JP2002262715A - 低い数の精子細胞を有する哺乳動物の性特異的受精 - Google Patents
低い数の精子細胞を有する哺乳動物の性特異的受精Info
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
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-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
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-
- A—HUMAN NECESSITIES
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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Abstract
(57)【要約】
【課題】雌雄識別された受精を、より低い投与量で、現
実的な商業環境の下で作動する様式において達成するこ
と。 【解決手段】予め決定された性を有する哺乳動物を産生
する方法であって、該方法は以下の工程： ａ．哺乳動物の種の雄から精子細胞を収集する工程； ｂ．複数の該精子細胞の性特徴を決定する工程； ｃ．該その性特徴の決定に従って、該精子細胞を選別す
る工程； ｄ．代表的な未選別の人工受精サンプルと比較して、該
精子細胞の数の約１０％〜約５０％を有する選別された
人工受精サンプルを確立する工程； ｅ．該選別された人工受精サンプルを該哺乳動物の該種
の雌に挿入する工程； ｆ．少なくとも１つの卵を、該代表的な未選別の人工受
精投与量に対して統計学的比較可能な成功レベル（ｐ＞
０．１）で、該哺乳動物の該種の該雌内に受精させる工
程；および ｇ．所望の性の子孫哺乳動物を産生する工程、を包含す
る、方法。
実的な商業環境の下で作動する様式において達成するこ
と。 【解決手段】予め決定された性を有する哺乳動物を産生
する方法であって、該方法は以下の工程： ａ．哺乳動物の種の雄から精子細胞を収集する工程； ｂ．複数の該精子細胞の性特徴を決定する工程； ｃ．該その性特徴の決定に従って、該精子細胞を選別す
る工程； ｄ．代表的な未選別の人工受精サンプルと比較して、該
精子細胞の数の約１０％〜約５０％を有する選別された
人工受精サンプルを確立する工程； ｅ．該選別された人工受精サンプルを該哺乳動物の該種
の雌に挿入する工程； ｆ．少なくとも１つの卵を、該代表的な未選別の人工受
精投与量に対して統計学的比較可能な成功レベル（ｐ＞
０．１）で、該哺乳動物の該種の該雌内に受精させる工
程；および ｇ．所望の性の子孫哺乳動物を産生する工程、を包含す
る、方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、一般的に、哺乳動
物子孫の性選択の分野に関する。本発明は特に、所望の
性の子孫を生成するための低用量人工受精の局面および
卵生成の増加の局面に関連する。詳細には、本発明は、
選別技術、人工受精時および増加した排卵の結果となる
技術での性特異的かつ低用量の努力のためにフローサイ
トメトリーを介して精子を選別するためのシステム、な
どにかかわらず、低投与量での、雌雄識別した（ｓｅｘ
ｅｄ）人工受精を達成することに関する。
物子孫の性選択の分野に関する。本発明は特に、所望の
性の子孫を生成するための低用量人工受精の局面および
卵生成の増加の局面に関連する。詳細には、本発明は、
選別技術、人工受精時および増加した排卵の結果となる
技術での性特異的かつ低用量の努力のためにフローサイ
トメトリーを介して精子を選別するためのシステム、な
どにかかわらず、低投与量での、雌雄識別した（ｓｅｘ
ｅｄ）人工受精を達成することに関する。
【０００２】
【従来の技術】長期間の間、特定の子孫の性を選択する
ことが所望されている。明らかな心理学的局面を超え
て、哺乳動物子孫の実際の性選択は、食料生産動物（例
えば、畜牛）ならびに有名な優勝動物（例えば、ウマ）
などへのその適用を考える場合には、有意な経済的意義
を有する。この大きな望みは、性が選択された子孫を達
成するための有意な種々の努力となっている。おそら
く、所望の結果を達成する可能性が最も高いようであっ
た努力は、受精の前にＸ精子とＹ精子との間の選別およ
び選択をする際の努力であった。
ことが所望されている。明らかな心理学的局面を超え
て、哺乳動物子孫の実際の性選択は、食料生産動物（例
えば、畜牛）ならびに有名な優勝動物（例えば、ウマ）
などへのその適用を考える場合には、有意な経済的意義
を有する。この大きな望みは、性が選択された子孫を達
成するための有意な種々の努力となっている。おそら
く、所望の結果を達成する可能性が最も高いようであっ
た努力は、受精の前にＸ精子とＹ精子との間の選別およ
び選択をする際の努力であった。
【０００３】Ｘ精子とＹ精子とを選別する際の努力が直
面した難題の１つは、関与する精子の数が大きいことで
ある。自然受精では、精子は、数種においては、数十億
で生産される；しかし、人工受精なしでは、依然として
有意に大きな数の精子が用いられる。例えば、人工受精
技術は、通常、１０００万〜５０億個（種に依存する）
の精子を使用する。従って、有意な数の精子が、人工受
精の環境においてさえも、必要である。
面した難題の１つは、関与する精子の数が大きいことで
ある。自然受精では、精子は、数種においては、数十億
で生産される；しかし、人工受精なしでは、依然として
有意に大きな数の精子が用いられる。例えば、人工受精
技術は、通常、１０００万〜５０億個（種に依存する）
の精子を使用する。従って、有意な数の精子が、人工受
精の環境においてさえも、必要である。
【０００４】多くの方法が、Ｘ染色体を保有する精子と
Ｙ染色体を保有する精子との分離を達成するために試み
られている。これらの方法は、米国特許第４２７６１３
９号に開示されて現れるような磁気的技術から、米国特
許第５５１４５３７号に開示されて現れるような柱状技
術、米国特許第３８９４５２９号、再発行特許第３２３
５０号、米国特許第４０９２２２９号、同第４０６７９
６５号、および同第４１５５８３１号に考察されるよう
な重量計測技術までの範囲にわたっている。電気的特性
はまた、Ｕ．Ｓ．４０８３９５７に示されるように、な
らびに電気的特性と重量測定特性との組合せは米国特許
第４２２５４０５号、同第４６９８１４２号、および同
第４７４９４５８号に考察されるように試みられてい
る。運動性の努力もまた、米国特許第４００９２６０号
および同第４３３９４３４号に示されるように試みられ
ている。米国特許第４５１１６６１号および同第４９９
９２８３号（モノクローナル抗体を含む）、ならびに米
国特許第５０２１２４４号、同第５３４６９９０号、同
第５４３９３６２号、および同第５６６０９９７号（膜
タンパク質を含む）、ならびに米国特許第３６８７８０
３号、同第４１９１７４９号、同第４４４８７６７号、
および同第４６８０２５８号（抗体を含む）に示すよう
な化学的技術、ならびに米国特許第４０８５２０５号に
示すような血清成分の添加。これらの技術の各々は、効
率が高いかのように示されているが、実際は現時点で
は、これらの技術はいずれも所望のレベルの性予備選択
を生じない。しかし、分離技術が最終的に用いられるに
かかわらず、天然に存在する精子が多数であること、お
よびＸ染色体を保有する精子とＹ染色体を保有する精子
とを分離するアプローチの競合する組合せは、より少数
の精子を用いて受精を達成する能力を開発することを望
ましくしている。
Ｙ染色体を保有する精子との分離を達成するために試み
られている。これらの方法は、米国特許第４２７６１３
９号に開示されて現れるような磁気的技術から、米国特
許第５５１４５３７号に開示されて現れるような柱状技
術、米国特許第３８９４５２９号、再発行特許第３２３
５０号、米国特許第４０９２２２９号、同第４０６７９
６５号、および同第４１５５８３１号に考察されるよう
な重量計測技術までの範囲にわたっている。電気的特性
はまた、Ｕ．Ｓ．４０８３９５７に示されるように、な
らびに電気的特性と重量測定特性との組合せは米国特許
第４２２５４０５号、同第４６９８１４２号、および同
第４７４９４５８号に考察されるように試みられてい
る。運動性の努力もまた、米国特許第４００９２６０号
および同第４３３９４３４号に示されるように試みられ
ている。米国特許第４５１１６６１号および同第４９９
９２８３号（モノクローナル抗体を含む）、ならびに米
国特許第５０２１２４４号、同第５３４６９９０号、同
第５４３９３６２号、および同第５６６０９９７号（膜
タンパク質を含む）、ならびに米国特許第３６８７８０
３号、同第４１９１７４９号、同第４４４８７６７号、
および同第４６８０２５８号（抗体を含む）に示すよう
な化学的技術、ならびに米国特許第４０８５２０５号に
示すような血清成分の添加。これらの技術の各々は、効
率が高いかのように示されているが、実際は現時点で
は、これらの技術はいずれも所望のレベルの性予備選択
を生じない。しかし、分離技術が最終的に用いられるに
かかわらず、天然に存在する精子が多数であること、お
よびＸ染色体を保有する精子とＹ染色体を保有する精子
とを分離するアプローチの競合する組合せは、より少数
の精子を用いて受精を達成する能力を開発することを望
ましくしている。
【０００５】現時点では、フローサイトメトリーの技術
を介する精子の個々の分別および分離を含む、Ｘ染色体
保有精子とＹ染色体保有精子との分離を達成するために
用いられる唯一の定量的技術が存在している。この技術
は、Ｘ染色体保有精子およびＹ染色体保有精子の差示的
色素吸収を含む進歩および発見の結果として可能である
ようであった。これは、米国特許第４３６２２４６号に
おいて最初に考察され、そして米国特許第５１３５７５
９号においてＬａｗｒｅｎｃｅ Ｊｏｈｎｓｏｎにより
開示される技術を通して有意に拡大された。フローサイ
トメトリーを利用してＸ染色体保有精子とＹ染色体保有
精子とを分離するＪｏｈｎｓｏｎの技術は、このような
精子の商業的分離を初めて可能にした、非常に有意な進
歩であった。依然として実験的であるとはいえ、分離
は、高速フローサイトメーター（例えば、Ｃｙｔｏｍａ
ｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．により製造されるＭｏＦｌｏ（登録
商標）フローサイトメーター）の利用により有意に増強
され、そして米国特許第５１５０３１３号、同第５６０
２０３９号、同第５６０２３４９号、および同第５６４
３７９６号、ならびに国際ＰＣＴ特許公開ＷＯ９６／１
２１７１を含む種々の他の特許に考察された。Ｃｙｔｏ
ｍａｔｉｏｎのＭｏＦｌｏ（登録商標）サイトメーター
の利用は、速度が大いに増加するのを可能にし、一方、
これらの速度の増加は、しばしば使用される精子が多数
であることを考慮すれば特に適切であるが、特定の問題
が依然として残っている。ＭｏＦｌｏ（登録商標）フロ
ーサイトメーターによる可能な速度のほぼ１０倍の進歩
にもかかわらず、さらにより短い分別時間がいくつかの
理由から望まれている。最初に、実際問題として、精子
は時間が重要な細胞であることが発見された。これら
は、使用されないままの時間が長いほど、それらの有効
性を失う。第２に、収集、分別、および受精のタイミン
グは、速度を商業的に非常に重要な項目にした。従っ
て、精子細胞およびプロセスにとって時間が重要である
という性質は、速度を高い効力および成功率を達成する
際の必須の要素とした。
を介する精子の個々の分別および分離を含む、Ｘ染色体
保有精子とＹ染色体保有精子との分離を達成するために
用いられる唯一の定量的技術が存在している。この技術
は、Ｘ染色体保有精子およびＹ染色体保有精子の差示的
色素吸収を含む進歩および発見の結果として可能である
ようであった。これは、米国特許第４３６２２４６号に
おいて最初に考察され、そして米国特許第５１３５７５
９号においてＬａｗｒｅｎｃｅ Ｊｏｈｎｓｏｎにより
開示される技術を通して有意に拡大された。フローサイ
トメトリーを利用してＸ染色体保有精子とＹ染色体保有
精子とを分離するＪｏｈｎｓｏｎの技術は、このような
精子の商業的分離を初めて可能にした、非常に有意な進
歩であった。依然として実験的であるとはいえ、分離
は、高速フローサイトメーター（例えば、Ｃｙｔｏｍａ
ｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．により製造されるＭｏＦｌｏ（登録
商標）フローサイトメーター）の利用により有意に増強
され、そして米国特許第５１５０３１３号、同第５６０
２０３９号、同第５６０２３４９号、および同第５６４
３７９６号、ならびに国際ＰＣＴ特許公開ＷＯ９６／１
２１７１を含む種々の他の特許に考察された。Ｃｙｔｏ
ｍａｔｉｏｎのＭｏＦｌｏ（登録商標）サイトメーター
の利用は、速度が大いに増加するのを可能にし、一方、
これらの速度の増加は、しばしば使用される精子が多数
であることを考慮すれば特に適切であるが、特定の問題
が依然として残っている。ＭｏＦｌｏ（登録商標）フロ
ーサイトメーターによる可能な速度のほぼ１０倍の進歩
にもかかわらず、さらにより短い分別時間がいくつかの
理由から望まれている。最初に、実際問題として、精子
は時間が重要な細胞であることが発見された。これら
は、使用されないままの時間が長いほど、それらの有効
性を失う。第２に、収集、分別、および受精のタイミン
グは、速度を商業的に非常に重要な項目にした。従っ
て、精子細胞およびプロセスにとって時間が重要である
という性質は、速度を高い効力および成功率を達成する
際の必須の要素とした。
【０００６】他の問題がまた、実用的な問題から仮想的
な問題までの範囲で存在する。実用的側面では、安価な
使い捨て構成要素および物質を用いて、雌雄識別した精
子サンプルを達成することが所望された。また、費用の
側面では、できる限り効率的な労力の結果で選別（なら
びに収集および受精）を達成し得ることが所望された。
従って、この分野での商業的生産および成功のために、
効率の増加のみを示し得る改良が依然として重要であり
得る。費用の実用的局面に関連するのは、プロセス全体
の繊細さおよび感度の実用的局面である。このことにつ
いては、このプロセスを単純化し、そして手順について
できる限り強健にし、その結果、操作者の誤りまたは技
術が減りつづける役割を果たし得ることが所望されてい
る。彼らはまた、組み合わさって、より低い投与量での
受精をさらにより望ましいものとした。
な問題までの範囲で存在する。実用的側面では、安価な
使い捨て構成要素および物質を用いて、雌雄識別した精
子サンプルを達成することが所望された。また、費用の
側面では、できる限り効率的な労力の結果で選別（なら
びに収集および受精）を達成し得ることが所望された。
従って、この分野での商業的生産および成功のために、
効率の増加のみを示し得る改良が依然として重要であり
得る。費用の実用的局面に関連するのは、プロセス全体
の繊細さおよび感度の実用的局面である。このことにつ
いては、このプロセスを単純化し、そして手順について
できる限り強健にし、その結果、操作者の誤りまたは技
術が減りつづける役割を果たし得ることが所望されてい
る。彼らはまた、組み合わさって、より低い投与量での
受精をさらにより望ましいものとした。
【０００７】このプロセスの繊細さに加えて、精子自体
が非常に繊細な細胞であることが常に公知であった。こ
の因子は一見したところでは、容易に理解されるとみな
され得るように見えるが、実際は、この細胞の全部の程
度の感度は未だに充分には調査されていない。一般にフ
ローサイトメトリーの状況では、大部分の選別された細
胞または粒子は、しばしば球状であるか、さもなければ
種々の乱用に身体的に抵抗し得る。これは、精子細胞に
ついては事実ではない。実際、本発明が開示するよう
に、通常のフローサイトメーター技術を介するプロセシ
ングは、実際に、特定の適用において精子細胞のサイト
メトリー選別に受け入れられないかもしれない。感度
は、希釈の問題、および各々の細胞を個々に単離し、そ
して区別するためのフローサイトメーターの固有の必要
性、ならびに代表的なフローサイトメトリーが、本発明
の以前に、選別した細胞または他の物質に付与した圧力
および他のストレスにわたった。これはまた、精子細胞
の独特の因子を示し得る。なぜなら、精子細胞がフロー
サイトメーターを通過し得るようであり、そして肉眼的
に識別可能な副作用を有さずに選別し得たとしても、実
際は、この細胞自体は、受精プロセスにおいて最適より
劣って機能するという点でストレスが与えられ得るよう
であるからである。従って、因子の相互作用が関連する
ように見え、そして精子細胞選別の見込みおよび人工受
精のための最終的な使用から通常でない問題を生じた。
が非常に繊細な細胞であることが常に公知であった。こ
の因子は一見したところでは、容易に理解されるとみな
され得るように見えるが、実際は、この細胞の全部の程
度の感度は未だに充分には調査されていない。一般にフ
ローサイトメトリーの状況では、大部分の選別された細
胞または粒子は、しばしば球状であるか、さもなければ
種々の乱用に身体的に抵抗し得る。これは、精子細胞に
ついては事実ではない。実際、本発明が開示するよう
に、通常のフローサイトメーター技術を介するプロセシ
ングは、実際に、特定の適用において精子細胞のサイト
メトリー選別に受け入れられないかもしれない。感度
は、希釈の問題、および各々の細胞を個々に単離し、そ
して区別するためのフローサイトメーターの固有の必要
性、ならびに代表的なフローサイトメトリーが、本発明
の以前に、選別した細胞または他の物質に付与した圧力
および他のストレスにわたった。これはまた、精子細胞
の独特の因子を示し得る。なぜなら、精子細胞がフロー
サイトメーターを通過し得るようであり、そして肉眼的
に識別可能な副作用を有さずに選別し得たとしても、実
際は、この細胞自体は、受精プロセスにおいて最適より
劣って機能するという点でストレスが与えられ得るよう
であるからである。従って、因子の相互作用が関連する
ように見え、そして精子細胞選別の見込みおよび人工受
精のための最終的な使用から通常でない問題を生じた。
【０００８】（Ｊｏｈｎｓｏｎの特許および関連技術に
より達成された大きな進歩にもかかわらず）残っている
別の問題は、本発明の前には、使用される分離技術にか
かわらず、雌雄識別した精子を用いて、より低い投与量
の受精を達成することが極めて困難であったという事実
である。歴史的に、低用量受精はいくらか達成されてい
るが、商業的適用において経験されるようであるかまた
は適用可能であるような環境ではなく、理論的または実
験室的環境では、より多いようであった。このことにつ
いて、要望は、低用量受精を達成することだけでなく、
むしろ現在の、雌雄識別していない高投与量人工受精努
力と匹敵する妊娠成功率で低用量受精を達成することで
あった。従って、雌雄識別され、かつ低用量の両方であ
る人工受精において本発明者らによって達成された進歩
は、初めて、商業的適用を可能にし得る有意な進歩を示
す。
より達成された大きな進歩にもかかわらず）残っている
別の問題は、本発明の前には、使用される分離技術にか
かわらず、雌雄識別した精子を用いて、より低い投与量
の受精を達成することが極めて困難であったという事実
である。歴史的に、低用量受精はいくらか達成されてい
るが、商業的適用において経験されるようであるかまた
は適用可能であるような環境ではなく、理論的または実
験室的環境では、より多いようであった。このことにつ
いて、要望は、低用量受精を達成することだけでなく、
むしろ現在の、雌雄識別していない高投与量人工受精努
力と匹敵する妊娠成功率で低用量受精を達成することで
あった。従って、雌雄識別され、かつ低用量の両方であ
る人工受精において本発明者らによって達成された進歩
は、初めて、商業的適用を可能にし得る有意な進歩を示
す。
【０００９】（さらに、Ｊｏｈｎｓｏｎの特許および関
連する技術による大きな進歩にもかかわらず）産業界の
当業者が直面した別の問題は、この問題自体が、すなわ
ち、高い成功率での人工受精が、多数の因子が相互作用
するようである統計学的性質の１つであるという事実で
ある。従って、提案される解決策は、ある程度、徹底的
に統計学的に研究した場合に、単独または他の因子との
組み合わせのいずれかで必要であることが示される因子
の組合せを含み得る。このような決定はさらに、結果自
体が種によって変化するという事実によって妥協され、
そして大きな充分なデータベースに対する検定および統
計学的サンプリングが最初の段階での努力に見合わない
ようであるという事実のために確認することが困難であ
り得る。これらの理由から、本発明はまた、個々でまた
は組合せで、所定の適用のために適切な溶液を示し得る
因子の組合せを含み得る。従って、この開示は、開示さ
れる技術の種々の組合せおよび普及が達成され得るため
に充分に広いとみなされる。未知の相乗作用が他の因子
について存在し得る。このような因子は、選別またはお
そらくフローサイトメーター工程における因子から、収
集工程および受精工程における因子の範囲であり得る。
現在、研究は主にウシの種において達成されているが、
これらの技術がこのような種に限定される、またはこの
ような問題が精子細胞のみに限定されるとは考えられな
い。使用される技術が、選別されるいずれかの感受性部
材を含む領域へのまさに精子細胞を超える適用、または
この部材が選別された際のフローサイトメトリーのスト
レスの影響の単なる最小化を有し得るようである。
連する技術による大きな進歩にもかかわらず）産業界の
当業者が直面した別の問題は、この問題自体が、すなわ
ち、高い成功率での人工受精が、多数の因子が相互作用
するようである統計学的性質の１つであるという事実で
ある。従って、提案される解決策は、ある程度、徹底的
に統計学的に研究した場合に、単独または他の因子との
組み合わせのいずれかで必要であることが示される因子
の組合せを含み得る。このような決定はさらに、結果自
体が種によって変化するという事実によって妥協され、
そして大きな充分なデータベースに対する検定および統
計学的サンプリングが最初の段階での努力に見合わない
ようであるという事実のために確認することが困難であ
り得る。これらの理由から、本発明はまた、個々でまた
は組合せで、所定の適用のために適切な溶液を示し得る
因子の組合せを含み得る。従って、この開示は、開示さ
れる技術の種々の組合せおよび普及が達成され得るため
に充分に広いとみなされる。未知の相乗作用が他の因子
について存在し得る。このような因子は、選別またはお
そらくフローサイトメーター工程における因子から、収
集工程および受精工程における因子の範囲であり得る。
現在、研究は主にウシの種において達成されているが、
これらの技術がこのような種に限定される、またはこの
ような問題が精子細胞のみに限定されるとは考えられな
い。使用される技術が、選別されるいずれかの感受性部
材を含む領域へのまさに精子細胞を超える適用、または
この部材が選別された際のフローサイトメトリーのスト
レスの影響の単なる最小化を有し得るようである。
【００１０】興味深いことに、本発明は、精子細胞に対
する選別の影響またはストレスを最小にするためのアプ
ローチをとるが、他者は、速度および他のこのような性
能についての圧力および要求を増加させることにより、
実際にはこの方向からはなれて行動したようである。本
質的に、個々の、またはおそらく相互に関連した様式で
の、低用量受精および高速プロセシングのための動因
は、互いに制限される問題を与えるかもしれない。従っ
て、長い間感じられていたが満足されていない、高速で
雌雄識別した低用量受精についての必要性が存在してお
り、そして実行する技術および要素が長い間利用可能で
あるが、本発明の前には、進歩またはおそらく進歩の組
合せは、当業者によって明らかに見落とされていた。お
そらく、ある程度まで、当業者は、この問題が、因子の
相互作用、およびこの分野に関与する型の細胞（精子細
胞またはおそらく種特異的精子細胞）についての特有の
必要性を含むことを認識できなかった。興味深いこと
に、本考察における先の努力のリストが示すように、実
質的な試みが行われたが、これらはこのような領域にお
いて雌雄識別した低用量受精として固有の問題を明らか
に理解できず、そしておそらく自然種付け事象はおそら
く数十億の精子を含むので、４桁も数が少ない数での人
工受精の達成についての物理的制限が存在し得ると仮定
された。従って、ある程度は、本発明者らが行った技術
方向とは実際の逆の教示（ｔｅａｃｈ ａｗａｙ）が存
在したことは、驚くべきことではないかもしれない。お
そらく、この結果はさらに、ある程度まで予期されない
とみなされ得る。なぜなら、この結果は、雌雄識別され
た低用量の人工受精が、雌雄識別していない高用量の人
工受精の成功率と匹敵し得る成功率で達成され得ること
を示したからである。本発明の技術および進歩を実際に
組合せて、示された大きな結果が達成されることはある
人にとってはさらに驚くべきことであり得る。各技術
が、単離において、ある人によっては驚きではないと概
説され得るとはいえ、実際は、単独で考慮されても、ま
たは他のわずかな変更との組合せで考慮されても、わず
かな変更が最終的な結果に有意な進歩を与えるようであ
る。
する選別の影響またはストレスを最小にするためのアプ
ローチをとるが、他者は、速度および他のこのような性
能についての圧力および要求を増加させることにより、
実際にはこの方向からはなれて行動したようである。本
質的に、個々の、またはおそらく相互に関連した様式で
の、低用量受精および高速プロセシングのための動因
は、互いに制限される問題を与えるかもしれない。従っ
て、長い間感じられていたが満足されていない、高速で
雌雄識別した低用量受精についての必要性が存在してお
り、そして実行する技術および要素が長い間利用可能で
あるが、本発明の前には、進歩またはおそらく進歩の組
合せは、当業者によって明らかに見落とされていた。お
そらく、ある程度まで、当業者は、この問題が、因子の
相互作用、およびこの分野に関与する型の細胞（精子細
胞またはおそらく種特異的精子細胞）についての特有の
必要性を含むことを認識できなかった。興味深いこと
に、本考察における先の努力のリストが示すように、実
質的な試みが行われたが、これらはこのような領域にお
いて雌雄識別した低用量受精として固有の問題を明らか
に理解できず、そしておそらく自然種付け事象はおそら
く数十億の精子を含むので、４桁も数が少ない数での人
工受精の達成についての物理的制限が存在し得ると仮定
された。従って、ある程度は、本発明者らが行った技術
方向とは実際の逆の教示（ｔｅａｃｈ ａｗａｙ）が存
在したことは、驚くべきことではないかもしれない。お
そらく、この結果はさらに、ある程度まで予期されない
とみなされ得る。なぜなら、この結果は、雌雄識別され
た低用量の人工受精が、雌雄識別していない高用量の人
工受精の成功率と匹敵し得る成功率で達成され得ること
を示したからである。本発明の技術および進歩を実際に
組合せて、示された大きな結果が達成されることはある
人にとってはさらに驚くべきことであり得る。各技術
が、単離において、ある人によっては驚きではないと概
説され得るとはいえ、実際は、単独で考慮されても、ま
たは他のわずかな変更との組合せで考慮されても、わず
かな変更が最終的な結果に有意な進歩を与えるようであ
る。
【００１１】従って、本発明までは、雌雄識別した低用
量人工受精についての成功率の達成は、必要な性能のレ
ベルでは、または商業的実施を達成するために必要であ
るようである単純化された手順では、可能でなかった。
しかし、今までに達成された商業的レベルの雌雄識別し
た低用量受精を超えて、本発明はまた、改善された性能
の達成を可能にし、従って、所望される最終結果、すな
わち、商業ベースでの雌雄識別した低用量人工受精を容
易にする、技術を開示する。
量人工受精についての成功率の達成は、必要な性能のレ
ベルでは、または商業的実施を達成するために必要であ
るようである単純化された手順では、可能でなかった。
しかし、今までに達成された商業的レベルの雌雄識別し
た低用量受精を超えて、本発明はまた、改善された性能
の達成を可能にし、従って、所望される最終結果、すな
わち、商業ベースでの雌雄識別した低用量人工受精を容
易にする、技術を開示する。
【００１２】（ＩＩＩ．発明の開示）従って、本発明
は、商業的レベルでの低用量受精および哺乳動物の性を
予め決定するために適用されるような結果の達成を請求
する。本発明はまた、フローサイトメーター分離技術を
通してそれらの性を決定するための、精子細胞の選別の
ための改善されたシースシステムおよびコレクターシス
テムを提供する。この分離技術では、フローサイトメー
ターにおいて代表的に使用されるようなシース液は、精
子細胞が選別されるときの精子細胞に対するストレスを
最小にする流体で置換される。さらに、収集システムを
改良して精子細胞が受ける物理的ストレスおよび化学的
ストレスの両方を最小にする。種々の技術および物質が
示されるが、当業者が容易に理解するように、種々の組
合せおよび置換が、特定のプロセシング適用において関
与する種、分離技術、目的、および他のパラメーターに
基づく性能に最適化され得る様式で用いられ得る。
は、商業的レベルでの低用量受精および哺乳動物の性を
予め決定するために適用されるような結果の達成を請求
する。本発明はまた、フローサイトメーター分離技術を
通してそれらの性を決定するための、精子細胞の選別の
ための改善されたシースシステムおよびコレクターシス
テムを提供する。この分離技術では、フローサイトメー
ターにおいて代表的に使用されるようなシース液は、精
子細胞が選別されるときの精子細胞に対するストレスを
最小にする流体で置換される。さらに、収集システムを
改良して精子細胞が受ける物理的ストレスおよび化学的
ストレスの両方を最小にする。種々の技術および物質が
示されるが、当業者が容易に理解するように、種々の組
合せおよび置換が、特定のプロセシング適用において関
与する種、分離技術、目的、および他のパラメーターに
基づく性能に最適化され得る様式で用いられ得る。
【００１３】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、雌雄識別された受精を、より低い投与量で、現実的
な商業環境の下で作動する様式において単に達成するこ
とである。目的はまた、物質（例えば、精子細胞）につ
いてのより良好な選別を達成することである。関連する
目的は、選別機能自体が細胞または選別され得る他の感
受性部材に対して有する衝撃を最小にすることである。
フローサイトメトリー選別技術について、具体的な目的
は、シース液が細胞に与える衝撃を最小にし、そして関
与する種々のストレスを扱う際に細胞を補助するように
肯定的に作用するシース液を潜在的に提供することであ
る。類似の目的は、一般的には精子細胞に、ウシ精子細
胞に、ウマ精子細胞に、そしてＸ染色体保有構成要素お
よびＹ染色体保有構成要素へのこのような精子細胞の分
離のために特に適切である物質および技術を提供するこ
とである。同様に、１つの目的は、収集期（例えば、選
別後）が細胞に対して有する衝撃を最小にすること、な
らびにこのような雌雄識別された精子細胞に対する物理
的衝撃および化学的衝撃を最小にすることである。従っ
て、１つの目的は、できる限り影響の少ない、選別の結
果を達成することである。
は、雌雄識別された受精を、より低い投与量で、現実的
な商業環境の下で作動する様式において単に達成するこ
とである。目的はまた、物質（例えば、精子細胞）につ
いてのより良好な選別を達成することである。関連する
目的は、選別機能自体が細胞または選別され得る他の感
受性部材に対して有する衝撃を最小にすることである。
フローサイトメトリー選別技術について、具体的な目的
は、シース液が細胞に与える衝撃を最小にし、そして関
与する種々のストレスを扱う際に細胞を補助するように
肯定的に作用するシース液を潜在的に提供することであ
る。類似の目的は、一般的には精子細胞に、ウシ精子細
胞に、ウマ精子細胞に、そしてＸ染色体保有構成要素お
よびＹ染色体保有構成要素へのこのような精子細胞の分
離のために特に適切である物質および技術を提供するこ
とである。同様に、１つの目的は、収集期（例えば、選
別後）が細胞に対して有する衝撃を最小にすること、な
らびにこのような雌雄識別された精子細胞に対する物理
的衝撃および化学的衝撃を最小にすることである。従っ
て、１つの目的は、できる限り影響の少ない、選別の結
果を達成することである。
【００１４】本発明の別の目的は、代表的な、雌雄識別
していない高用量人工受精のレベルおよび成功率に匹敵
するレベルおよび成功率を有する低用量の選別された受
精を達成することである。この目的に一致して、目標
は、商業的に実用的な様式でこの目的を達成し得る、人
工受精についての全般的なシステムを提示することであ
る。従って、精子細胞に対するストレスまたは潜在的な
損傷を最小にするという先の目的は重要である。高速お
よび低ストレスの両方の選別を提供し、そして低用量の
状況での精子細胞選別に特に適応する様式の選別は、そ
の上重要な目的である。精子の受精能に負に影響を与え
ず、かつ人工受精と適合するシース液および他の流体を
提供するという目的もまた重要である。
していない高用量人工受精のレベルおよび成功率に匹敵
するレベルおよび成功率を有する低用量の選別された受
精を達成することである。この目的に一致して、目標
は、商業的に実用的な様式でこの目的を達成し得る、人
工受精についての全般的なシステムを提示することであ
る。従って、精子細胞に対するストレスまたは潜在的な
損傷を最小にするという先の目的は重要である。高速お
よび低ストレスの両方の選別を提供し、そして低用量の
状況での精子細胞選別に特に適応する様式の選別は、そ
の上重要な目的である。精子の受精能に負に影響を与え
ず、かつ人工受精と適合するシース液および他の流体を
提供するという目的もまた重要である。
【００１５】当然、本発明のさらなる目的は、明細書お
よび特許請求の範囲の他の領域を通して開示される。
よび特許請求の範囲の他の領域を通して開示される。
【００１６】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、予め決
定された性を有する哺乳動物を産生する方法が提供さ
れ、この方法は、以下の工程： ａ．哺乳動物の種の雄から精子細胞を収集する工程； ｂ．複数の精子細胞の性特徴を決定する工程； ｃ．その性特徴の決定に従って、精子細胞を選別する工
程； ｄ．代表的な人工受精投与量と比較して、少ない数の精
子細胞を有する受精サンプルを確立する工程； ｅ．この受精サンプルの少なくとも一部を哺乳動物の種
の雌に挿入する工程； ｆ．哺乳動物の種の雌内の少なくとも１つの卵を、代表
的な雌雄識別されていない人工受精投与量に対して統計
学的比較可能な成功レベルで受精させる工程；および ｇ．所望の性の子孫哺乳動物を産生する工程、を包含す
る。
定された性を有する哺乳動物を産生する方法が提供さ
れ、この方法は、以下の工程： ａ．哺乳動物の種の雄から精子細胞を収集する工程； ｂ．複数の精子細胞の性特徴を決定する工程； ｃ．その性特徴の決定に従って、精子細胞を選別する工
程； ｄ．代表的な人工受精投与量と比較して、少ない数の精
子細胞を有する受精サンプルを確立する工程； ｅ．この受精サンプルの少なくとも一部を哺乳動物の種
の雌に挿入する工程； ｆ．哺乳動物の種の雌内の少なくとも１つの卵を、代表
的な雌雄識別されていない人工受精投与量に対して統計
学的比較可能な成功レベルで受精させる工程；および ｇ．所望の性の子孫哺乳動物を産生する工程、を包含す
る。
【００１７】１つの実施形態においては、哺乳動物の種
の雌内の少なくとも１つの卵を、代表的な人工受精投与
量に対して統計学的比較可能な成功レベルで受精させる
上記工程が、この哺乳動物の種の雌内の少なくとも１つ
の卵を、少なくとも３５％、少なくとも４１％、少なく
とも５０％、および少なくとも９０％からなる群より選
択される成功レベルで受精させる工程を包含する。
の雌内の少なくとも１つの卵を、代表的な人工受精投与
量に対して統計学的比較可能な成功レベルで受精させる
上記工程が、この哺乳動物の種の雌内の少なくとも１つ
の卵を、少なくとも３５％、少なくとも４１％、少なく
とも５０％、および少なくとも９０％からなる群より選
択される成功レベルで受精させる工程を包含する。
【００１８】１つの実施形態においては、哺乳動物の種
の雄から精子細胞を収集する上記工程が、ウシおよびウ
マからなる群から選択される哺乳動物の種の雄から精子
細胞を収集する工程を包含する。
の雄から精子細胞を収集する上記工程が、ウシおよびウ
マからなる群から選択される哺乳動物の種の雄から精子
細胞を収集する工程を包含する。
【００１９】１つの実施形態においては、代表的な人工
受精投与量と比較して、少ない数の精子細胞を有する受
精サンプルを確立する上記工程が、代表的な雌雄識別さ
れていない人工授精事象において提供される精子の代表
的な数の１０％以下を有する受精サンプルを確立する工
程を包含する。
受精投与量と比較して、少ない数の精子細胞を有する受
精サンプルを確立する上記工程が、代表的な雌雄識別さ
れていない人工授精事象において提供される精子の代表
的な数の１０％以下を有する受精サンプルを確立する工
程を包含する。
【００２０】１つの実施形態においては、代表的な人工
受精投与量と比較して、少ない数の精子細胞を有する受
精サンプルを確立する上記工程が、１０万以下の精子細
胞のウシ受精サンプル、２５万以下の精子細胞のウシ受
精サンプル、３０万以下の精子細胞のウシ受精サンプ
ル、１００万以下の精子細胞のウマ受精サンプル、５０
０万以下の精子細胞のウマ受精サンプル、１０００万以
下の精子細胞のウマ受精サンプル、および２５００万以
下の精子細胞のウマ受精サンプルからなる群より選択さ
れる受精サンプルを確立する工程を包含する。
受精投与量と比較して、少ない数の精子細胞を有する受
精サンプルを確立する上記工程が、１０万以下の精子細
胞のウシ受精サンプル、２５万以下の精子細胞のウシ受
精サンプル、３０万以下の精子細胞のウシ受精サンプ
ル、１００万以下の精子細胞のウマ受精サンプル、５０
０万以下の精子細胞のウマ受精サンプル、１０００万以
下の精子細胞のウマ受精サンプル、および２５００万以
下の精子細胞のウマ受精サンプルからなる群より選択さ
れる受精サンプルを確立する工程を包含する。
【００２１】１つの実施形態においては、受精サンプル
の少なくとも一部を哺乳動物の種の雌に挿入する上記工
程、および哺乳動物の種の雌内の少なくとも１つの卵
を、代表的な雌雄識別されていない人工受精投与量に対
して統計学的比較可能な成功レベルで受精させる上記工
程が、各々野外環境において達成される。
の少なくとも一部を哺乳動物の種の雌に挿入する上記工
程、および哺乳動物の種の雌内の少なくとも１つの卵
を、代表的な雌雄識別されていない人工受精投与量に対
して統計学的比較可能な成功レベルで受精させる上記工
程が、各々野外環境において達成される。
【００２２】１つの実施形態においては、野外環境にお
いて、受精サンプルの少なくとも一部を哺乳動物の種の
雌に挿入する上記工程、および野外環境において哺乳動
物の種の雌内の少なくとも１つの卵を代表的な雌雄識別
されていない人工受精投与量に対して統計学的比較可能
な成功レベルで受精させる上記工程が、有意な数の受精
サンプルを、有意な数の哺乳動物の種の雌に、迅速に連
続してかつ農場または牧場条件で反復的に挿入する工程
を包含する。
いて、受精サンプルの少なくとも一部を哺乳動物の種の
雌に挿入する上記工程、および野外環境において哺乳動
物の種の雌内の少なくとも１つの卵を代表的な雌雄識別
されていない人工受精投与量に対して統計学的比較可能
な成功レベルで受精させる上記工程が、有意な数の受精
サンプルを、有意な数の哺乳動物の種の雌に、迅速に連
続してかつ農場または牧場条件で反復的に挿入する工程
を包含する。
【００２３】１つの実施形態においては、上記哺乳動物
が子宮角を有し、そして受精サンプルの少なくとも一部
を哺乳動物の種の雌に挿入する上記工程が、受精サンプ
ルを、同側および対側の両方で、哺乳動物の種の雌の子
宮角内に挿入する工程を包含する。
が子宮角を有し、そして受精サンプルの少なくとも一部
を哺乳動物の種の雌に挿入する上記工程が、受精サンプ
