JP2002524041A - 腫瘍抑制および／またはウイルス耐性の分子経路に関連する遺伝子 - Google Patents
腫瘍抑制および／またはウイルス耐性の分子経路に関連する遺伝子Info
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Abstract
(57)【要約】
本発明は腫瘍抑制および／またはウイルス耐性に関する分子経路に関与する遺伝子であって、その細胞発現が特にアポトーシスおよび／または腫瘍抑制中に誘導もしくは阻害される遺伝子に関する。
Description
【０００１】
【発明の背景】発明の分野 本発明は腫瘍抑制および／またはウイルス耐性の分子経路に関連する遺伝子の
解明に関する。
解明に関する。
【０００２】背景技術 本発明は、ｐ５３抑制遺伝子により誘導される腫瘍抑制中および／またはアポ
トーシスのプロセス中に発現または抑制されるメッセンジャーＲＮＡに対応する
ｃＤＮＡの単離よって可能となった。
トーシスのプロセス中に発現または抑制されるメッセンジャーＲＮＡに対応する
ｃＤＮＡの単離よって可能となった。
【０００３】 アポトーシスに関連する最も重要な抑制遺伝子の１つにｐ５３遺伝子がある。
正常に機能していると、この遺伝子は細胞増殖およびアポトーシスのプロセスを
制御し、特に癌の発達を防ぐために細胞の増殖を阻害し、アポトーシスのプロセ
スを誘導するのがこの遺伝子である。このようにｐ５３に関してヌル接合性のマ
ウスは腫瘍形成に対する感受性がずっと高いことが証明されている。また、癌に
おいてｐ５３遺伝子が極めて頻繁に変異し、アポトーシスのメッセージを運ぶこ
とができないタンパク質の産生をもたらすということも証明されている。
正常に機能していると、この遺伝子は細胞増殖およびアポトーシスのプロセスを
制御し、特に癌の発達を防ぐために細胞の増殖を阻害し、アポトーシスのプロセ
スを誘導するのがこの遺伝子である。このようにｐ５３に関してヌル接合性のマ
ウスは腫瘍形成に対する感受性がずっと高いことが証明されている。また、癌に
おいてｐ５３遺伝子が極めて頻繁に変異し、アポトーシスのメッセージを運ぶこ
とができないタンパク質の産生をもたらすということも証明されている。
【０００４】 本発明の明細書で用いられているのはこの特殊性である。
【０００５】
具体的には本発明は、ｐ５３遺伝子の機能不全が存在する場合に直接的な代替
療法を計画することができないか、または少なくとも極めて困難であると考えら
れるという知見に基づいている。特に、ｐ５３は癌における場合は変異し、正常
なｐ５３の生理学的な作用が無効となる。
療法を計画することができないか、または少なくとも極めて困難であると考えら
れるという知見に基づいている。特に、ｐ５３は癌における場合は変異し、正常
なｐ５３の生理学的な作用が無効となる。
【０００６】 ゆえにｐ５３に直接的に作用する代替療法の概念は、少なくとも初期において
は断念せざるを得なかった。
は断念せざるを得なかった。
【０００７】 従って本発明は上記の問題を回避するため、ｐ５３の上流および下流に位置す
る遺伝子を鋭意研究した。
る遺伝子を鋭意研究した。
【０００８】 正常なｐ５３（野生型ｐ５３）によって活性化または阻害される遺伝子を単離
するために、悪性の表現型が抑制される悪性系統（Ｋ５６２）および誘導細胞（
ＫＳ）（さらに詳しくは、機能的に正常なｐ５３を発現する細胞（ＫＳ）および
ｐ５３を発現しない細胞（Ｋ５６２））において、あらゆる組み合わせの遺伝子
発現を行った。発現した遺伝子（２種の細胞で発現したメッセンジャーＲＮＡ）
の比較により、示差的に発現した、すなわち一方の細胞で発現するが、他方では
発現しない遺伝子（これらの遺伝子は活性化されるか、または阻害される可能性
がある）を明らかにすることができた。
するために、悪性の表現型が抑制される悪性系統（Ｋ５６２）および誘導細胞（
ＫＳ）（さらに詳しくは、機能的に正常なｐ５３を発現する細胞（ＫＳ）および
ｐ５３を発現しない細胞（Ｋ５６２））において、あらゆる組み合わせの遺伝子
発現を行った。発現した遺伝子（２種の細胞で発現したメッセンジャーＲＮＡ）
の比較により、示差的に発現した、すなわち一方の細胞で発現するが、他方では
発現しない遺伝子（これらの遺伝子は活性化されるか、または阻害される可能性
がある）を明らかにすることができた。
【０００９】 このことから、これらの遺伝子がある場合にはそれらの不在によって、他の場
合にはそれらの存在によって癌化のプロセスに関与することは容易に推測される
。
合にはそれらの存在によって癌化のプロセスに関与することは容易に推測される
。
【００１０】 この示差研究に用いられる方法は１９９２年、Liang and Pardee（ポリメラー
ゼ連鎖反応による原核生物ｍＲＮＡの示差提示）により記載された方法である。
ゼ連鎖反応による原核生物ｍＲＮＡの示差提示）により記載された方法である。
【００１１】 本発明の課題に対するアプローチにより、機能と直接的に結びついた配列を単
離することができた。結局、ＥＳＴのランダムシーケンシングと異なってこれら
の配列は、その機能が既知であり、かつ、悪性表現型の抑制および／またはｐ５
３抑制遺伝子によって誘導されるアポトーシスのプロセス、および／またはウイ
ルス耐性に関与する配列である。
離することができた。結局、ＥＳＴのランダムシーケンシングと異なってこれら
の配列は、その機能が既知であり、かつ、悪性表現型の抑制および／またはｐ５
３抑制遺伝子によって誘導されるアポトーシスのプロセス、および／またはウイ
ルス耐性に関与する配列である。
【００１２】 このように本発明は新規な配列およびそれらを含む遺伝子、ならびにまさに抗
癌剤および抗ウイルス製剤の試験を意図したモデルの作出に関するこれらの配列
の診断レベル、および治療レベル双方での使用に関する。
癌剤および抗ウイルス製剤の試験を意図したモデルの作出に関するこれらの配列
の診断レベル、および治療レベル双方での使用に関する。
【００１３】
本発明はまず第一に、 （ａ）配列番号１〜１５の１つの配列を含んでなる遺伝子、 または （ｂ）（ａ）の配列の１つとハイブリダイズする配列、 （ｃ）（ａ）または（ｂ）と少なくとも８０％の相同性を有する配列、または （ｄ）（ａ）、（ｂ）または（ｃ）の遺伝子によりコードされるタンパク質ま
たは同等のタンパク質をコードする配列 を含んでなる同等の遺伝子、に対応するヌクレオチド配列、ならびに特に癌の抑
制および／またはウイルス耐性、および治療の監視におけるその使用に関する。
たは同等のタンパク質をコードする配列 を含んでなる同等の遺伝子、に対応するヌクレオチド配列、ならびに特に癌の抑
