JP2002514428A - ダイズ油の品質及び機能性を改変する新規な遺伝子組み合わせ物 - Google Patents

ダイズ油の品質及び機能性を改変する新規な遺伝子組み合わせ物

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JP2002514428A JP2000548480A JP2000548480A JP2002514428A JP 2002514428 A JP2002514428 A JP 2002514428A JP 2000548480 A JP2000548480 A JP 2000548480A JP 2000548480 A JP2000548480 A JP 2000548480A JP 2002514428 A JP2002514428 A JP 2002514428A
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ブログリー，リチヤード・マーテイン
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キニー，アンソニー・ジヨン
ノウルトン，スーザン
セバスチヤン，スコツト・アンソニー
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イー・アイ・デュポン・ドウ・ヌムール・アンド・カンパニー
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Abstract

(57)【要約】 ダイズ種子の新規な脂質プロフィールをもたらす新規な遺伝子組み合わせ及びそのような種子から抽出される油が開示される。また、そのような組み合わせの製造方法も記述される。さらに、本発明の油は、マーガリン及びスプレッド製品の製造において有用であることが開示される。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 発明の分野 本発明は、ダイズ種子の新規な脂質組成をもたらす新規な遺伝子組み合わせ及
びそのようなダイズ種子から抽出される油に関する。これらの新規なダイズ遺伝
子組み合わせ物は、より高価な油の製造及び特定の機能品質及び健康特性を与え
るための油の化学的改変に対する別法を提供する。
【０００２】 発明の背景 植物脂質は様々な工業的及び栄養学的用途を有し、そして植物膜機能及び気候
適応にとって重要である。これらの脂質は非常に多数の化学構造を示し、これら
の構造は脂質の生理学的及び工業的特性を決定する。これらの構造の多くは、脂
質の不飽和の程度を改変する代謝プロセスに直接的または間接的に起因する。異
なる植物における異なる代謝方式によりこれらの改変された脂質は生産され、大
量の所望される脂質を経済的に生産するためには、通常、外来植物種の栽培品種
化または作物学的に適応した種の改変のいずれかが必要とされる。
【０００３】 植物脂質は、トリアシルグリセロールの形態で食用油としてそれらの主要な用
途がある。食用油の特定の性能及び健康特性は主としてそれらの脂肪酸組成によ
り決定される。商業的植物変種から得られる大部分の植物油は、主としてパルミ
チン酸（１６：０）、ステアリン酸（１８：０）、オレイン酸（１８：１）、リ
ノール酸（１８：２）及びリノレン酸（１８：３）から成る。パルミチン酸及び
ステアリン酸は、それぞれ、１６及び１８炭素長の飽和脂肪酸である。オレイン
酸、リノール酸及びリノレン酸は、それぞれ、１、２及び３個の二重結合を含有
する１８炭素長の不飽和脂肪酸である。オレイン酸はモノ不飽和脂肪酸と呼ばれ
、一方、リノール酸及びリノレン酸はポリ不飽和脂肪酸と呼ばれる。一般に使用
される食用植物油中の飽和及び不飽和脂肪酸の相対量を以下に要約する（表１）
。
【０００４】
【表１】
【０００５】 多数の最近の研究作業により、飽和及び不飽和脂肪酸が冠動脈性心疾患の危険
を減らすことにおいて果たす役割が調べられている。従来、飽和脂肪酸及びポリ
不飽和脂肪酸と異なり、モノ不飽和脂肪酸は血清コレステロール及び冠動脈性心
疾患の危険に対していかなる影響もないと考えられた。いくつかの最近のヒト臨
床研究は、モノ不飽和脂肪が高く且つ飽和脂肪が低い食品が、「善玉」（高密度
リポタンパク質）コレステロールを維持しながら「悪玉」（低密度リポタンパク
質）コレステロールを減らす可能性があることを示唆する（Ｍａｔｔｓｏｎ ｅ
ｔ ａｌ．（１９８５）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２６：１９４−２０２）。
【０００６】 全飽和脂肪酸が低く且つモノ不飽和脂肪酸が高い植物油は、消費者には著しい
健康の恩恵を、そして油加工業者には経済的恩恵を与える。例として、カノラ油
は非常に健康によい油と考えられる。しかしながら、使用中に、カノラ油中の高
レベルのポリ不飽和脂肪酸のために油は不安定で、容易に酸化され、そして嫌な
臭い及び風味を発生しやすくなる（Ｇａｉｌｌｉａｒｄ（１９８０）Ｔｈｅ Ｂ ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｐｌａｎｔｓ 中，Ｖｏｌ．４，ｐｐ．８５−１
１６，Ｓｔｕｍｐｆ，Ｐ．Ｋ．編集、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ）。ポリ不飽和脂肪酸のレベルを水素化により下げることができるが、
この工程の費用及び残留する不飽和脂肪酸の栄養学的に疑問の余地があるトラン ス 異性体の付随する生成は、水素化された油の総体的な望ましさを下げる（Ｍｅ
ｎｓｉｎｋ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊ．Ｍｅｄｉ ｃｉｎｅ Ｎ３２３：４３９−４４５）。同様な問題がダイズ油で存在し、そし
て表１において示されるように、商品ダイズ油は典型的にカノラ油の２倍以上の
飽和脂肪含有量を含む。
【０００７】 作物学種の食用油中に存在するポリ不飽和脂肪酸レベルのレベルを改変するこ
とにおいて突然変異育種プログラムがいくらかの成功をおさめている。商業的に
育てられた変種の例は、高（８５％）オレイン酸のヒマワリ及び低（２％）リノ
レン酸のアマである（Ｋｎｏｗｌｅｓ（１９８０）Ｗｏｒｌｄ Ｃｏｎｆｅｒｅ ｎｃｅ ｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｆａｔｓ ａｎ ｄ Ｏｉｌｓ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ 中，Ａｐｐｌｅｗｈ
ｉｔｅ，Ｔ．Ｈ．編集，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｏｉｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｓ’ Ｓｏ
ｃｉｅｔｙ，ｐｐ．３５−３８）。表１に示した他の植物での同様な商業的進展
は、主として方法の難しい性質及び植物耐寒性、収穫能力に対する突然変異方式
の多面的発現効果及び低ポリ不飽和脂肪酸形質の環境不安定性のために分かりに
くい。とりわけ、シーズン毎にそして異なる場所で特定の組成の油を安定して生
産できないことは、低ポリ不飽和脂肪酸ダイズ油の商業生産を実行不可能にして
いる。
【０００８】 ダイズ種子貯蔵脂質中に指向的に第二（国際特許公開ＷＯ ９４／１１５１６
）及び第三（国際特許公開ＷＯ ９３／１１２４５）の二重結合の導入を招く酵
素の発現を改変する方法の発見により、高いモノ不飽和、非常に低いポリ不飽和
脂肪酸含有量、特に非常に低いリノレン酸含有量を有するダイズの生産が可能に
なっている。本発明において記述するこれら２つの導入遺伝子プロフィールの遺
伝子の組み合わせは、最小のポリ不飽和脂肪酸及び高いモノ不飽和脂肪酸並びに
種子脂肪酸プロフィールの極端な環境安定性を有するダイズ系統をもたらす。
【０００９】 突然変異育種（Ｅｒｉｃｋｓｏｎ，Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｊ． Ｈｅｒｅｄ ．７９：４６５−４６８；Ｓｃｈｎｅｂｌｙ，Ｓ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．
，（１９９４）Ｃｒｏｐ Ｓｃｉ．３４：８２９−８３３；及びＦｅｈｒ，Ｗ．
Ｒ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｃｒｏｐ Ｓｃｉ．３１：８８−８９）及びトラ
ンスジェニック改変（米国特許第５，５３０，１８６号）に起因する減少したレ
ベルの飽和脂肪酸を有するダイズが記述されている。本発明の単一のダイズ系統
におけるこれら２つの形質の組み合わせの教示は、ダイズ生産に高モノ不飽和脂
肪酸、低飽和脂肪酸油の健康の恩恵をもたらす。
【００１０】 低レベルの飽和脂肪酸を有するダイズは健康によい食品を提供するという観点
から望ましいが、室温で固体である脂肪がいくつかの食物においてそれらの機能
特性に必要とされる。そのような用途には、非乳製品マーガリン及びスプレッド
の製造、並びに糖菓及び焼くことにおける各種用途が包含される。多数の動物脂
肪及び乳脂肪は必要な物理的特性を与えるが、それらはコレステロール及びコレ
ステロール生成（ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｇｅｎｉｃ）中位鎖脂肪酸の両方も含有
する。固体脂肪用途のために理想的なトリグリセリドは、主に非常に高融解の長
鎖脂肪酸ステアリン酸を、そして非常に少量のポリ不飽和脂肪とモノ不飽和脂肪
酸の残余を含有すべきである。天然の植物固体脂肪画分は、典型的に、トリグリ
セリドのｓｎ−１及びｓｎ−３位を占める飽和脂肪酸並びにｓｎ−２位で不飽和
脂肪酸を有するトリアシルグリセリド構造を有する。この全体的な脂肪酸組成及
びトリグリセリド構造は、最小量の飽和脂肪酸含有量で最適な固体脂肪結晶構造
及び最大の融点を与える。
【００１１】 この高融解温度植物脂肪のための天然脂肪の典型はココアバターである。ココ
アバターの脂肪酸組成は、２６％のパルミチン酸（１６：０）、３４％のステア
リン酸（１８：０）、３５％のオレイン酸（１８：１）及び３％のリノール酸（
１８：２）である。この脂肪酸プロフィールは、その正確な結晶構造により２５
°〜３６℃の融点の範囲をココアバターに与える。ココアバターの高い価格及び
不安定な供給のために、比較的高い１８：０含有量を有する他の油の分別または
高ポリ不飽和油の接触水素化及びそれに続く生成物の分別によるココアバター代
用品及びマーガリンストックのいくつかの製造方法がもたらされている。
【００１２】 高ステアリン酸エステル、低ポリ不飽和脂肪酸油を直接生産できる脂肪種子は
、水素化の費用及び水素化の望ましくない副産物であるトランスモノ不飽和脂肪
酸の両方を回避できる点で有益であるはずである。さらに、分別工程をより費用
効果的にするか、または生産される植物脂肪の融解温度範囲が十分に高い場合に
はおそらく省くことができるはずである。
【００１３】 植物における油生合成はかなりよく研究されている［Ｈａｒｗｏｏｄ（１９８
９）Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ．中、Ｖｏｌ．８（１）：１−４３を参照］。パルミチン酸、ステアリン酸及び
オレイン酸の生合成は、「ＡＣＰトラック（ＡＣＰ ｔｒａｃｋ）」の３つの重
要な酵素：パルミトイル−ＡＣＰエロンガーゼ（ｅｌｏｎｇａｓｅ）、ステアロ
イル−ＡＣＰデサチュラーゼ及びアシル−ＡＣＰチオエステラーゼの相互作用に
より色素体において起こる。
【００１４】 これら３つの酵素の種類のうち、アシル−ＡＣＰチオエステラーゼはアシル鎖
をキャリヤータンパク質（ＡＣＰ）から、従って代謝経路から別の方向へ取り除
くように働く。オレオイル−ＡＣＰチオエステラーゼは、パルミトイル−ＡＣＰ
及びステアロイル−ＡＣＰの加水分解もはるかに低い割合で触媒するが、オレオ
イル−ＡＣＰチオエステルの加水分解を比較的高い割合で触媒する。この複数の
活性は酵素間の基質競合を引き起こし、そして植物油のトリアシルグリセリド中
に存在するパルミチン酸及びステアリン酸の生成に寄与するのは、同じ基質に対
するアシル−ＡＣＰチオエステラーゼとパルミトイル−ＡＣＰエロンガーゼの競
合及び同じ基質に対するアシル−ＡＣＰチオエステラーゼとステアロイル−ＡＣ
Ｐデサチュラーゼの競合である。
【００１５】 いったんＡＣＰトラックから除かれると、脂肪酸は細胞質に運び出され、そこ
でそれらはアシル−補酵素Ａを合成するために用いられる。これらのアシル−Ｃ
ｏＡは、油生合成中にトリアシルグリセリド中にアシル部分を取り込む少なくと
も３つの異なるグリセロールアシル化酵素（グリセロール−３−Ｐアシルトラン
スフェラーゼ、１−アシル−グリセロール−３−Ｐアシルトランスフェラーゼ及
びジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ）のアシル供与体である。
【００１６】 これらのアシルトランスフェラーゼは、トリグリセリドのｓｎ−１及びｓｎ− ３ 位で飽和脂肪酸を、そしてｓｎ−２位でモノ不飽和脂肪酸を取り込むことに対
して強いが絶対的ではない優先を示す。従って、アシルプールの脂肪酸組成を改
変することは、油の脂肪酸組成の対応する変化を導く。さらに、この特異性のた
めに、アシルトランスフェラーゼの基質プールにおいて利用できる脂肪酸の適当
な組成がある場合に植物がココアバター代用品または他の特殊性脂肪を生産でき
る実験的証拠がある［Ｂａｆｏｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）ＪＡＯＣＳ ６
７：２１７−２２５］。
【００１７】 上記の説明に基づき、植物油中のパルミチン酸、ステアリン酸及びオレイン酸
のレベルを変えるための一つの方法は、油生合成に用いられる細胞質アシル−Ｃ
ｏＡプール中のそれらのレベルを改変することである。
【００１８】 ステアリン酸エステルレベルの操作は記述されている（Ｋｎｕｔｚｏｎ，Ｄ．
Ｓ．ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ Ａ ８９（７）：２６２４−２６２８）。種子特異的プロモーター領域を用いて
、植物において１８炭素脂肪酸中に第一の二重結合の導入を招く酵素であるブラ
シカ・カンペストリス（Ｂ．ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）ステアロイル−ＡＣＰデサ
チュラーゼをコードするｃＤＮＡのアンチセンス発現により、ブラシカ・カンペ
ストリス及びブラシカ・ナパス（Ｂ．ｎａｐｕｓ）の両方の植物からの種子が作
