JP2002507598A - チロシン蛋白質キナーゼを調節するためのヘテロ環式化合物のファミリー - Google Patents

チロシン蛋白質キナーゼを調節するためのヘテロ環式化合物のファミリー

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Abstract

(57)【要約】 本発明は，ある種のインドリノン系およびピラゾリルアミド系化合物，その合成方法，および化合物からなるコンビナトリアルライブラリに関する。本発明はまた，これらの化合物を使用して蛋白質キナーゼの機能を調節する方法，および蛋白質キナーゼおよび関連するシグナル伝達経路の機能を調節することにより疾患を治療する方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 関連出願 本出願は，Ｔａｎｇらの，"三環式系インドリノン化合物を用いてチロシン蛋 白質キナーゼ機能を調節する方法"と題する米国仮出願番号６０／０７９，７１ ３（１９９８年３月２６日出願）（Ｌｙｏｎ＆Ｌｙｏｎ Ｄｏｃｋｅｔ Ｎｏ．
２３１／２５０），Ｔａｎｇらの，"医薬としてのピラゾリルアミド系化合物"と
題する出願番号６０／０８１，７９２（１９９８年４月１５日出願）（Ｌｙｏｎ
＆Ｌｙｏｎ Ｄｏｃｋｅｔ Ｎｏ．２３１／２４９），Ｔａｎｇらの，"インド リノン化合物を用いてチロシン蛋白質キナーゼ機能を調節する方法"と題する出 願番号６０／０８０，４２２（１９９８年４月２日出願）（Ｌｙｏｎ＆Ｌｙｏｎ
Ｄｏｃｋｅｔ Ｎｏ．２３１／２４８），Ｔａｎｇらの，"蛋白質キナーゼ活 性の調節剤としての２−インドリノン誘導体"と題する出願番号６０／０８２， ０５６（１９９８年４月１６日出願）（Ｌｙｏｎ＆Ｌｙｏｎ Ｄｏｃｋｅｔ Ｎ
ｏ．２３０／２８８），Ｔａｎｇらの，"新規フェニル２−インドリノン誘導体 および蛋白質キナーゼ活性の調節剤"と題する出願番号６０／０９８，７８３（ １９９８年９月１日出願）（Ｌｙｏｎ＆Ｌｙｏｎ Ｄｏｃｋｅｔ Ｎｏ．２３６
／１２７），Ｔａｎｇらの，"無秩序な新脈管形成および／または脈管形成に関 連する疾患を治療する方法"と題する出願番号６０／０８９，５２１（１９９８ 年６月１６日出願）（Ｌｙｏｎ＆Ｌｙｏｎ Ｄｏｃｋｅｔ Ｎｏ．２２７／１２
６），およびＨａｎｎａｈらの，"性的活性を増強するためのインドリノン化合 物の使用"と題する出願番号６０／０８９，３９７（１９９８年６月１５日出願 ）（Ｌｙｏｎ＆Ｌｙｏｎ Ｄｏｃｋｅｔ Ｎｏ．２３４／２５２）に関連し優先
権を主張している。 発明の背景 以下の本発明の背景の記述は，本発明の理解を助けるために提供されるのもの
であり，本発明に対する先行技術を記載または構成すると認めるものではない。
【０００２】 細胞シグナル伝達は，細胞外刺激が細胞内部に伝播され，次に多様な細胞プロ
セスを制御する基本的なメカニズムである。シグナル伝達の鍵となる生化学メカ
ニズムの一つには，蛋白質の可逆的リン酸化が関与する。ポリペプチドのリン酸
化は，その構造および機能を変化させることにより，成熟蛋白質の活性を制御す
る。ほとんどの場合，蛋白質中のセリン，トレオニンまたはチロシンアミノ酸の
ヒドロキシル基（−ＯＨ）にリン酸が存在する。
【０００３】 細胞エフェクターのリン酸化を媒介する酵素は，一般に２つの群に分けられる
。第一の群は，アデノシン三リン酸から蛋白質基質にリン酸基を転移する蛋白質
キナーゼからなる。第二の群は，ホスホリル蛋白質基質からのリン酸基を加水分
解する蛋白質ホスファターゼからなる。蛋白質キナーゼおよび蛋白質ホスファタ
ーゼの逆の機能が，シグナル伝達プロセスにおいてシグナルの流れを釣り合わせ
，制御している。
【０００４】 蛋白質キナーゼおよび蛋白質ホスファターゼは，一般に２つの群，すなわちレ
セプター型および非レセプター型蛋白質に分けられる。ほとんどのレセプター型
蛋白質チロシンホスファターゼは，２つの保存された触媒ドメインを含み，この
それぞれが２４０アミノ酸残基のセグメントを含む（Ｓａｉｔｏ ｅｔ ａｌ．
，１９９１，Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ Ｄｉｆｆ．２：５９−６５）。
レセプター蛋白質チロシンホスファターゼは，その細胞外ドメインのアミノ酸配
列多様性に基づいてさらに分類することができる（Ｓａｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，
（上掲）；Ｋｒｕｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：７４１７−７４２１）。
【０００５】 蛋白質キナーゼおよび蛋白質ホスファターゼはまた，それらが作用するアミノ
酸に基づいて典型的に３つのクラスに分けられる。あるものは，セリンまたはト
レオニン上のリン酸の付加または加水分解のみを触媒し，あるものは，チロシン
上のリン酸の付加または加水分解のみを触媒し，あるものは，セリン，トレオニ
ンおよびチロシン上のリン酸の付加または加水分解を触媒する。
【０００６】 チロシンキナーゼは，細胞増殖に関与する他の蛋白質キナーゼの触媒活性を制
御することができる。不適当な活性を有する蛋白質キナーゼもまた，あるタイプ
の癌に関与している。異常に上昇したレベルの細胞増殖は，無秩序な活性を有す
るレセプターおよび非レセプター蛋白質キナーゼと関連している。
【０００７】 細胞増殖における役割に加えて，蛋白質キナーゼは，細胞分化プロセスに関与
すると考えられている。ある細胞においては，細胞分化は，神経成長因子（ＮＧ
Ｆ）または表皮成長因子（ＥＧＦ）の刺激により生ずる。細胞分化は，迅速な膜
波打ち運動，細胞平坦化および細胞粘着の増加により特徴づけられる（Ｃｈａｏ
，１９９２，Ｃｅｌｌ ６８：９９５−９９７）。
【０００８】 癌および他の疾患の新規な治療を発見するために，生物医薬の研究者および化
学者らは，蛋白質キナーゼの機能を阻害する分子を設計し，合成し，試験してき
た。いくつかの小さい有機分子が，蛋白質キナーゼの機能を調節する化合物群を
形成する。蛋白質キナーゼの機能を阻害することが報告されている分子の例は，
ビス−単環式，二環式またはヘテロ環式アリール化合物（ＰＣＴ ＷＯ９２／２
０６４２），ビニレン−アザインドール誘導体（ＰＣＴ ＷＯ９４／１４８０８
），１−シクロプロピル−４−ピリジル−キノロン（米国特許５，３３０，９９
２），スチリル化合物（Ｌｅｖｉｔｚｋｉ， ｅｔ ａｌ．，"ＥＧＦレセプタ ー蛋白質チロシンキナーゼを阻害するスチリル化合物"と題する米国特許５，２ １７，９９９），スチリル−置換ピリジル化合物（米国特許５，３０２，６０６
），ある種のキナゾリン誘導体（欧州特許出願０５６６２６６Ａ１），セレオイ
ンドールおよびセレニド（ＰＣＴ ＷＯ９４／０３４２７），三環式ポリ水酸化
化合物（ＰＣＴ ＷＯ９２／２１６６０），およびベンジルホスホン酸化合物（
ＰＣＴ ＷＯ９１／１５４９５）である。
【０００９】 細胞膜を横切り，酸加水分解に耐性の化合物は，患者に経口投与された後に非
常に生体利用性が高くなるため，潜在的に有利な治療剤である。しかし，これら
の蛋白質キナーゼ阻害剤の多くは，蛋白質キナーゼの機能を弱くしか阻害しない
。さらに，多くのものは種々の蛋白質キナーゼを阻害し，したがって，疾患の治
療剤として多くの副作用を引き起こすであろう。
【００１０】 癌の治療用の化合物の開発においてなされてきた著しい進歩にもかかわらず，
当該技術分野には，特定の蛋白質キナーゼの機能を調節しうる化合物を形成する
特定の構造および置換パターンを同定する要求が依然として存在する。 発明の概要 Ｉ．概要 本発明は，部分的には，三環式系インドリノン化合物，ピラゾリルアミド系化
合物，イミダゾイル−２−インドリノン誘導体，フェニル−２−インドリノン誘
導体，およびこれらの化合物を用いて蛋白質キナーゼ（ＰＫ）の機能を調節する
方法に関する。該方法には，蛋白質キナーゼを発現する細胞が組み込まれている
。さらに，本発明は，生物において，本明細書に記載される方法により同定され
る化合物を用いて，蛋白質キナーゼに関連する異常な状態を予防または治療する
方法を記載する。さらに，本発明は，本発明の方法により同定される化合物を含
む医薬組成物に関する。
【００１１】 本発明は，蛋白質キナーゼを阻害する可能性を有するインドリノン化合物，お
よび関連する生成物および方法を特徴とする。蛋白質キナーゼの阻害剤は，イン
ドリノン化合物に化学置換基を付加することにより得ることができる。本発明の
化合物は，１またはそれ以上の機能的または非機能的蛋白質キナーゼと関連する
疾患の治療の新世代を代表する。神経変性性疾患およびある種の癌は，この疾患
の群に含まれる。化合物は，その標的に特異的であるように，そして後に副作用
をほとんど引き起こさないように，したがって，可能性のある癌治療の新世代を
代表するように，修飾することができる。これらの特性は，現在用いられている
，多くの副作用を引き起こし患者を有害なように弱らせる癌治療に対する著しい
改良である。
【００１２】 本発明の化合物は，蛋白質キナーゼの活性を阻害することにより，固形腫瘍を
最小化し除去するか，あるいは，少なくとも腫瘍の成長および／または転移を調
節または阻害するであろうと考えられる。蛋白質キナーゼは，特に，新脈管形成
の間，血管の増殖を制御する。癌腫瘍は成長の間，酸素化された血液により滋養
されなければならないため，新脈管形成の速度の増加は，細胞における癌腫瘍の
成長を伴う。したがって，蛋白質キナーゼの阻害およびこれに対応する新脈管形
成の減少は，腫瘍を栄養飢餓状態にし，おそらくは腫瘍を除去するであろう。
【００１３】 本発明を実施するためには，化合物がＰＫ（例えば繊維芽細胞成長因子レセプ
ター１（ＦＧＦＲ1））を阻害するメカニズムの詳細な理解は必要ではないが， 化合物はＰＫの触媒領域のアミノ酸と相互作用すると考えられる。ＰＫは典型的
には二突出部構造を有し，ＡＴＰはＰＫの間でアミノ酸が保存されている領域中
の２つの突出部の間の割れ目に結合するようである。ＰＫの阻害剤は，ＡＴＰが
ＰＫに結合するのと同じ一般的領域中で，非共有結合的相互作用（例えば水素結
合，ファンデルワールス相互作用，およびイオン結合）によりＰＫに結合すると
考えられている。より詳細には，本発明の化合物のオキシインドール成分が，Ａ
ＴＰのアデニン環により占められる一般的空間と同じ空間で結合すると考えられ
る。特定のＰＫに対するインドリノンＰＫ阻害剤の特異性は，オキシインドール
コアの周辺の構成成分と個々のＰＫに特異的なアミノ酸ドメインとの間の相互作
用により与えられるであろう。すなわち，異なるインドリノン置換基が，特定の
ＰＫに対する優先的結合に寄与しているのかもしれない。異なるＡＴＰ結合部位
において活性を有する化合物を選択する能力のため，これらは，そのような部位
を有する任意の蛋白質（蛋白質チロシンキナーゼのみならず，セリン／トレオニ
ンキナーゼおよび蛋白質ホスファターゼ）を標的化するのに有用である。すなわ
ち，このような化合物は，そのような蛋白質のインビトロアッセイに，およびそ
のような蛋白質によるインビボでの治療効果に有用である。
【００１４】 少なくとも部分的には慢性関節リウマチ，子宮内膜症，眼疾患，癌および転移
，乾癬，動脈肥厚および再狭窄，および創傷治癒の間の過度の瘢痕等の疾病およ
び疾患の原因である，新脈管形成および血管新生に起因する無秩序な血管成長は
，活性化チロシンキナーゼによる基質分子のリン酸化に依存する。本発明の方法
は，蛋白質キナーゼの活性を特異的に阻害することにより，組織の新脈管形成お
よび血管新生を最小限にし，新脈管形成の間に血管の増殖を制御する。この阻害
により，チロシンシグナル伝達が妨害され，異常な細胞増殖，したがって疾患の
進行が中断される。あるいは，組織虚血の場合のように，新脈管形成により血管
の増殖を増加させるために，蛋白質キナーゼの活性を増加させることが有用であ
ろう。
【００１５】 最後に，本発明の化合物は，ホスファターゼの作用を阻害する可能性があり，
前記ホスファターゼの欠陥に関連する疾患の治療の新世代であるかもしれない。
すなわち，本発明の化合物は，蛋白質ホスファターゼの機能を調節するために用
いることができ，生物において蛋白質ホスファターゼに関連する異常な状態を予
防または治療するために用いることができる。キナーゼに関連して本明細書にお
いて定義される用語は，当業者にとってホスファターゼに関するものと同様であ
る。
【００１６】 本発明はまた，哺乳動物，特にヒトにおいて性的機能障害を予防または治療す
る方法を提供する。本発明は，必要とする哺乳動物に化合物を投与し，哺乳動物
の性的活性の進行，例えば，雄においては，勃起機能，性交を行う能力，挿入後
の勃起の維持，およびオーガズム，雌においては，膣の潤滑の増加およびオーガ
ズムをモニターする方法を提供する。 ＩＩ．定義 "化合物"との用語は，化合物またはその薬学的に許容しうる塩，エステル，ア
ミド，プロドラッグ，異性体，または代謝物を表す。
【００１７】 同じ分子式を有する異なる化合物は"異性体"と呼ばれる。異性体は同じ数の同
じ種類の原子を有するが，原子は互いに異なるように結合している。すなわち，
インドリノン化合物のすべての立体異性体は，本発明の範囲内である。
【００１８】 "薬学的に許容しうる塩"との用語は，化合物の生物学的活性および特性を排除
しない化合物の処方を表す。薬学的塩は，本発明の化合物を無機または有機酸，
例えば塩酸，シュウ酸，硫酸，硝酸，リン酸，メタンスルホン酸，エタンスルホ
ン酸，ｐ−トルエンスルホン酸，サリチル酸等と反応させることにより得ること
ができる。
【００１９】 "プロドラッグ"とは，インビボで親薬剤に変換される薬剤を表す。プロドラッ
グは，場合によっては親薬剤よりも投与が容易であるため，有用であることが多
い。例えば，これらは，経口投与により生体利用性を有するが，親薬剤はそうで
はない。プロドラッグはまた，親薬剤と比べて，医薬組成物中での改良された溶
解性を有する。プロドラッグの例としては，移動には水溶性が有害である細胞膜
を横切る運搬を容易にするためエステル（"プロドラッグ"）として投与されるが
，水溶性であることが有利な細胞の内部に入った後，代謝的に加水分解されて活
性種であるカルボン酸となる，本発明の化合物が挙げられるが，これらに限定さ
れない。
【００２０】 プロドラッグのさらに別の例は，短いポリペプチドであろう。例えば，末端ア
ミノ基を介して本発明の化合物のカルボキシ基に結合した２−１０個のアミノ酸
のポリペプチドが挙げられるが，これらに限定されない。このポリペプチドは，
インビボで加水分解または代謝されて活性な分子を放出する。
【００２１】 "インドリノン"との用語は，この用語が当該技術分野において慣用的に理解さ
れているように用いられ，アルデヒド基とオキシインドール基から合成すること
ができる置換または非置換化合物の大きいサブクラスを含む。
【００２２】 "オキシインドール"との用語は，化学置換基で任意に置換されていてもよいオ
キシインドール化合物を表す。オキシインドール化合物は次の一般構造を有する
：
【００２３】
【化２３】
【００２４】 "ピラゾリルアミド"との用語は，この用語が当該技術分野において慣用的に理
解されているように用いられ，アリール基とピラゾール基をアミド結合を介して
結合させることにより形成される置換または非置換化合物の大きいサブクラスを
含み，そのような結合はピラゾール環の３位に生ずる。
【００２５】 "ピラゾール"との用語は，化学置換基で置換されているピラゾール化合物を表
す。ピラゾール化合物は次の一般構造を有する：
【００２６】
【化２４】
【００２７】 本発明に関して，"置換"との用語は，任意の数の化学置換基で誘導化された化
合物を表す。 "アルキル"との用語は，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミ
ノ，ニトロ，エステル，および５員または６員の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族
，またはヘテロ脂肪族環基からなる群より選択される置換基で任意に置換されて
いてもよい飽和または不飽和アルキルを表し，ここで，環基は，アルキル，ハロ
ゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，およびエステル基
からなる群より独立して選択される１，２または３個の置換基で任意に置換され
ていてもよい。
【００２８】 "飽和アルキル"との用語は，アルケンまたはアルキン基を含有しないアルキル
基を表す。アルキル基は分枝していてもしていなくてもよい。 "不飽和アルキル"との用語は，少なくとも１つのアルケンまたはアルキン基を
含有するアルキル基を表す。アルキル基は分枝していてもしていなくてもよい。
【００２９】 "シクロアルキル"基とは，全炭素の単環または縮合環（すなわち，隣り合う炭
素原子の対を共有する）基であり，環の１またはそれ以上は完全に共役したパイ
電子系を有しない。シクロアルキル基の例としては，シクロプロパン，シクロブ
タン，シクロペンタン，シクロペンテン，シクロヘキサン，シクロヘキサジエン
，シクロヘプタンおよびシクロヘプタトリエンが挙げられるが，これらに限定さ
れない。シクロアルキル基は，置換されていてもされていなくてもよい。置換さ
れている場合，置換基は，好ましくはアルキル，アリール，ヘテロアリール，ヘ
テロ脂肪族環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，チオヒドロキシ，
チオアルコキシ，チオアリールオキシ，シアノ，ハロ，カルボニル，チオカルボ
ニル，カルボキシ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド
，ニトロ，アミノおよびＮＲ10Ｒ11からなる群より独立して選択される１または
それ以上の基であり，ここでＲ10およびＲ11は，本明細書において先に定義した
とおりである。
【００３０】 "アルケニル"基とは，少なくとも２つの炭素原子および少なくとも１つの炭素
−炭素二重結合からなる，本明細書において定義されるアルキル基を表す。 "アルキニル"基とは，少なくとも２つの炭素原子および少なくとも１つの炭素
−炭素三重結合からなる，本明細書において定義されるアルキル基を表す。
【００３１】 "芳香族"との用語は，共役パイ電子系を有する少なくとも１つの環を有する芳
香族基を表し，炭素環式アリール（例えばフェニル）およびヘテロ環式アリール
基（例えばピリジン）の両方を含む。"炭素環式"との用語は，１またはそれ以上
の閉環構造を含み，環の骨格を形成する原子がすべて炭素原子である化合物を表
す。したがって，この用語は，環骨格が少なくとも１つの炭素以外の原子を含む
ヘテロ環式環から炭素環式を区別する。"ヘテロ芳香族"との用語は，少なくとも
１つのヘテロ環式環を含む芳香族基を表す。本明細書において定義される芳香族
またはヘテロ芳香族環は，アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，
カルボキシレート，アミノ，ニトロ，およびエステル基からなる群より独立して
選択される１，２または３個の置換基で置換されていてもよい。
【００３２】 "脂肪族環"との用語は，１またはそれ以上の閉環構造を含み，骨格を形成する
原子の少なくとも１つが飽和炭素原子（例えばシクロヘキサン）である化合物を
表す。"ヘテロ脂肪族環"との用語は，骨格を形成する原子の少なくとも１つがヘ
テロ原子である環系（例えばテトラヒドロピラン）を表す。本明細書において定
義される脂肪族またはヘテロ脂肪族環は，アルキル，アルコキシ，ハロゲン，ト
リハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，エステル，および，アルキ
ル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニト
ロ，およびエステル基からなる群より独立して選択される１，２または３個の置
換基で任意に置換されていてもよい芳香族またはヘテロ芳香族環からなる群より
独立して選択される，１，２または３個の置換基で置換されていてもよい。
【００３３】 "縮合ヘテロアリール：シクロアルキル／ヘテロ脂肪族環式"基とは，ヘテロア
リール環の２つの隣接する炭素原子が，ヘテロアリール環へのそれぞれの直接共
有結合に加えて，すべて炭素原子またはヘテロ原子（窒素，酸素および／または
イオウ）と組み合わされた炭素原子からなっていてもよい五原子または六原子鎖
により互いに結合しているヘテロアリール基を表す。この第二の結合により第二
の環が形成する。縮合ヘテロアリール：シクロアルキル／ヘテロ脂肪族環式基の
例を以下に挙げるが，これらに限定されない：
【００３４】
【化２５】
【００３５】 縮合ヘテロアリール：シクロアルキル／ヘテロ脂肪族環式基は，置換されてい
てもされていなくてもよい。置換されている場合，縮合ヘテロアリール：シクロ
アルキル／ヘテロ脂肪族環式基のヘテロアリール基上の１つまたはそれ以上の置
換基は，ヘテロアリール基の定義において上述したものから選択される。同様に
，置換されている場合，縮合ヘテロアリール：シクロアルキル／ヘテロ−脂環式
基のシクロアルキルまたはヘテロ脂肪族環式基上の置換基は，シクロアルキルお
よびヘテロ脂肪族環式の定義において記載されたものから選択される。
【００３６】 "アミン"との用語は，式−（Ｘ1）n1−ＮＸ2Ｘ3の化学基を表し，ここで，Ｘ1 は，飽和または不飽和アルキル，および５員または６員の芳香族，ヘテロ芳香族
，または脂肪族環基からなる群より選択され，ｎ１は０，１，または２であり，
Ｘ2およびＸ3は，独立して，水素，飽和または不飽和アルキル，５員または６員
の芳香族，ヘテロ芳香族，または脂肪族環基からなる群より選択され，Ｘ2およ びＸ3は一緒になって，５員または６員のヘテロ芳香族またはヘテロ脂肪族環を 形成してもよい。これらの環は本明細書において定義される。
【００３７】 "ハロゲン"との用語は，フッ素，塩素，臭素，およびヨウ素からなる群より選
択される原子を表す。"トリハロメチル"との用語は，−ＣＸ3基を表し，ここで ，Ｘはハロゲンである。"トリハロメタンスルホニル"基とは，Ｘ3ＣＳ（＝Ｏ） ２基を表し，ここでＸはハロゲンである。
【００３８】 "ケトン"との用語は，式−（Ｘ4）n4−ＣＯ−Ｘ5を有する化学基を表し，ここ
でＸ4およびＸ5は，独立して，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，
アミノニトロ，エステルからなる群より選択される基で任意に置換されていても
よいアルキルおよび５員または６員の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘ
テロ脂肪族環であり，環基はアルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシ
レート，アミノ，ニトロ，およびエステル基からなる群より独立して選択される
１，２または３個の置換基で任意に置換されていてもよく，ｎ４は０，１，また
は２である。
【００３９】 "カルボン酸"との用語は，式−（Ｘ6）n6−ＣＯＯＨを有する化学基を表す。"
エステル"との用語は，式−（Ｘ7）n7−ＣＯＯ−Ｘ8を有する化学基を表す。Ｘ6 ，Ｘ7，およびＸ8は，独立して，アルキルおよび５員または６員の芳香族，ヘテ
ロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環基からなる群より選択され，ｎ６およ
びｎ７は，独立して，０，１，または２である。
【００４０】 "Ｏ−カルボキシ"基は，Ｘ4Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−基を表し，ここで，Ｘ4は本明細書
において定義されるとおりである。 "Ｃ−カルボキシ"基は，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＸ4基を表し，ここで，Ｘ4は，本明細
書において定義されるとおりである。
【００４１】 "チオカルボニル"基は，−Ｃ（＝Ｓ）−Ｘ4基を表し，ここで，Ｘ4は本明細書
において定義されるとおりである。 "アルコール"との用語は，式−（Ｘ9）n9−ＯＨの化学置換基を表し，"アルコ
キシアルキル"との用語は，式−（Ｘ10）n10−Ｏ−Ｘ11の化学置換基を表す。こ
こで，Ｘ9，Ｘ10，およびＸ11は，独立して，飽和または不飽和アルキルおよび ５員または６員の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環基から
なる群より選択され，ここで環は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カル
ボキシレート，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される１ま
たはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく，ｎ９およびｎ１０は，独
立して，０，１，または２である。ｎが０であるとき，アルコキシアルキル基は
"アルコキシ基"と称される。
【００４２】 "アルコキシアルコキシ"との用語は，式−Ｏ−（Ｘ20）n20−Ｏ−Ｘ23の化学 置換基を表し，ここで，Ｘ20およびＸ23は，それぞれ独立して，アルキル，ハロ
ゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，ニトロ，またはエステルからなる群
より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよ
いアルキル，５員または６員の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂
肪族環基からなる群より選択され，ｎ２０は０または１である。
【００４３】 "アミド"との用語は，式−（Ｘ12）n12−ＮＨＣＯＸ13の化学置換基，すなわ ち"Ｎ−アミド"または式−（Ｘ14）n14−ＣＯＮＸ15Ｘ16の化学置換基，すなわ ち"Ｃ−アミド"を表し，ここで，Ｘ12およびＸ14は，それぞれ独立して，アルキ
ル，および５員または６員の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪
族環基からなる群より選択され，環は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，
カルボキシレート，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される
１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく，ｎ１２およびｎ１４
は，独立して，０，１，または２であり，Ｘ13，Ｘ15，およびＸ16は，それぞれ
独立して，水素，アルキル，ヒドロキシル，および５員または６員の芳香族，ヘ
テロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環基からなる群より選択され，ここで
環は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，ニトロ，およ
びエステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意
に置換されていてもよい。
【００４４】 "シアノ"との用語は，式−Ｃ≡Ｎを有する化学基を意味する。 "シアナト"との用語は，式−ＣＮＯを有する化学基を意味する。 "イソシアナト"との用語は，式−ＮＣＯを有する化学基を意味する。
【００４５】 "チオシアナト"との用語は，式−ＣＮＳを有する化学基を意味する。 "イソチオシアナト"との用語は，式−ＮＣＳを有する化学基を意味する。 "スルホンアミド"との用語は，式−（ＸＩ７）n17−ＳＯ2ＮＸ18Ｘ19を有する
化学基を意味し，ここで，Ｘ18およびＸ19は，独立して，アルキル，ハロゲン，
トリハロメチル，カルボキシレート，ニトロ，またはエステルからなる群より独
立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよい，ア
ルキル，５員または６員の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族またはヘテロ脂肪族環
基からなる群より選択され，Ｘ18およびＸ19は，一緒になって，アルキル，ハロ
ゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，およびエステルか
らなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されて
いてもよい，５員または６員の脂肪族またはヘテロ脂肪族環を形成し，Ｘ17は，
アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，ニトロ，またはエス
テルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換
されていてもよい，アルキル，５員または６員の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族
，またはヘテロ脂肪族環基からなる群より選択され，Ｘ18およびＸ19は，一緒に
なって，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニ
トロ，およびエステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置
換基で任意に置換されていてもよい，５員または６員の脂肪族またはヘテロ脂肪
族環を形成し，ｎ１７は０，１，または２である。
【００４６】 "アルデヒド"との用語は，式−（Ｘ20）n20−ＣＯ−Ｈを有する化学基を表し ，Ｘ20は，飽和または不飽和アルキル，および５員または６員の芳香族，ヘテロ
芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環基からなる群より選択され，ここで，環
は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ
，およびエステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基
で任意に置換されていてもよく，ｎ２０は０，１，または２である。
【００４７】 "スルホン"との用語は，式−（Ｘ21）n21−ＳＯ2−Ｘ22を有する化学基を表し
，Ｘ21およびＸ22は，独立して，飽和または不飽和アルキル，および５員または
６員の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環基からなる群より
選択され，ここで環は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレー
ト，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される１また
はそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく，ｎ２１は０，１，または２
である。
【００４８】 "スルフィニル"基とは，−Ｓ（＝Ｏ）−Ｘ21基を表し，Ｘ21は，先に定義した
もののほか，ヒドロキシ基であってもよい。 "チオール"との用語は，式−（Ｘ23）n23−ＳＨを有する化学基を表し，"チオ
エーテル"との用語は，式−（Ｘ24）n24−Ｓ−Ｘ25の化学基を表し，Ｘ23，Ｘ24 ，およびＸ25は，独立して，飽和または不飽和アルキル，および５員または６員
の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環基からなる群より選択
され，環は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ
，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上
の置換基で任意に置換されていてもよく，ｎ２３およびｎ２４は，独立して，０
，１，または２である。
【００４９】 "アシル"との用語は，一般式−Ｃ（Ｏ）Ｒの化学基を表す。Ｒが水素であると
き，アシル基を含む分子はアルデヒドである。Ｒがアルキル，脂肪族環または芳
香族環であるとき，アシル基を含む分子はケトンである。
【００５０】 "Ｏ−カルバミル"との用語は，式−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ10Ｒ11基を有する化学基
を表し，Ｒ10およびＲ11は本明細書において定義されるとおりである。 "Ｎ−カルバミル"基との用語は，式Ｒ10ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ11−を有する化学基
を表し，Ｒ10およびＲ11は，本明細書において定義されるとおりである。
【００５１】 "Ｏ−チオカルバミル"基との用語は，式ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ10Ｒ11を有する化学
基を表し，Ｒ10およびＲ11は，本明細書において定義されるとおりである。 "Ｎ−チオカルバミル"基との用語は，式Ｒ11ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ10−を有する化
学基を表し，Ｒ10およびＲ11は，本明細書において定義されるとおりである。
【００５２】 "重金属"との用語は，元素周期律表の遷移金属系列を表し，元素番号２１−３
０，３９−４８，および５７−８２を含む。重金属は，５員または６員の芳香族
またはヘテロ芳香族環基で置換されていてもよく，ここで，環は，アルキル，ハ
ロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，およびエステル
からなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換され
ていてもよい。
【００５３】 "フェロセン"との用語は，２つのシクロペンタジエニル基でサンドイッチされ
た鉄原子を含有する有機金属サンドイッチ複合体を表す。シクロペンタジエニル
環は，本明細書において記載される置換基で任意に置換されていてもよい。フェ
ロセンは通常は，以下に示される２つの構造，構造Ａおよび構造Ｂのいずれかを
用いて表記される。
【００５４】
【化２６】
【００５５】 環系に結合した２つの隣接する"Ｒ"基に関して，"一緒になって"または"一緒 になって５員または６員の環を形成する"とは，２つのＲ基が１つまたは２つの 追加の原子により一緒に結合することを意味する。すなわち，構造は５員または
６員の環が形成されるように，｛−Ｒ−Ｘ−Ｘ−Ｒ｝となる。Ｘは炭素，窒素，
酸素またはイオウでありうる。
【００５６】 "コンビナトリアルライブラリ"とは，多次元アレイの１つの次元中の各化合物
を多次元アレイの別の次元のそれぞれの化合物と反応させることにより形成され
るすべての化合物を意味する。本明細書において用いる場合，多次元アレイは二
次元であり，一方の次元はすべて本発明のオキシインドールであり，他方の次元
はすべて本発明のアルデヒドである。各オキシインドールを各アルデヒドと反応
させて，２−インドリノンを形成することができる。このようにして形成される
すべての２−インドリノン化合物は，本発明の範囲内である。また，本発明のい
くつかのオキシインドールと本発明のすべてのアルデヒド，またはすべてのオキ
シインドールとアルデヒドのいくつか，またはオキシインドールのいくつかとア
ルデヒドのいくつかを反応させることにより形成されるより小さいコンビナトリ
アルライブラリもまた本発明の範囲内である。
【００５７】 設定温度に関して，"約"，すなわち"約５０℃または"約９０℃”とは，温度範
囲が好ましくは±１０℃，より好ましくは±５℃，最も好ましくは±２℃である
ことを意味する。すなわち，例えば"約５０℃”とは，温度範囲が好ましくは５ ０＋１０℃，より好ましくは５０±５℃，最も好ましくは５０±２℃であること
を意味する。
【００５８】 "医薬組成物"との用語は，本発明のインドリノン化合物と他の化学成分，例え
ば希釈剤，賦形剤，または担体との混合物を意味する。医薬組成物は，化合物の
生物への投与を容易にする。当該技術分野には化合物を投与する多くの技術が存
在し，例えば，経口，注射，エアロゾル，非経口，および局所投与が挙げられる
が，これらに限定されない。医薬組成物はまた，化合物を無機酸，例えば塩酸，
シュウ酸，硫酸，硝酸，リン酸，メタンスルホン酸，エタンスルホン酸，ｐ−ト
ルエンスルホン酸，サリチル酸等と反応させることにより得ることができる。
【００５９】 本明細書において用いる場合，"薬学的に許容しうる"または"薬学的"との用語
は，治療用化合物が治療効果を発揮することを妨害せず，許容しえない有害な副
作用を引き起こさない溶液または処方の成分を表す。薬学的に許容しうる試薬の
例は，Ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ，Ｔｈ
ｅＮａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｈ
ａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌ
ｅ，ＭＤ１９９０に記載される（図面および表を含めて本明細書の一部としてこ
こに引用する）。許容しえない副作用は，種々の疾患により異なる。一般に，疾
患が重篤であればあるほど，許容される作用の毒性も高くなるであろう。種々の
疾患についての許容しえない副作用は，当該技術分野において知られている。
【００６０】 "担体"との用語は，化合物の細胞または組織内への取り込みを容易にする化学
的化合物を規定する。例えばジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は，多くの有機
化合物を生物の細胞または組織に取り込むことを容易にするため，慣用的に用い
られている担体である。
【００６１】 "希釈剤"との用語は，水中に希釈されて所望の化合物を溶解させ，ならびに化
合物の生物学的に活性な形態を安定化させる化学的化合物を規定する。当該技術
分野においては，緩衝化溶液中に溶解した塩が希釈剤として用いられる。１つの
慣用的に用いられている緩衝化溶液はリン酸緩衝化食塩水であり，これはヒト血
液の塩条件を模倣するためである。緩衝化塩は低濃度で溶液のｐＨを制御しうる
ため，緩衝化希釈剤が化合物の生物学的活性を変更することはほとんどない。
【００６２】 "機能"との用語は，蛋白質キナーゼの細胞における役割を表す。蛋白質キナー
ゼファミリーには，シグナリングカスケード中の多くの工程を制御するメンバー
が含まれ，例えば，細胞成長，移動，分化，遺伝子発現，筋肉構成，グルコース
代謝，細胞性蛋白質合成，および細胞サイクルの制御を調節するカスケードが含
まれる。
【００６３】 本発明の文脈においては，"触媒活性"との用語は，蛋白質キナーゼが基質をリ
ン酸化する速度を規定する。触媒活性は，例えば，生成物に転換された基質の量
を時間の関数として決定することにより測定することができる。基質のリン酸化
は，蛋白質キナーゼの活性部位で生ずる。活性部位は，通常は，基質が蛋白質キ
ナーゼに結合しリン酸化される穴である。
【００６４】 本明細書において用いる場合，"基質"との用語は，蛋白質キナーゼによりリン
酸化される分子を表す。基質は好ましくはペプチドであり，より好ましくは蛋白
質である。
【００６５】 "活性化する"との用語は，蛋白質キナーゼの細胞機能を増加させることを表す
。蛋白質キナーゼ機能は，好ましくは，天然の結合パートナーとの相互作用であ
り，最も好ましくは触媒活性である。
【００６６】 "阻害する"との用語は，蛋白質キナーゼの細胞機能を減少させることを表す。
蛋白質キナーゼの機能は，好ましくは，天然の結合パートナーとの相互作用であ
り，最も好ましくは触媒活性である。
【００６７】 "調節する"との用語は，蛋白質キナーゼと天然の結合パートナーとの間に複合
体が形成される確率を増加または減少させることにより，蛋白質キナーゼの機能
を変化させることを表す。そのような調節は，インビボでまたはインビトロで生
じうる。調節剤は，好ましくは，蛋白質キナーゼと天然の結合パートナーとの間
にそのような複合体が形成される確率を増加させ，より好ましくは，蛋白質キナ
ーゼに暴露される化合物の濃度に依存して，蛋白質キナーゼと天然の結合パート
ナーとの間に複合体が形成される確率を増加または減少させ，最も好ましくは，
蛋白質キナーゼと天然の結合パートナーとの間に複合体が形成される確率を減少
させる。調節剤は，好ましくは，蛋白質キナーゼの触媒活性を活性化し，より好
ましくは，蛋白質キナーゼに暴露される化合物の濃度に依存して，蛋白質キナー
ゼの触媒活性を活性化または阻害し，最も好ましくは，蛋白質キナーゼの触媒活
性を阻害する。
【００６８】 "複合体"との用語は，互いに結合している少なくとも２つの分子の集合を表す
。シグナル伝達複合体は，しばしば，互いに結合している少なくとも２つの蛋白
質分子を含む。
【００６９】 "天然の結合パートナー"との用語は，細胞内で蛋白質キナーゼに結合するポリ
ペプチドを表す。天然の結合パートナーは，蛋白質キナーゼシグナル伝達プロセ
スにおいて，シグナルを伝搬する役割を果たすことができる。蛋白質キナーゼと
天然の結合パートナーとの間の相互作用の変化は，相互作用が形成される確率の
増加または減少として，または蛋白質キナーゼ／天然の結合パートナー複合体の
濃度の増加または減少として現れることができる。
【００７０】 蛋白質キナーゼの天然の結合パートナーは，高い親和性をもって，蛋白質キナ
ーゼの細胞内領域に結合することができる。高い親和性とは，１０-6Ｍまたはそ
れより低いオーダーの平衡結合定数を表す。さらに，天然の結合パートナーはま
た，蛋白質キナーゼの細胞内領域と過渡的に相互作用して，これを化学的に修飾
することができる。蛋白質キナーゼ天然の結合パートナーは，ＳＲＣホモロジー
２（ＳＨ２）または３（ＳＨ３）ドメイン，他のホスホリルチロシン結合（ＰＴ
Ｂ）ドメイン，グアニンヌクレオチド交換因子，蛋白質ホスファターゼ，および
他の蛋白質キナーゼを含む群から選択されるが，これらに限定されない。蛋白質
キナーゼと天然の結合パートナーとの間の相互作用の変化を決定する方法は，当
該技術分野において容易に入手可能である。
【００７１】 本明細書において用いる場合，"接触させる"との用語は，本発明の化合物また
は他の化合物，例えばＶＥＧＦ，ＦＧＦ，またはＰＤＧＦを含む溶液を，該方法
の細胞を含む液体媒体と混合することを表す。化合物を含む溶液はまた，他の成
分，例えばインドリノン化合物を該方法の細胞内に取り込ませることを容易にす
るジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含んでいてもよい。インドリノン化合物
を含む溶液は，輸送装置，例えばピペット系装置またはシリンジ系装置を用いて
，細胞を含む媒体に加えることができる。
【００７２】 "モニターする"との用語は，化合物を本発明の方法の細胞に加える影響を観察
することを表す。影響は，細胞表現型，細胞増殖，蛋白質キナーゼ触媒活性，ま
たは蛋白質キナーゼと天然の結合パートナーとの間の相互作用の変化として現れ
ることができる。さらに，本明細書において用いられる場合，"モニターする"と
の用語は，アジュバント関節炎モデルにおいてラットに及ぼす影響に関して，一
般的疾患の症状，例えば耳小結節形成，尾部小結節形成，鼻腫脹，足腫脹，およ
び亀頭炎が含まれる。関節炎指数は，実施例の部において定義されるように，こ
れらの測定値から計算することができる。
【００７３】 "影響"との用語は，細胞表現型または細胞増殖の変化または不変を記述する。
"影響"はまた蛋白質キナーゼの触媒活性の変化または不変を記述することができ
る。"影響"はまた，蛋白質キナーゼと天然の結合パートナーとの間の相互作用の
変化または不変を記述することができる。
【００７４】 "細胞表現型"との用語は，細胞または組織の外観，または細胞または組織の機
能を表す。細胞表現型の例は，細胞サイズ（減少または拡大），細胞増殖（増加
または減少した細胞数），細胞分化（細胞形状の変化または不変），細胞生存，
アポトーシス（細胞死），または代謝栄養物の利用性（例えばグルコース取り込
み）である。細胞表現型の変化または不変は，当該技術分野において知られる技
術により容易に測定することができる。
【００７５】 "抗体"との用語は，蛋白質キナーゼまたはそのフラグメントに対して特異的結
合親和性を有する抗体（例えばモノクローナルまたはポリクローナル抗体），ま
たは抗体フラグメントを表す。
【００７６】 "特異的結合親和性"とは，抗体が，特定の条件下で，他のポリペプチドに結合
するより高い親和性をもって標的（蛋白質キナーゼ）ポリペプチドに結合するこ
とを意味する。蛋白質キナーゼに特異的結合親和性を有する抗体は，免疫複合体
が形成される条件下で試料を抗体と接触させ，蛋白質キナーゼとコンジュゲート
した抗体の存在および／または量を検出することにより，試料中の蛋白質キナー
ゼの存在および／または量を検出する方法において用いることができる。そのよ
うな方法を実施するための診断キットは，抗体を含む第一の容器および抗体の結
合パートナーのコンジュゲートおよび標識（例えば放射性同位体）を有する第二
の容器を含むように構築することができる。診断キットはまた，ＦＤＡに認可さ
れた用途の通知書およびそのための指示を含むことができる。
【００７７】 "ポリクローナル抗体"との用語は，抗原またはその抗原性機能的誘導体で免疫
した動物の血清に由来する抗体分子の異種集団である抗体を表す。ポリクローナ
ル抗体を製造するためには，抗原を注射することにより種々の宿主動物を免疫す
ることができる。宿主の種に応じて，免疫応答を増加させるために種々のアジュ
バントを用いてもよい。
【００７８】 "モノクローナル抗体"は，特定の抗原に対する抗体の実質的に均一な集団であ
る。これは，連続培養細胞株による抗体分子の産生を与える任意の技術により得
ることができる。モノクローナル抗体は，当業者に知られる方法により得ること
ができる。例えば，Ｋｏｈｌｅｒ， ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４
９５−４９７（１９７５），および米国特許４，３７６，１１１０を参照のこと
。
【００７９】 "抗体フラグメント"との用語は，特定の分子に対して特異的結合親和性を示す
抗体の一部，しばしば超可変領域および周囲の重鎖および軽鎖の一部を表す。超
可変領域は，ポリペプチド標的に物理的に結合する抗体の部分である。
【００８０】 シグナル伝達プロセスに関連して，"異常型"との用語は，生物において過剰発
現または過小発現され，その触媒活性が野生型蛋白質キナーゼの活性より低いか
または高いように変異しているか，天然の結合パートナーともはや相互作用でき
ないように変異しているか，他の蛋白質キナーゼまたは蛋白質ホスファターゼに
よりもはや修飾されないか，または天然の結合パートナーともはや相互作用しな
い，蛋白質キナーゼを表す。
【００８１】 "異常な相互作用を促進または破壊する"との用語は，本発明の化合物を生物の
細胞または組織に投与することにより達成することができる方法を表す。化合物
は，複合体界面において多数の原子との好都合な相互作用を形成することにより
，蛋白質キナーゼと天然の結合パートナーとの間の相互作用を促進することがで
きる。あるいは，化合物は，複合体界面において原子の間に形成された好都合な
相互作用を傷つけることにより，蛋白質キナーゼと天然の結合パートナーとの間
の相互作用を阻害することができる。
【００８２】 本明細書において用いる場合，"予防する"との用語は，異常な状態がその患者
に現れる前に組成物を患者に投与し，そうでなければ生じたであろう異常な状態
を少なくとも部分的に停止または減少させることを表す。
【００８３】 本明細書において用いる場合，"治療する"との用語は，治療的効果を有し，生
物において異常な状態を少なくとも部分的に緩和または排除する，本発明の方法
を表す。
【００８４】 本明細書において用いる場合，"治療的効果"との用語は，異常な状態を引き起
こすかまたはそれに寄与する細胞成長を阻害することを表す。"治療的効果"との
用語はまた，異常な状態を引き起こすかまたはそれに寄与する因子を阻害するこ
とを表す。治療的効果はまた，異常な状態の１またはそれ以上の症状をある程度
軽減することを表す。
【００８５】 本明細書において用いる場合，"慢性関節リウマチ"との用語は，滑膜および関
節構造における炎症性変化および筋萎縮および骨の粗化により特徴づけられる，
主として関節の，通常は多関節の慢性全身疾患を表す。慢性関節リウマチの形態
には，若年性，慢性絨毛，輪状披裂，変形，変性，断節および増殖が含まれるが
，これらに限定されない。
【００８６】 本明細書において用いる場合，"子宮内膜症"との用語は，骨盤腔または身体の
他の部位の種々の場所（最も一般的には腹膜腔）で，典型的な子宮内膜顆粒およ
び間質要素を含む組織が異常に生ずる状態を表す。
【００８７】 本明細書において用いる場合，"眼疾患"との用語は，眼に関係するかまたは眼
に影響を与える疾患を表し，特に，網膜中の新しい毛細血管が硝子体に進入し，
出血し，失明を引き起こしうるものを表す。例としては，老人性筋肉退化および
糖尿病性網膜症が挙げられるが，これらに限定されない。
【００８８】 本明細書において用いる場合，"癌および転移"との用語は，細胞の増殖が無秩
序かつ進行的であり，初期に疾患進行に関与していた部位と離れた部位で細胞が
異常に成長する，組織の新たな成長を表す。
【００８９】 本明細書において用いる場合，"乾癬"との用語は，多遺伝子性の遺伝および変
動的過程を有する慣用的な慢性の鱗状の皮膚病を表す。診断の方法は当業者には
よく知られている。これは，表皮の過増殖，炎症および新脈管形成を特徴とする
慢性の皮膚疾患である。
【００９０】 本明細書において用いる場合，"動脈肥厚"との用語は，動脈硬化プロセスの一
部または例えば冠動脈閉塞の治療の結果としての，動脈壁の肥厚化を表す。動脈
硬化とは，動脈に黄色いプラークの沈積物が形成される，動脈硬化の非常に一般
的な形態を表す。
【００９１】 本明細書において用いる場合，"再狭窄"との用語は，再発性狭窄，特に初期の
状態を手術により矯正した後の心臓の弁の狭窄を表す。狭窄とは，管または導管
が狭くなるか狭窄することを表す。
【００９２】 本明細書において用いる場合，"組織虚血"との用語は，組織中の血液の欠乏を
表し，これは通常は，血管の機能的緊縮または実際の閉塞により生ずる。 本明細書において用いる場合，"創傷治癒の間の過度の瘢痕"との用語は，創傷
治癒の間の新生血管形成を引き起こす，無秩序な新脈管形成の結果を表す。
【００９３】 一例は，ケロイド形成である。ケロイドは，鋭く持ち上げられた，変則的な形
状の，拡大し続ける瘢痕である。 ＩＩＩ．三環式−オキシインドール系インドリノン化合物 Ａ．化合物 第一の観点において，本発明は，式ＩまたはＩｌで表される構造を有する三環
式系インドリノン化合物を特徴とする：
【００９４】
【化２７】
【００９５】 ［式中， （ａ）環Ａおよび環Ｂは，１つの共通の結合を共有し； （ｂ）環Ｂおよび環Ｃは，１つの共通の結合を共有し； （ｃ）環Ａ，環Ｂ，および環Ｒは，独立して，芳香族環，ヘテロ芳香族環，脂肪
族環，ヘテロ脂肪族環，および縮合芳香族または脂肪族環系からなる群より選択
され，ここでヘテロ芳香族環およびヘテロ脂肪族環は，それぞれ独立して，窒素
，酸素，およびイオウからなる群より独立して選択される０，１，２，または３
個のヘテロ原子を含み； （ｄ）環Ａ，環Ｂ，環Ｑ，および環Ｒは，それぞれ独立して，（ｉ）アルキル；
（ｉｉ）芳香族またはヘテロ芳香族環；（ｉｉｉ）脂肪族またはヘテロ脂肪族環
；（ｉｖ）アミン；（ｖ）式−ＮＯ2のニトロ；（ｖｉ）ハロゲンまたはトリハ ロメチル；（ｖｉｉ）ケトン；（ｖｉｉｉ）カルボン酸またはエステル；（ｉｘ
）アルコールまたはアルコキシアルキル基；（ｘ）アミド；（ｘｉ）スルホンア
ミド；（ｘｉｉ）アルデヒド；（ｘｉｉｉ）スルホン；（ｘｉｖ）チオールまた
はチオエーテル；および（ｘｖ）重金属からなる群より独立して選択される１，
２または３個の置換基で任意に置換されていてもよく； （ｅ）Ｘは，ＣＨおよび酸素からなる群より選択される。
【００９６】 好ましい態様においては，式Ｉの三環式系インドリノン化合物の環Ａおよび環
Ｂは，それぞれ独立して，５員環，６員環，７員環および８員環からなる群より
選択される。より好ましくは，環Ａおよび環Ｂは，それぞれ６員環である。
【００９７】 別の好ましい態様においては，式Ｉ中の環Ｒは，５員環，６員環，７員環，８
員環，および二環式または三環式縮合環系からなる群より選択される。より好ま
しくは，Ｒは５員環であり，さらに好ましくは，Ｒは６員環である。好ましい態
様においては，環Ｒは，好ましくは環骨格中に８個，より好ましくは９個，さら
に好ましくは１０個，最も好ましくは１３個の原子を含む二環式縮合環系である
。別の好ましい態様においては，Ｒは任意に置換されていてもよいフェロセンで
ある。
【００９８】 環Ｒは，最も好ましくは，表８に記載される化合物からなる群より選択される
アルデヒド，ケトン，またはラクトンに由来する。 別の観点においては，本発明は，ライブラリ，例えばオキシインドールとアル
デヒド，ケトン，またはラクトンとを反応させることにより形成しうる少なくと
も１０種類の三環式系インドリノン化合物のコンビナトリアルライブラリを特徴
とし，ここで，オキシインドールは，式ＩＩＩ：
【００９９】
【化２８】
【０１００】 で表される構造を有し，アルデヒドは，式ＩＶで表される構造を有し，ケトンは
，式Ｖで表される構造を有し，ラクトンは，式ＶＩで表される構造を有する。
【０１０１】
【化２９】
【０１０２】 環Ａ，Ｂ，Ｑ，およびＲは，本明細書において定義されるとおりであり，また
は本明細書に記載されるそれらのサブグループのいずれかである。 コンビナトリアルライブラリのオキシインドールは，好ましくは式ＶＩＩ，Ｖ
ＩＩＩ，またはＩＸで表される構造を有する：
【０１０３】
【化３０】
【０１０４】 前記式中の各環は，（ｉ）飽和または不飽和アルキル；（ｉｉ）芳香族または
ヘテロ芳香族環；（ｉｉｉ）脂肪族またはヘテロ脂肪族環；（ｉｖ）式−（Ｘ1 ）n1−ＮＸ2Ｘ3のアミン，ここでＸ1，Ｘ2，およびＸ3は，独立して，水素，飽 和または不飽和アルキル，および５員または６員の芳香族，ヘテロ芳香族，また
は脂肪族環基からなる群より選択され，ｎ１は０，１，または２である；（ｖ）
式−ＮＯ2のニトロ；（ｖｉ）ハロゲンまたはトリハロメチル；および（ｖｉｉ ）式−（Ｘ9）n9−ＯＨのアルコールまたは式−（Ｘ10）n10−Ｏ−Ｘ11のアルコ
キシアルキル基，ここで，Ｘ9，Ｘ10，およびＸ11は，独立して，飽和または不 飽和アルキルであり，ｎ９およびｎ１０は，独立して，０または１である， からなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換され
ていてもよい。
【０１０５】 コンビナトリアルライブラリのアルデヒド，ケトン，またはラクトンは，表８
に表される化合物からなる群より選択される。 Ｂ．合成 別の観点においては，本発明は，三環式系インドリノン化合物を合成する方法
を特徴とする。該方法は， （ａ）第一の反応物を，溶媒中で塩基の存在下で高温で第二の反応物と反応させ
，ここで，第一の反応物はオキシインドールであり，第二の反応物はアルデヒド
であり； （ｂ）前記三環式系インドリノン化合物を精製する， の各工程を含む。
【０１０６】 第一の反応物は，好ましくは，式ＩＩＩの構造を有するオキシインドールであ
る：
【０１０７】
【化３１】
【０１０８】 ［式中，環Ａ，Ｂ，およびＣは，本明細書において定義されるとおりであり，ま
たは本明細書に記載されるそれらのサブグループのいずれかである］。最も好ま
しくは，オキシインドールは，式ＶＩＩ，ＶＩＩＩ，またはＩＸで表される構造
を有する：
【０１０９】
【化３２】
【０１１０】 第二の反応物は，好ましくは，アルデヒド，ケトン，またはラクトンであり，
アルデヒドは式Ｘで表される構造を有し，ケトンは，式ＸＩで表される構造を有
し，ラクトンは，式ＸＩＩで表される構造を有し：
【０１１１】
【化３３】
【０１１２】 ここで，上述の構造中，環ＱおよびＲは本明細書において定義されるとおりであ
り，または本明細書に記載されるそれらのサブグループのいずれかである。最も
好ましくは，第二の反応物は，表８に記載される化合物からなる群より選択され
るアルデヒド，ケトン，またはラクトンである。
【０１１３】 塩基は好ましくは窒素塩基であり，最も好ましくは塩基はピペリジンである。 "窒素塩基"は，当該技術分野において商業的に用いられており，非環式および
環式アミンから選択される。窒素塩基の例としては，アンモニア，メチルアミン
，トリメチルアミン，アニリン，およびピペリジンが挙げられるが，これらに限
定されない。当業者には，どの窒素塩基が反応条件の要件に適合するかがわかる
。
【０１１４】 反応の溶媒は，好ましくはアルコールであり，最も好ましくは溶媒はエタノー
ルまたはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）である。 本発明の合成方法においては，反応は高温で行うことが必要である。"高温"と
の用語は，室温より高い温度を表す。より好ましくは，高温は約５０℃であり，
最も好ましくは高温は約９０℃である。この方法は，所望の活性および構造を有
する化合物についてライブラリをスクリーニングする工程が付随していてもよい
。すなわち，所望の特性を有する化合物を最初にスクリーニングし，次にその化
合物を化学的に合成することにより化合物を合成する方法が提供される。 ＩＶ．ピラゾリルアミド系化合物 Ａ．化合物 別の観点においては，本発明は，式Ｘ：
【０１１５】
【化３４】
【０１１６】 ［式中， （ａ）Ｒ1およびＲ2は，独立して（ｉ）水素；（ｉｉ）アルキル；（ｉｉｉ）芳
香族またはヘテロ芳香族環；（ｉｖ）脂肪族またはヘテロ脂肪族環；（ｖ）アミ
ン；（ｖｉ）式−ＮＯ2のニトロ；（ｖｉｉ）ハロゲン；（ｖｉｉｉ）ケトン； （ｉｘ）カルボン酸またはエステル；（ｘ）アルコールまたはアルコキシアルキ
ル基；（ｘｉ）アミド；（ｘｉｉ）スルホンアミド；（ｘｉｉｉ）アルコキシア
ルコキシ；および（ｘｉｖ）スルホンからなる群より選択され；そして （ｂ）Ｒ4およびＲ5は，それぞれ独立して，（ｉ）水素；（ｉｉ）アルキル；（
ｉｉｉ）芳香族環；（ｉｖ）ヘテロ芳香族環；（ｖ）脂肪族またはヘテロ脂肪族
環；（ｖｉ）アミン；（ｖｉｉ）ケトン；（ｖｉｉｉ）カルボン酸またはエステ
ル；（ｉｘ）アルコールまたはアルコキシアルキル基；（ｘ）アミド；（ｘｉ）
スルホンアミド；（ｘｉｉ）スルホン；および（ｘｉｉｉ）アルコキシアルコキ
シからなる群より選択され；そして （ｃ）Ｒ3は，（ｉ）水素；（ｉｉ）アルキル；（ｉｉｉ）芳香族またはヘテロ 芳香族環；（ｉｖ）脂肪族またはヘテロ脂肪族環；（ｖ）ハロゲンおよびトリハ
ロメチル；（ｖｉ）アミン；（ｖｉｉ）アミド；（ｖｉｉｉ）アルコールまたは
アルコキシアルキル基；（ｉｘ）カルボン酸またはエステル；（ｘ）式−ＣＮの
シアノ；および（ｘｉ）スルホンアミドからなる群より選択され； （ｄ）ｐおよびｑは，それぞれ独立して，０，１，２，または３であり；そして
（ｅ）ＫおよびＬは，それぞれ独立して，（ｉ）水素；（ｉｉ）アルキルからな
る群より選択され，または（ｉｉｉ）ＫおよびＬは，一緒になって，３員，４員
，５員，または６員の脂肪族環を形成する］ で表される構造を有するピラゾリルアミド系化合物を提供する。
【０１１７】 さらに別の観点においては，本発明は，式Ｘ：
【０１１８】
【化３５】
【０１１９】 ［式中， （ａ）Ｒ1，Ｒ4，およびＲ5は，独立して，（ｉ）水素；（ｉｉ）アルキル；（ ｉｉｉ）芳香族またはヘテロ芳香族環；（ｉｖ）脂肪族またはヘテロ脂肪族環；
（ｖ）アミン；（ｖｉ）式−ＮＯ2のニトロ；（ｖｉｉ）ハロゲン；（ｖｉｉｉ ）ケトン；（ｉｘ）カルボン酸またはエステル；（ｘ）アルコールまたはアルコ
キシアルキル基；（ｘｉ）式のアミド；（ｘｉｉ）スルホンアミド；（ｘｉｉｉ
）アルコキシアルコキシ；および（ｘｉｖ）スルホンからなる群より選択され；
ここで，Ｒ4およびＲ5の少なくとも１つは本明細書に記載される芳香族またはヘ
テロ芳香族環であり；そして （ｂ）Ｒ2は，（ｉ）アルキル；（ｉｉ）芳香族またはヘテロ芳香族環；（ｉｉ ｉ）脂肪族またはヘテロ脂肪族環；（ｉｖ）アミン；（ｖ）ケトン；（ｖｉ）カ
ルボン酸またはエステル；（ｖｉｉ）アルコールまたはアルコキシアルキル基；
（ｖｉｉｉ）アミド；（ｉｘ）スルホンアミド；および（ｘ）スルホンからなる
群より選択され；そして （ｃ）Ｒ3は，（ｉ）水素；（ｉｉ）アルキル；（ｉｉｉ）芳香族またはヘテロ 芳香族環；（ｉｖ）脂肪族またはヘテロ脂肪族環；および（ｖ）ハロゲンおよび
トリハロメチル；（ｖｉ）アミン；（ｖｉｉ）アミド；（ｖｉｉｉ）アルコール
またはアルコキシアルキル基；（ｉｘ）カルボン酸またはエステル；（ｘ）式−
ＣＮのシアノ；および（ｘｉ）スルホンアミドからなる群より選択され； （ｄ）ｐおよびｑは，それぞれ独立して，０，１，２，または３であり；そして
（ｅ）ＫおよびＬは，それぞれ独立して，（ｉ）水素；（ｉｉ）アルキルからな
る群より選択され，または（ｉｉｉ）ＫおよびＬは，一緒になって，３員，４員
，５員，または６員の脂肪族環を形成する］ で表される構造を有するピラゾリルアミド系化合物を提供する。
【０１２０】 好ましい態様においては，本発明は，Ｒ1が，（ｉ）水素；（ｉｉ）アルキル ；（ｉｉｉ）芳香族またはヘテロ芳香族環；および（ｉｖ）脂肪族またはヘテロ
脂肪族環からなる群より選択される，ピラゾリルアミド系化合物を提供する。
【０１２１】 より好ましくは，Ｒ1は，水素および任意に置換されていてもよい飽和または 不飽和アルキルからなる群より選択される。最も好ましくは，Ｒ1は，水素，メ チル，ｎ−プロピル，ｉ−プロピル，ｎ−ブチル，イソブチル，ｓｅｃ−ブチル
，およびｔ−ブチルからなる群より選択される。すなわち，ある好ましい態様に
おいては，Ｒ1はメチルであり，ある別の好ましい態様においては，Ｒ1はｎ−プ
ロピルであり，さらに別の好ましい態様においては，Ｒ1はｔ−ブチルである。
【０１２２】 本発明のピラゾリルアミド系化合物のＲ2基は，好ましくは，水素，アルキル ，およびハロゲンからなる群より選択される。より好ましくは，Ｒ2基は，水素 およびハロゲンからなる群より選択され，最も好ましは水素であり，さらに最も
好ましくは臭素である。
【０１２３】 本発明のアリールピラゾールアミド系化合物においては，Ｒ4およびＲ5は，好
ましくはそれぞれ独立して，水素，アルキル，芳香族またはヘテロ芳香族環，お
よび脂肪族またはヘテロ脂肪族環からなる群より選択される。最も好ましくは，
Ｒ4およびＲ5は，それぞれ独立して，アルキルおよびアルコキシ基からなる群よ
り独立して選択される１，２または３個の置換基で任意に置換されていてもよい
，水素，および芳香族またはヘテロ芳香族環からなる群より選択される。さらに
最も好ましくは，Ｒ4およびＲ5は，それぞれ独立して，水素，メチル，フェニル
，ピリジン−２−イル，ピリジン−３−イル，ピリジン−４−イル，３−メチル
−ピリジン−２−イル，４−メチル−ピリジン−２−イル，５−トリフルオロメ
チル−ピリジン−２−イル，５−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル，４
，６−ジメチル−ピリジン−３−イル，２，６−ジメトキシ−ピリジン−３−イ
ル，２，３，５，６−テトラフルオロ−ピリジン−４−イル，キノリン−３−イ
ル，３−メチル−キノリン−４−イル，イソキノリン−１−イル，イソキノリン
−３−イル，ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル，４−メトキシ−ビフェ
ニル−３−イル，６−メトキシ−ビフェニル−３−イル，６，３'−ジメトキシ −ビフェニル−３−イル，９−オキソ−９Ｈ−フルオレン−１−イル，９−オキ
ソ−９Ｈ−フルオレン−３−イル，７−アセチルアミノ−９−オキソ−９Ｈ−フ
ルオレン−２−イル，２'−ヒドロキシ−［１，１'；３'，１"］テルフェニル−
５'−イル，９−エチル−９Ｈ−カルバゾール−３−イル，および６−オキソ− ６Ｈ−ベンゾ［ｃ］クロメン−２−イルからなる群より選択される。
【０１２４】 ある別の好ましい態様においては，Ｒ4およびＲ5は，それぞれ独立して，２−
トリフルオロメチル−フェニル，３−トリフルオロメチル−フェニル，および４
−トリフルオロメチル−フェニルからなる群より選択される。
【０１２５】 別の好ましい態様においては，ピラゾリルアミド系化合物のＲ3は，水素，ア ルキル，ハロゲン，およびトリハロメチルからなる群より選択される。 Ｒ3は，好ましくは，水素，メチル，およびハロゲンからなる群より選択され る。より好ましくは，Ｒ3は水素であり，さらに好ましくはＲ3はメチルであり，
最も好ましくはＲ3は塩素である。
【０１２６】 ある好ましい態様においては，ｐおよびｑは，それぞれ独立して，０，１，２
，または３である。より好ましくは，ｐは１であり，最も好ましくはｑは１であ
る。
【０１２７】 好ましい態様においては，本発明のピラゾリルアミド系化合物は，以下の表１
０に記載の，ＡＰ−００１からＡＰ−０３３の番号が付されているピラゾリルア
ミド系化合物からなる群より選択される。
【０１２８】
【表１】
【０１２９】
【表２】
【０１３０】 上述の化合物の構造は以下の表１１に示されており，ここで，置換基Ｒ1，Ｒ2 ，およびＲ3は，次の一般構造を表す。
【０１３１】
【化３６】
【０１３２】
【表３】
【０１３３】
【表４】
【０１３４】 Ｂ．合成 別の観点においては，本発明は， （ａ）第一の反応物を第二の反応物および塩基と溶媒中で設定温度で反応させ；
そして （ｂ）生成物を精製する の工程を含む，ピラゾリルアミド系化合物を合成する方法を特徴とする。
【０１３５】 第一の反応物は，好ましくは置換ピラゾールであり，より好ましくは，塩化１
−ベンジル−３−ｔｅｒｔ−ブチルピラゾール−５−カルボニル，１−ベンジル
−３−ｔｅｒｔ−ブチルピラゾール−５−カルボン酸，１−（４−メチルフェニ
ル）−３−メチルピラゾール−５−カルボン酸，１−（４−メチルベンジル）−
３−メチルピラゾール−５−カルボン酸および１−（４−クロロベンジル）−３
メチルピラゾール−５−カルボン酸からなる群より選択される。
【０１３６】 第二の反応物は，好ましくはアミンであり，より好ましくは，２−トリフルオ
ロメチル−アニリン，３−トリフルオロメチル−アニリン，４−トリフルオロメ
チル−アニリン，２−アミノピリジン，３−アミノピリジン，４−アミノピリジ
ン，２−アミノ−３−メチル−ピリジン，２−アミノ−４−メチル−ピリジン，
２−アミノ−５−トリフルオロメチル−ピリジン，３−アミノ−５−トリフルオ
ロメチル−ピリジン，３−アミノ−４，６−ジメチル−ピリジン，３−アミノ−
２，６−ジメトキシ−ピリジン，４−アミノ−２，３，５，６−テトラフルオロ
−ピリジン，３−アミノ−キノリン，４−アミノ−３−メチル−キノリン，１−
アミノ−イソキノリン，３−アミノ−イソキノリン，５−アミノ−ベンゾ［１，
３］ジオキソール，３−アミノ−４−メトキシ−ビフェニル，３−アミノ−６−
メトキシ−ビフェニル，３−アミノ−６，３'−ジメトキシビフェニル，１−ア ミノ−９−オキソ−９Ｈ−フルオレン，３−アミノ−９−オキソ−９Ｈ−フルオ
レン，２−アミノ−７−アセチルアミノ−９−オキソ−９Ｈ−フルオレン，５' −アミノ−２'−ヒドロキシ−［１，ｌ'；３'，１"］テルフェニル，３−アミノ
