JP2002155087A - 新規ベンゾキノン系抗生物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】制がん剤として有用な新規ベンゾキノン系抗生
物質、それらの製造方法および生産する微生物の提供。 【解決手段】 ベンゾキノン系抗生物質アクリジノマイ
シンＡ、およびアクリジノマイシンＢ。ストレプトマイ
セス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属し、前記抗生
物質を生産する能力を有する微生物を培養して、培養物
から前記抗生物質を採取する前記抗生物質の製造方法。
前記抗生物質を生産する能力を有するストレプトマイセ
ス・ハルステディ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈａｌ
ｓｔｅｄｉ）ＫＢ０１２株（ＦＥＲＭ Ｐ−１８０６
２）。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ストレプトマイセ
ス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する微生物が生
産する新規なベンゾキノン系抗生物質に関する。

【０００２】

【発明の背景】がんは、１９８１年以降、我が国の死因
のトップを占める疾患であり、その克服は大きな課題と
なっている。その対策として、手術などの外科的療法や
放射線照射などともに化学療法が大きな柱の一つとなっ
ている。現在、抗腫瘍性物質は、既に多数のものが知ら
れているが、それらのうちの、極めて少数の化合物が、
抗腫瘍剤として実用化されているに過ぎない。しかも、
これらのものは、薬効と副作用の点で必ずしも満足でき
るものではない。その上、抗腫瘍剤は、試験管内試験や
動物試験の結果が必ずしも直接人間での抗腫瘍作用とし
て反映できないため、多角的な研究が要求される。その
ため、腫瘍細胞に特異的に作用する新規な化合物の提案
が望まれている。

【０００３】一方、抗腫瘍活性を示すベンゾキノン系抗
生物質として、ナフチリジノマイシン（ｎａｐｈｔｈｙ
ｌｉｄｉｎｏｍｙｃｉｎ：Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ
ｓ，２８，４９７〜５０２（１９７５））や、バイオキ
サロマイシン（ｂｉｏｘａｌｏｍｙｃｉｎ：Ｊ．Ｏｒ
ｇ．Ｃｈｅｍ．，５９，４０４５〜４０４７（１９９
４））が知られているが、これらの物質は強力な殺細胞
活性を有する反面、空気酸化で簡単に分解されるという
極めて不安定な性質を持つため、その医薬品としての開
発は著しく困難であった。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、ストレプト
マイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する微生
物が生産する新規なベンゾキノン系抗生物質、それらの
製造方法および生産する微生物を提供するものである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、より有用
な抗腫瘍性物質を効率よく見出すため、その検索方法に
ついて検討していたところ、変異原性テスト（Ｒｅｃ
ａｓｓａｙ）の改変法を用いることにより、抗腫瘍性物
質の検索が迅速に行えることを見出し、先に論文に発表
した（Ｊ．Ｆａｃ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．，Ｈ
ｉｒｏｓｈｉｍａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，３８，５９−
６９（１９９９））。

【０００６】この検索方法は、ｒｅｃ^-変異株（ｒｅｃ
ｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｍｕｔａ
ｎｔ）とｒｅｃ⁺である親株を接種した平板上でのカッ
プ法による被検サンプルの抗菌活性（１５ｍｍの抗菌ゾ
ーンを与える濃度）のｒｅｃ⁺／ｒｅｃ^-比（Ｒｅｃ活
性）を求めるものである。この方法によれば、ＲＮＡ合
成阻害剤に属する化合物はＲｅｃ活性が１．１〜１．４
の値を、ＤＮＡ合成阻害剤に属する化合物はＲｅｃ活性
が１．５〜６．０の値を、ＤＮＡ合成の阻害に至る代謝
拮抗物質（例えば、メトトレキセート、５−フルオロウ
ラシル等）は、１．０未満の値を示し、一方、通常の抗
菌性物質（例えば、細胞壁または蛋白質合成阻害あるい
は細胞膜障害性抗生物質等）は、１．０のＲｅｃ活性を
示すので、抗腫瘍性物質の迅速な検出と、その作用機序
の推定が行える。

