JP2002509246A - 光度計並びに混合方法および混合用キュベット - Google Patents
光度計並びに混合方法および混合用キュベットInfo
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Abstract
Description
イクロキュベット用ホルダおよびこのキュベットの方へ向けた光束の透過率を測
定するための測定手段を有する光度計によって決定することに関する。マイクロ
キュベットは、液体試料の毛管層のためのキャビティを有し、その試料は、自由
液体表面がキャビティの主面を横切って拡がる。更に詳しくは、このキャビティ
は、液体試料の自由液体表面がこの実際のキャビティにまたはそれに関連して出
来るようでもよい。このキャビティは、最初に反応を達成するための試薬を用意
し、それが液体試料の透過率に影響し、所定の物質の含有量を決定できるように
する。
、光学的方法は良く知られ、多くの文献がある。 そのような定量的決定を行うための光度計も良く知られ、通常光学部品、機械
部品および電気部品を含む。光学部品には、例えば、所定の波長の光束を創るた
めのモノクロメータ干渉フィルタを備える光源、および透過光束の光量に相当す
る電気信号を発生する光検出器がある。機械部品には、光学部品が取付けられて
いるケーシング、およびやはりこのケーシングに配置されていて、この光度計で
測定すべき試料用を意図するホルダがある。やはりこのケーシングに配置されて
いるのが適当な電気部品には、測定結果を提示するためのユニットは勿論、光源
を制御し且つ光検出器からの信号を扱うために必要な回路がある。命令を有する
マイクロプロセッサをこの電気部品の必須要素として含めることができる。 上記のような光度計は、ヨーロッパ特許第0 469 097号に開示されてい
る。この特許は、全血の中のグルコースを決めるための光度計を開示する。この
光度計は、二つの異なる波長での測定に基づく。これらの一つは、測定波長を構
成し、他は、例えば、濁った試料についての測定の安全性を増すための補償波長
を構成する。この光度計の設計は、簡単で頑丈である。
開示されている。これらのマイクロキュベットは、血液のような、液体の採取、
この液体試料の試薬との混合および試薬と混合した試料の直接光学分析用を意図
する。このキュベットは、二つの平行な、および好ましくは平面の、表面を有す
る本体を含み、それらの表面が光学波長を形成し、互いから所定の距離に置いて
平面の測定キャビティを作る。この測定キャビティは、入口を介してこの本体の
外部環境に通ずる。更に、この測定キャビティは、所定の容積を有し、試料が毛
管力によって入れるように設計してある。乾燥試薬をこのキャビティの内面に付
ける。
度に商業的に成功し、現在、例えば、全血の中のヘモグロビンおよびグルコース
の定量的決定のために使われている。この成功に寄与した重要な要因は、採取か
ら応答までの時間が非常に短いことである。この時間が非常に短い理由の一つは
、ヘモグロビンおよびグルコースの決定のために使う試薬組成物がマイクロキュ
ベットの毛管キャビティに吸込んだ少量の血液に容易に溶けることである。これ
は、試薬成分が一様分布で実際上直ちに混合する結果となる。しかし、これらの
従来技術のマイクロキュベットは、容易には溶けず、従って溶解のために比較的
長期間要する試薬が必要な成分の決定には適さないことが分かった。仮令、米国
特許第4,088,448号が示唆するように、試料と試薬の混合をマイクロキ
ュベットを振動しながら行っても、混合は不十分である。
めに特別に開発した方法が米国特許第4,936,687号に提案されている。
この方法では、混合を達成するための手段として小さい磁性粒子を使用し、実際
の混合作業は、特別に設計し且つ配置しおよび所定の方法で操作する外部磁石を
