JP2002119286A - エピトープの免疫原性が増強された人工タンパク質 - Google Patents
エピトープの免疫原性が増強された人工タンパク質Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 従来の手法からは十分な免疫応答誘導活性が
得られないＨＩＶのｇｐ１２０ループ３等のペプチド性
エピトープに強い免疫応答誘導能力を付与し、エイズウ
イルス中和活性等を有する特異抗体を効率よく作製する
手法を提供すること。 【解決手段】 ペプチド性エピトープのアミノ酸配列の
全部又はその一部を含み、タンパク質の高次構造形成を
補助する性質が付与されたアミノ酸配列や、免疫担当細
胞による抗原提示処理を補助する性質が付与されたアミ
ノ酸配列から構成されているエピトープの免疫原性が増
強された人工タンパク質を調製する。次いで、該人工タ
ンパク質を用いて常法により前記ペプチド性エピトープ
に対する抗体を効率よく作製する。
得られないＨＩＶのｇｐ１２０ループ３等のペプチド性
エピトープに強い免疫応答誘導能力を付与し、エイズウ
イルス中和活性等を有する特異抗体を効率よく作製する
手法を提供すること。 【解決手段】 ペプチド性エピトープのアミノ酸配列の
全部又はその一部を含み、タンパク質の高次構造形成を
補助する性質が付与されたアミノ酸配列や、免疫担当細
胞による抗原提示処理を補助する性質が付与されたアミ
ノ酸配列から構成されているエピトープの免疫原性が増
強された人工タンパク質を調製する。次いで、該人工タ
ンパク質を用いて常法により前記ペプチド性エピトープ
に対する抗体を効率よく作製する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、エピトープの免疫
原性が増強された人工タンパク質や、該人工タンパク質
を含んでなる免疫応答の誘導剤や、該人工タンパク質を
抗原として用いる抗体の製造方法や、該人工タンパク質
を有効成分として含有する機能性食品や、該人工タンパ
ク質を発現する腸内細菌からなる脱感作・免疫寛容状態
の誘導剤や、該人工タンパク質をコードするＤＮＡを含
んでなる免疫応答誘導用ＤＮＡワクチン等に関する。
原性が増強された人工タンパク質や、該人工タンパク質
を含んでなる免疫応答の誘導剤や、該人工タンパク質を
抗原として用いる抗体の製造方法や、該人工タンパク質
を有効成分として含有する機能性食品や、該人工タンパ
ク質を発現する腸内細菌からなる脱感作・免疫寛容状態
の誘導剤や、該人工タンパク質をコードするＤＮＡを含
んでなる免疫応答誘導用ＤＮＡワクチン等に関する。
【０００２】
【従来の技術】分子進化工学の誕生により、生命反応の
根幹を形成するタンパク質あるいはそれらをコードする
遺伝子ＤＮＡを、実験室の中で人工的に創り出すことが
行われている。この技術により、自然には存在しない新
たな活性を持った酵素・タンパク質や、天然のタンパク
質とは大きく構造の異なるタンパク質を産み出すことが
可能となり、医療領域や工学領域への様々な応用が期待
されている。分子進化工学では、タンパク質又はそれを
コードする遺伝子を構成するアミノ酸又はヌクレオチド
のブロック単位のランダムな重合体プールの中から、目
的とする活性を持つ分子を選び出す操作が行われる。例
えば、Szostakらのグループは、１００塩基の長さをも
つランダムな配列をもったＤＮＡ集団をＤＮＡ合成機で
作製し、このＤＮＡ集団をインビトロでＲＮＡに転写
し、１０13の多様性をもつＲＮＡ集団を用意し、このＲ
ＮＡ集団の中から特定の色素に特異的に結合するＲＮＡ
分子を選択し、どのような配列構造を有するＲＮＡ分子
が与えられた機能を満足するかについて報告している
（Nature,346:818-822,1990）。Szostakらのグループは
さらに同様のアプローチで、リガーゼ活性といったより
複雑な活性をもつＲＮＡ分子を創出することに成功して
いる（Science,261:1411-1418,1993）。
根幹を形成するタンパク質あるいはそれらをコードする
遺伝子ＤＮＡを、実験室の中で人工的に創り出すことが
行われている。この技術により、自然には存在しない新
たな活性を持った酵素・タンパク質や、天然のタンパク
質とは大きく構造の異なるタンパク質を産み出すことが
可能となり、医療領域や工学領域への様々な応用が期待
されている。分子進化工学では、タンパク質又はそれを
コードする遺伝子を構成するアミノ酸又はヌクレオチド
のブロック単位のランダムな重合体プールの中から、目
的とする活性を持つ分子を選び出す操作が行われる。例
えば、Szostakらのグループは、１００塩基の長さをも
つランダムな配列をもったＤＮＡ集団をＤＮＡ合成機で
作製し、このＤＮＡ集団をインビトロでＲＮＡに転写
し、１０13の多様性をもつＲＮＡ集団を用意し、このＲ
ＮＡ集団の中から特定の色素に特異的に結合するＲＮＡ
分子を選択し、どのような配列構造を有するＲＮＡ分子
が与えられた機能を満足するかについて報告している
（Nature,346:818-822,1990）。Szostakらのグループは
さらに同様のアプローチで、リガーゼ活性といったより
複雑な活性をもつＲＮＡ分子を創出することに成功して
いる（Science,261:1411-1418,1993）。
【０００３】一方、遺伝子は小さな遺伝子が繰り返し重
合して誕生したのではないかという仮説があり（Proc.N
atl.Acad.Sci.USA,80:3391-3395,1983）、また、繰り返
し構造に富むポリペプチドは安定な高次構造を取りやす
いと考えられるので、大きなタンパク質や遺伝子を対象
とする分子進化工学では、短い構造単位を繰り返し重合
させ巨大分子を合成する技術が要求されている（Natur
e,367:323-324,1994）。短いＤＮＡ単位の繰り返し重合
体を得る方法として、ローリング・サークル合成法が報
告されている（Proc,Natl,Acad.Sci.USA,92:4641-4645,
1995）が、この方法はリン酸化反応、連結反応、重合反
応、二本鎖形成反応などのステップを何段階も経なけれ
ばならないため、反応系が複雑である。
合して誕生したのではないかという仮説があり（Proc.N
atl.Acad.Sci.USA,80:3391-3395,1983）、また、繰り返
し構造に富むポリペプチドは安定な高次構造を取りやす
いと考えられるので、大きなタンパク質や遺伝子を対象
とする分子進化工学では、短い構造単位を繰り返し重合
させ巨大分子を合成する技術が要求されている（Natur
e,367:323-324,1994）。短いＤＮＡ単位の繰り返し重合
体を得る方法として、ローリング・サークル合成法が報
告されている（Proc,Natl,Acad.Sci.USA,92:4641-4645,
1995）が、この方法はリン酸化反応、連結反応、重合反
応、二本鎖形成反応などのステップを何段階も経なけれ
ばならないため、反応系が複雑である。
【０００４】そこで本発明者らは、効率的かつ単純にマ
イクロ遺伝子の繰り返し重合体を作製する方法として、
少なくとも一部の配列が互いに相補しているオリゴヌク
レオチドＡ及びオリゴヌクレオチドＢに、ＤＮＡポリメ
ラーゼを作用させて重合反応を行うことを特徴とするマ
イクロ遺伝子重合法（特開平９−３２２７７５号公報）
を提案している。
イクロ遺伝子の繰り返し重合体を作製する方法として、
少なくとも一部の配列が互いに相補しているオリゴヌク
レオチドＡ及びオリゴヌクレオチドＢに、ＤＮＡポリメ
ラーゼを作用させて重合反応を行うことを特徴とするマ
イクロ遺伝子重合法（特開平９−３２２７７５号公報）
を提案している。
【０００５】また、絹タンパク質やエラスチン等の天然
タンパク質の反復単位に類似する反復単位を有するアミ
ノ酸ポリマーをコードするＤＮＡ（特開平１０−１４５
８６号公報）や、繰返しアミノ酸配列を有する人工タン
パク質をコードする遺伝子カセット（米国特許第５０８
９４０６号明細書）や、アミノ酸の繰返し配列を有する
大ポリペプチド作製用の合成反復ＤＮＡ（米国特許第５
６４１６４８号明細書）や、アミノ酸の繰返し単位を有
するペプチドをコードするＤＮＡ配列（米国特許第５７
７０６９７号明細書）や、アミノ酸の反復配列を含む大
ポリペプチド作製用の合成反復ＤＮＡ（米国特許第５８
３０７１３号明細書）が知られている。また、６つの読
み枠の１つがαヘリックス構造を形成しやすいＤＮＡ断
片をデザインし、そこから作成したライブラリーが高頻
度に安定なタンパク質をコードすることや、同様に、６
つの読み枠の中の１つがβストランド構造を形成しやす
いＤＮＡ断片をデザインすることが報告（Proc,Natl,Ac
ad.Sci.USA,94:3805-3810,1997）されている。
タンパク質の反復単位に類似する反復単位を有するアミ
ノ酸ポリマーをコードするＤＮＡ（特開平１０−１４５
８６号公報）や、繰返しアミノ酸配列を有する人工タン
パク質をコードする遺伝子カセット（米国特許第５０８
９４０６号明細書）や、アミノ酸の繰返し配列を有する
大ポリペプチド作製用の合成反復ＤＮＡ（米国特許第５
６４１６４８号明細書）や、アミノ酸の繰返し単位を有
するペプチドをコードするＤＮＡ配列（米国特許第５７
７０６９７号明細書）や、アミノ酸の反復配列を含む大
ポリペプチド作製用の合成反復ＤＮＡ（米国特許第５８
３０７１３号明細書）が知られている。また、６つの読
み枠の１つがαヘリックス構造を形成しやすいＤＮＡ断
片をデザインし、そこから作成したライブラリーが高頻
度に安定なタンパク質をコードすることや、同様に、６
つの読み枠の中の１つがβストランド構造を形成しやす
いＤＮＡ断片をデザインすることが報告（Proc,Natl,Ac
ad.Sci.USA,94:3805-3810,1997）されている。
【０００６】従来また、ペプチド性エピトープの抗原性
を増強する手法としては、ペプチド性エピトープをタン
デムにいくつも連結し、得られる種々のペプチド性エピ
トープのタンデム重合体を免疫原として用いる手法が知
られており（J. Immunol. 153:5634-5642, 1994）、例
えば米国特許第５，９５１，９８６号明細書には、ＨＩ
Ｖのエピトープを多価にもつペプチドの免疫原としての
利用について開示されている。また、枝状に連結し多価
にエピトープをもつ巨大分子を作製する方法（米国特許
第５，２２９，４９０号明細書、特表平０８−５１１０
０７号公報）や、ペプチド性エピトープを提示するファ
ージを免疫原として利用する方法（Nature Biotechnolo
gy, 18:873-876, 2000）なども知られている。
を増強する手法としては、ペプチド性エピトープをタン
デムにいくつも連結し、得られる種々のペプチド性エピ
トープのタンデム重合体を免疫原として用いる手法が知
られており（J. Immunol. 153:5634-5642, 1994）、例
えば米国特許第５，９５１，９８６号明細書には、ＨＩ
Ｖのエピトープを多価にもつペプチドの免疫原としての
利用について開示されている。また、枝状に連結し多価
にエピトープをもつ巨大分子を作製する方法（米国特許
第５，２２９，４９０号明細書、特表平０８−５１１０
０７号公報）や、ペプチド性エピトープを提示するファ
ージを免疫原として利用する方法（Nature Biotechnolo
gy, 18:873-876, 2000）なども知られている。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】上記、ペプチド性エピ
トープをタンデムに重合する手法は簡便ではあるが、か
ならずしも全てのエピトープで有効に機能するわけでは
ない（Mol. Immunol. 34:599-608, 1997）。例えばＨＩ
Ｖのｇｐ１２０ループ３ペプチドは、タンデムに重合し
て、さらにキャリアータンパク質と融合させた型ではマ
ウスでの免疫誘導反応の改善が見られるが、キャリアー
タンパク質と融合しない状態では単独のペプチドを用い
た免疫との有意な差は見られない(Vaccine 17:2392-239
9, 1999)。このような免疫原性の極めて弱いペプチド性
エピトープについて、強い免疫原性を与える新しい手法
の開発が望まれていた。本発明の課題は、従来の手法か
らは十分な免疫応答誘導活性が得られないペプチド性エ
ピトープに関しても、強い免疫応答誘導能力を付与する
手法を提供することにある。より具体的には、エピトー
プの免疫原性が増強された人工タンパク質や、該人工タ
ンパク質を含んでなる免疫応答の誘導剤や、該人工タン
パク質を抗原として用いる抗体の製造方法や、該人工タ
ンパク質を有効成分として含有する機能性食品や、該人
工タンパク質を発現する腸内細菌からなる脱感作・免疫
寛容状態の誘導剤や、該人工タンパク質ををコードする
ＤＮＡを含んでなる免疫応答誘導用ＤＮＡワクチン等を
提供することにある。
トープをタンデムに重合する手法は簡便ではあるが、か
ならずしも全てのエピトープで有効に機能するわけでは
ない（Mol. Immunol. 34:599-608, 1997）。例えばＨＩ
Ｖのｇｐ１２０ループ３ペプチドは、タンデムに重合し
て、さらにキャリアータンパク質と融合させた型ではマ
ウスでの免疫誘導反応の改善が見られるが、キャリアー
タンパク質と融合しない状態では単独のペプチドを用い
た免疫との有意な差は見られない(Vaccine 17:2392-239
9, 1999)。このような免疫原性の極めて弱いペプチド性
エピトープについて、強い免疫原性を与える新しい手法
の開発が望まれていた。本発明の課題は、従来の手法か
らは十分な免疫応答誘導活性が得られないペプチド性エ
ピトープに関しても、強い免疫応答誘導能力を付与する
手法を提供することにある。より具体的には、エピトー
プの免疫原性が増強された人工タンパク質や、該人工タ
ンパク質を含んでなる免疫応答の誘導剤や、該人工タン
パク質を抗原として用いる抗体の製造方法や、該人工タ
ンパク質を有効成分として含有する機能性食品や、該人
工タンパク質を発現する腸内細菌からなる脱感作・免疫
寛容状態の誘導剤や、該人工タンパク質ををコードする
ＤＮＡを含んでなる免疫応答誘導用ＤＮＡワクチン等を
提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】ペプチド性エピトープが
十分な抗原性をもつためには、そのペプチド性エピトー
プが、免疫担当細胞に取り込まれ、プロセシングを受け
た後に、ＭＨＣ分子によりＢ細胞、Ｔ細胞へと効率よく
提示される必要がある。このような「取り込み」「プロ
セシング」「ＭＨＣによる提示」反応が効率よく進むた
めには、ペプチド性エピトープが、天然のタンパク質に
近いコンテクストの中に存在する必要があると考えられ
る。このような考えのもとに、「ペプチド性エピトープ
を少なくとも１コピーもつような天然のタンパク質に近
い性質をもった人工タンパク質」をデザイン・作製し、
この人工タンパク質の免疫原性を調べる実験をまず実施
した。
十分な抗原性をもつためには、そのペプチド性エピトー
プが、免疫担当細胞に取り込まれ、プロセシングを受け
た後に、ＭＨＣ分子によりＢ細胞、Ｔ細胞へと効率よく
提示される必要がある。このような「取り込み」「プロ
セシング」「ＭＨＣによる提示」反応が効率よく進むた
めには、ペプチド性エピトープが、天然のタンパク質に
近いコンテクストの中に存在する必要があると考えられ
る。このような考えのもとに、「ペプチド性エピトープ
を少なくとも１コピーもつような天然のタンパク質に近
い性質をもった人工タンパク質」をデザイン・作製し、
この人工タンパク質の免疫原性を調べる実験をまず実施
した。
【０００９】エイズウイルスのもつｇｐ１２０タンパク
質のループ３と呼ばれる領域は、中和エピトープとして
知られており、このエピトープに対する抗体のいくつか
は、ウイルスの増殖を抑えるといった中和活性をもち、
エイズ治療に利用できる重要な抗体となる。エイズウイ
ルスは、急速に自身の遺伝子配列を変化させることによ
り、ループ３領域のアミノ酸配列を変化させ、この中和
抗体からの攻撃を逃れることが知られている。中和抗体
の臨床利用の観点から考えると、このようにして新たに
出現したエイズウイルス変異体に対する新しい中和抗体
の迅速な作製が必要となるが、ｇｐ１２０タンパク質そ
のものを免疫原としても、あるいは、ループ３領域に相
当するペプチドを免疫原としても、十分な免疫誘導が引
き起こすことができないことも知られており、中和抗体
の新たな作製には多大の時間と労力が必要であるのが現
状であった（Nature 376:115, 1995）。そして、従来用
いられているようなエピトープ配列のタンデム重合体を
抗原として用いても、ループ３ペプチド配列に対する十
分な免疫を誘導できないことが報告されている（Vaccin
e 17:2392-2399, 1999）。ｇｐ１２０タンパク質そのも
のを免疫原としてもループ３領域に対する抗体ができな
い理由は、ループ３ペプチドが、ｇｐ１２０タンパク質
の内部に埋もれているからと考えられている。ループ３
領域に相当するペプチドが弱い免疫原性しかもたないの
は、免疫担当細胞による「取り込み」「プロセシング」
「ＭＨＣによる提示」反応が、このペプチドでは効率よ
く進まないためだと考えられる。
質のループ３と呼ばれる領域は、中和エピトープとして
知られており、このエピトープに対する抗体のいくつか
は、ウイルスの増殖を抑えるといった中和活性をもち、
エイズ治療に利用できる重要な抗体となる。エイズウイ
ルスは、急速に自身の遺伝子配列を変化させることによ
り、ループ３領域のアミノ酸配列を変化させ、この中和
抗体からの攻撃を逃れることが知られている。中和抗体
の臨床利用の観点から考えると、このようにして新たに
出現したエイズウイルス変異体に対する新しい中和抗体
の迅速な作製が必要となるが、ｇｐ１２０タンパク質そ
のものを免疫原としても、あるいは、ループ３領域に相
当するペプチドを免疫原としても、十分な免疫誘導が引
き起こすことができないことも知られており、中和抗体
の新たな作製には多大の時間と労力が必要であるのが現
状であった（Nature 376:115, 1995）。そして、従来用
いられているようなエピトープ配列のタンデム重合体を
抗原として用いても、ループ３ペプチド配列に対する十
分な免疫を誘導できないことが報告されている（Vaccin
e 17:2392-2399, 1999）。ｇｐ１２０タンパク質そのも
のを免疫原としてもループ３領域に対する抗体ができな
い理由は、ループ３ペプチドが、ｇｐ１２０タンパク質
の内部に埋もれているからと考えられている。ループ３
領域に相当するペプチドが弱い免疫原性しかもたないの
は、免疫担当細胞による「取り込み」「プロセシング」
「ＭＨＣによる提示」反応が、このペプチドでは効率よ
く進まないためだと考えられる。
【００１０】そこで、「全体としては天然のタンパク質
に近い性質」をもちながら、その構造上に少なくとも１
コピーのループ３ペプチド配列をもつような人工タンパ
ク質を作製し、これを用いた効率の良い免疫誘導法を試
みた（図１）。なお、人工タンパク質の作製には「多機
能塩基配列及びそれを含む人工遺伝子」（特願２０００
−１８０９９７）や、「マイクロ遺伝子重合法」（特開
平９−３２２７７５号公報）に記載された方法を用い
た。
に近い性質」をもちながら、その構造上に少なくとも１
コピーのループ３ペプチド配列をもつような人工タンパ
ク質を作製し、これを用いた効率の良い免疫誘導法を試
みた（図１）。なお、人工タンパク質の作製には「多機
能塩基配列及びそれを含む人工遺伝子」（特願２０００
−１８０９９７）や、「マイクロ遺伝子重合法」（特開
平９−３２２７７５号公報）に記載された方法を用い
た。
【００１１】まず、エイズウイルスの中和抗原として知
られているループ３ペプチド「ＲＫＳＩＲＩＱＲＧＰＧ
ＲＴＦＶＴＩＧＫＩ」を読み枠の１つにコードするマイ
クロ遺伝子をデザインすることとした。例えば、最初の
Ｒ（アルギニン）には「ＣＧＴ」「ＣＧＣ」「ＣＧＡ」
「ＣＧＧ」「ＡＧＡ」「ＡＧＧ」の６つのコドンが対応
するがこの中から特定のコドンを選択し、次のＫ（リシ
ン）には「ＡＡＡ」「ＡＡＧ」の２つのコドンが対応す
るがこの中から特定のコドンを選択し、以下同様にして