【０００７】本発明者らは、上記のＲｅｃ活性を指標と
する検索方法を用いて、各種微生物の培養物についてス
クリーニングを行なったところ、ストレプトマイセス
（ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する一菌株が、新
規な抗腫瘍性のベンゾキノン系抗生物質を生産すること
を見出した。しかも、それらの物質は空気酸化に対して
極めて安定なことを見出し、本発明を完成した。

【０００８】本発明により提供される新規ベンゾキノン
系抗生物質は、下記一般式（Ｉ）、

【化４】 （式中、Ｒは水素原子または水酸基を表す）で示される
化合物である。

【０００９】本発明者らは、これらの化合物のうち、式
（Ｉ―Ａ）、

【化５】 で示される化合物を抗生物質アクリジノマイシンＡ（Ａ
ｃｌｉｄｉｎｏｍｙｃｉｎ Ａ）、式（Ｉ―Ｂ）、

【化６】 で示される化合物を抗生物質アクリジノマイシンＢ（Ａ
ｃｌｉｄｉｎｏｍｙｃｉｎ Ｂ）とそれぞれ命名した。
以後、これらの化合物は、上記名称を用いて説明する。

【００１０】本発明に使用される微生物は、ストレプト
マイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属し、本発
明のベンゾキノン系抗生物質を生産する能力を有する菌
株であれば、どのようなものでも使用できるが、代表例
としてストレプトミセス・ハルステディ（Ｓｔｏｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ｈａｌｓｔｅｄｉ）ＫＢ０１２菌株を
挙げることができる。該菌株は、平成１２年９月２９日
付で工業技術院生命工学工業技術研究所に生命研菌寄第
１８０６２号（ＦＥＲＭ Ｐ−１８０６２）として寄託
されている。

【００１１】以下に、ＫＢ０１２菌株の菌学的性状を示
す。 １．形態学的性状 菌糸状繊維体は分断せず、気菌糸の形成と胞子の連鎖を
呈し、胞子のう様小胞を形成せず、胞子は輪生する胞子
柄に生じない。胞子表面は平滑で、胞子柄は直線状から
大きな径での屈曲（Ｒｅｃｔｉｆｌｅｘｉｂｉｌｅｓ）
を示す。コロニー色調は当初白色から次第に灰色を呈
し、コロニー裏面はやや黄色を呈する。

【００１２】２．菌体脂肪酸組成（ＣＦＡ） トリプティケース−ソーヤ培地に植菌し、２８℃で４日
間振とう培養後、集菌し常法に従い脂肪酸を抽出して測
定した。主要菌体脂肪酸組成は１２−ｍｅｔｈｙｌｔｅ
ｔｒａｄｅｃａｎｏｉｃ（１５：０ ａｎｔｅｉｓｏ）
ａｃｉｄ、１４−ｍｅｔｈｙｌｐｅｎｔａｄｅｃａｎｏ
ｉｃ（１６：０ ｉｓｏ）ａｃｉｄおよびｈｅｘａｄｅ
ｃａｎｏｉｃ（１６：０ ａｎｔｅｉｓｏ）ａｃｉｄで
全脂肪酸に対する各脂肪酸の割合は２７．６％、１５．
４％および１１．３％であった。

【００１３】本発明のベンゾキノン系抗生物質は上記菌
株を栄養培地に接種し、好気的に培養することにより製
造される。上記菌株の培養方法は、原則的には一般微生
物の培養方法に準ずるが、通常は液体培養による振とう
培養、通気撹拌培養などの好気的条件下で行なうのが好
適である。

