JP2002530399A - サイトカイン阻害活性を有する化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 関節炎などのサイトカイン介在疾患の治療に有用性を示す式（Ｉ）の化合物およびその化合物の医薬的に許容される塩が開示される。 【化１】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （技術分野） 本発明は、サイトカイン阻害活性を有する置換複素環化合物に関する。サイト
カイン介在疾患ならびにサイトカイン阻害、抑制および拮抗は、１以上のサイト
カインの過剰または無秩序な産生または活性が生じる疾患または状態の文脈で用
いる。対象となるサイトカインの例には代表的には、インターロイキン−１（Ｉ
Ｌ−１）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−８（ＩＬ−
８）および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）などがある。

【０００２】 （背景技術） インターロイキン−１（ＩＬ−１）および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）は、免疫調
節および他の生理状態に関与する各種細胞によって産生される。

【０００３】 ＩＬ−１が関与している多くの疾患状態がある。例としては、慢性関節リウマ
チ、骨関節炎、内毒素血症、毒素ショック症候群、エンドトキシン誘発炎症反応
もしくは炎症性腸疾患などの急性および慢性の炎症疾患；結核、アテローム性動
脈硬化、筋肉変性、悪液質、乾癬性関節炎、ライター症候群、慢性関節リウマチ
、痛風、外傷性関節炎、風疹性関節炎および急性関節滑膜炎がある。最近、ＩＬ
−１活性を糖尿病に結びつける証拠も得られている。

【０００４】 インターロイキン−１は、免疫調節および他の生理状態で重要であると考えら
れている各種生理活性に介在することが示されている（Dinarello et al., Rev.
Infect. Disease, 6, 51 (1984)）。ＩＬ−１の公知の生理活性には、Ｔヘルパ
ー細胞の活性化、発熱の誘発、プロスタグランジンもしくはコラゲナーゼ産生の
刺激、好中球走化性、急性期蛋白の誘発および血漿鉄レベルの抑制などがある。

【０００５】 過剰または制御されていない腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の産生もしくは活性が、
慢性関節リウマチ、リウマチ様脊椎炎、骨関節炎、痛風性関節炎および他の関節
炎状態、敗血症、敗血症ショック、内毒素ショック、グラム陰性敗血症、毒素シ
ョック症候群、成人呼吸窮迫症候群、大脳マラリア、慢性肺炎症疾患、珪肺症、
肺肉腫、骨吸収疾患、再潅流損傷、移植片対宿主疾患、同種異系移植片拒絶反応
、感染による発熱および筋肉痛、感染もしくは悪性腫瘍が原因の悪液質、後天性
免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）が原因の悪液質、ＡＩＤＳ関連コンプレックス（co
mplex）、ケロイド形成、瘢痕組織形成、クローン病、潰瘍性大腸炎およびピレ
シス（pyresis）の介在または増悪において関与している。

【０００６】 ＴＮＦなどのモノカイン類も、単球および／または大食球でのＨＩＶ複製を活
性化させることが明らかになっている（Poli et al., Proc. Natl. Acad. Sci.,
87: 782-784 (1990)参照）。従って、モノカインの産生または活性を阻害する
ことが、ＨＩＶの進行を抑制する上で役立つ。ＴＮＦは、サイトメガロウィルス
（ＣＭＶ）、インフルエンザウィルスおよびヘルペスウィルスなどの他のウィル
ス感染での各種役割において関与している。

【０００７】 インターロイキン−６（ＩＬ−６）は、免疫系および造血を行うサイトカイン
である。それは、ＩＬ−１などの物質に反応していくつかの種類の哺乳動物細胞
によって産生され、血管小胞性リンパ組織過形成などの疾患状態に関連している
。

【０００８】 インターロイキン−８（ＩＬ−８）は、１９８７年に初めて同定および特性決
定された走化性因子である。ＩＬ−８には、好中球誘引物質／活性化蛋白−１（
ＮＡＰ−１）、単球由来好中球走化性因子（ＭＤＮＣＦ）、好中球活性化因子（
ＮＡＦ）およびＴ細胞リンパ球走化性因子などの多くの異なる名称で呼ばれてい
る。ＩＬ−１と同様に、ＩＬ−８は、単核球、線維芽細胞、内皮細胞およびケタ
イノ細胞（ketainocyte）などのいくつかの種類の細胞によって産生される。そ
れの産生は、ＩＬ−１、ＴＮＦおよびリポ多糖類（ＬＰＳ）によって誘発される
。ＩＬ−８はin vitroで多くの細胞機能を刺激する。それは、好中球、Ｔ−リン
パ球および好塩基球に対する化学誘引物質である。それは、好塩基球からのヒス
タミン放出を誘発する。それは、好中球からのリゾチーム酵素放出および呼吸バ
ーストを引き起こし、デノボ蛋白合成を起こさずに好中球でのＭａｃ−１（ＣＤ
１１ｂ／ＣＤ１８）の表面発現を増加させることが明らかになっている。

【０００９】 サイトカイン介在疾患の治療に有用であり、それ自体がＩＬ−１、ＩＬ−６、
ＩＬ−８およびＴＮＦなどのサイトカイン類の産生もしくは活性を阻害、抑制も
しくは拮抗する化合物が現在もなお必要とされている。

【００１０】 （発明の開示） 本発明は、下記式の化合物Ｉもしくはその化合物の医薬的に許容される付加塩
および／もしくは水和物、または該当する場合には、それの幾何もしくは光学異
性体もしくはラセミ混合物に関する。

【００１１】

【化３】 式中、 Ａは、水素、または水素もしくはＣ_１〜Ｃ_６アルキルで置換されていても良い
窒素原子を有するピロリジン、モルホリンおよびピペリジンから選択される飽和
複素環基であり； Ｑ、Ｕ、ＶおよびＷは独立にＣＨまたはＮであり； Ｒ^１は水素またはＮＨ（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）アリールであり； Ｒ^２、Ｒ^３およびＲ^４は独立に、水素；ハロゲン；水酸基；ＣＦ_３；ＮＨ_２；
ＮＯ_２、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル；Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ
、置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ；Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキル、置換Ｃ_３〜Ｃ_８シク
ロアルキル；アリールまたは置換アリールからなる群から選択されるものを表す
。

【００１２】 本明細書に記載の本発明には、医薬的に許容される担体と組合せて上記で定義
の式Ｉの化合物を含む医薬組成物も含まれる。

【００１３】 本発明にはさらに、哺乳動物におけるサイトカイン介在疾患の治療方法であっ
て、そのような治療を必要とする哺乳動物患者に対して、そのサイトカイン介在
疾患を治療する上で有効な量の式Ｉの化合物を投与する段階を有する方法も含ま
れる。

【００１４】 （発明を実施するための最良の形態） 本発明は、下記式の化合物Ｉあるいはその化合物の医薬的に許容される付加塩
および／または水和物または該当する場合にはそれの幾何もしくは光学異性体ま
たはラセミ混合物に関する。

【００１５】

【化４】 式中、 Ａは、水素、または水素もしくはＣ_１〜Ｃ_６アルキルで置換されていても良い
窒素原子を有するピロリジン、モルホリンおよびピペリジンから選択される飽和
複素環基であり； Ｑ、Ｕ、ＶおよびＷは独立にＣＨまたはＮであり； Ｒ^１は水素またはＮＨ（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）アリールであり； Ｒ^２、Ｒ^３およびＲ^４は独立に、水素；ハロゲン；水酸基；ＣＦ_３；ＮＨ_２；
ＮＯ_２、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル；Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ
、置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ；Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキル、置換Ｃ_３〜Ｃ_８シク
ロアルキル；アリールまたは置換アリールからなる群から選択されるものを表す
。

【００１６】 好ましい実施態様においては、 Ａが、水素、または水素もしくはＣ_１〜Ｃ_６アルキルで置換された窒素原子を
有するピペリジンであり； Ｑ、ＵおよびＷが独立にＣＨまたはＮであり； Ｒ^１が水素またはＮＨＣＨ（ＣＨ_３）フェニルであり； Ｒ^２、Ｒ^３およびＲ^４が独立に水素またはＣＦ_３である式Ｉの化合物もしくは
その化合物の医薬的に許容される付加塩および／もしくは水和物、または該当す
る場合には、それの幾何もしくは光学異性体もしくはラセミ混合物が開示される
。

【００１７】 本発明に包含される代表的なものには次のようなものがある。

【００１８】

【化５】

【００１９】 別段の断りや指示がない限り、以下の定義を明細書および特許請求の範囲を通
じて用いるものとする。

【００２０】 「アルキル」という用語は、別段の定義がない限り、炭素原子１〜１５個を有
する１価アルカン（炭化水素）誘導基を指し、十分な大きさのもの（例：Ｃ_３〜
Ｃ_１５）である場合には環状であることができる。好ましい直鎖もしくは分岐の
アルキル基には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチルおよびｔ−
ブチルなどがある。好ましいシクロアルキル基には、シクロプロピル、シクロペ
ンチルおよびシクロヘキシルなどがある。

【００２１】 アルキルには、シクロプロピルメチルのようにシクロアルキル基で置換された
アルキル基も含まれる。アルキル基には、直鎖もしくは分岐のアルキル基も含ま
れる。

【００２２】 アルキル基のアルキレンおよび１価アルキル部分は、シクロアルキレン部分へ
のあらゆる利用可能な結合箇所で結合することができる。

【００２３】 置換アルキルが存在する場合それは、各変数に関して定義される１〜３個の基
で置換された上記で定義の直鎖、分岐または環状アルキル基を指す。

【００２４】 「アリール」という用語は、フェニル、置換フェニルなどの基のような芳香環
ならびにナフチルなどの縮合している環を指す。従ってアリールには、６以上の
原子を有する１以上の環があり、その環は２個まで存在し、それには１０個以下
の原子があり、隣接する炭素原子間に交互の（共鳴）二重結合がある。好ましい
アリール基はフェニルおよびナフチルである。アリール基も同様に、以下に定義
のように置換されていても良い。好ましい置換アリールには、１個または２個の
基で置換されたフェニルまたはナフチルなどがある。

【００２５】 「複素環アルキル」および「複素環」という用語は、環中の炭素原子のうちの
１個がＯ、Ｓ（Ｏ）_ｙまたはＮから選択されるヘテロ原子によって置き換わり、
別の炭素原子３個以下が前記ヘテロ原子によって置き換わっていても良いシクロ
アルキル基（非芳香族性）を指す。複素環に３個のヘテロ原子が存在する場合、
それら全てが連結されているとは限らない。

【００２６】 複素環の例としては、ピペリジニル、モルホリニル、アゼチジニル、ピロリジ
ニル、テトラヒドロフラニル、イミダゾリニル、ピペラジニル、ピロリジン−２
−オン、ピペリジン−２−オンなどがある。

