JP2002508970A

JP2002508970A - ヒトプロテアーゼ分子

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Publication number: JP2002508970A
Application number: JP2000540252A
Authority: JP
Inventors: バンドマン、オルガ; ヒルマン、ジェニファー・エル; ユエ、ヘンリー; ゲグラー、カール・ジェイ; コーレイ、ニール・シー; タング、ワイ・トム; シャー、パルビ
Original assignee: Incyte Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Incyte Corp
Priority date: 1998-01-16
Filing date: 1999-01-12
Publication date: 2002-03-26
Also published as: CA2317094A1; WO1999036550A2; US6203979B1; WO1999036550A3; EP1045913A2; AU2113599A

Abstract

(57)【要約】本発明は、ヒトプロテアーゼ分子（ＨＵＰＭ）及びＨＵＰＭを同定かつコードするポリヌクレオチドを提供する。また本発明は、発現ベクタ、宿主細胞、抗体、アゴニスト及びアンタゴニストを提供する。また本発明はＨＵＰＭの発現に関連する障害を治療或いは予防するための方法も提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】技術分野本発明はヒトプロテアーゼ分子の核酸配列及びアミノ酸配列に関し、細胞増殖
及び免疫障害の診断、治療及び予防におけるこれらの配列の使用法に関する。

【０００２】背景技術タンパク質分解処理は正常な細胞成長、分化、再構築及び恒常性に不可欠な処
理である。細胞内のペプチド結合の分割は、前駆タンパク質の活性型への成熟、
標的となるタンパク質からのシグナル配列の除去、誤って折り込まれたタンパク
質の分解、及び細胞内の調節されたペプチドの代謝回転のために必要とされる。
プロテアーゼはアポトーシス、炎症に、また胚発育、創傷治癒及び正常な成長中
の組織の再構築に関係する。プロテアーゼは、宿主内の細菌性、寄生虫性及びウ
イルス性浸潤並びに複製に必要な成分である。哺乳類プロテアーゼのうちの４つ
の主な種類が、活動部位構造、活動の機構、及び全３次元構造に基づいて特定さ
れている（Beynon, R.J.及びJ.S. Bond (1994) Proteolytic Enzymes: A Practi
cal Approach, Oxford University Press, New York, NY, pp. 1-5.）。

【０００３】セリンプロテアーゼ（ＳＰ）は、消化酵素、トリプシン及びキモトリプシン、
補体カスケード及び血液凝固カスケードの成分、細胞外マトリクスの巨大分子の
分解及び代謝回転を制御する酵素を含むタンパク質分解酵素の大きなファミリで
ある。タンパク質分割のための活動触媒部位において、通常配列ＧＤＳＧＧＰ内
に見出されるセリン残基の存在のため、ＳＰと呼ばれる。全ＳＰの活動部位は、
上記セリン、アスパラギン酸及びヒスチジン残基を含む３組の残基からなる。Ｓ
Ｐは広範な基質特異性を有しており、これらの特異性に基づいてサブファミリに
細分することができる。主なサブファミリは、アルギニン或いはリシンの後方で
分割するトリパーゼ（trypase）、アスパラギン酸の後方で分割するアスパーゼ（aspase）、フェニルアラニン或いはロイシンの後方で分割するキマーゼ（chym
ase）、メチオニンの後方で分割するメターゼ（metase）及びセリンの後方で分割するセラーゼ（serase）である。

【０００４】ＳＰは、分割前に小胞体間の未熟なタンパク質を排出するＮ末端シグナルペプ
チドを含む分泌タンパク質である（von Heijne, G.(1986) Nuc. Acid. Res. 14:
5683-5690）。これらのシグナル配列の差が個々のＳＰを識別する１つの手段を提供する。あるＳＰ、特に消化酵素は、不活性の前駆体或いはプレプロ酵素とし
て存在し、シグナルペプチドのＣ末端側にリーダ或いは活性化ペプチドを含む。
この活性化ペプチドは長さが２〜１２アミノ酸であり、シグナルペプチドの分割
部位から活性の成熟タンパク質のＮ末端まで延在する。この配列の分割は酵素を
活性化する。この配列は、生化学的経路並びにまたその基質により種々のＳＰに
おいて変化する（Zunino,0 S.J.等(1990) J. Immunol. 144:2001-2009及びSayer
s, T.J.等(1994) J. Immunol.152:2289-2297.）。

【０００５】システインプロテアーゼは、前駆タンパク質の処理から細胞内分解に渡る多様
な細胞プロセスに関係する。哺乳動物システインプロテアーゼは、リソソームカ
テプシン及びサイトゾルカルシウム活性化プロテアーゼ、すなわちカルパインを
含む。システインプロテアーゼは、炎症の部位に移動する免疫系の単核細胞、マ
クロファージ及び他の細胞により生成され、その保護的な役割として、損傷した
組織を修復するために種々の分子を分泌する。これらの細胞は同じ分子を過剰に
生成する場合があり、ある障害においては組織の破壊を招く。リウマチ様関節炎
のような自己免疫疾患では、システインプロテアーゼ、カテプシンＣの分泌が、
骨の細胞外マトリクスに見出されるコラーゲン、ラミニン及び他の構造のタンパ
ク質を分解する。リソソームプロテアーゼのカテプシンファミリは、システイン
プロテアーゼ、カテプシンＢ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、０２及びＳ、アスパルテルプロテア
ーゼ、カテプシンＤ及びＧを含む。このエンドソームプロテアーゼファミリの多
数のものが特に発現される。カテプシンＤのようなあるものは広範に組織に分布
し、一方他のものは免疫系の単核細胞、マクロファージ及び他の細胞内にのみ見
出される。

【０００６】カテプシンの異常な調節及び発現は、種々の炎症疾患部位を明らかにする。炎
症性滑膜から単離された細胞では、ストロメライシン、サイトカイン、ＴＩＭＰ
−１、ゼラチナーゼ及び他の分子に対するｍＲＮＡが優先的に発現される。カテ
プシンＬ及びＤの発現は、リウマチ様関節炎及び変形性関節炎を患う患者からの
滑膜組織において高められる。カテプシンＬの発現は、リウマチ様滑膜の破壊を
悪化させる単核細胞の流入の原因ともなる（Keyszer, G.M. (1995) Arthritis R
heum. 38:976-984.）。カテプシンの発現の増加及び調節の特異性は種々の癌の転移の可能性に結び付き、治療及び予後徴候の対象となる（Chambers, A.F. 等(
1993) Crit. Rev. Oncog. 4:95-114.）。

【０００７】システインプロテアーゼは、セリンプロテアーゼにおいて見出されたものと類
似の３組のアミノ酸残基を含む触媒ドメインにより特徴付けられる。システイン
は活性セリン残基に置き換わる。触媒作用はチオールエステル中間体を介して進
行し、隣接するヒスチジンおよびアスパラギン酸残基の側鎖により促進される。

【０００８】アスパラギン酸プロテアーゼは細菌性ペニシロペプシン、哺乳動物ペプシン、
レニン、キモシン及び真菌性プロテアーゼを含む。アスパラギン酸プロテアーゼ
の特徴的な活性化部位残基は、ペニシロペプシンにおける一対のアスパラギン酸
残基、例えばａｓｐ３３及びａｓｐ２１３である。またアスパラギン酸プロテア
ーゼは、活性のための最適なｐＨが２〜３であるため、酸性プロテアーゼとも呼
ばれる。このｐＨ範囲では、アスパラギン酸残基の１つがイオン化され、他はイ
オン化されない。アスパラギン酸プロテアーゼの強力なインヒビタは、ヘキサペ
プチド、ペプスタチンであり、遷移状態では正常な基質に似ている。

【０００９】カルボキシペプチダーゼＡ及びＢは、主な哺乳動物の代表的なメタロプロテア
ーゼファミリである。いずれも類似の構造及び活性化部位からなるエキソペプチ
ダーゼである。カルボキシペプチダーゼＡは、キモトリプシンと同様に、疎水性
のＣ末端芳香族及び脂肪族を選ぶのに対して、カルボキシペプチダーゼＢは、基
本的なアルギニン及びリシン残基に向けられる。活性化部位の成分は、２個のグ
ルタミン酸残基及び１個のヒスチジン残基からなる３つのリガンドを有する亜鉛
を含む。

【００１０】多くの他のタンパク質分解酵素は、活性化の機構並びにまた活性化部位が解明
されていないため、上記の主な種類には当てはまらない。これはアミノペプチダ
ーゼ及びシグナルペプチダーゼを含む。

【００１１】アミノペプチダーゼはペプチド基質のアミノ末端からのアミノ酸残基の加水分
解を触媒する。ウシロイシンアミノペプチダーゼは、金属イオンの結合で活性化
部位において少なくとも３つの反応性システイン残基からのスルフヒドリル基（
sulfydryl group）を用いる亜鉛金属酵素である（Cuypers, H.T.等(1982) J. Bi
ol. Chem. 257:7086-7091.）。シグナルペプチダーゼは、あるタンパク質からの
シグナルペプチダーゼの処理において機能する全ての原核及び真核細胞タイプに
おいて見出される特定化されたプロテアーゼ類である。シグナルペプチドは、そ
のリボソーム構築部位から特定の細胞或いは細胞外位置までタンパク質を配向す
るタンパク質上のアミノ末端配列である。一旦タンパク質が排出されれば、シグ
ナルペプチド及び翻訳後処理、例えばグリコシレーション或いはリン酸化による
シグナル配列の除去がタンパク質を活性化する。シグナルペプチダーゼは、酵母
及び哺乳動物の両方において多数サブユニットの複合体として存在する。イヌの
シグナルペプチダーゼ複合体は、５つのサブユニットからなる。全てミトコンド
リア膜に関連し、膜と同等或いはそれ以上の大きさに及ぶ疎水性領域を含む（Sh
elness, G.S.及びBlobel, G. (1990) J. Biol. Chem. 265:9512-9519.）。これらのサブユニットのあるものは、膜の適当な位置に複合体を固定するように機能
するが、他のものは実際の触媒活性を含む。触媒活性は、活性化部位のセリン残
基を含むものと考えられる。

【００１２】プロテアソームは、いくつかの細菌或いは全真核細胞内に見出される細胞内複
合体であり、細胞生理学上重要な役割を果たす。プロテアソームは、全種類の細
胞タンパク質の適当な分解の一因となり、転写及び細胞サイクル進行のような細
胞プロセスを活性化或いは抑圧するために機能するタンパク質を制御する（Ciec
hanover, A. (1994) Cell 79:13-21.）。プロテアソームは、ユビキチンと呼ばれる小タンパク質をタンパク質のリシン側鎖に共有結合することにより、加水分
解のために標的とされるタンパク質において機能する。ユビキチン−プロテアー
ゼ系は、有糸分裂サイクリックキナーゼ、オンコプロテイン、腫瘍抑制遺伝子（
ｐ５３）、シグナル伝達に関連する細胞表面受容体、転写調節因子、及び突然変
異或いは損傷したタンパク質の分解に関係する（Ciechanover、前掲）。プロテアソームは大きく（〜２０００ｋＤａ）、基質識別及びプロテアソーム活性の調
節において機能する種々のプロテアーゼ及び末端サブユニットを含む中央触媒コ
アからなるマルチサブユニット複合体である。

【００１３】プロテアーゼインヒビタは、プロテアーゼの活性化及び効果の調節において大
きな役割を果たす。それらは、タンパク質分解障害の動物標本において病原を制
御することが知られている（Murphy, G. (1991) Agents Actions Suppl 35:69-7
6.）。詳細には、低レベルのシスタチン、すなわちシステインプロテアーゼの低
分子量のインヒビタは悪性の癌の進行に相関があるものと考えられる（Calkins,
C.等(1995) Biol Biochem Hoppe Seyler 376:71-80.)）。システインプロテアーゼのレベルとそのインヒビタとの間のバランスも障害の進行において重要であ
る。特に、システインプロテアーゼレベルが上昇し、それにインヒビタ活性の減
少が伴う場合には、腫瘍細胞、関節炎の病理、ヒトの免疫疾患に悪性の特性が増
加することに相関がある。

【００１４】ｓｅｒｐｉｎは高分子量、例えば３７０〜４２０アミノ酸残基であり、哺乳動
物プラズマセリンプロテアーゼのインヒビタである。これらのインヒビタの多く
は、哺乳動物の血液凝固カスケード並びにまた補体カスケードを調節するように
機能する。これらのインヒビタの中で顕著なのは、α−１プロテアーゼインヒビ
タ、α−１アンチキモトリプシン、アンチトロンビンＩＩＩ及び「汎発性プロテ
アーゼインヒビタ」α−２マクログロブリンである。α−１プロテアーゼインヒ
ビタは主に好球中エラスターゼに対して有効であるが、同様に他のセリンプロテ
アーゼと結合する。α−１プロテアーゼインヒビタ、α−１アンチキモトリプシ
ン、アンチトロンビンＩＩＩは全て著しい配列相同性を示しており、それは、こ
れらのインヒビタの特定化が、対応するプロテアーゼ自体の特定化に応じて生じ
ることを示唆している。

【００１５】新規のヒトプロテアーゼ分子及びそれらをコードするポリヌクレオチドの発見
は、細胞増殖及び免疫障害の診断、治療及び予防において有用な新規の組成物を
提供することができ、当分野における必要性を満足するものである。

【００１６】発明の概要本発明は、集合的に「ＨＵＰＭ」と呼ばれ、個別に「ＨＵＰＭ−１」、「ＨＵ
ＰＭ−２」、「ＨＵＰＭ−３」、「ＨＵＰＭ−４」、「ＨＵＰＭ−５」、「ＨＵ
ＰＭ−６」、「ＨＵＰＭ−７」、「ＨＵＰＭ−８」、「ＨＵＰＭ−９」、「ＨＵ
ＰＭ−１０」、「ＨＵＰＭ−１１」及び「ＨＵＰＭ−１２」と呼ばれる実質的に
精製されたポリペプチド、ヒトプロテアーゼ分子を特徴とする。一態様では、本
発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２、ＳＥＱＩＤＮ
Ｏ：３、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、ＳＥＱＩＤＮＯ：５、ＳＥＱＩＤＮ
Ｏ：６、ＳＥＱＩＤＮＯ：７、ＳＥＱＩＤＮＯ：８、ＳＥＱＩＤＮ
Ｏ：９、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１及びＳＥＱＩ
ＤＮＯ：１２、並びにそのフラグメントからなる群から選択されるアミノ酸配
列の含む、実質的に精製されたポリペプチド、ＨＵＰＭを提供する。

【００１７】さらに本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、ＳＥＱＩＤＮＯ：５、ＳＥＱＩＤＮＯ：６、ＳＥＱＩＤＮＯ：７、ＳＥＱＩＤＮＯ：８、ＳＥＱＩＤＮＯ：９、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１及び
ＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸配列、或いはこれらの任意の配列のフラグ
メントに少なくとも９０％アミノ酸配列同一性を有するＨＵＰＭの実質的に精製
された変異体を提供する。また本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１、ＳＥＱＩ
ＤＮＯ：２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、ＳＥＱＩ
ＤＮＯ：５、ＳＥＱＩＤＮＯ：６、ＳＥＱＩＤＮＯ：７、ＳＥＱＩ
ＤＮＯ：８、ＳＥＱＩＤＮＯ：９、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０、ＳＥＱ
ＩＤＮＯ：１１及びＳＥＱＩＤＮＯ：１２、並びにそのフラグメントから
なる群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする単離され、
精製されたポリヌクレオチドを提供する。また本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：
１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３、ＳＥＱＩＤＮＯ：
４、ＳＥＱＩＤＮＯ：５、ＳＥＱＩＤＮＯ：６、ＳＥＱＩＤＮＯ：
７、ＳＥＱＩＤＮＯ：８、ＳＥＱＩＤＮＯ：９、ＳＥＱＩＤＮＯ：
１０、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１及びＳＥＱＩＤＮＯ：１２、並びにそのフ
ラグメントからなる群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコード
するポリヌクレオチドに少なくとも９０％ポリヌクレオチド同一性を有する単離
され、精製されたポリヌクレオチド変異配列を含む。

【００１８】さらに本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、ＳＥＱＩＤＮＯ：５、ＳＥＱＩＤＮＯ：６、ＳＥＱＩＤＮＯ：７、ＳＥＱＩＤＮＯ：８、ＳＥＱＩＤＮＯ：９、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１及び
ＳＥＱＩＤＮＯ：１２、並びにそのフラグメントからなる群から選択される
アミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む組成物を
提供する。さらに本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２
、ＳＥＱＩＤＮＯ：３、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、ＳＥＱＩＤＮＯ：５
、ＳＥＱＩＤＮＯ：６、ＳＥＱＩＤＮＯ：７、ＳＥＱＩＤＮＯ：８
、ＳＥＱＩＤＮＯ：９、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０、ＳＥＱＩＤＮＯ：
１１及びＳＥＱＩＤＮＯ：１２、並びにそのフラグメントからなる群から選
択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに厳密
な条件下でハイブリダイズする単離され、精製されたポリヌクレオチド配列、並
びにＳＥＱＩＤＮＯ：１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２、ＳＥＱＩＤＮＯ：
３、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、ＳＥＱＩＤＮＯ：５、ＳＥＱＩＤＮＯ：
６、ＳＥＱＩＤＮＯ：７、ＳＥＱＩＤＮＯ：８、ＳＥＱＩＤＮＯ：
９、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１及びＳＥＱＩＤ
ＮＯ：１２、並びにそのフラグメントからなる群から選択されるアミノ酸配列を
含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド相補的な単離され、精製された
ポリヌクレオチド配列を提供する。

【００１９】また本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４、ＳＥ
ＱＩＤＮＯ：１５、ＳＥＱＩＤＮＯ：１６、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７
、ＳＥＱＩＤＮＯ：１８、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９、ＳＥＱＩＤＮＯ
：２０、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２、ＳＥＱＩＤＮＯ：２３及びＳＥＱＩＤＮＯ：２４からなる群から選択されるポリヌク
レオチド配列を含む単離され、精製されたポリヌクレオチドを提供する。さらに
本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４、ＳＥＱＩ
ＤＮＯ：１５、ＳＥＱＩＤＮＯ：１６、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７、ＳＥ
ＱＩＤＮＯ：１８、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９、ＳＥＱＩＤＮＯ：２０
、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２、ＳＥＱＩＤＮＯ
：２３及びＳＥＱＩＤＮＯ：２４、並びにそのフラグメントからなる群から
選択されるポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドに少なくとも９０％ポ
リヌクレオチド同一性を有する単離され、精製されたポリヌクレオチド変異配列
と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４、ＳＥＱＩＤＮ
Ｏ：１５、ＳＥＱＩＤＮＯ：１６、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７、ＳＥＱＩ
ＤＮＯ：１８、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９、ＳＥＱＩＤＮＯ：２０、ＳＥ
ＱＩＤＮＯ：２１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２、ＳＥＱＩＤＮＯ：２３
及びＳＥＱＩＤＮＯ：２４、並びにそのフラグメントからなる群から選択さ
れるポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドに相補的な単離され、精製さ
れたポリヌクレオチドとを提供する。

【００２０】さらに本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、ＳＥＱＩＤＮＯ：５、ＳＥＱＩＤＮＯ：６、ＳＥＱＩＤＮＯ：７、ＳＥＱＩＤＮＯ：８、ＳＥＱＩＤＮＯ：９、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１及び
ＳＥＱＩＤＮＯ：１２、並びにそのフラグメントからなる群から選択される
アミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの少なくともフ
ラグメントを含む発現ベクタを提供する。別の態様では、発現ベクタは宿主細胞
に含まれる。

【００２１】また本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２、ＳＥＱ
ＩＤＮＯ：３、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、ＳＥＱＩＤＮＯ：５、ＳＥＱ
ＩＤＮＯ：６、ＳＥＱＩＤＮＯ：７、ＳＥＱＩＤＮＯ：８、ＳＥＱ
ＩＤＮＯ：９、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１及びＳ
ＥＱＩＤＮＯ：１２、並びにそのフラグメントからなるアミノ酸配列を含む
ポリペプチドを生成するための方法を提供し、その方法は、（ａ）ポリペプチド
の発現に適した条件下でＨＵＰＭをコードするポリヌクレオチド配列の少なくと
もフラグメントを有する発現ベクタを含む宿主細胞を培養する過程と、（ｂ）そ
の宿主細胞培養株からポリペプチドを回収する過程とを有する。

【００２２】また本発明は、適当な医薬品担体とともに、ＳＥＱＩＤＮＯ：１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、ＳＥＱＩＤＮＯ：５、ＳＥＱＩＤＮＯ：６、ＳＥＱＩＤＮＯ：７、ＳＥＱＩＤＮＯ：８、ＳＥＱＩＤＮＯ：９、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０、ＳＥ
ＱＩＤＮＯ：１１及びＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸配列或いはその
フラグメントを有する実質的に精製されたＨＵＰＭを含む医薬品組成物を提供す
る。

【００２３】さらに本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、ＳＥＱＩＤＮＯ：５、ＳＥＱＩＤＮＯ：６、ＳＥＱＩＤＮＯ：７、ＳＥＱＩＤＮＯ：８、ＳＥＱＩＤＮＯ：９、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１及び
ＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸配列或いはそのフラグメントを含むポリペ
プチドに結合する精製された抗体、並びにそのポリペプチドに対する精製された
アゴニスト及び精製されたアンタゴニストを提供する。

【００２４】また本発明は、ＨＵＰＭの発現或いは活性の増加に関連する細胞増殖の疾患を
治療或いは予防するための方法を提供し、その方法はＨＵＰＭのアンタゴニスト
の有効量を治療を要する被検者に投与する過程を含む。

【００２５】また本発明は、ＨＵＰＭの発現或いは活性の増加に関連する免疫障害を治療或
いは予防するための方法を提供し、その方法はＨＵＰＭのアンタゴニストの有効
量を治療を要する被検者に投与する過程を含む。

【００２６】また本発明は、ＨＵＰＭの発現或いは活性の増加に関連する細胞増殖の疾患を
治療或いは予防するための方法を提供し、その方法は適当な医薬品担体とともに
ＨＵＰＭを含む医薬品組成物を治療を要する被検者に投与する過程を含む。

【００２７】また本発明は、ＨＵＰＭの発現或いは活性の増加に関連する免疫障害を治療或
いは予防するための方法を提供し、その方法は適当な医薬品担体とともにＨＵＰ
Ｍを含む医薬品組成物を治療を要する被検者に投与する過程を含む。

【００２８】また本発明は、核酸を含む生物学的サンプルにおいてＨＵＰＭをコードするポ
リヌクレオチドを検出するための方法を提供し、その方法は、（ａ）ＳＥＱＩ
ＤＮＯ：１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２、ＳＥＱＩＤＮＯ：３、ＳＥＱＩ
ＤＮＯ：４、ＳＥＱＩＤＮＯ：５、ＳＥＱＩＤＮＯ：６、ＳＥＱＩ
ＤＮＯ：７、ＳＥＱＩＤＮＯ：８、ＳＥＱＩＤＮＯ：９、ＳＥＱＩ
ＤＮＯ：１０、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１及びＳＥＱＩＤＮＯ：１２或い
はそのフラグメントを含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の相
補配列を生物学的サンプルの核酸の少なくとも１つにハイブリダイズさせ、それ
よりハイブリダイゼーション複合体を形成する過程と、（ｂ）そのハイブリダイ
ゼーション複合体を検出する過程とを有し、ハイブリダイゼーション複合体の存
在が生物学的サンプルにおけるＨＵＰＭをコードするポリヌクレオチドの存在と
相関をなしている。一態様では、生物学的サンプルの核酸は、ハイブリダイズす
る前にポリメラーゼ連鎖反応により増幅される。