【００１４】培養に用いることのできる培地としては、
ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に
属する微生物が利用できる栄養源を含有する培地であれ
ばよく、各種の合成培地、半合成培地、天然培地などい
ずれも用いることができる。培地組成としては、例え
ば、炭素源として、グルコース、マルトース、シューク
ロース、水あめ、糖みつ、デキストリン、澱粉、グリセ
ロール、動物油、植物油などを単独または組み合わせて
使用することができ、また窒素源としては、大豆粉、小
麦胚芽、コーンスティープリカー、綿実粕、肉エキス、
ペプトン、酵母エキス、魚粉、尿素、硫酸アンモニウ
ム、塩化アンモニウム、硝酸ナトリウム、リン酸アンモ
ニウム、などを単独または組み合わせて使用することが
できる。また必要に応じて、塩化ナトリウム、塩化カリ
ウム、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウム、リン酸塩、
金属塩などの無機塩を加えることができる。その他、上
記菌株の生育あるいは本発明のアントラサイクリン抗生
物質の生産を促進する有機物、例えば、ビタミン類、ア
ミノ酸類を加えることができる。さらに必要に応じて、
消泡剤、例えば、アデカノール（商品名：旭電化工業
（株）製）、シリコーン（商品名：信越化学工業（株）
製）などを添加することができる。

【００１５】培養条件は、上記菌株が良好に生育して本
発明のベンゾキノン系抗生物質を生産し得る範囲内で適
宜選択すればよい。例えば、培地のｐＨは、５〜９程
度、通常６〜７とすることが好ましい。培養温度は、微
生物が良好に生育する温度、通常２０〜４０℃、好まし
くは２５〜２８℃に保つのがよい。培養時間は、２〜８
日間程度でよく、好ましくは４〜５日間である。もちろ
ん上述した各種の培養条件は、使用微生物の種類や特
性、外部条件などに応じて適宜変更でき、またそれに応
じて上記範囲から最適条件を選択、調整できる。その
際、培養液中の目的化合物の蓄積量が最大になったとき
に培養を停止して得た培養液を以下の精製工程に使用す
ればよい。

【００１６】このようにして得た培養液中に蓄積された
本発明のベンゾキノン系抗生物質は、培養後、濾過、遠
心分離等の一般的固液分離手段によって菌体を分離し、
濾液または上澄液から回収可能である。濾液または上澄
液を、まずｐＨ７〜９において、クロロホルム、トルエ
ン、酢酸エチルなどの有機溶媒で抽出するか、あるいは
アンバーライトＸＡＤ（ローム・アンド・ハース社
製）、ダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化学（株）製）等
のポリスチレン系吸着樹脂に吸着、溶出させ、さらにシ
リカゲル、アルミナ、活性炭などの担体を用いるカラム
クロマトグラフィーにより処理することができる。これ
らの担体から目的物質を溶出させる方法は、担体の種
類、性質によって異なるが、一例として、ポリスチレン
系吸着樹脂の場合には、溶出溶媒として、含水アルコー
ル、含水アセトン等を用いることができる。

【００１７】さらにセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅ
ｘ）ＬＨ−２０（ファルマシア社製）、バイオ・ゲルＰ
−２（バイオ・ラッド社製）等によるゲル濾過、シリカ
ゲル、アルミナ等による薄層クロマトグラフィー、順相
あるいは逆相カラムを用いた分取用高速液体クロマトグ
ラフィー（分取ＨＰＬＣ）等を用いることができ、これ
らの方法を単独または適宜組み合わせて、場合によって
は反復使用することにより、分離、精製することができ
る。

【００１８】以上のようにして得られる本発明のベンゾ
キノン系抗生物質は、以下に示す物理化学的性質を有す
る。 １．抗生物質アクリジノマイシンＡの物理化学的性質 （１）色および形状：黄色粉末。 （２）分子式：Ｃ₂₁Ｈ₂₅Ｎ₃Ｏ₆

【００１９】（３）紫外部吸収スペクトル：メタノール
溶液中で測定した結果は図１の通りである。また特徴的
な吸収は下記のとおりである。 λｍａｘ ｎｍ（ε）：２８２（１９０００）、４０３
（３５００） （４）赤外部吸収スペクトル）：ＫＢｒ法で測定した結
果は図２のとおりである。また特徴的な吸収は下記のと
おりである。 νｍａｘ ｃｍ^-1：３３７０、１６５７、１６２８、１
６０４、１５４７ （５）マススペクトル ＥＩ−ＭＳ：図３に示すとおりである。 ＨＲＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ４１６．１８０３ ［Ｍ＋
Ｈ］⁺（計算値：４１６．１８２３）

