JP2002517406A - イオン交換クロマトグラフィーの使用による、凝集体からのタンパク質モノマーの分離 - Google Patents

イオン交換クロマトグラフィーの使用による、凝集体からのタンパク質モノマーの分離

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Abstract

(57)【要約】 ダイマーおよび／またはマルチマーを含む混合物からポリペプチドモノマーを分離する方法が開示される。この方法は、この混合物を、カチオン交換クロマトグラフィー樹脂またはアニオン交換クロマトグラフィー樹脂に付与する工程、およびこの混合物を、約０〜１Ｍの溶出塩のグラジエントで溶出する工程を包含し、ここでこの混合物中に存在するダイマーおよび／またはマルチマーからモノマーが分離される。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （発明の分野） 本発明は、イオン交換クロマトグラフィーを用いてダイマーおよび／またはそ
の他のマルチマーからポリペプチドモノマーを分離するプロセスに関する。
【０００２】 （背景技術および関連技術の説明） 組換え宿主から、真正の適切に折り畳まれたタンパク質を精製する試みは、こ
の分子の三次構造に起因して挫折している。この点について、組換えにより産生
された分子の精製は、しばしば、大部分が、不活性で、誤って折り畳まれた、不
溶性の、および／または可溶性のダイマー、マルチマー、およびジスルフィド結
合した凝集体からなる不均質な混合物を生じる。フラグメント、切れ目が入った
形態、酸化形態、およびグリコシル化形態のようなその他の異常分子もまた存在
し得る。従って、精製は困難であり、そして真正モノマーの収率はしばしば低い
。例えば、Ｅｌｌｉｏｔｔら、Ｊ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｈｅｍ．、９：９５−１
０４（１９９０）を参照のこと。
【０００３】 異なる技法を用いてこれらの問題が矯正されている。例えば、Ｃｈａｎｇおよ
びＳｗａｒｔｚ、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｆｏｌｄｉｎｇ：ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｄ
ｉｎ ｖｉｔｒｏ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ、１
９９３）、１７８〜１８８頁は、アルカリ緩衝液中の低濃度の尿素およびジチオ
トレイトール（ＤＴＴ）を用いて、Ｅ．ｃｏｌｉ中で産生された凝集したＩＧＦ
−Ｉを可溶化する方法を記載する。米国特許第５，２３１，１７８号は、カチオ
ン交換、疎水性相互作用，およびゲル濾過クラマトグラフィーの組み合わせを用
いて、Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓから正確に折り畳まれたモノマーＩＧＦ−Ｉの精製
方法を記載する。ＷＯ ９６／４０７７６は、酵母細胞培地を用いる最初のカチ
オン交換クロマトグラフィー、変性およびクロマトグラフィーを用い、そして逆
相高速液体クロマトグラフィーを実施して、酵母から真正の適切に折り畳まれた
ＩＧＦを産生する方法を記載する。
【０００４】 タンパク質およびペプチドモノマーの、それらのダイマー、テトラマー、およ
びマルチマーからの分離は、分離の科学者に重大な挑戦を提示する。サイズ排除
クロマトグラフィー（ＳＥＣ）およびタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）（
米国特許第５，２５６，２９４号および同５，４９０，９３７号）は、凝集体か
らモノマーを分離するために用いられているが、制限を有している。ＳＥＣは、
マルチマーからモノマーを、そしていくつかの場合にはダイマーからモノマーを
分離し得る。ＳＥＣの主要な制限は、１）大カラムまたは複数サイクルを必要と
する、限られた負荷容積（代表的にはベッド容積の５％）。２）および負荷タン
パク質濃度（低濃度の供給ストックが、予備濃縮またはカラムについて複数サイ
クルを必要とする。より高いタンパク質濃度は、より粘性であり得、それによっ
て分離の効率を低減する）である。歴史的に、ＴＦＦは、モノマーより１０倍大
きいタンパク質マルチマーを分離し得る。米国特許第５，２５６，２９４号。
【０００５】 米国特許第４，２２８，１５４号および同第５，２５０，６６３号は、混合物
からアルブミンの分離を開示する。米国特許第４，２２８，１５４号は、マルチ
マーからのモノマーの分離なくして、精製のためのカチオン交換クロマトグラフ
ィーおよびアニオン交換クロマトグラフィーステップ両方の使用を記載する。
【０００６】 日本特許出願特願平７−２８５８８５号は、免疫グロブリンモノマーを、モノ
マーおよびポリマーを含む混合物から分離するプロセスを記載し、ここで、この
免疫グロブリンの混合物は、カチオン交換樹脂に付与される。このプロセスは、
濾過を含むが、任意の材料の溶出は含まない。
【０００７】 良好であって、１つのイオン交換ステップのみの使用を必要とし、そしてＳＥ
ＣまたはＴＦＦの制限を有さない、ダイマーおよびマルチマーからモノマーを分
離する必要性が存在する。
【０００８】 （発明の要旨） 従って、本発明は、ダイマーおよび／またはマルチマーを含む混合物から、ポ
リペプチドモノマーを分離する方法を提供し、ここでこの方法は、緩衝液中のカ
チオン交換またはアニオン交換クロマトグラフィー樹脂のいずれかに上記混合物
を付与する工程、ここでこの樹脂がカチオン交換である場合、上記緩衝液のｐＨ
は約４〜７であり、そしてここでこの樹脂がアニオン交換である場合、上記緩衝
液のｐＨは約６〜９であり、そして約０〜１Ｍの溶出塩のグラジエントで上記混
合物を溶出する工程、ここで上記モノマーは、上記混合物中に存在するダイマー
および／またはマルチマーから分離される工程、を包含する。
【０００９】 この研究では、イオン交換クロマトグラフィー（アニオンまたはカチオンのい
ずれか）が、タンパク質またはポリペプチドモノマーを、それらのダイマーおよ
び／またはマルチマーから分離するための有効な手段であることを示す。分離は
、段階的または直線状グラジエント溶出のいずれかを用いて実施される。イオン
交換は、上記のようにＳＥＣおよびＴＦＦ法に比べいくつかの利点を有する。第
１に、分離は、負荷物中のポリペプチド濃度とは独立であり、そしてそれ故予備
濃縮を必要としない。第２に、樹脂には、３０ｍｇポリペプチド／ｍＬ樹脂より
多く負荷し得、そしてなお、優れた分離を達成する。第３に、イオン交換樹脂は
、安価でかつ容易に用い得る。代表的な分離は、９９．５％純度より大きいモノ
マーの濃縮、および９０％を超える収率を達成する。
【００１０】 （好適な実施態様の詳細な説明） （定義） 本明細書で用いるとき、「ポリペプチド」は、一般に、約１０より多いアミノ
酸を有するペプチドおよびタンパク質をいう。好ましくは、ポリペプチドは、そ
れらが「異種」、すなわち、Ｅ．ｃｏｌｉにより産生されるヒトタンパク質のよ
うな、利用されている宿主細胞にとって外来であることを意味する「外因性」で
ある。しかし、それらはまた、それらが天然に存在するネイティブな供給源由来
であり得る。
【００１１】 哺乳類ポリペプチドの例は、例えば、レニン、成長ホルモン（ヒト成長ホルモ
ン；ウシ成長ホルモン；成長ホルモン放出因子；副甲状腺ホルモン；甲状腺刺激
ホルモン；リポプロテイン類；１−アンチトリプシン；インスリンＡ−鎖；イン
スリンＢ−鎖；プロインスリン；トロンボポイエチン；卵胞刺激ホルモン；カル
シトニン；黄体形成ホルモン；グルカゴン；第ＶＩＩＩＣ因子、第ＩＸ因子、組
織因子、およびフォン・ビルブラント因子のような凝固因子；プロテインＣのよ
うな抗凝固因子；心房性ナトリウム利尿因子；肺界面活性物質；ウロキナーゼま
たはヒト尿または組織型プラスミノゲンアクチベータ（ｔ−ＰＡ）のような、プ
ラスミノゲンアクチベータ；ボンベシン；トロンビン；造血成長因子；腫瘍壊死
