JP2002500009A - ヒトシグナルペプチド含有タンパク質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、ヒトシグナルペプチド含有タンパク質（SIGP）並びにSIGPを同定及びコードするポリヌクレオチドを提供する。また、本発明は発現ベクター、宿主細胞、抗体、アゴニスト、及びアンタゴニストを提供する。更に、本発明はSIGPの発現に関わる疾患の治療または予防の方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 技術分野 本発明は、ヒトシグナルペプチド含有タンパク質(human signal peptide-cont
aining proteins)の核酸配列およびアミノ酸配列、並びに癌および免疫疾患の診
断・予防・治療におけるこれらの配列の利用法に係るものである。

【０００２】 発明の背景 全ての生細胞にとってタンパク質輸送は必須のプロセスである。通常、個々の
タンパク質輸送は、タンパク質を標的としてリボソームのアセンブリー部位から
特定の細胞もしくは細胞外部位へ向けるアミノ末端のシグナル配列を介して起こ
る。輸送には次に示す幾つかのステップの何れかの組合せが関与し、そのステッ
プには、シャペロンとの接触、変性、受容体および／または細孔複合体との相互
作用、エネルギの付加、再折りたたみ（再生）が含まれる。更に、細胞外タンパ
ク質は不活性の前駆体として産生される。前駆体が一旦移出されると、翻訳後の
プロセシング（例えば、グルコシル化またはリン酸化）及びシグナルペプチダー
ゼによるシグナル配列の除去でタンパク質が活性化される。シグナル配列は、受
容体、基質分子（例えばアドヒージョン、カドヘリン、細胞外基質、インテグリ
ン、及びセレクチン）、サイトカイン、ホルモン、増殖および分化因子、神経ペ
プチド、血管媒介物(vasomediators)、ホスホキナーゼ、ホスファターゼ、ホス ホリパーゼ、ホスホジエステラーゼ、G及びRas関連タンパク質、イオンチャネル
、輸送体／ポンプ、プロテアーゼ、及び転写制御因子に共通である。

【０００３】 Gタンパク質共役型受容体（GPCR）は、細胞外シグナルを伝達する膜内在性タ ンパク質のスーパーファミリーである。GPCRには、例えばドーパミン、エピネフ
リン、ヒスタミン、グルタミン酸（代謝調節型の効果）、アセチルコリン（ムス
カリン性の効果）、及びセロトニンのような生体アミンの受容体や、例えばプロ
スタグランジン、血小板活性化因子、及びロイコトリエンのような炎症の脂質メ
ディエイタの受容体や、例えばカルシトニン、C5aアナフィラトキシン、卵胞刺 激ホルモン、ゴナドトロピン放出ホルモン、ニューロキニン、オキシトシン、及
びトロンビンのようなペプチドホルモンの受容体や、例えば網膜感光色素、嗅覚
刺激性分子のような感覚性シグナルメディエイタの受容体が含まれる。

【０００４】 これらの高度保存受容体の構造は、7つの疎水性膜貫通領域、第2及び第3の細 胞外ループの間のシステインジスルフィド架橋、及び細胞外N末端、細胞質内C末
端からなる。3つの細胞外ループは、3つの細胞内ループに代替されて7つの膜貫 通領域と結びつく。N末端は配位子と相互作用し、ジスルフィド架橋はアンタゴ ニスト及びアゴニストと相互作用し、また大きな第3細胞内ループはGタンパク質
と相互作用して、サイクリックAMP（cAMP）、ホスホリパーゼC、イノシトール3 リン酸、またはイオンチャネルタンパク質のようなセカンドメッセンジャーを活
性化する。これらのタンパク質の最も保存的な部分は、膜貫通領域および第1の2
つの細胞質内ループである。第2の細胞質内ループに存在する保存的な酸性-Arg-
芳香族トリプレットは、Gタンパク質と相互作用する。次のコンセンサスパター ン、[GSTALIVMYWC]-[GSTANCPDE]-{EDPKRH}-x(2)-[LIVMNQGA]-x(2)-[LIVMFT]-[GS
TANC]-[LIVMFYWSTAC]-[DENH]-R-[FYWCSH]-x(2)-[LIVM]は、このスーパーファミ リーに属する殆どのタンパク質に特有のものである（Watson, S.及びS.Arkinsta
ll(1994)The G-protein Linked. Receptor Facts Book, Academic Press. San D
iego,CA,pp.2-6；Bolander, F.F.(1994)Molecular Endcrinology,Academic Pres
s,San Diego,CA,pp.8-19）。

【０００５】 テトラスパニン(tetraspanins)は、系列特異的(lineage-specific)タンパク質
、インテグリン、及び他ののテトラスパニンを含む細胞表面シグナル伝達複合体
の形成および安定性を促進する膜タンパク質のスーパーファミリーである。それ
らは細胞の活性化、増殖（癌を含む）、分化、接着、及び運動に関連する。これ
らのタンパク質は膜を4度横切り、また保存された細胞外ならびに細胞内のN末端
およびC末端と、保存されない親水性ドメインを有する。高度に保存された3つの
極性アミノ酸は膜貫通ドメイン（TM）に位置し、アスパラギンはTM1に、グルタ ミン酸またはグルタミンはTM3とTM4に位置する。保存された3つの荷電残基の内 の2つは、グルタミン酸残基を含み、TM2とTM3の間の細胞質内ループに存在する 。TM3とTM4の間の細胞外ループは4つの保存されたシステイン残基を含み、それ らの2つはTM3まで約50残基のC末端に位置する保存されたCCGモチーフのものであ
り、1つは多くの場合グリシンの後に続くTM4まで11残基のN末端のものであり、1
つはPXSCモチーフに見られる細胞外ループのものである。テトラスパニンには、
例えば血小板および内皮細胞の膜タンパク質、白血球表面のタンパク質、組織特
異性および腫瘍状抗原、並びに網膜色素変性症関連の遺伝子ペリフェリン(perip
herin)が含まれる（Maecker,H.T.ら(1997)FASEB J.11:428-442）。基質タンパク
質（MPs）は、組織の形成、成長、再構築、及び維持に作用し、また炎症反応の 媒介物及び制御因子として機能する。MPsの発現およびバランスは、先天的疾患 、後成的疾患、又は感染症の結果生じる生化学的変化によって乱される。更に、
MPsは免疫応答における白血球の移動、増殖、分化、及び活性化に影響を及ぼす 。

【０００６】 MPsには種々のタンパク質とそれらの機能が含まれる。細胞外基質（ECM）タン
パク質は、ECMの多様な機能に関して重要な役割を果たす多領域タンパク質であ る。ECMタンパク質は、しばしば1以上のドメインの存在によって特徴づけられ、
そのドメインには、コラーゲン様ドメイン、EFG様ドメイン、免疫グロブリン様 ドメイン、フィブロネクチン様ドメイン、vWFA様モジュールが含まれる（Ayad,
S.ら(1994)The Extracellular Matrix Facts Book,Academic Press,San Diego,C
A,pp.2-16）。細胞接着分子（CAMs）は、他の分子との同種および／または異種 親和性の相互作用によって軸索の成長を刺激することが明らかにされている。更
に、接着分子とそれらの受容体との間の相互作用は、共有されたシグナル伝達経
路を介して細胞生化学における成長因子の効果を強化し得る（Ruoslahti,E.(199
7)Kidney Int.51:1413-1417）。カドヘリンは、多細胞生物の固体組織の細胞− 細胞接着の媒介において機能するカルシウム依存性の糖たんぱく質のファミリー
を含む。インテグリンは、細胞骨格との相互作用によって細胞をECMと結び付け る遍在性の膜貫通接着分子である。またインテグリンは、シグナル伝達受容体と
して機能し、細胞内のカルシウムレベルやプロテインキナーゼ活性の変化を誘導
する（Sjaastad,M.D.及びNelson,W.J.(1997)BioEssays 19:47-55）。レクチンは
、個別のモジュラー炭水化物認識ドメイン（CRDs）によって細胞膜に炭水化物を
結合させる能力によって特徴づけられるタンパク質である（Kishore,U.ら(1997)
Matrix Biol.15:583-592）。所定のサイトカイン及び膜貫通タンパク質は、細胞
外もしくは細胞内の配位子や、分泌性経路におけるタンパク質や、又はシグナル
伝達経路における分子との相互作用を強化するCRDsを有する。リポカリンのスー
パーファミリーは、種々の生理学的に重要な配位子に結合することによって、或
いはそれを輸送することによって機能する40以上のタンパク質の系統学的に保存
されたグループを構成する。このファミリーの構成要素は、レチノイド、匂い物
質、発色団、フェロモン、及びステロールの担体として機能し、またこれらのタ
ンパク質のサブセットは、生合成酵素または特異的な酵素阻害因子として多機能
に役立つ（Tanaka,T.ら(1997)J.Biol.Chem.272:15789-15795；及びvan't Hof,W.
ら(1997)J.Biol.Chem.272:1837-1841）。セレクチンは、炎症性の血管内皮や幾 つかの白血球の表面において発現されるカルシウムイオン依存性レクチンのファ
ミリーである。それらは、血液細胞と血管壁の間の接着性の接触や回転運動に介
在する。セクレチン及びそれらの配位子の構造は、流れの条件下で細胞が運ばれ
ることを可能にする解離及び結合形成のタイプを維持する（Rossiter,H.ら(1997
)Mol.Med.Today 3:214-222）。

【０００７】 プロテインキナーゼは、リン酸基をタンパク質に付加することによって、多種
多様な細胞の増殖、分化、及びシグナル伝達プロセスを調節する。可逆的なタン
パク質のリン酸化は、真核生物の細胞においてタンパク質の機能的活性を制御す
るための基本的な方法である。このような活性状態にさせる高エネルギのリン酸
は、プロテインキナーゼによってアデノシン3リン酸（ATP）から特定のタンパク
質へ移され、またプロテインホスファターゼによってそのタンパク質から取除か
れる。リン酸化は、細胞外シグナル、細胞周期チェックポイント、及び環境性も
しくは栄養性のストレスに応じて起こる。プロテインキナーゼは概して2つのグ ループ、即ちチロシン残基をリン酸化するプロテインチロシンキナーゼ（PTKs）
とセリン若しくはスレオニン残基をリン酸化するセリン／スレオニンキナーゼ（
STKs）とに分類することができる。プロテインキナーゼの幾つかは2重の特異性 を有する。大半のキナーゼは、250〜300アミノ酸の触媒作用ドメインを含んでお
り、それは更に11のサブドメインに分割することができる。サブドメインIからI
Vを含むN末端ドメインは、ATP（またはGTP）ドナー分子を結合して方向づける2 つの浅裂の構造(two-lobed structure)に折り重なる。サブドメインVIAからXIを
含むより大きなC末端ドメインは、タンパク質基質を結合し、ATPから標的アミノ
酸残基のヒドロキシル基へのγリン酸の移動を行なう。サブドメインVは2つのド
メインと結びついている。11の各サブドメインには、高度に保存された特徴的な
モチーフ及び特異的なアミノ酸残基が含まれる（Hardie,G.及びHanks,S.(1995) The Protein Kinase Facts Book ,Vol I,pp.7-47,Academic Press, San Diego,CA
）。

【０００８】 プロテインホスファターゼは、予めプロテインキナーゼによって修飾された分
子からリン酸基を取り除き、従って細胞のシグナル伝達、増殖、分化、接触、及
び発癌に関与する。タンパク質のリン酸化は、真核生物の細胞においてタンパク
質の機能的活性を制御するのに用いる基本的な方法である。高エネルギのリン酸
は、プロテインキナーゼによってATPからタンパク質へ移され、またプロテイン ホスファターゼによってタンパク質から取除かれる。進化的に異なる3つのプロ テインホスファターゼ遺伝子ファミリー、即ちプロテインホスファターゼ（PPs ）、チロシンホスファターゼ（PTPs）、酸／アルカリホスファターゼ（APs）が 存在すると考えられる。PPsは、ホスホセリン／スレオニン残基を脱リン酸化し 、また細胞内における多くのcAMP媒介のホルモン応答の重要な制御因子である。
PTPsは、プロテインチロシンキナーゼの効果を逆転させ、従って細胞周期および
細胞シグナル伝達プロセスにおいて重要な役割を果たす。APsは、in vitroで基 質を脱リン酸化するが、in vitroでのそれらの役割は良く分からない（Carbonne
au,H.及び Tonks,N.K.(1992)Annu.Rev.Cell Biol.8:463-493）。

【０００９】 プロテインホスファターゼインヒビターは、特異的なホスファターゼの活性を
制御する。PP-Iの特異的なインヒビターI-1は、PP-Iに特異的に結合するcAMP依 存性プロテインキナーゼ（PKA）によってリン酸化される際にその活性を阻害す ることが確認されている。PP-Iは、PKAによってリン酸化された多くのタンパク 質を脱リン酸化するので、PKAによるI-1の活性化は、PKAが介在する多くのcAMP 依存性応答およびPKAの効果を増大させるのに役立つ。更に、PP-IはPKAによって
リン酸化されていない多くのリンタンパク質を脱リン酸化するので、I-1活性化 は、別のタンパク質のリン酸化においてcAMPの制御を働かせるのに役立つ。I₁PP
2Aは、PP-IIAの特異的かつ有効なインヒビターである（Li,M.ら (1996)Biochemi
stry 35:6998-7002）。PP-IIAは、セリン／スレオニンキナーゼのリン酸化の逆 を担う主なホスファターゼであるので、I₁PP2Aはタンパク質のリン酸化の調節に
おいて広く効果を有する。

【００１０】 サイクリックヌクレオチド（cAMP及びcGMP）は、細胞内のセカンドメッセンジ
ャーとして機能し、ホルモン、光および神経伝達物質を含む種々の細胞外シグナ
ルを伝達する。サイクリックヌクレオチドホスホジエステラーゼ（PDEs）は、サ
イクリックヌクレオチドを対応する1リン酸に分解し、従ってサイクリックヌク レオチドの細胞内濃度やシグナル伝達へのそれらの影響を調節する。哺乳類のPD
Esの少なくとも7つのファミリーが、基質特異性および親和性、コファクターに 対する感受性ならびに抑制的薬剤に対する感受性に基づき同定されている（Beav
o,J.A.(1995)Physiological Reviews 75:725-748）。PDEsは、〜270のアミノ酸 の触媒作用ドメイン、コファクターの結合を担うN末端調節性ドメインを含み、 また場合によっては未知の機能を有するC末端ドメインを含む。触媒作用ドメイ ンにおいては、PDEファミリーの間で約30%のアミノ酸同一性が存在し、また同じ
ファミリーのアイソザイムの間で〜85-95%の同一性が存在する。更に、ファミリ
ーの中では触媒作用ドメインの外側において広範な類似性（＞60%）があり、一 方ファミリーに跨っては配列の類似性は若干あるか、或いは全くない。種々の疾
患はPDE活性の増加に起因するものであり、PDEsのインヒビターが抗炎症性、降 圧性、及び抗血栓性の薬剤として効果的に用いられてきた（Verghese,M.W.ら (1
995)Mol.Pharmacol.47:1164-1171；Banner,K.H.及びPage,C.P.(1995)Eur.Respir
.J.8:996-1000）。

【００１１】 ホスホリパーゼ（PLs）は、ホスホグリセリドからの脂肪酸残基の除去を触媒 する酵素である。PLsは膜貫通シグナル伝達において重要な役割を果たし、また 加水分解されるホスホグリセリドの特異的なエステル結合に従い命名される（即
ち、A₁、A₂、C、D）。PLA₂は、アラキドン酸を生じさせる膜リン脂質のグリセロ
ール部分の位置2においてエステル結合を切断する。アラキドン酸はエイコサノ イドの4つの主要な分類、即ちプロスタグランジン、プロスタサイクリン、トロ ンボキサンおよびロイコトリエンに共通の前駆体である。エイコサノイドは、平
滑筋の収縮、血小板凝集、並びに痛みおよび炎症反応に関与するシグナル伝達分
子である。PLCは、所定の受容体媒介のシグナル伝達経路におけるリンクにおい て重要である。ホルモン、成長因子、神経伝達物質、及び免疫グロブリンを含む
細胞外のシグナル伝達分子は、各々の細胞表面の受容体に結合し、PLCを活性化 する。活性化されたPLCは、細胞のプロセス（例えば、分泌、神経の活性、代謝 、及び増殖）を調節するイノシトールリン脂質の加水分解によりセカンドメッセ
ンジャー分子を生成する（Alberts,B.ら(1994)Molecular Biology of The Cell,
Garland Publishing,Inc.,New York,NY,pp.85,211,239-240,642-645）。

【００１２】 ヌクレオチドシクラーゼ（即ち、アデニル酸およびグアニル酸シクラーゼ）は
、ATP及びGTPからの各々のサイクリックヌクレオチド（cAMP及びcGMP）の合成を
触媒する。それらはcAMP及びcGMPを分解するホスホジエステラーゼと共に作用し
、これらの分子の細胞の量およびそれらの機能を調節する。cAMP及びcGMPは、細
胞内のセカンドメッセンジャーとして機能し、光および神経伝達物質やホルモン
などの種々の細胞外シグナルを伝達する。アデニル酸シクラーゼは原形質膜タン
パク質であり、原形質膜に位置する種々のホルモン受容体と結合する。ホルモン
がその受容体と結合することにより、アデニル酸シクラーゼが活性化され、サイ
トゾルにおけるAMPのレベルを次々に増大させる。cAMPによる他の分子の活性化 は、ホルモンの細胞性作用(cellular effect)の誘因となる。同様に、グアニル 酸シクラーゼは目の視覚的興奮および光伝達のプロセスに関与する（Stryer,L.(
1988)Biochemistry W.H.Freeman and Co.,New York,pp.975-980,1029-1035）。 サイトカインは細胞の動揺(cell perturbation)に応じて産生される。サイトカ インの幾つかは前駆型として産生され、また活性化のために多量体を形成する。
それらは特定の刺激または疾患に特徴的なパターン及びグループにおいて産生さ
れ、そのグループの構成要素は互いに相互作用し、また別の分子と相互作用して
全体的な生化学的応答を生じさせる。インターロイキン、ニューロトロフィン、
成長因子、インターフェロン、及びケモカインは、全てサイトカインのファミリ
ーであり、細胞の受容体と共に作用して細胞の増殖および分化を調節し、また例
えば白血球の移動および作用、造血性細胞増殖、温度調節、感染に対する急性応
答、組織の再構築、及び細胞の生存のような活動に影響を及ぼす。抗体、或いは
特定のサイトカインの活性を変化させる別の薬剤を使用する研究が、病理学もし
くは生理学において個々のサイトカインの役割を解明するのに利用される。

【００１３】 ケモカインは、白血球の情報交換において活性な小さな化学誘引物質のサイト
カインである。ケモカインは最初は炎症性組織から単離され精製されたが、最近
になってその幾つかは分子クローニング技術によって発見されている。ケモカイ
ンは、細胞の活性化および移動、血管形成および血管制圧(angiostatic)活性、 造血の抑制、HIVの感染力、Th-1 (IL-2-, interferon γ-stimulated)サイトカ イン遊離の促進において活性であることが明らかにされている。

【００１４】 ケモカインは一般に70〜100のアミノ酸を含み、保存されたCXC、CC、CX3C、及
びCモチーフの存在ならびに配列に基づいて4つのサブファミリーに細分される。
CXC（α）、CC（β）、及びCX3Cケモカインは、4つの保存されたシステインを含
む。CCサブファミリーは、単球、リンパ球、好酸球、及び肥満細胞において活性
であり、またCXCサブファミリーは好中球において活性であり、更にCX3C及びCサ
ブファミリーはT細胞において活性である。CCケモカインの多くは、構造的およ び機能的に特徴づけられている（Callard,R.及びGearing,A.(1994)The Cytokine Facts Book ,Academic Press, New York,NY,pp.181-190,210-213,223-227）。

【００１５】 成長因子および分化因子は、細胞間の伝達において機能する。一旦細胞から分
泌されると、その因子の幾つかは、機能するためにECMとの結合またはオリゴマ ー形成を必要とする。複合体はこれらの因子の間で相互作用し、それらの受容体
は結果として細胞分裂、細胞の分化、細胞のシグナル伝達、及び細胞の運動の刺
激または阻害となる。その因子の幾つかは、元のそれらの細胞（自己分泌シグナ
ル伝達）や、隣接する細胞（パラ分泌シグナル伝達）や、或いは離れた細胞（内
分泌シグナル伝達）において作用する。

【００１６】 成長因子および分化因子の概ね3つのクラスが存在する。第1のクラスには、例
えば上皮細胞成長因子、線維芽細胞成長因子、腫瘍成長因子、インシュリン様成
長因子、及び血小板由来の成長因子のような大きなポリペプチド成長因子が含ま
れる。これらの各々は関連する分子のファミリーを規定し、その分子は創傷治癒
、骨の合成および再構築、並びに上皮、表皮および結合組織の再生のための細胞
増殖を刺激し、胎生組織の分化を誘発する。神経成長因子は、神経栄養性因子と
して特異的に機能し、その全ては胎生組織の分化を誘発する。第2のクラスには 、例えばBリンパ球、Tリンパ球、赤血球、血小板、好酸球、好塩基球、好中球、
マクロファージ、及びそれらの幹細胞の前駆体のような血液細胞の増殖および分
化を刺激する造血成長因子が含まれる。これらの因子には、コロニー刺激因子、
エリスロポエチン、及びサイトカイン（例えば、インターロイキン、インターフ
ェロン(IFNs)、及び腫瘍壊死因子(TNF)）が含まれる。サイトカインは免疫系の 細胞によって分泌され、免疫調節において機能する。第3のクラスには、例えば ボンベシン、バソプレッシン、オキシトシン、エンドセリン、トランスフェリン
、アンジオテンシンII、血管作用性小腸ペプチド、及びブラジキニンのような小
さなペプチド因子が含まれ、それらはホルモンとして機能して増殖以外の細胞機
能を調節する。

【００１７】 成長因子および分化因子は、in vitroの細胞の腫瘍性形質転換およびin vivo の腫瘍の進行において重要な役割を果たしていることが明らかにされている。腫
瘍細胞による成長因子の不適切な発現は、黒色性腫瘍の血管新生および転移の一
因となる。造血における成長因子の誤った調節の結果として貧血、白血病および
リンパ腫が生じる可能性がある。所定の成長因子（例えば、IFN）は、in vitro およびin vivoのどちらにおいても腫瘍細胞に対して細胞毒性である。更に、成 長因子および／またはそれらの受容体は、腫瘍性タンパク質に対して構造的かつ
機能的に関わる。その上、成長因子はプロトオンコジーン及びオンコサプレッサ
ー遺伝子の双方の転写調節に影響を及ぼす（Pimentel,E.(1994)Handbook of Gro wth Factors ,CRC Press,Ann Arbor,MI,pp.6-25）。

【００１８】 タンパク質分解酵素、即ちプロテアーゼは、ペプチド結合の加水分解に必要な
活性化エネルギーを低下させることによってタンパク質を分解する。主要なファ
ミリーは、亜鉛、セリン、システイン、チオール、及びカルボキシルプロテアー
ゼである。

【００１９】 亜鉛プロテアーゼ（例えば、カルボキシペプチダーゼ）は、活性部位に結合し
た亜鉛イオンを有し、芳香族もしくは粗大な脂肪族側鎖を含むC末端を認識し、C
末端残基に隣接するペプチド結合を加水分解する。セリンプロテアーゼは、活性
部位セリン残基を有し、また消化性酵素（例えば、トリプシン及びキモトリプシ
ン）、血液凝固カスケードの補体の成分、細胞外基質（ECM）分子の分解および 代謝回転を調節する酵素を含む。セリンプロテアーゼのサブファミリーには、ト
リプターゼ(tryptases)（アルギニン又はアルギニンの後の切断）、アスパーゼ(
aspases)（アスパラギン酸の後の切断）、チマーゼ（フェニルアラニン又はロイ
シンの後の切断）、メタ−ゼ(metases)（メチオニンの後の切断）、及びセラー ゼ(serases)（セリンの後の切断）が含まれる。システインプロテアーゼ（例え ば、カテプシン）は、単球、マクロファージ、及び他の免疫細胞によって産生さ
れ、前駆体タンパク質のプロセシングから細胞内分解に及ぶ多様な細胞プロセス
に関与する。これらの酵素の過剰産生は、関節リウマチ及び喘息に関連する組織
破壊の原因となり得る。チオールプロテアーゼ（例えば、パパイン）は、活性部
位システインを含み、また組織内に広く分布する。チオールプロテアーゼは、基
部のヒスチジン側鎖によって促進されたチオールエステル中間体による触媒作用
をもたらす。カルボキシルプロテアーゼ（例えば、ペプシン）は、酸性（pH2〜3
）条件下においてのみ活性である。ペプシンの活性部位には、2つのアスパラギ ン酸残基が含まれ、1つのアスパラギン酸がイオン化されて別のアスパラギン酸 がイオン化されない場合に酵素は活性である。カルボキシルプロテアーゼに共通
の特徴は、それらが非常に低い濃度（10^-10M）の阻害因子ペプスタチンによって
阻害されるということである。プロテアーゼの活性部位において構造的変化を誘
発する基質類似体は、アンタゴニスト又はインヒビターとして働く。