【００２０】（６）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００Ｍ
Ｈｚ）：重クロロホルム中で測定した結果は図４に示す
とおりである。また、主要なシグナルの化学シフト、多
重度、スピン結合定数は下記のとおりである。 δ（ｐｐｍ，ＴＭＳを基準にして） ５．４２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１５．６，２．８）、５．
３３（１Ｈ，ｂｒ ｑ，Ｊ＝２．８）、４．９８（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１５．６，２．８）、４．１９（３Ｈ、
ｓ）、４．０８（１Ｈ，ｂｒ ｓ）、３．９３（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝３．７）、３．７９（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝８．
３，７．３，１．８）、３．７１（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝
９．２ｄ，７．３ｔ）、３．３１（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ
＝７．３）、３．２３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．５，４．
６）、３．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．８）、２．８６
（１Ｈ，ｍ）、２．５３（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝８．３，
７．３，１．８）、２．５２（３Ｈ，ｓ）、２．２４
（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝９．２ｄ，８．３ｔ）、１．９２
（３Ｈ，ｓ）、１．７９（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１３．
８，１１．０，７．３）、１．６９（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ
＝１３．８，７．３，１１．８）

【００２１】（７）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５Ｍ
Ｈｚ）：重クロロホルム中で測定した結果は図５に示す
とおりである。また、主要なシグナルの化学シフトは、
下記のとおりである。 δ（ｐｐｍ，ＴＭＳを基準にして） １９６．６、１７５．４、１６２．８、１５９．０、１
２４．９、９６．０、９１．６、９１．３、７２．６、
７１．４、６５．９、６３．４、６２．４、６１．２、
５６．２、５２．５、４８．５、４１．１、３７．６、
１９．２、９．２

【００２２】（８）円偏光２色性：メタノール溶液中で
測定した結果は下記のとおりである。 ［Θ］₂₃₈ ＋３０００、［Θ］₂₆₅ −１２０００、
［Θ］₂₉₃ ＋４００００、［Θ］₃₅₀ ＋７５００、
［Θ］₄₀₅ −８５００

【００２３】２．抗生物質アクリジノマイシンＢの物理
化学的性質 （１）色および形状：黄色無定形固体。 （２）分子式：Ｃ₂₁Ｈ₂₅Ｎ₃Ｏ₇ （３）比旋光度：［α］_D ²⁵ ＋１８８．１°（ｃ
０．１６、メタノール）

【００２４】（４）紫外部吸収スペクトル：メタノール
溶液中で測定した結果は図６のとおりである。また特徴
的な吸収は下記のとおりである。 λｍａｘ ｎｍ（ε）：２８６（２１５００）、３９８
（５０００） （５）赤外部吸収スペクトル：ＫＢｒ法で測定した結果
は図７のとおりである。また特徴的な吸収は下記のとお
りである。 νｍａｘ ｃｍ^-1：３３５０、１６５５、１６２８、１
６０９、１５５１ （６）マススペクトル ＥＩ−ＭＳ：図８に示すとおりである。 ＨＲＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ４３２．１７９６ ［Ｍ＋
Ｈ］⁺（計算値：４３２．１７７２）

【００２５】（７）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００Ｍ
Ｈｚ）：重メタノール中で測定した結果は図９に示すと
おりである。また、主要なシグナルの化学シフト、多重
度、スピン結合定数は、下記のとおりである。 δ（ｐｐｍ，ＴＭＳを基準にして） ６．４９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５）、５．５９（１Ｈ，
ｂｒ ｓ）、４．１３（１Ｈ，ｍ）、４．１２（３Ｈ、
ｓ）、３．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．８）、３．７７
（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝８．３，７．３，１．８）、３．
６８（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝９．２ｄ，７．３ｔ）、３．３
６（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．６）、３．２７（１Ｈ，
ｔ，Ｊ＝５．１）、３．１４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．
９）、２．８５（１Ｈ，ｍ）、２．５１（３Ｈ，ｓ）、
２．４８（１Ｈ，ｍ）、２．２４（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝
９．２ｄ，８．３ｔ）、１．９４（３Ｈ，ｓ）、１．７
７（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１４．０，１１．０，７．
６）、１．５６（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１４．０，８．
０，１．５）