【００２７】 「ハロゲン」または「ハロ」という用語は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素
を含むものである。

【００２８】 本明細書で使用する場合に「組成物」という用語は、指定された成分を指定さ
れた量で含む製造物ならびに指定された成分を指定された量で組み合わせること
で直接または間接に得られる製造物を含むものである。

【００２９】 さらに、前記の複素環基の多くが複数の互変異型で存在し得ることは当業者に
は公知である。そのような互変異体は全て本発明の範囲に包含されるものとする
。

【００３０】 本発明の化合物の光学異性体すなわちエナンチオマー（例：ラセミ体）または
ジアステレオマーの混合物ならびに個々のエナンチオマーまたはジアステレオマ
ーが含まれる。その個々のエナンチオマーは一般に、それらが行う旋光に従って
、（＋）および（−）、（Ｌ）および（Ｄ）、（１）および（ｄ）あるいはそれ
らの組合せの記号で呼ばれる。これらの異性体は、その絶対空間配置に従って、
それぞれが左旋性および右旋性を示す（Ｓ）および（Ｒ）によって呼ぶこともで
きる。

【００３１】 個々の光学異性体は、例えば適切な光学活性酸による処理、ジアステレオマー
の分離およびその後の所望の異性体の回収などの従来の分割手順を用いて製造す
ることができる。さらに個々の光学異性体は、不斉合成によって製造することが
できる。

【００３２】 さらに、ある化学式または化学名称は、それの医薬的に許容される付加塩およ
び水和物などのそれの溶媒和物を包含するものとする。

【００３３】 本発明の化合物はそれ自体で有効であるが、安定性、結晶化の簡便性、溶解度
上昇および他の望ましい特性を得るべく、それの医薬的に許容される付加塩の形
で製剤および投与することができる。

【００３４】 本発明の化合物は、医薬的に許容される塩の形で投与することができる。「医
薬的に許容される塩」という用語は、全ての許容される塩を含むものである。酸
塩の例としては、塩酸塩、硝酸塩、硫酸塩、リン酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、トリフ
ルオロ酢酸塩、プロピオン酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、マロン酸塩、メタ
ンスルホン酸塩などがあり、それらは溶解度もしくは加水分解特性を変えるため
の製剤として用いることができるか、あるいは徐放製剤またはプロドラッグ製剤
で用いることができる。本発明の化合物の特定の官能性に応じて、本発明の化合
物の医薬的に許容される塩には、ナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシ
ウム、リチウム、マグネシウム、亜鉛などのカチオンから形成されるもの、なら
びにアンモニア、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルタミン、リジン、アルギニ
ン、オルニチン、コリン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロ
カイン、ジエタノールアミン、プロカイン、Ｎ−ベンジルフェネチルアミン、ジ
エチルアミン、ピペラジン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンおよび水
酸化テトラメチルアンモニウムなどの塩基から形成されるものなどがある。これ
らの塩は、好適な有機もしくは無機塩基と遊離酸との反応あるいは別法として好
適な有機もしくは無機酸と遊離塩基との反応などの標準的な手順によって製造す
ることができる。

【００３５】 さらには、酸（−ＣＯＯＨ）基またはアルコール基が存在する場合、メチル、
エチル、ブチル、アセテート、マレエート、ピバロイルオキシメチルなどの医薬
的に許容されるエステルならびに当業界で公知のエステルを用いて、徐放製剤も
しくはプロドラッグ製剤としての使用に向けて溶解度または加水分解特性を変え
ることができる。

【００３６】 本発明の化合物は、立体化学が式Ｉに示されているキラル中心以外のキラル中
心を有することができることから、ラセミ体、ラセミ混合物および個々のエナン
チオマーまたはジアステレオマーとして得られる場合があり、そのような異性体
はいずれも本発明に含まれ、さらにはそれらの混合物もあり得る。さらに、本発
明の化合物についての結晶型の一部は、多形体として存在することができ、それ
自体で本発明に含まれるものである。さらに本発明の化合物の一部は、水または
一般的な有機溶媒と溶媒和物を形成することができる。そのような溶媒和物は、
本発明の範囲に含まれる。

【００３７】 「ＴＮＦ介在疾患または疾患状態」という用語は、ＴＮＦ自体の産生もしくは
活性レベル上昇によって、あるいはＩＬ−１もしくはＩＬ−６など（これらに限
定されるものではない）の別のモノカインを放出させることで、ＴＮＦが何らか
の役割を果たす疾患状態を指す。従って、例えばＩＬ−１が主要成分であり、そ
れの産生もしくは活性がＴＮＦに反応して増悪または分泌される疾患状態は、Ｔ
ＮＦが介在する疾患状態と見なされると考えられる。

【００３８】 本明細書で使用される「サイトカイン」という用語は、細胞の機能に影響を与
える、免疫応答、炎症応答または造血応答で細胞間の相互作用を調節する分子で
ある分泌ポリペプチドを意味する。サイトカインには、どの細胞がそれを産生す
るかとは無関係に、モノカイン類およびリンフォカイン類などがあるが、それら
に限定されるものではない。サイトカインの例としては、インターロイキン−１
（ＩＬ−１）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−８（Ｉ
Ｌ−８）、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）および腫瘍壊死因子−β（ＴＮＦ−
β）などがあるが、これらに限定されるものではない。

【００３９】 「サイトカイン妨害量またはサイトカイン抑制量」という用語は、過剰もしく
は無秩序なサイトカイン産生もしくは活性によって増悪されるかそれが原因であ
る疾患状態の予防または治療を目的として患者に投与した場合に、サイトカイン
のin vivoの活性またはレベルを正常レベルまたは正常以下のレベルまで低下さ
せる有効量の式Ｉの化合物を意味する。

【００４０】 本発明の化合物は、以下の反応図式によって製造される。置換基はいずれも、
別段の断りがない限り上記で定義した通りである。

【００４１】 ピリダジン類の製造

【００４２】

【化６】

【００４３】 ピラジン類の製造

【００４４】

【化７】 式１の化合物は、過剰または無秩序なサイトカイン類（例：ＩＬ−１、ＩＬ−
６、ＩＬ−８またはＴＮＦ）によって増悪または引き起こされる哺乳動物におけ
る疾患状態の予防または治療で用いることができる。

【００４５】 式Ｉの化合物はサイトカイン類を阻害することから、その化合物は、慢性関節
リウマチ、リウマチ様脊椎炎、骨関節炎、痛風関節炎および他の関節状態など、
サイトカインの存在または活性が示唆される疾患の治療に有用である。

【００４６】 式Ｉの化合物は、過剰または無秩序なＴＮＦ産生または活性が介在する疾患状
態の治療に有用である。そのような疾患には、敗血症、敗血症ショック、内毒素
ショック、グラム陰性敗血症、毒素ショック症候群、成人呼吸窮迫症候群、大脳
マラリア、慢性肺炎症疾患、珪肺症、肺肉腫、骨粗鬆症などの骨吸収疾患、再潅
流損傷、移植片対宿主疾患、同種異系移植片拒絶反応、発熱、感染による筋肉痛
、感染もしくは悪性腫瘍が原因の悪液質、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）が
原因の悪液質、ＡＩＤＳ、ＡＲＣ（ＡＩＤＳ関連コンプレックス）、ケロイド形
成、瘢痕組織形成、クローン病、潰瘍性大腸炎、ピレシス、ＡＩＤＳおよびサイ
トメガロウィルス（ＣＭＶ）、インフルエンザウィルスおよび帯状疱疹またはＩ
型もしくはＩＩ型単純疱疹などのヘルペスウィルスファミリーなどの他のウィル
ス感染などがあるが、これらに限定されるものではない。

【００４７】 式Ｉの化合物は、慢性関節リウマチ、リウマチ様脊椎炎、骨関節炎、痛風性関
節炎および他の関節炎状態；関節炎症、湿疹、乾癬または日焼けなどの他の炎症
性皮膚状態；結膜炎などの炎症性眼球状態；ピレシス、疼痛および他の炎症に関
連する状態の治療などの炎症治療において局所的に有用でもある。

【００４８】 式Ｉの化合物はまた、過剰のＩＬ−８活性を特徴とする疾患の治療においても
有用である。そのような疾患状態には、乾癬、炎症性腸疾患、喘息、心臓および
腎臓再潅流損傷、成人呼吸窮迫症候群、血栓症および糸球体腎炎などがある。

【００４９】 そこで本発明には、処置を必要とする哺乳動物における乾癬、炎症性腸疾患、
喘息、心臓および腎臓再潅流損傷、成人呼吸窮迫症候群、血栓症および糸球体腎
炎の治療方法であって、その哺乳動物に対して前記疾患または状態を治療する上
で有効な量の式Ｉの化合物を投与する段階を有する方法が含まれる。

【００５０】 サイトカインまたは複数のサイトカインが示唆される疾患を治療すべく患者に
投与する場合、用いる用量は広い範囲で変動可能であって、それは疾患の種類、
患者の年齢および全身状態、投与する特定の化合物、薬剤を用いて生じる毒性も
しくは有害効果の有無もしくはレベルおよび他の要素によって決まるものである
。好適な用量範囲の代表的な例は、下限約０．０１ｍｇ／ｋｇから上限約１００
ｍｇ／ｋｇの範囲である。しかしながら投与される用量は通常、医師の裁量に委
ねられる。

【００５１】 前記治療方法は、式Ｉの化合物を非経口的に投与することで行うことができる
。本明細書で使用される「非経口的」という用語は、静脈投与、筋肉投与または
腹腔内投与を含むものである。皮下および筋肉型の非経口投与の投与が好ましい
。本発明はされらに、式Ｉの化合物を皮下投与、鼻腔内投与、経直腸投与、経皮
投与または経膣投与することで行うことができる。

【００５２】 式Ｉの化合物はまた、吸入によって投与することもできる。「吸入」とは、鼻
腔内投与および経口吸入投与を意味している。エアロゾル製剤または定量吸入器
などのそのような投与用の適切な製剤は、従来法によって製造することができる
。

【００５３】 本発明はさらに、式Ｉの化合物と医薬的に許容される担体を含む医薬組成物に
関するものでもある。式Ｉの化合物はまた、第２の治療活性化合物と組み合わせ
て医薬組成物に含有させることもできる。

【００５４】 用いられる医薬担体は例えば、固体、液体または気体であることができる。固
体担体の例としては、乳糖、白土、ショ糖、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン
、アカシア、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸などがある。液体担体の
例としては、シロップ、落花生油、オリーブ油、水などがある。気体担体の例に
は、二酸化炭素および窒素などがある。

