JP2002521425A

JP2002521425A - 吸着表面を有する微小粒子、それを作製する方法、およびその使用

Info

Publication number: JP2002521425A
Application number: JP2000561979A
Authority: JP
Inventors: デレックオハーゲン，; マンモハンシン，; ゲイリーエス．オット，; ジョンバラックマン，; ジーナカッザズ，
Original assignee: カイロンコーポレイション
Priority date: 1998-07-29
Filing date: 1999-07-29
Publication date: 2002-07-16
Anticipated expiration: 2019-07-29
Also published as: DE69930642T2; CA2338646A1; AU5245299A; AU763975B2; CY1107326T1; HK1035862A1; WO2000006123A1; DE69930642D1; PT1100468E; NZ509853A; CA2338646C; EP1100468A1; ATE321535T1; JP4601168B2; JP2010168392A; EP1100468B1; DK1100468T3; ES2260923T3

Abstract

(57)【要約】吸着表面を有する微小粒子、そのような微小粒子を作製する方法、およびその使用が開示される。この微小粒子は、ポリマー（例えば、ポリ（αヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物など）を含有し、カチオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤を用いて形成される。この微小粒子の表面は、ＤＮＡ，ポリペプチド、抗原およびアジュバントのような生物学的に活性な高分子を効率よく吸着する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（関連出願の引用）本出願は、１９９９年４月２日に出願された米国特許出願番号０９／２８５，
８５５の一部継続出願であり、米国特許法第１２０条の下でそこから優先権が主
張され、そしてこの出願はその全体が参考として本明細書中に援用される。米国
特許出願番号０９／２８５，８５５は、１９９８年７月２９日に出願された米国
特許出願番号０９／１２４，５３３の一部継続出願であり、米国特許法第１２０
条の下でそこから優先権が主張され、そしてこの出願はその全体が参考として本
明細書中に援用される。米国特許出願番号０９／１２４，５３３は、１９９８年
１月２９日に出願された米国特許出願番号０９／０１５，６５２の一部継続出願
であり、米国特許法第１２０条の下でそこから優先権が主張され、そしてこの出
願はその全体が参考として本明細書中に援用される。米国特許出願番号０９／０
１５，６５２は、次には、１９９７年１月３０日に出願された米国仮出願番号６
０／０３６，３１６、および１９９７年１２月１６日に出願された６０／０６９
，７４９に関連し、米国特許法第１１９条（ｅ）（１）の下でそこから優先権が
主張され、そしてこの出願はその全体が参考として本明細書中に援用される。

【０００２】（技術分野）本発明は、一般的に、薬学的組成物に関する。詳細には、本発明は、吸着表面
を有する微小粒子、このような微小粒子を調製するための方法、およびそれらの
使用に関する。さらに、本発明は、生分解性の微小粒子を含む組成物に関し、こ
こで生物学的に活性な薬剤（例えば、治療用ポリヌクレオチド、ポリペプチド、
抗原、およびアジュバント）は、微小粒子の表面に吸着される。

【０００３】（背景）粒子キャリアは、制御された、治療化合物の非経口的な送達を達成するために
使用されてきた。このようなキャリアは、長期間にわたって送達系において活性
薬剤を維持するために設計される。微小粒子キャリアの例には、ポリメチルメタ
クリレートポリマー由来の微小粒子、ならびにポリ（ラクチド）（例えば、米国
特許第３，７７３，９１９号を参照のこと）、ＰＬＧとして知られるポリ（ラク
チド−コ−グリコリド）（例えば、米国特許第４，７６７，６２８号を参照のこ
と）、ＰＥＧとして知られるポリエチレングリコール（例えば、米国特許第５，
６４８，０９５号を参照のこと）由来の微小粒子が含まれる。ポリメチルメタク
リレートポリマーは、非分解性であり、一方、ＰＬＧ粒子は、ランダムな非酵素
的なエステル結合の加水分解によって、通常の代謝経路に沿って排出される乳酸
およびグリコール酸に生分解する。

【０００４】例えば、米国特許第５，６４８，０９５号は、鼻、経口、肺、および経口送達
のための薬物送達系として、カプセル化された医薬を有するミクロスフェアの使
用を記載する。種々のポリペプチド増殖因子を含む徐放性処方物もまた、記載さ
れている。例えば、国際公開番号ＷＯ９４／１２１５８、米国特許第５，１３
４，１２２号、および国際公開番号ＷＯ９６／３７２１６を参照のこと。

【０００５】Ｆａｔｔａｌら、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＲｅｌｅａ
ｓｅ５３：１３７−１４３（１９９８）は、吸着したオリゴヌクレオチドを有
するポリアルキルシアノアクリレート（ＰＡＣＡ）から調製されるナノ粒子を記
載する。

【０００６】粒子キャリアはまた、適切な免疫応答を誘発するための試みにおいて吸着また
は包括された抗原とともに使用されてきた。このようなキャリアは、免疫系に対
する選択された抗原の複数のコピーを提示し、そして局所的なリンパ節における
抗原の捕捉および保持を促進する。この粒子は、マクロファージによって食菌さ
れ得、そしてサイトカイン放出を通して抗原提示を増強し得る。例えば、１９９
８年１月２９日に出願された、共有に係る、同時係属中の出願番号０９／０１５
，６５２は、細胞媒介免疫応答を刺激するための、抗原を吸着させた微小粒子お
よび抗原をカプセル化させた微小粒子の使用、ならびにその微小粒子を作製する
方法を記載する。

【０００７】例えば、共有に係る仮特許出願６０／０３６，３１６において、微小粒子を形
成する方法が開示され、これは、ポリマーを有機溶媒と合わせる工程、次いで、
エマルジョン安定化剤（例えば、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ））を添加する
工程、次いで、有機溶媒を蒸発させ、それによって微小粒子を形成する工程を包
含する。この微小粒子の表面は、そのポリマーおよびその安定化剤を含む。次い
で、高分子（例えば、ＤＮＡ、ポリペプチド、および抗原）が、これらの表面に
吸着され得る。

【０００８】カチオン性脂質に基づくエマルジョンは、遺伝子キャリアとして使用され得る
ことがまた示さている。例えば、Ｙｉら、ＣａｔｉｏｎｉｃＬｉｐｉｄＥｍ
ｕｌｓｉｏｎ；ａＮｏｖｅｌＮｏｎ−Ｖｉｒａｌ，ａｎｄＮｏｎ−Ｌｉｐ
ｏｓｏｍａｌＧｅｎｅＤｅｌｉｖｅｒｙＳｙｓｔｅｍ，Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ
’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．，２４
：６５３−６５４（１９９７）；Ｋｉｍら、ＩｎＶｉｖｏＧｅｎｅＴｒａ
ｎｓｆｅｒＵｓｉｎｇＣａｔｉｏｎｉｃＬｉｐｉｄＥｍｕｌｓｉｏｎ−
ＭｅｄｉａｔｅｄＧｅｎｅＤｅｌｉｖｅｒｙＳｙｓｔｅｍｂｙＩｎｔ
ｒａＮａｓａｌＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓ
ｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．，２５：３４４
−３４５（１９９８）；Ｋｉｍら、ＩｎＶｉｔｒｏａｎｄＩｎＶｉｖｏ
ＧｅｎｅＤｅｌｉｖｅｒｙＵｓｉｎｇＣａｔｉｏｎｉｃＬｉｐｉｄ
Ｅｍｕｌｓｉｏｎ，Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ
．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．，２６，＃５４３８（１９９９）を参照のこと。

【０００９】抗原吸着したＰＬＧ微小粒子は、他のより毒性の系よりも有意な利点を提供し
、微小粒子表面への生物学的に活性な薬剤の吸着は、問題であり得る。例えば、
荷電しているか、またはかさ高い生物学的に活性な薬剤（例えば、ポリヌクレオ
チド、大きなポリペプチドなど）を、微小粒子表面に吸着させることは、しばし
ば困難か、または不可能である。従って、このような薬剤、特に、高度に感受性
でありかつ処方するのが困難な薬物のための柔軟な送達系の必要性が、継続して
存在する。

【００１０】（発明の要旨）本発明者らは、本明細書中において、広範な種々の高分子を吸着し得る吸着表
面を有する微小粒子を形成する方法を発明した。この微小粒子は、ポリマーおよ
び界面活性剤の両方からなる。本発明の微小粒子は、現在利用可能な他の微小粒
子よりも効率的にこのような高分子を吸着する。

【００１１】この微小粒子は、ポリマー（例えば、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロ
キシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ＰＡＣＡ、
ポリシアノアクリレートなど）から誘導され、そして界面活性剤（例えば、カチ
オン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、または非イオン性界面活性剤）とと
もに形成される。これらの界面活性剤は、組み合わせて使用され得る。さらに、
本発明者らは、これらの微小粒子が、ＰＶＡのみを使用するプロセスによって形
成される微小粒子と比較して、ウイルス抗原の吸着の改善をもたらし、そして、
優れた免疫応答を提供することを発見した。ＰＶＡのみを用いて作製される微小
粒子は、いくつかの高分子を吸着し得るが、他の界面活性剤を単独で、組み合わ
せて、またはＰＶＡと組み合わせて使用する本発明の微小粒子は、広範な種々の
高分子を吸着する。従って、次いで、本発明は、主に、そのような微小粒子、な
らびに、そのような微小粒子を作製するためのプロセス、およびその微小粒子を
使用する方法に関する。

【００１２】１つの実施態様において、本発明は、吸着表面を有する微小粒子に関し、ここ
でその微小粒子は、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプ
ロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物、およびポリシアノアクリレート
からなる群より選択されるポリマーを含む。

【００１３】別の実施態様において、本発明は、微小粒子表面に吸着される、選択した高分
子（例えば、医薬、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、タンパク質、ホルモン、
酵素、転写メディエーター、翻訳メディエーター、代謝経路の中間体、免疫調節
剤、抗原、アジュバント、またはそれらの組合せなど）をさらに含むこのような
微小粒子に関する。

【００１４】別の実施態様において、本発明は、本発明の微小粒子に吸着した、選択した高
分子、および薬学的に受容可能な賦形剤を含む、微小粒子組成物に関する。

【００１５】別の実施態様において、本発明は、生分解性ポリマーおよびイオン性界面活性
剤を含有する微小粒子に関する。

【００１６】別の実施態様において、本発明は、吸着表面を有する微小表面を産生する方法
に関し、この方法は以下の工程：（ａ）ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン
、ポリオルトエステル、ポリ無水物、およびポリシアノアクリレートからなる群
より選択されるポリマーを含有するポリマー溶液（ここでこのポリマーは、約１
％〜約３０の濃度で、有機溶媒中に存在する）、およびアニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、または非イオン性界面
活性剤（ここでこれらの界面活性剤は、０．００１〜１０の重量対重量の界面活
性剤対ポリマーの比で存在して、ポリマー／界面活性剤混合物を形成する）をポ
リマー溶液と合わせる工程；（ｂ）このポリマー／界面活性剤混合物を分散させる工程；（ｃ）有機溶媒を除去する工程；ならびに（ｄ）微小粒子を回収する工程、を包含する。

【００１７】好ましくは、ポリマー／界面活性剤混合物は、有機溶媒を除去する前に乳化さ
れてエマルジョンを形成する。

【００１８】別の実施態様において、本発明は、上記に記載した方法によって産生される微
小粒子に関する。

【００１９】別の実施態様において、本発明は、吸着された高分子を有する微小粒子を産生
する方法に関し、以下の工程：（ａ）ポリ（Ｄ，Ｌ−ポリラクチド−コ−グリコリド）を含有するポリマー溶
液（ここでこのポリマーは、有機溶媒中で、約３％〜約１０％の濃度で存在する
）；および、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、または非イオン性界
面活性剤（ここでこの界面活性剤は、０．００１〜１０の重量対重量の界面活性
剤対ポリマーの比で存在して、ポリマー／界面活性剤混合物を形成する）を合わ
せる工程；（ｂ）このポリマー／界面活性剤混合液を分散させる工程；（ｃ）このエマルジョンから溶媒を除去する工程；（ｄ）微小粒子を回収する工程；ならびに（ｅ）微小粒子の表面に高分子を吸着させる工程であって、ここでこの高分子
は、医薬、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、ホルモン、酵素、転写メディエー
ター、翻訳メディエーター、代謝経路の中間体、免疫調節剤、抗原、アジュバン
ト、およびそれらの組合せからなる群より選択される。好ましくは、ポリマー／
界面活性剤混合物は、有機溶媒を除去する前に乳化されて、エマルジョンを形成
する。別の実施態様において、本発明は、上記に記載の方法によって産生された
吸着した高分子を有する微小粒子に関する。

【００２０】別の実施態様において、本発明は、微小粒子の表面に吸着した高分子および薬
学的に受容可能な賦形剤を有する、吸着微小粒子を合わせる工程を包含する、吸
着微小粒子組成物を産生する方法に関する。

【００２１】なお別の実施態様において、本発明は、上記の組成物を、脊椎動物被験体に投
与する工程を包含する、脊椎動物被験体に高分子を送達する方法に関する。

【００２２】さらなる実施態様において、本発明は、本発明の微小粒子に吸着した選択され
た高分子の治療的有効量を、脊椎動物被験体に投与する工程を包含する、脊椎動
物被験体において細胞内免疫応答を誘発するための方法に関する。

【００２３】別の実施態様において、本発明は、上記の微小粒子組成物の治療的有効量を、
脊椎動物被験体に投与する工程を包含する、免疫方法に関する。この組成物は、
必要に応じて、結合していない高分子を含み得、そしてまた、必要に応じて、ア
ジュバント（アルミニウム塩（例えば、リン酸アルミニウム）を含む）を含み得
る。

【００２４】好ましい実施態様において、微小粒子は、ポリ（α−ヒドロキシ酸）；より好
ましくは、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）；そして最も好ましくは
、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）から形成される。

【００２５】好ましい実施態様において、微小粒子は、疾患の診断における使用のためであ
る。

【００２６】好ましい実施態様において、微小粒子は、疾患の処置における使用のためであ
る。

【００２７】好ましい実施態様において、微小粒子は、ワクチンにおける使用のためである
。

【００２８】好ましい実施態様において、微小粒子は、免疫応答を惹起する際における使用
のためである。

【００２９】非消耗性の以前に記載された吸着微小粒子の各々はまた、必要に応じて、それ
らの中に包括された高分子を有し得る。

【００３０】本発明のこれらおよび他の実施態様は、本明細書中の開示を考慮して、当業者
に容易に想定される。

【００３１】（発明の詳細な説明）本発明の実施は、他に示さない限り、当業者の範囲内にある、化学、高分子化
学、生化学、分子生物学、免疫学、および薬学の従来の方法を利用する。このよ
うな技術は、文献に十分に説明されている。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ
ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版（Ｅａｓｔｏｎ，
Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ：ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ
，１９９０）；ＭｅｔｈｏｄｓＩｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．Ｃｏｌｏｗ
ｉｃｋおよびＮ．Ｋａｐｌａｎ編、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）
；ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
，第Ｉ巻〜第ＩＶ巻（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編、
１９８６，ＢｌａｃｋｗｅｌｌＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＰｕｂｌｉｃａｔｉｏ
ｎｓ）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａ
ｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ（第２版、１９８９）；Ｈａｎｄｂｏｏｋｏ
ｆＳｕｒｆａｃｅａｎｄＣｏｌｌｏｉｄａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｂｉ
ｒｄｉ，Ｋ．Ｓ．編、ＣＲＣＰｒｅｓｓ，１９９７）およびＳｅｙｍｏｕｒ／
Ｃａｒｒａｈｅｒ’ｓＰｏｌｙｍｅｒＣｈｅｍｉｓｔｒｙ（第４版、Ｍａｒ
ｃｅｌＤｅｋｋｅｒＩｎｃ．，１９９６）を参照のこと。