ルを、同側および対側の両方で、哺乳動物の種の雌の子
宮角内に挿入する工程を包含する。
【００２４】１つの実施形態においては、上記哺乳動物
が少なくとも１つの子宮角を有し、そして受精サンプル
の少なくとも一部を哺乳動物の種の雌に挿入する上記工
程が、受精サンプルを子宮角内に深く挿入する工程を包
含する。
が少なくとも１つの子宮角を有し、そして受精サンプル
の少なくとも一部を哺乳動物の種の雌に挿入する上記工
程が、受精サンプルを子宮角内に深く挿入する工程を包
含する。
【００２５】１つの実施形態においては、受精サンプル
の少なくとも一部を哺乳動物の種の雌に挿入する上記工
程が、受精サンプルを子宮角内に深く挿入する工程をさ
らに包含する。
の少なくとも一部を哺乳動物の種の雌に挿入する上記工
程が、受精サンプルを子宮角内に深く挿入する工程をさ
らに包含する。
【００２６】１つの実施形態においては、受精サンプル
の少なくとも一部を哺乳動物の種の雌に挿入する上記工
程が、受精サンプルを、胎芽移植機器の使用によって子
宮角内に挿入する工程をさらに包含する。
の少なくとも一部を哺乳動物の種の雌に挿入する上記工
程が、受精サンプルを、胎芽移植機器の使用によって子
宮角内に挿入する工程をさらに包含する。
【００２７】１つの実施形態においては、受精サンプル
の少なくとも一部を哺乳動物の種の雌に挿入する上記工
程が、受精サンプルを、胎芽移植機器の使用によって子
宮角内に挿入する工程をさらに包含する。
の少なくとも一部を哺乳動物の種の雌に挿入する上記工
程が、受精サンプルを、胎芽移植機器の使用によって子
宮角内に挿入する工程をさらに包含する。
【００２８】１つの実施形態においては、受精サンプル
の少なくとも一部を哺乳動物の種の雌に挿入する上記工
程が、受精サンプルを、一般的に単一の人工受精に至適
であると考えられている時間の１２時間後に挿入する工
程を包含する。
の少なくとも一部を哺乳動物の種の雌に挿入する上記工
程が、受精サンプルを、一般的に単一の人工受精に至適
であると考えられている時間の１２時間後に挿入する工
程を包含する。
【００２９】１つの実施形態においては、代表的な人工
授精投与量と比較して、少ない数の精子細胞を有する受
精サンプルを確立する上記工程が、凍結されていない受
精サンプルを確立する工程を包含し、ここで、精子細胞
を、その性特徴の決定に従って選別する上記工程を、選
別時間で行い、そしてここで受精サンプルの少なくとも
一部を、哺乳動物の雌種に挿入する上記工程を、選別時
間から約１７時間より遅れずに行う。
授精投与量と比較して、少ない数の精子細胞を有する受
精サンプルを確立する上記工程が、凍結されていない受
精サンプルを確立する工程を包含し、ここで、精子細胞
を、その性特徴の決定に従って選別する上記工程を、選
別時間で行い、そしてここで受精サンプルの少なくとも
一部を、哺乳動物の雌種に挿入する上記工程を、選別時
間から約１７時間より遅れずに行う。
【００３０】１つの実施形態においては、代表的な人工
授精投与量と比較して、少ない数の精子細胞を有する受
精サンプルを確立する上記工程が、凍結されていない受
精サンプルを確立する工程を包含し、ここで、精子細胞
をその性特徴の決定に従って選別する上記工程を、選別
時間で行い、そしてここで受精サンプルの少なくとも一
部を哺乳動物の雌種に挿入する上記工程を、選別時間か
ら約１０時間より遅れずに行う。
授精投与量と比較して、少ない数の精子細胞を有する受
精サンプルを確立する上記工程が、凍結されていない受
精サンプルを確立する工程を包含し、ここで、精子細胞
をその性特徴の決定に従って選別する上記工程を、選別
時間で行い、そしてここで受精サンプルの少なくとも一
部を哺乳動物の雌種に挿入する上記工程を、選別時間か
ら約１０時間より遅れずに行う。
【００３１】１つの実施形態においては、複数の精子細
胞の性特徴を決定する上記工程が、細胞を、高濃度の染
料を用いて染色する工程を包含する。
胞の性特徴を決定する上記工程が、細胞を、高濃度の染
料を用いて染色する工程を包含する。
【００３２】１つの実施形態においては、複数の精子細
胞の性特徴を決定する上記工程が、細胞を、少なくとも
約３８μＭ含量の染料を用いて染色する工程を包含す
る。
胞の性特徴を決定する上記工程が、細胞を、少なくとも
約３８μＭ含量の染料を用いて染色する工程を包含す
る。
【００３３】１つの実施形態においては、複数の精子細
胞の性特徴を決定する上記工程、および精子細胞をその
性特徴の決定に従って選別する上記工程が、以下の工
程： ａ．選別される細胞を供給する細胞供給源を確立する工
程； ｂ．シース流体を化学的に調整して、細胞のためのシー
ス流体環境を作製する工程であって、シース流体が、選
別前細胞流体環境および選別後細胞流体環境の両方で調
整される、工程； ｃ．細胞の特性を感受する工程； ｄ．所望の性特徴を有する細胞間を識別する工程；およ
び ｅ．所望の性特徴を有する細胞を収集する工程、を包含
する。
胞の性特徴を決定する上記工程、および精子細胞をその
性特徴の決定に従って選別する上記工程が、以下の工
程： ａ．選別される細胞を供給する細胞供給源を確立する工
程； ｂ．シース流体を化学的に調整して、細胞のためのシー
ス流体環境を作製する工程であって、シース流体が、選
別前細胞流体環境および選別後細胞流体環境の両方で調
整される、工程； ｃ．細胞の特性を感受する工程； ｄ．所望の性特徴を有する細胞間を識別する工程；およ
び ｅ．所望の性特徴を有する細胞を収集する工程、を包含
する。
【００３４】１つの実施形態においては、複数の精子細
胞の性特徴を決定する上記工程、および精子細胞をその
性特徴の決定に従って選別する上記工程が、以下の工
程： ａ．選別される細胞を供給する細胞供給源を確立する工
程； ｂ．シース流体を化学的に調整して、細胞のためのシー
ス流体環境を作製する工程であって、シース流体が、選
別前細胞流体環境および選別後細胞流体環境の両方で調
整される、工程； ｃ．細胞の特性を感受する工程； ｄ．所望の性特徴を有する細胞間を識別する工程；およ
び ｅ．所望の性特徴を有する細胞を収集する工程、を包含
する。
胞の性特徴を決定する上記工程、および精子細胞をその
性特徴の決定に従って選別する上記工程が、以下の工
程： ａ．選別される細胞を供給する細胞供給源を確立する工
程； ｂ．シース流体を化学的に調整して、細胞のためのシー
ス流体環境を作製する工程であって、シース流体が、選
別前細胞流体環境および選別後細胞流体環境の両方で調
整される、工程； ｃ．細胞の特性を感受する工程； ｄ．所望の性特徴を有する細胞間を識別する工程；およ
び ｅ．所望の性特徴を有する細胞を収集する工程、を包含
する。
【００３５】１つの実施形態においては、複数の精子細
胞の性特徴を決定する上記工程、および精子細胞をその
性特徴の決定に従って選別する上記工程が、以下の工
程： ａ．選別されるウシ精子細胞を供給する細胞供給源を確
立する工程； ｂ．ウシ精子細胞のための、約２．９％のクエン酸ナト
リウムを含むシース流体を確立する工程； ｃ．細胞の特性を感受する工程； ｄ．所望の性特徴を有する細胞間を識別する工程；およ
び ｅ．所望の性特徴を有する細胞を収集する工程、を包含
する。
胞の性特徴を決定する上記工程、および精子細胞をその
性特徴の決定に従って選別する上記工程が、以下の工
程： ａ．選別されるウシ精子細胞を供給する細胞供給源を確
立する工程； ｂ．ウシ精子細胞のための、約２．９％のクエン酸ナト
リウムを含むシース流体を確立する工程； ｃ．細胞の特性を感受する工程； ｄ．所望の性特徴を有する細胞間を識別する工程；およ
び ｅ．所望の性特徴を有する細胞を収集する工程、を包含
する。
【００３６】１つの実施形態においては、複数の精子細
胞の性特徴を決定する上記工程、および精子細胞をその
性特徴の決定に従って選別する上記工程が、以下の工
程： ａ．選別されるウマ精子細胞を供給する細胞供給源を確
立する工程； ｂ．ウマ精子細胞のための、ヘペス緩衝化培地を含むシ
ース流体を確立する工程； ｃ．細胞の特性を感受する工程； ｄ．所望の性特徴を有する細胞間を識別する工程；およ
び ｅ．所望の性特徴を有する細胞を収集する工程、を包含
する。
胞の性特徴を決定する上記工程、および精子細胞をその
性特徴の決定に従って選別する上記工程が、以下の工
程： ａ．選別されるウマ精子細胞を供給する細胞供給源を確
立する工程； ｂ．ウマ精子細胞のための、ヘペス緩衝化培地を含むシ
ース流体を確立する工程； ｃ．細胞の特性を感受する工程； ｄ．所望の性特徴を有する細胞間を識別する工程；およ
び ｅ．所望の性特徴を有する細胞を収集する工程、を包含
する。
【００３７】１つの実施形態においては、複数の精子細
胞の性特徴を決定する上記工程、および精子細胞をその
性特徴の決定に従って選別する上記工程が、以下の工
程： ａ．選別される細胞を供給する細胞供給源を確立する工
程； ｂ．細胞のためのシース流体を確立する工程； ｃ．細胞の特性を感受する工程； ｄ．所望の性特徴を有する細胞間を識別する工程；およ
び ｅ．所望の性特徴を有する細胞を収集し、一方細胞を収
集容器との衝撃から緩衝する工程、を包含する。
胞の性特徴を決定する上記工程、および精子細胞をその
性特徴の決定に従って選別する上記工程が、以下の工
程： ａ．選別される細胞を供給する細胞供給源を確立する工
程； ｂ．細胞のためのシース流体を確立する工程； ｃ．細胞の特性を感受する工程； ｄ．所望の性特徴を有する細胞間を識別する工程；およ
び ｅ．所望の性特徴を有する細胞を収集し、一方細胞を収
集容器との衝撃から緩衝する工程、を包含する。
【００３８】１つの実施形態においては、複数の精子細
胞の性特徴を決定する上記工程、および精子細胞をその
性特徴の決定に従って選別する上記工程が、以下の工
程： ａ．選別されるウシ精子細胞を供給する細胞供給源を確
立する工程； ｂ．ウシ精子細胞のためのシース流体を確立する工程； ｃ．ウシ精子細胞の特性を感受する工程； ｄ．所望の性特徴を有するウシ精子細胞間を識別する工
程；および ｅ．所望の性特徴を有するウシ精子細胞を、上記収集工
程を開始する前に約６％の卵黄を含むクエン酸収集液中
で収集する、工程、を包含する。
胞の性特徴を決定する上記工程、および精子細胞をその
性特徴の決定に従って選別する上記工程が、以下の工
程： ａ．選別されるウシ精子細胞を供給する細胞供給源を確
立する工程； ｂ．ウシ精子細胞のためのシース流体を確立する工程； ｃ．ウシ精子細胞の特性を感受する工程； ｄ．所望の性特徴を有するウシ精子細胞間を識別する工
程；および ｅ．所望の性特徴を有するウシ精子細胞を、上記収集工
程を開始する前に約６％の卵黄を含むクエン酸収集液中
で収集する、工程、を包含する。
【００３９】本発明の別の局面によれば、所望の性の哺
乳動物を産生する方法が提供され、この方法は、上記プ
ロセスを使用して上記哺乳動物を産生する工程を包含す
る。
乳動物を産生する方法が提供され、この方法は、上記プ
ロセスを使用して上記哺乳動物を産生する工程を包含す
る。
【００４０】１つの実施形態においては、上記方法は、
精子細胞を高速で選別する工程をさらに包含する。
精子細胞を高速で選別する工程をさらに包含する。
【００４１】１つの実施形態においては、上記方法は、
排卵製剤を用いて、複数の卵の産生を生じる工程をさら
に包含し、そしてここで哺乳動物の種の雌内の少なくと
も１つの卵を、代表的な雌雄識別されていない人工受精
投与量に対して統計学的に比較可能な成功レベルで受精
する上記工程が、複数の卵を受精して、雌雄識別された
複数の胚を産生する工程を包含する。
排卵製剤を用いて、複数の卵の産生を生じる工程をさら
に包含し、そしてここで哺乳動物の種の雌内の少なくと
も１つの卵を、代表的な雌雄識別されていない人工受精
投与量に対して統計学的に比較可能な成功レベルで受精
する上記工程が、複数の卵を受精して、雌雄識別された
複数の胚を産生する工程を包含する。
【００４２】１つの実施形態においては、排卵製剤を用
いて、複数の卵の産生を生じる上記工程が、１投与量の
卵胞刺激ホルモンを一日に複数回注入する工程を包含す
る。
いて、複数の卵の産生を生じる上記工程が、１投与量の
卵胞刺激ホルモンを一日に複数回注入する工程を包含す
る。
【００４３】１つの実施形態においては、卵胞刺激ホル
モンの投与量を一日に複数回注入する上記工程が、おお
よそ半日の増分で、発情周期の９日目と１２日目との間
の６、６、４、４、２、２、２、および２ｍｇの投与量
レベルを含む卵胞刺激ホルモンを注入する工程を包含
し、そして卵胞刺激ホルモンの第６および第７の投与量
において、それぞれ２５および１２．５ｍｇのプロスタ
グランジンＦ−２−αを注入する工程をさらに包含す
る。
モンの投与量を一日に複数回注入する上記工程が、おお
よそ半日の増分で、発情周期の９日目と１２日目との間
の６、６、４、４、２、２、２、および２ｍｇの投与量
レベルを含む卵胞刺激ホルモンを注入する工程を包含
し、そして卵胞刺激ホルモンの第６および第７の投与量
において、それぞれ２５および１２．５ｍｇのプロスタ
グランジンＦ−２−αを注入する工程をさらに包含す
る。
【００４４】１つの実施形態においては、上記方法が、
以下の工程： ａ．雄哺乳動物の精子細胞を染色する工程； ｂ．精子細胞の性に従って、高速フローサイトメトリー
の使用によって選別する工程；および ｃ．選別された精子細胞を濃縮する工程、さらに包含す
る。
以下の工程： ａ．雄哺乳動物の精子細胞を染色する工程； ｂ．精子細胞の性に従って、高速フローサイトメトリー
の使用によって選別する工程；および ｃ．選別された精子細胞を濃縮する工程、さらに包含す
る。
【００４５】本発明の別の局面によれば、所望の細胞を
単離するための改良されたフローサイトメーターシステ
ムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべき細胞
を供給する細胞供給源； ｂ．細胞のための、約２．９％のクエン酸ナトリウムを
含むシース流体環境を作製する、シース流体供給源； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するように作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．所望の特徴を有する細胞が内部に配置される、コレ
クター、を備える。
単離するための改良されたフローサイトメーターシステ
ムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべき細胞
を供給する細胞供給源； ｂ．細胞のための、約２．９％のクエン酸ナトリウムを
含むシース流体環境を作製する、シース流体供給源； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するように作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．所望の特徴を有する細胞が内部に配置される、コレ
クター、を備える。
【００４６】１つの実施形態においては、上記細胞供給
源が、ウシ精子細胞を含む。
源が、ウシ精子細胞を含む。
【００４７】本発明の別の局面によれば、所望の細胞を
単離するための改良されたフローサイトメーターシステ
ムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべき細胞
を供給する細胞供給源； ｂ．細胞のための、ヘペス緩衝化培地を含むシース流体
環境を作製する、シース流体供給源； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するように作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．所望の特徴を有する細胞が内部に配置される、コレ
クター、を備える。
単離するための改良されたフローサイトメーターシステ
ムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべき細胞
を供給する細胞供給源； ｂ．細胞のための、ヘペス緩衝化培地を含むシース流体
環境を作製する、シース流体供給源； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するように作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．所望の特徴を有する細胞が内部に配置される、コレ
クター、を備える。
【００４８】１つの実施形態においては、上記細胞供給
源が、ウマ精子細胞を含む。
源が、ウマ精子細胞を含む。
【００４９】本発明の別の局面によれば、所望の細胞を
単離するための改良されたフローサイトメーターシステ
ムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべき細胞
を供給する細胞供給源； ｂ．細胞のためのシース流体環境を作製する、シース流
体供給源； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するように作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．所望の特徴を有する細胞が内部に配置され、そして
約６％の卵黄を含むクエン酸コレクター流体を含む、コ
レクター、を備える。
単離するための改良されたフローサイトメーターシステ
ムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべき細胞
を供給する細胞供給源； ｂ．細胞のためのシース流体環境を作製する、シース流
体供給源； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するように作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．所望の特徴を有する細胞が内部に配置され、そして
約６％の卵黄を含むクエン酸コレクター流体を含む、コ
レクター、を備える。
【００５０】１つの実施形態においては、上記シース流
体供給源が、約２．９％のクエン酸ナトリウムを含む溶
液を含む。
体供給源が、約２．９％のクエン酸ナトリウムを含む溶
液を含む。
【００５１】１つの実施形態においては、上記細胞供給
源が、ウシ精子細胞を含む。
源が、ウシ精子細胞を含む。
【００５２】本発明の別の局面によれば、所望の細胞を
単離するための改良されたフローサイトメーターシステ
ムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべき細胞
を供給する細胞供給源； ｂ．細胞のためのシース流体環境を作製する、シース流
体供給源； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するように作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．所望の特徴を有する細胞が内部に配置され、そして
流動に適合される容器の物理的特徴を有する試験管を備
える、コレクター、を備える。
単離するための改良されたフローサイトメーターシステ
ムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべき細胞
を供給する細胞供給源； ｂ．細胞のためのシース流体環境を作製する、シース流
体供給源； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するように作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．所望の特徴を有する細胞が内部に配置され、そして
流動に適合される容器の物理的特徴を有する試験管を備
える、コレクター、を備える。
【００５３】１つの実施形態においては、上記細胞供給
源が、機械的に繊細である細胞を含む。
源が、機械的に繊細である細胞を含む。
【００５４】１つの実施形態においては、上記細胞供給
源が、周囲の流体環境の化学的組成物に対して過応答受
性である細胞を含む。
源が、周囲の流体環境の化学的組成物に対して過応答受
性である細胞を含む。
【００５５】１つの実施形態においては、上記コレクタ
ーが、低用量の精子を提供するために使用される。
ーが、低用量の精子を提供するために使用される。
【００５６】１つの実施形態においては、上記ノズル、
上記発振器、上記細胞感受システム、および上記ソータ
ー識別システムが、フローサイトメーターシステムの部
分であり、そしてここでこのフローサイトメーターシス
テムが、高速セルソーターを備える。
上記発振器、上記細胞感受システム、および上記ソータ
ー識別システムが、フローサイトメーターシステムの部
分であり、そしてここでこのフローサイトメーターシス
テムが、高速セルソーターを備える。
【００５７】１つの実施形態においては、上記ノズル、
上記発振器、上記細胞感受システム、および上記ソータ
ー識別システムが、フローサイトメーターシステムの部
分であり、そしてここでこのフローサイトメーターシス
テムが、高速セルソーターを備える。
上記発振器、上記細胞感受システム、および上記ソータ
ー識別システムが、フローサイトメーターシステムの部
分であり、そしてここでこのフローサイトメーターシス
テムが、高速セルソーターを備える。
【００５８】本発明の別の局面によれば、雌雄識別され
た精子標本が提供され、この標本は、上記システムに従
って産生される。
た精子標本が提供され、この標本は、上記システムに従
って産生される。
【００５９】１つの実施形態においては、上記コレクタ
ーは、低用量の精子を提供するために使用される。
ーは、低用量の精子を提供するために使用される。
【００６０】１つの実施形態においては、上記ノズル、
上記発振器、上記細胞感受システム、および上記ソータ
ー識別システムが、フローサイトメーターシステムの部
分であり、そしてここでこのフローサイトメーターシス
テムが、高速セルソーターを備える。
上記発振器、上記細胞感受システム、および上記ソータ
ー識別システムが、フローサイトメーターシステムの部
分であり、そしてここでこのフローサイトメーターシス
テムが、高速セルソーターを備える。
【００６１】１つの実施形態においては、上記コレクタ
ーは、低用量の精子を提供するために使用される。
ーは、低用量の精子を提供するために使用される。
【００６２】本発明の別の局面によれば、上記のシステ
ムに従って産生される雌雄識別された精子標本を使用し
て産生される、哺乳動物が提供される。
ムに従って産生される雌雄識別された精子標本を使用し
て産生される、哺乳動物が提供される。
【００６３】１つの実施形態においては、上記哺乳動物
は、低用量の精子の使用によって産生される。
は、低用量の精子の使用によって産生される。
【００６４】１つの実施形態においては、上記ノズル、
上記発振器、上記細胞感受システム、および上記ソータ
ー識別システムが、フローサイトメーターシステムの部
分であり、そしてここでこのフローサイトメーターシス
テムが、高速セルソーターを備える。
上記発振器、上記細胞感受システム、および上記ソータ
ー識別システムが、フローサイトメーターシステムの部
分であり、そしてここでこのフローサイトメーターシス
テムが、高速セルソーターを備える。
【００６５】１つの実施形態においては、上記哺乳動物
は、低用量の精子の使用によって産生される。
は、低用量の精子の使用によって産生される。
【００６６】本発明の別の局面によれば、所望の細胞を
単離するための、改良されたフローサイトメーターシス
テムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべき細胞
を供給する、細胞供給源； ｂ．選別前および選別後の細胞流体環境の両方で調整さ
れるように選択される、細胞のためのシース流体環境を
作製する、化学的に調整されたシース流体供給源； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するために作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．所望の特徴を有する細胞が内部に配置される、コレ
クター、を備える。
単離するための、改良されたフローサイトメーターシス
テムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべき細胞
を供給する、細胞供給源； ｂ．選別前および選別後の細胞流体環境の両方で調整さ
れるように選択される、細胞のためのシース流体環境を
作製する、化学的に調整されたシース流体供給源； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するために作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．所望の特徴を有する細胞が内部に配置される、コレ
クター、を備える。
【００６７】１つの実施形態においては、上記選別前お
よび選別後の細胞流体環境が、上記細胞が特に応答性で
ある少なくとも１つの過応答性化学組成物を含み、そし
て上記化学的に調整されるシース流体供給源が、この過
応答性化学的組成物に対する変化を最小化する。
よび選別後の細胞流体環境が、上記細胞が特に応答性で
ある少なくとも１つの過応答性化学組成物を含み、そし
て上記化学的に調整されるシース流体供給源が、この過
応答性化学的組成物に対する変化を最小化する。
【００６８】１つの実施形態においては、上記過応答性
化学的組成物が、代謝性化学的組成物を含む。
化学的組成物が、代謝性化学的組成物を含む。
【００６９】１つの実施形態においては、上記過応答性
化学的組成物がクエン酸を含む。
化学的組成物がクエン酸を含む。
【００７０】１つの実施形態においては、上記細胞供給
源が、上記選別前細胞流体環境を作製し、そして上記コ
レクターが、上記選別後細胞流体環境を作製する。
源が、上記選別前細胞流体環境を作製し、そして上記コ
レクターが、上記選別後細胞流体環境を作製する。
【００７１】１つの実施形態においては、上記細胞供給
源が非修復細胞を含む。
源が非修復細胞を含む。
【００７２】１つの実施形態においては、上記細胞供給
源が、非転写ＤＮＡを有する細胞を含む。
源が、非転写ＤＮＡを有する細胞を含む。
【００７３】１つの実施形態においては、上記細胞供給
源が、非複製ＤＮＡを有する細胞を含む。
源が、非複製ＤＮＡを有する細胞を含む。
【００７４】１つの実施形態においては、上記細胞供給
源が、精子細胞を含む。
源が、精子細胞を含む。
【００７５】１つの実施形態においては、上記細胞供給
源が、ウシ精子細胞を含む。
源が、ウシ精子細胞を含む。
【００７６】１つの実施形態においては、上記細胞供給
源が、ウマ精子細胞を含む。
源が、ウマ精子細胞を含む。
【００７７】１つの実施形態においては、上記細胞供給
源が、シース流体環境中の化学的組成物に対して過応答
受性である細胞を含む。
源が、シース流体環境中の化学的組成物に対して過応答
受性である細胞を含む。
【００７８】１つの実施形態においては、上記コレクタ
ーが、低用量の精子を提供するために使用される。
ーが、低用量の精子を提供するために使用される。
【００７９】１つの実施形態においては、上記低用量の
精子が、代表的な投与量の約１０％未満の投与量を含
む。
精子が、代表的な投与量の約１０％未満の投与量を含
む。
【００８０】１つの実施形態においては、上記精子細胞
がウシ精子細胞を含み、そして上記低用量の精子が、約
５０万未満の精子の投与量を含む。
がウシ精子細胞を含み、そして上記低用量の精子が、約
５０万未満の精子の投与量を含む。
【００８１】１つの実施形態においては、上記精子細胞
がウシ精子細胞を含み、そして上記低用量の精子が、約
３０万未満の精子の投与量を含む。
がウシ精子細胞を含み、そして上記低用量の精子が、約
３０万未満の精子の投与量を含む。
【００８２】１つの実施形態においては、上記精子細胞
がウマ精子細胞を含み、そして上記低用量の精子が、約
１０００万未満の精子の投与量を含む。
がウマ精子細胞を含み、そして上記低用量の精子が、約
１０００万未満の精子の投与量を含む。
【００８３】１つの実施形態においては、上記化学的に
調整されたシース流体供給源が、約２．９％のクエン酸
ナトリウムを含む溶液を含む。
調整されたシース流体供給源が、約２．９％のクエン酸
ナトリウムを含む溶液を含む。
【００８４】１つの実施形態においては、上記細胞供給
源が、ウシ精子細胞を含む。
源が、ウシ精子細胞を含む。
【００８５】本発明の別の局面によれば、所望の細胞を
単離するための改良されたフローサイトメーターシステ
ムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべき細胞
を供給する細胞供給源； ｂ．細胞のための、約２．９％のクエン酸ナトリウムを
含む溶液を含むシース流体環境を作製する、シース流体
供給源； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するように作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．所望の特徴を有する細胞が内部に配置される、コレ
クター、を備える。
単離するための改良されたフローサイトメーターシステ
ムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべき細胞
を供給する細胞供給源； ｂ．細胞のための、約２．９％のクエン酸ナトリウムを
含む溶液を含むシース流体環境を作製する、シース流体
供給源； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するように作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．所望の特徴を有する細胞が内部に配置される、コレ
クター、を備える。
【００８６】１つの実施形態においては、上記コレクタ
ーは、人工授精のための精子を提供するために使用され
る。
ーは、人工授精のための精子を提供するために使用され
る。
【００８７】１つの実施形態においては、上記コレクタ
ーは、人工授精のための低用量の精子を提供するために
使用される。
ーは、人工授精のための低用量の精子を提供するために
使用される。
【００８８】１つの実施形態においては、上記化学的に
調整されたシース流体供給源が、ヘペス緩衝化培地を含
む溶液を含む。
調整されたシース流体供給源が、ヘペス緩衝化培地を含
む溶液を含む。
【００８９】１つの実施形態においては、上記細胞供給
源が、ウマ精子細胞を含む。
源が、ウマ精子細胞を含む。
【００９０】本発明の別の局面によれば、所望の細胞を
単離するための改良されたフローサイトメーターシステ
ムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべき細胞
を供給する細胞供給源； ｂ．細胞のための、ヘペス緩衝化培地を含む溶液を含む
シース流体環境を作製する、シース流体供給源； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するように作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．所望の特徴を有する細胞が内部に配置される、コレ
クター、を備える。
単離するための改良されたフローサイトメーターシステ
ムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべき細胞
を供給する細胞供給源； ｂ．細胞のための、ヘペス緩衝化培地を含む溶液を含む
シース流体環境を作製する、シース流体供給源； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するように作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．所望の特徴を有する細胞が内部に配置される、コレ
クター、を備える。
【００９１】１つの実施形態においては、上記コレクタ
ーは、人工授精のための精子を提供するために使用され
る。
ーは、人工授精のための精子を提供するために使用され
る。
【００９２】１つの実施形態においては、上記コレクタ
ーは、人工授精のための低用量の精子を提供するために
使用される。
ーは、人工授精のための低用量の精子を提供するために
使用される。
【００９３】１つの実施形態においては、上記ノズル、
上記発振器、上記細胞感受システム、および上記ソータ
ー識別システムが、フローサイトメーターシステムの部
分であり、そしてここでこのフローサイトメーターシス
テムが、高速セルソーターを備える。
上記発振器、上記細胞感受システム、および上記ソータ
ー識別システムが、フローサイトメーターシステムの部
分であり、そしてここでこのフローサイトメーターシス
テムが、高速セルソーターを備える。
【００９４】１つの実施形態においては、上記高速セル
ソーターが、１秒あたり少なくとも約５００を選別する
速度で、分析されるべき細胞を選別する。
ソーターが、１秒あたり少なくとも約５００を選別する
速度で、分析されるべき細胞を選別する。
【００９５】１つの実施形態においては、上記高速セル
ソーターが、１平方インチあたり少なくとも約５０ポン
ドの圧力で操作される。
ソーターが、１平方インチあたり少なくとも約５０ポン
ドの圧力で操作される。
【００９６】１つの実施形態においては、上記コレクタ
ーが緩衝要素を含む容器を備える。
ーが緩衝要素を含む容器を備える。
【００９７】１つの実施形態においては、上記容器が、
広い収集管を備える。
広い収集管を備える。
【００９８】本発明の別の局面によれば、所望の細胞を
単離するための改良されたフローサイトメーターシステ
ムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべきウシ
精子細胞を供給する細胞供給源； ｂ．細胞のための、約２．９％のクエン酸ナトリウムを
含むシース流体環境を作製する、化学的に調整されたシ
ース流体供給源； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するように作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．所望の特徴を有する細胞が内部に配置され、約６％
の卵黄を含むクエン酸収集流体を含み、そして約５０万
未満の精子の投与量を提供するために使用される、コレ
クター、を備え、ここで、これらのノズル、発振器、細
胞感受システム、およびソーター識別システムが、フロ
ーサイトメーターシステムの一部であって、このフロー
サイトメーターシステムが、１秒あたり少なくとも約５
００を選別する速度で、分析されるべき精子細胞を選別
し、そして１平方インチあたり少なくとも約５０ポンド
の圧力で操作される。
単離するための改良されたフローサイトメーターシステ
ムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべきウシ
精子細胞を供給する細胞供給源； ｂ．細胞のための、約２．９％のクエン酸ナトリウムを
含むシース流体環境を作製する、化学的に調整されたシ
ース流体供給源； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するように作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．所望の特徴を有する細胞が内部に配置され、約６％
の卵黄を含むクエン酸収集流体を含み、そして約５０万
未満の精子の投与量を提供するために使用される、コレ
クター、を備え、ここで、これらのノズル、発振器、細
胞感受システム、およびソーター識別システムが、フロ
ーサイトメーターシステムの一部であって、このフロー
サイトメーターシステムが、１秒あたり少なくとも約５
００を選別する速度で、分析されるべき精子細胞を選別
し、そして１平方インチあたり少なくとも約５０ポンド
の圧力で操作される。
【００９９】本発明の別の局面によれば、所望の細胞を
単離するための改良されたフローサイトメーターシステ
ムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべきウマ
精子細胞を供給する細胞供給源； ｂ．細胞のための、ヘペス緩衝化培地を含むシース流体
環境を作製する、化学的に調整されたシース流体供給
源； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するように作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．所望の特徴を有する細胞が内部に配置され、ヘペス
緩衝化培地を含む収集流体を含み、そして約１０００万
未満の精子の投与量を提供するために使用される、コレ
クター、を備え、ここで、これらのノズル、発振器、細
胞感受システム、およびソーター識別システムが、フロ
ーサイトメーターシステムの一部であって、このフロー
サイトメーターシステムが、１秒あたり少なくとも約５
００を選別する速度で、分析されるべき細胞を選別し、
そして１平方インチあたり少なくとも約５０ポンドの圧
力で操作される。
単離するための改良されたフローサイトメーターシステ
ムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべきウマ
精子細胞を供給する細胞供給源； ｂ．細胞のための、ヘペス緩衝化培地を含むシース流体
環境を作製する、化学的に調整されたシース流体供給
源； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するように作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．所望の特徴を有する細胞が内部に配置され、ヘペス
緩衝化培地を含む収集流体を含み、そして約１０００万
未満の精子の投与量を提供するために使用される、コレ
クター、を備え、ここで、これらのノズル、発振器、細
胞感受システム、およびソーター識別システムが、フロ
ーサイトメーターシステムの一部であって、このフロー
サイトメーターシステムが、１秒あたり少なくとも約５
００を選別する速度で、分析されるべき細胞を選別し、
そして１平方インチあたり少なくとも約５０ポンドの圧
力で操作される。
【０１００】本発明の別の局面によれば、所望の細胞を
単離するための、改良されたフローサイトメーターシス
テムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべき細胞
を供給する、細胞供給源； ｂ．細胞のためのシース流体環境と、選別前および選別
後の細胞流体環境の両方との間の変化を最小化するため
の手段； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するために作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．所望の特徴を有する細胞が内部に配置される、コレ
クター、を備える。
単離するための、改良されたフローサイトメーターシス
テムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべき細胞
を供給する、細胞供給源； ｂ．細胞のためのシース流体環境と、選別前および選別
後の細胞流体環境の両方との間の変化を最小化するため
の手段； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するために作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．所望の特徴を有する細胞が内部に配置される、コレ
クター、を備える。
【０１０１】１つの実施形態においては、細胞のための
シース流体環境と選別前および選別後の細胞流体環境の
両方との間の変化を最小化するための上記手段が、上記
シース流体を含む。
シース流体環境と選別前および選別後の細胞流体環境の
両方との間の変化を最小化するための上記手段が、上記
シース流体を含む。
【０１０２】１つの実施形態においては、上記コレクタ
ーがコレクター流体を含み、そして細胞のためのシース
流体環境と選別前および選別後の細胞流体環境の両方と
の間の変化を最小化するための上記手段が、このコレク
ター流体を含む。