【００５５】 同様に、担体または希釈剤は、グリセリルモノステアレートまたはグリセリル
ジステアレートなどの当業界で公知の遅延材料を単独またはロウとの混合で含む
ことができる。

【００５６】 非常に多様な医薬製剤を用いることができる。経口投与に固体製剤を用いる場
合、製剤は錠剤、硬ゼラチンカプセル、トローチまたはロゼンジの形とすること
ができる。固体担体の量は広い範囲で変動するが、一般には約０．０２５ｍｇ〜
約１ｇである。経口投与用に液体製剤が望まれる場合、製剤は代表的には、シロ
ップ、乳濁液、軟ゼラチンカプセル、懸濁液または液剤の形である。非経口製剤
を用いる場合には、薬剤は固体もしくは液体製剤であることができ、直接投与用
に製剤したり、あるいは再生に適したものとすることができる。

【００５７】 局所製剤も含まれる。局所製剤の例としては、固体、液体および半固体がある
。固体には、散粉剤、湿布薬などがあると考えられる。液体には液剤、懸濁液お
よび乳濁液などがある。半固体には、クリーム、軟膏、ゲルなどがある。

【００５８】 局所的に使用される式Ｉの化合物の量は当然のことながら、選択される化合物
、状態の性質および重度によって変動するものであり、医師の裁量に従って変動
し得る。代表的な式Ｉの化合物の局所用量は、下限約０．０１ｍｇと上限約２．
０ｇであって、１日に１〜４回、好ましくは１〜２回投与する。

【００５９】 局所投与の場合、有効成分は約０．００１重量％〜約１０重量％で含まれ得る
。

【００６０】 本発明による滴剤は、無菌または非無菌の水系もしくは油系の溶液または懸濁
液を含むものができ、適宜に殺細菌剤および／または殺菌剤および／または他の
好適な保存剤と適宜に界面活性剤を含む好適な水溶液に有効成分を溶解させるこ
とで調製することができる。得られる溶液を濾過によって透明とし、好適な容器
に移し入れ、それを次に密封し、オートクレーブ処理または１／２時間にわたっ
て９８〜１００℃に維持することで滅菌する。別法として、溶液を濾過によって
滅菌し、無菌的に容器に移すことができる。滴剤に含有させるのに好適な殺細菌
剤および殺菌剤の例としては、硝酸もしくは酢酸フェニル水銀（０．００２％）
、塩化ベンザルコニウム（０．０１％）および酢酸クロロヘキシジン（０．０１
％）がある。油系溶液の調製に好適な溶媒には、グリセリン、希アルコールおよ
びプロピレングリコールなどがある。

【００６１】 本発明によるローションには、皮膚または眼球への投与に好適なものなどがあ
る。点眼剤は、適宜に殺細菌剤を含む無菌水溶液を含むことができ、滴剤の調製
について説明したものと同様の方法によって調製することができる。皮膚投与用
のローションまたは塗布剤は、アルコールもしくはアセトンなどの乾燥を促進し
皮膚の冷却を促進するための薬剤および／またはグリセリンなどの保湿剤または
ヒマシ油もしくはラッカセイ油などの油を含むこともできる。

【００６２】 本発明におけるクリーム、軟膏またはペーストは、体外投与用の有効成分の半
固体製剤である。それは、微粉砕または粉末での有効成分を単独でまたは水系も
しくは非水系溶媒中の溶液もしくは懸濁液で、油脂性もしくは非油脂性基材と混
合することで製造することができる。基剤は、硬、軟もしくは液体パラフィンな
どの炭化水素、グリセリン、蜜ロウ、金属石鹸；粘液質；扁桃油、トウモロコシ
油、落花生油、ヒマシ油もしくはオリーブ油などの天然起源の油；ウール脂肪ま
たはそれの誘導体、あるいはステアリン酸もしくはオレイン酸などの脂肪酸を、
プロピレングリコールもしくはマクロゲルなどとともに含むことができる。その
製剤は、ソルビタンエステル類もしくはそれのポリオキシエチレン誘導体のよう
なアニオン系、カチオン系もしくはノニオン系界面活性剤などの好適な界面活性
薬剤を組み込むことができる。天然ガム類、セルロース誘導体またはシリカ類な
どの無機材料のような懸濁剤ならびにラノリンなどの他の成分も含有することが
できる。

【００６３】 実施例１ α−（２−メチルチオピリミジン−４−イル）−３−トリフルオロメチルアセ
トフェノン（３）。

【００６４】

【化８】

【００６５】 Ａｒ下に、ジイソプロピルアミン（７０ｍＬ、０．５ｍｏｌ）のＴＨＦ（５０
０ｍＬ）溶液を冷却して−７０℃とし、ｎ−ＢｕＬｉの２．５Ｎヘキサン溶液（
０．５ｍｏｌ）を滴下した。滴下後、溶液を−７０℃で０．５時間撹拌し、１（
４４ｇ、０．３１ｍｏｌ）のＴＨＦ（２５ｍＬ）溶液を滴下した。０．７５時間
後、２（８７．４ｇ、０．３８ｍｏｌ）のＴＨＦ（２５ｍＬ）溶液を滴下した。
反応液を−７０℃でさらに２時間撹拌し、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液で処理した。
水層をＥｔＯＡｃで抽出し（３回）、合わせた有機抽出液をブラインで洗浄し、
脱水し、濾過し、濃縮乾固して固体を得た。固体を塩化メチレン−ヘキサンから
結晶化させて、純度の低い生成物６６ｇを得た。それをさらに３０％エーテル−
ヘキサンで磨砕して、３（４５ｇ）を得た。母液をスティル（Still）カラム（
１００ｍｍ）および溶離液１５％酢酸エチル−ヘキサンでさらにクロマトグラフ
ィー精製して、さらに３２．６ｇを得て、３を計７７．６ｇ得た。

【００６６】 実施例２ ４−（２−クロロアセチル）−Ｎ−カルボベンゾキシピペリジン（５）。

【００６７】

【化９】

【００６８】 Ａｒ下、酸４をＤＭＦ（０．５ｍＬ）を含む塩化メチレン（５００ｍＬ）に溶
かし、溶液を０〜４℃まで冷却した。オキサリルクロライド（５．５ｍＬ、６３
ｍｍｏｌ）を滴下した。滴下後、反応液を室温で３時間撹拌し、濃縮乾固し、残
留物をＴＨＦ（１００ｍＬ）およびアセトニトリル（１００ｍＬ）で処理した。
溶液を冷却して０〜４℃とし、トリメチルシリルジアゾメタンの２．０ＭＥｔ_２ Ｏ溶液（２５ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）を滴下した。滴下後、反応液を０〜４℃で１
時間、次に室温で１時間撹拌した。溶媒を減圧（２０ｍｍＨｇ）下に除去し、残
留物をＥｔ_２Ｏ（２００ｍＬ）に溶かし、冷却して０〜４℃とし、ＨＣｌの１．
０Ｍ Ｅｔ_２Ｏ（５０ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）を滴下したところＮ_２が発生した。
滴下後、氷浴を外し、反応液を室温で撹拌した。１５時間後、飽和ＮａＨＣＯ_３ 溶液を加えた。分液を行い、水層をさらにＥｔＯＡｃで抽出した（２回）。合わ
せた有機抽出液を脱水し、濾過し、濃縮乾固した。残留物についてスティルカラ
ム（８０ｍｍ）でのクロマトグラフィー精製し、生成物を２０ＥｔＯＡｃ／ヘキ
サンで溶出して、５（７．６ｇ）を得た。

【００６９】 実施例３ ４−（３−トリフルオロメチルフェニル）−４−オキソ−３−（２−メチルチ
オピリミジン−４−イル）−１−オキソ−１−Ｎ−カルボベンゾキシピペリジン
−４−イル）ブタン（６）。

【００７０】

【化１０】

【００７１】 Ａｒ下、３（５．０ｇ、１６．０ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（３０ｍＬ）溶液を、
氷浴で冷却した９５％ＮａＨ（０．４２ｇ、１７．６ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（２
０ｍＬ）懸濁液に滴下した。２０分後、５（５．２ｇ、１７．６ｍｍｏｌ）のＤ
ＭＳＯ（２０ｍＬ）溶液を一定流で加えた。添加後、溶液を室温で撹拌した。１
５時間後、反応液を飽和ＮａＨＣＯ_３に投入した。水層をＥｔ_２Ｏで抽出した（
３回）。有機抽出液をＨ_２Ｏ（２回）、ブラインで洗浄し、脱水し、濾過し、濃
縮乾固した。残留物についてスティルカラムでのクロマトグラフィーを行い、生
成物を４０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサンで溶出して６（５．２ｇ）を得た。

【００７２】 実施例４ ３−（３−トリフルオロメチルフェニル）−４−（２−メチルチオピリミジン
−４−イル）−６−（Ｎ−カルボベンゾキシピペリジン−４−イル）ピリダジン
（７）。

【００７３】

【化１１】

【００７４】 Ａｒ下、６（５．３ｇ、９．３ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１５０ｍＬ）溶液を室
温で撹拌し、ヒドラジン（０．６ｍＬ、１９ｍｍｏｌ）を加えた。３時間後、Ｅ
ｔＯＨ（２０ｍｍ）を減圧下に濃縮除去した。残留物をＨ_２Ｏで処理し、水溶液
をＥｔＯＡｃで抽出した（３回）。合わせた抽出液をブラインで洗浄し、脱水し
、濾過し、濃縮乾固した。残留物（６．０ｇ）をトルエン（１８０ｍＬ）に溶か
し、ＤＤＱ（２．３ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）で処理し、暗色懸濁液を室温で撹拌
した。７２時間後、反応混合物をシリカゲルとともに濃縮乾固し、残留物をステ
ィルカラム（７０ｍｍ）に負荷し、生成物を７０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサンで溶出
して７（４．６ｇ）を得た。

【００７５】 実施例５ ３−（３−トリフルオロメチルフェニル）−４−（２−メチルスルホニルピリ
ミジン−４−イル）−６−（Ｎ−カルボベンゾキシピペリジン−４−イル）ピリ
ダジン（８）。

【００７６】

【化１２】

【００７７】 Ａｒ下、７（４．６ｇ、８．１ｍｍｏｌ）、ＣＨ_３ＯＨ（３０ｍＬ）、ＥｔＯ
Ａｃ（９０ｍＬ）およびＮａ_２ＷＯ_４・２Ｈ_２Ｏ（３６０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ
）の混合物を室温で撹拌しながら、３０％Ｈ_２Ｏ_２（３．７ｍＬ、３２．６ｍｍ
ｏｌ）を加えた。添加後、混合物を１５時間加熱還流し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液
に投入し、水層をＥｔＯＡｃで抽出した（３回）。合わせた有機抽出液をブライ
ンで逆洗浄し、脱水し、濾過し、濃縮乾固させて８（４．５ｇ）を得た。