られた。これらの種子は、同じ種からの改変されていない植物からの種子と比較
した場合に、高いレベルのリノレン酸（１８：３）も含有する、ステアリン酸が
高い油を生産した。高いレベルのステアリン酸は、ステアロイル−ＡＣＰデサチ
ュラーゼの同様な不十分な発現によりダイズにおいて（米国特許第５，４４３，
９７４号）、そしてアシル−ＡＣＰチオエステラーゼの過剰発現によりカノラに
おいて（米国特許第５，５３０，１８６号）得られている。突然変異育種によっ
てもまた、種子油中に高いレベルのステアリン酸を有するダイズ系統が作製され
ている（Ｇｒａｅｆ，Ｇ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，（１９８５）ＪＡＯＣＳ ６２：
７７３−７７５；Ｈａｍｍｏｎｄ，Ｅ．Ｇ．及びＷ．Ｒ．Ｆｅｈｒ，（１９８３
）Ｃｒｏｐ Ｓｃｉ．２３：１９２−１９３）。
【００１９】 ポリ不飽和脂肪酸は液体植物油の低い融点に寄与する。高飽和脂肪酸油におい
てそれらの存在は、それらが融点を下げ、それ故、室温で可塑性の脂肪を得るた
めにさらに高レベルの望ましくない飽和脂肪酸が必要とされる点で不利になるも
のである。さらに、焼くこと及び菓子製造用途において使用する場合、高レベル
のポリ不飽和脂肪酸は、液体油に上記のような酸化不安定性をもたらす。従って
、最大の有用性のために、ダイズにおいて生産される高飽和脂肪は、飽和脂肪酸
、モノ不飽和脂肪酸及びできるだけ少量のポリ不飽和脂肪酸を含有すべきである
。本発明において見いだされた遺伝子組み合わせは、これらの規準を満たすダイ
ズにおける新規な脂肪酸プロフィールを提供する。
【００２０】 発明の要約 本発明は、全種子脂肪酸プロフィールが２１％より多いＣ１６：０及びＣ１８
：０総合含有量、６０％より多いＣ１８：１含有量並びに７％未満のＣ１８：２
及びＣ１８：３総合含有量を含んでなる成熟種子を作るダイズ植物に関する。
【００２１】 第二の態様として、本発明は、全種子脂肪酸プロフィールが１０％より多いＣ
１６：０含有量、３０％より多いＣ１６：０及びＣ１８：０総合含有量、５５％
より多いＣ１８：１含有量並びに７％未満のＣ１８：２及びＣ１８：３総合含有
量を含んでなる成熟種子を作るダイズ植物に関する。
【００２２】 第三の態様として、本発明は、全種子脂肪酸プロフィールが４２％より多いＣ
１６：０及びＣ１８：０総合含有量を含んでなる成熟種子を作るダイズ植物に関
し、ここで、該植物が以下の： （ａ）Ｃ１８：０含有量が全種子脂肪酸の少なくとも１０％を含んでなり、そし
てオレオイル−ＡＣＰチオエステラーゼ酵素をコードする核酸フラグメントの少
なくとも１つの導入遺伝子コピーをさらに含んでなる第一の親ダイズ植物を高い
種子ステアリン酸含有量のためのｆａｓａ対立遺伝子を含んでなる第二の親と交
配すること； （ｂ）工程（ａ）の交配から雑種種子を得、該種子を発芽させ、育て、そして１
サイクルまたはそれ以上の自家受粉によりダイズ植物の分離する集団を作製する
こと；及び （ｃ）工程（ｂ）の分離する集団から該脂肪酸プロフィールを有する種子を作る
植物を選択すること を含んでなる工程により作製される。
【００２３】 第四の態様として、本発明は、全種子脂肪酸プロフィールが７％未満のＣ１６
：０及びＣ１８：０総合含有量、８７％より多いＣ１８：１含有量並びに６％未
満のＣ１８：２及びＣ１８：３総合含有量を含んでなる成熟種子を作るダイズ植
物に関する。
【００２４】 第五の態様として、本発明は、全種子脂肪酸プロフィールが１２％未満のＣ１
６：０及びＣ１８：０総合含有量、８４％より多いＣ１８：１含有量並びに５％
未満のＣ１８：２及びＣ１８：３総合含有量を含んでなる成熟種子を作るダイズ
植物に関する。
【００２５】 第六の態様として、本発明は、マーガリン及び／またはスプレッド製品を製造
するための、本明細書に記述したダイズ植物から生産される高ステアリン酸、ま
たは高ステアリン酸で高オレイン酸の油の使用に関する。また、ブレンドされた
形態にせよブレンドされていない形態にせよマーガリン及び／またはスプレッド
製品を製造するためにそのような油の水素化、分別、エステル交換反応または加
水分解で作られる生成物も用いることができる。
【００２６】 第七の態様として、本発明は、他の油とのブレンドからマーガリン及び／また
はスプレッド製品を製造するための、本明細書に記述したダイズ植物から生産さ
れる高ステアリン酸、またはステアリン酸で高オレイン酸の油の使用に関する。
また、ブレンドされた形態にせよブレンドされていない形態にせよマーガリン及
び／またはスプレッド製品を製造するためにそのような油の水素化、分別、エス
テル交換反応または加水分解で作られる生成物も用いることができる。
【００２７】 生物学的寄託 以下のダイズ種子はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌ
ｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ），１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖ
ａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ ２０１１０−２２０９に寄託されており、以
下の名称、受託番号及び寄託日を有する。
【００２８】 ダイズ 受託番号 寄託日 ダイズ T1S ATCC 203033 1998年5月14日 ダイズ L9216116-109 ATCC XXXXXX 1999年4月 日 発明の詳細な記述 油の品質を改変する多種多様な新規なダイズ遺伝子が、天然の変異の選択、突
然変異育種及び遺伝子工学により見いだされている。それらの新規な遺伝子を含
有するある種のダイズ系統または組み合わせを本開示に使用し、そして表２に記
述した「遺伝子組み合わせまたは系統名」名称で表す。
【００２９】
【表２】
【００３０】1 この表に用いた遺伝子記号は以下のものをさす： Ｔ１Ｓは、センスの向きであって機能性酵素を発現するオレオイル−ＡＣＰチオ
エステラーゼ発現構築物をさす。 Ｄ２Ｔは、センスの向きであるデルタ−１２デサチュラーゼ構築物をさし、その
組込みは活性の減少をもたらす。 Ｄ３Ａは、アンチセンスの向きであるデルタ−１５デサチュラーゼ構築物をさし
、その組込みは活性の減少をもたらす。ｆａｎ は、減少した種子リノレン酸含有量の遺伝子をさす。ｆａｐ１ は、減少した種子パルミチン酸含有量の遺伝子をさす。ｆａｐ２ は、高い種子パルミチン酸含有量の遺伝子をさす。ｆａｐ３ は、減少した種子パルミチン酸含有量の遺伝子をさす。ｆａｓａ は、高い種子ステアリン酸含有量の遺伝子をさす。 Ｌ９２１６１１６−１０９は、系統（ＨＳＴ１＊（ＨＯ２＊ＨＯ４）＊野生型由
来の高ステアリン酸含有量を有する系統をさす。 ＨＳＴ１は、Ｎ８５−２１７６由来の高ステアリン酸突然変異体系統をさす。 ＨＯ２は、Ｎ８５−２１７６由来の高オレイン酸突然変異体系統をさす。 ＨＯ４は、Ａ５由来の高オレイン酸突然変異体系統をさす。 Ｔ２Ｔは、センスの向きであるパルミトイル−ＡＣＰチオエステラーゼ構築物を
さし、その組込みは活性の減少をもたらす。
【００３１】 本開示の文脈上、多数の用語が利用される。「遺伝子」は、コーディング配列
の前（５’非コーディング配列）及び後（３’非コーディング配列）の調節配列
を包含する、特定のタンパク質を発現する核酸フラグメントをさす。「天然の遺
伝子」は、天然においてそれ自体の調節配列と共に見いだされるような遺伝子を
さす。「キメラ遺伝子」は、天然において一緒に見いだされない調節配列及びコ
ーディング配列を含んでなる、天然の遺伝子ではないあらゆる遺伝子をさす。従
って、キメラ遺伝子は、異なる起源に由来する調節配列及びコーディング配列、
または同じ起源に由来するが天然において見いだされるものと異なるように配置
される調節配列及びコーディング配列を含んでなることができる。「導入遺伝子
」は、形質転換法によりゲノム中に導入されている遺伝子である。
【００３２】 「遺伝子座」という表現は、本明細書において用いる場合、１つの染色体また
は染色体組上の遺伝子の位置を意味する。「対立遺伝子」という用語は、本明細
書において用いる場合、遺伝子座の選び得る型のいずれかをさす。「発現」とい
う用語は、本明細書において用いる場合、機能的最終生成物の生産を意味するも
のとする。遺伝子の発現または過剰発現は、遺伝子の転写及び前駆体または成熟
タンパク質へのｍＲＮＡの翻訳を含む。「アンチセンス阻害」は、標的タンパク
質の発現を妨げることができるアンチセンスＲＮＡ転写産物の生産をさす。「過
剰発現」は、通常のまたは形質転換されていない生物における生産のレベルを超
えるトランスジェニック生物における遺伝子産物の生産をさす。「共抑制」は、
異所性及び内在性遺伝子の両方の発現の抑制をもたらす内在性遺伝子に実質的な
相同性を有する導入遺伝子の発現をさす。
【００３３】 「改変された発現」は、野生型生物からの匹敵する組織（器官及び発生型の）
における活性と著しく異なる量または割合のトランスジェニック生物における遺
伝子産物（１つまたは複数）の生産をさす。
【００３４】 「環境的に安定な」または「環境安定性」という用語は、本明細書において用
いる場合、植物を育てる環境条件にかかわらず比較的一定である表現型を表すた
めに用いられる。
【００３５】 「形質転換」は、遺伝的に安定な継承をもたらす、宿主細胞のゲノム中への核
酸フラグメントの形質導入をさす。形質転換した核酸フラグメントを含有する宿
主生物は、「トランスジェニック」生物と呼ばれる。植物形質転換の方法の例に
は、アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）によりもたらされる形
質転換（Ｄｅ Ｂｌａｅｒｅ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ
ｏｌ．１５３：２７７）及び粒子加速されるまたは「遺伝子銃」形質転換技術（
Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ） ３２７
：７０−７３；米国特許第４，９４５，０５０号）が包含される。
【００３６】 本明細書において用いる場合、「ダイズ」は種グリシン・マックス（Ｇｌｙｃ ｉｎｅ ｍａｘ ）、グリシン・ソジャ（Ｇｌｙｃｉｎｅ ｓｏｊａ）またはグリ
シン・マックスと生殖的に異種交配和合性であるあらゆる種をさす。「系統」は
、少なくとも１つの形質に関して個体間でほとんどまたは全く遺伝的変化を示さ
ない類似した起源（ｐａｒｅｎｔａｇｅ）の一群の植物である。そのような系統
を１世代もしくはそれ以上の自家受粉及び選択、または組織もしくは細胞培養技
術によることを包含する単一の親からの栄養増殖により作製することができる。
「作物学的選択系統」または「選択系統」は、商業的に使用できてもできなくて
もよい望ましい作物学的性能を有する系統をさす。「変種」、「栽培品種」、「
選択変種」または「選択栽培品種」は、詳細に試験されており、商業的ダイズ生
産のために使用されているかまたは使用されていた作物学的に優れた選択系統を
さす。「突然変異」は、分離または遺伝的組変えにより生じない検出可能で且つ
遺伝性の遺伝子変化（自然に起こるかまたは誘導した）をさす。「突然変異体」
は、突然変異を保有する個体または個体の系統をさす。本明細書において用いる
場合、「Ｆ１集団」は、ある系統を別の系統と他家受粉することから生じる子孫
である。そのような他家受粉を表すために本明細書において用いる形式は「雌性
親＊雄性親」である。「Ｆ２集団」は、自家受粉したＦ１植物の子孫である。「
Ｆ２に由来する系統」または「Ｆ２系統」は、個々のＦ２植物の自家受粉から生
じる系統である。Ｆ２に由来する系統を繰り返した自家受粉及び該Ｆ２に由来す
る系統の植物からの種子を一緒にすること（ｂｕｌｋｉｎｇ）により次の世代（
Ｆ３、Ｆ４、Ｆ５等）を通して増殖させることができる。「分離する集団」は、
Ｆ２または後の同系交配の段階である交配から生じる植物の集団である。
【００３７】 「成熟種子（１個または複数）」という用語は、本明細書において用いる場合
、２０％未満、好ましくは１２％未満の水分含有量を有するまたは有したもはや
緑色ではないダイズをさす。
【００３８】 「脂肪生成物」という用語は、本明細書において用いる場合、天然の（水素化
されていない及び化学的に改変されていない）形態のまたは水素化された及び／
もしくは化学的に改変された形態のいずれかの植物油、あるいは天然の（水素化
されていない及び化学的に改変されていない）形態または水素化された及び／も
しくは化学的に改変された形態のいずれかのそれらから得られる画分をさす。
【００３９】 本明細書において用いる標準的な組換えＤＮＡ及び分子クローニング技術は当
該技術分野において周知であり、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．，Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｅ
．Ｆ．及びＭａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏ
ｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏ
ｒ，１９８９（以下「Ｍａｎｉａｔｉｓ」）にさらに十分に記述されている。
【００４０】 本発明は、新規な脂肪酸組成を有するダイズ系統に関する。
【００４１】 一つの態様として、本発明は、全種子脂肪酸プロフィールが２１％より多いＣ
１６：０及びＣ１８：０総合含有量、６０％より多いＣ１８：１含有量並びに７
％未満のＣ１８：２及びＣ１８：３総合含有量を含んでなる成熟種子を作るダイ
ズ植物に関する。
【００４２】 そのような脂肪酸プロフィールを有するダイズ植物を以下の： （ａ）Ｃ１８：１含有量が全種子脂肪酸の少なくとも８０％を含んでなり、そし
てデルタ−１２デサチュラーゼ酵素をコードするダイズ核酸フラグメントの少な
くとも１つの導入遺伝子コピーをさらに含んでなる第一の親ダイズ植物を高い種
子ステアリン酸含有量を与える適切な導入遺伝子またはｆａｓａ対立遺伝子のよ
うな突然変異のいずれかを含んでなる第二の親と交配すること； （ｂ）工程（ａ）の交配から雑種種子を得、該種子を発芽させ、育て、そして１
サイクルまたはそれ以上の自家受粉によりダイズ植物の分離する集団を作製する
こと；及び （ｃ）工程（ｂ）の分離する集団から該脂肪酸プロフィールを有する種子を作る
植物を選択すること を含んでなる工程により作製する。
【００４３】 また目的のものは、そのような植物から得られる種子、これらの種子から得ら
れる油、そのような油の水素化、分別、エステル交換反応または加水分解で作ら