特定のコドンを順次選択しマイクロ遺伝子をデザインす
る場合、上記中和抗原ペプチドを読み枠の１つにコード
する塩基配列は、コドンの縮重から約１，６５１億種あ
ることになる。また、単一マイクロ遺伝子はプラス鎖及
びマイナス鎖に各３種の読み枠をもつことから、６種の
異なるペプチドをコードすることができることになり、
例えば、同じ方向の異なる２つの読み枠では、上記中和
抗原ペプチドとは全く異なる２つのペプチドがコードさ
れることになる。そこで、同じ方向の他の読み枠２つの
いずれかで「二次構造を形成しやすい」という性質を有
するペプチドをコードする塩基配列を、上記約１，６５
１億種の塩基配列の中から計算機により検索することに
した。
られているループ３ペプチド「ＲＫＳＩＲＩＱＲＧＰＧ
ＲＴＦＶＴＩＧＫＩ」を読み枠の１つにコードするマイ
クロ遺伝子をデザインすることとした。例えば、最初の
Ｒ（アルギニン）には「ＣＧＴ」「ＣＧＣ」「ＣＧＡ」
「ＣＧＧ」「ＡＧＡ」「ＡＧＧ」の６つのコドンが対応
するがこの中から特定のコドンを選択し、次のＫ（リシ
ン）には「ＡＡＡ」「ＡＡＧ」の２つのコドンが対応す
るがこの中から特定のコドンを選択し、以下同様にして
特定のコドンを順次選択しマイクロ遺伝子をデザインす
る場合、上記中和抗原ペプチドを読み枠の１つにコード
する塩基配列は、コドンの縮重から約１，６５１億種あ
ることになる。また、単一マイクロ遺伝子はプラス鎖及
びマイナス鎖に各３種の読み枠をもつことから、６種の
異なるペプチドをコードすることができることになり、
例えば、同じ方向の異なる２つの読み枠では、上記中和
抗原ペプチドとは全く異なる２つのペプチドがコードさ
れることになる。そこで、同じ方向の他の読み枠２つの
いずれかで「二次構造を形成しやすい」という性質を有
するペプチドをコードする塩基配列を、上記約１，６５
１億種の塩基配列の中から計算機により検索することに
した。
【００１２】計算機としてＳｕｎのＥｎｔｅｒｐｒｉｓ
ｅ２５０を用いて実行したところ、約１，６５１億種の
塩基配列全てを同時に計算するには無理があることがわ
かったので、上記中和抗原ペプチドの両端を削除した
「ＩＲＩＱＲＧＰＧＲＴＦＶＴ」の１３個のアミノ酸か
らなるペプチドについて計算することとした。１つの読
み枠でこのペプチドをコードする可能性のある塩基配列
を全て計算機内に書き出したところ、約５億種の塩基配
列が作成された。これら５億種の塩基配列の、同じ方向
の他の２つの読み枠を翻訳し、終止コドンが現れて翻訳
が途中でストップするものや、ペプチド配列として重複
するものを除いた、約１，５０６万種のペプチド配列の
集団を計算機の中に作成した。次に、この約１，５０６
万種のペプチドの中から「二次構造を形成しやすい」と
いう性質をもつペプチドを、二次構造予測プログラムを
用いて個別に計算してスコアづけを行った。この計算に
１週間以上要したが、得られた結果をスコアの高い順に
ソートしたところ、第２読み枠でαヘリックスを非常に
形成しやすい塩基配列として、「ＡＴＡＣＧＣＡＴＴＣ
ＡＧＡＧＡＧＧＣＣＣＴＧＧＣＣＧＣＡＣＴＴＴＴＧＴ
ＴＡＣＴ」を選択することができた。
ｅ２５０を用いて実行したところ、約１，６５１億種の
塩基配列全てを同時に計算するには無理があることがわ
かったので、上記中和抗原ペプチドの両端を削除した
「ＩＲＩＱＲＧＰＧＲＴＦＶＴ」の１３個のアミノ酸か
らなるペプチドについて計算することとした。１つの読
み枠でこのペプチドをコードする可能性のある塩基配列
を全て計算機内に書き出したところ、約５億種の塩基配
列が作成された。これら５億種の塩基配列の、同じ方向
の他の２つの読み枠を翻訳し、終止コドンが現れて翻訳
が途中でストップするものや、ペプチド配列として重複
するものを除いた、約１，５０６万種のペプチド配列の
集団を計算機の中に作成した。次に、この約１，５０６
万種のペプチドの中から「二次構造を形成しやすい」と
いう性質をもつペプチドを、二次構造予測プログラムを
用いて個別に計算してスコアづけを行った。この計算に
１週間以上要したが、得られた結果をスコアの高い順に
ソートしたところ、第２読み枠でαヘリックスを非常に
形成しやすい塩基配列として、「ＡＴＡＣＧＣＡＴＴＣ
ＡＧＡＧＡＧＧＣＣＣＴＧＧＣＣＧＣＡＣＴＴＴＴＧＴ
ＴＡＣＴ」を選択することができた。
【００１３】上記計算は、エイズウイルス中和抗原ペプ
チド２０アミノ酸残基の真ん中部分１３アミノ酸残基に
ついて実施したので、未計算の両端部分についても同様
の計算をおこない、それらの結果を合わせてマイクロ遺
伝子「デザイン−２５」を得ることができた。このマイ
クロ遺伝子「デザイン−２５」は、その読み枠の１つに
中和抗原配列をコードし、他の読み枠２つに終止コドン
をもたず、さらに、そのうちの１つにαヘリックスを形
成しやすい性質のペプチドをコードし、「エイズウイル
ス中和抗原性」と「構造形成能力」といった２つの生物
機能構造が潜源化したマイクロ遺伝子ということができ
る。次に、かかるマイクロ遺伝子「デザイン−２５」
を、前記本発明者によるマイクロ遺伝子重合法（特開平
９−３２２７７５号公報）を利用して重合し、「中和抗
原配列」と「αヘリックスを形成しやすい配列」とが複
雑に組み合わさった種々の人工遺伝子からなる人工遺伝
子ライブラリーを作製した。これら人工遺伝子ライブラ
リーを用いて種々の人工タンパク質を大腸菌で発現さ
せ、全体としてはαヘリックスの構造に支えられなが
ら、その中のところどころにエイズウイルス中和抗原配
列をもつ人工タンパク質が得られた。かかる人工タンパ
ク質を用いてマウスを免疫し、ｇｐ１２０タンパク質の
ループ３領域に対する抗血清を効率よく作製することが
できることや、対照実験としてのループ３領域に相当す
る合成ペプチドを用いた免疫からは有意な免疫誘導が生
起しないことを確認し、本発明を完成するに至った。
チド２０アミノ酸残基の真ん中部分１３アミノ酸残基に
ついて実施したので、未計算の両端部分についても同様
の計算をおこない、それらの結果を合わせてマイクロ遺
伝子「デザイン−２５」を得ることができた。このマイ
クロ遺伝子「デザイン−２５」は、その読み枠の１つに
中和抗原配列をコードし、他の読み枠２つに終止コドン
をもたず、さらに、そのうちの１つにαヘリックスを形
成しやすい性質のペプチドをコードし、「エイズウイル
ス中和抗原性」と「構造形成能力」といった２つの生物
機能構造が潜源化したマイクロ遺伝子ということができ
る。次に、かかるマイクロ遺伝子「デザイン−２５」
を、前記本発明者によるマイクロ遺伝子重合法（特開平
９−３２２７７５号公報）を利用して重合し、「中和抗
原配列」と「αヘリックスを形成しやすい配列」とが複
雑に組み合わさった種々の人工遺伝子からなる人工遺伝
子ライブラリーを作製した。これら人工遺伝子ライブラ
リーを用いて種々の人工タンパク質を大腸菌で発現さ
せ、全体としてはαヘリックスの構造に支えられなが
ら、その中のところどころにエイズウイルス中和抗原配
列をもつ人工タンパク質が得られた。かかる人工タンパ
ク質を用いてマウスを免疫し、ｇｐ１２０タンパク質の
ループ３領域に対する抗血清を効率よく作製することが
できることや、対照実験としてのループ３領域に相当す
る合成ペプチドを用いた免疫からは有意な免疫誘導が生
起しないことを確認し、本発明を完成するに至った。
【００１４】すなわち本発明は、ペプチド性エピトープ
のアミノ酸配列の全部又はその一部を含むアミノ酸配列
から構成されていることを特徴とするエピトープの免疫
原性が増強された人工タンパク質（請求項１）や、ペプ
チド性エピトープのアミノ酸配列の全部又はその一部を
含み、タンパク質の高次構造形成を補助する性質が付与
されたアミノ酸配列から構成されていることを特徴とす
る請求項１記載のエピトープの免疫原性が増強された人
工タンパク質（請求項２）や、ペプチド性エピトープの
アミノ酸配列の全部又はその一部を含み、免疫担当細胞
による抗原提示処理を補助する性質が付与されたアミノ
酸配列から構成されていることを特徴とする請求項１記
載のエピトープの免疫原性が増強された人工タンパク質
（請求項３）や、ペプチドタグ又はマーカータンパク質
が融合していることを特徴とする請求項１〜３のいずれ
か記載のエピトープの免疫原性が増強された人工タンパ
ク質（請求項４）や、ペプチドタグがポリヒスチジン残
基であることを特徴とする請求項４記載のエピトープの
免疫原性が増強された人工タンパク質（請求項５）や、
ペプチド性エピトープのアミノ酸配列が、配列番号１に
示されるアミノ酸配列であることを特徴とする請求項１
〜３のいずれか記載のエピトープの免疫原性が増強され
た人工タンパク質（請求項６）や、ペプチド性エピトー
プのアミノ酸配列の全部又はその一部を含むアミノ酸配
列が、配列番号２４〜４７のいずれかに示されるアミノ
酸配列であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか
記載のエピトープの免疫原性が増強された人工タンパク
質（請求項７）に関する。
のアミノ酸配列の全部又はその一部を含むアミノ酸配列
から構成されていることを特徴とするエピトープの免疫
原性が増強された人工タンパク質（請求項１）や、ペプ
チド性エピトープのアミノ酸配列の全部又はその一部を
含み、タンパク質の高次構造形成を補助する性質が付与
されたアミノ酸配列から構成されていることを特徴とす
る請求項１記載のエピトープの免疫原性が増強された人
工タンパク質（請求項２）や、ペプチド性エピトープの
アミノ酸配列の全部又はその一部を含み、免疫担当細胞
による抗原提示処理を補助する性質が付与されたアミノ
酸配列から構成されていることを特徴とする請求項１記
載のエピトープの免疫原性が増強された人工タンパク質
（請求項３）や、ペプチドタグ又はマーカータンパク質
が融合していることを特徴とする請求項１〜３のいずれ
か記載のエピトープの免疫原性が増強された人工タンパ
ク質（請求項４）や、ペプチドタグがポリヒスチジン残
基であることを特徴とする請求項４記載のエピトープの
免疫原性が増強された人工タンパク質（請求項５）や、
ペプチド性エピトープのアミノ酸配列が、配列番号１に
示されるアミノ酸配列であることを特徴とする請求項１
〜３のいずれか記載のエピトープの免疫原性が増強され
た人工タンパク質（請求項６）や、ペプチド性エピトー
プのアミノ酸配列の全部又はその一部を含むアミノ酸配
列が、配列番号２４〜４７のいずれかに示されるアミノ
酸配列であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか
記載のエピトープの免疫原性が増強された人工タンパク
質（請求項７）に関する。
【００１５】また本発明は、請求項１〜７のいずれか記
載のエピトープの免疫原性が増強された人工タンパク質
を含んでなることを特徴とする免疫応答の誘導剤（請求
項８）や、免疫応答が体液性免疫であることを特徴とす
る請求項８記載の免疫応答の誘導剤（請求項９）や、免
疫応答が細胞性免疫であることを特徴とする請求項８記
載の免疫応答の誘導剤（請求項１０）や、請求項１〜７
のいずれか記載のエピトープの免疫原性が増強された人
工タンパク質を抗原として用いることを特徴とする抗体
の製造方法（請求項１１）や、抗体がモノクローナル抗
体であることを特徴とする請求項１１記載の抗体の製造
方法（請求項１２）や、請求項１１又は１２記載の抗体
の製造方法により得られることを特徴とする抗体（請求
項１３）や、請求項１３記載の抗体を産生する細胞（請
求項１４）や、請求項１〜７のいずれか記載のエピトー
プの免疫原性が増強された人工タンパク質を発現するこ
とができる発現系を含んでなる宿主細胞（請求項１５）
や、腸内細菌であることを特徴とする請求項１５記載の
宿主細胞（請求項１６）や、請求項１６記載の腸内細菌
を含んでなることを特徴とする脱感作・免疫寛容状態の
誘導剤（請求項１７）に関する。
載のエピトープの免疫原性が増強された人工タンパク質
を含んでなることを特徴とする免疫応答の誘導剤（請求
項８）や、免疫応答が体液性免疫であることを特徴とす
る請求項８記載の免疫応答の誘導剤（請求項９）や、免
疫応答が細胞性免疫であることを特徴とする請求項８記
載の免疫応答の誘導剤（請求項１０）や、請求項１〜７
のいずれか記載のエピトープの免疫原性が増強された人
工タンパク質を抗原として用いることを特徴とする抗体
の製造方法（請求項１１）や、抗体がモノクローナル抗
体であることを特徴とする請求項１１記載の抗体の製造
方法（請求項１２）や、請求項１１又は１２記載の抗体
の製造方法により得られることを特徴とする抗体（請求
項１３）や、請求項１３記載の抗体を産生する細胞（請
求項１４）や、請求項１〜７のいずれか記載のエピトー
プの免疫原性が増強された人工タンパク質を発現するこ
とができる発現系を含んでなる宿主細胞（請求項１５）
や、腸内細菌であることを特徴とする請求項１５記載の
宿主細胞（請求項１６）や、請求項１６記載の腸内細菌
を含んでなることを特徴とする脱感作・免疫寛容状態の
誘導剤（請求項１７）に関する。
【００１６】さらに本発明は、請求項１〜７のいずれか
記載のエピトープの免疫原性が増強された人工タンパク
質をコードするＤＮＡ（請求項１８）や、塩基配列の読
み枠を異にした場合、該塩基配列の少なくとも１つの読
み枠にペプチド性エピトープがコードされ、他の読み枠
に該ペプチド性エピトープの抗原性を高めるような性質
を付与しうるペプチドがコードされていることを特徴と
する請求項１８記載のＤＮＡ（請求項１９）や、請求項
１８又は１９記載のＤＮＡを含んでなることを特徴とす
る免疫応答誘導用ＤＮＡワクチン（請求項２０）や、免
疫応答が体液性免疫であることを特徴とする請求項２０
記載の免疫応答誘導用ＤＮＡワクチン（請求項２１）
や、免疫応答が細胞性免疫であることを特徴とする請求
項２０記載の免疫応答誘導用ＤＮＡワクチン（請求項２
２）や、請求項１〜７のいずれか記載のエピトープの免
疫原性が増強された人工タンパク質を有効成分として含
有する機能性食品（請求項２３）や、脱感作・免疫寛容
状態を誘導することができる請求項２３記載の機能性食
品（請求項２４）に関する。
記載のエピトープの免疫原性が増強された人工タンパク
質をコードするＤＮＡ（請求項１８）や、塩基配列の読
み枠を異にした場合、該塩基配列の少なくとも１つの読
み枠にペプチド性エピトープがコードされ、他の読み枠
に該ペプチド性エピトープの抗原性を高めるような性質
を付与しうるペプチドがコードされていることを特徴と
する請求項１８記載のＤＮＡ（請求項１９）や、請求項
１８又は１９記載のＤＮＡを含んでなることを特徴とす
る免疫応答誘導用ＤＮＡワクチン（請求項２０）や、免
疫応答が体液性免疫であることを特徴とする請求項２０
記載の免疫応答誘導用ＤＮＡワクチン（請求項２１）
や、免疫応答が細胞性免疫であることを特徴とする請求
項２０記載の免疫応答誘導用ＤＮＡワクチン（請求項２
２）や、請求項１〜７のいずれか記載のエピトープの免
疫原性が増強された人工タンパク質を有効成分として含
有する機能性食品（請求項２３）や、脱感作・免疫寛容
状態を誘導することができる請求項２３記載の機能性食
品（請求項２４）に関する。
【００１７】
【発明の実施の形態】本発明のエピトープの免疫原性が
増強された人工タンパク質としては、ペプチド性エピト
ープのアミノ酸配列の全部又はその一部を含むアミノ酸
配列から構成されているタンパク質又はペプチドであれ
ば特に制限されるものではなく、ここで人工タンパク質
とは、天然に存在しないタンパク質又はペプチドであっ
て、例えば前記文献(Vaccine 17:2392-2399, 1999)に記
載された、ＨＩＶのｇｐ１２０ループ３ペプチドのタン
デム重合体とキャリアータンパク質との融合体など、公
知のペプチド性エピトープのタンデム重合体や、公知の
ペプチド性エピトープ又は公知のペプチド性エピトープ
のタンデム重合体と公知のキャリアタンパク質との融合
タンパク質や融合ペプチドは除かれる。かかるエピトー
プの免疫原性が増強された人工タンパク質としては、ペ
プチド性エピトープのアミノ酸配列の全部又はその一部
を含み、タンパク質の高次構造形成を補助する性質が付
与されたアミノ酸配列から構成されている人工タンパク
質や、ペプチド性エピトープのアミノ酸配列の全部又は
その一部を含み、免疫担当細胞による抗原提示処理を補
助する性質が付与されたアミノ酸配列から構成されてい
る人工タンパク質を好適に例示することができる。
増強された人工タンパク質としては、ペプチド性エピト
ープのアミノ酸配列の全部又はその一部を含むアミノ酸
配列から構成されているタンパク質又はペプチドであれ
ば特に制限されるものではなく、ここで人工タンパク質
とは、天然に存在しないタンパク質又はペプチドであっ
て、例えば前記文献(Vaccine 17:2392-2399, 1999)に記
載された、ＨＩＶのｇｐ１２０ループ３ペプチドのタン
デム重合体とキャリアータンパク質との融合体など、公
知のペプチド性エピトープのタンデム重合体や、公知の
ペプチド性エピトープ又は公知のペプチド性エピトープ
のタンデム重合体と公知のキャリアタンパク質との融合
タンパク質や融合ペプチドは除かれる。かかるエピトー
プの免疫原性が増強された人工タンパク質としては、ペ
プチド性エピトープのアミノ酸配列の全部又はその一部
を含み、タンパク質の高次構造形成を補助する性質が付
与されたアミノ酸配列から構成されている人工タンパク
質や、ペプチド性エピトープのアミノ酸配列の全部又は
その一部を含み、免疫担当細胞による抗原提示処理を補
助する性質が付与されたアミノ酸配列から構成されてい
る人工タンパク質を好適に例示することができる。
【００１８】上記タンパク質の高次構造形成を補助する
性質としては、αヘリックス形成能力、二次構造形成能
力、疎水性度向上能力に関する性質を例示することがで
き、また、免疫担当細胞による抗原提示処理を補助する
性質としては、クラスＩ、クラスIIのＭＨＣ分子との親
和性向上能力に関する性質を例示することができるが、
その他、天然のタンパク質に類似させた種々の性質を付
与することもできる。そして、これらの有用な性質を有
するアミノ酸配列は、アミノ酸組成や配列の繰り返し性
を調整することにより、あるいは、かかる性質を保持し
た既知の配列を参考にすることにより調製することがで
きる。また、本発明のエピトープの免疫原性が増強され
た人工タンパク質のエピトープのアミノ酸配列に由来す
るアミノ酸配列以外のアミノ酸配列として、上記タンパ
ク質の高次構造形成を補助する性質を付与しうるペプチ
ド配列や免疫担当細胞による抗原提示処理を補助する性
質を付与しうるペプチド配列の他、例えば、糖の付加シ
グナルをもったペプチド配列を用いることもでき、かか
るペプチド配列を加えることにより、合成された天然タ
ンパク質は糖修飾され、タンパク質−糖のハイブリッド
人工タンパク質などとすることもできる。
性質としては、αヘリックス形成能力、二次構造形成能
力、疎水性度向上能力に関する性質を例示することがで
き、また、免疫担当細胞による抗原提示処理を補助する
性質としては、クラスＩ、クラスIIのＭＨＣ分子との親
和性向上能力に関する性質を例示することができるが、
その他、天然のタンパク質に類似させた種々の性質を付
与することもできる。そして、これらの有用な性質を有
するアミノ酸配列は、アミノ酸組成や配列の繰り返し性
を調整することにより、あるいは、かかる性質を保持し
た既知の配列を参考にすることにより調製することがで
きる。また、本発明のエピトープの免疫原性が増強され
た人工タンパク質のエピトープのアミノ酸配列に由来す
るアミノ酸配列以外のアミノ酸配列として、上記タンパ
ク質の高次構造形成を補助する性質を付与しうるペプチ
ド配列や免疫担当細胞による抗原提示処理を補助する性
質を付与しうるペプチド配列の他、例えば、糖の付加シ
グナルをもったペプチド配列を用いることもでき、かか
るペプチド配列を加えることにより、合成された天然タ
ンパク質は糖修飾され、タンパク質−糖のハイブリッド
人工タンパク質などとすることもできる。
【００１９】本発明の人工タンパク質として、具体的に
は、免疫原性のきわめて弱いペプチド性エピトープであ
るＨＩＶのｇｐ１２０ループ３に強い免疫原生を付与す
ることができる、該ペプチド性エピトープループ３の全
部又はその一部を含むアミノ酸配列、例えば配列番号２