【００７８】 実施例６ （Ｓ）３−（トリフルオロメチルフェニル）−４−［（２−α−メチルベンジ
ルアミノ）ピリミジン−４−イル）］−６−（Ｎ−カルボベンゾキシピペリジン
−４−イル）ピリダジン（９）。

【００７９】

【化１３】

【００８０】 Ａｒ下、８（４．５ｇ、７．６ｍｍｏｌ）およびＳ（−）α−メチルベンジル
アミン（１１．４ｍＬ、８８ｍｍｏｌ）の混合物を１２５℃で３時間加熱した。
室温で終夜放置した後、混合物についてスティルカラム（１００ｍｍ）でのクロ
マトグラフィー精製を行い、生成物を６０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサンで溶出して９
（４．０ｇ）を得た。

【００８１】 実施例７ （Ｓ）３−トリフルオロメチルフェニル−４−［（２−α−メチルベンジルア
ミノ）ピリミジン−４−イル）］−６−（ピペリジン−４−イル）ピリダジン（
１０）。

【００８２】

【化１４】

【００８３】 Ａｒ下、９（３．１ｇ、４．９ｍｍｏｌ）、３０％ＨＢｒ−ＡｃＯＨ（３０ｍ
Ｌ）および塩化メチレン（１０ｍＬ）の溶液を室温で撹拌した。３時間後、３Ｎ
ＨＣｌを加え、溶液をＥｔ_２Ｏで抽出した（２回）。水層を固体Ｎａ_２ＣＯ_３ で塩基性とし、ＥｔＯＡｃで抽出した（３回）。合わせた抽出液を脱水し、濾過
し、濃縮乾固した。残留物をＥｔＯＡｃに溶かし、ＨＣｌの１Ｎ Ｅｔ_２Ｏ溶液
（１０ｍＬ）で処理し、溶液を濃縮乾固し、Ｅｔ_２Ｏで磨砕し、濾過して、１０
（０．４６ｇ）を得た。

【００８４】 元素分析：Ｃ_２８Ｈ_２７Ｎ_６Ｆ_３・２ＨＣｌ・Ｈ_２Ｏ 理論値：Ｃ、５６．４７；Ｈ、５．２５；Ｎ、１４．１１ 実測値：Ｃ、５６．７２；Ｈ、５．５４；Ｎ、１３．６１； ＭＳ（Ｍ＋１）＝５０５．５。

【００８５】 実施例８ （Ｓ）３−トリフルオロメチルフェニル−４−［２−（α−メチルベンジルア
ミノ）ピリミジン−４−イル）］−６−（Ｎ−メチル）ピペリジン−４−イル）
ピリダジン（１１）。

【００８６】

【化１５】

【００８７】 Ｈ_２雰囲気下、１０（２．０ｇ、４ｍｍｏｌ）、メタノール（３０ｍＬ）、３
６〜３８％ホルムアルデヒド水溶液（２．２ｍＬ）および１０％Ｐｄ／炭素（３
７０ｍｇ）の懸濁液を室温で撹拌した。２０時間後、懸濁液をＮ_３雰囲気下にセ
ライト濾過し、濾液を濃縮乾固した。残留物についてスティルカラム（８０ｍｍ
）でのクロマトグラフィー精製を行い、生成物をＮＨ_３で飽和した２．５％メタ
ノール−クロロホルムで溶出した。共通の分画を濃縮乾固し、残留物を３Ｎ Ｈ
Ｃｌで処理した。水溶液をＥｔ_２Ｏで抽出し（２回）、塩基性とし、ＥｔＯＡｃ
で抽出した（３回）。ＥｔＯＡｃ層を脱水し、濾過し、濃縮乾固した。残留物を
塩化メチレン−シクロヘキサンに溶かし、ＨＣｌの１Ｎ Ｅｔ_２Ｏ溶液で処理し
た。溶液を濃縮乾固し、残留物をＥｔ_２Ｏで磨砕し、濾過し、真空乾燥して、１
１（０．９ｇ）を得た。

【００８８】 元素分析：Ｃ_２９Ｈ_２９Ｆ_３Ｎ_６・ＨＣｌ・１．５Ｈ_２Ｏ 理論値：Ｃ、５９．８４；Ｈ、５．７１；Ｎ、１４．４４ 実測値：Ｃ、５９．８８；Ｈ、５．３３；Ｎ、１４．１９； ＭＳ（Ｍ＋１）＝５１９．３。

【００８９】 実施例９ ４−（３−トリフルオロメチルフェニル）−４−オキソ−３−（ピリジン−４
−イル）−１−オキソ−１−（Ｎ−カルボベンゾキシピペリジン−４−イル）ブ
タン（１３）。

【００９０】

【化１６】

【００９１】 Ａｒ下、１２（８．１ｇ、３０．６ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１００ｍＬ）溶液
を９５％ＮａＨ（０．９ｇ、３５．５ｍｍｏｌ）で処理し、室温で撹拌した。１
時間後、５（９．１ｇ、３０．７ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１００ｍＬ）溶液を滴
下した。１８時間後、２Ｎ ＡｃＯＨ（１００ｍＬ）を加え、溶液を注意深く飽
和Ｎａ_２ＣＯ_３溶液に投入した。水溶液をＥｔＯＡｃで抽出した（４回）。合わ
せた有機層を飽和Ｎａ_２ＣＯ_３、水、ブラインで逆洗浄し、脱水し、濾過し、濃
縮乾固した。残留物をＥｔ_２Ｏで磨砕し、濾過して、１４（８．６ｇ、５４％）
を黄橙赤色固体として得た。母液についてスティルカラム（１００ｍｍ）でのク
ロマトグラフィー精製を行い、生成物を６５％から９０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン
で溶出して１３（２．２ｇ）を得た。

【００９２】 実施例１０ ３−（３−トリフルオロメチルフェニル）−４−（ピリジン−４−イル）−６
−（Ｎ−カルボベンゾキシピペリジン−４−イル）ピリダジン（１５）。

【００９３】

【化１７】

【００９４】 Ａｒ下、１３（２．２ｇ、４．２ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（５０ｍＬ）溶液をヒ
ドラジン（３０６ｍｇ、９．６ｍｍｏｌ）で処理した。４時間後、反応液を濃縮
乾固し、残留物を水−ＥｔＯＡｃの間で分配した（３回）。ＥｔＯＡｃ抽出液を
ブラインで逆洗浄し、脱水し、濾過し、濃縮乾固した。残留物をトルエン（６０
ｍＬ）に溶かし、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン
（ＤＤＱ）（１．０ｇ、４．５ｍｍｏｌ）を加えた。０．５時間後、反応液につ
いてスティルカラム（６０ｍｍ）でのクロマトグラフィー精製を行い、生成物を
９０％から１００％ＥｔＯＡｃ−ヘキサンで溶出して１５（１．６ｇ）を得た。

【００９５】 実施例１１ ３−（３−トリフルオロメチルフェニル）−４−（ピリジン−４−イル）−６
−（Ｎ−メチルピペリジン−４−イル）ピリダジン（１６）。

【００９６】

【化１８】

【００９７】 Ａｒ下、１５（０．７３ｇ、１．４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１７５ｍＬ）溶液を
ＬＡＨ（０．３７ｇ、９．７ｍｍｏｌ）で処理した。添加後、反応液を６０℃で
加熱した。２時間後、反応液を冷却して室温とし、懸濁が生じるまで飽和Ｎａ_２ ＳＯ_４で処理した。反応混合物を濾過し、濾液をＥｔＯＡｃで洗浄した。有機層
をＨ_２Ｏ、ブラインで洗浄し、脱水し、濾過し、濃縮乾固した。残留物をＥｔ_２ Ｏ−ヘキサンで処理し、濾過し、乾燥させて、１６（０．３ｇ）を得た（融点：
１８８〜９℃）。

【００９８】 元素分析：Ｃ_２２Ｈ_２１Ｎ_４Ｆ_３ 理論値：Ｃ、６４．９９；Ｈ、５．４３；Ｎ、１３．７８ 実測値：Ｃ、６５．２９；Ｈ、５．８３；Ｎ、１４．０６。

【００９９】 実施例１２ ３−（トリフルオロメチルフェニル）−４−（ピリジン−４−イル）−６−（
ピペリジン−４−イル）ピリダジン（１７）。

【０１００】

【化１９】

【０１０１】 Ａｒ下、１５（０．８７ｇ、１７ｍｍｏｌ）の３０％ＨＢｒ溶液のＡｃＯＨ（
１０ｍＬ）中混合物を室温で撹拌した。１．５時間後、反応液を３Ｎ ＨＣｌに
投入し、Ｅｔ_２Ｏで抽出した（２回）。水層を飽和Ｎａ_２ＣＯ_３溶液で注意深く
塩基性とし、ＥｔＯＡｃで抽出した（３回）。合わせたＥｔＯＡｃ層を脱水し、
濾過し、濃縮乾固した。残留物についてスティルカラム（５０ｍｍ）でのクロマ
トグラフィー精製を行い、生成物をＮＨ_３で飽和したクロロホルムで溶出して１
７（０．４ｇ）を得た。生成物をＨＣｌの１Ｎ ＥｔＯＨ溶液で処理し、濃縮乾
固し、Ｅｔ_２Ｏで磨砕し、濾過し、乾燥して、塩酸塩を得た（融点：２１８〜２
０℃）。

【０１０２】 元素分析：Ｃ_２１Ｈ_１９Ｆ_３Ｎ_４・３ＨＣｌ・１／２Ｈ_２Ｏ 理論値：Ｃ、５０．１６；Ｈ、４．６１；Ｎ、１１．１４ 実測値：Ｃ、４９．９６；Ｈ、４．７６；Ｎ、１１．１５。

【０１０３】 実施例１３ ４−（３−トリフルオロメチルフェニル）−４−オキソ−３−（２−フルオロ
ピリジン−４−イル）−１−オキソ−１−（Ｎ−カルボベンゾキシピペリジン−
４−イル）ブタン（１９）。

【０１０４】

【化２０】

【０１０５】 Ａｒ下、反応液を室温で撹拌しながら、１８（４．０ｇ、１４．１ｍｍｏｌ）
のＤＭＳＯ（３０ｍＬ）溶液を、９５％ＮａＨ（０．４ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）
で処理した。１／２時間後、５（５．０ｇ、１６．９ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（４
０ｍＬ）溶液を滴下し、溶液を室温で撹拌した。１８時間後、反応液を２Ｎ Ｈ
Ｃｌ（５０ｍＬ）に投入し、飽和Ｎａ_２ＣＯ_３で塩基性とし、ＥｔＯＡｃで抽出
した（３回）。有機抽出液をＨ_２Ｏ、ブラインで逆洗浄し、脱水し、濾過し、濃
縮乾固して、１９（８．８ｇ）を得た。