れる生成物及びこの油の製造中に作られる副産物である。さらに、本発明はまた
、ブレンドされた形態にせよブレンドされていない形態にせよマーガリンまたは
スプレッド製品を製造するための、そのような油の使用及びそのような油の水素
化、分別、エステル交換反応または加水分解で作られる生成物の使用にも関する
。
【００４４】 第二の態様として、本発明は、全種子脂肪酸プロフィールが１０％より多いＣ
１６：０含有量、３０％より多いＣ１６：０及びＣ１８：０総合含有量、５５％
より多いＣ１８：１含有量並びに７％未満のＣ１８：２及びＣ１８：３総合含有
量を含んでなる成熟種子を作るダイズ植物に関する。
【００４５】 そのような脂肪酸プロフィールを有するダイズ植物を以下の： （ａ）Ｃ１８：１含有量が全種子脂肪酸の少なくとも８０％を含んでなり、そし
てデルタ−１２デサチュラーゼ酵素をコードするダイズ核酸フラグメントの少な
くとも１つの導入遺伝子コピーをさらに含んでなる第一の親ダイズ植物を種子中
のパルミチン酸及びステアリン酸の両方の含有量を増やすキメラ導入遺伝子を含
んでなる第二の親、あるいはまた高い種子ステアリン酸含有量のためのｆａｓａ 及び高い種子パルミチン酸のためのｆａｐ２のような突然変異を含んでなる第二
の親と交配すること； （ｂ）工程（ａ）の交配から雑種種子を得、該種子を発芽させ、育て、そして１
サイクルまたはそれ以上の自家受粉によりダイズ植物の分離する集団を作製する
こと；及び （ｃ）工程（ｂ）の分離する集団から該脂肪酸プロフィールを有する種子を作る
植物を選択すること を含んでなる工程により作製する。
【００４６】 また目的のものは、そのような植物から得られる種子、これらの種子から得ら
れる油、そのような油の水素化、分別、エステル交換反応または加水分解で作ら
れる生成物及びこの油の製造中に作られる副産物である。さらに、本発明はまた
、ブレンドされた形態にせよブレンドされていない形態にせよマーガリンまたは
スプレッド製品を製造するための、そのような油の使用及びそのような油の水素
化、分別、エステル交換反応または加水分解で作られる生成物の使用にも関する
。
【００４７】 第三の態様として、本発明は、全種子脂肪酸プロフィールが４２％より多いＣ
１６：０及びＣ１８：０総合含有量を含んでなる成熟種子を作るダイズ植物に関
し、ここで、該植物を以下の： （ａ）Ｃ１８：０含有量が全種子脂肪酸の少なくとも１０％を含んでなり、そし
てオレオイル−ＡＣＰチオエステラーゼ酵素をコードする核酸フラグメントの少
なくとも１つの導入遺伝子コピーをさらに含んでなる第一の親ダイズ植物を高い
種子ステアリン酸含有量を与える適切な導入遺伝子またはｆａｓａ対立遺伝子の
ような突然変異のいずれかを含んでなる第二の親と交配すること； （ｂ）工程（ａ）の交配から雑種種子を得、該種子を発芽させ、育て、そして１
サイクルまたはそれ以上の自家受粉によりダイズ植物の分離する集団を作製する
こと；及び （ｃ）工程（ｂ）の分離する集団から該脂肪酸プロフィールを有する種子を作る
植物を選択すること を含んでなる工程により作製する。
【００４８】 また目的のものは、そのような植物から得られる種子、これらの種子から得ら
れる油、そのような油の水素化、分別、エステル交換反応または加水分解で作ら
れる生成物及びこの油の製造中に作られる副産物である。さらに、本発明はまた
、マーガリンまたはスプレッド製品を製造するために用いることができるそのよ
うな油、そのような油から作られる生成物及びそのような油から作られるブレン
ドされた生成物の使用にも関する。
【００４９】 第四の態様として、本発明は、全種子脂肪酸プロフィールが７％未満のＣ１６
：０及びＣ１８：０総合含有量、８７％より多いＣ１８：１含有量並びに６％未
満のＣ１８：２及びＣ１８：３総合含有量を含んでなる成熟種子を作るダイズ植
物に関する。
【００５０】 この脂肪酸プロフィールを有するダイズ植物を以下の： （ａ）Ｃ１８：１含有量が全種子脂肪酸の少なくとも８０％を含んでなり、そし
てデルタ−１２デサチュラーゼ酵素をコードするダイズ核酸フラグメントの少な
くとも１つの導入遺伝子コピーをさらに含んでなる第一の親ダイズ植物を（ｉ）
減少した種子パルミチン酸含有量のためのｆａｐ１対立遺伝子及び減少した種子
パルミチン酸含有量のためのｆａｐ３対立遺伝子の両方を含んでなる第二の親、
または（ii）減少した種子パルミチン酸含有量のための植物アシル−ＡＣＰチオ
エステラーゼをコードするダイズ核酸フラグメントの少なくとも１つの導入遺伝
子コピーを含んでなり、ここで、該チオエステラーゼがステアロイル−ＡＣＰも
しくはオレオイル−ＡＣＰのいずれかよりパルミトイル−ＡＣＰに対して少なく
とも２倍優先的である第二の親と交配すること； （ｂ）工程（ａ）の交配から雑種種子を得、該種子を発芽させ、育て、そして１
サイクルまたはそれ以上の自家受粉によりダイズ植物の分離する集団を作製する
こと；及び （ｃ）工程（ｂ）の分離する集団から該脂肪酸プロフィールを有する種子を作る
植物を選択すること を含んでなる工程により作製する。
【００５１】 また目的のものは、そのような植物から得られる種子、これらの種子から得ら
れる油、そのような油の水素化、分別、エステル交換反応または加水分解で作ら
れる生成物及びこの油の製造中に作られる副産物である。
【００５２】 第五の態様として、本発明は、全種子脂肪酸プロフィールが１２％未満のＣ１
６：０及びＣ１８：０総合含有量、８４％より多いＣ１８：１含有量並びに５％
未満のＣ１８：２及びＣ１８：３総合含有量を含んでなる成熟種子を作るダイズ
植物に関する。
【００５３】 この脂肪酸プロフィールを有するダイズ植物を以下の： （ａ）Ｃ１８：１含有量が全種子脂肪酸の少なくとも８０％を含んでなり、そし
てデルタ−１２デサチュラーゼ酵素をコードするダイズ核酸フラグメントの少な
くとも１つの導入遺伝子コピーをさらに含んでなる第一の親ダイズ植物を減少し
た種子リノレン酸含有量のためのｆａｎ対立遺伝子のような突然変異またはデル
タ−１５デサチュラーゼ酵素をコードするダイズ核酸フラグメントの少なくとも
１つの導入遺伝子コピーのいずれかを含んでなり、そしてさらにＣ１８：３含有
量が全種子脂肪酸の４％未満を含んでなる第二の親と交配すること； （ｂ）工程（ａ）の交配から雑種種子を得、該種子を発芽させ、育て、そして１
サイクルまたはそれ以上の自家受粉によりダイズ植物の分離する集団を作製する
こと；及び （ｃ）工程（ｂ）の分離する集団から該脂肪酸プロフィールを有する種子を作る
植物を選択すること を含んでなる工程により作製する。
【００５４】 また目的のものは、そのような植物から得られる種子、これらの種子から得ら
れる油、そのような油の水素化、分別、エステル交換反応または加水分解で作ら
れる生成物及びこの油の製造中に作られる副産物である。
【００５５】 本明細書に記述した新規な種子脂肪酸プロフィールを招く特定の遺伝子型を集
めるために用いた一般法は以下のとおりである： １）種子脂肪酸プロフィールに関して選択した親系統を一方の親植物の花から
もう一方の親植物の除雄した花への花粉の手動移動により他家受粉した。
【００５６】 ２）他家受粉した花からの成熟種子を植えてＦ１植物を作り、それを自家受粉
させて２つの親の種子脂肪酸表現型を生じることに関与する遺伝子の異なる量を
保有するＦ２集団の種子を作った。
【００５７】 ３）胚軸と直接接触していない子葉の一部から成熟種子の小片を取り除いた。
種子脂質を含んでなる５つの主要な脂肪酸の相対含有量をＷＯ ９３／１１２４
５に記述されたようにガス液体クロマトグラフィーにより決定し、分析した小片
の脂肪酸プロフィールに基づいて選択した種子の残りの部分を植えた。選択した
Ｆ２植物を自家受粉させ、Ｆ３種子を作った。この世代からの単一種子及びこの
世代からの全部の種子ロットに対して上記の分析方法を繰り返した。
【００５８】 代案として、事前の選択なしにＦ２種子集団を育て、自家受粉させ、得られた
Ｆ２植物の個々の植物からの全部の種子を分析して単一植物の全部の種子脂肪酸
分析に基づいてＦ２：３ファミリーを選択することができる。
【００５９】 いったん所望する脂肪酸プロフィールを有する系統を同定すると、種子脂肪酸
プロフィールを維持し、試験するために自家受粉した集団として進めることがで
きる。
【００６０】 高レベルのオレイン酸及び低レベルのポリ不飽和脂肪酸を相伴って有する系統
を作製するために、ＷＯ ９７／４０６９８に記述されたデルタ−１２デサチュ
ラーゼをダウンレギュレートしたトランスジェニック系統を一方の親として選択
した。ポリ不飽和脂肪酸が低いが飽和脂肪酸が高いダイズ系統を作製するために
、高レベルのステアリン酸をもたらす突然変異を含有するダイズ系統を第二の親
として選択した。そのような系統の例を米国特許第５，５５７，０３７号に見い
だすことができ、その開示は引用することにより本明細書に組み込まれる。この
特許は、ｆａｓａ遺伝子座と呼ばれる遺伝子座に突然変異を保有するダイズ系統
Ａ６を開示している。
【００６１】 高レベルのオレイン酸及び非常に低レベルの飽和脂肪酸を相伴って有する系統
を作製するために、デルタ−１２デサチュラーゼをダウンレギュレートした系統
を一方の親として選択し、非常に低レベルのパルミチン酸を有する系統を第二の
親として選択した。１つの方法は、遺伝子の組み合わせを含有する第二の親を用
いることであり、そのような系統を米国特許第５，５８５，５３５号に見いだす
ことができ、その開示は引用することにより本明細書に組み込まれる。別の方法
は、第二の親としてＷＯ ９６／０６９３６に開示された系統を用いることであ
り、そこには、センスの向きであるパルミトイル−ＡＣＰチオエステラーゼ構築
物が開示されており、その組込みは活性の減少をもたらす。
【００６２】 ポリ不飽和脂肪酸リノレン酸のレベルをさらに減らし、そして低ポリ不飽和脂
肪酸表現型の環境安定性を高めるために、デルタ−１２デサチュラーゼをダウン
レギュレートしたトランスジェニック系統を一方の親として選択し、そしてデル
タ−１５デサチュラーゼのダウンレギュレートされた発現を有するトランスジェ
ニック系統または類似したリノレン酸表現型を有する突然変異体系統のいずれか
を第二の親として選択した。デルタ−１５デサチュラーゼのダウンレギュレーシ
ョンにより生じるものに類似したリノレン酸表現型を有する突然変異体系統の例
を米国特許第５，５３４，４２５に見いだすことができ、その開示は引用するこ
とにより本明細書に組み込まれる。
【００６３】 高レベルのステアリン酸を有する種子を作る突然変異体系統と植物アシル−Ａ
ＣＰチオエステラーゼの種子特異的過剰発現のためのキメラ遺伝子を保有するト
ランスジェニック系統との組み合わせによりダイズ種子中の非常に高レベルの飽
和脂肪酸を生成せしめた。
【００６４】 ダイズ油及び荒粉を製造するためのダイズ種子の抽出及び加工方法はダイズ加
工産業の全体にわたって周知である。一般に、油を含有する種子から食用油生成
物の抽出及び精製を成し遂げる一連の工程を用いてダイズ油を製造する。以下の
図式に示す一般化された工程を用いてダイズ油及びダイズ副産物を製造する。
【００６５】
【表３】
【００６６】 ダイズ種子をきれいにし、焼戻し、皮をむき、薄片にし、それにより油抽出の
効率が上がる。通常、油抽出を溶媒（ヘキサン）抽出により実施するが、物理的
圧力及び／または溶媒抽出の組み合わせによっても行うことができる。得られた
油は粗油と呼ばれる。リン脂質並びに他の極性及び中性複合脂質を水和させ、そ
れにより水和しないトリグリセリド画分（ダイズ油）からのそれらの分離を促す
ことにより粗油からゴムを除去することができる。得られたレシチンゴムをさら
に処理して乳化及び剥離（非付着）剤として様々な食品及び工業製品において用
いられる商業的に重要なレシチン製品を製造することができる。ゴム除去した油
を不純物：主として遊離脂肪酸、色素及び残留ゴムの除去のためにさらに精錬す
ることができる。遊離脂肪酸と反応して石鹸を生成せしめ、そして粗油中のホス
ファチド及びタンパク質を水和させる苛性アルカリの添加により精錬を実施する
。精錬中に生じる石鹸の痕跡を洗浄して除くために水を用いる。石鹸原料副産物
を動物飼料中に直接用いることができ、または酸性にして遊離脂肪酸を回収する
ことができる。クロロフィル及びカロチノイド化合物の大部分を除く漂白土（ｂ
ｌｅａｃｈｉｎｇ ｅａｒｔｈ）での吸着により色を除く。精錬した油を水素化
して、様々な融解特性及び質感を有する脂肪をもたらすことができる。ウィンタ
ーライゼーション（ｗｉｎｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ）（分別）を用いて注意深く制
御された冷却条件下での結晶化により水素化された油からステアリンを除くこと
ができる。主として真空下での水蒸気蒸留である脱臭は最後の工程であり、油に
臭いまたは風味を与える化合物を除くことを意図する。トコフェロール及びステ
ロールのような他の有益な副産物を脱臭工程中に取り除くことができる。これら
の副産物を含有する脱臭された蒸留物を天然のビタミンＥ及び他の高価な製薬学
的製品の製造のために販売することができる。精錬し、漂白し、（水素化し、分
別し）、脱臭した油及び脂肪を包装し、直接販売するかまたはより特殊化した製
品にさらに加工することができる。ダイズ種子加工、ダイズ油製造及び副産物利
用のより詳細な参考文献をＥｒｉｃｋｓｏｎ，１９９５，Ｐｒａｃｔｉｃａｌ
Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｓｏｙｂｅａｎ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ａｎｄ Ｕ
ｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ，Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｏｉｌ Ｃｈｅｍｉｓｔ’
ｓ Ｓｏｃｉｅｔｙ ａｎｄ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｏｙｂｅａｎ Ｂｏａｒｄに見
いだすことができる。
【００６７】 水素化は、ニッケルのような触媒を用いて不飽和脂肪酸二重結合に水素を付加
する化学反応である。高オレイン酸ダイズ油は不飽和のオレイン、リノール及び
リノレン脂肪酸を含有し、これらの各々を水素化できる。水素化は２つの主要な
効果を有する。第一に、不飽和脂肪酸含有量の減少の結果として油の酸化安定性
を上げる。第二に、脂肪酸改変は融点を上げ、室温で半液体または固体の脂肪を
もたらすので油の物理的特性を変える。
【００６８】 水素化反応に影響を与え、同様に最終生成物の組成を変える多数の変数がある
。制御できるより重要なパラメーターの中には、圧力、温度、触媒の種類及び濃