因子αおよびβ；エンケファリナーゼ；ヒト血清アルブミンのような血清アルブ
ミン；ミューラー阻害物質；レラキシンＡ−鎖；レラキシンＢ−鎖；プロレラキ
シン；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；β−ラクタマーゼのような微生物タ
ンパク質；ＤＮアーゼ；インヒビン；アクチビン；血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ
）；ホルモン類または成長因子類のレセプター；インテグリン；プロテインＡま
たはＤ；リウマチ因子；脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン
−３、−４、−５、または−６（ＮＴ−３、ＮＴ−４、ＮＴ−５、またはＮＴ−
６）のような神経栄養因子、またはＮＧＦのような神経成長因子；カルジオトロ
フィン−１（ＣＴ−１）のようなカルジオトロフィン類（心臓肥大因子）；血小
板由来成長因子（ＰＤＧＦ）；ａＦＧＦおよびｂＦＧＦのような線維芽細胞成長
因子；上皮増殖因子（ＥＧＦ）；ＴＦＧ−１、ＴＧＦ−２、ＴＧＦ−３、ＴＧＦ
−４、またはＴＧＦ−５を含む、ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−βのようなトランス
ホーミング増殖因子（ＴＧＦ）；インスリン様成長因子−Ｉおよび−ＩＩ（ＩＧ
Ｆ−ＩおよびＩＧＦ−ＩＩ）；デス（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ（脳ＩＧＦ−Ｉ）、
インスリン様成長因子結合タンパク質；ＣＤ−３、ＣＤ−４、ＣＤ−８、および
ＣＤ−１９のようなＣＤタンパク質類；エリスロポイエチン；骨誘導性因子類；
イムノトキシン類；骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）；インターフェロン−α，
−β、および−γのようなインターフェロン；ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）ま
たはウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）のような血清アルブミン；コロニー刺激因子
（ＣＳＦ）類、例えば、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＧ−ＣＳＦ；インタ
ーロイキン（ＩＬ）類、例えば、ＩＬ−１〜ＩＬ−１０；抗ＨＥＲ−２抗体；ス
ーパーオキシドジスムターゼ；Ｔ−細胞レセプター；表面膜タンパク質類；崩壊
促進因子；例えば、ＡＩＤＳエンベロープの部分のようなウイルス抗原；輸送タ
ンパク質類；ホーミングレセプター類；アドレシン類；調節タンパク質類；抗体
類；および上記に列挙したポリペプチドの任意のフラグメントのような分子を含
む。
【００１２】 目的の好ましいポリペプチドは哺乳類ポリペチドである。このような哺乳動物
ポリペプチドの例は、酵素類、ホルモン類、サイトカイン類、アルブミン類、ケ
モカイン類、イムノトキシン類、ウイルス成分類、抗体類、ニューロトロフィン
類、および抗原類を含む。適切なこのようなポリペプチドは、ＨＳＡ、ＢＳＡ、
抗ＩｇＥ、抗ＣＤ２０、抗ＩｇＧ、ｔ−ＰＡ、ｇｐ１２０、抗ＣＤ１１ａ、抗Ｃ
Ｄ１８、抗ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ、ＴＧＦ−β、アクチビン、インヒビン、抗ＨＥ
Ｒ−２、ＤＮアーゼ、ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ、脳ＩＧＦ−Ｉ、成長ホルモン
、レラキシン鎖、成長ホルモン放出因子、インスリン鎖またはプロインスリン、
ＮＧＦ、ＮＴ−３、ＢＤＮＦ、およびウロキナーゼのようなポリペプチドを包含
する。特に好適な哺乳類ポリペプチドは、例えば、ｔ−ＰＡ、ｇｐ１２０（ＩＩ
Ｉｂ）、抗ＨＥＲ−２、抗ＣＤ１１ａ、抗ＣＤ１８、抗ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ、Ｂ
ＳＡ、ＨＳＡ、抗ＣＤ２０、抗ＩｇＥ、抗ＩｇＧ、ＤＮアーゼ、ＩＧＦ−Ｉ、Ｉ
ＧＦ−ＩＩ、ＴＧＦ−β、ＩＧＦＢＰ−３、ＩＧＦＢＰ−２、ＩＧＦＢＰ−１、
成長ホルモン、ＮＧＦ、ＮＴ−３、ＮＴ−４、ＮＴ−５、およびＮＴ−６を含む
。より好適なポリペプチドは、抗体または血清アルブミン、より好適には、抗Ｉ
ｇＥ、抗ＩｇＧ、抗Ｈｅｒ−２、抗ＣＤ１１ａ、抗ＣＤ１８、抗ＣＤ２０、抗Ｖ
ＥＧＦ、ＢＳＡ、またはＨＳＡである。
【００１３】 本明細書における目的のために、「混合物」は、モノマー、およびダイマーも
しくはマルチマーのいずれかまたはダイマーおよびマルチマーの両方を含む。代
表的には、この混合物は、細胞、細胞成分、または細胞の産物に由来するかまた
はこれらを含む任意の液体を示す、生物学的液体である。生物学的液体は、発酵
ブロス、細胞培養上清液、細胞溶解物、清澄化細胞溶解物、細胞抽出物、組織抽
出物、血液、血漿、血清、痰、精液、粘液、ミルク、およびそれらのフラクショ
ンを含むがこれらに限定されない。この定義は、細胞が培養され、そして細胞産
物を含む栄養培地を示す細胞馴化培養培地を含む。
【００１４】 本明細書における目的のために、「イオン交換クロマトグラフィー樹脂」とは
、アニオン−またはカチオン−交換分離のためのクロマトグラフィー媒体をいう
。
【００１５】 本明細書で用いられるとき、「溶出塩」は、アルカリ土類塩、アルカリ金属塩
、またはアンモニウム塩、すなわち、アルカリ土類元素またはアルカリ金属元素
またはアンモニウムカチオンからのカチオンを有し、そして無機または有機（炭
化水素を基礎にした）アニオンを有する塩をいう。このような塩の例は、塩化ナ
トリウム、塩化アンモニウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウム、塩化カ
リウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、リン酸ナトリウム、リン酸カルシ
ウム、リン酸アンモニウム、リン酸マグネシウム、リン酸カリウム、硫酸ナトリ
ウム、硫酸アンモニウム、硫酸カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸カルシウムな
どを含む。本明細書において、好適な塩は、塩化物または硫酸塩である。本明細
書において最も好適な塩は塩化ナトリウムである。
【００１６】 本明細書で用いるとき、「マルチマー」は、ｎが３〜１０であるｎマー、すな
わち、ダイマーではないが凝集体を除くポリマーをいう。マルチマーに対して、
凝集体は、１０より大きいｎの値、および／または２百万ダルトンより大きい分
子量を有する、および／またはＳＵＰＥＲＯＳＥ６TM（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）の
ような分析用サイズ排除クロマトグラフィーカラムの排除容積に含まれる種であ
る。
【００１７】 （発明を実施する形態） 本発明は、ポリペプチドのモノマーを、それらのダイマーもしくはマルチマー
または両方から分離する方法に関する。この方法は、供給源がなんであれそこか
ら、モノマーおよびダイマーおよび／またはマルチマーの混合物を、クロマトグ
ラフィー分離に用いられる樹脂が、カチオン−またはアニオン−交換樹脂である
か否かに依存して、約４〜９の範囲のｐＨの平衡緩衝液中に配置することを包含
する。得られる混合物を、カチオン交換またはアニオン交換クロマトグラフィー
樹脂のいずれか上に負荷し、この混合物中に存在するｎマー（モノマー、ダイマ
ー、トリマー、テトラマーなど）すべてを捕捉する。イオン交換カラムクロマト
グラフィーには、通常の親和性のリガンドを用いて、所望の選択性および結合性
質を達成し得る。負荷することは、樹脂がアニオン交換である場合、約６〜９の
ｐＨの緩衝液で、そして樹脂がカチオン交換の場合、約４〜７で行われる。正確
なｐＨは、例えば、ポリペプチドの等電点に依存する。
【００１８】 樹脂がカチオン交換樹脂である場合、上記混合物を負荷する前に、マトリッス
