JP2002097152A

JP2002097152A - 抗腫瘍組成物

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Publication number: JP2002097152A
Application number: JP2000288295A
Authority: JP
Inventors: Kunihiko Ishitani; 邦彦石谷
Original assignee: RIKOMU KK; Ricom Corp
Current assignee: RIKOMU KK; Ricom Corp
Priority date: 2000-09-22
Filing date: 2000-09-22
Publication date: 2002-04-02

Abstract

(57)【要約】【課題】新規な抗腫瘍組成物、ＮＫ細胞活性増強用組成
物、血中アンモニア濃度低下用組成物、癌免疫応答誘導
組成物を提供すること。【解決手段】マッシュルームエキスを有効成分とする抗
腫瘍組成物、ＮＫ細胞活性増強用組成物、血中アンモニ
ア濃度低下用組成物、癌免疫応答誘導組成物。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、抗腫瘍組成物、Ｎ
Ｋ細胞活性増強用組成物、血中アンモニア濃度低下用組
成物及び癌免疫応答誘導組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】ナチュラルキラー細胞（以下、ＮＫ細胞
という）は、極めて多様な機能を有していることが知ら
れている。即ち、(1)腫瘍細胞の発生・増殖・転移抑
制、(2)感染症の抑制、(3)免疫機能の増強及び制御、
(4)疾患への関与、などである。最近では(5)慢性疲労症
候群にも関与しているといわれている。通常、ヒトの細
胞分裂において、正常細胞の他に、まれに腫瘍細胞が発
生するといわれているが、発生した腫瘍細胞を殺傷する
のはＮＫ細胞だといわれている。これはＮＫ細胞が非特
異的に各種腫瘍細胞を攻撃し、ＬＡＫ細胞への変化によ
って腫瘍に対する免疫学的監視機能を持っているためで
ある。

【０００３】ＮＫ細胞は、インターフェロン、インター
ロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキ
ン−３、ＧＭ−ＣＳＦあるいはＴＮＦを産生することに
より、キラー活性が増強されることが知られている。こ
れによりウイルスや寄生虫、真菌、一般の細菌などに対
し、これらを殺傷する能力が増強される。ＮＫ細胞はま
た、各種サイトカインを産生し、造血幹細胞の増殖・分
化を抑制する事により免疫機能の制御も行っている。Ｇ
−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦなどのサイトカイ
ンの産生は、キラー活性を増強し、移植臓器の拒絶反
応、自己免疫疾患、糖尿病、消化器疾患など各種疾患に
関与していることが知られている。ＮＫ細胞はこのよう
に多様な機能を有する生体にとって重要な細胞である。

【０００４】従来、外科手術、化学療法及び放射線療法
が悪性腫瘍の三大療法となっているが、未だ充分な成果
が上がっていないのが現状である。殊に、長期間繁用さ
れる化学療法剤にあっては、総じて副作用が極めて強い
のみならず、抗腫瘍効果が不定で、大腸癌、食道癌等の
固形癌や、転移能の高い腫瘍には、有効な薬物はほとん
ど存在しない。さらに最近、エイズなどの患者や慢性疲
労症候群では、ＮＫ細胞活性が低下していることがわか
ってきた。これはＮＫ細胞活性の増強により、エイズや
慢性疲労症候群発症の予防や治療が可能であることを示
唆している。

【０００５】このため、抗腫瘍効果を高めることを期待
して様々な多剤併用療法が試みられているが、副作用の
重複や増強、新たな障害や薬害等をもたらし、著しい生
活の質（ＱＯＬ）の低下、治療による体力の消耗や寿命
の短縮等も少なからず発生している。結核菌もしくは溶
連菌の菌体懸濁液等を注射することにより、ＮＫ細胞活
性がわずかに上昇することが知られているが、痛みや、
悪心などの副作用が強く、患者ごとに細かい対応が必要
なこともあり、有効に使い切れていないのが現状であ
る。

