등) 및 폴리비닐 피롤리돈을 포함한다. 바람직하게, 본 발명의 Ig 유래 단백질을 변형하는 친수성 폴리머는 분리된 분자 엔터티로서 약 800 내지 약 150,000 달톤의 분자량을 갖는다. 예를 들면, PEG₅₀₀₀ 및 PEG_20,000(여기에서, 아랫 첨자는 폴리머의 평균 분자량(달톤)이다)이 사용될 수 있다.

친수성 폴리머 군은 1 내지 약 6개의 알킬, 지방산 또는 지방산 에스테르 군으로 치환될 수 있다. 지방산 또는 지방산 에스테르 군으로 치환된 친수성 폴리머를 적절한 방법을 사용하여 제조할 수 있다. 예를 들면, 아민 군을 포함하는 폴리머는 지방산 또는 지방산 에스테르의 카복실레이트에 커플링될 수 있고, 지방산 또는 지방산 에스테르상의 활성화된 카복실레이트(예를 들어, N,N-카보닐 디이미다졸로 활성화됨)는 폴리머상의 하이드록실 군과 커플링될 수 있다.

본 발명의 Ig 유래 단백질을 변형시키는데 적절한 지방산과 지방산 에스테르는 포화될 수 있거나 하나 이상의 불포화 단위를 함유할 수 있다. 본 발명의 Ig 유래 단백질을 변형시키는데 적절한 지방산은, 예를 들어, n-도데카노에이트(C₁₂, 라우레이트), n-테트라데카노에이트(C₁₄, 미리스테이트), n-옥타데카노에이트(C₁₈, 스테아레이트), n-아이코사노에이트(C₂₀, 아라키데이트), n-도코사노에이트(C₂₂, 베헤네이트), n-트리아콘타노에이트(C₃₀), n-테트라콘타노에이트(C₄₀), 시스-Δ9-옥타데카노에이트(C₁₈, 올레에이트), 모든 시스-Δ5,8,11,14-아이코사테트라에노에이트(C₂₀, 아라키도네이트), 옥탄디오익산, 테트라데칸디오익산, 옥타데칸디오익산, 도코산디오익산 등을 포함한다. 적절한 지방산 에스테르는 선형 또는 분지된 저급 알킬 군을 포함하는 디카복실산의 모노-에스테르를 포함한다. 저급 알킬 군은 1 내지 약 12개, 바람직하게는 1 내지 약 6개의 탄소원자를 포함할 수 있다.

변이된 인간 Ig 유래 단백질 및 항원-결합 단편은 적절한 방법, 이를테면 하나 이상의 변이제와의 반응에 의해 제조될 수 있다. 본 발명에서 사용된 용어 "변이제"는 활성화 군을 포함하는 적절한 유기 군(예, 친수성 폴리머, 지방산, 지방산 에스테르)을 언급한다. "활성화 군"은 적당한 조건 하에, 제 2 화학 군과 반응하여 변이제와 제 2 화학 군 사이의 공유 결합을 형성할 수 있는 화학 부분 또는 작용 군이다. 예를 들어, 아민-반응성 활성화 군은 토실레이트, 메실레이트, 할로(클로로, 브로모, 플루오로, 요오도), N-하이드록시숙신이미딜 에스테르(NHS) 등과 같은 친전자성 군을 포함한다. 티올과 반응할 수 있는 활성화 군은, 예를 들어, 말레이미드, 요오도아세틸, 아크릴롤일, 피리딜 디설파이드, 5-티올-2-니트로벤조산 티올(TNB-티올) 등을 포함한다. 알데히드 작용 군은 아민- 또는 하이드라지드-함유 분자에 커플링될 수 있으며, 아지드 군은 3가 인산 군과 반응하여 포스포라미데이트 또는 포스포이미드 링크를 형성할 수 있다. 활성화 군을 분자로 도입하는 적절한 방법은 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, Hermanson, G. T., Bioconjtzgate Techniques. Academic Press: San Diego, CA (1996) 참조). 활성화 군은 유기 군(예, 친수성 폴리머, 지방산, 지방산 에스테르)에 직접, 또는 링커 부분, 예를 들어 2가 C₁ - C₁₂ 군(여기에서 하나 이상의 탄소 원자는 산소, 질소 또는 황과 같은 이형원자에 의해 대체될 수 있음)을 통해 결합될 수 있다. 적절한 링커 부분은 예를 들어, 테트라에틸렌 글리콜, -(CH₂)₃-, -NH-(CH₂)₆-NH-, -(CH₂)₂-NH- 및 -CH₂-O-CH₂-CH₂-OCH₂-CH₂-O-CH-NH-를 포함한다. 링커 부분을 포함하는 변형제는, 예를 들어, 모노-Boc-알킬디아민(예를 들어, 모노-Boc-에틸렌디아민, 모노-Boc-디아미노헥산)을 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드(EDC)의 존재하에 지방산과 반응시켜 유리 아민과 지방산 카복실레이트 사이에 아미드 결합을 형성함으로써 제조될 수 있다. Boc 보호기를 트리플루오로아세트산(TFA)의 처리로 생성물로부터 제거하여 기재된 바와 같이 또다른 카복실레이트에 커플링될 수 있거나, 무수 말레산과 반응시키고 생성된 생성물을 고리화하여 지방산의 활성화 말레이미도 유도체를 제조할 수 있는 1차 아민을 노출시킬 수 있다(예를 들어, Thompson, et al., WO 92/16221 참조, 이의 전체가 참조로서 본원에 포함됨).

본 발명의 변이된 Ig 유래 단백질은 인간 Ig 유래 단백질 또는 항원-결합 단편을 변이제와 반응시켜 제조될 수 있다. 예를 들어, 유기 부위는 아민-반응성 변이제, 예를 들어, PEG의 NHS 에스테르를 사용함으로써 위치-특이성이 없는 방식으로 Ig 유래 단백질에 결합될 수 있다. 변형된 인간 Ig 유래 단백질 또는 항원-결합 단편은 또한 Ig 유래 단백질 또는 항원 결합 단편의 이황화 결합(예, 사슬내 이황화 결합)을 환원시킴으로써 제조될 수 있다. 환원된 Ig 유래 단백질 또는 항원-결합 단편을 티올-반응성 변형제와 반응시켜 본 발명의 변형된 Ig 유래 단백질을 제조할 수 있다. 본 발명의 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 특이 부위에 결합되는 유기 부분을 포함하는 변형된 인간 Ig 유래 단백질 항체 및 항원-결합 단편은 적절한 방법, 이를테면 역 단백질 가수분해를 이용하여 제조될 수 있다(Fisch et al., Bioconjtzgate Chem., 3: 147-153 (1992); Werlen etal., Bioconfugate Chem., 5: 411-417 (1994); Kumaran et al., Protein Sci. 6 (10): 2233-2241 (1997); Itoh et al., Bioorg. Chem., 24 (1) : 59-68 (1996) ; Capellas et al., Biotechnol. Bioeng., 56 (4): 456-463 (1997)), 및 Hermanson, G. T., Bioconjzlgate Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996))에 개시된 방법.

IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물

본 발명은 또한 본 발명에서 기재되고/되거나 당업계에서 공지된, 적어도 하나, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개 이상의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 이의 특정 부분 또는 변형체를 함유하며 비자연적 발생 조성물, 혼합물 또는 형태로 제공되는 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물을 제공한다. 이러한 조성물은 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 아미노산 서열, 또는 이의 특정 단편, 도메인 또는 변형체의 적어도 하나 또는 2개의 전장, C- 및/또는 N-말단 결실된 변형체, 도메인, 단편, 또는 특정 변형체를 포함하는 비자연적 발생 조성물을 함유한다. 이러한 조성물 퍼센트는 당업계에 공지되거나 본 발명에서 기재된 바와 같이, 액체 또는 드라이 용액, 혼합물, 현탁액, 에멀젼 또는 콜로이드로서 중량, 부피, 농도, 몰농도, 몰랄농도에 의한 것이다.

본 발명의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물은 희석제, 결합제, 안정화제, 완충액, 염, 친유성 용매, 보존제, 어쥬번트 등을 포함하지만 이에 제한되는 것은 아닌 적어도 하나의 임의의 적절한 보조제를 추가로 포함한다. 약제학적으로 허용 가능한 보조제가 바람직하다. 이러한 무균 용액의 제조 방법의 비제한적 예는 Gennaro, Ed., Rentington's Pharmaceutical Sciences, 18^th Edition, Mack Publishing Co. (Easton, PA) 1990을 포함하지만 이에 제한되는 것은 아니며, 당업계에 널리 공지되어 있다. 약제학적으로 허용가능한 담체는 업계에 널리 공지되거나 본 명세서에 기술된 바와 같이 IL-4 또는 IL-13 조성물의 투여방법, 용해도 및/또는 안정성에 적절하도록 루틴하게 선택될 수 있다.

본 조성물에 유용한 약제학적 부형제 및 첨가제는 단백질, 펩티드, 아미노산, 지방 및 탄수화물(예를 들면, 모노사카리드, 디-, 트리-, 테트라- 및 올리고사카리드와 같은 당류; 알디톨, 알돈산, 에스테르화된 당 등과 같은 유도된 당류; 및 다당류 또는 당 폴리머)을 포함하지만 이에 제한되는 것은 아니며, 이들은 단독으로 또는 조합하여 사용되고, 단독 또는 1-99.99 중량% 또는 부피%의 조합을 포함한다. 예시적 단백질 부형제는 인간 혈청 알부민(HSA), 재조합 인간 알부민(rHA), 젤라틴, 카제인 등과 같은 혈청 알부민을 포함한다. 완충 수용력에서도 역할을 하는, 대표적 아미노산/Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 성분은 알라닌, 글리신, 아르기닌, 베타인, 히스티딘, 글루타민산, 아스파르트산, 시스테인, 라이신, 류신, 이소류신, 발린, 메티오닌, 페닐알라닌, 아스파르탐 등을 포함한다. 바람직한 아미노산은 글리신이다.

본 발명에서 사용하기에 적절한 탄수화물 부형제는, 예를 들면 프룩토오스, 말토오스, 갈락토오스, 글루코오스, D-만노스, 소르보스 등의 단당류; 락토오스, 수크로오스, 트레할로스, 셀로비오스 등의 이당류; 라피노스, 멜레지토스, 말토덱스트린, 덱스트란, 전분 등의 다당류; 및 만니톨, 자일리톨, 말티톨, 락티톨, 자일리톨, 솔비톨(글루시톨), 미오이노시톨 등의 알디톨을 포함한다. 본 발명에서 사용하기에 바람직한 탄수화물 부형제는 만니톨, 트레할로스 및 라피노스이다.

IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 조성물은 또한 완충액 또는 pH 조절제를 포함할 수 있다; 전형적으로, 완충액은 유기산 또는 염기로부터 제조된 염이다. 대표적인 완충액는 시트르산, 아스코르브산, 글루콘산, 탄산, 타르타르산, 숙신산, 아세트산 또는 프탈산의 염과 같은 유기산염; 트리스, 트로메타민 염산 또는 인산 완충액를 포함한다. 본 조성물에서 사용하기에 바람직한 완충액은 시트레이트와 같은 유기산염이다.

부가적으로, 본 발명의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물은 폴리비닐피롤리돈, 피콜스(중합 당), 덱스트레이트(예를 들면, 2-히드록시프로필-β-사이클로덱스트린 같은 사이클로덱스트린), 폴리에틸렌 글리콜, 향료, 살균제, 감미제, 항산화제, 정균제, 계면활성제(예를 들면, "TWEEN 20" 및"TWEEN 80" 같은 폴리소르베이트), 지방(예를 들면, 포스포리피드, 지방산), 스테로이드(예를 들면, 콜레스테롤) 및 킬레이트제(예를 들면, EDTA)와 같은 폴리머 부형제/첨가제를 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 IL-4 또는 IL-13 조성물에 사용하기에 적절한 이들 부가적 공지의 약제학적 부형제 및/또는 첨가제는, 예를 들어, "Remington: The Science & Practice of Pharmacy', 19^th ed., Williams & Williams, (1995), 및 'Physician's Desk Reference', 52^td ed., Medical Economics, Montvale, NJ (1998)에 열거되어 있는 바와 같이 당업계에 공지되어 있고, 그 개시내용은 전체가 참조로서 본 명세서에 포함된다. 바람직한 담체 또는 부형제 물질은 탄수화물(예를 들면, 당류 및 알디톨) 및 완충액(예를 들면, 시트레이트) 또는 폴리머제이다.

치료적 성분을 추가로 포함하는 Ig 유래 단백질 조성물

상기 조성물은 임의로 항-감염성 약물, 심혈관(CV)계 약물, 중추 신경계(CNS) 약물, 자율 신경계(ANS) 약물, 기도 약물, 위장(GI)관 약물, 호르몬 약물, 체액 또는 전해질 균형을 위한 약물, 혈액 약물, 항종양제, 면역제어 약물, 눈, 귀 또는 코 사용을 위한 약물, 국소 약물, 영양제 약물 등 중에서 적어도 하나로부터 선택되는 유효량의 적어도 하나의 화합물 또는 단백질을 추가로 포함할 수 있다. 상기 약물들은 본 명세서에 제시한 각각의 제제, 지시사항, 투여량 및 투여를 포함하며 당업계에 잘 공지되어 있다(예를 들어, Nursing 2001 Handbook of Drugs, 21^st edition, Springhouse Corp., Springhouse, PA, 2001; Health Professional's Drug Guide 2001, ed., Shannon, Wilson, Stang, Prentice-Hall, Inc, Upper Saddle River, NJ; Pharmcotherapy Handbook, Wells et al., ed., Appleton & Lange, Stamford, CT(각 전체적으로 참조로서 본 명세서에서 인용됨) 참조).

항-감염성 약물은 아메바구제제 또는 적어도 하나의 항원충제, 구충제, 항진균제, 항말라리아제, 항결핵제 또는 적어도 하나의 항나병약, 아미노글리코시드, 페니실린, 세팔로스포린, 테트라사이클린, 설폰아미드, 플루오로퀴놀론, 항바이러스제, 마크로리드 항-감염제, 기타 항감염제로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. CV 약물은 수축촉진약, 항부정맥제, 항협심증제, 항고혈압제, 항지방혈제, 그외 심혈관 약물로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. CNS 약물은 비마약성 진통제로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있거나, 해열제, 비스테로이드성 항-염증 약물, 마약 또는 적어도 하나의 아편유사진통제, 진정수면제, 항경련제, 항우울제, 항불안제 약물, 정신병치료제, 중추신경계 자극제, 항파킨슨병약, 그외 중추 신경계 약물로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. ANS 약물은 콜린작용약물 (부교감흥분제), 항콜린작용약물, 아드레날린성 (교감신경흥분제), 아드레날린성 차단제 (부교감신경억제), 골격근이완제, 신경근육 차단제로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 호흡기관 약물은 항히스타민제, 기관지확장제, 거담제로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있거나, 진해제, 그외 호흡기관 약물로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. GI관 약물은 제산제로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있거나, 흡착제로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있거나, 고창성 약물, 소화 효소로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있거나, 담석 가용화제, 지사제, 설사제, 구토약, 항궤양 제로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 호르몬 약물은 코르티코스테로이드, 안드로겐로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있거나 단백동화스테로이드, 에스트로겐로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있거나 프로게스틴, 생식샘자극호르몬, 당뇨병약 약물로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있거나, 글루카곤, 갑상샘호르몬, 갑상샘호르몬 길항제, 뇌하수체 호르몬, 부갑상샘-유사 약물로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 체액 및 전해질 균형을 위한 약물은 이뇨제, 전해질로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있거나, 대체 용액, 산화제로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있거나, 알킬리화제로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 혈액 약물은 조혈제, 항응고제, 혈액 유도체, 혈전용해 효소로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 항종양제는 알킬화제, 항대사물질, 항생제 항종양제, 호르몬 균형을 변경시키는 항종양제, 그외 항종양제로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 면역제어 약물은 면역억제제, 백신로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있거나, 적어도 하나의 변성독소, 항독소로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있거나, 항뱀독소, 면역 혈청, 생물학적반응 변형제로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 눈, 귀, 및 코 사용을 위한 약물은 안과용 항-감염제 약물, 안과용 항-염증제, 축동제, 동공확대제, 안과용 혈관수축제, 그외의 안과용 약제, 귀, 코 사용 약물로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 국소용 약물은 국소용 항-감염제 약물, 옴약으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있거나 이살충제, 국소용 코르티코스테로이드로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 영양제는 비타민, 미네랄 또는 고칼로리제(calorics)로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 예로서, Nursing 2001 Drug Handbook, 상동 참조.