【００２９】発明を実施するための形態本タンパク質、ヌクレオチド配列及び方法を記載する前に、本発明は記載され
る特定の方法、プロトコル、細胞株、ベクタ並びに薬剤に限定されず、変更され
る場合もあることを理解されたい。また本明細書で用いられる専門用語は、特定
の実施例を記載することのみを目的としており、本発明の範囲を制限することを
意図するわけではなく、本発明は添付の請求の範囲によってのみ限定されること
を理解されたい。

【００３０】本明細書で用いられるように、添付の請求の範囲では、単数形の冠詞並びに「
その（前記）」は、文脈において異なるように明確に規定されない限り、複数の
指示物を含むことに注意されたい。従って例えば、「ある宿主細胞」が示すもの
は、複数のそのような宿主細胞を含んでおり、「その抗体」は当業者には既知の
１つ或いはそれ以上の抗体及びその等価物を示しており、他も同様である。

【００３１】異なるように規定されなければ、本明細書で用いられる科学技術用語は、本発
明が属する分野の当業者に通常理解されているのと同じ意味である。本明細書で
記載される内容と類似或いは等価な任意の方法、装置並びに材料が本発明の検証
に際して用いられてもよいが、好適な方法、装置並びに材料は本明細書中に記載
される。本明細書に記載される全ての発行物は、本発明に関連して用いられる場
合がある発行物において報告される細胞株、ベクタ、方法論を記載及び開示する
ために、参照して本明細書の一部としている。本明細書に記載される内容は、本
発明が、先行発明によるそのような開示に先行して権利を与えられないことを容
認するものと解釈されるべきではない。

【００３２】定義「ＨＵＰＭ」は自然、合成、半合成或いは組換え体の何れかの任意のソースか
らの任意の種、特にウシ、ヒツジ、ブタ、ネズミ、ウマ及び好適にはヒトを含む
哺乳類から得られる実質的に精製されたＨＵＰＭのアミノ酸配列である。

【００３３】「アゴニスト」は、ＨＵＰＭに結合される際に、ＨＵＰＭの量を増加するか、
或いは活性の期間を延長する分子のことである。アゴニストはタンパク質、核酸
、炭水化物或いはＨＵＰＭに結合し、その作用を調節する任意の他の分子を含む
場合がある。

【００３４】「アレル」或いは「アレル配列」はＨＵＰＭをコードする遺伝子の代替形であ
る。アレルは、核酸配列における少なくとも１つの突然変異から生じ、変化した
ｍＲＮＡ或いはポリペプチドを生じ、その構造或いは機能は変化する場合もしな
い場合もある。任意の所与の遺伝子は、１つ或いは多くのアレル形を有する場合
もあれば、全く有さない場合もある。アレルを引き起こす通常の突然変異は一般
に、ヌクレオチドの自然の欠失、付加或いは置換に起因する。これらの種類の変
化はそれぞれ単独で、或いは他との組み合わせにおいて、所与の配列において１
回或いは２回以上生じる場合がある。

【００３５】ＨＵＰＭをコードする「変化した」核酸配列は、同一或いは機能的に等価なＨ
ＵＰＭをコードするポリヌクレオチドをもたらす種々のヌクレオチドの欠失、挿
入或いは置換を含む。本定義には、ＨＵＰＭをコードするポリヌクレオチドのあ
る特定のオリゴヌクレオチドプローブを用いて容易に検出することができる場合
もできない場合もある多形性及びＨＵＰＭをコードするポリヌクレオチド配列に
対する通常の染色体位置とは異なる位置を有する、アレルへの不適当な或いは予
想外のハイブリダイゼーションが含まれる。またコードされたタンパク質は「変
化して」、サイレント変化を生成し、機能的に等価なＨＵＰＭをもたらすアミノ
酸残基の欠失、挿入或いは置換も含む場合もある。故意のアミノ酸置換は、ＨＵ
ＰＭの生物活性が保持される限り、残基の極性、電荷、可溶性、疎水性、親水性
並びにまた両親媒性における類似性に基づいて行うことができる。例えば、負に
帯電したアミノ酸はアスパラギン酸及びグルタミン酸を含み、正に帯電したアミ
ノ酸はリジン及びアルギニンを含み、同様の親水値を有する帯電していない極性
頭基（polar head group）有するアミノ酸はロイシン、イソロイシン及びバリン
、グリシン及びアラニン、アスパラギン及びグルタミン、セリン及びスレオニン
、フェニルアラニン及びチロシンを含む。

【００３６】「アミノ酸」或いは「アミノ酸配列」は、オリゴペプチド、ペプチド、ポリペ
プチド或いはタンパク質配列及びそのフラグメント、並びに自然発生或いは合成
分子のことである。ＨＵＰＭのフラグメントは長さが約５〜約１５アミノ酸であ
り、ＨＵＰＭの生物学的活性或いは免疫学的活性を保持していることが好ましい
。「アミノ酸配列」は自然発生タンパク質分子のアミノ酸配列を示すものとして
表されるが、アミノ酸配列等の用語は、示されるタンパク質分子に関連する完全
な自然アミノ酸配列にそのアミノ酸配列を限定することを意味しない。

【００３７】「増幅」は、核酸配列のさらなる複製の生成のことであり、一般に当分野にお
いて周知のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術を用いて実行される（例えば、 Dieffenbach, C.W.及びG.S. Dveksler (1995) PCR Primer, a Lab. oratory Ma
nual, Cold Spring Harbor Press,Plainview, NY, pp. 1-5.を参照されたい）。

【００３８】「アンタゴニスト」は、ＨＵＰＭに結合される際にＨＵＰＭの生物学的或いは
免疫学的活性を減少させる分子のことである。アンタゴニストはタンパク質、核
酸、炭水化物或いはＨＵＰＭに結合し、ＨＵＰＭの作用を減少させる任意の他の
分子を含む場合がある。

【００３９】「抗体」は、エピトープ決定基を結合することができる、Ｆａ、Ｆ（ａｂ′） ₂ 及びＦｖのような無傷の分子及びそのフラグメントのことである。ＨＵＰＭポリペプチドを結合する抗体は、免疫性抗原として対象の小さなペプチドを含む無
傷のポリペプチド或いはフラグメントを用いて作製ことができる。動物（例えば
マウス、ラット或いはウサギ）を免疫するために用いられるポリペプチド或いは
オリゴペプチドは、ＲＮＡの翻訳に由来するか、或いは化学的に合成され、所望
により担体タンパク質に結合することができる。ペプチドに化学的に結合される
通常用いられる担体は、ウシ血清アルブミン及びサイログロブリン、キーホール
リンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）を含む。その後結合されたペプチドを用いて
動物を免疫する。

【００４０】「抗原決定基」は、特定の抗体と接触する分子の部分（すなわちエピトープ）
のことである。タンパク質或いはそのフラグメントを用いて宿主動物を免疫する
際、タンパク質の多くの領域が、タンパク質上の所与の領域或いは三次元構造体
に特異に結合する抗体の生成を誘発する場合がある。これらの領域或いは構造体
は抗原決定基と呼ばれる。抗原決定基は、抗体に結合するために、無傷の抗原（
すなわち免疫反応を誘発するために用いられるイムノゲン）と競合する場合があ
る。

【００４１】「アンチセンス」は、特異なＤＮＡ或いはＲＮＡ配列に相補的なヌクレオチド
配列を含む任意の組成物である。用語「アンチセンス鎖」は、「センス」鎖に相
補的な核酸鎖を示すために用いられる。アンチセンス分子はペプチド核酸を含み
、合成或いは転写を含む任意の方法により生成することができる。一度細胞内に
導入されれば、相補ヌクレオチドは細胞により生成される自然配列と結合し、二
重鎖を形成し、転写或いは翻訳のいずれかを遮断する。記号「負（マイナス）」
はアンチセンス鎖を示す際に用いられる場合があり、「正（プラス）」はセンス
鎖を示す場合に用いられることがある。

【００４２】「生物学的活性」は、自然発生分子の構造的、調節的或いは生化学的機能を有
するタンパク質のことである。同様に「免疫学的活性」は自然、組換え或いは合
成ＨＵＰＭ、又はその任意のオリゴペプチドが、適当な動物或いは細胞において
特異な免疫反応を誘発し、かつ特異な抗体と結合する能力のことである。

【００４３】「相補的」或いは「相補性」は、塩基対による許容塩類及び温度条件下でのポ
リヌクレオチドの自然結合のことである。例えば、配列「Ａ−Ｇ−Ｔ」の場合、
相補配列「Ｔ−Ｃ−Ａ」に結合する。２つの一本鎖分子間の相補性は、核酸のあ
るものだけが結合する「部分的」であるか、或いは完全な相補性が一本鎖分子間
に存在する場合には完全である場合もある。核酸鎖間の相補性の度合いは、核酸
鎖間のハイブリダイゼーションの効率及び強度に著しく影響する。これは核酸鎖
間の結合に及びＰＮＡ分子の設計及び使用に依存する増幅反応において特に重要
である。

【００４４】「所与のポリヌクレオチド配列を含む組成物」は、所与のポリヌクレオチド配
列を含む任意の組成物に幅広く用いられる。その組成物は乾燥状態或いは水溶液
状態を含む。ＨＵＰＭをコードするポリヌクレオチド配列或いはそのフラグメン
トを含む組成物はハイブリダイゼーションプローブとして用いることもできる。
そのプローブは凍結乾燥状態で保管され、炭水化物のような安定化剤と関連する
こともできる。ハイブリダイゼーションでは、そのプローブは塩類（例えばＮａ
Ｃｌ）、界面活性剤（例えばＳＤＳ）及び他の組成物（例えばデンハート液、粉
乳、サケ精子ＤＮＡ等）を含む水溶液に分散される場合もある。

【００４５】「コンセンサス」は、核酸配列のうち、不要な塩基を分解するために再配列さ
れているもの、或いは５´或いは３´方向にXL-PCR (Perkin Elmer, Norwalk, C
T)を用いて伸長され、再配列されているもの、或いはフラグメント構築用コンピ
ュータプログラム（例えばGELVIEW Fragment Assembly System、GCG, Madison W
I）を用いて２つ以上のインサイト社クローンの重複配列から構築されているもののことである。ある配列は伸長及び構築のいずれもが施され、コンセンサス配
列を生成している。

【００４６】「ポリヌクレオチドの発現と相関がある」は、ノーザン分析によるＨＵＰＭを
コードするポリヌクレオチドに類似のリボ核酸の存在の検出が、サンプルにおい
てＨＵＰＭをコードするｍＲＮＡの存在を示しており、それによりそのタンパク
質をコードするポリヌクレオチドからの転写物の発現と相関があることを示す。

【００４７】「欠失」は、アミノ酸配列或いはヌクレオチド配列いずれかにおいて変化し、
１つ或いはそれ以上のアミノ酸残基或いはヌクレオチドが欠如することである。

【００４８】「誘導体」は、ＨＵＰＭをコードする核酸配列或いはＨＵＰＭ又はコードされ
たＨＵＰＭの相補配列の化学修飾体のことである。そのような修飾の例示は、水
素をアルキル基、アシル基或いはアミノ基に置換することである。核酸誘導体は
、自然分子の生物学的及び免疫学的機能を保持するポリペプチドをコードする。
誘導体ポリペプチドは、グリコシレーション、ポリエチレングリコール形成（pe
gylation）或いは由来したポリペプチドの生物学的或いは免疫学的機能を保持す
る任意の類似のプロセスにより修飾されるポリペプチドである。

【００４９】「相同性」は相補性の度合いのことである。部分的相同性或いは完全相同性（
すなわち同一）がある。部分的相同性配列は、同一配列が標的核酸にハイブリダ
イズするのを少なくとも部分的に抑制する配列であり、実用的な用語「実質的に
相同性の」を用いることが好ましい。完全に相補的な配列の標的配列へのハイブ
リダイゼーションの抑制は、低い厳密性の条件下でハイブリダイゼーション検定
法（サザンブロット或いはノーザンブロット、溶液ハイブリダイゼーション等）
を用いて検査することができる。実質的に相同的な配列或いはプローブは、低い
厳密性の条件下で完全に相同的な配列及びプローブの標的配列への結合と競合し
、それを抑制するであろう。低い厳密性の条件は非特異な結合が許容されるよう
な条件であることは言うまでもない。低い厳密な条件は、２つの配列の互いへの
結合が特異な（すなわち選択的な）相互作用であることを必要とする。非特異な
結合の欠如は、部分的な度合いの相補性さえ存在しない（例えば約３０％同一性
より小さい）第２の標的配列の使用により検査される場合もある。非特異な結合
が存在しない場合、そのプローブは第２の非相補的標的配列にハイブリダイズし
ないであろう。

【００５０】「パーセント同一性」或いは「％同一性」という表現は、２以上のアミノ酸ま
たは核酸配列を比較した際の配列類似性のパーセンテージである。パーセント同
一性は、例えばMegAlignプログラム（DNASTAR, Inc., Madison WI）を用いることによって電子的に求めることができる。このMegAlign^TMプログラムは、異なる
方法、例えばクラスタ法（clustal method）（例えばHiggins, D.G.及びP.M. Sh
arp (1988) Gene 73:237-244参照）に従って２以上の配列のアライメントを作成
することができる。このクラスタ法のアルゴリズムでは、配列群を、全ての配列
の対について両配列間の距離を調べることによってクラスタ（集団）にグループ
分けする。このクラスタ群について、一対毎にアライメントをとり、次にグルー
プにおいてアライメントをとる。２つのアミノ酸配列、例えば配列Ａと配列Ｂの
間のパーセント類似性は、（配列Ａの長さ−配列Ａにおけるギャップ残基の数−
配列Ｂにおけるギャップ残基の数）／（配列Ａと配列Ｂとの間の残基の一致の総
数）×１００で計算する。２つのアミノ酸配列の間の類似性の差が低いか無いケ
ースは、パーセント類似性の計算に含められない。核酸配列間のパーセント同一
性も、他の周知の方法、例えばJotun Hein法（例えばHein J. (1990) Methods E
nzymol. 183: 626-645参照）によってカウント即ち計算することができる。配列
間の同一性は、他の周知の方法、例えばハイブリダイゼーション条件を変えるこ
とによっても決定することができる。

【００５１】「ヒト人工染色体」（ＨＡＣ）は、大きさが１０Ｋから１０ＭのＤＮＡ配列を
含み、安定した有糸分裂染色体の分離及び保持に必要とされる全ての要素を含む
直鎖状の小染色体である。

【００５２】「ヒト化抗体」は、ヒト抗体により似せるために非抗原結合領域内においてア
ミノ酸が置換されているが、その一方で元の結合能力を保持している抗体分子の
ことである。

【００５３】「ハイブリダイゼーション」は、核酸の鎖が塩基対を介して相補鎖と結合する
任意のプロセスのことである。

【００５４】ハイブリダイゼーション複合体」は、相補的なＧとＣ塩基との間、並びに相補
的なＡとＴ塩基との間に水素結合を形成することにより２つの核酸配列間に形成
される複合体のことである。これらの水素結合は、塩基スタッキング相互作用に
よりさらに安定化する場合もある。２つの相補的核酸配列は、逆平行形状におい
て水素結合する。ハイブリダイゼーション複合体は、溶液（例えばＣ₀ｔ或いはＲ₀ｔ分析）内に、又は溶液中に存在する一方の核酸配列と固形支持体（例えば紙、膜、フィルタ、チップ、ピン、或いはスライドガラス、又は細胞或いはその
核酸が固定されている任意の他の適切な支持体）上に固定化される別の核酸配列
との間に形成することもできる。

【００５５】「挿入」或いは「付加」は、自然発生分子に比べて、１つ或いはそれ以上のア
ミノ酸残基或いはヌクレオチドがそれぞれ加わるアミノ酸配列或いはヌクレオチ
ド配列における変化のことである。

【００５６】「免疫応答」は、炎症、外傷、免疫疾患、又は感染症や遺伝病等と関連のある
状態を指すものである。これらの状態は、細胞や全身の防御系を活性化する様々
な因子、例えばサイトカイン、ケモカイン、及び他のシグナル伝達分子の産生に
よって特性化することができる。

【００５７】「マイクロアレイ」は、紙、ナイロン或いは他の種類の膜、フィルタ、チップ
、スライドガラス或いは任意の他の適当な固形支持体のような支持体上に配列さ
れる個別のポリヌクレオチド或いはオリゴヌクレオチドからなるアレイのことで
ある。

【００５８】「調節」は、ＨＵＰＭの生物学的活性の変更ことである。例えば調節により、
ＨＵＰＭのタンパク質活性、結合特性或いは生物学的、機能的或いは免疫学的特
性が増減するようになる。

【００５９】「核酸配列」はオリゴヌクレオチド、ヌクレオチド或いはポリヌクレオチド並
びにそのフラグメント、一本鎖或いは二本鎖の場合があり、センス鎖或いはアン
チセンス鎖を表すゲノム或いは合成起源のＤＮＡ或いはＲＮＡ、ペプチド核酸（
ＰＮＡ）或いは任意のＤＮＡ様或いはＲＮＡ様物質のことである。「フラグメン
ト」は、長さが６０ヌクレオチドより長い核酸配列であり、長さが少なくとも１
００ヌクレオチド或いは少なくとも１０００ヌクレオチド、さらに少なくとも１
０，０００ヌクレオチドであるフラグメントを含むことが最も好ましい。

【００６０】本明細書において、用語「機能的に関連する」又は「機能的に結びついた」は
、機能的に関連する核酸配列を表す。プロモータは、そのプロモータがコードさ
れるポリペプチドの転写を調節している場合、コード配列の機能的に関連又は機
能的に結びついている。機能的に関連した、又は機能的に結びついた核酸配列は
近接して読み枠内に存在することができるが、ある種のゲノムの配列、例えばリ
プレッサー遺伝子は、コードされるポリペプチドに近接していないが、やはりそ
のポリペプチドの発現を調節するオペレーター配列に結合する。

【００６１】「オリゴヌクレオチド」は、少なくとも約６ヌクレオチドから６０ヌクレオチ
ドの核酸配列、好ましくは約１５−３０ヌクレオチドの核酸配列、より好ましく
は２０−２５ヌクレオチドの核酸配列であり、ＰＣＲ増幅或いはハイブリダイゼ
ーション検定法において用いることができる。ここで用いる場合、オリゴヌクレ
オチドは、一般に当分野において定義されているような用語「アンプリマ」、「
プライマ」、「オリゴマ」及び「プローブ」と実質的に等価である。

【００６２】「ペプチド核酸」（ＰＮＡ）は、リジンにおいて終端するアミノ酸残基のペプ
チドバックボーンに結合する、長さが少なくとも５ヌクレオチドからなるオリゴ
ヌクレオチドを含むアンチセンス分子或いは抗遺伝因子（anti-gene agent）ことである。ＰＮＡはポリエチレングリコール化され、細胞の寿命を延長し、その
中で相補一本鎖ＤＮＡ及びＲＮＡを優先的に結合し、転写延長を停止する（Niel
sen PE 等(1993) Anticancer Drug Des 8:53-63）。

【００６３】「サンプル」は幅広い意味に用いられる。ＨＵＰＭをコードする核酸或いはそ
のフラグメント又はＨＵＰＭ自体を含むと予想される生物学的サンプルは、溶液
中に存在するか、或いは固形支持体、組織、組織転写物（tissue print）等に結
合されている体液、細胞からの抽出物、染色体、細胞器官或いは細胞から単離さ
れた膜、細胞、ゲノムＤＮＡ、ＲＮＡ或いはｃＤＮＡを含む。

【００６４】「特異な結合」或いは「特異に結合する」は、タンパク質或いはペプチドとア
ゴニスト、抗体とアンタゴニストとの間の相互作用のことである。その相互作用
は、結合分子により識別されるタンパク質の特定の構造（すなわち抗原決定基或
いはエピトープ）の存在に依存する。例えば、抗体がエピトープ「Ａ」に対して
特異である場合には、標識された「Ａ」を含むある反応におけるエピトープＡ（
或いは遊離し、標識されないＡ）及びその抗体を含むタンパク質の存在が、その
抗体に結合される標識されたＡの量を減らすであろう。

【００６５】「厳密な条件」は、ポリヌクレオチド配列と、特許請求の範囲に記載されたポ
リヌクレオチド配列との間のハイブリダイゼーションを許容する条件のことであ
る。適切なレベルの厳密な条件は、例えば、プレハイブリダイゼーション及びハ
イブリダイゼーション領域における塩又はホルムアミドの濃度、又はハイブリダ
イゼーション温度によって決定することができ、当分野でよく知られている。詳
述すると、厳密性は、塩の濃度を低下させること、ホルムアミドの濃度を上昇さ
せること、又はハイブリダイゼーション温度を高めることによって高めることが
できる。

【００６６】例えば、高い厳密な条件の下でのハイブリダイゼーションは、約３７℃〜４２
℃における約５０％のホルムアミド濃度で生じるようになる。低い厳密な条件の
下でのハイブリダイゼーションは、約３０℃〜３５℃の温度での約３５％〜２５
％のホルムアミド濃度で生じるようになる。詳細には、高い厳密な条件の下での
ハイブリダイゼーションは、５０％のホルムアミド濃度、５ＸＳＳＰＥ、０．
３％ＳＤＳ、及び２００μｇ／ｍｌの剪断された変性サケ精子ＤＮＡを用いて４
２℃で生じるようになる。低い厳密な条件の下でのハイブリダイゼーションは、
上記の条件で、温度を３５℃に下げ、ホルムアミド濃度を３５％にする際に生じ
るようになる。特定のレベルの厳密性に対応する温度範囲は、目的の核酸のプリ
ン対ピリミジン比を計算し、それに従って温度を調節することによってさらに狭
めることができる。上記の温度範囲及び条件の変更については当分野で周知であ
る。

【００６７】「実質的に精製された」は、自然環境から除去されるか、単離されるか或いは
分離された核酸配列或いはアミノ酸配列のことであり、それらは自然に関連する
他の成分を少なくとも６０％、好適には７５％、最も好適には９０％含まないも
のである。

【００６８】「置換」は、１つ或いはそれ以上のヌクレオチド或いはアミノ酸が、それぞれ
異なるヌクレオチド或いはアミノ酸に置き換えられることである。

【００６９】「形質転換」は、外来ＤＮＡが侵入し、受容体細胞を変化させるプロセスを意
味する。それは当分野において周知の種々の方法を用いて自然或いは人工的条件
下で生じさせることができる。形質転換は、外来核酸配列を原核或いは真核宿主
細胞に挿入するための任意の既知の方法に基づく場合がある。その方法は形質転
換される宿主細胞に基づいて選択され、限定はしないが、ウイルス感染、電気穿
孔法、熱ショック、リポフェクション並びに粒子照射を含む場合がある。そのよ
うに「形質転換された」細胞は、安定に形質転換された細胞を含んでおり、その
細胞では挿入されたＤＮＡが、自動的に複製するプラスミド或いはその宿主染色
体の一部の何れかとして複製されることができる。またその細胞は、限られた期
間だけ挿入されたＤＮＡ或いはＲＮＡを一時的に発現する細胞も含む。

【００７０】ここで用いるＨＵＰＭの「変異体」は、１つ或いはそれ以上のアミノ酸により
変更されるアミノ酸配列のことである。変異体は「保存的に」変化する場合があ
り、その場合置換されたアミノ酸は、例えばロイシンをイソロイシンに置き換え
る場合のように、類似の構造的及び化学的特性を有する。さらにまれにではある
が、変異体は、グリシンをトリプトファンに置き換える場合のように「非保存的
に」変化する場合がある。また類似の少数変異体は、アミノ酸欠失或いは挿入、
又はその両方を含む場合もある。生物学的及び免疫学的活性を無くすことなくア
ミノ酸残基が置換、挿入或いは欠失されるかを判定する際の指標は、当業者に周
知のコンピュータプログラム、例えばDNASTARソフトウエアを用いて見出すことができる。