【００３２】本明細書中で引用される、すべての刊行物、特許、および特許出願は、上記ま
たは下記に関わらず、それらの全体が本明細書によって参考として援用される。

【００３３】本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形「ａ」
「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈がそうでないと明確に指示しない限りは、複
数形の言及を含む。従って、例えば、用語「微小粒子（ａｍｉｃｒｏｐａｒｔ
ｉｃｌｅ）」とは、１つ以上の微小粒子をいう、などである。

【００３４】（Ａ．定義）本明細書において記載される際に、以下の用語が使用され、そして以下に示す
ように定義されることが意図される。

【００３５】本明細書中で使用される場合、用語「微小粒子」とは、直径約１００ｎｍ〜約
１５０ｎｍ、より好ましくは、直径約２００ｎｍ〜約３０μｍ、そして最も好ま
しくは、直径約５００ｎｍ〜約１０μｍの粒子をいう。好ましくは、この微小粒
子は、針およびキャピラリーをふさぐことなく、非経口投与または粘膜投与を可
能にする直径のものである。微小粒子のサイズは、当該分野で周知の技術（例え
ば、光子相関分光法、レーザー回折法、および／または走査電子顕微鏡法）によ
って容易に決定される。

【００３６】本明細書中における使用のための微小粒子は、滅菌可能であり、非毒性であり
、そして生分解性である物質から形成される。このような物質には、限定するこ
となく、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン
、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ＰＡＣＡ、およびポリシアノアクリレート
が挙げられる。好ましくは、本発明での使用のための微小粒子は、ポリ（α−ヒ
ドロキシ酸）由来、特に、ポリ（ラクチド）（「ＰＬＡ」）、またはＤ，Ｌ−ラ
クチドおよびグリコリドもしくはグリコール酸のコポリマー（例えば、Ｄ，Ｌ−
ラクチド−コ−グリコリド）（「ＰＬＧ」または「ＰＬＧＡ」）またはＤ，Ｌ−
ラクチドおよびカプロラクトンのコポリマー由来である。この微小粒子は、種々
のポリマー性の出発物質のいずれかから誘導され得る。この物質は、種々の分子
量を有し、そしてＰＬＧのようなコポリマーの場合、種々のラクチド：グリコリ
ド比、を有し、これらの選択は、大部分選択可能な問題であり、同時投与される
高分子に部分的に依存する。これらのパラメーターは、以下でより十分に議論さ
れる。

【００３７】本明細書中で使用される場合、用語「界面活性剤（ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ）」と
は、界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）およびエマルジョン安定化剤を含む。
アニオン性界面活性剤には、ＳＤＳ、ＳＬＳ、硫酸化脂肪アルコールなどが挙げ
られるが、これらに限定されない。カチオン性界面活性剤には、セトリミド（Ｃ
ＴＡＢ）、塩化ベンザルコニウム、ＤＤＡ（ジメチルジオクトデシルアンモニウ
ムブロマイド）、ＤＯＴＡＰなどが挙げられるが、これらに限定されない。非イ
オン性界面活性剤には、ソルビタンエステル、ポリソルビン酸、ポリオキシエチ
ル化グリコールモノエステル、ポリオキシエチル化アルキルフェノール、ポロキ
サマーなどが挙げられるが、これらに限定されない。

【００３８】本明細書で用いられる用語「正味の正電荷」は、微小粒子の表面上の電荷が、
ＰＶＡを用いて作製された対応する微小粒子の表面上の電荷より正であることを
意味する。同様に、本明細書で用いられる「正味の負電荷」は、微小粒子の表面
上の電荷が、ＰＶＡを用いて作製された対応する微小粒子の表面上の電荷より負
であることを意味する。正味の電荷は、カチオン性またはアニオン性界面活性剤
を用いて作製された微小粒子のζ電位（界面動電位としてもまた知られる）を、
ＰＶＡを用いて作製された対応する微小粒子と比較することにより評価され得る
。従って、「正味の正電荷」を有する微小粒子表面は、ＰＶＡを用いて作製され
た微小粒子の表面のζ電位より大きなζ電位を有し、そして「正味の負電荷」を
有する微小粒子は、ＰＶＡを用いて作製された微小粒子の表面のζ電位より小さ
なζ電位を有する。明らかなように、本発明の微小粒子の正味の電荷は、対応す
るＰＶＡ微小粒子のζ電位に対して算出される。

【００３９】本明細書で用いる用語「ζ電位」は、すべての固体と液体の界面を横切って存
在する電位、すなわち、荷電したコロイド粒子を取り囲むイオンの拡散層を横切
る電位をいう。ζ電位は、電気泳動の移動度、すなわち、測定される物質と接触
して配置された荷電電極の間をたどるコロイド粒子の速度から、当該部分野で周
知の技法を用いて算出され得る。

【００４０】本明細書で用いる用語「高分子」は、制限されずに、医薬品、ポリヌクレオチ
ド、ポリペプチド、ホルモン、酵素、転写メディエーターまたは翻訳メディエー
ター、代謝経路中の中間体、免疫モジュレーター、抗原、アジュバント、または
それらの組み合わせをいう。本発明との使用のための特定の高分子は、以下によ
り詳細に記載される。

【００４１】用語「医薬品」は、以下でより詳細に論議される、抗生物質、抗ウイルス剤、
増殖因子、ホルモンなどのような生物学的に活性な化合物をいう。

【００４２】「ポリヌクレオチド」は、生物学的に活性な（例えば、免疫原性または治療）
タンパク質またはポリペプチドをコードする核酸分子である。このポリヌクレオ
チドによりコードされるポリペプチドの性質に依存して、例えば、このポリヌク
レオチドが抗原をコードする場合、ポリヌクレオチドは、１０程度の少ないヌク
レオチドを含み得る。さらに、「ポリヌクレオチド」は、二本鎖および一本鎖配
列の両方を含み得、そして限定されないが、ウイルスからのｃＤＮＡ、原核生物
ｍＲＮＡまたは真核生物ｍＲＮＡ、ウイルスからのゲノムＲＮＡおよびＤＮＡ配
列（例えば、ＲＮＡおよびＤＮＡウルイスおよびレトロウイルス）または原核生
物ＤＮＡ、および特に合成ＤＮＡ配列をいう。この用語はまた、ＤＮＡおよびＲ
ＮＡの任意の公知の塩基アナログを含み、かつ核酸分子が、治療または抗原性タ
ンパク質をコードする限り、ネイティブ配列に対する、欠失、付加および置換の
ような改変（本質的にほぼ保存的）を含む配列を示す。これらの改変は、部位特
異的変異誘発によるように意図的であり得るか、または抗原を産生する宿主の変
異によるような偶発的であり得る。

【００４３】用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーをい
い、そしてこの産物の最小長さに限定されない。従って、ペプチド、オリゴペプ
チド、ダイマー、マルチマーなどがこの定義内に含まれる。完全長タンパク質お
よびそのフラグメントの両方がこの定義に包含される。この用語はまた、タンパ
ク質が、免疫応答を惹起する能力を維持するか、またはこのタンパク質が投与さ
れる被験体に対する治療効果を有する限り、ネイティブ配列に対する欠失、付加
および置換（本質的にほぼ保存的）のような改変もまた含む。

【００４４】「抗原」は、宿主の免疫系を刺激し得る１つ以上のエピトープを含み、この抗
原が本発明に従って提示されるとき、細胞抗原特異的免疫応答、または体液性抗
体応答を生じる分子を意味する。抗原は、それ自身で、または別の分子と組み合
わせて存在するとき、細胞性または体液性応答を惹起し得る。通常、エピトープ
は、約３〜１５の間、一般に約５〜１５のアミノ酸を含む。所定のタンパク質の
エピトープは、当該分野で周知の任意の数のエピトープマッピング技術を用いて
同定され得る。例えば、ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌ
ｏｇｙ、第６６巻（ＧｌｅｎｎＥ．Ｍｏｒｒｉｓ編、１９９６）Ｈｕｍａｎａ
Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ，ＮｅｗＪｅｒｓｅｙ中のＥｐｉｔｏｐｅＭａ
ｐｐｉｎｇＰｒｏｔｏｃｏｌｓを参照のこと。例えば、直線状のエピトープは
、例えば、固体支持体上で多数のペプチドを同時に合成すること（これらのペプ
チドはタンパク質分子の部分に対応する）、およびこれらのペプチドをなお支持
体に付着しているまま、これらペプチドを抗体と反応させることにより決定され
得る。このような技法は、当該分野で公知であり、そして例えば、米国特許第４
、７０８、８７１；Ｇｅｙｓｅｎら（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ
．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８１：３９９８−４００２；Ｇｅｙｓｅｎら（１９８６）Ｍ
ｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：７０９−７１５に記載される（すべてはそれ
らの全体が参考として援用される）。同様に、構造エピトープは、例えば、Ｘ線
結晶学および２次元核磁気共鳴によるようなアミノ酸の空間的構造を決定するこ
とにより容易に同定され得る。例えば、ＥｐｉｔｏｐｅＭａｐｐｉｎｇＰｒ
ｏｔｏｃｏｌｓ、前述を参照のこと。

【００４５】本明細書で用いる用語「抗原」は、サブユニット抗原、すなわち抗原が自然状
態では会合している完全な生物から分離および別個である抗原、および殺傷、弱
毒または不活性化細菌、ウイルス、寄生体またはその他の微生物の両方を示す。
抗イディオタイプ抗体、そのフラグメント、および抗原または抗原性決定基を模
倣し得る合成ペプチドミモトープ（ｍｉｍｏｔｏｐｅ）のような抗体はまた、本
明細書で用いられるような抗原の定義の下に含ます得る。同様に、遺伝子治療お
よび核酸免疫化適用におけるような、インビボで、治療または免疫原性タンパク
質、または抗原性決定基を発現するオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチド
もまた、本明細書で抗原の定義内に含まれる。

【００４６】さらに、本発明の目的には、抗原は、任意のいくつかの公知のウイルス、細菌
、寄生体およびカビ、ならびに任意の種々の腫瘍抗原に由来し得る。さらに、本
発明の目的には、「抗原」は、タンパク質が免疫学的応答を惹起する能力を維持
する限り、ネイティブ配列に対する、欠失、付加および置換のような改変（本質
的にほぼ保存的）を含むタンパク質をいう。これらの改変は、部位特異的変異誘
発によるような意図的であり得るか、または抗原を産生する宿主の変異によるよ
うな偶発的であり得る。

【００４７】抗原または組成物に対する「免疫学的応答」は、被験体における、目的の組成
物中に存在する分子に対する体液性および／または細胞性免疫応答の発生である
。本発明の目的には、「体液性免疫応答」は、抗体分子により媒介される免疫応
答をいい、その一方、「細胞性免疫応答」は、Ｔリンパ球および／またはその他
の白血球細胞により媒介されるものである。細胞性免疫の１つの重要な局面は、
細胞溶解性Ｔ細胞（「ＣＴＬ」）による抗原特異的応答を含む。ＣＴＬは、主要
組織適合性複合体（ＭＨＣ）によりコードされるタンパク質と会合して存在し、
そして細胞の表面上に発現されるペプチド抗原に対する特異性を有する。ＣＴＬ
は、細胞内微生物の細胞内破壊、またはこのような微生物で感染した細胞の溶解
を補助して誘導しかつ促進する。細胞性免疫の別の局面は、ヘルパーＴ細胞によ
る抗原特異的応答を含む。ヘルバーＴ細胞は、この機能を補助して促進し、そし
てそれらの表面上にＭＨＣ分子と会合するペプチド抗原を提示する細胞に対して
非特異的エフェクター細胞の活性を集めるために作用する。「細胞免疫応答」は
また、サイトカイン、ケモカイン、ならびに活性化Ｔ細胞および／またはＣＤ４
＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞由来の白血球を含むその他の白血球細胞により産生され
る他のそのような分子の産生をいう。

【００４８】免疫原性組成物のような組成物、または細胞免疫応答を惹起するワクチンは、
細胞表面で、ＭＨＣ分子と会合する抗原の提示によって脊椎動物被験体を感作す
るように働き得る。細胞媒介免疫応答は、それらの表面で抗原を提示する細胞、
またはその近傍を指向する。さらに、抗原特異的Ｔリンパ球が生成され、免疫化
宿主の将来の保護を可能にし得る。

【００４９】特定の抗原または組成物が細胞媒介性免疫学的応答を刺激する能力は、リンパ
球増殖（リンパ球活性化）アッセイ、ＣＴＬ細胞傷害性細胞アッセイによるか、
感作された被験体中の抗原に特異的であるＴリンパ球についてアッセイすること
によるような、多くのアッセイにより測定され得る。このようなアッセイは、当
該分野で周知である。例えば、Ｅｒｉｃｋｓｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１
９９３）１５１：４１８９−４１９９；Ｄｏｅら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ
．（１９９４）２４：２３６９−２３７６；および以下の実施例を参照のこと。

【００５０】従って、本明細書で用いられるように、免疫学的応答は、ＣＴＬの産生、およ
び／またはヘルパーＴ細胞の産生または活性化を刺激するものであり得る。目的
の抗原はまた、抗体媒介性免疫応答を惹起し得る。それ故、免疫学的応答は、以
下の効果の１つ以上を含み得る：Ｂ細胞による抗体の産生；および／または目的
の組成物またはワクチン中に存在する抗原（単数または複数）に対して特異的な
サプレッサーＴ細胞および／またはγδＴ細胞の活性化。これらの応答は、感染
力を中和するため、および／または抗体−補体、または抗体依存性細胞傷害性（
ＡＤＣＣ）を媒介するように働き得、免疫化宿主に保護を提供する。このような
応答は、当該分野で周知の標準的な免疫アッセイおよび中和アッセイを用いて決
定され得る。

【００５１】微小粒子に吸着された選択抗原を含む組成物は、それが、微小粒子と会合する
ことなく送達されたときに、等量の抗原によって惹起される免疫応答より大きい
免疫応答を惹起する能力を所有するとき、「増大した免疫応答」を果たす。従っ
て、組成物は、「増大した免疫原性」を果たし得る。何故なら、抗原は、微小粒
子への吸着のため、より強力に免疫原性であるからであるか、またはより低用量
の抗原が、それが投与される被験体における免疫応答を達成するために必要であ
るからである。このような増大した免疫原性は、微小粒子／抗原組成物、および
抗原コントロールを動物に投与すること、ならびに当該分野で周知の、ラジオイ
ムノアッセイおよびＥＬＩＳＡのような標準的なアッセイを用いることにより、
この２つに対する抗体力価を比較することにより測定され得る。