度、撹拌並びに反応器設計を包含する操作条件がある。より多い不飽和脂肪酸を
より少ない不飽和のものより優先して水素化するために選択的水素化条件を用い
ることができる。液体油の安定性を増すためには非常に弱いまたは軽い水素化が
しばしば用いられる。さらなる水素化は液体油を物理的に固体の油に転化する。
水素化の程度は、特定の最終生成物に意図される適切な性能及び融解特性により
決まる。水素化により得られる無数の可能な油及び脂肪生成物の中には、焼く製
品の製造に用いられる液体ショートニング、商業的な揚げる及び焼く操作のため
に用いられる固体脂肪及びショートニング、並びにマーガリン製造のためのベー
スストックがある。水素化及び水素化された生成物のより詳細な記述をＰａｔｔ
ｅｒｓｏｎ，Ｈ．Ｂ．Ｗ．，１９９４，Ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆ
ａｔｓ ａｎｄ Ｏｉｌｓ：Ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｔｈｅ
Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｏｉｌ Ｃｈｅｍｉｓｔ’ｓ Ｓｏｃｉｅｔｙに見いだす
ことができる。
【００６９】 水素化された油はまた、水素化工程に起因するトランス脂肪酸異性体の存在の
ために議論の的にもなっている。大量のトランス異性体の摂取は、血液血漿中の
高密度リポタンパク質に対する低密度の増加した割合及び冠動脈性心疾患の増加
した危険を包含する有害な健康作用と関連している。トランス脂肪酸を含まない
形態の水素化された油を一般に使用する食品を製造することが有益である。「ト
ランス脂肪酸を実質的に含まない」という用語は、本明細書において用いる場合
、健康を脅かさないレベルのトランス脂肪酸を意味する。例えば、そのようなレ
ベルは、０．１％（すなわち、トランス脂肪酸レベルを評価するための現在の方
法により信頼性高く検出できない量）から健康の危険がない上限までの範囲であ
ることができる。近い将来には、食品中に存在してもよく、「トランス脂肪酸を
含まない」資格を有することができるトランス脂肪酸異性体のレベルに対する上
限を連邦政府が置くと予想される。本発明の油、マーガリン及びスプレッド製品
の全ては、政府当局によりどのような制限が与えられようとも適合するはずであ
ると考えられる。
【００７０】 油中の脂肪酸のトランス異性体の検出限界は約０．１％である。（油中のトラ
ンス脂肪酸を検出するためのガスクロマトグラフィー法は、ＡＯＣＳ Ｃｅ １Ｃ
−８９に略述されている）。水素化法の改変により製造された「低トランス異性
体油」の報告は、５−２０％（ｗ／ｗ）のレベルを達成することができるが、通
常、高い飽和脂肪酸レベルを犠牲にしてである（Ａｌｌｅｎ，Ｄ．Ａ．（１９９
８）Ｌｉｐｉｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０（２），２９−３３）。本発明に
おける完全にまたは部分的に水素化されていない及び化学的に改変されていない
油、脂肪生成物及びブレンドされた脂肪生成物は、トランス脂肪酸を実質的に含
まないはずであり、すなわち、それらは油の２０％（ｗ／ｗ）未満、好ましくは
１０％未満、より好ましくは５％未満、さらにより好ましくは３％未満、またよ
り好ましくは１％未満、そして最も好ましくは０．５％未満のトランス脂肪酸濃
度を達成するはずであると考えられる。
【００７１】 エステル交換反応は、エステルと酸（酸分解）、エステルとアルコール（アル
コール分解）またはエステルとエステル（エステル交換反応）の間の脂肪アシル
部分の交換をさす。エステル交換反応は化学的または酵素的工程を用いて行われ
る。ランダムなまたは選択的エステル交換反応工程は、脂肪酸組成を変えずにト
リグリセリド分子上の脂肪酸を転位する。改変されたトリグリセリド構造は、改
変された物理的特性を有する脂肪をもたらす可能性がある。リパーゼを用いる選
択的エステル交換反応は、ココアバター代用品のような高価な特殊製品のために
ますます重要になっている。エステル交換反応を用いて商業的に製造されている
製品には、ショートニング、マーガリン、ココアバター代用品並びに中位鎖脂肪
酸及びポリ不飽和脂肪酸を含有する構造化（ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄ）脂質が包含
されるがそれらに限定されるものではない。エステル交換反応は、Ｈｕｉ，Ｙ．
Ｈ．，１９９６，Ｂａｉｌｅｙ’ｓ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｏｉｌ ａｎｄ
Ｆａｔ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ｖｏｌｕｍｅ ４，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓ
ｏｎｓにさらに説明されている。
【００７２】 脂肪酸及び脂肪酸メチルエステルは、植物油から得られる重要な油化学製品の
うちの２つである。脂肪酸は、石鹸、中位鎖トリグリセリド、ポリオールエステ
ル、アルカノールアミド等のような多数の生成物の製造のために用いられる。植
物油をそれらの対応する脂肪酸及びグリセリンに加水分解するかまたは分解する
ことができる。様々な脂肪分解工程から製造された脂肪酸は、未精製で用いるこ
とができ、またはたいてい蒸留及び分別により画分もしくは個々の脂肪酸に精製
される。精製された脂肪酸及びそれらの画分は、二量体及び三量体酸、二酸、ア
ルコール、アミン、アミド並びにエステルのような多種多様な油化学製品に転化
される。脂肪酸メチルエステルは、脂肪アルコール、アルカノールアミド、ａ−
スルホン化メチルエステル、ディーゼル油成分等のような多数の油化学製品の出
発原料として脂肪酸にますます置き換わっている。また、植物油の分解または加
水分解を用いるトリグリセリドの開裂によりグリセリンも得られる。脂肪酸及び
油化学製品の商業的用途に関するさらなる参考文献をＥｒｉｃｋｓｏｎ，Ｄ．Ｒ
．，１９９５，Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｓｏｙｂｅａｎ
Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ａｎｄ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ，Ｔｈｅ Ａｍｅｒ
ｉｃａｎ Ｏｉｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｓ’ Ｓｏｃｉｅｔｙ，ａｎｄ Ｕｎｉｔｅ
ｄ Ｓｏｙｂｅａｎ Ｂｏａｒｄ；Ｐｒｙｄｅ，Ｅ．Ｈ．，１９７９，Ｆａｔｔ
ｙ Ａｃｉｄｓ，Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｏｉｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｓ’ Ｓ
ｏｃｉｅｔｙ；及びＨｕｉ，Ｙ．Ｈ．，１９９６，Ｂａｉｌｅｙ’ Ｉｎｄｕｓ
ｔｒｉａｌ Ｏｉｌ ａｎｄ Ｆａｔ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ｖｏｌｕｍｅ ４，
Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓに見いだすことができる。
【００７３】 当業者は、本発明において記述した油の水素化、分別、エステル交換反応また
は加水分解から得られる生成物をマーガリンまたはスプレッド製品を製造するた
めに使用できることを認識する。さらに、マーガリンまたはスプレッド製品を製
造するために他の成分と組み合わせて、天然の状態または水素化、分別、エステ
ル交換反応及び／もしくは加水分解により改変したいずれかの、本発明の分別さ
れたまたは分別されていない油を利用して以下に記述するようにブレンドされた
製品を作ることができる。
【００７４】 マーガリンは、食卓用または揚げる、焼く等のような調理目的のために乳製品
バター代用品として一般に使用される風味をつけた食品である。マーガリンの組
成は典型的に８０％の脂肪であり、選択した脂肪及び油を他の成分とブレンドす
ることにより製造され、ビタミンＡで強化される。ブレンドされた脂肪を作るた
めに用いることができる成分の例には、完全に水素化されたダイズ油、完全に水
素化された綿実油、完全に水素化されたヤシ油、部分的に水素化されたダイズ油
、部分的に水素化された綿実油、部分的に水素化されたヤシ油、ダイズ油、トウ
モロコシ油、ヤシ油、カノラ油、ヒマワリ油、ラッカセイ油、ベニバナ油または
それらの混合物よりなる群から選択される少なくとも１つの成分が包含されるが
それらに限定されるものではない。
【００７５】 ブレンドする工程及び最終生成物を異なる用途のために変えることができる。
８０％未満の脂肪を含有する全ての製品は「スプレッド」と呼ぶ必要がある。「
スプレッド」または「スプレッド製品」という用語は本明細書において互換的に
用いられる。マーガリン及びスプレッドは、１つまたはそれ以上の水相成分並び
に特定の機能を有する他の任意の成分を含有することができる。異なる製品とし
て全て包装されるレギュラー、ホイップした、ソフトタブ（ｓｏｆｔ−ｔｕｂ）
、液状、低カロリー、スプレッド、脂肪分のない、レストラン、パン屋及び特殊
タイプを包含する１０以上の異なるタイプの現在製造されているマーガリン及び
スプレッドがある。
【００７６】 １９５０年代初期にはほとんど全ての消費者マーガリンはスティックの種類で
あった。売上高及び一人当たりの消費が高まり、１９５７年にはバターのものを
越えた。売上高の増加は新しい技術進歩及び新製品開発を刺激した。使いやすさ
及び栄養学的認識並びに消費者の体重意識に対する要望を満たすためによく延び
るマーガリン、ポリ不飽和のマーガリン及び低脂肪製品が開発された。
【００７７】 過去からの最初の主要な発展は、冷蔵庫から出してよく延び、タブに包装され
たソフトマーガリンの導入であった。この柔らかい全脂肪製品は１９７３年まで
にマーガリン市場の１／４を獲得した。近年では、スティック食卓用スプレッド
が全食卓用スプレッド市場のわずかに半分未満を占める。最も顕著な最近の傾向
は、マーガリン（８０％）脂肪から離れて、より低い脂肪レベルを含有するスプ
レッドにある。６０％の脂肪で最初に導入されて、１９８０年以来、７５％〜５
％未満の脂肪を含有するスプレッドが市場に現れている。それらの製品は、ステ
ィック、液状及び柔らかいホイップした形態の固体である。４０−７５％の脂肪
を含有する低カロリー、ソフト及びスティックスプレッドは、通常、それぞれソ
フト及びスティックマーガリンの製造のために用いられるものと同じ油ブレンド
から調合される。マーガリン及びスプレッド製造業務並びに製品特性の詳細な記
述をＢａｉｌｅｙ’ｓ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｏｉｌ ａｎｄ Ｆａｔ Ｐｒ
ｏｄｕｃｔｓ，第５版、Ｖｏｌｕｍｅ ３，Ｙ．Ｈ．Ｈｕｉ，編集，Ｊｏｈｎ
Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９６，ｐｐ６５−
１１４；及びＢａｉｌｅｙ’ｓ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｏｉｌ ａｎｄ Ｆａ
ｔ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，第５版、Ｖｏｌｕｍｅ ４，Ｙ．Ｈ．Ｈｕｉ，編集，Ｊ
ｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９６，ｐ
ｐ４９１−５６８に見いだすことができる。
【００７８】 消費者マーガリンは、異なる程度の硬さを有する２つまたはそれ以上の油ベー
スストックをブレンドすることにより調合される。これによりマーガリンは冷蔵
庫から出して直接よく延ばすことができ、そして室温での固体硬度を保つことが
できる。優れた性能のマーガリンの特性を脂肪ブレンドの固体脂肪含有量（ＳＦ
Ｃ、以下参照）を測定することにより提示することができる。次に、このプロフ
ィールを用いてマーガリン製品としての他の油ブレンドの性能を予測することが
できる。マーガリン調合の詳細な記述をＦａｔｓ ａｎｄ Ｏｉｌｓ，Ｆｏｒｍ
ｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｆｏｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉ
ｏｎｓ，Ｒ．Ｄ．Ｏ’Ｂｒｉｅｎ編集、Ｔｅｃｈｎｏｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｉ
ｎｇ Ｃｏ，Ｌａｎｃａｓｔｅｒ，ＰＡ，１９９８，ｐｐ４３７−４５７に見い
だすことができる。
【００７９】 脂肪の融解特性及び可塑性を工業基準技術により測定することができる。最も
一般に用いられる方法は固体脂指数（ＳＦＩ、ＡＯＣＳ Ｃｄ１０−５７−９３
）及び固体脂肪含有量（ＳＦＣ、ＡＯＣＳ Ｃｄ１６ｂ−９３（９７））である
。ＳＦＩ測定は、液体状態に融解する脂肪に起因する容量変化に基づいて脂肪中
の固体または液体の量を測定する膨張率測定法に基づく。この技術は徐々にＳＦ
Ｃにより置き換わられている。この方法は、サンプル中の固体及び液体の相対量
をサンプルをパルス標識した後のそれら２相におけるプロトンの緩和の速度（ｒ
ａｔｅｓ）の違いに基づいて測定するパルス標識した低解像度核磁気共鳴（ＮＭ
Ｒ）に基づく。ＳＦＣへのＳＦＩの転化はいつも信頼性が高いとは限らない。与
えられたサンプルに対して、一般に１０°ないし４０℃の間である温度にわたっ
て固体のパーセンテージを測定する。異なる温度での脂肪の特性を理解するため
には全ＳＦＣ曲線が必要とされる。脂肪の機能性は、重要な温度、例えば室温な
いし体温の間での固体含有量及びＳＦＣ曲線の傾きの両方に基づく。このように
して、性能のために重要な温度に対してその脂肪の可塑性を予測することができ
る。
【００８０】 マーガリンまたは通常の油及び脂肪に対して、直接的な一連の安定化しない方
法を用いてＳＦＣを決定する。ＳＦＣ ＮＭＲ直接法は、固体及び液体相からの
シグナルを測定し、比較する。ＳＦＣは、サンプルの固体及び液体相の両方にお
ける核からの反応に対する固体相において水素核から得られるＮＭＲ反応間のパ
ーセント比率として定義される。一連の安定化しない方法は、１００℃で１５分
間融解し、貯蔵し、６０℃で５分間そして０℃で１時間保持することにより焼戻
される単一組のサンプルを利用する。次に、それらのサンプルを各記録温度で３
