JP2002520334A - 骨および軟骨成長と修復を促進する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、有効量のアンギオテンシノゲン、アンギオテンシンＩ（ＡＩ）、ＡＩ類似体、ＡＩ断片およびその類似体、アンギオテンシンＩＩ（ＡＩＩ）、ＡＩＩ類似体、ＡＩＩ断片およびその類似体、またはＡＩＩＡＴ_２２型レセプターアゴニストを投与することを特徴とする、骨、軟骨および軟骨修復、骨および人工器官移植、および軟骨、骨または他の組織への軟骨の付着および固定、および軟骨細胞増殖を増強するための改善された方法、キット、および組成物に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （関連文献） 本発明は、１９９８年７月１３日に提出された米国仮出願番号第６０／０９２
，６５３号の一部継続および１９９９年３月８日に提出された米国仮出願番号第
６０／１３０，８５５号の一部継続である。

【０００２】 （発明の分野） 本発明は、骨および軟骨の修復、再生、および移植のための方法、組成物、お
よびキットに関する。

【０００３】 （発明の背景） 修復、治癒および増大の自然の機構は、骨と軟骨で類似する（米国特許番号第
５，６８６，１１６号）。修復、治癒および増大は、十分に定義されていない複
雑な一連の事象を必要とするが、特に自然に生じる因子が、これらの目的を達成
するために必要とされることが知られている。このような因子は、損傷を受けた
領域に放出されるかまたは浸透し、そして腫れた領域のマトリックス形成および
再モデル化を刺激する骨および軟骨における骨芽細胞および軟骨細胞およびぞう
げ芽細胞を刺激する（ｔｅｎ Ｄｉｊｋｅら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，
７巻：７９３−７９８頁（１９８９年））。

【０００４】 生きている骨組織は、骨マトリックスおよびミネラルの再吸収および沈着の過
程によって連続して補給されている。この一過性で空間的に結合した、骨の再モ
デル化と称される過程は、２つの細胞集団である破骨細胞および骨芽細胞に主に
付随される。（米国特許番号第５，６５６，５９８号、全体的にここに参照して
組込まれる）。再モデル化過程は、破骨細胞が、骨髄、または骨表面に対する循
環から調達されるか、または骨の円板型ポケットを移動するときに開始される。
骨マトリックスおよびミネラルは、骨髄から再吸収された骨表面に補充される一
群の骨芽細胞に順次変換される。軟骨細胞は、軟骨細胞に分化する局所間葉（間
質）前駆体から由来する。

【０００５】 新たな骨は、３つの基本的機構：骨形成、骨伝導および骨誘導によって形成さ
れうる。（米国特許番号第５，４６４，４３９号、全体的にここに参照して組込
まれる）。骨形成性移殖では、生育可能な骨芽細胞および骨芽周囲細胞は、それ
らが、１方の体の配置から、骨形成の中心を樹立する別の配置に移動される。網
状骨および骨髄移植片は、このような生育可能な細胞を供する。ＴＧＦ−ベータ
は、骨芽細胞の増殖およびマトリックス合成を刺激し（Ｃｅｎｔｒｅｌｌａら、
Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２６２巻：２８６９−２８７４頁（１９８７年））、そ
して破骨細胞の形成および活性を阻害し（Ｃｈｅｎｕら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５巻：６８３−５６８７頁（１９８８年）；
Ｋｉｅｂｚａｋら、Ｊ．Ｂｏｎｅ Ｍｉｎ．Ｒｅｓ．３巻：４３９−４４６頁（
１９８８年））、そして生体内で局所の骨形成を刺激すること（Ｊｏｙｃｅら、
Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１１０巻：２１９５−２２０７頁（１９９０年）；Ｎ
ｏｄａおよびＣａｍｉｌｌｉｅｒｅ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １２４巻：
２９９１−２２９４頁（１９８９年））が示された。骨成長を刺激することが報
告されている他の因子としては、形態発生蛋白質（ＷＯ８８／００２０５号）、
インシュリン様成長因子（ＩＧＦ）（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．１３
巻：Ｅ３６７−７２頁、１９８６年）および甲状腺傍ホルモン（Ｊ．Ｂｏｎｅ＆
Ｍｉｎ．Ｒｅｓ．１巻：３７７−３８１頁、１９８６年）が挙げられる。

【０００６】 形態発生蛋白質ファミリーの構成員は、軟骨および骨形成の誘導に有用である
ことが示された。例えば、ＢＭＰ−２は、ラットの異所性移殖片モデル（米国特
許番号第５，０１３，６４９号参照）で；イヌでの下顎欠損（Ｔｏｒｉｕｍｉら
、Ａｒｃｈ．Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ Ｈｅａｄ Ｎｅｃｋ Ｓｕｒｇ．、１１
７巻：１１０１−１１１２頁（１９９１年）参照）で；およびヒツジでの大腿節
欠損（Ｇｅｒｈａｒｔら、Ｔｒａｎｓ Ｏｒｔｈｏｐ Ｒｅｓ Ｓｏｃ、１６巻
：１７２頁（１９９１年））で；生体内で新たな軟骨および／または骨組織の形
成を誘導できることが示された。ＢＭＰ−４、−６および−７（Ｗｏｚｎｅｙ、
細胞および分子生物学、１３１−１６７頁（アカデミック・プレス社、１９９３
年）で、骨形態発生蛋白質およびそれらの遺伝子発現、参照）を含めたＢＭＰフ
ァミリーの他の構成員は、骨形成活性を有することも示されている。ＢＭＰ蛋白
質は、軟骨を含めた多様な他の組織での誘導性および／または分化相乗作用活性
を例示することも示された。（米国特許番号第５，７００，７７４号、全体的に
ここに参照して組込まれる）。

【０００７】 皮膚骨または異種遺伝子型の貯蔵骨の大型セグメントの移殖では、直接骨形成
は生じない。むしろ、骨伝導は、死んだ骨が、血管の内部成長、続いて移殖片の
再吸収および新たな骨の沈着のための足場として作用するところで起こる。しか
し、この過程は、非常に遅く、これにより大型セグメントの欠損を再構成するの
にしばしば数年を要する。

【０００８】 骨誘導は、適切な刺激因子による骨への接触性組織の表現型の変換である。こ
の概念が示す通り、骨の形成は、非骨格部位でさえ誘導されうる。この型の移殖
片が、特に、２週間以内に宿主骨に組込まれるので、骨誘導は、骨伝導より好ま
れる。対照的に、骨伝導移殖片は、移殖後１年と同じくらいの長さ、組込まれな
いことが分かった。骨誘導に適切な環境を供するために、その容積を通して骨形
成を誘導する能力があるのみでなく、生物適合性、非炎症でもあり、そして体に
結局再吸収され、そして新たな自然の骨に置換される能力を保有する材料が、選
択されるべきである。

【０００９】 異常な骨細胞機能に関連した病理学上の条件の中でも、骨粗鬆症、変形性関節
症、パジェット病、骨石灰脱失症、骨軟化症、歯周病、多発性骨肉種または他の
形態の癌から生じる骨損失、他の医療処置（ステロイドのような）の副作用から
生じる骨損失、および骨マスの年齢に関連した損失である。不適切な有機マトリ
ックスマスは、骨折が、毎日の生活の最小の外傷から生じうるように骨格不全の
危機に個人を置く。その骨折の不十分な修復または治癒がある限り、このような
骨折は、明らかな病気または病的状態を起す。特定の病理学的条件では、破骨細
胞依存性の再吸収は、骨芽細胞によって制御されないが、しかし癌細胞によって
誘導され、それにより生物または宿主の免疫細胞に感染する。それらの疾病条件
で、骨の再吸収は、骨形成をはるかに越える。このように促進された破骨細胞活
性は、骨格マスの総損失を付随して、しばしば、カルシウムの血液濃度の形態で
カルシウム恒常性における付随の撹乱を伴って、骨中の無機鉱物からカルシウム
の過剰放出を引起す。（米国特許番号第５，６８６，１１６号、全体的にここに
参照して組込まれる）。

【００１０】 新たな骨形成を指示する方法は知られているが、骨成長が促進される改善方法
が必要とされる。例えば、骨粗鬆症のために最近認可された治療剤は、逆再吸収
性である。そのように、それらは、いずれの型（脊椎および／または股関節骨折
で減少した骨密度）の樹立骨粗鬆症を示す患者に、またはＩＩ型骨粗鬆症を示す
患者に有効でない。さらに、最近用途で骨粗鬆症についての最も許容される予防
剤は、乳癌または子宮内膜癌の病歴を有する女性、または骨粗鬆症を示す男性に
ついては許容しうる治療剤でないエストロゲン療法である。

【００１１】 同様に、骨移殖片の首尾よい移植および機能は、移殖片への隣接骨の結合に依
存する（米国特許番号第５，６８６，１１６号）。このような結合は、移殖片と
移殖片に最も近い骨の間の干渉で新たなマトリックス成分の形成による骨修復を
必要とする。骨と、移殖片へのヒトに設置される人工関節装置のおよそ１０パー
セントの骨が、非結合のため機能不全に陥る。生じた不能力は、デバイスの再手
術および再移殖をしばしば必要とする。さらに、全骨折の５から１０パーセント
は、決して修復されない。これらの非治癒の骨折を手当てする多くの方法が、提
案されたが、申し分ないと立証されたものはまだない。上記の全てに基づいて、
骨成長が促進されたことを供する改善方法の当業界における必要性が明らかに存
在する。

【００１２】 軟骨は、マトリックス内に埋設される細胞から構成される特定の型の密集接触
性組織である。数種の軟骨がある。（米国特許番号第５，７３６，３７２号、全
体的にここに参照して組込まれる）。コラーゲン性繊維を含む均質性マトリック
スを有する半透明な軟骨が、関節性軟骨に、肋骨軟骨に、鼻の中隔に、喉頭およ
び気管に見られる。関節性軟骨は、骨の関節性表面を覆う硝子様の軟骨である。
肋骨軟骨は、真肋および胸骨を接着する。繊維性軟骨は、コラーゲン繊維を含む
。黄色軟骨は、喉頭蓋、外耳、および耳管で最初に知見される軟骨細胞を支持す
る弾性繊維のネットワークである。軟骨は、有機化合物コラーゲン、ヒアルロン
酸（プロテオグリカン）、軟骨産生の起因である軟骨細胞から最初に構成される
細胞外マトリックスから作られる組織である。これらの有機マトリックス構成要
素内に捕われたコラーゲン、ヒアルロン酸および水は、軟骨の特徴的な弾性特性
および強さを生む。軟骨細胞は、Ｉ型およびＩＩ型コラーゲンを産生する。ＩＩ
型コラーゲンは、骨中に見られない一方で、Ｉ型コラーゲンは、骨中に見られる
（米国特許番号第５，６８６，１１６号）。内在性成長因子ＴＧＦベータおよび
ＢＭＰは、新たな軟骨および骨形成の両方を誘導することが先に示されている。
Ｗｏｚｎｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２巻：１５２８−１５３３頁（１９８８
年）およびＳｐｏｒｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．、１０５巻：１０３９−１
０４５頁（１９８７年）。

【００１３】 軟骨では、コラーゲン合成が、移殖片と人工器官デバイスの首尾よい結合のた
めと同様に、修復、治癒および増大のために必要とされる。（米国特許番号第５
，６８６，１１６号）。コラーゲンは、軟骨の建築学上の整合性に起因する主要
な構造蛋白質である。したがって、軟骨細胞の適切な供給は、軟骨の修復、治癒
、および増大のために十分な量のコラーゲンを産生するために必須である。オス
テオネクチン、フィブロネクチンおよびプロテオグリカンのような他の非コラー
ゲン蛋白質は、軟骨修復にとっても重要である。

【００１４】 軟骨に隣接する関節空間に見られる滑液細胞のような細胞は、軟骨代謝に重要
な役割を果す。滑液細胞は、軟骨を破壊する能力のあるコラゲナーゼのような金
属結合プロテイナーゼを産生する。ＴＧＦベータは、金属結合プロテイナーゼの
細胞放出（およびおそらく合成）を阻害すること、そして新たなマトリックス成
分を産生する軟骨細胞（軟骨形成細胞）を誘導すること、および軟骨修復、治癒
および増大を引起すように軟骨破壊性酵素の産生を阻害することが知られている
。Ｓｐｏｒｎら、（１９８７年）。甲状腺傍ホルモン関連ペプチド（ＰＴＨｒＰ
）におけるマウス欠損は、異常な軟骨突然変異を示し、それによりＰＴＨｒＰが
、軟骨細胞発生および突然変異についての必須の因子であることを示すことも示
されている（米国特許番号第５，７００，７７４号）。

【００１５】 軟骨移殖は、鼻形成術のような再構築または整形手術でしばしば使用される。
軟骨細胞増殖およびコラーゲン合成を増加し、そしてその結果、軟骨破棄を阻害
し、そして軟骨修復を増強する方法について当業界で必要性がある。このような
方法は、それに限定されないが、軟骨移殖片および軟骨移植片の治癒を含めた軟
骨修復の臨床的利用性を増加させる。

【００１６】 上記方法のうちのいくつかは、制限された成功を伴い適合したが、骨および軟
骨修復、治癒および増大を増強し、そして骨および軟骨移植片の付着および固定
を増強する改善方法の当業界での必要性が残る。

【００１７】 （発明の概要） 本発明は、１）骨および軟骨修復；２）骨および人工器官移植；３）骨または
他の組織への軟骨の付着および固定を増強する方法、キットおよび組成物；およ
び軟骨細胞の増殖のための方法、細胞培養用培地およびキットを提供する。それ
らの全てが、アンギオテンシノーゲン、アンギオテンシンＩ（ＡＩ）、ＡＩ類似
体、ＡＩ断片およびその類似体、アンギオテンシンＩＩ（ＡＩＩ）、ＡＩＩ類似
体、ＡＩＩ断片またはその類似体またはＡＩＩＡＴ_２２型レセプターアゴニスト
の投与を含む。

【００１８】 本発明のこれらの概念および他の概念は、次の詳細な説明の点で明らかになる
。

【００１９】 （好ましい実施の態様の詳細な説明） 全ての文献、特許および特許出願は、全体的に参照してここに組込まれる。

【００２０】 この出願の中で、特に規定されない限り、利用される技術は、分子クローニン
グ：実験室マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ）（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９８９年）、遺伝子発現
技術（Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）（Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１８５巻、Ｄ．Ｇｏｅｄｄｅｌ編、１９９
１年、アカデミック・プレス、カリフォルニア州サンディエゴ）、Ｍｅｔｈｏｄ
ｓ ｉｎ Ｆｎｚｙｍｏｌｏｇｙにおける「蛋白質精製に対する指針」（Ｍ．Ｐ
．Ｄｅｕｔｓｈｃｅｒら、アカデミック・プレス社、１９９０年）；ＰＣＲプロ
トコル（ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｋｏｌｓ）：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄ
ｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｉｎｎｉｓら、アカデミック・プレス
社、カリフォルニア州サンディエゴ（１９９０年））、動物細胞の培養：基礎的
技術のマニュアル（Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ：Ａ Ｍ
ａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）、第２版（Ｒ．Ｉ．Ｆｒ
ｅｓｈｎｅｙ、１９８７年、リス社．ニューヨーク州ニューヨーク）、遺伝子転
写および発現プロトコル、１０９−１２８頁、Ｅ．Ｊ．Ｍｕｒｒａｙ編、ヒュー
マナ・プレス社．ニュージャージー州クリフトン、およびアンビオン１９９８カ
タログ（アンビオン、テキサス州オースチン）のようないくつかのよく知られて
いる文献のいくつかに見ることができる。