【００２０】 グアノシン3リン酸結合タンパク質（Gタンパク質）は、細胞内のシグナル伝達
に関与し、細胞表面の受容体によって調節性経路を調節する。これらの受容体は
、GTPの結合によって、ホルモン、成長因子、神経調節物質、又は他のシグナル 伝達分子に応答する。GTPの結合は、他のタンパク質の活性化およびリン酸化を 調節するcAMPの生成の誘因となる。このプロセスにおいて、GTPの加水分解は、G
TPase活性のためのオン-オフスイッチとしてだけでなく、エネルギソースとして
作用する。

【００２１】 Gタンパク質は、単一の21〜30kDaのポリペプチドからなる小さなタンパク質で
ある。それらは、5つのサブファミリー、即ちRas、Rho、Ran、Rab、及びADPリボ
シル化因子に分類することができる。これらのタンパク質は、細胞増殖、細胞周
期の調節、タンパク質の分泌、及び細胞内の小胞の相互作用を調節する。特に、
Rasタンパク質は、受容体チロシンキナーゼから細胞の増殖および分化を調節す るセリン／スレオニンキナーゼまでのシグナル伝達において不可欠である。GTP を結合するが加水分解できないミュータントRasタンパク質は、持続的に活性化 され、連続的な細胞増殖、即ち癌の原因となる。

【００２２】 5つの全てのサブファミリーは、共通の構造的特徴および4つの保存されたモチ
ーフ、IからIVを共有する。モチーフIは最も変異性のものであって、またGXXXXG
Kのサインを有し、そこではリジンがGTPのβ-及びγ-リン酸基と相互作用する。
モチーフII、III、及びIVは、それらの各々のサインとしてDTAGQE、NKXD、及びE
XSAXを有し、g-リン酸、GTP、及びGTPのグアニン塩基の各々の結合を調節する。
膜結合型のGタンパク質の殆どは、膜の連合性および生物活性のために、翻訳後 に添加されたカルボキシ末端イソプレニルグループ（CAAX）を必要とする。また
Gタンパク質は、モチーフIとIIの間に位置する可変性のエフェクター領域を有し
、それはグアニンヌクレオチド交換因子またはGTPase活性化タンパク質に対する
相互作用部位として特徴づけられる。

【００２３】 真核生物の細胞は膜に結び付けられ、膜境界の区画に細分される。膜は多くの
イオン及び極性分子に対して不透過性であるので、これらの分子の輸送は、イオ
ンチャネル、イオンポンプ、輸送タンパク質、又はポンプが媒介する。共輸送体
および対向輸送体は、輸送イオン及び小さな分子（例えば、膜を横切るアミノ酸
、グルコース、及び薬剤）によってサイトゾルのpHを調節し、ここで共輸送体(s
ymporters)は小さな分子やイオンを同じ方向に輸送し、対向輸送体(antiporters
)は反対方向に輸送する。輸送体のスーパーファミリーには、MHCクラスI分子に 対する抗原性のペプチド類のターゲティング及び多剤耐性に関与する活性なATP 結合カセット輸送体および促通性の輸送体が含まれる。これらの輸送体は、特異
的なイオン又は他の分子と結合し、膜を横切ってイオン又は分子を輸送するため
に立体配置的変化を受ける。輸送は、受動的、濃度依存的なメカニズムによって
生じ、またATP加水分解もしくはイオン勾配のようなエネルギーソースと結び付 く可能性がある。

【００２４】 イオンチャネルは、膜を横切る一列に並んだ経路を形成する膜貫通タンパク質
によって形成され、それを通って水やイオン（例えばNa⁺、K⁺、Ca²⁺、Cl^-）が細
胞に出入りする。例えば、塩素イオンチャネルは、膜を横切るイオンの吸収およ
び分泌だけでなく、膜電位の調節にも関与している。またエンドサイトーシスの
輸送体およびゴルジ体の細胞内膜において、塩素イオンチャネルは細胞小器官の
pHを調節する。電気生理学的および薬理学的研究により、様々な塩素イオンチャ
ネルが種々の細胞タイプにおいて存在し、またこれらのチャネルの多くは1以上 のプロテインキナーゼリン酸化部位を有していることが提示されている。

【００２５】 イオンポンプは、膜の勾配を活性的に維持するATPaseである。イオンポンプは
、その機能および構造に従って3つのクラス（例えばP、V、F）に分類される。そ
の全ては、膜のサイトゾル面にATPに対する1以上の結合部位を有する。2つのα 及び2つのβ膜貫通サブユニットからなるPクラスのイオンポンプには、Ca²⁺ATPa
se及びNa⁺／K⁺ATPaseが含まれ、またH⁺、Na⁺、K⁺、Ca²⁺イオンの輸送において機
能する。V及びFクラスのイオンポンプは、類似の構造、少なくとも5つの外因性 のポリペプチド及び少なくとも2つの膜貫通タンパク質によって形成されたサイ トゾルのドメインを有し、H⁺のみを輸送する。FクラスのH⁺ポンプ（プロトンポ ンプ）は、ミトコンドリア及び葉緑体から同定されており、またVクラスのH⁺ポ ンプは、リソソーム、エンドソーム、及び植物の液胞内の酸性度を調節する。

【００２６】 促通性のグルコース輸送体として知られる構造的に関連する内因性の膜タンパ
ク質のファミリーは、グルコースや他の選択された糖の原形質膜を横切る移動を
触媒する。このファミリーのタンパク質は、12の膜貫通αへリックスで形成され
た高度に保存された膜貫通ドメインと、幾つかの低位に保存された非対称性の細
胞質内および細胞質外(exoplasmic)のドメインを有する（Pessin,J.E.,及び Bel
l,G.I.(1992)Annu.Rev.Physiol.54:911-930）。

【００２７】 アミノ酸輸送は、Na⁺依存性アミノ酸輸送体によって媒介される。これらの輸 送体は、胃腸および腎臓の食餌性および細胞性のアミノ酸の取り込みや、神経伝
達物質の再取り込みに関与する。陽イオン性のアミノ酸の輸送は、システムy+フ
ァミリーメンバー(system y+ family members)および陽イオン性アミノ酸輸送体
（CAT）ファミリーによって媒介される。CATファミリーの構成要素は、高度の配
列同一性を共有し、各々は12〜14の推定上の膜貫通ドメインを含む（Ito,K.及び
Groudine,M.(1997)J.Biol.Chem.272:26780-26786）。

【００２８】 PEPT1及びPEPT2のような水素イオン結合型(Proton-coupled)の12の膜貫通ドメ
イン輸送体は、電気化学的なH⁺勾配を推進力として利用してペプチドの胃腸の吸
収および腎臓の再吸収を担う。TAP1及びTAP2からなるヘテロ2量体のペプチド輸 送体は、抗原のプロセシングに関連する。ペプチド抗原は小胞体の膜を横切り輸
送され、主要な組織適合性複合体クラスI分子に向けられ得る。各TAPタンパク質
は、複数の疎水性の膜貫通セグメント及び高度に保存されたATP結合カセットか らなる(Boll,M.ら (1996)Proc.Natl.Acad.Sci.93:284-289)。

【００２９】 ホルモンは、体液中を循環し、標的組織細胞の表面または内部の特異的な受容
体に結合する分泌された分子である。それらは多様な生化学的組成および作用機
構を有するが、ホルモンは2つのカテゴリーに分類できる。第1のカテゴリーは小
さな親油性の分子からなり、その分子は標的細胞の原形質膜の中に散在し、サイ
トゾル又は核の受容体と結合し、遺伝子発現を変化させる複合体を形成する。こ
のカテゴリーの例には、レチノイン酸、チロキシン、並びに、ステロイドホルモ
ン、プロゲステロン、エストロゲン、テストステロン、コルチゾール、及びアル
ドステロンに由来するコレステロールが含まれる。これらのホルモンは長い半減
期（例えば、数時間から数日に及ぶ）と、それらの標的細胞の長期的効果を有す
る。血液中のそれらの溶解度は、担体分子との結合によって増加する。標的細胞
の核の中において、ホルモン／レセプター複合体は標的遺伝子の調節性領域で特
異的応答要素と結合する。

【００３０】 第2のカテゴリーは親水性のホルモンからなり、そのホルモンは細胞表面の受 容体と結合することによって機能し、原形質膜を横切ってシグナルを伝達する。
このカテゴリーの例には、カテコールアミン（例えばエピネフリン、ノルエピネ
フリン、ヒスタミン）やペプチドホルモン（例えばグルカゴン、インシュリン、
ガストリン、セクレチン、コレシストキニン、副腎皮質刺激ホルモン、卵胞刺激
ホルモン、黄体形成ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、副甲状腺ホルモン、バソプ
レッシン）のようなアミノ酸誘導体が含まれる。ペプチドホルモンは、不活性化
状態として合成され、分泌性の小胞に蓄えられる。これらのホルモンは、細胞か
ら放出される前に、プロテアーゼの切断によって活性化される。多くの親水性の
ホルモンは、非常に短い半減期および効果（例えば、数秒から数時間）を有し、
また血液中でプロテアーゼによって不活性化される（Lodishら(1995)Molecular Cell Biology ,Scientific American Books Inc.,New York,NY,pp.856-864）。

【００３１】 神経ペプチド及び血管メディエイター(vasomediators) （NP/VM）は、内在性 のシグナル伝達分子の大きなファミリーからなる。そのファミリーに包含される
ものには、ボンベシン、ニューロペプチドY、ニューロテンシン、ニューロメデ ィンN、メラノコルチン、オピオイド（例えばエンケファリン、エンドルフィン 、ダイノルフィン）、ガラニン、ソマトスタチン、タキキニン、バソプレッシン
、及び血管作用性小腸ペプチドのような神経伝達物質や、循環系のシグナル伝達
分子（例えばアンジオテンシン、補体、カルシトニン、エンドセリン、ホルミル
メチオニルペプチド、グルカゴン、コレシストキニン、ガストリン）が含まれる
。これらのタンパク質は、「プレプロ」分子として合成され、タンパク分解の切断
によって活性化、また不活性化される。NP/VMsはシグナルを直接伝達し、他の神
経伝達物質およびホルモンの遊離または活性を変化させ、カスケードにおいて触
媒的酵素として作用する。NP/VMsの効果は、非常に短い範囲か或いは持続性（皮
膚のメラニンにおけるメラノコルチン媒介の変化）である。調節性の分子は、細
胞や組織の種々の誘導的な機構に応じて個々の遺伝子もしくは遺伝子の一群を刺
激および遮断し、また転写が開始されたか、増強されたか、或いは抑圧されたか
どうかを決定することにより転写制御因子として作用し、更に特性の細胞または
組織に要求されるように転写物をスプライシングする。それらは、ゲノム全体に
渡って散在したDNAの短いストレッチと相互作用するが、殆どの遺伝子発現は、 転写が開始される部位の近傍か、或いは発現される遺伝子の読み枠において調節
される。DNAの調節されたストレッチは、単一なものであって単一のタンパク質 のみと相互作用するか、或いは遺伝子発現を調節するために複合体の一部として
作用する幾つかのタンパク質を必要とし得る。認識部位を与える2重らせんの外 的特徴は、へリックスにおける別個のベンドの原因となる配列の規則的な反復ス
トレッチ、水素結合ドナー及びアクセプターグループ、疎水性のパッチ、及び主
溝および副溝である。調節性分子の表面の特徴は、それらのDNAに相補的なこと である。

【００３２】 転写制御因子の多くは、DNA結合の構造的モチーフのセットの1つを組み入れ、
その各々はαへリックス又はβシートの何れかを含み、DNAの主溝に結合する。 転写制御因子に共通の7つの構造的モチーフは、ヘリックス・ターン・ヘリック ス、ホメオドメイン、Znフィンガー、ステロイド受容体、βシート、ロイシンジ
ッパー、及びヘリックス・ループ・ヘリックスである（Pabo,C.O.及びR.T.Sauer
(1992)Ann.Rev.Biochem.61:1053-95）。転写制御因子の別のドメインは、DNAと の重要な接触を形成することがある。更に、付属のタンパク質は、特定のタンパ
ク質複合体を活性化因子またはリプレッサーに転換し、結合を防ぐ重要な相互作
用をもたらす（Alberts,B.ら(1994)Molecular Biology of the Cell,Garland Pu
blishing Co,New York,NY pp.401-474）。

【００３３】 ヒトシグナルペプチド含有タンパク質およびこれらの分子をコードするポリヌ
クレオチドの開示は、癌及び免疫疾患の診断・治療・予防に役立つ新たな組成物
を提供して従来技術における要求を満たすものである。

【００３４】 発明の概要 本発明の特徴は、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SE
Q ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO
:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、及びSEQ ID
NO:15からなるグループより選択されたアミノ酸配列を有する実質的に精製され たヒトシグナルペプチド含有タンパク質（SIGP）である。

【００３５】 更に本発明は、SIGPをコードする単離され実質的に精製されたポリヌクレオチ
ドを提供する。特定の態様においては、そのポリヌクレオチドはSEQ ID NO:16、
SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SE
Q ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ
ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、及びSEQ ID NO:30からなるグループよ
り選択された核酸配列を有する。

【００３６】 更に本発明は、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ
ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:1
0、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、及びSEQ ID NO
:15からなるグループより選択されたSIGPをコードするポリヌクレオチドの何れ かとハイブリダイズするポリヌクレオチドまたはその断片を提供する。別の態様
において、本発明は、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:
19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24
、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、
及びSEQ ID NO:30、又はその断片からなるグループより選択された単離され実質
的に精製されたポリヌクレオチドを含む組成物を提供する。

【００３７】 更に本発明は、SIGPをコードするポリヌクレオチドの何れか1つの相補配列、 又はその断片を含むポリヌクレオチドを提供する。別の態様において、本発明は
、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、
SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SE
Q ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、及びSEQ ID NO:30、
又はその断片の相補配列を含む単離され実質的に精製されたポリヌクレオチドを
含む組成物を提供する。

【００３８】 更に本発明は、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、
SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SE
Q ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、及び
SEQ ID NO:30からなるグループより選択された何れか1つのポリヌクレオチドの 少なくとも断片を含む発現ベクターを提供する。また別の態様では、そのポリヌ
クレオチドを含む発現ベクターは宿主細胞に包含される。

【００３９】 また本発明は、ポリペプチドまたはその断片の製造方法を提供し、その方法に
は、（ａ）前記ポリペプチドの発現に適した条件下で、SIGPをコードするポリヌ
クレオチドの少なくとも断片を含む発現ベクターを含む宿主細胞を培養する過程
と、（ｂ）その宿主細胞の培地から前記ポリペプチドを回収する過程とが含まれ
る。

【００４０】 また本発明は、実質的に精製されたSIGPを適切な製薬用担体と共に含む医薬品
成分を提供する。

【００４１】 更に本発明には、SIGPの精製されたアゴニストおよび精製されたアンタゴニス
トだけでなく、SIGPに結合する精製された抗体が含まれる。

【００４２】 また本発明は、SIGPの活性または発現の低下に関連する癌の治療又は予防の方
法を提供し、その方法には、そのような治療が必要な被験者に対してSIGPを含む
医薬品組成物を有効な量投与する過程が含まれる。

【００４３】 また本発明は、SIGPの活性または発現の増大に関連する癌の治療又は予防の方
法を提供し、その方法には、そのような治療が必要な被験者に対してSIGPのアン
タゴニストを有効な量投与する過程が含まれる。

【００４４】 また本発明は、SIGPの活性または発現の増大に関連する免疫疾患の治療又は予
防の方法を提供し、その方法には、そのような治療が必要な被験者に対してSIGP
のアンタゴニストを有効な量投与する過程が含まれる。

【００４５】 また本発明は、生物学的サンプルにおけるヒト調節タンパク質をコードする核
酸配列の検出方法を提供し、その検出方法には、（ａ）生物学的サンプルの核酸
配列とSIGPをコードするポリヌクレオチドと相補的なポリヌクレオチド配列をハ
イブリダイズさせて、ハイブリダイゼーション複合体を形成する過程と、（ｂ）
前記ハイブリダイゼーション複合体の存在が、前記生物学的サンプルにおけるヒ
ト調節タンパク質をコードする核酸配列の存在と相関性を有する、前記ハイブリ
ダイゼーション複合体を検出する過程とが含まれる。

【００４６】 また本発明は、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ
ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:1
0、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、及びSEQ ID NO
:15からなるグループより選択されたアミノ酸配列を有するポリペプチドをコー ドする少なくとも1つのポリヌクレオチドの少なくとも断片を含むマイクロアレ イを提供する。

【００４７】 また本発明は、生物学的サンプルにおけるヒト調節タンパク質をコードする核
酸の発現レベルの検出方法を提供し、その検出方法には、生物学的サンプルの核
酸配列を相補的なポリヌクレオチドとハイブリダイズさせて、ハイブリダイゼー
ション複合体を形成する過程と、前記ハイブリダイゼーション複合体の存在を同
定することによって、生物学的サンプルにおけるヒト調節タンパク質をコードす
る核酸の発現を測定する過程とが含まれる。好適実施例においては、前記ハイブ
リダイゼーション過程の前に、ポリメラーゼ連鎖反応法により生物学的サンプル
の核酸を増幅および標識する。

【００４８】 発明を実施するための形態 本発明のタンパク質、核酸配列、及び方法について説明する前に、本発明は、
ここに開示した特定の方法論、プロトコル、細胞系、ベクター、及び試薬に限定
されるものではなく、その実施形態は変更可能であることを理解されたい。また
、ここで使用した専門用語は、特定の実施例のみを説明する目的で用いたもので
あり、特許請求の範囲のみで限定される本発明の範囲を限定することを意図した
ものではないことも理解されたい。

【００４９】 請求の範囲を含む本明細書において、単数形の「或る」及び「その（この）」
の表記は、文脈からそうでないことが明らかである場合以外は、複数の意味も含
むことに注意されたい。従って、例えば「或る宿主細胞」の表記には、複数のそ
のような宿主細胞が含まれ、この「抗体」の表記は、１またはそれ以上の抗体及
び当業者に周知のその等価物なども表している。

【００５０】 特別に定義されていない限り、本明細書における全ての専門用語及び特定の用
語は、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者に一般に理解され
るものと同じ意味を有する。ここで説明したものと類似あるいは等価な方法や材
料を本発明の実施や試験において使用可能であるが、本明細書においては好適な
方法、装置、材料を説明する。本発明で言及した全ての文献は、文献で報告され
た本発明に関して用いられ得る株化細胞、ベクター、及び方法論を説明・開示す
るために引用したものである。本明細書のあらゆる開示内容は、本発明が従来発
明によるそのような開示に先行し得ないことを認めるものと解釈してはならない
。

【００５１】 定義 ここで用いる「SIGP」は、任意の種、詳細にはウシ、ヒツジ、ブタ、マウス、ウ
マ、及び好ましくをヒトを含む特定の哺乳類の種から得られたものであって、天
然、合成、半合成か、或いは組換え体を起源として得られた実質的に精製された
SIGPのアミノ酸配列を指す。

【００５２】 ここで用いる用語「アゴニスト」は、SIGPと結合した場合にSIGPの効果を高めた
り、その効果の持続時間を延ばす分子を指す。アゴニストには、SIGPに結合して
その作用を調節するタンパク質、核酸、糖質、または任意の他の分子が含まれ得
る。

【００５３】 ここで用いる「アレル」または「アレルの配列」は、SIGPをコードする遺伝子の対
立形である。アレルは、核酸配列における少なくともひとつの突然変異に起因し
、変異したmRNA或いはポリペプチドが生ずるが、それらの構造又は機能は変化す
る場合と変化しない場合がある。与えられた任意の自然の遺伝子または組換え型
の遺伝子には、アレル形がないもの、１つ存在するもの、或いは多数存在するも
のがある。一般にアレルが生じる通常の変異は、ヌクレオチドの自然な欠失、付
加、または置換に因るものである。これらのタイプの変化の各々は、単独または
他の変化と組み合わされて、所定の配列において１またはそれ以上の回数で生じ
得る。

【００５４】 ここで用いるSIGPをコードする「変異した（altered）」核酸配列には、結果と して同一のSIGPまたはSIGPの機能的特徴の少なくとも1つをともなうポリペプチ ドをコードするポリヌクレオチドをもたらす種々のヌクレオチドの欠失、挿入、
または置換をともなうそれらの配列が含まれる。この定義には、SIGPをコードす
るポリヌクレオチドの特定のオリゴヌクレオチドプローブを用いて容易に検出可
能な、或いは検出困難な多型と、またSIGPをコードするポリヌクレオチド配列の
正常の染色体の位置とは別の所定の位置を有する、アレルに対する不適切な或い
は予期しないハイブリダイゼーションとが含まれる。コード化されたタンパク質
もまた「変異した」ものであり得て、サイレント変化（silent change）を生ずる アミノ酸残基の置換、欠失、または挿入を含み、結果的に機能的に等価SIGPとな
るものである。意図的なアミノ酸置換は、SIGPの生物学的または免疫学的活性が
保持される限りにおいて、残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性、および
／または両親媒性の性質についての類似性に基づき行なわれ得る。例えば、負に
荷電したアミノ酸にはアスパラギン酸およびグルタミン酸が含まれ、正に荷電し
たアミノ酸にはリジンおよびアルギニンが含まれ、同様な親水性値を有する非電
荷の極性頭基(polar head groups)を有するアミノ酸には、ロイシン、イソロイ シン、バリン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレ
オニン、フェニルアラニン、及びチロシンが含まれる。

【００５５】 ここで用いる「アミノ酸」または「アミノ酸配列」は、オリゴペプチド、ペプチ ド、ポリペプチド、又はタンパク質の配列、またはそれらの何れかの断片であり
、自然発生又は合成の分子を指す。SIGPの断片は、好ましくは約5〜約15個のア ミノ酸の長さを有し、SIGPの生物的活性又は免疫学的活性を保持しているもので
ある。この文脈において、「断片」、「免疫原性の断片」、または「抗原性の断片」は
、好ましくは約5〜15のアミノ酸の長さであってSIGPの生物学的活性または免疫 学的活性を保持するSIGPの断片を指す。ここで「アミノ酸配列」は、自然発生タ
ンパク質分子のアミノ酸配列を指すものとして挙げているが、「アミノ酸配列」
や類似の用語は、列挙されたタンパク質分子に関連する完全で元のままのアミノ
酸配列にアミノ酸配列を限定する意味で用いられるわけではない。

【００５６】 ここで用いる「増幅」は、核酸配列の追加の複製物を生成することであり、通
常は当業者に周知のポリメラーゼ連鎖反応（PCR）技術を用いて実施される（Die
ffenbach, C.W.及びG.S. Dveksler (1995) PCR Primer. a Laboratory Manual,
Cold Spring Harbor Press, Plainview, NY,pp.1-5参照）。

【００５７】 ここで用いる用語「アンタゴニスト」は、SIGPに結合した場合にSIGPの生物学
的又は免疫学的活性の効果の程度を低下させたり、効果の持続時間を短縮する分
子を指す。アンタゴニストには、タンパク質、核酸、糖質、或いはSIGPの作用を
低下させる任意の他の分子が含まれ得る。

【００５８】 ここで用いる用語「抗体」は、完全な分子、並びに抗原決定基と結合し得るFa
、F(ab')₂、及びFvフラグメントのようなそれらの断片も指す。SIGPポリペプチド
に結合する抗体は、無処置のポリペプチドを用いて、或いは免疫化する抗原とし
て関与する小型のペプチドを含むその断片を用いて調製することができる。動物
（例えば、マウス、ラット、またはウサギ）を免疫化するのに用いるポリペプチ
ドまたはオリゴペプチドは、RNAの翻訳または化学的に合成されたものから得ら れ、必要ならば担体タンパク質と結合可能である。ペプチドと化学的に結合する
通常用いられる担体には、ウシ血清アルブミン及びサイログロブリン、キーホー
ルリンペットヘモシアニン（KLH）が含まれる。次に、この結合したペプチドを 用いて動物を免疫化する。