적어도 하나의 아메바구제제 또는 원충제는 아토바퀴온, 클로로퀸 히드로클로라이드, 클로로퀸 포스페이트, 메트로니다졸, 메트로니다졸 히드로클로라이드, 펜타미딘 이스에티오네이트로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 구충제는 메벤다졸, 피라텔 파모에이트, 티아벤다졸로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항진균제는 암포테리신 B, 암포테리신 B 콜레스테릴 설페이트 복합체, 암포테리신 B 지질 복합체, 암포테리신 B 리포조말, 플루코나졸, 플루시토신, 그리세오풀빈 마이크로사이즈, 그리세오풀빈 울트라마이크로사이즈, 이트라코나졸, 케토코나졸, 니스타틴, 테르비나핀 히드로클로라이드로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항말라리아제는 클로로퀸 히드로클로라이드, 클로로퀸 포스페이트, 독시사이클린, 하이드록시클로로퀸 설페이트, 메플로퀸 히드로클로라이드, 프리마퀸 포스페이트, 피리메틸아민, 설파독신을 포함하는 피리메타민으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항결핵약 또는 항나병약은 클로파지민, 사이클로세린, 답손, 에탐부톨 히드로클로라이드, 이소니아지드, 피라진아미드, 리파부틴, 리팜핀, 리파펜틴, 스트렙토마이신 설페이트로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 아미노글리코시드는 아미카신 설페이트, 젠타미신 설페이트, 네오마이신 설페이트, 스트렙토마이신 설페이트, 토브라마이신 설페이트으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 페니실린은 아목실린/클라부라네이트 포타슘, 아목실린 트리하이드레이트, 암피실린, 암피실린 소듐, 암피실린 트리하이드레이트, 암피실린 소듐/술박탐 소듐, 클록사실린 소듐, 디클록사실린 소듐, 메즐로실린 소듐, 나프실린 소듐, 옥사실린 소듐, 페니실린 G 벤자틴, 페니실린 G 포타슘, 페니실린 G 프로카인, 페니실린 G 소듐, 페니실린 V 포타슘, 피페라실린 소듐, 피페라실린 소듐/타조칵탐 소듐, 티카르실린 디소듐, 티카르실린 디소듐/클라부라네이트 포타슘으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 세팔로스포린은 세파클로르, 세파드록실, 세파졸린 소듐, 세프디니르, 세페피메 히드로클로라이드, 세픽시메, 세프메타졸 소듐, 세포니시드 소듐, 세포페라존 소듐, 세포탁심 소듐, 세포테탄 디소듐, 세폭시틴 소듐, 세포독심 프록세틸, 세프프로질, 세프타지딤, 세프티부텐, 세프티족심 소듐, 세프트리악손 소듐, 세푸록심 악세틸, 세푸록심 소듐, 세팔렉신 히드로클로라이드, 세팔렉신 모노하이드레이트, 세프라딘, 로라카르베프로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 테트라사이클린은 데메클로사이클린 히드로클로라이드, 독시사이클린 칼슘, 독시사이클린 하이클레이트, 독시사이클린 히드로클로라이드, 독시사이클린 모노하이드레이트, 미노사이클린 히드로클로라이드, 테트라클린 히드로클로라이드로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 설폰아미드는 코-트리목사졸, 설파디아진, 설파메톡사졸, 설픽속사졸 및 설픽속사졸 아세틸로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 플루오로퀴놀론은 알라트로플록사신 메실레이트, 시프로플록사신, 에녹사신, 레보플록사신, 로메플록사신 히드로클로라이드, 나리딕신산, 노르플록사신, 오플록사신, 스파르플록사신, 트로바플록사신 메실레이트로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 플루오로퀴놀론은 알라트로플록사신 메실레이트, 시프로플록사신, 에녹사신, 레보플록사신, 로메플록사신 히드로클로라이드, 나리딕신산, 노르플록사신, 오플록사신, 스파르플록사신, 트로바플록사신 메실레이트로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항바이러스제는 아바카비르 설페이트, 아시클로버 소듐, 아만타딘 히드로클로라이드, 암프레나버, 시도포버, 델라비르딘 메실레이트, 디다노신, 에파비렌즈, 팜시클로버, 포미비르센 소듐, 포스카넷 소듐, 간시클로버, 인디나버 설페이트, 라미부딘, 라미부딘/지도부딘, 넬피나비르 메실레이트, 네비라핀, 오셀타미버 포스페이트, 리바비린, 리만타딘 히드로클로라이드, 리토나버, 사퀴나버, 사퀴나버 메실레이트, 스타부딘, 발라사이클로버 히드로클로라이드, 잘시타빈, 자나미버, 지도부딘으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 매크롤린 항감염제는 안지트로 마이신, 클라리트로마이신, 디리트로마이신, 에리트로마이신 염기, 에리트로마이신 에스톨레이트, 에리트로마이신 에틸숙시네이트, 에리트로마이신 락토비오네이트, 에리트로마이신 스테아레이트로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 기타 항-감염제는 안즈트레오남, 바시트라신, 클로람페니콜 소듐 숙시네이트, 실린다마이신 히드로클로라이드, 실린다마이신팔미테이트 히드로클로라이드, 실린다마이신 포스페이트, 이미페남 및 실라스타틴 소듐, 메로페넴, 니트로푸란토인 매크로크리스탈, 니트로푸란토인 마이크로크리스탈, 퀴누프리스틴/달포프리스틴, 스펙티노마이신 히드로클로라이드, 트리메토프림, 반코마이신 히드로클로라이드로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다(예컨대, Nursing 2001 Drug Handbook의 24-214 페이지 참조).

적어도 하나의 수축촉진제는 암리논 락테이트, 디곡신, 밀리논 락테이트로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항부정맥제는 아데노신, 아미오다론 히드로클로라이드, 아트로핀 설페이트, 브레틸륨 토실레이트, 딜티아젬 히드로클로라이드, 디이소피라미드, 디이소피라미드 포스페이트, 에스몰롤 히드로클로라이드, 플레카이니드 아세테이트, 이부틸리드 푸마레이트, 리도카인 히드로클로라이드, 메실레틴 히드로클로라이드, 모리시진 히드로클로라이드, 페니토인, 페니토인 소듐, 프로카인아미드 히드로클로라이드, 프로파페논 히드로클로라이드, 프로파놀롤 히드로클로라이드, 퀴니딘 비설페이트, 퀴니딘 글루코네이트, 퀴니딘 폴리갈락트로네이트, 퀴니딘 설페이트, 소탈롤, 토카니드 히드로클로라이드, 베라파밀 히드로클로라이드로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항협심증제는 암로디피딘 베실레이트, 아밀 니트리트, 베피리딜 히드로클로라이드, 딜티아젬 히드로클로라이드, 이소소르비드 디니트레이트, 이소소르비드 모노니트레이트, 나돌롤, 니카디핀 히드로클로라이드, 니페디핀, 니트로글리세린, 프로파놀롤 히드로클로라이드, 베라파밀, 베라파밀 히드로클로라이드로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항고혈압제는 아세부토롤 히드로클로라이드, 암로디핀 베실레이트, 아테노롤, 베나제프릴 히드로클로라이드, 베타졸롤 히드로클로라이드, 비이소프롤 푸마레이트, 칸데사르탄 실렉세틸, 카프토프릴, 카르테오롤 히드로클로라이드, 카르베딜롤, 클로니딘, 클로니딘 히드로클로라이드, 디아족사이드, 딜티아젬 히드로클로라이드, 독사조신 메실레이트, 에날라프릴라트, 에날라프릴 말레이트, 에프로사르탄 메실레이트, 펠로디핀, 페놀도팜 메실레이트, 포시노프릴 소듐, 구아나벤즈 아세테이트, 구아나드렐 설페이트, 구안파신 히드로클로라이드, 하이드랄라진 히드로클로라이드, 이르베사르탄, 이스라디핀, 라베탈롤 히드로클로라이드, 리시노프릴, 로사르탄 포타슘, 메틸도파, 메틸도페이트 히드로클로라이드, 메토프롤롤 숙시네이트, 메타프롤롤 타르트레이트, 미녹시딜, 모엑시프릴 히드로클로라이드, 나돌롤, 니카르디핀 히드로클로라이드, 니페디핀, 니솔디핀, 니트로프루시드 소듐, 펜부톨롤 설페이트, 페린도프릴 에르부민, 펜톨아민 메실레이트, 핀돌롤, 피라조신 히드로클로라이드, 프로프라놀롤 히드로클로라이드, 퀴나프릴 히드로클로라이드, 라미프릴, 텔미사르탄, 테라조신 히드로클로라이드, 티몰롤 말레이트, 트란돌라프릴, 발사르탄, 베라파밀 히드로클로라이드로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항고지혈제는 아토르바스타닌 칼슘, 세리바스타닌 소듐, 콜레스티르아민, 콜레스티폴 히드로클로라이드, 페노피브레이트(최소화된), 플라바스타틴 소듐, 젬피브로질, 로바스타틴, 니아신, 프라바스타틴 소듐, 심바스타틴으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 기타 CV 약물은 압시시밥, 알프로스타딜, 아르부타민 히드로클로라이드, 실로트타졸, 클로피도그렐 비설페이트, 디피리다몰, 엡티피바티드, 미도드린 히드로클로라이드, 펜톡시필린, 티클로피딘 히드로클로라이드, 티로피반 히드로클로라이드로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다(예컨대, Nursing 2001 Drug Handbook의 215-336 페이지 참조).

적어도 하나의 비마약성 진통제 또는 해열제는 아세트아미노펜, 아스피린, 콜린성마그네슘 트리살리실레이트, 디플루니살, 마그네슘 살리실레이트로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 비스테로이드성 항-염증 약물은 셀레코시브, 디클로페나크 포타슘, 디클로페나크 소듐, 에토도락크, 페노프로펜 칼슘, 플루르비프로펜, 이부프로펜, 인도메타신, 인도메타신 소듐 트리하이드레이트, 케토프로펜, 케토로락 트로메타민, 나부메톤, 나프록센, 나프록센 소듐, 옥사프로진, 피록시캄, 로페코시브, 설린다크로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 마약 또는 아편성 진통제는 알펜타닐 히드로클로라이드, 부프레노이핀 히드로클로라이드, 부토르파놀 타르트레이트, 코데인 포스페이트, 코데인 설페이트, 펜타닐 시트레이트, 펜타닐 경피 시스템, 펜타닐 점막 관통, 히드로모르폰 히드로클로라이드, 메페리딘 히드로클로라이드, 메타돈 히드로클로라이드, 모르핀 히드로클로라이드, 모르핀 설페이트, 모르핀 타르트레이트, 날부핀 히드로클로라이드, 옥시코돈 히드로클로라이드, 옥시코돈 펙티네이트, 옥시모르폰 히드로클로라이드, 펜타조신 히드로클로라이드, 펜타조신 히드로클로라이드 및 날록손 히드로클로라이드, 펜타조신 락테이트, 프로폭시펜 히드로클로라이드, 프로폭시펜나프실레이트, 레니펜타닐 히드로클로라이드, 수펜타닐 시트레이트, 트라마돌 히드로클로라이드로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 진정수면제는 클로랄 하이드레이트, 에스타조람, 플루라제팜 히드로클로라이드, 펜토바르비탈, 펜토바르비탈 소듐, 펜토바르비탈 소듐, 세코바르비탈 소듐, 테마제팜, 트리아조람, 잘레프론, 졸피뎀 타르트레이트로부터 선택된 적어도 하나 일 수 있다. 적어도 하나의 항경련제는 아세타졸아미드 소듐, 카바마제핀, 클로나제팜, 클로라제페이트 디포타슘, 디아제팜, 디발프고엑스 소듐, 에트리오숙시미드, 포스페니포인 소듐, 가바펜틴, 라모트리진, 마그네슘 설페이트, 페노바르비탈, 페노바르비탈 소듐, 페니토인, 페니토인 소듐, 페니토인 소듐 (기관간), 프리미돈, 티아가빈 히드로클로라이드, 토피라메이트, 발프로에이트 소듐, 발프론산으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항우울제는 아미트립티린 히드로클로라이드, 암트립티린 파모에이트, 아목사핀, 부프로피온 히드로클로라이드, 시탈로프람 히드로브로마이드, 클로미프라민 히드로클로라이드, 데시프라민 히드로클로라이드, 독세핀 히드로클로라이드, 플록세틴 히드로클로라이드, 이미프라민 히드로클로라이드, 이미프라민 파모에이트, 미르타자핀, 네파조돈 히드로클로라이드, 노르트립티린 히드로클로라이드, 파록세틴 히드로클로라이드, 페넬진 설페이트, 세르트라린 히드로클로라이드, 트라닐시프로민 설페이트, 트리미프라민 말레이트, 벤라펙신 히드로클로라이드로부터 선택된 어느 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항불안제 약물은 알프라졸람, 부스피론 히드로클로라이드, 클로로디아제프록시드, 클로로디아제프록시드 히드로클로라이드, 클로라제페이트 디포타슘, 디아제팜, 독세핀 히드로클로라이드, 하이드록시진 에보네이트, 하이드록시진 히드로클로라이드, 하이드록시진 파모에이트, 로라제팜, 메프로바메이트, 미다조람 히드로클로라이드, 옥사제팜으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 정신병치료제는 클로르프로마진 히드로클로라이드, 클로자핀, 플루페나진 데카노에이트, 플루에페나진 에난테이트, 플루페나진 히드로클로라이드, 할로페리돌, 할로페리돌 데카노에이트, 할로페리돌 락테이트, 록사핀 히드로클로라이드, 록사핀 숙시네이트, 메소리다진 베실레이트, 몰린돈 히드로클로라이드, 오란자핀, 페르페나진, 피모지드, 프로클로이페라진, 퀴에티아핀 푸마레이트, 리스페리돈, 티오리다진 히드로클로라이드, 티오티센, 티오티센 히드로클로라이드, 트리플루오페라진 히드로클로라이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 중추 신경계 자극제는 암페타민 설페이트, 카페인, 덱스트로암페타민 설페이트, 독사프람 히드로클로라이드, 메탐페타민 히드로클로라이드, 메틸페니데이트 히드로클로라이드, 모다피닐, 페몰, 펜테르민 히드로클로라이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항파킨슨병약은 아만타딘 히드로클로라이드, 벤즈트로핀 메실레이트, 비페리덴 히드로클로라이드, 비페리덴 락테이트, 브롬크립틴 메실레이트, 카비도파-레보도파, 엔타카폰, 레보도파, 페르골리드 메실레이트, 프라미페솔 디히드로클로라이드, 로피니롤 히드로클로라이드, 세레기린 히드로클로라이드, 톨카폰, 트리헥시페니딜 히드로클로라이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 그외의 중추 신경계 약물은 부프로피온 히드로클로라이드, 도네페질 히드로클로라이드, 드로페리돌, 플루복사민 말레이트, 리튬 카보네이트, 리튬 시트레이트, 나라트립탄 히드로클로라이드, 니코틴 포락크리렉스, 니코틴 경피 시스템, 프로포폴, 리자트립탄 벤조에이트, 시부트라민 히드로클로라이드 모노하이드레이트, 수마트립탄 숙시네이트, 타크린 히드로클로라이드, 졸미트립탄으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다(참조, 예로서, Nursing 2001 Drug Handbook의 337-530 페이지).

적어도 하나의 콜린성약물(예: 부교감흥분제)은 베타네콜 클로라이드, 에드로포늄 클로라이드, 네오스티그민 브로마이드, 네오스티그민 메틸설페이트,피소스티그민 살리실레이트, 피리도스티그민 브로마이드로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항콜린작용약물은 아트로핀 설페이트, 디사이클로민 하이드로클로라이드, 글리코피롤레이트, 히오스시아민, 히오스시아민 설페이트, 프로판테린 브로마이드, 스코포라민, 스코포라민 부틸브로마이드, 스코포라민 히드로브로마이드로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 아드레날린성 약물(교감신경흥분제)은 도부타민 히드로클로라이드, 도파민 히드로클로라이드, 메타라미놀 바이타르트레이트, 노르에피네프린 바이타르트레이트, 페닐에프린 히드로클로라이드, 슈도에페드린 히드로클로라이드, 슈도에페드린 설페이트로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 아드레날린성 차단제(부교감신경억제제)는 디히드로에르고타민 메실레이트, 에르고타민 타르트레이트, 메티세르기드 말레이트, 프로파놀로 히드로클로라이드로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 골격근 이완제는 바클로펜, 카리소프로돌, 클로르족사존, 사이클로벤자프린 히드로클로라이드, 단트로렌 소듐, 메토카르바몰, 티자니딘 히드로클로라이드로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 신경근육 차단제는 아트라쿠리움 베실레이트, 시스아트라쿠리움 베실레이트, 독사쿠리움 클로라이드, 미바쿠리움 클로라이드, 판쿠리움 브로마이드, 페피쿠로니움 브로마이드, 라파쿠로니움 브로마이드, 로쿠로니움 브로마이드, 숙시닐콜린 클로라이드, 투보루라린 클로라이드, 베쿠로니움 브로마이드로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다(예를 들어, Nursing 2001 Drug Handbook의 531-84 페이지 참조).

적어도 하나의 항히스타민제는 브롬페니라민 말레이트, 세티리진 히드로클로라이드, 클로페니라민 말레이트, 클레마스틴 푸마레이트, 시프로헵타딘 히드로클로라이드, 디펜하이드라민 히드로클로라이드, 펙소페나딘 히드로클로라이드, 로라타딘, 프로메타진 히드로클로라이드, 프로메타진 티오타진, 트리프롤리딘 히드로클로라이드로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 기관지확장제는 알부테롤, 알부테롤 설페이트, 아미노필린, 아트로핀 설페이트, 에페드린 설페이트, 에피네프린, 에피네프린 비타르트레이트, 에피네프린 히드로클로라이드, 이프라트로피움 브로마이드, 이소프로테레놀, 이소프로테레놀 히드로클로라이드, 이소프로테레놀 설페이트, 레발부테로 히드로클로라이드, 메타프로테레놀 설페이트, 옥스트리필리, 피르부테롤 아세테이트, 살메테롤 시나포에이트, 테르부탈린 설페이트, 테오필린으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 거담제 또는 진해제는 벤조나테이트, 코데이네 포스페이트, 코데이네 설페이트, 덱스트람메토르판 히드로브로마이드, 디펜하이드라민 히드로클로라이드, 구아이페네신, 히드로모르폰 히드로클로라이드로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 기타 호흡기 약물은 아세틸시스테인, 베크로메타손 디프로피오네이트, 베락탄트, 부데소나이드, 칼팍탄트, 크로몰린 소듐, 도르나제 알파, 에포프로스테놀 소듐, 프루니솔리드, 프루티카손 프로피오네이트, 몬텔루카스느 소듐, 네도크로밀 소듐, 파리비주맙, 트리암실노론 아세토니드, 자피루카스느, 질레우톤으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다(예컨대, Nursing 2001 Drug Handbook의 585-642 페이지 참조).

적어도 하나의 제산제, 흡수제 또는 항고창제는 알루미늄 카보네이트, 알루미늄 하이드록사이드, 칼슘 카보네이트, 마갈드레이트, 마그네슘 하이드록사이드, 마그네슘 옥사이드, 시메티콘, 소듐 비카보네이트로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 소화효소 또는 담석 용해화제는 판크레아틴, 판크레리파제, 우르소디올로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 지사제는 아타풀기테, 비스무스 서브살리실레이트, 칼슘 폴리카보필, 디페녹실레이트 히드로클로라이드 또는 아트로핀 설페이트, 로페라미드, 옥트레오타이드 아세테이트, 오피움 틴크튜어, 오피움 틴큐어(캄포레이티드)로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 설사제는 비소코딜, 칼슘 폴리카보필, 카스카라 사그라다, 카스카라 사그라다 아로마틱 프루이덱스트랙트, 카스카라 사그라다 프루이덱스트랙트, 캐스터 오일, 도큐사테 칼슘, 도큐사테 소듐, 글리세린, 락튜로즈, 마그네슘 시트레이트, 마그네슘 하이드록사이드, 마그네슘 설페이트, 메틸셀루로오즈, 미네랄 오일, 폴리에틸렌글리콜 또는 전해질 용액, 프실리움, 센나, 소듐 포스페이트로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항구토제는 클로프로마진 히드로클로라이드, 디멘히드리네이트, 도라세트론 메실레이트, 드로나비놀, 그라니세트론 히드로클로라이드, 메크리진 히드로클로라이드, 메토크로프로아미드 히드로클로라이드, 온단세트론 히드로클로라이드, 페르페나진, 프로크로페라진, 프로클로페라진 에디실레이트, 프로클로페라진 말레이트, 프로메타진 히드로클로라이드, 스코폴아민, 티에틸페라진 말레이트, 트리메토벤즈아미드 히드로클로라이드로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항괴양성 약물은 시메티딘, 시메티딘 히드로클로라이드, 파모티딘, 란소프라졸, 미소프로스톨, 니자티딘, 오메프라졸, 라베프로졸 소듐, 란티딘 비스무스 시트레이트, 라니티딘 히드로클로라이드, 수크라페이트로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다(예컨대, Nursing 2001 Drug Handbook, 643-95 페이지 참조).