−９−エチル−９Ｈ−カルバゾール，および２−アミノ−６−オキソ−６Ｈ−ベ
ンゾ［ｃ］クロメンからなる群より選択される。
【０１３７】 塩基は，好ましくはアミンであり，より好ましくはジイソプロピルアミンであ
る。溶媒は，好ましくは極性溶媒であり，より好ましくは塩化メチレンおよびジ
メチルホルムアミドからなる群より選択される。
【０１３８】 反応は設定温度で行うことが好ましい。設定温度は，好ましくは室温であり，
より好ましくは温度は室温より高い。温度が室温より高い場合，好ましくは約５
０℃，より好ましくは約５５℃，最も好ましくは約９０℃である。 Ｖ．三環式アルデヒド系インドリノン化合物 Ａ．化合物 別の観点においては，本発明は，式ＸＩで表される構造を有するインドリノン
化合物を提供する：
【０１３９】
【化３７】
【０１４０】 ［式中， （Ａ）Ｑは，式ＸＩＩＩで表される構造を有するオキシインドール基であり：
【０１４１】
【化３８】
【０１４２】 ［式中， （ａ）Ｒ1，Ｒ2，およびＲ3は，独立して，（ｉ）水素；（ｉｉ）アルキル；（ ｉｉｉ）芳香族またはヘテロ芳香族環；（ｉｖ）脂肪族またはヘテロ脂肪族；（
ｖ）アミン；（ｖｉ）式−ＮＯ2のニトロ；（ｖｉｉ）ハロゲンまたはトリハロ メチル；（ｖｉｉｉ）ケトン；（ｉｘ）カルボン酸またはエステル；（ｘ）アル
コールまたはアルコキシアルキル基；（ｘｉ）アミド；（ｘｉｉ）スルホンアミ
ド；（ｘｉｉｉ）アルデヒド；および（ｘｉｖ）スルホン；および（ｘｖ）チオ
ールまたはチオエーテルからなる群より選択され； （ｂ）Ａ，Ｂ，Ｄ，およびＥは，炭素および窒素からなる群より選択され；そし
て （ｃ）Ｑは，式ＩＩに記載されるように，オキシインドール環の３位を介して分
子の残りに結合する］； （Ｂ）Ｔは，式ＸＩＩで表される構造を有する環基であり：
【０１４３】
【化３９】
【０１４４】 ［式中， （ａ）Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6およびＲ7は，独立して，（ｉ）水素；（ｉｉ）アルキル；
（ｉｉｉ）芳香族またはヘテロ芳香族環；（ｉｖ）脂肪族またはヘテロ脂肪族環
；（ｖ）アミン；（ｖｉ）式−ＮＯ2のニトロ；（ｖｉｉ）ハロゲンまたはトリ ハロメチル；（ｖｉｉｉ）ケトン；（ｉｘ）カルボン酸またはエステル；（ｘ）
アルコールまたはアルコキシアルキル基；（ｘｉ）アミド；（ｘｉｉ）スルホン
アミド；（ｘｉｉｉ）アルデヒド；（ｘｉｖ）スルホン；および（ｘｖ）チオー
ルまたはチオエーテルからなる群より選択され；そして （ｂ）ＸはＮＸ26，イオウ，ＳＯ，ＳＯ2，および酸素からなる群より選択され ，ここでＸ26は，（ｉ）水素；（ｉｉ）アルキル；（ｉｉｉ）アルキル，アルコ
キシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，ニトロ，およびエステル
基からなる群より独立して選択される１，２または３個の置換基で任意に置換さ
れていてもよいアリール；（ｉｖ）式−ＳＯ2−Ｘ27のスルホン，ここでＸ27は ，飽和または不飽和アルキルおよび５員または６員のアリールまたはヘテロアリ
ール基からなる群より選択される；および（ｖ）式−Ｃ（Ｏ）Ｘ28のアシル，こ
こでＸ28は，水素，飽和および不飽和アルキル，アリール，および５員または６
員の環基からなる群より選択される；からなる群より選択される； （ｃ）環Ｙは，５員，６員，および７員の芳香族，ヘテロ芳香族，または非芳香
族環からなる群より選択され，ここで，ヘテロ芳香族環は，窒素，酸素，および
イオウからなる群より選択されるヘテロ原子を含み，非芳香族環は，Ｒ4と一緒 になって，任意にカルボニル官能基を形成してもよく； （ｄ）Ｇ，Ｊ，およびＬは，炭素および窒素からなる群より選択され；そして （ｅ）Ｔは，式ＸＩＩにおいてアスタリスク（＊）で表される環の位置を介して
分子の残りに結合している。
【０１４５】 好ましい態様においては，本発明は，式ＸＩのインドリノン化合物に関し，こ
こで，Ｒ1およびＲ2は，（ｉ）水素；（ｉｉ）ハロゲン，トリハロメチル，カル
ボキシレート，ニトロ，エステルで任意に置換されていてもよい飽和アルキル，
およびハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，ニトロ，およびエステル
基で任意に置換されていてもよい脂肪族またはヘテロ脂肪族環；（ｉｉｉ）アル
キル，アルコキシ，ハロゲン，およびニトロ基からなる群より独立して選択され
る１，２または３個の置換基で任意に置換されていてもよい芳香族環；（ｉｖ）
式−（Ｘ1）n1−ＮＸ2Ｘ3のアミン，ここでＸ1は任意に置換されていてもよい飽
和アルキルであり，ｎ１は０または１であり，Ｘ2およびＸ3は，独立して，水素
および任意に置換されていてもよい飽和アルキルからなる群より選択される；（
ｖ）式−ＮＯ2のニトロ；（ｖｉ）ハロゲンまたはトリハロメチル；（ｖｉｉ） 式−（Ｘ4）n4−ＣＯ−Ｘ5のケトン，ここでＸ4およびＸ5はアルキルであり，ｎ
４は０または１である；（ｖｉｉｉ）式−（Ｘ6）n6−ＣＯＯＨのカルボン酸ま たは式−（Ｘ7）n7−ＣＯＯ−Ｘ8のエステル，ここでＸ6，Ｘ7，およびＸ8はア ルキルであり，ｎ６およびｎ７は，独立して，０または１である；（ｉｘ）式−
（Ｘ9）n9−ＯＨのアルコールまたは式−（Ｘ10）n10−Ｏ−Ｘ11のアルコキシア
ルキル基であり，Ｘ9，Ｘ10およびＸ11は，飽和アルキルであり，ｎ９およびｎ １０は，独立して，０または１である；（ｘ）アミド；および（ｘｉ）スルホン
アミドからなる群より選択される。
【０１４６】 より好ましくは，本発明のインドリノン化合物のＲ1およびＲ2は，（ｉ）水素
；（ｉｉ）ハロゲン，トリハロメチル，シアノ，およびニトロ基で任意に置換さ
れていてもよいメチル，エチル，プロピル，およびブチル基；（ｉｉｉ）アルキ
ル，アルコキシ，ハロゲン，およびニトロ基からなる群より独立して選択される
１，２または３個の置換基で任意に置換されていてもよいフェニル；（ｉｖ）式
−（Ｘ1）n1−ＮＸ2Ｘ3のアミン，ここでＸ2およびＸ3は，独立して，水素およ び任意に置換されていてもよい飽和アルキルからなる群より選択され，Ｘ1は， 任意に置換されていてもよい飽和アルキルであり，ｎは０または１であり；（ｖ
）式−ＮＯ2のニトロ；（ｖｉ）ハロゲンまたはトリハロメチル；（ｖｉｉ）式 −ＣＯ−Ｘ4のケトン，ここでＸ4は，メチル，エチル，プロピル，およびブチル
からなる群より選択される；（ｖｉｉｉ）式−（Ｘ6）n6−ＣＯＯＨのカルボン 酸または式−（Ｘ7）n7−ＣＯＯ−Ｘ8のエステル，ここでＸ6およびＸ7は，単結
合，メチレン，エチレン，およびプロピレンからなる群より選択され，Ｘ8は， メチルおよびエチルからなる群より選択され，ｎ６およびｎ７は，独立して，０
および１である；（ｉｘ）式−Ｏ−Ｘ11のアルコキシ基，ここでＸ11は，メチル
およびエチルからなる群より選択される；（ｘ）式−ＮＨＣＯＸ13のアミド，こ
こでＸ13は，アルキル，ハロゲン，カルボキシレート，またはエステルからなる
群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていても
よいフェニルである；および（ｘｉ）式−ＳＯ2ＮＸ18Ｘ19のスルホンアミド， ここでＸ18およびＸ19は，独立して，アルキル，ハロゲン，およびトリハロメチ
ルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換さ
れていてもよい水素，メチル，エチル，フェニルからなる群より選択され，Ｘ18 およびＸ19は，一緒になって，６員のヘテロ脂肪族環基を形成してもよい， からなる群より選択される。
【０１４７】 ある態様においては，式ＸＩＩＩ中のＥは窒素である。 最も好ましくは，本発明のインドリノン化合物は，その構造が式ＸＩで表され
るものであり，ここで，Ｑは，タイプＱオキシインドールからなる群より選択さ
れる。"タイプＱオキシインドール"とは，Ｏ−１からＯ−６０との番号が付され
たオキシインドールの一覧から選択されるオキシインドール化合物を意味し，以
下に説明する。
【０１４８】
【化４０】
【０１４９】
【化４１】
【０１５０】
【化４２】
【０１５１】 ある別の好ましい態様においては，本発明のインドリノン化合物は，式ＸＩで
表される構造を有し，ここでＲ4およびＲ5は，独立して， （ｉ）水素； （ｉｉ）ハロゲン，トリハロメチル，シアノ，およびニトロ基で任意に置換され
ていてもよいメチル，エチル，プロピル，およびブチル基； （ｉｉｉ）式−（Ｘ1）n1−ＮＸ2Ｘ3のアミン，ここでＸ2およびＸ3は，独立し て，水素および置換飽和アルキルからなる群より選択され，Ｘ1は置換飽和アル キルであり，ｎ１は０または１であり，またはＸ2およびＸ3は，一緒になって，
５員または６員の脂肪族またはヘテロ脂肪族環を形成し，環炭素原子またはヘテ
ロ原子上で，メチル，エチル，プロピル，フェニル，およびアルコキシフェニル
からなる群より選択される置換基で任意に置換されていてもよい； （ｉｖ）式−ＮＯ2のニトロ； （ｖ）ハロゲンまたはトリハロメチル； （ｖｉ）式−ＣＯ−Ｘ4のケトン，ここでＸ4はメチル，エチル，プロピル，ｎ−
ブチル，およびｔ−ブチルからなる群より選択される； （ｖｉｉ）式−（Ｘ6）n6−ＣＯＯＨのカルボン酸または式−（Ｘ7）n7−ＣＯＯ
−Ｘ8のエステル，ここでＸ6およびＸ7は，単結合，メチレン，エチレン，およ びプロピレンからなる群より選択され，Ｘ8は，メチルおよびエチルからなる群 より選択され，ｎ６およびｎ７は，独立して，０または１である； （ｖｉｉｉ）式−ＮＨＣＯＸ13または式−ＣＯＮＸ15Ｘ16のアミド，ここでＸ13 ，Ｘ15，およびＸ16は，それぞれ独立して，水素，メチル，エチル，プロピル，
およびフェニルからなる群より選択される； （ｉｘ）−ＳＯ2ＮＸ18Ｘ19，ここでＸ18およびＸ19は，独立して，水素，メチ ル，およびエチルからなる群より選択される； （ｘ）式−（Ｘ9）n9−ＯＨのアルコールまたは式−（Ｘ10）n10−Ｏ−Ｘ11のア
ルコキシアルキル基，ここでＸ9およびＸ10は，独立して，メチレン，エチレン ，およびプロピレンからなる群より選択され，Ｘ11は，独立して，メチル，エチ
ル，およびプロピルからなる群より選択され，ｎ９およびｎ１０は，独立して，
０または１である； （ｘｉ）式−（Ｘ21）n21−ＳＯ2−Ｘ22のスルホン，ここでＸ22は水素，飽和ま
たは不飽和アルキル，および５員または６員のアリールまたはヘテロアリール基
からなる群より選択され，Ｘ21は飽和アルキルであり，ｎ２１は０または１であ
り；（ｘ）式−（Ｘ24）n24−Ｓ−Ｘ25のチオエーテル，ここでＸ24は，独立し て，メチレン，エチレン，およびプロピレンからなる群より選択され，Ｘ25は，
独立して，メチル，エチル，プロピル，およびフェニルからなる群より選択され
，ｎ２４は０または１である， からなる群より選択される。
【０１５２】 より好ましくは，Ｒ4およびＲ5は，それぞれ独立して，（ｉ）水素；（ｉｉ）
メチルおよびエチル；（ｉｉｉ）式−（Ｘ1）n1−ＮＸ2Ｘ3のアミン，ここでＸ2 およびＸ3は，独立して，水素，メチルおよびエチルからなる群より選択され， Ｘ1はメチレンまたはエチレンであり，ｎ１は０または１であり，またはＸ2およ
びＸ3は，一緒になって，
【０１５３】
【化４３】
【０１５４】
【化４４】
【０１５５】 からなる群より選択される置換環を形成し；（ｉｖ）式−ＮＯ2のニトロ；（ｖ ）ハロゲン；（ｖｉ）式−ＣＯ−Ｘ4のケトン，ここでＸ4はメチルおよびｔ−ブ
チルからなる群より選択される；（ｖｉｉ）式−（Ｘ6）n6−ＣＯＯＨのカルボ ン酸または式−（Ｘ7）n7−ＣＯＯ−Ｘ8のエステル，ここで，Ｘ6およびＸ7は，
単結合，メチレン，エチレン，およびプロピレンからなる群より選択され，Ｘ8 は，メチルおよびエチルからなる群より選択され，ｎ６およびｎ７は，独立して
，０または１である；（ｖｉｉｉ）式−ＮＨＣＯＸ13または式−ＣＯＮＸ15Ｘ16 のアミド，ここで，Ｘ13，Ｘ15，およびＸ16は，それぞれ独立して，水素，メチ
ル，およびフェニルからなる群より選択される；（ｉｘ）−ＳＯ2ＮＸ18Ｘ19， ここでＸ18およびＸ19は，独立して，水素，メチル，およびエチルからなる群よ
り選択される；（ｘ）式−（Ｘ9）n9−ＯＨのアルコールまたは式−（Ｘ10）n10 −Ｏ−Ｘ11のアルコキシアルキル基，ここでＸ9およびＸ10は，独立して，メチ レン，エチレン，およびプロピレンからなる群より選択され，Ｘ11は，独立して
，メチル，エチル，およびプロピルからなる群より選択され，ｎ９およびｎ１０
は，独立して，０または１である；（ｘｉ）式−ＳＯ2−Ｘ22のスルホン，ここ でＸ22はヒドロキシドである；および（ｘｉ）式−Ｓ−Ｘ25のチオエーテル，こ
こでＸ25はフェニルである， からなる群より選択される。
【０１５６】 好ましくは，本発明のインドリノン化合物のＲ6およびＲ7基は，独立して，（
ｉ）水素；（ｉｉ）ハロゲン，トリハロメチル，シアノ，およびニトロ基で任意
に置換されていてもよいメチル，エチル，プロピル，およびブチル基；（ｉｉｉ
）式−（Ｘ1）n1−ＮＸ2Ｘ3のアミン，ここでＸ2およびＸ3は，独立して，水素 および置換飽和アルキルからなる群より選択され，Ｘ1は，任意に置換されてい てもよい飽和アルキレンであり，ｎ１は０または１である；（ｉｖ）ハロゲンま
たはトリハロメチル；（ｖ）式−（Ｘ9）n9−ＯＨのアルコールまたは式−（Ｘ1 0 ）n10−Ｏ−Ｘ11のアルコキシアルキル基，ここでＸ9およびＸ10は，独立して ，メチレン，エチレン，およびプロピレンからなる群より選択され，Ｘ11は，独
立して，メチル，エチル，およびプロピルからなる群より選択され，ｎ９および
ｎ１０は，独立して，０または１である， からなる群より選択される。
【０１５７】 より好ましくは，Ｒ6およびＲ7は，独立して，（ｉ）水素；（ｉｉ）メチルお
よびエチル；（ｉｉｉ）式−（Ｘ1）n1−ＮＸ2Ｘ3のアミン，ここでＸ2およびＸ 3 は，独立して，水素，メチル，およびエチルからなる群より選択され，および Ｘ1はメチレンおよびエチレンからなる群より選択され，ｎ１は０または１であ る；（ｉｖ）ハロゲン；（ｖ）ヒドロキシ−ＯＨまたは式−Ｏ−Ｘ11アルコキシ
基であり，Ｘ11は，独立して，メチル，エチル，およびプロピルからなる群より
選択される， からなる群より選択される。
【０１５８】 好ましくは，本発明のインドリノン化合物のＹ環は，６員の芳香族またはヘテ
ロ芳香族環である。Ｙが芳香族環である場合，式ＸＩＩで表される基は，式ＸＩ
Ｉ−Ａ：
【０１５９】
【化４５】
【０１６０】 で表される形状であり， 環は本明細書に記載されるように任意に置換されていてもよく，Ｅは本明細書に
記載される限定を有する。Ｙがヘテロ芳香族環である場合，式Ｖで表される構造
のＹ環の炭素原子の少なくとも１つはヘテロ原子（例えば窒素）である。
【０１６１】 別の好ましい態様においては，インドリノン化合物のＹ環は６員の脂肪族また
はヘテロ脂肪族環である。すなわち，式ＸＩＩに記載される構造中のＹ環は，例
えば，任意に置換されていてもよい
【０１６２】
【化４６】
【０１６３】 または
【０１６４】
【化４７】
【０１６５】 の形状である。 別の好ましい態様においては，Ｇ，Ｊ，およびＬは，独立して，窒素である。
Ｘはまた，好ましくは酸素，アルキルで任意に置換されていてもよい窒素，また
は，イオウ，ＳＯ，およびＳＯ2からなる群より選択される。
【０１６６】 好ましい態様においては，式ＸＩで表される本発明のインドリノン化合物のＴ
基の前駆体は，タイプＴアルデヒドからなる群より選択される。"タイプＴアル デヒド"とは，Ａ−１からＡ−９５の番号を付したアルデヒドの一覧から選択さ れるアルデヒド化合物を意味し，以下に説明される。
【０１６７】
【化４８】
【０１６８】
【化４９】
【０１６９】
【化５０】
【０１７０】
【化５１】
【０１７１】
【化５２】
【０１７２】 別の観点においては，本発明は，オキシインドールをアルデヒドと反応させる
ことにより形成しうる，少なくとも１０種類のインドリノン化合物のコンビナト
リアルライブラリに関する。好ましい態様においては，オキシインドールは，本
明細書において定義される式ＸＩＩＩで表される構造，または本明細書において
記載されるそれらのサブグループのいずれかを有する。オキシインドールは，好
ましくはタイプＱオキシインドールからなる群より選択される。
【０１７３】 本発明のコンビナトリアルライブラリのアルデヒドは，好ましくは式ＸＩＶで
表される構造を有し：
【０１７４】
【化５３】
【０１７５】 ここで，Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6，Ｒ7，Ｇ，Ｊ，Ｌ，Ｘ，およびＹは，式ＸＩＩの化合物
について本明細書において定義されるとおりであるか，または本明細書において
記載されるそれらのサブグループの任意のものである。好ましくは，アルデヒド
は，タイプＴアルデヒドからなる群より選択される。
【０１７６】 本発明はまた，新規なオキシインドール化合物を特徴とする。１つの観点にお
いては，本発明は，式ＸＶのオキシインドール化合物を特徴とする：
【０１７７】
【化５４】
【０１７８】 ［式中， Ｒ8は（ｉ）アルコキシ，トリハロメチル，ニトロ，およびシアノ基からなる群 より選択される置換基で任意に置換されていてもよい飽和アルキルであり，ただ
し該アルキルはメチルではない；（ｉｉ）アミン；（ｉｉｉ）ヨウ素；（ｉｖ）
式−（Ｘ4）n4−ＣＯ−Ｘ5のケトン，ここでＸ4およびＸ5は，独立して，アルキ
ルであり，ｎ４は０または１である；（ｖ）カルボン酸またはエステル；（ｖｉ
）アミド；および（ｖｉｉ）スルホンアミド，からなる群より選択される。
【０１７９】 式ＸＶのオキシインドール化合物は，好ましくは
【０１８０】
【化５５】
【０１８１】
【化５６】
【０１８２】 からなる群より選択される。 別の観点においては，本発明は，式ＸＶＩのオキシインドール化合物を特徴と
する：
【０１８３】
【化５７】
【０１８４】 ［式中， Ｒ9は，（ｉ）アミン；（ｉｉ）式−ＮＯ2のニトロ；（ｉｉｉ）塩素，臭素，ま
たはヨウ素；（ｉｖ）ケトン；（ｖ）カルボン酸またはエステル；（ｖｉ）アミ
ド；および（ｖｉｉ）スルホンアミドからなる群より選択される］。
【０１８５】 式ＸＶＩのオキシインドール化合物は，好ましくは
【０１８６】
【化５８】
【０１８７】 からなる群より選択される。 別の観点においては，本発明は，式ＸＶＩＩのオキシインドール化合物を特徴
とする：
【０１８８】
【化５９】
【０１８９】 ［式中，Ｒ10は，（ｉ）芳香族またはヘテロ芳香族環；（ｉｉ）脂肪族またはヘ
テロ脂肪族環；（ｉｉｉ）アミン；（ｉｖ）式−ＮＯ2のニトロ；（ｖ）臭素； （ｖｉ）ケトン；（ｖｉｉ）カルボン酸またはエステル；（ｖｉｉｉ）スルホン
アミドからなる群より選択される］。
【０１９０】 式ＸＶＩＩのオキシインドール化合物は，好ましくは
【０１９１】
【化６０】
【０１９２】 からなる群より選択される。 別の観点においては，本発明は，
【０１９３】
【化６１】
【０１９４】 からなる群より選択されるオキシインドール化合物を特徴とする。 Ｂ．合成 別の観点においては，本発明は，インドリノン化合物を合成する方法を特徴と
する。該方法は， （ａ）第一の反応物を，溶媒中で塩基の存在下で高温で第二の反応物と反応させ
，ここで，第一の反応物はオキシインドールであり，第二の反応物はアルデヒド
であり； （ｂ）インドリノン化合物を精製する， の各工程を含む。
【０１９５】 第一の反応物は，好ましくはタイプＱオキシインドールからなる群より選択さ
れ，第二の反応物は，好ましくはタイプＴアルデヒドからなる群より選択される
。塩基は好ましくは窒素塩基であり，最も好ましくは，塩基はピペリジンである
。
【０１９６】 "窒素塩基"は，当該技術分野において商業的に用いられており，非環式および
環式アミンから選択される。窒素塩基の例としては，アンモニア，メチルアミン
，トリメチルアミン，アニリン，およびピペリジンが挙げられるが，これらに限
定されない。当業者には，どの窒素塩基が反応条件の要件に適合するかがわかる
。
【０１９７】 反応の溶媒は，好ましくはアルコールであり，最も好ましくは溶媒はエタノー
ルである。 本発明の合成方法においては，反応は高温で行うことが必要である。"高温"と
の用語は，室温より高い温度を表す。より好ましくは，高温は約９０℃である。 ＶＩ．イミダゾイル２−インドリノン誘導体 Ａ．化合物 １つの観点において，本発明の化合物は，式ＸＩＸの化学構造を有するイミダ
ゾイル−２−インドリノン誘導体に関する：
【０１９８】
【化６２】
【０１９９】 Ａ，Ｂ，ＤおよびＥは，独立して，炭素および窒素からなる群より選択され，
ここで，Ａ，Ｂ，ＤまたはＥが窒素であるとき，それぞれＲ6，Ｒ7，Ｒ8，また はＲ9は存在せず，結合手がないことが理解される。
【０２００】 ＧおよびＪは，Ｇが窒素であるときＪは炭素であり，Ｊが窒素であるときＧは
炭素であるように，窒素および炭素からなる群より選択される。ＧまたはＪのい
ずれかが窒素であるとき，それぞれＲ5またはＲ5’は，存在しない。
【０２０１】 Ｒ2およびイミダゾリル環は，二重結合上でその位置を交換することができる 。すなわち，式ＸＩＸの化合物は，２−インドリノンの３位で二重結合のまわり
にＥまたはＺコンフィギュレーションで存在しうる。
【０２０２】 Ｒ1およびＲ3は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，ヒ
ドロキシ，アルコキシ，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，Ｃ−アミド，Ｃ−チ
オアミド，スルホニルおよびトリハロメチルスルホニルからなる群より選択され
る。
【０２０３】 Ｒ2は，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，ヘテロアリールおよび ハロからなる群より選択される。 Ｒ4，Ｒ5，およびＲ5’は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，ア ルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂肪族環式，ハロ，
トリハロメチル，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，Ｃ−カルボキシ，
Ｏ−カルボキシ，カルボニル，ニトロ，シアノ，Ｓ−スルホンアミド，アミノお
よび−ＮＲ10Ｒ11からなる群より選択される。
【０２０４】 Ｒ10およびＲ11は，独立して，アルキル，シクロアルキル，アリール，カルボ
ニル，スルホニル，トリハロメタンスルホニルからなる群より選択されるか，ま
たは，一緒になって５員または６員のヘテロ脂肪族環式環である。
【０２０５】 Ｒ6，Ｒ7，Ｒ8，およびＲ9は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル
，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテ
ロ脂肪族環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，チオヒドロキシ，チ
オアルコキシ，チオアリールオキシ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホン
アミド，Ｎ−スルホンアミド，Ｎ−トリハロメタンスルホンアミド，カルボニル
，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，シアノ，ニトロ，ハロ，シアナト，イソシ
アナト，チオシアナト，イソチオシアナト，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，
Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，アミノお
よび−ＮＲ10Ｒ11からなる群より選択される。
【０２０６】 Ｒ6およびＲ7またはＲ7およびＲ8またはＲ8およびＲ9は，一緒になって，５員
または６員の芳香族，ヘテロ芳香族，脂環式またはヘテロ脂肪族環式環を形成し
てもよい。例としては，限定されるものではないが，メチレンジオキシまたはエ
チレンジオキシ環が挙げられる。
【０２０７】 本発明の好ましい構造的特徴は，Ｒ1が水素である。本発明の好ましい化合物 においては，Ａ，Ｂ，Ｄ，およびＥは炭素である。また本発明の好ましい化合物
において，Ｒ2は水素である。同様に，本発明の好ましい化合物において，Ｒ3は
水素である。
【０２０８】 また，上述の限定の４つすべてが同じ分子中に含まれていること，すなわち，
Ｒ1，Ｒ2，およびＲ3が水素であり，Ａ，Ｂ，ＤおよびＥが炭素であることも， 本発明の好ましい態様である。
【０２０９】 本発明のさらに好ましい態様においては，Ｒ6，Ｒ7，Ｒ8およびＲ9は，水素，
非置換低級アルキル，ハロ，Ｃ−カルボキシおよび−ＮＲ10Ｒ11からなる群より
選択される基で置換されている低級アルキル；非置換低級アルコキシ，ハロ，Ｃ
−カルボキシおよび−ＮＲ10Ｒ11からなる群より選択される基で置換されている
低級アルコキシ；トリハロメチル，非置換アルケニル，非置換アルキニル，非置
換アリール，非置換低級アルキル，ハロ，Ｃ−カルボキシ，非置換アルコキシ，
アミノ，Ｓ−スルホンアミドまたは−ＮＲ10Ｒ11からなる群より選択される１ま
たはそれ以上の基で置換されている低級アルキルからなる群より独立して選択さ
れる１またはそれ以上の基で置換されているアリール；非置換ヘテロ脂肪族環式
，非置換低級アルキル，１またはそれ以上のハロ基で置換されている低級アルキ
ル，アルデヒド，非置換低級アルキルカルボニル，ヒドロキシ，非置換アルコキ
シ，１またはそれ以上のハロ，Ｃ−カルボキシ，アミノ，Ｓ−スルホンアミドま
たは−ＮＲ10Ｒ11基で置換されているアルコキシからなる群より独立して選択さ
れる１またはそれ以上の基で置換されているヘテロ脂肪族環式；非置換アリール
オキシ，非置換低級アルキル，トリハロメチル，ハロ，ヒドロキシ，アミノ，ス
ルホンアミドまたはＮＲ10Ｒ11からなる群より独立して選択される１またはそれ
以上の基で置換されているアリールオキシ；チオヒドロキシ，非置換チオアルコ
キシ，非置換チオアリールオキシ，ハロ，ヒドロキシ，アミノ，Ｓ−スルホンア
ミドまたはＮＲ10Ｒ11からなる群より独立して選択される１またはそれ以上の基
で置換されているチオアリールオキシ，Ｓ−スルホンアミド，Ｃ−カルボキシ，
Ｏ−カルボキシ，ヒドロキシ，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド
，アミノおよび−ＮＲ10Ｒ11，からなる群より選択される。
【０２１０】 Ｒ10およびＲ11に関して，本発明の好ましい態様においては，これらの一方が
水素であり，他方が非置換低級アルキル基である。 最後に，Ｒ4，Ｒ5およびＲ5’に関して，これらは好ましくは，水素，非置換 低級アルキル，トリハロメチル，環への結合点から最も遠い炭素でＣ−カルボキ
シ基で置換されている低級アルキル，ハロ，ヒドロキシ，非置換アルコキシ，Ｏ
−カルボキシ，Ｃ−カルボキシ，アミノ，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，Ｓ−スルホ
ンアミド，ニトロ，アミノおよび−ＮＲ10Ｒ11からなる群より独立して選択され
る。
【０２１１】 本明細書において参照される化学式は，互変異性および構造的異性の現象を示
すかもしれない。例えば，本明細書に記載される化合物は，２−インドリノン基
をイミダゾイル基につなぐ二重結合のまわりにＥまたはＺコンフィギュレーショ
ンをとることができ，またはこれらはＥおよびＺの混合物でありうる。本明細書
に記載される式は，二重結合のイミダゾイル側を波線で描いて，Ｒ2の位置とイ ミダゾイル基とは互換可能であることを表している。本発明は，ＲＴＫ，ＣＴＫ
および／またはＳＴＫ活性を調節する能力を有する互変異性型または構造的異性
体型およびそれらの混合物をすべて包含し，いずれか１つの互変異性型または構
造的異性体型に限定されるものではない。 Ｂ．合成 別の観点においては，本発明は， （ａ）カルボニルイミダゾールを固体基質に結合させ； （ｂ）前記固体基質結合カルボニルイミダゾールを２−インドリノンと反応させ
て，固体基質結合イミダゾイル−２−インドリノンを形成し，そして （ｃ）イミダゾイル−２−インドリノンを固体基質から解離させる， の工程を含む，イミダゾイル−２−インドリノンを合成する方法を提供する。
【０２１２】 好ましい態様においては，固体基質は樹脂を含む。より好ましくは，樹脂は２
−クロロトリチル樹脂を含む。別の好ましい態様においては，合成方法は，固体
基質結合イミダゾイル−２−インドリノンをアセトン，水，ジクロロメタンおよ
びメタノールで洗浄することを含む。 ＶＩＩ．フェニル２−インドリノン誘導体 別の観点においては，本発明の化合物は，式ＸＸの化学構造を有するフェニル
−２−インドリノン誘導体に関する：
【０２１３】
【化６３】
【０２１４】 Ａ，ＢおよびＤは，独立して，炭素および窒素からなる群より選択され，ここ
で，Ａ，ＢまたはＤが窒素であるとき，それぞれＲ3，Ｒ4またはＲ5は存在しな いことが理解される。
【０２１５】 Ｒ1は，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，ヘテロアリール，ヒド ロキシ，アルコキシ，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，Ｃ−アミド，Ｃ−チオ
アミド，スルホニルおよびトリハロメチルスルホニルからなる群より選択される
。
【０２１６】 Ｒ2は，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，およびヘテロアリール からなる群より選択される。 Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6，Ｒ7，Ｒ8，Ｒ9およびＲ10は，独立して，水素，アルキ ル，トリハロメチル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘ
テロアリール，ヘテロ脂肪族環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，
チオヒドロキシ，チオアルコキシ，チオアリールオキシ，スルフィニル，スルホ
ニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，Ｎ−トリフルオロメタンスル
ホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，シアノ，アジド，
ニトロ，ハロ，シアナト，イソシアナト，チオシアナト，イソチオシアナト，Ｏ
−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ
−アミド，Ｎ−アミド，アミノおよび−ＮＲ11Ｒ12からなる群より選択される。
【０２１７】 Ｒ3およびＲ4またはＲ6およびＲ7またはＲ7およびＲ8またはＲ8およびＲ9また
はＲ9およびＲ10は，一緒になって，メチレンジオキシまたはエチレンジオキシ 基を形成してもよい。
【０２１８】 Ｑは，アリール，ヘテロアリールおよび縮合ヘテロアリール：シクロアルキル
／ヘテロ脂肪族環式からなる群より選択される。 Ｒ11およびＲ12は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，
カルボニル，アセチル，スルホニル，トリハロメタンスルホニルからなる群より
選択されるか，または一緒になって，５員または６員のヘテロ脂肪族環式環を形
成してもよい。
【０２１９】 本発明の好ましい態様は，Ｒ1およびＲ2が水素である化合物である。 本発明のさらに好ましい態様は，Ａ，ＢおよびＤが炭素である化合物である。 上述の５つの構造的限定が同じ分子中に取り込まれていることが好ましい。す
なわち，本発明の化合物において，Ｒ1およびＲ2は水素であり，Ａ，ＢおよびＤ
は炭素である。
【０２２０】 また，Ｒ3，Ｒ4およびＲ5が水素であることも，本発明の好ましい態様である 。 同様に，Ｒ6，Ｒ7，Ｒ8，Ｒ9およびＲ10が，独立して，水素および非置換低級
アルコキシからなる群より選択されることも，本発明の好ましい態様である。
【０２２１】 Ｒ6，Ｒ7，Ｒ8，Ｒ9またはＲ10の少なくとも１つが非置換低級アルコキシであ
ることが，本発明の好ましい態様である。 本発明の別の好ましい態様は，Ｑがアリールであるとき，アリール基は，水素
，非置換低級アルキル，非置換低級アルコキシおよびヘテロ脂肪族環式，特に４
−ホルミルピペラジン−１−イルからなる群より独立して選択される１またはそ
れ以上の基で置換されている。
【０２２２】 Ｑがヘテロアリールであるとき，ヘテロアリール基は，ピロール−２−イル，
イミダゾ−４−イルおよびチオフェン−２−イルからなる群より選択されること
が，本発明の好ましい態様である。
【０２２３】 Ｑが縮合ヘテロアリール：シクロアルキル／ヘテロ脂肪族環式基であるとき，
ヘテロアリール基は，好ましくは，ピロロ，チオフェノ，フラノ，チアゾロ，オ
キサゾロ，ピリジノおよびイミダゾロからなる群より選択される。現在のところ
特に好ましい態様においては，Ｑは４，５，６，７−テトラヒドロインドール−
２−イルである。
【０２２４】 最後に，Ｑは，好ましくは，水素，非置換低級アルキル，非置換低級アルコキ
シ，カルボキシ，カルボキシ塩，カルボキシアルキルおよびカルボキシアルキル
塩からなる群より独立して選択される１またはそれ以上の基で置換されておりこ
こで，カルボキシアルキルまたはカルボキシアルキル塩においてｒは１または２
である。
【０２２５】 本発明の代表的な化合物は表９に示される。示される化合物は，例示のために
のみ提示されており，いかなる意味においても本発明の範囲を限定するものと解
釈すべきではない。
【０２２６】 本発明の別の観点は，式ＸＸＩ：
【０２２７】
【化６４】
【０２２８】 の一般化学構造を有するオキシインドールを，式ＸＸＩＩの一般化学構造を有す
るアルデヒドと反応させることにより形成される少なくとも１０種類の化合物の
コンビナトリアルライブラリである：
【０２２９】
【化６５】
【０２３０】 ［式中，Ｒ1，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6，Ｒ7，Ｒ8，Ｒ9およびＲ10は，上で定義した
とおりである］。 Ｇ，Ｊ，Ｌ，ＭおよびＰは，独立して，炭素および窒素からなる群より選択さ
れ，ｎは０または１でありＧ，Ｊ，Ｌ，Ｍおよび／またはＰのいずれかが窒素で
あるとき，形成される５員環または６員環は，化学の技術分野において知られる
ものであることが理解される。
【０２３１】 Ｒ14，Ｒ15，Ｒ16，Ｒ17およびＲ18は，独立して，水素，アルキル，トリハロ
メチル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール
，ヘテロ脂肪族環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，チオヒドロキ
シ，チオアルコキシ，チオアリールオキシ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−ス
ルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，Ｎ−トリハロメタンスルホンアミド，カル
ボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，シアノ，アジド，ニトロ，ハロ，シ
アナト，イソシアナト，チオシアナト，イソチオシアナト，Ｏ−カルバミル，Ｎ
−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−ア
ミド，アミノおよび−ＮＲ11Ｒ12からなる群より選択される。
【０２３２】 Ｒ14およびＲ15またはＲ15およびＲ16またはＲ16およびＲ17またはＲ17および
Ｒ18は，一緒になって５員または６員のシクロアルキルまたはヘテロ脂肪族環式
環を形成してもよい。
【０２３３】 Ｇ，Ｊ，Ｌ，ＭまたはＰが窒素であるとき，それぞれＲ14，Ｒ15，Ｒ16，Ｒ17 またはＲ18は存在しない。 ＶＩＩＩ．細胞増殖を調節する方法 本発明の別の観点は，細胞増殖を調節する方法を特徴とする。該方法は，その
ような治療を必要とする患者に，治療的に有効量の１またはそれ以上の式ＸＶＩ
ＩＩ：
【０２３４】
【化６６】
【０２３５】 ［式中， Ｒ1は，Ｈまたはアルキルであり； Ｒ2は，ＯまたはＳであり； Ｒ3はＨであり； Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6，およびＲ7は，それぞれ独立して，水素，アルキル，アルコキシ
，アリール，アリールオキシ，アルカリール，アルカリールオキシ，ハロゲン，
トリハロメチル，Ｓ（Ｏ）Ｒ，ＳＯ2ＮＲＲ'，ＳＯ3Ｒ，ＳＲ，ＮＯ2，ＮＲＲ' ，ＯＨ，ＣＮ，Ｃ（Ｏ）Ｒ，ＯＣ（Ｏ）Ｒ，ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ，（ＣＨ2）nＣＯ2 Ｒ，ＣＯＮＲＲ'，および（ＣＨ2）nＯＮＲＲ'からなる群より選択され； Ａは，４，５，６，７−テトラヒドロインドールおよび５員ヘテロアリール環か
らなる群より選択され，ここで，５員環は，チオフェン，ピロール，ピラゾール
，イミダゾール，１，２，３−トリアゾール，１，２，４−トリアゾール，オキ
サゾール，イソオキサゾール，チアゾール，イソチアゾール，２−スルホニルフ
ラン，４−アルキルフラン，１，２，３−オキサジアゾール，１，２，４−オキ
サジアゾール，１，２，５−オキサジアゾール，１，３，４−オキサジアゾール
，１，２，３，４，−オキサトリアゾール，１，２，３，５−オキサトリアゾー
ル，１，２，３−チアジアゾール，１，２，４−チアジアゾール，１，２，５−
チアジアゾール，１，３，４−チアジアゾール，１，２，３，４−チアトリアゾ
ール，１，２，３，５−チアトリアゾール，およびテトラゾールからなる群より
選択され，ここで，５員環およびテトラヒドロインドールは，アルキル，アルコ
キシ，アリール，アリールオキシ，アルカリール，アルカリールオキシ，ハロゲ
ン，トリハロメチル，Ｓ（Ｏ）Ｒ，ＳＯ2ＮＲＲ'，ＳＯ3Ｒ，ＳＲ，ＮＯ2，ＮＲ
Ｒ'，ＯＨ，ＣＮ，Ｃ（Ｏ）Ｒ，ＯＣ（Ｏ）Ｒ，ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ，（ＣＨ2）nＣ Ｏ2Ｒ，ＣＯＮＲＲ'，および（ＣＨ2）nＯＮＲＲ'からなる群より選択される１ またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよい； ｎは，０−３であり； Ｒは，Ｈ，アルキル，およびアリールからなる群より選択され；そして Ｒ'は，Ｈ，アルキル，およびアリールからなる群より選択され，ここで，アル キルは，６員ヘテロ脂肪族環で任意に置換されていてもよく，６員環は，１また
はそれ以上の位置で，アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，ＮＯ 2 および（ＣＨ2）nＣＯ2Ｒからなる群より選択される置換基で任意に置換されて
いてもよい］ のインドリノン化合物を含む薬学的に許容しうる組成物を投与することを含む。
【０２３６】 本明細書において用いる場合，"異常な細胞増殖"または"細胞増殖疾患"との用
語は，多細胞生物において細胞の１またはそれ以上のサブセットの過剰な細胞増
殖が生じ，多細胞生物に傷害（例えば不快または予測寿命の短縮）を及ぼす疾患
を表す。過剰な細胞増殖は，全体の集団を参照することにより，および／または
特定の患者を参照することにより（例えば，患者の生涯のより早期の時点におい
て），決定することができる。過増殖細胞疾患は，種々のタイプの動物およびヒ
トにおいて生じることができ，影響を受けた細胞に依存して，物理学的に異なる
ように現れる。過増殖細胞疾患には，癌および転移，自己免疫疾患，慢性関節リ
ウマチ，子宮内膜症，眼疾患，動脈硬化および再狭窄，炎症性疾患（例えば乾癬
）および繊維性疾患（例えば異常型の創傷治癒）が含まれる。
【０２３７】 異常な細胞増殖状態の治療に関しては，治療効果とは，以下の１またはそれ以
上を表す：（ａ）過増殖の減少；（ｂ）過増殖の阻害；（ｃ）腫瘍転移の阻害（
すなわち，減速または停止）；および（ｄ）異常な状態に伴う１またはそれ以上
の症状のある程度の緩和。
【０２３８】 本明細書において用いる場合，"シグナル伝達"との用語は，多様な細胞プロセ
スを制御する外部刺激が細胞内部に伝播される基本的メカニズムを表す。シグナ
ル伝達の鍵となる生化学メカニズムの一つはキナーゼによる蛋白質の可逆的リン
酸化であり，これは，成熟蛋白質の構造および機能を変化させることにより，そ
の活性の制御を可能とする。シグナル伝達に関与する蛋白質キナーゼには，チロ
シン残基のアルコール基上で蛋白質をリン酸化するチロシンキナーゼ，およびセ
リン／トレオニン残基をリン酸化するセリン／トレオニンキナーゼが含まれる。
【０２３９】 さらに，"シグナル伝達経路"との用語は，外部シグナルを細胞膜を通して伝達
し，細胞内シグナルとする分子を表す。次に，これらのシグナルは，細胞応答を
刺激することができる。シグナル伝達プロセスに関与するポリペプチド分子は，
典型的には，レセプターおよび非レセプター蛋白質キナーゼ，レセプターおよび
非レセプター蛋白質ホスファターゼ，アダプター分子，ヌクレオチド交換因子，
および転写因子である。
【０２４０】 本明細書において用いる場合，"溶媒"との用語は，化合物の溶解を容易にする
化学的化合物を表す。溶媒の例としては，薬学的に許容しうるアルコール，例え
ばエタノール；ポリオキシヒドロカルビル化合物，例えばポリ（エチレングリコ
ール）；薬学的に許容しうる界面活性剤，例えばＣＲＥＭＯＰＨＯＲ ＥＬ（登
録商標）ポリグリコール化脂質，例えばＣＥＬＵＣＩＲＥ（登録商標）およびＬ
ＡＢＲＡＳＯＬ（登録商標）；および薬学的に許容しうる油，例えばｍｉｇｌｙ
ｏｌ ８１２が挙げられるが，これらに限定されない。
【０２４１】 本明細書において用いる場合，"薬学的に許容しうるアルコール"との用語は，
ほぼ室温（約２０℃）で液体であるアルコールを表す。これらには，プロピレン
グリコール，エタノール，２−（２−エトキシエトキシ）エタノール（ＴＲＡＮ
ＳＣＵＴＯＬ（登録商標）Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ，Ｗｅｓｔｗｏｏｄ，ＮＪ ０
７６７５），およびグリセロールが含まれる。
【０２４２】 本明細書において用いる場合，"ポリオキシヒドロカルビル化合物"との用語は
，グルコース，スクロース，マルトトリオース等の水溶性炭水化物，グルコン酸
およびマンニトール等の水溶性炭水化物誘導体，およびオリゴサッカライドおよ
び水溶性高分子，例えばポリビニルピロリドン，ポリ（ビニルアルコール），特
にポリエーテル（ポリ（エチレングリコール）を含む他のポリオキシアルキレン
），または他の水溶性混合オキシアルキレンポリマーおよびエチレングリコール
のポリマー形を表す。ポリオキシヒドロカルビル化合物は，好ましくは２以上の
炭素，酸素，および水素原子を含むが，ある分子，例えばポリ（エチレンイミン
）もまた含まれる。
【０２４３】 特に好ましい可溶化ポリオキシヒドロカルビル基には，ポリ（エチレングリコ
ール）（ＰＥＧ）およびＰＥＧ誘導体，例えばＰＥＧモノメチルエーテルが含ま
れる。他の適当なＰＥＧ誘導体には，ＰＥＧ−シリコン誘導化エーテルが含まれ
る。これらのポリマーの多くは，種々の分子量のものが商業的に入手可能である
。他のものは，商業的に入手可能な材料から適切に，例えば，アミノ−ＰＥＧ基
をハロアルキルシリルまたはシラン基にカップリングさせることにより製造する
ことができる。
【０２４４】 適当なＰＥＧは，約２００ｇ／ｍｏｌ−約２０，０００ｇ／ｍｏｌまたはそれ
以上の種々の分子量のものであることができ，より好ましくは２００ｇ／ｍｏｌ
−５，０００ｇ／ｍｏｌ，さらに好ましくは２５０ｇ／ｍｏｌ−１，０００ｇ／
ｍｏｌ，最も好ましくは２５０ｇ／ｍｏｌ−５００ｇ／ｍｏｌである。特定の分
子量の選択は，選択された特定のインドリノン化合物およびその分子量および疎
水性の程度，ならびにその処方が用いられる特定の用途に依存するであろう。
【０２４５】 本明細書において用いる場合，"薬学的に許容しうる界面活性剤"との用語は，
インドリノン化合物を水性溶液に可溶性にするかまたは溶解を助けることができ
る化合物を表す。好ましくは，非経口処方用には，界面活性剤は非イオン性界面
活性剤である。薬学的に許容しうる界面活性剤の例としては，ＰＯＬＹＳＯＲＢ
ＡＴＥ８０（登録商標）および他のポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステ
ル，グリセリルモノオレエート，ポリビニルアルコール，エチレンオキシドコポ
リマー，例えばＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）（ポリエーテル）およびＴＥＴＲ
ＯＮＩＣ（登録商標）（ＢＡＳＦ），ポリオール基，およびソルビタンエステル
が挙げられる。好ましくはエトキシル化ひまし油，例えばＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（
登録商標）ＥＬ，をインドリノン化合物の処方に用いる。
【０２４６】 本明細書において用いる場合，"エトキシル化ひまし油"との用語は，少なくと
も１つの酸素含有基で修飾したひまし油を表す。特に，この用語は，少なくとも
１つのエトキシル基を含有するひまし油を表す。
【０２４７】 さらに，本明細書において用いる場合，経口処方に関して"薬学的に許容しう る界面活性剤"との用語は，薬学的に許容しうる非イオン性界面活性剤（例えば ポリオキシエチレンポリプロピレングリコール，例えばＰＯＬＯＸＡＭＥＲ（登
録商標）６８（ＢＡＳＦＣｏｒｐ．）またはポリオキシエチレン（２０）ソルビ
タンモノオレエート（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０），ポリオキシエチレン（２
０）ソルビタンモノステアレート（ＴＷＥＥＮ（登録商標）６０），ポリオキシ
エチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート（ＴＷＥＥＮ（登録商標）４０）
，ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウリレート（ＴＷＥＥＮ（登録
商標）２０）等のモノ脂肪酸エステル；ポリオキシエチレンひまし油誘導体（例
えば，ポリオキシエチレングリセロール−トリリシノレートまたはポリオキシル
３５ひまし油（ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）ＥＬ，ＢＡＳＦ Ｃｏｒｐ．）
，ポリオキシエチレングリセロールオキシステアレート（ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（
登録商標）ＲＨ４０（ポリエチレングリコール４０水素化ひまし油）または（Ｃ
ＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）ＲＨ６０（ポリエチレングリコール６０水素化ひ
まし油），ＢＡＳＦ Ｃｏｒｐ．）等；または薬学的に許容しうるアニオン性界
面活性剤を表す。
【０２４８】 本明細書において用いる場合，"ポリグリコール化脂質"との用語は，２００ｇ
／ｍｏｌ−２，０００ｇ／ｍｏｌのＰＥＧを用いる植物油の部分的アルコール分
解，またはＰＥＧ２００ｇ／ｍｏｌ−２，０００ｇ／ｍｏｌおよびグリセロール
を用いる脂肪酸のエステル化により形成される，モノグリセリド，ジグリセリド
，またはトリグリセリドとポリエチレングリコールモノエステルおよびジエステ
ルとの混合物を表す。好ましくは，これらにはＧＥＬＵＣＩＲＥ（登録商標）３
５／１０，ＧＥＬＵＣＩＲＥ（登録商標）４４／１４，ＧＥＬＵＣＩＲＥ（登録
商標）４６／０７，ＧＥＬＵＣＩＲＥ（登録商標）５０／１３，ＧＥＬＵＣＩＲ
Ｅ（登録商標）５３／１０，およびＬＡＢＲＡＳＯＬ（登録商標）が含まれる。
【０２４９】 本明細書において用いる場合，"薬学的に許容しうる油"との用語は，鉱物油ま
たは植物油（例えば，べにばな油，落花生油およびオリーブ油），分画化ココヤ
シ油，プロピレングリコールモノラウリレート，トリグリセリドとカプリル酸お
よびカプリン酸の混合物等の油を表す。本発明の好ましい態様は，鉱物油，植物
油，分画化ココヤシ油，トリグリセリドとカプリル酸およびカプリン酸の混合物
を特徴とする。本発明の特に好ましい態様は，Ｍｉｇｌｙｏｌ ８１２（Ｈｕｌ
ｓ Ａｍｅｒｉｃａ，ＵＳＡより入手可能）を特徴とする。
【０２５０】 異常な細胞増殖を調節する方法の好ましい態様においては，組成物は，式ＸＶ
ＩＩＩの化合物からなり，式中，Ａは，アルキル，アルコキシ，アリール，アリ
ールオキシ，アルカリール，アルカリールオキシ，ハロゲン，トリハロメチル，
Ｓ（Ｏ）Ｒ，ＳＯ2ＮＲＲ'，ＳＯ3Ｒ，ＳＲ，ＮＯ2，ＮＲＲ'，ＯＨ，ＣＮ，Ｃ （Ｏ）Ｒ，ＯＣ（Ｏ）Ｒ，ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ，（ＣＨ2）nＣＯ2Ｒ，ＣＯＮＲＲ'，
および（ＣＨ2）nＯＮＲＲ’からなる群より選択される１またはそれ以上の置換
基で任意に置換されていてもよい，ピロール，チオフェン，および４，５，６，
７−テトラヒドロインドールからなる群より選択され；ｎは０−３であり；Ｒは
，Ｈ，アルキル，およびアリールからなる群より選択され；およびＲ'は，Ｈ， アルキル，およびアリールからなる群より選択され，ここで，アルキルは，６員
のヘテロ脂肪族環で任意に置換されていてもよく，６員環は，１またはそれ以上
の位置で，アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，ＮＯ2，および （ＣＨ2）nＣＯ2Ｒからなる群より選択される置換基で任意に置換されていても よい。特に好ましい態様においては，Ａはピロールである。別の好ましい態様に
おいては，式ＸＶＩＩＩのインドリノン化合物は，好ましくは化合物ＡＶ−００
２，化合物ＡＶ−００３，化合物ＡＶ−００４，化合物ＡＶ−００５，化合物Ａ
Ｖ−００６，化合物ＡＶ−００７，および化合物ＡＶ−００８からなる群より選
択される。
【０２５１】 "化合物ＡＶ−００２"とは，インドリノン化合物，５−アミノ−３−（３，５
−ジエチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン）−１，３−ジヒドロ−インド
ール−２−オンのＥまたはＺ異性体のいずれかを意味する。
【０２５２】 "化合物ＡＶ−００３"とは，インドリノン化合物，４−メチル−３−（３−メ
チル−チオフェン−２−イルメチレン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−
オンのＥまたはＺ異性体のいずれかを意味する。
【０２５３】 "化合物ＡＶ−００４"とは，インドリノン化合物，５−クロロ−３−（３，５
−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン）−１，３−ジヒドロ−インド
ール−２−オンのＥまたはＺ異性体のいずれかを意味する。
【０２５４】 "化合物ＡＶ−００５"とは，インドリノン化合物，３−［４−メチル−５−（
２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピ
ロール−３−イル］プロピオン酸のＥまたはＺ異性体のいずれかを意味する。
【０２５５】 "化合物ＡＶ−００６"とは，インドリノン化合物，３−［２，４−ジメチル−
５−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−１
Ｈ−ピロール−３−イル］−プロピオン酸を意味する。
【０２５６】 "化合物ＡＶ−００７”とは，インドリノン化合物，Ｎ−（２−モルホリン− ４−イル−エチル）−３−［２−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール
−３−イリデンメチル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−ｌＨ−インドール−
３−イル］−プロピオンアミドのＥまたはＺ異性体のいずれかを意味する。
【０２５７】 "化合物ＡＶ−００８"とは，インドリノン化合物，３−［２−（２−オキソ−
１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−４，５，６，７−テト
ラヒドロ−１Ｈ−インドール−３−イル］−プロピオン酸のＥまたはＺ異性体の
いずれかを意味する。
【０２５８】 本明細書において用いる場合，"ＥまたはＺ異性体"との用語は，各二重結合炭
素原子についての２つの原子または基の配置を，他方の二重結合炭素についての
２つの原子または基の配置と比較して表す。各二重結合炭素原子について２つの
原子または基の優先順位を同定し，次に互いの相対配置，すなわち，各二重結合
炭素原子について優先順位の高いほうの原子または基が同じ側かまたは反対側に
あるかを決定する。Ｚは同じ側を意味し，Ｅは反対側を意味する。"優先順位"と
は，原子番号を表し，原子量の大きい方の原子が高い優先順位を有する。２つの
原子が同じ元素の同位体である場合，質量数の大きい方の原子が高い優先順位を
有する。二重結合炭素に結合している２つの基の相対的優先順位を決定すること
ができない場合，これらの基に結合している原子について同様の比較を行い，こ
れを続ける。
【０２５９】 異常な細胞増殖を調節する方法の別の好ましい態様においては，組成物は処方
中にさらに１またはそれ以上の薬学的に許容しうる賦形剤を含み，ここで，処方
は，非経口，局所および経口処方からなる群より選択されるが，これらに限定さ
れない。組成物中の化合物の有効量は，１−１０００ｍｇ／ｍ2／日，好ましく は１０−５００ｍｇ／ｍ2／日，最も好ましくは１０−２５０ｍｇ／ｍ2／日の，
１またはそれ以上のインドリノン化合物である。好ましくは患者は哺乳動物であ
り；より好ましくは哺乳動物はヒトである。あるいは，哺乳動物はラットであっ
てもよく，この場合，ＶＥＧＦ，ＦＧＦ，および／またはＰＤＧＦの変更された
活性を誘導することができる。
【０２６０】 本明細書において用いる場合，"哺乳動物"との用語は，好ましくは，マウス，
ラット，ウサギ，モルモット，ヤギ，ヒツジ，ウマおよびウシなどの生物を表す
。例えば；より好ましくはイヌ，ネコ，有尾猿および無尾猿を表し；最も好まし
くはヒトを表す。
【０２６１】 本発明の別の観点は，細胞に対するＶＥＧＦ，ＦＧＦ，および／またはＰＤＧ
Ｆの活性を，インビトロでまたはより好ましくはインビボで調節する方法を特徴
とする。該方法は，前記細胞に，治療的に有効量の式ＸＶＩＩＩ：
【０２６２】
【化６７】
【０２６３】 ［本明細書において定義されるとおりであり，または本明細書に記載されるそれ
らのサブグループのいずれかである。］ の１またはそれ以上のインドリノン化合物を含む薬学的に許容しうる組成物を投
与することを含む。
【０２６４】 ＶＥＧＦ，ＦＧＦ，またはＰＤＧＦの細胞に対する活性を調節する方法の好ま
しい態様においては，組成物は処方中にさらに１またはそれ以上の薬学的に許容
しうる賦形剤を含む。好ましくは，処方は，非経口，経口，および局所処方から
なる群より選択され，組成物中の化合物の有効量は，１−１０００ｍｇ／ｍ2／ 日，好ましくは１０−５００ｍｇ／ｍ2／日，および最も好ましくは１０−２５ ０ｍｇ／ｍ2／日の，１またはそれ以上のインドリノン化合物である。好ましく は患者は哺乳動物であり；より好ましくは哺乳動物はヒトである。あるいは，哺
乳動物はラットであってもよく，この場合，ＶＥＧＦ，ＦＧＦ，および／または
ＰＤＧＦの変更した活性を誘導することができる。
【０２６５】 別の観点においては，本発明はまた，チロシンキナーゼシグナル伝達を調節す
る方法を特徴とする。該方法は，そのような治療を必要とする患者に，治療的に
有効量の式ＸＶＩＩＩ：
【０２６６】
【化６８】
【０２６７】 ［本明細書において定義されるとおりであり，または本明細書に記載されるそれ
らのサブグループのいずれかである。］ の１またはそれ以上のインドリノン化合物を含む薬学的に許容しうる組成物を投
与することを含む。
【０２６８】 チロシンキナーゼシグナル伝達を調節する方法の好ましい態様においては，組
成物は処方中にさらに１またはそれ以上の薬学的に許容しうる賦形剤を含む。好
ましくは，処方は非経口，経口，および局所処方からなる群より選択され，組成
物中の化合物の有効量は，１−１０００ｍｇ／ｍ2／日，好ましくは１０−５０ ０ｍｇ／ｍ2／日，最も好ましくは１０−２５０ｍｇ／ｍ2／日の，化合物ＡＶ−
００２，化合物ＡＶ−００３，および化合物ＡＶ−００４からなる群より選択さ
れる１またはそれ以上のインドリノン化合物である。好ましくは患者は哺乳動物
であり；より好ましくは哺乳動物はヒトである。あるいは，哺乳動物はラットで
あってもよく，この場合，ＶＥＧＦ，ＦＧＦ，および／またはＰＤＧＦの変更し
た活性を誘導することができる。
【０２６９】 本発明の別の観点は，成長因子刺激または血小板由来成長因子刺激細胞増殖を
阻害する１またはそれ以上のインドリノン化合物を同定する方法を特徴とする。
該方法は，以下の工程を含む：（ａ）細胞を式ＸＶＩＩＩの１またはそれ以上の
インドリノン化合物と接触させ；（ｂ）細胞を，ＶＥＧＦ，ＰＤＧＦ，およびＦ
ＧＦからなる群より選択される１またはそれ以上の成長因子と接触させ；そして
（ｃ）細胞に対する影響をモニターする。好ましくは，成長因子はＶＥＧＦであ
り，細胞は内皮細胞であるか，成長因子はＰＤＧＦであり細胞は平滑筋細胞であ
るか，または成長因子はＦＧＦである。好ましくは，影響は比色により，例えば
吸光度の変化を用いてモニターする。
【０２７０】 本発明のインドリノン化合物は，好ましくは，インビトロで蛋白質キナーゼの
活性を調節する。これらの化合物は，好ましくは，問題とする疾患または疾病の
治療に対応する活性について，１またはそれ以上のインビトロアッセイ（例えば
，以下の実施例に記載されるアッセイ）において陽性の結果を示す。
【０２７１】 本発明はまた，ラットのアジュバント関節炎モデルにおいて活性な１またはそ
れ以上のインドリノン化合物を同定する方法を特徴とする。該方法は，以下の工
程を含む：（ａ）式ＸＶＩＩＩの１またはそれ以上のインドリノン化合物をラッ
トに投与し；そして（ｂ）ラットに及ぼす影響をモニターする。好ましくは，化
合物は，１−１０００ｍｇ／ｍ2／日，好ましくは１０−５００ｍｇ／ｍ2／日，
および最も好ましくは１０−２５０ｍｇ／ｍ2／日の１またはそれ以上のインド リノン化合物の濃度で投与され，ラットの疾患への影響は，耳小結節形成，尾部
小結節形成，鼻腫脹，足腫脹，および亀頭炎からなる群より選択される。
【０２７２】 本明細書において，"アジュバント関節炎モデル"との用語は，ラット，好まし
くはＷｉｓｔａｒ−Ｌｅｗｉｓまたは当業者に慣用的に知られる他のラット株を
表すのに用いられる。このラットにおいては，０．１ｍＬのフロイントアジュバ
ントを尾部の基部に注射することにより，疾患が誘導される。このアジュバント
関節炎モデルは，本発明の化合物を試験するために用いることができる動物モデ
ルの一例にすぎない。３つの最も慣用的な動物モデルについては，ｓｅｅＯｌｉ
ｖｅｒ＆Ｂｒａｈｎ（１９９６）Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２３：５６−６０（
図面または表を含め，その全体を本明細書の一部としてここに引用する）を参照
のこと。
【０２７３】 本発明の別の観点は，異常な細胞増殖，細胞に対するＶＥＧＦ，ＦＧＦ，また
はＰＤＧＦのインビボまたはインビトロでの活性，またはチロシンキナーゼシグ
ナル伝達を調節する方法を特徴とする。該方法は，そのような治療を必要とする
患者に，治ＶＥＧＦ−，ＦＧＦ−，またはＰＤＧＦ−刺激細胞増殖を阻害する，
ラットにおいてアジュバント関節炎のまたは１またはそれ以上の影響を阻害する
能力により同定された，療的に有効量の，１またはそれ以上の式ＸＶＩＩＩのイ
ンドリノン化合物を含む薬学的に許容しうる組成物を投与することを含む。好ま
しくは，化合物は，処方中にさらに１またはそれ以上の薬学的に許容しうる賦形
剤を含む組成物中で投与される。これは，経口投与，非経口，または局所的に投
与されるが，これらに限定されない。化合物は，１−１０００ｍｇ／ｍ2／日， 好ましくは１０−５００ｍｇ／ｍ2／日，最も好ましくは１０−２５０ｍｇ／ｍ2 ／日の１またはそれ以上のインドリノン化合物の濃度で，好ましくは哺乳動物に
，より好ましくはヒトに投与することができる。
【０２７４】 本発明の別の観点は，治療を必要とする患者に，治療的に有効量の式ＸＶＩＩ
Ｉ：
【０２７５】
【化６９】
【０２７６】 ［本明細書において定義されるとおりであり，または本明細書において記載され
るサブグループのいずれかである。］ の１またはそれ以上のインドリノン化合物を含む薬学的に許容しうる組成物を投
与することにより，異常な状態を治療または予防する方法を特徴とする。
【０２７７】 異常な状態を治療または予防する別の方法には，そのような治療を必要とする
患者に，先に記載した，ＶＥＧＦ−，ＦＧＦ−，またはＰＤＧＦ−活性を調節す
るか，またはラットにおけるアジュバント関節炎モデルにおいて活性である化合
物を同定する方法により同定された，治療的に有効量の１またはそれ以上の化合
物を含む薬学的に許容しうる組成物を投与することを含む。ここで，異常な状態
は，慢性関節リウマチ，子宮内膜症，眼疾患，癌および転移，乾癬，動脈肥厚お
よび再狭窄，組織虚血，および創傷治癒中の過剰の瘢痕からなる群より選択され
る。疾患は，好ましくは子宮内膜症または慢性関節リウマチであり，組成物は，
筋肉内，デポー製剤，非経口，経口，局所処方からなる群より選択される処方中
に，さらに１またはそれ以上の薬学的に許容しうる賦形剤を含む。好ましくは，
化合物はインビトロでチロシンキナーゼ活性を阻害し，患者は哺乳動物であり，
または好ましくはヒトである。あるいは，哺乳動物はラットであってもよく，こ
の場合，記述される疾患を誘導することができる。 ＩＸ．性的活性の増強 さらに別の観点においては，本発明は，哺乳動物にインドリノン化合物を含有
する処方を投与することにより，哺乳動物の性的機能を増加させる方法を提供す
る。本発明はまた，治療を必要とする哺乳動物において性的機能障害を治療する
方法を提供する。該方法は，（ａ）哺乳動物にインドリノン化合物を含有する処
方を投与し；（ｂ）哺乳動物の性的活性をモニターし；そして（ｃ）化合物の用
量を哺乳動物の特定の必要性に適合するよう調節する，の各工程を含む。本発明
の別の観点は，哺乳動物において性的機能障害を予防する方法を提供する。該方
法は，（ａ）哺乳動物にインドリノン化合物を含有する処方を投与し；（ｂ）哺
乳動物の性的活性をモニターし；そして（ｃ）化合物の用量を哺乳動物の特定の
必要性に適合するよう調節する，の各工程を含む。
【０２７８】 "哺乳動物"は，一般に，マウス，ラット，ウサギ，イヌ，ネコ，ブタ，ウシ，
ヒツジ，ヤギ等の生物を表し，より好ましくは有尾猿および無尾猿であり，最も
好ましくはヒトである。雄および雌の哺乳動物の両方が，本発明の方法による治
療の患者として企図される。
【０２７９】 "性的機能"とは，任意の性的活動を行うことを表し，性欲，性交，およびオー
ガズムを含む。すなわち，"性的機能障害"とは，性的活性の喪失をもたらすであ
ろう任意の疾患，または性的行為を行うことが不可能であることを表す。本発明
において企図される性的機能障害には，性心理的基礎ではなく生物学的基礎（例
えばインポテンス）を有する機能障害が含まれる。
【０２８０】 普通の性的機能障害はインポテンスである。"インポテンス"とは，雄哺乳動物
に生じ，雄が雌の膣に挿入するかまたは性的行為を行うのに十分なペニスの伸長
および硬化である勃起に達するかまたはそれを維持する能力がないことからなる
性的機能障害である。インポテンスは必ずしも，性欲の欠如を伴わない。一般に
，インポテンスの雄は性欲を有するが，性的行為を行うことができない。したが
って，インポテンスとは，２つの異なる条件を表す。すなわち，第１には，雄が
勃起を得ることができないことであり，第２にはいったん勃起が得られた後，雄
がそれを性的行為を完了させるまで十分長く維持できないことである。これらの
両方の状態の治療が，本発明の範囲内である。
【０２８１】 哺乳動物における他の性的機能障害には，性欲の喪失およびオーガズムに到達
できないこと，および雌哺乳動物における膣乾燥が含まれる。雄哺乳動物におい
ては，オーガズムは，通常はペニスを通じる精液の放出である射精と同時に生じ
る。
【０２８２】 本発明の方法においては，性的機能障害を患う哺乳動物にインドリノン化合物
を投与する。"投与する"とは，広く，生物に与えることに関係し，特に，化合物
を生物の細胞または組織内に導入する方法である。当該技術分野においては，化
合物を生物に投与する多くの技術が存在し，例えば，経口，非経口，経皮，注射
およびエアロゾル適用が含まれる，これらに限定されない。
【０２８３】 好ましくは，本発明の方法において用いられるインドリノン化合物は，３−［
（２，４−ジメチルピロール−５−イル）メチレン］−２−インドリノンであり
，これは式ＸＸＩＩＩで表される構造を有する。
【０２８４】
【化７０】
【０２８５】 本発明の方法はまた，インドリノン化合物および薬学的に許容しうる希釈剤ま
たは担体を含む医薬組成物を含む。 インドリノン化合物を哺乳動物に投与した後，哺乳動物の性的活性をモニター
し，変化または改善を記録することができる。"モニターする"との用語は，本発
明の化合物を哺乳動物に加えたときの影響を観察することを表す。影響は，哺乳
動物の性的活性の変化に現れることができる。"性的活性"とは，例えば，哺乳動
物の性欲，性的行為を行う能力，またはオーガズムを得る能力でありうる。
【０２８６】 別の観点においては，本発明は，哺乳動物において性的機能を増加させるイン
ドリノン化合物を同定する方法を提供する。該方法は，（ａ）哺乳動物に，イン
ドリノン化合物を含む処方を投与し；（ｂ）哺乳動物の性的活性をモニターし；
そして（ｃ）哺乳動物の性的活性を調節するインドリノン化合物を同定する，の
各工程を含む。本発明はまた，本発明の方法により，哺乳動物の性的活性の調節
剤であると同定されたインドリノン化合物を合成する方法を提供する。
【０２８７】 "調節する"との用語は，例えば，性欲を有する頻度を増加または減少させるこ
とにより，勃起を得ることにより，またはオーガズムに達することにより，哺乳
動物の性的活性を変化させることを表す。調節剤は，好ましくは，哺乳動物の性
的活性を増加させる。
【０２８８】 別の観点においては，本発明は，性的機能の増加を必要とする哺乳動物におい
て性的機能を増加させる方法を提供する。該方法は，（ａ）性的機能の増加を必
要とする哺乳動物を同定し；そして（ｂ）哺乳動物にインドリノン化合物を含む
処方を投与する，の各工程を含む。同定工程は，哺乳動物の医学的診断の一部と
して健康管理の専門家が行ってもよく，または哺乳動物がヒトである場合には，
そのヒトがその性的機能の増加を必要としているか否かを自己診断してもよい。 Ｘ．組成物，治療の方法 別の観点においては，本発明は（ｉ）生理学的に許容しうる担体，希釈剤，ま
たは賦形剤；および（ｉｉ）本明細書に記載されるインドリノン化合物またはそ
の塩を含む医薬組成物を特徴とする。
【０２８９】 本発明はまた，本発明の化合物を用いて蛋白質キナーゼの機能を調節する方法