【００５２】本明細書で提供されるように、高分子／微小粒子の、用語「有効量」または「
薬学的に有効な量」は、免疫学的応答、および対応する治療効果のような所望の
応答を提供するために、非毒性であるが十分な量、または治療タンパク質の送達
の場合には、以下に規定されるように被験体の処置を行うに十分な量の高分子／
微小粒子をいう。以下に指摘されるように、正確な必要量は、被験体の種、年齢
、および一般状態、処置される状態の重篤度、および目的の特定の高分子、投与
の様式などに依存して、被験体により変動し得る。任意の個々の事例における適
切な「有効」量は、慣用的な実験を用いて当業者により決定され得る。

【００５３】「脊椎動物被験体」は、ｃｏｒｄａｔａ亜門（ｓｕｂｐｈｙｌｕｍｃｏｒｄ
ａｔａ）の任意のメンバーを意味し、制限されずに、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ
、ウマおよびヒトのような哺乳動物；イヌおよびネコのような家畜動物；ならび
にヒヨコを含む雄鳥および雌鳥、七面鳥およびその他のキジ類の鳥のような、家
禽、野生および狩猟鳥を含む鳥類を含む。この用語は、特定の年齢を示さない。
従って、成体動物および新生動物の両方を含むことが意図される。

【００５４】「薬学的に受容可能」または「薬理学的に受容可能」は、生物学的でないか、
またはそうでなければ所望されない材料を意味し、すなわち、この材料は、任意
の所望されない生物学的影響を引き起こさないか、またはそれが含まれる組成物
の任意の成分と有害な様式で相互作用することなく、微小粒子処方物とともに、
個体に投与され得る。

【００５５】「生理学的ｐＨ」または「生理学的範囲にあるｐＨ」は、約７．２〜８．０を
含む範囲、より代表的には、約７．２〜７．６を含む範囲にあるｐＨを意味する
。

【００５６】本明細書で用いられる「処置」は、（ｉ）伝統的なワクチンにおけるような、
感染または再感染の予防、（ｉｉ）症状の低減または除去、および（ｉｉｉ）問
題の病原体または障害の実質的または完全な除去のいずれもをいう。処置は、予
防的（感染前）または治療的（感染後）に実施され得る。

【００５７】（Ｂ．一般的方法）本発明は、本発明のＰＬＡおよびＰＬＧ微小粒子が、生物学的に活性な高分子
を効率的に吸着するという発見に基づく。さらに、これらの微小粒子は、ＰＶＡ
で調製された微小粒子より容易に、荷電および／またはかさ高い高分子を含む、
より多種の分子を吸収する。従って、本発明の高分子／微小粒子は、広範な種類
の疾患を処置、予防および／または診断するために、生物学的に活性な成分を送
達するための送達系として用い得る。

【００５８】本発明は、広範な種類の高分子を送達するために用い得、制限されないで、抗
生物質および抗ウイルス剤、非ステロイド抗炎症性薬物、鎮痛剤、血管拡張薬、
循環器薬物、向精神剤、神経安定薬、抗うつ薬、抗パーキンソン薬物、βブロッ
カー、カルシウムチャネルブロッカー、ブラジキニンインヒビター、ＡＣＥイン
ヒビター、血管拡張剤、プロラクチンインヒビター、ステロイド、ホルモンアン
タゴニスト、抗ヒスタミン剤、セロトニンアンタゴニスト、ヘパリン、化学療法
剤、抗腫瘍剤および増殖因子（ＰＤＧＦ、ＥＧＦ、ＫＧＦ、ＩＧＦ−１およびＩ
ＧＦ−２、ＦＧＦを含むがこれらに限定されない）、ワクチンにおける使用のた
めの、治療または免疫原性タンパク質、免疫原性タンパク質およびそれらのエピ
トープをコードするポリヌクレオチド、ペプチドホルモン（例えば、インスリン
、プロインスリン、成長ホルモン、ＧＨＲＨ、ＬＨＲＨ、ＥＧＦ、ソマトスタチ
ン、ＳＮＸ−１１１、ＢＮＰ、インスリノトロピン、ＡＮＰ、ＦＳＨ、ＬＨ、Ｐ
ＳＨおよびｈＣＧ）、生殖腺ステロイドホルモン（アンドロゲン、エストロゲン
およびプロゲステロン）、甲状腺刺激ホルモン、インヒビン、コレシストキニン
、ＡＣＴＨ、ＣＲＦ、シソルフィン、エンドルフィン、エンドセリン、フィブロ
ネクチンフラグメント、ガラニン、ガストリン、インスリノトロピン、グルカゴ
ン、ＧＴＰ結合タンパク質フラグメント、グアニリン、ロイコキニン、マガイニ
ン、マストパランス（ｍａｓｔｏｐａｒａｎｓ）、デルマセプシン（ｄｅｒｍａ
ｓｅｐｔｉｎ）、システミン（ｓｙｓｔｅｍｉｎ）、ニューロメディン（ｎｅｕ
ｒｏｍｅｄｉｎ）、ニューロテンシン、パンクレアスタチン、膵臓ポリペプチド
、サブスタンスＰ、セクレチン、チモシン、などを含むホルモン、酵素、転写ま
たは翻訳メディエーター、代謝経路中の中間体、（インターロイキン１、インタ
ーロイキン２、インターロイキン３、インターロイキン４、およびγインターフ
ェロンを含む種々のサイトカインのいずれかのような）免疫モジュレーター、抗
原、ならびにアジュバントのような医薬品を含む。

【００５９】好適な実施態様では、上記高分子は抗原である。本発明の特定の利点は、吸着
された抗原をともなう微小粒子が脊椎動物被験体で細胞媒介免疫応答を生成する
能力である。本発明の抗原／微小粒子が選択された抗原に対する細胞媒介性免疫
応答を惹起する能力は、広範な種類の病原体による感染に対する強力なツールを
提供する。従って、本発明の抗原／微小粒子は、ワクチン組成物中に取り込まれ
得る。

【００６０】従って、従来の抗体応答に加えて、本明細書に記載のシステムは、例えば、ク
ラスＩＭＨＣ分子との発現された抗原の会合を提供し、その結果、目的の抗原
に応答するインビボ細胞免疫応答が、ＣＴＬの産生を刺激し、この抗原の将来の
認識を可能するようにマウントされ得る。さらに、この方法は、ヘルパーＴ細胞
による抗原特異的応答を惹起し得る。従って、本発明の方法は、細胞性および／
または体液性免疫応答が所望される任意の高分子、好ましくは、抗体，Ｔ細胞ヘ
ルパーエピトープおよびＴ細胞細胞障害性エピトープを誘導し得るウイルス病原
体由来の抗原、を用いた使用を見出す。このような抗原は、制限されないで、ヒ
トおよび動物ウイルスによりコードされる抗原を含み、そして構造または非構造
タンパク質のいずれかに対応し得る。

【００６１】本発明の微小粒子は、通常、貧弱な免疫応答を惹起する細胞内ウイルスに対す
る免疫化に特に有用である。例えば、本発明は、ヘルペスウイルスファミリーか
らの広範な種類のタンパク質に対する免疫応答を刺激するための使用を見出し、
このタンパク質には、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２糖タンパク質ｇＢ、ｇＤおよ
びｇＨのような、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１型および２型由来のタンパ
ク質；ＣＭＶｇＢおよびｇＨを含む、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプ
スタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）およびサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）由来
の抗原；ならびにＨＨＶ６およびＨＨＶ７のような他のヒトヘルペスウイルス由
来の抗原が挙げられる。（例えば、Ｃｈｅｅら、Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕ
ｓｅｓ（サイトメガロウイルスのタンパク質コード内容の総説は、Ｊ．Ｋ．Ｍｃ
Ｄｏｕｇａｌｌ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｌａｇ１９９０）１２５〜１６９
頁；種々のＨＳＶ−１がコードするタンパク質の論議は、ＭｃＧｅｏｃｈら、Ｊ
．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．（１９８８）６９：１５３１〜１５７４；ＨＳＶ−１お
よびＨＳＶ−２ｇＢおよびｇＤタンパク質およびそれらをコードする遺伝子の
論議は、米国特許第５，１７１，５６８号；ＥＢＶゲノム中のタンパク質コード
配列の同定は、Ｂａｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ（１９８４）３１０：２０７〜２１１
；ならびにＶＺＶの総説は、ＤａｖｉｓｏｎおよびＳｃｏｔｔ、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖ
ｉｒｏｌ．（１９８６）６７：１７５９〜１８１６を参照のこと）。

【００６２】Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイル
ス（ＨＣＶ）、Δ肝炎ウイルス（ＨＤＶ）、Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）および
Ｇ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）を含む、ウイルスの肝炎ファミリーからの抗原もま
た、本明細書に記載の技法において首尾良く用いられ得る。例として、ＨＣＶの
ウイルスゲノム配列は、この配列を得るための方法のように公知である。例えば
、国際公開番号ＷＯ８９／０４６６９；ＷＯ９０／１１０８９；およびＷＯ９０
／１４４３６を参照のこと。このＨＣＶゲノムは、Ｅ１（Ｅとしてもまた公知）
およびＥ２（Ｅ２／ＮＳ１としてもまた公知）およびＮ−末端ヌクレオカプシド
タンパク質（「コア」と呼ばれる）を含むいくつかのウイルスタンパク質をコー
ドする（Ｅ１およびＥ２を含むＨＣＶタンパク質の論議は、Ｈｏｕｇｈｔｏｎら
、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ（１９９１）１４：３８１〜３８８を参照のこと）。こ
れらタンパク質の各々、およびその抗原性フラグメントは、本発明の組成物およ
び方法において使用を見出し得る。

【００６３】同様に、ＨＤＶ由来のδ抗原の配列は公知であり（例えば、米国特許第５，３
７８，８１４号を参照のこと）、そしてこの抗原はまた、本発明の組成物および
方法において好都合に使用され得る。さらに、ＨＢＶ由来の抗原（例えば、コア
抗原、表面抗原、ｓＡｇ、およびプレ表面配列（ｐｒｅ−Ｓ１およびｐｒｅ−Ｓ
２（以前はｐｒｅ−Ｓと呼ばれた）、ならびに上記の組み合わせ（例えば、ｓＡ
ｇ／ｐｒｅ−Ｓ１、ｓＡｇ／ｐｒｅ−Ｓ２、ｓＡｇ／ｐｒｅ−Ｓ１／ｐｒｅ−Ｓ
２、およびｐｒｅ−Ｓ１／ｐｒｅ−Ｓ２）は、本明細書中で用途を見出す。例え
ば、「ＨＢＶＶａｃｃｉｎｅｓ−ｆｒｏｍｔｈｅｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
ｔｏｌｉｃｅｎｃｅ：ａｃａｓｅｓｔｕｄｙ」、Ｍａｃｋｅｔｔ、Ｍ．
およびＷｉｌｌｉａｍｓｏｎ、Ｊ．Ｄ．、ＨｕｍａｎＶａｃｃｉｎｅｓａｎ
ｄＶａｃｃｉｎａｔｉｏｎ、１５９〜１７６頁、ＨＢＶ構造の考察について；
米国特許第４，７２２，８４０号、第５，０９８，７０４号、第５，３２４，５
１３号（その全体が参考として本明細書中に援用される）；Ｂｅａｍｅｓら、Ｊ
．Ｖｉｒｏｌ．（１９９５）６９：６８３３−６８３８、Ｂｉｒｎｂａｕｍら、
Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（１９９０）６４：３３１９−３３３０；およびＺｈｏｕら、
Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（１９９１）６５：５４５７−５４６４を参照のこと。

【００６４】他のウイルス由来の抗原もまた、本願発明の組成物および方法における用途を
見出す。このような抗原としては、限定なく、とりわけ以下の科のウイルスのメ
ンバー由来のタンパク質が挙げられる：ピコルナウイルス科（例えば、ポリオウ
イルスなど）；カルシウイルス科；トガウイルス科（例えば、風疹ウイルス、デ
ングウイルスなど）；フラビウイルス科；コロナウイルス科；レオウイルス科；
ビルナウイルス科；ラボドウイルス科（Ｒｈａｂｏｄｏｖｉｒｉｄａｅ）（例え
ば、狂犬病ウイルスなど）；フィロウイルス科；パラミクソウイルス科（例えば
、流行性耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、ＲＳウイルス（ｒｅｓｐｒａｔｏｒ
ｙｓｙｎｃｙｔｉａｌｖｉｒｕｓ）など）；オルトミクソウイルス科（例え
ば、インフルエンザウイルスＡ型、Ｂ型、Ｃ型など）；ブンヤウイルス科；アレ
ナウイルス科；レトロウイルス科（例えば、ＨＴＬＶ−Ｉ；ＨＴＬＶ−ＩＩ；Ｈ
ＩＶ−Ｉ（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶ、ＡＲＶ、ｈＴＬＲなどとしても知られる
）であり、分離株ＨＩＶ_IIIb、ＨＩＶ_SF2、ＨＩＶ_LAV、ＨＩＶ_LAI、ＨＩＶ_MN由
来の抗原を含むが、これらに限定されない）；ＨＩＶ−１_CM235、ＨＩＶ−１_US4 ；ＨＩＶ−２；シミアン免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）。さらに、抗原はまた、ヒ
トパピローマウイルス（ＨＰＶ）、およびダニ媒介脳炎ウイルス由来であり得る
。これらおよび他のウイルスの説明については、例えば、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、第
３版（Ｗ．Ｋ．Ｊｏｋｌｉｋ編、１９８８）；ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＶｉｒ
ｏｌｏｇｙ、第２版（Ｂ．Ｎ．ＦｉｅｌｄｓおよびＤ．Ｍ．Ｋｎｉｐｅ編、１９
９１）を参照のこと。

【００６５】より詳細には、上記のＨＩＶ分離株（ＨＩＶの種々の遺伝子サブタイプのメン
バーを含む）のいずれかに由来のｇｐ１２０エンベロープタンパク質が公知であ
り、そして報告され（例えば、Ｍｙｅｓら、ＬｏｓＡｌａｍｏｓＤａｔａｂ
ａｓｅ、ＬｏｓＡｌａｍｏｓＮａｔｉｏｎａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｌ
ｏｓＡｌａｍｏｓ、ＮｅｗＭｅｘｉｃｏ（１９９２）；Ｍｙｅｒｓら、Ｈｕ
ｍａｎＲｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓａｎｄＡｉｄｓ、１９９０、ＬｏｓＡ
ｌａｍｏｓ、ＮｅｗＭｅｘｉｃｏ：ＬｏｓＡｌａｍｏｓＮａｔｉｏｎａｌ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ；およびＭｏｄｒｏｗら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（１９８７
）６１：５７０−５７８を参照のこと（種々のＨＩＶ分離株のエンベロープ配列
の比較について））、そしてこれらの分離株のいずれかに由来の抗原は、本方法
において用途を見出す。さらに、本発明は、種々のＨＩＶ分離株のいずれかに由
来の他の免疫原性タンパク質（種々のエンベロープタンパク質（例えば、ｇｐ１
６０およびｇｐ４１）、ｇａｇ抗原（例えば、ｐ２４ｇａｇおよびｐ５５ｇａｇ
）、ならびにｐｏｌ領域由来のタンパク質を含む）に等しく適用し得る。

