JP2002205953A

JP2002205953A - 抗腫瘍組成物

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Publication number: JP2002205953A
Application number: JP2001002239A
Authority: JP
Inventors: Kenshiro Fujimoto; 健四郎藤本; Takehito Takamiya; 健仁高宮; Wataru Matsumoto; 渉松本
Original assignee: Asahi Denka Kogyo KK
Current assignee: Adeka Corp
Priority date: 2001-01-10
Filing date: 2001-01-10
Publication date: 2002-07-23
Anticipated expiration: 2021-01-10
Also published as: JP5099946B2

Abstract

(57)【要約】（修正有）【課題】安全性が高く副作用の少ない、実用に供し得
る抗腫瘍組成物並びに該抗腫瘍組成物を含有する医薬品
及び食品の提供。【解決手段】苦瓜種子油又はリパーゼによる加水分解
処理を行なって得られるα−エレオステアリン酸含有グ
リセリドを濃縮した苦瓜種子油を含有することを特徴と
する抗腫瘍組成物、医薬品、食品。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、抗腫瘍組成物並び
に該抗腫瘍組成物を含有する医薬品及び食品に関する。
詳しくは、苦瓜種子油又はリパーゼによる加水分解処理
を行ないα−エレオステアリン酸含有グリセリドを濃縮
した苦瓜種子油を含有する、種々の異なるタイプの癌の
治療に有用な抗腫瘍組成物並びに該抗腫瘍用組成物を含
有する医薬品及び食品に関する。

【０００２】

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】近年、
癌による死亡率は増加し続けており、癌の治療及び症状
の軽減に適した治療方法を開発するために多くの研究が
行われている。化学療法の分野では、抗生物質（アドリ
アマイシン、カルチノフィリン等）、代謝拮抗物質、ア
ルキル化剤、ホルモン剤等が癌細胞に有効な抗腫瘍剤と
して見出されている。しかしながら、これらの多くの抗
腫瘍剤は、癌細胞を攻撃するだけでなく、正常細胞にも
作用するので、癌治療を必要とする患者に投与した場
合、嘔吐、悪心、食欲不振、脱毛等の副作用を引き起こ
す問題等があった。

【０００３】一方、油脂成分は種々の生理作用を有して
いるが、幾つかの脂肪酸については、癌細胞に対して抑
制効果を示すことが見出されている。特に、ｎ−６、ｎ
−３系列の不飽和脂肪酸のもつ活性が注目されている
（鹿山光編、「ＡＡ、ＥＰＡ、ＤＨＡ−高度不飽和脂肪
酸」、１５０〜１７０頁、１９９５年恒星社厚生閣発
行）。脂肪酸は、日常摂取する油脂を構成する成分であ
ることから、より安全な癌の治療薬としての利用が提案
されている。また脂肪酸は、癌治療の目的で使用するだ
けではなく、癌の予防食としての効果も期待できる。最
近、リノール酸をアルカリ共役化した共役リノール酸
が、癌細胞の増殖抑制効果を持つことが報告されている
（ＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ、Ｎｏ．１
５、１２４１〜１２４６頁、１９９５年）。その効果に
ついては、共役リノール酸が抗酸化活性を有するという
説やエイコサノイド代謝への影響等が考えられているが
詳細は不明である。その他、パリナリン酸（１８：４，
９−シス、１１―トランス、１３−トランス、１５−シ
ス−オクタデカテトラエン酸）やα−エレオステアリン
酸（１８：３，９−シス、１１−トランス、１３−トラ
ンス）にも抗腫瘍活性があることが見出されている（Ｃ
ａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ、Ｎｏ．５１、６０２５
〜６０３０頁、１９９１年）。またそれ以上に炭素数及
び二重結合数の多い共役脂肪酸に関しても抗腫瘍性が報
告されている（第３８回油化学討論会講演要旨集：ｐ１
６４、ｐ１６７、日本農芸化学会２０００年度大会講演
要旨集：ｐ７０、ｐ２６３、日米油化学世界会議（ＪＡ
ＷＣ）２０００Ａｂｓｔｒａｃｔｓ：ｐ１１８、ｐ２
６０、ｐ２６１、特開２０００―２８１５７２号公報、
特開２０００―２９０１７８号公報等）。