使って実施する。この混合手順の後に、磁性粒子を試料の分析すべき部分から分
離する。 この方法は、液体と試薬のある組合せに対しては良く機能するが、磁石の特別
な配置と設計が必要であるので、工業上および商業上の観点からは特に魅力はな
い。微細磁性粒子を使い、混合工程後にこれらの粒子を分離することも時間と労
力を要し、それがこの方法を複雑で比較的高価にする。その上、試料と試薬両方
の化学的障害の危険性がある。
2枚の平行な板を含み、その間に分析すべき液体試料を薄層として付ける。混合
は、これらの板のそれらの平面に垂直な相対運動によって実施する。しかし、こ
の種の混合は、上に述べた型式のマイクロキュベットには、測定キャビティを形
成するそれらの二つの平行な表面が互いから所定の距離に配置されているので、
適用できない。
けにくい試薬にも適する方法があれば、マイクロキュベットで実施できる決定の
数を増やすだろう。その結果、マイクロキュベットがこれまで実施できなかった
分析または以前に関心がなかった分析にも魅力的になるだろう。 本発明の一つの態様によれば、マイクロキュベットの中の薄い液体層での混合
の問題に対して、前記請求項1に記載した顕著な特徴を有する、特別に設計した
光度計によって解決策が見つかった。この光度計の好適実施例は、関連する従属
請求項に記載されている。 この創意ある光度計は、前記請求項7から明白な特徴を備え、それ自体この発
明の第2態様を構成する、混合プロセスを実行する。この混合プロセスの好適実
施例は、関連する従属請求項から明白である。
ティを有し、自由液体表面がこのキャビティの主面を横切って伸びるマイクロキ
ュベットの中の液体試料の透過率を決定するための光度計に関する。更に、この
キャビティは、最初に反応を達成するための試薬を用意し、それがこの液体試料
の所定の物質の含有量を定量化するためのその透過率に影響する。この光度計は
、キュベット用ホルダおよびこのキュベットを通る透過率を測定するために測定
手段を有する。この発明によれば、このホルダを、この自由液体表面の平面内に
位置し且つこのキャビティの主面と平行な成分を有する方向に振動するために、
軸受に取付ける。この成分は、この振動方向の主成分である、即ち、振動が本質
的にこの自由液体表面の平面内で且つこのキャビティの主面と平行に起こるのが
好ましい。その結果、比較的迅速な混合を達成し、それで溶解および反応を加速
する。
動の波長および振幅は、この振動の振動数および大きさに依る。 好適実施例では、この振動を、この測定手段によってこのキュベットの方に向
けた光束の方向と本質的に平行な軸の周りに揺動するために軸受に取付けたキュ
ベットホルダによって達成する。このキュベットホルダによって支持するマイク
ロキュベットの中のキャビティの主面は、揺動の平面を伸び、または本質的に揺
動の軸に関する半径の周りに傾斜することによってそれと(または一般的に、振
動方向と)鋭角を成すことが出来る。
質的に平行平面壁の間に配置した、薄い液体層の中で混合を実行する方法に関す
る。混合は、これらの壁にこの液体層の平面内の運動を受けさせ、この運動をこ
れらの壁によってこの液体に加えられる毛管力と釣り合わせ、およびこの液体層
と周囲媒体の間の境界面をそれが弾性膜として機能するように選択することによ
って実行する。この指示した運動は、本質的に往復運動であるのが好ましい。 この方法は、上に示す種類のマイクロキュベットの中に存在する薄い液体層の
中で試料と試薬の混合を達成するのに良く適する。しかし、基本的に、この混合
方法は、互いから毛管の距離に配置した本質的に平行な壁の間の薄い層の形の全
ての液体に適用できる。
む資料の種類、およびこれらの壁の間の距離に依る。この運動の振動数および振
幅パラメータは、個々のケースに存在する毛管力に対して釣り合っていなければ
ならず、これらのパラメータは、この振動数/振幅が高過ぎると起こるかも知れ