【００２６】（８）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５Ｍ
Ｈｚ）：重メタノール中で測定した結果は図１０に示す
とおりである。また、主要なシグナルの化学シフトは、
下記のとおりである。 δ（ｐｐｍ，ＴＭＳを基準にして） １９５．８、１７５．８、１６２．４、１５７．４、１
２６．５、９７．７、９６．８、９１．１、９０．７、
７１．１、６５．８、６２．９、６２．１、６１．３、
５５．２、５２．５、４８．５、４０．９、３７．６、
１９．１、９．５

【００２７】（９）円偏光２色性：メタノール溶液中で
測定した結果は下記のとおりである。 ［Θ］₂₁₆ −１２６００、［Θ］₂₄₀ ＋３０６００、
［Θ］₂₆₅ −１６００、［Θ］₂₉₄ ＋５２４００、
［Θ］₄₀₂ −１１３００

【００２８】本発明のベンゾキノン系抗生物質アクリジ
ノマイシンＡおよびＢは、いずれもＲｅｃ活性が、１．
５〜６．０の範囲にあり、ＤＮＡ合成阻害作用を有する
ことが推定される。実際にヒト白血病細胞Ｋ５６２に対
して、増殖抑制作用を示し、抗腫瘍剤として有用であ
る。

【００２９】（Ｒｅｃ活性）５５℃に保温した滅菌培地
（ポリペプトン０．５％、肉エキス０．５％、食塩０．
３％、寒天１．５％、脱イオン水、ｐＨ７．２）３００
ｍｌを入れた５００ｍｌ容三角フラスコ２個を用意し、
Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｍ４５Ｔ株（ｒ
ｅｃ^-変異株）および同ＨＡ１７株（ｒｅｃ⁺親株）の胞
子懸濁液を、それぞれ最終胞子細胞数が１．０〜２．０
ｘ１０⁶／ｍｌになるように接種した。これを、それぞ
れ滅菌シャーレ（内径９０ｍｍ）に２０ｍｌずつ分注
し、固化させた。このｒｅｃ^-およびｒｅｃ⁺平板の各１
枚ごとに力価検定用シリンダーカップ（内径８ｍｍ）の
４点を等間隔に配置し、アクリジノマイシンＡおよびＢ
の各４００μｇ／ｍｌ水溶液の２倍連続希釈液（２０
０、１００、５０、２５、１２．５、６．２５μｇ／ｍ
ｌ）をカップいっぱいに分注し、３０℃で２４時間培養
し、生じる増殖阻止円（ｍｍ）を測定した（１の濃度２
点）。片面対数方眼紙（サンプル濃度を対数表示）に阻
止円をプロットし、その直線関係からそれぞれ１５ｍｍ
の阻止円を与えるサンプル濃度を算出し、その比ｒｅｃ
⁺平板／ｒｅｃ^-平板をＲｅｃ活性値（ｒｅｃ ｐｏｔｅ
ｎｃｙ）として求めた。

【００３０】表１に結果を示す

【表１】

【００３１】（ヒト白血病Ｋ５６２細胞に対する増殖阻
害作用）１０％仔牛血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地
（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ；フェノールレッドなし）へＫ５
６２細胞を２．２×１０⁴個／ｍｌとなるように接種
し、９０μｌずつ分注した。本発明の化合物の溶液を目
的終濃度の１０倍濃度で１０μｌずつ添加し、３７℃に
て炭酸ガス培養器中で７２時間培養し対照区に対する５
０％増殖阻害濃度を求めた。なお、培養終了の２．５時
間前に、発色試薬ＷＳＴ−１（和光試薬）を１０μｌず
つ添加し、生細胞のカウントをおこなった。表２に結果
を示す。

