JP2002521479A - サイトカイン阻害活性を有する置換イミダゾール - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 関節炎のようなサイトカイン媒介疾患の治療に有効な、式（Ｉ）の化合物および医薬的に許容されるその塩を開示する。 【化１】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 発明の背景 本発明は、サイトカイン阻害活性を有する置換イミダゾール化合物に関する。
サイトカイン媒介疾患ならびにサイトカイン阻害、抑制および拮抗作用なる用語
は、１種類またはそれ以上のサイトカインの過剰のまたは無制御な産生または活
性が認められる疾患または症状に関連して使用される。有効なサイトカインの例
は一般に、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、インターロイキン−６（ＩＬ−
６）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）である
。

【０００２】 インターロイキン−１（ＩＬ−１）および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）は、免疫制
御および他の生理学的状態に関係する種々の細胞によって産生される。

【０００３】 ＩＬ−１が関係する多くの疾患状態が存在する。その例は、慢性関節リウマチ
、骨関節炎、内毒素血症、毒素ショック症候群、内毒素によって誘発される炎症
反応または炎症性腸疾患のような急性および慢性炎症性疾患、結核、アテローム
性動脈硬化症、筋肉変性(muscle degeneration)、悪液質、乾せん性関節炎、ラ
イター症候群、慢性関節リウマチ、痛風、外傷性関節炎(traumatic arthritis)
、風疹性関節炎(rubella arthritis)、および急性滑膜炎(acute synovitis)であ
る。近年、糖尿病に対するＩＬ−１活性も報告されている。

【０００４】 インターロイキン−１は、免疫制御および他の生理学的状態に重要であると考
えられる種々の生物学的活性を媒介することが示されている（例えば、Ｄｉｎａ
ｒｅｌｌｏら、Ｒｅｖ． Ｉｎｆｅｃｔ． Ｄｉｓｅａｓｅ， ６， ５１（１
９８４）参照）。ＩＬ−１の既知の生物学的活性は、Ｔヘルパー細胞の活性化、
熱の誘発、プロスタグランジンまたはゴラゲナーゼ産生の刺激、好中球化学走性
、急性期タンパク質の誘発、および血漿鉄量の抑制を包含する。

【０００５】 過剰のまたは無制御な腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の産生または活性は、慢性関節
リウマチ、リウマトイド脊椎炎、骨関節炎、痛風性関節炎および他の関節炎症状
、敗血症、敗血症性ショック、内毒素性ショック、グラム陰性敗血症(gram nega
tive sepsis)、毒素ショック症候群、成人型呼吸窮迫症候群、脳性マラリア(cer
ebral malaria)、慢性肺炎症疾患(chronic pulmonary inflammatory disease)、
珪肺症、肺筋肉瘤腫(pulmonary sarcosis)、骨吸収疾患、再灌流傷害、移植片対
宿主拒絶反応、同種移植片拒絶反応、感染による熱および筋肉痛、感染または悪
性腫瘍(malignancy)による悪液質、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）による悪
液質、ＡＩＤＳ関連症候群（ＡＲＣ）、ケロイド形成、瘢痕組織形成、クローン
病、潰瘍性大腸炎およびピレシス（pyresis）を媒介するかまたは悪化させるこ
とに関係している。

【０００６】 ＴＮＦのようなモノカインが、単球および／またはマクロファージにおけるＨ
ＩＶ複製を活性化することが示されており（Ｐｏｌｉら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ
． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．， ８７：７８２−７８４（１９９０）参照）、従っ
て、モノカイン産生または活性の阻害は、ＨＩＶ進行を制限するのを補助する。
ＴＮＦは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、インフルエンザウイルスおよびヘ
ルペスウイルスのような他のウイルス感染において種々の役割を果たしている。

【０００７】 インターロイキン−６（ＩＬ−６）は、免疫系および血液生成に影響を与える
サイトカインである。それはＩＬ−１のような物質に反応していくつかの哺乳動
物細胞系によって産生され、血管濾胞リンパ性過形成（angiofollicular lympho
id hyperplasia）のような疾患状態に関係している。

【０００８】 インターロイキン−８（ＩＬ−８）は１９８７年に初めて確認され、特性決定
された走化性因子である。好中球誘因物質／活性タンパク質−１（ＮＡＰ−１）
、単球由来好中球走化性因子（ＭＤＮＣＦ）、好中球活性因子（ＮＡＦ）、およ
びＴ細胞リンパ球走化性因子のような種々の名称がＩＬ−８に使用されている。
ＩＬ−８は、ＩＬ−１と同様に、単核細胞、線維芽細胞、内皮細胞およびケタイ
ノサイト（ketainocytes）を含むいくつかの細胞系によって産生される。その産
生は、ＩＬ−１、ＴＮＦおよびリポポリサッカリド（ＬＰＳ）によって誘発され
る。ＩＬ−８は、生体外において多くの細胞機能を刺激する。それは、好中球、
Ｔリンパ球および好塩基球に関する化学誘因物質である。それは、好塩基球から
のヒスタミンの放出を誘発する。それは、好中球からのリソソーム酵素放出およ
び呼吸バーストを生じ、および、新たなタンパク質合成を必要とせず、好中球に
おけるＭａｃ−１（ＣＤ１１ｂ／ＣＤ １８）の表面発現を増加させることが報
告されている。

【０００９】 サイトカイン媒介疾患を治療し、従って、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８およ
びＴＮＦのようなサイトカインの産生または活性を阻害し、抑制し、または拮抗
するのに有効な化合物が必要とされている。

【００１０】 発明の開示 本発明は、式Ｉ：

【００１１】

【化３】 ［式中： Ｒ_１は、Ｃ_１〜６アルキルであり； Ｒ_２は、Ｈ、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜８シクロアルキル、ＯＣ_１〜６アルキ
ルまたはＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキルであり； Ｒ_３は、Ｈ、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜８シクロアルキル、ＯＣ_１〜６アルキ
ル、Ｃ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキルまたはアラルキルであり； Ｘは、ＣまたはＮであり； Ｙは、Ｈ、ハロゲン、Ｃ_１〜６アルキル、ＣＮまたはＣＦ_３であり； Ｚは、ＮＨＲ_３またはＦである］ で示される化合物、または医薬的に許容されるそれの付加塩および／または水和
物、あるいは適用可能な場合には、それの幾何または光学異性体またはラセミ混
合物に関する。

【００１２】 医薬的に許容される担体と組み合わせた前記に定義される式Ｉの化合物を含ん
で成る医薬組成物も本発明に含まれる。

【００１３】 サイトカイン媒介疾患の治療に有効な量の式Ｉの化合物を、治療を必要とする
哺乳動物に投与することを含んで成る、哺乳動物のサイトカイン媒介疾患の治療
法も本発明に含まれる。