【００６６】インフルエンザウイルスは、本発明が特に有用であるウイルスの別の例である
。詳細には、エンベロープ糖タンパク質であるインフルエンザＡのＨＡおよびＮ
Ａは、免疫応答を生成するために特に関心が高い。インフルエンザＡの多数のＨ
Ａサブタイプは、同定されている（Ｋａｗａｏｋａら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（１９
９０）１７９：７５９−７６７；Ｗｅｂｓｔｅｒら「Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｖａ
ｒｉａｔｉｏｎａｍｏｎｇｔｙｐｅＡｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ
ｅｓ」１２７〜１６８頁、Ｐ．ＰａｌｅｓｅおよびＤ．Ｗ．Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙ
（編）、Ｇｅｎｅｔｉｃｓｏｆｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｅｓ．Ｓｐ
ｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、ＮｅｗＹｏｒｋ）。従って、これらの分離株の
いずれかに由来のタンパク質もまた、本明細書中に記載の組成物および方法にお
いて使用され得る。

【００６７】本明細書中に記載の組成物および方法はまた、種々の細菌抗原（例えば、ジフ
テリア、コレラ、結核、破傷風、百日咳、脳髄膜、および他の病原状態を引き起
こす生物（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ
ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｙ）、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｇｏｎｏ
ｒｒｈｏｅａｅ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ、およびＨａｅｍｏ
ｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎ
ｚａＢ型（ＨＩＢ）、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ、およびそれ
らの組み合わせを含むが、これらに限定されない）に由来の抗原）を伴う用途を
見出す。ＮｅｉｓｓｅｒｉａｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓＢ由来の抗原の例は
、以下の共同所有する特許出願に開示される：ＰＣＴ／ＵＳ９９／０９３４６；
ＰＣＴＩＢ９８／０１６５５；ＰＣＴＩＢ９９／００１０３；および米国仮
特許出願第６０／０８３，７５３号；第６０／０９４，８６９号；第６０／０９
８，９９４号；第６０／１０３，７４９号；第６０／１０３，７９４号；第６０
／１０３，７９６号；および第６０／１２１，５２８号。寄生生物抗原の例は、
マラリア病およびライム病を引き起こす生物に由来する抗原を包含する。

【００６８】本発明は、広範な種々の高分子を送達するために、従って多数の疾患の処置、
予防、および／または診断するために使用され得ることが、容易に明らかである
。別の実施態様では、本発明の高分子／微小粒子組成物は、部位特異的標的化送
達のために使用され得る。例えば、高分子／微小粒子組成物の静脈投与は、肺、
肝臓、脾臓、血液循環、または骨髄を標的化するために使用され得る。

【００６９】吸着微小粒子の表面への高分子の吸着は、任意の結合−相互作用機構を介して
生じる。このような機構としては、イオン結合、水素結合、共有結合、ファンデ
ルワールス結合、および親水性／疎水性相互作用を介する結合を包含するが、こ
れらに限定されない。当業者は、吸着される高分子のタイプに適切な界面活性剤
を容易に選択し得る。

【００７０】例えば、荷電された界面活性剤（例えば、アニオン性界面活性剤またはカチオ
ン性界面活性剤）の存在下で製造された微小粒子は、正味の負電荷または正味の
正電荷を有する表面を有する微小粒子を生じ得る。この微小粒子は、広範な種々
の分子を吸着し得る。例えば、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）のようなアニ
オン性界面活性剤を用いて製造された微小粒子（すなわち、ＳＤＳ−ＰＬＧ微小
粒子）は、正に荷電された抗原（例えば、タンパク質）を吸着する。同様に、ヘ
キサデシルトリメチルアンモニウムブロミド（ＣＴＡＢ）のようなカチオン性界
面活性剤を用いて製造された微小粒子（すなわち、ＣＴＡＢ−ＰＬＧ微小粒子）
は、負に荷電された高分子（例えば、ＤＮＡ）を吸着する。吸着される高分子が
正電荷および負電荷の領域を有する場合、カチオン性界面活性剤またはアニオン
性界面活性剤のいずれかが適切であり得る。

【００７１】本発明と共に使用するための微小粒子を製造するための生分解性ポリマーは、
例えば、ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＩｎｇｅｌｈｅｉｍ、ＧｅｒｍａｎｙおよびＢ
ｉｒｍｉｎｇｈａｍＰｏｌｙｍｅｒｓ，Ｉｎｃ．、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、Ａ
Ｌ．から容易に商業的に入手可能である。例えば、本明細書中の微小粒子を形成
するために有用なポリマーは、ポリヒドロキシ酪酸；ポリカプロラクトン；ポリ
オルトエステル；ポリ無水物；ならびにポリ（α−ヒドロキシ酸）（例えば、ポ
リ（Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）（ともに、本明細書中で「ＰＬ
Ａ」として知られる）、ポリ（ヒドロキシブチレート）、Ｄ，Ｌ−ラクチドおよ
びグリコリドのコポリマー（例えば、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリ
ド）（本明細書中では「ＰＬＧ」または「ＰＬＧＡ」と称される）、またはＤ，
Ｌ−ラクチドおよびカプロラクトンのコポリマーに由来のポリマーを包含する。
本明細書中の使用のための特に好ましいポリマーは、ＰＬＡおよびＰＬＧポリマ
ーである。これらのポリマーは、種々の分子量で利用可能であり、そして所定の
用途のための適切な分子量は、当業者によって容易に決定される。従って、例え
ば、ＰＬＡについては、適切な分子量は、約２０００〜５０００の桁であり得る
。ＰＬＧについては、適切な分子量は、一般に、約１０，０００〜約２００，０
００の範囲であり、好ましくは約１５，０００〜約１５０，０００、そして最も
好ましくは約５０，０００〜約１００，０００である。

【００７２】ＰＬＧのようなコポリマーを用いて微小粒子を形成する場合、種々のラクチド
：グリコリド比が本明細書中で用途を見出し、そしてこの比は大いに設計事項で
あり、同時投与される高分子、および所望の分解率に一部依存する。例えば、５
０：５０ＰＬＧポリマー（５０％Ｄ，Ｌ−ラクチドおよび５０％グリコリドを含
む）は、迅速に再吸収するコポリマーを提供するが、一方、７５：２５ＰＬＧ
は、より緩慢に分解し、そして８５：１５および９０：１０ではさらにより緩慢
である。これは、ラクチド成分の増加に起因する。ラクチド：グリコリドの適切
な比は、問題の抗原および障害の性質に基づいて当業者によって容易に決定され
ることが、容易に明らかである。さらに、種々のラクチド：グリコリド比を伴う
微小粒子の混合物が、所定の高分子について所望の放出速度論を達成するため、
および一次免疫応答および二次免疫応答の両方を提供するために、本明細書中で
用途を見出す。本発明の微小粒子の分解率はまた、ポリマー分子量およびポリマ
ー結晶性のような要因によって制御され得る。種々のラクチド：グリコリド比お
よび分子量を伴うＰＬＧコポリマーは、多数の供給源から商業的に容易に入手可
能である。このような供給源としては、ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＩｎｇｅｌｈｅ
ｉｍ、ＧｅｒｍａｎｙおよびＢｉｒｍｉｎｇｈａｍＰｏｌｙｍｅｒｓ、Ｉｎｃ
．、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬが挙げられる。これらのポリマーはまた、当該
分野で周知の技術（例えば、Ｔａｂａｔａら、Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．
Ｒｅｓ．（１９８８）２２：８３７−８５８に記載の技術）を用いて、乳酸成分
の単純な縮合によって合成され得る。

【００７３】高分子／微小粒子は、当該分野で周知のいくつかの方法のいずれかを用いて調
製される。例えば、二重エマルジョン／溶媒エバポレーション技術（例えば、米
国特許第３，５２３，９０７号およびＯｇａｗａら、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂ
ｕｌｌ．（１９８８）３６：１０９５−１１０３に記載の技術）が、この微小粒
子を作製するために本明細書中で使用され得る。これらの技術は、ポリマー溶液
の小滴からなる一次エマルジョンの形成を包含する。これは、続いて、粒子安定
剤／界面活性剤を含む連続した水相と混合される。

【００７４】あるいは、水中油中水（ｗ／ｏ／ｗ）溶媒エバポレーションシステムは、Ｏ’
Ｈａｇａｎら、Ｖａｃｃｉｎｅ（１９９３）１１：９６５−９６９およびＪｅｆ
ｆｅｒｙら、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．（１９９３）１０：３６２により記載のよう
に微小粒子を形成するために使用され得る。本技術において、特定のポリマーは
、有機溶媒（例えば、酢酸エチル、塩化ジメチル（塩化メチレンおよびジクロロ
メタンとも呼ばれる）、アセトニトリル、アセトン、クロロホルムなど）と組み
合わされる。ポリマーは、有機溶媒中、約１〜３０％溶液、好ましくは約２〜１
５％、より好ましくは約３〜１０％、および最も好ましくは約４％溶液中に提供
される。このポリマー溶液が、例えば、ホモジナイザーを用いて乳化される。必
要に応じて、次いで、エマルジョンが、大量のエマルジョン安定剤（例えば、ポ
リビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン、およびカチオン性界面
活性剤、アニオン性界面活性剤、または非イオン性界面活性剤）の水溶液と組み
合わされる。エマルジョンは、１つより多くのエマルジョン安定剤および／また
は界面活性剤と組み合わされ得る（例えば、ＰＶＡおよび界面活性剤の組み合わ
せ）。特定の高分子は、安定剤および／または界面活性剤の組み合わせを有する
微小粒子に、より容易に吸着し得る。エマルジョン安定剤が使用される場合、代
表的には約２〜１５％溶液、より代表的には約４〜１０％溶液で提供される。一
般に、約０．００００１：１から約０．１：１の範囲の界面活性剤：ポリマー重
量比が使用され、より好ましくは、約０．０００１：１から約０．０１：１、よ
り好ましくは約０．００１：１から約０．０１：１、およびさらにより好ましく
は約０．００５：１から約０．０１：１である。次いで、混合物はホモジナイズ
されて、安定なｗ／ｏ／ｗ二重エマルジョンを生成する。有機溶媒は、次いでエ
バポレートされる。

【００７５】処方パラメーターは、０．０５μｍ（５０ｎｍ）の桁の小さな微小粒子から５
０μｍまたはさらに大きいより大きな微小粒子の調製を可能にするように操作さ
れ得る。例えば、Ｊｅｆｆｅｒｙら、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．（１９９３）１０：
３６２−３６８；ＭｃＧｅｅら、Ｊ．Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐ．（１９９６）を参
照のこと。例えば、攪拌の減少は、内部相の体積の増大につれて、より大きな微
小粒子を生じる。小さな粒子は、高い濃度のエマルジョン安定剤を有する低い水
性相体積により生成される。

【００７６】微小粒子はまた、噴霧乾燥およびコアセルベーション（例えば、Ｔｈｏｍａｓ
ｉｎら、Ｊ．ＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＲｅｌｅａｓｅ（１９９６）４１：１３１
；米国特許第２，８００，４５７号；Ｍａｓｔｅｒｓ、Ｋ．（１９７６）Ｓｐｒ
ａｙＤｒｙｉｎｇ、第２版、Ｗｉｌｅｙ、ＮｅｗＹｏｒｋに記載のような）
；空気懸濁コーティング技術（例えば、パンコーティングおよびＷｕｒｓｔｅｒ
コーティング）（Ｈａｌｌら（１９８０）Ｔｈｅ「ＷｕｒｓｔｅｒＰｒｏｃｅ
ｓｓ」、ＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＲｅｌｅａｓｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ：
Ｍｅｔｈｏｄｓ、Ｔｈｅｏｒｙ、ａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ａ．Ｆ．
Ｋｙｄｏｎｉｅｕｓ編）、Ｖｏｌ．２、１３３〜１５４頁、ＣＲＣＰｒｅｓｓ
、ＢｏｃａＲａｔｏｎ、ＦｌｏｒｉｄａおよびＤｅａｓｙ、Ｐ．Ｂ．、Ｃｒｉ
ｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．ＤｒｕｇＣａｒｒｉｅｒＳｙｓｔ．（１９８８）Ｓ
（２）：９９−１３９に記載のような）；およびイオンゲル化（例えば、Ｌｉｍ
ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８０）２１０：９０８−９１０により記載のような
）を用いて形成される。

【００７７】粒子サイズは、例えば、レーザー光散乱によって、例えば、ヘリウム−ネオン
レーザーを取り込むスペクトロメーターを用いて、決定され得る。一般には、粒
子サイズは室温で決定され、そして粒子直径についての平均値を得るための問題
のサンプルの複数回分析（例えば、５〜１０回）を包含する。粒子サイズはまた
、走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）を用いて容易に決定される。

【００７８】調製後、微小粒子は、そのままで貯蔵され得るか、または将来の使用のために
凍結乾燥され得る。高分子を微小粒子に吸着するために、微小粒子調製物は、目
的の高分子と単に混合され、そして得られた処方物は、使用する前に再度凍結乾
燥され得る。一般に、高分子が微小粒子に添加されて、約０．０００１：１から
約０．２５：１、好ましくは、約０．００１：１から０．１、より好ましくは約
０．０１から０．０５の高分子：微小粒子の重量比を有する吸着された高分子を
有する微小粒子を生成する。微小粒子の高分子含量は、標準的な技術を使用して
容易に決定され得る。

【００７９】本発明の微小粒子は、その上に吸着された高分子を有すると同様に、その中に
包括されたまたはカプセル化された高分子を有する。従って、例えば、当業者は
、本発明に従って、その上に吸着されたタンパク質を伴うカプセル化されたアジ
ュバントを有する微小粒子、またはその上に吸着されたアジュバントを有するカ
プセル化されたタンパク質を有する微小粒子を調製し得る。

【００８０】高分子で吸着された微小粒子が一旦生成されると、それらは、上記のように、
広範な種々の障害を処置、予防、および／または診断するために、薬学的組成物
またはワクチンに処方される。組成物は、一般に、１つ以上の「薬学的に受容可
能な賦型剤またはビヒクル」（例えば、水、生理食塩水、グリセロール、ポリエ
チレングリコール、ヒアルロン酸、エタノールなど）を包含する。さらに、付属
物質（例えば、湿潤剤または乳化剤、生物学的緩衝物質など）は、このようなビ
ヒクル中に存在し得る。生物学的緩衝液は、事実上、薬学的に受容可能であり、
そして所望のｐＨ（すなわち、生理学的範囲のｐＨ）を有する処方物を提供する
任意の溶液であり得る。緩衝溶液の例としては、生理食塩水、リン酸緩衝生理食
塩水、Ｔｒｉｓ緩衝化生理食塩水、ハンクス緩衝化生理食塩水などが挙げられる
。

