JP2002524021A - 分子相互作用の検出および薬剤発見のための電気化学的プローブ - Google Patents
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- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/972—Plasminogen activators
- G01N2333/9726—Tissue plasminogen activator
Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1.生物学的結合対の要素間の結合を検出するための電気化学的分析を実施す るための装置であって、 導体または半導体を含み、生物学的結合対の第1要素が固定される対象である 多孔性親水性高分子層で被覆された表面を有する第1電極と、 電解質水溶と接触している導電性金属を含む第2の照合電極と、 導電性金属を含む第3の補助電極と を含み、 ここで、各電極はポテンシオスタットに電気的に接続されており、 各電極が該溶液に電気化学的に接触している電解質溶液が入っている反応チャ ンバをさらに含み、 該溶液が、電位が電極に加えられている条件下で電極による還元/酸化反応に 関与することができる化学物質を含む電気化学的メディエータを含み、 前記溶液が、さらに、電位が電極に加えられている条件下で電気化学的メディ エータとの還元/酸化反応に関与することができる化学物質により電気化学的に 標識されている生物学的結合対の第2要素を含み、 生物学的結合対の第2要素が生物学的結合対の第1要素に結合している条件の 下で、電位が電極に加えられるとき当該装置内で電流が発生することを特徴とす る装置。 2.電気化学的分析が循環ボルタンメトリーであることを特徴とする請求項1 に記載の装置。 3.それぞれ多数の前記電極および多数の反応チャンバをさらに含み、各反応 チャンバには電解質が入っており、各反応チャンバが装置内の多数の電極の中の 3つの前記電極のそれぞれ1つに電気的に接触していることを特徴とする請求項 1に記載の装置。 4.生物学的結合対の第2要素がルテニウムで電気化学的に標識されているこ とを特徴とする請求項1に記載の装置。 5.電気化学的メディエータがルテニウム化合物であることを特徴とする請求 項1に記載の装置。 6.生物学的結合対の第1要素が受容体タンパク質またはそのリガンド結合フ ラグメントであり、生物学的結合対の第2要素が受容体タンパク質に特異的に結 合するリガンドであることを特徴とする請求項1に記載の装置。 7.生物学的結合対の第1要素が、抗体タンパク質またはその抗原結合フラグ メントであり、生物学的結合対の第2要素が、該抗体に特異的に結合する抗原で あることを特徴とする請求項1に記載の装置。 8.生物学的結合対の第1要素が、第1タンパク質またはそのフラグメントで あり、生物学的結合対の第2要素が、第1タンパク質に特異的に結合する第2タ ンパク質またはそのフラグメントであることを特徴とする請求項1に記載の装置 。 9.導電性金属または半導体を含む電極であって、生物学的結合対の第1要素 が固定された多孔性親水性高分子層で被覆された表面を有する電極。 10.請求項9に記載の電極を製作するためのキットであって、導体または半 導体を含む電極と、生物学的結合対の第1要素と、電極の表面上の多孔性親水性 高分子層を調製するための試薬と、生物学的結合対の第1要素を電極の表面上の 多孔性親水性高分子層内に固定化するための試薬とを含むキット。 11.a)導体または半導体を含む電極を提供するステップと、 b)電極の表面上に多孔性親水性高分子層を調製するステップと、 c)電極の表面上の多孔性親水性高分子層内に生物学的結合対の第1要 素を固定化するステップと を含む請求項9に記載の電極を製作する方法。 12.生物学的結合対の第1要素に対して、約1ナノモル濃度(nM)〜約1 00マイクロモル濃度(μM)の結合親和力を有する生物学的結合対の第2要素 を含む電気化学的に標識された代理リガンド。 