ーがコレクター流体を含み、そして細胞のためのシース
流体環境と選別前および選別後の細胞流体環境の両方と
の間の変化を最小化するための上記手段が、このコレク
ター流体を含む。
【０１０３】本発明の別の局面によれば、所望の細胞を
単離するための改良されたフローサイトメーターシステ
ムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべき細胞
を供給する細胞供給源； ｂ．細胞のためのシース流体環境を作製する、シース流
体供給源； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するように作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．所望の特徴を有する細胞が内部に配置され、そして
化学的に調整されたコレクター流体シース流体共有源を
備える、コレクターであって、このコレクター流体シー
ス流体供給源が、以前の細胞流体環境で調整されるよう
選択される、細胞のためのコレクター流体環境を作製す
る、コレクター、を備える。
単離するための改良されたフローサイトメーターシステ
ムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべき細胞
を供給する細胞供給源； ｂ．細胞のためのシース流体環境を作製する、シース流
体供給源； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するように作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．所望の特徴を有する細胞が内部に配置され、そして
化学的に調整されたコレクター流体シース流体共有源を
備える、コレクターであって、このコレクター流体シー
ス流体供給源が、以前の細胞流体環境で調整されるよう
選択される、細胞のためのコレクター流体環境を作製す
る、コレクター、を備える。
【０１０４】１つの実施形態においては、上記コレクタ
ー流体が、細胞の選別の完了後に栄養分のレベルを平均
化するために調整される栄養分を含む。
ー流体が、細胞の選別の完了後に栄養分のレベルを平均
化するために調整される栄養分を含む。
【０１０５】１つの実施形態においては、上記コレクタ
ー流体が、約６％の卵黄を含むクエン酸溶液を含む。
ー流体が、約６％の卵黄を含むクエン酸溶液を含む。
【０１０６】１つの実施形態においては、上記細胞供給
源が、上記コレクター流体環境中の化学的組成物に対し
て過応答性である細胞を含む。
源が、上記コレクター流体環境中の化学的組成物に対し
て過応答性である細胞を含む。
【０１０７】１つの実施形態においては、上記細胞供給
源が精子細胞を含む。
源が精子細胞を含む。
【０１０８】１つの実施形態においては、上記細胞供給
源がウシ精子細胞を含む。
源がウシ精子細胞を含む。
【０１０９】１つの実施形態においては、上記コレクタ
ーが、低用量の精子を提供するために使用される。
ーが、低用量の精子を提供するために使用される。
【０１１０】１つの実施形態においては、上記低用量の
精子が、代表的な投与量の約１０％未満の投与量を含
む。
精子が、代表的な投与量の約１０％未満の投与量を含
む。
【０１１１】１つの実施形態においては、上記精子細胞
がウシ精子細胞を含み、そして上記低用量の精子が、約
５０万未満の精子の投与量を含む。
がウシ精子細胞を含み、そして上記低用量の精子が、約
５０万未満の精子の投与量を含む。
【０１１２】１つの実施形態においては、上記精子細胞
がウシ精子細胞を含み、そして上記低用量の精子が、約
３０万未満の精子の投与量を含む。
がウシ精子細胞を含み、そして上記低用量の精子が、約
３０万未満の精子の投与量を含む。
【０１１３】１つの実施形態においては、上記ノズル、
上記発振器、上記細胞感受システム、および上記ソータ
ー識別システムが、フローサイトメーターシステムの部
分であり、そしてここで、このフローサイトメーターシ
ステムが、高速セルソーターを備える。
上記発振器、上記細胞感受システム、および上記ソータ
ー識別システムが、フローサイトメーターシステムの部
分であり、そしてここで、このフローサイトメーターシ
ステムが、高速セルソーターを備える。
【０１１４】１つの実施形態においては、上記高速セル
ソーターが、分析されるべき細胞を、１秒あたり少なく
とも約５００を選別する速度で選別する。
ソーターが、分析されるべき細胞を、１秒あたり少なく
とも約５００を選別する速度で選別する。
【０１１５】１つの実施形態においては、上記高速セル
ソーターが、１平方インチあたり少なくとも約５０ポン
ドの圧力で操作される。
ソーターが、１平方インチあたり少なくとも約５０ポン
ドの圧力で操作される。
【０１１６】１つの実施形態においては、上記シース流
体供給源が、選別前および選別後の精子流体環境の両方
で調整されるように選択される、細胞のためのシース流
体環境を作製する、化学的に調整されたシース流体供給
源を備える。
体供給源が、選別前および選別後の精子流体環境の両方
で調整されるように選択される、細胞のためのシース流
体環境を作製する、化学的に調整されたシース流体供給
源を備える。
【０１１７】１つの実施形態においては、上記化学的に
調整されたシース流体供給源が、約２．９％のクエン酸
ナトリウムを含む溶液を含む。
調整されたシース流体供給源が、約２．９％のクエン酸
ナトリウムを含む溶液を含む。
【０１１８】本発明の別の局面によれば、所望の細胞を
単離するための改良されたフローサイトメーターシステ
ムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべき細胞
を供給する細胞供給源； ｂ．細胞のためのシース流体環境を作製する、シース流
体供給源； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するように作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．緩衝要素を備えるコレクター、を備える。
単離するための改良されたフローサイトメーターシステ
ムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべき細胞
を供給する細胞供給源； ｂ．細胞のためのシース流体環境を作製する、シース流
体供給源； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するように作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．緩衝要素を備えるコレクター、を備える。
【０１１９】１つの実施形態においては、上記コレクタ
ーが、上記緩衝要素を備える容器を備える。
ーが、上記緩衝要素を備える容器を備える。
【０１２０】１つの実施形態においては、上記容器が広
い収集管を備える。
い収集管を備える。
【０１２１】１つの実施形態においては、上記広い収集
管が、少なくとも約１５ｍｍの幅である。
管が、少なくとも約１５ｍｍの幅である。
【０１２２】１つの実施形態においては、上記容器が、
流動に適合される容器の物理的特徴を有する試験管を備
える。
流動に適合される容器の物理的特徴を有する試験管を備
える。
【０１２３】１つの実施形態においては、上記細胞供給
源が、機械的に繊細である細胞を含む。
源が、機械的に繊細である細胞を含む。
【０１２４】１つの実施形態においては、上記細胞供給
源が精子細胞を含む。
源が精子細胞を含む。
【０１２５】１つの実施形態においては、上記コレクタ
ーが緩衝要素を備える。
ーが緩衝要素を備える。
【０１２６】１つの実施形態においては、上記コレクタ
ーが、上記緩衝要素を備える容器を備える。
ーが、上記緩衝要素を備える容器を備える。
【０１２７】１つの実施形態においては、上記容器が広
い収集管を備える。
い収集管を備える。
【０１２８】１つの実施形態においては、上記広い収集
管が、少なくとも約１５ｍｍの幅である。
管が、少なくとも約１５ｍｍの幅である。
【０１２９】１つの実施形態においては、上記容器が、
流動に適合される容器の物理的特徴を有する試験管を備
える。
流動に適合される容器の物理的特徴を有する試験管を備
える。
【０１３０】１つの実施形態においては、上記細胞供給
源が、機械的に繊細である細胞を含む。
源が、機械的に繊細である細胞を含む。
【０１３１】１つの実施形態においては、上記細胞供給
源が精子細胞を含む。
源が精子細胞を含む。
【０１３２】１つの実施形態においては、上記ノズル、
上記発振器、上記細胞感受システム、および上記ソータ
ー識別システムが、フローサイトメーターシステムの部
分であり、そしてここで、このフローサイトメーターシ
ステムが、高速セルソーターを備える。
上記発振器、上記細胞感受システム、および上記ソータ
ー識別システムが、フローサイトメーターシステムの部
分であり、そしてここで、このフローサイトメーターシ
ステムが、高速セルソーターを備える。
【０１３３】１つの実施形態においては、上記セルソー
ターが、１秒あたり少なくとも約５００を選別する速度
で、分析されるべき細胞を選別する。
ターが、１秒あたり少なくとも約５００を選別する速度
で、分析されるべき細胞を選別する。
【０１３４】１つの実施形態においては、上記高速セル
ソーターが、１平方インチあたり少なくとも約５０ポン
ドの圧力で操作される。
ソーターが、１平方インチあたり少なくとも約５０ポン
ドの圧力で操作される。
【０１３５】本発明の別の局面によれば、所望の細胞を
単離するための、改良されたフローサイトメーターシス
テムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべき細胞
を供給する、細胞供給源； ｂ．細胞のためのシース流体環境を作製する、シース流
体供給源； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するように作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．細胞とコレクターとの間の衝撃を回避するための手
段を備える、コレクター、を備える。
単離するための、改良されたフローサイトメーターシス
テムが提供され、このシステムは、以下： ａ．フローサイトメーターによって分析されるべき細胞
を供給する、細胞供給源； ｂ．細胞のためのシース流体環境を作製する、シース流
体供給源； ｃ．細胞が、シース流体環境に供される間に通過する、
ノズル； ｄ．シース流体がノズルを通過する際にシース流体に作
用する、発振器； ｅ．細胞に応答する、細胞感受システム； ｆ．所望の特徴を有する細胞を選別するように作用す
る、ソーター識別システム；および ｇ．細胞とコレクターとの間の衝撃を回避するための手
段を備える、コレクター、を備える。
【０１３６】本発明の別の局面によれば、予め決定され
た性を有する哺乳動物を産生する方法が提供され、この
方法は、以下の工程： ａ．哺乳動物の雄の種から精子細胞を収集する工程； ｂ．複数の精子細胞の性特徴を決定する工程； ｃ．その性特徴の決定に従って精子細胞を選別する工
程； ｄ．代表的な人工受精投与量と比較して、少ない数の精
子細胞を有する受精サンプルを確立する工程； ｅ．受精サンプルの少なくとも一部を、哺乳動物の雌種
に挿入する工程； ｆ．哺乳動物の雌種内の少なくとも１つの卵を受精させ
る工程；ならびに ｇ．所望の性の子孫哺乳動物を産生する工程、を包含す
る。
た性を有する哺乳動物を産生する方法が提供され、この
方法は、以下の工程： ａ．哺乳動物の雄の種から精子細胞を収集する工程； ｂ．複数の精子細胞の性特徴を決定する工程； ｃ．その性特徴の決定に従って精子細胞を選別する工
程； ｄ．代表的な人工受精投与量と比較して、少ない数の精
子細胞を有する受精サンプルを確立する工程； ｅ．受精サンプルの少なくとも一部を、哺乳動物の雌種
に挿入する工程； ｆ．哺乳動物の雌種内の少なくとも１つの卵を受精させ
る工程；ならびに ｇ．所望の性の子孫哺乳動物を産生する工程、を包含す
る。
【０１３７】１つの実施形態においては、哺乳動物の雄
の種から精子細胞を収集する上記工程が、ウシおよびウ
マからなる群より選択される哺乳動物の雄の種から精子
細胞を収集する工程を包含する。
の種から精子細胞を収集する上記工程が、ウシおよびウ
マからなる群より選択される哺乳動物の雄の種から精子
細胞を収集する工程を包含する。
【０１３８】１つの実施形態においては、代表的な人工
受精投与量と比較して、少ない数の精子細胞を有する受
精サンプルを確立する上記工程が、代表的な雌雄識別さ
れていない人工授精事象において提供される精子の代表
的な数の１０％以下を有する受精サンプルを確立する工
程を包含する。
受精投与量と比較して、少ない数の精子細胞を有する受
精サンプルを確立する上記工程が、代表的な雌雄識別さ
れていない人工授精事象において提供される精子の代表
的な数の１０％以下を有する受精サンプルを確立する工
程を包含する。
【０１３９】１つの実施形態においては、代表的な人工
受精投与量と比較して、少ない数の精子細胞を有する受
精サンプルを確立する上記工程が、１０万以下の精子細
胞のウシ受精サンプル、２５万以下の精子細胞のウシ受
精サンプル、３０万以下の精子細胞のウシ受精サンプ
ル、１００万以下の精子細胞のウマ受精サンプル、５０
０万以下の精子細胞のウマ受精サンプル、１０００万以
下の精子細胞のウマ受精サンプル、および２５００万以
下の精子細胞のウマ受精サンプルからなる群より選択さ
れる受精サンプルを確立する工程を包含する。
受精投与量と比較して、少ない数の精子細胞を有する受
精サンプルを確立する上記工程が、１０万以下の精子細
胞のウシ受精サンプル、２５万以下の精子細胞のウシ受
精サンプル、３０万以下の精子細胞のウシ受精サンプ
ル、１００万以下の精子細胞のウマ受精サンプル、５０
０万以下の精子細胞のウマ受精サンプル、１０００万以
下の精子細胞のウマ受精サンプル、および２５００万以
下の精子細胞のウマ受精サンプルからなる群より選択さ
れる受精サンプルを確立する工程を包含する。
【０１４０】１つの実施形態においては、受精サンプル
の少なくとも一部を哺乳動物の種の雌に挿入する上記工
程、および少なくとも１つの卵を哺乳動物の種の雌内で
受精させる上記工程が、各々野外環境において達成され
る。
の少なくとも一部を哺乳動物の種の雌に挿入する上記工
程、および少なくとも１つの卵を哺乳動物の種の雌内で
受精させる上記工程が、各々野外環境において達成され
る。
【０１４１】１つの実施形態においては、受精サンプル
の少なくとも一部を哺乳動物の種の雌に挿入する上記工
程が、受精サンプルを、胎芽移植機器の使用によって子
宮角内に挿入する工程をさらに包含する。
の少なくとも一部を哺乳動物の種の雌に挿入する上記工
程が、受精サンプルを、胎芽移植機器の使用によって子
宮角内に挿入する工程をさらに包含する。
【０１４２】１つの実施形態においては、複数の精子細
胞の性特徴を決定する上記工程が、細胞を、高濃度の染
料を用いて染色する工程を包含する。
胞の性特徴を決定する上記工程が、細胞を、高濃度の染
料を用いて染色する工程を包含する。
【０１４３】１つの実施形態においては、複数の精子細
胞の性特徴を決定する上記工程、およびその性特徴の決
定に従って精子細胞を選別する上記工程が、以下の工
程： ａ．選別されるべき細胞を供給する細胞供給源を確立す
る工程； ｂ．選別前細胞流体環境および選別後細胞流体環境の両
方で調整される、細胞のためのシース流体環境を作製す
るために、シース流体を化学的に調整する工程； ｃ．細胞の特性を感受する工程； ｄ．所望の性特徴を有する細胞間を識別する工程；なら
びに ｅ．所望の性特徴を有する細胞を収集する工程、を包含
する。
胞の性特徴を決定する上記工程、およびその性特徴の決
定に従って精子細胞を選別する上記工程が、以下の工
程： ａ．選別されるべき細胞を供給する細胞供給源を確立す
る工程； ｂ．選別前細胞流体環境および選別後細胞流体環境の両
方で調整される、細胞のためのシース流体環境を作製す
るために、シース流体を化学的に調整する工程； ｃ．細胞の特性を感受する工程； ｄ．所望の性特徴を有する細胞間を識別する工程；なら
びに ｅ．所望の性特徴を有する細胞を収集する工程、を包含
する。
【０１４４】本発明の別の局面によれば、所望の性の哺
乳動物を産生する方法が提供され、この方法は、上記プ
ロセスを使用して上記哺乳動物を産生する工程を包含す
る。
乳動物を産生する方法が提供され、この方法は、上記プ
ロセスを使用して上記哺乳動物を産生する工程を包含す
る。
【０１４５】１つの実施形態においては、上記方法は、
上記細胞を高速で選別する工程をさらに包含する。
上記細胞を高速で選別する工程をさらに包含する。
【０１４６】本発明の別の局面によれば、細胞を選別す
る方法が提供され、この方法は、以下の工程： ａ．選別される細胞を供給する細胞供給源を確立する工
程； ｂ．選別前および選別後の細胞流体環境の両方で調整さ
れる、細胞のためのシース流体環境を作製するために、
シース流体を化学的に調整する工程； ｃ．細胞の特性を感受する工程； ｄ．所望の特徴を有する細胞間を識別する工程；および ｅ．所望の特徴を有する細胞を収集する工程、を包含す
る。
る方法が提供され、この方法は、以下の工程： ａ．選別される細胞を供給する細胞供給源を確立する工
程； ｂ．選別前および選別後の細胞流体環境の両方で調整さ
れる、細胞のためのシース流体環境を作製するために、
シース流体を化学的に調整する工程； ｃ．細胞の特性を感受する工程； ｄ．所望の特徴を有する細胞間を識別する工程；および ｅ．所望の特徴を有する細胞を収集する工程、を包含す
る。
【０１４７】１つの実施形態においては、上記方法は、
上記細胞が上記シース流体に供される結果として供され
る化学的変化を最小化する工程をさらに包含する。
上記細胞が上記シース流体に供される結果として供され
る化学的変化を最小化する工程をさらに包含する。
【０１４８】１つの実施形態においては、細胞供給源を
確立する上記工程が、非修復細胞の供給源を確立する工
程を包含する。
確立する上記工程が、非修復細胞の供給源を確立する工
程を包含する。
【０１４９】１つの実施形態においては、細胞供給源を
確立する上記工程が、精子細胞の供給源を確立する工程
を包含する。
確立する上記工程が、精子細胞の供給源を確立する工程
を包含する。
【０１５０】１つの実施形態においては、細胞供給源を
確立する上記工程が、ウシ精子細胞の供給源を確立する
工程を包含する。
確立する上記工程が、ウシ精子細胞の供給源を確立する
工程を包含する。
【０１５１】１つの実施形態においては、細胞供給源を
確立する上記工程が、ウマ精子細胞の供給源を確立する
工程を包含する。
確立する上記工程が、ウマ精子細胞の供給源を確立する
工程を包含する。
【０１５２】１つの実施形態においては、上記方法は、
低用量の上記精子細胞を使用して哺乳動物を受精させる
工程をさらに包含する。
低用量の上記精子細胞を使用して哺乳動物を受精させる
工程をさらに包含する。
【０１５３】１つの実施形態においては、選別前および
選別後の細胞流体環境の両方で調整される、細胞のため
のシース流体環境を作製するために、シース流体を化学
的に調整する上記工程が、約２．９％のクエン酸ナトリ
ウムを含むシース流体を確立する工程を包含する。
選別後の細胞流体環境の両方で調整される、細胞のため
のシース流体環境を作製するために、シース流体を化学
的に調整する上記工程が、約２．９％のクエン酸ナトリ
ウムを含むシース流体を確立する工程を包含する。
【０１５４】１つの実施形態においては、選別前および
選別後の細胞流体環境の両方で調整される、細胞のため
のシース流体環境を作製するために、シース流体を化学
的に調整する上記工程が、ヘペス緩衝化培地を含むシー
ス流体を確立する工程を包含する。
選別後の細胞流体環境の両方で調整される、細胞のため
のシース流体環境を作製するために、シース流体を化学
的に調整する上記工程が、ヘペス緩衝化培地を含むシー
ス流体を確立する工程を包含する。
【０１５５】１つの実施形態においては、上記方法は、
上記細胞を高速で選別する工程をさらに包含する。
上記細胞を高速で選別する工程をさらに包含する。
【０１５６】１つの実施形態においては、細胞を高速で
選別する上記工程が、細胞を１平方インチあたり少なく
とも約５０ポンドの圧力に供する工程を包含する。
選別する上記工程が、細胞を１平方インチあたり少なく
とも約５０ポンドの圧力に供する工程を包含する。
【０１５７】１つの実施形態においては、所望の特徴を
有する細胞を収集する上記工程が、上記細胞の上記収集
容器との衝撃を緩衝する工程を包含する。
有する細胞を収集する上記工程が、上記細胞の上記収集
容器との衝撃を緩衝する工程を包含する。
【０１５８】１つの実施形態においては、細胞の収集容
器との衝撃を緩衝する上記工程が、広い開口部をこの容
器に提供する工程を包含する。
器との衝撃を緩衝する上記工程が、広い開口部をこの容
器に提供する工程を包含する。
【０１５９】本発明の別の局面によれば、細胞を選別す
る方法が提供され、この方法は、以下の工程： ａ．選別されるべき細胞を供給する細胞供給源を確立す
る工程； ｂ．細胞のためのシース流体環境を作製するために、シ
ース流体を確立する工程； ｃ．細胞の特性を感受する工程； ｄ．所望の性特徴を有する細胞間を識別する工程； ｅ．所望の性特徴を有する細胞をコレクター流体におい
て収集する工程；ならびに ｆ．選別前流体環境で調整される、細胞のための終了コ
レクター流体環境を作製するために、このコレクター流
体を化学的に調整する工程、を包含する。
る方法が提供され、この方法は、以下の工程： ａ．選別されるべき細胞を供給する細胞供給源を確立す
る工程； ｂ．細胞のためのシース流体環境を作製するために、シ
ース流体を確立する工程； ｃ．細胞の特性を感受する工程； ｄ．所望の性特徴を有する細胞間を識別する工程； ｅ．所望の性特徴を有する細胞をコレクター流体におい
て収集する工程；ならびに ｆ．選別前流体環境で調整される、細胞のための終了コ
レクター流体環境を作製するために、このコレクター流
体を化学的に調整する工程、を包含する。
【０１６０】１つの実施形態においては、細胞供給源を
確立する上記工程が、細胞のための最初の栄養素を提供
する工程を包含し、そしてさらに、細胞のための収集流
体栄養素を提供する工程を包含し、そしてコレクター流
体において所望の特徴を有する細胞を収集する上記工程
が、細胞を収集する工程の完了後に、最初の栄養素とコ
レクター流体栄養素とを平衡化させる工程を包含する。
確立する上記工程が、細胞のための最初の栄養素を提供
する工程を包含し、そしてさらに、細胞のための収集流
体栄養素を提供する工程を包含し、そしてコレクター流
体において所望の特徴を有する細胞を収集する上記工程
が、細胞を収集する工程の完了後に、最初の栄養素とコ
レクター流体栄養素とを平衡化させる工程を包含する。
【０１６１】１つの実施形態においては、コレクター流
体において所望の特徴を有する細胞を収集する上記工程
が、収集するこの工程を開始する前に、約６％の卵黄を
含むクエン酸収集流体を確立する工程を包含する。
体において所望の特徴を有する細胞を収集する上記工程
が、収集するこの工程を開始する前に、約６％の卵黄を
含むクエン酸収集流体を確立する工程を包含する。
【０１６２】１つの実施形態においては、細胞供給源を
確立する上記工程が、ウシ精子細胞の供給源を確立する
工程を包含する。
確立する上記工程が、ウシ精子細胞の供給源を確立する
工程を包含する。
【０１６３】１つの実施形態においては、上記方法は、
低用量の上記精子細胞を使用して、哺乳動物を受精させ
る工程をさらに包含する。
低用量の上記精子細胞を使用して、哺乳動物を受精させ
る工程をさらに包含する。
【０１６４】本発明の別の局面によれば、細胞を選別す
る方法が提供され、この方法は、以下の工程： ａ．選別されるべき細胞を供給する細胞供給源を確立す
る工程； ｂ．細胞のためのシース流体環境を作製するために、シ
ース流体を確立する工程； ｃ．細胞の特性を感受する工程； ｄ．所望の性特徴を有する細胞間を識別する工程；なら
びに ｅ．所望の性特徴を有する細胞を収集する工程であっ
て、細胞が収集容器と衝突することを緩衝する工程を包
含する、工程、を包含する。
る方法が提供され、この方法は、以下の工程： ａ．選別されるべき細胞を供給する細胞供給源を確立す
る工程； ｂ．細胞のためのシース流体環境を作製するために、シ
ース流体を確立する工程； ｃ．細胞の特性を感受する工程； ｄ．所望の性特徴を有する細胞間を識別する工程；なら
びに ｅ．所望の性特徴を有する細胞を収集する工程であっ
て、細胞が収集容器と衝突することを緩衝する工程を包
含する、工程、を包含する。
【０１６５】１つの実施形態においては、細胞が収集容
器と衝突することを緩衝する上記工程が、この容器に広
い開口部を提供する工程を包含する。
器と衝突することを緩衝する上記工程が、この容器に広
い開口部を提供する工程を包含する。
【０１６６】１つの実施形態においては、細胞供給源を
提供する上記工程が、機械的に繊細である細胞の供給源
を確立する工程を包含する。
提供する上記工程が、機械的に繊細である細胞の供給源
を確立する工程を包含する。
【０１６７】１つの実施形態においては、細胞供給源を
確立する上記工程が、精子細胞の供給源を確立する工程
を包含する。
確立する上記工程が、精子細胞の供給源を確立する工程
を包含する。
【０１６８】１つの実施形態においては、上記方法は、
上記細胞を高速で選別する工程をさらに包含する。
上記細胞を高速で選別する工程をさらに包含する。
【０１６９】１つの実施形態においては、細胞を高速で
選別する上記工程が、細胞を、１平方インチあたり少な
くとも約５０ポンドの圧力に供する工程を包含する。
選別する上記工程が、細胞を、１平方インチあたり少な
くとも約５０ポンドの圧力に供する工程を包含する。
【０１７０】本発明の別の局面によれば、雌雄識別され
た精子標本を産生する方法が提供され、この方法は、上
記プロセスを使用して標本を作製する工程を包含する。
た精子標本を産生する方法が提供され、この方法は、上
記プロセスを使用して標本を作製する工程を包含する。
【０１７１】１つの実施形態によれば、上記方法は、上
記細胞を高速で選別する工程をさらに包含する。
記細胞を高速で選別する工程をさらに包含する。
【０１７２】１つの実施形態においては、上記方法は、
低用量の上記精子細胞を使用して哺乳動物を受精させる
ための、雌雄識別された精子標本を提供する工程を、さ
らに包含する。
低用量の上記精子細胞を使用して哺乳動物を受精させる
ための、雌雄識別された精子標本を提供する工程を、さ
らに包含する。
【０１７３】１つの実施形態においては、上記方法は、
低用量の精子細胞を使用して哺乳動物を受精させるため
の、雌雄識別された精子標本を提供する工程を、さらに
包含する。
低用量の精子細胞を使用して哺乳動物を受精させるため
の、雌雄識別された精子標本を提供する工程を、さらに
包含する。
【０１７４】本発明の別の局面によれば、所望の性別の
哺乳動物を産生する方法が提供され、この方法は、上記
プロセスのいずれかを使用して哺乳動物を産生する工程
を包含する。
哺乳動物を産生する方法が提供され、この方法は、上記
プロセスのいずれかを使用して哺乳動物を産生する工程
を包含する。
【０１７５】１つの実施形態においては、上記方法は、
上記細胞を高速で選別する工程をさらに包含する。
上記細胞を高速で選別する工程をさらに包含する。
【０１７６】１つの実施形態においては、上記方法は、
低用量の精子細胞を使用して、哺乳動物を受精させる工
程をさらに包含する。
低用量の精子細胞を使用して、哺乳動物を受精させる工
程をさらに包含する。
【０１７７】１つの実施形態においては、上記方法は、
低用量の精子細胞を使用して、哺乳動物を受精させる工
程をさらに包含する。
低用量の精子細胞を使用して、哺乳動物を受精させる工
程をさらに包含する。
【０１７８】本発明の別の局面によれば、雌の哺乳動物
から、雌雄識別された性を有する胚を複数産生する方法
が提供され、この方法は、以下の工程： ａ．複数の卵が産生されるために排卵製剤を使用する工
程を包含する、少なくとも２つの卵を作製するために哺
乳動物において過剰排卵を作製する工程； ｂ．雄の哺乳動物の精子細胞の性を決定する工程； ｃ．精子細胞の性に従って選別する工程； ｄ．排卵の開始後に、雌の哺乳動物の子宮内に選別され
た精子細胞の少なくとも一部を挿入する工程；および ｅ．雌雄識別された胚を複数産生するために、子宮中の
複数の卵を受精させる工程、を包含する。
から、雌雄識別された性を有する胚を複数産生する方法
が提供され、この方法は、以下の工程： ａ．複数の卵が産生されるために排卵製剤を使用する工
程を包含する、少なくとも２つの卵を作製するために哺
乳動物において過剰排卵を作製する工程； ｂ．雄の哺乳動物の精子細胞の性を決定する工程； ｃ．精子細胞の性に従って選別する工程； ｄ．排卵の開始後に、雌の哺乳動物の子宮内に選別され
た精子細胞の少なくとも一部を挿入する工程；および ｅ．雌雄識別された胚を複数産生するために、子宮中の
複数の卵を受精させる工程、を包含する。
【０１７９】１つの実施形態においては、過剰排卵を作
製する上記工程が、発情周期の間に促進される。
製する上記工程が、発情周期の間に促進される。
【０１８０】１つの実施形態においては、排卵製剤を使
用する上記工程が、排卵製剤を、発情周期の任意の２日
目と１８日目との間、半日の増分で注入する工程を包含
する。
用する上記工程が、排卵製剤を、発情周期の任意の２日
目と１８日目との間、半日の増分で注入する工程を包含
する。
【０１８１】１つの実施形態においては、排卵製剤を半
日の増分で注入する上記工程が、少なくとも７回の注射
で注射する工程を包含し、そしてさらに少なくとも約６
回目および７回目の注射の際に排卵操作システムを組み
入れる工程を包含する。
日の増分で注入する上記工程が、少なくとも７回の注射
で注射する工程を包含し、そしてさらに少なくとも約６
回目および７回目の注射の際に排卵操作システムを組み
入れる工程を包含する。
【０１８２】１つの実施形態においては、子宮内に選別
された精子細胞の少なくとも一部を挿入する上記工程
が、精子細胞を、この子宮の両方の子宮角に挿入する工
程を包含する。
された精子細胞の少なくとも一部を挿入する上記工程
が、精子細胞を、この子宮の両方の子宮角に挿入する工
程を包含する。
【０１８３】１つの実施形態においては、両方の子宮角
内に挿入する上記工程が、上記排卵の開始後約２０〜２
４時間で精子細胞を挿入する工程を包含する。
内に挿入する上記工程が、上記排卵の開始後約２０〜２
４時間で精子細胞を挿入する工程を包含する。
【０１８４】１つの実施形態においては、複数の卵が産
生されるために排卵製剤を使用する上記工程が、１投与
量の卵胞刺激ホルモンを１日複数回注入する工程を包含
する。
生されるために排卵製剤を使用する上記工程が、１投与
量の卵胞刺激ホルモンを１日複数回注入する工程を包含
する。
【０１８５】１つの実施形態においては、少なくとも２
つの卵を作製するために哺乳動物において過剰排卵を作
製する上記工程が、上記投与量の卵胞刺激ホルモンにプ
ロスタグランジンＦ−２−αを補充する工程を包含す
る、排卵操作システムを組み入れる工程をさらに包含す
る。
つの卵を作製するために哺乳動物において過剰排卵を作
製する上記工程が、上記投与量の卵胞刺激ホルモンにプ
ロスタグランジンＦ−２−αを補充する工程を包含す
る、排卵操作システムを組み入れる工程をさらに包含す
る。
【０１８６】１つの実施形態においては、１日複数回卵
胞刺激ホルモンの投与量を注入する上記工程が、上記発
情期の９日と１２日との間の６、６、４、４、２、２、
２、および２ｍｇの投与量レベルでの約半日の増分にお
いて卵胞刺激ホルモンを注入する工程を包含し、ここ
で、卵胞刺激ホルモンの投与量にプロスタグランジンＦ
−２−αを補給する工程が、卵胞刺激ホルモンのそれぞ
れ第６および第７の投与量において、２５ｍｇおよび１
２．５ｍｇのプロスタグランジンＦ−２−αを注入する
工程を包含する。
胞刺激ホルモンの投与量を注入する上記工程が、上記発
情期の９日と１２日との間の６、６、４、４、２、２、
２、および２ｍｇの投与量レベルでの約半日の増分にお
いて卵胞刺激ホルモンを注入する工程を包含し、ここ
で、卵胞刺激ホルモンの投与量にプロスタグランジンＦ
−２−αを補給する工程が、卵胞刺激ホルモンのそれぞ
れ第６および第７の投与量において、２５ｍｇおよび１
２．５ｍｇのプロスタグランジンＦ−２−αを注入する
工程を包含する。
【０１８７】１つの実施形態においては、上記方法は、
以下の工程： ａ．雄の哺乳動物の精子細胞を染色する工程； ｂ．高速フローサイトメトリーを使用して、精子細胞の
性に従って選別する工程；および ｃ．選別された精子細胞を濃縮する工程、をさらに包含
する。
以下の工程： ａ．雄の哺乳動物の精子細胞を染色する工程； ｂ．高速フローサイトメトリーを使用して、精子細胞の
性に従って選別する工程；および ｃ．選別された精子細胞を濃縮する工程、をさらに包含
する。
【０１８８】１つの実施形態においては、選別された精
子細胞の少なくとも一部を挿入する上記工程が、低用量
の精子細胞を使用する工程を包含する。
子細胞の少なくとも一部を挿入する上記工程が、低用量
の精子細胞を使用する工程を包含する。
【０１８９】１つの実施形態においては、選別された精
子細胞の少なくとも一部を挿入する上記工程が、低用量
の精子細胞を使用する工程を包含する。
子細胞の少なくとも一部を挿入する上記工程が、低用量
の精子細胞を使用する工程を包含する。
【０１９０】本発明の別の局面においては、所望の性の
哺乳動物を産生する方法が提供され、この方法は、上記
プロセスを使用して上記哺乳動物を産生する工程を包含
する。
哺乳動物を産生する方法が提供され、この方法は、上記
プロセスを使用して上記哺乳動物を産生する工程を包含
する。
【０１９１】本発明の別の局面においては、所望の性の
哺乳動物を産生する方法が提供され、この方法は、上記
プロセスを使用して、雌雄識別された精子細胞の哺乳動
物を産生する工程を包含し、そして上記細胞を高速で選
別する工程をさらに包含する。
哺乳動物を産生する方法が提供され、この方法は、上記
プロセスを使用して、雌雄識別された精子細胞の哺乳動
物を産生する工程を包含し、そして上記細胞を高速で選
別する工程をさらに包含する。
【０１９２】１つの実施形態においては、上記方法は、
上記雌の哺乳動物を、低用量の精子細胞を使用して受精
させる工程をさらに包含する。
上記雌の哺乳動物を、低用量の精子細胞を使用して受精
させる工程をさらに包含する。
【０１９３】１つの実施形態においては、上記方法は、
選別前および選別後の細胞流体環境の両方で調整され
る、細胞のためのシース流体環境を作製するために、シ
ース流体を化学的に調整する上記工程をさらに包含し、
この工程は、約２．９％のクエン酸ナトリウムを含むシ
ース流体を確立する工程を包含する。
選別前および選別後の細胞流体環境の両方で調整され
る、細胞のためのシース流体環境を作製するために、シ
ース流体を化学的に調整する上記工程をさらに包含し、
この工程は、約２．９％のクエン酸ナトリウムを含むシ
ース流体を確立する工程を包含する。
【０１９４】１つの実施形態においては、選別前および
選別後の細胞流体環境の両方で調整される、細胞のため
のシース流体環境を作製するために、シース流体を化学
的に調整する上記工程が、ヘペス緩衝化培地含むシース
流体を確立する工程を包含する。
選別後の細胞流体環境の両方で調整される、細胞のため
のシース流体環境を作製するために、シース流体を化学
的に調整する上記工程が、ヘペス緩衝化培地含むシース
流体を確立する工程を包含する。
【０１９５】１つの実施形態においては、上記方法は、
上記性の精子細胞を収集する工程、および細胞が収集容
器と衝突することを緩衝する工程を、さらに包含する。
上記性の精子細胞を収集する工程、および細胞が収集容
器と衝突することを緩衝する工程を、さらに包含する。
【０１９６】本発明の別の局面によれば、細胞を選別す
る方法が提供され、この方法は、以下の工程： ａ．選別されるべき細胞を供給する細胞供給源を確立す
る工程； ｂ．選別前の細胞流体環境と選別後の細胞流体環境との
両方によって調整される、細胞のためのシース流体環境
を作製するために、シース流体を化学的に調整する工
程； ｃ．細胞の特性を感受する工程； ｄ．所望の性特徴を有する細胞間を識別する工程；およ
び ｅ．所望の性特徴を有する細胞を収集する工程、を包含
する。
る方法が提供され、この方法は、以下の工程： ａ．選別されるべき細胞を供給する細胞供給源を確立す
る工程； ｂ．選別前の細胞流体環境と選別後の細胞流体環境との
両方によって調整される、細胞のためのシース流体環境
を作製するために、シース流体を化学的に調整する工
程； ｃ．細胞の特性を感受する工程； ｄ．所望の性特徴を有する細胞間を識別する工程；およ
び ｅ．所望の性特徴を有する細胞を収集する工程、を包含
する。
【０１９７】１つの実施形態においては、上記方法は、
上記細胞を高速で選別する工程をさらに包含する。
上記細胞を高速で選別する工程をさらに包含する。
【０１９８】
【発明の実施の形態】みられるように、本発明の基本概
念は、種々の方法において組み合わせられ、そして包含
され得る。本発明は、単に、商業的に実用的な低用量、
性交での受精およびこの結果を含む。フローサイトメト
リ分離技術について、本発明はまた、改良されたフロー
サイトメーターシステム、ならびに人工受精およびこの
ような技術により産生される動物に使用され得る性特異
的精子サンプルの作製についてのシステムの両方を含
む。本発明は、高い成功率が商業的な環境においてでさ
え可能である全体的なプロセスを含む。さらに、この技
術は、一般的な様式で開示されるので、一旦、この一般
的な原理が理解されると、これらの技術が特定のシステ
ムおよび適用に適用され得る。デバイス増強が開示され
るが、これらの増強は、特定の方法を達成するのみでは
なく、多数の方法において変動され、そして組み合わさ
れ得ることが理解されるべきである。重要なことに、上
記の全てに関して、これらの様相の各々が、本開示によ
り包含されることが理解されるべきである。
念は、種々の方法において組み合わせられ、そして包含
され得る。本発明は、単に、商業的に実用的な低用量、
性交での受精およびこの結果を含む。フローサイトメト
リ分離技術について、本発明はまた、改良されたフロー
サイトメーターシステム、ならびに人工受精およびこの
ような技術により産生される動物に使用され得る性特異
的精子サンプルの作製についてのシステムの両方を含
む。本発明は、高い成功率が商業的な環境においてでさ
え可能である全体的なプロセスを含む。さらに、この技
術は、一般的な様式で開示されるので、一旦、この一般
的な原理が理解されると、これらの技術が特定のシステ
ムおよび適用に適用され得る。デバイス増強が開示され
るが、これらの増強は、特定の方法を達成するのみでは
なく、多数の方法において変動され、そして組み合わさ
れ得ることが理解されるべきである。重要なことに、上
記の全てに関して、これらの様相の各々が、本開示によ
り包含されることが理解されるべきである。
【０１９９】述べたように、基本的な目的は、Ｙ保有精
子からＸ保有精子を分離することである。これは、各々
を別々に包装し、そして処理し得るように、２つの型の
精子を単離する様式において実行される。現在、この単
離は、好ましくは、フローサイトメトリの使用を通じて
実行される。一般にフローサイトメトリは、よく理解さ
れる技術である。例えば、それの基本的な局面は、Ｃｙ
ｔｏｍａｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．に対する種々の特許（例え
ば、米国特許および先に列挙された他の刊行物）におい
て示され、そして議論される。これらの特許および本明
細書中で引用される参考文献の各々は、参考として援用
される；従って、当業者は、含まれる基本的な原理を容
易に理解し得る。
子からＸ保有精子を分離することである。これは、各々
を別々に包装し、そして処理し得るように、２つの型の
精子を単離する様式において実行される。現在、この単
離は、好ましくは、フローサイトメトリの使用を通じて
実行される。一般にフローサイトメトリは、よく理解さ