【００５９】 ここで用いる用語「抗原決定基」は、特定の抗体と接触する分子の断片（即ち
、エピトープ）を指す。タンパク質またはタンパク質の断片を用いてホストの動
物を免疫化する場合、このタンパク質の多くの領域が、抗原決定基（タンパク質
の所定の領域または三次元構造）と特異的に結合する抗体の産生を誘発し得る。
抗原決定基は抗体への結合について元の抗原（即ち、免疫応答を誘発するために
用いられる免疫原）と競合し得る。

【００６０】 ここで用いる用語「アンチセンス」は、特定の核酸配列と相補的な核酸配列を
含む任意の成分を指す。用語「アンチセンス鎖」は、「センス」鎖に対して相補
的な核酸鎖に関して用いられる。アンチセンス分子は、合成や転写を含む任意の
方法で作り出すことができる。この相補的ヌクレオチドは、一度細胞内に導入さ
れると、細胞によって作られた天然の配列と結合して2重鎖を形成し、転写や翻 訳を妨げる。「マイナス（−）」なる表現がアンチセンス鎖を指し、「プラス（
＋）」なる表現がセンス鎖を指すことがある。

【００６１】 ここで用いる用語「生物学的に活性」は、自然発生の分子の構造的機能、調節
機能、又は生化学的機能を有するタンパク質を指す。同様に「免疫学的に活性」
は、天然の、組換え体の、又は合成のSIGP、若しくはその任意のオリゴペプチド
の能力を指し、適当な動物や細胞における特定の免疫応答を誘発し、特定の抗体
に結合する。

【００６２】 ここで用いる用語「相補的」または「相補性」は、許容的な塩類(permissive
salt)及び温度条件の下での塩基対によるポリヌクレオチド同士の自然な結合で ある。例えば、配列「A-G-T」は相補的配列「T-C-A」に結合する。2つの1本鎖分
子間の相補性は、幾つかの核酸のみが結合しているような「部分的」なものも、
或いは1本鎖分子間に完全な相補性が存在するような「完全」なものもある。核酸 鎖同士の相補性の程度は、核酸鎖同士のハイブリダイゼーションの効率及び強さ
に大きな影響を与える。このことは、核酸鎖同士の結合によって左右される増幅
反応や、ペプチド核酸（PNA）分子の設計及び使用において特に重要である。

【００６３】 ここで用いる「所定のポリヌクレオチド配列を含む組成物」または「所定のア ミノ酸配列を含む組成物」とは、概して所定のポリヌクレオチド配列またはアミ ノ酸配列を含む任意の組成物を指す。この組成物には、乾燥した製剤、水溶液、
または無菌の組成物が含まれ得る。SIGP（例えばSEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、
SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SE
Q ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ
ID NO:28、SEQ ID NO:29、及びSEQ ID NO:30）またはその断片をコードするポリ
ヌクレオチドを含む組成物は、ハイブリダイゼーションプローブとして利用でき
る。このプローブは凍結乾燥した形態で保存することができ、糖質のような安定
化剤と結合させることができる。ハイブリダイゼーションにおいて、このプロー
ブは、塩（例えば、NaCl）、界面活性剤（例えば、SDS）及び他の物質（例えば 、デンハート液、乾燥ミルク、サケ精子DNA等）を含む水溶液に分散させること ができる。

【００６４】 ここで用いる用語「コンセンサス配列」は、再度配列決定して不要な塩基が分
離された核酸配列か、XL-PCR^TM(Perkin Elmer, Norwalk, CT)を用いて5’方向及
び／又は3’方向に伸長して再度配列決定した核酸配列か、或いはフラグメント の組み合わせのためのコンピュータプログラム（例えば、GELVIEW^TM Fragment A
ssembly system, GCG, Madison WI）を用いて2種以上のインサイト社クローンの
重複した配列から組み合わせて作られた核酸配列である。いくつかの配列が伸長
され、かつ組み合わされてコンセンサス配列が作られる。

【００６５】 ここで用いる用語「ポリヌクレオチドの発現と相関性を有する」とは、ノーザ
ン解析によるSIGPをコードする核酸配列と同一か又は関連する核酸の存在の検出
が、サンプル内のSIGPをコードする核酸の存在を示しており、従ってSIGPをコー
ドするポリヌクレオチドからの転写産物の発現と相関性を有している、というこ
とを表している。

【００６６】 ここで用いる用語「SIGP」は、ヒトポリペプチド、SIGP-1、SIGP-2、SIGP-3、SI
GP-4、SIGP-5、SIGP-6、SIGP-7、SIGP-8、SIGP-9、SIGP-10、SIGP-11、SIGP-12 、SIGP-13、SIGP-14、及びSIGP-15の何れか又はその全てを指す。

【００６７】 ここで用いる「欠失」は、ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列における変化
であり、結果的に１個またはそれ以上のヌクレオチド若しくはアミノ酸残基が欠
けることである。

【００６８】 ここで用いる用語「誘導体」は、SIGP、SIGPをコードするポリヌクレオチド配
列、またはSIGPをコードするポリヌクレオチド配列と相補的なポリヌクレオチド
配列を化学修飾したものを指す。ポリヌクレオチド配列の化学修飾には、例えば
、水素からアルキル基、アシル基、又はアミノ基への置換が含まれる。ポリヌク
レオチド誘導体は、自然発生の分子の生物学的又は免疫学的機能を保持している
ポリペプチドをコードする。誘導体ポリペプチドは、グリコシル化、ポリエチレ
ングリコール化(pegylation)、または元のポリペプチドの生物学的又は免疫学的
機能を保持する別の任意のプロセスで修飾されたものである。

【００６９】 ここで用いる用語「相同性」は、或る程度の相補性を意味する。部分的な相同
性と、完全な相同性の場合がある。用語「相同性」の代わりに「同一性」を用いるこ
とができる。同一の配列が標的の核酸とハイブリダイズするのを少なくとも部分
的に阻害する部分的に相補的な配列は、「実質的に相同な」ことを指す。完全に
相補的な配列と標的配列とのハイブリダイゼーションの阻害は、緩やかな厳密性
のもとで、ハイブリダイゼーションアッセイ（サザン法またはノーザン法、溶液
ハイブリダイゼーション等）を用いて検定可能である。実質的に相同な配列また
はハイブリダイゼーションプローブは、緩やかな厳密性の下で完全に相同な配列
との結合について標的の配列と競合し、それを阻害する。このことは、緩やかな
厳密性の条件が、非特異的な結合を許容するようなものであるということを意味
するわけではなく、緩やかな厳密性の条件では2つの配列の相互の結合が特異的 （即ち選択的）相互作用であることが必要である。非特異的結合が存在しないこ
とを、部分的な程度の相補性（即ち約30%未満の同一性）さえも有していない第2
の標的配列を用いることにより検査することができる。非特異的結合が存在しな
い場合、概ね相同な配列またはプローブは第2の非相補的な標的配列とハイブリ ダイズしない。

【００７０】 ここで用いる用語「同一性のパーセント」又は「同一性の%」は、2以上のアミノ酸
または核酸配列の比較において見出された配列の類似性の百分率を指す。同一性
のパーセントは、例えばMegAlignプログラム（Lasergene software package,DNA
STAR,Inc.,Madison WI）を用いることによって電子的に決定できる。MegAlignプ
ログラムは、例えばClustal Method.（Higgins,D.G.及びSharp,P.M.(1988)Gene
73:237-244）のような種々の方法に従い、2以上の配列の間のアライメントを作 成することができる。Clustalアルゴリズムは、全てのペアの間の距離を調べる ことによって配列をクラスターに分類する。クラスターはペアでアライメントさ
れ、次にグループにおいてアライメントされる。2つのアミノ酸配列（例えば、 配列A及び配列B）の間の類似性のパーセンテージは、（配列Aと配列Bとの間で一
致する残基の総数）／（配列Aの長さ−配列Aにおけるギャップ残基(gap residue
s)の数−配列Bにおけるギャップ残基の数）×100によって計算する。2つのアミ ノ酸の間の低い相同性または非相同性のギャップは、類似性のパーセンテージの
測定に含まれない。また、核酸配列の間の同一性のパーセントは、Clustal Meth
odや当業者に周知のJotun Hein Method（例えばHein,J.(1990)Methods in Enzym
ology 183:626-645参照）等により計算できる。更に配列間の同一性は、例えば ハイブリダイゼーション条件を変更することによる当業者に周知の別の方法によ
って測定可能である。

【００７１】 「ヒト人工染色体」（HACs）は6kb〜10MbのサイズのDNA配列を含んでおり、安定
した有糸分裂染色体の分離及び維持に必要な全ての要素を含む直鎖状の小染色体
である（Harrington, J.J.ら (1997) Nat Genet. 15:345-355参照）。

【００７２】 ここで用いる用語「ヒト化抗体」は、抗体が本来の結合能力をそのまま保持し
ながらヒト抗体により近づくように、非抗体結合領域におけるアミノ酸配列配列
を置換した抗体分子を指す。

【００７３】 ここで用いる用語「ハイブリダイゼーション」は、核酸の鎖が塩基対合を介し
て相補鎖と結合する任意の過程を指す。

【００７４】 ここで用いる用語「ハイブリダイゼーション複合体」は、相補的な塩基の間の
水素結合形成の効力によって、2つの核酸配列で形成された複合体を指す。ハイ ブリダイゼーション複合体は、溶液中で形成されるか（例えば、C₀t又はR₀t解析
）、或いは核酸は溶液中に存在する一方の核酸と固体支持体（例えば、紙、メン
ブラン、フィルタ、ピン、またはスライドガラス、ポリマー、または細胞やその
核酸が固定される他の適切な基板）に固定されたもう一方の核酸との間で形成さ
れ得る。

【００７５】 ここで用いる「挿入」或いは「付加」は、自然発生の分子にみられる配列に対
して、1個または2個以上のヌクレオチド、アミノ酸残基が各々加わるような、ヌ
クレオチド配列或いはアミノ酸配列の変化を指す。

【００７６】 「免疫応答」は、炎症、心的外傷、免疫不全、又は伝染性もしくは遺伝性の疾患
に関連する容態を指す。これらの容態は、細胞および全身の防御系に作用する種
々の因子（例えばサイトカイン、ケモカイン、及び他のシグナル伝達分子）の発
現によって特徴づけられる。

【００７７】 「マイクロアレイ」とは、例えば紙、ナイロン、又は他のタイプのメンブラン
、フィルタ、チップ、スライドガラス、又は他の任意の適切な固体支持体のよう
な基板上に配列された個々のポリヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドを配列し
たものを指す。

【００７８】 ここで用いる用語「調節(modulate)」は、SIGPの活性の変化を指す。例えば、
調節によって、タンパク質活性の向上や低下、結合特性の変化、又はSIGPの生物
学的、機能的、免疫学的特性等の他の変化がもたらされる。

【００７９】 ここで用いる「核酸」または「核酸配列」は、1本鎖または2本鎖の、センス鎖又
はアンチセンス鎖である、ゲノム起源又は合成起源のDNA、RNAや、ヌクレオチド
、オリゴヌクレオチド、又はポリヌクレオチド、及びその任意の断片や、ペプチ
ド核酸（PNA）や、任意のDNA様もしくはRNA様材料を指す。「フラグメント（断 片）」は、長さが60ヌクレオチド以上の核酸配列であり、最も好ましくは、長さ
が100ヌクレオチド以上、又は1000ヌクレオチド以上、更には10,000ヌクレオチ ド以上の断片を指す。

【００８０】 ここで用いる用語「操作可能に関連する」、即ち「操作可能に連結する」は、機能
的に関係した核酸配列を指す。プロモーターがコードされたポリペプチドの転写
を制御する場合、プロモーターはコード配列と操作可能に関連する、即ち操作可
能に連結する。操作可能に関連した、即ち操作可能に連結した核酸配列が、読み
枠に存在あるいは近接する際に、所定の遺伝因子（例えば、リプレッサー遺伝子
）は、コードされたポリペプチドには連続的に連結せずに、それでもポリペプチ
ドの発現を制御するオペレーター配列に結合する。

【００８１】 ここで用いる「オリゴヌクレオチド」は、PCR増幅又はハイブリダイゼーショ ンアッセイ、またはマイクロアレイで用いることができる核酸配列であって、長
さが少なくとも約6ヌクレオチドから約60ヌクレオチド程度のもので、好適には1
5〜30ヌクレオチド、より好適には20〜25ヌクレオチドであるものを指す。ここ で用いる「オリゴヌクレオチド」は、当技術分野において一般に定義されている用
語「アンプライマー」、「プライマー」、「オリゴマー」、及び「プローブ」と
概ね同義である。

【００８２】 ここで用いる「ペプチド核酸」（PNA）は、リジンを末端とするアミノ酸残基 のペプチドバックボーンに結合した5ヌクレオチド以上の長さのオリゴヌクレオ チドを含むアンチセンス分子又は抗遺伝子剤(anti-gene agent)を指す。末端の リジンがその組成に溶解性を賦与している。PNAは相補的な1本鎖DNAやRNAに優先
的に結合して転写物の伸長を止め、またPNAをポリエチレングリコール化して細 胞におけるPNAの寿命を延ばすことが可能である。（Nielsen, P.E.ら(1993) Ant
icancer Drug Des. 8:53-63）。

【００８３】 ここで用いる用語「サンプル」は、その最も広い意味で用いられる。SIGPをコ
ードする核酸、若しくはその断片、またSIGP自体を含む疑いのある生物学的サン
プルは、体液や、細胞から分離された染色体、細胞小器官、又は細胞膜からの抽
出物や、細胞や、（溶液中の、或いは固体支持体に結合した）ゲノムのDNA、RNA
、またはcDNAや、組織や、組織プリントその他を含み得る。

【００８４】 ここで用いる用語「特異的結合」または「特異的に結合する」は、抗体ならび
にタンパク質もしくはペプチド、抗体及びアンタゴニストの相互作用を指す。こ
の相互作用は、結合する分子が認識するタンパク質の特定の構造（即ち、抗原決
定基、つまりエピトープ）の存在に左右されることを意味している。例えば、抗
体がエピトープ「A」に対して特異的である場合、標識された遊離した「A」及び
その抗体を含む反応において、エピトープA（つまり遊離し、標識されていないA
）を含むポリヌクレオチドが存在することにより、抗体に結合した標識されたA の量が低下する。

【００８５】 ここで用いる用語「厳密な条件」は、ポリヌクレオチド配列と要求されたポリ
ヌクレオチド配列とのハイブリダイゼーションが可能な条件を指す。適切な厳密
な条件は、例えば、プレハイブリダイゼーションにおける塩類またはホルムアミ
ドの濃度、ハイブリダイゼーション溶液、ハイブリダイゼーション温度によって
定義することが可能であり、これらの条件は当技術分野で周知である。特に、塩
類の濃度を低下させることや、ホルムアミドの濃度を上昇させることや、ハイブ
リダイゼーション温度を上昇させることによって厳密性が増す。

【００８６】 例えば、高い厳密性の条件の下でのハイブリダイゼーションは、約37℃〜42℃
の約50%のホルムアミド中において起こり得る。またハイブリダイゼーションは 、約30℃〜35℃の約35%〜25%のホルムアミド中の緩やかな厳密性の条件下で起こ
り得る。特に、ハイブリダイゼーションは、42℃の50%のホルムアミド中、5X SS
PE、0.3%SDS、および200μg/mlの切断され変性したサケの精液DNA、という高い 厳密性の条件下で起こり得る。また、ハイブリダイゼーションは、温度を35℃に
低下させた35%のホルムアミド中において、前述のような緩やかな厳密性の条件 下で起こり得る。特定のレベルの厳密性に対応する温度範囲は、対象物の核酸の
ピリミジンに対するプリンの割合を算出して、温度を調節することによってさら
に狭めることができる。上述の温度範囲および条件の変更例は、当業者には周知
である。

【００８７】 ここで用いる用語「実質的に精製」は、天然の環境から取り除かれた核酸配列
又はアミノ酸配列であって、天然にはそれが結合して存在する他の構成成分から
単離又は分離されて、その構成要素が60%以上、好ましくは75%以上、最も好まし
くは90%以上除去された核酸配列又はアミノ酸配列である。

【００８８】 ここで用いる「置換」は、それぞれ1個または2個以上のヌクレオチド或いはア
ミノ酸を、別のヌクレオチド或いはアミノ酸に各々置換することを指す。

【００８９】 ここで用いる「形質転換」の定義は、外来性のDNAが入り込みレシピエント細 胞を変化させるプロセスを意味する。形質転換は、当業者に周知の種々の方法を
用いた天然または人工の条件の下で起こり、また外来性の核酸配列を原核細胞ま
たは真核細胞の宿主細胞に導入するための任意の既知の方法に基づき得る。形質
転換の方法は、形質転換される宿主細胞のタイプによって選択され、以下に限定
はされないが、ウイルス感染、熱ショック、電気穿孔法（エレクトロポレーショ
ン）、リポフェクション、及び微粒子銃を用いる方法が含まれる。このような「
形質転換された」細胞には、挿入されたDNAを自律的に複製するプラスミドとし て、または宿主の染色体の一部として複製が可能な安定的に形質転換された細胞
が含まれ、またそれは限られた時間で導入されたDNAやRNAを一過性に発現する細
胞を指す。

【００９０】 ここで用いるSIGPの「変異体」は、1又は2以上のアミノ酸が変異したアミノ酸
配列である。この変異体は「保存的」変化を含むものであり得、この場合、例え
ばロイシンをイソロイシンで置き換えるように、置換されるアミノ酸が類似な構
造的及び化学的特性を有する。稀にではあるが、例えばグリシンがトリプトファ
ンで置換されるように、変異体が「非保存的」に変化する場合もある。類似した
小さい変化には、アミノ酸の欠失または挿入、或いはその両方が含まれる。例え
ばDNASTARソフトウエアのような周知のコンピュータプログラムを用いて、何れ のアミノ酸残基が生物学的或いは免疫学的活性を損なわずに置換、挿入、又は除
去可能であるということを決定するガイダンスを提供することができる。

【００９１】 発明 本発明は、新規のヒトシグナルペプチド含有タンパク質（まとめてSIGP、個別
にはSIGP-1、SIGP-2、SIGP-3、SIGP-4、SIGP-5、SIGP-6、SIGP-7、SIGP-8、SIGP
-9、SIGP-10、SIGP-11、SIGP-12、SIGP-13、SIGP-14、及びSIGP-15と称する）、
SIGPをコードするポリヌクレオチド（SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:
18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23
、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、
SEQ ID NO:29、及びSEQ ID NO:30）、並びに癌および免疫疾患の診断、予防、又
は治療のためのこれらの物質の使用法の発見に基づくものである。表１には、本
発明で開示する各ヒトシグナルペプチド含有タンパク質のインサイト社クローン
ID、cDNAライブラリー、NCBI配列識別子およびGenBank種の説明が示されている 。

【００９２】

【表１】

【００９３】 本発明のSIGP-1をコードする核酸は、アミノ酸配列アライメントのためのコン
ピュータ検索を用い、脳腫瘍cDNAライブラリー(BRAITUT03)からのインサイト社 クローン866885に於いて初めて同定された。コンセンサス配列、SEQ ID NO:16は
、次に挙げる重複且つ／又は伸長された核酸配列、インサイト社クローン866885
(BRAITUT03)、2991983(KIDNFET02)、067954(HUVESTB01 )、及び1499109(SINTBST
01)から導出された。

【００９４】 一実施例において、本発明はSEQ ID NO:1のアミノ酸配列を含むポリペプチド を包含する。SIGP-1は、236のアミノ酸の長さであり、またN199の潜在的Nグルコ
シル化部位と、S8及びT72の2つの潜在的カゼインキナーゼIIリン酸化部位と、G1
69の潜在的Nミリストイル化部位と、T43、S96、T201の3つの潜在的プロテインキ
ナーゼCリン酸化部位とを有する。SIGP-1は、ラットシンタキシン(GI 1488683) と24%の同一性を共有する。約ヌクレオチド43から約ヌクレオチド93までのSEQ I
D NO:16の断片は、ハイブリダイゼーションに有用である。ノーザン分析は、造 血および免疫、生殖、胃腸、神経、心血管、並びに発生のcDNAライブラリーにお
いてこの配列の発現を示す。これらのライブラリーの少なくとも約43%が腫瘍性 の疾患に、約26%が炎症に、約19%が細胞増殖に関係するものである。

【００９５】 本発明のSIGP-2をコードする核酸は、アミノ酸配列アライメントのためのコン
ピュータ検索を用い、精巣cDNAライブラリー(TESTTUT02)からのインサイト社ク ローン1273453に於いて初めて同定された。コンセンサス配列、SEQ ID NO:17は 、インサイト社クローン1273453(TESTTUT02)、1970337(UCMCL5T01)、1218926(NE
UTGMT01)、1881349(LEUKNOT03)、及び1722377 (BLADNT06)から導出された。

【００９６】 一実施例において、本発明はSEQ ID NO:2のアミノ酸配列を含むポリペプチド を包含する。SIGP-17は、267のアミノ酸の長さであり、N230の潜在的Nグルコシ ル化部位と、S9、T45、T77、S190、T263の5つの潜在的カゼインキナーゼIIリン 酸化部位と、S232、S236の2つの潜在的プロテインキナーゼCリン酸化部位とを有
する。約ヌクレオチド140から約ヌクレオチド175までのSEQ ID NO:17の断片は、
ハイブリダイゼーションに有用である。ノーザン分析は、生殖、心血管、並びに
造血および免疫のcDNAライブラリーにおいてこの配列の発現を示す。これらのラ
イブラリーの少なくとも約42%が腫瘍性の疾患に、約40%が免疫応答に関係するも
のである。

【００９７】 本発明のSIGP-3をコードする核酸は、アミノ酸配列アライメントのためのコン
ピュータ検索を用い、脾臓cDNAライブラリー(SPLNNOT04)からのインサイト社ク ローン1534876に於いて初めて同定された。コンセンサス配列、SEQ ID NO:18は 、インサイト社クローン1253004(LUNGFET03)、1382838(BRAITUT08)、1532501(SP
LNNOT04)、1534876(SPLNNOT04)、1705806(DUODNOT02)、1738301(COLNNOT22)、及
び1926209(BRSTNOT02)、並びにショットガン配列SAOA00587、SAOA02048、及び S
AOA03535から導出された。

【００９８】 一実施例において、本発明はSEQ ID NO:3のアミノ酸配列を含むポリペプチド を包含する。SIGP-3は、161のアミノ酸の長さであり、M1及びC13の間に潜在的シ
グナルペプチド配列を有する。またSIGP-3は、分子内のジスルフィド架橋の形成
に対して潜在的な17のシステイン残基を有する。C129とC152の間のこれらの6つ のシステイン残基は、分子内のジスルフィド架橋を伴う構造を形成するトリプシ
ン／αアミラーゼ インヒビターに対するサイン配列(signature sequence)にお いて見られる。SIGP-3は、T25及びS35の2つの潜在的カゼインキナーゼIIリン酸 化部位と、S35及びT87の2つの潜在的プロテインキナーゼCリン酸化部位とを有す
る。トリプシン／αアミラーゼ インヒビターのサイン配列を含む約ヌクレオチ ド406から約ヌクレオチド477までのSEQ ID NO:18の断片は、ハイブリダイゼーシ
ョンに有用である。ノーザン分析は、胃腸ならびに男性および女性の生殖のcDNA
ライブラリーにおいてこの配列の発現を示す。これらのライブラリーの少なくと
も約45%が腫瘍性の疾患に、約28%が炎症および免疫応答に関係するものである。

【００９９】 本発明のSIGP-4をコードする核酸は、アミノ酸配列アライメントのためのコン
ピュータ検索を用い、盲腸組織cDNAライブラリー(COLNNOT19)からのインサイト 社クローン1634813に於いて初めて同定された。コンセンサス配列、SEQ ID NO:1
9は、インサイト社クローン1634813(COLNNOT19)、2904583(THYMNOT05)、1634813
(COLNNOT19)、及び1310492(COLNFET02)、並びにショットガン配列SAPA04436から
導出された。

