JP2002502887A

JP2002502887A - オリゴ糖を含むアポトーシス異常の治療用薬剤

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Publication number: JP2002502887A
Application number: JP2000530215A
Authority: JP
Inventors: ジャン・クロード・イヴァン; フローレンス・クルツ; ヴァレリー・デカン; クリストフ・リシャール; ヴェスナ・ティバル; パトリック・アリゴ; ベルナール・クローレック
Original assignee: ラボラトワール・ゴエマー・ソシエテ・アノニム
Priority date: 1998-02-03
Filing date: 1999-02-03
Publication date: 2002-01-29
Also published as: US6750208B1; EP1052996A1; CA2319677A1; DE69918953D1; PT1052996E; DE69918953T2; EP1052996B1; FR2774289B1; WO1999039718A1; ES2226331T3; FR2774289A1; AU2171099A

Abstract

(57)【要約】本発明は、活性成分として、アポトーシス異常の調整に適し、かつ単位の少なくともあるものに対し、硫酸、メチルおよびアセチル基を含む群の少なくとも一つの置換基を任意に含む、有効量の少なくとも一つのオリゴ糖物質を含む薬剤を対象とし、前記物質は、酵素または化学的方法によって、任意に（１→６）−β−分枝を含む（１→３）−β−グルカンを含むポリマー群から抽出されたオリゴ糖、および酵素または化学的方法によって、硫酸ガラクタン、特にカラゲナン、寒天およびポルフィランから抽出されたオリゴ糖、を含む群から選択される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、アポトーシス異常の治療用薬剤を対象とする。

【０００２】「アポトーシス」という用語は、プログラム細胞死または細胞自殺を指す。

【０００３】この死は、一定のプログラムに従った細胞の自動除去に対応する。

【０００４】この死は、まず原形質膜レベルの膨張によって現れ、この膨張は膜の構造的変
化を伴い、次に収縮し、かつ自己の上に崩壊するように見える細胞の体積減少に
よって現れる。

【０００５】核は凝縮し、かつＤＮＡは小断片に断片化する（Ｒａｆｆ，“Ｎａｔｕｒｅ”
，３５６，３９７，１９９２；Ｂｏｒｔｎｅｒｅｔａｌ．，“Ｔｒｅｎｄ
ｓｉｎＣｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．”５，２１，１９９５）。

【０００６】Ｉｎｖｉｖｏでは、アポトーシス細胞は、アポトーシス細胞を食細胞により
貪食し、いかなる炎症過程もなしに除去しようとするマクロファージによって認
識される。

【０００７】Ｉｎｖｉｖｏではまた、アポトーシスは核、特に活性化後のリンパ球の数を
制御するために、生物によって広く利用される。

【０００８】またアポトーシスは、生物の発育過程で、不要な胚組織除去（トカゲの尻尾、
一方または他方の性の生殖器の現れ）および生物の形成（将来の指と他の指の間
の指間水かき部分の除去）において最も重要な役割を果たす。

【０００９】生物内に存在する、ある種の化合物が特にアポトーシス現象を誘発する。この
ようにして、例えば哺乳類では、ＡＰＯ−１またはＣＤ９５によっても示される
Ｆａｓ膜レセプターにＦａｓリガンドが結合することが、特にアポトーシスを誘
発する。このアポトーシスは、リンパ球、特にＴリンパ球の数を制御するために
生物が使用する。

【００１０】前記レセプターおよびリガンドは、生物内でもはや望まれない細胞を特別に除
去することにおいて起こる非常に興味深い生理学システムを表す。

【００１１】Ｔリンパ球の成熟および活性化過程の細胞除去を特に挙げることができる。実
際、Ｆａｓシステム、すなわちＦａｓリガンド／Ｆａｓレセプターは、免疫シス
テムの恒常性において最も重要な役割を果たす。

【００１２】Ｆａｓレセプターは、細胞の表面でレセプターとして作用し、かつＴＮＦ（腫
瘍壊死因子）およびＮＧＦ（神経成長因子）レセプターも含むたんぱく質ファミ
リーの一員である。

【００１３】Ｆａｓレセプターは、多数の細胞中に表れる。Ｆａｓレセプターは、ゴルジ体
のレベルで蓄積されるであろう。

【００１４】Ｆａｓシステムが細胞死を誘発するメカニズムは、不明であるがＩＣＥ様（英
語の「インターロイキン−１ β−変換酵素」）またはカスパーゼ（ｃａｓｐａ
ｓｅｓ）という名称で知られているプロテアーゼの活性化に助けを求めている。

【００１５】Ｆａｓリガンドは、細胞の適正な自殺を誘発するために細胞から分泌され得る
ことに注目できる。しかしこのリガンドが活性化させる細胞の表面にもまた存在
するので、それにより活性化させる細胞は、単純接触により対象となる細胞の自
殺を誘発する。一旦活性化すると、Ｆａｓレセプターは、アポトーシスを開始す
る信号を伝達するために多数の細胞内たんぱく質と相互作用を及ぼす。

【００１６】Ｉｎｖｉｔｒｏでは、アポトーシスを誘発する他の手段が存在する。例えば
ある種のキナーゼ、特にキナーゼＣの活性化を抑制することによる。この場合、
スタウロスポリン（ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ）に頼ることもできる。

【００１７】この生成物はアポトーシスによる細胞死を誘発するのに非常に有効である。

【００１８】それでもスタウロスポリンによって誘発されるシグナル伝達は、Ｆａｓレセプ
ターに作用するシグナル伝達とは相違することに注意すべきである。

【００１９】しかしながら、アポトーシス活性手段が相違するものの、これら二通りの活性
形式によって誘発される死のプログラム実行は、等価値であり、カスパーゼカス
ケードの活性化および細胞のプログラム破壊を促進する化合物（例えばチトクロ
ームＣ）を有利するミトコンドリアの異常を特徴とする。この現象は、エネルギ
ー依存性ではあるが、新規のたんぱく質合成を必要としない。実際、適正な破壊
を確保するために、細胞の中には全てが準備されている。

【００２０】Ｉｎｖｉｖｏでは、アポトーシス現象の調節は、非常に重要である。

【００２１】実際、多数の病理学は、その異常に結び付けられる。

【００２２】例えば、アポトーシスがＦａｓシステムを通じて調整される二つのアポトーシ
ス異常：アポトーシスが不充分である自己免疫疾患およびアポトーシスが過度に
活発なＨＩＶ−１に感染したＴリンパ球ＣＤ４＋破壊、が挙げられる。