【０００４】しかし、これらの知見によれば、多くの共
役脂肪酸は、非共役脂肪酸を共役化処理して得ている。
共役化処理として水酸化カリウム、水酸化ナトリウム等
のアルカリ金属水酸化物、ヨウ素、ヨウ化カリウム、二
酸化硫黄やチオール類等の硫黄化化合物等を触媒とし、
又は無触媒下で紫外線を照射しながら、窒素ガス等の不
活性ガス雰囲気中で１５０〜２５０℃にて５分〜１時
間、共役化反応を行って調製している。しかし、これら
の反応は大量の触媒や有毒の触媒を使用するほか、極め
て高温の反応であるため、副生成物が生じるため収率が
悪くなり、また、これらの副生成物による副作用が懸念
される。さらに、これらの副生成物を除去するのに、困
難を生じている。

【０００５】一方、天然由来の共役脂肪酸を利用した抗
腫瘍性の評価も知られている。特に、優れた抗腫瘍性が
報告されているα−エレオステアリン酸はきり油に多く
含まれていることが知られている。しかし、きり油は強
い毒性と臭いから食用とはされていないのが現状であ
り、利用には毒性を除くための精製方法や脱臭が必要で
あるが、安価で簡便な手段は見出されていない。

【０００６】一方、苦瓜の種子にもα−エレオステアリ
ン酸が含まれていることが知られている。苦瓜は熱帯ア
ジア原産の一年生つる性草本で、中国南部から東南アジ
ア、沖縄、台湾では重要な野菜である。ビタミンＣやミ
ネラルの含有量が極めて多く、健康食品としての利用価
値が高い。果実は短楕円形から長円筒形で先が尖ってお
り、普通、食する場合は未熟果の種子部を取り除いてお
り、種子は未利用となっている。

【０００７】これまでに、苦瓜種子油における栄養学的
特性として、ラットの血清脂質、組織脂質に与える影響
が知られているほか（Ａｎｎ．Ｎｕｔｒ．Ｍｅｔａ
ｂ．、Ｎｏ．４２、ｐ２９０−２９６、１９９８）、ラ
ット血液における酸化の影響が知られている（Ｌｉｐｉ
ｄｓ、Ｖｏｌ．３４、Ｎｏ．２、ｐ１０９−１１４、１
９９９）。しかし、苦瓜種子油における抗腫瘍活性につ
いては明らかとはなっていなかった。

【０００８】従って、本発明の目的は、安全性が高く副
作用の少ない、実用に供し得る抗腫瘍組成物並びに該抗
腫瘍組成物を含有する医薬品及び食品を提供することに
ある。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、苦瓜種子
について種々検討する過程で、苦瓜種子油に抗腫瘍活性
が存在し、特に種々の異なるタイプの癌の治療に有用で
あることを見出し、さらにリパーゼによる加水分解処理
を行うことで、容易に、優れた抗腫瘍活性を有する抗腫
瘍組成物が得られることを見出し、本発明を完成するに
至った。

【００１０】すなわち、本発明は、苦瓜種子油を含有す
ることを特徴とする抗腫瘍組成物を提供するものであ
る。

【００１１】また、本発明は、リパーゼによる加水分解
処理を行なって得られるα−エレオステアリン酸含有グ
リセリドを濃縮した苦瓜種子油を含有することを特徴と
する抗腫瘍組成物を提供するものである。