【０１００】 一実施例において、本発明はSEQ ID NO:4のアミノ酸配列を含むポリペプチド を包含する。SIGP-4は、150のアミノ酸の長さであり、N139の1つの潜在的Nグル コシル化部位と、T48、S118、S126、S135、S136の5つの潜在的リン酸化部位とを
有する。またSIGP-4は、残基M1〜A23を包含する潜在的シグナルペプチド配列を 有する。SIGP-4は、マウスのベータケモカイン、Exodus-2(GI 2196924)と28%の 同一性を共有する。約ヌクレオチド175から約ヌクレオチド235までのSEQ ID NO:
19の断片は、ハイブリダイゼーションに有用である。ノーザン分析は、胃腸、発
生、造血、及び免疫のcDNAライブラリーにおいてこの配列の発現を示す。これら
のライブラリーの少なくとも約50%が胎児の発育／細胞増殖に、約25%が免疫応答
に関係するものである。

【０１０１】 本発明のSIGP-5をコードする核酸は、アミノ酸配列アライメントのためのコン
ピュータ検索を用い、前立腺cDNAライブラリー(PROSNOT16)からのインサイト社 クローン1711840に於いて初めて同定された。コンセンサス配列、SEQ ID NO:20 は、インサイト社クローン1711840(PROSNOT16)及び2550483(LUNGTUT06)、並びに
ショットガン配列SAQA03185から導出された。

【０１０２】 一実施例において、本発明はSEQ ID NO:5のアミノ酸配列を含むポリペプチド を包含する。SIGP-5は、118のアミノ酸の長さであり、S48、T103、S109の3つの 潜在的プロテインキナーゼCリン酸化部位と、M1からA20までの潜在的シグナルペ
プチド配列とを有する。SIGP-5は、ヒトミッドカイン、増殖および分化の調節に
関与するレチノイン酸応答性のヘパリン結合因子(GI 182651)と61%の同一性を共
有する。約ヌクレオチド511から約ヌクレオチド555までのSEQ ID NO:20の断片は
、ハイブリダイゼーションに有用である。ノーザン分析は、生殖、胃腸、発生、
神経、及び心血管のcDNAライブラリーにおいてこの配列の発現を示す。これらの
ライブラリーの少なくとも約58%が癌に、約16%が免疫応答に、約23%が胎生／増 殖性細胞に関係するものである。

【０１０３】 本発明のSIGP-6をコードする核酸は、アミノ酸配列アライメントのためのコン
ピュータ検索を用い、胃腫瘍cDNAライブラリー(STOMTUT02)からのインサイト社 クローン1747327に於いて初めて同定された。コンセンサス配列、SEQ ID NO:21 は、インサイト社クローン475228 (MMLR2DT01)、1500771(SINTBST01)、1880656(
LEUKNOT03)、1747327(STOMTUT02)、及び2720285(LUNGTUT10)から導出された。

【０１０４】 一実施例において、本発明はSEQ ID NO:6のアミノ酸配列を含むポリペプチド を包含する。SIGP-6は、248のアミノ酸の長さであり、N56の1つの潜在的Nグルコ
シル化部位と、S46、S134、S140の潜在的カゼインキナーゼIIリン酸化部位と、T
217の1つの潜在的プロテインキナーゼCリン酸化部位とを有する。SIGP-6は、乳 癌細胞および末梢血の白血球において発現されるヒトK12タンパク質前駆体(GI 2
062391)と100%の同一性を共有する。ノーザン分析は、胃腸、生殖、造血／免疫 、及び心血管のcDNAライブラリーにおいてこの配列の発現を示す。これらのライ
ブラリーの少なくとも約59%が癌に、約35%が免疫応答に関係するものである。

【０１０５】 本発明のSIGP-7をコードする核酸は、アミノ酸配列アライメントのためのコン
ピュータ検索を用い、病的な前立腺cDNAライブラリー(PROSNOT19)からのインサ イト社クローン1864292に於いて初めて同定された。コンセンサス配列、SEQ ID
NO:22は、インサイト社クローン1864292(PROSNOT19)、並びにショットガン配列S
ARA02195、SARA03070、SARA03675、及びSATA02454から導出された。

【０１０６】 一実施例において、本発明はSEQ ID NO:7のアミノ酸配列を含むポリペプチド を包含する。SIGP-7は、404のアミノ酸の長さであり、V136の1つの潜在的アミド
化部位と、S66の潜在的cAMP及びcGMP依存性プロテインキナーゼリン酸化部位と 、S23、T27、T74、S110、S111、S118、T122、S143、S145、S205、S207、S218、S
219、S220、T252、S254、S328、S330、S385、及びT393の20の潜在的カゼインキ ナーゼIIリン酸化部位と、T27、S76、T81、S140、S161、S176、S229、T285、S30
9、S356、S367、及びS398の12の潜在的プロテインキナーゼCリン酸化部位とを有
する。SIGP-7は、DNA依存性RNAポリメラーゼI及びIIのサブユニットAC40のミュ ータントの弱いサプレッサー、SRP40 によってコードされるS. cerevisiaeタン パク質(GI 295671)と18%の同一性を共有する。約ヌクレオチド193から約ヌクレ オチド222までのSEQ ID NO:22の断片は、ハイブリダイゼーションに有用である 。ノーザン分析は、生殖、心血管、及び造血／免疫のcDNAライブラリーにおいて
この配列の発現を示す。これらのライブラリーの少なくとも約75%が癌に、約25%
が免疫応答に関係するものである。

【０１０７】 本発明のSIGP-8をコードする核酸は、アミノ酸配列アライメントのためのコン
ピュータ検索を用い、ヒト前単球細胞系cDNAライブラリー(THP1NOT01)からのイ ンサイト社クローン1866437に於いて初めて同定された。コンセンサス配列、SEQ
ID NO:23は、インサイト社クローン817970(OVARTUT01)、825684(PROSNOT06)、1
866437(THP1NOT01)、2190170(PROSNOT26)、及び3137972(SMCCNOT02)から導出さ れた。

【０１０８】 一実施例において、本発明はSEQ ID NO:8のアミノ酸配列を含むポリペプチド を包含する。SIGP-8は、405のアミノ酸の長さであり、N378の1つの潜在的Nグル コシル化部位と、S332の1つの潜在的cAMP及びcGMPリン酸化部位と、T34、S51、T
77、S107、S158、S264、T266、S296、及びS332の9つの潜在的カゼインキナーゼI
Iリン酸化部位と、S68の1つの潜在的プロテインキナーゼCリン酸化部位とを有す
る。約ヌクレオチド85から約ヌクレオチド144までのSEQ ID NO:23の断片は、ハ イブリダイゼーションに有用である。ノーザン分析は、生殖、造血／免疫、神経
、及び発生のcDNAライブラリーにおいてこの配列の発現を示す。これらのライブ
ラリーの少なくとも約37%が癌に、約33%が免疫応答に、約22%が胎生／増殖性細 胞に関係するものである。

【０１０９】 本発明のSIGP-9をコードする核酸は、アミノ酸配列アライメントのためのコン
ピュータ検索を用い、脚の皮膚の結節性紅斑cDNAライブラリー(SKINBIT01)から のインサイト社クローン1871375に於いて初めて同定された。コンセンサス配列 、SEQ ID NO:24は、インサイト社クローン1428052(SINTBST01)、1871375(SKINBI
T01)、及び3210563(BLADNOT08)から導出された。

【０１１０】 一実施例において、本発明はSEQ ID NO:9のアミノ酸配列を含むポリペプチド を包含する。SIGP-9は、177のアミノ酸の長さであり、S133の1つの潜在的カゼイ
ンキナーゼIIリン酸化部位と、S28GGGの1つの潜在的グリコサミノグリカン付着 部位と、S44、S82、S115、T148の4つの潜在的プロテインキナーゼCリン酸化部位
とを有する。SIGP-9は、S52RWSLWSにおける成長ホルモン関連分子、造血成長因 子、及びリンホカインの受容体の結合部位によって共有されるサイン配列を含む
。約ヌクレオチド190から約ヌクレオチド249までの受容体結合ドメインのサイン
を包囲する配列をコードするSEQ ID NO:24の断片は、ハイブリダイゼーションに
有用である。ノーザン分析は、生殖、心血管、胃腸、及び発生のcDNAライブラリ
ーにおいてこの配列の発現を示す。これらのライブラリーの少なくとも約44%が 癌に、約19%が免疫応答に関係するものである。

【０１１１】 本発明のSIGP-10をコードする核酸は、アミノ酸配列アライメントのためのコ ンピュータ検索を用い、白血球cDNAライブラリー(LEUKNOT03)からのインサイト 社クローン1880830に於いて初めて同定された。コンセンサス配列、SEQ ID NO:2
5は、インサイト社クローン361577(PROSNOT01)、2113591(BRAITUT03)、及び1880
830(LEUKNOT03)、並びにショットガン配列SATA03292及びSATA00377から導出され
た。

【０１１２】 一実施例において、本発明はSEQ ID NO:10のアミノ酸配列を含むポリペプチド
を包含する。SIGP-10は、197のアミノ酸の長さであり、S121の潜在的cAMP及びcG
MP依存性プロテインキナーゼリン酸化部位と、T3、S57、T107、T153の4つの潜在
的プロテインキナーゼCリン酸化部位とを有する。SIGP-40は、Arabidopsis thal iana Znフィンガータンパク質Lsd1(GI 1872521)と15%の同一性を共有する。約ヌ
クレオチド567から約ヌクレオチド621までのSEQ ID NO:25の断片は、ハイブリダ
イゼーションに有用である。ノーザン分析は、神経および生殖のcDNAライブラリ
ーにおいてこの配列の発現を示す。これらのライブラリーの少なくとも約49%が 腫瘍性疾患に、約24%が免疫応答に、16%が胎児の発育に関係するものである。

【０１１３】 本発明のSIGP-11をコードする核酸は、アミノ酸配列アライメントのためのコ ンピュータ検索を用い、結腸cDNAライブラリー(COLNNOT11)からのインサイト社 クローン2328134に於いて初めて同定された。コンセンサス配列、SEQ ID NO:26 は、インサイト社クローン2328134(COLNNOTI1)、1870180(SKINBIT01)、081403(S
YNORAB01)、及び851547(NGANNOT01)から導出された。

【０１１４】 一実施例において、本発明はSEQ ID NO:11のアミノ酸配列を含むポリペプチド
を包含する。SIGP-11は、346のアミノ酸の長さであり、S43及びS217の2つの潜在
的cAMP及びcGMP依存性プロテインキナーゼリン酸化部位と、残基T96の1つの潜在
的カゼインキナーゼIIリン酸化部位と、残基T2、T15、T39、T247、S301の5つの 潜在的プロテインキナーゼCリン酸化部位とを有する。SIGP-50は、残基T96にお けるカゼインキナーゼIIリン酸化部位および推定上のヒトrab5相互作用タンパク
質(GI 1911776)と33%同一性を共有する。約ヌクレオチド16から約ヌクレオチド7
6までの潜在的細胞外配位子結合ドメインをコードするSEQ ID NO:26の断片は、 ハイブリダイゼーションに有用である。ノーザン分析は、生殖、胃腸、心血管、
及び神経のcDNAライブラリーにおいてこの配列の発現を示す。これらのライブラ
リーの少なくとも約44%が癌に、約28%が免疫応答に、20%が胎生の疾患に関係す るものである。

【０１１５】 本発明のSIGP-12をコードする核酸は、アミノ酸配列アライメントのためのコ ンピュータ検索を用い、胸腺cDNAライブラリー(THYMNOT04)からのインサイト社 クローン2652271に於いて初めて同定された。コンセンサス配列、SEQ ID NO:27 は、インサイト社クローン2652271(THYMNOT04)、2742813 (BRSTTUT14)、763431(
BRAITUT02)、1272403(TESTTUT02)、1240531(LUNGNOT03)、及び1318448(BLADNOT0
4)から導出された。

【０１１６】 一実施例において、本発明はSEQ ID NO:12のアミノ酸配列を含むポリペプチド
を包含する。SIGP-12は、256のアミノ酸の長さであり、N76、N106、N212の3つの
潜在的Nグルコシル化部位と、T46、S188、T204の3つの潜在的カゼインキナーゼI
Iリン酸化部位と、S130及びS221の2つの潜在的プロテインキナーゼCリン酸化部 位と、W62からP69まで、及びF110からC121までの2つの潜在的リボヌクレアーゼT
2ファミリーヒスチジン活性部位と、M1からA24までの潜在的シグナルペプチド配
列とを有する。SIGP-59は、Solanum lycopersicum LE(GI 895855)と24%の同一性
を有し、W62とP75の間の2つのうちの第1のリボヌクレアーゼT2ファミリーのヒス
チジン活性部位と80%の同一性を有し、F110とC121の間の第2のリボヌクレアーゼ
T2ファミリーヒスチジン活性部位と92%の同一性を有する。約ヌクレオチド462か
ら約ヌクレオチド494までのSEQ ID NO:27の断片は、ハイブリダイゼーションに 有用である。ノーザン分析は、生殖、造血、及び胃腸のcDNAライブラリーにおい
てこの配列の発現を示す。これらのライブラリーの少なくとも約53%が腫瘍性疾 患に、約28%が免疫応答にに関係するものである。

【０１１７】 本発明のSIGP-13をコードする核酸は、アミノ酸配列アライメントのためのコ ンピュータ検索を用い、頚髄cDNAライブラリー(SCORNOT04)からのインサイト社 クローン2965248に於いて初めて同定された。コンセンサス配列、SEQ ID NO:28 は、インサイト社クローン2965248(SCORNOT04)、485746(HNT2RAT01)、865684(BR
AITUT03)、1459157(COLNFET02)、1597772(BRAINOT14)、531430(BRAINOT03)、725
362(SYNOOAT01)、1620429(BRAITUT13)、及び190305(SYNORAB01)から導出された 。

【０１１８】 一実施例において、本発明はSEQ ID NO:13のアミノ酸配列を含むポリペプチド
を包含する。SIGP-13は、235のアミノ酸の長さであり、S50、T80、T98、T126、S
135、S136、及びT194の7つの潜在的cAMP及びcGMP依存性プロテインキナーゼリン
酸化部位と、S60、T80、S81の3つの潜在的カゼインキナーゼIIリン酸化部位と、
S114、T119、T137、S142、S146、及びS174の6つの潜在的プロテインキナーゼCリ
ン酸化部位と、P75からE84までのstrathmin 1ファミリーのサインとを有する。S
IGP-28は、アルツハイマー病におけるヒトstrathminホモログSCG10/神経細胞特 異性の増殖関連タンパク質(GI 1478503)と44%の同一性を共有し、またM1とA107 の間で71%の同一性を有する。更に、1つのcAMP及びcGMP依存性プロテインキナー
ゼリン酸化部位と、1つのカゼインキナーゼIIリン酸化部位と、strathmin 1ファ
ミリーのサインと、疎水性の膜貫通ドメインは、これらの分子の間で保存される
。TM1は約L15から約F25まで伸長し、TM2は約G196からP212まで伸長する。約ヌク
レオチド158から約ヌクレオチド196まで、及び約ヌクレオチド614から約ヌクレ オチド643までのSEQ ID NO:28の断片は、ハイブリダイゼーションに有用である 。ノーザン分析は、神経、生殖、胃腸、及び造血／免疫のcDNAライブラリーにお
いてこの配列の発現を示す。これらのライブラリーの少なくとも約50%が腫瘍性 疾患に、約19%が免疫応答にに関係するものである。

【０１１９】 本発明のSIGP-14をコードする核酸は、アミノ酸配列アライメントのためのコ ンピュータ検索を用い、脳橋cDNAライブラリー(PONSAZT01)からのインサイト社 クローン3057669に於いて初めて同定された。コンセンサス配列、SEQ ID NO:29 は、インサイト社クローン3057669(PONSAZT01)、548211(BEPINOT01)、3702516(P
ENCNOT07)、3581270(293TF3T01)、495191(HNT2NOT01)、2784427(BRSTNOT13)、15
15961(PANCTUT01)、3552333(SYNONOT01)、2838668(DRGLNOT01)、14600680(COLNF
ET02)、及び 285677(EOSIHET02)から導出された。

【０１２０】 一実施例において、本発明はSEQ ID NO:14のアミノ酸配列を含むポリペプチド
を包含する。SIGP-14は、371のアミノ酸の長さであり、N70、N125、N362の3つの
潜在的Nグルコシル化部位と、T22、S66、S72、S73、S102、T160、T201、T215、T
278、T285、及び S316の11の潜在的カゼインキナーゼIIリン酸化部位と、S72、T
79、S99、T127、S134、S257、及びT299の7つの潜在的プロテインキナーゼCリン 酸化部位と、L188からF200までの1つのプロテインキナーゼサイン及びプロフィ ールとを有する。ノーザン分析は、胃腸、生殖、及び神経のcDNAライブラリーに
おいてこの配列の発現を示す。これらのライブラリーの少なくとも約54%が腫瘍 性疾患に、約14%が免疫応答にに関係するものである。

【０１２１】 本発明のSIGP-15をコードする核酸は、アミノ酸配列アライメントのためのコ ンピュータ検索を用い、リンパ節cDNAライブラリー(LNODNOT05)からのインサイ ト社クローン3125156に於いて初めて同定された。コンセンサス配列、SEQ ID NO
:30は、インサイト社クローン3125156(LNODNOT05)、1417459(BRAINOT12)、15678
61(UTRSNOT05)、154233(THP1PLB02)、872652(LUNGAST01)、2525803(BRAITUT21) 、及び1209172(BRSTNOT02)から導出された。

【０１２２】 一実施例において、本発明はSEQ ID NO:15のアミノ酸配列を含むポリペプチド
を包含する。SIGP-15は、523のアミノ酸の長さであり、N186の1つの潜在的Nグル
コシル化部位と、S63、T85、S179、S188、T210、S231、T269、T295、及び S474 の9つの潜在的カゼインキナーゼIIリン酸化部位と、T9、S159、S172、S179、T24
6、S263、S283、S416、S447、及び S498の10の潜在的プロテインキナーゼCリン 酸化部位と、Y106及びY170の2つの潜在的チロシンキナーゼリン酸化部位と、V33
1の1つのチロシン特異性タンパク質ホスファターゼ活性部位とを有する。SIGP-3
0は、N186グリコシル化部位、S179、S188、T210、T246、S263、T295、S416、及 び Y170のリン酸化部位でヒトT細胞タンパク質チロシンホスファターゼ(GI 8047
50)と21%の同一性を共有し、P324とF344の間でチロシン特異性タンパク質ホスフ
ァターゼ活性部位の領域と50%の同一性を共有する。約ヌクレオチド64から約ヌ クレオチド183まで、及び約ヌクレオチド1087から約ヌクレオチド1119までのSEQ
ID NO:30の断片は、ハイブリダイゼーションに有用である。ノーザン分析は、 神経、生殖、及び胃腸のcDNAライブラリーにおいてこの配列の発現を示す。これ
らのライブラリーの少なくとも約55%が腫瘍性疾患に、約22%が免疫応答にに関係
するものである。

【０１２３】 また本発明はSIGPの変異体を含む。SIGP変異体は、SIGP アミノ酸配列に対し て好ましくは少なくとも80%、より好ましくは少なくとも90%、最も好ましくは少
なくとも95%以上のアミノ酸配列の同一性を有し、またSIGPの機能的もしくは構 造的特徴の少なくとも１つを含むアミノ酸配列である。

【０１２４】 また本発明は、SIGPをコードするポリヌクレオチドを包含する。従って、SIGP
のアミノ酸配列をコードする任意の核酸配列を、SIGPを発現する組換え型分子の
生成に用いることができる。特定の実施例において、本発明はSEQ ID NO:16、SE
Q ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ
ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID
NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、及びSEQ ID NO:30からなるグループから
選択された核酸配列からなるポリヌクレオチドを包含する。

【０１２５】 遺伝暗号の縮重の結果、既知のの遺伝子及び自然発生の遺伝子のポリヌクレオ
チド配列に対する最小の相同性を有する幾つかのものを含め、多数のSIGPをコー
ドするポリヌクレオチド配列が作り出されることが、当業者には理解されるであ
ろう。従って、本発明は、可能なコドン選択に基づく組合せの選択により作り出
され得るポリヌクレオチド配列の可能な全ての変異を考慮している。これらの組
合せは自然発生のSIGPのヌクレオチド配列に対し適用されるような標準のトリプ
レット遺伝暗号に従い作り出されるものであり、また全てのそのような変異はこ
こに明確に開示されると考えられたい。

【０１２６】 SIGPをコードするヌクレオチド配列及びその変異配列は、適切に選択された厳
密性の条件下に於いて、好ましくは自然発生のSIGPのヌクレオチド配列に対しハ
イブリダイズ可能であり、それは実質的に異なるコドンの用法を有するSIGP又は
その誘導体をコードするヌクレオチド配列を作り出すのに有利である。特定のコ
ドンが宿主により利用される頻度に従い、真核生物又は原核生物の宿主に於いて
ペプチドの発現が起こる割合を高めるようにコドンを選択することができる。コ
ードされるアミノ酸配列を変化させることなしにSIGP及びその誘導体をコードす
るヌクレオチド配列を実質的に変更する別の理由は、自然発生の配列から作り出
された転写物よりも長い半減期のようなより望ましい特性を有するRNA転写物を 作り出すためである。

【０１２７】 また本発明は、SIGP及びその誘導体をコードするDNA配列、またはその断片を 専ら合成化学によって作り出すことを含む。作製の後に、合成配列を当業者によ
って周知の試薬を用いて任意の多数の利用可能な発現ベクター及び細胞系に挿入
することが可能である。更に、合成化学を利用してSIGPをコードする配列又はそ
れらの任意のフラグメントに突然変異を導入しうる。

【０１２８】 また本発明に包含されるものには、種々の厳密な条件の下で、特に以下の請求
されたポリヌクレオチド配列、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SE
Q ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ
ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID
NO:29、及びSEQ ID NO:30に対してハイブリダイズ可能なポリヌクレオチド配列
が含まれる（例えば、Wahl, G.M.及びS.L. Berger(1987) Methods Enzymol.152:
399-407；Kimmel, A.R.(1987)Methods Enzymol.152:507-511参照）。

【０１２９】 DNA塩基配列決定方法は周知のものであり、一般に先行技術に於いても利用さ れ、本発明の任意の実施例においても利用されうる。その方法は、DNAポリメラ ーゼＩのクレノウフラグメント、Sequenase ^ョ（US Biochemical Corp,Cleveland ,OH）、Taqポリメラーゼ（Perkin Elmer）、耐熱性T7ポリメラーゼ（Amersham,
Chicago,IL）、或いはELONGASE増幅システム（GIBCO/BRL,Gaithersburg,MD）に 於いて発見されたようなプルーフリーディングエキソヌクレアーゼ及びポリメラ
ーゼの組合せのような酵素を使用する。そのプロセスは、Hamilton Micro Lab 2
200（Hamilton,Reno,NV）、Peltier Thermal Cycler（PTC200; MJ Research,Wat
ertown,MA）及びABI Catalyst及び373及び377 DNA sequencers（Perkin Elmer）
のような装置によって自動化することが好ましい。

【０１３０】 SIGPをコードする核酸配列は、部分的なヌクレオチド配列を用いて先行技術に
於いて周知の種々の方法で伸長し、プロモータ及び調節エレメントのような上流
の配列を検出することができる。例えば、用いられる方法の１つである制限部位
PCR法は、一般的なプライマーを使用し、既知の位置に隣接する未知の配列を検 索する（例えば、Sarkar, G. (1993) PCR Methods Applic.2:318-322参照）。特
にゲノムDNAは、ベクターの中のリンカーシークエンスに対して相補的なプライ マー及び遺伝子をコードすることが予定された領域に対して特異的なプライマー
の存在下に於いてまず増幅される。次に増幅された配列は、同様なリンカープラ
イマー及び最初のものの内に含まれる別の特異的プライマのを用いて、2ラウン ドのPCRを受ける。各ラウンドのPCRの生成物は、適切なRNAポリメラーゼを用い て転写され、逆転写酵素を用い配列決定される。