13.ルテニウム化合物で標識された、請求項12に記載の電気化学的に標識 された代理リガンド。 14.式:Gly−His−Gly−Ser−Gly−Arg−Ala−Leu−Pro−Pro−Leu−Pro− Arg−Tyr−NH2(SEQ ID No.:1)、 His−Gly−Ser−Gly−Ser−Phe−Ser−His−Pro−Gln−Asn−Thr(SEQ ID No. :2)、 ビオチン−His−His−Ser−Gly−Ser−Gly−Ser−Gln−Thr−Phe−Ser−Asp− Leu−Trp−Lys−Leu(SEQ ID No.:3)、 Arg−Pro−Leu−Pro−Pro−Leu−Pro(SEQ ID No.:4)、 Ala−Pro−Pro−Val−Pro−Pro−Arg(SEQ ID No.:5)、または、 Leu−Tyr−Ser−Trp−Pro−Asp−Glu−Gln−Tyr−Glu−A.rg−Pro−Ser−Gly −Ser−Gly−Lys(SEQ ID No.:6) で表されるペプチドを含む請求項12に記載の電気化学的に標識された代理リガ ンド。 15.ルテニウム化合物を含む請求項1に記載の電気化学的メディエータ。 16.請求項1に記載の装置を使用して、電気化学的に標識された生物学的結 合対の第2要素と、電極上に固定化された生物学的結合対の第1要素との結合を 検出する方法であって、 a)請求項1に記載の各電極と電気的に接触している第1反応チャンバと、請 求項1に記載の各電極と電気的に接触している第2反応チャンバとを提供するス テップであって、ここで、第1反応チャンバと第2反応チャンバにおいて第1電 極がそれに固定化された生物学的結合対の第1要素を含み、各電極がポテンシオ スタット電気的に接続されており、ここで、前記第1反応チャンバが請求項1に 記載の電気化学的メディエータと、固定化された生物学的結合対の第1要素に特 異的に結合する電気化学的に標識された生物学的結合対の第2要素とを含み、且 つ、第2反応チャンバが請求項1に記載の電気化学的メディエータと、固定化さ れた生物学的結合対の第1要素に特異的に結合しない電気化学的に標識された物 質とを含むステップを含み、さらに、 b)請求項1に記載の装置の第1反応チャンバおよび第2反応チャンバのそれ ぞれの中で電気化学的分析を実施するステップと、 c)第1反応チャンバ内での電気化学的分析で発生する電流を、第2反応チャ ンバでの電気化学的分析で発生する電流と比較するステップであって、第2反応 チャンバで発生するより第1反応チャンバで大きい電流が発生することによって 、電気化学的に標識された生物学的結合対の第2要素と固定化された生物学的結 合対の第1要素との結合が検出されることを特徴とするステップと を含む方法。 17.請求項1に記載の装置を使用して、電気化学的に標識された生物学的結 合対の第2要素と電極上に固定化された生物学的結合対の第1要素との結合の阻 害因子を同定する方法であって、 a)請求項1に記載の各電極と電気的に接触している第1反応チャンバと、請 求項1に記載の各電極と電気的に接触している第2反応チャンバとを提供するス テップであって、ここで、第1反応チャンバと第2反応チャンバにおいて第1電 極がそれに固定化された生物学的結合対の第1要素を含み、各電極がポテンシオ スタット電気的に接続されており、ここで、前記各チャンバが請求項1に記載の 電気化学的メディエータと、固定化された生物学的結合対の第1要素に特異的に 結合する電気化学的に標識された生物学的結合対の第2要素とを含み、且つ、第 2反応チャンバが、固定化された生物学的結合対の第1要素に特異的に結合する 生物学的結合対の第2要素の結合の阻害因子をさらに含むステップを含み、さら に、 b)請求項1に記載の装置の第1反応チャンバおよび第2反応チャンバのそれ ぞれの中で電気化学的分析を実施するステップと、 c)第1反応チャンバ内での電気化学的分析で発生する電流を、第2反応チャ ンバでの電気化学的分析で発生する電流と比較するステップであって、第2反応 チャンバで発生するより第1反応チャンバで大きい電流が発生することによって 、電気化学的に標識された生物学的結合対の第2要素と固定化された生物学的結 合対の第1要素との結合の阻害因子が同定されることを特徴とするステップと を含む方法。 