【００２１】 ここに定義される場合、語句「骨修復を増強する」は、骨再モデル化、骨形成
、骨伝導および／または骨誘導を介して新たな骨形成の速度を増加させることに
該当する。本発明の哺乳類における骨修復を増強する方法としては、骨形成を刺
激するもの、および骨損失を逆行させるものが挙げられる。したがって、その方
法は、（１）予防的に作用して衰弱および／または不健全な状態の発生を避ける
のに十分な多量の物質を有する目的物を供するのに；または（２）疾病状態およ
び／または疾病状態の徴候、および衰弱および／または不健全な状態を緩和また
は排除するために十分な量の物質を有する目的物を供するために使用されうる。

【００２２】 ここに使用される場合、語句「軟骨修復を増強する」は、軟骨損傷、裂け目、
奇形または欠陥の治癒および再生、および軟骨組織に対する損傷を避ける上での
予防的用途を包含する。

【００２３】 本発明は、骨粗鬆症、変形性関節症、パジェット病、骨石灰脱失症、骨軟化症
、歯周病、多発性骨肉種または他の形態の癌から生じる骨損失、他の医療処置（
ステロイドのような）の副作用から生じる骨損失、および骨マスの年齢に関連し
た損失のような衰弱した骨になる骨折、欠陥、および障害を患っている哺乳類に
おける骨修復を増強する方法の必要性を満たす。さらに、種々の人工器官のデバ
イスへの骨の内部成長は、おおいに増強されて、その結果そのような人工的部品
が、自然の骨様の架橋を通して周囲の骨格組織に堅くそして永続的に固定されう
る。

【００２４】 本発明は、さらに、軟骨細胞の増殖を促進し、そしてそれにより軟骨修復で使
用するためのコラーゲンの合成を増大させることによって、哺乳類での軟骨の修
復を増強する方法の必要性を満たす。このような方法は、軟骨の治癒における、
例えば、ヒトおよび他の動物における関節性軟骨、裂け目、奇形または他の軟骨
欠陥における用途を示す。その方法は、軟骨性組織に対する損傷を予防する上で
の予防的用途、並びに骨または他の組織に対する軟骨の固定が改善される上での
、および軟骨組織に対する欠陥を修復する上での用途を有する。本発明の化合物
によって誘導されるデノバ軟骨様組織形成は、誘導された先天的な外傷、または
他の臓器の他の軟骨欠陥の修復に寄与し、そして軟骨の付着または修復について
の手術で有用でもある。本発明の方法および組成物は、関節炎および他の軟骨欠
陥の治療に有用でもありうる。本発明の方法は、軟骨組織を治癒または再生する
ことが望みうる他の適応にも使用しうる。このような適応としては、制限なしに
、関節性軟骨に対する損傷の再生または修復が挙げられる。本発明の方法は、軟
骨形成細胞を引きつけるか、軟骨形成細胞の成長を刺激するか、または軟骨形成
細胞および軟骨細胞の先祖の分化を誘導する環境を提供する。

【００２５】 本発明の方法およびキットは、軟骨細胞（軟骨形成細胞）の増殖を促進するた
めに改善された化学的に定義された培地をも提供する。別の実施の態様では、本
発明の組成物および方法は、細胞の軟骨細胞の表現型および生存性を維持するた
めに、関節性軟骨細胞のような軟骨細胞セルラインを処置するのに使用すること
ができる。したがって、処置され細胞集団は、遺伝子療法の用途としても有用で
ある。

【００２６】 ＤｉＺｅｒｅｇａへの米国特許番号第５，０１５，６２９号（その開示全体は
、参照してここに組込まれる）では、上記増大に十分である量でアンギオテンシ
ンＩＩ（ＡＩＩ）のこのような組織への使用を特徴とする、創傷組織の治癒の速
度を増大する方法が記述されている。創傷組織へのＡＩＩの使用は、創傷治癒の
速度を明らかに増大し、それによりいっそう迅速な再上皮形成および組織修復が
導かれる。語句ＡＩＩは、配列Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉ
ｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ［配列番号：１］を示すヒトおよび他の種に存在するオクタ
ペプチドに該当する。アンギオテンシンの生物学的形成は、血漿基質アンギオテ
ンシノゲンにおけるレニンの作用によって開始される（Ｃｌｏｕｓｔｏｎら、Ｇ
ｅｎｏｍｉｃｓ ２巻：２４０−２４８頁（１９８８年）；Ｋａｇｅｙａｍａら
、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２３巻：３６０３−３６０９頁；Ｏｈｋｕｂｏら
、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８０巻：２１９６−２２００頁（１
９８３年）；各々の文献は、その全体的にここに組込まれる）。そのように形成
された物質は、ＡＩからＣ末端のＨｉｓ−Ｌｅｕ残基を除去するアンギオテンシ
ン変換酵素（ＡＣＥ）［配列番号：３７］によってＡＩＩに変換されるアンギオ
テンシンＩ（ＡＩ）と呼ばれるデカペプチドである。ＡＩＩは、公知昇圧剤であ
り、そして市販で入手可能である。

【００２７】 研究は、ＡＩＩが、創傷修復に関与している培養細胞中での有糸分裂誘発およ
び化学走性を増大し、そして成長因子および細胞外マトリックスのそれらの放出
を増大もすることを示した（ｄｉＺｅｒｅｇａ、米国特許番号第５，０１５，６
２９号；Ｄｚａｕら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．２１巻Ｓ７（補
追ＩＩＩ）１９８９年；Ｂｅｒｋら、Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ１３巻：３０５
−１４頁（１９８９年）；Ｋａｗａｈａｒａら、ＢＢＲＣ １５０巻：５２−９
（１９８８年）；Ｎａｆｔｉｌａｎら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８３巻：
１４１９−２３頁（１９８９年）；Ｔａｕｂｍａｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ
．２６４巻：５２６−５３０頁（１９８９年）；Ｎａｋａｈａｒａら、ＢＢＲＣ
１８４巻：８１１−８頁（１９９２年）；ＳｔｏｕｆｆｅｒおよびＯｗｅｎｓ
、Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．７０巻：８２０頁（１９９２年）；Ｗｏｌｆら、Ａｍ．Ｊ
．Ｐａｔｈｏｌ．１４０巻：９５−１０７頁（１９９２年）；ＢｅｌｌおよびＭ
ａｄｒｉ、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１３７巻：７−１２頁（１９９０年））。
さらに、ＡＩＩは、ウサギの角膜の眼およびニワトリの漿尿膜モデルにおける脈
管形成性であることが示された（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚら、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ
．Ｍｅｄ． １０５巻：１４１頁（１９８５年）；ＬｅＮｏｂｌｅら、Ｅｕｒ．
Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９５巻：３０５−６頁（１９９１年））。さらに、
ＡＩＩおよびアンギオテンシンＩＩＩ類似体およびその断片は、創傷治癒に有効
であることが示された。（米国特許番号第５，６２９，２９２号；国際出願番号
ＷＯ９５／０８５６５号；国際出願番号ＷＯ９５／０８３３７号；国際出願番号
ＷＯ９６／３９１６４号；全文献は、全体的にここに組込まれる）。

【００２８】 先行の研究では、アンギオテンシンＩ（ＡＩ）およびＡＩＩの両方が、ただ骨
芽細胞の存在下でのみ、骨の切片上でインキュベートされた破骨細胞によって生
体外で骨再吸収を刺激すること、それによりアンギオテンシンＩＩの効果は、直
接的でなく、むしろ骨芽細胞関連の細胞における一次ホルモン性相互作用によっ
て指示されることが示唆される。（Ｈａｔｔｏｎら、Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ
．１５２巻：５−１０頁（１９９７年））。骨の再吸収のＡＩ刺激は、ＡＣＥ阻
害剤によって阻害され、それにより、ＡＩからのＡＩＩの形成は、骨の再吸収の
刺激に起因したことが示唆される。ＡＩもＡＩＩのいずれも、破骨細胞形成にお
けるいかなる影響をも示さないことが示された。したがって、この研究では、局
所骨破壊が、骨の再吸収のＡＩＩ刺激によって指示されうることが示唆される。

【００２９】 他の研究は、単離された表現型で未成熟な骨芽細胞の一次培養における生体外
でのＤＮＡおよびコラーゲン合成のＡＩＩ刺激が、胎仔ラットの頭蓋冠およびヒ
ト成人の海綿質の骨膜から由来したことを示した。（Ｌａｍｐａｒｔｅｒら、Ｊ
．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１７５巻：８９−９８頁（１９９８年））。直接
的ＡＩＩ効果で、成熟骨芽細胞表現型を示す一次細胞集団で検出されたものはな
く、そしてＡＩＩ応答性骨芽細胞の前駆体細胞を通した間接的効果が提案された
。細胞の骨芽細胞の豊富な集団における類似の生体外研究は、類似の効果を示し
た一方で、成熟骨芽細胞増殖の刺激を除外しない。（Ｈｉｒｕｍａら、Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２３０巻：１７６−
１７８頁（１９９７年））。別の研究は、ＡＩＩが、ラットの頭蓋冠の骨芽細胞
の分化および骨形成の速度を落とす可能性があることを示した。（Ｈａｇｉｗａ
ｒａら、Ｊ．ｏｆ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １５６巻：５４３−５５０頁
（１９９８年））。

【００３０】 上記研究の全てに基づいて、アンギオテンシノゲン、アンギオテンシンＩ（Ａ
Ｉ）、ＡＩ類似体、ＡＩ断片およびその類似体、ＡＩＩ、ＡＩＩ類似体、ＡＩＩ
断片またはその類似体またはＡＩＩＡＴ_２２型レセプターアゴニストの使用が、
骨および軟骨修復を増強する上で有効であるか、または軟骨細胞の増殖およびコ
ラーゲン合成を促進する上で有効である可能性はない。

【００３１】 我々の実験室における先の研究では、ＡＩＩおよびＡＩＩ類似体および断片の
クラスが、間葉の幹細胞の増殖を刺激し、それは、骨および軟骨を作る細胞生み
出すことが示された。（１９９８年１月２３日に提出された米国特許出願番号第
０９／０１２，４００号、全体的に参照してここに組込まれる）。

【００３２】 ＡＴ２レセプターに選択性のあるペプチドアゴニスト（ＡＩＩは、ＡＴＲ１よ
りＡＴ２について１００倍高い親和性を示す）が同定された。このペプチドは、
ｐ−アミノフェニルアラニン６−ＡＩＩ［「（ｐ−ＮＨ_２−Ｐｈｅ）６−ＡＩＩ
」］、Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｘａａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ［配
列番号：３６］（式中、Ｘａａはｐ−ＮＨ_２−Ｐｈｅである）である（Ｓｅｔｈ
およびＫｉｍ、ＢＢＲＣ １６９巻：９９７−１００６頁（１９９０年））。こ
のペプチドは、試験された実験的モデルにおけるＡＴ２アンタゴニストに匹敵す
る結合特性を付与する（Ｃａｔａｌｉｏｔｏら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏ
ｌ．２５６巻：９３−９７頁（１９９４年）；Ｂｒｙｓｏｎら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐ
ｈａｒｍａｃｏｌ．２２５巻：１１９−１２７頁（１９９２年））。

【００３３】 ＡＩＩレセプターおよびＡＩＩレセプターアンタゴニストの効果は、血管損傷
および修復の２つの実験的モデルで試験され、そしてＡＩＩレセプターサブタイ
プ（ＡＴ１およびＡＴ２）の両方が、創傷治癒で役割を果すことが示唆される（
Ｊａｎｉａｋら、Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ２０巻：７３７−４５頁（１９９
２年）；Ｐｒｅｓｃｏｔｔら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１３９巻：１２９１−
１２９６頁（１９９１年）；Ｋａｕｆｆｍａｎら、Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．４９巻：
２２３−２２８頁（１９９１年）；Ｖｉｓｗａｎａｔｈａｎら、Ｐｅｐｔｉｄｅ
ｓ １３巻：７８３−７８６頁（１９９２年）；Ｋｉｍｕｒａら、ＢＢＲＣ １
８７巻：１０８３−１０９０頁（１９９２年））。

【００３４】 多くの研究は、ＡＩＩ（１−７）（ＡＩＩ残渣１−７）またはそれらの活性を
評価するＡＩＩの他の断片に焦点を合わした。ＡＩＩ（１−７）は、ある程度引
出すが、しかしＡＩＩによって引出される全範囲の効果ではない。Ｐｆｅｉｌｓ
ｃｈｉｆｔｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２２５巻：５７−６２頁
（１９９２年）；Ｊａｉｓｗａｌら、Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ １９巻（補追
ＩＩ）：ＩＩ−４９―ＩＩ−５５（１９９２年）；ＥｄｗａｒｄｓおよびＳｔａ
ｃｋ、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐｅｒ．Ｔｈｅｒ．２６６巻：５０６−５
１０頁（１９９３年）；Ｊａｉｓｗａｌら、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐｅ
ｒ．Ｔｈｅｒ．２６５巻：６６４−６７３頁（１９９１年）；Ｊａｉｓｗａｌら
、Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ １７巻：１１１５―１１２０頁（１９９１年）；
Ｐｏｒｔｓｉら、Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１１１巻：６５２−６５４頁
（１９９４年）。

【００３５】 以降に定義される通り、本発明によって使用するための好ましいクラスのＡＴ
２アゴニストは、アンギオテンシノゲン、アンギオテンシンＩ（ＡＩ）、ＡＩ類
似体、ＡＩ断片およびその類似体、ＡＩＩ、ＡＩＩ類似体、ＡＩＩ断片または類
似体、またはＡＩＩの位置６に対応する位置にｐ−ＮＨ−Ｐｈｅを有するＡＩＩ
ＡＴ_２２型レセプターアゴニストを含む。ペプチド剤に加えて、必要なＡＴ２ア
ゴニスト活性を示す種々の非ペプチド性剤（例えば、ペプチド擬似体）は、本発
明による使用についてさらに意図される。