【０００６】悪性腫瘍に対する新しい療法として種々の
免疫療法が提案されているが、研究段階であり、副作用
の少ない有効な免疫療法剤の早期実現が待たれている。
たとえば、ＮＫ細胞活性を増強することにより、癌細胞
のアポトーシス（プログラムされた細胞死）を誘導し、
癌組織を萎縮もしくは縮退できることが知られている。
これまでに、数多くの多糖類がＮＫ細胞を誘導すること
が知られている。しかしながら、ＮＫ細胞の活性は、血
中アンモニア濃度に依存している事が予想されているの
で、元来これらのアンモニア濃度が高い多くの患者に
は、効果があまり期待できなかった。投与経路について
も血管や腫瘍局所等への注射が主体であり、有用性の高
い経口用の抗悪性腫瘍剤は皆無に等しいのが現状であ
る。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、上記問題点のない新規な抗腫瘍組成物を提供するこ
とである。本発明の他の目的は、ＮＫ細胞活性増強用組
成物を提供することである。本発明の更に他の目的は、
血中アンモニア濃度低下用組成物を提供することであ
る。本発明の更に他の目的は、癌免疫応答誘導組成物を
提供することである。本発明の別の目的は、非侵襲的な
手段である経口投与により、副作用なしに悪性腫瘍を効
果的に抑制又は予防することができる組成物を提供する
ことである。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者はマッシュルー
ムエキスが血中アンモニア濃度を効果的に低下させるこ
と、ＮＫ細胞活性と血中アンモニア濃度が密接な相関を
有することを見出し、本発明を完成するに至った。本発
明は、マッシュルームエキスを有効成分とする抗腫瘍組
成物を提供するものである。本発明はまた、マッシュル
ームエキスを有効成分とするＮＫ細胞活性増強用組成物
を提供するものである。本発明はさらに、マッシュルー
ムエキスを有効成分とする血中アンモニア濃度低下用組
成物を提供するものである。本発明はさらに、マッシュ
ルームエキスを有効成分とする癌免疫応答誘導組成物を
提供するものである。

【０００９】

【発明の実施の形態】ＮＫ細胞は、抗体の介在なしに直
接癌細胞やウイルスに感染した細胞を攻撃することが知
られている。マッシュルームエキスは、血中アンモニア
濃度を下げることにより、ＮＫ細胞を増殖させ、ＮＫ細
胞活性増強を主たる作用機序として、患者に重篤な副作
用を伴うことなく、このＮＫ細胞の腫瘍細胞へのアポト
ーシスによって腫瘍増殖抑制効果を発現するものと考え
られる。本発明の抗腫瘍組成物は、このような全く新し
い作用機序をもつ新規な抗悪性腫瘍剤である。本発明
は、従来、確実な治療法がなく、看過されてきた極めて
悪性の腫瘍に対して、新しい治療法を提供するものであ
り、既存の抗癌療法との併用等によって治癒率の一層の
向上に資するものである。

【００１０】一般的にＮＫ細胞は、血中アンモニアの濃
度が高いとその活性が弱くなることが知られていたが、
具体的に血中アンモニア濃度を下げる方法はこれまでに
知られていなかった。一方、マッシュルームエキスを経
口投与することにより、アンモニアを主体とする便臭が
激減することが知られていたが、血中アンモニア濃度が
減少するかどうかについては知られていなかった。本発
明者は、マッシュルームエキスを経口投与すると、便臭
が激減するだけでなく、血中アンモニア濃度も大幅に減
少すること、またこの血中アンモニア濃度の減少に伴
い、ＮＫ細胞活性が顕著に増大することを見出した。こ
れは全く新しいメカニズムによるＮＫ細胞の増強法であ
る。本発明のマッシュルームエキスを有効成分とする抗
腫瘍剤は、長期連続投与が可能であり、他の薬剤との併
用も可能である。このため、外科療法や放射線治療など
が適用できない悪性腫瘍や、その効果が認められない悪
性腫瘍への新しい治療法を提供するものである。特に、
血中アンモニア濃度が増大し、ＮＫ細胞活性が低下して
癌が発生しやすい条件が整っている中高年齢者において
は、癌発生の予防効果が期待できるものである。

【００１１】マッシュルームエキスの原料となるマッシ
ュルームとしては、アガリカス・ビスポラスが好まし
い。なお広く食用に供されている子実体を有する菌類で
あれば、特に制限されない。このような菌類の例として
は、椎茸、ヒラタケ、シメジ等が挙げられる。この明細
書においてマッシュルームエキスとは、このような菌類
の抽出物も含むものとする。

【００１２】マッシュルームエキスの抽出溶媒として
は、水、アルコール類(例えば、エチルアルコール、グ
リセリン、プロピレングリコール等)、有機酸(例えば、
乳酸、酢酸等)、無機塩類(例えば、イーストフード等)
を含む水溶液、或いはこれらの2種以上の混合物が挙げ
られる。