０分間保持し、そしてＳＦＣの測定後すぐに次のより高い温度に移す。本明細書
に提示した高オレイン酸で高ステアリン酸の油並びに同様の組成を有する油は、
２５℃で２０未満、好ましくは２５℃で１５未満、より好ましくは２５℃で１０
未満、最も好ましくは２５℃で５未満、そして１０℃で２０より大きい、好まし
くは１０℃で２０〜５０の間、最も好ましくは１０℃で２０〜３５の間のＳＦＣ
プロフィールを有する脂肪生成物を製造できると考えられる。
【００８１】 脂肪の融点もまた重要な測定である。脂肪は異なる融点を有するトリグリセリ
ドの混合物から構成されるので、鋭敏な測定はいつも可能とは限らない。毛管融
点（ＡＯＣＳ Ｃｃ１−２５−９３）、ウイリー（Ｗｉｌｅｙ）融点（ＡＯＣＳ
Ｃｃ２−３８−９１）、滑り点（ｓｌｉｐ ｐｏｉｎｔ）（ＡＯＣＳ Ｃｃ３−
２５−９３）及び滴点（ＡＯＣＳ Ｃｃ１８−８０−９５）を包含する、融点を
測定する産業に共通のいくつかの方法がある。
【００８２】 米国マーガリン油の典型的な固体脂指数値を表３に示す。数字は市販製品の代
表である。しかしながら、与えられたタイプのマーガリンに対して、明細事項は
１）所望される官能特性、２）栄養分含有量要求または栄養分パネルに関する他
の情報を満たすための組成の必要条件、３）製品が冷却しない陳列を用いて市販
されるかどうか、及び４）利用できる包装装置のタイプにより製造業者間でかな
り異なる可能性がある。固体値は、冷蔵庫温度（１０℃）での完成品の展性、室
温（２１．１℃）での油分離に対する耐性及び口特性（ｍｏｕｔｈ ｑｕａｌｉ
ｔｉｅｓ）（３３．３℃）における融解を示す。
【００８３】
【表４】
【００８４】 マーガリン製品の物理的及び機能的性質は、主としてその油相の特徴により決ま
る。脂肪固体含有量と完成したマーガリンの構造、硬度及び可塑性の間に直接的
関係が存在する。マーガリン硬度、風味及び乳化安定性は、結晶化した脂肪によ
り決まる。米国において、水素化はマーガリンベースストックの固体／液体関係
を変えるための好ましい工程である。しかしながら、水素化された油は、水素化
工程に起因するトランス脂肪酸異性体の存在のために議論の的になっている。大
量のトランス異性体の摂取は、血液血漿中の高密度リポタンパク質に対する低密
度の増加した割合及び冠動脈性心疾患の増加した危険を包含する有害な健康作用
と関連している。環境的観点からは、水素化工程における金属触媒の使用が、有
毒な金属廃棄物の再生及び処理に関する問題を提起している。水素化のネガティ
ブな面の増加する一般認識は、工業的に改変された油の存在を減らすかまたは除
くようにマーガリン調合の著しい変化をもたらすと思われる。
【００８５】 酸化安定性を測定するために多数の方法が当業者に周知である。市販の料理用
油の安定性を評価するために現在一般的に用いられる標準法は、Ｒｏｃｋｌａｎ
ｄ，ＭＡ，ＵＳＡのＯｍｉｎｉｏｎ，Ｉｎｃ．により製造された機械を用いて自
動的に測定される酸化安定性指数（ＯＳＩ）である。
【００８６】 ＯＳＩ機械は、１１０℃に加熱した油を通して空気を泡立たせることにより働
く。油が酸化するにつれて、揮発性有機酸、主としてギ酸が生じ、それをセル中
の蒸留水中に集めることができる。機械は蒸留水の伝導率を絶えず測定し、そし
てこの伝導率が急な上昇を始めるのにかかる時間として誘導期を測定する。ブレ
ンドされていない及びブレンドされた形態の本発明において提示した高オレイン
酸で高ステアリン酸の油並びに同様の組成を有する油は、１５より大きい、好ま
しくは２５より大きい、最も好ましくは３５より大きいＯＳＩ（１１０）を有す
る脂肪生成物を製造できると考えられる。
【００８７】 実施例 以下の実施例は本発明を例示するものであり、それに関して限定を与えない。
全ての温度は他に示されないかぎり摂氏単位で示される。これらの実施例におい
て挙げる固体脂肪含有量（ＳＦＣ）プロフィールは、示した温度で固体相にある
と決定された全脂肪成分のパーセンテージを報告する。
【００８８】 実施例１ ダイズからの油の製造及び脂肪酸組成の分析 これらの実施例において用いた全ての油を以下の実験室規模方法に従って製造
した。収穫したダイズを電子レンジで１８０°Ｆに加熱し、室温に冷却し、Ｒｏ
ｓｋａｍｐ ＴＲＣ ６５０−６ Ｃｒａｃｋ ａｎｄ Ｒｏｌｌを用いて砕いた。
Ｋｉｃｅ Ａｓｐｉｒａｔｏｒを用いてダイズ外皮を取り除き、残りの果肉を１
８０°Ｆに加熱し、Ｒｏｓｋａｍｐ ＴＲＣ ９１２ Ｆｌａｋｅ ａｎｄ Ｒｏｌ
ｌで薄片にした。約４：１の溶媒：固体の比率を用いて６０°に加熱したガラス
製の水ジャケット付き抽出容器中で４５分間粗油を抽出した。ヘキサン／油混合
物を集め、抽出を繰り返した。回転式エバポレーターを用いて混合物を脱溶媒し
、粗油を遊離した。
【００８９】 粗油の０．１％（ｖ／ｖ）に等しい８５％リン酸溶液の容量を加え、溶液を撹
拌しながら６５°−７０°に１０分間加熱した。さらに０．２％ ｗｔ／ｗｔ過
剰で遊離脂肪酸及びＨ3ＰＯ4を中和するために温かい（６０°）ＮａＯＨ（８％
水溶液）を油に滴下して加えた。溶液を５分間撹拌し、遠心分離により固体を分
離した。サンプルを速く撹拌しながら９０°に加熱すると熱水を２０％（ｖ／ｖ
）まで加えることにより油を水洗浄した。油及び水を室温で１０分間冷却させ、
次に遠心分離により分けた。８５°−９５°で３０分間または全ての水分（気泡
、液化）が除かれるまで真空下で非常に速い撹拌を用いて油を脱水した。次に、
真空を窒素で破った。２％（ｗｔ／ｗｔ）のＡｃｔｉｖａｔｅｄ Ｂｌｅａｃｈ
ｉｎｇ Ｅａｒｔｈ（ＡＯＣＳ ＃Ｚ１０７７）を加えることにより油を漂白し
、溶液を８５°−９５°で３０分間真空下で混合し、その後８０°に冷却した。
真空を窒素で破り、１％（ｗｔ／ｗｔ）の珪藻土を加え、珪藻土の調製したベッ
ドを通して混合物を濾過した。
【００９０】 クエン酸を約５０ｐｐｍまで加え、油をガラス製脱臭剤中で蒸気（１００ｇの
油当たり４ｍＬの水）を用いて２４０°で約１時間脱臭した。散布しながら油を
８０℃に冷却し、そして窒素下で４０°までさらに冷却した。精錬し、漂白し、
脱臭した油を窒素大気下で冷凍して保存した。
【００９１】 これらの実施例において記述した全ての脂肪酸組成分析を本質的にＡＯＣＳ
Ｃｅ １ｃ−８９に記述された方法により決定した。脂肪酸メチルエステルを以
下のように調製した。１０μＬの油または液化した脂肪を１ｍＬのヘキサン及び
０．２５ｍＬの３％ナトリウムメトキシド溶液と３０分間混合した。酢酸（０．
１ｍＬの１０％溶液）を加え、サンプルを混合し、遠心分離により層を分離した
。ヘキサン層中に抽出される得られた脂肪酸メチルエステルをガスクロマトグラ
フィー（ＧＣ）により分離した。ＳＰ２３４０カラム（６０ｍ、０．２５ｍｍ
ＩＤ、０．２０ミクロンのフィルム厚さ）（Ｓｕｐｅｌｃｏ、Ｂｅｌｌｅｆｏｎ
ｔｅ、ＰＡ）を備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ ５８９０ＧＣ（Ｗｉｌ
ｍｉｎｇｔｏｎ、ＤＥ）。カラム温度は注入で１５０°であり、温度を１５０°
から２００°まで４０分にわたって２℃／分でプログラムした。インジェクター
及び検出器温度はそれぞれ２１５°及び２３０°であった。報告される全ての組
成値は、ＧＣ検出器により測定された積分面積から計算された相対値である。
【００９２】 全てのＳＦＣ測定を本質的にＡＯＣＳ Ｃｄ１６ｂ−９３に記述された方法に
より実施した。
【００９３】 全ての酸化安定性測定を本質的にＡＯＣＳ Ｃｄ１２ｂ−９２（９３）に記述
された方法によりＯＳＩにより決定した。
【００９４】 実施例２ 市販のマーガリン固体脂肪含有量 異なる程度の固体性を有する市販のマーガリンのサンプルをＳＦＣに関して分
析した。製品を１００度で融解し、水層を除くことによりサンプルを調製した。
得られた脂肪画分を温度の関数としてＳＦＣに関して分析し、結果を表４に挙げ
る。この表は、脂肪可塑性及び所望される製品形態（例えばソフトタブ、スティ
ック、低脂肪スプレッド）により異なるタイプのマーガリン及びスプレッド製品
を製造するために用いることができる固体の範囲を示す。
【００９５】
【表５】
【００９６】 実施例３ 高ステアリン酸ダイズ油の固体脂肪含有量 Ｌ９２１６１１６−１０９と称する系統からの高ステアリン酸ダイズが、系統
（ＨＳＴ１＊（ＨＯ２＊ＨＯ４））＊Ａ２５０６（ＨＯ２及びＨＯ４間の交配か
らの子孫をＨＳＴ１に交配し、そして得られた子孫を野生型系統Ａ２５０６に交
配してＬ９２１６１１６−１０９を作製したことを意味する）からＤｕｐｏｎｔ
で開発された。作られた種子は、通常のダイズより高いステアリン酸含有量及び
低いリノレン酸含有量を有する。突然変異誘発のための出発材料として異なるダ
イズ系統を用い、そして選択が炭水化物含有量の代わりに脂肪酸含有量の変化に
基づいたことを除いて、親ＨＳＴ１、ＨＯ２及びＨＯ４（表２参照）は米国特許
第５，７１０，３６５号に略述される突然変異誘発プロトコルにより選択された
突然変異体系統である。ＨＳＴ１は、Ｊ．Ｗ．Ｂｕｒｔｏｎ（Ｋｕｈｒ ｅｔ
ａｌ．，Ｍａｒｃｈ ２６，１９８７ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｎｏｔｉｃｅ ｆｏｒ
Ｎ８５−２１２４、Ｎ８５−２１３１，ａｎｄ Ｎ８５−２１７６．ＵＳＤＡ
Ａｇｒｉｃ Ｒｅｓ．Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）によりノースカロライナ州立大学（
Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）で開発さ
れた高オレイン酸、低リノレン酸系統である系統Ｎ８５−２１７６の突然変異体
である。ＨＳＴ１は、Ｎ８５−２１７６のより低いリノレン酸含有量を保持しな
がら、その異常に高いステアリン酸含有量（ＨＳＴ＝高ステアリン酸）によりそ
の親Ｎ８５−２１７６と異なる。ＨＳＴ１における高ステアリン酸突然変異は、
Ｎ８５−２１７６からの遺伝子バックグラウンド中に存在する高オレイン酸遺伝
子（１個または複数）を抑制する（に対して優位である）。それ故、ＨＳＴ１は
Ｎ８５−２１７６のようにオレイン酸が高くない。ＨＳＴ１におけるステアリン
酸突然変異は、系統Ａ６（アイオワ州からのＷ．Ｆｅｈｒ）におけるｆａｓａ（
表２参照）に対立遺伝子であり、ｆａｓａ対立遺伝子として類似したバックグラ
ウンドに交配すると類似した表現型をもたらす。Ｎ８５−２１７６とＡ５（アイ
オワ州からのＷ．Ｆｅｈｒ）間の交配は、Ｎ８５−２１７６が類似した低リノレ
ン酸表現型を与えるＡ５中に存在するｆａｎ遺伝子（表２参照）の対立遺伝子を
含有することを裏付ける。従って、ＨＳＴ１は（ｆａｓａに対立遺伝子の）高ス
テアリン酸突然変異及び（ｆａｎに対立遺伝子の）低リノレン酸突然変異の両方
を含有する。
【００９７】 ＨＯ２は、系統Ｎ８５−２１７６の突然変異誘発から選択されたＤｕｐｏｎｔ
所有の突然変異体系統である。Ｎ８５−２１７６を突然変異誘発のための出発材
料として用い、そして選択が炭水化物含有量の代わりに脂肪酸含有量の変化に基
づいたことを除いて、突然変異誘発プロトコルは米国特許第５，７１０，３６５
号に記述されるものと本質的に同じであった。ＨＯ２は、わずかに高いオレイン
酸含有量（ＨＯ＝高オレイン酸）を有する点でＮ８５−２１７６（ｆａｎ）と異
なるが、Ｎ８５−２１７６の低リノレン酸含有量を保持する。従って、ＨＯ２は
、ｆａｎ遺伝子に加えてＮ８５−２１７６より高いオレイン酸含有量を与える不
特定の突然変異を含有する。
【００９８】 ＨＯ４は、系統Ａ５の突然変異誘発から選択されたＤｕｐｏｎｔ所有の突然変
異体系統である。Ａ５を突然変異誘発のための出発材料として用い、そして選択
が炭水化物含有量の代わりに脂肪酸含有量の変化に基づいたことを除いて、突然
変異誘発プロトコルは米国特許第５，７１０，３６５号に記述されるものと本質
的に同じであった。ＨＯ４は、より高いオレイン酸含有量（ＨＯ＝高オレイン酸
）を有する点でＡ５（ｆａｎ）と異なるが、Ａ５の低リノレン酸含有量を保持す
る。従って、ＨＯ４は、ｆａｎ遺伝子に加えてＡ５より高いオレイン酸含有量を
与える不特定の突然変異を含有する。
【００９９】 Ａ６（ｆａｓａ）の誘導体または本発明において開示したものと類似した高ス
テアリン酸及び低リノレン酸表現型を含んでなる油組成を有する種子を生じる同
様の植物は、本明細書に記述した方法のために有用であると考えられる。
【０１００】 高ステアリン酸及び高オレイン酸ダイズを実施例５において略述したように開
発した。
【０１０１】 全てのダイズ油を実施例１に記述したように製造し、脂肪酸組成及び様々な温
度での固体脂肪含有量に関して分析した。
【０１０２】 表５及び６は、１５％〜２２％のステアリン酸の範囲の高ステアリン酸ダイズ
油の組成及び機能特性を示す。さらに、これらの油のうち４つは高いレベルのオ
レイン酸を有する。２２％のステアリン酸及び通常のオレイン酸含有量を含む油
は、ソフトタブマーガリンに必要とされる明細事項を満たすために十分な固体性
をもたなかった（図１参照）。しかしながら、２２％のステアリン酸、高オレイ
ン酸の組み合わせのＳＦＣプロフィールは、市販のソフトタブマーガリンに対し
て公開された範囲内に入った。本明細書に提示する高オレイン酸と組み合わせた
高ステアリン酸の油並びに類似した組成を有する油は、２５℃で２０未満、好ま
しくは２５℃で１５未満、より好ましくは２５℃で１０未満、最も好ましくは２
５℃で５未満、そして１０℃で２０より大きい、好ましくは１０℃で２０〜５０
の間、最も好ましくは１０℃で２０〜３５の間のＳＦＣプロフィールを有する脂
肪生成物を製造できると考えられる。
【０１０３】 ２２％未満のステアリン酸を有する油は、マーガリン及びスプレッド製品と一
致するＳＦＣプロフィールをもたなかった。従って、少なくとも２２％のステア
リン酸濃度と組み合わせて高オレイン酸濃度を有するブレンドされていない油か
らマーガリン及びスプレッド製品と一致するＳＦＣプロフィールを得ることがで
きた。
【０１０４】
【表６】
【０１０５】
【表７】
【０１０６】 実施例４ トランス脂肪酸異性体を欠くマーガリンを製造するためのベース油ブレンド マーガリンのＳＦＣ必要条件を満たし且つトランス脂肪酸異性体を含有しない
脂肪を製造するために高ステアリン酸油をヤシ油または完全に水素化されたダイ
ズフレーク（Ｄｒｉｔｅｘ ＰＳＴ Ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ Ｓｏｙｂｅａ
ｎ Ｆｌａｋｅｓ，ＡＣ ＨＵＭＫＯ，５２５Ｗ．１st Ａｖｅｎｕｅ，Ｃｏｌ
ｕｍｂｕｓ ＯＨ）のいずれかと（表７に示すように）ブレンドした。得られた
ブレンドを脂肪酸組成、様々な温度での固体脂肪含有量及び酸化安定性に関して