적어도 하나의 코리코스테로이드는 베타메타손, 베타메타손 아세테이트 또는 베타메타손 소듐 포스페이트, 베타메타손 소듐 포스페이트, 코르티손 아세테이트, 덱사메타손, 덱사메타손 아세테이트, 덱사메타손 소듐 포스페이트, 프루도코르티손 아세테이트, 히드로코르티손, 히드로코르티손 아세테이트, 히드로코르티손 시피오네이트, 히드로코르티손 소듐 포스페이트, 히드로코르티손 소듐 숙시네이트, 메틸프레드니솔론, 메틸프레드니솔론 아세테이트, 메틸프레드니솔론 소듐 숙시네이트, 프레드니솔론, 프레드니솔론 아세테이트, 프레드니솔론 소듐 포스페이트, 프레드니솔론 테부테이트, 프레드니손, 트리암시놀론, 트리암시놀론 아세토니드, 트리암시놀론 디아세테이트로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 안드로겐 또는 단백동화 스테로이드는 다나졸, 프루옥시메스테론, 메틸테스토스테론, 난드롤론 데카노에이트, 난드롤론 펜프로피오네이트, 테스토스테론, 테스토스테론 시피오네이트, 테스토스테론 에난테이트, 테스토스테론 프로피오네이트, 테스토스테론 경피 시스템으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 에스트로겐 또는 프로게스틴은 에스테르화 에스트로겐, 에스트라디올, 에스트라디올 시피오네이트, 에스트라디올/노르에틸드론 아세테이트 경피 시스템, 에스트라디올 발레레이트, 에스트로겐(콘쥬게이티드), 에스트로피페이트, 에틴일 에스트라디올, 에틴일 에스트라디올 및 데소게스트렐, 에틴일 에스트라디올 및 에틴노디올 디아세테이트, 에틴일 에스트라디올 및 데소게스트렐, 에틴일 에스트라디올 및 에티노디올 디아세테이트, 에틴일 에스트라디올 및 레보노르게스트렐, 에틴일 에스트라디올 및 노르에틴드롤, 에틴일 에스트라디올 및 노르에틴드론 아세테이트, 에틴일 에스트라디올 및 노르게스티메이트, 에틴일 에스트라디올 및 노르게스트렐, 에틴일 에스트라디올 및 노르에틴드론 및 아세테이트 및 페로스 푸마레이트, 레보노르게스트렐, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메스트라놀 및 노르에틴드론, 노르에틴드로네, 노르에틴드로네 아세테이트, 노르게스트렐, 프로게스테론으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 고나도트로핀(gonadroptropin)은 가니렐릭스 아세테이트, 고나도레린 아세테이트, 히스트레린 아세테이트, 메노트로핀스로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항당뇨성 또는 글루카곤은 아카보제, 클로로프로파미드, 글리메피리드, 글리피지데, 글루카곤, 글리부리데, 인슐린, 메트포림 히드로클로라이드, 미글리톨, 피오글리타존 히드로클로라이드, 레파글리니데, 로시글리타존 말레이트, 트로글리타존으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 갑상선 호르몬은 레보티록신 소듐, 리오티로닌 소듐, 리오트릭스, 티로이드로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 갑상선 호르몬 길항제는 메티마졸, 포타슘 아이오다이드, 포타슘 아이오다이드(포화 용액), 프로필티오우라실, 방사성 아이오딘(소듐 아이오다이드 ¹³¹I), 강력한 아이오딘 용액으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 뇌하수체 호르몬은 코르티코트로핀, 코신트로핀, 데스모프레신 아세테이트, 류프롤리드 아세테이트, 저장성 코르티코트로핀, 소마트렘, 소마트로핀, 바소프레신으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 부갑상선-유사 약물은 칼시페디올, 칼시토닌(인간), 칼시토닌(연어), 칼시트리올, 디히드로타키스테롤, 에트리도네이트 디소듐으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다(예컨대, Nursing 2001 Drug Handbook의 696-796 페이지 참조).

적어도 하나의 이뇨제는 아세타졸아미드, 아세타졸아미드 소듐, 아밀로리드 히드로클로라이드, 부메타니드, 클로르탈리돈, 에타크리네이트 소듐, 에타크린산, 푸로세미드, 히드로클로로티아지드, 인다파미드, 만니톨, 메톨라존, 스피로놀락톤, 토르세미드, 트리암테렌, 우레아로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 전해질 또는 대체 용액은 칼슘 아세테이트, 칼슘 카보네이트, 칼슘 클로라이드, 칼슘 시트레이트, 칼슘 글루비오네이트, 칼슘 글루셉테이트, 칼슘 글루코네이트, 칼슘 락테이트, 칼슘 포스페이트(2염기성), 칼슘 포스페이트(3염기성), 덱스트란(고분자량), 덱스트란(저분자량), 헤타스타치(hetastarch), 마그네슘 클로라이드, 마그네슘 설페이트, 포타슘 아세테이트, 포타슘 비카보네이트, 포타슘 클로라이드, 포타슘 글루코네이트, 링거주사액, 링거주사액(락테이트), 소듐 클로라이드로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 산성화제 또는 알킬화제는 소듐 비카보네이트, 소듐 락테이트, 트로메타민으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다(예컨대, Nursing 2001 Drug Handbook의 797-833 페이지 참조).

적어도 하나의 조혈제는 제1철 푸마레이트, 제1철 글루코네이트, 제1철 설페이트, 제1철 설페이트(건조된), 철 덱스트란, 철 소르비톨, 폴리사카라이드-철 복합체, 소듐 제2철 글루코네이트 복합체로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항응집제는 아데파린 소듐, 달테파린 소듐, 다나파로이드 소듐, 에녹사파린 소듐, 헤파린 칼슘, 헤파린 소듐, 와파린 소듐으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 혈액 유도체는 알부민 5%, 알부민 25%, 항혈우병 인자, 항-저해제 혈액 응고제 복합체, 항트롬빈III(인간), 인자 Ix(인간), 인자 IX 복합체, 혈장 단백질 분획으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 혈전용해 효소는 알테플라제, 아니스트레플라제, 레테플라제(재조합), 스트렙토키나아제, 유로키나아제(예컨대, Nursing 2001 Drug Handbook의 834-66 페이지 참조).

적어도 하나의 알킬화 약물은 부설판, 카보플라틴, 카르무스틴, 클로람부실, 시스플라틴, 사이클로포스파미드, 이포스파미드, 로무스틴, 메클로레타민 히드로클로라이드, 멜팔란, 멜판란 히드로클로라이드, 스트렙토조신, 테모졸로마이드, 티오테파로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항대사제는 카페시타빈, 클라드리빈, 시타라빈, 플록수리딘, 플루다라빈 포스페이트, 플루오로라우실, 하이드록시우레아, 머캅토푸린, 메토트렉사에이트, 메토트렉사에이트 소듐, 티오구아닌으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항생 항종양제는 블레오마이신 설페이트, 닥티노마이신, 다우노루비신 시트레이트 리포조말, 다우노르부신 히드로클로라이드, 독소루비신 히드로클로라이드, 독소루비신 히드로클로라이드 리포조말, 에피루비신 히드로클로라이드, 이다루비신 히드로클로라이드, 미토마이신, 펜토스타틴, 플리카마이신, 발루비신으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 호르몬 균형을 변경하는 적어도 하나의 항종양제는 아나스트로졸, 비칼루타미드, 에스트라무스틴 포스페이트 소듐, 엑세메스탄, 플루타미드, 고세렐린 아세테이트, 레트로졸, 류플로리드 아세테이트, 메게스트론 아세테이트, 닐루타미드, 타목시펜 시트레이트, 테스토락톤, 토레미펜 시트레이트로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 기타 항종양제는 아스파라기나제, 바실루스 칼메테-구에렌(BCG)(살아있는 방광내), 다카르바진, 도세탁셀, 에토포시드, 에토포시드 포스페이트, 젬시타빈 히드로클로라이드, 이리노테칸 히드로클로라이드, 미토탄, 미토잔트론 히드로클로라이드, 파클리탁셀, 페가스파가제, 포르피머 소듐, 프로카바진 히드로클로라이드, 리투시맙, 테니포시드, 토포테칸 히드로클로라이드, 트라스투주맙, 트레티노인, 빈플라스틴 설페이트, 빈크리스틴 설페이트, 비노렐빈 타르트레이트로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다(예컨대, Nursing 2001 Drug Handbook의 867-963 페이지 참조).

적어도 하나의 면역억제제는 아자티오프린, 바실릭시맙, 사이클로스포린, 다클리주맙, 림프구 면역글로불린, 뮤로모납-CD3, 미코페놀에이트 모페틸, 미코페놀에이트 모페틸 히드로클로라이드, 시롤리무스, 타크롤리무스로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 백신 또는 변성독소는 BCG 백신, 콜레라 백신, 디프테리아 및 파상풍 변성독소(흡착된), 디프테리아 및 파상풍 변성독소 및 무세포 백일해 백신(흡착된), 디프테리아 및 파상풍 변성독소 및 전-세포 백일해 백신, 해모필루스 b 컨쥬게이트 백신, 간염 A 백신(불활성화된), 간염 B 백신(재조합), 인플루엔자 바이러스 백신 1999-2000 3가 유형 A & B(정제된 표면 항원), 인플루엔자 바이러스 백신 1999-2000 3가 유형 A & B(서브비리온 또는 정제된 서브비리온), 인플루엔자 바이러스 백신 1999-2000 3가 유형 A & B(전체 비리온), 일본 뇌염 바이러스 백신(불활성화된), 라임병 백신(재조합 OspA), 홍역 및 볼거리 및 풍진 바이러스 백신(살아있는), 홍역 및 볼거리 및 풍진 바이러스 백신(약화되어 살아있는), 홍역 바이러스 백신(약화되어 살아있는), 수막구균 폴리사카라이드 백신, 볼거리 바이러스 백신(살아있는), 플라그 백신, 폐렴구균 백신(다가), 폴리오바이러스 백신(불활성화된), 폴리오바이러스 백신(살아있는, 경구, 3가), 광견병 백신(흡착된), 광견병 백신(인간 이배체 세포), 풍진 및 볼거리 바이러스 백신(살아있는), 풍진 바이러스 백신(약화되어 살아있는), 파상풍 변성독소(흡착된), 파상풍 변성독소(액체), 장티푸스 백신(경구), 장티푸스 백신(비경구), 장티푸스 Vi 폴리사카라이드 백신, 수두 바이러스 백신, 황열병 백신으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항독소 또는 항뱀독소는 검은 과부 거미 항뱀독소, 크로탈리데 안티베놈(Crotalidae antivenom)(다가), 디프테리아 항독소 (말), 미그루루스 플루비우스(Micrurus fulvius) 항뱀독소)로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 면역 혈청은 사이토메갈로바이러스 면역글로불린 (정맥내), 간염 B 면역글로불린 (인간), 면역글로불린 근육 내, 면역글로불린 정맥내, 광견병 면역글로불린 (인간), 호흡기 합포체 바이러스 면역글로불린 정맥내 (인간), Rh₀(D)면역글로불린 (인간), Rh₀(D)면역글로불린 정맥내 (인간), 파상풍 면역글로불린 (인간), 수두-대상포진 면역글로불린으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 생물학적 반응 수정자는 아델스류킨, 에오에틴 알파, 필그라스팀(filgrastim), 주사를 위한 글라티라머(glatiramer) 아세테이트, 인터페론 알파콘-1, 인터페론 알파-2a (재조합), 인터페론 알파-2b (재조합), 인터페론 베타-1a, 인터페론 베타-1b (재조합), 인터페론 감마-1b, 레바미솔 히드로클로라이드, 오프렐베킨, 사르그라모스팀으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다(예컨대, Nursing 2001 Drug Handbook의 964-1040 페이지 참조.)

적어도 하나의 안용 항-감염제는 바시트라신, 클로르암페니콜, 시프로플록사신 히드로클로라이드, 에리트로마이신, 겐타마이신 설페이트, 오플록사신 0.3%, 폴리믹신 B 설페이트, 설파아세트아미드 소듐 10%, 설파아세트아미드 소듐 15%, 설프아세트아미드 소듐 30%, 토브라마이신, 비다라빈으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 안용 항염증제는 덱사메타손, 덱사메타손 소듐 포스페이트, 디클로페낙 소듐 0.1%, 플루오로메톨론, 플루비프로펜 소듐, 케토로락트로메타민, 프레드니솔론 아세테이트 (현탁액), 프레드니솔론 소듐 포스페이트 (용액)으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 축동제는 아세틸로콜린클로라이드, 카바콜 (안 내), 카바콜 (국소용), 에코티오페이트 아이오다이드, 필로카핀, 필로카핀 히드로클로라이드, 필로카핀 니트레이트로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 동공확대제는 아트로핀 설페이트, 사이클로펜톨레이트 히드로클로라이드, 에피네프린 히드로클로라이드, 에피네프릴 보레이트, 호마트로핀 히드로브로마이드, 페닐에프린 히드로클로라이드, 스코폴아민 히드로브로마이드, 트로픽 아미드로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 안용 혈관수축제는 나파졸린 히드로클로라이드, 옥시메타졸린 히드로클로라이드, 테트라히드로졸린 히드로클로라이드로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 기타 안용제는 아프라클로니딘 히드로클로라이드, 베탁솔롤 히드로클로라이드, 브리모니딘 타르트레이트, 카르테오롤 히드로클로라이드, 디피데프린 히드로클로라이드, 도르졸아미드 히드로클로라이드, 에메다스틴 디푸마레이트, 플루오레세인 소듐, 케토티펜 푸마레이트, 란타노프로스트, 레보부놀롤 히드로클로라이드, 메티프라놀롤 히드로클로라이드, 소듐 클로라이드(고장성), 티몰롤 말레이트로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 귀용 약물은 보르산, 카바미드 퍼옥사이드, 클로르암페니콜, 트리에탄올아민 폴리펩티드 올레이트-콘덴세이트로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 코용 약물은 베클로메타손 디프로피오네이트, 부데소니드, 에페드린 설페이트, 에피네프린 히드로클로라이드, 플루니솔리드, 풀루티카손 프로피오네이트, 나파졸린 히드로클로라이드, 옥시메타졸린 히드로클로라이드, 페닐에프린 히드로클로라이드, 테트라히드로졸린 히드로클로라이드, 트리암시놀론 아세토니드, 자일로메타졸린 히드로클로라이드로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다(예컨대, Nursing 2001 Drug Handbook의 1041-97 페이지 참조).

적어도 하나의 국소 항-감염제는 사이클로비르, 암포테리신 B, 젤라산 크림, 바시트라신, 부토코나졸 니트레이트, 실린다마이신 포스페이트, 클로트리마졸, 에코나졸 니트레이트, 에리트로마이신, 겐타마이신 설페이트, 케노코나졸, 마페니드 아세테이트, 메트로니다졸 (국소용), 미코나졸 니트레이트, 무피로신, 나프티핀 히드로클로라이드, 네오마이신 설페이트, 니트로푸라존, 니스타틴, 실버 설파디아진, 테르비나핀 히드로클로라이드, 테르코나졸, 테트라사이클린 히드로클로라이드, 티오코나졸, 톨나프테이트로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 옴약 또는 이살충제는 크로타미톤, 린단, 퍼메트린, 피레트린스로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 국소용 코르티코스테로이드는 베타메타손 디프로피오네이트, 베타메타손 발레이트, 클로베타솔 프로피오네이트, 데소니드, 데속시메타손, 덱사메타손, 덱사메타손 소듐 포스페이트, 디플로라손 디아세테이트, 플루오시놀론 아세토니드, 플루오시노니드, 플루란드레놀리드, 플루티카손 프로피오네이트, 할시오니드, 히드로코티손, 히드로코티손 아세테이트, 히드로코티손 부티레이트, 히드로코티손 발레이트, 모메타손 푸로에이트, 트리암시놀론 아세토니드로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다(예컨대, Nursing 2001 Drug Handbook의 1098-1136 페이지 참조).

적어도 하나의 비타민 또는 미네랄은 비타민 A, 비타민 B 복합체, 시아노코발라민, 엽산, 하이드록소코발라민, 류코보린 칼슘, 니아신, 니아신아미드, 피리독신 히드로클로라이드, 리보플라빈, 티아민 히드로클로라이드, 비타민 C, 비타민 D, 콜레칼시페롤, 에르고칼시페롤, 비타민 D 유사체, 독세르칼리페롤, 파리칼시톨, 비타민 E, 비타민 K 유사체, 피토나디온, 소듐 플루오라이드, 소듐 플루오라이드(국소용), 미량 원소), 크로뮴, 구리, 아이오딘, 망간, 셀레늄, 아연으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 칼로리는 아미노산 주입액 (결정체), 덱스트로스 중의 아미노산 주입액, 전해질을 갖는 아미노산 주입액, 전해질을 갖는 덱스트로스 중의 아미노산 주입액, 간 장애에 대한 아미노산 주입액, 고 대사성 스트레스에 대한 아미노산 주입액, 신장 장애에 대한 아미노산 주입액, 덱스트로스, 지방 유액, 미디움-체인트리글리세리드로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다(예컨대, Nursing 2001 Drug Handbook의 1137-63 페이지 참조.)

제제

상기한 바와 같이, 본 발명은 안정한 제제를 제공하는데, 이는 바람직하게는 식염수 또는 선택된 염을 갖는 인산 완충액과 더불어 보존된 용액 및 보존제를 함유하는 제제와 더불어 약제학적 또는 수의학적 용도에 적절한 다용도 보존된 제제이고, 약제학적으로 허용가능한 제제 내에 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 포함한다. 보존된 제제는 수성 희석제 내에, 적어도 하나의 페놀, m-크레졸, p-크레졸, o-크레졸, 클로로크레졸, 벤질 알코올, 페닐머큐릭 니트리트, 페녹시에탄올, 포름알데히드, 클로로부탄올, 마그네슘 클로라이드(예를 들면, 6수화물), 알킬파라벤(메틸, 에틸, 프로필, 부틸 등), 벤잘코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드, 소듐 디히드로아세테이트 및 티머로살, 또는 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 임의로 선택되거나, 적어도 하나의 공지된 보존제를 포함한다. 임의의 적절한 농도 또는 혼합물은 0.001-5%, 또는 임의의 범위 또는 그 값과 같이 업계에 공지된 바대로 사용될 수 있고, 0.001, 0.003, 0.005, 0.009, 0.01, 0.02, 0.03, 0.05, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.3, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 또는 임의의 범위 또는 그 값을 포함하지만 이에 제한되는 것은 아니다. 비제한적 예는 보존제를 포함하지 않거나, 0.1-2% m-크레졸(예를 들면, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.9, 1.0%), 0.1-3% 벤질 알코올(예를 들면, 0.5, 0.9, 1.1, 1.5, 1.9, 2.0, 2.5%), 0.001-0.5% 티머로살(예를 들면, 0.005, 0.01), 0.001-2.0% 페놀(예를 들면, 0.05, 0.25, 0.28, 0.5, 0.9, 1.0%), 0.0005-1.0% 알킬파라벤(들)(예를 들면, 0.00075, 0.0009, 0.001, 0.002, 0.005, 0.0075, 0.009, 0.01, 0.02, 0.05, 0.075, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.5, 0.75, 0.9, 1.0%) 등을 포함한다.