【０１０６】 実施例１４ ３−（３−トリフルオロメチルフェニル）−４−（２−フルオロピリジン−４
−イル）−６−（Ｎ−カルボベンゾキシピペリジン−４−イル）ピリダジン（２
０）。

【０１０７】

【化２１】

【０１０８】 Ａｒ下、１９（８．８ｇ、１４．１ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（２７０ｍＬ）溶液
を室温で撹拌し、ヒドラジン（１．４ｍＬ、４２．１ｍｍｏｌ）を加えた。２時
間後、反応液を濃縮乾固した。反応物をＨ_２ＯとＥｔＯＡｃとの間で分配した（
３回）。有機抽出液をブラインで逆洗浄し、脱水し、濾過し、濃縮乾固した。残
留物をトルエン（４００ｍＬ）に溶かし、ＤＤＱ（３．４ｇ、１４．９ｍｍｏｌ
）で処理した。室温で３時間撹拌した後、反応液を濃縮乾固した。残留物につい
てスティルカラム（１００ｍｍ）でのクロマトグラフィー精製を行い、生成物を
６０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサンで溶出して２０（５．５ｇ）を得た。

【０１０９】 実施例１５ （Ｓ）３−（３−トリフルオロメチルフェニル）−４−［（２−（α−メチル
ベンジルアミノ）ピリジン−４−イル］−６−（Ｎ−カルボベンゾキシピペリジ
ン−４−イル）ピリダジン（２１）。

【０１１０】

【化２２】

【０１１１】 Ａｒ下、２０（１．６ｇ、３．０ｍｍｏｌ）およびＳ（−）α−メチルベンジ
ルアミン（８ｍＬ）の混合物を１８０℃で１．０時間加熱した。反応液について
スティルカラム（１００ｍｍ）でのクロマトグラフィー精製を行い、生成物を５
０％から６０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサンで溶出して２１（１．０ｇ）を得た。

【０１１２】 実施例１６ （Ｓ）−３−（３−トリフルオロメチルフェニル）−４−［（３−（α−メチ
ルベンジルアミノ）ピリジン−４−イル］−６−（ピペリジン−４−イル）ピリ
ダジン（２２）。

【０１１３】

【化２３】

【０１１４】 ２１（０．７ｇ、１．１ｍｍｏｌ）のイソプロパノール（５０ｍＬ）溶液をＡ
ｒ下にパールの装置に入れ、１０％Ｐｄ／Ｃ（２００ｍｇ）を加えた。懸濁液を
約４１．４ＫＰａ（６ｐｓｉ）のＨ_２下に水素化した。パール装置で終夜振盪し
た後、懸濁液をＡｒ下にスーパーセル（super-cel）で濾過し、濾材層をＥｔＯ
Ａｃで洗浄した。濾液を濃縮乾固した。残留物についてスティルカラム（５０ｍ
ｍ）でのクロマトグラフィー精製を行い、生成物をＮＨ_３で飽和した３％ＣＨ_３ ＯＨ−クロロホルムで溶出して２２（０．２４ｇ）を得た。

【０１１５】 元素分析：Ｃ_２９Ｈ_２８Ｆ_３Ｎ_５・０．２５Ｈ_２Ｏ 理論値：Ｃ、６８．５５；Ｈ、５．６５；Ｎ、１３．７９ 実測値：Ｃ、６８．３６；Ｈ、５．６７；Ｎ、１３．７５； ＭＳ（Ｍ＋１）＝５０４．２６１２。

【０１１６】 実施例１７ （Ｓ）３−（３−トリフルオロメチルフェニル）−４−［２−（α−メチルベ
ンジルアミノ）ピリジン−４−イル］−６−（Ｎ−メチルピペリジン−４−イル
）ピリダジン（２３）。

【０１１７】

【化２４】

【０１１８】 Ａｒ下、２１（０．８ｇ、１．２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液をＬＡ
Ｈ（０．３ｇ、７．９ｍｍｏｌ）で処理し、５０℃まで加熱した。２時間後、反
応液を冷却して室温とし、白色懸濁液が生じるまで飽和Ｎａ_２ＳＯ_４で処理した
。懸濁液をスーパーセル濾過し、濾材層をＥｔＯＡｃで洗浄した。有機抽出液を
濃縮乾固し、残留物についてスティルカラム（５０ｍｍ）でのクロマトグラフィ
ー精製を行い、生成物をＮＨ_３で飽和したクロロホルムで溶出した。残留物をＨ
Ｃｌの１Ｎ Ｅｔ_２Ｏ溶液で処理し、濃縮乾固し、残留物を１：１ＥｔＯＡｃ−
Ｅｔ_２Ｏ（２０ｍＬ）とともに撹拌し、氷浴で冷却し、濾過した。固体を真空乾
燥して、２３（３５０ｍｇ）を得た。

【０１１９】 元素分析：Ｃ_３０Ｈ_３０Ｆ_３Ｎ_５・２ＨＣｌ・１．５Ｈ_２Ｏ 理論値：Ｃ、５８．３４；Ｈ、５．７１；Ｎ、１１．３４ 実測値：Ｃ、５８．５６；Ｈ、５．８２；Ｎ、１０．７２； ＭＳ（Ｍ＋１）＝５１８．３１。

【０１２０】 実施例１８ １−（２−メチルチオピリミジン−４−イル）−１−オキソ−２−（３−トリ
フルオロメチルフェニル）エタン（２５）。

【０１２１】

【化２５】

【０１２２】 Ａｒ下、３−トリフルオロメチルベンジルクロライド（１２ｍＬ、７７ｍｍｏ
ｌ）のＥｔ_２Ｏ（７５ｍＬ）溶液を、Ｍｇ細片（１．７ｇ、７１ｍｍｏｌ）、Ｅ
ｔ_２Ｏ（７５ｍＬ）および触媒量のＩ_２の混合物に滴下した。混合物を０．５時
間加熱還流し、室温で１時間撹拌し、２４（９．３ｇ、４４ｍｍｏｌ）のＥｔ_２ Ｏ（７５ｍＬ）溶液を滴下した。４時間還流後、反応液を冷却して室温とし、２
Ｎ ＨＣｌで処理した。水層をＥｔ_２Ｏ（１回）およびＥｔＯＡｃ（２回）で抽
出した。合わせた抽出液をＨ_２Ｏ、ブラインで逆洗浄し、脱水し、濾過し、濃縮
乾固した。残留物についてスティルカラム（１００ｍｍ）でのクロマトグラフィ
ー精製を行い、生成物を２０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサンで溶出して２５（３．５ｇ
）を得た。

【０１２３】 実施例１９ １−（２−メチルチオピリミジン−４−イル）−１−オキソ−２−（３−トリ
フルオロメチルフェニル）−４−オキソ−４−（Ｎ−カルボベンゾキシピペリジ
ン−４−イル）ブタン（２６）。

【０１２４】

【化２６】

【０１２５】 Ａｒ下、２５（４．０ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（３０ｍＬ）溶液を
、９５％ＮａＨ（０．３５ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）で処理した。室温で１５分間
撹拌した後、５（３．９ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（２０ｍＬ）溶液を
、暗赤色溶液に１回で加えた。室温で１８時間撹拌後、２Ｎ ＡｃＯＨを加え、
飽和Ｎａ_２ＣＯ_３に注意深く投入した。塩基性水層をＥｔＯＡｃで抽出した（３
回）。有機抽出液をＨ_２Ｏ、ブラインで逆洗浄し、脱水し、濾過し、濃縮乾固し
た。残留物についてスティルカラム（８０ｍｍ）でのクロマトグラフィー精製を
行い、生成物を３０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサンで溶出して２６（１．５ｇ）を得た
。

【０１２６】 実施例２０ ３−（２−メチルチオピリミジン−４−イル）−４−（３−トリフルオロメチ
ルフェニル）−６−（Ｎ−カルボベンゾキシピペリジン−４−イル）ピリダジン
（２７）。

【０１２７】

【化２７】

【０１２８】 Ａｒ下、２６（１．５ｇ、２．６ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（５０ｍＬ）溶液をヒ
ドラジン（０．５ｍＬ、１６ｍｍｏｌ）で処理した。５時間後、反応液を濃縮乾
固した。残留物をＨ_２Ｏで処理し、ＥｔＯＡｃで抽出した（３回）。ＥｔＯＡｃ
抽出液を脱水し、濾過し、濃縮乾固した。残留物をトルエン（１００ｍＬ）に溶
かし、ＤＤＱ（０．６２ｇ、２．７ｍｍｏｌ）で処理した。０．５時間後、暗色
反応液を濃縮乾固した。残留物についてスティルカラム（５０ｍｍ）でのクロマ
トグラフィー精製を行い、生成物を４０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサンで溶出して２７
（１．２ｇ）を得た。

【０１２９】 実施例２１ ３−（２−メチルスルホニルピリミジン−４−イル）−４−（３−トリフルオ
ロメチルフェニル）−６−（Ｎ−カルボベンゾキシピペリジン−４−イル）ピリ
ダジン（２８）。

【０１３０】

【化２８】

【０１３１】 Ａｒ下、２７（１．２ｇ、２．１ｍｍｏｌ）のＣＨ_３ＯＨ（１０ｍＬ）および
ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）溶液にＮａ_２ＷＯ_４・２Ｈ_２Ｏ（１００ｍｇ、０．３ｍ
ｍｏｌ）および３０％Ｈ_２Ｏ_２（１．３ｍＬ、１１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を
加熱還流した。１８時間後、飽和ＮａＨＳＯ_３溶液を加えて過剰の過酸化物を分
解し、水層をＥｔＯＡｃで抽出した（３回）。有機抽出液を脱水し、濾過し、濃
縮乾固させた。残留物についてスティルカラム（６０ｍｍ）でのクロマトグラフ
ィー精製を行い、生成物を９０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサンで溶出して２８（０．６
１ｇ）を得た。

【０１３２】 実施例２２ （Ｓ）３−［２−（α−メチルベンジルアミノ）ピリミジン−４−イル］−４
−（３−トリフルオロメチルフェニル）−６−（Ｎ−カルボベンゾキシピペリジ
ン−４−イル）ピリダジン（２９）。

【０１３３】

【化２９】

【０１３４】 Ａｒ下、２８（０．６２ｇ、１．０ｍｍｏｌ）およびＳ（−）−α−メチルベ
ンジルアミン（１．５ｍＬ、１１．６ｍｍｏｌ）の混合物を１２０℃で３時間加
熱した。反応液についてスティルカラム（４０ｍｍ）でのクロマトグラフィー精
製を行い、生成物を８０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサンで溶出して２９（０．６ｇ）を
得た。