【００１４】 発明の詳細な説明 他に指定されない限り下記のように定義される用語を使用して、本発明を詳細
に説明する。

【００１５】 「アルキル」という用語は、他に指定されない限り、１〜１５個の炭素原子を
有する一価アルカン（炭化水素）誘導基を意味する。それは直鎖、分岐鎖または
環状であることができる。好ましい直鎖または分岐鎖アルキル基は、メチル、エ
チル、プロピル、イソプロピル、ブチル、およびｔ−ブチルを包含する。好まし
いシクロアルキル基は、シクロペンチルおよびシクロヘキシルを包含する。

【００１６】 アルキルは、シクロアルキレン部分を含むかまたはそれによって中断されてい
る直鎖または分岐鎖アルキル基も包含する。その例は、下記のものである：

【００１７】

【化４】 ［式中： ｘおよびｙは、０〜１０であり； ｗおよびｚは、０〜９である］。

【００１８】 アルキル基のアルキレンおよび一価アルキル部分は、シクロアルキレン部分の
結合可能ないずれの部位においても結合させることができる。

【００１９】 置換アルキルが存在する場合に、これは、各可変構造部分に関して規定される
１〜３個の基で置換されている、前記に定義される直鎖、分岐鎖または環状アル
キル基を意味する。

【００２０】 「アルケニル」という用語は、２〜１５個の炭素原子および少なくとも１個の
炭素−炭素二重結合を有する、直鎖、分岐鎖または環状炭化水素基を意味する。
１個の炭素−炭素二重結合が存在するのが好ましく、４個までの非芳香族（非共
鳴）炭素−炭素二重結合が存在し得る。好ましいアルケニル基は、エテニル、プ
ロペニル、ブテニルおよびシクロヘキセニルを包含する。アルキルに関して先に
記載したように、アルケニル基の直鎖、分岐鎖または環状部分は、二重結合を有
することができ、置換アルケニル基の場合は置換されていてもよい。

【００２１】 アリールは、芳香環、例えば、フェニル、置換フェニルなどの基、ならびに縮
合している環、例えばナフチルなどを意味する。従って、アリールは、少なくと
も６個の原子を有する少なくとも１個の環を有し、隣接する炭素原子の間に交互
（共鳴）二重結合を有する１０個までの炭素原子を有する２個までのそのような
環が存在する。好ましいアリール基は、フェニルおよびナフチルである。アリー
ル基も同様に、下記のように置換されていてもよい。好ましい置換アリールは、
１個またはそれ以上の基で置換されていてもよいフェニルおよびナフチルを包含
する。

【００２２】 置換アルキルおよびアリール、ならびにアラルキル、アラルコキシなどの基の
置換部分は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アシル、アシルアミノ、アラルコキシ
、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アルキルスルホニルアミノ、アリ
ールスルホニルアミノ、アルキルアミノカルボニル、アルキル、アルコキシ、ア
リール、アリールオキシ、アラルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキル
アミノおよびスルホニルアミノから成る群から選択される１〜３個の基で置換さ
れている。

【００２３】 アラルキルは、−Ｃ_１〜６アルキルアリール基を意味する。

【００２４】 ハロは、独立に選択されるＣｌ、Ｆ、ＢｒおよびＩを意味する。

【００２５】 本明細書において使用される「組成物」という用語は、所定量の所定成分を含
んでなる生成物、および所定量の所定成分の組み合わせから直接的または間接的
に得られる生成物を意味する。

【００２６】 「ＴＮＦ媒介疾患または疾患状態」という用語は、ＴＮＦ自体の産生または増
加した活性レベルによるか、あるいは限定されないがＩＬ−１またはＩＬ−６の
ような他のモノカインを放出させることによって、ＴＮＦが作用する疾患状態を
意味する。従って、例えばＩＬ−１が主要素であり、それの産生または作用がＴ
ＮＦに反応して激化するかまたは分泌される疾患状態は、ＴＮＦによって媒介さ
れる疾患状態であると考えられる。

【００２７】 本明細書に使用される「サイトカイン」という用語は、細胞の機能に影響を与
え、免疫、炎症または血液生成反応において細胞間の相互作用を調節する分子で
ある、分泌ポリペプチドを意味する。サイトカインは、限定されないが、それら
を産生する細胞に関係なく、モノカインおよびリンフォカインを包含する。サイ
トカインの例は、限定されないが、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、インタ
ーロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロキン−８（ＩＬ−８）、腫瘍壊死因子
−α（ＴＮＦ−ａ）および腫瘍壊死因子−β（ＴＮＦ−ｂ）を包含する。

【００２８】 「サイトカイン阻害またはサイトカイン抑制量」という用語は、過剰のまたは
無制御なサイトカインの産生または活性によって悪化する疾患状態の予防または
治療のために患者に投与した際に、サイトカインの生体内活性またはレベルを通
常レベルまたは通常以下のレベルに減少させる式Ｉの化合物の有効量を意味する
。

【００２９】 本発明の化合物は、１個またはそれ以上の不斉炭素原子を有し、ラセミ形態、
任意に活性形態で存在することができる。これらは全て本発明に含まれる。

【００３０】 重要な本発明の化合物の１つの種類は、Ｒ_２がＣ_３〜８シクロアルキル（シク
ロペンチルが特に好ましいシクロアルキル基である）である式Ｉの化合物である
。

【００３１】 本発明の化合物の代表的な例は、下記の種類： １−（Ｓ）−フェニル−Ｎ−｛４−［３−シクロペンチル−２−メチル−５−（
３−トリフルオロメチル−フェニル）−３Ｈ−イミダゾル−４−イル］−ピリジ
ン−２−イル｝−エチルアミン； および医薬的に許容されるそれらの塩を包含する。

【００３２】 本発明の化合物は、下記反応式に示される手順によって一般に製造される。

【００３３】

【化５】

【００３４】 特に、本発明の好ましい化合物は下記反応式１に示されるように製造される。

【００３５】

【化６】

【００３６】 本発明の化合物は、医薬的に許容される種々の塩形態において有効である。「
医薬的に許容される塩」という用語は、医薬化学者に明らかな塩形態、即ち、実
質的に非毒性であり、所望の薬物動態特性、嗜好性、吸収、分布、代謝または排
泄を与える塩形態をを意味する。選択において重要な、性質的により実際的な他
の要素は、原料コスト、結晶化の容易性、収率、安定性、吸湿性、および得られ
た塊状薬剤の流動性である。医薬組成物は、医薬的に許容される担体と組み合わ
せた有効成分から製造するのが好ましい。

【００３７】 式Ｉの化合物の医薬的に許容される塩は、例えば非毒性無機または有機酸から
形成される式Ｉの化合物の一般的な非毒性塩または第四級アンモニウム塩を包含
する。例えば、非毒性塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、燐酸、
硝酸等のような無機酸から誘導される非毒性塩；および、酢酸、プロピオン酸、
琥珀酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、ア
スコルビン酸、パモ酸（pamoic acid）、スルファニル酸、２−アセトキシ安息
香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸
、蓚酸、イセチオン酸、トリフルオロ酢酸等のような有機酸から製造される塩を
包含する。