クは、数カラム容積の希釈した弱酸（例えば、４カラム容積の、２０ｍＭ酢酸、
ｐＨ３、または２０ｍＭリン酸、ｐＨ約２．８）を用いて平衡化され得る。平衡
の後、混合物を添加し、そして混合物の溶出の前に、カラムはまた、弱い酢酸ま
たはリン酸溶液のような弱酸溶液を用いて１〜数回洗浄され得る。この目的のた
めに用いられる緩衝液は、例えば、ポリペプチド、および樹脂のアニオンまたは
カチオン性質に依存する。アニオン交換には、好ましくは、この緩衝液は、ＴＲ
ＩＳまたはリン酸緩衝液であり；カチオン交換には、この緩衝液は、好ましくは
、酢酸またはリン酸緩衝液である。
【００１９】 代表的には、イオン交換クロマトグラフィーは、約１８〜２５℃の温度、好ま
しくは約２０℃（室温）で実施される。好適なカラム負荷は、２０〜３０ｍｇ総
ポリペフチドあたり約１ｍｌの樹脂である。
【００２０】 イオン交換体へのｎマー分子の吸着後、混合物は、樹脂を適切なイオン強度を
有する溶出塩と接触させ、マトリックスからモノマーを置換することにより溶出
される。約０〜１Ｍの溶出塩グラジエントが用いられる。このグラジエントは直
線状または段階的であり得る。好ましくはこのグラジエントは、約０〜５００ｍ
Ｍ溶出塩、より好ましくは５０〜２００ｍＭ溶出塩、そして最も好ましくは０〜
５０ｍＭ溶出塩である。好ましくは、この溶出塩は、塩化ナトリウムのようなナ
トリウム塩であるが、当業者に公知のその他の溶出塩および濃度グラジエントも
また本明細書における使用を見いだす。溶出緩衝液の量は広く変化し得、そして
一般に約２〜４０カラム容積、好ましくは１０〜４０カラム容積の範囲である。
溶出後、溶出物を、総モノマー濃度についてアッセイし得る。
【００２１】 本明細書における好適なカチオン交換樹脂は、当該分野で公知の広範な種類の
材料を含み、広いｐＨ範囲に亘ってポリペプチドを結合し得るものを含む。例え
ば、カルボキシメチル化マトリックス、硫酸化マトリックス、アガロースを基礎
にするマトリックス、またはポリマーのポリスチレン／ジビニルベンゼンカチオ
ン交換マトリックスが特に好ましい。その他の有用なマトリックス材料は、繊維
状マトリックス、微粒子状マトリックス、およびビーズ状マトリックスのような
セルロースマトリックス；デキストラン、ポリアクリレート、ポリビニル、ポリ
スチレン、シリカ、およびポリエーテルマトリックス；およびコンポジットを含
むがこれらに限定されない。これらのマトリックスは、例えば、ＣＭ５２ ＣＥ
ＬＬＵＬＯＳＥＴＭ（Ｗｈａｔｍａｎ、Ｉｎｃ．）；Ｓ−ＨＹＰＥＲＤＴＭおよ
びＣＭ ＳＰＨＥＲＯＤＥＸＴＭ（Ｓｅｃｐｒａｃｏｒ）；ＳＰ ＳＥＰＨＡＲ
ＯＳＥ ＦＦＴＭ、ＤＥＡＥ ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ ＦＦＴＭ、ＣＭ−ＳＥＰＨ
ＡＲＯＳＥＴＭ、およびＲＥＳＯＵＲＣＥ ＳＴＭ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａ
ｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＡＢ）；およびＪＴ ＢＡＫＥＲ ＣＳＸＴＭ
（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、Ｉｎｃ．）、ならびに機能的リガンドＲ−ＳＯ３−を含
むもの、好ましくは、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ ＳＰ５５０ＣＴＭ（Ｔｏｓｏｈａａ
ｓ）およびＦＲＡＣＴＯＧＥＬ ＥＭＤＴＭＳＯ３−６５０（ｍ）（Ｍｅｒｃｋ
）のようなスルホプロピル樹脂を含む。カチオン交換クロマトグラフィーにおけ
る使用のためのその他の適切な材料は、当業者の知識内にある。
【００２２】 アニオン交換クロマトグラフィーは、当該分野で公知のような、そのために適
切な媒体を用いて実施される。適切な媒体は、例えば、ポリマーのポリスチレン
／ジビニルベンゼン樹脂およびアガロースを基礎にした樹脂、ならびにアガロー
スビーズ、デキストランビーズ、ポリスチレンビーズ、第三または第四アミン基
で誘導体化された不溶性の粒子状基体を含む媒体、およびトリメチルアミノエチ
ル基で誘導体化された支持体を含む。適切なこのような媒体の例は、ＤＥ９２Ｔ
Ｍ（ジエチルアミノエチルセルロース、Ｗｈａｔｍａｎ）；ＤＥＡＥ−ＣＥＬＬ
ＵＬＯＳＥＴＭ（Ｓｉｇｍａ）、ＢＡＫＥＲＢＯＮＤ ＡＢＸ ４０ｍｕＴＭ（
Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、Ｉｎｃ．）；ＦＲＡＣＴＯＧＥＬ ＥＭＤ ＤＥＡＥ−６
５０ＴＭ（ＥＭ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ）、ＦＲＡＣＴＯＧＥＬ ＥＭＤ Ｔ
ＭＡＥ−６５０（Ｓ）ＴＭ（ＥＭ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ、ＮＪ
）、ＴＳＫゲルＤＥＡＥ−ＳＰＷＴＭ（Ｔｏｓｏｈａａｓ）、ＤＥＡＥ−ＳＥＰ
ＨＡＲＯＳＥ ＣＬ−６ＢＴＭおよびキレート化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥＴＭ（Ａｍ
ｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＡＢ）、ＤＥＡＥ ＭＥ
ＲＥ ＳＥＰ．１０００ＴＭ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、およびＤＥＡＥ ＳＰＨ
ＥＲＯＤＥＸＴＭ（Ｓｅｐｒａｃｏｒ）のようなＤＥＡＥ樹脂；ＲＥＳＯＵＲＣ
Ｅ ＱＴＭおよびＱ ＳＥＰＨＡＲＯＳＥＴＭ（ＱＳＦＦ）（Ａｍｅｒｓｈａｍ
Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＡＢ）；およびＭＡＣＲＯ−ＰＥＰ
ＱＴＭ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ
）；Ｑ−ＨＹＰＥＲＤＴＭ（ＢｉｏＳｅｐｒａ、Ｉｎｃ．、Ｍａｒｌｂｏｒｏｕ
ｇｈ、Ｍａｓｓ）などを含む。その他の適切なアニオン交換クロマトグラフィー
材料、ならびに本出願のためのこれらの材料の選択および使用は、当該分野では
通常である。
【００２３】 イオン交換クロマトグラフィーから得られたモノマーの精製されたフラクショ
ンは、これらを、下流プロセッシングおよび精製のために設計された任意の適切
な技法に供することによりさらにプロセッシングされ得る。これは、ポリペプチ
ドのタイプおよびその意図された使用に大いに依存する。混合物中のダイマーお
よび／またはマルチマーからモノマーの所望の分離を行うために、１回のイオン
交換ステップが必要であるに過ぎないが、本発明では、所望であれば、このポリ
ペプチドの上流または下流プロセッシングにおいてより多いこのようなステップ
を用いることを排除しない。
【００２４】 本発明は、以下の実施例への参照によってより完全に理解される。しかし、そ
れらは本発明の範囲を制限するとして解釈されるべきではない。本明細書におけ
るすべての文献および特許の引用は参考として援用される。
【００２５】 （実施例Ｉ） この実施例は、抗ＩｇＥモノマーおよびウシ血清アルブミンモノマーのダイマ
ーおよびマルチマーからの分離を示す。
【００２６】 （材料および方法：） （樹脂：） Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｑ−ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ ＦＡＳＴ ＦＬＯＷＴＭ。４ｍ
Ｌ〜２３５Ｌ評価ベッド容積 Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＲＥＳＯＵＲＣＥ ＳおよびＲＥＳＯＵＲＣＥ ＱＴＭ：
１ｍＬ充填カラム ＪＴ Ｂａｋｅｒ ＣＳＸＴＭ、０．４６×５ｃｍ、５μ粒子 （タンパク質：） Ａ．Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｉｎｃ．から入手可能なヒト化抗ＩｇＥモノクロー