【００２３】例えば板硬化症で見つかったニューロンの変質などの他の場合では、アポトー
シスはまだ不明である方法によって活性化する。

【００２４】アポトーシスが不充分である他の病理学も存在する。この点に関して、アポト
ーシスがＦａｓシステムに依存しているように見えるであろう癌細胞の蓄積を挙
げることができる（“Ｇｒｅｅｎ”，Ｓｃｉｅｎｃｅ，ｖｏｌ．２７８，１２４
６，１９９７）。

【００２５】出願人は、上記に述べた事項を確認した上で、自己免疫疾患および癌の病理学
を含む群の病理学の場合の活性化の観点からも、ＡＩＤＳを含む群の病理学の場
合の抑制の観点からも、アポトーシス異常の調整が可能な薬剤を使用した時から
、これらの疾患と闘うことが可能になることを発見する功績を挙げた。

【００２６】また出願人はそれに劣らぬ、その単位の少なくともあるものおいて、硫酸、メ
チルおよびアセチル基を含む群の少なくとも一つの置換基を任意に含む、ある種
のオリゴ糖および単糖類物質は、アポトーシス異常を調整するのに適しているこ
とを発見する功績を挙げた。

【００２７】本発明は、従って活性成分として、アポトーシス異常の調整に適し、かつ単位
モチーフの少なくともあるものに対し、硫酸、メチルおよびアセチル基を含む群
の少なくとも一つの置換基を任意に含む、オリゴ糖物質の少なくとも一つの有効
量を含むことを特徴とする薬剤を対象とし、前記物質は、 − 酵素または化学的方法によって、任意に（１→６）−β−分枝を含む（１→
３）−β−グルカンを含むポリマー群から抽出されたオリゴ糖、 − 酵素または化学的方法によって、硫酸ガラクタン、特にカラゲナン、寒天お
よびポルフィラン（ｐｏｒｐｈｙｒａｎｅ）から得られたオリゴ糖、を含む群から選択される。

【００２８】好ましい実施様態によれば、本発明の薬剤は、アポトーシス異常の調整に適し
、下記式に対応するオリゴ糖の少なくとも一つの有効量を活性成分として含む。

【化３】式中、ｎは１から５０、好適には５から１０である整数を表し、また式中分枝数
は、反復単位によって０から３に変化する。

【００２９】他の好ましい実施様態によれば、本発明の薬剤は、活性成分として、有効量の
少なくとも一つの、アポトーシス異常の調整に適し、下記式に対応する反復二糖
（ｄｉｓａｃｃｈａｒｉｄｅｄｅｒｅｐｅｔｉｔｉｏｎ）を含む。

【化４】式中、ｎは１から５０、好適には１から２０である整数を表し、式（ＩＩ）の反
復二糖の少なくともあるものは、一つ以上の硫酸基を含み得る。

【００３０】他の好ましい実施様態によれば、本発明の薬剤は、活性成分として、有効量の
、少なくとも部分的にアポトーシスを抑制するのに適し、かつイオタ−カラゲネ
ートナトリウムから加水分解によって得られる生成物を含み、この生成物は、Ｉ ₉ によって示されるオリゴ−イオタ−カラゲナンの混合物からなり、[チルマンス
（Ｔｉｌｌｍａｎｓ）およびフィリッピ（Ｐｈｉｌｉｐｐｉ）によって測定され
た）全単糖類の濃度が６２％であり、またザブラキス（Ｚａｂｌａｋｉｓ）およ
びペレツ（Ｐｅｒｅｚ）がポリアクリルアミド電気泳動で概算した寸法による分
布概要は、下記の通りである。イオタ−ネオカラテトラオス（ＤＰ２）８〜１２％イオタ−ネオカラヘキサオス（ＤＰ３）２３〜２７％イオタ−ネオカラオクタオス（ＤＰ４）１８〜２２％イオタ−ネオカラデカオス（ＤＰ５）１３〜１７％イオタ−ネオカラドデカオス（ＤＰ６）８〜１２％オリゴ−イオタカラゲナン（ＤＰ７）３〜７％８から１５の反復二糖からなるオリゴ− イオタカラゲナン（ＤＰ８〜１５）１３〜１７％

【００３１】上記方法は、ＺａｂｌａｋｉｓＥ．およびＰｅｒｅｚＪ．のものに関して
は、“Ｂｏｔａｎｉｃａｍａｒｉｎａ”，３３，２７３−２７６（１９９０）
に、ＴｉｌｌｍａｎｓＪ．およびＰｈｉｌｉｐｐｉＫ．のものに関しては、
“Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｚ．”，２１５，３０‐６０（１９３０）に記載されている
。

【００３２】Ｉ₉を製造するためには、以下の処理ができる。

【００３３】温度４５〜５０℃で部分的に精製したイオタカラゲナーゼ酵素の存在下でイオ
タカラゲナンを培養し、次に１００００Ｄａの膜で加水分解で生成物を限外ろ過
する。このようにして、Ｉ₉を得る。

【００３４】より特別には、イオタカラゲナンポリマーは、大腸菌株内で過度に圧力を加え
られた組み換えイオタカラゲナーゼによって加水分解される。

【００３５】酵素の製造は、（培養１リットルに対応する）細菌底部の溶解によって１０ｍ
Ｍトリス緩衝液ｐＨ７．５、１００ｍＭＮａＣｌ、５ｍＭＣａＣｌ₂の５０ｍｌの中で、最終的に５００Ｕ／ｍｌになるよう、行われる。

【００３６】実際的な観点からは、濃度が５ｇ／ｌとなるようにイオタカラゲナン基質１０
０ｇを熱した（８０℃）蒸留水２０ｌで溶解し、炭酸アンモニウムでｐＨを７．
５に調節する。

【００３７】加水分解を実行するために酵素は、５０Ｕ／ｇポリマーで加えられる。連続の
限外ろ過は、３０分後に開始される。接線限外ろ過のことである。

【００３８】この接線限外ろ過に関して、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社の１００００Ｄａ０．４
６ｍ²ＰＴＧＣのカセットを含むＰｅｌｌｉｃｏｎマークの装置を使用することができる。この装置は入り口では２バールに、出口では０．５バールに調節され
ている。

【００３９】ろ過液の出口は、ろ過の流量を１時間あたり１リットルに保つために部分的に
閉鎖されている。

【００４０】反応室の特質は、溶液２０ｌが使い尽くされるまで酵素を基質に供給すること
および２リットルの一定の体積を維持できるように選択されている。

【００４１】回転蒸留によって１リットルにまで濃縮される１８ｌの限外ろ過液を得て、次
に濃縮液は、凍結乾燥される。このようにして得られた凍結乾燥物は、Ｉ₉生成物を含んでいる。