상기한 바와 같이, 본 발명은 충전 물질 및 임의로 수성 희석제 내의 지정된 완충액 및/또는 보존제와 함께 적어도 하나의 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 용액을 포함하는 최소한 하나의 바이얼을 포함하는 제품을 제공하는데, 여기서 충전 물질은 이러한 용액이 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 12, 18, 20, 24, 30, 36, 40, 48, 54, 60, 66, 72 시간 또는 그 이상의 시간 동안 사용가능함을 표시하는 표지를 포함한다. 본 발명은 충전 물질 및 동결 건조된 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 포함하는 제 1의 바이얼 및, 지정된 완충액 또는 보존제의 수성 희석제를 포함하는 제 2의 바이얼을 포함하는 제품을 제공하는데, 충전 물질은 수성 희석제 내의 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체가 24 시간 또는 그 이상의 시간 동안 사용가능한 용액을 형성함을 표시하도록 재구성한다는 것을 환자에게 알려주는 표지를 포함한다.

본 발명에 따라 사용되는 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체는 포유동물 세포 또는 트랜스제닉 제제를 포함하는 재조합 수단에 의해 제조될 수 있거나, 본 명세서에서 기술되거나 업계에 공지된 바와 같이 다른 생물학적 공급원으로부터 정제될 수 있다.

본 발명의 생산에서 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 범위는 습윤/건조 시스템인 경우, 비록 더 낮거나 높은 농도가 사용가능하고 원하는 전달 매체에 의존적이고, 예를 들면 용액 제제는 피부통과 패치, 폐, 점막투과, 또는 삼투압 또는 마이크로 펌프 방법과 다르지만, 재구성에 의해 약 1.0 μg/ml 내지 약 1000 mg/ml 농도의 양을 포함한다.

바람직하게 수성 희석제는 약제학적으로 허용가능한 보존제를 임의로 더 포함한다. 바람직한 보존제는 페놀, m-크레졸, p-크레졸, o-크레졸, 클로로크레졸, 벤질 알코올, 알킬파라벤(메틸, 에틸, 프로필, 부틸 등), 벤잘코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드, 소듐 디히드로아세테이트 및 티머로살, 또는 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된 것을 함유한다. 제제 내에 사용된 보존제의 농도는 항-미생물 효과를 내기에 충분한 농도이다. 이러한 농도는 선택된 보존제에 의존하고 당업자에 의해 쉽게 결정된다.

다른 부형제, 예를 들면 등장화제, 완충액, 항산화제, 보존성 증강제가 희석제에 부가되는 것이 임의적이고 바람직하다. 글리세린과 같은 등장화제는 공지된 농도에서 통상 사용된다. 생리학적으로 허용되는 완충액은 향상된 pH 제어를 제공하도록 바람직하게는 부가된다. 제제는 약 pH 4 내지 약 pH 10과 같은 넓은 범위의 pH를 포함하고, 바람직한 범위는 약 pH 5 내지 약 pH 9이고, 가장 바람직한 범위는 약 6.0 내지 약 8.0이다. 바람직하게는 본 발명의 제제는 약 6.8 내지 약 7.8 사이의 pH를 갖는다. 바람직한 완충액는 인산 완충액, 더욱 바람직하게는 인산염, 특히, 인산 완충된 식염수(PBS)를 포함한다.

Tween 20 (폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노라우레이트), Tween 40 (폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노팔미테이트), Tween 80 (폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올리에이트), Pluronic F68(폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 블락 코폴리머) 및 PEG(폴리에틸렌 글리콜) 또는 폴리소르베이트 20 또는 80 또는 폴록사머 184 또는 188, Pluronic^® polyls 같은 비이온 계면활성제, 기타 블록 코-폴리머, EDTA 및 EGTA 같은 킬레이트제 같은 다른 첨가제는 응집을 감소시키기 위해 제제 또는 조성물에 임의로 부가될 수 있다. 이들 첨가제는 펌프 또는 플라스틱 용기가 제제를 투여하는데 사용되면 특히 유용하다. 약제학적으로 허용가능한 계면활성제의 존재는 단백질 응집 성향을 완화한다.

본 발명의 제제는 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 및, 수성 희석제 내의 페놀, m-크레졸, p-크레졸, o-크레졸, 클로로크레졸, 벤질 알코올, 알킬파라벤(메틸, 에틸, 프로필, 부틸 등), 벤제소늄 클로라이드, 소듐 디히드로아세테이트 및 티머로살 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된 보존제를 혼합하는 것을 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다. 수성 희석제 내의 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 및 보존제의 혼합은 통상의 용해 및 혼합 절차를 이용하여 수행한다. 적절한 제제를 제조하기 위해, 예를 들면, 완충액 용액 내의 계량된 양의 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 소기의 농도로 단백질 및 보존제를 제공하는데 충분한 양의 완충액된 용액 내의 소기 보존제와 조합시킨다. 본 공정의 변형은 당업자에 의해 인식될 것이다. 예를 들면, 성분을 가하는 순서, 부가적 첨가제가 사용되는지 여부, 제제가 제조되는 온도 및 pH는 모두 사용된 투여 수단 및 농도에 대해 최적화될 수 있는 인자이다.

청구되는 제제는 맑은 용액으로서, 또는, 물, 보존제 및/또는 부형제, 바람직하게는 인산 완충액 및/또는 식염수 및 선택된 염을 수성 희석제 내에서 포함하는 제 2의 바이얼과 함께 재구성되는 동결 건조된 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 바이얼을 포함하는 이중 바이얼로서 환자에 제공될 수 있다. 단일 용액 바이얼 또는 재구성을 요구하는 이중 바이얼은 수회 재사용될 수 있고, 단일 또는 여러 주기의 환자 치료에 충분하고 따라서 현재 사용되는 것보다 더욱 편리한 치료 요법을 제공할 수 있다.

본원에서 청구된 제품은 즉시부터 24 시간 또는 그 이상에 걸쳐 투여하는데 유용하다. 따라서, 현재 청구된 제품은 환자에게 상당한 이점을 준다. 본 발명의 제제는 약 2 내지 약 40℃의 온도에서 안정하게 보존될 수 있고, 연장된 시간 동안 생물학적 단백질 활성을 유지하고, 따라서 용액이 6, 12, 18, 24, 36, 48, 72 또는 96 시간 또는 그 이상에 걸쳐 이용 및/또는 보조될 수 있는 용액을 표시하는 포장 표지를 허용한다. 보존된 희석제가 사용된 경우, 이러한 표지는 1-12 개월, 반년, 1년 반 및/또는 2년의 사용을 포함할 수 있다.

본 발명에서 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 용액은 수성 희석제에 적어도 하나의 적어도 하나의 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 혼합하는 것을 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다. 혼합은 통상의 용해 및 혼합법을 사용하여 수행한다. 적절한 희석제를 제조하기 위하여 예를 들면, 물 또는 완충액 중 적절한 적어도 하나의 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 계량된 양을 단백질 및 임의로 방부제 또는 완충액을 원하는 농도로 제공하기에 충분한 양으로 배합한다. 본 공정의 변형은 당업자에 의해 인식될 것이다. 예를 들면, 성분을 가하는 순서, 부가적 첨가제가 사용되는지 여부, 제제가 제조되는 온도 및 pH는 모두 사용된 투여 수단 및 농도에 대해 최적화될 수 있는 인자이다.

청구된 제품은 수성 희석제를 포함하는 제 2의 바이얼과 함께 재구성된 동결 건조된 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 바이얼을 포함하는 이중 바이얼 또는 맑은 용액으로서 환자에 제공될 수 있다. 단일 용액 바이얼 또는 재구성을 요하는 이중 바이얼은 수회 재사용될 수 있고, 단일 또는 여러 주기의 환자 치료에 충분하고 따라서 현재 사용되는 것보다 더욱 편리한 치료 요법을 제공할 수 있다.

청구되는 제품은 약국, 병원, 또는 다른 기관 및 기구에, 수성 희석제를 포함하는 제 2의 바이얼과 함께 재구성된 동결 건조된 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 바이얼을 포함하는 이중 바이얼 또는 맑은 용액을 제공하여 환자에 간접적으로 제공될 수 있다. 이 경우 투명 용액는 1리터 이상 일 수 있고, 이는 소량의 적어도 하나의 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 용액이 소량의 바이얼로 전달되기 위해 단회 또는 다회 회수될 수 있고 약국 또는 병원에 의해 손님 및/또는 환자에게 제공되는 다량 저장고를 제공한다.

이들 단일 바이얼 시스템을 포함하는 인식 장치는 용액 전달을 위한 펜-인젝터를 포함하며, 예로서, BD Pens, BD Autojector^®, Humaject^®, NovoPen^®, B-D^® Pen, AutoPen^®, 및 OptiPen^®, GenotropinPen^®, Genotronorm Pen^®, Humatro Pen^®, Reco-Pen^®, Roferon Pen^®, Biojector^®, Iject^®, J-tip Needle-Free Injector^®, Intraject^®, Medi-Ject^®, 예: Becton Dickensen (Franklin Lakes, NJ, www. bectondickenson. com), Disetronic (Burgdorf, Switzerland, www. disetronic. com; Bioject, Portland, Oregon (www. bioject. com); National Medical Products, Weston Medical (Peterborough, UK, www. weston-medical. com), Medi-Ject Corp (Minneapolis, MN, www. mediject. com)으로부터 제조되거나 개발된 것을 포함한다. 이중 바이얼 시스템을 포함하는 인식 장치는 HumatroPen^®과 같은 재구성 용액의 전달을 위한 카트리지 내 동결 건조 약물을 재구성용 펜-인젝터 시스템을 포함한다.

청구되는 제품은 포장 재료를 포함한다. 포장 재료는 조절 기구에 의해 요구되는 정보 외에 제품을 사용할 수 있는 조건을 제공한다. 본 발명의 포장 재료는 2 개의 바이얼, 습윤/건조 제품에 대하여 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 수성 희석제에서 재구성하여 용액을 제조하고 상기 용액을 2-24시간 이상의 기간 동안 사용하도록 하는 지시사항을 환자에게 제공한다. 단일 바이얼, 용액 제품에 대하여 표지는 상기 용액을 2-24시간 이상의 기간 동안 사용할 수 있음을 지시한다. 청구되는 제품은 인간 약제학적 제품 용도로 유용하다.

본 발명의 제제는 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 및 선택된 완충액, 바람직하게 염수 또는 선택된 염을 포함하는 인산 완충액과 혼합하는 것을 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다. 수성 희석제내 적어도 하나의 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 및 완충액을 혼합하는 것은 통상의 희석법 및 혼합법에 의해 수행된다. 적절한 제제를 제조하기 위하여 물 또는 완충액중 계량된 양의 적어도 하나의 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체는 원하는 농도로 단백질 및 완충액을 제공하기 충분한 양으로 물중 원하는 완충제와 혼합한다. 본 공정의 변형은 당업자에 의해 인식될 것이다. 예를 들면, 성분을 가하는 순서, 부가적 첨가제가 사용되는지 여부, 제제가 제조되는 온도 및 pH는 모두 사용된 투여 수단 및 농도에 대해 최적화될 수 있는 인자이다.

청구되는 안정 또는 보존 제제는 수성 희석제 또는 완충액 및 수성 희석제 내 부형제를 포함하는 제 2의 바이얼과 함께 재구성된 동결 건조된 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 바이얼을 포함하는 이중 바이얼 또는 맑은 용액으로서 환자에 제공될 수 있다. 단일 용액 또는 재구성을 요하는 이중 바이얼은 수회 재사용될 수 있고, 단일 또는 여러 주기의 환자 치료에 충분하고 따라서 현재 사용되는 것보다 더욱 편리한 치료 요법을 제공할 수 있다.

본 발명에 개시된 안정 또는 보존 제제 또는 용액 내의 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체는 당업계에 공지된 바와 같이 SC 또는 IM 주사; 경피, 폐, 경점막, 이식, 삼투펌프, 카트리지, 마이크로 펌프, 또는 기술자에 이해되는 다른 방법에 의해 본 발명에 따른 환자에게 투여될 수 있다.

치료적 적용

본 발명은 또한 세포, 조직, 기관, 동물, 또는 환자에서, 한정하는 것은 아니나, 적어도 하나의 간질성 폐질환, 피부경화증, 간 섬유증, 신장 섬유증, 유육종증, 비후성 반흔, 켈로이드 반흔, 심장 섬유증, 연령 관련 황반 변성, 또는 아교질 혈관병 등을 포함하는, 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 섬유증과 관련된 증상 또는 병리증상을 조절하거나 치료하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 전체가 참조로서 본원에 포함되는, Merck Manual, 12th-17th Editions, Merck & Company, Rahway, NJ (1972, 1977, 1982, 1987, 1992, 1999), Pharmacotherapy Handbook, Wells et al., eds., Second Edition, Appleton 및 Lange, Stamford, Conn. (1998, 2000) 참조할 수 있다.

치유를 통한 상처 치료의 대부분은 형성된 새로운 조직이 원래의 조직(반흔 조직)과 구조적 및 화학적으로 다르다. 조직 치유의 이른 단계에서, 대부분 항상 관련있는 하나의 과정은 조직 상처 부위에서 일시적 연결 조직의 형성이다. 이 과정은 섬유아세포에 의한 새로운 세포외 콜라겐 기질의 형성에 의해 시작된다. 이어서 새로운 세포외 콜라겐 기질은 마지막 치료 과정 동안 연결 조직을 위한 지지체이다. 대부분의 조직에서 마지막 치료는 연결 조직을 포함하는 반흔 형성이다. 재생성 성질을 갖는 조직, 예를 들어, 피부 및 뼈에서, 마지막 치료는 원래 조직의 재생성을 포함한다. 이러한 재생성된 조직은 종종 일부의 반흔 특성, 예를 들어, 치료된 뼈 구조를 두껍게하는 특성을 갖는다.

일반적인 상처 치료의 단계는 염증(일반적으로 1-3일), 이동(일반적으로 1-6일), 증식(일반적으로 3-24일) 및 성숙(일반적으로 1-12 개월)을 포함한다. 치료 과정은 기질 성분의 합성뿐만 아니라 다양한 세포형의 이동, 증식 및 분화와 관련 있는 복잡하고 잘 편성된 생리학적 과정이다. 치료 과정은 하기의 3개의 시기로 분리될 수 있다:

i) 지혈 및 염증. 혈소판이 순환계 밖에 존재하고 트롬빈 및 콜라겐에 노출될 경우, 이들은 활성화되고 응집된다. 따라서, 혈소판은 지혈을 확실하게 하고 박테리아로부터의 침입을 막기 위하여 일시적인 플러그를 형성하고 응집함에 따라 치유 과정을 개시한다. 활성화된 혈소판은 응고 시스템 및 방출 성장 인자 유사 혈소판으로 유래 성장 인자(PDGF) 및 상피 성장 인자(EGF) 및 변형 성장 인자(TGF)를 개시한다. 상처 영역을 침입하는 제 1의 세포는 호중성 백혈구이고 그 다음으로는 마크로 파지에 의해 활성화된 단핵구이다.

호중성 백혈구의 중요한 역할은 상처를 치유하거나 박테리아 오염에 대하여 상처를 방어하고 죽은 세포 및 혈소판을 제거함으로써 상처의 치료를 개선시키는 것으로 나타났다. 호중성 백혈구의 침윤은 상처에 박테리아의 오염이 존재하지 않는다면 약 제 1의 48시간 이내에 중지된다. 과도한 호중성 백혈구는 혈액-뼈 단핵구의 순환 풀로부터 보충된 조직 마크로파지에 의해 식균작용을 한다. 마크로파지는 그들이 또한 병원성 개체의 식세포작용 및 조직 파편을 제거하는 역할을 하므로 효과있는 상처 치료에 필수적이라고 사료된다. 또한, 그들은 치료 과정의 연속된 일련의 과정과 관련된 많은 인자를 방출한다. 마크로파지는 콜라겐의 생산을 시작하는 섬유아세포를 공격한다.

ii) 과립 조직 형성 및 재-상피화. 상처 후 48 시간 이내에, 섬유아세포는 상처 가장자리에서 연결 조직으로부터 증식 및 상처 공간으로 이동하기 시작한다. 섬유아세포는 콜라겐 및 글리코사미노글리칸을 생산하고 특히 상처에서 낮은 산소 분압은 내피 세포의 증식을 자극한다. 내피 세포는 새로운 모세관 그물을 형성한다.

콜라게나제 및 플라스미노겐 활성자는 케라티노사이트로부터 분비된다. 상처가 교란되지 않고 산소와 영양분으로 잘 보호된다면, 케라티노사이트는 상처를 통하여 이동할 것이다. 케라티노사이트는 단지 생존가능한 조직을 통하여 이동하는 것으로 사료되고, 따라서, 케라티노사이트는 죽은 조직 및 상처의 딱지 아래의 영역으로 이동한다. 상처 영역은 또한 수축에 의해 감소된다.

iii) 진피 개조. 재-상피화가 완결되자마자 조직의 개조가 시작된다. 몇 년 동안 지속되는 이 시기는 상처 조직에 대한 강도를 회복시킨다.

상기 언급한 모든 치료 과정은 상당한 시간이 든다. 치료 속도는 감염으로부터의 상처의 해방, 개체의 유전적 건강, 이물질의 존재 등에 영향을 받는다. 감염, 수척해짐, 탈수, 유전적 약질 및 영양실조와 같은 일부 병리학적 증상은 만성 궤양, 예를 들어, 허혈성 궤양의 형성을 유도한다. 적어도 표면적으로 치료가 일어날 때까지, 상처는 지속되거나 새로운 감염의 위험이 남아있다. 그러므로, 상처를 빨리 치료할수록, 위험은 제거된다. 따라서, 상처 치료 속도에 영향을 줄 수 있거나 상처의 치료에 유리하게 영향을 줄 수 있는 임의의 절차는 매우 가치있다. 또한, 거의 모든 조직의 치유 과정은 이른 연결 조직 형성을 포함하므로, 이러한 자극 및 연속된 과정은 조직 치료를 개선한다고 예상된다.