18.請求項1に記載の装置を使用して、電気化学的に標識された生物学的結 合対の第2要素と電極上に固定化された生物学的結合対の第1要素との結合の阻 害因子について、複雑な化学混合物をスクリーニングする方法であって、 a)請求項1に記載の各電極と電気的に接触している第1反応チャンバと、請 求項1に記載の各電極と電気的に接触している第2反応チャンバとを提供するス テップであって、ここで、第1反応チャンバと第2反応チャンバにおいて第1電 極がそれに固定化された生物学的結合対の第1要素を含み、各電極がポテンシオ スタット電気的に接続されており、ここで、前記各チャンバが請求項1に記載の 電気化学的メディエータと、固定化された生物学的結合対の第1要素に特異的に 結合する電気化学的に標識された生物学的結合対の第2要素とを含み、且つ、第 2反応チャンバが、固定化された生物学的結合対の第1要素に特異的に結合する 生物学的結合対の第2要素の結合の阻害因子の一部を含む複雑な混合物をさらに 含むステップを含み、さらに、 b)請求項1に記載の装置の第1反応チャンバおよび第2反応チャンバのそれ ぞれの中で電気化学的分析を実施するステップと、 c)第1反応チャンバ内での電気化学的分析で発生する電流を、第2反応チャ ンバでの電気化学的分析で発生する電流と比較するステップであって、第2反応 チャンバで発生するより第1反応チャンバで大きい電流が発生することによって 、電気化学的に標識された生物学的結合対の第2要素と固定化された生物学的結 合 対の第1要素との結合の阻害因子を有する複雑な混合物が同定されることを特徴 とするステップと を含む方法。 19.生物学的結合対の第2要素が電気化学的に標識された代理リガンドであ ることを特徴とする請求項16に記載の方法。 20.生物学的結合対の第2要素が電気化学的に標識された代理リガンドであ ることを特徴とする請求項17に記載の方法。 21.生物学的結合対の第2要素が電気化学的に標識された代理リガンドであ ることを特徴とする請求項18に記載方法。 22.d)第1電極上に固定化された生物学的結合対の第1要素への生物学的 結合対の第2要素の結合の阻害因子を化学的に分画して、分画された半混合物を 生成するステップと、 e)分画された半混合物のそれぞれに対して請求項18に記載のステップ(a )〜ステップ(c)を実施し、生物学的結合対の結合の阻害因子を有する半混合 物を同定するステップと をさらに含む請求項18に記載の方法。 23.生物学的結合対の要素間の結合を検出するための電気化学的分析を実施 するための装置であって、 導体または半導体を含み、且つ、多孔性親水性高分子層で被覆された表面を有 し、電極に電位が加えられている条件下で生物学的結合対の第1要素および電極 との還元/酸化反応に関与することができる化学物質を含む電気化学的メディエ ータがそれぞれその上に固定化されていることを特徴とする第1電極と、 電解質水溶と接触している導電性金属を含む第2の照合電極と、 導電性金属を含む第3の補助電極と を含み、 各電極はポテンシオスタットに電気的に接続されており、さらに、 各電極が電気化学的に接触する電解質溶液が入っている反応チャンバをさらに 含み、 前記溶液が、電位が電極に加えられている条件下で電気化学的メディエータと の還元/酸化反応に関与することができる化学物質により電気化学的に標識され ている生物学的結合対の第2要素をさらに含み、 生物学的結合対の第2要素が生物学的結合対の第1要素に結合している条件下 で、電位が電極に加えられるとき装置内で電流が発生することを特徴とする装置 。 24.電気化学的分析が循環ボルタンメトリーであることを特徴とする請求項 23に記載の装置。 25.それぞれ多数の前記電極および多数の反応チャンバをさらに含み、各反 応チャンバが電解質を含み、且つ、当該装置内の多数の電極中の3つの前記電極 のそれぞれ1つと電気化学的に接触していることを特徴とする請求項23に記載 の装置。 