【００３６】 本発明による活性ＡＩＩ類似体、ＡＩＩの断片および特に目的のその類似体は
、一般式Ｉ Ｒ^１−Ｒ^２−Ｒ^３−Ｒ^４−Ｒ^５−Ｒ^６−Ｒ^７−Ｒ^８ （式中、Ｒ^１およびＲ^２は、一緒に式 Ｘ−Ｒ^Ａ−Ｒ^Ｂ−、 ［式中、Ｘは、Ｈまたは１個から３個までのペプチド基であるか、または存在せ
ず、 Ｒ^Ａは、Ｈ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｃｐｃ（１−アミノシクロペンタン
カルボン酸）、Ａｌａ、Ｍｅ^２Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｂｅｔ、Ｇｌｕ（ＮＨ_２）、Ｇ
ｌｙ、Ａｓｐ（ＮＨ_２）およびＳｕｃから適切に選択され、 Ｒ^Ｂは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｏｒｎ、シトロン、Ｓｅｒ（Ａｃ）、Ｓａ
ｒ、Ｄ−ＡｒｇおよびＤ−Ｌｙｓから適切に選択される］ で表される基を形成する； Ｒ^３は、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａ
ｉｂ、ＡｃｐｃおよびＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、ホモＳｅｒ
およびアザＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｖａｌ、およびＧｌｙから構
成される群から選択される； Ｒ^６は、Ｈｉｓ、Ａｒｇまたは６−ＮＨ_２−Ｐｈｅである； Ｒ^７は、ＰｒｏまたはＡｌａである；および Ｒ^８は、末端Ｔｙｒ基としてＲ^４を含む配列を除外しながら、Ｐｈｅ、Ｐｈｅ
（Ｂｒ）、ＩｌｅおよびＴｙｒから構成される群から選択されるか、または存在
しない） で表される配列中の基Ｒ^１−Ｒ^８の少なくとも３つの隣接のアミノ酸から構成さ
れる配列を含む。

【００３７】 本発明の実施に有用なＡＴ２アゴニストのカテゴリー内に入る化合物としては
、Ｒ^６がｐ−ＮＨ_２−Ｐｈｅであるという制限について上に規定されるＡＩＩ類
似体が挙げられる。

【００３８】 Ｒ^Ａ−Ｒ^Ｂについての特に好ましい組合せは、Ａｓｐ−Ａｒｇ、Ａｓｐ−Ｌｙ
ｓ、Ｇｌｕ−ＡｒｇおよびＧｌｕ−Ｌｙｓである。このクラスの特に好ましい実
施の態様としては、以下のものが挙げられる：ＡＩＩ、ＡＩＩＩまたはＡＩＩ（
２−８）、Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ［配列番
号：２］；デス１−ＡＩＩＩまたはＡＩＶとしても知られるＡＩＩ（３−８）、
Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ［配列番号：３］；ＡＩＩ（
１−７）、Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ［配列番
号：４］；ＡＩＩ（２−７）、Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒ
ｏ［配列番号：５］；ＡＩＩ（３−７）、Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐ
ｒｏ［配列番号：６］；ＡＩＩ（５−８）、Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ［
配列番号：７］；ＡＩＩ（１−６）、Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ
−Ｈｉｓ［配列番号：８］；ＡＩＩ（１−５）、Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙ
ｒ−Ｉｌｅ［配列番号：９］；ＡＩＩ（１−４）、Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔ
ｙｒ［配列番号：１０］；およびＡＩＩ（１−３）、Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ［
配列番号：１１］。他の好ましい実施の態様としては、Ａｒｇ−ノルＬｅｕ−Ｔ
ｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ［配列番号：１２］およびＡｒｇ−Ｖａ
ｌ−Ｔｙｒ−ノルＬｅｕ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ［配列番号：１３］が挙げら
れる。本発明の範囲内に含まれるさらに別の好ましい実施の態様は、配列Ａｓｐ
−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ［配列番号：３１
］を有するペプチドである。ＡＩＩ（６−８）、Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ［配列
番号：１４］およびＡＩＩ（４−８）、Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈ
ｅ［配列番号：１５］も試験し、そして有効でないことが分かった。

【００３９】 軟骨細胞増殖、コラーゲン合成、軟骨修復および骨または他の組織への軟骨の
付着および固定のための方法の特に好ましい実施の態様では、本発明の活性化合
物は、以下の一般式： Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｒ４−Ｒ５−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｒ６ （式中、Ｒ１は、水素、Ｇｌｙ、およびＡｓｐから構成される群から選択される
； Ｒ２は、Ａｒｇ、シトロン、またはオルニチンから構成される群から選択され
る； Ｒ３は、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、およびノルＬｅｕ、またはＰｒｏ
から構成される群から選択される； Ｒ４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、およびＡｌａから選択される； Ｒ５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびノルＬｅｕから構成される
群から選択される；および Ｒ６は、Ｐｈｅ、Ｉｌｅであるか、または存在しない） を含むものから選択される。

【００４０】 このクラスの化合物の最も特に好ましい実施の態様は、配列番号：１、配列番
号：２、配列番号：４、配列番号：１３、配列番号：１８、配列番号：１９、配
列番号：１２、配列番号：２４、配列番号：２６、配列番号：３２、配列番号：
３３、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０、配列番号：４１、配
列番号：４２、配列番号：４３、配列番号：４４、および配列番号：４５から構
成される群から選択される。

【００４１】 骨修復および骨および人工器官の移植のための方法の特に好ましい実施の態様
では、本発明の活性化合物は、以下の一般式： Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｒ１−Ｒ２−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｒ２ （式中、Ｒ１は、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびノルＬｅｕ
から構成される群から選択される； Ｒ２は、ＴｙｒおよびＴｙｒ（ＰＯ_３）_２から選択される；および Ｒ３は、Ｐｈｅであるか、または存在しない） を含むものから選択される。

【００４２】 このクラスの化合物の最も特に好ましい実施の態様は、配列番号：１、配列番
号：４、配列番号：２４、配列番号：３１、配列番号：３２、配列番号：３３、
配列番号：４１、および配列番号：４５から構成される群から選択される。

【００４３】 本発明による得に興味深い別のクラスの化合物は、一般式ＩI Ｒ^２−Ｒ^３−Ｒ^４−Ｒ^５−Ｒ^６−Ｒ^７−Ｒ^８ （式中、Ｒ^２は、Ｈ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｏｒｎ、シトロン、Ｓｅｒ（Ａ
ｃ）、Ｓａｒ、Ｄ−ＡｒｇおよびＤ−Ｌｙｓから構成される群から選択される； Ｒ^３は、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａ
ｉｂ、ＡｃｐｃおよびＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、ホモＳｅｒ、Ａｌａ
、およびアザＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｖａｌ、およびＧｌｙから構
成される群から選択される； Ｒ^６は、Ｈｉｓ、Ａｒｇまたは６−ＮＨ_２−Ｐｈｅである； Ｒ^７は、ＰｒｏまたはＡｌａである；および Ｒ^８は、Ｐｈｅ、Ｐｈｅ（Ｂｒ）、ＩｌｅおよびＴｙｒから構成される群から
選択される） で表されるものである。

【００４４】 一般式ＩＩの化合物の特に好ましいサブクラスは、式 Ｒ^２−Ｒ^３−Ｔｙｒ−Ｒ^５−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ［配列番号：１６］ （式中、Ｒ^２、Ｒ^３およびＲ^５は、先に定義される通りである） を示す。特に好ましいのは、式Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｒｙ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒ
ｏ−Ｐｈｅ［配列番号：２］で表されるアンギオテンシンＩＩＩである。他の好
ましい化合物としては、構造式Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｒｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｐｒ
ｏ−Ｐｈｅ［配列番号：１７］およびＡｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｒｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ
−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ［配列番号：１８］で表されるペプチドが挙げられる。断片Ａ
ＩＩ（４−８）は、反復試験では有効でなかった。これは、Ｎ−末端にある露出
したチロシンによると考えられる。

【００４５】 上記式で、アミノ酸残基についての標準の３文字略号が使用される。対照に対
する指示の不在下で、Ｌ−型のアミノ酸が意図される。他の残基は、以下の通り
に略記される。

【００４６】

【表１】 ＡＩＩおよびその類似体は、ガンマまたはベータ回転のいずれかに適合するこ
とが示唆された（Ｒｅｇｏｌｉら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉ
ｅｗｓ ２６巻：６９頁（１９７４年）。一般に、位置Ｒ^３、Ｒ^５およびＲ^７に
ある中性の側鎖は、レセプターへの結合および／または固有の活性に一次的に起
因する位置Ｒ^４、Ｒ^６およびＲ^８にある活性基の間に適切な距離を維持するのに
関与しうることが分かる。位置Ｒ^３、Ｒ^５およびＲ^８にある疎水性側鎖は、ペプ
チドの全形態で重要な役割をも果し、および／または仮定的疎水性ポケットの形
成に寄与しうる。

【００４７】 位置Ｒ^２にあるアミノ酸上の適切な側鎖は、標的レセプターについての化合物
の親和性に寄与し、および／またはそのペプチドの形態に重要な役割を果しうる
。この理由のため、ＡｒｇおよびＬｙｓは、Ｒ^２として特に好ましい。

【００４８】 本発明の目的のために、Ｒ^３は、Ｒ^５（ガンマ反転モデルにある）またはＲ^６ （ベータ反転モデルにある）との線状または非線状の水素結合の形成に関与しう
ることが分かる。Ｒ^３も、ベータ逆平行構造（可能な構造として提案もされてい
る）で第一の反転に関与する。一般式Ｉ中の他の位置と対照的に、ベータおよび
ガンマ分岐は、この位置で等しく有効であるようである。さらに、単独の水素結
合は、比較的安定な形態を維持するのに十分でありうる。したがって、Ｒ^３は、
Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｉｂ、Ａｃ
ｐｃおよびＴｙｒから適切に選択されうる。

【００４９】 Ｒ^４に関しては、形態の分析では、この位置にある（並びにＲ^３およびＲ^５に
ある）側鎖が、レセプターの占有および刺激に必須であると思われる疎水性クラ
スターに寄与することが示唆されている。したがって、Ｒ^４は、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ
、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、ホモＳｅｒ、Ｓｅｒ、およびアザＴｙｒから構成される
のが好ましい。この位置で、Ｔｙｒは、フェノール性水酸基から得られる水素を
受け入れる能力のあるレセプター部位と水素結合を形成しうる場合、特に好まし
い（Ｒｅｇｏｌｉら、上記（１９７４年））。Ｒ^３も、適切にはＡｌａでありう
る。

【００５０】 位置Ｒ^５では、β脂肪族または脂環式鎖を有するアミノ酸が特に望ましい。し
たがって、Ｇｌｙが、位置Ｒ^５で適切である場合、この位置にあるアミノ酸は、
Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、ＧｌｙおよびＶａｌから選択されること
が好ましい。

【００５１】 本発明による特に興味深いアンギオテンシノゲン、ＡＩ、ＡＩ類似体、ＡＩ断
片およびその類似体、ＡＩＩ類似体、断片およびその類似体では、Ｒ^６は、Ｈｉ
ｓ、Ａｒｇまたは６−ＮＨ_２−Ｐｈｅである。ヒスチジンのイミダゾール環の特
徴的な特性（例えば、生理学的ｐＨでのイオン化、プロトンドナーまたはアクセ
プターとして作用する能力、芳香族特性）は、Ｒ^６としてその特定の利用性に寄
与すると考えらえる。例えば、形態的モデルは、Ｈｉｓが、Ｒ^７の配向性に影響
を及ぼすことによって逆平行構造の水素結合形成（ベータモデルで）に、または
第二の反転に関与しうることを示唆する。同様に、Ｒ^７は、Ｒ^８の最も望ましい
配向性を供するためにＰｒｏであるべきであると現在考えられる。位置Ｒ^８では
、疎水性環および陰イオン性カルボキシル末端の両方が、レセプターに対する目
的の類似体の結合の上で特に有用であるように見える。したがって、Ｔｙｒおよ
び特にＰｈｅは、本発明の目的として好ましい。

【００５２】 特に目的の類似体としては、以下のものが挙げられる。

【００５３】

【表２】 本発明のポリペプチドは、任意の従来の方法によって合成されうるが、それは
、それに限定さることなく、Ｊ．Ｍ．ＳｔｅｗａｒｔおよびＪ．Ｄ．Ｙｏｕｎｇ
、固相ペプチド合成（Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ）、２版、ピエ
ールス・ケミカル社．、イリノイ州ロックフォード（１９８４年）および固相合
成に関してはＪ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ、ホルモン性蛋白質およびペプチド（Ｈ
ｏｒｍｏｎａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）、２巻、アカデミック
・プレス社、ニューヨーク（１９７３年）および溶液合成に関してはＥ．Ｓｃｈ
ｒｏｄｅｒおよびＫ．Ｌｕｂｋｅ、Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、１巻、アカデミ
ック・プレス社、ニューヨーク（１９６５年）に規定されるものが挙げられる。
前述の協定の開示は、ここに参照して組込まれる。

【００５４】 一般に、これらの方法は、成長しているペプチド鎖への保護アミノ酸の連続添
加に関与する（米国特許番号第５，６９３，６１６号、全体的に参照してここに
組込まれる）。正常には、第一のアミノ酸のアミノまたはカルボキシル基のいず
れか、および任意の反応性側鎖基が保護される。その後、この保護アミノ酸は、
内部固形支持体に付着されるか、または溶液中で利用され、そして配列の次のさ
らに適切に保護されたアミノ酸を、アミノ酸結合の形成になじみ易い条件下で添
加する。全ての所望のアミノ酸が、適切な配列に繋げられた後、保護基および任
意の固形支持体を除去して、粗ポリペプチドを供する。ポリペプチドを脱塩し、
そして好ましくはクロマトグラフィーで精製して、最終生成物を得る。

【００５５】 好ましくは、製造業者の指示に従って、アプライド・バイオシステムズ・モデ
ル４３０Ａペプチド合成装置（アプライド・バイオシステムズ、カリフォルニア
州フォスター・シティー）で働きうるように、標準固相方法論にしたがって、ペ
プチドを合成する。固相方法論または液相のいずれかによる、ペプチドまたはペ
プチド擬似体を合成する他の方法は、当業者によく知られている。

【００５６】 １つの態様では、本発明は、アンギオテンシノゲン、アンギオテンシンＩ（Ａ
Ｉ）、ＡＩ類似体、ＡＩ断片およびその類似体、アンギオテンシンＩＩ（ＡＩＩ
）、ＡＩＩ類似体、ＡＩＩ断片または類似体、またはＡＩＩＡＴ_２２型レセプタ
ーアゴニスト（以降、「活性剤」に該当する）の投与を特徴とする、哺乳類にお
ける骨および軟骨の修復、治癒、および増大を増強する方法およびキットを提供
する。化合物は、単独で、または骨および／または軟骨の修復、治癒、および増
大を増強する他の化合物と組合せて投与することができるが、それに限定されず
に、骨形態発生蛋白質−２、骨形態発生蛋白質−４、骨形態発生蛋白質−６、骨
形態発生蛋白質−７、形質転換成長因子−ベータ、インシュリン様成長因子、お
よび甲状腺ホルモンが挙げられる。

【００５７】 活性剤は、従来の医薬上許容しうる担体、アジュバント、およびベヒクルを含
有する用量単位処方で、経口で、非経口で、吸入スプレーによって、直腸で、ま
たは局所でを含めた任意の適切な経路によって投与しうる。このようなベヒクル
は、そこに埋設された本発明の化合物を有するベヒクルとしてタンタルまたはヒ
ドロキシアパタイトの足場を含みうる。一方、高分子基質は、米国特許番号第５
，４４３，５１５号；第５，１７１，２７３号；第５，６０７，４７４号；第４
，９１６，２０７号；および第５，３２４，７７５号に開示される高分子基質の
ような骨または軟骨への化合物送出のために使用することができる。全ての文献
は、全体的にここに組込まれる。ここで使用される場合、語句非経口としては、
局所（すなわち、骨の中の位置）、皮下、静脈内、動脈内、筋内、基質内、腱内
、脊椎内、頭蓋内、胸内の注入技術または腹腔内が含まれる。