【００４２】このようにして得られたフラクションＩ₉のオリゴカラゲナンは、バイオゲルカラムＰ６、次にセファデックスカラムＧ１０で低圧クロマトグラフィーによる
補助分別を受ける。

【００４３】このようにして上記フラクションを得る。

【００４４】他の好ましい実施様態によれば、本発明の薬剤は、活性成分として、有効量の
、少なくとも部分的にアポトーシスを抑制するのに適し、かつ生成物Ｉ₉のフラクションＤＰ７からなる生成物を含む。

【００４５】他の好ましい実施様態によれば、本発明の薬剤は、活性成分として、有効量の
、アポトーシス異常を活性化するのに適し、ラミナリア・デジタータ（Ｌａｍｉ
ｎａｒｉａｄｉｇｉｔａｔａ）と呼ばれる褐色の海藻から酸性水抽出によって
得られた生成物を含み、この生成物は、Ｌ₁₁と示されるオリゴ（１→３）−β−
グルカンの混合物からなり、かつ糖質単位１から５０、好適には２０から３０を
含み、当該の生成物は図１に示されるＲＭＮスペクトルを呈する。

【００４６】生成物Ｌ₁₁は、ラミナリア・デジタータが代表である褐色の海藻一般から水抽
出によっても得られることに注目すべきである。

【００４７】生成物Ｌ₁₁の製造は、以下の通り実行し得る。

【００４８】新鮮なまたは乾燥した形の８月に収穫したラミナリア・デジタータ型の新鮮な
海藻３００ｇに０．３％の硫酸１ｌを徐々に加える。

【００４９】この作業は、温度約７０℃の湯煎鍋で２時間３０分攪拌しながら行う。

【００５０】この作業は、２回繰り返す。

【００５１】得られた抽出物は、孔隙率１．２μｍのろ過器でろ過することによって精製す
る。

【００５２】このろ過で生じた液体は、孔隙率５００００ダルトンの膜で接線限外ろ過を受
ける。

【００５３】限外ろ過は、圧力１バールを保ち、行われる。

【００５４】このようにして、体積が約０．８リットルを呈する、ｐＨを５．５にした限外
ろ過物が得られる。この限外ろ過物は、孔隙率が５００ダルトンに等しいセルロ
ースエステル膜で透析を受ける。

【００５５】ＲＯＴＯＶＡＰＯＲ型の装置を使用して、８０℃で蒸発することによって体積
１００ｍｌに濃縮し、次に凍結乾燥した透析物を得る。

【００５６】生成物Ｌ₁₁を構成するクリーム色の粉７ｇが得られる。

【００５７】電流測定器に連結され、かつＤＩＯＮＥＸ社が販売しているイオン交換樹脂を
使用したイオンクロマトグラフィーによる分析は、上記粉を構成するオリゴ（１
→３）−β−グルカンは実際に糖質単位１から５０、好適には２０から３０であ
ることを示す。

【００５８】クロマトグラフィーの条件（ＨＰＬＣ、すなわち“高圧での液体クロマトグラ
フィー”、と呼ばれる方法）は、下記の通りである。カラムＣａｒｂｏｐａｃＰＡ１流量１ｍｌ／ｍｉｎ検出電流測定 − 金の電極注入５０μｌ溶離傾度ソーダ５０ｍＭ／酢酸ナトリウム５００ｍＭ − 脱塩水分析時間１５分保留時間＝９〜１０分図１６に示された、生成物Ｌ₁₁を識別する曲線が得られた。

【００５９】Ｄ₂０中の溶液８０ｍｇ／ｍｌから行われ、図１に示した生成物Ｌ₁₁の¹³ＣのＲＭＮスペクトル検査では、文献（Ｗｉｌｌｉａｍｓｅｔａｌ．，１９９２
“サッカロミセス−セレビジエ（Saccharomyces cerevisiae）から抽出した水溶
性、硫酸化（１→３）−β−Ｄ−グルカン生物反応改質剤の発展”、Ｃａｒｂｏ
ｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．２３５：２４７：２５を参照）の値に比較して、異なる
炭素の共鳴が識別できた（下記表Ａ中にまとめる）β−Ｄ−（１→３）‐グルカ
ンの骨格構造を示した。

【００６０】

【表１】

【００６１】以上に説明した本発明の薬剤は、保持されている投与方式および薬量学に対応
する従来の処方の補助剤を含む。

【００６２】本発明は、上述の活性成分の少なくとも一つを薬学的組成物に含ませることを
特徴とするアポトーシス異常の治療用薬剤の製造方法も対象とする。

【００６３】好適な実施態様では、前記薬学的組成物は、静脈内経路の投与に適している。

【００６４】本発明は、アポトーシス異常の治療用薬剤製造のために、任意に（１→６）−
β−分枝を含む（１→３）−β−グルカンおよび、硫酸ガラクタン、特にカラゲ
ナン、寒天およびポルフィランから酵素または化学的方法によって抽出されたオ
リゴ糖を含む群のポリマーの酵素または化学的方法によって抽出されたオリゴ糖
を含む群の糖類物質の使用も目的としている。

【００６５】より特別には、本発明は、アポトーシス異常の治療用薬剤製造のために、式（
Ｉ）のオリゴ糖および式（ＩＩ）のオリゴ糖の使用を目的としている。

【００６６】また更に特別には、本発明は、アポトーシス異常の治療用薬剤製造のために、
Ｉ₉およびＬ₁₁で示される生成物、並びにＩ₉のフラクションＤＰ２およびＤＰ７
の使用を目的としている。

【００６７】本発明は、以下に続く記載の補足および限定的では全くないが好適な実施態様
に対応する実施例によって更に良く理解されるであろう。

【００６８】以下に記載される実験では、細胞培養に関して作業し、当該細胞培養では、Ｆ
ａｓシステムまたはスタウロスポリンに頼ってアポトーシス過程を開始し、次に
本発明の薬剤の活性成分を構成する生成物によって得られる調整効果を研究した
。

【００６９】これらの実験の枠内では、一方で、アポトーシス調整を探求する効果を得るた
めに適量の活性成分を測定し、他方で、探求する調整効果を得るために、活性成
分またはそれを含む薬剤を投与するに適した時期を測定した。

【００７０】（実施例１）Ｆａｓヒトレセプターを構成的に表現するために遺伝学的に変更した齧歯類（
ｍｕｒｉｎｅ）の繊維芽細胞の培養に関して作業した。検査された活性成分はＩ ₉ によって示される生成物である。