【００７１】発明本発明は、新規のヒトプロテアーゼ分子（ＨＵＰＭ）、ＨＵＰＭをコードする
ポリヌクレオチド及び細胞増殖並びに免疫障害の診断、治療及び予防のためのこ
れらの組成物の使用法に基づいている。表１はここで開示する各ヒトプロテアー
ゼ分子に対する配列識別番号、インサイト社クローン識別番号及びｃＤＮＡライ
ブラリを示す。

【００７２】

【表１】本発明のＨＵＰＭ−１をコードする核酸は最初にアミノ酸配列アライメントに
対するコンピュータ検索を用いて骨髄ｃＤＮＡライブラリ（ＢＭＡＲＮＯＴ０２
）からのインサイト社クローン１３５３６０において同定された。コンセンサス
配列、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３は重複並びにまた伸長した核酸配列、インサイ
ト社クローン１３５３６０（ＢＭＡＲＮＯＴ０２）、１４４０６５４（ＴＨＹＲ
ＮＯＴ０３）、１９８５６７７（ＬＵＮＧＡＳＴ０１）、２０１６３１６（ＥＮ
ＤＣＮＯＴ０３）、２３０９３６９（ＮＧＡＮＮＯＴ０１）、３００３１０５（
ＴＬＹＭＮＯＴ０６）及び３６０４７９１（ＬＵＮＧＮＯＴ３０）に由来した。

【００７３】一実施例では、本発明はＳＥＱＩＤＮＯ：１のアミノ酸配列を有するポリ
ペプチドを含む。ＨＵＰＭ−１は長さが６３アミノ酸であり、図１Ａ及び図１Ｂ
に示されるように、ラットプロテアソームサブユニットＣ８（ＧＩ２０３２０
７）と化学的及び構造的に相同である。詳細にはＨＵＰＭ−１とＣ８とは５４％
同一性を有する。約ヌクレオチド６８８〜約ヌクレオチド７４４のＳＥＱＩＤＮＯ：１３のフラグメントは、ハイブリダイゼーションに有用である。ノーザ
ン分析は心臓血管、男女の生殖及び胃腸のｃＤＮＡライブラリにおいてこの配列
の発現を示す。これらのライブラリの約２５％は腫瘍性障害に関連し、その３３
％は炎症及び免疫反応に関連する。

【００７４】本発明のＨＵＰＭ−２をコードする核酸は最初にアミノ酸配列アライメントに
対するコンピュータ検索を用いてＴリンパ球ｃＤＮＡライブラリ（ＴＹＬＭＮＯ
Ｔ０２）からのインサイト社クローン４４７４８４において同定された。コンセ
ンサス配列、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４は重複並びにまた伸長した核酸配列、イ
ンサイト社クローン００７５６２（ＨＭＣ１ＮＯＴ０１）、２８８３６９（ＥＯ
ＳＩＨＥＴ０２）、４４７４８４（ＴＬＹＭＮＯＴ０２）、１３５７８７６（Ｌ
ＵＮＧＮＯＴ０９）、１６８８１５０（ＰＲＯＳＴＵＴ１０）、２５０６０７５
（ＣＯＮＵＴＵＴ０１）、２７４８３６４（ＬＵＮＧＴＵＴ１１）及びショット
ガン配列ＳＡＪＡ０２９６３、ＳＡＪＡ００４８７並びにＳＡＪＡ００３８４に
由来した。

【００７５】別の実施例では、本発明はＳＥＱＩＤＮＯ：２のアミノ酸を有するポリペ
プチドを含む。ＨＵＰＭ−２は長さが２６２アミノ酸であり、Ｎ９１に潜在的な
Ｎグリコシレーション部位及びＳ５５、Ｓ６３、Ｓ９７、Ｔ１６８においてカゼ
インキナーゼＩＩのための、またＳ９７、Ｓ１８６、Ｔ２４６においてプロテイ
ンキナーゼＣのための潜在的なリン酸化部位を有する。システインプロテアーゼ
に対する潜在的な触媒活性部位の３つがアミノ酸残基Ｃ３６、Ｄ１７６及びＨ１
７７に見出される。約ヌクレオチド２２４２〜約ヌクレオチド２２９２のＳＥＱＩＤＮＯ：１４のフラグメントはその分子の領域をコードする活性部位シス
テインを含み、ハイブリダイゼーションに有用である。ノーザン分析は心臓血管
、男女の生殖及び造血のｃＤＮＡライブラリにおいてこの配列の発現を示す。こ
れらのライブラリの約４８％は腫瘍性障害に関連し、その２４％は炎症及び免疫
反応に関連する。

【００７６】本発明のＨＵＰＭ−３をコードする核酸は最初にアミノ酸配列アライメントに
対するコンピュータ検索を用いて前立腺癌ｃＤＮＡライブラリ（ＰＲＯＳＴＵＴ
０３）からのインサイト社クローン７８９９２７において同定された。コンセン
サス配列、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５は重複並びにまた伸長した核酸配列、イン
サイト社クローン７８９９２７（ＰＲＯＳＴＵＴ０３）、１６４６９７６（ＰＲ
ＯＳＴＵＴ０９）及び１９７９７９１（ＬＵＮＧＴＵＴ０３）に由来した。

【００７７】別の実施例では、本発明はＳＥＱＩＤＮＯ：３のアミノ酸を有するポリペ
プチドを含む。ＨＵＰＭ−２は長さが３１４アミノ酸であり、アミノ酸残基Ｍ１
とＲ１９との間に１つの潜在的なシグナルペプチド配列を有する。Ｎ１６７、Ｎ
２００及びＮ２７３に潜在的なＮグリコシレーション部位、及びＴ８６、Ｓ１３
４、Ｓ１６Ｉ、Ｔ１９０及びＳ２９１においてカゼインキナーゼＩＩのための、
またＴ３９、Ｓ５８、Ｓ７３、Ｓ１２７及びＳ２１２においてプロテインキナー
ゼＣのための潜在的なリン酸化部位を有する。セリンプロテアーゼに特徴的な潜
在的な活性部位ヒスチジン及びセリン残基を含む配列は、ＨＵＰＭ−３のＬＴＡ
ＡＨ８２及びＧＤＳ２３８ＧＧＰに見出される。約ヌクレオチド２７１〜約ヌク
レオチド３３０のＳＥＱＩＤＮＯ：１５のフラグメントは活性部位ヒスチジ
ンを含み、ハイブリダイゼーションに有用である。ノーザン分析は心臓血管、造
血及び女性生殖のｃＤＮＡライブラリにおいてこの配列の発現を示す。このライ
ブラリの約８６％は腫瘍性障害に関連する。

【００７８】本発明のＨＵＰＭ−４をコードする核酸は最初にアミノ酸配列アライメントに
対するコンピュータ検索を用いて肺ｃＤＮＡライブラリ（ＬＵＮＧＡＳＴ０１）
からのインサイト社クローン８７７６１７において同定された。コンセンサス配
列、ＳＥＱＩＤＮＯ：１６は重複並びにまた伸長した核酸配列、インサイト
社クローン３７２３１４（ＬＵＮＧＮＯＴ０２）、６９８３３５（ＳＹＮＯＲＡ
Ｔ０３）、６９２７１８（ＬＵＮＧＴＵＴ０２）、８７７６１７（ＬＵＮＧＡＳ
Ｔ０１）及び１３９９４７０（ＢＲＡＩＴＵＴ０８）に由来した。

【００７９】別の実施例では、本発明はＳＥＱＩＤＮＯ：４のアミノ酸配列を有するポ
リペプチドを含む。ＨＵＰＭ−４は長さが４２０アミノ酸であり、残基Ｍ１〜Ｐ
２１に延在する潜在的なシグナルペプチド配列を有する。潜在的なＮグリコシレ
ーション部位がＮ９０、Ｎ１３３及びＮ３３６に見出される。潜在的なリン酸化
部位がカゼインキナーゼＩＩの場合にＳ６０及びＴ３３８に、またプロテインキ
ナーゼの場合にＳ１０６，Ｔ１４３，Ｔ３４６及びＳ３９３に見出される。２つ
の潜在的なロイシンジッパーパターンがＬ３０９及びＬ３１６において開始され
るのが見出されており、潜在的な細胞付着部位が配列Ｒ３８７ＧＤにおいて見出
される。アスパラギン酸プロテアーゼの特徴である２つの潜在的な活性部位アス
パラギン酸残基が残基Ｄ９６及びＤ２８３に見出される。約ヌクレオチド１６０
９〜約ヌクレオチド１６９２のＳＥＱＩＤＮＯ：１６のフラグメントは、ロ
イシンジッパードメインを含み、ハイブリダイゼーションに有用である。ノーザ
ン分析は心臓血管、造血及び男女生殖のｃＤＡＮライブラリにおいてこの配列の
発現を示す。このライブラリの約５６％が腫瘍性障害に関連し、１８％が炎症及
び免疫反応に関連し、１８％が外傷に関連する。

【００８０】本発明のＨＵＰＭ−５をコードする核酸は最初にアミノ酸配列アライメントに
対するコンピュータ検索を用いて腎臓腫瘍ｃＤＮＡライブラリ（ＫＩＤＮＴＵＴ
０１）からのインサイト社クローン９９９３２２において同定され、コンセンサ
ス配列、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７このクローンに由来した。

【００８１】別の実施例では、本発明はＳＥＱＩＤＮＯ：５のアミノ酸配列を有するポ
リペプチドを含む。ＨＵＰＭ−５は長さが２００アミノ酸であり、Ｎ１２１にお
いて潜在的なＮグリコシレーション部位を有し、さらにＳ３５においてｃＡＭＰ
−及びｃＧＭＰ−依存プロテインキナーゼのための、Ｓ１５０及びＴ１５８にお
いてカゼインキナーゼＩＩのための、またＴ１８０においてプロテインキナーゼ
Ｃのための潜在的なリン酸化部位を有する。セリンプロテアーゼのための潜在的
な活性部位セリンは配列ＧＤＳ１１２ＧＧＰにおいて見出される。活性部位セリ
ンドメインからの約ヌクレオチド７７５〜約ヌクレオチド８３８のＳＥＱＩＤＮＯ：１７のフラグメントは、ハイブリダイゼーションに有用である。ノーザ
ン分析は腎臓腫瘍（ＫＩＤＮＴＵＴ０１）において唯一この配列の発現を示す。

【００８２】本発明のＨＵＰＭ−６をコードする核酸は最初にアミノ酸配列アライメントに
対するコンピュータ検索を用いて結腸ｃＤＮＡライブラリ（ＣＯＬＮＮＯＴ１３
）からのインサイト社クローン１３３７０１８において同定された。コンセンサ
ス配列、ＳＥＱＩＤＮＯ：１８は重複並びにまた伸長した核酸配列、インサ
イト社クローン１２７１７２５（ＴＥＳＴＴＵＴ０２）、１３３７０１８（ＣＯ
ＬＮＮＯＴ１３）、５８６９８２及び５８８５９８（ＵＴＲＳＮＯＴ０１）に由
来した。

【００８３】別の実施例では、本発明はＳＥＱＩＤＮＯ：６のアミノ酸配列を有するポ
リペプチドを含む。ＨＵＰＭ−６は長さが４３５アミノ酸であり、残基Ｎ１２８
及びＮ１７６において潜在的なＮグリコシレーション部位を有し、さらにＴ２４
９においてｃＡＭＰ−及びｃＧＭＰ−依存プロテインキナーゼのための、Ｓ９３
及びＳ２３１においてカゼインキナーゼＩＩのための、Ｔ２６、Ｓ１４４、Ｔ１
４８、Ｓ１９７、Ｔ２００、Ｓ２６０、Ｔ３０３、Ｓ３５１及びＴ３６５におい
てプロテインキナーゼＣのための、またＹ５９及びＹ３６０においてチロシンキ
ナーゼのための潜在的なリン酸化部位を有する。セリンプロテアーゼのための潜
在的な活性部位ヒスチジン及びセリン残基を含む配列がそれぞれＬＴＡＡＨ２４
３Ｃ及びＧＤＳ３８５ＧＧＰにおいて見出される。活性部位ヒスチジン残基を含
む約ヌクレオチド９００〜約ヌクレオチド９４９のＳＥＱＩＤＮＯ：１８の
フラグメントはハイブリダイゼーションに有用である。ノーザン分析は胃腸及び
男女生殖のｃＤＮＡライブラリにおいてこれらの配列の発現を示している。これ
らのライブラリの約６５％は腫瘍性障害に関連し、２２％は免疫反応に関連する
。

【００８４】本発明のＨＵＰＭ−７をコードする核酸は最初にアミノ酸配列アライメントに
対するコンピュータ検索を用いて結腸ｃＤＮＡライブラリ（ＣＯＬＮＮＯＴ２７
）からのインサイト社クローン１７９８４９６において同定された。コンセンサ
ス配列、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９は重複並びにまた伸長した核酸配列、インサ
イト社クローン８１９８９６（ＫＥＲＡＮＯＴ０２）、１７９８４９６（ＣＯＬ
ＮＮＯＴ２７）及びショットガン配列ＳＡＧＡ００１１９に由来した。

【００８５】別の実施例では、本発明はＳＥＱＩＤＮＯ：７のアミノ酸配列を有するポ
リペプチドを含む。ＨＵＰＭ−７は長さが２６０アミノ酸であり、残基Ｍ１〜Ａ
２８に延在する潜在的なシグナルペプチド配列を有する。潜在的なＮミリストイ
ル化部位がＧ１９、Ｇ２０及びＧ３５におけるシグナルペプチド分割部位の付近
に見出される。潜在的なＮグリコシレーション部位はＮ１１０に見出され、潜在
的なリン酸化部位は、カゼインキナーゼＩＩの場合にＳ１１２、Ｓ１４０尾ｙ日
Ｓ１６２に、プロテインキナーゼＣの場合にＴ８０、Ｓ１６２、Ｓ２０１及びＳ
２３６に、チロシンキナーゼの場合にＹ１８８に見出される。潜在的にグリコサ
ミノグリカン付着部位はＳ１５５に見出され、セリンプロテアーゼのための潜在
的な活性部位ヒスチジン及びセリン残基を含む配列がそれぞれＬＴＡＡＨ７３Ｃ
及びＧＤＳ２１２ＧＧＰに見出される。活性部位ヒスチジンとセリン残基との間
に位置する、約ヌクレオチド５１７〜約ヌクレオチド５７４のＳＥＱＩＤＮ
Ｏ：１９のフラグメントはハイブリダイゼーションに有用である。ノーザン分析
は女性生殖、神経、肺及び結腸のｃＤＮＡライブラリにおいてこれらの配列の発
現を示す。これらのライブラリの約８３は腫瘍性障害に関連する。

【００８６】本発明のＨＵＰＭ−８をコードする核酸は最初にアミノ酸配列アライメントに
対するコンピュータ検索を用いて子宮ｃＤＮＡライブラリ（ＵＴＲＳＮＯＴ０８
）からのインサイト社クローン２０８２１４７において同定された。コンセンサ
ス配列、ＳＥＱＩＤＮＯ：２０は重複並びにまた伸長した核酸配列、インサ
イト社クローン５８６７７６（ＵＴＲＳＮＯＴ０１）、１７１９１９４（ＢＬＡ
ＤＮＯＴ０６）、２０８２１４７及び２０８２１７０（ＵＴＲＳＮＯＴ０８）、
３３５９８１４（ＰＲＯＳＴＵＴ１６）、及びショットガン配列ＳＡＧＡ０１３
６８及びＳＡＧＡ０１８９５に由来した。

【００８７】別の実施形態では、本発明はＳＥＱＩＤＮＯ：８のアミノ酸配列を有する
ポリペプチドを含む。ＨＵＰＭ−８は長さが１７５アミノ酸であり、残基Ｍ１と
Ｌ３０との間に延在する潜在的なシグナルペプチド配列を、Ｔ２８においてカゼ
インキナーゼＩＩのためのリン酸化部位を、Ｓ８１においてプロテインキナーゼ
Ｃのための潜在的なリン酸化部位を有する。潜在的な細胞付着部位がＲ７３ＤＧ
に見出され、活性部位セリン残基を含む潜在的なペプチダーゼサイン配列がＤＧ
ＨＨＧＨＳ１２８ＦＤにおいて見出される。触媒活性部位からの約ヌクレオチド
７５７〜約ヌクレオチド７８９のＳＥＱＩＤＮＯ：２０のフラグメントは、
ハイブリダイゼーションに有用である。ノーザン分析は胎児、胃腸、男女生殖及
び神経ｃＤＮＡライブラリにおけるこの配列の発現を示す。これらのライブラリ
の約３８％は腫瘍性障害に関連し、２４％は免疫反応に関連し、１４％は胎児発
育に関連する。

【００８８】本発明のＨＵＰＭ−９をコードする核酸は最初に、アミノ酸配列アライメント
に対するコンピュータ検索を用いて内皮細胞ｃＤＮＡライブラリ（ＥＮＤＣＮＯ
Ｔ０３）からのインサイト社クローン２１７０９６７において同定された。コン
センサス配列、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１は重複並びにまた伸長した核酸配列、
インサイト社クローン１６６７４６２（ＢＭＡＲＮＯＴ０３）、１８３０４６５
（ＴＨＰ１ＡＺＴ０１）、１８８８９８９（ＢＬＡＤＴＵＴ０７）、１９２８６
２７（ＢＲＳＴＮＯＴ０２）、２１７０９６７（ＥＮＤＣＮＯＴ０３）、３１２
５５９０（ＬＵＮＧＴＵＴ１２）及び３４５６５６７（２９３ＴＦ１Ｔ０１）に
由来した。

【００８９】別の実施例では、本発明はＳＥＱＩＤＮＯ：９のアミノ酸配列を有するポ
リペプチドを含む。ＨＵＰＭ−９は長さが５１９アミノ酸であり、Ｎ３６２ＴＤ
ＡＥＧＲＬにおいて潜在的なアミノペプチダーゼサイン配列を有しており、Ｄ３
６４及びＥ３６６は活性部位における亜鉛結合リガンドを表す。またＨＵＰＭ−
９はＮ７２及びＮ４１０において２つの潜在的なＮグリコシレーション部位を、
Ｓ２８、Ｓ５４、Ｓ１３８、Ｓ２２８、Ｓ２３８、Ｔ３６３、Ｔ４８７及びＴ５
０６においてカゼインキナーゼＩＩのための潜在的なリン酸化部位を、またＳ１
７４、Ｓ２２７、Ｓ２９２、Ｓ３４０、Ｔ４８７及びＴ５００においてプロテイ
ンキナーゼＣのための潜在的なリン酸化部位を有する。約ヌクレオチド６８８〜
約ヌクレオチド７４７のＳＥＱＩＤＮＯ：２１のフラグメントは、ハイブリ
ダイゼーションに有用である。ノーザン分析は心臓血管、男女生殖、造血及び神
経系ｃＤＮＡライブラリにおけるこの配列の発現を示す。これらのライブラリの
約４６％は腫瘍性障害に関連し、約３１％は免疫反応に関連する。

【００９０】本発明のＨＵＰＭ−１０をコードする核酸配列は最初にアミノ酸配列アライメ
ントに対するコンピュータ検索を用いて大動脈平滑筋細胞ｃＤＮＡライブラリ（
ＳＭＣＡＮＯＴ０１）からのインサイト社クローン２４８４２１８において同定
された。コンセンサス配列、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２は重複並びにまた伸長し
た核酸配列、インサイト社クローン１３５１０４３（ＬＡＴＲＴＵＴ０２）、１
３８１９８０（ＢＲＡＩＴＵＴ０８）、１４３２０２７（ＢＥＰＩＮＯＮ０１）、１４５７８
８１（ＣＯＬＮＦＥＴ０２）及び２４８４２１８（ＳＭＣＡＮＯＴ０１）に由来
した。

【００９１】別の実施例では、本発明はＳＥＱＩＤＮＯ：１０のアミノ酸配列を有する
ポリペプチドを含む。ＨＵＰＭ−１０は長さが３２７アミノ酸であり、Ｎ１２、
Ｎ５０及びＮ２１４において３つの潜在的なＮグリコシレーション部位を、Ｓ１
８、Ｔ９３、Ｔ１０７、Ｓ１６６、Ｓ１７０及びＴ２１６においてカゼインキナ
ーゼＩＩのための潜在的なリン酸化部位を、Ｔ２７２においてプロテインキナー
ゼＣのための潜在的なリン酸化部位を、さらにＹ１０４においてチロシンキナー
ゼのための潜在的なリン酸化部位を有する。ＨＵＰＭ−１０はヒトプロテアソー
ムサブユニットｐ４０（ＧＩ９７１２７０）と化学的及び構造的に相同である
。詳細にはＨＵＰＭ−１０とｐ４０は２３％相同性を有する。約ヌクレオチド１
３６〜約ヌクレオチド２１１のＳＥＱＩＤＮＯ：２２のフラグメントはハイ
ブリダイゼーションに有用である。ノーザン分析は心臓血管、男女生殖、神経系
及び造血のｃＤＮＡライブラリにおけるこの配列の発現を示す。これらのライブ
ラリの約４０％は腫瘍性障害に関連し、２４％は免疫反応に関連し、２２％は胎
児発育に関連する。

【００９２】本発明のＨＵＰＭ−１１をコードする核酸配列は最初にアミノ酸配列アライメ
ントに対するコンピュータ検索を用いて回腸ｃＤＮＡライブラリ（ＳＩＮＩＵＣ
Ｔ０１）からのインサイト社クローン２６８０５４８において同定された。コン
センサス配列、ＳＥＱＩＤＮＯ：２３は、重複並びにまた伸長した核酸配列
、インサイト社クローン７２５１００（ＳＹＮＯＯＡＴ０１）、７７９９７５（
ＭＹＯＭＮＯＴ０１）、１５２８２７４（ＵＣＭＣＬ５Ｔ０１）、１６５８９６
４（ＵＲＥＴＴＵＴ０１）、１７８１９３３（ＰＧＡＮＮＯＮ０２）、２６１８
７８６（ＧＢＬＡＮＯＴ０１）及び２６８０５４８（ＳＩＮＩＵＣＴ０１）に由
来した。

【００９３】別の実施例では、本発明はＳＥＱＩＤＮＯ：１１のアミノ酸配列を有する
ポリペプチドを含む。ＨＵＰＭ−１１は長さが４５８アミノ酸であり、ＶＴＮＡ
Ｈ１９８Ｖ及びＧＮＳ３０６ＧＧＰにおいてそれぞれセリンプロテアーゼのため
の潜在的な活性部位ヒスチジン及びセリン残基を含む２つの配列を有する。２つ
の潜在的なＮグリコシレーション部位がＮ１８１及びＮ３４９において見出され
、潜在的なリン酸化部位が、ｃＡＭＰ−及びｃＧＭＰ−依存プロテインキナーゼ
の場合にＳ３５０に、カゼインキナーゼＩＩの場合にＴ２２１、Ｔ２９０及びＳ
３８３に、またプロテインキナーゼＣの場合にＳ１３、Ｓ１４２、Ｔ２３１、Ｔ
３２２、Ｓ３３５及びＳ３５７に見出される。潜在的なヒスチジン活性部位残基
とセリン活性部位残基との間の約ヌクレオチド６９４〜約ヌクレオチド７５６の
ＳＥＱＩＤＮＯ：２３のフラグメントはハイブリダイゼーションに有用であ
る。ノーザン分析は胃腸、男女生殖及び神経系ｃＤＮＡライブラリにおけるこの
配列の発現を示す。これらのライブラリの約４３％は腫瘍性障害に関連し、約２
５％は免疫反応に関連する。