制および／またはウイルス耐性、および治療の監視におけるその使用に関する。
【００１４】 配列１〜１５は関連する遺伝子の一部でしかないが、本発明は全遺伝子、特に
それらが本明細書の以下で記載されるような同等のタンパク質をコードする場合
にはこの遺伝子の断片に対応するヌクレオチド配列の両者を包含することを思い
起こすべきである。
それらが本明細書の以下で記載されるような同等のタンパク質をコードする場合
にはこの遺伝子の断片に対応するヌクレオチド配列の両者を包含することを思い
起こすべきである。
【００１５】 これらのヌクレオチド配列はＤＮＡ配列およびＲＮＡ配列のいずれであっても
く、またはそれらの薬理特性を改良するため、あるいはそれらの同定を可能とす
るためにそのヌクレオチドのいくつが非天然型である配列であってもよい。
く、またはそれらの薬理特性を改良するため、あるいはそれらの同定を可能とす
るためにそのヌクレオチドのいくつが非天然型である配列であってもよい。
【００１６】 （ｂ）に記載の配列は本質的に完全にまたは部分的に相補的な配列である（特
に上記の場合）。
に上記の場合）。
【００１７】 従って本発明はまた、上記の遺伝子と高い相同性、好ましくは該遺伝子の必須
部分、すなわち通常少なくとも配列の５０％について８０％より高い相同性を有
する遺伝子のヌクレオチド配列に関するものであり、この相同性はこれらの部分
について９０％より高いことが好ましい。
部分、すなわち通常少なくとも配列の５０％について８０％より高い相同性を有
する遺伝子のヌクレオチド配列に関するものであり、この相同性はこれらの部分
について９０％より高いことが好ましい。
【００１８】 最後に、該遺伝子がタンパク質をコードする場合、本発明はまた遺伝コードの
縮重を考慮して同じタンパク質、また同等のタンパク質、すなわち同じ作用をも
たらすタンパク質、特に欠失タンパク質および／または点突然変異を受けたタン
パク質をコードする配列に関する。
縮重を考慮して同じタンパク質、また同等のタンパク質、すなわち同じ作用をも
たらすタンパク質、特に欠失タンパク質および／または点突然変異を受けたタン
パク質をコードする配列に関する。
【００１９】 本発明の配列はさらに詳しくは、細胞のアポトーシス中に誘導または阻害され
るされる配列、特にｐ５３および／またはｐ２１および／またはＴＳＡＰ３（Ｈ
ＵＭＳＩＡＨ）および／またはアンチセンス−ＴＳＩＰ２（アンチセンス−ＰＳ
１）によって誘導されるものである。言い換えると、これらの配列はｐ２１形質
転換体、ＴＳＡＰ３形質転換体およびアンチセンスＴＳＩＰ２形質転換体からな
る群から選択される少なくとも１つの形質転換体によってその細胞内発現が活性
化される遺伝子に相当する。
るされる配列、特にｐ５３および／またはｐ２１および／またはＴＳＡＰ３（Ｈ
ＵＭＳＩＡＨ）および／またはアンチセンス−ＴＳＩＰ２（アンチセンス−ＰＳ
１）によって誘導されるものである。言い換えると、これらの配列はｐ２１形質
転換体、ＴＳＡＰ３形質転換体およびアンチセンスＴＳＩＰ２形質転換体からな
る群から選択される少なくとも１つの形質転換体によってその細胞内発現が活性
化される遺伝子に相当する。
【００２０】 該遺伝子は、ＴＳＡＰすなわち「腫瘍抑制因子活性化経路」としてともに分類
されてＴＳＡＰ９〜ＴＳＡＰ２２（配列番号１〜１４に相当）と呼ばれ、またＴ
ＳＩＰすなわち「腫瘍抑制因子阻害経路」として分類されてＴＳＩＰ３（配列番
号１５に相当）と呼ばれる。
されてＴＳＡＰ９〜ＴＳＡＰ２２（配列番号１〜１４に相当）と呼ばれ、またＴ
ＳＩＰすなわち「腫瘍抑制因子阻害経路」として分類されてＴＳＩＰ３（配列番
号１５に相当）と呼ばれる。
【００２１】 これらの配列の特徴は本明細書に添付される表に示されている。
【００２２】 ＴＳＡＰ遺伝子に対応するヌクレオチド配列はアポトーシスのプロセス中に発
現する配列であるが、それらが発現しなければ発癌のプロセスが継続する。従っ
て、 対応する遺伝子におけるいずれかの異常性を検出すること（この異常性はより
高い発癌感受性をもたらす）、および 代替療法を提供し得ること が有利である。
現する配列であるが、それらが発現しなければ発癌のプロセスが継続する。従っ
て、 対応する遺伝子におけるいずれかの異常性を検出すること（この異常性はより
高い発癌感受性をもたらす）、および 代替療法を提供し得ること が有利である。
【００２３】 さらにこれらの遺伝子は腫瘍抑制プロセス以外のプロセスに関与し得ることを
思い起こすべきであり、特にｐ５３はある点ではゲノムの完全性を監視するもの
であり、これらの条件下ではＴＳＡＰまたはＴＳＩＰ遺伝子もこの制御機能への
関与が疑われる。従ってこれが上記検出および治療の対象となり得るゲノムの可
能性ある改変の総てである。一方、ＴＳＩＰ遺伝子は発癌の際に発現し、この発
現はアポトーシスおよび腫瘍抑制の際に低下、または阻害されさえし、ゆえにこ
場合も同様にＴＳＩＰの可能性のある異常性を検する、また阻害／遮断治療を提
供するのが有利である。
思い起こすべきであり、特にｐ５３はある点ではゲノムの完全性を監視するもの
であり、これらの条件下ではＴＳＡＰまたはＴＳＩＰ遺伝子もこの制御機能への
関与が疑われる。従ってこれが上記検出および治療の対象となり得るゲノムの可
能性ある改変の総てである。一方、ＴＳＩＰ遺伝子は発癌の際に発現し、この発
現はアポトーシスおよび腫瘍抑制の際に低下、または阻害されさえし、ゆえにこ
場合も同様にＴＳＩＰの可能性のある異常性を検する、また阻害／遮断治療を提
供するのが有利である。
【００２４】 代替療法は遺伝子療法により、すなわちＴＳＡＰ遺伝子をin vivoでその発現
を可能とするエレメントとともに導入することにより行われる。遺伝子療法の原
理は公知である。例えばアデノウイルス、レトロウイルス、ヘルペスウイルスま
たはポックスウイルスなどの特定のウイルスまたは非ウイルスベクターを用いる
ことができる。最も一般的にはこれらのベクターは組み込みを伴う、または伴わ
ないＴＳＡＰ発現のための伝達体として機能する欠陥型で使用される。これらの
ベクターはまた合成することもできるし（すなわち、模倣ウイルス配列）、また
は特にVICAL社によって開発された技術に従った裸のＤＮＡもしくはＲＮＡから
なってもよい。
を可能とするエレメントとともに導入することにより行われる。遺伝子療法の原
理は公知である。例えばアデノウイルス、レトロウイルス、ヘルペスウイルスま
たはポックスウイルスなどの特定のウイルスまたは非ウイルスベクターを用いる
ことができる。最も一般的にはこれらのベクターは組み込みを伴う、または伴わ