【００７１】予めなされた実験では、齧歯類の繊維芽細胞がＦａｓレセプターを認識し、か
つ以後ＦａｓＡｂと示されるＦａｓリガンドか、あるいは主動筋抗体の存在下に
おかれた場合、齧歯類の繊維芽細胞はアポトーシスによって破壊されていること
が示された。

【００７２】他の予めなされた実験では、生成物Ｉ₉は、細胞増加を変化させないこと、使用した濃度では齧歯類の繊維芽細胞に対し有毒でないこと、かつ従って問題を生
じることなく細胞培地に加えられることが測定された。

【００７３】齧歯類繊維芽細胞の培養に使用された培地は“Ｄｕｌｂｅｃｃｏ‘ｓＭｏｄ
ｉｆｉｅｄＥａｇｌｅＭｅｄｉｕｍ”という名称でＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ社が販売しているものである。この培地は、Ｄｕｌｂｅｃｃｏｅ
ｔａｌ．による“Ｖｉｒｏｌｏｇｙ”８，３９６（１９５９）に記載されてい
る。

【００７４】この培地に５体積％の牛胎児血清を加えた。

【００７５】次に、この培地は、汚染の可能性を除くために充分な量の抗生物質の存在下、
齧歯類の繊維芽細胞をもって接種された。培地中の繊維芽細胞の濃度は、培地１
ｍｌにつき細胞１０⁵である。

【００７６】培養は、温度が３７℃に保たれた培養器内部で行われた。培養器を満たした空
気にはＣＯ₂５％が含まれていた。

【００７７】２４時間培養した後、Ｆａｓリガンドか、あるいはＦａｓＡｂを直接培地に加
えた。

【００７８】ＦａｓＡｂの加えられた量は、培地１ｍｌにつき５０μｇであった。

【００７９】この条件で、約２４時間の培養の後、約７０％の培養細胞がアポトーシスによ
り破壊された。

【００８０】この破壊は、生き残った細胞に紫水晶の色が着いたことによって明らかにされ
た。

【００８１】次に、活性成分の働きを明らかにするために何回かテストを行った。

【００８２】これらのテストでは、ＦａｓＡｂを加えることに関して、活性成分の最適な濃
度および活性成分導入の最も都合の良い時期を測定できるように、一方では、活
性成分が培地に使用される濃度を、また他方では、活性成分がこの培地に加えら
れる時期を変化させた。

【００８３】活性成分の濃度を０．００１から２ｍｇ／ｍｌに変化させた。

【００８４】まず活性成分をＦａｓＡｂより前に、次に同時にまた最後には後で加えて得ら
れた効果を相次いで研究した。

【００８５】最初のテストでは、活性成分はＦａｓＡｂの２４時間前に加えた。

【００８６】このテストの枠内で、培地１ｍｌにつき０、次に５、次に１０、次に５０、次
に１００および最後に５００ｎｇのＦａｓＡｂを順に使用し、かつ各場合で、培
地１ｍｌにつき活性成分の濃度が順に０．２５、次に０．５および最後に１ｍｇ
に等しくして得られた効果を書き留め、また活性成分がない場合、すなわち濃度
０％で得られた効果も書き留めた。

【００８７】２４時間の培養後、生き残りの分析を行った。

【００８８】分析の結果は図２のヒストグラムで表した。

【００８９】このヒストグラムの横軸にはｎｇ／ｍｌで表現したＦａｓＡｂの培地濃度が示
され、縦軸には％で表現した生存率が示される。

【００９０】縦軸に平行な４本の長方形で、各ＦａｓＡｂの濃度に対し、活性成分の４通り
の濃度、すなわち０ｍｇ／ｍｌ、０．２５ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、およ
び１ｍｇ／ｍｌ、のそれぞれにつき生存率を表し、標準偏差は、対応する長方形
の上にある縦軸と平行な線分で毎回表している。

【００９１】活性成分０ｍｇ／ｍｌに対応する長方形は、毎回一番左にある長方形であり、
活性成分０．２５ｍｇ／ｍｌに対応する長方形はその右にあり、０．５ｍｇ／ｍ
ｌに対応する長方形は、０．２５ｍｇ／ｍｌの右にあり、以下同様である。

【００９２】４本の長方形は、固有の線影、点線、ぼかしによって毎回識別される。

【００９３】このようにして図２のヒストグラムに集められた結果を検討すると、活性成分
がない場合、ＦａｓＡｂの濃度の増加と共に、生存率が減少すること、および活
性成分を加えることによって生存率は著しく改善されることを示している。

【００９４】２回目のテストでは、培地にＦａｓＡｂおよび活性成分を同時に加えた。

【００９５】この２回目のテストでは、１回目のテストと同一濃度のＦａｓＡｂおよび活性
成分を相次いで使用して得られた効果を書き留めた。

【００９６】２４時間培養した後、生き残りの分析をした。

【００９７】記録された結果は、図２のヒストグラムに関して説明した原則と同一の原則に
従って構成された図３のヒストグラムに集められている。

【００９８】これらの結果を検討すると、１回目のテストで書き留めた生存率と類似した様
子で生存率が変化することを示している。

【００９９】３回目の一連のテストでは、培養１ｍｌにつきＦａｓＡｂの濃度を０から５０
０ｎｇに同様に変化させて、活性成分をＦａｓＡｂの後に、すなわち相次いで、最初に、ＦａｓＡｂの１時間後、次に、ＦａｓＡｂの３時間後、および最後に、ＦａｓＡｂの６時間後、に添加する。

【０１００】活性成分をＦａｓＡｂの１時間後に加えた場合、 − 図４のヒストグラムに、Ｉ₉の濃度０ｍｇ／ｍｌ、０．００５ｍｇ／ｍｌ、０．０１ｍｇ／ｍｌおよび最後に０．０５ｍｇ／ｍｌに関して書き留めた結果
を集め、 − 図５のヒストグラムに、Ｉ₉の濃度０ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌ、０．２５ｍｇ／ｍｌおよび最後に０．５ｍｇ／ｍｌに関して書き留めた結果を集め
、かつ − 図６のヒストグラムに、Ｉ₉の濃度０ｍｇ／ｍｌ、０．２５ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌおよび最後に１ｍｇ／ｍｌに関して書き留めた結果を集めた。

【０１０１】図４から６のヒストグラムは、図２のヒストグラムに関して説明した原則と同
一の原則に従って構成されている。

【０１０２】活性成分の添加がＦａｓＡｂ添加の３時間後に行われた場合、図７のヒストグ
ラムに、Ｉ₉の濃度０ｍｇ／ｍｌ、０．２５ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌおよび１ｍｇ／ｍｌに関して書き留めた結果を集めた。