【０１３５】 実施例２３ （Ｓ）３−［２−（α−メチルベンジルアミノ）ピリミジン−４−イル］−４
−（３−トリフルオロメチルフェニル）−６−（ピペリジン−４−イル）ピリダ
ジン（３０）。

【０１３６】

【化３０】

【０１３７】 Ａｒ下、２９（０．３ｇ、０．４７ｍｍｏｌ）の３０％ＨＢｒ−ＡｃＯＨ（５
ｍＬ）溶液を室温で１時間撹拌した。反応液を２Ｎ ＨＣｌで処理し、Ｅｔ_２Ｏ
で抽出した（２回）。得られた水層を飽和Ｎａ_２ＣＯ_３で塩基性とし、ＥｔＯＡ
ｃで抽出した（３回）。有機抽出液を脱水し、濾過し、濃縮乾固した。残留物に
ついてスティルカラム（４０ｍｍ）でのクロマトグラフィー精製を行い、生成物
をＮＨ_３で飽和した５％ＣＨ_３ＯＨ／ＣＨＣｌ_３で溶出して３０（７０ｍｇ）を
得た。

【０１３８】 元素分析：Ｃ_２８Ｈ_２７Ｆ_３Ｎ_６−Ｈ_２Ｏ 理論値：Ｃ、６３．２６；Ｈ、５．８８；Ｎ、１５．８１ 実測値：Ｃ、６３．８２；Ｈ、５．４０；Ｎ、１５．３３； ＭＳ（Ｍ＋１）＝５０５．２１。

【０１３９】 実施例２４ （Ｓ）３−［２−（α−メチルベンジルアミノ）ピリミジン−４−イル］−４
−（３−トリフルオロメチルフェニル）−６−（Ｎ−メチルピペリジン−４−イ
ル）ピリダジン（３１）。

【０１４０】

【化３１】

【０１４１】 Ａｒ下、２９（０．２８ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液を
室温でＬＡＨ（１４０ｍｇ、３．７ｍｍｏｌ）で処理した。白色懸濁液が生じる
まで反応液を注意深く飽和Ｎａ_２ＳＯ_４で処理した。混合物をスーパーセル濾過
し、濾材層をＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液を濃縮乾固した。残留物についてステ
ィルカラム（４０ｍｍ）でのクロマトグラフィー精製を行い、生成物をＮＨ_３で
飽和した塩化メチレンで溶出した。共通の分画を合わせ、濃縮乾固した。残留物
をＨＣｌの１Ｎ Ｅｔ_２Ｏ溶液で処理し、濃縮乾固し、Ｅｔ_２Ｏで磨砕し、濃縮
乾固し、Ｅｔ_２Ｏで磨砕し、濾過して、３１（８５ｍｇ）を得た。

【０１４２】 元素分析：Ｃ_２９Ｈ_２９Ｆ_３Ｎ_６・２ＨＣｌ・１．２５Ｈ_２Ｏ 理論値：Ｃ、５６．７２；Ｈ、５．５０；Ｎ、１３．６９ 実測値：Ｃ、５６．９４；Ｈ、５．６７；Ｎ、１３．０４； ＭＳ（Ｍ＋１）＝５１９．２７。

【０１４３】 実施例２５ １−（ピリジン−４−イル）−１−オキソ−２−（３−トリフルオロメチルフ
ェニル）エタン（３３）。

【０１４４】

【化３２】

【０１４５】 Ａｒ下、３２（５．０ｇ、３２．７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液を冷
却して−７８℃とし、ｎ−ＢｕＬｉの２．５Ｎヘキサン溶液（１４ｍＬ、３５ｍ
ｍｏｌ）を滴下した。滴下後、溶液を−７８℃で１５分間撹拌し、３−トリフル
オロメチルベンジルクロライド（５．４ｍＬ、６．８ｇ、３５ｍｍｏｌ）を滴下
した。滴下後、溶液を０〜４℃で撹拌し、暗紫色が消えて明琥珀色となった。２
時間後、反応液を室温で１時間撹拌し、飽和ＮａＨＣＯ_３に投入し、ＥｔＯＡｃ
で抽出した（３回）。有機抽出液をブラインで逆洗浄し、脱水し、濾過し、濃縮
乾固した。残留物をギ酸（１１６ｍＬ）で処理し、混合物を８０℃で加熱した。
２時間後、反応液を濃縮乾固した。残留物をＥｔＯＡｃ（３回）−飽和ＮａＨＣ
Ｏ_３の間で分配した。有機抽出液を濃縮乾固した。残留物についてスティルカラ
ム（７０ｍｍ）でのクロマトグラフィー精製を行い、生成物を５０％ＥｔＯＡｃ
−ヘキサンで溶出して、３３（５．０ｇ、５７％）を得た。

【０１４６】 実施例２６ １−（ピリジン−４−イル）−１−オキソ−２−（３−トリフルオロメチルフ
ェニル）−４−オキソ−４−（Ｎ−カルボベンゾキシピペリジン−４−イル）ブ
タン（３４）。

【０１４７】

【化３３】

【０１４８】 Ａｒ下、３３（５．２ｇ、１９．６ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（６５ｍＬ）溶液を
、９５％ＮａＨ（０．５８ｇ、２２．８ｍｍｏｌ）で処理した。１時間後、５（
５．８ｇ、１９．６ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（２５ｍＬ）溶液を滴下した。１８時
間後、反応液を２Ｎ ＨＣｌ（１００ｍＬ）に投入し、飽和Ｎａ_２ＣＯ_３で塩基
性とし、ＥｔＯＡｃで抽出した（３回）。合わせたＥｔＯＡｃ抽出液をＨ_２Ｏ、
ブラインで逆洗浄し、脱水し、濾過し、濃縮乾固した。残留物についてスティル
カラムでのクロマトグラフィー精製を行って、粗３４（３．３ｇ）を得た。

【０１４９】 実施例２７ ３−（ピリジン−４−イル）−４−（３−トリフルオロメチルフェニル）−６
−（Ｎ−カルボベンゾキシピペリジン−４−イル）ピリダジン（３５）。

【０１５０】

【化３４】

【０１５１】 Ａｒ下、３４（３．３ｇ）のＥｔＯＨ（７５ｍＬ）溶液にヒドラジン（０．５
ｍＬ、０．５１ｇ、１５．９ｍｍｏｌ）を加えた。４時間後、溶液を濃縮乾固し
、残留物をトルエン（６０ｍＬ）およびジオキサン（６０ｍＬ）ならびにＤＤＱ
（０．８ｇ、３．５ｍｍｏｌ）で処理した。１５時間後、反応液を濃縮乾固した
。残留物についてスティルカラム（５０ｍｍ）でのクロマトグラフィー精製を行
い、生成物を１００％ＥｔＯＡｃで溶出して３５（１．２ｇ）を得た。

【０１５２】 実施例２８ ３−（ピリジン−４−イル）−４−（３−トリフルオロメチルフェニル）−６
−（ピペリジン−４−イル）ピリダジン（３６）。

【０１５３】

【化３５】

【０１５４】 Ａｒ下、３５（０．６８ｇ、１．３ｍｍｏｌ）および３０％ＨＢｒ−ＡｃＯＨ
（１０ｍＬ）の混合物を室温で撹拌した。３時間後、３Ｎ ＨＣｌ（５０ｍＬ）
を加え、溶液をＥｔ_２Ｏで抽出した（２回）。水層を飽和Ｎａ_２ＣＯ_３で塩基性
とし、ＥｔＯＡｃで抽出した（６回）。有機抽出液を脱水し、濾過し、濃縮乾固
した。残留物についてＥｔＯＡｃ−ヘキサンからの結晶化を行って、３６（７３
ｍｇ、１５％）を得た（融点：１４８〜５０℃）。

【０１５５】 元素分析：Ｃ_２１Ｈ_１９Ｆ_３Ｎ_４・２．５Ｈ_２Ｏ 理論値：Ｃ、５８．７３；Ｈ、５．６３；Ｎ、１３．０５ 実測値：Ｃ、５８．８５；Ｈ、５．１０；Ｎ、１２．０４。

【０１５６】 実施例２９ ２−（２−メチルチオピリミジン−４−イル）−３−（３−トリフルオロメチ
ルフェニル）ピラジン（２）。

【０１５７】

【化３６】

【０１５８】 Ａｒ下、エチレンジアミン（０．２７ｇ、４．５ｍｍｏｌ）およびＡｃＯＨ（
４滴）を含むオキシム３７（１．０ｇ、２．９ｍｍｏｌ）の純粋ＥｔＯＨ（３０
ｍＬ）溶液を加熱還流した。３日後、反応混合物を濃縮乾固し、飽和ＮａＨＣＯ _３ とＥｔＯＡｃの間で分配した（３回）。有機抽出液を脱水し、濾過し、濃縮乾
固した。残留物をトルエン（８０ｍＬ）に溶かし、ＤＤＱ（０．６６ｇ、２．９
ｍｍｏｌ）で処理した。室温で終夜撹拌した後、懸濁液についてスティルカラム
（５０ｍｍ）でのクロマトグラフィー精製を行い、生成物を３０％ＥｔＯＡｃ−
ヘキサンで溶出して３８（１００ｍｇ、１０％）を得た。

【０１５９】 実施例３０ ２−（２−メチルスルホニルピリミジン−４−イル）−３−（３−トリフルオ
ロメチルフェニル）ピラジン（３９）。

【０１６０】

【化３７】

【０１６１】 Ａｒ下、３８（２９０ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）のＣＨ_３ＯＨ（２ｍＬ）およ
びＥｔＯＡｃ（９ｍＬ）溶液をタングステン酸ナトリウム・２水和物（５５ｍｇ
、０．１７ｍｍｏｌ）および３０％Ｈ_２Ｏ_２（０．５ｍＬ、４．４ｍｍｏｌ）で
処理した。１５時間還流撹拌後、飽和ＮａＨＳＯ_３溶液で処理し、ＥｔＯＡｃで
抽出した（３回）。有機抽出液を脱水し、濾過し、濃縮乾固させて、３９（０．
２８、８９％）を得た。

【０１６２】 実施例３１ （Ｓ）−［２−（α−メチルベンジルアミノ）ピリミジン−４−イル］−３−
（３−トリフルオロメチルフェニル）ピラジン（４０）。

【０１６３】

【化３８】

【０１６４】 Ａｒ下、スルホン３９（０．２８ｇ、０．７４ｍｍｏｌ）および５−（−）−
α−メチルベンジルアミン（０．９７ｇ、８ｍｍｏｌ）を１２０℃で加熱した。
２０時間後、混合物についてスティルカラム（５０ｍｍ）でのクロマトグラフィ
ー精製を行い、生成物を３０％から４０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサンで溶出した。残
留物をＥｔＯＡｃおよび１Ｎ ＨＣｌ（３ｍＬ）で処理し、濃縮乾固し、ヘキサ
ンで磨砕し、濾過して、４０（１６０ｍｇ）を得た。