【００５８】 本発明の活性剤は、人工器官装置の表面上のコーティングに組込むこともでき
る。このようなコーティングは、適切な期間、骨付着を増強するのに十分な速度
で活性剤の拡散をゆっくりにさせる高分子から構成されうる。適切なコーティン
グとしては、それに限定されないが、ヒドロキシアパタイト、メタクリレートお
よびリン酸トリカルシウムが挙げられる。さらに、高分子コーティングは、骨の
内部成長が所望される人工器官装置上の部位にのみ使用しうる。骨移殖片を、移
植片に活性剤を染み込ませるように移殖前に洗浄剤またはゲルで被覆、または浸
漬または浸すことができる。処置を必要としない組織および臓器への薬の露出を
減らす場合、移殖の部位または移殖片それ自身のいずれかへの活性剤の局所また
は局部投与が、好ましい。

【００５９】 活性剤は、固形形態（顆粒、粉末または坐剤を含めた）で、または液体形態（
例えば、溶液、懸濁液、または乳液）で、作成しうる。本発明の化合物は、多様
な溶液で使用されうる。本発明による用途として適切な溶液は、無菌であり、十
分な量のペプチドを溶解させ、そして目的の法とに有害でない。この点で、本発
明の化合物は、非常に安定であるが、しかし、強酸および塩基によって加水分解
される。本発明の化合物は、有機溶媒に、およびｐＨ５−８での水性溶液に溶解
性がある。

【００６０】 活性剤は、無菌化のような従来の医薬上の操作にかけることができ、および／
または防腐剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝液などのような従来のアジュバ
ントを含みうる。

【００６１】 投与については、活性剤は、投与の例示経路のために適切な１つまたはそれ以
上のアジュバントと日常的に組み合わされる。化合物は、ラクトース、ショ糖、
スターチ粉末、アルカノール酸のセルロースエステル、ステアリン酸、タルク、
ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸および硫酸のナトリウム
およびカルシウム塩、アラビアゴム、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、ポリビ
ニルピロリジン、および／またはポリビニルアルコールと混合され、そして錠剤
化、または従来の投与のために封入されうる。選択的に、本発明の化合物は、生
理食塩水、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、カルボキシメ
チルセルロースコロイド性溶液、エタノール、コーン油、落花生油、綿実油、ゴ
マ油、トラガカントゴム、および／または種々の緩衝液に溶解されうる。他のア
ジュバントおよび投与の態様は、製薬業界でよく知られている。担体または希釈
剤としては、グリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートのよ
うな時間遅延材料を単独で、またはワックス、または当業界でよく知られる他の
材料と共に含みうる。

【００６２】 局所投与に適切な処方としては、皮膚を通しての浸透に適切な液体または半液
体製品（例えば、塗布剤、ローション、軟膏、クリームまたはペースト）、およ
び眼、耳または鼻への投与に適切な液滴が挙げられる。

【００６３】 骨および軟骨修復を活性剤で増強するための投与計画は、損傷の型、年齢、体
重、性別、個人の医療状況、症状の重篤度、投与の経路、および使用される特定
の化合物を含めた種々の因子に基づいている。したがって、投与計画は、広範に
変化しうるが、しかし、標準法を用いて医師によって日常的に投与されうる。０
．１ｎｇ／ｋｇと１０ｍｇ／ｋｇ体重の間の桁の活性剤の用量レベルは、ここに
開示される用途の全ての方法に有用である。

【００６４】 例として、化合物が、タンタルまたはヒドロキシアパタイトのような骨および
／または軟骨のために使用される足場に埋設される活性剤で骨および軟骨修復を
促進するための投与計画は、充填されるべき骨の容積に基づいているのであって
、治療されるべき対象の体重に基づいてはいない。欠陥に基づいて計算された、
対象に投与されるべき特定の用量体積の決定に続いて、個々の用量が準備される
。最終の送出薬製品は、１部（２０％）の活性剤（約．００１μｇ／ｍｌと約５
ｍｇ／ｍｌの間の濃度で）から４部（８０％）の希釈剤の比で防腐性の条件下で
混合される。

【００６５】 治療計画は、治療されるべき疾病によって変化もし、損傷の型、年齢、体重、
性別、個人の医療状況、症状の重篤度、投与の経路、および使用される特定の化
合物を含めた種々の因子に基づいている。例えば、活性剤は、３０日までの間、
骨粗鬆症の患者に投与される。療法は、上に記述される通り投与で毎日１から６
回投与される。

【００６６】 好ましい実施の態様では、活性剤は、皮下に投与される。活性剤の有効成分の
適切な皮下の用量は、骨または軟骨修復を増強するのに十分な時間、毎日２回、
投与される約０．１ｎｇ／ｋｇと約１０ｍｇ／ｋｇの間であるのが好ましい。さ
らに好ましい実施の態様では、活性剤の濃度は、約１００ｎｇ／ｋｇ体重と約１
０．０ｍｇ／ｋｇ体重の間にある。最も好ましい実施の態様では、活性剤の濃度
は、約１０μｇ／ｋｇ体重と約１０．０ｍｇ／ｋｇ体重の間にある。この投与計
画は、必要とされるアゴニストの量を最小限にしつつ、本発明の治療的利益を最
大限にする。このような使用法は、費用並びに可能な害のある副作用を最小限に
する。

【００６７】 皮下投与については、有効成分は、１０％ｗ／ｗと同じくらい包含しうるが、
０．０００１％から１０％ｗ／ｗ、例えば１％から２重量％の処方を包含でき、
好ましくは５％ｗ／ｗ未満、そしてさらに好ましくは０．１％から１％の処方を
含みうる。

【００６８】 本発明の別の好ましい実施の態様では、活性剤は、骨または軟骨損失または修
復の部位に局所で投与される。適切な局所用量および処方における有効成分濃度
は、皮下投与について記述される通りである。

【００６９】 別の好ましい実施の態様では、活性剤は、骨再吸収の部位にある歯肉組織で、
または非癒合性骨破損の部位に手術で移殖された足場での被膜送出を介するよう
に、骨または軟骨修復の所望の部位に投与される。処方における適切な用量およ
び有効成分濃度は、皮下の投与について記述される通りである。

【００７０】 本発明の１つの実施の態様では、生体外法は、単離した細胞集団を、アンギオ
テンシノゲン、ＡＩ、ＡＩ類似体、ＡＩ断片およびその類似体、ＡＩＩ、ＡＩＩ
類似体、ＡＩＩ断片およびその類似体および／またはＡＩＩＡＴ_２２型レセプタ
ーアゴニストと接触させながら、対象からの骨芽細胞集団の単離、および対象へ
の骨芽細胞集団の連続再注入を介して骨修復を増強するために表される。骨芽細
胞集団を単離するための方法は、記述されている（Ｈｉｒｕｍａら、１９９７年
；Ｌａｍｐａｒｔｅｒら、１９９８年）。好ましい実施の態様では、ヒトの骨細
胞は、骨折により股関節部置換を受けている患者から得られる大腿骨頭の管状骨
断片の副産物から培養され、そしていくつかの連続したコラゲナーゼ消化期間ま
で、１ｍｇ／ｍｌＩＩ型コラゲナーゼ溶液（ワーシントン・ダイアグノスチック
・システムズ）を用いて、消化期間当たり２０分間、処置される。

【００７１】 本発明の別の実施の態様では、生体外または生体内法は、単離された細胞集団
を活性剤に接触させながら、対象から軟骨細胞集団を単離すること、および対象
への軟骨細胞集団の連続した再注入を介して、軟骨修復を増強することについて
表される。軟骨細胞集団の単離は、記述されている。Ｋａｔｏら、Ｊ．Ｃｅｌｌ
Ｂｉｏｌ．１００巻、４７７−４８５頁（１９８５年）；米国特許番号第４，
６４２，１２０号；第５，０５３，０５０号；および第５，７３６，３７２号、
各々、全体的に参照してここに組込まれる）。

【００７２】 好ましい実施の態様では、自己のまたは同質の骨髄が、腸骨稜または大腿管か
ら骨生検針で吸い出すことによって得られる。（米国特許番号第５，０５３，０
５０号）。吸出した細胞を、０．２５％トリプシンを含むリン酸緩衝生理食塩水
（ＰＢＳ）に注入し、１７、１８および２０ゲージの針を通して連続して吸出し
て、単独の細胞懸濁液に達する。細胞を、５０−１００×１０^６細胞の密度で、
１００ｍｍ組織培養皿に載せ、１５％Ｆ．Ｃ．Ｓ．（胎仔ウシ血清）を有するＢ
ＧＪｂ培地（ＧＩＢＣＯ）で育成する。培地を、毎日、または細胞の増殖速度に
よって要求される通り交換する。培地は、約０．１ｎｇ／ｍｌと１０ｍｇ／ｍｌ
活性剤の間で補足される。細胞は、毎週予備培養され、そして５−６回予備培養
した後、ほとんど純粋な繊維芽間質細胞集団が達成される。その後、この細胞集
団をトリプシン処理し、そして３−８×１０^６細胞／ｍｌの培地の密度で懸濁培
養を付け加え、そしてその培地に毎日加えた１０％Ｆ．Ｃ．Ｓ．および５０μｇ
／ｍｌアスコルビン酸ナトリウムを有するＦ−１２培地中の軟質寒天上で培養す
る。繊維芽間質細胞は、すぐに凝集を開始し、そして３−７日後、細胞のほとん
どは、３０−６０細胞の凝集にある。全ての凝集は、分析のために組織化学的お
よび免疫組織化学的プローブを使用することによって決定される通り、軟骨細胞
表現型を発現する。

【００７３】 軟骨細胞から由来する骨髄が好ましいが、自己または相同の起源の軟骨細胞、
または相同の収容軟骨細胞、または任意の他の先祖細胞を使用することができる
。この当初の処方は、軟骨形成性表現型を発現する集団の精製、増殖および増幅
を含むことが分かりうる。さらに詳細には、増殖細胞は、骨髄間質細胞、胚性収
容軟骨細胞、および任意の未分化間葉細胞を含むクラスから得られる。

【００７４】 好ましい実施の態様では、軟骨細胞における本発明の活性剤の増殖性効果は、
非増殖細胞中でより増殖細胞中でより高い濃度で存在することが知られている蛋
白質に対して指示された抗体に対する反応性によって評価され、それにより限定
されないが、増殖細胞核抗原（ＰＣＮＡ、またはサイクリン；ザイムド・ラボラ
トリーズ、カリフォルニア州サウス・サンフランシスコ）が挙げられる。生育可
能な細胞は、トリパン・ブルー排除アッセイのような技術を使用して同定するこ
ともできる。対象に再注入されるべき細胞を、洗浄して培養液の全ての軌跡を除
去し、適切な培地に再懸濁し、そしてその後、ペレット化させ、そして数回洗浄
する。最終の洗浄後、細胞を、適切な培地中のｍｌ当たり０．７×１０^６および
５０×１０^６細胞の間で再懸濁し、そして以下に記述される通り投与する。

【００７５】 一方で、骨および軟骨細胞中でのマトリックス成分合成における活性剤の効果
は、全体的にここに参照して組込まれる米国特許番号第５，６８６，１１６号に
記述される通り、２つのマトリックス蛋白質の濃度を測定することによって、臓
器培養中および単離細胞中で決定される。Ｉ型コラーゲンは、骨および軟骨の主
要なマトリックス・蛋白質である。コラーゲンは、ほとんど全体的に、プロリン
、ＯＨ−プロリン、アラニンおよびグリシンから構成される。したがって、新た
な骨コラーゲン合成は、^３Ｈ−Ｐｒｏの取込みを、続いて^３Ｈ−ＯＨ−Ｐｒｏの
外観を測定することによって測定でき、そしてそれは、コラーゲンへのその組込
みに続いてプロリンを変換させることによって形成される。オステオカルシンは
、破骨細胞を骨に引きつけて、骨分解を開始するための細胞シグナルであるべき
と考えられ、そして新たに石化する骨の形成をゆっくりまたは遅らせると考えら
れる骨特異的マトリックス・蛋白質である。Ｐｒｉｃｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ
．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７９：７７３４−７７３８（１９８２年）。した
がって、オステオカルシン合成が減少したのは、骨修復に関連する。

【００７６】 任意の滑液細胞（軟骨形成）細胞が使用されうる。好ましい実施の態様では、
正常な滑液細胞に存在する多くの特性を維持する恒久的軟骨セルラインであるセ
ルラインＨＩＧ−８２が使用される。Ｇｅｏｒｇｅｓｃｕら、Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ
Ｃｅｌｌ． Ｄｅｖ． Ｂｉｏｌ．、２４巻：１０１５−１０２２頁（１９８
８年）。

【００７７】 滑液細胞は、２４−４８時間活性剤にさらし、その後、総細胞性ＲＮＡは、標
準手段によって単離される。（分子クローニング：実験室マニュアル（ＭＯｌｅ
ｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｒｙ Ｍａｎｕａｌ）（Ｓａ
ｍｂｒｏｏｋら、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｒｙ
Ｐｒｅｓｓ（１９８９年））。Ｉ型コラーゲンについてのｍＲＮＡの検出は、
それに限定されないが、Ｉ型コラーゲンまたはオステオカルシンに特異的なプラ
イマーを使用する逆転写ポリメラーゼ鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、またはＲＮＡの
ノーザンブロッティング、続いてＩ型コラーゲンまたはオステオカルシンのため
のプローブを用いたハイブリダイゼーションを含めた当業界で標準の技術を介し
て行うことができる。（分子クローニング：実験室マニュアル（Ｓａｍｂｒｏｏ
ｋら、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｒｙ Ｐｒｅｓ
ｓ（１９８９年））。

【００７８】 選択的に、Ｉ型コラーゲン合成の発現は、米国特許番号第５，６８６，１１６
号に記述される通り、臓器培養中で決定される。好ましい実施の態様では、新生
仔ラットから得た頭蓋冠（頭蓋）骨を、生存性を維持する栄養性培地を有する無
菌の培養皿に載せる。この状態で、構造組織は、新たなマトリックス成分（主に
骨特異性コラーゲン）を形成することによって成長するが、この成長は、非常に
遅い。Ｋｒｅａｍら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、１１６巻：２９６−３０２頁（１
９８５年）。２１日齢の胎仔ラットから得た片側頭蓋冠を、種々の濃度でアンギ
オテンシノゲン、ＡＩ、ＡＩ類似体、ＡＩ断片およびその類似体、ＡＩＩ、ＡＩ
Ｉ類似体、ＡＩＩ断片およびその類似体および／またはＡＩＩＡＴ_２２型レセプ
ターアゴニストの存在および不在下で４８時間インキュベートする。^３Ｈ−Ｐｒ
ｏを、インキュベーションの最後の１８時間に添加する。ＡＩＩが、胎仔ラット
の片側頭蓋冠中のプロリン（Ｐｒｏ）およびヒドロキシプロリン（ＯＨ−Ｐｒｏ
）の濃度を増加させることを示す結果は、ＡＩＩが、正常な骨培養系中のＩ型コ
ラーゲン合成の濃度を増加できることを示す。