26.生物学的結合対の第2要素がルテニウム電気化学的に標識されているこ とを特徴とする請求項23に記載の装置。 27.電気化学的メディエータがオスミウム化合物であることを特徴とする請 求項23に記載の装置。 28.電気化学的メディエータがルテニウム化合物であることを特徴とする、 請求項23に記載の装置。 29.生物学的結合対の第1要素が受容体タンパク質またはそのリガンド結合 フラグメントであり、生物学的結合対の第2要素が前記受容体タンパク質に特異 的に結合するリガンドであることを特徴とする請求項23に記載の装置。 30.生物学的結合対の第1要素が抗体タンパク質またはその抗原結合フラグ メントであり、生物学的結合対の第2要素が前記抗体に特異的に結合する抗原で あることを特徴とする請求項23に記載の装置。 31.生物学的結合対の第1要素が第1タンパク質またはそのフラグメントで あり、生物学的結合対の第2要素が第1タンパク質に特異的に結合する第2タン パク質またはそのフラグメントであることを特徴とする請求項23に記載の装置 。 32.導体または半導体を含む電極であって、且つ多孔性親水性高分子層で被 覆された表面を有し、生物学的結合対の第1要素と、電極に電位が加えられてい る条件下で電極による還元/酸化反応に関与することができる化学物質を含む電 気化学的メディエータとがそれぞれその上に固定化されていることを特徴とする 電極。 33.請求項32に記載の電極を調製するためのキットであって、導体または 半導を含む電極と、生物学的結合対の第1要素と、電気化学的メディエータと、 電極の表面上の多孔性親水性高分子層を調製するための試薬と、生物学的結合対 の第1要素および電気化学的メディエータを電極の表面上の多孔性親水性高分子 層内に固定化するための試薬とを含むキット。 34.a)導体または半導体を含む電極を提供するステップと、 b)電極の表面上の多孔性親水性高分子層を調製するステップと、 c)電極の表面上の多孔性親水性高分子層内に生物学的結合対の第1要 素および電気化学的メディエータを固定化するステップと を含む請求項32に記載の電極を製作する方法。 35.請求項23に記載の装置を使用して、電気化学的に標識された生物学的 結合対の第2要素と、電極上に固定化された生物学的結合対の第1要素との結合 を検出する方法であって、 a)請求項23に記載の各電極と電気的に接触している第1反応チャンバと、 請求項23に記載の各電極と電気的に接触している第2反応チャンバとを提供す るステップであって、ここで、第1反応チャンバと第2反応チャンバにおいて第 1電極がそれに固定化された生物学的結合対の第1要素を含み、各電極がポテン シオスタット電気的に接続されており、ここで、前記第1反応チャンバが請求項 23に記載の電気化学的メディエータと、固定化された生物学的結合対の第1要 素に特異的に結合する電気化学的に標識された生物学的結合対の第2要素とを含 み、且つ第2反応チャンバが請求項23に記載の電気化学的メディエータと、固 定化された生物学的結合対の第1要素に特異的に結合しない電気化学的に標識さ れた物質とを含むステップを含み、さらに b)請求項23に記載の装置の第1反応チャンバおよび第2反応チャンバのそ れぞれの中で電気化学的分析を実施するステップと、 c)第1反応チャンバ内での電気化学的分析で発生する電流を、第2反応チャ ンバでの電気化学的分析で発生する電流と比較するステップであって、第2反応 チャンバで発生するより第1反応チャンバで大きい電流が発生することによって 、電気化学的に標識された生物学的結合対の第2要素と固定化された生物学的結 合対の第1要素との結合が検出されることを特徴とするステップと、 を含む方法。 36.