【０１０３】活性成分の添加がＦａｓＡｂ添加の６時間後に行われた場合、図８のヒストグ
ラムに、Ｉ₉の濃度０ｍｇ／ｍｌ、０．２５ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌおよび１ｍｇ／ｍｌに関して書き留めた結果を集めた。

【０１０４】図７および８のヒストグラムは、図２のヒストグラムに関して説明した原則と
同一の原則に従って構成されている。

【０１０５】図４から８のヒストグラムに集められた結果全体を検討すると、ＦａｓＡｂ添
加後の活性成分添加の場合、生存率は、常に増加することが示される。しかしな
がらこの効果は、ＦａｓＡｂと活性成分の連続した添加の間に経った時間が増加
するときは、減少する傾向にある。また、この効果は活性成分の濃度が０．２５
ｍｇ／ｍｌ未満であるときに、活性成分の濃度に影響されやすい。０．２５ｍｇ
／ｍｌを超える濃度に関しては、著しい改善は得られなかった。

【０１０６】ここまで記載した実験では、アポトーシスはＦａｓＡｂシステムによって誘発
された。

【０１０７】スタウロスポリンによって構成されるキナーゼ抑制剤によってアポトーシスを
誘発して他の実験を行った。

【０１０８】０．５から５μＭに変化した分量で、大部分の細胞の場合、スタウロスポリン
がアポトーシス死を誘発することが想起される。

【０１０９】この実験では、スタウロスポリンおよびＩ₉の添加は同時であった。

【０１１０】Ｉ₉の分量は２通り、すなわち０．２ｍｇ／ｍｌおよび０．５ｍｇ／ｍｌが使用された。

【０１１１】スタウロスポリンは、０．５μＭ、次に１μＭで、および最後に１．５μＭの
割合で使用される。

【０１１２】処理された細胞の生存率は、毎回１８時間の培養後に測定された。

【０１１３】記録された結果は、スタウロスポリンの濃度に応じ、かつ上記に特定したＩ₉ の分量について、図９に示されかつ％で表現された生存率を示すヒストグラムに
現れている。

【０１１４】証拠となる実験が、スタウロスポリンの濃度０μＭで行われた。

【０１１５】ヒストグラムに現れている結果を検討すると、Ｉ₉の使用は、スタウロスポリンに誘発されるアポトーシスを緩和することが示されている。

【０１１６】ここまで記載した２回の実験の結果、本発明の薬剤は、アポトーシスが幾つか
の作用物から誘発されるとき、アポトーシスの意義深い緩和を得ることが可能に
なっている。

【０１１７】（実施例２）この実施例では、研究した細胞培養は、Ｔリンパ球（Ｊｕｒｋａｔ型）からな
る不死化したヒト細胞の培養である。

【０１１８】使用された培地は“ＲＰＭＩ１６４０Ｍｅｄｉｕｍ”という名称でＬｉｆ
ｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社が販売しているものである。この培地は、Ｍｏ
ｏｒｅｅｔａｌ．による出版物“Ａ．Ｍ．Ａ．”１９９，５１９（１９６７
）に記載されている。

【０１１９】この培地に１０体積％の牛胎児血清および汚染の可能性を除くために抗生物質
を加えた。

【０１２０】この培地を、培地１ｍｌにつきＴリンパ球１０⁶の量で接種した。

【０１２１】培養温度は３７℃であり、培養器を満たした空気にはＣＯ₂５％が含まれている。

【０１２２】２４時間培養した後、ＦａｓＡｂおよび活性成分を同時に加えた。

【０１２３】加えられるＦａｓＡｂ（ＵｐｓｔａｔｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社が製
造し、Ｅｕｒｏｍｅｄｅｘ社がカタログ０５‐２０１号で販売しているものを指
す）の量は、培地１ｍｌにつき５０ｎｇである。

【０１２４】活性成分は、生成物Ｉ₉および生成物Ｌ₁₁から順次構成される。

【０１２５】各場合で使用される量は、０．５ｍｇ／ｍｌである。

【０１２６】生き残りの分析は、実験開始後１８時間で行われた。

【０１２７】この生き残りの分析は、流動細胞計測法によって機能する型の装置に細胞１０ ⁴ を含む培養液を通すことからなり、この場合、ＢｅｃｋｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ社が“ＦＡＣＳｃａｎｃｙｔｏｍｅｔｅｒ”という名称で販売したも
のである。

【０１２８】この装置は、細胞の表面におけるホスファチジルセリンの存在を検出するゾン
デを使用する。この生成物の存在することは、当該細胞がアポトーシスであるこ
とを示す。

【０１２９】この分析の結果は図１０から１３に表し、各図には、異なる細胞の数を表象す
るために輪郭を定めた３個の多角形、それぞれＡ、ＢおよびＣを表示する。多角
形Ａは、生細胞の集団を、多角形Ｂは、アポトーシス細胞の集団を、また多角形
Ｃは、死細胞の集団を囲む。

【０１３０】下記の表２では、以下に注釈を施す図１０から１３の各場合の生細胞、アポト
ーシス細胞の割合および死細胞の割合を集めた。

【０１３１】

【表２】

【０１３２】図１０は、ＦａｓＡｂも活性成分も添加しない培地試料に関して行われた生き
残りの分析を表す。これは証拠である。この場合、多角形Ａ内にある生きた細胞
しか実質的にないのが見られる（表２の１行目参照）。

【０１３３】図１１は、ＦａｓＡｂのみ添加した培地試料に関して行われた生き残りの分析
を表す。この場合、多角形Ｂがアポトーシス細胞２１％を含んでいることが見ら
れる（表２の２行目参照）。

【０１３４】図１２は、ＦａｓＡｂおよび活性成分Ｉ₉（０．５ｍｇ／ｍｌ）が同時に加えられた培地試料に関して行われた生き残りの分析を表す。この場合、多角形Ｂが
事実上アポトーシス細胞（２％）を含んでいないことが見られ、多角形Ａは多く
の生細胞を含み、また多角形Ｃは、死細胞の幾らかの集中（６％）を含んでいる
（表２の３行目参照）。

【０１３５】図１３は、ＦａｓＡｂおよび活性成分Ｌ₁₁（０．５ｍｇ／ｍｌ）が同時に加え
られた培地試料に関して行われた生き残りの分析を表す。この場合、多角形Ｂが
大量のアポトーシス細胞（１３％）を含んでいること、および多角形Ｃは無視で
きない量の死細胞（９％）を含んでいることが見られる（表２の４行目参照）。