【００３８】 本発明の医薬的に許容される塩は、従来の化学法によって合成することができ
る。一般に、好適な溶媒または溶媒の組合せの中で、遊離塩基または酸を、理論
量のまたは過剰の所望の塩形成無機または有機酸または塩基と反応させることに
よって、塩を製造する。

【００３９】 本発明の化合物は、不斉中心を有し、ラセミ酸塩、ラセミ混合物、および個々
のジアステレオ異性体として生成しうる。光学異性体を含む全てのそのような異
性体が、本発明に含まれる。

【００４０】 本発明は、医薬的に許容される担体と組み合わせた本発明化合物を含んで成る
医薬組成物も包含する。

【００４１】 本発明は、サイトカイン媒介疾患の治療に有効な量の本発明化合物を、治療を
必要とする哺乳動物患者に投与することを含んで成る、哺乳動物におけるサイト
カイ媒介疾患の治療法も包含する。

【００４２】 特に重要なのは、抗炎症有効量の本発明化合物を患者に投与することを含んで
成る、治療を必要とする哺乳動物患者における炎症の治療法である。

【００４３】 特に重要な他の治療法は、疾患が骨粗鬆症である、本明細書に記載のサイトカ
イン媒介疾患の治療法である。

【００４４】 特に重要な他の治療法は、疾患が慢性関節リウマチまたは骨関節炎である、本
明細書に記載のサイトカイン媒介疾患の治療法である。

【００４５】 特に重要な他の治療法は、疾患が非骨粗鬆症性骨吸収である、本明細書に記載
のサイトカイン媒介疾患の治療法である。

【００４６】 特に重要なさらに他の治療法は、疾患がクローン病である、本明細書に記載の
サイトカイン媒介疾患の治療法である。

【００４７】 本発明は、１種類またはそれ以上のサイトカインを通常レベルかまたはある場
合には通常以下のレベルに阻害して、疾患状態を改善し、予防し、または治療す
るのに有効な量の式Ｉの化合物を哺乳動物に投与することを含んで成る、哺乳動
物における１種類またはそれ以上のサイトカインを阻害する方法にも関する。

【００４８】 式Ｉの化合物は、過剰のまたは無制御なサイトカイン、特にＩＬ−１、ＩＬ−
６、ＩＬ−８またはＴＮＦによって悪化するかまたは生じる哺乳動物における疾
患状態の予防または治療に使用することができる。

【００４９】 式Ｉの化合物は、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８およびＴＮＦのようなサイト
カインを阻害する故に、該化合物は、サイトカインの存在または活性が関与する
疾患、例えば、慢性関節リウマチ、リウマトイド脊椎炎、骨関節炎、痛風性関節
炎およびその他の関節炎症状の治療に有効である。

【００５０】 式Ｉの化合物は、過剰のまたは無制御なＴＮＦ産生または活性によって媒介さ
れの他の疾患状態の治療にも有効である。そのような疾患は、限定されないが、
敗血症、敗血症性ショック、内毒素性ショック、グラム陰性敗血症、毒素ショッ
ク症候群、成人型呼吸窮迫症候群、脳性マラリア、慢性肺炎症疾患、珪肺症、肺
筋肉瘤腫、骨吸収疾患、例えば骨粗鬆症、再灌流傷害、移植片対宿主拒絶反応、
同種移植片拒絶反応、熱、感染による筋肉痛、感染または悪性腫瘍による悪液質
、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）による悪液質、ＡＩＤＳ、ＡＲＣ（ＡＩＤ
Ｓ関連症候群）、ケロイド形成、瘢痕組織形成、クローン病、潰瘍性大腸炎、ピ
レシス（pyresis）、ＡＩＤＳおよび他のウイルス感染、例えば、サイトメガロ
ウイスル（ＣＭＶ）、インフルエンザウイルス、およびＨｅｒｐｅｓ Ｚｏｓｔ
ｅｒまたはＳｉｍｐｌｅｘ ＩおよびＩＩのようなウイルスのヘルペス種を包含
する。

【００５１】 式Ｉの化合物は、慢性関節リウマチ、リウマトイド脊椎炎、骨関節炎、痛風性
関節炎および他の関節炎症状；炎症を起こした関節、湿疹、乾せん、または日焼
けのような他の炎症性皮膚症状；結膜炎のような炎症性眼症状；ピレシス（pyre
sis）、痛み、および炎症に関係する他の症状のような炎症の治療においても局
所的に有効である。

【００５２】 式Ｉの化合物は、過剰のＩＬ−８活性を特徴とする疾患にも有効である。これ
らの疾患状態は、乾せん、炎症性腸疾患、喘息、心臓および腎臓再灌流傷害、成
人型呼吸窮迫症候群、血栓症、および糸球体腎炎を包含する。

【００５３】 従って、本発明は、式Ｉの化合物を疾患または症状を治療するのに有効な量で
哺乳動物に投与することを含んで成る、治療を必要とする哺乳動物における、乾
せん、炎症性腸疾患、喘息、心臓および腎臓再灌流傷害、成人型呼吸窮迫症候群
、血栓症、ならびに糸球体腎炎の治療法を含む。

【００５４】 １種類またはそれ以上のサイトカインが関係する疾患の治療のために患者に投
与する場合に、使用される用量は、疾患の種類、患者の年齢および一般的健康状
態、投与される特定化合物、薬剤による毒性または副作用の存在または程度、お
よび他の要因に依存して変化させることができる。好適な用量範囲の一般的な例
は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇである。しかし、投与される用
量は一般に医師の判断に任される。

【００５５】 治療の方法は、式Ｉの化合物を非経口的に送達することによって行うのが好ま
しい。本明細書において使用される「非経口」という用語は、静脈投与、筋肉投
与、または腹膜投与を包含する。非経口投与の皮下投与形態および筋肉投与形態
が一般に好ましい。本発明は、式Ｉの化合物を、皮下、鼻腔、直腸、経皮、また
は膣投与することによって実施することもできる。

【００５６】 式Ｉの化合物を吸入によって投与することもできる。「吸入」は、鼻腔または
経口吸入投与を意味する。そのような投与に適した投与形態、例えば、エアゾー
ル製剤または計用量吸入器は、通常法によって製造することができる。

【００５７】 本発明は、式Ｉの化合物および医薬的に許容される担体を含んで成る医薬組成
物にも関する。式Ｉの化合物を、第二治療活性化合物と組み合わせた医薬組成物
中に含有させることもできる。

【００５８】 医薬担体は、例えば、固体、液体、または気体であってもよい。固体担体の例
は、ラクトース、白土、スクロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカ
シア、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸等である。液体担体の例は、シ
ロップ、ピーナツ油、オリーブ油、水等である。気体担体の例は、二酸化炭素お
よび窒素である。

