JP2002533444A - 殺精子性活性を示すフェネチル−５−ブロモピリジルチオ尿素（ｐｂｔ）およびジヒドロアルコキシベンジルオキソピリミジン（ｄａｂｏ）誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 新規なフェネチル−５−ブロモピリジルチオ尿素（ＰＢＴ）およびジヒドロアルコキシベンジルオキソピリミジン（ＤＡＢＯ）誘導体は、殺精子活性とともに抗ウィルス活性を示す。これら新規化合物は避妊用調合物に殺精子性または精子固定化活性を提供するために組み込むことができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の分野） 本発明は、新規なＰＢＴおよびＤＡＢＯ誘導体への道を示す。ある一つの実施
形態においては、本発明は、殺精子性活性を示す新規なＰＢＴおよびＤＡＢＯ誘
導体への道を示す。

【０００２】 （発明の背景） 後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の病原体であるヒト免疫不全ウィルス（Ｈ
ＩＶ）は、生殖可能年齢の女性の死因のうち、最も急速に増加しているものであ
る。ヘテロセクシャルな感染は、世界中のすべてのＨＩＶ感染の中で９０％を計
上し、米国では、新規なＨＩＶ感染の増加する比率を構成している。西暦２００
０年までに、世界全体の４，０００万人のＨＩＶ感染した個人以外の１，３００
万人の女性がＨＩＶに感染するだろう。効果的な予防薬としての抗ＨＩＶワクチ
ンまたは抗レトロウィルス療法が存在しないために、女性主導型の、粘膜からの
および分娩時のＨＩＶ感染を抑制するための膣内殺菌剤が必要とされている。

【０００３】 ノノキシノール−９（Ｎ−９）のような洗浄剤である殺精子剤が全世界で使用
されていることと、ＨＩＶ感染のリスクを現実に増加させていることとは関係が
あるであろう。Ｎ−９は、殺精子の目的で、店頭販売のゲル、フォーム、クリー
ム、スポンジ、フィルムおよび発泡錠剤中に３０年以上使用されてきた。Ｎ−９
は、in vitroでＨＩＶを不活性化させることが明らかになったため、女性の性的
感染によるＨＩＶ感染に対する保護のために最近考慮されている唯一の局所殺菌
剤である。しかしながら、Ｎ−９を使用することの主な不利益は、上皮細胞への
洗浄剤型の効果である。Ｎ−９の膣内避妊薬としての頻繁な使用は、膣頚管(cer
vicovaginal)感染、炎症または潰瘍のリスクの増加と関連付けられている。Ｎ−
９の継続的な使用は、膣内の生理的寄生菌を除去し、易感染性を促進する可能性
があるために、子宮膣部の皮膜組織および頚管内粘膜のＨＩＶ感染に対する感染
しやすさを高めてしまうおそれがある。さらに、最近の臨床試験は、Ｎ−９を含
む膣内避妊薬は、ＨＩＶ／エイズのヘテロセクシャルな感染を予防するための予
防プログラム全体の一部として提供される場合には、ＨＩＶ／エイズおよび他の
ＳＴＤ感染症に効果がないことを示している。例えば、Roddy et al., 1998, N.
Eng. J. Med. 339: 504-510; Hira et al., 1997, Int. J. STD AIDS 8: 243-2
50を参照のこと。

【０００４】 新規で、効果的で、安全で、かつ、女性主導型の、洗浄剤型の膜毒性を持たな
い局所的な殺菌剤は、最近利用可能な膣内殺菌剤と比較して、臨床上の利点があ
るであろう。生理学的な受精は、射精された精液が泳動し、透明帯と結合し、卵
子に侵入する能力に依存する。これらのそれぞれの活性は、本質的に、精子の運
動性に依存する。したがって、非ヌクレオシドインヒビター（non-nucleoside i
nhibitors、ＮＮＩｓ）のような選り抜きの抗レトロウィルス薬剤に殺精子剤と
しての機能を付け加えることは、ヘテロセクシャルなＨＩＶの経膣感染を抑制す
るとともに受胎を回避する効果的な道となり得る。

【０００５】 （発明の要約） 本発明は、新規な非ヌクレオシドインヒビター（ＮＮＩｓ）であるフェネチル
−５−ブロモピリジルチオ尿素（ＰＢＴ）およびジヒドロアルコキシベンジルオ
キソピリミジン（ＤＡＢＯ）誘導体を提供する。これらの化合物は、精子を固定
化する(immobilizing)ための、または避妊のための薬剤として有用である。出願
人の知識によれば、ＰＢＴおよびＤＡＢＯ誘導体は、従来は、何ら避妊のための
、例えば、殺精子剤として、または精子を固定化するための活性を有しているこ
とは研究および認識されてこなかった。

【０００６】 本発明は、（Ｉ）の化学構造を有するハロゲン化されたＰＢＴ誘導体または薬
学的に許容可能なその塩を提供する。

【０００７】

【化４】

【０００８】 ここで、Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄は、それぞれ独立に水素、Ｆ、Ｃｌ、Ｂ
ｒまたはＩであり、かつ、Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄のうち少なくとも一つは
、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである。

【０００９】 本発明は、また、式（III）の構造を含む新規なＤＡＢＯ誘導体化合物または
薬学的に許容可能なその塩を提供する。

【００１０】

【化５】

【００１１】 ここで、Ｒ₁およびＲ₂は、同じであるかまたは異なっており、かつ、水素、ハ
ロ、アルキル、アルケニル、ヒドロキシ、アルコキシ、チオアルキル、チオール
、ホスフィノ、ＲＯＨ、またはＲＮＨ基である。ここで、Ｒは、アルキル基であ
る。Ｙは、ＳまたはＯであり、Ｒ₃は、アルキル、アルケニル、アリール、アラ
ルキル、ＲＯＨ、またはＲＮＨ₂基であり、ここで、Ｒは、アルキル基である。

【００１２】 本発明は、さらに、哺乳類の受胎を阻害する方法を提供する。前記方法は、哺
乳類の精子を、殺精子剤として効果的な量の本発明における新規なハロゲン化Ｐ
ＢＴ誘導体または新規なＤＡＢＯ誘導体と接触させることを含む。

【００１３】 本発明の他の面は、精子の運動性を阻害するための方法である。前記方法は、
哺乳類の精子を、精子の運動性を阻害するために効果的な量の本発明における新
規なハロゲン化ＰＢＴ誘導体または新規なＤＡＢＯ誘導体と接触させることを含
む。

【００１４】 本発明は、また、精子を殺すのに効果的な量の殺精子薬剤と、薬学的に許容可
能な担体、希釈剤またはベヒクルとを含む調合物を提供する。前記殺精子薬剤は
、本発明におけるハロゲン化ＰＢＴ誘導体またはＤＡＢＯ誘導体を含む。

【００１５】 本発明は、また、本発明におけるハロゲン化ＰＢＴ誘導体またはＤＡＢＯ誘導
体を含む殺精子性物品を提供する。

【００１６】 本発明の他の面は、以下の図面、詳細な説明、実施例および請求項を参照する
ことにより、この技術分野における当業者に明らかになるであろう。

【００１７】 （図面の簡単な説明） 図１は、Ｎ−［２−（２，５−ジメトキシフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５
−ブロモピリジル）］チオ尿素（Ｄ−ＰＢＴ）、Ｎ−［２−（２−フルオロフェ
ネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジル）］−チオ尿素（Ｆ−ＰＢＴ）
、５−イソプロピル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６−（ベンジル）−
ピリミジン−４−（１Ｈ）−オン（Ｓ−ＤＡＢＯ）、およびＮ−［２−（２−ピ
リジル）エチル］−Ｎ’−［２−ブロモピリジル］−チオ尿素（トロビルジン(t
rovirdine)、ＰＥＴＴ誘導体の一種）の化学構造を示している。

【００１８】 図２は、トロビルジン、Ｄ−ＰＢＴ、Ｆ−ＰＢＴ、Ｓ−ＤＡＢＯおよびＮ−９
による精子の運動性の濃度依存性阻害である。高度な運動性を有する精子のフラ
クションを、アッセイ媒体中Ｄ−ＰＢＴ、Ｆ−ＰＢＴ、Ｓ−ＤＡＢＯおよびＮ−
９の濃度増大（３１．２μＭ〜５００μＭ）または１％のＤＭＳＯで３時間イン
キュベートし、運動性の精子のパーセンテージをＣＡＳＡにより評価した。それ
ぞれのデータの得点は、３回から４回の独立な実験の平均値を示す。

【００１９】 図３は、Ｆ−ＰＢＴの存在下における時間依存の精子の固定化を示す。運動性
の精子を、アッセイ媒体中１ｍＭのＦ−ＰＢＴまたは１％のＤＭＳＯ単独の存在
下、３７℃でインキュベートした。５分または１０分間隔で、精子の運動性をＣ
ＡＳＡにより評価した。それぞれのデータの得点は、２回の独立な実験による平
均値±標準偏差を示す。

【００２０】 図４は、Ｆ−ＰＢＴにおける精子の動きのパラメータに対する影響を示すグラ
フである。運動性の精子のフラクションを、アッセイ媒体中、１ｍＭのＦ−ＰＢ
Ｔ存在下でインキュベートし、時間依存の運動性を、"Materials and Methods."
に記述されているＨａｍｉｌｔｏｎ Ｔｈｏｒｎｅ−ＩＶＯＳ ｖｅｒｓｉｏｎ
１０ ＣＡＳＡを使用して決定した。数値は、ＶＣＬ、ＶＡＰ、ＶＳＬについ
てはμｍ／ｓであり、ＡＬＨについてはμｍであり、ＭＯＴ、ＳＴＲ、ＬＩＮに
ついては％であり、ＢＣＦについてはＨｚである。

【００２１】 図５Ａは、Ｄ−ＰＢＴ、Ｆ−ＰＢＴ、Ｓ−ＤＡＢＯ、およびＮ−９の、精子の
先体膜の完全性に対する効果を示すグラフである。運動性の精子を、濃度増大の
三種のＮＮＩｓおよびＮ−９の存在下または非存在下で、６時間プレインキュベ
ートした。ＦＩＴＣ−Pisum sativum レクチン(lectin)結合アッセイにより決定
した先体が完全な精子のパーセンテージは、３回の別個の実験の平均値±標準偏
差として表した。

【００２２】 図５Ｂから５Ｅまでは、精子のレーザー走査共焦蛍光イメージを示す。図示し
た精子は、先体に対しＦＩＴＣ−Pisum sativum レクチン(lectin)（緑）、ＤＮ
Ａに対しＴＯＴＯ−３ヨージド（青）、および膜脂質に対しナイルレッド（赤）
で三重に標識したものである。先体が完全な精子では、精子頭部の先体部位は、
一様に明るい緑の蛍光を示す。先体が反応した精子では、緑の蛍光は無いか、ま
たは精子頭部の赤道付近(equatorial)部分に限定されている。図５Ｂは、０．５
％ＤＭＳＯ単独に暴露した精子を示す。図５Ｃは、５００μＭのＦ−ＰＢＴに暴
露した精子を示す。また、図５Ｄは、５００μＭのＳ−ＤＡＢＯに暴露した精子
を示す。図５Ｂ、５Ｃまたは５Ｄのいずれも、６時間のインキュベーションによ
る精子先体の反応の増加を示していない。図５Ｅは、５００μＭのＮ−９に暴露
した精子を示し、唯一、先体が反応した精子を示している。（現物からの拡大率
は１０００倍である。） （詳細な説明） ［定義］ 本願で使用される全ての科学的および技術的な用語は、特に定義しない限り、
当該技術分野で一般的に使用される意味を有する。下記の単語またはフレーズは
、本願で使用される場合には、特別な意味を有する。

【００２３】 ここで使用される「ＤＡＢＯ」とは、ジヒドロキシアルコキシベンジルオキソ
ピリミジンという化合物を意味する。

【００２４】 ここで使用される「Ｓ−ＤＡＢＯ」とは、５−イソプロピル−２−［（メチル
チオメチル）チオ］−６−（ベンジル）−ピリミジン−４−（１Ｈ）−オンとい
う化合物を意味する。

【００２５】 ここで使用される「ＰＢＴ」とは、フェネチル−５−ブロモピリジルチオ尿素
という化合物を意味する。

【００２６】 ここで使用される「Ｆ−ＰＢＴ」とは、Ｎ−［２−（２−フルオロフェネチル
）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジル）］−チオ尿素という化合物を意味す
る。

【００２７】 ここで使用される「Ｄ−ＰＢＴ」とは、Ｎ−［２−（２，５−ジメトキシフェ
ネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジル）］−チオ尿素という化合物を
意味する。