【０１３６】従って、図１０から１３の検査および異なる多角形に存在する細胞の割合の分
析から導き出し得る結論は、活性成分Ｉ₉が、この実験の範囲で、ＦａｓＡｂアポトーシスを抑制するということである（アポトーシス細胞が２１％から２％に
なった）。しかしながら、死細胞の数の僅かな増加が認められた（この数は、１
％から６％になった）。生細胞の数を考慮した場合、１３％の保護が観察された
（７７％から９０％になった）。

【０１３７】活性成分Ｌ₁₁に関して、ＦａｓＡｂのみによって誘発された効果と比較すると
死細胞の数の増加が観察される（１％から９％になった）。成分Ｌ₁₁は、生細胞
の数に関しては重要な効果を誘発しないものの、細胞死の相乗作用物として作用
するのであろう。

【０１３８】Ｌ₁₁の活性を最適化するために、下記の実験を行った。

【０１３９】上記と同一に培養して、＞１回目の実験では、（上記に特定したＥｕｒｏｍｅｄｅｘが出している）
ＦａｓＡｂ５０ｎｇ／ｍｌのみを、＞２回目の実験では、生成物Ｌ₁₁０．５ｍｇ／ｍｌと同時に、同一量の同一
のＦａｓＡｂを、および＞３回目の実験では、生成物Ｌ₁₁０．５ｍｇ／ｍｌを、次に２４時間後に同
一のＦａｓＡｂ５０ｎｇ／ｍｌを、投与した。

【０１４０】１８時間の培養の後に得られた結果を、以下にＦａｓＡｂもＬ₁₁も加えられな
かった対照の培養で観察されたものと比較し、生細胞の数を考慮すると：・ＦａｓＡｂのみを加えた場合：生細胞の数は、３．６％減少し、・ＦａｓＡｂおよびＬ₁₁を同時に加えた場合、生細胞の数は６．４％減少し、お
よび・ＦａｓＡｂおよびＬ₁₁を別々に加えた場合、生細胞の数は、１３．７％減少す
る。

【０１４１】Ｌ₁₁が、ＦａｓＡｂの前に投与されたとき、Ｌ₁₁ははるかに活発であるという
結果になる。

【０１４２】上記に特定したＦａｓＡｂを他から出されているＦａｓＡｂ、すなわちＡｌｅ
ｘｉｓＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（米国、サンディエゴ）が製造し、ＣｏｇｅｒＳＡ（パリ）が販売しているものと替えても同様の結果が得られることが示さ
れる。

【０１４３】前述の実験結果の検討からは、生成物Ｌ₁₁を主成分とした薬剤は、アポトーシ
スを強化することができるように見える。従って自己免疫型病または癌の治療に
使用することを考慮できる。

【０１４４】この他の実験では、一方では、弱度のＦａｓアポトーシスが誘発されたリンパ
球培養で、他方では、強度のＦａｓアポトーシスが誘発されたリンパ球培養で、
生成物Ｉ₉を投与したことによって生じた効果を確認することができた。

【０１４５】弱度のＦａｓアポトーシスは、Ｅｕｒｏｍｅｄｅｘの出しているＦａｓＡｂを
使用して誘発され得る。この様なアポトーシスは、３から１０％であり得る。

【０１４６】強度のＦａｓアポトーシスは、ＡｌｅｘｉｓＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎの出し
ているＦａｓＡｂを使用して誘発され得る。この様なアポトーシスは、２０から
５０％であり得る。

【０１４７】０．２ｍｇ／ｍｌの生成物Ｉ₉を使用して行った実験は、記録された効果、すなわち、ＦａｓＡｂ（濃度５０から２００ｎｇ／ｍｌ）のみによって誘発される
アポトーシスの強さ（％で表現した）に応じたアポトーシスの増進かあるいは抑
制（％）を示す図１４に表されている。

【０１４８】図１４は、・ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ点によって横軸に図示した３から１０％
の弱度のアポトーシスの場合、Ｉ₉の投与は、ＦａｓＡｂのみによって誘発されるアポトーシスに比較してアポトーシスの強化２０から４０％を惹起する、およ
び・ｌ、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ点によって横軸に図示した２０から５０％の強度のアポト
ーシスの場合、同一量のＩ₉の投与はＦａｓＡｂのみによって生じるアポトーシスに比較してアポトーシスの抑制５から２０％を惹起する、ことを示している。

【０１４９】一定の患者はリンパ球で誘発されたアポトーシスを測定することが可能なこと
が判っているので、前記アポトーシスの確認された強度に応じて、Ｉ₉を主成分とする薬剤をこの患者に投与することによって、強化する方向または抑制する方
向で、アポトーシスを調整することができる。

【０１５０】この薬剤は、従って、患者が弱いアポトーシスに対応する癌または自己免疫疾
患を罹っている場合、アポトーシスを増強する方向に、また患者が強いアポトー
シスに対応する免疫不全症候群の疾患を罹っている場合、抑制する方向にアポト
ーシスを修正することが可能になる。

【０１５１】このため、前述の実験を受ける培養中に存在するＴリンパ球Ｊｕｒｋａｔ型は
、腫瘍抑制遺伝子ｐ５３またはｐ５３たんぱく質（ＢｉｎｇＡｎｅｔａｌ
．，１９９８，“ＣｅｌｌＤｅａｔｈａｎｄＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉ
ｏｎ”５，１０６２−１０７５）が変異しており、そのため不活性である細胞で
あることが明確に述べられる。

【０１５２】本発明に従って使用された生成物，特にＩ₉およびＬ₁₁によって観察された効果は、従って、おそらくｐ５３と関連がない。換言すれば，生成物Ｉ₉およびＬ₁ ₁ は、単に存在することによって、かつ活性化ｐ５３遺伝子の存在または不在とは無関係に、アポトーシスの増進または抑制を強化することが可能である。

【０１５３】しかるにヒトの癌の大部分では（Ｈｏｌｌｓｔｅｉｎｅｔａｌ．，１９９
４，“Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄＲｅｓ．”，２２，３５５１参照）、ｐ５３たん
ぱく質は、変異しており、従って不活性である。本発明の生成物の一つ、特にＩ ₉ およびＬ₁₁を主成分とする薬剤の使用は、ｐ５３たんぱく質の機能異常を直し、癌および自己免疫疾患を治療することを可能にする。