【００９４】本発明のＨＵＰＭ−１２をコードする核酸は最初にアミノ酸配列アライメント
に対するコンピュータ検索を用いて胎児腎臓ｃＤＮＡライブラリ（ＫＩＤＮＦＥ
Ｔ０１）からのインサイト社クローン２９５７９６９において同定された。コン
センサス配列、ＳＥＱＩＤＮＯ：２４は重複並びにまた伸長した核酸配列、
インサイト社クローン８７５９７３（ＬＵＮＧＡＳＴ０１）、９７８２２０（Ｂ
ＲＳＴＮＯＴ０２）、１３６２９５５（ＬＵＮＧＮＯＴ１２）、１５１１５８１
（ＬＵＮＧＮＯＴ１４）、２３５４５６６（ＬＵＮＧＮＯＴ２０）、２９５７９
６９（ＫＩＤＮＦＥＴ０１）及び３６７６８８０（ＰＬＡＣＮＯＴ０７）に由来
した。

【００９５】別の実施例では、本発明はＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸配列を有する
ポリペプチドを含む。ＨＵＰＭ−１２は長さが５３２アミノ酸であり、Ｎ１８２
、Ｎ３２９及びＮ３４８に３つの潜在的なＮグリコシレーション部位を、カゼイ
ンキナーゼＩＩの場合にＳ２０、Ｔ２０５、Ｔ３３１、Ｔ３５０及びＳ４４１に
、プロテインキナーゼＣの場合にＴ１４４、Ｓ１５０、Ｓ２７９、Ｓ３４１、Ｔ
３８８及びＳ５２６に潜在的なリン酸化部位を有する。潜在的なアミノペプチダ
ーゼサイン配列がＮ３４９ＴＤＡＥＧＲＬにおいて見出され、Ｄ３５１及びＥ３
５３はその活性部位における亜鉛結合リガンドを表す。潜在的なｃＡＴＰ−及び
ｃＧＴＰ−結合部位（Ｐ−ループ）もＧ２７７ＬＳＩＫＧＫＴに見出される。約
ヌクレオチド７０９〜約ヌクレオチド７８１のＳＥＱＩＤＮＯ：２４のフラ
グメントはハイブリダイゼーションに有用である。ノーザン分析は心臓血管、男
女生殖及び神経系ｃＤＮＡライブラリにおけるこの配列の発現を示す。これらの
ライブラリの約５５は腫瘍性障害に関連し、１２％は免疫反応に関連し、１４％
は胎児組織及び増殖性細胞株に関連する。

【００９６】また本発明は、ＨＵＰＭ変異体を含む。好適なＨＵＰＭ変異体はＨＵＰＭアミ
ノ酸配列に少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、最も好ま
しいＨＵＰＭ変異体はＨＵＰＭに少なくとも約９５％アミノ酸が同一である変異
体であり、ＨＵＰＭの少なくとも１つの機能的或いは構造的特徴を含むまた本発明はＨＵＰＭをコードするポリヌクレオチドを含む。特定の実施例で
は本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４、ＳＥＱ
ＩＤＮＯ：１５、ＳＥＱＩＤＮＯ：１６、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７、Ｓ
ＥＱＩＤＮＯ：１８、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９、ＳＥＱＩＤＮＯ：２
０、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２、ＳＥＱＩＤＮ
Ｏ：２３及びＳＥＱＩＤＮＯ：２４からなる群から選択される核酸配列から
なるポリヌクレオチドを含む。

【００９７】また本発明は、ＨＵＰＭをコードするポリヌクレオチド配列の変異配列を含む
。詳細には、そのようなポリヌクレオチド変異配列は、ＨＵＰＭをコードするポ
リヌクレオチド配列に少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％
、最も好ましくは少なくとも約９５％のポリヌクレオチド配列同一性を有するで
あろう。本発明の特定の態様は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３、ＳＥＱＩＤＮ
Ｏ：１４、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５、ＳＥＱＩＤＮＯ：１６、ＳＥＱＩ
ＤＮＯ：１７、ＳＥＱＩＤＮＯ：１８、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９、ＳＥ
ＱＩＤＮＯ：２０、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２
、ＳＥＱＩＤＮＯ：２３及びＳＥＱＩＤＮＯ：２４からなる群から選択
されるポリヌクレオチド配列に少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも
約９０％、最も好ましくは少なくとも約９５％のポリヌクレオチド配列同一性を
有するＳＥＱＩＤＮＯ：１３、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４、ＳＥＱＩＤ
ＮＯ：１５、ＳＥＱＩＤＮＯ：１６、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７、ＳＥＱ
ＩＤＮＯ：１８、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９、ＳＥＱＩＤＮＯ：２０、Ｓ
ＥＱＩＤＮＯ：２１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２、ＳＥＱＩＤＮＯ：２
３及びＳＥＱＩＤＮＯ：２４からなる群から選択されるポリヌクレオチド配
列の変異配列を含む。

【００９８】遺伝子コードの縮重の結果として、ＨＵＰＭをコードする多数のヌクレオチド
配列が生成され、その中には任意の既知の自然発生遺伝子のヌクレオチド配列に
最低限の相同性を示すものもあることは当業者には理解されよう。このように本
発明は、可能なコドン選択に基いて組み合わせを選択することにより形成される
ようになるヌクレオチド配列のあらゆる可能な変異配列を考慮する。これらの組
み合わせは、自然発生ＨＵＰＭのヌクレオチド配列に適用されるような標準的な
トリプレット遺伝子コードに従って形成され、全てのそのような変形例が明確に
開示されているものと考慮されたい。

【００９９】ＨＵＰＭをコードするヌクレオチド配列及びその変異配列は、適当に選択され
た厳密な条件下で、自然発生ＨＵＰＭのヌクレオチド配列にハイブリダイズでき
ることが好ましいが、実質的に異なるコドン使用法を有するＨＵＰＭをコードす
るヌクレオチド配列或いはその誘導体を生成することが有利な場合もある。コド
ンを選択して、特定のコドンが宿主によって利用される頻度に応じて、ペプチド
の発現が特定の原核或いは真核発現宿主において生じる割合を増加してもよい。
コードされたアミノ酸配列を変更することなくＨＵＰＭをコードするヌクレオチ
ド配列及びその誘導体を実質的に変更する他の理由は、より長い半減期のような
、自然発生配列から生成された転写物より望ましい特性を有するＲＮＡ転写物を
生成することを含む。

【０１００】また本発明は、合成化学的に完全に、ＨＵＰＭ及びその誘導体をコードするＤ
ＮＡ配列或いはそのフラグメントを生成することを含む。生成後、本特許出願の
出願時点で当分野において周知の薬剤を用いて、合成配列を、任意の多くの入手
可能な発現ベクタ及び細胞系に挿入することができる。さらに合成化学的に、Ｈ
ＵＰＭをコードする配列或いは任意のそのフラグメントに突然変異を導入するこ
ともできる。

【０１０１】また本発明にはに教示されるような種々の厳密性の条件下で請求されるヌクレ
オチド配列、詳細にはＳＥＱＩＤＮＯ：１３、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４、
ＳＥＱＩＤＮＯ：１５、ＳＥＱＩＤＮＯ：１６、ＳＥＱＩＤＮＯ：
１７、ＳＥＱＩＤＮＯ：１８、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９、ＳＥＱＩＤ
ＮＯ：２０、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２、ＳＥＱ
ＩＤＮＯ：２３及びＳＥＱＩＤＮＯ：２４或いはそのフラグメントに示さ
れるヌクレオチド配列にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチド配列
が含まれる（例えば、Wahl,G.M及びS.L.Berger(1987;Methods Enzymol. Vol. 15
2:399-407)及びKimmel, A.R.(1987;Methods Enzymol. Vol 152: 507-511)を参照
されたい）。

【０１０２】当分野において周知で、一般に入手可能なＤＮＡ配列決定のための方法が本発
明の任意の実施例を実行するために用いられる。これらの方法はDNA polymerase
I, Sequenase(US Biochemical Corp, Cleveland OH))のKlenow fragment、Taq
polymerase (Perkin Elmer)、耐熱性T7 polymerase (Amersham, Chicago IL)或いはGibco BRL (Gaithersburg MD)により市販されているELONGASE Amplificatio
n Systemのような組換えポリメラーゼとプルーフリーディングエキソヌクレアー
ゼの組み合わせのような酵素を利用する。このプロセスはHamilton Micro Lab 2
200 (Hamilton, Reno NV), Peltier Thermal Cycler (PTC200; MJ Research, Wa
tertown MA) 及びABI Catalyst並びに373及び377 DNA sequencers (Perkin Elme
r)のような機器を用いて自動化することが好ましい。

【０１０３】ＨＵＰＭをコードする核酸配列は、部分ヌクレオチド配列を利用して、かつプ
ロモータ及び調節エレメントのような上流配列を検出するための当分野において
既知の種々の方法を用いて伸長させることができる。例えば、用いられる場合が
ある１つの方法、「制限部位」ＰＣＲは、汎用プライマを用いて既知の位置に隣
接する未知の配列を回収する（Sarkar. G (1993) PCR Methods Applic 2:318-32
2）。詳細には、ゲノムＤＮＡがリンカー配列に対するプライマ及び既知の領域に特異なプライマの存在下で最初に増幅される。その後増幅された配列は、同じ
リンカープライマ及び第１のプライマに内在する別の特異なプライマを用いて第
２巡目のＰＣＲにかけられる。各回のＰＣＲの生成物は、適当なＲＮＡポリメラ
ーゼを用いて転写され、逆転写酵素を用いて配列決定される。

【０１０４】また逆ＰＣＲを利用して、既知領域に基づく多岐プライマを用いて配列を増幅
或いは伸長することもできる（Triglia T等(1988) Nucleic Acids Res 16:8186 ）。プライマはOLIGO4.06 Primer Analysis Software (National Biosciences I
nc, Plymouth MN)或いは別の適当なプログラムのような市販のソフトウエアを用
いて、長さが２２−３０ヌクレオチドになり、５０％以上のＧＣ含量を有し、さ
らに約６８−７２℃の温度で標的配列にアニールするように設計される。その方
法はいくつかの制限酵素を用いて、遺伝子の既知の領域に適当なフラグメントを
生成する。その際そのフラグメントは、分子内連結反応により環状にされ、ＰＣ
Ｒテンプレートとして用いられる。

【０１０５】用いられる場合がある別の方法は、ヒト及び酵母人工染色体ＤＮＡの既知の配
列に隣接するＤＮＡフラグメントをＰＣＲ増幅することを伴う捕獲ＰＣＲ（Lage
rstrom M 等(1991) PCR Methods Applic 1:111-19）である。この方法では、多数の制限酵素消化及び連結を用いて、ＰＣＲを実行する前に遺伝子操作された二
本鎖配列をＤＮＡ分子の未知のフラグメントに配置することができる。

【０１０６】未知の配列を回収するために用いられることがある別の方法は、Parker JD 等
(1991; Nucleic Acids Res 19:3055-3060)による方法である。さらにある方法はＰＣＲ、入れ子状プライマ及びPromoterFinderライブラリを用いて、ゲノムＤ
ＮＡを歩行することができる（Clontech, Palo Alto CA）。このプロセスにより
ライブラリをスクリーニングする必要がなくなり、イントロン／エクソン接合部
を見つける際に有用である。

【０１０７】完全長ｃＤＮＡに対してスクリーニングする際に、より長いｃＤＮＡを含むよ
うに大きさを選択されたライブラリを用いることが好ましい。またランダムに初
回抗原刺激を受けたライブラリも、それらが遺伝子の５´及び上流領域を含むよ
り大きな配列を含むという点で好ましい。ランダムに初回抗原刺激を受けたライ
ブラリの使用は、オリゴｄ（Ｔ）ライブラリが完全長ｃＤＮＡを産生しない状況
では特に好ましい。ゲノムライブラリは５´非転写制御領域に配列を伸長するた
めに有用な場合がある。

【０１０８】市販の毛細管電気泳動系を用いて、配列決定或いはＰＣＲ生成物の大きさを解
析したり、或いはそのヌクレオチド配列を確認することもできる。詳細には毛細
管配列決定法は、電気泳動分離のための流動性ポリマ、レーザにより活性化され
る（各ヌクレオチドに対して１種類の）４つの異なる蛍光性染料及びＣＣＤカメ
ラによる放射波長の検出を用いる場合がある。出力／光強度が適当なソフトウエ
ア（例えばGenotyper及びSequence Navigator 、Perkin Elmer）を用いて電気信
号に変換され、サンプルの装填からコンピュータ解析及び電子データ表示までの
全プロセスがコンピュータ制御される。毛細管電気泳動法は、特定のサンプルの
限定された量内に存在する場合があるＤＮＡの小片の配列決定に特に好ましい。

【０１０９】本発明の別の実施例では、ＨＵＰＭをコードするポリヌクレオチド配列或いは
そのフラグメントが、適当な宿主細胞においてＨＵＰＭ、そのフラグメント或い
はその機能的等価物の発現をもたらすために組換えＤＮＡ分子に用いられる場合
がある。ゲノムコードの固有の縮重により、概ね同一か或いは機能的に等価なア
ミノ酸配列をコードする他のＤＮＡ配列が生成され、この配列を用いてＨＵＰＭ
をクローニングし、発現することもできる。

【０１１０】非自然発生コドンを有するＨＵＰＭをコードするヌクレオチド配列を生成する
ことが有利な場合もあることは当業者には理解されよう。例えば、特定の原核或
いは真核宿主により選択されたコドンを選択して、タンパク質発現の割合を増加
したり、或いは自然発生配列から生成される転写物より長い半減期のような所望
の特性を有するＲＮＡ転写物を生成することもできる。

【０１１１】本発明のヌクレオチド配列は、限定はしないが、遺伝子生成物のクローニング
、プロセッシング並びにまた発現を修飾する変更を含む種々の理由によりＨＵＰ
Ｍをコードする配列を変更するために、当分野において周知の方法を用いて遺伝
子操作することができる。遺伝子フラグメント及び合成オリゴヌクレオチドのラ
ンダムなフラグメント化及びＰＣＲ再構築によるＤＮＡ混合を用いて、ヌクレオ
チド配列を遺伝子操作することができる。例えば、位置指定突然変異誘発を用い
て、新しい制限部位の挿入、グリコシレーションパターンの変更、コドン優先度
の変更、スプライシング変異配列の生成或いは突然変異の導入等を行うこともで
きる。

【０１１２】本発明の別の実施例では、ＨＵＰＭをコードする自然、修飾或いは組換えポリ
ヌクレオチドは、融合タンパク質をコードするために異種配列に結合されること
もできる。例えば、ＨＵＰＭ活性のインヒビタ用のペプチドライブラリをスクリ
ーニングするために、市販されている抗体により識別されるキメラＨＵＰＭタン
パク質をコードすることが有用な場合もある。また融合タンパク質は、ＨＵＰＭ
をコードする配列と異種タンパク質配列との間に位置する切断部位を含むように
遺伝子操作されることもでき、それによりＨＵＰＭは切断され、異種部分から離
れて精製されるようになる。

【０１１３】別の実施例では、当分野で周知の化学的方法を用いて、ＨＵＰＭをコードする
配列を、全体的に或いは部分的に合成することができる（Caruthers MH 等 (198
0) Nuc Acids Res Symp Ser 215-23, Horn T等(1980) Nuc Acids Res Symp Ser
225-232参照）。別法では、タンパク質自体が、ＨＵＰＭのアミノ酸配列或いは一部を合成するために化学的方法を用いて生成される場合がある。例えばペプチ
ド合成は種々の固相技術（Roberge JY 等(1995) Science 269:202-204）を用いて実行することができ、自動合成は、例えばABI 431A Peptide Synthesizer (Pe
rkin Elmer)を用いることにより実現することができる。さらにＨＵＰＭのアミノ酸配列或いはその任意の一部は、直接合成中に変更されるか、並びにまた他の
タンパク質或いはその任意の一部からの配列を用いる化学的方法により結合され
、変異体ポリペプチドを生成することもできる。

【０１１４】そのペプチドは、調製用高速液体クロマトグラフィにより実質的に精製される
ことができる（例えばChiez, R.M. and F.Z. Regnier (1990) Methods Enzymol.
182:392-421を参照されたい）。合成ペプチドの組成物は、アミノ酸分析或いは配列決定により確認することができる（例えばCreighton, T. (1983) Proteins,
Structures. and. Molecular Prop..erties, WH Freeman and Co., New York,
NYを参照されたい）。

【０１１５】生物学的に有効なＨＵＰＭを発現するために、ＨＵＰＭをコードするヌクレオ
チド配列或いはその機能的等価物が、適当な発現ベクタ、すなわち挿入されたコ
ード化配列の転写及び翻訳のために必要なエレメントを含むベクタ内に挿入され
てもよい。

【０１１６】当業者に周知の方法を用いて、ＨＵＰＭをコードする配列及び適当な転写或い
は翻訳制御エレメントを含む発現ベクタを作製することができる。これらの方法
は、ｉｎｖｉｔｒｏ組換えＤＮＡ技術、合成技術並びにｉｎｖｉｖｏゲノム
組換えを含む（例えば、Sambrook,等(1989) Molecular Cloning. A Laboratory
Manual, Cold Spring Harbor Press, Plainview, NY, ch. 4, 8, and 16-17;並びにAusubel, F.M.等(1995, and periodic supplements) current Protocols in
Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York, NY, ch. 9, 13, and 16を
参照されたい）。

【０１１７】種々の発現ベクタ／宿主系を利用して、ＨＵＰＭをコードする配列を含有し、
発現する場合もある。これらは、限定はしないが、組換えバクテリオファージ、
プラスミド或いはコスミドＤＮＡ発現ベクタと形質転換されたバクテリア、酵母
発現ベクタと形質転換された酵母、ウイルス発現ベクタで感染した昆虫細胞系（
例えばバキュロウイルス）、ウイルス発現ベクタと形質転換された植物細胞系（
例えば、カリフラワーモザイクウイルスＣａＭＶ、タバコモザイクウイルスＴＭ
Ｖ）或いはバクテリア発現ベクタと形質転換された植物細胞系（例えば、Ｔｉ或
いはｐＢＲ３２２プラスミド）又は動物細胞系のような微生物を含む。本発明は
用いられる宿主細胞により制限されない。

【０１１８】「制御エレメント」或いは「調節配列」はベクタの非翻訳領域、すなわちエン
ハンサ、プロモータ並びに５´及び３´非翻訳領域であり、転写及び翻訳を実行
するために宿主細胞タンパク質と相互作用する。そのようなエレメントは強度及
び特異性において異なる場合がある。用いられるベクタ系及び宿主により、構成
的及び誘導性プロモータを含む、任意の数の適当な転写及び翻訳エレメントを用
いることができる。例えばバクテリア系においてクローニングする際に、Bluesc
ript ファージミド(Stratagene, LaJolla CA) のハイブリッドｌａｃＺプロモー
タ或いはpSport 1 プラスミド(Gibco BRL)等の誘導性プロモータを用いることが
できる。バキュロウイルスポリヘドリン（polyhedrin）プロモータは昆虫細胞に
用いられる。植物細胞のゲノムに由来するプロモータ或いはエンハンサ（例えば
熱ショック、ＲＵＢＩＳＣＯ及び貯蔵タンパク質遺伝子）或いは植物ウイルスに
由来するプロモータ或いはエンハンサ（例えばウイルス性プロモータ或いはリー
ダ配列）が、ベクタにクローニングされる場合もある。哺乳動物細胞系では、哺
乳動物遺伝子或いは哺乳動物ウイルスに由来するプロモータが好ましい。ＨＵＰ
Ｍをコードする配列の多数の複製を含む細胞株を発生させる必要がある場合には
、ＳＶ４０或いはＥＢＶ系のベクタを適当な選択可能マーカと共に用いることが
できる。

【０１１９】バクテリア系では、いくつかの発現ベクタが、ＨＵＰＭのための使用に応じて
選択されてもよい。例えば大量のＨＵＰＭが抗体を誘導するために必要とされる
とき、容易に精製される融合タンパク質を高レベルで発現させるベクタを用いる
ことができる。そのようなベクタは、限定するわけではないが、ＨＵＰＭをコー
ドする配列が、アミノ末端Ｍｅｔ及び後続のβ−ガラクトシダーゼの７残基に対
する配列の枠内のベクタに結合されることができ、ハイブリッドタンパク質が生
成される、多機能Ｅ．ｃｏｌｉクローニング及びBluescript(Stratagene)のよう
な発現ベクタ、並びにｐＩＮベクタ（Van Heeke & Schuster (1989) J Biol Che
m 264:5503-5509）等を含む。またｐＧＥＸベクタ（Promega, Madison WI）を用
いて、外来のポリペプチドをグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）を
有する融合タンパク質として発現してもよい。一般にそのような融合タンパク質
は可溶性であり、グルタチオン−アガロースビードへの吸収及びそれに後続する
遊離グルタチオンの存在時の溶出により分離した細胞から容易に精製することが
できる。そのような系内で形成されるタンパク質はヘパリン、トロンビン或いは
第ＸＡ因子プロテアーゼ切断部位を含むように設計され、対象のクローニングさ
れたポリペプチドが自由にＧＳＴ成分から遊離されるようにする。

【０１２０】酵母、サッカロミセス‐セレビジエでは、α因子、アルコールオキシダーゼ及
びＰＧＨのような構成的及び誘導性プロモータを含むいくつかのベクタを用いる
ことができる（例えば、Ausubel 等 (上記)及びGrant等(1987;Methods in Enzym
ology 153:516-544)を参照されたい）。

【０１２１】植物発現ベクタが用いられる場合には、ＨＵＰＭをコードする配列の発現は、
いくつかのプロモータの任意のものにより行われる。例えばＣａＭＶの３５Ｓ及
び１９Ｓプロモータのようなウイルス性プロモータは単独で、或いはＴＭＶから
のω−リーダ配列と共に用いることができる（Takamatsu 等 (1987) EMBO J 6:3
07-311）。別法では、ＲＵＢＩＳＣＯの小サブユニットのような植物プロモータ
或いは熱ショックプロモータ（Coruzzi 等 (1984) EMBO J 3:1671-1680; Brogli
e 等 (1984) Science 224:838-843及びWinter J and Sinibaldi RM (1991) Resu
lts Probl Cell Differ 17:85-105）を用いる場合もある。これらの構成体は、直接ＤＮＡ形質転換或いは病原体媒介形質移入により植物細胞内に導入されるこ
とができる。その技術は一般に入手できるいくつかの概説に記載される（例えば
、Hobbs S or Murry LE in McGraw Hill Yearbook of Science and Technology
(1992) McGraw Hill New York NY, pp. 191-196を参照されたい）。

【０１２２】また昆虫系もＨＵＰＭを発現するために用いることができる。例えばある系で
は、Autographa californica核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）をベクタとして
用いて、ヨトウガ（Spodoptera frugiperda）細胞或いはイクラサキンウワバ幼虫（Trichoplusia larvae）において外来遺伝子を発現する。ＨＵＰＭをコードする配列は、ポリヘドリン（polyhedrin）遺伝子のようなウイルスの非必須領域
にクローニングし、ポリヘドリンプロモータの制御下に置かれる。ＨＵＰＭをコ
ードする配列を有効に挿入することにより、ポリヘドリン遺伝子は非活性になり
、コートタンパク質を欠如する組換えウイルスが生成される。その後組換えウイ
ルスを用いて、ＨＵＰＭが発現される、例えばヨトウガ細胞或いはイクラサキン
ウワバ幼虫を感染させる（例えば、Engelhard EK 等 (1994), Proc Nat Acad Sc
i 91:3224-3227を参照されたい）。