【０１３１】 また逆PCR法(inverse PCR)を用いて、既知領域に基づく多様なプライマーを用
いた配列の増幅、または伸長を行なうこともできる。（例えば、Triglia,T.ら（
1988）Nucleic Acids Res 16:8186参照）。プライマーは、市販のOLIGO 4.06プ ライマー分析ソフトウエア（National Biosciences Inc.,Plymouth MN）や他の 適切なプログラムを用いて、長さが22〜30ヌクレオチドで、50%以上のGC含量を 有し、約68〜72℃の温度で標的配列をアニーリングするように設計する。その方
法により、いくつかの制限酵素を用いて遺伝子の既知領域における適当な断片を
作り出す。そこで、この断片を分子内連結反応により環状にし、PCR用の鋳型と して使用する。

【０１３２】 使用できる別の方法には捕獲PCR法(capture PCR)があり、この方法には、ヒト
及び酵母菌人工染色体DNA内の既知の配列に隣接するDNA断片のPCR増幅が含まれ る（例えば、Lagerstrom, M.ら（1991）PCR Methods Applic 1:111-119参照）。
またこの方法では、PCRの前に、複数の制限酵素による消化及びライゲーション を用いて、DNA分子の未知の断片に操作された2本鎖配列を配置することもできる
。未知の配列を引き出すために用いることができる別の方法が長業者に周知であ
る（例えば、Parker, J.D.ら(1991) Nucleic Acids Res.19:3055-3060）。更に 、PCR、入れ子状態のプライマー、PromoterFinder^TMライブラリーを用いて、ゲ ノムDNA歩行を行うことができる（Clontech, Palo Alto CA）。このプロセスは 、ライブラリーのスクリーニングが不要で、イントロン／エクソン接合部の発見
に有用である。

【０１３３】 完全長cDNAをスクリーニングするとき、大きなcDNAを含むようにサイズ選択さ
れたライブラリーを用いることが好ましい。またランダムに準備刺激された(ran
dom primed)ライブラリーは、遺伝子の5’領域を含む配列をより多く含むという
点で好適である。ランダムに準備刺激されたライブラリーは、oligo d(T)ライブ
ラリーで完全長cDNAが得られない場合には特に好適である。またゲノムライブラ
リーは、5’非転写領域における配列の伸長のために役立ち得る。

【０１３４】 配列決定やPCRの産物のヌクレオチド配列のサイズ分析または確認のために、 市販のキャピラリー電気泳動法システムを用いることができる。特に、キャピラ
リーシークエンシングでは、電気泳動分離のための流動性ポリマー、レーザーで
活性化される4つの異なる蛍光色素（各ヌクレオチドに対して1つ）、放射された
波長の検出を行うCCDカメラを使用する。出力／光強度は適切なソフトウエア（ 例えば、Perkin Elmer製のGenotyper^TM及びSequence Navigator^TM）を用いて電 気信号に変換され、サンプルのローディングからコンピュータ解析及び電子デー
タ表示までの全過程がコンピュータ制御され得る。キャピラリー電気泳動法は、
特定のサンプル内に限られた量だけ存在するDNAの小片の配列決定に特に好適で ある。

【０１３５】 本発明の別の実施例では、SIGPをコードするポリヌクレオチド配列またはその
断片を組換えDNA分子に用いて、SIGP、その断片またはその機能的等価物の適切 な宿主細胞内における発現を指向することができる。遺伝暗号の固有の縮重によ
って、実質的に同一、即ち機能的に等価なアミノ酸配列をコードする他のDNA配 列が作り出され、これらの配列はSIGPのクローニングや発現のために用いること
ができる。

【０１３６】 当業者に理解されるように、非自然発生コドンを有するSIGPをコード化するヌ
クレオチド配列を作り出すことは有益であり得る。例えば、特定の原核生物或い
は真核生物の宿主において選好されるコドンを選択することにより、タンパク質
の発現率を増大させたり、或いは自然発生配列から生成された転写物よりも長い
半減期であるような望ましい特性を有するRNA転写物を作製することが可能であ る。

【０１３７】 限定はしないが遺伝子産物のクローニング、プロセシング及び／又は発現を改
変すること等の種々の理由により、SIGPをコードする配列を改変するために、本
発明のヌクレオチド配列を当業者に周知の方法を用いて操作可能である。ランダ
ムな断片化によるDNA混合や、遺伝子断片及び合成オリゴヌクレオチドのPCR再構
成を用いて、ヌクレオチド配列を操作できる。例えば、特異的部位の突然変異誘
発により、新しい制限部位の挿入、グリコシル化パターンの変更、コドン選好の
変化、スプライシングバリアントの生成、及び突然変異の導入等をもたらすこと
ができる。

【０１３８】 本発明の別の実施例では、SIGPをコードする自然な、改変された、或いは組換
え型の核酸配列を、融合タンパク質をコードするために、非相同的な配列に結合
させうる。例えば、SIGP活性のインヒビターに対してペプチドライブラリーをス
クリーニングするために、市販の抗体により認識されるキメラSIGPタンパク質を
コードすることが有用である。また、融合タンパク質はSIGPコーディング配列と
非相同的なタンパク質配列との間の位置に切断部位を有するように操作可能であ
り、これによってSIGPを切断して非相同的な部分から分けて精製することが可能
となる。

【０１３９】 本発明の別の実施例では、当業者に周知の化学的手法を用いて、SIGPをコード
する配列の全体、或いはその一部を合成することができる（例えば、Caruthers.
M.H.ら(1980)Nucl.Acids Res.Symp.Ser.215-223；Horn,T.ら(1980)Nucl.Acids R
es.Symp.Ser.225-232参照）。或いは、化学的手法を用いてタンパク質自体を作 り出し、SIGPのアミノ酸配列又はその一部を合成することができる。例えば、種
々の固相技術を用いてペプチド合成を行うことができる（例えば、Roberge, J.Y
.ら(1995) Science 269:202-204参照）。また、ABI 431Aペプチドシンセサイザ （Perkin Elmer）を用いて合成の自動化を行なうことができる。

【０１４０】 この新たに合成されたペプチドは、分離用の高速液体クロマトグラフィにより
実質的に精製することができる（例えば、Chiez, R.M.およびRegnier. F.Z. (19
90) Methods Enzymol. 182:392-421参照）。合成されたペプチドの組成は、アミ
ノ酸解析或いはシークエンシングにより確認することができる（Creighton,T.(1
983) Proteins. Structures avd Molecular Properties,WH Freeman and Co.,Ne
w York,NY）。更に、SIGPのアミノ酸配列もしくはその任意の部分を、直接の合 成において改変することにより、並びに／又は他のタンパク質もしくはその任意
の部分に由来する配列と結合させることにより、変異体ポリペプチドを生成可能
である。

【０１４１】 生物学的に活性なSIGPを発現させるために、SIGPまたはその誘導体をコードす
るヌクレオチド配列またはその機能的等価物を、適切な発現ベクター（即ち、挿
入されたコーディング配列の転写および翻訳に必要な要素を含むベクター）に挿
入する。

【０１４２】 SIGPをコードする配列および適切な転写や翻訳の調節領域を含む発現ベクター
を作製するために、当業者に周知の方法が用いられる。これらの方法には、in v itro 組換えDNA技術、合成技術、及びin vivo遺伝的組換え技術が含まれる（例え
ば、Sambrook, J.ら(1989)Molecular Cloning, A Laboratory Manual,Cold Spri
ng Harbor Press,Plainview,NY,ch.4,8,及び16-17；Ausubel,F.M.ら(1995,and p
eriodic supplements)Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley &
Sons,New York,NY,ch.9,13,及び16参照）。

【０１４３】 SIGPをコードする配列を包含し、発現するために、種々の発現ベクター／宿主
系が利用できる。これらには、以下に限定しないが、組換え型のバクテリオファ
ージ、プラスミド或いはコスミドDNA発現ベクターで形質転換した細菌のような 微生物や、酵母菌発現ベクターで形質転換した酵母菌や、ウイルス発現ベクター
（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系や、ウイルス発現ベクター
（例えば、カリフラワーモザイクウイルスCaMVまたはタバコモザイクウイルスTM
V）或いは細菌の発現ベクター（例えば、TiまたはpBR322プラスミド）で形質転 換した植物細胞系や、或いは動物細胞系が含まれる。本発明は、利用される宿主
細胞によって限定されるものではない。

【０１４４】 これらの系の「制御エレメント」或いは「調節配列」は、転写及び翻訳を実行
するために宿主細胞のタンパク質と相互作用するSIGPをコードするポリヌクレオ
チド配列及びベクターの非翻訳領域（例えば、エンハンサー、プロモーター並び
に5’及び3’非翻訳領域）である。このようなエレメントの強さ及び特異性は様
々である。利用されるベクター及び宿主に応じて、構成的及び誘導的プロモータ
ーを含む任意の数の適切な転写及び翻訳エレメントを用いることができる。例え
ば、細菌系にクローニングする場合、誘導性のプロモーター（例えば、Bluescri
ptョ ファージミド(Stratagene, LaJolla,CA)またはpSport1^TMプラスミド(Gibco BRL)のハイブリッドlacZプロモーター）を用いることができる。昆虫細胞におい
てバキュロウイルスポリヘドリンプロモーターを用いることができる。植物細胞
のゲノムに由来するプロモーター或いはエンハンサ（例えば、熱ショック, RUBI
SCO及び貯蔵タンパク質遺伝子）、若しくは植物ウイルスに由来するプロモータ ー或いはエンハンサ（例えば、ウイルス性プロモータまたはリーダー配列）をベ
クターにクローンニングできる。哺乳類細胞系においては、哺乳類の遺伝子或い
は哺乳類ウイルス由来のプロモーターが好ましい。SIGPをコードする配列の多数
の複製を含む細胞株を作る必要がある場合、SV40或いはEBVに基づくベクターを 適切な選択マーカーと共に用いることができる。

【０１４５】 細菌系では、SIGPの用途に応じて多数の発現ベクターを選択することができる
。例えば、抗体の誘発のために大量のSIGPが必要な場合は、容易に精製される融
合タンパク質を高レベルで発現するベクターを用いることができる。そのような
ベクターには、以下に限定しないが、SIGPをコードする配列を、アミノ末端メチ
オニン及び後続のβ-ガラクトシダーゼの7残基の配列を備えたフレーム内におい
てベクターに結合してハイブリッドタンパク質を生成できるBluescriptョ（Strat agene）のような、多機能の大腸菌クローニング、発現ベクターや、pINベクター
（Van Heeke, G.及びS.M. Schuster（1989）J. Biol. Chem. 264:5503-5509）等
が含まれる。またpGEXベクター（Pharmacia Biotech,Uppsala,Sweden）も、グル
タチオンS-トランスファーゼ（GST）を伴う融合タンパク質として異種ポリペプ チドを発現するため用いることができる。一般的に、そのような融合タンパク質
は可溶性であり、グルタチオンアガロースビーズへ吸着させた後に遊離グルタチ
オンの存在下で溶出させることによって、溶解した細胞から容易に精製できる。
そのような系において生成されるタンパク質は、ヘパリン、トロンビン又はXA因
子プロテアーゼ切断部位を含み、目的のクローン化ポリペプチドをGST部分から 随意に放出させることができるように設計できる。

【０１４６】 酵母菌、Saccharomyces cerevisiaeでは、α因子、アルコールオキシダーゼ及
びPGHのような構成的或いは誘導的プロモーターを含む多数のベクターを用いる ことができる（例えばAusubelら（前出）;及びGrantら(1987)Methods Enzymol.1
53:516-544参照）。

【０１４７】 植物発現ベクターを用いる場合には、SIGPをコードする配列の発現は、多数の
プロモータの何れかで行なわれ得る。例えばCaMVの35S及び19Sプロモーターのよ
うなウイルスのプロモーターを単独で用いるか、或いはTMV（Takamatsu,N.ら(19
87)EMBO J.6:307-311）由来のオメガリーダー配列と併用することができる。或 いは、RUBISCOの小サブユニットまたは熱ショックプロモーターのような植物プ ロモーターを用いてもよい（例えば、Coruzzi,G.ら（1984）EMBO J.3:1671-1680
）; Broglie,R.ら(1984)Science 224:838-843; 及びWinter,J.ら(1991)Results
Probl.Cell Differ.17:85-105参照）。これらの作製物は、直接のDNA形質転換ま
たは病原体が媒介した形質移入により植物細胞内に導入できる。このような技術
は一般に入手可能な多くの文献に記載されている（例えば、Hobbs, S.又はMurry
, L.E. in McGraw Hill Yearbook of Science and Technology（1992）McGraw H
ill New York,NY; pp.191-196を参照）。

【０１４８】 昆虫系もSIGPの発現に用いることができる。例えば、そのような系の一つにお
いては、Spodoptera frugiperda細胞またはTrichoplusiaの幼生において外来遺 伝子を発現するためのベクターとして、Autographa californica多核角体病ウイ
ルス（AcNPV）を用いる。SIGPをコードする配列は、ポリヘドリン遺伝子のよう なウイルスの非必須な領域にクローン化され、ポリヘドリンプロモーターの制御
下に置くことができる。SIGPをコードする配列の挿入の成功により、ポリヘドリ
ン遺伝子が不活性になり、コートタンパク質膜が欠如した組換え型のウイルスが
生成される。そこで、この組換え型のウイルスを用いて、例えばS.frugiperda細
胞またはTrichoplusiaの幼生へ感染させ、その中でSIGPを発現させることができ
る（例えば、Engelhard, E.K.ら(1994)Proc.Nat.Acad.Sci.91:3224-3227参照） 。

【０１４９】 哺乳類の宿主細胞においては、多数のウイルスベースの発現系を利用すること
ができる。発現ベクターとしてアデノウイルスが用いられる場合、SIGPをコード
する配列が、後発のプロモータ及び三連のリーダー配列からなるアデノウイルス
転写／翻訳複合体の中に結合され得る。ウイルスのゲノムの非必須E1又はE3領域
における挿入により、感染した宿主細胞においてSIGPを発現可能である生存可能
なウイルスが得られる（例えば、Logan,J.及びShenk,T.(1984)Proc.Natl.Acad.S
ci.81:3655-3659参照）。さらに、ラウス肉腫ウイルス（RSV）エンハンサーのよ
うな転写エンハンサーを、哺乳類の宿主細胞内の発現を増大させるために用いる
ことができる。

【０１５０】 また、ヒト人工染色体（HAC）を用いることにより、プラスミドに含まれ発現 され得るものに比べてより大きなDNAの断片を供給することもできる。治療を目 的とし、6kb〜10MbのHACを構築して従来のデリバリー方法（リポソーム、ポリカ
チオンのアミノポリマー、又は小胞）を介して供給することができる。

【０１５１】 また、特定の開始シグナルを用いて、SIGPをコードする配列のより効率的な翻
訳を行なうことができる。これらのシグナルには、ATG開始コドン及び隣接する 配列が含まれる。SIGPをコードする配列、その開始コドンおよび上流配列が適切
な発現ベクター内に挿入された場合、追加の転写または翻訳の制御シグナルは不
要である。しかし、コーディング配列又はその一部のみが挿入される場合には、
ATG開始コドンを含む外来性の翻訳制御シグナルを与えなければならない。さら に、全てのインサートの転写を確実にするために、開始コドンは正しい読み枠に
存在しなければならない。外来性の翻訳エレメント及び開始コドンは、天然及び
合成の両方の種々の起源に由来するものであり得る。用いられる特定の細胞系に
適切なエンハンサーを含めることで、発現の効率を高めることができる（例えば
、Scharf,D.ら(1994)Results Probl.Cell Differ.20:125-162参照）。

【０１５２】 さらに宿主細胞株は、挿入された配列の発現を調節する能力や、発現したタン
パク質を望ましい形にプロセシングする能力によって選択可能である。このよう
なポリペプチドの修飾には、以下に限定しないが、アセチル化、カルボキシル化
、グリコシル化、リン酸化、リピド化(lipidation)及びアシル化が含まれる。ま
たタンパク質の「プレプロ」形を切り離す翻訳後のプロセシングを用いて、正し
い挿入、折り畳み、及び／又は機能することを促進できる。翻訳後の活性のため
の特定の細胞器械及び特徴的な機構を有している種々の宿主細胞（例えば、CHO 、HeLa、MDCK293、WI38）は、American Type Culture Collection（ATCC; Bethe
sda, MD）より入手可能であり、これらを外来タンパク質の正しい修飾やプロセ シングを確実に行なうために選択してもよい。

【０１５３】 組換え型タンパク質の高収率の産生を長期間にわたり確保するためには安定し
た発現が好ましい。例えば、ウイルス起源の複製及び／若しくは内在性発現エレ
メント並びに選択可能なマーカー遺伝子を同一のベクター上、又は別々のベクタ
ー上に含む発現ベクターを用いて、SIGPを安定的に発現可能な株化細胞を形質転
換することができる。ベクターの導入の後、選択培地に切り替える前に濃縮培地
内で細胞を1〜2日間増殖させる。選択可能なマーカーの目的は、選択のための耐
性を与えることであり、またその存在によって導入された配列をうまく発現する
細胞の増殖および回収が可能とすることである。安定的に形質転換された細胞の
耐性クローンは、その細胞の型に適した組織培養技術を用いて増殖することがで
きる。

【０１５４】 形質転換された細胞株を回収するために任意の数の選択系を用いることができ
る。これらには、以下に限定しないが、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ
遺伝子及びアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子が含まれ、それぞ
れは、tk^-及びapr^-細胞において用いられる（例えば、Wigler,M.ら(1977)Cell 1
1:223-32；Lowy,I.ら(1980)Cell 22:817-23参照）。また代謝拮抗剤、抗生剤或 いは除草剤への耐性を選択の基礎として用いることが可能で、例えばdhfrはメト
トレキセートに対する耐性を与え、nptはアミノグリコシドネオマイシン及びG-4
18に対する耐性を与え、als或いはpatはクロルスルフロン(chlorsulfuron)、ホ スフィノトリシンアセチルトランスフェラーゼ(phosphinotricin acetyltransfe
rase)に対する耐性を与える（例えば、Wigler, M.ら(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.
77:3567-70；Colberre-Garapin,F. ら(1981)J.Mol.Biol.150:1-14；Murry,前出 参照）。さらに選択可能な遺伝子として、例えば、細胞がトリプトファンの代わ
りにインドールを利用できるようにするtrpB、細胞がヒスチジンの代わりにヒス
チノール(histinol)を利用できるようにするhisDが文献に記載されている（例え
ば、Hartman,S.C.及びR.C.Mulligan(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.85:8047-8051参 照）。最近では、例えば、アントシアニン、β-グルクロニダーゼ及びその基質G
US、及びルシフェラーゼ及びその基質ルシフェリンのようなマーカーと共に可視
マーカーがよく利用されるようになった。また緑色蛍光タンパク質（GFP）（Clo
ntech,Palo Alto,CA）も用いられる（例えば、Chalfie,M.ら(1994) Science 263
:802-805参照）。これらのマーカーは形質転換体を同定するだけでなく、特定の
ベクター系による一過性の或いは安定的なタンパク質発現の量を定量するために
広く用いられる（例えば、Rhodes,C.A.ら(1995)Methods Mol. Biol.55:121-131 参照）。

【０１５５】 マーカー遺伝子発現の存在／非存在によって目的の遺伝子の存在も示唆される
が、その遺伝子の存在及び発現の確認を必要とすることもある。例えばSIGPをコ
ードする配列がマーカー遺伝子配列内に挿入された場合、SIGPをコードする配列
を含む形質転換された細胞は、マーカー遺伝子の機能が存在しないことにより同
定できる。或いは、単一のプロモータの制御下において、マーカー遺伝子をSIGP
をコードする配列と直列に配置することができる。選択または誘導に応じた標識
遺伝子の発現は、通常直列に配置された配列の発現も同様に示す。

【０１５６】 或いは、当業者に周知の様々な方法により、SIGPをコードする核酸配列を含み
SIGPを発現する宿主細胞を同定できる。このような方法には、以下に限定しない
が、DNA−DNA或いはDNA−RNAハイブリダイゼーション並びに、核酸とタンパク質
配列を検出及び／若しくは定量するための技術に基づく膜、溶液、若しくはチッ
プを含むタンパク質バイオアッセイ又はイムノアッセイが含まれる。

【０１５７】 SIGPをコードするポリヌクレオチドの断片またはプローブ若しくは断片を用い
るDNA−DNA又はDNA−RNAハイブリダイゼーション又は増幅により、SIGPをコード
するポリヌクレオチド配列の存在を検出できる。SIGPをコードするDNA或いはRNA
を含む形質転換体を検出するために、核酸増幅に基づくアッセイは、SIGPをコー
ドする核酸配列に基づくオリゴヌクレオチド或いはオリゴマーの使用を含む。

【０１５８】 SIGPの発現を検出・測定するための種々のプロトコルは、このタンパク質に特
異的なポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体のいずれかを用い、また当業
者に周知のものである。そのような技術の例には、酵素結合免疫検定法（ELISA ）、ラジオイムノアッセイ（RIAs）及び蛍光細胞分析分離（FACS）が含まれる。
SIGP上において２つの非干渉エピトープに対して反応するモノクローナル抗体を
利用する二部位のモノクローナルベースのイムノアッセイ（two-site, monoclon
al-based immunoassay）が好ましいが、競合的結合実験も用いられうる。これら
アッセイおよび他のアッセイは、当業者によって開示されている（例えばHampto
n,R.ら(1990);Serological Methods, a Laboratory Manual, APS Press,St Paul
,MN Section IV；及びMaddox, D.E.ら(1983); J.Exp.Med.158:1211-1216参照） 。

【０１５９】 多様なラベル及び結合技術が当業者には周知であり、そして種々の核酸及びア
ミノ酸のアッセイにおいて用いることができる。SIGPをコードするポリヌクレオ
チドに関係する配列を検出するための、標識されたハイブリダイゼーションプロ
ーブやPCRプローブを作製するための手段には、オリゴ標識（oligolabeling）、
ニックトランスレーション法、末端標識（end-labeling）、或いは標識ヌクレオ
チドを用いるPCR増幅などが含まれる。或いは、SIGPをコードする配列、又はそ の任意の断片を、mRNAプローブの作製のためのベクターにクローン化できる。そ
のようなベクターは当業者に周知で、また市販されており、これを用いて、例え
ばT7、T3或いはSP6のような適切なRNAポリメラーゼ及び標識したヌクレオチドを
加えることによってin vitroでRNAプローブを合成することができる。これらの 方法は、種々の市販のキット（Pharmacia & Upjohn（Kalamazoo, MI）；Promega
（Madison WI）；及びU.S. Biochemical Corp.,Cleveland, OH提供）を用いて実
施することができる。検出を容易にするために用いる適切なレポーター分子、即
ち標識には、放射性核種、酵素、蛍光剤、化学発光剤或いは色素生産剤や、基質
、コファクター、インヒビター、磁性粒子等が含まれる。

【０１６０】 細胞培養からのタンパク質の回収および発現に適した条件下において、SIGPを
コードするヌクレオチド配列で形質転換された宿主細胞を培養することができる
。形質転換された細胞により産生されるタンパク質は、用いられる配列及び／ま
たはベクターに応じて分泌される、つまり細胞内に含まれるようにすることがで
きる。当業者に理解されるように、SIGPをコードするポリヌクレオチドを含む発
現ベクターは、原核生物か真核生物の細胞膜を通してSIGP分泌を指向するシグナ
ル配列を含むように設計することができる。また他の作製物を用いることにより
、SIGPをコードする配列を、可溶性タンパク質の精製を促進するポリペプチドド
メインをコードするヌクレオチド配列に結合することができる。そのような精製
を容易にするドメインには、以下に限定しないが、固定化金属上での精製を可能
にするヒスチジントリプトファンモジュールのような金属キレート化ペプチド類
、固定化免疫グロブリン上での精製を可能にするプロテインAドメイン、及びFLA
GS延長／アフィニティー精製システムにおいて用いられるドメイン（Immunex Co
rp., Seattle WA）が含まれる。精製ドメインとSIGPコーディング配列の間にお けるXA因子またはエンテロキナーゼ（Invitrogen, San Diego CA）に対して特異
的な配列のような切断可能なリンカー配列の包含により、精製が容易になる。こ
のような発現ベクターの１つは、SIGPおよびチオレドキシン及びエンテロキナー
ゼ切断部位に先行する6個のヒスチジン残基をコードする核酸を含む融合タンパ ク質を発現する。ヒスチジン残基が固定化金属イオンアフィニティクロマトグラ
フィー（IMAC）での精製を促進する（例えば、Porath,Jら (1992)Prot.Exp.Puri
f.3:263-281参照）。エンテロキナーゼ切断部位が融合タンパク質からのSIGPの 精製のための手段を与える（例えば、Kroll,D.J.ら(1993)DNA Cell Biol.12:441
-453参照）。