ナル抗体（ＩｇＧ１）：ｐＩ約７．５、Ｅ２５およびＥ２６と称される。１９９
３年３月４日に公開されたＷＯ９３／０４１７３は、ヒト化抗ＩｇＥ抗体、ここ
では、ヒトＩｇＥ（ＭａＥ１１）に対して惹起されたマウス抗体を用いてＣＤＲ
領域を提供し、これをＩｇＧ１免疫グロブリンフレーム枠中に置き換えた（ｒｈ
ｕＭａＥ２５）、を記載する。Ｅ−２５の研究およびさらなる記載のために、Ｃ
ａｃｉａら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３５：１８９７〜１９０３（１９９６
）もまた参照のこと。
【００２７】 Ｂ．不死化ヒトミエローマ細胞株Ｕ２６６Ｂ１（ＡＴＣＣ ＴＩＢ １９６）
の培養上清液から、単離された抗ＩｇＥ抗体（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ ＭＡＥ１）
上のアフィニティークロマトグラフィー精製を用いて調製されたモノクローナル
抗ＩｇＥ抗体。詳細には、６週齢の５匹のＢＡＬＢ／ｃ雌マウスを、それらの足
蹠中に、Ｒｉｂｉのアジュバント中の１０μｇの精製ＩｇＥで免疫化した。次の
注射を、最初の免疫化の後、１週間および３週間目に同様に行った。最後の注射
の３日後、鼠径リンパ節および膝窩リンパ節を取り出してプールし、そしてこの
組織を、スチールガーゼを通過させることにより単一細胞懸濁液を作製した。こ
の細胞を、４：１の比でマウスミエローマＰ３Ｘ６３−Ａｇ８．６５３（ＡＴＣ
Ｃ ＣＲＬ１５８０）と、５０％Ｗ／Ｖポリエチレングリコール４０００を含む
高グルコース（ＤＭＥＭ）中で融合した。あるいは、注射あたり３０μｇのＩｇ
Ｅを用い、そしてＩｇＥフラグメント３１５〜３４７（Ｋｏｂａｔ）を灌流追加
免疫としてアッセイしたか；または注射を、１００μｇの２回の投与量および５
０μｇの最終追加免疫を皮下に行い、そして脾臓細胞を融合に用いたことを除い
て同様の方法で免疫を行った。
【００２８】 次いで、融合細胞を、９６ウェルの組織培養プレート中ウェルあたり２×１０
５の密度でプレートに入れた。２４時間後、ＨＡＴ選択培地ヒポキサンチン／ア
ミノプテリン／チミジン、Ｓｉｇｍａ、＃Ｈ０２６２を添加した。プレートした
１４４０のウェルのうち、ＨＡＴ選択の後、３６５が増殖細胞を含んでいた。
【００２９】 融合の１５日後、上清液を、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用い
てヒトＩｇＥに特異的な抗体の存在について試験した。このＥＬＩＳＡは、すべ
てのインキュベーションを室温で行って以下のように実施した。試験プレート（
Ｎｕｎｃ Ｉｍｍｕｎｏｐｌａｔｅ）を、５０ｍＭ炭酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ
９．６中の１μｇ／ｍｌのラット抗マウスＩｇＧ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａ
ｎｎｈｅｉｍ、＃６０５〜５００）で２時間の間コートし、次いでリン酸緩衝化
生理食塩水（ＰＢＳ）中の０．５％ウシ血清アルブミンで３０分間ブロックし、
次いで０．０５％ＴＷＥＥＮ２０ＴＭを含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）で４回洗浄した
。試験上清液を添加し、そして振盪しながら２時間インキュベートし、次いでＰ
ＢＳＴで４回洗浄した。ヒトＩｇＥ（上記のようにＵ２６６細胞から精製した）
を、０．５μｇ／ｍｌで添加し、そして振盪しながら１時間インキュベートし、
次いでＰＢＳＴ中４回洗浄した。西洋ワサビペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ヒトＩ
ｇＥ（Ｋｉｒｋｅｇａｒｒｄ＆Ｐｅｒｒｙ Ｌａｂｓ、＃１４−１０−０４、０
．５ｍｇ／ｍｌ）を１：２５００希釈で添加し、そして１時間インキュベートし
、次いでＰＢＳＴで４回洗浄した。このプレートに、２５ｍｌリン酸クエン酸緩
衝液、ｐＨ５．０中１０ｍｇのｏ−フェニレンジアミンジヒドロクロライド（Ｓ
ｉｇｍａ、＃Ｐ８２８７）および１０μｌの３０％過酸化水素溶液を含む溶液を
１００μｌ／ウェル添加し、そして１５分間インキュベートすることにより発色
した。反応を、２．５Ｍ硫酸を１００μｌ／ウェル添加することにより停止した
。データは、このプレートを、自動化ＥＬＩＳＡプレートリーダー中４９０ｎｍ
の吸光度で読みとることにより得た。１つの抗体に対して、３６５個の上清液を
試験し、そして１００個がヒトＩｇＥに特異的であった。その他の抗体に対して
クスリーニングしたとき、ＩｇＥ特異性の同様の頻度が得られた。
【００３０】 Ｃ．ウシ血清アルブミン：ｐＩ ４．７および４．９（Ｒａｄｏｌａ、Ｂｉｏ
ｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、２９５：４１２〜４２８（１９７３））
・Ｂａｙｅｒ Ｃｏｒｐ．Ｐ／Ｎ ８１−０２４−２、「ウシアルブミン、スル
フヒドリル修飾」（ＢＳＡ Ｍｉｘ、ブロック化） ・ＩＣＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｉｎｃ．Ｐ／Ｎ ８１００１３、「アルブミ
ンウシ」（ＢＳＡ Ｍｉｘ、ネイティブ） ・Ｂａｙｅｒ ＢＳＡから実験室で調製したＢＳＡモノマーおよびダイマー（そ
れぞれＢＳＡモノマーおよびＢＡＳダイマー） （クロマトグラフィーシステム：） Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ １０９０ＴＭＨＰＬＣ ＰｈａｒｍａｃｉａＴＭＦＰＬＣ ２１５または２８０ｎｍにおける検出 （緩衝液：（詳細は表Ｉを参照のこと）） 精製水 Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ 酢酸ナトリウム 塩化ナトリウム リン酸ナトリウム クエン酸ナトリウムおよびクエン酸 （試料調製：） 試料を、平衡に用いた緩衝液（以下の表１に示される）で希釈しｐＨを確実に
し、そして電導度を開始カラム条件に一致させた。すべての試料を負荷前に０．
２μｍ濾過した。
【００３１】 （クロマトグラフィー：） 試料を、自動または手動インジェクターのいずれかを用いてカラムに導入した
。すべての操作は室温で行った。フラクションは、手動またはＰＨＡＲＭＡＣＩ
Ａ ＦＲＡＣ １００ＴＭコレクターで集めた。
【００３２】 クロマトグラフィーの分離性能は、ＢＳＡストック試薬の溶出プロフィールと
精製ＢＳＡモノマーおよびダイマーの溶出プロフィールを比較することにより評
価した；同じことをＩｇＥおよびモノクローナル抗体（ＭＡｂ）について行った
。ＩｇＥおよびＭＡｂの、それらのダイマーおよびマルチマーからの分離を、分
析用サイズ排除クロマトグラフィーを用いて溶出フラクションを分析することに
よってさらに評価した。ＭＡｂ ＭＷ形態 対 フラクション数のプロットを作
成した。ＩｇＥおよびＭＡｂの回収は、２８０ｎｍにおける吸光度を測定するこ
とにより分光学的に測定した。
【００３３】 （結果：） 結果を以下の表１に要約する。
【００３４】
【表１】 分離は、ポリマーのポリスチレン／ジビニルベンゼン樹脂（ＲＥＳＯＵＲＣＥ
ＱおよびＳＴＭ）、シリカを基礎にした樹脂（ＪＴ ＢＡＫＥＲ ＣＳＸＴＭ
）、およびアガロースを基礎にした樹脂（Ｑ−ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ ＦＡＳＴ
ＦＬＯＷＴＭ、ＱＳＦＦ）を用いて評価した。分離は、これら樹脂のいずれを用
いても達成されたが、特に、分離はＱ−ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ ＦＡＳＴ ＦＬＯ
ＷＴＭ、ＲＥＳＯＵＲＣＥ ＱＴＭ、およびＲＥＳＯＵＲＣＥ ＳＴＭ上で良好
に行われた。ＢＳＡモノマーおよびダイマーの両方の供給者からの分離は、非常
に類似して見え、Ｂａｙｅｒからの「スルフヒドリル修飾」材料は、分子種がよ
り容易に分離されるようにはこのタンパク質を改変しなかったことを示唆した。