【０１２３】哺乳類宿主細胞では、いくつかのウイルス性発現系が利用される場合がある。
アデノウイルスが発現ベクタとして用いられる場合には、ＨＵＰＭをコードする
配列は、後期プロモータ及び３連のリーダ配列からなるアデノウイルス転写／翻
訳複合体に結合される場合がある。ウイルスゲノムの非必須Ｅ１或いはＥ３領域
内の挿入により、感染した宿主細胞においてＨＵＰＭを発現することができる生
ウイルスを得ることができる（例えば、Logan and Shenk (1984) Proc Natl Aca
d Sci 81:3655-59を参照されたい）。さらにラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）エン
ハンサのような転写エンハンサを用いて、哺乳動物宿主細胞内の発現を増加させ
ることができる。

【０１２４】またヒト人工染色体（ＨＡＣ）を用いて、プラスミドに含まれ、発現させるこ
とができるＤＮＡのより大きなフラグメントを送達することもできる。治療のた
め、６〜１０ＭのＨＡＣが構成され、従来の送達方法（リポソーム、ポリカチオ
ンアミノポリマ或いはベシクル）を用いて送達される。

【０１２５】また特異な開始シグナルを用いて、ＨＵＰＭをコードする配列のより効率的な
転写を達成することもできる。そのシグナルはＡＴＧ開始コドン及び隣接配列を
含む。ＨＵＰＭをコードする配列、その開始コドン及び上流配列が適当な発現ベ
クタ内に挿入される場合には、追加の転写或いは翻訳制御シグナルは不要である
。しかしながらコードする配列或いはその一部のみが挿入される場合には、ＡＴ
Ｇ開始コドンを含む外来の翻訳制御シグナルが与えられるべきである。さらに開
始コドンは、全挿入物を確実に転写するために、正確な読み枠内に置かれなけれ
ばならない。外来転写エレメント及び開始コドンは、自然及び合成両方の種々の
起源からなることができる。発現の効率は、論文に記載されるように、使用され
る特定の細胞系に適したエンハンサを含有することにより高められる場合がある
（例えば、Scharf D 等 (1994) Results Probl Cell Differ 20: 125-162を参照
されたい）。

【０１２６】さらに宿主細胞株は、挿入した配列の発現を調節できるように、或いは所望の
ように発現したタンパク質を処理できるように選択することができる。そのよう
なポリペプチドの調節は、限定はしないが、アセチル化、カルボキシル化、グリ
コシル化、リン酸化、脂質化或いはアシル化を含む。またタンパク質の「プレプ
ロ」形態を切断する翻訳後プロセッシングを用いて、正確な挿入、折りたたみ並
びにまた機能を促進することができる。翻訳後活性のために特異な細胞機構及び
特性機構を有する種々の宿主細胞（例えばＣＨＯ、ＨｅＬａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ
２９３及びＷＩ３８）がAmerican Type Culture Collection（ATTC; Bethesda,
MD）から市販されており、外来タンパク質の正確な調節及びプロセッシングを確
実にするように選択することができる。

【０１２７】長期間組換え体タンパク質を歩留まり高く生産する場合、安定した発現が望ま
しい。例えば、ＨＵＰＭを安定して発現する細胞株は、複製或いは内性発現エレ
メントのウイルス起源及び同じ或いは別のベクタにおける選択可能マーカ遺伝子
を含む発現ベクタを用いて形質転換することができる。ベクタの導入に続いて、
細胞を強化培地内で１〜２日間成長させ、その後選択培地に切り替えるようにす
る。選択可能マーカの目的は、選択への耐性を与えることであり、その存在によ
り、導入された配列を有効に発現する細胞が成長し、回収されるようになる。安
定して形質転換された細胞の耐性クローンは、細胞タイプに適した組織培養技術
を用いて増殖させることができる。

【０１２８】任意の数の選択系を用いて、形質転換された細胞株を回収することができる。
これらは、限定はしないが、それぞれｔｋ^-細胞或いはａｐｒｔ^-細胞において用
いることができる単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Wigler,M等(1977) C
ell 11:223-32）及びアデニンフォスフォリボシール転換酵素遺伝子（Lowy I等(
1980) Cell 22:817-23）含む。また代謝拮抗物質、抗生物質或いは除草剤耐性を
選択のための基準として用いることができる。例えば、ｄｈｆｒはメトトレキセ
ートへの耐性を与え（Wigler M等(1980)Proc Natl Acad Sci 77:3567-70）、ｎｐｔはアミノグリコシッドネオマイシン及びＧ−４１８への耐性を与え（Colber
e-Garapin F等(1981) J Mol Biol 150:1-14）、ａｌｓ或いはｐａｔはそれぞれクロルスルフロン及びホスフィノトリシン（phosphinotricin）アセチル基転移酵素への耐性を与える（Murry、前掲）。さらに選択可能遺伝子が記載されており、例えば、ｔｒｐＢにより細胞がトリプトファンの代わりにインドールを利用
できるようになり、ｈｉｓＤにより細胞がヒスチジンの代わりにヒスチノール（
histinol）を利用できるようになる（Hartman S.C及びR.C Mulligan(1988)Proc
Natl Acad Sci 85:8047-51）。最近では、アントシアニン、β−グルクロニダー
ゼ及びその基質ＧＵＳ並びにルシフェラーゼ及びその基質ルシフェリンのような
マーカと共に可視マーカを使用することが普及しており、転換体を同定するのみ
ならず、特異なベクタ系に起因する一過性或いは安定したタンパク質発現の量を
定量するために幅広く用いられる（Rhodes CA等(1995) Methods Mol Biol 55:12
1-131）。

【０１２９】マーカ遺伝子発現の存否は、対象の遺伝子が存在することを示唆するが、その
存在及び発現は確認される必要がある。例えば、ＨＵＰＭをコードする配列がマ
ーカ遺伝子配列内に挿入される場合には、ＨＵＰＭをコードする配列を含む組換
え細胞は、マーカ遺伝子機能の欠如により同定されることができる。別法では、
マーカ遺伝子は、単一のプロモータの制御下でＨＵＰＭをコードする配列と直列
に配置される。誘導及び選択に応じたマーカ遺伝子の発現は通常、同様に直列型
遺伝子の発現を示す。

【０１３０】別法では、ＨＵＰＭをコードする核酸配列を含み、ＨＵＰＭを発現する宿主細
胞は、当業者に知られる種々の手順により同定されることができる。この手順は
、限定はしないが、核酸或いはタンパク質の検出並びにまた定量化のための膜、
溶液或いはチップ系技術を含むＤＮＡ−ＤＮＡ或いはＤＮＡ−ＲＮＡハイブリダ
イゼーション及びタンパク質バイオアッセイ或いはイムノアッセイ技術を含む。

【０１３１】ＨＵＰＭをコードするポリヌクレオチド配列の存在は、ＨＵＰＭをコードする
ポリヌクレオチドのプローブ或いはフラグメントを用いるＤＮＡ−ＤＮＡ或いは
ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリダイゼーション或いは増幅により検出されることができ
る。核酸増幅系アッセイは、ＨＵＰＭをコードするＤＮＡ或いはＲＮＡを含む形
質転換体を検出するために、ＨＵＰＭをコードする配列に基づくオリゴヌクレオ
チド或いはオリゴマを使用することを伴う。

【０１３２】ＨＵＰＭの発現を検出し、測定するための種々のプロトコルは、そのタンパク
質に対して特異なポリクローナル抗体或いはモノクローナル抗体のいずれかを用
いており、当業者には周知である。例えば酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、
ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、蛍光標示式細胞分取（ＦＡＣＥ）などである
。ＨＵＰＭにおける２つの非干渉性エピトープに反応するモノクローナル抗体を
用いる２部位のモノクローナル系イムノアッセイ（monoclonal-based immunoass
ay）が好ましいが、結合タンパク競合測定法が用いられてもよい（例えば、Hamp
ton R 等(1990, Serological Methods, a Laboratory Manual, APS Press, St.
Paul MN)及びMaddox DE 等 (1983, J Exp'Med 158:1211-1216を参照されたい)。

【０１３３】幅広い標識及び接合技術が当業者には知られており、種々の核酸及びアミノ酸
検定法において用いることができる。ＨＵＰＭをコードするポリヌクレオチドに
関連する配列を検出するための標識化ハイブリダイゼーション或いはＰＣＲプロ
ーブを生成するための手段は、オリゴ標識化、ニックトランスレーション、末端
標識化或いは標識化ヌクレオチドを用いるＰＣＲ増幅を含む。別法では、ＨＵＰ
Ｍをコードする配列或いはその任意の一部が、ｍＲＮＡプローブの生成のために
ベクタ内にクローニングされる場合もある。そのようなベクタが当分野において
知られ、市販されており、Ｔ７、Ｔ３或いはＳＰ６のような適当なＲＮＡポリメ
ラーゼ及び標識されたヌクレオチドを加えることによりｉｎｖｉｔｒｏでＲＮ
Ａプローブを合成するために用いることができる。これらの手順は種々の市販の
キット（Pharmacia&upjohn (Kalamazoo,MI)、Promega (Madison WI)及びUS Bioc
hemical Corp (Cleveland OH)）を用いて行われる。適当なリポータ分子或いは標識が用いられる場合もあり、放射性核種、酵素、蛍光剤、化学発光剤或いは色
素生産剤並びに基質、コファクタ、インヒビタ、磁気粒子等を含む。

【０１３４】ＨＵＰＭをコードするヌクレオチド配列と形質転換された宿主細胞は、細胞培
養からのタンパク質の発現及び回収のために適した条件下で培養されることがで
きる。組換え体細胞により生成されるタンパク質は、用いられる配列並びにまた
ベクタにより、分泌されるか或いは細胞内に含有される。ＨＵＰＭをコードする
ポリヌクレオチドを含む発現ベクタは、原核細胞膜或いは真核細胞膜を介してＨ
ＵＰＭの分泌を促すシグナル配列を含むように設計することができることは当業
者には理解されよう。他の組換え構造を用いて、可溶性タンパク質の精製を容易
にするポリペプチド領域をコードするヌクレオチド配列にＨＵＰＭをコードする
配列を結合する場合もある。そのような精製を容易にする領域は、限定はしない
が、固定化金属上で精製できるようにするヒスチジン−トリプトファンモジュー
ルのような金属キレート化ペプチド、固定化免疫グロブリン上で精製できるよう
にするタンパク質Ａドメイン及びＦＬＡＧＳ伸長／親和性精製系（Immunex Corp
., Seatile, WA）において用いられるドメインを含む。精製ドメインとＨＵＰＭ
との間に第ＸＡ因子或いはエンテロキナーゼ（Invitrogen, San Diego, CA）に対して特異な配列のような分割可能リンカー配列を含有することにより、精製が
容易になる場合もある。１つのそのような発現ベクタが、ＨＵＰＭ及びチオレド
キシン或いはエンテロキナーゼ切断部位に先行する６ヒスチジン残基をコードす
る核酸を含む融合タンパク質の発現をもたらす。ヒスチジン残基は、ＩＭＡＣ（
Porath, J. 等 (1992, Prot. Exp. Purif. 3:263-281)に記載されるような固定化金属イオン親和性クロマトクグラフィ）において精製を容易にし、一方エンテ
ロキナーゼ切断部位は融合タンパク質からのＨＵＰＭを精製するための手段を提
供する（例えば、Kroll,D.J.等(1993;DNA Cell Biol. 12:441-453を参照されたい)。

【０１３５】組換え生成物に加えて、ＨＵＰＭのフラグメントは、固相技術（Merrifield J
(1963) J Am Chem Soc 85:2149-2154）を用いる直接ペプチド合成により生成さ
れる場合もある。タンパク質合成は手動技術を用いて或いは自動化により実行さ
れることができる。例えば、Applied Biosystems 431A Peptide Synthesizer (P
erkin Elmer)を製造者により提供される取扱説明書に従って用いることにより自
動合成を実現してもよい。ＨＵＰＭの種々のフラグメントは化学的に個別に合成
されるか、或いは化学的方法を用いて結合され、完全長分子を生成することがで
きる。

【０１３６】治療本発明のヒトプロテアーゼ分子間には化学的及び構造的相同性がある。さらに
、ＨＵＰＭは癌に関連する増殖細胞タイプ及び免疫反応において発現される。そ
れゆえＨＵＰＭは細胞増殖性障害及び免疫障害においてある役割を有するものと
考えられる。それゆえＨＵＰＭが発現されている、或いは細胞増殖を促進してい
る細胞増殖或いは免疫障害では、ＨＵＰＭの発現を減少させることが望ましい。
ＨＵＰＭの発現が減少した細胞増殖或いは免疫障害では、タンパク質を供給し、
発現を増加させることが望ましい。

【０１３７】それゆえ一実施例では、ＨＵＰＭのアンタゴニストを被検者に投与して、ＨＵ
ＰＭの発現或いは活性の増加に関連する細胞増殖性障害を治療或いは予防するこ
とができる。そのような障害は、限定はしないが、動脈硬化症、アテローム性動
脈硬化症、滑液泡炎、肝硬変、肝炎、混合型結合組織病（ＭＣＴＤ）、骨髄線維
症、発作性夜間血色素尿症、真性多血症、乾癬、原発性血小板血症、及び腺癌、
白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫、肉腫、及び奇形癌、具体的には、副腎、膀
胱、骨、骨髄、脳、乳房、子宮頚、胆嚢、神経節、消化管、心臓、腎臓、肝臓、
肺、筋肉、卵巣、膵臓、副甲状腺、陰茎、前立腺、唾液腺、皮膚、脾臓、精巣、
胸腺、甲状腺、及び子宮の癌が含まれる。一態様では、ＨＵＰＭに特異に結合す
る抗体が、アンタゴニストとして直接、或いはＨＵＰＭを発現する細胞或いは組
織に医薬品因子を運ぶためのターゲティング或いは送達機構として間接的に用い
られる場合がある。

【０１３８】さらに別の実施例では、ＨＵＰＭをコードするポリヌクレオチドの相補配列を
発現するベクタを被検者に投与して、限定はしないが上記障害を含む細胞増殖性
障害を治療或いは予防することができる。

【０１３９】ＨＵＰＭのアンタゴニストを被検者に投与してＨＵＰＭの発現或いは活性の増
加に関連する免疫障害を治療或いは予防することができる。そのような障害は、
限定はしないが、アジソン病、成人呼吸窮迫症候群、アレルギー、強直性脊椎炎
、アミロイド症、貧血症、喘息、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性溶血性貧
血、自己免疫性甲状腺炎、気管支炎、胆嚢炎、接触性皮膚炎、クローン病、アト
ピー性皮膚炎、皮膚筋炎、糖尿病、肺気腫、結節性紅斑、萎縮性胃炎、糸球体腎
炎、グッドパスチャー症候群、痛風、グレーブス病、橋本甲状腺炎、過好酸球増
加症、過敏性腸症候群、紅班性狼瘡、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋または
心膜の炎症、変形性関節炎、骨粗鬆症、膵炎、多発筋炎、リウマチ性関節炎、強
皮症、シェーグレン症候群、全身性アナフィラキシ、全身性紅班性狼瘡、全身性
硬化症、潰瘍性大腸炎、ウェルナー症候群、及び癌、血液透析、体外循環の合併
症、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、寄生虫感染、原虫感染、及び蠕虫感染
；及び外傷を含む場合もある。

【０１４０】さらに別の実施例では、ＨＵＰＭをコードするポリヌクレオチドの相補配列を
発現するベクタを被検者に投与して、限定はしないが上記障害を含む免疫障害を
治療或いは予防することができる。

【０１４１】別の実施例では、ＨＵＰＭ或いはそのフラグメント又は誘導体を被検者に投与
して、ＨＵＰＭの発現或いは活性の減少に関連する細胞増殖性障害を治療或いは
予防することができる。そのような障害は、限定はしないが、動脈硬化症、アテ
ローム性動脈硬化症、滑液泡炎、肝硬変、肝炎、混合型結合組織病（ＭＣＴＤ）
、骨髄線維症、発作性夜間血色素尿症、真性多血症、乾癬、原発性血小板血症、
及び腺癌、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫、肉腫、及び奇形癌、具体的には
、副腎、膀胱、骨、骨髄、脳、乳房、子宮頚、胆嚢、神経節、消化管、心臓、腎
臓、肝臓、肺、筋肉、卵巣、膵臓、副甲状腺、陰茎、前立腺、唾液腺、皮膚、脾
臓、精巣、胸腺、甲状腺、及び子宮の癌が含まれる。

【０１４２】別の実施例では、ＨＵＰＭ或いはそのフラグメント又は誘導体を発現すること
ができるベクタを被検者に投与して、限定はしないが上記障害を含む細胞増殖性
障害を治療或いは予防することができる。

【０１４３】さらに別の実施例では、適当な医薬品担体とともに実質的に精製されたＨＵＰ
Ｍを含む医薬品組成物を被検者に投与して、限定はしないが上記障害を含む細胞
増殖性障害を治療或いは予防することができる。

【０１４４】さらに別の実施例では、ＨＵＰＭの活性を調節するアゴニストを被検者に投与
して、限定はしないが上記障害を含む細胞増殖性障害を治療或いは予防すること
ができる。

【０１４５】別の実施例では、ＨＵＰＭ或いはそのフラグメント又は誘導体を被検者に投与
して、ＨＵＰＭの発現或いは活性の減少に関連する細胞増殖性障害を治療或いは
予防することができる。そのような障害は、限定はしないが、アジソン病、成人
呼吸窮迫症候群、アレルギー、強直性脊椎炎、アミロイド症、貧血症、喘息、ア
テローム性動脈硬化症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性甲状腺炎、気管支炎
、胆嚢炎、接触性皮膚炎、クローン病、アトピー性皮膚炎、皮膚筋炎、糖尿病、
肺気腫、結節性紅斑、萎縮性胃炎、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、痛風
、グレーブス病、橋本甲状腺炎、過好酸球増加症、過敏性腸症候群、紅班性狼瘡
、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋または心膜の炎症、変形性関節炎、骨粗鬆
症、膵炎、多発筋炎、リウマチ性関節炎、強皮症、シェーグレン症候群、全身性
アナフィラキシ、全身性紅班性狼瘡、全身性硬化症、潰瘍性大腸炎、ウェルナー
症候群、及び癌、血液透析、体外循環の合併症、ウイルス感染、細菌感染、真菌
感染、寄生虫感染、原虫感染、及び蠕虫感染；及び外傷を含む場合もある。

【０１４６】別の実施例では、ＨＵＰＭ或いはそのフラグメント又は誘導体を発現すること
ができるベクタを被検者に投与して、限定はしないが上記障害を含む免疫障害を
治療或いは予防することができる。

【０１４７】さらに別の実施例では、適当な医薬品担体とともに実質的に精製されたＨＵＰ
Ｍを含む医薬品組成物を被検者に投与して、限定はしないが上記障害を含む免疫
障害を治療或いは予防することができる。

【０１４８】さらに別の実施例では、ＨＵＰＭの活性を調節するアゴニストを被検者に投与
して、限定はしないが上記障害を含む免疫障害を治療或いは予防することができ
る。

【０１４９】他の実施例では、本発明のタンパク質、アンタゴニスト、抗体、アゴニスト、
相補配列或いはベクタの任意のものが、他の適当な治療薬剤と組み合わせて投与
される場合もある。併用療法において用いるのに適した薬剤の選択は、従来の製
薬原理に基づいて当業者により行われることができる。治療薬剤の組み合わせは
相互依存的に作用し、上記種々の疾患の治療及び予防に影響を与えるようになる
。このアプローチを用いて、少ない投与量の薬剤で治療有効度を達成し、それに
より有害な副作用に対する危険性を低減することができる。

【０１５０】ＨＵＰＭのアンタゴニストは当業者に広く知られた方法を用いて生成されるこ
とができる。詳細には、精製されたＨＵＰＭを用いて抗体を生成するか、或いは
医薬品因子のライブラリをスクリーニングし、ＨＵＰＭと特異に結合するものを
同定することができる。

【０１５１】ＨＵＰＭに対する抗体は当業者に周知の方法を用いて生成することができる。
そのような抗体は、限定はしないが、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ
、一本鎖、Ｆａｂフラグメント及びＦａｂ発現ライブラリにより生成されるフラ
グメントを含む場合がある。中和性抗体（ダイマ形成を抑制する抗体）が特に治
療上の使用に適している。

【０１５２】抗体を生成する場合、ヤギ、ウサギ、ラット、マウス、ヒト等を含む種々の宿
主を、ＨＵＰＭ或いはその任意のフラグメント又は免疫原特性を有するオリゴペ
プチドを注射することにより免疫することができる。宿主種に応じて、種々のア
ジュバントを用いて免疫学的反応を高めることができる。そのようなアジュバン
トは、限定はしないが、フロイントアジュバント、水酸化アルミニウムのような
ミネラルゲル、及びリゾレシチン、プルロニックポリオル、ポリアニオン、ペプ
チド、油乳剤、キーホールリンペットヘモシアニン及びジニトロフェノールのよ
うな表面活性物質を含む。ヒトに用いられるアジュバントの中では、ＢＣＧ（カ
ルメット−ゲラン杆菌）及びコリネバクテリウム‐パルヴムが特に好ましい。

【０１５３】ＨＵＰＭに対する抗体を誘発するために用いられるオリゴペプチド、ペプチド
、或いはフラグメントは、少なくとも５アミノ酸からなるアミノ酸配列を有し、
より好ましくは少なくとも１０アミノ酸からなるアミノ酸配列を有する。それら
は自然タンパク質のアミノ酸配列の一部と同一であり、小さな自然発生分子から
なる完全なアミノ酸配列を含むことが好ましい。ＨＵＰＭアミノ酸の短い伸展部
はキーホールリンペットヘモシアニンのような別のタンパク質の伸展部及びキメ
ラ分子に対して生成される抗体と融合されることもできる。

【０１５４】ＨＵＰＭに対するモノクローナル抗体は、培養中の持続細胞株による抗体分子
の生成を実現する任意の技術を用いて調製することができる。これらの技術は、
限定はしないが、ハイブリドーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術及びＥＢ
Ｖ−ハイブリドーマ技術を含む（Koehler等(1975) Nature 256:495-497、Kozbor
等 (1985) J.Immunol Methods 81:31-42、Cote等(1983) Proc Natl Acad Sci 8
0:2026-2030、Cole, S.P 等 (1984) Mol. Cell Biol.62:109-120）。

【０１５５】さらに「キメラ抗体」を生成するために開発された技術、適当な抗原特異性及
び生物活性を有する分子を得るためのマウス抗体遺伝子のヒト抗体遺伝子へのス
プライシングを用いることができる（Morrison 等(1984) Proc Natl Acad Sci 8
1:6851-6855: Neuberger 等(1984) Nature 312:604-608; Takeda 等(1985) Natu
re 314:452-454）。別法では、一本鎖抗体の生成のために記載される技術を、当
分野で知られた方法を用いて適合して、ＨＵＰＭ特異性一本鎖抗体を生成しても
よい。関連する特異性を有するが、個別のイディオタイプ組成物からなる抗体が
、ランダムに組み合わせた免疫グロビンライブラリからの鎖混合により生成され
ることもできる（Burton D.R.(1991)Proc Natl Acad Sci 88:10134-10137）。

【０１５６】また抗体は、リンパ球集団においてin vivoで生成を誘発することにより、或いは組換え免疫グロブリンライブラリ又は論文（Orlandi 等(1989, Proc Natl A
cad Sci 86:3833-3837、Winter G and Milstein C (1991; Nature 349:293-299)
に開示されるような非常に特異的な結合剤のパネルをスクリーニングすることに
より生成することもできる。