４〜４７のいずれかに示されるアミノ酸配列から構成さ
れる人工ペプチドあるいは人工タンパク質を挙げること
ができる。これら人工ペプチドあるいは人工タンパク質
を含め、本発明のエピトープの免疫原性が増強された人
工タンパク質は、生体おける体液性免疫や細胞性免疫等
の免疫応答を誘導するための免疫応答の誘導（薬）剤と
して用いることができる。
は、免疫原性のきわめて弱いペプチド性エピトープであ
るＨＩＶのｇｐ１２０ループ３に強い免疫原生を付与す
ることができる、該ペプチド性エピトープループ３の全
部又はその一部を含むアミノ酸配列、例えば配列番号２
４〜４７のいずれかに示されるアミノ酸配列から構成さ
れる人工ペプチドあるいは人工タンパク質を挙げること
ができる。これら人工ペプチドあるいは人工タンパク質
を含め、本発明のエピトープの免疫原性が増強された人
工タンパク質は、生体おける体液性免疫や細胞性免疫等
の免疫応答を誘導するための免疫応答の誘導（薬）剤と
して用いることができる。
【００２０】本発明のエピトープの免疫原性が増強され
た人工タンパク質をコードするＤＮＡとしては、塩基配
列の読み枠を異にした場合、該塩基配列の少なくとも１
つの読み枠にペプチド性エピトープがコードされ、他の
読み枠に該ペプチド性エピトープの抗原性を高めるよう
な性質を付与しうるペプチドがコードされているＤＮＡ
や、同じ読み枠にペプチド性エピトープと該ペプチド性
エピトープの抗原性を高めるような性質を付与しうるペ
プチドがコードされているＤＮＡを例示することがで
き、例えばかかるＤＮＡを組み込んだ発現ベクターは細
胞性免疫や体液性免疫等の免疫応答誘導用ＤＮＡワクチ
ンとして用いることができる。
た人工タンパク質をコードするＤＮＡとしては、塩基配
列の読み枠を異にした場合、該塩基配列の少なくとも１
つの読み枠にペプチド性エピトープがコードされ、他の
読み枠に該ペプチド性エピトープの抗原性を高めるよう
な性質を付与しうるペプチドがコードされているＤＮＡ
や、同じ読み枠にペプチド性エピトープと該ペプチド性
エピトープの抗原性を高めるような性質を付与しうるペ
プチドがコードされているＤＮＡを例示することがで
き、例えばかかるＤＮＡを組み込んだ発現ベクターは細
胞性免疫や体液性免疫等の免疫応答誘導用ＤＮＡワクチ
ンとして用いることができる。
【００２１】本発明はまた、上記本発明のエピトープの
免疫原性が増強された人工タンパク質を発現することが
できる発現系を含んでなる宿主細胞に関し、宿主細胞と
しては、サルモネラ菌、大腸菌、ストレプトミセス、枯
草菌、ストレプトコッカス、スタフィロコッカス等の細
菌原核細胞や、酵母、アスペルギルス等の真菌細胞や、
ドロソフィラＳ２、スポドプテラＳｆ９等の昆虫細胞
や、Ｌ細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＨｅＬａ細胞、
Ｃ１２７細胞、ＢＡＬＢ／ｃ３Ｔ３細胞（ジヒドロ葉酸
レダクターゼやチミジンキナーゼなどを欠損した変異株
を含む）、ＢＨＫ２１細胞、ＨＥＫ２９３細胞等の動物
細胞や、植物細胞等を挙げることができるが、サルモネ
ラ菌等の腸内細菌を好ましく例示することができる。か
かる人工タンパク質を発現する腸内細菌を生体に投与す
ると、脱感作・免疫寛容状態を誘導することができるこ
とから、これら腸内細菌は脱感作・免疫寛容状態の誘導
剤として期待できる。
免疫原性が増強された人工タンパク質を発現することが
できる発現系を含んでなる宿主細胞に関し、宿主細胞と
しては、サルモネラ菌、大腸菌、ストレプトミセス、枯
草菌、ストレプトコッカス、スタフィロコッカス等の細
菌原核細胞や、酵母、アスペルギルス等の真菌細胞や、
ドロソフィラＳ２、スポドプテラＳｆ９等の昆虫細胞
や、Ｌ細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＨｅＬａ細胞、
Ｃ１２７細胞、ＢＡＬＢ／ｃ３Ｔ３細胞（ジヒドロ葉酸
レダクターゼやチミジンキナーゼなどを欠損した変異株
を含む）、ＢＨＫ２１細胞、ＨＥＫ２９３細胞等の動物
細胞や、植物細胞等を挙げることができるが、サルモネ
ラ菌等の腸内細菌を好ましく例示することができる。か
かる人工タンパク質を発現する腸内細菌を生体に投与す
ると、脱感作・免疫寛容状態を誘導することができるこ
とから、これら腸内細菌は脱感作・免疫寛容状態の誘導
剤として期待できる。
【００２２】また、発現系としては、上記本発明のエピ
トープの免疫原性が増強された人工タンパク質を宿主細
胞内で発現させることができる発現系であればどのよう
なものでもよく、染色体、エピソーム及びウイルスに由
来する発現系、例えば、細菌プラスミド由来、酵母プラ
スミド由来、ＳＶ４０のようなパポバウイルス、ワクシ
ニアウイルス、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂
犬病ウイルス、レトロウイルス由来のベクター、バクテ
リオファージ由来、トランスポゾン由来及びこれらの組
合せに由来するベクター、例えば、コスミドやファージ
ミドのようなプラスミドとバクテリオファージの遺伝的
要素に由来するものを挙げることができる。この発現系
は発現を起こさせるだけでなく発現を調節する制御配列
を含んでいてもよい。また、読み枠を変えて翻訳するこ
とができる発現ベクターシリーズも有利に用いることが
できる。
トープの免疫原性が増強された人工タンパク質を宿主細
胞内で発現させることができる発現系であればどのよう
なものでもよく、染色体、エピソーム及びウイルスに由
来する発現系、例えば、細菌プラスミド由来、酵母プラ
スミド由来、ＳＶ４０のようなパポバウイルス、ワクシ
ニアウイルス、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂
犬病ウイルス、レトロウイルス由来のベクター、バクテ
リオファージ由来、トランスポゾン由来及びこれらの組
合せに由来するベクター、例えば、コスミドやファージ
ミドのようなプラスミドとバクテリオファージの遺伝的
要素に由来するものを挙げることができる。この発現系
は発現を起こさせるだけでなく発現を調節する制御配列
を含んでいてもよい。また、読み枠を変えて翻訳するこ
とができる発現ベクターシリーズも有利に用いることが
できる。
【００２３】本発明の人工タンパク質をコードするＤＮ
Ａや該人工タンパク質をコードするＤＮＡが組み込まれ
た発現系の宿主細胞への導入は、Davisら（BASIC METHO
DS IN MOLECULAR BIOLOGY, 1986）及びSambrookら（MOL
ECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, 2nd Ed., Cold
Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbo
r, N.Y., 1989）などの多くの標準的な実験室マニュア
ルに記載される方法、例えば、リン酸カルシウムトラン
スフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランス
フェクション、トランスベクション(transvection)、マ
イクロインジェクション、カチオン性脂質媒介トランス
フェクション、エレクトロポレーション、形質導入、ス
クレープローディング (scrape loading)、弾丸導入(ba
llisticintroduction)、感染等により行うことができ
る。
Ａや該人工タンパク質をコードするＤＮＡが組み込まれ
た発現系の宿主細胞への導入は、Davisら（BASIC METHO
DS IN MOLECULAR BIOLOGY, 1986）及びSambrookら（MOL
ECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, 2nd Ed., Cold
Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbo
r, N.Y., 1989）などの多くの標準的な実験室マニュア
ルに記載される方法、例えば、リン酸カルシウムトラン
スフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランス
フェクション、トランスベクション(transvection)、マ
イクロインジェクション、カチオン性脂質媒介トランス
フェクション、エレクトロポレーション、形質導入、ス
クレープローディング (scrape loading)、弾丸導入(ba
llisticintroduction)、感染等により行うことができ
る。
【００２４】本発明の人工タンパク質の製法としては、
従来公知のタンパク質の製造方法であれば特に制限され
るものではなく、例えば、該人工タンパク質をコードす
るＤＮＡを発現ベクターに組み込んで宿主細胞を形質転
換し、該形質転換細胞を培養することにより、あるいは
ペプチド合成法により得ることができる。上記人工タン
パク質をコードするＤＮＡは、例えば実施例に説明され
ているようなマイクロ遺伝子重合法を用いることにより
作製することができ、その際エピトープをコードする塩
基配列に付加する人工タンパク質の性質は、マイクロ遺
伝子の同じ読み枠に存在していても異なる読み枠に存在
していてもよいが、人工タンパク質をコードするＤＮＡ
の作製はこれらの方法に限定されるものではない。ま
た、上記発現ベクター由来の翻訳領域に、ポリヒスチジ
ン残基をコードする塩基配列を存在させるなどして、該
人工タンパク質のアミノ酸配列の一部にポリヒスチジン
残基等の分離精製用のペプチドタグを存在させることも
できる。
従来公知のタンパク質の製造方法であれば特に制限され
るものではなく、例えば、該人工タンパク質をコードす
るＤＮＡを発現ベクターに組み込んで宿主細胞を形質転
換し、該形質転換細胞を培養することにより、あるいは
ペプチド合成法により得ることができる。上記人工タン
パク質をコードするＤＮＡは、例えば実施例に説明され
ているようなマイクロ遺伝子重合法を用いることにより
作製することができ、その際エピトープをコードする塩
基配列に付加する人工タンパク質の性質は、マイクロ遺
伝子の同じ読み枠に存在していても異なる読み枠に存在
していてもよいが、人工タンパク質をコードするＤＮＡ
の作製はこれらの方法に限定されるものではない。ま
た、上記発現ベクター由来の翻訳領域に、ポリヒスチジ
ン残基をコードする塩基配列を存在させるなどして、該
人工タンパク質のアミノ酸配列の一部にポリヒスチジン
残基等の分離精製用のペプチドタグを存在させることも
できる。
【００２５】また、本発明の人工タンパク質を、マーカ
ータンパク質及び／又はペプチドタグと結合させた融合
タンパク質や融合ペプチドとすることもできる。マーカ
ータンパク質としては、従来知られているマーカータン
パク質であれば特に制限されるものではなく、例えば、
アルカリフォスファターゼ、抗体のＦｃ領域、ＨＲＰ、
ＧＦＰなどを具体的に挙げることができ、またペプチド
タグとしては、Ｍｙｃタグ、Ｈｉｓタグ、ＦＬＡＧタ
グ、ＧＳＴタグなどの従来知られているペプチドタグを
具体的に例示することができる。かかる融合タンパク質
や融合ペプチドは、常法により作製することができ、Ｎ
ｉ−ＮＴＡとＨｉｓタグの親和性を利用した本発明の人
工タンパク質の精製や、Ｔ細胞誘導活性を有するタンパ
ク質の検出や、本発明の人工タンパク質に対する抗体の
定量、免疫不全症の診断用マーカーなどとして、また当
該分野の研究用試薬としても有用である。
ータンパク質及び／又はペプチドタグと結合させた融合
タンパク質や融合ペプチドとすることもできる。マーカ
ータンパク質としては、従来知られているマーカータン
パク質であれば特に制限されるものではなく、例えば、
アルカリフォスファターゼ、抗体のＦｃ領域、ＨＲＰ、
ＧＦＰなどを具体的に挙げることができ、またペプチド
タグとしては、Ｍｙｃタグ、Ｈｉｓタグ、ＦＬＡＧタ
グ、ＧＳＴタグなどの従来知られているペプチドタグを
具体的に例示することができる。かかる融合タンパク質
や融合ペプチドは、常法により作製することができ、Ｎ
ｉ−ＮＴＡとＨｉｓタグの親和性を利用した本発明の人
工タンパク質の精製や、Ｔ細胞誘導活性を有するタンパ
ク質の検出や、本発明の人工タンパク質に対する抗体の
定量、免疫不全症の診断用マーカーなどとして、また当
該分野の研究用試薬としても有用である。
【００２６】本発明の抗体の製造方法としては、エピト
ープの免疫原性が増強された人工タンパク質を抗原とし
て用いる方法であれば特に制限されるものではなく、か
かる抗体の種類としては、モノクローナル抗体、ポリク
ローナル抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、ヒト化抗体等
の免疫特異的な抗体を具体的に挙げることができ、これ
らは本発明のエピトープの免疫原性が増強された人工タ
ンパク質又はその一部を抗原として用いて常法により作
製することができるが、その中でもモノクローナル抗体
がその特異性の点で好ましく、特にエイズウイルスの増
殖に対する中和活性をもったモノクローナル抗体がより
好ましい。かかるモノクローナル抗体等の抗体は、例え
ば、エイズ等の免疫不全症等の治療ばかりでなく、エイ
ズ等の免疫不全症の発症機構を明らかにする上で有用で
ある。
ープの免疫原性が増強された人工タンパク質を抗原とし
て用いる方法であれば特に制限されるものではなく、か
かる抗体の種類としては、モノクローナル抗体、ポリク
ローナル抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、ヒト化抗体等
の免疫特異的な抗体を具体的に挙げることができ、これ
らは本発明のエピトープの免疫原性が増強された人工タ
ンパク質又はその一部を抗原として用いて常法により作
製することができるが、その中でもモノクローナル抗体
がその特異性の点で好ましく、特にエイズウイルスの増
殖に対する中和活性をもったモノクローナル抗体がより
好ましい。かかるモノクローナル抗体等の抗体は、例え
ば、エイズ等の免疫不全症等の治療ばかりでなく、エイ
ズ等の免疫不全症の発症機構を明らかにする上で有用で
ある。
【００２７】また、本発明の抗体は、慣用のプロトコー
ルを用いて、動物（好ましくはヒト以外）に本発明のエ
ピトープの免疫原性が増強された人工タンパク質又はそ
の一部を、あるいはかかる人工タンパク質の一部とＭＨ
Ｃとの複合体を膜表面に発現した細胞を投与することに
より産生され、例えばモノクローナル抗体の調製には、
連続細胞系の培養物により産生される抗体をもたらす、
ハイブリドーマ法（Nature 256, 495-497, 1975）、ト
リオーマ法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ法（Immunology
Today 4, 72, 1983）及びＥＢＶ−ハイブリドーマ法
（MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY, pp.77-
96, Alan R.Liss, Inc., 1985）など任意の方法を用い
ることができる。
ルを用いて、動物（好ましくはヒト以外）に本発明のエ
ピトープの免疫原性が増強された人工タンパク質又はそ
の一部を、あるいはかかる人工タンパク質の一部とＭＨ
Ｃとの複合体を膜表面に発現した細胞を投与することに
より産生され、例えばモノクローナル抗体の調製には、
連続細胞系の培養物により産生される抗体をもたらす、
ハイブリドーマ法（Nature 256, 495-497, 1975）、ト
リオーマ法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ法（Immunology
Today 4, 72, 1983）及びＥＢＶ−ハイブリドーマ法
（MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY, pp.77-
96, Alan R.Liss, Inc., 1985）など任意の方法を用い
ることができる。
【００２８】本発明の上記人工タンパク質に対する一本
鎖抗体をつくるために、一本鎖抗体の調製法（米国特許
第4,946,778号）を適用することができる。また、ヒト
化抗体を発現させるために、トランスジェニックマウス
又は他の哺乳動物等を利用したり、上記抗体を用いて、
本発明のエピトープの免疫原性が増強された人工タンパ
ク質を発現するクローンを単離・同定したり、アフィニ
ティークロマトグラフィーでそのポリペプチドを精製す
ることもできる。本発明のエピトープの免疫原性が増強
された人工タンパク質やその抗原エピトープを含むペプ
チドに対する抗体は、エイズ等の免疫不全症の診断や治
療に使用できる可能性がある。また本発明の上記抗体を
産生する細胞としては、株化した培養細胞が好ましく、
例えば、モノクローナル抗体産生ハイブリドーマ、株化
Ｂ細胞等を例示することができる。
鎖抗体をつくるために、一本鎖抗体の調製法（米国特許
第4,946,778号）を適用することができる。また、ヒト
化抗体を発現させるために、トランスジェニックマウス
又は他の哺乳動物等を利用したり、上記抗体を用いて、
本発明のエピトープの免疫原性が増強された人工タンパ
ク質を発現するクローンを単離・同定したり、アフィニ
ティークロマトグラフィーでそのポリペプチドを精製す
ることもできる。本発明のエピトープの免疫原性が増強
された人工タンパク質やその抗原エピトープを含むペプ
チドに対する抗体は、エイズ等の免疫不全症の診断や治
療に使用できる可能性がある。また本発明の上記抗体を
産生する細胞としては、株化した培養細胞が好ましく、
例えば、モノクローナル抗体産生ハイブリドーマ、株化
Ｂ細胞等を例示することができる。
【００２９】本発明の機能性食品としては、本発明のエ
ピトープの免疫原性が増強された人工タンパク質を有効
成分として含有するものであればどのような食品でもよ
く、かかる人工タンパク質を飲食品原料の一部として用
いたり、あるいは製造工程又は製造後に添加・配合する
ことにより得ることができる。かかる機能性食品として
は特に制限されるものではなく、クッキー、パン、ケー
キ、煎餅などの焼き菓子、ラムネ菓子等などの錠菓、羊
羹などの和菓子、プリン、ゼリー、アイスクリーム類な
どの冷菓、チューインガム、キャンディ等の菓子類や、
クラッカー、チップス等のスナック類や、うどん、そば
等の麺類や、かまぼこ、ハム、魚肉ソーセージ等の魚肉
練り製品や、チーズ、バターなどの乳製品や、みそ、し
ょう油、ドレッシング、マヨネーズ、甘味料等の調味類
や、豆腐、こんにゃく、その他佃煮、餃子、コロッケ、
サラダ、スープ、シチュー等の各種総菜や、ヨーグル
ト、ドリンクヨーグルト、ジュース、牛乳、豆乳、酒
類、コーヒー、紅茶、煎茶、ウーロン茶、スポーツ飲料
等の各種飲料などを具体的に例示することができる。
ピトープの免疫原性が増強された人工タンパク質を有効
成分として含有するものであればどのような食品でもよ
く、かかる人工タンパク質を飲食品原料の一部として用
いたり、あるいは製造工程又は製造後に添加・配合する
ことにより得ることができる。かかる機能性食品として
は特に制限されるものではなく、クッキー、パン、ケー
キ、煎餅などの焼き菓子、ラムネ菓子等などの錠菓、羊
羹などの和菓子、プリン、ゼリー、アイスクリーム類な
どの冷菓、チューインガム、キャンディ等の菓子類や、
クラッカー、チップス等のスナック類や、うどん、そば
等の麺類や、かまぼこ、ハム、魚肉ソーセージ等の魚肉
練り製品や、チーズ、バターなどの乳製品や、みそ、し
ょう油、ドレッシング、マヨネーズ、甘味料等の調味類
や、豆腐、こんにゃく、その他佃煮、餃子、コロッケ、
サラダ、スープ、シチュー等の各種総菜や、ヨーグル
ト、ドリンクヨーグルト、ジュース、牛乳、豆乳、酒
類、コーヒー、紅茶、煎茶、ウーロン茶、スポーツ飲料
等の各種飲料などを具体的に例示することができる。
【００３０】
【実施例】以下に、実施例を揚げてこの発明を更に具体
的に説明するが、この発明の範囲はこれらの例示に限定
されるものではない。 実施例１ ＨＩＶウイルスの一群の亜種がもつｇｐ１２０タンパク
質の部分配列である、配列番号１に示されるアミノ酸配