【００２８】 ここで使用される「Ｎ−９」とは、殺ウィルス性／殺精子剤であるノノキシノ
ール−９という化合物を意味する。

【００２９】 ここで使用される「逆転写酵素（ＲＴ）」とは、ＨＩＶ−１ ＲＴと同様のＮ
ＮＩ結合部位を有する酵素を示す。

【００３０】 ここで使用されるＨＩＶ逆転写酵素（ＨＩＶ−ＲＴ）の「非ヌクレオシドイン
ヒビター（ＮＮＩ）」とは、ＨＩＶ−ＲＴのアロステリック部位と結合し、ＨＩ
Ｖ−ＲＴ活性の非競争的な阻害へと導く化合物を意味する。ＨＩＶ−ＲＴの非ヌ
クレオシドインヒビターの例は、Ｓ−ＤＡＢＯ、Ｆ−ＰＢＴおよびＤ−ＰＢＴを
含むが、これらに限定されない。

【００３１】 ここで使用される「同族体」または「誘導体」という用語は、それぞれ互換性
があるように使用され、他の物質と構造的および機能的に関連する化学物質を意
味する。同族体または誘導体は、前記他の物質を修飾した構造を含み、前記他の
物質の機能を維持し、この場合には、ＮＮＩ−ＲＴの結合部位と相互作用する能
力を維持する。前記同族体または誘導体は、前記他の物質から合成する必要はな
いが、そのようにしても良い。例えば、ＤＡＢＯ同族体または誘導体は、ＤＡＢ
Ｏと構造的に関連する化合物を意味するが、ＤＡＢＯから作られることが必須で
はない。

【００３２】 ここで使用される「薬学的に許容可能な塩」とは、親化合物の望ましい生理活
性を保持し、かつ、何らの望ましくない毒物学上の効果も与えない塩を表す。そ
のような塩は、例えば、以下のものを含むが、これらに限定されない。（ａ）無
機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸その他同様のものととも
に形成された酸付加塩、または、例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、
マレイン酸、フマル酸(furmaric acid)、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、ア
スコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パモイル酸(pamoic acid)、アルギニン
酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリ
ガラクツロン酸のような有機酸とともに形成された塩。（ｂ）例えば、亜鉛、カ
ルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、
ニッケル、カドミウム、その他同様の多価金属カチオンの塩。または、（ｃ）Ｎ
，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミンもしくはエチレンジアミンから形成された
有機カチオンとともに形成された塩。または、（ｄ）（ａ）と（ｂ）または（ｃ
）との結合、例えば、タンニン酸亜鉛、その他同様のもの。好ましい酸付加塩は
、トリフルオロ酢酸塩および酢酸塩である。

【００３３】 ここで使用される「薬学的に許容可能な担体」とは、本発明の化合物と併用し
たとき、前記化合物が、精子の活動を阻害する能力のような生理活性を維持する
ことが可能であり、かつ、患者の免疫系と反応しない任意の材料を含む。例とし
ては、リン酸緩衝生理食塩水、水、油／水エマルジョンのようなエマルジョン、
および種々のタイプの加湿薬のような任意の標準的な薬学的担体を含むが、これ
らに限定されない。エアロゾルまたは非経口投与のための好ましい希釈剤は、リ
ン酸緩衝生理食塩水または標準（０．９％）の生理食塩水である。そのような担
体を含む調合物は、よく知られた従来技術により調製することができる。（例え
ば、Remington's Pharmaceutical Science, Chapter 43, 14th Ed., Mack Publi
shing Col, Easton PA 18042, USAを参照のこと。） （化合物） ＨＩＶ−１逆転写酵素（ＲＴ）のＮＮＩｓが抗ＨＩＶ活性を有していることが
明らかになるうちに、前記ＮＮＩｓの新規なものが合成された。１９９８年３月
１７日出願の米国特許出願シリアルナンバー０９／０４０，５３８は、参照する
ことによりそのすべての成果をこの場に組み込むことができるが、逆転写酵素の
非ヌクレオシドインヒビター、ＨＩＶ−ＲＴのＮＮＩ複合結合ポケット、および
それらの使用方法を開示している。

【００３４】 これらＮＮＩｓのうち特定のものは、殺精子性および／または精子を固定化す
る活性を有することが予期せず発見され、それらは、避妊および精子固定化の製
造物および方法のための活性薬剤として有用であると考えられた。殺精子活性を
有するＮＮＩｓは、ＰＢＴおよびＤＡＢＯの新規な誘導体を含む。本発明の、前
記ＰＢＴおよびＤＡＢＯの誘導体は、特に、性的感染病の流行、特にＨＩＶの流
行を減少させる避妊のための製造物を形成するのに有用である。精子をこれらの
殺精子ＮＮＩｓに接触させることは、精子の運動性を阻害し、望ましい殺精子お
よび／または受胎阻害機能を得る。

【００３５】 顕著な殺精子活性を示すＰＢＴ誘導体は、下記に示す（Ｉ）の化学構造を有す
るハロゲン置換ＰＢＴ誘導体または薬学的に許容可能なその塩を含む。

【００３６】

【化６】

【００３７】 ここで、Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄は、それぞれ独立に水素、Ｆ、Ｃｌ、Ｂ
ｒおよびＩであり、かつ、Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄のうち少なくとも一つは
、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである。

【００３８】 式（Ｉ）中Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄のうち少なくとも一つは、ＦまたはＣ
ｌであることが好ましい。本発明のハロゲン置換ＰＢＴ誘導体のうち好適なもの
のすべてではないがいくつかを以下に列挙する。

【００３９】 Ｎ−［２−（２−フルオロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジ
ル）］−チオ尿素 Ｎ−［２−（２−クロロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジル
）］−チオ尿素 Ｎ−［２−（３−フルオロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジ
ル）］−チオ尿素 Ｎ−［２−（３−クロロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジル
）］−チオ尿素 Ｎ−［２−（４−フルオロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジ
ル）］−チオ尿素 Ｎ−［２−（４−クロロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジル
）］−チオ尿素。

【００４０】 本発明のより好ましいＰＢＴ誘導体の一つは、下記に示す（II）の化学構造を
有するＮ−［２−（２−フルオロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピ
リジル）］−チオ尿素（Ｆ−ＰＢＴ）である。

【００４１】

【化７】

【００４２】 本発明のＰＢＴ誘導体は、ここに示す実施例にしたがって、また、Vig et al.
,BIOORG. MED. CHEM., 6:1789-1797 (1998)の記述にしたがって合成することが
できる。簡単に言うと、２−アミノ−５−ブロモピリジンを、１，１−チオカル
ボニルジイミダゾールとともに縮合して、前駆体のチオカルボニル誘導体を供給
する。さらなる反応を、適切にハロゲン置換されたフェネチルアミンと共に行う
ことにより、標的のハロゲン化ＰＢＴ誘導体を得る。

【００４３】 顕著な殺精子活性を有するＤＡＢＯ誘導体は、下記に示す化学構造（III）を
有するＤＡＢＯ誘導体または薬学的に許容可能なその塩を含む。

【００４４】

【化８】

【００４５】 ここで、Ｒ₁およびＲ₂は、同じであるかまたは異なっており、かつ、水素、ハ
ロ、アルキル、アルケニル、ヒドロキシ、アルコキシ、チオアルキル、チオール
、ホスフィノ、ＲＯＨ、またはＲＮＨ基である。ここで、Ｒは、アルキル基であ
る。好ましくは、Ｒ₁およびＲ₂のうち１またはそれ以上は、メチル（Ｍｅ）、エ
チル（Ｅｔ）、またはイソプロピル（ｉ−Ｐｒ）のような、１〜３個の炭素原子
(carbonatones)を有する（Ｃ₁〜Ｃ₃）アルキル基である。好ましくは、Ｒ₁は、
アルキル、アルケニル、ＲＯＨ、またはＲＮＨ₂である。Ｒ２は、好ましくは、
ハロ、アルキル、またはＣ₁〜Ｃ₃アルコキシである。

【００４６】 Ｙは、ＳまたはＯであり、好ましくはＳである。Ｒ₃は、アルキル、アルケニ
ル、アリール、アラルキル、ＲＯＨ、またはＲＮＨ₂基である。ここで、Ｒは、
アルキル基であり、好ましくはＣ₁〜Ｃ₃アルキル基である。

【００４７】 好ましいＤＡＢＯ誘導体は、下記に示す化学構造（IV）を有する化合物または
薬学的に許容可能なその塩を含む。

【００４８】

【化９】

【００４９】 ここで、Ｒ₁は、Ｍｅ、Ｅｔ、またはｉ−Ｐｒであり、Ｒ₂は、ＨまたはＭｅで
ある。

【００５０】 本発明の好適なＤＡＢＯ誘導体化合物のすべてではないがいくつかは、下記に
列挙する（ａ）から（ｄ）までの化合物または薬学的に許容可能なその塩を含む
。 （ａ） ５−メチル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６−ベンジル−ピリ
ミジン−４−１Ｈ−オン、 （ｂ） ５−エチル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６−ベンジル−ピリ
ミジン−４−１Ｈ−オン、 （ｃ） ５−イソプロピル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６−ベンジル
−ピリミジン−４−１Ｈ−オン、および （ｄ） ５−イソプロピル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６−（３，５
−ジメチルベンジル）−ピリミジン−４−１Ｈ−オン。

【００５１】 本発明のより好ましいＤＡＢＯ誘導体の一つは、下記に示す化学構造（Ｖ）に
より例示する５−イソプロピル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６−（ベ
ンジル）−ピリミジン−４−（１Ｈ）−オン（Ｓ−ＤＡＢＯ）および薬学的に許
容可能なその塩である。

【００５２】

【化１０】

【００５３】 ＤＡＢＯ誘導体は、ここに示す実施例の記述に従い、およびVig et al., BIOO
RG MED CHEM LETTERS, 8: 1461-1466 (1998)の記述にしたがって調製することが
できる。

【００５４】 上記に列挙した（ａ）から（ｄ）までのＤＡＢＯ誘導体の調製のための一般的
な合成スキームは、以下の通りである。

【００５５】

【化１１】

【００５６】 試薬および条件：ａ）Ｒ₂ＣＨＢｒＣＯＯＥｔ／Ｚｎ／ＴＨＦ、 ｂ）ＨＣｌ（
ａｑ）、 ｃ）（Ｈ₂Ｎ）₂ＣＳ／Ｎａ／ＥｔＯＨ、 ｄ）ＤＭＦ、Ｋ₂ＣＯ₃、ク
ロロメチルメチルスルフィド、１５時間 簡単に言うと、エチル−２−アルキル−４−（フェニル）−３−オキソブチレ
ート１ａ〜ｄを、市販ルートで入手可能なフェニルアセトニトリルから得た。前
記β−ケトエステルを、ナトリウムエトキシドの存在下でチオ尿素とともに縮合
し、対応するチオウラシル２ａ〜ｄを供給した。化合物（１ａ〜ｄおよび２ａ〜
ｄ）は、以前に記述された方法に従って製造された。(Danel, K. et al., Acta
Chemica Scandinavica, 1997, 51, 426-430; Mai, A. et al., J. Med. Chem.,
1997, 40, 1447-1454; Danel, K. et al., J. Med. Chem., 1998, 41, 191-198)
続いての反応は、チオウラシルとメチルクロロメチルスルフィドのＮ，Ｎ−ジ
メチルホルムアミド（ＤＭＦ）中炭酸カリウムの存在下での反応であり、化合物
３ａ〜ｄを中程度の収率で与えた。チオウラシル化合物２（１ｍｍｏｌ）、メチ
ルクロロメチルスルフィド（１ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（１ｍｍｏｌ）
の無水ＤＭＦ（５ｍｌ）中混合物を、室温で一晩攪拌した。水（５０ｍｌ）で処
理した後、前記溶液を、酢酸エチル（３×５０ｍｌ）で抽出した。抽出液を合わ
せ、飽和食塩水（２×５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、減
圧下で濃縮し、粗生成物３ａ〜ｄを得た。それを、カラムクロマトグラフィー（
ヘキサン：酢酸エチル展開溶媒）で精製した。

【００５７】 いくつかのＰＢＴ誘導体およびＤＡＢＯ誘導体の純度および物理化学的性質は
、ここでの実施例に記述されており、また、Vig et al., BIOORG. MED. CHEM.,
6: 1789-1797 (1998); およびVig et al., BIOORG MED CHEM LETTERS, 8: 1461-
1466 (1998)の中で詳細に報告されている。