【０１５７】またＨＵＰＭに対する特異な結合部位を含む抗体フラグメントを発生させるこ
ともできる。例えば、そのようなフラグメントは、限定はしないが、抗体分子の
ペプシン消化により生成することができるＦ（ａｂ´）２フラグメント及びＦ（
ａｂ´）２フラグメントのジスルフィド架橋を還元することにより生成すること
ができるＦａｂフラグメントを含む。別法では、Ｆａｂ発現ライブラリを、所望
の特異性を有するモノクローナルＦａｂフラグメントを迅速にしかも容易に同定
できるように作製してもよい（Huse WD 等 (1989) Science 256:1275-1281）。

【０１５８】種々のイムノアッセイを用いて、所望の特異性を有する抗体を同定するために
スクリーニングすることができる。確立された特異性を有するポリクローナル抗
体或いはモノクローナル抗体のいずれかを用いる結合タンパク競合測定法或いは
免疫放射測定法用の種々のプロトコルが、当分野では周知である。そのようなイ
ムノアッセイは典型的には、ＨＵＰＭとその特異的抗体との間の複合形成体を測
定することを含む。２つの非干渉性ＨＵＰＭエピトープに反応するモノクローナ
ル抗体を利用する２部位モノクローナル系イムノアッセイが好ましいが、結合タ
ンパク質競合測定法を用いることもできる(Maddox、前掲)。

【０１５９】本発明の別の実施例では、ＨＵＰＭをコードするポリヌクレオチド或いはその
任意のフラグメント又は相補配列を治療のために用いる場合もある。一態様では
、ＨＵＰＭをコードするポリヌクレオチドに対する相補配列が、ｍＲＮＡの転写
を遮断することが望ましい状況において用いられる。詳細には、細胞は、ＨＵＰ
Ｍをコードするポリヌクレオチドに相補的な配列と形質転換されることができる
。このように相補分子或いはフラグメントを用いて、ＨＵＰＭ活性を調節するか
、或いは遺伝子機能の調節を実現することができる。そのような技術は当分野で
は周知であり、センス或いはアンチセンスオリゴヌクレオチド又はより大きなフ
ラグメントを、ＨＵＰＭをコードする配列のコード化或いは調節領域に沿った種
々の位置から設計することができる。

【０１６０】レトロウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス或いはワクシニアウイル
スに、また種々の細菌性プラスミドに由来する発現ベクタが、標的となる器官、
組織或いは細胞集団にヌクレオチド配列を送達するために用いられる場合がある
。当業者には周知の方法を用いて、ＨＵＰＭをコードする遺伝子のポリヌクレオ
チドに相補的な核酸配列を発現するベクタを作製することができる（例えばSamb
rook 等(前掲)及びAusubel 等 (前掲)を参照されたい）。

【０１６１】ＨＵＰＭをコードする遺伝子は、細胞或いは組織を、ＨＵＰＭをコードする高
レベルのポリヌクレオチド或いはそのフラグメントを発現する発現ベクタと形質
転換することにより遮断されるようになる。そのような作製物は、翻訳できない
センス或いはアンチセンス配列を細胞内に導入するために用いられる。ＤＮＡ内
に統合されない場合であっても、そのようなベクタは、内因性ヌクレアーゼによ
り無能にされるまで、ＲＮＡ分子を転写し続けることができる。一過性の発現は
、非複製ベクタを用いて一ヶ月或いはそれ以上の間持続し、適当な複製エレメン
トがベクタ系の一部であるならさらに長く持続するようになる。

【０１６２】上記のように遺伝子発現の修飾は、ＨＵＰＭをコードする遺伝子の制御、５´
或いは調節領域（シグナル配列、プロモータ、エンハンサ及びイントロン）に対
する相補配列或いはアンチセンス分子（ＤＮＡ、ＲＮＡ或いはＰＮＡ）を設計す
ることにより得られるようになる。転写開始部位、例えば開始部位からの位置−
１０と＋１０との間に由来するオリゴヌクレオチドが好ましい。同様に「三重ら
せん」塩基対技術を用いて抑制を実現することができる。二重らせんの能力の抑
制がポリメラーゼ、転写因子或いは調節分子を結合するのに十分に開放されるよ
うになるため、三重らせん対は有用である。三重ＤＮＡを用いる最近の治療の進
歩は、論文（Gee JE 等(1994)In: Huber BE and BI Carr, Molecular and Immun ologic Approaches, Futura Publishing Co. Mt Kisco NY, pp.163-177)に記載されている。また相補配列或いはアンチセンス分子は、転写物がリボソームに結
合するのを防ぐことによりｍＲＮＡの翻訳を遮断するように設計することができ
る。

【０１６３】リボザイム、すなわち酵素ＲＮＡ分子が、ＲＮＡの特異な切断を触媒するため
に用いられる場合がある。リボザイム作用の機構は、相補的標的ＲＮＡへのリボ
ザイム分子の配列特異性ハイブリダイゼーションを伴い、それにヌクレオチド鎖
切断分割が伴う。用いられる例は、ＨＵＰＭをコードする配列のヌクレオチド鎖
切断分割に特異にしかも有効に触媒作用することができる遺伝子操作されたハン
マヘッドモチーフリボザイムを含む。

【０１６４】任意の潜在的なＲＮＡ標的内の特異なリボザイム切断部位は、配列を含むリボ
ザイム切断部位ＧＵＡ、ＧＵＵ及びＧＵＣに対して標的分子を走査することによ
り最初に同定される。一度同定されれば、切断部位を含む標的遺伝子の領域に対
応する１５〜２０の間のリボヌクレオチドの短いＲＮＡ配列は、オリゴヌクレオ
チドを無能にする副次構造的な特徴に対して評価されることができる。また候補
標的の適合性も、リボヌクレアーゼ保護アッセイを用いて相補的なオリゴヌクレ
オチドとのハイブリダイゼーションに対する容易性を検査することにより評価す
ることができる。

【０１６５】本発明の相補的リボ核酸分子及びリボザイムは、核酸分子の合成に関して当分
野で知られた任意の方法により調製することができる。これらは、固相ホスホラ
ミダイト化学合成のようなオリゴヌクレオチドを化学的に合成するための方法を
含む。別法では、ＲＮＡ分子は、ＨＵＰＭをコードするＤＮＡ配列のin vitro及
びin vivo転写により生成することができる。そのようなＤＮＡ配列は、Ｔ７或いはＳＰ６のような適当なＲＮＡポリメラーゼプロモータを用いて種々のベクタ
内に組み込むことができる。別法では、これらのｃＤＮＡ作成物は、相補ＲＮＡ
を合成し、細胞株、細胞或いは組織内に構成的に或いは誘導的に導入することが
できる。

【０１６６】ＲＮＡ分子を修飾して細胞内安定性及び半減期を改善することもできる。可能
な修飾は、限定はしないが、分子の５´並びにまた３´末端でのフランキング配
列の付加、或いは分子のバックボーンにおけるホスホジエステラーゼ連鎖ではな
くホスホロチオネート或いは２´Ｏ−メチルの使用を含む。この概念はＰＮＡの
生成に固有のものであり、イノシン、キュェオシン及びワイブトシン並びにアセ
チル−、メチル−、チオ−、及び内因性エンドヌクレアーゼにより容易には識別
されないアデニン、シチジン、グアニン、チミン及びウリジンの同様に修飾され
た形成体のような従来にはない塩基を含有することにより、これら分子の全体に
拡張されることができる。

【０１６７】細胞或いは組織内にベクタを導入するために多くの方法が利用可能であり、in vivo、in vitro及びex vivoで使用するのに同様に適している。ex vivo治療の場合、ベクタは、患者から取り出された基幹細胞内に導入され、同じ患者に戻さ
れる自家移植物に対してクローンのように繁殖することができる。形質移入、リ
ポソーム注射或いはポリカチオンアミノポリマによる送達は、当分野で周知の方
法を用いて実現することができる（例えばGoldman, C.K. 等(1997）Nature Biot
echnology 15:462-466を参照されたい)。

【０１６８】上記治療方法の任意の方法は、例えばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ウサギ、サル
、そして最も好ましくはヒトのような哺乳類を含む、治療を要する被検体に適用
されることができる。

【０１６９】本発明のさらに別の実施例は、上記任意の治療効果のために、製薬的に許容可
能な担体と共に用いられる医薬品組成物の投与に関連する。そのような医薬品組
成物は、ＨＵＰＭ、ＨＵＰＭに対する抗体、擬態、アゴニスト、アンタゴニスト
或いはＨＵＰＭのインヒビタからなることができる。組成物は単独で、或いは限
定はしないが、食塩水、緩衝食塩水、デキストロース及び水を含む任意の滅菌の
生体適合性医薬品担体において投与されることがある、安定化化合物のような少
なくとも１つの他の薬剤との組み合わせて投与されることができる。これらの組
成物は単独で、或いは他の薬剤、薬物或いはホルモンと組み合わせて患者に投与
してもよい。

【０１７０】本発明に用いられる医薬品組成物は、限定はしないが、経口、静脈内、筋肉内
、動脈内、骨髄内、クモ膜下、心室内、経皮、皮下、腹膜内、鼻腔内、腸内、局
所、舌下、直腸手段を含む任意の経路により投与されることができる。

【０１７１】活性処方成分に加えて、これらの医薬品組成物は、製薬的に用いることができ
るプレパラートへの活性化合物の処理を容易にする医薬品添加物及び補助剤を含
む適当な製薬的に許容可能な担体を含む場合もある。さらに製剤及び投与に関す
る技術についての詳細は、Remington's Pharmaceutical Sciences(Maack Publis
hing Co. Easton PA)の最新版に見出される。

【０１７２】経口投与の場合の医薬品組成物は、経口投与に適した投与量の当分野で周知の
製薬的に許容可能な担体を用いて調剤することができる。そのような担体により
、医薬品組成物は、患者が経口摂取するための錠剤、丸剤、糖衣剤、カプセル剤
、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー、懸濁剤等として調剤されることができ
る。

【０１７３】経口投与するための医薬品調剤は、活性化合物と固形の医薬品添加物とを混合
して、選択的にはその混合物を細かく砕いて、さらに所望に応じて、錠剤或いは
糖衣剤コアを得るために適当な補助剤を加えた後、顆粒剤の混合物を処理して得
られるようになる。適当な医薬品添加物は、ラクトース、スクロース、マンニト
ール或いはソルビトールを含む糖、トウモロコシ、小麦、米、じゃがいも或いは
他の植物からのデンプン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロ
ース或いはカルボキシルメチルセルロースナトリウムのようなセルロース、及び
アラビアゴム及びトラガカントゴムを含むゴム、並びにゼラチン及びコラーゲン
のようなタンパク質を含む炭水化物或いはタンパク質賦形剤である。必要なら、
架橋結合されたポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸或いはアルギン酸ナト
リウムのようなその塩を含む、崩壊剤或いは可溶化剤が加えられてもよい。

【０１７４】糖衣剤コアは濃縮糖液のような適当なコーティングと共に用いられ、その濃縮
糖液はアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポルゲル（carbop
ol gel）、ポリエチレングリコール並びにまた二酸化チタン、ラッカー溶液及び
適当な有機溶剤或いは溶剤混合物を含む場合もある。染料或いは色素が製品識別
、或いは活性化合物の量、すなわち投与量を特徴付けるために、錠剤或いは糖衣
錠コーティングに加えられる場合もある。

【０１７５】経口投与される医薬品製剤は、ゼラチンからなる押込嵌合式のプッシュフィッ
トカプセル剤、並びにゼラチン及びグリコール或いはソルビトールのようなコー
ティングからなる軟らかく封止されたソフトシールカプセル剤を含む。プッシュ
フィットカプセル剤は、ラクトース或いはデンプンのような賦形剤或いは結合剤
、タルク或いはステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、さらに選択的に安定
化剤と混合された活性処方成分を含むことができる。ソフトカプセル剤では、活
性化合物は、脂肪油、パラフィン油、或いは安定化剤を用いる場合も用いない場
合があるが液体ポリエチレングリコールのような適当な溶液内に溶解或いは懸濁
される場合がある。

【０１７６】非経口投与のための医薬品製剤は、活性化合物の水溶液を含む。注射するため
に、本発明の医薬品組成物は、水溶液内で、好ましくはハンクス溶液、リンガー
溶液或いは生理緩衝食塩水のような生体適合性緩衝液内で調製される。水性の注
入懸濁液は、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、ソルビトール或いはデ
キストランのように、懸濁液を増粘する物質を含む場合がある。さらに活性化合
物の懸濁液は、適当な油性の注射懸濁液として調製される場合もある。適当な親
油性溶剤或いは溶媒は、ゴマ油のような脂肪油、或いはオレイン酸エチル又はト
リグリセリドのような合成脂肪酸エステル、或いはリポソームを含む。選択に応
じて懸濁液は、高濃縮の溶液の調製を可能とするために化合物の可溶性を増加さ
せる適当な安定化剤或いは薬剤を含む場合もある。

【０１７７】局所或いは鼻腔投与の場合、特定の障壁を浸透させるのに適した浸透剤が調製
において用いられる。そのような浸透剤は当分野で一般に知られている。

【０１７８】本発明の医薬品組成物は、当分野において知られた、例えば、従来の混合、溶
解、顆粒化、糖衣形成、微粒子化、乳状化、カプセル化、封入（entrapping）或
いは凍結乾燥処理による方法で製造される。

【０１７９】医薬品組成物は塩類として提供され、限定はしないが、塩酸、硫酸、酢酸、乳
酸、酒石酸、リンゴ酸、琥珀酸等の多くの酸を用いて形成することができる。塩
類は、対応する遊離塩基形の場合より、水性或いはプロトン性溶剤において可溶
性を有する傾向がある。他の場合に好ましい製剤は、使用前に緩衝剤と結合され
たｐＨ範囲４．５−５．５の１ｍＭ−５０ｍＭヒスチジン、０．１％−２％スク
ロース、２％−７％マンニトールの任意のもの或いは全てを含む凍結乾燥粉末で
ある。

【０１８０】医薬品組成物が調製された後、それらは適当な容器に入れられ、指示された条
件の治療のためにラベルを貼付される。ＨＵＰＭの投与の場合、そのようなラベ
ル貼付は、投与の量、頻度並びに方法を含むであろう。

【０１８１】本発明に用いるために適した医薬品組成物は、活性処方成分が目的を果たすた
めの有効な量だけ含まれる組成物を含む。有効な量を投与することは、当業者の
能力内で果たすことができる。

【０１８２】任意の化合物の場合、製薬的に有効な量は、例えば腫瘍性細胞の細胞培養アッ
セイ、或いは通常マウス、ウサギ、イヌ或いはブタの動物標本のいずれかにおい
て最初に見積もられる。また動物標本を用いて、所望の濃縮範囲及び投与の経路
が確定される。その後その情報を用いて、ヒトに投与するための有効な量及び経
路を確定することができる。

【０１８３】製薬的に有効な量は、症状或いは状態を改善する、例えばＨＵＰＭ或いはその
フラグメント、ＨＵＰＭの抗体、アゴニスト、アンタゴニスト、或いはＨＵＰＭ
のインヒビタの主成分の量である。そのような化合物の治療に対する有効度及び
毒性は、細胞培養或いは実験動物における標準的な製薬的手順、例えばＥＤ５０
（集団の５０％において製薬的に有効な量）及びＬＤ５０（集団の５０％が致死
する量）により確定することができる。治療効果と毒性効果の投与量比が治療指
数であり、比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表すことができる。大きな治療指数を示
す医薬品組成物が望ましい。細胞培養アッセイ及び動物実験から得られるデータ
は、ヒトに投与するための量の範囲を処方する際に用いられる。そのような化合
物の投与量は、毒性が非常に少ないか或いは全くなくＥＤ５０を含む血中濃度の
範囲内にあることが好ましい。投与量は、用いられる投与形態、患者の感度及び
投与経路によりこの範囲内で変化する。

【０１８４】厳密な投与量は、治療を要する患者に関連する要因により医師によって確定さ
れるであろう。量及び投与を調整して、十分なレベルの活性成分を与えたり、或
いは所望の効果を維持することもある。考慮される場合がある要因は疾患状態の
重症度、被検者の健康状態、患者の年齢、体重及び性別、食事、投与の時間及び
頻度、薬物の組み合わせ、反応への敏感度、並びに治療に対する耐性／反応を含
む。特定の製剤の半減期及びクリアランス率に応じて、３〜４日毎、毎週或いは
２週間毎に一度、長時間作用性の医薬品組成物が投与される場合もある。

【０１８５】通常の投与量は０．１μｇ〜１００，０００μｇまで変化し、投与の経路にも
よるが、全投与量は約１ｇまでである。詳細な投与量及び送達の方法に関する手
引きは文献に与えられており、一般に当分野の開業医が利用できる。当業者は、
タンパク質或いはそのインヒビタの場合とは異なる製剤を、ヌクレオチドの場合
に用いるであろう。同様にポリヌクレオチド或いはポリペプチドの送達は特定の
細胞、状態、位置等に対して特異であろう。

【０１８６】診断別の実施例では、ＨＵＰＭを特異に結合する抗体を、ＨＵＰＭの発現により特
徴付けられる状態或いは疾患の診断のために、又はＨＵＰＭ、アゴニスト、アン
タゴニスト或いはインヒビタを用いて治療中の患者をモニタするための検定法に
おいて用いることができる。診断のために有用な抗体は、治療の場合に上記した
方法と同様の方法で調製することができる。ＨＵＰＭに対する診断検定法は、抗
体及び標識を用いて、ヒト体液或いは細胞又は組織の抽出物においてＨＵＰＭを
検出する方法を含む。抗体は、修飾しても修飾しなくても用いることができ、リ
ポータ分子と共有結合或いは非共有結合の何れかで結合することにより標識され
ることができる。当分野において知られる種々のリポータ分子を用いることがで
き、そのいくつかが上記される。

【０１８７】ＨＵＰＭを測定するためのＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ及びＦＡＣＳを含む種々のプロ
トコルが当分野において知られており、ＨＵＰＭ発現の変更されたレベル或いは
異常なレベルを診断するための方法を提供する。ＨＵＰＭ発現のための正常或い
は標準的な値は、正常な哺乳動物被検者、好ましくはヒトから取り出された体液
或いは細胞抽出物を複合体形成に適した条件下でＨＵＰＭに対する抗体と結合す
ることにより確立される。標準的な複合体形成量は種々の方法により定量するこ
とができるが、光計測による手段が好ましい。被検者において発現したＨＵＰＭ
の量、制御及び疾患、生検組織からのサンプルが標準値と比較される。標準値と
被検者値との間の偏差が疾患を診断するためのパラメータを確立する。

【０１８８】本発明の別の実施例では、ＨＵＰＭをコードするポリヌクレオチドを診断のた
めに用いることができる。用いられるポリヌクレオチドはオリゴヌクレオチド配
列、アンチセンスＲＮＡ及びＤＮＡ分子及びＰＮＡを含む。ポリヌクレオチドを
用いて、ＨＵＰＭの発現が疾患と相関をなす可能性がある生検組織の遺伝子発現
を検出かつ定量することができる。診断検定法を用いて、ＨＵＰＭの存否及び過
剰発現を識別することができ、さらに治療処置中のＨＵＰＭレベルの調節をモニ
タすることができる。

【０１８９】一態様では、ＨＵＰＭ或いは密接に関連する分子をコードするゲノム配列を含
むポリヌクレオチド配列を検出することができるＰＣＲプローブを用いるハイブ
リダイゼーションにより、ＨＵＰＭをコードする核酸配列を同定することができ
る。非常に特異な領域、例えば５´調節領域内の１０個の特有のヌクレオチド、
或いは特異性の低い領域、例えば特に３´コード化領域の何れかからなるプロー
ブの特異性及びそのハイブリダイゼーション或いは増幅の厳密性（最大、高、中
間或いは低）が、そのプローブがＨＵＰＭをコードする自然発生配列、アレルの
みを同定するか、或いは関連する配列を同定するかを確定するであろう。

【０１９０】またプローブは関連する配列の検出に用いることもでき、ＨＵＰＭをコードす
る配列の任意のものからのヌクレオチドの少なくとも５０％を含むことが好まし
い。本発明のハイブリダイゼーションプローブはＤＮＡ或いはＲＮＡであり、Ｓ
ＥＱＩＤＮＯ：１３、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４、ＳＥＱＩＤＮＯ：１
５、ＳＥＱＩＤＮＯ：１６、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７、ＳＥＱＩＤＮ
Ｏ：１８、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９、ＳＥＱＩＤＮＯ：２０、ＳＥＱＩ
ＤＮＯ：２１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２、ＳＥＱＩＤＮＯ：２３及びＳ
ＥＱＩＤＮＯ：２４の配列に、或いはプロモータ、エンハンサエレメント及
び自然発生ＨＵＰＭのイントロンを含むゲノム配列に由来する。

【０１９１】ＨＵＰＭをコードするＤＮＡのための特異なハイブリダイゼーションプローブ
を生成するための手段は、ＨＵＰＭ或いはＨＵＰＭ誘導体をコードする核酸配列
を、ｍＲＮＡプローブの生成のためにベクタにクローニングする過程を含む。そ
のようなベクタは当分野では周知で、市販されており、適当なＲＮＡポリメラー
ゼ及び適当な標識化ヌクレオチドを加えることによりin vitroでＲＮＡプローブ
を合成するために用いることができる。ハイブリダイゼーションプローブは、種
々のリポータ群、例えば³²Ｐ或いは³⁵Ｓのような放射性核種、又はアビジン／ビ
オチン結合系等を介してプローブに結合されるアルカリ性フォスファターゼのよ
うな酵素標識により標識されることができる。

【０１９２】ＨＵＰＭをコードするポリヌクレオチド配列はＨＵＰＭの発現に関連する障害
の診断のために用いることができる。そのような障害は、限定はしないが、動脈
硬化症、アテローム性動脈硬化症、滑液泡炎、肝硬変、肝炎、混合型結合組織病
（ＭＣＴＤ）、骨髄線維症、発作性夜間血色素尿症、真性多血症、乾癬、原発性
血小板血症のような細胞増殖性障害、及び腺癌、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨
髄腫、肉腫、及び奇形癌、具体的には、副腎、膀胱、骨、骨髄、脳、乳房、子宮
頚、胆嚢、神経節、消化管、心臓、腎臓、肝臓、肺、筋肉、卵巣、膵臓、副甲状
腺、陰茎、前立腺、唾液腺、皮膚、脾臓、精巣、胸腺、甲状腺、及び子宮の癌、
アジソン病、成人呼吸窮迫症候群、アレルギー、強直性脊椎炎、アミロイド症、
貧血症、喘息、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性甲
状腺炎、気管支炎、胆嚢炎、接触性皮膚炎、クローン病、アトピー性皮膚炎、皮
膚筋炎、糖尿病、肺気腫、結節性紅斑、萎縮性胃炎、糸球体腎炎、グッドパスチ
ャー症候群、痛風、グレーブス病、橋本甲状腺炎、過好酸球増加症、過敏性腸症
候群、紅班性狼瘡、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋または心膜の炎症、変形
性関節炎、骨粗鬆症、膵炎、多発筋炎、リウマチ性関節炎、強皮症、シェーグレ
ン症候群、全身性アナフィラキシ、全身性紅班性狼瘡、全身性硬化症、潰瘍性大
腸炎、ウェルナー症候群、及び癌、血液透析、体外循環の合併症、ウイルス感染
、細菌感染、真菌感染、寄生虫感染、原虫感染、及び蠕虫感染；及び外傷のよう
な免疫障害とを含む。ＨＵＰＭをコードするポリヌクレオチド配列は、サザン分
析或いはノーザン分析、ドットブロット、又は他の膜系技術において、又はＰＣ
Ｒ技術において、又は変更されたＨＵＰＭ発現を検出するために患者生検からの
体液或いは組織を利用するディップスティック、ｐｉｎ、ＥＬＩＳＡ検定法或い
はマイクロアレイにおいて用いることができる。そのような定性的或いは定量的
方法は当分野において周知である。