【００５９】 担体または希釈剤は、単独かまたはワックスと一緒に使用されるグリセリルモ
ノステアレートまたはグリセリルジステアレートのような当分野でよく知られて
いる遅延物質（time delay material）も含有することができる。

【００６０】 種々の医薬投与形態を使用することができる。固体投与形態が経口投与に使用
される場合に、製剤は、錠剤、硬質ゼラチンカプセル剤、トローチ剤、またはロ
ーゼンジ剤であることができる。固体担体の量は広範囲に変化しうるが、一般に
約０．０２５ｍｇ〜約１ｇである。液体投与形態が経口投与に所望される場合に
、製剤は一般に、シロップ剤、乳剤、軟質ゼラチンカプセル剤、懸濁剤または液
剤の形態である。非経口投与形態が使用される場合に、薬剤は固体または液体形
態であり、直接的な投与のために製剤化されるかかまたは再構成に好適なもので
あってもよい。

【００６１】 局所投与形態であってもよい。局所投与形態の例は、固体、液体、または半固
体である。固体は、粉剤、パップ剤等を包含する。液体は、液剤、懸濁剤および
乳剤を包含する。半固体は、クリーム剤、軟膏剤、ゲル剤等を包含する。

【００６２】 局所的に使用される式Ｉの化合物の量は、当然であるが、選択された化合物、
症状の種類および程度によって変化し、医師の判断によって変化しうる。式Ｉの
化合物の一般的な局所投与量は約０．０１ｍｇ〜約２．０ｇであり、１日に１回
〜４回、好ましくは１回〜２回で投与される。

【００６３】 一般的な局所投与において、有効成分は約０．００１％〜約１０％ｗ／ｗを占
める。

【００６４】 本発明の滴剤は、滅菌または非滅菌の、水性または油性の溶液または懸濁液を
含んで成り、殺菌剤および／または殺カビ剤および／または他の好適な防腐剤な
らびに界面活性剤を任意に含有する好適な水溶液に、有効成分を溶解させること
によって製造することができる。次に、得られた溶液を、濾過によって透明化し
、好適な容器に入れ、次に、密閉し、オートクレーブ滅菌するかまたは９８〜１
００℃において１時間にわたって維持することによって滅菌することができる。
あるいは、溶液を濾過によって滅菌し、美的な容器に入れることもできる。滴剤
に含有するのに好適な殺菌剤および殺カビ剤の例は、硝酸または酢酸フェニル水
銀（０．００２％）、塩化ベンザルコニウム（０．０１％）および酢酸クロロヘ
キシジン（０．０１％）である。油性液剤の製造に好適な溶剤は、グリセロール
、希釈アルコールおよびプロピレングリコールである。

【００６５】 本発明のローション剤は、皮膚または眼への投与に好適なローション剤である
。眼用ローション剤は、殺菌剤を任意に含有する滅菌水性液剤を含有し、滴剤と
同様の製造法によって製造することができる。皮膚に適用されるローション剤お
よびリニメント剤は、乾燥を早め、皮膚を冷やす薬剤、例えば、アルコールまた
はアセトンおよび／またはモイスチャライザー、例えばグリセロールまたはヒマ
シ油および落花生油のような油も含有することができる。

【００６６】 本発明のクリーム剤、軟膏剤またはペースト剤は、外部適用される有効成分の
半固体製剤である。それらは、微細分割または粉末形態の有効成分を、単独で、
あるいは水性または非水性液体中に溶液させるかまたは懸濁させて、油状または
非油状基剤と混合することによって製造することができる。基剤は、炭化水素、
例えば、硬質、軟質または液体パラフィン、グリセロール、蜜蝋、金属石鹸；粘
漿剤；天然油、例えば、アーモンド油、コーン油、落花生油、ヒマシ油またはオ
リーブ油；羊毛脂またはその誘導体、あるいはステアリン酸またはオレイン酸の
ような脂肪酸を、プロピレングルコールのようなアルコールまたはマクロゲルと
一緒に含有する。製剤は、アニオン、カチオンまたはノニオン界面活性剤のよう
な好適な界面活性剤、例えばソルビタンエステルまたはそのポリオキシエチレン
誘導体を含有することができる。懸濁化剤、例えば、天然ゴム、セルロース誘導
体またはシリカのような無機物質、およびラノリンのような他の成分も含有させ
ることができる。

【００６７】 実施例１

【００６８】

【化７】

【００６９】 ステップＡ： Ｎ−メチル−Ｎ−メトキシ−（３−トリフルオロメチル）フェ
ニルカルボキサミド（２）の製造および２−（２−フルオロピリジン−４−イル
）−１−（３−トリフルオロメチルフェニル）エタノン（３）の製造 ０℃のジクロロメタン（１Ｌ）中のＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミンヒド
ロクロリド（５８．２ｇ、０．６０モル）の懸濁液に、アルゴン雰囲気中で、３
−トリフルオロメチルベンゾイルクロリド（１０４．０ｇ、０．５０モル）を加
え、次に、（＜＋５℃）のトリエチルアミン（１５２．３ｍＬ、１．０９モル）
をゆっくり加えた。反応を＋５℃で３０分間置き、次に室温に加温した。ＴＬＣ
（１：１、酢酸エチル／ヘキサン）が反応の終了を示した。次にその反応を５％
クエン酸水溶液（５００ｍＬ）および５％炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した
。水性抽出物を塩化メチレン（１００ｍＬ）で逆抽出し、合わせた塩化メチレン
抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮して、油状物を得た。その油状
物をトルエン（２ｘ１００ｍＬ）に再溶解し、真空蒸発して、Ｗｅｉｎｒｅｂア
ミド（１１４．７ｇ、９８％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ _３ ）ｄ ７．９８（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）、７．８９（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，
Ａｒ）、７．７２（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，Ａｒ）、７．５５（ｔ，Ｊ＝７
．８Ｈｚ，１Ｈ，Ａｒ）、３．５５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３Ｏ）、３．３９（ｓ，３
Ｈ，ＣＨ_３Ｎ）。

【００７０】 −７８℃の無水ＴＨＦ（２００ｍＬ）中のジイソプロピルアミンの攪拌溶液（
１７．６９ｍｌ、０．１３５モル）に、アルゴン雰囲気中で、ｎ−ブチルリチウ
ム（５４．０ｍＬ、ヘキサン中２．５Ｍ、０．１３５モル）を加え、５分後、無
水ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の２−フルオロ−４−メチルピリジン（１０ｇ、０．０
９０モル）の溶液を加えた。−７８℃において１５分間攪拌した後、無水ＴＨＦ
（１０ｍＬ）中のＮ−メトキシ−Ｎ−メチル−３−トリフルオロメチルベンズア
ミド（２）（２３．０８ｇ、０．０９９モル）の溶液をその反応混合物に加え、
次に、５分間攪拌し、０℃に温めた。その反応を水（４００ｍＬ）で鎮静化し、
酢酸エチル（３ｘ２００ｍＬ）で抽出した。酢酸エチル抽出物を合わせ、無水硫
酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮して、油状物を得、シリカゲル（１ｋｇ）
でクロマトグラフィーにかけ、ヘキサン中２０％酢酸エチルで溶離して、標記化
合物２１．６ｇ（８５％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）
ｄ ８．２５（ｓ，１Ｈ，Ｐｙｒ）、８．２０（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｐ
ｙｒ）、８．１８（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｙｒ）、７．８８（ｄ，Ｊ＝
７．８Ｈｚ，Ａｒ）、７．６７（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ，Ａｒ）、７．０９
（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ，Ａｒ）、６．８６（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）、４．３７
（ｓ，２Ｈ，ＰｙｒＣＨ_２Ｃ）。