れる技術である。例えば、それの基本的な局面は、Ｃｙ
ｔｏｍａｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．に対する種々の特許（例え
ば、米国特許および先に列挙された他の刊行物）におい
て示され、そして議論される。これらの特許および本明
細書中で引用される参考文献の各々は、参考として援用
される；従って、当業者は、含まれる基本的な原理を容
易に理解し得る。
【０２００】本質的に、フローサイトメトリは、いくつ
かの型の細胞供給源を通じてフローサイトメーター機器
に提供された、選別する対象（例えば、細胞）を含む。
概念的な機器を図１に示す。このフローサイトメーター
装置は、フローサイトメーターにより分析される細胞ま
たはいくつかの他の型の対象を確立するかまたは供給す
るように作用する、細胞供給源（１）を備える。この細
胞は、細胞がシース液（３）により包囲されるような様
式において、ノズル（２）内に蓄積される。このシース
液（３）は、通常、この細胞供給源（１）がその細胞を
供給し、このシース液（３）がノズル（２）を介して同
時に給送されるような、いくらかのシース液源（４）に
より供給される。この様式において、このシース液
（３）が細胞のためのシース液環境をどのように形成す
るか容易に理解され得る。種々の流体は、同じ圧力でフ
ローサイトメーターに提供されるために、それらはノズ
ル（２）から流出し、そしてノズル開口部（５）で出
る。発振制御（１９）を通じて非常に正確に制御され得
るいくつかの型の発振器（６）を提供することによっ
て、気圧波は、ノズル（２）内に定着され、そしてノズ
ル開口部（５）でのノズル（２）を出す流体に変換され
得る。従って、発振器（６）は、シース液（３）に作用
するために、ノズル開口部（５）を出る流動（７）は、
最終的および調節的にドロップ（８）を形成する。細胞
は、シース液環境に包囲されているので、ドロップ
（８）は、それらの内部に個々の単離された細胞または
他の対象を含み得る。
かの型の細胞供給源を通じてフローサイトメーター機器
に提供された、選別する対象（例えば、細胞）を含む。
概念的な機器を図１に示す。このフローサイトメーター
装置は、フローサイトメーターにより分析される細胞ま
たはいくつかの他の型の対象を確立するかまたは供給す
るように作用する、細胞供給源（１）を備える。この細
胞は、細胞がシース液（３）により包囲されるような様
式において、ノズル（２）内に蓄積される。このシース
液（３）は、通常、この細胞供給源（１）がその細胞を
供給し、このシース液（３）がノズル（２）を介して同
時に給送されるような、いくらかのシース液源（４）に
より供給される。この様式において、このシース液
（３）が細胞のためのシース液環境をどのように形成す
るか容易に理解され得る。種々の流体は、同じ圧力でフ
ローサイトメーターに提供されるために、それらはノズ
ル（２）から流出し、そしてノズル開口部（５）で出
る。発振制御（１９）を通じて非常に正確に制御され得
るいくつかの型の発振器（６）を提供することによっ
て、気圧波は、ノズル（２）内に定着され、そしてノズ
ル開口部（５）でのノズル（２）を出す流体に変換され
得る。従って、発振器（６）は、シース液（３）に作用
するために、ノズル開口部（５）を出る流動（７）は、
最終的および調節的にドロップ（８）を形成する。細胞
は、シース液環境に包囲されているので、ドロップ
（８）は、それらの内部に個々の単離された細胞または
他の対象を含み得る。
【０２０１】ドロップ（８）は一般に、単離された細胞
を含むために、このフローサイトメーターは、適切な細
胞（単数または複数）がドロップ内に含まれるか否かに
基づいて液滴を区別し、そして分離し得る。これは、細
胞感受システム（９）を通じて達成される。この細胞感
受システムは、Ｌａｒｒｙ Ｊｏｈｎｓｏｎ、すなわ
ち、米国特許第５１３５７５９号による独創的な研究
（語呂合わせは意図されない）の長さで議論されるよう
に、各ドロップ（８）内に含まれる細胞に応答する少な
くともいくつかの型のセンサー（１０）を備える。Ｊｏ
ｈｎｓｏｎ特許が精子細胞を説明するように、この細胞
感受システム（９）は、レーザー励磁機（１１）のよう
ないくつかの刺激により励磁され得る特定の色素の相対
的な存在または相対的な非存在に依存する作用を生じ得
る。各々の型の精子細胞は、この色素により染色される
が、Ｘ染色体およびＹ染色体の異なる長さは、異なるレ
ベルの染色を生じる。従って、精子細胞中に存在する色
素の程度を検出することによって、それらの異なる発光
レベルによりＸ保有精子とＹ保有精子との間を識別する
ことが可能である。
を含むために、このフローサイトメーターは、適切な細
胞（単数または複数）がドロップ内に含まれるか否かに
基づいて液滴を区別し、そして分離し得る。これは、細
胞感受システム（９）を通じて達成される。この細胞感
受システムは、Ｌａｒｒｙ Ｊｏｈｎｓｏｎ、すなわ
ち、米国特許第５１３５７５９号による独創的な研究
（語呂合わせは意図されない）の長さで議論されるよう
に、各ドロップ（８）内に含まれる細胞に応答する少な
くともいくつかの型のセンサー（１０）を備える。Ｊｏ
ｈｎｓｏｎ特許が精子細胞を説明するように、この細胞
感受システム（９）は、レーザー励磁機（１１）のよう
ないくつかの刺激により励磁され得る特定の色素の相対
的な存在または相対的な非存在に依存する作用を生じ得
る。各々の型の精子細胞は、この色素により染色される
が、Ｘ染色体およびＹ染色体の異なる長さは、異なるレ
ベルの染色を生じる。従って、精子細胞中に存在する色
素の程度を検出することによって、それらの異なる発光
レベルによりＸ保有精子とＹ保有精子との間を識別する
ことが可能である。
【０２０２】フローサイトメーター分離技術において適
切な細胞の究極的な分離および単離を達成するために、
センサー（１０）により受け取られるシグナルは、いく
つかの型のソーター識別システム（１２）に送り込ま
れ、このシステムは、非常に迅速に決定を行い、そして
所望の細胞がドロップ（８）内に存在するか否かの決定
に基づいて各ドロップ（８）を差示的に荷電し得る。こ
の様式において、このソーター識別システム（１２）
は、それらが適切な細胞または他の対象を含むか否かに
基づいて、静電気的な偏向プレート（１３）が、ドロッ
プ（８）を偏向させることを許容するように作用する。
結果として、このフローサイトメーターは、細胞を１つ
以上のコレクター（１４）に収集させることによって、
細胞を分類するように作用する。従って、細胞または他
の対象のいくつかの性質を感受することによって、この
フローサイトメーターは、特定の特徴に基づく細胞間を
識別し、そして適切なコレクター（１４）に細胞を配置
する。精子を分類するために現在使用されるシステムに
おいて、Ｘ保有精子液滴は、正に荷電され、従って、１
つの方向へ偏向し、Ｙ保有精子液滴は、負に荷電され、
従って、他の向きに偏向し、そして廃棄された流動（す
なわち、選別不能細胞）は、荷電されず、従って、偏向
されない流動中において吸水管などに収集される。
切な細胞の究極的な分離および単離を達成するために、
センサー（１０）により受け取られるシグナルは、いく
つかの型のソーター識別システム（１２）に送り込ま
れ、このシステムは、非常に迅速に決定を行い、そして
所望の細胞がドロップ（８）内に存在するか否かの決定
に基づいて各ドロップ（８）を差示的に荷電し得る。こ
の様式において、このソーター識別システム（１２）
は、それらが適切な細胞または他の対象を含むか否かに
基づいて、静電気的な偏向プレート（１３）が、ドロッ
プ（８）を偏向させることを許容するように作用する。
結果として、このフローサイトメーターは、細胞を１つ
以上のコレクター（１４）に収集させることによって、
細胞を分類するように作用する。従って、細胞または他
の対象のいくつかの性質を感受することによって、この
フローサイトメーターは、特定の特徴に基づく細胞間を
識別し、そして適切なコレクター（１４）に細胞を配置
する。精子を分類するために現在使用されるシステムに
おいて、Ｘ保有精子液滴は、正に荷電され、従って、１
つの方向へ偏向し、Ｙ保有精子液滴は、負に荷電され、
従って、他の向きに偏向し、そして廃棄された流動（す
なわち、選別不能細胞）は、荷電されず、従って、偏向
されない流動中において吸水管などに収集される。
【０２０３】図２を参照すると、このプロセスは、さら
によく理解され得る。この図に示されるように、ノズル
（２）は、発振器（６）（図２で示されず）がドロップ
（８）を形成するので、流動（７）を発する。細胞供給
源（１）（図２に示されず）は、Ｊｏｈｎｓｏｎの技術
に従い染色されている精子細胞（１５）を供給し得るの
で、レーザー励磁機（１１）による光刺激は、それが流
動（７）から分離するように各ドロップ（８）上の電荷
の存在または非存在が、フローサイトメーターにより制
御され得るように、センサー（１０）によって差示的に
決定される。この制御は、それらの内容物に基づいて、
正荷電、負荷電、および非荷電ドロップ（８）を生じ
る。図２に示されるように、特定のドロップは、偏向さ
れたドロップ（１６）として示される。これらの偏向さ
れたドロップ（１６）は、一方の性または他方の性の精
子細胞（１５）を含むドロップである。次いで、それら
は、後の使用のために適切なコレクター（１４）に蓄積
される。
によく理解され得る。この図に示されるように、ノズル
（２）は、発振器（６）（図２で示されず）がドロップ
（８）を形成するので、流動（７）を発する。細胞供給
源（１）（図２に示されず）は、Ｊｏｈｎｓｏｎの技術
に従い染色されている精子細胞（１５）を供給し得るの
で、レーザー励磁機（１１）による光刺激は、それが流
動（７）から分離するように各ドロップ（８）上の電荷
の存在または非存在が、フローサイトメーターにより制
御され得るように、センサー（１０）によって差示的に
決定される。この制御は、それらの内容物に基づいて、
正荷電、負荷電、および非荷電ドロップ（８）を生じ
る。図２に示されるように、特定のドロップは、偏向さ
れたドロップ（１６）として示される。これらの偏向さ
れたドロップ（１６）は、一方の性または他方の性の精
子細胞（１５）を含むドロップである。次いで、それら
は、後の使用のために適切なコレクター（１４）に蓄積
される。
【０２０４】精子の選別に対するその適用に特に重要で
あるフローサイトメトリの１つの局面は、フローサイト
メーターの高速な作動である。進歩は、ＭｏＦｌｏ（登
録商標）商標の下でＣｙｔｏｍａｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．を
介して入手可能なフローサイトメーターにより特に作製
されている。これらのフローサイトメーターは、並外れ
て増加した選別速度を有し、従って、フローサイトメト
リを精子選別の現実的な商業的適用（他の商業的適用）
にするようである技術にした。それらは、別の利用され
る分類よりも著しくより速い速度での高速選別を達成す
るように作用する。具体的には、Ｃｙｔｏｍａｔｉｏ
ｎ’ｓ ＭｏＦｌｏ（登録商標）フローサイトメーター
は約５ｋＨｚよりも大きい発振器の周波数で作用し、そ
してより具体的には、１０〜３０か、またはさらに５０
ｋＨｚの範囲内において操作され得る。従って、液滴は
非常に高周波数で形成され、そしてシース液環境内に含
まれる細胞は、ノズル（２）から非常に迅速に放射され
得る。結果として、フローサイトメーターシステムを構
成しそして部分である、ノズル（２）、発振器（６）な
どのような構成要素の各々は、設定されるかまたは選択
され、高速な細胞ソーターを生じ得る。精子細胞の選別
に対する高速な細胞ソーターの適用において、１秒当た
り約５００を選別するよりも大きい速度での選別が達成
される。実際、１０００および１２００の範囲での選別
速度は、高速な細胞ソーターを介して既に達成されてい
る。重要なことに、用語「高速」は、フローサイトメト
リにおける他の利点および特定の適用が達成されるよう
な相対的な用語であり、「高」とみなされる局面は、変
動し得るかまたは絶対的なままであり得ることが理解さ
れるべきである。いずれかの定義において、この一般原
理は、精子細胞のような特定の細胞を選別する場合、こ
の分類が、フローサイトメーターのパラメーターおよび
物理的な性質が細胞自体に対して有意である速度で生じ
得ることである。
あるフローサイトメトリの１つの局面は、フローサイト
メーターの高速な作動である。進歩は、ＭｏＦｌｏ（登
録商標）商標の下でＣｙｔｏｍａｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．を
介して入手可能なフローサイトメーターにより特に作製
されている。これらのフローサイトメーターは、並外れ
て増加した選別速度を有し、従って、フローサイトメト
リを精子選別の現実的な商業的適用（他の商業的適用）
にするようである技術にした。それらは、別の利用され
る分類よりも著しくより速い速度での高速選別を達成す
るように作用する。具体的には、Ｃｙｔｏｍａｔｉｏ
ｎ’ｓ ＭｏＦｌｏ（登録商標）フローサイトメーター
は約５ｋＨｚよりも大きい発振器の周波数で作用し、そ
してより具体的には、１０〜３０か、またはさらに５０
ｋＨｚの範囲内において操作され得る。従って、液滴は
非常に高周波数で形成され、そしてシース液環境内に含
まれる細胞は、ノズル（２）から非常に迅速に放射され
得る。結果として、フローサイトメーターシステムを構
成しそして部分である、ノズル（２）、発振器（６）な
どのような構成要素の各々は、設定されるかまたは選択
され、高速な細胞ソーターを生じ得る。精子細胞の選別
に対する高速な細胞ソーターの適用において、１秒当た
り約５００を選別するよりも大きい速度での選別が達成
される。実際、１０００および１２００の範囲での選別
速度は、高速な細胞ソーターを介して既に達成されてい
る。重要なことに、用語「高速」は、フローサイトメト
リにおける他の利点および特定の適用が達成されるよう
な相対的な用語であり、「高」とみなされる局面は、変
動し得るかまたは絶対的なままであり得ることが理解さ
れるべきである。いずれかの定義において、この一般原
理は、精子細胞のような特定の細胞を選別する場合、こ
の分類が、フローサイトメーターのパラメーターおよび
物理的な性質が細胞自体に対して有意である速度で生じ
得ることである。
【０２０５】フローサイトメーター分離技術を介して精
子細胞を選別する場合に効果を示すようである高速選別
の１つの局面は、精子細胞がフローサイトメーター内に
供される、圧力および他のストレスのそれである。例え
ば、高速（および「高速」の代替的な定義）で操作した
場合、フローサイトメーターを、１インチの２乗当たり
５０ポンドおよび１インチの２乗当たり６０以上のポン
ドの圧力で操作され得る。これらの圧力は、高いとみな
され得る。なぜなら、これらの圧力は、選別されている
細胞に効果を生じ得るからである。この様相に対して本
発明で開示されるような手がかりは、特定の細胞のスト
レス閾値が決定因子であるという事実である。さらに、
さらなる知識が得られるので、ストレスの閾値は、細胞
の、特定の種、あるいは特定の前かまたは続く取扱いの
ような、組み合わされた効果の関数であることが示され
得る。このことに関しての手がかりは、細胞に課された
ストレスが、実際、所望の結果を達成するためにそれら
の生存率およびそれらの能力を変化し得ることである。
圧力の場合では、その圧力でフローサイトメーターの操
作の結果として精子細胞をより高い圧力に単に供するこ
とは、細胞の減少した性能を生じ得る。１つの点に関し
て、本発明は、これらのストレスを最小化するように作
用し、従って、以下で議論されるようなより大きい効率
ならびに低い用量を生じる。
子細胞を選別する場合に効果を示すようである高速選別
の１つの局面は、精子細胞がフローサイトメーター内に
供される、圧力および他のストレスのそれである。例え
ば、高速（および「高速」の代替的な定義）で操作した
場合、フローサイトメーターを、１インチの２乗当たり
５０ポンドおよび１インチの２乗当たり６０以上のポン
ドの圧力で操作され得る。これらの圧力は、高いとみな
され得る。なぜなら、これらの圧力は、選別されている
細胞に効果を生じ得るからである。この様相に対して本
発明で開示されるような手がかりは、特定の細胞のスト
レス閾値が決定因子であるという事実である。さらに、
さらなる知識が得られるので、ストレスの閾値は、細胞
の、特定の種、あるいは特定の前かまたは続く取扱いの
ような、組み合わされた効果の関数であることが示され
得る。このことに関しての手がかりは、細胞に課された
ストレスが、実際、所望の結果を達成するためにそれら
の生存率およびそれらの能力を変化し得ることである。
圧力の場合では、その圧力でフローサイトメーターの操
作の結果として精子細胞をより高い圧力に単に供するこ
とは、細胞の減少した性能を生じ得る。１つの点に関し
て、本発明は、これらのストレスを最小化するように作
用し、従って、以下で議論されるようなより大きい効率
ならびに低い用量を生じる。
【０２０６】細胞のストレスの局面を考慮する際に、本
発明は、このストレスを最小化する様式で作用する。こ
れらのストレスは、周期あるいは動物を制御、選別、ま
たは受精させるプロセスの全てにわたって任意の時点で
最小化され得る。重要なことに、フローサイトメーター
内で細胞を取扱うことによって課されるストレスは、こ
の適用に有意であるようである。本発明の１つの実施形
態において、シース液は、特異的に選択され、選別前細
胞流体の環境または選別後細胞流体の環境の両方（また
はいずれか）の調製された様式において供し得る。天然
では、選別前流体または選別後流体のいずれかで調節す
ることが可能であるが、１つの実施形態では、本発明
は、シース液（３）を調節し、以前に達成されたよりも
その細胞において有意に少ないストレスを課する。１つ
の点に関して、本発明は、細胞自体からのストレスを取
扱いそして取り除く際の焦点に対して、フローサイトメ
ーターの操作の焦点から総焦点を取り除くという点で顕
著である。例えば、適切なｐＨ因子または浸透圧（ｏｓ
ｍｏａｌｉｔｙ）を有する流体を利用することは公知と
なっているが、本発明は、細胞が過応答受性であり得る
特定の化学的組成物が存在し得ることを認識する。これ
らの過応答性の化学的組成物は、天然で、細胞に基づい
て、または細胞の取扱いの前でさえ変動し得る。重要な
ことに現在、精子細胞の特定の代謝性化学的組成物（例
えば、クエン酸）は、細胞上の異常な高ストレスを予防
するようであることが明白である。従って、過応答性の
化学的組成物は、細胞がそれらの機能性および既存の取
扱い技術の状況内で特に応答性である化学的組成物とし
て規定され得る。精子細胞に関して、代謝性組成物、具
体的には、ウシ精子細胞についてのクエン酸定常性およ
びウマ精子細胞についてのｈｅｐｅｓ緩衝液定常性は、
非常に重要であり得ることが明らかである。従って、本
発明は、操作の型または基質の選択を介する変化を最小
にするように作用し、これは、細胞が経験する変化を最
小にするための手段として作用し得る。
発明は、このストレスを最小化する様式で作用する。こ
れらのストレスは、周期あるいは動物を制御、選別、ま
たは受精させるプロセスの全てにわたって任意の時点で
最小化され得る。重要なことに、フローサイトメーター
内で細胞を取扱うことによって課されるストレスは、こ
の適用に有意であるようである。本発明の１つの実施形
態において、シース液は、特異的に選択され、選別前細
胞流体の環境または選別後細胞流体の環境の両方（また
はいずれか）の調製された様式において供し得る。天然
では、選別前流体または選別後流体のいずれかで調節す
ることが可能であるが、１つの実施形態では、本発明
は、シース液（３）を調節し、以前に達成されたよりも
その細胞において有意に少ないストレスを課する。１つ
の点に関して、本発明は、細胞自体からのストレスを取
扱いそして取り除く際の焦点に対して、フローサイトメ
ーターの操作の焦点から総焦点を取り除くという点で顕
著である。例えば、適切なｐＨ因子または浸透圧（ｏｓ
ｍｏａｌｉｔｙ）を有する流体を利用することは公知と
なっているが、本発明は、細胞が過応答受性であり得る
特定の化学的組成物が存在し得ることを認識する。これ
らの過応答性の化学的組成物は、天然で、細胞に基づい
て、または細胞の取扱いの前でさえ変動し得る。重要な
ことに現在、精子細胞の特定の代謝性化学的組成物（例
えば、クエン酸）は、細胞上の異常な高ストレスを予防
するようであることが明白である。従って、過応答性の
化学的組成物は、細胞がそれらの機能性および既存の取
扱い技術の状況内で特に応答性である化学的組成物とし
て規定され得る。精子細胞に関して、代謝性組成物、具
体的には、ウシ精子細胞についてのクエン酸定常性およ
びウマ精子細胞についてのｈｅｐｅｓ緩衝液定常性は、
非常に重要であり得ることが明らかである。従って、本
発明は、操作の型または基質の選択を介する変化を最小
にするように作用し、これは、細胞が経験する変化を最
小にするための手段として作用し得る。
【０２０７】シース液について、物質は、本発明の１つ
の実施形態に従って選択され、その結果、最小の変化を
与えるように化学的に調整され得る。従って、フローサ
イトメトリのパラメータの状況内のみではなく、むしろ
細胞のパラメータ自体の状況内でもまた適切なシース液
を選択することによって、細胞が経験した変化およびこ
の選別全体にわたる結果が増強され得る。これは、図３
に概念的に示される。図３は、いくつかの型の化学的な
因子（例えば、クエン酸または他の因子）を示す。なぜ
なら、それはこのプロセスの種々の相の至るところで存
在し得るからである。例えば、示される４つの相は、フ
ローサイトメトリ分離技術について示され限定されない
以下を表す：相Ｉは、細胞供給源（１）内の細胞の存在
を表し得、相ＩＩは、シース液環境内で選別されるよう
な細胞の存在を示し得、相ＩＩＩは、選別後に収集され
る細胞のような細胞を示し、および相ＩＶは、選別後の
貯蔵培地において再構成された細胞を示し得る。先行技
術に示されるようなこれらの４つの相は、非常に異なる
化学的因子の環境を経験し得る。しかし、本発明で概念
的に示されるように、細胞は、非常に小さい変化を経験
し得、最も著しくは、この相Ｉと相ＩＩとの間を経験し
たディップまたはドロップは、実質的に存在し得ない。
これは、上記のような適切なシース液の選択の結果とし
てである。従って、適切なシース液に供されている結果
として、本発明における細胞は、非常に低いレベルのス
トレスを経験し得る。
の実施形態に従って選択され、その結果、最小の変化を
与えるように化学的に調整され得る。従って、フローサ
イトメトリのパラメータの状況内のみではなく、むしろ
細胞のパラメータ自体の状況内でもまた適切なシース液
を選択することによって、細胞が経験した変化およびこ
の選別全体にわたる結果が増強され得る。これは、図３
に概念的に示される。図３は、いくつかの型の化学的な
因子（例えば、クエン酸または他の因子）を示す。なぜ
なら、それはこのプロセスの種々の相の至るところで存
在し得るからである。例えば、示される４つの相は、フ
ローサイトメトリ分離技術について示され限定されない
以下を表す：相Ｉは、細胞供給源（１）内の細胞の存在
を表し得、相ＩＩは、シース液環境内で選別されるよう
な細胞の存在を示し得、相ＩＩＩは、選別後に収集され
る細胞のような細胞を示し、および相ＩＶは、選別後の
貯蔵培地において再構成された細胞を示し得る。先行技
術に示されるようなこれらの４つの相は、非常に異なる
化学的因子の環境を経験し得る。しかし、本発明で概念
的に示されるように、細胞は、非常に小さい変化を経験
し得、最も著しくは、この相Ｉと相ＩＩとの間を経験し
たディップまたはドロップは、実質的に存在し得ない。
これは、上記のような適切なシース液の選択の結果とし
てである。従って、適切なシース液に供されている結果
として、本発明における細胞は、非常に低いレベルのス
トレスを経験し得る。
【０２０８】この現象に関して存在し得る可能性のある
普遍性の１つは、特定の化学的組成物が他よりも過応答
性である化学的組成物を表し得るという事実である。天
然では、これは精子の種、この取扱い、または含まれる
細胞の型にさえ依存して変動し得るが、それらの意図す
る目的（ここでは、人工受精）についての細胞の生存率
は、大きく、天然もしくは選別または両方のため、変動
して、この細胞は、その化学的組成物に関して過応答性
である特徴を示すようである。特定の代謝性の化学的組
成物を選択することによって、クエン酸回路内にある最
も著しいクエン酸または化学物質は、大きな利点が可能
なようである。従って、ウシ精子の適用について、この
シース液（３）は、約２．９パーセントのクエン酸ナト
リウム組成物を提示するように選択され、そして調整さ
れる。具体的には、２．９パーセントクエン酸ナトリウ
ム溶液は、以下のように作製され得る： １．１，０００ｍｌの容積測定フラスコ中に２９．０ｇ
のクエン酸ナトリウム２水和物（Ｎａ3Ｃ6Ｈ5Ｏ7・２Ｈ
2Ｏ）を置く ａ．３／４の水バッチにクエン酸ナトリウムを溶解し、
次いで、容積まで水を加える ２．脱イオン化またはＮａｎｏｐｕｒｅ水を加え１，０
００ｍｌの最終容積にする。 ３．ボトルに移し、そして１５ ｌｂｓ圧力（２４５o
Ｆ）で少なくとも３０分間オートクレーブする。
普遍性の１つは、特定の化学的組成物が他よりも過応答
性である化学的組成物を表し得るという事実である。天
然では、これは精子の種、この取扱い、または含まれる
細胞の型にさえ依存して変動し得るが、それらの意図す
る目的（ここでは、人工受精）についての細胞の生存率
は、大きく、天然もしくは選別または両方のため、変動
して、この細胞は、その化学的組成物に関して過応答性
である特徴を示すようである。特定の代謝性の化学的組
成物を選択することによって、クエン酸回路内にある最
も著しいクエン酸または化学物質は、大きな利点が可能
なようである。従って、ウシ精子の適用について、この
シース液（３）は、約２．９パーセントのクエン酸ナト
リウム組成物を提示するように選択され、そして調整さ
れる。具体的には、２．９パーセントクエン酸ナトリウ
ム溶液は、以下のように作製され得る： １．１，０００ｍｌの容積測定フラスコ中に２９．０ｇ
のクエン酸ナトリウム２水和物（Ｎａ3Ｃ6Ｈ5Ｏ7・２Ｈ
2Ｏ）を置く ａ．３／４の水バッチにクエン酸ナトリウムを溶解し、
次いで、容積まで水を加える ２．脱イオン化またはＮａｎｏｐｕｒｅ水を加え１，０
００ｍｌの最終容積にする。 ３．ボトルに移し、そして１５ ｌｂｓ圧力（２４５o
Ｆ）で少なくとも３０分間オートクレーブする。
【０２０９】ａ．蒸発を最小にする条件を使用して溶液
をオートクレーブする（カバーを緩める）。
をオートクレーブする（カバーを緩める）。
【０２１０】ｂ．水が蒸発しないことに注意。 ４．室温で緩徐に冷やす。 ５．５℃の低温室で密閉して貯蔵する。さらに、シース
液について、クエン酸ナトリウム溶液を濾過し得る。 ６．無菌技術を使用して０．２２ミクロンフィルターで
濾過する。
液について、クエン酸ナトリウム溶液を濾過し得る。 ６．無菌技術を使用して０．２２ミクロンフィルターで
濾過する。
【０２１１】興味深いことに、ウマの精子細胞について
は、このような組成物は、同様に実行しない。むしろ、
ウマの精子細胞について、ｈｅｐｅｓウシ配偶子培地の
ような、ｈｅｐｅｓ緩衝化培地−特に、ウシの適用のた
めにＪ．Ｊ．Ｐａｒｒｉｓｈにより以前に作製されたＨ
ＢＧＭ３−が功を奏する。この培地は、本明細書中で参
考として援用される論文「Ｃａｐａｃｉｔａｔｉｏｎ
ｏｆ ＢｏｖｉｎｅＳｐｅｒｍ ｂｙ Ｈｅｐａｒｉ
ｎ」、３８ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｒｅｐｒｏｄｕｃ
ｔｉｏｎ １１７１（１９８８）中で議論される。ウシ
精子に利用されるのと同じ型の物質ではないために、こ
れは驚きだけではなく、実際の緩衝液もまた、本来、ウ
シの適用に開発された。従って、ウマの適用において、
ｈｅｐｅｓ緩衝液を含むシース液が選択される。この溶
液は、以下の組成を有する、室温で約７．５４のｐＨ
（３９℃でｐＨ＝７．４）を有し得る：
は、このような組成物は、同様に実行しない。むしろ、
ウマの精子細胞について、ｈｅｐｅｓウシ配偶子培地の
ような、ｈｅｐｅｓ緩衝化培地−特に、ウシの適用のた
めにＪ．Ｊ．Ｐａｒｒｉｓｈにより以前に作製されたＨ
ＢＧＭ３−が功を奏する。この培地は、本明細書中で参
考として援用される論文「Ｃａｐａｃｉｔａｔｉｏｎ
ｏｆ ＢｏｖｉｎｅＳｐｅｒｍ ｂｙ Ｈｅｐａｒｉ
ｎ」、３８ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｒｅｐｒｏｄｕｃ
ｔｉｏｎ １１７１（１９８８）中で議論される。ウシ
精子に利用されるのと同じ型の物質ではないために、こ
れは驚きだけではなく、実際の緩衝液もまた、本来、ウ
シの適用に開発された。従って、ウマの適用において、
ｈｅｐｅｓ緩衝液を含むシース液が選択される。この溶
液は、以下の組成を有する、室温で約７．５４のｐＨ
（３９℃でｐＨ＝７．４）を有し得る：
【０２１２】
【表１】 本発明において相互作用し得る１つの他の局面は、含ま
れる細胞が、異常な感受性を経験し得るという事実であ
る。１つの点に関して、これは精子細胞が非修復細胞で
ある細胞のクラス内であるという事実に起因し得る。す
なわち、それらは、それ自体を修復する能力を有さず、
それ故、それらは、フローサイトメーターまたは他の取
扱い設備に対して代表的であるよりも感受的に処置され
ることを必要とし得る。従って、フローサイトメータ
ー、または他の分離デバイスが精子細胞の供給源を確立
するように作用する場合、この増強は、特に適用可能で
あることが適切であり得る。精子細胞のような細胞のク
ラスに独特であり得る、別の可能性のある関連する局面
は、それらのＤＮＡが非修復、非複製、および非転写で
あるという事実である。これらの因子のいずれかは、効
果を示し得、そしてそれらは、個々または一緒のいずれ
かで関連し得る。従って、本発明の教示は、非修復、非
翻訳、非転写細胞である、全ての配偶子細胞またはウイ
ルスなどにさえも適用し得る。
れる細胞が、異常な感受性を経験し得るという事実であ
る。１つの点に関して、これは精子細胞が非修復細胞で
ある細胞のクラス内であるという事実に起因し得る。す
なわち、それらは、それ自体を修復する能力を有さず、
それ故、それらは、フローサイトメーターまたは他の取
扱い設備に対して代表的であるよりも感受的に処置され
ることを必要とし得る。従って、フローサイトメータ
ー、または他の分離デバイスが精子細胞の供給源を確立
するように作用する場合、この増強は、特に適用可能で
あることが適切であり得る。精子細胞のような細胞のク
ラスに独特であり得る、別の可能性のある関連する局面
は、それらのＤＮＡが非修復、非複製、および非転写で
あるという事実である。これらの因子のいずれかは、効
果を示し得、そしてそれらは、個々または一緒のいずれ
かで関連し得る。従って、本発明の教示は、非修復、非
翻訳、非転写細胞である、全ての配偶子細胞またはウイ
ルスなどにさえも適用し得る。
【０２１３】また重要であり得るフローサイトメーター
処理の別々の局面は、選別された後に化学的および物理
的の両方で細胞を適切に処理する事実である。図４に示
されるように、ドロップ（８）内の細胞をコレクター
（１４）内に獲得するために、コレクターを構成する容
器は、適切なサイズであり、その結果細胞と容器自体と
の間の衝撃を回避するいくつかの手段として作用するこ
とが重要であり得る。細胞が容器の底部にぶつからない
ようにするため、細胞を収集する容器の底部に最初のコ
レクター流体（１７）を置くことは公知であるが、容器
内への細胞の衝突に起因する流動の提示ならびに回避不
能なはね（ｓｐｌａｓｈｉｎｇ）において変動に処理を
施すための容器の単純な広さは、この結果を増強するた
めに使用され得ることが明らかである。１つの点に関し
て、これは緩衝要素として作用し得、その結果機械的に
繊細であり得る細胞、すなわち、衝撃により破壊するか
または損傷を受け得る細胞は、適切に処理され得る。従
って、サイトメーター供給源が、選別されるべき細胞の
ように物理的に繊細な細胞である細胞を確立する場合、
開口部の広さ（１８）が細胞との接触を回避する様式に
おいて容器の壁を配置するために供する、広い収集管の
ようないくつかの型の緩衝要素を提供することは重要で
あり得る。従って、この管は、側壁にそれほど近接して
存在しないので、選別されるそれらの細胞と管壁との間
に接触の任意の有意な見込みが存在する。この様式にお
いて、コレクター流体（１７）に加えて、同様に広い収
集管を備えることが所望される。おそらく、コレクター
（１４）の部分として供する容器に広い開口部を単に提
供することは、有意であり得る。精子細胞の高速分類を
利用する適用のために、少なくとも１５ミリメーターの
内部直径の開口部を有する容器を提供することが有意で
あると考えられることが見出されている。具体的に、こ
のような適用において１４ｍｌのＦａｌｃｏｎ試験管を
利用する場合、コレクター（１４）の結果として細胞へ
の最小の物理的損傷が発見されている。
処理の別々の局面は、選別された後に化学的および物理
的の両方で細胞を適切に処理する事実である。図４に示
されるように、ドロップ（８）内の細胞をコレクター
（１４）内に獲得するために、コレクターを構成する容
器は、適切なサイズであり、その結果細胞と容器自体と
の間の衝撃を回避するいくつかの手段として作用するこ
とが重要であり得る。細胞が容器の底部にぶつからない
ようにするため、細胞を収集する容器の底部に最初のコ
レクター流体（１７）を置くことは公知であるが、容器
内への細胞の衝突に起因する流動の提示ならびに回避不
能なはね（ｓｐｌａｓｈｉｎｇ）において変動に処理を
施すための容器の単純な広さは、この結果を増強するた
めに使用され得ることが明らかである。１つの点に関し
て、これは緩衝要素として作用し得、その結果機械的に
繊細であり得る細胞、すなわち、衝撃により破壊するか
または損傷を受け得る細胞は、適切に処理され得る。従
って、サイトメーター供給源が、選別されるべき細胞の
ように物理的に繊細な細胞である細胞を確立する場合、
開口部の広さ（１８）が細胞との接触を回避する様式に
おいて容器の壁を配置するために供する、広い収集管の
ようないくつかの型の緩衝要素を提供することは重要で
あり得る。従って、この管は、側壁にそれほど近接して
存在しないので、選別されるそれらの細胞と管壁との間
に接触の任意の有意な見込みが存在する。この様式にお
いて、コレクター流体（１７）に加えて、同様に広い収
集管を備えることが所望される。おそらく、コレクター
（１４）の部分として供する容器に広い開口部を単に提
供することは、有意であり得る。精子細胞の高速分類を
利用する適用のために、少なくとも１５ミリメーターの
内部直径の開口部を有する容器を提供することが有意で
あると考えられることが見出されている。具体的に、こ
のような適用において１４ｍｌのＦａｌｃｏｎ試験管を
利用する場合、コレクター（１４）の結果として細胞へ
の最小の物理的損傷が発見されている。
【０２１４】１４ｍｌのファルコン試験管ですらも最適
ではないかもしれないことに注意すべきである。特に、
流れの幾何学に適した収集容器（すなわち、「流れ適合
容器（ｓｔｒｅａｍ−ｍａｔｃｈｅｄ ｃｏｎｔａｉｎ
ｅｒ）」）を設計することが最良であり得ると考えられ
る。この流れ適合容器は、以下の特徴のいずれかまたは
全てを有し得る：相対的に広い開口部、楕円形に成形さ
れた開口部、現在関わっているものより小さな高さ：幅
の比、角度がつけられているか、またはそうでなければ
落下流に対して平行な側壁を示し得るように調整された
体裁など。ボールベアリングなどのような可動要素また
は媒体のような取り付け要素を提供して、試験管の可変
性の配向を、収集することが所望される落下流に適合さ
せることもまた望ましい。さらに、既存の試験管（「フ
ァルコン型」試験管として記載される）のような容器の
分類についての物理的特徴としては、試験管の幅だけで
なく試験管が作製される材質（例えば、細胞が固着しな
いポリスチレン）もまた挙げられ得る。（これらの材質
選択は、１４ｍｌファルコン試験管について周知であ
る。）従って、この容器およびその収集液はまた、緩衝
要素として作用して、細胞への物理的損傷を最小限にし
得る。これは、サイズによっては、有意な希釈効果なく
精子の適切な数の収集を容易にするためにもまた作用し
得る。
ではないかもしれないことに注意すべきである。特に、
流れの幾何学に適した収集容器（すなわち、「流れ適合
容器（ｓｔｒｅａｍ−ｍａｔｃｈｅｄ ｃｏｎｔａｉｎ
ｅｒ）」）を設計することが最良であり得ると考えられ
る。この流れ適合容器は、以下の特徴のいずれかまたは
全てを有し得る：相対的に広い開口部、楕円形に成形さ
れた開口部、現在関わっているものより小さな高さ：幅
の比、角度がつけられているか、またはそうでなければ
落下流に対して平行な側壁を示し得るように調整された
体裁など。ボールベアリングなどのような可動要素また
は媒体のような取り付け要素を提供して、試験管の可変
性の配向を、収集することが所望される落下流に適合さ
せることもまた望ましい。さらに、既存の試験管（「フ
ァルコン型」試験管として記載される）のような容器の
分類についての物理的特徴としては、試験管の幅だけで
なく試験管が作製される材質（例えば、細胞が固着しな
いポリスチレン）もまた挙げられ得る。（これらの材質
選択は、１４ｍｌファルコン試験管について周知であ
る。）従って、この容器およびその収集液はまた、緩衝
要素として作用して、細胞への物理的損傷を最小限にし
得る。これは、サイズによっては、有意な希釈効果なく
精子の適切な数の収集を容易にするためにもまた作用し
得る。
【０２１５】コレクター液（１７）の別の局面は、細胞
に対する化学的ストレスを最小にするためにもまた作用
し得るという事実であり得る。１つの点では、選別の前
後両方で細胞に栄養素を与えることが重要であり得るの
で、コレクター液（１７）は、調整されたレベルの栄養
素を提供するように選択され得るため、この栄養素レベ
ルは選別の前後両方で平衡化される。２％卵黄レベルで
卵黄クエン酸塩の栄養素が利用されるウシ精子に関して
は、６％卵黄クエン酸塩レベル（すなわち、クエン酸塩
溶液中に６％の卵黄含量）を利用することが良好な結果
を提供することが発見された。これは、選別事象の前後
に存在する容量の結果である。コレクター液（１７）
は、約２ｍｌの容量で（選別前に）開始され得る。選別
事象によって、この容量の約２倍が添加され得（最初の
開始容量の３倍で終了する）、（目詰まりおよび他のフ
ローサイトメーターの考慮すべき事項に起因して）溶液
中に卵黄クエン酸塩はほとんどない。従って、存在する
卵黄クエン酸塩の量のレベルという点では、最終結果
は、開始結果、すなわち、含まれる容量に起因して、ク
エン酸溶液中に２％卵黄クエン酸含量に等しくあり得
る。従って、コレクター液（１７）は、最終コレクター
液環境を作り出すように選択され得、この最終コレクタ
ー液環境は、最初の栄養素または他の流体環境と平衡化
される。この様式で、コレクター液は、細胞が供される
時間および組成のレベルの変化を最小にするために作用
し得る。もちろん、これらの流体環境は、フローサイト
メーター内で示されていてもよいし、ある他の重要な時
間に存在していてもよく、重要な点は、細胞の寿命にお
ける任意の時点で細胞が供されるストレスをほとんど最
小化しないことである。さらに、最初の化学物質量が変
動され得る（例えば、クエン酸塩中のパーセント卵黄含
量は、上下に変動され得る）ので、同様に、開始収集液
環境または種々の容量もまた、最終結果が同じであるよ
うに変動され得る。従って、選別プロセスを開始する前
に、コレクター液は、クエン酸塩溶液中６％卵黄含量で
存在し、そして選別事象が終了した後には、コレクター
液（性特定精子を有する）は、結果的に最初の栄養素含
量と同様にクエン酸塩溶液中２％卵黄含量になり得る。
に対する化学的ストレスを最小にするためにもまた作用
し得るという事実であり得る。１つの点では、選別の前
後両方で細胞に栄養素を与えることが重要であり得るの
で、コレクター液（１７）は、調整されたレベルの栄養
素を提供するように選択され得るため、この栄養素レベ
ルは選別の前後両方で平衡化される。２％卵黄レベルで