본 명세서에서 용어 "임상적 치료"는 조직 방해가 육안적으로 관찰되지 않고 단지 염증의 개별적 신호가 밝은 붉은색 또는 개별적으로 팽창된 조직으로 존재할 경우의 상태를 언급하는데 사용된다. 또한, 기관을 쉬게 하거나 건드리지 않을 경우 고통이 존재하지 않는다.

상술한 바와 같이, 본 발명은 상처 치료제로서, 즉 진피 또는 점막 상처의 치료를 가속화, 촉진 또는 증진시키는 약제로서 에나멜 기질, 에나멜 기질 유도체 및/또는 에나멜 기질 단백질의 용도에 관한 것이다. 따라서, 중요한 용도는 또한 조직 재생성 및/또는 치유제로서의 용도이다. 또한, 상처 치료 효과에 기인한 에나멜 기질, 에나멜 기질 유도체 및/또는 에나멜 기질 단백질은 고통 완화 효과를 갖는다.

이러한 방법은 이러한 조절, 치료 또는 요법을 요하는 세포, 조직, 기관, 동물 또는 환자에 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 포함하는 유효량의 적어도 하나의 조성물 또는 약제학적 조성물을 투여하는 것을 임의로 포함할 수 있다.

치료적 치료. 본 발명의 임의의 방법은 조절, 처리 또는 치료가 필요한 세포, 조직, 기관, 동물 또는 환자에 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 포함하는 유효량의 조성물 또는 약제학적 조성물을 투여하는 것을 포함하는 IL-4 또는 IL-13 섬유증 매개 장애를 치료하는 방법을 포함할 수 있다.

전형적으로, 병리적 증상의 치료는 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 관련 단백질 조성물의 유효량 또는 투여량에 의해 영향을 받고, 전체, 평균, 범위는 투여량 당 환자의 킬로그램 당 0.01 내지 500 밀리그램의 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체, 바람직하게는 조성물에 포함된 특정 활성에 따라 단일 또는 다중 투여 당 환자의 킬로그램 당 적어도 약 0.1 내지 100 밀리그램 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체이다. 또한 유효 혈청 농도는 단일 또는 다중 투여 당 0.1-5000 μg/ml 혈청 농도를 포함할 수 있다. 적합한 투여량은 임상의에 의해 잘 알려져 있고, 물론, 특정 질환의 상태, 투여되는 조성물의 특정 활성 및 치료될 특정 환자에 좌우될 것이다. 예컨대, 목적하는 치료적 투여량을 얻기 위해, 반복된 투여, 즉, 특정 모니터된 또는 계량된 투여량을 반복하여 개인에게 투여하는 것이 필요하며, 여기서, 개인 투여는 원하는 하루 투여량 또는 효과가 달성될 때까지 계속한다.

바람직한 투여량은 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 및/또는 100 mg/kg/투여 또는 임의의 범위, 그의 값 또는 이의 분율을 포함하거나, 단일 또는 다중 투여당 0.1, 0.5, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.5, 1.9, 2.0, 2.5, 2.9, 3.0, 3.5, 3.9, 4.0, 4.5, 4.9, 5.0, 5.5, 5.9, 6.0, 6.5, 6.9, 7.0, 7.5, 7.9, 8.0, 8.5, 8.9, 9.0, 9.5, 9.9, 10, 10.5, 10.9, 11, 11.5, 11.9, 20, 12.5, 12.9, 13.0, 13.5, 13.9, 14.0, 14.5, 4.9, 5.0, 5.5., 5.9, 6.0, 6.5, 6.9, 7.0, 7.5, 7.9, 8.0, 8.5, 8.9, 9.0, 9.5, 9.9, 10, 10.5, 10.9, 11, 11.5, 11.9, 12, 12.5, 12.9, 13.0, 13.5, 13.9, 14, 14.5, 15, 15.5, 15.9, 16, 16.5, 16.9, 17, 17.5, 17.9, 18, 18.5, 18.9, 19, 19.5, 19.9, 20, 20.5, 20.9, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 96, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500 및/또는 5000 μg/ml 혈청 농도 또는 임의의 범위, 그의 값의 혈청 농도를 달성하기 위한 투여량을 임의로 포함할 수 있다.

택일적으로, 상기 투여량은 공지의 인자, 예컨대, 특정 약제의 약물동력학적 특성, 그의 투여 방식 및 경로; 수용자의 연령, 건강 및 체중; 증상의 특징 및 정도, 병행 치료의 종류, 치료의 횟수, 원하는 효과에 의해 변화될 수 있다. 일반적으로, 활성 물질의 투여량은 체중의 킬로그램 당 약 0.1 내지 100 밀리그램일 수 있다. 통상 투여 당 킬로그램 당 0.1 내지 50, 및 바람직하게는 0.1 내지 10 밀리그램 또는 서방성 유출 형태가 목적하는 결과를 달성하기에 효과적이다.

비제한적인 예로서, 인간 또는 동물의 치료는 1일당 0.5, 0.9, 1.0, 1.1, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100 mg/kg과 같이, 0.1 내지 100 mg/kg을 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 또는 40의 적어도 하나의 일, 또는 택일적으로 또는 추가적으로, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 또는 52의 적어도 하나의 주, 또는 택일적으로 또는 추가적으로, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20의 적어도 하나의 년에, 본 발명의 적어도 하나의 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 일회 또는 기간적인 투여량, 또는 이의 임의의 조합, 단독 사용, 융합 또는 반복 투여로서 제공될 수 있다.

체내 투여에 적합한 투여량 형태(조성물)는 일반적으로 유닛 또는 용기당 활성 성분의 약 0.1 밀리그램 내지 약 500 밀리그램을 포함한다. 약제학적 조성물에서, 활성 성분은 일반적으로 조성물의 전체 무게에 기초하여 약 0.5-99.999 중량%의 양으로 존재한다.

비경구 투여를 위해, 상기 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체는 약제학적으로 허용되는 비경구 비히클과 복합 또는 분리되어 제공되는 용액, 현탁액, 에멀젼, 입자, 분말 또는 냉동 건조된 분말로 제제화될 수 있다. 상기 비히클의 예는 물, 식염수, 링거액, 덱스트로즈 용액 및 1-10% 인간 혈청 알부민이다. 리포좀 및 고정된 오일과 같은 비수성 비히클도 사용될 수 있다. 비히클 또는 동결 건조된 분말은 등장성을 유지하기 위한 첨가제(예, 염화나트륨, 만니톨) 및 화학적 안정성을 유지하기 위한 첨가제(예, 완충액 및 보존제)를 포함할 수 있다. 상기 제제는 공지 또는 적절한 기술로서 멸균된다.

적절한 약제학적 담체는 본 기술의 표준 참조인 Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol의 최신판에 기재되어 있다.

대체 투여

많은 공지 및 개발된 유형을 약제학적 유효량의 본 발명에 따른 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 투여하기 위해 본 발명에서 사용할 수 있다. 폐 투여가 하기와 같이 사용되지만, 다른 투여 유형이 적절한 결과를 위해 본 발명에 사용될 수 있다.

본 발명의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질은 흡입에 의한 투여에 적합한 다양한 모든 장치 및 방법 또는 공지된 다른 방법을 사용하여 용액, 에멀젼, 콜로이드 또는 현탁액 또는 건조 분말과 같은 담체 내에서 전달될 수 있다.

비경구 제제 및 투여

비경구 투여를 위한 제제는 통상의 부형제로서 멸균수 또는 식염수, 폴리에틸렌글리콜과 같은 폴리알킬렌글리콜, 식물 기원의 오일, 수소화 나프탈렌 등을 함유할 수 있다. 주사용 수성 또는 유성 현탁액은 공지의 방법에 따라 적절한 유화제 또는 습윤제 및 현탁화제를 사용하여 제조할 수 있다. 주사용 약제는 용매 중에 수용액 또는 멸균 주사용액 또는 현탁액과 같은 비독성의, 비경구 투여가능한 희석제일 수 있다. 사용가능한 운반체 또는 용매로서, 물, 링거액, 등장성 식염수 등이 허용된다; 보통의 용매 또는 현탁화제로서, 멸균 비휘발성 오일을 사용할 수 있다. 이들 목적을 위하여, 천연 또는 합성 또는 반합성 지방 오일 또는 지방산을 포함하여 임의의 종류의 비휘발성 오일과 지방산을 사용할 수 있다. 비경구 투여가 당업계에 알려져 있으며, 전체가 참조로서 본원에 포함되는, 미국 특허 제5,851,198호에 기재된 바와 같은 가스 가압 무-바늘 주사 장치 및 미국 특허 제5,839,446호에 기재된 바와 같은 레이저 천공 장치와 같은 통상적인 주사 수단을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다.

대체 전달

본 발명은 또한 비경구, 피하, 근육내, 정맥내, 볼루스, 질내, 직장내, 구강내, 설하, 비내, 또는 경피 수단에 의해 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 투여에 관한 것이다. 항-IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물은 특히 비경구 (피하, 근육내 또는 정맥내) 투여를 위해 액체 용액 또는 현탁액의 형태로; 특히 질내 또는 직장내 투여를 위해 크림 및 좌약과 같은 반고체 형태로; 특히 구강내 또는 설하 투여를 위해 정제 또는 캡슐제의 형태로; 또는 분말, 비강내 드롭 또는 에어로졸 또는 특정 제제 형태로 비강내로; 또는 겔, 연고, 로션, 현탁액 또는 패치 운반 시스템에서, 피부 구조를 변형시키거나 경피 패치에서 약물 농도를 증가시키기 위하여, 디메틸설폭사이드와 같은 화학적 증진제와 함께(Junginger, et al. In "Drug PermeationEnhancement"; Hsieh, D. S., Eds., pp. 59-90 (Marcel Dekker, Inc. New York 1994, 전체를 참조로서 인용함), 또는, 피부에 단백질과 펩티드를 함유하는 제제의 적용(WO 98/53847), 또는 전기천공과 같은 일시적인 수송 경로를 만들거나, 이온 삼투요법과 같은 피부를 통한 전하를 띤 약물의 이동성을 증가시키는 전기장의 적용, 또는 초음파 치료와 같은 초음파의 적용(미국 특허 제4,309,989호 및 제4,767,402호)을 가능하게 하는 산화제와 함께, 특히 경피 투여를 위해 제조될 수 있다(상기 간행물 및 특허는 전체가 참조로서 인용된다).

폐/비강내 투여

폐 투여를 위해, 바람직하게는 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물은 폐 또는 동(sinus)의 하부 기도에 도달하기 위해 유효한 입자 크기로 전달된다. 본 발명에 따르면, 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체는 흡입에 의해 치료제를 투여하기 위한 당업계에 공지된 임의의 다양한 흡입 또는 비강내 장치에 의해 전달된다. 환자의 동강 또는 폐포에서 에어로졸화된 제제를 침적할 수 있는 이들 장치는 계측 투여량 흡입기, 분무기, 건조 분말 생성기, 스프레이어 등을 포함한다. Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 폐 또는 비강내 투여를 유도하는데 적당한 다른 장치 또한 당업계에 알려져 있다. 모든 이러한 장치는 에어로졸 중의 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 분배를 위한 투여에 적당한 제제를 사용할 수 있다. 이러한 에어로졸은 용액(수성 및 비수성) 또는 고체 입자로 구성될 수 있다. Ventolin^® 계측 투여량 흡입기와 같은 계측 투여량 흡입기는 전형적으로 추진 가스를 사용하고 흡입 중 작동을 요구한다(예를 들어 WO94/16970, WO98/35888 참조). Turbuhaler™(Astra), Rotahaler^®(Glaxo), Diskus^®(Glaxo), Spiros™ 흡입기(Dura), Inhale Therapeutics에 의해 시판된 장치, 및 Spinhaler^® 분말 흡입기(Fisons)와 같은 건조 분말 흡입기는 혼합 분말의 호흡-작동을 사용한다(US 4668218 Astra, EP 237507 Astra, WO 97/25086 Glaxo, WO 94/08552 Dura, US 5458135 Inhale, WO 94/06498 Fisons, 전체가 참조로서 인용된다). AUERx™ Aradigm, Ultravent^® 분무기(Mallinckrodt), 및 Acorn Ⅱ^® 분무기(Marquest Medical Products)(US 5404871 Aradigm, WO 97/22376)(상기 문헌들은 전체가 참조로서 인용된다)는 계측 투여량 흡입기, 건조 분말 흡입기 등이 소입자 에어로졸을 생성하는데 비해, 용액으로부터 에어로졸을 생산한다. 상업적으로 이용가능한 흡입 장치의 이들 특정 예들은 본 발명의 실시를 위해 적당한 특정 장치의 대표적인 예이며 본 발명의 범위를 제한하고자 하는 것은 아니다. 바람직하게는 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 포함하는 조성물은 건조 분말 흡입기 또는 스프레이어에 의해 전달된다. 본 발명의 적어도 하나의 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 투여하기 위한 흡입 장치의 몇몇 바람직한 특징이 있다. 예를 들어, 흡입 장치에 의한 전달은 우수하게 신뢰할 수 있고, 재현가능하며, 정확하다. 흡입 장치는 임의로 양호한 호흡성을 위해 예를 들어, 약 10 ㎛, 바람직하게는 약 1-5 ㎛의 소 건조 입자를 전달할 수 있다.

스프레이로서 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물의 투여

IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물 단백질을 포함하는 스프레이는 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 현탁액이나 용액을 가압 하의 노즐을 통해 통과시켜 제조할 수 있다. 노즐 크기와 형태, 적용되는 압력과, 액체 유입 속도를 원하는 결과와 입자 크기를 얻을 수 있도록 선택할 수 있다. 예를 들어, 전기스프레이를 모세관 또는 노즐 피드와 연결된 전기장에 의해 제조할 수 있다. 우수하게는, 스프레이어에 의해 전달되는 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물 단백질의 입자는 약 10 ㎛ 미만, 바람직하게는 약 1 ㎛ 내지 약 5 ㎛, 가장 바람직하게는 약 2 ㎛ 내지 약 3 ㎛의 입자 크기를 갖는다.

스프레이어와 사용하기에 적당한 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물 단백질의 제제는 전형적으로 용액 ㎖ 당, 약 0.1 ㎎ 내지 약 100 ㎎의 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물 단백질, 또는, ㎎/gm, 또는, 임의의 범위 또는 이의 수치의 농도, 예를 들어, 비한정적으로 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100 ㎎/㎖ 또는 ㎎/gm의 농도에서 수용액 중에 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물 단백질을 포함한다. 제제는 부형제, 완충제, 등장화제, 보존제, 계면활성제 및 바람직하게는 아연과 같은 약제를 포함할 수 있다. 제제는 또한 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물 단백질의 안정화를 위한 부형제 또는 약제, 예를 들어 완충제, 환원제, 벌크 단백질, 탄수화물을 포함할 수 있다. Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물 단백질을 제제화하는데 유용한 벌크 단백질은 알부민, 프로타민 등을 포함한다. Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물 단백질을 제제화하는데 유용한 전형적인 탄수화물은 수크로오스, 만니톨, 락토오스, 트레할로스, 글루코오스 등을 포함한다. Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물 단백질 제제는 또한 에에로졸 형성에서 용액의 분무에 의해 유발된 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물 단백질의 표면-유도된 응집을 감소시키거나 방지할 수 있는 계면활성제를 포함할 수 있다. 폴리옥시에틸렌 지방산 에스테르 및 알코올 및 폴리옥시에틸렌 솔비톨 지방산 에스테르와 같은 다양한 보편적인 계면활성제를 사용할 수 있다. 양은 일반적으로 제제의 0.001 내지 14 중량% 범위일 것이다. 본 발명의 목적에 특히 바람직한 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 솔비탄 모노올레에이트, 폴리솔베이트 80, 폴리솔베이트 20 등이다. IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질, 또는 특정 부분 또는 변형체와 같은 단백질 제제를 위해 당업계에 공지된 부가적인 약제 또한 제제에 포함될 수 있다.

분무기에 의한 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물의 투여

Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물 단백질은 제트 분무기 또는 초음파 분무기와 같은 분무기에 의해 투여될 수 있다. 전형적으로는, 제트 분무기에서, 압축 공기 소스를 사용하여 오리피스를 통하여 고속 공기 제트를 생성시킨다. 가스가 노즐을 넘어 팽창함에 따라, 저-압력 부분이 생겨, Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물 단백질의 용액을 액체 저장소에 연결된 모세관 튜브를 통해 끌어낸다. 모세관 튜브로부터의 액체 흐름은 튜브를 나갈 때 불안정한 필라멘트와 드롭렛으로 전단되어, 에어로졸을 생성시킨다. 일정 범위의 형태, 유속과 배플 유형을 사용하여 주어진 제트 분무기로부터 원하는 행동 특성을 얻을 수 있다. 초음파 분무기에서는, 고-주파 전기 에너지를 사용하여 전형적으로 압전성 튜랜스듀서를 사용하여 진동의, 기계적 에너지를 생성시킨다. 이 에너지는 직접 또는 커플링 유체를 통해 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물 단백질의 제제로 전달되어 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물 단백질을 포함하는 에어로졸을 생성시킨다. 우수하게는, 분무기에 의해 전달되는 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물 단백질의 입자는 약 10 ㎛, 바람직하게는 약 1 ㎛ 내지 약 5 ㎛, 가장 바람직하게는 약 2 ㎛ 내지 약 3 ㎛ 범위의 입자 크기를 갖는다.

제트 또는 초음파 분무기로 사용하기에 적당한 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 제제는 전형적으로 용액 ㎖ 당 약 0.1 ㎎ 내지 약 100 ㎎의 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 단백질을 포함한다. 제제는 부형제, 완충액, 등장화제, 보존제, 계면활성제, 및 바람직하게는 아연을 포함할 수 있다. 제제는 또한 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물 단백질의 안정화를 위한 부형제 또는 약제, 예를 들어 완충제, 환원제, 벌크 단백질, 또는 탄수화물을 포함할 수 있다. 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물 단백질을 제제화하는데 유용한 벌크 단백질은 알부민, 프로타민 등을 포함한다. 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 제제화하는데 유용한 전형적인 탄수화물은 수크로오스, 만니톨, 락토오스, 트레할로스, 글루코오스 등을 포함한다. 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 제제는 또한 에에로졸 형성에서 용액의 분무에 의해 유발된 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 표면-유도된 응집을 감소시키거나 방지할 수 있는 계면활성제를 포함할 수 있다. 폴리옥시에틸렌 지방산 에스테르 및 알코올 및 폴리옥시에틸렌 솔비톨 지방산 에스테르와 같은 다양한 보편적인 계면활성제를 사용할 수 있다. 양은 일반적으로 제제의 0.001 내지 4 중량% 범위이다. 본 발명의 목적에 특히 바람직한 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 솔비탄 모노올레에이트, 폴리솔베이트 80, 폴리솔베이트 20 등이다. Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 단백질과 같은 단백질의 제제를 위해 당업계에 공지된 부가적인 약제 또한 제제에 포함될 수 있다.