ないＴＳＡＰ発現のための伝達体として機能する欠陥型で使用される。これらの
ベクターはまた合成することもできるし（すなわち、模倣ウイルス配列）、また
は特にVICAL社によって開発された技術に従った裸のＤＮＡもしくはＲＮＡから
なってもよい。
【００２５】 ほとんどの場合において、組織または器官特異的発現を確実にするターゲッテ
ィングエレメントを提供する必要があり、特に非制御のアポトーシス現象の活性
化は考えることができない。
ィングエレメントを提供する必要があり、特に非制御のアポトーシス現象の活性
化は考えることができない。
【００２６】 従って本発明は上記ベクターのあらゆるものに関する。
【００２７】 本発明はまた、上記のように発現ベクターで形質転換された細胞、および形質
転換細胞を培養することによって得られるタンパク質に関する。
転換細胞を培養することによって得られるタンパク質に関する。
【００２８】 タンパク質を産生するための発現系は上記ベクターなどの原核細胞系および細
菌細胞における真核細胞系の双方であり得る。
菌細胞における真核細胞系の双方であり得る。
【００２９】 Ｉ．［原文のまま］本発明の利点の１つはアポトーシスにおけるいくつかの遺
伝子の関与を証明したことであり、従って遺伝子療法による遺伝子の１つの過剰
発現は、それらのいくつかについてはその他の障害遺伝子がすでに発現している
細胞、すなわち悪性細胞にのみアポトーシスを誘導することができる。
伝子の関与を証明したことであり、従って遺伝子療法による遺伝子の１つの過剰
発現は、それらのいくつかについてはその他の障害遺伝子がすでに発現している
細胞、すなわち悪性細胞にのみアポトーシスを誘導することができる。
【００３０】 本発明はまた医薬としての、それがアポトーシスおよび／または腫瘍抑制中に
誘導される場合に上記ヌクレオチド配列の少なくとも１つ、特にＴＳＡＰ９〜Ｔ
ＳＡＰ２２遺伝子の細胞内発現を確実にする、または逆にそれがアポトーシスお
よび／または腫瘍抑制中に阻害される場合に上記のような少なくとも１つの細胞
内配列、特にＴＳＩＰ３の細胞内発現の阻害を確実にする化合物に関する。例え
ばそれはヌクレオチド配列の阻害を確実にする活性型ヌクレオチドであってもよ
いし、またはそのヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質に向けられ
るモノクローナル抗体であってもよい。
誘導される場合に上記ヌクレオチド配列の少なくとも１つ、特にＴＳＡＰ９〜Ｔ
ＳＡＰ２２遺伝子の細胞内発現を確実にする、または逆にそれがアポトーシスお
よび／または腫瘍抑制中に阻害される場合に上記のような少なくとも１つの細胞
内配列、特にＴＳＩＰ３の細胞内発現の阻害を確実にする化合物に関する。例え
ばそれはヌクレオチド配列の阻害を確実にする活性型ヌクレオチドであってもよ
いし、またはそのヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質に向けられ
るモノクローナル抗体であってもよい。
【００３１】 さらに遺伝子療法以外のアプローチ、特にセンスまたはアンチセンス戦略にお
けるヌクレオチド配列、すなわちＴＳＩＰの発現を阻害することができるが、も
う一方で上流で機能してＴＳＡＰの発現を誘導するものを考えることも可能であ
る。
けるヌクレオチド配列、すなわちＴＳＩＰの発現を阻害することができるが、も
う一方で上流で機能してＴＳＡＰの発現を誘導するものを考えることも可能であ
る。
【００３２】 ＴＳＡＰに対応するタンパク質またはＴＳＩＰに対応する阻害的抗体を提供す
ることによる直接的な代替戦略を考えることもできる。
ることによる直接的な代替戦略を考えることもできる。
【００３３】 最後に、その活性がＴＳＡＰを活性化する、もしくはその発現産物の作用を模
倣する、またはＴＳＩＰを阻害する、またはその発現産物の作用を阻害する非タ
ンパク質分子の使用も考えることができる。
倣する、またはＴＳＩＰを阻害する、またはその発現産物の作用を阻害する非タ
ンパク質分子の使用も考えることができる。
【００３４】 これらの産物は、実施例に記載の改変細胞に対して、試験される産物を細胞培
養物に導入し、さらにアポトーシス現象の発生を検出することにより容易に試験
できる。ＤＮＡ、ＲＮＡまたはタンパク質戦略では、それらの産物はもちろん記
載の配列の関数として開発される。
養物に導入し、さらにアポトーシス現象の発生を検出することにより容易に試験
できる。ＤＮＡ、ＲＮＡまたはタンパク質戦略では、それらの産物はもちろん記
載の配列の関数として開発される。
【００３５】 本発明は特に抗癌剤としての上記医薬の使用に関する。
【００３６】 しかしながら、実施例を読めば明らかになるように、ＴＳＡＰ９〜２２および
ＴＳＩＰ３遺伝子の産物もまた抗癌剤として有用である。
ＴＳＩＰ３遺伝子の産物もまた抗癌剤として有用である。
【００３７】 従って本発明はまた、抗癌剤としての上記医薬の使用に関する。
【００３８】 さらに本発明は癌の疾病素因を決定する診断薬としての、ヌクレオチドプロー
ブまたは増幅プライマーとして使用される本発明の配列の全部または一部、また
、癌の疾病素因を決定するための診断薬としての、本発明の配列によりコードさ
れるタンパク質の全部もしくは一部に対応する抗原、または任意の培養後の対応
する抗体に関する。
ブまたは増幅プライマーとして使用される本発明の配列の全部または一部、また
、癌の疾病素因を決定するための診断薬としての、本発明の配列によりコードさ
れるタンパク質の全部もしくは一部に対応する抗原、または任意の培養後の対応
する抗体に関する。
【００３９】 診断法は公知であり、例えば単離および任意の増幅の後に可変部分をマイクロ
シーケンシングする技術、またはＲＦＬＰ検出法もしくは特に単純増幅法であっ
てもよい。特に示差技術によって正常なＴＳＡＰ（またはＴＳＩＰ）と異常なも
のとの違い証明することが可能となる。
シーケンシングする技術、またはＲＦＬＰ検出法もしくは特に単純増幅法であっ
てもよい。特に示差技術によって正常なＴＳＡＰ（またはＴＳＩＰ）と異常なも
のとの違い証明することが可能となる。
【００４０】 本発明はまた上記配列を用いたモデルに関する。
【００４１】 さらに本発明らは最初に明らかにした本発明の配列の拡張により、該拡張配列
と既知のタンパク質に対応する配列によって示される相同性を証明したことを強
調すべきであろう。
と既知のタンパク質に対応する配列によって示される相同性を証明したことを強
調すべきであろう。
【００４２】 さらに詳しくは、ＴＳＡＰ９とＴＣＰ−１遺伝子を含むマウス・チャペロニン