【０１９３】特定の態様では、ＨＵＰＭをコードするヌクレオチド配列は、種々の癌、特に
上記したような癌の活性化或いは誘発を検出する検定法において有用である。Ｈ
ＵＰＭをコードするヌクレオチド配列は標準的な方法において標識され、ハイブ
リダイゼーション複合体の形成に適した条件下で患者からの体液或いは組織サン
プルに加えられることができる。適当な時間インキュベートした後、サンプルは
洗浄され、そのシグナルが定量され、標準値と比較される。生検された或いは抽
出されたサンプルのシグナルの量が比較制御サンプルのシグナルの量から著しく
変更されている場合には、そのヌクレオチド配列はサンプル内のヌクレオチド配
列とハイブリダイズされており、サンプル内のＨＵＰＭをコードするヌクレオチ
ド配列の変更レベルの存在が関連する疾患の存在を示す。またそのような検定法
を用いて、動物実験、臨床試験或いは個々の患者の治療をモニタする際に特定の
治療措置の有効度を評価することができる。

【０１９４】ＨＵＰＭの発現に関連する疾患を診断する基準を与えるために、発現に対する
正常或いは標準値が確立される。これは、動物或いはヒトいずれかの正常な被検
者から取り出された体液或いは細胞抽出物を、当分野で周知の複合体形成に適し
た条件下でＨＵＰＭをコードする配列或いはそのフラグメントと結合することに
より与えられる。標準的なハイブリダイゼーションは、正常な被検者から得られ
た値を、既知の量の実質的に精製されたポリヌクレオチドが用いられる実験から
得られた値と比較することにより定量することができる。正常サンプルから得ら
れた標準値が、疾患の症状がある被検者のサンプルから得られた値と比較される
。標準値と被検者値との間の偏差を用いて、疾患状態の存在を立証する。

【０１９５】一度疾患が確定され、治療プロトコルが開始されれば、その患者の発現のレベ
ルが正常な患者において観測されるレベルに接近し始めるか否かを評価するため
に、ハイブリダイゼーション検定法が規則的に繰り返される。継続的な検定法か
ら得られる結果を用いて、数日から数ヶ月の期間に渡る治療の有効度を示すこと
ができる。

【０１９６】癌の場合、個々の患者からの生検組織内の異常な量の転写物の存在が、疾患の
発生に対する素因を示すか、或いは実際の臨床的な症状が発生する前に疾患を検
出するための手段を提供する。この種のより決定的な診断により、専門医は、予
防措置或いは初期段階での積極的な治療を行うことができ、それにより癌の発生
を予防したり、或いは進行するのを防ぐこともできる。

【０１９７】ＨＵＰＭをコードする配列から設計されるオリゴヌクレオチドに対するさらな
る診断上の使用は、ＰＣＲの使用を含む場合がある。そのようなオリゴマは化学
的に合成されるか、酵素的に生成されるか、或いはin vitroで生成されてもよい
。オリゴマは、ＨＵＰＭをコードするポリヌクレオチドのフラグメント、或いは
ＨＵＰＭをコードするポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチドのフラグメ
ントを含み、特異な遺伝子或いは条件の同定のために最適化された条件下で用い
られることが好ましい。同一の２つのオリゴマ、入れ子状の組のオリゴマ、或い
はオリゴマの縮重プールであっても、密接に関連するＤＮＡ或いはＲＮＡ配列を
検出並びにまた定量するために低い厳密な条件下で用いることができる。

【０１９８】またＨＵＰＭの発現を定量するために用いることができる方法は、ヌクレオチ
ドの放射標識或いはビオチン標識、或いは制御核酸の相互増幅並びに実験結果が
書き込まれる標準曲線を含む（Melby, P.C. 等 (1993) J. Immunol. Methods, 1
59:235-244; Duplaa, C. 等 (1993) Anal. Blochem. 229-236）。多数サンプルを定量する速度は、ＥＬＩＳＡフォーマットの検定法を実行することにより加速
することができ、その際対象のオリゴマは種々の希釈法において表され、スペク
トル光計測反応或いは色計測反応が迅速な定量化がもたらされる。

【０１９９】さらに別の実施例では、ここで記載されたポリヌクレオチド配列の任意のもの
に由来するオリゴヌクレオチド或いはその長寸のフラグメントをマイクロアレイ
の標的として用いることもできる。マイクロアレイを用いて、多数の遺伝子の発
現レベルを同時にモニタし（転写画像を生成するために）、遺伝子変異配列、突
然変異及び多形性を同定することができる。この情報は、遺伝子機能を確定し、
疾患の遺伝的基礎を理解し、かつ疾患を診断する際に有用であり、また治療薬剤
の活性を発生及びモニタする際に有用であろう。

【０２００】一実施例では、全て参照してその全体を本明細書の一部としているＰＣＴ出願
ＷＯ９５／１１９９５（Chee等）、Lockhart, D.J.等（1996; Nat. Biotech. 14
:1675-1680）及びSchena, M等（1996; Proc. Natl. Acad. Sci. 93:10614-10619
）に記載される方法に従ってマイクロアレイが準備及び使用される。

【０２０１】マイクロアレイは、多数の固有の一本鎖核酸配列、通常固形支持体に固定され
るｃＤＮＡの合成アンチセンスオリゴヌクレオチド或いはフラグメントのいずれ
がからなることが好ましい。そのオリゴヌクレオチドは長さが約６−６０ヌクレ
オチドであることが好ましく、１５−３０ヌクレオチドであることがより好まし
く、約２０−２５ヌクレオチドであることが最も好ましい。ある種のマイクロア
レイの場合、長さが７−１０ヌクレオチドしかないオリゴヌクレオチドを用いる
ことが好ましいこともある。マイクロアレイは、既知の５´或いは３´配列に及
ぶオリゴヌクレオチド、完全長配列に及ぶ連続的なオリゴヌクレオチド、或いは
その配列の長さに沿った特定の領域から選択される固有のオリゴヌクレオチドを
含む場合がある。マイクロアレイに用いられるポリヌクレオチドは対象の遺伝子
に特異なオリゴヌクレオチドであり、その中では少なくともその配列のフラグメ
ントが既知であるか、或いは特定の細胞タイプ、発生的或いは疾患状態に共通の
１つ或いはそれ以上の未同定のｃＤＮＡに特異である。ある状況では、マイクロ
アレイにおいてオリゴヌクレオチドの対を用いることが適切である。その「対」
は、好ましくは中央に位置する１つのヌクレオチドを除いて同一であろう。その
対の第２の（１つだけ一致しない）ヌクレオチドは、制御体として機能する。オ
リゴヌクレオチド対の数は２−１００万の範囲にある。

【０２０２】あるマイクロアレイ用に既知の配列に対するオリゴヌクレオチドを生成するた
めに、対象の遺伝子が、ヌクレオチド配列の５´或いはより好ましくは３´末端
で開始するコンピュータアルゴリズムを用いて試験される。そのアルゴリズムは
、その遺伝子に対して固有で、ハイブリダイゼーションに適した範囲内にＧＣ含
有物を有し、ハイブリダイゼーションに干渉することがある予測される副構造体
のない所定の長さのオリゴマを同定する。一態様ではそのオリゴマは、光照射化
学処理（light-directed chemical process、例えばChee等（前掲）を参照されたい）を用いて支持体上の指定された領域で合成される。支持体は紙、ナイロン
或いは他の種類の膜、フィルタ、チップ、スライドガラス或いは任意の他の適切
な固定支持体である。

【０２０３】別の態様では、オリゴヌクレオチドは、参照してその全体を本明細書の一部と
しているＰＣＴ出願ＷＯ９５／２５１１１６（Baldeschweiler等）に記載される
ような、化学的結合手順及びインクジェット吐着装置を用いることにより支持体
の表面上で合成されることができる。別の態様では、ドット（或いはスロット）
ブロットに類似の「グリッド（gridded）」アレイ(HYBRIDOT apparatus, Life T
echnologies)を用いて、真空系、熱、紫外線（ＵＶ）、機械的或いは化学的結合
手順を利用して、支持体の表面にｃＤＮＡフラグメント或いはオリゴヌクレオチ
ドを配列及び結合することができる。さらに別の態様では、アレイは手動で或い
は市販の装置、材料及び機器(including Brinkmann multichannel pipettors or
robotic instruments)を用いて生成され、８ドット、２４ドット、９６ドット、３８４ドット、１５３６ドット或いは６１４４オリゴヌクレオチド、又は市販
の機器を有効に使用するのに適した２〜１，０００，０００の任意の他の数量を
含む。

【０２０４】マイクロアレイを用いてサンプルの分析を行うために、生物学的サンプルから
ポリヌクレオチドが抽出される。生物学的サンプルは任意の体液（例えば血液、
尿、唾液、粘液、胃液等）、培養された細胞、バイオプシ或いは他の組織標本か
ら得ることができる。プローブを作製するために、サンプルから抽出されたポリ
ヌクレオチドを用いて、マイクロアレイ上の核酸に相補的な核酸配列を生成する
。マイクロアレイがｃＤＮＡからなる場合には、アンチセンスＲＮＡ（ａＲＮＡ
）がプローブに適している。それゆえ一態様では、ｍＲＮＡを用いてｃＤＮＡを
生成し、さらに蛍光性ヌクレオチドの存在下で、ｃＤＮＡを用いてフラグメント
或いはオリゴヌクレオチドａＲＮＡプローブを作製する。これらの蛍光標識され
たプローブは、マイクロアレイでインキュベートされ、プローブ配列がマイクロ
アレイのｃＤＮＡオリゴヌクレオチドにハイブリダイズするようにする。別の態
様では、相補的な核酸配列をプローブとして用いて、ハイブリダイゼーション技
術の領域で周知の制限酵素、ＰＣＲ技術及びオリゴ標識化（Oligolabelling）或
いはTransProbe kits (Amersham Pharmacia)を用いて、核酸配列としてポリヌク
レオチド、フラグメント、相補的或いはアンチセンス配列を作製することができ
る。

【０２０５】ハイブリダイゼーションの条件は、ハイブリダイゼーションが正確な相補的一
致或いは種々の低い相補性の度合で生じるように調整される。ハイブリダイズさ
れなかったプローブを除去した後、スキャナを用いて蛍光のレベル及びパターン
を確定する。スキャナで読取られた画像は検査され、マイクロアレイ上の各オリ
ゴヌクレオチド配列の相補性の度合及び相対的な存在比を確定する。同時に、個
々の配列の全てに対して、検出系を用いて、ハイブリダイゼーションの存否或い
は量を測定することができる。このデータは、サンプル内の配列、突然変異、変
異配列或いは多形性についての大規模な相関調査の場合に用いることができる(H
eller, R.A.等, (1997) Proc. Natl. Acad. Sci. 94:2150-55)。

【０２０６】本発明の別の実施例では、ＨＵＰＭをコードする核酸配列を用いて、自然発生
ゲノム配列をマッピングするために有用なハイブリダイゼーションプローブを生
成することもできる。その配列は特定の染色体に或いは染色体の特異領域に、又
はPrice CM (1993; Blood Rev 7:127-34)及びTrask BJ (1991; Trends Genet 7:
149-154)に記載されるような、例えばヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母菌人工染
色体（ＹＡＣ）、細菌性人工染色体（ＢＡＣ）、細菌性Ｐ１構造体或いは単一染
色体ｃＤＮＡライブラリのような人工染色体構造にマッピンクされてもよい。

【０２０７】蛍光in situハイブリダイゼーション（Verma 等(1988) Human Chromosomes: A Manual of Basic Techniques, Pergamon Press, New York NYに記載されるＦＩ
ＳＨ）は、他の物理的な染色体マッピング技術及び遺伝マップデータと相関をな
す。遺伝子マップデータの例は種々の科学雑誌或いはOnline Mendelian Inherit
ance in Man（ＯＭＩＭ）に見出すことができる。物理的染色体マップ上のＨＵＰＭをコードする遺伝子の位置と特定の疾患或いは特定の疾患に対する素因との
間の相関は、その遺伝的疾患に関連するＤＮＡの領域の境界を定めることを可能
にする。本発明のヌクレオチド配列を用いて、正常者と保菌者、すなわち感染し
た個体との間の遺伝子配列の差を検出することができる。

【０２０８】染色体標本のin situハイブリダイゼーション及び確立された染色体マーカを用いる連鎖分析のような物理的マッピング技術が、遺伝子マップを拡張するため
に用いることができる。マウスのような別の哺乳動物種の染色体上の遺伝子の配
置が、特定のヒト染色体の数或いは腕が未知であっても、関連するマーカを明ら
かにできる場合もある。新規の配列は、物理的なマッピングにより染色体腕或い
はその一部に割り当てることができる。これは、位置クローニング或いは他の遺
伝子発見技術を用いる疾患遺伝子を検索する研究者に貴重な情報を与える。一度
疾患或いは症候群が、特定のゲノム領域、例えばＡＴから１１ｑ２２−２３まで
(Gatti等(1998) Nature 336:577-580)への遺伝子連鎖により自然のまま局在され
ていれば、その領域に対する任意の配列マッピングが、さらなる研究のための関
連或いは調節遺伝子を表すことができる。また本発明のヌクレオチド配列を用い
て、正常個体と保菌者、すなわち感染個体との間における転座、逆位等により染
色体位置内の差を検出することができる。

【０２０９】本発明の別の実施例では、ＨＵＰＭ、その触媒作用或いは免疫原性フラグメン
ト又はオリゴペプチドを用いて、種々の薬物スクリーニング技術の任意のものに
おいて化合物のライブラリをスクリーニングすることができる。そのようなスク
リーニングにおいて用いられるフラグメントは溶液中に遊離するか、固形支持体
に付着するか、細胞表面上に支持されるか、或いは細胞内に配置されてもよい。
ＨＵＰＭと被試験因子との間に形成される結合複合体が測定される場合もある。

【０２１０】薬物スクリーニングに用いる場合がある別の技術は、ＰＣＴ出願ＷＯ８４／０
３５６４に記載されるような、対象のタンパク質への適当な結合親和性を有する
化合物の高スループットスクリーニングを実現する。この方法では、ＨＵＰＭに
適用されるような、多数の異なる小さな検査化合物がプラスチックピン或いはあ
る他の表面のような固体支持体上で合成される。検査化合物はＨＵＰＭ或いはそ
のフラグメントと反応し、洗浄される。その後結合されたＨＵＰＭが当分野で周
知の方法により検出される。また精製されたＨＵＰＭは、上記の薬物スクリーニ
ング技術において用いるためのプレート上に直接コーティングされることもでき
る。別法では、非中和性抗体を用いて、ペプチドを捕捉し、それを固体支持体上
に固定化することもできる。

【０２１１】別の実施例では、ＨＵＰＭを特異に結合することができる中和性抗体がＨＵＰ
Ｍを結合するための検査化合物と競合する、競合薬物スクリーニングアッセイを
使用する。このようにして、抗体を用いて、ＨＵＰＭと１つ或いはそれ以上の抗
原決定基を共有するあらゆるペプチドの存在を検出することができる。

【０２１２】さらに別の実施例では、その新規の技術が、限定はしないがトリプレット遺伝
子コード及び特異な塩基対相互作用のような特性を含む現在知られているヌクレ
オチド配列の特性に依存する場合には、ＨＵＰＭをコードするヌクレオチド配列
を、将来開発されるあらゆる分子生物学技術において用いることができる。

【０２１３】以下の例は、本発明を例示するために与えるものであり、本発明を制限するも
のではない。

【０２１４】

【実施例】

例示のために、インサイト社クローン７８９９７２を単離したＰＲＯＳＴＵＴ
０３ｃＤＮＡライブラリの準備及び配列決定が記載される。ＬＩＦＥＳＥＱ内の
ライブラリのｃＤＮＡの準備及び配列決定は時間とともに変化しており、徐々に
変化することため、ライブラリが作製され、解析された特定の時期に利用可能な
キット、プラスミド及び装置類を使用している。

【０２１５】１ＰＲＯＳＴＵＴ０３ｃＤＮＡライブラリの作製ＰＲＯＳＴＵＴ０３ｃＤＮＡライブラリは、根治的前立腺切除により７６歳白
人男性から切除された前立腺腫瘍組織から作製された。病理報告では、前立腺の
周囲にグレード３（４段階のうちの）腺癌（Gleasonグレード３＋３）が見られた。神経周囲の浸潤が、前立腺周囲組織を含むように存在した。前立腺の非腫瘍
性の部分は腺線維筋腫性過形成を示した。患者は高いレベルの前立腺特異性抗原
（ＰＳＡ）を有していた。骨盤リンパ節は腫瘍に対して陰性であった。患者の病
歴には、以前に胃潰瘍及びアテローム性硬化症があった。

【０２１６】冷凍組織をBrinkmann Homogenizer Polytron-PT 3000（Brinkmann Instrument
s, INC., Westbury, NJ）を用いて、グアニジウムイソチオシアネートの中でホモジナイズし溶解した。この溶解産物は、StratageneのＲＮＡ単離プロトコル（
Stratagene）毎にｐＨ４．０の酸性フェノールで一度抽出され、ｐＨ４．０のフ
ェノールクロロフォルムで一度抽出された。ＲＮＡは、０．３Ｍの酢酸ナトリウ
ム及び２．５倍量のエタノールを用いて沈殿され、ＲＮＡアーゼの無い水に再懸
濁され、３７℃で２５分間ＤＮアーゼ処理された。ＲＮＡ抽出及び沈殿は上記の
ように繰返された、その後このｍＲＮＡをOLIGOTEX kit（QIAGEN, Chatsworth,
CA）を用いて単離し、ｃＤＮＡライブラリの作製のために用いた。

【０２１７】このｍＲＮＡをｃＤＮＡ合成、プラスミドクローニング用のSUPERSCRIPT Plas
mid System (Life Technologies)における推奨プロトコルに従って取り扱った(C
at. # 18248-013,Gibco/BRL)。ＰＲＯＳＴＵＴ０３ｃＤＮＡをSEPHAROSE CL4Bカ
ラム（Cat. #275105; Pharmacia）上で分画化し、４００ｂｐを越えるサイズのｃＤＮＡをpSport 1に結合した。次いで、プラスミドpSport1をDH5αコンピテン
ト細胞（Cat.#18258-012; Gibco/BRL）に形質転換した。

【０２１８】２ｃＤＮＡクローンの単離及び配列決定プラスミドＤＮＡは細胞から放出され、REAL Prep 96 Plasmid Kit（Catalog
#26173,QIAGEN, Inc.）を用いて精製した。推奨プロトコルを用いたが、以下の点を変更した。１）２５mg/Lのカルベニシリン及び０．４%のグリセロールと共に１mlの滅菌Terrific Broth（Catalog#22711, Life Technologies, Gaithersbu
rg, MD）において細菌を培養した。（２）植菌の後、培地を１９時間インキュベ
ートし、インキュベーション終了時に、細胞を０．３mlの溶解バッファに溶解し
た。（３）イソプロパノール沈殿の後、プラスミドＤＮＡペレットを０．１mlの
蒸留水に再懸濁した。プロトコルの最終ステップの終了後、サンプルを９６穴ブ
ロックに移し４℃で保管した。

【０２１９】このｃＤＮＡの配列決定は、Peltier Thermal Cyclers （PTC200 from MJ Res
earch, Watertown, MA）及びApplied Biosystems 377 DNA Sequencing Systems と組み合わせてHamilton Micro Lab 2200 （Hamilton, Reno, NV）を用いてSang
er F.及びA.R. Coulsonの方法（1975, J. Mol. Biol.94:441f）により行われた。

【０２２０】３ｃＤＮＡクローン及びそれらの類推されるタンパク質の相同性検索配列表のヌクレオチド配列及び、それらから類推されるアミノ酸配列を問い合
わせ配列として用いて、例えばGenBank、SwissProt、BLOCKS、及びPima IIのようなデータベースを検索した。これらのデータベースには既に同定された配列が
注釈付きで含められており、BLAST（Basic Local Alignment Toolを表す）を用いて相同性（類似性）を有する領域をこのデータベースのなかから検索した（Al
tschul. S.F. (1993) J. Mol. Evol. 36:290-300; Altschulら(1990) J. Mol. B
iol. 215:403-10）。

【０２２１】 BLASTは、ヌクレオチド及びアミノ酸配列の両方のアライメントを作成して配列の類似性を決定する。そのアライメントの局所的性質のために、BLASTは厳密な一致、すなわち原核生物（細菌）や真核生物（動物、菌類、又は植物）を起源
とする相同体を求める際に特に有効である。一次配列パターンや二次構造ギャッ
プの問題を処理する際には、参照して本明細書の一部としているSmith R.F.及び
T.F. Smith（1992, Protein Engineering 5:35-51）に記載のアルゴリズムのような他のアルゴリズムを用いることができる。本明細書に開示された配列の長さ
は少なくとも４９ヌクレオチドであり、不必要な塩基は１２％以下である（この
場合、Ａ、Ｃ、Ｇ、又はＴではなく、Ｎが記録される）。

【０２２２】 BLAST法は、参照して本明細書の一部としているKarlin. S.及びS.F. Altschul
（1993: Proc. Nat. Acad. Sci. 90:5873-7）に詳細に記載されているように、問い合わせ配列とデータベースの配列の一致を検索し、発見したあらゆる配列の
一致の統計的有意性を評価して、ユーザが選択した有意性の閾値を満たす一致の
みを報告する。本出願での閾値は、ヌクレオチドで１０^-25、ペプチドで１０^-10 に設定した。

【０２２３】インサイト社ヌクレオチド配列が霊長類（ｐｒｉ）、齧歯類（ｒｏｄ）及び哺
乳動物（ｍａｍ）配列の場合にＧｅｎＢａｎｋデータベースに対して検索され、
その後同じクローンから推定されたアミノ酸配列が、GenBank機能タンパク質データベース、哺乳動物（ｍａｍｐ）、脊椎動物（ｖｒｔｐ）及び真核生物（ｅｕ
ｋｐ）に対して相同性を検索された。

【０２２４】４ノーザン分析ノーザン分析は、遺伝子の転写物の存在を検出するために用いられる実験技術
であり、標識されたヌクレオチド配列と特定の細胞タイプまたは組織に由来する
ＲＮＡが結合した膜とのハイブリダイゼーションを行う（Sambrook等、前掲）。

【０２２５】 BLAST（Altschul, S.F. 1993及び1990, 前出）を用いる類似のコンピュータ技
術を用いて、GenBank又はLIFESEQ^TMデータベース（Incyte Pharmaceuticals）の
ようなデータベースにおける同一或いは関連する分子を検索した。この分析は、
多くの膜系ハイブリダイゼーションと比較して非常に高速である。さらにコンピ
ュータ検索の感度を変更して、ある一致が正確な一致か、相同的であるかの分類
を決定することができる。

【０２２６】検索の基準値は、積スコア（product score）であり、これは以下の式で定義されるものである。（配列の一致率（％）×最大BLASTスコア（％））／１００この積スコアは、２つの配列間の類似性の程度、及び配列の長さの一致の両方を
考慮している。例えば、積スコアが４０の場合は、一致は誤差が１〜２％の範囲
で正確であり、スコアが７０の場合は正確に一致している。相同な分子は、通常
積スコアとして１５〜４０を示すものを選択することにより同定されるが、スコ
アの低いものも関連する分子として同定することもできる。