列からなるペプチドをコードする塩基配列を読み枠の１
つとし、かつ同方向の他の読み枠２つのうちの少なくと
も１つの読み枠で２次構造を形成しやすいアミノ酸配列
からなるペプチドをコードすることができるマイクロ遺
伝子をデザインするために、図２に示すフローチャート
にしたがってマイクロ遺伝子を構築した。計算機の処理
能力を考慮して、配列番号１に示される２０アミノ酸残
基を、互いに一部重複する部分配列である３つのアミノ
酸配列、すなわち配列番号２、配列番号３、配列番号４
にそれぞれ示される３つのアミノ酸配列からなるペプチ
ドに分割し、それぞれについて計算を実行した。
的に説明するが、この発明の範囲はこれらの例示に限定
されるものではない。 実施例１ ＨＩＶウイルスの一群の亜種がもつｇｐ１２０タンパク
質の部分配列である、配列番号１に示されるアミノ酸配
列からなるペプチドをコードする塩基配列を読み枠の１
つとし、かつ同方向の他の読み枠２つのうちの少なくと
も１つの読み枠で２次構造を形成しやすいアミノ酸配列
からなるペプチドをコードすることができるマイクロ遺
伝子をデザインするために、図２に示すフローチャート
にしたがってマイクロ遺伝子を構築した。計算機の処理
能力を考慮して、配列番号１に示される２０アミノ酸残
基を、互いに一部重複する部分配列である３つのアミノ
酸配列、すなわち配列番号２、配列番号３、配列番号４
にそれぞれ示される３つのアミノ酸配列からなるペプチ
ドに分割し、それぞれについて計算を実行した。
【００３１】配列番号３に示されるアミノ酸配列からな
るペプチドをコードする塩基配列の場合、まず読み枠の
１つに配列番号３に示されるアミノ酸配列からなるペプ
チドをコードすることのできる全ての塩基配列（塩基長
は１３×３＝３９）である約５億種の塩基配列を計算機
内に作成し、この配列集団の中から、同方向の他の２つ
の読み枠に終止コドンをもたない約１，１３５万種の塩
基配列を計算機内で選び出した。次に、これら選び出さ
れた塩基配列の読み枠１と同方向の他の２つの読み枠の
コードする全てのアミノ酸配列約２，２７０万種を計算
機内に作成し、このアミノ酸配列からなるペプチド集団
の中から同じアミノ酸配列をもった重複配列を除き、そ
れぞれ異なる配列をもつペプチド集団約１，５０６万種
を選び出した。このそれぞれのペプチド集団に対して、
そのαヘリックス、あるいは、βシートの二次構造形成
能力を前記の二次構造予測プログラムを用いたスコアー
によって評価し、二次構造形成能力が高いと予想される
ペプチドの中から、配列番号５に示されるアミノ酸配列
からなるペプチドを選定した。このペプチドは、配列番
号６に示される塩基配列の第２読み枠にコードされるア
ミノ酸配列であり、αヘリックス構造を形成しやすい配
列と予想された。
るペプチドをコードする塩基配列の場合、まず読み枠の
１つに配列番号３に示されるアミノ酸配列からなるペプ
チドをコードすることのできる全ての塩基配列（塩基長
は１３×３＝３９）である約５億種の塩基配列を計算機
内に作成し、この配列集団の中から、同方向の他の２つ
の読み枠に終止コドンをもたない約１，１３５万種の塩
基配列を計算機内で選び出した。次に、これら選び出さ
れた塩基配列の読み枠１と同方向の他の２つの読み枠の
コードする全てのアミノ酸配列約２，２７０万種を計算
機内に作成し、このアミノ酸配列からなるペプチド集団
の中から同じアミノ酸配列をもった重複配列を除き、そ
れぞれ異なる配列をもつペプチド集団約１，５０６万種
を選び出した。このそれぞれのペプチド集団に対して、
そのαヘリックス、あるいは、βシートの二次構造形成
能力を前記の二次構造予測プログラムを用いたスコアー
によって評価し、二次構造形成能力が高いと予想される
ペプチドの中から、配列番号５に示されるアミノ酸配列
からなるペプチドを選定した。このペプチドは、配列番
号６に示される塩基配列の第２読み枠にコードされるア
ミノ酸配列であり、αヘリックス構造を形成しやすい配
列と予想された。
【００３２】配列番号２に示されるアミノ酸配列からな
るペプチドをコードする塩基配列についても、上記同様
の計算を実行し、第１読み枠で、配列番号２に示される
アミノ酸配列からなるペプチドを、第２読み枠でαヘリ
ックスを形成する可能性が高いペプチドをコードし、か
つ、そのペプチドの４番目から６番目のアミノ酸配列
が、上記配列番号５に示されるアミノ酸配列の１番目か
ら３番目のアミノ酸配列に一致する、配列番号７に示さ
れるアミノ酸配列からなるペプチドを選び出した。この
ペプチドは、配列番号８に示される塩基配列の第２読み
枠にコードされるアミノ酸配列である。
るペプチドをコードする塩基配列についても、上記同様
の計算を実行し、第１読み枠で、配列番号２に示される
アミノ酸配列からなるペプチドを、第２読み枠でαヘリ
ックスを形成する可能性が高いペプチドをコードし、か
つ、そのペプチドの４番目から６番目のアミノ酸配列
が、上記配列番号５に示されるアミノ酸配列の１番目か
ら３番目のアミノ酸配列に一致する、配列番号７に示さ
れるアミノ酸配列からなるペプチドを選び出した。この
ペプチドは、配列番号８に示される塩基配列の第２読み
枠にコードされるアミノ酸配列である。
【００３３】配列番号４についても上記同様の計算を実
行し、第１読み枠で、配列番号４に示されるアミノ酸配
列からなるペプチドを、第２読み枠でαヘリックスを形
成する可能性が高いペプチドをコードし、かつ、そのペ
プチドの１番目から３番目のアミノ酸配列が、配列番号
５の１１番目から１３番目のアミノ酸配列に一致する、
配列番号９に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを
選び出した。このペプチドは、配列番号１０に示される
塩基配列の第２読み枠にコードされるアミノ酸配列であ
る。
行し、第１読み枠で、配列番号４に示されるアミノ酸配
列からなるペプチドを、第２読み枠でαヘリックスを形
成する可能性が高いペプチドをコードし、かつ、そのペ
プチドの１番目から３番目のアミノ酸配列が、配列番号
５の１１番目から１３番目のアミノ酸配列に一致する、
配列番号９に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを
選び出した。このペプチドは、配列番号１０に示される
塩基配列の第２読み枠にコードされるアミノ酸配列であ
る。
【００３４】上記の操作で得られた配列番号６、配列番
号８、配列番号１０にそれぞれ示される塩基配列を、重
複を考慮しながら連結し、配列番号１１に示される塩基
配列を有するマイクロ遺伝子「デザイン−２５」を得
た。このデザインされたマイクロ遺伝子は、図３に示す
ように、第１読み枠でＨＩＶウイルスの一群の亜種がも
つｇｐ１２０タンパク質の部分配列をコードし、第２読
み枠で、αヘリックス構造を形成しやすいペプチドの配
列をコードする。なお、マイクロ遺伝子デザイン−２５
の場合、マイクロ遺伝子のマイナス鎖（配列番号１１に
示される塩基配列に対して相補的な配列）に関しては、
終止コドンの出現の回避などの制限を加えていない。
号８、配列番号１０にそれぞれ示される塩基配列を、重
複を考慮しながら連結し、配列番号１１に示される塩基
配列を有するマイクロ遺伝子「デザイン−２５」を得
た。このデザインされたマイクロ遺伝子は、図３に示す
ように、第１読み枠でＨＩＶウイルスの一群の亜種がも
つｇｐ１２０タンパク質の部分配列をコードし、第２読
み枠で、αヘリックス構造を形成しやすいペプチドの配
列をコードする。なお、マイクロ遺伝子デザイン−２５
の場合、マイクロ遺伝子のマイナス鎖（配列番号１１に
示される塩基配列に対して相補的な配列）に関しては、
終止コドンの出現の回避などの制限を加えていない。
【００３５】上記のデザインされたマイクロ遺伝子「デ
ザイン−２５」を出発材料とし、前記特開平９−３２２
７７５号公報記載の高分子マイクロ遺伝子重合体の作成
方法の技術を用いて、マイクロ遺伝子重合体ライブラリ
ーを作製した。なお、重合の基礎となるオリゴヌクレオ
チドＡとして、配列番号１２に示される塩基配列からな
るＫＹ−１１９７を、オリゴヌクレオチドＢとして、配
列番号１３に示される塩基配列からなるＫＹ−１１９８
をそれぞれ合成して用いた。これら３４ヌクレオチドか
らなるオリゴヌクレオチドＡの３′側１０残基と、３６
ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドＢの３′側１
０残基とが、ともに３′端を除いて互いに相補的な配列
として構成されている。
ザイン−２５」を出発材料とし、前記特開平９−３２２
７７５号公報記載の高分子マイクロ遺伝子重合体の作成
方法の技術を用いて、マイクロ遺伝子重合体ライブラリ
ーを作製した。なお、重合の基礎となるオリゴヌクレオ
チドＡとして、配列番号１２に示される塩基配列からな
るＫＹ−１１９７を、オリゴヌクレオチドＢとして、配
列番号１３に示される塩基配列からなるＫＹ−１１９８
をそれぞれ合成して用いた。これら３４ヌクレオチドか
らなるオリゴヌクレオチドＡの３′側１０残基と、３６
ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドＢの３′側１
０残基とが、ともに３′端を除いて互いに相補的な配列
として構成されている。
【００３６】上記オリゴヌクレオチドＡとオリゴヌクレ
オチドＢとを用いた重合反応の条件は、５０μＬの反応
容量では以下の通りである。 ＫＹ−１１９７ ２０ｐｍｏｌ ＫＹ−１１９８ ２０ｐｍｏｌ ＫＣｌ １０ ｍＭ (ＮＨ4)2ＳＯ4 １０ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ(ｐＨ８．８) １０ ｍＭ ＭｇＳＯ4 ２ ｍＭ ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ ０．１ ％ ２．５ｍＭ ｄＮＴＰ ７ μＬ 上記反応液を９４℃で１０分間処理した後、ＤＮＡポリ
メラーゼ（ニューイングランドバイオラブス社製「Ｖｅ
ｎｔR」）を５．２ユニット加えた。
オチドＢとを用いた重合反応の条件は、５０μＬの反応
容量では以下の通りである。 ＫＹ−１１９７ ２０ｐｍｏｌ ＫＹ−１１９８ ２０ｐｍｏｌ ＫＣｌ １０ ｍＭ (ＮＨ4)2ＳＯ4 １０ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ(ｐＨ８．８) １０ ｍＭ ＭｇＳＯ4 ２ ｍＭ ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ ０．１ ％ ２．５ｍＭ ｄＮＴＰ ７ μＬ 上記反応液を９４℃で１０分間処理した後、ＤＮＡポリ
メラーゼ（ニューイングランドバイオラブス社製「Ｖｅ
ｎｔR」）を５．２ユニット加えた。
【００３７】重合反応は、パーキン・エルマー社の２４
００ジーンアンプＰＣＲシステムを用いて行った。反応
条件は、９４℃で１０秒間熱変性させ、６６℃で６０秒
間アニーリングと伸張反応を行うというサイクルで５５
サイクル繰り返し、最後の伸張反応を６６℃で７分間行
った。重合反応産物として得られた本発明の人工遺伝子
をプラスミドベクターｐＴＺ１９Ｒ(Protein Eng.,1:67
-74,1986)にクローニングし、その挿入ＤＮＡ断片の塩
基配列をシークエンサー（パーキン・エルマー社）を用
いて決定した。クローニングした１０種類のＤＮＡ断
片、すなわちｐＴＨ１２７、ｐＴＨ１３３、ｐＴＨ１３
６、ｐＴＨ１４２、ｐＴＨ１４３、ｐＴＨ１４５、ｐＴ
Ｈ１５５、ｐＴＨ１６７、ｐＴＨ１７１及びｐＴＨ１７
６を図４及び図５に示す。このうち、ｐＴＨ１３３、ｐ
ＴＨ１４２、ｐＴＨ１４３及びｐＴＨ１６７は、その挿
入断片が長く、また繰り返し配列といった性質をもつた
めに、その全長の塩基配列を決定することができないの
で、その部分配列が図４及び図５に示している。これら
図４及び図５に示される各挿入塩基配列を配列番号１４
〜２３にそれぞれ示す。
００ジーンアンプＰＣＲシステムを用いて行った。反応
条件は、９４℃で１０秒間熱変性させ、６６℃で６０秒
間アニーリングと伸張反応を行うというサイクルで５５
サイクル繰り返し、最後の伸張反応を６６℃で７分間行
った。重合反応産物として得られた本発明の人工遺伝子
をプラスミドベクターｐＴＺ１９Ｒ(Protein Eng.,1:67
-74,1986)にクローニングし、その挿入ＤＮＡ断片の塩
基配列をシークエンサー（パーキン・エルマー社）を用
いて決定した。クローニングした１０種類のＤＮＡ断
片、すなわちｐＴＨ１２７、ｐＴＨ１３３、ｐＴＨ１３
６、ｐＴＨ１４２、ｐＴＨ１４３、ｐＴＨ１４５、ｐＴ
Ｈ１５５、ｐＴＨ１６７、ｐＴＨ１７１及びｐＴＨ１７
６を図４及び図５に示す。このうち、ｐＴＨ１３３、ｐ
ＴＨ１４２、ｐＴＨ１４３及びｐＴＨ１６７は、その挿
入断片が長く、また繰り返し配列といった性質をもつた
めに、その全長の塩基配列を決定することができないの
で、その部分配列が図４及び図５に示している。これら
図４及び図５に示される各挿入塩基配列を配列番号１４
〜２３にそれぞれ示す。
【００３８】上記マイクロ遺伝子重合体である人工遺伝
子を大腸菌内で発現させるために、プラスミドベクター
ｐＴＺ１９Ｒにクローニングした１０種の挿入ＤＮＡ断
片を切りだし、方向、読み枠などを考慮しながら、方
向、読み枠を選んで発現させることができる発現プラス
ミドベクターシリーズｐＫＳ６００〜ｐＫＳ６０５のい
ずれか１つに再クローニングした。この６種の発現プラ
スミドベクターｐＫＳ６００〜ｐＫＳ６０５は、キアゲ
ン社から発売されている読み枠を１つずつずらした発現
ベクターシリーズであるｐＱＥ−９、ｐＱＥ−１０、ｐ
ＱＥ−１１のクローニングサイトを改変したもので、プ
ラス鎖とマイナス鎖のそれぞれ３読み枠、合計６種の読
み枠のいずれかにより翻訳産物を大腸菌の中で大量発現
させることができるように作製したものである。
子を大腸菌内で発現させるために、プラスミドベクター
ｐＴＺ１９Ｒにクローニングした１０種の挿入ＤＮＡ断
片を切りだし、方向、読み枠などを考慮しながら、方
向、読み枠を選んで発現させることができる発現プラス
ミドベクターシリーズｐＫＳ６００〜ｐＫＳ６０５のい
ずれか１つに再クローニングした。この６種の発現プラ
スミドベクターｐＫＳ６００〜ｐＫＳ６０５は、キアゲ
ン社から発売されている読み枠を１つずつずらした発現
ベクターシリーズであるｐＱＥ−９、ｐＱＥ−１０、ｐ
ＱＥ−１１のクローニングサイトを改変したもので、プ
ラス鎖とマイナス鎖のそれぞれ３読み枠、合計６種の読
み枠のいずれかにより翻訳産物を大腸菌の中で大量発現
させることができるように作製したものである。
【００３９】これら人工遺伝子が挿入された２４種類の
発現プラスミドベクターｐＴＨ１７７〜ｐＴＨ２００、
すなわち、ｐＴＨ１２７の挿入配列をｐＫＳ６０１に移
し変えたｐＴＨ１７７、ｐＴＨ１３３の挿入配列をｐＫ
Ｓ６０１に移し変えたｐＴＨ１７８、ｐＴＨ１３６の挿
入配列をｐＫＳ６００に移し変えたｐＴＨ１７９、ｐＴ
Ｈ１４３の挿入配列をｐＫＳ６００に移し変えたｐＴＨ
１８０、ｐＴＨ１４５の挿入配列をｐＫＳ６０１に移し
変えたｐＴＨ１８１、ｐＴＨ１５５の挿入配列をｐＫＳ
６０１に移し変えたｐＴＨ１８２、ｐＴＨ１６７の挿入
配列をｐＫＳ６０１に移し変えたｐＴＨ１８３、ｐＴＨ
１７１の挿入配列をｐＫＳ６０１に移し変えたｐＴＨ１
８４、ｐＴＨ１７６の挿入配列をｐＫＳ６０１に移し変
えたｐＴＨ１８５、ｐＴＨ１２７の挿入配列をｐＫＳ６
０３に移し変えたｐＴＨ１８６、ｐＴＨ１３３の挿入配
列をｐＫＳ６０３に移し変えたｐＴＨ１８７、ｐＴＨ１
４２の挿入配列をｐＫＳ６０２に移し変えたｐＴＨ１８
８、ｐＴＨ１４３の挿入配列をｐＫＳ６０２に移し変え
たｐＴＨ１８９、ｐＴＨ１５５の挿入配列をｐＫＳ６０
３に移し変えたｐＴＨ１９０、ｐＴＨ１６７の挿入配列
をｐＫＳ６０３に移し変えたｐＴＨ１９１、ｐＴＨ１７
１の挿入配列をｐＫＳ６０３に移し変えたｐＴＨ１９２
であり、ｐＴＨ１７６の挿入配列をｐＫＳ６０３に移し
変えたｐＴＨ１９３、ｐＴＨ１２７の挿入配列をｐＫＳ
６０５に移し変えたｐＴＨ１９４、ｐＴＨ１３３の挿入
配列をｐＫＳ６０５に移し変えたｐＴＨ１９５、ｐＴＨ
１４３の挿入配列をｐＫＳ６０４に移し変えたｐＴＨ１
９６ｐＴＨ１５５の挿入配列をｐＫＳ６０５に移し変え
たｐＴＨ１９７、ｐＴＨ１６７の挿入配列をｐＫＳ６０
５に移し変えたｐＴＨ１９８、ｐＴＨ１７１の挿入配列
をｐＫＳ６０５に移し変えたｐＴＨ１９９、ｐＴＨ１７
６の挿入配列をｐＫＳ６０５に移し変えたｐＴＨ２０
０、が導入された大腸菌ＸＬ１Ｂｌｕｅ株を、発現誘導
剤であるＩＰＴＧ存在下で培養することにより、ＨＩＶ
ｇｐ１２０のループ３ペプチド配列の全部、あるいは一
部をもつ人工タンパク質が得られた。
発現プラスミドベクターｐＴＨ１７７〜ｐＴＨ２００、
すなわち、ｐＴＨ１２７の挿入配列をｐＫＳ６０１に移
し変えたｐＴＨ１７７、ｐＴＨ１３３の挿入配列をｐＫ
Ｓ６０１に移し変えたｐＴＨ１７８、ｐＴＨ１３６の挿
入配列をｐＫＳ６００に移し変えたｐＴＨ１７９、ｐＴ
Ｈ１４３の挿入配列をｐＫＳ６００に移し変えたｐＴＨ
１８０、ｐＴＨ１４５の挿入配列をｐＫＳ６０１に移し
変えたｐＴＨ１８１、ｐＴＨ１５５の挿入配列をｐＫＳ
６０１に移し変えたｐＴＨ１８２、ｐＴＨ１６７の挿入
配列をｐＫＳ６０１に移し変えたｐＴＨ１８３、ｐＴＨ
１７１の挿入配列をｐＫＳ６０１に移し変えたｐＴＨ１
８４、ｐＴＨ１７６の挿入配列をｐＫＳ６０１に移し変
えたｐＴＨ１８５、ｐＴＨ１２７の挿入配列をｐＫＳ６
０３に移し変えたｐＴＨ１８６、ｐＴＨ１３３の挿入配
列をｐＫＳ６０３に移し変えたｐＴＨ１８７、ｐＴＨ１
４２の挿入配列をｐＫＳ６０２に移し変えたｐＴＨ１８
８、ｐＴＨ１４３の挿入配列をｐＫＳ６０２に移し変え
たｐＴＨ１８９、ｐＴＨ１５５の挿入配列をｐＫＳ６０
３に移し変えたｐＴＨ１９０、ｐＴＨ１６７の挿入配列
をｐＫＳ６０３に移し変えたｐＴＨ１９１、ｐＴＨ１７
１の挿入配列をｐＫＳ６０３に移し変えたｐＴＨ１９２
であり、ｐＴＨ１７６の挿入配列をｐＫＳ６０３に移し
変えたｐＴＨ１９３、ｐＴＨ１２７の挿入配列をｐＫＳ
６０５に移し変えたｐＴＨ１９４、ｐＴＨ１３３の挿入
配列をｐＫＳ６０５に移し変えたｐＴＨ１９５、ｐＴＨ
１４３の挿入配列をｐＫＳ６０４に移し変えたｐＴＨ１
９６ｐＴＨ１５５の挿入配列をｐＫＳ６０５に移し変え
たｐＴＨ１９７、ｐＴＨ１６７の挿入配列をｐＫＳ６０
５に移し変えたｐＴＨ１９８、ｐＴＨ１７１の挿入配列
をｐＫＳ６０５に移し変えたｐＴＨ１９９、ｐＴＨ１７
６の挿入配列をｐＫＳ６０５に移し変えたｐＴＨ２０
０、が導入された大腸菌ＸＬ１Ｂｌｕｅ株を、発現誘導
剤であるＩＰＴＧ存在下で培養することにより、ＨＩＶ
ｇｐ１２０のループ３ペプチド配列の全部、あるいは一
部をもつ人工タンパク質が得られた。
【００４０】上記ｐＴＨ１７７〜ｐＴＨ２００翻訳産物
であり、それらのＮ末とＣ末には発現プラスミド由来ペ
プチド配列が融合している２４種類の人工タンパク質の
アミノ酸配列を図６〜９に示す。なお、図６〜９には、
その重合体塩基配列の部分配列しかわからないものにつ
いては、Ｎ末領域のペプチド配列のみが示されている。
図６〜９に示されるｐＴＨ１７７の挿入ペプチド配列を
配列番号２４に、ｐＴＨ１７８の挿入ペプチド配列を配
列番号２５に、ｐＴＨ１７９の挿入ペプチド配列を配列
番号２６に、ｐＴＨ１８０の挿入ペプチド配列を配列番
号２７に、ｐＴＨ１８１の挿入ペプチド配列を配列番号
２８に、ｐＴＨ１８２の挿入ペプチド配列を配列番号２
９に、ｐＴＨ１８３の挿入ペプチド配列を配列番号３０
に、ｐＴＨ１８４の挿入ペプチド配列を配列番号３１
に、ｐＴＨ１８５の挿入ペプチド配列を配列番号３２
に、ｐＴＨ１８６の挿入ペプチド配列を配列番号３３
に、ｐＴＨ１８７の挿入ペプチド配列を配列番号３４
に、ｐＴＨ１８８の挿入ペプチド配列を配列番号３５
に、ｐＴＨ１８９の挿入ペプチド配列を配列番号３６
に、ｐＴＨ１９０の挿入ペプチド配列を配列番号３７
に、ｐＴＨ１９１の挿入ペプチド配列を配列番号３８
に、ｐＴＨ１９２の挿入ペプチド配列を配列番号３９
に、ｐＴＨ１９３の挿入ペプチド配列を配列番号４０
に、ｐＴＨ１９４の挿入ペプチド配列を配列番号４１
に、ｐＴＨ１９５の挿入ペプチド配列を配列番号４２
に、ｐＴＨ１９６の挿入ペプチド配列を配列番号４３
に、ｐＴＨ１９７の挿入ペプチド配列を配列番号４４