との相同性（９）の他、ＴＳＡＰ１３とヒト・プロテアソームのｐ４０．５サブ
ユニットとで示される強い相同性（１１）、およびＴＳＡＰ２１とＳＮＡＲＥタ
ンパク質（１２）群に属するシンタキシン１１とで示される強い相同性を明らか
にした。
との相同性（９）の他、ＴＳＡＰ１３とヒト・プロテアソームのｐ４０．５サブ
ユニットとで示される強い相同性（１１）、およびＴＳＡＰ２１とＳＮＡＲＥタ
ンパク質（１２）群に属するシンタキシン１１とで示される強い相同性を明らか
にした。
【００４３】 チャペロニンはタンパク質の折りたたみおよび原核生物の細胞質ゾルの構築に
関与する。それらは中間体を捕捉する（そうしなければ凝集してしまう）ことに
よってこの折りたたみの速度を遅くするものと推測される。ＴＳＡＰ９と相同な
ＴＣＰ−１遺伝子を含むチャペロニンが作用するタンパク質のうち、Ｂ型肝炎ウ
イルスのアクチン、チューブリン、およびカプシドタンパク質が挙げられる。
関与する。それらは中間体を捕捉する（そうしなければ凝集してしまう）ことに
よってこの折りたたみの速度を遅くするものと推測される。ＴＳＡＰ９と相同な
ＴＣＰ−１遺伝子を含むチャペロニンが作用するタンパク質のうち、Ｂ型肝炎ウ
イルスのアクチン、チューブリン、およびカプシドタンパク質が挙げられる。
【００４４】 プロテアソームは、ユビキチンと同様、突然変異または環境ストレスに起因す
る異常なタンパク質をはじめ、多くの細胞内タンパク質の分解を担う主要なタン
パク質分解系の主成分である。最近、ヒト２６Ｓプロテアソームｐ４０．５サブ
ユニットが、酵母Ｎａｓ７ｐにおけるその相同体とともに明らかにされた。ヒト
では、上記サブユニットに対応するｍＲＮＡはさらに詳しくは膵臓、胎盤、精巣
、心臓および骨格筋で発現する。さらに、Ｎａｓ７ｐに欠陥がある酵母細胞は熱
ストレスに特に感受性がある。２６Ｓプロテアソームの機能は熱ストレスの際に
退化するという示唆の一助となる。
る異常なタンパク質をはじめ、多くの細胞内タンパク質の分解を担う主要なタン
パク質分解系の主成分である。最近、ヒト２６Ｓプロテアソームｐ４０．５サブ
ユニットが、酵母Ｎａｓ７ｐにおけるその相同体とともに明らかにされた。ヒト
では、上記サブユニットに対応するｍＲＮＡはさらに詳しくは膵臓、胎盤、精巣
、心臓および骨格筋で発現する。さらに、Ｎａｓ７ｐに欠陥がある酵母細胞は熱
ストレスに特に感受性がある。２６Ｓプロテアソームの機能は熱ストレスの際に
退化するという示唆の一助となる。
【００４５】 ＳＮＡＲＥ（可溶性Ｎ−エチルマレイミド感受性因子結合タンパク質受容体）
タンパク質は、その示差的発現および会合が細胞の膜コンパートメントの組織化
に関与するタンパク質である。これらのタンパク質は特にエンドソームおよびリ
ソソームのゴルジ体領域に位置し、それらがこれらのオルガネラを用いて膜交換
の調節における役割を果たしていることを示唆している。さらに詳しくはシンタ
キシン１１はゴルジ領域の後に位置しているものと考えられる。
タンパク質は、その示差的発現および会合が細胞の膜コンパートメントの組織化
に関与するタンパク質である。これらのタンパク質は特にエンドソームおよびリ
ソソームのゴルジ体領域に位置し、それらがこれらのオルガネラを用いて膜交換
の調節における役割を果たしていることを示唆している。さらに詳しくはシンタ
キシン１１はゴルジ領域の後に位置しているものと考えられる。
【００４６】 本発明の配列が関与する分子経路が上記タンパク質が関与する分子経路と共通
点を有するかどうかを調べることができるのは有利であり、これにより例えば治
療目的または診断目的のための上記配列の新規な作用様式を考案することができ
るようになる。
点を有するかどうかを調べることができるのは有利であり、これにより例えば治
療目的または診断目的のための上記配列の新規な作用様式を考案することができ
るようになる。
【００４７】 図１は拡張されたＴＳＡＰ１３配列（配列番号５）を示す。下線部分は発明者
らによって独自に明らかにされた配列に相当する。太字の文字は２６Ｓヒト・プ
ロテアソームｐ４０．５サブユニットと１００％の相同性を有する配列に相当す
る。
らによって独自に明らかにされた配列に相当する。太字の文字は２６Ｓヒト・プ
ロテアソームｐ４０．５サブユニットと１００％の相同性を有する配列に相当す
る。
【００４８】 図２は拡張されたＴＳＡＰ２１配列（配列番号１３）を示す。下線部分は発明
者らよって独自に明らかにされた配列に相当する。太字の文字はＳＮＡＲＥタン
パク質群のシンタキシン１１と１００％の相同性を有する配列に相当する。
者らよって独自に明らかにされた配列に相当する。太字の文字はＳＮＡＲＥタン
パク質群のシンタキシン１１と１００％の相同性を有する配列に相当する。
【００４９】
本発明のその他の特徴は以下の実施例を読めば明らかになる。
【００５０】材料および方法 細胞培養 Ｋ５６２、ＫＳ、ＫＳ２およびＫＳ３細胞をモデルとして用いた。Ｋ５６２系
統はエリトロミエロイド種の慢性白血病に由来する腫瘍系統である。それは特に
転座を含むフィラデルフィア染色体（９、２２）により特徴づけられ、そこには
ｂｃｒ遺伝子とａｂｌ前癌遺伝子との再配列が存在する。さらにこの系統は異常
な核型を有し、ｍｙｃおよびｐｉｍ−１癌遺伝子の過剰発現を示す。これらの系
統はA. Telerman et al.: A model tumor suppression using H-1 parvovirus,
Proc. Natl. Acad. Sci. USA. Vol. 90, pp. 8702-8706, September 1993に記載
されている。
統はエリトロミエロイド種の慢性白血病に由来する腫瘍系統である。それは特に
転座を含むフィラデルフィア染色体（９、２２）により特徴づけられ、そこには
ｂｃｒ遺伝子とａｂｌ前癌遺伝子との再配列が存在する。さらにこの系統は異常
な核型を有し、ｍｙｃおよびｐｉｍ−１癌遺伝子の過剰発現を示す。これらの系
統はA. Telerman et al.: A model tumor suppression using H-1 parvovirus,
Proc. Natl. Acad. Sci. USA. Vol. 90, pp. 8702-8706, September 1993に記載
されている。
【００５１】 要するに、Ｋ５６２のモノクローンにＨ−１パルボウイルスを感染させた。こ
の感染は細胞培養物を著しく死滅させた。この培養物を２ヶ月間維持した後、Ｋ
Ｓクローンを単離した。２回目に行った同実験では、インキュベーション３ヶ月