【００５８】 （調合物、物品および方法） 本発明におけるＰＢＴおよびＤＡＢＯの誘導体は、殺精子剤として使用する調
合物に製剤することができる。そのような調合物は、特に哺乳類、すなわち、幼
体を乳腺から分泌されるミルクで養う高等な脊椎動物の任意のクラス、例えば、
ヒト、ウサギおよびサルに使用するよう意図されている。また、前記調合物は、
精子固定化のための調合物として使用することもできるように意図されている。
本発明は、最も実際的な応用において、ヒトに使用されることが期待される。

【００５９】 前記本発明の調合物は、上記で開示した殺精子性ＰＢＴおよびＤＡＢＯならび
に薬学的に許容可能なそれらの塩のうち一種類以上を含む。通常用いられる殺精
子性ＰＢＴおよびＤＡＢＯ誘導体の量は、望ましい殺精子剤としておよび抗ウィ
ルス保護薬としての結果を達成するのに必須の量である。前記量は、特定の調合
物に対する必要に応じて変えることができる。殺精子性ＰＢＴおよびＤＡＢＯ誘
導体の量の典型的な範囲は、避妊用調合物の総重量に基づいて０．０２５〜０．
５重量％である。好ましくは、使用される前記殺精子性ＰＢＴおよびＤＡＢＯの
量は、避妊用調合物の総重量に基づいて０．０５〜０．５重量％であり、より好
ましくは、０．０５〜０．２５重量％である。

【００６０】 前記本発明の調合物は、殺精子性ＰＢＴおよびＤＡＢＯ誘導体だけでなく、必
要に応じ、薬学的に許容可能な担体、希釈剤またはベヒクルをも含んでいても良
い。すなわち、殺精子性ＮＮＩｓを、精子と接触する部位に適切に輸送し、およ
び／または留め、望ましい殺精子性、および／または抗ウィルス保護薬としての
活性を提供する材料である。

【００６１】 殺精子剤投与のための前記薬学的調合物における一つの有用な成分は、米国特
許第５，５９５，９８０号に記述されているポリマー状輸送成分(polymeric del
ivery component)であり、この特許は、参照することによりこの場に組み込まれ
る。そのようなポリマー状輸送成分は、殺精子性効果を増進させ、投与時の膣内
炎症を減少させることが分かっている。

【００６２】 前記ポリマー状成分に加え、前記避妊用調合物の残りの部分、すなわち、典型
的には約０．１〜９９．８％、およびしばしば約５０〜９９．８重量％は、任意
に一種類以上の化粧品用処方成分(cosmetic ingredient)を含んでいても良い。
そのような化粧品用処方成分は、この技術分野の当業者に対し公知であり、この
技術分野では、しばしば、希釈剤、溶剤および補助剤として適用される。典型的
な化粧品用処方成分は、例えば、水、エチルアルコール、イソプロピルアルコー
ル、グリセリン、グリセロールプロピレングリコール、ソルビトールおよび他の
高分子量アルコールを含む。加えて、避妊用調合物は、少量の、例えば、前記避
妊用調合物の総重量に基づいて約０．１〜５％重量の他の添加剤を含んでいても
良い。前記他の添加剤とは、例えば、安定剤、界面活性剤、メントール、ユーカ
リ油、他の精油、香料、およびその他同様のものである。ポリオキシエチレン２
０ソルビタンモノラウリル酸エステルは、前記調合物への使用に好ましい安定剤
である。化粧品用処方成分と他の添加剤の選択および量、ならびにブレンド手法
は、この技術分野における周知の技法にしたがって行うことができる。

【００６３】 本発明における前記殺精子活性の処方成分、およびそれを含む避妊用調合物は
、この技術分野における当業者に公知である任意の手段により哺乳類の膣に輸送
して(deliver)良い。前記調合物を輸送するための典型的な形態は、例えば、ク
リーム、ローション、ゲル、フォーム、また、スポンジ、女性用コンドームを含
むコンドーム、座薬およびフィルムのような膣内デバイスを含む。加えて、本発
明の前記避妊用化合物および調合物は、例えば、コンドーム潤滑剤その他同様の
もののような個人医療用製品として使用することもできる。そのような潤滑剤は
、前記本発明の調合物に加えて、一般に知られている処方成分を含んでいても良
い。例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、グリコールおよびグリ
コールエステル等の湿潤剤、グルコノ−ｄ−ラクトン等の緩衝剤、グルコン酸ク
ロルヘキシジン等の殺菌剤(germicides or bactericides)、メチルパラベン等の
保存料、ヒドロキシエチルセルロース等の増粘剤(viscosifier)、色素および香
料等の他の補助剤等である。この技術分野における当業者は、そのような輸送形
態の物理的性質、例えば粘度等は、幅広く変化するということを認識できるはず
である。例として、前記本発明の調合物のゲル形態の粘度は、例えば１５万セン
チポアズであり、前記本発明の調合物のローション形態の粘度、例えば１００セ
ンチポアズよりも本質的に高くて良い。そのような輸送形態の材料、処方成分、
配合および製造手段(procedures)のさらなる詳細は、この技術分野における周知
の方法にしたがって選択することができる。

【００６４】 前記本発明の避妊用調合物は、好ましくは、哺乳類の膣のような精子と接触す
る部位に、精子、例えば膣内に存在する精子を固定化するのに効果的な用量、お
よび／または精子が子宮頚管粘液を透過するのを阻害するのに効果的な用量投与
される。前記調合物の典型的な用量範囲は、哺乳類の体重１キログラム当たり約
０．０００１〜０．００１グラムである。

【００６５】 膣内デバイスも、また、前記殺精子活性を有する処方成分またはそれを含む避
妊用調合物を補助するために用いて良い。その使用は、米国特許第５，０６９，
９０６号と同様のものを含み、その開示内容は、参照によりこの場に組み込まれ
る。

【００６６】 上記の調合物の形態により殺精子活性を有する処方成分を投与する場合、前記
調合物は、また、前記殺精子剤を急速におよび／または薬剤の延長放出により放
出するように剤型化して良い。急速なおよび延長された放出を提供するそのよう
な剤型化は、米国特許第４，７０７，３６２号に記述されており、これもまた、
参照によりこの場に組み込まれる。

【００６７】 本発明の殺精子性ＮＮＩｓは、膣内挿入物、コンドームまたは同様の他のデバ
イスのような殺精子性物品に組み込み、前記物品が使用されたとき、前記殺精子
性ＮＮＩが精子と接触するように輸送されることも意図されている。

【００６８】 本発明を、以下の実施例を参照しながらさらに説明する。これは、本発明を限
定するものと解釈すべきではない。

【００６９】 （実施例） 受胎能コントロールを提供するとともに潜在的にＨＩＶ感染症の予防に適した
膣内殺菌性避妊剤を開発する努力において、ＨＩＶ−１逆転写酵素（ＲＴ）の新
規な非ヌクレオシドインヒビター（ＮＮＩｓ）を合成し、抗ＨＩＶおよび殺精子
活性の二重機能を試験した。

【００７０】 ＨＩＶ ＲＴのインヒビターとしての新規なＮＮＩｓの合成は、複合結合ポケ
ットが９のそれぞれ独立したＲＴ−ＮＮＩ複合体の結晶構造から構成されている
コンピュータモデルに基づいた。［挿入部位(INSERT CITATION)］前記新規なＮ
ＮＩｓは、Ｎ−［２−（２，５−ジメトキシフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５
−ブロモピリジル）］チオ尿素（Ｄ−ＰＢＴ）、Ｎ−［２−（２−フルオロフェ
ネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジル）］−チオ尿素（Ｆ−ＰＢＴ）
、および５−イソプロピル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６−（ベンジ
ル）−ピリミジン−４−（１Ｈ）−オン（Ｓ−ＤＡＢＯ）を含む。

【００７１】 図１に示す通り、ＮＮＩトロビルジンは、チオ尿素基によって二つの化学基が
互いに結合していることが見て取れる。前記分子の二分の一は、分子内水素結合
したヘテロ環を形成するピリジルチオ尿素部分から構成されている。前記分子の
他の半分は、エチル架橋によりチオカルボニル基から分離されたピリジン環であ
る。トロビルジンを用いたコンピュータによるドッキング方法(computer dockin
g procedures)は、トロビルジンのピリジン環、エチル架橋および５−ブロモ部
位の近辺を囲むより大きな官能基の取り込みに使用することができる複数の部位
を明らかにした。したがって、戦略的にデザインされた官能基を、潜在的にＨＩ
Ｖ ＲＴのＮＮＩ結合ポケットとより高い親和性を有する新規な誘導体を得るた
めに付加した。二種類の新規なＰＢＴ誘導体（Ｄ−ＰＢＴおよびＦ−ＰＢＴ）を
、トロビルジンの２−ピリジル環を２，５−ジメトキシフェニル部分で置換（Ｄ
−ＰＢＴ）またはオルト位をフッ素原子で置換することにより（Ｆ−ＤＢＴ）合
成した。ＤＡＢＯの誘導体化は、強力なＨＥＰＴ誘導体のモデリング研究および
チミン環のＣ−５位へのイソプロピル基の付加により達成された（Ｓ−ＤＡＢＯ
）。

【００７２】 これら三種の新規ＮＮＩｓ（Ｄ−ＰＢＴ、Ｆ−ＤＢＴおよびＳ−ＤＡＢＯ）に
おける抗ＨＩＶ活性を、トロビルジンおよび殺ウィルス性／殺精子剤であるノノ
キシノール−９（Ｎ−９）と比較した。前記比較は、ＨＩＶ感染したヒト末梢血
単核細胞（ＰＢＭＣｓ）を用いてウィルスＲＴ活性およびウィルス複製のマーカ
ーとしてのｐ２４抗原生産を測定することにより行った。精子の動きの運動学お
よび精子の膜の完全性に対する効果は、計算機補助による精子解析（computer-a
ssisted sperm analysis、ＣＡＳＡ）および共焦レーザー走査顕微鏡検査法（co
nfocal laser scanning microscopy、ＣＬＳＭ）によりそれぞれ分析した。ＮＮ
Ｉ対Ｎ−９の、正常なヒト子宮膣部および頚管内上皮細胞に対する成長阻害効果
は、ＭＴＴアッセイを用いてテストした。三種のＮＮＩｓのすべては、Ｎ−９ま
たはトロビルジン（ＩＣ₅₀値はそれぞれ２．２μＭおよび０．００７μＭ）と比
較すると、精製した組替えＨＩＶ ＲＴの強力なインヒビターであり、かつ、Ｐ
ＢＭＣｓ中のＨＩＶ複製をナノモル濃度（ＩＣ₅₀＜１ｎＭ）で廃止した。Ｆ−Ｐ
ＢＴおよびＳ−ＤＡＢＯの二種類のＮＮＩｓは、それに加え、濃度および時間依
存の殺精子活性を示した。

【００７３】 Ｉ． 構成物質および手法 Ａ． 化学合成 全ての化学薬品は、Aldrich Chemical Company（ウィスコンシン州ミルウォー
キー）から入手して使用した。全ての反応は、窒素雰囲気下で行った。カラムク
ロマトグラフィーは、EM Scienceのシリカゲル６０を用い、酢酸エチル、メタノ
ール、クロロホルム、ヘキサン、または塩化メチレンのうち一種類の溶媒を用い
て行った。核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは、Varian（カリフォルニア州パロ
アルト(Palo Alto)）の３００ＭＨｚ機器（Mercury 2000モデル）により記録し
、ケミカルシフト（δ）は、テトラメチルシランを０ｐｐｍの内部標準として、
百万分率（ｐｐｍ）で報告した。¹³ＣＮＭＲスペクトルは、同じ機器により、プ
ロトンデカップリング法を用い、ＣＤＣｌ₃中７５ＭＨｚで記録した。¹³ＣＮＭ
Ｒについて報告したケミカルシフトは、７７ｐｐｍにおけるクロロホルム三重線
と比較対照したものである。融点は、Mel-Temp 3.0（Laboratory Devices社、マ
サチューセッツ州ホリストン(Holliston)）融点測定機器を用いて測定したもの
であり、未補正値である。ＵＶスペクトルは、Beckmann（カリフォルニア州フー
レルトン(Fullerton)）のmodel DU 7400 ＵＶ／Ｖｉｓスペクトロメータにより
、経路長1ｃｍのセルおよびメタノールを用いて記録したものである。フーリエ
変換赤外スペクトルは、FT-Nicolet（ウィスコンシン州マディソン）のmodel Pr
otege 460機器を用いて記録した。マススペクトル解析は、ヒューレットパッカ
ード（カリフォルニア州パロアルト）のMatrix Assisted Laser Description ti
me-of-flight （MALDI-TOF）スペクトロメータ（model G2025A）を用い、分子イ
オン検知モードで行った（使用したマトリックスは、シアノヒドロキシケイ皮酸
である）。いくつかのサンプルは、Finnigan（ウィスコンシン州マディソン）の
MAT 95機器を用いて解析した。元素分析は、Atlantic Microlabs（ジョージア州
ノークロス(Norcross)）により行われた。