を特徴とする。該方法は，蛋白質キナーゼを発現する細胞を化合物と接触させる
工程を含む。
【０２９０】 本発明の化合物は，好ましくはインビトロで蛋白質キナーゼの活性を調節する
。これらの化合物は，好ましくは，問題とする疾患または疾病の治療に対応した
活性についての１またはそれ以上のインビトロアッセイ（例えば，以下の実施例
に記載されるアッセイ）で陽性の結果を示す。
【０２９１】 本発明はまた，蛋白質キナーゼの機能を調節するインドリノン化合物を同定す
る方法を特徴とする。該方法は，以下の工程を含む：（ａ）蛋白質キナーゼを発
現する細胞を化合物と接触させ；そして（ｂ）細胞に及ぼす影響をモニターする
。細胞に及ぼす影響は，好ましくは，細胞表現型の変化または不変，より好まし
くは細胞増殖の変化または不変，さらに好ましくは蛋白質キナーゼの触媒活性の
変化または不変，最も好ましくは蛋白質キナーゼと本明細書に記載される天然の
結合パートナーとの間の相互作用の変化または不変である。
【０２９２】 好ましい態様においては，本発明は，本発明のインドリノン化合物を同定する
方法を特徴とする。該方法は，以下の工程を含む：（ａ）細胞を溶解して蛋白質
キナーゼを含む溶解物とし；（ｂ）蛋白質キナーゼを抗体に吸着させ；（ｃ）吸
着した蛋白質キナーゼを１またはそれ以上の基質とともにインキュベートし；そ
して（ｄ）１またはそれ以上の基質を固体支持体または抗体に吸着させる。ここ
で，細胞に対する影響をモニターする工程は，１またはそれ以上の基質のリン酸
濃度を測定することを含む。
【０２９３】 さらに別の観点においては，本発明は，無秩序なチロシンキナーゼシグナル伝
達に関連する疾患を治療する方法を特徴とする。該方法は，治療を必要とする患
者に治療的に有効量の本明細書に記載されるインドリノン化合物を投与する工程
を含む。
【０２９４】 本発明はまた，チロシンキナーゼシグナル伝達を制御する方法を特徴とする。
該方法は，患者に治療的に有効量の本明細書に記載される化合物を投与すること
を含む。
【０２９５】 さらに，本発明は，生物において異常な状態を予防または治療する方法を特徴
とする。該方法においては，異常な状態は，蛋白質キナーゼと天然の結合パート
ナーとの間の相互作用により特徴づけられるシグナル伝達経路の異常型と関連す
る。該方法は，以下の工程を含む：（ａ）本明細書に記載される化合物を投与し
；そして（ｂ）異常な相互作用を促進させるか破壊する。生物は好ましくは哺乳
動物であり，異常な状態は好ましくは癌である。
【０２９６】 上述の本発明の概要は非限定的なものであり，本発明の他の特徴および利点は
，以下の好ましい態様の記載および特許請求の範囲から明らかであろう。 図面の簡単な説明 表１は，外来的に適用したＶＥＧＦの非存在および存在下における，インドリノ
ン化合物（化合物ＡＶ−００２，化合物ＡＶ−００３，および化合物ＡＶ−００
４）による，ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）のＶＥＧＦ刺激の阻害のＩＣ50 判定の概要を示す。ドキソルビシンの影響は，比較のために含まれている。
【０２９７】 表２は，外来的に適用したＰＤＧＦの非存在および存在下における，インドリ
ノン化合物（化合物ＡＶ−００２，化合物ＡＶ−００３，および化合物ＡＶ−０
０４）の胚性胸大動脈平滑筋細胞（Ａ１０細胞）に対する活性のＩＣ50判定の概
要を示す。
【０２９８】 表３は，プレインキュベーションしたときの，外来的に適用したＰＤＧＦの非
存在および存在下における，Ａ１０細胞に対するインドリノン化合物（化合物Ａ
Ｖ−００２，化合物ＡＶ−００３，および化合物ＡＶ−００４）の活性のＩＣ50 判定の概要を示す。ドキソルビシンの影響は，比較のために含まれている。
【０２９９】 表４は，プレインキュベーションなしの，インドリノン化合物（化合物ＡＶ−
００２，化合物ＡＶ−００３，および化合物ＡＶ−００４）によるＡ１０細胞の
ＰＤＧＦ−刺激の阻害のＩＣ50判定の概要を示す。
【０３００】 表５は，プレインキュベーションしたときの，インドリノン化合物（化合物Ａ
Ｖ−００２，化合物ＡＶ−００３，および化合物ＡＶ−００４）によるＡ１０細
胞のＰＤＧＦ−刺激の阻害のＩＣ50判定の概要を示す。ドキソルビシンの影響は
，比較のために含まれている。
【０３０１】 表６は，関節炎対照（ベヒクルのみ）と比較したときの，アジュバント関節炎
ラットモデルにおける試験化合物（化合物ＡＶ−００２，化合物ＡＶ−００３，
および化合物ＡＶ−００４）の影響の概要を示す。
【０３０２】 表７は，関節炎対照（ベヒクルのみ）と比較したときの，アジュバント関節炎
ラットモデルにおける試験化合物（化合物ＡＶ−００２，化合物ＡＶ−００３，
および化合物ＡＶ−００４）の影響の概要を関節炎指標として示す。
【０３０３】 図１は，アジュバント関節炎ラットの足体積に及ぼす化合物ＡＶ−００２の影
響を示す。 図２は，アジュバント関節炎ラットの足体積に及ぼす化合物ＡＶ−００３の影
響を示す。
【０３０４】 図３は，アジュバント関節炎ラットの足体積に及ぼす化合物ＡＶ−００４の影
響を示す。 図４は，アジュバント関節炎ラットの体重に及ぼす試験化合物の影響を示す。
発明の詳細な説明 本発明はプロテインキナーゼシグナル伝達、特にレセプターおよび非レセプタ
ープロテインキナーゼシグナル伝達を制御および／または調節できる化合物に関
している。
【０３０５】 レセプターチロシンキナーゼ仲介シグナル伝達は特定の増殖因子（リガンド）
との細胞外相互作用により開始され、レセプターの二量化、固有のプロテインキ
ナーゼ活性の一時的刺激およびリン酸化が続く。 それにより細胞内シグナル伝 達分子のための結合部位が作られ、適切な細胞応答（例えば、細胞分割、細胞外
局所環境への代謝性効果）を容易にする細胞質シグナリング分子分画との複合体
形成を導く。Ｓｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ ａｎｄ Ｕｌｌｒｉｃｈ，１９９２，
Ｎｅｕｒｏｎ ９：３０３−３９１、を参照されたい。
【０３０６】 増殖因子レセプターのチロシンリン酸化部位は、シグナリング分子のＳＨ２（
ｓｒｃ同族体）ドメインに対する高い親和性結合部位として機能していることが
示されている。Ｆａｎｔｌ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｃｅｌｌ ６９：４１３
−４２３；Ｓｏｎｇｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂ
ｉｏｌ．／４：２７７７−２７８５）；Ｓｏｎｇｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９
９３，Ｃｅｌｌ ７２：７６７−７７８；およびＫｏｃｈ ｅｔ ａｌ．，１９
９ｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２：６６８−６７８。レセプターチロシンキナーゼ
に会合するいくつかの細胞内基質タンパク質が同定されている。それらは二つの
主な群に分けられるであろう：（１）触媒ドメインを持つ基質；および（２）そ
のようなドメインを欠くが、アダプターとして働き、触媒的に活性な分子と会合
する基質。Ｓｏｎｇｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃｅｌｌ ７２：７６
７−７７８。レセプターおよび基質のＳＨ２ドメイン間の相互作用特異性はリン
酸化チロシン残基を囲むすぐ近くのアミノ酸残基により決定される。ＳＨ２ドメ
インおよび特定のレセプター上でホスホチロシンを囲んでいるアミノ酸配列間の
結合親和性の相違は、基質リン酸化プロフィールで観察された相違と一致してい
る。Ｓｏｎｇｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃｅｌｌ ７２：７６７−７
７８。これらの観察は、各々のレセプターチロシンキナーゼの機能はその発現パ
ターンおよびリガンド利用可能性のみでなく、特定のレセプターにより活性化さ
れたシグナル伝達経路下流の一連の経路によっても決定されることを示唆してい
る。従って、リン酸化は、特定の増殖因子レセプターならびに分化因子レセプタ
ーにより起こされるシグナリング経路の選択性を決定する重要な制御過程である
。
【０３０７】 チロシンキナーゼシグナル伝達は、応答の中でも細胞増殖、分化および代謝を
結果として生じる。異常細胞増殖は、癌腫、肉腫、白血病、神経芽腫、血管腫、
乾癬、動脈硬化、関節炎および糖尿病性網膜炎（または制御されない血管新生お
よび／または血管叢形成に関連した他の障害）のような新生物の発育を含んだ広
範囲の障害および疾患を生じる。
【０３０８】 従って本発明は、ＲＴＫおよび／または非レセプターチロシンキナーゼの酵素
活性に影響し、そのようなタンパク質により伝達されるシグナルを妨害すること
によりチロシンキナーゼシグナル伝達を制御、調節および／または阻害する化合
物に関している。特に本発明は、癌腫、肉腫、白血病、赤芽球腫、神経芽腫、髄
膜腫、神経膠星状細胞腫、黒色腫および筋芽細胞腫を含む（これらに制限される
わけではない）多くの種類の固形腫瘍を治すための治療法としてＲＴＫおよび／
または非レセプターチロシンキナーゼ仲介シグナル伝達経路を制御、調節および
／または阻害する化合物に関している。徴候には脳の癌、膀胱癌、卵巣癌、胃癌
、膵臓癌、結腸癌、血液癌、肺癌および骨の癌が含まれるが、それらに制限され
るわけではない。 Ｉ．本発明の化合物により処置されるべき標的疾患 本明細書に記載された化合物は細胞増殖性障害、線維性障害および代謝性障害
を含む、制御されないチロシンキナーゼシグナル伝達に関連した障害を処置する
ために有用である。
【０３０９】 本発明により処置できるまたはさらに研究できる細胞増殖性障害には癌、血管
増殖性障害およびメサンギウム細胞増殖性障害が含まれる。 血管増殖性障害とは血管新生性および血管叢形成性疾患を意味しており、一般
的に血管の異常な増殖を生じる。血管の形成および拡がり（または各々血管叢形
成および血管新生）は胚発生、黄体形成、創傷治癒および器官再生のような種々
の生理学的過程に重要な役割を果たしている。それらはまた癌発生に中枢的役割
を果たしている。血管増殖性障害の別の例には、新しい毛細血管が関節に侵襲し
て軟骨を破壊する関節炎および網膜中の毛細血管が硝子体を侵襲し、出血して失
明を引き起こす糖尿病性網膜炎のような眼球疾患が含まれる。逆に、再狭窄のよ
うな血管の収縮、狭窄または閉鎖に関連した障害もまた関係がある。
【０３１０】 線維性障害とは細胞外マトリックスの異常な形成を意味している。線維性障害
の例には肝硬変およびメサンギウム細胞増殖性障害が含まれる。肝硬変は細胞外
マトリックス構成物の増加により特徴付けられ、肝臓瘢痕の形成を生じる。肝硬
変は肝臓の硬変症のような疾患を起こす。肝臓瘢痕を生じる細胞外マトリックス
の増加はまた肝炎のようなウイルス感染でも引き起こされる。類洞周囲脂質細胞
は肝硬変に主たる役割を果たしているようである。関係する他の線維性障害には
アテローム性動脈硬化症が含まれる（下記参照）。
【０３１１】 メサンギウム細胞増殖性障害とはメサンギウム細胞の異常な増殖によりもたら
される障害を意味している。メサンギウム細胞増殖性障害には、腎炎、糖尿病性
腎障害、悪性腎硬化症、血栓性細小血管症候群、移植片拒否および糸球体症のよ
うな種々のヒト腎疾患が含まれる。ＰＤＧＦ−Ｒがメサンギウム細胞増殖の維持
に関係があるとされている。Ｆｌｏｅｇｅ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｋｉｄｎ
ｅｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ４３：４７Ｓ−５４Ｓ。
【０３１２】 ＰＫがそのような細胞増殖性障害に関係している。例えば、ＲＴＫファミリー
のいくつかのものは癌の発生に関係している。ＥＧＦＲ（Ｔｕｚｉ ｅｔ ａｌ
．，１９９１，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ６３：２２７−２３３；Ｔｏｒｐ ｅ
ｔ ａｌ．，１９９２，ＡＰＭＩＳ １００：７１３−７１９）、ＨＥＲ２／ｎ
ｅｕ（Ｓｌａｍｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：７０
７−７１２）およびＰＤＧＦ−Ｒ（Ｋｕｍａｂｅ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｏ
ｎｃｏｇｅｎｅ ７：６２７−６３３）のようなこれらのレセプターのいくつか
は多くの腫瘍で過剰発現されており、および／または自己分泌ループにより持続
的に活性化されている。実際、最も普通のおよび重度の癌において、これらのレ
セプター過剰発現（Ａｋｂａｓａｋ ａｎｄ Ｓｕｎｅｒ−Ａｋｂａｓａｋ ｅ
ｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．１１１：１１９−１３３；
Ｄｉｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
Ｒｅｓ．６１：２４９−２７３；Ｋｏｒｃ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｃ
ｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９０：１３５２−１３６０）および自己分泌ループ（Ｌ
ｅｅ ａｎｄ Ｄｏｎｏｇｈｕｅ，１９９２，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１１８
：１０５７−１０７０；Ｋｏｒｃ ｅｔ ａｌ．，前記文献；Ａｋｂａｓａｋ
ａｎｄ Ｓｕｎｅｒ−Ａｋｂａｓａｋ ｅｔ ａｌ．前記文献，）が示されてい
る。例えば、ＥＧＦＲレセプターは扁平上皮癌、神経膠星状細胞腫、神経芽腫、
頭部および頚部癌、肺癌および膀胱癌に関係している。ＨＥＲ２は乳腺、卵巣、
胃、肺、膵臓および膀胱癌に関係している。ＰＤＧＦ−Ｒは神経芽腫、肺、卵巣
、黒色腫および前立腺に関係していた。ＲＴＫ ｃ−ｍｅｔは一般的に肝発癌お
よび従って肝細胞癌腫に関係していた。加えて、ｃ−ｍｅｔは悪性腫瘍形成に関
連している。特に、ＲＴＫ ｃ−ｍｅｔは癌の中でも結腸直腸、甲状腺、膵臓お
よび胃癌腫、白血病およびリンパ腫に関係している。さらに、ｃ−ｍｅｔ遺伝子
の過剰発現はホジキン病、バーキット病の患者およびリンパ腫細胞株で検出され
ている。
【０３１３】 ＩＧＦ−ＩＲは栄養支持およびＩＩ型糖尿病に関係あることに加え、いくつか
の型の癌にも関係していた。例えば、ＩＧＦ−Ｉはいくつかの腫瘍型の自己分泌
増殖刺激剤として関係している、例えば、ヒト乳癌癌腫細胞（Ａｒｔｅａｇａ
ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８４：１４１８−１４
２３）および小肺腫瘍細胞（Ｍａｃａｕｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｃａ
ｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５０：２５１１−２５１７）。加えて、神経系の正常発育お
よび分化に必須なものとして関与しているＩＧＦ−Ｉは、ヒト神経膠腫の自己分
泌刺激剤であるようである。Ｓａｎｄｂｅｒｇ−Ｎｏｒｄｑｖｉｓｔ ｅｔ ａ
ｌ．，１９９３，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：２４７５−２４７８。細胞増殖
におけるＩＧＦ−ＩＲおよびそのリガンドの重要性は、培養での多くの細胞型（
線維芽細胞、上皮細胞、平滑筋細胞、Ｔリンパ球、骨髄細胞、軟骨細胞、骨芽細
胞、骨髄の幹細胞）がＩＧＦ−Ｉにより増殖が刺激されるという事実によりさら
に支持される。Ｇｏｌｄｒｉｎｇ ａｎｄ Ｇｏｌｄｒｉｎｇ，１９９１，Ｅｕ
ｋａｒｙｏｔｉｃ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ １：３０１−３２６。一
連の最近の報告において、ＢａｓｅｒｇａはＩＧＦ−ＩＲは形質転換の機構で中
心的な役割を果たしており、広範囲のヒト悪性腫瘍の治療的介入の好適な標的で
あるにちがいないことさえ示唆している。Ｂａｓｅｒｇａ，ｌ９９５，Ｃａｎｃ
ｅｒ Ｒｅｓ．５５：２４９−２５２；Ｂａｓｅｒｇａ，１９９４，Ｃｅｌｌ
７９：９２７−９３０；Ｃｏｐｐｏｌａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｍｏｌ．Ｃ
ｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１４：４５８８−４５９５。
【０３１４】 しかしながらＲＴＫの異常性および疾患間の関連は癌に限定されない。例えば
、ＲＴＫは乾癬、糖尿病、創傷治癒および神経消耗性疾患のような代謝疾患にも
関係している。これらの疾患には高血圧症、うつ病、汎発性不安障害、恐怖症、
心的外傷後ストレス症候群、回避的人格障害、性的機能不全、摂食障害、肥満症
、化学依存症、群発頭痛、片頭痛、疼痛、アルツハイマー病、強迫性障害、パニ
ック障害、記憶障害、パーキンソン病、内分泌障害、血管痙攣、小脳性運動失調
症および胃腸管障害が含まれるが、それらに限定されるわけではない。例えば、
ＥＧＦ−Ｒが核膜および皮膚創傷治癒に指摘されている。インシュリン−Ｒおよ
びＩＧＦ−ＩＲの欠陥がＩＩ型糖尿病に指摘されている。特定のＲＫＴおよびそ
の治療的指示間のより完全な相関はＰｌｏｗｍａｎ ｅｔ ａｌ，１９９４，Ｄ
Ｎ＆Ｐ ７：３３４−３３９、に示されている。
【０３１５】 レセプターチロシンキナーゼのみでなく、ｓｒｃ、ａｂｌ、ｆｐｓ、ｙｅｓ、
ｆｙｎ、ｌｙｎ、ｌｃｋ、ｂｌｋ、ｈｃｋ、ｆｇｒ、 ｙｒｋ を含む多くの細
胞性チロシンキナーゼ（ＣＴＫ）（Ｂｏｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２，ＦＡ
ＳＥＢ Ｊ．６：３４０３−３４０９に総説がある）もまた増殖および代謝シグ
ナル伝達経路に関与しており、従って本発明の表示内である。例えば、突然変異
したｓｒｃ（ｖ−ｓｒｖ）はニワトリにおける癌タンパク質（ｐｐ６０v-src） として示されている。さらに、細胞内同族体、原癌遺伝子ｐｐ６０c-srcは多く のレセプターの癌シグナルを伝達する。例えば、腫瘍におけるＥＧＦ−Ｒまたは
ＨＥＲ２／ｎｅｕの過剰発現はｐｐ６０c-srcの構成的活性化を導き、それは悪 性細胞に特徴的であるが、正常細胞には存在しない。一方、ｃ−ｓｒｃの発現が
欠損しているマウスは大理石骨病的表現型を示し、破骨細胞機能におけるｃ−ｓ
ｒｃの鍵となる関与、および関連障害における関与の可能性を示している。同様
に、Ｚａｐ７０がＴ細胞シグナリングに関係している。
【０３１６】 さらに、ＲＴＫにねらいを付けた遮断剤を増強するおよびさらには共同するＣ
ＴＫ調節化合物の同定も本発明の特色である。 最後に、ＲＴＫおよび非レセプター型キナーゼの両方が過免疫障害に結びつけ
られた。
【０３１７】 普段は細胞増殖を制御しているプロテインキナーゼ機能の変化は、ある種の疾
患で明らかなように細胞増殖状態の促進または減少を導くことができる。異常細
胞増殖状態には血管新生性および血管叢形成性障害が含まれ、リウマチ様関節炎
、子宮内膜症、眼性疾患、癌および転移、乾癬、動脈肥厚および再狭窄、組織虚
血および創傷治癒の間の過剰瘢痕化を含んでいる。 癌および転移 血管新生および癌の関連はよく確立されている。血管新生は過形成から新形成
への移行の重要な過程であり、腫瘍が１を超えて２ｍｍ3へ成長するためにはそ れが起こらなければならない。（Ｆｏｌｋｍａｎ，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ
Ｉｎｓｔ．１９９０，８２，４−６；Ｆｏｌｋｍａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ
ｕｒｅ １９８９，３３９，５８−６１）。微小血管密度と疾患の重度の相関が
、悪性神経膠腫（Ｐｌａｔｅ ＆ Ｒｉｓａｕ，ＧＬＩＡ １９９５，１５，３
３９−３４７）および乳腺（Ｈｏｒａｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ １９９
２，３４０，１１２０−１１２４）、膀胱（Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．
，Ｂｒ．Ｊ．Ｕｒｏｌ．１９９４，７４，７６２−７６６）、結腸（Ｔａｋａｈ
ａｓｈｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９５，５５，３９６４−
３９６８）および子宮内膜（Ｋｉｒｓｃｈｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｏ
ｂｓｔｅｔ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．１９９６，１７４，１８７９−１８８２）を含ん
だ多数の異なった腫瘍型で観察されている。
【０３１８】 腫瘍血管新生の多くの活性化剤は内皮細胞の増殖を刺激する増殖因子である。
ＶＥＧＦおよびその同起源のレセプターＦｌｋ−１／ＫＤＲの役割がよく確立さ
れている。ＶＥＧＦは、神経膠腫（Ｔｓａｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓ
ｕｒｇ １９９５，８２，８６４−８６７）、黒色腫（Ｃｌａｆｆｅｙ，ｅｔ
ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９６，５４，１７２−１８１）、カポジ肉
腫、および類表皮癌細胞（Ｍｙｏｋｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９９１，８８，５８１９−５８２３）を含む、多
数のヒト腫瘍細胞株により培養で分泌されている。より重要なことは、ＶＥＧＦ
転写体またはタンパク質が原発性神経膠腫（Ｐｌａｔｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｌａｂ
Ｉｎｖｅｓｔ．１９９２，６７，５２９−Ｓ３４；Ｐｌａｔｅ，ｅｔ ａｌ．
，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １９９４，５９，５２０−５２９）、血管芽腫（
Ｈａｔｖａ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１９９６，１４８，
７６３−７７５）および乳腺（Ｔｏｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅ
ｒ Ｒｅｓ．１９９４，８５，１０４５−１０４９；Ａｎａｎ，ｅｔ ａｌ．，
Ｓｕｒｇｅｒｙ １９９６，１１９，３３３−３３９；Ｙｏｓｈｉｊｉ，ｅｔ
ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９６，５６，２０１３−２０１６）、結腸
（Ｂｒｏｗｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９３，５３，４７２
７−４７３５；Ｔａｋａｈａｓｈｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１
９９５，５５，３９６４−３９６８）および腎細胞腫瘍（Ｔａｋａｈａｓｈｉ，
ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９４，５４，４２３３−４２３７）
におけるｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションまたは免疫組織化学で同定され
ている。グリア芽腫において、ＶＥＧＦのためのメッセージが壊死性領域に隣接
する細胞中で観察され、それは低酸素状態による上方制御と一致していた（Ｓｈ
ｗｅｉｋｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ １９９２，３５９，８４３−８４５
；Ｐｌａｔｅ，ｅｔ ａｌ，Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ．１９９２，６７，５２９−
５３４）。さらに、癌患者は正常ボランティアよりも著しく高い血清ＶＥＧＦレ
ベルを示した。最も高いＶＥＧＦ濃度が非処置転移癌を持つ患者で観察された。
【０３１９】 腫瘍血管新生におけるＶＥＧＦの機能を調べるために多数の動物モデルが開発
された。ラットＣ６神経膠腫およびヒトＵ８７ＭＧグリア芽腫細胞はＶＥＧＦを
分泌し、無胸腺マウスにおいて皮下で増殖する（Ｓａｌｅｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９６，５６，３９３−４０１；Ｃｈｅｎｇ，ｅｔ ａ
ｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９９６，９３，８５
０２−８５０７）。細胞内へのＶＥＧＦ ｍＲＮＡに対するアンチセンス構築物
の導入はそれらの生体内増殖、ならびに血管新生の程度を減少させる。ＶＥＧＦ
に対するモノクローナル抗体は、無胸腺マウスにおいてヒト横紋筋肉腫、グリア
芽腫、平滑筋肉腫（Ｋｉｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ １９９３，３６２，
８４１−８４４）および線維肉腫（Ａｓａｎｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ．１９９５，５５，５２９６−５３０１）の皮下増殖を阻害した。線維肉
腫（Ａｓａｎｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９５，５５，５２
９６−５３０１）および結腸癌腫瘍（Ｗａｒｒｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉ
ｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９５，９５，１７８９−１７９７）の転移がまた抗ＶＥ
ＧＦ抗体により阻止された。原発性腫瘍および腫瘍細胞株におけるＶＥＧＦの存
在、ならびにアンチセンスおよびＶＥＧＦへの中和抗体の阻害活性は、ＶＥＧＦ
が腫瘍血管新生において重要な役割を果たしていることを示している。腫瘍増殖
に対するＶＥＧＦレセプター、Ｆｌｋ−１／ＫＤＲおよびＦｌｔ−１の寄与もま
た精力的に研究されている。ＶＥＧＦ同様、それらのｍＲＮＡが神経膠腫（Ｐｌ
ａｔｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ．１９９２，６７，５２９−５３
４，Ｐｌａｔｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １９９４，５９，
５２０−５２９）、血管芽腫（Ｈａｔｖａ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ
ｏｌ．１９９６，１４６，３６８−３７８）、結腸癌（Ｔａｋａｈａｓｈｉ，ｅ
ｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９５，５５，３９６４−３９６８）お
よび腺癌（Ｂｒｏｗｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９３，５３
，４７２７−４７３５）のような腫瘍で検出されている。これらの場合、レセプ
ターは血管の内皮細胞上で検出されており、腫瘍細胞では検出されていない。こ
のことは、腫瘍細胞から分泌されたＶＥＧＦが内皮細胞の増殖を刺激するパラ分
泌機構を支持している。対照的に、カポジ肉腫（ＫＳ）細胞株および原発性組織
はＦｌｔ−１およびＫＤＲ、ならびにＶＥＧＦを発現する（Ｍａｓｏｏｄ，ｅｔ
ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９９７，９４，
９７９−９８４）。この発見は、ＫＳ細胞株の増殖がＶＥＧＦアンチセンスオリ
ゴヌクレオチドで阻害されることとあわせて、カポジ肉腫中に自己分泌ループが
存在し、細胞増殖および脈管構造の促進を導くことを示唆している。
【０３２０】 腫瘍増殖の調節剤として働くＦｌｋ−１の能力は、動物腫瘍モデルで研究され
ている。無胸腺マウスに腫瘍細胞および端が切り取られたｆｌｋ−１遺伝子をコ
ード化しているウイルスＤＮＡを産生するウイルス産生細胞が同時に移植された
（Ｍｉｌｌａｕｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ １９９４，３６７，５７６
−５７９；Ｍｉｌｌａｕｅｒ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９６，５６，１６１
５−１６２０）。同時移植は内皮細胞内への突然変異レセプターの導入を可能に
し、それは優性陰性様式で働いてＦｌｋ−１の活性化を阻止し、腫瘍の増殖に影
響する。この方法により、種々のヒト、ラットおよびマウス腫瘍細胞の皮下増殖
が阻害されていることが示された。加えて、微小血管密度は形成された小腫瘍中
で減少していることが示され、Ｆｌｋ−１、血管新生および腫瘍増殖間の関連を
確固たるものにしている。
【０３２１】 Ｆｌｋ−１／ＫＤＲは新規抗癌剤の開発のための優れた標的である。血管新生
は健康な成人にはほとんど起こらないと考えられるので（創傷傷害に続くまたは
子宮内膜および卵巣での周期的変化の間の血管新生を除いて）、Ｆｌｋ−１／Ｋ
ＤＲの特異的阻害剤は細胞毒性化学療法剤よりも副作用が少ないと期待されるで
あろう。ＶＥＧＦ（Ｋｉｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ １９９３，３６２，
８４１−８４４）およびＦｌｋ−１（Ｒｏｃｋｗｅｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏ
ｃ．Ａｍ．Ａｓｓｃ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９７，３８，２６６）に特異
的なモノクローナル抗体は、レセプターへのＶＥＧＦの結合を破壊することによ
り、動物において腫瘍増殖を阻害することが示されている。また、Fｌｋ−１チ ロシンキナーゼ活性の合成小分子阻害剤がいくつかのインビトロおよびインビボ
系でＶＥＧＦの影響を阻止することが示されている（Ｓｔｒａｗｎ，ｅｔ ａｌ
．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９６，５６，３５４０−３５４５）。
【０３２２】 酸性および塩基性線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ１／ａＦＧＦおよびＦＧＦ２／
ｂＦＧＦ）およびそれらのレセプター、ＦＧＦＲ−１およびＦＧＦＲ−２は種々
の腫瘍型で同定されている。ヒト腎細胞癌腫細胞株はＦＧＦ２／ｂＦＧＦを分泌
することが示されており（Ｓｉｎｇｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ
Ｄｉｆｆ．１９９６，７，３９７−４０４）、二つのヒト前立腺腫瘍細胞株は
ＦＧＦ２／ｂＦＧＦを作り出しおよびそれに応答することが観察されている（Ｎ
ａｋａｍｏｔｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９２，５２，５７
１−５７７）。種々の程度の神経膠星状細胞腫からのｍＲＮＡ分析は、異なった
ＦＧＦレセプターの発現が、より高い程度の悪性度へ進行するにつれ変化するこ
とを明らかにした（Ｙａｍａｇｕｃｈｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９９４，９１，４８４−４８８）。黒色腫患者か
らの手術的に切り出された皮膚では、侵襲している黒色腫細胞および間質が高い
ＦＧＦＲ−１発現を示すが、内皮細胞中には発現されないことが観察された（Ｋ
ａｉｐａｉｎｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９４，５４，６
５７１−６５７７）。ＦＧＦおよびそれらのレセプターの分布パターンは腫瘍増
殖にＦＧＦが関係があるとしている。
【０３２３】 ＦＧＦ２／ｂＦＧＦに特異的な中和抗体が癌におけるＦＧＦ２／ｂＦＧＦの役
割を調べるために使用されてきた。ｂＦＧＦに応答したＳＣ１１５マウス乳房癌
腫細胞のＦＧＦ誘導有糸分裂は抗ＦＧＦ抗体により阻害されていることが示され
ている（Ｌｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９８９，４９，４９６
３−４９６７）。同様に、抗ＦＧＦ２／ｂＦＧＦモノクローナル抗体は、培養に
おける、およびヌードマウスでの異種移植片としてのＵ８７ＭＧおよびＴ９８Ｇ
ヒトグリア芽腫細胞の増殖を阻止した（Ｔａｋａｈａｓｈｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｆ
ＥＢＳ Ｌｅｔｔ．１９９１，２８８，６５−７１）。
【０３２４】 血管新生に支援的役割を果たしている他の増殖因子およびそれらのレセプター
も多分腫瘍増殖に関与しているであろう。ＰＤＧＦレセプターもまた種々の腫瘍
および腫瘍細胞株で同定されており、細胞の形質転換に寄与している。ＦＧＦレ
セプターのように、それらは血管新生および腫瘍細胞の増殖および生存を促進す
ることにより腫瘍の増殖に寄与しているのであろう。
【０３２５】 ＰＤＧＦおよびＰＤＧＦレセプターファミリーは血管新生研究に、特に血管周
囲細胞のＰＤＧＦ−Ｂ鎖のための役割を示している最近のノックアウトマウスを
考慮すれば、重要な役割を果たすものと考えなければならない。ＰＤＧＦは間葉
細胞起源細胞の最も強力な有糸分裂促進剤である。腎臓糸球体脈管膜細胞はマウ
スにおける破壊されたＰＤＧＦ−ＢまたはＰＤＧＦ−βレセプター（Ｌｅｖｅｅ
ｎ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．１９９４，８，１８７５−１８
８７；Ｓｏｒｉａｎｏ，Ｐ．，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．１９９４，８，１８８８−
１８９６）遺伝子の標的であり、後期胚形成での致死的出血および浮腫の発生を
導くことが観察された。メサンギウム細胞は微小血管周囲細胞に関係しており、
破壊されたＰＤＧＦ−Ｂ遺伝子の別の標的である。多くの異なった組織で血管周
囲細胞は微小血管を取り囲んでいる。それらは収縮性細胞であり、従って、毛細
血管壁の機械的安定性に寄与しているであろう。血管周囲細胞はＰＤＧＦレセプ
ターを発現し、インビトロでＰＤＧＦに応答する。血管周囲細胞はまた内皮細胞
機能も制御する。それ故、ＰＤＧＦおよびそのレセプターは血管完全性を支援す
るように働いているのであろう。 リウマチ様関節炎 リウマチ様関節炎（ＲＡ）は炎症性関節疾患であり、それはおよび好中球によ
る滑液の、およびＴリンパ球およびマクロファージによる滑膜の細胞浸潤、パン
ヌスの形成を生じる滑膜細胞の過増殖、および軟骨および骨の破壊により特徴付
けられる（Ｆｅｌｄｍａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
１９９６，１４，３９７−４４０；Ｐａｌｅｏｌｏｇ，Ｂｒ．Ｊ．Ｒｈｅｕｍａ
ｔｏｌ．１９９６， ３５，９１７−９２０）。血管新生はＲＡの病因論に重要
な役割を持っていると考えられており（Ｃｏｌｖｉｌｌｅ−Ｎａｓｈ ＆ Ｓｃ
ｏｔｔ，Ａｎｎａｌｓ．Ｒｈｅｕｍａｔｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ １９９２，５
１，９１９−９２５、およびそれに引用されている文献）；フマギリン類似体、
ＡＧＭ−１４７０による血管新生の阻害はＲＡの実験モデルにおいてＲＡを抑制
している（Ｐｅａｃｏｃｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９２，１
７５，１１３５−１１３８；Ｐｅａｃｏｃｋ， ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ．Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．１９９５，１６０，１７８−１８４）。
【０３２６】 多くの増殖因子およびサイトカインがＲＡで役割を果たしているとされており
（総説としてＦｅｌｄｍａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ
．１９９６，１４，３９７−４４０を参照されたい）、それらのいくつかは血管
新生因子とされている（総説としてＣｏｌｖｉｌｌｅ−Ｎａｓｈ ＆ Ｓｃｏｔ
ｔ，Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｉｃ Ｄｉｓ．１９９２，５１，９１９−９２５；
Ｓｈａｗｖｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃ．Ｔｏｄａｙ １９９７，
２，５０−６３を参照されたい）。ＲＡ滑液または組織中に発現されていると報
告されている推定血管新生因子にはＶＥＧＦ（Ｆａｖａ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅ
ｘｐ．Ｍｅｄ．１９９４，１８０，３４１−３４６；Ｋｏｃｈ，ｅｔ ａｌ．Ｊ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４，１５２，４１４９−４１５６；Ｎａｇａｓｈｉｍ
ａ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．１９９５，２２，１６２４−１６
３０；Ｂｅｎ−Ａｖ，ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．１９９５，３７２，
８３−８７）、ＦＧＦ２／ＦＧＦ２／ｂＦＧＦ（Ｃｏｚｚｏｌｉｎｏ，ｅｔ ａ
ｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９３，９１，２５０４−２５１２；Ｔ
ａｍｕｒａ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ １９９６，１３７，３７２
９−３７３７）、およびＦＧＦ１／ａＦＧＦ（Ｂｙｒｄ，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔ
ｈ．＆ Ｒｈｅｕｍａｔ．１９９６，３９，９１４−９２２）が含まれる。直接
的血管新生因子としての役割の最も強い証拠はＶＥＧＦに存在する。
【０３２７】 ＶＥＧＦ発現は、ＲＡ患者からの滑液および組織においては他の型の関節炎患
者からのものにおけるよりも著しく高かった（Ｆａｖａ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅ
ｘｐ．Ｍｅｄ．１９９４，１８０，３４１−３４６；Ｋｏｃｈ，ｅｔ ａｌ．Ｊ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４，１５２，４１４９−４１５６）。このＶＥＧＦの
起源は、滑膜内層細胞、亜滑膜マクロファージ、微小血管を取り巻いている線維
芽細胞、および血管平滑筋細胞における高められた発現であるようである（Ｆａ
ｖａ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ １９９４，１８０，３４１−３４６
；Ｋｏｃｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４，１５２，４１４９
−４１５６；Ｎａｇａｓｈｉｍａ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．１
９９５，２２，１６２４−１６３０）。他の因子によるＶＥＧＦの間接誘導もそ
の上に起こっているようである。
【０３２８】 リウマチ様疾患関節の滑膜内層細胞、内皮細胞および血管平滑筋細胞（Ｈｏｓ
ａｋａ，ｅｔ ａｌ．，Ｐａｔｈｏｂｉｏｌ．１９９５，６３，２４９−５６）
、ならびにリウマチ様疾患滑膜中の肥満細胞（Ｑｕ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．
Ｐａｔｈｏｌ．１９９５，ｌ４７，５６４−５７３）がＦＧＦ２／ｂＦＧＦを発
現していることが報告されているが、ＲＡ滑液では上昇していないようである（
Ｈｏｓａｋａ，１９９５、前記文献）。ＦＧＦ１／ａＦＧＦはＲＡ患者からの滑
膜組織で豊富に発現されており（Ｂｙｒｄ，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ
＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ １９９６，３９，９１４−９２２）、ＦＧＦ−Ｒ
、ＦＧＦ１およびＦＧＦ２（Ｏｒｎｉｔｚ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈ
ｅｍ．１９９６，２７１，１５２９２−１５２９７）の発現がＣＤ４+ Ｔ細胞 で促進されている（Ｂｙｒｄ，１９９６、前記文献）。 乾癬 乾癬は慢性皮膚障害であり、表皮の過増殖、炎症および血管新生により特徴付
けられる。血管新生は乾癬の病因論できわめて重要であるようであり、微小血管
の変化は乾癬病変の発生において最も早く検出可能な出来事の一つである（総説
としてＣｒｅａｍｅｒ ＆ Ｂａｒｋｅｒ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏ
ｌ．１９９５，２０，６−９を参照されたい）。いくつかの報告は血管新生因子
の起源として表皮を関係付けている（Ｎｉｓｈｉｏｋａ ＆ Ｒｙａｎ，Ｊ．Ｉ
ｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１９７２，５８，３３−４５；Ｗｏｌｆ ＆
Ｈａｒｒｉｓｏｎ，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１９７３，５９，４
０−４３；Ｂａｒｎｈｉｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ １
９８４，１１０，２７３−２８１；Ｍａｌｈｏｔｒａ，ｅｔ ａｌ．，Ｌａｂ．
Ｉｎｖｅｓｔ．１９８９，６１，１６２−１６５）。しかしながら、リンパ球、
マクロファージ、肥満細胞および好中球により分泌されるサイトカインもまた血
管新生に寄与できるので（Ｍａｊｅｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｄｅｒ
ｍａｔｏｌ．１９８５，１２１，１０１８−１０２１；Ｍａｊｅｗｓｋｉ，ｅｔ
ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１９８７，１２３，２２１−２２５；
Ｋｏｃｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９２，２５８，１７９８−１８
０１；Ｑｕ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１９９５，１４７，５６
４−５７３）、この疾患の炎症性成分が、疾患に関与する血管因子の吟味を複雑
にしていると長く認識されている（Ｗｏｌｆ，Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９８９
，６１，１３９−１４２）。
【０３２９】 皮膚で同定されている多くの血管新生因子（Ａｒｂｉｓｅｒ，Ａｍ．Ａｃａｄ
．Ｄｅｒｍ．１９９６，３４，４８６−４９７）のうち、ＶＥＧＦは血管新生の
直接的誘導剤として最もよく特徴付けがなされている。ＶＥＧＦは乾癬性皮膚の
表皮細胞で過剰発現されているが、正常皮膚では最少でしか発現されていない（
Ｄｅｔｍａｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９４，１８０，１１４
１−１１４６）。ＶＥＧＦはまた、水疱性類天疱瘡、疱疹状皮膚炎および多形性
紅斑のような他の皮膚疾患（Ｂｒｏｗｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒ
ｍａｔｏｌ．１９９５，１０４，７４４−７４９）において、遅延皮膚超過敏反
応（Ｂｒｏｗｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５，１５４，２８
０１−２８０７）において、および紫外光への暴露後の培養表皮細胞におけるＶ
ＥＧＦ発現の誘導により示唆されているごとく（Ｂｒａｕｃｈｌｅ，ｅｔ ａｌ
．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９６，２７１，２１７９３−２１７９７）、
多分太陽光暴露後にも過剰発現される。
【０３３０】 ＦＧＦ２／ｂＦＧＦは表皮細胞および内皮細胞で発現されており、自己分泌お
よびパラ分泌機構の両方を通して増殖を刺激する（Ｓｃｈｗｅｉｇｅｒｅｒ，ｅ
ｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ １９８７，３２５，２５７−２５９；Ｏ’Ｋｅｅｆ
ｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１９８８，９０，７
６７−７６９）。肥満細胞もまた、慢性炎症性疾患におけるＦＧＦ２／ｂＦＧＦ
源であると報告されており（Ｑｕ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１
９９５，１４７，５６４−５７３）、炎症および血管新生間の連結に寄与してい
るのであろう。 眼性疾患 虚血網膜からの血管新生因子の放出が網膜血管新生の中心的刺激であると仮定
されてきた。眼球内血管新生に副次的な緑内障、硝子体出血および網膜剥離によ
り、未熟児網膜症、年齢相関黄斑変性および糖尿病性網膜症のようないくつかの
眼性疾患で視力の喪失が生じると説明されている。新しい血管成長を誘導するお
よびその領域への酸素の供給を増加させるための虚血網膜からの血管新生因子の
放出は有害であることがわかっており、新しい血管は正常な構造では成長しない
。浮腫、出血、血管蛇行および病的血管新生に続いて網膜剥離が起こり、失明を
導く。
【０３３１】 ＩＧＦ−１、ＦＧＦおよびＶＥＧＦのようないくつかの血管新生因子は網膜障
害を持つ患者の硝子体および新生血管膜での発現が上昇していた（Ｇｒａｎｔ，
ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ １９８６，３５，４１６−２０；Ｓｉｖａｌ
ｉｎｇａｒｎ，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．１９９０，１
０８，８６９−７２；Ａｉｅｌｌｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍ
ｅｄ．１９９４，３３１，１４８０−１４８７；Ｍａｌｅｃａｚｅ，ｅｔ ａｌ
．，Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．１９９４，１１２，１４７６−８２；Ａ
ｄａｍｉｓ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ １９
９４，１１８，４４５−５０）。従って、これらの増殖因子は、網膜障害におい
て眼球内血管新生を調節または開始する血管新生因子の候補である。
【０３３２】 ＶＥＧＦは正常な眼の血管化組織で連続的に発現されている（Ａｄａｍｉｓ，
ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．１９９６，１１４，６６−７
１）。眼球内ＶＥＧＦ遺伝子発現は糖尿病性網膜症のような疾患状態で増加して
いる（Ａｄａｍｉｓ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇ
ｙ １９９４，１１８，４４５−４５０；Ｍａｌｅｃａｚｅ，ｅｔ ａｌ．，Ａ
ｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ １９９４，１１２，１４７６−１４８２
；Ａｉｅｌｌｏ，１９９４，前記文献；Ｐｅ’ｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｌａｂ Ｉ
ｎｖｅｓｔ．１９９５，７２，６３８−６４５）。ＶＥＧＦに特異的な中和抗体
および可溶性ＶＥＧＦ−レセプター キメラタンパク質を用いて、ＶＥＧＦが十
分血管新生を誘導することが示されている（Ａｉｅｌｌｏ，１９９４，前記文献
；Ａｄａｍｉｓ，１９９４，前記文献；Ｔｏｌｅｎｔｉｎｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｏ
ｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ １９９６，１０３，１８２０−１８２８；Ｔｏｌｅ
ｎｔｉｎｏ，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．１９９６，１１
４，９６４−９７０）。動物モデルにおいて、正常な眼内へのＶＥＧＦの眼内注
射は網膜浮腫、微細動脈瘤、出血および網膜内血管新生を起こしている（Ｐｉｅ
ｒｃｅ，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．１９９５，１１４，
９６４−９７０；Ｍｉｌｌｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１９
９４，１４５，５７４−５８４；Ｔｏｌｅｎｔｉｎｏ，１９９６，前記文献）。
ＶＥＧＦレベルの減少は増殖性網膜症の退行と平行していた。糖尿病における低
酸素状態のような酸素の剥奪に関連する刺激（Ｐｉｅｒｃｅ，１９９５，前記文
献；Ｍｉｌｌｅｒ，１９９４，前記文献；Ｓｈｗｅｉｋｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａ
ｔｕｒｅ １９９２，３５９，８４３−８４５；Ｐｌａｔｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｌ
ａｂ Ｉｎｖｅｓｔ．１９９２，６７，５２９−３４）、酸素中間体の発生（Ｋ
ｕｒｏｋｉ，ｅｔ ａｌ．，血管新生新規治療法開発コンフェランス、１９９６
，未発表速報）および進行した糖化最終生成物の蓄積（Ａｄａｍｉｓ，血管新生
新規治療法開発コンフェランス、１９９７）はインビボでの内因性ＶＥＧＦ発現
を増加させた。アンチセンスＶＥＧＦ試薬（Ｓｍｉｔｈ，血管新生眼性疾患のた
めの血管新生阻害剤およびその他の新規治療法に関するＩＢＣコンフェランス、
１９９６）および可溶性ＶＥＧＦレセプターキメラタンパク質（Ａｉｅｌｌｏ，
ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９９５，９
２，１０４５７−１０４６１）を含むＶＥＧＦシグナリングの阻害剤、ＶＥＧＦ
レセプターサブタイプｍＲＮＡを標的とするリボザイム（Ｃｕｓｈｍａｎ，ｅｔ ａｌ．，血管新生眼性疾患のための血管新生阻害剤およびその他の新規治療法
に関するＩＢＣコンフェランス抄録、１９９６；Ｐａｖｃｏ，血管新生眼性疾患
のための血管新生阻害剤およびその他の新規治療法に関するＩＢＣコンフェラン
ス、１９９７）、および選択的ＰＫＣ阻害剤（Ａｉｅｌｌｏ，１９９５，前記文
献）は角膜および網膜血管新生、インビトロにおけるＶＥＧＦ刺激細胞増殖およ
びインビボにおけるＶＥＧＦ誘導網膜透過性の著しい阻害を生じさせた。これら
のデータのすべてが眼球血管新生におけるＶＥＧＦの直接的な役割を強く支持し
ている。
【０３３３】 ＦＧＦ２／ｂＦＧＦは糖尿病性網膜炎に一つの役割を果たしているようである
（Ｓｉｖａｌｉｎｇａｍ，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ １
９９０，１０８，８６９−８７２；Ｈａｎｎｅｋｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ
．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ １９９１，１０９，１００５−１０１１）。網膜障害
の硝子体切除試料に存在しているのに加え（Ｓｉｖａｌｉｎｇａｍ，１９９０、
前記文献）、ＦＧＦ２／ｂＦＧＦは内皮細胞の増殖（Ｇｏｓｐｏｄａｒｏｗｉｔ
ｚ，Ｐｒｏｇ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓ．１９７６，９，１−１９；Ｄ’Ａ
ｒｒｎｏｒｅ ＆ Ｋｌａｇｓｂｒｕｎ，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１９７６，
９９，１５４５−９）、移動（Ｈｅｒｍａｎ ＆ Ｄ’Ａｒｍｏｒｅ，Ｊ．Ｍｕ
ｓｃｌｅ Ｒｅｓ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｔｉｌ １９８４，５，６９７−７０９）お
よびコラーゲナーゼおよびプラスミノーゲン活性化因子の放出（Ｐｒｅｓｔａ，
ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１９８６，６，４０６０−６）を
誘導する。インビボにおいて、ＦＧＦ２／ｂＦＧＦは角膜血管新生（Ｇｏｓｐｏ
ｄａｒｏｗｉｔｚ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．１９７９，２８，
５０１−１４；Ｒｉｓａｕ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ
１９８６，８３，３８５５−３８５９）、ならびに、硝子体腔内へ注射された場
合にＩＧＦ−１と比較して線維性成分が豊富な網膜維管増殖（Ｇｒａｎｔ，ｅｔ
ａｌ．，Ｒｅｇ．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ １９９３，４８，２６７−２７８）を誘
導する。網膜毛細管基底膜肥厚の発生、および続いての網膜牽引および剥離は糖
尿病を持つヒトおよび動物で同様に起こっている。 動脈肥厚および再狭窄 アテローム性動脈硬化症過程の一部としてまたは冠動脈閉鎖を処置するための
バルーン媒介損傷としての動脈損傷は動脈壁の肥厚を伴うことが知られている。
この応答はまた、器官拒否反応の場合にも観察され、慢性血管損傷が器官移植部
位の動脈肥厚に関係している。ＲＴＫが損傷応答に関連する疾患過程で重要な役
割を果たしているとされている。アテローム性動脈硬化症の場合（本明細書）、
ＰＤＧＦおよびＦＧＦの両方が動脈平滑筋細胞の過増殖に関係している。これら
の細胞層が虚血になった場合、それらは過増殖を維持するために新しい血管形成
を必要とする。平滑筋細胞移動の場合、分裂促進因子活性化プロテインキナーゼ
の活性化がＰＤＧＦ依存性細胞移動に関係していることが示されている（Ｇｒａ
ｆ，ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ １９９７，２９，３３４−３３
９）。
【０３３４】 ＰＤＧＦのそのレセプターへの結合を阻止する合成化合物は平滑筋細胞の化学
走性を阻害し、ラットにおいて頸動脈のバルーン損傷に続く再狭窄病変での新内
膜形成を阻害する（Ｍｕｌｌｉｎｓ，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ
Ｔｈｒｏｍｂ １９９４，１４，１０４７−１０５５）。加えて、ＰＤＧＦ
ｍＲＮＡレベルがヒト心臓同種移植片で増加していることが示されている（Ｚｈ
ａｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９４，９４，９９２−
１００３）。動物モデルにおいて、ＰＤＧＦおよびＦＧＦは心臓（Ｚｈａｏ，１
９９４，前記文献；Ｚｈａｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １９９
４，９０，６７７−６８５）および腎臓（Ａｌｐｅｒｓ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．
Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１９９６，１４８，４３９−４５１；Ａｂｂｏｕｄ，Ａｎｎ
ｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１９９５，５７，２９７−３０９）移植後の損傷
応答で発現していることが示されている。 アテローム性動脈硬化症 アテローム性動脈硬化症は動脈病変の形成または内皮被覆線維−脂質性プラー
クから成るアテロームに関連する疾患である。内皮層の下に平滑筋細胞および可
変的な量の血清タンパク質を含んでいる細胞外マトリックス成分が存在する。こ
れは脂質を多く含んだマクロファージの堆積により特徴づけられる領域の上に横
たわっている。著しい数のリンパ球（特にＴ細胞）もまた存在し、リンパ球仲介
血管新生に寄与しているであろう（Ｋａｍｉｎｓｋｉ，Ｍ．＆ Ａｕｅｒｂａｃ
ｈ，Ｒ．，Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．１９８８，１８８．
４４０−４４３）。マクロファージおよびリンパ球の両方がアテローム病変へ入
るために内皮細胞を横切る。病変は、内皮細胞へ入るまたは内皮細胞から出る血
小板を含む血液細胞の流れにより特徴付けられる。再狭窄病変と同様に、平滑筋
細胞の積み重ねは血管新生により支えられており、低酸素状態になった場合の平
滑筋細胞から放出される因子により刺激されるようである。アテロームと対照的
に、動脈および静脈の血栓はフィブリンメッシュを含む構造により特徴付けられ
、そこでは血球細胞が捕捉されている。
【０３３５】 病変中における血小板およびその他の細胞の存在は、この疾患に働く関係する
増殖因子およびそれらの対応するレセプターチロシンキナーゼの研究を導いた（
Ｃｈａｂｒｉｅｒ，Ｉｎｔ．Ａｎｇｉｏｌ．１９９６，１５，１００−１０３）
。この点に関して最も主となるものはＰＤＧＦである。ＰＤＧＦはラット（Ｗａ
ｌｔｅｎｂｅｇｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ
．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ １９９６，１６，１５１６−１５２３）、ウサギ（Ａｇ
ａｐｉｔｏｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ａｎｇｉｏｌ．１９９６，１５，２４９
−２５１）およびヒト（Ｂｉｌｌｅｔｔ，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌ
ｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．１９９６，１６，３９９−４０６；
Ｉｔｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌ．Ｒｅｓ．１９９５，１７，３４５−３４
８）起源のアテローム性動脈硬化病変で検出されている。血小板およびその他の
リンパ球からのＰＤＧＦの放出は、病変付近の血液細胞および平滑筋細胞へのパ
ラ分泌効果の多面発現を惹起すると考えられている。細胞におけるＰＤＧＦレセ
プター機能の化学誘因、細胞生存、移動および分裂促進特性は、異なった細胞型
に対する異なった活性へ直接的または間接的に寄与するであろう。
【０３３６】 ＰＤＧＦ ＲＮＡ発現は、高コレステロール症患者における循環単核細胞の存
在に関係していることが示されている（Ｂｉｌｌｅｔｔ，１９９６，前記文献）
。アテローム性動脈硬化病変における単核および他の血液細胞の存在はまたＶＥ
ＧＦおよびＦＧＦ増殖因子の発現を作り出すことが示されている。平滑筋細胞に
おいて、ＰＤＧＦは血管新生過程に直接的または間接的に影響するであろう多く
の効果を働かせることが示されている（Ｎｅｗｂｙ，Ａ．Ｃ．＆ Ｇｅｏｒｇｅ
，Ｓ．Ｊ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃａｒｄｉｏｌ．１９９６，１１，５７４−
５８２）。例えば、ＰＤＧＦシグナリングは平滑筋細胞においてＶＥＧＦの発現
を上方制御することが示唆されている（Ｓｔａｖｒｉ，ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ
Ｌｅｔｔ．１９９５，３５８，３１１−３１５）。加えて、ＰＤＧＦはアテロ
ーム性動脈硬化プラークの形成に関する血管内膜増殖で働いていることは明白で
ある。平滑筋細胞におけるＰＤＧＦ機能の増殖性（Ｒａｎｄｏｎｅ，ｅｔ ａｌ
．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｖａｓｃ．Ｅｎｄｏｖａｓｃ．Ｓｕｒｇ．１９９７，１３，６
６−７１）、移動性（Ｇｒａｆ，１９９７，前記文献；Ａｂｅｄｉ，Ｈ．＆ Ｚ
ａｃｈａｒｙ，Ｉ．，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．１９９５，３０，５４４
−５６；Ｋｏｓｔｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｉｏｌｏｇｙ １９９５，４６，
９９−１０６）および細胞生存（Ｂｅｎｎｅｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．
Ｉｎｖｅｓｔ．１９９５，９５，２２６６−２２７４）特性はアテローム性動脈
硬化病変形成の主たる決定要素であろう。
【０３３７】 加えて、ＰＤＧＦ（Ｗａｌｔｅｎｂｅｒｇｅｒ，１９９６，前記文献；Ｓｔａ
ｖｒｉ，１９９５，前記文献；Ｍｉｃｈｉｅｌｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｃｅ
ｌｌ．Ｒｅｓ．１９９４，２１３，４３−５４）、ＶＥＧＦ（Ｓｔａｖｒｉ，１
９９５，前記文献；Ｋｎｉｇｈｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８
３，２２１，１２８３−１２８５；Ｌｉ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉ
ｏｌ．１９９６，２７０，１８０３−１８１１）およびＦＧＦ（Ｍｉｃｈｉｅｌ
ｓ，１９９４，前記文献）の促進された発現が低酸素状態下の平滑筋細胞で起こ
っていることが示されている。内皮細胞増殖および血管新生は低酸素圧力条件下
で引き金が引かれることはよく確立されている。これらの因子の誘導能力は、こ
れらの因子およびこの過程への関与因子としてのＦｌｋ−１／ＫＤＲ、Ｆｌｋ−
１、ＰＤＧＦレセプターの従来の関係と一致している。線維性血栓の場合、フィ
ブリンゲルそれ自身が一時的マトリックスとみなされ、創傷治癒と同様にその中
へ血管化結合組織が侵襲する。ＦＧＦはこの病変の過増殖性および血管新生特性
で重要な働きを行っていると考えられている。ＦＧＦＩ／ａＦＧＦおよびＦＧＦ
２／ｂＦＧＦまたはレセプター発現がラット大動脈平滑筋細胞（ｖａｎ Ｎｅｃ
ｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．１９９５，１
２６１，２１０−２１４）、ヒト心臓同種移植片（Ｚｈａｏ，１９９４，前記文
献； Ｚｈａｏ，１９９４，前記文献）、ＣＤ４+ Ｔ細胞（Ｚｈａｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５，１５５，３９０４−３９１１）および
アテローム性動脈硬化症ヒト動脈（Ｈｕｇｈｅｓ，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅ
ｓ．１９９６，３２，５５７−５６９）で増加していることが示されている。
【０３３８】 ＰＤＧＦ、ＶＥＧＦおよびＦＧＦはアテロームおよび線維性病変の形成に一つ
の役割を果たしているので、ＲＴＫ仲介シグナリング過程は病変の発生および維
持に重要であろう。これらのシグナリング系の妨害は形成を阻害し、または病変
のリモデリングまたは完全性を破壊する。線維性血栓においては、これらのレセ
プターの標的化が、フィブリン沈着および血栓の発生に関係する結合組織の数を
減少させるのに都合がよいであろう。 組織虚血 新しい血管の形成はレセプターチロシンキナーゼおよびその対応するリガンド
により厳密に制御されている。このことはＶＥＧＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦレセ
プター系で具体化されており、これらのレセプターは内皮細胞、血管周囲細胞お
よび動脈平滑筋細胞の増殖および生存を成し遂げている。組織虚血の場合、新し
い血管の成長は、酸素および栄養制限が疾患病因論に関係している特定のヒト疾
患の処置に有利であろう。ＰＤＧＦ（Ａｌｐｅｒｓ，１９９６，前記文献；Ｗａ
ｌｔｅｎｂｅｇｅｒ，１９９６，前記文献；Ｍｉｃｈｉｅｌｓ，１９９４，前記
文献）、ＶＥＧＦ（Ｓｔａｖｒｉ，１９９５，前記文献；Ｋｎｉｇｈｔｏｎ，１
９８３，前記文献；Ｌｉ，１９９６，前記文献）およびＦＧＦ（Ｍｉｃｈｉｅｌ
ｓ，１９９４，前記文献）は低酸素条件下で細胞に発現されることが示されてい
るので、新しい血管の誘導を導く増殖因子治療が心筋虚血を克服するための機構
として示唆されている（Ｗａｒｅ ＆ Ｓｉｍｏｎｓ，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ
１９９７，３，１５８−１６４）。この理論的根拠は、病的心臓への本処置が、
心筋酸素の回復または血流の回復により徴候を除去し、それにより疾患進行を防
止し、または血管形成術または心臓バイパス手術を用いる処置を改善することを
示唆している。
【０３３９】 動物実験はこれらの因子に基づいた処置の理論的根拠を支持している。イヌ（
Ｙａｎｉｇｉｓａｗａ−Ｍｉｗａ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９２，
２５７，１４０１−１４０３）およびブタ（Ｂａｔｔｌｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ
．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏ．１９９５，２２，２００１−２００６；Ｐａ
ｄｕａ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９５，１４３
，１２９−１３５）の急性虚血モデルは、ＦＧＦの冠動脈注射が有益であること
を示唆している。慢性冠動脈閉塞を持つイヌへのＦＧＦ２／ｂＦＧＦの長期投与
は、機能のすばやい改善および血管数の増加を示した（Ｇｉｏｒｄａｎｏ，ｅｔ
ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．１９９６，２，５３４−５３９；Ｌａｚａｒ
ｏｕｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １９９５，９１，１４５−１
５３）。さらに、ＶＥＧＦの長期冠動脈内注入は病的心臓の冠動脈流の相当な改
善を生じた（Ｐｅａｒｌｍａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ １９９