【００７１】

【化８】

【００７２】 ステップＢ： １−（２−フルオロピリジン−４−イル）−２−（３−トリフ
ルオロメチルフェニル）エタン−１，２−ジオン １−オキシム（４）の製造 アルゴン雰囲気中−１０℃のエタノール（２００ｍＬ）中の２−（２−フルオ
ロピリジン−４−イル）−１−（３−トリフルオロメチルフェニル）エタノン（
３）（１０．８０ｇ、０．０３８モル）の混合物に、−５℃未満の温度に維持し
ながら、亜硝酸ｔ−ブチル（５．０ｍＬ、０．０４２モル）および塩酸（１２．
２ｍＬ、エタノール中２．５Ｍ、０．０３１モル）を滴下した。滴下終了後、そ
の反応を２時間で室温に温めた。次に、その反応混合物を真空濃縮し、水（１０
０ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム（２００ｍＬ）で塩基性化し、酢酸
エチル（３ｘ４００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を水（３００ｍＬ）およ
びブライン（３００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃
縮して、油状物１１．４ｇ（９５％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ
ＤＣｌ_３）ｄ ８．３１（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）、８．２９（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，
１Ｈ，Ｐｙｒ）、８．２４（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，Ａｒ）、７．９２（ｄ
，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ，Ａｒ）、７．７１（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，Ａｒ
）、７．４０（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｙｒ）、７．２３（ｓ，１Ｈ，Ｐ
ｙｒ）。

【００７３】

【化９】

【００７４】 ステップＣ： ２−アミノ−２−（２−フルオロピリジン−４−イル）−１−
（３−トリフルオロメチルフェニル）エタノール（５）の製造 周囲温度のエタノール（４００ｍＬ）中の１−（２−フルオロピリジン−４−
イル）−２−（３−トリフルオロメチルフェニル）エタン−１，２−ジオン １
−オキシム（４）（８．０ｇ、２７ミリモル）の溶液に、炭素上１０％パラジウ
ム（３．０ｇ）を、加えた。反応器を水素で真空パージし、１０時間にわたって
勢いよく攪拌した。反応終了後、その溶液をセライトのパッドで濾過し、濃縮し
て、黄色固形物を得た。残渣を、塩化メチレンおよびヘキサンからの再結晶によ
って精製することができた。あるいは非極性不純物を、塩化メチレン中５％メタ
ノール〜塩化メチレン中５％メタノール、０．５％水酸化アンモニウムを使用し
てシリカゲルで濾過することによって除去することができた。無色固形物（９１
％）：融点１２８〜１２９℃：^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤ_３ＯＤ）ｄ
８．０１（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ，Ａｒ）、７．５３（ｍ，１Ｈ，Ａｒ）、
７．４９（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）、７．４３（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）、７．０６（ｄ，Ｊ
＝５．０Ｈｚ，１Ｈ，Ａｒ）、６．８６（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）、４．９６（ｄ，Ｊ
＝５．０Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ）、４．１２（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ）。

【００７５】

【化１０】

【００７６】 ステップＤ： ２−（２−フルオロピリジン−４−イル）−２−シクロペンチ
ルアミノ−１−（３−トリフルオロメチルフェニル）エタノール（６）の製造 １，２−ジクロロエタン（２０ｍＬ）中の、２−アミノ−２−（２−フルオロ
ピリジン−４−イル）−１−（３−トリフルオロメチルフェニル）エタノール（
５）（１．０ｇ、３．３ミリモル）、シクロペンタノン（０．４２ｇ、５．０ミ
リモル）およびＮａ（ＯＡｃ）_３ＢＨ（１．４ｇ、６．７ミリモル）を、アルゴ
ン雰囲気中で室温において１５時間にわたって攪拌した。得られた混合物を飽和
ＮａＨＣＯ_３（５０ｍＬ）で処理し、酢酸エチル（３ｘ７５ｍＬ）で抽出し、乾
燥し（硫酸ナトリウム）、濃縮した。得られた残渣を、塩化メチレン中５０％酢
酸エチルを使用してシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、標記化合
物（１．１ｇ、９２％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）ｄ
８．０５（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｙｒ）、７．５１（ｄ，Ｊ＝７．９
Ｈｚ，１Ｈ，Ａｒ）、７．３６（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，Ａｒ）、７．３２
（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）、７．２２（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ，Ａｒ）、６．８１
（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｙｒ）、６．６４（ｓ，１Ｈ，Ｐｙｒ）、５．
００（ｄ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，１Ｈ，ＰｈＣＨＯＨ）、４．０１（ｄ，Ｊ＝４．９
Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨＣＨＮＨ）、２．９９（ｑｕｉｎ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ
Ｈ_２ＣＨＣＨ_２）、１．８５−１．２５（ｍ，８Ｈ，ＣＨ_２）。

【００７７】

【化１１】

【００７８】 ステップＥ： ２−（２−フルオロピリジン−４−イル）−２−（Ｎ−アセチ
ルシクロペンチルアミノ）−１−（３−トリフルオロメチルフェニル）エタノー
ル（８）の製造 塩化メチレン（１０ｍＬ）中の、２−（２−フルオロピリジン−４−イル）−
２−シクロペンチルアミノ−１−（３−トリフルオロメチルフェニル）エタノー
ル（６）（１．０ｇ、２．７ミリモル）およびジイソプロピルアミン（０．９５
ｍＬ、５．４ミリモル）の攪拌した溶液を、アルゴン雰囲気中に置き、−１０℃
に冷却した。塩化メチレン（１．０ｍＬ）中の塩化アセチル（０．２１ｍＬ、３
．０ミリモル）をその反応混合物にゆっくり加えた。２時間後、酢酸エチル（２
００ｍＬ）、次に、クエン酸水溶液（１０％溶液５０ｍＬ）を加えた。次に、有
機相を炭酸水素ナトリウム水溶液（飽和溶液５０ｍＬ）および水（５０ｍＬ）で
洗浄し、乾燥し（硫酸ナトリウム）、濾過し、濃縮した。粗残渣をシリカゲルの
パッドに通して（ヘキサン中５０％酢酸エチル）、少量の不純物を除去し、次の
段階に使用した。無色油状物（９５％）：^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣ
ｌ_３）ｄ ８．５４（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｙｒ）、７．４９（ｍ，４
Ｈ，Ａｒ）、６．８１（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｙｒ）、６．７２（ｓ，
１Ｈ，Ｐｙｒ）、５．６３（ｓ，１Ｈ，ＯＨ）、５．４６（ｓ，１Ｈ，ＰｈＣＨ
ＯＨ）、４．３４（ｓ，１Ｈ，ＣＨＣＨＮ）、４．１６（ｍ，１Ｈ，ＣＨ_２ＣＨ
ＣＨ_２）、２．３２（ｓ，３Ｈ，ＣＯＣＨ_３）、１．９０（ｍ，１Ｈ，ＣＨ_２）
、１．６０（ｍ，７Ｈ，ＣＨ_２）。