【００３２】

【表２】

【００３３】以下、実施例を挙げ、本発明をさらに詳細
に説明する。

【実施例】実施例１ 培養液の調製 ストレプトミセス・ハルステディ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ ｈａｌｓｔｅｄｉ）ＫＢ０１２菌株（ＦＥＲＭ
Ｐ−１８０６２）の保存用培地（グルコース１．０
％、Ｌ−アスパラギン０．０５％、硝酸カリウム０．１
％、酵母エキス０．１％、寒天１．５％を海水に溶解し
て調製、ｐＨ７．０）斜面培養より一白金耳を採り、前
培養用液体培地（可溶性デンプン０．５％、グルコース
０．５％、大豆粉１．０％、リン酸二カリウム０．１
％、硫酸マグネシウム０．１％、塩化ナトリウム０．２
％を海水に溶解して調製、ｐＨ７．２）５０ｍｌを分
注、殺菌した５００ｍｌ三角フラスコ６本に接種し、３
０℃、２２０ｒｐｍで４８時間回転振とう培養し、種母
を作成した。

【００３４】次に本培養用培地（グルコース１．５％、
スクロース１．５％、大豆粉１．５％、乾燥酵母０．７
５％、酵母エキス０．１％、ミネラル溶液０．１％（ｖ
／ｖ）、ハロゲン溶液１．０％（ｖ／ｖ）、アデカノー
ルＬＧ１２６ ０．０１％を海水に溶解して調製、ｐＨ
７．０：但し、ミネラル溶液は、硫酸銅・５水和物１．
０ｇ、硫酸亜鉛０．４ｇ、硫酸コバルト・７水和物０．
４ｇ、硫酸第一鉄・７水和物１．０ｇおよび硫酸マンガ
ン・４水和物１．０ｇを水２００ｍｌに溶解し、希硫酸
でｐＨ２．３に調整したものである。またハロゲン溶液
は、臭化カリウム、ヨウ化カリウムおよびフッ化ナトリ
ウム各５００ｍｇを水５０ｍｇに溶解したものであ
る。）１５Ｌを入れ、３０Ｌジャー２基に、前記種母を
各１５０ｍｌ接種し、３０℃、１５０ｒｐｍで２日間、
２２５ｒｐｍで２日間攪拌し、培養液２７Ｌを得た。

【００３５】実施例２ ベンゾキノン系抗生物質アクリ
ジノマイシンＡおよびＢの精製 実施例１に記載した方法で得た培養液２７Ｌをシャープ
レス連続遠心機（１２，０００ｒｐｍ）を用いて遠心分
離した。得られた上清をダイヤイオンＨＰ−２０カラム
（１Ｌ容）に付し、冷水３Ｌで洗浄後、７０％アセトン
２Ｌで溶出した。得られた溶出液を１／３容まで減圧濃
縮後、炭酸水素ナトリウムでｐＨ８．０に調整し、クロ
ロホルム５００ｍｌで２回抽出した。得られたクロロホ
ルム溶液を濃縮乾固し、粗抽出物１．５ｇを回収した。

【００３６】粗抽出物をクロロホルム１０ｍｌに溶解
し、Ｗａｋｏｇｅｌ Ｃ−２００シリカゲルカラム（φ
４５ｍｍ×２５０ｍｍ）に吸着させた。次いで、クロロ
ホルム１００ｍｌ、クロロホルム−メタノール−水（３
０：１：０．１）２００ｍｌ、クロロホルム−メタノー
ル−水（１５：１：０．５）４００ｍｌ、クロロホルム
−メタノール−水（１０：１：０．５）４００ｍｌ、ク
ロロホルム−メタノール−水（８：１：０．１）４００
ｍｌの各展開溶媒で順次溶出した。クロロホルム−メタ
ノール（５：１）を展開溶媒としてＴＬＣ分析（Ｓｉｌ
ｉｃａｇｅｌ ７０Ｆ₂₅₄：和光純薬社製）を行い、各
画分に含まれる成分を確認した。そのうち、クロロホル
ム−メタノール−水（８：１：０．１）で溶出された画
分に含まれる、Ｒｆ値０．５８のスポットを示す成分
（黄色、アクリジノマイシンＡ）と、Ｒｆ値０．３２の
スポットを示す成分（黄色、アクリジノマイシンＢ）を
それぞれ回収し、濃縮乾固して、９０ｍｇおよび６０ｍ
ｇの部分精製物を得た。