５，１，１０８５−１０８９；Ｈａｒａｄａ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙ
ｓｉｏｌ．１９９６，２７０，１７９２−１８０２）。末梢虚血では、ＦＧＦ２
／ｂＦＧＦ（Ｂａｆｆｏｕｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖａｓｃ．Ｓｕｒｇ．１９９
２，１６，１８１−１９１）およびＶＥＧＦ（Ｔａｋｅｓｈｉｔａ，ｅｔ ａｌ
．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ １９９４，９３，６６２−６７０）の注射に
より副行循環が改善されたことが示されている。より最近、ＶＥＧＦ遺伝子療法
が改善された血管機能を測定するために開始された（Ｉｓｎｅｒ，Ｌａｎｃｅｔ
１９９６，３４８，３７０−３７４）。 子宮内膜症 子宮内膜症もまた、子宮外側の子宮内膜細胞の確立および増殖を許すために血
管新生および新生血管形成を必要とする。子宮内膜症は女性不妊の最も大きな原
因であり、米国で約６００万人の女性が影響を受けている。本疾患は最も普通に
は腹腔での子宮内膜の増殖により特徴付けられ、そらは各々の卵巣周期で増殖、
侵襲、分泌、剥離および蓄積する。腹部疼痛、線維化、まれな腹水形成、および
腹部内構造の接着を生じる。
【０３４０】 子宮内膜症は血管新生因子レベルの上昇、特に上昇したＶＥＧＦレベルに関係
している（Ｌ．Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１９９７
，７６，２４５−２５５；Ｊ．Ｓｈｉｆｒｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．
Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．，１９９６，８１，３１１２−３１１８；
Ｊ．ＭｃＬａｒｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｒｅｐｒｏｄ．，１９９６，１１
，２２０−２２３）。月経周期の間、Ｆｌｋの発現は一定であるが、レセプター
を含んでいるキナーゼ挿入ドメイン（Ｆｌｋ−１／ＫＤＲ）は黄体期に増加し、
その時細胞がＶＥＧＦに応答して移動する。Ｆｌｋ−１／ＫＤＲ発現および移動
応答は子宮内膜症の患者で著しく高い（Ｊ．ＭｃＬａｒｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ
．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９６，９８，４８２）。従って、本発明の方法
は子宮外の子宮内膜細胞の増殖を防止または阻害できるであろう。
【０３４１】 従って、上記の節で示したように、本発明の化合物はいくつかの種類の疾患処
置に使用することができ、それらには扁平上皮癌、神経膠星状細胞腫、神経芽腫
、肺癌、膀胱癌、頭部および頚部の癌、黒色腫、卵巣癌、前立腺癌、乳癌、胃腸
癌、結腸直腸癌、小細胞肺癌および神経膠腫のような癌、免疫学的障害、過増殖
障害、心臓血管障害、炎症性障害、再狭窄、線維症、乾癬、変形性関節症、リウ
マチ様関節炎、アテローム性動脈硬化症、糖尿病および血管新生が含まれるが、
それらに限定されるわけではない。 ＩＩ．医薬処方および投与経路 本明細書に記載した化合物はヒト患者へそれ自体で、または組み合わせ治療に
おける様に他の活性成分と混合されて、または適した担体または賦形剤と混合さ
れた医薬組成物として投与できる。本出願の化合物の処方および投与のための技
術は、”Ｒｅｍｉｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃ
ｅｓ”Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，最新版
にみることができるであろう。 ａ）投与経路 投与の適した経路には、例えば、経口、直腸、経皮または腸管投与；筋肉内、
皮下、静脈内、骨髄内注射、ならびに鞘内、直接的脳室内、腹腔内、鼻孔内また
は眼球内注射を含む非経口送達が含まれるであろう。
【０３４２】 もしくは、例えば、しばしば貯蔵または徐放性処方で固形腫瘍内への直接的化
合物の注射によるように、全身的様式よりもむしろ局所的に化合物は投与される
であろう。
【０３４３】 さらに、例えば、腫瘍特異的抗体で被覆されたリポソームのように、標的化薬
剤送達系で薬剤が投与されるであろう。リポソームは標的化され、腫瘍により選
択的に取り込まれるであろう。 ｂ）組成物／処方 本発明の医薬組成物は、例えば、通常の混合、溶解、顆粒化、糖衣丸作製、研
和、乳化、カプセル化、エントラッピングまたは凍結乾燥法などの手段によりそ
れ自体がよく知られた方法で作製される。
【０３４４】 本発明に従った使用のための医薬組成物は、薬学的に使用できる、活性化合物
の製剤への加工を容易にする賦形剤および補助剤を含んだ一つまたはそれ以上の
生理学的に受容可能な担体を用いて通常の方法で処方される。適した処方は選択
された投与経路に依存する。
【０３４５】 注射のためには、本発明の薬剤は水溶液、好適にはリンガー液または生理学的
塩緩衝液のような生理学的に一致する緩衝液に処方される。経粘膜投与には、透
過されるべき障壁に適した浸透剤が処方に使用される。そのような浸透剤は本分
野では一般的に既知である。
【０３４６】 経口投与のためには、化合物は本分野ではよく知られている医薬として受容可
能な担体と活性化合物を混合することにより容易に処方できる。そのような担体
は本発明の化合物を、処置されるべき患者による経口摂取のための錠剤、ピル剤
、糖衣錠剤、カプセル剤、水剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁剤など
として処方することを可能にする。経口使用のための医薬製剤は固形賦形剤を、
任意に生じる混合物を細かく砕き、および顆粒の混合物を加工し、必要に応じて
適した補助剤を加えた後、錠剤または糖衣丸コアを得ることで得られる。適した
賦形剤は、特に、ラクトース、スクロース、マンニトールまたはソルビトールを
含む糖のような充填剤；例えば、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デン
プン：ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、
ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、カルボキシメチルセルロース ナトリ
ウムおよび／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）のようなセルロース製品で
ある。望むなら、架橋ポリビニルピロリドン、寒天またはアルギン酸（またはア
ルギン酸ナトリウムのようなその塩）のような崩壊剤を加えてもよい。
【０３４７】 糖衣丸コアは適したコーティングをして提供される。この目的のためには、任
意にアラビアゴム、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレング
リコールおよび／または二酸化チタン、ラッカー溶液および適した有機溶剤また
は溶剤混合物を含む濃縮糖溶液が使用される。同定のためまたは活性化合物用量
の異なった組み合わせを特徴付けるために錠剤または糖衣剤コーティングに染料
または色素を加えてもよい。
【０３４８】 経口で使用できる医薬製剤にはゼラチンで作られたプッシュ−フィットカプセ
ル、ならびにゼラチンおよびグリセロールまたはソルビトールのような可塑剤で
作られた軟、封カプセルが含まれる。プッシュ−フィットカプセルは、ラクトー
スのような充填剤、デンプンのような結合剤、および／またはタルクまたはステ
アリン酸マグネシウムのような潤滑剤および任意に安定剤と混合された活性成分
を含むことができる。軟カプセル中では、活性化合物は脂肪油、液体パラフィン
または液体ポリエチレングリコールのような適した液体に溶解または懸濁されて
いる。加えて、安定剤を加えてもよい。経口投与のためのすべての処方は、その
ような投与に適した用量でなければならない。
【０３４９】 バッカル剤投与では、組成物は常法で処方された錠剤またはロレンジ剤の形を
取っているであろう。 吸入による投与では、本発明に従った使用のための化合物は適した噴射剤（例
えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラ
フルオロエタン、二酸化炭素または他の適した気体）を使用する加圧パックまた
は噴霧器からのエアロゾルスプレー体裁の形で都合よく送達される。加圧エアロ
ゾルの場合、投与量は決められた量を出すバルブを提供することにより決定され
る。吸入器または注入器で使用するための例えば、ゼラチンの使用では、化合物
の粉末混合物およびラクトースまたはデンプンのような適した粉末基剤を含むよ
うに処方される。
【０３５０】 化合物は、注射による（例えば、大量注射または連続的注入）非経口投与のた
めにも処方される。注射のための処方は、保存剤が加えられ、単一用量剤形（例
えば、アンプルまたは多数回用量容器）で存在するであろう。組成物は懸濁液、
溶液または油性または水性賦形剤での乳液の形をとっており、懸濁化剤、安定化
剤および／または分散剤のような処方用薬剤を含んでいるであろう。
【０３５１】 非経口投与のための医薬処方には水溶性形での活性化合物の水溶液が含まれる
。さらに、活性化合物の懸濁液が適した油性注射懸濁液として処方される。適し
た親油性溶剤または賦形剤にはゴマ油またはオレイン酸エチルまたはトリグリセ
リドような合成脂肪酸エステルまたはリポソームのような脂肪油が含まれる。水
性注射懸濁液はカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールまたはデ
キストランのような懸濁液の粘度を増加させる物質を含んでいてもよい。任意に
、懸濁液は適した安定化剤または高濃度溶液の処方を可能にするために化合物の
溶解度を高める薬剤を含んでいてもよい。
【０３５２】 もしくは、適した賦形剤（例えば、滅菌され、発熱物質を含まない水）と組み
合わせるため、活性成分は使用前には粉末の形であってもよい。 化合物はまた、座剤または保持浣腸のような直腸組成物（例えば、ココアバタ
ーまたはその他のグリセリドのような通常の座剤基剤を含んでいる）に処方され
てもよい。
【０３５３】 上に説明した処方に加え、化合物はデポー剤として処方されてもよい。そのよ
うな長時間作用処方は移植（例えば、皮下または筋肉内）により、または筋肉内
注射により投与されるであろう。従って、例えば、化合物は適したポリマー性ま
たは疎水性物質（例えば、受容可能な油中の乳剤として）またはイオン交換樹脂
と、あるいはわずかに溶ける誘導体（例えば、わずかに溶ける塩として）として
処方されるであろう。
【０３５４】 本発明の疎水性化合物のための医薬担体は、ベンジルアルコール、非極性界面
活性剤、水混和性有機ポリマーおよび水相から成る共溶媒系である。共溶媒系は
ＶＰＤ共溶媒系であろう。ＶＰＤは３％ｗ／ｖベンジルアルコール、８％ｗ／ｖ
の非極性界面活性剤ポリソルベート８０、および６５％ｗ／ｖポリエチレングリ
コール３００の溶液である（無水エタノールで１００％に）。ＶＰＤ共溶媒系（
ＶＰＤ：Ｄ５Ｗ）は５％デキストロース水溶液で１：１に希釈されたＶＰＤから
成っている。この共溶媒系は疎水性化合物をよく溶解し、それ自身は全身投与で
低い毒性しか示さない。当然、共溶媒系の比率は、その溶解および毒性特性を変
えることなくかなり変化させることができる。さらに、共溶媒系成分の同一性も
変更してもよい：例えば、ポリソルベート８０の代わりに他の低毒性非極性界面
活性剤を使用してもよく；ポリエチレングリコールの分画比を変化させてもよく
；他の生物適合性ポリマーでポリエチレングリコールを置き換えてもよく、例え
ば、ポリビニルピロリドン；および他の糖またはポリサッカライドでデキストロ
ースを置換できる。
【０３５５】 もしくは、疎水性医薬化合物のための他の送達系を用いてもよい。リポソーム
および乳剤は疎水性薬剤のための送達賦形剤または担体のよく知られた例である
。ジメチルスルホキシドのようなある種の有機溶媒もまた用いてもよいが、通常
より高い毒性という代償を払わなければならない。さらに、治療薬を含んでいる
固形疎水性ポリマーの半透過性マトリックスのような徐放性系を使用して化合物
を送達してもよい。種々の徐放性マトリックスが確立されており、当業者にはよ
く知られている。徐放性カプセルはそれらの化学的性質に依存して、化合物を数
週間から１００日以上かけて放出する。治療薬の化学的性質および生物学的安定
性に依存して、タンパク質安定化のための追加の方法を用いてもよい。
【０３５６】 医薬組成物はまた、適した固体またはゲル相担体または賦形剤を含んでいても
よい。そのような担体または賦形剤の例としては炭酸カルシウム、リン酸カルシ
ウム、種々の糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチンおよびポリエチレング
リコールのようなポリマーが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【０３５７】 本発明の多くのＰＫ調節化合物は医薬適合性対イオンとの塩として提供される
。医薬適合性塩は塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸などを
含む多くの酸（これらの限定されるわけではない）と形成される。塩は対応する
遊離塩基形よりも水性またはプロトン供与性溶媒に溶解しやすい傾向がある。 ｃ）有効用量 本発明での使用に適した医薬組成物には、活性成分がその意図された目的を達
成するために有効な量で含有されている組成物が含まれる。特に、治療的に有効
な量とは、疾患徴候を防止、軽減または回復する、または処置されている患者の
生存を延長するために有効である化合物の量を意味している。治療的に有効な量
の決定は当業者の手腕にまかされているが、特に本明細書に提供されている詳細
な開示を考慮されたい。
【０３５８】 本発明の方法で使用された任意の化合物に対し、治療的有効量は最初に細胞培
養アッセイから見積もることができる。例えば、細胞培養で決定されたＩＣ50（
すなわち、ＰＫ活性の半最大阻害を達成する試験化合物の濃度）を含む循環濃度
範囲を達成するように投与量が動物モデルで処方できる。そのような情報はヒト
の有用量をより正確に決定するために使用できる。
【０３５９】 本明細書に説明された化合物の毒性および治療効能は標準薬理学的方法により
細胞培養または実験動物で決定できる、例えば、ＬＤ50（集団の５０％に致死的
である用量）およびＥＤ50（集団の５０％に治療的に有効である用量）を決定す
ることにより。毒性および治療効果の間の用量比は治療係数であり、ＬＤ50およ
びＥＤ50間の比として表現できる。高い治療係数を示す化合物が好ましい。これ
らの細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータはヒトで使用するため
の投与量範囲の処方に使用できる。そのような化合物の投与量は、好適には全く
またはほとんど毒性がなくＥＤ50を含む循環濃度範囲内に存在する。投与量は用
いられた剤形および利用された投与経路に依存してこの範囲内で変化するであろ
う。正確な処方、投与経路および投与量は患者の状態を考慮して個々の医者が選
択できる（例えば、Ｆｉｎｇｌ ｅｔ．ａｌ．，１９７５，”Ｔｈｅ Ｐｈａｒ
ｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ”，Ｃ
ｈ．１ ｐ．１を参照されたい）。
【０３６０】 投与量および間隔は、キナーゼ調節効果を維持するのに十分な活性部分の血漿
レベル、または最小有効濃度（ＭＥＣ）を提供するように個々に調整される。Ｍ
ＥＣは各々の化合物で変化するであろうが、インビトロデータから推定できる；
例えば、前記のアッセイを使用して５０−９０％の阻害を達成するのに必要な濃
度。ＭＥＣを達成するのに必要な投与量は、個々の特性および投与経路に依存す
るであろう。しかしながら、ＨＰＬＣアッセイまたは生物学的試験が血漿濃度を
決定するために使用できる。
【０３６１】 投与間隔はまた、ＭＥＣ値を用いても決定できる。化合物は時間の１０−９０
％、好適には３０−９０％、および最も好適には５０−９０％をＭＥＣより高い
血漿レベルを維持する投与計画を用いて投与されなければならない。
【０３６２】 局所投与または選択的取り込みの場合、薬剤の有効局所濃度は血漿濃度と相関
しないであろう。 投与された特定の化合物量は、もちろん処置されている患者、患者の体重、心
身苦悩の大きさ、投与様式および処方する医師の判断に依存するであろう。 ｄ）包装 必要に応じ組成物は、活性成分を含んでいる一つまたはそれ以上の単一剤形を
含むＦＤＡ認可キットのようなパックまたはディスペンサーに存在する。パック
は例えばブリスターパックのような金属またはプラスチックホイルから成ってい
る。パックまたはディスペンサーには投与のための使用説明書が付随しているで
あろう。パックまたはディスペンサーにはまた製造を統制している政府機関によ
り規定された形式の容器、医薬の使用または販売に関連した注意が付随しており
、この注意は組成物またはヒトまたは獣医学的投与の形式の機関による認可を反
映している。そのような注意は、例えば、挿入された処方薬または認可された製
品の米国食品医薬品局により認可されたラベルであろう。適合医薬担体に処方さ
れた本発明の化合物から成る組成物も製造され、適した容器に入れられ、および
示された状態の処置のためのラベルが付けられる。ラベル上の示された適した状
態には腫瘍の処置、血管新生の阻害、線維症の処置、糖尿病などが含まれるであ
ろう。 ＩＩＩ．性的活動度の促進 本発明はまた、本発明の化合物を哺乳動物に投与することにより哺乳動物の性
的機能を促進する方法にも関している。いくつかの態様において、本発明には哺
乳動物に対する化合物の効果のモニタリングが含まれている。本発明の化合物を
合成する方法、これらの化合物を哺乳類に投与する方法、これらの化合物を含ん
でいる医薬組成物を製造する方法、およびこれらの化合物のいくつかの生物学的
活性は、Ｓｈｅｎｏｙらによる”疎水性医薬品のための処方”と題した国際特許
出願第ＰＣＴ／ＵＳ９８／０４１３４号（Ｌｙｏｎ ＆ Ｌｙｏｎ書類番号第２
３１／２９９号）、およびＳｈｅｎｏｙらにより１９９７年３月１８日に出願さ
れ、”インドリノン化合物のための処方”と題した米国仮出願番号第６０／０４
１，２５１号（Ｌｙｏｎ ＆ Ｌｙｏｎ書類番号第２２４／２６６号）、これら
の両方とも図を含んで全文が本明細書において援用される、に詳細に説明されて
いる。
【０３６３】 実施例 以下の実施例は非限定的であり、単に本発明の種々の観点および特徴を代表す
るものである。実施例には本発明の化合物を合成する方法、およびプロテインキ
ナーゼの機能に対する化合物の効果を測定する方法を記載する。
【０３６４】 方法に使用する細胞は市販されている。細胞が擁する核酸ベクターも市販され
ており、種々のプロテインキナーゼの遺伝子配列は配列データバンクで容易に入
手できる。従って、当該分野で通常の技術を有する者は細胞系を適時に容易に再
現することができ、これは市販の細胞、市販の核酸ベクター、およびプロテイン
キナーゼ遺伝子を合一することによるもので、通常の当業者が容易に利用できる
技術を使用する。
【０３６５】 合成法 実施例１：本発明の３環系インドリノン化合物の合成法 本発明の３環系インドリノン化合物の一般的な合成プロトコール： 化合物の調製は、表８のアルデヒド／ケトン／ラクトン化合物のいずれか一つ
、および式VII、VIII、およびIXに示す３環系インドリン-２-オンのいずれか一 つをここに記載するように縮合して行う。
【０３６６】 アルデヒドが化合物調製の出発物質の一つの場合、方法１を使用する。ケトン
またはラクトンが出発物質の一つの場合、方法２を使用して最終産物を調製する
。方法１ 適切な３環系インドリン-２-オン（１．０当量）、好適なアルデヒド（１．２
当量）、およびピペリジン（０．１当量）をエタノール（１-２ｍＬ／１．０ｍ ｍｏｌオキシインドール）に混合した反応混液を９０℃で３-５時間攪拌する。 冷却後、沈殿を濾過し、冷エタノールで洗浄し、乾燥して標的化合物を得る。方法２ 適切な３環系インドリン-２-オン（３．０当量）、好適なケトンまたはラクト
ン（１．０当量）、およびピペリジン（３．０当量）をＤＭＦ（１-２ｍＬ／１ ．０ｍｍｏｌケトンまたはラクトン）に混合した反応混液を１３０℃で５時間攪
拌する。冷却後、反応混液を氷水に注入する。以下のwork-up手順は生成物の性 質によって使用しうる： （ａ）沈殿を濾過し、水で洗浄し、酢酸エチルおよびヘキサンの混合液で倍散し
（triturated）、オーブンで一晩乾燥する。 （ｂ）沈殿が微細で濾過できない場合、酢酸エチルで抽出する。有機相を食塩水
で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮する。その後、残渣を酢酸エチルおよ
びヘキサンの混合液で倍散し、オーブンで一晩乾燥する。３環系インドリン-２-オンの調製： 式VIIのオキシインドール： 完全な手順はJ. Chem. Soc. 1913, 103, 1973-1985に見られる。式VIIIのオキシインドールおよびIXのオキシインドール： これら２つの化合物は、既知の文献の手順（Synthesis, 1993, 51-53）によっ
て、市販の出発物質（式VIIIのオキシインドールの調製には１，２-ジクロロ-３
-ニトロ-ナフタレン、そして式IXのオキシインドールの合成には６-クロロ-７- ニトロ-キノキサリン）から容易に調製しうる。アルデヒドの調製： ほとんどのアルデヒド、全てのケトンおよびラクトンは市販されている。市販
されていないアルデヒドは通常のフィルスマイヤーのホルミル化によって調製し
うる（例えばOrg. Synth. Coll., Vol. IV, 1963, 831を参照されたい）。実施例２：本発明のピラゾリルアミド系化合物の合成法 以下の方法を本発明のピラゾリルアミド系化合物の合成のために提供する。こ
こにＡＰ-００１からＡＰ-０３３で示す本発明の化合物の名称は以下に記載する
。実験： 化合物ＡＰ-００１からＡＰ-０２９：一般的手順： １．２当量の１-ベンジル-３-tert-ブチルピラゾール-５-カルボニルクロライ
ド（参考文献：J. Gen. Chem. USSR, 英語訳, Vol. 30, 1960, p2901、またはMa
ybridge Chemical社（UK）から市販されている）を０．２Ｍのジクロロメタン溶
液に混合したもの（室温）に１当量のアミン、次いで２当量のジイソプロピルエ
チルアミンを添加する。反応液を室温で、または必要により５５℃に加熱して、
反応が完了するまで攪拌する。次いで反応混液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出
する。その後有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液および食塩水で洗浄し、硫酸
ナトリウムで乾燥し、濾過して濃縮する。その後、粗製の反応混合物をシリカゲ
ルカラムで精製するが、これにはヘキサン／酢酸エチルまたはジクロロメタン／
メタノールの混合溶媒を溶出液として使用する。化合物ＡＰ-００１： ３３１ｍｇの１-ベンジル-３-tert-ブチルピラゾール-５-カルボニルクロライ
ドを５ｍＬのジクロロメタンに混合したもの（室温）に１６１ｍｇの4-トリフル
オロメチルアニリン、次いで０．６ｍＬのジイソプロピルエチルアミンを添加し
た。次いで混合液を５５℃で２４時間加熱した。５０ｍＬの水で希釈した後、混
合液を２ｘ５０ｍＬの酢酸エチルで抽出した。合一した有機抽出液を２０ｍＬの
飽和炭酸水素ナトリウム溶液、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥して濾過
した。濾液を濃縮し、粗生成物をシリカゲルカラムでヘキサンおよび酢酸エチル
の１０：１混合溶媒を使用して精製し、２５０ｍｇの２-ベンジル-５-tert-ブチ
ル-２Ｈ-ピラゾール-３-カルボン酸（４-トリフルオロメチル-フェニル）-アミ ドのオフホワイト色の固体を得た。化合物ＡＰ-００２からＡＰ-０２９： これらの化合物は相当するアミンを使用して一般的手順に従って調製した。化合物ＡＰ-０３０： １ｇの１-（４-メチルベンジル）-３-メチルピラゾール-５-カルボン酸エチル
（Maybridge Chemical社（UK）から入手可）を５ｍＬずつのエタノールおよび２
Ｎ水酸化カリウム溶液に混合したものを９０℃で４時間加熱した。冷却した反応
混液を６Ｎ塩酸でｐＨ３まで酸性化した。得られた白色固体を濾過し、水および
冷エタノールで洗浄して８５０ｍｇの１-（４-メチルフェニル）-３-メチルピラ
ゾール-５-カルボン酸を得た。２２６ｍｇの１-（４-メチルフェニル）-３-メチ
ルピラゾール-５-カルボン酸を３ｍＬのジメチルホルムアミドに混合した溶液に
２５０ｍｇの１，３-ジシクロヘキシルカルボジイミド、次いで１６０ｍｇの１-
ヒドロキシベンゾトリアゾールを添加した。反応混液を室温で３０分間攪拌し、
１３０ｍｇの４-トリフルオロメチルアニリン（4-triflurormethylaniline）、 次いで０．６ｍＬのジイソプロピルエチルアミンを添加した。混合液を５０℃で
６時間加熱し、５０ｍＬの水で希釈して酢酸エチルで抽出した。有機抽出液を水
、飽和炭酸水素ナトリウム溶液、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥して濾
過した。シリカゲルカラムで粗生成物を精製し、１００ｍｇの５-メチル-２-（ ４-メチル-ベンジル）-２Ｈ-ピラゾール-３-カルボン酸（４-トリフルオロメチ ル-フェニル）-アミドのオフホワイト色の蝋様固体を得た。化合物ＡＰ-０３１： ２２６ｍｇの１-（４-メチルベンジル）-３-メチルピラゾール-５-カルボン酸
を３ｍＬのジメチルホルムアミドに混合した溶液に２５０ｍｇの１，３-ジシク ロヘキシルカルボジイミド、次いで１６０ｍｇの１-ヒドロキシベンゾトリアゾ ールを添加した。反応混液を室温で３０分間攪拌し、１３０ｍｇの３-トリフル オロメチルアニリン（３-triflurormethylaniline）、次いで０．６ｍＬのジイ ソプロピルエチルアミンを添加した。混合液を５０℃で６時間加熱し、５０ｍＬ
の水で希釈して酢酸エチルで抽出した。有機抽出液を水、飽和炭酸水素ナトリウ
ム溶液、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥して濾過した。シリカゲルカラ
ムで粗生成物を精製し、９５ｍｇの５-メチル-２-（４-メチル-ベンジル）-２Ｈ
-ピラゾール-３-カルボン酸（３-トリフルオロメチル-フェニル）-アミドのオフ
ホワイト色の蝋様固体を得た。化合物ＡＰ-０３２： １ｇの１-（４-クロロベンジル）-３-メチルピラゾール-５-カルボン酸エチル
（Maybridge Chemical社（UK）から入手可）を５ｍＬずつのエタノールおよび２
Ｎ水酸化カリウム溶液に混合したものを９０℃で４時間加熱した。冷却した反応
混液を６Ｎ塩酸でｐＨ３まで酸性化した。得られた白色固体を濾過し、水および
冷エタノールで洗浄して９００ｍｇの１-（４-クロロフェニル）-３-メチルピラ
ゾール-５-カルボン酸を得た。２２６ｍｇの１-（４-クロロフェニル）-３-メチ
ルピラゾール-５-カルボン酸を３ｍＬのジメチルホルムアミドに混合した溶液に
２５０ｍｇの１，３-ジシクロヘキシルカルボジイミド、次いで１６０ｍｇの１-
ヒドロキシベンゾトリアゾールを添加した。反応混液を室温で３０分間攪拌し、
１３０ｍｇの４-トリフルオロメチルアニリン（4-triflurormethylaniline）お よび０．６ｍＬのジイソプロピルエチルアミンを添加した。混合液を５０℃で６
時間加熱し、５０ｍＬの水で希釈して酢酸エチルで抽出した。有機抽出液を水、
飽和炭酸水素ナトリウム溶液、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥して濾過
した。シリカゲルカラムで粗生成物を精製し、１１０ｍｇの５-メチル-２-（４-
クロロ-ベンジル）-２Ｈ-ピラゾール-３-カルボン酸（４-トリフルオロメチル- フェニル）-アミドの蝋様固体を得た。化合物ＡＰ-０３３： ２２６ｍｇの１-（４-クロロベンジル）-３-メチルピラゾール-５-カルボン酸
を３ｍＬのジメチルホルムアミドに混合した溶液に２５０ｍｇの１，３-ジシク ロヘキシルカルボジイミド、次いで１６０ｍｇの１-ヒドロキシベンゾトリアゾ ールを添加した。反応混液を室温で３０分間攪拌し、１３０ｍｇの３-トリフル オロメチルアニリン（３-triflurormethylaniline）および０．６ｍＬのジイソ プロピルエチルアミンを添加した。混合液を５０℃で６時間加熱し、５０ｍＬの
水で希釈して酢酸エチルで抽出した。有機抽出液を水、飽和炭酸水素ナトリウム
溶液、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥して濾過した。シリカゲルカラム
で粗生成物を精製し、１０２ｍｇの５-メチル-２-（４-クロロ-ベンジル）-２Ｈ
-ピラゾール-３-カルボン酸（３-トリフルオロメチル-フェニル）-アミドの蝋様
固体を得た。実施例３：本発明のインドリノン化合物の合成法 I．２-インドリノンの合成 適切なオキシインドール（１．０当量）、好適なアルデヒド（１．２当量）、
およびピペリジン（０．１当量）をエタノール（１-２ｍＬ／１．０ｍｍｏｌオ キシインドール）に混合した反応混液を９０℃で３-５時間攪拌した。冷却後、 沈殿を濾過し、冷エタノールで洗浄し、乾燥して標的化合物を得た。
【０３６７】 式XXIVの化合物を上記の方法を用いて合成し、1Ｈ ＮＭＲ分光法を用いてキ ャラクタライズした。
【０３６８】
【化７１】
【０３６９】 ＮＭＲのデータは以下の通りである：
【０３７０】
【化７２】
【０３７１】 II．オキシインドールおよびアルデヒドの合成 本特許における実施例の物質（examples）を調製するために使用するオキシイ
ンドールおよびアルデヒドは全て、市販されているか、または以下に記載する方
法で調製する。
【０３７２】 Ａ．オキシインドールの合成 ５-アミノ-２-オキシインドール（Ｏ-１） ５-ニトロ-２-オキシインドール（６．３ｇ）をメタノール中、活性炭に担持 した１０％パラジウムで水素化し、３．０ｇ（収率６０％）の標記化合物の白色
固体を得た。５-ブロモ-２-オキシインドール（Ｏ-２） ２-オキシインドール（１．３ｇ）を２０ｍＬのアセトニトリルに混合したも のを-１０℃まで冷却し、２．０ｇのＮ-ブロモスクシンイミドを攪拌しながら徐
々に添加した。反応混液を-１０℃で１時間、そして０℃で２時間攪拌した。沈 殿を回収し、水で洗浄し、乾燥して１．９ｇ（収率９０％）の標記化合物を得た
。５-クロロ-２-オキシインドール（Ｏ-３） ５-クロロ-２-オキシインドールはAldrich Chemicalsから市販されている。５，６-ジメトキシ-２-オキシインドール（Ｏ-４） ５，６-ジメトキシ-２-オキシインドールはMaybridgeから市販されている。２-オキシインドール（Ｏ-５） ２-オキシインドールはAldrich Chemicalsから市販されている。４-メチル-2-オキシインドール（Ｏ-６） シュウ酸ジエチル（３０ｍＬ）を２０ｍＬの乾燥エーテルに混合したものを、
１９ｇのカリウムエトキシドを５０ｍＬの乾燥エーテルに懸濁したものに攪拌し
ながら添加した。混合液を氷浴中で冷却し、２０ｍＬの３-ニトロ-ｏ-キシレン を２０ｍＬの乾燥エーテルに混合したものを徐々に添加した。濃厚な暗赤色の混
合液を０．５時間加熱還流し、濃縮して暗赤色の固体とし、ほとんど全ての固体
が溶解するまで１０％水酸化ナトリウムで処理した。暗赤色の混合液を赤色が黄
色に変化するまで３０％過酸化水素で処理した。あるいは、混合液を暗赤色がも
はや存在しなくなるまで１０％水酸化ナトリウムおよび３０％過酸化水素で処理
した。固体を濾別し、濾液を６Ｎ塩酸で酸性化した。得られた沈殿を吸引濾過で
回収し、水で洗浄し、真空乾燥して９．８ｇ（収率４５％）の１-メチル-６-ニ トロフェニル酢酸のオフホワイト色の固体を得た。固体をメタノール中、活性炭
に担持した１０％パラジウムで水素化し、９．０４ｇの標記化合物の白色固体を
得た。５，７-ジブロモ-２-オキシインドール（Ｏ-７） 5-ブロモ-２-オキシインドール（Ｏ-２）の調製法と同様で、２当量のＮ-ブロ
モスクシンイミドを使用した。７-ブロモ-５-クロロ-２-オキシインドール（Ｏ-８） ５-クロロ-２-オキシインドール（１６．８ｇ）および１９．６ｇのＮ-ブロモ
スクシンイミドを１４０ｍＬのアセトニトリルに懸濁し、３時間加熱還流した。
２時間還流した時点での薄層クロマトグラフィー（シリカ、酢酸エチル）は５- クロロ-２-オキシインドールまたはＮ-ブロモスクシンイミド（Ｒｆ０．８）、 生成物（Ｒｆ０．８５）、および第二の生成物（Ｒｆ０．９）を示し、その比率
は更に１時間還流した後も変化しなかった。混合液を１０℃まで冷却し、沈殿を
吸引濾過で回収し、２５ｍＬのエタノールで洗浄し、漏斗中で２０分間吸引して
乾燥し、１４．１ｇの湿性生成物（収率５６％）を得た。固体を２００ｍＬの変
性エタノールに懸濁し、攪拌しながらスラリーを洗浄し、１０分間加熱還流した
。混合液を氷浴中で１０℃まで冷却した。固体生成物を吸引濾過で回収し、２５
ｍＬのエタノールで洗浄し、４４℃で真空乾燥して１２．７ｇ（収率５１％）の
７-ブロモ-５-クロロ-２-オキシインドールを得た。５-フルオロ-２-オキシインドール（Ｏ-９） ５-フルオロイサチン（８．２ｇ）を５０ｍＬのヒドラジン一水和物に溶解し 、１時間加熱還流した。次いで反応混液を氷水に注入した。その後沈殿を濾過し
、水で洗浄して真空オーブンで乾燥し、標記化合物を得た。５-ニトロ-２-オキシインドール（Ｏ-１０） ２-オキシインドール（６．５ｇ）を２５ｍＬの濃硫酸に溶解し、混合液を-１
０-１５℃に保持しつつ２．１ｍＬの発煙硝酸を滴加した。硝酸の添加後、反応 混液を０℃で０．５時間攪拌し、氷水に注入した。沈殿を濾過して回収し、水で
洗浄し、５０％酢酸から結晶化させた。その後、最終結晶産物を濾過し、水で洗
浄し、真空下で乾燥して６．３ｇ（収率７０％）の５-ニトロ-２-オキシインド ールを得た。５-ヨード-２-オキシインドール（Ｏ-１１） ２-オキシインドール（８２．９ｇ）を６３０ｍＬの酢酸に攪拌機で攪拌しつ つ懸濁し、混合液を氷水浴で１０℃まで冷却した。Ｎ-ヨードスクシンイミドの 固体（１７５ｇ）を１０分間にわたり、数回に分けて添加した。添加が完了した
後、混合液を１０℃で１時間攪拌した。懸濁した固体が常に存在したが、この時
点で非常に濃厚になった。固体を吸引濾過で回収し、１００ｍＬの５０％酢酸／
水、次いで２００ｍＬの水で洗浄し、漏斗上で２０分間吸引乾燥した。生成物を
真空下で乾燥し、９３．５ｇ（３６％）の５-ヨード-２-オキシインドールを得 た。５-メチル-２-オキシインドール（Ｏ-１２） ５-メチルイサチン（１５．０ｇ）および６０ｍＬのヒドラジン一水和物を１ ４０-１６０℃まで４時間加熱した。薄層クロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘ キサン １：２、シリカゲル）は出発物質が残存しないことを示した。反応混液
を室温まで冷却し、３００ｍＬの氷水に注入して６Ｎ塩酸でｐＨ２まで酸性化し
た。室温で２日間放置した後、沈殿を吸引濾過で回収し、水で洗浄し、真空下で
乾燥して６．５ｇ（収率４７％）の５-メチル-２-オキシインドールを得た。５-ブロモ-４-メチル-２-オキシインドール（Ｏ-１３）および５，７-ジブロモ- ４-メチル-２-オキシインドール（Ｏ-３２） ４-メチル-２-オキシインドール（５ｇ）を４０ｍＬのアセトニトリルに混合 したものを７．２６ｇのＮ-ブロモスクシンイミドで処理し、室温で４時間攪拌 した。薄層クロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン １：２、シリカゲル）
は５-ブロモ（Ｒｆ０．３）および５，７-ジブロモ（Ｒｆ０．５）生成物が混合
していることを示した。別の７．２６ｇのＮ-ブロモスクシンイミドを添加し、 混合液を更に４時間攪拌した。固体を吸引濾過で回収し、２０ｍＬのアセトニト
リルで洗浄し、乾燥してモノおよびジブロモ化合物の１：１混合物を得た。濾液
を濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン １：２）を
行い、１．６７ｇの５-ブロモ-４-メチル-２-オキシインドールの薄褐色固体を 得た。１：１混合物の固体を氷酢酸から２回再結晶し、３．２ｇの５，７-ジブ ロモ-４-メチル-２-オキシインドールの淡橙色固体を得た。この物質からの濾液
について上記のようにクロマトグラフィーを行い、０．６ｇの５-ブロモ-４-メ チル-２-オキシインドールおよび０．５ｇの５，７-ジブロモ-４-メチル-２-オ キシインドールを得た。６-フルオロ-２-オキシインドール（Ｏ-１４） 水素化ナトリウム（２．６ｇ）および１４．５ｇのマロン酸ジメチルを攪拌し
、１６０ｍＬのジメチルスルホキシド中、１００℃まで１時間加熱した。混合液
を室温まで冷却し、７．９５ｇの２，５-ジフルオロニトロベンゼンを添加し、 ３０分間攪拌した。次いで混合液を１００℃まで１時間加熱し、室温まで冷却し
て４００ｍＬの飽和塩化アンモニウム溶液に注入した。混合液を２００ｍＬの酢
酸エチルで抽出し、有機相を食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真
空下で濃縮した。残渣をメタノールから結晶化し、２４．４ｇ（収率８０％）の
４-フルオロ-２-ニトロフェニルマロン酸ジメチルの白色固体を得た。薄層クロ マトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン １：６、シリカゲル）はＲｆ０．２で
あった。濾液を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘ
キサン １：８）を行い、５．０３ｇの４-フルオロ-２-ニトロフェニルマロン 酸ジメチルを得、総量は２９．５ｇ（収率９６％）であった。
【０３７３】 ４-フルオロ-２-ニトロフェニルマロン酸ジメチル（５．０ｇ）を２０ｍＬの ６Ｎ塩酸中で２４時間加熱還流した。反応混液を冷却し、白色固体を吸引濾過で
回収し、水で洗浄して乾燥し、３．３ｇ（収率８７％）の４-フルオロ-２-ニト ロフェニル酢酸を得た。薄層クロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン １：
２、シリカゲル）はＲｆ０．６であった。
【０３７４】 ４-フルオロ-２-ニトロフェニル酢酸（３．３ｇ）を１５ｍＬの酢酸に溶解し 、活性炭に担持した１０％パラジウム（０．４５ｇ）で、６０ｐｓｉで２時間水
素化した。触媒を濾別し、１５ｍＬのメタノールで洗浄した。合一した濾液を濃
縮し、水で希釈した。沈殿を吸引濾過で回収し、水で洗浄して乾燥し、１．６ｇ
（収率７０％）の６-フルオロ-２-オキシインドールを得た。薄層クロマトグラ フィーはＲｆ０．２４であった。濾液を濃縮して紫色固体を得たが、このＮＭＲ
スペクトルは第一の生成物と同様であった。紫色固体のクロマトグラフィー（酢
酸エチル：ヘキサン １：２、シリカゲル）を行い、第二の生成物６-フルオロ-
２-オキシインドールの白色固体を得た。６-クロロ-２-オキシインドール（Ｏ-１５） ６-クロロオキシインドールはFinorgaから市販されている。５-カルボキシエチル-４-メチル-２-オキシインドール（Ｏ-１６） ５-カルボキシエチル-２-オキシインドール（Ｏ-２７）の手順と同様である。 ５-アミノスルホニル-２-オキシインドール（Ｏ-１７） ２７ｍＬのクロロスルホン酸を充填した１００ｍＬのフラスコに１３．３ｇの
２-オキシインドールを徐々に添加した。添加の際、反応温度を３０℃未満に保 持した。添加後、反応混液を室温で１．５時間攪拌し、６８℃まで１時間加熱し
、冷却し、水に注入した。沈殿を水で洗浄し、真空オーブンで乾燥し、１１．０
ｇの５-クロロスルホニル-２-オキシインドール（収率５０％）を得、これを更 なる精製を行わずに使用した。
【０３７５】 ５-クロロスルホニル-２-オキシインドール（２．１ｇ）を１０ｍＬのエタノ ールに混合した１０ｍＬの水酸化アンモニウムに添加し、室温で一晩攪拌した。
混合液を濃縮し、吸引濾過して固体を回収し、０．４ｇ（収率２０％）の標記化
合物のオフホワイト色の固体を得た。５-メチルアミノスルホニル-２-オキシインドール（Ｏ-１８） オキシインドールＯ-１７からの５-クロロスルホニル-２-オキシインドール（
３．３８ｇ）１０ｍＬの２Ｍメチルアミン／テトラヒドロフランに懸濁したもの
を室温で４時間攪拌したが、その時点で白色固体が存在した。沈殿を吸引濾過で
回収し、５ｍＬずつの水で２回洗浄し、真空下、４０℃で一晩乾燥して３．０ｇ
（収率８８％）の５-メチルアミノスルホニル-２-オキシインドールを得た。５-（４-トリフルオロメチルフェニルアミノスルホニル）-２-オキシインドール （Ｏ-１９） 実施例Ｏ-１８からの５-クロロスルホニル-２-オキシインドール（２．１ｇ）
、１．６ｇの４-トリフルオロメチルアニリン、および１．４ｇのピリジンを２ ０ｍＬのジクロロメタンに懸濁したものを室温で４時間攪拌した。沈殿を吸引濾
過で回収し、５ｍＬずつの水で２回洗浄し、真空下、４０℃で一晩乾燥して２．
４ｇの粗生成物を得たが、これは薄層クロマトグラフィーによれば不純物を含有
していた。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキ
サン １：２）に適用し、１．２ｇ（収率３７％）の５-（４-トリフルオロメチ
ルフェニルアミノスルホニル）-２-オキシインドールを得た。５-（モルホリン-４-スルホニル）-２-オキシインドール（Ｏ-２０） 実施例Ｏ-１８からの５-クロロスルホニル-２-オキシインドール（２．３ｇ）
および２．２ｇのモルホリンを５０ｍＬのジクロロメタンに懸濁したものを室温
で３時間攪拌した。白色沈殿を吸引濾過で回収し、酢酸エチルおよびヘキサンで
洗浄し、真空下、４０℃で一晩乾燥して２．１ｇ（収率７４％）の５-（モルホ リン-４-スルホニル）-２-オキシインドールを得た。６-トリフルオロメチル-２-オキシインドール（Ｏ-２１） ジメチルスルホキシド（３３０ｍＬ）を７．９ｇの水素化ナトリウムに添加し
、次いで４３．６ｇのシュウ酸ジエチルを滴加した。混合液を１００℃まで１時
間加熱し、室温まで冷却した。２-ニトロ-４-トリフルオロメチルトルエン（３ １．３ｇ）を添加し、反応液を室温で３０分間攪拌し、その後１００℃まで１時
間加熱した。反応液を冷却し、飽和塩化アンモニウム水溶液、酢酸エチル、およ
びヘキサンの混合液に注入した。有機相を飽和塩化アンモニウム、水、および食
塩水で洗浄し、乾燥し、濃縮して２-(2ニトロ-４-トリフルオロメチルフェニル)
マロン酸ジメチルを得た。
【０３７６】 ジエステルを、６．４ｇの塩化リチウムおよび２．７ｍＬの水を１００ｍＬの
ジメチルスルホキシドに混合したものに溶解し、１００℃まで３時間加熱した。
反応液を冷却し、酢酸エチルおよび食塩水の混合液に注入した。有機相を食塩水
で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥して濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（
１０％酢酸エチル／ヘキサン）に適用した。生成物を含有する画分をエバポレー
トし、２５．７ｇの２-ニトロ-４-トリフルオロメチルフェニル酢酸メチルを得 た。
【０３７７】 ２-ニトロ-４-トリフルオロメチルフェニル酢酸メチル（２６ｍｇ）を活性炭 に担持した１０％パラジウムで水素化し、次いで１００℃で３時間加熱した。触
媒を濾別し、溶媒をエバポレートして標記化合物を得た。５-（２-クロロエチル）-２-オキシインドール（Ｏ-２２） ５-クロロアセチル-２-オキシインドール（塩化クロロアセチルから出発した 以外は、Ｏ-５３の調製に使用した手順と同様に調製した）（４．１８ｇ）を３ ０ｍＬのトリフルオロ酢酸に混合したもの（氷浴中）を４．６５ｇのトリエチル
シランで処理し、室温で３時間攪拌した。混合液を１５０ｍＬの水に注入し、沈
殿を吸引濾過で回収し、５０ｍＬの水で洗浄し、乾燥して２．５３ｇ（収率６５
％）の５-（２-クロロエチル）-２-オキシインドールの赤褐色固体を得た。４-メトキシカルボニル-２-オキシインドール（Ｏ-２３） ４-カルボキシ-２-オキシインドール（Ｏ-２５）とトリメチルシリルジアゾメ
タンのエステル化。５-メトキシカルボニル-２-オキシインドール（Ｏ-２４） ５-ヨード-２-オキシインドール（１７ｇ）を２ｇの２酢酸パラジウム、１８ ．２ｇのトリエチルアミン、１５０ｍＬのメタノール、１５ｍＬのジメチルスル
ホキシド、および２．６ｇのＤＰＰＰと共に、一酸化炭素飽和雰囲気下で加熱還
流した。２４時間後、反応液を濾過して触媒を除去し、濾液を濃縮した。濃縮物
をシリカゲルクロマトグラフィー（３０％酢酸エチル／ヘキサン）に適用した。
生成物を含有する画分を濃縮し、放置した。沈殿した生成物を吸引濾過で回収し
、０．８ｇ（７％）の標記化合物のオフホワイト色の固体を得た。４-カルボキシ-２-オキシインドール（Ｏ-２５） トリメチルシリルジアゾメタンをヘキサンに混合した溶液（２Ｍ）を、２．０
１ｇの2-クロロ-３-カルボキシ-ニトロベンゼンを２０ｍＬのメタノールに混合 した溶液に、室温で気体が発生しなくなるまで滴加した。過剰のトリメチルシリ
ルジアゾメタンを酢酸でクエンチングした。反応混液をロータリーポンプで乾燥
し、残渣を更にオーブンで一晩乾燥した。生成物（2-クロロ-３-メトキシカルボ
ニル-ニトロベンゼン）は以下の反応に十分な純度であった。
【０３７８】 マロン酸ジメチル（６．０ｍＬ）を、２．１ｇの水素化ナトリウムを１５ｍＬ
のＤＭＳＯに混合した氷冷懸濁液に添加した。次いで反応混液を１００℃で１時
間攪拌し、室温まで冷却した。2-クロロ-３-メトキシカルボニル-ニトロベンゼ ン（２．１５ｇ）を上記の混合液に一度に添加し、混合液を１００℃まで１．５
時間加熱した。次いで反応混液を室温まで冷却し、氷水に注入し、ｐＨ５まで酸
性化し、酢酸エチルで抽出した。その後有機相を食塩水で洗浄し、無水硫酸上で
乾燥して濃縮し、３．０ｇの２-メトキシカルボニル-６-ニトロフェニルマロン 酸ジメチルを得た。
【０３７９】 ２-メトキシカルボニル-６-ニトロフェニルマロン酸ジメチル（３．０ｇ）を ５０ｍＬの６Ｎ塩酸中で一晩、加熱還流した。混合液を濃縮乾固し、２０ｍＬの
エタノールに混合した１．１ｇの塩化スズ（II）と共に２時間、加熱還流した。
混合液をセライトを通して濾過し、濃縮してシリカゲルクロマトグラフィー（酢
酸エチル：ヘキサン：酢酸）に適用し、０．６５ｇ（収率３７％）の４-カルボ キシ-２-オキシインドールの白色固体を得た。５-カルボキシ-２-オキシインドール（Ｏ-２６） ２-オキシインドール（６．７ｇ）を、２３ｇの塩化アルミニウムを３０ｍＬ のジクロロエタンに混合した氷浴中の攪拌懸濁液に添加した。塩化クロロアセチ
ル（１１．３ｇ）を徐々に添加し、塩化水素ガスを放出させた。１０分間の攪拌
後、反応液を４０-５０℃まで１．５時間加温した。薄層クロマトグラフィー（ 酢酸エチル、シリカゲル）は出発物質が残存しないことを示した。混合液を室温
まで冷却し、氷水に注入した。沈殿を吸引濾過で回収し、水で洗浄し、真空下で
乾燥して１０．３ｇ（９８％）の５-クロロアセチル-２-オキシインドールのオ フホワイト色の固体を得た。
【０３８０】 ９．３ｇの５-クロロアセチル-２-オキシインドールの懸濁液を９０ｍＬのピ リジン中で８０-９０℃で３時間攪拌し、その後室温まで冷却した。沈殿を吸引 濾過で回収し、２０ｍＬのエタノールで洗浄した。固体を９０ｍＬの２．５Ｎ水
酸化ナトリウムに溶解し、７０-８０℃で３時間攪拌した。混合液を室温まで冷 却し、０．５Ｎ塩酸でｐＨ２まで酸性化した。沈殿を吸引濾過で回収し、水で完
全に洗浄して粗製の５-カルボキシ-２-オキシインドールの暗褐色固体を得た。 一晩放置後、濾液から２ｇの５-カルボキシ-２-オキシインドールの黄色固体が 得られた。粗製の暗褐色生成物を熱メタノールに溶解し、不溶性物質を濾過して
除去し、濾液を濃縮して５．６ｇの５-カルボキシ-２-オキシインドールの褐色 固体を得た。合一した収率は９７％であった。５-カルボキシエチル-２-オキシインドール（Ｏ-２７） ５-シアノエチル-２-オキシインドール（４．０２ｇ）を２５ｍＬの濃塩酸を 含有する水１０ｍＬに混合したものを４時間加熱還流した。混合液を冷却し、水
を添加し、得られた固体を吸引濾過で回収し、水で洗浄し、乾燥して１．９ｇ（
収率４４％）の標記化合物の黄色固体を得た。５-アミノ-４-メチル-２-オキシインドール（Ｏ-２８） ５-アミノオキシインドール（Ｏ-１）の手順と同様。５-ニトロ-４-メチル-２-オキシインドール（Ｏ-２９） ５-ニトロオキシインドール（Ｏ-１０）の手順と同様。５-クロロ-４-メチル-２-オキシインドール（Ｏ-３０） ３．０ｇの４-メチル-２-オキシインドールを５０ｍＬのアセトニトリルに室 温で攪拌懸濁し、３．３ｇのＮ-クロロスクシンイミドを数回に分けて添加した 。次いでトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を添加した。懸濁液を室温で３日間攪拌し
たが、その間、常に固体が存在していた。白色固体を吸引濾過で回収し、少量の
冷アセトンで洗浄し、４０℃の真空オーブンで一晩乾燥し、２．５ｇ（６８％）
の５-クロロ-４-メチル-２-オキシインドールを得た。５-ヨード-４-メチル-２-オキシインドール（Ｏ-３１） ２ｇの４-メチル-２-オキシインドールを４０ｍＬの氷酢酸に混合したもの（ 氷浴中）に、３．６７ｇのＮ-ヨードスクシンイミドを添加した。混合液を１時 間攪拌し、１００ｍＬの５０％酢酸／水で希釈し、濾過した。得られた白色固体
を高真空下で乾燥し、３．２７ｇ（収率８８％）の標記化合物のオフホワイト色
の固体を得た。５，７-ジブロモ-４-メチルオキシインドール（Ｏ-３２） ５-ブロモ-４-メチルオキシインドール（Ｏ-１３）の手順を参照されたい。５-ブチル-２-オキシインドール（Ｏ-３３） トリエチルシラン（２．３ｇ）を２０ｍＬのトリフルオロ酢酸に混合した２ｇ
の４-ブタノイル-２-オキシインドールに室温で添加し、溶液を３時間攪拌した 。反応液を氷水に注入して赤色油を得たが、これは放置後に固体化した。固体を
吸引濾過で回収し、水およびヘキサンで洗浄し、乾燥して１．７ｇ（収率９１％
）の標記化合物のオフホワイト色の固体を得た。５-エチル-２-オキシインドール（Ｏ-３４） ５-アセチル-２-オキシインドール（２ｇ）を１５ｍＬのトリフルオロ酢酸に 混合したもの（氷浴中）を、１．８ｇのトリエチルシランで徐々に処理し、次い
で室温で５時間攪拌した。１ｍＬのトリエチルシランを添加し、一晩攪拌を続け
た。反応混液を氷水に注入し、得られた沈殿を吸引濾過で回収し、何度も水で洗
浄し、真空下で乾燥して１．３ｇ（収率７１％）の標記化合物の黄色固体を得た
。５-（モルホリン-４-イル）エチル-２-オキシインドール（Ｏ-３５） ５-クロロエチル-２-オキシインドール（２．３ｇ）、１．２ｍＬのモルホリ ン、および１．２ｍＬのジイソプロピルエチルアミンを１０ｍＬのジメチルスル
ホキシド中、１００℃で一晩加熱した。混合液を冷却し、水に注入し、酢酸エチ
ルで抽出した。有機相を食塩水で洗浄し、乾燥してエバポレートした。残渣をシ
リカゲルクロマトグラフィー（５％メタノール／クロロホルム）に適用し、０．
９ｇ（３１％）の標記化合物の白色固体を得た。５-（４-カルボキシベンズアミド）-２-オキシインドール（Ｏ-３６） ５-（４-メトキシカルボニルベンズアミド）-２-オキシインドール（０．９ｇ
）および０．４ｇの水酸化ナトリウムを２５ｍＬのメタノールに混合したものを
３時間加熱還流した。混合液を濃縮し、水を添加し、混合液を６Ｎ塩酸で酸性化
した。沈殿を吸引濾過で回収し、０．７５ｇ（８７％）の標記化合物の白色固体
を得た。５-（４-メトキシカルボニルベンズアミド）-２-オキシインドール（Ｏ-３７） ８２．０ｍｇの５-アミノ-２-オキシインドールおよび１３１．０ｍｇの４-メ
トキシカルボニルベンゾイルクロライドをピリジンに混合したものを室温で３時
間攪拌し、氷水に注入した。沈殿を濾過し、水で洗浄し、真空オーブンで乾燥し
、１３８．０ｍｇの５-（４-メトキシカルボニルベンズアミド）-２-オキシイン
ドール（収率８１％）を得た。５-メトキシ-２-オキシインドール（Ｏ-３８） 抱水クロラール（９．６ｇ）を８３ｇの硫酸ナトリウムを含有する２００ｍＬ
の水に溶解した。溶液を６０℃に加温し、１１．４ｇの塩酸ヒドロキシルアミン
を５０ｍＬの水に混合した溶液を添加し、混合液を６０℃に保持した。別のフラ
スコで、６．４ｇの４-アニシジンおよび４．３ｍＬの濃塩酸を８０ｍＬの水に 混合したものを８０℃に加温した。第一の溶液を第二の溶液に添加し、加熱還流
した。反応液を２分間加熱還流し、徐々に室温まで冷却し、その後氷浴中で冷却
した。黄褐色の沈殿を吸引濾過で回収し、水で洗浄し、真空下で乾燥して８．６
ｇ（収率８５％）のＮ-（２-ヒドロキシイミノアセチル）アニシジンを得た。
【０３８１】 ５ｍＬの水を含有する濃硫酸（４５ｍＬ）を６０℃に加温し、８．６ｇのＮ- （２-ヒドロキシイミノアセチル）アニシジンを一度に添加した。攪拌した混合 液を９３℃まで１０分間加熱し、その後室温まで冷却させた。混合液を５００ｇ
の氷に注入し、酢酸エチルで３回抽出した。合一した抽出液を無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥し、濃縮して５．１ｇ（収率６５％）の５-メトキシイサチンの暗赤色 固体を得た。
【０３８２】 ５-メトキシイサチン（５．０ｇ）および３０ｍＬのヒドラジン一水和物を１ ５分間加熱還流した。反応混液を室温まで冷却し、５０ｍＬの水を添加した。混
合液を２５ｍＬずつの酢酸エチルで３回抽出し、有機相を合一し、無水硫酸ナト
リウムで乾燥し、濃縮して黄色固体を得た。固体を酢酸エチル中で攪拌し、１．
１ｇの不溶性物質を吸引濾過で除去し、保存した。この物質は２-ヒドラジノカ ルボニルメチル-４-アニシジンと判明した。濾液を濃縮し、シリカゲルクロマト
グラフィーを行って酢酸エチル：ヘキサン １：１で溶出し、０．７ｇの５-メ トキシ-２-オキシインドールの混濁した黄色固体を得た。１．１ｇの２-ヒドラ ジノカルボニルメチル-４-アニシジンを２０ｍＬの１Ｎ水酸化ナトリウム中で１
時間加熱還流した。混合液を冷却し、濃塩酸でｐＨ２まで酸性化し、２５ｍＬず
つの酢酸エチルで３回抽出した。有機相を合一し、食塩水で洗浄し、無水硫酸ナ
トリウムで乾燥し、濃縮して０．８ｇの５-メトキシ-２-オキシインドールの黄 色固体を得た。合一した収量は１．５ｇまたは３３％であった。 参考文献： Crestin, C., およびR. Saladino, Synthetic Communications 24:2839-2841 (1
994)。７-アザ-2-オキシインドール（Ｏ-３９） ３，３-ジブロモ-７-アザオキシインドール（２．９ｇ）を２０ｍＬの酢酸お よび３０ｍＬのアセトニトリルの混合液に溶解した。溶液に６．５ｇの亜鉛末を
添加した。混合液を室温で２時間攪拌した。混合液から固体を濾過し、溶媒をエ
バポレートした。残渣を酢酸エチルで処理した。不溶性の固体を含有する酢酸エ
チル溶液をシリカゲルのショートカラムに通過させた。回収した酢酸エチル溶液
をエバポレートし、残渣を真空下で乾燥して１．８ｇ（収率９１％）の７-アザ オキシインドール酢酸塩を得た。５-クロロ-７-メチル-２-オキシインドール（Ｏ-４０） ５-フルオロオキシインドール（Ｏ-９）の手順と同様。７-フルオロ-２-オキシインドール（Ｏ-４１） ６-フルオロオキシインドール（Ｏ-１４）の手順と同様。４-フルオロ-２-オキシインドール（Ｏ-４２） ６-フルオロオキシインドール（Ｏ-１４）の手順と同様。６-メトキシ-２-オキシインドール（Ｏ-４３） ６-メトキシオキシインドールはFinorgaから市販されている。５-トリフルオロメチル-２-オキシインドール（Ｏ-４４） ５-フルオロオキシインドール（Ｏ-９）の手順と同様。５-ジメチルアミノスルホニル-２-オキシインドール（Ｏ-４５） ２．３ｇの５-クロロスルホニル-２-オキシインドール（Ｏ-１７）を１０ｍＬ
の２Ｍジメチルアミン／メタノールに懸濁したものを室温で４時間攪拌したが、
その時点で白色固体が存在した。沈殿を吸引濾過で回収し、５ｍＬの１Ｎ水酸化
ナトリウムおよび５ｍＬの１Ｎ塩酸で洗浄し、真空下、４０℃で一晩乾燥し、１
．９ｇ（収率７９％）の５-ジメチルアミノスルホニル-２-オキシインドールを 得た。６-フェニル-２-オキシインドール（Ｏ-４６） マロン酸ジメチル（１０ｍＬ）を２５ｍＬのジメチルスルホキシドに混合した
ものを、３．５ｇの水素化ナトリウムを２５ｍＬのジメチルスルホキシドに懸濁
したものに滴加し、混合液を１００℃で１０分間加熱した。混合液を室温まで冷
却し、４．７ｇの４-フルオロ-3-ニトロビフェニルを２５ｍＬのジメチルスルホ
キシドに混合したものを添加した。混合液を１００℃で２時間加熱し、冷却し、
３００ｍＬの飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチングした。混合液を酢酸エチ
ルで３回抽出し、合一した有機相を水および食塩水で洗浄し、エバポレートして
黄色油、粗製の３-ニトロビフェニル-4-マロン酸ジメチルを得た。
【０３８３】 粗製の３-ニトロビフェニル-4-マロン酸ジメチルを３０ｍＬの６Ｎ塩酸中で２
４時間加熱還流した。沈殿を濾過して回収し、水で洗浄し、乾燥して４．５ｇ（
４-フルオロ-３-ニトロビフェニルを基準にして８０％）の３-ニトロビフェニル
-４-酢酸のクリーム色の固体を得た。
【０３８４】 鉄粉（２．６ｇ）を、４０ｍＬの酢酸に混合した４．５ｇの３-ニトロビフェ ニル-４-酢酸に一度に全量添加した。混合液を２時間加熱還流し、濃縮乾固し、
酢酸エチルに溶解した。固体を濾過して除去し、濾液を１Ｎ塩酸および食塩水で
２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾液を濃縮して３．４ｇ（収率９
３％）の６-フェニル-２-オキシインドールの淡褐色固体を得た。６-（２-メトキシフェニル）-２-オキシインドール（Ｏ-４７） テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１ｇ）を、５ｇの２-メ トキシフェニルボロン酸、６．６ｇの５-ブロモ-２-フルオロニトロベンゼン、 および３０ｍＬの２Ｍ炭酸ナトリウム溶液を５０ｍＬのトルエンおよび５０ｍＬ
のエタノールに混合したものに添加した。混合液を２時間加熱還流し、濃縮し、
残渣を酢酸エチルで２回抽出した。酢酸エチル相を水、食塩水で洗浄し、乾燥し
、濃縮して暗緑色油を得たが、これは放置すると固体化し、粗製の４-フルオロ-
２’-メトキシ-３-ニトロビフェニルであった。
【０３８５】 マロン酸ジメチル（１４ｍＬ）を、２．９ｇの水素化ナトリウムを５０ｍＬの
ジメチルスルホキシドに懸濁したものに滴加した。混合液を１００℃で１５分間
加熱し、室温まで冷却した。６０ｍＬのジメチルスルホキシドに混合した粗製４
-フルオロ-２’-メトキシ-３-ニトロビフェニルを添加し、混合液を１００℃で ２時間加熱した。反応混液を冷却し、３００ｍＬの飽和塩化ナトリウム溶液でク
エンチングし、酢酸エチルで２回抽出した。抽出液を合一し、飽和塩化アンモニ
ウム、水、および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して粗製
の２’-メトキシ-３-ニトロビフェニル-4-マロン酸ジメチルの黄色油を得た。
【０３８６】 粗製の２’-メトキシ-３-ニトロビフェニル-4-マロン酸を５０ｍＬの６Ｎ塩酸
中、１００℃で２４時間加熱し、冷却した。沈殿を濾過して回収し、水およびヘ
キサンで洗浄し、乾燥して９．８の２’-メトキシ-２-ニトロビフェニル-4-酢酸
の淡黄褐色固体を得た。
【０３８７】 鉄粉（５ｇ）を、９．８ｇの２’-メトキシ-３-ニトロビフェニル-4-酢酸を５
０ｍＬの氷酢酸に混合したものに一度に添加し、１００℃まで３時間加熱した。
反応混液を濃縮乾固し、酢酸エチル中で超音波処理し、不溶性物質を濾別した。
濾液を１Ｎ塩酸、水、食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮
した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン １：２）
に適用し、５．４ｇ（５-ブロモ-２-フルオロニトロベンゼンを基準にして収率 ６９％）の６-（２-メトキシフェニル）-２-オキシインドールのバラ色の固体を
得た。６-（３-メトキシフェニル）-２-オキシインドール（Ｏ-４８） テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０．８ｇ）を、５ｇの３
-メトキシフェニルボロン酸、５ｇの５-ブロモ-２-フルオロニトロベンゼン、お
よび１１ｍＬの２Ｍ炭酸ナトリウム溶液を１００ｍＬのトルエンに混合したもの
に添加した。混合液を２時間加熱還流し、水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。
酢酸エチル相を飽和炭酸水素ナトリウム、食塩水で洗浄し、乾燥し、濃縮して油
状固体を得た。固体をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン
１：６）に適用し、４．３ｇ（収率７７％）の4-フルオロ-３’-メトキシ-３-ニ
トロフェニルを得た。
【０３８８】 マロン酸ジメチル（９．７ｍＬ）を、２．０ｇの水素化ナトリウムを５０ｍＬ
のジメチルスルホキシドに懸濁したものに滴加した。混合液を１００℃まで３５
分間加熱し、室温まで冷却した。５０ｍＬのジメチルスルホキシドに混合した４
-フルオロ-２’-メトキシ-３-ニトロビフェニル（４．２ｇ）を添加し、混合液 を１００℃で１時間加熱した。反応混液を冷却し、３００ｍＬの飽和塩化アンモ
ニウム溶液でクエンチングし、酢酸エチルで２回抽出した。抽出液を合一し、食
塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して粗製の３’-メトキシ-３
-ニトロビフェニル-4-マロン酸ジメチルの薄黄色固体を得た。
【０３８９】 粗製の３’-メトキシ-３-ニトロビフェニル-4-マロン酸を４５ｍＬの６Ｎ塩酸
中、１１０℃で４日間加熱し、冷却した。沈殿を濾過して回収し、水およびヘキ
サンで洗浄し、乾燥して５．３ｇの３’-メトキシ-２-ニトロビフェニル-4-酢酸
の淡黄褐色固体を得た。
【０３９０】 ３’-メトキシ-３-ニトロビフェニル-4-酢酸（５．２ｇ）をメタノールに溶解
し、活性炭に担持した１０％パラジウム（０．８ｇ）で、室温で３時間水素化し
た。触媒を濾別し、メタノールで洗浄し、濾液を合一し、濃縮して褐色固体を得
た。固体をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン：酢酸 ３３
：６６：１）に適用し、３．０ｇ（４-フルオロ-３’-メトキシ-3-ニトロビフェ
ニルを基準にして７５％の収率）の６-（３-メトキシフェニル）-２-オキシイン
ドールの桃色固体を得た。６-（４-メトキシフェニル）-２-オキシインドール（Ｏ-４９） テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１ｇ）を、５ｇの４-メ トキシフェニルボロン酸、６．６ｇの５-ブロモ-２-フルオロニトロベンゼン、 および３０ｍＬの２Ｍ炭酸ナトリウム溶液を５０ｍＬのトルエンおよび５０ｍＬ
のエタノールに混合したものに添加した。混合液を２時間加熱還流し、濃縮し、
残渣を酢酸エチルで２回抽出した。酢酸エチル相を水、食塩水で洗浄し、乾燥し
、濃縮して褐色の油状固体を得た。固体をシリカゲルクロマトグラフィー（５％
酢酸エチル／ヘキサン）に適用し、粗製４-フルオロ-４’-メトキシ-３-ニトロ ビフェニルの薄黄色固体を得た。
【０３９１】 マロン酸ジメチル（１０ｍＬ）を、２．０ｇの水素化ナトリウムを６０ｍＬの
ジメチルスルホキシドに懸濁したものに滴加した。混合液を１００℃まで１０分
間加熱し、室温まで冷却した。５０ｍＬのジメチルスルホキシドに混合した粗製
４-フルオロ-２’-メトキシ-３-ニトロビフェニル（５．２ｇ）を添加し、混合 液を１００℃で２時間加熱した。反応混液を冷却し、３００ｍＬの飽和塩化ナト
リウム溶液でクエンチングし、酢酸エチルで３回抽出した。抽出液を合一し、飽
和塩化アンモニウム、水、および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し
、濃縮して粗製の４’-メトキシ-３-ニトロビフェニル-4-マロン酸ジメチルの黄
色油を得た。
【０３９２】 粗製の４’-メトキシ-３-ニトロビフェニル-4-マロン酸を６０ｍＬの６Ｎ塩酸
中、１００℃で１５時間加熱し、冷却した。沈殿を濾過して回収し、水およびヘ
キサンで洗浄し、乾燥して７．２ｇの粗製４’-メトキシ-３-ニトロビフェニル-
4-酢酸の淡黄褐色固体を得た。
【０３９３】 鉄粉（３．６ｇ）を、７．２ｇの４’-メトキシ-３-ニトロビフェニル-4-酢酸
を５０ｍＬの氷酢酸に混合したものに一度に添加し、１００℃で一晩加熱した。
反応混液を濃縮乾固し、酢酸エチル中で超音波処理し、不溶性物質を濾別した。
濾液を１Ｎ塩酸、食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して
、２．７ｇ（５-ブロモ-２-フルオロニトロベンゼンを基準にして収率５４％） の６-（４-メトキシフェニル）-２-オキシインドールのバラ色の固体を得た。６-（３-エトキシフェニル）-２-オキシインドール（Ｏ-５０） テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０．８ｇ）を、４．２ｇ
の３-エトキシフェニルボロン酸、５．０ｇの５-ブロモ-２-フルオロニトロベン
ゼン、および２２ｍＬの２Ｍ炭酸ナトリウム溶液を５０ｍＬのトルエンおよび５
０ｍＬのエタノールに混合したものに添加した。混合液を２時間加熱還流し、濃
縮し、水を添加し、混合液を酢酸エチルで２回抽出した。酢酸エチル相を水、食
塩水で洗浄し、乾燥し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（５％
酢酸エチル／ヘキサン）に適用し、５．３ｇ（収率９０％）の粗製４-フルオロ-
３’-エトキシ-３-ニトロビフェニルの黄色油を得た。
【０３９４】 マロン酸ジメチル（１１．４ｍＬ）を、４．０ｇの水素化ナトリウムを２０ｍ
Ｌのジメチルスルホキシドに懸濁したものに滴加した。混合液を１００℃まで１
０分間加熱し、室温まで冷却した。２５ｍＬのジメチルスルホキシドに混合した
粗製の４-フルオロ-３’-エトキシ-３-ニトロビフェニル（５．３ｇ）を添加し 、混合液を１００℃で２時間加熱した。反応混液を冷却し、３００ｍＬの飽和塩
化アンモニウム溶液でクエンチングし、酢酸エチルで３回抽出した。抽出液を合
一し、水および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して粗製の
３’-エトキシ-３-ニトロビフェニル-4-マロン酸ジメチルの黄色油を得た。
【０３９５】 粗製の３’-エトキシ-３-ニトロビフェニル-4-マロン酸ジメチルを６０ｍＬの
６Ｎ塩酸中、１００℃で計４日間加熱し、冷却した。沈殿を濾過して回収し、水