【０１６１】 組換え体の生成だけでなく、固相技術を用いた直接のペプチド合成によって、
SIGPの断片を作り出すことができる（Merrifield J. (1963) J. Am. Chem. Soc.
85:2149-2154参照）。タンパク質合成は手作業または自動で行なうことができ る。自動化された合成は、例えば、Applied Biosystem 431Aペプチドシンセサイ
ザ（Perkin Elmer）を用いて行うことができる。SIGPの種々の断片を個別に合成
して、次に結合させて完全長分子を作り出すことも可能である。

【０１６２】 治療 本発明のヒトシグナルペプチド含有タンパク質（SIGP）の発現は、細胞増殖と
密接に関係している。従って、SIGPが活性化因子、転写制御因子、又はエンハン
サーとなって細胞増殖を促進する癌や免疫応答においては、SIGPの発現を低下さ
せることが望ましい。SIGPがインヒビター又はサプレッサーであり、また細胞増
殖を調節または減少させる条件においては、タンパク質を供給またはSIGPの発現
を増大させることが望ましい。

【０１６３】 SIGPがインヒビターである一実施例においては、例えば、腺癌、白血病、リン
パ腫、黒色腫、骨髄腫、肉腫、奇形癌腫のような癌の治療または予防のためにSI
GP又はフラグメント又はその誘導体を被験者に投与することができる。そのよう
な癌には、以下に限定しないが、副腎、膀胱、骨、骨髄、脳、乳房、頚、胆嚢、
神経節、消化管、心臓、腎臓、肝臓、肺、筋肉、卵巣、膵臓、副甲状腺、陰茎、
前立腺、唾液腺、皮膚、脾臓、精巣、胸腺、甲状腺、及び子宮の癌が含まれる。

【０１６４】 別の実施例においては、限定はしないが上述のものを含む癌の治療または予防
のために、精製されたSIGPを含む医薬品組成物を用いてもよい。

【０１６５】 また別の実施例においては、限定はしないが上述のものを含む癌の治療または
予防のために、SIGPに対して特異的なアゴニストを被験者に投与してもよい。

【０１６６】 更に別の実施例においては、限定はしないが上述のものを含む癌の治療または
予防のために、SIGP又はフラグメント若しくはその誘導体を発現可能なベクター
を被験者に投与してもよい。

【０１６７】 SIGPが細胞増殖を促進する別の実施例においては、例えば、腺癌、白血病、リ
ンパ腫、黒色腫、骨髄腫、肉腫、奇形癌腫のような癌の治療または予防のために
、SIGPの発現または活性を低下させるアンタゴニストを被験者に投与してもよい
。そのような癌には、以下に限定しないが、副腎、膀胱、骨、骨髄、脳、乳房、
頚、胆嚢、神経節、消化管、心臓、腎臓、肝臓、肺、筋肉、卵巣、膵臓、副甲状
腺、陰茎、前立腺、唾液腺、皮膚、脾臓、精巣、胸腺、甲状腺、及び子宮の癌が
含まれる。一態様では、SIGPと特異的に結合する抗体をアンタゴニストとして直
接用いるか、或いはSIGPを発現する細胞や組織に薬剤をもたらす送達機構または
ターゲティングとして間接的に用いることができる。

【０１６８】 更に別の実施例においては、限定はしないが上述のものを含む癌の治療または
予防のために、SIGPをコードするポリヌクレオチドの相補配列を発現するベクタ
ーを被験者に投与してもよい。

【０１６９】 SIGPが白血球の活性または増殖を促進する更に別の実施例においては、免疫応
答の治療または予防のために、SIGPの活性を低下させるアンタゴニストを被験者
に投与してもよい。そのような応答には、以下に限定しないが、AIDS、アジソン
病、成人呼吸困難症候群、アレルギー、貧血、喘息、アテローム性動脈硬化症、
気管支炎、胆嚢炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎、皮膚筋炎、
糖尿病、肺気腫、萎縮性胃炎、糸球体腎炎、痛風、グレーブス病、過剰好酸球増
加症、被刺激性の腸シンドローム、エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無
力症、心筋または心臓周囲の炎症、骨関節炎、骨粗鬆症、膵炎、多発性筋炎、関
節リウマチ、強皮症、シェーグレーン症候群、及び自己免疫性の甲状腺炎、癌・
血液透析・体外循環の合併症、潰瘍性・細菌性・真菌・寄生虫・原生動物・寄生
虫様の感染症、及び心的外傷のような疾患が含まれる。一態様では、SIGPと特異
的に結合する抗体をアンタゴニストとして直接用いるか、或いはSIGPを発現する
細胞や組織に薬剤をもたらす送達機構またはターゲティングとして間接的に用い
ることができる。

【０１７０】 別の実施例においては、限定はしないが上述のものを含む免疫応答の治療また
は予防のために、SIGPをコードするポリヌクレオチドの相補配列を発現するベク
ターを被験者に投与してもよい。

【０１７１】 他の実施例においては、本発明のタンパク質、アンタゴニスト、抗体、アゴニ
スト、相補的配列またはベクターの何れかを、他の適切な治療薬と組合せて投与
することもできる。当業者は従来の製薬の原理に基づいて併用療法で使用するた
めの適切な薬剤を選択することができるであろう。治療薬を組み合わせることに
より、上述の種々の反応の治療又は予防に効果を与えるように相乗剤的に機能し
得る。この方法を用いることにより、より少ない各薬剤の投与量で治療効果を上
げることができ、従って副作用の可能性を低下させることができる。

【０１７２】 SIGPのアンタゴニストは、当業者に周知の方法を用いて製造することができる
。詳細には、精製されたSIGPを用いて抗体を作り出したり、或いはSIGPに特異的
に結合するものを同定するために、薬剤のライブラリーをスクリーニングするこ
とができる。SIGPに対する抗体は、当業者によく知られた方法を用いて産生する
ことができる。このような抗体には、以下に限定されないが、ポリクローナル抗
体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、単鎖抗体、Fabフラグメント、及びFab発
現ライブラリーにより作られたフラグメントが含まれる。中和抗体（即ち、二量
体形成を阻害するもの）は治療の用途に特に好適である。

【０１７３】 抗体を産生するために、SIGPか、免疫学的特性を有するその任意の断片或いは
そのオリゴペプチドを注射することによって、ヤギ、ウサギ、ラット、マウス、
ヒト等を含む種々の宿主を免疫化することができる。宿主の種に応じて、免疫学
的反応を増強するために種々のアジュバントを用いることができる。そのような
アジュバントには、以下に限定しないが、フロイントのアジュバント、アルミニ
ウムの水酸化物ようなミネラルゲル、リゾレシチンのような界面活性剤、プルロ
ニックポリオール(pluronic polyols)、ポリアニオン、ペプチド、オイルエマル
ジョン、KLH及びジニトロフェノールが含まれる。ヒトで使用するアジュバント の中では、BCG（カルメット‐ゲラン杆菌）及びCorynebacterium parvumが特に 好ましい。

【０１７４】 SIGPに対する抗体を誘発するために用いられるオリゴペプチド、ペプチド、ま
たはその断片は、好ましくは少なくとも5個のアミノ酸、より好ましくは少なく とも10個のアミノ酸からなるアミノ酸配列を有する。またこれらのオリゴペプチ
ド、ペプチド、または断片は、天然のタンパク質のアミノ酸配列の一部と同一で
、小形の自然発生の分子の全アミノ酸配列を含んでいることが好ましい。SIGPア
ミノ酸の短い伸展部が、KLHのような別のタンパク質の伸展部と融合し、キメラ 分子に対する抗体が産生され得る。

【０１７５】 SIGPのモノクローナル抗体は、培養における持続的な細胞株によって抗体分子
を産生させる任意の技術を用いて調製できる。このような技術には、以下に限定
しないが、ハイブリドーマ技術、ヒトB細胞ハイブリドーマ技術、及びEBV-ハイ ブリドーマ技術が含まれる（例えば、Kohler, G.ら(1975) Nature 256:495-497 ；Kozbor, D. ら(1985) Immunol. Methods 81 :31-42；Cote, R.J. ら(1983) Pr
oc. Natl. Acad. Sci. 80:2026-2030；Cole, S.P. ら(1984) Mol. Cell Biol. 6
2:109-120参照）。

【０１７６】 さらに、適切な抗原特異性および生物活性を備えた分子を得るために、ヒト抗
体遺伝子へのマウス抗体遺伝子のスプライシングする技術のような「キメラ抗体
」の産生のために開発された技術を用いることができる（例えば、Morrison,S.L
.ら(1984)Proc. Natl. Acad. Sci. 81:6851-6855;Neuberger, M.S. ら(1984)Nat
ure 312:604-608;Takeda, S. ら(1985)Nature 314:452-454参照）。或いは、当 業者に周知の方法を用いて単鎖の抗体の生成のための技術を適用して、SIGPに特
異的な単鎖抗体を産生することができる。関連する特異性を有するがイディオタ
イプ組成が異なる抗体は、ランダムな組み合わせの免疫グロブリンライブラリー
からの鎖混合(chain shuffling)によって産生することができる（例えば、Burto
n D.R.(1991) Proc. Natl. Acad. Sci. 88:10134-10137参照）。

【０１７７】 抗体は、免疫グロブリンライブラリーまたは高度に特異的な結合試薬のパネル
をスクリーニングすることにより、或いはリンパ球集団でのin vivoの産生を誘 導することにより産生することができる（例えば、Orlandi,R.ら(1989), Proc.
Natl. Acad. Sci. 86:3833-3837；Winter, G.ら(1991) Nature 349:293-299参照
）。

【０１７８】 またSIGPに対する特異的な結合部位を含む抗体フラグメントも作り出すことが
できる。例えばこのような断片には、以下に限定はしないが、抗体分子のペプシ
ン消化により生成することができるF(ab’)₂フラグメントや、F(ab’)₂フラグメ
ントのジスルフィド架橋を減らすことにより生成することができるFabフラグメ ントが含まれる。或いは、所望の特異性を備えたモノクローナルFabフラグメン トを迅速かつ容易に同定可能なように、Fab発現ライブラリーを構成し得る（例 えば、Huse,W.D.ら(1989) Science 246:1275-1281参照）。

【０１７９】 種々のイムノアッセイを、所望の特異性を有する抗体を同定するためのスクリ
ーニングに用いることができる。確立された特異性を有するモノクローナル抗体
またはポリクローナル抗体の何れかを用いる競合的結合アッセイ或いは免疫放射
線測定法の多数のプロトコルが、当技術分野で周知である。このようなイムノア
ッセイには、一般にSIGPとその特異的な抗体との間の複合体の形成の測定が含ま
れる。2つの非干渉SIGPエピトープに対して反応するモノクローナル抗体を用い る2部位のモノクローナル抗体ベースのイムノアッセイ（two sites monoclonal
based immunoassay）が好適であるが、競合的結合アッセイも用いられ得る（Mad
dox , 前出）。

【０１８０】 本発明の別の実施例では、SIGPをコードするポリヌクレオチド、またはその任
意の断片や相補配列を、治療を目的として用いることができる。一態様では、mR
NAの転写を阻害することが望ましい状況において、SIGPをコードするポリヌクレ
オチドに対する相補配列を用いることができる。詳細には、SIGPをコードするポ
リヌクレオチドに相補的な配列で細胞を形質転換することができる。従って、SI
GPの活性を調節する、或いは遺伝子の機能を調節するために、相補的な分子また
は断片を用いることができる。現在このような技術は周知であり、センス又はア
ンチセンスオリゴヌクレオチド、或いはより大きな断片を、SIGPをコードする配
列のコード領域や調節領域に従って様々な位置から設計可能である。

【０１８１】 レトロウイルス、アデノウイルス、ヘルペスまたはワクシニアウイルスに由来
する、或いは種々の細菌性プラスミドに由来する発現ベクターは、標的の器官、
組織、即ち細胞群へのヌクレオチド配列の送達のために用いられ得る。当業者に
周知の方法を用いて、SIGPをコードする遺伝子のポリヌクレオチドに相補的な核
酸配列を発現するベクターを産生することができる（例えば、Sambrook,前出、 及びAusubel,前出 参照）。

【０１８２】 SIGPをコードするポリヌクレオチドまたはその断片を高レベルで発現する発現
ベクターで細胞または組織を形質転換させることによって、SIGPをコードする遺
伝子を作り出すことができる。このような作製物は、翻訳不能なセンス配列或い
はアンチセンス配列を細胞に導入するために用いることができる。DNAへ組み込 みが存在しない場合でも、このようなベクターは、それらが内在性のヌクレアー
ゼにより無能となるまで、RNA分子を転写し続けうる。一過性の発現は、非複製 ベクターでも1ヶ月以上、適切な複製エレメントがベクター系の一部である場合 にはさらに長い期間持続し得る。

【０１８３】 前述のように、SIGPをコードする遺伝子の制御、5’、又は調節領域に対する 相補配列、つまりアンチセンス分子（DNA、RNAまたはPNA）を設計することによ って、遺伝子発現を変更することができる。転写開始点（例えば、開始部位から
+10〜-10の位置）に由来するオリゴヌクレオチドが好ましい。同様に、三重らせ
ん体の塩基対形成方法論を用いて、阻害を達成することができる。ポリメラーゼ
、転写制御因子、或いは調節分子の結合のために二重らせんが十分にほどける能
力を阻害するので、三重らせん対合は有用である（例えば、Gee, J.E.ら(1994)I
n: Huber, B.E.及びB.I. Carr, Molecular and Immunologic Approaches, Futur
a Publishing Co.,Mt.Kisco,NY,pp.163-177参照）。転写物のリボソームへの結 合を阻止することによりmRNAの転写を阻害するために、相補的配列、即ちアンチ
センス分子を設計し得る。

【０１８４】 リボザイム、つまり酵素RNA分子を用いてRNAの特異的切断を触媒することがで
きる。リボザイム作用機構は、相補的標的RNAへのリボザイム分子の配列の特異 的ハイブリダイゼーションに関与し、その後のヌクレオチド鎖切断が行なわれる
。例えば、操作されたハンマーヘッド(hammerhead)モチーフリボザイム分子は、
SIGPをコードする配列のヌクレオチド鎖切断を特異的かつ効果的に触媒し得る。

【０１８５】 任意の潜在的なRNA標的物内の特異的なリボザイム切断部位は、最初、後続す る配列GUA、GUU並びにGUCを含むリボザイム切断部位に対する標的分子を走査す ることによって同定される。一度同定されると、切断部位を含む標的遺伝子の領
域に対応する15〜20個のリボヌクレオチドの間の短いRNA配列は、そのオリゴヌ クレオチドを動作不能(inoperable)とする2次の構造的特徴について評価するこ とができる。また候補の標的の適合性は、リボヌクレアーゼ保護アッセイ(ribon
uclease protection assay)を用い、相補的なオリゴヌクレオチドとのハイブリ ダイゼーションに対する接触性(accessibility)の検査により評価することがで きる。

【０１８６】 本発明の相補的リボ核酸分子及びリボザイムは、核酸分子を合成するのための
当技術分野で周知の方法により作り出すことができる。これらには、固相ホスホ
ラミダイト化学合成のようなオリゴヌクレオチドの化学的合成のための技術が含
まれる。或いは、RNA分子は、SIGPをコードするDNA配列のin vitro及びin vivo の転写により作り出すことができる。このようなDNA配列は、T7或いはSP6のよう
な適切なRNAポリメラーゼプロモーターを伴う多様なベクターに取り込むことが できる。或いは、構成的または誘導的に相補的なRNAを合成するこれらのcDNA作 製物は、株化細胞、細胞または組織内に導入することができる。

【０１８７】 細胞内の安定性を高め、また半減期を長くするために、RNA分子は修飾するこ とができる。可能な修飾としては、以下に限定しないが、その分子の5′末端及 び／又は3′末端でのフランキング配列の付加や、分子のバックボーン内におけ るホスホジエステラーゼ結合ではなくホスホロチオネート或いは2′O-メチルを 使用を含む。この概念はPNA生成において固有のものであり、内在性エンドヌク レアーゼにより容易に認識されないアデニン、シチジン、グアニン、チミン、及
びウリジンの、アセチル−、メチル−、チオ−、及び類似の修飾形態だけでなく
、イノシン、クエオシン(queosine)、及びワイブトシン(wybutosine)のような従
来よりあまり用いられない塩基を含めることにより、これら全ての分子にに拡張
可能である。

【０１８８】 細胞或いは組織内にベクターを導入するための多くの方法が利用可能で、同様
にin vivo、in vitro、及びex vivoでの使用にも適している。ex vivoでの治療 法のに対し、ベクターを患者から採取された幹細胞に導入し、自己移植して同じ
患者に戻すためにクローンとして増殖させることができる。トランスフェクショ
ンによるデリバリー、或いはリポソーム注入またはポリカチオンアミノポリマー
によるデリバリーは、当技術分野でよく知られた方法を用いて実施することがで
きる（例えば、Goldman, C.K.ら(1997) Nature Biotechnology 15:462-466参照 ）。

【０１８９】 前述の治療法は何れも、例えばイヌ、ネコ、雌ウシ、ウマ、ウサギ、サル、及
び最も好ましくはヒトのような哺乳類を含む治療が必要な任意の対象に適用する
ことができる。

【０１９０】 本発明の更なる実施例では、前述の任意の治療効果のために、医薬成分を薬剤
上受け入れられる担体とともに投与する。このような医薬成分は、SIGP、SIGPの
抗体、SIGPの擬態(mimetics)、アゴニスト、アンタゴニスト、又はインヒビター
からなるものでありうる。この成分は、単体或いは例えば安定化する配合ような
1以上の他の薬剤とともに、任意の無菌の生体適合性の医薬用担体に投与され、 その担体には、以下に限定しないが、生理食塩水、バッファー食塩水、ブドウ糖
或いは水が含まれる。このような組成物は、単体或いは他の薬剤、ドラッグやホ
ルモンと結合した形で患者に投与されうる。

【０１９１】 本発明で用いられる医薬品組成物の投与経路には、以下に限定されないが、経
口投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、髄内投与、くも膜下腔内投与、
脳室内投与、経皮投与、皮下投与、腹腔内投与、鼻腔内投与、経腸投与、局所的
投与、舌下投与、或いは直腸投与が含まれうる。

【０１９２】 活性成分に加えて、これらの医薬成分は、活性化合物を医薬上使用できる製剤
にするための処理を容易にする医薬品添加物及び補助剤を含む、適切な医薬上認
められる担体を含みうる。更に、製剤或いは投与に関する技術の詳細は、Reming ton's Pharmaceutical Sciences （Maack Publishing Co., Easton,PA）の最新版
に記載されている。

【０１９３】 経口投与のための医薬成分は、当技術分野でよく知られる医薬上認められる担
体を用いて、経口投与に適当な投与量に配合される。このような担体により、医
薬成分を、患者に摂取させるための錠剤、丸剤、糖衣丸、カプセル剤、液体剤、
ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁液等に処方できる。

【０１９４】 経口投与に用いるための製剤は、活性化合物と固形の賦形剤とを配合すること
によって得られるが、必要に応じて適切な補助剤を添加した後に、また（所望に
より、得られた混合物を粉砕した後に）顆粒の混合物を処理し、錠剤或いは糖衣
丸コア(dragee core)を作ることができる。必要ならば、適切な添加物が加えら れる。適切な医薬品添加物には、ラクトース、スクロース、マンニトール或いは
ソルビトールを含む砂糖のような糖質またはタンパク質賦形剤、トウモロコシ、
コムギ、コメ、ジャガイモ等からのデンプン、メチルセルロース、ヒドロキシプ
ロピルメチルセルロース或いはカルボキシルメチルセルロースナトリウムのよう
なセルロース、アラビアゴム或いはトラガカントゴムのようなゴム、並びにゼラ
チン或いはコラーゲンのようなタンパク質が含まれる。必要ならば、クロスリン
クしたポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸ナトリウムのようなアルギン酸
、又はその塩のような、崩壊剤(disintegrating agents)或いは可溶化剤が加え られる。

【０１９５】 糖衣丸コアは、濃縮糖液のような適切なコーティングと結合するが、溶液には
アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポルゲル剤(carbopol ge
l)、ポリエチレングリコール及び／又はチタンの二酸化物、ラッカー溶液及び適
切な有機溶剤或いは溶剤の混合物を含みうる。錠剤の識別のため、或いは活性化
合物の量（即ち投与量）を特徴づけるために、染料或いは色素を錠剤或いは糖衣
錠皮に加えることができる。

【０１９６】 経口投与できる製剤には、ゼラチンからなるプッシュフィット(push-fit)カプ
セル、ゼラチンからなる柔らかくシールされたカプセル及びグリセロール或いは
ソルビトールのようなコーティングが含まれる。プッシュフィットカプセルは、
ラクトース或いはデンプンのような賦形剤または結合剤、タルク或いはステアリ
ン酸マグネシウムのような潤滑剤、及び所望により安定剤と混合された活性成分
を含みうる。柔らかいカプセルにおいて、活性化合物は、安定剤とともに或いは
安定剤なしに、脂肪性の油、液体、または液状ポリエチレングリコールのような
適切な液体に溶解或いは懸濁される。

【０１９７】 非経口投与用の製剤は、水溶液中、好適にはハンク溶液(Hanks's solution)、
リンゲル溶液或いは生理緩衝食塩水のような生理学的に適合するバッファーの中
で配合することができる。水性の注射懸濁液は、カルボキシルメチルセルロース
ナトリウム、ソルビトールまたはデキストランのような懸濁液の粘性を高める物
質を含みうる。更に、活性化合物の懸濁液は、適切な油性注入懸濁液として調製
される。適切な親油性の溶媒或いは媒介物は、胡麻油のような脂肪性の油や、オ
レイン酸エチル、トリグリセリド或いはリポソームのような合成脂肪酸エステル
を含む。また非脂質ポリカチオンアミノポリマーが、送達のために用いられる。
所望により、懸濁液は化合物の溶解度を増加させて濃縮度の高い溶液の調製を可
能にする適切な安定剤または薬剤を含んでもよい。

【０１９８】 局所または経鼻投与用には、浸透する特定の障壁に対して適切な浸透剤が調合
に用いられる。このような浸透剤は、当技術分野において周知のものである。

【０１９９】 本発明の医薬組成物は周知の方法、例えば通常の混合処理、溶解処理、顆粒化
処理、糖衣形成処理、湿式粉砕処理(levigating)、乳化処理、カプセル化処理、
エントラップ処理(entrapping)或いは凍結乾燥処理により製造される。

【０２００】 この医薬組成物は塩類として提供されることもあり、以下に限定しないが、塩
酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸等を含む多くの酸とともに
形成することができる。塩は水性或いはプロトニック溶剤において、対応する遊
離塩基形態であるよりも溶解性が高くなる傾向がある。別のケースにおいて、好
適な製剤としては、1mM〜50mMのヒスチジン、0.1%〜2%のショ糖、使用前に緩衝 剤と結合させたpH4.5〜5.5の範囲にある2%〜7%のマンニトールの何れか、或いは
全てを含む凍結乾燥粉末でもよい。

【０２０１】 医薬組成物は、調製された後に適切な容器内に入れられて、示された状態の治
療のためにラベル付けされうる。SIGPの投与の場合では、このようなラベルには
、投与量、投与頻度、投与方法が表示される。

【０２０２】 本発明において使用するのに適切な医薬組成物は、所望の目的を達成するため
に、活性成分を効果的な量だけ含む成分を含んでいる。有効量の決定は、当業者
の能力の範囲内で十分行うことができる。

【０２０３】 任意の化合物の場合、治療に有効な量は、例えば最初はどちらかの細胞培養の
アッセイ（マウス、ウサギ、イヌ、ブタのような動物モデルまたは腫瘍性細胞）
において見積もられる。適切な濃度範囲および投与経路を決定するために動物モ
デルを用いることができる。次にこのような情報を利用して、ヒトにおける投与
量や投与経路を決定することができる。