ｐＨ６でリン酸緩衝液が良好に作用したことが観察され得るが、平衡緩衝液とし
て、ｐＨ６で２０ｍＭクエン酸緩衝液を用いた場合、タンパク質は、カチオンま
たはアニオン交換カラムに結合しなかった。クエン酸緩衝液は、より低濃度、例
えば約５ｍＭでアニオンおよびカチオン交換の両方について作用することが期待
される。
【００３５】 代表的には、アニオン交換樹脂上のモノマーＩｇＥおよびＩｇＥに対するＭＡ
ｂの回収は、９９．５％より大きい純度で９０％より多い。図１Ａおよび１Ｂは
、ＩｇＥモノマーのダイマーおよびマルチマーからの分離におけるアニオン交換
（ＲＥＳＯＵＲＣＥＴＭＱ）クロマトグラムを示す。図２Ａ１および２Ａ２は、
抗ＩｇＥ ＭＡｂモノマーのダイマーおよびマルチマーからの分離におけるアニ
オン交換（ＲＥＳＯＵＲＣＥＴＭＱ）クロマトグラムを示す。図２Ｂは、抗Ｉｇ
Ｅ ＭＡｂモノマーのダイマーおよびマルチマーからの分離におけるアニオン交
換（Ｑ−ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ ＦＡＳＴ−ＦＬＯＷＴＭ）クロマトグラムを示す
。ＳＥＣ（ＳＵＰＥＲＤＥＸ ２００ ＨＲ １０／３０ＴＭ）を、イオン交換
分離からの試料中のモノマーおよびマルチマーの量を測定する分析方法として用
い、そして図２Ｃは、図２ＢからのフラクションのＳＥＣ分析を示す。ダイマー
からのＢＳＡモノマーの分離は、ｐＨ８およびｐＨ６におけるアニオン交換樹脂
上で容易に達成された。ｐＨ８（Ｔｒｉｓ緩衝液）およびｐＨ６（リン酸緩衝液
）におけるアニオン交換（ＲＥＳＯＵＲＣＥＴＭＱ）によるダイマーおよびマル
チマーからのＢＳＡモノマーの分離におけるクロマトグラムについては、図３Ａ
〜Ｃおよび４Ａ〜Ｃをそれぞれ参照のこと。
【００３６】 カチオン交換樹脂からのＭＡｂモノマーの回収および純度は、アニオン交換樹
脂のそれに匹敵した。図５Ａ〜Ｂは、ｐＨ６（リン酸緩衝液）におけるダイマー
およびマルチマーからの抗ＩｇＥＭＡｂモノマーの分離におけるカチオン交換（
ＲＥＳＯＵＲＣＥＴＭ Ｓ）クロマトグラムを示す。カチオン交換樹脂上のＢＳ
Ａの分離は、ｐＨ４．６および４．３（４．３が幾分良好）で実施され得る。図
６Ａ〜Ｂは、ｐＨ４．３（酢酸緩衝液）におけるダイマーおよびマルチマーから
のＢＳＡモノマーの分離におけるカチオン交換（ＲＥＳＯＵＲＣＥＴＭＳ）クロ
マトグラムを示す。
【００３７】 要約すれば、ポリペプチド多量体の混合物を、種々の樹脂を用い、および種々
のｐＨおよび溶出塩条件の下で、カチオンまたはアニオン交換クロマトグラフィ
ーに供し、そして首尾よく分離が達成された。塩基性および酸性等電点を持つ４
つのタンパク質（２つのＩｇＧ１ ＭＡｂ、ＩｇＥおよび血清アルブミン）から
の結果に基づき、この方法が、ポリペプチドモノマーのそれらのダイマーおよび
マルチマーからの分離に一般に適用可能であることを示す。
【図面の簡単な説明】
【図１Ａ】 図１Ａは、ＲＥＳＯＵＲＣＥ ＱTMアニオン交換カラム上での、Ｕ２６６ Ｉ
ｇＥモノマーの、ダイマーおよびマルチマーからの分離を示す。カラムを、２５
ｍＭ Ｔｒｉｓ／ｐＨ８中で平衡化し、そして１０カラム容積に亘って０〜０．
５Ｍの塩化ナトリウムのクラジエントで溶出した。図１Ａは、ダイマー類および
マルチマー類を示すフルスケールの図である。
【図１Ｂ】 図１Ｂは、ＲＥＳＯＵＲＣＥ ＱTMアニオン交換カラム上での、Ｕ２６６ Ｉ
ｇＥモノマーの、ダイマーおよびマルチマーからの分離を示す。カラムを、２５
ｍＭ Ｔｒｉｓ／ｐＨ８中で平衡化し、そして１０カラム容積に亘って０〜０．
５Ｍの塩化ナトリウムのクラジエントで溶出した。図１Ｂは、ダイマー類および
マルチマー類を示すクローズアップの図である。
【図２Ａ１】 図２Ａ１は、抗ＩｇＥモノクローナル抗体モノマーの、ダイマーおよびマチル
マーからの分離を示す。図２Ａ１は、ＲＥＳＯＵＲＣＥ ＱTMアニオン交換カラ
ム上で行う。図２Ａ１は、ダイマー類およびマルチマー類を示すフルスケールの
図である。カラムは２５ｍＭ Ｔｒｉｓ／ｐＨ８中で平衡化した。図２Ａのパネ
ルで用いたグラジエントは、４０カラム容積に亘る０〜０．５Ｍ塩化ナトリウム
であった。
【図２Ａ２】 図２Ａ２は、抗ＩｇＥモノクローナル抗体モノマーの、ダイマーおよびマチル
マーからの分離を示す。図２Ａ２は、ＲＥＳＯＵＲＣＥ ＱTMアニオン交換カラ
ム上で行う。図２Ａ２は、ダイマー類およびマルチマー類を示すクローズアップ
の図である。カラムは２５ｍＭ Ｔｒｉｓ／ｐＨ８中で平衡化した。図２Ａのパ
ネルで用いたグラジエントは、４０カラム容積に亘る０〜０．５Ｍ塩化ナトリウ
ムであった。
【図２Ｂ】 図２Ｂは、抗ＩｇＥモノクローナル抗体モノマーの、ダイマーおよびマチルマ
ーからの分離を示す。図２Ｂは、Ｑ−ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ ＦＡＳＴ−ＦＬＯＷ TM 樹脂上で行う。カラムは２５ｍＭ Ｔｒｉｓ／ｐＨ８中で平衡化した。図２Ｂ
で用いたグラジエント（Ｑ−ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ ＦＡＳＴ−ＦＬＯＷTM）は、
１０カラム容積に亘る０．０５〜０．２Ｍ ＮａＣｌであった。
【図２Ｃ】 図２Ｃは、抗ＩｇＥモノクローナル抗体モノマーの、ダイマーおよびマチルマ
ーからの分離を示す。図２Ｃは、フラクション中で観察されたモノマーおよびダ
イマー／マルチマーのプロットである。白丸はモノマーであり、黒四角はダイマ
ーである。このモノマーおよびダイマー／マルチマーを、ＳＵＰＥＲＤＥＸ ２
００ＨＲTM １０／３０分析用サイズ排除カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏ
ｔｅｃｈ）を用いて測定した。カラムは２５ｍＭ Ｔｒｉｓ／ｐＨ８中で平衡化
した。
【図３Ａ】 図３Ａは、ｐＨ８における、ＲＥＳＯＵＲＣＥ ＱTMアニオン交換カラム上の
ＢＳＡモノマーおよびダイマーの分離を示す。カラムを２５ｍＭ Ｔｒｉｓ／ｐ
Ｈ８中で平衡化し、そして４０カラム容積に亘って０．１２５〜０．２７５Ｍ塩
化ナトリウムのグラジエントで溶出した。図３Ａは精製されたモノマーである。
【図３Ｂ】 図３Ｂは、ｐＨ８における、ＲＥＳＯＵＲＣＥ ＱTMアニオン交換カラム上の
ＢＳＡモノマーおよびダイマーの分離を示す。カラムを２５ｍＭ Ｔｒｉｓ／ｐ
Ｈ８中で平衡化し、そして４０カラム容積に亘って０．１２５〜０．２７５Ｍ塩
化ナトリウムのグラジエントで溶出した。図３Ｂは精製されたダイマーである。
【図３Ｃ】 図３Ｃは、ｐＨ８における、ＲＥＳＯＵＲＣＥ ＱTMアニオン交換カラム上の
ＢＳＡモノマーおよびダイマーの分離を示す。カラムを２５ｍＭ Ｔｒｉｓ／ｐ
Ｈ８中で平衡化し、そして４０カラム容積に亘って０．１２５〜０．２７５Ｍ塩
化ナトリウムのグラジエントで溶出した。図３Ｃはモノマーおよびダイマーの両
方を含むＢＳＡの市販の調製物（Ｂａｙｅｒ）である。
【図４Ａ】 図４Ａは、ｐＨ６における、ＲＥＳＯＵＲＣＥ ＱTMアニオン交換カラム上の
ＢＳＡモノマーおよびダイマーの分離を示す。カラムを２０ｍＭ リン酸ナトリ
ウム／ｐＨ６中で平衡化し、そして１０カラム容積に亘って０〜０．５Ｍ塩化ナ
トリウムの直線状グラジエントで溶出した。図４Ａは精製されたモノマーである
。
【図４Ｂ】 図４Ｂは、ｐＨ６における、ＲＥＳＯＵＲＣＥ ＱTMアニオン交換カラム上の
ＢＳＡモノマーおよびダイマーの分離を示す。カラムを２０ｍＭ リン酸ナトリ
ウム／ｐＨ６中で平衡化し、そして１０カラム容積に亘って０〜０．５Ｍ塩化ナ
トリウムの直線状グラジエントで溶出した。図４Ｂは精製されたダノマーである
。
【図４Ｃ】 図４Ｃは、ｐＨ６における、ＲＥＳＯＵＲＣＥ ＱTMアニオン交換カラム上の
ＢＳＡモノマーおよびダイマーの分離を示す。カラムを２０ｍＭ リン酸ナトリ
ウム／ｐＨ６中で平衡化し、そして１０カラム容積に亘って０〜０．５Ｍ塩化ナ
トリウムの直線状グラジエントで溶出した。図４Ｃはモノマーおよびダイマーの
両方を含むＢＳＡの市販の調製物（Ｂａｙｅｒ）である。