ない、液体の一部がマイクロキュベットから逃げる如何なる危険もなしに、混合
を行うに十分でなければならない。 この弾性膜の、即ち、この試料の周囲媒体、例えば、空気に対する境界面の長
さの上限は、液体試料の体積が平行壁によってだけ限られ、且つキャビティに閉
じ込められない場合に存在する。下限は、試料液体、試薬、適当なビート振動数
、キャビティ深さ等に基づいて実験によって決める。 この運動に対する正しい条件が存在するとき、この境界面が弾性膜の役をし、
それが試料液体の中の化合物および、もしあれば、溶けたまたは溶けている試薬
組成物をこの液体運動で無理に動かし、それがこの薄い液体層の中で試料液体と
試薬を混合する結果となる。
使い捨てマイクロキュベットの中で混合するのに適する。 そのようなマイクロキュベットは、一般的に測定キャビティを備える本体を含
み、その境界面が二つの本質的に平行で且つ好ましくは平面の表面を含み、それ
がこのマイクロキュベットを通る光路を形成し且つ互いから所定の距離に配置さ
れてこのマイクロキュベットを通る光路長(経路長)を決定する。この測定キャ
ビティは、所定の容積および隙間幅を有し、毛管入口がこのキャビティをこの本
体の外部環境に結合する。毛管力の作用の下で、この入口を介して試料を測定キ
ャビティに引き込む。所定量の乾燥試薬をこの測定キャビティに配置し、例えば
、このキャビティの表面に付ける。
の薄い層の厚さは、0.01mmと2.0mmの間で、好ましくは0.1mmと
1.0mmの間でばらついてもよい。キュベットの入口または開口での壁間の距
離は、好ましくは0.01mmと1mmの間であることが出来、測定キャビティ
の壁間の距離より大きいのが好ましい。 どんな種類の試薬でもキュベットに付けられたとしても、蛋白質類および炭水
化物類のような、比較的溶解困難な試薬を使うとき、特別な利益が得られる。
混合を達成するために十分な期間および速度で本質的にこの層の平面内で運動さ
せることによって混合を実行する。この運動は、回転でよいが、往復運動が好ま
しい。これらの運動のどの様な組合せも使うことが出来る。この新規な混合方法
の重要な特徴は、液体試料がマイクロキュベットから流れ出ないように、この運
動が毛管力に対して釣り合いがとれていることである。この毛管力は、試料の種
類およびマイクロキュベットの壁の材料によって決まり、釣合せ作業は、実験的
に行うのが好ましい。上述のように、試料と環境の間の境界面をこの境界面が弾
性膜の役を出来るように選択することが決定的な特徴であり、その場合この運動
もこの境界面の平面で起こり、または少なくともその成分を有するのが好ましい
。使い捨てマイクロキュベットを使うとき、入口での試料と空気の間の境界面は
、この入口の長さが十分であるか、またはこのマイクロキュベットが本質的に非
毛管で更なる弾性膜を作れる、少なくとももう一つのキャビティを含むという条
件でだけ弾性膜の役をするだろう。後者の場合、キュベットの入口は測定キャビ
ティの平行壁間の距離より大きい必要はないが、一方前者の場合、即ち、試料液
体のだけが周囲媒体(空気)に対して連続境界面(連続膜)を形成するとき、入
口の長さは、測定キャビティの中の液体層の深さより少なくとも5倍、好ましく
は10倍大きくあるべきである。
管測定キャビティに隣接して且つこの入口および測定キャビティと本質的に整列
して配置する。この実施例で液体試料をマイクロキュベットに引き込んで、この
発明に従って混合するとき、測定キャビティの中の液体および非毛管キャビティ
に存在する媒体、通常空気が別の境界面を形成し、それも弾性膜の役をする。 さて、この発明による光度計の実施例並びにそれに使用するマイクロキュベッ
トを添付の図面を参照して更に詳しく説明する。
えるケーシング1を有する。蓋3は、軸4の軸受に旋回可能に取付けられ、この
ケーシング1の上面にあるボタン5を押すことによって解放なフック部材によっ