卵黄クエン酸塩の栄養素が利用されるウシ精子に関して
は、６％卵黄クエン酸塩レベル（すなわち、クエン酸塩
溶液中に６％の卵黄含量）を利用することが良好な結果
を提供することが発見された。これは、選別事象の前後
に存在する容量の結果である。コレクター液（１７）
は、約２ｍｌの容量で（選別前に）開始され得る。選別
事象によって、この容量の約２倍が添加され得（最初の
開始容量の３倍で終了する）、（目詰まりおよび他のフ
ローサイトメーターの考慮すべき事項に起因して）溶液
中に卵黄クエン酸塩はほとんどない。従って、存在する
卵黄クエン酸塩の量のレベルという点では、最終結果
は、開始結果、すなわち、含まれる容量に起因して、ク
エン酸溶液中に２％卵黄クエン酸含量に等しくあり得
る。従って、コレクター液（１７）は、最終コレクター
液環境を作り出すように選択され得、この最終コレクタ
ー液環境は、最初の栄養素または他の流体環境と平衡化
される。この様式で、コレクター液は、細胞が供される
時間および組成のレベルの変化を最小にするために作用
し得る。もちろん、これらの流体環境は、フローサイト
メーター内で示されていてもよいし、ある他の重要な時
間に存在していてもよく、重要な点は、細胞の寿命にお
ける任意の時点で細胞が供されるストレスをほとんど最
小化しないことである。さらに、最初の化学物質量が変
動され得る（例えば、クエン酸塩中のパーセント卵黄含
量は、上下に変動され得る）ので、同様に、開始収集液
環境または種々の容量もまた、最終結果が同じであるよ
うに変動され得る。従って、選別プロセスを開始する前
に、コレクター液は、クエン酸塩溶液中６％卵黄含量で
存在し、そして選別事象が終了した後には、コレクター
液（性特定精子を有する）は、結果的に最初の栄養素含
量と同様にクエン酸塩溶液中２％卵黄含量になり得る。
【０２１６】後者の使用では、これらの精子細胞は、他
の理由のためにクエン酸塩液中２０％卵黄含量に対して
処理され得る。しかし、これらの変更は、全体的な受精
プロセスの公知の部分に過ぎないように、細胞に対する
ストレスを提供するとは認められない。もちろん、この
レベルは当業者によって容易に理解され得るので、変動
され得るが、２０％卵黄クエン酸塩緩衝液は、以下のよ
うに構成され得る： Ｉ．最終組成： ８０％ クエン酸ナトリウム溶液（７２ｍＭ） ２０％ （容量／容量）卵黄 ＩＩ．１Ｌ用の調製： Ａ．クエン酸ナトリウム溶液 １．１，０００ｍｌ容積フラスコ中に２９．０ｇのクエ
ン酸ナトリウム二水和物（Ｎａ3Ｃ6Ｈ5Ｏ7・２Ｈ2Ｏ）
を入れる ２．最終容量が１，０００ｍｌになるように脱イオン水
またはナノピュア（Ｎａｎｏｐｕｒｅ）水を添加する ３．瓶に移し、１５ｌｂｓ圧力（２４５Ｆ°）で少なく
とも３０分間オートクレーブにかける ａ．蒸発を最小にするための条件を使用して溶液をオー
トクレーブにかける（緩くふたをする） ｂ．水が沸騰して外に漏れないように注意する ４．室温でゆっくり冷却する ５．密栓して５℃の低温室で保存する Ｂ．卵調製物 １．新鮮な鶏卵を優良な商業供給源から得る ２．埃がないように卵を洗浄し（過剰な界面活性剤は使
用しない）、そしてすすぐ ３．卵を７０％エタノールに２〜５分間浸漬する ４．卵を取り出し、乾燥させ（または拭いて乾燥さ
せ）、そして清潔なタオル上で保存する Ｃ．エキステンダーの調製 １．清潔な滅菌ガラス製品を使用する ２．Ａ−画分（グリセロールなし画分） ａ．１，０００ｍｌのメスシリンダーに８００ｍｌの
２．９％クエン酸ナトリウム溶液を入れる ｂ．エキステンダーのグリセロールなし画分（Ａ画分）
についての抗生物質レベルは、以下のとおりであり得
る； ｉ．タイロシン＝１００μｇ／ｍｌ ｉｉ．ゲンタマイシン＝５００μｇ／ｍｌ ｉｉｉ．リンコ−スペクチン＝３００／６００μｇ／ｍ
ｌ ｃ．２００ｍｌの新鮮卵黄を以下に概説するように添加
する（Ｄ節） ｉ．徹底的に混合する ｄ．これは、２０％卵黄およびウシ精子に対して非毒性
であることが公知の濃度の抗生物質を有する２．９％ク
エン酸ナトリウムに基づいたＡ画分エキステンダーを提
供する ｅ．エキステンダーは、一晩５℃で保存され得る。
の理由のためにクエン酸塩液中２０％卵黄含量に対して
処理され得る。しかし、これらの変更は、全体的な受精
プロセスの公知の部分に過ぎないように、細胞に対する
ストレスを提供するとは認められない。もちろん、この
レベルは当業者によって容易に理解され得るので、変動
され得るが、２０％卵黄クエン酸塩緩衝液は、以下のよ
うに構成され得る： Ｉ．最終組成： ８０％ クエン酸ナトリウム溶液（７２ｍＭ） ２０％ （容量／容量）卵黄 ＩＩ．１Ｌ用の調製： Ａ．クエン酸ナトリウム溶液 １．１，０００ｍｌ容積フラスコ中に２９．０ｇのクエ
ン酸ナトリウム二水和物（Ｎａ3Ｃ6Ｈ5Ｏ7・２Ｈ2Ｏ）
を入れる ２．最終容量が１，０００ｍｌになるように脱イオン水
またはナノピュア（Ｎａｎｏｐｕｒｅ）水を添加する ３．瓶に移し、１５ｌｂｓ圧力（２４５Ｆ°）で少なく
とも３０分間オートクレーブにかける ａ．蒸発を最小にするための条件を使用して溶液をオー
トクレーブにかける（緩くふたをする） ｂ．水が沸騰して外に漏れないように注意する ４．室温でゆっくり冷却する ５．密栓して５℃の低温室で保存する Ｂ．卵調製物 １．新鮮な鶏卵を優良な商業供給源から得る ２．埃がないように卵を洗浄し（過剰な界面活性剤は使
用しない）、そしてすすぐ ３．卵を７０％エタノールに２〜５分間浸漬する ４．卵を取り出し、乾燥させ（または拭いて乾燥さ
せ）、そして清潔なタオル上で保存する Ｃ．エキステンダーの調製 １．清潔な滅菌ガラス製品を使用する ２．Ａ−画分（グリセロールなし画分） ａ．１，０００ｍｌのメスシリンダーに８００ｍｌの
２．９％クエン酸ナトリウム溶液を入れる ｂ．エキステンダーのグリセロールなし画分（Ａ画分）
についての抗生物質レベルは、以下のとおりであり得
る； ｉ．タイロシン＝１００μｇ／ｍｌ ｉｉ．ゲンタマイシン＝５００μｇ／ｍｌ ｉｉｉ．リンコ−スペクチン＝３００／６００μｇ／ｍ
ｌ ｃ．２００ｍｌの新鮮卵黄を以下に概説するように添加
する（Ｄ節） ｉ．徹底的に混合する ｄ．これは、２０％卵黄およびウシ精子に対して非毒性
であることが公知の濃度の抗生物質を有する２．９％ク
エン酸ナトリウムに基づいたＡ画分エキステンダーを提
供する ｅ．エキステンダーは、一晩５℃で保存され得る。
【０２１７】ｆ．次の日に上清（上部の８００ｍｌ）を
デカントする ｇ．次の日の使用前に３７℃に暖める Ｄ．緩衝化溶液に卵黄を添加するために、以下の手順を
十分に行う １．卵を十分に洗浄し、清潔にする（上記Ｂを参照のこ
と） ２．卵を割り、卵黄分離器を用いて卵白と卵黄を分離す
る。あるいは、卵黄を卵の殻に左右交互に２〜３回出し
入れする。卵黄膜を破らないこと ３．卵黄を１５ｃｍの滅菌濾紙上におく ４．緩衝液を入れたメスシリンダーの上に濾紙を配置
し、（卵黄膜を破りながら）卵黄を絞り出し、金で処理
した（ｇｏｌｄｅｄ）濾紙からメスシリンダーへ流出さ
せる。代表的には、約１２〜１５ｍｌの卵黄が１つの卵
から得られ得る。
デカントする ｇ．次の日の使用前に３７℃に暖める Ｄ．緩衝化溶液に卵黄を添加するために、以下の手順を
十分に行う １．卵を十分に洗浄し、清潔にする（上記Ｂを参照のこ
と） ２．卵を割り、卵黄分離器を用いて卵白と卵黄を分離す
る。あるいは、卵黄を卵の殻に左右交互に２〜３回出し
入れする。卵黄膜を破らないこと ３．卵黄を１５ｃｍの滅菌濾紙上におく ４．緩衝液を入れたメスシリンダーの上に濾紙を配置
し、（卵黄膜を破りながら）卵黄を絞り出し、金で処理
した（ｇｏｌｄｅｄ）濾紙からメスシリンダーへ流出さ
せる。代表的には、約１２〜１５ｍｌの卵黄が１つの卵
から得られ得る。
【０２１８】本発明の種々の因子で相互作用し合い得る
別の局面は、人工受精などのために低用量の精子を利用
する局面である。雌雄識別した、人工受精の局面のさら
なる背景は、「Ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ ｆｏｒ Ｓｏｒｔ
ｉｎｇ ＭａｍｍａｌｉａｎＳｐｅｒｍ」、Ｒｕｐｅｒ
ｔ Ｐ．ＡｍｍａｎおよびＧｅｏｒｇｅ Ｅ．Ｓｅｉｄ
ｅｌ，Ｊｒ．，Ｃｏｌｏｒａｄｏ Ａｓｓｏｃｉａｔｅ
ｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８２）
（本明細書中に参考として援用される）に見いだされ得
る。言及したように、自然な受精は、何十億ものオーダ
ーの精子数が関与する。代表的な人工受精は、現在で
は、ウシ種に関しては数百万の精子で行われ、そしてウ
マ種に関しては数億の精子で行われる。用語「低用量」
によって、受精事象で用いられる精子の投与量が、代表
的な人工受精事象で提供される代表的精子数の１／２よ
り少ないか、または好ましくはそれの約１０％より少な
くさえあることを意味する。従って、用語「低用量」
は、代表的な人工受精投与量の状況で考えられることで
あり、絶対数としてもまた考えられる。現在百万〜一千
万の精子が提供されるウシ精子に関しては、低用量プロ
セスは、約５００，０００精子数の絶対数、またはおそ
らく３００，０００精子以下と考えられ得る。事実、本
発明の技術を利用することによって、良好な割合での人
工受精の成功は、４８Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙ
１２５５（１９９７）で公開された論文「Ｕｔｅｒｉｎ
ｅ Ｈｏｒｎ Ｉｎｓｅｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｅ
ｉｆｅｒｓＷｉｔｈ Ｖｅｒｙ Ｌｏｗ Ｎｕｍｂｅｒ
ｓ ｏｆ Ｎｏｎ−ｆｒｏｚｅｎａｎｄ Ｓｅｘｅｄ
Ｓｐｅｒｍａｔｏｚｏａ」（これは、本明細書中に参考
として援用される）に示されるように、１００，０００
および２５０，０００精子（それぞれ妊娠率は４１％お
よび５０％）の受精のレベルで示された。精子細胞は、
希釈に対する感受性を示すようであるため、これらの結
果は、本発明の種々の技術に関して、低用量の精子サン
プルの利用に対して特定の相互依存性を示し得る。絶対
数は、種依存性であり得る。ウマ種では、たとえ、約二
千五百万、一千万、五百万、または百万の精子より少な
いにしても低用量プロセスが考えられ得る。
別の局面は、人工受精などのために低用量の精子を利用
する局面である。雌雄識別した、人工受精の局面のさら
なる背景は、「Ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ ｆｏｒ Ｓｏｒｔ
ｉｎｇ ＭａｍｍａｌｉａｎＳｐｅｒｍ」、Ｒｕｐｅｒ
ｔ Ｐ．ＡｍｍａｎおよびＧｅｏｒｇｅ Ｅ．Ｓｅｉｄ
ｅｌ，Ｊｒ．，Ｃｏｌｏｒａｄｏ Ａｓｓｏｃｉａｔｅ
ｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８２）
（本明細書中に参考として援用される）に見いだされ得
る。言及したように、自然な受精は、何十億ものオーダ
ーの精子数が関与する。代表的な人工受精は、現在で
は、ウシ種に関しては数百万の精子で行われ、そしてウ
マ種に関しては数億の精子で行われる。用語「低用量」
によって、受精事象で用いられる精子の投与量が、代表
的な人工受精事象で提供される代表的精子数の１／２よ
り少ないか、または好ましくはそれの約１０％より少な
くさえあることを意味する。従って、用語「低用量」
は、代表的な人工受精投与量の状況で考えられることで
あり、絶対数としてもまた考えられる。現在百万〜一千
万の精子が提供されるウシ精子に関しては、低用量プロ
セスは、約５００，０００精子数の絶対数、またはおそ
らく３００，０００精子以下と考えられ得る。事実、本
発明の技術を利用することによって、良好な割合での人
工受精の成功は、４８Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙ
１２５５（１９９７）で公開された論文「Ｕｔｅｒｉｎ
ｅ Ｈｏｒｎ Ｉｎｓｅｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｅ
ｉｆｅｒｓＷｉｔｈ Ｖｅｒｙ Ｌｏｗ Ｎｕｍｂｅｒ
ｓ ｏｆ Ｎｏｎ−ｆｒｏｚｅｎａｎｄ Ｓｅｘｅｄ
Ｓｐｅｒｍａｔｏｚｏａ」（これは、本明細書中に参考
として援用される）に示されるように、１００，０００
および２５０，０００精子（それぞれ妊娠率は４１％お
よび５０％）の受精のレベルで示された。精子細胞は、
希釈に対する感受性を示すようであるため、これらの結
果は、本発明の種々の技術に関して、低用量の精子サン
プルの利用に対して特定の相互依存性を示し得る。絶対
数は、種依存性であり得る。ウマ種では、たとえ、約二
千五百万、一千万、五百万、または百万の精子より少な
いにしても低用量プロセスが考えられ得る。
【０２１９】重要であり得る別の局面は、本発明の（ま
たは他の）技術によって精子の雌雄識別が人工受精シス
テムで利用されるという事実である。従って、フローサ
イトメーター技術に関しては、コレクター（１４）を使
用して、人工受精のための精子を提供するときに、本発
明の技術は、特に関連し得る。さらに、人工受精の使用
および低用量環境での使用の両方の組み合わせは、とも
に相乗効果を奏し得、これは、本発明の種々の技術を特
に適切にすることが可能である。当然、雌雄識別された
精子は、ただ人工受精態様だけではなく、インビトロ受
精技術などのような他の技術においても利用され得る。
たは他の）技術によって精子の雌雄識別が人工受精シス
テムで利用されるという事実である。従って、フローサ
イトメーター技術に関しては、コレクター（１４）を使
用して、人工受精のための精子を提供するときに、本発
明の技術は、特に関連し得る。さらに、人工受精の使用
および低用量環境での使用の両方の組み合わせは、とも
に相乗効果を奏し得、これは、本発明の種々の技術を特
に適切にすることが可能である。当然、雌雄識別された
精子は、ただ人工受精態様だけではなく、インビトロ受
精技術などのような他の技術においても利用され得る。
【０２２０】フローサイトメトリーの使用または他の分
離技術によって動物を収集、選別、および実際に人工受
精するプロセスは、種々の工程を包含する。ウシの人工
受精の状況で、第１に、精液を人工膣を使用してウシか
ら収集する。これは、約１５億精子／ｍｌの割合であ
る。この生の精液を分光光度計を使用してチェックし
て、濃度を評価し得る。そしてこの精液を検鏡によって
評価して、適切な運動性および生存性基準を満たすこと
を確実にし得る。次いで、抗生物質が添加され得る。結
果として、最初のサンプルは、１回の射精あたり約６０
〜７０％の前進運動性を有し得る。処理工程に関して
は、ある型のＴＡＬＰ（タイロードアルブミンラクテー
トピルベート）による希釈を用いて、約１億／ｍｌの管
理可能なレベルで（フロー分析について）精子数を入手
し得る。ＴＡＬＰは、精子細胞に栄養を与えるだけでな
く、精子を染色工程のために機能亢進させ得る。染色前
に、ウマ種のようないくつかの種では、遠心分離が行わ
れ得る。染色工程を、多重染色または単色染色プロトコ
ルに従って行い得、後者は、Ｊｏｈｎｓｏｎ特許および
関連技術である。染色工程を、適切な栄養素環境を作り
出すためにエキステンダーもまた調節しながら行い得
る。ウシの適用において、これは、染色後すぐにクエン
酸塩溶液中に約２０％卵黄含量を添加する工程を包含す
る。さらに、精子細胞を染色することにおいて、ある範
囲まで予測され得るよりも高い染色量によって、より良
好な結果が達成されることが発見された。これは、高濃
度染色工程が、数１０μＭ含量の染料量（例えば、Ｈｏ
ｅｃｈｓｔ ３３３４２染料が３８μＭ含量で使用され
る以下の実施例で議論される）を使用する工程を包含し
得る。
離技術によって動物を収集、選別、および実際に人工受
精するプロセスは、種々の工程を包含する。ウシの人工
受精の状況で、第１に、精液を人工膣を使用してウシか
ら収集する。これは、約１５億精子／ｍｌの割合であ
る。この生の精液を分光光度計を使用してチェックし
て、濃度を評価し得る。そしてこの精液を検鏡によって
評価して、適切な運動性および生存性基準を満たすこと
を確実にし得る。次いで、抗生物質が添加され得る。結
果として、最初のサンプルは、１回の射精あたり約６０
〜７０％の前進運動性を有し得る。処理工程に関して
は、ある型のＴＡＬＰ（タイロードアルブミンラクテー
トピルベート）による希釈を用いて、約１億／ｍｌの管
理可能なレベルで（フロー分析について）精子数を入手
し得る。ＴＡＬＰは、精子細胞に栄養を与えるだけでな
く、精子を染色工程のために機能亢進させ得る。染色前
に、ウマ種のようないくつかの種では、遠心分離が行わ
れ得る。染色工程を、多重染色または単色染色プロトコ
ルに従って行い得、後者は、Ｊｏｈｎｓｏｎ特許および
関連技術である。染色工程を、適切な栄養素環境を作り
出すためにエキステンダーもまた調節しながら行い得
る。ウシの適用において、これは、染色後すぐにクエン
酸塩溶液中に約２０％卵黄含量を添加する工程を包含す
る。さらに、精子細胞を染色することにおいて、ある範
囲まで予測され得るよりも高い染色量によって、より良
好な結果が達成されることが発見された。これは、高濃
度染色工程が、数１０μＭ含量の染料量（例えば、Ｈｏ
ｅｃｈｓｔ ３３３４２染料が３８μＭ含量で使用され
る以下の実施例で議論される）を使用する工程を包含し
得る。
【０２２１】染料を添加した後のインキュベーション期
間としては、例えば、約一億精子細胞／ｍｌの濃度で染
料取り込みを促進するために３４℃で１時間インキュベ
ートする工程を用い得る。次いで、それらを濾過して、
精子細胞の凝集を取り除き得る。次いで、約一億精子細
胞／ｍｌの所望の選別濃度への希釈または拡大が行われ
得る。次いで、先に議論された種々の技術に従う選別工
程が行われ、ここから精子細胞が収集相で回収され得
る。先に言及されたように、収集は、約２％卵黄クエン
酸塩濃度含量（ウシ種について）を有するサンプルで生
じ得る。次いで、このサンプルを、シース液および保存
液が除去され得る後に遠心分離によって、約３００〜５
００万精子細胞／ｍｌに濃縮し得る。次いで、最終的な
拡大は、２０％卵黄クエン酸塩またはＣｏｒｎｅｌｌ
Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｅｘｔｅｎｄｅｒなどのいずれか
で達成され得る。Ｃｏｒｎｅｌｌ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ
Ｅｘｔｅｎｄｅｒは、１０００ｍｌについて以下の組
成を有し得る： １４．５ｇ クエン酸ナトリウム二水和物 ２．１ｇ ＮａＨＣＯ3 ０．４ｇ ＫＣｌ ３．０ｇ グルコース ９．３７ｇ グリシン ０．８７ｇ クエン酸 ２０％卵黄組成については、上記調製物の８００ｍｌお
よび約２００ｍｌの卵黄を使用し得る。
間としては、例えば、約一億精子細胞／ｍｌの濃度で染
料取り込みを促進するために３４℃で１時間インキュベ
ートする工程を用い得る。次いで、それらを濾過して、
精子細胞の凝集を取り除き得る。次いで、約一億精子細
胞／ｍｌの所望の選別濃度への希釈または拡大が行われ
得る。次いで、先に議論された種々の技術に従う選別工
程が行われ、ここから精子細胞が収集相で回収され得
る。先に言及されたように、収集は、約２％卵黄クエン
酸塩濃度含量（ウシ種について）を有するサンプルで生
じ得る。次いで、このサンプルを、シース液および保存
液が除去され得る後に遠心分離によって、約３００〜５
００万精子細胞／ｍｌに濃縮し得る。次いで、最終的な
拡大は、２０％卵黄クエン酸塩またはＣｏｒｎｅｌｌ
Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｅｘｔｅｎｄｅｒなどのいずれか
で達成され得る。Ｃｏｒｎｅｌｌ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ
Ｅｘｔｅｎｄｅｒは、１０００ｍｌについて以下の組
成を有し得る： １４．５ｇ クエン酸ナトリウム二水和物 ２．１ｇ ＮａＨＣＯ3 ０．４ｇ ＫＣｌ ３．０ｇ グルコース ９．３７ｇ グリシン ０．８７ｇ クエン酸 ２０％卵黄組成については、上記調製物の８００ｍｌお
よび約２００ｍｌの卵黄を使用し得る。
【０２２２】この最後の拡大後に、３００〜５００万精
子／ｍｌ（ウシ種について）が生じ得る。次いで、この
サンプルを精子の代謝を緩慢にするように、そしてより
長い期間にわたる使用を可能にするように冷却され得
る。次いで、ウマ種では、このサンプルは、当業者がよ
く理解するように、卵管プロセスまたは他の受精プロセ
スで使用され得る。ウシの精子では、サンプルは、所望
の投与レベルまでさらに１回希釈され得る。希釈は、精
子細胞の生存性に影響をもたらし得るために、より少量
のサンプルを提供することによって希釈のレベルがあま
りに大きくなり過ぎることを避けることが適切であり得
ることが見いだされた。それにもかかわらず、使用され
ている分離技術のうち、現在では、約３００，０００精
子／０．１８４ｍｌの低投与量が達成され得る。さら
に、約５％のレベルで精漿のレベルを維持することが所
望され得るが、この必要性の結果は、現在では結びつけ
られている。次いで、精子細胞試料は、人工受精に使用
するためのストローに配置され、そして受精させるため
に経産牛または未経産牛に輸送され得る。
子／ｍｌ（ウシ種について）が生じ得る。次いで、この
サンプルを精子の代謝を緩慢にするように、そしてより
長い期間にわたる使用を可能にするように冷却され得
る。次いで、ウマ種では、このサンプルは、当業者がよ
く理解するように、卵管プロセスまたは他の受精プロセ
スで使用され得る。ウシの精子では、サンプルは、所望
の投与レベルまでさらに１回希釈され得る。希釈は、精
子細胞の生存性に影響をもたらし得るために、より少量
のサンプルを提供することによって希釈のレベルがあま
りに大きくなり過ぎることを避けることが適切であり得
ることが見いだされた。それにもかかわらず、使用され
ている分離技術のうち、現在では、約３００，０００精
子／０．１８４ｍｌの低投与量が達成され得る。さら
に、約５％のレベルで精漿のレベルを維持することが所
望され得るが、この必要性の結果は、現在では結びつけ
られている。次いで、精子細胞試料は、人工受精に使用
するためのストローに配置され、そして受精させるため
に経産牛または未経産牛に輸送され得る。
【０２２３】都合のよいタイミングでの人工受精を達成
するために、未経産牛または経産牛の発情期を、当該分
野で周知の技術に従って、プロスタグランジンＦ２αの
利用のような公知の技術により同期化させ得る。この後
者の内容は、論文「Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｆ２
α−Ａ Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ Ｄｒｕｇ ｉｎ Ｄａｉ
ｒｙ Ｃａｔｔｌｅ？」１８ Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌ
ｏｇｙ ２４５（１９８２）（これは、本明細書中に参
考として援用される）で議論されるように未経産牛での
受精能の増強を潜在的に達成することが報告されたとい
う点で特に価値があり得る。最近の結果では、前述の事
項は維持されなかったが、本発明は、雌雄識別された低
用量の受精の状況で特別の生存性を実証することであり
得る。次いで、ウシ種に関しては、人工受精は、子宮角
内深くに精子細胞を配置する胎芽移植機器の使用によっ
て達成され得る。これは、人工受精において代表的に使
用されるピーク時ではなく、むしろピーク時の１２時間
後のようないくらか遅い時期に達成され得る。なぜな
ら、雌雄識別された人工受精に関する受精は、わずかに
より遅く生じ得るいくらかの可能性があるからである。
胎芽移植機器の利用は、このような低用量の雌雄識別さ
れた受精に関して、子宮壁が非常に敏感であり得るため
に使用され得る。
するために、未経産牛または経産牛の発情期を、当該分
野で周知の技術に従って、プロスタグランジンＦ２αの
利用のような公知の技術により同期化させ得る。この後
者の内容は、論文「Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｆ２
α−Ａ Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ Ｄｒｕｇ ｉｎ Ｄａｉ
ｒｙ Ｃａｔｔｌｅ？」１８ Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌ
ｏｇｙ ２４５（１９８２）（これは、本明細書中に参
考として援用される）で議論されるように未経産牛での
受精能の増強を潜在的に達成することが報告されたとい
う点で特に価値があり得る。最近の結果では、前述の事
項は維持されなかったが、本発明は、雌雄識別された低
用量の受精の状況で特別の生存性を実証することであり
得る。次いで、ウシ種に関しては、人工受精は、子宮角
内深くに精子細胞を配置する胎芽移植機器の使用によっ
て達成され得る。これは、人工受精において代表的に使
用されるピーク時ではなく、むしろピーク時の１２時間
後のようないくらか遅い時期に達成され得る。なぜな
ら、雌雄識別された人工受精に関する受精は、わずかに
より遅く生じ得るいくらかの可能性があるからである。
胎芽移植機器の利用は、このような低用量の雌雄識別さ
れた受精に関して、子宮壁が非常に敏感であり得るため
に使用され得る。
【０２２４】さらに、この技術を組み合わせて、さらに
より効率的な生産を達成し得る。特に、高速選別および
雌雄識別された胚の低用量人工受精を可能にする、たっ
た今発明されたプロセスの各々は、過排卵動物において
実行可能である。過排卵は、排卵誘発剤（ｓｕｐｅｒｏ
ｖｕｌａｔｏｒｙ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）の
使用または他の任意の技術によって達成され得る。排卵
誘発剤は、例えば、正常よりも多く卵の生成を達成する
ために一連の反応によって直接または間接に作用し得
る。過排卵との組み合わせは、以前、過排卵がこのよう
な組み合わせを妨げると認められたので驚くべきことで
ある。精子輸送は、過排卵処理されたウシで損なわれる
ので、動物を複数の機会でおよび／または複数の用量の
精液で、頻繁に人工受精していた。また、精液を雌雄識
別する以前の手順は、比較的緩慢であった；従って、こ
れらの新たな技術の組み合わせを用いて、過排卵誘発剤
（例えば、ＦＳＨ（卵胞刺激ホルモン））処置ウシの、
合計６００，０００の雌雄識別した未凍結精子を用いた
１回の人工受精後の受精率を決定することは、興味深い
ことである。
より効率的な生産を達成し得る。特に、高速選別および
雌雄識別された胚の低用量人工受精を可能にする、たっ
た今発明されたプロセスの各々は、過排卵動物において
実行可能である。過排卵は、排卵誘発剤（ｓｕｐｅｒｏ
ｖｕｌａｔｏｒｙ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）の
使用または他の任意の技術によって達成され得る。排卵
誘発剤は、例えば、正常よりも多く卵の生成を達成する
ために一連の反応によって直接または間接に作用し得
る。過排卵との組み合わせは、以前、過排卵がこのよう
な組み合わせを妨げると認められたので驚くべきことで
ある。精子輸送は、過排卵処理されたウシで損なわれる
ので、動物を複数の機会でおよび／または複数の用量の
精液で、頻繁に人工受精していた。また、精液を雌雄識
別する以前の手順は、比較的緩慢であった；従って、こ
れらの新たな技術の組み合わせを用いて、過排卵誘発剤
（例えば、ＦＳＨ（卵胞刺激ホルモン））処置ウシの、
合計６００，０００の雌雄識別した未凍結精子を用いた
１回の人工受精後の受精率を決定することは、興味深い
ことである。
【０２２５】例示として、１２頭のＡｎｇｕｓ交雑未経
産牛を、標準的手順を使用して過排卵処理した：６、
６、４、４、２、２、２、および２ｍｇのＦＳＨを発情
周期の９日目と１２日目の間で始まる半日間隔で筋肉内
注射した；２５ｍｇおよび１２．５ｍｇのプロスタグラ
ンジンＦ−２αを６回目と７回目のＦＳＨ注射とともに
筋肉内注射した。未知の受精能のウシからの精子をＨｏ
ｅｃｈｓｔ ３３３４２で染色し、次いで、ＭｏＦｌｏ
（登録商標）フローサイトメーター／セルソーターを使
用して選別し、７００〜８００の生きた精子を各々の性
／秒で得た。平均選別純度は、所望される性の８９％で
あった。選別された精子を、５℃に冷却して６５０ｇ、
１０分間で遠心分離することによって３．３６×１０6
精子／ｍｌに濃縮し、そして４時間保存した。次いで、
１８４μｌを０．２５ｍｌのプラスチックストローに入
れ；この用量の半分を自動側壁開口胎芽移植シース（ａ
ｕｔｏｍａｔｉｃ ｓｉｄｅ−ｏｐｅｎｉｎｇ ｅｍｂ
ｒｙｏ ｔｒａｎｓｆｅｒｓｈｅａｔｈ）を使用して発
情後２０〜２４時間後に各子宮角に人工受精した。胚を
標準的な非外科的手順によって発情後７または１６日目
に収集した。結果は、７日目と１６日目での収集との間
およびＸおよびＹ選別精子で同様であった。胚を９頭の
未経産牛から回収した。発生の正常段階で５２胚（平均
４．３±５．３／ドナー）、１３の発達の遅れた胚およ
び３１の未受精卵が存在した。４６胚が、Ｙ染色体特異
的ＤＮＡ配列についてのプライマーを使用してＰＣＲに
よって雌雄識別され；そのうち４３（９３％）が意図さ
れた性であった。この研究は、少数の動物に関与しただ
けであるが、驚くべきことに、わずか合計６００，００
０の（生存した）雌雄識別した未凍結精子での過排卵処
置した未経産牛の人工受精は、従来の手順と同様の結果
を与えた。上記のバリエーションはまた、フローサイト
メーター手段以外によって選別する工程、他の様式で過
排卵を達成する工程、他の様式で受精能を増加させる工
程など（を含むが、これらに限定されない）で達成され
得る。
産牛を、標準的手順を使用して過排卵処理した：６、
６、４、４、２、２、２、および２ｍｇのＦＳＨを発情
周期の９日目と１２日目の間で始まる半日間隔で筋肉内
注射した；２５ｍｇおよび１２．５ｍｇのプロスタグラ
ンジンＦ−２αを６回目と７回目のＦＳＨ注射とともに
筋肉内注射した。未知の受精能のウシからの精子をＨｏ
ｅｃｈｓｔ ３３３４２で染色し、次いで、ＭｏＦｌｏ
（登録商標）フローサイトメーター／セルソーターを使
用して選別し、７００〜８００の生きた精子を各々の性
／秒で得た。平均選別純度は、所望される性の８９％で
あった。選別された精子を、５℃に冷却して６５０ｇ、
１０分間で遠心分離することによって３．３６×１０6
精子／ｍｌに濃縮し、そして４時間保存した。次いで、
１８４μｌを０．２５ｍｌのプラスチックストローに入
れ；この用量の半分を自動側壁開口胎芽移植シース（ａ
ｕｔｏｍａｔｉｃ ｓｉｄｅ−ｏｐｅｎｉｎｇ ｅｍｂ
ｒｙｏ ｔｒａｎｓｆｅｒｓｈｅａｔｈ）を使用して発
情後２０〜２４時間後に各子宮角に人工受精した。胚を
標準的な非外科的手順によって発情後７または１６日目
に収集した。結果は、７日目と１６日目での収集との間
およびＸおよびＹ選別精子で同様であった。胚を９頭の
未経産牛から回収した。発生の正常段階で５２胚（平均
４．３±５．３／ドナー）、１３の発達の遅れた胚およ
び３１の未受精卵が存在した。４６胚が、Ｙ染色体特異
的ＤＮＡ配列についてのプライマーを使用してＰＣＲに
よって雌雄識別され；そのうち４３（９３％）が意図さ
れた性であった。この研究は、少数の動物に関与しただ
けであるが、驚くべきことに、わずか合計６００，００
０の（生存した）雌雄識別した未凍結精子での過排卵処
置した未経産牛の人工受精は、従来の手順と同様の結果
を与えた。上記のバリエーションはまた、フローサイト
メーター手段以外によって選別する工程、他の様式で過
排卵を達成する工程、他の様式で受精能を増加させる工
程など（を含むが、これらに限定されない）で達成され
得る。
【０２２６】さらに、受精能を損なうことなく、ＤＮＡ
含量に基づいて精子を雌雄識別する方法、高速フローサ
イトメーター／セルソーター、および合計５００，００
０より少ない精子で未経産牛を人工受精する手順の調和
が、わずか数年内にウシにおける生存可能な雌雄識別し
た精液産業の可能性を生じた。８５％より高い正確性で
雌雄識別した精子についての多くの適用が存在する。お
そらく、最も明白なのは、雌の群を置換するために、一
方のサブセット（乳牛および肉牛の両方）のウシを人工
受精すること、および逆のサブセット（乳牛および肉牛
の両方）を肉用に生産された雄に対して全く異なるタイ
プのウシと交配させることである。上記の非常に重要な
サブセットは、Ｘ染色体保有精子で未経産牛に人工受精
して、雌ウシを生産することである。これは、主にサイ
ズがより小さいことに起因して、雄ウシより難産の発生
率は低くなる。さらに、若い乳用種牛を提供すること
は、未経産牛の優勢にはるかにより有効である。８５％
より多い未経産牛を有することはまた、乳牛を管理する
ことを可能にするために、それらは、平均すると、寿命
あたり２頭の生存牛より少ない。これは、妊娠および分
娩に関連する問題を減少させるためには魅力的なもので
ある。肉生産の単一性別システム（ｓｉｎｇｌｅ ｓｅ
ｘ ｓｙｓｔｅｍ）もまた可能になる。ここで、各雌を
それ自身が交換し、そして２〜３年の間で屠殺されるた
め、成長のためのシステム中ではるかにより高い栄養素
を使用して、そして維持する割合はより低い。雌雄識別
した精液は、インビトロ人工受精のために、および胎芽
移植のために過剰排卵処理したウシを人工受精するため
に有用である。頻繁には、ある性のウシが他方よりかな
り価値があり、そして胚を雌雄識別する正確な方法が利
用可能であるにもかかわらず、それらは、時間がかか
り、そして生成された胚のうちの半分は、あまり価値の
ない性である。正確に雌雄識別された精液は、雌雄識別
の追加料金が低く、かつ受精能が最小限にしか損なわれ
ない場合、ウシの人工受精に広範に適合すると推測され
る。人工受精される肉牛の割合は、おそらく、実質的に
雌雄識別された精液での肉牛が増えるであろう。
含量に基づいて精子を雌雄識別する方法、高速フローサ
イトメーター／セルソーター、および合計５００，００
０より少ない精子で未経産牛を人工受精する手順の調和
が、わずか数年内にウシにおける生存可能な雌雄識別し
た精液産業の可能性を生じた。８５％より高い正確性で
雌雄識別した精子についての多くの適用が存在する。お
そらく、最も明白なのは、雌の群を置換するために、一
方のサブセット（乳牛および肉牛の両方）のウシを人工
受精すること、および逆のサブセット（乳牛および肉牛
の両方）を肉用に生産された雄に対して全く異なるタイ
プのウシと交配させることである。上記の非常に重要な
サブセットは、Ｘ染色体保有精子で未経産牛に人工受精
して、雌ウシを生産することである。これは、主にサイ
ズがより小さいことに起因して、雄ウシより難産の発生
率は低くなる。さらに、若い乳用種牛を提供すること
は、未経産牛の優勢にはるかにより有効である。８５％
より多い未経産牛を有することはまた、乳牛を管理する
ことを可能にするために、それらは、平均すると、寿命
あたり２頭の生存牛より少ない。これは、妊娠および分
娩に関連する問題を減少させるためには魅力的なもので
ある。肉生産の単一性別システム（ｓｉｎｇｌｅ ｓｅ
ｘ ｓｙｓｔｅｍ）もまた可能になる。ここで、各雌を
それ自身が交換し、そして２〜３年の間で屠殺されるた
め、成長のためのシステム中ではるかにより高い栄養素
を使用して、そして維持する割合はより低い。雌雄識別
した精液は、インビトロ人工受精のために、および胎芽
移植のために過剰排卵処理したウシを人工受精するため
に有用である。頻繁には、ある性のウシが他方よりかな
り価値があり、そして胚を雌雄識別する正確な方法が利
用可能であるにもかかわらず、それらは、時間がかか
り、そして生成された胚のうちの半分は、あまり価値の
ない性である。正確に雌雄識別された精液は、雌雄識別
の追加料金が低く、かつ受精能が最小限にしか損なわれ
ない場合、ウシの人工受精に広範に適合すると推測され
る。人工受精される肉牛の割合は、おそらく、実質的に
雌雄識別された精液での肉牛が増えるであろう。
【０２２７】興味深いことに、このような受精が通常配
置される子宮体内への受精よりも、子宮角内深くへの受
精によって、より良好な結果が達成され得る。おそら
く、このようにはるかに研究されたサンプルは、子宮角
内深くで達成された場合に、同側性の受精と対側性の受
精との間に違いを示さないこともまた驚くべきことであ
る。深いことによって、その挿入は、胎芽移植機器を使
用して、子宮角に良好に配置されることが理解されるべ
きである。同側性の受精と対側性の受精を使用して、結
果が有意に異ならないようであるという事実は、本発明
者らに、両方の受精の使用の提案を導き、その結果、適
切な子宮角を同定するプロセスはもはや必要であり得な
い。
置される子宮体内への受精よりも、子宮角内深くへの受
精によって、より良好な結果が達成され得る。おそら
く、このようにはるかに研究されたサンプルは、子宮角
内深くで達成された場合に、同側性の受精と対側性の受
精との間に違いを示さないこともまた驚くべきことであ
る。深いことによって、その挿入は、胎芽移植機器を使
用して、子宮角に良好に配置されることが理解されるべ
きである。同側性の受精と対側性の受精を使用して、結
果が有意に異ならないようであるという事実は、本発明
者らに、両方の受精の使用の提案を導き、その結果、適
切な子宮角を同定するプロセスはもはや必要であり得な
い。
【０２２８】受精の結果として、当然のこととして、所
望の性の動物が産生されることが所望される。この動物
は、雌雄選別された精子標品の使用を介する先に議論し
た系に従って産生され得る。本発明の技術は、例えば、
腹腔鏡検査的（ｌａｐｒｏｓｃｏｐｉｃ）受精、卵管受
精などのような他の技術における適用を見い出し得るこ
とがまた、理解されるべきである。
望の性の動物が産生されることが所望される。この動物
は、雌雄選別された精子標品の使用を介する先に議論し
た系に従って産生され得る。本発明の技術は、例えば、
腹腔鏡検査的（ｌａｐｒｏｓｃｏｐｉｃ）受精、卵管受
精などのような他の技術における適用を見い出し得るこ
とがまた、理解されるべきである。
【０２２９】実施例として、以下の実験が行われた。本
明細書に記載される本発明のあらゆる局面のすべての使
用ではなく、それらは、本発明の異なる局面を通して可
能な実行の増強を示す。さらに、いくつかの実験の要約
は、以前に引用した論文「非常に少数の非凍結および雌
雄選別された精子を用いた未経産牛の子宮角受精」に含
まれる。この論文は、本発明の有効性を示すデータのい
くつかを要約する。実験については、雌雄選別された非
凍結精子細胞を用いて行われ、以下のように高い成功を
収めた。
明細書に記載される本発明のあらゆる局面のすべての使
用ではなく、それらは、本発明の異なる局面を通して可
能な実行の増強を示す。さらに、いくつかの実験の要約
は、以前に引用した論文「非常に少数の非凍結および雌
雄選別された精子を用いた未経産牛の子宮角受精」に含
まれる。この論文は、本発明の有効性を示すデータのい
くつかを要約する。実験については、雌雄選別された非
凍結精子細胞を用いて行われ、以下のように高い成功を
収めた。
【０２３０】
【実施例】（実施例１）Ａｎｇｕｓ未経産牛（１３〜１
４月齢（ｍｏ）であり、そして中程度の体調）は、１２
日間の間隔をあけて２５ｍｇのプロスタグランジンＦ−
２αを用いて同期化させ、そして直立発情期（ｓｔａｎ
ｄｉｎｇ ｅｓｔｒｕｓ）が観察された６〜２６時間
後、受精させた。１４〜２６月齢の３頭の雄ウシから新
鮮に収集した精液を、ＴＡＬＰ培地中で１時間、３４℃
で、７５×１０6精子／ｍｌで、３８μＭ Ｈｏｅｃｈ
ｓｔ ３３３４２中でインキュベートした。精子を、５
０ｐｓｉで操作するＭｏＦｌｏ（登録商標）フローサイ
トメーター／セルソーターを使用して、そしてシース液
として、２．９％ クエン酸Ｎａを使用して、１５０ｍ
Ｗでの３５１ｎｍおよび３６４ｎｍにおけるレーザー励
起からの落射蛍光（ｅｐｉｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）
に基づいて、性染色体によって選別した。Ｘ染色体を有
する精子（超音波処理した精子アリコートを回復させる
ことによって確認されたように、約９０％の純度）を、
約５００生精子／秒で、１００μｌ Ｃｏｒｎｅｌｌ
Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｅｘｔｅｎｄｅｒ（ＣＵＥ）を含
む２−ｍｌ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管に、２０％卵黄とと
もに収集した。収集した精子を、６００×ｇで１０分間
遠心分離し、そして１．６３×１０6生精子／ｍｌでＣ
ＵＥ中に再懸濁した。雌雄選別されていない精液のコン
トロールについて；Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２染色精
子を、シース液で、９×１０5精子／ｍｌに希釈し、そ
して遠心分離し、そしてＣＵＥ中で１．６３×１０6の
進行的に運動性の精子／ｍｌに再懸濁した。雌雄選別さ
れた精液および液体コントロール精液を５℃に７５分間
冷却し、そして０．２５ｍｌストロー（１８４ｕｌ／ス
トロー）にロードした。ストローを、受精のために、分
取の５〜９時間後に３〜５℃の温度制御飲料冷却機２４
０ｋｍに移した。雌雄選別された精液および液体コント
ロール精液を、側開口青色シース（ｓｉｄｅ−ｏｐｅｎ
ｉｎｇ ｂｌｕｅ ｓｈｅａｔｈｓ（ＩＭＶ））を使用
して受精し、各々のストローの半分を、各々の子宮角に
入れた（３×１０5生精子／未経産牛）。標準的なコン
トロールとして、同じ雄ウシ由来の精液を、標準的な手
順によって０．５ｃｃストロー中で冷凍し（平均１５．
６×１０6の運動性の精子／溶解後用量）、３５℃で３
０秒間溶解し、そして子宮体中に受精させた。処置を、
３頭の雄ウシおよび２人の受精者に対して、雌雄選別さ
れた精液および２つのコントロールについて３：２：２
の受精の比で平均化した。妊娠を、胎仔もまた雌雄選別
された場合（盲目的に）、受精の３１〜３４日後超音波
で決定し、そして６４〜６７日後に確認した。データを
表に示す。
４月齢（ｍｏ）であり、そして中程度の体調）は、１２
日間の間隔をあけて２５ｍｇのプロスタグランジンＦ−
２αを用いて同期化させ、そして直立発情期（ｓｔａｎ
ｄｉｎｇ ｅｓｔｒｕｓ）が観察された６〜２６時間
後、受精させた。１４〜２６月齢の３頭の雄ウシから新
鮮に収集した精液を、ＴＡＬＰ培地中で１時間、３４℃
で、７５×１０6精子／ｍｌで、３８μＭ Ｈｏｅｃｈ
ｓｔ ３３３４２中でインキュベートした。精子を、５
０ｐｓｉで操作するＭｏＦｌｏ（登録商標）フローサイ
トメーター／セルソーターを使用して、そしてシース液
として、２．９％ クエン酸Ｎａを使用して、１５０ｍ
Ｗでの３５１ｎｍおよび３６４ｎｍにおけるレーザー励
起からの落射蛍光（ｅｐｉｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）
に基づいて、性染色体によって選別した。Ｘ染色体を有
する精子（超音波処理した精子アリコートを回復させる
ことによって確認されたように、約９０％の純度）を、
約５００生精子／秒で、１００μｌ Ｃｏｒｎｅｌｌ
Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｅｘｔｅｎｄｅｒ（ＣＵＥ）を含
む２−ｍｌ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管に、２０％卵黄とと
もに収集した。収集した精子を、６００×ｇで１０分間
遠心分離し、そして１．６３×１０6生精子／ｍｌでＣ
ＵＥ中に再懸濁した。雌雄選別されていない精液のコン
トロールについて；Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２染色精
子を、シース液で、９×１０5精子／ｍｌに希釈し、そ
して遠心分離し、そしてＣＵＥ中で１．６３×１０6の
進行的に運動性の精子／ｍｌに再懸濁した。雌雄選別さ
れた精液および液体コントロール精液を５℃に７５分間
冷却し、そして０．２５ｍｌストロー（１８４ｕｌ／ス
トロー）にロードした。ストローを、受精のために、分
取の５〜９時間後に３〜５℃の温度制御飲料冷却機２４
０ｋｍに移した。雌雄選別された精液および液体コント
ロール精液を、側開口青色シース（ｓｉｄｅ−ｏｐｅｎ
ｉｎｇ ｂｌｕｅ ｓｈｅａｔｈｓ（ＩＭＶ））を使用
して受精し、各々のストローの半分を、各々の子宮角に
入れた（３×１０5生精子／未経産牛）。標準的なコン
トロールとして、同じ雄ウシ由来の精液を、標準的な手
順によって０．５ｃｃストロー中で冷凍し（平均１５．
６×１０6の運動性の精子／溶解後用量）、３５℃で３
０秒間溶解し、そして子宮体中に受精させた。処置を、
３頭の雄ウシおよび２人の受精者に対して、雌雄選別さ
れた精液および２つのコントロールについて３：２：２
の受精の比で平均化した。妊娠を、胎仔もまた雌雄選別
された場合（盲目的に）、受精の３１〜３４日後超音波
で決定し、そして６４〜６７日後に確認した。データを
表に示す。
【０２３１】
【表２】 a,b異なる上付き文字を有する値の雌雄選別比は異なる
（ｐ＜０．０２）。
（ｐ＜０．０２）。
【０２３２】雌雄選別された精液を用いた妊娠率は、コ
ントロールの８０％にすぎなかったが、この差異は統計
学的に有意でなかった（＞０．１）。１回の妊娠は、雌
雄選別されかつ凍結したコントロール群の各々において
６４〜６７日で失われる；雌雄選別群中で１９胎児のう
ちの１８（９５％）は雌であり、そしてコントロール群
の３０のうちの２０（６７％）は雌であった。液体精液
コントロールは、５０倍より多い運動性の精液（全精子
の１２０倍以上）を含む凍結精液コントロールに対して
実質的に同一の妊娠率を産み出し、このことは、子宮角
中への低用量受精の有効性を例証する。本発明者らは、
フローサイトメーター技術および人工受精を使用して、
ウシでの性比率を有意に変更した。
ントロールの８０％にすぎなかったが、この差異は統計
学的に有意でなかった（＞０．１）。１回の妊娠は、雌
雄選別されかつ凍結したコントロール群の各々において
６４〜６７日で失われる；雌雄選別群中で１９胎児のう
ちの１８（９５％）は雌であり、そしてコントロール群
の３０のうちの２０（６７％）は雌であった。液体精液
コントロールは、５０倍より多い運動性の精液（全精子
の１２０倍以上）を含む凍結精液コントロールに対して
実質的に同一の妊娠率を産み出し、このことは、子宮角
中への低用量受精の有効性を例証する。本発明者らは、
フローサイトメーター技術および人工受精を使用して、
ウシでの性比率を有意に変更した。
【０２３３】同様に、雌雄選別されていない、非凍結の
精子細胞を用いて１つの実験を行い、そして以下のよう
に報告し得る。
精子細胞を用いて１つの実験を行い、そして以下のよう
に報告し得る。
【０２３４】（実施例２）実験の目的は、理想的な野外
の条件下で、極度に少ない数の凍結精子を用いて未経産
牛に受精させた場合に、妊娠率を決定することであっ
た。上記の平均妊娠率である３頭のＨｏｌｓｔｅｉｎ雄
ウシ由来の精液を、均質化ミルク、７％グリセロール
（ＣＳＳ）エキステンダー、および５％相同精液漿中
で、０．２５ｍｌフレンチストローあたり総精子２×１
０5、５×１０5、または１０×１０6（コントロール）
まで広げ、そして液体窒素蒸気に移して凍結させた。精
液を、３７℃の水浴中で２０秒間融解した。１３〜１５
月齢で３５０〜４５０ｋｇの体重のＨｏｌｓｔｅｉｎ未
経産牛に、２５ｍｇのプロスタグランジンＦ−２−α
（Ｌｕｔａｌｙｓｅ（登録商標））を、１２日間の間隔
をあけて２回注入し、そして胎芽移植ストローガン（ｅ
ｍｂｒｙｏ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｓｔｒａｗ ｇｕｎ）
および側開口シースを用いて受精させ、そして精液の半
分は、発情期の検出の１２時間または２４時間後、各々
の子宮角深くに入る。実験を５ヶ月にわたって５回の反
復で行い、そして２人の受精者で平均された。繁殖の周
囲温度はしばしば−１０℃から−２０℃であったので、
受精器具を暖かく保つことに注意が払われた。妊娠を、
発情から４０〜４４日後に、超音波を使用して、生存可
能な胎仔の検出によって決定し、そして発情後５５〜６
２日後に確認し；２０２の受胎産物のうちの４つが、こ
れらの時期に失われた。５５〜６２日では、妊娠率は２
×１０5、５×１０5、および１０×１０6総精子／受精
（Ｐ＜．１）について、５５／１０３（５３％）、７１
／１０１（７０％）および７２／１０２（７１％）であ
った。妊娠率は、雄ウシの間で異なっていたが（５９、
６２、および７４％、Ｐ＜．０５）、実験者の間で（６
４および６５％）、または発情後の受精回数（１２時間
で６５％、２４時間で６４％、Ｎ＝１５３、各回）では
異ならなかった。記載した方法を用いる、未経産牛にお
ける妊娠率は、受精あたり５×１０5および１０×１０6
総精子を用いるのと同様であった。
の条件下で、極度に少ない数の凍結精子を用いて未経産
牛に受精させた場合に、妊娠率を決定することであっ
た。上記の平均妊娠率である３頭のＨｏｌｓｔｅｉｎ雄
ウシ由来の精液を、均質化ミルク、７％グリセロール
（ＣＳＳ）エキステンダー、および５％相同精液漿中
で、０．２５ｍｌフレンチストローあたり総精子２×１
０5、５×１０5、または１０×１０6（コントロール）
まで広げ、そして液体窒素蒸気に移して凍結させた。精
液を、３７℃の水浴中で２０秒間融解した。１３〜１５
月齢で３５０〜４５０ｋｇの体重のＨｏｌｓｔｅｉｎ未
経産牛に、２５ｍｇのプロスタグランジンＦ−２−α
（Ｌｕｔａｌｙｓｅ（登録商標））を、１２日間の間隔
をあけて２回注入し、そして胎芽移植ストローガン（ｅ
ｍｂｒｙｏ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｓｔｒａｗ ｇｕｎ）
および側開口シースを用いて受精させ、そして精液の半
分は、発情期の検出の１２時間または２４時間後、各々
の子宮角深くに入る。実験を５ヶ月にわたって５回の反
復で行い、そして２人の受精者で平均された。繁殖の周
囲温度はしばしば−１０℃から−２０℃であったので、
受精器具を暖かく保つことに注意が払われた。妊娠を、
発情から４０〜４４日後に、超音波を使用して、生存可
能な胎仔の検出によって決定し、そして発情後５５〜６
２日後に確認し；２０２の受胎産物のうちの４つが、こ
れらの時期に失われた。５５〜６２日では、妊娠率は２
×１０5、５×１０5、および１０×１０6総精子／受精
（Ｐ＜．１）について、５５／１０３（５３％）、７１
／１０１（７０％）および７２／１０２（７１％）であ
った。妊娠率は、雄ウシの間で異なっていたが（５９、
６２、および７４％、Ｐ＜．０５）、実験者の間で（６
４および６５％）、または発情後の受精回数（１２時間
で６５％、２４時間で６４％、Ｎ＝１５３、各回）では
異ならなかった。記載した方法を用いる、未経産牛にお
ける妊娠率は、受精あたり５×１０5および１０×１０6
総精子を用いるのと同様であった。
【０２３５】１つの実験がまた、雌雄選別された非凍結
の精子細胞で行われ、そして以下のように報告され得
る： （実施例３）精液を、Ａｔｌａｎｔｉｃ Ｂｒｅｅｄｅ
ｒｓ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅの雄ウシから収集し、Ｈ
ＥＰＥＳ緩衝化エキステンダー＋０．１％ＢＳＡで１：
４に希釈し、そしてＭａｒｙｌａｎｄ、Ｂｅｌｔｓｖｉ
ｌｌｅまで１６０ｋｍ（約２時間）輸送した。ここで精
液を、周囲温度において、以前に記載された方法（Ｂｉ
ｏｌ Ｒｅｐｒｏｄ ４１：１９９）を使用して、ＴＥ
ＳＴ収量（２０％）エキステンダー中にフローサイトメ
トリーによって選別した。約９０％純度において、５〜
６時間あたり各性の２×１０6精子までの選別速度を達
成した。精子を、遠心分離（３００ｇで４分間）によっ
て、２×１０6精子／ｍｌまで濃縮した。いくらかの精
子を、相同な精液漿を含むエキステンダー中に選別した
（最終濃度５％）。選別した精子を、飛行機でコロラド
まで輸送し（約２，６００ｋｍ）、そして周囲温度また
は５℃のいずれかで保存した（Ｅｑｕｉｔａｉｎｅｒ
（氷を含む仕切りを用いる遮蔽された装置）中で６時間
以上輸送の間冷却した）。発情が検出されるよりも１１
〜３６時間早くに、未経産牛または乳の出なくなったウ
シに、精子選別セッションの終わりの９〜２９時間以内
に受精させた。精子（０．１ｍｌ中に１〜２×１０5）
を、受精の際に超音波によって決定された最も大きい濾
胞を有する卵巣に対して同側の子宮角に深く入れた。
の精子細胞で行われ、そして以下のように報告され得
る： （実施例３）精液を、Ａｔｌａｎｔｉｃ Ｂｒｅｅｄｅ
ｒｓ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅの雄ウシから収集し、Ｈ
ＥＰＥＳ緩衝化エキステンダー＋０．１％ＢＳＡで１：
４に希釈し、そしてＭａｒｙｌａｎｄ、Ｂｅｌｔｓｖｉ
ｌｌｅまで１６０ｋｍ（約２時間）輸送した。ここで精
液を、周囲温度において、以前に記載された方法（Ｂｉ
ｏｌ Ｒｅｐｒｏｄ ４１：１９９）を使用して、ＴＥ
ＳＴ収量（２０％）エキステンダー中にフローサイトメ
トリーによって選別した。約９０％純度において、５〜
６時間あたり各性の２×１０6精子までの選別速度を達
成した。精子を、遠心分離（３００ｇで４分間）によっ
て、２×１０6精子／ｍｌまで濃縮した。いくらかの精
子を、相同な精液漿を含むエキステンダー中に選別した
（最終濃度５％）。選別した精子を、飛行機でコロラド
まで輸送し（約２，６００ｋｍ）、そして周囲温度また
は５℃のいずれかで保存した（Ｅｑｕｉｔａｉｎｅｒ
（氷を含む仕切りを用いる遮蔽された装置）中で６時間
以上輸送の間冷却した）。発情が検出されるよりも１１
〜３６時間早くに、未経産牛または乳の出なくなったウ
シに、精子選別セッションの終わりの９〜２９時間以内
に受精させた。精子（０．１ｍｌ中に１〜２×１０5）
を、受精の際に超音波によって決定された最も大きい濾
胞を有する卵巣に対して同側の子宮角に深く入れた。
【０２３６】輸送され、周囲温度で保存された精子を受
精させた場合に、１０頭の雌はいずれも妊娠しなかっ
た。輸送の間に５℃で冷却された精子を受精させた２９
頭の雌の内、１４頭が４週間、そして１２頭（４１％）
が８週間の妊娠期間の間妊娠した。選別の最後の１０時
間以内に受精させた２２頭の内１１頭が８週間妊娠した
が、しかし選別の１７〜２４時間後に受精させた７頭の
内１頭のみが妊娠した。精液漿の添加の有意な効果はな
かった。１２の胎仔の内の１つは予測された性ではな
く、１つは不明瞭であり、そして１０は、妊娠の６０〜
７０日間の超音波検査によって決定されたように、予測
された性であった。
精させた場合に、１０頭の雌はいずれも妊娠しなかっ
た。輸送の間に５℃で冷却された精子を受精させた２９
頭の雌の内、１４頭が４週間、そして１２頭（４１％）
が８週間の妊娠期間の間妊娠した。選別の最後の１０時
間以内に受精させた２２頭の内１１頭が８週間妊娠した
が、しかし選別の１７〜２４時間後に受精させた７頭の
内１頭のみが妊娠した。精液漿の添加の有意な効果はな
かった。１２の胎仔の内の１つは予測された性ではな
く、１つは不明瞭であり、そして１０は、妊娠の６０〜
７０日間の超音波検査によって決定されたように、予測
された性であった。
【０２３７】引き続いて、３３のさらなる未経産牛に、
超音波検査の使用なしで各々の子宮角中に０．０５ｍｌ
（上記のように広げた精液）を用いて受精させた；３例
のみが受精後４週間妊娠し、そして１例のみが８週間妊
娠したままであった。しかし、先の群からの異なる雄ウ
シを使用して、そしてすべての受精は、選別１８〜２９
時間後に行った。別の雄ウシ由来の選別された精子を用
いて、本発明者らの研究室から２００ｋｍの、さらなる
３８例の未経産牛を同様に受精させた（選別約２２時間
後）；これらのいずれも、受精後８週間妊娠しなかっ
た。
超音波検査の使用なしで各々の子宮角中に０．０５ｍｌ
（上記のように広げた精液）を用いて受精させた；３例
のみが受精後４週間妊娠し、そして１例のみが８週間妊
娠したままであった。しかし、先の群からの異なる雄ウ
シを使用して、そしてすべての受精は、選別１８〜２９
時間後に行った。別の雄ウシ由来の選別された精子を用
いて、本発明者らの研究室から２００ｋｍの、さらなる
３８例の未経産牛を同様に受精させた（選別約２２時間
後）；これらのいずれも、受精後８週間妊娠しなかっ
た。
【０２３８】要約すると、フローサイトメトリーによっ
て性染色体について選別された精子の人工受精によっ
て、ウシにおいて妊娠を達成することは可能であり、そ
して胎仔の性比率は、選別された精子のＤＮＡ含有量に
ついての再分析によって予測される性比率に近づく（９
０％）。しかし、妊娠率は、長距離の精子の輸送を必要
とした、これらの予備的実験において大きく変動した。
受精率は、選別後１７時間で急激に減少したが、いくぶ
んかの混乱が存在した。なぜなら、異なった時間に異な
った雄ウシを使用したからである。妊娠率に見られる変
動は、雄ウシの違いによるものか、受精の技術によるも
のか、選別と受精の間の間隔によるものか、または他の
因子によるものかを決定するために、さらなる研究が必
要とされている。
て性染色体について選別された精子の人工受精によっ
て、ウシにおいて妊娠を達成することは可能であり、そ
して胎仔の性比率は、選別された精子のＤＮＡ含有量に
ついての再分析によって予測される性比率に近づく（９
０％）。しかし、妊娠率は、長距離の精子の輸送を必要
とした、これらの予備的実験において大きく変動した。
受精率は、選別後１７時間で急激に減少したが、いくぶ
んかの混乱が存在した。なぜなら、異なった時間に異な
った雄ウシを使用したからである。妊娠率に見られる変
動は、雄ウシの違いによるものか、受精の技術によるも
のか、選別と受精の間の間隔によるものか、または他の
因子によるものかを決定するために、さらなる研究が必
要とされている。
【０２３９】最後に、１つの実験がまた、雌雄選別され
ていない、非凍結精子細胞を用いて行われ、そして以下
のように報告され得る。
ていない、非凍結精子細胞を用いて行われ、そして以下
のように報告され得る。
【０２４０】（実施例４）この実施例の目的は、未経産
牛に理想的な実験条件下で非常に少数の精子を用いて受
精させた場合に、妊娠率を決定することであった。３頭
のＨｏｌｓｔｅｉｎ雄ウシ由来の精液を、Ｃｏｒｎｅｌ
ｌ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｅｘｔｅｎｄｅｒおよび５％
の均質な精液漿中で１×１０5または２．５×１０5精子
／０．１ｍｌまで広げた；２．５×１０6全精子／０．
２５ｍｌをコントロールとして使用した。十分に広げた
精液を、０．１または０．２５ｍｌの受精用量を送達す
るために、改変した０．２５ｍｌプラスチックフレンチ
ストロー中に詰めた。精液を５℃に冷却し、そして収集
の２６〜５７時間後に使用した。Ｈｏｌｓｔｅｉｎ未経
産牛１３〜１５月齢、体重３５０〜４５０ｋｇに、１２
日間の間隔で、２５ｍｇ プロスタグランジンＦ−２α
（Ｌｕｔａｌｙｓｅ（登録商標））を注射し、そして発
情の検出から２４時間後に、胎芽移植ストローガンおよ
び側開口シースを用いて、１つの子宮角に受精させた。
受精は、発情１２時間後超音波によって決定された最大
の濾胞を有する側に対して同側性であった；排卵の側
は、発情７〜９日後超音波によって黄体の検出によって
確認した。妊娠は、発情４２〜４５日後超音波によって
胎仔の検出によって決定した。この実験は、４回反復
し、そして３人の受精技術者で平均した。排卵の側は、
２２５未経産牛のうち２０５で正しく決定された（９１
％）；驚くべきことに、妊娠率は、同側および対側の受
精でほとんど同一であった。妊娠率は、１×１０5、
２．５×１０5、および２．５×１０6精子／受精（Ｐ
＞．１）について、３８／９３（４１％）、４５／８７
（５２％）、および２５／４５（５６％）であった。技
術者の間で、有意な妊娠率の違い（Ｐ＜．０５）が存在
したが、雄ウシの間にはなかった。フローサイトメータ
ーを用いて性によって選別された精子が、商業的な適用
を有する記載した方法を用いて、受精あたりの精子の数
を十分に減らすことが可能であり得る。
牛に理想的な実験条件下で非常に少数の精子を用いて受
精させた場合に、妊娠率を決定することであった。３頭
のＨｏｌｓｔｅｉｎ雄ウシ由来の精液を、Ｃｏｒｎｅｌ
ｌ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｅｘｔｅｎｄｅｒおよび５％
の均質な精液漿中で１×１０5または２．５×１０5精子
／０．１ｍｌまで広げた；２．５×１０6全精子／０．
２５ｍｌをコントロールとして使用した。十分に広げた
精液を、０．１または０．２５ｍｌの受精用量を送達す
るために、改変した０．２５ｍｌプラスチックフレンチ
ストロー中に詰めた。精液を５℃に冷却し、そして収集
の２６〜５７時間後に使用した。Ｈｏｌｓｔｅｉｎ未経
産牛１３〜１５月齢、体重３５０〜４５０ｋｇに、１２
日間の間隔で、２５ｍｇ プロスタグランジンＦ−２α
（Ｌｕｔａｌｙｓｅ（登録商標））を注射し、そして発
情の検出から２４時間後に、胎芽移植ストローガンおよ
び側開口シースを用いて、１つの子宮角に受精させた。
受精は、発情１２時間後超音波によって決定された最大
の濾胞を有する側に対して同側性であった；排卵の側
は、発情７〜９日後超音波によって黄体の検出によって
確認した。妊娠は、発情４２〜４５日後超音波によって
胎仔の検出によって決定した。この実験は、４回反復
し、そして３人の受精技術者で平均した。排卵の側は、
２２５未経産牛のうち２０５で正しく決定された（９１
％）；驚くべきことに、妊娠率は、同側および対側の受
精でほとんど同一であった。妊娠率は、１×１０5、
２．５×１０5、および２．５×１０6精子／受精（Ｐ
＞．１）について、３８／９３（４１％）、４５／８７
（５２％）、および２５／４５（５６％）であった。技
術者の間で、有意な妊娠率の違い（Ｐ＜．０５）が存在
したが、雄ウシの間にはなかった。フローサイトメータ
ーを用いて性によって選別された精子が、商業的な適用
を有する記載した方法を用いて、受精あたりの精子の数
を十分に減らすことが可能であり得る。
【０２４１】上述のように、そして種々の実験から見ら
れ得るように、野外は統計学的に根拠のあるものであ
り、従って種々のさらなる実験が、適切な組み合わせお
よび制限のストラテジーを示すために行われ得る。従っ
て、種々の影響の間の相乗作用（例えば、レーザー励起
を用いる色素の効果および組み合わされた色素の効果が
研究され得る例）が、さらに同定される。
れ得るように、野外は統計学的に根拠のあるものであ
り、従って種々のさらなる実験が、適切な組み合わせお
よび制限のストラテジーを示すために行われ得る。従っ
て、種々の影響の間の相乗作用（例えば、レーザー励起
を用いる色素の効果および組み合わされた色素の効果が
研究され得る例）が、さらに同定される。
【０２４２】本出願に含まれる議論は、基本的な記載と
して働くことを意図している。読者は、特定の議論が明
白にすべての可能な実施形態を記載しなくてもよいし；
多くの代替手段が暗黙のものであることに気付くべきで
ある。それはまた、本発明の一般的な性質について十分
に説明しなくともよいし、そしてそれぞれの特色または
要素が、実際により広い機能をいかにして示し得るか、
または非常に多様な代替手段もしくは等価な要素をいか
にして示し得るかを明白に示さなくともよい。かさね
て、これらは、暗黙に本開示中に含まれる。本発明が、
デバイスを指向する用語において記載されている場合に
は、各々のデバイスの要素は、暗黙に機能を行う。装置
の請求項は、記載されるデバイスについて含まれてもよ
いだけではなく、また、方法またはプロセスの請求項
が、本発明および各々の要素が行う機能を扱うために含
まれ得る。記載または用語のいずれもが、提出され得る
請求項の範囲を限定することを意図するものではない。
種々の変更が、本発明の本質から離れることなくなされ
得ることが理解されるべきである。このような変更はま
た、明細書中に暗黙に含まれ得る。これらもなお、本発
明の範囲にある。示される明白な実施形態、非常に多様
な暗黙の代替的な実施形態、および広い方法もしくはプ
ロセスなどの両方を含む広い開示が、本開示によって含
まれる。
して働くことを意図している。読者は、特定の議論が明
白にすべての可能な実施形態を記載しなくてもよいし；
多くの代替手段が暗黙のものであることに気付くべきで
ある。それはまた、本発明の一般的な性質について十分
に説明しなくともよいし、そしてそれぞれの特色または
要素が、実際により広い機能をいかにして示し得るか、
または非常に多様な代替手段もしくは等価な要素をいか
にして示し得るかを明白に示さなくともよい。かさね
て、これらは、暗黙に本開示中に含まれる。本発明が、
デバイスを指向する用語において記載されている場合に
は、各々のデバイスの要素は、暗黙に機能を行う。装置
の請求項は、記載されるデバイスについて含まれてもよ
いだけではなく、また、方法またはプロセスの請求項
が、本発明および各々の要素が行う機能を扱うために含
まれ得る。記載または用語のいずれもが、提出され得る
請求項の範囲を限定することを意図するものではない。
種々の変更が、本発明の本質から離れることなくなされ
得ることが理解されるべきである。このような変更はま
た、明細書中に暗黙に含まれ得る。これらもなお、本発
明の範囲にある。示される明白な実施形態、非常に多様
な暗黙の代替的な実施形態、および広い方法もしくはプ
ロセスなどの両方を含む広い開示が、本開示によって含
まれる。
【０２４３】さらに、本発明の種々の要素および請求項
のそれぞれがまた、種々の様式において達成され得る。
本開示は、このような各々のバリエーション（任意の器
具の実施形態のバリエーションの実施形態、方法または
プロセスの実施形態、またはこれらの任意の要素のバリ
エーションにさえすぎない）を含むことが理解されるべ
きである。特に、本発明の要素に言及する開示として、
各々の要素についての語が、たとえ機能または結果のみ
が同じであるとしても、等価な器具の用語または方法の
用語によって表現され得ることが理解されるべきであ
る。このような等価な、より広い、またはより一般的で
さえある用語は、各々の要素または作用の記載に含まれ
るとみなされるべきである。このような用語は、本発明
が権利を与えられる暗黙の広い適用範囲を明白にするこ
とが所望される場合に置き換えられ得る。１つの例とし
てではなく、すべての作用が、その作用を獲得するため
の手段として、またはその作用を起こす要素として表現
され得ることが理解されるべきである。同様に、開示さ
れた各々の物理的要素は、物理的要素が容易にする作用
の開示を含むと理解されるべきである。この局面の１つ
の例としてではなく、「コレクター」の開示が、明白に
議論されるか否かにかかわらず、「収集すること」の作
用の開示を含むことが理解されるべきであり、そして逆
に、「収集すること」の作用の開示のみが存在する場
合、このような開示は、「コレクター」の開示を含むこ
とが理解されるべきである。このような変更および代替
的な用語は、本明細書中に明白に含まれることが理解さ
れる。さらに、最初に提示した請求項に加えて、その請
求項は、少なくとも以下により広く取り組むために変更
され得ることが理解されるべきである：ｉ）本明細書中
に開示および記載されるデバイス、ｉｉ）開示および記
載される関連方法、ｉｉｉ）そしてこれらのデバイスお
よび方法の各々の、同様の、等価な、暗黙でさえのバリ
エーション、ｉｖ）開示および記載されるとして示され
る機能のそれぞれを達成するこれらの代替的な設計、
ｖ）開示および記載されることを達成するために暗黙で
あるとして示される機能の各々を達成する、代替的な設
計および方法、ｖｉ）別個のかつ独立した発明として示
される各々の特徴、要素、および工程、ならびにｖｉ
ｉ）上記の各々の種々の組み合わせおよび順列。
のそれぞれがまた、種々の様式において達成され得る。
本開示は、このような各々のバリエーション（任意の器
具の実施形態のバリエーションの実施形態、方法または
プロセスの実施形態、またはこれらの任意の要素のバリ
エーションにさえすぎない）を含むことが理解されるべ
きである。特に、本発明の要素に言及する開示として、
各々の要素についての語が、たとえ機能または結果のみ
が同じであるとしても、等価な器具の用語または方法の
用語によって表現され得ることが理解されるべきであ
る。このような等価な、より広い、またはより一般的で
さえある用語は、各々の要素または作用の記載に含まれ
るとみなされるべきである。このような用語は、本発明
が権利を与えられる暗黙の広い適用範囲を明白にするこ
とが所望される場合に置き換えられ得る。１つの例とし
てではなく、すべての作用が、その作用を獲得するため
の手段として、またはその作用を起こす要素として表現
され得ることが理解されるべきである。同様に、開示さ
れた各々の物理的要素は、物理的要素が容易にする作用
の開示を含むと理解されるべきである。この局面の１つ
の例としてではなく、「コレクター」の開示が、明白に
議論されるか否かにかかわらず、「収集すること」の作
用の開示を含むことが理解されるべきであり、そして逆
に、「収集すること」の作用の開示のみが存在する場
合、このような開示は、「コレクター」の開示を含むこ
とが理解されるべきである。このような変更および代替
的な用語は、本明細書中に明白に含まれることが理解さ
れる。さらに、最初に提示した請求項に加えて、その請
求項は、少なくとも以下により広く取り組むために変更
され得ることが理解されるべきである：ｉ）本明細書中
に開示および記載されるデバイス、ｉｉ）開示および記
載される関連方法、ｉｉｉ）そしてこれらのデバイスお
よび方法の各々の、同様の、等価な、暗黙でさえのバリ
エーション、ｉｖ）開示および記載されるとして示され
る機能のそれぞれを達成するこれらの代替的な設計、
ｖ）開示および記載されることを達成するために暗黙で
あるとして示される機能の各々を達成する、代替的な設
計および方法、ｖｉ）別個のかつ独立した発明として示
される各々の特徴、要素、および工程、ならびにｖｉ
ｉ）上記の各々の種々の組み合わせおよび順列。
【０２４４】本発明の理解を助けるために、種々の刊行
された引用文献が役立ち得る。これらは以下に列挙さ
れ、そしてそれによって参考として援用される；しか
し、記載がこの／これらの発明の特許化と矛盾している
とみなされ得る点で、これらの記載は明白に出願人によ
ってなされたとはみなされない。強力に役立つ引用文献
は、米国特許第５６６０９９７号；同第５５８９４５７
号；同第５５１４５３７号；同第５４３９３６２号；同
第５３４６９９０号；同第５１３５７５９号；同第５０
２１２４４号；同第４９９９２８３号；同第４７４９４
５８号；同第４６９８１４２号；同第４６８０２５８
号；同第４５１１６６１号；同第４４４８７６７号；同
第４３６２２４６号；同第４３３９４３４号；同第４２
７６１３９号；同第４２２５４０５号；同第４１９１７
４９号；同第４１５５８３１号；同第４０９２２２９
号；同第４０８５２０５号；同第４０８３９５７号；同
第４０６７９６５号；同第４００９２６０号；同第３８
９４５２９号；同第３６８７８０６号；ＲＥ３２３５０
号を含む。役立つ引用文献はまた、以下の刊行物を含み
得る：
された引用文献が役立ち得る。これらは以下に列挙さ
れ、そしてそれによって参考として援用される；しか
し、記載がこの／これらの発明の特許化と矛盾している
とみなされ得る点で、これらの記載は明白に出願人によ
ってなされたとはみなされない。強力に役立つ引用文献
は、米国特許第５６６０９９７号；同第５５８９４５７
号；同第５５１４５３７号；同第５４３９３６２号；同
第５３４６９９０号；同第５１３５７５９号；同第５０
２１２４４号；同第４９９９２８３号；同第４７４９４
５８号；同第４６９８１４２号；同第４６８０２５８
号；同第４５１１６６１号；同第４４４８７６７号；同
第４３６２２４６号；同第４３３９４３４号；同第４２
７６１３９号；同第４２２５４０５号；同第４１９１７
４９号；同第４１５５８３１号；同第４０９２２２９
号；同第４０８５２０５号；同第４０８３９５７号；同
第４０６７９６５号；同第４００９２６０号；同第３８
９４５２９号；同第３６８７８０６号；ＲＥ３２３５０
号を含む。役立つ引用文献はまた、以下の刊行物を含み
得る：
【０２４５】
【表３】 本明細書を通して、その文脈がそれ以外に必要としない
限りは、語「ｃｏｍｐｒｉｓｅ」または、「ｃｏｍｐｒ
ｉｓｅｓ」もしくは「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」のような
バリエーションは、言及された要素もしくは整数、また
は要素もしくは整数の群を含むが、任意の他の要素もし
くは整数、または要素もしくは整数の群を排除しないこ
とを暗示することが理解される。
限りは、語「ｃｏｍｐｒｉｓｅ」または、「ｃｏｍｐｒ
ｉｓｅｓ」もしくは「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」のような
バリエーションは、言及された要素もしくは整数、また
は要素もしくは整数の群を含むが、任意の他の要素もし
くは整数、または要素もしくは整数の群を排除しないこ
とを暗示することが理解される。
【０２４６】
【発明の効果】本発明によれば、雌雄識別された受精
が、より低い投与量で、現実的な商業環境の下で作動す
る様式において達成される。
が、より低い投与量で、現実的な商業環境の下で作動す
る様式において達成される。
【図１】図１は、本発明についてのフローサイトメータ
ー分離技術によるソーターシステムの模式図である。
ー分離技術によるソーターシステムの模式図である。
【図２】図２は、代表的なフローサイトメーターの自由
落下領域において飛沫同伴した細胞の図である。
落下領域において飛沫同伴した細胞の図である。
【図３】図３は、本発明の結果としてほぼ表れた差異を
示す概念図である。
示す概念図である。
【図４】図４は、着陸帯領域において収集されるような
選別した細胞流の図である。
選別した細胞流の図である。
３ シース液 １４ 収集システム １８ 精子細胞
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (71)出願人 500308495 コロラド ステイト ユニバーシティ ス ルー イッツ エージェント コロラド ステイト ユニバーシティリサーチ ファ ウンデーション アメリカ合衆国 コロラド 80522，フォ ート コリンズ，ピ−．オー．ボックス 483，コロラド ステイト ユニバーシテ ィ リサーチ ファウンデーション内 (72)発明者 ジョージ イー． セイデル アメリカ合衆国 コロラド 80525， ラ ポルテ， アローヘッド ロード 3101 (72)発明者 リサ ヘリックホフ アメリカ合衆国 コロラド 80524， フ ォート コリンズ， イースト カントリ ー ロード 52 5123 (72)発明者 ジョン シェンク アメリカ合衆国 コロラド 80526， フ ォート コリンズ， コンスティチューシ ョン 1906
Claims (1)
- 【請求項１】 予め決定された性を有する哺乳動物を産
生する方法であって、該方法は以下の工程： ａ．哺乳動物の種の雄から精子細胞を収集する工程； ｂ．複数の該精子細胞の性特徴を決定する工程； ｃ．該その性特徴の決定に従って、該精子細胞を選別す
る工程； ｄ．代表的な未選別の人工受精サンプルと比較して、該
精子細胞の数の約１０％〜約５０％を有する選別された
人工受精サンプルを確立する工程； ｅ．該選別された人工受精サンプルを該哺乳動物の該種
の雌に挿入する工程； ｆ．少なくとも１つの卵を、該代表的な未選別の人工受
精投与量に対して統計学的比較可能な成功レベル（ｐ＞
０．１）で、該哺乳動物の該種の該雌内に受精させる工
程；および ｇ．所望の性の子孫哺乳動物を産生する工程、を包含す
る、方法。
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Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008507287A (ja) * | 2004-07-22 | 2008-03-13 | モンサント テクノロジー エルエルシー | 精子細胞の集団を富化する方法 |
| JP2008530985A (ja) * | 2005-02-01 | 2008-08-14 | アリックス インコーポレイテッド | 細胞分類方法及び装置 |
| KR20150006061A (ko) * | 2012-06-06 | 2015-01-15 | 인구란, 엘엘씨 | 성별 선택된 정세포를 사용하여 양돈의 계통 또는 품종에서 유전적 진보를 증가시키는 방법 |
| JP2015164935A (ja) * | 2003-09-04 | 2015-09-17 | プレミアム ジェネティクス （ユーケー） リミテッド | レーザ操縦を用いた多層流に基づく粒子及び細胞の分離 |
| CN105557621A (zh) * | 2014-10-13 | 2016-05-11 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 快速高效获得无菌哺乳动物的方法 |
Families Citing this family (65)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4323571B2 (ja) * | 1997-01-31 | 2009-09-02 | エックスワイ， インコーポレイテッド | 光学装置 |
| ATE326228T1 (de) | 1997-07-01 | 2006-06-15 | Vicam Lp | Verfahren zur geschlechtsbestimmung von säuger- nachkommenschaft |
| US6071689A (en) * | 1997-12-31 | 2000-06-06 | Xy, Inc. | System for improving yield of sexed embryos in mammals |
| US6149867A (en) | 1997-12-31 | 2000-11-21 | Xy, Inc. | Sheath fluids and collection systems for sex-specific cytometer sorting of sperm |
| EP2283848A1 (en) * | 1998-07-30 | 2011-02-16 | Xy, Llc | Equine system for non-surgical articificial insemination |
| US7208265B1 (en) | 1999-11-24 | 2007-04-24 | Xy, Inc. | Method of cryopreserving selected sperm cells |
| IT1317724B1 (it) * | 2000-01-14 | 2003-07-15 | Istituto Sperimentale Italiano | Procedimento per la produzione di embrioni non umani di sessopredeterminato ad alto valore genetico. |
| AUPQ629100A0 (en) * | 2000-03-16 | 2000-04-15 | Btf Pty Ltd | Process for preparing controlled samples of particles such as microorganisms and cells |
| HUP0302232A2 (hu) * | 2000-05-09 | 2003-10-28 | Xy, Inc. | Berendezés és eljárás X-kromoszómát hordozó hímivarsejtek és Y-kromoszómát hordozó hímivarsejtek szétválogatására, eljárás részecskék megkülönböztetésére és részecskeosztályozó berendezés |