【０１６５】 元素分析：Ｃ_２３Ｈ_１８Ｆ_３Ｎ_５・ＨＣｌ・０．４Ｈｅｘ・０．５Ｈ_２Ｏ 理論値：Ｃ、６０．９；Ｈ、４．８５；Ｎ、１３．６１ 実測値：Ｃ、６０．８４；Ｈ、５．１５；Ｎ、１３．９７； ＭＳ（Ｍ＋１）＝４２２．１。

【０１６６】 実施例３２ １−（２−フルオロピリジン−４−イル）１，２−ジオキソ−２−（３−トリ
フルオロメチルフェニル）エタン（４２）。

【０１６７】

【化３９】

【０１６８】 Ａｒ下、４１（６．４ｇ、２２．６ｍｍｏｌ）の５％ジオキサン水溶液（１０
０ｍＬ）中溶液をＳｅＯ_２（９．５ｇ、８６．５ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を
撹拌しながら加熱還流した。２時間後、反応液を冷却して室温とし、濃縮乾固し
た。残留物をシリカゲル（５０ｇ）に乾燥充填し、スティルカラム（７０ｍｍ）
でクロマトグラフィーを行った。生成物を１５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサンで溶出し
て、４２（３．３５ｇ）を得た。

【０１６９】 実施例３３ ２−（２−フルオロピリジン−４−イル）−３−（３−トリフルオロメチルフ
ェニル）ピラジン（４３）。

【０１７０】

【化４０】

【０１７１】 Ａｒ下、４２（３．３５ｇ、１１．３ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１５０ｍｌ）溶
液をエチレンジアミン（０．９ｇ、１５ｍｍｏｌ）で処理し、５０℃で加熱した
。３時間後、反応液を濃縮乾固し、残留物をＨ_２ＯとＥｔＯＡｃの間で分配した
（３回）。合わせた有機抽出液を脱水し、濾過し、濃縮乾固した。残留物をトル
エン（２３０ｍＬ）に溶かし、ＤＤＱ（４．０ｇ、１７．６ｍｍｏｌ）と反応さ
せた。室温で１８時間後、反応液を６０℃で２時間加熱し、次に追加のＤＤＱ（
１．０ｇ）で処理し、８０℃で５時間加熱した。残留物をシリカゲル（７０ｇ）
に乾燥充填し、スティルカラム（８０ｍｍ）でクロマトグラフィーを行った。生
成物を３０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサンで溶出して、４３（２．８５ｇ）を得た。

【０１７２】 実施例３４ （Ｓ）−２−［２−（α−メチルベンジルアミノピリジン−４−イル］−３−
（３−トリフルオロメチルフェニル）ピラジン（４４）。

【０１７３】

【化４１】

【０１７４】 Ａｒ下、４３（１．１ｇ、３．４ｍｍｏｌ）およびＳ−（−）−α−メチルベ
ンジルアミン（４．７ｇ、３７ｍｍｏｌ）の混合物を１８０℃で加熱した。６時
間後、混合物についてスティルカラム（６０ｍｍ）でのクロマトグラフィー精製
を行い、生成物を５０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサンで溶出した。残留物をエタノール
性ＨＣｌで処理し、濃縮乾固し、残留物をポンプ乾燥して４４（１．２ｇ）をガ
ラス状物として得た。

【０１７５】 元素分析：Ｃ_２４Ｈ_１９Ｆ_３Ｎ_４・ＨＣｌ・１／２Ｈ_２Ｏ 理論値：Ｃ、６１．８７；Ｈ、４．５４；Ｎ、１２．０３ 実測値：Ｃ、６２．１２；Ｈ、５．０２；Ｎ、１１．６８； ＭＳ（Ｍ＋１）＝４２１．２１。

【０１７６】 実施例３５ １−（ピリジン−４−イル）−１，２−ジオキソ−２−（３−トリフルオロメ
チルフェニル）エタン（４６）。

【０１７７】

【化４２】

【０１７８】 Ａｒ下、４５（７．７ｇ、２９ｍｍｏｌ）の５％ジオキサン水溶液（１３０ｍ
Ｌ）中溶液をＳｅＯ_２（１２．２ｇ、１１０ｍｍｏｌ）で処理し、加熱還流した
。２時間後、反応液をスーパーセル濾過し、濾材層をＥｔＯＡｃで洗浄した。濾
液をシリカゲル（２００ｍＬ）に乾燥充填し、スティルカラム（８０ｍｍ）でク
ロマトグラフィーを行った。生成物を５０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサンで溶出して、
４６（２．３ｇ）を得た。

【０１７９】 実施例３６ ２−（ピリジン−４−イル）−３−（３−トリフルオロメチルフェニル）ピラ
ジン（４７）。

【０１８０】

【化４３】

【０１８１】 Ａｒ下、４６（２．３ｇ、８．２ｍｍｏｌ）の純粋ＥｔＯＨ（１００ｍｌ）溶
液をエチレンジアミン（０．５８ｇ、９．６ｍｍｏｌ）で処理し、５０℃で加熱
した。１８時間後、溶液を濃縮乾固した。残留物をＨ_２ＯとＥｔＯＡｃの間で分
配し（３回）、有機抽出液を脱水し、濾過し、濃縮乾固した。残留物をトルエン
（１２５ｍＬ）およびＤＤＱ（３．８ｇ、１６．７ｍｍｏｌ）で処理し、８０℃
まで加熱した。１８時間後、反応液を濃縮乾固した。残留物をシリカゲル（１０
０ｍＬ）に乾燥充填し、スティルカラム（８０ｍｍ）でクロマトグラフィーを行
った。生成物をＥｔＯＡｃで溶出し、共通の分画を濃縮乾固した。残留物をＥｔ _２ Ｏおよびエタノール性ＨＣｌで処理し、濃縮乾固した。残留物をＥｔＯＡｃで
磨砕し、濾過して、４７（１００ｍｇ）を得た。

【０１８２】 元素分析：Ｃ_１６Ｈ_１０Ｆ_３Ｎ_３・ＨＣｌ 理論値：Ｃ、５６．９０；Ｈ、３．２８；Ｎ、１２．４４ 実測値：Ｃ、５６．４５；Ｈ、３．６３；Ｎ、１２．０９； ＭＳ（Ｍ＋１）＝３０２．１。

【０１８３】 本発明の化合物がサイトカイン類の合成または活性を阻害する能力は、以下の
in vitroアッセイを用いて示すことができる。

【０１８４】 生物学的アッセイ リポ多糖類介在のサイトカイン類産生 ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、チンらの手順（Chin and Kostura, J. Imm
unol. 151, 5574-5585 (1993)）に従って新鮮なヒト血液から単離する。ナトリ
ウム−ヘパリン（Upjohn、１０００Ｕ／ｍＬ）１．０ｍＬでコーティングした６
０ｍＬ注射器中に無菌的静脈穿刺によって全血を採血し、ハンクス液（Gibco）
で１：１に希釈する。フィコール−ハイパック比重遠心媒体での遠心によって、
ＰＢＭＣから赤血球を分離する。ＰＢＭＣをハンクス液で３回洗浄し、１０％の
新鮮な自家ヒト血清、ペニシリンストレプトマイシン（１０Ｕ／ｍＬ）および０
．０５％ＤＭＳＯを含むＲＰＭＩ中に最終濃度が細胞２×１０^６個／ｍＬとなる
まで再懸濁させる。リポ多糖類（サルモネラＲｅ５４５型；Sigma Chemicals）
を細胞に最終濃度１００ｎｇ／ｍＬまで加える。細胞の少量（０．１ｍＬ）を、
適切な希釈度の被験化合物０．１ｍＬを含む９６ウェルプレートの各ウェルにた
だちに分配し、５％ＣＯ_２中３７℃で２４時間インキュベートする。培養期間終
了後、細胞培養上清について、特異的ＥＬＩＳＡを用いて、ＩＬ−１ｂ、ＴＮＦ
−ａ、ＩＬ−６およびＰＧＥ_２産生のアッセイを行う。

【０１８５】 ＩＬ−１介在サイトカイン産生 ヒト末梢血単核球を、チンらの手順（Chin and Kostura, J. Immunol. 151, 5
574-5585 (1993)）に従って新鮮なヒト血液から単離する。ナトリウム−ヘパリ
ン（Upjohn、１０００Ｕ／ｍＬ）１．０ｍＬでコーティングした６０ｍＬ注射器
中に無菌的静脈穿刺によって全血を採血し、ハンクス液（Gibco）で１：１に希
釈する。フィコール−ハイパック比重遠心媒体での遠心によって、ＰＢＭＣから
赤血球を分離する。ＰＢＭＣをハンクス液で３回洗浄し、１０％の新鮮な自家ヒ
ト血清、ペニシリンストレプトマイシン（１０Ｕ／ｍＬ）および０．０５％ＤＭ
ＳＯを含むＲＰＭＩ中に最終濃度が細胞２×１０^６個／ｍＬとなるまで再懸濁さ
せる。エンドトキシンを含まない組換えヒトＩＬ−１ｂを最終濃度５０ｐＭまで
加える。細胞の少量（０．１ｍＬ）を、適切な希釈度で化合物０．１ｍＬを含む
９６ウェルプレートの各ウェルにただちに分配し、５％ＣＯ_２中３７℃で２４時
間インキュベートする。培養期間終了後、細胞培養上清について、特異的ＥＬＩ
ＳＡを用いて、ＴＮＦ−ａ、ＩＬ−６およびＰＧＥ_２合成のアッセイを行う。