【００８１】アジュバントは、薬学的組成物の有効性を増強するために使用され得る。アジ
ュバントは、本発明の微小粒子と同時に、例えば、同じ組成物中でまたは別個の
組成物中で、投与され得る。あるいは、アジュバントは、本発明の微小粒子組成
物の前にまたは引き続いて投与され得る。別の実施態様では、そのアジュバント
（例えば、免疫学的アジュバント）は、微小粒子中にカプセル化され得る。アジ
ュバント（例えば、任意の高分子）は、当該分野で公知のいくつかの方法のいず
れかを使用して、微小粒子内でカプセル化され得る。例えば、米国特許第３，５
２３，９０７号；Ｏｇａｗａら、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．（１９８８
）３６：１０９５−１１０３；Ｏ’Ｈａｇａｎら、Ｖａｃｃｉｎｅ（１９９３）
１１：９６５−９６９およびＪｅｆｆｅｒｙら、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．（１９９
３）１０：３６２を参照のこと。あるいは、アジュバントは、任意の高分子につ
いて上述したように微小粒子上で吸着され得る。

【００８２】免疫学的アジュバントとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない
：（１）アルミニウム塩（ミョウバン）（例えば、水酸化アルミニウム、リン酸
アルミニウム、硫酸アルミニウムなど）；（２）水中油エマルジョン処方物（他
の特定の免疫刺激剤（例えば、ムラミルペプチド（以下を参照のこと）または細
菌細胞壁成分）を有するまたは有さない）、（例えば、（ａ）ＭＦ５９（国際公
開番号ＷＯ９０／１４８３７）、５％スクアラン（Ｓｑｕａｌｅｎｅ）、０．５
％Ｔｗｅｅｎ８０、０．５％Ｓｐａｎ８５（種々の量のＭＴＰ−ＰＥ（以下を参
照のこと）を必要に応じて含むが、これらは特に必要とされない）（Ｍｏｄｅｌ
１１０Ｙマイクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ、Ｎｅｗｔｏ
ｎ、ＭＡ）のようなマイクロフルイダイザーを使用するサブミクロン粒子に処方
される）、（ｂ）ＳＡＦ（１０％スクアラン（Ｓｑｕａｌａｎｅ）、０．４％Ｔ
ｗｅｅｎ８０、５％プルロニックブロックポリマーＬ１２１、およびｔｈｒ−Ｍ
ＤＰ（以下を参照のこと）（サブミクロンエマルジョンにマイクロフルイダイズ
化されるか、またはボルテックスされるかのいずれかで、より大きな粒子サイズ
のエマルジョンを生成する）、および（ｃ）Ｒｉｂｉ^TMアジュバントシステム（
ＲＡＳ）（ＲｉｂｉＩｍｍｕｎｏｃｈｅｍ、Ｈａｍｉｌｔｏｎ、ＭＴ）（２％
スクアラン（Ｓｑｕａｌｅｎｅ）、０．２％Ｔｗｅｅｎ８０、およびモノホスホ
リピドＡ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格
（ＣＷＳ）からなる群からの１つ以上の細菌細胞壁成分、好ましくは、ＭＰＬ＋
ＣＷＳ（Ｄｅｔｏｘ^TM）（本明細書中で使用するための適切なサブミクロン水中
油エマルジョンについてのさらなる考察について、共同所有する米国特許出願第
０９／０１５，７３６号（１９９８年１月２９日出願）を参照のこと）；（３）
サポニンアジュバント（例えば、ＱＳ２１（例えば、Ｓｔｉｍｕｌｏｎ^TM（Ｃａ
ｍｂｒｉｄｇｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ、ＭＡ））が使用
され得るか、またはそれから生成され得る粒子（例えば、ＩＳＣＯＭ（免疫刺激
複合体））；（４）フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）およびフロイント不
完全アジュバント（ＩＦＡ）；（５）サイトカイン（例えば、インターロイキン
（ＩＬ−１、Ｉｌ−２など）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）
、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、など；（６）細菌ＡＤＰリボシル化毒素（例えば、
コレラ毒素（ＣＴ）、百日咳毒素（ＰＴ）、またはＥ．ｃｏｌｉ熱不安定毒素（
ＬＴ））の解毒変異体（特に、ＬＴ−Ｋ６３（６３位の野生型アミノ酸がリジン
に置換されている）、ＬＴ−Ｒ７２（７２位の野生型アミノ酸がアルギニンに置
換されている）、ＣＴ−Ｓ１０９（１０９位の野生型アミノ酸がセリンに置換さ
れている）、およびＰＴ−Ｋ９／Ｇ１２９（９位の野生型アミノ酸がリジンに、
そして１２９位の野生型アミノ酸がグリシンに置換されている）（例えば、国際
公開ＷＯ９３／１３２０２およびＷＯ９２／１９２６５を参照のこと）；（７）
ＣｐＧオリゴヌクレオチドおよび他の免疫刺激配列（ＩＳＳ）；ならびに（８）
組成物の有効性を増強するために免疫刺激剤として作用する他の物質。ミョウバ
ンおよびＭＦ５９が好ましい。

【００８３】ムラミルペプチドとしては、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−
イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニ
ル−Ｄ−イソグルタミン（ｉｓｏｇｌｕａｔｍｅ）（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−ア
セチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（
１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキ
シ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）などが挙げられるが、これらに限定されな
い。

【００８４】アジュバントのさらなる例のために、ＶａｃｃｉｎｅＤｅｓｉｇｎ，Ｔｈｅ
ＳｕｂｕｎｉｔａｎｄｔｈｅＡｄｊｕｖａｎｔＡｐｐｒｏａｃｈ、Ｐ
ｏｗｅｌｌ、Ｍ．Ｆ．およびＮｅｗｍａｎ、Ｍ．Ｊ．編、ＰｌｅｎｕｍＰｒｅ
ｓｓ、１９９５を参照のこと）。

【００８５】この組成物は、目的の高分子の「治療上有効な量」を含む。すなわち、症状を
予防、減弱、排除または診断するために、被験体に十分な応答を生じさせる量の
高分子／微小粒子がこの組成物に含まれる。正確な量は、以下に依存して必然的
に変化する：（他にも因子はあるが）、処置される被験体；処置される被験体の
年齢および全身状態；処置される状態の重篤度；免疫学的応答の場合には、被験
体の免疫系が抗体を合成する能力；所望されるタンパク質の程度および選択され
る特定の抗原ならびにその投与の形態。適切な有効量は、当業者により容易に決
定され得る。従って、「治療上有効な量」は、慣用的なトライアルを通して決定
され得る比較的広範な範囲におさまる。たとえば、本発明の目的のためには、高
分子がポリヌクレオチドである場合、有効用量は、代表的に１用量あたり送達さ
れる高分子の約１ｎｇ〜約１ｍｇ、より好ましくは約１０ｎｇ〜約１μｇ、そし
て最も好ましくは約５０ｎｇ〜約５００ｎｇの範囲であり；高分子が抗原である
場合は、代表的に１用量あたり送達される高分子の約１μｇ〜約１００ｍｇ、よ
り好ましくは約１０μｇ〜約１ｍｇ、そして最も好ましくは約５０μｇ〜約５０
０μｇの範囲である。

【００８６】一旦処方されれば、本発明の組成物は、非経口的に、例えば、注射により投与
され得る。この組成物は、皮下に、腹腔内に、静脈内に、または筋肉内にのいず
れかで注射され得る。投与の他の形態としては、経鼻投与、経口投与および肺投
与、坐剤、ならびに経皮適用（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌまたはｔｒａｎｓｃｕｔ
ａｎｅｏｕｓ）が挙げられる。投薬処置は、単回用量スケジュールまたは複数用
量スケジュールであってもよい。複数用量スケジュールは、投与の初回の経過が
、治療応答を維持および／または増強するように選択された、１〜１０の別個の
用量、その後引き続く時間間隔で与えられる他の用量、例えば、第２の用量につ
いては１〜４ヶ月、そして必要であれば数ヶ月後の引き続く用量を伴い得るスケ
ジュールである。この投薬レジメンはまた、少なくとも一部は、被験体の必要性
により決定され、そして医師の判定に依存する。

【００８７】さらに、疾患の防御が所望される場合、目的の病原での初回感染の前にワクチ
ン中の高分子が一般的に投与される。処置（例えば、症状または再発の減少）が
所望される場合、高分子は、一般に初回感染に続いて投与される。

【００８８】（Ｃ．実験）以下は、本発明を実行するための特定の実施態様の実施例である。本実施例は
、例示の目的のためにのみ提供されるものであり、そしていかなる手段でも本発
明の範囲を限定することは意図しない。

【００８９】用いる数値（例えば、量、温度など）について精度を保証する努力がなされて
いるが、当然ながらある程度の実験誤差および偏差は許容されるべきである。

【００９０】（実施例１）（エマルジョン安定剤としてＰＶＡを用いるブランク微小粒子の調製）ブランク微小粒子（例えば、高分子を吸着または包括しない）を以下のように
ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）を用いて作製した。用いた溶液は以下である：（１）ジクロロメタン中の６％ＲＧ５０４ＰＬＧ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ
Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）（２）水中の１０％ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）（ＩＣＮ）。

【００９１】詳細には、１０ｍｌのポリマー溶液と１．０ｍｌの蒸留水を組み合わせること
、および１０ｍｍのプローブでのＯｍｎｉベンチトップホモジナイザーを１０Ｋ
ｒｐｍで３分間用いてホモジナイズすることにより、水／油（ｗ／ｏ）エマル
ジョンを形成し、微小粒子を作製した。このｗ／ｏエマルジョンを４０ｍｌの１
０％ＰＶＡ溶液に添加し、そして３分間ホモジナイズして、水／油／水（ｗ／ｏ
／ｗ）エマルジョンを形成した。このｗ／ｏ／ｗエマルジョンを溶媒エバポレー
ションのために一晩撹拌し続け、微小粒子を形成した。形成した微小粒子を４回
遠心分離することで水で洗浄し、そして凍結乾燥した。次いで、この微小粒子を
、後の使用のためにＭａｌｖｅｒｎＭａｓｔｅｒ整粒器中でサイズ選別した。

【００９２】（実施例２）（ＣＴＡＢを用いるブランク微小粒子の調製）ブランク微小粒子を以下のようにＣＴＡＢを用いて生成した。用いた溶液は以
下である：（１）ジメチルクロライド中の４％ＲＧ５０４ＰＬＧ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅ
ｒＩｎｇｅｌｈｅｉｍ）（２）水中の０．５％ＣＴＡＢ（ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．，Ｓｔ
．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。

【００９３】詳細には、１２．５ｍｌのポリマー溶液と１．２５ｍｌの蒸留水を合わせるこ
と、および１０ｍｍのプローブを備えるＯｍｎｉベンチトップホモジナイザーを
１０Ｋｒｐｍで３分間用いてホモジナイズして、ｗ／ｏエマルジョンを形成す
ることにより、微小粒子を作製した。このｗ／ｏエマルジョンを５０ｍｌの０．
５％ＣＴＡＢ溶液に添加し、そして３分間ホモジナイズし、水／油／水（ｗ／ｏ
／ｗ）エマルジョンを形成した。このｗ／ｏ／ｗエマルジョンを溶媒エバポレー
ションのために一晩撹拌し続け、微小粒子を形成した。次いで、形成した微小粒
子を３８μメッシュを通して濾過し、４回遠心分離することで水で洗浄し、そし
て凍結乾燥した。次いで、この微小粒子を、後の使用のためにＭａｌｖｅｒｎ
Ｍａｓｔｅｒ整粒器中でサイズ選別した。

【００９４】（実施例３）（ＳＤＳを用いるブランク微小粒子の調製）ブランク微小粒子を以下のようにＳＤＳを用いて生成した。用いた溶液は以下
である：（１）ジメチルクロライド中の６％ＲＧ５０４ＰＬＧ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅ
ｒＩｎｇｅｌｈｅｉｍ）（２）水中の１％ＳＤＳ（ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．，Ｓｔ．Ｌｏ
ｕｉｓ，ＭＯ）。

【００９５】詳細には、１２．５ｍｌのポリマー溶液と５０ｍｌのＳＤＳ溶液を合わせるこ
と、および１０ｍｍのプローブを備えるＯｍｎｉベンチトップホモジナイザーを
１０Ｋｒｐｍで３分間用いてホモジナイズすることにより、この微小粒子を作
製した。このエマルジョンを溶媒エバポレーションのために一晩撹拌し続けた。
形成した微小粒子を３８μメッシュを通して濾過し、４回遠心分離することで水
で洗浄し、そして後の使用のために凍結乾燥した。次いで、この微小粒子を、後
の使用のためにＭａｌｖｅｒｎＭａｓｔｅｒ整粒器中でサイズ選別した。

【００９６】（実施例４）（ブランク微小粒子へのタンパク質の吸着）以下のように、微小粒子にタンパク質を吸着させた。

【００９７】（Ａ．ｐ５５ｇａｇの１％および３％の理論的負荷）１％および３％の理論的負荷を獲得するために、実施例３で生成した５０ｍｇ
の凍結乾燥したブランクＳＤＳ／ＰＬＧ微小粒子をＮａｌｇｅｎｅ遠心分離管に
入れ、そしてｐ５５ｇａｇタンパク質（ＣｈｉｒｏｎＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ
，Ｂｅｒｋｅｌｅｙ，ＣＡ）を含有する６Ｍ尿素を有する、１０ｍｌの２５ｍＭ
ホウ酸緩衝液、ｐＨ９を添加した：（ａ）１％理論負荷のために、１０ｍｌの５
０μｇ／ｍｌｐ５５ｇａｇ溶液を用いた；そして（ｂ）３％理論負荷のために
、１０ｍｌの１５０μｇ／ｍｌｐ５５ｇａｇ溶液を用いた。この溶液を室温で
一晩振盪しながらインキュベートした。翌日、この微小粒子を遠心分離し、そし
て上清を、ビシンコニン（ｂｉｃｉｎｃｈｏｎｉｎｉｃ）アッセイ（ＢＣＡ；Ｐ
ｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）によりｇａｇ濃度についてアッセイして
、吸着した量を決定した。この微小粒子を１０ｍｌのホウ酸／６Ｍ尿素緩衝液で
２回、そして３０ｍｌの水で２回洗浄し、そして後の使用のために凍結乾燥した
。

【００９８】（Ｂ．ＨＣＶコア抗原の１％理論負荷）１％理論負荷を獲得するために、５０ｍｇの凍結乾燥ブランクＳＤＳ／ＰＬＧ
微小粒子をＮａｌｇｅｎｅ遠心分離管に入れ、そしてモノマー性ＨＣＶコアタン
パク質（１０ｍｌの５０μｇ／ｍｌＨＣＶコアタンパク質溶液；Ｃｈｉｒｏｎ
Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｂｅｒｋｅｌｅｙ，ＣＡ）を含有する６Ｍ尿素を有す
る、１０ｍｌの３０ｍＭクエン酸緩衝液、ｐＨ６．５を添加した。この混合物を
室温で一晩振盪しながらインキュベートした。翌日、この微小粒子を遠心分離し
、そして上清を、ビシンコニンアッセイ（ＢＣＡ；Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏ
ｒｄ，ＩＬ）によりＨＣＶ濃度についてアッセイし、吸着した量を決定した。こ
の微小粒子を３０ｍｌのクエン酸／６Ｍ尿素緩衝液で２回、そして３０ｍｌの水
で２回洗浄し、そして後の使用のために凍結乾燥した。