後にＫＳ２とＫＳ３クローンが得られた。
の感染は細胞培養物を著しく死滅させた。この培養物を２ヶ月間維持した後、Ｋ
Ｓクローンを単離した。２回目に行った同実験では、インキュベーション３ヶ月
後にＫＳ２とＫＳ３クローンが得られた。
【００５２】 本発明者らは同じアプローチを用いてＵ９３７悪性細胞集団から、Ｈ−１パル
ボウイルス耐性であって、かつ、悪性表現型の抑制を示すＵＳ３とＵＳ４系統を
得た。これらの系統は参照文献（７）に記載されている。
ボウイルス耐性であって、かつ、悪性表現型の抑制を示すＵＳ３とＵＳ４系統を
得た。これらの系統は参照文献（７）に記載されている。
【００５３】 Ｍ１骨髄性白血病細胞およびＭ１細胞を熱感受性変異体ｖａｌ１３５ ｐ５３
（ＬＴＲ６）で安定的にトランスフェクトした。
（ＬＴＲ６）で安定的にトランスフェクトした。
【００５４】 これらの細胞を、３７℃、５％ＣＯ２下で１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４
０培地で培養した。温度を変更するため、この培養物を３２℃の第２のインキュ
ベーターに置いた。
０培地で培養した。温度を変更するため、この培養物を３２℃の第２のインキュ
ベーターに置いた。
【００５５】 Ｐ２１ＷＡＦ１でトランスフェクトしたＵ９３７系統：Ｐ２１ＷＡＦ１遺伝子
のｃＤＮＡの完全なコード部分をｐＢＫ−ＲＳＶベクター(Stratgene, La Jolla
, California)へクローン化した。３５０万個のＵ９３７細胞をＤＮＡ２０マイ
クログラム／リポフェクチン(Life Technologies)３０マイクログラムでトラン
スフェクトした。
のｃＤＮＡの完全なコード部分をｐＢＫ−ＲＳＶベクター(Stratgene, La Jolla
, California)へクローン化した。３５０万個のＵ９３７細胞をＤＮＡ２０マイ
クログラム／リポフェクチン(Life Technologies)３０マイクログラムでトラン
スフェクトした。
【００５６】 １．５ｍｇ／ｍｌのＧ４１８(Sigma)を用いて安定なトランスフェクト体を選
抜した。この系統の特徴として、特に悪性表現型の抑制を呈する。
抜した。この系統の特徴として、特に悪性表現型の抑制を呈する。
【００５７】 アンチセンス位のＴＳＩＰ２（ＰＳ１）でトランスフェクトしたＵ９３７系統
：ＴＳＩＰ２（ＰＳ１）遺伝子のｃＤＮＡの完全なコード部分をｐＢＫ−ＲＳＶ
ベクター(Stratagene, La Jolla, California)に、アンチセンス位でクローン化
した。３００万個のＵ９３７細胞をＤＮＡ２０マイクログラム／リポフェクチン
(Life Technologies)３０マイクログラムでトランスフェクトした。
：ＴＳＩＰ２（ＰＳ１）遺伝子のｃＤＮＡの完全なコード部分をｐＢＫ−ＲＳＶ
ベクター(Stratagene, La Jolla, California)に、アンチセンス位でクローン化
した。３００万個のＵ９３７細胞をＤＮＡ２０マイクログラム／リポフェクチン
(Life Technologies)３０マイクログラムでトランスフェクトした。
【００５８】 １．５ｍｇ／ｍｌのＧ４１８(Sigma)を用いて安定なトランスフェクト体を選
抜した。この系統の特徴として、特に増殖速度の低下、アポトーシスの活性化お
よび悪性表現型の抑制を呈し、参照文献（８）に記載されている。
抜した。この系統の特徴として、特に増殖速度の低下、アポトーシスの活性化お
よび悪性表現型の抑制を呈し、参照文献（８）に記載されている。
【００５９】 ＴＳＡＰ３（ＨＵＭＳＩＡＨ）でトランスフェクトしたＵ９３７系統：ＴＳＡ
Ｐ３遺伝子のｃＤＮＡの完全なコード部分をｐＢＫ−ＲＳＶベクター(Stratgene
, La Jolla, California)へクローン化した。３万個のＵ９３７細胞をＤＮＡ２
０マイクログラム／リポフェクチン(Life Technologies)３０マイクログラムで
トランスフェクトした。
Ｐ３遺伝子のｃＤＮＡの完全なコード部分をｐＢＫ−ＲＳＶベクター(Stratgene
, La Jolla, California)へクローン化した。３万個のＵ９３７細胞をＤＮＡ２
０マイクログラム／リポフェクチン(Life Technologies)３０マイクログラムで
トランスフェクトした。
【００６０】 １．５ｍｇ／ｍｌのＧ４１８(Sigma)を用いて安定なトランスフェクト体を選
抜した。この系統の特徴として、特にアポトーシスの活性化および悪性表現型の
抑制を呈する。
抜した。この系統の特徴として、特にアポトーシスの活性化および悪性表現型の
抑制を呈する。
【００６１】示差的ｃＤＮＡの研究 標準的な実験条件の下で試験し、全体的に再現性ある結果を得るために、原型
（１）のプロトコールに対して以下の改良を行った： Fast Track(Invitrogen, San Diego CA)を用いオリゴｄＴカラムで２回精製し
たポリＡ＋ｍＲＮＡを常に使用する。ｄＮＴＰ(Boehringer-Mannheim)各２０μ
Ｍを用いたポリＡ＋０．０５μｇ上での逆転写(M-MLV Reverse Transcriptase,
Gibco BRL)の後、非添加ｄＮＴＰを最終のＰＣＲ混合物に加える。ＰＣＲ(GeneA
mp PCRシステム9600 Perkin Elmer Cetus)の前に９４℃で５分「ホットスタート
」を行う。サンプルを氷水上で急速冷却する。５０℃から４０℃の１０サイクル
の「タッチダウン」を行い（９４℃３０秒−５０℃３０秒−７２℃３０秒）、そ
の後３５サイクル（９４℃３０秒−４０℃１分−７２℃３０秒）、最後に７２℃
５分の伸長を行う。このＰＣＲ産物を非変性６％ポリアクリルアミドゲルで分離
する（４）。このゲルを乾燥させずに露光させた。各示差的表示は、３７℃で、
およびＭ１Ｓ６とＬＴＲ６を３２℃で４時間インキュベートした後に２つの細胞
系統を比較することにより行う。
（１）のプロトコールに対して以下の改良を行った： Fast Track(Invitrogen, San Diego CA)を用いオリゴｄＴカラムで２回精製し
たポリＡ＋ｍＲＮＡを常に使用する。ｄＮＴＰ(Boehringer-Mannheim)各２０μ
Ｍを用いたポリＡ＋０．０５μｇ上での逆転写(M-MLV Reverse Transcriptase,
Gibco BRL)の後、非添加ｄＮＴＰを最終のＰＣＲ混合物に加える。ＰＣＲ(GeneA
mp PCRシステム9600 Perkin Elmer Cetus)の前に９４℃で５分「ホットスタート
」を行う。サンプルを氷水上で急速冷却する。５０℃から４０℃の１０サイクル