【図５Ａ】 図５Ａは、ｐＨ６における、ＲＥＳＯＵＲＣＥ ＳTMカチオン交換カラム上の
抗ＩｇＥモノクローナル抗体モノマーの、ダイマーおよびマルチマーからの分離
を示す。カラムは２０ｍＭ リン酸ナトリウム／ｐＨ６中で平衡化し、そして３
０カラム容積に亘って０〜０．０５Ｍ塩化ナトリウムの直線状グラジエントで溶
出した。図５Ａは分離からのクロマトグラムである。
【図５Ｂ】 図５Ｂは、ｐＨ６における、ＲＥＳＯＵＲＣＥ ＳTMカチオン交換カラム上の
抗ＩｇＥモノクローナル抗体モノマーの、ダイマーおよびマルチマーからの分離
を示す。カラムは２０ｍＭ リン酸ナトリウム／ｐＨ６中で平衡化し、そして３
０カラム容積に亘って０〜０．０５Ｍ塩化ナトリウムの直線状グラジエントで溶
出した。図５Ｂは、図２Ａ１〜図２Ｃに記載したのと同じ方法を用い、フラクシ
ョン中で観察されたモノマーおよびダイマー／マルチマーのプロットであり、白
丸はモノマーであり、そして黒丸はダイマーである。
【図６Ａ】 図６Ａは、ｐＨ４．３における、ＲＥＳＯＵＲＣＥ ＳTMカチオン交換カラム
上のＢＳＡモノマーおよびダイマーの分離を示す。カラムは２０ｍＭ 酢酸ナト
リウム／ｐＨ４．３中で平衡化し、次いで２０カラム容積に亘って０〜１Ｍ塩化
ナトリウムのグラジエントで溶出した。図６Ａは精製されたモノマーである。
【図６Ｂ】 図６Ｂは、ｐＨ４．３における、ＲＥＳＯＵＲＣＥ ＳTMカチオン交換カラム
上のＢＳＡモノマーおよびダイマーの分離を示す。カラムは２０ｍＭ 酢酸ナト
リウム／ｐＨ４．３中で平衡化し、次いで２０カラム容積に亘って０〜１Ｍ塩化
ナトリウムのグラジエントで溶出した。図６Ｂは精製されたダイマーである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，Ｇ Ｅ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ， ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，Ｍ Ｎ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ， ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，Ｚ Ｗ (71)出願人 460 Ｐｏｉｎｔ Ｓａｎ Ｂｒｕｎｏ Ｂｌｖｄ．，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａ ｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ 94080 ＵＳＡ (72)発明者 レスター， フィリップ アメリカ合衆国 カリフォルニア 94580， サン ロレンツォ， ビア コルサ 15766 Ｆターム(参考） 4H045 AA20 DA70 DA75 GA23 【要約の続き】

Claims (12)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ポリペプチドモノマーを、モノマー、およびダイマーまたは
    マルチマーまたは両方を含む混合物から分離する方法であって、 該混合物を、緩衝液中でカチオン交換またはアニオン交換クロマトグラフィー
    樹脂に付与する工程であって、ここで該樹脂がカチオン交換である場合、該緩衝
    液のｐＨは約４〜７であり、そしてここで該樹脂がアニオン交換である場合、該
    緩衝液のｐＨは約６〜９である、工程、および、 該混合物を、約０〜１Ｍの溶出塩のグラジエントで溶出する工程であって、こ
    こで該モノマーが該混合物中に存在するダイマーまたはマルチマーまたは両方か
    ら分離される工程、を包含し；クエン酸塩が緩衝液として用いられる場合、２０
    ｍＭ未満の濃度で用いられる、方法。
  2. 【請求項２】 前記ポリペプチドが、抗体または血清アルブミンであり；特
    に該抗体が、抗ＩｇＥ、抗ＩｇＧ、抗Ｈｅｒ−２、抗−ＣＤ１１ａ、抗ＣＤ１８
    、抗−ＣＤ２０、または抗ＶＥＧＦであるか；あるいは該血清アルブミンがウシ
    血清アルブミンである、請求項１に記載の方法。
  3. 【請求項３】 前記イオン交換樹脂がカチオン交換樹脂であるか；または前
    記イオン交換樹脂がアニオン交換樹脂である、請求項１または２に記載の方法。
  4. 【請求項４】 前記グラジエントが直線状または段階的である、請求項１〜
    ３のいずれかに記載の方法。
  5. 【請求項５】 前記溶出塩がナトリウム塩であり；特に該溶出塩が塩化ナト
    リウムである、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
  6. 【請求項６】 前記グラジエントが０〜５００ｍＭの溶出塩であり；特に該
    グラジエントが５０〜２００ｍＭの溶出塩であるか；または該グラジエントが０
    〜５０ｍＭの溶出塩である、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
  7. 【請求項７】 クエン酸が緩衝液として用いられる場合、約５ｍＭの濃度で
    用いられる、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
  8. 【請求項８】 ポリペプチドモノマーを、モノマー、およびダイマーまたは
    マルチマーまたは両方を含む混合物から分離する方法であって、 該混合物を、緩衝液中でアニオン交換クロマトグラフィー樹脂に付与する工程
    であって、ここで該緩衝液のｐＨは約６〜９である、工程、および、 該混合物を、約０〜１Ｍの溶出塩のグラジエントで溶出する工程であって、こ
    こで該モノマーが該混合物中に存在するダイマーまたはマルチマーまたは両方か
    ら分離される工程、を包含し；クエン酸塩が緩衝液として用いられる場合、２０
    ｍＭ未満の濃度で用いられる、方法。
  9. 【請求項９】 請求項２、および４〜７のいずれかに規定された特徴をさら
    に含む、請求項８に記載の方法。
  10. 【請求項１０】 ポリペプチドモノマーを、モノマー、およびダイマーまた
    はマルチマーまたは両方を含む混合物から分離する方法であって、 該混合物を、緩衝液中でカチオン交換またはアニオン交換クロマトグラフィー
    樹脂に付与する工程であって、ここで該樹脂がカチオン交換である場合、該緩衝
    液のｐＨは約４〜７であり、そしてここで該樹脂がアニオン交換である場合、該
    緩衝液のｐＨは約６〜９である、工程、および、 該混合物を、約０〜１Ｍの溶出塩のグラジエントで溶出する工程であって、こ
    こで該モノマーが該混合物中に存在するダイマーまたはマルチマーまたは両方か
    ら分離される工程、を包含し；クエン酸塩が緩衝液として用いられる場合、２０
    ｍＭ未満の濃度で用いられ；そして該分離されたモノマーが、９９．５％より大
    きい純度を有する、方法。
  11. 【請求項１１】 請求項２〜７のいずれかで規定される特徴をさらに含む、
    請求項１０に記載の方法。
  12. 【請求項１２】 ポリペプチドモノマーを、モノマー、およびダイマーまた
    はマルチマーまたは両方を含む混合物からイオン交換クロマトグラフィーによっ
    て分離するためのイオン交換樹脂の使用であって；該混合物を該樹脂に付与する
    工程、および該混合物を、約０〜１Ｍの溶出塩のグラジエントで溶出する工程を
    包含する、使用。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007525412A (ja) * 2003-02-28 2007-09-06 ロンザ・バイオロジクス・ピーエルシー プロテインａおよびイオン交換クロマトグラフィーによる抗体精製
JPWO2007123242A1 (ja) * 2006-04-25 2009-09-10 東ソー株式会社 ＩｇＧ精製用分離剤、及びそれを用いたＩｇＧ単量体の精製方法