【００７９】 別の実施の態様では、本発明は、本発明の活性剤の投与によって生体内で骨ま
たは軟骨修復を増強する方法を包含する。１つの実施の態様では、本発明の化合
物は、マウスの右頭蓋上の皮下組織に注入する。対照ベヒクルは、１％ＢＳＡで
補足したＰＢＳである。ヘパリンは、５０単位／ｍｌの用量で投与する。動物を
、１４日目に犠牲にし、そして骨成長は、組織形態学によって測定する。

【００８０】 定量のための骨サンプルを、隣接組織から取り出し、そして２４−４８時間、
１０％緩衝フォルマリンに固定し、１−３週間、１４％ＥＤＴＡで石灰質を除去
し、等級アルコールを通して加工し、そして流動ワックスに埋設する。頭蓋およ
び大腿骨の３ミクロンの切片を作製する。個々の切片は、骨形成および骨再吸収
上の活性剤の効果の組織形態学的評価のために選択される。切片は、顕微鏡画像
をデジタル化プレートに直接跡をつけるために取り付けたカメラを用いて測定す
る。骨変換は、頭蓋の注入および非注入側の両方にある４つの隣接１×１ｍｍフ
ィールドを越えて、２００ｍｕ ｍ離れて収集された切片上で測定される。新た
な骨は、層構造よりむしろそのウォーブンによって同定され、そして破骨細胞お
よび骨芽細胞は、それらの特有な形態学によって同定される。組織形態学のソフ
トウエア（骨測定、オステオメトリックス社、アトランタ）を使用して、デジタ
ライザー入力を加工して、細胞数および特性領域または周囲を測定する。

【００８１】 一方で、本発明の活性剤は、無傷の動物で骨芽細胞機能を高めるのに使用され
うる。好ましい実施の態様では、異常な骨芽細胞活性についてのモデルである離
乳しているスプレーグ−ドーリーのラットを、製造業者の指示による通り、リン
酸およびビタミンＤ−欠乏食餌（食餌、番号８００３９、テクラッド、ウイスコ
ンシン州マディソン）で世話をする。食餌中の動物は、暗所に維持して、デノバ
・ビタミンＤ合成を防止もする。このような条件に置かれた動物は、異常な骨形
成および総骨マスに際立った欠陥を示す。

【００８２】 食餌中の離乳しているラットの１群を、２１日間、１日おきに、皮下注射とし
て付与され、約０．１ｎｇ／ｋｇと１０ｍｇ／ｋｇの間で処置する。その食餌中
の１群は、未処理のままにし、そして対照として役割を果した。その食餌中でな
いおよび活性剤で処置していない１腹の対照は、血液サンプルを、アルカリ性ホ
スファターゼ活性の測定についての食餌中の動物を犠牲にするときに供給する。
犠牲により、長い骨を、連続分析のための食餌中の動物から取り出される。

【００８３】 血清のアルカリ性ホスファターゼ活性は、アルカリ性ホスファターゼ活性のレ
ベルが上昇していることが、実験動物での異常な骨転換の証拠であるように、骨
芽細胞活性の信頼性のある指標として使用される。血清のアルカリ性ホスファタ
ーゼ活性は、Ｌｏｗｒｙら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０７巻：１９−３７頁
（１９５４年）の方法により、血清サンプルによるリン酸ｐ−ニトロフェニルの
加水分解によって測定される。際立って上昇した血清のアルカリ性ホスファター
ゼ活性は、異常な骨芽細胞活性を示す。対照的に、骨細胞の機能の正常化は、対
照動物に比較して、血清のアルカリ性ホスファターゼ活性のレベルが減少するこ
と、および骨マス（骨の灰重量の測定を介して試験された）が増加することによ
って立証される。

【００８４】 一方、成体ウサギの大腿−膝蓋骨における全厚みの関節性軟骨欠陥モデルを使
用して、全体的に参照してここに組込まれる米国特許番号第５，７００，７７４
号に記述される通り軟骨および骨修復に影響を及ぼす本発明の化合物の能力を評
価する。成体ニュージーランドの白色ウサギを麻酔し、無菌の手術のために準備
する。関節性軟骨を通し、そして内在する肋軟骨下の骨への３×３ｍｍの傷が、
膝関節の膝蓋骨溝に穴をあける。傷は、空のままであるか、またはコラーゲン海
綿（対照）で、または約０．１ｎｇ／ｍｌと１０ｍｇ／ｍｌの間の活性剤に浸漬
されたコラーゲン海綿で満たされるかである。切り目を閉じ、そして動物を、４
週間、それらのケージ内で自由に移動させる。４週間後、動物を慈悲深く安楽死
させ、そして関節性軟骨／肋軟骨下の骨の傷を、修復組織の組織建築、量および
品質について組織学的に評価する。ノーザン分析を、別の表現型決めについて行
った。

【００８５】 別の実施の態様では、歯および整形外科の移殖片を、本発明の化合物で被覆す
ることができる。一般に、移殖片デバイスを、２ｍｇ／ｍｌ血清アルブミンを含
むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に０．１ｎｇ／ｍｌから１０ｍｇ／ｍｌの
範囲にある濃度で溶解された本発明の活性剤で被覆する。移殖片の多孔性末端を
、溶液に漬け、そして空気乾燥させ（または凍結乾燥させ）るか、骨の部位にす
ぐに移殖させる。コーティング溶液の粘度は、所望の場合、０．１ｍｇ／ｍｌか
ら１００ｍｇ／ｍｌまでの最終濃度でヒアルロネートを添加するか、または他の
医薬上許容しうる賦形剤を添加することによって増大される。選択的に、活性剤
を含む溶液を、２ｍｇ／ｍｌから１００ｍｇ／ｍｌの最終コラーゲン濃度まで、
コラーゲンゲルまたはヒトコラーゲン（例えば、ザイデルムの登録商標コラーゲ
ン・インプラント、コラーゲン社、カリフォルニア州パロアルト）と混合させて
、ペーストまたはゲルを形成し、そしてその後、それを使用して、移殖デバイス
の多孔性末端を被覆する。被覆した移殖デバイスを、直ぐに骨の部位に入れるか
、または空気乾燥させ、そして移殖片への新たな骨形成を最大限にする一方で、
移殖部位への軟質組織の内部成長を最小限にする目的で移殖前にＰＢＳで再水和
する。

【００８６】 別の態様では、本発明は、キットが骨または軟骨修復のための活性剤の有効量
、および治療剤として有効量の活性剤を使用するための指示を包含することを特
徴とする、骨または軟骨修復を増強するキットを提供する。好ましい実施の態様
では、キットは、さらに、上に記述されるそれらのアジュバントのような医薬上
許容しうる担体を含む。別の好ましい実施の態様では、患者への活性剤の送出の
ための手段を含む。このようなデバイスとしては、それに制限されないが、シリ
ンジ、マトリックス性またはミセル性溶液、包帯、創傷包帯剤、高分子足場、コ
ラーゲンベヒクル、エアゾールスプレー、液体フォーム、経皮性パッチ、局所投
与剤、ポリエチレングリコール高分子、カルボキシメチル・セルロース製品、晶
質製品（例えば、生理食塩水、リンガーのラクテート溶液、リン酸緩衝生理食塩
水など）、粘弾性物、ポリエチレングリコール、およびポリプロピレングリコー
ルが挙げられる。送出する手段は、有効量の活性剤を含有するか、または化合物
から分離されるかのいずれかでありうるが、それは、その後、使用時に送出のた
めの手段に使用される。

【００８７】 キットは、さらに、骨または軟骨の修復、再生、および増大のために有効な量
の別の化合物を含むことができ、そしてそれは、それらに限定されないが、骨の
形態発生蛋白質−２、骨の形態発生蛋白質−４、骨の形態発生蛋白質−６、骨の
形態発生蛋白質−７、形質転換成長因子−ベータ、インシュリン様成長因子、お
よび甲状腺傍ホルモンが挙げられる。キットは、都合により、医薬上許容しうる
担体を含有しうる。

【００８８】 本発明の別の態様では、軟骨細胞の増殖について改善された細胞培養用培地が
提供され、そしてここで、改善は、軟骨細胞増殖を刺激するのに有効量の活性剤
を細胞培養用培地に添加することを特徴とする。軟骨細胞の成長を指示できる任
意の細胞培養用培地が、本発明に使用できる。このような細胞培養用培地として
は、それに限定されないが、イーグル基本培地、ダルベッコ改質イーグル培地、
イスコフの改質ダルベッコ培地、マッコイ培地、最小必須培地、Ｆ−１０ニュー
トリエント・ミックスチャー、登録商標オプチ−ＭＥＭ（Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ．）
減少血清培地、ＲＰＭＩ培地、およびマクロファージ−ＳＦＭ培地またはそれら
の組合せが挙げられる。

【００８９】 改質された細胞培養用培地は、濃縮（すなわち、１０Ｘ）または非濃縮形態の
いずれかで供給でき、そして液体、粉末または凍結乾燥物のいずれかとして供給
しうる。細胞培養は、化学的に定義されるか、または血清補足物を含みうる。培
養培地は、ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ（メリーラント州ゲーサーズバーグ）およびシグ
マ（ミズーリー州セントルイス）のような多くの源から市販で入手可能である。

【００９０】 別の実施の態様では、本発明の方法は、軟骨細胞表現型および生存の細胞を維
持するために、関節性軟骨細胞のような軟骨細胞セルラインを処理するのに使用
されうる。したがって、処理された細胞集団は、遺伝子療法用途のために有用で
もありうる。

【００９１】 別の好ましい実施の態様では、キットは、さらに、無菌の容器を含む。無菌の
容器は、細胞培養用フラスコ、回転ボトルまたは遠心管のような密封された容器
、または細胞培養用プレートまたはマイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ；イリ
ノイ州ネーパービル）のような密封されない容器を含む。

【００９２】 別の好ましい実施の態様では、キットは、さらに、再構築細胞成長培地中の封
入物のための抗生物質補足物を含む。適切な抗生物質補足物としては、それに限
定されないが、アクチノマイシンＤ、登録商標フンギゾン（Ｆｕｎｇｉｚｏｎｅ
）、カナマイシン、ネオマイシン、ニスタチン、ペニシリン、ストレプトマイシ
ン、またはそれらの組合せ（ＧＩＢＣＯ）が挙げられる。

【００９３】 本発明の別の目的は、本発明の方法に使用するための成分として活性剤を含む
医薬組成物を提供することである。組成物は、活性剤を、骨または軟骨の移植、
修復および再生を増強もする、それに限定されないが、骨の形態発生蛋白質−２
、骨の形態発生蛋白質−４、骨の形態発生蛋白質−６、骨の形態発生蛋白質−７
、形質転換成長因子−ベータ、インシュリン様成長因子、および甲状腺傍ホルモ
ンを含めた化合物または化合物類と一緒に、医薬上許容しうる担体と一緒に含む
。この語句としては、活性剤および他の化合物の生物学的活性の効力に干渉しな
い任意の担体が含まれ、そしてそれは、投与される宿主に毒性がない。医薬組成
物の用量および投与は、上記の通り、損傷の型、年齢、体重、性別、個々の医療
上の症状、症状の重篤度、投与の経路、および使用される特定の化合物を含めた
種々の因子に基づいて、治療されるべき疾病によって変化する。したがって、投
与計画は、広範に変化できるが、しかし標準法を使用する医師によって日常的に
決定できる。

【００９４】 本発明は、それに限定されないが、骨粗鬆症、変形性関節症、パジェット病、
骨石灰脱失症、骨軟化症、歯周病；多発性骨髄腫および他の形態の癌から生じる
骨損失；他の医療処置（ステロイドのような）の副作用から生じる骨損失；骨マ
スの年齢に関連した損失；関節性軟骨裂傷、変形および他の軟骨傷を含めた広範
で多様な障害および損傷を患っている哺乳類における骨および軟骨修復を増強す
る方法の必要性を満たす。

【００９５】 実施例１．ウサギの軟骨細胞の培養の方法 軟骨細胞を、成体ウサギの膝関節の軟骨から単離し、そしてＯｋａｚａｋｉら
（Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．５５巻：１８１−１８６頁、１９９６年）の方
法によって培養した。簡略には、軟骨体外移殖組織を、小片（およそ１．５ｍｍ
対１．５ｍｍ）に切った。その組織片を、連続して、１０分間０．０５％ヒアル
ノニダーゼ（４１５Ｕ／ｍｇ蛋白質）中で、１５分間、０．２％ＩＩＩ型トリプ
シン（１０，０００Ｕ／ｍｇ蛋白質、シグマ）および０．５３ｍＭ ＥＤＴＡで
、そして３０分間、０．２％Ｉ型コラゲナーゼ（１３６Ｕ／蛋白質、シグマ）で
３７℃で消化させた。その後、サンプルを洗浄し、そして、１０％胎仔ウシ血清
、３．５ｍｇ／ｍｌグルコース、０．２％Ｉ型コラゲナーゼおよび抗生物質（１
００Ｕ／ｍｌペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン）で富化し
たダルベッコの改質イーグル培地で、空気中５％ＣＯ_２の中で３７℃で一夜イン
キュベートした。

【００９６】 このインキュベーションの後、細胞を回収し、そしてリン酸緩衝生理食塩水（
ｐＨ７．２）で１回洗浄した。その後、細胞を血球計数計で計数し、そして１０
％胎仔ウシ血清および抗生物質で補足したハムのＦ１２中１×１０^５細胞／ｍｌ
に再懸濁した。１０ｍｌアリコート量の細胞を、コラーゲンで被覆した２５ｃｍ ^２ フラスコ（ラット尾部腱から単離したコラーゲンで被覆された）に移し、そし
て空気中５％ＣＯ_２の中で３７℃でインキュベートした。培養の開始の５から７
日後、細胞を、空気中５％ＣＯ_２の中で３７℃で、０．０５％トリプシン−ＥＤ
ＴＡ（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ）で剥がした。剥離後、その細胞をリン酸緩衝生理食
塩水で一回洗浄し、１０％胎仔ウシ血清および抗生物質で補足したハムのＦ１２
中２００細胞／ｍｌに再懸濁した。その後、２００マイクロメーターの細胞を、
９６穴マイクロタイタープレートのコラーゲン被覆ウエルに分別し、そして粘着
させ、その後、表３に列記されるＡＩＩおよびＡＩＩ類似体および断片ペプチド
１０μｇ／ｍｌを、そのウエルに添加し、培養開始後１、２、および３日に、軟
骨細胞増殖におけるそれらの効果を評価した。ギムザ染色で細胞を染色すること
によって、細胞数を定量し、そして顕微鏡を介して検出される核の数を計数した
。データ（図１−４）は、ＡＩＩおよびＡＩＩ類似体および断片が全て、軟骨細
胞増殖を促進することを示す。