【０１８６】 ＩＬ−１ｂ、ＴＮＦ−ａ、ＩＬ−６の測定ならびにＬＰＳもしくはＩＬ−１刺 激ＰＢＭＣからのプロスタノイド産生 ＩＬ−１ｂ ＥＬＩＳＡ ヒトＩＬ−１ｂは、以下の特異的捕捉ＥＬＩＳＡを用いて、細胞培養上清また
は全血で検出することができる。９６ウェルのプラスチック製プレート（Immulo
n 4; Dynatech）を、ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（−ＭｇＣｌ_２、−Ｃ
ａＣｌ_２）で希釈した１ｍｇ／ｍＬの蛋白−Ａアフィニティクロマトグラフィー
精製マウス抗ヒトＩＬ−１ｂモノクローナル抗体（LAO Enterprise, Gaithersbu
rg Marylandから腹水製造品として購入）で４℃にて１２時間コーティングする
。プレートをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（Kirkegaard and Perry）で洗浄し、１％ＢＳ
Ａ希釈・遮断液（Kirkegaard and Perry）で室温にて６０分間遮断し、次にＰＢ
Ｓ Ｔｗｅｅｎで洗浄する。大腸菌から得られる精製組換えＩＬ−１ｂからＩＬ
−１ｂ標準を製造する。最高濃度を１０ｎｇ／ｍＬとし、それから１１種類の２
倍連続希釈液を調製する。細胞培養上清または血漿からＩＬ−１ｂを検出するた
め、ＰＢＳ Ｔｗｅｅｎ７５〜９０ｍＬの入った各試験ウェルに上清１０〜２５
ｍＬを加える。サンプルを室温で２時間インキュベートし、自動プレート洗浄機
（Dennly）でＰＢＳ Ｔｗｅｅｎにて６回洗浄する。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで１：
５００希釈されたウサギ抗ヒトＩＬ−１ｂポリクローナル抗血清をプレートに加
え、室温で１時間インキュベートし、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで６回洗浄する。ＰＢ
Ｓ−Ｔｗｅｅｎで１：１００００希釈したヤギ抗ウサギＩｇＧ−セイヨウワサビ
ペルオキシダーゼ結合体（Accurate Scientific）のＦａｂ’部分を用いて、結
合したウサギ抗ＩＬ−１ｂを検出する。４５０ｎＭでの吸光度を測定するよう設
定された９６ウェルプレート分光光度計（Molecular Devices）での色強度の定
量により、ＴＭＢペルオキシダーゼ基質キット（Kirkegaard and Perry）を用い
てペルオキシダーゼ活性を測定した。吸光度−濃度の標準曲線を用いてサンプル
を評価する。通常は、４パラメータロジスティックス解析を用いてデータを適合
させ、未知化合物の濃度を得る。

【０１８７】 ＴＮＦ−ａ ＥＬＩＳＡ イムロン４（Immulon 4）（Dynatech）９６ウェルプラスチック製プレートを
、マウス抗ヒトＴＮＦ−ａモノクローナル抗体の０．５ｍｇ／ｍＬ溶液でコーテ
ィングする。第２の抗体は購入（Genzyme）ウサギ抗ヒトＴＮＦ−ａポリクロー
ナル血清の１：２５００希釈液である。他の操作はＩＬ−１ｂについて前述した
ものと同様である。標準は、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ＋１０％ＦＢＳもしくはＨＳで
調製する。ＴＮＦ−ａ ２０ｎｇ／ｍＬから開始して、１１種類の２倍希釈を調
製する。

【０１８８】 ＩＬ−６ ＥＬＩＳＡ 分泌ヒトＩＬ−６のレベルも、チンらの既報の報告（Chin and Kostura, J. I
mmunol. 151, 5574-5585 (1993)）に記載の方法に従って測定される。（Dynatec
h）ＥＬＩＳＡプレートを、ＰＢＳで０．５ｍｇ／ｍＬまで希釈したマウス抗ヒ
トＩＬ−６モノクローナル抗体でコーティングする。第２の抗体であるウサギ抗
ヒトＩＬ−６ポリクローナル抗血清を、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで１：５０００希釈
する。他の操作はＩＬ−１ｂについて前述したものと同様である。標準は、ＰＢ
Ｓ−Ｔｗｅｅｎ＋１０％ＦＢＳもしくはＨＳで調製する。ＩＬ−６ ５０ｎｇ／
ｍＬから開始して、１１種類の２倍希釈を調製する。

【０１８９】 ＰＧＥ_２産生 市販の酵素イムノアッセイを用いて、ＬＰＳまたはＩＬ−１刺激ＰＢＭＣから
の細胞培養上清でプロスタグランジンＥ_２を検出する。アッセイは購入し（Caym
an Chemicalから；カタログ番号５１４０１０）、製造者の指示に正確に従って
行う。

【０１９０】 インターロイキン８（ＩＬ−８） 本発明の化合物について、以下に記載の方法に従ってＩＬ−８阻害活性のアッ
セイを行うこともできる。一次ヒト臍帯内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）（Cell Systems
, Kirland, Wa）を、１５％ウシ胎仔血清およびａＦＧＦとヘパリンからなる１
％ＣＳ−ＨＢＧＦとを補給した培地で維持する。次に細胞を２０倍希釈してから
、ゼラチンコート９６ウェルプレートに入れる（２５０μＬ）。使用に先だって
、培地を新鮮な培地（２００μＬ）と入れ替える。次に、緩衝液または被験化合
物（２５μＬ、適切な濃度）を、４連ウェルで各ウェルに加え、プレートを５％
ＣＯ_２雰囲気下に３７℃で加湿インキュベーター中で６時間インキュベートする
。インキュベーション期間終了後、上清を除去し、ＩＬ−８ＥＬＩＳＡキット（
R&D Systems, Minneapolis, MNから入手）を用いてＩＬ−８濃度のアッセイを行
う。データはいずれも、標準曲線に基づいた複数サンプルの平均値として示す。
適宜にＩＣ_５０値を非線形回帰分析によって得る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 9/10 Ａ６１Ｐ 9/10 11/00 11/00 19/00 19/00 19/02 19/02 19/06 19/06 25/00 １０１ 25/00 １０１ 29/00 29/00 31/04 31/04 31/18 31/18 33/06 33/06 35/00 35/00 37/02 37/02 37/06 37/06 39/02 39/02 Ｃ０７Ｄ 401/04 Ｃ０７Ｄ 401/04 403/04 403/04 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＲ，ＫＺ，Ｌ Ｃ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ， ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，Ｓ Ｌ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ポンテイセロ，ジエラルド・エス アメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07065−0907、ローウエイ、イースト・リ ンカーン・アベニユー・126 Ｆターム(参考） 4C063 AA01 AA03 BB01 CC28 CC29 CC34 DD10 DD12 DD28 DD29 EE01 4C086 AA01 AA02 AA03 BC41 BC42 BC48 GA07 GA08 MA01 MA04 NA14 ZA02 ZA45 ZA59 ZA66 ZA89 ZA94 ZA96 ZA97 ZB07 ZB08 ZB11 ZB15 ZB33 ZB35 ZB38 ZC55

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記式のもしくは該化合物の医薬的に許容される付加塩のお
   よび／もしくは水和物の、または該当する場合には、該化合物の幾何異性体のも
   しくは光学異性体のもしくはそのラセミ混合物の 【化１】 ［式中、 Ａは、水素、または水素もしくはＣ_１〜Ｃ_６アルキルで置換されていても良い
   窒素原子を有するピロリジン、モルホリンおよびピペリジンから選択される飽和
   複素環基であり； Ｑ、Ｕ、ＶおよびＷは独立にＣＨまたはＮであり； Ｒ^１は水素またはＮＨ（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）アリールであり； Ｒ^２、Ｒ^３およびＲ^４は独立に、水素；ハロゲン；水酸基；ＣＦ_３；ＮＨ_２；
   ＮＯ_２、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル；Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ
   、置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ；Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキル、置換Ｃ_３〜Ｃ_８シク
   ロアルキル；アリールまたは置換アリールからなる群から選択されるものを表す
   。］化合物。
2. 【請求項２】 Ａが、水素、または水素もしくはＣ_１〜Ｃ_６アルキルで置換された窒素原子を
   有するピペリジンであり； Ｑ、ＵおよびＷが独立にＣＨまたはＮであり； Ｒ^１が水素またはＮＨＣＨ（ＣＨ_３）フェニルであり； Ｒ^２、Ｒ^３およびＲ^４が独立に水素またはＣＦ_３である化合物もしくは該化合
   物の医薬的に許容される付加塩および／もしくは水和物、または該当する場合に
   は、該化合物の幾何もしくは光学異性体もしくはそのラセミ混合物である請求項
   １に記載の化合物。
3. 【請求項３】 下記構造式のいずれかによって表される請求項１に記載の化
   合物。 【化２】
4. 【請求項４】 医薬的に許容される担体と組合せて請求項１に記載の化合物
   を含む医薬組成物。
5. 【請求項５】 請求項１に記載の化合物と医薬的に許容される担体とを組み
   合わせることで製造される医薬組成物。
6. 【請求項６】 哺乳動物におけるサイトカイン介在疾患の治療方法であって
   、そのような治療を必要とする哺乳動物患者に対して、そのサイトカイン介在疾
   患を治療する上で有効な量の請求項１に記載の化合物を投与する段階を有する方
   法。
7. 【請求項７】 処置を必要とする哺乳動物における炎症の治療方法であって
   、該患者に対して、抗炎症上有効な量の請求項１に記載の化合物を投与する段階
   を有する方法。
8. 【請求項８】 前記サイトカイン介在疾患が、慢性関節リウマチ、リウマチ
   様脊椎炎、骨関節炎、内毒素血症、毒素ショック症候群、炎症性腸疾患、結核、
   アテローム性動脈硬化、筋肉変性、悪液質、乾癬性関節炎、ライター症候群、慢
   性関節リウマチ、痛風、外傷性関節炎、風疹性関節炎または急性関節滑膜炎であ
   る請求項６に記載の方法。
9. 【請求項９】 前記サイトカイン介在疾患が、慢性関節リウマチ、リウマチ
   様脊椎炎、骨関節炎、痛風性関節炎、敗血症、敗血症ショック、内毒素ショック
   、グラム陰性敗血症、毒素ショック症候群、成人呼吸窮迫症候群、大脳マラリア
   、慢性肺炎症疾患、珪肺症、肺肉腫、骨吸収疾患、再潅流損傷、移植片対宿主疾
   患、同種異系移植片拒絶反応、発熱、感染による筋肉痛、感染もしくは悪性腫瘍
   が原因の悪液質、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）が原因の悪液質、ＡＩＤＳ
   関連コンプレックス（ＡＲＣ）、ケロイド形成、瘢痕組織形成、クローン病、潰
   瘍性大腸炎またはピレシスである請求項６に記載の方法。
10. 【請求項１０】 処置を必要とする哺乳動物患者における骨粗鬆症の治療方
    法であって、該患者に対して、骨粗鬆症を治療する上で有効な量の請求項１に記
    載の化合物を投与する段階を有する方法。
11. 【請求項１１】 処置を必要とする哺乳動物患者における骨吸収の治療方法
    であって、該患者に対して、骨吸収を治療する上で有効な量の請求項１に記載の
    化合物を投与する段階を有する方法。
12. 【請求項１２】 処置を必要とする哺乳動物患者におけるクローン病の治療
    方法であって、該患者に対して、クローン病を治療する上で有効な量の請求項１
    に記載の化合物を投与する段階を有する方法。
13. 【請求項１３】 請求項１に記載の化合物と医薬的に許容される担体とを組
    み合わせる段階を有する医薬組成物の製造方法。