【００３７】このようにして得られたアクリジノマイシ
ンＡおよびＢの各部分精製物を、逆相系ＨＰＬＣを用い
て精製した。すなわち、各部分精製物をアセトニトリル
−水（３：７）混液２ｍｌに溶解し、０．１ｍｌずつ小
分けして注入し、溶出させた。なお、ＨＰＬＣの条件は
下記のとおりである。

【００３８】ＨＰＬＣ条件 カラム：Ｌｕｎａ ５μＣ１８（２） ２５０ｍｍ×１
０ｍｍ 移動相：アセトニトリル−水（３：７） 流速：２．０ｍｌ／ｍｉｎ 検出：ＵＶ２１０ｎｍ

【００３９】アクリジノマイシンＡについては、保持時
間約１５分に溶出する画分を集め、少量まで濃縮し、過
剰のｎ−ヘキサンを加えて沈殿させた。これを遠心分離
して集め、真空乾燥し、黄色粉末状のアクリジノマイシ
ンＡを６０ｍｇ得た。アクリジノマイシンＢについて
は、保持時間約１０分に溶出する画分を集め、濃縮乾固
し、黄色無定形固体のアクリジノマイシンＢを３４ｍｇ
得た。

【図面の簡単な説明】

【図１】 ベンゾキノン系抗生物質アクリジノマイシン
Ａのメタノール中での紫外部吸収スペクトルである。

【図２】 ベンゾキノン系抗生物質アクリジノマイシン
ＡのＫＢｒ法による赤外部吸収スペクトルである。

【図３】 ベンゾキノン系抗生物質アクリジノマイシン
Ａのマススペクトルである。

【図４】 ベンゾキノン系抗生物質アクリジノマイシン
Ａの重クロロホルム中での¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５
００ＭＨｚ）である。

【図５】 ベンゾキノン系抗生物質アクリジノマイシン
Ａの重クロロホルム中での¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１
２５ＭＨｚ）である。

【図６】 ベンゾキノン系抗生物質アクリジノマイシン
Ｂのメタノール中での紫外部吸収スペクトルである。

【図７】 ベンゾキノン系抗生物質アクリジノマイシン
ＢのＫＢｒ法による赤外部吸収吸収スペクトルである。

【図８】 ベンゾキノン系抗生物質アクリジノマイシン
Ｂのマススペクトルである。

【図９】 ベンゾキノン系抗生物質アクリジノマイシン
Ｂの重クロロホルム中での¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５
００ＭＨｚ）である。

【図１０】 ベンゾキノン系抗生物質アクリジノマイシ
ンＢの重クロロホルム中での¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル
（１２５ＭＨｚ）である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） (Ｃ１２Ｎ 1/20 (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ａ Ｃ１２Ｒ 1:465） Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 17/18 (Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ Ｃ１２Ｒ 1:465） Ｃ１２Ｒ 1:465）

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記一般式（Ｉ）、 【化１】 （但し、式中Ｒは水素原子または水酸基を表す）で示さ
   れるベンゾキノン系抗生物質。
2. 【請求項２】 下記式（Ｉ−Ａ）、 【化２】 で示されるベンゾキノン系抗生物質
3. 【請求項３】 下記式（Ｉ−Ｂ）、 【化３】 で示されるベンゾキノン系抗生物質。
4. 【請求項４】 ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
   ｙｃｅｓ）属に属し、請求項１〜３のいずれか１項に記
   載のベンゾキノン系抗生物質を生産する能力を有する微
   生物を培養し、培養物から請求項１〜３のいずれか１項
   に記載のベンゾキノン系抗生物質を採取することを特徴
   とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載のベンゾキ
   ノン系抗生物質の製造方法。
5. 【請求項５】 請求項１〜３のいずれか１項に記載のベ
   ンゾキノン系抗生物質を生産する能力を有するストレプ
   トマイセス・ハルステディ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
   ｈａｌｓｔｅｄｉ）ＫＢ０１２株（ＦＥＲＭ Ｐ−１
   ８０６２）。