【０２０４】 治療的に有効な量とは、例えば、症状や状態を回復させるSIGPまたはその断片
、SIGPの抗体、アゴニスト、アンタゴニスト、又はインヒビターの活性成分の量
である。治療的な効力および毒性は、細胞培養或いは実験動物における標準的な
製薬方法により、例えばED50(母集団の50%における治療的な有効投与量）または
LD50(母集団の50%の致死投与量)統計量を計算することによって決定することが できる。毒性に対する治療効果の用量比が治療指数であり、LD50/ED50の比とし て表すことができる。医薬組成物は大きな治療指数を示すことが好ましい。細胞
培養のアッセイ及び動物研究から得られたデータは、ヒトの使用のための投与量
の範囲をまとめるのに用いることができる。そのような成分の用量は、毒性少な
いか或いは全く毒性がなく、ED50を含む循環する濃度の範囲内にあることが好ま
しい。使用する剤形、患者の感受性並びに投与経路に応じて、投与量はこの範囲
内で変化する。

【０２０５】 正確な用量は、治療が必要な被験者に関連する要因の観点から医師が決定する
。投与及び投薬量は、十分なレベルの活性成分を与える、即ち所定の効果を維持
するために調節される。考慮すべき要因としては、疾病状態の重症度、被験者の
通常の健康、年齢、体重、性別、食餌、投与の時間及び頻度、併用する薬剤、反
応感受性、および治療への反応が含まれる。長時間作用性の医薬組成物は３〜４
日毎に、１週間毎に、或いは半減期及び特定の製剤のクリアランス速度に応じて
２週間に１度投与してもよい。

【０２０６】 通常の投与量は0.1〜100,000μgの範囲であり、最大約1gの総投与量まで、投 与経路に応じて変化する。特定の投与量或いは送達の方法のガイダンスは文献に
おいて提供され、通常当技術分野の医師に利用可能である。当業者は、ヌクレオ
チドに対しては、タンパク質やインヒビター用の製剤とは異なる製剤を採用する
ことができる。同様に、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの送達は、特定の
細胞、状態、位置等に対して特異的でありうる。

【０２０７】 診断 別の実施例においては、SIGPに特異的に結合する抗体を、SIGPの発現によって
特徴づけられる状態や疾病の診断や、SIGP又はSIGPのアゴニスト、アンタゴニス
ト、インヒビターで治療を受けている患者のモニタリングのためのアッセイに用
いることができる。診断目的に対し有用な抗体は、前述の治療のためのものと同
様の方法で作製することができる。SIGPの診断のアッセイには、ヒトの体液、細
胞或いは組織の抽出物においてSIGPを検出するために抗体および標識を用いる方
法が含まれる。抗体は修飾しても、修飾なしでも用いることができ、また共有結
合或いは非共有結合かのいずれかによりリポーター分子と結合させて標識するこ
とができる。当業者に周知の多様なリポーター分子が用いられ、その幾つかにつ
いては前述の通りである。

【０２０８】 ELISA、RIA及びFACSを含む、SIGPを測定するための種々のプロトコルが当技術 分野では周知であり、またこれによりSIGP発現の変化や異常性のレベルを診断す
るための基礎が得られる。SIGPの発現の正常値、即ち標準値は、複合体形成に適
した条件下で、哺乳類、好ましくはヒトの正常な被験者から得られる体液或いは
細胞抽出物とSIGPに対する抗体を結合させることによって確立できる。標準の複
合体形成量は、種々の方法、好ましくは測光の手段を用いて定量化できる。被験
者の生検組織からの調節及び疾病サンプルにおいて発現されたSIGPの量を、標準
値と比較する。標準値と被験者の値との偏差から、疾病診断のためのパラメータ
が確立される。

【０２０９】 本発明の別の実施例において、SIGPをコードするポリヌクレオチドを、診断目
的で用いることができる。用いられるポリヌクレオチドには、オリゴヌクレオチ
ド配列、相補的RNA及びDNA分子、及びPNAが含まれる。このポリヌクレオチドは 、SIGPの発現が疾病と関連するような生検組織における遺伝子発現を検出および
定量するために用いられる。診断アッセイは、SIGPが存在、非存在、過剰発現の
いずれの状態かを識別したり、治療の処置の際にSIGPレベルの調節をモニタリン
グするために用いることができる。

【０２１０】 一態様では、SIGPまたは近い関連の分子をコードする、ゲノム配列を含むポリ
ヌクレオチド配列を検出可能なPCRプローブとのハイブリダイゼーションを用い て、SIGPをコードする核酸配列を同定することができる。そのプローブの特異性
、つまりそのプローブが非常に高度に特異的な領域（例えば、5′調節領域）に 由来するか、或いはより特異性の度合いの低い領域（例えば、特に3′コーディ ング領域）の何れに由来するかによって、またハイブリダイゼーション或いは増
幅（最大の、高い、中程度の或いは低い）の厳密性によって、そのプローブがSI
GPをコードする自然発生の配列のみを同定するか、或いはアレルや関連する配列
も同定するかということが決定される。

【０２１１】 プローブは関連する配列を検出するためにも用いることができ、また好ましく
はSIGPをコードする任意の配列からのヌクレオチドを少なくとも50%含むべきで ある。本発明のハイブリダイゼーションプローブは、DNAやRNAか、またSEQ ID N
O:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:
21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26
、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、及びSEQ ID NO:30の配列に由来
するものか、或いはSIGP遺伝子のイントロン、エンハンサー、及びプロモータを
含むゲノムの配列に由来するものでもよい。

【０２１２】 SIGPをコードするDNAに対して特異的なハイブリダイゼーションプローブを作 製するための手段には、mRNAプローブを作り出すために、SIGP又はSIGP誘導体を
コードするポリヌクレオチド配列をベクターにクローンニングする方法がある。
このようなベクターは当業者に周知であり、また市販されており、適切なRNAポ リメラーゼや適切な標識されたヌクレオチドを付加することにより、in vitroで
RNAプローブを合成するために用いることができる。ハイブリダイゼーションプ ローブは種々のリポータグループにより標識され、例えば、この標識には、³²P や³⁵Sのような放射性核種によるものや、アビジン／ビオチン結合系を介してプ ローブに結合するアルカリホスファターゼのような酵素による標識等が含まれる
。

【０２１３】 SIGPをコードするポリヌクレオチド配列を、SIGPの発現の増強または低下に関
係する疾患の診断のために用いることができる。そのような疾患の例には、以下
に限定はしないが、腺癌、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫、肉腫、奇形癌腫
のような癌や、また副腎、膀胱、骨、骨髄、脳、乳房、頚、胆嚢、神経節、消化
管、心臓、腎臓、肝臓、肺、骨髄、筋肉、卵巣、膵臓、副甲状腺、陰茎、前立腺
、唾液腺、皮膚、脾臓、精巣、胸腺、甲状腺、及び子宮の癌や、例えばakathesi
a、アルツハイマー病、健忘症、筋萎縮性側索硬化症、双極性障害、緊張病、大 脳の腫瘍、痴呆、うつ病、ダウン症候群、遅発性ジスキネジア、筋緊張異常、て
んかん、ハンチントン病、多発性硬化症、神経線維腫症、パーキンソン病、偏執
傾向精神病、精神分裂病、及びトウーレット病のようなニューロンの疾患や、更
に、例えば、AIDS、アジソン病、成人呼吸困難症候群、アレルギー、貧血、喘息
、アテローム性動脈硬化症、気管支炎、胆嚢炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、ア
トピー性皮膚炎、皮膚筋炎、糖尿病、肺気腫、萎縮性胃炎、糸球体腎炎、痛風、
グレーブス病、過剰好酸球増加症、被刺激性の腸シンドローム、エリテマトーデ
ス、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋または心臓周囲の炎症、骨関節炎、骨粗
鬆症、膵炎、多発性筋炎、関節リウマチ、強皮症、シェーグレーン症候群、及び
甲状腺炎のような免疫疾患が含まれる。SIGPをコードするポリヌクレオチド配列
を、患者の生検組織や体液を利用するサザンブロットまたはノーザン分析、ドッ
トブロット法或いは他の膜ベース(membrane-based)技術や、PCR技術や、ディッ プスティック試験法(dipstick)、ピン、ELISAアッセイまたはマイクロアレイに おいて用いて、SIGP発現の変化を検出することができる。このような定性的また
は定量的試験法は当業者に周知のものである。

【０２１４】 特定の態様では、特に上述のような関連する疾患の存在を検出するアッセイに
おいて、SIGPをコードするヌクレオチド配列は有用であり得る。SIGPをコードす
るヌクレオチド配列は、標準的な方法で標識され、またハイブリダイゼーション
複合体の形成に適した条件下で、患者からの体液や組織サンプルに加えることが
できる。適当なインキュベーション期間の後、そのサンプルは洗浄され、シグナ
ルが定量されて標準値と比較される。患者のサンプルにおけるシグナルの量が、
対照サンプルに比べて有意に変化している場合、サンプルのなかのSIGPをコード
するヌクレオチド配列のレベルの変化は、関連する疾患の存在を示している。ま
た、このようなアッセイを用いて、動物実験、臨床試験、または個々の患者の治
療のモニタリングにおける特定の治療学的な処置法の有効性を評価することもで
きる。

【０２１５】 SIGPの発現に関連する疾病の診断のための基礎を提供するために、正常な、即
ち標準の発現のプロフィールを確立する。これは、ハイブリダイゼーション或い
は増幅に適した条件下で、動物またはヒト何れかの正常な被験者から採取された
体液或いは細胞抽出物を、SIGPをコードする配列又はその断片と結合させること
により達成される。標準のハイブリダイゼーションは、正常な被験者から得られ
る値と、既知の量の実質的に精製されたポリヌクレオチドが用いられる実験から
得られる値とを比較することにより定量し得る。このように正常なサンプルから
得られた標準値は、疾病の徴候がある患者のサンプルから得られる値と比較する
ことができる。標準値からの偏差を用いて疾病の存在を証明する。

【０２１６】 一旦疾患の存在が確認され、治療プロトコルが開始されると、ハイブリダイゼ
ーションアッセイが定期的に繰り返され、患者の発現のレベルが正常な患者にお
いて観察されるレベルに近づき始めたか否かを評価することができる。連続的な
アッセイから得られる結果を用いて、数日から数ヶ月にわたる治療の効果を示す
ことができる。

【０２１７】 癌に関しては、個体からの生検組織における比較的多量の転写物の存在が、疾
病の発生の素因を示し、つまり実際の臨床的症状が現れる前に疾病を検出するた
めの手段となり得る。このタイプのより決定的な診断により、健康の専門家が予
防的処置を講じたり、より早期に積極的な治療を行なうことが可能となり、故に
癌の発生や更なる進行を予防することができる。

【０２１８】 SIGPをコードする配列から設計されたオリゴヌクレオチドの付加的な診断のた
めの使用法には、PCR法の利用が含まれる。これらのオリゴマーは化学的に合成 され、酵素を用いて作製され、またはin vitroで作製されてもよい。オリゴマー
は、好ましくはSIGPをコードするポリヌクレオチドの断片、またはSIGPをコード
するポリヌクレオチドと相補的なポリヌクレオチドの断片を含み、特定の遺伝子
或いは状態を識別するための最適化された条件の下で用いられる。また深く関わ
るDNAまたはRNA配列の検出及び／又は定量のために、オリゴマーは緩やかな厳密
性の条件で用いることができる。

【０２１９】 またSIGP発現を定量するために用いられる方法には、放射標識或いはビオチン
化したヌクレオチドの利用、対照核酸の同時増幅(coamplification)の利用、及 び標準の検量線で補間する実験結果の利用が含まれる（Melby, P.C.ら(1993) J.
Immunol. Methods, 159:235-244；Duplaa, C. ら(1993) Anal. Biochem. 229-2
36）。多数のサンプルの定量の速度は、目的のオリゴマーが様々な希釈溶液中に
存在し、分光光度法または比色定量応答により迅速に定量するELISA形式におい てアッセイを実施することによって加速することができる。

【０２２０】 別の実施例においては、ここに開示した任意のポリヌクレオチド配列に由来す
るオリゴヌクレオチド又はより長い断片を、マイクロアレイにおける標的として
用いることができる。マイクロアレイを用いて、同時に多くの遺伝子の発現レベ
ルをモニタし、また遺伝子の変異配列、変異及び多形性を同定することができる
。この情報は、遺伝子機能の決定、疾病の遺伝的基礎の理解、疾病の診断、並び
に治療薬の開発およびその活性のモニタリングにおいて有用である。

【０２２１】 一実施例においては、当業者に周知の方法に従いマイクロアレイを準備して利
用する（例えば、Cheeら(1995)PCT出願WO95/11995；Lockhart,D.J. ら (1996)Na
t.Biotech.14:1675-1680；及びSchena,M.ら(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.93:10614
-10619参照）。

【０２２２】 マイクロアレイは、一般に合成アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはcDNAの
断片の何れかの、数多くの独特の1本鎖の核酸配列から好ましくは構成される。 そのオリゴヌクレオチドは、好ましくは約6〜60個のヌクレオチドの長さ、より 好ましくは約15〜30個のヌクレオチドの長さ、最も好ましくは約20〜25個のヌク
レオチドの長さをなす。約7〜10個のヌクレオチドの長さのオリゴヌクレオチド を用いるのが好ましいことがあり得る。マイクロアレイは、既知の5’又は3’配
列をカバーするオリゴヌクレオチドや、完全長配列をカバーする連続的なオリゴ
ヌクレオチドや、或いは配列の長さに沿った特定の領域から選択された独特のオ
リゴヌクレオチドを含み得る。またオリゴヌクレオチドは、特定の細胞または組
織のタイプに関連する1以上の未同定のcDNAに特異的であり得る。マイクロアレ イでは、対をなすオリゴヌクレオチドを用いることが適当である。各対における
第1のオリゴヌクレオチドは第2のオリゴヌクレオチドと1ヌクレオチドだけ異な る。このヌクレオチドは、配列の中央に位置していることが好ましい。第2のオ リゴヌクレオチドは調節に役立つ。対をなすオリゴヌクレオチドの数は、約2〜1
,000,000の範囲である。 マイクロアレイで用いるオリゴヌクレオチドを作製するために、コンピュータア
ルゴリズムを用いて、ヌクレオチド配列の5’またはより好ましくは3’末端から
始めて、目的の遺伝子を調査する。このアルゴリズムにより、その遺伝子に独特
な、ハイブリダイゼーションに適した範囲のGC含量を有する、ハイブリダイゼー
ションを妨げうる予想された二次構造のない、限定された長さのオリゴマーを同
定する。一態様においては、オリゴマーは、光照射(light-directed)化学プロセ
スを用いて基板上で合成される（Cheeら,前出）。その基板は適切な任意の固形 支持体（例えば、紙、ナイロン、又は別のタイプのメンブラン、フィルタ、チッ
プ、スライドガラス）でよい。

【０２２３】 別の態様では、オリゴヌクレオチドを基板表面上で、化学結合プロシージャ及
びインクジェット装置を用いて合成することができる（例えば、Baldeschweiler
ら(1995) PCT出願WO95/251116参照）。前記PCT出願はここで言及することにより
本明細書の一部とする。ドットブロット又はスロットブロット（HYBRIDOT^ョ appa ratus, IBCO/BRL）に類似の所定のアレイを用い、真空システム、熱、UV、機械 的又は化学的結合プロシージャを利用してcDNA断片又はオリゴヌクレオチドを基
板の表面に対して配置及び結合することができる。またアレイは、手作業或いは
市販の装置で、材料、及び機械（例えば、Brinkmann^ョ マルチチャネルピペッタ
ーまたはロボット装置）を用いることにより製作することができる。アレイは、
2個から100万個、即ち可能な任意の数のオリゴヌクレオチを含み得る。

【０２２４】 マイクロアレイを用いてサンプル解析を実施するために、ポリヌクレオチドが
サンプルから抽出される。サンプルは、任意の体液（例えば、血液、尿、唾液、
痰、胃液）、培養細胞、生検材料、または他の組織標本から得られる。プローブ
を作製するために、サンプルから抽出されたポリヌクレオチドは、マイクロアレ
イ上の核酸と相補的な核酸配列を作るのに用いられる。マイクロアレイがcDNAか
らなる場合、アンチセンスRNA（aRNA）がプローブに適している。従って、一態 様おいては、mRNAはcDNAに逆転写される。蛍光性の標識の存在下において、cDNA
を用いてフラグメント又はオリゴヌクレオチドaRNAプローブを作製する。蛍光性
に標識されたプローブをマイクロアレイと共にインキュベートし、プローブをマ
イクロアレイのオリゴヌクレオチドとハイブリダイズさせる。プローブとして用
いられる核酸配列には、制限酵素、PCR、又は当業者に周知の他の方法を用いて 作り出されたポリヌクレオチド、断片、並びに相補的配列、即ちアンチセンス配
列が含まれる。

【０２２５】 ハイブリダイゼーションの条件は、ハイブリダイゼーションが相補性のレベル
の変化を伴って起こるように調節される。ハイブリダイズしていないプローブを
取り除いた後、スキャナーを用いて蛍光のレベル及びパターンを決定する。マイ
クロアレイ上の各オリゴヌクレオチド配列の相補性の度合および相対的な量は、
スキャンされたイメージの解析によって評価される。検出システムを用いて、全
ての配列に対してハイブリダイゼーションの非存在、存在、またはレベルを測定
することができる。（例えば、Heller,R.A.ら (1997)Proc.Natl.Acad.Sci.94:21
50-2155）。

【０２２６】 本発明の別の実施例においては、SIGPをコードする核酸配列を用いて、自然発
生のゲノム配列をマッピングするために有用なハイブリダイゼーションプローブ
を作り出すこともできる。この配列は、特定の染色体、染色体の特定の領域、又
は人工染色体作製物にマッピングすることができ、その人工染色体作製物には、
例えば、ヒト人工染色体（HACs）、酵母菌人工染色体（YACs）、細菌人工染色体
（BACs）、細菌性P1作製物又は1本鎖染色体cDNAライブラリーがある（例えば、P
rice, C.M.(1993)Blood Rev.7:127-134）；及びTrask, B.J.(1991)Trends Genet
.7:149-154参照）。

【０２２７】 蛍光性インサイチューハイブリダイゼーション（FISH）は、他の物理的な染色
体マッピング技術及び遺伝地図データと関連し得る（例えば、Heinz-Ulrichら(1
995)in Meyers,R.A.(ed.)Molecular Biology and Biotechnology,VCH Publisher
s New York,NY,pp.965-968参照）。遺伝地図データの例は、種々の科学誌、また
はOnline Mendelian Inheritance in Man（OMIM）部位に見られる。物理的な染 色体地図上のSIGPをコードする配列の位置および特定の疾病、もしくは特定の疾
病の素因との関連性の助けにより、疾患に関係するDNAの領域の範囲を定めるこ とができる。本発明のヌクレオチド配列を用いて、正常者とキャリア、及び発症
した個体の間の遺伝子配列の違いを検出することができる。

【０２２８】 遺伝地図を広げるために、染色体作製物のin situハイブリダイゼーション及 び確立された染色体マーカーを用いる連鎖解析のような物理的なマッピング技術
を用いることができる。場合によっては、特定のヒト染色体の数やアームが未知
であっても、マウスのような別の哺乳類の染色体上の遺伝子配置によって関連す
るマーカーが明らかになる。物理的なマッピングによって、新たな配列を染色体
のアーム、或いはその一部へ割当てることができる。これにより、位置クローニ
ングまたは別の遺伝子発見技術を用いて、疾病遺伝子を検索する研究者に価値あ
る情報を提供できる。ひとたび疾患或いは症候群が、特定のゲノム領域、例えば
AT to 11q22-23への遺伝連鎖によって不完全な局所化がなされると、その領域に
マッピングされる任意の配列は、さらなる研究のための関連する遺伝子または調
節遺伝子を表し得る（例えば、Gatti, R.A.ら（1988）Nature 336:577-580参照 ）。また、本発明のヌクレオチド配列を用いて、正常者の染色体の位置と、キャ
リア、即ち発症した個体の、転座、逆位等によって生じた染色体の位置との違い
を検出することもできる。

【０２２９】 本発明の別の実施例においては、SIGPや、その触媒作用性または免疫原性断片
、即ちそれらのオリゴペプチドを、種々の薬剤スクリーニング技術における化合
物のライブラリーのスクリーニングのために用いることができる。そのようなス
クリーニングにおいて用いられる断片は、溶液中で遊離しているか、固体支持体
へ付着しているか、細胞表面へ付着しているか、或いは細胞内に位置しているも
のでありうる。SIGPと検定する薬剤との結合複合体の形成を測定することができ
る。

【０２３０】 別の薬物スクリーニング技術として、目的のタンパク質に対する適切な結合親
和性を有する化合物の高スループットスクリーニングが提供される（例えば、Ge
ysenら(1984) PCT出願WO84/03564参照）。この方法において、多くの異なる小形
の試験化合物が、プラスチックピン或いは別の表面のような固体基質において合
成される。試験化合物をSIGP又はその断片と反応させ、そして洗浄する。次に、
当技術分野で周知の方法で結合SIGPを検出する。また、前述の薬剤スクリーニン
グ技術において使用するために、精製されたSIGPをプレート上に直接コーティン
グすることもできる。或いは、非中和性抗体を用いて、ペプチドを捕捉して固体
支持体上に固定することができる。

【０２３１】 別の実施例においては、SIGP結合のためにSIGPと結合可能な中和抗体が試験化
合物と特異的に競合する競合的薬物スクリーニングアッセイを用いることができ
る。この方法において、抗体を用いて、1またはそれ以上の抗原決定基をSIGPと 共有する任意のペプチドの存在を検出することができる。

【０２３２】 さらに別の実施例においては、その新技術が、以下に限らないが、トリプレッ
ト遺伝暗号及び特異的な塩基対相互作用のようなものを含む特性の現在周知のヌ
クレオチド配列の特性に基づくものであれば、SIGPをコードするヌクレオチド配
列を、未だ開発されていない分子生物学的技術に用いることができる。

【０２３３】 以下に示す実施例は本発明の例示であって、本発明を限定しようとするもので
はない。

【０２３４】

【実施例】

例示を目的として、インサイト社クローン1534876及び1559131が単離されたSP
LNNOT04 cDNAライブラリーの準備ならびに配列決定について説明する。LIFESEQ^{T M} データベースのライブラリーにおけるcDNAの調製および配列決定は時を経て変 化してきており、ライブラリーが作製され解析された特定の時期におけるその段
階的な変化には利用可能なキット、プラスミド、及び機器の使用が含まれる。

【０２３５】 １ SPLNNOT04 cDNAライブラリーの作製 SPLNNOT04 cDNAライブラリーは、脳無酸素症で死亡した2歳のスペイン人の男 児から得られた正常な脾臓の微視的組織から作製された。患者の血清学および過
去の病歴については陰性であった。

【０２３６】 グアニジニウムイソチオシアネート溶液中で凍結組織をBrinkmann Homogenize
r Polytron PT-3000（Brinkmann Instruments,Westbury,NJ）を用いて均質化お よび溶解した。溶解産物は、Beckman L8-70M超遠心機のBeckman SW28ローター（
Beckman Instruments）を用いて、室温において25,000rpmで18時間、5.7MのCsCl
クッションで遠心分離した。RNAを酸性フェノール（pH4.0）で抽出し、0.3Mの酢
酸ナトリウム及び2.5倍量のエタノールを用いて沈殿させ、RNAseフリーの水に再
懸濁させ、37℃においてDNaseで処理した。RNAを抽出および沈殿を前述のように
繰返した。mRNAをQiagen Oligotex kit（QIAGEN,Inc.,Chatsworth,CA）を用いて
単離してcDNAライブラリーの作製に使用した。

【０２３７】 mRNAは、SuperScript Plasmid Systemの推奨プロトコル(Cat. #18248-013,GIB
CO-BRL,Gaithersburg,MD)に従って取扱った。cDNA合成は、NotI-oligo d(T)プラ
イマーで開始した。2本鎖cDNAを平滑末端化し、EcoRIアダプタと結合させ、NotI
で消化し、セファロースCL4Bカラム(Cat. #275105-01;Pharmacia)において分別 し、400bpを超えるこれらのcDNAをpINCYベクター（インサイト社）のNotI 及びE
coRI 部位と結びつけた。続いてプラスミドpINCY 1をDH5α^TMコンピテント細胞 （Cat. #18258-012,GIBCO-BRL）に形質転換した。

【０２３８】 ２ cDNAクローンの単離および配列決定 プラスミドDNAを細胞から遊離し、REAL Prep 96 Plasmid（Catalog #26173,QI
AGEN）を用いて精製した。推奨プロトコルを用いたが、以下の点を変更した。１
）細菌は、25mg/Lのカルベニシリン及び0.4%のグリセロールと共に1mlの滅菌Ter
rific Broth(Catalog #22711,GIBCO-BRL)において培養した。２）接種の後、培 養株を19時間インキュベートし、インキュベーションの終了時に細胞を0.3mlの 溶解バッファーで溶解した。３）イソプロパノール沈殿の後に、プラスミドDNA ペレッを0.1mlの蒸留水中に再懸濁した。プロトコルの最終ステップの終了後に 、サンプルを96穴ブロックに移して4℃で保管した。