【００９９】（実施例５）（微小粒子の吸着効率）実施例４からの吸着したタンパク質と凍結乾燥された微小粒子を、以下のよう
に塩基加水分解を用いて総吸着タンパク質について分析した。１０ｍｇの凍結乾
燥した吸着粒子を５％ＳＤＳを有する２ｍｌ０．２ＮＮａＯＨ中で４時間、
加水分解し、中和し、そして１：１０に希釈し、そしてＭｉｃｒｏＢＣＡタンパ
ク質アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を用いてタンパク質含
量について分析した。表１に示すように、ＣＴＡＢおよびＳＤＳのような界面活
性剤で調製した改変された表面を有する微小粒子は、両方とも、ＰＶＡのみを用
いて作製した微小粒子よりもより効率的にタンパク質を吸着した。

【０１００】

【表１】（実施例６）（Ａ．ｇａｇ吸着微小粒子の免疫原性）実施例４に記載のように、ＰＶＡまたはＳＤＳを用いて生成したｇａｇ吸着微
小粒子ならびにｐ５５ｇａｇ単独を、関連する微小粒子（陰性コントロールとし
て）およびワクシニアｇａｇ−ｐｏｌコントロール（陽性コントロールとして）
を伴わずに、マウスに筋肉内投与した。この動物を７日および１４日でブースト
（追加免疫）した。投与した総用量を表２および３に示す。最終免疫後２週間で
脾臓を収集し、そしてＤｏｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１
９９６）９３：８５７８〜８５８３に記載のようにＣＴＬ活性をアッセイした。

【０１０１】リンパ球培養物を以下のように調製した。免疫マウスからの脾臓細胞（ｓｃ）
を１ウェルあたり５×１０⁶細胞で２４ウェルシャーレ中で培養した。これらの
細胞のうち、１×１０⁶を、合成エピトープペプチド形態ＨＩＶ−１_SF2タンパク
質で１０μＭの濃度で３７℃で１時間、感作させ、洗浄し、そして残りの４×１
０⁶の未処置のｓｃとともに、熱非働化ウシ胎仔血清、５×１０^-5Ｍ２−メルカ
プトエタノール、抗生物質および５％インターロイキン２（ＲａｔＴ−Ｓｔｉ
ｍ，ＣｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＰｒｏｄｕｃｔｓ，
Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）を補充した２ｍｌの培養培地［５０％ＲＰＭＩ１６４
０および５０％α−ＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ）］中で、同時培養した。３日目およ
び５日目に１ｍｌの新鮮培養培地を細胞に供給し、そして６日目に細胞傷害性を
アッセイした。

【０１０２】細胞傷害性細胞アッセイを以下のように実施した。⁵¹ＣＶ放出アッセイにおい
て用いたＳｖＢＡＬＢ（Ｈ−２^d）（ＳｖＢ）標識細胞およびＭＣ５７（Ｈ−２^b ）標的細胞は、クラスＩＭＨＣ分子を発現するがクラスＩＩＭＨＣ分子は発現し
ない。約１×１０⁶の標的細胞を５０μＣｉ（１Ｃｉ＝３７Ｇｂｑ）の⁵¹Ｃｒお
よび合成ＨＩＶ−１ペプチド（１ｍＭ）を含有する２００μｌの培地中で６０分
間インキュベートし、そして３回洗浄した。エフェクター（Ｅ）細胞を、９６ウ
ェル丸底組織培養プレート中で、５×１０³標的（Ｔ）細胞とともに種々のＥ／
Ｔ比で、２００μｌの培養培地中で、４時間培養した。二連のウェルからの平均
ｃｐｍを用いて⁵¹Ｃｒ解離の特異比を算出した。

【０１０３】表２および３に示すように、ＳＤＳ−ＰＬＧ／ｐ５５微小粒子は、ワクシニア
コントロールに匹敵する活性を有し、そしてＰＶＡ−ＰＬＧ／ｐ５５微小粒子お
よびｐ５５ｇａｇタンパク質処方物よりも活性であった。詳細には、表２に示す
ように、ｐ５５ｇａｇタンパク質は、１０μｇ、２５μｇおよび５０μｇの濃度
で不活性であった。さらに、表３に示すように、ＳＤＳ−ＰＬＧ／ｐ５５処方物
は、ＰＶＡ−ＰＬＧ／ｐ５５微小粒子およびｐ５５ｇａｇタンパク質処方物より
も活性であった。このことは、タンパク質がＰＶＡ−ＰＬＧ／ｐ５５タンパク質
処方物およびｐ５５ｇａｇタンパク質処方物に比べて、ＳＤＳ−ＰＬＧ／ｐ５５
処方物において、微小粒子により効率的に吸着されたことを示す。

【０１０４】

【表２】

【０１０５】

【表３】（実施例７）（改変された表面を有するｐＣＭＶｇｐ１２０ＤＮＡ−吸着微小粒子の調製）ｇｐ１２０をコードする吸着プラスミドＤＮＡを有する微小粒子を以下のよう
に調製した。実施例１および２に記載の様に調製した、１ｍｌ用量の２０ｍｇの
ブランク微小粒子をｐＣＭＶｇｐ１２０ＤＮＡの漸増濃度とともに４℃で３時間
インキュベートした。インキュベーション後、この微小粒子を遠心分離し、Ｔｒ
ｉｓ−ＥＤＴＡ緩衝液で２回洗浄し、そして一晩、凍結乾燥した。この微小粒子
を実施例５に記載の様に加水分解し、吸着したＤＮＡの量についてＡ₂₆₀ｎｍで
分析した。

【０１０６】表４は、ＰＬＧ−ＰＶＡ微小粒子およびＰＬＧ−ＣＴＡＢ微小粒子の負荷効率
を提示する。この表に示されるように、ＰＬＧ−ＣＴＡＢ微小粒子は、対応する
ＰＬＧ−ＰＶＡ粒子よりも効率的に吸着する。

【０１０７】

【表４】（実施例８）（ＨＣＶ−Ｅ２吸着）微小粒子を、ＰＶＡ、およびいくつかの異なる界面活性剤を使用して、先の実
施例に記載のように調製した。Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）由来のＥ２タンパク
質を、以下のようにこれらの微小粒子の表面上に吸着させた：０．２ｍｇ／ｍｌ
のＥ２を、２０ｍｇの、ＰＢＳ中の微小粒子に添加し、全容量０．５ｍｌ中、０
．５％ｗ／ｗのＥ２／ＰＬＧの溶液を形成させた。この溶液を、３７℃で、１
．５時間インキュベートし、次いで遠心分離した。この上清を収集し、次いで、
ｍｉｃｒｏＢＣＡによってタンパク質含量を測定した。この結果を、表５に示す
。この結果は、本発明の微小粒子による高分子の優れた吸着を確証する。

【０１０８】

【表５】（実施例９）（ｇｐ１２０タンパク質の吸着）先の実施例に記載のように、ＰＶＡを使用して微小粒子を調製した。また、以
下のように、オレイン酸Ｎａ、アニオン性界面活性剤を使用して、微小粒子を調
製した：ｗ／ｏ／ｗエマルジョンを、内部水相として１．６７ｍｌの３０ｍＭク
エン酸Ｎａ（ｐＨ６）、溶媒（油相）として１６．７ｍｌの、ジクロロメタン
中６％のポリマーＲＧ５０５ＰＬＧ（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＩｎｇｅｌｈｅｉ
ｍ）、および外部水相として６６．８ｍｌの０．４％オレイン酸Ｎａを用いて、
調製した。これらの微小粒子を、「オレイン酸Ｎａ−ＰＬＧ（ｗ／ｏ／ｗ）」と
して、以下の表６に示す。さらに、微小粒子を、水中油処方物中のオレイン酸Ｎ
ａを使用して調製し、そしてこれらの微小粒子を、「オレイン酸Ｎａ−ＰＬＧ（
ｏ／ｗ）」として、以下の表６に示す。ｇｐ１２０タンパク質を、以下のように
、この調製した微小粒子の表面上に吸着させた：０．３８８ｍｇ／ｍｌのタンパ
ク質を、約２０ｍｇの、ＰＢＳ中の微小粒子に添加し、全容量０．８ｍｌ中、約
１．４％ｗ／ｗのｇｐ１２０／ＰＬＧの溶液を形成させた。この溶液を、３７
℃で、１．５時間インキュベートし、次いで遠心分離した。この上清を収集し、
次いで、ｍｉｃｒｏＢＣＡによってタンパク質含量を測定した。この結果を、表
６に示す。この結果は、本発明の微小粒子による高分子の優れた吸着を確証する
。

【０１０９】

【表６】（実施例１０）（リステリア溶解素（Ｌｙｓｔｅｒｉｏｌｙｓｉｎ）タンパク質の吸着）先の実施例に記載のように、ＰＶＡおよびＣＴＡＢを使用して微小粒子を調製
した。Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ由来のリステリア溶解素
タンパク質（ＬＬＯ）を、以下のように、この微小粒子の表面上に吸着させた：
１．０ｍｇ／ｍｌのＬＬＯを、１００ｍｇの、ＰＢＳ中の微小粒子に添加し、全
容量５ｍｌ中、１％ｗ／ｗのＬＬＯ／ＰＬＧの溶液を形成させた。この溶液を
、３７℃で、１．５時間インキュベートし、次いで遠心分離した。この上清を収
集し、次いで、ｍｉｃｒｏＢＣＡによってタンパク質含量を測定した。この結果
を、表７に示す。この結果は、本発明の微小粒子による高分子の優れた吸着を確
証する。

【０１１０】

【表７】（実施例１１）（アジュバントとしてのアルミニウム塩の効果）ｐ５５ｇａｇＤＮＡ吸着ＰＬＧ微小粒子を、上記のように、ＣＴＡＢを使用し
て調製した。この微小粒子を、２つの濃度でマウスに筋肉内注射し、そしてコン
トロールとして、ＤＮＡ単独を、同じ２つの濃度で注射した。さらに、１つの試
行において、５０μｇのリン酸アルミニウムを、注射するＣＴＡＢ組成物に添加
した。各処方物を、１０匹のマウスに注射した。このマウスを、２８日後にブー
ストした。この２回目の免疫化の２週間後、血清を収集し、そして各血清の相乗
平均力価（ＧＭＴ）を、標準誤差とともに測定した。この結果を、表８（線形値
およびｌｏｇ値の両方として表される）に要約する。各数値は、１０匹のマウス
から得られた結果の平均である。

【０１１１】

【表８】これらの結果を統計的に比較するために、以下のものについて、Ｐ値を生成し
た：ＤＮＡ−ＣＴＡＢ対ＤＮＡ−ＣＴＡＢ＋ＡＬＵＭ（Ｐ値＝０．００１７）；
ＤＮＡ−ＣＴＡＢ＋ＡＬＵＭ対ＤＮＡ単独（Ｐ値＜０．０００１）；およびＤＮ
Ａ−ＣＴＡＢ（１０μｇ）対ＤＮＡ単独（１０μｇ）（Ｐ値＜０．０００１）。
これらのＰ値は、表８中の値の統計的有意性を確証する。

【０１１２】（実施例１２）（ζ電位の測定） ζ電位の測定を、ＣｏｕｌｔｅｒＣｏｒｐ．，Ｍｉａｍｉ，ＦＬ３３１１６
のＤＥＬＳＡ４４０ＳＸゼータサイザー（ｚｅｔａｓｉｚｅｒ）上で実行した
。このシステムを、Ｃｏｕｌｔｅｒ（ＥＭＰＳＬ７（ポリスチレンラテックス
ビーズの水性懸濁液））の移動度スタンダードを使用して較正する。サンプルセ
ルを滅菌水でリンスした後、サンプルをサンプルセルに添加した。次いで、カウ
ンターを、最も低い値にビームを合わせることによって０に設定した。電流を、
対照について０．７ｍＡおよびこのサンプルについて２０Ｖに設定した。４つ全
てのビームからの検出レベルをチェックし、次いでこのサンプルを、ソフトウェ
アから「ｒｕｎ」を選択することによって作動させ、周波数測定を読取った。ビ
ームを２０Ｈｚ間隔にするべきである。次いで、各サンプルについての平均ζ電
位を読取った。

【０１１３】本発明のいくつかの微小粒子処方物についての測定を読取った。結果を表９に
示す。この結果が示すように、微小粒子表面への高分子の吸着は、微小粒子のζ
電位を変化させる。

【０１１４】

【表９】（実施例１３）（カプセル化または吸着された高分子を含む微小粒子）（Ａ）ＰＬＧ微小粒子を、ＲＧ５０５ＰＬＧおよびＰＶＡを使用し、そしてア
ジュバントＬＴＫ６３をカプセル化して調製した。１００ｍｇの微小粒子を、４
００μｇ／ｍｌのｐ２４ｇａｇタンパク質を含む５ｍｌＰＢＳと共にインキュ
ベートした。次いで、この混合物を、室温で一晩、振動させながらインキュベー
トし、２０ｍｌＰＢＳで２回および水で１回、遠心分離によって洗浄し、次い
で、凍結乾燥させた。塩基の加水分解および中和後、吸着タンパク質％およびカ
プセル化アジュバント％を測定した；その結果を、表１０に示す。

【０１１５】（Ｂ）ＰＬＧ微小粒子を、以下のように、ＳＤＳおよびＲＧ５０５ＰＬＧを使
用し、そしてアジュバントＣｐＧオリゴヌクレオチドをカプセル化して調製した
：ＤＣＭ中、５ｍｌの６％ＲＧ５０５ポリマーを、０．５ｍｌの、５０ｍＭＴ
ｒｉｓ／ＥＤＴＡ中、５ｍｇ／ｍｌのＣｐＧで乳化して、ｗ／ｏエマルジョンを
形成した。このｗ／ｏエマルジョンを、２０ｍｌの１％ＳＤＳに添加し、次い
で乳化して、ｗ／ｏ／ｗエマルジョンを形成した。微小粒子を、一晩の溶媒エバ
ポレーションによって形成し、次いで、洗浄し、遠心分離し、そして凍結乾燥さ
せた。１０ｍｇのＣｐＧカプセル化微小粒子を、１ｍｌのＤＣＭ中に溶解させた
。０．５ｍｌの水を添加して、このオリゴヌクレオチドを抽出し、次いで、この
混合物を遠心分離して、そしてその水相を、移動相としてＰＢＳを用いる、サイ
ズ排除カラム上に注入した。１０ｍｇのプラセボ微小粒子を、１００μｇのＣｐ
Ｇオリゴヌクレオチドと混合し、そして上記のように、ＤＣＭで抽出し、スタン
ダードとしてこのカラム上で泳動させた。この捕捉された粒子中に存在するＣｐ
Ｇオリゴヌクレオチドの量を、スタンダードに対して算出した。