て閉じた位置に保持され、ばねが蓋3と協同してこの蓋を図2に示す上方に旋回
したまたは開いた位置へ開く。 キュベットホルダ6を測定区画室2に配置する。マイクロキュベット7をキュ
ベットホルダ6の中の適所に配置して示し、キュベットホルダ6の中に配置した
マイクロキュベット7の下でこの測定区画室の底8に取付けた光検出器9の上で
測定の準備ができている。
位置で下の部品がばね作用によって測定区画室2の底8に対して押し付けられ、
この光検出器9および蓋3の下部にある光源10が蓋3を閉じる度毎に互いに対
して所定の位置を取るようになっている。蓋3を閉じた位置では、この様に光源
10および光検出器9が互いから所定の距離および互いに対して所定の向きにあ
り、それは蓋3が移動式であるにも拘わらず光度計の測定を秀れた再現性で実施
できることを意味する。 キュベットホルダ6は、軸11上の軸受に枢着され、その軸は、キュベットホ
ルダ6の中に配置されたマイクロキュベット7の薄いキャビティの主面に垂直に
伸びる。キュベットホルダ6を軸11上で旋回するとき、マイクロキュベット7
のキャビティがこの様にそれ自体の平面を動く。キュベットホルダ6は、軸11
の直径上でキュベットホルダ6の中に置いたマイクロキュベット7と反対の側を
伸びるアーム12も有する。アーム12の自由端は、クランク13の第1端に関
節結合され、その他端は、モータ16の軸15に固定したクランクアーム14に
結合されている。クランクアーム14は、この場合、軸15と同心でクランク1
3の他端と偏心結合された円板の形を有する。
き、クランク13の第1端、従ってアーム12の自由端がその結果として揺動さ
せられ、キュベットホルダ6が軸11の周りに揺動運動し、マイクロキュベット
7がそのキャビティの主面で振動させられる。 マイクロキュベット7がキュベットホルダ6の中で、このマイクロキュベット
7のキャビティの中の試料液体の自由液体表面が軸11の接平面と本質的に一致
するような位置を有し、即ち、キュベットホルダ6の中のマイクロキュベット7
の振動が自由液体表面と一致しまたは少なくともその平面の成分を有し、および
本質的にこのキャビティの主面と本質的の平行である方向に起こるべきであるこ
とが本質的特徴である。これは、試料液体と試薬を効果的に混合する結果となり
、それが測定に決定的な透過率変化を生じる反応を加速する。
一の測定位置を達成するために、好適にはステップモータであるモータ16をク
ランクの変位がキュベットホルダ6の変位を最小にする領域でクランク13の運
動を止めるようにする。これは、アーム12がモータ軸15から最も離れている
か最も近いときに停止するとこうなる。 光源10がマイクロキュベット7の方に向ける光束の数ミリ程度の小さな直径
に対して、マイクロキュベット7を通る透過率の測定が振動中如何なる場合も邪
魔されずに継続的に実行可能であるような、振幅でキュベットホルダ6を振動す
ることによって、結局透過率変化を決定できる。これは、混合が得るべき透過率
の正しい値に対して十分であるときを決める可能性をもたらす。
を、ケーシング1’に固定して取付け、および図1ないし図5による実施例と同
様な方法で軸11上に枢着し且つモータによって揺動するようにされたキュベッ
トホルダ6’の上に突出する測定ブリッジ9’内に配置する。しかし、この場合
は、キュベットホルダ11’内に置いたマイクロキュベット7の測定キャビティ
の主面が測定ブリッジ9’内で発生し、マイクロキュベット7の方へ向けられた
光束に垂直に伸びないように、キュベットホルダ6’が軸11’に関する半径の
周りに小角度傾斜する。この場合本質的特徴は、垂直位置からの偏差が混合を効
果的に起こるようにする以上に大きくないことである。例えば、10°のオーダ
の偏差が極めて適切であると分かった。 言い方を変えると、測定キャビティの主面がこの場合揺動の平面と(または一