およびヘキサンで洗浄し、乾燥して４．７ｇ（５-ブロモ-２-フルオロニトロベ ンゼンを基準にして収率７７％）の粗製３’-エトキシ-３-ニトロビフェニル-4-
酢酸の淡黄褐色固体を得た。
【０３９６】 鉄粉（２．４ｇ）を、４．６ｇの３’-エトキシ-３-ニトロビフェニル-4-酢酸
を４０ｍＬの氷酢酸に混合したものに一度に添加し、２時間加熱還流した。反応
混液を濃縮乾固し、酢酸エチルで繰り返し処理し、不溶性物質を濾別した。濾液
を１Ｎ塩酸、食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して３．
５ｇ（収率９１％）の６-（３-エトキシフェニル）-２-オキシインドールの淡褐
色固体を得た。６-ブロモ-２-オキシインドール（Ｏ-５１） マロン酸ジメチル（１３ｍＬ）を、２．７ｇの水素化ナトリウムを２０ｍＬの
ジメチルスルホキシドに懸濁したものに滴加した。混合液を１００℃まで１０分
間加熱し、室温まで冷却した。２５ｍＬのジメチルスルホキシドに混合した５- ブロモ-２-フルオロニトロベンゼン（５．０ｇ）を添加し、混合液を１００℃で
２時間加熱した。反応混液を冷却し、３００ｍＬの飽和塩化アンモニウム溶液で
クエンチングし、酢酸エチルで３回抽出した。抽出液を合一し、飽和塩化アンモ
ニウム、水、および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して粗
製の４-ブロモ-２-ニトロフェニルマロン酸ジメチルの淡黄色油を得た。
【０３９７】 粗製の４-ブロモ-２-ニトロフェニルマロン酸ジメチルを４０ｍＬの６Ｎ塩酸 中、１１０℃で２４時間加熱し、冷却した。沈殿を濾過して回収し、水で洗浄し
、乾燥して５．３ｇ（収率８９％）の４-ブロモ-２-ニトロフェニル酢酸のオフ ホワイト色の固体を得た。
【０３９８】 ４-ブロモ-２-ニトロフェニル酢酸（０．２６ｇ）、０．２６ｇの亜鉛末、お よび３ｍＬの５０％硫酸を５ｍＬのエタノールに混合したものを１００℃で一晩
加熱した。反応混液を濾過し、少量の酢酸で希釈し、濃縮してエタノールを除去
し、水で希釈し、酢酸エチルで２回抽出した。合一した抽出液を食塩水で洗浄し
、無水硫酸で乾燥し、濃縮して０．１９ｇ（収率９０％）の６-ブロモ-２-オキ シインドールの黄色固体を得た。５-カルボキシ-４-メチル-２-オキシインドール（Ｏ-５２） ５-カルボキシオキシインドール（Ｏ-２６）の手順と同様。５-アセチル-２-オキシインドール（Ｏ-５３） ２-オキシインドール（３ｇ）を１，２-ジクロロエタンに懸濁し、３．２ｍＬ
の塩化アセチルで徐々に処理した。得られた懸濁液を５０℃まで５時間加熱し、
冷却し、水に注入した。得られた沈殿を吸引濾過で回収し、何度も水で洗浄し、
真空下で乾燥して２．９ｇ（収率７３％）の標記化合物の褐色固体を得た。５-ブタノイル-２-オキシインドール（Ｏ-５４） ３０ｍＬの１，２-ジクロロエタンに懸濁した１５ｇの塩化アルミニウム（氷 浴中）に７．５ｇの２-オキシインドール、次いで１２ｇの塩化ブタノイルを添 加した。得られた懸濁液を５０℃まで一晩加熱した。混合液を氷水に注入し、酢
酸エチルで３回抽出した。合一した酢酸エチル相を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリ
ウムで乾燥し、濃縮乾固して褐色固体を得た。固体をシリカゲルカラムクロマト
グラフィー（５０％酢酸エチル／ヘキサン）に適用し、３ｇ（２５％）の標記化
合物の黄色固体を得た。５-シアノエチル-２-オキシインドール（Ｏ-５５） シアン化カリウム（２．０ｇ）を１５ｍＬのジメチルスルホキシドに添加し、
９０℃に加熱した。５ｍＬのジメチルスルホキシドに溶解した５-クロロエチル-
２-オキシインドール（３．０ｇ）を攪拌しながら徐々に添加し、反応液を１５ ０℃まで２時間加熱した。混合液を冷却し、氷水に注入し、沈殿を吸引濾過で回
収し、水で洗浄し、乾燥して粗生成物を得た。粗製の物質をシリカゲルクロマト
グラフィー（５％メタノール／クロロホルム）に適用し、１．２ｇ（収率４２％
）の標記化合物を得た。４-クロロ-２-オキシインドール（Ｏ-５６） ５-フルオロオキシインドール（Ｏ-９）の手順と同様。６-アミノ-２-オキシインドール（Ｏ-５７） ６-アミノオキシインドールはHelv. Chem. Acta 31:1381, 1948に記載された 手順を使用して合成した。６-（モルホリン-４-イル）-２-オキシインドール（Ｏ-５８） ６-アミノ-２-オキシインドール（２．２ｇ）、４．０ｇの２，２’-ジブロモ
エチルエーテル、および７．９ｇの炭酸ナトリウムを２０ｍＬのエタノール中で
一晩還流し、濃縮し、５０ｍＬの水で希釈した。混合液を５０ｍＬずつの酢酸エ
チルで３回抽出し、有機抽出液を合一し、２０ｍＬの食塩水で洗浄し、無水硫酸
ナトリウムで乾燥して濃縮乾固した。固体をシリカゲルクロマトグラフィーに適
用し、０．７％酢酸を含有する酢酸エチル：ヘキサンの１：１混合液で溶出して
１．２ｇ（収率３７％）の標記化合物のベージュ色の固体を得た。６-アセチルアミノ-２-オキシインドール（Ｏ-５９） ６-アセチルアミノ-２-オキシインドールはHelv. Chem. Acta 20:373, 1937に
記載された手順を使用して合成した。６-（３-トリフルオロアセトアミドフェニル）-２-オキシインドール（Ｏ-６０ ） ３-アミノフェニルボロン酸（３．９ｇ）、５ｇの５-ブロモ-２-フルオロニト
ロベンゼン（fluronitrobenzene）、０．８ｇのテトラキス（トリフェニルホス フィン）-パラジウム、および２３ｍＬの２Ｍ炭化水素ナトリウム溶液を５０ｍ Ｌのトルエンに混合したもの（窒素雰囲気下）を２．５時間還流した。反応液を
２００ｍＬの氷水に注入し、混合液を５０ｍＬずつの酢酸エチルで３回抽出した
。合一した有機相を５０ｍＬの水および２０ｍＬの食塩水で洗浄し、無水硫酸ナ
トリウムで乾燥し、濃縮して９．７ｇ（収率９２％）の２-フルオロ-５-（３-ア
ミノフェニル）ニトロベンゼンの暗褐色油を得た。
【０３９９】 無水トリフルオロ酢酸（５．４ｍＬ）を、９．７ｇの２-フルオロ-５-（３-ア
ミノフェニル）-ニトロベンゼンおよび５．３ｍＬのトリエチルアミンを５０ｍ Ｌのジクロロメタンに混合した攪拌溶液に０℃で徐々に添加し、混合液を更に２
０分間攪拌した。混合液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
に適用して１０％酢酸エチル／ヘキサンで溶出し、８．６ｇ（収率６５％）の２
-フルオロ-５-（３-トリフルオロアセチルアミドフェニル）-ニトロベンゼンの 淡橙色油を得たが、これは放置すると固体化した。
【０４００】 マロン酸ジメチル（９．６ｍＬ）を、３．２ｇの６０％水素化ナトリウム／鉱
油を４０ｍＬの無水ジメチルスルホキシドに混合した攪拌懸濁液に窒素雰囲気下
で滴加した。混合液を１０分間攪拌し、２-フルオロ-５-（３-トリフルオロアセ
トアミドフェニル）ニトロベンゼンを２０ｍＬのジメチルスルホキシドに混合し
たものを添加した。得られた暗赤色の混合液を１００℃まで２時間加熱した。反
応液をクエンチングするために１００ｍＬの飽和塩化アンモニウム溶液に注入し
、５０ｍＬずつの酢酸エチルで２回抽出した。有機相を５０ｍＬずつの飽和塩化
アンモニウム溶液、水、および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、
濃縮して黄色油を得た。油をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに適用して酢
酸エチル：ヘキサンの１：４混合液で溶出し、４．４ｇ（収率５０％）の２-［ ２-ニトロ-４-（３-トリフルオロアセトアミドフェニル）フェニル］マロン酸ジ
メチルの淡黄色固体を得た。
【０４０１】 ２-［２-ニトロ-４-（３-トリフルオロアセトアミドフェニル）フェニル］マ ロン酸ジメチル（４．４ｇ）を５０ｍＬの６Ｎ塩酸中で一晩還流した。反応混液
を室温まで冷却し、固体を吸引濾過で回収し、水で洗浄し、真空下で乾燥して２
．７ｇ（収率７３％）の２-［２-ニトロ-４-（３-トリフルオロアセトアミドフ ェニル）フェニル］酢酸を得た。
【０４０２】 ２-［２-ニトロ-４-（３-トリフルオロアセトアミドフェニル）-フェニル］酢
酸（１００ｍｇ）および５０ｍｇの鉄粉を３ｍＬの酢酸に混合したものを１００
℃まで２時間加熱した。反応混液を濃縮し、残渣を５ｍＬの酢酸エチル中で超音
波処理した。不溶性の固体を吸引濾過して除去し、濾液を１Ｎ塩酸、水、および
食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して１０ｍｇ（収率１４％
）の標記化合物のバラ色の固体を得た。
【０４０３】 Ｂ．アルデヒドの合成 ６，７，８，９-テトラヒドロ-５Ｈ-カルバゾール-３-カルバルデヒドの合成 １．相当する市販されていない置換型テトラヒドロカルバゾールは公表されて
いる手順（J. Chem. Soc. 1945, 530; Aust. J. Chem. 1952, 976；およびJ. Ch
em. Soc. 1950, 84, 94）を使用して調製した。
【０４０４】 ２．段階１からの置換型６，７，８，９-テトラヒドロ-５Ｈ-カルバゾールの フィルスマイヤーのホルミル化（Org. Synth. Coll., Vol. IV, 1963, 831）に より、最終の置換型テトラヒドロカルバゾール-３-カルボキシアルデヒドを得る
。置換型９Ｈ-カルバゾール-３-カルバルデヒド、ジベンゾチフェン-２-カルボキ シアルデヒド、ジベンゾフラン-２-カルボキシアルデヒド、６，７，８，９-テ トラヒドロ-ジベンゾフラン-２-カルバルデヒド、９Ｈ-カルボリン-６-カルバル デヒド、９Ｈ-２，４，９-トリアザ-フルオレン-６-カルバルデヒド、９Ｈ-ピリ ド［２，３-ｂ］インドール-６-カルバルデヒド、９-チア-１，５，７-トリアザ -フルオレン-３-カルバルデヒド、およびフロ［３，２-ｂ；４，５-ｂ’］ジピ リジン-２-カルバルデヒドの合成 置換型９Ｈ-カルバゾール-３-カルバルデヒド、ジベンゾチフェン-２-カルボ キシアルデヒド、ジベンゾフラン-２-カルボキシアルデヒドは以下の市販の物質
から出発して通常のフィルスマイヤーのホルミル化によって調製する：置換型９
Ｈ-カルバゾール、ジベンゾチフェン、ジベンゾフラン、６，７，８，９-テトラ
ヒドロ-ジベンゾフラン、９Ｈ-カルボリン、９Ｈ-２，４，９-トリアザ-フルオ レン、９Ｈ-ピリド［２，３-ｂ］インドール-６-カルバルデヒド、９-チア-１，
５，７-トリアザ-フルオレン-３-カルバルデヒド、およびフロ［３，２-ｂ；４ ，５-ｂ’］ジピリジン。実施例４：本発明のイミダゾイルインドリノン化合物の合成法 本発明の化合物、並びに前駆体２-インドリノンおよびカルボニルイミダゾー ル（ここで“カルボニルイミダゾール”は以下の構造を有する化合物をいう）：
【０４０５】
【化７３】
【０４０６】 は、化学分野で周知の技術を使用して容易に合成しうる。当業者に評価されるよ
うに、本発明の化合物を生成するための他の合成経路が利用でき、また以下は例
として提供するものであり、制限するものではない。
【０４０７】 Ａ．一般的合成法 以下の一般的な方法論を使用して本発明の化合物を調製してもよい： 好適に置換した２-インドリノン（１当量）、好適に置換したカルボニルイミ ダゾール（１．２当量）、およびピペリジン（０．１当量）をエタノール（１- ２ｍＬ／ｍｍｏｌ ２-インドリノン）と混合し、その後混合液を９０℃で３か ら５時間加熱する。冷却後、沈殿を濾過し、冷エタノールで洗浄し、乾燥して標
的化合物を得る。
【０４０８】 Ｂ．特殊な合成 以下の実施例に、本発明の２-インドリノンのいくつかの代表的な合成法を示 す。これらの２-インドリノンは他に請求するものと同様、上記の手順を使用し て好適に置換されたカルボニルイミダゾールと反応させることによって請求する
化合物を生成する。５-ブロモ-２-インドリノンの調製 ２-インドリノン（１．３ｇ）を２０ｍＬのアセトニトリルに混合したものを-
１０℃まで冷却（collected）し、２．０ｇのＮ-ブロモスクシンイミドを攪拌し
ながら徐々に添加した。反応液を１０℃で１時間、および０℃で２時間攪拌した
。沈殿を回収し、水で洗浄し、乾燥して１．９ｇ（収率９０％）の標記化合物を
得た。５-ニトロ-２-インドリノンの調製 ２-インドリノン（６．５ｇ）を２５ｍＬの濃硫酸に溶解し、混合液を-１０- １５℃に保持しつつ、２．１ｍＬの発煙硝酸を滴加した。硝酸の添加後、反応混
液を０℃で０．５時間攪拌し、氷水に注入した。濾過して沈殿を回収し、水で洗
浄し、５０％酢酸から結晶化させた。次いで最終の結晶を濾過し、水で洗浄し、
真空下で乾燥して６．３ｇ（７０％）の５-ニトロ-２-インドリノンを得た。５-カルボキシエチル-２-インドリノンの調製 段階１：５-クロロアセチル-２-インドリノンの合成 塩化アルミニウム（３０．８ｇ）および２-オキシインドール（５．０ｇ）を ２００ｍＬの二硫化炭素に室温で添加し、混合液を攪拌した。塩化クロロアセチ
ル（３．８ｍＬ）を添加し、１時間攪拌を続けた。混合液を３時間加熱還流し、
冷却して溶媒をデカントした。残渣を氷水中で、固体懸濁物になるまで攪拌した
。固体を吸引濾過で回収し、水で洗浄し、乾燥して７．０ｇ（収率９０％）の標
記化合物を得た。 段階２：５-クロロエチル-２-インドリノンの合成 （インドリノン-０４１）５-クロロアセチル-２-インドリノン（７．０ｇ）を
２５ｍＬのトリフルオロ酢酸に添加し、混合液を氷浴中で攪拌しながら冷却した
。トリエチルシラン（１２．３ｍＬ）を２分間にわたって滴加した。その後反応
液を室温で４時間攪拌し、氷水に注入した。ヘキサンを添加し、混合液を激しく
攪拌し、固体を吸引濾過で回収し、ヘキサンで洗浄して５．９ｇ（収率９１％）
生成物の白色固体を得た。 段階３：５-シアノエチル-２-インドリノンの合成 シアン化カリウム（２．０２ｇ）を１５ｍＬのジメチルスルホキシドに添加し
、９０℃まで加熱した。５-クロロエチル-２-インドリノン（３．０ｇ）を５ｍ Ｌのジメチルスルホキシドに溶解したものを攪拌しながら徐々に添加し、反応液
を１５０℃まで２時間加熱した。混合液を冷却し、氷水に注入し、沈殿を濾過し
て回収し、水で洗浄し、乾燥して粗製の生成物を得た。粗製の物質をシリカゲル
クロマトグラフィー（５％メタノール／クロロホルム）に適用し、１．２ｇ（収
率４２％）の標記化合物を得た。 段階４：５-カルボキシエチル-２-インドリノンの合成 ５-シアノエチル-２-インドリノン（４．０２ｇ）を、２５ｍＬの濃塩酸を含 有する１０ｍＬの水に混合したものを４時間還流した。混合液を冷却し、水を添
加し、得られた固体を吸引濾過で回収し、水で洗浄し、乾燥して１．９ｇ（収率
４４％）の標記化合物の黄色固体を得た。５-アミノスルホニル-２-インドリノンの調製 段階１：５-クロロスルホニル-２-インドリノンの合成 １００ｍＬのフラスコに２７ｍＬのクロロスルホン酸を充填し、これに２-イ ンドリノンを徐々に添加した。反応混液を２５-３０℃の間に保持した。２-イン
ドリノンの添加後、反応混液を室温で１．５時間攪拌し、次いで６９℃まで１時
間加熱し、冷却し、氷水に注入した。沈殿を濾過し、水で洗浄し、真空オーブン
で乾燥して１１．０ｇ（５０％）の５-クロロスルホニル-２-インドリノンを得 た。 段階２：５-アミノスルホニル-２-インドリノンの合成 ５-クロロスルホニル-２-インドリノン（２．１ｇ）を、１０ｍＬの水酸化ア ンモニウムを１０ｍＬのエタノールに混合したものに添加し、室温で一晩攪拌し
た。混合液を濃縮し、固体を吸引濾過で回収し、０．４ｇ（収率２０％）の標記
化合物のオフホワイト色の固体を得た。５-（モルホリン-４-イル）スルホニル-２-インドリノンの調製 １００ｍＬのフラスコに２７ｍＬのクロロスルホン酸を充填し、これに１３．
３ｇの２-インドリノンを徐々に添加した。オキシインドールの添加中、反応温 度を３０℃未満に保持した。２-インドリノンの添加後、反応混液を室温で１． ５時間攪拌し、６８℃まで１時間加熱し、冷却し、水に注入した。沈殿を水で洗
浄し、真空オーブンで乾燥した。
【０４０９】 ５-クロロスルホニル-２-インドリノン（２．３ｇ）および２．２ｇのモルホ リンを５０ｍＬのジクロロメタンに混合したものを室温で３時間攪拌した。沈殿
を吸引濾過で回収し、酢酸エチルおよびヘキサンで洗浄し、乾燥して２．０９ｇ
（７４％）の標記化合物の白色固体を得た。 固定化相合成（immobilized phase synthesis）による３-（２-エチルイミダゾ ール-４-イル）-２-インドリノンの調製 本発明の化合物への上記の合成アプローチに加え、以下の新規の手順があり、
ここではカルボニルイミダゾールを（１）反応に使用する溶媒に不溶で、かつ（
制限されるわけではないが）濾過および他の物理的手順によって操作するのに十
分なサイズの固体基質に可逆的に結合させ、（２）２-インドリノンと反応させ 、（３）残存する出発物質および固定化されていない副産物を除去し、そして（
４）固体基質から遊離して単離する。以下はこの手順の実施例であり、これを使
用して本発明の化合物のいずれを調製してもよい。 Ａ．２-エチル-４-ホルミルイミダゾールの２-クロロトリチルクロライド樹脂へ の結合 ２-クロロトリチルクロライド樹脂（２、１００ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ／ｇ 許容負荷量）、Ｎ，Ｎ-ジイソプロピルエチルアミン（８７ｍｇ、０．６７ｍｍ ｏｌ）、およびジクロロメタン（１ｍＬ）の混合液を周囲温度で穏やかに４５分
間攪拌した。次いで攪拌溶液に２-エチル-４-ホルミルイミダゾール（３、２５ ｍｇ、０．２０１ｍｍｏｌ）を添加した。２１時間の攪拌後、樹脂を濾過し、３
０ｍＬずつのアセトン、水、ジクロロメタン、メタノール、および更なるアセト
ンで洗浄した。樹脂を１５分間自然乾燥した。
【０４１０】
【化７４】
【０４１１】 Ｂ．樹脂結合イミダゾリルインドリノンの合成 ２-クロロトリチル樹脂に結合した２-エチル-４-ホルミルイミダゾール（４、
７８ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ／ｇ負荷量を基準にして０．０５２ｍｍｏｌ）、Ｄ
ＭＦ（０．９ｍＬ）、およびピペリジン（０．１ｍＬ）を周囲温度で穏やかに４
５分間攪拌し、その後２-インドリノン（５、７０ｍｇ、０．５２３ｍｍｏｌ） を添加した。得られた混合液を穏やかに攪拌し、８０℃で２０時間加熱した。樹
脂を濾過し、３０ｍＬずつのアセトン、水、ジクロロメタン、メタノール、およ
び更なるアセトンで洗浄した。最後に樹脂を２０分間自然乾燥した。
【０４１２】
【化７５】
【０４１３】 Ｃ．樹脂結合イミダゾリルインドリノンの開裂 樹脂に結合したイミダゾリルインドリノン（６、６４ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ
／ｇ負荷量を基準にして０．０４３ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（０．９ｍＬ）
、およびトリフルオロ酢酸（０．１ｍＬ）の混合液を１５分毎に２時間、周囲温
度でボルテックス処理した。混合液を濾過し、樹脂をＭｅＯＨ（１ｍＬ）で洗浄
した。濾液を濃縮し、イミダゾリルインドリノンのＴＦＡ塩（７、１２ｍｇ、０
．０３４ｍｍｏｌ、７９％）の１０：１ Ｅ／Ｚ異性体混合物を得た。ピペリジ
ン（０．１ｍＬ）およびＥｔＯＨ（０．９ｍＬ）を用いて混合物を７０℃で６時
間処理し、イミダゾリルインドリノン（８）の２：１ Ｚ／Ｅ異性体混合物を得
た。
【０４１４】
【化７６】
【０４１５】実施例５：フェニル-２-インドリノン化合物の合成 本発明の化合物は以下に記載する手順で合成してもよい。本発明の化合物を得
るための化合物および／または前駆体の合成への他のアプローチはここでの開示
に基づいて当業者に明らかになる。それらの変更した手順は本発明の範囲および
意図の範囲内である。以下の代表的な合成は本発明の範囲をいかなるようにも制
限するものと解釈するべきではない。化合物ＰＩ-００１ ：３-（３，５-ジメチル-１Ｈ-ピロール-２-イルメチレン）-
６-（３-メトキシフェニル）-１，３-ジヒドロインドール-２-オン テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０．８ｇ）を、５ｇの３
-メトキシフェニルボロン酸、５ｇの５-ブロモ-２-フルオロニトロベンゼン、お
よび１１ｍＬの２Ｍ炭酸ナトリウム溶液を１００ｍＬのトルエンに混合したもの
に添加した。混合液を２時間還流し、水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。酢酸
エチル相を分離し、飽和炭酸水素ナトリウム、次いで食塩水で洗浄し、乾燥し、
濃縮して油状固体を得た。固体をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル：
ヘキサン １：６を溶出液として使用）に適用し、４．３ｇ（収率７７％）の4-
フルオロ-３’-メトキシ-３-ニトロビフェニルを得た。
【０４１６】 マロン酸ジメチル（９．７ｍＬ）を、２．０ｇの水素化ナトリウムを５０ｍＬ
のジメチルスルホキシドに懸濁したものに滴加した。混合液を１００℃で３５分
間攪拌し、その後室温まで冷却した。５０ｍＬのジメチルスルホキシドに混合し
た４-フルオロ-２’-メトキシ-３-ニトロビフェニル（４．２ｇ）を添加し、混 合液を再び１００℃まで加熱し、１時間攪拌した。反応混液を冷却し、３００ｍ
Ｌの飽和塩化アンモニウムでクエンチングし、酢酸エチルで２回抽出した。抽出
液を合一し、食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して粗製の３
’-メトキシ-３-ニトロビフェニル-4-マロン酸ジメチルの薄黄色固体を得た。
【０４１７】 粗製の３’-メトキシ-３-ニトロビフェニル-4-マロン酸ジメチルを４５ｍＬの
６Ｎ塩酸に添加し、混合液を１１０℃で４日間攪拌し、その後室温まで冷却した
。沈殿を濾過して回収し、水およびヘキサンで洗浄し、乾燥して５．３ｇの３’
-メトキシ-２-ニトロビフェニル-4-酢酸の淡黄褐色固体を得た。
【０４１８】 ３’-メトキシ-３-ニトロビフェニル-4-酢酸（５．２ｇ）をメタノールに溶解
し、室温で３時間水素化したが、これには水素化触媒として活性炭に担持した１
０％パラジウム（０．８ｇ）を使用した。触媒を濾別し、メタノールで洗浄し、
濾液を合一し、濃縮して褐色固体を得た。固体をシリカゲルクロマトグラフィー
（酢酸エチル：ヘキサン：酢酸 ３３：６６：１を溶出液として使用）に適用し
、３．０ｇ（４-フルオロ-３’-メトキシ-3-ニトロビフェニルを基準にして７５
％の収率）の６-（３-メトキシフェニル）-２-オキシインドールの桃色固体を得
た。
【０４１９】
【化７７】
【０４２０】 ３，５-ジメチル-１Ｈ-ピロール-２-カルボキシアルデヒド（７４ｍｇ）、１ ２０ｍｇの６-（３-メトキシフェニル）-２-オキシインドール、および１滴のピ
ペリジンを２ｍＬのエタノールに混合したものを９５℃まで加熱し、一晩保持し
た。反応混液を冷却し、生成した沈殿を濾過し、冷エタノールおよびヘキサンで
洗浄し、真空オーブンで一晩乾燥し、１３０ｍｇの標記化合物（７５％）の褐色
固体を得た。
【０４２１】
【化７８】
【０４２２】化合物ＰＩ-００２ ：６-（３-メトキシフェニル）-３-（４，５，６，７-テトラ
ヒドロ-１Ｈ-インドール-２-イルメチレン）-１，３-ジヒドロインドール-２-オ
ン ２．３ｇの１：１ ジメチルホルムアミド／オキシ塩化リン（フィルスマイヤ
ー試薬）を２０ｍＬのジクロロメタンに混合した攪拌懸濁液（０℃）に２ｇの４
，５，６，７-テトラヒドロインドールを数回に分けて添加し、温度を１０℃未 満に保持した。透明の混合液を４５分間還流し、その後４℃まで冷却した。水（
３０ｍＬ）を添加し、水相を分離して保存した。有機相を１０ｍＬの水で抽出し
、抽出水溶液を合一し、４℃まで冷却した。２５ｍＬの２．５Ｎ水酸化ナトリウ
ムを攪拌水相に徐々に添加し、その後混合液を１時間攪拌したが、その間、温度
は約４℃に保持した。生成した淡黄褐色沈殿を吸引濾過で回収し、水で洗浄液の
ｐＨが７と８の間になるまで洗浄した。生成物を漏斗上で吸引乾燥し、次いで真
空乾燥して１ｇの４，５，６，７-テトラヒドロ-１Ｈ-インドール-２-カルボキ シアルデヒド（４１％）の黄褐色固体を得た。
【０４２３】
【化７９】
【０４２４】 ４，５，６，７-テトラヒドロ-１Ｈ-インドール-２-カルボキシアルデヒド（ ９０ｍｇ）、１２０ｍｇの６-（３-メトキシフェニル）-２-オキシインドール、
および１滴のピペリジンを２ｍＬのエタノールに混合したものを９５℃で一晩保
持した。反応混液を冷却し、生成した沈殿を濾過し、冷エタノールおよびヘキサ
ンで洗浄し、真空オーブンで一晩乾燥し、１７０ｍｇの標記化合物（９２％）の
褐色固体を得た。
【０４２５】
【化８０】
【０４２６】化合物ＰＩ-００３ ：３-（３，５-ジエチル-１Ｈ-ピロール-２-イルメチレン）-
６-（３-メトキシフェニル）-１，３-ジヒドロインドール-２-オン ジメチルホルムアミド（５０．２ｇ）および２００ｍＬのジクロロメタンを、
スターラー、別の漏斗、および熱電対を装備した２ｌフラスコに充填し、-４℃ まで冷却した。オキシ塩化リン（１０５．６ｇ）を４５０ｍＬの塩化メチレンに
混合したものを数分にわたって添加し、反応液を室温で４５分間攪拌した。次い
で混合液を-４℃に冷却し、７６．９ｇの２，４-ジエチルピロールを１５０ｍＬ
のジクロロメタンに混合したものを攪拌しながら１３分間にわたって滴加した。
添加終了時の温度は１４℃であった。反応液を９．５時間攪拌し、その間、反応
液を室温とさせた。薄層クロマトグラフィーは出発物質が存在しないことを示し
た。反応混液を１０分間加熱還流し、その後室温まで冷却した。水酸化ナトリウ
ム（４０ｇ／７００ｍＬ水）および酢酸（１２０ｇ）を攪拌しながら５分間にわ
たって添加した。自然還流が静まった時点で、反応液を３０分間還流し、４０ｇ
の固体の酢酸ナトリウムを添加し、更に１５分間還流を継続した。ガスクロマト
グラフィーは単一の生成物のみが存在することを示した。緑色の有機相を分離し
、７５ｍＬの飽和炭酸ナトリウムで３回洗浄したが、その際、溶液は褐色に変化
した。溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ロータリーエバポレーターに適用し
、１０インチのvacuum jacketed Vigreux カラムを通して０．６-１．０ｍｍで 蒸留し、９６．４ｇ（９４％）の２，４-ジエチル-５-ホルミルピロール（沸点 １０８-１１３℃）を得た。生成物は淡黄色であったが、回収フラスコ内で迅速 に濃色となった。
【０４２７】
【化８１】
【０４２８】 ３，５-ジエチル-１Ｈ-ピロール-２-カルボキシアルデヒド（９０ｍｇ）、１ ２０ｍｇの６-（３-メトキシフェニル）-２-オキシインドール、および１滴のピ
ペリジンを２ｍＬのエタノールに混合したものを９５℃まで加熱し、その温度で
一晩保持した。反応混液を冷却し、生成した沈殿を濾過し、冷エタノールおよび
ヘキサンで洗浄し、真空オーブンで一晩乾燥し、１６２ｍｇの３-（３，５-ジエ
チル-１Ｈ-ピロール-２-イルメチレン）-６-（３-メトキシフェニル）-１，３- ジヒドロインドール-２-オン（８７％）の褐色固体を得た。
【０４２９】
【化８２】
【０４３０】化合物ＰＩ-００４ ：３-（３Ｈ-イミダゾール-４-イルメチレン）-６-（３-メト
キシフェニル）-１，３-ジヒドロインドール-２-オン ３Ｈ-イミダゾール-４-カルボキシアルデヒド（１０８．６ｍｇ）、１２０ｍ ｇの６-（３-メトキシフェニル）-２-オキシインドール、および１滴のピペリジ
ンを２ｍＬのエタノールに混合したものを９５℃で一晩保持した。反応混液を冷
却し、生成した沈殿を濾過し、冷エタノールおよびヘキサンで洗浄し、真空オー
ブンで一晩乾燥し、１４０ｍｇの標記化合物（８８％）の褐色固体を得た。
【０４３１】
【化８３】
【０４３２】化合物ＰＩ-００５ ：４-｛４-［６-（３-メトキシフェニル）-２-オキソ-１，２
-ジヒドロインドール-３-イリデンメチル］-フェニル｝-ピペラジン-１-カルボ キシアルデヒド ３０ｍＬのジメチルホルムアミドを２００ｍＬのジクロロエタンに混合して０
℃に冷却した溶液に、３０ｍＬのオキシ塩化リンを添加した。混合液を３０分間
攪拌し、１６ｇの１-フェニルピペラジンを１５分間にわたって徐々に添加した 。混合液を５０℃で１時間攪拌した。薄層クロマトグラフィー（酢酸エチル：ア
セトン：ヘキサン、２：１：１、シリカゲル）は出発物質が存在せず、主たる生
成物（Ｒｆ０．４）および少量の生成物（Ｒｆ０．５）を示した。反応混液を氷
水に注入し、水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ９に調整し、１時間攪拌した。混合
液を酢酸エチルで抽出し、抽出液を食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥
して濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに適用し、酢酸エチ
ル：アセトン：ヘキサン（２：１：１）で溶出して９．０ｇ（収率４１％）の４
-（４-ホルミルフェニル）-ピペラジン-１-カルボキシアルデヒドを得た。
【０４３３】 ４-（４-ホルミルフェニル）-ピペラジン-１-カルボキシアルデヒド（１３１ ｍｇ）、１２０ｍｇの６-（３-メトキシフェニル）-２-オキシインドール、およ
び１滴のピペリジンを２ｍＬのエタノールに混合したものを９５℃で一晩保持し
た。反応混液を冷却し、生成した沈殿を濾過し、冷エタノールおよびヘキサンで
洗浄し、真空オーブンで一晩乾燥し、２００ｍｇの標記化合物（９１％）の褐色
固体を得た。
【０４３４】
【化８４】
【０４３５】化合物ＰＩ-００６ ：６-（３-メトキシフェニル）-３-（３-メチル-４，５，６ ，７-テトラヒドロ-１Ｈ-インドール-２-イルメチレン）-１，３-ジヒドロイン ドール-２-オン 酢酸（３４ｍＬ）、１８ｇの２-アセチルシクロヘキサノン、２８．５ｇの塩 酸アミノマロン酸ジエチル（diethyl aminomalonate hydrochloride）、および １１．６ｇの酢酸ナトリウムを、還流冷却器およびマグネティック・スターラー
を装備した２５０ｍＬの３つ口フラスコに充填した。フラスコを油浴に配し、浴
中の温度を２０分間にわたって１３０℃まで上昇させた。８０℃で二酸化炭素が
発生し始めた。１３０℃に達してから１５分後、気体発生は終了した。混合液を
氷浴で冷却し、６８ｍＬの水を攪拌しながら徐々に添加した。生成した黄褐色の
固体を吸引濾過で回収し、水で２回、そして冷エタノール：水 ２：１で２回洗
浄し、２０．８ｇ（収率７８％）の２-エトキシカルボニル-３-メチル-４，５，
６，７-テトラヒドロインドールのオフホワイト色の固体を得た。薄層クロマト グラフィー（ジクロロメタン、シリカゲル）は２つのスポット、Ｒｆ０．６およ
び０．５を示した。プロトンＮＭＲにより、スポットが所望の生成物（Ｒｆ０．
６）およびその位置異性体（regioisomer）（Ｒｆ０．５）（７：１の割合）で あることが明らかとなった。ヘキサン（約８ｍＬ／ｇ）からの再結晶で１２．６
ｇ（収率７０％）の２-エトキシカルボニル-３-メチル-４，５，６，７-テトラ ヒドロインドールのオフホワイト色の固体を得た。再結晶した生成物のＮＭＲを
行ったところ、所望の生成物とその位置異性体の比率は４３：１であった。
【０４３６】 ２-エトキシカルボニル-３-メチル-４，５，６，７-テトラヒドロインドール （１５．３ｇ）、１０４ｍＬの２．５Ｎ水酸化ナトリウム、１２５ｍＬのエタノ
ール、および１８０ｍＬの水を、還流冷却器およびマグネティック・スターラー
を装備した５００ｍＬの丸底フラスコに充填した。フラスコを油浴に配し、加熱
還流した。混合液を５時間還流したが、その時点で少量の暗色油が生成した。混
合液を１００ｍＬの水で希釈し、２℃まで冷却した。約０．５ｇの固化した油を
濾別した。油は出発物質および３-メチル-４，５，６，７-テトラヒドロインド ールを含有した。５０ｍＬの６Ｎ塩酸を攪拌しながら添加した。オフホワイト色
の沈殿が生成し、迅速に桃色に変化したが、これを吸引濾過で回収し、水で洗浄
し、周囲温度で３日間真空乾燥し、１４．５ｇ（収率１１１％）の２-カルボキ シ-３-メチル-４，５，６，７-テトラヒドロインドールを得た。
【０４３７】 ２-カルボキシ-３-メチル-４，５，６，７-テトラヒドロインドール（１４． ５ｇ）をマグネティック・スターラーを装備した５０ｍＬの丸底フラスコに入れ
た。フラスコを油浴中に配し、油浴の温度を１４０-１５０℃まで２０分間加熱 した。フラスコのネックに水が凝縮しているのが観察された。薄層クロマトグラ
フィー（ジクロロメタン、シリカゲル、Ｒｆ０．９）は、完全に生成物に変換し
たことを示した。暗色の液体を冷却し、３０ｍＬのヘキサンに溶解し、硫酸ナト
リウムで乾燥し、エバポレートして７．５ｇの３-メチル-４，５，６，７-テト ラヒドロインドールの結晶と暗色油の混合物を得た。
【０４３８】 ５．０ｇのフィルスマイヤー試薬を４０ｍＬのジクロロメタンに混合した攪拌
懸濁液（０℃）に４．８ｇの３-メチル-４，５，６，７-テトラヒドロインドー ルを、温度を１０℃未満に保持するように数回に分けて添加した。透明な混合液
を４５分間還流し、その後４℃まで冷却した。水（８０ｍＬ）を添加し、水相を
分離して保存した。有機相を２０ｍＬの水で抽出し、水相を合一して４℃まで冷
却した。６２ｍＬの２．５Ｎ水酸化ナトリウムを攪拌水相に徐々に添加し、その
後混合液を４℃で１時間攪拌した。生成した淡黄褐色の沈殿を吸引濾過で回収し
、洗浄液のｐＨが７と８の間になるまで水で洗浄した。生成物を漏斗上で吸引乾
燥した後、真空乾燥して４．３ｇの２-ホルミル-３-メチル-４，５，６，７-テ トラヒドロインドールの黄褐色固体を得た。薄層クロマトグラフィー（酢酸エチ
ル、シリカゲル）、Ｒｆ０．７５。同純度の更なる生成物（０．７ｇ）が母液か
ら濃縮せずに直接回収された。これを真空乾燥し、合計５．０ｇ（収率８６％）
の３-メチル-４，５，６，７-テトラヒドロ-１Ｈ-インドール-２-カルボキシア ルデヒドを得た。
【０４３９】
【化８５】
【０４４０】 ３-メチル-４，５，６，７-テトラヒドロ-１Ｈ-インドール-２-カルボキシア ルデヒド（９８ｍｇ）、１２０ｍｇの６-（３-メトキシフェニル）-２-オキシイ
ンドール、および１滴のピペリジンを２ｍＬのエタノールに混合したものを９５
℃で一晩保持した。反応混液を冷却し、生成した沈殿を濾過し、冷エタノールお
よびヘキサンで洗浄し、真空オーブンで一晩乾燥し、１６６ｍｇの標記化合物（
８６％）の褐色固体を得た。
【０４４１】
【化８６】
【０４４２】化合物ＰＩ-００７ ：３-（３，５-ジメチル-１Ｈ-ピロール-２-イルメチレン）-
６-フェニル-１，３-ジヒドロインドール-２-オン マロン酸ジメチル（１０ｍＬ）を２５ｍＬのジメチルスルホキシドに混合した
ものを、２５ｍＬのジメチルスルホキシドに懸濁した３．５ｇの水素化ナトリウ
ムに滴加し、混合液を１００℃で１０分間攪拌した。次いで混合液を室温まで冷
却し、４．７ｇの４-フルオロ-３-ニトロビフェニルを２５ｍＬのジメチルスル ホキシドに混合したものを添加した。混合液を再び１００℃まで加熱した後、２
時間攪拌し、冷却して３００ｍＬの飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチングし
た。混合液を酢酸エチルで３回抽出し、合一した有機相を水および食塩水で洗浄
し、エバポレートして粗製の３-ニトロビフェニル-４-マロン酸ジメチルの黄色 油を得た。
【０４４３】 粗製の３-ニトロビフェニル-４-マロン酸ジメチルを３０ｍＬの６Ｎ塩酸中で ２４時間還流した。生成した沈殿を吸引濾過で回収し、水で洗浄し、乾燥して４
．５ｇ（４-フルオロ-３-ニトロビフェニルを基準にして８０％）の３-ニトロビ
フェニル-４-酢酸のクリーム色の固体を得た。
【０４４４】 鉄粉（２．６ｇ）を、４．５ｇの３-ニトロビフェニル-4-酢酸を４０ｍＬの酢
酸に混合したものに一度に添加した。混合液を２時間還流し、濃縮乾固し、その
後酢酸エチルに溶解した。固体を濾別し、濾液を１Ｎ塩酸、次いで食塩水で２回
洗浄した。その後、酢酸エチル溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。硫酸ナト
リウムを濾別し、濾液を濃縮して３．４ｇ（収率９３％）の６-フェニル-２-オ キシインドールの淡褐色固体を得た。
【０４４５】
【化８７】
【０４４６】 ３，５-ジメチル-１Ｈ-ピロール-２-カルボキシアルデヒド（７４ｍｇ）、１ ０５ｍｇの６-フェニル-２-オキシインドール、および１滴のピペリジンを２ｍ Ｌのエタノールに混合したものを９０℃で一晩保持した。反応混液を冷却し、生
成した沈殿を濾過し、冷エタノールおよびヘキサンで洗浄し、真空オーブンで一
晩乾燥し、１００ｍｇの標記化合物（６４％）の橙色固体を得た。
【０４４７】
【化８８】
【０４４８】化合物ＰＩ-００８ ：３-（３，５-ジメチル-１Ｈ-ピロール-２-イルメチレン）-
６-（３-エトキシフェニル）-１，３-ジヒドロインドール-２-オン テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０．８ｇ）を、４．２ｇ
の３-エトキシフェニルボロン酸、５．０ｇの５-ブロモ-２-フルオロニトロベン
ゼン、および２２ｍＬの２Ｍ炭酸ナトリウムを５０ｍＬのトルエンおよび５０ｍ
Ｌのエタノールに混合したものに添加した。混合液を２時間還流し、濃縮し、水
を添加し、混合液を酢酸エチルで２回抽出した。酢酸エチル相を水、次いで食塩
水で洗浄し、その後、乾燥して濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー
（５％酢酸エチル／ヘキサンを溶出液として使用）に適用し、５．３ｇ（収率９
０％）の粗製４-フルオロ-３’-エトキシ-３-ニトロビフェニルの黄色油を得た 。
【０４４９】 マロン酸ジメチル（１１．４ｍＬ）を、４．０ｇの水素化ナトリウムを２０ｍ
Ｌのジメチルスルホキシドに懸濁したものに滴加した。混合液を１００℃で１０
分間攪拌した後、室温まで冷却した。２５ｍＬのジメチルスルホキシドに混合し
た粗製の４-フルオロ-３’-エトキシ-３-ニトロビフェニル（５．３ｇ）を添加 し、混合液を再び１００℃まで加熱し、更に２時間攪拌した。次いで反応混液を
冷却し、３００ｍＬの飽和塩化アンモニウムでクエンチングし、酢酸エチルで３
回抽出した。抽出液を合一し、水および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで
乾燥し、濃縮して粗製の３’-エトキシ-３-ニトロビフェニル-4-マロン酸ジメチ
ルの黄色油を得た。
【０４５０】 粗製の３’-エトキシ-３-ニトロビフェニル-4-マロン酸ジメチルを６０ｍＬの
６Ｎ塩酸に添加し、混合液を１００℃まで加熱し、その温度で４日間攪拌した。
その後反応混液を室温まで冷却した。生成した沈殿を濾過して回収し、水および
ヘキサンで洗浄し、乾燥して４．７ｇ（５-ブロモ-２-フルオロニトロベンゼン を基準にして７７％）の粗製３’-エトキシ-３-ニトロビフェニル-4-酢酸の淡黄
褐色固体を得た。
【０４５１】 鉄粉（２．４ｇ）を、４．６ｇの３’-エトキシ-３-ニトロビフェニル-4-酢酸
を４０ｍＬの氷酢酸に混合したものに一度に添加し、混合液を２時間還流した。
次いで反応混液を濃縮乾固し、酢酸エチルで繰り返し処理し、不溶性物質を濾別
した。濾液を１Ｎ塩酸、次いで食塩水で２回洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾
燥し、濃縮して３．５ｇ（収率９１％）の６-（３-エトキシフェニル）-２-オキ
シインドールの淡褐色固体を得た。
【０４５２】
【化８９】
【０４５３】 ３，５-ジメチル-１Ｈ-ピロール-２-カルボキシアルデヒド（７４ｍｇ）、１ ０５ｍｇの６-（３-エトキシフェニル）-２-オキシインドール、および１滴のピ
ペリジンを２ｍＬのエタノールに混合したものを９０℃で一晩保持した。反応混
液を冷却し、生成した沈殿を濾過し、冷エタノールおよびヘキサンで洗浄し、真
空オーブンで一晩乾燥し、１５０ｍｇの標記化合物（８４％）の橙色固体を得た
。
【０４５４】
【化９０】
【０４５５】化合物ＰＩ-００９ ：６-（３-エトキシフェニル）-３-（４，５，６，７-テトラ
ヒドロ-１Ｈ-インドール-２-イルメチレン）-１，３-ジヒドロインドール-２-オ
ン ４，５，６，７-テトラヒドロ-１Ｈ-インドール-２-カルボキシアルデヒド（ ９０ｍｇ）、１２７ｍｇの６-（３-エトキシフェニル）-２-オキシインドール、
および１滴のピペリジンを２ｍＬのエタノールに混合したものを９０℃で一晩保
持した。反応混液を冷却し、生成した沈殿を濾過し、冷エタノールおよびヘキサ
ンで洗浄し、真空オーブンで一晩乾燥し、１５７ｍｇの標記化合物（８２％）の
橙色固体を得た。
【０４５６】
【化９１】
【０４５７】化合物ＰＩ-０１０ ：６-（３-エトキシフェニル）-３-（３Ｈ-イミダゾール-４-
イルメチレン）-１，３-ジヒドロインドール-２-オン ３Ｈ-イミダゾール-４-カルボキシアルデヒド（５８ｍｇ）、１２７ｍｇの６-
（３-エトキシフェニル）-２-オキシインドール、および１滴のピペリジンを２ ｍＬのエタノールに混合したものを９５℃まで加熱し、一晩保持した。反応混液
を冷却し、生成した沈殿を濾過し、冷エタノールおよびヘキサンで洗浄し、真空
オーブンで一晩乾燥し、１３０ｍｇの標記化合物（７８％）の黄金色固体を得た
。
【０４５８】
【化９２】
【０４５９】化合物ＰＩ-０１１ ：６-（３-エトキシフェニル）-３-（５-メチルチオフェン- ２-イルメチレン）-１，３-ジヒドロインドール-２-オン ５-メチルチオフェン-２-カルボキシアルデヒド（７５．６ｍｇ）、１２７ｍ ｇの６-（３-エトキシフェニル）-２-オキシインドール、および１滴のピペリジ
ンを２ｍＬのエタノールに混合したものを９５℃まで加熱し、一晩保持した。反
応混液を冷却し、生成した沈殿を濾過し、冷エタノールおよびヘキサンで洗浄し
、真空オーブンで一晩乾燥し、９８ｍｇの標記化合物（５４％）の褐色固体を得
た。
【０４６０】
【化９３】
【０４６１】化合物ＰＩ-０１２ ：３-（３，５-ジエチル-１Ｈ-ピロール-２-イルメチレン）-
６-（３-エトキシフェニル）-１，３-ジヒドロインドール-２-オン ３，５-ジエチル-１Ｈ-ピロール-２-カルボキシアルデヒド（９０．６ｍｇ） 、１２７ｍｇの６-（３-エトキシフェニル）-２-オキシインドール、および１滴
のピペリジンを２ｍＬのエタノールに混合したものを９０℃まで加熱し、一晩保
持した。反応混液を冷却し、生成した沈殿を濾過し、冷エタノールおよびヘキサ
ンで洗浄し、真空オーブンで一晩乾燥し、１４９ｍｇの標記化合物（７７％）の
橙色固体を得た。
【０４６２】
【化９４】
【０４６３】化合物ＰＩ-０１３ ：６-フェニル-３-（４，５，６，７-テトラヒドロ-１Ｈ-イ ンドール-２-イルメチレン）-１，３-ジヒドロインドール-２-オン ４，５，６，７-テトラヒドロ-１Ｈ-インドール-２-カルボキシアルデヒド（ ９０ｍｇ）、１０５ｍｇの６-フェニル-２-オキシインドール、および１滴のピ ペリジンを２ｍＬのエタノールに混合したものを９５℃まで加熱し、一晩保持し
た。次いで反応混液を冷却し、生成した沈殿を濾過し、冷エタノールおよびヘキ
サンで洗浄し、真空オーブンで一晩乾燥し、１２０ｍｇ（７０％）の標記化合物
の橙色固体を得た。
【０４６４】
【化９５】
【０４６５】化合物ＰＩ-０１４ ：３-（３Ｈ-イミダゾール-４-イルメチレン）-６-フェニル-
１，３-ジヒドロインドール-２-オン ３Ｈ-イミダゾール-４-カルボキシアルデヒド（５８ｍｇ）、１０５ｍｇの６-
フェニル-２-オキシインドール、および１滴のピペリジンを２ｍＬのエタノール
に混合したものを９５℃まで加熱し、一晩保持した。反応混液を冷却し、生成し
た沈殿を濾過し、冷エタノールおよびヘキサンで洗浄し、真空オーブンで一晩乾
燥し、７８ｍｇの標記化合物（５４％）の黄金色固体を得た。
【０４６６】
【化９６】
【０４６７】化合物ＰＩ-０１５ ：３-（５-メチルチオフェン-２-イルメチレン）-６-フェニ ル-１，３-ジヒドロインドール-２-オン ５-メチルチオフェン-２-カルボキシアルデヒド（７５．６ｍｇ）、１０５ｍ ｇの６-フェニル-２-オキシインドール、および１滴のピペリジンを２ｍＬのエ タノールに混合したものを９５℃まで加熱し、一晩保持した。反応混液を冷却し
、生成した沈殿を濾過し、冷エタノールおよびヘキサンで洗浄し、真空オーブン
で一晩乾燥し、９３ｍｇの標記化合物（５９％）の橙色固体を得た。
【０４６８】
【化９７】
【０４６９】化合物ＰＩ-０１６ ：３-（３，５-ジエチル-１Ｈ-ピロール-２-イルメチレン）-
６-フェニル-１，３-ジヒドロインドール-２-オン ３，５-ジエチル-１Ｈ-ピロール-２-カルボキシアルデヒド（９０．６ｍｇ） 、１０５ｍｇの６-フェニル-２-オキシインドール、および１滴のピペリジンを ２ｍＬのエタノールに混合したものを９５℃まで加熱し、一晩保持した。反応混
液を冷却し、生成した沈殿を濾過し、冷エタノールおよびヘキサンで洗浄し、真
空オーブンで一晩乾燥し、１２２ｍｇの標記化合物（７１％）の赤色固体を得た
。
【０４７０】
【化９８】
【０４７１】化合物ＰＩ-０１７ ：３-（３，５-ジメチル-１Ｈ-ピロール-２-イルメチレン）-
６-（４-メトキシフェニル）-１，３-ジヒドロインドール-２-オン テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１ｇ）を、５ｇの４-メ トキシフェニルボロン酸、６．６ｇの５-ブロモ-２-フルオロニトロベンゼン、 および３０ｍＬの２Ｍ炭酸ナトリウムを５０ｍＬのトルエンおよび５０ｍＬのエ
タノールに混合したものに添加した。混合液を２時間還流し、濃縮し、残渣を酢
酸エチルで２回抽出した。酢酸エチル相を水および食塩水で洗浄し、乾燥して濃
縮し、褐色の油状固体を得た。固体をシリカゲルクロマトグラフィー（５％酢酸
エチル／ヘキサンを溶出液として使用）に適用し、粗製４-フルオロ-４’-メト キシ-３-ニトロビフェニルの淡黄色固体を得た。
【０４７２】 マロン酸ジメチル（１０ｍＬ）を、２．０ｇの水素化ナトリウムを６０ｍＬの
ジメチルスルホキシドに懸濁したものに滴加した。混合液を１００℃まで加熱し
、その温度で１０分間攪拌した後、室温まで冷却した。５０ｍＬのジメチルスル
ホキシドに混合した粗製の４-フルオロ-２’-メトキシ-３-ニトロビフェニル（ ５．２ｇ）を添加し、混合液を再び１００℃まで加熱し、その温度で２時間攪拌
した。反応混液を冷却し、３００ｍＬの飽和塩化ナトリウムでクエンチングし、
酢酸エチルで３回抽出した。抽出液を合一し、飽和塩化アンモニウム、水、およ
び食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して粗製の４’-メトキ シ-３-ニトロビフェニル-4-マロン酸ジメチルの黄色油を得た。
【０４７３】 粗製の４’-メトキシ-３-ニトロビフェニル-4-マロン酸を６０ｍＬの６Ｎ塩酸
中で１００℃まで加熱し、その温度で１５時間攪拌し、その後反応液を室温まで
冷却した。生成した沈殿を濾過して回収し、水およびヘキサンで洗浄し、乾燥し
て７．２ｇの粗製４’-メトキシ-３-ニトロビフェニル-4-酢酸の淡黄褐色固体を
得た。
【０４７４】 鉄粉（３．６ｇ）を、７．２ｇの４’-メトキシ-３-ニトロビフェニル-4-酢酸
を５０ｍＬの氷酢酸に混合したものに一度に添加し、混合液を１００℃まで加熱
し、その温度で一晩攪拌した。次いで反応混液を濃縮乾固し、酢酸エチル中で超
音波処理を行い、不溶性物質を濾別した。濾液を１Ｎ塩酸、次いで食塩水で２回
洗浄し、その後無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して２．７ｇ（５-ブロモ-２
-フルオロニトロベンゼンを基準にして５４％）の６-（４-メトキシフェニル）-
２-オキシインドールのバラ色の固体を得た。
【０４７５】
【化９９】
【０４７６】 ３，５-ジメチル-１Ｈ-ピロール-２-カルボキシアルデヒド（７４ｍｇ）、１ ２０ｍｇの６-（４-メトキシフェニル）-２-オキシインドール、および１滴のピ
ペリジンを２ｍＬのエタノールに混合したものを９０℃まで加熱し、その温度で
一晩保持した。その後反応混液を冷却し、生成した沈殿を濾過し、冷エタノール
およびヘキサンで洗浄し、真空オーブンで一晩乾燥し、８７ｍｇの標記化合物（
５０％）の褐色固体を得た。
【０４７７】
【化１００】
【０４７８】化合物ＰＩ-０１８ ：３-（３，５-ジエチル-１Ｈ-ピロール-２-イルメチレン）-
６-（４-メトキシフェニル）-１，３-ジヒドロインドール-２-オン ３，５-ジエチル-１Ｈ-ピロール-２-カルボキシアルデヒド（９１ｍｇ）、１ ２０ｍｇの６-（４-メトキシフェニル）-２-オキシインドール、および１滴のピ
ペリジンを２ｍＬのエタノールに混合したものを９０℃まで加熱し、その温度で
４時間保持した。その後反応混液を冷却し、生成した沈殿を濾過し、冷エタノー
ルおよびヘキサンで洗浄し、真空オーブンで一晩乾燥し、９０ｍｇの標記化合物
（４８％）の暗赤色固体を得た。
【０４７９】
【化１０１】
【０４８０】化合物ＰＩ-０１９ ：３-（３Ｈ-イミダゾール-４-イルメチレン）-６-（４-メト
キシフェニル）-１，３-ジヒドロインドール-２-オン ３Ｈ-イミダゾール-４-カルボキシアルデヒド（５８ｍｇ）、１２０ｍｇの６-
（４-メトキシフェニル）-２-オキシインドール、および１滴のピペリジンを２ ｍＬのエタノールに混合したものを９０℃まで加熱し、その温度で４時間保持し
た。反応混液を冷却し、生成した沈殿を濾過し、冷エタノールおよびヘキサンで
洗浄し、真空オーブンで一晩乾燥し、８５ｍｇの標記化合物（５４％）の暗赤色
固体を得た。
【０４８１】
【化１０２】
【０４８２】化合物ＰＩ-０２０ ：６-（４-メトキシフェニル）-３-（４，５，６，７-テトラ
ヒドロ-１Ｈ-インドール-２-イルメチレン）-１，３-ジヒドロインドール-２-オ
ン ４，５，６，７-テトラヒドロ-１Ｈ-インドール-２-カルボキシアルデヒド（ ９０ｍｇ）、１２０ｍｇの６-（４-メトキシフェニル）-２-オキシインドール、
および１滴のピペリジンを２ｍＬのエタノールに混合したものを９０℃まで加熱
し、その温度で４時間保持した。反応混液を冷却し、生成した沈殿を濾過し、冷
エタノールおよびヘキサンで洗浄し、真空オーブンで一晩乾燥し、９２ｍｇの標
記化合物（５０％）の橙色固体を得た。
【０４８３】
【化１０３】
【０４８４】化合物ＰＩ-０２１ ：６-（４-メトキシフェニル）-３-（３-メチル-４，５，６ ，７-テトラヒドロ-１Ｈ-インドール-２-イルメチレン）-１，３-ジヒドロイン ドール-２-オン ３-メチル-４，５，６，７-テトラヒドロ-１Ｈ-インドール-２-カルボキシア ルデヒド（９８ｍｇ）、１２０ｍｇの６-（４-メトキシフェニル）-２-オキシイ
ンドール、および１滴のピペリジンを２ｍＬのエタノールに混合したものを９０
℃まで加熱し、その温度で一晩保持した。反応混液を冷却し、生成した沈殿を濾
過し、冷エタノールおよびヘキサンで洗浄し、真空オーブンで一晩乾燥し、９２
ｍｇの標記化合物（４８％）の橙色固体を得た。
【０４８５】
【化１０４】
【０４８６】化合物ＰＩ-０２２ ：６-（４-メトキシフェニル）-３-（５-メチルチオフェン- ２-イルメチレン）-１，３-ジヒドロインドール-２-オン ５-メチルチオフェン-２-カルボキシアルデヒド（７６ｍｇ）、１２０ｍｇの ６-（４-メトキシフェニル）-２-オキシインドール、および１滴のピペリジンを
２ｍＬのエタノールに混合したものを９０℃まで加熱し、その温度で一晩保持し
た。反応混液を冷却し、生成した沈殿を濾過し、冷エタノールおよびヘキサンで
洗浄し、真空オーブンで一晩乾燥し、７８ｍｇの標記化合物（４５％）の黄金色
固体を得た。
【０４８７】
【化１０５】
【０４８８】化合物ＰＩ-０２３ ：３-｛２-［６-（３-メトキシフェニル）-２-オキソ-１，２
-ジヒドロインドール-３-イリデンメチル］-４，５，６，７-テトラヒドロ-１Ｈ
-インドール-３-イル｝-プロピオン酸 １-（モルホリン-４-イル）シクロヘキサン（３００ｇ）、２１４ｇのトリエ チルアミン、および１４００ｍＬのジクロロメタンを１５分間還流し、次いで水
浴で１５-２０℃まで冷却した。塩化エチルスクシニル（２６６ｇ）を５００ｍ Ｌのジクロロメタンに溶解したものを３０分間にわたって添加した。混合液を３
０分間還流し、水浴で室温まで冷却した。生成した固体を吸引濾過で回収し、１
００ｍＬのジクロロメタンで洗浄し、廃棄した。濾液をフラスコに戻し、溶媒を
留去し、４５４ｇの粗製４-（２-モルホリン-４-イル-シクロヘキシ-１-エニル ）-４-オキソブチル酸エチルエステルの油を得た。
【０４８９】 粗製４-（２-モルホリン-４-イル-シクロヘキシ-１-エニル）-４-オキソブチ ル酸エチルエステル（４５４ｇ）、３９８ｇの塩酸アミノマロン酸ジエチル、１
６２ｇの酢酸ナトリウム、および３５０ｍＬの氷酢酸を３０分間にわたって１０
８℃まで加熱した。混合液を１００-１０８℃で２時間攪拌し、その後、水浴で 約５０℃まで冷却した。水（２５００ｍＬ）および７００ｍＬの酢酸エチルを添
加した。酢酸エチル相を分離し、食塩水で３回、飽和炭酸水素ナトリウムで２回
、食塩水で更に１回洗浄し、次いで無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ロータリーエ
バポレートして４９４ｇ（収率１０５％）の粗製３-（２-エトキシカルボニル- エチル）-４，５，６，７-テトラヒドロ-１Ｈ-インドール-２-カルボン酸エチル
エステルの油を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エ
チル：ヘキサンの１：１０を溶出液として使用）に適用し、１２２．１ｇの純粋
な３-（２-エトキシカルボニル-エチル）-４，５，６，７-テトラヒドロ-１Ｈ- インドール-２-カルボン酸エチルエステルの低融点固体を得た。
【０４９０】
【化１０６】
【０４９１】 精製した３-（２-エトキシカルボニルエチル）-４，５，６，７-テトラヒドロ
-１Ｈ-インドール-２-カルボン酸エチルエステル（１２２．１ｇ）および３２８
ｍＬの５Ｎ水酸化ナトリウムを８０分間還流した。加熱を停止し、１６５ｍＬの
１０Ｎの塩酸を滴加漏斗を介し、還流冷却器を通して慎重に添加したが、この間
混合液を激しく攪拌した。ｐＨが２-３になるまで添加を続けた。混合液を氷浴 で冷却し、その際、生成した油が固体化した。固体を吸引濾過で回収し、水で３
回洗浄し、真空下、５０-６０℃で乾燥して５４．９ｇ（収率７１％）の３-（４
，５，６，７-テトラヒドロ-１Ｈ-インドール-３-イル）プロピオン酸の暗褐色 固体を得た。
【０４９２】
【化１０７】
【０４９３】 ３-（２-ホルミル-４，５，６，７-テトラヒドロ-１Ｈ-インドール-３-イル）
プロピオン酸（９５ｍｇ）、１０３ｍｇの６-（３-メトキシフェニル）-２-オキ
シインドール、および１滴のピペリジンを２ｍＬのエタノールに混合したものを
９０℃まで加熱し、その温度で一晩保持した。反応混液を冷却して濃縮した。残
渣を６Ｎ塩酸に懸濁し、生成した沈殿を濾過し、洗浄液のｐＨが約６になるまで
水で洗浄し、次いで真空オーブンで一晩乾燥し、１５６ｍｇの標記化合物（８２
％）の褐色固体を得た。
【０４９４】
【化１０８】
【０４９５】化合物ＰＩ-０２４ ：３-｛２-［６-（４-メトキシフェニル）-２-オキソ-１，２
-ジヒドロインドール-３-イリデンメチル］-４，５，６，７-テトラヒドロ-１Ｈ
-インドール-３-イル｝-プロピオン酸 ３-（２-ホルミル-４，５，６，７-テトラヒドロ-１Ｈ-インドール-３-イル）
プロピオン酸（９５ｍｇ）、１０３ｍｇの６-（４-メトキシフェニル）-２-オキ
シインドール、および１滴のピペリジンを２ｍＬのエタノールに混合したものを
９０℃まで加熱し、その温度で一晩保持した。反応混液を冷却して濃縮した。残
渣を６Ｎ塩酸に懸濁し、生成した沈殿を濾過し、洗浄液のｐＨが約６になるまで
水で洗浄し、次いで真空オーブンで一晩乾燥し、５７ｍｇの標記化合物（３０％
）の褐色固体を得た。
【０４９６】
【化１０９】
【０４９７】化合物ＰＩ-０２５ ：３-［２-（２-オキソ-６-フェニル-１，２-ジヒドロインド
ール-３-イリデンメチル）-４，５，６，７-テトラヒドロ-１Ｈ-インドール-３-
イル］-プロピオン酸 ３-（２-ホルミル-４，５，６，７-テトラヒドロ-１Ｈ-インドール-３-イル）
プロピオン酸（９５ｍｇ）、９０ｍｇの６-フェニル-２-オキシインドール、お よび１滴のピペリジンを２ｍＬのエタノールに混合したものを９０℃まで加熱し
、その温度で４時間保持した。次いで反応混液を冷却して濃縮した。残渣を６Ｎ
塩酸で酸性化し、生成した沈殿を濾過し、洗浄液のｐＨが約６になるまで水で洗
浄し、次いで真空オーブンで一晩乾燥し、５９ｍｇの標記化合物（３１％）の褐
色固体を得た。
【０４９８】
【化１１０】
【０４９９】化合物ＰＩ-０２６ ：３-｛２-［６-（２-メトキシフェニル）-２-オキソ-１，２
-ジヒドロインドール-３-イリデンメチル］-４，５，６，７-テトラヒドロ-１Ｈ
-インドール-３-イル｝-プロピオン酸 テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１ｇ）を、５ｇの２-メ トキシフェニルボロン酸、６．６ｇの５-ブロモ-２-フルオロニトロベンゼン、 および３０ｍＬの２Ｍ炭酸ナトリウムを５０ｍＬのトルエンおよび５０ｍＬのエ
タノールに混合したものに添加した。混合液を２時間還流し、濃縮し、残渣を酢
酸エチルで２回抽出した。酢酸エチル抽出液を合一し、水および食塩水で洗浄し
、乾燥して濃縮し、粗製４-フルオロ-２’-メトキシ-３-ニトロビフェニルの暗 緑色油を得たが、これは放置すると固体化した。
【０５００】 マロン酸ジメチル（１４ｍＬ）を、２．９ｇの水素化ナトリウムを５０ｍＬの
ジメチルスルホキシドに懸濁したものに滴加した。混合液を１００℃まで加熱し
、その温度で１５分間攪拌した。次いで反応液を室温まで冷却した。６０ｍＬの
ジメチルスルホキシドに混合した粗製の４-フルオロ-２’-メトキシ-３-ニトロ ビフェニルを添加し、混合液を再び１００℃まで加熱し、更に２時間攪拌した。
その後、反応混液を冷却し、３００ｍＬの飽和塩化ナトリウムでクエンチングし
、酢酸エチルで２回抽出した。抽出液を合一し、飽和塩化アンモニウム、水、お
よび食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して粗製の２’-メト キシ-３-ニトロビフェニル-4-マロン酸ジメチルの黄色油を得た。
【０５０１】 粗製の２’-メトキシ-３-ニトロビフェニル-4-マロン酸を５０ｍＬの６Ｎ塩酸
中で１００℃まで加熱し、その温度で２４時間攪拌し続けた。次いで混合液を冷
却し、生成した沈殿を濾過し、水およびヘキサンで洗浄し、その後乾燥して９．
８ｇの粗製２’-メトキシ-３-ニトロビフェニル-4-酢酸の淡黄褐色固体を得た。
【０５０２】 鉄粉（５ｇ）を、９．８ｇの２’-メトキシ-３-ニトロビフェニル-4-酢酸を５
０ｍＬの氷酢酸に混合したものに一度に添加し、混合液を１００℃まで加熱し、
その温度で３時間攪拌した。次いで反応混液を濃縮乾固し、酢酸エチル中で超音
波処理を行い、不溶性物質を濾別した。濾液を１Ｎ塩酸で２回、次いで水、更に
食塩水で洗浄した。その後濾液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。得ら
れた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサンの１：２を溶
出液として使用）に適用し、５．４ｇ（５-ブロモ-２-フルオロニトロベンゼン を基準にして収率６９％）の６-（２-メトキシフェニル）-２-オキシインドール
のバラ色の固体を得た。
【０５０３】
【化１１１】
【０５０４】 ３-（２-ホルミル-４，５，６，７-テトラヒドロ-１Ｈ-インドール-３-イル）
プロピオン酸（９５ｍｇ）、１０３ｍｇの６-（２-メトキシフェニル）-２-オキ
シインドール、および１滴のピペリジンを２ｍＬのエタノールに混合したものを
９０℃まで加熱し、その温度で４時間保持した。次いで反応混液を冷却して濃縮
した。残渣を６Ｎ塩酸で酸性化し、生成した沈殿を濾過し、洗浄液のｐＨが約６
になるまで水で洗浄し、次いで真空オーブンで一晩乾燥し、６７ｍｇの標記化合
物（３５％）の褐色固体を得た。
【０５０５】
【化１１２】
【０５０６】化合物ＰＩ-０２７ ：３，５-ジメチル-１Ｈ-ピロール-２-イルメチレン）-６-（
２-メトキシフェニル）-１，３-ジヒドロインドール-２-オン ３，５-ジメチル-１Ｈ-ピロール-２-カルボキシアルデヒド（１５０ｍｇ）、 ２３９ｍｇの６-（２-メトキシフェニル）-２-オキシインドール、および１滴の
ピペリジンを２ｍＬのエタノールに混合したものを９０℃まで加熱し、その温度
で４時間保持した。その後反応混液を冷却し、生成した沈殿を濾過し、冷エタノ
ールおよびヘキサンで洗浄し、真空オーブンで一晩乾燥し、２６８ｍｇの標記化
合物（７８％）の褐色固体を得た。
【０５０７】
【化１１３】
【０５０８】化合物ＰＩ-０２８ ：３，５-ジエチル-１Ｈ-ピロール-２-イルメチレン）-６-（
２-メトキシフェニル）-１，３-ジヒドロインドール-２-オン ３，５-ジエチル-１Ｈ-ピロール-２-カルボキシアルデヒド（１８１ｍｇ）、 ２３９ｍｇの６-（２-メトキシフェニル）-２-オキシインドール、および１滴の
ピペリジンを２ｍＬのエタノールに混合したものを９０℃まで加熱し、その温度
で４時間保持した。その後反応混液を冷却し、生成した沈殿を濾過し、冷エタノ
ールおよびヘキサンで洗浄し、真空オーブンで一晩乾燥し、３０３ｍｇの標記化
合物（８１％）の褐色固体を得た。
【０５０９】
【化１１４】
【０５１０】化合物ＰＩ-０２９ ：３-（３Ｈ-イミダゾール-４-イルメチレン）-６-（２-メト
キシフェニル）-１，３-ジヒドロインドール-２-オン ３Ｈ-イミダゾール-４-カルボキシアルデヒド（１１５ｍｇ）、２３９ｍｇの ６-（２-メトキシフェニル）-２-オキシインドール、および１滴のピペリジンを
２ｍＬのエタノールに混合したものを９０℃まで加熱し、その温度で４時間保持
した。その後反応混液を冷却し、生成した沈殿を濾過し、冷エタノールおよびヘ
キサンで洗浄し、真空オーブンで一晩乾燥し、２５７ｍｇの標記化合物（８１％
）の黄色固体を得た。
【０５１１】
【化１１５】
【０５１２】化合物ＰＩ-０３０ ：６-（２-メトキシフェニル）-３-（４，５，６，７-テトラ
ヒドロ-１Ｈ-インドール-２-イルメチレン）-１，３-ジヒドロインドール-２-オ
ン ４，５，６，７-テトラヒドロ-１Ｈ-インドール-２-カルボキシアルデヒド（ １８０ｍｇ）、２３９ｍｇの６-（２-メトキシフェニル）-２-オキシインドール
、および１滴のピペリジンを２ｍＬのエタノールに混合したものを９０℃まで加
熱し、その温度で４時間保持した。その後反応混液を冷却し、生成した沈殿を濾
過し、冷エタノールおよびヘキサンで洗浄し、真空オーブンで一晩乾燥し、３１
５ｍｇの標記化合物（８５％）の橙色固体を得た。
【０５１３】
【化１１６】
【０５１４】化合物ＰＩ-０３１ ：６-（２-メトキシフェニル）-３-（３-メチル-４，５，６ ，７-テトラヒドロ-１Ｈ-インドール-２-イルメチレン）-１，３-ジヒドロイン ドール-２-オン ３-メチル-４，５，６，７-テトラヒドロ-１Ｈ-インドール-２-カルボキシア ルデヒド（１９５ｍｇ）、２３９ｍｇの６-（２-メトキシフェニル）-２-オキシ
インドール、および１滴のピペリジンを２ｍＬのエタノールに混合したものを９
０℃まで加熱し、その温度で４時間保持した。その後反応混液を冷却し、生成し
た沈殿を濾過し、冷エタノールおよびヘキサンで洗浄し、真空オーブンで一晩乾
燥し、３１７ｍｇの標記化合物（８２％）の橙色固体を得た。
【０５１５】
【化１１７】
【０５１６】化合物ＰＩ-０３２ ：３-（３，５-ジイソプロピル-４-メトキシベンジリデン）-
６-（３-メトキシフェニル）-１，３-ジヒドロインドール-２-オン ２，６-ジイソプロピルフェノール（１０ｇ）および炭酸カリウム（９．２ｇ ）をジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）に混合した攪拌溶液（室温）に９．５ｇ
のインドメタンを徐々に添加した。混合液を室温で一晩攪拌した。混合液を水に
注入した。生成した沈殿を吸引濾過で回収し、水で洗浄した。次いで沈殿を真空
乾燥し、１０．３ｇの１，３-ジイソプロピル-２-メトキシベンゼンを得た。
【０５１７】 ７．３ｇのフィルスマイヤー試薬を１００ｍＬのジクロロメタンに混合した攪
拌懸濁液（０℃）に１０ｇの１，３-ジイソプロピル-２-メトキシベンゼンを、 反応温度を１０℃未満に保持するように数回に分けて添加した。次いで混合液を
４時間還流し、その後５℃まで冷却した。水（１００ｍＬ）を添加し、水相を分
離して保存した。有機相を１００ｍＬの水で抽出し、抽出水溶液を合一して５℃
まで冷却した。次いで合一した抽出水溶液を攪拌しながら、１００ｍＬの２．５
Ｎ水酸化ナトリウムを徐々に添加した。水酸化ナトリウムを全て添加した時点で
混合液を更に１時間攪拌し、温度は約５℃に保持した。その後水溶液を酢酸エチ
ルで抽出し、抽出液を食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して濃縮した
。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに適用し、８．０２ｇの１，３- ジイソプロピル-４-メトキシベンズアルデヒド（７０％）の淡黄色油を得た。
【０５１８】
【化１１８】
【０５１９】 １，３-ジイソプロピル-４-メトキシベンズアルデヒド（２６４ｍｇ）、２３ ９ｍｇの６-（３-メトキシフェニル）-２-オキシインドール、および１滴のピペ
リジンを２ｍＬのエタノールに混合したものを９０℃まで加熱し、その温度で４
時間保持した。その後、反応混液を冷却し、生成した沈殿を濾過し、冷エタノー
ルおよびヘキサンで洗浄し、真空オーブンで一晩乾燥し、標記化合物の橙色固体
を得た。
【０５２０】
【化１１９】
【０５２１】化合物ＰＩ-０３３ ：３-（３，５-ジイソプロピル-４-メトキシベンジリデン）-
６-（３-エトキシフェニル）-１，３-ジヒドロインドール-２-オン １，３-ジイソプロピル-４-メトキシベンズアルデヒド（２６４ｍｇ）、２５ ３ｍｇの６-（３-エトキシフェニル）-２-オキシインドール、および１滴のピペ
リジンを２ｍＬのエタノールに混合したものを９０℃まで加熱し、その温度で４
時間保持した。次いで反応混液を冷却し、生成した沈殿を濾過し、冷エタノール
およびヘキサンで洗浄し、真空オーブンで一晩乾燥し、標記化合物の褐色固体を
得た。
【０５２２】
【化１２０】
【０５２３】化合物ＰＩ-０３４ ：３-（３，５-ジイソプロピル-４-メトキシベンジリデン）-
６-フェニル-１，３-ジヒドロインドール-２-オン １，３-ジイソプロピル-４-メトキシベンズアルデヒド（２６４ｍｇ）、２３ ９ｍｇの６-フェニル-２-オキシインドール、および１滴のピペリジンを２ｍＬ のエタノールに混合したものを９０℃まで加熱し、その温度で４時間保持した。
次いで反応混液を冷却し、生成した沈殿を濾過し、冷エタノールおよびヘキサン
で洗浄し、真空オーブンで一晩乾燥し、標記化合物の金褐色固体を得た。
【０５２４】
【化１２１】
【０５２５】 アッセイ手順 以下のin vitroにおけるアッセイを用いて、１つまたはそれ以上のPKSに対す る本発明の種々の化合物の活性および効果のレベルを決定し得る。同じ方針に則