分析した。表７は、これらのブレンドの各々の脂肪酸組成及びＯＳＩ値を示す。
図２に図式表示を示す。高ステアリン酸／高オレイン酸油で作られたブレンドは
、通常のオレイン酸レベルを有する高ステアリン酸油で作られたブレンドより４
−７倍大きい酸化安定性値を示す。ブレンドされていない形態及びブレンドされ
た形態の本明細書に提示する高オレイン酸で高ステアリン酸の油並びに類似した
組成を有する油は、１５より大きい、好ましくは２５より大きい、最も好ましく
は３５より大きいＯＳＩ（１１０）を有する脂肪生成物を製造できると考えられ
る。表８は、これらのブレンドの各々の固体脂肪含有量を示す。高い酸化安定性
を示す高ステアリン酸／高オレイン酸油のブレンドされた形態（ＨＳＨＯ Ｃ＋
ヤシ油、及びＨＳＨＯ Ｄ＋完全に水素化されたダイズ油）は図３において示さ
れるようにそれらのＳＦＣプロフィールも改善しており、今度はソフトタブマー
ガリンの曲線と適合する。ブレンドされていない形態及びブレンドされた形態の
本明細書に提示する高オレイン酸で高ステアリン酸の油並びに類似した組成を有
する油は、２５℃で２０未満、好ましくは２５℃で１５未満、より好ましくは２
５℃で１０未満、最も好ましくは２５℃で５未満、そして１０℃で２０より大き
い、好ましくは１０℃で２０〜５０の間、最も好ましくは１０℃で２０〜３５の
間のＳＦＣプロフィールを有する脂肪生成物を製造できると考えられる。
【０１０７】
【表８】
【０１０８】
【表９】
【０１０９】 実施例５ 高ステアリン酸及び高オレイン酸含有量を有するダイズ 種子脂肪酸中に高いレベルのオレイン酸を有するダイズ系統と種子脂肪酸中に
高いレベルのステアリン酸を有する系統間で交配を実施した。高オレイン酸系統
はダイズ脂肪酸デサチュラーゼ遺伝子、ｇｍＦＡＤ２−１（Ｈｅｐｐａｒｄ，Ｅ
．Ｐ．ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．１１０：３１１
−３１９）の導入遺伝子コピーを含有し、それはｇｍＦＡＤ２−１メッセージレ
ベルの共抑制、従ってダウンレギュレーションをもたらし、ＷＯ ９７／４０６
９８に記述されている。ＦＡＤ２−１機能の減少した発現は、デルタ−１２デサ
チュラーゼの活性の減少及びポリ不飽和脂肪酸の蓄積の減少を導く。高オレイン
酸系統はＤ２Ｔと呼ばれ、その種子脂質の典型的な脂肪酸プロフィールを表２に
示す。高ステアリン酸エステルの親は、突然変異させたダイズ種子集団（米国特
許第５，５５７，０３７号）から単離された脂肪酸合成突然変異体であり、Ａ６
と呼ばれ、脂肪酸突然変異体ｆａｓａ対立遺伝子を含有する。その典型的な種子
脂質脂肪酸プロフィールを表２に示す。
【０１１０】 交配から得られたＦ１種子を植えてＦ１植物を得た。次に、Ｆ１植物を自家受
粉させて種子脂肪酸プロフィールに影響を及ぼす遺伝子座の両方に関して分離す
るＦ２種子を得た。これらのＦ２種子を植え、前の世代におけるようにそれらの
植物を自家受粉させた。個々のＦ２植物から一緒にした種子サンプル中の５つの
主要な脂肪酸の相対含有量をＷＯ ９４／１１５１６に記述されたようにガス液
体クロマトグラフィーにより決定した。最大のステアリン酸及びオレイン酸含有
量を含むＦ２植物からの残りの種子を選択し、植え、Ｆ３：４種子を得るために
自家受粉させた。次に、個々のＦ３：４表現型を決定できるように各Ｆ３植物か
らのＦ４種子のサンプル（Ｆ３：４種子）をＧＣ分析に供した。次に、共通のＦ
２植物祖先に由来するＦ３：４植物表現型を平均してＦ２に由来するファミリー
の平均表現型（Ｆ２：４ファミリー平均）を得た。オレイン酸及びステアリン酸
が最も高い単一植物及びファミリー平均を表９に示す。個々の植物系統及びファ
ミリー平均を種子脂肪酸中の減少するステアリン酸の順に示す。
【０１１１】
【表１０】
【０１１２】 Ｄ２Ｔ親から生じる非常に低いポリ不飽和脂肪酸表現型は、ｆａｓａを含有す
る親に由来する非常に高レベルのステアリン酸と同様に交配からの選択した子孫
において維持される。Ｄ２Ｔ親に対する交配から選択した子孫におけるステアリ
ン酸の増加したレベルは、オレイン酸含有量の減少をもたらす。
【０１１３】 実施例６ 高オレイン酸及び高パルミチン酸及び高ステアリン酸含有量を有するダイズ （高オレイン酸含有量のための）Ｄ２Ｔ遺伝子を含有するダイズ系統と（高パ
ルミチン酸含有量のための）ｆａｐ２対立遺伝子及び（高ステアリン酸含有量の
ための）ｆａｓａ対立遺伝子の両方を含有するダイズ系統間で交配を実施してＦ
１子孫を得た。次に、Ｆ１子孫を次の世代において自殖させてＦ２種子及びＦ２
：３ファミリーを得た。最大のパルミチン酸＋ステアリン酸＋オレイン酸含有量
を含むＦ２：３ファミリーを選択し、植え、自家受粉させてＦ３：４種子を得た
。次に、個々のＦ３：４表現型を決定できるように各Ｆ３植物からのＦ４種子の
サンプル（Ｆ３：４種子）をＧＣ分析に供した。次に、共通のＦ２植物祖先に由
来するＦ３：４植物表現型を平均してＦ２に由来するファミリーの平均表現型（
Ｆ２：４ファミリー平均）を得た。パルミチン酸＋ステアリン酸＋オレイン酸含
有量が最も高い単一植物及びファミリー平均を表１０に示し、減少する全種子飽
和脂肪酸の順に示す。
【０１１４】
【表１１】
【０１１５】 実施例７ 高オレイン酸及び低パルミチン酸含有量を有するダイズ （高オレイン酸含有量のための）Ｄ２Ｔ遺伝子を含有するダイズ系統と（低パ
ルミチン酸含有量のための）ｆａｐ１対立遺伝子及びｆａｐ３対立遺伝子の両方
を含有するダイズ系統間で交配を実施してＦ１子孫を得た。次に、Ｆ１子孫を次
の世代において自殖させてＦ２種子及びＦ２：３ファミリーを得た。次に、最小
のパルミチン酸含有量及び最大のオレイン酸含有量を含むＦ２：３ファミリーを
選択し、植え、自家受粉させてＦ３：４子孫を得た。次に、個々のＦ３：４表現
型を決定できるように各Ｆ３植物からのＦ４種子のサンプル（Ｆ３：４種子）を
ＧＣ分析に供した。次に、共通のＦ２植物祖先に由来するＦ３：４植物表現型を
平均してＦ２に由来するファミリーの平均表現型（Ｆ２：４ファミリー平均）を
得た。パルミチン酸含有量が最も低く且つオレイン酸含有量が最も高い単一植物
及びファミリー平均を表１１に示し、全種子脂肪酸中の増加するパルミチン酸の
順に示す。低パルミチン酸含有量の選択は１／１０％までの精度を必要とするの
で、表１１中のパルミチン酸値はそのレベルの精度まで示され、一方、他の脂肪
酸の値は最も近い整数の％に四捨五入される。
【０１１６】
【表１２】
【０１１７】 実施例８ 高オレイン酸及び低リノレン酸含有量を有するダイズ 高オレイン酸含有量のためのＤ２Ｔ遺伝子を含有するダイズ系統と低リノレン
酸含有量のためのｆａｎ対立遺伝子またはＤ３Ａ遺伝子のいずれかを含有するダ
イズ系統間で交配を実施してＦ１子孫を得た。次に、Ｆ１子孫を次の世代におい
て自殖させてＦ２種子及びＦ２：３ファミリーを得た。次に、最小のリノレン酸
含有量及び最大のオレイン酸含有量の両方を含むＦ２：３ファミリーを選択し、
植え、自家受粉させてＦ３：４子孫を得た。次に、個々のＦ３：４表現型を決定
できるように各Ｆ３植物からのＦ４種子のサンプル（Ｆ３：４種子）をＧＣ分析
に供した。次に、共通のＦ２植物祖先に由来するＦ３：４植物表現型を平均して
Ｆ２に由来するファミリーの平均表現型（Ｆ２：４ファミリー平均）を得た。リ
ノレン酸含有量が最も低く且つオレイン酸含有量が最も高い単一植物及びファミ
リー平均を表１２に示し、増加するリノレン酸の順に示す。低リノレン酸含有量
の選択は１／１０％までの精度を必要とするので、表１２中のリノレン酸値はそ
のレベルの精度まで示され、一方、他の脂肪酸の値は最も近い整数の％に四捨五
入される。
【０１１８】
【表１３】
【０１１９】 実施例９ アシル−ＡＣＰチオエステラーゼをコードするブラシカ・ナパスからのｃＤＮＡ の単離 受粉後２０〜２６日の間である莢から収穫したブラシカ・ナパスの発生中の種
子より単離したｍＲＮＡからｃＤＮＡライブラリーを調製した。全ＲＮＡを抽出
し、オリゴｄＴクロマトグラフィーによりｍＲＮＡを精製した。いくらか改変し
て、Ｐｈａｒｍａｃｉａから購入した試薬を用いて、Ｒａｙ及びＲａｙ（１９９
１，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９：４５５９）により
記述された技術によりライブラリーを作製した。得られたｃＤＮＡをＬａｍｂｄ
ａ ＺＡＰベクター（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）中に製
造業者の説明書に従ってクローン化した。一次ライブラリーは約１ｘ１０6の個
体を含有し、一回増幅させた。
【０１２０】 用いたクローニング技術は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．［（１９８９）
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａ
ｌ，第２版，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｐｒｅｓｓ］からであった。増幅したライブラリーからの約３ｘ１０5プラーク
を全部で６枚のプレート上で平板培養したエシェリキア・コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）
の感染により発生させ、各発生したプレートから二重のニトロセルロースリフト
を取った。二重のニトロセルロースリフトをブラシカゲノムクローン（ＷＯ ９
２／１１３７３中の配列番号：２０）からの32Ｐ標識した（ランダムプライマー
ラベリングキット，Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂ
ｕｒｇ，ＭＤ）配列で調べ、ハイブリダイゼーションバッファー（６ｘＳＳＣ［
０．９Ｍ ＮａＣｌ，０．０９Ｍクエン酸ナトリウム，ｐＨ ７］、５ｘデンハル
ト溶液［０．５ｇフィコール（タイプ４００，Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、０．５ｇ
ポリビニルピロリドン、０．５ｇウシ血清アルブミン（画分Ｖ、Ｓｉｇｍａ）、
１ｍＭ ＥＤＴＡ、１％ ＳＤＳ及び１００μｇの変性したサケ精子ＤＮＡ／ｍ
ｌ（Ｓｉｇｍａ））中で６３°でアニーリングさせた。リフトを１８時間アニー
リングさせ、次に、０．２ＸＳＳＣ中で６３°で洗浄し、写真用フィルム上に置
いた。１６個のプラークをプローブにハイブリダイズすると評点し、これらのう
ち７個をＬａｍｂｄａ ＺＡＰ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｉｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ
Ｍａｎｕａｌ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）中の使用説明書に従って精製し、切り
出した。得られたファージミドを用いてエシェリキア・コリＸＬ−１ Ｂｌｕｅ
細胞に感染させ、選択したｃＤＮＡインサートを含有する二本鎖プラスミドをも
たらした。精製したプラスミドの制限分析により２種類のクローンが示された。
１つの種類はｐ５Ｃと呼ばれるクローンにより示された。ｐ５Ｃ中のインサート
をジデオキシシークエンシングにより配列決定し、ブラシカ・ナパスのオレオイ
ル−ＡＣＰチオエステラーゼをコードすると確認した。このｃＤＮＡの配列を配
列番号：１に示す。コードされるタンパク質の配列を配列番号：２に示す。予測
される翻訳産物は、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９５，Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌ ｌ ７：３５９−３７１）により報告され、受託番号Ｕ１７０９８でジーンバン
クに付託された別のｃＤＮＡによりコードされるタンパク質に９８．６％同一で
ある。この第二のチオエステラーゼクローン及びタンパク質の配列をそれぞれ配
列番号：３及び４に示す。
【０１２１】 実施例１０ ダイズ種子におけるブラシカ・ナパスからのオレオイル−ＡＣＰチオエステラー ゼの発現 ｐ５Ｃ中の全ｃＤＮＡインサートをｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔからＸｍｎＩフラ
グメントとして遊離し、選択ダイズ栽培品種Ａ２３９６のバイオリスティック（
ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ）形質転換における使用のためにダイズ種子発現ベクター中
にクローン化した。
【０１２２】 ブラシカ・ナパスｃＤＮＡ配列からのアシル−ＡＣＰ（オレオイル−ＡＣＰ）
チオエステラーゼがダイズβ−コングリシニンプロモーター（Ｂｅａｃｈｙ Ｒ
．Ｎ．ｅｔ ａｌ．（１９８５）ＥＭＢＯ Ｊ．４：３０４７−３０５３）の制
御下に置かれるプラスミドを構築した。このベクターの構築は、ＷＯ ９４／１
１５１６に記述されたプラスミドｐＣＷ１０９の使用により容易になった。ベク
ターｐＣＷ１０９は、ダイズ種子貯蔵タンパク質βコングリシニンのαサブユニ
ットのプロモーター配列を含む８３０塩基のＤＮＡセグメント、複数の制限部位
を有する領域及び一般的なマメ種子貯蔵タンパク質ファゼオリンからの１０８０
塩基の３’調節配列を含有する。マルチクローニング領域中にＳｍａＩ部位も含
有するようにベクターｐＣＷ１０９を改変した。ｐ５ＣのｃＤＮＡインサートを
ＸｍｎＩでの消化により取り出し、単離し、ＳｍａＩで消化した改変したｐＣＷ
１０９中に連結し、ｐ５ＣからのｃＤＮＡインサートがセンスの向きに配置され
た事象を選択し、ｐＳＴ１４と称した。
【０１２３】 ｐＫＳ１８ＨＨと称するプラスミドをこのプラスミドで形質転換された植物ま
たは細菌のいずれかにハイグロマイシンＢに対する授与耐性を与えるように構築
した。このプラスミドを以下の遺伝子要素：１）β−ラクタマーゼコーディング
領域の除去により改変されたプラスミドベクターｐＳＰ７２（Ｐｒｏｍｅｇａ，
Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、２）ハイグロマイシンＢホスホトランスフェラーゼ（
ＨＰＴ）に連結されたカリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭＶ）からの３５Ｓ
プロモーター及びアグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅ ｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ ）からのノパリンシンターゼ３’調節配列か