【０１５４】従って本発明は、当該疾患を、患者の変異した細胞の染色体中に正常のｐ５３
遺伝子を再導入することを特に目的とする原則に基づく遺伝子治療と根本的に異
なり、より簡易な方法によって治療することを可能にする。

【０１５５】大部分の癌細胞は、ＦａｓＡｂアポトーシスに対する感受性を失っており、ま
た現在使用されている大部分の抗癌剤は、それ自体がＦａｓＡｂシステムに対し
て積極的に作用するｐ５３遺伝子を活性化させて作用することが知られている。
しかしながら、これらのシステムは、ｐ５３が変異している場合は、もはや機能
しない（Ｍｕｌｌｅｒｅｔａｌ．１９９８，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８，
２０３３−２０４３）。

【０１５６】最近の観察では，ＦａｓＡｂシステムは、免疫系により、または抗癌剤の活性
により、癌細胞を破壊することができ；それにより、本発明に従って使用された
生成物、特にＩ₉およびＬ₁₁は、ｐ５３と無関係に前記癌細胞のアポトーシスを調整するという事実は、とても重要であり、新しい世代の薬剤、特に抗癌剤の開
発が可能となる。

【０１５７】（実施例３）生成物Ｉ₉は、上述の通り、オリゴ−イオタ−カラゲナンの混合物から組成される。

【０１５８】この混合物の様々な成分、特にフラクションＤＰ２、ＤＰ３、ＤＰ４、ＤＰ５
およびＤＰ７によって誘発される効果を検査した。

【０１５９】同様にＩ₉の原料となるポリマーおよびＫＩＫ（カッパ−イオタ−カッパ型の六糖類）という名称の生成物も検査した。

【０１６０】この実験に関して、一方で前記Ｉ₉のフラクションのそれぞれを０．２ｍｇ／ｍｌおよび、他方でＥｕｒｏｍｅｄｅｘの出しているＦａｓＡｂ１００ｎｇ／ｍ
ｌを同時に導入して、実施例１で示した通りに実行した。

【０１６１】２４時間の培養の後、下記に要約する確認を行った。

【０１６２】フラクションＤＰ２、ＤＰ３、ＤＰ４およびＤＰ５は、不活性であり、Ｅｕｒ
ｏｍｅｄｅｘが出している、それ自体が１８時間の培養の後に６％の細胞死を誘
発する、ＦａｓＡｂの少量（１００ｎｇ／ｍｌ）によって誘発されるアポトーシ
スを増進しない。

【０１６３】これに反してフラクションＤＰ７（５０％）に対して、および生成物Ｉ₉（７０％）によって非常に強い増進効果が得られ、このことは、混合物Ｉ₉の活性組成物の一つが、フラクションＤＰ７からなり得ることを示している。さらに、生
成物ＫＩＫは、活性がない。

【０１６４】最後に、イオターゼ酵素（ｅｎｚｙｍｅｉｏｔａｓｅ）による断片化以前に
Ｉ₉を製造する原料を構成するポリマーも、活性であり、弱度のＦａｓアポトーシスを増進する。これに反してイオターゼ酵素自体は、５０単位の割合で使用さ
れるが、細胞と培養されるときは、活性がない。

【０１６５】結果として内在するアポトーシス活性がない活性成分Ｉ₉は、弱度のＦａｓＡｂアポトーシスの場合非常に強い増進を誘発する。

【０１６６】（実施例４）図１４に表した結果を確認するさらなる実験が行われた。

【０１６７】Ｆａｓによって誘発されるアポトーシス現象の場合、第一の活性化カスパーゼ
カスケードカスパーゼは、カスパーゼ８である。

【０１６８】ＦａｓＡｂのみ、およびＩ₉と同時にＦａｓＡｂで処理した、または処理しないＪｕｒｋａｔ細胞の溶解後に、たんぱく質分解酵素であるこのカスパーゼ８の
活性処置を行った。

【０１６９】このために、・ＦａｓＡｂおよびＩ₉不在下で、Ｊｕｒｋａｔ細胞培養の第一フラクション中のカスパーゼ８の活性；この培養中、生細胞の割合は９３％である；・Ｅｕｒｏｍｅｄｅｘが出しているＦａｓＡｂ（上述の通り、１３％の弱いアポ
トーシスを誘発する）５００ｎｇ／ｍｌで培養した１８時間後の同一の培養の第
二フラクション中のカスパーゼ８の活性；この培養中生細胞の割合は８０％であ
る；・Ｅｕｒｏｍｅｄｅｘが出しているＦａｓＡｂ５００ｎｇ／ｍｌおよびＩ₉０．２ｍｇ／ｍｌで培養した１８時間後の同一の培養の第三フラクション中のカスパ
ーゼ８の活性；この培養中生細胞の割合は、５０％である；・Ａｌｅｘｉｓが出しているＦａｓＡｂ（上述の通り、４０％の強いアポトーシ
スを誘発する）２５ｎｇ／ｍｌで培養した１８時間後の同一の培養の第四フラク
ション中のカスパーゼ８の活性；この培養中生細胞の割合は５３％である；Ａｌｅｘｉｓが出しているＦａｓＡｂ２５ｎｇ／ｍｌおよびＩ₉０．２ｍｇ／ｍｌで培養した１８時間後の同一の培養の第五フラクション中のカスパーゼ８の活
性、この培養中生細胞の割合は、５９％である、を測定した。

【０１７０】カスパーゼの活性の測定は、毎回Ｏｚｙｍｅ社が“ＡｐｏＡｌｅｒｔＦｌ
ｉｃｅＦｌｕｏｒ”Ｎｏ．Ｋ２０２８−２という名称で販売しているキットを
使用して行った。

【０１７１】これらの測定の結果は、図１５のヒストグラムに集められている。

【０１７２】このヒストグラムを検査すると、＞カスパーゼ８の活性は、ＥｕｒｏｍｅｄｅｘＦａｓＡｂのみによって僅
かに増進され（相関係数ｆａｃｔｅｕｒｖｉｃｉｎｉｔｙ１．３７）、Ｉ₉との同時投与は、強い増進を誘発する（相関係数３．９３）、＞カスパーゼ８の活性は、ＡｌｅｘｉｓＦａｓＡｂのみによって強度に増
進され（相関係数４．９６）、Ｉ₉がＡｌｅｘｉｓＦａｓＡｂと同時に導入されるときは、この強い増進は緩和される（相関係数４．０５）、ことが示される。