り、この技術分野で十分知られている手法を用いて、いかなるPKに関しても類似
のアッセイをデザインすることができる。
【０５２６】 本明細書中に記載の細胞/触媒アッセイは、ELISAの形式で行う。大体の手順は
以下の通りである。すなわち、本来あるいは組み換えによって試験キナーゼを発
現している細胞に化合物を導入する。試験キナーゼが受容体である場合には、そ
の受容体活性を活性化することが知られているリガンドを、その後しばらくの間
、添加する。細胞を可溶化し、酵素によるリン酸化反応の基質を認識する特異抗
体をあらかじめコートしたELISAプレートのウェルに可溶化物を移す。細胞可溶 化物のうちの非基質化合物を洗い流し、リン酸化チロシンを特異的に認識する抗
体を用いて基質のリン酸化量を検出し、試験化合物と接触させなかった対照の細
胞と比較する。
【０５２７】 本明細書中に記載の細胞/生物アッセイは、試験キナーゼの活性化に応答して 作られるDNAの量を測定するもので、増殖応答の一般的な測定である。本アッセ イの大体の手順は以下の通りである。すなわち、本来あるいは組み換えによって
試験キナーゼを発現している細胞に化合物を導入する。試験キナーゼが受容体で
ある場合には、その受容体活性を活性化することが知られているリガンドを、そ
の後しばらくの間、添加する。少なくとも一晩インキュベートした後、ブロモデ
オキシウリジン（BrdU）あるいは3H-チミジンといったDNA標識試薬を添加する。
抗BrdU抗体を用いてかあるいは放射活性を測定することによって、標識されたDN
Aの量を検出し、試験化合物と接触させなかった対照の細胞と比較する。
【０５２８】 実施例6：EGF受容体キナーゼ活性を測定するアッセイ ヒトEGF-Rを発現するように遺伝子操作された細胞におけるEGF受容体キナーゼ
活性を、以下に記載の通りに測定する。
【０５２９】 材料および試薬 以下の材料および試薬を用いる。 a. EGFリガンド：ストック濃度＝16.5 μM；EGF 201、TOYOBO, Co., Ltd. Ja
pan b. 05-101（UBI）（EGFR細胞外ドメインを認識するモノクローナル抗体） c. 抗リン酸化チロシン抗体（抗Ptyr）（ポリクローナル） d. 検出抗体：セイヨウワサビペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ウサギIgG、TAGO,
Inc., Burlingame, CA e. TBSTバッファー：
【０５３０】
【表５】
【０５３１】 f. HNTG SXストック：
【０５３２】
【表６】
【０５３３】 g. ABTSストック：
【０５３４】
【表７】
【０５３５】 溶液は使用するまで4℃で暗所に保存すること。 h. ストック試薬：
【０５３６】
【表８】
【０５３７】 手順 以下のプロトコールを用いる。 A. ELISAプレートをあらかじめコートする 1. PBS中、最終濃度150 μL/ウェルで、1ウェルあたり0.5 μgの05-101抗体 にてELISAプレート（Corning, 96ウェル, Cat. ＃25805-96）をコートし、一晩 、4℃にて保存する。コートされたプレートは、4℃で保存した場合は10日までの
間、有効である。
【０５３８】 2. 使用する日にコーティングバッファーを除き、ブロッキングバッファー（
PBS中5% Carnation Instant NonFat Dry Milk）で置換する。プレートを室温（ 約23℃から25℃）で、振とうしながら30分間インキュベートする。使用する直前
にブロッキングバッファーを除き、TBSTバッファーにて4回洗う。 B. 細胞をまく 1. NIH 3T3/C7細胞株（Honegger, et al., Cell 51:199-209, 1987）をこの アッセイに用い得る。
【０５３９】 2. 実験用に、80-90%コンフルエントの状態のディッシュを選ぶ。細胞をトリ
プシン処理し、10% CS DMEM培地を加えることによって反応を停止する。細胞をD
MEM培地（10% CS DMEM培地）に懸濁して1000 rpmで1回、5分間室温で1回遠心す る。
【０５４０】 3. 細胞を播種用培地（DMEM、0.5%ウシ血清）に再懸濁し、トリパンブルーを
用いて細胞を計数する。90%以上の生存率が許容可能である。DMEM培地（0.5%ウ シ血清）中1ウェルあたり100 μL、1ウェルあたり10,000細胞の密度で、96ウェ ルマイクロタイタープレートに細胞をまく。まいた細胞を5% CO2中、37℃にて約
40時間インキュベートする。 C. アッセイ手順 1. 倒立顕微鏡を用いて、まいた細胞のコンタミネーションをチェックする。
薬剤ストック（DMSO中10 mg/mL）をDMEM培地にて1:10に希釈して5μLを試験ウェ
ルに移し、最終薬剤希釈1:200、最終DMSO濃度1%となるようにする。対照ウェル はDMSOのみを入れる。5% CO2中、37℃にて1時間インキュベートする。
【０５４１】 2. EGFリガンドを調製する。すなわち、10 μLの希釈EGF（1:12希釈）を移し
た際に25 nMの最終濃度が達成されるように、ストックEGFをDMEMにて希釈する。 3. 1ウェルあたり100 μLとするのに十分な、新しい10 mL HNTG*を調製する 。HNTG*には、HNTGストック（2.0 mL）、ミリQ H2O（7.3 mL）、EDTA, 100 mM,
pH 7.0（0.5 mL）、Na3VO4 0.5 M（0.1 mL）およびNa4(P2O7), 0.2 M（0.1 mL）
が含まれる。
【０５４２】 4. 氷上に置く。 5. 薬剤と共に2時間インキュベートした後、調製済みのEGFリガンドを1ウェ ルあたり10 μL、細胞に加え、最終濃度25 nMとする。対照ウェルにはDMEMのみ を入れる。室温で5分間、振とうしながらインキュベートする。
【０５４３】 6. 薬剤、EGF、およびDMEMを除く。細胞をPBSにて2回洗う。HNTGを1ウェルあ
たり100 μL、細胞に移す。氷上に5分間置く。同時に、別のELISAプレートから ブロッキングバッファーを除き、上述のようにTBSTにて洗う。
【０５４４】 7. マイクロピペッターにしっかりとはめたピペットチップを用いてプレート
から細胞をかき取り、HNTG*可溶化バッファーを繰り返し吸ったりはいたりする ことにより、細胞物質をホモジナイズする。コートし、ブロックし、洗ったELIS
Aプレートに可溶化物を移す。室温で振とうしながら1時間インキュベートする。
【０５４５】 8. 可溶化物を除き、TBSTにて4回洗う。新たに希釈した抗Ptyr抗体をELISAプ
レートに1ウェルあたり100 μL移す。室温で振とうしながら30分間、抗Ptyr抗血
清（TBSTにて1:3000希釈）の存在下、インキュベートする。
【０５４６】 9. 抗Ptyr抗体を除き、TBSTにて4回洗う。新たに希釈したTAGO 30抗ウサギIg
G抗体をELISAプレートに1ウェルあたり100 μL移す。室温で振とうしながら30分
間インキュベートする（抗ウサギIgG抗体：TBSTにて1:3000希釈。
【０５４７】 10. 検出抗体を除き、TBSTにて4回洗う。新たに調製したABTS/H2O2溶液をELI
SAプレートに1ウェルあたり100 μL移す。室温で20分間インキュベートする。AB
TS/H2O2溶液：10 mLのABTSストック中、1.2 μL 30% H2O2。
【０５４８】 11. 10 μL 5N H2SO4を添加することによって反応を止め（任意）、410 nmに
おけるO.D.を求める。 12. 陽性対照から陰性対照の値を引くことにより、最大リン酸化チロシンシ グナルを求める。次に、陰性対照を引いてから、抽出物を含むウェルに関するリ
ン酸化チロシン含量のパーセント阻害を算出する。
【０５４９】 式XXIVの化合物に関する、EGF受容体リン酸化アッセイにおいて測定したIC50 値は、> 100 μMであるとわかった。
【０５５０】
【化１２２】
【０５５１】 実施例7：IGF-1受容体キナーゼ活性を測定するアッセイ 以下のプロトコールを用いて、IGF-1受容体のリン酸化チロシンレベルを測定 する。これは、IGF-1受容体チロシンキナーゼ活性の指標となる。
【０５５２】 材料および方法 以下の材料および試薬を用いる。 a. 本アッセイにおいて用いる細胞株は、IGF-1受容体を過剰発現するように遺 伝子操作された細胞株3T3-L1/IGF-1Rである。 b. NIH3T3/IGF-1Rを、5% CO2のインキュベーター中、37℃にて培養する。増殖 培地はDMEM + 10% FBS（熱非働化済み）+ 2 mM L-グルタミンである。 c. アフィニティー精製した抗IGF-1R抗体17-69。 d. D-PBS
【０５５３】
【表９】
【０５５４】 e. ブロッキングバッファー：TBSTプラス5% Milk（Carnation Instant Non-Fat
-Dry Milk） f. TBSTバッファー：
【０５５５】
【表１０】
【０５５６】 TBS（10X）のストック溶液を調製し、希釈の際にTriton X-100をバッファーに
加える。 g. HNTGバッファー：
【０５５７】
【表１１】
【０５５８】 h. EDTA/HCl：100Xストックとして0.5 M pH7.0（NaOH） i. Na3VO4：100Xストックとして0.5 M。分注したものを-80℃にて保存する。 j. Na4P2O7：100Xストックとして0.2 M k. Promega（Cat# G5111）製のインスリン様増殖因子-1 l. ウサギポリクローナル抗リン酸化チロシン抗血清 m. POD結合ヤギ抗ウサギIgG（検出抗体）、Tago（Cat. No. 4520, Lot No. 180
2）：Tago, Inc., Burlingame, CA n. ABTS（2,2'-アジノビス（3-エチルベンズチアゾリンスルホン酸））溶液：
【０５５９】
【表１２】
【０５６０】 ABTS溶液は、暗所に4℃で保存しなければならない。緑色になった時は溶液を 捨てなければならない。 o. 過酸化水素：30%溶液を4℃で暗所に保存する。
【０５６１】 手順 以下の全過程は特に示していない限り室温で行う。ELISAプレートの洗いは全 て、プレートを水道水にて3回すすぎ、TBSTにて1回すすぐことによって行う。ペ
ーパータオルでプレートを軽くたたいて乾かす。
【０５６２】 A. 細胞の播種： 1. 組織培養ディッシュ（Corning 25020-100）中で80-90%コンフルエントの 状態まで増殖した細胞を、トリプシン-EDTA（0.25%、0.5 mL/D-100, GIBCO）に て回収する。
【０５６３】 2. 細胞を新しいDMEM+10% FBS+2 mM L-グルタミン中に再懸濁し、96ウェル組
織培養プレート（Corning, 250806-96）に20,000細胞/ウェル（100 μL/ウェル ）で移す。1日間インキュベートし、次に培地を無血清培地（90 μL）に置き換 え、5% CO2、37℃にて一晩インキュベートする。
【０５６４】 B. ELISAプレートのコーティングおよびブロッキング： 1. 100 μL PBS中、0.5 μg/ウェルの抗IGF-IR抗体にてELISAプレート（Corni
ng 25805-96）を少なくとも2時間コートする。
【０５６５】 2. コーティング溶液を除き、100 μLのブロッキングバッファーで置換し、 室温で30分間振とうする。可溶化物を加える直前にブロッキングバッファーを除
き、プレートを4回洗う。
【０５６６】 C. アッセイ手順： 1. 薬剤を無血清条件下で試す。 2. 薬剤ストック（100% DMSO中）を96ウェルポリプロピレンプレート中、DME
Mにて1:10に希釈し、この溶液10 μL/ウェルを細胞に移して最終薬剤希釈1:100 、および1.0%の最終DMSO濃度を達成する。細胞を5% CO2中、37℃にて2時間イン キュベートする。
【０５６７】 3. 新たに細胞可溶化バッファー（HNTG*）を調製する。
【０５６８】
【表１３】
【０５６９】 4. 薬剤インキュベーションを2時間した後、200 nM IGF-1リガンドのPBS溶液
10 μL/ウェルを細胞に移し（最終濃度= 20 nM）、5% CO2、37℃にて10分間イン
キュベートする。
【０５７０】 5. 培地を除き、100 μL/ウェルのHNTG*を添加して10分間振とうする。顕微 鏡下で細胞を観察し、細胞が十分に可溶化されているかどうか見る。 6. 12チャネルピペットを用いて細胞をプレートから掻き取り、繰り返し吸っ
たりはいたりすることにより、可溶化物をホモジナイズする。抗体をコートした
ELISAプレートに全可溶化物を移し、1時間振とうする。
【０５７１】 7. 可溶化物を除き、プレートを洗い、抗pTyr（TBSTにて1:3,000）を100 μL
/ウェル移して30分間振とうする。 8. 抗pTyrを除き、プレートを洗い、Tago（TBSTにて1:3,000）を100 μL/ウ ェル移して30分間振とうする。
【０５７２】 9. 検出抗体を除き、プレートを洗い、新しいABTS/H2O2（10 mLのABTSに対し
て）100 μL/ウェルをプレートに移し、発色を開始させる。 10. Dynatec MR5000を用い、参照波長630 nmにて410 nmにおけるODを測定す る。
【０５７３】 式XXIV（実施例6）の化合物に関してIGF-1リン酸化アッセイにおいて測定した
IC50値は、8.52 μMであるとわかった。 実施例8：PDGF受容体キナーゼ活性を測定するアッセイ 全ての細胞増殖培地、グルタミン、およびウシ胎児血清は、別に明記していな
い限り、Gibco Life Technologies （Grand Island, NY）から購入した。全ての
細胞は、90-95%空気および5-10% CO2の湿潤大気中、37℃にて培養した。全ての 細胞株は、機械的に週に2回継代し、Mycotect法（Gibco）によって測定したとこ
ろマイコプラズマに関しては陰性であった。
【０５７４】 ELISAアッセイに関しては、細胞（U1242、Joseph schlessinge, NYUから得た ）を増殖培地（10% FBS、NEAA、1 mM NaPyrおよび2 mM GLNを含むMEM）中で80-9
0%のコンフルエントの状態になるまで培養し、ウェルあたり25,000から30,000個
で0.5%血清中、96ウェル組織培養プレートにまいた。0.5%の血清を含む培地中で
一晩インキュベートした後、細胞を無血清培地にかえ、5% CO2、37℃のインキュ
ベーター中、試験化合物にて2時間処理した。次に、細胞をリガンドにて5-10分 間刺激し、続いてHNTG（20 mM Hepes、150 mM NaCl、10%グリセロール、5 mM ED
TA、5 mM Na3VO4、0.2% Triton X-100、および2 mM NaPyr）にて可溶化した。あ
らかじめ受容体特異的な抗体をコートしてあり、TBST（50 mM Tris-HCl ph 7.2 、150 mM NaClおよび0.1% Triton X-100）中5%ミルクにて室温で30分間ブロック
したELISAプレートに、細胞可溶化物（PBS中、0.5 mg/ウェル）を移した。可溶 化物を1時間、室温で振とうしながらインキュベートした。プレートをTBSTにて4
回洗い、次に室温で30分間、抗リン酸化チロシンポリクローナル抗体とインキュ
ベートした。プレートをTBSTにて4回すすぐことにより過剰な抗リン酸化チロシ ン抗体を除いた。ELISAプレートにヤギ抗ウサギIgG抗体を30分間室温で加え、次
にTBSTにてさらに4回すすいだ。ABTS（100 mM クエン酸、250 mM Na2HPO4および
0.5 mg/mL 2,2-アジノ-ビス（3-エチベンズチアゾリン-6-スルホン酸））プラス
H2O2（10 mL ABTSに対し1.2 mL 30% H2O2）をELISAプレートに添加して発色を開
始させた。参照波長630 nmにて410 nmにおける吸光度を、ABTS添加後約15分から
30分後に記録した。
【０５７５】 式XXIV（実施例6）の化合物に関するPDGF受容体リン酸化アッセイにおいて測 定したIC50値は、49.29 μMであるとわかった。 実施例9：EGF受容体HER2キナーゼ活性を測定するアッセイ 全EGFR-NIH3T3細胞におけるHER2キナーゼ活性を、以下に記載の通りに測定し た。
【０５７６】 材料および試薬 a. EGF：ストック濃度＝16.5 ILM；EGF 201、TOYOBO, Co., Ltd. Japan b. 05-101（UBI）（EGFR細胞外ドメインを認識するモノクローナル抗体） c. 抗リン酸化チロシン抗体（抗Ptyr）（ポリクローナル）（上記Fendleyら を参照） d. 検出抗体：セイヨウワサビペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ウサギIgG、TAGO,
Inc., Burlingame, CA e. TESTバッファー：
【０５７７】
【表１４】
【０５７８】 f. HNTG 5Xストック：
【０５７９】
【表１５】
【０５８０】
【表１６】
【０５８１】 g. ABTSストック：
【０５８２】
【表１７】
【０５８３】 * （2,2'-アジノビス（3-エチルベンズチアゾリンスルホン酸））。溶液は使
用するまで4℃で暗所に保存すること。 h. ストック試薬：
【０５８４】
【表１８】
【０５８５】 手順 以下のプロトコールを用いた。 A. ELISAプレートをあらかじめコートする 1. PBS中、最終濃度100 μL/ウェルで、1ウェルあたり0.5 μgの05-101抗体 にてELISAプレート（Corning, 96ウェル, Cat. ＃25805-96）をコートし、一晩 、4℃にて保存する。コートされたプレートは、4℃で保存した場合は10日までの
間、有効である。
【０５８６】 2. 使用する日にコーティングバッファーを除き、100 μLのブロッキングバ ッファー（PBS中5% Carnation Instant Non-Fat Dry Milk）で置換する。プレー
トを室温（約23℃から25℃）で、振とうしながら30分間インキュベートする。使
用する直前にブロッキングバッファーを除き、TESTバッファーにて4回洗う。 B. 細胞をまく 1. EGFR細胞外ドメインおよび細胞内HER2キナーゼドメインを含むキメラ受容
体を過剰発現したNIH 3T3細胞株をこのアッセイに用い得る。
【０５８７】 2. 実験用に、80-90%コンフルエントの状態のディッシュを選ぶ。細胞をトリ
プシン処理し、10% ウシ胎児血清を加えることによって反応を停止する。細胞を
DMEM培地（10% CS DMEM培地）に懸濁して1500 rpmで5分間、室温で1回遠心する 。
【０５８８】 3. 細胞を播種用培地（DMEM、0.5%ウシ血清）に再懸濁し、トリパンブルーを
用いて細胞を計数する。90%以上の生存率が許容可能である。DMEM培地（0.5%ウ シ血清）中1ウェルあたり100 μL、1ウェルあたり10,000細胞の密度で、96ウェ ルマイクロタイタープレートに細胞をまく。まいた細胞を5% CO2中、37℃にて約
40時間インキュベートする。 C. アッセイ手順 1. 倒立顕微鏡を用いて、まいた細胞のコンタミネーションをチェックする。
薬剤ストック（DMSO中10 mg/mL）をDMEM培地にて1:10に希釈して5μLをTBSTウェ
ルに移し、最終薬剤希釈1:200、最終DMSO濃度1%となるようにする。対照ウェル はDMSOのみを入れる。5% CO2中、37℃にて2時間インキュベートする。
【０５８９】 2. EGFリガンドを調製する。すなわち、10 μLの希釈EC37（1:12希釈）を移 した際に100 nMの最終濃度が達成されるように、ストックEGFをDMEMにて希釈す る。
【０５９０】 3. 1ウェルあたり100 μLとするのに十分な、新しいHNTGを調製し、氷上に置
く。 HNTG（10 mL）：
【０５９１】
【表１９】
【０５９２】 4. 薬剤と共に120分間インキュベートした後、調製済みのSGFリガンドを1ウ ェルあたり10 μL、細胞に加え、最終濃度100 nMとする。対照ウェルにはDMEMの
みを入れる。室温で5分間、振とうしながらインキュベートする。
【０５９３】 5. 薬剤、EGF、およびDMEMを除く。細胞をPBSにて2回洗う。HNTG*を1ウェル あたり100 μL、細胞に移す。氷上に5分間置く。同時に、別のELISAプレートか らブロッキングバッファーを除き、上述のようにTBSTにて洗う。
【０５９４】 6. マイクロピペッターにしっかりとはめたピペットチップを用いてプレート
から細胞をかき取り、HNTG*可溶化バッファーを繰り返し吸ったりはいたりする ことにより、細胞物質をホモジナイズする。コートし、ブロックし、洗ったELIS
Aプレートに可溶化物を移す。室温で振とうしながら1時間インキュベートする。
【０５９５】 7. 可溶化物を除き、TBSTにて4回洗う。新たに希釈した抗Ptyr抗体をELISAプ
レートに1ウェルあたり100 μL移す。室温で振とうしながら30分間、抗Ptyr抗血
清（TBSTにて1:3000希釈）の存在下、インキュベートする。
【０５９６】 8. 抗Ptyr抗体を除き、TBSTにて4回洗う。新たに希釈したTAGO抗ウサギIgG抗
体をELISAプレートに1ウェルあたり100 μL移す。室温で振とうしながら30分間 インキュベートする（抗ウサギIgG抗体：TBSTにて1:3000希釈。
【０５９７】 9. TAGO検出抗体を除き、TBSTにて4回洗う。新たに調製したABTS/H2O2溶液を
ELISAプレートに1ウェルあたり100 μL移す。振とうしながら室温で20分間イン キュベートする。（ABTS/H2O2溶液：10 mLのABTSストック中、1.0 μL 30% H2O2 ）。
【０５９８】 10. 10 μL 5N H2SO4を添加することによって反応を止め（任意）、410 nmに
おけるO.D.を求める。 11. 陽性対照から陰性対照の値を引くことにより、最大リン酸化チロシンシ グナルを求める。次に、陰性対照を引いてから、抽出物を含むウェルに関するリ
ン酸化チロシン含量のパーセント阻害を算出する。
【０５９９】 式XXIVの化合物に関する、EGF受容体HER2リン酸化アッセイにおいて測定したI
C50値は、8.72 μMであるとわかった。 実施例10：インスリン受容体キナーゼ活性を測定するアッセイ 以下のプロトコールを用い、本発明の化合物がインスリン受容体チロシンキ
ナーゼかっせりを有するかどうかを決定した。 材料および試薬 以下の材料および試薬を用いてインスリン受容体上のリン酸化チロシンレベル
（インスリン受容体チロシンキナーゼ活性の指標となる）を測定した。
【０６００】 1. 好ましい細胞株は、インスリン受容体を過剰発現するNIH3T3細胞株（ATCC
No. 1658）（H25細胞）であった。 2. H25細胞を、5% CO2のインキュベーター中、37℃にて培養する。増殖培地 はDMEM + 10% FBS（熱非働化済み）+ 2 mM L-グルタミンである。
【０６０１】 3. ELISAプレートをコートするために、BBEという名の抗IRモノクローナル抗
体を精製し、用いる。 4. 以下のものを含むD-PBS：
【０６０２】
【表２０】
【０６０３】 5. ブロッキングバッファー：TBSTプラス5% Milk（Carnation Instant Non-F
at Dry Milk） 6. 以下のものを含むTBSTバッファー：
【０６０４】
【表２１】
【０６０５】 注：TBS（10X）のストック溶液を調製し、希釈の際にTriton X-100をバッファー
に加える。 7. 以下のものを含むHNTGバッファー：
【０６０６】
【表２２】
【０６０７】 注：ストック溶液（5X）を調製し、4℃に保存する。 8. EDTA/HCl：100Xストックとして0.5 M pH7.0（NaOH） 9. Na3VO4：100Xストックとして0.5 M。分注したものを-80℃にて保存する。
【０６０８】 10. Na4P2O7：100Xストックとして0.2 M 11. GIBCO BRL（Cat# 18125039）製のインスリン 12. 抗リン酸化チロシンポリクローナル抗血清：ウサギ血清あるいはリン酸 化チロシン特異的なUB40モノクローナル抗体 13. POD結合した、好ましくはヤギ抗ウサギIgGである検出抗体、Tago（Cat.
No. 4520, Lot No. 1802）：Tago, Inc., Burlingame, CA 14. 以下のものを含むABTS溶液：
【０６０９】
【表２３】
【０６１０】 表中、ABTSは、2,2'-アジノビス（3-エチルベンズチアゾリンスルホン酸）で あり、暗所に4℃で保存し、緑色になった時は溶液を捨てなければならない。 15. 過酸化水素：30%溶液を4℃で暗所に保存する。 プロトコール 以下の全過程は特に示していない限り室温で行う。ELISAプレートの洗いは全 て、プレートを水道水にて3回すすぎ、TBSTにて1回すすぐことによって行う。全
てのプレートは、使用する前にペーパータオルで軽くたたいて乾かした。
【０６１１】 A. 細胞の播種： 1. 細胞を組織培養ディッシュ（10 cm、Corning 25020-100）中で80-90%コン
フルエントの状態まで増殖させ、トリプシン-EDTA（0.25%、0.5 mL/D-100, GIBC
O）にて回収した。
【０６１２】 2. 細胞を新しいDMEM+10% FBS+2 mM L-グルタミン中に再懸濁し、96ウェル組
織培養プレート（Corning, 250806-96）に20,000細胞/ウェル（100 μL/ウェル ）で移す。次に細胞を1日間インキュベートする。そのインキュベーションの後 、0.01%血清培地（90 μL）を古い培地と置き換え、細胞を5% CO2、37℃にて一 晩インキュベートする。
【０６１３】 B. ELISAプレートのコーティングおよびブロッキング： 1. 100 μL PBS中、0.5 μg/ウェルの抗IR抗体にてELISAプレート（Corning 2
5805-96）を少なくとも2時間コートする。
【０６１４】 2. コーティング溶液を除き、100 μLのブロッキングバッファーで置換し、 室温で30分間振とうする。可溶化物を加える直前にブロッキングバッファーを除
き、プレートを4回洗う。
【０６１５】 C. アッセイ手順： 1. 薬剤を無血清条件下で試す。 2. 薬剤ストック（100% DMSO中）を96ウェルポリプロピレンプレート中、DME
Mにて1:10に希釈し、この溶液10 μL/ウェルを細胞に移して最終薬剤希釈1:100 、および1.0%の最終DMSO濃度を達成する。細胞を5% CO2中、37℃にて2時間イン キュベートする。
【０６１６】 3. 新たに細胞可溶化バッファー（HNTG*）を調製する。
【０６１７】
【表２４】
【０６１８】 4. 薬剤インキュベーションを2時間した後、1 μMインスリンのPBS溶液10 μ
L/ウェルを細胞に移し（最終濃度= 100 nM）、5% CO2、37℃にて10分間インキュ
ベートする。
【０６１９】 5. 培地を除き、100 μL/ウェルのHNTG*を添加して10分間振とうする。顕微 鏡下で細胞を観察し、細胞が十分に可溶化されているかどうか見る。 6. 12チャネルピペットを用いて細胞をプレートから掻き取り、繰り返し吸っ
たりはいたりすることにより、可溶化物をホモジナイズする。抗体をコートした
ELISAプレートに全可溶化物を移し、1時間振とうする。
【０６２０】 7. 可溶化物を除き、プレートを洗い、抗pTyr（TBSTにて1:3,000）を100 μL
/ウェル移して30分間振とうする。 8. 抗pTyrを除き、プレートを洗い、Tago（TBSTにて1:3,000）を100 μL/ウ ェル移して30分間振とうする。
【０６２１】 9. 検出抗体を除き、プレートを洗い、新しいABTS/H2O2（10 mLのABTSに対し
て1.2μLのH2O2）100 μL/ウェルをプレートに移し、発色を開始させる。 10. Ingresに接続してあるDynatec MR5000を用い、410 nmにおけるODを測定 する。以下の全ての過程はIngresの使用説明書に従えばよい。
【０６２２】 式XXIV（実施例6）の化合物に関してインスリン受容体リン酸化アッセイにお いて測定したIC50値は、21.94 μMであるとわかった。 実施例11：FLK-1受容体キナーゼ活性を測定するアッセイ FLK-1受容体のキナーゼ活性、より明確に言えばFLK-1受容体に対するTK活性の
阻害または活性化、を測定するためにELISAアッセイを行った。とりわけ、以下 のアッセイを行って、遺伝子操作によってFLK-1を発現するようにした細胞にお けるFLK-1受容体のキナーゼ活性を測定した。
【０６２３】 材料および方法 以下の試薬および補助品を用いた。 a. Corning 96ウェルELISAプレート（Corning Catalog No. 25805-96）； b. Cappelヤギ抗ウサギIgG（catalog no. 55641）； c. PBS（Gibco Catalog No. 450-1300EB）； d. TBSWバッファー（50 mM Tris pH 7.2）、150 mM NaClおよび0.1% Tween-20 ）； e. エタノールアミンストック（10%エタノールアミン（pH 7.0）、4℃にて保存
）； f. HNTGバッファー（20 mM HEPESバッファー（pH7.5）、150 mM NaCl、0.2% Tr
iton X-100、およびグリセロール）； g. EDTA（100Xストックとして0.5 M (pH7.0)）； h. オルトバナジン酸ナトリウム（100Xストックとして0.5 M）； i. ピロリン酸ナトリウム（100Xストックとして0.2 M）； j. NUNC 96ウェルV底ポリプロピレンプレート（Applied Scientific Catalog N
o. AS-72092）； k. NIH3T3 C7#3細胞（FLK-1発現細胞）； l. 1X高グルコースLグルタミンを含むDMEM（catalog No. 11965-050）； m. FBS、Gibco（catalog no. 25030-016）； o. VEGF、Pepro Tech, Inc. （catalog no. 100-20）（Milli-Q dH2O中 1 μg/
100 μLのストックとして維持し、-20℃にて保存する）； p. アフィニティー精製した抗FLK-1抗血清； q. リン酸化チロシン特異的UB40モノクローナル抗体（Fendley, et al ., 1990
, Cancer Research 50:1550-1558参照）； r. EIAグレードのヤギ抗マウスIgG-POD（BioRad catalog no. 172-1011）； s. 2,2-アジノ-ビス（3-エチルベンズ-チアゾリン-6-スルホン酸）（ABTS）溶 液、（100 mMクエン酸（無水）、250 mM Na2HPO4 (pH4.0)、0.5 mg/mL ABTS（Si
gma catalog no. A-1888））、使用する準備ができるまで溶液は暗所に4℃で保 存すべきである； t. H2O2（30%溶液）（Fisher catalog no. H325）； u. 使用する5分前に調製し、室温に置いておいたABTS/ H2O2（15 mL ABTS溶液 、2 μLH2O2）； v. H2O中、0.2 M HClストック； w. ジメチルスルホキシド（100%）（Sigma Catalog No. D-8418）；および y. トリプシン-EDTA（Gibco BRL Catalog No. 25200-049） プロトコール アッセイを行うために、以下のプロトコールを用いた。
【０６２４】 1. Corning 96ウェルelisaプレートを、1ウェルあたり1.0 μgのCappel抗ウ サギIgG抗体の0.1 M Na2CO3 pH 9.6溶液にてコートする。1ウェルあたり150 μL
の最終容量となるようにする。プレートを4℃にて一晩コートする。プレートは 、4℃に保存する場合は2週間まで保存可能である。
【０６２５】 2. 細胞を適切な培養ディッシュにてGrowth培地（DMEM、2.0 mM L-グルタミ ン、10% FBSを補ったもの）中、コンフルエントになるまで37℃、5% CO2にて培 養する。
【０６２６】 3. トリプシン処理により細胞を回収し、Corning 25850ポリスチレン96ウェ ル丸底細胞プレートに、200 μLの増殖培地中に25,000/ウェルでまく。 4. 細胞を少なくとも1日間、37℃、5% CO2にて培養する。
【０６２７】 5. 細胞をD-PBS 1Xにて洗う。 6. 200 μL/ウェルの飢餓培地（DMEM、2.0 mM l-グルタミン、0.1% FBS）を 加える。一晩、37℃、5% CO2にてインキュベートする。
【０６２８】 7. 飢餓培地を用い、ポリプロピレン96ウェルプレート中で化合物を1:20に希
釈する。対照ウェルに用いるために、ジメチルスルホキシドを1:20に希釈する。 8. 96ウェル細胞培養プレートから飢餓培地を除き、162μLの新しい飢餓培地
を各ウェルに加える。
【０６２９】 9. 18 μLの1:20希釈した化合物希釈物（過程7からのもの）を各ウェルに加 え、対照ウェル（+/- VEGF）に1:20ジメチルスルホキシド希釈物を加えて、細胞
刺激後に最終希釈1:200となるようにする。最終ジメチルスルホキシドは0.5%で ある。プレートを37℃、5% CO2にて2時間インキュベートする。
【０６３０】 10. プレートを逆さにして液体を除くことにより、未結合の抗体をELISAプレ
ートから除く。TBSW + 0.5%エタノールアミン、pH 7.0にて3回洗う。プレートを
紙タオルに軽くたたきつけ、過剰な液体と泡を除く。
【０６３１】 11. プレートを、1ウェルあたり150 μLのTBSW + 0.5%エタノールアミン、pH
7.0にてブロックする。マイクロリットルプレート振とう器上で振とうしている
間、プレートを30分間インキュベートする。
【０６３２】 12. 過程10に記載の通りにプレートを3回洗う。 13. アフィニティー精製した抗FLU-1ウサギポリクローナル抗血清を0.5 μg/
ウェル加える。TBSW + 0.5%エタノールアミン、pH 7.0にて最終容量が150 μL/ ウェルとなるようにする。振とうしながら30分間、プレートをインキュベートす
る。
【０６３３】 14. 180 μLの飢餓培地を細胞に加え、20 μL/ウェルの10.0 mMオルトバナジ
ン酸ナトリウムおよび500 ng/mLのVEGF（最終濃度が1ウェルあたり1.0 mMオルト
バナジン酸ナトリウムおよび50 ng/mLのVEGFとなる）を用いて8分間、37℃、5%
CO2にて細胞を刺激する。陰性対照ウェルには飢餓培地のみを加える。
【０６３４】 15. 8分後、培地を細胞から除き、200 μL/ウェルのPBSにて1回洗わなければ
ならない。 16. 室温で5分間振とうしながら、細胞を150 μL/ウェルHNTGにて可溶化する
。HNTG調製物にはオルトバナジン酸ナトリウム、ピロリンサンナトリウムおよび
EDTAが含まれる。
【０６３５】 17. ELISAプレートを過程10に記載の通りに3回洗う。 18. 細胞可溶化物を細胞プレートからELISAプレートに移し、振とうしながら
2時間インキュベートする。細胞可溶化物を移すために、ウェルをひっかきなが らピペットで吸ったりはいたりする。
【０６３６】 19. 過程10に記載の通りにプレートを3回洗う。 20. ELISAプレートをTBSW + 0.5%エタノールアミン中0.02 μg/ウェルのUB40
と共にインキュベートする。最終容量を150 μL/ウェルとなるようにする。振と
うしながら30分間インキュベートする。
【０６３７】 21. 過程10に記載の通りにプレートを3回洗う。 22. ELISAプレートを、TBSW + 0.5%エタノールアミンpH 7.0にて1:10,000希 釈したEIAグレードのヤギ抗マウスIgG結合セイヨウワサビペルオキシダーゼと共
にインキュベートする。最終容量を150 μL/ウェルとなるようにする。振とうし
ながら30分間インキュベートする。
【０６３８】 23. 過程10に記載の通りにプレートを洗う。 24. ウェルに100 μLのABTS/H2O2を加える。振とうしながら10分間インキュ ベートする。
【０６３９】 25. 100 μLの0.2 M HClを加えて最終0.1 M HClとし、発色反応を停止する。
室温で1分間振とうする。空気をゆっくりと流すことにより泡を除き、410 nmに てELISAプレートリーダー中でELISAプレートを読みとる。
【０６４０】 式XXIV（実施例6）の化合物に関してFLK-1受容体リン酸化アッセイにおいて測
定したIC50値は、4.84 μMであるとわかった。 実施例12：A431細胞の増殖に対するインドリノン化合物の効果を測定するアッ
セイ 以下のアッセイはA431細胞の増殖速度を測定するものである。
【０６４１】 材料 96ウェル平底滅菌プレート 96ウェル丸底滅菌プレート 滅菌した25 mLまたは100 mLの貯蔵器 ピペット、多チャンネルピペットマン 滅菌したピペットチップ 滅菌した15 mLおよび50 mLチューブ。
【０６４２】 試薬 1 %酢酸中0.4% SRB 10 mMトリス塩基 10% TCA 1%酢酸 無菌DMSO（Sigma） DMSO中化合物（100 mMあるいはそれ以下のストック溶液） トリプシン-EDTA（GIBCO BRL）。
【０６４３】 細胞株 A431細胞（ATCC CRL 1555）。 増殖培地 2%ウシ血清/DMEM + 2 mMグルタミン、Pen/Strep プロトコール 0日目：細胞プレーティング アッセイのこの部分は層流フード内で行う。
【０６４４】 1. 細胞をトリプシン処理する。10 mLのアイソトンに対して200 μLの細胞懸
濁液を移す。細胞をCoulter Counterを用いて計数する。 2. 細胞を増殖培地にて60,000細胞/ウェルに希釈する。100 μLの細胞を96ウ
ェル平底プレートの各ウェルに移し、6000細胞/ウェルとする。
【０６４５】 3. 各化合物にはプレートの半分（4列）を、各化合物濃度にはウェルを4重に
、培地対照には1連の4ウェルを用いる。 4. プレートを穏やかに振とうし、細胞を均一に接着させる。
【０６４６】 5. プレートを、10% CO2インキュベーター内で37℃にてインキュベートする 。 1日目：化合物の添加： アッセイのこの部分は、層流フード内で行う。
【０６４７】 1. 96ウェル丸底プレートのカラム1から11に、最も高いスクリーニング濃度 の化合物中にある2X最終% DMSOを含む120 μLの増殖培地を加える。例えば、最 も高い濃度が100 μLであって、これが100 mMストックから作られている場合は 、1X DMSOは0.1%であり、2X DMSOは0.2%である。このプレートを化合物あたり4 列用い、化合物の力価検定する。
【０６４８】 2. 滅菌15 mLチューブ内に、増殖培地プラス2X DMSO中、最も高いスクリーニ
ング濃度の化合物の2X溶液を作る。細胞株につき1 mLが必要である。化合物の出
発濃度は、通常は100 μMであるがこの濃度は化合物の溶解性に応じて変化し得 る。
【０６４９】 3. 240 μLの2X出発化合物溶液を、96ウェル丸底プレートのカラム12の4重の
ウェルに移す。12μLをカラム12からカラム11に、カラム11からカラム10に、と いうようにカラム2まで移すことにより、右から左にプレートを横切って1:2に連
続希釈を行う。100 μLの化合物希釈物およびカラム1の100 μLの培地を、96ウ ェル平底プレートの対応するウェル内の細胞上の100 μL培地に移す。ウェルあ たりの総容量は200 μLのはずである。
【０６５０】 4. プレートをインキュベーターに戻し、3日間インキュベートする。 4日目：アッセイの展開 アッセイのこの部分は実験台上で行う。
【０６５１】 1. 培地を吸引するか注ぎ去る。各ウェルに200 μL冷10% TCAを加えて細胞を
固定する。プレートを少なくとも60分間、4℃にてインキュベートする。 2. TCAを捨て、ウェルを水道水にて5回すすぐ。プレートを紙タオル上で逆さ
まにして乾かす。
【０６５２】 3. 細胞を100 μL/ウェルの0.4% SRBにて10分間染色する。 4. SRBを流し、ウェルを1%酢酸にて5回すすぐ。プレートを紙タオル上で逆さ
まにして完全に乾かす。
【０６５３】 5. 5-10分間振とう器上で100 μL/ウェルの10 mMトリス塩基にて、色素を可 溶化する。 6. Dynatech ELISA Plate Reader上で参照630 nmにて570 nmにおいてプレー トを読みとる。
【０６５４】 式XXIV（実施例6）の化合物はA431細胞の増殖速度を阻害し、IC50は0.712 μM
であるとわかった。 実施例13：SKOV3細胞の増殖に対するインドリノン化合物の効果を測定するア ッセイ このアッセイはA431細胞の代わりにSKOV3細胞（ATCC HTB77）を用いることを 除き、実施例10に示したアッセイと同じである。
【０６５５】 式XXIV（実施例6）の化合物はSKOV3細胞の増殖速度を阻害し、IC50は1.08 μM
であるとわかった。 実施例14：C6細胞の増殖に対するインドリノン化合物の効果を測定するアッセ
イ このアッセイはA431細胞の代わりにC6細胞（ATCC 107）を用いることを除き、
実施例10に示したアッセイと同じである。
【０６５６】 式XXIV（実施例6）の化合物はC6細胞の増殖速度を阻害し、IC50は1.55 μMで あるとわかった。 実施例15：PDGF、EGF、およびFGFによって誘導されるBRDU取り込みアッセイ 材料および試薬 (1) PDGF：ヒトPDGF B/B；1276-956、Boehringer Mannheim, Germany (2) BrdU標識試薬：10 mM、PBS（pH 7.4）中、Cat. No. 1 647 229、Boehringer
Mannheim, Germany (3) FixDenat：固定溶液（そのまま使用できる）、Cat. No. 1 647 229、Boehr
inger Mannheim, Germany (4) 抗BrdU-POD：ペルオキシダーゼ結合マウスモノクローナル抗体、Cat. No.
1 647 229、Boehringer Mannheim, Germany (5) TMB基質溶液：テトラメチルベンジジン（TME）、そのまま使用できる、Cat
. No. 1 647 229、Boehringer Mannheim, Germany (6) PBS洗い溶液：1 X PBS、pH 7.4、houseにて作製されたもの (7) アルブミン、ウシ（BSA）：フラクションV粉末；A-8551、Sigma Chemical
Co., USA (8) ヒトPDGF-Rを発現するように遺伝子操作された3T3細胞株 プロトコール (1) 96ウェルプレートに、細胞をDMEM、10% CS、2 mM Gln中8000細胞/ウェルに
てまく。細胞を37℃、5% CO2にて一晩インキュベートする。 (2) 24時間後、細胞をPBSにて洗い、次に無血清培地（0.1% BSAを含む0% CS DM
EM）中で血清を24時間欠乏させた。 (3) 3日目に、リガンド（PDGF = 3.8 nM、0.1% BSAを含むDMEMにて調製）およ び試験化合物を細胞に同時に加える。陰性対照ウェルには0.1% BSAを含む無血清
培地のみを加え；陽性対照ウェルにはリガンド（PDGF）を加えるが試験化合物は
加えない。試験化合物はリガンドを含む無血清DMEMにて96ウェルプレート中に調
製し、7試験濃度に連続希釈する。 (4) リガンド活性化の20時間後、希釈したBrdU標識試薬（DMEM、0.1% BSA中、1
:100）を加え、細胞をBrdU（最終濃度=10 μM）と共に1.5時間インキュベートす
る。 (5) 標識試薬と共にインキュベートした後、デカントして逆さにしたプレート を紙タオル上に軽くたたきつけることにより培地を除く。FixDewnat溶液を加え （50 μL/ウェル）、プレート振とう器上でプレートを室温で45分間インキュベ ートする。 (6) デカントして逆さにしたプレートを紙タオル上に軽くたたきつけることに よりFixDewnat溶液を完全に除く。ブロッキング溶液としてミルクを加え（PBS中
5%乾燥ミルク、200 μL/ウェル）、プレート振とう器上でプレートを室温で30分
間インキュベートする。 (7) デカントしウェルをPBSにて5回すすぐことによりブロッキング溶液を除き 、逆さにして紙タオル上に軽くたたきつけることによりその場所を乾かす。TMB 基質溶液を加え（100 μL/ウェル）、発色が光度計検出に十分になるまでプレー
ト振とう器上で室温で20分間インキュベートする。 (10) 試料の吸光度を、Dynatech ELISAプレートリーダーを用い410 nm（参照波
長として490 nmにおけるフィルターリーディングを用いた”二重波長”モード）
において測定する。
【０６５７】 本発明のいくつかの化合物に関してIC50値を測定した。これらの値を表に述べ
る。
【０６５８】
【表２５】
【０６５９】 *：この化合物に関しては生物学的データーは入手可能ではない。 式XXIV（実施例6）の化合物に関してもIC50値を測定した。表に述べる。
【０６６０】
【表２６】
【０６６１】 実施例16：IN VIVO腫瘍阻止 in vivo腫瘍阻止を、皮下異種移植モデルを用いて測定した。マウス（BALB/c 、nu/nu）にCalu-6ヒト肺癌細胞を移植し、本発明の化合物が腫瘍増殖を阻止す る能力を測定した。
【０６６２】 Calu-6細胞を10%ウシ胎児血清（FBS）および2 mMグルタミン（GLN）を補ったH
am's F10にて維持した。コンフルエントあるいはそれに近い状態の時に細胞を0.
05%トリプシン-EDTAにて回収し、450 x gにて10分間遠心した。ペレットを無菌P
BSあるいは培地（FBSなし）に再懸濁して特定の濃度にし、細胞をマウスの後横 腹内に移植した。venierキャリパーを用いて腫瘍増殖を3から6週間に渡って測定
した。他に示していない限り、腫瘍体積は長さ x 幅 x 高さの積として算出した
。AP-001を50-100μLの溶媒（VPD:D5W）に溶解させた。化合物を様々な用量でIP
注入により輸送した。
【０６６３】 以下の表は、化合物AP-001が腫瘍増殖を阻止する能力を説明するものである。
【０６６４】
【化１２３】
【０６６５】 効果の増強は、投薬プログラムを最適化することにより得ることができる。例
えば、投薬の量およびタイミングを、この技術分野で知られており本明細書中に
記載の手順を用いて変化させ試すことができる。
【０６６６】 表に示すように、25 mg/kg/日では、AP-001は皮下異種移植モデルにおいてCal
u-6細胞の増殖を70%まで有意に抑制した。この用量ではいかなる死亡発生も見ら
れなかった。50および75 mg/kg/日ではいかなる阻害も見られなかったが、この 化合物はVPD:D5Wに溶解させた際にゲルを形成した。
【０６６７】
【表２７】
【０６６８】 *：定義により、対照試料はいかなる阻害も示さない。 実施例17：IN VITROにおけるFLK-1自己リン酸化アッセイ 以下のプロトコールは、in vitroにおけるFLK-1自己リン酸化活性を求めるた めに用いるELISA手順を説明するものである。この手順は、インドリノン化合物 の最初のスクリーニングのためのプロトコールをも説明する。
【０６６９】 試薬および補助品 1. 15 cm組織培養ディッシュ 2. FLK-1/NIH細胞：ヒトFLK-1クローン3（MPI, Martinsried, Germany）を過剰
発現するNIH線維芽細胞株 3. 増殖培地：DMEMプラス熱非働化10% FBSおよび2 mMグルタミン（Gibco-BRL,
Gaithersburg, USA） 4. 飢餓培地：DMEMプラス0.5%熱非働化FBSおよび2 mMグルタミン（Gibco-BRL,
Gaithersburg, USA） 5. Corning 96ウェルELISAプレート（Corning Cat. # 25805-96） 6. L4あるいはE38：FLK-1特異的なモノクローナル抗体；プロテインAアガロー スアフィニティークロマトグラフィー（SUGEN, Inc., Reswood City, CA）によ り精製した 7. PBS（ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水）（Gibco Catalog # 450-1300EB）
【０６７０】
【表２８】
【０６７１】 8. HNTG
【０６７２】
【表２９】
【０６７３】 9. Pierce BCAタンパク質定量キット 10. ブロッキングバッファー PBS中5% Carnationインスタントミルク 11. TBST、pH 7.0
【０６７４】
【表３０】
【０６７５】 Triton-X100 0.1% 12. キナーゼバッファー
【０６７６】
【表３１】
【０６７７】 13. キナーゼ停止溶液 EDTA 200 mM 14. ビオチン化4G10、リン酸化チロシン特異的（UBI Cat# 16-103、Lake Placi
d, NY） 15. ABキット（Vector Laboratories, Cat # PK 4000, Burlingame, CA） 16. DMSO 17. 化合物用NUNC 96ウェルV底ポリプロピレンプレート（Applied Scientific,
Cat # AS-72092） 18. ABTS溶液
【０６７８】
【表３２】
【０６７９】 19. 過酸化水素30%溶液（Fisher Cat # H325）。使用する準備ができるまで暗 所に4℃にて保存する。 20. ABTS/H2O2
【０６８０】
【表３３】
【０６８１】 21. ATP（Sigma Cat # A-7699） 22. TBST、pH 7.0
【０６８２】
【表３４】
【０６８３】 23. TBS pH 7.0中20% DMSO 手順 A. 細胞増殖および可溶化物調製 1. 細胞を増殖培地中にまき、90-100%コンフルエントの状態まで37℃かつ5%
CO2にて2-3日間増殖させる。継代#20を超えないようにすること。
【０６８４】 2. 培地を除き、細胞をPBSにて2回洗う。HNTG可溶化バッファーにて可溶化す
る。全ての可溶化物を回収し、20-30秒間ボルテックスすることにより混合する 。
【０６８５】 3. 不溶性物質を遠心（〜10,000xgにて5-10分間）により除く。 4. BCAキットによりタンパク質濃度を求める。 5. 可溶化物を1 mgの分注物に分注し、-80℃にて保存する。
【０６８６】 B. アッセイ手順 1. Corning 96ウェルELISAプレートを、100 μLのPBS中 2 μg/ウェルの精製L
4（あるいはE38）にて4℃で一晩コートする。
【０６８７】 2. プレートを逆さにして液体を除くことにより、未結合のタンパク質をウェ
ルから除く。d-H2Oにて1回洗い、プレートを紙タオルに軽くたたきつけて過剰な
液体を除く。
【０６８８】 3. プレートを、1ウェルあたり150 μLのブロッキングバッファーにてブロッ
クする。4℃にて振とうしながら45-60分間インキュベートする。 4. ブロッキングバッファーを除き、ELISAプレートを。d-H2Oにて3回、TBST にて1回洗う。プレートを紙タオル上に軽くたたきつけて過剰な液体を除く。
【０６８９】 5. 可溶化物をPBSに希釈し、最終濃度50 ug/100 μLとなるようにする。ウェ
ルあたり100 μLの希釈可溶化物を加える。4℃にて振とうしながら一晩インキュ
ベートする。
【０６９０】 6. プレートを逆さにすることにより未結合のタンパク質をウェルから除く。
過程4のように洗う。 7. 80 μLのキナーゼバッファーをウェルに加える（陰性対照ウェルには90 μL加える）。
【０６９１】 8. TBS中20% DMSOを含むポリプロピレンプレートのウェルに、化合物を希釈 する（通常10倍）。 9. 100 μLのあらかじめ希釈した化合物を、固定化したFLK-1を含むELISAウ ェルに加え、振とうする。対照ウェルには化合物を全く加えない。
【０６９２】 10. ストック1 mM ATPから、d-H2O（キナーゼバッファも用い得る）にて0.3
mM ATP溶液を調製する。 11. 陰性対照ウェルを除く全てのウェルに、10 μLの0.3 mM ATPを加える。 振とうしながら室温で60分間インキュベートする。
【０６９３】 12. 10-15分後、11 μLの200 mM EDTAを加えることにより、キナーゼ反応を 停止させる。 13. ELISAプレートをd-H2Oにて4回、TBSTにて2回洗う。
【０６９４】 14. 100μLの1:5000倍希釈したビオチン化4G10（TBST中）を全てのウェルに 加える。振とうしながら室温で45分間インキュベートする。 15. 上記のものをインキュベートしている間、50μLの溶液A & B（ABCキット
の）/10 mLのTBSTを加える。これらは使用する-30分前に配合しなければならな い。
【０６９５】 16. プレートを過程4の通りに洗う。 17. 100 μLの上であらかじめ形成させた複合体（TBST中溶液A & B）を全て のウェルに加える。振とうしながら室温で30分間インキュベートする。
【０６９６】 18. プレートを過程4の通りに洗う。 19. 100 μL ABTS/H2O2溶液を加える。室温で5-10分間振とうする。 20. 陽性対照ウェルの色が約0.35-0.4の吸光度に達したら、プレートをDynat
ech MR7000 ELISAリーダーにて読みとる。
【０６９７】 試験フィルター 630 nm 参照フィルター 410 nm 式XXIV（実施例6）の化合物に関して上記のアッセイにおいて測定したIC50値 は、> 50 μMであるとわかった。
【０６９８】 実施例18：HUV-EC-Cアッセイ 以下のプロトコールは、それらすべてがHUV-EC細胞によって本来発現されてい
る PDGF-R、FGF-RあるいはFlk-1/KDRに対する化合物の活性を測定するのにも用 い得る。 0日目 1. HUV-EC細胞（ヒト臍帯静脈血管内皮細胞）（American Type Culture Coll
ection; catalogue no. 1730 CRL）を洗い、トリプシン処理する。ダルベッコリ
ン酸緩衝生理食塩水（D-PBS；Gibco BRLから得た、catalogue no. 14190-029） にて2回、約1 mL/組織培養フラスコ10 CM2で洗う。非酵素的細胞解離溶液（Sigm
a Chemical Company; catalogue no. C-1544）中0.05%トリプシン/EDTAにてトリ
プシン処理する。0.05%トリプシンは、0.25%トリプシン/1 mM EDTA（Gibco; cat
alogue no. 25200-049）を細胞解離溶液に希釈することにより作製した。約1 mL
/組織培養フラスコ25-30 cm2にて約5分間、37℃にてトリプシン処理する。細胞 がフラスコから離れた後、等量のアッセイ培地を加え、50 mL滅菌遠心チューブ （Fisher Scientific; catalogue no. 05-539-6）に移す。
【０６９９】 2. アッセイ培地を加えることにより、50 mL滅菌遠心チューブ中で約35 mLア
ッセイ培地にて細胞を洗い、およそ200xgにて10分間遠心し、上清を吸引して35
mL D-PBSに再懸濁する。D-PBSにてもう2回洗いを繰り返し、細胞を約1 mLアッセ
イ培地/15 cm2の組織培養フラスコに再懸濁する。アッセイ培地は、F12K培地（G
ibco BRL；catalogue no. 21127-014）+ 0.5%熱非働化ウシ胎児血清を含む。細 胞をCoulter CounterRv Coulter Electronics, Inc.）にて計数し、アッセイ培 地を細胞に加えて0.8-1.0 x 105細胞/mLの濃度を得る。
【０７００】 3. 細胞を100 μL/ウェルあるいは0.8-1.0 x 104細胞/ウェルにて96ウェル平
底プレートに加え、-24 h、37 C、5% CO2にてインキュベートする。 1日目 1. 通常は50μMから0μMまで、異なる96ウェルプレート中で2倍薬剤力価系列
を作る。上の0日目、過程2にて述べたのと同じアッセイ培地を用いる。力価系列
は、200μM（4X最終ウェル濃度）の薬剤90μL/ウェルを特定のプレートカラムの
上端のウェルに加えることによって作製する。ストック薬剤濃度は通常はDMSO中
20 mMであるので、200μM薬物濃度には2% DMSOが含まれる。
【０７０１】 それゆえ、薬剤を希釈するがDMSO濃度は一定に保つために、アッセイ培地（F1
2K + 0.5%ウシ胎児血清）にて2% DMSOまで作製した希釈物を、薬剤力価系列用の
希釈剤として用いる。この希釈剤を60μL/ウェルでカラムの残りのウェルに加え
る。カラムの上端のウェルの120μLの200μM薬剤希釈物から60μLを取り、カラ ムの2段目のウェルの60μLと混合する。このウェルから60μLを取り、カラムの3
段目のウェルの60μLと混合し、2倍力価系列が完成するまでそのように続ける。
最後から2段目のウェルを混合したら、このウェルの120μLから60μLを取り、そ
れを捨てる。最後のウェルは薬剤を含まない対照として60μLのDMSO/培地のまま
にしておく。1) VEGF（Pepro Tech Inc., catalogue no. 100-200から得た）、
2) 内皮細胞増殖因子（ECGF）（酸性線維芽細胞増殖因子、あるいはaFGFとして
も知られている）（Boehringer Mannheim Biochemica, catalogue no. 1439 600
）；あるいは、3) ヒトPDGF B/B（1276-956, Boehringer Mannheim, Germany）
およびアッセイ培地対照に対して各三重ウェルとするのに十分な、9カラムの滴 定薬剤を作製する。ECGFはヘパリンナトリウムを含む調製物として入手される。
【０７０２】 2. 50μL/ウェルの薬剤希釈物を、0日目由来の0.8-1.0 x 104細胞/100μL/ウ
ェルのHUV-EC-C細胞を含む96ウェルアッセイプレートに移し、-2h、37 ℃、5% C
O2にてインキュベートする。
【０７０３】 3. 三重で、50 μL/ウェルの80 μg/mL VEGF、20 ng/mL ECGF、あるいは培地
対照を各薬剤条件に加える。薬剤を含む時は、増殖因子濃度は目的の最終濃度の
4Xである。約24時間、37 ℃、5% CO2にてインキュベートする。各ウェルは50 μ
L薬剤希釈、50μL増殖因子あるいは培地、および100 μL細胞= 計200μL/ウェル
を含むだろう。従って、4X濃度の薬剤および増殖因子はいったん全てのものがウ
ェルに加えられたなら1Xになる。 2日目 1. 3H-チミジン（Amersham; catalogue no. TRK-686）を1 μCi/ウェル（RPM
I培地+ 10%熱非働化ウシ胎児血清にて作製した10 μL/ウェルの100 μCi/mL溶液
）で加え、-24 h、37 ℃、5% CO2にてインキュベートする。注： 3H-チミジン を用いる他の全ての適用はRPMI中で行われる実験を伴うため、 3H-チミジンはR
PMI培地にて作製する。この過程での培地の違いは重大なものではない。RPMIはG
ibco BRL、catalogue no. 11875-051から得た。 3日目 1. プレートを-20℃にて一晩凍結する。 4日目 1. プレートを解凍し、96ウェルプレート回収器（Tomtec Harvester 96R）を
用いてフィルターマット（Wallac; catalogue no. 1205-401）上に回収し；Wall
ac Betaplate液体シンチレーションカウンターにてカウントを読み取る。
【０７０４】 式XXIV（実施例6）の化合物に関してHUVEC vEGFアッセイにおいて測定したIC5 0 値は、0.68 μMであり、HUVEC aFGFアッセイにおいては0.63 μMであるとわか った。また、化合物AV-002は化合物AV-003よりも細胞増殖のFGF刺激をより大き く阻害し（それぞれ8.0 μM対16.2 μM）、両者とも化合物AV-004（>50 μM）よ
りも強力であった。
【０７０５】 実施例19：HER-2 ELISA 全EGFR-NIH3T3細胞中のHER2キナーゼ活性を、以下に記載のように測定するこ とができる。 材料および試薬 以下の材料および試薬を用いてアッセイを行った： a. EGF：ストック濃度：16.5 ILM；EGF 201, TOYOBO, Co., Ltd. Japan b. 05-101（UBI）(EGFR細胞外ドメインを認識するモノクローナル抗体) c. 抗リン酸化チロシン抗体（抗Ptyr）（ポリクローナル）（上記Fendleyら参 照） d. 検出抗体：セイヨウワサビペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ウサギIgG、TAGO, I
nc., Burlingame, CA e. TBSTバッファー：
【０７０６】
【表３５】
【０７０７】 f. HNTG 5Xストック：
【０７０８】
【表３６】
【０７０９】 g. ABTSストック：
【０７１０】
【表３７】
【０７１１】 *（2,2'-アジノビス（3-エチルベンズチアゾリンスルホン酸））。溶液は使用
するまで4℃で暗所に保存すること。 h. ストック試薬：
【０７１２】
【表３８】
【０７１３】 手順 以下のプロトコールを用いた。 A. ELISAプレートをあらかじめコートする 1. PBS中、最終濃度100 μL/ウェルで、1ウェルあたり0.5 gの05-101抗体に てELISAプレート（Corning, 96ウェル, Cat. ＃25805-96）をコートし、一晩、4
℃にて保存する。コートされたプレートは、4℃で保存した場合は10日までの間 、有効である。
【０７１４】 2. 使用する日にコーティングバッファーを除き、100 μLブロッキングバッ ファー（PBS中5% Carnation Instant NonFat Dry Milk）で置換する。プレート を室温（約23℃から25℃）で、振とうしながら30分間インキュベートする。使用
する直前にブロッキングバッファーを除き、TBSTバッファーにて4回洗う。
【０７１５】 B. 細胞をまく 1. EGFR細胞外ドメインおよび細胞内HER2キナーゼドメインを含むキメラ受容
体を過剰発現するNIH 3T3細胞株をこのアッセイに用い得る。
【０７１６】 2. 実験用に、80-90%コンフルエントの状態のディッシュを選ぶ。細胞をトリ
プシン処理し、10% ウシ胎児血清を加えることによって反応を停止する。細胞を
DMEM培地（10% CS DMEM培地）に懸濁して1500 rpmで1回、5分間室温で遠心する 。
【０７１７】 3. 細胞を播種用培地（DMEM、0.5%ウシ血清）に再懸濁し、トリパンブルーを
用いて細胞を計数する。90%以上の生存率が許容可能である。DMEM培地（0.5%ウ シ血清）中1ウェルあたり100 μL、1ウェルあたり10,000細胞の密度で、96ウェ ルマイクロタイタープレートに細胞をまく。まいた細胞を5% CO2中、37℃にて約
40時間インキュベートする。
【０７１８】 C. アッセイ手順 1. 倒立顕微鏡を用いて、まいた細胞のコンタミネーションをチェックする。
薬剤ストック（DMSO中10 mg/mL）をDMEM培地にて1:10に希釈して5μLをTBSTウェ
ルに移し、最終薬剤希釈1:200、最終DMSO濃度1%となるようにする。対照ウェル はDMSOのみを入れる。5% CO2中、37℃にて2時間インキュベートする。
【０７１９】 2. EGFリガンドを調製する。すなわち、10 μLの希釈EGF（1:12希釈）を移し
た際に100 nMの最終濃度が達成されるように、ストックEGFをDMEMにて希釈する 。
【０７２０】 3. 1ウェルあたり100 μLとするのに十分な、新しい10 mL HNTG*を調製し、 氷上に置く。
【０７２１】
【表３９】
【０７２２】 4. 薬剤と共に120分間インキュベートした後、調製済みのSGFリガンドを1ウ ェルあたり10 μL、細胞に加え、最終濃度100 nMとする。対照ウェルにはDMEMの
みを入れる。室温で5分間、振とうしながらインキュベートする。
【０７２３】 5. 薬剤、EGF、およびDMEMを除く。細胞をPBSにて2回洗う。HNTG*を1ウェル あたり100 μL、細胞に移す。氷上に5分間置く。同時に、別のELISAプレートか らブロッキングバッファーを除き、上述のようにTBSTにて洗う。
【０７２４】 6. マイクロピペッターにしっかりとはめたピペットチップを用いてプレート
から細胞をかき取り、HNTG*可溶化バッファーを繰り返し吸ったりはいたりする ことにより、細胞物質をホモジナイズする。コートし、ブロックし、洗ったELIS
Aプレートに可溶化物を移す。室温で振とうしながら1時間インキュベートする。
【０７２５】 7. 可溶化物を除き、TBSTにて4回洗う。新たに希釈した抗Ptyr抗体をELISAプ
レートに1ウェルあたり100 μL移す。室温で振とうしながら30分間、抗Ptyr抗血
清（TBSTにて1:3000希釈）の存在下、インキュベートする。
【０７２６】 8. 抗Ptyr抗体を除き、TBSTにて4回洗う。新たに希釈したTAGO抗ウサギIgG抗
体をELISAプレートに1ウェルあたり100 μL移す。室温で振とうしながら30分間 インキュベートする（抗ウサギIgG抗体：TBSTにて1:3000希釈。
【０７２７】 9. TAGO検出抗体を除き、TBSTにて4回洗う。新たに調製したABTS/H2O2溶液を
ELISAプレートに1ウェルあたり100 μL移す。室温で振とうしながら20分間イン キュベートする。（ABTS/H2O2溶液：10 mLのABTSストック中、1.0 μL 30% H2O2 ）。
【０７２８】 10. 10 μL 5N H2SO4を添加することによって反応を止め（任意）、410 nmに
おけるO.D.を求める。 11. 陽性対照から陰性対照の値を引くことにより、最大リン酸化チロシンシ グナルを求める。次に、陰性対照を引いてから、抽出物を含むウェルに関するリ
ン酸化チロシン含量のパーセント阻害を算出する。
【０７２９】 実施例20：MET自己リン酸化アッセイ-ELISA このアッセイは、Met受容体上のMetタンパクキナーゼレベルを解析することに
よりMetチロシンキナーゼ活性を求めるものである。 試薬 a. HNTG（5Xストック溶液）：23.83 g HEPESおよび48.83 g NaClを約350 mL dH 2 Oに溶解する。HClまたはNaOHにてpHを7.2に調整し、500 mLグリセロールおよび
10 mL Triton X-100を加え、混合し、総体積1 LになるまでdH2Oを加える。1 Lの
1X使用溶液を作製するには、200 mL 5Xストック溶液を800 mL dH2Oに加え、必要
に応じてpHをチェックし調整し、4℃に保存する。 b. PBS（ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水）、Gibco Cat. # 450-1300EB（1X溶
液）。 c. ブロッキングバッファー：500 mL dH2O中に100 g BSA、12.1 g Tris-pH7.5 、58.44 g NaClおよび10 mL Tween-20を加え、総体積1 Lとなるまで希釈する。 d. キナーゼバッファー：500 mL dH2Oに12.1 g TRIS pH7.2、58.4 g NaCl、40.