【００７４】 １． トロビルジンの化学合成 トロビルジン（Ｎ−［２−（２−ピリジル）エチル］−Ｎ’−（２−ブロモピ
リジル）チオ尿素）は、文献の方法にしたがって合成した。Cantrell et al., J
MED CHEM 39: 4216-4274 (1996)を参照のこと。

【００７５】 ２． Ｄ−ＰＢＴの化学合成 化合物Ｄ−ＰＢＴ（［Ｎ−［２−（２，５−ジメトキシフェネチル）］−Ｎ’
−［２−（５−ブロモピリジル）］チオ尿素）は、Vig et al., BIOORG. MED. C
HEM., 6: 1789-1797 (1998)に記述の通りに合成した。

【００７６】 簡単に言うと、Ｄ−ＰＢＴは、スキーム１に記述の通りに合成した。

【００７７】

【化１２】

【００７８】 得られたＤ−ＰＢＴの純度および性質は、以下の通りである。 白色固体(2g、67%); 融点133〜138℃; UV(MeOH)λ_max: 202,205,231,276および30
0nm; IR(KBrディスク) ν 3209, 3152, 3078, 3028, 2951, 2831, 1595, 1533,
1468, 1306, 1227, 1095, 1059, 1022, 862, 825, 796, 707cm^-1; ¹H NMR(CDCl₃ ) δ 11.24(br s, 1H), 9.30(br s,1H), 8.10-8.09(d,1H), 7.65(dd,1H), 6.82-
6.76(m,4H), 4.03-3.97(q,2H), 3.77(s,3H), 3.76(s,3H), 3.00-2.96(t,2H); ¹³ C NMR(CDCl₃) δ 178.7, 153.1, 151.8, 151.7, 146.5, 140.9, 128.1, 117.7,
113.3, 112.6, 111.2, 110.9, 55.7, 55.5, 45.6, および29.9; MALDI-TOF mass
実測値,394.0(M-1), 396.0(M+1), 計算値,395.0; 元素分析 (C₁₆H₁₈BrN₃O₂S) C
,H,N,S,Br. ３． Ｆ−ＰＢＴの化学合成 化合物Ｆ−ＰＢＴ（Ｎ−［２−（２−フルオロフェネチル）］−Ｎ’−［２−
（５−ブロモピリジル）］−チオ尿素）は、Vig et al., BIOORG. MED. CHEM.,
6: 1789-1797 (1998)に記述の通りに合成した。

【００７９】 より詳しく言うと、Ｆ−ＰＢＴは、スキーム２にしたがって合成した。簡単に
言うと、２−アミノ−５−ブロモピリジンを１，１−チオカルボニルジイミダゾ
ールと縮合して、前駆体のチオカルボニル誘導体を与えた。適切に置換されたフ
ェネチルアミン、このケースでは２−フルオロフェネチルアミンとさらに反応さ
せ、標的のＦ−ＰＢＴを得た。

【００８０】

【化１３】

【００８１】 ここで、 ｉ）１，１−チオカルボニルジイミダゾール、アセトニトリル、室温、１２時間
および ii）ＤＭＦ、２−フルオロフェネチルアミン、１００℃、１５時間 である。

【００８２】 Ｆ−ＰＢＴの合成のために、以下の方法を特別に用いた。チオカルボニルジイ
ミダゾール（８．９０ｇ、５０ｍｍｏｌ）および２−アミノ−５−ブロモピリジ
ン（８．９２ｇ、５０ｍｍｏｌ）を、５０ｍＬの乾燥アセトニトリル中に室温で
加えた。この反応混合物を１２時間攪拌し、沈殿物を濾取し、冷アセトニトリル
（２×２５ｍＬ）で洗浄し、減圧下で乾燥して、１１．４０ｇ（８０％）の化合
物Ａを得た。化合物Ａ（０．５５当量）のジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）中
縣濁液に、適切なアミン、このケースでは２−フルオロフェネチルアミン（０．
５０当量）を加えた。この反応混合物を１００℃に熱し、１５時間攪拌した。こ
の反応混合物を氷水中に注ぎ、その縣濁液を３０分間攪拌した。この生産物を濾
取し、水洗し、乾燥し、さらにカラムクロマトグラフィーで精製して、標的化合
物を良好な収率で与えた。

【００８３】 得られたＮ−［２−（２−フルオロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロ
モピリジル）］チオ尿素（Ｆ−ＰＢＴ）の純度および性質は、以下の通りである
。 収率: 71%; 融点156〜157℃; UV(MeOH)λ_max: 209,256,274および305nm; IR(KBr
) ν 3446, 3234, 3163, 3055, 2935, 1672, 1595, 1560, 1531, 1466, 1390, 1
362, 1311, 1265, 1227, 1169, 1136, 1089, 1003, 864, 825, 756cm^-1; ¹H NMR
(CDCl₃) δ 11.36(br s, 1H), 9.47(br s,1H), 8.05-8.04(d,1H), 7.72-7.68(dd
,1H), 7.30-7.03(m,4H), 6.87-6.84(d,1H), 4.06-3.99(q,2H), 3.10-3.05(t,2H)
; ¹³C NMR(CDCl₃) δ 179.1, 163.1, 151.7, 146.2, 141.1, 131.2, 131.1, 128
.5, 128.4, 124.1, 115.5, 115.2, 113.6, 112.2, 45.8 および28.2; ¹⁹F NMR(C
DCl₃) δ -42.58および-42.55(d); Maldi Tof 実測値,355.0(M+1), 計算値,354.
0; 元素分析 (C₁₄H₁₃BrFN₃S) C,H,N,S. ４． Ｓ−ＤＡＢＯの化学合成 Ｓ−ＤＡＢＯ、５−イソプロピル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６−
（ベンジル）−ピリミジン−４−（１Ｈ）−オン（Ｓ−ＤＡＢＯ）は、Vig et a
l., BIOORG. MED. CHEM. LETTERS, 8: 1461-1466 (1998)に記述の通りに合成し
た。

【００８４】 より詳しく言うと、Ｓ−ＤＡＢＯは、スキーム３に示す通りに調製した。

【００８５】

【化１４】

【００８６】 ここで、 ａ） Ｒ₂ＣＨＢｒＣＯＯＥｔ／Ｚｎ／ＴＨＦ、 ｂ） ＨＣｌ（ａｑ） ｃ） （Ｈ₂Ｎ）₂ＣＳ／Ｎａ／ＥｔＯＨ、 ｄ） ＤＭＦ、Ｋ₂ＣＯ₃、クロロメチルメチルスルフィド、１５時間 である。

【００８７】 簡単に言うと、エチル−２−イソプロピル−４−（フェニル）−３−オキソブ
チレートを、市販ルートで入手可能なフェニルアセトニトリルから得た。このβ
−ケトエステルを、チオ尿素とともに、ナトリウムエトキシドの存在下で縮合し
、チオウラシルを与えた。前記エチル−２−イソプロピル−４−（フェニル）−
３−オキソブチレートおよび前記チオウラシル化合物は、以前に報告されている
方法により製造した(Danel, K. et al., Acta Chemica Scandinavica, 1997, 51
, 426-430; Mai, A. et al., J. Med. Chem., 1997, 40, 1447-1454; Danel, K.
et al., J. Med. Chem., 1998, 41, 191-198)。続いて、チオウラシルとメチル
クロロメチルスルフィドを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中炭酸カ
リウムの存在下で反応させ、化合物３ａ〜ｄを中程度の収率で得た。ＤＭＦ（５
ｍｌ）中チオウラシル化合物２（１ｍｍｏｌ）、メチルクロロメチルスルフィド
（１ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で一晩攪拌
した。水（５０ｍｌ）で処理した後、前記溶液を、酢酸エチル（３×５０ｍｌ）
で抽出した。合わせた抽出液を、飽和食塩水（２×５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し
（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、減圧下で濃縮し、粗生成物３ａ〜ｄを得た。それを、
シリカゲル６０のカラムクロマトグラフィーで、ヘキサン／酢酸エチルを展開溶
媒に用いて精製した。

【００８８】 得られた５−イソプロピル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６−（ベン
ジル）−ピリミジン−４−１Ｈ−オン（Ｓ−ＤＡＢＯ）の純度および性質は、以
下の通りである。 収率 57%; 融点116〜117℃; ¹H NMR(CDCl₃) δ 1.22(d, 6H), 2.07(s,3H), 3.03
(q,1H), 3.88(s,2H), 4.21(s,2H), 7.24-7.13(m,5H), 12.43(s,1H); ¹³C NMR(CD
Cl₃) δ 15.4(SCH₃), 19.6(CH₃), 28.0(CH), 36.3(CH₂Ph), 40.9(SCH₂), 125.3(
C-5), 138.3-126.3(Ph), 155.5(C-6), 161.1(C-4), 164.5(C-2); CI-MS 321.1(M
+1). Ｂ． 抗ＨＩＶ活性のin vitroアッセイ ＨＩＶ−１のＨＴＬＶ_IIIB株(strain)をＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞中に繁殖させ、
感染細胞における無細胞の上澄みから得られたウィルスのストックを、ＭＴ−２
細胞を用いて適定した。無細胞の上澄みは、収穫し、１ｍｌのアリクォット(ali
quot)中、−７０℃で凍結した。前記ストックウィルスの適定は、ＭＴ−２細胞
を用いて行った。また、この研究で用いたウィルスの細胞変性効果は、ＭＴ−２
細胞に対するＨＩＶ−１の典型的なものだった。

【００８９】 被験薬であるＤ−ＰＢＴ、Ｆ−ＰＢＴ、Ｓ−ＤＡＢＯ、トロビルジンおよびＮ
−９（IGEPAL CO-630; Rhone Poulenc製、ニュージャージー州クランベリー）の
抗ＨＩＶ−１活性のin vitroアッセイのために、ＨＩＶ−１陰性ドナーからの正
常な末梢血単核細胞（ＰＢＭＣｓ）を、２０％（ｖ／ｖ）の熱不活性化したウシ
胎児血清、３％のインターロイキン−２．２ｍＭのＬ−グルタミン、２５ｍＭの
ＨＥＰＥＳ、２ｇ／ＬのＮａＨＣＯ₃、５０μｇ／ｍｌのゲンタマイシン、およ
び４μｇ／ｍｌのフィトヘマグルチニン入りのＲＰＭＩ１６４０媒体（Gibco-BR
L、ニューヨーク州グランドアイランド）で７２時間培養することにより前処理
し、次に、ＨＩＶ−１に、感染多重度０．１、吸着時間１時間、３７℃、加湿５
％ＣＯ₂雰囲気中で暴露した。ＮＮＩｓ、トロビルジン、Ｄ−ＰＢＴ、Ｆ−ＰＢ
ＴおよびＳ−ＤＡＢＯのストック溶液（１０ｍＭ）は、ジメチルスルホキシド（
ＤＭＳＯ）により調製し、Ｎ−９は、培養液中で希釈した。細胞は、９６ウェル
のミクロタイタープレート（１００μｌ／ウェル； ２×１０⁶細胞／ｍｌ、三
重(triplicate)ウェル）中、種々の濃度（０．００１μＭから１００μＭ）の抗
ＨＩＶ薬剤の存在下および非存在下で７日間培養した。非感染の対照からの細胞
は、調製物からウィルスを除く他は同様にして扱った。培地の上澄み液のアリク
ォットは、感染後７日後に、ＲＴアッセイおよびｐ２４抗原のためにウェルから
除去した。これについては、以下の参考文献にすでに記述されている通りである
。Erice et al., ANTIMICROB AG CHEMOTHER, 37: 835-838 (1998); Uckun et al
., ANTIMICROB AGENTS CHEMOTHER, 42: 383-388 (1998); and Zarling et al.,
Nature 347: 92-95 (1990). ｐ２４酵素イムノアッセイは、市販ルートで入手可能な（Coulter Corporatio
n/Immunotech, Inc., メイン州ウェストブルック(westbrook)）非修飾の反応速
度アッセイである。このアッセイは、ＨＩＶ核タンパク質に対するネズミのモノ
クローナル抗体を、試験培養液上澄みサンプル中に存在する抗原が結合したミク
ロウェルストライプにコートして用いた。前記プレートは、ＥＬＩＳＡリーダー
（Molecular Devices, カリフォルニア州サニーベール(Sunnyvale)）により６５
０ｎｍで読み、ｎｇ／ｍｌで表したｐ２４レベルは、Coulter/Immunotech, Inc.
から入手した公知の標準試料に対して計算した。ウィルス阻害のパーセンテージ
は、試験物質で処理した感染細胞のｐ２４値を非感染細胞（すなわち、ウィルス
対照）のｐ２４値と比較して計算した。