請求項23に記載の装置を使用して、電気化学的に標識された生物学的 結合対の第2要素と電極上に固定化された生物学的結合対の第1要素との結合の 阻害因子を同定する方法であって、 a)請求項23に記載の各電極と電気的に接触している第1反応チャンバと、 請求項23に記載の各電極と電気的に接触している第2反応チャンバとを提供す るステップであって、ここで、第1反応チャンバと第2反応チャンバにおいて第 1電極がそれに固定化された生物学的結合対の第1要素を含み、各電極がポテン シオスタット電気的に接続されており、ここで、前記各反応チャンバが固定化さ れた生物学的結合対の第1要素に特異的に結合する電気化学的に標識された生物 学的結合対の第2要素を含み、且つ、第2反応チャンバが、固定化された生物学 的結合対の第1要素に特異的に結合する生物学的結合対の第2要素の結合の阻害 因子をさらに含むステップを含み、さらに、 b)請求項23に記載の装置の第1反応チャンバおよび第2反応チャンバのそ れぞれの中で電気化学的分析を実施するステップと、 c)第1反応チャンバ内での電気化学的分析で発生する電流を、第2反応チャ ンバでの電気化学的分析で発生する電流と比較するステップであって、第2反応 チャンバで発生するより第1反応チャンバで大きい電流が発生することによって 、電気化学的に標識された生物学的結合対の第2要素と固定化された生物学的結 合対の第1要素との結合の阻害因子が同定されることを特徴とするステップと、 を含む方法。 37.請求項23に記載の装置を使用して、電気化学的に標識された生物学的 結合対の第2要素と電極上に固定化された生物学的結合対の第1要素との結合の 阻害因子について、複雑な化学混合物をスクリーニングする方法であって、 a)請求項23に記載の各電極と電気的に接触している第1反応チャンバと、 請求項23に記載の各電極と電気的に接触している第2反応チャンバとを提供す るステップであって、ここで、第1反応チャンバと第2反応チャンバにおいて第 1電極がそれに固定化された生物学的結合対の第1要素を含み、各電極がポテン シオスタット電気的に接続されており、ここで、前記各チャンバが電気化学的に 標識された、固定化された生物学的結合対の第1要素に特異的に結合する電気化 学的に標識された生物学的結合対の第2要素を含み、且つ、第2反応チャンバが 、固定化された生物学的結合対の第1要素に特異的に結合する生物学的結合対の 第2要素の結合の阻害因子の一部を含む複雑な混合物をさらに含むステップを含 み、さらに、 b)請求項23に記載の装置の第1反応チャンバおよび第2反応チャンバのそ れぞれの中で電気化学的分析を実施するステップと、 c)第1反応チャンバ内での電気化学的分析で発生する電流を、第2反応チャ ンバでの電気化学的分析で発生する電流と比較するステップであって、第2反応 チャンバで発生するより第1反応チャンバで大きい電流が発生することによって 、電気化学的に標識された生物学的結合対の第2要素と固定化された生物学的結 合対の第1要素との結合の阻害因子を有する複雑な混合物が同定されるステップ と を含む方法。 38.生物学的結合対の第2要素が電気化学的に標識された代理リガンドであ ることを特徴とする請求項35に記載の方法。 39.生物学的結合対の第2要素が電気化学的に標識された代理リガンドであ ることを特徴とする請求項36に記載の方法。 40.生物学的結合対の第2要素が電気化学的に標識された代理リガンドであ ることを特徴とする請求項37に記載の方法。 41.d)第1電極上に固定化された生物学的結合対の第1要素への生物学的 結合対の第2要素の結合についての阻害因子を化学的に分画して、分画された半 混合物を生成するステップと、 e)分画された半混合物のそれぞれに対して請求項37に記載のステップ(a )〜ステップ(c)を実施し、生物学的結合対の結合の阻害因子を有する半混合 物を同定するステップと をさらに含む請求項37に記載の方法。 42.