の「タッチダウン」を行い（９４℃３０秒−５０℃３０秒−７２℃３０秒）、そ
の後３５サイクル（９４℃３０秒−４０℃１分−７２℃３０秒）、最後に７２℃
５分の伸長を行う。このＰＣＲ産物を非変性６％ポリアクリルアミドゲルで分離
する（４）。このゲルを乾燥させずに露光させた。各示差的表示は、３７℃で、
およびＭ１Ｓ６とＬＴＲ６を３２℃で４時間インキュベートした後に２つの細胞
系統を比較することにより行う。
【００６２】 全体的な再現性を確認するため、この示差的表示法を３回の異なる実験で反復
する。
する。
【００６３】 示差的に発現したバンドをゲルから切り出し、溶出し、再増幅した（１）。こ
のＰＣＲ産物を提供されている使用説明書に従いＴＡクローニング系(Invitroge
n, San Diego, CA)を用いてサブクローニングする。
のＰＣＲ産物を提供されている使用説明書に従いＴＡクローニング系(Invitroge
n, San Diego, CA)を用いてサブクローニングする。
【００６４】 各連結反応について１０個の組換えクローンをＡＢＩ自動システムを用いて配
列決定する。
列決定する。
【００６５】ＲＮＡ抽出、解析およびノーザンブロットプローブ 全ＲＮＡをトリアゾール(Life tachnologies)で抽出する。ポリ１＋［原文の
まま］ＲＮＡをOligotexdTキット(Qjagen, CA)を用いて調製する。全ＲＮＡ30μ
gまたはポリＡ＋ＲＮＡ2μgを１％アガロース、１×ＭＯＰＳ／２％ホルムアル
デヒドゲル上で分離し、従前に記載されたように（５）ナイロンメンブラン(Hyb
ond N+, Appligene, France)に移する。ノーザンブロットを、ＴＳＡＰおよびＴ
ＳＩＰ挿入部上でＰ３２で標識したプローブとハイブリダイズさせ、従前に記載
されたように（５）洗浄する。野生型ｐ５３機能の誘導を確認するため、ノーザ
ンブロットをサイクリンＧプローブとハイブリダイズさせる（６）。標識された
ｍＲＮＡのに関する対照として、このブロットをＧＡＰＤＨプローブとハイブリ
ダイズさせる。同じ条件下で種々のノーザンブロット(Clontech CA)を用い、対
照としてβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせる。このノーザンブロット
を−８０℃で１０日間露光する。
まま］ＲＮＡをOligotexdTキット(Qjagen, CA)を用いて調製する。全ＲＮＡ30μ
gまたはポリＡ＋ＲＮＡ2μgを１％アガロース、１×ＭＯＰＳ／２％ホルムアル
デヒドゲル上で分離し、従前に記載されたように（５）ナイロンメンブラン(Hyb
ond N+, Appligene, France)に移する。ノーザンブロットを、ＴＳＡＰおよびＴ
ＳＩＰ挿入部上でＰ３２で標識したプローブとハイブリダイズさせ、従前に記載
されたように（５）洗浄する。野生型ｐ５３機能の誘導を確認するため、ノーザ
ンブロットをサイクリンＧプローブとハイブリダイズさせる（６）。標識された
ｍＲＮＡのに関する対照として、このブロットをＧＡＰＤＨプローブとハイブリ
ダイズさせる。同じ条件下で種々のノーザンブロット(Clontech CA)を用い、対
照としてβ−アクチンプローブとハイブリダイズさせる。このノーザンブロット
を−８０℃で１０日間露光する。
【００６６】例１ 望まれる目的は癌の抑制をもたらす分子経路を同定することである。 モデルを開発するために以下の仮説を立てた：Ｈ−１パルボウイルスの細胞変
性作用に感受性のある腫瘍から耐性細胞の選択が可能であったとすれば、この耐
性はそれらの悪性表現型における変化によるものであり得る。Ｋ５６２赤白血病
細胞から選択されるＫＳ細胞についてはこのことを実証することができた。Ｋ５
６２親系統とは異なり、ＫＳ、ＫＳ２およびＫＳ３クローンはＨ−１パルボウイ
ルスの細胞変性作用に耐性がある。さらにＫＳ、ＫＳ２およびＫＳ３細胞の発癌
性は軟寒天で培養した場合には９０％まで低下するが、Ｓｃｉｄ−Ｓｃｉｄ免疫
抑制マウスに注射した場合のin vivoにおけるこれら同ＫＳ系統の発癌性も低下
する。分子レベルでは、この悪性表現型の抑制はｐ５３抑制遺伝子の再発現と相
まって起こることに注目できる。
性作用に感受性のある腫瘍から耐性細胞の選択が可能であったとすれば、この耐
性はそれらの悪性表現型における変化によるものであり得る。Ｋ５６２赤白血病
細胞から選択されるＫＳ細胞についてはこのことを実証することができた。Ｋ５
６２親系統とは異なり、ＫＳ、ＫＳ２およびＫＳ３クローンはＨ−１パルボウイ
ルスの細胞変性作用に耐性がある。さらにＫＳ、ＫＳ２およびＫＳ３細胞の発癌
性は軟寒天で培養した場合には９０％まで低下するが、Ｓｃｉｄ−Ｓｃｉｄ免疫
抑制マウスに注射した場合のin vivoにおけるこれら同ＫＳ系統の発癌性も低下
する。分子レベルでは、この悪性表現型の抑制はｐ５３抑制遺伝子の再発現と相
まって起こることに注目できる。
【００６７】 Ｋ５６２とＫＳ細胞の間で示差的に発現した１５ｃＤＮＡを単離した。ＴＳＡ
Ｐ９はチャペロニンと相同である。
Ｐ９はチャペロニンと相同である。
【００６８】 表１は同定された分子を示し、プライマーとノーザンブロットにより検出され
たｍＲＮＡの大きさが示されてている。
たｍＲＮＡの大きさが示されてている。
【００６９】 これらの１５の分子の総てが、ＴＳＩＰ３を除くＫＳ細胞で誘導され、悪性表
現型の抑制中にその発現は阻害される。
現型の抑制中にその発現は阻害される。
【００７０】 トランスフェクション実験では、Ｈ−１パルボウイルスの細胞変性作用耐性が
ｐ５３遺伝子の完全な機能と相まって生じ、ｐ５３変異体でトランスフェクトし
た細胞はＨ−１パルボウイルスの細胞変性作用に耐性となることも実証できた。
ｐ５３遺伝子の完全な機能と相まって生じ、ｐ５３変異体でトランスフェクトし
た細胞はＨ−１パルボウイルスの細胞変性作用に耐性となることも実証できた。
【００７１】 従って発明者らが単離した１５分子は、その過剰発現（ＴＳＡＰ９−ＴＳＡＰ
２２）または阻害（ＴＳＩＰ３）癌の抑制に関連しているだけでなく、Ｈ−１パ
ルボウイルス耐性とも関連している遺伝子をコードしている。結果として、これ
らの遺伝子は癌抑制の分子経路の一部である分子をコードし、可能性ある抑制遺
伝子である。
２２）または阻害（ＴＳＩＰ３）癌の抑制に関連しているだけでなく、Ｈ−１パ
ルボウイルス耐性とも関連している遺伝子をコードしている。結果として、これ
らの遺伝子は癌抑制の分子経路の一部である分子をコードし、可能性ある抑制遺
伝子である。
【００７２】 ｐ５３／ｐ２１活性化経路をより明確に定義するため、発明者らは以下のこと