般的に、振動の方向と)鋭角を成し、一方図1ないし図5による実施例では、同
じ主面が揺動の平面(および振動方向)と平行である。
。試料をキュベット20に引き込んだとき、本質的に入口21の開口と一致する
試料の自由境界面が周囲空気の方に弾性膜を形成する。この自由境界面が本質的
に平面であり、(このマイクロキュベットの測定キャビティの主面と平行に見た
)長さLが(上記主面に垂直に見た)幅Bより長いことは明らかである。しかし
、この自由境界面は必ずしも平面である必要はなく、多かれ少なかれ曲がってい
ても良く、その場合、この境界面の平面はこの境界面の平均平面と理解すべきで
ある。 対応して、二つの弾性膜が図9および図10に示すマイクロキュベット22で
空気の方に生じ、そのマイクロキュベットは、毛管入口23および深さの深いキ
ャビティ24を有し、上記キャビティは本質的に非毛管である。 この発明による攪拌を以下のように例示できる: この攪拌をキャビティ深さとビート振動数の関数として検討した。同じ設計の
キュベットを使用した。
この様に、良い攪拌は400μm深さのキャビティで60ビート/sで得られる
が、30ビート/sでは得られない。もし、キャビティの深さが15ビート/s
以下に減少すると、攪拌が起こらない。 この発明によれば、30と60ビート/sの間のビート振動数を使用するのが
好ましい。その上、測定キャビティは、10μmと1000μmの間、好ましく
は400μmと600μmの間の液体深さの試料液体薄層を与えるように設計す
るのが適切である。 この発明は、例えば、抗原抗体反応に基づく方法に良く適する。そのような方
法の例は、尿の中のμアルブミンの決定であり、その場合人アルブミンに対する
抗体を尿試料の中のアルブミンと反応するようにする。所定量の抗体を、PEG
6000のような、補助剤がもしあればそれと共にキュベットキャビティに加え
、乾燥する。所定の体積の試料がキュベットキャビティに入ると、試薬が溶解し
、尿試料の中に存在するアルブミンが溶解した抗体と反応し、凝集物を形成して
濁りを生じ、それは分光測光的に測定でき、アルブミンの濃度に比例する。本発
明による混合は、上に説明した型式の光度計で行うのが好ましく、迅速且つ再現
可能な応答を得るための重要な条件である。
修正できることが分かるだろう。 それで、図1ないし図5による実施例の光検出器9は、光源10からの光束の
中心線からオフセットして配置することができ、即ち、所定の角度を通って液体
試料で散乱してから光源10からの光の透過率を測定すると言うことができる。 その代わりに、図1ないし図5による実施例で、光束の中心線からの光検出器
9の距離を、異なる角度を通る散乱後に透過率を決定できるように、調整できる
。後者は、もし、光検出器9が複数の光検出素子を光束の上記中心線から異なる
距離に含むならばやはり達成できる。勿論、対応する配置を図6による第2実施
例で可能である。 最後に、この光度計が、そのディスプレイ装置上で、測定した透過率または光
の散乱またはこの測定した透過率に対応する吸収値を示すように設計することが
できる。この光度計がプリンタ等へ接続可能な信号出力も持つことができること
は言うまでもない。
Claims (14)
- 【請求項1】 液体試料の毛管層のためのキャビティを有し、自由液体表面
がこのキャビティの主面を横切って伸びるマイクロキュベット(7,20,22
)の中の液体試料の透過率を決定するための光度計で、そのキャビティに最初に
反応を達成するための試薬を用意し、それがこの液体試料の所定の物質の含有量
を決定するためのその透過率に影響し、上記光度計がマイクロキュベット用ホル
ダ(6;6’)およびこのマイクロキュベットの方へ向けた光束の透過率を測定
するために測定手段(9,10;9’)を有する光度計に於いて、このキュベッ
トホルダ(6;6’)を、この自由液体表面の平面内に位置し且つこのキャビテ