生物学的結合対の要素間の結合を検出するための電気化学的分析を実施 するための装置であって、 導体または半導体を含み、且つ、多孔性親水性高分子層で被覆された表面を有 し、電極に電位が加わえられた条件下で、生物学的結合対の第1要素および電極 との還元/酸化反応に関与することができる化学物質を含む電気化学的メディエ ータがそれぞれその上に固定化されている第1電極と、 電解質水溶と接触している導電性金属を含む第2の照合電極と、 導電性金属を含む第3の補助電極と を含み、 各電極はポテンシオスタットに電気的に接続されており、さらに、 各電極が電気化学的に接触している電解質溶液が入っている反応チャンバをさ らに含み、 前記溶液が、電位が電極に加えられている条件下で電気化学的メディエータに よる還元/酸化反応に関与することができる電気化学的触媒に結合する生物学的 結合対の第2要素をさらに含み、 生物学的結合対の第2要素に結合している電気化学的触媒の基質の存在下で、 生物学的結合対の第2要素が生物学的結合対の第1要素に結合している条件で電 位が電極に加わるとき、当該装置内で電流が発生することを特徴とする装置。 43.電気化学的分析がクロノアンペロメトリーであることを特徴とする請求 項42に記載の装置。 44.それぞれ多数の前記電極および多数の反応チャンバをさらに含み、各反 応チャンバが電解質を含み、且つ、当該装置内の多数の電極の中で3つの前記電 極のそれぞれ1つと電気化学的に接触していることを特徴とする請求項42に記 載の装置。 45.生物学的結合対の第2要素に結合している電気化学的触媒が酵素である ことを特徴とする請求項42に記載の装置。 46.酵素がセイヨウワサビペルオキシダーゼであることを特徴とする請求項 45に記載の装置。 47.電気化学的メディエータがオスミウム化合物であることを特徴とする請 求項42に記載の装置。 48.生物学的結合対の第1要素が受容体タンパク質またはそのリガンド結合 フラグメントであり、生物学的結合対の第2要素が前記受容体タンパク質に特異 的に結合するリガンドであることを特徴とする請求項42に記載の装置。 49.生物学的結合対の第1要素が抗体タンパク質またはその抗原結合フラグ メントであり、生物学的結合対の第2要素が前記抗体に特異的に結合する抗原で あることを特徴とする請求項42に記載の装置。 50.生物学的結合対の第1要素が第1タンパク質またはそのフラグメントで あり、生物学的結合対の第2要素が前記第1タンパク質に特異的に結合する第2 タンパク質であることを特徴とする請求項42に記載の装置。 51.請求項42に記載の装置を使用して、電気化学的に標識された生物学的 結合対の第2要素と、電極上に固定化された生物学的結合対の第1要素との結合 を検出する方法であって、 a)請求項42に記載の各電極と電気的に接触している第1反応チャンバと、 請求項42に記載の各電極と電気的に接触している第2反応チャンバとを提供す るステップを含み、 ここで、第1反応チャンバと第2反応チャンバにおいて第1電極がそれに固定 化された生物学的結合対の第1要素を含み、各電極がポテンシオスタット電気的 に接続されており、ここで、前記第1反応チャンバが電気化学的触媒の基質と、 電気化学的触媒に結合し、固定化された生物学的結合対の第1要素に特異的に結 合する電気化学的に標識された生物学的結合対の第2要素とを含み、且つ、第2 反応チャンバが電気化学的触媒の基質と、電気化学的触媒に結合し、固定化され た生物学的結合対の第1要素に特異的に結合しない化学物質とを含み、さらに、 b)請求項42に記載の装置の第1反応チャンバおよび第2反応チャンバのそ れぞれの中で電気化学的分析を実施するステップと、 c)第1反応チャンバ内での電気化学的分析で発生する電流を第2反応チャン バでの電気化学的分析で発生する電流と比較するステップであって、第2反応チ ャンバで発生するより第1反応チャンバで大きい電流が発生することによって、 生物学的結合対の第2要素と固定化された生物学的結合対の第1要素との結合が 検出されることを特徴とするステップと、 を含む方法。 52.