【００７９】

【化１２】

【００８０】 ステップＦ： １−シクロペンチル−５−（２−フルオロピリジン−４−イル
）−２−メチル−４−（３−トリフルオロメチルフェニル）−１Ｈ−イミダゾー
ル（９）の製造 −７８℃の塩化メチレン（１０ｍＬ）中のジメチルスルホキシド（０．５２ｍ
Ｌ、７．３ミリモル）の溶液に、塩化オキサリル（０．５３ｍＬ、６．１ミリモ
ル）を加えた。２０分後、塩化メチレン（１．０ｍＬ）中の２−（２−フルオロ
ピリジン−４−イル）−２−（Ｎ−アセチルシクロペンチルアミノ）−１−（３
−トリフルオロメチルフェニル）エタノール（８）（１．０ｇ、２．４ミリモル
）を加え、その反応溶液を−７８℃において２時間攪拌した。トリエチルアミン
（１．７ｍＬ、１２．２ミリモル）を加え、冷却浴を除去した。その溶液を酢酸
エチル（１５０ｍＬ）で希釈し、塩化アンモニウム水溶液（７５ｍＬ）およびブ
ライン（７５ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（硫酸ナトリウム）、濃縮して、ケトンを
得た。次に、最少量のエーテル−塩化メチレンを使用して、無水アンモニウムト
リフルオロアセテート（４ｇ）を含有するフラスコに、このケトンを入れた。そ
の混合物を真空において溶媒を除去し、次に、予熱した油浴（１５０℃）に入れ
た。全ての固形物が溶解し、充分な攪拌（約１０分間）を行った後に、イミダゾ
ールの形成が終了したことが分かった。加熱浴を除去し、固形物を酢酸エチルと
水（１５０／５０ｍＬ）の間に分配した。有機相を乾燥し（硫酸ナトリウム）、
濾過し、濃縮した。生成物を、塩化メチレン中７５％酢酸エチルを使用してシリ
カゲルクロマトグラフィーによって精製した。無色固形物（５３％）：^１Ｈ Ｎ
ＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）ｄ ８．３２（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ，
Ｐｙｒ）、７．７１（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）、７．４２（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ
，Ａｒ）、７．３６（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ，Ａｒ）、７．２９（ｔ，Ｊ＝
７．６Ｈｚ，１Ｈ，Ａｒ）、７．１３（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｙｒ）、
６．８８（ｓ，１Ｈ，Ｐｙｒ）、４．３０（ｑｕｉｎ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ，
ＣＨ）、２．６２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ_３）、２．０９−１．６２（ｍ，８Ｈ，ＣＨ _２ ）。

【００８１】

【化１３】

【００８２】 ステップＧ： １−（Ｓ）−フェニル−Ｎ−｛４−［３−シクロペンチル−２
−メチル−５−（３−トリフルオロメチルフェニル）−３Ｈ−イミダゾル−４−
イル］ピリジン−２−イル｝エチルアミン（１０）（Ｌ−８４５，７２２）の製
造 Ｓ−（−）−ａ−メチルベンジルアミン（０．７８ｇ、６．４ミリモル）中の
１−シクロペンチル−５−（２−フルオロピリジン−４−イル）−２−メチル−
４−（３−トリフルオロメチルフェニル）−１Ｈ−イミダゾール（９）（０．２
５ｇ、０．６４ミリモル）の攪拌した溶液を、１５０℃において１５時間加熱し
た。加熱浴を除去し、フラスコの含有物を、酢酸エチル（１００ｍＬ）とｐＨ４
．５の緩衝剤（５０ｍＬ、１０Ｎ水酸化ナトリウムで処理してｐＨ４．５とした
１０％クエン酸から成る）の間に分配した。有機相を乾燥し（硫酸ナトリウム）
、濾過し、濃縮した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して
、目的化合物（７３％）を得た。白色泡状物：^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｃ
ＤＣｌ_３）ｄ ８．１６（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｙｒ）、７．７６（ｓ
，１Ｈ，Ａｒ）、７．３８−７．１９（ｍ，８Ｈ，Ａｒ）、６．４９（ｄ，Ｊ＝
５．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｐｙｒ）、５．１７（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨ）、
４．６１（ｑｕｉｎ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ_２ＣＨＮ）、４．０７（ｑ，
Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ，ＰｈＣＨＣＨ_３）、２．５３（ｓ，３Ｈ，ＮＣＣＨ_３）
、１．５４（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ，ＰｈＣＨＣＨ_３）、１．８２−１．４
４（ｍ，８Ｈ，ＣＨ_２）。

【００８３】 バイオアッセイ リポポリサッカリド媒介サイトカイン産生 ＣｈｉｎおよびＫｏｓｔｕｒａ， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５１， ５５
７４−５５８５（１９９３）の方法によって、ヒト末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ
）を、新鮮なヒト血液から単離する。滅菌静脈穿刺によって、１．０ｍＬのナト
リウム−ヘパリン（Ｕｐｊｏｈｎ、１０００Ｕ／ｍＬ）で被覆した６０ｍＬのシ
リンジに全血を採取し、Ｈａｎｋｓ Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ Ｓｏｌｕｔ
ｉｏｎ（Ｇｉｂｃｏ）中で１：１に希釈する。Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅリ
ンパ球分離材での遠心分離によって、赤血球をＰＢＭＣから分離する。ＰＢＭＣ
をＨａｎｋｓ Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ中で３回洗浄し
、次に、１０％の新鮮な自己由来ヒト血清、ペニシリンストレプトマイシン（１
０Ｕ／ｍＬ）および０．０５％ＤＭＳＯを含有するＲＰＭＩ中に最終濃度２ｘ１
０^６細胞／ｍＬに再懸濁する。リポポリサッカリド（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ型Ｒ
ｅ５４５；Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を細胞に加えて、最終濃度１００
ｎｇ／ｍＬとする。適切に希釈した０．１ｍＬの試験化合物を含有する９６穴皿
の各穴に、細胞のアリコート（０．１ｍＬ）を速やかに分配し、５％ＣＯ_２の雰
囲気中で３７℃において２４時間培養する。培養の終了時に、特異的ＥＬＩＳＡ
を使用して、ＩＬ−１ｂ、ＴＮＦ−ａ、ＩＬ−６およびＰＧＥ_２の産生について
細胞培養物上澄みを定量する。