【００１３】マッシュルームエキスを抽出する溶媒のｐ
Ｈは酸性(好ましくはｐＨ１〜６、より好ましくはｐＨ
3.0〜5.0)が好ましい。酸としては、塩酸、硫酸、リン
酸、などの鉱酸や、酢酸、乳酸、酪酸、パルミチン酸、
酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイ
ン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、カンフ
ァースルホン酸等の有機酸が用いられる。これらのうち
好ましいものは有機酸であり、さらに好ましくはリンゴ
酸及びクエン酸である。これらの酸の添加量は、必要な
ｐＨとするのに適切な量であるが、例えば、抽出溶媒
中、0.05〜2.0質量％である。しかしながら、抽出は中
性ｐＨでも可能である。その場合は、適当な塩類、例え
ば、上記の有機酸や無機酸のアルカリ金属塩、アルカリ
土類金属塩、具体的には、リンゴ酸ナトリウム、クエン
酸カリウム、食塩、塩化カルシウム等や、界面活性剤、
親水性溶媒、例えば、エチルアルコール、プロピレング
リコール、マクロゴール、エトキシ化イソステアリルア
ルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステ
ル類等などの追加成分を加えて、中性で抽出することも
できる。これらの塩、その他の添加剤の添加量はそれぞ
れ、好ましくは0.05〜2.0質量％である。抽出は、細か
く破砕あるいはスライスした新鮮なマッシュルーム子実
体１質量部に抽出溶媒2〜10質量部を加え、好ましくは
４０℃〜１２０℃、さらに好ましくは８０℃で２時間以
上、９０℃で３０分以上行えばよい。マッシュルームエ
キスの製造方法については、特許第2930323号、米国特
許第5639470号、欧州特許第381055号に詳細に記載され
ている。

【００１４】本発明のマッシュルームエキスを有効成分
とする組成物は、経口的に、ヒトを含む、ほ乳動物に投
与することができる。例えば、本発明の組成物は、ゼリ
ー、みそ汁、スープ、ポタージュ、飴、煎餅、ビスケッ
ト、パン等の食品等と混合して経口投与することもでき
る。

【００１５】本発明の組成物の投与単位形態は、上記食
品としての形態の他、治療目的に応じて適宜選択でき
る。具体的には、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳
剤、顆粒剤、カプセル剤等が例示できる。ここで用いら
れる製剤担体としては、通常の薬剤に汎用される各種の
もの、例えば充填剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、界面活
性剤、滑沢剤等の希釈剤ないし賦形剤等を例示できる。

【００１６】錠剤の形態に成形するに際しては、担体と
して例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、
尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セル
ロース、ケイ酸等の賦形剤、水、エタノール、単シロツ
プ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキ
シメチルセルロース、セラツク、メチルセルロース、リ
ン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤、乾燥
デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナ
ラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオ
キシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫
酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプ
ン、乳糖等の崩壊剤、白糖、ステアリン酸、カカオバタ
ー、水素添加油等の崩壊抑制剤、第４級アンモニウム
塩、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリ
ン、デンプン等の保湿剤、デンプン、乳糖、カオリン、
ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤、精製タル
ク、ステアリン酸塩等の滑沢剤等を使用できる。更に錠
剤は必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば、糖衣
錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング
錠、二重錠、多層錠等とすることができる。

【００１７】丸剤の形態に成形するに際しては、担体と
して例えば、ブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬
化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴム
末、トラガント末、ゼラチン等の結合剤、ラミナラン、
カンテン等の崩壊剤等を使用できる。カプセル剤は本発
明の有効成分であるマッシュルームエキスを上記で例示
した各種の担体と混合し、硬質ゼラチンカプセル、軟質
カプセル等に充填して調製される。

【００１８】更に上記各組成物には必要に応じて着色
剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等や他の医薬品を配
合してもよい。

【００１９】本発明の組成物中に含まれるマッシュルー
ムエキスの量は特に限定されず、適宜選択すればよい
が、組成物中、乾燥質量換算で、好ましくは１〜８０質
量％、さらに好ましくは５〜５０質量％程度とするのが
よい。

【００２０】本発明の組成物は経口投与するのが好まし
い。投与方法は、各種組成物の製剤形態、患者の年齢、
性別、患者の症状の程度、その他の条件に応じて決定さ
れる。例えば、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳
剤、顆粒剤及びカプセル剤は経口投与される。

【００２１】本発明の組成物の投与量は、用法、患者の
年齢、性別、疾患の程度、その他の条件により適宜選択
できる。通常、マッシュルーム抽出物(乾燥質量換算)を
０.０１〜５００ｍg／kg／日程度、好ましくは５〜１０
０mg／kg／日程度、さらに好ましくは１〜８０mg／kg／
日程度の範囲となる量を目安とするのがよい。これら本
発明の組成物は１日に１回又は２〜４回程度に分けて投
与することができる。