に、ｐＴＨ１９８の挿入ペプチド配列を配列番号４５
に、ｐＴＨ１９９の挿入ペプチド配列を配列番号４６
に、ｐＴＨ２００の挿入ペプチド配列を配列番号４７に
示す。
であり、それらのＮ末とＣ末には発現プラスミド由来ペ
プチド配列が融合している２４種類の人工タンパク質の
アミノ酸配列を図６〜９に示す。なお、図６〜９には、
その重合体塩基配列の部分配列しかわからないものにつ
いては、Ｎ末領域のペプチド配列のみが示されている。
図６〜９に示されるｐＴＨ１７７の挿入ペプチド配列を
配列番号２４に、ｐＴＨ１７８の挿入ペプチド配列を配
列番号２５に、ｐＴＨ１７９の挿入ペプチド配列を配列
番号２６に、ｐＴＨ１８０の挿入ペプチド配列を配列番
号２７に、ｐＴＨ１８１の挿入ペプチド配列を配列番号
２８に、ｐＴＨ１８２の挿入ペプチド配列を配列番号２
９に、ｐＴＨ１８３の挿入ペプチド配列を配列番号３０
に、ｐＴＨ１８４の挿入ペプチド配列を配列番号３１
に、ｐＴＨ１８５の挿入ペプチド配列を配列番号３２
に、ｐＴＨ１８６の挿入ペプチド配列を配列番号３３
に、ｐＴＨ１８７の挿入ペプチド配列を配列番号３４
に、ｐＴＨ１８８の挿入ペプチド配列を配列番号３５
に、ｐＴＨ１８９の挿入ペプチド配列を配列番号３６
に、ｐＴＨ１９０の挿入ペプチド配列を配列番号３７
に、ｐＴＨ１９１の挿入ペプチド配列を配列番号３８
に、ｐＴＨ１９２の挿入ペプチド配列を配列番号３９
に、ｐＴＨ１９３の挿入ペプチド配列を配列番号４０
に、ｐＴＨ１９４の挿入ペプチド配列を配列番号４１
に、ｐＴＨ１９５の挿入ペプチド配列を配列番号４２
に、ｐＴＨ１９６の挿入ペプチド配列を配列番号４３
に、ｐＴＨ１９７の挿入ペプチド配列を配列番号４４
に、ｐＴＨ１９８の挿入ペプチド配列を配列番号４５
に、ｐＴＨ１９９の挿入ペプチド配列を配列番号４６
に、ｐＴＨ２００の挿入ペプチド配列を配列番号４７に
示す。
【００４１】前記２４種類の人工遺伝子が挿入された発
現ベクターｐＴＨ１７７〜ｐＴＨ２００の翻訳産物の中
で、発現量の多いｐＴＨ１７７、ｐＴＨ１７８、ｐＴＨ
１８０、ｐＴＨ１８１、ｐＴＨ１８３、ｐＴＨ１８４、
ｐＴＨ１８５、ｐＴＨ１８６、ｐＴＨ１８７、ｐＴＨ１
８８、ｐＴＨ１８９、ｐＴＨ１９０、ｐＴＨ１９２、ｐ
ＴＨ１９４、ｐＴＨ１９５、ｐＴＨ１９６、ｐＴＨ１９
７、ｐＴＨ１９８、ｐＴＨ１９９、ｐＴＨ２００の各人
工タンパク質について、発現ベクターに由来するＮ末端
のポリヒスチジン残基を利用することによって次のよう
に精製した。各発現プラスミドをもつ大腸菌ＸＬ１Ｂｌ
ｕｅ株の５００ｍｌスケールの培養を３７℃で開始し、
培養液のＯＤ660が０．２に達した時点で発現誘導剤で
あるＩＰＴＧを０．２４ｇ／ｌになるように加え、さら
に３時間培養を続け、培養液を３，０００ｇで１０分間
遠心し、集菌した。
現ベクターｐＴＨ１７７〜ｐＴＨ２００の翻訳産物の中
で、発現量の多いｐＴＨ１７７、ｐＴＨ１７８、ｐＴＨ
１８０、ｐＴＨ１８１、ｐＴＨ１８３、ｐＴＨ１８４、
ｐＴＨ１８５、ｐＴＨ１８６、ｐＴＨ１８７、ｐＴＨ１
８８、ｐＴＨ１８９、ｐＴＨ１９０、ｐＴＨ１９２、ｐ
ＴＨ１９４、ｐＴＨ１９５、ｐＴＨ１９６、ｐＴＨ１９
７、ｐＴＨ１９８、ｐＴＨ１９９、ｐＴＨ２００の各人
工タンパク質について、発現ベクターに由来するＮ末端
のポリヒスチジン残基を利用することによって次のよう
に精製した。各発現プラスミドをもつ大腸菌ＸＬ１Ｂｌ
ｕｅ株の５００ｍｌスケールの培養を３７℃で開始し、
培養液のＯＤ660が０．２に達した時点で発現誘導剤で
あるＩＰＴＧを０．２４ｇ／ｌになるように加え、さら
に３時間培養を続け、培養液を３，０００ｇで１０分間
遠心し、集菌した。
【００４２】上記集菌した菌体を４０ｍｌの溶菌バッフ
ァー（５０ｍＭのＮａＨ2ＰＯ4（ｐＨ８．０）、１０ｍ
ＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、６Ｍの塩酸グア
ニジン、１００ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＰＭＳＦ）に
懸濁し、３７℃で１時間インキュベートし、７，０００
ｇ×３０分間遠心して得られた上清を、溶菌バッファー
で平衡化前処理した５０％ＴＡＬＯＮ樹脂（クロンテッ
ク社）液４ｍｌと混合し、室温で２０分間緩やかに攪拌
した後、７００ｇ×５分間遠心した。次いで、上清を捨
て、２０ｍｌの溶菌バッファーで洗浄し、室温で１０分
間緩やかに攪拌した後、７００ｇ×５分間遠心して上清
を捨て溶菌バッファーによる洗浄を繰り返した。次に、
２ｍｌの溶菌バッファーを加え、voltexで懸濁し、カラ
ムに充填し、６ｍｌの洗浄バッファー（５０ｍＭのＮａ
Ｈ2ＰＯ4（ｐＨ７．０）、８Ｍの尿素、１００ｍＭのＮ
ａＣｌ、１５ｍＭのイミダゾール）で洗浄した後、溶出
バッファー（５０ｍＭのＮａＨ2ＰＯ4（ｐＨ５．０）、
２０ｍＭのＭＥＳ（ｐＨ５．０）、８Ｍの尿素、１００
ｍＭのＮａＣｌ、２５０ｍＭのイミダゾール）でＴＡＬ
ＯＮ樹脂に結合した精製タンパク質を溶出させた。精製
タンパク質を含む溶出分画を５０ｍＭのＴｒｉｓ−酢
酸、ｐＨ４．０、１００ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤ
ＴＡで透析（ピアス社、分画分子量１万）し、限外濾過
膜（アミコン社、セントリップ、分画分子量１万）で濃
縮後、濃度を測定し精製標本とした。
ァー（５０ｍＭのＮａＨ2ＰＯ4（ｐＨ８．０）、１０ｍ
ＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、６Ｍの塩酸グア
ニジン、１００ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＰＭＳＦ）に
懸濁し、３７℃で１時間インキュベートし、７，０００
ｇ×３０分間遠心して得られた上清を、溶菌バッファー
で平衡化前処理した５０％ＴＡＬＯＮ樹脂（クロンテッ
ク社）液４ｍｌと混合し、室温で２０分間緩やかに攪拌
した後、７００ｇ×５分間遠心した。次いで、上清を捨
て、２０ｍｌの溶菌バッファーで洗浄し、室温で１０分
間緩やかに攪拌した後、７００ｇ×５分間遠心して上清
を捨て溶菌バッファーによる洗浄を繰り返した。次に、
２ｍｌの溶菌バッファーを加え、voltexで懸濁し、カラ
ムに充填し、６ｍｌの洗浄バッファー（５０ｍＭのＮａ
Ｈ2ＰＯ4（ｐＨ７．０）、８Ｍの尿素、１００ｍＭのＮ
ａＣｌ、１５ｍＭのイミダゾール）で洗浄した後、溶出
バッファー（５０ｍＭのＮａＨ2ＰＯ4（ｐＨ５．０）、
２０ｍＭのＭＥＳ（ｐＨ５．０）、８Ｍの尿素、１００
ｍＭのＮａＣｌ、２５０ｍＭのイミダゾール）でＴＡＬ
ＯＮ樹脂に結合した精製タンパク質を溶出させた。精製
タンパク質を含む溶出分画を５０ｍＭのＴｒｉｓ−酢
酸、ｐＨ４．０、１００ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤ
ＴＡで透析（ピアス社、分画分子量１万）し、限外濾過
膜（アミコン社、セントリップ、分画分子量１万）で濃
縮後、濃度を測定し精製標本とした。
【００４３】実施例２ ２０種の精製タンパク質を３週ごと３回にわけて、２０
〜２５μｇをそれぞれ５匹のマウス（ＢＡＬＢ／ｃ）、
合計１００匹の脾臓に注射することにより免疫し、最終
免疫から５日目に血液をマウス網膜血管から採取した。
また、ＨＩＶｇｐ１２０ループ３領域を含む４０ｍｅｒ
の合成ペプチドＩＮＣＴＲＰＮＮＮＴＲＫＳＩＲＩＱＲ
ＧＰＧＲＴＦＮＴＩＧＫＩＧＮＭＲＱＡＨＣＮＩ（配列
番号４８）を用いて同様に免疫した５匹のマウス（ＢＡ
ＬＢ／ｃ）から採取した血液を対照（Ｖ３）として用い
た。次に、常法により、ＨＩＶｇｐ１２０ループ３領域
を含む４０ｍｅｒの合成ペプチドを用いたＥＬＩＳＡ実
験を行い、免疫誘導能力を評価した。ＥＬＩＳＡは、９
６穴プレート（ファルコン社、3539）に上記合成ペプチ
ド（配列番号４８）を固相化した後、マウス血清を一次
抗体として吸着させ、洗浄の後、二次抗体としてペルオ
キシダーゼ結合ヒツジ抗マウスＩｇＧ抗体（アマシャム
ファルマシアバイオテク社）を加え、洗浄の後、ＯＰＤ
（o-Phenylenediamine）を基質として発色させ、波長４
９２ｎｍにおける吸光度を測定することにより行った。
〜２５μｇをそれぞれ５匹のマウス（ＢＡＬＢ／ｃ）、
合計１００匹の脾臓に注射することにより免疫し、最終
免疫から５日目に血液をマウス網膜血管から採取した。
また、ＨＩＶｇｐ１２０ループ３領域を含む４０ｍｅｒ
の合成ペプチドＩＮＣＴＲＰＮＮＮＴＲＫＳＩＲＩＱＲ
ＧＰＧＲＴＦＮＴＩＧＫＩＧＮＭＲＱＡＨＣＮＩ（配列
番号４８）を用いて同様に免疫した５匹のマウス（ＢＡ
ＬＢ／ｃ）から採取した血液を対照（Ｖ３）として用い
た。次に、常法により、ＨＩＶｇｐ１２０ループ３領域
を含む４０ｍｅｒの合成ペプチドを用いたＥＬＩＳＡ実
験を行い、免疫誘導能力を評価した。ＥＬＩＳＡは、９
６穴プレート（ファルコン社、3539）に上記合成ペプチ
ド（配列番号４８）を固相化した後、マウス血清を一次
抗体として吸着させ、洗浄の後、二次抗体としてペルオ
キシダーゼ結合ヒツジ抗マウスＩｇＧ抗体（アマシャム
ファルマシアバイオテク社）を加え、洗浄の後、ＯＰＤ
（o-Phenylenediamine）を基質として発色させ、波長４
９２ｎｍにおける吸光度を測定することにより行った。
【００４４】ｐＴＨ１７７、ｐＴＨ１７８、ｐＴＨ１８
０、ｐＴＨ１８１、ｐＴＨ１８４、ｐＴＨ１８５、ｐＴ
Ｈ１８６、ｐＴＨ１８８、ｐＴＨ１９０、ｐＴＨ１９２
からの精製タンパク質及び対照としてのＨＩＶｇｐ１２
０ループ３領域を含む４０ｍｅｒの合成ペプチドを免疫
原として用いた免疫実験の、それぞれ５匹の免疫マウス
から得た血清を２５００倍希釈し、ＥＬＩＳＡを行っ
た。結果を図１０に示す。図１０に示される結果は、こ
れらの人工タンパク質がマウスの生体内で異物として認
識され、免疫反応を誘導することを示している。また、
対照実験であるＨＩＶｇｐ１２０ループ３領域を含む４
０ｍｅｒの合成ペプチドで免疫したマウスからは該合成
ペプチドに対する抗血清は予想通りの結果が得られなか
った。
０、ｐＴＨ１８１、ｐＴＨ１８４、ｐＴＨ１８５、ｐＴ
Ｈ１８６、ｐＴＨ１８８、ｐＴＨ１９０、ｐＴＨ１９２
からの精製タンパク質及び対照としてのＨＩＶｇｐ１２
０ループ３領域を含む４０ｍｅｒの合成ペプチドを免疫
原として用いた免疫実験の、それぞれ５匹の免疫マウス
から得た血清を２５００倍希釈し、ＥＬＩＳＡを行っ
た。結果を図１０に示す。図１０に示される結果は、こ
れらの人工タンパク質がマウスの生体内で異物として認
識され、免疫反応を誘導することを示している。また、
対照実験であるＨＩＶｇｐ１２０ループ３領域を含む４
０ｍｅｒの合成ペプチドで免疫したマウスからは該合成
ペプチドに対する抗血清は予想通りの結果が得られなか
った。
【００４５】図１０の実験で用いた同一サンプルを、同
一抗原の５匹のマウス内で混合し、いろいろな希釈の後
にＨＩＶｇｐ１２０ループ３領域を含む４０ｍｅｒの配
列をもつ合成ペプチドを抗原としたＥＬＩＳＡ実験を行
った結果を図１１に示す。この結果は、人工タンパク質
のｇｐ１２０ループ３配列に相当する部分に対する抗体
が多くのマウスで作られていることを示している。
一抗原の５匹のマウス内で混合し、いろいろな希釈の後
にＨＩＶｇｐ１２０ループ３領域を含む４０ｍｅｒの配
列をもつ合成ペプチドを抗原としたＥＬＩＳＡ実験を行
った結果を図１１に示す。この結果は、人工タンパク質
のｇｐ１２０ループ３配列に相当する部分に対する抗体
が多くのマウスで作られていることを示している。
【００４６】ｐＴＨ１９４、ｐＴＨ１９５、ｐＴＨ１９
６、ｐＴＨ１９８、ｐＴＨ１９９からの精製タンパク質
を用いた免疫実験の、それぞれ５匹の免疫マウスから得
た血清を別々に４０００倍希釈し、ＨＩＶｇｐ１２０ル
ープ３領域を含む４０ｍｅｒの合成ペプチドを抗原とし
たＥＬＩＳＡの結果を図１２に示す。この結果は、人工
タンパク質のｇｐ１２０ループ３配列に相当する部分に
対する抗体が多くのマウスで作られていることを示して
いる。
６、ｐＴＨ１９８、ｐＴＨ１９９からの精製タンパク質
を用いた免疫実験の、それぞれ５匹の免疫マウスから得
た血清を別々に４０００倍希釈し、ＨＩＶｇｐ１２０ル
ープ３領域を含む４０ｍｅｒの合成ペプチドを抗原とし
たＥＬＩＳＡの結果を図１２に示す。この結果は、人工
タンパク質のｇｐ１２０ループ３配列に相当する部分に
対する抗体が多くのマウスで作られていることを示して
いる。
【００４７】ｐＴＨ１８３、ｐＴＨ１８７、ｐＴＨ１８
９、ｐＴＨ１９７、ｐＴＨ２００からの精製タンパク質
を用いた免疫実験の、それぞれ５匹の免疫マウスから得
た血清を５０００倍希釈し、ＨＩＶｇｐ１２０ループ３
領域を含む４０ｍｅｒの合成ペプチドを抗原としたＥＬ
ＩＳＡの結果を図１３に示す。
９、ｐＴＨ１９７、ｐＴＨ２００からの精製タンパク質
を用いた免疫実験の、それぞれ５匹の免疫マウスから得
た血清を５０００倍希釈し、ＨＩＶｇｐ１２０ループ３
領域を含む４０ｍｅｒの合成ペプチドを抗原としたＥＬ
ＩＳＡの結果を図１３に示す。
【００４８】
【発明の効果】本発明のエピトープの免疫原性が増強さ
れた人工タンパク質を用いると、生体での体液性免疫を
誘導することができる。また、かかる人工タンパク質を
用いてマウスその他の動物を免疫することにより、前記
エピトープに対する抗体を簡便かつ効率的に製造するこ
とができ、得られた抗体は、抗体を用いた治療や抗体を
用いた診断に利用できる。前記人工タンパク質をコード
するＤＮＡをＤＮＡワクチンとして用いることにより、
生体での細胞性免疫を誘導することができる。そして、
これらの体液性免疫、細胞性免疫の誘導は、マラリアな
ど広い抗原に対するワクチンとして利用できることを示
している。さらに、人工タンパク質を発現する腸内細菌
等は脱感作・免疫寛容の誘導にも利用できる他、生体内
で免疫寛容状態のタンパク質（癌抗原や胎児抗原など）
に免疫反応を引き起こさせる手法としても利用できる。
れた人工タンパク質を用いると、生体での体液性免疫を
誘導することができる。また、かかる人工タンパク質を
用いてマウスその他の動物を免疫することにより、前記
エピトープに対する抗体を簡便かつ効率的に製造するこ
とができ、得られた抗体は、抗体を用いた治療や抗体を
用いた診断に利用できる。前記人工タンパク質をコード
するＤＮＡをＤＮＡワクチンとして用いることにより、
生体での細胞性免疫を誘導することができる。そして、
これらの体液性免疫、細胞性免疫の誘導は、マラリアな
ど広い抗原に対するワクチンとして利用できることを示
している。さらに、人工タンパク質を発現する腸内細菌
等は脱感作・免疫寛容の誘導にも利用できる他、生体内
で免疫寛容状態のタンパク質（癌抗原や胎児抗原など）
に免疫反応を引き起こさせる手法としても利用できる。
【００４９】
【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> JAPAN SCIENCE AND TECHNOLOGY CORPORATION <120> Artificial proteins with enriched immunogen of epitope <130> 12-213 <140> <141> <160> 48 <170> PatentIn Ver. 2.1 <210> 1 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Designed Peptide <400> 1 Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr 1 5 10 15 Ile Gly Lys Ile 20 <210> 2 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Designed Peptide <400> 2 Arg Lys Ser Ile Arg Ile 1 5 <210> 3 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Designed Peptide <400> 3 Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr 1 5 10 <210> 4 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Designed Peptide <400> 4 Phe Val Thr Ile Gly Lys Ile 1 5 <210> 5 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Designed Peptide <400> 5 Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu Leu 1 5 10 <210> 6 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Designed Base Sequence <400> 6 atacgcattc agagaggccc tggccgcact tttgttact 39 <210> 7 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Designed Peptide <400> 7 Glu Arg Ala Tyr Ala Phe 1 5 <210> 8 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Designed Base Sequence <400> 8 cgaaagagca tacgcatt 18 <210> 9 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Designed Peptide <400> 9 Leu Leu Leu Leu Ala Arg Phe 1 5 <210> 10 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Designed Base Sequence <400> 10 tttgttacta ttggcaaaat t 21 <210> 11 <211> 60 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Designed Base Sequence <400> 11 cgaaagagca tacgcattca gagaggccct ggccgcactt ttgttactat tggaaagata 60 <210> 12 <211> 34 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:KY-1197 <400> 12 cgaaagagca tacgcattca gagaggccct ggca 34 <210> 13 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:KY-1198 <400> 13 tatctttcca atagtaacaa aagtgcggcc agggca 36 <210> 14 <211> 221 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH127 <400> 14 cgaaagagca tacgcattca gagaggccct ggccgcactt ttgttactat tggcgaaaga 60 gcatacgcat tcagagaggc cctggccgca cttttgttac tattggacga aagagcatac 120 gcattcagag aggccctggc cgcacttttg ttactattgg aaagatcgaa agagcatacg 180 cattcagaga ggccctggcc gcacttttgt tactattgga g 221 <210> 15 <211> 422 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH133 <400> 15 gcattcagag aggccctggc