【０２２７】ノーザン分析の結果は、ＨＵＰＭをコードする転写物が発生するライブラリの
リストとして報告される。配列の存在量（abundance）及び存在率（percent abu
ndance）のリストも報告される。存在量は、特定の転写物の検出回数を直接反映
し、存在率は、存在量をｃＤＮＡライブラリ内で検出された配列の総数で割った
値である。

【０２２８】５ＨＵＰＭをコードする配列の延長本発明のポリヌクレオチドのうちの１つの配列を用いて、部分ヌクレオチド配
列を完全長まで伸長するためにオリゴヌクレオチドプライマを設計した。１つの
プライマを合成してアンチセンス方向の伸長を開始し、他のプライマを合成して
センス方向の配列を伸長した。プライマを用いて、対象の領域に対する新規で未
知のヌクレオチド配列を含むアンプリコンを「外側に」発生させる既知の配列の
伸長を容易にした。初期プライマが、OLIGO 4.06 (National Biosciences)或いは他の適当なプログラムを用いてｃＤＮＡから設計され、長さが約２２−３０の
ヌクレオチドになり、５０％以上のＧＣ含有物を有し、約６８−７２℃の温度で
標的配列にアニーリングするようにした。ヘアピン構造及びプライマ−プライマ
２量体化をもたらすことになるヌクレオチドの伸展は避けられた。

【０２２９】選択されたヒトｃＤＮＡライブラリ（Gibco/BRL）を用いて配列を伸長した。２つ以上の伸長が必要或いは望まれる場合には、既知領域をさらに伸長させるた
めに、追加のプライマの組が設計される。

【０２３０】 XL-PCR kit (Perkin Elmer)の取扱説明書に従って、酵素及び反応混合物を完全に混合することにより、高い忠実度の増幅が得られた。各プライマを４０ｐｍ
ｏｌかつキット全ての他の成分を推奨された濃度で開始する場合、ＰＣＲがPelt
ier Thermal Cycler (PTC200; MJ Research, Watertown MA)を用いて、ステップ１１分間９４℃（初期変性）ステップ２１分間６５℃ ステップ３６分間６８℃ ステップ４１５秒間９４℃ ステップ５１分間６５℃ ステップ６７分間６８℃ ステップ７さらに１５サイクル間ステップ４−６の繰返しステップ８１５秒間９４℃ ステップ９１分間６５℃ ステップ１０７分１５秒間６８℃ ステップ１１１２サイクル間ステップ８−１０の繰返しステップ１２８分間７２℃ ステップ１３４℃（保持）のパラメータで実行された。

【０２３１】反応混合物の５−１０μｌ部分標本が低濃度（約０．６−０．８％）アガロー
スミニゲル上で電気泳動法により分析され、どの反応物が配列の伸長に成功した
かを判定した。最も大きな生成物を含むと考えられる帯がゲルから切除され、QI
A Quick^TM (QIAGEN Inc.Chatsworth, CA)を用いて精製され、再結合及びクローニングを容易にするためにクレノウ酵素を用いて、オーバーハングから切除され
た。

【０２３２】エタノール沈殿後、その生成物は１３μｌの連結緩衝液中に再溶解され、１μ
ｌＴ４−ＤＮＡリガーゼ（１５ユニット）及び１μｌＴ４ポリヌクレオチドキナ
ーゼが加えられ、その混合物は２〜３時間室温で、或いは１６℃で一晩の間イン
キュベートされた。コンピテントＥ．ｃｏｌｉ細胞（４０μｌの適当な媒質内に
ある）が３μｌの連結混合物と形質転換され、８０μｌのＳＯＣ媒質内で培養さ
れた（例えばSambrook、前掲、付録Ａ p.2を参照されたい）。３７℃で１時間イ
ンキュベートした後、Ｅ．ｃｏｌｉ混合物が、２ｘＣａｒｂを含むLuria Bertan
i (LB)-agar (Sambrook、前掲、付録Ａ p.1を参照されたい)上に蒔かれた。翌日
、いくつかのコロニーが各プレートから無作為に選び取られ、適当な市販の滅菌
９６穴微量定量プレートの個々のウエル内に置かれた１５０μｌの液体ＬＢ／２
ｘＣａｒｂ媒質内で培養された。その翌日、各５μｌの一晩おいた培養株が有菌
の９６穴プレートに移され、水で１：１０に希釈された後、５μｌの各サンプル
がＰＣＲアレイに移された。

【０２３３】ＰＣＲ増幅の場合、４ユニットのｒＴｔｈＤＮＡポリメラーゼ、ベクタプライ
マ及び伸長反応のために用いられる１つ或いは両方の遺伝子特異的プライマを含
む１８μｌの濃縮ＰＣＲ反応混合物（３．３ｘ）が各ウエルに加えられた。増幅
は、ステップ１６０秒間９４℃ ステップ２２０秒間９４℃ ステップ３３０秒間５５℃ ステップ４９０秒間７２℃ ステップ５さらに２９サイクルの間ステップ２−４の繰返しステップ６１８０秒間７２℃ ステップ７４℃（保持）の条件で実行された。

【０２３４】ＰＣＲ反応物の部分標本が、分子重量マーカと共にアガロースゲル上で処理さ
れた。ＰＣＲ生成物の大きさが、元の部分ｃＤＮＡと比較され、適当なクローン
が選択され、プラスミドに結合され、そして配列決定された。

【０２３５】同様にして、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５、ＳＥＱＩＤＮＯ：１６、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７、
ＳＥＱＩＤＮＯ：１８、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９、ＳＥＱＩＤＮＯ：
２０、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２、ＳＥＱＩＤ
ＮＯ：２３及びＳＥＱＩＤＮＯ：２４のヌクレオチド配列を用いて、上記手
順、５´伸長用に設計されたオリゴヌクレオチド及び適当なゲノムライブラリを
用いて５´調節配列を得る。

【０２３６】６個々のハイブリダイゼーションプローブの標識及び使用ＳＥＱＩＤＮＯ：１３、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４、ＳＥＱＩＤＮＯ
：１５、ＳＥＱＩＤＮＯ：１６、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７、ＳＥＱＩＤＮＯ：１８、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９、ＳＥＱＩＤＮＯ：２０、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２、ＳＥＱＩＤＮＯ：２３及
びＳＥＱＩＤＮＯ：２４に基づくハイブリダイゼーションプローブを用いて
、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ並びにゲノムＤＮＡをスクリーニングする。約２０塩基対
からなるオリゴヌクレオチドの標識について特に記載されるが、より大きなｃＤ
ＮＡフラグメントの場合でも概ね同じ手順を用いる。オリゴヌクレオチドをOLIG
O 4.06（National Bioscience）のような最新のソフトウェアを用いてデザインし、５０ｐｍｏｌの各オリゴマと、２５０μＣｉの[γ‐³²Ｐ]アデノシン三リン
酸（Amersham）及びＴ４ポリヌクレオチドキナーゼ（DuPont NEN、Boston MA）とを組み合わせて用いることにより標識する。標識されたオリゴヌクレオチドを
、Sephadex G-25超精細樹脂カラム（Pharmacia & Upjohn）を用いて精製する。
毎分１０⁷カウントの標識されたプローブを含むアリコットを、エンドヌクレアーゼ（AseI，Bgl II，EcoRI，Pst I，Xba1或いはPvuII；DuPont NEN）の１つを用いて切断したヒトゲノムＤＮＡの典型的な膜系ハイブリダイゼーション分析に
おいて用いる。

【０２３７】各切断物からのＤＮＡを、０．７％アガロースゲル上で分画して、ナイロン膜
（Nytran Plus, Schleicher & Schuell, Durham NH）に転写する。ハイブリダイ
ゼーションは４０℃で１６時間行われる。非特異的シグナルを取り除くため、ブ
ロットを、０．１ｘクエン酸ナトリウム食塩水及び０．５％ドデシル硫酸ナトリ
ウムまでの徐々に厳密性が増す条件で順次室温にて洗浄する。XOMAT AR^TMフィル
ム（Kodak, Rochester, NY）を、Phosphoimager cassette（Molecular Dynamics
, Sunnyvale, CA）においてブロットに数時間露光した後、ハイブリダイゼーションパターンを視覚的に比較する。

【０２３８】７マイクロアレイマイクロアレイ用のオリゴヌクレオチドを作製するために、本明細書に記載の
ヌクレオチド配列を、ヌクレオチド配列の３´末端からコンピュータアルゴリズ
ムを用いて調査する。このアルゴリズムは、その遺伝子に固有で、ハイブリダイ
ゼーションに適した範囲内のＧＣ含量を有し、かつハイブリダイゼーションを妨
げるような予想される２次構造が存在しない、所定の長さの各オリゴマを同定す
る。このアルゴリズムは、長さ２０ヌクレオチドの２０個の配列特異的オリゴヌ
クレオチド（２０量体）を同定する。各配列の中央の１個のヌクレオチドだけが
変化している点を除いて一致しているオリゴヌクレオチドの組を作製する。この
プロセスはマイクロアレイにおける各遺伝子について繰り返され、２０個の２０
量体の組が二組、光照射化学プロセスを用いてシリコンチップの表面上で合成さ
れ配列される（Chee, M、前掲）。

【０２３９】別法では、化学結合手順及びインクジェット装置を用いて、基板の表面上でオ
リゴマを合成する（Baldeschweiler, J.D.、前掲）。さらに別の形態では、ドッ
トブロット法（またはスロットブロット法）に類似した「グリッド」アレイを用
いて、真空システム、熱、ＵＶ、機械的又は化学的結合手順を利用してｃＤＮＡ
フラグメント又はオリゴヌクレオチドを基板の表面に配置し結合させる。アレイ
は、手を用いることにより、又は市販の材料及び機械を用いることによって製造
することができ、８ドット、２４ドット、９４ドット、３８４ドット、１５３６
ドット、又は６１４４ドットの格子を有することができる。ハイブリダイゼーシ
ョン後、マイクロアレイを洗浄してハイブリダイズしていないプローブを取り除
き、スキャナーを用いて蛍光のレベル及びパターンを決定する。走査画像を調べ
て、マイクロアレイ上の各オリゴヌクレオチド配列の相補性の程度及び相対的な
量を求める。

【０２４０】８相補的ポリヌクレオチドＨＵＰＭをコードする配列或いはその任意の一部に対して相補的な配列は、自
然発生のＨＵＰＭの発現を低減又は阻害するために用られる。約１５〜約３０個
の塩基対を含むオリゴヌクレオチドの使用について特に記載されるが、より小さ
な配列或いはより大きな配列フラグメントの場合でも概ね同じ方法を用いること
ができる。Oligo4.06ソフトウェア及びＨＵＰＭのコーディング配列を用いて、適切なオリゴヌクレオチドを設計することができる。転写を阻害するためには、
最も固有の５′配列から相補的なオリゴヌクレオチドをデザインし、これを用い
てプロモータがコーディング配列に結合するのを阻害する。翻訳を阻害するため
には、相補的なオリゴヌクレオチドをデザインして、リボソームがＨＵＰＭをコ
ードする転写物に結合するのを防ぐ。

【０２４１】９ＨＵＰＭの発現ＨＵＰＭの発現は、ｃＤＮＡを適切なベクタ内にサブクローニングし、そのベ
クターを宿主細胞に移入することによって達成される。この場合、大腸菌におい
てＨＵＰＭを発現させるためにクローニングベクタも用いられる。クローニング
部位の上流には、β−ガラクトシダーゼに対するプロモータが存在し、その後ろ
にはアミノ末端Met及びβ−ガラクトシダーゼの７残基を含む配列が存在する。後続のこれら８つの残基は、転写に役立つバクテリオファージプロモータであり
、多くの固有の制限部位を含むリンカーである。

【０２４２】単離された形質移入菌株を、ＩＰＴＧを用いて標準的な方法で誘導し、初めの
βガラクトシダーゼの７残基、約５〜１５残基のリンカー、及び完全長タンパク
質からなる融合タンパク質を作製する。このシグナル配列が細菌増殖培地へのＨ
ＵＰＭの分泌を誘導し、この培地を以下に記載の活性のアッセイにおいて直接用
いることができる。

【０２４３】１０ＨＵＰＭの活性の実証ＨＵＰＭのセリンプロテアーゼ活性は、種々のペプチドチオベンジルエステル
（peptide thiobenzyl ester）基質の加水分解により測定される。基質は種々の
ＳＰタイプ（キマーゼ、トリパーゼ、アスパーゼ等）を表すように選択される。
室温（〜２５℃）において検定が実行され、０．０１ＭＣａＣｌ₂並びに８％ジメチルスルホキシドを含むｐＨ７．５のＨＥＰＥＳバッファにＨＵＰＭのアリコ
ート及び適当な基質を収容する。その反応は、加水分解中に遊離されたチオベン
ジル基と反応し、それをチオピリドンに変える０．３４ｍＭジチオピリジンも含
む。その反応は光学キュベットにおいて実行され、チオピリドンの生成が、３２
４ｎｍで生じた吸収により分光光度計において測定される。その反応において生
成されたチオピリドンの量がＨＵＰＭの活性に比例する。

【０２４４】１１ＨＵＰＭ特異的抗体の産生標準的なプロトコルを用いたウサギの免疫化及び抗体の産生には、ＰＡＧＥ電
気泳動法（Sambrook前掲）または他の精製技術を用いて実質的に精製されたＨＵ
ＰＭを用いる。ＳＥＱＩＤＮＯ：１１−２０から類推されるアミノ酸配列をDN
AStarソフトウエア（DNASTAR社）を用いて解析して免疫原性の高い領域を決定し
、対応するオリゴペプチドを当業者が周知の手段により合成して、当業者に周知
の方法で抗体を産生するために用いる。Ｃ末端付近或いは隣接する親水性領域内
のエピトープのような、適切なエピトープの選択については、Ausubel等（前掲）の論文等に記載されている。

【０２４５】典型的にはオリゴペプチドは長さ１５残基で、ｆｍｏｃ（フルオレニルメトキ
シカルボニル）化学作用を用いるApplied Biosystems Peptide Synthesizer Mod
el 431Aを用いて合成され、M-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester（
MBS: Ausubel等、前出）と反応することによりキーホールリンペットヘモシアニ
ン(KLH, Sigma, St.Louis, MO)に結合される。ウサギは、完全なフロイントアジ
ュバント内でオリゴペプチド−ＫＬＨ複合体で免疫される。その結果生じる抗血
清は、例えば、プラスチックにペプチドを結合し、１％ＢＳＡで遮断し、ウサギ
抗血清と反応させ、洗浄し、さらに放射ヨウ素標識されたヤギ抗ウサギＩｇＧと
反応させることにより、抗ペプチド活性に対して検査される。

【０２４６】１２特異的抗体を用いる自然発生ＨＵＰＭの精製自然発生或いは組換えＨＵＰＭは、ＨＵＰＭに対して特異な抗体を用いる免疫
親和性クロマトグラフィにより実質的に精製される。免疫親和性カラムが、ＨＵ
ＰＭ抗体を、CnBr-activated Sepharose (Pharmacia＆Upjohn)のような活性化さ
れたクロマトグラフ樹脂に共有結合させることにより構成される。結合後、製造
者の取扱説明書に従って樹脂は遮断及び洗浄される。

【０２４７】ＨＵＰＭを含む培地を免疫親和性カラム上を通過させ、カラムは、ＨＵＰＭを
選択吸収させる条件下（例えば洗浄剤中に高イオン強度緩衝剤を入れたもの）で
洗浄される。カラムは、抗体／ＨＵＰＭ結合を分裂させる条件下（ｐＨ２−３の
緩衝剤或いは尿素或いはチオシアネートイオンのような高濃度のカオトロープ）
で溶出され、ＨＵＰＭが回収される。

【０２４８】１３ＨＵＰＭと相互作用する分子の同定ＨＵＰＭ或いはその生物学的活性フラグメントが、¹²⁵I Bolton-Hunter試薬(B
olton AE 等(1973) Biochem J 133:529)を用いて標識される。多穴プレートのウ
エル内に以前に配列された候補分子が、標識されたＨＵＰＭでインキュベートさ
れ、洗浄され、標識されたＨＵＰＭ複合体を有する任意のウエルが検定される。
種々のＨＵＰＭ濃度から得られたデータを用いて、数、親和性及びＨＵＰＭと候
補分子との関係を示す値を計算する。

【０２４９】上記明細書中に記載された全ての特許出願及び特許は参照して本明細書の一部
としている。記載された本発明の方法及びシステムの種々の変更例及び変形例は
、本発明の範囲及び精神から逸脱することなく当業者には明らかとなろう。本発
明は特定の好適な実施例に関連して記載されてきたが、請求される本発明はその
ような特定の実施例に不当に制限されるべきでないことを理解されたい。実際に
、本発明を実施するために記載された形態の種々の変更例は、分子生物学或いは
関連する分野の当業者には明らかであり、以下の請求の範囲内に入るものと考慮
されたい。

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ４Ｈ０４５ 9/48 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 9/64 Ａ６１Ｋ 37/54 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ａ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者ヒルマン、ジェニファー・エルアメリカ合衆国カリフォルニア州94040・マウンテンビュー・＃12・モンロードライブ 230 (72)発明者ユエ、ヘンリーアメリカ合衆国カリフォルニア州94087・サニーベイル・ルイスアベニュー 826 (72)発明者ゲグラー、カール・ジェイアメリカ合衆国カリフォルニア州94025・メンロパーク・オークランドアベニュー 1048 (72)発明者コーレイ、ニール・シーアメリカ合衆国カリフォルニア州94040・マウンテンビュー・＃30・デールアベニュー 1240 (72)発明者タング、ワイ・トムアメリカ合衆国カリフォルニア州94087・サニーベイル・＃14・イーストレミントンドライブ 110 (72)発明者シャー、パルビアメリカ合衆国カリフォルニア州94087・サニーベイル・＃５・クイーンシャルロットドライブ 1608 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 AA19 BA14 CA04 CA09 CA20 DA06 EA04 GA11 HA03 HA13 HA14 4B050 CC01 CC03 DD11 EE01 FF13E FF14E LL01 LL03 LL05 4B063 QA01 QA08 QA20 QQ43 QQ53 QR08 QR32 QR40 QR42 QR56 QR62 QR84 QS16 QS25 QS34 QX02 QX10 4B065 AA01X AA26X AA58X AA72X AA87X AA93Y AB01 AC14 BA02 BD14 CA33 CA44 CA46 4C084 AA02 AA06 AA07 BA01 BA08 BA20 BA22 BA23 CA17 DC02 NA14 ZB012 ZB212 ZB261 4H045 AA11 CA40 DA76 DA89 EA20 EA50 GA01 GA26 GA30

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ＳＥＱＩＤＮＯ：１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２、ＳＥ
ＱＩＤＮＯ：３、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、ＳＥＱＩＤＮＯ：５、ＳＥ
ＱＩＤＮＯ：６、ＳＥＱＩＤＮＯ：７、ＳＥＱＩＤＮＯ：８、ＳＥ
ＱＩＤＮＯ：９、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１及
びＳＥＱＩＤＮＯ：１２並びにそのフラグメントからなる群から選択された
アミノ酸配列を含む実質的に精製されたヒトプロテアーゼ分子（ＨＵＰＭ）。
【請求項２】請求項１のアミノ酸配列に少なくとも９０％アミノ酸同一
性を有するＨＵＰＭの実質的に精製された変異体。
【請求項３】請求項１のＨＵＰＭをコードする単離され、精製されたポ
リヌクレオチド配列。
【請求項４】請求項３のポリヌクレオチド配列に少なくとも９０％ポリ
ヌクレオチド同一性を有する単離され、精製されたポリヌクレオチド変異配列。
【請求項５】請求項３のポリヌクレオチドを含む組成物。
【請求項６】請求項３のポリヌクレオチド配列に厳密な条件下ハイブリ
ダイズする単離され、精製されたポリヌクレオチド配列。
【請求項７】請求項３のポリヌクレオチド配列に相補的な単離され、精
製されたポリヌクレオチド配列。
【請求項８】ＳＥＱＩＤＮＯ：１３、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４、
ＳＥＱＩＤＮＯ：１５、ＳＥＱＩＤＮＯ：１６、ＳＥＱＩＤＮＯ：
１７、ＳＥＱＩＤＮＯ：１８、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９、ＳＥＱＩＤ
ＮＯ：２０、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２、ＳＥＱ
ＩＤＮＯ：２３及びＳＥＱＩＤＮＯ：２４並びにそのフラグメントからな
る群から選択されたポリヌクレオチド配列を含む単離され、精製されたポリヌク
レオチド配列。
【請求項９】請求項８のポリヌクレオチド配列に少なくとも９０％ポリ
ヌクレオチド同一性を有する単離され、精製されたポリヌクレオチド変異配列。
【請求項１０】請求項８のポリヌクレオチド配列に相補的な単離され、
精製されたポリヌクレオチド配列。
【請求項１１】請求項３のポリヌクレオチド配列の少なくともフラグメ
ントを含む発現ベクタ。
【請求項１２】請求項１１の発現ベクタを含む宿主細胞。
【請求項１３】ＳＥＱＩＤＮＯ：１、ＳＥＱＩＤＮＯ：２、Ｓ
ＥＱＩＤＮＯ：３、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、ＳＥＱＩＤＮＯ：５、Ｓ
ＥＱＩＤＮＯ：６、ＳＥＱＩＤＮＯ：７、ＳＥＱＩＤＮＯ：８、Ｓ
ＥＱＩＤＮＯ：９、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１
及びＳＥＱＩＤＮＯ：１２並びにそのフラグメントからなるアミノ酸配列を
含むポリペプチドを生成するための方法であって、ａ）前記ポリペプチドの発現に適した条件下で請求項１２の宿主細胞を培養す
る過程と、ｂ）前記宿主細胞培養株から前記ポリペプチドを回収する過程とを有すること
を特徴とする方法。
【請求項１４】適当な医薬品担体とともに請求項１のＨＵＰＭを含む医
薬品組成物。
【請求項１５】請求項１のＨＵＰＭに特異に結合する精製された抗体。
【請求項１６】請求項１のＨＵＰＭの精製されたアゴニスト。
【請求項１７】請求項１のＨＵＰＭの精製されたアンタゴニスト。
【請求項１８】請求項１４の医薬品組成物の有効量を治療を要する被検
者に投与する過程を含む細胞増殖性障害を治療或いは予防するための方法。
【請求項１９】請求項１４の医薬品組成物の有効量を治療を要する被検
者に投与する過程を含む免疫障害を治療或いは予防するための方法。
【請求項２０】請求項１７の精製されたアンタゴニストの有効量を治療
を要する被検者に投与する過程を含む細胞増殖性障害を治療或いは予防するため
の方法。
【請求項２１】請求項１７の精製されたアンタゴニストの有効量を治療
を要する被検者に投与する過程を含む免疫障害を治療或いは予防するための方法
。
【請求項２２】核酸材料を含む生物学的サンプルにおいてＨＵＰＭをコ
ードするポリヌクレオチドを検出するための方法であって、（ａ）前記生物学的サンプルの前記核酸材料の少なくとも１つに請求項７のポ
リヌクレオチドをハイブリダイズさせ、それによりハイブリダイゼーション複合
体を形成する過程と、（ｂ）前記ハイブリダイゼーション複合体を検出する過程とを有し、前記ハイ
ブリダイゼーション複合体の存在が前記生物学的サンプルにおいてＨＵＰＭをコ
ードするポリヌクレオチドの存在と相関をなすことを特徴とする方法。
【請求項２３】前記生物学的サンプルの前記核酸材料が、ハイブリダイ
ゼーション前にポリメラーゼ連鎖反応により増幅されることを特徴とする請求項
２２に記載の方法。