JP2002521065A5

JP2002521065A5 -

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Publication number: JP2002521065A5
Application number: JP2000562554A
Authority: JP
Filing date: 1999-07-20
Publication date: 2006-09-14

Description

【特許請求の範囲】
【請求項１】変化を含む配列番号：１の核酸を含む単離されたＤＮＡであって、該変化がポジション１７１４のＴ、ポジション１７６２のＧ、ポジション１８４１のＴ、ポジション１９５５のＣ、および表７に掲載する全ての突然変異よりなる群から選択されることを特徴とする単離されたＤＮＡ。
【請求項２】配列番号：１の核酸にハイブリダイズしないであろう条件下で、請求項１記載の単離されたＤＮＡにハイブリダイズする核酸プローブ。
【請求項３】請求項２記載のプローブを患者の身体から分離したＤＮＡまたはＲＮＡの患者の試料にハイブリダイズさせることを含み、ハイブリダイゼーション・シグナルの存在が長期ＱＴ症候群の指標であることを特徴とする長期ＱＴ症候群を引起す突然変異の存在を判定する方法。
【請求項４】患者の身体から分離したＤＮＡまたはＲＮＡを増幅させ、該増幅させたＤＮＡまたはＲＮＡを請求項２記載のプローブとハイブリダイズさせることを特徴とする請求項３記載の方法。
【請求項５】該ハイブリダイゼーションをイン・サイチュ（in situ）で行うことを特徴とする請求項３記載の方法。
【請求項６】該アッセイを核酸マイクロチップ技術を用いて行うことを特徴とする請求項３記載の方法。
【請求項７】一本鎖ＤＮＡ高次構造多型解析技術を用いることを含む長期ＱＴ症候群を引起す突然変異の存在を判定する方法であって、ここに当該方法が：
１）配列番号：５６および５７；
２）配列番号：５８および５９；
３）配列番号：６０および６１；
４）配列番号：６２および６３；
５）配列番号：６４および６５；
６）配列番号：６６および６７；
７）配列番号：６８および６９；
８）配列番号：７０および７１；
９）配列番号：７２および７３；
１０）配列番号：７４および７５；
１１）配列番号：７６および７７；
１２）配列番号：７８および７９；
１３）配列番号：８０および８１；
１４）配列番号：８２および８３；
１５）配列番号：８４および８５；
１６）配列番号：８６および８７；
１７）配列番号：８８および８９；
１８）配列番号：９０および９１；
１９）配列番号：９２および９３；および
２０）配列番号：９４および９５；
よりなる群から選択されるプライマー・ペアを用いることを特徴とする方法。
【請求項８】ＨＥＲＧ遺伝子またはＲＮＡの領域を増幅させ、ついで増幅させた遺伝子またはＲＮＡを配列決定することを含む長期ＱＴ症候群を引起す突然変異の存在を判定する方法であって、ここに長期ＱＴ症候群が以下の群：配列番号：１の塩基１７１４のＴ、配列番号：１の塩基１７６２のＧ、配列番号：１の塩基１８４１のＴ、配列番号：１の塩基１８８９のＣならびに表７に示す突然変異、のいずれか１またはそれを超える突然変異によって示されることを特徴とする方法。
【請求項９】患者の身体から分離したＤＮＡまたはＲＮＡと野生型ＤＮＡまたはＲＮＡプローブとの間の誤対合を同定することを含む長期ＱＴ症候群を引起す突然変異の存在を判定する方法であって、ここに該プローブがＤＮＡまたはＲＮＡの領域にハイブリダイズし、ここに該領域が以下の群：配列番号：１の塩基１７１４のＴ、配列番号：１の塩基１７６２のＧ、配列番号：１の塩基１８４１のＴ、配列番号：１の塩基１８８９のＣならびに表７に示す突然変異を含む領域、のいずれか１であることを特徴とする方法。
【請求項１０】該誤対合をＲＮアーゼ・アッセイによって同定することを特徴とする請求項９記載の方法。
【請求項１１】突然変異ＨＥＲＧポリペプチドに結合するが、野生型ＨＥＲＧポリペプチドには結合しない抗体であって、ここに該突然変異ポリペプチドが長期ＱＴ症候群を引起こし、ここに該突然変異ポリペプチドが配列番号：２のポリペプチドであって、該ポリペプチドが：アミノ酸残基５７２のシステイン、アミノ酸残基５８８のアスパラギン酸、アミノ酸残基６１４のバリン、アミノ酸残基６３０のアラニンおよび表７に示す突然変異よりなる群から選択される突然変異を有することを特徴とする抗体。
【請求項１２】該抗体がモノクローナル抗体であることを特徴とする請求項１１記載の抗体。