| EP1294293A4 (en) * | 2000-06-12 | 2009-11-04 | Xy Inc | INTEGRATED FLUID MANAGEMENT SYSTEM USING ISOLATED POPULATIONS OF X- AND Y-CHROMOSOME-CARRYING SPERMATOZOES |
| EP1315521A2 (en) * | 2000-07-10 | 2003-06-04 | Pharmacia & Upjohn Company | Method for improving the efficacy of artificial insemination of non-human animals |
| US20030172394A1 (en) * | 2001-08-01 | 2003-09-11 | Holzer George L | Selection and cloning methods |
| US6554811B2 (en) * | 2000-09-08 | 2003-04-29 | University Of Saskatchewan Technologies Inc. | Internal artificial vagina for collecting animal semen |
| NZ537680A (en) | 2000-10-05 | 2007-01-26 | Xy Inc | System of hysteroscopic insemination |
| US7713687B2 (en) | 2000-11-29 | 2010-05-11 | Xy, Inc. | System to separate frozen-thawed spermatozoa into x-chromosome bearing and y-chromosome bearing populations |
| AU2002220018A1 (en) | 2000-11-29 | 2002-06-11 | Colorado State University | System for in-vitro fertilization with spermatozoa separated into x-chromosome and y-chromosome bearing populations |
| US7674576B2 (en) * | 2001-01-12 | 2010-03-09 | Abs Corporation | Semen extender composition and methods for manufacturing and using |
| EP1361789A2 (en) * | 2001-01-30 | 2003-11-19 | Rebholtz, Amy K. | Method for embryo transfer after impregnation of the recipient female |
| US20030135876A1 (en) * | 2002-01-16 | 2003-07-17 | Larry Mobraaten | Maintenance of genetic lines using cryopreserved sperm |
| CN1313061C (zh) * | 2002-03-11 | 2007-05-02 | 刘凤鸣 | 一种动物精子的性别分选方法 |
| WO2004009237A2 (en) * | 2002-07-22 | 2004-01-29 | Xy, Inc. | Sperm cell process system |
| US8486618B2 (en) | 2002-08-01 | 2013-07-16 | Xy, Llc | Heterogeneous inseminate system |
| MX337304B (es) * | 2002-08-01 | 2016-02-24 | Xy Llc | Sistema de separacion de baja presion para celulas de esperma. |
| WO2004017041A2 (en) | 2002-08-15 | 2004-02-26 | Xy, Inc. | High resolution flow cytometer |
| US7169548B2 (en) | 2002-09-13 | 2007-01-30 | Xy, Inc. | Sperm cell processing and preservation systems |
| US20040142384A1 (en) * | 2003-01-16 | 2004-07-22 | Cohen Barb Ariel | Magnetic separator |
| BRPI0408852A (pt) * | 2003-03-28 | 2006-04-04 | Monsanto Technology Llc | processo para a coloração de espermatozóide |
| EP2306174B1 (en) | 2003-03-28 | 2016-05-11 | Inguran, LLC | Flow cytometry nozzle for orienting particles and corresponding method |
| NZ544103A (en) | 2003-05-15 | 2010-10-29 | Xy Llc | Efficient haploid cell sorting for flow cytometer systems |
| US20050114915A1 (en) * | 2003-11-26 | 2005-05-26 | Vicam L.P. | Method for sex biasing spermatozoa |
| CN104974983A (zh) | 2004-03-29 | 2015-10-14 | 英格朗公司 | 用于授精的精子悬浮液 |
| EP1730523B1 (en) * | 2004-03-29 | 2010-01-13 | Inguran, LLC | Use of a composition which regulates oxidation/reduction reactions intracellularly and/or extracellularly in a staining or sorting process of spermatozoa |
| EP2884258B1 (en) | 2004-07-27 | 2016-10-12 | Beckman Coulter, Inc. | Enhancing flow cytometry discrimination with computer-implemented geometric transformation |
| US20060118167A1 (en) * | 2004-12-03 | 2006-06-08 | Xy, Inc. | Pressure regulated continuously variable volume container for fluid delivery |
| US20060172315A1 (en) * | 2005-02-01 | 2006-08-03 | Anderson Amy L | Methods for staining cells for identification and sorting |
| US7618770B2 (en) * | 2005-07-29 | 2009-11-17 | Xy, Inc. | Methods and apparatus for reducing protein content in sperm cell extenders |
| CA2701170A1 (en) | 2007-09-29 | 2009-08-27 | Timothy James Williams | Composition and method to modify sperm function and increase male gender ratio in mammals |
| US9879222B2 (en) | 2007-12-14 | 2018-01-30 | Mofa Group Llc | Gender-specific separation of sperm cells and embryos |
| JP4572973B2 (ja) | 2008-06-16 | 2010-11-04 | ソニー株式会社 | マイクロチップ及びマイクロチップにおける送流方法 |
| US8251887B2 (en) * | 2009-01-24 | 2012-08-28 | Xihe Li | Reproductive technology of low dose semen production and in vitro/in vitro fertilization in domestic animals |
| US8512224B2 (en) * | 2009-01-24 | 2013-08-20 | Xy, Llc | Method of producing an inseminate |
| EP2478866A2 (en) * | 2009-09-16 | 2012-07-25 | Carlos Alberto Barcelo Rojas | Artificial insemination method for impregnating cows |
| US20110236923A1 (en) * | 2010-03-23 | 2011-09-29 | Genetics & Ivf Institute | Method for staining and sorting of a small volume of sperm |
| AR099629A1 (es) | 2010-06-09 | 2016-08-10 | Xy Llc | Un producto de inseminación heterogéneo |
| ITTO20100651A1 (it) | 2010-07-28 | 2012-01-29 | Ist Sperimentale It Lazzaro Spallanza | Procedimento ed apparecchiatura per la caratterizzazione e la separazione di spermatozoi con sensori micrometrici a leva sospesa |
| JP6014121B2 (ja) | 2011-04-29 | 2016-10-25 | ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニーＢｅｃｔｏｎ， Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ | セルソータシステムおよび方法 |
| CN103649294B (zh) * | 2011-04-29 | 2016-05-18 | 贝克顿·迪金森公司 | 多路分类系统和方法 |
| US8771934B2 (en) * | 2011-12-09 | 2014-07-08 | The Curators Of The University Of Missouri | Inorganic pyrophosphate and uses thereof |
| US9888990B2 (en) | 2012-06-06 | 2018-02-13 | Inguran, Llc | Methods for use of sex sorted semen to improve genetic management in swine |
| CN103555662B (zh) * | 2013-10-31 | 2015-09-16 | 大连金弘基种畜有限公司 | 将四溴化1,1,2,2-四-[4-(2-三乙基乙氧基胺基)]苯乙烯应用于精子分离 |
| AU2015357516A1 (en) | 2014-12-05 | 2017-06-15 | Inguran, Llc | Cell processing using magnetic particles |
| US10302545B2 (en) | 2015-10-05 | 2019-05-28 | Becton, Dickinson And Company | Automated drop delay calculation |
| CN108474727B (zh) * | 2015-12-23 | 2021-10-01 | 西门子保健有限责任公司 | 用于分析在待检测液体中的颗粒的流动室 |
| US11279913B2 (en) | 2017-01-20 | 2022-03-22 | Inguran, Llc | Sperm processing method, apparatus and related media compositions |
| US11376220B2 (en) | 2017-06-30 | 2022-07-05 | Therio, LLC | Single-injection methods and formulations to induce and control multiple ovarian follicles in bovine, caprine, ovine, camelid and other female animals |
| WO2019043656A1 (en) | 2017-09-01 | 2019-03-07 | Genus Plc | METHODS AND SYSTEMS FOR ASSESSING AND / OR QUANTIFYING POPULATIONS OF SPERMATOZOIDS WITH SEXUAL ASYMMETRY |
| US11413358B2 (en) | 2018-04-09 | 2022-08-16 | Inguran, Llc | Sperm nuclei and methods of their manufacture and use |
| CN112136034A (zh) * | 2018-04-27 | 2020-12-25 | 贝克顿·迪金森公司 | 用于流式细胞术分选样品的收集系统及其使用方法 |
| CN112136033A (zh) | 2018-04-27 | 2020-12-25 | 贝克顿·迪金森公司 | 具有气溶胶含量受控的封闭式液滴分选仪的流式细胞仪及其使用方法 |
| EP3942019A4 (en) | 2019-03-19 | 2022-12-14 | Inguran, LLC | METHODS OF IMPROVING SPERM POPULATIONS |
| KR102316634B1 (ko) * | 2019-03-25 | 2021-10-25 | 중앙대학교 산학협력단 | 신규한 정액보존액을 이용한 암컷 수태율 증진방법 |
| US11513114B2 (en) * | 2019-05-29 | 2022-11-29 | Abs Global, Inc. | Kill event optimization |
| WO2021259903A1 (en) | 2020-06-22 | 2021-12-30 | Westfälische Wilhelms-Universität Münster | Sperm stratification |
| KR102646806B1 (ko) * | 2021-09-08 | 2024-03-13 | 단국대학교 산학협력단 | 정자의 성별 분류장치 |
| CN115868447B (zh) * | 2023-02-15 | 2024-06-18 | 新疆天澳牧业有限公司 | 一种青年牛同期返情加定时输精的繁殖管理方法 |
Family Cites Families (197)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US34782A (en) * | 1862-03-25 | Improvement in lamps | ||
| US32350A (en) | 1861-05-21 | Improvement in machines for turning and spreading hay | ||
| US3005756A (en) | 1958-11-14 | 1961-10-24 | Noland L Van Demark | Diluter containing carbon dioxide for preserving semen |
| US3299354A (en) | 1962-07-05 | 1967-01-17 | Coulter Electronics | Aperture tube structure for particle study apparatus |
| US3499435A (en) | 1967-06-02 | 1970-03-10 | Paul E Rockwell | Esophageal probe for use in monitoring |
| US3547526A (en) | 1967-10-26 | 1970-12-15 | Kollsman Instr Corp | Optical beam cross-section converter |
| US3810010A (en) | 1968-11-02 | 1974-05-07 | Telefunken Patent | Particle analysis method and apparatus wherein liquid containing particles is sucked into a constricted flow path |
| US3829216A (en) | 1968-11-26 | 1974-08-13 | M Persidsky | Optical system and method for counting sperm cells |
| DE1815352C3 (de) | 1968-12-18 | 1975-03-20 | Wolfgang Prof. Dr. Dittrich | Automatisches MeB- und Zählgerät für die Teilchen einer Dispersion |
| US3894529A (en) | 1969-04-10 | 1975-07-15 | Bio Controls Inc | Method and means for controlling the sex of mammalian offspring and product therefor |
| US4474875A (en) | 1969-04-10 | 1984-10-02 | Wallace Shrimpton | Method and means for controlling the sex of mammalian offspring and product therefor |
| US4327177A (en) | 1969-04-10 | 1982-04-27 | Wallace Shrimpton | Method and means for controlling the sex of mammalian offspring and product therefor |
| DE1919628C3 (de) | 1969-04-18 | 1975-04-10 | Wolfgang Prof. Dr. Dittrich | Anordnung zum automatischen Zählen und/oder Klassifizieren von in einem strömungsfähigen Medium dispergierten Teilchen |
| US3687806A (en) | 1969-11-04 | 1972-08-29 | Bio Controls Inc | Method for controlling sex of mammalian offspring |
| US3788744A (en) | 1970-01-14 | 1974-01-29 | Bio Physics Systems Inc | Method and apparatus for photoanalysis |
| US3661460A (en) | 1970-08-28 | 1972-05-09 | Technicon Instr | Method and apparatus for optical analysis of the contents of a sheathed stream |
| US3687803A (en) | 1970-11-09 | 1972-08-29 | American Cyanamid Co | Acid chloride activators for hydrogen peroxide bleaching |
| US3816249A (en) | 1970-11-23 | 1974-06-11 | B Bhattacharya | Universal medium and method for extending the useful life of semen in vitro |
| US3644128A (en) | 1970-12-28 | 1972-02-22 | Stuart Lipner | Method of preparing comminuted meat products |
| US3756459A (en) | 1971-01-12 | 1973-09-04 | Damon Corp | Method and apparatus for metering fluid utilizing pressure differentials |
| US3791384A (en) | 1971-07-15 | 1974-02-12 | Schaumann H | Artificial insemination of sows |
| US3833796A (en) | 1971-10-13 | 1974-09-03 | Georgia Tech Res Inst | Method and apparatus for chromosome digitizing |
| BE793185A (fr) | 1971-12-23 | 1973-04-16 | Atomic Energy Commission | Appareil pour analyser et trier rapidement des particules telles que des cellules biologiques |
| US3826364A (en) | 1972-05-22 | 1974-07-30 | Univ Leland Stanford Junior | Particle sorting method and apparatus |
| US3761941A (en) | 1972-10-13 | 1973-09-25 | Mead Corp | Phase control for a drop generating and charging system |
| US3791517A (en) | 1973-03-05 | 1974-02-12 | Bio Physics Systems Inc | Digital fluidic amplifier particle sorter |
| US4009260A (en) | 1973-04-19 | 1977-02-22 | Schering Aktiengesellschaft | Fractionation of sperm |
| US3893766A (en) | 1973-06-14 | 1975-07-08 | Coulter Electronics | Apparatus for orienting generally flat particles for slit-scan photometry |
| US3947093A (en) | 1973-06-28 | 1976-03-30 | Canon Kabushiki Kaisha | Optical device for producing a minute light beam |
| US3944917A (en) | 1973-08-13 | 1976-03-16 | Coulter Electronics, Inc. | Electrical sensing circuitry for particle analyzing device |
| US3909744A (en) | 1973-09-24 | 1975-09-30 | United Technologies Corp | Unstable resonator system producing a high irradiance beam in the far field |
| US3906929A (en) | 1973-11-23 | 1975-09-23 | Lynn Lawrence Augspurger | Processes for reproduction of cellular bodies |
| FR2254639B1 (ja) | 1973-12-18 | 1978-06-02 | Agronomique Inst Nat Rech | |
| US4070617A (en) | 1974-05-08 | 1978-01-24 | Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. | Device for controlling the particle flow in an apparatus for measuring the properties of particles suspended in liquid |
| US3973196A (en) | 1974-05-24 | 1976-08-03 | Coulter Electronics, Inc. | Method and apparatus for ejecting a metered amount of particulate sample |
| US3963606A (en) | 1974-06-03 | 1976-06-15 | Coulter Electronics, Inc. | Semi-automatic adjusting delay for an electronic particle separator |
| US3877430A (en) | 1974-07-17 | 1975-04-15 | Horst K Wieder | Artificial insemination apparatus |
| US4083957A (en) | 1974-07-26 | 1978-04-11 | Lang John L | Process for the alteration of the sex-ratio of mammals |
| US4006360A (en) | 1974-08-21 | 1977-02-01 | Block Engineering, Inc. | Method of discriminating between dyed particles and background fluorescence of the dye |
| US4092229A (en) | 1975-12-17 | 1978-05-30 | Bhattacharya Bhairab C | Thermal convection counter streaming sedimentation and forced convection galvanization method for controlling the sex of mammalian offspring |
| USRE32350E (en) | 1974-11-22 | 1987-02-10 | Bhairab C. Bhattacharya | Thermal convection counter streaming sedimentation and forced convection galvanization method for controlling the sex of mammalian offspring |
| US3976197A (en) | 1974-11-22 | 1976-08-24 | Bhattacharya Bhairab C | Thermal convection counter streaming sedimentation method and apparatus for controlling the sex of mammalian offspring |
| US4014611A (en) | 1975-04-30 | 1977-03-29 | Coulter Electronics, Inc. | Aperture module for use in particle testing apparatus |
| DE2521236C3 (de) | 1975-05-10 | 1978-12-14 | Hildegard Dr. 4400 Muenster Goehde Geb. Kuhl | Einrichtung zum Zählen und Messen von in einer Flüssigkeit suspendierten Teilchen |
| US3960449A (en) | 1975-06-05 | 1976-06-01 | The Board Of Trustees Of Leland Stanford Junior University | Measurement of angular dependence of scattered light in a flowing stream |
| US4058732A (en) | 1975-06-30 | 1977-11-15 | Analytical Radiation Corporation | Method and apparatus for improved analytical fluorescent spectroscopy |
| US4007087A (en) | 1975-10-17 | 1977-02-08 | Gametrics Limited | Sperm fractionation and storage |
| AU2154077A (en) | 1976-01-27 | 1978-07-27 | Univ Edinburgh | Control of sex ratio in mammalian offspring |
| US4162282A (en) | 1976-04-22 | 1979-07-24 | Coulter Electronics, Inc. | Method for producing uniform particles |
| US4302166A (en) | 1976-04-22 | 1981-11-24 | Coulter Electronics, Inc. | Droplet forming apparatus for use in producing uniform particles |
| GB1563856A (en) | 1976-06-10 | 1980-04-02 | Coulter Electronics | Methods and apparatus for delectively separating small particles suspended in a liquid |
| GB1583150A (en) | 1976-08-02 | 1981-01-21 | Milk Marketing Board | Apparatus for collecting eggs |
| US4110604A (en) | 1976-11-04 | 1978-08-29 | Becton, Dickinson And Company | Particle density measuring system |
| DE2709399C3 (de) | 1977-03-04 | 1980-07-24 | Goehde, Wolfgang, Dr., 4400 Muenster | Einrichtung zum Messen von Zelleigenschaften |
| DE2716095A1 (de) | 1977-04-12 | 1978-10-19 | Zoeld Tibor Dr Phys | Gasgesteuertes verfahren zum sortieren von in einem elektrolyten suspendierten teilchen und vorrichtung zur durchfuehrung des verfahrens |
| US4448767A (en) | 1977-10-11 | 1984-05-15 | Sumar Corporation | Preparation of monospecific male-specific antibody and the use thereof for increasing the percentage of mammalian offspring of either sex |
| US4191749A (en) | 1977-10-11 | 1980-03-04 | Bryant Bernard J | Method and material for increasing the percentage of mammalian offspring of either sex |
| US4189236A (en) | 1978-03-20 | 1980-02-19 | Coulter Electronics, Inc. | Ellipsoid-conic radiation collector and method |
| US4179218A (en) | 1978-05-15 | 1979-12-18 | The Boeing Company | Particle size analyzer |
| US4251733A (en) | 1978-06-29 | 1981-02-17 | Hirleman Jr Edwin D | Technique for simultaneous particle size and velocity measurement |
| DE2832091A1 (de) | 1978-07-21 | 1980-01-31 | Eidenschink Henning | Optisches verfahren zur bestimmung der teilchengroesse kolloidaler loesungen und messgeraet zur durchfuehrung des verfahrens |
| US4276139A (en) | 1978-08-16 | 1981-06-30 | Lawson Rommon L | Process for magnetic separation and collection of viable female and male spermatozoa |
| US4225405A (en) | 1978-08-16 | 1980-09-30 | Lawson Rommom L | Process for separation and collection of viable female and male spermatozoa |
| US4230558A (en) | 1978-10-02 | 1980-10-28 | Coulter Electronics, Inc. | Single drop separator |
| US4341471A (en) | 1979-01-02 | 1982-07-27 | Coulter Electronics, Inc. | Apparatus and method for measuring the distribution of radiant energy produced in particle investigating systems |
| US4267268A (en) | 1979-03-12 | 1981-05-12 | Nelson Jr Robert A | Spermatozoa extenders |
| US4274408A (en) | 1979-03-26 | 1981-06-23 | Beatrice Nimrod | Method for guide-wire placement and novel syringe therefor |
| US4200802A (en) | 1979-03-28 | 1980-04-29 | The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy | Parabolic cell analyzer |
| US4408877A (en) | 1979-04-10 | 1983-10-11 | Ernst Leitz Wetzlar Gmbh | Device for hydrodynamic focussing of a particle-suspension in a liquid flow cytophotometer |
| US4255021A (en) | 1979-04-20 | 1981-03-10 | The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy | Optical device with conical input and output prism faces |
| US4263508A (en) | 1979-04-20 | 1981-04-21 | Research Corporation | Pulse edge measurement for determining particle dimensional characteristics |
| US4318480A (en) | 1979-08-20 | 1982-03-09 | Ortho Diagnostics, Inc. | Method and apparatus for positioning the point of droplet formation in the jetting fluid of an electrostatic sorting device |
| US4318481A (en) | 1979-08-20 | 1982-03-09 | Ortho Diagnostics, Inc. | Method for automatically setting the correct phase of the charge pulses in an electrostatic flow sorter |
| US4318482A (en) | 1979-08-20 | 1982-03-09 | Ortho Diagnostics, Inc. | Method for measuring the velocity of a perturbed jetting fluid in an electrostatic particle sorting system |
| US4317520A (en) | 1979-08-20 | 1982-03-02 | Ortho Diagnostics, Inc. | Servo system to control the spatial position of droplet formation of a fluid jet in a cell sorting apparatus |
| US4325483A (en) | 1979-08-20 | 1982-04-20 | Ortho Diagnostics, Inc. | Method for detecting and controlling flow rates of the droplet forming stream of an electrostatic particle sorting apparatus |