【００９７】

【表３】実施例１で使用された類似体／断片の名称 名称 略称 配列 配列番号 GSD 37B Orn²-AII D(Orn)VYIHPF 配列番号38 GSD 28 Ile⁸-AII DRVYIHPI 配列番号39 GSD 24B Pro³-AII DRPYIHPF 配列番号31 GSD 22A Ala⁴-AIII RVYAHPF 配列番号18 GSD 36 Gly¹-AII GRVYIHPF 配列番号42 GSD 38B Citron²-AII D(Citron)VYIHPF 配列番号43 1GD Ala⁴-AII(1-7) DRVAIHP 配列番号40 2GD Pro³-AII(1-7) DRPYIHP 配列番号41 3GD Pro³Ala⁴-AII(1-7) DRPAIHP 配列番号44 AIII AII(2-8) RVYIHPF 配列番号2 AII(1-7) DRVYIHP 配列番号4 AII DRVYIHPF 配列番号1 実施例２．骨治癒 雌のスプレーグ−ドーリーのラットが、ケタミン／ロンパンで筋内麻酔を受け
、そして手術部位を剃り、そしてベタジン・スクラブ、続いて７０％エタノール
でこすり洗うことによって無菌の手術を準備した。その後、ラットを、外科医に
面する側面臥位の位置にある無菌領域に載せた。その後、剃った脚を、ベタジン
溶液で覆い、そして防腐をかけた。皮膚の切り目を、右中央の骨幹の長い軸に平
行に行った。筋肉を、顔面に沿って分離して、脛骨を露出させた。その後、直径
１．４ｍｍの傷を、中軸の皮質の側面側から穴をあけて、その結果、傷は、骨髄
を介して、一方の皮質側から他方に伸長した。注射のために無菌の生理食塩水（
０．９％ＮａＣｌ）を、使用して、組織残骸および骨断片の手術領域を清浄した
。ヒドロン高分子溶液（ベヒクル：１０％ヒドロン、６０％エタノール、１％ポ
リエチレングリコール高分子）またはヒドロン高分子溶液中のペプチド（１ｍｇ
／ｍｌでのＡＩＩ、ＡＩＩ（１−７）、または９ＧＤ）のいずれかを、骨の傷に
注いで、傷に高分子（およそ０．１ｍｌの高分子）を充填した。切れ目を、連続
Ｕ字縫合を用いて３−０ビクリル縫合糸で閉じた。その動物を、麻酔から回復さ
せ、無痛覚のためにブプロネックスを付与し、そして安楽死が７日後になるまで
自由に運動させた。

【００９８】 全体観察によって、本発明のペプチドを受けた傷は、さらに完全に、石灰化し
始めた新たな組織で充填された。対照の傷の大半は、新たな組織で充填されたの
は５０％未満であり、そしてその組織の硬化は、観察されなかった。これらのデ
ータは、本発明のペプチドが、新たな骨組織の形成を促進することを示す。

【００９９】 全体評価後、筋肉組織を、骨から取除き、そして骨を、固定のためにホルマリ
ンに入れた。１０％緩衝ホルムアルデヒド中で２日後、その組織を、６時間、３
：１に希釈した脱石灰化溶液（ラピッド・ボーン・デカル（Ｒａｐｉｄ Ｂｏｎ
ｅ Ｄｅｃａｌ）、アメリカン・マスターテック・サイエンティフィック社、カ
リフォルニア州ロディ）に入れた。脱灰後、骨を、長い軸に沿って半分に切り、
パラフィンに埋設し、切片にし、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。

【０１００】 組織切片の顕微鏡評価は、全体観察を確認した。７日目に、傷がヒドロン（プ
ラセボ）で充填した傷は、自然で炎症であると観察された細胞の大半で充填され
たゆるいフィブリンフィラーを有した。偶然に、間葉臓器または血管のものであ
ると思われる細胞は、損傷の部位に見られた。ペプチドで処置した動物の全てで
、膨大な血管を有する広範囲にわたる間質細胞の内部成長が観察された。およそ
５０％のペプチドで処置した動物では、新たな骨の外観を伴う組織が観察された
。これらのデータは、新たな骨形成を促進するこれらのアンギオテンシン・ペプ
チドの能力を明らかに指示する。

【０１０１】

【表４】実施例２で使用された類似体／断片の名称 AII(1-7) DRVYIHP 配列番号4 AII DRVYIHPF 配列番号1 9GD ノルLeu3-AII(1-7) DR(ノル)YIHP 配列番号45 本発明は、操作の正確な詳細に、または示され、そして明らかな修飾および等
価物が、当業者に明らかであるように、記述された正確な化合物、組成物、方法
、手段または実施の態様に限定されるべきでなく、そしてしたがって、本発明は
、付随の請求項の全範囲によってのみ限定されるべきであると理解するべきであ
る。

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、軟骨細胞増殖におけるＡＩＩ、ＡＩＩＩおよびＧＳＤ３７Ｂ（１０μ
ｇ／ｍｌ）の効果を示す棒線である。

【図２】 図２は、軟骨細胞増殖における本発明のＡＩＩ、ＧＳＤ３６、ＧＳＤ３７Ｂ、
ＧＳＤ３８ＢおよびＧＳＤ２８（１０μｇ／ｍｌ）の効果を示す棒線である。

【図３】 図３は、軟骨細胞増殖におけるＡＩＩ、１ＧＤ、２ＧＤ、および３ＧＤ（１０
μｇ／ｍｌ）の効果を示す棒線である。

【図４】 図４は、軟骨細胞増殖における本発明のＡＩＩ、ＡＩＩ（１−７）、ＧＳＤ２
２Ａ、ＧＳＤ２２Ａ、ＧＳＤ２４Ｂ、およびＧＳＤ２８（１０μｇ／ｍｌ）の効
果を示す棒線である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｋ 7/14 ＺＮＡ Ａ６１Ｋ 37/36 Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，Ｊ Ｐ，ＭＸ，ＵＳ (72)発明者 ディゼレガ、 ギーア アメリカ合衆国 91106 カリフォルニア 州 パサデナ ヒルクレスト アヴェニュ ー 1270 Ｆターム(参考） 4B065 AA90X BD39 CA43 CA44 4C084 AA02 BA23 DB34 DB60 NA14 ZA961 ZA962 ZC061 ZC062 ZC081 ZC082 4H045 AA30 BA12 BA13 BA14 BA15 DA36 DA50 DA57 EA28