계측 투여량 흡입기에 의한 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물의 투여

계측 투여량 흡입기(MDI)에서, 추진제, 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 및 임의의 부형제 또는 다른 첨가제가 액화 압축 가스를 포함하는 혼합물로서 상자에 함유된다. 계측 밸브의 작동은 혼합물을 바람직하게는 약 10 ㎛ 미만, 바람직하게는 약 1 ㎛ 내지 5 ㎛, 가장 바람직하게는 약 2 ㎛ 내지 약 3 ㎛ 범위 크기의 입자를 함유하는 에어로졸로서 방출한다. 원하는 에어로졸 입자 크기는 제트-밀링, 분무 건조, 임계점 응축 등을 포함하는 당업자에게 공지된 다양한 방법에 의해 생산된 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물 단백질의 제제를 사용하여 수득될 수 있다. 바람직한 계측 투여량 흡입기는 히드로플루오로카본 추진제를 사용하며 3M이나 글락소에 의해 제작된 것들을 포함한다.

계측-투여량 흡입기 장치로 사용하기 위한 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 제제는 일반적으로 예를 들어, 계면활성제의 도움으로 추진제 중에 현탁된, 비수성 매질중의 현탁액으로서 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 함유하는 미세 분할 분말을 포함한다. 추진제는 트리클로로플루오로메탄, 디클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄 및 1,1,1,2-테트라플루오로에탄, HFA-134a(히드로플루로알칸-134a), HFA-227(히드로플루로알칸-227) 등을 포함하는, 클로로플루오로카본, 히드로플루오로카본, 히드로플루오로카본 또는 탄화수소와 같이, 이 목적을 위해 사용되는 임의의 통상적인 재료일 수 있다. 바람직하게는 추진제는 히드로플루오로카본이다. 계면활성제는 추진제 중에 현탁액으로서 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 안정화하거나, 활성 약물을 화학적 분해 등에 대해 보호하기 위하여 선택될 수 있다. 적당한 계면활성제는 솔비탄 트리올레에이트, 콩 레시틴, 올레산 등을 포함한다. 일부 경우 에탄올과 같은 용매를 사용하는 용액 에어로졸이 바람직하다. 단백질 제제를 위해 당업계에 공지된 부가적인 약제 또한 제제에 포함될 수 있다.

당업자는 본 발명의 방법이 여기에 기재되지 않은 장치를 통해 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 조성물의 폐 투여에 의해 달성될 수 있음을 인지할 것이다.

경구 제제 및 투여

경구 제제는 소장 벽의 투과성을 인공적으로 증가시키는 애쥬번트(예를 들어, 레조르시놀 및 폴리옥시에틸렌 올레일 에테르와 n-헥사데실폴리에틸렌 에테르와 같은 비이온성 계면활성제)의 공동-투여, 및 효소 분해를 저해하는 효소 저해제(예를 들어, 십이지장 트립신 저해제, 디이소프로필플루오로포스페이트(DFF) 및 트라실롤)의 공동-투여에 의존한다. 경구 투여를 위한 고형 제형의 활성 성분 화합물은 수크로오스, 락토오스, 셀룰로오스, 만니톨, 트레할로스, 라피노스, 말티톨, 덱스트란, 전분, 아가, 아르기네이트, 키틴, 키토산, 펙틴, 트라가칸트 검, 아라비아 검, 젤라틴, 콜라겐, 카제인, 알부민, 합성 또는 반합성 폴리머 및 글리세라이드를 포함하는 적어도 하나의 첨가제와 혼합될 수 있다. 이들 제형은 또한 다른 유형의 첨가제, 예를 들어 불활성 희석제, 마그네슘 스테아레이트, 파라벤과 같은 활택제, 알파-토코페롤, 아스코르브산, 소르브산과 같은 보존제, 시스테인과 같은 항산화제, 붕해제, 결합제, 증점제, 완충화제, 감미제, 향료, 방향제 등을 함유할 수 있다.

정제와 환제는 추가로 장용 제제로 가공될 수 있다. 경구 투여용 액체 제제는 의학적 용도에 허용되는 에멀젼, 시럽, 엘릭시르, 현탁액 및 용액 제제를 포함한다. 이들 제제는 당업계에서 보통 사용되는 불활성 희석제, 예를 들어 물을 함유할 수 있다. 리포좀이 또한 인슐린과 헤파린의 약물 전달 시스템으로서 기재된 바 있다(미국 특허 제4,239,754호). 더욱 최근에, 혼합된 아미노산(프로티노이드)의 인공적 폴리머 마이크로스피어가 약제를 운반하는 데 이용되었다(미국 특허 제 4,925,673호). 또한, 미국 특허 제5,879,681호 및 미국 특허 제5,5,871,753호에 기재된 담체 화합물이 당압계에 공지된 바와 같이 경구로 생물학적 활성 약물을 전달하는데 사용된다.

점막 제제 및 투여

점막 표면을 통한 흡수를 위하여, 적어도 하나의 L-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 투여하는 조성물 및 방법은 서브마이크론 입자, 점막부착 마크로분자, 생활성 펩티드 및 점막 표면을 통한 흡수를 증진시켜, 에멀젼 입자의 점막부착을 달성하는 수성 연속상을 포함하는 에멀젼을 포함한다(미국 특허 제5,514,670호). 본 발명의 에멀젼의 적용을 위해 적합한 점막 표면은 각막, 결막, 구강내, 설하, 비강, 질내, 폐, 위, 장 및 직장내 투여 경로를 포함할 수 있다. 질내 또는 직장내 투여를 위한 제제, 예컨대, 좌약은 부형제로서, 예를 들어, 폴리알킬렌글리콜, 바셀린, 코코아버터 등을 포함할 수 있다. 비내 투여를 위한 제제는 고체일 수 있으며, 부형제로서, 예를 들어, 락토오스를 포함할 수 있거나, 수성 또는 비강 점적제의 유성 용액일 수 있다. 구강내 투여에 대한 부형제는 당, 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 프리젤리네이틴된 녹말(pregelinatined starch) 등을 포함한다(미국 특허 제5,849,695호).

경피 제제 및 투여

경피 투여를 위해, 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체는 리포좀 또는 폴리머성 나노입자, 마이크로입자, 마이크로캡슐, 또는 마이크로스피어와 같은 전달 장치에 캡슐화된다(다르게 언급하지 않는 한 총괄적으로 마이크로입자로 언급한다). 폴리락트산, 폴리글리콜산 및 그의 코폴리머와 같은 폴리하이드록시산, 폴리오르소에스테르, 폴리언하이드라이드 및 폴리포스파진과 같은 합성 폴리머 및 콜라겐, 폴리아미노산, 알부민 및 기타 단백질, 알기네이트 및 다른 다당류와 같은 천연 폴리머, 및 그들의 배합물로 제조된 마이크로입자를 포함하는, 많은 적당한 장치가 알려져 있다(미국 특허 번호 5,814,599호).

장기 투여 및 제제

때때로 본 발명의 화합물을 대상에게 장시간, 예를 들어 단일 투여로부터 1 주 내지 1 년에 걸쳐 전달하는 것이 바람직할 수 있다. 다양한 서방성, 데포 또는 이식 제형을 사용할 수 있다. 예를 들어, 제형은 체액에서 낮은 용해도를 갖는 화합물의 약제학적으로 허용되는 비독성 염, 예를 들어 (a) 인산, 황산, 시트르산, 타르타르산, 탄닌산, 파모산, 알긴산, 폴리글루타민산, 나프탈렌 모노- 또는 디-설폰산, 폴리갈락투론산 등과 같은 다염기 산으로 산 부가된 염; (b) 아연, 칼슘, 비스무스, 바륨, 마그네슘, 알루미늄, 구리, 코발트, 니켈, 카드뮴 등과 같은 다가 금속 양이온 또는, 예를 들어, N,N'-디벤질-에틸렌디아민 또는 에틸렌디아민으로부터 형성된 유기 양이온을 갖는 염; 또는 (c) (a)와 (b)의 조합물, 예를 들어 아연 탄네이트 염을 함유할 수 있다. 부가적으로, 본 발명의 화합물, 또는 바람직하게는 상기한 바와 같은 상대적 불용성 염은 젤, 예를 들어, 주사에 적합한, 예를 들어 참깨유를 이용하여 알루미늄 모노스테아레이트 젤에서 제제화될 수 있다. 특히 바람직한 염은 아연 염, 아연 탄네이트 염, 파모에이트 염 등이다. 주사용의 또 다른 유형의 서방성 데포 제제는, 예를 들어, 미국 특허 제3,773,919호에 기재된 바와 같이 폴리락트산/폴리글리콜산 폴리머와 같이 서서히 분해되고, 비독성이며, 비-항원성인 폴리머에서 캡슐화되기 위해 분산된 화합물 또는 염을 함유한다. 화합물, 또는 바람직하게는 상기한 바와 같은 상대적 불용성 염은 또한 특히 동물에서 사용하기 위하여 콜레스테롤 매트릭스 실라스틱 펠렛으로 제제화될 수 있다. 부가적인 서방성 데포 또는 이식 제제, 예를 들어 가스 또는 액체 리포좀이 문헌에 알려져 있다(미국특허 제5,770,222호 및 "Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems", J. R. Robinson ed., Marcel Dekker, Inc., N.Y., 1978).

일반적으로 기재된 본 발명은 하기 실시예를 참조함으로써 보다 쉽게 이해될 수 있으나, 하기 실시예는 설명의 한 방편으로서, 본 발명을 제한하려는 의도는 아니다.

실시예 1: 포유류 세포에서 항-IL-4 또는 IL-13 면역글로불린 유래 단백질의 생성, 클로닝 및 발현

항-IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질을 공지의 방법, 예컨대, 인간 IL-4 또는 IL-13으로 면역화된 인간 항체를 발현하는 뮤린 또는 트랜스재닉 마우스를 사용하여 생산하고, IL-4 또는 IL-13에 대한 활성을 특정화하고 억제하기 위하여 공지된 방법 및 어세이, 예를 들어, 당업계에 공지되고 본원에 기술된 바와 같이, B 세포를 분리하고 클론하고 선별하였다(예를 들어, www.copewithcvtokines.de, IL-4 또는 IL-13에 대하여, IL-4 또는 IL-13 단백질에 대한 기술 및 참조를 위하여, IL-4 또는 IL-13 어세이 참조, 이들을 당업계에 공지된 바와 같이, 참조로서 전체가 본원에 포함된다).

본 발명의 항-IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질로서, IL-4 또는 IL-13 특정 항체 또는 융합 단백질을 발현하는 클론을 중화하거나 적어도 하나의 IL-4 또는 IL-13을 억제하기 위하여 선별하였고, 이는 당업계의 공지된 방법을 사용하여, 하기 기준의 적어도 3-7을 만족시켜야한다.

기준

1. 적어도 하나의 인간 야생형(wt) 재조합 또는 정제된 IL-4 또는 IL-13, IL-4 또는 IL-13 수용체 및/또는 다른 특정의 IL-4 또는 IL-13 돌연변이, 예컨대, 한정하는 것은 아니나, 서열 번호 42, 43 또는 44의 1-10, 10-20, 20-30, 30-40, 40-50, 50-60, 60-70, 70-80, 80-90, 90-100, 100-110, 110-120, 120-130, 130-140 및/또는 14-145개중 적어도 하나를 비롯하여, 1-145개의 아미노산으로서, 예를 들어, 한정하는 것은 아니나, 적어도 하나의 Ile48, Val48, Gln90, Glu90, Leu95, Ile95, Leu96, Ile96, Leu99, Ile99, Phe1O3, Tyr1O3, Asn130 및/또는 Gln130에 결합한다(ELISA에서).

2. 재조합 wt 인간 IL13 또는 IL-4 또는 IL-13 수용체에 대한 결합에는 특이적이나, 구조적으로 관련된 사이토카인, 인간 GM-CSF에 대해서는 그렇지 않다(ELISA에서).

3. 바람직하게 ND50 ≤ 1O nM로 인간 IL-4 또는 IL-13 수용체 또는 적절한 동물 IL-4 또는 IL-13 수용체와의 인간 재조합 wt 인간 IL13 상호작용을 억제한다.

4. 네가티브 대조군보다 인간 종양 TF-1 세포의 인간 야생형 인간 IL-4 또는 IL-13 의존 증식을 억제한다.

5. 0.5 nM 이하의 특정 돌연변이 또는 인간 IL13 wt에 대한 겉보기 Kd를 갖는다(BIAcore로 측정).

6. B9 어세이뿐만 아니라 네가티브 대조군보다 신선한 인간 B 세포에서의 인간 IL13 wt 재조합 인간 IL-4 또는 IL-13 의존 시험관 내 IgE 생산을 더욱 억제한다.

7. B9 어세이 및/또는 ELISA로 결정될 수 있는 바와 같이, 재조합 IL-4 또는 IL-13와 유사한 효능으로 네가티브 인간 IL13과 교차 반응한다.

중쇄, 경쇄 CDR, 가변 영역 또는 가변 및 불변 영역을 클론하고 적당한 발현 벡터로 삽입하였다. 전형적인 포유동물 발현 벡터는 mRNA, Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체 코딩 서열의 전사 개시와 전사체의 폴리아데닐화 및 전사의 종결에 필요한 신호를 매개하는 적어도 하나의 프로모터 요소를 함유한다. 부가적인 요소는 인핸서, 코작(kozak) 서열 및 RNA 스플라이싱의 공여자 및 수용자 부위에 의해 연결되는 중간 서열을 포함한다. 고 효율 전사는 SV40으로부터의 초기 및 후기 프로모터, 레트로바이러스, 예를 들어 RSV, HTLVI, HIVI로부터의 말단 반복 서열(LTR), 및 사이토메갈로바이러스(CMV)의 초기 프로모터로 달성될 수 있다. 그러나, 세포 인자 또한 사용될 수 있다(예: 인간 액틴 프로모터). 본 발명을 실시하는데 사용하기에 적합한 발현 벡터는 예를 들어, pIRES1neo, pRetro-Off, pRetro-On, PLXSN 또는 pLNCX(Clonetech Labs, Palo Alto, CA), pcDNA3.1(+/-), pcDNA/Zeo(+/-) 또는 pcDNA3.1/Hygro(+/-)(Invitrogen), PSVL 및 PMSG(Pharmacia, Uppsala, Sweden), pRSVcat(ATCC37152), pSV2dhfr(ATCC 37146) 및 pBC12MI(ATCC 67109)와 같은 벡터를 포함한다. 사용될 수 있는 포유류 숙주 세포는 인간 Hela 293, H9 및 Jurkat 세포, 마우스 NIH3T3 세포 및 C127 세포, Cos 1, Cos 7 및 CV 1, 퀘일 QC1-3 세포, 마우스 L 세포 및 중국 햄스터 난소(CHO) 세포를 포함한다.

다르게는, 유전자는 염색체로 도입된 유전자를 함유하는 안정한 세포주에서 발현될 수 있다. dhfr, gpt, 네오마이신 또는 하이그로마이신과 같은 선별 마커 로의 공동-트랜스펙션은 트랜스펙션된 세포의 확인 및 분리를 가능하게 한다.

트랜스펙션된 유전자는 또한 대량의 코딩된 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 발현하도록 증폭될 수 있다. DHFR(디하이드로폴레이트 환원효소) 마커는 관심 있는 유전자의 수백 또는 수천 카피를 운반하는 세포주를 발생시키는데 유용하다. 다른 유용한 선별 마커는 효소 글루타민 합성효소(GS)(Murphy et al., Biochem J. 227: 277-279(1991); Bebbington et al., Bio/Technology10: 169-175(1992))이다. 이들 마커를 사용하여, 포유 세포를 선별 배지에서 증식시키고 최고의 내성을 갖는 세포를 선별한다. 이들 세포주는 염색체로 도입된 증폭 유전자(들)을 함유한다. 중국 햄스터 난소(CHO) 및 NSO 세포는 종종 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 생산에 사용된다.

발현 벡터 pC1 및 pC4는 라우스 사르코마 바이러스의 강력한 프로모터(LTR)(Cullen et al., Molec. Cell. Biol. 5: 438-447(1985))와 CMV-인핸서(Boshart et al., Cell 41: 521-530(1985)의 단편을 함유한다. 예를 들어 제한효소 절단 위치 BamHⅠ, XbaⅠ 및 Asp718을 갖는, 다중 클로닝 부위는 관심 있는 유전자의 클로닝을 용이하게 한다. 벡터들은 부가적으로, 랫 프리프로인슐린 유전자의 3' 인트론, 폴리아데닐화 및 종결 신호를 함유한다.

CHO 세포에서 클로닝 및 발현

벡터 pC4를 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체의 발현을 위해 사용하였다. 플라스미드 pC4는 플라스미드 pSV2-dhfr(ATCC 수탁 번호 37146)의 유도체이다. 상기 플라스미드는 SV40 초기 프로모터의 조절 하에 있는 마우스 DHFR 유전자를 포함한다. 상기 플라스미드에 트랜스펙션되어 디히드로폴레이트 활성을 상실한 중국 햄스터 난소 또는 다른 세포는 선택적 배지(예, 알파 마이너스 MEM, Life Technologies, Gaithersburg, MD)에서 화학치료제인 메토트렉세이트(MTX)를 첨가하여 세포를 증식시켜 선택할 수 있다. 메토트렉세이트(MTX)에 내성인 세포에서 DHFR 유전자의 증폭은 문헌에 잘 나타나 있다(참조, 예, F. W. Alt, et al., J. Biol. Chem. 253: 1357-1370 (1978) ; J. L. Hamlin and C. Ma, Biochem. et Biophys. Acta 1097: 107-143 (1990); 및 M. J. Page 및 M. A. Sydenham, Biotechnology 9: 64-68 (1991)). DHFR 유전자의 증폭의 결과로서, DHFR, 표적 효소를 과생산함에 의해 약물에 내성을 만드는 MTX 농도의 증가에서 세포를 배양하였다. 만일 2차 유전자가 DHFR 유전자에 링크된다면, 일반적으로 공동 발현 및 과발현된다. 증식된 유전자의 1,000 카피 이상을 운반하는 세포주의 개발을 위해 수행되는 이러한 연구는 당업계에 공지되어 있다. 계속하여, 메토트렉세이트를 철회하면, 숙주세포의 하나 이상의 크로모좀(들) 내로 삽입된 증폭된 유전자를 포함하는 세포주가 얻어진다.