| DE2943116C2 (de) | 1979-10-25 | 1986-06-19 | Gesellschaft für Strahlen- und Umweltforschung mbH, 8000 München | Einrichtung zur durchflußcytometrischen Reaktions- und/oder Diffusionsmessung |
| US4400764A (en) | 1980-02-05 | 1983-08-23 | The Boeing Company | Low backscatter illumination system |
| US4367043A (en) | 1980-05-05 | 1983-01-04 | Leland Stanford Junior University | Method and means for delivering liquid samples to a sample scanning device |
| US4362246A (en) | 1980-07-14 | 1982-12-07 | Adair Edwin Lloyd | Method of treating collected mammal semen and separating sperm into X Y components |
| US4348107A (en) | 1980-07-18 | 1982-09-07 | Coulter Electronics, Inc. | Orifice inside optical element |
| US4350410A (en) | 1980-10-08 | 1982-09-21 | The United States Of America As Represented By The Administrator Of The National Aeronautics And Space Administration | Multiprism collimator |
| US4487320A (en) | 1980-11-03 | 1984-12-11 | Coulter Corporation | Method of and apparatus for detecting change in the breakoff point in a droplet generation system |
| US4395676A (en) | 1980-11-24 | 1983-07-26 | Coulter Electronics, Inc. | Focused aperture module |
| US4361400A (en) | 1980-11-26 | 1982-11-30 | The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy | Fluidic assembly for an ultra-high-speed chromosome flow sorter |
| US4680258A (en) | 1981-03-24 | 1987-07-14 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Process for sex determination in man by use of monoclonal antibodies to the H-Y antigen |
| US4339434A (en) | 1981-08-17 | 1982-07-13 | Gametrics Limited | Method of increasing the incidence of female offspring |
| US4395397A (en) | 1981-09-17 | 1983-07-26 | Sidney Farber Cancer Institute, Inc. | Apparatus and method for killing unwanted cells |
| US4422761A (en) | 1981-09-28 | 1983-12-27 | Frommer Joseph C | Photo-electric particle sensing system |
| US4515274A (en) | 1981-12-02 | 1985-05-07 | Coulter Corporation | Particle analyzing and sorting apparatus |
| US4511661A (en) | 1982-03-19 | 1985-04-16 | University Patents, Inc. | ATCC HB8116 And its monoclonal anti-H-Y antibody, Hyclonalan |
| US4498766A (en) | 1982-03-25 | 1985-02-12 | Becton, Dickinson And Company | Light beam focal spot elongation in flow cytometry devices |
| US4559309A (en) | 1982-09-01 | 1985-12-17 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Flow cytometry-fluorescence measurements for characterizing sperm |
| US4501366A (en) | 1982-12-14 | 1985-02-26 | Adolph Coors Company | Photomultiplier tube assembly |
| US4492436A (en) | 1983-01-03 | 1985-01-08 | At&T Bell Laboratories | Polarization independent beam splitter |
| JPS59143146A (ja) * | 1983-02-07 | 1984-08-16 | Nippon Kogaku Kk <Nikon> | ミラ−集光型照明光学系 |
| IT1197570B (it) * | 1983-02-11 | 1988-12-06 | Serono Ist Farm | Miscele di fsh e lh da ipofisi porcine in rapporto definito |
| US4523809A (en) | 1983-08-04 | 1985-06-18 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Air Force | Method and apparatus for generating a structured light beam array |
| US4538733A (en) | 1983-10-14 | 1985-09-03 | Becton, Dickinson And Company | Particle sorter with neutralized collection wells and method of using same |
| US4585736A (en) | 1983-10-18 | 1986-04-29 | The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy | Flow cytometric measurement of total DNA and incorporated halodeoxyuridine |
| US4573796A (en) | 1984-01-06 | 1986-03-04 | The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy | Apparatus for eliminating background interference in fluorescence measurements |
| US4545677A (en) | 1984-03-05 | 1985-10-08 | Becton, Dickinson And Company | Prismatic beam expander for light beam shaping in a flow cytometry apparatus |
| US4600302A (en) | 1984-03-26 | 1986-07-15 | Becton, Dickinson And Company | Flow cytometry apparatus with uniform incoherent light excitation |
| US4605558A (en) | 1984-04-20 | 1986-08-12 | Wallace Shrimpton | Process for cell separation |
| US4660971A (en) | 1984-05-03 | 1987-04-28 | Becton, Dickinson And Company | Optical features of flow cytometry apparatus |
| FR2563726B1 (fr) * | 1984-05-04 | 1986-10-10 | Robert Cassou | Appareil d'insemination artificielle, notamment des carnivores |
| DE3580418D1 (de) | 1984-07-31 | 1990-12-13 | Hitachi Ltd | Elektrophoretisches trennverfahren mit freier stroemung und apparat dafuer. |
| US4598408A (en) | 1984-10-22 | 1986-07-01 | Trw Inc. | High extraction efficiency cylindrical ring resonator |
| US4989977A (en) * | 1985-07-29 | 1991-02-05 | Becton, Dickinson And Company | Flow cytometry apparatus with improved light beam adjustment |
| US4999283A (en) | 1986-01-10 | 1991-03-12 | University Of Kentucky Research Foundation | Method for x and y spermatozoa separation |
| US4780451B1 (en) * | 1987-01-23 | 1995-04-04 | Asua International Inc | Composition and method for producing superovulation in cattle |
| US5162306A (en) * | 1987-01-23 | 1992-11-10 | Donaldson Lloyd E | Composition and method for producing superovulation in mammals |
| DE3851458T2 (de) * | 1987-04-08 | 1995-02-09 | Hitachi Ltd | Vorrichtung mit einer scheideförmigen Durchflusszelle. |
| US5021244A (en) | 1988-12-06 | 1991-06-04 | Cytogam, Inc. | Sex-associated membrane antibodies and their use for increasing the probability that offspring will be of a desired sex |
| US5346990A (en) | 1987-04-08 | 1994-09-13 | Cytogam, Inc. | Sex-associated membrane proteins and methods for increasing the probability that offspring will be of a desired sex |
| FR2614626B1 (fr) * | 1987-04-30 | 1989-07-21 | Ranoux Claude | Conteneur pour fecondation des ovocytes et replacement des embryons chez l'homme et l'animal |
| US4987539A (en) * | 1987-08-05 | 1991-01-22 | Stanford University | Apparatus and method for multidimensional characterization of objects in real time |
| US5712807A (en) * | 1987-10-21 | 1998-01-27 | Bangham; James Andrew | Pulse analyzing method and apparatus |
| GB8726304D0 (en) * | 1987-11-10 | 1987-12-16 | Secr Defence | Particle asymmetry analyser |
| US4988619A (en) | 1987-11-30 | 1991-01-29 | United States Department Of Energy | Flow cytometry apparatus |
| JPH0718785B2 (ja) * | 1988-09-19 | 1995-03-06 | 株式会社日立製作所 | フローセル装置 |
| US5726009A (en) * | 1989-03-20 | 1998-03-10 | Anticancer, Inc. | Native-state method and system for determining viability and proliferative capacity of tissues in vitro |
| US4981580A (en) * | 1989-05-01 | 1991-01-01 | Coulter Corporation | Coincidence arbitration in a flow cytomery sorting system |
| ES2091823T3 (es) * | 1989-05-10 | 1996-11-16 | Us Agriculture | Metodo para preseleccionar el sexo de la progenie. |
| EP0475936B1 (en) * | 1989-05-12 | 1995-09-13 | Cytogam, Inc. | Sex-associated membrane proteins and methods for increasing the probability that offspring will be of a desired sex |
| JPH0353164A (ja) * | 1989-07-20 | 1991-03-07 | Canon Inc | サンプル供給装置及びこれを用いたサンプル測定装置 |
| US5098657A (en) * | 1989-08-07 | 1992-03-24 | Tsi Incorporated | Apparatus for measuring impurity concentrations in a liquid |
| JP2808321B2 (ja) * | 1989-09-19 | 1998-10-08 | 東亜医用電子株式会社 | 細胞分析方法及び装置 |
| US5275787A (en) * | 1989-10-04 | 1994-01-04 | Canon Kabushiki Kaisha | Apparatus for separating or measuring particles to be examined in a sample fluid |
| EP0422616B1 (en) * | 1989-10-11 | 1996-02-07 | Canon Kabushiki Kaisha | Apparatus for and method of fractionating particle in particle-suspended liquid in conformity with the properties thereof |
| EP0448931B1 (en) * | 1990-01-26 | 1996-04-03 | Canon Kabushiki Kaisha | Method for measuring a specimen by the use of fluorescence light |
| US5150313A (en) | 1990-04-12 | 1992-09-22 | Regents Of The University Of California | Parallel pulse processing and data acquisition for high speed, low error flow cytometry |
| US5087295A (en) * | 1990-06-13 | 1992-02-11 | Becton Dickinson And Company | Cleaning cycle for flow cytometers |
| DE9107792U1 (de) * | 1991-06-25 | 1991-09-12 | Labotect-Labor-Technik, Göttingen, GmbH, 3406 Bovenden | Instrumentensatz zum uterinen Embryonentransfer |
| US5488469A (en) * | 1991-08-30 | 1996-01-30 | Omron Corporation | Cell analyzing apparatus |
| US5866344A (en) * | 1991-11-15 | 1999-02-02 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Antibody selection methods using cell surface expressed libraries |
| US5400179A (en) * | 1992-02-18 | 1995-03-21 | Asahi Kogaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Optical multilayer thin film and beam splitter |
| US5298967A (en) * | 1992-06-02 | 1994-03-29 | Pacific Scientific Company | Measurement of concentrations of dissolved solvent |
| US5466572A (en) | 1992-09-03 | 1995-11-14 | Systemix, Inc. | High speed flow cytometric separation of viable cells |
| US5395588A (en) * | 1992-12-14 | 1995-03-07 | Becton Dickinson And Company | Control of flow cytometer having vacuum fluidics |
| JP3052665B2 (ja) | 1993-01-26 | 2000-06-19 | 株式会社日立製作所 | フローセル装置 |
| US5494795A (en) * | 1993-05-05 | 1996-02-27 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Specific oligonucleotide primers for detection of pathogenic campylobacter bacteria by polymerase chain reaction |
| PL307305A1 (en) * | 1993-06-04 | 1995-05-15 | Kwahak International Co Ltd | Apparatus for arificial fertilisation and transfer of embryos |
| US5483469A (en) | 1993-08-02 | 1996-01-09 | The Regents Of The University Of California | Multiple sort flow cytometer |
| DE69434551T2 (de) * | 1993-09-16 | 2006-06-14 | Sysmex Corp | Teilchen-Analysegerät |
| US5480774A (en) * | 1993-10-14 | 1996-01-02 | A/F Protein, Inc. | Determination of genomic sex in salmonids |
| GB9324938D0 (en) * | 1993-12-04 | 1994-01-26 | Atomic Energy Authority Uk | Aerosol generator |
| DE4419894A1 (de) * | 1994-06-07 | 1995-12-14 | Gip Medizin Technik Gmbh | Endoskopische Punktionsnadelvorrichtung |
| US5601234A (en) * | 1994-08-01 | 1997-02-11 | Abbott Laboratories | Fluid nozzle and method of introducing a fluid |
| US5700692A (en) | 1994-09-27 | 1997-12-23 | Becton Dickinson And Company | Flow sorter with video-regulated droplet spacing |
| US5602349A (en) | 1994-10-14 | 1997-02-11 | The University Of Washington | Sample introduction system for a flow cytometer |
| US5643796A (en) | 1994-10-14 | 1997-07-01 | University Of Washington | System for sensing droplet formation time delay in a flow cytometer |
| US5602039A (en) | 1994-10-14 | 1997-02-11 | The University Of Washington | Flow cytometer jet monitor system |
| EP0786078B1 (en) * | 1994-10-14 | 2004-01-07 | University of Washington | System and method for high speed flow cytometer droplet formation |
| JP3411112B2 (ja) * | 1994-11-04 | 2003-05-26 | シスメックス株式会社 | 粒子画像分析装置 |
| US5495719A (en) * | 1994-11-14 | 1996-03-05 | Gray, Jr.; Carl O. | Method of preserving spermatozoa |
| JP3347495B2 (ja) * | 1994-11-14 | 2002-11-20 | シスメックス株式会社 | 粒子分析装置 |
| US5514537A (en) | 1994-11-28 | 1996-05-07 | Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | Process and apparatus for sorting spermatozoa |
| US5632754A (en) * | 1994-12-23 | 1997-05-27 | Devices For Vascular Intervention | Universal catheter with interchangeable work element |
| FI98765C (fi) * | 1995-01-16 | 1997-08-11 | Erkki Soini | Virtaussytometrinen menetelmä ja laite |
| US5608519A (en) * | 1995-03-20 | 1997-03-04 | Gourley; Paul L. | Laser apparatus and method for microscopic and spectroscopic analysis and processing of biological cells |
| FR2734637B1 (fr) * | 1995-05-24 | 1997-08-14 | Abx Sa | Dispositif d'inspection optique d'un fluide, notamment pour analyses hematologiques |
| US5589457A (en) * | 1995-07-03 | 1996-12-31 | Ausa International, Inc. | Process for the synchronization of ovulation |
| US5726751A (en) * | 1995-09-27 | 1998-03-10 | University Of Washington | Silicon microchannel optical flow cytometer |
| JP3584108B2 (ja) * | 1996-01-08 | 2004-11-04 | キヤノン株式会社 | レンズ鏡筒 |
| US5707808A (en) * | 1996-04-15 | 1998-01-13 | The Regents Of The University Of California | Optical selection and collection of DNA fragments |
| JP2963393B2 (ja) * | 1996-06-14 | 1999-10-18 | 浜松ホトニクス株式会社 | 光電子増倍管用電圧分割回路 |
| US5872627A (en) * | 1996-07-30 | 1999-02-16 | Bayer Corporation | Method and apparatus for detecting scattered light in an analytical instrument |
| US5719667A (en) * | 1996-07-30 | 1998-02-17 | Bayer Corporation | Apparatus for filtering a laser beam in an analytical instrument |
| US5873254A (en) * | 1996-09-06 | 1999-02-23 | Interface Multigrad Technology | Device and methods for multigradient directional cooling and warming of biological samples |
| JP4323571B2 (ja) | 1997-01-31 | 2009-09-02 | エックスワイ， インコーポレイテッド | 光学装置 |
| US5874266A (en) * | 1997-03-27 | 1999-02-23 | Palsson; Bernhard O. | Targeted system for removing tumor cells from cell populations |
| US5985216A (en) | 1997-07-24 | 1999-11-16 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture | Flow cytometry nozzle for high efficiency cell sorting |
| US5876942A (en) * | 1997-07-24 | 1999-03-02 | National Science Council Of Republic Of China | Process for sexing cow embryos |
| US6071689A (en) | 1997-12-31 | 2000-06-06 | Xy, Inc. | System for improving yield of sexed embryos in mammals |
| US6149867A (en) * | 1997-12-31 | 2000-11-21 | Xy, Inc. | Sheath fluids and collection systems for sex-specific cytometer sorting of sperm |
| EP1058688A4 (en) | 1998-02-03 | 2004-10-06 | Xy Inc | USE OF SPECIFIC OLIGONUCLEOTIDE PRIMERS TO DETECT THE PRESENCE OF MALE BOVINE CHROMOSOME BY CHAIN AMPLIFICATION BY POLYMERASE |
| CN100357723C (zh) | 1998-02-20 | 2007-12-26 | Xy公司 | 用于分类流量细胞计数器的振动系统和流量细胞计数方法 |
| US6175409B1 (en) * | 1999-04-02 | 2001-01-16 | Symyx Technologies, Inc. | Flow-injection analysis and variable-flow light-scattering methods and apparatus for characterizing polymers |
| EP2283848A1 (en) | 1998-07-30 | 2011-02-16 | Xy, Llc | Equine system for non-surgical articificial insemination |
| US6150119A (en) * | 1999-01-19 | 2000-11-21 | Caliper Technologies Corp. | Optimized high-throughput analytical system |
| US6193647B1 (en) * | 1999-04-08 | 2001-02-27 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Microfluidic embryo and/or oocyte handling device and method |
| EP2281879B1 (en) * | 1999-11-30 | 2016-01-27 | Intrexon Corporation | Apparatus for determining a morphological or physiological characteristic of individual cells in a biological specimen |
| US6503698B1 (en) * | 2000-06-16 | 2003-01-07 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Cryopreservation of swine embryos |
| US20040005582A1 (en) * | 2000-08-10 | 2004-01-08 | Nanobiodynamics, Incorporated | Biospecific desorption microflow systems and methods for studying biospecific interactions and their modulators |
| US20040031071A1 (en) * | 2000-10-05 | 2004-02-12 | Xy, Inc. | System of hysteroscopic insemination of mares |
| CA2428326A1 (en) * | 2000-11-09 | 2002-05-16 | University Of Guelph | Mammalian sex selection using genetic modification |
| US7713687B2 (en) * | 2000-11-29 | 2010-05-11 | Xy, Inc. | System to separate frozen-thawed spermatozoa into x-chromosome bearing and y-chromosome bearing populations |
| US6849423B2 (en) * | 2000-11-29 | 2005-02-01 | Picoliter Inc | Focused acoustics for detection and sorting of fluid volumes |
| JP2002208277A (ja) * | 2001-01-05 | 2002-07-26 | Toshiba Corp | 半導体記憶装置のセンスアンプ制御回路 |
| US6673095B2 (en) * | 2001-02-12 | 2004-01-06 | Wound Healing Of Oklahoma, Inc. | Apparatus and method for delivery of laser light |
| US20020159920A1 (en) * | 2001-04-03 | 2002-10-31 | Weigl Bernhard H. | Multiple redundant microfluidic structures cross reference to related applications |
| US6849394B2 (en) * | 2002-02-21 | 2005-02-01 | Minitube Of America | Compositions comprising reproductive cell media and methods for using such compositions |
| BRPI0408852A (pt) * | 2003-03-28 | 2006-04-04 | Monsanto Technology Llc | processo para a coloração de espermatozóide |
| US20050011582A1 (en) * | 2003-06-06 | 2005-01-20 | Haug Jeffrey S. | Fluid delivery system for a flow cytometer |
| US7591064B2 (en) * | 2005-07-20 | 2009-09-22 | Hitachi Global Storage Technologies Netherlands B.V. | Method of fabrication for tape medium read head with unitary formation of multiple elements |
| US7618770B2 (en) * | 2005-07-29 | 2009-11-17 | Xy, Inc. | Methods and apparatus for reducing protein content in sperm cell extenders |
-
1998
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1999
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-
2002
- 2002-02-20 US US10/081,955 patent/US7629113B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-02-20 JP JP2002044035A patent/JP4577666B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2005
- 2005-12-28 JP JP2005380486A patent/JP2006115856A/ja not_active Withdrawn
-
2007
- 2007-06-22 JP JP2007165690A patent/JP2007325596A/ja not_active Withdrawn
-
2010
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- 2010-02-02 HK HK10101120.9A patent/HK1134007A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2010-06-18 JP JP2010139978A patent/JP2010252801A/ja not_active Withdrawn
-
2013
- 2013-02-06 JP JP2013021330A patent/JP2013078346A/ja not_active Withdrawn
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015164935A (ja) * | 2003-09-04 | 2015-09-17 | プレミアム ジェネティクス （ユーケー） リミテッド | レーザ操縦を用いた多層流に基づく粒子及び細胞の分離 |
| JP2008507287A (ja) * | 2004-07-22 | 2008-03-13 | モンサント テクノロジー エルエルシー | 精子細胞の集団を富化する方法 |
| JP2008530985A (ja) * | 2005-02-01 | 2008-08-14 | アリックス インコーポレイテッド | 細胞分類方法及び装置 |
| KR20150006061A (ko) * | 2012-06-06 | 2015-01-15 | 인구란, 엘엘씨 | 성별 선택된 정세포를 사용하여 양돈의 계통 또는 품종에서 유전적 진보를 증가시키는 방법 |
| KR101708105B1 (ko) | 2012-06-06 | 2017-02-17 | 인구란, 엘엘씨 | 성별 선택된 정세포를 사용하여 양돈의 계통 또는 품종에서 유전적 진보를 증가시키는 방법 |
| CN105557621A (zh) * | 2014-10-13 | 2016-05-11 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 快速高效获得无菌哺乳动物的方法 |
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| GB2381004A (en) | A method of sorting cells | |
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