【００８４】 ＩＬ−１媒介サイトカイン産生 ＣｈｉｎおよびＫｏｓｔｕｒａ， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５１， ５５
７４−５５８５（１９９３）の方法によって、ヒト末梢血液単核細胞を、新鮮な
ヒト血液から単離する。滅菌静脈穿刺によって、１．０ｍＬのナトリウム−ヘパ
リン（Ｕｐｊｏｈｎ、１０００Ｕ／ｍＬ）で被覆した６０ｍＬのシリンジに全血
を採取し、Ｈａｎｋｓ Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｇｉ
ｂｃｏ）中で１：１に希釈する。Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅリンパ球分離材
での遠心分離によって、赤血球をＰＢＭＣから分離する。ＰＢＭＣをＨａｎｋｓ
Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ中で３回洗浄し、次に、１０
％の新鮮な自己由来ヒト血清、ペニシリンストレプトマイシン（１０Ｕ／ｍＬ）
および０．０５％ＤＭＳＯを含有するＲＰＭＩ中に最終濃度２ｘ１０^６細胞／ｍ
Ｌに再懸濁する。次に、エンドトキシン不含組み換えヒトＩＬ−１ｂを加えて、
最終濃度５０ｐＭｏｌａｒとする。適切に希釈した０．１ｍＬの化合物を含有す
る９６穴皿の各穴に、細胞のアリコート（０．１ｍＬ）を速やかに分配し、５％
ＣＯ_２の雰囲気中で３７℃において２４時間培養する。培養の終了時に、特異的
ＥＬＩＳＡを使用して、ＴＮＦ−ａ、ＩＬ−６およびＰＧＥ_２の合成について細
胞培養物上澄みを定量する。

【００８５】 ＬＰＳまたはＩＬ−１によって刺激されたＰＢＭＣからのＩＬ−１ｂ、ＴＮＦ
−ａ、ＩＬ−６およびプロスタノイドの産生の測定 ＩＬ−１ｂ ＥＬＩＳＡ 下記の特異的トラッピング（specific trapping）ＥＬＩＳＡを使用して、細
胞培養物上澄みまたは全血中にヒトＩＬ−１ｂを検出することができる。９６穴
プラスチック皿（Ｉｍｍｕｌｏｎ ４；Ｄｙｎａｔｅｃｈ）を、４℃において１
２時間にわたって、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ燐酸緩衝液（−ＭｇＣｌ_２、−ＣａＣｌ_２ ）で希釈した１ｍｇ／ｍＬのプロテインＡアフィニティークロマトグラフィー精
製マウス抗ヒトＩＬ−１ｂモノクローナル抗体（ＬＡＯ Ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅ
， Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ Ｍａｒｙｌａｎｄから腹水製剤（ａｓｃｉｔｅ
ｓ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）として購入）によって被覆する。その皿をＰＢＳ
−Ｔｗｅｅｎ（ＫｉｒｋｅｇａａｒｄおよびＰｅｒｒｙ）で洗浄し、１％ＢＳＡ
希釈剤および阻止溶液（ＫｉｒｋｅｇａａｒｄおよびＰｅｒｒｙ）で室温におい
て６０分間ブロックし、次に、ＰＢＳ Ｔｗｅｅｎで洗浄する。Ｅ． Ｃｏｌｉ
．から産生される精製組み換えＩＬ−１ｂから、ＩＬ−１ｂ標準を調製する。最
大濃度を１０ｎｇ／ｍＬで開始し、次に１１の２倍の連続希釈を行う。細胞培養
物上澄みまたは血漿からのＩＬ−１ｂの検出のために、７５〜９５ｍＬのＰＢＳ
Ｔｗｅｅｎと一緒に１０〜２５ｍＬの上澄みを各試験穴に加える。試料を室温
において２時間培養し、次に、自動皿洗浄機（Ｄｅｎｎｌｙ）によってＰＢＳ
Ｔｗｅｅｎで６回洗浄する。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで１：５００に希釈したウサギ
抗ヒトＩＬ−１ｂポリクローナル抗血清を皿に加え、室温で１時間培養し、次に
、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで６回洗浄する。結合したウサギ抗ＩＬ−１ｂ ＩｇＧの
検出を、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで１：１０，０００に希釈したヤギ抗ウサギＩｇＧ
−セイヨウワサビペルオキシダーゼコンジュゲート（Ａｃｃｕｒａｔｅ Ｓｃｉ
ｅｎｔｉｆｉｃ）のＦａｂフラグメントを使用して行う。ＴＭＢペルオキシダー
ゼ基質キット（ＫｉｒｋｅｇａａｒｄおよびＰｅｒｒｙ）を使用して、４５０ｎ
Ｍにおける吸収を測定するように設定した９６穴皿Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖ
ｉｃｅｓ分光光度計で色の強度を定量して、ペルオキシダーゼ活性を測定した。
濃度に対する吸収の標準曲線を使用して、試料を評価する。４パラメーターロジ
スティック分析を一般に使用して、データを適合させ、未知の化合物の濃度を得
る。

【００８６】 ＴＮＦ−ａ ＥＬＩＳＡ Ｉｍｍｕｌｏｎ ４（Ｄｙｎａｔｅｃｈ）９６穴プラスチック皿を、マウス抗
ヒトＴＮＦ−ａモノクローナル抗体の０．５ｍｇ／ｍＬ溶液で被覆する。第二抗
体は、Ｇｅｎｚｙｍｅから購入したウサギ抗ヒトＴＮＦ−ａポリクローナル血清
の１：２５００希釈溶液である。他の全ての操作は、ＩＬ−１ｂについて先に記
載したのと同様である。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ＋１０％ＦＢＳまたはＨＳ中に標準
を調製する。２０ｎｇ／ｍＬのＴＮＦ−ａで開始して、１１の２倍の希釈液を作
る。

【００８７】 ＩＬ−６ ＥＬＩＳＡ ＣｈｉｎおよびＫｏｓｔｕｒａ， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５１， ５５
７４−５５８５（１９９３）に記載されている特異的トラッピングＥＬＩＳＡに
よって、分泌ヒトＩＬ−６のレベルも測定する。（Ｄｙｎａｔｅｃｈ）ＥＬＩＳ
Ａ皿を、ＰＢＳ中０．５ｍｇ／ｍＬに希釈したマウス抗ヒトＩＬ−６モノクロー
ナル抗体で被覆する。第二抗体、ウサギ抗ヒトＩＬ−６ポリクローナル抗血清を
、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで１：５０００に希釈する。他の全ての操作は、ＩＬ−１
ｂについて先に記載したのと同様である。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ＋１０％ＦＢＳま
たはＨＳ中に標準を調製する。５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−６で開始して、１１の２
倍の希釈液を作る。