JP2013523865A (ja) * 2010-04-14 2013-06-17 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 免疫グロブリン凝集体の除去
US8653246B2 (en) 2007-10-26 2014-02-18 Asahi Kasei Chemicals Corporation Method for purifying protein
US9441011B2 (en) 2009-07-03 2016-09-13 Asahi Kasei Chemicals Corporation Method for purification of antibody using porous membrane having amino group and alkyl group both bound to graft chain immobilized on porous substrate

Families Citing this family (44)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2158923B1 (en) * 1998-08-06 2013-02-27 Mountain View Pharmaceuticals, Inc. Peg-urate oxidase conjugates and use thereof
US6783965B1 (en) 2000-02-10 2004-08-31 Mountain View Pharmaceuticals, Inc. Aggregate-free urate oxidase for preparation of non-immunogenic polymer conjugates
JP4798832B2 (ja) * 2000-10-24 2011-10-19 一般財団法人化学及血清療法研究所 ヒト血清アルブミン多量体の除去方法
AU2003901507A0 (en) * 2003-03-28 2003-04-17 Norika Holdings Process for isolating a pharmaceutical product
KR101412271B1 (ko) * 2003-05-09 2014-06-25 듀크 유니버시티 Ｃｄ２０-특이적 항체 및 이를 이용한 방법
US20050065136A1 (en) * 2003-08-13 2005-03-24 Roby Russell R. Methods and compositions for the treatment of infertility using dilute hormone solutions
US20080058507A1 (en) * 2004-02-11 2008-03-06 Hui Liu Method For The Removal Of Aggregate Proteins From Recombinant Samples Using Ion Exchange Chromatography
WO2005105106A2 (en) * 2004-04-21 2005-11-10 Roby Russell R Hormone treatment of macular degeneration
US20060025390A1 (en) * 2004-07-28 2006-02-02 Roby Russell R Treatment of hormone allergy and related symptoms and disorders
US20080312425A1 (en) * 2004-08-30 2008-12-18 Lonza Biologics Plc. Ion Exchange Chromatography and Purification of Antibodies
JP4498186B2 (ja) * 2005-03-24 2010-07-07 株式会社日立ハイテクノロジーズ 液体クロマトグラフ分析方法及び装置
US8148123B2 (en) * 2005-04-11 2012-04-03 Savient Pharmaceuticals, Inc. Methods for lowering elevated uric acid levels using intravenous injections of PEG-uricase
RU2435847C2 (ru) 2005-04-11 2011-12-10 Савиент Фармасьютикалз, Инк. Вариантная форма урат-оксидазы и ее использование
US20080159976A1 (en) * 2005-04-11 2008-07-03 Jacob Hartman Methods for lowering elevated uric acid levels using intravenous injections of PEG-uricase
PL3321359T3 (pl) 2005-04-11 2021-06-28 Horizon Pharma Rheumatology Llc Wariantowe postacie oksydazy moczanowej i ich zastosowanie
WO2006125452A1 (en) * 2005-05-23 2006-11-30 Universite De Geneve Injectable superparamagnetic nanoparticles for treatment by hyperthermia and use for forming an hyperthermic implant
TWI391399B (zh) 2005-05-25 2013-04-01 Hoffmann La Roche 測定溶離多肽之鹽濃度之方法
AR058568A1 (es) 2005-12-20 2008-02-13 Bristol Myers Squibb Co Metodos para producir una composicion con moleculas ctla4-ig a partir de un medio de cultivo
PL2253644T3 (pl) 2005-12-20 2014-04-30 Bristol Myers Squibb Co Kompozycje i sposoby wytwarzania kompozycji
CA2633554C (en) 2005-12-22 2012-11-13 Genetech, Inc. Recombinant production of heparin binding proteins
ES2532804T3 (es) * 2006-04-12 2015-03-31 Crealta Pharmaceuticals Llc Purificación de proteínas con tensioactivo catiónico
CN101506222B (zh) 2006-07-14 2013-10-02 健泰科生物技术公司 重组蛋白的重折叠
PT2061803T (pt) 2006-08-28 2019-11-21 Ares Trading Sa Processo de purificação de proteinas contendo fc
NZ579873A (en) 2007-03-23 2011-11-25 Asahi Kasei Pharma Corp Method for producing soluble thrombomodulin of high purity
ITLU20070007A1 (it) * 2007-05-07 2008-11-08 Kedrion Spa Processo cromatografico per l'ottenimento di un complesso fviii/vwf con differenti rapporti tra le due proteine da utilizzare nella terapia della emofilia a e nella malattia di von willebrand.