【００９０】 化合物Ｄ−ＰＢＴ、Ｆ−ＰＢＴ、Ｓ−ＤＡＢＯおよびトロビルジンは、精製し
た組替えＨＩＶ ＲＴに対するＲＴ阻害活性を、シンチレーション近接アッセイ
(scintillation proximity assay)の原理を利用した無細胞 Quan−T-RT システ
ム（アマシャム社、イリノイ州アーリントンハイツ）を用いて試験した。Scinti
llation proximity assay, Nature, 341: 167-168 (1989)を参照のこと。前記ア
ッセイでは、ＤＮＡ／ＲＮＡプライマー／テンプレートは、ビオチン／ストレプ
トアビジンリンケージを介してＳＰＡビーズに結合している。前記プライマーＤ
ＮＡは、１６−ｍｅｒのオリゴ（Ｔ）であり、ポリ（ｒＡ）テンプレートにアニ
ールされている。前記プライマー／テンプレートは、ストレプトアビジンでコー
トされたＳＰＡビーズに結合されている。前記プライマーには、逆転写により、 ³ Ｈ−ＴＴＰが組み込まれている。簡単に言うと、最終濃度０．５Ｃｉ／試料の³ Ｈ−ＴＴＰを、ＲＴアッセイ緩衝液（４９．５ｍＭ トリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．
０、８０ｍＭ ＫＣｌ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ₂、１０ｍＭ ＤＴＴ、２．５ｍＭ
ＥＧＴＡ、０．０５％ Ｎｏｎｉｄｅｔ−Ｐ−４０）で希釈し、ＳＰＡビーズ
に結合したアニール済みＤＮＡ／ＲＮＡに添加した。テストされた前記化合物は
、前記反応混合物に対し、０．００１μＭ〜１００μＭ濃度で添加した。１０ｍ
Ｕの組替えＲＴの添加および３７℃、１時間のインキュベーションは、前記プラ
イマーの³Ｈ−ＴＴＰ組み込みによる拡張を引き起こした。前記反応は、０．２
ｍｌの１２０ｍＭ ＥＤＴＡを添加して停止させた。前記サンプルは、Beckman
LS 7600機器（Beckman Instruments、カリフォルニア州フーレルトン）を用いて
オープンウィンドウでカウントした(counted in an open window)。

【００９１】 ウィルス複製阻害のパーセンテージは、試験薬剤で処理した感染細胞のｐ２４
抗原値またはＲＴ活性を、未処理の感染細胞におけるｐ２４抗原値またはＲＴ活
性と比較して算出した。化合物の抗ＨＩＶ活性は、用量−応答曲線から算出され
、ＨＩＶ−１感染したＰＢＭＣｓのＨＩＶ−１ ＲＴ活性またはｐ２４抗原生産
を５０％に減少させる薬剤濃度で定義されるＩＣ₅₀値で表した。並行して、種々
の処理の細胞生存率に対する効果を、ミクロカルチャーテトラゾリウムアッセイ
（ＭＴＡ）を用いて試験した。前記アッセイは、２，３−ビス（２−メトキシ−
４−ニトロ−５−スルホフェニル）−５−［（フェニルアミノ）−カルボニル］
−２Ｈ−テトラゾリウムヒドロキシド（ＸＴＴ）を用い、Uckun et al., ANTIMI
CROB AGENTS CHEMOTHER, 42: 383-388 (1998)に開示の通りに行った。

【００９２】 Ｃ． 精子固定化活性（ＳＩＡ）のアッセイ トロビルジン、Ｄ−ＰＢＴ、Ｆ−ＰＢＴ、Ｓ−ＤＡＢＯおよびＺＤＶの殺精子
効果をＮ−９と比較して評価するために、共同提供したドナー（ｎ＝６）の精子
における高運動性フラクションを、断続性（９０〜４５％）のPercoll gradient
（Conception Technologies、カリフォルニア州サンディエゴ）遠心分離およびD
'Cruz et al., BIOL REPROD, 54: 1217-1228 (1996)に記述の「スイムアップ」
手法により調製した。全てのドナー精子検体は、Hughes Institute Institution
al Review Boardのガイドラインに従い、インフォームド・コンセント後に取得
した。運動性の精子（≧１０×１０⁶／ｍｌ）は、１％ＤＭＳＯ中一連の試験物
質の二倍希釈液（５００μＭから３１．２μＭ）の存在下および非存在下、２５
ｍＭのＨＥＰＥＳ（Irvine Scientific, カリフォルニア州サンタアナ）および
０．３％のＢＳＡを含む１ｍｌのBiggers、WhittenおよびWhittingamの媒体（Ｂ
ＷＷ）に縣濁させた。ＮＮＩｓのストック溶液は、ＤＭＳＯ（１００ｍＭ）を用
いて調製し、アッセイ媒体で希釈して、望みの濃度を得た。対応する量のＤＭＳ
Ｏ（１％）を、対照の試験管に加えた。Ｎ−９は、ＢＷＷ−０．３％ ＢＳＡ（
ｐＨ７．４）で希釈し、望みの濃度（３１．２μＭから５００μＭ）を得た。３
７℃で３時間のインキュベーション後、運動性精子のパーセンテージを、ＣＡＳ
Ａを用い、D' Cruz et al., BIOL REPROD, 58: 1515-1526 (1998)およびD' Cruz
et al., MOL HUM REPROD, 4: 683-693 (1998)に記述の方法によって評価した。
前記運動性パーセンテージは、シャム(sham)処理した運動性精子の対照縣濁液と
比較した。試験化合物の殺精子活性は、ＥＣ₅₀（運動性精子の割合を５０％に減
少させる媒体中化合物の最終濃度）で表した。

【００９３】 殺精子性ＮＮＩｓのＳＩＡにおけるインキュベーション持続の効果をテストす
るために、精子の運動性フラクション（１０⁷／ｍｌ）を、１％ＤＭＳＯ中１ｍ
ＭのＦ−ＰＢＴ、Ｓ−ＤＡＢＯ存在下、またはベヒクルコントロールとして１％
ＤＭＳＯのみの存在下、ＢＷＷ−０．３％ ＢＳＡ中３７℃でインキュベートし
た。５〜１０分の間隔で、まったく同じアリクォット（４−μｌ）を二つの２０
μｍミクロセルチャンバー（Conception Technologies）に移し、精子の運動性
は、持続時間６０分で、ＣＡＳＡにより評価した。

【００９４】 Ｄ． 精子の運動パラメータ ＣＡＳＡのために、それぞれの精子縣濁液の４μｌを、３７℃の計算盤中二つ
の２０μｍミクロセルチャンバーに充填した。チャンバーごとに少なくとも５〜
８フィールドをスキャンし、Hamilton Thorne Integrated Visual Optical Syst
em（ＩＶＯＳ）バージョン１０機器（Hamilton Thorne Research Inc., マサチ
ューセッツ州ダンバーズ(Danvers)）を用いて解析した。それぞれのフィールド
は、３０秒間記録した。コンピュータによる検定は、(computer calibration)は
、フレームレート３０／秒で、３０フレーム行った。他の設定は、以下の通りで
ある。最小コントラスト８、最小サイズ６、低サイズゲート１．０、高サイズゲ
ート２．９、低強度ゲート０．６、高強度ゲート１．４、位相差顕微鏡の照度(p
hase-contrast illumination)、低経路速度１０μｍ／ｓ、および直線度の閾値(
threshold straightness)８０％、および拡大因子１．９５。

【００９５】 決定された前記精子の運動パラメータは、多数の運動性（ＭＯＴ）および進歩
的に（ＰＲＧ）運動性の精子、曲線状速度（ＶＣＬ、与えられた精子がデータ処
理の間に移動した全距離を経過時間で割った測定値）、平均経路速度（ＶＡＰ、
精子頭部の揺れを取り除いた空間的な平均経路）、直線速度（ＶＳＬ、移動経路
の始点と終点の間の直線距離をかかった時間で割ったもの）、ビートクロス周波
数（ＢＣＦ、精子頭部が精子の平均経路を横切る周波数）、精子頭部の横向き変
位量の幅（ＡＬＨ、精子頭部の振れの平均幅）およびそれらの導関数、ストレー
トネス（ＳＴＲ＝ＶＳＬ／ＶＡＰ×１００）およびリニアリティー（ＬＩＮ＝Ｖ
ＳＬ／ＶＣＬ×１００、精子の経路の直線からの逸脱度）を含んでいた。各個の
細胞経路からのデータを記録し、解析した。サンプルしたそれぞれのアリクォッ
トに対し、少なくとも２００の運動性精子を解析した。

【００９６】 Ｅ． 共焦レーザー走査顕微鏡検査法（confocal laser scanning microscopy
、ＣＬＳＭ） 増加濃度（３１．２μＭから５００μＭ）の三種のＮＮＩｓ（Ｓ−ＤＡＢＯ、
Ｆ−ＰＢＴおよびＤ−ＰＢＴ）の存在下または非存在下、６時間の処理後におけ
る先体が無傷な精子のパーセンテージは、Ｎ−９の場合と比較し、ＣＬＳＭで評
価した。エタノール透過し、空気乾燥した精子の塗抹標本は、三種の蛍光マーカ
ーFITC-Pisum sativum レクチン(lectin)、TOTO-3ヨージドおよびナイルレッド
（Molecular Probes、オレゴン州ユージン）で順次染色した。なぜならば、それ
らの標的は異なる（それぞれ先体、核および膜脂質）からである。試料は、クリ
プトン／アルゴン混合ガスレーザー（励起ライン４８８、５６８および６４７ｎ
ｍ）を装備し、Nikon Eclipse E800シリーズアップライト型顕微鏡を取り付けた
Bio Rad MRC-1024 レーザー走査共焦顕微鏡（Bio Rad Laboratories、カリフォ
ルニア州ハーキュリーズ）で試験した。エタノール透過後、精子の先体領域、核
および細胞膜からのフルオレッセイン、TOTO-3ヨージドおよびナイルレッドの蛍
光放射は、それぞれ５９８／４０ｎｍ、５２２ＤＦ３２および６８０ＤＦ３２放
射／フィルターを用いて同時に検出した。共焦イメージは、Nikon １００×（Ｎ
Ａ １．３５）対物レンズおよびKalman集光フィルターを用いて得た。デジタル
画像は、Jaz disk（Iomega Corporation、ユタ州ロイ）に保存し、Lasersharp（
Bio-Rad）およびアドビフォトショップソフトウェア（アドビ システムズ、カ
リフォルニア州マウンテンビュー）を用いて加工した。最終画像は、Fuji Pictr
ography 3000（富士写真フィルム株式会社、日本国東京）カラープリンタで印刷
した。

【００９７】 Ｆ． 細胞増殖アッセイ 正常なヒト子宮膣部（CrEC 4627）および頚管内（CrEC−En 4312）細胞をClon
etics（カリフォルニア州サンディエゴ）から入手し、Ｔ−１５０ｃｍ²組織培養
フラスコ（コーニング社、ニューヨーク州コーニング）を用いて、５０μｇ／ｍ
ｌのＢＰＥ、０．５μｇ／ｍｌのヒドロコルチゾン、０．５μｇ／ｍｌのｈＥＧ
Ｆ、０．１μｇ／ｍｌのレチノイン酸、１０μｇ／ｍｌのトランスフェリン、５
μｇ／ｍｌのインシュリン、５μｇ／ｍｌのエピネフリンおよび０．５ｍｇ／ｍ
ｌのＢＳＡ−ＦＡＦにより供給された小気道上皮細胞基礎培地(small airway ep
ithelial cell basal medium) (Clonetics)中で増殖させた。Ｆ−ＰＢＴおよび
Ｓ−ＤＡＢＯの、Ｎ−９と比較しての成長阻害効果を決定するために、我々は、
Narla et al., CLIN CANDER RES, 4: 1405-1414 (1998)に記述されているＭＴＴ
（３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラ
ゾリウムブロミド）をベースにした細胞増殖の定量のための比色定量アッセイを
用いた。