ィの主面と平行な成分を有する方向に振動し、それによって混合を達成して溶解
および反応を加速するために、軸受に取付けることを特徴とする光度計。 - 【請求項2】 請求項1で請求する光度計に於いて、上記成分が前記振動方
向の主成分である、即ち、振動が本質的にこの自由液体表面の平面内で且つ本質
的にこのキャビティの主面と平行に起こる光度計。 - 【請求項3】 請求項1または請求項2で請求する光度計に於いて、前記キ
ュベットホルダ(6;6’)を、この測定手段(9,10;9’)によってこの
キュベット(7,20,22)の方に向けた光束の方向と本質的に平行な軸(1
1)の周りに揺動するために軸受に取付けた光度計。 - 【請求項4】 請求項3で請求する光度計に於いて、モータ(16)を配置
し、クランク(13)を介してこのキュベットホルダ(6;6’)を揺動させる
光度計。 - 【請求項5】 請求項4で請求する光度計に於いて、前記測定を実行するた
めに、このモータ(16)がこのクランク(13)の運動を、このクランクの変
位がキュベットホルダ(6;6’)の変位を最小にする領域で、止めるようにし
た光度計。 - 【請求項6】 請求項1ないし請求項5の何れか一つで請求する光度計に於
いて、前記キュベットホルダ(6;6’)を、このマイクロキュベット(7,2
0,22)を通る透過率の測定のためにこの測定手段(9,10;9’)が発生
した光束の直径に対して、このマイクロキュベットを通る透過率の測定を振動中
継続的に実行可能であるような小さな振幅で振動するようにした光度計。 - 【請求項7】 互いから毛管の距離の本質的に平行な壁の間に配置した、薄
い液体層の中で混合を実行する方法であって、これらの壁にこの液体層の平面内
の運動を受けさせ工程と、この運動をこれらの壁によってこの液体に加えられる
毛管力と釣り合わせる工程と、およびこの液体層と周囲媒体の間の境界面をそれ
が弾性膜として機能するような方法で選択する工程とを有することを特徴とする
混合を実行する方法。 - 【請求項8】 請求項7で請求する方法に於いて、前記運動を本質的に往復
運動として実行する方法。 - 【請求項9】 毛管入口を有する使い捨てマイクロキュベットの中で試料お
よび試薬を混合するための請求項8で請求する方法で、この入口がこのキュベッ
トの測定キャビティをこのマイクロキュベットの外部環境と結合し、この入口を
通して液体試料を毛管力の作用の下でこの測定キャビティにに引き込むようにし
た方法。 - 【請求項10】 請求項9で請求する方法に於いて、前記液体層の平面内の
運動が15と60ビート/sの間、好ましくは30と60ビート/sの間のビー
ト振動数によって与えられる方法。 - 【請求項11】 請求項7ないし請求項10の何れか一つに従って薄層で混
合を実行するために適したマイクロキュベットに於いて、前記測定キャビティを
、10μmと1000μmの間、好ましくは400μmと600μmの間の液体
深さの試料液体薄層を与えるように設計したマイクロキュベット。 - 【請求項12】 請求項11で請求するマイクロキュベットに於いて、前記
入口の長さ(L)がこの層の深さ(B)より少なくとも5倍、好ましくは10倍
大きいマイクロキュベット。 - 【請求項13】 請求項11または請求項12で請求するマイクロキュベッ
トであって、蛋白質類および炭水化物類からなるグループから選択した試薬を含
むマイクロキュベット。 - 【請求項14】 請求項7ないし請求項10の何れか一つに従って薄層で混
合を実行するのに適したマイクロキュベットに於いて、本質的に非毛管のキャビ
ティ(24)を前記毛管測定キャビティに隣接して且つこの入口および測定キャ
ビティと本質的に整列して配置したマイクロキュベット。
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