KR101226353B1 (ko) 2007-06-01 2013-01-24 에프. 호프만-라 로슈 아게 면역글로불린 정제
PT2215117E (pt) 2007-10-30 2015-04-01 Genentech Inc Purificação de anticorpo por cromatografia de troca de catiões
US9631008B2 (en) 2008-12-22 2017-04-25 Hoffmann-La Roche Inc. Immunoglobulin purification
KR101861547B1 (ko) 2009-06-25 2018-07-02 크레알타 파마슈티칼스 엘엘씨 페길화된 유리카아제 치료 중에 혈청 요산을 모니터링하여 주입 반응의 위험성 및 반응의 항체­매개 상실을 예측하는 방법 및 키트
WO2011064247A1 (en) 2009-11-24 2011-06-03 Novo Nordisk Health Care Ag Method of purifying pegylated proteins
CA2784278C (en) 2009-12-18 2019-02-26 Novartis Ag Wash solution and method for affinity chromatography
CN101948528B (zh) * 2010-09-26 2012-02-01 广东工业大学 一种来自斑蝥的纤溶活性蛋白及其制备方法和应用
EP2686334B2 (en) 2011-03-16 2020-07-01 F.Hoffmann-La Roche Ag Ion exchange chromatography with improved selectivity for the separation of polypeptide monomers, aggregates and fragments by modulation of the mobile phase
PL221899B1 (pl) * 2011-05-06 2016-06-30 Wrocławskie Centrum Badań Eit + Spółka Z Ograniczoną Czysta albumina oraz sposób jej otrzymywania i detekcji
SG10201701224UA (en) 2012-03-12 2017-04-27 Merck Patent Gmbh Removal of protein aggregates from biopharmaceutical preparations in a flowthrough mode
KR101516054B1 (ko) * 2012-11-21 2015-05-06 씨제이헬스케어 주식회사 신규한 지속형 인간 성장호르몬 단량체를 제조하는 방법
SG11201505901YA (en) 2013-03-14 2015-08-28 Emd Millipore Corp Methods of increasing protein purity using protein a based chromatography
AR096713A1 (es) * 2013-06-25 2016-01-27 Cadila Healthcare Ltd Proceso de purificación para anticuerpos monoclonales
CN110054661A (zh) 2013-12-12 2019-07-26 Emd密理博公司 使用含丙烯酰胺的过滤器分离蛋白
CN107531750B (zh) * 2015-04-28 2021-03-16 深圳翰宇药业股份有限公司 多肽混合物高效液相色谱分析方法
CA2992419C (en) * 2015-07-14 2023-08-15 Yeda Research And Development Co. Ltd. Peptide combinations for use in the diagnosis of schizophrenia
JP6749590B2 (ja) * 2015-09-17 2020-09-02 国立大学法人 東京大学 酸化型及び還元型アルブミンの分析方法、酸化型及び還元型アルブミンの分析装置、及び酸化型及び還元型アルブミンの分析キット
EA202092335A1 (ru) 2018-04-02 2021-01-22 Эмджен Инк. Композиции на основе эренумаба и пути их применения
AR125236A1 (es) 2021-03-31 2023-06-28 Hoffmann La Roche Purificación de anticuerpos por cromatografía de modo mixto

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4228154A (en) * 1979-02-26 1980-10-14 Armour Pharmaceutical Company Purification of plasma albumin by ion exchange chromatography
FR2548670B1 (fr) * 1983-07-07 1985-10-25 Merieux Inst Procede de preparation des principales proteines du sang hemolyse sous forme non denaturee
US5196323A (en) * 1985-04-27 1993-03-23 Boehringer Ingelheim International Gmbh Process for preparing and purifying alpha-interferon
US4765903A (en) * 1987-10-06 1988-08-23 Interferon Sciences, Inc. Purification of monomeric interferon
US5250663A (en) * 1990-04-19 1993-10-05 Miles Inc. Preparing essentially monomeric normal human serum albumin
EP0452753B1 (en) * 1990-04-19 2004-06-23 Bayer Corporation Method for preparing essentially monomeric normal serum albumin (human)
US5110913A (en) 1990-05-25 1992-05-05 Miles Inc. Antibody purification method
US5256294A (en) * 1990-09-17 1993-10-26 Genentech, Inc. Tangential flow filtration process and apparatus
US5231178A (en) 1991-01-16 1993-07-27 The Salk Institute Biotechnology/Industrial Associates, Inc. Method for the purification of intact, correctly-folded insulin-like growth factor-1
DE4110974A1 (de) * 1991-04-05 1992-10-08 Bayer Ag Hochkautschukhaltige polymerkombinationen
JPH07285885A (ja) * 1994-04-21 1995-10-31 Kyodo Nyugyo Kk 免疫グロブリンの製造法
EP0832121B1 (en) 1995-06-07 2003-10-29 Chiron Corporation Methods for purifying authentic igf from yeast hosts
TW505655B (en) * 1997-10-14 2002-10-11 Tanox Inc Enhanced aggregate removal from bulk-biologicals using ion exchange chromatography
DE69936946T2 (de) 1998-05-06 2008-05-15 Genentech, Inc., South San Francisco Reinigung von Antikörpern durch Ionenaustauschchromatographie

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007525412A (ja) * 2003-02-28 2007-09-06 ロンザ・バイオロジクス・ピーエルシー プロテインａおよびイオン交換クロマトグラフィーによる抗体精製
JP2012067108A (ja) * 2003-02-28 2012-04-05 Lonza Biologics Plc プロテインａおよびイオン交換クロマトグラフィーによる抗体精製
JPWO2007123242A1 (ja) * 2006-04-25 2009-09-10 東ソー株式会社 ＩｇＧ精製用分離剤、及びそれを用いたＩｇＧ単量体の精製方法
US8653246B2 (en) 2007-10-26 2014-02-18 Asahi Kasei Chemicals Corporation Method for purifying protein
US9441011B2 (en) 2009-07-03 2016-09-13 Asahi Kasei Chemicals Corporation Method for purification of antibody using porous membrane having amino group and alkyl group both bound to graft chain immobilized on porous substrate
JP2013523865A (ja) * 2010-04-14 2013-06-17 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 免疫グロブリン凝集体の除去

Also Published As

Publication number Publication date
AU750977B2 (en) 2002-08-01
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IL139609A (en) 2006-06-11
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CA2333747A1 (en) 1999-12-09
DE69919701T2 (de) 2005-09-15
HK1037879A1 (en) 2002-02-22
PT1084136E (pt) 2004-12-31
EP1084136B1 (en) 2004-08-25
JP2006071646A (ja) 2006-03-16
US6620918B2 (en) 2003-09-16
EP1500661A1 (en) 2005-01-26
US20040116674A1 (en) 2004-06-17
EP1084136A1 (en) 2001-03-21
WO1999062936A1 (en) 1999-12-09
ES2228052T3 (es) 2005-04-01
CA2333747C (en) 2008-02-19

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