7 g MgCl2および1.9 g EGTAを加え、dH2Oにて総体積1 Lとする。 e. PMSF（フッ化フェニルメチルスルホニル）、Sigma Cat. # P-7626、435.5 m
gに対し、100%エタノールを総体積25 mLになるまで加え、ボルテックスする。 f. ATP（細菌由来）、Sigma Cat. # A-7699、粉末を-20℃にて保存する；使用 する溶液を作製するには、3.31 mgを1 mL dH2Oに溶解する。 g. RC-20H HRPO結合抗リン酸化チロシン、Transduction Laboratories Cat. #
E120H。 h. Pierce 1-Step（TM）Turbo TMB-ELISA（3,3'.5.5'-テトラメチルベンジジン
、Pierce Cat, # 34022） i. H2SO4、1 mL濃（18N）を35 mL dH2Oに加える。 j. TRIS HCL、Fischer Cat. # BP152-5；121.14 gの材料に600 mLのMilliQ H2O
を加え、HClにてpHを7.5（あるいは7.2）に調整し、MilliQ H2Oにて体積を1 Lに
する。 k. NaCl、Fischer Cat. # S271-10、5M溶液を作製する。 l. Tween-20、Fischer Cat. # S454-50、1.8 gの材料に80 mL MilliQ H2Oを加 え、HClまたはNaOHにてpHを10.0に調整し、マイクロ波中で煮沸し、冷却してpH をチェックし、pHが10.0で一定となるまで手順を繰り返し、総体積100 mLとなる
までMilliQ H2Oを加え、1 mLの分注物を作って-80℃にて保存する。 n. MgCl2、Fischer Cat. # M33-500、1 M溶液を作製する。 o. HEPES、Fischer Cat. # BP310-500、200 mL MilliQ H2Oに59.6 gの材料を加
え、pHを7.5に調整して体積を計250 mLとし、滅菌フィルターを通す。 p. アルブミン、ウシ（BSA）、Sigma Cat. # A-4503、30グラムの材料に無菌蒸
留水を加えて総体積300 mLとし、4℃にて保存する。 q. TBSTバッファー：1 L目盛り付きシリンダーに入った約900 mL dH2Oに6.057
gのTRISおよび8.766 g NaClを加え、溶解したらHClにてpHを7.2に調整し、1.0 m
L Triton X-100を加えてdH2Oにて総体積1 Lとする。 r. ヤギアフィニティー精製抗体ウサギIgG（分子全体）、Cappel Cat. # 55641
s. 抗h-Met（C-28）ウサギポリクローナルIgG抗体、Santa Cruz Chemical Cat.
# SC-161 t. 一過性にトランスフェクトされたEGFR/Metキメラ細胞（EMR）（Komada, et
al., Oncogene, 8:2381-2390（1993） u. 炭酸ナトリウムバッファー、（Na2CO4、Fischer Cat. # S495）：10.6 gの 材料に800 mL MilliQ H2Oを加え、溶解したらNaOHにてpHを9.6に調整し、MilliQ
H2Oにて総体積を1 Lにし、濾過して4℃にて保存する。
【０７３０】 手順 以下の全ての過程は、特に別に示していない限り室温で行う。全てのELISAプ レート洗いはTBSTにて4Xすすぐことによる。
【０７３１】 A. EMR可溶化 この手順は、受容体捕捉の前夜あるいは直前に行い得る。 1. 残存する結晶が消えるまで、37℃水浴中で渦を巻かせる動作により可溶化
物を速やかに解凍する。
【０７３２】 2. 1 mM PMSFを含む1X HNTGにて細胞ペレットを可溶化する。15 cmディッシ ュの細胞あたり3 mLのHNTGを用いる。1/の見積もったHNTG体積を加え、チューブ
を1分間ボルテックスし、残りの量のHNTGを加えてさらに1分間ボルテックスする
。
【０７３３】 3. チューブのバランスを合わせ、4℃、10,000x gで10分間遠心する。 4. 上清を貯め、タンパク質定量用に分注する。 5. ドライアイス/エタノールバス中で、貯めておいた試料を急速凍結する。 この過程は、可溶化物を一晩保存するか、タンパク質定量後に直ちに使用するか
によらず行う。
【０７３４】 6. 標準的なビシンコニン酸（BCA）法（Pierce Chemical Cat. # 23225のBCA
Assay Reagent Kit）を用いてタンパク質定量を行う。 ELISA手順 1. Corning 96ウェルELISAプレートを、総ウェル体積50 μlとなるように1ウェ
ルあたり5 μgのヤギ抗ウサギ抗体の炭酸バッファー溶液にてコートする。4℃に
て一晩コートする。 2. プレートを逆さにして液体を除くことにより、未結合のヤギ抗ウサギ抗体を
除く。 3. 各ウェルに150 μlのブロッキングバッファーを加える。30分間室温で振と うしながらインキュベートする。 4. TBSTにて4X洗う。プレートを紙タオルに軽くたたきつけて過剰の液体および
泡を除く。 5. ウェルあたり、TBSTにて希釈した1 μgのウサギ抗Met抗体を、総ウェル体積
が100 μlとなるように加える。 6. 可溶化物をHNTGにて希釈する（90 μg可溶化物/100 μl）。 7. 希釈した可溶化物を各ウェルに100 μL加える。室温で60分間振とうする。 8. TBSTにて4X洗う。プレートを紙タオルに軽くたたきつけて過剰の液体および
泡を除く。 9. ウェルあたり50 μLの1X可溶化物バッファーを加える。 10. ポリプロピレン96ウェルプレート中で1Xキナーゼバッファーにて化合物/抽
出物を1:10に希釈する。 11. 5.5 μLの希釈した薬剤をELISAプレートのウェルに移す。振とうしながら2
0分間、室温でインキュベートする。 12. ウェルあたり5.5 μLの60 μM ATPを加える。陰性対照にはATPを全く加え ない。振とうしながら90分間、室温でインキュベートする。 13. TBSTにて4X洗う。プレートを紙タオルに軽くたたきつけて過剰の液体およ び泡を除く。 14. ウェルあたり100 μLのRC20（ブロッキングバッファーにて1:2000希釈）を
加える。振とうしながら30分間、室温でインキュベートする。 15. TBSTにて4X洗う。プレートを紙タオルに軽くたたきつけて過剰の液体およ び泡を除く。 16. ウェルあたり100 μLのTurbo-TMBを加える。振とうしながら30-60分間、イ
ンキュベートする。 17. ウェルあたり100 μLの1M H2SO4を加えて反応を停止する。 18. Dynatech MR7000 ELISAリーダーにてアッセイを読みとる。試験フィルター
= 450 nm、参照フィルター= 410 nm。
【０７３５】 実施例21：生化学的SRCアッセイ-ELISA このアッセイを用いて、読み出しとしてビオチン化ペプチドのリン酸化を測定
してsrcタンパク質キナーゼ活性を決定する。 材料および試薬： a. srcにて形質転換した酵母（Sugen, Inc., Reswood City, California） b. 細胞可溶化物：srcを発現する酵母細胞をペレットにし、水で1回洗い、再び
ペレットにして使用するまで-80℃にて保存する。 c. N末端がビオチン化されたEEEYEEYEEEYEEEYEEEYを、当業者には十分知られて
いる標準的な手順によって調製する。 d. DMSO：Sigma, St. Louis, MO e. 96ウェルELISAプレート：Corning 96 Well Easy Wash, Modified flat Bott
om Plate, Corning Cat. #25805-96 f. 化合物の希釈用のNUNC 96ウェルV底ポリプロピレンプレート：Applied Scie
ntific Cat. # A-72092 g. Vecastain ELISA ABC試薬：Vector, Burlingame, CA h. 抗src（327）mab：Schizosaccharomyces Pombeを用い、組み換え型Srcを発 現させた（Superti-Furga, et al., EMBO J., 12:2625-2634; Superti-Furga, e
t al., Nature Biochem., 14:600-605）。S. Pombe菌株SP200（h-s leul.32 ura
4 ade210）を記載の通りに培養し、pRSP発現プラスミドによる形質転換を酢酸リ
チウム法（上記Superti-Furga）により行った。細胞を1 μMチアミン存在下で培
養して、nmtlプロモーターからの発現を抑制するか、あるいはチアミン非存在下
で培養して発現を誘導した。 i. モノクローナル抗リン酸化チロシン、UBI 05-321（UB40を代わりに使っても
よい） j. Turbo TMB-ELISAペルオキシダーゼ基質：Pierce Chemical バッファー溶液 a. PBS（ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水）：GIBCO PBS, GIBCO Cat. # 450-1
300EB b. ブロッキングバッファー：PBS中5%Non-fat milk（Carnation） c. 炭酸バッファー：FischerのNa2CO4、Cat. # S495、100 mMストック溶液を作
る。 d. キナーゼバッファー：1.0 mL（1Mストック溶液から）MgCl2； 0.2 mL（1Mス
トック溶液から）MnCl2；0.2 mL（1Mストック溶液から）DTT；5.0 mL（1Mストッ
ク溶液から）HEPES；0.1 mLTX-100；MilliQ H2Oにて総体積10 mLとする。 e. 可溶化バッファー：5.0 HEPES（1Mストック溶液から）； 2.74 mL NaCl（5
Mストック溶液から）；10 mLグリセロール；1.0 mL TX-100；0.4 mL EDTA（100
mMストック溶液から）；1.0 mL PMSF（100 mMストック溶液から）；0.1 mL Na3V
O4（0.1 Mストック溶液から）；MilliQ H2Oにて総体積100 mLとする。 f. ATP：Sigma Cat. # A-7699、10 mMストック溶液を作る（5.51 mg/mL）。 g. TRIS-HCL：Fischer Cat. # BP 152-5、600 mL MilliW H2Oに対し、121.14 g
を加える。 h. NaCl：Fischer Cat. # S271-10、MilliW H2Oにて5Mストック溶液を作る。Na 3 VO4：Fischer Cat. # S454-50；80 mLのMilliW H2Oに1.8 gの材料を加え、HCl またはNaOHにてpHを10.0に調整し；マイクロ波中で煮沸し；冷却し；pHをチェッ
クし：加熱/冷却サイクル後にpHが一定のままになるまで、pH調整を繰り返し；M
illiW H2Oにて総体積を100 mLにし；1 mLの分注物を作って-80℃に保存する。 j. MgCl2、Fischer Cat. # M33-500、MilliW H2Oにて1 M溶液を作製する。 k. HEPES、Fischer Cat. # BP310-500、200 mL MilliQ H2Oに59.6 gの材料を加
え、pHを7.5に調整してMilliW H2Oにて体積を計250 mLとし、滅菌フィルターを 通す（1 Mストック溶液）。 l. TBSTバッファー：1 TBSTバッファー： 900 mL dH2Oに6.057 gのTRISおよび8
.766 g NaClを加え； HClにてpHを7.2に調整して1.0 mL Triton X-100を加え；d
H2Oにて総体積1 Lとする。 m. MnCl2、Fischer Cat. # M87-100、MilliW H2Oにて1 M溶液を作製する。 n. DTT；Fischer Cat. # BP172-5 o. TBS（TIRS緩衝生理食塩水）：900 mL dH2Oに6.057 gのTRISおよび8.777 g N
aClを加え；MilliQ H2Oにて総体積1 Lとする。 p. キナーゼ反応混合液：アッセイプレートあたりの量（100ウェル）：1.0 mL キナーゼバッファー、200 μg GST-、MilliQ H2Oにて最終体積8.0 mLとする。q. ビオチン標識EEEYEEYEEEYEEEYEEEY：ペプチドストック溶液（1 mM、2.98 mg/m
L）を使用直前に新しく水にて作製する。 r. Vectastain ELITE ABC試薬：14 mLの使用試薬を調製するのに、1滴の試薬A を15 mLのTBSTに加え、チューブを数回逆さまにして混合する。次に、1滴の試薬
Bを加える。チューブを室温で軌道振とう器上に置き、30分間混合する。
【０７３６】 手順： A. SrcコートされたElisaプレートの調製 1. 100 μLのpH 9.6炭酸ナトリウムバッファー中0.5 μg/ウェルの抗src mab
にてELISAプレートを一晩、4℃にてコートする。
【０７３７】 2. ウェルをPBSにて1回洗う。 3. プレートを0.15 mL PBS中5%ミルクにて30分間、室温でブロックする。 4. プレートをPBSにて5X洗う。
【０７３８】 5. 可溶化バッファー（ウェルあたり0.1 mL総体積）にて希釈した、10 μ/ウ
ェルのsrc形質転換された酵母可溶化物を加える。（可溶化物の量はバッチ毎に 異なり得る。）プレートを室温で20分間振とうする。
【０７３９】 B. リン酸化チロシン抗体コートされたElisaプレートの調製 1. 4G10プレート：100 μL PBS中0.5 μg/ウェルの4G10にて一晩、4℃でコー
トし、150 μL PBS中5%ミルクにて30分間、室温でブロックする。
【０７４０】 C. キナーゼアッセイ手順 1. 上の過程1-7に由来する未結合のタンパク質を除き、プレートをPBSにて5X
洗う。
【０７４１】 2. ウェルあたり0.08 mLキナーゼ反応混合液（10 μLの10Xキナーゼバッファ
ーおよび、水にて希釈したウェルあたり10 μM（最終濃度）ビオチン-EEEYEEYEE
EYEEEYEEEY）を含む）を加える。
【０７４２】 3. 10% DMSOを含む、水にて希釈した化合物10 μLを加え、室温で15分間イン
キュベートする。 4. 10 μL/ウェルの0.05 mM ATP水溶液（最終5 μM ATP）を加えることによ りキナーゼ反応を開始させる。
【０７４３】 5. ELISAプレートを室温で15分間振とうする。 6. ウェルあたり10 μLの0.5 M EDTAを加えることにより、キナーゼ反応を停
止させる。
【０７４４】 7. 90 μLの上清を、上のセクションB由来のブロックされた4G10コートELISA
プレートに移す。 8. 室温で振とうしながら、30分間インキュベートする。
【０７４５】 9. プレートをTBSTにて5X洗う。 10. Vectastain ELITE ABC試薬（100 μl/ウェル）と共に室温で30分間イン キュベートする。
【０７４６】 11. ウェルをTBSTにて5X洗う。 12. Turbo TMBにて発色させる。 実施例22：生化学的LCKアッセイ-ELISA このアッセイを用いて、読み出しとしてGST-のリン酸化を測定してlckタンパ ク質キナーゼ活性を決定する。
【０７４７】 材料および試薬： a. lckにて形質転換した酵母。Schizosaccharomyces Pombeを用い、組み換えLc
kを発現させた（Superti-Furga, et al., EMBO J, 12:2625-2634；Superti-Furg
a, et al., Nature Biotech., 14:600-605）。S. Pombe菌株SP200（h-s leul.32 ura4 ade210）を記載の通りに培養し、pRSP発現プラスミドによる形質転換を、
酢酸リチウム法（上記Superti-Furga）により行った。細胞を1 μMチアミン存在
下で培養し、発現を誘導した。 b. 細胞可溶化物：lckを発現する酵母細胞をペレットにし、水で1回洗い、再び
ペレットにして使用するまで-80℃にて保存する。 c. GST-：細菌中での発現用の、GST-融合タンパク質をコードするDNAを、カリ フォルニア大学サンフランシスコ校Hughes Medical InstituteのArthur Weissよ
り入手した。形質転換された細菌を、25℃で振とうしながら一晩培養した。GST-
をグルタチオンアフィニティークロマトグラフィー、Pharmacia、Alameda、CAに
より精製した。 d. DMSO：Sigma, St. Louis, MO e. 96ウェルELISAプレート：Corning 96 Well Easy Wash, Modified flat Bott
om Plate, Corning Cat. #25805-96 f. 化合物の希釈用のNUNC 96ウェルV底ポリプロピレンプレート：Applied Scie
ntific Cat. # A-72092 g. 精製ウサギ抗GST抗血清：Amrad Corporation（Australia）Cat. #90001605 。 h. ヤギ抗ウサギIgG-HRP：Amersham Cat. #V010301 i. ヒツジ抗マウスIgG（H + L）：Jackson Labs Cat. # 5215-005-003 j. 抗Lck（3A5）mab：Santa Cruz Biotechnology Cat. #sc-433 k. モノクローナル抗リン酸化チロシンUBI 05-321（UB40を代わりに使ってもよ
い） バッファー溶液： a. PBS（ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水）1X溶液：GIBCO PBS, GIBCO Cat. # 450-1300EB b. ブロッキングバッファー：100 g BSA、12.1 g TRIS-pH7.5、58.44 g NaCl、
10 mL Tween-20、MilliQ H2Oにて総体積1 Lとする。 c. 炭酸バッファー：FischerのNa2CO4、Cat. # S495；MilliQ H2Oにて100 mMス
トック溶液を作る。 d. キナーゼバッファー：1.0 mL（1Mストック溶液から）MgCl2； 0.2 mL（1Mス
トック溶液から）MnCl2；0.2 mL（1Mストック溶液から）DTT；5.0 mL（1Mストッ
ク溶液から）HEPES；0.1 mLTX-100；MilliQ H2Oにて総体積10 mLとする。 e. 可溶化バッファー：5.0 HEPES（1Mストック溶液から）； 2.74 mL NaCl（5
Mストック溶液から）；10 mLグリセロール；1.0 mL TX-100；0.4 mL EDTA（100
mMストック溶液から）；1.0 mL PMSF（100 mMストック溶液から）；0.1 mL Na3V
O4（0.1 Mストック溶液から）；MilliQ H2Oにて総体積100 mLとする。 f. ATP：Sigma Cat. # A-7699、10 mMストック溶液を作る（5.51 mg/mL）。 g. TRIS-HCL：Fischer Cat. # BP 152-5、600 mL MilliW H2Oに対し、121.14 g
を加え、HClにてpHを7.5に調整し、MilliQ H2Oにて総体積1 Lとする。 h. NaCl：Fischer Cat. # S271-10、MilliW H2Oにて5Mストック溶液を作る。i. Na3VO4：Fischer Cat. # S454-50；80 mLのMilliW H2Oに1.8 gの材料を加え、
HClまたはNaOHにてpHを10.0に調整し；マイクロ波中で煮沸し；冷却し；pHをチ ェックし：加熱/冷却サイクル後にpHが一定のままになるまで、pH調整を繰り返 し；MilliW H2Oにて総体積を100 mLにし；1 mLの分注物を作って-80℃に保存す る。 j. MgCl2、Fischer Cat. # M33-500、MilliW H2Oにて1 M溶液を作製する。 k. HEPES、Fischer Cat. # BP310-500、200 mL MilliQ H2Oに59.6 gの材料を加
え、pHを7.5に調整してMilliW H2Oにて体積を計250 mLとし、滅菌フィルターを 通す（1 Mストック溶液）。 l. アルブミン、ウシ（BSA）、Sigma Cat. # A4503；150 mL MilliQ H2Oに30 g
の材料を加え、MilliQ H2Oにて総体積300 mLとし、0.22 μmフィルターにてフィ
ルター濾過し、4℃に保存する. m. TBSTバッファー：900 mL dH2Oに6.057 gのTRISおよび8.766 g NaClを加え； HClにてpHを7.2に調整して1.0 mL Triton X-100を加え；dH2Oにて総体積1 Lと する。 n. MnCl2、Fischer Cat. # M87-100、MilliW H2Oにて1 M溶液を作製する。 o. DTT；Fischer Cat. # BP172-5 p. TBS（TIRS緩衝生理食塩水）：900 mL MilliW H2Oに6.057 gのTRISおよび8.7
77 g NaClを加え；MilliQ H2Oにて総体積1 Lとする。 q. キナーゼ反応混合液：アッセイプレートあたりの量（100ウェル）：1.0 mL キナーゼバッファー、200 μg GST-、MilliQ H2Oにて最終体積8.0 mLとする。
【０７４８】 手順： A. LckコートされたElisaプレートの調製 1. 100 μLのpH 9.6炭酸ナトリウムバッファー中2.0 μg/ウェルのヒツジ抗 マウスIgGにてELISAプレートを一晩、4℃にてコートする。
【０７４９】 2. ウェルをPBSにて1回洗う。 3. プレートを0.15 mLブロッキングバッファーにて30分間、室温でブロック する。
【０７５０】 4. プレートをPBSにて5X洗う。 5. 0.5 μg/ウェルの0.1 mL PBS中抗lck（mab 3A5）を加え、室温で1-2時間 おく。
【０７５１】 6. PBSにて5X洗う。 7. 可溶化バッファー（ウェルあたり0.1 mL総体積）にて希釈した、20 μg/ ウェルのlck形質転換された酵母可溶化物を加える。（可溶化物の量はバッチ毎 に異なり得る。）活性の損失を防ぐために、プレートを4℃で一晩振とうする。
【０７５２】 B. リン酸化チロシン抗体コートされたElisaプレートの調製 1. UB40プレート：100 μL PBS中1.0 μg/ウェルのUB40にて一晩、4℃でコー
トし、150 μL ブロッキングバッファーにて少なくとも1時間ブロックする。
【０７５３】 C. キナーゼアッセイ手順 1. 上の過程1-7に由来する未結合のタンパク質を除き、プレートをPBSにて5X
洗う。
【０７５４】 2. ウェルあたり0.08 mLキナーゼ反応混合液（10 μLの10Xキナーゼバッファ
ーおよび、水にて希釈したウェルあたり2 μg GST-を含む）を加える。 3. 10% DMSOを含む、水にて希釈した化合物10 μLを加え、室温で15分間プレ
インキュベートする。
【０７５５】 4. 10 μL/ウェルのATP水溶液（最終10 μM ATP）を加えることによりキナー
ゼ反応を開始させる。 5. ELISAプレートを室温で60分間振とうする。
【０７５６】 6. ウェルあたり10 μLの0.5 M EDTAを加えることにより、キナーゼ反応を停
止させる。 7. 90 μLの上清を、上のセクションB由来のブロックされた4G10コートELISA
プレートに移す。
【０７５７】 8. 室温で振とうしながら、30分間インキュベートする。 9. プレートをTBSTにて5X洗う。 10. 100 μL TBST中1:5000希釈のウサギ抗GST抗体と共に室温で30分間インキ
ュベートする。
【０７５８】 11. ウェルをTBSTにて5X洗う。 12. 100 μL TBST中1:20,000希釈のヤギ抗ウサギIgG-HRP抗体と共に室温で30
分間インキュベートする。
【０７５９】 13. ウェルをTBSTにて5X洗う。 14. Turbo TMBにて発色させる。 実施例23：RAFのリン酸化機能を測定するアッセイ 以下のアッセイは、その標的タンパク質であるMEKやMEKの標的であるMAPKの、
RAF触媒リン酸化の量を報告するものである。RAF遺伝子配列は、Bonner et al., 1985, Molec. Cell. Biol. 5: 1400-1407に記載されており、多重遺伝子配列デ
ータバンクにて容易にアクセスすることができる。本発明の本部分に用いる核酸
ベクターおよび細胞株の構築は、Morrison et al., 1988, Proc. Natl. Acad. S ci. USA 85: 8855-8859に完全に記載されている。
【０７６０】 材料および試薬 1. Sf9（Spodoptera frugiperda）細胞；GIBCO-BRL, Gaithersburg, MD 2. RIPAバッファー：20 mM Tris/HCl pH 7.4、137 mM NaCl、10%グリセロール 、1 mM PMSF、5 mg/Lアプロチニン、0.5% Triton X-100； 3. チオレドキシン-MEK融合タンパク質（T-MEK）：T-MEK発現およびアフィニテ
ィークロマトグラフィーによる精製を、製造者の手順に従って行った。Catalog# K 350-01およびR 350-40、Invitrogen Corp., San Diego, CA。 4. His-MAPK（ERK2）；Hisタグ付加MAPKを、His-MAPKをコードするpUC18ベクタ
ーにて形質転換したXL1 Blue細胞に発現させた。本明細書中に記載の通りにHis-
MAPKをNiアフィニティークロマトグラフィーCat#27-4949-01, Pharmacia, Alame
da, CAにて精製した。 5. ヤギ抗マウスIgG：Jackson laboratories, West Grove, PA. Catalog, # 51
5-006-008, Lot# 28563 6. RAF-1タンパク質キナーゼ特異的抗体：UBI製URP2653 7. コーティングバッファー：PBS；リン酸緩衝生理食塩水、GIBCO-BRL, Gaithe
rsburg, MD 8. 洗いバッファー： TBST- 50 mM Tris/HCL pH 7.2、150 mM NaCl、0.1% Trit
on X-100 9. ブロックバッファー：TBST、0.1%エタノールアミンpH 7.4 10. DMSO、Sigma, St. Louis, MO 11. キナーゼバッファー（KB）：20 mM HEPES/HCl pH 7.2、150 mM NaCl、0.1% Triton X-100、1 mM PMSF、5 mg/Lアプロチニン、75 mMオルトバナジン酸ナト リウム、0.5 MM DTTおよび10 mM MgCl2。 12. ATP混合液：100 mM MgCl2、300 mM ATP、10 mCi 33P ATP（Dupont-NEN）/m
L 13. 停止溶液：1%リン酸；Fischer, Pittsburgh, PA 14. Wallac Cellulose Phosphate Filterマット；Wallac, Turku, Finnland 15. フィルター洗い溶液：1%リン酸、Fischer, Pittsburgh, PA 16. Tontecプレート回収器、Wallac, Turku, FInnland 17. Wallacベータプレートリーダー#1205、Wallac, Turku, FInnland 18. 化合物用NUNC 96ウェルV底ポリプロピレンプレートApplied Scientific Ca
talog # AS-72092 手順 以下の全ての過程は特に示していない限り室温で行った。 1. ELISAプレートコート：ELISAウェルを100 mLのヒツジ抗マウスアフィニティ
ー精製抗血清（1 mg/100 mLコーティングバッファー）抗体にて、一晩、4℃にて
コートする。ELISAプレートは、4℃で保存した場合は2週間使用することができ る。 2. プレートを逆さにし、液体を除く。100 mLのブロッキング溶液を加え、30分
間インキュベートする。 3. ブロッキング溶液を除き、洗いバッファーにて4回洗う。プレートを紙タオ ルに軽くたたきつけて過剰の液体を除く。 4. 各ウェルに、RAF-1特異的な抗体を1 mg加え、1時間インキュベートする。過
程3に記載の通りに洗う。 5. RAS/RAF感染Sf9細胞由来の可溶化物を解凍し、TBSTにて10 mg/100 mLに希釈
する。希釈した可溶化物を10 mg、ウェルに加え、1時間インキュベートする。イ
ンキュベートの間、プレートを振とうする。陰性対照には可溶化物を加えない。
各ウイルスあたりMOI 5にて組み換えバキュロウイルスを細胞に感染させ、48時 間後に回収した後、RAS/RAF感染Sf9昆虫細胞由来の可溶化物を調製する。細胞を
PBSにて1回洗い、RIPAバッファーにて可溶化する。不溶性の物質を遠心（10 000 x gにて5分間）により除く。可溶化物の分注物をドライアイス/エタノール中で
凍結し、使用するまで-80℃にて保存する。 6. 未結合の物質を除き、上に概説したとおり（過程3）に洗う。 7. ウェルあたり2 mgのT-MEKおよび2 mgのHis-MAEPKを加え、キナーゼバッファ
ーにて体積を40 mLに合わせる。細胞抽出物からT-MEKおよびMAPKを精製する方法
は、本明細書中に実施例により提供している。 8. 化合物（ストック溶液10 mg/mL DMSO）または抽出物をTBSTプラス1% DMSOに
て20倍にあらかじめ希釈する。あらかじめ希釈した化合物/抽出物を5 mL、過程6
で記載したウェルに加える。20分間インキュベートする。対照には薬剤を加えな
い。 9. 5 mL ATP混合物を加えることによりキナーゼ反応を開始させ；インキュベー
ションの間、プレートをELISAプレート振とう器にて振とうする。 10. 各ウェルに30 mLの停止溶液を加えることにより、60分後にキナーゼ反応を
停止させる。 11. リンセルロースマットおよびELISAプレートをTomtecプレート回収器内に置
く。フィルターを回収し、製造者の推奨することに従って、フィルター洗い溶液
にて洗う。フィルターマットを乾燥させる。フィルターマットを封入し、ホルダ
ー内に置く。ホルダーを放射活性検出装置内に挿入し、フィルターマット上の放
射性リンを定量する。
【０７６１】 あるいは、アッセイプレートの個々のウェルから40 mLの分注物を、リンセル ロースフィルターマット上の対応する位置に移してもよい。フィルターを風乾さ
せた後、フィルターをトレイ内に置く。トレイを穏やかにゆすり、洗い溶液を15
分間隔で1時間交換する。フィルターマットを風乾させる。フィルターマットを 封入し、試料中の放射性リンを測定するのに適したホルダー内に置く。ホルダー
を検出装置内に挿入し、フィルターマット上の放射性リンを定量する。
【０７６２】 実施例24：CDK2/サイクリンA阻害アッセイ このアッセイは、外来基質におけるCDK2のタンパク質キナーゼ活性を解析する
ものである。
【０７６３】 試薬： A. バッファーA（80 mM Tris（pH 7.2）、40 mM MgCl2）：500 mL H2Oに溶解
した、4.84 G. Tris（F.W. = 121.1 g/mol）、4.07 g. MgCl2（F. W. = 203.31
g/mol）。HClにてpHを7.2に調整する。
【０７６４】 B. ヒストンH1溶液（0.45 mg/mLヒストンH1および20 mM HEPES pH 7.2（pH 7
.4もOK））：100 mL ddH2Oに溶解させた、11.111 mL 20 mM HEPES pH 7.2（477
mg HEPES（F.W.= 238.3 g/mol））中、5 mgヒストンH1（Boehringer Mannheim）
、1 mL分注物にして-80℃にて保存する。
【０７６５】 C. ATP溶液（60 μM ATP、300 μg/mL BSA、3 mM DTT）：20 mLに対し120 μ
L 10 mM ATP、600 μL 10 mg/mL BSA、1 mL分注物にして-80℃にて保存する。 D. CDK2溶液：10 mM HEPES pH 7.2、25 mM NaCl、0.5 mM DTT、10%グリセロ ール中cdk2/サイクリンA、9μL分注物にして-80℃にて保存する。 アッセイの説明： 1. 阻害物質の溶液をddH2O/体積で15% DMSO中に目的の最終アッセイ濃度の3倍 に調製する。 2. ポリプロピレン96ウェルプレートのウェルに20μLの阻害物質（あるいは、 陽性および陰性対照には20μL 15% DMSO）を分注する。 3. ヒストンH1溶液（1 mL/プレート）、ATP溶液（1 mL/プレートプラス陰性対 照用に1分注物）、およびCDK2溶液（9μL/プレート）を解凍する。CDK2は使用す
るまで氷上に置く。凍結-融解サイクルの繰り返しを避けるためにCDK2溶液を適 切に分注する。 4. 9 μL CDK2溶液を2.1 mLバッファーAに希釈する（プレートあたり）。混合 する。20 μLを各ウェルに分注する。 5. 1 mLヒストンH1溶液を1 mL ATP溶液（プレートあたり）と10 mLネジブタ式 チューブ中で混合する。33P ATPを、0.15 μCi/20 μL（0.15 μCi/アッセイの ウェル）の濃度になるまで加える。BSAの泡立ちを避けるために注意深く混合す る。適切なウェルに20 μLを加える。プレートをプレート振とう器にて混合する
。陰性対照には、ATP溶液を等量の20 mM HEPES pH 7.2と混合し、33P ATPを、0.
15 μCi/20 μL溶液の濃度になるまで加える。適切なウェルに20 μLを加える。 6. 反応を60分間進める。 7. 各ウェルに35 μL 10% TCAを加える。プレートをプレート振とう器にて混合
する。 8. 各試料40 μLをP30フィルターマットのます目にスポットする。マットを乾 燥させる（およそ10-20分間）。 9. フィルターマットを4 X 10分間、250 mL 1%リン酸（1リットルのddH2Oにつ き10 mLリン酸）にて洗う。 10. フィルターマットをベータプレートリーダーにて計数する。
【０７６６】 表は、本発明の典型的なイミダゾイル2-インドリノンの生物学的アッセイの結
果を示す。化合物は表の後に挙げてある。IC50は一般的には、化合物が全く存在
しない対照に関するPKの活性に50%変化の影響を与えるために必要な化合物の量 をのことを言う。表中の試験に関しては、評価となる50%変化は、あらゆる化合 物が存在しない対照の活性に対する、本発明の化合物によるPK活性の50%阻害で ある。
【０７６７】
【表４０】
【０７６８】
【化１２４】
【０７６９】 実施例25：異種移植動物モデル 無胸腺マウス（例えば、Balb/c, nu/nuなど）に異種移植片としてヒトの腫瘍 が増殖できるということは、ヒトの腫瘍の治療に対する生物応答を研究するため
の有用なin vivoモデルを提供する。無胸腺マウスへのヒトの腫瘍の、最初の異 種移植成功（Rygaard and Povlsen, 1969, Acta Pathol. Microbial. Scand. 77
:758-760）以来、多数の異なるヒト腫瘍細胞株（例えば、乳、肺、尿生殖器、胃
腸、頭部および頸部、．神経膠芽腫、骨、および悪性メラノーマ）がヌードマウ
スに移植され、うまく生着してきた。以下のアッセイは、本発明の異なる化合物
の活性の程度、特異性および効果を決定するのに用い得る。これらの一般的な種
類のアッセイは、化合物を評価するのに有用である：細胞/触媒、細胞/生物学的
およびin vivo。細胞/触媒アッセイの目的は、TKが細胞内の既知の基質上のチロ
シンをリン酸化する能力に対する化合物の効果を決定することである。細胞/生 物学的アッセイの目的は、細胞内でTKによって刺激される生物応答に対する化合
物の効果を決定することである。in vivoアッセイの目的は、癌などの特定の疾 患の動物モデルにおける化合物の効果を決定することである。
【０７７０】 皮下異種移植実験に適した細胞株には、C6細胞（神経膠細胞腫、ATCC # CCL 1
07）、A375細胞（メラノーマ、ATCC # CRL 1619）、A431細胞（類表皮癌、ATCC
# CRL 1555）、Calu 6細胞（肺、ATCC # HTB 56）、PC3細胞（膵臓、ATCC # CRL
1435）およびEGFR、PDGFR、IGF-1Rあるいは他のあらゆる試験キナーゼを発現す
るように遺伝子操作されたNIH3T3線維芽細胞が含まれる。以下のプロトコールを
用いて、異種移植実験を行うことができる。
【０７７１】 メスの無胸腺マウス（BALB/c, nu/nu）をSimonsen Laboratories（Gilroy, CA
）から得る。すべての動物は、アルファ乾燥床敷を用いマイクロアイソレーター
ケージ内でクリーンルーム条件下で維持する。滅菌した齧歯類餌および水を無制
限に与える。
【０７７２】 細胞株は適切な培地（例えば、MEM、DMEM、Ham's F10、あるいはHam's F12プ ラス5%-10%ウシ胎児血清（FBS）および2 mMグルタミン（GLN））中で培養する。
全ての細胞培養培地、グルタミン、およびウシ胎児血清は、他に明記していない
限り、Gibco Life Technologies（Grand Island, NY）から購入する。全ての細 胞は、90-95%空気および5-10% CO2の湿潤大気中、37℃にて培養する。全ての細 胞株は、機械的に週に2回継代し、Mycotect法（Gibco）によって測定したところ
マイコプラズマに関しては陰性である。
【０７７３】 コンフルエントあるいはそれに近い状態の時に細胞を0.05%トリプシン-EDTAに
て回収し、450 x gにて10分間沈殿させる。ペレットを無菌PBSあるいは培地（FB
Sなし）に再懸濁して特定の濃度にし、細胞をマウスの後横腹内に移植する。ven
ierキャリパーを用いて腫瘍増殖を3から6週間に渡って測定する。他に示してい ない限り、腫瘍体積は長さ x 幅 x 高さの積として算出する。50-100μLの溶媒 （DMSO、あるいはVPD:D5W）中の試験化合物を、様々な用量で、通常は移植1日後
から開始してIP注入により輸送した。
【０７７４】 実施例26：腫瘍浸潤モデル 以下の腫瘍浸潤モデルは、KDR/FLK-1受容体を選択的に阻害すると同定された 化合物の治療価値および効果を評価するために開発され、そのために使用し得る
。 手順 8週齢のヌードマウス（メス）（Simonsen Inc.）を実験動物として用いた。腫
瘍細胞の移植は、層流フード内で行った。麻酔のために、キシラジン/ケタミン カクテル（100 mg/kgケタミンおよび5 mg/kgキシラジン）を腹腔内に投与する。
正中切開を行って、腹腔を露出させ（およそ長さ1.5 cm）、100 μL容量の培地 中107の腫瘍細胞を注入する。細胞を膵臓の十二指腸ローブ内か、あるいは結腸 漿膜下のいずれかに注入する。腹膜および筋を6-0絹連続縫合にて閉じ、創クリ ップを用いて皮膚を閉じる。動物を毎日観察した。
【０７７５】 解析 2-6週間後、動物のおおまかな観察に従ってマウスを屠殺し、様々な臓器（肺 、肝、脳、胃、脾臓、心臓、筋）への局所の腫瘍転移を摘出して解析する（腫瘍
サイズの測定、浸潤の程度、免疫化学、およびin situハイブリダイゼーション ）。
【０７７６】 実施例27：細胞毒性の測定 治療用化合物は、細胞毒性効果を発揮することよりもタンパク質キナーゼ活性
を阻害することにおいてより効果がなければならない。化合物の有効性および細
胞毒性の尺度は、治療インデックス、すなわちIC50/LD50を求めることにより得 ることができる。IC50は50%阻害を達成するのに必要な用量であり、本明細書中 で記載しているような標準的な手法を用いて測定することができる。LD50は50% 毒性をもたらす用量であり、これも標準的な手法（Mossman, 1983, J. Immunol. Methods , 65:55-63）によって、放出されたLDH量を測定することによって（Kor
zeniewski adn Callewaert, 1983, J. Immunol. Methods, 64:313; Decker and
Lohmann-Matthes, 1988, J. Immunol. Methods, 115:61）、あるいは動物モデル
における致死用量を測定することによって測定することができる。大きな治療イ
ンデックスを有する化合物が好ましい。治療インデックスは2以上、好ましくは 少なくとも10、より好ましくは少なくとも50でなければならない。
【０７７７】 実施例28：血管内皮細胞増殖因子刺激された細胞増殖の阻害の実例 ヒトVEGF刺激されたヒト臍帯静脈血管内皮細胞（HUVEC）の細胞増殖に対する いくつかのインドリノン化合物（化合物AV-002、化合物AV-003、および化合物AV
-004）の効果を記載する。インドリノン化合物は活性化受容体チロシンキナーゼ
による基質分子のリン酸化を妨げ、それによりシグナル伝達およびその結果の細
胞増殖を止める。
【０７７８】 3つの化合物は、異なる有効性および特異性でもってHUVECのVEGF刺激を阻害す
ると評価された。本実施例では、化合物AV-003は化合物AV-002よりもより強力で
あり、化合物AV-004は、参照化合物であるドキソルビシンにより観察されたもの
と同様の非特異的な抗増殖メカニズムを介してVEGF刺激によるHUVECの増殖を見 かけ上阻害した。
【０７７９】 化合物AV-002および化合物AV-003の作用の細胞メカニズムは、受容体チロシン
キナーゼおよびそれによる細胞増殖を開始するのに必要な細胞核へのシグナル伝
達の阻害により説明することができる。しかし、発明者は、この説明に限定する
ことを望んでいるわけではない。
【０７８０】 材料および方法 用いた細胞は、ATCCから入手したHUV-EC-C細胞（臍帯静脈血管、ヒト）であっ
た。細胞をMEM（Sigma, M5650）+ 10% FCS（Gibco Brl）+ bulletキット中で培
養し、週に一度継代した。初期の継代のみ（継代10まで）を用いた。細胞は、ト
リプシン/EDTAと共にインキュベートすることにより細胞培養フラスコから単離 した。
【０７８１】 試験化合物を40 nMでDMSOに溶解し、4℃にて保存した。参照化合物ドキソルビ
シンは2 mMでA. destに溶解させた。 対照群は、VEGFなしかつ基質なしの細胞とした。試験群は試験基質の連続希釈
物を添加した対応する群とした。
【０７８２】 in vitroの実験条件：(1) TCA（10%）：10 g TCAを90 g A.destに溶解した；
(2) 酢酸（1%, Merck）：1 mL酢酸を99 mLのA. destに溶解した；(3) SRB溶液
（0.4%, Sigma）：2 gスルホローダミンBを500 mL酢酸（1%）に溶解した；(4)
TRISバッファー（10 mM）：1.211 g/L TRISをA. destに溶解し、NaOH（1M）にて
pH 10.5に滴定した；(5) VEGFストック溶液（10 μg/mL）：10μg VEGFを1000 μl A.destに溶解した。さらなる希釈をMEM + 10% FCS（2241μL培地+ 9μL VEG
Fストック溶液）にて直接行った。
【０７８３】 試験手順：細胞を100 μL MEM + 1% FCS中5 x 103細胞/ウェルを96ウェルマイ
クロリットルプレートにまいた（37℃；5% CO2 95%相対湿度）。一晩インキュベ
ートした後、50μL MEM中の試験化合物をウェルに加えた。各希釈につき、8ウェ
ル行った。5分後に50μL VEGF（0.04 μg/mL）を半分のウェルに加え；50μL培 地を他の半分のウェルに加えた。インキュベーションを3日間進めた。培地を除 き、100 μL TCA（10%）を加え、1時間、4℃にてインキュベートした。ウェルを
200 μL A. destにて3回すすいだ。スルホローダミンB（SRB）溶液（1%酢酸中0.
4%）を1時間、室温で加えた（100 μL/ウェル）。ウェルを200 μL酢酸1%にて3 回すすいだ。穏やかに振とうして、タンパク質に結合した色素を200 μL/ウェル
TRIS ph 10.5中に溶解させた。
【０７８４】 in vitroシステムにおける化合物の濃度：連続希釈を培地（MEM + 1% FCS）に
て行った。最も高い濃度では、576 μL培地+ 40 mM基質ストック溶液から24 μL
を組み合わせた。次の希釈過程では、その前の希釈から120 μLを480μL培地に 加えた。さらなる連続希釈を同様に行い、各回では前の希釈過程から120 μLを 使った。
【０７８５】 最も高いドキソルビシン濃度では、480 μL培地+ 2 mMストック溶液から120 μLを組み合わせた。続く各希釈過程では、その前の希釈から120 μLを480μL培
地に加えた。
【０７８６】 マイクロタイタープレート中で、連続希釈系列は最終的に4倍に希釈される： 試験化合物（0.00512 - 0.0256 - 0.128 - 0.64 - 3.2 - 16 - 80 - 400 μM） ；ドキソルビシン（0.000256 - 0.00128 - 0.0064 - 0.032 - 0.16 - 0.8 - 4 -
20 - 100 μM）。
【０７８７】 観察および測定： 吸光値を、Immuno Reader NJ 2000 AT 570 nmを用いて各ウェルについて測定 した。化合物AV-004およびドキソルビシンについては、300 μM群における吸光 値は意外なことに80 μM群と比較して増加していた。通常、より高い基質濃度は
より高い細胞毒性をもたらし、それゆえより低い吸光値をもたらす。この現象は
ウェル内に残存する化合物AV-003あるいはドキソルビシンの色によるもので、タ
ンパク質に結合したSRBによるものではない。 データの評価： 各希釈および対照について、4ウェルの平均吸光値および標準偏差を算出した （Microsoft Excel 5.0）。
【０７８８】 IC50を、ソフトウエアプログラムGraFit 3.0（Erithacus Software Ltd., Sta
ines, UK）から等式”IC50 - 4つのパラメーター理論”（0から始まり）を用い て算出した。
【０７８９】 VEGF刺激の阻害を、以下の式に従って算出する。
【０７９０】
【数１】
【０７９１】 VEGFでPDGFを置換する場合は Ex = 各群の平均吸光度 結果： 各化合物についてVEGF刺激の阻害に関する試験に適した濃度範囲を決定するた
めに、簡単なIC50推定（VEGF非存在下）を行った。400 μMが、細胞が許容する 最高濃度であった（最も毒性の低い基質に関して）。それゆえ、これをVEGFと組
み合わせて試験する最高濃度とした。
【０７９２】 3つの化合物がHUVECのVEGF刺激を異なる有効性および特異性でもって阻害した
（表）。順序は、化合物AV-003 > 化合物AV-002 > 化合物AV-004であった。0.64
μMでは、化合物AV-003により阻害はほぼ完全であった。化合物AV-004の効果は
、本実施例では、無刺激対照の阻害も起こる濃度で阻害が起こったため、より非
特異的であるとみられる。
【０７９３】 VEGF刺激細胞の阻害IC50と無刺激細胞の阻害IC50の比較（表）は、化合物AV-0
02または化合物AV-003を試験する場合に明らかな阻害の違いを示している（VEGF
刺激の阻害に関するIC50 <無刺激のものの阻害に関するIC50）。しかし、化合物
AV-004によるしけんは全く差を示さず、阻害の差の逆転さえ示している（VEGF刺
激の阻害に関するIC50 > 無刺激の阻害に関するIC50）。ドキソルビシン（細胞 毒性対照）も刺激細胞および無刺激細胞に対して同様の阻害パターンを示した。
【０７９４】 実施例29：血小板由来増殖因子刺激された細胞増殖の阻害の実例 ラット平滑筋細胞のPDGF刺激された細胞増殖に対する本発明のインドリノン化
合物（AV-003、および化合物AV-004）の効果を、A10細胞（American Type Cultu
re Collection）を用いて研究した。A10細胞はDB1Xラット由来の胎児胸部大動脈
平滑筋細胞である。 3つの化合物が、A10細胞のPDGF刺激の異なる程度の阻害を示す。これは、PDGFを
添加する前に化合物を細胞とプレインキュベートした場合により明確である。ド
キソルビシンを参照化合物として用いた。
【０７９５】 化合物AV-002、化合物AV-003、および化合物AV-004は、（ラット）胸部平滑筋
細胞のPDGF刺激された増殖を阻害することができる。本実施例では、化合物AV-0
04は化合物AV-002よりも、特にプレインキュベーション実験においてより強力で
あり、化合物AV-003は非特異的なメカニズムを介して細胞増殖を見かけ上阻害し
た。
【０７９６】 化合物AV-002および化合物AV-004の作用の細胞メカニズムは、受容体チロシン
キナーゼおよびそれによる細胞増殖を開始するのに必要な細胞核へのシグナル伝
達の阻害により説明することができる。しかし、発明者は、データの説明の１つ
の可能性にしばられるべきではない。本実施例では、増殖データは、化合物AV-0
04はPDGF受容体チロシンキナーゼの最も強力な阻害物質であるはずであるという
ことを示唆している。
【０７９７】 材料および方法 A10細胞（胎児胸部大動脈平滑筋細胞、DB1Xラット）は、ATCCから入手した。 細胞をMEM（Sigma, M5650）+ 10% FCS（Gibco Brl）で培養し、週に一度継代し
た。初期の継代のみ（継代10まで）を用いた。細胞は、トリプシン/EDTAと共に インキュベートすることにより細胞培養フラスコから単離した。
【０７９８】 試験化合物（化合物AV-002、化合物AV-003、および化合物AV-004）および参照
化合物であるドキソルビシンを、実施例28に記載の通りに調製し保存した。実施
例28と同様の実験対照を含める。
【０７９９】 in vitroの実験条件は、PDGFをVEGFと置き換えたこと以外は、実施例28に記載
の通りである。PDGFストック溶液（100 μg/mL；Pepro Tech）：10μg PDGFを10
0μl A.destに溶解した。さらなる希釈をMEM + 5% FCS（2241μL培地+ 9μL PDG
Fストック溶液）にて直接行った。
【０８００】 試験手順は、試験化合物をウェルに加えた後に、5分あるいは24時間後にVEGF ではなく50 μL PDGFをウェルの半分に加え、50 μL培地を他の半分のウェルに 加えたこと以外は実施例Iと同様にした。残りの実験プロトコールは実施例28と 同じにした。
【０８０１】 観察および測定： 実施例28と同様に、吸光値を、Immuno Reader NJ 2000 AT 570 nmを用いて各 ウェルについて測定した。化合物AV-003については、400 μM群における吸光値 は意外なことに80 μM群と比較して増加していた。通常、より高い基質濃度はよ
り高い細胞毒性をもたらし、それゆえより低い吸光値をもたらす。この現象はウ
ェル内に残存する化合物AV-003あるいはドキソルビシンの色によるもので、タン
パク質に結合したSRBによるものではない。 データの評価： 式中のVEGFの代わりにPDGFを用いることを除き、データを実施例28と同様に評
価した。
【０８０２】 結果： 各化合物についてPDGF刺激の阻害に関する試験に適した濃度範囲を決定するた
めに、最初のIC50推定（PDGF非存在下）を行った（表XおよびX）。400 μMが、 細胞が許容する最高濃度であった（最も毒性の低い基質に関して）。それゆえ、
これをPDGFと組み合わせて試験する最高濃度とした。
【０８０３】 3つの化合物がA10ラット大動脈平滑筋細胞のPDGF刺激を異なる有効性および特
異性でもって阻害した。これは、PDGFを加える24時間前に化合物を細胞とプレイ
ンキュベートした場合に最も明らかである（表X,X）。基質の有効性は、PDGF添 加の直前に基質を加えた場合には低い（特に化合物AV-004に関して；表X,X）。
【０８０４】 本実施例では、有効性の順序は、化合物AV-004 > 化合物AV-002 > 化合物AV-0
03である。3.2 μMでは、化合物AV-004により阻害はほぼ完全であり、化合物AV-
002は5倍高い濃度で阻害する。化合物AV-003の効果は、無刺激対照の阻害も起こ
る濃度でPDGF刺激細胞の阻害が起こったため、より非特異的であるとみられる。
【０８０５】 化合物の活性間の違いは、PDGF刺激細胞の阻害IC50（表X,X）を無刺激細胞の 阻害IC50（表X,X）と比較した場合に明らかに見られる。本実施例では、化合物A
V-002および化合物AV-004に関して刺激および無刺激IC50間に明らかな違いがあ るが、化合物AV-003に関しては最小の違いがあるか全く違いがない。参照化合物
ドキソルビシンは、化合物AV-003と同様に、刺激細胞および無刺激細胞に対して
同等の阻害プロファイルを示した（表XのPDGF刺激の阻害に関するIC50を表Xの無
刺激細胞の阻害に関するIC50と比較せよ）。
【０８０６】 実施例30：ラットのアジュバント関節炎モデルにおける化合物の効果の実例 本研究では、ラットのアジュバント関節炎モデルにおける本発明のいくつかの
インドリノン化合物（化合物AV-002、化合物AV-003、および化合物AV-004）の効
果を明らかにした。アジュバント関節炎モデルは本発明の化合物を試験するのに
用い得る動物実験モデルの一例に過ぎない。最も一般的な3つの動物モデルの総 説については、Oliver & Brahn (1996) J. Rheumatol. 23:56-60を参照のこと。
実験は、Mollegaard Breeding Centre Ltd.から得たオスWistar-Lewisラットを 用いて行った。試験化合物は18日間、2つの推奨用量にて毎日I.P.で与えた。
【０８０７】 全3つの化合物は、足の腫脹の阻止および一般的な疾患兆候の発生の阻止を示 した。化合物AV-003は最も有効な基質であることが示されたが、16 mg/kgでは逆
転した用量-反応を示した。化合物AV-004は、明らかな用量-反応を示し、16 mg/
kgで8 mg/kgにおける化合物AV-003とほぼ同じく有効であった。
【０８０８】 インドリノン化合物の薬物動態学的効果は、受容体チロシンキナーゼおよびそ
れによる細胞増殖を開始するのに必要な細胞核へのシグナル伝達の阻害により説
明することができる。細胞増殖の阻止は、血管新生およびその結果として生じる
疾患の進展を阻止する。しかし、発明者はデータの一説明に制限されることは望
んでいない。
【０８０９】 試験システム： 動物を対照群および試験群に分けた。対照群には3つの亜群が含まれる：健康 な動物、関節炎を患った疾患動物、および溶媒で治療される、関節炎を患った疾
患動物である。試験群には、溶媒中の試験化合物で治療される、関節炎を患った
疾患動物が含まれる。疾患は、0.1 mLフロイントアジュバント（= 6 mg結核菌懸
濁液、重白色パラフィン油Merck/DarmastadtのmLあたり）を尾の基部内に注入す
ることにより誘導する。
【０８１０】 溶媒には、PEG-400 35%、CREMOPHOR EL 25%、ベンジルアルコール2%、エタノ ール（無水）11.4%、および滅菌水およそ30%が含まれていた。試験基質に関する
特別な製剤は以下の表１６に示す。
【０８１１】
【表４１】
【０８１２】 Wistar-Lewisラット（Mollegaard, Breeding Centre Ltd., EJBY, DK 4623 LI
, Skensved, PO box 28, DK）に、5 mL/kgの化合物AV-002および化合物AV-003、
および10 mg/kgの化合物AV-004を生理食塩水にてそれぞれの用量（8 mg/kgおよ び16 mg/kg）に合わせ、i.p.にて投与した。ラットを毎日、1日目から18日目ま で処置した。ラットは、典型的な昼光スケジュールに維持し、規格化された餌AL
TROMINR（Altrogge, Lage）を与え、水に自由に接近できるようにした。
【０８１３】 観察および測定： 関節炎インデックスを以下の図式に従って算出する。
【０８１４】
【表４２】
【０８１５】 一群の全ての動物のインデックスを要約し、必要ならば6動物の群サイズに対 して標準化する。足体積を肢体容積計にて測定する。 データの評価： 平均値、さらに標準偏差（SD）および平均の標準誤差（SEM）を、Microsoft E
xcel 5.0にて個々の値の表から算出した。
【０８１６】 結果： 3つのインドリノン化合物、化合物AV-002、化合物AV-003、およびAV-004が、 足体積の増加を抑制（図1-3）し、疾患インデックスとして表される疾患兆候の 要約を表XおよびXに示す。
【０８１７】 低容量（8 mg/kg）では、有効性の順序は化合物AV-003 > 化合物AV-004 > AV-
002であった。疾患の阻止は化合物AV-003によってほぼ完全であった。化合物AV-
004はわすかに活性が低かった。化合物AV-002の活性は下限に近いに過ぎないと みられる。
【０８１８】 高い方の用量（16 mg/kg）では、有効性の順序は化合物AV-004 > 化合物AV-00
3 > AV-002であった。疾患の阻止は化合物AV-004によってほぼ完全であった。化
合物AV-003による疾患兆候の減少は低い方の用量ほどははっきりしなかった。高
い方の用量での化合物AV-002の活性は有意であったが、依然として低い方の用量
での化合物AV-003あるいは化合物AV-004ほどには顕著ではなかった。
【０８１９】 体重曲線の推移（図4）は、化合物AV-003および化合物AV-004について最良の 許容可能性を示している（疾患対照+溶媒を上回る体重）。これらの化合物に関 しては、最大耐用量は16 mg/kgよりも高いと見られる。しかし、少なくとも化合
物AV-003の場合には、8から16 mg/kgへの用量の増加は薬物動態学的効果を改善 しなかった。
【０８２０】 実施例31：性不能症を治療するためのインドリノン化合物の使用 式XXIIIの化合物を含む製剤を、投与後に性機能に有意な恩恵を報告した患者 に投与した。
【０８２１】
【化１２５】
【０８２２】 男性の癌患者である患者は、6ヶ月以上に渡り性不能症のために性的関係を経験 することができずにいた。患者を27 mg/m2の式XXIIIの化合物にて週に2回治療し
た。すると彼は、各治療から2-3時間後に勃起を経験することができた。彼は、 勃起を得ることおよび射精に達することの両方により性的関係を持つことができ
た。
【０８２３】 実施例32：本発明の化合物のうちのいくつかのものの活性 本発明の化合物のうちのいくつかのものの活性を、上の実施例に記載した方法
を用いて試験した。これらの試験の結果を以下の表Xに示す。
【０８２４】
【表４３】
【０８２５】 結論 当業者であれば、目的を実行し、言及した結果および利点、さらに本明細書に
おいて推論されるものを得るのに本発明は十分適用されるということを容易に認
めるだろう。本明細書中に記載した分子複合体および方法、手順、処置、分子、
特別な化合物は、目下のところ好ましい態様の典型であり、具体例であって、本
発明の範囲の限定を意図するものではない。請求項の範囲によって定義される本
発明の精神の内に包含される、それらおよび他の使用の改変は、当業者であれば
思いつくであろう。
【０８２６】 当業者には、様々な置換および修飾が、本発明の範囲および精神から離れるこ
となく、本明細書中に開示される本発明に対してなされ得るということが直ちに
明らかになるであろう。
【０８２７】 本明細書中で言及した全ての特許および刊行物は、本発明が関係する技術分野
の当業者のレベルを示すものである。全ての特許および刊行物は、個々の出版物
が参考文献として援用されているということを特別かつ個別に示されているのと
同程度に、本明細書中に参考文献として援用されている。
【０８２８】 本明細書中で例示的に記載されている本発明は、本明細書中に特に開示されて
いないあらゆる要素あるいは要素群、限定あるいは限定群のない条件でも適切に
実行され得る。したがって、例えば、本明細書中の各実例においては、”含む”
、”本来含む”および”-からなる”のどの用語も、他の2つの用語のいずれかと
置き換えることができる。用いた用語および表現は限定の用語としてではなく、
説明の用語として用いたのであって、そのような用語および表現の使用において
示され記載される特徴あるいはその一部分と等価のものを排除する意図は全くな
いが、請求する本発明の範囲ないの様々な修飾が可能であるということが理解さ
れる。したがって、本発明は好ましい態様および任意の特徴によって特異的に開
示されてきたが、本明細書中に開示される概念の修飾および改変が当業者によっ
てなされ得るということ、およびそのような修飾および改変は添付の請求項によ
って定義されるとおりの本発明の範囲内にあると見なされるということが理解さ
れるべきである。
【０８２９】 加えて、本発明の特徴あるいは観点がMarkushグループによって記載される部 分では、当業者は、本発明はMarkushグループのあらゆる個々のメンバーあるい はメンバーのサブグループによっても記載されるということを認識するだろう。
例えば、Xが臭素、塩素、およびヨウ素からなる群から選択されると記載されて いる場合、Xが臭素である請求および Xが臭素および塩素であるという請求が完 全に記載される。
【０８３０】 本発明を本明細書中で広範かつ包括的に記載してきた。包括的な開示ないにあ
るより狭い種類および亜属分類のそれぞれも、本発明の一部を形成する。これに
は、その取り出した物質が本明細書中に特別に列挙されているか否かにかかわら
ず、あらゆる問題となっている事柄をその種類から除くような条件あるいは否定
的な制限のもとでの本発明の包括的な記載が含まれる。
【０８３１】 他の態様は特許請求の範囲にある。
【０８３２】
【表４４】
【０８３３】
【表４５】
【０８３４】
【表４６】
【０８３５】
【表４７】
【０８３６】
【表４８】
【０８３７】
【表４９】
【０８３８】
【表５０】
【０８３９】
【表５１】
【０８４０】
【表５２】
【０８４１】
【表５３】
【０８４２】
【表５４】
【０８４３】
【表５５】
【０８４４】
【表５６】
【０８４５】
【表５７】
【０８４６】
【表５８】
【０８４７】
【表５９】
【０８４８】
【表６０】
【０８４９】
【表６１】
【０８５０】
【表６２】
【０８５１】
【表６３】
【０８５２】
【表６４】
【０８５３】
【表６５】
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は，アジュバント関節炎ラットの足体積に及ぼす化合物ＡＶ
−００２の影響を示す。
【図２】 図２は，アジュバント関節炎ラットの足体積に及ぼす化合物ＡＶ
−００３の影響を示す。
【図３】 図３は，アジュバント関節炎ラットの足体積に及ぼす化合物ＡＶ
−００４の影響を示す。
【図４】 図４は，アジュバント関節炎ラットの体重に及ぼす試験化合物の
影響を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 17/02 Ａ６１Ｐ 17/02 19/02 19/02 27/02 27/02 29/00 １０１ 29/00 １０１ 35/00 35/00 35/04 35/04 37/06 37/06 43/00 １１１ 43/00 １１１ Ｃ０７Ｄ 231/14 Ｃ０７Ｄ 231/14 403/06 403/06 409/06 409/06 (31)優先権主張番号 ６０／０８１，７９２ (32)優先日 平成10年４月15日(1998．4．15) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ６０／０８２，０５６ (32)優先日 平成10年４月16日(1998．4．16) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ６０／０８９，３９７ (32)優先日 平成10年６月15日(1998．6．15) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ６０／０８９，５２１ (32)優先日 平成10年６月16日(1998．6．16) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ６０／０９８，７８３ (32)優先日 平成10年９月１日(1998．9．1) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ， ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，Ｎ Ｏ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ， ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (71)出願人 230 Ｅａｓｔ Ｇｒａｎｄ Ａｖｅｎｕ ｅ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓ ｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ 94080，Ｕ ｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅ ｒｉｃａ (72)発明者 フォン，アニー アメリカ合衆国カリフォルニア州94087， サニーヴェイル，シェトランド・プレイス 811 (72)発明者 ハンナー，アリソン アメリカ合衆国カリフォルニア州94070， サン・カーロス，ブリッタン・アベニュー 3449 (72)発明者 ハリス，デイヴィス・ジー アメリカ合衆国カリフォルニア州94114， サンフランシスコ，ルーズヴェルト・ウェ イ 417 (72)発明者 ハース，ピーター アメリカ合衆国カリフォルニア州94114， サンフランシスコ，コリングウッド・ス トリート 334 (72)発明者 ランゲッカー，ピーター アメリカ合衆国カリフォルニア州95030， モンテ・セレノ，ヴィア・セレノ 17610 (72)発明者 リャン，コンジン アメリカ合衆国カリフォルニア州94087， サニーヴェイル，ウエスト・レミントン・ ドライブ 726 (72)発明者 マクマホン，ジェラルド アメリカ合衆国カリフォルニア州95452， ケンウッド，シュルツ・ロード 1800 (72)発明者 ショーバー，ローラ・ケイ アメリカ合衆国カリフォルニア州94112， サンフランシスコ，コッター・ストリート 216 (72)発明者 サン，リー アメリカ合衆国カリフォルニア州94404， フォスター・シティ，ロックハーバー・レ イン 64 (72)発明者 タン，ペン・シー アメリカ合衆国カリフォルニア州94556， モラガ，カミノ・リカルド 827 (72)発明者 ウルリヒ，アクセル ドイツ連邦共和国デー−80799 ミュンヘ ン，トゥルケンシュトラーセ 104 Ｆターム(参考） 4C063 AA01 BB03 BB08 CC06 CC25 DD04 DD06 EE01 4C086 AA01 AA02 AA03 BC13 BC38 BC73 GA07 GA09 GA12 MA01 MA02 MA03 MA04 MA05 MA52 MA55 NA14 NA15 ZA33 ZA81 ZA96 ZB26 ZC20 ZC41 4C204 BB01 CB03 DB30 EB02 GB03 GB14 GB19 GB21 GB24 GB30 GB31 GB32

Claims (104)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 式ＩまたはＩＩ： 【化１】 ［式中， （ａ）環Ａおよび環Ｂは，１つの共通の結合を共有し； （ｂ）環Ｂおよび環Ｃは，１つの共通の結合を共有し； （ｃ）環Ａ，環Ｂ，および環Ｒは，独立して，芳香族環，ヘテロ芳香族環，脂環
    ，ヘテロ脂肪族環，および縮合芳香族または脂環系からなる群より選択され，こ
    こで，前記ヘテロ芳香族環およびヘテロ脂肪族環は，それぞれ独立して，窒素，
    酸素，およびイオウからなる群より独立して選択される０，１，２，または３個
    のヘテロ原子を含み； （ｄ）環Ａ，環Ｂ，環Ｑ，および環Ｒは，それぞれ独立して，（ｉ）アルキル；
    （ｉｉ）芳香族またはヘテロ芳香族環（ｉｉｉ）脂肪族またはヘテロ脂肪族環；
    （ｉｖ）アミン；（ｖ）式−ＮＯ2のニトロ；（ｖｉ）ハロゲンまたはトリハロ メチル；（ｖｉｉ）ケトン；（ｖｉｉｉ）カルボン酸またはエステル；（ｉｘ）
    アルコールまたはアルコキシアルキル基；（ｘ）アミド；（ｘｉ）スルホンアミ
    ド；（ｘｉｉ）アルデヒド；（ｘｉｉｉ）スルホン；（ｘｉｖ）チオールまたは
    チオエーテル；および（ｘｖ）５員または６員芳香族またはヘテロ芳香族環基で
    置換されている重金属，ここで，前記環は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチ
    ル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立し
    て選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよい；からな
    る群より独立して選択される１，２，または３個の置換基で任意に置換されてい
    てもよく； （ｅ）Ｘは，ＣＨおよび酸素からなる群より選択される］ で表される構造を有する三環式系インドリノン化合物。
  2. 【請求項２】 環Ａが，５員環，６員環，７員環，および８員環からなる群
    より選択される，請求項１記載の化合物。
  3. 【請求項３】 環Ｂが，５員環，６員環，７員環，および８員環からなる群
    より選択される，請求項１記載の化合物。
  4. 【請求項４】 環Ｒが，５員環，６員環，７員環，８員環，および二環式ま
    たは三環式縮合環系からなる群より選択される，請求項１記載の化合物。
  5. 【請求項５】 Ｒが環骨格中に８，９，１０，または１３個の原子を含む二
    環式縮合環系である，請求項４記載の化合物。
  6. 【請求項６】 Ｒが任意に置換されていてもよいフェロセンである，請求項
    ４記載の化合物。
  7. 【請求項７】 Ｒが，表８に記載される化合物からなる群より選択されるア
    ルデヒド，ケトン，またはラクトンから誘導される，請求項４記載の化合物。
  8. 【請求項８】 式Ｘ： 【化２】 ［式中， （ａ）Ｒ1およびＲ2は，独立して，（ｉ）水素；（ｉｉ）アルキル；（ｉｉｉ）
    芳香族またはヘテロ芳香族環；（ｉｖ）脂肪族またはヘテロ脂肪族環；（ｖ）ア
    ミン；（ｖｉ）式−ＮＯ2のニトロ；（ｖｉｉ）ハロゲン；（ｖｉｉｉ）ケトン ；（ｉｘ）カルボン酸またはエステル；（ｘ）アルコールまたはアルコキシアル
    キル基；（ｘｉ）アミド；（ｘｉｉ）スルホンアミド；（ｘｉｉｉ）アルコキシ
    アルコキシ；および（ｘｉｖ）スルホンからなる群より選択され；および （ｂ）Ｒ4およびＲ5は，それぞれ独立して，（ｉ）水素；（ｉｉ）アルキル；（
    ｉｉｉ）芳香族環；（ｉｖ）ヘテロ芳香族環；（ｖ）脂肪族またはヘテロ脂肪族
    ；（ｖｉ）アミン；（ｖｉｉ）ケトン（ｖｉｉｉ）カルボン酸またはエステル；
    （ｉｘ）アルコールまたはアルコキシアルキル基；（ｘ）アミド；（ｘｉ）スル
    ホンアミド；（ｘｉｉ）スルホン；および（ｘｉｉｉ）アルコキシアルコキシ，