らなる植物選択マーカーカセット、並びに３）バクテリオファージＴ７からのプ
ロモーター、ＨＰＴコーディング配列の上流のシャイン・ダルガルノ配列、及び
Ｔ７転写ターミネーター配列からなる細菌選択マーカーカセットを用いて構築し
た。
【０１２４】 クレブシエラ菌由来のプラスミド（ｐＪＲ２２５，Ｇｒｉｔｚ，Ｌ．及びＤａ
ｖｉｅｓ，Ｊ．（１９８３）ＧＥＮＥ ２５：１７９−１８８）を含有するエシ
ェリキア・コリ株Ｗ６７７からハイグロマイシンＢホスホトランスフェラーゼ遺
伝子を得た。ＮｏｖａＢｌｕｅ（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）のよ
うな、エシェリキア・コリのある種の株におけるＨＰＴ酵素の発現のためのＴ７
プロモーター：ＨＰＴ：Ｔ７ターミネーターカセットをｐＥＴベクターの誘導体
から得た。植物におけるＨＰＴの発現のための３５Ｓ：ＨＰＴ：ノパリンシンタ
ーゼ３’末端カセットの起源はＷＯ ９４／１１５１６に詳細に記述されている
。
【０１２５】 当業者は、分子クローニングのプロトコルを用いてこれらの要素を単一のプラ
スミド中に取り込むことができる。
【０１２６】 Ｃｈｒｉｓｔｏｕ ｅｔ ａｌ．（１９９０，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ ８：１４５）により記述された形質転換プロトコルにおいてベクターを使用で
きるように、３５Ｓ：ＨＰＴ：ノパリンシンターゼカセット中のＨＰＴをコード
する配列を制限エンドヌクレアーゼ消化により取り除き、細菌β−グルクロニダ
ーゼ遺伝子（Ｊｅｆｆｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８７）ＥＭＢＯ Ｊ．６
：３９０１−３９０７）の正しく配置されたコーディング領域により置き換えた
。得られたプラスミドをｐＫＳ１８と称した。
【０１２７】 ｐＳＴ１４中のβ−コングリシニン：ｐ５Ｃ：ファゼオリン−３’発現カセッ
トを部分的ＨｉｎｄIII消化により取り出し、単離し、同様にＨｉｎｄIIIで消化
したｐＫＳ１８中に連結してｐＲＢ１９と称する最終的な形質転換ベクターを得
た。
【０１２８】 形質転換技術により、導入された導入遺伝子に関して分離している可能性があ
る種子を与える植物を得る。また、これらの植物から一緒にした種子は導入遺伝
子に関してキメラである可能性もある。
【０１２９】 形質転換から３つの稔性植物を回収し、部分種子分析技術により種子をそれら
の脂肪酸表現型に関して分析した。胚軸から離れて位置する子葉の小片を安全か
みそりの刃で種子から切断した。１％ナトリウムメトキシドを含有するメタノー
ル中で小片を消化し、得られた脂肪酸メチルエステルをヘキサン中に抽出し、そ
の後、ガス液体クロマトグラフィーにより分離し、定量した。このようにして、
改変された脂肪酸プロフィールを有する種子を次の発芽及び成長のために同定し
た。
【０１３０】 ブラシカアシル−ＡＣＰチオエステラーゼを含有する種子発現ベクターで形質
転換した３つのダイズ植物のうち、１つは種子脂肪酸表現型のいかなる改変もな
かった（分析した３２個の種子は３．９％ステアリン酸の平均及び３．２％〜４
．６％の実測範囲を有した）。２つの残りの植物はそれらの種子中に増加したス
テアリン酸含有量を有した。第二の植物から２９個の種子を分析し、３．８％〜
７．５％の実測範囲で５．４％の平均ステアリン酸含有量を有すると決定し、一
方、第三の植物から４０個の種子を分析し、４．８５の平均ステアリン酸含有量
及び３．５％〜６．７％の実測範囲を有すると決定した。
【０１３１】 高いレベルの１６：０及び１８：０に基づいて最初の形質転換から選択された
種子において、一貫して高いレベルの飽和脂肪酸ステアリン酸及びパルミチン酸
を有する子孫を次の世代において選択した。典型的な非形質転換選択系統に対し
てステアリン酸レベルは約２〜３倍増加し、一方、パルミチン酸レベルは約２５
〜４０％増加した。この形質転換から得られた安定な系統をＴ１Ｓと称した。そ
れをＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍ
ａｎａｓｓａｓ，ＶＡに寄託した。
【０１３２】 実施例１１ ステアロイル−ＡＣＰデサチュラーゼ及びオレオイル−ＡＣＰチオエステラーゼ の組み合わされた改変に起因する非常に高いステアリン酸含有量を有するダイズ ｆａｓａ対立遺伝子を含有するダイズ系統と（オレオイルＡＣＰチオエステラ
ーゼを増やす）Ｔ１Ｓ遺伝子を含有するダイズ系統間で交配を実施してＦ１子孫
を得た。この目的はステアロイル−ＡＣＰを蓄積することであり、それは次にチ
オエステラーゼにより切断されて種子におけるステアリン酸の蓄積をもたらす。
次に、Ｆ１子孫を次の世代において自殖させてＦ２種子及びＦ２：３ファミリー
を得た。次に、パルミチン酸及びステアリン酸の両方の高いレベルを含有するＦ
２：３ファミリーを選択し、植え、自家受粉させてＦ３：４子孫を得た。次に、
個々のＦ３：４表現型を決定できるように各Ｆ３植物からのＦ４種子のサンプル
（Ｆ３：４種子）をＧＣ分析に供した。単一植物脂肪酸プロフィールを表１３に
示し、増加する全種子飽和脂肪酸の順に示す。
【０１３３】
【表１４】
【０１３４】 実施例１２ 非常に高ステアリン酸のダイズ油の個体脂肪含有量 非常に高ステアリン酸のダイズを実施例１１において記述した植物から得た。
実施例１において記述したように種子から油を製造し、脂肪酸組成及び様々な温
度での個体脂肪含有量に関して分析した。
【０１３５】 表１４及び１５は、３３％〜３８％のステアリン酸の範囲の非常に高ステアリ
ン酸のダイズ油の組成及び機能特性を示す。これらの油は全て、マーガリンの固
体性必要条件を満たす（比較のために図１中の曲線を参照）。これらの高ステア
リン酸油のＳＦＣプロフィールは、スティックマーガリンまたはバターから得ら
れるものと一致する（図４参照）。実施例１１から得られる油及び類似した組成
を有する油は、２５℃で２０未満、好ましくは２５℃で１５未満、より好ましく
は２５℃で１０未満、最も好ましくは２５℃で５未満、そして１０℃で２０より
大きい、好ましくは１０℃で２０〜５０の間、最も好ましくは１０℃で３５〜５
０の間のＳＦＣプロフィールを有する脂肪生成物を製造できると考えられる。従
って、これらの油は、トランス脂肪酸を実質的に含まないスティックマーガリン
を製造するため、またはマーガリンもしくは油を基にしたスプレッドを製造する
ためのブレンド中のハードストック添加剤として有用であるはずである。
【０１３６】
【表１５】
【０１３７】
【表１６】
【０１３８】 実施例１３ 高オレイン酸及び低飽和脂肪酸ダイズを製造するための代わりの方法 ダイズ体細胞胚生成培養物を形質転換するためにＷＯ９６０６９３６に記述さ
れたプロモーター：パルミトイル−ＡＣＰチオエステラーゼコーディング領域植
物形質転換ベクターを用い、そして再びＷＯ９６０６９３６に詳述された方法を
用いて形質転換された稔性ダイズ植物を得た。トランスジェニック植物で生じた
種子の成熟した子葉から取り除いた種子片の脂肪酸プロフィールを決定した。そ
れらの植物のごく一部は、非常に低い飽和脂肪酸表現型に関して分離しているよ
うである種子を有した。３つのそのような植物を同定し；３つ全てのトランスジ
ェニック事象の低飽和脂肪酸類は平均して全脂肪酸の５．６％の１６：０＋１８
：０総合含有量であり、一方、通常の飽和脂肪酸類は平均して１４．９％であっ
た。 最も望ましい事象から合わせた３植物からの種子の低飽和脂肪酸類からの
２２８種子小片から平均した全脂肪酸プロフィールを表１６に示す。
【０１３９】
【表１７】
【０１４０】 低飽和脂肪酸の親として上記の植物を用いて高オレイン酸、低飽和脂肪酸種子
表現型を作製するために、種子小片分析から残っている種子を植え、開花させる
。パルミトイル−ＡＣＰチオエステラーゼ共抑制植物と脂肪酸デルタ−１２デサ
チュラーゼ共抑制植物間で相互交雑を実施する。植え付け時に、低飽和脂肪酸種
子は、導入遺伝子に関してホモまたは導入遺伝子に関してヘテロの種子のいずれ
かからであった可能性があるので、親植物上の残っている花を自家受粉させる。
通常の飽和脂肪酸種子がないことにより示されるような低飽和脂肪酸導入遺伝子
に関してホモである植物を同定するために自家受粉により生じた種子の分離パタ
ーンを決定する。低飽和脂肪酸導入遺伝子に関してホモの植物に対して実施され
る交雑からの種子を植える。これらの花を自家受粉させ、高オレイン酸及び低飽
和脂肪酸表現型の両方に関して分離する種子を種子小片法により分析する。所望
する表現型を示す種子小片からの残りの種子を植え、それらの植物を自家受粉さ
せ、個々の植物から一緒にした種子を分析して所望する表現型を確かめる。
【０１４１】 図面の簡単な説明及び配列説明 本願の一部を形成する以下の詳細な記述、４つの図面の説明及び配列説明から
本発明をより完全に理解することができる。
【０１４２】 図１ ソフトタブ植物油スプレッドに比較した高ステアリン酸及び４つの異なる高ス
テアリン酸で高オレイン酸のダイズ油の固体脂肪含有量（ＳＦＣ）プロフィール
を示す。２２％の高ステアリン酸で高オレイン酸（ＨＳ／ＨＯ Ａ）のみがスプ
レッド製品として実現する。残りの油のＳＦＣプロフィールは、これらの油がス
プレッド製品として実現しないことを示した。
【０１４３】 図２ いくつかのブレンドされていない油及びブレンドされた油の相対的酸化安定性
（ＯＳＩ）を示す。低ポリ不飽和脂肪酸含有量と合わせた高オレイン酸含有量は
高い酸化安定性を得るために必要である。ヤシ油（ＰＯ）と混合したダイズ油（
ＳＯ）、またはヤシ油もしくは完全に水素化された油と混合した高ステアリン酸
（ＨＳ）油のようなブレンドされた油は、ＳＦＣプロフィールに基づきマーガリ
ンまたはスプレッド製品として十分に実現できる。
【０１４４】 図３ ヤシ油または完全に水素化されたダイズ油のようなハードストックと高ステア
リン酸で高オレイン酸の油（ＨＳ／ＨＯ Ｃ及びＨＳ／ＨＯ Ｄ）をブレンドする
ことにより、植物油スプレッドの特性と適合するようにそれらのＳＦＣプロフィ
ールが改善されることを示す。
【０１４５】 図４ 非常に高ステアリン酸の油がバター及びハードストック油と一致するＳＦＣプ
ロフィールを有することを示す。
【０１４６】 配列説明は、本明細書に添付した配列表を要約する。配列表は、Ｎｕｃｌｅｉ ｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １３：３０２１−３０３０（１９８５）及
びＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ２１９（Ｎｏ．２）：３４５−３
７３（１９８４）に記述されるＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ基準において定義されるよう
にヌクレオチド配列文字には１文字記号を、そしてアミノ酸には３文字記号を含
み、そして全てのヌクレオチド及びアミノ酸配列データに用いられる記号及び形
式はさらに３７ Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．８２１−１．８２５及びＷＩＰＯ基準Ｓｔ
．２５に記載されるような特許出願におけるヌクレオチド及び／またはアミノ酸
配列開示に適用される規則に従う。
【０１４７】 配列番号：１は、ブラシカ・ナパスからのアシル−ＡＣＰチオエステラーゼの
１４１２塩基対のｃＤＮＡを示す。
【０１４８】 配列番号：２は、ブラシカ・ナパス種子アシル−ＡＣＰチオエステラーゼの前
駆体タンパク質のアミノ酸配列を示す（配列番号：１のコーディング配列）。
【０１４９】 配列番号：３は、ジーンバンク受託Ｕ１７０９８に対応する、ブラシカ・ナパ
スからの第二のアシル−ＡＣＰチオエステラーゼｃＤＮＡのヌクレオチド配列を
示す。
【０１５０】 配列番号：４は、第二のブラシカ・ナパス種子アシル−ＡＣＰチオエステラー
ゼの前駆体タンパク質のアミノ酸配列を示す（配列番号：３のコーディング配列
）。
【配列表】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＵ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＤ，ＧＥ，ＨＲ， ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，Ｌ Ｃ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ， ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ (72)発明者 ヒツツ，ウイリアム・デイーン アメリカ合衆国デラウエア州19807ウイル ミントン・ヒルサイドロード404 (72)発明者 キニー，アンソニー・ジヨン アメリカ合衆国デラウエア州19809ウイル ミントン・ロアアベニユー609 (72)発明者 ノウルトン，スーザン アメリカ合衆国メリーランド州21921エル クトン・キヤスパラスウエイ410 (72)発明者 セバスチヤン，スコツト・アンソニー アメリカ合衆国デラウエア州19707ホツケ シン・クエイルホローロード44 Ｆターム(参考） 2B030 AA02 AB03 AD09 CA04 CA07 CA08 CB02 4B024 AA08 BA08 CA04 DA01 EA04 GA11 4H059 BA33 BB02 BB04 BB05 BB06 BC13 BC15 BC48 CA06 CA34 CA35 DA03 DA30 EA03

Claims (65)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 全種子脂肪酸プロフィールが２１％より多いＣ１６：０及び
    Ｃ１８：０総合含有量、６０％より多いＣ１８：１含有量並びに７％未満のＣ１
    ８：２及びＣ１８：３総合含有量を含んでなる成熟種子を作るダイズ植物。
  2. 【請求項２】 該植物が以下の： （ａ）Ｃ１８：１含有量が全種子脂肪酸の少なくとも８０％を含んでなり、そし
    てデルタ−１２デサチュラーゼ酵素をコードするダイズ核酸フラグメントの少な
    くとも１つの導入遺伝子コピーをさらに含んでなる第一の親ダイズ植物を高い種
    子ステアリン酸含有量のためのｆａｓａ対立遺伝子を含んでなる第二の親と交配
    すること； （ｂ）工程（ａ）の交配から雑種種子を得、該種子を発芽させ、育て、そして１
    サイクルまたはそれ以上の自家受粉によりダイズ植物の分離する集団を作製する
    こと；及び （ｃ）工程（ｂ）の分離する集団から該脂肪酸プロフィールを有する種子を作る
    植物を選択すること を含んでなる工程により作製される請求項１のダイズ植物。