【００１２】さらに、本発明は、上記抗腫瘍組成物を含
有することを特徴とする医薬品及び食品を提供するもの
である。

【００１３】

【発明の実施の形態】本発明で用いられる、苦瓜種子油
とは、苦瓜（ＭｏｍｏｒｄｉｃａＣｈａｒａｎｔｉａ
Ｌ．）の種子から採取される油である。

【００１４】苦瓜種子油は、以下の方法により得られた
ものを使用するのが好ましいが、これに限定されない。
すなわち、苦瓜（ＭｏｍｏｒｄｉｃａＣｈａｒａｎｔ
ｉａＬ．）の種子を、好ましくは殻を取り除いてから
（脱穀工程）、粉砕する（粉砕工程）。さらに、乾燥工
程で水分量を低下させる。乾燥方法は凍結乾燥、温風乾
燥等があるが、これらに限定されない。乾燥、脱穀及び
粉砕の順序はこの限りでない。また、加熱処理（クッキ
ング）を搾油前の前処理として行ってもよい。採油は、
上記工程後、圧搾式又は溶剤抽出法で行なうことが好ま
しい。溶剤抽出法で用いられる溶剤は、ノルマルヘキサ
ン、アセトン、エタノール、イソプロピルアルコール、
ジクロロエタン、クロロホルム、メタノール等が挙げら
れ、これらの溶剤を２種以上混合して用いてもよい。好
ましくはノルマルヘキサンを用いるのがよい。

【００１５】得られた油分は、さらに精製工程を経ても
よい。精製工程としては、脱ガム、脱酸、水洗、脱色、
脱臭、カラムクロマト等があるが、これらに限定されな
い。また、これらの工程を２種以上組み合わせて行って
もよい。

【００１６】このようにして得られた苦瓜種子油分に
は、トリグリセライドが５０〜９９重量％含まれてお
り、その構成脂肪酸中に占めるα−エレオステアリン酸
の割合は２０〜６０重量％である。

【００１７】上記苦瓜種子油は、トリグリセリドのまま
でもよく、その他のエステル、遊離脂肪酸もしくは金属
塩の形態にしてもよく、本発明では、いずれの形態も苦
瓜種子油として扱う。

【００１８】上記苦瓜種子油のエステルとしては、上記
苦瓜種子油と、炭素数１〜１０のアルコール、エチレン
グリコール、プロピレングリコール及びグリセリンから
なる群から選ばれた１種又は２種以上のアルコール類と
のエステル等が挙げられる。

【００１９】また、上記苦瓜種子油の金属塩としては、
ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、亜鉛塩及び
マグネシウム塩からなる群から選ばれた１種又は２種以
上の金属塩等が挙げられる。

【００２０】さらに、上記苦瓜種子油は、上記のエステ
ルもしくは金属塩の形態の他、アミドやリン脂質等の任
意の他の薬理学上許容される形態であってもよい。

【００２１】また、上記苦瓜種子油はリパーゼによる選
択的な加水分解処理を行うことで、α−エレオステアリ
ン酸含有グリセリドを濃縮せしめ、さらに優れた抗腫瘍
活性を示す。すなわち、上記苦瓜種子油において、加水
分解率５〜５０％、好ましくは１０〜４０％の範囲まで
加水分解することが特に好ましい。該加水分解率が５％
未満ではα−エレオステアリン酸含有グリセリドの充分
な高濃度化が行われず、５０％を超えるとα−エレオス
テアリン酸含有グリセリドの回収率が好ましくない。

【００２２】本発明で、加水分解に使用するリパーゼと
しては、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属
の細菌が生産するものやその他の細菌由来のものが挙げ
られる。かかるリパーゼについては、市販のものを用い
ることができ、例を挙げると、バクテリア由来のリパー
ゼとしては、シュードモナス属に属する微生物、好まし
くはシュードモナス・エスピー（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓｓｐ．）が産生するリパーゼ（天野製薬（株）製、
ＬｉｐａｓｅＰＳ）が挙げられる。但し、本発明に使用
するリパーゼは、上記シュードモナス・エスピー（Ｐｓ
ｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．）由来のものに限らない。
例えば、一次構造に相同性のあるリパーゼは同じような
作用特性を示すので、シュードモナス属だけでなく、ア
ルカリゲネス属、アクロモバクター属、クロモバクテリ
ウム属、スタフィロコッカス属等に属するバクテリア由
来のリパーゼもこの加水分解反応には有効である。