관심 유전자를 발현시키기 위해, 플라스미드 pC4는 로우스 사르코마 바이러스의 긴 말단 반복(LTR)의 강한 프로모터(Cullen, et al., Molec.Cell.Biol. 5: 438-447 (1985))와 인간 사이토메갈로바이러스(CMV)의 초기 유전자의 인핸서로부터 분리된 단편(Boshart, et al., cell 41: 521-530 (1985))을 함유한다. 프로모터의 다운스트림은 유전자의 포함을 허용하는 BamHI, XbaI 및 Asp718 제한 효소 절단 부위이다. 이들 클로닝 부위 외에, 플라스미드는 랫트의 프리프로인슐린 유전자의 3' 인트론 및 폴리아데닐화 부위를 함유한다. 예컨대, 인간 b-액틴 프로모터, SV40 초기 또는 후기 프로모터 또는 다른 레트로바이러스, 예컨대, HIV 및 HTLⅥ에서 유래된 긴 말단 반복과 같은 다른 고효율 프로모터가 또한 발현을 위해 이용될 수 있다. 클론테크사의 Tet-Off 및 Tet-On 유전자 발현 시스템 및 유사한 시스템이 포유동물 세포에서의 조절된 방식으로 IL-4 또는 IL-13을 발현시키기 위해 사용될 수 있다(M.Gossen, and H.Bujard, Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89: 5547-5551(1992)). mRNA의 폴리아데닐화를 위해 예컨대, 인간 성장 호르몬 또는 글로빈 유전자로부터의 다른 신호가 또한 잘 이용될 수 있다. 염색체 내로 포함된 관심 유전자를 운반하는 안정한 세포주는 또한 gpt, G418 또는 히그로마이신과 같은 선별 마커와 공-트랜스펙션되어 선택될 수 있다. 하나 이상의 선별 마커, 예컨대, G418 플러스 메토트렉세이트를 초기에 사용하는 것이 유리하다.

플라스미드 pC4를 제한효소로 소화시킨 후, 당업계에 공지된 방법에 따라 송아지 장 포스파타제를 이용하여 상기 제한효소를 탈인산화시켰다. 그 후, 벡터를 1% 아가로스 겔에서 분리하였다.

공지의 방법 단계에 따라, 본 발명의 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질의 HC 및 LC 가변 영역에 상응하는 완전한 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질 또는 특정 부분 또는 변형체를 코딩하는 DNA 서열을 이용하였다. 적절한 인간 불변 영역(즉, HC 및 LC 영역)을 코딩하는 분리된 핵산도 또한 본 작제물(예를 들어, 벡터 p1351에서 제공된 것)에서 사용된다.

상기 분리된 가변 및 불변 영역을 암호화하는 DNA 및 탈인산화된 벡터를 그후 T4 DNA 라이게이즈로 라이게이션시켰다. E. coli HB101 또는 XL-1 Blue 세포를 형질전환하고, 예컨대, 제한 효소 분석을 사용하여 플라스미드 pC4가 삽입된 단편을 함유하는 박테리아를 확인하였다.

활성이 있는 DHFR 유전자가 결핍된 중국 햄스터 난소(CHO) 세포를 트랜스펙션에 이용하였다. 5 ㎍의 발현 플라스미드 pC4를 0.5 ㎍의 플라스미드 pSV2-neo에 리포펙틴을 사용하여 공동트랜스펙션시켰다. 플라스미드 pSV2neo는 주된 선별 마커, G418를 포함하는 항생제 군에 내성을 부여하는 효소를 암호화하는 Tn5로부터의 네오 유전자를 포함한다. 세포를 1 ㎍/㎖ G418이 보충된 알파 마이너스 MEM에서 파종하였다. 2일 후, 세포를 트립신으로 처리하고, 10, 25 또는 50 ng/㎖의 메토트렉세이트 플러스 1 ㎍/㎖ G418를 보충한 알파 마이너스 MEM에서 하이브리도마 클로닝 플레이트에서 파종하였다(Greiner, Germany). 약 10-14일 후에, 단일 클론을 트립신으로 처리하고, 다른 농도의 메토트렉세이트(50 nM, 100 nM, 200 nM, 400 nM, 800 nM)를 이용한 6-웰 페트리 디쉬 또는 10 ㎖ 플라스크에 파종하였다. 메토트렉세이트의 가장 높은 농도에서 증식한 클론을 그 후 더 높은 농도의 메토트렉세이트(1 mM, 2 mM, 5 mM, 10 mM, 20 mM)를 포함하는 새로운 6-웰 플레이트로 옮겼다. 같은 방법을 100-200 mM의 농도에서 성장한 클론이 얻어질 때까지 반복하였다. 목적하는 유전자 산물의 발현을 예컨대, SDS-PAGE 및 웨스턴 블롯 또는 역상 HPLC 분석법에 의해 분석하였다.

인간 항-IL-4 또는 IL-13 단백질 Ig 유래 단백질을 추가로 완벽하게 특정지었다. 생산된 Ig 유래 단백질의 일부는 1 x 10⁹ 내지 9 x 10¹²의 친화 정수를 가질 것으로 예상된다. 이들 완전한 인간 단일항체의 Ig 유래 단백질의 높은 친화도는 이들을 IL-4 또는 IL-13 단백질-의존 질환, 병리증상 또는 관련 증상에서 치료적 적용에 적합하게 한다.

실시예 3 : 섬유증 및 IL -13 또는 IL4

폐 생검에서 IL -13의 검출

폐 생검 샘플을 미시간 대학교의 Cory Hogaboam 박사가 MTA를 통하여 제공하였다. UIP로부터의 폐 생검 샘플 및 폐 종양의 일반적인 가장자리를 완전한 프로테아제 억제제 \(Roche)를 함유하는 PBS 중에 균질화시켰다. IL-13 수준을 제조자의 프로토콜에 따라 루미넥스로 측정하였다. 각각의 폐 생검 샘플 중의 총 단백질을 BCA 어세이를 사용하여 측정하였다. IL-13 수준을 각 환자의 샘플에서 단백질의 밀리그램으로 일반화하였다.

섬유아세포 분리 및 정제:

세포주를 미시간 대학교의 Cory Hogaboam 박사가 제공하였다. 모든 일차 섬유아세포주를 앞서 (21) 기재한 바와 같이 분리하였다. 폐의 섬유아세포를 UIP 환자(n=4)로부터 취해진 폐 생검으로부터 분리하였고 이들을 "섬유형 섬유아세포"라고 언급한다. 섬유아세포를 또한 폐 종양 절제술이 진행되는 동안 취해진 폐 조직(n=5)으로부터 취해진 폐 조직으로부터 분리하였고 이들 샘플은 조직학적 분석에 의해 비-섬유형 조직이라는 것이 확인되었다. 이들 비-섬유형 조직에서 유래된 섬유아세포를 "비-섬유형 섬유아세포"라고 언급한다.

섬유아세포 유전자 발현

인간 폐 섬유아세포를 웰 당 100,000 세포로 24웰 플레이트(Costar, Corning, NY)에 파종하고 8 시간 동안 부착시켰다. 이어서 세포를 PBS로 세정하고 배양물을 무혈청 배지(1-글루타민을 함유한 DMEM, 펜/스트랩)에서 하룻밤동안 배양하였다. 이어서 세포를 24 시간 동안 TGFβ-1 (1 또는 10 ng/mL), PDGF-AB (20 또는 200 ng/mL), IL-4 (1 또는 1O ng/mL) 또는 IL-13 (1 또는 1O ng/mL)의 존재 또는 부재 하에 자극시켰다. TGFβ1, PDGF-AB, IL-4 및 IL-13은 R&D 시스템에서 구입하였다. 상청액을 제거한 다음 연속적으로 RNA를 제조자의 지침에 따라 RNeasy Plus Mini-Kit(QIAGEN, Valencia, CA)를 사용하여 분리하고 RNA를 TaqMan^® Reverse Transcription Reagent(Applied Biosystems, Foster City, CA)를 사용하여 cDNA로 역전사시켰다. 전섬유형 유전자 발현을 제조자의 지침에 따라 Taqman^® Universal PCR Master Mix(Applied Biosystems) 및 개발된 Taqman^® 유전자 Expression Assay(Applied Biosystems)를 사용하여 실시간 PCR로 결정하였다.

정량적 유전자 발현을 상대적인 C_T 방법을 사용하여 계산하였고, 여기에서 C_T 수치는 유전자 발현이 처음 탐지된 것에 대한 경계 싸이클로서 결정하였다. 관심있는 유전자에 대한 유전자 발현의 배수 변화를 하우스키핑 유전자 18S에 대하여 우선 일반화하고 ΔC_T 수치를 제공하였다. 섬유형 및 비-섬유형 섬유아세포 사이에서의 발현 상의 배수 변화를 다음과 같이 계산하였다: ΔC_{T(비-섬유형)} - ΔC_T(섬유형)=ΔΔC_T, 여기에서 비-섬유형 유전자 발현은 보정치로 제공된다. 시험관 내 자극에 기인하는 유전자 발현의 배수 변화는 ΔΔC_T = ΔC_T(비자극) - ΔC_T(자극)에 의해 계산되었고, 여기에서 비자극된 샘플은 보정치로 제공된다. 이어서 계산된 2^-ΔΔCT를 보정치와 비교할 경우 최종 배수 변화에 대한 상대적인 값으로 제공하였다.

비-섬유형 및 UIP 환자의 폐 생검으로부터의 IL-13 단백질 수준.

IL-13은 UIP 환자에서 상향조절되는 것으로 나타났다 (9). 본 발명자들은 비-섬유형 폐 조직으로부터 수득한 생검에 비해 폐 섬유증 환자의 폐 생검의 단백질 수준에서 IL-13의 수준이 증가함을 관찰하였다. (* p<0.05, Welch's 보정을 갖는 Students unpaired t-test).

비-섬유형 폐 부위로부터 분리된 섬유아세포에 비하여 UIP 섬유아세포에서 섬유증과 관련된 다양한 유전자 발현의 증가

약어:

αSMA: 알파-평활근 액틴

PCOL1 : 프로콜라겐 I

PCOL3: 프로콜라겐 III

CTGF: 연결 조직 성장 인자

TGFβ-1 : 변형 성장 인자-1

TGFβR1 : TGFβ 수용체 I형

TGFβR2: TGFβ 수용체 II형

IL13Rα1: 인터루킨-13 수용체 알파 1 서브유닛

IL13Rα2: 인터루킨-13 수용체 알파 2 서브유닛

비-섬유형(n=4) 섬유아세포에 비하여 UIP 섬유아세포(n=3)에서 전섬유형 유저자 발현의 베이스라인 발현이 상이한 지를 결정하기 위하여, 유전자 발현을 환자의 양쪽 코호트로부터 비자극된 세포 중에서 비교하였다. 데이터는 UIP 섬유아세포가 분석된 모든 유전자에서 베이스라인 섬유형 유전자 발현을 많이 하는 것으로 나타났다.

αSMA 발현 상에서 TGFβ1, PDGF, IL-13 및 IL-4의 효과

근섬유모세포는 비-섬유형 조직에서 상대적으로 결여된 편이다 (4). 근섬유모세포는 이들 세포에 수축성 표현형을 제공하고, 상처 치유를 제공하는 평활근 액틴 섬유를 포함한다. 그러므로 알파-평활근 액틴(αSMA) 유전자 발현은 근섬유모세포에 대한 마커이다. TGFβ1은 αSMA 발현을 앞서 유도하는 원형 전섬유형 성장 인자이다 (22). 여기에서 본 발명자들은 TGFβ1이 비-섬유형 및 섬유형 섬유아세포에서 αSMA을 유도하고 섬유형 섬유아세포에서 더 많이 유도됨을 발견하였다. PDGF, IL-13 및 IL-4는 단지 섬유형 섬유아세포에서만 αSMA 발현의 중간 정도의 증가를 유도할 뿐이었다.

프로콜라겐 I (A) 및 프로콜라겐 III (B) 유전자 발현 상에서 TGFβ1, PDGF, IL-13 및 IL-4의 효과.

콜라겐 침전은 섬유증에 대한 중요한 증거이다. 두개의 유전자 프로콜라겐 I 및 프로콜라겐 III은 UIP와 관련 있는 것으로 이미 나타났다. 프로콜라겐 I 및 III은 UIP 샘플에서, 폐 및 전신에서 모두 증가되는 것으로 나타났다 (23) (24) (25). 본 발명의 데이터는 IL-13 및 IL-4이 UIP 섬유아세포에서 프로콜라겐 I 및 프로콜라겐 III 둘 모두를 유도하는 것으로 나타났다. 또한, 유전자 유도라는 점은 섬유형 섬유아세포에서 TGFβ1 및 PDGF-AB 둘 모두에 필적하였다. IL-4는 또한 비-섬유형 섬유아세포에서 프로콜라겐 III의 중간 정도의 증가를 유도하였다.

TGFβ1, PDGF, IL-13 및 IL-4로 유도된 TGFβ1 유전자 발현.

TGFβ1의 전섬유형 역할이 제안되었다. TGFβ1은 또한 TGFβ1이 추가로 TGFβ1 생산을 유도하는 자가 발생 루프를 갖는다. 이 현상은 또한 본원에서, 비-섬유형 및 섬유형 섬유아세포 모두에서 발견되었다. 생성된 데이터는 IL-13 및 IL-4이 또한 TGFβ1 유전자 발현을 증진시킬 수 있다는 것을 나타내었다. TGFβ1과 유사하게, PDGF에 의해 유도된 TGFβ1 유전자 유도 및 2형 사이토카인 모두가 섬유형 섬유아세포에서 더 많았다.

TGFβ1, PDGF, IL-13 및 IL-4로 유도된 CTGF 유전자 발현.

연결 조직 성장 인자(CTGF)는 콜라겐 생산을 포함하는 TGFβ1의 많은 효과를 중재하는 것으로 나타났다 (28) (29) (30). TGFβ1은 섬유형 및 비-섬유형 섬유아세포 둘 모두에서 CTGF 유전자 발현의 증가를 유도하였다. 또한, 저-농도의 PDGF(20 ng/ml)뿐만 아니라, IL-13 및 IL-4는 UIP 섬유아세포에서 CTGF 유전자 발현의 증가를 유도하였다.

TGFβ1, PDGF, IL-13 및 IL-4로 유도된 TGFβRI (A) 및 TGFβRII (B) 유전자 발현.

TGFβ1 및 PDGF는 UIP 섬유아세포에서 TFGβ1 유전자 발현의 증진뿐 아니라, 두개의 TGFβ 수용체 서브유닛의 증가를 유도한다. TGFβ 수용체는 피부경화증 섬유아세포에서 상승되는 것으로 밝혀졌다 (31, 32). 산출된 데이터는 또한 IL-13 및 IL-4가 섬유형 세포에서 IL-4는 TGFβRII의 최대한의 유전자 유도를 매개함과 동시에, 두개의 TGFβ 수용체 서브유닛의 증가를 유도하는 것으로 나타났다.

TGFβ1, PDGF, IL-13 및 IL-4로 유도된 IL13Rα1 (A) 및 IL13Rα2 (B) 유전자 발현

문헌에서 이미 보고되고, 본원에 기재한 바와 같이, IL-13은 UIP 환자의 폐에서 수준이 상승되는 것으로 밝혀졌다. IL-13은 시험관 내 및 생체 내 모델 동안에 전섬유형이다. IL-13은 콜라겐 생성 및 섬유아세포의 증식을 유도한다(12-14). 또한, IL-13 활성의 억제는 다양한 뮤린의 폐 섬유증 모델에서 이로운 것으로 나타났다(17-20). TGFβ1, PDGF, IL-4 및 IL-13은 UIP 섬유아세포에서 IL13Rα1의 상향조절을 유도하였다. 4개의 모든 매개자들은 IL13Rα2 발현의 상향조절을 유도하므로, 잠재적으로 이들 세포를 IL-13으로 중재된 반응에 더욱 민감하게 만든다. 또한, IL13Rα2를 통한 신호는 TGFβ1의 유도를 통하여 전섬유형이 된다고 최근에 증명되었다(15).

TGFβ1, PDGF, IL-13 및 IL-4로 유도된 CD44 유전자 발현

섬유아세포로부터 유도된 히알루로난은 이미 폐 섬유증의 동물 모델을 사용하여 섬유증과 상호관련이 있는 것으로 증명되었다(33). 섬유아세포로부터 방출된 히알루로난은 전염증성이므로 잠재적으로 섬유형 반응을 악화시킨다. 히알루로난은 CD44에 결합한다. 본 발명자들은 본원에 모든 매개자들이 이들 세포가 히알루로난에 의해 중재된 다운스트림 이벤트에 과대-반응을 보임을 가르키면서 UIP 섬유아세포에서 CD44 유전자 발현의 상향조절을 유도한다고 나타내었다.

TGFβ1, PDGF, IL-13 및 IL-4로 유도된 피브로넥틴 유전자 발현

피브로넥틴은 세포외 기질의 성분이다. 본원에서 모든 매개자들은 UIP 섬유아세포에서 직접적으로 피브로넥틴 유전자 발현의 상향조절을 유도하고, 이는 폐 섬유증과 관련된 과도한 세포외 기질 침전에 부가될 것임을 가르키는 증거를 제안한다.

TGFβ1, PDGF, IL-13 및 IL-4로 유도된 PDGFRA (A) 및 PDGFRB (B) 유전자 발현

PDGF(혈소판으로 유도되는 성장 인자)는 섬유아세포의 증식을 증진시킨다고 증명된 성장 인자이다. 또한, PDGF 수용체 신호의 억제가 최근 생체 내에서 섬유증을 제한한다고 증명되었다(34). 본 연구에서, TGFβ1, PDGF, IL-13 및 IL-4는 UIP 섬유아세포에서 두개의 PDGF 수용체 사슬의 증가를 유도하였다. 이는 검사된 모든 매개자가 PDGF로 유도된 다운스트림 이벤트, 예컨대, 증식에 대한 UIP 섬유아세포의 감수성을 증진시킬 것이라는 것을 지시한다.