請求項42に記載の装置を使用して、電気化学的に標識された生物学的 結合対の第2要素と、電極上に固定化された生物学的結合対の第1要素との結合 の阻害因子を同定する方法であって、 a)請求項42に記載の各電極と電気的に接触している第1反応チャンバと、 請求項42に記載の各電極と電気的に接触している第2反応チャンバとを提供す るステップを含み、 ここで、第1反応チャンバと第2反応チャンバにおいて第1電極がそれに固定 化された生物学的結合対の第1要素を含み、各電極がポテンシオスタット電気的 に接続されており、ここで、前記各反応チャンバが電気化学的触媒の基質と、電 気化学的触媒に結合し、固定化された生物学的結合対の第1要素に特異的に結合 する電気化学的に標識された生物学的結合対の第2要素とを含み、且つ、第2反 応チャンバが、固定化された生物学的結合対の第1要素に特異的に結合する生物 学的結合対の第2要素の結合の阻害因子をさらに含み、そして、電気化学的触媒 の基質をさらに含み、さらに、 b)請求項42に記載の装置の第1反応チャンバおよび第2反応チャンバのそ れぞれの中で、電気化学的分析を実施するステップと、 c)第1反応チャンバ内での電気化学的分析で発生する電流を第2反応チャン バでの電気化学的分析で発生する電流と比較するステップであって、第2反応チ ャンバで発生するより第1反応チャンバで大きい電流が発生することによって、 生物学的結合対の第2要素と固定化された生物学的結合対の第1要素との結合の 阻害因子が同定されることを特徴とするステップと、 を含む方法。 53.請求項42に記載の装置を使用して、電気化学的に標識された生物学的 結合対の第2要素と、電極上に固定化された生物学的結合対の第1要素との結合 の阻害因子について、複雑な化学混合をスクリーニングする方法であって、 a)請求項42に記載の各電極と電気的に接触している第1反応チャンバと、 請求項42に記載の各電極と電気的に接触している第2反応チャンバとを提供す るステップであって、ここで、第1反応チャンバと第2反応チャンバにおいて第 1電極がそれに固定化された生物学的結合対の第1要素を含み、各電極がポテン シオスタット電気的に接続されており、ここで、前記各反応チャンバが電気化学 的触媒の基質と、電気化学的触媒に結合した、固定化された生物学的結合対の第 1要素に特異的に結合する電気化学的に標識された生物学的結合対の第2要素と を含み、且つ、第2反応チャンバが固定化された生物学的結合対の第1要素に特 異的に結合する、生物学的結合対の第2要素の結合の阻害因子を含む複雑な混合 物の一部をさらに含み、電気化学的触媒の基質をさらに含むステップを含み、さ らに、 b)請求項42に記載の装置の第1反応チャンバおよび第2反応チャンバのそ れぞれの中で電気化学的分析を実施するステップと、 c)第1反応チャンバ内での電気化学的分析で発生する電流を、第2反応チャ ンバでの電気化学的分析で発生する電流と比較するステップであって、第2反応 チャンバで発生するより第1反応チャンバで大きい電流が発生することによって 、生物学的結合対の第2要素と固定化された生物学的結合対の第1要素との結合 の阻害因子を有する複雑な混合物が同定されるステップと、 を含む方法。 54.生物学的結合対の第2要素が代理リガンドであることを特徴とする請求 項51に記載の方法。 55.生物学的結合対の第2要素が代理リガンドであることを特徴とする請求 項52に記載の方法。 56.生物学的結合対の第2要素が代理リガンドであることを特徴とする請求 項53に記載の方法。 57.d)第1電極上に固定化された生物学的結合対の第1要素への生物学的 結合対の第2要素の結合についての阻害因子を化学的に分画して、分画された半 混合物を生成するステップと、 e)分画された半混合物のそれぞれに対して請求項53に記載のステップ(a )〜ステップ(c)を実施し、生物学的結合対の結合の阻害因子を有する半混合 物を同定するステップと をさらに含む請求項53に記載の方法。 58.代理リガンドを第2反応チャンバに加えた後に、阻害因子を第2反応チ ャンバ加えることを特徴とする請求項55に記載の方法。 59.代理リガンドを第2反応チャンバに加える前に、阻害因子を第2反応チ ャンバ加えること 60.代理リガンドと一緒に阻害因子を第2反応チャンバに加えることを特徴 とする請求項55に記載の方法。
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