【０１１６】ｐ５５ｇａｇを、以下のように、ＣｐＧカプセル化微小粒子上に吸着させた：
５０ｍｇの凍結乾燥したＣｐＧカプセル化微小粒子を、５ｍｌの、１４０μｇの
ｐ５５ｇａｇタンパク質を含む、６Ｍ尿素を含む２５ｍＭホウ酸（ｐＨ９）と
共に一晩インキュベートした。この混合物を、室温で一晩、振動させながらイン
キュベートし、２０ｍｌのホウ酸緩衝液／６Ｍ尿素で２回、および水で２回洗
浄し、次いで凍結乾燥させた。

【０１１７】１０ｍｇのＣｐＧカプセル化／ｐ５５ｇａｇ吸着微小粒子を、塩基加水分解し
、そして捕捉微小粒子％および吸着微小粒子％を測定した。他に示されない限り
、この標的化された負荷は１．０％であった。この結果を、表１０に示す。

【０１１８】

【表１０】（実施例１４）（吸着した２つの高分子を有する微小粒子）（Ａ）本発明に従って、２つ以上の高分子を、両方の高分子を吸着した微小粒
子を含む組成物中で投与し得るか、または２つ以上の別個の微小粒子（各々が単
一の高分子を吸着している）を含む組成物中で投与し得る。例えば、微小粒子を
、以下のように、Ｅ２ポリペプチドおよびアジュバントＣｐＧオリゴヌクレオチ
ドの両方を吸着するように調製した：ブランクのＰＬＧ−ＣＴＡＢを、以前に記
載されるように調製した。凍結乾燥した２０ｍｇの微小粒子を、生理食塩水中で
１ｍｌの２００μｇ／ｍｌＥ２とともに４時間インキュベートした。この混合
物を、室温で４時間振動し、１０，０００Ｇでの遠心分離によって２０ｍｌの通
常の生理食塩水で２回洗浄し、そしてペレットを、室温で４時間、２００μｇ／
ｍｌＣｐＧを含有するＴＥ緩衝液中の１ｍｌのＣｐＧ溶液中に再懸濁した。最
終的な懸濁液を、遠心分離によってＴＥ緩衝液で２回洗浄し、次いで凍結乾燥し
た。吸着したＣｐＧおよびＥ２を有する１０ｍｇの微小粒子を塩基性加水分解し
、そしてタンパク質濃度をＢＣＡによって決定し、そして上清中に残存するＣｐ
Ｇの量をＨＰＬＣによってアッセイして、微小粒子上に吸着したＣｐＧの量を測
定した。この結果を表１１に表し、これは、両方の高分子についての陽性吸着を
実証する。

【０１１９】（Ｂ）微小粒子を、本発明に従って調製した。一部を使用してＥ２ポリペプチ
ドを吸着させ、一方別の部分を使用してアジュバントＣｐＧオリゴヌクレオチド
を吸着させた。ブランクのＰＬＧ−ＣＴＡＢを、以前に記載されるように調製し
た。凍結乾燥した２０ｍｇの微小粒子を、生理食塩水中で１ｍｌの２００μｇ／
ｍｌＥ２とともに４時間インキュベートした。この混合物を、室温で４時間振
盪し、１０，０００Ｇでの遠心分離によって２０ｍｌの通常の生理食塩水で２回
洗浄し、次いで凍結乾燥した。別に、凍結乾燥した２０ｍｇの微小粒子を、ＴＥ
緩衝液中で１ｍｌの２００μｇ／ｍｌＣｐＧとともに４時間インキュベートし
た。この混合物を、室温で４時間振動し、１０，０００Ｇでの遠心分離によって
２０ｍｌのＴＥ緩衝液で２回洗浄し、次いで凍結乾燥した。吸着した微小粒子の
パーセントの測定の結果を、表１１に表す。

【０１２０】

【表１１】（実施例１５）（界面活性剤およびＰＶＡの組合せを使用して形成された微小粒子）以下の手順を使用して、２つの界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）（ＰＶＡ
および界面活性剤（ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ））を含む微小粒子を形成した：ＤＣＭ
中で１０ｍｌの５％ＰＬＧポリマーおよび０．２％の界面活性剤ＤＯＴＡＰを
、１２、０００ｒｐｍで３分間、１０ｍｌの滅菌水とともに乳化して、一次ｗ／
ｏエマルジョンを形成した。このｗ／ｏエマルジョンを、４０ｍｌの０．８％
ＰＶＡに添加し、そして３分間乳化して、二次ｗ／ｏ／ｗエマルジョンを形成し
、このエマルジョンを、一晩攪拌して溶媒をエバポレートし、そして微小粒子を
形成させた。この微小粒子を滅菌水中で２回洗浄し、そして凍結乾燥した。次い
で、この微小粒子を、本発明に従う高分子の吸着のために準備ができている。

【０１２１】同じ手順を利用して、ＰＶＡおよび界面活性剤ＤＤＡの組合せを含む微小粒子
を形成した。

【０１２２】（実施例１６）（吸着したｐ５５ＤＮＡを有する微小粒子の免疫原性）微小粒子を、界面活性剤ＣＴＡＢまたはＤＤＡを使用する、以前の実施例のよ
うに形成した。ｐ５５ＤＮＡをこの微小粒子に吸着し、そして免疫原性を、以
前の実施例に記載された手順を使用して評価した。この結果を、以下の表１２に
要約する。

【０１２３】

【表１２】（実施例１７）（吸着したルシフェラーゼＤＮＡを有する微小粒子を使用するインビボルシフ
ェラーゼ発現）微小粒子を、ＰＬＧおよび界面活性剤ＣＴＡＢを使用する上記の手順を使用し
て形成した。ルシフェラーゼＤＮＡを、以前に記載した方法を使用してこの微小
粒子上に吸着させた。５μｇ用量のルシフェラーゼＤＮＡを使用するインビトロ
ルシフェラーゼ発現を、ルシフェラーゼＤＮＡ単独（１２４８ｐｇ）および微小
粒子上に吸着したルシフェラーゼＤＮＡを有する微小粒子（２２５０ｐｇ）を使
用して測定した。インビボルシフェラーゼ発現を、以下のように、投与後１日目
および１４日目において筋肉中で測定した：２つの群のマウス（ｎ＝５）を、各
々、５０μｇのルシフェラーゼプラスミドまたは５０μｇのＰＬＧ−ＣＴＡＢ−
ルシフェラーゼＤＮＡ微小粒子のいずれかで注射した。両群のマウスに、２本の
脚の前頸骨（ＴＡ）筋において筋肉内に注射した。２つの群における各マウス由
来の両方のＴＡ筋を、１日目および１４日目のいずれかで収集し、そして−８０
℃フリーザー中に保存した。この筋肉を、ドライアイス上で乳鉢および乳棒を用
いて粉砕した。粉末化筋肉を、０．５ｍｌの１×ＲｅｐｏｒｔｅｒＬｙｓｉｓ
緩衝液を含有するエッペンドルフチューブ中に収集した。このサンプルを、室温
で１５分間ボルテックスした。３回の凍結／融解後、このサンプルを、１４，０
００ｒｐｍで１０分間回転させた。各時点での各マウスのＴＡ筋の上清をプール
し、そしてこのサンプルの２０μｌを、ＭＬ３０００（Ｄｙｎａｔｅｃｈ）を使
用して、ルシフェラーゼ発現のための増大したフラッシュ下でアッセイした。

【０１２４】ルシフェラーゼ測定を、化学ルミネッセンスアッセイを使用して実施した。１
×ＲｅｐｏｒｔｅｒＬｙｓｉｓ（Ｐｒｏｍｅｇａ）中に１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ
を含有する緩衝液を、調製した。１０ｍｇ／ｍｌでのルシフェラーゼ酵素ストッ
ク（Ｐｒｏｍｅｇａ）を基準物として使用し、５００ｐｇ／２０μｌの濃度に希
釈した。この基準物を、Ｍｉｃｒｏｌｉｔｅ２プレート（Ｄｙｎａｔｅｃｈ）
下へ連続的に１：２に希釈して、標準曲線を作製した。２０μｌのブランクおよ
びサンプルもまたこのプレート上に置き、そして連続的に１：２に希釈した。こ
のプレートを、１ウェルあたり１００μｌのＬｕｃｉｆｅｒａｓｅＡｓｓａｙ
Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を注入したＭＬ３０００に置いた。増大し
たフラッシュ下において、相対光単位を、各サンプルについて測定した。

【０１２５】この結果を、以下の表１３において表にする。

【０１２６】

【表１３】（実施例１８）（包括された抗原を有する微小粒子の免疫原性に対する、吸着された抗原を有
する微小粒子の免疫原性）微小粒子を、以前の実施例において議論された手順を使用して調製した。次い
で、Ｅ２タンパク質を、上記のようにこの微小粒子上に吸着させた。微小粒子を
また、上記のように、Ｅ２をこの微小粒子上に吸着させるのではなくこの微小粒
子中に包括するように調製した。この微小粒子を、各々の型の微小粒子を用いる
１０匹のマウスの免疫後にＩｇＧ抗体を誘導する能力について評価した。各マウ
ス由来の血清の相乗平均力価（ＧＭＴ）を測定し、次いで、１０匹の動物の群に
ついて平均した。標準誤差（ＳＥ）もまた算出した。ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ（
有意レベル５％）を、ｐ＝０．０００６で測定した。この結果を、以下の表１４
に示す：この結果は、本発明の吸着された微小粒子を使用して体液性免疫応答が
優位に誘導されることを明確に実証する。

【０１２７】

【表１４】（実施例１９）（その上にスレオニンを吸着したＨＣＶＥ１Ｅ２タンパク質を有する微小粒
子の免疫原性）ＰＬＧ−ＣＴＡＢ微小粒子を、以前の実施例において議論された手順を使用し
て調製した。Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）由来のＥ１Ｅ２タンパク質を、この微
小粒子上に吸着させた。この粒子を使用して、アジュバントミョウバンを用いて
かまたは用いないで、１０μｇまたは１００μｇのタンパク質のいずれかを提供
するために算出した微小粒子の用量でマウスを免疫した。相乗平均力価を測定し
、そしてこの結果を以下の表１５に示す。

【０１２８】

【表１５】この結果が示すように、微小粒子上に吸着したタンパク質を有する微小粒子は
、１０μｇ用量で優位な免疫応答を生じる。このことは、この微小粒子が、遊離
のＤＮＡがこのような応答を生じ得ない低用量において免疫応答を誘発すること
に有用であるという利点を有することを実証する。

【０１２９】（実施例２０）（吸着されたｐ２４ｇａｇタンパク質を有する微小粒子の免疫原性）ＰＬＧ−ＰＶＡ微小粒子を、以前の実施例において議論された手順を使用して
調製した。次いで、タンパク質ｐ２４ｇａｇを、上記のようにこの微小粒子上に
吸着させた。この微小粒子を、１０匹のマウスの免疫後にＩｇＧ抗体、ＩｇＧ１
抗体、およびＩｇＧ２ａ抗体を誘導する能力について評価した。２回目の免疫の
２週間後（２ｗｐ２）および３回目の免疫の２週間後（２ｗｐ３）のマウスから
収集した血清の相乗平均力価（ＧＭＴ）を測定し、次いで、１０匹の動物の群に
ついて平均した。平均誤差（ＳＥ）もまた算出した。結果を以下の表１６に示す
。この結果は、本発明の吸着した微小粒子を使用して体液性免疫応答が優位に誘
導されることを明確に実証する。

【０１３０】

【表１６】（実施例２１）（ｐ５５ｇａｇタンパク質および種々のアジュバントのＩＭ免疫）ＰＬＧ／ＣＴＡＢ微小粒子、ＰＬＧ／ＳＤＳ微小粒子、およびＰＬＧ／ＰＶＡ
微小粒子を、先の実施例において上記されたように形成した。遊離の可溶性ｐ５
５ｇａｇを提供することに対する、微小粒子上に吸着させた抗原ｐ５５ｇａ
ｇタンパク質でマウスを免疫することの異なる効果を分析するため、そして同じ
く他の微小粒子上に吸着させるか、または遊離の可溶性形態で提供されるアジュ
バントＣｐＧ（ＣｐＧモチーフを有する２０塩基長の一本鎖オリゴヌクレオチド
）を有することの効果を決定するために、８つの群の微小粒子を作製した。この
異なる群を、以下のように調製した。

【０１３１】群１は、吸着ＣｐＧを有するＰＬＧ／ＣＴＡＢ粒子と混合した可溶性ｐ５５
ｇａｇタンパク質（２Ｍ尿素を有するｔｒｉｓ／ＮａＣｌ緩衝液中で、２ｍｇ／
ｍｌで酵母において生成された、組換えＨＩＶｐ５５タンパク質）を使用した
。

【０１３２】群２は、吸着ＣｐＧを有するＰＬＧ／ＣＴＡＢ粒子と混合した吸着ｐ５５ｇ
ａｇを有するＰＬＧ／ＳＤＳ粒子を使用した。

【０１３３】群３は、遊離ＣｐＧと混合した吸着ｐ５５ｇａｇを有するＰＬＧ／ＳＤＳ粒
子を使用した。

【０１３４】群４は、吸着ｐ５５ｇａｇを有するＰＬＧ／ＳＤＳ粒子を、アジュバントな
しで使用した。

【０１３５】群５は、吸着ＣｐＧを有するＰＬＧ／ＣＴＡＢ粒子と混合した、粒子中に包括
されるｐ５５ｇａｇを有するＰＬＧ／ＰＶＡ粒子を使用した。

【０１３６】群６は、コントロールであり、抗原を使用せず、そして可溶性ＣｐＧを使用し
た。

【０１３７】群７は、別のコントロールであり、可溶性ｐ５５ｇａｇタンパク質を使用し
、そしてアジュバントを使用しなかった。

【０１３８】群８は、別のコントロールであり、ｇａｇ遺伝子を発現するワクシニアウイル
ス（ｖｖｇａｇ）を単独で使用し、そしてアジュバントを使用しなかった。

【０１３９】各群について、１０匹のマウスを、群８を除いて（群８は、１０×１０⁷ｐｆ
ｕの投薬量で使用した）ｐ５５ｇａｇ抗原およびＣｐＧアジュバントの投薬量
が各々２５μｇ（その群に存在する場合）になるように、十分な量の微小粒子ま
たは遊離分子で免疫した。免疫経路は、群８を除いてＩＭであった（群８は、Ｉ
Ｐであった）。免疫後、血清の抗ｐ５５ＩｇＧ力価を測定した。その結果を以
下の表１７において明らかにする、ＣＴＬによる標的の溶解もまた各群で測定し
た。その結果を以下の表１８において明らかにする。

【０１４０】

【表１７】

【０１４１】

【表１８】（実施例２２）（ｐ５５ＤＮＡの吸着対包括）吸着ｐ５５ＤＮＡを有するＰＬＧ／ＣＴＡＢ微小粒子、および微小粒子中に
包括されたｐ５５ＤＮＡを有するＰＬＧ／ＣＴＡＢ微小粒子を、先の実施例に
おいて上記されたように形成した。マウスのＩＭ免疫および抗体の誘導（血清の
収集および分析）を、１回目の免疫の４週間後（４ｗｐ１）、および２回目の免
疫の２、４、６、１３、および１５週間後（それぞれ、２ｗｐ２、４ｗｐ２、６
ｗｐ２、１３ｗｐ２、および１５ｗｐ２）に、先の実施例において記載されたよ
うに実施した。以下の表１９に示される結果は、包括ｐ５５および遊離ｐ５５の
両方に優る吸着微小粒子の明白な利点を実証する。