【００２３】上記加水分解反応については、反応系中の
苦瓜種子油の量として１〜９０重量％で行なうのが好ま
しく、より好ましくは１０〜８０重量％であり、水の量
は１０〜９９重量％で行なうのが好ましく、より好まし
くは２０〜９０重量％である。苦瓜種子油／水（重量
比）としては０．０１〜９．０で行なうのが好ましく、
より好ましくは０．１１〜４．０である。

【００２４】加水分解に使用されるリパーゼの使用形態
は特に限定されず、セライトやイオン交換樹脂、セラミ
ック担体等に固定化されたリパーゼを用いてもよいが、
リパーゼをそのまま用いるのが好ましい。リパーゼの添
加量は反応液１ｇに対して２〜５０００ユニットが好ま
しく、更には５〜１０００ユニットである。ここでの１
ユニットとは、オリーブ油を基質として、１分間に１μ
モルの脂肪酸が生成するのに必要なリパーゼ量を示す。

【００２５】本発明では加水分解率を好ましくは５〜５
０％、好ましくは１０〜４０％の範囲にコントロールす
ることが必要で、リパーゼの添加量、反応温度、反応時
間、撹拌速度、反応系中の苦瓜種子油と水の重量比等の
反応条件を調製することで上記範囲に加水分解率をコン
トロールできる。具体的には、苦瓜種子油、水、加水分
解用リパーゼの存在下（添加順序は特に限定されない）
で、反応条件として、反応温度を１０〜５５℃、好まし
くは２０〜４０℃、反応時間を０．１〜７２時間、好ま
しくは０．５〜１０時間、撹拌速度を０〜８００ｒｐｍ
に調整するとよい。反応は大気下で行っても良いが、不
活性ガス、例えば窒素ガス等の雰囲気下で行うとより好
ましい。

【００２６】尚、本発明でいう加水分解率とは、油脂中
の脂肪酸グリセリドが加水分解により脂肪酸として遊離
するときの割合（％）であり、加水分解率＝（反応後の油層の酸価／反応前の油脂のケ
ン化価）×１００で示される。

【００２７】加水分解反応後、リパーゼを含む水層を除
去し、油脂分を得るが、ここに濃縮されたα−エレオス
テアリン酸含有グリセリドを主成分とするグリセリド
と、反応によって生成したα−エレオステアリン酸以外
の遊離脂肪酸を主成分とする遊離脂肪酸が含まれる。従
って、アルカリ脱酸法、分子蒸留法、カラムクロマト法
等の公知の方法によって遊離脂肪酸を除くことが必要で
ある。このようにして、リパーゼ処理されたα−エレオ
ステアリン酸含有グリセリド濃縮苦瓜種子油が得られ
る。

【００２８】上記α−エレオステアリン酸含有グリセリ
ド濃縮苦瓜種子油は、グリセリドの形態のままでもよ
く、その他のエステル、遊離脂肪酸もしくは金属塩の形
態に変換してもよい。

【００２９】上記濃縮苦瓜種子油のエステルとしては、
上記濃縮苦瓜種子油と、炭素数１〜１０のアルコール、
エチレングリコール、プロピレングリコール及びグリセ
リンからなる群から選ばれた１種又は２種以上のアルコ
ール類とのエステル等が挙げられる。

【００３０】また、上記濃縮苦瓜種子油の金属塩として
は、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、亜鉛塩
及びマグネシウム塩からなる群から選ばれた１種又は２
種以上の金属塩等が挙げられる。

【００３１】さらに、上記リパーゼ処理した濃縮苦瓜種
子油は、上記のエステルもしくは金属塩の形態の他、ア
ミドやリン脂質等の任意の他の薬理学上許容される形態
であってもよい。本発明では、いずれの形態もリパーゼ
による加水分解処理を行なった濃縮苦瓜種子油として扱
う。

【００３２】上記苦瓜種子油及び濃縮苦瓜種子油の抗腫
瘍剤としての作用機序は、該種子油中に含有されるα−
エレオステアリン酸又はその誘導体に由来するものと推
測されるが、その詳細は不明である。しかしながら、上
記苦瓜種子油及び濃縮苦瓜種子油を有効成分とする本発
明の抗腫瘍組成物は、後述の実施例に示すように組織に
関係なく種々の腫瘍に対して有効な抗腫瘍細胞作用を示
す。従って、本発明の抗腫瘍組成物を様々な態様で腫瘍
患者に投与することにより極めて有効な抗腫瘍効果を示
すと期待される。