を研究した： Moshe Orenで開発した熱感受性ｐ５３モデルにおける、これらのＴＳＡＰの活
性化／ＴＳＩＰの阻害、 Ｕ９３７細胞をｐ２１遺伝子でトランスフェクトしたモデルにおける、これら
のＴＳＡＰの活性化／ＴＳＩＰの阻害、 Ｕ９３７細胞をＴＳＡＰ３遺伝子でトランスフェクトしたモデルにおける、新
規なＴＳＡＰの活性化／ＴＳＩＰの阻害、および Ｕ９３７細胞をＴＳＩＰ２（ＰＳ１）遺伝子でアンチセンス位でトランスフェ
クトしたモデルにおける、これらの新規なＴＳＡＰ／ＴＳＩＰの活性化。
を研究した： Moshe Orenで開発した熱感受性ｐ５３モデルにおける、これらのＴＳＡＰの活
性化／ＴＳＩＰの阻害、 Ｕ９３７細胞をｐ２１遺伝子でトランスフェクトしたモデルにおける、これら
のＴＳＡＰの活性化／ＴＳＩＰの阻害、 Ｕ９３７細胞をＴＳＡＰ３遺伝子でトランスフェクトしたモデルにおける、新
規なＴＳＡＰの活性化／ＴＳＩＰの阻害、および Ｕ９３７細胞をＴＳＩＰ２（ＰＳ１）遺伝子でアンチセンス位でトランスフェ
クトしたモデルにおける、これらの新規なＴＳＡＰ／ＴＳＩＰの活性化。
【００７３】 下記表１はＫ５６２／ＫＳモデルおよびその他のＵ９３７／ＵＳ３−ＵＳ４モ
デル、すなわちｐ２１遺伝子がｐ５３独立経路を介して活性化される腫瘍抑制の
モデルにおける種々のプローブ（ＴＳＡＰ９−ＴＳＡＰ２２、ＴＳＩＰ３）のノ
ーザンブロットによって解析した示差的発現の結果を報告したものである。従っ
てこれらのｃＤＮＡは腫瘍抑制の２つの異なる細胞系（Ｋ５６２／Ｋ２赤白血病
モデルおよびＵ９３７／ＵＳ骨髄単球性モデル）で活性化される。
デル、すなわちｐ２１遺伝子がｐ５３独立経路を介して活性化される腫瘍抑制の
モデルにおける種々のプローブ（ＴＳＡＰ９−ＴＳＡＰ２２、ＴＳＩＰ３）のノ
ーザンブロットによって解析した示差的発現の結果を報告したものである。従っ
てこれらのｃＤＮＡは腫瘍抑制の２つの異なる細胞系（Ｋ５６２／Ｋ２赤白血病
モデルおよびＵ９３７／ＵＳ骨髄単球性モデル）で活性化される。
【００７４】 この表によれば、ほとんどの場合において、Ｋ５６２／ＫＳモデルにおいて示
差的に発現する遺伝子はまたＵ９３７／ＵＳ３−ＵＳ４モデルでも示差的に発現
することに気づく。従って、種々の癌に共通の腫瘍抑制に関する分子機構が存在
する。この結論はＭ１／ＬＴＲ−６モデルについても当てはまる。後者の場合、
ある種のＴＳＡＰ−ＴＳＩＰにおいてシグナルが存在しないのは、おそらく実験
が２種の異種系（マウスＲＮＡに対してヒトプローブ）で行われたことによるも
のであることに注目すべきである。
差的に発現する遺伝子はまたＵ９３７／ＵＳ３−ＵＳ４モデルでも示差的に発現
することに気づく。従って、種々の癌に共通の腫瘍抑制に関する分子機構が存在
する。この結論はＭ１／ＬＴＲ−６モデルについても当てはまる。後者の場合、
ある種のＴＳＡＰ−ＴＳＩＰにおいてシグナルが存在しないのは、おそらく実験
が２種の異種系（マウスＲＮＡに対してヒトプローブ）で行われたことによるも
のであることに注目すべきである。
【００７５】
【表１】
【００７６】
【表２】
【００７７】 下記表２は種々のトランスフェクト系統におけるあるＴＳＡＰおよびＴＳＩＰ
クローンの示差発現を要約したものである。 この表から、ほとんどの場合、ｐ２１トランスフェクト体、ＴＳＡＰトランス
フェクト体またはアンチセンスＴＳＩＰトランスフェクト体が、Ｕ９３７／ＵＳ
とＫ５６２／ＫＳ系に共通の腫瘍抑制の分子機構を活性化し得ることが明らかに
なる。
クローンの示差発現を要約したものである。 この表から、ほとんどの場合、ｐ２１トランスフェクト体、ＴＳＡＰトランス
フェクト体またはアンチセンスＴＳＩＰトランスフェクト体が、Ｕ９３７／ＵＳ
とＫ５６２／ＫＳ系に共通の腫瘍抑制の分子機構を活性化し得ることが明らかに
なる。
【００７８】
【表３】
【００７９】 下記表３はノーザンブロットによるｃＤＮＡクローンの示差発現の特徴を要約
したものである。
したものである。
【００８０】
【表４】
【００８１】参考文献
【表５】
【００８２】
【配列表】
【図１】 拡張されたＴＳＡＰ１３配列（配列番号５）を示す。下線部分は発明者らによ
って独自に明らかにされた配列に相当する。太字の文字は２６Ｓヒト・プロテア
ソームｐ４０．５サブユニットと１００％の相同性を有する配列に相当する。
って独自に明らかにされた配列に相当する。太字の文字は２６Ｓヒト・プロテア
ソームｐ４０．５サブユニットと１００％の相同性を有する配列に相当する。
【図２】 拡張されたＴＳＡＰ２１配列（配列番号１３）を示す。下線部分は発明者らよ
って独自に明らかにされた配列に相当する。太字の文字はＳＮＡＲＥタンパク質
群のシンタキシン１１と１００％の相同性を有する配列に相当する。
って独自に明らかにされた配列に相当する。太字の文字はＳＮＡＲＥタンパク質
群のシンタキシン１１と１００％の相同性を有する配列に相当する。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 48/00 Ａ６１Ｐ 35/00 ４Ｃ０８４ Ａ６１Ｐ 31/12 Ｃ０７Ｋ 14/47 ４Ｃ０８５ 35/00 16/18 ４Ｃ０８７ Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ１２Ｎ 1/15 ４Ｈ０４５ 16/18 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 Ｃ１２Ｐ 21/08 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｃ１２Ｐ 21/08 33/50 Ｔ Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｚ Ｇ０１Ｎ 33/15 33/53 Ｄ 33/50 Ｍ 33/566 33/53 33/577 Ｂ Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/566 5/00 Ｂ 33/577 Ａ６１Ｋ 37/02 Ｆターム(参考） 2G045 AA25 AA26 AA28 AA40 CB01 CB21 DA12 DA13 DA14 DA36 DA77 DA78 FB02 FB03 FB04 4B024 AA01 AA12 BA80 CA04 CA09 CA12 CA20 DA01 DA02 DA03 DA05 DA11 DA12 EA02 FA01 GA11 HA13 HA14 4B063 QA01 QA13 QA17 QA19 QQ43 QQ53 QR08 QR32 QR35 QR40 QR56 QR62 QS16 QS25 QS34 QS36 QX02 4B064 AG27 CA10 CA20 CC01 CC24 DA01 DA14 4B065 AA01X AA58X AA72X AA90X AA93Y AB01 AC14 BA02 CA24 CA44 CA46 4C084 AA02 AA07 AA13 AA17 BA44 CA53 NA14 ZB262 ZB332 4C085 AA14 EE01 4C087 AA02 BC83 NA14 ZB26 ZB33 4H045 AA10 AA11 AA30 BA10 CA40 DA76 EA28 EA51 FA71 FA74