【００２２】本発明の抗腫瘍組成物、とりわけ抗悪性腫
瘍剤を投与することにより治療できる悪性腫瘍として
は、特に制限はなく、例えば、食道癌、胃癌、肝臓癌、
胆のう・胆管癌、膵臓癌、結腸癌、直腸癌、頭頚部癌、
肺癌、乳癌、子宮頚癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌、睾
丸腫瘍、骨・軟部肉腫、皮膚癌、悪性リンパ腫、急性白
血病、エイズ、脳腫瘍等が挙げられる。さらにその作用
メカニズムがＮＫ細胞を介していることが示唆されるの
で、これまで対応する治療法、治療薬がなかった慢性疲
労症候群にも有効であると考えられる。

【００２３】

【実施例】以下に参考例、実施例、試験例を挙げ、本発
明をさらに詳しく説明する。これらは例示、説明のため
のものであって何ら本発明を限定するものではない。参考例１新鮮なマッシュルーム(アガリカス・ビスポラス)の子実
体１kgに、0.5質量％クエン酸水溶液3kgを加えてｐＨ5.
0以下とし、80℃で2時間抽出し、抽出物を約半分になる
まで減圧濃縮し、フィルターで濾過して抽出液2.5kgを
得た。これを凍結乾燥して40ｇのマッシュルームエキス
を得た。

【００２４】参考例２新鮮なマッシュルーム(アガリカス・ビスポラス)の子実
体１0kgに、1質量％リンゴ酸水溶液20kgを加えてｐＨ5.
0以下とし、70℃で70分間抽出した。抽出液20kgを10倍
濃縮して2kgの濃縮液を得た。この濃縮液2kgに、デキス
トリン1.64kgを加え、スプレードライ加工し、粉末1kg
を得た。これらの濃縮物、及び粉末は、株式会社リコム
から「シャンピニオンエキス」(登録商標)という商品名
で市販されている。

【００２５】実施例1 参考例１で調製したマッシュルームエキス1質量部をゼ
リー500質量部に添加混合して、マッシュルームエキス
を含むゼリーを調製した。このゼリーはＮＫ細胞活性増
強用として使用できる。

【００２６】実施例2 参考例2の粉末1ｇ、乳清カルシウム0.2ｇ、イソマルト
オリゴ糖0.2ｇ、セルロース0.1ｇを混合し、顆粒分包に
配合した。この配合物は血中アンモニア濃度低下用組成
物として使用できる。実施例3 参考例2の粉末1ｇに粉末スープ又は粉末みそ汁又は固形
ブイヨンエキス又は粉末ポタージュをそれぞれ1〜5ｇ加
え、癌免疫応答誘導組成物を調製した。

【００２７】試験例１以下の試験に同意する老人保健施設の高齢者１３人を対
象として、実施例１で調製した、マッシュルームエキス
0.2ｇを含有するゼリー100ｇを１日２本、朝及び夕に、
一ヶ月間継続して摂食してもらった(マッシュルームエ
キス(固形分0.2質量％)として0.4ｇ／日）。投与前と投
与後の血中アンモニア濃度とＮＫ細胞活性、その他の血
液中各種細胞数の増減を比較した。

【００２８】1) 血液検査：下記の検査のため、試食開
始前と試食１カ月後、各々１２ｍｌ採血し、該当する保
存容器に分注し、試験に供した。

【００２９】2) ＮＫ細胞活性：血液６ｍｌを採血管
（保存液ヘパリン含有）に分注し、室温にて保存した。
Ｋ５６２細胞に取り込ませた放射性クロミウム−５１の
放出をメルクマールとする方法により血中のＮＫ細胞活
性を測定した。すなわちマッシュルームエキス投与前の
患者から１０〜１５ｍｌの血液を採取し、ＰＢＳ（リン
酸緩衝液を含む生理食塩水）で２倍に希釈、比重１．０
０７のフィコール−コンレイ密度勾配液に重層、室温で
３０分間１３５０r.p.m.で遠心分離した。単核球細胞を
集め、これを末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）とした。GIBC
OのRPMI 1640培地で３回洗浄した後、ＰＢＭＣを１０％
子牛血清（ＦＣＳ）を含むRPMI 1640培地に懸濁し、細
胞濃度を５×１０⁶／ｍｌになるように調整した。細胞
の生存率はトライパンブルーでチェックし、常に９５％
以上を確保した。ＰＢＭＣはマッシュルームエキス投与
後にも集められ、同様の処理が加えられた。