【００３３】上記苦瓜種子油、苦瓜種子油由来脂肪酸グ
リセリド、濃縮苦瓜種子油、それらの遊離脂肪酸、脂肪
酸のエステルもしくは金属塩又はその他の形態物を有効
成分とする本発明の抗腫瘍組成物を医薬として使用する
場合の形態は、制限されるものではなく、投与方法や適
用される腫瘍の種類、形状及び存在部位等に応じて、注
射液、座薬、軟膏、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、
ドリンク剤等の種々の形態を適宜選択することができ
る。さらに、上記形態に応じて、薬理上許される希釈
剤、安定剤、賦形剤等を含有させることができる。

【００３４】本発明の抗腫瘍組成物における上記苦瓜種
子油、苦瓜種子油由来脂肪酸グリセリド、濃縮苦瓜種子
油、それらの遊離脂肪酸、脂肪酸のエステルもしくは金
属塩又はその他の形態物の含有量は、後述する投与量
（治療上有効量）を目安にし、１日の服用回数や用量を
考慮して決定すればよい。本発明の抗腫瘍組成物の投与
方法としては、静脈内注射、皮下注射、座薬、軟膏等に
よる非経口投与方法、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤
等による経口投与法が可能である。

【００３５】また、本発明の抗腫瘍組成物は、食用油脂
組成物、食用乳化油脂組成物、ベーカリー製品、調理食
品、飲料等の各種飲食品に混合してもよい。このような
飲食品としては、具体的にはマーガリン、ショートニン
グ、クリーム、アイスクリーム、バター、チーズ、スー
プ、パン、ケーキ、ビスケット、クラッカー、クッキ
ー、ジャム等が挙げられ、必要に応じて、デキストリ
ン、乳糖、澱粉等の賦型剤や香料、色素等と共にペレッ
ト、錠剤、顆粒等に加工したり、またゼラチン等で被覆
してカプセルに成形加工して健康食品や栄養補助食品等
としても利用できるが、これらに限定されるものではな
い。

【００３６】本発明の抗腫瘍組成物の投与量は、治療上
有効量であり、腫瘍の種類等により一概に言えないが、
おおよそ、例えば成人（体重６０ｋｇ）の場合、１日当
たり上記苦瓜種子油及び濃縮苦瓜種子油の量として１０
〜５０００ｍｇ、好ましくは２０〜３０００ｍｇであ
る。本発明の抗腫瘍剤組成物は、適宜、公知の抗腫瘍剤
を含む他の治療薬と併用することもできる。

【００３７】

【実施例】以下、実施例により本発明を具体的に説明す
るが、本発明はこれらの例によって何ら限定されるもの
ではない。

【００３８】〔実施例１〕苦瓜（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ
ＣｈａｒａｎｔｉａＬ．）の種子から殻を取り除き、
真空凍結乾燥機（東京理科機械（株）製、ＦＤ−１）で
４８時間乾燥した後、粉砕器（共立理工（株）製、ＳＫ
−Ｍ２）で粉砕した。得られた粉砕物からノルマルヘキ
サンを用いて抽出を行い粗抽出物（苦瓜種子油）を得
た。

【００３９】次に、上記のようにして得られた苦瓜種子
油を被験物として用い、得られた抽出物に水酸化ナトリ
ウムを溶解したエタノールを加え加水分解を行って遊離
の脂肪酸を得て、以下のようにして腫瘍細胞に対する細
胞毒性試験を行った。