Claims (38)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式Ｉ Ｒ^１−Ｒ^２−Ｒ^３−Ｒ^４−Ｒ^５−Ｒ^６−Ｒ^７−Ｒ^８ （式中、Ｒ^１およびＲ^２は、一緒に式 Ｘ−Ｒ^Ａ−Ｒ^Ｂ−、 ［式中、Ｘは、Ｈまたは１個から３個までのペプチド基であるか、または存在せ
   ず、 Ｒ^Ａは、Ｈ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｃｐｃ（１−アミノシクロペンタン
   カルボン酸）、Ａｌａ、Ｍｅ^２Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｂｅｔ、Ｇｌｕ（ＮＨ_２）、Ｇ
   ｌｙ、Ａｓｐ（ＮＨ_２）およびＳｕｃから適切に選択され、 Ｒ^Ｂは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｏｒｎ、シトロン、Ｓｅｒ（Ａｃ）、Ｓａ
   ｒ、Ｄ−ＡｒｇおよびＤ−Ｌｙｓから適切に選択される］ で表される基を形成する； Ｒ^３は、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａ
   ｉｂ、ＡｃｐｃおよびＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、ホモＳｅｒ
   およびアザＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｖａｌ、およびＧｌｙから構
   成される群から選択される； Ｒ^６は、Ｈｉｓ、Ａｒｇまたは６−ＮＨ_２−Ｐｈｅである； Ｒ^７は、ＰｒｏまたはＡｌａである；および Ｒ^８は、末端Ｔｙｒ基としてＲ^４を含む配列を除外しながら、Ｐｈｅ、Ｐｈｅ
   （Ｂｒ）、ＩｌｅおよびＴｙｒから構成される群から選択されるか、または存在
   しない） で表される配列中の基Ｒ^１−Ｒ^８の少なくとも３つの隣接のアミノ酸から構成さ
   れる配列を含む少なくとも１つの活性剤の、哺乳類における骨修復を増強するの
   に有効な量を投与することを特徴とする、哺乳類における骨修復を増強する方法
   。
2. 【請求項２】 一般式Ｉ Ｒ^１−Ｒ^２−Ｒ^３−Ｒ^４−Ｒ^５−Ｒ^６−Ｒ^７−Ｒ^８ （式中、Ｒ^１およびＲ^２は、一緒に式 Ｘ−Ｒ^Ａ−Ｒ^Ｂ−、 ［式中、Ｘは、Ｈまたは１個から３個までのペプチド基であるか、または存在せ
   ず、 Ｒ^Ａは、Ｈ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｃｐｃ（１−アミノシクロペンタン
   カルボン酸）、Ａｌａ、Ｍｅ^２Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｂｅｔ、Ｇｌｕ（ＮＨ_２）、Ｇ
   ｌｙ、Ａｓｐ（ＮＨ_２）およびＳｕｃから適切に選択され、 Ｒ^Ｂは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｏｒｎ、シトロン、Ｓｅｒ（Ａｃ）、Ｓａ
   ｒ、Ｄ−ＡｒｇおよびＤ−Ｌｙｓから適切に選択される］ で表される基を形成する； Ｒ^３は、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａ
   ｉｂ、ＡｃｐｃおよびＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、ホモＳｅｒ
   およびアザＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｖａｌ、およびＧｌｙから構
   成される群から選択される； Ｒ^６は、Ｈｉｓ、Ａｒｇまたは６−ＮＨ_２−Ｐｈｅである； Ｒ^７は、ＰｒｏまたはＡｌａである；および Ｒ^８は、末端Ｔｙｒ基としてＲ^４を含む配列を除外しながら、Ｐｈｅ、Ｐｈｅ
   （Ｂｒ）、ＩｌｅおよびＴｙｒから構成される群から選択されるか、または存在
   しない） で表される配列中の基Ｒ^１−Ｒ^８の少なくとも３つの隣接のアミノ酸から構成さ
   れる配列を含む少なくとも１つの活性剤の、哺乳類における骨および人工器官移
   殖を増強するのに有効な量を投与することを特徴とする、哺乳類における骨およ
   び人工器官移殖についての改善方法。
3. 【請求項３】 （ａ）一般式Ｉ Ｒ^１−Ｒ^２−Ｒ^３−Ｒ^４−Ｒ^５−Ｒ^６−Ｒ^７−Ｒ^８ （式中、Ｒ^１およびＲ^２は、一緒に式 Ｘ−Ｒ^Ａ−Ｒ^Ｂ−、 ［式中、Ｘは、Ｈまたは１個から３個までのペプチド基であるか、または存在せ
   ず、 Ｒ^Ａは、Ｈ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｃｐｃ（１−アミノシクロペンタン
   カルボン酸）、Ａｌａ、Ｍｅ^２Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｂｅｔ、Ｇｌｕ（ＮＨ_２）、Ｇ
   ｌｙ、Ａｓｐ（ＮＨ_２）およびＳｕｃから適切に選択され、 Ｒ^Ｂは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｏｒｎ、シトロン、Ｓｅｒ（Ａｃ）、Ｓａ
   ｒ、Ｄ−ＡｒｇおよびＤ−Ｌｙｓから適切に選択される］ で表される基を形成する； Ｒ^３は、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａ
   ｉｂ、ＡｃｐｃおよびＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、ホモＳｅｒ
   およびアザＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｖａｌ、およびＧｌｙから構
   成される群から選択される； Ｒ^６は、Ｈｉｓ、Ａｒｇまたは６−ＮＨ_２−Ｐｈｅである； Ｒ^７は、ＰｒｏまたはＡｌａである；および Ｒ^８は、末端Ｔｙｒ基としてＲ^４を含む配列を除外しながら、Ｐｈｅ、Ｐｈｅ
   （Ｂｒ）、ＩｌｅおよびＴｙｒから構成される群から選択されるか、または存在
   しない） で表される配列中の基Ｒ^１−Ｒ^８の少なくとも３つの隣接のアミノ酸から構成さ
   れる配列を含む少なくとも１つの活性剤の、哺乳類における骨修復を増強するの
   に有効な量を投与すること、および （ｂ）哺乳類における骨修復を増強するのに有効な量の活性剤を使用することに
   ついて指示することを特徴とする、哺乳類における骨修復を増強するキット。
4. 【請求項４】 （ａ）一般式Ｉ Ｒ^１−Ｒ^２−Ｒ^３−Ｒ^４−Ｒ^５−Ｒ^６−Ｒ^７−Ｒ^８ （式中、Ｒ^１およびＲ^２は、一緒に式 Ｘ−Ｒ^Ａ−Ｒ^Ｂ−、 ［式中、Ｘは、Ｈまたは１個から３個までのペプチド基であるか、または存在せ
   ず、 Ｒ^Ａは、Ｈ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｃｐｃ（１−アミノシクロペンタン
   カルボン酸）、Ａｌａ、Ｍｅ^２Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｂｅｔ、Ｇｌｕ（ＮＨ_２）、Ｇ
   ｌｙ、Ａｓｐ（ＮＨ_２）およびＳｕｃから適切に選択され、 Ｒ^Ｂは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｏｒｎ、シトロン、Ｓｅｒ（Ａｃ）、Ｓａ
   ｒ、Ｄ−ＡｒｇおよびＤ−Ｌｙｓから適切に選択される］ で表される基を形成する； Ｒ^３は、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａ
   ｉｂ、ＡｃｐｃおよびＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、ホモＳｅｒ
   およびアザＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｖａｌ、およびＧｌｙから構
   成される群から選択される； Ｒ^６は、Ｈｉｓ、Ａｒｇまたは６−ＮＨ_２−Ｐｈｅである； Ｒ^７は、ＰｒｏまたはＡｌａである；および Ｒ^８は、末端Ｔｙｒ基としてＲ^４を含む配列を除外しながら、Ｐｈｅ、Ｐｈｅ
   （Ｂｒ）、ＩｌｅおよびＴｙｒから構成される群から選択されるか、または存在
   しない） で表される配列中の基Ｒ^１−Ｒ^８の少なくとも３つの隣接のアミノ酸から構成さ
   れる配列を含む少なくとも１つの活性剤の、哺乳類における骨および人工器官移
   殖を増強するのに有効な量を投与すること、および （ｂ）哺乳類における骨および人工臓器の移植を増強するのに有効な量の活性剤
   を使用することについて指示することを特徴とする、改善された骨および人工器
   官の移植のためのキット。
5. 【請求項５】 一般式Ｉ Ｒ^１−Ｒ^２−Ｒ^３−Ｒ^４−Ｒ^５−Ｒ^６−Ｒ^７−Ｒ^８ （式中、Ｒ^１およびＲ^２は、一緒に式 Ｘ−Ｒ^Ａ−Ｒ^Ｂ−、 ［式中、Ｘは、Ｈまたは１個から３個までのペプチド基であるか、または存在せ
   ず、 Ｒ^Ａは、Ｈ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｃｐｃ（１−アミノシクロペンタン
   カルボン酸）、Ａｌａ、Ｍｅ^２Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｂｅｔ、Ｇｌｕ（ＮＨ_２）、Ｇ
   ｌｙ、Ａｓｐ（ＮＨ_２）およびＳｕｃから適切に選択され、 Ｒ^Ｂは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｏｒｎ、シトロン、Ｓｅｒ（Ａｃ）、Ｓａ
   ｒ、Ｄ−ＡｒｇおよびＤ−Ｌｙｓから適切に選択される］ で表される基を形成する； Ｒ^３は、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａ
   ｉｂ、ＡｃｐｃおよびＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、ホモＳｅｒ
   およびアザＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｖａｌ、およびＧｌｙから構
   成される群から選択される； Ｒ^６は、Ｈｉｓ、Ａｒｇまたは６−ＮＨ_２−Ｐｈｅである； Ｒ^７は、ＰｒｏまたはＡｌａである；および Ｒ^８は、末端Ｔｙｒ基としてＲ^４を含む配列を除外しながら、Ｐｈｅ、Ｐｈｅ
   （Ｂｒ）、ＩｌｅおよびＴｙｒから構成される群から選択されるか、または存在
   しない） で表される配列中の基Ｒ^１−Ｒ^８の少なくとも３つの隣接のアミノ酸から構成さ
   れる配列を含む少なくとも１つの活性剤の、哺乳類に対する軟骨修復を増強する
   のに有効な量を投与することを特徴とする、哺乳類における軟骨修復を増強する
   方法。
6. 【請求項６】 （ａ）一般式Ｉ Ｒ^１−Ｒ^２−Ｒ^３−Ｒ^４−Ｒ^５−Ｒ^６−Ｒ^７−Ｒ^８ （式中、Ｒ^１およびＲ^２は、一緒に式 Ｘ−Ｒ^Ａ−Ｒ^Ｂ−、 ［式中、Ｘは、Ｈまたは１個から３個までのペプチド基であるか、または存在せ
   ず、 Ｒ^Ａは、Ｈ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｃｐｃ（１−アミノシクロペンタン
   カルボン酸）、Ａｌａ、Ｍｅ^２Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｂｅｔ、Ｇｌｕ（ＮＨ_２）、Ｇ
   ｌｙ、Ａｓｐ（ＮＨ_２）およびＳｕｃから適切に選択され、 Ｒ^Ｂは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｏｒｎ、シトロン、Ｓｅｒ（Ａｃ）、Ｓａ
   ｒ、Ｄ−ＡｒｇおよびＤ−Ｌｙｓから適切に選択される］ で表される基を形成する； Ｒ^３は、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａ
   ｉｂ、ＡｃｐｃおよびＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、ホモＳｅｒ
   およびアザＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｖａｌ、およびＧｌｙから構
   成される群から選択される； Ｒ^６は、Ｈｉｓ、Ａｒｇまたは６−ＮＨ_２−Ｐｈｅである； Ｒ^７は、ＰｒｏまたはＡｌａである；および Ｒ^８は、末端Ｔｙｒ基としてＲ^４を含む配列を除外しながら、Ｐｈｅ、Ｐｈｅ
   （Ｂｒ）、ＩｌｅおよびＴｙｒから構成される群から選択されるか、または存在
   しない） で表される配列中の基Ｒ^１−Ｒ^８の少なくとも３つの隣接のアミノ酸から構成さ
   れる配列を含む少なくとも１つの活性剤の、哺乳類に対する軟骨修復を増強する
   のに有効な量を投与すること、および （ｂ）哺乳類における軟骨修復を増強するのに有効な量の活性剤を使用すること
   について指示することを特徴とする、哺乳類における軟骨修復を増強するキット
   。
7. 【請求項７】 一般式Ｉ Ｒ^１−Ｒ^２−Ｒ^３−Ｒ^４−Ｒ^５−Ｒ^６−Ｒ^７−Ｒ^８ （式中、Ｒ^１およびＲ^２は、一緒に式 Ｘ−Ｒ^Ａ−Ｒ^Ｂ−、 ［式中、Ｘは、Ｈまたは１個から３個までのペプチド基であるか、または存在せ
   ず、 Ｒ^Ａは、Ｈ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｃｐｃ（１−アミノシクロペンタン
   カルボン酸）、Ａｌａ、Ｍｅ^２Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｂｅｔ、Ｇｌｕ（ＮＨ_２）、Ｇ
   ｌｙ、Ａｓｐ（ＮＨ_２）およびＳｕｃから適切に選択され、 Ｒ^Ｂは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｏｒｎ、シトロン、Ｓｅｒ（Ａｃ）、Ｓａ
   ｒ、Ｄ−ＡｒｇおよびＤ−Ｌｙｓから適切に選択される］ で表される基を形成する； Ｒ^３は、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａ
   ｉｂ、ＡｃｐｃおよびＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、ホモＳｅｒ
   およびアザＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｖａｌ、およびＧｌｙから構
   成される群から選択される； Ｒ^６は、Ｈｉｓ、Ａｒｇまたは６−ＮＨ_２−Ｐｈｅである； Ｒ^７は、ＰｒｏまたはＡｌａである；および Ｒ^８は、末端Ｔｙｒ基としてＲ^４を含む配列を除外しながら、Ｐｈｅ、Ｐｈｅ
   （Ｂｒ）、ＩｌｅおよびＴｙｒから構成される群から選択されるか、または存在
   しない） で表される配列中の基Ｒ^１−Ｒ^８の少なくとも３つの隣接のアミノ酸から構成さ
   れる配列を含む少なくとも１つの活性剤の、哺乳類における骨または他の組織へ
   の軟骨移殖片を付着および固定するのに有効な量を投与することを特徴とする、
   哺乳類における骨または他の組織への軟骨移殖片の付着および固定のための改善
   方法。
8. 【請求項８】 （ａ）一般式Ｉ Ｒ^１−Ｒ^２−Ｒ^３−Ｒ^４−Ｒ^５−Ｒ^６−Ｒ^７−Ｒ^８ （式中、Ｒ^１およびＲ^２は、一緒に式 Ｘ−Ｒ^Ａ−Ｒ^Ｂ−、 ［式中、Ｘは、Ｈまたは１個から３個までのペプチド基であるか、または存在せ
   ず、 Ｒ^Ａは、Ｈ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｃｐｃ（１−アミノシクロペンタン
   カルボン酸）、Ａｌａ、Ｍｅ^２Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｂｅｔ、Ｇｌｕ（ＮＨ_２）、Ｇ
   ｌｙ、Ａｓｐ（ＮＨ_２）およびＳｕｃから適切に選択され、 Ｒ^Ｂは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｏｒｎ、シトロン、Ｓｅｒ（Ａｃ）、Ｓａ
   ｒ、Ｄ−ＡｒｇおよびＤ−Ｌｙｓから適切に選択される］ で表される基を形成する； Ｒ^３は、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａ
   ｉｂ、ＡｃｐｃおよびＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、ホモＳｅｒ
   およびアザＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｖａｌ、およびＧｌｙから構
   成される群から選択される； Ｒ^６は、Ｈｉｓ、Ａｒｇまたは６−ＮＨ_２−Ｐｈｅである； Ｒ^７は、ＰｒｏまたはＡｌａである；および Ｒ^８は、末端Ｔｙｒ基としてＲ^４を含む配列を除外しながら、Ｐｈｅ、Ｐｈｅ
   （Ｂｒ）、ＩｌｅおよびＴｙｒから構成される群から選択されるか、または存在
   しない） で表される配列中の基Ｒ^１−Ｒ^８の少なくとも３つの隣接のアミノ酸から構成さ
   れる配列を含む少なくとも１つの活性剤の、哺乳類における骨または他の組織へ
   の軟骨移植片を付着および固定するのに有効な量、および （ｂ）哺乳類における骨または他の組織への軟骨移植片を付着および固定するの
   に有効な量の活性剤の有効量を使用する指示を特徴とする、骨または他の組織へ
   の軟骨移植片の改善した付着および固定のためのキット。
9. 【請求項９】 改善が、一般式Ｉ Ｒ^１−Ｒ^２−Ｒ^３−Ｒ^４−Ｒ^５−Ｒ^６−Ｒ^７−Ｒ^８ （式中、Ｒ^１およびＲ^２は、一緒に式 Ｘ−Ｒ^Ａ−Ｒ^Ｂ−、 ［式中、Ｘは、Ｈまたは１個から３個までのペプチド基であるか、または存在せ
   ず、 Ｒ^Ａは、Ｈ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｃｐｃ（１−アミノシクロペンタン
   カルボン酸）、Ａｌａ、Ｍｅ^２Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｂｅｔ、Ｇｌｕ（ＮＨ_２）、Ｇ
   ｌｙ、Ａｓｐ（ＮＨ_２）およびＳｕｃから適切に選択され、 Ｒ^Ｂは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｏｒｎ、シトロン、Ｓｅｒ（Ａｃ）、Ｓａ
   ｒ、Ｄ−ＡｒｇおよびＤ−Ｌｙｓから適切に選択される］ で表される基を形成する； Ｒ^３は、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａ
   ｉｂ、ＡｃｐｃおよびＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、ホモＳｅｒ
   およびアザＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｖａｌ、およびＧｌｙから構
   成される群から選択される； Ｒ^６は、Ｈｉｓ、Ａｒｇまたは６−ＮＨ_２−Ｐｈｅである； Ｒ^７は、ＰｒｏまたはＡｌａである；および Ｒ^８は、末端Ｔｙｒ基としてＲ^４を含む配列を除外しながら、Ｐｈｅ、Ｐｈｅ
   （Ｂｒ）、ＩｌｅおよびＴｙｒから構成される群から選択されるか、または存在
   しない） で表される配列中の基Ｒ^１−Ｒ^８の少なくとも３つの隣接のアミノ酸から構成さ
   れる配列を含む少なくとも１つの活性剤を、軟骨細胞の増殖を促進するのに有効
   な量で細胞に接触させることを特徴とする、軟骨細胞の培養のための改質培地。
10. 【請求項１０】 活性剤が、アンギオテンシノゲン、配列番号：１、配列番
    号：２、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６、配列番号
    ：７、配列番号：８、配列番号：９、配列番号：１０、配列番号：１１、配列番
    号：１２、配列番号：１３、配列番号：１６、配列番号：１７、配列番号：１８
    、配列番号：１９、配列番号：２０、配列番号：２１、配列番号：２２、配列番
    号：２３、配列番号：２４、配列番号：２５、配列番号：２６、配列番号：２７
    、配列番号：２８、配列番号：２９、配列番号：３０、配列番号：３１、配列番
    号：３２、配列番号：３３、配列番号：３４、配列番号：３５、配列番号：３６
    、配列番号：３７、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０、配列番
    号：４１、配列番号：４２、配列番号：４３、配列番号：４４、および配列番号
    ：４５から構成される群から選択される請求項９に記載の改質培地。
11. 【請求項１１】 （ａ）一般式Ｉ Ｒ^１−Ｒ^２−Ｒ^３−Ｒ^４−Ｒ^５−Ｒ^６−Ｒ^７−Ｒ^８ （式中、Ｒ^１およびＲ^２は、一緒に式 Ｘ−Ｒ^Ａ−Ｒ^Ｂ−、 ［式中、Ｘは、Ｈまたは１個から３個までのペプチド基であるか、または存在せ
    ず、 Ｒ^Ａは、Ｈ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｃｐｃ（１−アミノシクロペンタン
    カルボン酸）、Ａｌａ、Ｍｅ^２Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｂｅｔ、Ｇｌｕ（ＮＨ_２）、Ｇ
    ｌｙ、Ａｓｐ（ＮＨ_２）およびＳｕｃから適切に選択され、 Ｒ^Ｂは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｏｒｎ、シトロン、Ｓｅｒ（Ａｃ）、Ｓａ
    ｒ、Ｄ−ＡｒｇおよびＤ−Ｌｙｓから適切に選択される］ で表される基を形成する； Ｒ^３は、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａ
    ｉｂ、ＡｃｐｃおよびＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、ホモＳｅｒ
    およびアザＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｖａｌ、およびＧｌｙから構
    成される群から選択される； Ｒ^６は、Ｈｉｓ、Ａｒｇまたは６−ＮＨ_２−Ｐｈｅである； Ｒ^７は、ＰｒｏまたはＡｌａである；および Ｒ^８は、末端Ｔｙｒ基としてＲ^４を含む配列を除外しながら、Ｐｈｅ、Ｐｈｅ
    （Ｂｒ）、ＩｌｅおよびＴｙｒから構成される群から選択されるか、または存在