【００９８】 簡単に言うと、細胞を、０．１２５％（ｗ／ｖ）のトリプシンおよび０．０２
％のＥＤＴＡ（ＧＩＢＣＯ）を用いた指数関数的相維持培養(exponential-phase
maintenance cultures)により収穫し、遠心分離した（３００ｇ×５分）。縣濁
させ、計数した後、細胞を、三重９６ウェルの組織培養プレートに、１００μｌ
体積で分配した。３および２４時間のインキュベーション後、培養液を捨て、１
００μｌの新鮮な媒体で置換した。前記媒体は、それぞれ２倍希釈の薬剤を含む
ことにより、Ｎ−９について３．９μＭから２５０μＭ、Ｆ−ＰＢＴおよびＳ−
ＤＡＢＯについて２５０μＭから４ｍＭを得る。ＮＮＩｓは、ＤＭＳＯ中、１０
０ｍＭ濃度に再構成した。Ｎ−９のストック溶液は、無菌ＰＢＳにより調製した
。対照として、０．２５％のＤＭＳＯのみを含むコントロールウェルを含むよう
にした。つぎに、培養プレートを２４時間インキュベートし、続いてそれぞれの
ウェルに１０μｌのＭＴＴ溶液（ＰＢＳ中５ｍｇ／ｍｌ）を加えた。それぞれの
プレートに対し、媒体およびＭＴＴのみを含むウェルを対照として用いた。テト
ラゾリウム／ホルマザン反応を３７℃で４時間進行させ、続いて、１００μｌの
可溶化緩衝液（０．１％ＨＣｌ中１０％のドデシル硫酸ナトリウム）を全てのウ
ェルに加え、暗青色のホルマザン結晶を溶解させるため、徹底的に攪拌した。

【００９９】 ３７℃で一夜インキュベーション後、５４０ｎｍでの光学密度（optical dens
ities、ＯＤ）を、９６ウェルのマルチスキャナーオートリーダーを使用し、可
溶化緩衝液をブランクとして用意して測定した。前記ＯＤ₅₄₀の値を各ウェル内
の生存細胞数に翻訳するため、前記ＯＤ₅₄₀値を、各細胞ラインから生成された
標準的なＯＤ₅₄₀対細胞数曲線と比較した。生存のパーセンテージは、次の式を
用いて計算した。生存（％）＝生存細胞数［試験］／生存細胞数［対照］×１０
０。全てのアッセイは３回ずつ行い、結果はＩＣ₅₀値で表した。前記ＩＣ₅₀値は
、細胞生存を５０％に減少させるために必要な濃度として定義した。

【０１００】 Ｇ． 統計的解析 結果は、それぞれの解析からの平均または平均±標準偏差値として提示した。
試験グループ間の差異における統計的な有意性は、分散(vairance)の一方向解析
およびDunnettの多重比較テスト(Dunnett's multiple comparison test)により
解析した。二つの測定パラメータ間の関連値を見出すために、線形回帰解析を用
いた。０．０５未満のｐ値を、有意義とみなした。ＩＣ₅₀およびＥＣ₅₀値を濃度
効果曲線から見出すために、Graph Pad PRISMバージョン２．０ソフトウェアプ
ログラム（カリフォルニア州サンディエゴ）を用いた非線型回帰解析を使用した
。

【０１０１】 II． 結果 Ａ． 表 下記の二つの表は、前記実験の結果をディスカッションするために参照すべき
ものである。

【０１０２】 表１．三種の新規なＮＮＩｓの、精製した組替えＨＩＶ−ＲＴ、ＨＩＶ感染Ｐ
ＢＭＣにおけるｐ２４抗原生産物の酵素活性およびヒト精子運動性に対する効果 化合物 抗ＨＩＶ活性 殺精子活性 rRT^a HTLV_IIIB EC₅₀(μM)^d IC₅₀rRT(μM)^b IC₅₀p24(μM)^c Ｄ−ＰＢＴ 0.1 <0.001 >500 Ｆ−ＰＢＴ 0.4 <0.001 147 Ｓ−ＤＡＢＯ 6.1 <0.001 202 トロビルジン 0.8 0.007 >500 Ｎ−９ Nd^e 2.2 81 ^a 組替えＨＩＶ逆転写酵素。^b IC₅₀RTは、ＨＩＶ−ＲＴ活性を５０％に阻害する薬剤濃度である。^c IC₅₀p24は、ＨＩＶ−ｐ２４抗原生産を５０％に阻害する薬剤濃度である。^d EC₅₀は、精子の運動性を５０％に阻害する薬剤濃度である。^e NDは、データなし(not determined)を意味する。 表２．Ｆ−ＰＢＴおよびＮ−９における、正常なヒト子宮膣部および頚管内上
皮細胞の細胞成長に対する効果のＭＴＴアッセイによる定量 処理 精子 子宮膣部上皮細胞^a 頚管内上皮細胞^a EC₅₀(μM)^b IC₅₀(μM)^c SI^d IC₅₀(μM) SI Ｆ−ＰＢＴ 147 >1000 >6.8 >1000 >6.8 Ｓ−ＤＡＢＯ 202 >4000 >19.8 >4000 >19.8 Ｎ−９ 81 15 0.18 11 0.13 ^a 細胞増殖は、５種類の異なる濃度（２５０μＭから４０００μＭ）のＦ−ＰＢ
ＴおよびＳ−ＤＡＢＯで２４時間処理後に試験した。^b EC₅₀は、精子の運動性を５０％に阻害する薬剤濃度である。^c IC₅₀は、細胞増殖を５０％に阻害する薬剤濃度である。^d SIは、選択指数(selectivity index)であり、IC₅₀のEC₅₀に対する比率に等しい
。 Ｂ． 新規ＮＮＩｓの抗ＨＩＶ活性 図１に示した三種の新規ＮＮＩ誘導体およびトロビルジンの効果を、精製した
組替えＨＩＶ ＲＴを用いた細胞フリーアッセイにおけるＲＴ阻害活性（ＩＣ₅₀ ［ｒＲＴ］としてリストした）について、およびＨＴＬＶ_IIIB感染ＰＢＭＣｓに
おける抗ＨＩＶ活性（ＩＣ₅₀［ｐ２４］としてリストした）のin vitroアッセイ
により試験した。表１に示した通り、三種のＮＮＩｓの全ては、１ｎＭ以下で、
ＨＩＶ感染ヒトＰＢＭＣｓのｐ２４生産によるＩＣ₅₀値が示す強力な抗ＨＩＶ活
性を引き出した。今日までに報告された最も効力の強いＮＮＩであるトロビルジ
ンは、同一の実験条件下で、少なくとも７分の１以下の効力しかなかった。かつ
、Ｄ−ＰＢＴおよびＦ−ＰＢＴは、組替えＨＩＶ ＲＴの阻害について、トロビ
ルジンよりも２〜８倍強力であった。観測された三種のＮＮＩによるＲＴ活性お
よびｐ２４生産の減少は、これら新規な薬剤における何らかの細胞障害性効果に
よるものではない。なぜならば、ＰＢＭＣの細胞生存力は、試験した最も高い濃
度（ＩＣ₅₀［ＭＴＡ］＞１００μＭ）においてさえも影響されなかったからであ
る。前記三種の新規ＮＮＩｓの抗ＨＩＶ活性（ＩＣ₅₀［ｐ２４］）は、洗浄剤型
殺菌剤であるＮ-９（ＩＣ₅₀＝２．２μＭ）は、少なくとも２０００倍強力であ
った。

【０１０３】 Ｃ． 新規ＮＮＩｓの殺精子活性 つぎに、前記三種のＮＮＩｓ（Ｓ−ＤＡＢＯ、Ｄ−ＰＢＴおよびＦ−ＰＢＴ）
およびトロビルジンのヒト精子機能に対する効果を、Ｎ−９と比較して試験した
。ヒト精子の高運動性フラクションをトロビルジンまたはＤ−ＰＢＴに暴露した
場合、５００μＭの高濃度でさえも、精子の運動性に影響を及ぼさなかった（図
２および表１を参照のこと）。さらに、ＣＡＳＡを用いての精子の動きの運動学
は、トロビルジンまたはＤ−ＰＢＴによる処理は、進歩的な運動性（ＰＲＧ）、
軌跡(track)速度（ＶＣＬ）、経路速度（ＶＡＰ）、直線速度（ＶＳＬ）、泳動
パターンのストレートネス（ＳＴＲ）、精子軌跡のリニアリティー（ＬＩＮ）、
ビートクロス周波数（ＢＣＦ）および精子頭部の横向き変位量の幅（amplitude
of lateral sperm-head displacement、ＡＬＨ）のような精子運動のパラメータ
を変えないということを証明した。トロビルジンまたはＤ−ＰＢＴとは対照的に
、ＰＢＴにおけるフェニル環のオルト位へのフッ素原子の導入またはＳ−ＤＡＢ
Ｏにおけるチミン環のＣ−５位へのイソプロピル基の導入は、濃度依存性の殺精
子活性を引き起こした。Ｆ−ＰＢＴについて得られた１４７μＭというＥＣ₅₀値
（９５％ＣＩ：９４〜３３０μＭ）は、Ｎ−９の殺精子性の範囲内（ＥＣ₅₀値８
１μＭ、９５％ＣＩ：４１〜４１０μＭ）であった（図２および表１を参照のこ
と）。また、精子固定化の運動特性のＣＡＳＡによる評価は、化合物Ｆ−ＰＢＴ
に対する暴露後、インキュベーション時間および進歩的な精子運動性(progressi
ve sperm motility)のロスとの間で直線関係（相関係数０．８１１、ｐ＜０．０
０５）を示した（図３を参照のこと）。Ｆ−ＰＢＴに暴露した進歩的な運動性精
子の運動性の５０％ロスに必要な時間は、１０分間であった（９５％ＣＩ：８〜
１２分間）。比較して、対照サンプル中の精子の運動性は、６０分間のモニター
時間の間、安定なままであった（ベースラインと比較して９５±３％）。

【０１０４】 Ｆ−ＰＢＴにより引き起こされる時間依存性の精子運動性ロス（ＰＲＧ）は、
生存精子の運動特性、特に軌跡(track)速度（ＶＣＬ）、経路速度（ＶＡＰ）、
直線速度（ＶＳＬ）に関しての顕著な変化と関連付けた。図４に、Ｆ−ＰＢＴ処
理精子における代表的な精子運動学のパラメータ対時間を示す。ＶＳＬおよびＶ
ＣＬ、またはＶＳＬおよびＶＡＰの減少は、同程度の大きさであった。したがっ
て、精子の軌跡のリニアリティー（ＬＩＮ）および泳動パターンのストレートネ
ス（ＳＴＲ）の値は、比較的一定に保たれた。また、ビートクロス周波数（ＢＣ
Ｆ）および精子頭部の横向き変位量の幅（amplitude of lateral sperm-head di
splacement、ＡＬＨ）は、運動性ロスの線形位相の間、運動性精子の比率が減少
したので、比較的安定であった。対照精子における精子運動性のパラメータは、
６０分間のインキュベーション期間の間、何ら顕著な変化を示さなかった。

【０１０５】 Ｄ． 殺精子性ＮＮＩｓにおける洗浄剤様膜毒性の欠如 最も広く用いられている膣内殺精子剤であるノノキシノール−９は、精子の細
胞膜に対する洗浄剤型作用の結果として精子を固定化する。その膜破壊特性のた
めに、Ｎ−９の継続的な使用は、膣頚管(cervicovaginal)上皮に損傷を与え、急
性組織炎症反応を引き起こし、かつ、異性間伝染によるＨＩＶ感染の可能性を高
めることが分かっている。洗浄剤型避妊薬における何らの非特異性膜毒性特質も
引き出さない殺精子剤は、臨床上の利点を提供するであろう。

【０１０６】 それゆえに、ＣＬＳＭを用い、精子の三重染色（先体に対しＦＩＴＣ−Pisum
sativum レクチン(lectin)、核ＤＮＡに対しＴＯＴＯ−３ヨージド、および膜脂
質に対しナイルレッド）により、Ｆ−ＰＢＴおよびＳ−ＤＡＢＯの精子頭部先体
膜の完全性に対する効果を膜損傷の標識として試験した。FITC‐レクチン、TOTO
-3およびナイルレッドで染色した精子のＣＬＳＭによる試験は、先体に対しFITC
-レクチン（緑）、ＤＮＡに対しTOTO-3（青）、および膜脂質に対しナイルレッ
ド（赤）の、それぞれ強い染色を示した（図５を参照のこと）。共焦顕微鏡検査
法によると、Ｆ−ＰＢＴおよびＳ−ＤＡＢＯの存在下における精子の完全な固定
化にも関わらず、処理した精子の９０％超（＞９０％）は、６時間のインキュベ
ーション後に先体染色を示した。比較して、Ｎ−９は、先体染色の完全なロスを
示した（図５Ａを参照のこと）。したがって、化合物Ｆ−ＰＢＴの殺精子活性は
、膜破壊を伴うかまたはそれによって引き起こされるものではない。ベヒクル（
すなわち、１％ＤＭＳＯ）のみ（図５Ｂを参照のこと）、または５００μＭ Ｆ
−ＰＢＴ（図５Ｃを参照のこと）、またはＳ−ＤＡＢＯ（図５Ｄを参照のこと）
に６時間暴露した精子では、半数以上の精子頭部（すなわち、先体領域）が同様
に明るい緑の蛍光を示し、先体が無傷で残っていることを表した。比較して、同
様の条件で５００μＭのＮ−９に暴露した精子（図５Ｅを参照のこと）では、膜
の完全性の破壊および先体膜の喪失により、緑の蛍光は見られなかった。Ｆ−Ｐ
ＢＴおよびＳ−ＤＡＢＯの性質は、現在使用されている殺精子剤Ｎ−９の、精子
膜を損傷しそれによって精子の機能を弱める洗浄剤様能力を通じてその効果を発
揮する活性特性とはきわめて対照的である。