cgcacttttg ttattattgg aaagagcata cgcattcaga 60 gaggccctgg ccgcactttt gttactattg gacgaaagag catacgcatt cagagaggcc 120 ctggccgcac ttttgttact attggcgaaa gagcatacgc attcagagag gccctggccg 180 cacttttgtt actattggaa agagcatacg cattcagaga ggccctggcc gcacttttgt 240 tactattgga aagatcgaaa gagcatacgc attcagagag gccctggccg cacttttgtt 300 actattggaa agaaagagca tacgcattca gagaggccct ggccgcactt ttgttactat 360 tggaaagatc gaaagagcat acgcattcag agaggccctg gccgcacttt ttgttactat 420 tg 422 <210> 16 <211> 507 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH136 <400> 16 cgaaagagca tacgcattca gagaggccct ggccgcactt ttgttactat tggacgaaag 60 agcatacgca ttcagaggag gccctggccg cacttttgtt actattggaa agcgaaagag 120 catacgcatt cagagaggcc ctggccgcac ttttgttact attggaaagc gaaagagcat 180 acgcattcag agaggccctg gccgcacttt tgttactatt ggaaagatac gaaagagcat 240 acgcattcag agaggccctg gccgcacttt tgttactatt ggaaagatag aaagagcata 300 cgcattcaga gaggccctgg ccgcactttt gttactattg gacgaagagc atacgcattc 360 agagaggccc tggccgcact tttgttacta ttggcgaaag aacatacgca ttcagagagg 420 ccctggccgc acttttgtta ctattggaaa gcgaaagagc atacgctttc agagaggccc 480 tggccgcact tttgttacta ttggaaa 507 <210> 17 <211> 456 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH142 <400> 17 cgaaagagca tacgcttcag agaggccctg gccgcacttt tgttactatt ggaaagatag 60 aaagagcata cgcattcaga gaggccctgg ccgcactttt gttactattg gaaagatacg 120 aaagagcata cgcattcaga gaggccctgg ccgcactttt gttactattg gaacgaaaga 180 gcatacgcat tcagagaggc cctggccgca cttttgttac tattggaaag atacgtaaga 240 gcatacgcat tcagagaggc cctggccgca cttttgttac tattggcgaa agagcatacg 300 cattcagaga ggccctggcc gcacttttgt tactattgga aggcgaaaga gcatacgcat 360 tcagagaagc cctggccgca cttttgttac tattggaaag cgaaagagca tacgcattca 420 gaaaggccct ggccgcactt ttgttactat tggaaa 456 <210> 18 <211> 427 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH143 <400> 18 aaagagcata cgcattcaga gaggccctgg ccgcactttt gttactattg gcgaaagagc 60 atacgcattc agagaggccc tggccgcact tttgttacta ttggcgaaag agcatacgca 120 ttcagagagg ccctggccgc acttttgtta ctattggcga aagagcatac gcattcagag 180 aggccctggc cgcacttttg ttactattgg acgaaagagc atacgcattc agagaggccc 240 tggccgcact tttgttacta ttggcgaaag agcatacgca ttcagagagg ccctggccgc 300 acttttgtta ctattggaaa gatacgaaag agcatacgca ttcagagaag ccctggccgc 360 acttttgtta ctattgcgaa agacatacgc attcagagaa gccctggccg cacttttgtt 420 actattg 427 <210> 19 <211> 323 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH145 <400> 19 gaaaaagcat acgcattcag agaggccctg gccgcacttt tgttactatt ggaaagatag 60 agcatacgca ttcagagagg ccctggccgc acttttgtta ctattggaaa gatagcatac 120 gcattcagag aggccctggc cgcacttttg ttactattgg cgaaagagca tacgcattca 180 gagaggccct ggccgcactt ttgttactat tgcgaaagag catacgcatt cagagaggcc 240 ctggccgcac ttttgttact attgggcgaa agagcatacg cattcagaga ggccctggcc 300 gcacttttgt tactattgga aag 323 <210> 20 <211> 426 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH155 <400> 20 cgaaagagca tacgcattca gagagccctg ccggcacttt tgttactatt ggaaagagca 60 tacgcattca gagaggccct ggccgcactt ttgttattat tggaaacgaa agagcatacg 120 cattcagaga ggccctggcc gcacttttgt tactattgga acgaaagagc atacgcattc 180 agagaggccc tggccgcact tttgttacta ttggaaagag catacgcatt cagagaggcc 240 ctggccgcac ttttgttact attggcgaaa gagcatacca ttcgagaggc cctggccgca 300 cttttgttac tattgcgaaa gagcatacgc attcagagag gccctggccg cacttttgtt 360 actattggcg aaagagcata cgcattcaga gaggccctgg ccgcactttt tgttactatt 420 ggaaag 426 <210> 21 <211> 220 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH167 <400> 21 cgaaagagca tacgcattca gagaggccct ggccgcactt ttgttactat tggcgaaaga 60 gcatacgcat tcagagaggc cctggccgca cttttgttac tattggacga aagagcatac 120 gcattcagag aggccctggc cgcacttttg ttactattgg aaagatcgaa agagcatacg 180 cattcagaga ggccctggcc gcacttttgt tactattgga 220 <210> 22 <211> 326 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH171 <400> 22 cgaaagagca tacgcattca gagaggccct ggccgcactt ttgttactat tggaagcgaa 60 agagcatacg cattcagaga ggccctggcc gcacttttgt tactattgga aacgaaagag 120 catacgcatt cagagaggcc ctggccgcac ttttgttact attggcgaaa gagcatacgc 180 attcagagag gccctggccg cacttttgtt actattggaa agacgaaaga gcatacgcat 240 tcagagaggc cctggccgca cttttgttta ctattggaaa gatacgaaag agcatacgca 300 ttcagagagg ccctggccgc actttt 326 <210> 23 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH176 <400> 23 cgaaagacat acgcattcag agaggccctg gccgcacttt tgttactatt ggcgaaagag 60 catacgcatt cagagaggcc ctggccgcac ttttgttact attggcgaaa gagcatacgc 120 attcagagag gccctggccg cacttttgtt actattggaa agcgaaagag catacgcatt 180 cagagaggcc ctggccgcac ttttgttact attggaaagc gaaagagcat acgcattcag 240 agaggccctg gccgcacttt tgttactatt ggcgaaagaa catacgcatt cagagaggcc 300 ctggccgcac ttttgttact attggcg 327 <210> 24 <211> 94 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH177 <400> 24 Met Arg Gly Ser His His His His His His Gly Ser Val Asp Gly Thr 1 5 10 15 Pro Lys Glu His Thr His Ser Glu Arg Pro Trp Pro His Phe Cys Tyr 20 25 30 Tyr Trp Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe 35 40 45 Val Thr Ile Gly Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg 50 55 60 Thr Phe Val Thr Ile Gly Lys Ile Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu 65 70 75 80 Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu Leu Leu Glu Gly Asp Leu Gly 85 90 <210> 25 <211> 157 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH178 <400> 25 Met Arg Gly Ser His His His His His His Gly Ser Val Asp Gly Thr 1 5 10 15 Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val Ile Ile Gly Lys Ser 20 25 30 Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile Gly Arg 35 40 45 Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile 50 55 60 Gly Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu 65 70 75 80 Leu Leu Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu 85 90 95 Leu Leu Leu Glu Arg Ser Lys Glu His Thr His Ser Glu Arg Pro Trp 100 105 110 Pro His Phe Cys Tyr Tyr Trp Lys Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu 115 120 125 Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu Leu Leu Glu Arg Ser Lys Glu His Thr 130 135 140 His Ser Glu Arg Pro Trp Pro His Phe Leu Leu Leu Leu 145 150 155 <210> 26 <211> 160 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH179 <400> 26 Met Arg Gly Ser His His His His His His Gly Ser Val Asp Arg Ser 1 5 10 15 Pro Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu 20 25 30 Leu Leu Asp Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Gly Gly Pro Gly Arg Thr 35 40 45 Phe Val Thr Ile Gly Lys Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro 50 55 60 Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile Gly Lys Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln 65 70 75 80 Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile Gly Lys Ile Arg Lys Ser 85 90 95 Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile Gly Lys 100 105 110 Ile Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu 115 120 125 Leu Leu Asp Glu Glu His Thr His Ser Glu Arg Pro Trp Pro His Phe 130 135 140 Cys Tyr Tyr Trp Arg Lys Asn Ile Arg Ile Gln Gly Thr Arg Val Asn 145 150 155 160 <210> 27 <211> 160 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH180 <400> 27 Met Arg Gly Ser His His His His His His Gly Ser Val Asp Arg Ser 1 5 10 15 Pro Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr 20 25 30 Ile Gly Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu 35 40 45 Leu Leu Leu Ala Lys Glu His Thr His Ser Glu Arg Pro Trp Pro His 50 55 60 Phe Cys Tyr Tyr Trp Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly 65 70 75 80 Arg Thr Phe Val Thr Ile Gly Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly 85 90 95 Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile Gly Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg 100 105 110 Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu Leu Leu Glu Arg Tyr Glu Arg Ala 115 120 125 Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu Leu Leu Arg Lys 130 135 140 Thr Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu Leu Leu Glu 145 150 155 160 <210> 28 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH181 <400> 28 Met Arg Gly Ser His His His His His His Gly Ser Val Asp Gly Thr 1 5 10 15 Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr 20 25 30 Ile Gly Lys Ile Glu His Thr His Ser Glu Arg Pro Trp Pro His Phe 35 40 45 Cys Tyr Tyr Trp Lys Asp Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg 50 55 60 Thr Phe Val Thr Ile Gly Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu 65 70 75 80 Ala Ala Leu Leu Leu Leu Leu Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly 85 90 95 Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile Gly Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln 100 105 110 Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile Gly Lys Gly Asp Leu Gly 115 120 125 <210> 29 <211> 163 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH182 <400> 29 Met Arg Gly Ser His His His His His His Gly Ser Val Asp Gly Thr 1 5 10 15 