【請求項１３】患者の身体から分離した試料と請求項１１記載の抗体とを反応させることによる患者中の突然変異ＨＥＲＧポリペプチドの存在についてのアッセイよりなる長期ＱＴ症候群を判定する方法であって、陽性反応の存在が長期ＱＴ症候群の指標であることを特徴とする方法。
【請求項１４】該抗体がモノクローナル抗体であることを特徴とする請求項１３記載の方法。
【請求項１５】該アッセイがイムノブロッティングを含むことを特徴とする請求項１３記載の方法。
【請求項１６】該アッセイが免疫組織化学的技術を含むことを特徴とする請求項１３記載の方法。
【請求項１７】長期ＱＴ症候群を引起こす突然変異を含む単離されたＨＥＲＧポリペプチドであって、ここに該突然変異が、アミノ酸残基５７２のシステイン、アミノ酸残基５８８のアスパラギン酸、アミノ酸残基６１４のバリン、アミノ酸残基６３０のアラニン、または表７に示す突然変異であることを特徴とする単離されたＨＥＲＧポリペプチド。
【請求項１８】ＨＥＲＧポリペプチドを含む長期ＱＴ症候群を判定する方法であって、ここに該ポリペプチド中の突然変異が長期ＱＴ症候群の指標であり、ここに該突然変異が、アミノ酸残基５７２のシステイン、アミノ酸残基５８８のアスパラギン酸、アミノ酸残基６１４のバリン、アミノ酸残基６３０のアラニンおよび表７に示す突然変異よりなる群から選択されることを特徴とする方法。
【請求項１９】１）配列番号：５６および５７；
２）配列番号：５８および５９；
３）配列番号：６０および６１；
４）配列番号：６２および６３；
５）配列番号：６４および６５；
６）配列番号：６６および６７；
７）配列番号：６８および６９；
８）配列番号：７０および７１；
９）配列番号：７２および７３；
１０）配列番号：７４および７５；
１１）配列番号：７６および７７；
１２）配列番号：７８および７９；
１３）配列番号：８０および８１；
１４）配列番号：８２および８３；
１５）配列番号：８４および８５；
１６）配列番号：８６および８７；
１７）配列番号：８８および８９；
１８）配列番号：９０および９１；
１９）配列番号：９２および９３；および
２０）配列番号：９４および９５
よりなる群から選択される核酸のペア。
【請求項２０】請求項１９記載のプライマー・ペアから選択されるプライマーのペアを用いることを含む、ＨＥＲＧのエキソンを増幅させる方法。
【請求項２１】配列番号：３を含む単離された核酸。
【請求項２２】ａ）突然変異を有するＨＥＲＧを発現する第１セットの細胞を浸漬溶液に入れて第１の誘導Ｋ^＋電流を測定し、ここに該突然変異が、アミノ酸残基５７２のシステイン、アミノ酸残基５８８のアスパラギン酸、アミノ酸残基６１４のバリン、アミノ酸残基６３０のアラニン、または表７に示す突然変異であり；
ｂ）該第１の誘導Ｋ^＋電流を測定し；
ｃ）野生型ＨＥＲＧを発現する第２セットの細胞を浸漬溶液に入れて第２の誘導Ｋ^＋電流を測定し；
ｄ）該第２の誘導Ｋ^＋電流を測定し；
ｅ）工程（ａ）の浸漬溶液に薬物を添加し；
ｆ）工程（ｅ）における細胞の第３の誘導Ｋ^＋電流を測定し；ついで
ｇ）第３の誘導Ｋ^＋電流が、第１の誘導Ｋ^＋電流よりも第２の誘導Ｋ^＋電流により類似するか否かを判定することを含むＨＥＲＧ中の突然変異を有する個人を治療するのに有用である薬剤のスクリーニング方法であって、ここに該突然変異が、アミノ酸残基５７２のシステイン、アミノ酸残基５８８のアスパラギン酸、アミノ酸残基６１４のバリン、アミノ酸残基６３０のアラニン、または表７に示す突然変異を生じるものであって、ここに第１の誘導Ｋ^＋電流よりも第２の誘導Ｋ^＋電流により近い第３の誘導Ｋ^＋電流を生じる薬剤が該個人を治療するのに有用であることを特徴とするスクリーニング方法。
【請求項２３】該第１セットの細胞の細胞を突然変異ＨＥＲＧでトランスフェクトし、ここに該突然変異ＨＥＲＧがアミノ酸残基５７２のシステイン、アミノ酸残基５８８のアスパラギン酸、アミノ酸残基６１４のバリン、アミノ酸残基６３０のアラニン、または表７に示す突然変異を有するＨＥＲＧタンパク質をコードすることを特徴とする請求項２２記載の方法。
【請求項２４】該第２セットの細胞の細胞を野生型ＨＥＲＧをコードする核酸でトランスフェクトすることを特徴とする請求項２２記載の方法。
【請求項２５】該第１セットの細胞または該第２セットの細胞をトランスジェニック動物から得ることを特徴とする請求項２２記載の方法。
【請求項２６】請求項１記載の単離されたＤＮＡを含むベクター。
【請求項２７】請求項２６記載のベクターでトランスフェクトした細胞。
【請求項２８】請求項１記載のＤＮＡでトランスフェクトした細胞。
【請求項２９】請求項１記載のＤＮＡを含む非ヒト・トランスジェニック動物。
【請求項３０】請求項２６記載のベクターを含む非ヒト・トランスジェニック動物。