  3. 【請求項３】 請求項１の植物から得られる種子。
  4. 【請求項４】 請求項１の植物の種子から得られる油。
  5. 【請求項５】 該油が１５より大きいＯＳＩ（１１０）を有する請求項４の
    油。
  6. 【請求項６】 該油が１０℃で２０より大きく且つ２５℃で２０未満のＳＦ
    Ｃを有する請求項４の油。
  7. 【請求項７】 請求項４、５または６の油を含んでなるマーガリンまたはス
    プレッド製品。
  8. 【請求項８】 該マーガリンがトランス脂肪酸を実質的に含まない請求項７
    のマーガリンまたはスプレッド製品。
  9. 【請求項９】 請求項４、５または６の油を含んでなるマーガリンまたはス
    プレッド製品を製造するために適当なブレンドされた脂肪生成物。
  10. 【請求項１０】 １５より大きいＯＳＩ（１１０）を有する請求項９のブレ
    ンドされた脂肪生成物。
  11. 【請求項１１】 完全に水素化されたダイズ油、完全に水素化された綿実油
    、完全に水素化されたヤシ油、部分的に水素化されたダイズ油、部分的に水素化
    された綿実油、部分的に水素化されたヤシ油、ダイズ油、トウモロコシ油、ヤシ
    油、カノラ油、ヒマワリ油、ラッカセイ油、ベニバナ油またはそれらの混合物よ
    りなる群から選択される少なくとも１つの成分をさらに含んでなる請求項９のブ
    レンドされた脂肪生成物。
  12. 【請求項１２】 完全に水素化されたダイズ油、完全に水素化された綿実油
    、完全に水素化されたヤシ油、部分的に水素化されたダイズ油、部分的に水素化
    された綿実油、部分的に水素化されたヤシ油、ダイズ油、トウモロコシ油、ヤシ
    油、カノラ油、ヒマワリ油、ラッカセイ油、ベニバナ油またはそれらの混合物よ
    りなる群から選択される少なくとも１つの成分をさらに含んでなる請求項１０の
    ブレンドされた脂肪生成物。
  13. 【請求項１３】 トランス脂肪酸を実質的に含まない請求項９のブレンドさ
    れた脂肪生成物。
  14. 【請求項１４】 トランス脂肪酸を実質的に含まない請求項１０のブレンド
    された脂肪生成物。
  15. 【請求項１５】 完全に水素化されたダイズ油、完全に水素化された綿実油
    、完全に水素化されたヤシ油、ダイズ油、トウモロコシ油、ヤシ油、カノラ油、
    ヒマワリ油、ラッカセイ油、ベニバナ油またはそれらの混合物よりなる群から選
    択される少なくとも１つの成分をさらに含んでなり、トランス脂肪酸を実質的に
    含まない請求項９のブレンドされた脂肪生成物。
  16. 【請求項１６】 完全に水素化されたダイズ油、完全に水素化された綿実油
    、完全に水素化されたヤシ油、ダイズ油、トウモロコシ油、ヤシ油、カノラ油、
    ヒマワリ油、ラッカセイ油、ベニバナ油またはそれらの混合物よりなる群から選
    択される少なくとも１つの成分をさらに含んでなり、トランス脂肪酸を実質的に
    含まない請求項１０のブレンドされた脂肪生成物。
  17. 【請求項１７】 請求項９のブレンドされた脂肪生成物を含んでなるマーガ
    リンまたはスプレッド製品。
  18. 【請求項１８】 請求項１０のブレンドされた脂肪生成物を含んでなるマー
    ガリンまたはスプレッド製品。
  19. 【請求項１９】 請求項１１のブレンドされた脂肪生成物を含んでなるマー
    ガリンまたはスプレッド製品。
  20. 【請求項２０】 請求項１２のブレンドされた脂肪生成物を含んでなるマー
    ガリンまたはスプレッド製品。
  21. 【請求項２１】 請求項１３のブレンドされた脂肪生成物を含んでなるマー
    ガリンまたはスプレッド製品。
  22. 【請求項２２】 請求項１４のブレンドされた脂肪生成物を含んでなるマー
    ガリンまたはスプレッド製品。
  23. 【請求項２３】 請求項１５のブレンドされた脂肪生成物を含んでなるマー
    ガリンまたはスプレッド製品。
  24. 【請求項２４】 請求項１６のブレンドされた脂肪生成物を含んでなるマー
    ガリンまたはスプレッド製品。
  25. 【請求項２５】 請求項４、５または６の油の水素化、分別、エステル交換
    反応または加水分解で作られる生成物。
  26. 【請求項２６】 請求項２５の生成物を含んでなるマーガリンまたはスプレ
    ッド製品。
  27. 【請求項２７】 請求項２５の生成物を含んでなるマーガリンまたはスプレ
    ッド製品を製造するために適当なブレンドされた脂肪生成物。
  28. 【請求項２８】 完全に水素化されたダイズ油、完全に水素化された綿実油
    、完全に水素化されたヤシ油、部分的に水素化されたダイズ油、部分的に水素化
    された綿実油、部分的に水素化されたヤシ油、ダイズ油、トウモロコシ油、ヤシ
    油、カノラ油、ヒマワリ油、ラッカセイ油、ベニバナ油またはそれらの混合物よ
    りなる群から選択される少なくとも１つの成分をさらに含んでなる請求項２７の
    ブレンドされた脂肪生成物。
  29. 【請求項２９】 請求項４、５または６の油の製造中に作られる副産物。
  30. 【請求項３０】 全種子脂肪酸プロフィールが１０％より多いＣ１６：０含
    有量、３０％より多いＣ１６：０及びＣ１８：０総合含有量、５５％より多いＣ
    １８：１含有量並びに７％未満のＣ１８：２及びＣ１８：３総合含有量を含んで
    なる成熟種子を作るダイズ植物。
  31. 【請求項３１】 該植物が以下の： （ａ）Ｃ１８：１含有量が全種子脂肪酸の少なくとも８０％を含んでなり、そし
    てデルタ−１２デサチュラーゼ酵素をコードするダイズ核酸フラグメントの少な
    くとも１つの導入遺伝子コピーをさらに含んでなる第一の親ダイズ植物を高い種
    子ステアリン酸含有量のためのｆａｓａ対立遺伝子及び高い種子パルミチン酸の
    ためのｆａｐ２対立遺伝子を含んでなる第二の親と交配すること； （ｂ）工程（ａ）の交配から雑種種子を得、該種子を発芽させ、育て、そして１
    サイクルまたはそれ以上の自家受粉によりダイズ植物の分離する集団を作製する
    こと；及び （ｃ）工程（ｂ）の分離する集団から該脂肪酸プロフィールを有する種子を作る
    植物を選択すること を含んでなる工程により作製される請求項３０のダイズ植物。
  32. 【請求項３２】 請求項３０の植物から得られる種子。
  33. 【請求項３３】 請求項３０の植物の種子から得られる油。
  34. 【請求項３４】 請求項３３の油の水素化、分別、エステル交換反応または
    加水分解で作られる生成物。
  35. 【請求項３５】 請求項３３の油の製造中に作られる副産物。
  36. 【請求項３６】 全種子脂肪酸プロフィールが４２％より多いＣ１６：０及
    びＣ１８：０総合含有量を含んでなる成熟種子を作るダイズ植物であって、以下
    の： （ａ）Ｃ１８：０含有量が全種子脂肪酸の少なくとも１０％を含んでなり、そし
    てオレオイル−ＡＣＰチオエステラーゼ酵素をコードする核酸フラグメントの少
    なくとも１つの導入遺伝子コピーをさらに含んでなる第一の親ダイズ植物を高い
    種子ステアリン酸含有量のためのｆａｓａ対立遺伝子を含んでなる第二の親と交
    配すること； （ｂ）工程（ａ）の交配から雑種種子を得、該種子を発芽させ、育て、そして１
    サイクルまたはそれ以上の自家受粉によりダイズ植物の分離する集団を作製する
    こと；及び （ｃ）工程（ｂ）の分離する集団から該脂肪酸プロフィールを有する種子を作る
    植物を選択すること を含んでなる工程により作製されるダイズ植物。
  37. 【請求項３７】 請求項３６の植物から得られる種子。
  38. 【請求項３８】 請求項３６の植物の種子から得られる油。
  39. 【請求項３９】 該油が１０℃で２０より大きく且つ２５℃で２０未満のＳ
    ＦＣを有する請求項３８の油。
  40. 【請求項４０】 請求項３８の油を含んでなるマーガリンまたはスプレッド
    製品。
  41. 【請求項４１】 トランス脂肪酸を実質的に含まない請求項４０のマーガリ
    ンまたはスプレッド製品。
  42. 【請求項４２】 請求項３８または３９の油を含んでなるマーガリンまたは
    スプレッド製品を製造するために適当なブレンドされた脂肪生成物。
  43. 【請求項４３】 完全に水素化されたダイズ油、完全に水素化された綿実油
    、完全に水素化されたヤシ油、部分的に水素化されたダイズ油、部分的に水素化
    された綿実油、部分的に水素化されたヤシ油、ダイズ油、トウモロコシ油、ヤシ
    油、カノラ油、ヒマワリ油、ラッカセイ油、ベニバナ油及びそれらの混合物より
    なる群から選択される少なくとも１つの他の成分をさらに含んでなる請求項４２
    のブレンドされた脂肪生成物。
  44. 【請求項４４】 トランス脂肪酸を実質的に含まない請求項４２のブレンド
    された脂肪生成物。
  45. 【請求項４５】 完全に水素化されたダイズ油、完全に水素化された綿実油
    、完全に水素化されたヤシ油、ダイズ油、トウモロコシ油、ヤシ油、カノラ油、
    ヒマワリ油、ラッカセイ油、ベニバナ油及びそれらの混合物よりなる群から選択
    される少なくとも１つの他の成分をさらに含んでなり、そしてトランス脂肪酸を
    実質的に含まない請求項４４のブレンドされた脂肪生成物。
  46. 【請求項４６】 中に混和される請求項４２のブレンドされた脂肪生成物を
    含んでなるマーガリンまたはスプレッド製品。
  47. 【請求項４７】 中に混和される請求項４３のブレンドされた脂肪生成物を
    含んでなるマーガリンまたはスプレッド製品。
  48. 【請求項４８】 請求項４４のブレンドされた脂肪生成物を含んでなるマー
    ガリンまたはスプレッド製品。
  49. 【請求項４９】 請求項４５のブレンドされた脂肪生成物を含んでなるマー
    ガリンまたはスプレッド製品。
  50. 【請求項５０】 請求項３８または３９の油の水素化、分別、エステル交換
    反応または加水分解で作られる生成物。
  51. 【請求項５１】 請求項５０の生成物を含んでなるマーガリンまたはスプレ
    ッド製品。
  52. 【請求項５２】 請求項５０の生成物を含んでなるマーガリンまたはスプレ
    ッド製品を製造するために適当なブレンドされた脂肪生成物。
  53. 【請求項５３】 完全に水素化されたダイズ油、完全に水素化された綿実油
    、完全に水素化されたヤシ油、部分的に水素化されたダイズ油、部分的に水素化
    された綿実油、部分的に水素化されたヤシ油、ダイズ油、トウモロコシ油、ヤシ
    油、カノラ油、ヒマワリ油、ラッカセイ油、ベニバナ油またはそれらの混合物よ
    りなる群から選択される少なくとも１つの成分をさらに含んでなる請求項５２の
    ブレンドされた脂肪生成物。
  54. 【請求項５４】 請求項３８または３９の油の製造中に作られる副産物。
  55. 【請求項５５】 全種子脂肪酸プロフィールが７％未満のＣ１６：０及びＣ
    １８：０総合含有量、８７％より多いＣ１８：１含有量並びに６％未満のＣ１８
    ：２及びＣ１８：３総合含有量を含んでなる成熟種子を作るダイズ植物。
  56. 【請求項５６】 該植物が以下の： （ａ）Ｃ１８：１含有量が全種子脂肪酸の少なくとも８０％を含んでなり、そし
    てデルタ−１２デサチュラーゼ酵素をコードするダイズ核酸フラグメントの少な
    くとも１つの導入遺伝子コピーをさらに含んでなる第一の親ダイズ植物を減少し
    た種子パルミチン酸含有量のためのｆａｐ１対立遺伝子及び減少した種子パルミ
    チン酸含有量のためのｆａｐ３対立遺伝子の両方を含んでなる第二の親または減
    少した種子パルミチン酸含有量のための植物アシル−ＡＣＰチオエステラーゼを
    コードするダイズ核酸フラグメントの少なくとも１つの導入遺伝子コピーを含ん
    でなり、ここで、該チオエステラーゼがステアロイル−ＡＣＰもしくはオレオイ
    ル−ＡＣＰのいずれかよりパルミトイル−ＡＣＰに対して少なくとも２倍優先的
    である第二の親と交配すること； （ｂ）工程（ａ）の交配から雑種種子を得、該種子を発芽させ、育て、そして１
    サイクルまたはそれ以上の自家受粉によりダイズ植物の分離する集団を作製する
    こと；及び （ｃ）工程（ｂ）の分離する集団から該脂肪酸プロフィールを有する種子を作る
    植物を選択すること を含んでなる工程により作製される請求項５５のダイズ植物。
  57. 【請求項５７】 請求項５５の植物から得られる種子。
  58. 【請求項５８】 請求項５５の植物の種子から得られる油。
  59. 【請求項５９】 請求項５８の油の水素化、分別、エステル交換反応または
    加水分解で作られる生成物。
  60. 【請求項６０】 請求項５８の油の製造中に作られる副産物。
  61. 【請求項６１】 全種子脂肪酸プロフィールが１２％未満のＣ１６：０及び
    Ｃ１８：０総合含有量、８４％より多いＣ１８：１含有量並びに５％未満のＣ１
    ８：２及びＣ１８：３総合含有量を含んでなる成熟種子を作るダイズ植物であっ
    て、以下の： （ａ）Ｃ１８：１含有量が全種子脂肪酸の少なくとも８０％を含んでなり、そし
    てデルタ−１２デサチュラーゼ酵素をコードするダイズ核酸フラグメントの少な
    くとも１つの導入遺伝子コピーをさらに含んでなる第一の親ダイズ植物を減少し
    た種子リノレン酸含有量のためのｆａｎ対立遺伝子またはデルタ−１５デサチュ
    ラーゼ酵素をコードするダイズ核酸フラグメントの少なくとも１つの導入遺伝子
    コピーのいずれかを含んでなり、さらにＣ１８：３含有量が全種子脂肪酸の４％
    未満を含んでなる第二の親と交配すること； （ｂ）工程（ａ）の交配から雑種種子を得、該種子を発芽させ、育て、そして１
    サイクルまたはそれ以上の自家受粉によりダイズ植物の分離する集団を作製する
    こと；及び （ｃ）工程（ｂ）の分離する集団から該脂肪酸プロフィールを有する種子を作る
    植物を選択すること を含んでなる工程により作製されるダイズ植物。
  62. 【請求項６２】 請求項６１の植物から得られる種子。
  63. 【請求項６３】 請求項６１の植物の種子から得られる油。
  64. 【請求項６４】 請求項６３の油の水素化、分別、エステル交換反応または
    加水分解で作られる生成物。
  65. 【請求項６５】 請求項６３の油の製造中に作られる副産物。
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