【００４０】＜腫瘍細胞に対する細胞毒性試験方法＞被
験物質をエタノールに溶解し、１０％牛胎児血清を含む
ＲＰＭ１−１６４０培地により適宜希釈して９６穴プラ
スチック培養プレートの各穴に０．１ｍｌずつ添加した
（各穴のエタノール濃度は０．１％以下となるように調
整した）。ここに上記培地で５×１０４個／ｍｌに調整
したヒト結腸癌細胞（ＨＴ−２９）を０．１ｍｌずつ分
注した後、炭酸ガスインキュベーター内で３７℃、４８
時間培養した。培養後、培養プレート１穴あたり、２，
３−ビス［２−メトキシ−４−ニトロ−５−スルホ−フ
ェニル］−２Ｈ−テトラゾリウム−５−カルボキシアニ
リド（５０ｍｇ／ｍｌ）及びフェナジンメトスルフェー
ト（１．５ｍｇ／ｍｌ）をそれぞれ１μｌずつ加え、マ
イクロプレートリーダーで吸光度を測定した。苦瓜種子
油（被験物質）を含まない培地で培養したヒト結腸癌細
胞についても同様に吸光度を測定し、次式に従ってヒト
結腸癌細胞の増殖阻止率を算出した。

【００４１】増殖阻止率（％）＝（１−Ａ／Ｂ）×１００Ａ：被験物質を添加した培地で培養した細胞の吸光度Ｂ：被験物質無添加の培地で培養した細胞の吸光度

【００４２】その結果を下記表１に示す。これにより本
発明品が、ヒト結腸癌細胞に対して、優れた増殖阻止効
果があることが分かる。

【００４３】〔実施例２〕苦瓜（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ
ＣｈａｒａｎｔｉａＬ．）の種子から殻を取り除き、
真空凍結乾燥機（東京理科機械（株）製、ＦＤ−１）で
４８時間乾燥した後、粉砕器（共立理工（株）製、ＳＫ
−Ｍ２）で粉砕した。得られた粉砕物からノルマルヘキ
サンを用いて抽出を行い粗抽出物を得た。

【００４４】得られた粗抽出物にシュードモナス・エス
ピー（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．）が産生するリ
パーゼ（天野製薬（株）製、ＬｉｐａｓｅＰＳ）を油１
ｇに対して２００ユニットになるように溶解した蒸留水
を加えて、撹拌しながら４０℃で１時間加水分解反応を
行った後、リパーゼを含む水層を除去し、７％含水フロ
リジル（和光純薬（株）製、Ｆｌｏｒｉｓｉｌ）を充填
したカラムに適用し、エーテル／メタノール（９８：
２）で溶出してグリセリド画分を得た。α−エレオステ
アリン酸含量が５０．６重量％であった苦瓜種子油はリ
パーゼによる加水分解処理によって、７８．５重量％に
濃縮された。

【００４５】次に、上記のようにして得られた濃縮苦瓜
種子油に水酸化ナトリウムを溶解したエタノールを加え
加水分解を行って遊離の苦瓜脂肪酸を得て、実施例１と
同様にしてヒト結腸癌細胞（ＨＴ−２９）を用いた細胞
毒性試験を行い、細胞の増殖阻止率を求めた。

【００４６】その結果を下記表１に示す。これにより本
発明品が、ヒト結腸癌細胞に対して、優れた増殖阻止効
果があることがわかる。

【００４７】

【表１】

【００４８】

【発明の効果】本発明により、安全性が高く副作用の少
ない、実用に供し得る抗腫瘍組成物並びに該抗腫瘍組成
物を含有する医薬品及び食品を提供することができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続きＦターム(参考） 4B018 MD53 ME08 MF12 4B064 AD85 CA21 CB03 DA05 DA10 4C088 AB19 AC04 BA18 CA25 MA02 MA52 NA14 ZB26 4C206 AA01 AA02 DB47 MA01 MA02 MA72 NA14 ZB26

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】苦瓜種子油を含有することを特徴とする
抗腫瘍組成物。
【請求項２】リパーゼによる加水分解処理を行なって
得られるα−エレオステアリン酸含有グリセリドを濃縮
した苦瓜種子油を含有することを特徴とする抗腫瘍組成
物。
【請求項３】請求項１又は２記載の抗腫瘍組成物を含
有することを特徴とする医薬品。
【請求項４】請求項１又は２記載の抗腫瘍組成物を含
有することを特徴とする食品。