【０２３９】 Peltier Thermal Cyclers （PTC200 from MJ Research, Watertown,MA）、並 びにApplied Biosystems 377 DNA Sequencing Systems若しくはPerkin Elmer 37
3 DNA Sequencing SystemとPerkin Elmer Catalyst 800 若しくはHamilton Micr
o Lab 2200 （Hamilton,Reno,NV）とを組み合わせて用いて、Sangerら（1975,J.
Mol.Biol.94:441f）の方法によってcDNAの配列決定を行ない、読み枠を画定した
。

【０２４０】 ３ cDNAクローン及びそれらの類推されるタンパク質の相同性検索 GenBank、SwissProt、BLOCKS、及びPima IIデータベースにおいて、配列表の ヌクレオチド配列および／またはアミノ酸配列を問い合わせ配列として用いた。
これらのデータベースには既に同定された注釈付きの配列が含まれており、BLAS
T(Basic Local Alignment Search Tool)を用いて相同性を有する領域をこのデー
タベースの中から検索した（例えば、Altschul.S.F.(1993)J.Mol.Evol.36:290-3
00；及びAltschulら(1990)J.Mol.Biol.215:403-410参照）。

【０２４１】 BLASTはヌクレオチド及びアミノ酸配列の両方のアライメントを生成し、配列 類似性を判定する。そのアライメントの局部的性質のため、BLASTは厳密な一致 を判定する、即ち原核生物（細菌）又は真核生物（動物、真菌、植物）起源のホ
モログを同定する際に特に有効である。他のアルゴリズムを、一次配列パターン
及び二次的な構造ギャップペナルティを取り扱う際に用いることができる（例え
ば、Smith,Tら(1992) Protein Engineering 5:35-51参照）。本明細書に開示さ れた配列は、少なくとも49ヌクレオチドの長さであり、不要な塩基は12%未満で ある（ここでは、A、C、G、TではなくNが記録される）。

【０２４２】 BLASTアプローチは、問い合わせ配列とデータベースの配列の一致を検索する 。また、BLASTは、発見されたあらゆる配列の一致の統計的有意性を評価して、 ユーザが選択した有意性のしきい値を満たすそれらの一致のみを報告する。本出
願でのしきい値は、ヌクレオチドで10^-25、ペプチドで10^-8に設定した。

【０２４３】 インサイト社のヌクレオチド配列を、霊長類（pri）、げっ歯類（rod）、及び
他の哺乳類配列（mam）のGenBankデータベースで検索し、そして同じクローンか
ら類推されたアミノ酸配列を、GenBankの機能性タンパク質データベース、哺乳 類（mamp）、脊椎動物（vrtp）、及び真核生物（eukp）で、相同性について検索
した。

【０２４４】 ４ ノーザン分析 ノーザン分析は、遺伝子の転写物の存在を検出するために用いられる実験用技
術であり、特定の細胞種或いは組織に由来するRNAが結合されている膜への標識 されたヌクレオチド配列のハイブリダイゼーションを伴う（例えば、Sambrookら
、前出, ch.7；並びにAusubel, F.M.ら前出, ch.4および16.参照）。

【０２４５】 BLAST（Altschul,S.F.(1993)J.Mol.Evol.36:290-300; Altschul,S.F.ら(1990)
J.Mol.Evol. 215:403-410）を使用する類似のコンピュータ技術を用いて、GenB
ank或いはLIFESEQ^TM データベース（インサイト社）のようなヌクレオチドデー
タベース内の同一或いは関連する分子を検索する。この分析は多くの膜系ハイブ
リダイゼーションより非常に速度が速い。さらにコンピュータ検索の感度を変更
して、任意の特定の一致が、厳密な一致或いは相同的一致の何れとして分類され
るかを決定することができる。検索の基準は、以下で定義される積スコア（prod
uct score）である。 （%配列同一性×%最大BLASTスコア）／100 積スコアは、2つの配列間の類似度及び配列一致の長さの両方を考慮に入れる。 例えば、積スコア40の場合、その一致は1〜2%誤差の範囲内の正確さであり、積ス
コア70の場合は正確な一致となる。相同性分子は通常、15〜40間の積スコアを示す
分子を選択することにより同定されるが、それより低いスコアでも関連した分子
が同定される場合もある。

【０２４６】 ノーザン分析の結果は、SIGPをコードする転写物が発生するライブラリのリス
トとして報告される。また存在量及び存在比も報告される。存在量は、特定の転
写物がcDNAライブラリ内に現れる回数を正に表すものであり、存在率は、存在量
をcDNAライブラリ内で試験された配列の全数で割った値である。

【０２４７】 ５ SIGPをコードするポリヌクレオチドの伸長 本発明の1つのポリヌクレオチドの核酸配列を用いて、部分ヌクレオチド配列 を完全長まで伸長するためのオリゴヌクレオチドプライマーを設計した。一方の
プライマーを合成してアンチセンスポリヌクレオチドの伸長を開始し、他方のプ
ライマーを合成してセンスポリヌクレオチドの配列を伸長を開始した。プライマ
ーを用いることにより、対象の領域に対する新たな未知のヌクレオチド配列を含
むアンプリコンを「外側に」発生させる既知の配列の伸長を容易にした。初期の
プライマーを、OLIGO4.06 (National Biosciences,Plymouth,MN)或いは他の適切
なプログラムを用いて、約22〜30ヌクレオチドからなる長さで、50%以上のGC含 有物を有し、且つ約68〜72℃の温度で標的配列にアニーリングするようにcDNAか
ら設計した。ヘアピン構造及びプライマー−プライマー2量体を生ずるようなヌ クレオチドの如何なる伸展も避けた。

【０２４８】 選択されたヒトcDNAライブラリ(Gibco/BRL)を用いて配列を伸長した。２つ以 上の伸長が必要である、もしくは望まれる場合には、さらに別のプライマの組を
設計して既知領域をさらに伸長させる。

【０２４９】 XL-PCR kit (Perkin Elmer)の取扱説明書に従って、酵素及び反応混合物を完 全に混合することにより、高い忠実度の増幅が得られた。PCRはPeltier Thermal
Cycler (PTC200; M.J.Research, Watertown,MA)を用いて実施され、以下のパラ
メータで、40pmolの各プライマおよびキットの他の全ての成分を推奨された濃度
で開始した。 ステップ1 94℃で1分間(初期変性） ステップ2 65℃で1分間 ステップ3 68℃で6分間 ステップ4 94℃で15秒間 ステップ5 65℃で1分間 ステップ6 68℃で7分間 ステップ7 ステップ4〜6をさらに15サイクル繰返す ステップ8 94℃で15秒間 ステップ9 65℃で1分間 ステップ10 68℃で7分15秒間 ステップ11 ステップ8〜10を12サイクル繰返す ステップ12 72℃で8分間 ステップ13 4℃（保持する） 反応混合物の5〜10μlのアリコットを低濃度（約0.6〜0.8%）アガロースミニ ゲル上で電気泳動法により分析し、どの反応物が配列の伸長に成功したかを判定
した。最も大きな生成物を含むと考えられるバンドをゲルから切出し、QIA Quic
k^TM （QIAGEN Inc.,Chatsworth,CA）を用いて精製し、クレノウ酵素を用いてオ ーバーハングを切除して、再連結及びクローニングを容易にした。

【０２５０】 エタノール沈殿の後、その生成物を13μlの連結緩衝液中に再溶解し、1μlT4-
DNAリガーゼ（15単位)及び1μlT4ポリヌクレオチドキナーゼが加えて、その混合
物を2〜3時間室温で、或いは16℃で一晩インキュベートした。コンピテントE.col i 細胞(40μlの適切な培養液中の）を3μlの連結混合物を用いて形質転換し、80μ
lのSOC培養液で培養した（例えば、Sambrook、前出,Appendix A, p.2参照）。37
℃で1時間インキュベートした後、E.coli混合物を、2x Carbを含むLuria Bertan
i (LB)-agar (例えば、Sambrook、前出,Appendix A, p.1参照)上で培養した（pl
ated）。翌日、いくつかのコロニーを各プレートから無作為に選択して、適切な
市販の滅菌96穴マイクロタイタープレートの個々のウエル内に置かれた150μlの
液体LB/2xCarb培地で培養した。その翌日、終夜培養した各5μlの培養物を非滅 菌の96穴プレートに移し、水で1:10に希釈した後、各サンプルから5μlをのPCRア
レイに移した。

【０２５１】 PCR増幅の場合、4単位のrTthDNAポリメラーゼ、ベクタプライマー、及び伸長 反応のために用いられる１つ或いは両方の遺伝子特異的プライマーを含む18μl の濃縮PCR反応混合物(3.3x)が各ウエルに加えられた。増幅は、以下の条件で実 施した。 ステップ1 94℃で60秒間 ステップ2 94℃で20秒間 ステップ3 55℃で30秒間 ステップ4 72℃で90秒間 ステップ5 ステップ2〜4をさらに29サイクル繰返す ステップ6 72℃で180秒間 ステップ7 4℃（保持する） PCR反応物のアリコットを、分子量マーカと共にアガロースゲル上で移動させ た。PCR生成物の大きさを元の部分cDNAと比較し、適切なクローンを選択し、プ ラスミドに結合させて、配列決定した。

【０２５２】 同様に、本発明のヌクレオチド配列の中の1つのヌクレオチド配列を用いて、 上記手順、5’伸長用に設計されたオリゴヌクレオチド及び適切なゲノムライブ ラリを用いる5’調節配列を得る。

【０２５３】 ６ 個々のハイブリダイゼーションプローブの標識化及び使用 本発明のヌクレオチドの1つに由来するハイブリダイゼーションプローブを用 いて、cDNA、ゲノムDNA、又はmRNAをスクリーニングする。約２０塩基対からな るオリゴヌクレオチドの標識化について特に記載するが、より大きなヌクレオチ
ドフラグメントにも概ね同じ手順を用いる。オリゴヌクレオチドを、OLIGO 4.06
（National Biosciences）のような現状の技術分野のソフトウエアを用いて設 計し、50pmolの各オリゴマーと250μCiの[γ-³²P]アデノシン三リン酸 （Amersh
am,Chicago,IL）及びT4ポリヌクレオチドキナーゼ(DuPont NEN^ョ, Boston MA)と を組み合わせることにより標識する。標識されたオリゴヌクレオチドを、Sephad
ex G-25超精細樹脂カラム（Pharmacia＆Upjohn,Kalamazoo,MI）を用いて実質的 に精製する。毎分10⁷カウントの標識されたプローブを含むアリコットを、エン ドヌクレアーゼ（Ase I, Bgl II, Eco RI, Pst I, Xba 1.或いは Pvu II(DuPont
NEN^ョ,Boston,MA)）の1つで消化されたヒトゲノムDNAの典型的な膜ベースのハイ ブリダイゼーション解析に用いる。

【０２５４】 各消化物からのDNAを、0.7%アガロースゲルに上で分画して、ナイロン膜(Nytr
an Plus, Schleicher & Schuell, Durham NH)に転写する。ハイブリダイゼーシ ョンは40℃で16時間実施する。非特異的シグナルを除去するために、0.1×クエ ン酸ナトリウム食塩水及び0.5%ドデシル硫酸ナトリウムまでの徐々に厳密性を増
す条件下で、ブロットを室温にて連続的に洗浄する。XOMAT AR^TMフィルム (Koda
k, Rochester,NY)を数時間ブロットに対して露光した後、ハイブリダイゼーショ
ンパターンを視覚的に比較する。

【０２５５】 ７ マイクロアレイ マイクロアレイ用のオリゴヌクレオチドを作り出すために、本発明のヌクレオ
チド配列を、そのヌクレオチド配列の3’末端から開始して、所定のコンピュー タアルゴリズムを用いて調べる。各々について、そのアルゴリズムによって、そ
の核酸配列に固有で、ハイブリダイゼーションに適した範囲内のGC含有物を有し
、ハイブリダイゼーションに妨げとなるような二次的構造がない特定の長さのオ
リゴマを同定する。そのアルゴリズムは、各核酸配列に対応する約20のオリゴヌ
クレオチドを同定する。各配列の中央の1つのヌクレオチドが変化していること を除いて一致したオリゴヌクレオチドの組を形成する。このプロセスはマイクロ
アレイ内の各遺伝子に対して繰返され、20個の20量体からなる組の2つが、光配 向（light-directed）化学処理を用いてシリコンチップの表面上で合成及び配列
される（例えば、Chee,前出 参照）。

【０２５６】 別法として、化学的結合プロシージャ及びインクジェット装置を用いることに
より、基板の表面上でオリゴマを合成することができる。（例えば、Baldeschwe
iler,前出 参照）。また、ドットブロット又はスロットブロット法に類似の所定
のアレイを用いて、熱、紫外線（UV）、機械的或いは化学的結合プロシージャま
たは真空システムを利用して、基板の表面にフラグメント或いはオリゴヌクレオ
チドを配列及び結合させることができる。一般にアレイは手動で或いは市販の道
具及び装置を用いて、任意の適切な数のエレメントを含むように製造できる。ハ
イブリダイゼーション後、ハイブリダイズしていないプローブを除去し、スキャ
ナーを用いて蛍光のレベル及びパターンを判定する。マイクロアレイ上の各オリ
ゴヌクレオチド配列の相補性の度合及び相対的な存在量は、スキャナーで読取ら
れた画像を解析することによって評価する。

【０２５７】 ８ 相補的ポリヌクレオチド SIGPをコードする配列に相補的な配列或いはその任意の一部を用いて、自然発
生SIGPの発現を検出して低下させ、即ち抑制する。約15〜約30塩基対を含むオリ
ゴヌクレオチドの使用について記載するが、より小さな、或いはより大きな配列
フラグメントの場合でも概ね同じ方法が用いられる。Oligo4.06ソフトウエア及びS IGPコーディング配列を用いて適切なオリゴヌクレオチドを設計する。転写を抑 制するために、相補オリゴヌクレオチドを最も独特の5´配列から設計し、プロ モーターのコーディング配列への結合を防止するために用いる。翻訳を抑制する
ために、相補的なオリゴヌクレオチドを、リボソームのSIGPをコードする転写物
への結合を防ぐように設計する。

【０２５８】 ９ SIGPの発現 SIGPの発現は、cDNAを適切なベクタにサブクローニングし、ベクターを宿主細
胞に形質転換することにより行われる。このベクターは、cDNAに操作可能に連結
する、例えばクローニング部位の上流のβガラクトシダーゼのような、適切なプ
ロモーターを含む（例えば、Sambrook,前出,pp.404-433；及びRosenberg,M.ら(1
983) Methods Enzymol.101:123-138参照）。

【０２５９】 単離され、標準的な方法を用いてIPTG (isopropyil beta-D-thiogalactopyran
oside)と転換された菌種の誘発により、β-ガラクトシダーゼの最初の8残基、リ
ンカーの約5〜15残基及び完全長タンパク質からなる融合タンパク質を生成する 。このシグナル残基により細菌増殖培地へのSIGPの分泌が促され、この培地を後
述の活性のためのアッセイにおいて直接用いることができる。

【０２６０】 １０ SIGP特異的抗体の産生 PAGE電気泳動法（Harrington,M.G.(1990)Methods Enzymol.182:488-495）、或
いは他の精製技術を用いて実質的に精製されたSIGPを用いて、ウサギを免疫化し
、標準的なプロトコルを使用して抗体を生成する。アミノ酸配列を、DNASTAR so
ftware （DNASTAR Inc）を用いて分析して、免疫原性の高い領域を判定し、対応
するオリゴポリペプチドを合成し、これを用いて当業者に知られた方法により抗
体を作り出す。C-末端付近、或いは親水性領域内のエピトープのような適切なエ
ピトープの選択方法の詳細については当業者の文献に記載されている（例えばAu
subelら 前出,ch.11参照）。

【０２６１】 通常、オリゴペプチドは15残基の長さであり、fmoc法の化学作用を利用するApp
lied Biosystems Peptide Synthesizer Model 431Aを用いて合成し、MBS（N-mal
eimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester）を用いた反応によりKLH(Sigma, S
t.Louis, MO)に結合させて免疫抗原性を増強させる（例えば、Ausubelら 前出, 参照）。ウサギは、完全なフロイントのアジュバントにおけるオリゴペプチド-K
LH複合体で免疫化する。その結果生じる抗血清は、例えば、プラスチックにペプ
チドを結合させ、1%BSAでブロッキングし、ウサギ抗血清と反応させ、洗浄し、 さらに放射性ヨウ素標識されたヤギ抗ウサギIgGと反応させることにより、抗ペ プチド活性に対して検査される。

【０２６２】 １１ 特異的抗体を用いる自然発生SIGPの精製 SIGPに対して特異な抗体を用いるイムノアフィニティークロマトグラフィによ
り、自然発生或いは組換えSIGPを実質的に精製する。イムノアフィニティーカラ
ムは、SIGP抗体を、CnBr-activated Sepharose (Pharmacia＆Upjohn)のような活
性化されたクロマトグラフィー用樹脂に共有結合させることにより作製する。結
合の後、製造者の取扱説明書に従って樹脂をブロック及び洗浄する。

【０２６３】 SIGPを含む培養液を免疫親和性カラムに通し、そのカラムをSIGPを優先的に吸
着させる条件下（例えば、界面活性剤の存在下における高イオン強度のバッファ
ー）で洗浄する。抗体／SIGP結合を分裂させる条件下（例えば、pH2〜3のバッフ
ァー、又は尿素もしくはチオシアン酸塩イオンのような高濃度のカオトロープ(c
haotrope)）でカラムを溶出させ、SIGPを回収する。

【０２６４】 １２ SIGPと相互作用する分子の同定 ¹²⁵I Bolton-Hunter試薬を用いて、SIGP或いはその生物学的に活性な断片を標
識する（例えば、Boltonら(1973) Biochem.J.133:529参照）。マルチウエルプレ
ートのウエル内に予め配列した候補分子を、標識されたSIGPでインキュベートし
、洗浄し、標識されたSIGP複合体を有する任意のウエルを検定する。種々のSIGP
濃度で得られたデータを用いて、数、親和性及びSIGPと候補分子との会合につい
ての値を計算する。

【０２６５】 上記の刊行物および特許出願の全ては、ここで言及することにより本明細書の
一部とする。当業者は、本発明の範囲及び精神から逸脱することなく本明細書に
記載した方法及びシステムの種々の改変を行うことができるであろう。本発明を
特定の好適実施例に関して説明してきたが、請求する発明がそのような特定の実
施例に過度に制限されるべきではないことを理解されたい。実際に、記載した本
発明の実施のための方法の種々の改変は、分子生物学或いは関連する分野の当業
者には明らかであり、請求の範囲内に含まれることを意図するものである。

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 39/395 Ａ６１Ｋ 48/00 45/00 Ａ６１Ｐ 31/00 48/00 35/00 Ａ６１Ｐ 31/00 37/02 35/00 37/08 37/02 Ｃ０７Ｋ 14/47 37/08 16/18 Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ１２Ｍ 1/00 Ａ 16/18 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｍ 1/00 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/68 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｇ０１Ｎ 33/68 Ａ６１Ｋ 37/02 // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ａ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ， ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，Ｌ Ｖ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ， ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，Ｕ Ｓ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 ヒルマン、ジェニファー・エル アメリカ合衆国カリフォルニア州94040・ マウンテンビュー・＃12・モンロードライ ブ 230 (72)発明者 コーレイ、ニール・シー アメリカ合衆国カリフォルニア州94040・ マウンテンビュー・＃30・デールアベニュ ー 1240 (72)発明者 ゲグラー、カール・ジェイ アメリカ合衆国カリフォルニア州94025・ メンロパーク・オークランドアベニュー 1048 (72)発明者 ボーグン、マライア・アール アメリカ合衆国カリフォルニア州95125・ サンノゼ・ラロッササークル 1537 (72)発明者 サザー、スーザン・ケイ アメリカ合衆国カリフォルニア州94303・ パロアルト・アパートメント ＃203・ミ ッドタウンコート 2721 (72)発明者 シャー、パルビ アメリカ合衆国カリフォルニア州94087・ サニーベイル・＃５・クイーンシャルロッ トドライブ 1608

Claims (23)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、
   SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID
   NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、及びSEQ I
   D NO:15からなる一群より選択されたアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む 実質的に精製されたヒトシグナルペプチド含有タンパク質（SIGP）。
2. 【請求項２】 厳密な条件の下で請求項１のSIGPをコードするポリヌクレ
   オチドとハイブリダイズする単離され精製されたポリヌクレオチド。
3. 【請求項３】 請求項１のSIGPをコードする単離され精製されたポリヌク
   レオチド。
4. 【請求項４】 請求項１のSIGPをコードする少なくとも1つのポリヌクレ オチドの少なくとも断片を含むマイクロアレイ。
5. 【請求項５】 請求項３のポリヌクレオチドに対して少なくとも90%以上 のポリヌクレオチド同一性を有する単離され精製されたポリヌクレオチドの変異
   配列。
6. 【請求項６】 請求項３のポリヌクレオチドを含む所定の組成物。
7. 【請求項７】 厳密な条件の下で請求項３のポリヌクレオチドとハイブリ
   ダイズする単離され精製されたポリヌクレオチド。
8. 【請求項８】 請求項３のポリヌクレオチドに対して相補的な、単離され
   精製されたポリヌクレオチド。
9. 【請求項９】 SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:
   19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24
   、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、
   及びSEQ ID NO:30からなる一群より選択された核酸配列を有する単離され精製さ
   れたポリヌクレオチド。
10. 【請求項１０】 請求項９のポリヌクレオチドに対して少なくとも90%以 上のポリヌクレオチド同一性を有する単離され精製されたポリヌクレオチドの変
    異配列。
11. 【請求項１１】 請求項９のポリヌクレオチド配列に対して相補的な、単
    離され精製されたポリヌクレオチド。
12. 【請求項１２】 請求項３のポリヌクレオチドの少なくとも断片を含む発
    現ベクター。
13. 【請求項１３】 請求項１２の発現ベクターを含む宿主細胞。
14. 【請求項１４】 SIGPをコードするポリペプチドの製造方法であって、 （ａ）前記ポリペプチドの発現に適した条件の下で、請求項１３の宿主細胞を
    培養する過程と、 （ｂ）前記宿主細胞の培地から前記ポリペプチドを回収する過程とを含むこと
    を特徴とするポリペプチドの製造方法。
15. 【請求項１５】 適切な医薬用担体と共に請求項１のSIGPを含む医薬品組
    成物。
16. 【請求項１６】 請求項１のSIGPに特異的に結合する精製された抗体。
17. 【請求項１７】 請求項１のSIGPの精製されたアゴニスト。
18. 【請求項１８】 請求項１のSIGPの精製されたアンタゴニスト。
19. 【請求項１９】 癌の治療方法または予防方法であって、そのような治療
    が必要な患者に対して、有効な量の請求項１５の医薬品組成物を投与する過程を
    含む方法。
20. 【請求項２０】 癌の治療方法または予防方法であって、そのような治療
    が必要な患者に対して、有効な量の請求項１８のアンタゴニストを投与する過程
    を含む方法。
21. 【請求項２１】 免疫応答の治療方法または予防方法であって、そのよう
    な治療が必要な患者に対して、有効な量の請求項１８のアンタゴニストを投与す
    る過程を含む方法。
22. 【請求項２２】 核酸を含む生物学的サンプルにおけるSIGPをコードする
    ポリヌクレオチドの検出方法であって、 （ａ）請求項８のポリヌクレオチドを生物学的サンプルの少なくとも１つの核
    酸材料とハイブリダイズさせ、ハイブリダイゼーション複合体を形成する過程と
    、 （ｂ）前記ハイブリダイゼーション複合体を検出する過程であって、該複合体
    の存在が、前記生物学的サンプルにおけるSIGPをコードするポリヌクレオチドの
    存在と相関性を有する、該過程とを含むことを特徴とするSIGPの検出方法。
23. 【請求項２３】 ハイブリダイゼーションの前に、前記生物学的サンプル
    の核酸をポリメラーゼ連鎖反応法によって増幅することを特徴とする請求項２２
    に記載の方法。