【０１７３】従って、アポトーシスとカスパーゼ８の活性の間には明らかな相関関係が存在
する。

【０１７４】生成物Ｉ₉は、従ってカスパーゼ８の活性を調整できる生成物を表す。

【０１７５】この酵素がＦａｓによって誘発されたアポトーシスの生化学的経路にとって大
変重要であること（Ｊｕｏｅｔａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．８，１００１
−１００８，１９９８）を示すことによって、カスパーゼなどの標的酵素に対す
るオリゴ糖を主成分とする新規な薬剤を考慮することを可能となる。

【０１７６】従って、この生成物は、カスパーゼ８（カスパーゼ８の“自殺基質”）によっ
て認識される数列を有するペプチドに基づく治療の代替案を表している。

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１２年３月２９日（２０００．３．２９）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正内容】

【特許請求の範囲】

【化１】（式中、ｎは１から５０、好適には５から１０までの整数を表し、式中分枝数は
、一反復単位当たり０から３までの範囲で変化する）を満足する少なくとも一つのオリゴ糖の有効量を活性成分として含むことを特徴
とする薬剤。

【化２】（式中、ｎは１から５０、好適には１から２０である整数を表し、式（ＩＩ）の
反復二糖のうち少なくともあるものは、一つ以上の硫酸基を含み得る）を満足する少なくとも一つの反復二糖の有効量を活性成分として含むことを特徴
とする薬剤。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者ヴァレリー・デカンフランス・Ｆ−29680・ロスコフ・リュ・ヤン・ダルジェン・22 (72)発明者クリストフ・リシャールフランス・Ｆ−29400・プローゴーヴェスト・ケルヌヴェ（番地なし) (72)発明者ヴェスナ・ティバルフランス・Ｆ−69002・リヨン・リュ・ジェンティル・５ (72)発明者パトリック・アリゴフランス・Ｆ−74930・ペル−ジュスィ・ジュスィ（番地なし) (72)発明者ベルナール・クローレックフランス・Ｆ−29250・サン・ポル・ドゥ・レオン・リュ・ドゥ・ラ・リヴ・81 Ｆターム(参考） 4C086 AA01 AA02 EA03 EA24 MA01 MA04 NA14 ZB26 4C090 AA09 BA64 BB13 BB32 BB33 BB35 BB36 BB55 BB62 BB63 BC04 DA23

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】アポトーシス異常を調整することができ、かつ任意で、硫酸
、メチルおよびアセチル基を含む群の少なくとも一つの置換基を各単位の少なく
ともあるものにおいて含む、少なくとも一つのオリゴ糖物質の有効量を、活性成
分として含み、該物質は、 − 酵素または化学的方法によって、任意で（１→６）−β−分枝を含む（１→３）−β−グルカンを含む群のポリマーから得られたオリゴ糖、および − 酵素または化学的方法によって、硫酸ガラクタン、特にカラゲナン、寒天およびポルフィランから抽出されたオリゴ糖、を含む群から選択されるこ
とを特徴とする薬剤。
【請求項２】アポトーシス異常を調整することができ、式：【化１】（式中、ｎは１から５０、好適には５から１０までの整数を表し、式中分枝数は
、一反復単位当たり０から３までの範囲で変化する）を満足する少なくとも一つのオリゴ糖の有効量を活性成分として含むことを特徴
とする薬剤。
【請求項３】アポトーシス異常を調整することができ、式：【化２】（式中、ｎは１から５０、好適には１から２０である整数を表し、式（ＩＩ）の
反復二糖のうち少なくともあるものは、一つ以上の硫酸基を含み得る）を満足する少なくとも一つの反復二糖の有効量を活性成分として含むことを特徴
とする薬剤。
【請求項４】少なくとも部分的にアポトーシスを抑制することができ、か
つイオタ−カラゲネートナトリウムから加水分解によって得られる生成物の有効
量を活性成分として含み、この生成物は、Ｉ₉によって示されるオリゴ−イオタ −カラゲナンの混合物からなり、（チルマンスおよびフィリッピによって測定さ
れた）全単糖類の濃度が６２％であり、またザブラキスおよびペレツによりポリ
アクリルアミド電気泳動で概算された大きさによる分布概要は、イオタ−ネオカラテトラオス（ＤＰ２）８〜１２％イオタ−ネオカラヘキサオス（ＤＰ３）２３〜２７％イオタ−ネオカラオクタオス（ＤＰ４）１８〜２２％イオタ−ネオカラデカオス（ＤＰ５）１３〜１７％イオタ−ネオカラドデカオス（ＤＰ６）８〜１２％オリゴ−イオタカラゲナン（ＤＰ７）３〜７％８から１５の反復二糖からなるオリゴ− イオタカラゲナン（ＤＰ８〜１５）１３〜１７％であることを特徴とする薬剤。
【請求項５】アポトーシス異常を活性化することができ、褐色海藻、特に
ラミナリア・デジタータと呼ばれる褐色の海藻から酸性水抽出によって得られた
生成物の有効量を活性成分として含み、この生成物は、Ｌ₁₁と示されるオリゴ−
（１→３）β−グルカンの混合物からなり、かつ糖質単位１から５０、好適には
２０から３０を含み、当該の前記生成物は図１に示されるＲＭＮスペクトルを呈
することを特徴とする薬剤。
【請求項６】アポトーシス異常を活性化することができ、かつ生成物Ｉ₉ のフラクションＤＰ７からなる生成物の有効量を活性成分として含むことを特徴
とする薬剤。
【請求項７】アポトーシス異常の治療用薬剤の製造方法であって、請求項
1から６の少なくとも一つの薬剤の活性成分の少なくとも一つを薬学的組成物に含ませることを特徴とする製造方法。
【請求項８】各単位の少なくともあるものに、硫酸、メチルおよびアセチ
ル基を含む群の少なくとも一つの置換基を任意で含む、少なくとも一つのオリゴ
糖物質であって、アポトーシス異常を調整することができ、 − 酵素または化学的方法によって、任意に（１→６）−β−分枝を含む（１→
３）−β−グルカンを含む群のポリマーから得られたオリゴ糖、および − 酵素または化学的方法によって、硫酸ガラクタン、特にカラゲナン、寒天お
よびポルフィランから抽出されたオリゴ糖、を含む群から選択される前記物質の、アポトーシス異常の治療用薬剤製造のため
の使用。
【請求項９】式（Ｉ）のオリゴ糖および式（ＩＩ）のオリゴ糖の、アポト
ーシス異常の治療用薬剤製造のための使用。
【請求項１０】Ｉ₉およびＬ₁₁で示される生成物並びに生成物Ｉ₉のフラク
ションＤＰ７からなる生成物の、アポトーシス異常の治療用薬剤製造のための使
用。