이점

IL-4 및 IL-13에 대한 UIP 섬유아세포의 전섬유형 기능의 반응성의 기술은 처음으로 공지되었다. 본 연구는 또한 섬유증에 대한 효능있는 치료제 역할의 평가시 비-섬유형 섬유아세포 및 섬유형 섬유아세포의 비교의 중요성을 강조하였다. IL-4 및/또는 IL-13의 억제는 다양한 섬유증의 모델에서 이로운 것으로 나타났다. 기계적으로, 동물 모델에서 섬유증의 억제는 섬유아세포 증식 및 콜라겐 생산의 감소에 기여하였다. 그러나 본 연구는 비-섬유형 조직에서 유래된 세포와 섬유증의 부위로부터 섬유아세포를 비교함으로써 더욱 중개 의학 접근을 취하였다. 또한 본 연구는 시험관 내에서 IL-4 또는 IL-13의 자극에 따라 증대되는 다수의 유전자를 밝혔다. 전반적으로 본 발명은 이들 두개의 2형 사이토카인 중 하나의 자극에 따라 유도되는 많은 유전자로서 IL-4 및/또는 IL-13을 표적하는 것이 폐 섬유증의 환자에서 어떻게 이로운가를 기술하고 있다. 또한, 전섬유형 매개자의 일부에 있어서 유전자 상향조절이 전형적인 전섬유형 매개자 TGFβ1 및 PDGF에 유도된 상향조절과 비교되었다. 또한 두개의 원형 성장 인자, TGFβ1 및 PDGF가 섬유형 조직에서 발견되었고, IL-13 수용체 서브유닛의 상향조절을 유도하였고, 이는 섬유형 조직 환경에서 IL-13에 대한 UIP 섬유아세포의 반응성이 더욱 증진될 것이라는 것을 가르킨다. 결론적으로, 또한 많은 유전자가 직접적으로 IL-4 및 IL-13에 의해 매개되므로, 이들 유전자(예를 들어 IL13Rα2, 프로콜라겐 I 및 III)는 요법에 대한 반응의 표시로서 IL-4 및 IL-13을 억제하는 요법으로 치료될 환자에 있어서 임상적 바이오마커로 제공될 수 있다. 전반적으로 본 발명은 이들 2형 사이토카인에 의한 촉진에 따라 유도되는 많은 수의 유전자로서 IL-4 및/또는 IL-13을 표적하는 것이 간질성 폐질환 환자에서 어떻게 이로운지를 설명한다. 또한 많은 다른 섬유형 병리증상을 갖는 질환, 예컨대, 한정하는 것은 아니나, 간질성 폐질환, 피부경화증(국부 및 확산), 간 섬유증, 신장 섬유증, 유육종증, 비후성 반흔, 켈로이드 반흔, 심장 섬유증, 연령 관련 황반 변성, 아교질 혈관병 및 관련된 질환에서 IL-4 및/또는 IL-13을 표적하는 것은 이로울 것이다.

참조 문헌

본 발명이 상기 상세한 설명 및 실시예에서 특히 개시된 것과 달리 실행될 수 있음은 명확할 것이다.

그러므로, 상기 교시의 관점에서 본 발명의 다양한 변형 및 변이가 가능하며, 이는 첨부된 청구범위 범주 내에 있다.

표 1.

SEQUENCE LISTING <110> <120> METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATING IL-4 or IL-13 RELATED PATHOLOGIES <130> CEN5067 <160> 42 <170> PatentIn Ver 3.1 SEQ ID NO:1 QVQLLVQSGA EVKKPGASVK VSCKASGYTF TXWVRQAPGQ GLEWMGXRVT MTRDTSTSTA 60 YMELSSLRSE DTAVYYCARX WGQGTLVTVS SGSTKGPSVF PLAPSSKSTS GGTAALGCLV 120 KDYFP 125 SEQ ID NO:2 QITLKESGPA LVKPTQTLTL TCTFSGFSLS XWIRQPPGKA LEWLAXRLTI SKDTSKNQVV 60 LTMTNMDPVD TATYYCARXW GQGTLVTVSS GSASAPS 97 SEQ ID NO:3 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS XWVRQAPGKG LEWVSXRFTI SRDNSKNTLY 60 LQMNSLRAED TAVYYCARXW GQGQGTLVTV SSGSTKAPSV FP 102 SEQ ID NO:4 EVQLVESGGG LVKPGGSLRL SCAASGFTFS XWVRQAPGKG LEWVGXRFTI SRDDSKNTLY 60 LQMNSLKTED TAVYYCTTXW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LA 102 SEQ ID NO:5 EVQLVESGGG LVQPGRSLRL SCTASGFTFG XWVRQAPGKG LEWVGXRFTI SRDDSKSIAY 60 LQMNSLKTED TAVYYCTRXV TVSSGSTKGP SVLP 94 SEQ ID NO:6 QVQLQESGPG LVKPSETLSL TCTVSGGSIS XWIRQPPGKG LEWIGXRVTI SVDTSKNQFS 60 LKLSSVTAAD TAVYYCARXW GQQGTLVTVS SAPTKAPDVF PIISGC 106 SEQ ID NO:7 EVQLVQSGAE VKKPGESLKI SCKGSGYSFT XWVRQMPGKG LEWMGXQVTI SADKSISTAY 60 LQWSSLKASD TAMYYCARXW GQGTLVTVSS ASTKGPS 97 SEQ ID NO:8 QVQLQQSGPG LVKPSQTLSL TCAISGDSVS XWIRQSPSRG LEWLGXRITI NPDTSKNQFS 60 LQLNSVTPED TAVYYCARXW GQGTLVTVSS G 91 SEQ ID NO:9 QVQLVQSGSE LKKPGASVKV SCKASGYTFT XWVRQAPGQG LEWMGXRFVF SLDTSVSTAY 60 LQISSLKAED TAVYYCARXW GQGTLVTVSS S 91 SEQ ID NO:10 DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCXWYQQKP GKAPKLLIYX GVPSRFSGSG SGTDFTLTIS 60 SLQPEDFATY YCX 73 SEQ ID NO:11 DIVMTQSPLS LPVTPGQPAS ISCXWYLQKP GQSPQLLIYX GVPDRFSGSG SGTDFTLKIS 60 RVEAEDVGVY YCX 73 SEQ ID NO:12 EIVLTQSPGT LSLSPGERAT LSCXWYQQKP GQAPRLLIYX GIPDRFSGSG SGTDFTLTIS 60 RLEPEDFAVY YCX 73 SEQ ID NO:13 ETTLTQSPAF MSATPGDKVN ISCXWYQQKP GEAAIFIIQX GIPPRFSGSG YGTDFTLTIN 60 NIESEDAAYY FCX 73 SEQ ID NO:14 EIVMTQSPVN LSMSAGEXWY QQKPGQAPRL FIYXGISARF SGSGSGTDFT LTITSLQSED 60 FAVYYCX 67 SEQ ID NO:15 ELTQSPGTLS LSPGEXWYQH KPGQAPRLVI HXGISDRFSG SGSGTDFTLT ITRLEPEDFA 60 LYYCX 65 SEQ ID NO:16 QSVLTQPPSA SGTPGQRVTI SCXWYQQLPG TAPKLLIYXG VPDRFSGSKS GTSASLAISG 60 LQSEDEADYY CX 72 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DASGATFTWT PSSGKSAVQG PPERDLCGCY SVSSVLPGCA 180 QPWNHGETFT CTAAHPELKT PLTANITKSG NTFRPEVHLL PPPSEELALN ELVTLTCLAR 240 GFSPKDVLVR WLQGSQELPR EKYLTWASRQ EPSQGTTTFA VTSILRVAAE DWKKGDTFSC 300 MVGHEALPLA FTQKTIDRLA GKPTHVNVSV VMAEVDGTCY 340 SEQ ID NO:33 APTKAPDVFP IISGCRHPKD NSPVVLACLI TGYHPTSVTV TWYMGTQSQP QRTFPEIQRR 60 DSYYMTSSQL STPLQQWRQG EYKCVVQHTA SKSKKEIFRW PESPKAQASS VPTAQPQAEG 120 SLAKATTAPA TTRNTGRGGE EKKKEKEKEE QEERETKTPE CPSHTQPLGV YLLTPAVQDL 180 WLRDKATFTC FVVGSDLKDA HLTWEVAGKV PTGGVEEGLL ERHSNGSQSQ HSRLTLPRSL 240 WNAGTSVTCT LNHPSLPPQR LMALREPAAQ APVKLSLNLL ASSDPPEAAS WLLCEVSGFS 300 PPNILLMWLE DQREVNTSGF APARPPPQPR STTFWAWSVL RVPAPPSPQP ATYTCVVSHE 360 DSRTLLNASR SLEVSYVTDH GPMK 384 SEQ ID NO:34 ASTQSPSVFP LTRCCKNIPS NATSVTLGCL ATGYFPEPVM VTWDTGSLNG TTMTLPATTL 60 TLSGHYATIS LLTVSGAWAK QMFTCRVAHT PSSTDWVDNK TFSVCSRDFT PPTVKILQSS 120 CDGGGHFPPT IQLLCLVSGY TPGTINITWL EDGQVMDVDL STASTTQEGE LASTQSELTL 180 SQKHWLSDRT YTCQVTYQGH TFEDSTKKCA DSNPRGVSAY LSRPSPFDLF IRKSPTITCL 240 VVDLAPSKGT VNLTWSRASG KPVNHSTRKE EKQRNGTLTV TSTLPVGTRD WIEGETYQCR 300 VTHPHLPRAL MRSTTKTSGP VGPRAAPEVY AFATPEWPGS RDKRTLACLI QNFMPEDISV 360 QWLHNEVQLP DARHSTTQPR KTKGSGFFVF SRLEVTRAEW EQKDEFICRA VHEAASPSQT 420 VQRAVSVNPG KDVCVEEAEG EAPWTWTGLC IFAALFLLSV SYSAALTLLM VQRFLSATRQ 480 GRPQTSLDYT NVLQPHA 497 SEQ ID NO:35 ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS 60 GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPELLGG 120 PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN 180 STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSRDE 240 LTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESBNGQ PENNYKTTPP VLDSDGSFFL YSKLTVDKSR 300 WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG KTHTCPPCP 339 SEQ ID NO:36 ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS 60 GLYSLSSVVT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTVER KCCVECPPCP APPVAGPSVF 120 LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP EVQFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQFNSTFR 180 VVSVLTVVHQ DWLNGKEYKC KVSNKGLPAP IEKTISKTKG QPREPQVYTL PPSREEMTKN 240 QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY KTTPPMLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN 300 VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSPGK 326 SEQ ID NO:37 ASTKGPSVFP LAPCSRSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS 60 GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YTCNVNHKPS NTKVDKRVEL KTPLGDTTHT CPRCPEPKSC 120 DTPPPCPRCP EPKSCDTPPP CPRCPEPKSC DTPPPCPRCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT 180 LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVQFKWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTF RVVSVLTVLH 240 QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKTK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK 300 GFYPSDIAVE WESSGQPENN YNTTPPMLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NIFSCSVMHE 360 ALHNRFTQKS LSLSPGK 377 SEQ ID NO:38 ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS 60 GLYSLSSVVT VPSSSLGTKT YTCNVDHKPS NTKVDKRVES KYGPPCPSCP APEFLGGPSV 120 FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSQED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQFNSTY 180 RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPS SIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSQEEMTK 240 NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSRL TVDKSRWQEG 300 NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSLGK 327 SEQ ID NO:39 GSASAPTLFP LVSCENSPSD TSSVAVGCLA QDFLPDSITF SWKYKNNSDI SSTRGFPSVL 60 RGGKYAATSQ VLLPSKDVMQ GTDEHVVCKV QHPNGNKEKN VPLPVIAELP PKVSVFVPPR 120 DGFFGNPRSK SKLICQATGF SPRQIQVSWL REGKQVGSGV TTDQVQAEAK ESGPTTYKVT 180 STLTIKESDW LSQSMFTCRV DHRGLTFQQN ASSMCVPDQD TAIRVFAIPP SFASIFLTKS 240 TKLTCLVTDL TTYDSVTISW TRQNGEAVKT HTNISESHPN ATFSAVGEAS ICEDDWNSGE 300 RFTCTVTHTD LPSPLKQTIS RPKGVALHRP DVYLLPPARE QLNLRESATI TCLVTGFSPA 360 DVFVQWQMQR GQPLSPEKYV TSAPMPEPQA PGRYFAHSIL TVSEEEWNTG ETYTCVVAHE 420 ALPNRVTERT VDKSTGKPTS ADEEGFENLW ATASTFIVLY NVSLVMSDTA GTCYVK 476 SEQ ID NO:40 RTVAAPSVFI FPPSDEQLKS GTASVVCLLN NFYPREAKVQ WKVDNALQSG NSQESVTEQD 60 SKDSTYSLSS TLTLSKADYE KHKVYACEVT HQGLSSPVTK SFNRGEC 107 SEQ ID NO:41 GQPKAAPSVT LFPPSSEELQ ANKATLVCLI SDFYPGAVTV AWKADSSPVK AGVETTTPSK 60 QSNNKYAASS YLSLTPEQWK SHRKSYSCQV THEGSTVEKT VAPTECS 107 Human IL-13 <210> 42 <211> 146 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 42 Met His Pro Leu Leu Asn Pro Leu Leu Leu Ala Leu Gly Leu Met Ala 1 5 10 15 Leu Leu Leu Thr Thr Val Ile Ala Leu Thr Cys Leu Gly Gly Phe Ala 20 25 30 Ser Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Glu Leu Ile Glu 35 40 45 Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly 50 55 60 Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys Ala Ala 65 70 75 80 Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr 85 90 95 Gln Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln 100 105 110 Phe Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe 115 120 125 Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Gln 130 135 140 Phe Asn 145 Human IL-4 <210> 43 <211> 146 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 43 Met Gly Leu Thr Ser Gln Leu Leu Pro Pro Leu Phe Phe Leu Leu Ala 1 5 10 15 Cys Ala Gly Asn Phe Val His Gly His Lys Cys Asp Ile Thr Leu Gln 20 25 30 Glu Ile Ile Lys Thr Leu Asn Ser Leu Thr Glu Gln Lys Thr Leu Cys 35 40 45 Thr Glu Leu Thr Val Thr Asp Ile Phe Ala Ala Ser Lys Asn Thr Thr 50 55 60 Glu Lys Glu Thr Phe Cys Arg Ala Ala Thr Val Leu Arg Gln Phe Tyr 65 70 75 80 Ser His His Glu Lys Asp Thr Arg Cys Leu Gly Ala Thr Ala Gln Gln 85 90 95 Phe His Arg His Lys Gln Leu Ile Arg Phe Leu Lys Arg Leu Asp Arg 100 105 110 Asn Leu Trp Gly Leu Ala Gly Leu Asn Ser Cys Pro Val Lys Glu Ala 115 120 125 Asn Gln Ser Thr Leu Glu Asn Phe Leu Glu Arg Leu Lys Thr Ile Met 130 135 140 Arg Glu Lys Tyr Ser Lys Cys Ser Ser 145 150 Human IL-4 splice variant <210> 44 <211> 137 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 44 Met Gly Leu Thr Ser Gln Leu Leu Pro Pro Leu Phe Phe Leu Leu Ala 1 5 10 15 Cys Ala Gly Asn Phe Val His Gly His Lys Cys Asp Ile Thr Leu Gln 20 25 30 Glu Ile Ile Lys Thr Leu Asn Ser Leu Thr Glu Gln Lys Asn Thr Thr 35 40 45 Glu Lys Glu Thr Phe Cys Arg Ala Ala Thr Val Leu Arg Gln Phe Tyr 50 55 60 Ser His His Glu Lys Asp Thr Arg Cys Leu Gly Ala Thr Ala Gln Gln 65 70 75 80 Phe His Arg His Lys Gln Leu Ile Arg Phe Leu Lys Arg Leu Asp Arg 85 90 95 Asn Leu Trp Gly Leu Ala Gly Leu Asn Ser Cys Pro Val Lys Glu Ala 100 105 110 Asn Gln Ser Thr Leu Glu Asn Phe Leu Glu Arg Leu Lys Thr Ile Met 115 120 125 Arg Glu Lys Tyr Ser Lys Cys Ser Ser 130 135

Claims (8)

1. 치료적 유효량의 적어도 하나의 길항제 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질을 세포, 조직 또는 동물과 접촉시키거나 그에 투여하는 것을 포함하는, 적어도 하나의 인간 IL-4 또는 IL-13 섬유증 관련 병리증상을 치료하는 방법으로서, 상기 IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질은 생체 내, 시험관 내 또는 인 시츄에서 상기 IL-4 또는 IL-13의 적어도 하나의 생물학적 활성을 억제하는 것인 방법.
2. 제 1항에 있어서, IL-4 또는 IL-13 관련 병리증상이 적어도 하나의 간질성 폐질환, 피부경화증, 간 섬유증, 신장 섬유증, 유육종증, 비후성 반흔, 켈로이드 반흔, 심장 섬유증, 연령 관련 황반 변성 및 아교질 혈관병 중 적어도 하나로부터 선택됨을 특징으로 하는 방법.
3. 제 1항에 있어서, Ig 유래 단백질이 생물학적으로 활성인 인간 IL-4 또는 IL-13 단백질 또는 리간드의 적어도 하나의 에피토프에 결합함을 특징으로 하는 방법.
4. 제 2항에 있어서, 에피토프가 서열 번호 42, 43 또는 44의 1-10, 10-20, 20-30, 30-40, 40-50, 50-60, 60-70, 70-80, 80-90, 90-100, 100-110, 110-120, 120-130, 130-140 또는 140-145의 적어도 하나의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14개의 아미노산으로 구성된 그룹으로부터 선택된 적어도 1 내지 3개를 전체 아미노산 서열로 포함함을 특징으로 하는 방법.
5. 제 1항에 있어서, IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질이 적어도 10^-9 M, 적어도 1O^-10 M, 적어도 10^-11 M, 또는 적어도 10^-12 M, 또는 적어도 10^-13 M 또는 적어도 10^-14 M으로부터 선택된 적어도 하나의 친화성으로 IL-4 또는 IL-13 또는 IL-4 또는 IL-13 수용체에 결합함을 특징으로 하는 방법.
6. 제 1항에 있어서, IL-4 또는 IL-13 Ig 유래 단백질이 항체, 및 항체 융합 단백질 또는 수용체 융합 단백질로부터 선택됨을 특징으로 하는 방법.
7. 제 1항에 있어서, 유효량이 세포, 조직, 기관 또는 동물의 킬로그램 당 0.001 내지 50 mg임을 특징으로 하는 방법.
8. 제 1항에 있어서, 접촉 또는 투여가 비경구, 피하, 근육내, 정맥내, 관절내, 기관지내, 복강내, 낭내, 연골내, 강내, 복내(intracelial), 소뇌내, 뇌실내, 결장내, 경부내, 위내, 간내, 심근내, 골내, 골반내, 심막내(intrapericardiac), 복막내, 흉막내, 전립선내, 폐내, 직장내, 신장내, 망막내, 척수내, 활액내, 흉부내, 자궁내, 방광내, 볼루스, 질내, 직장내, 구강내, 설하, 비강내 및 경피로부터 선택된 적어도 하나의 방법에 의한 것임을 특징으로 하는 방법.