    からなる群より選択され；および （ｃ）Ｒ3は，（ｉ）水素；（ｉｉ）アルキル；（ｉｉｉ）芳香族またはヘテロ 芳香族環；（ｉｖ）脂肪族またはヘテロ脂肪族環；（ｖ）ハロゲンまたはトリハ
    ロメチル；（ｖｉ）アミン；（ｖｉｉ）アミド；（ｖｉｉｉ）アルコールまたは
    アルコキシアルキル基；（ｉｘ）カルボン酸またはエステル；（ｘ）式−ＣＮの
    シアノ；および（ｘｉ）スルホンアミド，からなる群より選択され； （ｄ）ｐおよびｑは，それぞれ独立して，０，１，２，または３であり；および
    （ｅ）ＫおよびＬは，それぞれ独立して，（ｉ）水素；（ｉｉ）アルキルからな
    る群より選択され；または（ｉｉｉ）ＫおよびＬは，一緒になって，３員，４員
    ，５員，または６員の脂環を形成する， で表される構造を有するピラゾリルアミド系化合物。
  9. 【請求項９】 式Ｘ： 【化３】 ［式中， （ａ）Ｒ1，Ｒ4，およびＲ5は，独立して，（ｉ）水素；（ｉｉ）アルキル；（ ｉｉｉ）芳香族またはヘテロ芳香族環；（ｉｖ）脂肪族またはヘテロ脂肪族環；
    （ｖ）アミン；（ｖｉ）式−ＮＯ2のニトロ；（ｖｉｉ）ハロゲン；（ｖｉｉｉ ）ケトン；（ｉｘ）カルボン酸またはエステル；（ｘ）アルコールまたはアルコ
    キシアルキル基；（ｘｉ）アミド；（ｘｉｉ）スルホンアミド；（ｘｉｉｉ）ア
    ルコキシアルコキシ；および（ｘｉｖ）スルホン，からなる群より選択され，こ
    こで，Ｒ4およびＲ5の少なくとも１つは本明細書に記載される芳香族またはヘテ
    ロ芳香族環であり；および （ｂ）Ｒ2は，（ｉ）アルキル；（ｉｉ）芳香族またはヘテロ芳香族環；（ｉｉ ｉ）脂肪族またはヘテロ脂肪族環；（ｉｖ）アミン；（ｖ）ケトン；（ｖｉ）カ
    ルボン酸またはエステル；（ｖｉｉ）アルコールまたはアルコキシアルキル基；
    （ｖｉｉｉ）アミド；（ｉｘ）スルホンアミド；および（ｘ）スルホン，からな
    る群より選択され；および （ｃ）Ｒ3は，（ｉ）水素；（ｉｉ）アルキル；（ｉｉｉ）芳香族またはヘテロ 芳香族環；（ｉｖ）脂肪族またはヘテロ脂肪族環；（ｖ）ハロゲンまたはトリハ
    ロメチル；（ｖｉ）アミン；（ｖｉｉ）アミド；（ｖｉｉｉ）アルコールまたは
    アルコキシアルキル基；（ｉｘ）カルボン酸またはエステル；（ｘ）式−ＣＮの
    シアノ；および（ｘｉ）スルホンアミド，からなる群より選択され； （ｄ）ｐおよびｑは，それぞれ独立して，０，１，２，または３であり；および
    （ｅ）ＫおよびＬは，それぞれ独立して，水素，アルキルからなる群より選択さ
    れ，またはＫおよびＬは，一緒になって，３員，４員，５員，または６員脂環を
    形成する］ で表される構造を有するピラゾリルアミド系化合物。
  10. 【請求項１０】 Ｒ1が，水素，アルキル，芳香族またはヘテロ芳香族環， および脂肪族またはヘテロ脂肪族環からなる群より選択される，請求項８または
    ９記載の化合物。
  11. 【請求項１１】 Ｒ1が，水素，メチル，ｎ−プロピル，ｉ−プロピル，ｎ −ブチル，イソブチル，ｓｅｃ−ブチル，およびｔ−ブチルからなる群より選択
    される，請求項１０記載の化合物。
  12. 【請求項１２】 Ｒ2が，水素，アルキル，およびハロゲンからなる群より 選択される，請求項８または９記載の化合物。
  13. 【請求項１３】 Ｒ4およびＲ5が，それぞれ独立して，水素，アルキル，芳
    香族またはヘテロ芳香族環，および脂肪族またはヘテロ脂肪族環からなる群より
    選択される，請求項８または９記載の化合物。
  14. 【請求項１４】 Ｒ4およびＲ5が，それぞれ独立して，水素，メチル，フェ
    ニル，ピリジン−２−イル，ピリジン−３−イル，ピリジン−４−イル，３−メ
    チル−ピリジン−２−イル，４−メチル−ピリジン−２−イル，５−トリフルオ
    ロメチル−ピリジン−２−イル，５−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル
    ，４，６−ジメチル−ピリジン−３−イル，２，６−ジメトキシ−ピリジン−３
    −イル，２，３，５，６−テトラフルオロ−ピリジン−４−イル，キノリン−３
    −イル，３−メチル−キノリン−４−イル，イソキノリン−１−イル，イソキノ
    リン−３−イル，ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル，４−メトキシ−ビ
    フェニル−３−イル，６−メトキシ−ビフェニル−３−イル，６，３’−ジメト
    キシ−ビフェニル−３−イル，９−オキソ−９Ｈ−フルオレン−１−イル，９−
    オキソ−９Ｈ−フルオレン−３−イル，７−アセチルアミノ−９−オキソ−９Ｈ
    −フルオレン−２−イル，２'−ヒドロキシ−［１，１'；３'，１″］テルフェ ニル−５'−イル，９−エチル−９Ｈ−カルバゾール−３−イル，および６−オ キソ−６Ｈ−ベンゾ［ｃ］クロメン−２−イル，からなる群より選択される，請
    求項１３記載の化合物。
  15. 【請求項１５】 Ｒ4およびＲ5が，それぞれ独立して，２−トリフルオロメ
    チル−フェニル，３−トリフルオロメチル−フェニル，および４−トリフルオロ
    メチル−フェニルからなる群より選択される，請求項１４記載の化合物。
  16. 【請求項１６】 Ｒ3が，水素，アルキル，ハロゲン，およびトリハロメチ ルからなる群より選択される，請求項１４または１５記載の化合物。
  17. 【請求項１７】 Ｒ3が，水素，メチル，およびハロゲンからなる群より選 択される，請求項１６記載の化合物。
  18. 【請求項１８】 ｐおよびｑが，それぞれ独立して，０，１，２，または３
    である，請求項８または９記載の化合物。
  19. 【請求項１９】 前記化合物が，２−ベンジル−５−ｔｅｒｔ−ブチル−２
    Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（４−トリフルオロメチル−フェニル）−アミ
    ド，２−ベンジル−５−ｔｅｒｔ−ブチル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸
    キノリン−３−イルアミド，２−ベンジル−５−ｔｅｒｔ−ブチル−２Ｈ−ピラ
    ゾール−３−カルボン酸（２，６−ジメトキシピリジン−３−イル）−アミド，
    ２−ベンジル−５−ｔｅｒｔ−ブチル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（２
    ，３，５，６テトラフルオロ−ピリジン−４−イル）−アミド，２−ベンジル−
    ５−ｔｅｒｔ−ブチル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（３メチル−キノリ
    ン−４−イル）−アミド，２−ベンジル−５−ｔｅｒｔ−ブチル−２Ｈ−ピラゾ
    ール−３−カルボン酸（４，６−ジメチル−ピリジン−３−イル）−アミド，２
    −ベンジル−５−ｔｅｒｔ−ブチル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸ベンゾ
    ［１，３］ジオキソール−５−イルアミド，２−ベンジル−５−ｔｅｒｔ−ブチ
    ル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（３−トリフルオロメチル−フェニル）
    −アミド，２−ベンジル−５−ｔｅｒｔ−ブチル−２Ｈ−ピラゾール−３−カル
    ボン酸（２−トリフルオロメチル−フェニル）−アミド，２−ベンジル−５−ｔ
    ｅｒｔ−ブチル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸ピリジン−２−イルアミド
    ，２−ベンジル−５−ｔｅｒｔ−ブチル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸イ
    ソキノリン−１−イルアミド，２−ベンジル−５−ｔｅｒｔ−ブチル−２Ｈ−ピ
    ラゾール−３−カルボン酸ピリジン−４−イルアミド，２−ベンジル−５−ｔｅ
    ｒｔ−ブチル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸ピリジン−３−イルアミド，
    ２−ベンジル−５−ｔｅｒｔ−ブチル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（４
    −メチル−ピリジン−２−イル）−アミド，２−ベンジル−５−ｔｅｒｔ−ブチ
    ル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（３−メチル−ピリジン−２−イル）−
    アミド，２−ベンジル−５−ｔｅｒｔ−ブチル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボ
    ン酸（５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イル）−アミド，２−ベンジル
    −５−ｔｅｒｔ−ブチル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸イソキノリン−３
    −イルアミド，２−ベンジル−５−ｔｅｒｔ−ブチル−２Ｈ−ピラゾール−３−
    カルボン酸（５−トリフルオロメチル−ピリジン−３−イル）−アミド，２−ベ
    ンジル−５−ｔｅｒｔ−ブチル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（４−メト
    キシ−ビフェニル−３−イル）−アミド，２−ベンジル−５−ｔｅｒｔ−ブチル
    −２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（９−オキソ−９Ｈ−フルオレン−３−イ
    ル）−アミド，２−ベンジル−５−ｔｅｒｔ−ブチル−２Ｈ−ピラゾール−３−
    カルボン酸（７−アセチルアミノ−９−オキソ−９Ｈ−フルオレン−２−イル）
    −アミド，２−ベンジル−５−ｔｅｒｔ−ブチル−２Ｈ−ピラゾール−３−カル
    ボン酸（６−メトキシ−ビフェニル−３−イル）−アミド，２−ベンジル−５−
    ｔｅｒｔ−ブチル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（２'−ヒドロキシ−［ １，１'；３’，１"）］テルフェニル−５'−イル）−アミド，２−ベンジル− ５−ｔｅｒｔ−ブチル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（９−エチル−９Ｈ
    −カルバゾール−３−イル）−アミド，２−ベンジル−５−ｔｅｒｔ−ブチル−
    ２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（９−オキソ−９Ｈ−フルオレン−１−イル
    ）−アミド，２−ベンジル−５−ｔｅｒｔ−ブチル−２Ｈ−ピラゾール−３−カ
    ルボン酸（６−オキソ−６Ｈ−ベンゾ［ｃ］クロメン−２−イル）−アミド，２
    −ベンジル−５−ｔｅｒｔ−ブチル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸ビフェ
    ニル−３−イルアミド，２−ベンジル−５−ｔｅｒｔ−ブチル−２Ｈ−ピラゾー
    ル−３−カルボン酸（６−メトキシ−ビフェニル−３−イル）−アミド，２−ベ
    ンジル−５−ｔｅｒｔ−ブチル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（６，３' −ジメトキシ−ビフェニル−３−イル）−アミド，５−メチル−２−（４−メチ
    ル−ベンジル）−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（４−トリフルオロメチル
    −フェニル）−アミド，５−メチル−２−（４−メチル−ベンジル）−２Ｈ−ピ
    ラゾール−−３−カルボン酸（３−トリフルオロメチル−フェニル）−アミド，
    ５−メチル−２−（４−クロロ−ベンジル）−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン
    酸（４−トリフルオロメチル−フェニル）−アミド，５−メチル−２−（４−ク
    ロロ−ベンジル）−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（３−トリフルオロメチ
    ル−フェニル）−アミド，からなる群より選択される，請求項１８記載の化合物
    。
  20. 【請求項２０】 式ＸＩ： 【化４】 ［式中， （Ａ）Ｑは，オキシインドール環の３位で分子の残りに結合している，任意に置
    換されていてもよいオキシインドール基であり；および （Ｂ）Ｔは，式ＸＩＩ： 【化５】 ［式中， （ａ）Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6，およびＲ7は，独立して，（ｉ）水素；（ｉｉ）アルキル
    ；（ｉｉｉ）芳香族またはヘテロ芳香族環；（ｉｖ）脂肪族またはヘテロ脂肪族
    環；（ｖ）アミン；（ｖｉ）式−ＮＯ2のニトロ；（ｖｉｉ）ハロゲンまたはト リハロメチル；（ｖｉｉｉ）ケトン；（ｉｘ）カルボン酸またはエステル；（ｘ
    ）アルコールまたはアルコキシアルキル基；（ｘｉ）アミド；（ｘｉｉ）スルホ
    ンアミド；（ｘｉｉｉ）アルデヒド；（ｘｉｖ）スルホン；および（ｘｖ）チオ
    ールまたはチオエーテル，からなる群より選択され； （ｂ）Ｘは，ＮＸ26，イオウ，ＳＯ，ＳＯ2，および酸素からなる群より選択さ れ，ここで，Ｘ26は，（ｉ）水素；（ｉｉ）アルキル；（ｉｉｉ）アルキル，ア
    ルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，ニトロ，およびエス
    テル基からなる群より独立して選択される１，２または３個の置換基で任意に置
    換されていてもよいアリール；（ｉｖ）式−ＳＯ2−Ｘ27のスルホン，ここで， Ｘ27は，飽和または不飽和アルキルおよび５員または６員のアリールまたはヘテ
    ロアリール基からなる群より選択される；および（ｖ）式−Ｃ（Ｏ）Ｘ28のアシ
    ル，ここで，Ｘ28は，水素，飽和および不飽和アルキル，アリール，および５員
    または６員環基からなる群より選択される からなる群より選択される］ で表される構造を有する環基であり； （ｃ）環Ｙは，５員，６員，および７員の芳香族，ヘテロ芳香族，または非芳香
    族環からなる群より選択され，ここで，前記ヘテロ芳香族環は，窒素，酸素，お
    よびイオウからなる群より選択されるヘテロ原子を含み，前記非芳香族環は，Ｒ 4 と一緒になって任意にカルボニル官能基を形成してもよく； （ｄ）Ｇ，Ｊ，およびＬは，炭素および窒素からなる群より選択され；および （ｅ）Ｔは，式ＸＩＩ中においてアスタリスク（＊）で示される環の位置におい
    て分子の残りと結合している］ で表される構造を有するインドリノン化合物。
  21. 【請求項２１】 ＱがタイプＱオキシインドールからなる群より選択される
    ，請求項２０記載の化合物。
  22. 【請求項２２】 Ｒ4，およびＲ5が，独立して， （ｉ）水素； （ｉｉ）ハロゲン，トリハロメチル，シアノ，およびニトロ基からなる群より選
    択される置換基で任意に置換されていてもよいメチル，エチル，プロピル，およ
    びブチル基； （ｉｉｉ）式−（Ｘ1）n1−ＮＸ2Ｘ3のアミン，ここで，Ｘ2およびＸ3は，独立 して，水素および任意に置換されていてもよい飽和アルキルからなる群より選択
    され，Ｘ1は，任意に置換されていてもよい飽和アルキルであり，ｎ１は０また は１であり，またはＸ2およびＸ3は，一緒になって，５員または６員の脂肪族ま
    たはヘテロ脂肪族環を形成し，環炭素原子またはヘテロ原子でメチル，エチル，
    プロピル，フェニル，およびアルコキシフェニルからなる群より選択される置換
    基で任意に置換されていてもよい； （ｉｖ）式−ＮＯ2のニトロ； （ｖ）ハロゲンまたはトリハロメチル； （ｖｉ）式−−ＣＯＸ4のケトン，ここで，Ｘ4は，メチル，エチル，プロピル，
    ｎ−ブチル，およびｔ−ブチルからなる群より選択される； （ｖｉｉ）式−（Ｘ6）n6−ＣＯＯＨのカルボン酸または式−（Ｘ7）n7−ＣＯＯ
    −Ｘ8のエステル，ここで，Ｘ6およびＸ7は，単結合，メチレン，エチレン，お よびプロピレンからなる群より選択され，Ｘ8は，メチルおよびエチルからなる 群より選択され，ｎ６およびｎ７は，独立して，０または１である； （ｖｉｉｉ）式−ＮＨＣＯＸ13または式ＣＯＮＸ15Ｘ16のアミド，ここで，Ｘ13 ，Ｘ15，およびＸ16は，それぞれ独立して，水素，メチル，エチル，プロピル，
    およびフェニルからなる群より選択される； （ｉｘ）−ＳＯ2ＮＸ18Ｘ19，ここで，Ｘ18およびＸ19は，独立して，水素，メ チル，およびエチルからなる群より選択される； （ｘ）式−（Ｘ9）n9−ＯＨのアルコールまたは式−（Ｘ10）n10−Ｏ−Ｘ11のア
    ルコキシアルキル基，ここで，Ｘ9，およびＸ10は，独立して，メチレン，エチ レン，およびプロピレンからなる群より選択され，Ｘ11は，独立して，メチル，
    エチル，およびプロピルからなる群より選択され，ｎ９およびｎ１０は，独立し
    て，０または１である； （ｘｉ）式−（Ｘ21）n21−ＳＯ2−Ｘ22のスルホン，ここで，Ｘ22は，ヒドロキ
    シド，飽和または不飽和アルキル，および５員または６員のアリールまたはヘテ
    ロアリール基からなる群より選択され，Ｘ21は，飽和アルキルであり，ｎ２ｌは
    ０または１である；および （ｘｉｉ）式−（Ｘ24）n24−Ｓ−Ｘ25のチオエーテル，ここで，Ｘ24は，独立 して，メチレン，エチレン，およびプロピレンからなる群より選択され，Ｘ25は
    ，独立して，メチル，エチル，プロピル，およびフェニルからなる群より選択さ
    れ，ｎ２４は，０または１である， からなる群より選択される，請求項２０記載の化合物。
  23. 【請求項２３】 Ｒ4およびＲ5が，独立して，（ｉ）水素；（ｉｉ）メチル
    およびエチル；（ｉｉｉ）式−（Ｘ1）n1−ＮＸ2Ｘ3のアミン，ここで，Ｘ2およ
    びＸ3は，独立して，水素，メチルおよびエチルからなる群より選択され，Ｘ1は
    メチレンまたはエチレンであり，ｎ１は０または１であり，またはＸ2およびＸ3 は，一緒になって， 【化６】 からなる群より選択される任意に置換されていてもよい環を形成し； （ｉｖ）式−ＮＯ2のニトロ；（ｖ）ハロゲン；（ｖｉ）式−ＣＯ−Ｘ4のケトン
    ，ここで，Ｘ4はメチルおよびｔ−ブチルからなる群より選択される；（ｖｉｉ ）式−（Ｘ6）n6−ＣＯＯＨのカルボン酸または式−（Ｘ7）n7−ＣＯＯ−Ｘ8の エステル，ここで，Ｘ6およびＸ7は，単結合，メチレン，エチレン，およびプロ
    ピレンからなる群より選択され，Ｘ8は，メチルおよびエチルからなる群より選 択され，ｎ６およびｎ７は，独立して，０または１である；（ｖｉｉｉ）式−Ｎ
    ＨＣＯＸ13または式−ＣＯＮＸ15Ｘ16のアミド，ここで，Ｘ13，Ｘ15，およびＸ 16 は，それぞれ独立して，水素，メチル，およびフェニルからなる群より選択さ
    れる；（ｉｘ）式−ＳＯ2ＮＸ18Ｘ19のスルホンアミド，ここで，Ｘ18およびＸ1 9 は，独立して，水素，メチル，およびエチルからなる群より選択される；（ｘ ）式−（Ｘ9）n9−ＯＨのアルコールまたは式−（Ｘ10）n10−Ｘ11のアルコキシ
    アルキル基，ここで，Ｘ9およびＸ10は，独立して，メチレン，エチレン，およ びプロピレンからなる群より選択され，Ｘ11は，独立して，メチル，エチル，お
    よびプロピルからなる群より選択され，ｎ９およびｎ１０は，独立して，０また
    は１である；（ｘｉ）式−ＳＯ2ＯＨのスルホン；および（ｘｉｉ）式−Ｓ−フ ェニルのチオエーテル， からなる群より選択される，請求項２２記載の化合物。
  24. 【請求項２４】 Ｒ6およびＲ7が，独立して，（ｉ）水素；（ｉｉ）ハロゲ
    ン，トリハロメチル，シアノ，およびニトロ基で任意に置換されていてもよいメ
    チル，エチル，プロピル，およびブチル基；（ｉｉｉ）式−（Ｘ1）n10−ＮＸ2 Ｘ3のアミン，ここで，Ｘ2およびＸ3は，独立して，水素および任意に置換され ていてもよい飽和アルキルからなる群より選択され，Ｘ1は，任意に置換されて いてもよい飽和アルキレンであり，ｎ１は０または１である；（ｉｖ）ハロゲン
    またはトリハロメチル；および（ｖ）式−（Ｘ9）n9−ＯＨのアルコールまたは 式−（Ｘ10）n10−Ｏ−Ｘ11のアルコキシアルキル基，ここで，Ｘ9およびＸ10は
    ，独立して，メチレン，エチレン，およびプロピレンからなる群より選択され，
    Ｘ11は，メチル，エチル，およびプロピルからなる群より選択され，ｎ９および
    ｎ１０は，独立して，０または１である， からなる群より選択される，請求項２２記載の化合物。
  25. 【請求項２５】 Ｒ6およびＲ7が，独立して，（ｉ）水素；（ｉｉ）メチル
    およびエチル；（ｉｉｉ）式−（Ｘ1）n1−ＮＸ2Ｘ3のアミン，ここでＸ2および
    Ｘ3は，独立して，水素，メチル，およびエチルからなる群より選択され，Ｘ1は
    ，メチレンおよびエチレンからなる群より選択され，ｎ１は０または１である；
    （ｉｖ）ハロゲン；および（ｖ）ヒドロキシ−ＯＨまたは式−Ｏ−Ｘ11のアルコ
    キシ基，ここで，Ｘ11は，独立して，メチル，エチル，およびプロピルからなる
    群より選択される， からなる群より選択される，請求項２４記載の化合物。
  26. 【請求項２６】 Ｙが，６員の芳香族またはヘテロ芳香族環である，請求項
    ２５記載の化合物。
  27. 【請求項２７】 Ｙが，６員の脂肪族またはヘテロ脂肪族環である，請求項
    ２５記載の化合物。
  28. 【請求項２８】 Ｙが，任意に置換されていてもよい 【化７】 からなる群より選択される環を形成する，請求項２７記載の化合物。
  29. 【請求項２９】 Ｇ，Ｊ，およびＬが，それぞれ独立して，窒素およびＣＨ
    からなる群より選択される，請求項２５記載の化合物。
  30. 【請求項３０】 Ｘが，アルキルイオウ，ＳＯ，ＳＯ2，および酸素で任意 に置換されていてもよい窒素からなる群より選択される，請求項２５記載の化合
    物。
  31. 【請求項３１】 ＴがタイプＴアルデヒドからなる群より選択される，請求
    項２５記載の化合物。
  32. 【請求項３２】 式ＸＶ： 【化８】 ［式中， Ｒ8は，（ｉ）飽和アルキル；（ｉｉ）アミン；（ｉｉｉ）ヨウ素；（ｉｖ）式 −（Ｘ4）n4−ＣＯ−Ｘ5のケトン，ここで，Ｘ4およびＸ5は，独立して，アルキ
    ルであり，ｎ４は０または１である；（ｖ）カルボン酸またはエステル；（ｖｉ
    ）アミド；および（ｖｉｉ）スルホンアミド，からなる群より選択される］ のオキシインドール化合物。
  33. 【請求項３３】 前記オキシインドール化合物が， 【化９】 【化１０】 からなる群より選択される，請求項３２記載のオキシインドール化合物。
  34. 【請求項３４】 式ＸＶＩ： 【化１１】 ［式中，Ｒ9は，（ｉ）アミン；（ｉｉ）式ＮＯ2のニトロ；（ｉｉｉ）塩素，臭
    素，またはヨウ素；（ｉｖ）ケトン；（ｖ）カルボン酸またはエステル；（ｖｉ
    ）アミド；および（ｖｉｉ）スルホンアミド，からなる群より選択される］ のオキシインドール化合物。
  35. 【請求項３５】 前記オキシインドール化合物が， 【化１２】 【化１３】 からなる群より選択される，請求項３４記載のオキシインドール化合物。
  36. 【請求項３６】 式ＸＶＩＩ： 【化１４】 ［式中，Ｒ10は，（ｉ）芳香族またはヘテロ芳香族環；（ｉｉ）脂肪族またはヘ
    テロ脂肪族環；（ｉｉｉ）アミン；（ｉｖ）式−ＮＯ2のニトロ；（ｖ）臭素； （ｖｉ）ケトン；（ｖｉｉ）カルボン酸またはエステル；および（ｖｉｉｉ）ス
    ルホンアミド，からなる群より選択される］ のオキシインドール化合物。
  37. 【請求項３７】 前記オキシインドール化合物が， 【化１５】 からなる群より選択される，請求項３６記載のオキシインドール化合物。
  38. 【請求項３８】 前記オキシインドール化合物が 【化１６】 からなる群より選択される，請求項３６記載のオキシインドール化合物。
  39. 【請求項３９】 化学構造： 【化１７】 ［式中， （ａ）Ａ，Ｂ，ＤおよびＥは，独立して，炭素および窒素からなる群より選択さ
    れ，ここで，Ａ，Ｂ，ＤまたはＥが窒素であるとき，Ｒ6，Ｒ7，Ｒ8またはＲ9，
    はそれぞれ存在しないことが理解され； （ｂ）ＧおよびＪは，窒素および炭素からなる群より選択され，ここで，Ｇが窒
    素であるとき，Ｊは炭素であり，およびＪが窒素であるときＧは炭素であり，Ｇ
    またはＪが窒素であるとき，Ｒ5またはＲ5'はそれぞれ存在しないことが理解さ れ； （ｃ）Ｒ1およびＲ3は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール
    ，ヒドロキシ，アルコキシ，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，Ｃ−アミド，Ｃ
    −チオアミド，スルホニルおよびトリハロメチルスルホニルからなる群より選択
    され； （ｄ）Ｒ2は，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，ヘテロアリールお よびハロからなる群より選択され； （ｅ）Ｒ4，Ｒ5およびＲ5'は，独立して，水素，アルキル，アルケニル，アルキ
    ニル，シクロアルキル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂肪族環式，ハロ，
    ヒドロキシ，ニトロ，シアノ，アルコキシ，アリールオキシ，Ｃ−カルボキシ，
    Ｏ−カルボキシ，カルボニル，Ｓ−スルホンアミド，アミノおよびＮＲ10Ｒ11か
    らなる群より選択され，ここで，Ｒ10およびＲ11は，独立して，アルキル，シク
    ロアルキル，アリール，カルボニル，スルホニル，トリハロメタンスルホニルか
    らなる群より選択され，または一緒になって５員または６員のヘテロ脂肪族環式
    環を形成し； （ｆ）Ｒ6，Ｒ7，Ｒ8およびＲ9は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキ
    ル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘ
    テロ脂肪族環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，チオヒドロキシ，
    チオアルコキシ，チオアリールオキシ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホ
    ンアミド，Ｎ−スルホンアミド，Ｎ−トリハロメタンスルホンアミド，カルボニ
    ル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，シアノ，ニトロ，ハロ，シアナト，イソ
    シアナト，チオシアナト，イソチオシアナト，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル
    ，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，アミノ
    および−ＮＲ10Ｒ11であり，ここで，Ｒ10およびＲ11は上で定義したとおりであ
    り；および （ｇ）Ｒ6およびＲ7またはＲ7およびＲ8またはＲ8およびＲ9は，一緒になって，
    ５員または６員の芳香族，ヘテロ芳香族，脂環式またはヘテロ脂肪族環式環基を
    形成してもよい， からなる群より選択される］ を有する２−インドリノン。
  40. 【請求項４０】 Ａ，Ｂ，ＤおよびＥが炭素である，請求項３９記載の化合
    物。
  41. 【請求項４１】 Ｒ1，Ｒ2，およびＲ3の少なくとも１つが水素である，請 求項３９記載の化合物。
  42. 【請求項４２】 Ｒ6，Ｒ7，Ｒ8およびＲ9が，独立して，（ｉ）水素；（ｉ
    ｉ）非置換低級アルキル；（ｉｉｉ）ハロ，Ｃ−カルボキシおよび−ＮＲ10Ｒ11 からなる群より選択される基で置換されている低級アルキル；（ｉｖ）ハロ，Ｃ
    −カルボキシおよびＮＲ10Ｒ11からなる群より選択される置換基で任意に置換さ
    れていてもよい低級アルコキシ；（ｖ）トリハロメチル；（ｖｉ）非置換アルケ
    ニル；（ｖｉｉ）非置換アルキニル；（ｖｉｉｉ）非置換低級アルキル，１また
    はそれ以上のハロ基で置換されている低級アルキル，ハロ，非置換低級アルコキ
    シ，Ｃ−カルボキシ，アミノ，Ｓ−スルホンアミドまたは−ＮＲ10Ｒ11からなる
    群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていても
    よいアリール；（ｉｘ）非置換低級アルキル，１またはそれ以上のハロ基で置換
    されている低級アルキル，アルデヒド，非置換低級アルキル，カルボニル，ヒド
    ロキシ，非置換アルコキシ，１またはそれ以上のハロ基で置換されているアルコ
    キシ，Ｃ−カルボキシ，アミノ，Ｓ−スルホンアミドまたは−ＮＲ10Ｒ11からな
    る群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていて
    もよいヘテロ脂肪族環式；（ｘ）非置換低級アルキル，トリハロメチル，ハロ，
    ヒドロキシ，アミノ，Ｓ−スルホンアミドからなる群より独立して選択される１
    またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよいアリールオキシ；（ｘｉ
    ）−ＮＲ10Ｒ11；（ｘｉｉ）チオヒドロキシ；（ｘｉｉｉ）非置換チオアルコキ
    シ；（ｘｉｖ）ハロ，ヒドロキシ，アミノ，Ｓ−スルホンアミドまたは−ＮＲ10 Ｒ11からなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換
    されていてもよいチオアリールオキシ；（ｘｖ）Ｓ−スルホンアミド；（ｘｖｉ
    ）Ｃ−カルボキシ；（ｘｖｉｉ）Ｏ−カルボキシ；（ｘｖｉｉｉ）ヒドロキシ；
    （ｘｉｘ）シアノ；（ｘｘ）ニトロ；（ｘｘｉ）ハロ；（ｘｘｉｉ）Ｃ−アミド
    ；（ｘｘｉｉｉ）Ｎ−アミド；（ｘｘｉｖ）アミノ；および（ｘｘｖ）−ＮＲ10 Ｒ11， からなる群より選択される，請求項３９記載の化合物。
  43. 【請求項４３】 Ｒ10が水素であり，Ｒ11が非置換低級アルキルである，請
    求項３９記載の化合物。
  44. 【請求項４４】 Ｒ4，Ｒ5およびＲ5'が，独立して，水素，非置換低級アル
    キル，トリハロメチル，環への結合点から最も遠い炭素でＣ−カルボキシ基で置
    換されている低級アルキル，ハロ，ヒドロキシ，非置換低級アルコキシ，Ｏ−カ
    ルボキシ，Ｃ−カルボキシ，アミノ，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，ニトロ，アミノ
    ，Ｓ−スルホンアミドおよび−ＮＲ10Ｒ11からなる群より選択される，請求項３
    ９記載の化合物。
  45. 【請求項４５】 Ｒ1，Ｒ2およびＲ3が水素である，請求項４０記載の化合 物。
  46. 【請求項４６】 Ａ，Ｂ，ＤおよびＥが炭素であり，Ｒ1，Ｒ2およびＲ3が 水素である，請求項４２記載の化合物。
  47. 【請求項４７】 Ｒ10が水素であり，Ｒ11が非置換低級アルキルである，請
    求項４６記載の化合物。
  48. 【請求項４８】 Ｒ4およびＲ5およびＲ5'が，独立して，水素，非置換低級
    アルキル，環への結合点から最も遠い炭素でＣ−カルボキシ基で置換されている
    低級アルキル，トリハロメチル，ハロ，ヒドロキシ，非置換低級アルコキシ，Ｏ
    −カルボキシ，Ｃ−カルボキシ，アミノ，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，ニトロ，Ｓ
    −スルホンアミドおよび−ＮＲ10Ｒ11からなる群より選択される，請求項４７記
    載の化合物。
  49. 【請求項４９】 （ａ）Ｇが窒素であり；（ｂ）Ｊが炭素であり；および（
    ｃ）Ｒ4およびＲ5’が水素である，請求項４７記載の化合物。
  50. 【請求項５０】 （ａ）Ｇが炭素であり；（ｂ）Ｊが窒素であり；および（
    ｃ）Ｒ4およびＲ5が水素である，請求項４７記載の化合物。
  51. 【請求項５１】 次の化学構造： 【化１８】 ［式中， （ａ）Ａ，ＢおよびＤは，独立して，炭素および窒素からなる群より選択され，
    ここで，Ａ，ＢまたはＤが窒素であるとき，Ｒ3，Ｒ4またはＲ5はそれぞれ存在 せず； （ｂ）Ｒ1は，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，ヘテロアリール， ヒドロキシ，アルコキシ，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，Ｃ−アミド，Ｃ−
    チオアミド，スルホニルおよびトリハロメチル−スルホニルからなる群より選択
    され； （ｃ）Ｒ2は，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，およびヘテロアリ ールからなる群より選択され； （ｄ）Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6，Ｒ7，Ｒ8，Ｒ9およびＲ10は，独立して，水素，ア ルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリー
    ル，ヘテロアリール，ヘテロ脂肪族環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオ
    キシ，チオヒドロキシ，チオアルコキシ，チオアリールオキシ，スルフィニル，
    スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，Ｎ−トリハロメタンス
    ルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｃ−カルボキシ塩，Ｏ−カルボキ
    シ，カルボキシアルキル，カルボキシアルキル塩，シアノ，アジド，ニトロ，ハ
    ロ，シアナト，イソシアナト，チオシアナト，イソチオシアナト，Ｏ−カルバミ
    ル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，
    Ｎ−アミド，アミノおよび−ＮＲ11Ｒ12からなる群より選択され； （ｅ）Ｒ3およびＲ4またはＲ6およびＲ7またはＲ7およびＲ8またはＲ8およびＲ9 またはＲ9およびＲ10は，一緒になって，メチレンジオキシまたはエチレンジオ キシ基を形成してもよく； （ｆ）Ｑは，アリール，ヘテロアリールおよび縮合ヘテロアリール：シクロアル
    キル／ヘテロ脂肪族環式からなる群より選択され；および， （ｇ）Ｒ11およびＲ12は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アリー
    ル，カルボニル，アセチルスルホニル，トリハロメタンスルホニルからなる群よ
    り選択されるか，または一緒になって，５員または６員のヘテロ脂肪族環式環を
    形成する］ を有する化合物。
  52. 【請求項５２】 Ｒ1およびＲ2が水素である，請求項５１記載の化合物，塩
    またはプロドラッグ。
  53. 【請求項５３】 Ａ，ＢおよびＤが炭素である，請求項５２記載の化合物，
    塩またはプロドラッグ。
  54. 【請求項５４】 Ｒ3，Ｒ4，およびＲ5が水素である，請求項５３記載の化 合物，塩またはプロドラッグ。
  55. 【請求項５５】 Ｒ6，Ｒ7，Ｒ8，Ｒ9およびＲ10が，独立して，水素および
    非置換低級アルコキシからなる群より選択される，請求項５４記載の化合物，塩
    またはプロドラッグ。
  56. 【請求項５６】 Ｒ6，Ｒ7，Ｒ8，Ｒ9またはＲ10の少なくとも１つが非置換
    低級アルコキシである，請求項５５記載の化合物，塩またはプロドラッグ。
  57. 【請求項５７】 Ｑがアリールであるとき，前記アリール基が，水素，非置
    換低級アルキル，非置換低級アルコキシおよびヘテロ脂肪族環式からなる群より
    独立して選択される１またはそれ以上の基で置換されている，請求項５６記載の
    化合物，塩またはプロドラッグ。
  58. 【請求項５８】 前記ヘテロ脂肪族環式基が４−ホルミルピペラジン−１−
    イルである，請求項５７記載の化合物，塩またはプロドラッグ。
  59. 【請求項５９】 Ｑがヘテロアリールであるとき，前記ヘテロアリール基が
    ピロール−２−イル，イミダゾ−４−イルおよびチオフェン−２−イルからなる
    群より選択される，請求項５６記載の化合物，塩またはプロドラッグ。
  60. 【請求項６０】 Ｑが縮合ヘテロアリール：シクロアルキル／ヘテロ脂肪族
    環式基であるとき，前記縮合ヘテロアリール：シクロアルキル／ヘテロ脂肪族環
    式基が４，５，６，７−テトラヒドロインドール−２−イルである，請求項５６
    記載の化合物，塩またはプロドラッグ。
  61. 【請求項６１】 Ｑがヘテロアリールまたはヘテロアリール：シクロアルキ
    ル／ヘテロ脂肪族環式であるとき，Ｑが，水素，非置換低級アルキル，非置換低
    級アルコキシ，カルボキシ，カルボキシ塩，カルボキシアルキルおよびカルボキ
    シアルキル塩からなる群より独立して選択される１またはそれ以上の基で置換さ
    れており，ここで，前記カルボキシアルキルまたは前記カルボキシアルキル塩中
    のｒは，１または２である，請求項５６記載の化合物，塩またはプロドラッグ。
  62. 【請求項６２】 （ｉ）生理学的に許容しうる担体，希釈剤，または賦形剤
    ；および （ｉｉ）請求項１，８，９，２０，３９，および５１のいずれかに記載の化合物
    またはその塩 を含む医薬組成物。
  63. 【請求項６３】 請求項１，８，９，２０，３９，および５１のいずれかに
    記載のインドリノン化合物またはその塩を用いて蛋白質キナーゼの機能を調節す
    る方法であって，前記蛋白質キナーゼを発現する細胞を前記化合物と接触させる
    工程を含む方法。
  64. 【請求項６４】 蛋白質キナーゼの機能を調節するインドリノン化合物を同
    定する方法であって，以下の工程： （ａ）前記蛋白質キナーゼを発現する細胞を前記化合物と接触させ；そして （ｂ）前記細胞に及ぼす影響をモニターする， を含む方法。
  65. 【請求項６５】 前記影響が，細胞表現型の変化または不変，細胞増殖の変
    化または不変，前記蛋白質キナーゼの触媒活性の変化または不変，および本明細
    書に記載される前記蛋白質キナーゼと天然の結合パートナーの間の相互作用の変
    化または不変からなる群より選択される，請求項６４記載の方法。
  66. 【請求項６６】 以下の工程： （ａ）前記細胞を溶解して，蛋白質キナーゼを含む溶解物とし； （ｂ）前記蛋白質キナーゼを抗体に吸着させ； （ｃ）前記吸着された蛋白質キナーゼを１つまたはそれ以上の基質とインキュベ
    ートし；そして （ｄ）前記基質を固体支持体または抗体に吸着させる， を含み，ここで，前記細胞に及ぼす前記影響をモニターする前記工程が，前記基
    質のリン酸濃度を測定することを含むことを特徴とする，請求項６５記載の方法
    。
  67. 【請求項６７】 無秩序の(チロシンキナーゼシグナル伝達に関連する疾患 を治療する方法であって，治療的に有効量の請求項１，８，９，２０，３９，お
    よび５１のいずれかに記載の化合物を，治療を必要とする患者に投与する工程を
    含む方法。
  68. 【請求項６８】 チロシンキナーゼシグナル伝達を制御する方法であって，
    治療的に有効量の請求項１，８，９，２０，３９，および５１のいずれかに記載
    の化合物を患者に投与することを含む方法。
  69. 【請求項６９】 生物における異常な状態を予防または治療する方法であっ
    て，ここで，前記異常な状態は，蛋白質キナーゼと天然の結合パートナーとの間
    の相互作用により特徴づけられるシグナル伝達経路の異常型と関連しており， （ａ）請求項１，８，９，２０，３９，および５１のいずれかに記載の化合物を
    投与し；そして （ｂ）異常な相互作用を促進させるかまたは破壊する， の各工程を含む方法。
  70. 【請求項７０】 前記生物が哺乳動物である，請求項６９記載の方法。
  71. 【請求項７１】 前記異常な状態が，癌，子宮内膜症，関節炎，眼新生血管
    形成，固形腫瘍成長および転移，創傷治癒中の過度の瘢痕，慢性関節リウマチ，
    自己免疫疾患，および移植拒絶からなる群より選択される，請求項６９記載の方
    法。
  72. 【請求項７２】 異常な細胞増殖を調節する方法であって，そのような治療
    を必要とする患者に，治療的に有効量の１またはそれ以上の，式ＸＶＩＩＩ： 【化１９】 ［式中， Ｒ1はＨまたはアルキルであり； Ｒ2はＯまたはＳであり； Ｒ3はＨであり； Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6，およびＲ7は，それぞれ独立して，水素，アルキル，アルコキシ
    ，アリール，アリールオキシ，アルカリール，アルカリールオキシ，ハロゲン，
    トリハロメチル，Ｓ（Ｏ）Ｒ，ＳＯ2ＮＲＲ'，ＳＯ3Ｒ，ＳＲ，ＮＯ2，ＮＲＲ' ，ＯＨ，ＣＮ，Ｃ（Ｏ）Ｒ，ＯＣ（Ｏ）Ｒ，ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ，（ＣＨ2）nＣＯ2 Ｒ，ＣＯＮＲＲ'，および（ＣＨ2）nＯＮＲＲ'からなる群より選択され； Ａは，４，５，６，７−テトラヒドロインドールおよび５員のヘテロアリール環
    からなる群より選択され，ここで，前記５員環は，チオフェン，ピロール，ピラ
    ゾール，イミダゾール，１，２，３−トリアゾール，１，２，４−トリアゾール
    ，オキサゾール，イソオキサゾール，チアゾール，イソチアゾール，２−スルホ
    ニルフラン，４−アルキルフラン，１，２，３−オキサジアゾール，１，２，４
    −オキサジアゾール，１，２，５−オキサジアゾール，１，３，４−オキサジア
    ゾール，１，２，３，４，−オキサトリアゾール，１，２，３，５−オキサトリ
    アゾール，１，２，３−チアジアゾール，１，２，４−チアジアゾール，１，２
    ，５−チアジアゾール，１，３，４−チアジアゾール，１，２，３，４−チアト
    リアゾール，１，２，３，５−チアトリアゾール，およびテトラゾールからなる
    群より選択され，ここで，前記５員環および前記テトラヒドロインドールは，ア
    ルキル，アルコキシ，アリール，アリールオキシ，アルカリール，アルカリール
    オキシ，ハロゲン，トリハロメチル，Ｓ（Ｏ）Ｒ，ＳＯ2ＮＲＲ'，ＳＯ3Ｒ，Ｓ Ｒ，ＮＯ2，ＮＲＲ'，ＯＨ，ＣＮ，Ｃ（Ｏ）Ｒ，ＯＣ（Ｏ）Ｒ，ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ
    ，（ＣＨ2）nＣＯ2Ｒ，ＣＯＮＲＲ'，および（ＣＨ2）nＯＮＲＲ'からなる群よ り選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく； ｎは０−３であり； ＲはＨ，アルキル，およびアリールからなる群より選択され；および Ｒ'はＨ，アルキル，およびアリールからなる群より選択され，ここで，前記ア ルキルは，６員のヘテロ脂肪族環で任意に置換されていてもよく，前記６員環は
    ，１またはそれ以上の位置において，アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハ
    ロメチル，ＮＯ2，および（ＣＨ2）nＣＯ2Ｒからなる群より選択される置換基で
    任意に置換されていてもよい］ のインドリノン化合物を含む薬学的に許容しうる組成物を投与することを含む方
    法。
  73. 【請求項７３】 前記Ａは，アルキル，アルコキシ，アリール，アリールオ
    キシ，アルカリール，アルカリールオキシ，ハロゲン，トリハロメチル，Ｓ（Ｏ
    ）Ｒ，ＳＯ2ＮＲＲ'，ＳＯ3Ｒ，ＳＲ，ＮＯ2，ＮＲＲ'，ＯＨ，ＣＮ，Ｃ（Ｏ） Ｒ，ＯＣ（Ｏ）Ｒ，ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ，（ＣＨ2）nＣＯ2Ｒ，ＣＯＮＲＲ'，および
    （ＣＨ2）nＯＮＲＲ’からなる群より選択される１またはそれ以上の置換基で任
    意に置換されていてもよい，チオフェン，ピロール，および４，５，６，７−テ
    トラヒドロインドールであり； ｎは０−３からなる群より選択され； ＲはＨ，アルキル，およびアリールからなる群より選択され；および Ｒ'はＨアルキル，およびアリールからなる群より選択され，ここで，前記アル キルは，６員のヘテロ脂肪族環で任意に置換されていてもよく，前記６員環は，
    １またはそれ以上の位置において，アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロ
    メチル，ＮＯ2，および（ＣＨ2）nＣＯ2Ｒからなる群より選択される置換基で任
    意に置換されていてもよい， 請求項７２記載の方法。
  74. 【請求項７４】 （ａ）式ＸＶＩＩＩの前記インドリノン化合物が，５−ア
    ミノ−３−（３，５−ジエチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン）−１，３
    −ジヒドロ−インドール−２−オンのＥまたはＺ異性体，４−メチル−３−（３
    −メチルチオフェン−２−イルメチレン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２
    −オンのＥまたはＺ異性体，５−クロロ−３−（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロ
    ール−２−イルメチレン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンのＥまた
    はＺ異性体，３−［４メチル−５−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドー
    ル−３−イリデンメチル）−Ｈ−ピロール−３−イル］−プロピオン酸のＥまた
    はＺ異性体，３−［２，４−ジメチル−５−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−
    インドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−イル］−プロピオン
    酸のＥまたはＺ異性体，Ｎ−（２−モルホリン−４−イル−エチル）−３−［２
    −（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−４，
    ５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−インドール−３−イル］−プロピオンアミド
    ，および３−［２−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデ
    ンメチル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−インドール−３−イル］プ
    ロピオン酸のＥまたはＺ異性体； からなる群より選択され； （ｂ）前記組成物は処方中にさらに１またはそれ以上の薬学的に許容しうる賦形
    剤を含んでいてもよく，前記処方は，非経口，経口，および局所処方からなる群
    より選択され；および （ｃ）前記有効量は１−１０００ｍｇ／ｍ2／日を含む， 請求項７２記載の方法。
  75. 【請求項７５】 細胞に対するＶＥＧＦ，ＦＧＦ，またはＰＤＧＦの活性を
    インビボでまたはインビトロで調節する方法であって，前記細胞に，治療的に有
    効量の１またはそれ以上の式ＸＶＩＩＩ： 【化２０】 ［式中， Ｒ1はＨまたはアルキルであり； Ｒ2はＯまたはＳであり； Ｒ3はＨであり； Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6，およびＲ7は，それぞれ独立して，水素，アルキル，アルコキシ
    ，アリール，アリールオキシ，アルカリール，アルカリールオキシ，ハロゲン，
    トリハロメチル，Ｓ（Ｏ）Ｒ，ＳＯ2ＮＲＲ'，ＳＯ3Ｒ，ＳＲ，ＮＯ2，ＮＲＲ' ，ＯＨ，ＣＮ，Ｃ（Ｏ）Ｒ，ＯＣ（Ｏ）Ｒ，ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ，（ＣＨ2）nＣＯ2 Ｒ，ＣＯＮＲＲ'，および（ＣＨ2）nＯＮＲＲ'からなる群より選択され； Ａは，４，５，６，７−テトラヒドロインドールおよび５員のヘテロアリール環
    からなる群より選択され，ここで，前記５員環は，チオフェン，ピロール，ピラ
    ゾール，イミダゾール，１，２，３−トリアゾール，１，２，４−トリアゾール
    ，オキサゾール，イソオキサゾール，チアゾール，イソチアゾール，２−スルホ
    ニルフラン，４−アルキルフラン，１，２，３−オキサジアゾール，１，２，４
    −オキサジアゾール，１，２，５−オキサジアゾール，１，３，４−オキサジア
    ゾール，１，２，３，４，−オキサトリアゾール，１，２，３，５−オキサトリ
    アゾール，１，２，３−チアジアゾール，１，２，４−チアジアゾール，１，２
    ，５−チアジアゾール，１，３，４−チアジアゾール，１，２，３，４−チアト
    リアゾール，１，２，３，５−チアトリアゾール，およびテトラゾールからなる
    群より選択され，ここで，前記５員環および前記テトラヒドロインドールは，ア
    ルキル，アルコキシ，アリール，アリールオキシ，アルカリール，アルカリール
    オキシ，ハロゲン，トリハロメチル，Ｓ（Ｏ）Ｒ，ＳＯ2ＮＲＲ'，ＳＯ3Ｒ，Ｓ Ｒ，ＮＯ2，ＮＲＲ'，ＯＨ，ＣＮ，Ｃ（Ｏ）Ｒ，ＯＣ（Ｏ）Ｒ，ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ
    ，（ＣＨ2）nＣＯ2Ｒ，ＣＯＮＲＲ'，および（ＣＨ2）nＯＮＲＲ’からなる群よ
    り選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく； ｎは０−３であり； Ｒは，Ｈ，アルキル，およびアリールからなる群より選択され；および Ｒ'は，Ｈ，アルキル，およびアリールからなる群より選択され，ここで前記ア ルキルは，６員のヘテロ脂肪族環で任意に置換されていてもよく，前記６員環は
    ，１またはそれ以上の位置でアルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル
    ，ＮＯ2，および（ＣＨ2）nＣＯ2Ｒからなる群より選択される置換基で任意に置
    換されていてもよい］ のインドリノン化合物を含む薬学的に許容しうる組成物を投与することを含む方
    法。
  76. 【請求項７６】 前記Ａが，アルキル，アルコキシ，アリール，アリールオ
    キシ，アルカリール，アルカリールオキシ，ハロゲン，トリハロメチル，Ｓ（Ｏ
    ）Ｒ，ＳＯ2ＮＲＲ'，ＳＯ3Ｒ，ＳＲ，ＮＯ2，ＮＲＲ'，ＯＨＣＮ，Ｃ（Ｏ）Ｒ ，ＯＣ（Ｏ）Ｒ，ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ，（ＣＨ2）nＣＯ2Ｒ，ＣＯＮＲＲ'，および（
    ＣＨ2）nＯＮＲＲ'からなる群より選択される１またはそれ以上の置換基で任意 に置換されていてもよい，チオフェン，ピロール，および４，５，６，７−テト
    ラヒドロインドールからなる群より選択され； ｎが０−３であり； Ｒが，Ｈ，アルキル，およびアリールからなる群より選択され；および Ｒ'が，Ｈ，アルキル，およびアリールからなる群より選択され，ここで，前記 アルキルは，６員のヘテロ脂肪族環で任意に置換されていてもく，前記６員環は
    ，１またはそれ以上の位置で，アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチ
    ル，ＮＯ2，および（ＣＨ2）nＣＯ2Ｒからなる群より選択される置換基で任意に
    置換されていてもよい， 請求項７５記載の方法。
  77. 【請求項７７】 （ａ）前記式ＸＶＩＩＩのインドリノン化合物が，独立し
    て，５−アミノ−３−（３，５−ジエチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン
    ）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンのＥまたはＺ異性体，４−メチル
    −３−（３−メチル−チオフェン−２−イルメチレン）−１，３−ジヒドロ−イ
    ンドール−２−オンのＥまたはＺ異性体，５−クロロ−３（３，５−ジメチル−
    １Ｈ−ピロール−２−イルメチレン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オ
    ンのＥまたはＺ異性体，３−［４−メチル−５−（２−オキソ−１，２−ジヒド
    ロ−インドール−３−イリデンエチル）−Ｈ−ピロール−３−イル］−プロピオ
    ン酸のＥまたはＺ異性体，３［２，４−ジメチル−５−（２−オキソ−１，２−
    ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−イル］−
    プロピオン酸，Ｎ−（２−モルホリン−４−イル−エチル）−３−［２−（２−
    オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−４，５，６，
    ７−テトラヒドロ−１Ｈ−インドール−３−イル］−プロピオンアミドのＥまた
    はＺ異性体，および３−［２−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−
    ３−イリデンメチル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−インドール−３
    −イル］プロピオン酸のＥまたはＺ異性体からなる群より選択され； （ｂ）前記組成物が処方中にさらに１またはそれ以上の薬学的に許容しうる賦形
    剤を含み，ここで，前記処方は，非経口，経口，および局所処方からなる群より
    選択され；および （ｃ）前記有効量が１−１０００ｍｇ／ｍ2／日を含む， 請求項７５記載の方法。
  78. 【請求項７８】 チロシンキナーゼシグナル伝達を調節する方法であって，
    そのような治療を必要とする患者に，治療的に有効量の１またはそれ以上の式Ｘ
    ＶＩＩＩ： 【化２１】 ［式中， Ｒ1はＨまたはアルキルであり； Ｒ2はＯまたはＳであり； Ｒ3はＨであり； Ｒ，Ｒ5，Ｒ6，およびＲ7は，それぞれ独立して，水素，アルキル，アルコキシ ，アリール，アリールオキシ，アルカリール，アルカリールオキシ，ハロゲン，
    トリハロメチル，Ｓ（Ｏ）Ｒ，ＳＯ2ＮＲＲ'，ＳＯ3Ｒ，ＳＲ，ＮＯ2，ＮＲＲ' ，ＯＨ，ＣＮ，Ｃ（Ｏ）Ｒ，ＯＣ（Ｏ）Ｒ，ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ，（ＣＨ2）nＣＯ2 Ｒ，ＣＯＮＲＲ'，および（ＣＨ2）nＯＮＲＲ’からなる群より選択され； Ａは，４，５，６，７−テトラヒドロインドールおよび５員のヘテロアリール環
    からなる群より選択され，前記５員環は，チオフェン，ピロール，ピラゾール，
    イミダゾール，１，２，３−トリアゾール，１，２，４−トリアゾール，オキサ
    ゾール，イソオキサゾール，チアゾール，イソチアゾール，２−スルホニルフラ
    ン，４−アルキルフラン，１，２，３−オキサジアゾール，１，２，４−オキサ
    ジアゾール，１，２，５−オキサジアゾール，１，３，４−オキサジアゾール，
    ｌ，２，３，４，−オキサトリアゾール，１，２，３，５−オキサトリアゾール
    ，１，２，３−チアジアゾール，１，２，４−チアジアゾール，１，２，５−チ
    アジアゾール，１，３，４−チアジアゾール，１，２，３，４−チアトリアゾー
    ル，１，２，３，５−チアトリアゾール，およびテトラゾールからなる群より選
    択され，ここで，前記５員環および前記テトラヒドロインドールは，アルキル，
    アルコキシ，アリール，アリールオキシ，アルカリール，アルカリールオキシ，
    ハロゲン，トリハロメチル，Ｓ（Ｏ）Ｒ，ＳＯ2ＮＲＲ'，ＳＯ3Ｒ，ＳＲ，ＮＯ2 ，ＮＲＲ'，ＯＨ，ＣＮ，Ｃ（Ｏ）Ｒ，ＯＣ（Ｏ）Ｒ，ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ，（ＣＨ2 ）nＣＯ2Ｒ，ＣＯＮＲＲ'，および（ＣＨ2）nＯＮＲＲ'からなる群より選択され
    る１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく； ｎは０−３であり； Ｒは，Ｈ，アルキル，およびアリールからなる群より選択され；および Ｒ'は，Ｈ，アルキル，およびアリールからなる群より選択され，ここで前記ア ルキルは，６員のヘテロ脂肪族環で任意に置換されていてもよく，前記６員環は
    ，１またはそれ以上の位置で，アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチ
    ル，ＮＯ2，および（ＣＨ2）nＣＯ2Ｒからなる群より選択される置換基で任意に
    置換されていてもよい］ のインドリノン化合物を含む薬学的に許容しうる組成物を投与することを含む方
    法。
  79. 【請求項７９】 前記Ａが，アルキル，アルコキシ，アリール，アリールオ
    キシ，アルカリール，アルカリールオキシ，ハロゲン，トリハロメチル，Ｓ（Ｏ
    ）Ｒ，ＳＯ2ＮＲＲ'，ＳＯ3Ｒ，ＳＲ，ＮＯ2，ＮＲＲ'，ＯＨＣＮ，Ｃ（Ｏ）Ｒ ，ＯＣ（Ｏ）Ｒ，ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ，（ＣＨ2）nＣＯ2Ｒ，ＣＯＮＲＲ'，および（
    ＣＨ2）nＯＮＲＲ’からなる群より選択される１またはそれ以上の置換基で任意
    に置換されていてもよい，チオフェン，ピロール，および４，５，６，７−テト
    ラヒドロインドールからなる群より選択され， ｎが０−３であり； Ｒが，Ｈ，アルキル，およびアリールからなる群より選択され；および Ｒ'が，Ｈ，アルキル，およびアリールからなる群より選択され，ここで前記ア ルキルは６員のヘテロ脂肪族環で任意に置換されていてもよく，前記６員環は１
    またはそれ以上の位置で，アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，
    ＮＯ2，および（ＣＨ2）nＣＯ2Ｒからなる群より選択される置換基で任意に置換
    されていてもよい， 請求項７８記載の方法。
  80. 【請求項８０】 （ａ）前記式ＸＶＩＩＩのインドリノン化合物が，独立し
    て，５−アミノ−３−（３，５−ジエチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン
    ）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンのＥまたはＺ異性体，４−メチル
    −３−（３−メチル−チオフェン−２−イルメチレン）−１，３−ジヒドロ−イ
    ンドール−２−オンのＥまたはＺ異性体，５−クロロ−３（３，５−ジメチル−
    １Ｈ−ピロール−２−イルメチレン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オ
    ンのＥまたはＺ異性体，３−［４−メチル−５−（２−オキソ−１，２−ジヒド
    ロ−インドール−３−イリデンメチル）−Ｈ−ピロール−３−イル］−プロピオ
    ン酸のＥまたはＺ異性体，３−［２，４−ジメチル−５−（２−オキソ−１，２
    −ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−イル］
    −プロピオン酸，Ｎ−（２−モルホリン−４−イル−エチル）−３−［２−（２
    −オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−４，５，６
    ，７−テトラヒドロ−１Ｈ−インドール−３−イル］−プロピオンアミドのＥま
    たはＺ異性体，および３−［２−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール
    −３−イリデンメチル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−インドール−
    ３−イル］プロピオン酸のＥまたはＺ異性体からなる群より選択され； （ｂ）前記組成物が処方中にさらに１またはそれ以上の薬学的に許容しうる賦形
    剤を含み，前記処方が非経口，経口，および局所処方からなる群より選択され；
    および （ｃ）前記有効量が１−１０００ｍｇ／ｍ2／日を含む， 請求項７８記載の方法。
  81. 【請求項８１】 成長因子刺激細胞増殖を阻害する，式ＸＶＩＩＩの１また
    はそれ以上のインドリノン化合物を同定する方法であって， （ａ）細胞を前記１またはそれ以上のインドリノン化合物と接触させ； （ｂ）前記細胞をＶＥＧＦ，ＰＤＧＦ，およびＦＧＦからなる群より選択される
    １またはそれ以上の成長因子と接触させ；そして （ｃ）前記細胞に対する影響をモニターする， の各工程を含む方法。
  82. 【請求項８２】 前記成長因子がＶＥＧＦであり，前記細胞が内皮細胞であ
    る，請求項８１記載の方法。
  83. 【請求項８３】 前記成長因子がＰＤＧＦであり，前記細胞が平滑筋細胞で
    ある，請求項８１記載の方法。
  84. 【請求項８４】 前記成長因子がＦＧＦであり，前記細胞が内皮細胞である
    ，請求項８１記載の方法。
  85. 【請求項８５】 ラットにおけるアジュバント関節炎モデルにおいて活性な
    ，式ＸＶＩＩＩの１またはそれ以上のインドリノン化合物を同定する方法であっ
    て， （ａ）前記１またはそれ以上のインドリノン化合物を前記ラットに投与し；そし
    て （ｂ）前記ラットに対する影響をモニターする， の各工程を含む方法。
  86. 【請求項８６】 前記１またはそれ以上の化合物が，１−１０００ｍｇ／ｍ 2 ／日の濃度で投与される，請求項８５記載の方法。
  87. 【請求項８７】 異常な細胞増殖を調節する方法であって，そのような治療
    を必要とする患者に，請求項８１または８５のいずれかに記載の方法により同定
    される治療的に有効量の前記１またはそれ以上の化合物を含む薬学的に許容しう
    る組成物を投与することを含む方法。
  88. 【請求項８８】 前記組成物が処方中にさらに１またはそれ以上の薬学的に
    許容しうる賦形剤を含み，ここで前記処方は，非経口，経口，および局所処方か
    らなる群より選択される，請求項８７記載の方法。
  89. 【請求項８９】 ＶＥＧＦ，ＦＧＦ，またはＰＤＧＦの細胞に対する活性を
    インビボまたはインビトロで調節する方法であって，そのような治療を必要とす
    る患者に，請求項８１または８５のいずれかに記載の方法により同定される治療
    的に有効量の前記１またはそれ以上の化合物を含む薬学的に許容しうる組成物を
    投与することを含む方法。
  90. 【請求項９０】 前記組成物が処方中にさらに１またはそれ以上の薬学的に
    許容しうる賦形剤を含み，ここで前記処方は，非経口，経口，および局所処方か
    らなる群より選択される，請求項８９記載の方法。
  91. 【請求項９１】 チロシンキナーゼシグナル伝達を調節する方法であって，
    そのような治療を必要とする患者に，請求項８１または８５のいずれかに記載の
    方法により同定される治療的に有効量の前記１またはそれ以上の化合物を含む薬
    学的に許容しうる組成物を投与することを含む方法。
  92. 【請求項９２】 前記組成物が処方中にさらに１またはそれ以上の薬学的に
    許容しうる賦形剤を含み，ここで，前記処方は，非経口，経口，および局所処方
    からなる群より選択される，請求項９１記載の方法。
  93. 【請求項９３】 異常な状態を治療または予防する方法であって，そのよう
    な治療を必要とする患者に，治療的に有効量の１またはそれ以上の式ＸＶＩＩＩ
    のインドリノン化合物： 【化２２】 ［式中， Ｒ1は，Ｈまたはアルキルであり； Ｒ2はＯまたはＳであり； Ｒ3はＨであり； Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6，およびＲ7は，それぞれ独立して，水素，アルキル，アルコキシ
    ，アリール，アリールオキシ，アルカリール，アルカリールオキシ，ハロゲン，
    トリハロメチル，Ｓ（Ｏ）Ｒ，ＳＯ2ＮＲＲ'，ＳＯ3Ｒ，ＳＲ，ＮＯ2，ＮＲＲ' ，ＯＨ，ＣＮ，Ｃ（Ｏ）Ｒ，ＯＣ（Ｏ）Ｒ，ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ，（ＣＨ2）nＣＯ2 Ｒ，ＣＯＮＲＲ'，および（ＣＨ2）nＯＮＲＲ'からなる群より選択され； Ａは，４，５，６，７−テトラヒドロインドールおよび５員のヘテロアリール環
    からなる群より選択され，ここで，前記５員環は，チオフェン，ピロール，ピラ
    ゾール，イミダゾール，１，２，３−トリアゾール，１，２，４−トリアゾール
    ，オキサゾール，イソオキサゾール，チアゾール，イソチアゾール，２−スルホ
    ニルフラン，４−アルキルフラン，１，２，３−オキサジアゾール，１，２，４
    −オキサジアゾール，１，２，５−オキサジアゾール，１，３，４−オキサジア
    ゾール，ｌ，２，３，４，−オキサトリアゾール，１，２，３，５−オキサトリ
    アゾール，１，２，３−チアジアゾール，１，２，４−チアジアゾール，１，２
    ，５−チアジアゾール，１，３，４−チアジアゾール，１，２，３，４−チアト
    リアゾール，１，２，３，５−チアトリアゾール，およびテトラゾールからなる
    群より選択され，ここで，前記５員環および前記テトラヒドロインドールは，ア
    ルキル，アルコキシ，アリール，アリールオキシ，アルカリール，アルカリール
    オキシ，ハロゲン，トリハロメチル，Ｓ（Ｏ）Ｒ，ＳＯ2ＮＲＲ'，ＳＯ3Ｒ，Ｓ Ｒ，ＮＯ2，ＮＲＲ'，ＯＨ，ＣＮ，Ｃ（Ｏ）Ｒ，ＯＣ（Ｏ）Ｒ，ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ
    ，（ＣＨ2）nＣＯ2Ｒ，ＣＯＮＲＲ'，および（ＣＨ2）nＯＮＲＲ'からなる群よ り選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく； ｎは０−３であり； Ｒは，Ｈ，アルキル，およびアリールからなる群より選択され；および Ｒ'は，Ｈ，アルキル，およびアリールからなる群より選択され，ここで，前記 アルキルは，６員のヘテロ脂肪族環で任意に置換されていてもよく，前記６員環
    は，１またはそれ以上の位置で，アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメ
    チル，ＮＯ2，および（ＣＨ2）nＣＯ2Ｒからなる群より選択される置換基で任意
    に置換されていてもよい］ を含む薬学的に許容しうる組成物を投与することを含み，ここで，前記異常な状
    態は，関節炎，子宮内膜症，眼新生血管形成，固形腫瘍成長および転移，および
    創傷治癒の間の過度の瘢痕からなる群より選択されることを特徴とする方法。
  94. 【請求項９４】 前記Ａが，アルキル，アルコキシ，アリール，アリールオ
    キシ，アルカリール，アルカリールオキシ，ハロゲン，トリハロメチル，Ｓ（Ｏ
    ）Ｒ，ＳＯ2ＮＲＲ'，ＳＯ3Ｒ，ＳＲ，ＮＯ2，ＮＲＲ'，ＯＨＣＮ，Ｃ（Ｏ）Ｒ ，ＯＣ（Ｏ）Ｒ，ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ，（ＣＨ2）nＣＯ2Ｒ，ＣＯＮＲＲ'，および（
    ＣＨ2）nＯＮＲＲ’からなる群より選択される１またはそれ以上の置換基で任意
    に置換されていてもよい，チオフェン，ピロール，および４，５，６，７−テト
    ラヒドロインドールからなる群より選択され； ｎが０−３であり； Ｒが，Ｈ，アルキル，およびアリールからなる群より選択され， Ｒ'が，Ｈ，アルキル，およびアリールからなる群より選択され，ここで前記ア ルキルは，６員のヘテロ脂肪族環で任意に置換されていてもよく，前記６員環は
    ，１またはそれ以上の位置で，アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチ
    ル，ＮＯ2，および（ＣＨ2）nＣＯ2Ｒからなる群より選択される置換基で任意に
    置換されていてもよい， 請求項９３記載の方法。
  95. 【請求項９５】 式ＸＶＩＩＩの前記インドリノン化合物が，独立して，化
    合物ＡＶ−００２，化合物ＡＶ−００３，および化合物ＡＶ−００４からなる群
    より選択される，請求項９４記載の方法。
  96. 【請求項９６】 前記異常な状態が子宮内膜症である，請求項９３記載の方
    法。
  97. 【請求項９７】 前記疾患が関節炎である，請求項９３記載の方法。
  98. 【請求項９８】 前記組成物が処方中にさらに１またはそれ以上の薬学的に
    許容しうる賦形剤を含む，請求項９３記載の方法。
  99. 【請求項９９】 前記処方が，非経口，経口，および局所処方からなる群よ
    り選択される，請求項９３記載の方法。
  100. 【請求項１００】 異常な状態を治療または予防する方法であって，そのよ
    うな治療を必要とする患者に，請求項６４，８１，または８５のいずれかに記載
    の方法により同定される，治療的に有効量の前記１またはそれ以上の化合物を含
    む薬学的に許容しうる組成物を，投与することを含み， 前記異常な状態が，関節炎，子宮内膜症，眼新生血管形成，固形腫瘍成長および
    転移，および創傷治癒の間の過度の瘢痕からなる群より選択されることを特徴と
    する方法。
  101. 【請求項１０１】 前記異常な状態が子宮内膜症である，請求項１００記載
    の方法。
  102. 【請求項１０２】 前記疾患が関節炎である，請求項１００記載の方法。
  103. 【請求項１０３】 前記組成物が処方中にさらに１またはそれ以上の薬学的
    に許容しうる賦形剤を含む，請求項１００記載の方法。
  104. 【請求項１０４】 前記処方が，非経口，経口，および局所処方からなる群
    より選択される，請求項１００記載の方法。
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