【０１０７】 Ｅ． Ｆ−ＰＢＴおよびＳ−ＤＡＢＯ対Ｎ−９の選択的な殺精子活性 細胞増殖および生存率を測定するＭＴＴアッセイを、Ｆ−ＰＢＴおよびＳ−Ｄ
ＡＢＯの、正常なヒト子宮膣部および頚管部上皮細胞の併合単層(confluent mon
olayer)に対するin vitro細胞毒性をＮ−９と比較して試験するために用いた。
細胞は、それらの化合物に３．９μＭから４ｍＭの範囲の用量で３時間から２４
時間暴露した。これらの細胞における、Ｆ−ＰＢＴおよびＳ−ＤＡＢＯ対Ｎ−９
の濃度応答性細胞生存曲線をＭＴＴアッセイにより試験し、ＣＡＳＡにより測定
された殺精子活性と比較した。ＭＴＴアッセイでは、Ｎ−９は、子宮膣部上皮お
よび頚管部上皮の細胞に対し顕著な細胞毒性を示し、平均ＩＣ₅₀値はそれぞれ１
５μＭおよび１１μＭであった。比較して、Ｆ−ＰＢＴおよびＳ−ＤＡＢＯの子
宮膣部および頚管部上皮細胞に対する用量生存曲線におけるＩＣ₅₀値は、それぞ
れＳ−ＤＡＢＯにおいて４ｍＭ超（＞４ｍＭ）、Ｆ−ＰＢＴにおいて１ｍＭ超（
＞１ｍＭ）であった（表２を参照のこと）。そのように、Ｎ−９は、細胞毒性の
ある濃度でしか殺精子性でなかった（ＥＣ５０値は８１μＭであり、選択指数(s
electivity indices)は、子宮膣部および頚管内細胞に対して、それぞれ０．１
８および０．１３であった。）。ところが、Ｆ−ＰＢＴおよびＳ−ＤＡＢＯは、
これらの細胞に対して高い選択指数を示した（選択指数は、子宮膣部細胞および
頚管内細胞に対してそれぞれ６．８超（＞６．８）および１９．８超（＞１９．
８）であった。）。そのように、Ｆ−ＰＢＴおよびＳ−ＤＡＢＯは、これらの生
殖系細胞に対して顕著に活性が低かった。これらの研究は、Ｆ−ＰＢＴおよびＳ
−ＤＡＢＯの殺精子活性は、何らの非特異性細胞毒性とも関連していないことを
示す。

【０１０８】 III． 実験結果のディスカッション Ａ． 抗ＨＩＶ活性 予備的なモデリング研究は、より強力なＮＮＩｓの生成のためのいくつかの潜
在的なリガンドの誘導体化部位を明らかにした。ＰＥＴＴ誘導体、トロビルジン
の修飾は、ピリジン環を２，５−ジメトキシフェニル基で置換することにより、
Ｄ−ＰＢＴ（Ｎ−［２−（２，５−ジメトキシフェネチル）］−Ｎ’−［２−（
５−ブロモピリジル）］チオ尿素）、または、オルト位にフッ素原子を有するフ
ェニル環で置換することにより、Ｆ−ＰＢＴ（Ｎ−［２−（２−フルオロフェネ
チル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジル）］チオ尿素）というより強力な
抗ＨＩＶ薬剤に導くことが達成された。生物学的アッセイは、これら三種のＮＮ
Ｉｓが、現在までに報告されている最も強力なＰＥＴＴ誘導体の一つであるトロ
ビルジンよりも活性が高い（少なくとも７倍）ことを確証した。ＩＣ₅₀［ｐ２４
］で表した抗ＨＩＶ活性は、１ｎＭ未満であった。コンピュータによるドッキン
グ方法(computer docking procedures)は、また、Ｓ−ＤＡＢＯにおけるチミン
環の５位へのイソプロピル基の付加が、Ｓ−ＤＡＢＯの結合ポケットのこの位置
における比較的疎水性の環境に対するより高い親和性につながるであろうことも
示した。前記ＤＡＢＯ誘導体、５−イソプロピル−２−［（メチルチオメチル）
チオ］−６−（ベンジル）−ピリミジン−４−（１Ｈ）−オン（Ｓ−ＤＡＢＯ）
は、強力な抗ＨＩＶ活性を引き出した。ＨＩＶ複製の阻害において、ＩＣ₅₀値で
１ｎＭ未満である。そのように、三種のＮＮＩｓの全ては、Ｎ−９よりも２００
０倍を超えて強力であった。

【０１０９】 ＮＮＩｓは、ＨＩＶ−１ ＲＴのポリメラーゼ部位近辺の特定のアロステリッ
ク部位と結合し、ＲＴのコンホメーションまたは運動性を変化させることにより
、前記酵素の非競争的阻害へと導き、逆転写を妨害することが分かった。前記Ｎ
ＮＩｓと接触する多数のアミノ酸残基は、比較的融通が利き(flexible)、かつ、
構造ごとに異なり、また、無置換の(right)ＮＮＩで置き換えることができる。
それらの残基は、Ｔｙｒ１８０、Ｔｙｒ１８１、Ｔｙｒ３１８、Ｔｙｒ３１９、
Ｐｈｅ２２７、Ｌｅｕ２３４、Ｔｒｐ２２９、Ｐｒｏ９５およびＧｌｕ１３８（
ＲＴのｐ５１サブユニットから）を含む。ここで研究された前記新規ＰＢＴおよ
びＤＡＢＯ誘導体の増強された抗ＨＩＶ活性は、それらの、ＮＮＩの結合ポケッ
トに好都合な拡大された分子表面、ならびに増大した親油性（フェニル環の代わ
りにより嵩高いジメトキシフェニル基で置換したことに依存する）、より良好な
疎水性接触（チミン環のＣ−５位をイソプロピル基で置換したことに依存する）
、およびＲＴ（４４、４５）における標的アミノ酸残基Ｐｒｏ９５、Ｔｒｐ２２
９とのより近接した接触（無置換フェニル基のメタ／オルト位のメトキシ基によ
る置換またはオルト位のフルオロ基による置換に依存する）に大きく依存してい
るようである。加えて、このコンホメーションの変化は、近接するアミノ酸残基
の位置、特に、ＨＩＶ−１ ＲＴの不活性化に寄与するであろうＴｙｒ１８３お
よびＴｙｒ１８８に順番に影響することが可能であった。前記ドッキングの研究
は、Ｄ−ＰＢＴの２−メトキシ基は、残基Ｐｒｏ１９５およびＴｒｐ２２９との
近接接触を提供することを示した。このことは、それぞれの誘導化合物(lead co
mpound)に特有な構造上の利点のすべての複合により、さらに強力なＲＴインヒ
ビターが得られることを示唆する。

【０１１０】 Ｂ． 殺精子活性 共焦レーザー走査顕微鏡検査法と結び付けた精子の動きの運動学は、Ｆ−ＰＢ
ＴおよびＳ−ＤＡＢＯが、洗浄剤型殺精子剤Ｎ−９とは異なり、精子の細胞質お
よび先体膜の完全性に影響すること無く、濃度および時間依存で精子の運動性の
停止を引き起こすことを示した。さらに、Ｆ−ＰＢＴおよびＳ−ＤＡＢＯは、殺
精子用量でヒトの子宮膣部および頚管内上皮細胞に対し細胞毒性であるＮ−９と
比較して、選択的に殺精子性である。そのように、子宮膣部上皮細胞は、洗浄剤
型殺精子剤Ｎ−９の細胞毒性攻撃によって傷つきやすいことが分かる。本発明の
新規ＮＮＩｓにおける殺精子機能の増大は、これらＮＮＩｓをさらに修飾すると
、抗ＨＩＶおよび殺精子活性の二重機能を有し、かつ、生殖系上皮細胞への細胞
毒性がより少ない、もっと強力な二重機能ＮＮＩｓに導くことさえもできるであ
ろうことを示唆する。

【０１１１】 強力な殺精子活性を有する二重機能抗ＨＩＶ薬剤としての新規ＮＮＩｓの合成
は、ヘテロセクシャルな膣内ＨＩＶ伝染を抑制する新規殺菌剤の開発の有意義な
前進ステップを代表する。これらは、二重機能ＮＮＩｓが、ヘテロセクシャルな
膣内伝染によりＨＩＶを貰い受けるリスクの高い女性のための新規な女性主導型
局所的膣内避妊薬の有効成分となる独自の臨床上の可能性を示すということを例
証する結果を約束する。

【０１１２】 ここに記述した本発明は、他の実施形態を含むように変更することができる。
そのような明白な他の実施形態の全ては、以下にクレームした通り、本発明の意
図および適用範囲の範疇にある。

【０１１３】 本出願を通じて、多くの出版物が参照される。それら出版物の開示内容の全て
は、本発明が関連する技術分野の状態をより完全に述べるため、参照することに
より本出願の中に組み込まれる。

【図面の簡単な説明】

【図１】 Ｄ−ＰＢＴ、Ｆ−ＰＢＴ、Ｓ−ＤＡＢＯおよびトロビルジンの化学
構造を示す図である。

【図２】 トロビルジン、Ｄ−ＰＢＴ、Ｆ−ＰＢＴ、Ｓ−ＤＡＢＯおよびＮ−
９による精子の運動性の濃度依存性阻害を示す図である。

【図３】 Ｆ−ＰＢＴの存在下における時間依存の精子の固定化を示す図であ
る。

【図４】 Ｆ−ＰＢＴにおける精子の動きのパラメータに対する影響を示すグ
ラフである。

【図５】 図５Ａは、Ｄ−ＰＢＴ、Ｆ−ＰＢＴ、Ｓ−ＤＡＢＯ、およびＮ−９
の、精子の先体膜の完全性に対する効果を示すグラフであり、図５Ｂから５Ｅま
では、精子のレーザー走査共焦蛍光イメージを示す図である。

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１２年１０月５日（２０００．１０．５）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【化１】 ここで、Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄は、それぞれ独立に水素、Ｆ、Ｃｌ、Ｂ
ｒまたはＩであり、かつ、Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄のうち少なくとも一つは
、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである。

【化２】 ここで、Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄は、それぞれ独立に水素、Ｆ、Ｃｌ、Ｂ ｒまたはＩであり、かつ、Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄のうち少なくとも一つは 、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである。

【化３】 ここで、Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄は、それぞれ独立に水素、Ｆ、Ｃｌ、Ｂ ｒまたはＩであり、かつ、Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄のうち少なくとも一つは 、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである。

【化４】 ここで、Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄は、それぞれ独立に水素、Ｆ、Ｃｌ、Ｂ ｒまたはＩであり、かつ、Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄のうち少なくとも一つは 、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである。

【化５】 ここで、Ｒ₁およびＲ₂は、同じであるかまたは異なっており、かつ、水素、ハ ロ、アルキル、アルケニル、ヒドロキシ、アルコキシ、チオアルキル、チオール 、ホスフィノ、ＲＯＨ、またはＲＮＨ基である。ここで、Ｒは、アルキル基であ る。 Ｙは、ＳまたはＯであり、Ｒ₃は、アルキル、アルケニル、アリール、アラル
キル、ＲＯＨ、またはＲＮＨ₂基であり、ここで、Ｒは、アルキル基である。

【化６】 ここで、Ｒ₁は、Ｍｅ、Ｅｔ、またはｉ−Ｐｒであり、Ｒ₂は、ＨまたはＭｅで ある。

【化７】 ここで、Ｒ₁およびＲ₂は、同じであるかまたは異なっており、かつ、水素、ハ ロ、アルキル、アルケニル、ヒドロキシ、アルコキシ、チオアルキル、チオール 、ホスフィノ、ＲＯＨ、またはＲＮＨ基である。ここで、Ｒは、アルキル基であ る。 Ｙは、ＳまたはＯであり、Ｒ₃は、アルキル、アルケニル、アリール、アラル
キル、ＲＯＨ、またはＲＮＨ₂基であり、ここで、Ｒは、アルキル基である。