【００３０】白血病細胞のＫ５６２細胞株が標的細胞と
して用いられた。この株は１０％ＦＣＳを含むRPMI 164
0で培養され、５％ＣＯ₂を含む空気中３７℃の条件下、
放射性クロム酸ナトリウム（Na₂ ⁵¹CrO₄、１０⁶細胞当た
り３．７ＭＢｑ）で１時間ラベルした。標識後、細胞を
RPMI 1640で３回洗い、１０％ＦＣＳを含むRPMI 1640で
１０⁵／ｍｌになるよう調整した。ＮＫ細胞活性は標準
の４時間クロミウム放出分析法で測定した。それぞれ１
００μｌのＰＢＭＣとＫ５６２細胞を５０：１の割合で
９６穴のマイクロプレートのなかで混合した。最大放出
量はＫ５６２細胞に界面活性剤を混合することにより決
定された。自発的な放出量はＰＢＭＣなしの培養Ｋ５６
２細胞の放出量を基準にした。５％ＣＯ₂を含む空気
中、３７℃４時間の保温の後で、上清を集め放射活性を
ガンマカウンターで測定した。

【００３１】すべての分析はｎ＝３で行い、値はその平
均値として計算された。細胞傷害性の割合は、（測定値
−自発活性値）／（最大値−自発活性値）×１００とし
て計算された。すべての実験において、自発活性値は最
大放出値の１０％以下であった。サンプル量に限りがあ
るため、測定は、ＰＢＭＣとＫ５６２細胞が５０：１の
割合のみで行われた。

【００３２】3) アンモニア濃度測定用に血液１ｍｌを
採血管（除蛋白液４ｍｌ含有）へ分注した。アンモニア
はネスラー試薬などを用いて分析することができるが、
より正確なデータを得るために、我々は奥田-藤井(血中
アンモニア直接比色定量法」最新医学:第21巻第3号622-
627頁、1966)の改良変法を用いた。

【００３３】マッシュルームエキス投与前後のアンモニ
ア濃度(単位はppm)を図１に、ＮＫ細胞活性(単位は、血
液1μl中の個数)を、図２に示す。図１及び２から、血
中アンモニア濃度の減少とＮＫ細胞活性の増加の間に
は、強い相関があることがわかる。すなわち、患者ＳＡ
と患者ＭＨにおいては、血中アンモニア濃度が増加し、
ＮＫ細胞活性が減少しているのに対して、他の１１人の
患者では、血中アンモニア濃度が減少し、ＮＫ細胞活性
が増加している。患者ＳＡと患者ＭＨにおいて、血中ア
ンモニア濃度が増加した理由は不明であるが、アンモニ
ア濃度の減少とＮＫ細胞活性の増加が強い相関を有する
ことは明らかである。

【００３４】

【発明の効果】本発明の組成物は、マッシュルームエキ
スを有効成分とするものであり、経口投与が可能であ
り、患者に負担がなくかつ副作用が全くない、若しくは
極めて少ない。本発明の組成物は、血中アンモニア濃度
を減少させてＮＫ細胞の活性を増強することにより、Ｎ
Ｋ細胞がターゲットとする、たとえば、悪性腫瘍やエイ
ズなどの免疫性疾患、肝炎などのウイルス感染症、慢性
疲労症候群などの治療分野における、画期的な治療組成
物として有用である。とりわけ、初期癌から末期癌にま
で有効であり、長期連続投与が可能で、副作用もないこ
とからＱＯＬの高い治療手段を提供するものである。そ
の性状から、他の薬剤、治療法との併用も多くの場合可
能である。

【図面の簡単な説明】

【図１】マッシュルームエキス入りゼリー投与前と後で
の血中アンモニア濃度の比較を示す図面である。

【図２】マッシュルームエキス入りゼリー投与前と後で
のＮＫ細胞活性の比較を示す図面である。グラフ縦軸の
単位は、ＮＫ細胞活性の増加率を示す。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】マッシュルームエキスを有効成分とする
抗腫瘍組成物。
【請求項２】マッシュルームエキスを有効成分とする
ＮＫ細胞活性増強用組成物。
【請求項３】マッシュルームエキスを有効成分とする
血中アンモニア濃度低下用組成物。
【請求項４】マッシュルームエキスを有効成分とする
癌免疫応答誘導組成物。
【請求項５】マッシュルームが、アガリカス・ビスポ
ラスである請求項１〜４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６】マッシュルームエキスが、マッシュルー
ム抽出液を濃縮またはフリーズドライまたは熱風乾燥し
たものである請求項１〜５のいずれか１項記載の組成
物。
【請求項７】経口投与形態にある請求項１〜６のいず
れか１項記載の組成物。