【００８８】 ＰＧＥ_２産生 商業的に入手可能な酵素イムノアッセイを使用して、ＬＰＳまたはＩＬ−１刺
激ＰＢＭＣからの細胞培養物上澄み中に、プロスタグランジンＥ２を検出する。
該アッセイはＣａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ（要覧番号５１４０１０）から購
入され、製造者の使用説明書に従って正確に実施する。

【００８９】 インターロイキン８（ＩＬ−８） 下記のように、ＩＬ−８阻害活性についても本発明化合物を分析することがで
きる。一次ヒト臍帯内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）（Ｃｅｌｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｋ
ｉｒｌａｎｄ， Ｗａ）を、１５％ウシ胎児血清ならびにａＦＧＦおよびヘパリ
ンから成る１％ＣＳ−ＨＢＧＦを添加した培地に維持する。次に、ゼラチンを被
覆した９６穴皿で培養する前に、細胞を２０倍に希釈する（２５０μＬ）。使用
前に、培地を新しい培地（２００μＬ）と交換する。次に、緩衝剤または試験化
合物（２５μＬ、適切な濃度）を四重穴の各穴に加え、５％ＣＯ_２の雰囲気中で
３７℃において加湿インキュベーターで６時間にわたってその皿を培養する。培
養の終了時に、上澄みを採取し、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌ
ｉｓ， ＭＮ）から入手しうるＩＬ−８ ＥＬＩＳＡキットを使用してＩＬ−８
濃度について定量する。全てのデータを、標準曲線に基づく多重サンプルの平均
値（ｎｇ／ｍＬ）として表す。適切であれば、ＩＣ５０値を非直線回帰分析によ
って得る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 9/00 Ａ６１Ｐ 9/00 9/10 １０１ 9/10 １０１ 11/00 11/00 17/02 17/02 19/00 19/00 19/02 19/02 19/06 19/06 19/10 19/10 21/00 21/00 29/00 29/00 31/04 31/04 31/06 31/06 31/18 31/18 37/06 37/06 Ｃ０７Ｄ 403/04 Ｃ０７Ｄ 403/04 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＥＥ， ＧＤ，ＧＥ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＧ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ， ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，Ｔ Ｔ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ (72)発明者 クレアモン，デビツド・エイ アメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07065、ローウエイ、イースト・リンカー ン・アベニユー・126 (72)発明者 リバトン，ナイジエル・ジエイ アメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07065、ローウエイ、イースト・リンカー ン・アベニユー・126 Ｆターム(参考） 4C063 AA01 BB01 CC25 CC29 DD12 DD25 EE01 4C086 AA01 AA02 AA03 BC38 BC42 GA07 GA08 MA01 NA14 ZA36 ZA45 ZA59 ZA66 ZA96 ZA97 ZB08 ZB11 ZB35 ZC31 ZC54 ZC55

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式Ｉ： 【化１】 ［式中： Ｒ_１は、Ｃ_１〜６アルキルであり； Ｒ_２は、Ｈ、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜８シクロアルキル、ＯＣ_１〜６アルキ
   ルまたはＣ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキルであり； Ｒ_３は、Ｈ、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜８シクロアルキル、ＯＣ_１〜６アルキ
   ル、Ｃ（Ｏ）Ｃ_１〜６アルキルまたはアラルキルであり； Ｘは、ＣまたはＮであり； Ｙは、Ｈ、ハロゲン、Ｃ_１〜６アルキル、ＣＮまたはＣＦ_３であり； Ｚは、ＮＨＲ_３またはＦである］ で示される化合物、または医薬的に許容されるそれの付加塩および／または水和
   物、あるいは適用可能な場合には、それの幾何または光学異性体またはラセミ混
   合物。
2. 【請求項２】 Ｒ_２がＣ_３〜８シクロアルキルである、請求項１に記載の化
   合物。
3. 【請求項３】 式： 【化２】 で示される化合物、または医薬的に許容されるそれの付加塩および／または水和
   物、あるいは適用可能な場合には、それの幾何または光学異性体またはラセミ混
   合物。
4. 【請求項４】 医薬的に許容される担体と組み合わせた請求項１に記載の化
   合物を含んで成る医薬組成物。
5. 【請求項５】 請求項１に記載の化合物および医薬的に許容される担体を組
   み合わせることによって製造される医薬組成物。
6. 【請求項６】 サイトカイン媒介疾患の治療に有効な量の請求項１に記載の
   化合物を、そのような治療を必要とする哺乳動物患者に投与することを含んで成
   る、哺乳動物におけるサイトカイン媒介疾患の治療法。
7. 【請求項７】 抗炎症に有効な量の請求項１に記載の化合物を患者に投与す
   ることを含んで成る、炎症の治療を必要とする哺乳動物患者における炎症の治療
   法。
8. 【請求項８】 サイトカイン媒介疾患が、慢性関節リウマチ、骨関節炎、内
   毒素血症、毒素ショック症候群、炎症性腸疾患、結核、アテローム性動脈硬化症
   、筋肉変性、悪液質、乾せん性関節炎、ライター症候群、慢性関節リウマチ、痛
   風、外傷性関節炎、風疹性関節炎または急性滑膜炎である、請求項６に記載の方
   法。
9. 【請求項９】 サイトカイン媒介疾患が、慢性関節リウマチ、リウマトイド
   脊椎炎、骨関節炎、痛風性関節炎、敗血症、敗血症性ショック、内毒素性ショッ
   ク、グラム陰性敗血症、毒素ショック症候群、成人型呼吸窮迫症候群、脳性マラ
   リア、慢性肺炎症疾患、珪肺症、肺筋肉瘤腫、骨吸収疾患、再灌流傷害、移植片
   対宿主拒絶反応、同種移植片拒絶反応、熱、感染による筋肉痛、感染または悪性
   腫瘍による悪液質、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）による悪液質、ＡＩＤＳ
   関連症候群（ＡＲＣ）、ケロイド形成、瘢痕組織形成、クローン病、潰瘍性大腸
   炎またはピレシス（pyresis）である請求項６に記載の方法。
10. 【請求項１０】 骨粗鬆症の治療に有効な量の請求項１に記載の化合物を患
    者に投与することを含んで成る、そのような治療を必要とする哺乳動物患者にお
    ける骨粗鬆症の治療法。
11. 【請求項１１】 骨吸収の治療に有効な量の請求項１に記載の化合物を患者
    に投与することを含んで成る、そのような治療を必要とする哺乳動物患者におけ
    る骨吸収の治療法。
12. 【請求項１２】 クローン病の治療に有効な量の請求項１に記載の化合物を
    患者に投与することを含んで成る、そのような治療を必要とする哺乳動物患者に
    おけるクローン病の治療法。
13. 【請求項１３】 請求項１に記載の化合物および医薬的に許容される担体を
    組み合わせることを含んで成る、医薬組成物の製造法。