Claims (25)
- 【請求項１】 （ａ）配列番号１〜１５の１つの配列を含んでなる遺伝子、 または （ｂ）（ａ）の配列の１つとハイブリダイズする配列、 （ｃ）（ａ）または（ｂ）と少なくとも８０％の相同性を有する配列、または （ｄ）アポトーシスおよび／または腫瘍抑制中にその遺伝子の細胞内発現が誘
導または阻害されることを特徴とする配列 を含んでなる同等の遺伝子、に対応するヌクレオチド配列。 - 【請求項２】 アポトーシスおよび／または腫瘍抑制がｐ５３および／またはｐ２１により誘
導される、請求項１に記載の配列。 - 【請求項３】 ＴＳＡＰ９〜ＴＳＡＰ２２または同等の遺伝子から選択される、請求項１およ
び２のいずれかに記載の配列。 - 【請求項４】 アポトーシスおよび／または腫瘍抑制がｐ５３および／またはｐ２１により誘
導される、請求項３に記載の配列。 - 【請求項５】 ＴＳＩＰ３遺伝子または同等の遺伝子に対応する、請求項１に記載の配列。
- 【請求項６】 アポトーシスおよび／または腫瘍抑制中に遺伝子の細胞内発現が阻害される、
請求項５に記載の配列。 - 【請求項７】 遺伝子の細胞内発現が、ｐ２１形質転換体、ＴＳＡＰ３形質転換体およびアン
チセンスＴＳＩＰ２形質転換体からなる群より選択される少なくとも１つの形質
転換体によって活性化される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の配列。 - 【請求項８】 請求項１〜７のいずれか一項に記載の配列の細胞内発現のためのベクター。
- 【請求項９】 ウイルスベクターである、請求項８に記載の発現ベクター。
- 【請求項１０】 アデノウイルス、レトロウイルス、ヘルペスウイルスまたはポックスウイルス
である、請求項９に記載のベクター。 - 【請求項１１】 裸の核酸ベクターである、請求項８に記載のベクター。
- 【請求項１２】 組織特異的ターゲッティングおよび／または発現を確実にする配列を含んでな
る、請求項８〜１１のいずれか一項に記載のベクター。 - 【請求項１３】 請求項８〜１２のいずれか一項に記載の発現ベクターを用いて形質転換した細
胞。 - 【請求項１４】 請求項１３に記載の形質転換細胞を培養することにより得られるタンパク質で
あって、請求項１〜７のいずれか一項に記載の配列によりコードされるタンパク
質。 - 【請求項１５】 医薬としての、請求項８〜１２のいずれか一項に記載のベクター、または請求
項１４に記載のタンパク質。 - 【請求項１６】 医薬としての、請求項１〜３のいずれか一項に記載の少なくとも１つのヌクレ
オチド配列またはそれらの産物の細胞内発現を確実にする化合物。 - 【請求項１７】 請求項１５に記載の医薬としての、該配列の細胞内発現を確実にするヌクレオ
チドベクター。 - 【請求項１８】 医薬としての、請求項１、５〜７のいずれか一項に記載の少なくとも１つの細
胞内遺伝子またはそれらの産物の細胞内発現の阻害を確実にする化合物。 - 【請求項１９】 請求項１８に記載の医薬としての、ヌクレオチド配列の阻害を確実にする活性
型ヌクレオチド。 - 【請求項２０】 請求項１８に記載の医薬としての、ヌクレオチド配列によりコードされるタン
パク質に向けられたモノクローナル抗体。 - 【請求項２１】 癌の治療を意図した医薬としての、請求項１５〜２０のいずれか一項に記載の
医薬。 - 【請求項２２】 抗ウイルス薬としての、請求項１５〜２０のいずれか一項に記載の医薬。
- 【請求項２３】 特に癌の疾病素因を決定するため、および癌を監視するための診断薬としての
、ヌクレオチドプローブまたは増幅プライマーとして用いられる、請求項１〜７
のいずれか一項に記載の配列の全部または一部。 - 【請求項２４】 特に癌の疾病素因を決定するため、および癌を監視するための診断薬としての
、請求項１〜７のいずれか一項に記載の配列によりコードされるタンパク質の全
部または一部に相当する抗原、またはその対応する抗体。 - 【請求項２５】 抗癌剤および／または抗ウイルス薬を明らかにするための、請求項１３に記載
の細胞を含有するモデル。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR98/10077 | 1998-08-05 | ||
| FR9810077A FR2782085B1 (fr) | 1998-08-05 | 1998-08-05 | Genes impliques dans les voies moleculaires de la suppression tumorale et/ou la resistance aux virus |
| PCT/FR1999/001479 WO2000008147A1 (fr) | 1998-08-05 | 1999-06-18 | Genes impliques dans les voies moleculaires de la suppression tumorale et/ou la resistance aux virus |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002524041A true JP2002524041A (ja) | 2002-08-06 |
Family
ID=9529433
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000563773A Pending JP2002524041A (ja) | 1998-08-05 | 1999-06-18 | 腫瘍抑制および／またはウイルス耐性の分子経路に関連する遺伝子 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6956110B1 (ja) |
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