Pro Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Pro Leu Pro Ala Leu Leu Leu 20 25 30 Leu Leu Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu 35 40 45 Leu Leu Leu Glu Thr Lys Glu Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala 50 55 60 Ala Leu Leu Leu Leu Leu Glu Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly 65 70 75 80 Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile Gly Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg 85 90 95 Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile Gly Glu Arg Ala Tyr His Ser 100 105 110 Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile Ala Lys Glu His Thr His 115 120 125 Ser Glu Arg Pro Trp Pro His Phe Cys Tyr Tyr Trp Arg Lys Ser Ile 130 135 140 Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Cys Tyr Tyr Trp Lys Gly 145 150 155 160 Asp Leu Gly <210> 30 <211> 95 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH183 <400> 30 Met Arg Gly Ser His His His His His His Gly Ser Val Asp Gly Thr 1 5 10 15 Pro Lys Glu His Thr His Ser Glu Arg Pro Trp Pro His Phe Cys Tyr 20 25 30 Tyr Trp Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe 35 40 45 Val Thr Ile Gly Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg 50 55 60 Thr Phe Val Thr Ile Gly Lys Ile Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu 65 70 75 80 Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu Leu Leu Glu Gly Ile Trp Val Asn 85 90 95 <210> 31 <211> 130 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH184 <400> 31 Met Arg Gly Ser His His His His His His Gly Ser Val Asp Gly Thr 1 5 10 15 Pro Lys Glu His Thr His Ser Glu Arg Pro Trp Pro His Phe Cys Tyr 20 25 30 Tyr Trp Lys Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr 35 40 45 Phe Val Thr Ile Gly Asn Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu 50 55 60 Ala Ala Leu Leu Leu Leu Leu Ala Lys Glu His Thr His Ser Glu Arg 65 70 75 80 Pro Trp Pro His Phe Cys Tyr Tyr Trp Lys Asp Glu Arg Ala Tyr Ala 85 90 95 Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu Phe Thr Ile Gly Lys Ile Arg 100 105 110 Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Gly Ile Trp 115 120 125 Val Asn 130 <210> 32 <211> 132 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH185 <400> 32 Met Arg Gly Ser His His His His His His Gly Ser Val Asp Gly Thr 1 5 10 15 Pro Lys Asp Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr 20 25 30 Ile Gly Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu 35 40 45 Leu Leu Leu Ala Lys Glu His Thr His Ser Glu Arg Pro Trp Pro His 50 55 60 Phe Cys Tyr Tyr Trp Lys Ala Lys Glu His Thr His Ser Glu Arg Pro 65 70 75 80 Trp Pro His Phe Cys Tyr Tyr Trp Lys Ala Lys Glu His Thr His Ser 85 90 95 Glu Arg Pro Trp Pro His Phe Cys Tyr Tyr Trp Arg Lys Asn Ile Arg 100 105 110 Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile Gly Gly Gly Ser 115 120 125 Gly Leu Ile Asn 130 <210> 33 <211> 96 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH186 <400> 33 Met Arg Gly Ser His His His His His His Thr Asp Pro Ser Thr Val 1 5 10 15 Pro Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val 20 25 30 Thr Ile Gly Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu 35 40 45 Leu Leu Leu Leu Asp Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala 50 55 60 Ala Leu Leu Leu Leu Leu Glu Arg Ser Lys Glu His Thr His Ser Glu 65 70 75 80 Arg Pro Trp Pro His Phe Cys Tyr Tyr Trp Arg Gly Ile Trp Val Asn 85 90 95 <210> 34 <211> 158 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH187 <400> 34 Met Arg Gly Ser His His His His His His Thr Asp Pro Ser Thr Val 1 5 10 15 Pro Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu Leu Leu Glu Arg 20 25 30 Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu Leu Leu Asp 35 40 45 Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu Leu 50 55 60 Leu Ala Lys Glu His Thr His Ser Glu Arg Pro Trp Pro His Phe Cys 65 70 75 80 Tyr Tyr Trp Lys Glu His Thr His Ser Glu Arg Pro Trp Pro His Phe 85 90 95 Cys Tyr Tyr Trp Lys Asp Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro 100 105 110 Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile Gly Lys Lys Glu His Thr His Ser Glu 115 120 125 Arg Pro Trp Pro His Phe Cys Tyr Tyr Trp Lys Asp Arg Lys Ser Ile 130 135 140 Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Cys Tyr Tyr Trp 145 150 155 <210> 35 <211> 169 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH188 <400> 35 Met Arg Gly Ser His His His His His His Thr Asp Pro Ser Thr Asp 1 5 10 15 Pro Pro Lys Glu His Thr Leu Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val 20 25 30 Thr Ile Gly Lys Ile Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala 35 40 45 Ala Leu Leu Leu Leu Leu Glu Arg Tyr Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg 50 55 60 Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu Leu Leu Glu Arg Lys Ser Ile Arg 65 70 75 80 Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile Gly Lys Ile Arg 85 90 95 Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile 100 105 110 Gly Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu 115 120 125 Leu Leu Glu Gly Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala 130 135 140 Leu Leu Leu Leu Leu Glu Ser Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Lys Ala 145 150 155 160 Leu Ala Ala Leu Leu Leu Leu Leu Glu 165 <210> 36 <211> 177 <212> 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Description of Artificial Sequence:pTH190 <400> 37 Met Arg Gly Ser His His His His His His Thr Asp Pro Ser Thr Val 1 5 10 15 Pro Pro Lys Glu His Thr His Ser Glu Ser Pro Cys Arg His Phe Cys 20 25 30 Tyr Tyr Trp Lys Glu His Thr His Ser Glu Arg Pro Trp Pro His Phe 35 40 45 Cys Tyr Tyr Trp Lys Arg Lys Arg His Thr His Ser Glu Arg Pro Trp 50 55 60 Pro His Phe Cys Tyr Tyr Trp Asn Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu 65 70 75 80 Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu Leu Leu Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg 85 90 95 Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu Leu Leu Ala Lys Glu His Thr Ile 100 105 110 Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu Leu Leu Arg Lys Ser Ile Arg 115 120 125 Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile Gly Glu Arg Ala 130 135 140 Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Phe Val Thr Ile Gly Lys 145 150 155 160 Gly Ile Trp Val Asn 165 <210> 38 <211> 97 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH191 <400> 38 Met Arg Gly Ser His His His His His His Thr Asp Pro Ser Thr Val 1 5 10 15 Pro Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val 20 25 30 Thr Ile Gly Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu 35 40 45 Leu Leu Leu Leu Asp Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala 50 55 60 Ala Leu Leu Leu Leu Leu Glu Arg Ser Lys Glu His Thr His Ser Glu 65 70 75 80 Arg Pro Trp Pro His Phe Cys Tyr Tyr Trp Arg Gly Ser Gly Leu Ile 85 90 95 Asn <210> 39 <211> 132 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH192 <400> 39 Met Arg Gly Ser His His His His His His Thr Asp Pro Ser Thr Val 1 5 10 15 Pro Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val 20 25 30 Thr Ile Gly Ser Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala 35 40 45 Leu Leu Leu Leu Leu Glu Thr Lys Glu His Thr His Ser Glu Arg Pro 50 55 60 Trp Pro His Phe Cys Tyr Tyr Trp Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg 65 70 75 80 Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile Gly Lys Thr Lys Glu His Thr 85 90 95 His Ser Glu Arg Pro Trp Pro His Phe Cys Leu Leu Leu Glu Arg Tyr 100 105 110 Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu Gly Ser 115 120 125 Gly Leu Ile Asn 130 <210> 40 <211> 130 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH193 <400> 40 Met Arg Gly Ser His His His His His His Thr Asp Pro Ser Thr Val 1 5 10 15 Pro Arg Lys Thr Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu 20 25 30 Leu Leu Ala Lys Glu His Thr His Ser Glu Arg Pro Trp Pro His Phe 35 40 45 Cys Tyr Tyr Trp Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg 50 55 60 Thr Phe Val Thr Ile Gly Lys Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly 65 70 75 80 Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile Gly Lys Arg Lys Ser Ile Arg Ile 85 90 95 Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile Gly Glu Arg Thr Tyr 100 105 110 Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu Leu Leu Ala Gly Asp 115 120 125 Leu Gly 130 <210> 41 <211> 97 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH194 <400> 41 Met Arg Gly Ser His His His His His His Gly Ile Arg Arg Arg Tyr 1 5 10 15 Pro Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu 20 25 30 Leu Leu Ala Lys Glu His Thr His Ser Glu Arg Pro Trp Pro His Phe 35 40 45 Cys Tyr Tyr Trp Thr Lys Glu His Thr His Ser Glu Arg Pro Trp Pro 50 55 60 His Phe Cys Tyr Tyr Trp Lys Asp Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg 65 70 75 80 Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile Gly Gly Gly Ser Gly Leu Ile 85 90 