【０１４２】

【表１９】（実施例２３）（モルモットにおける免疫応答の微小粒子誘導）吸着ｇｐ１２０ＤＮＡを有するＰＬＧ／ＣＴＡＢ微小粒子を、先の実施例に
おいて上記のように形成した。他のサンプルは、以下の表２０に示される通りで
ある。そしてこれは、リン酸アルミニウムを伴うかまたは伴わない微小粒子、リ
ン酸アルミニウムを伴うかまたは伴わない遊離の可溶性ｇｐ１２０のコントロー
ル、およびｇｐ１２０ＤＮＡによってコードされるＭＦ５９タンパク質を含む
。モルモットのＩＭ免疫および抗体の誘導（血清の収集および分析）を、先の実
施例において記載のように実施した。この結果を、以下の表２０に示す。

【０１４３】

【表２０】（実施例２４）（ｐ５５ＤＮＡ吸着微小粒子での鼻腔内（ＩＮ）免疫）吸着ｐ５５ＤＮＡを有するＰＬＧ／ＣＴＡＢ微小粒子、および吸着ｐ５５
ＤＮＡを有するＰＬＧ／ＤＤＡ微小粒子を、先の実施例において上記されたよう
に形成した。２５または１００μｇでのマウスのＩＮ免疫、抗体の誘導（血清の
収集および分析）、およびＣＴＬ誘導を、１回目の免疫の２および４週間後（２
ｗｐ１、４ｗｐ１）、２回目の免疫の２および４週間後（２ｗｐ２、４ｗｐ２）
、ならびに３回目の免疫の２および４週間後（２ｗｐ３、４ｗｐ３）に、先の実
施例において記載のように実施した。コントロールは、可溶性ｐ５５ＤＮＡ単
独での免疫、または１０μｇのコレラ毒素での免疫を含んだ。抗体誘導について
の結果を表２１に示す。そしてＣＴＬによる溶解についての結果（４回目の免疫
の４週間後）を、以下の表２２に示す。

【０１４４】

【表２１】

【０１４５】

【表２２】本発明の好ましい実施態様が幾分詳細に記載されたが、添付の特許請求の範囲
に規定される本発明の精神および範囲から逸脱することなく、明白な改変がなさ
れ得ることが理解される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 45/00 Ａ６１Ｋ 45/00 47/32 47/32 47/34 47/34 Ａ６１Ｐ 31/16 Ａ６１Ｐ 31/16 31/18 31/18 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者オット，ゲイリーエス．アメリカ合衆国カリフォルニア 94605，オークランド，マーロウドライブ 112 (72)発明者バラックマン，ジョンアメリカ合衆国カリフォルニア 94577，サンレアンドロ，ジョクインアベニュー 431 (72)発明者カッザズ，ジーナアメリカ合衆国カリフォルニア 94903，サンラファエル，カナダコート１Ｆターム(参考） 4C076 AA33 BB15 CC06 DD01 DD02 DD08 DD16 DD26 EE13 EE24 EE25 EE30 EE41 GG06 4C084 BA44 CA01 CA04 MA05 MA43 MA65 ZB332 ZB352 4C085 AA03 BA18 BA69 EE06 FF01 FF14 FF19 GG02 GG03 GG06

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】吸着表面を有する微小粒子であって、該微小粒子は、以下：ポリ（αヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオ
ルトエステル、ポリ無水物およびポリシアノアクリレートからなる群より選択さ
れるポリマー；および界面活性剤、を含有する、微小粒子。
【請求項２】さらに、以下：前記微小粒子の表面に吸着した第一の生物学的に活性な高分子であって、ここ
で、該第一の生物学的に活性な高分子が、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、ポ
リヌクレオシド、抗原、医薬、ホルモン、酵素、転写メディエーター、翻訳メデ
ィエーター、代謝経路の中間体、免疫調節剤、およびアジュバントからなる群よ
り選択される少なくとも１つのメンバーである、第一の生物学的に活性な高分子
を含有する、請求項１に記載の微小粒子。
【請求項３】さらに、以下：前記微小粒子内にカプセル化された第二の生物学的に活性な高分子であって、
ここで、該第二の生物学的に活性な高分子が、ポリペプチド、ポリヌクレオチド
、ポリヌクレオシド、抗原、医薬、ホルモン、酵素，転写メディエーター、翻訳
メディエーター、代謝経路の中間体、免疫調節剤、およびアジュバントからなる
群より選択される少なくとも１つのメンバーである、第二の生物学的に活性な高
分子を含有する、請求項２に記載の微小粒子。
【請求項４】前記微小粒子がポリ（Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラク
チド）およびポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）からなる群より選択さ
れるポリ（αヒドロキシ酸）を含有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の
微小粒子。
【請求項５】前記微小粒子がポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）
を含有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の微小粒子。
【請求項６】前記界面活性剤がカチオン性界面活性剤である、請求項１〜
５のいずれか１項に記載の微小粒子。
【請求項７】前記界面活性剤がアニオン性界面活性剤である、請求項１〜
５のいずれか１項に記載の微小粒子。
【請求項８】前記界面活性剤が非イオン性界面活性剤である、請求項１〜
５のいずれか１項に記載の微小粒子。
【請求項９】前記第一の生物学的に活性な高分子が、ｇｐ１２０、ｐ２４
ｇａｇ、ｐ５５ｇａｇおよびインフルエンザＡ赤血球凝集素抗原からなる群より
選択される抗原である、請求項２〜８のいずれか１項に記載の微小粒子。
【請求項１０】前記第一の生物学的に活性な高分子がｇｐ１２０をコード
するポリヌクレオチドである、請求項２〜９のいずれか１項に記載の微小粒子。
【請求項１１】前記第二の生物学的に活性な高分子がアジュバントである
、請求項３〜１０のいずれか１項に記載の微小粒子。
【請求項１２】前記アジュバントがアルミニウム塩である、請求項１〜１
１のいずれか１項に記載の微小粒子。
【請求項１３】請求項１〜１２のいずれか１項に記載の微小粒子および薬
学的に受容可能な賦形剤を含有する、微小粒子組成物。
【請求項１４】請求項１〜１２のいずれか１項に記載の微小粒子を含有し
、さらにアジュバントを含有する、微小粒子組成物。
【請求項１５】前記アジュバントがＣｐＧオリゴヌクレオチド、ＬＴＫ６
３、ＬＴＲ７２、ＭＰＬおよびアルミニウム塩からなる群より選択されるメンバ
ーである、請求項１４に記載の微小粒子組成物。
【請求項１６】前記アジュバントがアルミニウム塩であって、該アルミニ
ウム塩がリン酸アルミニウムである、請求項１５に記載の微小粒子組成物。
【請求項１７】吸着表面を有する微小粒子を産生する方法であって、該方
法は以下の工程：（ａ）ポリマー溶液および界面活性剤の混合物を分散させる工程であって、こ
こで、該ポリマー溶液が、ポリ（αヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリ
カプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物およびポリシアノアクリレー
トからなる群より選択されるポリマーを含有し、ここで、該ポリマーが有機溶媒
中の約１％〜約３０％の濃度で存在し、そして該界面活性剤が約０．００００１
：１〜約０．１：１の重量対重量の界面活性剤対ポリマー比で該混合物中に存在
する、工程；および該エマルジョンから該有機溶媒を除去する工程、を包含する、方法。
【請求項１８】前記界面活性剤がアニオン性界面活性剤である、請求項１
７に記載の方法。
【請求項１９】前記界面活性剤がカチオン性界面活性剤である、請求項１
７に記載の方法。
【請求項２０】前記界面活性剤が非イオン性界面活性剤である、請求項１
７に記載の方法。
【請求項２１】前記界面活性剤が約０．０００１：１〜約０．０１：１の
重量対重量での界面活性剤対ポリマー比で存在する、請求項１７〜２０のいずれ
か１項に記載の方法。
【請求項２２】前記界面活性剤が約０．００１：１〜約０．０１：１の重
量対重量での界面活性剤対ポリマー比で存在する、請求項１７〜２０のいずれか
１項に記載の方法。
【請求項２３】前記界面活性剤が約０．００５：１〜約０．０１：１の重
量対重量での界面活性剤対ポリマー比で存在する、請求項１７〜２０のいずれか
１項に記載の方法。
【請求項２４】前記微小粒子がポリ（Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラ
クチド）およびポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）からなる群より選択
されるポリ（αヒドロキシ酸）を含有する、請求項１７〜２３のいずれか１項に
記載の方法。
【請求項２５】前記微小粒子が、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリ
ド）を含有する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】前記微小粒子が約３％〜約１０％の濃度で存在するポリ（
Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）を含有する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】吸着表面を有する微小粒子を産生する方法であって、該吸
着表面には、生物学的に活性な高分子が吸着されており、該方法は以下の工程：（ａ）ポリマー溶液および界面活性剤の混合物を乳化してエマルジョンを形成
する工程であって、該ポリマー溶液は、ポリ（αヒドロキシ酸）、ポリヒドロキ
シ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物およびポリシア
ノアクリレートからなる群より選択されるポリマーを含有し、そして該ポリマー
は、約１％〜約３０％の濃度で、有機溶媒中に存在し、そして該界面活性剤は、
約０．００００１：１〜約０．１：１の重量対重量の界面活性剤対ポリマー比で
該混合物中に存在する、工程；（ｂ）該エマルジョンから該有機溶媒を除去して、該吸着表面を有する該微小
粒子を形成する工程；ならびに（ｃ）該微小粒子の表面に対して該高分子を吸着させる工程、を包含する、方法。
【請求項２８】前記高分子が、医薬、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオシ
ド、ポリペプチド、ホルモン、酵素、転写メディエーター、翻訳メディエーター
、代謝経路の中間体、免疫調節剤、抗原、およびアジュバントからなる群より選
択される少なくとも１つのメンバーである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】前記高分子が、ｇｐ１２０、ｐ２４ｇａｇ、ｐ５５ｇａｇ
およびインフルエンザＡ赤血球凝集素抗原からなる群より選択される抗原である
、請求項２７〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】前記高分子が、ｇｐ１２０をコードするポリヌクレオチド
である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】前記界面活性剤が約０．０００１：１〜約０．０１：１の
重量対重量での界面活性剤対ポリマー比で存在する、請求項２７〜３０のいずれ
か１項に記載の方法。
【請求項３２】前記界面活性剤が約０．００１：１〜約０．０１：１の重
量対重量での界面活性剤対ポリマー比で存在する、請求項２７〜３０のいずれか
１項に記載の方法。
【請求項３３】前記界面活性剤が約０．００５：１〜約０．０１：１の重
量対重量での界面活性剤対ポリマー比で存在する、請求項２７〜３０のいずれか
１項に記載の方法。
【請求項３４】請求項１７〜３３のいずれか１項に記載の方法に従って作
製された微小粒子。
【請求項３５】請求項３４に記載の微小粒子および薬学的に受容可能な賦
形剤を含有する、微小粒子組成物。
【請求項３６】吸着表面を有する微小粒子を含有する微小粒子組成物を産
生する方法であって、該吸着表面には、生物学的に活性な高分子が吸着されてお
り、該方法は以下の工程：（ａ）ポリマー溶液および界面活性剤の混合物を乳化してエマルジョンを形成
する工程であって、該ポリマー溶液は、ポリ（αヒドロキシ酸）、ポリヒドロキ
シ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物およびポリシア
ノアクリレートからなる群より選択されるポリマーを含有し、そして該ポリマー
は、約１％〜約３０％の濃度で、有機溶媒中に存在し、そして該界面活性剤は、
約０．００００１：１〜約０．１：１の重量対重量の界面活性剤対ポリマー比で
該混合物中に存在する、工程；（ｂ）該エマルジョンから該有機溶媒を除去して、該吸着表面を有する該微小
粒子を形成する工程；（ｃ）該微小粒子の表面に対して該高分子を吸着させる工程；ならびに（ｄ）工程（ｃ）からの該吸着された高分子を有する該微小粒子を薬学的に受
容可能な賦形剤と合わせて該微小粒子組成物を形成する工程、を包含する、方法。
【請求項３７】請求項３６に記載の方法に従って作製された微小粒子組成
物。
【請求項３８】脊椎動物被験体に治療上有効な量の高分子を送達する方法
であって、請求項１３〜１６、３５または３７のいずれか１項に記載の微小粒子
組成物を該脊椎動物被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項３９】疾患の診断のための、請求項１３〜１６、３５または３７
のいずれか１項に記載の微小粒子組成物の使用。
【請求項４０】疾患の処置のための、請求項１３〜１６、３５または３７
のいずれか１項に記載の微小粒子組成物の使用。
【請求項４１】ワクチンのための、請求項１３〜１６、３５または３７の
いずれか１項に記載の微小粒子組成物の使用。
【請求項４２】免疫応答を惹起するための、請求項１３〜１６、３５また
は３７のいずれか１項に記載の微小粒子組成物の使用。
【請求項４３】吸着表面を有する微小粒子であって、該微小粒子は以下：生体分解性ポリマー；および界面活性剤、を含有する、微小粒子。
【請求項４４】さらに、以下：前記微小粒子の表面に吸着した第一の生物学的に活性な高分子であって、ここ
で、該第一の生物学的に活性な高分子が、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、ポ
リヌクレオシド、抗原、医薬、ホルモン、酵素、転写メディエーター、翻訳メデ
ィエーター、代謝経路の中間体、免疫調節剤、およびアジュバントからなる群よ
り選択される少なくとも１つのメンバーである、第一の生物学的に活性な高分子
を含有する、請求項４３に記載の微小粒子。
【請求項４５】さらに、以下：前記微小粒子内にカプセル化された第二の生物学的に活性な高分子であって、
ここで、該第二の生物学的に活性な高分子が、ポリペプチド、ポリヌクレオチド
、ポリヌクレオシド、抗原、医薬、ホルモン、酵素，転写メディエーター、翻訳
メディエーター、代謝経路の中間体、免疫調節剤、およびアジュバントからなる
群より選択される少なくとも１つのメンバーである、第二の生物学的に活性な高
分子を含有する、請求項４４に記載の微小粒子。
【請求項４６】請求項４４〜４５のいずれか１項に記載の微小粒子および
薬学的に受容可能な賦形剤を含有する、微小粒子組成物。
【請求項４７】請求項４６の記載の微小粒子を含有し、さらに、アジュバ
ントを含有する、微小粒子組成物。
【請求項４８】疾患の診断のための、請求項４６〜４７のいずれか１項に
記載の微小粒子組成物の使用。
【請求項４９】疾患の処置のための、請求項４６〜４７のいずれか１項に
記載の微小粒子組成物の使用。
【請求項５０】ワクチンのための、請求項４６〜４７のいずれか１項に記
載の微小粒子組成物の使用。
【請求項５１】免疫応答を惹起するための、請求項４６〜４７のいずれか
１項に記載の微小粒子組成物の使用。