    しない） で表される配列中の基Ｒ^１−Ｒ^８の少なくとも３つの隣接のアミノ酸から構成さ
    れる配列を含む少なくとも１つの活性剤の、軟骨細胞の増殖を促進するのに有効
    な量、 （ｂ）軟骨細胞の増殖を促進するのに有効な量の活性剤の有効量を使用する指示
    を特徴とする、軟骨細胞の培養のためのキット。
12. 【請求項１２】 活性剤が、アンギオテンシノゲン、配列番号：１、配列番
    号：２、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６、配列番号
    ：７、配列番号：８、配列番号：９、配列番号：１０、配列番号：１１、配列番
    号：１２、配列番号：１３、配列番号：１６、配列番号：１７、配列番号：１８
    、配列番号：１９、配列番号：２０、配列番号：２１、配列番号：２２、配列番
    号：２３、配列番号：２４、配列番号：２５、配列番号：２６、配列番号：２７
    、配列番号：２８、配列番号：２９、配列番号：３０、配列番号：３１、配列番
    号：３２、配列番号：３３、配列番号：３４、配列番号：３５、配列番号：３６
    、配列番号：３７、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０、配列番
    号：４１、配列番号：４２、配列番号：４３、配列番号：４４、および配列番号
    ：４５から構成される群から選択される請求項１、２、５または７に記載の方法
    。
13. 【請求項１３】 活性剤が、アンギオテンシノゲン、配列番号：１、配列番
    号：２、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６、配列番号
    ：７、配列番号：８、配列番号：９、配列番号：１０、配列番号：１１、配列番
    号：１２、配列番号：１３、配列番号：１６、配列番号：１７、配列番号：１８
    、配列番号：１９、配列番号：２０、配列番号：２１、配列番号：２２、配列番
    号：２３、配列番号：２４、配列番号：２５、配列番号：２６、配列番号：２７
    、配列番号：２８、配列番号：２９、配列番号：３０、配列番号：３１、配列番
    号：３２、配列番号：３３、配列番号：３４、配列番号：３５、配列番号：３６
    、配列番号：３７、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０、配列番
    号：４１、配列番号：４２、配列番号：４３、配列番号：４４、および配列番号
    ：４５から構成される群から選択される請求項３、４、６、８、または１１に記
    載のキット。
14. 【請求項１４】 式 Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｒ１−Ｒ２−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｒ２ （式中、Ｒ１は、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびノルＬｅｕ
    から構成される群から選択される； Ｒ２は、ＴｙｒおよびＴｙｒ（ＰＯ_３）_２から選択される；および Ｒ３は、Ｐｈｅであるか、または存在しない） で表される少なくとも１つの活性剤の、哺乳類における骨修復を増強するのに有
    効な量を投与することを特徴とする、哺乳類における骨修復を増強する方法。
15. 【請求項１５】式 Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｒ１−Ｒ２−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｒ２ （式中、Ｒ１は、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびノルＬｅｕ
    から構成される群から選択される； Ｒ２は、ＴｙｒおよびＴｙｒ（ＰＯ_３）_２から選択される；および Ｒ３は、Ｐｈｅであるか、または存在しない） で表される少なくとも１つの活性剤の、哺乳類における骨および人工器官移植を
    増強するのに有効な量を投与することを特徴とする、哺乳類における骨および人
    工器官移植のための改善方法。
16. 【請求項１６】 活性剤が、配列番号：１、配列番号：４、配列番号：２４
    、配列番号：３１、配列番号：３２、配列番号：３３、配列番号：４１、および
    配列番号：４５から構成される群から選択される請求項１５または１６に記載の
    方法。
17. 【請求項１７】 （ａ）式 Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｒ１−Ｒ２−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｒ２ （式中、Ｒ１は、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびノルＬｅｕ
    から構成される群から選択される； Ｒ２は、ＴｙｒおよびＴｙｒ（ＰＯ_３）_２から選択される；および Ｒ３は、Ｐｈｅであるか、または存在しない） で表される少なくとも１つの活性剤の、哺乳類における骨修復を増強するのに有
    効な量；および （ｂ）哺乳類における骨修復を増強する活性剤の有効な量を使用する指示を特徴
    とする、哺乳類における骨修復を増強するためのキット。
18. 【請求項１８】 （ａ）式 Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｒ１−Ｒ２−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｒ２ （式中、Ｒ１は、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびノルＬｅｕ
    から構成される群から選択される； Ｒ２は、ＴｙｒおよびＴｙｒ（ＰＯ_３）_２から選択される；および Ｒ３は、Ｐｈｅであるか、または存在しない） で表される少なくとも１つの活性剤の、哺乳類における骨および人工器官を増強
    するのに有効な量；および （ｂ）哺乳類における骨および人工器官移植を増強する活性剤の有効な量を使用
    する指示を特徴とする、改善された骨および人工器官移殖のためのキット。
19. 【請求項１９】 活性剤が、配列番号：１、配列番号：４、配列番号：２４
    、配列番号：３１、配列番号：３２、配列番号：３３、配列番号：４１、および
    配列番号：４５から構成される群から選択される請求項１７または１８に記載の
    キット。
20. 【請求項２０】式 Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｒ４−Ｒ５−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｒ６ （式中、Ｒ１は、水素、Ｇｌｙ、およびＡｓｐから構成される群から選択される
    ； Ｒ２は、Ａｒｇ、シトロン、またはオルニチンから構成される群から選択され
    る； Ｒ３は、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、およびノルＬｅｕから構成される
    群から選択されるか、またはＰｒｏである； Ｒ４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、およびＡｌａから選択される； Ｒ５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびノルＬｅｕから構成される
    群から選択される；および Ｒ６は、Ｐｈｅ、Ｉｌｅであるか、または存在しない） で表される少なくとも１つの活性剤の、哺乳類における軟骨修復を増強するのに
    有効な量を投与することを特徴とする、哺乳類での軟骨修復を増強する方法。
21. 【請求項２１】式 Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｒ４−Ｒ５−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｒ６ （式中、Ｒ１は、水素、Ｇｌｙ、およびＡｓｐから構成される群から選択される
    ； Ｒ２は、Ａｒｇ、シトロン、またはオルニチンから構成される群から選択され
    る； Ｒ３は、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、およびノルＬｅｕから構成される
    群から選択されるか、またはＰｒｏである； Ｒ４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、およびＡｌａから選択される； Ｒ５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびノルＬｅｕから構成される
    群から選択される；および Ｒ６は、Ｐｈｅ、Ｉｌｅであるか、または存在しない） で表される配列を含む少なくとも１つの活性剤の、哺乳類における軟骨修復を増
    強するのに有効な量；および （ｂ）哺乳類における軟骨修復を増強するために活性剤の有効な量を使用する指
    示を特徴とする、哺乳類における軟骨修復を増強するキット。
22. 【請求項２２】式 Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｒ４−Ｒ５−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｒ６ （式中、Ｒ１は、水素、Ｇｌｙ、およびＡｓｐから構成される群から選択される
    ； Ｒ２は、Ａｒｇ、シトロン、またはオルニチンから構成される群から選択され
    る； Ｒ３は、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、およびノルＬｅｕから構成される
    群から選択されるか、またはＰｒｏである； Ｒ４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、およびＡｌａから選択される； Ｒ５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびノルＬｅｕから構成される
    群から選択される；および Ｒ６は、Ｐｈｅ、Ｉｌｅであるか、または存在しない） で表される少なくとも１つの活性剤の、哺乳類における骨または他の組織に軟骨
    移殖片を付着および固定するのに有効な量を投与することを特徴とする、哺乳類
    における骨または他の組織への軟骨移殖片を付着および固定するための改善方法
    。
23. 【請求項２３】式 Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｒ４−Ｒ５−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｒ６ （式中、Ｒ１は、水素、Ｇｌｙ、およびＡｓｐから構成される群から選択される
    ； Ｒ２は、Ａｒｇ、シトロン、またはオルニチンから構成される群から選択され
    る； Ｒ３は、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、およびノルＬｅｕから構成される
    群から選択されるか、またはＰｒｏである； Ｒ４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、およびＡｌａから選択される； Ｒ５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびノルＬｅｕから構成される
    群から選択される；および Ｒ６は、Ｐｈｅ、Ｉｌｅであるか、または存在しない） で表される少なくとも１つの活性剤の、哺乳類における骨または他の組織に軟骨
    移殖片を付着および固定するのに有効な量；および （ｂ）哺乳類における骨または他の組織に軟骨移殖片を付着および固定するのに
    有効な量の活性剤の有効量を使用する指示を特徴とする、哺乳類における骨また
    は他の組織への軟骨移殖片の改善された付着および固定のためのキット。
24. 【請求項２４】 活性剤が、配列番号：１、配列番号：２、配列番号：４、
    配列番号：１３、配列番号：１８、配列番号：１９、配列番号：１２、配列番号
    ：２４、配列番号：２６、配列番号：３２、配列番号：３３、配列番号：３８、
    配列番号：３９、配列番号：４０、配列番号：４１、配列番号：４２、配列番号
    ：４３、配列番号：４４、および配列番号：４５から構成される群から選択され
    る請求項２０または２２に記載の方法。
25. 【請求項２５】 改善が、式 Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｒ４−Ｒ５−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｒ６ （式中、Ｒ１は、水素、Ｇｌｙ、およびＡｓｐから構成される群から選択される
    ； Ｒ２は、Ａｒｇ、シトロン、またはオルニチンから構成される群から選択され
    る； Ｒ３は、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、およびノルＬｅｕから構成される
    群から選択されるか、またはＰｒｏである； Ｒ４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、およびＡｌａから選択される； Ｒ５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびノルＬｅｕから構成される
    群から選択される；および Ｒ６は、Ｐｈｅ、Ｉｌｅであるか、または存在しない） で表される配列を含む少なくとも１つの活性剤の、軟骨細胞の増殖を促進するの
    に有効な量を、細胞と接触させることを特徴とする、軟骨細胞の培養のための改
    質培地。
26. 【請求項２６】 活性剤が、配列番号：１、配列番号：２、配列番号：４、
    配列番号：１３、配列番号：１８、配列番号：１９、配列番号：１２、配列番号
    ：２４、配列番号：２６、配列番号：３２、配列番号：３３、配列番号：３８、
    配列番号：３９、配列番号：４０、配列番号：４１、配列番号：４２、配列番号
    ：４３、配列番号：４４、および配列番号：４５から構成される群から選択され
    る請求項２５に記載の培地。
27. 【請求項２７】 式 Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｒ４−Ｒ５−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｒ６ （式中、Ｒ１は、水素、Ｇｌｙ、およびＡｓｐから構成される群から選択される
    ； Ｒ２は、Ａｒｇ、シトロン、またはオルニチンから構成される群から選択され
    る； Ｒ３は、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、およびノルＬｅｕから構成される
    群から選択されるか、またはＰｒｏである； Ｒ４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、およびＡｌａから選択される； Ｒ５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびノルＬｅｕから構成される
    群から選択される；および Ｒ６は、Ｐｈｅ、Ｉｌｅであるか、または存在しない） で表される配列を含む少なくとも１つの活性剤の、軟骨細胞の増殖を促進するの
    に有効な量、および （ｂ）軟骨細胞の増殖を促進するのに有効な量の活性剤の有効量を使用する指示
    を特徴とする、軟骨細胞の培養のためのキット。
28. 【請求項２８】 活性剤が、配列番号：１、配列番号：２、配列番号：４、
    配列番号：１３、配列番号：１８、配列番号：１９、配列番号：１２、配列番号
    ：２４、配列番号：２６、配列番号：３２、配列番号：３３、配列番号：３８、
    配列番号：３９、配列番号：４０、配列番号：４１、配列番号：４２、配列番号
    ：４３、配列番号：４４、および配列番号：４５から構成される群から選択され
    る請求項２１、２３、または２７に記載のキット。
29. 【請求項２９】 活性剤の濃度が、約０．１ｎｇ／ｋｇと約１．０ｍｇ／ｋ
    ｇとの間にある請求項１、２、５、７、１２、１４、１５、１６、２０、２２、
    または２４に記載の方法。
30. 【請求項３０】 活性剤の濃度が、約０．１ｎｇ／ｋｇと約１．０ｍｇ／ｋ
    ｇとの間にある請求項３、４、６、８、１３、１７、１８、１９、２１、２３、
    または２８に記載のキット。
31. 【請求項３１】 活性剤の濃度が、約０．１ｎｇ／ｍｌと約１．０ｍｇ／ｍ
    ｌとの間にある請求項１１または２７に記載のキット。
32. 【請求項３２】 組織培養用培地をさらに含む請求項１１または２７に記載
    のキット。
33. 【請求項３３】 活性剤の送出のための手段をさらに含む請求項３、４、６
    、８、１３、１７、１８、１９、２１、２３、または２８に記載のキット。
34. 【請求項３４】 活性剤の濃度が、約０．１ｎｇ／ｍｌと約１．０ｍｇ／ｍ
    ｌとの間にある請求項９、10、２５、または２６に記載の培養培地。
35. 【請求項３５】 哺乳類における骨または軟骨修復、再生、または移植を増
    強するのに有効な量の、骨の形態発生蛋白質−２、骨の形態発生蛋白質−４、骨
    の形態発生蛋白質−６、骨の形態発生蛋白質−７、形質転換成長因子−ベータ、
    インシュリン様成長因子、および甲状腺傍ホルモンから選択される少なくとも１
    つの化合物をさらに含む請求項３、４、６、８、１３、１７、１８、１９、２１
    、２３、または２８に記載のキット。
36. 【請求項３６】 哺乳類における骨または軟骨修復、再生、または移植を増
    強するのに有効な量の、骨の形態発生蛋白質−２、骨の形態発生蛋白質−４、骨
    の形態発生蛋白質−６、骨の形態発生蛋白質−７、形質転換成長因子−ベータ、
    インシュリン様成長因子、および甲状腺傍ホルモンから選択される少なくとも１
    つの化合物を投与することをさらに特徴とする請求項１、２、５、７、１２、１
    ４、１５、１６、２０、２２、または２４に記載の方法。
37. 【請求項３７】 （ａ）式 Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｒ１−Ｒ２−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｒ２ （式中、Ｒ１は、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびノルＬｅｕ
    から構成される群から選択される； Ｒ２は、ＴｙｒおよびＴｙｒ（ＰＯ_３）_２から選択される；および Ｒ３は、Ｐｈｅであるか、または存在しない） で表される配列を含む少なくとも１つの活性剤の、哺乳類における骨または軟骨
    修復、骨および人工器官移殖、または軟骨移殖を増強するのに有効な量； （ｂ）哺乳類における骨修復または骨および人工器官移殖を増強するのに有効な
    量の、骨の形態発生蛋白質−２、骨の形態発生蛋白質−４、骨の形態発生蛋白質
    −６、骨の形態発生蛋白質−７、形質転換成長因子−ベータ、インシュリン様成
    長因子、および甲状腺傍ホルモンから選択される少なくとも１つの化合物；およ
    び （ｃ）医薬上許容しうる担体 を含む医薬組成物。
38. 【請求項３８】 （ａ）一般式Ｉ Ｒ^１−Ｒ^２−Ｒ^３−Ｒ^４−Ｒ^５−Ｒ^６−Ｒ^７−Ｒ^８ （式中、Ｒ^１およびＲ^２は、一緒に式 Ｘ−Ｒ^Ａ−Ｒ^Ｂ−、 ［式中、Ｘは、Ｈまたは１個から３個までのペプチド基であるか、または存在せ
    ず、 Ｒ^Ａは、Ｈ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｃｐｃ（１−アミノシクロペンタン
    カルボン酸）、Ａｌａ、Ｍｅ^２Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｂｅｔ、Ｇｌｕ（ＮＨ_２）、Ｇ
    ｌｙ、Ａｓｐ（ＮＨ_２）およびＳｕｃから適切に選択され、 Ｒ^Ｂは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｏｒｎ、シトロン、Ｓｅｒ（Ａｃ）、Ｓａ
    ｒ、Ｄ−ＡｒｇおよびＤ−Ｌｙｓから適切に選択される］ で表される基を形成する； Ｒ^３は、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａ
    ｉｂ、ＡｃｐｃおよびＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^４は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（ＰＯ_３）_２、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、ホモＳｅｒ
    およびアザＴｙｒから構成される群から選択される； Ｒ^５は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、ノルＬｅｕ、Ｖａｌ、およびＧｌｙから構
    成される群から選択される； Ｒ^６は、Ｈｉｓ、Ａｒｇまたは６−ＮＨ_２−Ｐｈｅである； Ｒ^７は、ＰｒｏまたはＡｌａである；および Ｒ^８は、末端Ｔｙｒ基としてＲ^４を含む配列を除外しながら、Ｐｈｅ、Ｐｈｅ
    （Ｂｒ）、ＩｌｅおよびＴｙｒから構成される群から選択されるか、または存在
    しない） で表される配列中の基Ｒ^１−Ｒ^８の少なくとも３つの隣接のアミノ酸から構成さ
    れる配列を含む少なくとも１つの活性剤の、哺乳類における骨修復または骨およ
    び人工器官移植を増強するのに有効な量、 （ｂ）哺乳類における骨修復または骨および人工器官移殖を増強するのに有効な
    量の、骨の形態発生蛋白質−２、骨の形態発生蛋白質−４、骨の形態発生蛋白質
    −６、骨の形態発生蛋白質−７、形質転換成長因子−ベータ、インシュリン様成
    長因子、および甲状腺傍ホルモンから選択される少なくとも１つの化合物；およ
    び （ｃ）医薬上許容しうる担体 を含む医薬組成物。