95 Asn <210> 42 <211> 158 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH195 <400> 42 Met Arg Gly Ser His His His His His His Gly Ile Arg Arg Arg Tyr 1 5 10 15 Pro His Ser Glu Arg Pro Trp Pro His Phe Cys Tyr Tyr Trp Lys Glu 20 25 30 His Thr His Ser Glu Arg Pro Trp Pro His Phe Cys Tyr Tyr Trp Thr 35 40 45 Lys Glu His Thr His Ser Glu Arg Pro Trp Pro His Phe Cys Tyr Tyr 50 55 60 Trp Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val 65 70 75 80 Thr Ile Gly Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe 85 90 95 Val Thr Ile Gly Lys Ile Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu 100 105 110 Ala Ala Leu Leu Leu Leu Leu Glu Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg 115 120 125 Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile Gly Lys Ile Glu Arg Ala Tyr 130 135 140 Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Phe Val Thr Ile Gly 145 150 155 <210> 43 <211> 163 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH196 <400> 43 Met Arg Gly Ser His His His His His His Gly Ile Arg Arg Gln Ile 1 5 10 15 Pro Lys Glu His Thr His Ser Glu Arg Pro Trp Pro His Phe Cys Tyr 20 25 30 Tyr Trp Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe 35 40 45 Val Thr Ile Gly Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala 50 55 60 Leu Leu Leu Leu Leu Ala Lys Glu His Thr His Ser Glu Arg Pro Trp 65 70 75 80 Pro His Phe Cys Tyr Tyr Trp Thr Lys Glu His Thr His Ser Glu Arg 85 90 95 Pro Trp Pro His Phe Cys Tyr Tyr Trp Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln 100 105 110 Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile Gly Lys Ile Arg Lys Ser 115 120 125 Ile Arg Ile Gln Arg Ser Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile Ala Lys 130 135 140 Asp Ile Arg Ile Gln Arg Ser Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile Gly 145 150 155 160 Lys Lys Thr <210> 44 <211> 166 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH197 <400> 44 Met Arg Gly Ser His His His His His His Gly Ile Arg Arg Arg Tyr 1 5 10 15 Pro Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Ala Leu Ala Gly Thr Phe Val 20 25 30 Thr Ile Gly Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe 35 40 45 Val Ile Ile Gly Asn Glu Arg Gly Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly 50 55 60 Arg Thr Phe Val Thr Ile Gly Thr Lys Glu His Thr His Ser Glu Arg 65 70 75 80 Pro Trp Pro His Phe Cys Tyr Tyr Trp Lys Glu His Thr His Ser Glu 85 90 95 Arg Pro Trp Pro His Phe Cys Tyr Tyr Trp Arg Lys Ser Ile Pro Phe 100 105 110 Glu Arg Pro Trp Pro His Phe Cys Tyr Tyr Cys Glu Arg Ala Tyr Ala 115 120 125 Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu Leu Leu Ala Lys Glu His 130 135 140 Thr His Ser Glu Arg Pro Trp Pro His Phe Leu Leu Leu Leu Glu Arg 145 150 155 160 Gly Ser Gly Leu Ile Asn 165 <210> 45 <211> 94 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH198 <400> 45 Met Arg Gly Ser His His His His His His Gly Ile Arg Arg Arg Tyr 1 5 10 15 Pro Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu 20 25 30 Leu Leu Ala Lys Glu His Thr His Ser Glu Arg Pro Trp Pro His Phe 35 40 45 Cys Tyr Tyr Trp Thr Lys Glu His Thr His Ser Glu Arg Pro Trp Pro 50 55 60 His Phe Cys Tyr Tyr Trp Lys Asp Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg 65 70 75 80 Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile Gly Gly Asp Leu Gly 85 90 <210> 46 <211> 129 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH199 <400> 46 Met Arg Gly Ser His His His His His His Gly Ile Arg Arg Arg Tyr 1 5 10 15 Pro Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu 20 25 30 Leu Leu Glu Ala Lys Glu His Thr His Ser Glu Arg Pro Trp Pro His 35 40 45 Phe Cys Tyr Tyr Trp Lys Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro 50 55 60 Gly Arg Thr Phe Val Thr Ile Gly Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu 65 70 75 80 Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu Leu Leu Glu Arg Arg Lys Ser Ile Arg 85 90 95 Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Val Tyr Tyr Trp Lys Asp Thr 100 105 110 Lys Glu His Thr His Ser Glu Arg Pro Trp Pro His Phe Trp Asp Leu 115 120 125 Gly <210> 47 <211> 131 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:pTH200 <400> 47 Met Arg Gly Ser His His His His His His Gly Ile Arg Arg Arg Tyr 1 5 10 15 Pro Glu Arg His Thr His Ser Glu Arg Pro Trp Pro His Phe Cys Tyr 20 25 30 Tyr Trp Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe 35 40 45 Val Thr Ile Gly Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala Leu Ala Ala 50 55 60 Leu Leu Leu Leu Leu Glu Ser Glu Arg Ala Tyr Ala Phe Arg Glu Ala 65 70 75 80 Leu Ala Ala Leu Leu Leu Leu Leu Glu Ser Glu Arg Ala Tyr Ala Phe 85 90 95 Arg Glu Ala Leu Ala Ala Leu Leu Leu Leu Leu Ala Lys Glu His Thr 100 105 110 His Ser Glu Arg Pro Trp Pro His Phe Cys Tyr Tyr Trp Arg Gly Ile 115 120 125 Trp Val Asn 130 <210> 48 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Synthesized Peptide <400> 48 Ile Asn Cys Thr Arg Pro Asn Asn Asn Thr Arg Lys Ser Ile Arg Ile 1 5 10 15 Gln Arg Gly Pro Gly Arg Thr Phe Asn Thr Ile Gly Lys Ile Gly Asn 20 25 30 Met Arg Gln Ala His Cys Asn Ile 35 40
【図１】本発明のエピトープの免疫原生が増強された人
工タンパク質が強い免疫誘導能力を獲得することを説明
するための図である。
工タンパク質が強い免疫誘導能力を獲得することを説明
するための図である。
【図２】マイクロ遺伝子の自動デザインの計算作業のフ
ローの一例を示す図である。
ローの一例を示す図である。
【図３】デザインされた２本鎖多機能ＤＮＡ配列からな
るマイクロ遺伝子とそれがコードするアミノ酸配列を示
す図である。
るマイクロ遺伝子とそれがコードするアミノ酸配列を示
す図である。
【図４】本発明のエピトープの免疫原生が増強された人
工タンパク質をコードするＤＮＡの一例を示す図であ
る。
工タンパク質をコードするＤＮＡの一例を示す図であ
る。
【図５】本発明のエピトープの免疫原生が増強された人
工タンパク質をコードするＤＮＡの一例を示す図であ
り、図４の続きである。
工タンパク質をコードするＤＮＡの一例を示す図であ
り、図４の続きである。
【図６】本発明のエピトープの免疫原生が増強された人
工タンパク質の一例を示す図である。
工タンパク質の一例を示す図である。
【図７】本発明のエピトープの免疫原生が増強された人
工タンパク質の一例を示す図であり、図６の続きであ
る。
工タンパク質の一例を示す図であり、図６の続きであ
る。
【図８】本発明のエピトープの免疫原生が増強された人
工タンパク質の一例を示す図であり、図７の続きであ
る。
工タンパク質の一例を示す図であり、図７の続きであ
る。
【図９】本発明のエピトープの免疫原生が増強された人
工タンパク質の一例を示す図であり、図８の続きであ
る。
工タンパク質の一例を示す図であり、図８の続きであ
る。
【図１０】本発明のエピトープの免疫原生が増強された
人工タンパク質を用いて得られた抗血清のＥＬＩＳＡの
結果を示す図である。
人工タンパク質を用いて得られた抗血清のＥＬＩＳＡの
結果を示す図である。
【図１１】本発明のエピトープの免疫原生が増強された
人工タンパク質を用いて得られた抗血清の種々の希釈物
のＥＬＩＳＡの結果を示す図である。
人工タンパク質を用いて得られた抗血清の種々の希釈物
のＥＬＩＳＡの結果を示す図である。
【図１２】本発明のエピトープの免疫原生が増強された
他の人工タンパク質を用いて得られた抗血清のＥＬＩＳ
Ａの結果を示す図である。
他の人工タンパク質を用いて得られた抗血清のＥＬＩＳ
Ａの結果を示す図である。
【図１３】本発明のエピトープの免疫原生が増強された
他の人工タンパク質を用いて得られた抗血清のＥＬＩＳ
Ａの結果を示す図である。
他の人工タンパク質を用いて得られた抗血清のＥＬＩＳ
Ａの結果を示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 39/395 Ａ６１Ｐ 37/02 ４Ｃ０８５ Ｃ０７Ｋ 14/155 ４Ｃ０８６ Ａ６１Ｐ 37/02 16/10 ４Ｈ０４５ Ｃ０７Ｋ 14/155 19/00 16/10 Ｃ１２Ｎ 1/21 19/00 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 1/21 (Ｃ１２Ｎ 1/21 5/10 Ｃ１２Ｒ 1:10） Ｃ１２Ｐ 21/08 1:91） //(Ｃ１２Ｎ 1/21 (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:10） Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｃ１２Ｒ 1:91） Ａ６１Ｋ 37/02 (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ Ｃ１２Ｒ 1:91） Ｃ１２Ｒ 1:91） Ｆターム(参考） 4B018 LB01 LB08 MD20 MD69 ME09 MF13 4B024 AA01 AA05 BA35 BA44 CA04 DA05 DA06 EA04 FA10 GA05 GA11 HA01 4B064 AG27 CA10 CA20 CC24 DA01 DA10 4B065 AA26X AA46X AA92X AA95Y AB01 AB05 BA01 CA24 CA25 CA41 CA44 4C084 AA02 AA07 BA01 BA08 BA22 BA23 MA01 NA14 ZB022 ZB052 ZB072 4C085 AA13 AA14 BA24 4C086 AA01 AA03 EA16 MA01 MA04 NA14 ZB02 ZB05 ZB07 4H045 AA11 AA20 AA30 BA10 BA41 CA05 CA42 DA76 DA86 EA29 FA72 FA74 GA10
Claims (24)
- 【請求項１】 ペプチド性エピトープのアミノ酸配列の
全部又はその一部を含むアミノ酸配列から構成されてい
ることを特徴とするエピトープの免疫原性が増強された
人工タンパク質。 - 【請求項２】 ペプチド性エピトープのアミノ酸配列の
全部又はその一部を含み、タンパク質の高次構造形成を
補助する性質が付与されたアミノ酸配列から構成されて
いることを特徴とする請求項１記載のエピトープの免疫
原性が増強された人工タンパク質。 - 【請求項３】 ペプチド性エピトープのアミノ酸配列の
全部又はその一部を含み、免疫担当細胞による抗原提示
処理を補助する性質が付与されたアミノ酸配列から構成
されていることを特徴とする請求項１記載のエピトープ
の免疫原性が増強された人工タンパク質。 - 【請求項４】 ペプチドタグ又はマーカータンパク質が
融合していることを特徴とする請求項１〜３のいずれか
記載のエピトープの免疫原性が増強された人工タンパク
質。 - 【請求項５】 ペプチドタグがポリヒスチジン残基であ
ることを特徴とする請求項４記載のエピトープの免疫原
性が増強された人工タンパク質。 - 【請求項６】 ペプチド性エピトープのアミノ酸配列
が、配列番号１に示されるアミノ酸配列であることを特
徴とする請求項１〜５のいずれか記載のエピトープの免
疫原性が増強された人工タンパク質。 - 【請求項７】 ペプチド性エピトープのアミノ酸配列の
全部又はその一部を含むアミノ酸配列が、配列番号２４
〜４７のいずれかに示されるアミノ酸配列であることを
特徴とする請求項１〜６のいずれか記載のエピトープの
免疫原性が増強された人工タンパク質。 - 【請求項８】 請求項１〜７のいずれか記載のエピトー
プの免疫原性が増強された人工タンパク質を含んでなる
ことを特徴とする免疫応答の誘導剤。 - 【請求項９】 免疫応答が体液性免疫であることを特徴
とする請求項８記載の免疫応答の誘導剤。 - 【請求項１０】 免疫応答が細胞性免疫であることを特
徴とする請求項８記載の免疫応答の誘導剤。 - 【請求項１１】 請求項１〜７のいずれか記載のエピト
ープの免疫原性が増強された人工タンパク質を抗原とし
て用いることを特徴とする抗体の製造方法。 - 【請求項１２】 抗体がモノクローナル抗体であること
を特徴とする請求項１１記載の抗体の製造方法。 - 【請求項１３】 請求項１１又は１２記載の抗体の製造
方法により得られることを特徴とする抗体。 - 【請求項１４】 請求項１３記載の抗体を産生する細
胞。 - 【請求項１５】 請求項１〜７のいずれか記載のエピト
ープの免疫原性が増強された人工タンパク質を発現する
ことができる発現系を含んでなる宿主細胞。 - 【請求項１６】 腸内細菌であることを特徴とする請求
項１５記載の宿主細胞。 - 【請求項１７】 請求項１６記載の腸内細菌を含んでな
ることを特徴とする脱感作・免疫寛容状態の誘導剤。 - 【請求項１８】 請求項１〜７のいずれか記載のエピト
ープの免疫原性が増強された人工タンパク質をコードす
るＤＮＡ。 - 【請求項１９】 塩基配列の読み枠を異にした場合、該
塩基配列の少なくとも１つの読み枠にペプチド性エピト
ープがコードされ、他の読み枠に該ペプチド性エピトー
プの抗原性を高めるような性質を付与しうるペプチドが
コードされていることを特徴とする請求項１８記載のＤ
ＮＡ。 - 【請求項２０】 請求項１８又は１９記載のＤＮＡを含
んでなることを特徴とする免疫応答誘導用ＤＮＡワクチ
ン。 - 【請求項２１】 免疫応答が体液性免疫であることを特
徴とする請求項２０記載の免疫応答誘導用ＤＮＡワクチ
ン。 - 【請求項２２】 免疫応答が細胞性免疫であることを特
徴とする請求項２０記載の免疫応答誘導用ＤＮＡワクチ
ン。 - 【請求項２３】 請求項１〜７のいずれか記載のエピト
ープの免疫原性が増強された人工タンパク質を有効成分
として含有する機能性食品。 - 【請求項２４】 脱感作・免疫寛容状態を誘導すること
ができる請求項２３記載の機能性食品。
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