【化８】 ここで、Ｒ₁は、Ｍｅ、Ｅｔ、またはｉ−Ｐｒであり、Ｒ₂は、ＨまたはＭｅで ある。

【化９】 ここで、Ｒ₁およびＲ₂は、同じであるかまたは異なっており、かつ、水素、ハ ロ、アルキル、アルケニル、ヒドロキシ、アルコキシ、チオアルキル、チオール 、ホスフィノ、ＲＯＨ、またはＲＮＨ基である。ここで、Ｒは、アルキル基であ る。 Ｙは、ＳまたはＯであり、Ｒ₃は、アルキル、アルケニル、アリール、アラル
キル、ＲＯＨ、またはＲＮＨ₂基であり、ここで、Ｒは、アルキル基である。

【化１０】 ここで、Ｒ₁は、Ｍｅ、Ｅｔ、またはｉ−Ｐｒであり、Ｒ₂は、ＨまたはＭｅで ある。

【化１１】 ここで、Ｒ₁およびＲ₂は、同じであるかまたは異なっており、かつ、水素、ハ ロ、アルキル、アルケニル、ヒドロキシ、アルコキシ、チオアルキル、チオール 、ホスフィノ、ＲＯＨ、またはＲＮＨ基である。ここで、Ｒは、アルキル基であ る。 Ｙは、ＳまたはＯであり、Ｒ₃は、アルキル、アルケニル、アリール、アラル
キル、ＲＯＨ、またはＲＮＨ₂基であり、ここで、Ｒは、アルキル基である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｄ 239/56 Ｃ０７Ｄ 239/56 // Ａ６１Ｆ 6/04 Ａ６１Ｆ 5/43 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ドクラッツ、オズモンド アメリカ合衆国、55117 ミネソタ州、メ イプルウッド、クラーク ストリート 2005 Ｆターム(参考） 4C055 AA01 BA02 BA28 BB17 CA02 CA13 DA01 4C086 AA02 AA03 BC17 BC42 MA02 MA05 NA14 ZA81 ZA86 ZB33 4C098 AA06 EE02 EE12

Claims (34)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記式の構造を含む化合物または薬学的に許容可能なその塩。 【化１】 ここで、Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄は、それぞれ独立に水素、Ｆ、Ｃｌ、Ｂ
   ｒまたはＩであり、かつ、Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄のうち少なくとも一つは
   、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである。
2. 【請求項２】 Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄のうち少なくとも一つがＦまたは
   Ｃｌである請求項１に記載の化合物。
3. 【請求項３】 Ｎ−［２−（２−フルオロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジ
   ル）］−チオ尿素； Ｎ−［２−（２−クロロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジル
   ）］−チオ尿素； Ｎ−［２−（３−フルオロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジ
   ル）］−チオ尿素； Ｎ−［２−（３−クロロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジル
   ）］−チオ尿素； Ｎ−［２−（４−フルオロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジ
   ル）］−チオ尿素； Ｎ−［２−（４−クロロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジル
   ）］−チオ尿素；および薬学的に許容可能なこれらの塩からなる群から選択され
   る請求項２に記載の化合物。
4. 【請求項４】 Ｎ−［２−（２−フルオロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５
   −ブロモピリジル）］−チオ尿素および薬学的に許容可能なその塩から選択され
   る請求項３に記載の化合物。
5. 【請求項５】 哺乳類の精子に殺精子剤として効果的な量の請求項１の化合物
   を接触させることを含む、哺乳類の受胎を阻害する方法。
6. 【請求項６】 前記化合物が、 Ｎ−［２−（２−フルオロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジ
   ル）］−チオ尿素； Ｎ−［２−（２−クロロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジル
   ）］−チオ尿素； Ｎ−［２−（３−フルオロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジ
   ル）］−チオ尿素； Ｎ−［２−（３−クロロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジル
   ）］−チオ尿素； Ｎ−［２−（４−フルオロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジ
   ル）］−チオ尿素； Ｎ−［２−（４−クロロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジル
   ）］−チオ尿素；および薬学的に許容可能なこれらの塩からなる群から選択され
   る請求項５に記載の方法。
7. 【請求項７】 前記化合物が、Ｎ−［２−（２−フルオロフェネチル）］−Ｎ
   ’−［２−（５−ブロモピリジル）］−チオ尿素および薬学的に許容可能なその
   塩から選択される請求項６に記載の方法。
8. 【請求項８】 精子の運動性を阻害するのに効果的な量の請求項１に記載の化
   合物を精子に接触させることを含む、精子の運動性を阻害する方法。
9. 【請求項９】 前記化合物が、 Ｎ−［２−（２−フルオロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジ
   ル）］−チオ尿素； Ｎ−［２−（２−クロロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジル
   ）］−チオ尿素； Ｎ−［２−（３−フルオロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジ
   ル）］−チオ尿素； Ｎ−［２−（３−クロロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジル
   ）］−チオ尿素； Ｎ−［２−（４−フルオロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジ
   ル）］−チオ尿素； Ｎ−［２−（４−クロロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジル
   ）］−チオ尿素；および薬学的に許容可能なこれらの塩からなる群から選択され
   る請求項８に記載の方法。
10. 【請求項１０】 前記化合物が、Ｎ−［２−（２−フルオロフェネチル）］−
    Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジル）］−チオ尿素および薬学的に許容可能なそ
    の塩から選択される請求項９に記載の方法。
11. 【請求項１１】 殺精子剤として有効な量の請求項１に記載の化合物と、薬学
    的に許容可能な担体、希釈剤またはベヒクルとを含む調合物。
12. 【請求項１２】 前記化合物が、 Ｎ−［２−（２−フルオロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジ
    ル）］−チオ尿素； Ｎ−［２−（２−クロロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジル
    ）］−チオ尿素； Ｎ−［２−（３−フルオロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジ
    ル）］−チオ尿素； Ｎ−［２−（３−クロロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジル
    ）］−チオ尿素； Ｎ−［２−（４−フルオロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジ
    ル）］−チオ尿素； Ｎ−［２−（４−クロロフェネチル）］−Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジル
    ）］−チオ尿素；および薬学的に許容可能なこれらの塩からなる群から選択され
    る請求項１１に記載の調合物。
13. 【請求項１３】 前記化合物が、Ｎ−［２−（２−フルオロフェネチル）］−
    Ｎ’−［２−（５−ブロモピリジル）］−チオ尿素および薬学的に許容可能なそ
    の塩から選択される請求項１２に記載の調合物。
14. 【請求項１４】 前記薬学的な担体が、前記殺精子剤の急速なおよび延長され
    た放出の両方を提供する請求項１１に記載の調合物。
15. 【請求項１５】 前記薬学的なベヒクルが、膣内挿入物およびコンドームから
    なる群から選択される請求項１１に記載の調合物。
16. 【請求項１６】 請求項１に記載の化合物を含む、殺精子性物品(article)。
17. 【請求項１７】 前記物品が、膣内挿入物およびコンドームからなる群から選
    択される請求項１３に記載の物品。
18. 【請求項１８】 下記式の構造を含む化合物または薬学的に許容可能なその塩
    。 【化２】 ここで、Ｒ₁およびＲ₂は、同じであるかまたは異なっており、かつ、水素、ハ
    ロ、アルキル、アルケニル、ヒドロキシ、アルコキシ、チオアルキル、チオール
    、ホスフィノ、ＲＯＨ、またはＲＮＨ基である。ここで、Ｒは、アルキル基であ
    る。 Ｙは、ＳまたはＯであり、Ｒ₃は、アルキル、アルケニル、アリール、アラル
    キル、ＲＯＨ、またはＲＮＨ₂基であり、ここで、Ｒは、アルキル基である。
19. 【請求項１９】 下記式の構造を含む請求項１８に記載の化合物または薬学的
    に許容可能なその塩。 【化３】 ここで、Ｒ₁は、Ｍｅ、Ｅｔ、またはｉ−Ｐｒであり、Ｒ₂は、ＨまたはＭｅで
    ある。
20. 【請求項２０】 ５−メチル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６−ベンジル−ピリミジン
    −４−１Ｈ−オン； ５−エチル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６−ベンジル−ピリミジン
    −４−１Ｈ−オン； ５−イソプロピル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６−ベンジル−ピリ
    ミジン−４−１Ｈ−オン； ５−イソプロピル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６−（３，５−ジメ
    チルベンジル）−ピリミジン−４−１Ｈ−オン； および薬学的に許容可能なそれらの塩からなる群から選択される請求項１９に記
    載の化合物。
21. 【請求項２１】 ５−イソプロピル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６
    −（ベンジル）−ピリミジン−４−（１Ｈ）−オンおよび薬学的に許容可能なそ
    の塩から選択される請求項２０に記載の化合物。
22. 【請求項２２】 哺乳類の精子を、殺精子剤として有効な量の請求項１８に記
    載の化合物に接触させることを含む、哺乳類の受胎を阻害する方法。
23. 【請求項２３】 前記化合物が、 ５−メチル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６−ベンジル−ピリミジン
    −４−１Ｈ−オン； ５−エチル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６−ベンジル−ピリミジン
    −４−１Ｈ−オン； ５−イソプロピル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６−ベンジル−ピリ
    ミジン−４−１Ｈ−オン； ５−イソプロピル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６−（３，５−ジメ
    チルベンジル）−ピリミジン−４−１Ｈ−オン； および薬学的に許容可能なそれらの塩からなる群から選択される請求項２２に記
    載の方法。
24. 【請求項２４】 前記化合物が、５−イソプロピル−２−［（メチルチオメチ
    ル）チオ］−６−（ベンジル）−ピリミジン−４−（１Ｈ）−オンおよび薬学的
    に許容可能なその塩から選択される請求項２３に記載の方法。
25. 【請求項２５】 精子を、精子の運動性を阻害するのに有効な量の請求項１８
    に記載の化合物に接触させることを含む、精子の運動性を阻害する方法。
26. 【請求項２６】 前記化合物が、 ５−メチル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６−ベンジル−ピリミジン
    −４−１Ｈ−オン； ５−エチル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６−ベンジル−ピリミジン
    −４−１Ｈ−オン； ５−イソプロピル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６−ベンジル−ピリ
    ミジン−４−１Ｈ−オン； ５−イソプロピル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６−（３，５−ジメ
    チルベンジル）−ピリミジン−４−１Ｈ−オン； および薬学的に許容可能なそれらの塩からなる群から選択される請求項２５に記
    載の方法。
27. 【請求項２７】 前記化合物が、５−イソプロピル−２−［（メチルチオメチ
    ル）チオ］−６−（ベンジル）−ピリミジン−４−（１Ｈ）−オンおよび薬学的
    に許容可能なその塩から選択される請求項２６に記載の方法。
28. 【請求項２８】 殺精子剤として効果的な量の請求項１８に記載の化合物と、
    薬学的に許容可能な担体、希釈剤またはベヒクルとを含む調合物。
29. 【請求項２９】 前記化合物が、 ５−メチル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６−ベンジル−ピリミジン
    −４−１Ｈ−オン； ５−エチル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６−ベンジル−ピリミジン
    −４−１Ｈ−オン； ５−イソプロピル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６−ベンジル−ピリ
    ミジン−４−１Ｈ−オン； ５−イソプロピル−２−［（メチルチオメチル）チオ］−６−（３，５−ジメ
    チルベンジル）−ピリミジン−４−１Ｈ−オン； および薬学的に許容可能なそれらの塩からなる群から選択される請求項２８に記
    載の調合物。
30. 【請求項３０】 前記化合物が、５−イソプロピル−２−［（メチルチオメチ
    ル）チオ］−６−（ベンジル）−ピリミジン−４−（１Ｈ）−オンおよび薬学的
    に許容可能なその塩から選択される請求項２９に記載の調合物。
31. 【請求項３１】 前記薬学的な担体が、前記殺精子剤の急速なおよび延長され
    た放出の両方を提供する請求項２８に記載の調合物。
32. 【請求項３２】 前記薬学的なベヒクルが、膣内挿入物およびコンドームから
    なる群から選択される請求項２８に記載の調合物。
33. 【請求項３３】 請求項１８に記載の化合物を含む殺精子性物品。
34. 【請求項３４】 膣内挿入物およびコンドームからなる群から選択される請求
    項３３に記載の物品。